RS60796B1 - Kompozicije i postupci za modulaciju ekspresije apolipoproteina (a) - Google Patents

Kompozicije i postupci za modulaciju ekspresije apolipoproteina (a)

Info

Publication number
RS60796B1
RS60796B1 RS20201052A RSP20201052A RS60796B1 RS 60796 B1 RS60796 B1 RS 60796B1 RS 20201052 A RS20201052 A RS 20201052A RS P20201052 A RSP20201052 A RS P20201052A RS 60796 B1 RS60796 B1 RS 60796B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
certain embodiments
compound
nucleoside
modified
oligonucleotide
Prior art date
Application number
RS20201052A
Other languages
English (en)
Inventor
Thazha P Prakash
Punit P Seth
Eric E Swayze
Mark J Graham
Original Assignee
Ionis Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=51843959&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS60796(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ionis Pharmaceuticals Inc filed Critical Ionis Pharmaceuticals Inc
Publication of RS60796B1 publication Critical patent/RS60796B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/03—Phosphoric monoester hydrolases (3.1.3)
    • C12Y301/03048—Protein-tyrosine-phosphatase (3.1.3.48)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C12N2310/113—Antisense targeting other non-coding nucleic acids, e.g. antagomirs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering nucleic acids [NA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/17—Immunomodulatory nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/322—2'-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/334—Modified C
    • C12N2310/3341—5-Methylcytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3511—Conjugate intercalating or cleaving agent
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3513—Protein; Peptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3525—MOE, methoxyethoxy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/353—Nature of the modification linked to the nucleic acid via an atom other than carbon
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Liquid Crystal Substances (AREA)

Description

Opis
POZADINA PRONALASKA
[0001] Princip u osnovi antisens tehnologije je da se antisens jedinjenje hibridizuje u ciljnu nukleinsku kiselinu i modulira količinu, aktivnost i/ili funkciju ciljne nukleinske kiseline. Na primer, u određenim slučajevima, antisens jedinjenja dovode do izmenjene transkripcije ili translacije cilja. Takva modulacija ekspresije se može postići putem, na primer, degradacije ciljne iRNK ili inhibicije na bazi popunjenosti. Primer modulacije ciljne funkcije RNK putem degradacije je degradacija na bazi RNaze H ciljne RNK nakon hibridizacije antisens jedinjenjem sličnim DNK. Još jedan primer modulacije ekspresije gena putem degradacije cilja je RNK interferencija (RNKi). RNKi se odnosi na antisens-posredovano gensko utišavanje pomoću mehanizma koji koristi kompleks RNK-indukovanog utišavanja (RNA-induced siliencing complex, RISC). Dodatni primer modulacije ciljne funkcije RNK je putem mehanizma na bazi popunjenosti kakav se u prirodi koristi od strane mikroRNK. MikroRNK su male nekodirajuće RNK koje regulišu ekspresiju RNK koje kodiraju proteine. Vezivanje antisens jedinjenja za mikroRNK sprečava da se mikroRNK vezuje za svoje ciljeve, informacione RNK, te tako ometa funkcionisanje mikroRNK. Imitatori mikroRNK mogu da poboljšaju funkciju nativne mikroRNK. Određena antisens jedinjenja menjaju splajsovanje pre-iRNK. Bez obzira na specifični mehanizam, specifičnost sekvence čini antisens jedinjenja atraktivnim alatom za validaciju cilja i funkcionalizaciju gena, kao i terapeutskim sredstvima za selektivnu modulaciju ekspresije gena koji učestvuju u patogenezi bolesti.
[0002] Antisens tehnologija je delotvoran način modulacije ekspresije jednog ili više specifičnih genskih proizvoda i stoga se može pokazati jedinstveno korisnom u nizu terapeutskih, dijagnostičkih i istraživačkih primena. Hemijski modifikovani nukleozidi mogu da se uključe u antisens jedinjenja kako bi se poboljšalo jedno ili više svojstava, kao što je otpornost na nukleazu, farmakokinetika ili afinitet prema ciljnoj nukleinskoj kiselini. Godine 1998. antisens jedinjenje, Vitravene® (fomivirsen; razvijen od strane kompanije Isis Pharmaceuticals Inc., Carlsbad, CA) bilo je prvi antisens lek koji je dobio dozvolu za puštanje na tržište od strane Uprave za hranu i lekove (FDA) Sjedinjenih Američkih Država, i trenutno se koristi kao terapija za retinitis indukovan citomegalovirusom (CMV) kod pacijenata obolelih od AIDS-a.
[0003] Nove hemijske modifikacije su unapredile potentnost i delotvornost antisens jedinjenja, što je stvorilo potencijal za oralnu isporuku i poboljšalo supkutanu primenu, smanjilo potencijal za pojavu neželjenih dejstava i dovelo do poboljšane pogodnosti za pacijente. Hemijske modifikacije koje povećavaju potentnost antisens jedinjenja omogućavaju primenu manjih doza, što smanjuje potencijalnu toksičnost i ukupne troškove terapije. Modifikacije koje povećavaju otpornost na degradaciju dovode do sporijeg klirensa iz organizma, što omogućava manje učestalo doziranje. Različite vrste hemijskih modifikacija mogu da se kombinuju u jednom jedinjenju, kako bi se dodatno optimizovala delotvornost jedinjenja.
[0004] Lipoproteini su loptaste čestice slične micelama koje se sastoje od nepolarnog jezgra acilglicerola i holesteril estara okruženog amfifilnim omotačem sačinjenim od proteina, fosfolipida i holesterola. Lipoproteini se klasifikuju u pet velikih kategorija na osnovu njihovih funkcionalnih svojstava: hilomikroni, lipoproteini veoma male gustine (very low density lipoproteins, VLDL), lipoproteini srednje gustine (intermediate density lipoproteins, IDL), lipoproteini male gustine (low density lipoproteins, LDL) i lipoproteini velike gustine (high density lipoproteins, HDL). Hilomikroni transportuju dijetarne lipide od creva do tkiva. VLDL, IDL i LDL transportuju triacilglicerole i holesterol od jetre do tkiva. HDL transportuju endogeni holesterol od tkiva do jetre
[0005] Čestice lipoproteina prolaze neprekidnu metaboličku obradu, i imaju promenljiva svojstva i sastav. Gustina lipoproteina raste bez povećanja prečnika čestice, jer je gustina njihovih spoljašnjih omotača manja od gustine unutrašnjeg jezgra. Proteinske komponente lipoproteina su poznate kao apolipoproteini. Najmanje devet apolipoproteina je u značajnim količina distribuirano u različitim ljudskim lipoproteinima.
[0006] Čestica lipoproteina (a) [Lp(a)] je identifikovana pre skoro 50 godina, i sastoji se od veoma jedinstvene čestice LDL u kojoj je jedan protein apolipoprotein B (apoB) putem disulfidne veze povezan sa jednim proteinom apolipoproteina (a) [apo(a)]. Apo(a) protein deli veliki stepen homologosti sa plazminogenom, naročito u kringl IV tip 2 repetitivnom domenu. Nivoi cirkulišućeg Lp(a) su obrnuto proporcionalni broju varijabilnih ponavljanja kringl IV tipa 2 prisutnih u molekulu i, pošto su oba alela koeksprimirana kod pojedinaca, mogu da pokazuju profile heterozigotnih izooblika plazme (Kraft i sar. Eur J Hum Genet, 1996; 4(2): 74-87). Smatra se da taj kringl ponavljajući domen u apo(a) može biti odgovoran za njegova protrombotska i antifibrinolitička svojstva, potencijalno poboljšavajući progresiju ateroskleroze.
[0007] Apo(a) se transkripciono reguliše putem IL-6, i u studijama kod pacijenata sa reumatoidnim artritisom koji su lečeni inhibitorom IL-6 (tocilizumab), nivoi u plazmi su smanjeni za 30% nakon 3 meseca lečenja (Schultz i sar. PLoS One 2010; 5:e14328).
[0008] Pokazalo se da apo(a) prvenstveno vezuje oksidisane fosfolipide i potencira vaskularnu inflamaciju (Bergmark i sar. J Lipid Res 2008; 49:2230-2239; Tsimikas i sar. Circulation. 2009; 119(13):1711-1719).
[0009] Nadalje, studije ukazuju da čestica Lp(a) može takođe da stimuliše endotelnu propustljivost, indukuje ekspresiju inhibitora aktivatora plazminogena tip 1 i aktivira lučenje makrofaga interleukina-8 (Koschinsky i Marcovina, Curr Opin Lipidol 2004; 15:167-174). Značajno je što su nedavne studije genetske asocijacije otkrile da je Lp(a) nezavisan faktor rizika za infarkt miokarda, moždani udar, perifernu vaskularnu bolest i aneurizmu abdominalne aorte (Rifai i sar. Clin Chem 2004; 50:1364-71; Erqou i sar. JAMA 2009;302:412-23; Kamstrup i sar. Circulation 2008;117:176-84). Nadalje, u nedavnoj studiji PROCARDIS (Precocious Coronary Artery Disease), Klark i sar. (Clarke et al., NEJM (2009)361; 2518-2528) opisali su značajnu i nezavisnu povezanost između koronarne bolesti srca i koncentracije Lp(a) u plazmi. Dodatno, Solfrici i sar. su ukazali na to da se povišeni Lp(a) u serumu može povezati sa povećanim rizikom od Alchajmerove bolesti (AB) (Solfrizzi i sar. J Neurol Neurosurg Psychiatry 2002, 72:732-736. Trenutno, u kliničkom okruženju, primeri indirektnih inhibitora apo(a) za lečenje kardiovaskularne bolesti uključuju aspirin, niaspan, mipomersen, anacetrapib, epirotirom i lomitapid koji smanjuju nivo Lp(a) u plazmi za 18%, 39%, 32%, 36%, 43%, odnosno 17%. Dodatno, afereza Lp(a) je korišćena na klinici za smanjenje Lp(a) čestica koje sadrže apo(a).
[0010] Do danas, terapeutske strategije za lečenje kardiovaskularne bolesti pomoću direktnog ciljanja nivoa apo(a) su bile ograničene. Razvijeni su ribozimski oligonukleotidi (U.S. Patent 5,877,022) i antisens oligonukleotidi (WO 2005/000201; WO 2003/014397; WO2013/177468; US20040242516; U.S. patenti br.8,138,328, 8,673,632 i 7,259,150; Merki i sar. J Am Coll Cardiol 2011; 57:1611-1621) ali nijedan nije bio odobren za komercijalnu upotrebu.
[0011] Tako, i dalje postoji jasna neispunjena medicinska potreba za novim agensima koji potencijalno i selektivno smanjuju nivo apo(a) kod pacijenata kod kojih postoji povećan rizik od kardiovaskularnih događaja usled hronično povišenog nivoa Lp(a) u plazmi.
SAŽETAK PRONALASKA
[0012] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid i konjugovanu grupu, pri čemu, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 20 povezanih nukleozida i ima nukleobaznu sekvencu koja sadrži 20 uzastopnih nukleobaza komplementarnih sa delom iste dužine nukleobaza 3901 do 3920 SEQ ID NO: 1, pri čemu, nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida je 100% komplementarna sa SEQ ID NO: 1; i pri čemu konjugovana grupa sadrži:
[0013] Predmenti pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač.
[0014] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje iz pronalaska za upotrebu u lečenju, prevenciji ili usporavanju progresije bolesti povezane sa povišenim apo(a) i/ili povišenim Lp(a).
SAŽETAK PRONALASKA
[0015] Ovde su otkrivene kompozicije i postupci za modulaciju ekspresije apo(a) iRNK i proteina. U određenim otelotvorenjima, specifični inhibitor apo(a) smanjuje ekspresiju apo(a) iRNK i proteina. Ovde su otkrivene kompozicije i postupci za modulaciju ekspresije nivoa Lp(a).
[0016] U određenim otelotvorenjima, kompozicija je specifični inhibitor apo(a). U određenim otelotvorenjima, specifični inhibitor apo(a) je nukleinska kiselina, protein ili mali molekul. U određenim otelotvorenjima, specifični inhibitor apo(a) je antisens oligonukleotid koji cilja apo(a) konjugatom. U određenim otelotvorenjima, specifični inhibitor apo(a) je modifikovani oligonukleotid i konjugat, pri čemu, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i ima nukleobaznu sekvencu koja sadrži deo od najmanje 8 uzastopnih nukleobaza komplementarnih sa delom iste dužine nukleobaza 3901 do 3920 SEQ ID NO: 1, pri čemu, nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida je najmanje 80% komplementarna sa SEQ ID NO: 1. U određenim otelotvorenjima, specifični inhibitor apo(a) je modifikovani oligonukleotid i konjugat, pri čemu, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i ima nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19 ili 20 uzastopnih nukleobaza nukleobazne sekvence SEQ ID NO: 1-130, 133, 134. U određenim otelotvorenjima, specifični inhibitor apo(a) je modifikovani oligonukleotid i konjugat, pri čemu, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 20 povezanih nukleozida i ima nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8 uzastopnih nukleobaza bilo koje od SEQ ID NO: 58, pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži: (a) segment razmaka (eng. gap) koji se sastoji od deset povezanih dezoksinukleozida; (b) 5' krilni segment koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; (c) 3' krilni segment koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; i pri čemu je segment razmaka pozicioniran između 5' krilnog segmenta i 3' krilnog segmenta, pri čemu svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži 2'-O-metoksietil šećer, pri čemu, najmanje jedna internukleozidna veza je fosforotioatna veza i pri čemu, svaki citozinski ostatak je 5-metilcitozin.
[0017] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića obezbeđuju kompoziciju koja sadrži ovde opisano konjugovano antisens jedinjenje, ili njegovu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.
[0018] U određenim otelotvorenjima, modulacija ekspresije apo(a) odvija se u ćeliji ili tkivu. U određenim otelotvorenjima, modulacija se odvija u ćeliji ili tkivu životinje. U određenim otelotvorenjima, životinja je čovek. U određenim otelotvorenjima, modulacija je smanjenje nivoa apo(a) u iRNK. U određenim otelotvorenjima, modulacija je smanjenje nivoa apo(a) u proteinu. U određenim otelotvorenjima, smanjeni su nivoi apo(a) u iRNK i u proteinu. U određenim otelotvorenjima, modulacija je smanjenje nivoa Lp(a). Do takvog smanjenja može doći na način zavisan od vremena ili način zavisan od doze.
[0019] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića obezbeđuju konjugovane antisens kompozicije i postupke za primenu u terapiji. Određena otelotvorenja predmetnog otkrića obezbeđuju kompozicije i postupke za prevenciju, lečenje, odlaganje, usporavanje progresije i/ili ublažavanje bolesti, poremećaja i stanja povezanih sa apo(a). Određena otelotvorenja predmetnog otkrića obezbeđuju kompozicije i postupke za prevenciju, lečenje, odlaganje, usporavanje progresije i/ili ublažavanje bolesti, poremećaja i stanja povezanih sa Lp(a). U određenim otelotvorenjima, takve bolesti, poremećaji i stanja su inflamatorne, kardiovaskularne i/ili metaboličke bolesti, poremećaji i stanja. U određenim otelotvorenjima, kompozicije i postupci za terapiju uključuju primenu specifičnog inhibitora apo(a) na pojedincu kome je to potrebno. U određenim otelotvorenjima, specifični inhibitor apo(a) je nukleinska kiselina. U određenim otelotvorenjima, nukleinska kiselina je antisens jedinjenje. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje je modifikovani oligonukleotid. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje je modifikovani oligonukleotid sa konjugatom.
[0020] U određenim otelotvorenjima, predmetno otkriće obezbeđuje konjugovano antisens jedinjenje. U određenim otelotvorenjima, predmetno otkriće obezbeđuje konjugovana antisens jedinjenja koja sadrže antisens oligonukleotid komplementaran sa transkriptom nukleinske kiseline. U određenim otelotvorenjima, predmetno otkriće obezbeđuje postupke koji obuhvataju dovođenje ćelije u kontakt sa konjugovanim antisens jedinjenjem koje sadrži antisens oligonukleotid komplementaran sa transkriptom nukleinske kiseline. U određenim otelotvorenjima, predmetno otkriće obezbeđuje postupke koji obuhvataju dovođenje ćelije u kontakt sa konjugovanim antisens jedinjenjem koje sadrži antisens oligonukleotid i smanjuje količinu ili aktivnost transkripta nukleinske kiseline u ćeliji.
[0021] Asijaloglikoproteinski receptor (ASGP-R) je prethodno bio opisan. Vidite npr. Park i sar. PNAS sveska 102, br. 47, str. 17125-17129 (2005). Takvi receptori su eksprimirani na ćelijama jetre, naročito hepatocitima. Nadalje, pokazalo se da su jedinjenja koja sadrže klastere od tri liganda N-acetilgalaktozamina (GalNAc) sposobna da se vezuju za ASGP-R, što dovodi do unosa jedinjenja u ćeliju. Vidite npr. Khorev i sar. Bioorganic and Medicinal Chemistry, 16, 9, str. 5216-5231 (maj 2008.). Shodno tome, konjugati koji sadrže takve klastere GalNAc su korišćeni za olakšavanje unosa određenih jedinjenja u ćelije jetre, naročito hepatocite. Na primer, pokazalo se da određeni konjugati koji sadrže GalNAc povećavaju aktivnost jedinjenja siRNK dupleksa u ćelijama jetre in vivo. U takvim slučajevima, konjugat koji sadrži GalNAc je obično povezan sa sens lancem dupleksa siRNK. Pošto se sens lanac odbacuje pre nego što se antisens lanac konačno hibridizuje sa ciljnom nukleinskom kiselinom, malo je verovatno da će konjugat ometati aktivnost. Konjugat je obično povezan sa 3' krajem sens lanca siRNK. Vidite npr. U.S. patent 8,106,022. Određene grupe konjugata koje su ovde opisane su aktivnije i/ili lakše za sintetisanje od grupa konjugata koje su prethodno opisane.
[0022] U određenim otelotvorenjima predmetnog otkrića, konjugati su povezani sa jednolančanim antisens jedinjenjima, uključujući, ali se ne ograničavajući na antisens jedinjenja na bazi RNaze H i antisens jedinjenja koja menjaju splajsovanje pre-iRNK ciljne nukleinske kiseline. U takvim otelotvorenjima, konjugat treba da ostane povezan sa antisens jedinjenjem dovoljno dugo da obezbedi korist (poboljšan unos u ćelije) ali zatim treba ili da bude otcepljen ili da na drugi način ne ometa dalje korake koji su neophodni za aktivnost, kao što je hibridizacija u ciljnu nukleinsku kiselinu i interakcija sa RNazom H ili enzimima povezanim sa splajsovanjem ili modulacijom splajsovanja. Ovaj bilans svojstava je važniji u postavci jednolančanih antisens jedinjenja nego u siRNK jedinjenjima, gde konjugat može jednostavno biti vezan za sens lanac. Ovde su otkrivena konjugovana jednolančana antisens jedinjenja koja imaju poboljšanu potentnost u ćelijama jetre in vivo u poređenju sa istim antisens jedinjenjem koje nema konjugat. S obzirom na potrebni bilans svojstava za ova jedinjenja, takva poboljšana potentnost je iznenađujuća.
[0023] U određenim otelotvorenjima, ovde date grupe konjugata sadrže ostatak koji može da se otcepi. Kao što je navedeno, bez želje da se ograničimo mehanizmom, logično je da konjugat treba da ostane na jedinjenju dovoljno dugo da obezbedi poboljšanje unosa, ali je nakon toga poželjno da određeni deo ili, idealno, ceo konjugat bude otcepljen, otpuštajući matično jedinjenje (npr. antisens jedinjenje) u njegovom najaktivnijem obliku. U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi je otcepljivi nukleozid. Takva otelotvorenja koriste endogene nukleaze u ćeliji tako što kače ostatak konjugata (klaster) za antisens oligonukleotid pomoću nukleozida putem jedne ili više raskidivih veza, kao što su fosfodiestarske veze. U određenim otelotvorenjima, klaster je vezan sa otcepljivim nukleozidom putem fosfodiestarske veze. U određenim otelotvorenjima, otcepljivi nukleozid je povezan sa antisens oligonukleotidom (antisens jedinjenje) putem fosfodiestarske veze. U određenim otelotvorenjima, grupa konjugata može da sadrži dva ili tri nukleozida koji se mogu otcepiti. U takvim otelotvorenjima, takvi nukleozidi koji se mogu otcepiti su povezani međusobno, sa antisens jedinjenjem i/ili sa klasterom putem raskidivih veza (kao što su fosfodiestarske veze). Određeni konjugati koji su ovde dati ne sadrže otcepljivi nukleozid i umesto toga sadrže raskidivu vezu. Pokazano je da je dovoljno cepanje konjugata od oligonukleotida obezbeđeno pomoću najmanje jedne veze koja je podložna cepanju u ćeliji (raskidiva veza).
[0024] U određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja su prolekovi. Takvi prolekovi se primenjuju na životinji i na kraju se metabolišu u aktivniji oblik. Na primer, konjugovana antisens jedinjenja se otcepljuju da bi se uklonio konjugat u celini ili delimično, što daje aktivni (ili aktivniji) oblik antisens jedinjenja kome nedostaje konjugat u celini ili delimično.
[0025] U određenim otelotvorenjima, konjugati su zakačeni za 5' kraj oligonukleotida. Određeni takvi 5'-konjugati se efikasnije cepaju nego parnjaci koji imaju sličnu konjugovanu grupu zakačenu za 3' kraj. U određenim otelotvorenjima, poboljšana aktivnost može biti povezana sa poboljšanim cepanjem. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi koji imaju konjugat na 5' kraju imaju veću efikasnost nego oligonukleotidi koji imaju konjugat na 3' kraju (vidite, na primer, Primere 56, 81, 83 i 84). Nadalje, 5'-vezivanje omogućava jednostavniju sintezu oligonukleotida. Oligonukleotidi se obično sintetišu na čvrstoj podlozi u smeru od 3' kao 5'. Da bi se napravio 3'-konjugovani oligonukleotid, obično se prekonjugovani 3' nukleozid zakači za čvrstu podlogu, i oligonukleotid se zatim pravi na uobičajeni način. Međutim, kačenje konjugovanog nukleozida za čvrstu podlogu komplikuje sintezu. Nadalje, koristeći taj pristup, konjugat je zatim prisutan kroz celu sintezu oligonukleotida i može da se degradira tokom daljih koraka, ili može da ograniči vrste reakcija i reagenasa koji mogu da se koriste. Koristeći ovde opisane strukture i tehnike za 5'-konjugovane oligonukleotide, oligonukleotid može da se sintetiše koristeći standardne automatizovane tehnike i konjugat može da se uvede sa finalnim (najviše-5') nukleozidom ili nakon što je oligonukleotid otcepljen od čvrste podloge.
[0026] Imajući u vidu struku i predmetno otkriće, osoba sa uobičajenim znanjem lako može da napravi bilo koji od ovde datih konjugata i konjugovanih oligonukleotida. Štaviše, sinteza određenih takvih konjugata i konjugovanih oligonukleotida koji su ovde otkriveni je jednostavnija i/ili zahteva mali broj koraka, te je stoga jeftinija od sinteze prethodno otkrivenih konjugata, što pruža prednosti u proizvodnji. Na primer, sinteza određenih konjugovanih grupa se sastoji od manjeg broja koraka sinteze, što dovodi do većeg prinosa u odnosu na konjugovane grupe koje su prethodno opisane. Konjugovane grupe kao što su GalNAc3-10 u Primeru 46 i GalNAc3-7 u Primeru 48 su mnogo jednostavnije od prethodno opisanih konjugata, kao što su oni opisani u U.S.8,106,022 ili U.S.7,262,177, koji zahtevaju sklapanje više hemijskih intermedijera. Shodno tome, ovi i drugi ovde opisani konjugati imaju prednost u odnosu na prethodno opisana jedinjenja za upotrebu sa bilo kojim oligonukleotidom, uključujući jednolančane oligonukleotide i bilo koji lanac dvolančanih oligonukleotida (npr. siRNK).
[0027] Slično tome, ovde su otkrivene konjugovane grupe koje imaju samo jedan ili dva GalNAc liganda. Kao što je prikazano, takve konjugovane grupe poboljšavaju aktivnost antisens jedinjenja. Takva jedinjenja su mnogo jednostavnija za pripremu od konjugata koji sadrže tri GalNAc liganda. Konjugovane grupe koje sadrže jedan ili dva GalNAc liganda mogu se vezati za bilo koje antisens jedinjenje, uključujući jednolančane oligonukleotide i bilo koji lanac dvolančanih oligonukleotida (npr. siRNK).
[0028] U određenim otelotvorenjima, ovde dati konjugati suštinski ne menjanju određene mere podnošljivosti. Na primer, ovde je pokazano da konjugovana antisens jedinjenja nisu
1
više imunogena od nekonjugovanih matičnih jedinjenja. Pošto je potentnost poboljšana, otelotvorenja u kojima podnošljivost ostaje ista (ili čak i kada je podnošljivost samo blago pogoršana u poređenju sa dobicima u potentnosti) imaju poboljšana svojstva za terapiju.
[0029] U određenim otelotvorenjima, konjugacija omogućava da se antisens jedinjenja izmene na način koji ima manje poželjne posledice u odsustvu konjugacije. Na primer, u određenim otelotvorenjima, zamena jedne ili više fosforotioatnih veza potpuno fosforotioatnog antisens jedinjenja sa fosfodiestarskim vezama dovodi do poboljšanja nekih mera podnošljivosti. Na primer, u određenim slučajevima, takva antisens jedinjenja koja imaju jedan ili više fosfodiestara su manje imunogena od istog jedinjenja u kome je svaka veza fosforotioat. Međutim, u određenim slučajevima, kao što je prikazano u Primeru 26, ta ista zamena jedne ili više fosforotioatnih veza fosfodiestarskim vezama takođe dovodi do smanjenog ćelijskog unosa i/ili gubitka potentnosti. U određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja koja su ovde opisana mogu da podnesu takve promene u vezama uz mali ili nepostojeći gubitak unosa ili potencije u poređenju sa konjugovanim potpuno fosforotioatnim parnjacima. Zapravo, u određenim otelotvorenjima, na primer, u Primerima 44, 57, 59 i 86, oligonukleotidi koji sadrže konjugat i najmanje jednu fosfodiestarsku internukleozidnu vezu zapravo ispoljavaju povećanu potentnost in vivo čak i u odnosu na potpuno fosforotioatni parnjak koji takođe sadrži isti konjugat. Štaviše, pošto konjugacija dovodi do značajnih povećanja unosa/potentnosti, mali gubitak tog značajnog povećanja može biti prihvatljiv kako bi se postigla poboljšana podnošljivost. Shodno tome, u određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja sadrže najmanje jednu fosfodiestarsku vezu.
[0030] U određenim otelotvorenjima, konjugacija ovde datih antisens jedinjenja dovodi do povećanja isporuke, unosa i aktivnosti kod hepatocita. Tako se veća količina jedinjenja isporučuje u tkivo jetre. Međutim, u određenim otelotvorenjima, samo ta povećana isporuka ne objašnjava celokupno povećanje aktivnosti. U određenim takvim otelotvorenjima, veća količina ulazi u hepatocite. U određenim otelotvorenjima, čak ni taj povećani unos hepatocita ne objašnjava celokupno povećanje aktivnosti. U takvim otelotvorenjima, produktivni unos konjugovanog jedinjenja je povećan. Na primer, kako je prikazano u Primeru 102, određena otelotvorenja konjugata koji sadrže GalNAc povećavaju obogaćenost antisens oligonukleotida hepatocitima u poređenju sa neparenhimskim ćelijama. Obogaćivanje je korisno za oligonukleotide koji ciljaju gene eksprimirane u hepatocitima.
[0031] U određenim otelotvorenjima, ovde data konjugovana antisens jedinjenja dovode do manje izloženosti bubrega. Na primer, kako je prikazano u Primeru 20, koncentracije antisens oligonukleotida koji sadrže određena otelotvorenja konjugata koji sadrže GalNAc su manje u bubregu od koncentracija antisens oligonukleotida koji nemaju konjugat koji sadrži GalNAc. Ovo ima nekoliko pogodnih terapeutskih implikacija. Za terapeutske implikacije u kojima se ne traži aktivnost u bubregu, izloženost bubrega dovodi do rizika od toksičnosti bubrega bez odgovarajuće koristi. Štaviše, velika koncentracija u bubregu obično dovodi do gubitka jedinjenja kroz urin i posledično bržeg klirensa. Shodno tome, za ciljeve koji nisu vezani za bubreg, akumulacija u bubrezima je nepoželjna.
[0032] U određenim otelotvorenjima, obezbeđena su konjugovana antisens jedinjenja sa strukturom:
[0033] Predmetno otkriće obezbeđuje sledeća neograničavajuća numerisana jedinjenja:
[0034] Konjugovano antisens jedinjenje može biti predstavljeno sledećom strukturom. Antisens jedinjenje može da sadrži modifikovani oligonukleotid ISIS 494372 sa 5'-X, pri čemu, X je konjugovana grupa koja sadrži GalNAc, kao što je definisano u zahtevima.
Antisens jedinjenje može da se sastoji od modifikovanog oligonukleotida ISIS 494372 sa 5'-X, pri čemu, X je konjugovana grupa koja sadrži GalNAc, kao što je definisano u zahtevima.
[0035] U određenim otelotvorenjima, konjugovano antisens jedinjenje može biti predstavljeno sledećom strukturom. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje sadrži konjugovani modifikovani oligonukleotid ISIS 681251. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje se sastoji od konjugovanog modifikovanog oligonukleotida ISIS 681251.
1
[0036] U određenim otelotvorenjima, konjugovano antisens jedinjenje može biti predstavljeno sledećom strukturom. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje sadrži konjugovani modifikovani oligonukleotid ISIS 681257. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje se sastoji od konjugovanog modifikovanog oligonukleotida ISIS 681257.
[0037] U određenim otelotvorenjima, konjugovano antisens jedinjenje može biti predstavljeno sledećom strukturom. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje sadrži modifikovani oligonukleotid sa SEQ ID NO: 58 sa 5'-GalNAc, kako je definisano u zahtevima, uz varijabilnost u šećernim modifikacijama krila. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje se sastoji od modifikovanog oligonukleotida sa SEQ ID NO: 58 sa 5'-GalNAc, kako je definisano u zahtevima, uz varijabilnost u šećernim modifikacijama krila.
1
[0038] Pri čemu, R<1>je -OCH2CH2OCH3(MOE) i R<2>je H; ili R<1>i R<2>zajedno grade most, pri čemu, R<1>je -O- i R<2>je -CH2-, -CH(CH3)-, ili -CH2CH2-, i R<1>i R<2>su neposredno povezani tako da je nastali most odabran od: -O-CH2-, -O-CH(CH3)- i -O-CH2CH2-;
I za svaki par R<3>i R<4>na istom prstenu, nezavisno za svaki prsten: R<3>je izabran od H i -OCH2CH2OCH3i R<4>je H; ili R<3>i R<4>zajedno grade most, pri čemu, R<3>je -O- i R<4>je - CH2-, -CH(CH3)-, ili -CH2CH2- i R<3>i R<4>su neposredno povezani tako da je nastali most odabran od: -O-CH2-, -O-CH(CH3)- i -O-CH2CH2-;
I R<5>je izabran od H i -CH3;
I Z je izabran od S<->i O-.
1
DETALJAN OPIS OTKRIĆA
[0039] Treba razumeti da i prethodni opšti opis i detaljan opis u nastavku služe samo kao primer i objašnjenje, i ne ograničavaju otkriće. U ovom tekstu, upotreba jednine uključuje i množinu, ako izričito nije drugačije navedeno. Kako se ovde koristi, upotreba „ili“ znači „i/ili“, ako nije drugačije navedeno. Nadalje, upotreba termina „uključujući“, kao i drugih oblika, poput „uključuje“ i „uključeno“, nije ograničavajuća. Takođe, termini kao što su „element“ ili „komponenta“ obuhvataju i elemente i komponente koji sadrže jednu jedinicu, i elemente i komponente koji sadrže više od jedne podjedinice, ako izričito nije drugačije navedeno.
[0040] Naslovi odeljaka koji se ovde koriste služe samo za organizacione svrhe, i ne treba ih tumačiti kao ograničenje date teme.
A. Definicije
[0041] Osim ako nisu obezbeđene specifične definicije, nomenklatura koja se koristi u vezi sa analitičkom hemijom, sintetskom organskom hemijom i medicinskom i farmaceutskom hemijom, kao i njihovim procedurama i tehnikama, koje su ovde opisane su one koje su dobro poznate i uobičajeno korišćene u oblasti. Standardne tehnike mogu da se koriste za hemijsku sintezu i hemijsku analizu. Neke takve tehnike i procedure se mogu naći, na primer, u „Carbohydrate Modifications in Antisense Research“ čiji su urednici Sangvi i Cook, American Chemical Society , Washington D.C., 1994; „Remington's Pharmaceutical Sciences“, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 21. izdanje, 2005; i „Antisense Drug Technology, Principles, Strategies, and Applications“ urednik Stanley T. Crooke, CRC Press, Boca Raton, Florida; i Sambrook i sar. „Molecular Cloning, A laboratory Manual“, 2. izdanje, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989
[0042] Ako nije drugačije naznačeno, sledeći termini imaju sledeća značenja:
Kako se ovde koristi, „nukleozid“ označava jedinjenje koje sadrži ostatak nukleobaze i ostatak šećera. Nukleozidi uključuju, ali nisu ograničeni na, nukleozide koji se javljaju u
1
prirodi (kao što se mogu naći u DNK i RNK) i modifikovane nukleozide. Nukleozidi mogu biti povezani sa fosfatnim ostatkom.
[0043] Kako se ovde koristi, „hemijska modifikacija“ označava hemijsku razliku kod jedinjenja kada se poredi sa parnjakom koji se javlja u prirodi. Hemijske modifikacije oligonukleotida uključuju modifikacije nukleozida (uključujući modifikacije ostatka šećera i modifikacije nukleobaze) i modifikacije internukleozidne veze. U pogledu oligonukleotida, hemijska modifikacija ne uključuje razlike samo u sekvenci nukleobaze.
[0044] Kako se ovde koristi, „furanozil“ označava strukturu koja sadrži 5-člani prsten koji sadrži četiri atoma ugljenika i jedan atom kiseonika.
[0045] Kako se ovde koristi, „ostatak šećera koji se javlja u prirodi“ označava ribofuranozil kao što se može naći u RNK koja se javlja u prirodi ili dezoksirubofuranozil kao što se može naći u DNK koja se javlja u prirodi.
[0046] Kako se ovde koristi, „ostatak šećera“ označava ostatak šećera koji se javlja u prirodi ili modifikovali ostatak šećera nukleozida.
[0047] Kako se ovde koristi, „modifikovani ostatak šećera“ označava supstituisani ostatak šećera ili surogat šećera.
[0048] Kako se ovde koristi, „supstituisani ostatak šećera“ označava furanozil koji nije ostatak šećera koji se javlja u prirodi. Supstituisani ostaci šećera uključuju, ali nisu ograničeni na furanozile koji imaju supstituente na 2'-poziciji, 3'-poziciji, 5'-poziciji i/ili 4'-poziciji. Određeni supstituisani ostaci šećera su biciklični ostaci šećera.
[0049] Kao što se ovde koristi, „2'-supstituisani ostatak šećera“ označava furanozil koji sadrži supstituent na 2'-poziciji koji nije H ili OH. Ako nije drugačije naznačeno, 2'-supstituisani ostatak šećera nije biciklični ostatak šećera (tj. 2'-supstituent 2'-supstituisanog ostatka šećera ne formira most do drugog atoma prstena furanozila.
[0050] Kako se ovde koristi, „MOE“ označava -OCH2CH2OCH3.
1
[0051] Kako se ovde koristi, „2'-F nukleozid“ se odnosi na nukleozid koji sadrži šećer koji ima fluor na poziciji 2'. Osim ako nije drugačije naznačeno, fluor u 2'-F nukleozidu je na ribo poziciji (zamenjuje OH prirodne riboze).
[0052] Kako se ovde koristi, termin „surogat šećera“ označava strukturu koja ne sadrži furanozil i koja može da zameni ostatak šećera nukleozida koji se javlja u prirodi, tako da dobijene podjedinice nukleozida mogu da se povezuju međusobno i/ili da se povezuju sa drugim nukleozidima i da grade oligomerno jedinjenje koje može da se hibridizuje u komplementarno oligomerno jedinjenje. Takve strukture uključuju prstenove koji sadrže različit broj atoma od furanozila (npr.4, 6 ili 7-člani prstenovi); zamenu kiseonika furanozila atomom koji nije kiseonik (npr. ugljenik, sumpor ili azot); ili i promenu broja atoma i zamenu kiseonika. Takve strukture takođe mogu da sadrže supstitucije koje odgovaraju onima opisanim za supstituisane ostatke šećera (npr. 6-člani karbociklični biciklični surogati šećera koji opciono sadrže dodatne supstituente). Surogati šećera takođe uključuju kompleksnije zamene šećera (npr. neprstenasti sistemi peptidne nukleinske kiseline). Surogati šećera uključuju, bez ograničenja, morfoline, cikloheksenile i cikloheksitole.
