RS57531B1

RS57531B1 - Derivati eksendina-4 kao dualni glp1/gip- ili trigonalni glp1/gip/glukagon agonisti

Info

Publication number: RS57531B1
Application number: RS20180942A
Authority: RS
Inventors: Torsten Haack; Michael Wagner; Bernd Henkel; Siegfried Stengelin; Andreas Evers; Martin Lorenz; Katrin Lorenz
Original assignee: Sanofi Sa
Priority date: 2012-12-21
Filing date: 2013-12-19
Publication date: 2018-10-31
Also published as: KR20150099548A; UY35232A; US9745360B2; CY1121153T1; EP2934566A1; ECSP15031141A; US20140221281A1; IL238650A0; CN104902919B; EP2934567B1; UY35231A; EP2934567B9; HUE035803T2; HK1213483A1; WO2014096148A1; JP2016503772A; EP2934566B1; UY35233A; IL238623A0; MX2015008077A

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na analoge ekstendin-4 peptida koji aktiviraju glukagonu slični peptid 1 (GLP-1) i glukozno-zavisni insulinotropni polipeptid (GIP) receptor i opciono receptor glukagona (GCG) i njihovu medicinsku upotrebu, na primer kod tretmana poremećaja metaboličkog sindroma, uključujući dijabetes i gojaznost, kao i smanjenje unosa hrane.

STANJE TEHNIKE

[0002] Eksendin-4 je 39 aminokiselinski peptid koji proizvode pljuvačne žlezde Gila monstruma (Heloderma suspectum) (Eng J. i dr., J. Biol. Chem., 267:7402-05,1992).

Eksendin-4 je aktivator glukagonu sličnog peptid 1 (GLP-1) receptora, dok pokazuje samo veoma nisku aktivaciju GIP receptora i ne aktivira receptor glukagona (pogledati Tabelu 1). Tabela 1: Potencijali eksendina-4 kod ljudskih GLP-1, GIP i Glukagon receptora (naznačeno u pM) pri rastućim koncentracijama i merenju formiranog cAMP kako je opisano u postupcima.

[0003] Eksendin-4 deli mnoge glukokoregulatorne aktivnosti primećene kod GLP-1. Kliničke i nekliničke studije su pokazale da eksendin-4 ima nekoliko korisnih antidijabetičkih osobina, uključujući poboljšanje sinteze i lučenja insulina zavisnih od glukoze, suzbijanje lučenja glukagona zavisnog od glukoze, usporavanje pražnjenja želuca, smanjenje unosa hrane i telesne težine i povećanje mase beta ćelija i markera funkcije beta ćelija (Gentilella R i dr., Diabetes Obes Metab., 11:544-56, 2009; Norris SL i dr., Diabet Med., 26:837-46, 2009; Bunck MC i dr., Diabetes Care., 34:2041-7, 2011).

[0004] Ovi efekti su korisni ne samo za dijabetičare već i za pacijente sa gojaznošću.

Pacijenti sa gojaznošću imaju veći rizik od dijabetesa, hipertenzije, hiperlipidemije, kardiovaskularnih i muskuloskeletnih bolesti.

[0005] U odnosu na GLP-1 i GIP, eksendin-4 je otporniji na cepanje sa dipeptidil peptidazom-4 (DPP4) što rezultuje dužim poluživotom i trajanjem delovanja in vivo (Eng J., Diabetes, 45 (Suppl 2):152A (abstract 554), 1996; Deacon CF, Horm Metab Res, 36: 761-5, 2004).

[0006] Eksendin-4 se takođe pokazao mnogo stabilnijim prema degradaciji pomoću neutralne endopeptidaze (NEP), u poređenju sa GLP-1, glukagonom ili oksintomodulinom (Druce MR i dr., Endocrinology, 150(4), 1712-1721, 2009).

[0007] Ipak, eksendin-4 je hemijski labilan zbog oksidacije metionina na položaju 14 (Hargrove DM i dr., Regul. Pept., 141: 113-9, 2007), kao i zbog deamidacije i izomerizacije asparagina na položaju 28 (WO 2004/035623).

[0008] Aminokiselinska sekvenca eksendin-4 je prikazana kao SEQ ID NO: 1:

HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2

[0009] Aminokiselinska sekvenca GLP-1 (7-36)-amida je prikazana kao SEQ ID NO: 2: HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-NH2

[0010] Liraglutid je tržišni hemijski modifikovan GLP-1 analog u kom je, između ostalih modifikacija, masna kiselina povezana sa lizinom na položaju 20 što dovodi do produženog trajanja delovanja (Drucker DJ i dr., Nature Drug Disc. Rev.9, 267-268, 2010; Buse, JB i dr., Lancet, 374:39-47, 2009).

[0011] Aminokiselinska sekvenca Liraglutida je prikazana kao SEQ ID NO: 3:

HAEGTFTSDVSSYLEGQAAK((S)-4-karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril-) EFIAWLVRGRG-OH

[0012] GIP (glukozno-zavisni insulinotropni polipeptid) je 42 aminokiselinski peptid koji se oslobađa od crevnih K-ćelija nakon unosa hrane. GIP i GLP-1 su dva stomačna hormona izvedena iz enteroendokrinih ćelija koja uzrokuju inkretinski efekat, što čini više od 70% odgovora insulina na oralni izazov glukozni (Baggio LL, Drucker DJ. Biology of incretins: GLP-1 and GIP. Gastroenterology 2007; 132: 2131-2157).

[0013] GIP aminokiselinska sekvenca je prikazana kao SEQ ID NO: 4:

YAEGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQKGKKNDWKHNITQ-OH

[0014] Glukagon je 29-aminokiselinski peptid koji se oslobađa u krvotok kada je cirkulacija glukoze niska. Glukagonova aminokiselinska sekvenca je prikazana u SEQ ID NO: 5:

HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT-OH

[0015] Tokom hipoglikemije, kada nivo glukoze u krvi pada ispod normale, glukagon signalizira jetru da razbije glikogen i oslobodi glukozu, što dovodi do povećanja nivoa glukoze u krvi kako bi se dostigao normalan nivo. Hipoglikemija je uobičajeni sporedni efekat pacijenata sa hiperglikemijom koji se tretiraju insulinom (povišeni nivo glukoze u krvi) zbog dijabetesa. Prema tome, najvažnija uloga glukagona u regulaciji glukoze je da se suprotstavi dejstvu insulina i održi nivo glukoze u krvi.

[0016] Holst (Holst, J. J. Physiol. Rev. 2007, 87, 1409) i Meier (Meier, J. J. Nat. Rev.

Endocrinol. 2012, 8, 728) opisuju da agonisti receptora GLP-1, kao što su GLP-1, liraglutid i eksendin-4, poboljšavaju kontrolu glikemije kod pacijenata sa T2DM smanjujući glukozu posta i postprandijalnu glukozu (FPG i PPG). Peptidi koji se vezuju i aktiviraju receptor GLP-1 opisani su u patentnim prijavama WO1998008871, WO2008081418 i WO2008023050.

[0017] WO 2008/081418 A1 opisuje glukagonu slična jedinjenja koja cilja protein-1 receptor, koja sadrže agens-veznik konjugate za vezivanje GLP-1 receptora koji su povezani sa mestom kombinovanja antitela, kao i upotrebu takvih jedinjenja uključujući postupke za sprečavanje ili lečenje dijabetesa ili stanja povezanih sa dijabetesom.

[0018] WO 2008/023050 A1 se odnosi na terapeutske peptide izvedene iz eksendina-4, gde se jedan lizin derivatizuje kako bi se dobio acilovani ostatak lizina.

[0019] Opisano je da dvojna aktivacija GLP-1 i GIP receptora, npr. kombinujući postupke GLP-1 i GIP u jednoj pripremi, dovodi do terapijskog principa sa znatno boljim smanjenjem nivoa glukoze u krvi, povećanom sekrecijom insulina i smanjenom telesnom težinom kod miševa sa T2DM i gojaznošću u poređenju sa tržišnim agonistom liraglutida GLP-1 (na primer VA Gault i dr., Clin Sci (Lond), 121, 107-117, 2011). Prirodni GLP-1 i GIP su dokazani kod ljudi nakon ko-infuzije za interakciju na aditivan način uz značajno povećan insulinotropni efekat u poređenju sa samim GLP-1 (MA Nauck i dr., J. Clin. Endocrinol. Metab., 76, 912-917, 1993).

[0020] Dizajniranje hibridnih molekula koji kombinuju agonizam na GLP-1 receptoru, GIP receptor i glukagon receptor pružaju terapeutski potencijal da postignu značajno bolje smanjenje nivoa glukoze u krvi, povećanu sekreciju insulina i još izraženiji značajan efekat na smanjenje telesne težine u poređenju sa tržišnim agonistom liraglutida GLP-1 (npr VA Gault i dr., Clin Sci (Lond), 121, 107-117, 2011).

[0021] Jedinjenja ovog pronalaska su derivati eksendina-4, koji pokazuju agonističku aktivnost na GLP-1 i GIP receptoru i opciono glukagon receptoru i koji su - između ostalog -poželjno sledeće modifikacije: Tyr na položaju 1 i Ile na položaju 12.

[0022] Iznenađujuće je utvrđeno da modifikacija selektivnog GLP-1R agonista Eksendina-4 Tyr na položaju 1 i Ile na položaju 12 dovodi do peptida sa visokom dualnom aktivnošću na GLP-1 i GIP receptorima. Ovo zapažanje je iznenađujuće, pošto ista modifikacija na drugim agonistima GLP-1, kao što je GLP-1, ne rezultuje visokom aktivnošću na GIP receptoru, kao što je prikazano u Tabeli 2.

Tabela 2: Potencijali eksendina-4 i GLP-1 peptidnih analoga na GLP-1 i GIP receptorima (naznačeno u pM) pri rastućim koncentracijama i merenju formiranog cAMP-a kao što je opisano u Postupcima.

[0023] Peptidi koji se vezuju i aktiviraju GIP i GLP-1 receptor i opciono glukagon receptor i poboljšavaju kontrolu glikemije, suzbijaju povećanje telesne težine i smanjuju unos hrane opisani su u patentnim prijavama WO 2011/119657 A1, WO 2012/138941 A1, WO 2010/011439 A2, WO 2010/148089 A1, WO 2011/094337 A1, WO 2012/088116 A2. Ove prijave obelodanjuju da mešani agonisti GLP-1 receptora, GIP receptora i opciono glukagon receptora mogu biti dizajnirani kao analozi prirodnih GIP ili glukagonskih sekvenci.

[0024] Jedinjenja ovog pronalaska su eksendin-4 peptidni analozi koji sadrže leucin na položaju 10 i glutamin na položaju 13. Krstenansky i dr. (Biochemistry, 25, 3833-3839, 1986) pokazuju značaj ostataka 10 do 13 glukagona za interakcije receptora i aktivaciju adenilat ciklaze. U analozima eksendin-4 peptida ovog pronalaska, nekoliko od navedenih ostataka se razlikuju od navedenog glukagona. Naročito, ostaci Tyr10 i Tyr13 zamenjuju se leucinom na položaju 10 i glutaminom, nearomatičnom polarnom aminokiselinom, na položaju 13. Ova zamena, posebno u kombinaciji sa izoleucinom na položaju 23 i glutamatom na položaju 24 dovodi do eksendin-4 derivata sa potencijalno poboljšanim biofizičkim osobinama kao što su rastvorljivost ili ponašanje agregacije u rastvoru.

Nekonzervativna zamena aromatične aminokiseline sa polarnom aminokiselinom na položaju 13 analoga eksendina-4 iznenađujuće dovodi do peptida sa visokom aktivnošću na GIP receptoru i opciono na glukagon receptoru.

[0025] Osim toga, jedinjenja ovog pronalaska su derivati eksendina-4 sa acilovanim ostacima masnih kiselina na položaju 14. Ova funkcionalizacija masne kiseline na položaju 14 dovodi do poboljšanog farmakokinetičkog profila. Iznenađujuće, funkcionalizacija masnih kiselina na položaju 14 takođe dovodi do peptida sa značajno većom GIPR aktivnošću, na primer onom prikazanom u Primeru 9, Tabela 8.

KRATAK PREGLED PRONALASKA

[0026] Ovde su navedeni analozi eksendina-4 koji potentno aktiviraju GLP-1 i GIP receptor i opciono glukagon receptor. Kod ovih analoga eksendina-4 - među ostalim supstitucijama -metionin na položaju 14 zamenjen je aminokiselinom koja nosi -NH2grupu u bočnom lancu, koja je dalje supstituisana lipofilnim bočnim lancem (npr. masnom kiselinom koja je opciono kombinovana sa veznikom).

[0027] Pronalazak pruža peptidno jedinjenje koje ima formulu (I):

R<1>- Z - R<2>(I)

gde je Z peptidni deo koji ima formulu (II)

Tyr-Aib-X3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-X12-Gln-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-X28-X29-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-X40 (II)

X3 predstavlja Glu,

X12 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ile i Lys,

X14 predstavlja aminokiselinski ostatak koji ima bočni lanac sa -NH2grupom, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa -C(O)-R<5>, gde R<5>može biti deo koji

sadrži do 50 ili do 100 atoma ugljenika i opciono heteroatoma izabranih od halogena, N, O, S i/ili P,

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser, Lys, Glu i Gln,

X17 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Arg, Lys, Glu, Gln, Leu, Aib, Tyr i Ala,

X18 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala i Arg,

X19 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala i Val,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln, Aib, Lys i His,

X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp, Glu i Leu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly, Thr i D-Ala,

X40 je odsutan ili predstavlja Lys,

R<1>predstavlja NH2,

R<2>predstavlja OH ili _NH2.

ili njegova so ili solvat.

[0028] Jedinjenja iz ovog pronalaska su agonisti GLP-1 i GIP receptora i opciono agonisti glukagon receptora, i utvrđeno je posmatranjem da su sposobni da stimulišu intracelularnu formaciju cAMP-a. Određivanje potencijala in vitro u ćelijskim analizama agonista kvantifikuje se određivanjem koncentracija koje uzrokuju 50% aktivaciju maksimalnog odgovora (EC50) kao što je opisano u Postupcima.

[0029] U određenim otelotvorenjima, pronalazak stoga pruža peptidno jedinjenje koje ima formulu (I):

R<1>- Z - R<2>(I)

gde je Z peptidni deo koji ima formulu (II)

X3 predstavlja Glu,

X12 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ile i Lys,

X14 predstavlja aminokiselinski ostatak koji ima bočni lanac sa -NH2grupom, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa -C(O)-R<5>, gde je R<5>deo koji sadrži do 50 ili do 100 atoma ugljenika i opciono heteroatoma izabranih od halogena, N, O, S i/ili P,

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser, Lys, Glu i Gln,

X18 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala i Arg,

X19 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala i Val,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln, Aib, Lys i His,

X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp, Glu i Leu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly, Thr i D-Ala,

X40 je odsutan ili predstavlja Lys,

R<1>predstavlja NH2,

R<2>predstavlja OH ili NH2.

ili njegova so ili solvat, gde peptidno jedinjenje ima relativnu aktivnost od barem 0,04%, poželjno barem 0,08%, poželjnije barem 0,2% u poređenju sa onom od prirodnog GIP na GIP receptoru.

[0030] Pored toga, peptidno jedinjenje, posebno sa lizinom na položaju 14, koji je dalje supstituisan lipofilnim ostatkom, pokazuje relativnu aktivnost od najmanje 0,07%, poželjno najmanje 0,1%, poželjnije najmanje 0,14%, poželjnije najmanje 0,35% i još poželjnije najmanje 0,4% u poređenju sa GLP-1 (7-36) na receptoru GLP-1.

[0031] Pored toga, peptidno jedinjenje, posebno sa lizinom na položaju 14, koji je dalje supstituisan sa lipofilnim ostatkom, pokazuje relativnu aktivnost od najmanje 0,04% (tj. EC50<1000 pM), poželjnije 0,08% (tj. EC50<500 pM) i još poželjnije 0,2% (tj. EC50<200 pM) u odnosu na prirodni GIP na GIP receptoru (EC50= 0,4 pM).

[0032] Opciono, u nekim otelotvorenjima, peptidno jedinjenje, posebno sa lizinom na položaju 14, koji je dalje supstituisan lipofilnim ostatkom, pokazuje relativnu aktivnost od najmanje 0,1%, poželjno najmanje 0,2%, poželjnije najmanje 0,3%, poželjnije najmanje 0,4%, a još poželjnije najmanje 0,5% u poređenju sa prirodnim glukagonom na receptoru glukagon.

[0033] Izraz „aktivnost“, kad se ovde koristi, poželjno se odnosi na sposobnost jedinjenja za aktivaciju ljudskog GLP-1 receptora, ljudskog GIP receptora i opciono ljudskog glukagon receptora. Poželjnije, izraz „aktivnost“ kad se ovde koristi odnosi se na sposobnost jedinjenja da stimuliše intracelularnu formaciju cAMP-a. Pod pojmom „relativna aktivnost“ kad se ovde koristi, podrazumeva se sposobnost jedinjenja da aktivira receptor u određenom odnosu u poređenju sa drugim agonista receptora ili u odnosu na drugi receptor. Aktivacija receptora od strane agonista (npr. merenjem nivoa cAMP) određuje se kako je ovde opisano, npr. kao što je opisano u primerima.

[0034] Prema jednom otelotvorenju, jedinjenja pronalaska imaju EC50za hGLP-1 receptor 500 pM ili manje, poželjno 200 pM ili manje; poželjnije 150 pM ili manje, poželjnije 100 pM ili manje, poželjnije 90 pM ili manje, poželjnije 80 pM ili manje, poželjnije 70 pM ili manje, poželjnije 60 pM ili manje, poželjnije 50 pM ili manje, poželjnije 40 pM ili manje, poželjnije 30 pM ili manje, i poželjnije 20 pM ili manje.

[0035] Prema jednom otelotvorenju, jedinjenja pronalaska imaju EC50za hGIP receptor 500 pM ili manje, poželjno 200 pM ili manje; poželjnije 150 pM ili manje, poželjnije 100 pM ili manje, poželjnije 90 pM ili manje, poželjnije 80 pM ili manje, poželjnije 70 pM ili manje, poželjnije 60 pM ili manje, poželjnije 50 pM ili manje, poželjnije 40 pM ili manje, poželjnije 30 pM ili manje, i poželjnije 20 pM ili manje.

[0036] Prema drugom otelotvorenju, jedinjenja pronalaska opciono imaju EC50za hGlukagon receptor 500 pM ili manje, poželjno 200 pM ili manje; poželjnije 150 pM ili manje, poželjnije 100 pM ili manje, poželjnije 90 pM ili manje, poželjnije 80 pM ili manje, poželjnije 70 pM ili manje, poželjnije 60 pM ili manje, poželjnije 50 pM ili manje, poželjnije 40 pM ili manje, poželjnije 30 pM ili manje, i poželjnije 20 pM ili manje.

[0037] Prema drugom otelotvorenju, jedinjenja pronalaska imaju EC50za hGLP-1 receptor 500 pM ili manje, poželjno 200 pM ili manje; poželjnije 150 pM ili manje, poželjnije 100 pM ili manje, poželjnije 90 pM ili manje, poželjnije 80 pM ili manje, poželjnije 70 pM ili manje, poželjnije 60 pM ili manje, poželjnije 50 pM ili manje, poželjnije 40 pM ili manje, poželjnije 30 pM ili manje, i poželjnije 20 pM ili manje, i/ili EC50za hGIP receptor 500 pM ili manje, poželjno 200 pM ili manje; poželjnije 150 pM ili manje, poželjnije 100 pM ili manje, poželjnije 90 pM ili manje, poželjnije 80 pM ili manje, poželjnije 70 pM ili manje, poželjnije 60 pM ili manje, poželjnije 50 pM ili manje, poželjnije 40 pM ili manje, poželjnije 30 pM ili manje, i poželjnije 20 pM ili manje, i/ili opciono EC50za hGlukagon receptor 500 pM ili manje, poželjno 200 pM ili manje; poželjnije 150 pM ili manje, poželjnije 100 pM ili manje, poželjnije 90 pM ili manje, poželjnije 80 pM ili manje, poželjnije 70 pM ili manje, poželjnije 60 pM ili manje, poželjnije 50 pM ili manje, poželjnije 40 pM ili manje, poželjnije 30 pM ili manje, i poželjnije 20 pM ili manje.

[0038] U drugom otelotvorenju, EC50za oba receptora, tj. za hGLP-1 receptor i za hGIP receptor, je 500 pM ili manje, poželjnije 200 pM ili manje, poželjnije 150 pM ili manje, poželjnije 100 pM ili manje, poželjnije 90 pM ili manje, poželjnije 80 pM ili manje, poželjnije 70 pM ili manje, poželjnije 60 pM ili manje, poželjnije 50 pM ili manje, poželjnije 40 pM ili manje, poželjnije 30 pM ili manje, poželjnije 20 pM ili manje.

[0039] U drugom otelotvorenju, EC50za sva tri receptora, tj. za hGLP-1 receptor, za hGIP receptor i za hGlukagon receptor, je 500 pM ili manje, poželjnije 200 pM ili manje, poželjnije 150 pM ili manje, poželjnije 100 pM ili manje, poželjnije 90 pM ili manje, poželjnije 80 pM ili manje, poželjnije 70 pM ili manje, poželjnije 60 pM ili manje, poželjnije 50 pM ili manje, poželjnije 40 pM ili manje, poželjnije 30 pM ili manje, poželjnije 20 pM ili manje.

[0040] EK50za hGLP-1 receptor, hGIP receptor i hGlukagon receptor mogu se odrediti kako je opisano u postupcima ovde i kako se koriste za generisanje rezultata opisanih u Primeru 9.

[0041] Jedinjenja iz ovog pronalaska imaju mogućnost smanjivanja probavnog perioda, povećanja gastričnog sadržaja i/ili smanjenja unosa hrane pacijenta. Ove aktivnosti jedinjenja prema pronalasku mogu se proceniti u modelima životinja poznatim stručnjaku i takođe su opisani ovde u Postupcima. Rezultati takvih eksperimenata su opisani u Primerima 11 i 12. Poželjna jedinjenja iz ovog pronalaska mogu povećati gastrični sadržaj kod miševa, poželjno ženki NMRI-miševa, ako se primenjuju kao pojedinačna doza, poželjno potkožna doza, od 0,02 mg/kg telesne težine, za najmanje 25%, poželjnije za najmanje 30%, poželjnije za najmanje 40%, poželjnije za najmanje 50%, poželjnije za najmanje 60%, poželjnije za najmanje 70%, još poželjnije za najmanje 80%.

