PL206590B1 - Sposób wytwarzania L-aminokwasu z wykorzystaniem wybranego mikroorganizmu - Google Patents
Sposób wytwarzania L-aminokwasu z wykorzystaniem wybranego mikroorganizmuInfo
- Publication number
- PL206590B1 PL206590B1 PL348448A PL34844801A PL206590B1 PL 206590 B1 PL206590 B1 PL 206590B1 PL 348448 A PL348448 A PL 348448A PL 34844801 A PL34844801 A PL 34844801A PL 206590 B1 PL206590 B1 PL 206590B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- ndh
- gene
- microorganism
- strain
- oxidase
- Prior art date
Links
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 41
- 239000000126 substance Substances 0.000 title description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 36
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims abstract description 33
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 25
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 42
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 33
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 32
- 101710164022 ATP-dependent RNA helicase A Proteins 0.000 claims description 30
- 102100030088 ATP-dependent RNA helicase A Human genes 0.000 claims description 27
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 25
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 claims description 20
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims description 20
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 17
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 14
- 108050008072 Cytochrome c oxidase subunit IV Proteins 0.000 claims description 13
- 102000000634 Cytochrome c oxidase subunit IV Human genes 0.000 claims description 13
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 11
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 claims description 11
- 241000186031 Corynebacteriaceae Species 0.000 claims description 9
- 108010077128 cytochrome o oxidase Proteins 0.000 claims description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 8
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 claims description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 101100461234 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) ndh-1 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 101100294913 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) ndh-2 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 3
- WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N subtilin Chemical compound CC1SCC(NC2=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O)CSC(C)C2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C2NC(=O)CNC(=O)C3CCCN3C(=O)C(NC(=O)C3NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)CC1=CC=CC=C1 WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N 0.000 claims description 3
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 claims 1
- 230000030609 dephosphorylation Effects 0.000 claims 1
- 238000006209 dephosphorylation reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 abstract description 35
- 230000035806 respiratory chain Effects 0.000 abstract description 35
- 239000013076 target substance Substances 0.000 abstract description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 101150106215 ndh gene Proteins 0.000 description 49
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 30
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 18
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 17
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 17
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 15
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 description 12
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 12
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 description 11
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 11
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 10
- 241001302584 Escherichia coli str. K-12 substr. W3110 Species 0.000 description 8
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 8
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 8
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 8
- 101710161590 NAD(P)H-quinone oxidoreductase subunit I Proteins 0.000 description 8
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 8
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 7
- 102000006746 NADH Dehydrogenase Human genes 0.000 description 6
- 108010086428 NADH Dehydrogenase Proteins 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 6
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 5
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 5
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 4
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 4
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 4
- 125000004151 quinonyl group Chemical group 0.000 description 4
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 4
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 3
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 3
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 3
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 3
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 3
- 108010013280 ubiquinol oxidase Proteins 0.000 description 3
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000015782 Electron Transport Complex III Human genes 0.000 description 2
- 108010024882 Electron Transport Complex III Proteins 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 2
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N acetyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N 0.000 description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 2
- -1 soybean hydrolyzate Chemical compound 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AUHDWARTFSKSAC-HEIFUQTGSA-N (2S,3R,4S,5R)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)-2-(6-oxo-1H-purin-9-yl)oxolane-2-carboxylic acid Chemical compound [C@]1([C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)(N1C=NC=2C(O)=NC=NC12)C(=O)O AUHDWARTFSKSAC-HEIFUQTGSA-N 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-[3-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC(N(CCCl)CCCl)=C1 QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HYPYXGZDOYTYDR-HAJWAVTHSA-N 2-methyl-3-[(2e,6e,10e,14e)-3,7,11,15,19-pentamethylicosa-2,6,10,14,18-pentaenyl]naphthalene-1,4-dione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C/C=C(C)/CC/C=C(C)/CC/C=C(C)/CC/C=C(C)/CCC=C(C)C)=C(C)C(=O)C2=C1 HYPYXGZDOYTYDR-HAJWAVTHSA-N 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 101100427576 Caenorhabditis elegans ung-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010000898 Chorismate mutase Proteins 0.000 description 1
- ACTIUHUUMQJHFO-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q10 Natural products COC1=C(OC)C(=O)C(CC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O ACTIUHUUMQJHFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001517047 Corynebacterium acetoacidophilum Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 108020005199 Dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- MNHZQLKGDANKTP-UHFFFAOYSA-N Dimethylmenaquinone Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC(=CCCC(=CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccc(C)c(C)c2C1=O)C)C)C)C)C)C MNHZQLKGDANKTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- GRSZFWQUAKGDAV-UHFFFAOYSA-N Inosinic acid Natural products OC1C(O)C(COP(O)(O)=O)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 GRSZFWQUAKGDAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008547 L-phenylalanines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000769 L-threonyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](O[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N NADPH Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N Nitrous acid Chemical compound ON=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010015724 Prephenate Dehydratase Proteins 0.000 description 1
- 108091081062 Repeated sequence (DNA) Proteins 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930003451 Vitamin B1 Natural products 0.000 description 1
- 241000319304 [Brevibacterium] flavum Species 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 235000017471 coenzyme Q10 Nutrition 0.000 description 1
- ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N coenzyme Q10 Chemical compound COC1=C(OC)C(=O)C(C\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- RQFCJASXJCIDSX-UUOKFMHZSA-N guanosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O RQFCJASXJCIDSX-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- 239000004226 guanylic acid Substances 0.000 description 1
- 235000013928 guanylic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 229910001410 inorganic ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004245 inosinic acid Substances 0.000 description 1
- 229940028843 inosinic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000013902 inosinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 1
- 229910001437 manganese ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 238000012269 metabolic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000011785 micronutrient Substances 0.000 description 1
- 235000013369 micronutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 101150116541 nadB gene Proteins 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- NPCOQXAVBJJZBQ-UHFFFAOYSA-N reduced coenzyme Q9 Natural products COC1=C(O)C(C)=C(CC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C)C(O)=C1OC NPCOQXAVBJJZBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 229940097022 thiamine 100 mg Drugs 0.000 description 1
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 230000004102 tricarboxylic acid cycle Effects 0.000 description 1
- 229940035936 ubiquinone Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000010374 vitamin B1 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011691 vitamin B1 Substances 0.000 description 1
- 235000019143 vitamin K2 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011728 vitamin K2 Substances 0.000 description 1
- 229940041603 vitamin k 3 Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/04—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
- C12P13/222—Phenylalanine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
- C12N9/0036—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on NADH or NADPH (1.6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
- C12N9/0036—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on NADH or NADPH (1.6)
- C12N9/0038—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on NADH or NADPH (1.6) with a heme protein as acceptor (1.6.2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 206590 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 348448 (51) Int.Cl.
C12P 13/04 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) (22) Data zgłoszenia: 04.07.2001
Opis patentowy przedrukowano ze względu na zauważone błędy (54) Sposób wytwarzania L-aminokwasu z wykorzystaniem wybranego mikroorganizmu
| (73) Uprawniony z patentu: | |
| (30) Pierwszeństwo: | AJINOMOTO CO, INC., Tokyo, JP |
| 05.07.2000, JP, 2000-204252 | (72) Twórca(y) wynalazku: |
| YUTA NAKAI, Kawasaki, JP | |
| (43) Zgłoszenie ogłoszono: 14.01.2002 BUP 02/02 | YOSHIO KAWAHARA, Kawasaki, JP OSAMU KURAHASHI, Kawasaki, JP NAKANISHI,Kazuo, Kawasaki, JP ITO,Hisao, Kawasaki, JP |
| (45) O udzieleniu patentu ogłoszono: | |
| 31.08.2010 WUP 08/10 | (74) Pełnomocnik: |
| rzecz. pat. Mirosława Ważyńska |
PL 206 590 B1
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania L-aminokwasu z wykorzystaniem mikroorganizmu wybranego z grupy składającej się z Escherichia coli i bakterii coryneform. Wynalazek przedstawia sposób zwiększenia wydajności otrzymywania substancji końcowych w sposobach wytwarzania z wykorzystaniem mikroorganizmów.
Wiele organizmów zdobywa energię wymaganą do aktywności życiowej poprzez oddychanie. W oddychaniu mikroorganizmów uczestniczą różne kompleksy enzymatyczne, zależnie od gatunku mikroorganizmu lub środowiska wzrostu, znacząco różna jest też wydajność uzyskiwania energii. Węglowodany, białka i kwasy alifatyczne są przekształcane w acetylo-CoA w glikolizie, β-utlenianiu itd. I rozkładane w cyklu kwasu cytrynowego. Energia zmagazynowana w wyniku tych procesów w postaci NADH zużywana jest do transportu protonów na zewnątrz komórki drobnoustroju z udziałem dehydrogenazy NADH (NDH) i układu przenoszenia elektronów składającego się z oksydoreduktaz. Dzięki temu tworzy się gradient stężenia protonów pomiędzy wewnętrzną a zewnętrzną błoną cytoplazmatyczną. Ten gradient stężenia protonów wykorzystywany jest do syntezy adenozynotrifosforanu (ATP). Jednocześnie, zależnie od kombinacji NDH i oksydoreduktaz, wśród szlaków przenoszenia elektronów występują szlaki o wysokiej zdolności transportu protonów oraz szlaki o niskiej zdolności transportu protonów na zewnątrz komórki. Uważa się, że szlak o wysokiej zdolności transportu protonów wskazuje na wysoką wydajność energetyczną a szlak o niskiej zdolności transportu protonów na zewnątrz komórki wskazuje na niską wydajność energetyczną. Tak więc, u jednego rodzaju mikroorganizmu jednocześnie występuje wiele równoległych szlaków łańcuchów oddechowych przenoszenia elektronów i szlaki te obejmują zarówno te o wysokiej jak i te o niskiej wydajności energetycznej.
U Escherichia coli obecne są dwa rodzaje NDH i dwa rodzaje końcowych oksydaz łańcucha oddechowego dla warunków tlenowych. Są to NDH: NDH-I (NDH-1, kodowany przez operon nuo) zapewniający dużą wydajność energetyczną oraz NDH-II (kodowany przez ndh) zapewniający niską wydajność energetyczną. Ponadto w przypadku oksydazy końcowej znane są: oksydaza cytochromu typu bo (kodowana przez operon cyoABCD), sklasyfikowana jako typ SoxM (Castresana, J, i Saraste, M., Trends In Biochem. Sci., 20, 443-448 (1995)) i charakteryzująca się wysoką wydajnością energetyczną oraz oksydaza cytochromu typu bd (kodowana przez cydAB) charakteryzująca się niską wydajnością energetyczną. Chociaż wiadomo, że poziom ekspresji tych enzymów łańcucha oddechowego zmienia się w zależności od warunków środowiska wzrostu (Minagawa i in., The Journal of Biological Chemistry, 265:11198-11203 (1990); Tseng i in., Journal of Bacteriology, 178:1094-1098 (1996); Green i in., Molecular Microbiology, 12:433-444 (1994); Bongaerts i in., Molecular Microbiology, 16:521-534 (1995)), wciąż niewiele wiadomo jakie jest fizjologiczne znaczenie poziomów ekspresji tych oksydaz.