[0053] Kako se ovde koristi, „biciklični ostatak šećera“ označava modifikovani ostatak šećera koji sadrži 4 do 7-člani prsten (uključujući, ali se ne ograničavajući na furanozil) koji sadrži most koji spaja dva atoma 4 do 7-članog prstena radi nastanka drugog prstena, što daje bicikličnu strukturu. U određenim otelotvorenjima, 4 do 7-člani prsten je prsten šećera. U određenim otelotvorenjima, 4 do 7-člani prsten je furanozil. U određenim takvim otelotvorenjima, most povezuje 2'-ugljenik i 4'-ugljenik furanozila.
[0054] Kao što se ovde koristi, „nukleinska kiselina“ se odnosi na molekule sačinjene od monomernih nukleotida. Nukleinska kiselina uključuje ribonukleinske kiseline (RNK), dezoksiribonukleinske kiseline (DNK), jednolančane nukleinske kiseline (ssDNK), dvolančane nukleinske kiseline (dsDNK), male interferirajuće ribonukleinske kiseline (siRNK) i mikroRNK (miRNK). Nukleinska kiselina takođe može da sadrži bilo koju kombinaciju ovih elemenata u pojedinačnom molekulu.
[0055] Kao što se ovde koristi, „nukleotid“ označava nukleozid koji dalje sadrži fosfatnu vezujuću grupu. Kao što se ovde koristi, „povezani nukleozidi“ mogu ili ne moraju biti
1
povezani putem fosfatnih veza te tako uključuju, ali nisu ograničeni na, „povezane nukleotide“. Kao što se ovde koristi, „povezani nukleozidi“ su nukleozidi koji su povezani u neprekidnoj sekvenci (tj. dodatni nukleozidi nisu prisutni između onih koji su povezani).
[0056] Kao što se ovde koristi, „nukleobaza“ označava grupu atoma koja može biti povezana sa ostatkom šećera kako bi nastao nukleozid koji može da se inkorporiše u oligonukleotid, i pri čemu je grupa atoma sposobna da se vezuje sa komplementarnom prirodnom nukleobazom drugog oligonukleotida ili nukleinske kiseline. Nukleobaze mogu biti prirodne ili modifikovane. Kao što se ovde koristi, „sekvenca nukleobaze“ označava redosled uzastopnih nukleobaza nezavisno od bilo kog šećera, veze ili modifikacije nukleobaze.
[0057] Kao što se ovde koriste, termini „nemodifikovane nukleobaze“ ili „nukleobaze koje se javljaju u prirodi“ označavaju heterociklične nukleobaze RNK ili DNK koje se javljaju u prirodi: purinske baze adenin (A) i guanin (G) i pirimidinske baze timin (T), citozin (C) (uključujući 5-metil C) i uracil (U).
[0058] Kao što se ovde koristi, „modifikovana nukleobaza“ označava bilo koju nukleobazu koja nije nukleobaza koja se javlja u prirodi.
[0059] Kao što se ovde koristi, „modifikovani nukleozid“ označava nukleozid koji sadrži najmanje jednu hemijsku modifikaciju u poređenju sa RNK ili DNK nukleozidima koji se javljaju u prirodi. Modifikovani nukleozidi sadrže modifikovani ostatak šećera i/ili modifikovanu nukleobazu.
[0060] Kao što se ovde koristi, „biciklični nukleozid“ ili „BNA“ označava nukleozid koji sadrži biciklični ostatak šećera.
[0061] Kao što se ovde koristi, „ograničeni etil nukleozid“ ili „cEt“ označava nukleozid koji sadrži biciklični ostatak šećera koji sadrži 4'-CH(CH3)-O-2' most.
[0062] Kao što se ovde koristi, „zaključani nukleozid nukleinske kiseline“ ili „LNA“ označava nukleozid koji sadrži biciklični ostatak šećera koji sadrži 4'-CH2-O-2' most.
2
[0063] Kao što se ovde koristi, „2'-supstituisani nukleozid“ označava nukleozid koji sadrži supstituent na 2'-poziciji koji nije H ili OH. Ako nije drugačije naglašeno, 2'-supstituisani nukleozid nije biciklični nukleozid.
[0064] Kao što se ovde koristi, „dezoksinukleozid“ označava nukleozid koji sadrži 2'-H furanozil ostatak šećera, kao što se može naći u dezoksiribonukleozidima (DNK) koji se javljaju u prirodi. U nekim otelotvorenjima, 2'-dezoksinukleozid može da sadrži modifikovanu nukleobazu ili može da sadrži RNK nukleobazu (npr. uracil).
[0065] Kao što se ovde koristi, „oligonukleotid“ označava jedinjenje koje sadrži mnoštvo povezanih nukleozida. U nekim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži jedan ili više nemodifikovanih ribonukleozida (RNK) i/ili nemodifikovanih dezoksiribonukleozida (DNK) i/ili jedan ili više modifikovanih nukleozida.
[0066] Kao što se ovde koristi, „oligonukleozid“ označava oligonukleotid u kome nijedna od internukleozidnih veza ne sadrži atom fosfora. Kao što se ovde koriste, oligonukleotidi uključuju oligonukleozide.
[0067] Kao što se ovde koristi, „modifikovani oligonukleotid“ označava oligonukleotid koji sadrži najmanje jedan modifikovani nukleozid i/ili najmanje jednu modifikovanu internukleozidnu vezu.
[0068] Kao što se ovde koristi, „veza“ ili „vezujuća grupa“ označava grupu atoma koji povezuju dve ili više drugih grupa atoma.
[0069] Kao što se ovde koristi, „internukleozidna veza“ označava kovalentnu vezu između susednih nukleozida u oligonukleotidu.
[0070] Kao što se ovde koristi, „internukleozidna veza koja se javlja u prirodi“ označava 3' do 5' fosfodiestarsku vezu.
[0071] Kao što se ovde koristi, „modifikovana internukleozidna veza“ označava bilo koju internukleozidnu vezu osim internukleozidne veze koja se javlja u prirodi.
[0072] Kao što se ovde koristi, „terminalna internukleozidna veza“ označava vezu između poslednja dva nukleozida oligonukleotida ili njegovog definisanog regiona.
[0073] Kao što se ovde koristi, „fosforna vezujuća grupa“ označava vezujuću grupu koja sadrži atom fosfora. Fosforne vezujuće grupe uključuju, bez ograničenja, grupe koje imaju formulu:
pri čemu:
Rai Rdsu svaki, nezavisno, O, S, CH2, NH, ili NJ1pri čemu, J1je C1-C6alkil ili supstituisani C1-C6alkil;
Rbje O ili S;
Rcje OH, SH, C1-C6alkil, supstituisani C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, supstituisani C1-C6alkoksi, amino ili supstituisani amino; i
J1je Rbje O ili S.
[0074] Fosforne vezujuće grupe uključuju, bez ograničenja, fosfodiestar, fosforotioat, fosforoditioat, fosfonat, fosforamidat, fosforotioamidat, tionoalkilfosfonat, fosfotriestre, tionoalkilfosfotriestar i boranofosfat.
[0075] Kao što se ovde koristi, „internukleozidna fosforna vezujuća grupa“ označava fosfornu vezujuću grupu koja neposredno vezuje dva nukleozida.
[0076] Kao što se ovde koristi, „neinternukleozidna fosforna vezujuća grupa“ označava fosfornu vezujuću grupu koja ne vezuje neposredno dva nukleozida. U nekim otelotvorenjima, neinternukleozidna fosforna vezujuća grupa povezuje nukleozid sa grupom koja nije nukleozid. U nekim otelotvorenjima, neinternukleozidna fosforna vezujuća grupa povezuje dve grupe, od kojih nijedna nije nukleozid.
[0077] Kao što se ovde koristi, „neutralna vezujuća grupa“ označava vezujuću grupu koja nije naelektrisana. Neutralne vezujuće grupe uključuju, bez ograničenja, fosfotriestre, metilfosfonate, MMI (-CH2-N(CH3)-O-), amid-3 (-CH2-C(=O)-N(H)-), amid-4 (-CH2-N(H)-C(=O)-), formacetal (-O-CH2-O-) i tioformacetal (-S-CH2-O-). Dalje neutralne vezujuće grupe uključuju nejonske veze koje sadrže siloksan (dialkilsiloksan), karboksilatni estar, karboksamid, sulfid, sulfonatni estar i amide (vidite, na primer: Carbohydrate Modifications in Antisense Research; Y.S. Sanghvi i P.D. Cook Eds. ACS Symposium Series 580; poglavlja 3 i 4, (str. 40-65)). Dalje neutralne vezujuće grupe uključuju nejonske veze koje sadrže pomešane N, O, S i CH2delove komponenti.
[0078] Kao što se ovde koristi, „internukleozidna neutralna vezujuća grupa“ označava neutralnu vezujuću grupu koja neposredno vezuje dva nukleozida.
[0079] Kao što se ovde koristi, „neinternukleozidna neutralna vezujuća grupa“ označava neutralnu vezujuću grupu koja ne vezuje neposredno dva nukleozida. U nekim otelotvorenjima, neinternukleozidna neutralna vezujuća grupa povezuje nukleozid sa grupom koja nije nukleozid. U nekim otelotvorenjima, neinternukleozidna neutralna vezujuća grupa povezuje dve grupe, od kojih nijedna nije nukleozid.
[0080] Kao što se ovde koristi, „oligomerno jedinjenje“ označava polimernu strukturu koja sadrži dve ili više podstruktura. U nekim otelotvorenjima, oligomerno jedinjenje sadrži oligonukleotid. U nekim otelotvorenjima, oligomerno jedinjenje sadrži jednu ili više konjugovanih grupa i/ili terminalnih grupa. U nekim otelotvorenjima, oligomerno jedinjenje se sastoji od oligonukleotida. Oligomerna jedinjenja takođe uključuju nukleinske kiseline koje se javljaju u prirodi. U nekim otelotvorenjima, oligomerno jedinjenje sadrži skelet od jedne ili više povezanih monomernih podjedinica gde je svaka povezana monomerna podjedinica direktno ili indirektno vezana za heterociklični bazni ostatak. U nekim otelotvorenjima, oligomerna jedinjenja takođe mogu da uključuju monomerne podjedinice koje nisu povezane sa heterocikličnim baznim ostatkom, čime obezbeđuju nebazna mesta. U nekim otelotvorenjima, veze koje spajaju monomerne podjedinice, ostatke šećera ili surogate
2
i heterociklične bazne ostatke mogu se nezavisno modifikovati. U nekim otelotvorenjima, vezujuća jedinica šećera, koja može, ali ne mora da uključuje heterocikličnu bazu, može da bude supstituisana mimetikom, kao što su monomeri u peptidnim nukleinskim kiselinama.
[0081] Kao što se ovde koristi, „terminalna grupa“ označava jedan ili više atoma vezanih za 3' kraj ili 5' kraj oligonukleotida, ili za oba. U nekim otelotvorenjima, terminalna grupa je konjugovana grupa. U nekim otelotvorenjima, terminalna grupa sadrži jedan ili više nukleozida terminalne grupe.
[0082] Kao što se ovde koristi, „konjugat“ ili „konjugovana grupa“ označava atom ili grupu atoma povezanu sa oligonukleotidom ili oligomernim jedinjenjem. Uopšteno, konjugovane grupe modifikuju jedno ili više svojstava jedinjenja za koje su vezane, uključujući, bez ograničenja, farmakodinamiku, farmakokinetiku, vezivanje, apsorpciju, ćelijsku distribuciju, ćelijski unos, naelektrisanje i/ili klirens.
[0083] Kao što se ovde koristi, „konjugovani linker“ ili „linker“ u kontekstu konjugovane grupe označava deo konjugovane grupe koji sadrži bilo koji atom ili grupu atoma i koji kovalentno povezuje (1) oligonukleotid sa drugim delom konjugovane grupe ili (2) dva ili više delova konjugovane grupe.
[0084] Konjugovane grupe su ovde prikazane kao radikali koji obezbeđuju vezu za nastanak kovalentnog vezivanja za oligomerno jedinjenje, kao što je antisens oligonukleotid. U nekim otelotvorenjima, tačka vezivanja oligomernog jedinjenja je 3' atom kiseonika 3'-hidroksilne grupe 3' terminalnog nukleozida oligomernog jedinjenja. U nekim otelotvorenjima, tačka vezivanja oligomernog jedinjenja je 5' atom kiseonika 5'-hidroksilne grupe 5' terminalnog nukleozida oligomernog jedinjenja. U nekim otelotvorenjima, veza za nastanak povezanosti sa oligomernim jedinjenjem je veza koja može da se cepa. U jednom takvom otelotvorenju, takva raskidiva veza čini celinu ili deo ostatka koji može da se otcepi.
[0085] U nekim otelotvorenjima, konjugovane grupe sadrže ostatak koji može da se otcepi (npr. raskidivu vezu ili otcepljivi nukleozid) i deo ugljovodoničnog klastera, kao što je deo GalNAc klastera. Takav ugljovodonični deo klastera sadrži: targetirajući ostatak i, opciono, konjugovani linker. U nekim otelotvorenjima, ugljovodonični deo klastera se identifikuje pomoću broja i identiteta liganda. Na primer, u nekim otelotvorenjima, ugljovodonični deo klastera sadrži 3 GalNAc grupe i označava se sa „GalNAc3“. U nekim otelotvorenjima, ugljovodonični deo klastera sadrži 4 GalNAc grupe i označava se sa „GalNAc4“. Specifični ugljovodonični delovi klastera (koji imaju specifične vezujuće, razgranate i konjugovane grupe linkera) su ovde opisani i označeni rimskim brojem nakon koga sledi indeks „a“. Shodno tome „GalNac3-1a“ se odnosi na specifični ugljovodonični deo klastera konjugovane grupe koji ima 3 GalNac grupe i specifično identifikovane vezujuće, razgranate i linkerske grupe. Takav ugljovodonični fragment klastera je povezan sa oligomernim jedinjenjem putem ostatka koji može da se otcepi, kao što je raskidiva veza ili otcepljivi nukleozid.
[0086] Kao što se ovde koristi, „ostatak koji može da se otcepi“ označava vezu ili grupu koja može da se podeli u fiziološkim uslovima. U nekim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi se otcepljuje unutar ćelije ili subćelijskih odeljaka, poput lizozoma. U nekim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi se otcepljuje putem endogenih enzima, kao što su nukleaze. U nekim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi sadrži grupu atoma sa jednom, dve, tri, četiri ili više od četiri otcepljive veze.
[0087] Kao što se ovde koristi, „raskidiva veza“ označava bilo koju hemijsku vezu koja može da se raskine. U nekim otelotvorenjima, raskidiva veza je odabrana od: amida, poliamida, estra, etra, jednog ili oba estra fosfodiestra, fosfatnog estra, karbamata, disulfida ili peptida.
[0088] Kao što se ovde koristi, „ugljovodonični klaster“ označava jedinjenje koje ima jedan ili više ugljovodoničnih ostataka povezanih sa skeletom ili linkerskom grupom. (vidite, npr. Maier i sar. "Synthesis of Antisense Oligonucleotides Conjugated to a Multivalent Carbohydrate Cluster for Cellular Targeting," Bioconjugate Chemistry, 2003, (14): 18-29, ili Rensen i sar. "Design and Synthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic Asiaglycoprotein Receptor," J. Med. Chem. 2004, (47): 5798-5808, za primere ugljovodoničnih konjugovanih klastera).
[0089] Kao što se ovde koristi, „modifikovani ugljeni hidrat“ označava bilo koji ugljeni hidrat koji ima jednu ili više hemijskih modifikacija u odnosu na ugljene hidrate koji se javljaju u prirodi.
2
[0090] Kao što se ovde koristi, „derivat ugljenog hidrata“ označava bilo koje jedinjenje koje može da se sintetiše koristeći ugljeni hidrat kao polaznu supstancu ili intermedijer.
[0091] Kao što se ovde koristi, „ugljeni hidrat“ označava ugljeni hidrat koji se javlja u prirodi, modifikovani ugljeni hidrat ili derivat ugljenog hidrata.
[0092] Kao što se ovde koristi, „zaštitna grupa“ označava bilo koje jedinjenje ili zaštitnu grupu poznatu osobama sa znanjem u oblasti. Neograničavajući primeri zaštitnih grupa mogu se naći u "Protective Groups in Organic Chemistry", T. W. Greene, P. G. M. Wuts, ISBN 0-471-62301-6, John Wiley & Sons, Inc, New York.
[0093] Kao što se ovde koristi, „jednolančano“ označava oligomerno jedinjenje koje nije hibridizovano u svoj komplement i koje nema dovoljnu svojstvenu komplementarnost da gradi stabilan dupleks samo sa sobom.
[0094] Kao što se ovde koristi, „dvolančano“ označava par oligomernih jedinjenja koja su hibridizovana međusobno, ili jedno samostalno komplementarno oligomerno jedinjenje koje gradi strukturu ukosnice. U nekim otelotvorenjima, dvolančano oligomerno jedinjenje sadrži prvo i drugo oligomerno jedinjenje.
[0095] Kao što se ovde koristi, „antisens jedinjenje“ označava jedinjenje koje sadrži ili uključuje oligonukleotid čiji je barem jedan deo komplementaran sa ciljnom nukleinskom kiselinom u koju može da se hibridizuje, što dovodi do barem jedne antisens aktivnosti.
[0096] Kao što se koristi ovde, „antisens aktivnost“ označava bilo koju promenu koja može da se detektuje i/ili izmeri i može da se pripiše hibridizaciji antisens jedinjenja u njegovu ciljnu nukleinsku kiselinu. U nekim otelotvorenjima, antisens aktivnost uključuje modulaciju količine ili aktivnosti ciljnog transkripta nukleinske kiseline (npr. iRNK). U nekim otelotvorenjima, antisens aktivnost uključuje modulaciju splajsovanja pre-iRNK.
[0097] Kao što se ovde koristi, „antisens jedinjenje na bazi RNaze H“ označava antisens jedinjenje, pri čemu se barem deo antisens aktivnosti antisens jedinjenja može pripisati
2
hibridizaciji antisens jedinjenja u ciljnu nukleinsku kiselinu i naknadnom cepanju ciljne nukleinske kiseline putem RNaze H.
[0098] Kao što se ovde koristi, „antisens jedinjenje na bazi RISC“ označava antisens jedinjenje, pri čemu se barem deo antisens aktivnosti antisens jedinjenja može pripisati kompleksu RNK-indukovanog utišavanja (RISC).
[0099] Kao što se ovde koristi, „detekcija“ ili „merenje“ znači da se obavlja test ili ispitivanje za detekciju ili merenje. Takva detekcija i/ili merenje mogu dati vrednost koja je nula. Tako, ako test za detekciju ili merenje rezultira time da nije otkrivena aktivnost (aktivnost je jednaka nuli), korak detekcije ili merenja aktivnosti je svejedno obavljen.
[0100] Kao što se koristi ovde, „aktivnost koja može da se detektuje i/ili izmeri“ označava statistički značajnu aktivnost koja nije nula.
[0101] Kao što se ovde koristi, „suštinski nepromenjeno“ označava malu ili nepostojeću promenu u konkretnom parametru, naročito u odnosu na drugi parametar koji se mnogo više menja. U nekim otelotvorenjima, parametar je suštinski nepromenjen kada se menja manje od 5%. U nekim otelotvorenjima, parametar je suštinski nepromenjen ako se menja manje nego dvostruko dok se drugi parametar menja najmanje desetostruko. Na primer, u nekim otelotvorenjima, antisens aktivnost je promena količine ciljne nukleinske kiseline. U nekim takvim otelotvorenjima, količina neciljne nukleinske kiseline je suštinski nepromenjena ako se menja mnogo manje nego ciljna nukleinska kiselina, ali promena ne mora biti nula.
[0102] Kao što se ovde koristi, „ekspresija“ označava proces pomoću koga gen na kraju daje protein. Ekspresija uključuje, ali nije ograničena na, transkripciju, post-transkripcionu modifikaciju (npr. splajsovanje, poliadenilaciju, dodatak 5'-zatvarača) i translaciju.
[0103] Kao što se ovde koristi, „ciljna nukleinska kiselina“ označava molekul nukleinske kiseline u koji antisens jedinjenje treba da se hibridizuje da bi se dobila željena antisens aktivnost. Antisens oligonukleotidi imaju dovoljnu komplementarnost sa svojim ciljnim nukleinskim kiselinama kako bi se omogućila hibridizaciju u fiziološkim uslovima.
2
[0104] Kao što se ovde koristi, „nukleobazna komplementarnost“ ili „komplementarnost“ u pogledu nukleobaza označava nukleobazu koja je sposobna za bazno sparivanje sa drugom nukleobazom. Na primer, u DNK, adenin (A) je komplementaran sa timinom (T). Na primer, u RNK, adenin (A) je komplementaran sa uracilom (U). U nekim otelotvorenjima, komplementarna nukleobaza označava nukleobazu antisens jedinjenja koja je sposobna za bazno sparivanje sa nukleobazom njene ciljne nukleinske kiseline. Na primer, ako je nukleobaza na određenoj poziciji antisens jedinjenja sposobna za vodonično vezivanje sa nukleobazom na određenoj poziciji ciljne nukleinske kiseline, onda se smatra da je pozicija vodoničnog vezivanja između oligonukleotida i ciljne nukleinske kiseline komplementarna na tom nukleobaznom paru. Nukleobaze koje sadrže određene modifikacije mogu zadržati sposobnost sparivanja sa parnjačkom nukleobazom, i tako su i dalje sposobne za nukleobaznu komplementarnost.
[0105] Kao što se ovde koristi, „nekomplementarnost“ u pogledu nukleobaza označava par nukleobaza koje ne grade vodonične veze jedna sa drugom.
[0106] Kao što se ovde koristi, „komplementarnost“ u pogledu oligomernih jedinjenja (npr. povezanih nukleozida, oligonukleotida ili nukleinskih kiselina) označava kapacitet takvih oligomernih jedinjenja ili njihovih regiona da se hibridizuju u drugo oligomerno jedinjenje ili njegov region putem nukleobazne komplementarnosti. Komplementarna oligomerna jedinjenja ne moraju da imaju nukleobaznu komplementarnost na svakom nukleozidu. Čak se pre tolerišu neka pogrešna sparivanja. U nekim otelotvorenjima, komplementarna oligomerna jedinjenja ili regioni su komplementarni za 70% nukleobaza (70% komplementarnosti). U nekim otelotvorenjima, komplementarna oligomerna jedinjenja ili regioni su 80% komplementarni. U nekim otelotvorenjima, komplementarna oligomerna jedinjenja ili regioni su 90% komplementarni. U nekim otelotvorenjima, komplementarna oligomerna jedinjenja ili regioni su 95% komplementarni. U nekim otelotvorenjima, komplementarna oligomerna jedinjenja ili regioni su 100% komplementarni.
[0107] Kao što se ovde koristi, „pogrešno sparivanje“ označava prvo oligomerno jedinjenje koje nije sposobno da se upari sa nukleobazom na odgovarajućoj poziciji drugog oligomernog jedinjenja, kada su prvo i drugo oligomerno jedinjenje poravnati. Bilo koje, ili oba od prvog i drugog oligomernog jedinjenja mogu biti oligonukleotidi.
2
[0108] Kao što se ovde koristi, „hibridizacija“ označava sparivanje komplementarnih oligomernih jedinjenja (npr. antisens jedinjenje i njegova ciljna nukleinska kiselina). Iako nije ograničeno na određeni mehanizam, najčešći mehanizam sparivanja uključuje vodonično vezivanje, koje može biti Votson-Krikovo, Hugstinovo ili obrnuto Hugstinovo vodonično vezivanje između komplementarnih nukleobaza.
[0109] Kao što se ovde koristi, „specifično se hibridizuje“ označava sposobnost oligomernog jedinjenja da se hibridizuje u jedno mesto nukleinske kiseline sa većim afinitetom nego što se hibridizuje u drugo mesto nukleinske kiseline.
[0110] Kao što se ovde koristi, „potpuno komplementaran“ kada se odnosi na oligonukleotid ili njegov deo znači da je svaka nukleobaza oligonukleotida ili njegovog dela sposobna da se sparuje sa nukleobazom komplementarne nukleinske kiseline ili njenog uzastopnog dela. Tako, potpuno komplementarni region ne sadrži pogrešna sparivanja ni nehibridizovane nukleobaze ni u jednom lancu.
[0111] Kao što se ovde koristi, „procenat komplementarnosti“ označava procenat nukleobaza oligomernog jedinjenja koje su komplementarne sa delom ciljne nukleinske kiseline koji je jednake dužine. Procenat komplementarnosti se izračunava deljenjem broja nukleobaza oligomernog jedinjenja koje su komplementarne sa nukleobazama na odgovarajućim pozicijama u ciljnoj nukleinskoj kiselini sa ukupnom dužinom oligomernog jedinjenja.
[0112] Kao što se ovde koristi, „procenat identičnosti“ označava broj nukleobaza u prvoj nukleinskoj kiselini koje su iste vrste (nezavisno od hemijskih modifikacija) kao nukleobaze na odgovarajućim pozicijama u drugoj nukleinskoj kiselini, podeljen ukupnim brojem nukleobaza u prvoj nukleinskoj kiselini.
[0113] Kao što se ovde koristi, „modulacija“ označava promenu količine ili kvaliteta molekula, funkcije ili aktivnosti u poređenju sa količinom ili kvalitetom molekula, funkcije ili aktivnosti pre modulacije. Na primer, modulacija uključuje promenu, bilo u vidu povećanja (stimulacija ili indukcija) ili smanjenja (inhibicija ili redukovanje) ekspresije gena. Kao dalji primer, modulacija ekspresije može da uključi promenu izbora mesta splajsovanja pre-iRNK
2
obrade, što dovodi do promene apsolutne ili relativne količine konkretne varijante splajsovanja u poređenju sa količinom u odsustvu modulacije.
[0114] Kao što se ovde koristi, „hemijski motiv“ označava obrazac hemijskih modifikacija u oligonukleotidu ili njegovom regionu. Motivi mogu da se definišu putem modifikacija na određenim nukleozidima i/ili određenim vezujućim grupama oligonukleotida.
[0115] Kao što se ovde koristi, „nukleozidni motiv“ označava obrazac modifikacija nukleozida u oligonukleotidu ili njegovom regionu. Veze takvog oligonukleotida mogu biti modifikovane ili nemodifikovane. Ako nije drugačije naznačeno, ovde dati motivi koji opisuju samo nukleozide treba da budu nukleozidni motivi. Tako, u takvim slučajevima, veze nisu ograničene.
[0116] Kao što se ovde koristi, „motiv šećera“ označava obrazac modifikacija šećera u oligonukleotidu ili njegovom regionu.
[0117] Kao što se ovde koristi, „vezujući motiv“ označava obrazac modifikacije veze u oligonukleotidu ili njegovom regionu. Nukleozidi takvog oligonukleotida mogu biti modifikovani ili nemodifikovani. Ako nije drugačije naznačeno, ovde dati motivi koji opisuju samo veze treba da budu vezujući motivi. Tako, u takvim slučajevima, nukleozidi nisu ograničeni.
[0118] Kao što se ovde koristi, „motiv modifikacije nukleobaze“ označava obrazac modifikacija nukleobaza duž oligonukleotida. Ako nije drugačije naznačeno, motiv modifikacije nukleobaze je nezavisan od sekvence nukleobaze.
[0119] Kao što se ovde koristi, „motiv sekvence“ označava obrazac nukleobaza raspoređenih duž oligonukleotida ili njegovog dela. Ako nije drugačije naznačeno, motiv sekvence je nezavisan od hemijskih modifikacija, i tako može imati bilo koju kombinaciju hemijskih modifikacija, uključujući izostanak hemijskih modifikacija.
[0120] Kao što se ovde koristi, „vrsta modifikacije“ u pogledu nukleozida ili nukleozid „vrste“ označava hemijsku modifikaciju nukleozida, i uključuje modifikovane i nemodifikovane nukleozide. Shodno tome, ako nije drugačije naznačeno, „nukleozid koji ima modifikacije prve vrste“ može biti nemodifikovani nukleozid.
[0121] Kao što se ovde koristi, „različito modifikovan“ označava hemijske modifikacije ili hemijske supstituente koji se međusobno razlikuju, uključujući odsustvo modifikacija. Tako, na primer, nukleozid MOE i nemodifikovani nukleozid DNK su „različito modifikovani“ iako je nukleozid DNK nemodifikovan. Slično tome, DNK i RNK su „različito modifikovani“, iako oba predstavljaju nemodifikovane nukleozide koji se javljaju u prirodi. Nukleozidi koji su isti osim što sadrže različite nukleobaze nisu različito modifikovani. Na primer, nukleozid koji sadrži 2'-OMe modifikovani šećer i nemodifikovanu adeninsku nukleobazu i nukleozid koji sadrži 2'-OMe modifikovani šećer i nemodifikovanu timinsku nukleobazu nisu različito modifikovani.
[0122] Kao što se ovde koristi, „ista vrsta modifikacije“ odnosi se na modifikacije koje su međusobno iste, uključujući odsustvo modifikacija. Tako, na primer, dva nemodifikovana nukleozida DNK imaju „istu vrstu modifikacije“, iako je nukleozid DNK nemodifikovan. Takvi nukleozidi koji imaju istu vrstu modifikacije mogu da sadrže različite nukleobaze.
[0123] Kao što se ovde koristi, „odvojeni regioni“ označava delove oligonukleotida, pri čemu hemijske modifikacije ili motiv hemijskih modifikacija bilo kojih susednih delova uključuju najmanje jednu razliku, kako bi se omogućilo da se odvojeni regioni međusobno razlikuju.
[0124] Kao što se ovde koristi, „farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač“ označava svaku supstancu koja je pogodna za primenu na životinji. U nekim otelotvorenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač je sterilni fiziološki rastvor. U nekim otelotvorenjima, takav sterilni fiziološki rastvor je fiziološki rastvor farmaceutskog kvaliteta.
[0125] Kao što se ovde koristi, termin „metabolički poremećaj“ označava bolest ili stanje prvenstveno okarakterisano disregulacijom metabolizma - kompleksnog skupa hemijskih reakcija povezanih sa razgradnjom hrane radi proizvodnje energije.
[0126] Kao što se ovde koristi, termin „kardiovaskularni poremećaj“ označava bolest ili stanje prvenstveno okarakterisano oštećenom funkcijom srca ili krvnih sudova.
1
[0127] Kao što se ovde koristi, termin „mono ili policiklični sistem prstena“ treba da uključi sve sisteme prstena izabrane od pojedinačnih ili policikličnih radikalnih sistema prstena, pri čemu su prstenovi spojeni ili povezani, i treba da uključuje pojedinačne i mešovitne sisteme prstenova individualno izabrane od alifatičnih, alicikličnih, aril, heteroaril, aralkil, arilalkil, heterocikličnih, heteroaril, heteroaromatičnih i heteroarilalkil. Takve mono i policiklične strukture mogu da sadrže prstenove od kojih svaki ima isti nivo zasićenosti ili svaki, nezavisno, ima različite nivoe zasićenosti, uključujući potpuno zasićene, delimično zasićene ili potpuno nezasićene. Svaki prsten može da sadrži atome prstena izabrane od C, N, O i S kako bi se dobili heterociklični prstenovi, kao i prstenovi koji sadrže samo C atome prstena koji mogu biti prisutni u mešovitom motivu, kao što je, na primer, benzimidazol u kome jedan prsten ima samo ugljenikove atome prstena, a kondenzovani prsten ima dva atoma azota. Mono ili policiklični sistem prstena se može dalje supstituisati supstituentskim grupama kao što je, na primer, ftalimid koji ima dve =0 grupe vezane za jedan od prstenova. Mono ili policiklični sistemi prstenova mogu biti vezani za matične molekule koristeći različite strategije kao što je neposredno putem atoma prstena, fuzionisani putem više atoma prstena, putem supstituentske grupe ili putem bifunkcionalnog vezujućeg ostatka.
[0128] Kao što se ovde koristi, „prolek“ označava neaktivan ili manje aktivan oblik jedinjenja koji se, kada se primenjuje na ispitaniku, metaboliše kako bi nastalo aktivno, ili aktivnije, jedinjenje (npr. lek).
[0129] Kao što se ovde koristi, „supstituent“ ili „supstituentska grupa“ označava atom ili grupu koja zamenjuje atom ili grupu imenovanog matičnog jedinjenja. Na primer, supstituent modifikovanog nukleozida je bilo koji atom ili grupa koja se razlikuje od atoma ili grupe koji se mogu naći u nukleozidu koji se javlja u prirodi (npr. modifikovani 2'-supstituent je bilo koji atom ili grupa na 2'-poziciji nukleozida osim H ili OH). Supstituentske grupe mogu biti zaštićene ili nezaštićene. U određenim otelotvorenjima, jedinjenja predmetnog otkrića imaju supstituente na jednoj ili više pozicija matičnog jedinjenja. Supstituenti takođe mogu biti dalje supstituisani drugim supstituentskim grupama i mogu biti vezani direktno ili putem vezujuće grupe, kao što je alkil ili hidrokarbilna grupa, za matično jedinjenje.
[0130] Slično tome, kako se ovde koristi, „supstituent“ kada se odnosi na hemijsku funkcionalnu grupu označava atom ili grupu atoma različitu od atoma ili grupe atoma normalno prisutne u imenovanoj funkcionalnoj grupi. U određenim otelotvorenjima,
2
supstituent zamenjuje atom vodonika funkcionalne grupe (npr. u određenim otelotvorenjima, supstituent supstituisane metil grupe je atom ili grupa osim vodonika koja zamenjuje jedan od atoma vodonika nesupstituisane metil grupe). Ako nije drugačije naznačeno, grupe pogodne za korišćenje kao supstituenti uključuju, bez ograničenja, halogen, hidroksil, alkil, alkenil, alkinil, acil (-C(O)Raa), karboksil (-C(O)O-Raa), alifatične grupe, aliciklične grupe, alkoksi, supstituisani oksi (-O-Raa), aril, aralkil, heterociklični radikal, heteroaril, heteroarilalkil, amino (-N(Rbb)(Rcc)), imino(=NRbb), amido (-C(O)N-(Rbb)(Rcc) ili -N(Rbb)C(O)Raa), azido (-N3), nitro (-NO2), cijano (-CN), karbamido (-OC(O)N(Rbb)(Rcc) ili -N(Rbb)C(O)ORaa), ureido (-N(Rbb)C(O)N(Rbb)(Rcc)), tioureido (-N(Rbb)C(S)N(Rbb)(Rcc)), gvanidinil (-N(Rbb)C(=NRbb)N(Rbb)(Rcc)), amidinil (-C(=NRbb)N(Rbb)(Rcc) ili -N(Rbb)C(=NRbb)(Raa)), tiol (-SRbb), sulfinil (-S(O)Rbb), sulfonil (-S(O)2Rbb) i sulfonamidil (-S(O)2N(Rbb)(Rcc) ili -N(Rbb)S(O)2Rbb). Pri čemu, svaki Raa, Rbbi Rccje, nezavisno, H, opciono povezana hemijska funkcionalna grupa ili dalja supstituentska grupa, gde poželjna lista uključuje, bez ograničenja, alkil, alkenil, alkinil, alifatičnu, alkoksi, acil, aril, aralkil, heteroaril, alicikličnu, heterocikličnu i heteroarilalkil grupu. Izabrani supstituenti u ovde opisanim jedinjenjima su prisutni do rekurzivnog nivoa.
[0131] Kao što se ovde koristi, „alkil“ označava zasićeni ravni ili razgranati ugljovodonični radikal koji sadrži do dvadeset četiri atoma ugljenika. Primeri alkil grupa uključuju, bez ograničenja, metil, etil, propil, butil, izopropil, n-heksil, oktil, decil, dodecil, i slično. Alkil grupe obično uključuju od 1 do oko 24 atoma ugljenika, uobičajenije od 1 do oko 12 atoma ugljenika (C1-C12alkil), pri čemu je poželjnije od 1 do oko 6 atoma ugljenika.
[0132] Kako se ovde koristi, „alkenil“ označava ravni ili razgranati radikal ugljovodoničnog lanca koji sadrži do dvadeset četiri atoma ugljenika i ima najmanje jednu dvostruku vezu ugljenik-ugljenik. Primeri alkenil grupa uključuju, bez ograničenja, etenil, propenil, butenil, 1-metil-2-buten-1-il, diene poput 1,3-butadiena, i slično. Alkenil grupe obično uključuju od 2 do oko 24 atoma ugljenika, uobičajenije od 2 do oko 12 atoma ugljenika, pri čemu je poželjnije od 2 do oko 6 atoma ugljenika. Alkenil grupe, kako se ovde koriste, opciono uključuju jednu ili više daljih supstituentskih grupa.
[0133] Kako se ovde koristi, „alkinil“ označava ravni ili razgranati radikal ugljovodonika koji sadrži do dvadeset četiri atoma ugljenika i ima najmanje jednu trostruku vezu ugljenikugljenik. Primeri alkinil grupa uključuju, bez ograničenja, etinil, 1 -propinil, 1 -butinil i slično.
Alkinil grupe obično uključuju od 2 do oko 24 atoma ugljenika, uobičajenije od 2 do oko 12 atoma ugljenika, pri čemu je poželjnije od 2 do oko 6 atoma ugljenika. Alkinil grupe, kako se ovde koriste, opciono uključuju jednu ili više daljih supstituentskih grupa.
[0134] Kako se ovde koristi, „acil“ označava radikal nastao uklanjanjem hidroksilne grupe iz organske kiseline i ima opštu formulu -C(O)-X, gde je X obično alifatična, aliciklična ili aromatična grupa. Primeri uključuju alifatične karbonile, aromatične karbonile, alifatične sulfonile, aromatične sulfinile, alifatične sulfinile, aromatične fosfate, alifatične fosfate, i slično. Acil grupe, kako se ovde koriste, opciono uključuju dalje supstituentske grupe.