[0042] Poželjno, ovaj rezultat se meri 1 sat nakon primene odgovarajućeg jedinjenja i 30 minuta nakon primene bolusa i/ili smanjuje probavni period miševa, poželjno ženki NMRI-miševa, ako se primenjuje kao pojedinačna doza, poželjno potkožna doza, od 0,02 mg/kg telesne težine, najmanje za 45%; poželjnije za najmanje 50%, poželjnije za najmanje 55%, poželjnije za najmanje 60%, a još poželjnije najmanje 65%; i/ili smanjuje unos hrane miševa, poželjno ženki NMRI-miševa, tokom perioda od 22 sata, ako se primenjuje kao pojedinačna doza, poželjno potkožna doza od 0,01 mg/kg telesne težine, za najmanje 10%, poželjnije 15% , i još poželjnije 20%.

[0043] Jedinjenja iz ovog pronalaska imaju sposobnost da smanjuju nivo glukoze u krvi i/ili smanjuju nivo HbA1c pacijenta. Ove aktivnosti jedinjenja prema pronalasku mogu se proceniti u modelima životinja poznatim stručnjaku i takođe su opisani ovde u postupcima. Rezultati takvih eksperimenata su opisani u Primerima 13, 14, 16 i 17.

[0044] Poželjna jedinjenja iz ovog pronalaska mogu smanjiti nivo glukoze u krvi kod miševa, poželjno kod ženki dijabetičkih db/db miševa deficitarnih za leptin-receptor tokom perioda od 24 sata, ako se primenjuju kao pojedinačna doza, poželjno potkožna doza, od 0,01 mg/kg telesne težine, za najmanje 4 mmol/L; poželjnije za najmanje 6 mmol/L, poželjnije za najmanje 8 mmol/L. Ako se doza povećava na 0,1 mg/kg telesne težine, kod miševa se može primetiti izrazitije smanjenje nivoa glukoze u krvi tokom perioda od 24 sata, ako se primenjuje kao pojedinačna doza, poželjno potkožna doza. Poželjno, jedinjenja iz ovog pronalaska dovode do smanjenja za najmanje 7 mmol/L; poželjnije za najmanje 9 mmol/L, poželjnije za najmanje 11 mmol/L. Jedinjenja iz ovog pronalaska poželjno smanjuju povećanje nivoa HbA1c kod miševa tokom perioda od 4 nedelje, ako se primenjuju u dnevnoj dozi od 0,01 mg/kg do oko vrednosti ignicije.

[0045] Jedinjenja iz ovog pronalaska takođe imaju sposobnost da smanje telesnu težinu pacijenta. Ove aktivnosti jedinjenja prema pronalasku mogu se proceniti kod životinjskih modela poznatih osobama koje su obučene, a takođe su opisane ovde u postupcima i u Primerima 13 i 15.

[0046] Iznenađujuće, otkriveno je da su peptidna jedinjenja formule (I), naročito ona sa lizinom (ili zatvoreni analozi) na položaju 14 koji je dalje supstituisan lipofilnim ostacima, pokazala su veoma potentnu aktivaciju GLP-1 i GIP receptora; dodatno u kombinaciji sa aminokiselinama kao što je Gln na položaju 3, takođe se može pružiti vrlo snažna aktivacija receptora glukagona.

[0047] Opisano je u literaturi (Murage EN i dr., Bioorg. Med. Chem.16 (2008), 10106-10112), da je GLP-1 analog sa acetilovanim Lizinom na položaju 14 pokazao značajno smanjenu potenciju u odnosu na prirodni GLP-1.

[0048] Pored toga, oksidacija (in vitro ili in vivo) metionina, prisutna u strukturi jezgra eksendina-4, više nije moguća za peptidna jedinjenja formule (I).

[0049] Dalje, jedinjenja iz ovog pronalaska poželjno imaju visoku rastvorljivost u kiselim i/ili fiziološkim pH vrednostima, npr. pri pH 4,5 i/ili pri pH 7,4 na 25°C, u drugom otelotvorenju najmanje 0,5 mg/ml i u određenom otelotvorenju najmanje 1,0 mg/ml.

[0050] Osim toga, prema jednom otelotvorenju, jedinjenja prema pronalasku poželjno imaju visoku stabilnost kada se čuvaju u rastvoru. Poželjni uslovi testa za određivanje stabilnosti su skladištenje tokom 7 dana na 25°C u rastvoru na pH 4,5 ili pH 7,4. Preostala količina peptida se određuje hromatografskim analizama kako je opisano u postupcima i primerima. Poželjno, nakon 7 dana na 25°C u rastvoru na pH 4,5 ili pH 7,4, preostala količina peptida je najmanje 80%, poželjnije najmanje 85%, čak poželjnije najmanje 90%, a još poželjnije najmanje 95%.

[0051] Poželjno, jedinjenja iz ovog pronalaska čine peptidni deo Z (formula II) koji je linearna sekvenca 39-40 amino karboksilnih kiselina, posebno α-amino karboksilnih kiselina povezanih peptidnim, tj. karboksamidnim vezama.

[0052] U jednom otelotvorenju položaj X14 predstavlja aminokiselinski ostatak sa funkcionalizovanom -NH2grupom bočnog lanca, kao što su funkcionalizovani Lys, Orn, Dab ili Dap, poželjnije funkcionalizovani Lys i X40 je odsutan ili predstavlja Lys.

[0053] Aminokiselinski ostatak sa -NH2grupom bočnog lanca, npr. Lys, Orn, Dab ili Dap, je funkcionalizovan u barem jednom H atomu -NH2grupe bočnog lanca, zamenjena je sa -C(O)-R<5>, gde je R<5>je deo koji sadrži do 50 ili do 100 atoma ugljenika i opciono heteroatoma izabranih od halogena, N, O, S i/ili P.

[0054] U nekim otelotvorenjima, R<5>može sadržati lipofilni deo, npr. aciklična linearna ili razgranata zasićena ugljovodonična grupa, gde R<5>posebno sadrži acikličnu linearnu ili razgranatu (C4-C30) zasićenu ili nezasićenu ugljovodoničnu grupu i/ili cikličnu zasićenu, nezasićenu ili aromatičnu grupu, naročito mono-, bi- ili tricikličnu grupu koja sadrži 4 do 14 atoma ugljenika i 0, 1 ili 2 heteroatoma izabrana od N, O, i S, npr. cikloheksil, fenil, bifenil, hromanil, fenantrenil ili naftil, gde aciklična ili ciklična grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana, npr. halogenom, -OH i/ili CO2H.

[0055] Više poželjnih R<5>grupa može sadržati lipofilni deo, npr. aciklična linearna ili razgranata (C12-C22) zasićena ili nezasićena ugljovodonična grupa. Lipofilni ostatak može biti vezan za -NH2grupu bočnog lana pomoću veznika u svim stereoizomernim oblicima, npr. veznik koji sadrži jednu ili više, npr.2, 3 ili 4, aminokiselinsku veznik grupu kao što su γaminobutirna kiselina (GABA), ε-aminoheksanojska kiselina (ε-Ahx), γ-Glu i/ili β-Ala. U jednom aspektu lipofilni ostatak je vezan za -NH2grupu bočnog lanca pomoću veznika. U još jednom otelotvorenju lipofilni ostatak je direktno vezan za -NH2grupu bočnog lanca.

Specifični primeri grupa aminokiselinskih veznika su (β-Ala)1-4, (γ-Glu)1-4, (ε-Ahx)1-4, ili (GABA)1-4. Poželjne grupe aminokiselinskih veznika su β-Ala, γ-Glu, β-Ala-β-Ala i γ-Glu-γ-Glu.

[0056] Specifični poželjni primeri za -C(O)-R<5>grupe su navedeni u narednoj Tabeli 3, i izabrani su iz grupe koju čine(S)-4-Karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril-, 4-heksadekanoilamino-butiril-, 4-{3-[(R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetil-tridecil)-hroman-6-iloksikarbonil]-propionilamino}-butiril-, 4-oktadekanoilamino-butiril-, 4-((Z)-oktadek-9-enoilamino)-butiril-, 6-[(4,4-Difenilcikloheksiloksi)-hidroksi-fosforiloksi]-heksanoil-, heksa-dekanoil-, (S)-4-Karboksi-4-(15-karboksi-pentadekanoilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-{3-[3-((2S,3R,4S,5R)-5-karboksi-2,3,4,5-tetrahidroksi-pentanoil-amino)-propionilamino]-propionilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-{3-[(R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetil-tridecil)-hroman-6-iloksikarbonil]-propionilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dienoilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-[6-((2S,3R,4S,5R)-5-karboksi-2,3,4,5-tetrahidroksipentanoilamino)-heksanoilamino]-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((2S,3R,4S,5R)-5-karboksi-2,3,4,5-tetrahidroksi-pentanoilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-tetradekanoilamino-butiril-, (S)-4-(11-Benziloksikarbonil-undekanoilamino)-4-karboksi-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-[11-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksi-heksilkarbamoil)-undekanoil-amino]-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((Z)-oktadek-9-enoilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-(4-dodeciloksibenzoilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-henikoza-noilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-dokozanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((Z)-nonadek-10-enoilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-(4-deciloksi-benzoilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-[(4'-oktiloksi-bifenil-4-karbonil)-amino]-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-(12-fenil-dodekanoilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-ikozanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-heksadekanoilamino-butirilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-oktadekanoilamino-butirilamino)-butiril-, 3-(3-oktadekanoilamino-propionilamino)-propionil-, 3-(3-heksadekanoil-amino-propionil-amino)-propionil-, 3-heksadekanoilaminopropionil-, (S)-4-Karboksi-4-[(R)-4-((3R,5S,7R,8R,9R,10S,12S,13R,14R,17R)-3,7,12-trihidroksi-8,10,13-trimetil-heksadekahidro-ciklopenta[a]-fenantren-17-il)-pentanoilamino]-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-[(R)-4-((3R,5R,8R,9S,10S,13R,14S,17R)-3-hidroksi-10,13-dimetilheksadekahidro-ciklopenta[a]fenantren-17-il)-pentanoilamino]-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((9S,10R)-9,10,16-trihidroksi-heksadekanoilamino)-butiril-, Tetradekanoil-, 11-Karboksiundekanoil-, 11-Benziloksikarbonil-undekanoil-, (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-tetradekanoilamino-butirilamino)-butiril-, 6-[hidroksi-(naftalen-2-iloksi)-fosforiloksi]-heksanoil-, 6-[hidroksi-(5-fenil-pentiloksi)-fosforiloksi]-heksanoil-, 4-(Naftalen-2-sulfonilamino)-4-okso-butiril-, 4-(Bifenil-4-sulfonilamino)-4-okso-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butiril-, (S)-4-Karboksi-2-{(S)-4-karboksi-2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksihepta-dekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butiril-, (S)-4-Karboksi-2-{(S)-4-karboksi-2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butiril-, 2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Karboksi-4-(17-karboksi-hepta-dekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetil-, 2-(2-{2-[(S)-4-Karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)-butiril-amino]-etoksi}-etoksi)-acetil, (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[(S)-4-karboksi-4-(19-karboksi-nonadekanoilamino)-butirilamino]-butirilamino}-butirilamino)-butiril, 2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Karboksi-4-(16-1H-tetrazol-5-ilheksadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetil-, 2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Karboksi-4-(16-karboksi-heksadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetil-, (S)-4-Karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-butirilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{(S)-4-karboksi-4-[10-(4-karboksi-fenoksi)-dekanoilamino]-butirilamino}-etoksi)-etoksi]-acetilamino}-etoksi)-etoksi]-acetilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(7-karboksiheptanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(11-karboksi-undekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[2-(2-{2-[2-(2-{2[(S)-4-karboksi-4-(13-karboksi-tridekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(15-karboksi-pentadekanoil-amino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-, i (S)-4-Karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(19-karboksi-nonadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-.

[0057] Dalje su poželjni stereoizomeri, posebno enantiomeri ovih grupa, ili S- ili R-enantiomeri. Izraz „R“ u Tabeli 3 ima za cilj da označi mesto pričvršćivanja -C(O)-R<5>na petidnu kičmu, posebno na ε-amino grupu od Lys.

Tabela 3

[0058] U nekim otelotvorenjima, pronalazak se odnosi na peptidna jedinjenja formule (I) kao što je prethodno definisano, gde X14 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Lys, Orn, Dab i Dap, gde je -NH2grupa bočnog lanca je funkcionalizovana sa -C(O)-R<5>, X40 predstavlja Lys i R<5>je lipofilni ostatak odabran od aciklične linearne ili razgranate (C4-C30) zasićene ili nezasićene ugljovodonične grupe i/ili ciklične zasićene, nezasićene ili aromatične grupe, gde lipofilni ostatak može biti vezan za -NH2grupu bočnog lanca pomoću veznika izabranog od (β-Ala)1-4, (γ-Glu)1-4, (ε-Ahx)1-4, ili (GABA)1-4u svim stereoizomernim oblicima.

[0059] U određenim otelotvorenjima, X14 predstavlja aminokiselinski ostatak sa funkcionalizovanom -NH2grupom bočnog lanca, kao što su funkcionalizovani Lys, Orn, Dab ili Dap, gde jedan H atom od -NH2grupe bočnog lanca je zamenjen sa -C(O)-R<5>, koji je izabran iz grupe koju čine supstituenti prema Tabeli 3 gore.

[0060] U nekim otelotvorenjima, X14 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Lys, Orn, Dab i Dap, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa -C(O)-R<5>, i -C(O)-R<5>je izabran iz grupe koju čine supstituenti prema Tabeli 3 gore.

[0061] U nekim otelotvorenjima pronalaska, položaj X14 i/ili X40 u formuli (II) predstavlja Lizin (Lys). Lys na položaju 14 je funkcionalizovan sa grupom -C(O)R<5>kao što je gore opisano. U drugim otelotvorenjima, X40 je odsutan i X14 je Lys funkcionalizovan sa -C(O)-R<5>, gde je R<5>kako je definisano gore. Konkretno, X14 je Lys funkcionalizovan sa C(O)-R<5>, koji je izabran iz grupe koju čine (S)-4-karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril (γE-x53), (S)-4-karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril (γE-x70), 4-heksadekanoilamino-butiril (GABA-x53), 4-{3-[(R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetil-tridecil)-hroman-6-iloksikarbonil]-propionilamino}-butiril-(GABA-x60), 4-oktadekanoilamino-butiril (GABA-x70), 4-((Z)-oktadek-9-enoilamino)-butiril (GABA-x74), 6-[(4,4-Difenil-cikloheksiloksi)-hidroksi-fosforiloksi]-heksanoil (Fosfo1), heksadekanoil (x53), (S)-4-Karboksi-4-(15-karboksi-pentadekanoilamino)-butiril (x52), (S)-4-Karboksi-4-{3-[3-((2S,3R,4S,5R)-5-karboksi-2,3,4,5-tetrahidroksi-pentanoilamino)-propionilamino]-propionilamino}-butiril (γE-x59), (S)-4-Karboksi-4-{3-[(R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetil-tridecil)-hroman-6-iloksikarbonil]-propionilamino}-butiril (γE-x60), (S)-4-Karboksi-4-((9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dienoilamino)-butiril (γE-x61), (S)-4-Karboksi-4-[6-((2S,3R,4S,5R)-5-karboksi-2,3,4,5-tetrahidroksi-pentanoilamino)-heksanoilamino]-butiril (γE-x64), (S)-4-Karboksi-4-((2S,3R,4S,5R)-5-karboksi-2,3,4,5-tetrahidroksi-pentanoilamino)-butiril (γE-x65), (S)-4-karboksi-4-tetradekanoilamino-butiril (γE-x69), (S)-4-(11-Benziloksikarbonilundekanoilamino)-4-karboksi-butiril (γE-x72), (S)-4-karboksi-4-[11-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksi-heksilkarbamoil)-undekanoilamino]-butiril (γE-x73), (S)-4-Karboksi-4-((Z)-oktadek-9-enoilamino)-butiril (γE-x74), (S)-4-Karboksi-4-(4-dodeciloksibenzoilamino)-butiril (γE-x75), (S)-4-Karboksi-4-henikozanoilamino-butiril (γE-x76), (S)-4-Karboksi-4-dokozanoilamino-butiril (γE-x77), (S)-4-Karboksi-4-((Z)-nonadek-10-enoilamino)-butiril (γE-x79), (S)-4-Karboksi-4-(4-deciloksi-benzoilamino)-butiril (γE-x80), (S)-4-Karboksi-4-[(4'-oktiloksi-bifenil-4-karbonil)-amino]-butiril (γE-x81), (S)-4-Karboksi-4-(12-fenil-dodekanoilamino)-butiril (γE-x82), (S)-4-Karboksi-4-ikozanoilamino-butiril (γE-x95), (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-heksadekanoilamino-butirilamino)-butiril (γE-γE-x53), (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-oktadekanoilamino-butirilamino)-butiril (γE-γE-x70), i 3-(3-oktadekanoilamino-propionilamino)-propionil (β-Ala-β-Ala-x70).

[0062] U nekim otelotvorenjima, X14 je Lys funkcionalizovan sa C(O)-R<5>, koji je izabran iz grupe koju čine (S)-4-karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril (γE-x53), (S)-4-karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril (γE-x70), (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-oktadekanoilaminobutirilamino)-butiril (γE-γE-x70), 4-oktadekanoilamino-butiril (GABA-x70), (S)-4-Karboksi-4-henikozanoilamino-butiril (γE-x76), i 3-(3-oktadekanoilamino-propionilamino)-propionil (β-Ala-β-Ala-x70).

[0063] Dalje otelotvorenje odnosi se na grupu jedinjenja, gde

R<1>je NH2,

R<2>je NH2ili

R<1>i R<2>su NH2.

[0064] Takođe je obelodanjena grupa jedinjenja, gde

X3 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln, Glu i His,

X12 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ile i Lys,

X14 predstavlja aminokiselinski ostatak koji ima bočni lanac sa -NH2grupom, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa - C(O)-R<5>, gde je R<5>kako je opisano iznad,

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser, Lys, Glu i Gln,

X17 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Arg, Lys, Glu, Ile, Gln, Leu, Aib, Tyr i Ala,

X18 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala, Arg, Aib, Leu, Lys i Tyr, X19 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala, Gln, Val i Aib,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln, Aib, Phe, Arg, Leu, Lys i His,

X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp, Glu, Tyr, i Leu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn, Ala, Aib, Arg i Lys, X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly, Thr, Aib, D-Ala i Ala, X40 je ili odsutan ili predstavlja Lys.

[0065] Takođe je obelodanjena grupa jedinjenja, gde

X3 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln, Glu i His,

X12 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ile i Lys,

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser, Lys, Glu i Gln,

X18 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala, Arg, Aib, Leu i Tyr, X19 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala, Val i Aib,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln, Aib, Phe, Leu, Lys, His, Pip, (S)MeLys, (R)MeLys i (S)MeOrn,

X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp, Glu i Leu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn, Ala, Aib i Ser,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly, Thr, Aib, D-Ala i Ala, X40 je ili odsutan ili predstavlja Lys.

[0066] Takođe je obelodanjena grupa jedinjenja, gde

X3 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln, Glu i His,

X12 predstavlja Ile,

X14 predstavlja aminokiselinski ostatak koji ima bočni lanac sa -NH2grupom, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa - C(O)-R<5>, gde R<5>kako je opisano iznad,

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser, Lys, Glu i Gln,

X18 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala i Arg,

X19 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala i Val,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln, Aib, Lys, Pip, (S)MeLys, (R)MeLys i (S)MeOrn i His,

X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp, Glu i Leu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly, Thr i D-Ala,

X40 je ili odsutan ili predstavlja Lys.

[0067] Takođe je obelodanjena grupa jedinjenja, gde

X3 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln, Glu i His,

X12 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ile i Lys,

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser, Lys, Glu i Gln,

X18 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala i Arg,

X19 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala i Val,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln, Aib, Lys i His,

X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp, Glu i Leu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly, Thr i D-Ala,

X40 je ili odsutan ili predstavlja Lys.

[0068] Takođe je obelodanjena grupa jedinjenja, gde

X3 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln i Glu,

X12 predstavlja Ile,

X14 predstavlja Lys, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa jednom od grupa izabranih od (S)-4-Karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-oktadekanoilamino-butirilamino)-butiril-, 3-(3-oktadekanoilamino-propionilamino)-propionil- i 4-oktadekanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-henikozanoilaminobutiril-,

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Glu i Asp,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser i Lys,

X17 predstavlja Arg,

X18 predstavlja Ala,

X19 predstavlja Ala,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln i Aib,

X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly i Thr,

X40 je odsutan.

[0069] Dalje otelotvorenje odnosi se na grupu jedinjenja, gde

X3 predstavlja Glu,

X12 predstavlja Ile,

X14 predstavlja Lys, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa jednom od grupa izabranih od (S)-4-Karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-oktadekanoilamino-butirilamino)-butiril-, 3-(3-oktadekanoilamino-propionilamino)-propionil-4-oktadekanoilamino-butiril-, i (S)-4-Karboksi-4-henikozanoilaminobutiril-,

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Glu i Asp,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser i Lys,

X17 predstavlja Arg,

X18 predstavlja Ala,

X19 predstavlja Ala,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln i Aib,

X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly i Thr,

X40 je odsutan.

[0070] Dalje otelotvorenje odnosi se na grupu jedinjenja, gde

X14 predstavlja Lys, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa jednom od grupa izabranih od (S)-4-Karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril-, 4-oktadekanoilamino-butiril-, Heksadekanoil-, (S)-4-Karboksi-4-henikozanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-oktadekanoilaminobutirilamino)-butiril-, i 3-(3-oktadekanoilamino-propionilamino)-propionil-.