Ponadto, u Corynebacterium glutamicum, występuje kompleks cytochromu bc1 oraz potwierdzono obecność co najmniej dwóch rodzajów oksydaz końcowych: oksydazy typu SoxM i oksydazy cytochromu typu bd (The Second Symposium Concerning Metabolic Engineering, Lecture Abstracts, 1999). Wskazuje to, że szlak przenoszenia elektronów z chinonu na cząsteczkę tlenu obejmuje dwa rodzaje szlaków, szlak wykorzystujący kompleks cytochromu bc1 i oksydazy typu SoxM oraz szlak wykorzystujący tylko oksydazę cytochromu typu bd. Uważa się, że pierwszy szlak jest szlakiem przenoszenia elektronów o wysokiej wydajności energetycznej, w którym wartość przeniesienia protonu w odniesieniu do przeniesienia jednego elektronu jest wysoka a drugi szlak jest szlakiem przenoszenia elektronów o niskiej wydajności energetycznej, w którym wartość przeniesienia protonu w odniesieniu do przeniesienia jednego elektronu jest niska.
W przypadku oksydazy końcowej z E. coli, jeśli porównuje się w hodowli tlenowej wzrost zmutowanego szczepu posiadającego tylko oksydazę cytochromu typu bo, ze zmutowanym szczepem mającym tylko oksydazę cytochromu typu bd i dziki szczep mający obie oksydazy, to najniższy wzrost obserwuje się dla zmutowanego szczepu mającego tylko oksydazę cytochromu typu bd i zależy on od rodzaju i wydajności energetycznej oksydazy końcowej (Annual Meeting of the Society for Fermentation i Bioengineering Japan, 1995, Lecture Abstracts, No. 357).
Obserwowano również szczep, który był pozbawiony NDH-I lub oksydazy cytochromowej typu bo związanych z wysoką wydajnością a wykazywał obniżoną wydajność energetyczną (Calhoun i in., Journal of Bacteriology, 175:3020-3925 (1993)).
Jednakże brak jest doniesień, że w wyniku amplifikacji genu kodującego enzymy łańcucha oddechowego zapewniającego wysoką wydajność, takie jak gen kodujący NDH-I i gen kodujący oksydaPL 206 590 B1 zę typu SoxM następowałaby zmiana wydajności energetycznej, co więcej nie jest nawet znana próba wykorzystania tego faktu w produkcji L-aminokwasu. Ponadto, nie przeprowadzono żadnych prób polegających na usunięciu enzymu łańcucha oddechowego o niskiej wydajności energetycznej takiego jak NDH-II i oksydazy cytochromu typu bd, w celu wytworzenia L-aminokwasu.
Do biosyntezy substancji, takich jak L-aminokwasy i kwasy nukleinowe, żywe organizmy potrzebują energii. Na większość używanej energii składa się siła redukująca NADH, NADPH itd. oraz energia gromadzona w postaci ATP. Współtwórcy wynalazku stwierdzili, że zwiększenie dopływu energii zużywanej przy produkcji substancji docelowych sposobami wytwarzania określonych substancji z wykorzystaniem mikroorganizmów, poprawi zdolność wytwarzania tych substancji. Na podstawie tego pomysłu, opracowano wynalazek polegający na skonstruowaniu mikroorganizmu o lepszej wydajności energetycznej i opisano sposób produkowania określonej substancji, L-aminokwasu, z wykorzystaniem tego mikroorganizmu.
Współtwórcy wynalazku stwierdzili, że mikroorganizm o wyższym poziomie wytwarzania energii można skonstruować przez wzmocnienie szlaku łańcucha oddechowego o wysokiej wydajności energetycznej lub upośledzenie szlaku łańcucha oddechowego o niskiej wydajności energetycznej. W szczególności, dla E. coli, szczepy, które uważa się za posiadające lepszą wydajność energetyczną wytworzono przez amplifikację genu kodującego oksydazę cytochromu typu bo jako enzymu łańcucha oddechowego o wysokiej wydajności energetycznej lub usunięcie genu kodującego NDH-II jako enzymu łańcucha oddechowego o niskiej wydajności energetycznej. Następnie, przy ich pomocy wytworzono L-aminokwas i stwierdzono, że wydajność produkcji L-aminokwasu była większa w szczepach, w których ulepszono wydajność energetyczną.
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania L-aminokwasu, w którym wykorzystuje się mikroorganizm wybrany z grupy składającej się z Escherichia coli i bakterii coryneform, obejmujący etapy, w których mikroorganizm hoduje się w pożywce w celu wytworzenia i nagromadzenia L-aminokwasu w pożywce i zbiera się L-aminokwas, charakteryzujący się tym, że mikroorganizm jest szczepem zmutowanym lub szczepem genetycznie zrekombinowanym, w którym aktywność oksydazy cytochromu typu bo, należącej do oksydaz typu SoxM, jest zwiększona w porównaniu ze szczepem niezmodyfikowanym poprzez zwiększenie liczby kopii genu kodującego oksydazę cytochromu typu bo i/lub zamianę promotora genu na silniejszy promotor.
L-aminokwas wybrany jest korzystnie z grupy obejmującej L-lizynę, L-treoninę i L-fenyloalaninę.
Korzystnie oksydaza cytochromu typu bo jest kodowana przez operon cyo.
Korzystnie przez wprowadzenie mutacji w genie kodującym NDH-II lub przez unieczynnienie tego genu pozbawia się funkcji NDH-II w mikroorganizmie.
Jako wybrany mikroorganizm hoduje się E. coli.
Sposób wytwarzania substancji docelowej obejmuje rozwiązanie, w którym dodatkowo szlak łańcucha oddechowego o niskiej wydajności energetycznej jest upośledzony przez mutację lub uszkodzenie genu kodującego enzym wchodzący w skład łańcucha oddechowego. Enzymy łańcucha oddechowego o niskiej wydajności energetycznej obejmują oksydazy cytochromu typu bd, NDH-II lub oba z nich.
Sposób według wynalazku objaśniono na rysunku, na którym:
Fig. 1 przedstawia konstrukcję plazmidu pTS^ndh do wytwarzania szczepu z uszkodzonym genem kodującym NDH-II.
Fig. 2 - konstrukcję pMAN997.
Oprócz L-aminokwasu, który jest otrzymywany zgodnie z wynalazkiem, rozwiązanie to może być stosowane do wytwarzania innej substancji, o ile jest to substancja wytwarzana przez mikroorganizm. Przykłady takich substancji obejmują np. oprócz L-aminokwasów takich jak L-treonina, L-lizyna, kwas L-glutaminowy, L-leucyna, L-izoleucyna, L-walina i L-fenyloalanina również kwasy nukleinowe takie jak kwas guanylowy i kwas inozynowy, witaminy, antybiotyki, czynniki wzrostu, substancje aktywne fizjologicznie itp.
Mikroorganizmem według wynalazku jest mikroorganizm wykazujący zdolność do wytwarzania substancji docelowej, skonstruowany z rodzicielskiego szczepu mikroorganizmu posiadającego jako szlaki łańcucha oddechowego szlak o wysokiej wydajności energetycznej i szlak o niskiej wydajności energetycznej, przy czym zwiększona jest wydajność szlaku łańcucha oddechowego o wysokiej wydajności energetycznej oraz ewentualnie obniżona jest wydajność szlaku łańcucha oddechowego o niskiej wydajności energetycznej.
Na ogół, mikroorganizmy takie jak E. coli i maczugowce (coryneform) mogą wykorzystywać jednocześnie kilka równoległych szlaków łańcucha oddechowego transportujących elektrony i szlaki te
PL 206 590 B1 wykazują bądź wysokie wartości przenoszenia protonów, bądź niskie wartości przenoszenia protonów w przeliczeniu na elektron. Np. u E. coli, w odniesieniu do donora elektronów NADH, obecne są NDH-I i NDH-II jako dehydrogenazy NADH, które katalizują przeniesienie protonu z NADH na pierścień chinonu. NDH-I wykazuje wysoką wydajność energetyczną a NDH-II - niską wydajność energetyczną. To oznacza, że dla NDH-II liczba protonów transportowanych na zewnątrz komórki z jednym elektronem (wartość przeniesienia protonu) wynosi 0, podczas gdy uważa się, że dla NDHI wynosi 2.
Ogólnie, wydajność energetyczna szlaku o wysokiej wartości przeniesienia protonu w przeliczeniu na elektron, jak opisano powyżej, np. szlaku łańcucha oddechowego o wysokiej wydajności energetycznej jest zwiększona a wydajność szlaku łańcucha oddechowego o niskiej wydajności energetycznej jest obniżona. Zwiększenie wydajności szlaku łańcucha oddechowego o wysokiej wydajności energetycznej może być uzyskane poprzez wzmocnienie aktywności enzymu uczestniczącego w szlaku ł a ń cucha oddechowego. Podczas gdy wydajność szlaku ł a ńcucha oddechowego o niskiej wydajności energetycznej może być obniżona przez zmniejszenie lub wyeliminowanie aktywności enzymu łańcucha oddechowego.
Dobór odpowiedniego enzymu łańcucha oddechowego nie podlega szczególnym ograniczeniom, o ile jest to enzym łańcucha oddechowego.
W szczególności, przykłady takich enzymów obejmują dehydrogenazy katalizujące przeniesienie elektronu z donora elektronu na pierścień chinonu, jak ubichinon, dimetylomenachinon i menachinon oraz oksydazy katalizujące przeniesienie elektronu z pierścienia chinonu na donora elektronu.
Oksydazy katalizujące reakcję wytwarzania cząsteczki wody przez przeniesienie elektronu z pierścienia chinonu klasyfikuje się jako enzymy typu SoxM (typ bo) albo typu bd. Wartość przeniesienia protonu przez enzymy typu bo wynosi 2, podczas gdy dla typu bd wynosi 1. Typ bo wykazuje więc większą wydajność energetyczną.