[0135] Kako se ovde koristi, „aliciklični“ označava cikličan sistem prstena u kome je prsten alifatični. Sistem prstena može da sadrži jedan ili više prstenova, pri čemu je najmanje jedan prsten alifatični. Poželjna aliciklična jedinjenja uključuju prstenove sa od oko 5 do oko 9 atoma ugljenika u prstenu. Aliciklično jedinjenje, kako se ovde koristi, opciono uključuje dalje supstituentske grupe.
[0136] Kako se ovde koristi, „alifatični“ označava ravni ili razgranati radikal ugljovodonika koji sadrži do dvadeset četiri atoma ugljenika, pri čemu je zasićenost između bilo koja dva atoma ugljenika jednostruka, dvostruka ili trostruka veza. Alifatična grupa poželjno sadrži od 1 do oko 24 atoma ugljenika, uobičajenije od 1 do oko 12 atoma ugljenika, pri čemu je poželjnije od 1 do oko 6 atoma ugljenika. Ravni ili razgranati lanac alifatične grupe može biti prekinut sa jednim ili više heteroatoma koji uključuju azot, kiseonik, sumpor i fosfor. Takve alifatične grupe prekinute heteroatomima uključuju, bez ograničenja, polialkoksi jedinjenja, kao što su polialkilen glikoli, poliamine i poliimine. Alifatične grupe, kako se ovde koriste, opciono uključuju dalje supstituentske grupe.
[0137] Kako se ovde koristi, „alkoksi“ označava radikal formiran između alkil grupe i atoma kiseonika, pri čemu se atom kiseonika koristi da veže alkoksi grupu za matični molekul. Primeri alkoksi grupa uključuju, bez ograničenja, metoksi, etoksi, propoksi, izopropoksi, nbutoksi, sek-butoksi, terc-butoksi, n-pentoksi, neopentoksi, n-heksoksi i slično. Alkoksi grupe, kako se ovde koriste, opciono uključuju dalje supstituentske grupe.
4
[0138] Kako se ovde koristi, „aminoalkil“ označava amino supstituisani C1-C12alkil radikal. Alkil deo radikala gradi kovalentnu vezu sa matičnim molekulom. Amino grupa može da se nalazi na bilo kojoj poziciji i aminoalkil grupa može biti supstituisana daljom supstituentskom grupom na alkil i/ili amino delovima.
[0139] Kao što se ovde koristi, „aralkil“ i „arilalkil“ označava aromatičnu grupu koja je kovalentno vezana za C1-C12alkil radikal. Alkil radikalni deo nastale aralkil (ili arilalkil) grupe gradi kovalentnu vezu sa matičnim molekulom. Primeri uključuju, bez ograničenja, benzil, fenetil, i slično. Aralkil grupe, kako se ovde koriste, mogu opciono da uključuju dalje supstituentske grupe vezane za alkil, aril ili obe grupe koje grade radikalnu grupu.
[0140] Kao što se ovde koristi, „aril“ i „aromatični“ označava radikale mono- ili policikličnog karbocikličnog sistema prstena koji imaju jedan ili više aromatičnih prstenova. Primeri aril grupa uključuju, bez ograničenja, fenil, naftil, tetrahidronaftil, indanil, idenil i slično. Poželjni aril sistemi prstenova imaju od oko 5 do oko 20 atoma ugljenika u jednom ili više prstenova. Aril grupe ,kako se ovde koriste, opciono uključuju dalje supstituentske grupe.
[0141] Kako se ovde koristi, „halo“ i „halogen“ označava atom izabran od fluora, hlora, broma i joda.
[0142] Kako se ovde koristi, „heteroaril“ i „heteroaromatični“ označava radikal koji sadrži mono- ili policiklični aromatični prsten, sistem prstenova ili sistem kondenzovanih prstenova, pri čemu je najmanje jedan od prstenova aromatični i uključuje jedan ili više heteroatoma. Heteroaril takođe treba da uključuje sisteme kondenzovanih prstenova uključujući sisteme u kojima jedan ili više od kondenzovanih prstenova ne sadrži heteroatome. Heteroaril grupe obično uključuju jedan atom prstena izabran od sumpora, azota ili kiseonika. Primeri heteroaril grupa uključuju, bez ograničenja, piridinil, pirazinil, pirimidinil, pirolil, pirazolil, imidazolil, tiazolil, oksazolil, izooksazolil, tiadiazolil, oksadiazolil, tiofenil, furanil, hinolinil, izohinolinil, benzimidazolil, benzooksazolil, hinoksalinil, i slično. Radikali heteroarila mogu da se vežu za matični molekul neposredno ili putem vezujućeg ostatka, kao što je alifatična grupa ili heteroatom. Heteroaril grupe, kako se ovde koriste, opciono uključuju dalje supstituentske grupe.
[0143] Kako se ovde koristi, „konjugovano jedinjenje“ označava bilo koji atom, grupu atoma, ili grupu povezanih atoma odgovarajućih za upotrebu kao konjugovana grupa. U određenim otelotvorenjima, konjugovana jedinjenja mogu da imaju ili da daju jedno ili više svojstava, uključujući, bez ograničenja, farmakodinamiku, farmakokinetiku, vezivanje, apsorpciju, ćelijsku distribuciju, ćelijski unos, naelektrisanje i/ili klirens.
[0144] Kako se ovde koristi, ako nije drugačije naznačeno ili modifikovano, termin „dvolančano“ se odnosi na dva odvojena oligomerna jedinjenja koja su hibridizovana jedno sa drugim. Takva dvolančana jedinjenja mogu imati jedan ili više nehibridizujućih nukleozida na jednom ili oba kraja jednog ili oba lanca (prepusti) i/ili jedan ili više unutrašnjih nehibridizujućih nukleozida (pogrešno spareni) pod uslovom da postoji komplementarnost dovoljna da se održi hibridizacija u fiziološki relevantnim uslovima.
[0145] Kako se ovde koristi, „5' ciljno mesto“ odnosi se na nukleotid ciljne nukleinske kiseline koji je komplementaran sa krajnjim 5' nukleotidom konkretnog antisens jedinjenja.
[0146] Kako se ovde koristi, „oko“ znači u rasponu od ±10% od vrednosti. Na primer, ako je navedeno, „marker može da se poveća za oko 50%“, podrazumeva se da marker može da se poveća između 45%-55%.
[0147] Kako se ovde koristi, „primenjeno istovremeno“ odnosi se na zajedničku primenu dva agensa na bilo koji način kod kojeg se farmakološka dejstva oba agensa manifestuju kod pacijenta u isto vreme. Istovremena primena ne zahteva da oba agensa budu primenjena u jednoj farmaceutskoj kompoziciji, u istom doznom obliku, niti putem istog načina primene. Dejstvo oba agensa ne mora da se manifestuje u isto vreme. Dejstva moraju da se preklapaju tokom određenog vremena, i ne moraju da budu koekstenzivna.
[0148] Kako se ovde koristi, „primenjivati“ ili „primena“ označava davanje farmaceutskog agensa pojedincu, i obuhvata, bez ograničenja, primenu od strane zdravstvenog stručnjaka ili samostalnu primenu. Primena farmaceutskog agensa na pojedincu može biti neprekidna, hronična, kratka ili naizmenična. Primena može biti parenteralna ili neparenteralna.
[0149] Kako se ovde koristi, „agens“ označava aktivnu supstancu koja može da pruži terapeutsku korist kada se primeni na životinji. „Prvi agens“ označava terapeutsko jedinjenje iz pronalaska. Na primer, prvi agens može biti antisens oligonukleotid koji cilja apo(a). „Drugi agens“ označava drugo terapeutsko jedinjenje iz pronalaska (npr. drugi antisens oligonukleotid koji cilja apo(a)) i/ili ne-apo(a) terapeutsko jedinjenje.
[0150] Kako se ovde koristi, „poboljšanje“ ili „poboljšati“ odnosi se na smanjivanje najmanje jednog pokazatelja, znaka ili simptoma povezane bolesti, poremećaja ili stanja. Težina pokazatelja može da se utvrdi subjektivnim ili objektivnim merama, koje su poznate osobama sa znanjem u oblasti.
[0151] Kako se ovde koristi, „životinja“ se odnosi na čoveka ili životinju koja nije čovek, uključujući, bez ograničenja, miševe, pacove, zečeve, pse, mačke, svinje i nehumane primate, uključujući, bez ograničenja, majmune i šimpanze.
[0152] Kako se ovde koristi, „apo(a)“ označava bilo koju nukleinsku kiselinu ili sekvencu proteina koja kodira apo(a). Na primer, u određenim otelotvorenjima, apo(a) uključuje sekvencu DNK koja kodira apo(a), sekvencu RNK prepisanu od DNK koja kodira apo(a) (uključujući genomsku DNK koja sadrži introne i egzone), sekvencu iRNK koja kodira apo(a) ili peptidnu sekvencu koja kodira apo(a).
[0153] Kako se ovde koristi, „apo(a) nukleinska kiselina“ označava bilo koju nukleinsku kiselinu koja kodira apo(a). Na primer, u određenim otelotvorenjima, apo(a) nukleinska kiselina uključuje sekvencu DNK koja kodira apo(a), sekvencu RNK prepisanu od DNK koja kodira apo(a) (uključujući genomsku DNK koja sadrži introne i egzone), sekvencu iRNK koja kodira apo(a).
[0154] Kako se ovde koristi, „apo(a) iRNK“ označava iRNK koja kodira apo(a) protein.
[0155] Kako se ovde koristi, „apo(a) protein“ označava bilo koju sekvencu proteina koja kodira apo(a).
[0156] Kako se ovde koristi, „inhibitor specifičan za apo(a)“ odnosi se na bilo koji agens sposoban da specifično inhibira ekspresiju apo(a) nukleinske kiseline i/ili apo(a) proteina. Na primer, inhibitori specifični za apo(a) uključuju nukleinske kiseline (uključujući antisens jedinjenja), peptide, antitela, male molekule i druge agense sposobne da inhibiraju ekspresiju apo(a) nukleinske kiseline i/ili apo(a) proteina. U određenim otelotvorenjima, putem specifične modulacije ekspresije apo(a) nukleinske kiseline i/ili ekspresije apo(a) proteina, inhibitori specifični za apo(a) mogu da utiču na druge komponente sistema za transport lipida, uključujući nishodne komponente. Slično tome, u određenim otelotvorenjima, inhibitori specifični za apo(a) mogu da utiču na druge molekulske procese u životinji.
[0157] Kako se ovde koristi, „ateroskleroza“ označava očvršćavanje arterija koje pogađa velike arterije i arterije srednje veličine, i karakteriše ga prisustvo masnih naslaga. Masne naslage se nazivaju „ateromi“ ili „plakovi“ i sastoje se prevashodno od holesterola i drugih masti, kalcijuma i ožiljnog tkiva, i oštećuju površinu arterija.
[0158] Kako se ovde koristi, „koronarna bolest srca (KBS)“ označava sužavanje malih krvnih sudova koji dovode krv i kiseonik u srce, što je često posledica ateroskleroze.
[0159] Kako se ovde koristi, „dijabetes melitus“ ili „dijabetes“ je sindrom okarakterisan poremećenim metabolizmom i abnormalno visokim nivoom šećera u krvi (hiperglikemija) usled nedovoljnih nivoa insulina ili smanjene osetljivosti na insulin. Karakteristični simptomi su prekomerna proizvodnja urina (poliurija) usled visokih nivoa glukoze u krvi, preterana žeđ i povećan unos tečnosti (polidipsija) u pokušaju da se nadoknadi povećano uriniranje, zamućen vid usled dejstva visokog nivoa glukoze u krvi na očnu optiku, neobjašnjiv gubitak težine i letargija.
[0160] Kako se ovde koristi, „dijabetesna dislipidemija“ ili „dijabetes tipa 2 sa dislipidemijom“ označava stanje koje je okarakterisano dijabetesom tipa 2, smanjenim HDL-C, povišenim trigliceridima (TG) i povišenim malim, gustim česticama LDL.
[0161] Kako se ovde koristi, „razblaživač“ označava sastojak u kompoziciji koji nema farmakološku aktivnost, ali je farmaceutski neophodan ili poželjan. Na primer, razblaživač u injektovanoj kompoziciji može biti tečnost, npr. fiziološki rastvor.
[0162] Kako se ovde koristi, „displipidemija“ se odnosi na poremećaj metabolizma lipida i/ili lipoproteina, uključujući prekomernu proizvodnju ili nedostatak lipida i/ili lipoproteina. Dislipidemije mogu da se manifestuju porastom lipida kao što je hilomikron, holesterol i trigliceridi, kao i lipoproteina kao što je holesterol lipoproteina male gustine (LDL).
[0163] Kao što se ovde koristi, „dozna jedinica“ označava oblik u kome je obezbeđen farmaceutski agens, npr. pilula, tableta ili druga dozna jedinica poznata u struci. U određenim otelotvorenjima, dozna jedinica je bočica koja sadrži liofilizovani antisens oligonukleotid. U određenim otelotvorenjima, dozna jedinica je bočica koja sadrži rekonstituisani antisens oligonukleotid.
[0164] Kao što se ovde koristi, „doza“ označava naznačenu količinu farmaceutskog agensa obezbeđenu u pojedinačnoj primeni, ili u naznačenom vremenskom periodu. U određenim otelotvorenjima, doza se može primenjivati u jednom, dva ili više bolusa, tableta ili injekcija. Na primer, u određenim otelotvorenjima kada je poželjna supkutana primena, željena doza zahteva zapreminu koja se ne može lako postići jednom injekcijom, stoga, dve ili više injekcija se može koristiti za postizanje željene doze. U određenim otelotvorenjima, farmaceutski agens se primenjuje putem infuzije tokom dužeg vremenskog perioda ili bez prekida. Doze mogu biti navedene kao količina farmaceutskog agensa na sat, dan, nedelju ili mesec. Doze takođe mogu biti navedene kao mg/kg ili g/kg.
[0165] Kako se ovde koristi, „efikasna količina“ ili „terapeutski efikasna količina“ označava količinu aktivnog farmaceutskog agensa dovoljnu za postizanje željenog fiziološkog ishoda kod pojedinca kome je agens potreban. Efikasna količina može da varira od pojedinca do pojedinca u zavisnosti od zdravlja i fizičkog stanja pojedinca koji se leči, taksonomske grupe pojedinca koji se leči, formulacije kompozicije, procene zdravstvenog stanja pojedinca i drugih relevantnih faktora.
[0166] Kako se ovde koristi, „potpuno komplementarno“ ili „100% komplementarno“ znači da svaka nukleobaza nukleobazne sekvence prve nukleinske kiseline ima komplementarnu nukleobazu u drugoj nukleobaznoj sekvenci druge nukleinske kiseline. U određenim otelotvorenjima, prva nukleinska kiselina je antisens jedinjenje, a druga nukleinska kiselina je ciljna nukleinska kiselina.
[0167] Kako se ovde koristi, „glukoza“ je monosaharid koji ćelije koriste kao izvor energije i inflamatorni intermedijer. „Glukoza u plazmi“ odnosi se na glukozu prisutnu u plazmi.
[0168] Kako se ovde koristi, „lipoprotein-C velike gustine“ ili „HDL-C“ označava holesterol povezan sa česticama lipoproteina velike gustine. Koncentracija HDL-C u serumu (ili plazmi) obično se kvantifikuje u mg/dl ili nmol/l. „HDL-C u serumu“ i „HDL-C u plazmi“ označava HDL-C u serumu, odnosno plazmi.
[0169] Kako se ovde koristi, „inhibitor HMG-CoA reduktaze“ označava agens koji deluje putem inhibicije enzima HMG-CoA reduktaze, kao što je atorvastatin, rosuvastatin, fluvastatin, lovastatin, pravastatin i simvastatin.
[0170] Kako se ovde koristi, „hiperholesterolemija“ označava stanje koje karakteriše povišen holesterol ili cirkulišući holesterol (u plazmi), LDL-holesterol i VLDL-holesterol, u skladu sa smernicama Izveštaja ekspertskog panela za nacionalni program edukacije o holesterolu (Expert Panel Report of the National Cholesterol Educational Program, NCEP) za detekciju, procenu lečenja visokog holesterola kod odraslih osoba (vidite, Arch. Int. Med. (1988) 148, 36-39).
[0171] Kako se ovde koristi, „hiperlipidemija“ ili „hiperlipemija“ je stanje koje karakteriše povišen nivo lipida u serumu ili cirkulišućih lipida (u plazmi). Ovo stanje se manifestuje abnormalno visokim koncentracijama masti. Frakcije lipida u krvotoku su holesterol, lipoproteini male gustine, lipoproteini veoma male gustine, hilomikroni i trigliceridi. Frederiksonova klasifikacija hiperlipidemija je zasnovana na obrascu TG i lipoproteinskih čestica bogatih holesterolom, što se meri elektroforezom ili ultracentrifugiranjem, i uobičajeno se koristi da se okarakterišu primarni uzroci hiperlipidemija, kao što je hipertrigliceridemija (Fredrickson i Lee, Circulation, 1965, 31:321-327; Fredrickson i sar. New Eng J Med, 1967, 276 (1): 34-42).
[0172] Kao što se ovde koristi, „hipertrigliceridemija“ označava stanje koje karakterišu povišeni nivoi triglicerida. Njena etiologija uključuje primarne (tj. genetski uzroci) i sekundarne (drugi postojeći uzroci, kao što je dijabetes, metabolički sindrom/otpornost na insulin, gojaznost, fizička neaktivnost, pušenje, prekomeran unos alkohola i ishrana veoma
4
bogata ugljenim hidratima) faktore ili, najčešće, kombinaciju jednih i drugih (Yuan i sar. CMAJ, 2007, 176:1113-1120).
[0173] Kao što se ovde koristi, „identifikovanje“ ili „odabir životinje sa metaboličkom ili kardiovaskularnom bolešću“ znači identifikovanje ili odabir ispitanika koji ima sklonost, ili mu je dijagnostikovana metabolička bolest, kardiovaskularna bolest ili metabolički sindrom; ili, identifikovanje ili odabir ispitanika koji ima bilo koji simptom metaboličke bolesti, kardiovaskularne bolesti ili metaboličkog sindroma, uključujući, bez ograničenja, hiperholesterolemiju, hiperglikemiju, hiperlipidemiju, hipertrigliceridemiju, hipertenziju povećane otpornosti na insulin, smanjenu osetljivost na insulin, telesnu težinu veću od normalne i/ili telesni procenat masti veći od normalnog, ili bilo koju njihovu kombinaciju. Takva identifikacija može da se postigne pomoću bilo kog postupka, uključujući, bez ograničenja, standardne kliničke testove ili procene, kao što je merenje serumskog ili cirkulišućeg holesterola (u plazmi), merenje serumske ili cirkulišuće glukoze u krvi (u plazmi), merenje serumskih ili cirkulišućih triglicerida (u plazmi), merenje krvnog pritiska, merenje procenta telesne masti, merenje telesne težine, i slično.
[0174] Kao što se ovde koristi, „poboljšan kardiovaskularni ishod“ znači smanjeno javljanje neželjenih kardiovaskularnih događaja, ili rizika od njihove pojave. Primeri neželjenih kardiovaskularnih događaja uključuju, bez ograničenja, smrt, ponovni infarkt, moždani udar, kardiogeni šok, plućni edem, zastoj srca i atrijalnu disritmiju.
[0175] Kao što se ovde koristi, „neposredno susedni“ znači da nema elemenata između neposredno susednih elemenata, na primer, između regiona, segmenata, nukleotida i/ili nukleozida.
[0176] Kako se ovde koristi, „rastući HDL“ ili „povećavajući HDL“ označava rastući nivo HDL u životinji nakon primene najmanje jednog jedinjenja iz pronalaska, u poređenju sa nivoom HDL u životinji na kojoj nije primenjeno nijedno jedinjenje.
[0177] Kako se ovde koristi, „pojedinac“ ili „ispitanik“ ili „životinja“ označava čoveka ili nehumanu životinju izabranu za lečenje ili terapiju.
[0178] Kako se ovde koristi, „pojedinac kome je to potrebno“ označava čoveka ili nehumanu životinju izabranu za lečenje ili terapiju kojoj je potrebno takvo lečenje ili terapija.
[0179] Kao što se ovde koristi, „indukuje“, „inhibira“, „potencira“, „povišava“, „povećava“, „smanjuje“, „redukuje“ i slično označava kvantitativne razlike između dva stanja. Na primer, „količina efikasna za inhibiranje aktivnosti ili ekspresije apo(a)“ znači da će nivo aktivnosti ili ekspresije apo(a) u lečenom uzorku biti različit od nivoa aktivnosti ili ekspresije apo(a) u nelečenom uzorku. Takvi termini se koriste, na primer, za nivoe ekspresije i nivoe aktivnosti.
[0180] Kako se ovde koristi, „inflamatorno stanje“ se odnosi na bolest, stanje usled bolesti, sindrom ili drugo stanje koje dovodi do inflamacije. Na primer, reumatoidni artritis i fibroza jetre su inflamatorna stanja. Drugi primeri inflamatornih stanja uključuju sepsu, ishemiju miokarda/reperfuzionu povredu, respiratorni distres sindrom kod odraslih, nefritis, odbacivanje kalema, inflamatornu bolest creva, multiplu sklerozu, arteriosklerozu, aterosklerozu i vaskulitis.
[0181] Kako se ovde koristi, „inhibiranje ekspresije ili aktivnosti“ odnosi se na smanjenje ili blokiranje ekspresije ili aktivnosti RNK ili proteina, i ne mora nužno da ukazuje na potpunu eliminaciju ekspresije ili aktivnosti.
[0182] Kako se ovde koristi, „otpornost na insulin“ se definiše kao stanje kod koga su normalne količine insulina nedovoljne da se dobije normalan insulinski odgovor u ćelijama masti, mišića i jetre. Otpornost na insulin u ćelijama masti dovodi do hidrolize uskladištenih triglicerida, što dovodi do povišenja masnih kiselina u krvnoj plazmi. Otpornost na insulin u mišiću smanjuje unos glukoze, dok otpornost na insulin u jetri smanjuje skladištenje glukoze, pri čemu oba dejstva dovode do povišene glukoze u krvi. Visoki nivoi insulina i glukoze u plazmi usled otpornosti na insulin često dovode do metaboličkog sindroma i dijabetesa tipa 2.
[0183] Kako se ovde koristi, „insulinska osetljivost“ je mera koliko efikasno pojedinac prerađuje glukozu. Pojedinac koji ima visoku insulinsku osetljivost efikasno prerađuje glukozu, dok pojedinac sa niskom insulinskom osetljivošću neefikasno prerađuje glukozu.
[0184] Kako se ovde koristi, „snižavanje lipida“ znači smanjenje jednog ili više lipida (npr. LDL, VLDL) kod pojedinca. „Povećavanje lipida“ znači porast lipida (npr. HDL) kod pojedinca. Do snižavanja ili povećavanja lipida može doći vremenom nakon jedne ili više doza.
[0185] Kako se ovde koristi, „terapija za snižavanje lipida“ ili „agens za snižavanje lipida“ označava terapeutski režim koji se daje ispitaniku kako bi se smanjio jedan ili više lipida kod ispitanika. U određenim otelotvorenjima, terapija za snižavanje lipida se daje kako bi se smanjio jedan ili više od apo(a), apoB, ukupnog holesterola, LDL-C, VLDL-C, IDL-C, ne-HLD-C, triglicerida, malih gustih čestica LDL i Lp(a) kod ispitanika. Primeri terapije za snižavanje lipida uključuju, ali nisu ograničeni na, inhibitore apoB, statine, fibrate i inhibitore MTP.
[0186] Kako se ovde koristi, „lipoprotein“, kao što je VLDL, LDL i HDL, odnosi se na grupu proteina koji se mogu naći u serumu, plazmi i limfi, i značajni su za transport lipida. Hemijski sastav svakog lipoproteina se razlikuje, na primer, po tome što HDL ima veći udeo proteina u odnosu na lipid, dok VLDL ima manji udeo proteina u odnosu na lipid.
[0187] Kako se ovde koristi, „Lp(a)“ sadrži apo(a) i česticu sličnu LDL koja sadrži apoB. Apo(a) je povezan sa apoB putem disulfidne veze.
[0188] Kako se ovde koristi, „holesterol lipoproteina male gustine (LDL-C)“ označava holesterol koji nose čestice lipoproteina male gustine. Koncentracija LDL-C u serumu (ili plazmi) obično se kvantifikuje u mg/dl ili nmol/l. „Serumski LDL-C“ i „LDL-C plazme“ označava LDL-C u serumu, odnosno plazmi.
[0189] Kako se ovde koristi, „značajni faktori rizika“ odnosi se na faktore koji doprinose visokom riziku od konkretne bolesti ili stanja. U određenim otelotvorenjima, značajni faktori rizika za koronarnu bolest srca uključuju, bez ograničenja, pušenje, hipertenziju, visok LDL, nizak HDL-C, porodičnu istoriju koronarne bolesti srca, starost i druge faktore koji su ovde otkriveni.
4
[0190] Kako se ovde koristi, „metabolički poremećaj“ ili „metabolička bolest“ odnosi se na stanje koje karakteriše izmena ili poremećaj metaboličke funkcije. „Metabolički“ ili „metabolizam“ su termini koji su dobro poznati u struci, i uopšteno uključuju ceo raspon biohemijskih procesa koji se odvijaju u živom organizmu. Metabolički poremećaji uključuju, ali nisu ograničeni na, hiperglikemiju, predijabetes, dijabetes (tip 1 i tip 2), gojaznost, otpornost na insulin, metabolički sindrom i dislipidemiju usled dijabetesa tip 2.
[0191] Kako se ovde koristi, „metabolički sindrom“ označava stanje koje karakteriše skupljanje lipidnih i nelipidnih kardiovaskularnih faktora rizika metaboličkog porekla. U određenim otelotvorenjima, metabolički sindrom se identifikuje prisustvom bilo koja 3 od sledećih faktora: obim struka veći od 102 cm kod muškaraca ili veći od 88 cm kod žena; serumski triglicerid od najmanje 150 mg/dl; HDL-C manji od 40 mg/dl kod muškaraca ili manji od 50 mg/dl kod žena; krvni pritisak od najmanje 130/85 mmHg; i glukoza prilikom gladovanja od najmanje 110 mg/dl. Ove determinante se jednostavno mogu izmeriti u kliničkoj praksi (JAMA, 2001, 285: 2486-2497).
[0192] „Parenteralna primena“ označava primenu putem injekcije ili infuzije. Parenteralna primena uključuje supkutanu primenu, intravensku primenu, intramuskularnu primenu, intraarterijsku primenu, intraperitonealnu primenu ili intrakranijalnu primenu, npr. intratekalnu ili intracerebroventrikularnu primenu. Primena može biti neprekidna, hronična, kratka ili naizmenična.
[0193] Kako se ovde koristi, „peptid“ označava molekul nastao povezivanjem najmanje dve aminokiseline amidnim vezama. Peptid se odnosi na polipeptide i proteine.
[0194] Kako se ovde koristi, „farmaceutski agens“ označava supstancu koja pruža terapeutsku korist kada se primeni na pojedincu. Na primer, u određenim otelotvorenjima, antisens oligonukleotid usmeren na apo(a) je farmaceutski agens.
[0195] Kako se ovde koristi, „farmaceutska kompozicija“ ili „kompozicija“ označava smešu supstanci pogodnu za primenu na pojedincu. Na primer, farmaceutska kompozicija može da sadrži jedan ili više aktivnih agenasa i farmaceutski nosač, npr. sterilni vodeni rastvor.
[0196] Kako se ovde koristi, „farmaceutski prihvatljiv derivat“ obuhvata derivate ovde opisanih jedinjenja kao što su solvati, hidrati, estri, prolekovi, polimorfi, izomeri, izotopski obeležene varijante, farmaceutski prihvatljive soli i drugi derivati poznati u struci.
[0197] Kako se ovde koristi, „farmaceutski prihvatljive soli“ označavaju fiziološki i farmaceutski prihvatljive soli antisens jedinjenja, tj. soli koje zadržavaju željenu biološku aktivnost matičnog jedinjenja i ne daju mu neželjena toksična dejstva. Termin „farmaceutski prihvatljiva so“ ili „so“ uključuje so pripremljenu od farmaceutski prihvatljivih netoksičnih kiselina ili baza, uključujući organske ili neorganske kiseline i baze. „Farmaceutski prihvatljive soli“ ovde opisanih jedinjenja mogu se pripremiti postupcima koji su dobro poznati u struci. Za pregled farmaceutski prihvatljivih soli, vidite Stahl i Wermuth, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use (Wiley-VCH, Weinheim, Nemačka, 2002). Natrijumove soli antisens oligonukleotida su korisne i opšteprihvaćene za terapeutsku primenu na ljudima. Shodno tome, u jednom otelotvorenju, ovde opisana jedinjenja su u obliku natrijumove soli.
[0198] Kako se ovde koristi, „deo“ označava određen broj uzastopnih (tj. povezanih) nukleobaza nukleinske kiseline. U određenim otelotvorenjima, deo je određeni broj uzastopnih nukleobaza ciljne nukleinske kiseline. U određenim otelotvorenjima, deo je određeni broj uzastopnih nukleobaza antisens jedinjenja.
[0199] Kako se ovde koristi, „sprečiti“ ili „prevencija“ odnosi se na odlaganje ili sprečavanje nastanka ili razvoja bolesti, poremećaja ili stanja u vremenskom trajanju koje može biti od nekoliko minuta do neograničenog. Sprečiti takođe znači smanjiti rizik od razvoja bolesti, poremećaja ili stanja.
[0200] Kako se ovde koristi, „povisiti“ znači povećati količinu. Na primer, povisiti nivoe HDL u plazmi znači povećati količinu HDL u plazmi.
[0201] Kako se ovde koristi, „redukovati“ znači smanjiti do manjeg opsega, veličine, količine ili broja. Na primer, redukovati nivoe triglicerida u plazmi znači smanjiti količinu triglicerida u plazmi.
4
[0202] Kako se ovde koristi, „region“ ili „ciljni region“ se definiše kao deo ciljne nukleinske kiseline koji ima najmanje jednu strukturu, funkciju ili karakteristiku koja se može identifikovati. Na primer, ciljni region može da obuhvata 3' UTR, 5' UTR, egzon, intron, spajanje egzona/introna, kodirajući region, region koji inicira translaciju, region koji prekida translaciju ili drugi definisani region nukleinske kiseline. Strukturno definisani regioni za apo(a) mogu se dobiti pomoću pristupnog broja iz baza podataka sekvenci poput NCBI. U određenim otelotvorenjima, ciljni region može da obuhvata sekvencu od 5' ciljnog mesta jednog ciljnog segmenta u ciljnom regionu do 3' ciljnog mesta drugog ciljnog segmenta u ciljnom regionu.
[0203] Kako se ovde koristi, „drugi agens“ ili „drugi terapeutski agens“ označava agens koji se može koristiti u kombinaciji sa „prvim agensom“. Drugi terapeutski agens može da uključuje, ali nije ograničen na, antisens oligonukleotide koji ciljaju apo(a) ili apoB. Drugi agens može takođe da uključuje anti- apo(a) antitela, apo(a) peptidne inhibitore, agense za snižavanje holesterola, agense za snižavanje lipida, agense za snižavanje glukoze i antiinflamatorne agense.
[0204] Kako se ovde koristi, „segmenti“ su definisani kao manji poddelovi regiona u nukleinskoj kiselini. Na primer, „ciljni segment“ označava sekvencu nukleotida ciljne nukleinske kiseline na koju je usmereno jedno ili više antisens jedinjenja. „5' ciljno mesto“ odnosi se na krajnji 5' nukleotid ciljnog segmenta. „3' ciljno mesto“ odnosi se na krajnji 3' nukleotid ciljnog segmenta. Alternativno, „mesto početka“ može da se odnosi na krajnji 5' nukleotid ciljnog segmenta, a „mesto prestanka“ se odnosi na krajnji 3' nukleotid ciljnog segmenta. Ciljni segment takođe može da počinje sa „mestom početka“ jedne sekvence i da se završava na „mestu prestanka“ druge sekvence.
[0205] Kako se ovde koristi, „statin“ označava agens koji inhibira aktivnost HMG-CoA reduktaze.
[0206] Kako se ovde koristi, „supkutana primena“ označava primenu odmah ispod kože.
[0207] Kako se ovde koristi, „ispitanik“ označava čoveka ili nehumanu životinju izabranu za lečenje ili terapiju.
4
[0208] Kako se ovde koristi, „simptom kardiovaskularne bolesti ili poremećaja“ označava fenomen koji se javlja usled kardiovaskularne bolesti ili poremećaja, prati ih i služi kao njihova naznaka. Na primer, angina; bol u grudima; plitko disanje; palpitacije; malaksalost; vrtoglavica; mučnina; znojenje; tahikardija; bradikardija; aritmija; atrijalna fibrilacija; oticanje donjih ekstremiteta; cijanoza; zamor; nesvestica; obamrlost lica; obamrlost udova; klaudikacija ili grčenje mišića; naduvenost abdomena ili groznica su simptomi kardiovaskularne bolesti ili poremećaja.
[0209] Kako se ovde koristi, „ciljanje“ ili „ciljni“ označava proces konstruisanja i selekcije antisens jedinjenja koje će se specifično hibridizovati u ciljnu nukleinsku kiselinu i indukovati željeno dejstvo.
[0210] Kako se ovde koristi, „terapeutski efikasna količina“ označava količinu farmaceutskog agensa koja pojedincu obezbeđuje terapeutsku korist.
[0211] Kako se ovde koristi, „terapeutska promena načina života“ označava promene u ishrani i načinu života koje treba da snize mast/masu adipoznog tkiva i/ili holesterol. Takve promene mogu da smanje rizik od razvoja srčane bolesti, i mogu da uključuju preporuke za ukupne dnevne kalorije koje se ishranom unose, ukupnu mast, zasićenu mast, polinezasićenu mast, mononezasićenu mast, ugljene hidrate, proteine, holesterol, nerastvorljiva vlakna, kao i preporuke za fizičku aktivnost.
[0212] Kako se ovde koristi, „lečiti“ se odnosi na primenu ovde opisanog jedinjenja kako bi se dovelo do izmene ili poboljšanja bolesti, poremećaja ili stanja.
[0213] Kako se ovde koristi, „triglicerid“ ili „TG“ označava lipid ili neutralnu mast koja se sastoji od glicerola kombinovanog sa tri molekula masne kiseline.
[0214] Kako se ovde koristi, „dijabetes tipa 2“ (poznat i kao „dijabetes melitus tipa 2“, „dijabetes melitus, tip 2“, „dijabetes nezavisan od insulina“, „IND“, „dijabetes povezan sa gojaznošću“ ili „adultni dijabetes“) je metabolički poremećaj koji primarno karakterišu otpornost na insulin, relativan nedostatak insulina i hiperglikemija.
4
Određena otelotvorenja otkrića
[0215] U određenim otelotvorenjima, jedinjenje sadrži siRNK ili antisens oligonukleotid usmeren na apolipoprotein(a) (apo(a)) poznat u struci i konjugovanu grupu koja je ovde opisana. Primeri antisens oligonukleotida usmerenih na apo(a) pogodnih za konjugaciju uključuju, ali nisu ograničeni na, one koji su otkriveni u WO 2013/177468; US 8,673,632; US 7,259,150 i US publikaciji patentne prijave br. US 2004/0242516. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje sadrži antisens oligonukleotid koji ima nukleobaznu sekvencu bilo kog od SEQ ID NO: 12-130, 133, 134 otkrivenih u WO 2013/177468 i ovde opisanu konjugovanu grupu. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje sadrži antisens oligonukleotid koji ima nukleobaznu sekvencu bilo kog od SEQ ID NO: 11-45 i 85-96 otkrivenih u US 8,673,632 i ovde opisanu konjugovanu grupu. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje sadrži antisens oligonukleotid koji ima nukleobaznu sekvencu bilo kog od SEQ ID NO: 11-45 otkrivenih u US 7,259,150 i ovde opisanu konjugovanu grupu. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje sadrži antisens oligonukleotid koji ima nukleobaznu sekvencu bilo kog od SEQ ID NO: 7-41 otkrivenih u US publikaciji patentne prijave br. 2004/0242516 i ovde opisanu konjugovanu grupu.
[0216] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenja i postupke za smanjivanje apo(a) iRNK i ekspresije proteina. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je inhibitor specifičan za apo(a) za lečenje, prevenciju ili ublažavanje bolesti povezane sa apo(a). U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je antisens oligonukleotid koji je usmeren na apo(a). U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je antisens oligonukleotid koji je usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu.
[0217] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenja i postupke za smanjivanje nivoa Lp(a). U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je inhibitor specifičan za apo(a) za lečenje, prevenciju ili ublažavanje bolesti povezane sa Lp(a). U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je antisens oligonukleotid koji je usmeren na apo(a). U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je antisens oligonukleotid koji je usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu.
4
[0218] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovan oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid sa konjugovanom grupom sastoji se od 15 do 30, 18 do 24, 19 do 22, 13 do 25, 14 do 25, 15 do 25 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid sa konjugovanom grupom sadrži najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, najmanje 20, najmanje 21, najmanje 22, najmanje 23, najmanje 24, najmanje 25, najmanje 26, najmanje 27, najmanje 28, najmanje 29 ili 30 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid sa konjugovanom grupom sastoji se od 20 povezanih nukleozida.