[0071] Dalje otelotvorenje odnosi se na grupu jedinjenja, gde

X14 predstavlja Lys, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa jednom od grupa izabranih od (S)-4-Karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril-, 4-oktadekanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-henikozanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4oktadekanoilamino-butirilamino)-butiril-, i 3-(3-oktadekanoilamino-propionilamino)-propionil-.

[0072] Dalje otelotvorenje odnosi se na grupu jedinjenja, gde

X14 predstavlja Lys, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa jednom od grupa izabranih od (S)-4-Karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril-, i (S)-4-Karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril-.

[0073] Dalje otelotvorenje odnosi se na grupu jedinjenja, gde

X3 predstavlja Glu,

X12 predstavlja Ile,

X14 predstavlja Lys, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa jednom od grupa izabranih od (S)-4-Karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril- i (S)-4-Karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril-,

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Glu i Asp,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser i Lys,

X17 predstavlja Arg,

X18 predstavlja Ala,

X19 predstavlja Ala,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln i Aib,

X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly i Thr,

X40 je odsutan.

[0074] Takođe je obelodanjena grupa jedinjenja, gde

X3 predstavlja Glu,

X12 predstavlja Ile,

X15 predstavlja Glu,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Glu i Lys,

X17 predstavlja Glu,

X18 predstavlja Ala,

X19 predstavlja Val,

X20 predstavlja Arg,

X21 predstavlja Leu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn, Aib i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly i Thr,

X40 je odsutan.

[0075] Takođe je obelodanjena grupa jedinjenja, gde

X3 predstavlja Glu,

X12 predstavlja Ile,

X15 predstavlja Glu,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Glu i Lys,

X17 predstavlja Glu,

X18 predstavlja Ala,

X19 predstavlja Val,

X20 predstavlja Arg,

X21 predstavlja Leu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn, Aib i Ala,

X29 predstavlja Gly,

X40 je odsutan.

[0076] Takođe je obelodanjena grupa jedinjenja, gde

X3 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln, His i Glu,

X12 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ile i Lys,

X14 predstavlja Lys, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa jednom od grupa izabranih od (S)-4-Karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril-, heksadekanoili (S)-4-Karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril-,

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Glu i Asp,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser, Lys, Glu i Gln,

X17 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Arg, Leu, Aib, Tyr, Glu, Ala i Lys,

X18 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala, Aib, Leu i Tyr, X19 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala, Val i Aib,

X20 predstavlja Aib,

X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Glu, Leu i Tyr,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn, Arg i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly, Ala, D-Ala i Thr, X40 je ili odsutan ili predstavlja Lys.

[0077] Takođe je obelodanjena grupa jedinjenja, gde

X3 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln, His i Glu,

X12 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ile i Lys,

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Glu i Asp,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser, Lys i Glu,

X17 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Arg, Lys, Ile, Glu i Gln, X18 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala, Arg i Lys,

X19 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala, Val i Gln,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln, Phe, Leu, Lys, His i Arg, X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Glu, Asp i Leu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn, Arg, Lys i Ala, X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly, Aib i Thr,

X40 je ili odsutan ili predstavlja Lys.

[0078] Dalje otelotvorenje odnosi se na grupu jedinjenja, gde

X12 predstavlja Ile.

[0079] Dalje otelotvorenje odnosi se na grupu jedinjenja, gde

X19 predstavlja Ala.

[0080] Dalje otelotvorenje odnosi se na grupu jedinjenja, gde

X28 predstavlja Ala,

X29 predstavlja Gly.

[0081] Dalje otelotvorenje odnosi se na grupu jedinjenja, gde

X28 predstavlja Asn,

X29 predstavlja Thr.

[0082] Takođe je obelodanjena grupa jedinjenja, gde

X3 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln i Glu,

X12 predstavlja Ile,

X14 predstavlja Lys, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa -C(O)-R<5>, koji je izabran od (S)-4-Karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril- (γE-x53), (S)-4-Karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril- (γE-x70), (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-oktadekanoilamino-butirilamino)-butiril- (γE-γE-x70), 3-(3-Oktadekanoilaminopropionilamino)-propionil- (βA-βA-x70), 4-oktadekanoilamino-butiril- (GABA-x70), i (S)-4-Karboksi-4-henikozanoilamino-butiril- (γE-x76),

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser i Lys,

X17 predstavlja Arg,

X18 predstavlja Ala,

X19 predstavlja Ala,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln i Aib,

X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly i Thr,

X40 je odsutan.

[0083] Dalje otelotvorenje odnosi se na grupu jedinjenja, gde

X3 predstavlja Glu,

X12 predstavlja Ile,

X14 predstavlja Lys, gde je -NH2 grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa - C(O)-R<5>, koji je (S)-4-Karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril-(γE-x53),

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser i Lys,

X17 predstavlja Arg,

X18 predstavlja Ala,

X19 predstavlja Ala,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln i Aib,

X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly i Thr,

X40 je odsutan.

[0084] Dalje otelotvorenje odnosi se na grupu jedinjenja, gde

X3 predstavlja Glu,

X12 predstavlja Ile,

X14 predstavlja Lys, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa - C(O)-R<5>, koji je izabran od (S)-4-Karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril- (γE-x70), (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-oktadekanoilamino-butirilamino)-butiril- (γE-γE-x70), 3-(3-oktadekanoilamino-propionilamino)-propionil- (βA-βA-x70), 4-oktadekanoilamino-butiril- (GABA-x70), i (S)-4-Karboksi-4-henikozanoilaminobutiril- (γE-x76),

X15 predstavlja Glu,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser i Lys,

X17 predstavlja Arg,

X18 predstavlja Ala,

X19 predstavlja Ala,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln i Aib,

X21 predstavlja Glu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly i Thr,

X40 je odsutan.

[0085] Specifični primeri peptidnih jedinjenja formule (I) su jedinjenja od SEQ ID NO: 9-12, 14-27, 31, 33-36, 39, kao i njihove soli i solvati.

[0086] Specifični primeri peptidnih jedinjenja formule (I) su jedinjenja od SEQ ID NO: 9, 10, 12, 14-27, 31, 33-36, kao i njihove soli i solvati.

[0087] Specifični primeri peptidnih jedinjenja formule (I) su jedinjenja od SEQ ID NO: 9-12 i 39, kao i njihove soli i solvati.

[0088] Specifični primeri peptidnih jedinjenja formule (I) su jedinjenja od SEQ ID NO: 9, 10, 12, kao i njihove soli i solvati.

[0089] Specifični primeri peptidnih jedinjenja formule (I) su jedinjenja od SEQ ID NO: 14-21 kao i njihove soli i solvati.

[0090] Specifični primeri peptidnih jedinjenja formule (I) su jedinjenja od SEQ ID NO: 22-27, 31, 33-36, kao i njihove soli i solvati.

[0091] U određenim otelotvorenjima, tj. kada jedinjenje formule (I) sadrži genetski kodirane aminokiselinske ostatke, pronalazak dalje pruža nukleinsku kiselinu (koja može biti DNK ili RNK) koja kodira navedeno jedinjenje, vektor eksprimiranja koji sadrži takvu nukleinsku kiselinu, i ćeliju domaćina koja sadrži takvu nukleinsku kiselinu ili vektor eksprimiranja.

[0092] U daljem aspektu, predmetni pronalazak pruža sastav koji sadrži jedinjenje prema pronalasku u smeši sa nosačem. U poželjnim otelotvorenjima, sastav je farmaceutski prihvatljiv sastav i nosač je farmaceutski prihvatljiv nosač. Jedinjenje pronalaska može biti u obliku soli, npr. farmaceutski prihvatljiva so ili solvat, npr. hidrat. U još jednom aspektu, ovaj pronalazak pruža sastav za upotrebu u postupku lečenja, posebno u ljudskoj medicini.

[0093] U određenim otelotvorenjima, nukleinska kiselina ili vektor eksprimiranja mogu se koristiti kao terapeutska sredstva, npr. u genskoj terapiji.

[0094] Jedinjenja formule (I) su pogodna za terapeutsku primenu bez dodatnog terapeutski efikasnog agensa. U drugim otelotvorenjima, međutim, jedinjenja se koriste zajedno sa najmanje jednim dodatnim terapeutski aktivnim agensom, kako je opisano u „kombinovanoj terapiji“.

[0095] Jedinjenja formule (I) posebno su pogodna za lečenje ili prevenciju bolesti ili poremećaja uzrokovanih, povezanih sa i/ili praćenim poremećajima u metabolizmu ugljenih hidrata i/ili lipida, npr. za lečenje ili prevenciju hiperglikemije, dijabetesa tipa 2, poremećaja tolerancije glukoze, dijabetesa tipa 1, gojaznosti i metaboličkog sindroma. Dalje, jedinjenja prema pronalasku su posebno pogodna za lečenje ili prevenciju degenerativnih bolesti, naročito neurodegenerativnih bolesti.

[0096] Opisana jedinjenja pronalaze upotrebu, između ostalog, u sprečavanju povećanja težine ili promovisanju gubitka težine. Pod „sprečavanjem“ podrazumeva se inhibicija ili smanjenje u odnosu na odsustvo lečenja i potpuni prekid poremećaja nije nužno podrazumevan.

[0097] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu dovesti do smanjenja unosa hrane i/ili povećanja potrošnje energije, što rezultuje vidljivim efektom na telesnu težinu.

[0098] Nezavisno od njihovog efekta na telesnu težinu, jedinjenja prema pronalasku mogu imati blagotvoran efekat na nivoe holesterola u cirkulaciji, budući da su sposobna da poboljšaju nivoe lipida, naročito LDL, kao i nivoe HDL (npr. Povećanje HDL/LDL odnosa).

[0099] Prema tome, jedinjenja iz ovog pronalaska mogu se koristiti za direktnu ili indirektnu terapiju bilo kog stanja izazvanog ili okarakterisanog viškom telesne težine, kao što je lečenje i/ili prevencija gojaznosti, morbidna gojaznost, upale povezane sa gojaznošću, bolest žučne kese povezana sa gojaznošću, apneja spavanja indukovana gojaznošću. Oni se takođe mogu koristiti za lečenje i prevenciju metaboličkog sindroma, dijabetesa, hipertenzije, aterogene dislipidemije, ateroskleroze, arterioskleroze, koronarne bolesti srca ili moždanog udara. Njihovi efekti u ovim uslovima mogu biti rezultat ili su povezani sa njihovim dejstvom na telesnu težinu, ili mogu biti nezavisni od toga.

[0100] Poželjna medicinska upotreba obuhvata odlaganje ili sprečavanje progresije bolesti kod dijabetesa tipa 2, tretman metaboličkog sindroma, tretman gojaznosti ili sprečavanje prekomerne težine, smanjenje unosa hrane, povećanje potrošnje energije, smanjenje telesne težine, odlaganje progresije od smanjene tolerancije glukoze (IGT) do dijabetesa tipa 2; odlaganje progresije od dijabetesa tipa 2 do dijabetesa koji zahteva insulin; regulisanje apetita; indukovanje sitosti; sprečavanje vraćanja telesne težine nakon uspešnog gubitka težine; lečenje bolesti ili stanja u vezi sa prekomernom težinom ili gojaznošću; lečenje bulimije; lečenje prejedanja; lečenje ateroskleroze, hipertenzije, dijabetesa tipa 2, IGT, dislipidemije, koronarne bolesti srca, steatoze jetre, terapije trovanja beta blokatorima, primena za inhibiciju pokretljivosti gastrointestinalnog trakta, primena u vezi sa istraživanjem gastrointestinalnog trakta koristeći tehnike kao što su rendgensko, CT i NMR skeniranje.

[0101] Dalje poželjne medicinske upotrebe uključuju tretman ili prevenciju degenerativnih poremećaja, naročito neurodegenerativnih poremećaja kao što su Alchajmerova bolest, Parkinsonova bolest, Hantingtonova bolest, ataksija, npr. Spinocerebelarna ataksija, Kenedijeva bolest, miotonička distrofija, demencija Levijevih tela, višestruka atrofija, amiotrofična lateralna skleroza, primarna lateralna skleroza, atrofija spinalnih mišića, prionpovezane bolesti, npr Krojcfeld-Jkcobova bolest, multipla skleroza, telangiektazija, Batenova bolest, kortikobazalna degeneracija, potkožna kombinovana degeneracija kičmene moždine, Tabes dorsalis, Tai-Saksova bolest, toksična encefalopatija, infantilna Refsumova bolest, Refsumova bolest, neuroakantocitoza, Nejman-Pikova bolest, Lime bolest , Makado-Džozefova bolest, Sandofova bolest, Ši-Dragerov sindrom, sindrom dlakavog ježa, proteopatija, cerebralna β-amiloidna angiopatija, degeneracija ćelija retinalnih ganglija kod glaukoma, sinucleinuopatije, tauopatije, frontotemporalna lobarna degeneracija (FTLD), demencija, kadasilov sindrom, cerebralna hemoragija sa amiloidozom, Aleksandrova bolest, seipinopatija, familijalna amiloidotska neuropatija, senilna sistemska amiloidoza, serpinopatije, amiloidoze (primarne sistemske amidoloze) AL (lakog lanca), amiloidoze AH (teškog lanca), AA (sekundarna) amiloidoza, aortna medijalna amiloidoza, ApoAI amiloidoza, ApoAII amiloidoza, ApoAIV amiloidoza, familijarna amiloidoza finskog tipa (FAF), lizozimska amiloidoza, fibrinogen amiloidoza, dijaliza amiloidoza, miozitis tela/miopatija, katarakta, retinitis pigmentoza sa mutacijama rodopsina, medularni karcinom štitne žlezde, atrijska amiloidoza srca, prolaktinoma hipofize, nasledna dermofonija rožnjače, kožna lihen amiloidoza, Malori tela, laktoferin amiloidoza rožnjače, pulmonarna alveolarna proteinaza, odontogeni (Pindborg) tumorski amiloid, cistična fibroza, bolest srpastih ćelija ili kritična oboljenja miopatije (CIM).

[0102] Dalja medicinska upotreba uključuje tretman poremećaja povezanih sa kostima, kao što su osteoporoza ili osteoartritis, itd., gde bi povećana formacija kostiju i smanjena resorpcija kostiju mogli biti korisni.

DETALJNI OPIS PRONALASKA

Definicije

[0103] Aminokiselinske sekvence predmetnog pronalaska sadrže konvencionalne jednoslovne i troslovne kodove za prirodne aminokiseline, kao i opšte prihvaćene troslovne kodove za druge aminokiseline, kao što je Aib (α-aminosobutrijska kiselina), Orn (ornitin), Dab (2,4-diamino buterna kiselina), Dap (2,3-diamino propionska kiselina), Nle (norleucin), GABA (γ-aminobuterna kiselina ) ili Ahx (ε-aminoheksanojska kiselina).

[0104] Pored toga, za aminokiseline prikazane u Tabeli 4 korišćeni su sledeći kodovi:

Tabela 4:

[0105] Izraz „prirodni eksendin-4“ odnosi se na prirodni eksendin-4 koji ima sekvencu HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(SEQ ID NO: 1).

[0106] Pronalazak pruža peptidna jedinjenja kao što je prethodno definisano.

[0107] Peptidna jedinjenja iz ovog pronalaska sadrže linearnu kičmu amino karboksilnih kiselina povezanih peptidom, tj. karboksamidnim vezama. Poželjno, amino karboksilne kiseline su α-amino karboksilne kiseline i poželjnije L-α-amino karboksilne kiseline, ako nije drugačije naznačeno. Peptidna jedinjenja poželjno sadrže glavnu sekvencu od 39-40 amino karboksilnih kiselina.

[0108] Peptidna jedinjenja predmetnog pronalaska mogu imati neizmenjene bočne lance, ali nose najmanje jednu modifikaciju u jednom od bočnih lanaca.

[0109] Za izbegavanje sumnje, u definicijama koje su ovde date, generalno je predviđeno da se sekvenca peptidnog dela (II) razlikuje od prirodnog eksendina-4 najmanje u jednom od onih položaja koji su navedeni da omogućavaju varijaciju. Aminokiseline unutar peptidnog dela (II) se mogu smatrati numerisanim uzastopno od 0 do 40 u konvencionalnom smeru od N-terminala do C-terminala. Upućivanje na „položaj“ unutar peptidnog dela (II) treba da bude u skladu sa tim, i trebalo bi da se odnosi na položaje u okviru prirodnog eksendina-4 i drugih molekula, npr. u eksendinu-4, His je na položaju 1, Gly na položaju 2,. .., Met na položaju 14, ... i Ser na položaju 39.

[0110] Aminokiselinski ostaci na položaju 14 imaju bočni lanac sa - NH2grupom, npr. Lys, Orn, Dab ili Dap su konjugovani u funkcionalnu grupu, npr. acil grupe. Prema tome, jedan ili više odabranih aminokiselina peptida u ovom pronalasku može nositi kovalentni dodatak u svojim bočnim lancima. U nekim slučajevima ti dodaci mogu biti lipofilni. Ovi lipofilni dodaci na bočnim lancima imaju potencijal da smanjuju in vivo klirens peptida, čime povećavaju poluživot in vivo.

[0111] Lipofilni dodatak može se sastojati od lipofilnog ostatka koji može biti razgranat ili nerazgranat, alifatski ili nezasićeni aciklični deo i/ili ciklični deo izabran iz jednog ili više alifatskih ili nezasićenih homocikla ili heterocikla, aromatičnih kondenzovanih ili nekondenzovanih homocikla ili heterocikla, etarskih veza, nezasićenih veza i supstituenata, npr hidroksi i/ili karboksi grupe. Lipofilni deo može biti povezan sa peptidom ili alkilacijom, reduktivnom aminacijom ili amidnom vezom, karbamatom ili sulfonamidnom vezom u slučaju aminokiselina koji nose amino grupu u njihovom bočnom lancu.

[0112] Neograničavajući primeri lipofilnih delova koji se mogu povezati sa lancima aminokiselina uključuju masne kiseline, npr. C8-30masne kiseline kao što su palmitinska kiselina, miristinska kiselina, stearinska kiselina i oleinska kiselina i/ili ciklične grupe kao što je prethodno opisano, ili njihove derivate.

[0113] Možda postoji jedan ili više veznika između aminokiselinog peptida i lipofilnog dodatka. Neosetljivi primeri onih veznika su β-alanin, γ-glutaminska kiselina, α-glutaminska kiselina, γ-aminobuterna kiselina i/ili ε-aminoheksanojska kiselina ili dipeptidi, kao β-Ala-β-Ala (takođe skraćeni kao βA-βA ovde ) i/ili γ-Glu-γ-Glu (takođe skraćeni kao γE-γE ovde) u svim svojim stereoizomernim oblicima (S i R enantiomeri).

[0114] Tako, jedan neograničavajući primer vezivanja sa bočnim lancima je palmitinska kiselina koja je kovalentno vezana za α-amino grupu glutaminske kiseline koja formira amidnu vezu. γ-karboksi grupa ove supstituisane glutaminske kiseline može da formira amidnu vezu sa amino grupom lanca u bočnom lancu unutar peptida.

[0115] U daljem aspektu, predmetni pronalazak pruža sastav koja sadrži jedinjenje iz pronalaska kao što je ovde opisano, ili njegovu so ili njegov solvat, u smeši sa nosačem.

[0116] Pronalazak takođe pruža upotrebu jedinjenja iz ovog pronalaska za upotrebu kao lek, posebno za tretman stanja kao što je opisano u nastavku.

[0117] Pronalazak takođe sadrži i sastav u kom je sastav farmaceutski prihvatljiv sastav, a nosač je farmaceutski prihvatljiv nosač.

Sinteza peptida

[0118] Stručnjak u oblasti je svestan raznih različitih postupaka za pripremanje peptida koji su opisani u ovom pronalasku. Ovi postupci uključuju, ali nisu ograničeni na sintetičke pristupe i rekombinantno eksprimiranje gena. Prema tome, jedan način pripreme ovih peptida je sinteza u rastvoru ili na čvrstoj podlozi i naknadne izolacije i prečišćavanja. Drugačiji način pripreme peptida je eksprimiranje gena u ćeliji domaćina u kojoj je uvedena DNK sekvenca koja kodira peptid. Alternativno, eksprimiranje gena se može postići bez korišćenja ćelijskog sistema. Postupci opisani gore mogu takođe biti kombinovane na bilo koji način.

[0119] Poželjan način za pripremanje peptida iz ovog pronalaska je sinteza čvrste faze na pogodnoj smoli. Sinteza čvrste faze peptida je dobro utvrđena postupakologija (pogledati na primer: Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford, III., 1984; E. Atherton and R. C. Sheppard, Solid Phase Peptide Synthesis. A Practical Approach, Oxford-IRL Press, New York, 1989). Sinteza čvrste faze započinje dodavanjem N-terminalno zaštićene aminokiseline sa karboksi terminusom na inertnu čvrstu podlogu koja nosi razdvojivi veznik. Ova čvrsta podloga može biti bilo koji polimer koji dozvoljava spajanje početne aminokiseline, npr. tritil smole, hlorotrilna smole, Vang smola ili Rink smole u kojoj je vezivanje karboksi grupe (ili karboksamida za Rink smolu) za smolu osetljivo na kiselinu (kada se koristi Fmoc strategija). Podloga polimera mora biti stabilna pod uslovima koji se koriste za deprotekciju α-amino grupe tokom sinteze peptida.

[0120] Nakon što je prva aminokiselina spojena sa čvrstom nosačem, α-amino zaštitna grupa ove aminokiseline je uklonjena. Preostale zaštićene aminokiseline se zatim spajaju jedna za drugu u redu prikazanom peptidnom sekvencom koristeći odgovarajuće reagense amidnog spajanja, na primer BOP, HBTU, HATU ili DIC (N,N'-diizopropilkarbodiimid)/HOBt (1-hidroksibenzotriazol), gde se BOP, HBTU i HATU koriste sa bazama tercijarnih amina. Alternativno, oslobođeni N-terminus može se funkcionalizovati sa drugim grupama osim aminokiselinama, na primer karboksilnim kiselinama itd.