Terminy „wysoka wydajność energetyczna i „niska wydajność energetyczna nie są tu stosowane w znaczeniu bezwzględnym ale rozpatrywane są jako terminy względne.
Poniżej wyjaśniono sposoby zwiększenia aktywności enzymu łańcucha oddechowego o wysokiej wydajności energetycznej oraz sposoby ograniczenia lub wyeliminowania aktywności enzymu łańcucha oddechowego o niskiej wydajności energetycznej.
W celu zwię kszenia aktywności enzymu ł a ńcucha oddechowego o wysokiej wydajnoś ci energetycznej, na przykład tworzy się zrekombinowany DNA przez ligację fragmentu genu kodującego enzym z wektorem działającym w komórce mikroorganizmu, korzystnie z wektorem wielokopijnym i wprowadza się ten wektor do mikroorganizmu transformują c komórki. Dzię ki temu ulega zwi ę kszeniu liczba kopii genu kodującego enzym w komórkach stransformowanego szczepu i w rezultacie, zwiększa się też aktywność enzymatyczna. Ta procedura zostanie wyjaśniona na przykładzie operonu cyo (cyoABCDE), kodującego oksydazę cytochromu typu bo, jako genu kodującego enzym łańcucha oddechowego o wysokiej wydajności energetycznej.
Sekwencja operonu cyo z E. coli została już opublikowana (Chepuri i in., The Journal of Biological Chemistry, 265:11185-11192 (1990)), można więc na jej podstawie sklonować operon. Można też zastosować gen pochodzący z bakterii należącej do rodzaju Escherichia lub gen pochodzący od innego mikroorganizmu, np. operon cyo z maczugowca.
Jako wektor do klonowania genu i wprowadzenia genu do mikroorganizmu, stosuje się np. wektor autonomicznie replikujący się w komórkach E. coli. W szczególności, przykłady wektorów obejmują pUC19, pUC18, pBR322, pHSG299, pHSG298, pHSG399, pHSG398, RSF1010, pSTV29 itd. Do wprowadzenia genu do maczugowca stosuje się wektor wahadłowy korzystnie autonomicznie replikujący się w komórkach maczugowców i E. coli.
Przykłady plazmidów autonomicznie replikujących się w komórkach maczugowców są następujące: pAM 330 (niebadana publikacja patentu japońskiego (Kokai) No. 58-67699) pHM 1519 (niebadana publikacja patentu japońskiego No. 58-77895) pAJ 655 (niebadana publikacja patentu japońskiego No. 58-192900) pAJ 611 (niebadana publikacja patentu japońskiego No. 58-192900) pAJ 1844 (niebadana publikacja patentu japońskiego No. 58-192900) pCG 1 (niebadana publikacja patentu japońskiego No. 57-134500) pCG 2 (niebadana publikacja patentu japońskiego Nr 58-35197) pCG 4 (niebadana publikacja patentu japońskiego Nr 57-183799) pCG 11 (niebadana publikacja patentu japońskiego Nr 57-183799) pHK4 (niebadana publikacja patentu japońskiego Nr 5-7491)
PL 206 590 B1
W celu zligowania fragmentu DNA zawierającego operon cyo z wektorem z wytworzeniem zrekombinowanego DNA, wektor jest wstępnie trawiony enzymem restrykcyjnym dającym końce odpowiadające końcom operonu cyo. Ligację zazwyczaj przeprowadza się stosując ligazę, np. ligazę DNA T4.
Wprowadzenie zrekombinowanego DNA, wytworzonego opisaną metodą, do mikroorganizmu, przeprowadza się dowolnymi znanymi metodami transformacji. Na przykład, stosuje się metodę traktowania komórek biorcy chlorkiem wapnia w celu zwiększenia przepuszczalności dla DNA, co opisano dla E. coli K-12 (Mandel, M, i Higa, A., J. Mol. Biol., 53, 159 (1970)); metoda przygotowania komórek kompetentnych z komórek znajdujących się w fazie wzrostu a następnie wprowadzenie do nich DNA, opisana dla Bacillus subtilis (Duncan, C. H., Wilson, G. A. i Young, F. E., Gene, 1, 153 (1977)). Oprócz tej metody, stosuje się także metody przeprowadzenia komórek biorcy DNA w protoplasty lub sferoplasty, które łatwo pobierają zrekombinowany DNA, po czym tak przygotowany zrekombinowany DNA wprowadza się do komórek, przy czym metoda ta jest odpowiednia dla Bacillus subtilis, Actinomycetes i drożdży (Chang, S. i Choen, S. N., Molec. Gen. Genet., 168, 111 (1979); Bibb, M. J., Ward, J.M. i Hopwood, O. A., Nature, 274, 398 (1978); Hinnen, A., Hicks, J. B. i Fink, G. R., Proc. Natl. Sci., USA, 75, 1929 (1978)). Transformację maczugowców można przeprowadzić metodą impulsu elektrycznego (publikacja niepoddanego badaniu patentu japońskiego 2-207791).
Zwiększenie aktywności oksydazy cytochromu typu bo przeprowadza się przez uzyskanie obecności w chromosomalnym DNA gospodarza wielu kopii operonu cyo. W celu wprowadzenia wielu kopii operonu cyo do chromosomalnego DNA mikroorganizmu, takiego jak bakterie należące do rodzaju Escherichia i maczugowce, przeprowadza się rekombinację homologiczną stosując sekwencję, której wielokrotne kopie występują w chromosomalnym DNA jako sekwencje docelowe. Jako sekwencje, których wielokrotne kopie występują w chromosomalnym DNA, można stosować repetytywny DNA lub odwrócone powtórzenia znajdujące się na końcach elementów transpozonowych. Można również jak ujawniono w niebadanej publikacji patentu japońskiego No. 2-109985, wprowadzać operon cyo do transpozonu, który po przeniesieniu umożliwia wprowadzenie wielokrotnych kopii operonu cyo do chromosomalnego DNA. Każda z tych metod prowadzi do zwiększenia liczby kopii operonu cyo w komórkach stransformowanego szczepu, a w rezultacie uzyskuje się zwiększenie aktywności oksydazy cytochromu typu bo.
Poza wymienioną amplifikacją genu, zwiększenie aktywności oksydazy cytochromu typu bo osiąga się przez zastąpienie sekwencji regulatorowej operonu cyo, np. promotora, silniejszym promotorem (patrz publikacja niebadanego patentu japońskiego No. 1-215280). Jako silne promotory znane są np. promotor lac, promotor trp, promotor trc, promotor tac, promotor PR i promotor PL faga lambda, promotor tet, promotor amyE itd.. Wprowadzenie tych promotorów zwiększa poziom ekspresji operonu cyo a zatem zwiększeniu ulega aktywność oksydazy cytochromu typu bo. Zwiększenie poziomu ekspresji sekwencji regulatorowej może być połączone ze zwiększeniem liczby kopii operonu cyo.
Zwiększenie aktywności enzymu łańcucha oddechowego o wysokiej wydajności energetycznej można też osiągnąć przez wprowadzenie mutacji, zwiększającej wewnątrzkomórkową aktywność enzymu poprzez poddanie procesom mutagennym mikroorganizmu. Przykłady mutacji obejmują mutacje w rejonie kodującym zwiększające specyficzną aktywność enzymu, mutacje w sekwencji regulatorowej zwiększające poziom ekspresji genu itd. Procesy mutagenne obejmują między innymi mutagenizowanie, można wymienić metody wykorzystujące naświetlanie promieniami ultrafioletowymi, traktowanie środkiem mutagennym, zazwyczaj używanym do mutagenezy, takim jak N-metylo-N'-nitro-N-nitrozoguanidyna (NTG) i kwas azotawy.
W celu ograniczenia lub zniesienia aktywnoś ci enzymu w ł a ń cuchu oddechowym o niskiej wydajności energetycznej, do genu kodującego enzym wprowadza się mutację tak, aby wewnątrzkomórkowa aktywność eksprymowanego enzymu uległa obniżeniu lub zniesieniu lub gen w obrębie chromosomu mikroorganizmu uszkadza się tak aby zaburzyć jego prawidłowe funkcjonowanie.
Poniżej wyjaśniono sposób uszkadzania genu na przykładzie genu ndh kodującego NDH-II jako genu enzymu łańcucha oddechowego o niskiej wydajności energetycznej.
Gen ndh klonuje się na podstawie znanej sekwencji ndh z E. coli (Young i in., European Journal of Biochemistry, 116:165-170 (1981)). Można również zastosować gen z innej bakterii z rodzaju Escherichia lub gen pochodzący z innych mikroorganizmów, taki jak gen ndh maczugowców.
Gen ndh w obrębie chromosomu uszkodza się przez transformację mikroorganizmu DNA zawierającym zmodyfikowany gen ndh z delecją w sekwencji kodującej, w celu uzyskania unieczynnionego genu NDH-II (delecja genu typu ndh) i umożliwienie rekombinacji genu typu ndh z delecją z genem ndh na chromosomie. Znany jest sposób unieczynnienia genu przez rekombinację homologiczną
PL 206 590 B1 i istnieją sposoby oparte na liniowym DNA, plazmidzie zawierającym wrażliwy na temperaturę region kontrolujący replikację itd.
Według wynalazku korzystna jest metoda wykorzystująca plazmid zawierający wrażliwy na temperaturę region kontrolujący replikację.
Gen ndh w obrębie chromosomu gospodarza może być zastąpiony w następujący sposób genem typu ndh z delecją. Zrekombinowany DNA wytwarza się przez insercję wrażliwego na temperaturę regionu kontrolującego replikację, genu typu ndh z delecją i genu markerowego niosącego oporność na lek a następnie tak zrekombinowanym DNA transformuje się komórki maczugowca. Następnie, uzyskany szczep transformanta hoduje się w temperaturze, w której wrażliwy na temperaturę region kontrolujący replikację nie funkcjonuje, po czym szczep transformanta można hodować w pożywce zawierającej lek w celu otrzymania szczepu transformanta, w którym zrekombinowany DNA jest włączony do chromosomalnego DNA.
W takim szczepie transformanta, w którym zrekombinowany DNA jest włączony do chromosomalnego DNA, gen typu ndh z delecją ulega rekombinacji z genem ndh pierwotnie obecnym w chromosomie i dwa fuzyjne geny: chromosomalny gen ndh i gen typu ndh z delecją są wbudowane do chromosomu tak, aby pozostałe fragmenty zrekombinowanego DNA (część wektora, wrażliwy na temperaturę region kontrolujący replikację i marker oporności na lek) występowały pomiędzy dwoma genami fuzyjnymi. Zatem, transformant eksprymuje NDH-II, ponieważ prawidłowy gen ndh jest w tym układzie dominujący.