[0219] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili 20 uzastopnih nukleobaza koje su komplementarne sa delom podjednake dužine iz bilo koje od SEQ ID NO: 1-4.
[0220] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) segment i konjugovanu grupu, pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili 20 uzastopnih nukleobaza koje su komplementarne sa delom podjednake dužine iz bilo kog od ciljnih segmenta koji su prikazani, na primer, u Primerima 114 i 117. U tabelama, „mesto početka“ se odnosi na krajnji 5' nukleotid ciljnog segmenta, a „mesto prestanka“ se odnosi na krajnji 3' nukleotid ciljnog segmenta. Ciljni segment može biti u rasponu od mesta početka do mesta prestanka svake od sekvenci navedenih u tabelama. Alternativno, ciljni segment može biti u rasponu od mesta početka jedne sekvence i da se završava na mestu prestanka druge sekvence. Na primer, kako je prikazano u Tabeli 125, ciljni segment može biti u rasponu od 3901-3920, od mesta početka do mesta prestanka SEQ ID NO: 58. U drugom primeru, kako je prikazano u Tabeli 125, ciljni segment može biti u rasponu od 3900-3923, od mesta početka SEQ ID NO: 57 do mesta prestanka SEQ ID NO: 61.
4
[0221] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu je nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 95% ili 100% komplementarna sa bilo kojom SEQ ID NO: 1-4. Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu je nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 95% ili 100% komplementarna sa bilo kojim od ciljnih segmenta koji su prikazani, na primer, u Primerima 114 i 117.
[0222] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i sadrži nukleobaznu sekvencu koja sadrži deo od najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili 20 uzastopnih nukleobaza koje su komplementarne sa delom podjednake dužine nukleobaza 3901 do 3920 SEQ ID NO: 1, pri čemu, nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida je najmanje 80% komplementarna sa SEQ ID NO: 1.
[0223] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i sadrži nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, najmanje 20, najmanje 21, najmanje 22, najmanje 23, najmanje 24, najmanje 25, najmanje 26, najmanje 27, najmanje 28, najmanje 29 ili 30 uzastopnih nukleobaza koje su komplementarne sa delom podjednake dužine nukleobaza 3900 do 3923 SEQ ID NO: 1, pri čemu, nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida je najmanje 80% komplementarna sa SEQ ID NO: 1.
[0224] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i sadrži nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili 20 uzastopnih nukleobaza bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 12-130, 133, 134. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8 uzastopnih nukleobaza bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 12-130, 133, 134. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje se sastoji od bilo koje SEQ ID NO: 12-130, 133, 134 i konjugovane grupe.
[0225] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i sadrži nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili 20 uzastopnih nukleobaza bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 12-20, 22-33, 35-44, 47-50, 51, 53, 57-62, 65-66, 68, 70-79, 81, 85-86, 89-90, 92-94, 97, 105-110, 103-104, 133-134. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje se sastoji od bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 12-20, 22-33, 35-44, 47-50, 51, 53, 57-62, 65-66, 68, 70-79, 81, 85-86, 89-90, 92-94, 97, 105-110, 103-104, 133-134 i konjugovane grupe.
[0226] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i sadrži nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili 20 uzastopnih nukleobaza bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 12-19, 26-30, 32, 35, 38-44, 46-47, 50, 57-58, 61, 64-66, 68, 72-74, 76-77, 92-94, 103-110. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje se sastoji od bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 12-19, 26-30, 32, 35, 38-44, 46-47, 50, 57-58, 61, 64-66, 68, 72-74, 76-77, 92-94, 103-110 i konjugovane grupe.
[0227] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i sadrži nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19,
1
ili 20 uzastopnih nukleobaza bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 111, 114-121, 123-129. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje se sastoji od bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 111, 114-121, 123-129 i konjugovane grupe.
[0228] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i sadrži nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili 20 uzastopnih nukleobaza bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 14, 17, 18, 26-28, 39, 71, 106-107. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje se sastoji od bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 14, 17, 18, 26-28, 39, 71, 106-107 i konjugovane grupe.
[0229] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i sadrži nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili 20 uzastopnih nukleobaza bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 14, 26-29, 39-40, 82. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje se sastoji od bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 14, 26-29, 39-40, 82 i konjugovane grupe.
[0230] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i sadrži nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili 20 uzastopnih nukleobaza bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 14, 16-18. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje se sastoji od bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 14, 16-18 i konjugovane grupe.
[0231] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se
2
modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i sadrži nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili 20 uzastopnih nukleobaza bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 26-27, 107. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje se sastoji od bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 26-27, 107 i konjugovane grupe.
[0232] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i sadrži nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili 20 uzastopnih nukleobaza bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 28-29, 39-40, 47. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje se sastoji od bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: : 28-29, 39-40, 47 i konjugovane grupe.
[0233] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i sadrži nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili 20 uzastopnih nukleobaza bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 28, 93, 104, 134. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje se sastoji od bilo koje od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 28, 93, 104, 134 i konjugovane grupe.
[0234] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i sadrži nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili 20 uzastopnih nukleobaza nukleobazne sekvence SEQ ID NO: 58. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid sa konjugovanom grupom ima nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8 uzastopnih nukleobaza nukleobazne sekvence SEQ ID NO: 58. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje se sastoji od SEQ ID NO: 58 i konjugovane grupe.
[0235] U određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja mogu biti predstavljena pomoću sledeće strukture. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje sadrži modifikovani oligonukleotid ISIS 494372 sa 5'-X, pri čemu je X konjugovana grupa koja sadrži GalNAc kao što je definisano u zahtevima. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje se sastoji od modifikovanog oligonukleotida ISIS 494372 sa 5'-X, pri čemu je X konjugovana grupa koja sadrži GalNAc kao što je definisano u zahtevima.
[0236] U određenim otelotvorenjima, konjugovano antisens jedinjenje može biti predstavljeno pomoću sledeće strukture. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje sadrži konjugovani modifikovani oligonukleotid ISIS 681251. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje se sastoji od konjugovanog modifikovanog oligonukleotida ISIS 681251.
4
[0237] U određenim otelotvorenjima, konjugovano antisens jedinjenje može biti predstavljeno pomoću sledeće strukture. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje sadrži konjugovani modifikovani oligonukleotid ISIS 681257. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje se sastoji od konjugovanog modifikovanog oligonukleotida ISIS 681257.
[0238] U određenim otelotvorenjima, konjugovano antisens jedinjenje može biti predstavljeno pomoću sledeće strukture. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje sadrži modifikovani oligonukleotid sa nukleobaznom sekvencom SEQ ID NO: 58 sa 5'-GalNAc, kako je definisano u zahtevima, uz varijabilnost u šećernim modifikacijama krila. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje se sastoji od modifikovanog oligonukleotida sa nukleobaznom sekvencom SEQ ID NO: 58 sa 5'-GalNAc, kako je definisano u zahtevima, uz varijabilnost u šećernim modifikacijama krila.
[0239] Pri čemu, R<1>je -OCH2CH2OCH3(MOE) i R<2>je H; ili R<1>i R<2>zajedno grade most, pri čemu, R<1>je -O- i R<2>je -CH2-, -CH(CH3)-, ili -CH2CH2-, i R<1>i R<2>su neposredno povezani tako da je nastali most odabran od: -O-CH2-, -O-CH(CH3)- i -O-CH2CH2-;
I za svaki par R<3>i R<4>na istom prstenu, nezavisno za svaki prsten: R<3>je izabran od H i -OCH2CH2OCH3i R<4>je H; ili R<3>i R<4>zajedno grade most, pri čemu, R<3>je -O- i R<4>je - CH2-, -CH(CH3)-, ili -CH2CH2- i R<3>i R<4>su neposredno povezani tako da je nastali most odabran od: -O-CH2-, -O-CH(CH3)- i -O-CH2CH2-;
I R<5>je izabran od H i -CH3;
I Z je izabran od S<->i O-.
[0240] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu je modifikovani oligonukleotid jednolančani.
[0241] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu je najmanje jedna internukleozidna veza modifikovana internukleozidna veza. U određenim otelotvorenjima, modifikovana internukleozidna veza je fosforotioatna internukleozidna veza. U određenom otelotvorenju, najmanje 1, najmanje 2, najmanje 3, najmanje 4, najmanje 5, najmanje 6, najmanje 7, najmanje 8, najmanje 9 ili najmanje 10 internukleozidnih veza pomenutog modifikovanog oligonukleotida su fosforotioatne internukleozidne veze. U određenim otelotvorenjima, svaka internukleozidna veza je fosforotioatna internukleozidna veza. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid sadrži najmanje 1, najmanje 2, najmanje 3, najmanje 4, najmanje 5, najmanje 6, najmanje 7, najmanje 8, najmanje 9 ili najmanje 10 fosfodiestarskih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, svaka internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida je odabrana od fosfodiestarske internukleozidne veze i fosforotioatne internukleozidne veze.
[0242] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovan oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu najmanje jedan nukleozid sadrži modifikovanu nukleobazu. U određenim otelotvorenjima, modifikovana nukleobaza je 5-metilcitozin.
[0243] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži najmanje jedan modifikovani šećer. U određenim otelotvorenjima, modifikovani šećer je biciklični šećer. U određenim otelotvorenjima modifikovani šećer sadrži 2'-O-metoksietil, ograničeni etil, 3'-fluor-HNA ili 4'- (CH2)n-O-2' most, pri čemu, n je 1 ili 2.
[0244] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i sadrži: (a) segment razmaka koji se sastoji od povezanih dezoksinukleozida; (b) 5' krilni segment koji se sastoji od povezanih nukleozida; (c) 3' krilni segment koji se sastoji od povezanih nukleozida; i pri čemu, segment razmaka je pozicioniran između 5' krilnog segmenta i 3' krilnog segmenta, i pri čemu svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži modifikovani šećer.
[0245] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 20 povezanih nukleozida i sadrži: (a) segment razmaka (eng. gap) koji se sastoji od deset povezanih dezoksinukleozida; (b) 5' krilni segment koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; (c) 3' krilni segment koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; i pri čemu je segment razmaka pozicioniran između 5' krilnog segmenta i 3' krilnog segmenta, pri čemu svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži 2'-O-metoksietil šećer, pri čemu, najmanje jedna internukleozidna veza je fosforotioatna veza i pri čemu, svaki citozinski ostatak je 5-metilcitozin.
[0246] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 20 povezanih nukleozida i ima nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8 uzastopnih nukleobaza iz bilo koje od SEQ ID NO: 12-130, 133, 134, pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži: (a) segment razmaka (eng. gap) koji se sastoji od deset povezanih dezoksinukleozida; (b) 5' krilni segment koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; (c) 3' krilni segment koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; i pri čemu je segment razmaka pozicioniran između 5' krilnog segmenta i 3' krilnog segmenta, pri čemu svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži 2'-O-metoksietil šećer, pri čemu, najmanje jedna internukleozidna veza je fosforotioatna veza i pri čemu, svaki citozinski ostatak je 5-metilcitozin.
[0247] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 20 povezanih nukleozida i ima nukleobaznu sekvencu koja sadrži najmanje 8 uzastopnih nukleobaza SEQ ID NO: 58, pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži: (a) segment razmaka koji se sastoji od deset povezanih dezoksinukleozida; (b) 5' krilni segment koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; (c) 3' krilni segment koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; i pri čemu je segment razmaka pozicioniran između 5' krilnog segmenta i 3' krilnog segmenta, pri čemu svaki nukleozid svakog bočnog segmenta sadrži 2'-0-metoksietil šećer, pri čemu, najmanje jedna internukleozidna veza je fosforotioatna veza i pri čemu, svaki citozinski ostatak je 5-metilcitozin.
[0248] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 20 povezanih nukleozida sa nukleobaznom sekvencom SEQ ID NO: 58, pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži: (a) segment razmaka (eng. gap) koji se sastoji od deset povezanih dezoksinukleozida; (b) 5' krilni segment koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; (c) 3' krilni segment koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; i pri čemu je segment razmaka pozicioniran između 5' krilnog segmenta i 3' krilnog segmenta, pri čemu svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži 2'-O-metoksietil šećer, pri čemu, najmanje jedna internukleozidna veza je fosforotioatna veza i pri čemu, svaki citozinski ostatak je 5-metilcitozin.
[0249] U određenim otelotvorenjima, konjugovana grupa je povezana sa modifikovanim oligonukleotidom na 5' kraju modifikovanog oligonukleotida. U određenim otelotvorenjima, konjugovana grupa je povezana sa modifikovanim oligonukleotidom na 3' kraju modifikovanog oligonukleotida.
[0250] Konjugovana grupa iz predmetnog pronalaska sadrži tri liganda, pri čemu je svaki ligand N-acetil galaktozamin.
[0251] Konjugovana grupa iz predmetnog pronalaska sadrži:
[0252] Konjugovana grupa je kovalentno vezana za modifikovani oligonukleotid.
1
svaki E je veznik;
svaki F je ligand; i
q je ceo broj između 1 i 5.
[0255] Konjugovana grupa iz predmetnog pronalaska sadrži ostatak usmeren na ćeliju koji sadrži:
[0256] U određenim otelotvorenjima, konjugovana grupa sadrži:
pri čemu, Q13 je H ili O(CH2)2-OCH3;
A je modifikovani oligonukleotid; i
Bx je heterociklični bazni ostatak.
2
[0257] U određenim otelotvorenjima, Bx je izabran od adenina, guanina, timina, uracila ili citozina ili 5-metil citozina. U određenim otelotvorenjima, Bx je adenin. U određenim otelotvorenjima, Bx je timin. U određenim otelotvorenjima, Q13 je O(CH2)2-OCH3. U određenim otelotvorenjima, Q13 je H.
[0258] U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je u obliku soli. U daljim otelotvorenjima, jedinjenje dalje sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje sadrži modifikovani oligonukleotid usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu, ili njegovu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.
[0259] Određena otelotvorenja predmetnog pronalaska pružaju kompoziciju koja sadrži konjugovano antisens jedinjenje kako je ovde opisano, pri čemu je nivo viskoznosti jedinjenja manji od 40 centipoaza (cP). U određenim otelotvorenjima, konjugovano antisens jedinjenje kako je ovde opisano je efikasno zahvaljujući tome što ima viskoznost manju od 40 cP, manju od 35 cP, manju od 30 cP, manju od 25 cP, manju od 20 cP ili manju od 15 cP kada se meri pomoću parametara kao što je opisano u Primeru 125.
[0260] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju kompozicije i postupke koji obuhvataju primenu na životinji konjugovanog antisens jedinjenja ili ovde otkrivene kompozicije. U određenim otelotvorenjima, primena konjugovanog antisens jedinjenja sprečava, leči, ublažava ili usporava progresiju kardiovaskularne, metaboličke i/ili inflamatorne bolesti
[0261] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju kompozicije i postupke za upotrebu u terapiji za lečenje bolesti, poremećaja ili stanja povezanog sa apo(a). Određena otelotvorenja predmetnog otkrića obezbeđuju kompozicije i postupke za upotrebu u terapiji za lečenje bolesti, poremećaja ili stanja povezanog sa Lp(a). U određenim otelotvorenjima, nivoi apo(a) i/ili Lp(a) su povišeni kod životinje. U određenim otelotvorenjima, kompozicija je jedinjenje koje sadrži specifični inhibitor apo(a). U određenim otelotvorenjima, specifični inhibitor apo(a) je nukleinska kiselina. U određenim otelotvorenjima, nukleinska kiselina je antisens jedinjenje. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje je modifikovani oligonukleotid koji je usmeren na apo(a). U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje je modifikovani oligonukleotid koji je usmeren na apo(a) i konjugovanu grupu. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid koji je usmeren na apo(a) sa konjugovanom grupom se koristi u lečenju, prevenciji, usporavanju progresije, ublažavanju kardiovaskularne i/ili metaboličke bolesti, poremećaja ili stanja. U određenim otelotvorenjima, kompozicije i postupci za terapiju uključuju primenu specifičnog inhibitora apo(a) na pojedincu kome je to potrebno.
[0262] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju kompozicije i postupke za smanjivanje nivoa apo(a). Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju kompozicije i postupke za smanjivanje nivoa Lp(a). U određenim otelotvorenjima, smanjenje nivoa apo(a) u tkivu, organu ili ispitaniku poboljšava odnos LDL prema HDL ili odnos TG prema HDL. Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju kompozicije i postupke za smanjenje apo(a) iRNK ili ekspresije proteina kod životinje koji obuhvataju primenu na životinji konjugovanog antisens jedinjenja ili kompozicije koja je ovde otkrivena za smanjenje apo(a) iRNK ili ekspresije proteina kod životinje. Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju kompozicije i postupke za smanjenje nivoa Lp(a) kod životinje koji obuhvataju primenu na životinji konjugovanog antisens jedinjenja ili kompozicije koja je ovde otkrivena za smanjenje apo(a) iRNK ili ekspresije proteina kod životinje.
[0263] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića obezbeđuju kompozicije i postupke za prevenciju, lečenje, odlaganje, usporavanje progresije i/ili ublažavanje bolesti, poremećaja i stanja povezanih sa apo(a) kod pojedinca kome je to potrebno. Određena otelotvorenja predmetnog otkrića obezbeđuju kompozicije i postupke za prevenciju, lečenje, odlaganje, usporavanje progresije i/ili ublažavanje bolesti, poremećaja i stanja povezanih sa Lp(a) kod pojedinca kome je to potrebno. U određenim otelotvorenjima, takve bolesti, poremećaji i stanja uključuju inflamatorne, kardiovaskularne i/ili metaboličke bolesti, poremećaje i stanja. Određene takve kardiovaskularne bolesti, poremećaji ili stanja uključuju, bez ograničenja, aortnu stenozu, aneurizmu (npr. abdominalnu aortnu aneurizmu), anginu, aritmiju, aterosklerozu, cerebrovaskularnu bolest, koronarnu arterijsku bolest, koronarnu bolest srca, dislipidemiju, hiperholesterolemiju, hiperlipidemiju, hipertenziju, hipertrigliceridemiju, infarkt miokarda, perifernu vaskularnu bolest (npr. periferna arterijska bolest, periferna arterijska okluzivna bolest), retinalnu vaskularnu okluziju ili moždani udar. Određene takve metaboličke bolesti, poremećaji ili stanja uključuju, bez ograničenja, hiperglikemiju, predijabetes, dijabetes (tip I i tip II), gojaznost, otpornost na insulin, metabolički sindrom i dijabetesnu dislipidemiju. Određene takve inflamatorne bolesti, poremećaji ili stanja
4
uključuju, bez ograničenja, aortnu stenozu, koronarnu arterijsku bolest (KAB), Alchajmerovu bolest i tromboembolijske bolesti, poremećaje ili stanja. Određene tromboembolijske bolesti, poremećaji ili stanja uključuju, bez ograničenja, moždani udar, trombozu (npr. venska tromboembolija), infarkt miokarda i perifernu vaskularnu bolest. Određena otelotvorenja predmetnog otkrića obezbeđuju kompozicije i postupke za prevenciju, lečenje, odlaganje, usporavanje progresije i/ili ublažavanje aortne stenoze.
[0264] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju postupak za smanjenje najmanje jednog simptoma kardiovaskularne bolesti, poremećaja ili stanja. U određenim otelotvorenjima, simptomi uključuju, ali nisu ograničeni na: anginu, bol u grudima, plitko disanje, palpitacije, malaksalost, vrtoglavicu, mučninu, znojenje, tahikardiju, bradikardiju, aritmiju, atrijalnu fibrilaciju, oticanje donjih ekstremiteta, cijanozu, zamor, nesvesticu, obamrlost lica, obamrlost udova, klaudikaciju ili grčenje mišića, naduvenost abdomena i groznicu. Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju postupak za smanjenje najmanje jednog simptoma aortne stenoze.
[0265] U određenim otelotvorenjima, modulacija ekspresije apo(a) ili Lp(a) odvija se u ćeliji, tkivu ili organu. U određenim otelotvorenjima, modulacije se odvijaju u ćeliji, tkivu ili organu životinje. U određenim otelotvorenjima, modulacija je smanjenje nivoa apo(a) u iRNK. U određenim otelotvorenjima, modulacija je smanjenje nivoa apo(a) u proteinu. U određenim otelotvorenjima, smanjeni su nivoi apo(a) u iRNK i u proteinu. U određenim otelotvorenjima, modulacija je smanjenje nivoa Lp(a). Do takvog smanjenja može doći na način zavisan od vremena ili način zavisan od doze.
[0266] U određenim otelotvorenjima, ispitanik ili životinja je čovek.
[0267] U određenim otelotvorenjima, konjugovano antisens jedinjenje se primenjuje parenteralno. U daljim otelotvorenjima, parenteralna primena je supkutana.
[0268] U određenim otelotvorenjima, konjugovano antisens jedinjenje ili kompozicija se primenjuje zajedno sa drugim agensom ili terapijom. U određenim otelotvorenjima, konjugovano antisens jedinjenje ili kompozicija i drugi agens se primenjuju istovremeno.
[0269] U određenim otelotvorenjima, drugi agens je agens za snižavanje glukoze. U određenim otelotvorenjima, drugi agens je agens za snižavanje LDL, TG ili holesterola. U određenim otelotvorenjima, drugi agens je antiinflamatorni agens. U određenim otelotvorenjima, drugi agens je lek za Alchajmerovu bolest. U određenim otelotvorenjima, drugi agens može biti, ali nije ograničen na, nesteroidni antiinflamatorni lek (NSAID, npr. aspirin), niacin (npr. niaspan), nikotinska kiselina, inhibitor apoB (npr. mipomersen), inhibitor CETP (npr. anacetrapib), inhibitor apo(a), analog tiroidnog hormona (npr. eprotirom), inhibitor reduktaze HMG-CoA (npr. statin), fibrat (npr. gemfibrozil) i inhibitor proteina transfera mikrozomskog triglicerida (npr. lomitapid). Terapija može biti, ali nije ograničena na, aferezu Lp(a). Agensi ili terapije se mogu primenjivati zajedno ili istovremeno. Agensi ili terapije se mogu primenjivati sekvencijalno ili jedan nakon drugog.
[0270] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju upotrebu konjugovanog antisens jedinjenja usmerenog na apo(a) za smanjivanje nivoa apo(a) kod životinje. Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju upotrebu konjugovanog antisens jedinjenja usmerenog na apo(a) za smanjivanje nivoa Lp(a) kod životinje. Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju upotrebu konjugovanih antisens jedinjenja usmerenih na apo(a) za lečenje, prevenciju ili ublažavanje bolesti, poremećaja ili stanja povezanog sa apo(a). Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju upotrebu konjugovanih antisens jedinjenja usmerenih na apo(a) za lečenje, prevenciju ili ublažavanje bolesti, poremećaja ili stanja povezanog sa Lp(a).
[0271] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju upotrebu konjugovanog antisens jedinjenja usmerenog na apo(a) u pripremi leka za smanjivanje nivoa apo(a) kod životinje. Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju upotrebu konjugovanog antisens jedinjenja usmerenog na apo(a) u pripremi leka za smanjivanje nivoa Lp(a) kod životinje. Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju upotrebu konjugovanog antisens jedinjenja za pripremu leka za lečenje, prevenciju ili ublažavanje bolesti, poremećaja ili stanja povezanog sa apo(a). Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju upotrebu konjugovanog antisens jedinjenja za pripremu leka za lečenje, prevenciju ili ublažavanje bolesti, poremećaja ili stanja povezanog sa Lp(a).
[0272] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju upotrebu konjugovanog antisens jedinjenja kako je ovde opisano u proizvodnji leka za lečenje, ublažavanje, odlaganje ili prevenciju jedne ili više bolesti povezanih sa apo(a) i/ili Lp(a).
[0273] Određena otelotvorenja predmetnog otkrića pružaju komplet za lečenje, prevenciju ili ublažavanje bolesti, poremećaja ili stanja kako je ovde opisano, pri čemu komplet sadrži: (i) inhibitor specifičan za apo(a) kako je ovde opisan; i opciono (ii) drugi agens ili terapiju kako je ovde opisano.
[0274] Komplet može dalje da sadrži uputstvo za upotrebu kompleta za lečenje, prevenciju ili ublažavanje bolesti, poremećaja ili stanja kako je ovde opisano pomoću kombinovane terapije kako je ovde opisano.
B. Određena jedinjenja
[0275] U određenim otelotvorenjima, predmetno otkriće obezbeđuje konjugovana antisens jedinjenja koja sadrže antisens oligonukleotide i konjugat.
a. Određeni antisens oligonukleotidi
[0276] U određenim otelotvorenjima, predmetno otkriće obezbeđuje antisens oligonukleotide. Takvi antisens oligonukleotidi sadrže povezane nukleozide, pri čemu svaki nukleozid sadrži ostatak šećera i nukleobazu. Struktura takvih antisens oligonukleotida može da se razmatra u pogledu hemijskih osobina (npr. modifikacije i obrasci modifikacija) i nukleobaznih sekvenci (npr. sekvenca antisens oligonukleotida, identitet i sekvenca ciljne nukleinske kiseline).
i. Određene hemijske osobine
[0277] Antisens oligonukleotid sadrži jednu ili više modifikacija. U određenim takvim otelotvorenjima, antisens oligonukleotidi sadrže jedan ili više modifikovanih nukleozida i/ili modifikovanih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, modifikovani nukleozidi sadrže modifikovani ostatak šećera i/ili modifikovanu nukleobazu.
1. Određeni ostaci šećera
[0278] U određenim otelotvorenjima, jedinjenja iz otkrića sadrže jedan ili više modifikovanih nukleozida koji sadrže modifikovani ostatak šećera. Takva jedinjenja koja sadrže jedan ili više nukleozida sa modifikovanim šećerom mogu imati poželjna svojstva, kao što su povećana stabilnost nukleaze ili povećan afinitet vezivanja prema ciljnoj nukleinskoj kiselini u odnosu na oligonukleotid koji sadrži samo nukleozide koji sadrže ostatke šećera koji se javljaju u prirodi. U određenim otelotvorenjima, modifikovani ostaci šećera su supstituisani ostaci šećera. U određenim otelotvorenjima, modifikovani ostaci šećera su surogati šećera. Takvi surogati šećera mogu da sadrže jednu ili više supstitucija koje odgovaraju onima kod supstituisanih ostataka šećera.
[0279] U određenim otelotvorenjima, modifikovani ostaci šećera su supstituisani ostaci šećera koji sadrže jedan ili više nepremošćavajućih supstituenata šećera, uključujući, bez ograničenja, supstituente na pozicijama 2' i/ili 5'. Primeri supstituenata šećera koji su pogodni za poziciju 2' uključuju, ali nisu ograničeni na: 2'-F, 2'-OCH3("OMe" ili "O-metil") i 2'-O(CH2)2OCH3("MOE"). U određenim otelotvorenjima, supstituenti šećera na poziciji 2' su izabrani od alila, amino, azido, tio, O-alila, O-C1-C10alkila, O-C1-C10supstituisanog alkila; OCF3, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn) i O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), gde je svaki Rm i Rn, nezavisno, H ili supstituisani ili nesupstituisani C1-C10alkil. Primeri supstituenata šećera na poziciji 5' uključuju, ali nisu ograničeni na: 5'-metil (R ili S); 5'-vinil i 5'-metoksi. U određenim otelotvorenjima, supstituisani šećeri sadrže više od jednog nepremošćavajućeg supstituenta šećera, na primer, 2'-F-5'-metil ostatke šećera (vidite, npr. PCT međunarodnu prijavu WO 2008/101157, za dodatne 5', 2'-bis supstituisane ostatke šećera i nukleozide).
[0280] Nukleozidi koji sadrže 2'-supstituisane ostatke šećera se nazivaju 2'-supstituisani nukleozidi. U određenim otelotvorenjima, 2'-supstituisani nukleozid sadrži 2'-supstituentsku grupu izabranu od halo, alila, amino, azido, SH, CN, OCN, CF3, OCF3, O, S ili N(Rm)-alkila; O, S ili N(Rm)-alkenila; O, S ili N(Rm)-alkinila; O-alkilenil-O-alkila, alkinila, alkarila, aralkila, O-alkarila, O-aralkila, O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn) ili O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), pri čemu je svaki Rmi Rn, nezavisno, H, amino zaštitna grupa ili supstituisani ili nesupstituisani C1-C10alkil. Ove 2'-supstituentske grupe mogu dalje biti supstituisane sa jednom ili više supstituentskih grupa nezavisno izabranih od hidroksil, amino, alkoksi, karboksi, benzil, fenil, nitro (NO2), tiol, tioalkoksi (S-alkil), halogen, alkil, aril, alkenil i alkinil.
[0281] U određenim otelotvorenjima, 2'- supstituisani nukleozid sadrži 2'-supstituentsku grupu izabranu od F, NH2, N3, OCF3, O-CH3, O(CH2)3NH2, CH2-CH=CH2, O-CH2-CH=CH2, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2i N-supstituisanog acetamida (O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), pri čemu je svaki Rmi Rn, nezavisno, H, amino zaštitna grupa ili supstituisani ili nesupstituisani C1-C10alkil.
[0282] U određenim otelotvorenjima, 2'- supstituisani nukleozid sadrži 2'-supstituentsku grupu izabranu od F, OCF3, O-CH3, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-ON(CH3)2, -O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2i O-CH2-C(=O)-N(H)CH3.
[0283] U određenim otelotvorenjima, 2'- supstituisani nukleozid sadrži ostatak šećera koji sadrži 2'-supstituentsku grupu izabranu od F, O-CH3, i OCH2CH2OCH3.
[0284] Određeni modifikovani ostaci šećera sadrže premošćavajući supstituent šećera koji gradi drugi prsten što daje biciklični ostatak šećera. U određenim takvim otelotvorenjima, biciklični ostatak šećera sadrži most između 4' i 2' atoma prstena furanoze. Primeri takvih 4' do 2' supstituenata šećera uključuju, ali nisu ograničeni na: -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(RaRb)-N(R)-O- ili -C(RaRb)-O-N(R)-; 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2', 4'-(CH2)-O-2' (LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2' (ENA); 4'-CH(CH3)-O-2' (cEt) i 4'-CH(CH2OCH3)-O-2', i njihove analoge (vidite, npr. U.S. patent 7,399,845, objavljen 15. jula 2008.); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2' i njegove analoge, (vidite, npr. WO2009/006478, objavljen 8. januara 2009.); 4'-CH2-N(OCH3)-2' ai njegove analoge (vidite, npr. WO2008/150729, objavljen 11 decembra 2008.); 4'-CH2-ON(CH3)-2' (vidite, npr. US2004/0171570, objavljen 2. septembra 2004); 4'-CH2-O-N(R)-2' i 4'-CH2-N(R)-0-2'-, pri čemu je svaki R, nezavisno, H, zaštitna grupa, ili C1-C12alkil; 4'-CH2-N(R)-O-2', pri čemu je R H, C1-C12alkil, ili zaštitna grupa (vidite, U.S. patent 7,427,672, objavljen 23. septembra 2008.); 4'-CH2-C(H)(CH3)-2' (vidite, npr. Chattopadhyaya, i sar. J. Org. Chem.,2009, 74, 118-134); i 4'-CH2-C(=CH2)-2' i njegovi analozi (vidite objavljenu PCT međunarodnu prijavu WO 2008/154401, objavljenu 8. decembra 2008.).
[0285] U određenim otelotvorenjima, takvi 4' do 2' mostovi nezavisno sadrže 1 do 4 povezanih grupa nezavisno izabranih od -[C(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=NRa)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, - Si(Ra)2-, -S(=O)x- i -N(Ra)-;
pri čemu:
x je 0, 1 ili 2;
n je 1, 2, 3 ili 4;
svaki Rai Rbje, nezavisno, H, zaštitna grupa, hidroksil, C1-C12alkil, supstituisani C1-C12alkil, C2-C12alkenil, supstituisani C2-C12alkenil, C2-C12alkinil, supstituisani C2-C12alkinil, C5-C20aril, supstituisani C5-C20aril, heterociklični radikal, supstituisani heterociklični radikal, heteroaril, supstituisani heteroaril, C5-C7aliciklični radikal, supstituisani C5-C7aliciklični radikal, halogen, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, acil (C(=O)-H), supstituisani acil, CN, sulfonil (S(=O)2-J1) ili sulfoksil (S(=O)-J1); i
svaki J1i J2je, nezavisno, H, C1-C12alkil, supstituisani C1-C12alkil, C2-C12alkenil, supstituisani C2-C12alkenil, C2-C12alkinil, supstituisani C2-C12alkinil, C5-C20aril, supstituisani C5-C20aril, acil (C(=O)-H), supstituisani acil, heterociklični radikal, supstituisani heterociklični radikal, C1-C12aminoalkil, supstituisani C1-C12aminoalkil, ili zaštitna grupa.
[0286] Nukleozidi koji sadrže biciklične ostatke šećera nazivaju se biciklični nukleozidi ili BNA. Biciklični nukleozidi uključuju, ali nisu ograničeni na, (A) α-L-metilenoksi (4'-CH2-O-2') BNA , (B) β-D-metilenoksi (4'-CH2-O-2') BNA (naziva se i zaključana nukleinska kiselina ili LNA), (C) etilenoksi (4'-(CH2)2-O-2') BNA, (D) aminooksi (4'-CH2-O-N(R)-2') BNA, (E) oksiamino (4'-CH2-N(R)-O-2') BNA, (F) metil(metilenoksi) (4'-CH(CH3)-O-2') BNA (takođe se naziva i ograničeni etil ili cEt), (G) metilentio (4'-CH2-S-2') BNA, (H) metilen-amino (4'-CH2-N(R)-2') BNA, (I) metil karbociklični (4'-CH2-CH(CH3)-2') BNA, i (J) propilen karbociklični (4'-(CH2)3-2') BNA, kao što je u nastavku prikazano.
pri čemu je Bx ostatak nukleobaze, a R je, nezavisno, H, zaštitna grupa ili C1-C12alkil.
[0287] Dodatni biciklični ostaci šećera su poznati u struci, na primer: Singh i sar. Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin i sar. Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt i sar. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar i sar. Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh i sar. J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava i sar. J. Am. Chem. Soc., 129(26) 8362-8379 (4. jul 2007.); Elayadi i sar. Curr. Opinion Invens. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch i sar. Chem. Biol., 2001, 8, 1-7; Orum i sar. Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; U.S. patenti br. 7,053,207, 6,268,490, 6,770,748, 6,794,499, 7,034,133, 6,525,191, 6,670,461 i 7,399,845; WO 2004/106356, WO 1994/14226, WO 2005/021570 i WO 2007/134181; U.S. patentne publikacije br. US2004/0171570, US2007/0287831 i US2008/0039618; U.S. patenti serijski br. 12/129,154, 60/989,574, 61/026,995, 61/026,998, 61/056,564, 61/086,231, 61/097,787 i 61/099,844; i PCT međunarodne publikacije br. WO/2008/150729, WO/2008/154401 i WO/2009/006478.
[0288] U određenim otelotvorenjima, biciklični ostaci šećera i nukleozidi koji sadrže takve biciklične ostatke šećera su dalje definisani putem izomerne konfiguracije. Na primer,
1
nukleozid koji sadrži 4'-2' metilen-oksi most može biti u α-L konfiguraciji ili u β-D konfiguraciji. Prethodno, α-L-metilenoksi (4'-CH2-O-2') biciklični nukleozidi su inkorporisani u antisens oligonukleotide koji su ispoljili antisens aktivnost (Frieden i sar. Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372).
[0289] U određenim otelotvorenjima, supstituisani ostaci šećera sadrže jedan ili više nepremošćavajućih supstituenata šećera i jedan ili više premošćavajućih supstituenata šećera (npr. 5'-supstituisani i 4'-2' premošćeni šećeri), (vidite, PCT međunarodnu publikaciju WO 2007/134181, objavljenu 11/22/07, pri čemu je LNA supstituisan sa, na primer, 5'-metil ili 5'-vinil grupom).
[0290] U određenim otelotvorenjima, modifikovani ostaci šećera su surogati šećera. U određenim takvim otelotvorenjima, atom kiseonika šećera koji se javlja u prirodi je supstituisan, npr. atomom sumpora, ugljenika ili azota. U određenim takvim otelotvorenjima, takav modifikovani ostatak šećera sadrži premošćavajuće i/ili nepremošćavajuće supstituente, kako je prethodno opisano. Na primer, određeni surogati šećera sadrže 4' atom sumpora i supstituciju na 2'-poziciji (vidite, npr. objavljenu U.S. patentnu prijavu US2005/0130923, objavljenu 16. juna 2005.) i/ili 5' poziciji. Kao dodatni primer, opisani su karbociklični biciklični nukleozidi koji imaju 4'-2' most (vidite, npr. Freier i sar. Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 i Albaek i sar. J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740).
[0291] U određenim otelotvorenjima, surogati šećera sadrže prstenove koji imaju atome osim 5-atoma. Na primer, u određenim otelotvorenjima, surogat šećera sadrži morfolino jedinjenje. Morfolino jedinjenja i njihova upotreba u oligomernim jedinjenjima je objavljena u brojnim patentima i objavljenim člancima (vidite, na primer: Braasch i sar. Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510; i U.S. patente 5,698,685; 5,166,315; 5,185,444; i 5,034,506). Kako se ovde koristi, termin „morfolino“ označava surogat šećera koji ima sledeću strukturu:
2
U određenim otelotvorenjima, morfolino mogu biti modifikovani, na primer putem dodavanja ili izmenjivanja različitih supstituentskih grupa iz prethodne morfolino strukture. Takvi surogati šećera se ovde nazivaju „modifikovani morfolino“.