[0121] Obično, reaktivne grupe bočnih lanaca aminokiselina zaštićene su odgovarajućim blokirajućim grupama. Ove zaštitne grupe se uklanjaju nakon sastavljanja željenih peptida. Istovremeno se uklanjaju sa odvajanjem željenog proizvoda iz smole pod istim uslovima. Zaštitne grupe i procedure za uvođenje zaštitnih grupa mogu se naći u Protective Groups in Organic Synthesis, 3d ed., Greene, T. W. and Wuts, P. G. M., Wiley & Sons (New York: 1999).

[0122] U nekim slučajevima bi bilo poželjno imati zaštitne grupe bočnog lanaca koje se selektivno mogu ukloniti, dok druge zaštitne grupe bočnog lanaca ostaju netaknute. U ovom slučaju oslobođena funkcionalnost može biti selektivno funkcionalizovana. Na primer, lizin može biti zaštićen sa ivDde ([1-(4,4-dimetil-2,6-dioksocikloheks-1-iliden)-3-metilbutil) zaštitnom grupom (S.R. Chhabra i dr., Tetrahedron Lett.39, (1998), 1603) koji je labilan u visoko nukleofilnim bazamae, na primer 4% hidrazin u DMF (dimetil formamid). Prema tome, ako su N-terminalna amino grupa i sve funkcionalnosti bočnog lanca zaštićene sa kiselo labilnim zaštitnim grupama, ivDde grupa se može selektivno ukloniti koristeći 4% hidrazin u DMF-u i odgovarajuća slobodna amino grupa se zatim može dalje modifikovati, npr. acilacijom. Lizin se alternativno može spojiti sa zaštićenom aminokiselinom i onda se amino grupa ove aminokiseline može ukloniti zaštitom, što rezultuje još jednom slobodnom amino grupom koja može biti acilovana ili vezana za dalje aminokiseline.

[0123] Na kraju, peptid se odvaja od smole. Ovo se može postići koristeći Kingov koktel (D. S. King, C. G. Fields, G. B. Fields, Int. J. Peptide Protein Res.36, 1990, 255-266). Sirovi materijal se zatim može prečišćavati hromatografijom, npr. preparativni RP-HPLC, ako je potrebno.

Potencija

[0124] Kad se ovde koristi, izraz „potencija“ ili „in vitro potencija“ je mera za sposobnost jedinjenja da aktivira receptore za GLP-1, GIP ili glukagon u ćelijskom testu. Numerički, izražava se kao „EC50vrednost“ što je efektivna koncentracija jedinjenja koja indukuje polu maksimalno povećanje odgovora (na primer, stvaranje intracelularnog cAMP-a) u eksperimentu odgovora na dozu.

Terapeutska upotreba

[0125] Jedinjenja iz ovog pronalaska su agonisti za receptore za GLP-1 i za GIP, kao i opciono receptor glukagona (npr. „dvostruki ili trigonalni agonisti“). Takvi peptidi koji su GIP/GLP-1 koagonisti ili GIP/GLP-1/glukagon tri-agonisti mogu pružiti terapeutsku korist kako bi se odgovorilo na kliničku potrebu za usmeravanjem metaboličkog sindroma tako što je omogućeno simultano lečenje dijabetesa i gojaznosti.

[0126] Metabolički sindrom je kombinacija medicinskih poremećaja koji se, kada se dešavaju zajedno, povećavaju rizik od razvoja dijabetesa tipa 2, kao i aterosklerotske vaskularne bolesti, npr. bolesti srca i moždanog udara. Definisanje medicinskih parametara za metabolički sindrom uključuje dijabetes melitus, poremećaj tolerancije glukoze, povećanu glukozu gladovanja, otpornost na insulin, sekreciju urinarnog albina, centralnu gojaznost, hipertenziju, povišene trigliceride, povišeni LDL holesterol i smanjeni HDL holesterol.

[0127] Gojaznost je zdravstveno stanje u kom se višak telesne masti akumulira u meri u kojoj ona može imati negativan uticaj na zdravlje i očekivani životni vek, i zbog povećane učestalosti kod odraslih i dece postala je jedan od vodećih uzroka smrti koji se mogu izbeći u savremenom svetu. Povećava verovatnoću raznih drugih bolesti, uključujući srčanu bolest, dijabetes tipa 2, opstruktivnu apneju spavanja, određene vrste karcinoma, kao i osteoartritis, i najčešće je uzrokovana kombinacijom prevelikog unosa hrane, smanjenjem potrošnje energije, kao i genetskom osetljivošću.

[0128] Diabetes mellitus, često jednostavno nazvan dijabetes, je grupa metaboličkih bolesti u kojima osoba ima visok nivo šećera u krvi, bilo zato što telo ne proizvodi dovoljno insulina, ili zato što ćelije ne reaguju na insulin koji se proizvodi. Najčešći tipovi dijabetesa su: (1) dijabetes tipa 1, gde telo ne proizvodi insulin; (2) dijabetes tipa 2, gde telo ne koristi pravilno insulin, u kombinaciji sa povećanjem nedostatka insulina tokom vremena, i (3) gestacion dijabetes, gde žene razvijaju dijabetes zbog svoje trudnoće. Svi oblici dijabetesa povećavaju rizik od dugotrajnih komplikacija, koje se obično razvijaju nakon mnogo godina. Većina ovih dugotrajnih komplikacija zasniva se na oštećenjima krvnih sudova i može se podeliti u dve kategorije „makrovaskularne“ bolesti, koja potiču od ateroskleroze većih krvnih sudova i „mikrovaskularne“ bolesti, koja proističu iz oštećenja malih krvnih sudova. Primeri za stanja makrovaskularnih bolesti su ishemijska bolest srca, infarkt miokarda, moždani udar i periferna vaskularna bolest. Primeri mikrovaskularnih bolesti su dijabetička retinopatija, dijabetična nefropatija, kao i dijabetička neuropatija.

[0129] Receptori za GLP-1 i GIP kao i glukagon su članovi porodice 7-transmembranskih proteina, heterotrimernih G-proteinskih uparenih receptora. Oni su strukturno povezani jedni sa drugima i dele ne samo značajan nivo sekvencijalnog identiteta, već imaju slične mehanizme prepoznavanja liganda i intracelularnih signalnih puteva.

[0130] Slično tome, peptidi GLP-1, GIP i glukagoni dele regije visoke identičnosti/sličnosti sekvence. GLP-1 i glukagon se proizvode iz zajedničkog prekursora, preproglukagona, koji se diferencijalno obrađuje na specifičan način u tkivu kako bi se dobio npr. GLP-1 u crevnim endokrinim ćelijama i glukagonu u alfa ćelijama pankreasnih ostrvaca. GIP je izveden iz većeg proGIP prohormonskog prekursora i sintetisan je i oslobođen iz K-ćelija lociranih u tankom crevu.

[0131] Peptidni inkretinski hormoni GLP-1 i GIP kuče id strane crevnih endokrinih ćelija kao odgovor na hranu i čine do 70% lučenja stimulisanog insulina stimulisanog ishranom. Dokazi sugerišu da je lučenje GLP-1 smanjeno kod ispitanika sa poremećenom tolerancijom glukoze ili dijabetesom tipa 2, dok je kod ovih pacijenata ipak očuvan odgovor na GLP-1. Tako ciljanje GLP-1 receptora sa pogodnim agonistima nudi atraktivan pristup za lečenje metaboličkih poremećaja, uključujući dijabetes. Receptor za GLP-1 je široko rasprostranjen, uglavnom je pronađen u pankreasnim ostrvcima, mozgu, srcu, bubregu i gastrointestinalnom traktu. U pankreasu, GLP-1 deluje strogo zavisno od glukoze povećanjem lučenja insulina iz beta ćelija. Ova zavisnost od glukoze pokazuje da je malo verovatno da će aktivacija GLP-1 receptora izazvati hipoglikemiju. Takođe, receptor za GIP je široko izražen u perifernim tkivima, uključujući pankreasna ostrvca, masno tkivo, želudac, tanko crevo, srce, kost, pluća, bubreg, testis, nadbubrežni korteks, hipofizu, endotelne ćelije, traheju, slezinu, timusa, štitnu žlezdu i mozak. U skladu sa svojom biološkom funkcijom kao hormon inkretina, β-ćelije pankreasa eksprimiraju najviše nivoe receptora za GIP kod ljudi. Postoje neki klinički dokazi da signalizacija posredovana GIP-receptorom može biti oštećena kod pacijenata sa T2DM, ali se GIP-dejstvo pokazalo reverzibilnim i može se vratiti poboljšanjem stanja dijabetesa.

Napominjemo da stimulacija lučenja insulina od strane insretin hormona, GIP-a i GLP-1 strogo zavisi od glukoze, što osigurava sigurnosni mehanizam povezan sa niskim rizikom za hipoglikemiju.

[0132] Na nivou beta ćelija pokazano je da GLP-1 i GIP promovišu senzitivnost glukoze, neogenezu, proliferaciju, transkripciju proinsulina i hipertrofiju, kao i antiapoptozu. Za peptid sa dvostrukom agonističkom aktivnošću za GLP-1 i GIP receptor može se očekivati da ima aditivnu ili sinergističku anti-dijabetičku korist. Drugi relevantni efekti GLP-1 izvan pankreasa uključuju odloženo pražnjenje želudca, povećanu zasićenost, smanjeni unos hrane, smanjenje telesne težine, kao i neuroprotektivne i kardioprotektivne efekti. Kod pacijenata sa dijabetesom tipa 2, takvi ekstrapankreaski efekti mogu biti posebno važni s obzirom na visoke stope komorbiditeta kao što su gojaznost i kardiovaskularna oboljenja. Dalea GIP aktivnosti u perifernim tkivima izvan pankreasa obuhvataju povećanu formaciju kostiju i smanjenu resorpciju kostiju, kao i neuroprotektivne efekte koji mogu biti korisni za lečenje osteoporoze i kognitivnih defekata kao što je Alchajmerova bolest.

[0133] Glukagon je peptidni hormon od 29 aminokiselina koji se proizvodi alkalnim ćelijama pankreasa i oslobađa se u krvotok kada je cirkulacija glukoze niska. Važna fiziološka uloga glukagona je da stimuliše izlaz glukoze u jetru, što je proces koji pruža glavni protivregulativni mehanizam za insulin u održavanju homeostaze glukoze in vivo.

[0134] Glukagon receptori su međutim takođe izraženi u ekstra-hepatičkim tkivima kao što su bubrezi, srce, adipociti, limfoblasti, mozak, retina, nadbubrežna žlezda i gastrointestinalni trakt, što ukazuje na širi fiziološku ulogu izvan glukoznog homeostaza. Prema tome, nedavne studije su objavile da glukagon ima terapeutski pozitivne efekte na upravljanje energijom, uključujući stimulaciju potrošnje energije i termogenezu, uz smanjenje unosa hrane i gubitka telesne težine. Ukupno, stimulacija receptora glukagona može biti korisna u lečenju gojaznosti i metaboličkog sindroma.

[0135] Oksintomodulin je peptidni hormon koji se sastoji od glukagona sa osam aminokiselina koji obuhvataju C-terminalno produženje. Kao i GLP-1 i glukagon, on se dobija u preproglukagonu i odvaja i luči na tkivno-specifične endokrinalne ćelije malih creva. Poznato je da je oksintomodulin stimulisao i receptore za GLP-1 i glukagon i stoga je prototip dualnog agonista.

[0136] Kako su GLP-1 i GIP poznati po svojim anti-dijabetičkim efektima, GLP-1 i glukagon su poznati po svojim uticajima na smanjenje unošenja hrane, a glukagon je takođe posrednik dodatnog trošenja energije, moguće je da kombinacija aktivnosti od dva ili tri hormona u jednom molekulu može dati snažan lek za lečenje metaboličkog sindroma, a naročito njegove komponente dijabetes i gojaznost.

[0137] Shodno tome, jedinjenja iz ovog pronalaska mogu se koristiti za lečenje intolerancije na glukozu, otpornost na insulin, pre-dijabetes, povećanu glukozu gladovanja, dijabetes tipa 2, hipertenziju, dislipidemiju, arteriosklerozu, koronarnu bolest srca, bolest periferne arterije, moždani udar ili bilo koju kombinaciju ovih pojedinačne komponente bolesti.

[0138] Pored toga, mogu se koristiti za kontrolu apetita, unosa hrane i kalorija, povećanje potrošnje energije, prevenciju porasta telesne težine, promovisanja gubitka telesne težine, smanjenja viška telesne težine i potpunog lečenja gojaznosti, uključujući morbidnu gojaznost.

[0139] Sledeća bolesna stanja i zdravstveni uslovi koji se mogu tretirati sa jedinjenjima pronalaska su upala vezana za gojaznost, bolest žučne kese koja je povezana sa gojaznošću i apneja tokom sna izazvana gojaznošću.

[0140] Iako sva ova stanja mogu biti povezani direktno ili indirektno sa gojaznošću, dejstva jedinjenja pronalaska mogu biti posredovana u celini ili delimično putem dejstva na telesnu težinu ili nezavisno od toga.

[0141] Dalje, bolesti koje treba lečiti su osteoporoza i neurodegenerativne bolesti kao što su Alchajmerova bolest ili Parkinsonova bolest ili druge degenerativne bolesti kao što je gore opisano.

[0142] U poređenju sa GLP-1, glukagonom i okintomodulinom, eksenzin-4 ima korisne fizičko-hemijske osobine, kao što su rastvorljivost i stabilnost u rastvoru i pod fiziološkim uslovima (uključujući enzimsku stabilnost prema degradaciji enzima, kao što su DPP-4 ili NEP), što rezultuje dužim trajanjem delovanja in vivo. Prema tome, eksendin-4 bi mogao da služi kao dobra početna skela kako bi se dobijali eksendin-4 analozi sa dvostrukim ili čak trostrukim farmakologijama, npr., GLP-1/GIP i opciono uz dodatak agonizma glukagona.

[0143] Ipak, pokazalo se da je i eksendin-4 hemijski labilan zbog oksidacije metionina na položaju 14, kao i deamidacije i izomerizacije asparagina na položaju 28. Stoga se stabilnost može dodatno poboljšati supstitucijom metionina na položaju 14 i izbegavanjem sekvence za koje je poznato da su sklone degradaciji formacijom aspartimida, posebno Asp-Gly ili Asn-Gly na položajima 28 i 29.

Farmaceutski sastavi

[0144] Izraz „farmaceutski sastav“ označava smešu koja sadrži sastojke koji su kompatibilni kada su pomešani i koji se mogu primenjivati. Farmaceutski sastav može uključivati jedan ili više medicinskih lekova. Pored toga, farmaceutski sastav može uključivati nosače, pufere, agense za acidizaciju, agense za alkalizaciju, rastvarače, adjuvante, podešavače toničnosti, emolijente, ekspandere, konzervanse, fizičke i hemijske stabilizatore, npr. surfaktanti, antioksidanti i druge komponente, bilo da se one smatraju aktivnim ili neaktivnim sastojcima. Smernice za stručnjake za pripremu farmaceutskih sastava mogu se pronaći, na primer, u Remington: The Science and Practice of Pharmacy, (20th ed.) ed. A. R. Gennaro A. R., 2000, Lippencott Williams & Wilkins i u R.C.Rowe et al (Ed), Handbook of Pharmaceutical Excipients, PhP, izdanje iz maja 2013.

[0145] Derivati eksendin-4 peptida iz ovog pronalaska ili njihove soli se daju u kombinaciji sa prihvatljivim farmaceutskim nosačem, razblaživačem ili ekscipijentom kao deo farmaceutskog preparata. „Farmaceutski prihvatljiv nosač“ je nosač koji je fiziološki prihvatljiv (npr. fiziološki prihvatljiv pH) dok zadržava terapeutska svojstva supstance sa kojom se primenjuje. Standardno prihvatljivi farmaceutski nosači i njihove formulacije su poznati stručnjaku u oblasti i opisani su, na primer, u Remington: The Science and Practice of Pharmacy, (20th ed.) ed. A. R. Gennaro A. R., 2000, Lippencott Williams & Wilkins i u R.C.Rowe et al (Ed), Handbook of Pharmaceutical excipients, PhP, izdanje iz maja 2013. Jedan primerak farmaceutski prihvatljivog nosača je fiziološki rastvor soli.

[0146] U jednom otelotvorenju nosači su izabrani iz grupe pufera (npr. citrat/limunska kiselina), agenasa za acidifikaciju (npr. hlorovodonična kiselina), agensa za alkalizaciju (npr. natrijum hidroksid), konzervansa (npr. fenol), ko-rastvarača (npr. polietilen glikol 400), regulatora toničnosti (npr. manitol), stabilizatora (npr. surfaktant, antioksidanti, aminokiseline).

[0147] Koncentracije koje se koriste su u opsegu koji je fiziološki prihvatljiv.

[0148] Prihvatljivi farmaceutski nosači ili razblaživači uključuju one koji se koriste u formulacijama pogodnim za oralnu, rektalnu, nazalnu ili parenteralnu primenu (uključujući potkožnu, intramuskularnu, intravensku, intradermalnu i transdermalnu). Jedinjenja iz ovog pronalaska će se tipično primenjivati parenteralno.

[0149] Izraz „farmaceutski prihvatljiva so“ znači soli jedinjenja pronalaska koja su bezbedna i efikasna za upotrebu kod sisara. Farmaceutski prihvatljive soli mogu uključivati, ali se ne ograničavaju na, kisele adicione soli i bazne soli. Primeri kiselih adicionih soli uključuju hlorid, sulfat, vodonik sulfat, (vodonik) fosfat, acetat, citrat, tozilat ili mezilat soli. Primeri baznih soli uključuju soli sa neorganskim katjonima, npr. soli alkalnih ili alkalijskih metala kao što su natrijum, kalijum, magnezijum ili kalcijum soli i soli sa organskim katjonima kao što su soli amina. Dalji primeri farmaceutski prihvatljivih soli su opisani u Remington: The Science and Practice of Pharmacy, (20th ed.) ed. A. R. Gennaro A. R., 2000, Lippencott Williams & Wilkins ili u Handbook of Pharmaceutical Salts, Properties, Selection and Use, e.d. P. H. Stahl, C. G. Wermuth, 2002, zajednički objavljeni od strane Verlag Helvetica Chimica Acta, Zurich, Switzerland, i Wiley-VCH, Weinheim, Germany.

[0150] Izraz „solvat“ znači kompleksi jedinjenja pronalaska ili njihove soli sa molekulima rastvarača, npr. molekuli organskog rastvarača i/ili voda.

[0151] U farmaceutskom sastavu derivat eksendin-4 može biti u monomernom ili oligomernom obliku.

[0152] Izraz „terapeutski efikasna količina“ jedinjenja odnosi se na netoksičnu, ali dovoljnu količinu jedinjenja kako bi se dobio željeni efekat. Količina jedinjenja formule I koja je neophodna za postizanje željenog biološkog efekta zavisi od određenog broja faktora, na primer odabranog specifičnog jedinjenja, nameravane upotrebe, načina primene i kliničkog stanja pacijenta. Pogodna „efikasna“ količina u bilo kom pojedinačnom slučaju može se odrediti od strane stručnjaka u oblasti korišćenjem rutinskog eksperimenta. Na primer, „terapeutski efikasna količina“ jedinjenja formule (I) je oko 0,01 do 50 mg/doza, poželjno 0.1 do 10 mg/doza.

[0153] Farmaceutski sastavi prema pronalasku su oni pogodni za parenteralnu (na primer potkožnu, intramuskularnu, intradermalnu ili intravenoznu), oralnu, rektalnu, topikalnu i peroralnu (na primer sublingvalnu) primenu, iako najprikladniji način primene zavisi od svakog pojedinačnog slučaja i prirode i ozbiljnost stanja koji se tretira i prirode jedinjenja formule I koja se koristi u svakom slučaju.

[0154] Pogodni farmaceutski sastavi mogu biti u obliku odvojenih jedinica, na primer kapsula, tableta i prah u bočicama ili ampulama, od kojih svaki sadrži određenu količinu jedinjenja; kao prah ili granule; kao rastvor ili suspenzija u vodenoj ili nevodnoj tečnosti; ili kao ulje-u-vodi ili voda-u-ulju emulzija. Može se pružiti u obliku pojedinačne ili višestruke doze za injektiranje, na primer u obliku igle. Sastavi mogu, kako je već pomenuto, biti pripremljeni bilo kojim pogodnim farmaceutskim postupkom koji uključuje korak u kome se aktivni sastojak i nosač (koji se mogu sastojati od jednog ili više dodatnih sastojaka) dovode u dodir.

[0155] U određenim otelotvorenjima farmaceutski sastav može biti obezbeđena zajedno sa uređajem za primenu, na primer zajedno sa špricem, injekcionim iglom ili autoinjektorom. Takvi uređaji mogu biti obezbeđeni odvojeno od farmaceutskog sastava ili prethodno ispunjeni farmaceutskim sastavom.

Kombinovana terapija

[0156] Jedinjenja iz ovog pronalaska, dualni agonisti za GLP-1 i GIP receptore ili trigonalni agonisti za GLP-1, GIP i glukagon receptore, mogu se široko kombinovati sa drugim farmakološki aktivnim jedinjenjima, kao što su svi lekovi navedeni u Rote Liste 2012 i/ili Rote Liste 2013, npr. sa svim antidijabeticima pomenutim u Rote Liste 2012 poglavlju 12 i/ili Rote Liste 2013, poglavlje 12, svi agensi za smanjenje težine ili suzbijači apetita pomenuti u Rote Liste 2012, poglavlje 1 i/ili Rote Liste 2013, poglavlje 1, svi agensi za snižavanje lipida pomenuti u Rote Liste 2012, poglavlje 58 i/ili Rote Liste 2013, poglavlje 58, svi antihipertenzivi i nefroprotektivi, pomenuti u Rote Liste 2012 i/ili Rote Liste 2013, ili svi diuretici pomenuti u Rote Liste 2012, poglavlje 36 i/ili Rote Liste 2013, poglavlje 36.

[0157] Kombinacije aktivnih sastojaka mogu se posebno koristiti za sinergetsko poboljšanje delovanja. Mogu se primenjivati ili zasebnim davanjem aktivnih sastojaka pacijentu ili u obliku kombinovanih proizvoda u kojima je prisutno mnoštvo aktivnih sastojaka u jednom farmaceutskom preparatu. Kada se aktivni sastojci primenjuju zasebnom primenom aktivnih sastojaka, to se može učiniti istovremeno ili sukcesivno.