Następnie, w celu pozostawienia w chromosomalnym DNA tylko genu typu ndh z delecją, jedną kopię genu ndh usuwa się razem z częścią wektora (obejmującą wrażliwy na temperaturę region kontrolujący replikację i marker oporności na lek) z chromosomalnego DNA przez rekombinację dwóch genów ndh. W takim przypadku, prawidłowy gen ndh pozostaje na chromosomalnym DNA, a gen typu ndh z delecją ulega wycięciu z chromosomalnego DNA, lub na odwrót, gen typu ndh z delecją pozostaje na chromosomalnym DNA a prawidłowy gen ndh ulega wycięciu z chromosomalnego DNA. W obu przypadkach, wycięty DNA może być zatrzymany w komórce jako plazmid gdy komórkę hoduje się w temperaturze, w jakiej funkcjonuje wrażliwy na temperaturę region kontrolujący replikację. Po czym komórkę hoduje się w temperaturze, w której nie funkcjonuje wrażliwy na temperaturę region kontrolujący replikację. Komórka nie może namnażać się w hodowli, gdy na chromosomalnym DNA pozostał gen typu ndh z delecją, ponieważ plazmid zawierający normalny gen ndh uległ usunięciu z komórki. Z drugiej strony komórka może się namnażać, gdy w obrębie chromosomalnego DNA pozostał normalny gen ndh. Zatem poprzez wybranie takiego szczepu, który może namnażać się w temperaturze, w której funkcjonuje region kontrolujący replikację wrażliwy na temperaturę lecz nie może namnażać się w temperaturze, w której nie funkcjonuje region kontrolujący replikację wrażliwy na temperaturę, może być otrzymany szczep, w którym w obrębie chromosomalnego DNA jest unieczynniony gen hdh, a normalny gen ndh jest przenoszony na plazmidzie.
Gdy szczep z unieczynnionym genem ndh otrzymany jak opisano powyżej hoduje się w temperaturze, w której funkcjonuje region kontrolujący replikację wrażliwy na temperaturę (na przykład w niskiej temperaturze), gen ndh pozostaje w komórce, natomiast gdy szczep ten hoduje się w temperaturze, w której nie funkcjonuje region kontrolujący replikację wrażliwy na temperaturę (na przykład w wysokiej temperaturze), następuje utrata genu ndh.
Otrzymany szczep recA-, z unieczynnionym genem ndh w obrębie chromosomowego DNA, podczas gdy normalny gen ndh jest wbudowany w plazmid, jest korzystnie stosowany jako mikroorganizm według wynalazku, ponieważ podczas hodowli w niskiej temperaturze w szczepie tym nie dojdzie do wbudowania genu ndh obecnego na plazmidzie do chromosomu, a zatem zapewnione jest pominięcie tego genu.
Przykłady wektorów posiadających wrażliwy na temperaturę region inicjacji replikacji u E. coli to np. plazmid pMAN997 opisany w międzynarodowym zgłoszeniu patentowym WO 99/03988 itd., a przykłady wektorów posiadających wraż liwy na temperaturę region inicjacji replikacji u maczugowców obejmują np. plazmid pHSC4 opisany w publikacji niebadanego patentu japońskiego No. 5-7491 itd. Jednakże, jako plazmidy można stosować również inne wektory.
Specyficzne przykłady mikroorganizmów jakie otrzymano opisanym sposobem obejmują mikroorganizmy, których oksydaza typu SoxM lub NDH-I lub obie razem są wzmocnione, mikroorganizmy, których aktywność oksydazy cytochromu typu bd lub NDH-II lub aktywności obu są obniżone lub zniesione oraz mikroorganizmy, których aktywność oksydazy typu SoxM lub NDH-I lub obie są zwiększone i aktywno ść oksydazy cytochromu typu bd lub NDH-II lub aktywnoś ci obu są obniż one lub zniesione.
PL 206 590 B1
Bardziej szczegółowo, przykładem może być E. coli, u której aktywność oksydazy typu SoxM jest zwiększona a NDH-II jest zniesiona. Przykładem oksydaz typu SoxM jest oksydaza cytochromu typu bo.
Nie ma szczególnych ograniczeń jakie mikroorganizmy zostaną użyte według wynalazku, o ile posiadają one wymienione właściwości i przykładem takich bakterii są należące do rodzaju Escherichia, takie jak E. coli, maczugowce takie jak Brevibacterium lactofermentum (Corynebacterium glutamicum), Bacillus, np. Bacillus subtilis, Serratia, np. Serratia marcescens, jak również drożdże np. Saccharomyces cerevisae itd.
W szczególności, jeś li produktem fermentacji jest L-treonina, jako odpowiednie mikroorganizmy można wymienić E. coli VKPM B-3996 (RIA 1867) (jak w amerykańskim opisie patentowym US 5,175,107), Corynebacterium acetoacidophilum AJ12318 (FERM BP-1172) (jak w amerykańskim opisie patentowym US 5,188,949) itd., dla L-lizyny: E. coli AJ11442 (NRRL B-12185, FERM BP-1543) (jak w amerykańskim opisie patentowym US 4,346,170), E. coli W3110 (tyrA) (ten szczep otrzymuje się usuwając plazmid pHATerm z E. coli W3110 (tyrA)/pHATerm (FERM BP-3653), jak opisano w publikacji zgłoszenia mię dzynarodowego WO 95/16042), Brevibacterium lactofermentum AJ12435 (FERM BP-2294) (jak w amerykańskim opisie patentowym US 5,304,476), Brevibacterium lactofermentum AJ3990 (ATCC31269) (jak w amerykańskim opisie patentowym US 4,066,501) itp.; dla kwasu L-glutaminowego: E. coli AJ12624 (FERM BP-3853) (jak w publikacji niebadanego patentu francuskiego FR 2,680,178), Brevibacterium lactofermentum AJ12821 (FERM BP-4172) (publikacja niebadanego patentu japońskiego nr 5-26811, publikacja niebadanego patentu francuskiego FR 2701489), Brevibacterium lactofermentum AJ12475 (FERM BP-2922) (jak w amerykańskim opisie patentowym US 5,272,067), Brevibacterium lactofermentum AJ13029 (jak opisano w międzynarodowym zgłoszeniu patentowym JP95/01586) itd., dla L-leucyny, można wymienić E. coli AJ11478 (FERM P-5274) (jak opisano w publikacji japońskiego zgłoszenia patentowego (Kokoku) nr 62-34397), Brevibacterium lactofermentum AJ3718 (FERM P-2516) (jak w amerykańskim opisie patentowym US 3,970,519) itp., dla L-izoleucyny: E. coli KX141 (VKPM B-4781) (jak opisano w publikacji niebadanego patentu europejskiego EP 519,113), Brevibacterium flavum AJ12149 (FERM BP-759) (jak w amerykańskim opisie patentowym US 4,656,135) itp.; dla L-waliny: E. coli VL1970 (VKPM B-4411) (jak opisano w publikacji niebadanego patentu europejskiego EP 519,113), Brevibacterium lactofermentum AJ12341 (FERM BP-1763) (jak w amerykańskim opisie patentowym US 5,188,948) itp. i dla L-fenyloalaniny można wymienić: E. coli AJ12604 (FERM BP-3579) (jak opisano w publikacji niebadanego patentu japońskiego No. 5-236947, w publikacji niebadanego patentu europejskiego EP 488,424), Brevibacterium lactofermentum AJ12637 (FERM BP-4160) (jak opisano w publikacji niebadanego patentu francuskiego FR 2686898) itd.
W mikroorganizmie zastosowanym wedł ug wynalazku, zależ nie od produkowanego L-aminokwasu, możliwe jest zwiększenie aktywności enzymu uczestniczącego w biosyntezie tej substancji. Co więcej, aktywność enzymu niekorzystna dla wytwarzania substancji docelowej może być zmniejszona lub zniesiona.
Jako pożywkę do wytwarzania L-aminokwasu typowo stosuje się dobrze znaną pożywkę, dobraną do stosowanego mikroorganizmu. Znaczy to, że pożywka może być zwykłą pożywką zawierającą źródło węgla, źródło azotu, jony nieorganiczne, jak również inne składniki organiczne, jeśli to konieczne. Do realizacji wynalazku nie jest potrzebna specjalna pożywka.
Jako źródło węgla można zastosować cukier, na przykład taki jak glukoza, laktoza, galaktoza, fruktoza lub hydrolizat skrobi, alkohol, np. glicerol lub sorbitol, kwasy organiczne, np. kwas fumarowy, kwas cytrynowy lub kwas bursztynowy itd.
Jako źródło azotu, stosuje się nieorganiczne sole amonowe, takie jak siarczan amonu, chlorek amonu lub fosforan amonu, organiczny azot taki jak hydrolizat sojowy, gazowy amoniak, wodny roztwór amoniaku itd.
Pożądane jest zastosowanie dodatkowych substancji, takich jak witamina B1, L-homoseryna i L-tyrozyna lub ekstrakt drożdżowy, w odpowiednich ilościach, jako śladowych organicznych składników pokarmowych, jak w mikronawozach organicznych. Inne związki niż wymienione, takie jak, fosforan potasu, siarczan magnezu, jony żelaza, jony manganu itd. dodaje się w małych ilościach, jeśli to konieczne.
Hodowlę można prowadzić w typowych, dobrze znanych warunkach wybranych zależnie od stosowanego mikroorganizmu. Np. hodowlę korzystnie prowadzi się w warunkach tlenowych przez 16-120 godzin. Temperaturę hodowli korzystnie kontroluje się tak, aby była w przedziale od 25°C do 45°C a pH podczas hodowli utrzymuje się w przedziale od 5-8. Substancje nieorganiczne lub orga8
PL 206 590 B1 niczne, kwasowe lub alkaliczne, jak również gazowy amoniak można stosować w celu uzyskania stosownych wartości pH.
Według wynalazku, do wyodrębnienia wytworzonych produktów z pożywki hodowlanej nie są wymagane żadne specjalne metody. Wynalazek realizuje się łącząc typowe, dobrze znane techniki jonowymienne, techniki wytrącania i inne.
Wynalazek wyjaśniono w następujących przykładach jego wykonania.