[0292] Kao još jedan primer, u određenim otelotvorenjima, surogat šećera sadrži šestočlani tetrahidropiran. Takvi tetrahidropirani mogu biti dalje modifikovani ili supstituisani. Nukleozidi koji sadrže takve modifikovane tetrahidropirane uključuju, ali nisu ograničeni na, heksitolsku nukleinsku kiselinu (HNA), anitolsku nukleinsku kiselinu (ANA), manitolsku nukleinsku kiselinu (MNA) (vidite Leumann, CJ. Bioorg. & Med. Chem. (2002) 10:841-854), fluornu HNA (F-HNA) i jedinjenja koja imaju formulu VI:
pri čemu je nezavisno za svaki od navedenog najmanje jedan nukleozidni tetrahidropiranski analog formule VI:
Bx je ostatak nukleobaze;
T3i T4su svaki, nezavisno, internukleozidna vezujuća grupa koja povezuje nukleozidni tetrahidropiranski analog sa antisens jedinjenjem ili je jedan od T3i T4internukleozidna vezujuća grupa koja povezuje nukleozidni tetrahidropiranski analog sa antisens jedinjenjem i drugi od T3i T4je H, hidroksilna zaštitna grupa, povezana konjugovana grupa, ili 5' ili 3'-terminalna grupa;
q1, q2, q3, q4, q5, q6i q7su svaki, nezavisno, H, C1-C6alkil, supstituisani C1-C6alkil, C2-C6alkenil, supstituisani C2-C6alkenil, C2-C6alkinil ili supstituisani C2-C6alkinil; i
svaki od R1i R2je nezavisno izabran od: vodonika, halogena, supstituisanog ili nesupstituisanog alkoksi, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2, i CN, pri čemu, X je O, S ili NJ1, i svaki J1, J2, i J3je, nezavisno, H ili C1-C6alkil.
[0293] U određenim otelotvorenjima, obezbeđeni su modifikovani THP nukleozidi iz formule VI, pri čemu q1, q2, q3, q4, q5, q6i q7su H. U određenim otelotvorenjima, najmanje jedan od q1, q2, q3, q4, q5, q6i q7nije H. U određenim otelotvorenjima, najmanje jedan od q1, q2, q3, q4, q5, q6i q7je metil. U određenim otelotvorenjima, obezbeđeni su THP nukleozidi formule VI, pri čemu, jedan od R1i R2je F. U određenim otelotvorenjima, R1je fluor i R2je H, R1je metoksi i R2je H, i R1je metoksietoksi i R2je H.
[0294] Mnogi drugi biciklo i triciklo sistemi prstenova surogata šećera su takođe poznati u struci, i mogu se koristiti za modifikaciju nukleozida radi inkorporacije u antisens jedinjenja (vidite, npr. revijalni članak: Leumann, J. C, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2002, 10, 841-854).
[0295] Kombinacije modifikacija su takođe obezbeđene bez ograničenja, kao što su 2'-F-5'-metil supstituisani nukleozidi (vidite PCT međunarodnu prijavu WO 2008/101157 objavljenu 8/21/08 za ostale objavljene 5', 2'-bis supstituisane nukleozide) i zamena atoma kiseonika ribozil prstena sa S i dalje supstitucije na 2'-poziciji (vidite objavljenu U.S. patentnu prijavu US2005-0130923, objavljenu 16. juna 2005.) ili alternativno 5'-supstitucija biciklične nukleinske kiseline (vidite PCT međunarodnu prijavu WO 2007/134181, objavljenu 11/22/07 pri čemu je 4'-CH2-O-2' biciklični nucleozid dalje supstituisan na 5' poziciji 5'-metil ili 5'-vinil grupom). Sinteza i priprema karbocikličnih bicikličnih nukleozida zajedno sa njihovom oligomerizacijom i biohemijskim studijama takođe su opisane (vidite, npr. Srivastava i sar. J. Am. Chem. Soc.2007, 129(26), 8362-8379).
[0296] U određenim otelotvorenjima, predmetno otkriće obezbeđuje oligonukleotide koji sadrže modifikovane nukleozide. Ti modifikovani nukleozidi mogu da uključuju modifikovane šećere, modifikovane nukleobaze i/ili modifikovane veze. Specifične modifikacije se biraju tako da dobijeni oligonukleotidi imaju željene karakteristike. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi sadrže jedan ili više nukleozida sličnih RNK. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi sadrže jedan ili više nukleozida sličnih DNK.
4
2. Određene nukleobazne modifikacije
[0297] U određenim otelotvorenjima, nukleozidi iz predmetnog otkrića sadrže jednu ili više nemodifikovanih nukleobaza. U određenim otelotvorenjima, nukleozidi iz predmetnog otkrića sadrže jednu ili više modifikovanih nukleobaza.
[0298] U određenim otelotvorenjima, modifikovane nukleobaze su izabrane od: univerzalnih baza, hidrofobnih baza, slobodnih baza, baza proširene veličine i fluorovanih baza, kako je ovde definisano. 5-supstituisani pirimidini, 6-azapirimidini i N-2, N-6 i 0-6 supstituisani purini, uključujući 2-aminopropiladenin, 5-propiniluracil; 5-propinilcitozin; 5-hidroksimetil citozin, ksantin, hipoksantin, 2-aminoadenin, 6-metil i drugi alkilni derivati adenina i guanina, 2-propil i drugi alkilni derivati adenina i guanina, 2-tiouracil, 2-tiotimin i 2-tiocitozin, 5-halouracil i citozin, 5-propinil uracil i citozin i drugi alkinil derivati pirimidinskih baza, 6-azo uracil, citozin i timin, 5-uracil (pseudouracil), 4-tiouracil, 8-halo, 8-amino, 8-tiol, 8-tioalkil, 8-hidroksil i drugi 8-supstituisani adenini i guanini, 5-halo, naročito 5-brom, 5-trifluormetil i drugi 5-supstituisani uracili i citozini, 7-metilguanin i 7-metiladenin, 2-F-adenin, 2-amino-adenin, 8-azaguanin i 8-azaadenin, 7-deazaguanin i 7-deazaadenin, 3-deazaguanin i 3-deazaadenin, univerzalne baze, hidrofobne baze, slobodne baze, baze proširene veličine i fluorovane baze, kako je ovde definisano. Dalje modifikovane nukleobaze uključuju triciklične pirimidine kao što je genoksazin citidin([5,4-b][1,4]benzoksazin-2(3H)-on), fenotiazin citidin (1H-pirimido[5,4-b][1,4]benzotiazin-2(3H)-on), G-stege kao što je supstituisani fenoksazin citidin (npr. 9-(2-aminoetoksi)-H-pirimido[5,4-b][1,4]benzoksazin-2(3H)-on), karbazol citidin (2H-pirimido[4,5-b]indol-2-on), piridoindol citidin (H-pirido[3',2':4,5]pirolo[2,3-d]pirimidin-2-on). Modifikovane nukleobaze mogu takođe da uključuju one u kojima je purinska ili pirimidinska baza zamenjena drugim heterociklima, na primer 7-deaza-adenin, 7-deazaguanozin, 2-aminopiridin i 2-piridon. Dalje nukleobaze uključuju one koje su objavljene u U.S. patentnu br. 3,687,808, one objavljene u The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, Kroschwitz, J.I., Ed., John Wiley & Sons, 1990, 858-859; one objavljene u Englisch i sar. Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613; i one objavljene u Sanghvi, Y.S., poglavlje 15, Antisense Research and Applications, Crooke, S.T. i Lebleu, B., Eds., CRC Press, 1993,273-288.
[0299] Reprezentativni patenti Sjedinjenih Američkih Država koji objašnjavaju pripremu nekih gorenavednih modifikovanih nukleobaza, kao i drugih modifikovanih nukleobaza, uključuju bez ograničenja, U.S. 3,687,808; 4,845,205; 5,130,302; 5,134,066; 5,175,273; 5,367,066; 5,432,272; 5,457,187; 5,459,255; 5,484,908; 5,502,177; 5,525,711; 5,552,540; 5,587,469; 5,594,121; 5,596,091; 5,614,617; 5,645,985; 5,681,941; 5,750,692; 5,763,588; 5,830,653 i 6,005,096.
3. Određene internukleozidne veze
[0300] U određenim otelotvorenjima, predmetno otkriće obezbeđuje oligonukleotide koji sadrže povezane nukleozide. U takvim otelotvorenjima, nukleozidi mogu biti međusobno povezani koristeći bilo koju internukleozidnu vezu. Dve glavne klase internukleozidnih vezujućih grupa se definišu prisustvom ili odsustvom atoma fosfora. Reprezentativne internukleozidne veze koje sadrže fosfor uključuju, ali nisu ograničene na, fosfodiestre (PO), fosfotriestre, metilfosfonate, fosforoamidate i fosforotioate (PS). Reprezentativne internukleozidne vezujuće grupe koje ne sadrže fosfor uključuju, ali nisu ograničene na, metilenmetilimino (-CH2-N(CH3)-O-CH2-), tiodiestar (-O-C(O)-S-), tionokarbamat (-O-C(O)(NH)-S-); siloksan (-O-Si(H)2-O-); i N,N'-dimetilhidrazin (-CH2-N(CH3)-N(CH3)-). Modifikovane veze, u poređenju sa prirodnim fosfodiestarskim vezama, mogu da se koriste da se izmeni, obično poveća, nukleazna otpornost oligonukleotida. U određenim otelotvorenjima, internukleozidne veze koje imaju hiralni atom mogu da se pripreme kao racemska smeša ili kao odvojeni enantiomeri. Reprezentativne hiralne veze uključuju, ali nisu ograničene na, alkilfosfonate i fosforotioate. Postupci pripreme internukleozidnih veza koje sadrže i ne sadrže fosfor su dobro poznati stručnjacima.
[0301] Ovde opisani oligonukleotid sadrži jedan ili više asimetričnih centara i tako daje enantiomere, dijastereomere i druge stereoizomerske konfiguracije koje se mogu definisati, u pogledu apsolutne stereohemije, kao (R) ili (S), a ili b kao za anomere šećera, ili kao (D) ili (L) kao za aminokiseline itd. U ovde data antisens jedinjenja uključeni su svi mogući izomeri, kao i njihovi racemski i optički čisti oblici.
[0302] Neutralne internukleozidne veze uključuju, bez ograničenja, fosfotriestre, metilfosfonate, MMI (3'-CH2-N(CH3)-O-5'), amid-3 (3'-CH2-C(=O)-N(H)-5'), amid-4 (3'CH2-N(H)-C(=O)-5'), formacetal (3'-O-CH2-O-5') i tioformacetal (3'-S-CH2-O-5'). Dalje neutralne internukleozidne veze uključuju nejonske veze koje sadrže siloksan (dialkilsiloksan), karboksilat estar, karboksamid, sulfid, sulfonat estar i amide (vidite, na primer: Carbohydrate Modifications in Antisense Research; Y.S. Sanghvi i P.D. Cook, Eds., ACS Symposium Series 580; poglavlja 3 i 4, 40-65). Dalje neutralne internukleozidne veze uključuju nejonske veze koje sadrže pomešane N, O, S i CH2delove komponenti.
4. Određeni motivi
[0303] U određenim otelotvorenjima, antisens oligonukleotidi sadrže jedan ili više modifikovanih nukleozida (npr. nukleozid koji sadrži modifikovani šećer i/ili modifikovanu nukleobazu) i/ili jednu ili više modifikovanih internukleozidnih veza. Obrazac takvih modifikacija na oligonukleotidu ovde se naziva motiv. U određenim otelotvorenjima, motivi šećera, nukleobaza i veza su nezavisni jedan od drugog.
a. Određeni motivi šećera
[0304] U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi sadrže jedan ili više tipova modifikovanih ostataka šećera i/ili ostataka šećera koji se javljaju u prirodi raspoređenih duž oligonukleotida ili njegovog regiona u definisanom obrascu ili motivu modifikacije šećera. Takvi motivi mogu da uključuju bilo koju od modifikacija šećera koje su ovde razmotrene i/ili druge poznate modifikacije šećera.
[0305] U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi sadrže ili se sastoje od regiona koji imaju gapmerni motiv šećera koji sadrži dva eksterna regiona ili „krila“ i centralni ili interni region ili „razmak“. Tri regiona gapmernog motiva šećera (5' krilo, razmak i 3'-krilo) grade uzastopnu sekvencu nukleozida, pri čemu se barem neki od ostataka šećera nukleozida oba krila razlikuju od barem nekih ostataka šećera nukleozida razmaka. Specifično, barem ostaci šećera nukleozida svakog krila koji su najbliži razmaku (3'-krajnji nukleozid 5'-krila i 5'-krajnji nukleozid 3'-krila) razlikuju se od ostatka šećera susednih nukleozida razmaka, čime se definiše granica između krila i razmaka. U određenim otelotvorenjima, ostaci šećera u razmaku su međusobno isti. U određenim otelotvorenjima, razmak uključuje jedan ili više nukleozida koji imaju ostatak šećera koji se razlikuje od ostatka šećera jednog ili više drugih nukleozida razmaka. U određenim otelotvorenjima, motivi šećera dva krila su međusobno isti (simetrični gapmer šećera). U određenim otelotvorenjima, motivi šećera 5'-krila se razlikuju od motiva šećera 3'-krila (asimetrični gapmer šećera).
i. Određena 5'-krila
[0306] U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 1 do 8 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 1 do 7 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'-krilo gapmera se sastoji od 1 do 6 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 1 do 5 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 2 do 5 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 3 do 5 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 4 ili 5 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 1 do 4 povezana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'-krilo gapmera se sastoji od 1 do 3 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 1 ili 2 povezana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 2 do 4 povezana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 2 ili 3 povezana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 3 ili 4 povezana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 1 nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 2 povezana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 3 povezana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 4 povezana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 5 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera se sastoji od 6 povezanih nukleozida.
[0307] U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan biciklični nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje dva biciklična nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje tri biciklična nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje četiri biciklična nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ograničeni etil nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan LNA nukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 5'- krila gapmera je biciklični nukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 5'- krila gapmera je ograničeni etil nukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 5'- krila gapmera je LNA nukleozid.
[0308] U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan nebiciklični modifikovani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan 2'-MOE nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan 2'-OMe nukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 5'- krila gapmera je nebiciklični modifikovani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 5'- krila gapmera je 2'-supstituisani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 5'- krila gapmera je 2'-MOE nukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 5'- krila gapmera je 2'-OMe nukleozid.
[0309] U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 5'- krila gapmera je 2'-dezoksinukleozid. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ribonukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 5'- krila gapmera je ribonukleozid. U određenim otelotvorenjima, jedan, više od jednog ili svaki od nukleozida 5'-krila je nukleozid sličan RNK.
[0310] U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan biciklični nukleozid i najmanje jedan nebiciklični modifikovani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan biciklični nukleozid i najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan biciklični nukleozid i najmanje jedan 2'-MOE nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan biciklični nukleozid i najmanje jedan 2'-OMe nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan biciklični nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
[0311] U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ograničeni etil nukleozid i najmanje jedan nebiciklični modifikovani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ograničeni etil nukleozid i najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ograničeni etil nukleozid i najmanje jedan 2'-MOE nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ograničeni etil nukleozid i najmanje jedan 2'-OMe nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 5'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ograničeni etil nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
ii. Određena 3'-krila
[0312] U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 1 do 8 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 1 do 7 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'-krilo gapmera se sastoji od 1 do 6 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 1 do 5 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 2 do 5 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 3 do 5 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 4 ili 5 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 1 do 4 povezana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'-krilo gapmera se sastoji od 1 do 3 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 1 ili 2 povezana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 2 do 4 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 2 ili 3 povezana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 3 ili 4 povezana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 1 nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 2 povezana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 3 povezana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 4 povezana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 5 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera se sastoji od 6 povezanih nukleozida.
[0313] U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan biciklični nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ograničeni etil nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan LNA nukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 3'- krila gapmera je biciklični nukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 3'- krila gapmera je ograničeni etil nukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 3'- krila gapmera je LNA nukleozid.
[0314] U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan nebiciklični modifikovani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje dva nebiciklična modifikovana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje tri nebiciklična modifikovana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'-krilo gapmera sadrži najmanje četiri nebiciklična modifikovana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan 2'-MOE nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan 2'-OMe nukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 3'- krila gapmera je nebiciklični modifikovani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 3'- krila gapmera je 2'-supstituisani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 3'- krila gapmera je 2'-MOE nukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 3'- krila gapmera je 2'-OMe nukleozid.
[0315] U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 3'- krila gapmera je 2'-dezoksinukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ribonukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid 3'- krila gapmera je ribonukleozid. U određenim otelotvorenjima, jedan, više od jednog ili svaki od nukleozida 5'-krila je nukleozid sličan RNK.
[0316] U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan biciklični nukleozid i najmanje jedan nebiciklični modifikovani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan biciklični nukleozid i najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan biciklični nukleozid i najmanje jedan 2'-MOE nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan biciklični nukleozid i najmanje jedan 2'-OMe nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan biciklični nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
[0317] U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ograničeni etil nukleozid i najmanje jedan nebiciklični modifikovani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ograničeni etil nukleozid i najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži
1
najmanje jedan ograničeni etil nukleozid i najmanje jedan 2'-MOE nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ograničeni etil nukleozid i najmanje jedan 2'-OMe nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ograničeni etil nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
[0318] U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan LNA nukleozid i najmanje jedan nebiciklični modifikovani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan LNA nukleozid i najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan LNA nukleozid i najmanje jedan 2'-MOE nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan LNA nukleozid i najmanje jedan 2'-OMe nukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan LNA nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
[0319] U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan biciklični nukleozid, najmanje jedan nebiciklični modifikovani nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ograničeni etil nukleozid, najmanje jedan nebiciklični modifikovani nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan LNA nukleozid, najmanje jedan nebiciklični modifikovani nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
[0320] U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan biciklični nukleozid, najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ograničeni etil nukleozid, najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan LNA nukleozid, najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
[0321] U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan biciklični nukleozid, najmanje jedan 2'-MOE nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ograničeni etil nukleozid, najmanje jedan 2'-MOE nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim
2
otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan LNA nukleozid, najmanje jedan 2'-MOE nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
[0322] U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan biciklični nukleozid, najmanje jedan 2'-OMe nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan ograničeni etil nukleozid, najmanje jedan 2'-OMe nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim otelotvorenjima, 3'- krilo gapmera sadrži najmanje jedan LNA nukleozid, najmanje jedan 2'-OMe nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
iii. Određeni centralni regioni (razmaci)
[0323] U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 6 do 20 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 6 do 15 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 6 do 12 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 6 do 10 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 6 do 9 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 6 do 8 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 6 ili 7 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 7 do 10 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 7 do 9 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 7 ili 8 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 8 do 10 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 8 ili 9 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 6 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 7 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 8 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 9 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 10 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 11 povezanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak gapmera se sastoji od 12 povezanih nukleozida.
[0324] U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid razmaka gapmera je 2'-dezoksinukleozid. U određenim otelotvorenjima, razmak sadrži jedan ili više modifikovanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, svaki nukleozid razmaka gapmera je 2'-dezoksinukleozid ili je modifikovani nukleozid koji je „sličan DNK“. U takvim otelotvorenjima, „sličan DNK“ znači da nukleozid ima slične karakteristike kao DNK, tako da je dupleks koji sadrži gapmer i molekul RNK sposoban da aktivira RNazu H. Na primer, u određenim uslovima, pokazano je da 2'-(ara)-F podržava aktivaciju RNaze H, pa je tako sličan DNK. U određenim otelotvorenjima, jedan ili više nukleozida razmaka gapmera nije 2'-dezoksinukleozid i nije sličan DNK. U određenim takvim otelotvorenjima, gapmer svejedno podržava aktivaciju RNaze H (npr. zahvaljujući broju ili rasporedu ne-DNK nukleozida).
[0325] U određenim otelotvorenjima, razmaci sadrže nemodifikovani 2'-dezoksinukleozd prekinut sa jednim ili više modifikovanih nukleozida, što daje tri podregiona (dva niza od jednog ili više 2'-dezoksinukleozida i jedan niz od jednog ili više ometajućih modifikovanih nukleozida). U određenim otelotvorenjima, nijedan niz nemodifikovanih 2'-dezoksinukleozida nije duži od 5, 6 ili 7 nukleozida. U određenim otelotvorenjima, takvi kratki nizovi se postižu koristeći kratke regione razmaka. U određenim otelotvorenjima, kratki nizovi se dobijaju prekidanjem dužeg regiona razmaka.
[0326] U određenim otelotvorenjima, razmak sadrži jedan ili više modifikovanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak sadrži jedan ili više modifikovanih nukleozida izabranih od cEt, FHNA, LNA i 2-tio-timidina. U određenim otelotvorenjima, razmak sadrži jedan modifikovani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, razmak sadrži 5'-supstituisani ostatak šećera izabran od 5'-Me i 5'-(R)-Me. U određenim otelotvorenjima, razmak sadrži dva modifikovana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak sadrži tri modifikovana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak sadrži četiri modifikovana nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak sadrži dva ili više modifikovanih nukleozida i svaki modifikovani nukleozid je isti. U određenim otelotvorenjima, razmak sadrži dva ili više modifikovanih nukleozida i svaki modifikovani nukleozid je različit.
[0327] U određenim otelotvorenjima, razmak sadrži jednu ili više modifikovanih veza. U određenim otelotvorenjima, razmak sadrži jednu ili više metil fosfonatnih veza. U određenim otelotvorenjima, razmak sadrži dve ili više modifikovanih veza. U određenim otelotvorenjima,
4
razmak sadrži jednu ili više modifikovanih veza i jedan ili više modifikovanih nukleozida. U određenim otelotvorenjima, razmak sadrži jednu modifikovanu vezu i jedan modifikovani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, razmak sadrži dve modifikovane veze i dva ili više modifikovanih nukleozida.
b. Određeni motivi internukleozidnih veza
[0328] U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi sadrže modifikovane internukleozidne veze raspoređene duž oligonukleotida ili njegovog regiona u definisanom obrascu ili modifikovanom motivu internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi sadrže region koji ima naizmenični motiv internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi iz predmetnog otkrića sadrže region uniformno modifikovanih internukleozidnih veza. U određenim takvim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži region koji je uniformno povezan putem fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid je uniformno povezan putem fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, svaka internukleozidna veza oligonukleotida je odabrana od fosfodiestra i fosforotioata. U određenim otelotvorenjima, svaka internukleozidna veza oligonukleotida je odabrana od fosfodiestra i fosforotioata i najmanje jedna internukleozidna veza je fosforotioat.
[0329] U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži najmanje 6 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži najmanje 7 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži najmanje 8 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži najmanje 9 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži najmanje 10 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži najmanje 11 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži najmanje 12 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži najmanje 13 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži najmanje 14 fosforotioatnih internukleozidnih veza.
[0330] U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži najmanje jedan blok od najmanje 6 uzastopnih fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži najmanje jedan blok od najmanje 7 uzastopnih fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži najmanje jedan blok od najmanje 8 uzastopnih fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži najmanje jedan blok od najmanje 9 uzastopnih fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži najmanje jedan blok od najmanje 10 uzastopnih fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži najmanje jedan blok od najmanje 12 uzastopnih fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim takvim otelotvorenjima, najmanje jedan takav blok se nalazi na 3' kraju oligonukleotida. U određenim takvim otelotvorenjima, najmanje jedan takav blok se nalazi u rasponu od 3 nukleozida od 3' kraja oligonukleotida. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži manje od 15 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži manje od 14 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži manje od 13 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži manje od 12 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži manje od 11 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži manje od 10 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži manje od 9 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži manje od 8 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži manje od 7 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži manje od 6 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži manje od 5 fosforotioatnih internukleozidnih veza.
c. Određeni motivi modifikacija nukleobaza
[0331] U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi sadrže hemijske modifikacije nukleobaza raspoređene duž oligonukleotida ili njegovog regiona u definisanom obrascu ili obrascu modifikacije nukleobaza. U određenim takvim otelotvorenjima, modifikacije nukleobaza su raspoređene u razmaknutom motivu. U određenim otelotvorenjima, modifikacije nukleobaza su raspoređene u naizmeničnom motivu. U određenim otelotvorenjima, svaka nukleobaza je modifikovana. U određenim otelotvorenjima, nijedna od nukleobaza nije hemijski modifikovana.
[0332] U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid sadrži blok modifikovanih nukleobaza. U određenim takvim otelotvorenjima, blok je na 3'-kraju oligonukleotida. U određenim takvim otelotvorenjima, blok je u rasponu od 3 nukleotida od 3'-kraja oligonukleotida. U određenim takvim otelotvorenjima, blok je na 5'-kraju oligonukleotida. U određenim takvim otelotvorenjima, blok je u rasponu od 3 nukleotida od 5'-kraja oligonukleotida.
[0333] U određenim otelotvorenjima, modifikacije nukleobaze su funkcija prirodne baze na određenoj poziciji oligonukleotida. Na primer, u određenim otelotvorenjima, svaki purin ili svaki pirimidin u oligonukleotidu je modifikovan. U određenim otelotvorenjima, svaki adenin je modifikovan. U određenim otelotvorenjima, svaki guanin je modifikovan. U određenim otelotvorenjima, svaki timin je modifikovan. U određenim otelotvorenjima, svaki citozin je modifikovan. U određenim otelotvorenjima, svaki uracil je modifikovan.
[0334] U određenim otelotvorenjima, neki, svi ili nijedan od citozinskih ostataka u oligonukleotidu su ostaci 5-metil citozina. Ovde, 5-metil citozin nije „modifikovana nukleobaza“. Shodno tome, ako nije drugačije naznačeno, nemodifikovane nukleobaze uključuju i citozinske ostatke koji imaju 5-metil i one koji nemaju 5 metil. U određenim otelotvorenjima, naznačeno je stanje metilovanja svih ili nekih citozinskih nukleobaza.
[0335] U određenim otelotvorenjima, hemijske modifikacije nukleobaza sadrže vezivanje određenih konjugovanih grupa za nukleobaze. U određenim otelotvorenjima, svaki purin ili svaki pirimidin u oligonukleotidu može biti opciono modifikovan da sadrži konjugovanu grupu.
d. Određene ukupne dužine
[0336] U određenim otelotvorenjima, predmetno otkriće pruža oligonukleotide različitih raspona dužine. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi se sastoje od X do Y povezanih nukleozida, gde X predstavlja najmanji broj nukleozida u opsegu, a Y predstavlja najveći broj nukleozida u opsegu. U određenim takvim otelotvorenjima, X i Y su nezavisno izabrani od 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, i 50; pod uslovom da je X≤Y. Na primer, u određenim otelotvorenjima, oligonukleotid može da se sastoji od 8 do 9, 8 do 10, 8 do 11, 8 do 12, 8 do 13, 8 do 14, 8 do 15, 8 do 16, 8 do 17, 8 do 18, 8 do 19, 8 do 20, 8 do 21, 8 do 22, 8 do 23, 8 do 24, 8 do 25, 8 do 26, 8 do 27, 8 do 28, 8 do 29, 8 do 30, 9 do 10, 9 do 11, 9 do 12, 9 do 13, 9 do 14, 9 do 15, 9 do 16, 9 do 17, 9 do 18, 9 do 19, 9 do 20, 9 do 21, 9 do 22, 9 do 23, 9 do 24, 9 do 25, 9 do 26, 9 do 27, 9 do 28, 9 do 29, 9 do 30, 10 do 11, 10 do 12, 10 do 13, 10 do 14, 10 do 15, 10 do 16, 10 do 17, 10 do 18, 10 do 19, 10 do 20, 10 do 21, 10 do 22, 10 do 23, 10 do 24, 10 do 25, 10 do 26, 10 do 27, 10 do 28, 10 do 29, 10 do 30, 11 do 12, 11 do 13, 11 do 14, 11 do 15, 11 do 16, 11 do 17, 11 do 18, 11 do 19, 11 do 20, 11 do 21, 11 do 22, 11 do 23, 11 do 24, 11 do 25, 11 do 26, 11 do 27, 11 do 28, 11 do 29, 11 do 30, 12 do 13, 12 do 14, 12 do 15, 12 do 16, 12 do 17, 12 do 18, 12 do 19, 12 do 20, 12 do 21, 12 do 22, 12 do 23, 12 do 24, 12 do 25, 12 do 26, 12 do 27, 12 do 28, 12 do 29, 12 do 30, 13 do 14, 13 do 15, 13 do 16, 13 do 17, 13 do 18, 13 do 19, 13 do 20, 13 do 21, 13 do 22, 13 do 23, 13 do 24, 13 do 25, 13 do 26, 13 do 27, 13 do 28, 13 do 29, 13 do 30, 14 do 15, 14 do 16, 14 do 17, 14 do 18, 14 do 19, 14 do 20, 14 do 21, 14 do 22, 14 do 23, 14 do 24, 14 do 25, 14 do 26, 14 do 27, 14 do 28, 14 do 29, 14 do 30, 15 do 16, 15 do 17, 15 do 18, 15 do 19, 15 do 20, 15 do 21, 15 do 22, 15 do 23, 15 do 24, 15 do 25, 15 do 26, 15 do 27, 15 do 28, 15 do 29, 15 do 30, 16 do 17, 16 do 18, 16 do 19, 16 do 20, 16 do 21, 16 do 22, 16 do 23, 16 do 24, 16 do 25, 16 do 26, 16 do 27, 16 do 28, 16 do 29, 16 do 30, 17 do 18, 17 do 19, 17 do 20, 17 do 21, 17 do 22, 17 do 23, 17 do 24, 17 do 25, 17 do 26, 17 do 27, 17 do 28, 17 do 29, 17 do 30, 18 do 19, 18 do 20, 18 do 21, 18 do 22, 18 do 23, 18 do 24, 18 do 25, 18 do 26, 18 do 27, 18 do 28, 18 do 29, 18 do 30, 19 do 20, 19 do 21, 19 do 22, 19 do 23, 19 do 24, 19 do 25, 19 do 26, 19 do 29, 19 do 28, 19 do 29, 19 do 30, 20 do 21, 20 do 22, 20 do 23, 20 do 24, 20 do 25, 20 do 26, 20 do 27, 20 do 28, 20 do 29, 20 do 30, 21 do 22, 21 do 23, 21 do 24, 21 do 25, 21 do 26, 21 do 27, 21 do 28, 21 do 29, 21 do 30, 22 do 23, 22 do 24, 22 do 25, 22 do 26, 22 do 27, 22 do 28, 22 do 29, 22 do 30, 23 do 24, 23 do 25, 23 do 26, 23 do 27, 23 do 28, 23 do 29, 23 do 30, 24 do 25, 24 do 26, 24 do 27, 24 do 28, 24 do 29, 24 do 30, 25 do 26, 25 do 27, 25 do 28, 25 do 29, 25 do 30, 26 do 27, 26 do 28, 26 do 29, 26 do 30, 27 do 28, 27 do 29, 27 do 30, 28 do 29, 28 do 30 ili 29 do 30 povezanih nukleozida. U otelotvorenjima u kojima je broj nukleozida oligonukleotida iz jedinjenja ograničen, bilo na raspon ili određeni broj, jedinjenja mogu, bez obzira na to, dalje sadržati dodatne druge supstituente. Na primer, oligonukleotid koji sadrži 8-30 nukleozida isključuje oligonukleotide koji imaju 31 nukleozid, ali, ako nije drugačije naznačeno, takvi oligonukleotidi mogu dalje da sadrže, na primer, jednu ili više konjugovanih grupa, terminalnih grupa ili drugih supstituenata.
[0337] Nadalje, kada se oligonukleotid opisuje pomoću raspona ukupne dužine i regiona koji imaju naznačene dužine, i kada je zbir naznačenih dužina regiona manji od gornje granice raspona ukupne dužine, oligonukleotid može imati dodatne nukleozide, osim onih u naznačenim regionima, pod uslovom da ukupan broj nukleozida ne premašuje gornju granicu raspona ukupne dužine.
5. Određeni hemijski motivi antisens oligonukleotida
[0338] U određenim otelotvorenjima, hemijske strukturne osobine antisens oligonukleotida su okarakterisane njihovim motivom šećera, motivom internukleozidne veze, motivom modifikacije nukleobaze i ukupnom dužinom. U određenim otelotvorenjima, ti parametri su međusobno nezavisni. Tako, svaka internukleozidna veza oligonukleotida koja ima gapmer motiv šećera može biti modifikovana ili nemodifikovana, i može ili ne mora da prati gapmer obrazac modifikacije za modifikacije šećera. Tako, internukleozidne veze u regionima krila gapmera šećera mogu biti međusobno iste ili različite, i mogu biti iste kao internukleozidne veze regiona razmaka ili različite od njih. Slično tome, takvi oligonukleotidi sa šećernim gapmerom mogu da sadrže jednu ili više modifikovanih nukleobaza nezavisno od gapmernog obrasca modifikacije šećera. Stručnjak će razumeti da se takvi motivi mogu kombinovati radi dobijanja raznovrsnih oligonukleotida.
[0339] U određenim otelotvorenjima, biranje modifikacije internukleozidne veze i nukleozida nije nezavisno jedno od drugog.
i. Određene sekvence i ciljevi
[0340] U određenim otelotvorenjima, predmetno otkriće pruža antisens oligonukleotide koji imaju komplementarnost sekvence sa ciljnom nukleinskom kiselinom. Takva antisens jedinjenja su sposobna da se hibridizuju u ciljnu nukleinsku kiselinu, što dovodi do najmanje jedne antisens aktivnosti. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenja se specifično hibridizuju u jednu ili više ciljnih nukleinskih kiselina. U određenim otelotvorenjima, specifično hibridizujuće antisens jedinjenje ima nukleobaznu sekvencu koja sadrži region koji ima dovoljnu komplementarnost sa ciljnom nukleinskom kiselinom da omogući hibridizaciju i dovede do antisens aktivnosti i nedovoljnu komplementarnost sa bilo kojom neciljnom nukleinskom kiselinom kako bi se izbegla ili smanjila nespecifična hibridizacija sa sekvencama neciljnih nukleinskih kiselina u uslovima u kojima je poželjna specifična hibridizacija (npr. u fiziološkim uslovima za in vivo ili terapeutske pripreme, i u uslovima u kojima se obavljaju testovi u slučaju in vitro testova). U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi su selektivni između cilja i onoga što nije cilj, iako i cilj i ono što nije cilj sadrže ciljnu sekvencu. U takvim otelotvorenjima, selektivnost može biti rezultat relativne pristupačnosti ciljnog regiona jednog molekula nukleinske kiseline u poređenju sa drugim.
[0341] U određenim otelotvorenjima, predmetno otkriće pruža antisens jedinjenja koja sadrže oligonukleotide koji su u potpunosti komplementarni sa ciljnom nukleinskom kiselinom celom dužinom oligonukleotida. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi su 99% komplementarni sa ciljnom nukleinskom kiselinom. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi su 95% komplementarni sa ciljnom nukleinskom kiselinom. U određenim otelotvorenjima, takvi oligonukleotidi su 90% komplementarni sa ciljnom nukleinskom kiselinom.
[0342] U određenim otelotvorenjima, takvi oligonukleotidi su 85% komplementarni sa ciljnom nukleinskom kiselinom. U određenim otelotvorenjima, takvi oligonukleotidi su 80% komplementarni sa ciljnom nukleinskom kiselinom. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje sadrži region koji je u potpunosti komplementaran sa ciljnom nukleinskom kiselinom i najmanje 80% je komplementaran sa ciljnom nukleinskom kiselinom celom dužinom oligonukleotida. U određenim takvim otelotvorenjima, region potpune komplementarnosti ima dužinu od 6 do 14 nukleobaza.
[0343] U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi sadrže hibridizujući region i terminalni region. U određenim takvim otelotvorenjima, hibridizujući region se sastoji od 12-30 povezanih nukleozida, i u potpunosti je komplementaran sa ciljnom nukleinskom kiselinom. U određenim otelotvorenjima, hibridizujući region uključuje jedno pogrešno sparivanje u odnosu na ciljnu nukleinsku kiselinu. U određenim otelotvorenjima, hibridizujući region uključuje dva pogrešna sparivanja u odnosu na ciljnu nukleinsku kiselinu. U određenim otelotvorenjima, hibridizujući region uključuje tri pogrešna sparivanja u odnosu na ciljnu nukleinsku kiselinu. U određenim otelotvorenjima, terminalni region se sastoji od 1-4 terminalna nukleozida. U određenim otelotvorenjima, terminalni nukleozidi su na 3' kraju. U određenim otelotvorenjima, jedan ili više terminalnih nukleozida nije komplementarno sa ciljnom nukleinskom kiselinom.
[0344] Antisens mehanizmi uključuju svaki mehanizam koji obuhvata hibridizaciju oligonukleotida sa ciljnom nukleinskom kiselinom, pri čemu hibridizacija dovodi do biološkog dejstva. U određenim otelotvorenjima, takva hibridizacija dovodi do degradacije ili zauzimanja ciljne nukleinske kiseline uz istovremenu inhibiciju ili stimulaciju ćelijskog mehanizma koja uključuje, na primer, translaciju, transkripciju ili splajsovanje ciljne nukleinske kiseline.