[0158] Većina aktivnih sastojaka pomenutih u daljem tekstu objavljena je u USP Dictionary od USAN i International Drug Names, US Pharmacopeia, Rockville 2011.

[0159] Druge aktivne supstance koje su pogodne za takve kombinacije uključuju naročito one koji, na primer, potenciraju terapeutski efekat jedne ili više aktivnih supstanci u odnosu na jednu od pomenutih indikacija i/ili koji omogućavaju smanjenje doze jedne ili više aktivnih supstanci.

[0160] Terapeutski agensi pogodni za kombinovanje uključuju, na primer, antidijabetike kao što su:

Insulin i derivati insulina, na primer: Glargin/Lantus®, 270 - 330U/ml insulin glargina (EP 2387989 A), 300U/mL insulin glargina (EP 2387989 A), Glulisin/Apidra®, Detemir/Levemir®, Lispro/Humalog®/Liprolog®, Degludec/DegludecPlus, Aspart, bazalni insulin i analozi (npr. LY-2605541, LY2963016, NN1436), PEGilovani insulin Lispro, Humulin®, Linjeta, SuliXen® , NN1045, Insulin plus Symlin, PE0139, brzo delujući i kratko delujući insulini (npr. Linjeta, PH20, NN1218, HinsBet), (APC-002) hidrogel, oralni, inhalabilni, transdermalni i sublingvalni insulini (npr. Exubera®, Nasulin®, Afrezza, Tregopil, TPM 02, Capsulin, Oral-lyn®, oralni insulin Cobalamin®, ORMD-0801, NN1953, NN1954, NN1956, VIAtab, Oshadi oralni insulin). Dodatno su uključeni i oni derivati insulina koji su povezani sa albuminom ili drugim proteinima pomoću bifunkcionalnog veznika.

[0161] GLP-1, GLP-1 analozi i agonisti receptora GLP-1, na primer:

Liksisenatid/AVE0010/ZP10/Liksumia, Eksenatid/Eksendin-4/Bijeta/Bidureon/ITCA 650/AC-2993, Liraglutide/Viktoza, Semaglutid, Taspoglutid, Sinkria/Albiglutid, Dulaglutid, rEksendin-4, CJC-1134-PC, PB-1023, TTP-054, Langlenatid/HM-11260C, CM-3, GLP-1 Eligen, ORMD-0901, NN-9924, NN-9926, NN-9927, Nodeksen, Viador-GLP-1, CVX-096, ZYOG-1, ZYD-1, GSK-2374697, DA-3091, MAR-701, MAR709, ZP-2929, ZP-3022, TT-401, BHM-034. MOD-6030, CAM-2036, DA-15864, ARI-2651, ARI-2255, Eksenatid-XTEN i Glukagon-Xten.

[0162] DPP-4 inhibitori, na primer: Alogliptin/Nesina, Trajenta/Linagliptin/BI-1356/Ondero/Trajenta/Tradjenta/Trayenta/Tradzenta, Saksagliptin/Ongliza, Sitagliptin/Januvia/Kselevia/Tesave/Janumet/Velmetia, Galvus/Vildagliptin, Anagliptin, Gemigliptin, Teneligliptin, Melogliptin, Trelagliptin, DA-1229, Omarigliptin/MK-3102, KM-223, Evogliptin, ARI-2243, PBL-1427, Pinoksacin.

[0163] SGLT2 inhibitori, na primer: Invokana/Canaglifozin, Forksiga/Dapagliflozin, Remoglifozin, Sergliflozin, Empagliflozin, Ipragliflozin, Tofogliflozin, Luseogliflozin, LX-4211, Ertuglifozin/PF-04971729, RO-4998452, EGT-0001442, KGA-3235/DSP-3235, LIK066, SBM-TFC-039,

[0164] Biguanidi (npr. Metformin, Buformin, Fenformin), Tiazolidinedioni (npr. Pioglitazon, Rivoglitazon, Rosiglitazon, Troglitazon), dualni PPAR agonisti (npr. Aleglitazar, Muraglitazar, Tesaglitazar), Sulfoniluree (npr. Tolbutamid, Glibenclamid, Glimepirid/Amaril, Glipizid), Meglitinidi (npr. Nateglinid, Repaglinid, Mitiglinid), inhibitori Alfa-glukozidaze (npr. Akarboza, Miglitol, Vogliboza), Amilin i analozi Amilina (npr. Pramlintid, Simlin).

[0165] GPR119 agonisti (npr. GSK-263A, PSN-821, MBX-2982, APD-597, ZYG-19, DS-8500), GPR40 agonisti (npr. Fasiglifam/TAK-875, TUG-424, P-1736, JTT-851 , GW9508).

[0166] Drugi pogodni kombinacioni partneri su: Cikloset, inhibitori 11-beta-HSD (npr.

LY2523199, BMS770767, RG-4929, BMS816336, AZD-8329, HSD-016, BI-135585), aktivatori glukokinaze (npr. TTP-399, AMG -151, TAK-329, GKM-001), inhibitori DGAT (npr. LCQ-908), inhibitori protein tirozinfosfataze 1 (npr. Troduskuemin), inhibitori glukoza-6-fosfataze, inhibitori fruktoza-1,6-bisfosfataze, inhibitori glikogen fosforilaze, inhibitori fosfoenol piruvat karboksinaze, inhibitori glikogen sintaza kinaze, inhibitori piruvat dehidrokinaze, alfa2-antagonisti, CCR-2 antagonisti, SGLT-1 inhibitori (npr. LX-2761).

[0167] Jedan ili više agensa za snižavanje lipida su takođe pogodni kao kombinacioni partneri, kao na primer: inhibitori HMG-CoA-reduktaze (npr. Simvastatin, Atorvastatin), fibrati (npr. Bezafibrat, Fenofibrat), nikotinska kiselina i njihovi derivati (npr. Niacin) PPAR-(alfa, gama ili alfa/gama) agonisti ili modulatori (npr. Aleglitazar), agonisti PPAR-delta, ACAT inhibitori (npr. Avasimib), inhibitori apsorpcije holesterola (npr. Ezetimib), supstance koje vezuju žučnu kiselinu (npr. Holestiramin), inhibitori transporta žučne kiseline, MTP inhibitori ili modulatori PCSK9.

[0168] Jedinjenja koja podižu HDL kao što su: CETP inhibitori (npr. Torcetrapib, Anacetrapid, Dalcetrapid, Evacetrapid, JTT-302, DRL-17822, TA-8995) ili ABC1 regulatori.

[0169] Drugi pogodni kombinacioni partneri su jedna ili više aktivnih supstanci za lečenje gojaznosti, kao što su npr. Sibutramin, Tesofenzin, Orlistat, antagonisti kanabinoid-1 receptora, antagonisti MCH-1 receptora, agonisti MC4 receptora, NPY5 ili NPY2 antagonisti (npr. Velneperit), beta-3-agonisti, leptin ili leptin mimetici, agonisti 5HT2c receptora (npr. Lorcaserin) ili kombinacije bupropion/naltrekson, bupropion/zonisamid, bupropion/fentermin ili pramlintid/metreleptin.

[0170] Drugi pogodni kombinacioni partneri su:

Dalji gastrointestinalni peptidi kao što su Peptid YY 3-36 (PYY3-36) ili njihovi analozi, pankreasni polipeptid (PP) ili njihovi analozi.

[0171] Agonisti ili antagonisti receptora glukagona, agonisti GIP receptora ili antagonisti, grelinski antagonisti ili inverzni agonisti, Ksenin i njihovi analozi.

[0172] Štaviše, kombinacije sa lekovima za uticaj na visok krvni pritisak, hroničnu srčanu insuficijenciju ili aterosklerozu, kao npr. antagonisti Angiotenzin II receptora (npr. telmisartan, kandesartan, valsartan, losartan, eprosartan, irbesartan, olmesartan, tasosartan, azilsartan), ACE inhibitori, ECE inhibitori, diuretici, beta-blokatori, antagonisti kalcijuma, centralno dejstvujući hipertenzivi, antagonisti alfa-2-adrenergičnog receptora, inhibitori neutralne endopeptidaze, inhibitori agregacije trombocita i drugi ili njihove kombinacije.

[0173] U drugom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na upotrebu jedinjenja prema pronalasku ili njegove fiziološki prihvatljive soli u kombinaciji sa najmanje jednom od aktivnih supstanci opisanih gore kao kombinovanog partnera, za pripremu medikamenta koji je pogodan za tretman ili sprečavanje bolesti ili stanja na koje se može uticati vezivanjem za receptore za GLP-1 i glukagon i moduliranje njihove aktivnosti. Ovo je poželjno bolest u kontekstu metaboličkog sindroma, posebno jedna od gore navedenih bolesti ili stanja, naročito dijabetes ili gojaznost ili njihove komplikacije.

[0174] Upotreba jedinjenja prema pronalasku, ili njegova fiziološki prihvatljiva so, u kombinaciji sa jednom ili više aktivnih supstanci može se odvijati istovremeno, odvojeno ili sekvencijalno.

[0175] Upotreba jedinjenja prema pronalasku, ili njegove fiziološki prihvatljive soli, u kombinaciji sa drugom aktivnom supstancom može se odvijati istovremeno ili u vremenu preokreta, ali naročito u kratkom vremenskom intervalu. Ako se istovremeno primenjuju, dve aktivne supstance daju se pacijentu zajedno; ako se koriste u raspoređenim vremenskim tačkama, dve aktivne supstance daju se pacijentu u periodu manjem od ili jednakom od 12 sati, ali posebno manjem ili jednakom od 6 sati.

[0176] Shodno tome, u drugom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na lek koji sadrži jedinjenje prema pronalasku ili fiziološki prihvatljivu so takvog jedinjenja i najmanje jednu od aktivnih supstanci opisanih gore, kao kombinacione partnere, opcionalno zajedno sa jednim ili više inertnih nosača i/ili razblaživača.

[0177] Jedinjenje prema pronalasku, ili njegova fiziološki prihvatljiva so ili solvat, i dodatna aktivna supstanca koja se kombinuje sa njima može biti zajedno prisutna u jednoj formulaciji, na primer tableta ili kapsula, ili posebno u dve identične ili različite formulacije, na primer kao tzv. komplet delova.

LEGENDA SLIKA

[0178]

Slika 1. Efekat potkožne primene jedinjenja SEQ ID NO: 13 pri 10 µg/kg na gastrično pražnjenje i probavni period kod ženki NMRI-miševa. Podaci su sredina+SEM.

a) gastrično pražnjenje

b) Mali probavni period u odnosu na dužinu malog creva

Slika 2. Efekat potkožne primene jedinjenja SEQ ID NO: 9 pri 1, 3 i 10 µg/kg na gastrično pražnjenje i probavni period kod ženki NMRI-miševa. Podaci su sredina+SEM.

a) gastrično pražnjenje

b) Mali probavni period u odnosu na dužinu malog creva

Slika 3a. Efekat potkožne primene jedinjenja SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 i liraglutida pri 100 µg/kg na uzimanje hrane tokom 22 sata kod ženki NMRI-miševa. Podaci su sredina+SEM.

Slika 3b. Efekat potkožne primene jedinjenja SEQ ID NO: 9 pri 3 i 10 µg/kg na uzimanje hrane tokom 22 sata kod ženki NMRI-miševa. Podaci su sredina+SEM. Slika 4. Efekat potkožne primene jedinjenja SEQ ID NO: 9 pri 10, 30 i 100 µg/kg na glukozu u krvi nakon 6 dana posle tretmana kod ženki C57BL/6NCrl miševa kojima je gojaznost indukovana ishranom (18 nedelja na ishrani bogatoj mastima). Podaci su sredina±SEM.

Slika 5. Efekat potkožne primene jedinjenja SEQ ID NO: 9 pri 10, 30 i 100 µg/kg na telesnu težinu kod ženki C57BL/6NCrl miševa kojima je gojaznost indukovana ishranom (DIO) (18 nedelja na ishrani bogatoj mastima). Podaci su sredina±SEM. Slika 6. Efekat potkožne primene jedinjenja SEQ ID NO: 9 pri 10, 30 i 100 µg/kg na telesnu težinu kod ženki C57BL/6NCrl miševa kojima je gojaznost indukovana ishranom (DIO) izračunat kao relativna promena od osnovice. Podaci su sredina ± SEM.

Slika 7. Efekat potkožne primene jedinjenja SEQ ID NO: 9 pri 10, 30 i 100 µg/kg na sadržaj telesne masti kod ženki C57BL/6NCrl miševa kojima je gojaznost indukovana ishranom (DIO). Podaci su sredina±SEM.

Slika 8. Efekat akutne potkožne primene jedinjenja SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 10 i SEQ ID NO: 9 pri 100 µg/kg na 24-časovni profil glukoze u krvi kod dijabetičkih db/db miševa. Podaci su sredina±SEM.

Slika 9. Efekat potkožne primene jednom dnevno jedinjenja SEQ ID NO: 9 pri 10, 30 i 100 µg/kg na glukozu u krvi od dijabetičkih db/db miševa nakon četvoronedeljnog hroničnog tretmana. Podaci su sredina±SEM.

Slika 10. Efekat potkožne primene jednom dnevno jedinjenja SEQ ID NO: 9 pri 10, 30 i 100µg/kg na HbA1c dijabetičkih db/db miševa na početku i kraju četvoronedeljnog hroničnog tretmana. Podaci su sredina±SEM.

Slika 11. Efekat potkožne primene jedinjenja SEQ ID NO: 9 i SEQ ID NO: 21 pri 10 µg/kg na telesnu težinu kod ženki C57BL/6NCrl miševa kojima je gojaznost indukovana ishranom (DIO) nakon tronedeljnog hroničnog tretmana jednom dnevno. Podaci su sredina ± SEM.

Slika 12. Efekat potkožne primene jedinjenja SEQ ID NO: 9 i SEQ ID NO: 2110 µg/kg na telesnu težinu kod ženki C57BL/6NCrl miševa kojima je gojaznost indukovana ishranom (DIO) nakon tronedeljnog hroničnog tretmana jednom dnevno. Promene u telesnoj težini su izračunate kao relativna promena od osnovice. Podaci su sredina ± SEM.

Slika 13. Efekat 3 nedelje posle tretmana sa SEQ ID NO: 16 pri 3 i 10 µg/kg, potkožno i SEQ ID NO: 21 pri 10 µg/kg, potkožno na ne-izgladnjivanu glukozu kod dijabetičkih dbdb-miševa, predstavljeno kao promena od osnovice (0 mmol/l, dan -7). Podaci su sredina+SEM.

Slika 14. Efekat 3 nedelje posle tretmana sa SEQ ID NO: 16 pri 3 i 10 µg/kg, potkožno i SEQ ID NO: 21 pri 10 µg/kg, potkožno na HbA1c kod dijabetičkih dbdbmiševa, predstavljeno kao promena od osnovice (0 %, dan -7). Podaci su sredina+SEM.

Slika 15. Efekat 3 nedelje posle tretmana sa SEQ ID NO: 16 pri 3 i 10 µg/kg, potkožno i SEQ ID NO: 21 pri 10 µg/kg, potkožno na toleranciju oralne glukoze kod dijabetičkih dbdb-miševa, predstavljeno kao promena od osnovice (t = 0 min, 0 mmol/l, neposredno pre primene glukoze). Podaci su sredina+SEM.

Slika 16. Efekat 3 nedelje posle tretmana sa SEQ ID NO: 16 pri 3 i 10 µg/kg, potkožno i SEQ ID NO: 21 pri 10 µg/kg, potkožno na toleranciju oralne glukoze kod dijabetičkih dbdb-miševa, predstavljeno kao površina ispod krive glukoze (Glucose-AUC). Podaci su sredina+SEM.

Slika 17. Efekat posle tretmana sa SEQ ID NO: 21 pri 3 µg/kg, potkožno na snižavanje glukoze kod ne-izgladnjivanih ženki dijabetičkih dbdb-miševa, predstavljeno kao promena od osnovice. Podaci su sredina+SEM.

Slika 18. Efekat posle tretmana sa SEQ ID NO: 14 pri 3 µg/kg, potkožno na snižavanje glukoze kod ne-izgladnjivanih ženki dijabetičkih dbdb-miševa, predstavljeno kao promena od osnovice. Podaci su sredina+SEM.

POSTUPCI

Skraćenice su korišćene kako sledi:

[0179]

AA aminokiselina

cAMP ciklični adenozin monofosfat

Boc tert-butiloksikarbonil

BOP (benzotriazol-1-iloksi)tris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat BSA albunim goveđeg seruma

tBu tercijarni butil

Dde 1-(4,4-dimetil-2,6-dioksocikloheksiliden)-etil

ivDde 1-(4,4-dimetil-2,6-dioksocikloheksiliden)3-metil-butil

DIC N,N'-diizopropilkarbodiimid

DIPEA N,N-diizopropiletilamine

DMEM Dulbekov modifikovan Iglov medijum

DMF dimetil formamid

EDT etanditiol

FA mravlja kiselina

FBS fetalni goveđi serum

Fmoc fluorenilmetiloksikarbonil

HATU O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat HBSS Henkov balansirani slani rastvor

HBTU 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil-uronijum heksafluorofosfat HEPES 2-[4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il]etansulfonska kiselina

HOBt 1-hidroksibenzotriazol

HOSu N-hidroksisukcinimid

HPLC Tečna hromatografija visokih performansi

HTRF Homogena vremenski rešena fulorescencija

IBMX 3-izobutil-1-metilksantin

LC/MS Tečna hromatografija/masena spektrometrija

Palm palmitoil

PBS fosfatom puferisan slani rastvor

PEG polietilene glikol

PK farmakokinetika

RP-HPLC Tečna hromatografija visokih performansi sa revernom fazom

Stea stearil

TFA trifluorosirćetna kiselina

Trt tritil

UV ultraljubičasto

Opšta sinteza peptidnih jedinjenja

Materijali:

[0180] Različite Rink-Amid smole (4- (2 ', 4'-dimetoksifenil-Fmoc-aminometil)-fenoksiacetamido-norluucilaminometiln smola, Merck Biosciences; 4-[(2,4-dimetoksifenil)(Fmoc-amino metil]fenoksi acetamido metil smola, Agilent Technologies) su korišćene za sintezu peptidnih amida sa opterećenjima u opsegu od 0,3-0,4 mmol/g.

[0181] Fmoc zaštićene prirodne aminokiseline kupljene su od Protein Technologies Inc., Senn Chemicals, Merck Biosciences, Novabiochem, Iris Biotech ili Bachem. Sledeće standardne aminokiseline su korišćene u svim sintezama: Fmoc-L-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-L-Asn(Trt)-OH, Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-L-Cys(Trt)-OH, Fmoc-L-Gln(Trt)-OH, Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-L-His(Trt)-OH, Fmoc-L-Ile-OH, Fmoc-L-Leu-OH, Fmoc-L-Lys(Boc)-OH, Fmoc-L-Met-OH, Fmoc-L-Phe-OH, Fmoc-L-Pro-OH, Fmoc-L-Ser(tBu)-OH, Fmoc-L-Thr(tBu)-OH, Fmoc-L-Trp(Boc)-OH, Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-L-Val-OH.

[0182] Pored toga, od istih dobavljača nabavljene su sledeće specijalne aminokiseline: FmocL-Lys(ivDde)-OH, Fmoc-L-Lys(Mmt)-OH, Fmoc-Aib-OH, Fmoc-D-Ser(tBu)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Boc-L-Tyr(tBu)-OH, Boc-L-His(Boc)-OH (dostupan kao toluen solvat) i Boc-L-His(Trt)-OH.

[0183] Sinteze peptida čvrste faze izvedene su na primer na Prelude Peptide Synthesizer (Protein Technologies Inc) ili sličnom automatizovanom sintisajzeru koristeći standardnu Fmoc hemiju i HBTU/DIPEA aktivaciju. DMF je korišćen kao solvent. Deprotekcija: 20% piperidin/DMF za 2 x 2,5 minuta. Pranje: 7 x DMF. Spajanje: 2:5:10200 mM AA/500 mM HBTU/2M DIPEA u DMF 2 x 20 minuta. Pranje: 5 x DMF.

[0184] U slučajevima kada je modifikovan Lys-lanac, Fmoc-L-Lys (ivDde)-OH ili Fmoc-L-Lys(Mmt)-OH je korišćen u odgovarajućem položaju. Nakon završetka sinteze, ivDde grupa je uklonjena prema modifikovanoj literaturi (S.R. Chhabra i dr., Tetrahedron Lett.39, (1998), 1603), koristeći 4% hidrazin hidrat u DMF. Mmt grupa je uklonjena ponovljenim tretmanom sa 1% TFA u dihlorometanu. Sledeće acilacije su izvedene tretiranjem smole sa N-hidroksi sukcinimid estrima željene kiseline ili korišćenjem reagensa za spajanje kao što su HBTU/DIPEA ili HOBt/DIC.

[0185] Svi peptidi koji su sintetisani odleđeni su iz smole sa Kingovim koktelom za razdvajanje koji se sastoji od 82,5% TFA, 5% fenola, 5% vode, 5% tioanizola, 2,5% EDT. Sirovi peptidi su tada precipitovani u dietil ili diizopropil etru, centrifugirani i liofilizovani. Peptidi su analizirane pomoću analitičke HPLC i provereni ESI masenom spektrometrijom. Sirovi peptidi su prečišćeni konvencionalnim preparativnim postupkom prečišćavanja HPLC.

Analitička HPLC/UPLC

[0186] Postupak A: Analitički UPLC/MS je izveden na Waters UPLC sistemu sa Waters UPLC HSS 1,7 μm C18 kolonom (2,1 x 100 mm) na 40°C sa elijentacijom gradijenta pri brzini protoka od 0,5 ml/min i nadgledano je na 215 i 280 nm. Gradijenti su postavljeni kao 10% B do 90% B tokom 15 minuta, a zatim 90% B tokom 1 minuta ili 15% B do 50% B tokom 12,5 minuta i zatim 50% B do 90% B tokom 3 minuta. Pufer A = 0,1% mravlja kiseline u vodi i B = 0,1% mravlja kiselina u acetonitrilu. Waters LCT Premier Time-of-Flight instrumen korišćen je kao maseni analizator opremljen elektrosprejom u pozitivnom jonskom režimu.