P r z y k ł a d 1:
Klonowanie genu kodującego oksydazę cytochromu typu bo
Operon sklonowano na podstawie opisanej w literaturze sekwencji operonu cyo (cyoABCDE) kodującej oksydazę cytochromu typu bo z E. coli (Chepuri i in., The Journal of Biological Chemistry, 265:11185-11192 (1990)).
W szczególności, operon genu cyo otrzymano z biblioteki fagowej Kohary (Kohara i in., Cell, 50:495-508 (1987)) zawierającej operon cyo. Fagowy DNA otrzymano z klonu faga 147[2H5] Kohary zawierającego operon stosując zestaw Wizard lambda prep (Promega). Otrzymany DNA faga 147[2H5] trawiono PshBl i otrzymany fragment o 5,5 kb, zawierający operon cyo po uzyskaniu tępych końców wstawiono w miejsce Smal pMW119 (Nippon Gene) aby sklonować operon cyo zawierający obszar promotora. W otrzymanym plazmidzie operon cyo wstawiono w odwrotnym kierunku w stosunku do promotora operonu laktozowego obecnego w pMW119. Uzyskany plazmid nazwano pMW(CYO)B.
Plazmid pMW(CYO)B wprowadzono do szczepu E. coli W3110 (otrzymanego z National Institute of Genetics/ Mishima, Shizuoka, Japan) tworząc W3110/pMW(CYO)B. Stosując znane metody zmierzono aktywność oksydazy ubichinolu w ekstraktach komórek szczepów W3110 i W3110/pMW(CYO)B jako aktywność oksydazy końcowej (Kita i in., The Journal of Biological Chemistry, 259:3368-3374 (1984)).
Wyniki przedstawiono w Tablicy 1.
T a b l i c a 1: Aktywność oksydazy ubichinolu
| Szczep | Aktywność oksydazy ubichinolu (mmol/min/mg białka) |
| W3110/pMW119 | 0,28 |
| W3110/pMW(CYO)B | 0,56 |
Stwierdzono, że aktywność końcowej oksydazy była wyższa w szczepie z wprowadzonym pMW(CYO)B, jak pokazano w Tablicy 1. Uzyskane zwiększenie aktywności oksydazy uważa się za spowodowane zwiększoną aktywnością oksydazy cytochromu typu bo poprzez zwiększenie aktywności operonu cyo.
P r z y k ł a d 2:
Uzyskanie szczepu pozbawionego NDH-II
W celu wytworzenia szczepu pozbawionego aktywności NDH-II skonstruowano wewnętrznie trawioną częściową sekwencję genu kodującego NDH-II (unieczynniony gen NDH-II). Częściową sekwencję kodującą NDH-II sklonowano korzystając ze znanej sekwencji genu ndh kodującego NDH-II z E. coli (Young i in., European Journal of Biochemistry, 116, 165-170 (1981)).
Szczegółowo, unieczynniony gen kodujący NDH-II wytworzono następująco (Fig. 1): fragment DNA o około 2,4 kb, zawierający częściową sekwencję NDH-II z E. coli zamplifikowano techniką PCR na matrycy chromosomalnego DNA stosując jako startery ndh-1 (SEQ ID NO: 1) i ndh-2 (SEQ ID NO; 2). Ten fragment wklonowano potem do wektora pGEM-T (Promega), tworząc pGEM-ndh. pGEM-ndh trawiono enzymami restrykcyjnymi EcoRI i Stul i otrzymany fragment DNA długości 0,5 kb zebrano i ligowano z pTWV229 (Takara Shuzo) trawionego EcoRI i Smal, tworząc pTWV-ndh.
Następnie pGEM-ndh trawiono enzymem restrykcyjnym Stul, i otrzymany fragment DNA o długości 0,9 kb wbudowano w miejsce HincII pTWV-ndh. Tak otrzymano pTWVΔndh zawierający część polilinkera pTWV229 w częściowej sekwencji ndh. Plazmid pTWVΔndh zawiera sekwencję ndh wbudowaną wraz z sekwencją o 17 bp pochodzącą z pTWV229 w miejscu Stul sekwencji ndh. Następnie fragment o długości 1,5 kb otrzymany w wyniku trawienia pTWVΔndh Hindlll i EcoRI wstawiono pomiędzy Hindlll i EcoRI plazmidu niosącego wrażliwość na temperatury pMAN997 (międzynarodowe zgłoszenie patentowe WO 99/03988), tworząc pTS^ndh. Przeprowadzono rekombinację homologiczną plazmidu pTS^ndh i genomu szczepu W3110 jak dla ndh zwykłymi technikami rekombinacji homologicznej, wykorzystując zależność od temperatury nadaną przez pTS^ndh (Matuyama i in.,
PL 206 590 B1
Journal of Bacteriology, 162:1196 (1985)), tworząc szczep W3110(ndh), nie eksprymujący prawidłowego białka NDH-II, ponieważ do obszaru kodującego ndh w genomie wstawiono sekwencję o 17 bp pochodzącą z pTWV229. Do szczepu W3110(ndh) wprowadzono unieczynniony tyrA z W3110(tyrA), przez transdukcję P1, stosując jako marker oporność na tetracyklinę, tworząc w ten sposób szczep W3110(ndh, tyrA).
Wymieniony pMAN997 otrzymano wymieniając fragment Vspl-Hindlll z pMAN031 (J. Bacteriol., 162, 1196 (1985)) z fragmentem VspI-HindIII z pUC19 (Takara Shuzo) (Fig. 2).
Następnie, ponieważ otrzymywanie szczepu W3110(tyrA) omówiono szczegółowo w publikacji niebadanego europejskiego zgłoszenia patentowego EP 488,424/1992, sposób jego otrzymywania krótko wyjaśniono poniżej.
Szczep E. coli W3110 otrzymano z National Institute of Genetics (Mishima, Shizuoka). Komórki wysiano na szalce z LB uzupełnionym streptomycyną i wybrano szczep tworzący kolonię, otrzymując szczep oporny na streptomycynę. Wybrany oporny na streptomycynę szczep mieszano ze szczepem E. coli K-12 ME8424 i aby indukować koniugację hodowano w pełnej pożywce (pożywka L; 1% Bactotrypton, 0,5% ekstraktu z drożdży, 0,5% NaCl) w temperaturze 37°C przez 15 minut hodowli stacjonarnej. Szczep E. coli K-12 ME8424 ma następujące cechy genetyczne (HfrP045, thi, relA1, tyrA::Tn10, ung-1, nadB) i może być uzyskany z National Institute of Genetics. Następnie hodowlę wysiewano na pożywce pełnej (pożywka L; 1% Bactotrypton, 0,5% ekstraktu z drożdży, 0,5% NaCl, 1,5% agar) zawierającej streptomycynę, tetracyklinę i L-tyrozynę, po czym wybierano szczep tworzący kolonie. Ten szczep określono jako szczep E. coli W3110(tyrA).
W publikacji niebadanego europejskiego zgł oszenia patentowego EP 488,424/1992 ujawniono liczne szczepy otrzymane przez wprowadzenie plazmidu do powyższego szczepu. Przykładowo, szczep otrzymany przez wprowadzenie plazmidu pHATerm, określony jako E. coli W3110 (tyrA) /pHATerm, złożono 16 listopada 1991, w National Institute of Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry (1-3 Higashi 1-Chome, Tsukuba-shi, Baraki-ken, Japan, postal code: 305) (obecnie, niezależna jednostka, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, International Patent Organism Depositary (Chuo Dai-6, 1-1 Higashi 1-Chome, Sukuba-shi, Baraki-ken, Japan, postal code: 305-5466) jako depozyt międzynarodowy zgodny z Traktatem Budapesztańskim i otrzymał numer FERM BP-3653. Szczep E. coli W3110(tyrA) otrzymano typowo eliminując plazmid pHATerm z powyższego szczepu.
P r z y k ł a d 3:
Wytwarzanie L-lizyny
Plazmid pMW(CYO)B otrzymany według przykładu 1 wprowadzono do szczepu W3110(tyrA) i szczepu w3110(ndh, tyrA), otrzymanego w przykładzie 2, tworząc odpowiednio W3110(tyrA)/pMW (CYO)B i W3110(ndA, tyrA)/pMW(CYO)B. Podobnie, pMW119 wprowadzono do W3110(tyrA) tworząc szczep W3110(tyrA)/pMW119. Wytwarzanie L-lizyny przez szczepy W3110(tyrA)/pMW(CYO)B, W3110(ndA, tyrA)/pMW(CYO)3 i W3110 (tyrA)/pMW119 stanowiący kontrolę, oszacowano dla hodowli w kolbie. Hodowlę prowadzono w temperaturze 37°C przez 24 do 48 godzin z wytrząsaniem stosując pożywkę o poniżej podanym składzie. Wyniki przedstawiono w Tablicy 2.
| (Skład pożywki) | |
| Glukoza | 40 g/l |
| MgSO4*7H2O | 1 g/l |
| KH2PO4 | 1 g/l |
| MgSO4*7H2O | 0,01 g/l |
| MgSO4*5H2O | 0,01 g/l |
| ekstrakt drożdżowy (Difco) | 2 g/l |
| L-tyrozyna | 0,1 g/l lub 0,05 g/l |
| pH pożywki doprowadzono do 7,0 stosując KOH i pożywkę autoklawowano w temperaturze |
115°C przez 10 minut. Glukozę i MgSO4*7H2O sterylizowano oddzielnie. Następnie, przed założeniem hodowli, zgodnie z Farmakopeą Japońską do pożywki dodano 30 g/l CaCO3 poddanego uprzednio suchej sterylizacji w 180°C, i 100 μg/l antybiotyku ampicyliny.
PL 206 590 B1
| T a b l i c a 2: Ilość wytworzonej L-lizyny | |
| Szczep | L-Lys (g/l) |
| W3110(tyrA)/pMW119 | 0,29 |
| W3110(tyrA)/pMW(CYO) B | 0,48 |
| W3110(ndA, tyrA)/pMW(CYO) | 0,53 |
Stwierdzono, że nastąpiło zwiększenie wydajności produkcji L-lizyny w E. coli w wyniku zwiększenia aktywności oksydazy cytochromu typu bo. Uważa się, że jest to wynik skuteczniejszego uzyskiwania energii przez zwiększenie produktywności łańcucha oddechowego o wysokiej wydajności energetycznej a uzyskana energia została użyta do wytworzenia L-lizyny.
Stwierdzono także, że nastąpił wzrost wydajności wytwarzania L-lizyny w E. coli z unieczynnionym NDH-II. Sądzi się, że jest to wynik skuteczniejszego uzyskiwania energii wskutek unieczynnienia szlaku łańcucha oddechowego o niskiej wydajności energetycznej a uzyskana energia została użyta do wytworzenia L-lizyny.