[0345] Jedna vrsta antisens mehanizma koji uključuje degradaciju ciljne RNK je antisens posredovan RNazom H. RNaza H je ćelijska endonukleaza koja otcepljuje RNK lanac dupleksa RNK:DNK. U struci je poznato da jednolančana antisens jedinjenja koja su „slična DNK“ izazivaju aktivnost RNaze H u ćelijama sisara. Aktivacija RNaze H, stoga, dovodi do cepanja RNK cilja, što u velikoj meri povećava efikasnost inhibicije genske ekspresije posredovane putem oligonukleotida sličnog DNK.
[0346] U određenim otelotvorenjima, konjugovana grupa sadrži ostatak koji može da se otcepi. U određenim otelotvorenjima, konjugovana grupa sadrži jednu ili više veza koje se mogu cepati. U određenim otelotvorenjima, konjugovana grupa sadrži linker. U određenim otelotvorenjima, linker sadrži protein vezujući ostatak. U određenim otelotvorenjima, konjugovana grupa sadrži ostatak usmeren na ćeliju (naziva se i grupa koja cilja ćeliju). U određenim otelotvorenjima, ostatak usmeren na ćeliju sadrži razgranatu grupu. U određenim otelotvorenjima, ostatak usmeren na ćeliju sadrži jednu ili više veza. U određenim otelotvorenjima, ostatak usmeren na ćeliju sadrži ugljeni hidrat ili klaster ugljenih hidrata.
ii. Određeni ostaci koji mogu da se otcepe
[0347] U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi je otcepljiva veza. U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi sadrži otcepljivu vezu. U određenim otelotvorenjima, konjugovana grupa sadrži ostatak koji može da se otcepi. U
1
određenim takvim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi se vezuje za antisens oligonukleotid. U određenim takvim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi se vezuje neposredno za ostatak usmeren na ćeliju. U određenim takvim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi se vezuje za konjugovani linker. U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi sadrži fosfat ili fosfodiestar. U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi je otcepljivi nukleozid ili analog nukleozida. U određenim otelotvorenjima, nukleozid ili analog nukleozida sadrži opciono zaštićenu heterocikličnu bazu izabranu od purina, supstituisanog purina, pirimidina ili supstituisanog pirimidina. U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi je nukleozid koji sadrži opciono zaštićenu heterocikličnu bazu izabranu od uracila, timina, citozina, 4-N-benzoilcitozina, 5-metilcitozina, 4-N-benzoil-5-metilcitozina, adenina, 6-N-benzoiladenina, guanina i 2-N-izobutirilguanina. U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi je 2'-dezoksi nukleozid koji je vezan za poziciju 3' antisens oligonukleotida putem fosfodiestarske veze i vezan je za linker putem fosfodiestarske ili fosforotioatne veze. U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi je 2'-dezoksi adenozin koji je vezan za poziciju 3' antisens oligonukleotida putem fosfodiestarske veze i vezan je za linker putem fosfodiestarske ili fosforotioatne veze. U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi je 2'-dezoksi adenozin koji je vezan za poziciju 3' antisens oligonukleotida putem fosfodiestarske veze i vezan je za linker putem fosfodiestarske veze.
[0348] U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi je vezan za 3' poziciju antisens oligonukleotida. U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi je vezan za 5' poziciju antisens oligonukleotida. U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi je vezan za 2' poziciju antisens oligonukleotida. U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi je vezan za antisens oligonukleotid putem fosfodiestarske veze. U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi je vezan za linker putem fosfodiestarske ili fosforotioatne veze. U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi je vezan za linker putem fosfodiestarske veze. U određenim otelotvorenjima, konjugovana grupa ne uključuje ostatak koji može da se otcepi.
[0349] U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi je otcepljen nakon što je kompleks primenjen na životinji tek pošto je internalizovan od strane ciljne ćelije. Unutar ćelije, ostatak koji može da se otcepi se otcepljuje tako otpuštajući aktivni antisens oligonukleotid. Uz izbegavanje da se ograničimo teorijom, veruje se da se ostatak koji može
2
da se otcepi otcepljuje putem jedne ili više nukleaza u ćeliji. U određenim otelotvorenjima, jedna ili više nukleaza cepa fosfodiestarsku vezu između ostatka moji može da se otcepi i linkera.
iii. Određeni linkeri
[0350] Konjugovana grupa iz pronalaska sadrži linker. U određenim takvim otelotvorenjima, linker je kovalentno vezan sa ostatkom koji može da se otcepi. U određenim takvim otelotvorenjima, linker je kovalentno vezan sa antisens oligonukleotidom. Linker je kovalentno vezan sa ostatkom usmerenim na ćeliju.
[0351] Linker je linearna grupa koja sadrži alkil, amid i etarske grupe. U određenim otelotvorenjima, linearna grupa je kovalentno vezana za ostatak usmeren na ćeliju i ostatak koji može da se otcepi. U određenim otelotvorenjima, linearna grupa je kovalentno vezana za ostatak usmeren na ćeliju i antisens oligonukleotid.
[0352] Konjugovani linker predmetnog pronalaska ima strukturu:
iv. Određeni ostaci usmereni na ćeliju
[0353] Konjugovana grupa iz predmetnog pronalaska sadrži ostatke usmerene na ćeliju. Određeni takvi ostaci usmereni na ćeliju povećavaju ćelijski unos antisens jedinjenja. Ostaci usmereni na ćeliju sadrže razgranatu grupu, tri veze i tri liganda.
1. Određene razgranate grupe
[0354] Konjugovana grupa iz predmetnog pronalaska sadrži ciljajući ostatak koji sadrži razgranatu grupu i tri vezana liganda. Razgranata grupa se vezuje za konjugovani linker. Razgranata grupa se kovalentno vezuje za linker i svaki od vezanih liganda.
[0355] Razgranata grupa iz predmetnog pronalaska ima strukturu:
2. Određeni veznici
[0356] Konjugovana grupa iz predmetnog pronalaska sadrži tri veznika kovalentno vezana za razgranatu grupu. Veznik je vezan za razgranatu grupu putem etarske grupe. Veznik je vezan za ligand putem etarske grupe.
[0357] Veznik iz predmetnog pronalaska ima strukturu:
3. Određeni ligandi
[0358] Svaki ligand iz predmetnog pronalaska je kovalentno vezan za veznik. U određenim otelotvorenjima, svaki ligand je izabran da ima afinitet prema najmanje jednoj vrsti receptora na ciljnoj ćeliji. U određenim otelotvorenjima, ligandi su izabrani da imaju afinitet prema najmanje jednoj vrsti receptora na površini ćelije jetre sisara. U određenim otelotvorenjima, ligandi su izabrani da imaju afinitet prema hepatičnom receptoru asijaloglikoproteina (ASGP-R). U određenim otelotvorenjima predmetnog otkrića, svaki ligand je ugljeni hidrat. Svaki ligand iz pronalaska je N-acetil galaktozamin (GalNAc). U određenim otelotvorenjima predmetnog otkrića, ciljajući ostatak sadrži 3 liganda. Ciljajući ostatak iz predmetnog pronalaska sadrži 3 liganda N-acetil galaktozamina.
[0359] U određenim otelotvorenjima, „GalNac“ ili „Gal-NAc“ se odnosi na 2-(acetilamino)-2-dezoksi-D-galaktopiranozu, koja se u literaturi obično naziva N-acetil galaktozamin. U određenim otelotvorenjima, „N-acetil galaktozamin“ se odnosi na 2-(acetilamino)-2-dezoksi-D-galaktopiranozu. „GalNac“ ili „Gal-NAc“ iz predmetnog pronalaska odnosi se na 2-
4
(acetilamino)-2-dezoksi-D-galaktopiranozu, koja je u β-obliku: 2-(acetilamino)-2-dezoksi-β-D-galaktopiranoza. Kao dodatak predmetnom pronalasku, ovde je otkriven i α-oblik: 2-(acetilamino)-2-dezoksi-D-galaktopiranoza, koji je radi reference prikazan u nastavku.
2-(acetilamino)-2-dezoksi-D-galaktopiranoza
2-(acetilamino)-2-dezoksi-α-D-galaktopiranoza
i. Određeni konjugati
[0360] U određenim otelotvorenjima, konjugovane grupe sadrže prethodne strukturne osobine koje su u skladu sa priloženim zahtevima.
1
[0374] Reprezentativni patenti Sjedinjenih Američkih Država, publikacije patentnih prijava Sjedinjenih Američkih Država i međunarodne publikacije patentnih prijava koje se bave pripremom nekih od prethodno navedenih konjugata, konjugovanih antisens jedinjenja, veza, linkera, razgranatih grupa, liganda, ostataka koji mogu da se otcepe kao i drugih modifikacija uključuju, bez ograničenja, US 5,994,517, US 6,300,319, US 6,660,720, US 6,906,182, US 7,262,177, US 7,491,805, US 8,106,022, US 7,723,509, US 2006/0148740, US 2011/0123520, WO 2013/033230 i WO 2012/037254. Reprezentativne publikacije se bave pripremom nekih od prethodno navedenih konjugata, konjugovanih antisens jedinjenja, veza, linkera, razgranatih grupa, liganda, ostataka koji mogu da se otcepe kao i drugih modifikacija uključuju, bez ograničenja, BIESSEN i sar. "The Cholesterol Derivative of a Triantennary Galactoside with High Affinity for the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor: a Potent Cholesterol Lowering Agent" J. Med. Chem. (1995) 38:1846-1852, BIESSEN i sar.
1 1
"Synthesis of Cluster Galactosides with High Affinity for the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor" J. Med. Chem. (1995) 38:1538-1546, LEE i sar. "New and more efficient multivalent glyco-ligands for asialoglycoprotein receptor of mammalian hepatocytes" Bioorganic & Medicinal Chemistry (2011) 19:2494-2500, RENSEN i sar. "Determination of the Upper Size Limit for Uptake and Processing of Ligands by the Asialoglycoprotein Receptor on Hepatocytes in Vitro and in Vivo" J. Biol. Chem. (2001) 276(40):37577-37584, RENSEN i sar. "Design and Synthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor" J. Med. Chem. (2004) 47:5798-5808, SLIEDREGT i sar. "Design and Synthesis of Novel Amphiphilic Dendritic Galactosides for Selective Targeting of Liposomes to the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor" J. Med. Chem. (1999) 42:609-618, i Valentijn i sar. "Solidphase synthesis of lysine-based cluster galactosides with high affinity for the Asialoglycoprotein Receptor" Tetrahedron, 1997, 53(2), 759-770.
[0375] U određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja sadrže oligomer na bazi RNaze H (kao što je gapmer) ili oligonukleotid koji moduliše splajsovanje (kao što je potpuno modifikovani oligonukleotid) i bilo koju konjugovanu grupu koja sadrži najmanje jednu, dve ili tri grupe GalNAc. U određenim otelotvorenjima, konjugovano antisens jedinjenje sadrži bilo koju konjugovanu grupu koja se može naći u bilo kojoj od sledećih referenci: Lee, Carbohydr Res, 1978, 67, 509-514; Connolly i sar. J Biol Chem, 1982,257, 939-945; Pavia i sar. Int J Pep Protein Res, 1983, 22, 539-548; Lee i sar. Biochem, 1984, 23, 4255-4261; Lee i sar. Glycoconjugate J, 1987, 4, 317-328; Toyokuni i sar. Tetrahedron Lett, 1990, 31, 2673-2676; Biessen i sar. J Med Chem, 1995, 38, 1538-1546; Valentijn i sar. Tetrahedron, 1997, 53, 759-770; Kim i sar. Tetrahedron Lett, 1997, 38, 3487-3490; Lee i sar. Bioconjug Chem, 1997, 8, 762-765; Kato i sar. Glycobiol, 2001, 11, 821-829; Rensen i sar. J Biol Chem, 2001, 276, 37577-37584; Lee i sar. Methods Enzymol, 2003, 362, 38-43; Westerlind i sar. Glycoconj J, 2004, 21, 227-241; Lee i sar. Bioorg Med Chem Lett, 2006, 16(19), 5132-5135; Maierhofer i sar. Bioorg Med Chem, 2007, 15, 7661-7676; Khorev i sar. Bioorg Med Chem, 2008, 16, 5216-5231; Lee i sar. Bioorg Med Chem, 2011, 19, 2494-2500; Kornilova i sar. Analyt Biochem, 2012, 425, 43-46; Pujol i sar. Angew Chemie Int Ed Engl, 2012, 51, 7445-7448; Biessen i sar. J Med Chem, 1995, 38, 1846-1852; Sliedregt i sar. J Med Chem, 1999, 42, 609-618; Rensen i sar. J Med Chem, 2004, 47, 5798-5808; Rensen i sar. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2006, 26, 169-175; van Rossenberg i sar. Gene Ther, 2004, 11, 457-464; Sato i sar. J Am Chem Soc, 2004, 126, 14013-14022; Lee i sar. J Org Chem,
1 2
2012, 77, 7564-7571; Biessen i sar. FASEB J, 2000, 14, 1784-1792; Rajur i sar. Bioconjug Chem, 1997, 8, 935-940; Duff i sar. Methods Enzymol, 2000, 313, 297-321; Maier i sar. Bioconjug Chem, 2003, 14, 18-29; Jayaprakash i sar. Org Lett, 2010, 12, 5410-5413; Manoharan, Antisense Nucleic Acid Drug Dev, 2002, 12, 103-128; Merwin i sar. Bioconjug Chem, 1994, 5, 612-620; Tomiya i sar. Bioorg Med Chem, 2013, 21, 5275-5281; Međunarodne prijave WO1998/013381; WO2011/038356; WO1997/046098; WO2008/098788; WO2004/101619; WO2012/037254; WO2011/120053; WO2011/100131; WO2011/163121; WO2012/177947; WO2013/033230; WO2013/075035; WO2012/083185; WO2012/083046; WO2009/082607; WO2009/134487; WO2010/144740; WO2010/148013; WO1997/020563; WO2010/088537; WO2002/043771; WO2010/129709; WO2012/068187; WO2009/126933; WO2004/024757; WO2010/054406; WO2012/089352; WO2012/089602; WO2013/166121; WO2013/165816; U.S. patente 4,751,219; 8,552,163; 6,908,903; 7,262,177; 5,994,517; 6,300,319; 8,106,022; 7,491,805; 7,491,805; 7,582,744; 8,137,695; 6,383,812; 6,525,031; 6,660,720; 7,723,509; 8,541,548; 8,344,125; 8,313,772; 8,349,308; 8,450,467; 8,501,930; 8,158,601; 7,262,177; 6,906,182; 6,620,916; 8,435,491; 8,404,862; 7,851,615; Objavljene U.S. publikacije patentnih prijava US2011/0097264; US2011/0097265; US2013/0004427; US2005/0164235; US2006/0148740; US2008/0281044; US2010/0240730; US2003/0119724; US2006/0183886; US2008/0206869; US2011/0269814; US2009/0286973; US2011/0207799; US2012/0136042; US2012/0165393; US2008/0281041; US2009/0203135; US2012/0035115; US2012/0095075; US2012/0101148; US2012/0128760; US2012/0157509; US2012/0230938; US2013/0109817; US2013/0121954; US2013/0178512; US2013/0236968; US2011/0123520; US2003/0077829; US2008/0108801; i US2009/0203132.
C. Određene primene i svojstva
[0376] U određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja ispoljavaju potentnu redukciju Apo(a) RNK in vivo. U određenim otelotvorenjima, nekonjugovana antisens jedinjenja se akumuliraju u bubrezima. U određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja se akumuliraju u jetri. U određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja se dobro podnose. Takva svojstva čine konjugovana antisens jedinjenja posebno korisnim za inhibiciju mnogih ciljnih RNK, uključujući, ali ne ograničavajući se na one koje učestvuju u metaboličkim, kardiovaskularnim i drugim bolestima, poremećajima ili stanjima. Tako, ovde su obezbeđeni postupci za lečenje takvih bolesti, poremećaja ili stanja putem dovođenja u kontakt tkiva jetre sa konjugovanim antisens jedinjenjima usmerenim na RNK
1
povezane sa takvim bolestima, poremećajima ili stanjima. Tako, takođe su otkriveni postupci za ublažavanje bilo koje od različitih metaboličkih, kardiovaskularnih i drugih bolesti, poremećaja ili stanja konjugovanim antisens jedinjenjima iz predmetnog otkrića.
[0377] U određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja su potentnija od nekonjugovanog parnjaka pri određenoj koncentraciji u tkivu. Bez želje da se ograničimo bilo kojom teorijom ili mehanizmom, u određenim otelotvorenjima, konjugat može omogućiti konjugovanom antisens jedinjenju da efikasnije uđe u ćeliju ili da produktivnije uđe u ćeliju. Na primer, u određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja mogu da ispoljavaju veću ciljnu redukciju u poređenju sa svojim nekonjugovanim parnjakom, pri čemu su i konjugovano antisens jedinjenje i njegov nekonjugovani parnjak prisutni u tkivu u istim koncentracijama. Na primer, u određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja mogu da ispoljavaju veću ciljnu redukciju u poređenju sa svojim nekonjugovanim parnjakom, pri čemu su i konjugovano antisens jedinjenje i njegov nekonjugovan parnjak prisutni u jetri u istim koncentracijama.
[0378] Produktivni i neproduktivni unos oligonukleotida je prethodno razmotren (vidite npr. Geary, R. S., E. Wancewicz, i sar. (2009). "Effect of Dose and Plasma Concentration on Liver Uptake and Pharmacologic Activity of a 2'-Methoxyethyl Modified Chimeric Antisense Oligonucleotide Targeting PTEN." Biochem. Pharmacol. 78(3): 284-91; & Koller, E., T. M. Vincent, i sar. (2011). "Mechanisms of single-stranded phosphorothioate modified antisense oligonucleotide accumulation in hepatocytes." Nucleic Acids Res. 39(11): 4795-807). Ovde opisane konjugovane grupe mogu da unaprede produktivan unos.
[0379] U određenim otelotvorenjima, ovde opisane konjugovane grupe mogu dalje da unaprede potentnost putem povećavanja afiniteta konjugovanog antisens jedinjenja prema određenoj vrsti ćelije ili tkiva. U određenim otelotvorenjima, ovde opisane konjugovane grupe mogu dalje da unaprede potentnost putem povećavanja prepoznavanja konjugovanog antisens jedinjenja od strane jednog ili više receptora ćelijske površine. U određenim otelotvorenjima, ovde opisane konjugovane grupe mogu dalje da unaprede potentnost putem olakšavanja endocitoze konjugovanog antisens jedinjenja.
1 4
[0380] U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi može dalje da unapredi potentnost tako što omogućava da konjugat bude otcepljen od antisens oligonukleotida nakon što konjugovano antisens jedinjenje uđe u ćeliju. Shodno tome, u određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja mogu da se primenjuju u dozama manjim od onih koje bi bile neophodne za nekonjugovane antisens oligonukleotide.
[0381] Fosforotioatne veze su prethodno inkorporisane u antisens oligonukleotide. Takve fosforotioatne veze su rezistentne na nukleaze i tako poboljšavaju stabilnost oligonukleotida. Nadalje, fosforotioatne veze takođe vezuju određene proteine, što dovodi do akumulacije antisens oligonukleotida u jetri. Oligonukleotidi sa manje fosforotioatnih veza manje se akumuliraju u jetri, a više u bubrezima (vidite, na primer, Geary, R., "Pharmacokinetic Properties of 2'-O-(2-Methoxyethyl)-Modified Oligonucleotide Analogs in Rats," Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, sveska 296, br. 3, 890-897; & Pharmacological Properties of 2'-O-Methoxyethyl Modified Oligonucleotides in Antisense a Drug Technology, poglavlje 10, Crooke, S.T., ed., 2008) U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi sa manje fosforotioatnih internukleozidnih veza i više fosforotioatnih internukleozidnih veza se akumuliraju manje u jetri, a više u bubrezima. Kada se leče bolesti u jetri, to je nepoželjno iz nekoliko razloga (1) manje leka dolazi do mesta željenog delovanja (jetre); (2) lek odlazi u mokraću; i (3) bubreg je izložen relativno velikoj koncentraciji leka što može dovesti do toksičnosti u bubregu. Tako, za bolesti jetre, fosforotioatne veze pružaju značajne koristi.
[0382] U određenim otelotvorenjima, međutim, primena oligonukleotida uniformno povezanih putem fosforotioatnih internukleozidnih veza indukuje jednu ili više proinflamatornih reakcija. (vidite, na primer: J Lab Clin Med. 1996 Sep; 128(3):329-38. "Amplification of antibody production by phosphorothioate oligodeoxynucleotides". Branda i sar.; i vidite takođe, na primer: Toxicologic Properties in Antisense a Drug Technology, poglavlje 12, strane 342-351, Crooke, S.T., ed., 2008). U određenim otelotvorenjima, primena oligonukleotida, pri čemu većina internukleozidnih veza sadrži fosforotioatne internukleozidne veze, indukuje jednu ili više proinflamatornih reakcija.
[0383] U određenim otelotvorenjima, stepen proinflamatornog dejstva može da zavisi od nekoliko promenljivih (npr. modifikacija skeleta, dejstva van mete, modifikacije nukleobaze i/ili modifikacije nukleozida) vidite, na primer: Toxicologic Properties in Antisense a Drug
1
Technology, poglavlje 12, strane 342-351, Crooke, S.T., ed., 2008). U određenim otelotvorenjima, stepen proinflamatornog dejstva može da se ublaži podešavanjem jedne ili više promenljivih. Na primer, stepen proinflamatornog dejstva datog oligonukleotida može da se ublaži zamenom bilo kog broja fosforotioatnih internukleozidnih veza sa fosfodiestarskim internukleozidnim vezama, čime se smanjuje ukupan broj fosforotioatnih internukleozidnih veza.
[0384] U određenim otelotvorenjima, bilo bi poželjno da se smanji broj fosforotioatnih veza, ako bi to moglo da se učini bez gubitka stabilnosti i bez premeštanja distribucije sa jetre na bubreg. Na primer, u određenim otelotvorenjima, broj fosforotioatnih veza može da se smanji zamenom fosforotioatnih veza fosfodiestarskim vezama. U takvom otelotvorenju, antisens jedinjenje koje ima manje fosforotioatnih veza i više fosfodiestarskih veza može da indukuje manje proinflamatorne reakcije ili izostanak proinflamatorne reakcije. Iako antisens jedinjenje koje ima manje fosforotioatnih veza i više fosfodiestarskih veza može da indukuje manje proinflamatornih reakcija, antisens jedinjenje koje ima manje fosforotioatnih veza i više fosfodiestarskih veza ne mora da se akumulira u jetri, i može biti manje efikasno u istoj ili sličnoj dozi u poređenju sa antisens jedinjenjem koje ima više fosforotioatnih veza. U određenim otelotvorenjima, stoga je poželjno da se konstruiše antisens jedinjenje koja ima mnoštvo fosfodiestarskih veza i mnoštvo fosforotioatnih veza, ali koje takođe poseduje stabilnost i dobru distribuciju u jetri.
[0385] U određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja se više akumuliraju u jetri i manje u bubregu nego nekonjugovani parnjaci, čak i kada se neke od fosforotioatnih veza zamene manje proinflamatornim fosfodiestarskim internukleozidnim vezama. U određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja se više akumuliraju u jetri i manje se izlučuju u mokraći u poređenju sa svojim nekonjugovanim parnjacima, čak i kada se neke od fosforotioatnih veza zamene manje proinflamatornim fosfodiestarskim internukleozidnim vezama. U određenim otelotvorenjima, primena konjugata omogućava da se konstruišu potentniji antisens lekovi koji se bolje podnose. Zaista, u određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja imaju veće terapeutske indekse nego nekonjugovani parnjaci. To omogućava da se konjugovano antisens jedinjenje primeni u većoj apsolutnoj dozi, pošto postoji manji rizik od proinflamatornog odgovora i manji rizik od toksičnosti bubrega. Ova veća doza omogućava manje često doziranje, pošto se očekuje da će klirens (metabolizam) biti sličan. Nadalje, pošto je jedinjenje potentnije, kao što je
1
prethodno opisano, može se pustiti da koncentracija bude niža pre sledeće doze bez gubitka terapeutske aktivnosti, što omogućava još duže periode između doziranja.
[0386] U određenim otelotvorenjima, inkluzija nekih fosforotioatnih veza ostaje poželjna. Na primer, terminalne veze su osetljive na egzonukleaze te tako, u određenim otelotvorenjima, te veze su fosforotioatne ili druge modifikovane veze. Internukleozidne veze koje povezuju dva dezoksinukleozida su osetljive na endonukleaze i tako, u određenim otelotvorenjima, te veze su fosforotioatne ili druge modifikovane veze. Internukleozidne veze između modifikovanog nukleozida i dezoksinukleozida kada je dezoksinukleozid na 5' strani povezanih dezoksinukleozida, osetljive su na endonukleaze te tako, u određenim otelotvorenjima, te veze su fosforotioatne ili druge modifikovane veze. Internukleozidne veze između dva modifikovana nukleozida određenih vrsta i između dezoksinukleozida i modifikovanog nukleozida određene vrste, pri čemu je modifikovani nukleozid na 5' strani veze, dovoljno su otporne na digestiju nukleazom da veza može biti fosfodiestar.
[0387] U određenim otelotvorenjima, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 16 fosfortioatnih veza. U određenim otelotvorenjima, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 15 fosfotioatnih veza. U određenim otelotvorenjima, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 14 fosfotioatnih veza. U određenim otelotvorenjima, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 13 fosfotioatnih veza. U određenim otelotvorenjima, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 12 fosfotioatnih veza. U određenim otelotvorenjima, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 11 fosfotioatnih veza. U određenim otelotvorenjima, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 10 fosfotioatnih veza. U određenim otelotvorenjima, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 9 fosfotioatnih veza. U određenim otelotvorenjima, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 8 fosfotioatnih veza.
[0388] U određenim otelotvorenjima, ovde opisano antisens jedinjenje koje sadrži jednu ili više konjugovanih grupa ima povećanu aktivnost i/ili potentnost i/ili podnošljivost u poređenju sa matičnim antisens jedinjenjem kome nedostaje jedna ili više konjugovanih grupa. Shodno tome, u određenim otelotvorenjima, vezivanje takvih konjugovanih grupa za oligonukleotid je poželjno. Takve konjugovane grupe mogu biti povezane sa 5'- i/ili 3'-krajem
1
oligonukleotida. U određenim slučajevima, vezivanje na 5'-kraju je sintetički poželjno. Tipično, oligonukleotidi se sintetišu vezivanjem 3' terminalnog nukleozida za čvrsti nosač i sekvencijalnim kuplovanjem nukleozida od 3' do 5' koristeći tehnike koje su dobro poznate u struci. Shodno tome, ako je konjugovana grupa poželjna na 3'-terminusu, može se (1) vezati konjugovana grupa za 3' terminalni nukleozid i vezati taj konjugovani nukleozid za čvrsti nosač za dalju pripremu oligonukleotida ili (2) vezati konjugovana grupa za 3'-terminalni nukleozid kompletiranog oligonukleotida nakon sinteze. Nijedan od ovih pristupa nije mnogo efikasan, te su tako oba skupa. Konkretno, vezivanje konjugovanog nukleozida za čvrsti nosač, iako prikazano u ovde datim Primerima, predstavlja neefikasan proces. U određenim otelotvorenjima, vezivanje konjugovane grupe za 5'-terminalni nukleozid je sintetički lakše od vezivanja za 3'-kraj. Nekonjugovani 3' terminalni nukleozid može da se poveže sa čvrstom potporom radi pripremanja oligonukleotida koristeći standardne i dobro okarakterisane reakcije. Potrebno je samo povezati 5' nukleozid koji ima konjugovanu grupu u poslednjem koraku kuplovanja. U određenim otelotvorenjima, to je efikasnije nego vezivanje konjugovanog nukleozida direktno sa čvrstim nosačem kao što se obično radi za pripremu 3'-konjugovanog oligonukleotida. Ovde dati primeri prikazuju vezivanje na 5' kraju. Dodatno, određene konjugovane grupe imaju sintetičke prednosti. Na primer, određene konjugovane grupe koje sadrže fosforne vezujuće grupe su sintetički jednostavnije i efikasnije pripremljene od drugih konjugovanih grupa, uključujući prethodno objavljene konjugovane grupe (npr. WO/2012/037254).
[0389] U određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja se primenjuju na ispitaniku. U takvim otelotvorenjima, ovde opisano antisens jedinjenje koje sadrži jednu ili više konjugovanih grupa ima povećanu aktivnost i/ili potentnost i/ili podnošljivost u poređenju sa matičnim antisens jedinjenjem kome nedostaje jedna ili više konjugovanih grupa. Bez ograničavanja mehanizmom, veruje se da konjugovana grupa pomaže u distribuciji, isporuci i/ili unosu u ciljnu ćeliju ili tkivo. U određenim otelotvorenjima, nakon ulaska u ciljnu ćeliju ili tkivo, poželjno je da se cela konjugovana grupa ili njen deo otcepi radi otpuštanja aktivnog oligonukleotida. U određenim otelotvorenjima, nije neophodno da cela konjugovana grupa bude otcepljena od oligonukleotida. Na primer, u Primeru 20, konjugovani oligonukleotid je primenjen na miševima, i detektovane su brojne različite hemijske vrste, od kojih svaka sadrži različiti deo konjugovane grupe koji ostaje na oligonukleotidu (Tabela 23a). Ovo konjugovano antisens jedinjenje je pokazalo dobru potentnost (Tabela 23). Tako, u određenim otelotvorenjima, takav metabolički profil
1
višestrukog delimičnog cepanja konjugovane grupe ne ometa aktivnost /potentnost. Svejedno, u određenim otelotvorenjima, poželjno je da prolek (konjugovani oligonukleotid) da jedno aktivno jedinjenje. U određenim slučajevima, ako je otkriveno više oblika aktivnog jedinjenja, može biti neophodno da se odrede relativne količine i aktivnosti za svako. U određenim otelotvorenjima, kada je potreban regulatorni pregled (npr. USFDA ili pandan), poželjno je da postoji pojedinačna (ili pretežno pojedinačna) aktivna vrsta. U određenim takvim otelotvorenjima, poželjno je da takva pojedinačna aktivna vrsta bude antisens oligonukleotid kome nedostaje bilo koji deo konjugovane grupe. U određenim otelotvorenjima, konjugovane grupe na 5'-kraju će verovatnije dovesti do potpunog metabolizma konjugovane grupe. Bez ograničavanja mehanizmom, može se desiti da su endogeni enzimi odgovorni za metabolizam na 5' kraju (npr. 5' nukleaze) aktivniji/efikasniji od 3' parnjaka. U određenim otelotvorenjima, specifične konjugovane grupe su podložnije metabolizmu u pojedinačne aktivne vrste. U određenim otelotvorenjima, specifične konjugovane grupe su podložnije metabolizmu u oligonukleotid.
D. Antisens
[0390] U određenim otelotvorenjima, oligomerno jedinjenje iz predmetnog otkrića je antisens jedinjenje. U takvim otelotvorenjima, oligomerno jedinjenje je komplementarno sa ciljnom nukleinskom kiselinom. U određenim otelotvorenjima, ciljna nukleinska kiselina je RNK. U određenim otelotvorenjima, ciljna nukleinska kiselina je nekodirajuća RNK. U određenim otelotvorenjima, ciljna nukleinska kiselina kodira protein. U određenim otelotvorenjima, ciljna nukleinska kiselina je odabrana od iRNK, pre-iRNK, mikroRNK, nekodirajuće RNK, uključujući malu nekodirajuću RNK i promoterom usmerenu RNK. U određenim otelotvorenjima, oligomerna jedinjenja su barem delimično komplementarna sa sa više od jedne ciljne nukleinske kiseline. Na primer, oligomerna jedinjenja mogu biti imitatori mikroRNK, koji se obično vezuju za više ciljeva.
[0391] U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje sadrži deo koji ima nukleobaznu sekvencu najmanje 70% komplementarnu sa nukleobaznom sekvencom ciljne nukleinske kiseline. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje sadrži deo koji ima nukleobaznu sekvencu najmanje 80% komplementarnu sa nukleobaznom sekvencom ciljne nukleinske kiseline. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje sadrži deo koji ima nukleobaznu sekvencu najmanje 90% komplementarnu sa nukleobaznom sekvencom ciljne nukleinske
1
kiseline. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje sadrži deo koji ima nukleobaznu sekvencu najmanje 95% komplementarnu sa nukleobaznom sekvencom ciljne nukleinske kiseline. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje sadrži deo koji ima nukleobaznu sekvencu najmanje 98% komplementarnu sa nukleobaznom sekvencom ciljne nukleinske kiseline. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenje sadrži deo koji ima nukleobaznu sekvencu koja je 100% komplementarna sa nukleobaznom sekvencom ciljne nukleinske kiseline. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenja su najmanje 70%, 80%, 90%, 95%, 98% ili 100% komplementarna sa nukleobaznom sekvencom ciljne nukleinske kiseline celom dužinom antisens jedinjenja.
[0392] Antisens mehanizmi uključuju svaki mehanizam koji obuhvata hibridizaciju oligomernog jedinjenja sa ciljnom nukleinskom kiselinom, pri čemu hibridizacija dovodi do biološkog dejstva. U određenim otelotvorenjima, takva hibridizacija dovodi do degradacije ili zauzimanja ciljne nukleinske kiseline uz istovremenu inhibiciju ili stimulaciju ćelijskog mehanizma koja uključuje, na primer, translaciju, transkripciju ili poliadenilaciju ciljne nukleinske kiseline ili nukleinske kiseline sa kojom ciljna nukleinska kiselina može inače da interaguje.
[0393] Jedna vrsta antisens mehanizma koji uključuje degradaciju ciljne RNK je antisens posredovan RNazom H. RNaza H je ćelijska endonukleaza koja otcepljuje RNK lanac dupleksa RNK:DNK. U struci je poznato da jednolančana antisens jedinjenja koja su „slična DNK“ izazivaju aktivnost RNaze H u ćelijama sisara. Aktivacija RNaze H, stoga, dovodi do cepanja RNK cilja, što u velikoj meri povećava efikasnost inhibicije genske ekspresije posredovane putem oligonukleotida sličnog DNK.
[0394] Antisens mehanizmi takođe uključuju, bez ograničenja, mehanizme RNKi, koji koriste RISC put. Takvi mehanizmi RNKi uključuju, bez ograničenja, mehanizme siRNK, ssRNK i mikroRNK. Takvi mehanizmi uključuju stvaranje imitatora mikroRNK i/ili antimikroRNK.
[0395] Antisens mehanizmi takođe uključuju, bez ograničenja, mehanizme koji hibridizuju ili imitiraju nekodirajuću RNK osim mikroRNK ili iRNK. Takva nekodirajuća RNK uključuje,
11
ali nije ograničena na, promoterom usmerenu RNK i kratku i dugačku RNK koja utiče na transkripciju ili translaciju jedne ili više nukleinskih kiselina.
[0396] U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi koji sadrže ovde opisane konjugate su jedinjenja RNKi. U određenim otelotvorenjima, oligomerni oligonukleotidi koji sadrže ovde opisane konjugate su jedinjenja ssRNK. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotidi koji sadrže ovde opisane konjugate su upareni sa drugim oligomernim jedinjenjem kako bi nastala siRNK. U određenim takvim otelotvorenjima, drugo oligomerno jedinjenje takođe sadrži konjugat. U određenim otelotvorenjima, drugo oligomerno jedinjenje je bilo koja modifikovana ili nemodifikovana nukleinska kiselina. U određenim jedinjenjima, oligonukleotidi koji sadrže ovde opisane konjugate su antisens lanac u jedinjenju siRNK. U određenim jedinjenjima, oligonukleotidi koji sadrže ovde opisane konjugate su sens lanac u jedinjenju siRNK. U otelotvorenjima u kojima je konjugovano oligomerno jedinjenje dvolančana siRNK, konjugat može biti na sens lancu, antisens lancu ili i sens lancu i antisens lancu.
C. Apolipoprotein (a) (apo(a))
[0397] U određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja ciljaju bilo koju apo(a) nukleinsku kiselinu. U određenim otelotvorenjima, ciljna nukleinska kiselina kodira apo(a) ciljni protein koji je klinički relevantan. U takvim otelotvorenjima, modulacija ciljne nukleinske kiseline daje kliničku korist.
[0398] Proces targetiranja obično uključuje određivanje najmanje jednog ciljnog regiona, segmenta ili mesta u okviru ciljne nukleinske kiseline da bi došlo do antisens interakcije tako da se ostvari željeno dejstvo.
[0399] U određenim otelotvorenjima, ciljni region je strukturno definisan region nukleinske kiseline. Na primer, u određenim takvim otelotvorenjima, ciljni region može da obuhvata 3' UTR, 5' UTR, egzon, intron, kodirajući region, region koji inicira translaciju, region koji prekida translaciju ili drugi definisani region nukleinske kiseline ili ciljni segment.