[0187] Postupak B: detektovanje pri 210 - 225 nm, opciono spojeno sa masenim analizatorom Waters LCT Premier, elektrosprej pozitivni jonski režim

[0188] Postupak C: detekcija na 215 nm

[0189] Postupak D: detekcija na 214 nm

[0190] Postupak E: detekcija na 210 - 225 nm, opciono spojen sa masenim analizatorom Waters LCT Premier, elektrosprej pozitivni jonski režim

Postupak prečišćavanja opšte preparativne HPLC:

[0191] Sirovi peptidi su prečišćeni bilo na Äkta Purifier Sistemu ili na Jasco semiprep HPLC sistemu. Pripremne RP-C18-HPLC kolone različitih veličina i različitih stopa protoka korišćene su u zavisnosti od količine sirove peptide koji treba prečistiti. Acetonitril 0,05 do 0,1% TFA (B) i voda 0,05 do 0,1% TFA (A) su korišćeni kao eluenti. Alternativno, korišćen je puferni sistem koji se sastoji od acetonitrila i vode sa malim količinama sirćetne kiseline. Frakcije koje sadrže proizvod su sakupljane i liofilizovane kako bi se dobio prečišćeni proizvod, tipično kao TFA ili acetatna so.

Rastvorljivost i ispitivanje stabilnosti derivata eksendina-4

[0192] Pre ispitivanja rastvorljivosti i stabilnosti peptidne serije određen je njegov sadržaj. Stoga su ispitana dva parametra, njegova čistoća (HPLC-UV) i količina soli serije (jonska hromatografija).

[0193] Za ispitivanje rastvorljivosti, ciljna koncentracija je bila 1,0 mg/mL čistog jedinjenja. Zbog toga su rastvori od čvrstih uzoraka pripremljeni u različitim pufernim sistemima sa koncentracijom od 1,0 mg/mL jedinjenja na osnovu prethodno određenog sadržaja. HPLC-UV je izvedena nakon 2 sata blagog mešanja iz supernatanta, koja je dobijena 20 min centrifugiranja pri 4000 rpm.

[0194] Rastvorljivost je tada utvrđena upoređivanjem sa područjima ultravisokih vrhova dobijenih pomoću osnovnog rastvora peptida u koncentraciji od 2 mg/mL u čistoj vodi ili promenljive količine acetonitrila (optička kontrola da je sve jedinjenje rastvoreno). Ova analiza služi i kao polazna tačka (t0) za ispitivanje stabilnosti.

[0195] Za ispitivanje stabilnosti, alikvot supernatanta dobijen za rastvorljivost je skladišten 7 dana na 25°C. Nakon tog vremena, uzorak je centrifugiran 20 min na 4000 o/min, i supernatant je analiziran pomoću HPLC-UV. Za određivanje količine preostalog peptida upoređene su vršnog područja ciljnog jedinjenja na t0 i t7, što rezultuje „% preostalim peptidom“, prateći jednačinu

% preostalog peptida = [(vršno područje peptida t7) x 100]/vršno područje peptida t0.

[0196] Količina rastvorljivih proizvoda razgradnje izračunava se iz upoređivanja sume vršnih područja od svih posmatranih nečistoća smanjenih za zbir vršnih područja uočenih u t0 (tj. određivanje količine novoformiranih peptidnih vrsta). Ova vrednost je data u procentualnoj relaciji sa početnom količinom peptida u t0, prateći jednačinu:

% rastvorljivog proizvoda razgradnje = {[(vršno područje nečistoća t7) - (vršno područje nečistoća t0)]x100}vršno područje peptida t0

[0197] Potencijalna razlika zbira „% preostalog peptida“ i „% rastvorljivih proizvoda razgradnje“ od 100% odražava količinu peptida koji nije ostao rastvorljiv pod stresnim uslovima prateći jednačinu

% taloga = 100-([% preostalog peptida] [% rastvorljivog proizvoda razgradnje])

[0198] Ovaj talog uključuje nerastvorene proizvode razgradnje, polimere i/ili fibrile, koji su uklonjeni iz analize centrifugiranjem.

[0199] Hemijska stabilnost je izražena kao „% preostalog peptida“.

Anjonska hromatografija

[0200] Instrument: Dionex ICS-2000, pred/kolona: Ion Pac AG-182 x 50 mm (Dionex)/AS18 2 x 250 mm (Dionex), eluent: vodeni natrijum hidroksid, protok: 0,38 ml/min, uspon: 0-6 min: 22 mM KOH, 6-12 min: 22-28 mM KOH, 12-15 min: 28-50 mM KOH, 15-20min: 22mM KOH, supresor: ASRS 3002 mm, detekcija: provodnost.

[0201] Kao HPLC/UPLC postupak, koripćen je postupak D ili E.

In vitro ćelijski testovi za GIP receptor, GLP-1 receptor i efikasnost receptora glukagona

[0202] Agonizam jedinjenja za receptore određen je funkcionalnim testovima koji su merili cAMP odgovor HEK-293 ćelijskih linija stabilno izražavajući ljudski GIP, GLP-1 ili glukagon receptor.

[0203] cAMP sadržaj ćelija je određen pomoću kompleta od Cisbio Corp. (kat. br.

62AM4PEC) na osnovu HTRF (Homogena vremenski rešena fulorescencija). Za pripremu, ćelije su podeljene u T175 boce za kulturu i uzgajane preko noći do blizu konfluentnosti u medijumu (DMEM/10% FBS). Medijum je zatim uklonjen i ćelije isprane sa PBS bez kalcijuma i magnezijuma, nakon čega sledi tretman proteinaze sa akutazom (Sigma-Aldrich kat. br. A6964). Odvojene ćelije su oprane i resuspendovane u puferu za testiranje (1 x HBSS, 20 mM HEPES, 0,1% BSA, 2 mM IBMX) i utvrđena je ćelijska gustina. Zatim su razređene do 400000 ćelija/ml i 25 μl-alikvoti su izdvojeni u komorice 96-komoričnih ploča. Za merenje, u komorice je dodato 25 μl test jedinjenja u puferu za testiranje, nakon čega je inkubacija trajala 30 minuta na sobnoj temperaturi. Posle dodavanja HTRF reagensa razblaženih u puferu za lizu (kompletna komponenta), ploče su inkubirane 1 sat, nakon čega se prati merenje fluorescentnog odnosa na 665/620 nm. Potencijal agonista in vitro je kvantifikovan određivanjem koncentracija koje su izazvale 50% aktivaciju maksimalnog odgovora (EC50).

Bioanalitički skrining postupak za kvantifikaciju derivata eksendina-4 kod miševa i svinja

[0204] Miševi su dozirani 1 mg/kg potkožno (s.c.). Miševi su žrtvovani i uzorci krvi su sakupljeni 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 16 i 24 sata nakon primene . Uzorci plazme su analizirani nakon taloženja proteina putem tečne hromatografije masene spektrometrije (LC/MS).

Parametri PK i poluživot su izračunati korišćenjem WinonLin Version 5.2.1 (model bez odeljaka).

[0205] Ženke Göttinger mini-svinja su dozirane 0,1 mg/kg potkožno (s.c.). Uzorci krvi su sakupljeni 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 24, 32, 48, 56 i 72 sata nakon primene. Uzorci plazme su analizirani nakon taloženja proteina putem masene spektrometrije tečne hromatografije (LC/MS). Parametri PK i poluživot su izračunati korišćenjem WinonLin Version 5.2.1 (model bez odeljaka).

Gastrično pražnjenje i probavni period kod miševa

[0206] Koriste se ženke NMRI-miševi telesne težine između 20 i 30 g. Miševi su prilagođeni uslovima mesta boravka najmanje nedelju dana.

[0207] Miševi su držani bez hrane preko noći, dok je voda ostala na raspolaganju stalno. Na dan ispitivanja, miševi su bili izmereni, pojedinačno stavljeni u kaveze, i dozvoljen im je pristup 500 mg hrane tokom 30 minuta, dok je voda uklonjena. Na kraju perioda za hranjenje od 30 minuta, preostali izvor hrane je uklonjen i izmeren. Zatim je potkožno dato test jedinjenje/referentno jedinjenje ili njegov nosač u kontrolnoj grupi.60 minuta kasnije, kako bi se jedinjenju dopustilo da postigne relevantnu izloženost plazme, obojeni, ne-kalorični bolus je instaliran putem gavaže u želudac. Posle još 30 min, životinje su žrtvovane i pripremjeni su želudac i tanko crevo. Ispunjeni želudac je izmeren, ispražnjen, pažljivo očišćen i osušen i ponovo izmeren. Sadržaj stomaka, izračunat kao težina ispunjenog minus težina ispražnjenog stomaka, pokazuje stepen ispražnjenosti želuca. Tanko crevo je ispravljeno bez sile i mereno u dužini. Zatim je izmereno rastojanje od želudačnog početka creva do vrha najdaljeg bolusa intestinalnog sadržaja. Prelaz creva je dat kao odnos u procentima te razdaljine i ukupne dužine tankog creva. Mogu se dobiti uporedivi podaci i za ženke i za mužjake miševa.

[0208] Statističke analize su izvedene sa Everstat 6.0 pomoću jednosmernog ANOVA, praćeno sa Dunetovim post-hoc testom. Dunetov test je primenjen za upoređivanje u odnosu na kontrolu nosačem. Razlike se smatraju statistički značajnim na nivou p <0,05.

Automatska procena unošenja hrane kod miševa

[0209] Koriste se ženke NMRI-miševi telesne težine između 20 i 30 g. Miševi su prilagođeni uslovima mesta boravka najmanje nedelju dana i barem jedan dan u pojedinačnom kavezu u opremi za ocenjivanje, kada su bazalni podaci snimljeni istovremeno. Na dan ispitivanja, test proizvod je primenjen potkožno blizu faze gašenja svetla (12 sati svetlo) i procena potrošnje hrane direktno je započeta nakon toga. Procena obuhvata nastavak nadgledanja tokom 22 sata, dok se podaci obrađuju kao značajni na svakih 30 minuta. Ponavljanje ovog postupka tokom nekoliko dana bilo je moguće. Ograničenje procene na 22 sata bilo je iz praktičnih razloga kako bi se omogućilo ponavljanje merenja životinja, dopunu hrane i vode i primenu lekova između procedura. Rezultati se mogu proceniti kao kumulirani podaci u trajanju od 22 sata ili diferencirani na intervale od 30 minuta. Mogu se dobiti uporedivi podaci i za ženke i za mužjake miševa.

[0210] Statističke analize su izvedene sa Eversta 6.0 pomoću dvosmerne ANOVA na ponovljenim merama i Dunetovim post-hoc analizama. Razlike se smatraju statistički značajnim na nivou p <0,05.

Akutni i subhronični efekti derivata eksendina-4 nakon potkožne terapije na glukozu u krvi i telesnu težinu kod ženki C57BL/6NCrl miševa kojima je gojaznost uzrokovana ishranom (DIO)

18 nedelja na prehrani sa visokim sadržajem masti (postupak 1)

[0211] Ženke C57BL/6NCrl miševa bile su smešteni u grupama u specifičnoj barijeri bez patogena u ciklusu svetlosti/mraka od 12 sati uz slobodan pristup vodi i hrani sa visokim sadržajem masti. Nakon 18 sedmica na visokoj masti, miševi su stratifikovani u grupe za tretman (n = 8), tako da svaka grupa ima sličnu srednju telesnu težinu. Grupa sa sličnom starosti, sa slobodnim pristupom standardnoj hrani, uključena je u standardnu kontrolnu grupu.

[0212] Pre eksperimenta, miševima je potkožno (s.c.) ubrizgan rastvor nosača i mereni su 3 dana kako bi se prilagodili procedurama.

1) Akutni efekat na glukozu u krvi kod hranjenih DIO miševa: inicijalni uzorci krvi su uzeti neposredno pre prve primene (sc) nosača (rastvor fosfatnog pufera) ili derivata eksendina-4 u dozama od 10, 30 i 100 μg/kg (rastvoreno u fosfatnom puferu), respektivno. Obim primene je bio 5 ml/kg. Životinje su imale pristup vodi i odgovarajuću ishranu u toku eksperimenta, potrošnja hrane je utvrđena u svim vremenskim tačkama uzorkovanja krvi. Nivoi glukoze u krvi su mereni na t = 0,5 sata, t = 1 sat, t = 2 sata, t = 4 sata, t = 6 sata, t = 8 sata i t = 24 sata (postupak: d-glukoza heksokinaza, hemolizat , AU640 Beckman Coulter). Uzimanje krvi izvršeno je visokim rezom bez anestezije.

2) Subhronični efekat na telesnu težinu: sve životinje su lečene jednom dnevno s.c. u popodnevnim satima, na kraju faze svetlosti (12 sati sa uključenim svetlom) sa bilo nosačem ili derivatima eksendina-4 u gore pomenutim dozama tokom 4 nedelje. Telesna težina je dnevno beležena. Tokom dana 6 i 28, ukupna masna masa je merena nuklearnom magnetnom rezonancom (NMR) koristeći Bruker minispec (Ettlingen, Nemačka).

14 nedelja pred-hranjenja sa ishranom sa visokim sadržajem masti (postupak 2)

[0213] Ženke miševi C57BL/6NCrl bili su smešteni u grupama u specifičnoj barijeri bez patogena u ciklusu svetlosti/mraka od 12 sati uz slobodan pristup vodi i ishrani sa visokim sadržajem masti. Nakon 14 nedelja na ishrani sa sa visokim sadržajem masti, miševi su stratifikovani u grupe za tretman (n = 8), tako da svaka grupa ima sličnu srednju telesnu težinu.

[0214] Grupa sa sličnom starosti, sa slobodnim pristupom standardnoj hrani, uključena je u standardnu kontrolnu grupu.

[0215] Pre eksperimenta, miševima je potkožno (s.c.) ubrizgan rastvor nosača i mereni su 3 dana kako bi se prilagodili procedurama.

[0216] Subhronični efekat na telesnu težinu: sve životinje su lečene jednom dnevno s.c. u popodnevnim satima, na kraju faze svetlosti (LD 12:12) sa bilo nosačem ili derivatima eksendina-4 u gore pomenutim dozama tokom 3 nedelje. Telesna težina je dnevno beležena.

[0217] Statističke analize su izvedene sa Everstat 6.0 pomoću ponovljenih merenja na dvosmernom ANOVA i Dunetovim post-hoc analizama (profil glukoze) i jednosmernom ANOVA, praćena Dunetovim post-hoc testom (telesna težina, telesna mast). Razlike u poređenju sa nosačem-tretiranim kontrolnim DIO miševima su smatrane statistički značajnim na nivou p <0,05.

Akutni i subhronični efekti derivata eksendina-4 nakon potkožnog lečenja glukoze u krvi i HbA1c kod ženki dijabetičkih db/db miševa deficijentnih za leptin-receptor (postupak 3)

[0218] Ženke BKS.Cg-m /+ Leprdb/J (db/db) i BKS.Cg-m /+ Leprdb/+ (blaga kontrola) miševa su dobijene od Charles River Laboratories, Nemačka, u starosti od 9 - 10 nedelja. Životinje su smeštene u grupe u specifičnom postrojenju sa barijerama bez patogena u ciklusu svetlosti/mraka od 12 časova sa slobodnim pristupom vodi i hrani. Nakon 1 nedelje aklimatizacije, uzorci krvi su izvučeni iz repa bez anestezije i određeni su nivo glukoze u krvi (postupak: d-glukoza heksokinaza, hemolizat, AU640 Beckman Coulter) i nivo HbA1c (postupak: hemolizat, Cobas6000 c501, Roche Diagnostics, Nemačka).

[0219] HbA1c je glikozilovani oblik hemoglobina čiji nivo odražava prosečan nivo glukoze na koji je eritrocit bio izložen tokom svog životnog veka. Kod miševa, HbA1c je relevantan biomarker za prosečnu koncentraciju glukoze u krvi tokom prethodnih 4 nedelja (životni vek mišića u mišu ~ 47 dana).

[0220] Db/db miševi su stratifikovani u grupe za tretman (n = 8), tako da je svaka grupa imala slične nivoe glukoze u krvi i nivoe HbA1c.

1) Akutni efekat na glukozu u krvi kod hranjenih db/db miševa: inicijalni uzorci krvi su uzeti neposredno pre prve primene (sc) nosača (rastvor fosfatnog pufera) ili derivata eksendina-4 u dozama od 3, 10 i 100 μg/kg (rastvoreno u fosfatnom puferu), respektivno. Obim primene je bio 5 ml/kg. Životinje su imale pristup vodi i hrani tokom eksperimenta, potrošnja hrane je utvrđena u svim vremenskim tačkama uzorkovanja krvi. Nivo glukoze u krvi je meren na t = 0,5 sata, t = 1 sat, t = 2 sata, t = 4 sata, t = 6 sati, t = 8 sati i t = 24 sata. Uzimanje krvi izvršeno je visokim rezom bez anestezije. Mogu se dobiti uporedivi podaci i za ženke i za mužjake miševa.

2) Subhronicni efekat na glukozu u krvi i HbA1c: sve životinje su tretirane jednom dnevno s.c. u popodnevnim satima, na kraju faze svetlosti (12 sati sa uključenim svetlom) sa bilo kojim nosačima ili derivatima eksendina-4 u gore pomenutim dozama tokom 4 nedelje. Na kraju ispitivanja analizirani su uzorci krvi (rep, bez anestezije) za glukozu i HbA1c. Mogu se dobiti uporedivi podaci i za ženke i za mužjake miševa.

[0221] Statističke analize su obavljene sa Everstat 6.0, ponovljenim merenjima dvosmerne ANOVA i Dunetove post-hoc analize. Razlike u odnosu na kontrolisane miševe db/db tretirane sa nosačima smatrane su statistički značajnim na nivou p <0,05.

Efekti 4 nedelje terapije na glukozu, HbA1c i oralnu toleranciju glukoze kod ženki dijabetičkih dbdb miševa (postupak 4)

[0222] Korišćene si 8 nedelja stare, ženske dijabetičkih dbdb miševe sa srednjom vrednosti glukoze bez gladovanja od 14,5 mmol/l i telesnom težinom od 37-40 g. Miševi su pojedinačno obeleženi i prilagođeni su uslovima mesta boravka najmanje nedelju dana.7 dana pre početka studije utvrđene su osnovne vrednosti za glukozu i HbA1c bez gladovanja, 5 dana pre početka studija, miševi su dodeljeni grupama i kavezima (5 miševa po kavezu, 10 po grupi) prema vrednostima HbA1c kako bi se osigurala jednaka raspodela nižih i viših vrednosti između grupa (stratifikacija).

[0223] Miševi su tretirani 4 nedelje, jednom dnevnom potkožnom primenom 3 sata pre faze mraka (18 sati do 6 sati). Uzorci krvi iz reza na vrhu repa su dobijeni za HbA1c na dan 21. studije, i tolerantnost oralnog glukoze procenjena je u četvrtoj nedelji. Test oralne tolerancije na glukozu obavljen je ujutru bez prethodne primene dodatnog jedinjenja sa ciljem da se proceni efekat hroničnog tretmana i manje akutna primene jedinjenja. Miševi su bili izgladnjivani 4 sata pre oralne primene glukoze (2 g/kg, t = 0 min). Uzorci krvi su izvučeni pre primene glukoze i nakon 15, 30, 60, 90, 120 i 180 minuta. Hrana je vraćena nakon poslednjeg uzorka krvi. Rezultati su predstavljeni kao promena od početne vrednosti, glukoza u mmol/l i HbA1c u%.

[0224] Statističke analize se izvode sa Everstat Version 6.0 na osnovu SAS pomoću jednosmerne ANOVA, nakon čega sledi Dunetov post-hoc test protiv kontrole nosačima. Razlike se smatraju statistički značajnim na nivou p <0,05.

Spuštanje glukoze kod ne-izgladnjivanih ženki dijabetičkih dbdb-miševa

[0225] Korišćene su ženke dijabetičkih dbdb-miševa sa srednjom vrednosti glukoze bez izgladnjivanja od 20-22 mmol/l i telesnom težinom od 42 g /- 0,6 g (SEM). Miševi su pojedinačno obeleženi i prilagođeni su uslovima mesta boravka najmanje nedelju dana.

[0226] 3-5 dana pre početka ispitivanja, miševi su dodeljeni grupama i kavezima (4 miša po kavezu, 8 po grupi) prema svojim vrednostima glukoze bez gladovanja kako bi se obezbedila ravnomerna raspodela niže i više vrednosti između grupa (stratifikacija). Na dan ispitivanja, miševi su izmereni i dozirani (t = 0). Neposredno pre primene jedinjenja, uklonjena je hrana, dok je voda ostala na raspolaganju, i uzet je prvi uzorak krvi sa rezom na repu (osnovica). Dalji uzorci krvi su uzeti rezom na repu na 30, 60, 90, 120, 240, 360 i 480 minuta.

[0227] Statističke analize se izvode sa Everstat Version 6.0 na osnovu SAS pomoću dvosmerne ANOVA, nakon čega sledi Dunetov post-hoc test protiv kontrole nosačima. Razlike se smatraju statistički značajnim na nivou p <0,05.

PRIMERI

[0228] Pronalazak je dalje ilustrovan narednim primerima.

Primer 1:

Sinteza SEQ ID NO: 20

[0229] Sinteza čvrste faze je sprovedena na Rink-smoli sa opterećenjem od 0,38 mmol/g, 75-150 µm od kompanije Agilent Technologies. Strategija Fmoc-sinteze je primenjena sa HBTU/DIPEA-aktivacijom. Na položaju 1 Boc-Tyr(tBu)-OH i na položaju 14 Fmoc-Lys(ivDde)-OH je korišćen u protokolu sinteze čvrste faze. ivDde-grupa je odvojena od peptida na smoli prema literaturi (S.R. Chhabra i dr., Tetrahedron Lett.39, (1998), 1603). U daljem tekstu Fmoc-Glu-OtBu je spojen za oslobođenu amino grupu koristeći reagense za spajanje HBTU/DIPEA, praćeno sa Fmoc-deprotekcijom sa 20% piperidinom u DMF.