P r z y k ł a d 4:
Wytwarzanie L-treoniny
Otrzymany wcześniej opisaną metodą plazmid pMW(CYO)B wprowadzono do bakterii E. coli VKPM B-3996 (RIA 1867) wytwarzającej L-treoninę (jak w amerykańskim opisie patentowym US 5,175,107, dalej opisywany tu jako „szczep B-3996), tworząc szczep B-3996/pMW(CYO)B. Szczep B3996 niósł plazmid pVIC40 (publikacja patentowego zgłoszenia międzynarodowego W090/04636) otrzymany przez wstawienie operonu treoninowego do wektora plazmidowego pAYC32 o szerokim zakresie gospodarzy, zawierającego marker oporności na streptomycynę (jak opisali Chistorerdov, A. Y., Tsygankov, Y. D., Plasmid, 1986, 16, 161-167). Szczep B-3996 zdeponowano w Instytucie Badań Antybiotyków USSR (VNIIA), pod numerem rejestracyjnym RIA1867.
Jako kontrolę otrzymano B-3996/pMW119 wprowadzając pMW119 do B-3996. Wytwarzanie L-treoniny przez B-3996/pMW(CYO) B i B-3996/pMW115 oszacowano dla hodowli prowadzonej w kolbie. Hodowlę prowadzono w temperaturze 37°C przez 38 godzin z mieszaniem przy 114-116 obrotach na minutę w pożywce o składzie wymienionym w Tablicy 3. Przygotowano składniki A, B i C, według Tablicy 3 i sterylizowano oddzielnie, następnie schłodzono i wymieszano w stosunku 16/20 objętości składnika A, 4/20 objętości składnika B i 30 g/l składnika C. Wyniki przedstawiono w Tablicy 4.
T a b l i c a 3: pożywka do produkcji treoniny
| A | (NH4)2SO4 16 g/l KH2PO4 1 g/l FeSO4*7H2O 0,01 mg/l MnOSO4*4H2O 0,01 mg/l Ekstrakt drożdżowy (Difco) 2 mg/l L-izoleucyna 50 mg/l Kwas nikotynowy 10 mg/l pH doprowadzono KOH do 7,0 i autoklawowano w 115°C przez 10 minut (16/20 objętości) |
| B | 20% glukoza autoklawowana w 115°C przez 10 minut (4/20 objętości) MgSO4*7H2O 1 mg/l |
| C | CaCO3 według Farmakopei Japońskiej, poddane suchej sterylizacji w 180°C (30 g/l) Antybiotyki (100 μg/l streptomycyny i 5 μg/l kanamycyny) |
T a b l i c a 4: ilość wytworzonej L-treoniny
| Szczep | L-Thr (g/l) |
| B-3996/pMW119 | 13,1 |
| B-3996/pMW(CYO)B | 14,3 |
Stwierdzono, że wydajność produkcji L-treoniny przez E. coli można podnieść zwiększając aktywność oksydazy cytochromu typ bo.
PL 206 590 B1
P r z y k ł a d 5:
Wytwarzanie L-fenyloalaniny
Plazmid pACMAB wyodrębniono ze szczepu E. coli W3110 (tyrA)/pACMAB, pBR-aroG4 standardowymi metodami oczyszczania plazmidu. Plazmid ten powstał przez wstawienie fragmentu DNA zawierającego uniewrażliwiony gen kodujący mutazę choryzmianu/dehydratazę prefenianu(CM-PDH) głównego szlaku biosyntezy L-fenyloalaniny, w miejsca BamHI i Hindlll wektora plazmiowego pACYC184 (Apr) (jak w publikacji międzynarodowego zgłoszenia patentowego WO 97/08333). Szczep W3110(tyrA)/pACMAB, pBR-aroG4 (oznaczony AJ12604) zdeponowano 28 stycznia 1991 w National Institute of Bioscience and Human Technology Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry (1-3 Higashi 1-Chome, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, Japan, postal code: 305) i otrzymał on numer dostępu FERM P-11975. Następnie został zdeponowany w depozycie międzynarodowym, zgodnie z ustaleniami Traktatu Budapesztańskiego, 26 września 1991, gdzie otrzymał numer dostępu FERM BP-3579.
Plazmid pACMAB cięto Sall uzyskując tępe końce. Następnie wklonowano weń tępo zakończony fragment DNA zawierający operon cyo o długości 5,5 kb, otrzymany z wymienionego wcześniej DNA faga 147[2H5] Kohary przez trawienie PshBI. Powstały plazmid pACMAB-cyo wprowadzono do w3110(tyrA)/pBR-aroG4. Otrzymany szczep transformanta hodowano w pożywce do wytwarzania L-fenyloalaniny (zawierającej 20 g glukozy, 29,4 g wodorofosforanu disodu, 6 g diwodorofosforanu potasu, 1 g chlorku sodu, 2 g chlorku amonu, 10 g cytrynianu sodu, 0,4 g glutaminianu sodu, 3 g siedmiowodnego siarczanu magnezu, 0,23 g chlorku wapnia, 2 mg chlorowodorku tiaminy, i 100 mg L-tyrozyny w 1 l wody, pH 7,0) w 37°C przez 40 godzin. Zawartość L-fenyloalaniny w pożywce określano metodą HPLC.
Wyniki przedstawiono w Tablicy 5.
T a b l i c a 5: Ilość wytwarzanej L-fenyloalaniny
| Szczep | L-Phe (g/l) |
| W3110(fy/A)/pACMAB, pBR-aroG4 | 3,9 |
| W3110(tyrA)/pACKAB-cyo, pBR-aroG4 | 4,2 |
Stwierdzono, że produktywność L-fenyloalaniny przez E. coli ulegała zwiększeniu po zwiększeniu aktywności oksydazy cytochromu typu bo.
Lista sekwencji <110> Ajinomoto Co., Inc.
<120> Sposób wytwarzania L-aminokwasu z wykorzystaniem wybranego mikroorganizmu <130> OP1186 <141> 2000-07-05 <150> JP 2000-204252 <151> 2001-07<160> 2 <170> Patentln Ver. 2.0 <210> 1 <211> 25 <212> DNA <213> Sztuczna sekwencja <220>
<223> Opis sztucznej sekwencji: starter do amplifikacji genu NDH-II (ndh-1) <400> 1 cgatggaagc ttccgcgatt atggg <210> 2 <211> 27 <212> DNA <213> Sztuczna sekwencja <220>
<223> Opis sztucznej sekwencji: starter do amplifikacji genu NDH-II genu (ndh-2) <400> 2 aagcgcggaa ttcgtccttc aatcatc
PL 206 590 B1
Claims (5)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wytwarzania L-aminokwasu, w którym wykorzystuje się mikroorganizm wybrany z grupy skł adają cej się z Escherichia coli i bakterii coryneform, obejmują cy etapy, w których mikroorganizm hoduje się w pożywce w celu wytworzenia i nagromadzenia L-aminokwasu w pożywce i zbiera się L-aminokwas, znamienny tym, że mikroorganizm jest szczepem zmutowanym lub szczepem genetycznie zrekombinowanym, w którym aktywność oksydazy cytochromu typu bo, należącej do oksydaz typu SoxM, jest zwiększona w porównaniu ze szczepem niezmodyfikowanym poprzez zwiększenie liczby kopii genu kodującego oksydazę cytochromu typu bo i/lub zamianę promotora genu na silniejszy promotor.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że oksydaza cytochromu typu bo jest kodowana przez operon cyo.
- 3. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że pozbawia się funkcji NDH-II w mikroorganizmie przez wprowadzenie mutacji w genie kodującym NDH-II lub przez unieczynnienie tego genu.
- 4. Sposób według zastrz. 1 albo 2 albo 3, znamienny tym, że L-aminokwas wybrany jest z grupy obejmującej L-lizynę, L-treoninę i L-fenyloalaninę.