[0400] U određenim otelotvorenjima, ciljni segment je deo ciljnog regiona od najmanje 8 nukleobaza na koji je usmereno konjugovano antisens jedinjenje. Ciljni segementi mogu da uključuju sekvence DNK ili RNK koje sadrže najmanje 8 uzastopnih nukleobaza od 5'-terminusa jednog od ciljnih segmenata (preostale nukleobaze su uzastopni niz iste DNK ili RNK koji počinje odmah ushodno od 5'-terminusa ciljnog segmenta i nastavlja se dok DNK ili RNK ne sadrži oko 8 do oko 30 nukleobaza). Ciljni segementi se takođe predstavljaju sekvencama DNK ili RNK koje sadrže najmanje 8 uzastopnih nukleobaza od 3'-terminusa jednog od ciljnih segmenata (preostale nukleobaze su uzastopni niz iste DNK ili RNK koji počinje odmah nishodno od 3'-terminusa ciljnog segmenta i nastavlja se dok DNK ili RNK ne sadrži oko 8 do oko 30 nukleobaza). Ciljni segmenti mogu takođe da se predstave pomoću sekvenci DNK ili RNK koje sadrže najmanje 8 uzastopnih nukleobaza iz internog dela sekvence ciljnog segmenta i mogu da se pružaju u jednom ili oba pravca sve dok konjugovano antisens jedinjenje ne sadrži oko 8 do oko 30 nukleobaza.
[0401] U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenja usmerena na apo(a) nukleinsku kiselinu mogu da se modifikuju kako je ovde opisano. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenja mogu da imaju modifikovan ostatak šećera ili nemodifikovan ostatak šećera ili smešu modifikovanih i nemodifikovanih ostataka šećera, kako je ovde opisano. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenja mogu da imaju modifikovanu internukleozidnu vezu ili nemodifikovanu internukleozidnu vezu ili smešu modifikovanih i nemodifikovanih internukleozidnih veza, kako je ovde opisano. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenja mogu da imaju modifikovanu nukleobazu, nemodifikovanu nukleobazu ili smešu modifikovanih i nemodifikovanih nukleobaza, kako je ovde opisano. U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenja mogu da imaju motiv, kako je ovde opisano.
[0402] U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenja usmerena na apo(a) nukleinske kiseline mogu biti konjugovana, kako je ovde opisano.
[0403] Jedan apo(a) protein je povezan putem disulfidne veze sa jednim apolipoproteinom B (apoB) kako bi nastala čestica lipoproteina(a) (Lp(a)). Apo(a) protein deli veliki stepen homologosti sa plazminogenom, naročito u kringl IV tip 2 repetitivnom domenu. Smatra se da kringl ponavljajući domen u apo(a) može biti odgovoran za njegova protrombotska i antifibrinolitička svojstva, potencijalno poboljšavajući progresiju ateroskleroze. Apo(a) se transkripciono reguliše putem IL-6, i u studijama kod pacijenata sa reumatoidnim artritisom koji su lečeni inhibitorom IL-6 (tocilizumab), nivoi u plazmi su smanjeni za 30% nakon 3 meseca lečenja. Pokazalo se da apo(a) preferencijalno vezuje oksidovane fosfolipide i potencira vaskularnu inflamaciju. Nadalje, studije ukazuju da čestica Lp(a) može takođe da stimuliše endotelnu propustljivost, indukuje ekspresiju inhibitora aktivatora plazminogena tip 1 i aktivira lučenje makrofaga interleukina-8. Značajno je što su nedavne studije genetske asocijacije otkrile da je Lp(a) nezavisan faktor rizika za infarkt miokarda, moždani udar, perifernu vaskularnu bolest i aneurizmu abdominalne aorte. Nadalje, u studiji PROCARDIS (Precocious Coronary Artery Disease), Klark i sar. opisali su značajnu i nezavisnu povezanost između koronarne bolesti srca i koncentracije Lp(a) u plazmi. Dodatno, Solfrici i sar. su ukazali na to da se povišeni Lp(a) u serumu može povezati sa povećanim rizikom od Alchajmerove bolesti (AB). Antisens jedinjenja usmerena na apo(a) su prethodno otkrivena u WO2005/000201 i US2010-0331390. Antisens oligonukleobaza usmerena na Apo(a), ISIS-APOARx, procenjena je u kliničkom ispitivanju Faze I da bi se proučio njen bezbednosni profil.
Određena konjugovana antisens jedinjenja usmerena na apo(a) nukleinsku kiselinu
[0404] U određenim otelotvorenjima, konjugovana antisens jedinjenja su usmerena na apo(a) nukleinsku kiselinu koja ima sekvencu sa GENBANK® pristupnim br. NM_005577.2, koja je ovde uključena kao SEQ ID NO: 1; GENBANK pristupnim br. NT_007422.12 koja je skraćena od nukleotida 3230000 do 3380000, uključena kao SEQ ID NO: 2; GENBANK pristupnim br. NT_025741.15 koja je skraćena od nukleotida 65120000 do 65258000, naznačena kao SEQ ID NO: 3; i GENBANK pristupnim br. NM_005577.1 koja je uključena ovde kao SEQ ID NO: 4. U određenim takvim otelotvorenjima, konjugovano antisens jedinjenje je najmanje 90%, najmanje 95% ili 100% komplementarno sa bilo kojom od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 1-4.
[0405] U određenim otelotvorenjima, konjugovano antisens jedinjenje usmereno na bilo koju od nukleobaznih sekvenci SEQ ID NO: 1-4 sadrži najmanje 8 uzastopnih nukleobaznih sekvenci izabranih od nukleobaznih sekvenci bilo kog od SEQ ID NO: 12-130, 133, 134. U određenim otelotvorenjima, konjugovano antisens jedinjenje usmereno na bilo koji od SEQ ID NO: 1-4 sadrži nukleobaznu sekvencu izabranu od nukleobaznih sekvenci bilo kog od SEQ ID NO: 12-130, 133, 134.
11
Tabela A: Antisens jedinjenja usmerena na Apo(a) SEQ ID NO: 1
11
Terapeutske indikacije apo(a)
[0406] U određenim otelotvorenjima, predmetno otkriće pruža postupke za primenu konjugovanog antisens jedinjenja usmerenog na apo(a) nukleinsku kiselinu za modulaciju ekspresije apo(a) kod ispitanika. U određenim otelotvorenjima, ekspresija apo(a) je smanjena.
11
[0407] U određenim otelotvorenjima, ovde su otkriveni postupci za lečenje ispitanika koji obuhvataju primenu jedne ili više farmaceutskih kompozicija, kako je ovde opisano. U određenim otelotvorenjima, ovde su otkriveni postupci za primenu konjugovanog antisens jedinjenja usmerenog na apo(a) nukleinsku kiselinu u farmaceutskoj kompoziciji za lečenje ispitanika. U određenim otelotvorenjima, pojedinac ima bolest povezanu sa apo(a). U određenim otelotvorenjima, pojedinac ima bolest povezanu sa Lp(a). U određenim otelotvorenjima, pojedinac ima inflamatornu, kardiovaskularnu i/ili metaboličku bolest, poremećaj ili stanje.
[0408] U određenim otelotvorenjima, ispitanik ima inflamatornu, kardiovaskularnu i/ili metaboličku bolest, poremećaj ili stanje.
[0409] U određenim otelotvorenjima, kardiovaskularne bolesti, poremećaji ili stanja uključuju, bez ograničenja, aortnu stenozu, aneurizmu (npr. abdominalnu aortnu aneurizmu), anginu, aritmiju, aterosklerozu, cerebrovaskularnu bolest, koronarnu arterijsku bolest, koronarnu bolest srca, dislipidemiju, hiperholesterolemiju, hiperlipidemiju, hipertenziju, hipertrigliceridemiju, infarkt miokarda, perifernu vaskularnu bolest (npr. periferna arterijska bolest), moždani udar, i slično.
[0410] U određenim otelotvorenjima, jedinjenja usmerena na apo(a) koja su ovde opisana modulišu fiziološke markere ili fenotipove kardiovaskularne bolesti, poremećaja ili stanja. Na primer, primena jedinjenja na životinjama može da smanji nivoe LDL i holesterola u tim životinjama u poređenju sa nelečenim životinjama. U određenim otelotvorenjima, modulacija fizioloških markera ili fenotipova može da se poveže sa inhibicijom apo(a) putem jedinjenja.
[0411] U određenim otelotvorenjima, fiziološki markeri kardiovaskularne bolesti, poremećaja ili stanja mogu da se kvantifikuju. Na primer, nivoi LDL ili holesterola mogu da se izmere i kvantifikuju putem, na primer, standardnih testova lipida. Za takve markere, u određenim otelotvorenjima, marker može da se smanji za oko 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ili 99%, ili u rasponu definisanom sa bilo koje dve od ovih vrednosti.
11
[0412] Takođe, ovde su otkriveni postupci za prevenciju, lečenje ili ublažavanje simptoma povezanog sa kardiovaskularnom bolešću, poremećajem ili stanjem kod ispitanika kome je to potrebno. U određenim otelotvorenjima, obezbeđen je postupak za smanjenje brzine pojave simptoma povezanog sa kardiovaskularnom bolešću, poremećajem ili stanjem. U određenim otelotvorenjima, obezbeđen je postupak za smanjenje težine simptoma povezanog sa kardiovaskularnom bolešću, poremećajem ili stanjem. U takvom otelotvorenju, postupci obuhvataju primenu terapeutski efikasne količine jedinjenja usmerenog na apo(a) nukleinsku kiselinu na pojedincu kome je to potrebno.
[0413] Kardiovaskularna bolest, poremećaj ili stanje može da se okarakteriše brojnim fizičkim simptomima. Bilo koji simptom za koji stručnjak zna da je povezan sa kardiovaskularnom bolešću, poremećajem ili stanjem može da se spreči, leči, ublaži ili na drugi način izmeni pomoću ovde opisanih jedinjenja i postupaka. U određenim otelotvorenjima, simptom može biti bilo koji od, bez ograničenja, angine, bola u grudima, plitkog disanja, palpitacija, malaksalosti, vrtoglavice, mučnine, znojenja, tahikardije, bradikardije, aritmije, atrijalne fibrilacije, oticanja donjih ekstremiteta, cijanoze, zamora, nesvestice, obamrlosti lica, obamrlosti udova, klaudikacije ili grčenja mišića, naduvenosti abdomena ili groznice.
[0414] U određenim otelotvorenjima, metaboličke bolesti, poremećaji ili stanja uključuju, bez ograničenja, hiperglikemiju, predijabetes, dijabetes (tip I i tip II), gojaznost, otpornost na insulin, metabolički sindrom i dijabetesnu dislipidemiju.
[0415] U određenim otelotvorenjima, jedinjenja usmerena na apo(a), kako su ovde opisana, modulišu fiziološke markere ili fenotipove metaboličke bolesti, poremećaja ili stanja. Na primer, primena jedinjenja na životinjama može da smanji nivoe glukoze i otpornosti na insulin u tim životinjama u poređenju sa nelečenim životinjama. U određenim otelotvorenjima, modulacija fizioloških markera ili fenotipova može da se poveže sa inhibicijom apo(a) putem jedinjenja.
[0416] U određenim otelotvorenjima, fiziološki markeri metaboličke bolesti, poremećaja ili stanja mogu da se kvantifikuju. Na primer, nivoi glukoze i otpornost na insulin mogu da se mere i kvantifikuju pomoću standardnih testova koji su poznati u oblasti. Za takve markere, u
11
određenim otelotvorenjima, marker može da se smanji za oko 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ili 99%, ili u rasponu definisanom sa bilo koje dve od ovih vrednosti. U drugom primeru, osetljivost na insulin može da se meri i kvantifikuje pomoću standardnih testova koji su poznati u oblasti. Za takve markere, u određenim otelotvorenjima, marker može da se poveća za oko 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ili 99%, ili u rasponu definisanom sa bilo koje dve od ovih vrednosti.
[0417] Takođe, ovde su otkriveni postupci za prevenciju, lečenje ili ublažavanje simptoma povezanog sa metaboličkom bolešću, poremećajem ili stanjem kod ispitanika kome je to potrebno. U određenim otelotvorenjima, obezbeđen je postupak za smanjenje brzine pojave simptoma povezanog sa metaboličkom bolešću, poremećajem ili stanjem. U određenim otelotvorenjima, obezbeđen je postupak za smanjenje težine simptoma povezanog sa metaboličkom bolešću, poremećajem ili stanjem. U takvom otelotvorenju, postupci obuhvataju primenu terapeutski efikasne količine jedinjenja usmerenog na apo(a) nukleinsku kiselinu na pojedincu kome je to potrebno.
[0418] Metabolička bolest, poremećaj ili stanje može da se okarakteriše brojnim fizičkim simptomima. Bilo koji simptom za koji stručnjak zna da je povezan sa metaboličkom bolešću, poremećajem ili stanjem može da se spreči, leči, ublaži ili na drugi način izmeni pomoću ovde opisanih jedinjenja i postupaka. U određenim otelotvorenjima, simptom može biti bilo koji od, bez ograničenja, prekomerne proizvodnje mokraće (poliurija), prekomerne žeđi i povećanog unosa tečnosti (polidipsija), zamućenja vida, neobjašnjenog mršavljenja i letargije.
[0419] U određenim otelotvorenjima, inflamatorne bolesti, poremećaji ili stanja uključuju, bez ograničenja, aortnu stenozu, koronarnu arterijsku bolest (KAB), Alchajmerovu bolest i tromboembolijske bolesti, poremećaje ili stanja. Određene tromboembolijske bolesti, poremećaji ili stanja uključuju, bez ograničenja, moždani udar, trombozu, infarkt miokarda i perifernu vaskularnu bolest.
[0420] U određenim otelotvorenjima, jedinjenja usmerena na apo(a) koja su ovde opisana modulišu fiziološke markere ili fenotipove inflamatorne bolesti, poremećaja ili stanja. Na primer, primena jedinjenja na životinjama može da smanji nivoe inflamatornih citokina ili
11
drugih inflamatornih markera u tim životinjama u poređenju sa nelečenim životinjama. U određenim otelotvorenjima, modulacija fizioloških markera ili fenotipova može da se poveže sa inhibicijom apo(a) putem jedinjenja.
[0421] U određenim otelotvorenjima, fiziološki markeri inflamatorne bolesti, poremećaja ili stanja mogu da se kvantifikuju. Na primer, nivoi citokina mogu da se mere i kvantifikuju pomoću standardnih testova koji su poznati u struci. Za takve markere, u određenim otelotvorenjima, marker može da se smanji najmanje za oko 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 99%, ili u rasponu definisanom sa bilo koje dve od ovih vrednosti.
[0422] Takođe, ovde su otkriveni postupci za prevenciju, lečenje ili ublažavanje simptoma povezanog sa inflamatornom bolešću, poremećajem ili stanjem kod ispitanika kome je to potrebno. U određenim otelotvorenjima, obezbeđen je postupak za smanjenje brzine pojave simptoma povezanog sa inflamatornom bolešću, poremećajem ili stanjem. U određenim otelotvorenjima, obezbeđen je postupak za smanjenje težine simptoma povezanog sa inflamatornom bolešću, poremećajem ili stanjem. U takvom otelotvorenju, postupci obuhvataju primenu terapeutski efikasne količine jedinjenja usmerenog na apo(a) nukleinsku kiselinu na pojedincu kome je to potrebno.
[0423] U određenim otelotvorenjima, obezbeđeni su postupci za lečenje pojedinca obolelog od bolesti, poremećaja ili stanja povezanog sa apo(a) koji obuhvataju primenu terapeutski efikasne količine jedne ili više farmaceutskih kompozicija kako je ovde opisano. U određenim otelotvorenjima, pojedinac ima bolest povišene nivoe apo(a). U određenim otelotvorenjima, obezbeđeni su postupci za lečenje pojedinca obolelog od bolesti, poremećaja ili stanja povezanog sa Lp(a) koji obuhvataju primenu terapeutski efikasne količine jedne ili više farmaceutskih kompozicija kako je ovde opisano. U određenim otelotvorenjima, pojedinac ima povišene nivoe Lp(a). U određenim otelotvorenjima, pojedinac ima inflamatornu, kardiovaskularnu i/ili metaboličku bolest, poremećaj ili stanje. U određenim otelotvorenjima, primena terapeutski efikasne količine antisens jedinjenja usmerenog na apo(a) nukleinsku kiselinu je praćena nadziranjem nivoa apo(a) ili Lp(a). U određenim otelotvorenjima, primena terapeutski efikasne količine antisens jedinjenja usmerenog na apo(a) nukleinsku kiselinu je praćena nadziranjem markera inflamatorne, kardiovaskularne i/ili metaboličke bolesti, ili drugih procesa bolesti povezane sa ekspresijom apo(a), kako bi se
12
utvrdio odgovor pojedinca na antisens jedinjenje. Lekar može da koristi odgovor pojedinca na primenu antisens jedinjenja usmerenog na apo(a) da odredi obim i trajanje terapeutske intervencije sa jedinjenjem.
[0424] U određenim otelotvorenjima, primena antisens jedinjenja usmerenog na apo(a) nukleinsku kiselinu dovodi do smanjenja ekspresije apo(a) za najmanje 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 99%, ili u opsegu koji je definisan sa bilo koje dve od ovih vrednosti. U određenim otelotvorenjima, ekspresija apo(a) je smanjena na najmanje ≤ 100 mg/dl, ≤ 90 mg/dl, ≤ 80 mg/dl, ≤ 70 mg/dl, ≤ 60 mg/dl, ≤ 50 mg/dl, ≤ 40 mg/dl, ≤ 30 mg/dl, ≤20 mg/dl ili ≤ 10 mg/dl.
[0425] U određenim otelotvorenjima, primena antisens jedinjenja usmerenog na apo(a) nukleinsku kiselinu dovodi do smanjenja ekspresije Lp(a) za najmanje 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 99%, ili u opsegu koji je definisan sa bilo koje dve od ovih vrednosti. U određenim otelotvorenjima, ekspresija Lp(a) je smanjena na najmanje ≤ 200 mg/dl, ≤ 190 mg/dl, ≤ 180 mg/dl, ≤ 175 mg/dl, ≤ 170 mg/dl, ≤ 160 mg/dl, ≤ 150 mg/dl, ≤ 140 mg/dl, ≤ 130 mg/dl, ≤ 120 mg/dl, ≤ 110 mg/dl, ≤ 100 mg/dl, ≤ 90 mg/dl, ≤ 80 mg/dl, ≤ 70 mg/dl, ≤ 60 mg/dl, ≤ 55 mg/dl, ≤ 50 mg/dl, ≤ 45 mg/dl, ≤ 40 mg/dl, ≤ 35 mg/dl, ≤ 30 mg/dl, ≤ 25 mg/dl, ≤ 20 mg/dl, ≤ 15 mg/dl ili ≤ 10 mg/dl.
[0426] U određenim otelotvorenjima, ovde su otkriveni postupci za primenu konjugovanog antisens jedinjenja usmerenog na apo(a) nukleinsku kiselinu u pripremi leka. U određenim otelotvorenjima, farmaceutske kompozicije koje sadrže konjugovano antisens jedinjenje usmereno na apo(a) se koriste za pripremu leka za lečenje pacijenta koji je oboleo od ili je podložan inflamatornoj, kardiovaskularnoj i/ili metaboličkoj bolesti, poremećaju ili stanju.
Apo(a) populacije za lečenje
[0427] Određeni ispitanici sa visokim nivoima Lp(a) imaju značajan rizik od različitih bolesti (Lippi i sar. Clinica Chimica Acta, 2011, 412:797-801; Solfrizz i sar.). Kod mnogih ispitanika sa visokim nivoima Lp(a), trenutna lečenja ne mogu da smanje njihov Lp(a) na bezbedne nivoe. Apo(a) ima značajnu ulogu u formiranju Lp(a), te stoga smanjivanje apo(a) može da smanji Lp(a) i spreči, leči ili ublaži bolest povezanu sa Lp(a).
[0428] U određenim otelotvorenjima, lečenje sa ovde otkrivenim jedinjenjima i postupcima je naznačeno za humanu životinju sa povišenim nivoima apo(a) i/ili Lp(a). U određenim otelotvorenjima, čovek ima nivoe apo(a) ≥ 10 mg/dl, ≥ 20 mg/dl, ≥ 30 mg/dl, ≥ 40 mg/dl, ≥ 50 mg/dl, ≥ 60 mg/dl, ≥ 70 mg/dl, ≥ 80 mg/dl, ≥ 90 mg/dl ili ≥ 100 mg/dl. U određenim otelotvorenjima, čovek ima nivoe apo(a) ≥ 10 mg/dl, ≥ 15 mg/dl, ≥ 20 mg/dl, ≥ 25 mg/dl, ≥ 30 mg/dl, ≥ 35 mg/dl, ≥ 40 mg/dl, ≥ 50 mg/dl, ≥ 60 mg/dl, ≥ 70 mg/dl, ≥ 80 mg/dl, ≥ 90 mg/dl, ≥ 100 mg/dl, ≥ 110 mg/dl, ≥ 120 mg/dl, ≥ 130 mg/dl, ≥ 140 mg/dl, ≥ 150 mg/dl, ≥ 160 mg/dl, ≥ 170 mg/dl, ≥ 175 mg/dl, ≥ 180 mg/dl, ≥ 190 mg/dl, ≥ 200 mg/dl.
D. Određene farmaceutske kompozicije
[0429] U određenim otelotvorenjima, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže jedno ili više antisens jedinjenja prema pronalasku. U određenim otelotvorenjima, takva farmaceutska kompozicija sadrži pogodni farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač. U određenim otelotvorenjima, farmaceutska kompozicija sadrži sterilni fiziološki rastvor i jedno ili više antisens jedinjenja. U određenim otelotvorenjima, takva farmaceutska kompozicija se sastoji od sterilnog fiziološkog rastvora i jednog ili više antisens jedinjenja. U nekim otelotvorenjima, sterilni fiziološki rastvor je fiziološki rastvor farmaceutskog kvaliteta. U određenim otelotvorenjima, farmaceutska kompozicija sadrži jedno ili više antisens jedinjenja i sterilnu vodu. U određenim otelotvorenjima, farmaceutska kompozicija se sastoji od jednog ili više antisens jedinjenja i sterilne vode. U nekim otelotvorenjima, sterilni fiziološki rastvor je voda farmaceutskog kvaliteta. U određenim otelotvorenjima, farmaceutska kompozicija sadrži jedno ili više antisens jedinjenja i fiziološki rastvor puferovan fosfatom (PBS). U određenim otelotvorenjima, farmaceutska kompozicija se sastoji od jednog ili više antisens jedinjenja i fiziološkog rastvora puferovanog fosfatom (PBS). U nekim otelotvorenjima, sterilni fiziološki rastvor je PBS farmaceutskog kvaliteta.
[0430] U određenim otelotvorenjima, antisens jedinjenja mogu da se mešaju sa farmaceutski prihvatljivim aktivnim i/ili inertnim supstancama za pripremu farmaceutskih kompozicija ili formulacija. Kompozicije i postupci za formulaciju farmaceutskih kompozicija zavise od brojnih kriterijuma, uključujući, ali ne ograničavajući se na, način primene, opseg bolesti ili dozu koja se primenjuje.
[0431] Farmaceutske kompozicije koje sadrže antisens jedinjenja obuhvataju bilo koje farmaceutski prihvatljive soli, estre ili soli takvih estara. U određenim otelotvorenjima, farmaceutske kompozicije koje sadrže antisens jedinjenja sadrže jedan ili više oligonukleotida koji su, nakon primene na životinji, uključujući čoveka, sposobni da obezbede (direktno ili indirektno) biološki aktivan metabolit ili njegov ostatak. Shodno tome, na primer, otkriće takođe obuhvata farmaceutski prihvatljive soli antisens jedinjenja, prolekova, farmaceutski prihvatljivih soli takvih lekova i drugih bioekvivalenata. Pogodne farmaceutski prihvatljive soli uključuju, ali nisu ograničene na, soli natrijuma i kalijuma.
[0432] Prolek može da uključi inkorporisanje dodatnih nukleozida na jednom ili oba kraja oligonukleotida koji se cepaju putem endogenih nukleaza u telu, radi nastanka antisens oligonukleotida.
[0433] Ostaci lipida su korišćeni u terapijama nukleinskom kiselinom u različitim postupcima. U određenim takvim postupcima, nukleinska kiselina je uvedena u prethodno formirane lipozome ili lipoplekse načinjene od smeše katjonskih lipida i neutralnih lipida. U određenim postupcima, kompleksi DNK sa mono- ili polikatjonskim lipidima se formiraju bez prisustva neutralnog lipida. U određenim otelotvorenjima, ostatak lipida je odabran da poveća distribuciju farmaceutskog agensa u određenu ćeliju ili tkivo. U određenim otelotvorenjima, ostatak lipida je odabran da poveća distribuciju farmaceutskog agensa u masno tkivo. U određenim otelotvorenjima, ostatak lipida je odabran da poveća distribuciju farmaceutskog agensa u mišićno tkivo.
[0434] U određenim otelotvorenjima, ovde obezbeđene farmaceutske kompozicije sadrže jedan ili više modifikovanih oligonukleotida i jedan ili više ekscipijenasa. U određenim takvim otelotvorenjima, ekscipijensi su odabrani od vode, rastvora soli, alkohola, polietilen glikola, želatina, laktoze, amilaze, magnezijum stearata, talka, silicijumove kiseline, viskoznog parafina, hidroksimetilceluloze i polivinilpirolidona.
12
[0435] U određenim otelotvorenjima, ovde obezbeđena farmaceutska kompozicija sadrži sistem za isporuku. Primeri sistema za isporuku uključuju, ali nisu ograničeni na, lipozome i emulzije. Određeni sistemi za isporuku su korisni za pripremu određenih farmaceutskih kompozicija, uključujući one koje sadrže hidrofobna jedinjenja. U određenim otelotvorenjima, koriste se neki organski rastvarači poput dimetilsulfoksida.
[0436] U određenim otelotvorenjima, ovde obezbeđena farmaceutska kompozicija sadrži jedan ili više molekula za isporuku specifičnih za tkivo konstruisanih da isporuče jedan ili više farmaceutskih agenasa iz predmetnog otkrića u specifična tkiva ili vrste ćelija. Na primer, u određenim otelotvorenjima, farmaceutske kompozicije uključuju lipozome obložene antitelom specifičnim za tkivo.
[0437] U određenim otelotvorenjima, ovde obezbeđena farmaceutska kompozicija sadrži sistem korastvarača. Neki od takvih sistema korastvarača obuhvataju, na primer, benzil alkohol, nepolarni surfaktant, organski polimer koji se meša sa vodom i vodenu fazu. U određenim otelotvorenjima, takvi korastvarački sistemi se koriste za hidrofobna jedinjenja. Neograničavajući primer takvog sistema korastvarača je VPD sistem korastvarača, koji je rastvor apsolutnog etanola koji sadrži 3% m/V benzil alkohola, 8% m/V nepolarnog surfaktanta Polysorbate 80™ i 65% m/V polietilen glikola 300. Proporcije takvih sistema korastvarača mogu u velikoj meri da se menjaju bez značajne izmene njihovih osobina rastvorljivosti i toksičnosti. Nadalje, identitet komponenti korastvarača može da se menja: na primer, mogu se koristiti drugi surfaktanti umesto Polysorbate 80™; veličina frakcije polietilen glikola može da se menja; drugi biokompatibilni polimeri mogu da zamene polietilen glikol, npr. polivinil pirolidon; i drugi šećeri ili polisaharidi mogu biti zamena za dekstrozu.
[0438] U određenim otelotvorenjima, ovde obezbeđena farmaceutska kompozicija se priprema za oralnu primenu. U određenim otelotvorenjima, farmaceutske kompozicije se pripremaju za bukalnu primenu.
[0439] U određenim otelotvorenjima, farmaceutska kompozicija se priprema za primenu putem injekcije (npr. intravenska, supkutana, intramuskularna, itd.). U određenim takvim otelotvorenjima, farmaceutska kompozicija sadrži nosač i formuliše se u vodenom rastvoru, kao što je voda ili fiziološki kompatibilni puferi kao što je Henksov rastvor, Ringerov rastvor ili fiziološki pufer. U određenim otelotvorenjima, uključeni su drugi sastojci (npr. sastojci koji pomažu u rastvorljivosti ili služe kao konzervansi). U određenim otelotvorenjima, injektabilne suspenzije se pripremaju koristeći odgovarajuće tečne nosače, suspendujuće agense, i slično. Određene farmaceutske kompozicije za injekciju su date u pojedinačnim doznim oblicima, npr. u ampulama ili multidoznoj ambalaži. Određene farmaceutske kompozicije za injekciju su suspenzije, rastvori ili emulzije u ulju ili vodenim pomoćnim sredstvima, i mogu sadržati agense za formulisanje, kao što su agensi za suspendovanje, stabilizaciju i/ili dispergovanje. Određeni rastvarači pogodni za upotrebu u farmaceutskim kompozicijama za injekciju uključuju, ali nisu ograničeni na, lipofilne rastvarače i masna ulja, kao što su susamovo ulje, estri sintetičkih masnih kiselina, kao što su etil oleat ili trigliceridi, i lipozomi. Vodene suspenzije za injekciju mogu da sadrže supstance koje povećavaju viskoznost suspenzije, kao što su natrijum karboksimetil celuloza, sorbitol ili dekstran. Opciono, takve suspenzije takođe mogu da sadrže odgovarajuće stabilizatore ili agense koji povećavaju rastvorljivost farmaceutskog agensa kako bi se omogućila priprema rastvora velike koncentracije.
[0440] U određenim otelotvorenjima, farmaceutska kompozicija se priprema za transmukoznu primenu. U određenim takvim otelotvorenjima, u formulaciji se koriste penetrati pogodni za barijeru koja treba da se pređe. Takvi penetrati su uopšteno poznati u struci.
[0441] U određenim otelotvorenjima, ovde obezbeđena farmaceutska kompozicija sadrži oligonukleotid u terapeutski efikasnoj količini. U određenim otelotvorenjima, terapeutski efikasna količina je dovoljna da se spreče, otklone ili ublaže simptomi bolesti, ili da se produži preživljavanje ispitanika koji se leči. Određivanje terapeutski efikasne količine ne predstavlja problem osobama sa znanjem u struci.
[0442] U određenim otelotvorenjima, jedan ili više ovde obezbeđenih oligonukleotida se formuliše kao prolek. U određenim otelotvorenjima, nakon in vivo primene, prolek se hemijski konvertuje u biološki, farmaceutski ili terapeutski aktivniji oblik oligonukleotida. U određenim otelotvorenjima, prolekovi su korisni jer su lakši za primenu od odgovarajućeg aktivnog oblika. Na primer, u određenim slučajevima, prolek može biti biološki dostupniji (npr. putem oralne primene) nego odgovarajući aktivni oblik. U određenim slučajevima,
12
prolek može imati poboljšanu rastvorljivost u poređenju sa odgovarajućim aktivnim oblikom. U određenim otelotvorenjima, prolekovi su manje rastvorljivi u vodi od odgovarajućeg aktivnog oblika. U određenim slučajevima, takvi prolekovi imaju bolji prenos kroz ćelijske membrane, kada je rastvorljivost u vodi smetnja za mobilnost. U određenim otelotvorenjima, prolek je estar. U određenim takvim otelotvorenjima, estar je metabolički hidrolizovan sa karboksilnom kiselinom nakon primene. U određenim slučajevima, karboksilna kiselina koja sadrži jedinjenje je odgovarajući aktivan oblik. U određenim otelotvorenjima, prolek sadrži kratak peptid (poliaminokiselina) povezan sa kiselom grupom. U određenim takvim otelotvorenjima, peptid se cepa nakon primene kako bi nastao odgovarajući aktivan oblik.
[0443] U određenim otelotvorenjima, predmetno otkriće pruža kompozicije i postupke za smanjenje količine ili aktivnosti ciljne nukleinske kiseline u ćeliji. U određenim otelotvorenjima, ćelija je životinja. U određenim otelotvorenjima, životinja je sisar. U određenim otelotvorenjima, životinja je glodar. U određenim otelotvorenjima, životinja je primat. U određenim otelotvorenjima, životinja je nehumani primat. U određenim otelotvorenjima, životinja je čovek.
[0444] U određenim otelotvorenjima, predmetno otkriće pruža postupke za primenu farmaceutske kompozicije koja sadrži oligonukleotid iz predmetnog otkrića na životinji. Pogodni načini primene uključuju, ali nisu ograničeni na, oralnu, rektalnu, transmukoznu, intestinalnu, enteralnu, topikalnu, supozitarnu, putem inhalacije, intratekalnu, intracerebroventrikularnu, intraperitonealnu, intranazalnu, intraokularnu, intratumorsku i parenteralnu (npr. intravensku, intramuskularnu, intramedularnu i supkutanu). U određenim otelotvorenjima, farmaceutska intratekalna sredstva se primenjuju radi postizanja lokalnih, a ne sistemskih izlaganja. Na primer, farmaceutske kompozicije mogu da se injektuju direktno u oblast željenog dejstva (npr. u jetru).
PRIMERI
[0445] Sledeći primeri ilustruju određena otelotvorenja predmetnog otkrića i nisu ograničavajući. Štaviše, kada je obezbeđeno specifično otelotvorenje, pronalazači su razmatrali generičku primenu tih specifičnih otelotvorenja. Na primer, otkriće oligonukleotida koji ima određeni motiv pruža razumnu podršku za dodatne oligonukleotide
12
koji imaju sličan ili isti motiv. I, na primer, kada se modifikacija sa naročitom velikim afinitetom javlja na određenoj poziciji, druge modifikacije sa velikim afinitetom na istoj poziciji se smatraju prikladnim, ako nije drugačije naznačeno.
Primer 1: Opšti postupak za pripremu fosforamidita, jedinjenja 1, 1a i 2
[0446]
Bx je heterociklična baza;
[0447] Jedinjenja 1, 1a i 2 su pripremljena u skladu sa procedurama koje su dobro poznate u struci, kako je opisano u ovde datoj specifikaciji (vidite Seth i sar. Bioorg. Med. Chem., 2011, 21(4), 1122-1125, J. Org. Chem., 2010, 75(5), 1569-1581, Nucleic Acids Symposium Series, 2008, 52(1), 553-554); i takođe vidite objavljene PCT međunarodne prijave (WO 2011/115818, WO 2010/077578, WO2010/036698, WO2009/143369, WO 2009/006478 i WO 2007/090071), i US patent 7,569,686).
Primer 2: Priprema jedinjenja 7
[0448]
12
[0449] Jedinjenje 3 (2-acetamido-1,3,4,6-tetra-O-acetil-2-deoksi-β-Dgalaktopiranoza ili galaktozamin pentaacetat) je komercijalno dostupno. Jedinjenje 5 je pripremljeno prema objavljenim procedurama (Weber i sar. J. Med. Chem., 1991, 34, 2692).
Primer 3: Priprema jedinjenja 11
[0450]
[0451] Jedinjenja 8 i 9 su komercijalno dostupna.
Primer 4: Priprema jedinjenja 18
[0452]
12
[0453] Jedinjenje 11 je pripremljeno prema procedurama ilustrovanim u Primeru 3. Jedinjenje 14 je komercijalno dostupno. Jedinjenje 17 je pripremljeno koristeći slične procedure koje su objavili Rensen i sar. J. Med. Chem., 2004, 47, 5798-5808.
Primer 39: Opšti postupak za pripremu oligomernog jedinjenja 83h koje sadrži GalNAc3-3 konjugat na 5' terminusu (GalNAc3-1 modifikovan za povezivanje na 5' kraju) putem čvrste potpore
[0454]
12
�
[0455] Jedinjenje 18 je pripremljeno prema procedurama ilustrovanim u Primeru 4. Jedinjenja 83a i 83b su komercijalno dostupna. Oligomerno jedinjenje 83e koje sadrži fosfodiestarski povezani heksilamin je pripremljeno koristeći standardne procedure sinteze oligonukleotida. Tretiranje zaštićenog oligomernog jedinjenja vodenim amonijakom dalo je 5'-GalNAc3-3 konjugovano oligomerno jedinjenje (83h).
[0456] Pri čemu, GalNAc3-3 ima strukturu:
[0457] GalNAc3deo klastera konjugatne grupe GalNAc3-3 (GalNAc3-3a) može da se kombinuje sa bilo kojim ostatkom koji može da se otcepi radi dobijanja različitih konjugatnih grupa. Pri čemu, GalNAc3-3aima formulu:
1 1
Primer 44: Dejstvo PO/PS veza na antisens inhibiciju ASO koji sadrže GalNAc3-1 konjugat (vidite Primer 9) na 3' terminusu usmerenih na SRB-1
[0458] ISIS 655861 i 655862 koji sadrže GalNAc3-1 konjugat na 3' terminusu i ciljaju SRB-1 su testirani u studiji pojedinačne primene na sposobnost da inhibiraju SRB-1 kod miševa. Matično nekonjugovano jedinjenje, ISIS 353382, takođe je uključeno u studiju radi poređenja.
[0459] ASO su 5-10-5 MOE gapmeri, pri čemu region razmaka sadrži deset 2'-dezoksiribonukleozida, i svaki region krila sadrži pet 2'-MOE modifikovanih nukleozida. ASO su pripremljeni koristeći slične postupke onima koji su prethodno ilustrovani u Primeru 19, i opisani su u Tabeli 36 ispod.
Tabela 36
1 2
[0460] Indeksi: „e“ označava 2'-MOE modifikovani nukleozid; „d“ označava β-D-2'-deoksiribonukleozid; „s“ označava fosforotioatne internukleozidne veze (PS); „o“ označava fosfodiestarske internukleozidne veze (PO); i „o“ označava -O-P(=O)(OH)-. Superskript „m“ označava 5-metilcitozine. Struktura „GalNAc3-1“ je prikazana u Primeru 9.