Konačno heneikozanil hlorid je spojen za amino-grupu od Glu u dihlorometanu sa DIPEA kao bazom. Peptid je cepan od smole sa Kingovim koktelom (D. S. King, C. G. Fields, G. B. Fields, Int. J. Peptid Protein Res.36, 1990, 255-266). Sirov proizvod je pročišćen sa pripremnom HPLC na Waters koloni (XBridge, BEH130, Prep C185µM) koristeći acetonitril/voda gradijent (oba pufera sa 0,05% TFA). Pročišćeni peptid je analiziran sa LCMS (Postupak C). Dekonvolucija masenih signala pronađena pod vrhom sa vremenom zadržavanja 31,67 min otkrila je peptidnu masu 4647,40 koja je u skladu sa očekivanom vrednošću 4647,35.

Primer 2:

Sinteza SEQ ID NO: 16

[0230] Sinteza čvrste faze je sprovedena na Novabiochem Rink-amid smoli (4-(2',4'-Dimetoksifenil-Fmoc-aminometil)-fenoksiacetamido-norleucilaminometil smola), 100-200 mreža, opterećenje od 0,34 mmol/g. Strategija Fmoc-sinteze je primenjena sa HBTU/DIPEA-aktivacijom. Na položaju 1 Boc-Tyr(tBu)-OH i na položaju 14 Fmoc-Lys(ivDde)-OH je korišćen u protokolu sinteze čvrste faze. ivDde-grupa je odvojena od peptida na smoli prema modifikovanoj proceduri iz literature (S.R. Chhabra i dr., Tetrahedron Lett.39, (1998), 1603), koristeći 4% hidrazin hidrat u DMF. U daljem tekstu Fmoc-Glu-OtBu je spojen za oslobođenu amino grupu koristeći reagense za spajanje HBTU/DIPEA, praćeno sa Fmocdeprotekcijom sa 20% piperidinom u DMF. Opet Fmoc-Glu-OtBu je spojen, praćeno sa Fmoc-deprotekcijom i konačnim spajanjem stearinske kiseline koristeći HBTU/DIPEA.

Peptid je cepan od smole sa Kingovim koktelom (D. S. King, C. G. Fields, G. B. Fields, Int. J. Peptid Protein Res.36, 1990, 255-266). Sirov proizvod je pročišćen sa pripremnom HPLC na Waters koloni (Sunfire, Prep C18) koristeći acetonitril/voda gradijent (oba pufera sa 0,05% TFA). Pročišćeni peptid je analiziran sa LCMS (Postupak C). Dekonvolucija masenih signala pronađena pod vrhom sa vremenom zadržavanja 28,45 min otkrila je peptidnu masu 4733,6 koja je u skladu sa očekivanom vrednošću 4734,4.

Primer 3:

Sinteza SEQ ID NO: 17

[0231] Sinteza čvrste faze je sprovedena na Rink-smoli sa opterećenjem od 0,38 mmol/g, 75-150 µm od kompanije Agilent Technologies. Strategija Fmoc-sinteze je primenjena sa HBTU/DIPEA-aktivacijom. Na položaju 1 Boc-Tyr(tBu)-OH i na položaju 14 Fmoc-Lys(ivDde)-OH je korišćen u protokolu sinteze čvrste faze. ivDde-grupa je odvojena od peptida na smoli prema literaturi (S.R. Chhabra i dr., Tetrahedron Lett.39, (1998), 1603). U daljem tekstu Fmoc-γ-amino buterna kiselina je spojena za oslobođenu amino grupu koristeći reagense za spajanje HBTU/DIPEA, praćeno sa Fmoc-deprotekcijom sa 20% piperidinom u DMF. Konačno stearic acid je spojen koristeći HBTU/DIPEA. Peptid je cepan od smole sa Kingovim koktelom (D. S. King, C. G. Fields, G. B. Fields, Int. J. Peptid Protein Res.36, 1990, 255-266). Sirov proizvod je pročišćen sa pripremnom HPLC na Waters koloni (XBridge, BEH130, Prep C185µM) koristeći acetonitril/voda gradijent (oba pufera sa 0,05% TFA). Pročišćeni peptid je analiziran sa LCMS (Postupak C). Dekonvolucija masenih signala pronađena pod vrhom sa vremenom zadržavanja 29,59 min otkrila je peptidnu masu 4561,4 koja je u skladu sa očekivanom vrednošću 4561,26.

Primer 4:

Sinteza SEQ ID NO: 18

[0232] Sinteza čvrste faze je sprovedena na Rink-smoli sa opterećenjem od 0,38 mmol/g, 75-150 µm od kompanije Agilent Technologies. Strategija Fmoc-sinteze je primenjena sa HBTU/DIPEA-aktivacijom. Na položaju 1 Boc-Tyr(tBu)-OH i na položaju 14 Fmoc-Lys(ivDde)-OH je korišćen u protokolu sinteze čvrste faze. ivDde-grupa je odvojena od peptida na smoli prema literaturi (S.R. Chhabra i dr., Tetrahedron Lett.39, (1998), 1603). U daljem tekstu Fmoc-β-Ala-OH je spojen za oslobođenu amino grupu koristeći reagense za spajanje HBTU/DIPEA, praćeno sa Fmoc-deprotekcijom sa 20% piperidinom u DMF. Opet Fmoc-β-Ala-OH je spojen, praćeno sa Fmoc-deprotekcijom i konačnim spajanjem stearinske kiseline koristeći HBTU/DIPEA. Peptid je cepan od smole sa Kingovim koktelom (D. S. King, C. G. Fields, G. B. Fields, Int. J. Peptid Protein Res.36, 1990, 255-266). Sirov proizvod je pročišćen sa pripremnom HPLC na Waters koloni (XBridge, BEH130, Prep C18 5µM) koristeći acetonitril/voda gradijent (oba pufera sa 0,05% TFA). Pročišćeni peptid je analiziran sa LCMS (Postupak C). Dekonvolucija masenih signala pronađena pod vrhom sa vremenom zadržavanja 28,97 min otkrila je peptidnu masu 4618,6 koja je u skladu sa očekivanom vrednošću 4618,32.

Primer 5:

Sinteza SEQ ID NO: 9

[0233] Sinteza čvrste faze je sprovedena na Novabiochem Rink-amid smoli (4-(2',4'-Dimetoksifenil-Fmoc-aminometil)-fenoksiacetamido-norleucilaminometil smola), 100-200 mreža, opterećenje od 0,34 mmol/g. Strategija Fmoc-sinteze je primenjena sa HBTU/DIPEA-aktivacijom. Na položaju 1 Boc-Tyr(tBu)-OH i na položaju 14 Fmoc-Lys(ivDde)-OH je korišćen u protokolu sinteze čvrste faze. ivDde-grupa je odvojena od peptida na smoli prema modifikovanoj proceduri iz literature (S.R. Chhabra i dr., Tetrahedron Lett.39, (1998), 1603), koristeći 4% hidrazin hidrat u DMF. U daljem tekstu Palm-Glu(γOSu)-OtBu je spojen za oslobođenu amino grupu. Peptid je cepan od smole sa Kingovim koktelom (D. S. King, C. G. Fields, G. B. Fields, Int. J. Peptid Protein Res. 36, 1990, 255-266). Sirov proizvod je pročišćen sa pripremnom HPLC na Waters koloni (Sunfire, Prep C18) koristeći acetonitril/voda gradijent (oba pufera sa 0,1% TFA). Pročišćeni peptid je analiziran sa LCMS (Postupak B). Dekonvolucija masenih signala pronađena pod vrhom sa vremenom zadržavanja 12,7 min otkrila je peptidnu masu 4577,3 koja je u skladu sa očekivanom vrednošću 4577,22.

Primer 6:

Sinteza SEQ ID NO: 36

[0234] Sinteza čvrste faze je sprovedena na Novabiochem Rink-amid smoli (4-(2',4'-Dimetoksifenil-Fmoc-aminometil)-fenoksiacetamido-norleucilaminometil smola), 100-200 mreža, opterećenje od 0,34 mmol/g. Strategija Fmoc-sinteze je primenjena sa HBTU/DIPEA-aktivacijom. Na položaju 1 Boc-Tyr(tBu)-OH i na položaju 14 Fmoc-Lys(ivDde)-OH je korišćen u protokolu sinteze čvrste faze. ivDde-grupa je odvojena od peptida na smoli prema modifikovanoj proceduri iz literature (S.R. Chhabra i dr., Tetrahedron Lett.39, (1998), 1603), koristeći 4% hidrazin hidrat u DMF. U daljem tekstu Palm-Glu(γOSu)-OtBu je spojen za oslobođenu amino grupu. Peptid je cepan od smole sa Kingovim koktelom (D. S. King, C. G. Fields, G. B. Fields, Int. J. Peptid Protein Res. 36, 1990, 255-266). Sirov proizvod je pročišćen sa pripremnom HPLC na Waters koloni (Sunfire, Prep C18) koristeći acetonitril/voda gradijent (oba pufera sa 0,05% TFA). Pročišćeni peptid je analiziran sa LCMS (Postupak B). Dekonvolucija masenih signala pronađena pod vrhom sa vremenom zadržavanja 12,53 min otkrila je peptidnu masu 4489,57 koja je u skladu sa očekivanom vrednošću 4490,13.

Primer 7:

Sinteza SEQ ID NO: 39

[0235] Sinteza čvrste faze je sprovedena na Novabiochem Rink-amid smoli (4-(2',4'-Dimetoksifenil-Fmoc-aminometil)-fenoksiacetamido-norleucilaminometil smola), 100-200 mreža, opterećenje od 0,34 mmol/g. Strategija Fmoc-sinteze je primenjena sa HBTU/DIPEA-aktivacijom. Na položaju 1 Boc-Tyr(tBu)-OH i na položaju 14 Fmoc-Lys(ivDde)-OH je korišćen u protokolu sinteze čvrste faze. ivDde-grupa je odvojena od peptida na smoli prema modifikovanoj proceduri iz literature (S.R. Chhabra i dr., Tetrahedron Lett.39, (1998), 1603), koristeći 4% hidrazin hidrat u DMF. U daljem tekstu Palm-Glu(γOSu)-OtBu je spojen za oslobođenu amino grupu. Peptid je cepan od smole sa Kingovim koktelom (D. S. King, C. G. Fields, G. B. Fields, Int. J. Peptid Protein Res.36, 1990, 255-266). Sirov proizvod je pročišćen sa pripremnom HPLC na Waters koloni (Sunfire, Prep C18) koristeći acetonitril/voda gradijent (oba pufera sa 0,05% TFA). Pročišćeni peptid je analiziran sa LCMS (Postupak B). Dekonvolucija masenih signala pronađena pod vrhom sa vremenom zadržavanja 13,5 min otkrila je peptidnu masu 4491,3 koja je u skladu sa očekivanom vrednošću 4492,1.

[0236] Na analogni način, naredni peptidi SEQ ID NO: 8 - 41 su sintetisani i karakterisani (Postupci A-E), pogledati Tabelu 5.

Tabela 5: spisak sintetisanih peptida i poređenje izračunate i izmerene molekulske težine.

Primer 8: Hemijska stabilnost i rastvorljivost

[0237] Rastvorljivost i hemijska stabilnost peptidnih jedinjenja su procenjeni kako je opisano u Postupcima. Rezultati su dati u Tabeli 6.

Tabela 6: Hemijska stabilnost i rastvorljivost

Primer 9: in vitro podaci na GLP-1, GIP i glukagon receptoru

[0238] Potencije peptidnih jedinjenja na GLP-1, GIP i glukagon receptorima su određene izlaganjem ćelija koje eksprimiraju ljudski glukagon receptor (hGLUC R), ljudski GIP (hGIP R) i ljudski GLP-1 receptor (hGLP-1 R) navedenim jedinjenjima u rastućim koncentracijama i merenjem formiranog cAMP kako je opisano u Postupcima.

[0239] Rezultati za derivate Eksendina-4 sa aktivnošću na ljudski GIP (hGIP R), ljudski GLP-1 receptor (hGLP-1 R) i ljudski glukagon receptor (hGLUC R) su prikazani u Tabeli 7. Tabela 7. EC50vrednosti analoga eksendin-4 peptida na GLP-1, GIP i Glukagon receptore (naznačeno u pM)

Uporedno testiranje

[0240] Izabrani derivati eksendina-4 pronalaska koji sadrže funkcionalizovanu aminokiselinu na položaju 14 su testirani u odnosu na odgovarajuća jedinjenja koja imaju na ovom položaju 14 „nefunkcionalizovanu“ aminokiselinu. Referentni par jedinjenja i odgovarajuće vrednosti EC50 kod GLP-1 i GIP receptora (naznačene u pM) dati su u Tabeli 8. Kao što je prikazano, derivati eksendina-4 pronalaska pokazuju superiornu aktivnost u poređenju sa jedinjenjima sa „nefunkcionalizovanom“ aminokiselinom na položaju 14.

Tabela 8. Upoređivanje derivata eksendina-4 koje sadrže nefunkcionalizovanu aminokiselinu na položaju 14 nasuprot derivatima eksendina-4 koji sadrže funkcionalizovanu aminokiselinu na položaju 14. EC50 vrednosti na GLP-1 i GIP receptorima su naznačene u pM. (K = lizin, Nle = norleucin, L = leucin, γE-x53=(S)-4-karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril)

Primer 10: Testiranje farmakokinetike

[0241] Farmakokinetički profili su određene kako je opisano u Postupcima. Izračunate T1/2i cmaxvrednosti prikazane su u Tabeli 9.

Tabela 9. Farmakokinetički profili derivata eksendina-4.

Primer 11: Uticaj SEQ ID NO: 9 i SEQ ID NO: 13 na gastrično pražnjenje i probavni period kod ženki NMRI-miševa

[0242] Žene NMRI-miševi, teške u proseku 25-30 g, primaju 1, 3 i 10 μg/kg SEQ ID NO: 9 ili 10 µg/kg SEQ ID NO: 13 ili potkožno fosfatno puferisani fiziološki rastvor soli (kontrola nosačem) 60 min pre primene obojenog bolusa.30 minuta kasnije, izvršena je procena sadržaja želuca i probavnog perioda (Slika 1 i 2).

[0243] U ovim istraživanjima, SEQ ID NO: 9 smanjuje probavni period za 49, 62 i 64% (p <0,0001) i povećava preostali gastrični sadržaj za 32, 79 i 111% (p <0,0001), respektivno. SEQ ID NO: 13 smanjuje probavni period za 60% (p <0,0001) i povećava preostali gastrični sadržaj za 40% (p <0,0001), respektivno. (p <0,0001 u odnosu na kontrolu nosača, jednosmerna ANOVA, nakon čega sledi Dunetov post-hoc test).

Primer 12:

Efekat SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 i liraglutida na 22-časovni unosu hrane kod ženki NMRI-miševa

[0244] Nahranjenim ženkama NMRI-miševa, teške u proseku od 25-30 g, dato su potkožno, direktno pre početka praćenja ishrane 0,1 mg/kg SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, liraglutida ili fosfatno puferisani fiziološki rastvor (kontrola nosačem). Faza sa isključenim svetlima (tamna faza) počela je 4 sata kasnije.

[0245] Svi testirani preparati indukovali su izrazito smanjenje unosa hrane, dostižući nakon 22 sata za liraglutid 47% (p = 0,006), za SEQ ID NO: 1271% (p <0,0001) i SEQ ID NO: 13 93% (p = 0,0003 , 2-V-ANOVA-RM na rangovima, post hoc Dunetov test) na kraju ispitivanja, respektivno (Slika 3a).

Efekat SEQ ID NO: 9 na 22-časovni unos hrane kod ženki NMRI-miševa

[0246] Nahranjenim ženkama NMRI-miševa, teškim u proseku od 25-30 g, dato je 3 μg/kg ili 10 μg/kg SEQ ID NO: 9 ili potkožno sa fosfatnim puferom (kontrola nosačem) direktno pre početka praćenja hranjenja. Faza sa isključenim svetlima (tamna faza) počela je 4 sata kasnije.

[0247] SEQ ID NO: 9 je indukovao izrazito smanjenje unosa hrane, posle 22 sata dostižući za 3 μg/kg 11% (nije značajno, p = 0,78), i za 10 μg/kg 62% (p = 0,0005, dvosmerna ANOVA-RM na ranku, post hoc Dunetov test) na kraju ispitivanja, respektivno (Slika 3b).

Primer 13:

[0248] Subhronični efekti SEQ ID NO: 9 posle potkožnog tretmana na glukozu u krvi i telesnu težinu kod ženki C57BL/6NCrl miševa sa ishranom indukovanom gojaznošću (DIO) (18 nedelja na ishrani bogatoj mastima, postupak 1)

1) Glukozni profil

[0249] Ishranom ugojenoj ženki C57BL/6NCrl miša davan je potkožno svakodnevno u popodnevnim satima, na kraju svetlosne faze (sa 12h sati uključenim svetlima) 10, 30 i 100 µg/kg SEQ ID N0: 9 ili fosfatno puferisan rastvor (kontrola nosačem na standardnoj ili ishrani bogatoj mastima). Na dan 6 lečenja i na predefinisanim vremenskim tačkama, uzeto je više uzoraka krvi za merenje nivoa glukoze u krvi i generisanje profila glukoze u krvi tokom 24 sata.

[0250] Već na početku uzorkovanja krvi na dan 6 tretmana nivo bazne koncentracije glukoze u krvi je zavisio od doze u odnosu na DIO kontrolne miševe (Slika 4).

2) Telesne težine

[0251] Gojazne ženke C57BL/6NCrl miševa su tretirane 4 nedelje jednom dnevno potkožno u popodnevnim satima, na kraju faze svetlosti (12 sati sa uključenim svetlima) sa 10, 30 ili 100 μg/kg SEQ ID NO: 9 ili sa nosačem. Telesna težina je dnevno zabeležena, a sadržaj telesne masti određen je pre početka lečenja i nakon 4 nedelje lečenja.

[0252] Mogu se dobiti uporedivi podaci i za mužjake i za ženke miševa.

[0253] Tretman sa SEQ ID NO: 9 je smanjio telesnu težinu, dok je kontrolna grupa ishrane sa mastima održavala telesnu težinu (Slika 5 i Tabela 10). Izračunavanje relativne promene telesne mase iz osnovnih vrednosti pokazalo je smanjenje telesne težine u zavisnosti od doze, koje varira između 13,3-16,4% na 10 μg/kg, 17,6-20,9% pri 30 μg/kg i 21,7-22,7% pri 100 μg/kg (Slika 6). Ove promene rezultovale su smanjenjem telesne masti, što pokazuju apsolutne promene u sadržaju masti (Slika 7 i Tabela 10).

Tabela 10. Promena težine kod miševa DIO tokom 4-nedeljnog tretmana (sredina ± SEM)

Primer 14: Akutni i subhronični efekti SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 10 i SEQ ID NO: 9 posle potkožnog lečenja glukoze u krvi i HbA1c kod ženki dijabetičkih db/db miševa deficitnih sa leptin receptorima (postupak 3)

1) Glukozni profil

[0254] Nakon uzorkovanja krvi za utvrđivanje osnovice nivoa glukoze u krvi, ženkama dijabetičkih db/db miševa primenjeno je 100 μg/kg SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 10 i SEQ ID NO: 9 ili rastvor fosfatnog pufera (nosačem tretirana db/db kontrola) potkožno, ujutro, na početku faze svetlosti (svetlo uključeno 12 sati). Na predefinisanim vremenskim tačkama, uzimano je više uzoraka krvi za merenje nivoa glukoze u krvi i stvaranje profila glukoze u krvi tokom 24 sata.

[0255] Mogu se dobiti uporedivi podaci i za mužjake i za ženke miševa.

[0256] U testiranoj dozi, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 10 i SEQ ID NO: 9 pokazuju značajno smanjenje glukoze u krvi u poređenju sa kontrolnim miševima db/db, koje traje duže od 24 sata u SEQ ID NO: 10 i SEQ ID NO: 9 doznim grupama (Slika 8).

2) Glukoza u krvi i HbA1c

[0257] Ženke dijabetičkih miševa su tretirane 4 nedelje jednom dnevno potkožno sa 10, 30 ili 100 μg/kg SEQ ID NO: 9 ili sa nosačem, ujutro, na početku faze svetlosti (svetlo uključeno 12 sati). Glukoza u krvi i HbA1c su određeni pre početka terapije i na kraju ispitivanja nakon 4 nedelje terapije. Moglo se primetiti snažno i smanjenje glukoze u krvi, zavisno od doze, superiornije od liraglutida u srednjoj i najvišoj dozi (Slika 9). Pre nego što je počelo lečenje, nikakve značajne razlike u nivoima glukoze u krvi nisu mogle da se otkriju između grupa db/db, samo su životinje slabe kontrole imale značajno niže nivoe glukoze. Tokom 4 nedelje lečenja, nivo glukoze se povećao u kontrolnoj grupi db/db tretiranoj sa nosačem, što ukazuje na pogoršanje stanja dijabetesa. Sve SEQ ID NO: 9-tretirane životinje pokazale su značajno niže nivo glukoze u krvi od kontrolnih miševa db na kraju ispitivanja.

[0258] Mogu se dobiti uporedivi podaci i za mužjake i za ženke miševa.

[0259] Odgovarajući na nivo glukoze u krvi, na početku ispitivanja, ne mogu se otkriti značajne razlike u nivoima HbA1c između grupa db/db, samo su životinje slabe kontrole imale znatno niže nivoe. Tokom 4 nedelje lečenja, HbA1c je povećan u kontrolnoj grupi db/db tretiranoj sa nosačima, što odgovara povećanju nivoa glukoze u krvi. Životinje tretirane sa SEQ ID NO: 9 su prikazale niži nivo HbA1c od kontrolnih miševa db/db na kraju ispitivanja u sve tri doze (slika 10).

Primer 15: Subhronični efekti SEQ ID NO: 9 i SEQ ID NO: 21 posle potkožnog lečenja telesne težine kod miševa kod ženki C57BL/6NCrl miševa sa ishranom indukovanom gojaznošću (DIO) (14 nedelja pred-hranjenja sa ishranom bogatom mastima, postupak 2)

[0260] Gojazne ženke C57BL/6NCrl miševa su tretirane 3 nedelje jednom dnevno potkožno u kasno popodne, pre kraja faze svetlosti (svetlo uključeno 12 sati) sa 10 μg/kg SEQ ID NO: 9 i SEQ ID NO: 21 ili nosačem. Telesna težina je dnevno beležena.