- 5. Sposób według zastrz. 1 albo 2 albo 3 albo 4, znamienny tym, że E. coli hoduje się jako wybrany mikroorganizm.PL 206 590 B1Rysunki pGEM-ndh pTWV-AndhFig. iH/msll ffinai defosforylacja ligacjaΗ!ηά\II wrażliwy na temperaturę plazmid pMAN997Hindll, EcoR IF«)R!. ///radli ligacja wrażliwy na temperaturę plazmid pTSAndh zastosowany do rozerwania ndh fragment PCR zamplifikowany ndh-1 i ndh-2 wklonowany do pGEM-TStu0.9 KbStu IStu I i Eco RłEco Rl, Stu IOS Kb pTWV229 i▼ EcEco Rl, Sme IEco RlPL 206 590 B1Hin d III, trawienie Vsp I Hin d IH, trawienie Vsp I ligacja i [ Amp pMAN997 | ' SacI
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000204252A JP4380029B2 (ja) | 2000-07-05 | 2000-07-05 | 微生物を利用した物質の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL348448A1 PL348448A1 (en) | 2002-01-14 |
| PL206590B1 true PL206590B1 (pl) | 2010-08-31 |
Family
ID=18701548
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL348448A PL206590B1 (pl) | 2000-07-05 | 2001-07-04 | Sposób wytwarzania L-aminokwasu z wykorzystaniem wybranego mikroorganizmu |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US8586334B2 (pl) |
| EP (2) | EP1170376B1 (pl) |
| JP (1) | JP4380029B2 (pl) |
| KR (1) | KR100805644B1 (pl) |
| CN (1) | CN1280419C (pl) |
| AT (2) | ATE501265T1 (pl) |
| AU (1) | AU782560B2 (pl) |
| BR (1) | BRPI0102666B1 (pl) |
| DE (2) | DE60139838D1 (pl) |
| DK (2) | DK2067864T3 (pl) |
| ES (2) | ES2331601T3 (pl) |
| MY (1) | MY127434A (pl) |
| PE (1) | PE20020172A1 (pl) |
| PL (1) | PL206590B1 (pl) |
| RU (1) | RU2238325C2 (pl) |
| TW (1) | TWI238192B (pl) |
Families Citing this family (98)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2175351C2 (ru) | 1998-12-30 | 2001-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | Фрагмент днк из escherichia coli, определяющий повышенную продукцию l-аминокислот (варианты), и способ получения l-аминокислот |
| JP2001046067A (ja) * | 1999-08-04 | 2001-02-20 | Ajinomoto Co Inc | 好熱性バチルス属細菌由来のｌ−リジン生合成系遺伝子 |
| PL341895A1 (en) * | 1999-08-12 | 2001-02-26 | Ajinomoto Kk | Plasmide autonomously replicable in corynebacter bacteria |
| EP1253195B1 (en) * | 2000-01-21 | 2008-10-15 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for producing l-lysine |
| CN1639339B (zh) * | 2002-02-27 | 2011-10-05 | Dsmip资产有限公司 | 发酵方法 |
| WO2004033421A2 (en) | 2002-10-04 | 2004-04-22 | Genencor International, Inc. | Improved production of bacterial strains |
| CA2501574C (en) | 2002-10-04 | 2013-12-03 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Process for the biological production of 1,3-propanediol with high yield |
| BR0304860A (pt) * | 2002-11-11 | 2004-08-31 | Ajinomoto Kk | Método para produzir uma substância alvo pela utilização de uma-bactéria pertencente ao gênero escherichia |
| DE10254074A1 (de) * | 2002-11-19 | 2004-06-17 | Forschungszentrum Jülich GmbH | Verfahren zur mikrobiellen Herstellung von Stoffwechselprodukten |
| BRPI0407600A (pt) * | 2003-02-18 | 2006-02-14 | Metabolic Explorer Sa | processos de preparação de microorganismos evoluìdos e de uma proteìna evoluìda e de biotransformação, gene evoluìdo, proteìna evoluìda, e utilização de um microorganismo evoluìdo ou de uma proteìna evoluìda |
| US7335496B2 (en) * | 2003-06-05 | 2008-02-26 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing target substance |
| PL1651758T3 (pl) | 2003-07-29 | 2009-04-30 | Ajinomoto Kk | Sposób wytwarzania L-lizyny lub L-treoniny przy użyciu bakterii Escherichia o atenuowanej aktywności enzymu jabłczanowego |
| FR2862068B1 (fr) * | 2003-11-06 | 2007-10-12 | Metabolic Explorer Sa | Souches de microorganismes optimisees pour des voies de biosyntheses consommatrices de nadph |
| JP4380305B2 (ja) * | 2003-11-21 | 2009-12-09 | 味の素株式会社 | 発酵法によるｌ−アミノ酸の製造法 |
| MXPA06003775A (es) | 2004-01-30 | 2006-06-14 | Ajinomoto Kk | Microorganismo productor de l-aminoacido y metodo para la produccion de l-aminoacido. |
| EP1724344B1 (en) * | 2004-02-27 | 2011-02-23 | Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. | Process for producing amino acid |
| US7344874B2 (en) * | 2004-03-04 | 2008-03-18 | Ajinomoto Co., Inc. | L-glutamic acid-producing microorganism and a method for producing L-glutamic acid |
| US7300776B2 (en) | 2004-04-26 | 2007-11-27 | Ajinomoto Co., Inc. | L-amino acid-producing bacterium and a method for producing L-amino acid |
| US7482140B2 (en) * | 2004-06-15 | 2009-01-27 | Ajinomoto Co., Inc. | L-tyrosine-producing bacterium and a method for producing L-tyrosine |
| US7205132B2 (en) * | 2004-09-10 | 2007-04-17 | Ajinomoto Co., Inc. | L-glutamic acid-producing microorganism and a method for producing L-glutamic acid |
| US7794989B2 (en) * | 2004-12-28 | 2010-09-14 | Ajinomoto Co., Inc. | L-glutamic acid-producing microorganism and a method for producing L-glutamic acid |
| EP1838726A1 (en) | 2005-01-18 | 2007-10-03 | Ajinomoto Co., Inc. | L-amino acid producing microorganism and a method for producing l-amino acid |
| WO2006129835A1 (en) * | 2005-05-30 | 2006-12-07 | Ajinomoto Co., Inc. | METHOD FOR PRODUCING POLY-gamma-GLUTAMIC ACID AND MICROORGANISM USED IN THE PRODUCTION METHOD |
| US20070004014A1 (en) * | 2005-06-29 | 2007-01-04 | Yuichiro Tsuji | Method for producing l-threonine |
| JP2008283863A (ja) | 2005-08-26 | 2008-11-27 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造方法 |
| JP2007185184A (ja) * | 2005-12-16 | 2007-07-26 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法 |
| WO2007086618A1 (en) | 2006-01-30 | 2007-08-02 | Ajinomoto Co., Inc. | L-amino acid producing bacterium and method of producing l-amino acid |
| JP2009095237A (ja) | 2006-02-02 | 2009-05-07 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2009118740A (ja) | 2006-03-03 | 2009-06-04 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| EP2004803A2 (en) | 2006-03-23 | 2008-12-24 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing an l-amino acid using bacterium of theenterobacteriaceae family with attenuated expression of a gene coding for small rna |
| JP2009060791A (ja) | 2006-03-30 | 2009-03-26 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2009165355A (ja) | 2006-04-28 | 2009-07-30 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸を生産する微生物及びｌ−アミノ酸の製造法 |
| WO2007129465A1 (ja) * | 2006-05-09 | 2007-11-15 | Mitsui Chemicals, Inc. | 補酵素合成強化によるヒドロキシカルボン酸類の生産方法 |
| CN101437949B (zh) | 2006-05-09 | 2012-08-22 | 三井化学株式会社 | 利用辅酶再生进行的羟基羧酸类的生产方法 |
| WO2007136133A1 (en) | 2006-05-23 | 2007-11-29 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family |
| CN101490251B (zh) * | 2006-07-19 | 2016-06-29 | 味之素株式会社 | 使用肠杆菌科细菌产生l-氨基酸的方法 |
| US20080293101A1 (en) * | 2006-07-27 | 2008-11-27 | Peters Matthew W | Engineered microorganisms for increasing product yield in biotransformations, related methods and systems |
| US9562224B2 (en) * | 2006-09-07 | 2017-02-07 | William Marsh Rice University | Reduced activity of ubiCA in E. coli |
| JP2010017081A (ja) * | 2006-10-10 | 2010-01-28 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| EP2094858B1 (en) * | 2006-12-11 | 2015-02-18 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing an l-amino acid |
| RU2006143864A (ru) | 2006-12-12 | 2008-06-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ cynT, cynS, cynX, ИЛИ cynR, ИЛИ ИХ КОМБИНАЦИИ |
| RU2006145712A (ru) * | 2006-12-22 | 2008-06-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Способ получения l-аминокислот методом ферментации с использованием бактерий, обладающих повышенной способностью к утилизации глицерина |
| ES2631360T3 (es) | 2007-01-22 | 2017-08-30 | Ajinomoto Co., Inc. | Microorganismo que produce un L-aminoácido y procedimiento para producir un L-aminoácido |
| JP2010088301A (ja) * | 2007-02-01 | 2010-04-22 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2010110217A (ja) | 2007-02-22 | 2010-05-20 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2010226956A (ja) * | 2007-07-23 | 2010-10-14 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−リジンの製造法 |
| JP2010263790A (ja) * | 2007-09-04 | 2010-11-25 | Ajinomoto Co Inc | アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法 |
| BRPI0816429A2 (pt) | 2007-09-04 | 2019-09-24 | Ajinomoto Kk | microorganismo, e, método para a produção de um l-aminoácido. |
| RU2395579C2 (ru) * | 2007-12-21 | 2010-07-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia |
| JP2011067095A (ja) | 2008-01-10 | 2011-04-07 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法による目的物質の製造法 |
| CN102348806A (zh) | 2008-01-23 | 2012-02-08 | 味之素株式会社 | L-氨基酸的生产方法 |
| RU2008105793A (ru) | 2008-02-19 | 2009-08-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Способ конструирования оперонов, содержащих трансляционно сопряженные гены, бактерия, содержащая такой оперон, способ продукции полезного метаболита и способ мониторинга экспрессии гена |
| JP2011167071A (ja) * | 2008-05-22 | 2011-09-01 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| WO2010027045A1 (ja) | 2008-09-08 | 2010-03-11 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸を生産する微生物及びｌ－アミノ酸の製造法 |
| KR101123213B1 (ko) * | 2008-09-11 | 2012-03-19 | 부산대학교 산학협력단 | 미생물 전자전달계 및 탄소원 대사경로가 재설계된 재조합 대장균 생촉매 |
| JP2012029565A (ja) | 2008-11-27 | 2012-02-16 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2010142200A (ja) | 2008-12-22 | 2010-07-01 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−リジンの製造法 |
| WO2010084995A2 (en) | 2009-01-23 | 2010-07-29 | Ajinomoto Co.,Inc. | A method for producing an l-amino acid |
| JP5521347B2 (ja) | 2009-02-16 | 2014-06-11 | 味の素株式会社 | Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法 |
| BRPI1014661B1 (pt) | 2009-07-29 | 2020-12-15 | Ajinomoto Co., Inc. | Método para produzir um l-aminoácido |
| JP2012223092A (ja) | 2009-08-28 | 2012-11-15 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2013013329A (ja) | 2009-11-06 | 2013-01-24 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| RU2010101135A (ru) | 2010-01-15 | 2011-07-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Бактерия семейства enterobacteriaceae - продуцент l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата, и способ получения l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата |
| RU2460793C2 (ru) | 2010-01-15 | 2012-09-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae |
| JP2013074795A (ja) | 2010-02-08 | 2013-04-25 | Ajinomoto Co Inc | 変異型ｒｐｓＡ遺伝子及びＬ−アミノ酸の製造法 |
| RU2471868C2 (ru) | 2010-02-18 | 2013-01-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | Мутантная аденилатциклаза, днк, кодирующая ее, бактерия семейства enterobacteriaceae, содержащая указанную днк, и способ получения l-аминокислот |
| RU2010122646A (ru) | 2010-06-03 | 2011-12-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия генов, кодирующих транспортер лизина/аргинина/орнитина |
| RU2471870C2 (ru) | 2010-06-03 | 2013-01-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА И L-ЦИТРУЛЛИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА pepA |
| RU2501858C2 (ru) | 2010-07-21 | 2013-12-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae |
| RU2482188C2 (ru) | 2010-07-21 | 2013-05-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ РОДА Escherichia, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ОПЕРОН astCADBE |
| JP2014036576A (ja) | 2010-12-10 | 2014-02-27 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| RU2011134436A (ru) | 2011-08-18 | 2013-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | Способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, обладающей повышенной экспрессией генов каскада образования флагелл и клеточной подвижности |
| JP2015013812A (ja) | 2011-11-01 | 2015-01-22 | 味の素株式会社 | 植物ウイルスの感染抑制剤およびそれを用いた植物ウイルス感染抑制方法 |
| RU2013118637A (ru) | 2013-04-23 | 2014-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ РАЗРЕГУЛИРОВАН ГЕН yjjK |
| WO2014185430A1 (ja) | 2013-05-13 | 2014-11-20 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| HK1221742A1 (zh) * | 2013-07-31 | 2017-06-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | 用於在原核细胞中重组生产多肽的方法 |
| RU2013140115A (ru) | 2013-08-30 | 2015-03-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ НАРУШЕНА ЭКСПРЕССИЯ КЛАСТЕРА ГЕНОВ znuACB |
| JP2016192903A (ja) | 2013-09-17 | 2016-11-17 | 味の素株式会社 | 海藻由来バイオマスからのｌ−アミノ酸の製造方法 |
| ES2761596T3 (es) | 2013-10-02 | 2020-05-20 | Ajinomoto Kk | Aparato de control de amoniaco y método de control de amoniaco |
| RU2013144250A (ru) | 2013-10-02 | 2015-04-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА, КОДИРУЮЩЕГО ФОСФАТНЫЙ ТРАНСПОРТЕР |
| EP2886651B1 (en) | 2013-10-21 | 2018-08-22 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing l-amino acid |
| WO2015060391A1 (ja) | 2013-10-23 | 2015-04-30 | 味の素株式会社 | 目的物質の製造法 |
| RU2015120052A (ru) | 2015-05-28 | 2016-12-20 | Аджиномото Ко., Инк. | Способ получения L-аминокислоты с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия гена gshA |
| WO2017146195A1 (en) | 2016-02-25 | 2017-08-31 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing l-amino acids using a bacterium of the family enterobacteriaceae overexpressing a gene encoding an iron exporter |
| JP7066977B2 (ja) | 2017-04-03 | 2022-05-16 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| EP3861109A1 (en) | 2018-10-05 | 2021-08-11 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing target substance by bacterial fermentation |
| JP7491312B2 (ja) | 2018-12-27 | 2024-05-28 | 味の素株式会社 | 腸内細菌科の細菌の発酵による塩基性ｌ－アミノ酸またはその塩の製造方法 |
| BR112021014194A2 (pt) | 2019-02-22 | 2021-12-28 | Ajinomoto Kk | Método para a produção de um l-aminoácido |
| WO2020204179A1 (en) | 2019-04-05 | 2020-10-08 | Ajinomoto Co., Inc. | Method of producing l-amino acids |
| CN111909917B (zh) * | 2019-05-10 | 2022-10-14 | 中国科学院微生物研究所 | 一种内溶素Lysmeta1及其编码基因与应用 |
| WO2021060438A1 (en) | 2019-09-25 | 2021-04-01 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing l-amino acids by bacterial fermentation |
| AU2020414201B2 (en) * | 2019-12-23 | 2023-10-05 | Cj Cheiljedang Corporation | Microorganism for producing L-amino acid having increased cytochrome C activity, and L-amino acid production method using same |
| CN113106075B (zh) * | 2021-02-25 | 2022-06-14 | 齐鲁工业大学 | 一种细胞色素氧化酶突变体及其应用 |
| KR102654301B1 (ko) * | 2021-06-23 | 2024-04-04 | 씨제이제일제당 주식회사 | NADH:quinone 산화환원효소의 발현이 조절된 재조합 미생물 및 이를 이용한 O-포스포세린, 시스테인 및 이의 유도체의 생산방법 |
| IL316086A (en) | 2022-04-04 | 2024-12-01 | Ajinomoto Kk | Method for controlling parasitic plants |
| JP2024003706A (ja) * | 2022-06-27 | 2024-01-15 | 花王株式会社 | 芳香族化合物の製造方法 |
| KR102922221B1 (ko) | 2023-04-26 | 2026-02-05 | (주)아이에스피 | 제조 공정 중 화학용액 자동 분석 시스템 |
| KR20240171498A (ko) | 2023-05-30 | 2024-12-09 | 주식회사 아이에스피 | 화학 공정 실시간 관리 시스템 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4104124A (en) * | 1976-08-30 | 1978-08-01 | Louisiana State University Foundation | Process for the production of single cell protein and amino acids |
| US4783403A (en) * | 1984-02-08 | 1988-11-08 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing l-phenylalanine |
| US5017483A (en) * | 1986-02-20 | 1991-05-21 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing L-threonine |
| DE4027453A1 (de) * | 1990-08-30 | 1992-03-05 | Degussa | Neue plasmide aus corynebacterium glutamicum und davon abgeleitete plasmidvektoren |
| PL185681B1 (pl) * | 1993-10-28 | 2003-07-31 | Ajinomoto Kk | Sposób wytwarzania L-aminokwasu przy użyciu mikroorganizmu |
| FI980551A7 (fi) * | 1998-03-11 | 1999-09-12 | Valtion Teknillinen | Transformoidut mikro-organismit, joilla on parannettuja ominaisuuksia |
| US6074830A (en) * | 1998-06-09 | 2000-06-13 | E. I. Du Pont De Nemours & Company | 3,4-dihydroxy-2-butanone 4-phosphate synthase |
| JPH11346776A (ja) * | 1998-06-11 | 1999-12-21 | Ajinomoto Co Inc | ブレビバクテリウム・ラクトファーメンタムのシトクロムｂｄ型キノールオキシダーゼ遺伝子 |
| RU2144565C1 (ru) * | 1998-11-12 | 2000-01-20 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Рекомбинантная плазмидная днк pq_f35, кодирующая гибридный полипептид f 35, обладающий антигенными и иммуногенными свойствами белка vp 35 вируса марбург, способ ее получения и штамм бактерий escherichia coli - сверхпродуцент рекомбинантного полипептида f 35 |
| US7220571B2 (en) * | 2000-09-28 | 2007-05-22 | Archer-Daniels-Midland Company | Escherichia coli strains which over-produce L-threonine and processes for the production of L-threonine by fermentation |
| AU2004286207B2 (en) * | 2003-10-21 | 2011-02-24 | Cargill, Incorporated | Production of monatin and monatin precursors |
-
2000
- 2000-07-05 JP JP2000204252A patent/JP4380029B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-07-02 EP EP01116050A patent/EP1170376B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 AT AT09003058T patent/ATE501265T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-07-02 ES ES01116050T patent/ES2331601T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 AU AU54169/01A patent/AU782560B2/en not_active Expired
- 2001-07-02 AT AT01116050T patent/ATE442453T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-07-02 ES ES09003058T patent/ES2360174T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 DK DK09003058.6T patent/DK2067864T3/da active
- 2001-07-02 DE DE60139838T patent/DE60139838D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 EP EP09003058A patent/EP2067864B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 DK DK01116050T patent/DK1170376T3/da active
- 2001-07-02 DE DE60144205T patent/DE60144205D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-03 MY MYPI20013161A patent/MY127434A/en unknown
- 2001-07-04 PL PL348448A patent/PL206590B1/pl unknown
- 2001-07-04 PE PE2001000664A patent/PE20020172A1/es not_active Application Discontinuation
- 2001-07-04 KR KR1020010039675A patent/KR100805644B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-04 RU RU2001118542A patent/RU2238325C2/ru active
- 2001-07-04 BR BRPI0102666A patent/BRPI0102666B1/pt active IP Right Grant
- 2001-07-05 CN CNB01125954XA patent/CN1280419C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-05 US US09/897,988 patent/US8586334B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-05 TW TW090116463A patent/TWI238192B/zh not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-10-16 US US14/055,302 patent/US20140045219A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1170376B1 (en) | 2009-09-09 |
| AU782560B2 (en) | 2005-08-11 |
| RU2238325C2 (ru) | 2004-10-20 |
| US20020160461A1 (en) | 2002-10-31 |
| US8586334B2 (en) | 2013-11-19 |
| BRPI0102666B1 (pt) | 2017-05-02 |
| AU5416901A (en) | 2002-01-10 |
| BR0102666A (pt) | 2002-02-26 |
| TWI238192B (en) | 2005-08-21 |
| DK2067864T3 (da) | 2011-06-27 |
| ES2360174T3 (es) | 2011-06-01 |
| EP2067864B1 (en) | 2011-03-09 |
| DE60144205D1 (de) | 2011-04-21 |
| EP2067864A1 (en) | 2009-06-10 |
| JP2002017363A (ja) | 2002-01-22 |
| CN1335401A (zh) | 2002-02-13 |
| PE20020172A1 (es) | 2002-03-22 |
| US20140045219A1 (en) | 2014-02-13 |
| PL348448A1 (en) | 2002-01-14 |
| DK1170376T3 (da) | 2009-12-14 |
| CN1280419C (zh) | 2006-10-18 |
| MY127434A (en) | 2006-12-29 |
| KR100805644B1 (ko) | 2008-02-26 |
| ES2331601T3 (es) | 2010-01-11 |
| ATE501265T1 (de) | 2011-03-15 |
| JP4380029B2 (ja) | 2009-12-09 |
| KR20020005441A (ko) | 2002-01-17 |
| DE60139838D1 (de) | 2009-10-22 |
| ATE442453T1 (de) | 2009-09-15 |
| EP1170376A1 (en) | 2002-01-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL206590B1 (pl) | Sposób wytwarzania L-aminokwasu z wykorzystaniem wybranego mikroorganizmu | |
| JP3106501B2 (ja) | Ｌ−リジンの製造法 | |
| JP4207426B2 (ja) | Ｌ−リジンの製造法 | |
| KR100823044B1 (ko) | 트레오닌 및 이소류신의 제조방법 | |
| JP4380305B2 (ja) | 発酵法によるｌ−アミノ酸の製造法 | |
| EP0811682A2 (en) | Method of producing L-lysine | |
| JP3861290B2 (ja) | ストレス耐性微生物及び発酵生産物の製造法 | |
| JPWO2001053459A1 (ja) | Ｌ−リジンの製造法 | |
| EP1484410A1 (en) | Fermentation methods and genetically modified bacteria with increased substrate and byproduct uptake. | |
| EP0834559B1 (en) | Process for producing l-lysine by fermentation | |
| US7163810B2 (en) | Method for producing target substance | |
| US20050106688A1 (en) | Method for producing L-amino acid | |
| WO2001005959A1 (fr) | Obtention d'une substance cible par un procede de fermentation | |
| JP2000050894A (ja) | 発酵生産物の製造法及びストレス耐性微生物 | |
| WO2001005979A1 (en) | Process for producing target substance by fermentation method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RECP | Rectifications of patent specification | ||
| RECP | Rectifications of patent specification |