[0261] Tretman sa SEQ ID NO: 9 i SEQ ID NO: 21 smanjuje telesnu težinu, dok je kontrolna grupa sa ishranom bogatom mastima čak dobila telesnu težinu (Slika 11 i Tabela 11).

Izračunavanje relativne promene telesne težine od osnovnih vrednosti pokazalo je smanjenje telesne težine do 15,1% za 10 μg/kg SEQ ID NO: 9 i 18,0% za 10 μg/kg SEQ ID NO: 21 (Slika 12).

Tabela 11. Promena težine kod miševa DIO tokom 3-nedeljnog tretmana (sredina ± SEM)

Primer 16: Uticaji 4 nedelje tretmana sa SEQ ID NO: 16 i SEQ ID NO: 21 na glukozu, HbA1c i toleranciju oralne glukoze kod ženki dijabetičkih dbdb miševa (postupak 4) [0262] Ženke dbdb-miševa primile su 3 i 10 µg/kg SEQ ID NO: 16 i 10 ug/kg SEQ ID NO: 21 ili fosfatom puferisan fiziološki rastvor (kontrola nosačem) jednom dnevno, potkožno tokom četiri nedelje.

[0263] Oba jedinjenja su postigla statistički značajno smanjenje glukoze bez gladovanja u poređenju sa kontrolu nosačem u dozama od 10 μg/kg (Slika 13); p <0,05, jednosmerna ANOVA, praćena Dunetovim post-hoc testom.

[0264] Osim toga, oba jedinjenja sprečila su povećanje HbA1c na statistički značajan način u poređenju sa kontrolom nosača u dozi od 10 μg/kg (Slika 14); (p <0,05, jednosmerna ANOVA, nakon čega sledi Dunetov post-hoc test). Tretman sa SEQ ID NO: 16 i SEQ ID NO: 21 dovodi do poboljšane tolerancije na oralnu glukozu (Slika 15, prikazana kao normalizovana na 0 mmol/l na 0 min), i redukcija AUC pod krivom glukoze dostigla je statističku značajnost u poređenju sa kontrolom nosačem (Slika 16); (p <0,05, jednosmerna ANOVA, nakon čega sledi Dunetov post-hoc test).

Primer 17: SEQ ID NO: 14 i SEQ ID NO: 21 na snižavanju glukoze kod neizgladnjivanih ženki dijabetičkih dbdb-miševa

[0265] Ženke dbdb miševa primile su potkožno 3 μg/kg SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 21 ili fosfatom puferisan fiziološki rastvor (kontrola nosačem), na vreme 0 minuta. Oba jedinjenja su odmah smanjila vrednosti glukoze (osnovica na 20-22 mmol/l), sa SEQ ID NO: 14 i dostižu maksimalni efekat ~ 8 mmol/l (Slika 18) i SEQ ID NO: 21 od 10-12 mmol/l smanjenja glukoze (Slika 17), respektivno, na 240 minuta i održavaju to do kraja posmatranja na 480 minuta.

[0266] Oba jedinjenja su dostigla statistički značajno smanjenje glukoze u poređenju sa kontrolom nosačem od t = 60 min do kraja posmatranja (p <0,05, dvosmerna ANOVA na ponovljenim merama, nakon čega sledi Dunetov post-hoc test).

Tabela 12: Sekvence

LISTA SEKVENCI

[0267]

Claims

Patentni zahtevi

1. Peptidno jedinjenje koje ima formulu (I):

R<1>-Z-R<2>(I)

gde je Z peptidni deo koji ima formulu (II)

X3 predstavlja Glu,

X12 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ile i Lys,

X14 predstavlja aminokiselinski ostatak koji ima bočni lanac sa -NH2grupom, gde je grupa -NH2bočnog lanca funkcionalizovana sa -C(O)-R<5>, gde R<5>može biti deo koji sadrži do 50 ili do 100 atoma ugljenika i opciono heteroatoma izabranih od halogena, N, O, S i/ili P,

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser, Lys, Glu i Gln,

X18 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala i Arg,

X19 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ala i Val,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln, Aib, Lys i His,

X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp, Glu i Leu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly, Thr i D-Ala,

X40 je ili odsutan ili predstavlja Lys,

R<1>predstavlja NH2,

R<2>predstavlja C-terminal grupa od peptidno jedinjenje i je izabran od OH i NH2, ili njegova so ili solvat, gde je jedinjenje GLP-1 i GIP receptor agonist.

2. Jedinjenje patentnog zahteva 1, gde

X14 predstavlja aminokiselinski ostatak sa funkcionalizovanom -NH2grupom bočnog lanca, kao što je funkcionalizovan Lys, Orn, Dab ili Dap, gde je barem jedan H atom od -NH2grupe bočnog lanca je zamenjen sa -C(O)-R<5>, koji je izabran i grupe koju čine (S)-4-Karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril-, 4-heksadekanoilamino-butiril-, 4-{3-[(R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetil-tridecil)-hroman-6-iloksikarbonil]-propionilamino}-butiril-, 4-oktadekanoilamino-butiril, 4-((Z)-oktadek-9-enoilamino)-butiril-, 6-[(4,4-Difenil-cikloheksiloksi)-hidroksi-fosforiloksi]-heksanoil-, Heksadekanoil-, (S)-4-Karboksi-4-(15-karboksi-pentadekanoilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-{3-[3-((2S,3R,4S,5R)-5-karboksi-2,3,4,5-tetrahidroksi-pentanoilamino)-propionilamino]-propionilamino}-butiril, (S)-4-Karboksi-4-{3-[(R)-2,5,7,8-tetrametil-2-((4R,8R)-4,8,12-trimetil-tridecil)-hroman-6-iloksikarbonil]-propionilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dienoilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-[6-((2S,3R,4S,5R)-5-karboksi-2,3,4,5-tetrahidroksi-pentanoilamino)-heksanoilamino]-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((2S,3R,4S,5R)-5-karboksi-2,3,4,5-tetrahidroksi-pentanoilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-tetradekanoilamino-butiril-, (S)-4-(11-Benziloksikarbonilundekanoilamino)-4-karboksi-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-[11-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksi-heksilkarbamoil)-undekanoilamino]-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((Z)-oktadek-9-enoilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-(4-dodeciloksi-benzoilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-henikozanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-dokozanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((Z)-nonadek-10-enoilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-(4-deciloksi-benzoilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-[(4'-oktiloksi-bifenil-4-karbonil)-amino]-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-(12-fenil-dodekanoilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-ikozanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-heksadekanoilamino-butirilamino)-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-oktadekanoilamino-butirilamino)-butiril-, 3-(3-oktadekanoilaminopropionilamino)-propionil-, 3-(3-heksadekanoilamino-propionilamino)-propionil-, 3-heksadekanoilamino-propionil-, (S)-4-Karboksi-4-[(R)-4-((3R,5S,7R,8R,9R,10S,12S,13R,14R,17R)-3,7,12-trihidroksi-8,10,13-trimetilheksadekahidro-ciklopenta[a]fenantren-17-il)-pentanoilamino]-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-[(R)-4-((3R,5R,8R,9S,10S,13R,14S,17R)-3-hidroksi-10,13-dimetil-heksadekahidrociklopenta[a]fenantren-17-il)-pentanoilamino]-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((9S,10R)-9,10,16-trihidroksi-heksadekanoilamino)-butiril-, tetradekanoil-, 11-Karboksi-undekanoil-, 11-Benziloksikarbonil-undekanoil-, (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-tetradekanoilaminobutirilamino)-butiril-, 6-[hidroksi-(naftalen-2-iloksi)-fosforiloksi]-heksanoil-, 6-[hidroksi-(5-fenil-pentiloksi)-fosforiloksi]-heksanoil-, 4-(Naftalen-2-sulfonilamino)-4-okso-butiril-, 4(Bifenil-4-sulfonilamino)-4-okso-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butiril-, (S)-4-Karboksi-2-{(S)-4-karboksi-2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butiril-,(S)-4-Karboksi-2-{(S)-4-karboksi-2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butiril-, 2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetil-, 2-(2-{2-[(S)-4-Karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetil-, (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[(S)-4-karboksi-4-(19-karboksi-nonadekanoilamino)-butirilamino]-butirilamino}-butirilamino)-butiril-, 2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Karboksi-4-(16-1H-tetrazol-5-il-heksadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetil-, 2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Karboksi-4-(16-karboksi-heksadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetil-, (S)-4-Karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksi-heptadekanoilamino)-butirilamino]-butirilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{(S)-4-karboksi-4-[10-(4-karboksi-fenoksi)-dekanoilamino]-butirilamino}-etoksi)-etoksi]-acetilamino}-etoksi)-etoksi]-acetilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(7-karboksi-heptanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(11-karboksi-undekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(13-karboksi-tridekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(15-karboksi-pentadekanoilamino)butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-, i (S)-4-Karboksi-4-{(S)-4-karboksi-4-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(19-karboksinonadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-butirilamino}-butiril-,

X40 je odsutan ili predstavlja Lys.

3. Jedinjenje bilo kod patentnog zahteva 1 - 2, gde

4. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, gde

X14 je Lys funkcionalizovan sa C(O)-R<5>, koji je izabran iz grupe koju čine (S)-4-karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril (γE-x53), (S)-4-karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril (γE-x70), (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-oktadekanoilamino-butirilamino)-butiril (γE-γE-x70), 4-oktadekanoilamino-butiril (GABA-x70), (S)-4-Karboksi-4-henikozanoilamino-butiril (γE-x76), i 3-(3-oktadekanoilamino-propionilamino)-propionil (β-Ala-β-Ala-x70).

5. Jedinjenje bilo kod patentnog zahteva 1 - 4, gde R<2>je NH2.

6. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, gde peptidno jedinjenje ima relativnu aktivnost od barem 0,04%, poželjno barem 0,08%, poželjnije barem 0,2% u poređenju sa onom od prirodnog GIP na GIP receptoru.

7. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6, gde peptidno jedinjenje pokazuje relativnu aktivnost od barem 0,07%, poželjno barem 0,1%, poželjnije barem 0,14%, poželjnije barem 0,35% i čak poželjnije barem 0,4% u poređenju sa onom od GLP-1(7-36) na GLP-1 receptoru.

8. Jedinjenje bilo kod patentnog zahteva 1-7, gde

X3 predstavlja Glu,

X12 predstavlja Ile,

X14 predstavlja Lys, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa jednom od grupa izabranih od (S)-4-Karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-oktadekanoilaminobutirilamino)-butiril-, 3-(3-oktadekanoilamino-propionilamino)-propionil-, 4-oktadekanoilamino-butiril-, i (S)-4-Karboksi-4-henikozanoilamino-butiril,

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Glu i Asp,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser i Lys,

X17 predstavlja Arg,

X18 predstavlja Ala,

X19 predstavlja Ala,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln i Aib,

X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly i Thr,

X40 je odsutan.

9. Jedinjenje bilo kod patentnog zahteva 1-8, gde

X14 predstavlja Lys, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa jednom od grupa izabranih od (S)-4-Karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril, 4-oktadekanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-henikozanoilamino-butiril-, (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-oktadekanoilamino-butirilamino)-butiril-, i 3-(3-oktadekanoilamino-propionilamino)-propionil-.

10. Jedinjenje bilo kod patentnog zahteva 1-7, gde

11. Jedinjenje bilo kod patentnog zahteva 1-7, gde

X3 predstavlja Glu,

X12 predstavlja Ile,

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Glu i Asp,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser i Lys,

X17 predstavlja Arg,

X18 predstavlja Ala,

X19 predstavlja Ala,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln i Aib,

X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly i Thr,

X40 je odsutan.

12. Jedinjenje patentnog zahteva 1, gde X19 predstavlja Ala.

13. Jedinjenje bilo kod patentnog zahteva 1-12, gde

X28 predstavlja Ala,

X29 predstavlja Gly.

14. Jedinjenje bilo kod patentnog zahteva 1-12, gde

X28 predstavlja Asn,

X29 predstavlja Thr.

15. Jedinjenje bilo kod patentnog zahteva 1-7,11-14, gde

X3 predstavlja Glu,

X12 predstavlja Ile,

X14 predstavlja Lys, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa -C(O)-R<5>, koji je (S)-4-Karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril-(γE-x53),

X15 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser i Lys,

X17 predstavlja Arg,

X18 predstavlja Ala,

X19 predstavlja Ala,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln i Aib,

X21 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asp i Glu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly i Thr,

X40 je odsutan.

16. Jedinjenje bilo kod patentnog zahteva 1-9, 12-14, gde

X3 predstavlja Glu,

X12 predstavlja Ile,

X14 predstavlja Lys, gde je -NH2grupa bočnog lanca funkcionalizovana sa -C(O)-R<5>, koji je izabran od (S)-4-Karboksi-4-oktadekanoilamino-butiril-(γE-x70), (S)-4-Karboksi-4-((S)-4-karboksi-4-oktadekanoilamino-butirilamino)-butiril-(γE-γE-x70), 3-(3-Oktadekanoilaminopropionilamino)-propionil-(βA-βA-x70), 4-oktadekanoilamino-butiril-(GABA-x70), i (S)-4-Karboksi-4-henikozanoilamino-butiril-(ϒE-x76),

X15 predstavlja Glu,

X16 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Ser i Lys,

X17 predstavlja Arg,

X18 predstavlja Ala,

X19 predstavlja Ala,

X20 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gln i Aib,

X21 predstavlja Glu,

X28 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Asn i Ala,

X29 predstavlja aminokiselinski ostatak izabran od Gly i Thr,

X40 je odsutan.

17. Jedinjenje patentnog zahteva 1, izabrano od jedinjenja od SEQ ID NO.: 9-12, 14-27, 31, 33-36, 39, ili njegova so ili solvat.

18. Jedinjenje patentnog zahteva 1, izabrano od jedinjenja od SEQ ID NO.: 9, 10, 12, 14-27, 31, 33-36, ili njegova so ili solvat.

19. Jedinjenje patentnog zahteva 1, izabrano od jedinjenja od SEQ ID NO.: 9-12 i 39, ili njegova so ili solvat.

20. Jedinjenje patentnog zahteva 1, izabrano od jedinjenja od SEQ ID NO.: 9, 10, 12, ili njegova so ili solvat.

21. Jedinjenje patentnog zahteva 1, izabrano od jedinjenja od SEQ ID NO.: 14-21 ili njegova so ili solvat.

22. Jedinjenje patentnog zahteva 1, izabrano od jedinjenja od SEQ ID NO.: 22-27, 31, 33-36, ili njegova so ili solvat.

23. Jedinjenje patentnog zahteva 1, gde je jedinjenje predstavljeno sa SEQ ID NO.: 9, ili njegova so ili solvat.

24. Jedinjenje patentnog zahteva 1, gde je jedinjenje predstavljeno sa SEQ ID NO.: 12, ili njegova so ili solvat.

25. Jedinjenje patentnog zahteva 1, gde je jedinjenje predstavljeno sa SEQ ID NO.: 14, ili njegova so ili solvat.

26. Jedinjenje patentnog zahteva 1, gde je jedinjenje predstavljeno sa SEQ ID NO.: 16, ili njegova so ili solvat.

27. Jedinjenje patentnog zahteva 1, gde je jedinjenje predstavljeno sa SEQ ID NO.: 17, ili njegova so ili solvat.

28. Jedinjenje patentnog zahteva 1, gde je jedinjenje predstavljeno sa SEQ ID NO.: 18, ili njegova so ili solvat.

29. Jedinjenje patentnog zahteva 1, gde je jedinjenje predstavljeno sa SEQ ID NO.: 20, ili njegova so ili solvat.

30. Jedinjenje patentnog zahteva 1, gde je jedinjenje predstavljeno sa SEQ ID NO.: 21, ili njegova so ili solvat.

31. Jedinjenje bilo kod patentnog zahteva 1-30 za primenu u medicini, posebno u ljudskoj medicini.

32. Jedinjenje patentnog zahteva 31 za primenu prema patentnom zahtevu 31 koje je prisutno kao aktivni agens u farmaceutskom sastavu zajedno sa barem jednim farmaceutski prihvatljivim nosačem.

33. Jedinjenje patentnog zahteva 31 za primenu prema patentnom zahtevu 31 ili 32 zajedno sa je barem jednim dodatnim terapeutski aktivnim agensom, gde je dodatni terapeutski aktivan agens izabran od serije Insulina i derivata Insulina, GLP-1, GLP-1 analoga i GLP-1 receptor agonista, polimerom vezanih GLP-1 i GLP-1 analoga, dualnogog GLP1/glukagon agonista, PYY3-36 ili njegovog analoga, pankreasnog polipeptida ili njegovog analoga, Glukagon receptor agonista, GIP receptor agonista ili antagonista, grelin antagonista ili inveznog agonista, Ksenina i njegovog analoga, DDP-IV inhibitora, SGLT2 inhibitora, dualnog SGLT2 / SGLT1 inhibitora, Biguanida, Tiazolidinediona, dualnog PPAR agonista, Sulfonilurea, Meglitinida, alfa-glucosidaza inhibitora, Amilin i Amilin analoga, GPR119 agonista, GPR40 agonista, GPR120 agonista, GPR142 agonista, sistemskog ili niskoapsorbljibog TGR5 agonista, cikloseta, inhibitora 11-beta-HSD, aktivatora glukokinaze, inhibitora DGAT, inhibitora protein tirozinfosfataze 1, inhibitora glukoza-6-fosfataze, inhibitora fructoza-1,6-bisfosfataze, inhibitora glikogen fosforilaze, inhibitora fosfoenol piruvat karboksikinaze, inhibitora glikogen sintaza kinaze, inhibitora piruvat dehidrogenaze kinaze, alfa2-antagonista, CCR-2 antagonista, modulatora glukoza transportera-4, agonista Somatostatin receptora 3, inhibitora HMG-CoA-reduktazae, fibrata, nikotinske kiseline i njenih derivata, nikotinska kiselina receptor 1 agonista, PPAR-alfa, gama ili alfa/gama agonista ili modulatora, PPAR-delta agonista, ACAT inhibitora, inhibitora apsorpcije holesterola, supstancekoja vezuje žučnu kiselinu, IBAT inhibitora, MTP inhibitora, modulatora PCSK9, regulatora na gore LDL receptora pomoću tiroidnog hormon receptor β agonista selektivnog na jetru, jedinjenja koja dižu HDL, modulatora metabolizma lipida, PLA2 inhibitora , ApoA-I poboljšivača, agonista receptor tiroidnog hormona, inhibitora sinteze holesterola, omega-3 masnih kiselina i njihovih derivata, aktivnih supstanci za tretman gojaznosti, kao što su Sibutramin, Tesofensin, Orlistat, antagonista CB-1 receptora, MCH-1 antagonista, agonista i delimičnog agonista MC4 receptora, NPY5 ili NPY2 antagonista, NPY4 agonista, beta-3-agonista, leptin ili leptin mimetika, agonista 5HT2c receptora, ili kombinacija od bupropion/naltrekson (CONTRAVE), bupropion/zonisamid (EMPATIC), bupropion/fentermin ili pramlintid/metreleptin, QNEXA (fentermin+ topiramat), inhibitora lipaze, inhibitora angiogeneze, H3 antagonista, AgRP inhibitora, inhibitora trostrukog uzimanja monoamina (norepinefrin i acetilholin), MetAP2 inhibitora, nazalne formulacije blokatora kalcijumskog kanala diltiazema, antisensa protiv proizvodnje receptora faktora rasta fibroblasta 4, peptida-1 koji cilja prohibitin, lekova za uticanje na visok krvni pritisak, hroničnog prstanka rada srca ili aterosklerze, kao što je antagonista angiotensin II receptora, ACE inhibitora, ECE inhibitora, diuretika, beta-blokatora, kalcijum antagonista, centralno delujućeg hipertensiva, antagonista alfa-2-adrenergičkog receptora, inhibitora neutralne endopeptidaze, inhibitora agregacije trombocita.

34. Jedinjenje patentnog zahteva 31 za primenu prema patentnom zahtevu 31 ili 32 zajedno sa je barem jednim dodatnim terapeutski aktivnim agensom, gde je dodatni terapeutski aktivan agens posebni GLP-1 agonist i/ili insulin ili analog insulina i/ili gastrointestinalni peptid.

35. Jedinjenje patentnog zahteva 31 za primenu prema bilo kom od patentnih zahteva 31-34 za primenu u tretmanu ili prevenciji hiperglikemije, dijabetesa tipa 2, poremećaja tolerancije glukoze, dijabetesa tipa 1, gojaznosti, metaboličkog sindroma i neurodegenerativnih poremećaja, posebno za primenu u odlaganju ili sprečavanju progresije bolesti kod dijabetesa ipa 2, tretmanu metaboličkog sindroma, tretmanu gojaznosti ili sprečavanju gojaznosti, smanjenju unosa hrane, povećanju utroška energije, smanjenju telesne težine, odlaganju napredovanja od poremećaja tolerancije glukoze (IGT) do dijabetesa tipa 2; odlaganju progresije od dijabetesa tipa 2 do dijabetesa kom je neophodan insulin; regulisanju apetita, indukovanje zasićenosti, sprečavanju dobijanja težine nakon uspešnog gubitka težine, tretmanu bolesti ili stanja povezanih sa prekomernom težinom ili gojaznošću, tretmanu bulimije, tretmanu nekontrolisanog prejedanja, tretmanu ateroskleroze, hipertenzije, IGT, dislipidemije, koronarne srčane bolesti, hepatičke steaoze, tretmanu trovanja betablokatorom, inhibiranju pokretljivosti gastro-intestinalnog trakta, za primene povezane sa ispitivanjem gastro-intestinalnog trakta koristeći tehnike kao što su rendgensko, CT i NMR skeniranje.

36. Jedinjenje patentnog zahteva 31 za primenu prema bilo kom od patentnih zahteva 31-35 za primenu u tretmanu ili prevenciji hiperglikemije, dijabetesa tipa 2, gojaznosti.