Tretman
[0461] Šest nedelja stari mužjaci Balb/c miševa (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) supkutano su injektovani jednom sa dozom koja je u nastavku prikazana sa ISIS 353382, 655861, 655862 ili PBS tretiranom kontrolom. Svaka grupa za tretman se sastojala od 4 životinje. Pre tretmana kao i nakon poslednje doze, od svakog miša je uzeta krv i uzorci plazme su analizirani. Miševi su žrtvovani 72 sata nakon poslednje primene da bi se odredili nivoi SRB-1 iRNK u jetri koristeći PCR u realnom vremenu i RIBOGREEN® reagens za kvantifikovanje RNK (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR) ili u skladu sa standardnim protokolima. Nivoi SRB-1 iRNK se određuju u odnosu na ukupnu RNK (koristeći ribogreen), pre normalizacije za kontrolu tretiranu sa PBS-om. Rezultati u nastavku su dati kao prosečni procenat nivoa SRB-1 iRNK za svaku grupu za tretman, normalizovani za kontrolu tretiranu
1
sa PBS-om i označeni kao „% PBS“. ED50se meri koristeći slične postupke kao što je prethodno opisano i objavljeno u nastavku.
[0462] Kao što je ilustrovano u Tabeli 37, tretman sa antisens oligonukleotidima je smanjio nivoe SRB-1 iRNK na način zavisan od doze u poređenju sa kontrolom tretiranom sa PBS-om. Zaista, antisens oligonukleotidi koji sadrže GalNAc3-1 konjugat na 3' terminusu (ISIS 655861 i 655862) pokazali su značajno poboljšanje potentnosti u poređenju sa nekonjugovanim antisens oligonukleotidom (ISIS 353382). Nadalje, ISIS 655862 sa mešovitim PS/PO vezama pokazao je unapređenu potentnost u poređenju sa kompletnim PS (ISIS 655861).
Tabela 37
1 4
[0463] Nivoi transaminaze u jetri, alanin aminotransferaze (ALT) i aspartat aminotransferaze (AST) u serumu izmereni su u poređenju sa miševima kojima je injektovan fiziološki rastvor koristeći standardne protokole. Težina organa je takođe procenjena. Rezultati su pokazali da nisu uočeni povišeni nivoi transaminaze (Tabela 38) niti težine organa (podaci nisu prikazani) kod miševa tretiranih sa ASO u poređenju sa PBS kontrolom. Nadalje, ASO sa mešovitim PS/PO vezama (ISIS 655862) pokazali su slične nivoe transaminaze u poređenju sa kompletnim PS (ISIS 655861).
Tabela 38
1
1
Primer 45: Priprema PFP estra, jedinjenje 110a [0464]
1
�
[0465] Jedinjenje 4 (9,5g, 28,8 mmol) je tretirano sa jedinjenjem 103a ili 103b (38 mmol), pojedinačno, i sa TMSOTf (0,5 ekv.) i molekulskim sitima u dihlormetanu (200 ml), i mešano tokom 16 sati na sobnoj temperaturi. Tada, organski sloj je filtriran kroz celit, zatim ispran sa natrijum bikarbonatom, vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je zatim odvojen, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i redukovan pod sniženim pritiskom. Dobijeno ulje je prečišćeno putem hromatografije na silika gelu (2%-->10% metanol/dihlormetan) , dajući jedinjenja 104a i 104b sa prinosom >80%. LCMS i protonska NMR bile su konzistentne sa strukturom.
[0466] Jedinjenja 104a i 104b tretirana su u istim uslovima kao za jedinjenja 100a-d (Primer 47) radi dobijanja jedinjenja 105a i 105b sa prinosom >90%. LCMS i protonska NMR bile su konzistentne sa strukturom.
[0467] Jedinjenja 105a i 105b su tretirana ,pojedinačno, sa jedinjenjem 90 u istim uslovima kao za jedinjenja 901a-d radi dobijanja jedinjenja 106a (80%) i 106b (20%). LCMS i protonska NMR bile su konzistentne sa strukturom.
1
[0468] Jedinjenja 106a i 106b tretirana su u istim uslovima kao za jedinjenja 96a-d (Primer 47) radi dobijanja 107a (60%) i 107b (20%). LCMS i protonska NMR bile su konzistentne sa strukturom.
[0469] Jedinjenja 107a i 107b tretirana su u istim uslovima kao za jedinjenja 97a-d (Primer 47) radi dobijanja jedinjenja 108a i 108b sa prinosom od 40-60%. LCMS i protonska NMR bile su konzistentne sa strukturom.
[0470] Jedinjenja 108a (60%) i 108b (40%) tretirana su u istim uslovima kao za jedinjenja 100a-d (Primer 47) radi dobijanja jedinjenja 109a i 109b sa prinosom >80%. LCMS i protonska NMR bile su konzistentne sa strukturom.
[0471] Jedinjenje 109a tretirano je u istim uslovima kao za jedinjenja 101a-d (Primer 47) radi dobijanja jedinjenja 110a sa prinosom od 30-60%. LCMS i protonska NMR bile su konzistentne sa strukturom. Alternativno, jedinjenje 110b može da se pripremi na sličan način počevši od jedinjenja 109b.
Primer 48: Priprema oligonukleotida 119 koji sadrži GalNAc3-7
[0472]
14
[0473] Jedinjenje 112 je sintetisano prateći proceduru opisanu u literaturi (J. Med. Chem.
2004, 47, 5798-5808).
[0474] Jedinjenje 112 (5 g, 8,6 mmol) je rastvoreno u 1:1 metanolu/etil acetatu (22 ml/22 ml). Dodat je paladijum hidroksid na ugljeniku (0,5 g). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika tokom 12 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz sloj celita i sloj je ispran sa 1:1 metanolom/etil acetatom. Filtrat i ispirci su kombinovani i koncentrovani do suva radi dobijanja jedinjenja 105a (kvantitativno). Struktura je potvrđena pomoću LCMS.
[0475] Jedinjenje 113 (1,25 g, 2,7 mmol), HBTU (3,2 g, 8,4 mmol) i DIEA (2,8 ml, 16,2 mmol) rastvoreni su u anhidrovanom DMF-u (17 ml) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 min. U to je dodat rastvor jedinjenja 105a (3,77 g, 8,4 mmol) u anhidrovanom DMF-u (20 ml). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja ulja. Ostatak je rastvoren u CH2Cl2(100 ml) i ispran sa vodenim zasićenim rastvorom NaHCO3(100 ml) i zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml). Organska faza je razdvojena, osušena (Na2SO4), filtrirana i uparena. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni silika gela i eluiran sa 10 do 20% MeOH u dihlormetanu da bi se dobilo jedinjenje 114 (1,45 g, 30%). Struktura je potvrđena pomoću LCMS i<1>H NMR analize.
[0476] Jedinjenje 114 (1,43 g, 0,8 mmol) je rastvoreno u 1:1 metanolu/etil acetatu (4 ml/4 ml). Dodat je paladijum na ugljeniku (vlažan, 0,14 g). Reakciona smeša je produvana vodonikom i mešana na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika tokom 12 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz sloj celita. Sloj celita je ispran metanolom/etil acetatom (1:1). Filtrat i ispirci su kombinovani i upareni pod sniženim pritiskom radi dobijanja jedinjenja 115 (kvantitativno). Struktura je potvrđena pomoću LCMS i<1>H NMR analize.
[0477] Jedinjenje 83a (0,17 g, 0,75 mmol), HBTU (0,31 g, 0,83 mmol) i DIEA (0,26 ml, 1,5 mmol) rastvoreni su u anhidrovanom DMF-u (5 ml) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 min. U to je dodat rastvor jedinjenja 115 (1,22 g, 0,75 mmol) u anhidrovanom DMF-u i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je rastvoren u CH2Cl2. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli i osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i filtriran. Organski sloj je koncentrovan do suva i dobijeni ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni silika gela i eluiran sa 3 do 15% MeOH u dihlormetanu da bi se dobilo jedinjenje 116 (0,84 g, 61%). Struktura je potvrđena pomoću LC MS i<1>H NMR analize.
[0478] Jedinjenje 116 (0,74 g, 0,4 mmol) je rastvoreno u 1:1 metanolu/etil acetatu (5 ml/5 ml). Dodat je paladijum na ugljeniku (vlažan, 0,074 g). Reakciona smeša je produvana vodonikom i mešana na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika tokom 12 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz sloj celita. Sloj celita je ispran metanolom/etil acetatom (1:1). Filtrat i ispirci su kombinovani i upareni pod sniženim pritiskom radi dobijanja jedinjenja 117 (0,73 g, 98%). Struktura je potvrđena pomoću LCMS i<1>H NMR analize.
[0479] Jedinjenje 117 (0,63 g, 0,36 mmol) je rastvoreno u anhidrovanom DMF-u (3 ml). U taj rastvor su dodati N,N-diizopropiletilamin (70 µl, 0,4 mmol) i pentafluorfenil trifluoracetat (72 µl, 0,42 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 h i izlivena u zasićeni vodeni rastvor NaHCO3. Smeša je ekstrahovana dihlormetanom, isprana zasićenim vodenim rastvorom soli i osušena iznad anhidrovanog Na2SO4. Rastvor dihlormetana je koncentrovan do suva i prečišćen pomoću hromatografije na koloni silika gela i eluiran sa 5
14
do 10% MeOH u dihlormetanu da bi se dobilo jedinjenje 118 (0,51 g, 79%). Struktura je potvrđena pomoću LCMS i<1>H i<1>H i<19>F NMR.
[0480] Oligomerno jedinjenje 119 koje sadrži GalNAc3-7 konjugatnu grupu je pripremljeno koristeći opšte procedure prikazane u Primeru 46. GalNAc3deo klastera konjugatne grupe GalNAc3-7 (GalNAc3-7a) može da se kombinuje sa bilo kojim ostatkom koji može da se otcepi radi dobijanja različitih konjugatnih grupa. U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi je -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-.
[0481] Struktura GalNAc3-7 (GalNAc3-7a-CM-) je prikazana ispod:
Primer 51: Priprema oligonukleotida 155 koji sadrži GalNAc3-6
[0482]
[0483] Jedinjenje 146 je sintetisano kao što je opisano u literaturi (Analytical Biochemistry 1995, 229, 54-60).
[0484] Jedinjenje 4 (15 g, 45,55 mmol) i jedinjenje 35b (14,3 grama, 57 mmol) su rastvorena u CH2Cl2(200 ml). Aktivirana molekulska sita (4 Å. 2 g, praškasta) su dodata i reakcija je ostavljena da se meša tokom 30 minuta u atmosferi azota. Dodat je TMS-OTf (4,1 ml, 22,77 mmol) i reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Nakon završetka, reakcija je ugašena pomoću izlivanja u rastvor zasićenog vodenog NaHCO3(500 ml) i mrvljenog leda (∼150 g). Organski sloj je odvojen, ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan do narandžastog ulja pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je prečišćena pomoću hromatografije na koloni silika gela i eluirana sa 2-10% MeOH u CH2Cl2da bi se dobilo jedinjenje 112 (16,53 g, 63%). LCMS i<1>H NMR su bili konzistentni sa očekivanim jedinjenjem.
14
[0485] Jedinjenje 112 (4,27 g, 7,35 mmol) je rastvoreno u 1:1 MeOH/EtOAc (40 ml). Reakciona smeša je produvana uduvavanjem mlaza azota kroz rastvor tokom 15 minuta. Perlmanov katalizator (paladijum hidroksid na ugljeniku, 400 mg) je dodat i vodonični gas je produvan kroz rastvor tokom 30 minuta. Po završetku (TLC 10% MeOH u CH2Cl2, i LCMS), katalizator je uklonjen filtracijom kroz sloj celita. Filtrat je koncentrovan pomoću rotarnog uparavanja i nakratko osušen pod visokim vakuumom radi dobijanja jedinjenja 105a (3,28 g). LCMS i 1H NMR su bile konzistentne sa željenim proizvodom.
[0486] Jedinjenje 147 (2,31 g, 11 mmol) je rastvoreno u anhidrovanom DMF-u (100 ml). Dodat je N,N-diizopropiletilamin (DIEA, 3,9 ml, 22 mmol), a zatim HBTU (4 g, 10,5 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se meša ∼15 minuta u atmosferi azota. U to je dodat rastvor jedinjenja 105a (3,3 g, 7,4 mmol) u suvom DMF-u i mešan tokom 2 h u atmosferi azota. Reakcija je razblažena dodatkom EtOAc i isprana zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i zasićenim rastvorom soli. Organska faza je razdvojena, osušena (MgSO4), filtrirana i koncentrovana do narandžastog sirupa. Sirova supstanca je prečišćena pomoću hromatografije na koloni 2-5% MeOH u CH2Cl2da bi se dobilo jedinjenje 148 (3,44 g, 73%). LCMS i<1>H NMR su bili konzistentni sa očekivanim proizvodom.
[0487] Jedinjenje 148 (3,3 g, 5,2 mmol) je rastvoreno u 1:1 MeOH/EtOAc (75 ml). Reakciona smeša je produvana uduvavanjem mlaza azota kroz rastvor tokom 15 minuta. Dodat je Perlmanov katalizator (paladijum hidroksid na ugljeniku) (350 mg). Vodonični gas je produvavan kroz rastvor tokom 30 minuta. Po završetku (TLC 10% MeOH u DCM, i LCMS), katalizator je uklonjen filtracijom kroz sloj celita. Filtrat je koncentrovan pomoću rotarnog uparavanja i nakratko osušen pod visokim vakuumom radi dobijanja jedinjenja 149 (2,6 g). LCMS je konzistentna sa željenim proizvodom. Ostatak je rastvoren u suvom DMF-u (10 ml) i smesta korišćen u sledećem koraku.
14
[0488] Jedinjenje 146 (0,68 g, 1,73 mmol) je rastvoreno u suvom DMF-u (20 ml). U to su dodati DIEA (450 µl, 2,6 mmol, 1,5 ekv.) i HBTU (1,96 g, 0,5,2 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se meša tokom 15 minuta na sobnoj temperaturi u atmosferi azota. Dodat je rastvor jedinjenja 149 (2,6 g) u anhidrovanom DMF-u (10 ml). pH reakcije je podešen na pH = 9-10 putem dodavanja DIEA (ako je to neophodno). Reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi u atmosferi azota tokom 2 h. Po završetku, reakcija je razblažena pomoću EtOAc (100 ml) i isprana vodenim zasićenim NaHCO3, zatim zasićenim vodenim rastvorom soli. Organska faza je odvojena, osušena iznad MGSO4, filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni silika gela i eluiran sa 2-10% MeOH u CH2Cl2da bi se dobilo jedinjenje 150 (0,62 g, 20%). LCMS i<1>H NMR su bili konzistentni sa željenim proizvodom.
[0489] Jedinjenje 150 (0,62 g) je rastvoreno u 1:1 MeOH/EtOAc (5 l). Reakciona smeša je produvana uduvavanjem mlaza azota kroz rastvor tokom 15 minuta. Dodat je Perlmanov katalizator (paladijum hidroksid na ugljeniku) (60 mg). Vodonični gas je produvavan kroz rastvor tokom 30 minuta. Po završetku (TLC 10% MeOH u DCM, i LCMS), katalizator je uklonjen filtracijom (teflonski filter za vrh šprica, 0,45 µm). Filtrat je koncentrovan pomoću
14
rotarnog uparavanja i nakratko osušen pod visokim vakuumom radi dobijanja jedinjenja 151 (0,57 g). LCMS je konzistentna sa željenim proizvodom. Proizvod je rastvoren u 4 ml suvog DMF-a i smesta korišćen u sledećem koraku.
[0490] Jedinjenje 83a (0,11 g, 0,33 mmol) je rastvoreno u anhidrovanom DMF-u (5 ml) i N,N-diizopropiletilamin (75 µl, 1 mmol) i PFP-TFA (90 µl, 0,76 mmol) su dodati. Reakciona smeša je poprimila ljubičasto-crvenu boju nakon kontakta, i postepeno je postala narandžasta tokom sledećih 30 minuta. Napredovanje reakcije je praćeno putem TLC i LCMS. Po završetku (nastanak PFP estra), dodat je rastvor jedinjenja 151 (0,57 g, 0,33 mmol) u DMF-u. pH reakcije je podešen na pH = 9-10 putem dodavanja N,N-diizopropiletilamina (ako je to neophodno). Reakciona smeša je mešana u atmosferi azota tokom ∼ 30 min. Po završetku, veći deo rastvarača je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa CH2Cl2i ispran sa vodenim zasićenim rastvorom NaHCO3, zatim zasićenim vodenim rastvorom soli.
14
Organska faza je razdvojena, osušena iznad MgSO4, filtrirana i koncentrovana do narandžastog sirupa. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni silika gela (2-10% MeOH u CH2Cl2) da bi se dobilo jedinjenje 152 (0,35 g, 55%). LCMS i<1>H NMR su bili konzistentni sa željenim proizvodom.
[0491] Jedinjenje 152 (0,35 g, 0,182 mmol) je rastvoreno u 1:1 MeOH/EtOAc (10 ml). Reakciona smeša je produvana uduvavanjem mlaza azota kroz rastvor tokom 15 minuta. Dodat je Perlmanov katalizator (paladijum hidroksid na ugljeniku) (35 mg). Vodonični gas je produvavan kroz rastvor tokom 30 minuta. Po završetku (TLC 10% MeOH u DCM, i LCMS), katalizator je uklonjen filtracijom (teflonski filter za vrh šprica, 0,45 µm). Filtrat je koncentrovan pomoću rotarnog uparavanja i nakratko osušen pod visokim vakuumom radi dobijanja jedinjenja 153 (0,33 g, kvantitativno). LCMS je konzistentna sa željenim proizvodom.
[0492] Jedinjenje 153 (0,33 g, 0,18 mmol) je rastvoreno u anhidrovanom DMF-u (5 ml) uz mešanje u atmosferi azota. U to su dodati N,N-diizopropiletilamin (65 µl, 0,37 mmol) i PFP-TFA (35 µl, 0,28 mmol). Reakciona smeša je mešana u atmosferi azota tokom ∼ 30 min. Reakciona smeša je nakon kontakta poprimila ljubičasto-crvenu boju i postepeno prešla u narandžastu. pH reakcione smeše je održavan na pH = 9-10 dodavanjem još N,-diizopropiletilamina. Napredovanje reakcije je praćeno putem TLC i LCMS. Po završetku, veći deo rastvarača je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa CH2Cl2(50 ml) i ispran sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, zatim zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan do narandžastog sirupa. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni i eluiran sa 2-10% MeOH u CH2Cl2da bi se dobilo jedinjenje 154 (0,29 g, 79%). LCMS i<1>H NMR su bili konzistentni sa željenim proizvodom.
14
[0493] Oligomerno jedinjenje 155 koje sadrži GalNAc3-6 konjugatnu grupu je pripremljeno koristeći opšte procedure prikazane u Primeru 46. GalNAc3deo klastera konjugatne grupe GalNAc3-6 (GalNAc3-6a) može da se kombinuje sa bilo kojim ostatkom koji može da se otcepi radi dobijanja različitih konjugatnih grupa. U određenim otelotvorenjima, ostatak koji može da se otcepi je -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-.
[0494] Struktura GalNAc3-6 (GalNAc3-6a-CM-) je prikazana ispod:
Primer 56: Studija zavisna od doze oligonukleotida koji sadrže 3' ili 5'-konjugatnu grupu (poređenje GalNAc3-1, 2, 3, 5, 6, 7 i 10) usmerenih na SRB-1 in vivo
[0495] U nastavku navedeni oligonukleotidi su testirani u studiji zavisnoj od doze na antisens inhibiranje SRB-1 kod miševa. Nekonjugovani ISIS 353382 je uključen kao standard. Svaka od različitih GalNAc3konjugatnih grupa je povezana za 5' terminus odgovarajućeg oligonukleotida pomoću fosfodiestarski vezanog 2'-deoksiadenozinskog nukleozida (ostatak koji može da se otcepi) osim ISIS 655861 koji ima GalNAc3konjugatnu grupu povezanu za 3' terminus.
Tabela 42
1
11
12
[0496] Velika slova označavaju nukleobazu za svaki nukleozid, a<m>C označava 5-metil citozin. Indeksi: „e“ označava 2'-MOE modifikovani nukleozid; „d“ označava P-D-2'-deoksiribonukleozid; „s“ označava fosforotioatnu internukleozidnu vezu (PS); „o“ označava fosfodiestarsku internukleozidnu vezu (PO); i „o“ označava -O-P(=O)(OH)-. Konjugatne grupe su podebljane.
[0497] Struktura GalNAc3-1aje prethodno prikazana u Primeru 9. Struktura GalNAc3-2aje prethodno prikazana u Primeru 37. Struktura GalNAc3-3aje prethodno prikazana u Primeru 39. Struktura GalNAc3-5aje prethodno prikazana u Primeru 49. Struktura GalNAc3-6aje prethodno prikazana u Primeru 51. Struktura GalNAc3-7aje prethodno prikazana u Primeru 48. Struktura GalNAc3-10aje prethodno prikazana u Primeru 46.
Tretman
[0498] Šest nedelja stari mužjaci Balb/c miševa (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) supkutano su injektovani jednom sa dozom koja je u nastavku prikazana sa ISIS 353382, 655861, 664507, 661161, 666224, 666961, 666981, 666881 ili fiziološkim rastvorom. Svaka grupa za tretman se sastojala od 4 životinje. Miševi su žrtvovani 72 sata nakon poslednje primene da bi se odredili nivoi SRB-1 iRNK u jetri koristeći PCR u realnom vremenu i RIBOGREEN® reagens za kvantifikovanje RNK (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR) ili u skladu sa standardnim protokolima. Rezultati u nastavku su dati kao prosečni procenat nivoa SRB-1 iRNK za svaku grupu za tretman, normalizovani za kontrolu sa fiziološkim rastvorom.
1
[0499] Kao što je ilustrovano u Tabeli 43, tretman sa antisens oligonukleotidima je smanjio nivoe SRB-1 iRNK na način zavisan od doze. Zaista, konjugovani antisens oligonukleotidi su pokazali značajno poboljšanje u potentnosti u poređenju sa nekonjugovanim antisens oligonukleotidom (ISIS 353382). 5' konjugovani antisens oligonukleotidi su pokazali blago povećanje u potentnosti u poređenju sa 3' konjugovanim antisens oligonukleotidom.
Tabela 43
1 4
1
[0500] Nivoi transaminaze u jetri, alanin aminotransferaze (ALT) i aspartat aminotransferaze (AST) u serumu izmereni su u poređenju sa miševima kojima je injektovan fiziološki rastvor koristeći standardne protokole. Ukupni bilirubin i BUN su takođe procenjeni. Promena u telesnoj težini je procenjena bez značajne promene u odnosu na grupu sa fiziološkim rastvorom. Vrednosti za ALT, AST, ukupni bilirubin i BUN su prikazane u Tabeli 44 ispod.
Tabela 44
1
1
1
Primer 80: Antisens inhibicija in vivo pomoću oligonukleotida usmerenih na alfa-1 antitripsin (A1AT) koji sadrže GalNAc3konjugat
[0501] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 72 ispod su testirani u studiji zavisnoj od doze na antisens inhibiranje A1AT kod miševa.
Tabela 72
1
1 Struktura GalNAc3-1aje prethodno prikazana u Primeru 9, GalNAc3-3aje prikazan u Primeru 39, GalNAc3-7aje prikazan u Primeru 48, GalNAc3-10aje prikazan u Primeru 46 i GalNAc3-13aje prikazan u Primeru 62.
Tretman
[0502] Šest nedelja stari mužjaci C57BL/6 miševa (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) su supkutano injektovani jednom nedeljno pri dozi koja je u nastavku prikazana, sa ukupno tri doze, oligonukleotidom koji je naveden u Tabeli 72 ili PBS-om. Svaka grupa za tretman se sastojala od 4 životinje. Miševi su žrtvovani 72 sata nakon poslednje primene. Nivoi A1AT iRNK u jetri su utvrđeni koristeći PCR u realnom vremenu i RIBOGREEN® reagens za RNK kvantifikaciju (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR) prema standardnim protokolima. Nivoi A1AT proteina u plazmi određeni su koristeći mišji alfa 1-antitripsin ELISA (kataloški br. 41-A1AMS-E01, Alpco, Salem, NH). Rezultati u nastavku su dati kao prosečni procenat nivoa A1AT iRNK jetre i nivoa proteina u plazmi za svaku lečenu grupu, normalizovani na kontrolu sa fiziološkim rastvorom.
[0503] Kao što je ilustrovano u Tabeli 73, tretman antisens oligonukleotidima je smanjio nivoe A1AT iRNK jetre i nivoa A1AT proteina u plazmi na način zavisan od doze. Oligonukleotidi koji sadrže GalNAc bili su značajno potentniji od matičnih (ISIS 476366).
Tabela 73
1 1
12
[0504] Nivoi transaminaze i BUN u plazmi jetre su izmereni u trenutku žrtvovanja koristeći standardne protokole. Telesne težine i težine organa su takođe merene. Rezultati su prikazani u Tabeli 74 ispod. Telesna težina je prikazana kao % u odnosu na početnu vrednost. Težina organa je prikazana kao % telesne težine u poređenju sa kontrolnom grupom sa PBS-om.
1
Tabela 74
14
1
Primer 81: Trajanje delovanja in vivo oligonukleotida usmerenih na A1AT koji sadrže GalNAc3klaster. Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 72 su testirani u studiji sa pojedinačnim dozama na trajanje delovanja kod miševa.
Tretman
[0505] Šeste nedelja stari mužjaci C57BL/6 miševa su supkutano jednom injektovani sa oligonukleotidom navedenim u Tabeli 72 ili PBS-om. Svaka grupa za tretman se sastojala od 4 životinje. Krv je vađena dan pre doziranja kako bi se odredila početna vrednost i 5, 12, 19 i 25 dana nakon doze. Nivoi A1AT proteina u plazmi su izmereni pomoću ELISA (vidite Primer 80). Rezultati u nastavku su dati kao prosečni procenat nivoa A1AT proteina u plazmi za svaku grupu za tretman, normalizovani na početne nivoe. Rezultati pokazuju da su oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugat potentniji i imaju duže trajanje dejstva nego matični kojima nedostaje GalNAc konjugat (ISIS 476366). Nadalje, oligonukleotidi koji sadrže 5'-GalNAc konjugat (ISIS 678381, 678382, 678383 i 678384) su uopšteno još potentniji sa još dužim trajanje dejstva nego oligonukleotidi koji sadrže 3'-GalNAc konjugat (ISIS 656326).
Tabela 75
1
1
1
Primer 82: Antisens inhibicija in vitro pomoću oligonukleotida usmerenih na SRB-1 koji sadrže GalNAc3konjugat
[0506] Primarni hepatociti jetre miševa su zasejani na ploče sa 96 bunarčića sa 15.000 ćelija/bunarčiću 2 sata pre tretmana. Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 76 su dodati sa 2, 10, 50 ili 250 nM u Vilijamsovom E medijumu, i ćelije su inkubirane preko noći na 37°C u 5% CO2. Ćelije su lizirane 16 sati nakon dodavanja oligonukleotida, i ukupna RNK je prečišćena koristeći RNease 3000 BioRobot (Qiagen). Nivoi SRB-1 iRNK su utvrđeni koristeći PCR u realnom vremenu i RIBOGREEN® reagens za RNK kvantifikaciju (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR) prema standardnim protokolima. IC50vrednosti su utvrđene koristeći softver Prism 4 (GraphPad). Rezultati pokazuju da su konjugati koji sadrže brojne različite GalNAc konjugatne grupe i brojne različite ostatke koji mogu da se otcepe značajno potentniji u in vitro eksperimentu slobodnog unosa od matičnih oligonukleotida kojima nedostaje GalNAc konjugatna grupa (ISIS 353382 i 666841).
Tabela 76
1
1
11
12
1
14
1
1 Struktura GalNAc3-1aje prethodno prikazana u Primeru 9, GalNAc3-3aje prikazana u Primeru 39, GalNAc3-5aje prikazana u Primeru 49, GalNAc3-6aje prikazana u Primeru 51, GalNAc3-7ae prikazana u Primeru 48, GalNAc3-8ae prikazana u Primeru 47, GalNAc3-9ae prikazana u Primeru 52, GalNAc3-10ae prikazana u Primeru 46, GalNAc3-12ae prikazana u Primeru 61, GalNAc3-13a e prikazana u Primeru 62, GalNAc3-14ae prikazana u Primeru 63, GalNAc3-15ae prikazana u Primeru 64, GalNAc3-17ae prikazana u Primeru 68, GalNAc3-18ae prikazana u Primeru 69, GalNAc3-19ae prikazana u Primeru 70, GalNAc3-20ae prikazana u Primeru 71, i GalNAc3-23ae prikazana u Primeru 76.
Primer 83: Antisens inhibicija in vivo pomoću oligonukleotida usmerenih na Faktor XI koji sadrže GalNAc3klaster
[0507] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 77 ispod su testirani u studiji zavisnoj od doze na antisens inhibiranje Faktora XI kod miševa.
Tabela 77
1
1
Struktura GalNAc3-1aje prethodno prikazana u Primeru 9, GalNAc3-3aje prikazan u Primeru 39, GalNAc3-7aje prikazan u Primeru 48, GalNAc3-10aje prikazan u Primeru 46 i GalNAc3-13aje prikazan u Primeru 62.
Tretman
[0508] Šest do osam nedelja stari miševi su supkutano injektovani jednom nedeljno pri dozi koja je u nastavku prikazana, sa ukupno tri doze, oligonukleotidom koji je naveden u nastavku ili PBS-om. Svaka grupa za tretman se sastojala od 4 životinje. Miševi su žrtvovani 72 sata nakon poslednje doze. Nivoi faktora XI u iRNK jetre su mereni koristeći PCR u realnom vremenu i normalizovani za ciklofilin u skladu sa standardnim protokolima. Transaminaze, BUN i bilirubin jetre su takođe izmereni. Rezultati u nastavku su dati kao prosečni procenat nivoa za svaku grupu za tretman, normalizovani za kontrolu sa PBS-om.
[0509] Kao što je ilustrovano u Tabeli 78, tretman sa antisens oligonukleotidima je smanjio nivoe faktora XI u iRNK jetre na način zavisan od doze. Rezultati pokazuju da su oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugat potentniji nego matični kojima nedostaje GalNAc konjugat (ISIS 404071). Nadalje, oligonukleotidi koji sadrže 5'-GalNAc konjugat (ISIS 663086, 678347, 678348 i 678349) su još potentniji nego oligonukleotidi koji sadrže 3'-GalNAc konjugat (ISIS 656173).
Tabela 78
1
1
Primer 84: Trajanje dejstva in vivo oligonukleotida usmerenih na Faktor XI koji sadrže GalNAc3konjugat
[0510] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 77 ispod su testirani u studiji sa pojedinačnom dozom na trajanje dejstva kod miševa.
Tretman
1 1
[0511] Šest do osam nedelja stari miševi su supkutano jednom injektovani sa oligonukleotidom navedenim u Tabeli 77 ili PBS-om. Svaka grupa za tretman se sastojala od 4 životinje. Uzeta je krv iz repa dan pre davanja doze da bi se odredila početna vrednost, kao i 3, 10. i 17. dana nakon doze. Nivoi proteina plazma faktora XI su izmereni ELISA testom koristeći faktor hvatanja XI i biotinilovana detekciona antitela dobijena od R & D Systems, Minneapolis, MN (kataloški br. AF2460, odnosno br. BAF2460) i OptEIA komplet reagenasa B (kataloški br. 550534, BD Biosciences, San Jose, CA). Rezultati u nastavku su dati kao prosečni procenat nivoa Faktora XI proteina u plazmi za svaku grupu za tretman, normalizovan na početne nivoe. Rezultati pokazuju da su oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugat potentniji sa dužim trajanjem dejstva nego matični kojima nedostaje GalNAc konjugat (ISIS 404071). Nadalje, oligonukleotidi koji sadrže 5'-GalNAc konjugat (ISIS 663086, 678347, 678348 i 678349) još su potentniji sa još dužim trajanjem dejstva nego oligonukleotidi koji sadrže 3'-GalNAc konjugat (ISIS 656173).
Tabela 79
1 2
1
Primer 89: Antisens inhibicija in vivo pomoću oligonukleotida usmerenih na apolipoprotein A (Apo(a)) koji sadrže konjugat GalNAc3
[0512] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 92 ispod su testirani u studiji zavisnoj od doze inhibiranja Apo(a) kod transgenih miševa.
Tabela 92
1 4
Struktura GalNAc3-7aje prikazana u Primeru 48.
Tretman
[0513] Šest nedelja stare ženke C57BL/6 miševa (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) supkutano su injektovane jednom nedeljno pri dozi koja je u nastavku prikazana, sa ukupno šest doza, oligonukleotidom koji je naveden u Tabeli 92 ili PBS-om. Svaka grupa za tretman se sastojala od 3-4 životinje. Vađenje krvi iz repa je obavljeno dan pre prve doze i svake nedelje nakon svake doze, da se odrede nivoi proteina Apo(a) u plazmi. Miševi su žrtvovani dva dana nakon poslednje primene. Nivoi Apo(a) iRNK u jetri su utvrđeni koristeći PCR u realnom vremenu i RIBOGREEN® reagens za kvantifikaciju RNK (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR) prema standardnim protokolima. Nivoi Apo(a) proteina u plazmi su utvrđeni koristeći ELISA, i utvrđeni su nivoi transaminaze u jetri. Rezultati za iRNK i protein u plazmi u Tabeli 93 su dati kao prosečni procenat grupe za tretman u odnosu na grupu tretiranu PBS-om. Nivoi proteina u plazmi su dalje normalizovani na početnu vrednost (BL) za PBS grupu. Prosečni apsolutni nivoi transaminaze i telesne težine (% u odnosu na prosečne početne vrednosti) objavljeni su u Tabeli 94.
[0514] Kao što je ilustrovano u Tabeli 93, tretman oligonukleotidima je smanjio nivoe Apo(a) iRNK jetre i proteina u plazmi na način zavisan od doze. Nadalje, oligonukleotid koji sadrži GalNAc konjugat bio je značajno potentniji sa dužim trajanjem dejstva nego matični oligonukleotid koji nema konjugat GalNAc. Kao što je ilustrovano u Tabeli 94, oligonukleotidi nisu uticali na nivoe transaminaze i telesnu težinu, što ukazuje na to da se oligonukleotidi dobro podnose.
1
Tabela 93
Tabela 94
1
Primer 93: Antisens inhibicija in vivo pomoću oligonukleotida usmerenih na SRB-1 koji sadrže mešavinu krila i 5'-GalNAc3konjugat
[0515] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 100 su testirani u studiji zavisnoj od doze na antisens inhibiranje SRB-1 kod miševa.
Tabela 100
1
Struktura GalNAc3-3aje prethodno prikazana u Primeru 39, a struktura GalNAc3-7a je prethodno prikazana u Primeru 48. Indeksi: „e“ označava 2'-MOE modifikovani nukleozid; „d“ označava β-D-2'-dezoksiribonukleozid; „k“ označava 6'-(S)-CH3biciklični nukleozid (cEt); „s“ označava fosforotioatne internukleozidne veze (PS); „o“ označava fosfodiestarske internukleozidne veze (PO). Superskript „m“ označava 5-metilcitozine.
1
Tretman
[0516] Šest do osam nedelja stari C57BL/6 miševi (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) jednom su supkutano injektovani dozom koja je u nastavku prikazana oligonukleotidom koji je naveden u Tabeli 100 ili fiziološkim rastvorom. Svaka grupa za tretman se sastojala od 4 životinje. Miševi su žrtvovani 72 sata nakon poslednje primene. Nivoi SRB-1 iRNK u jetri su izmereni koristeći PCR u realnom vremenu. Nivoi SRB-1 iRNK su normalnizovani za ciklofilinske nivoe iRNK u skladu sa standardnim protokolom. Rezultati su dati kao prosečni procenat nivoa SRB-1 iRNK za svaku grupu za tretman u odnosu na kontrolnu grupu sa fiziološkim rastvorom. Kao što je ilustrovano u Tabeli 101, tretman antisens oligonukleotidima je smanjio nivoe SRB-1 iRNK na način zavisan od doze, i gapmer oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugat i imaju krila koja su u potpunosti cEt ili mešane modifikacije šećera su bili znatno potentniji od matičnog oligonukleotida bez konjugata i koji sadrži u potpunosti cEt modifikovana krila.
[0517] Telesne težine, transaminaze jetre, ukupni bilirubin i BUN su takođe mereni, i prosečne vrednosti svake grupe za tretman su prikazane u Tabeli 101. Telesna težina je prikazana kao prosečni procenat telesne težine u odnosu na početnu telesnu težinu (% BL) izmerenu neposredno pre doze oligonukleotida.
Tabela 101
1
1
Primer 95: Antisens inhibicija in vivo pomoću oligonukleotida usmerenih na SRB-1 koji sadrže biciklične nukleozide i konjugat 5'-GalNAc3
[0518] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 104 su testirani na antisens inhibiciju SRB-1 kod miševa u studiji zavisnoj od doze.
Tabela 104
1 1
[0519] Indeks „g“ označava fluor-HNA nukleozid, indeks „1“ označava zaključani nukleozid koji sadrži 2'-O-CH2-4' most. Vidite legendu za tabelu iz Primera 74 za ostale skraćenice. Struktura GalNAc3-1aje prethodno prikazana u Primeru 9, struktura GalNAc3-3aje prethodno prikazana u Primeru 39, a struktura GalNAc3-7a je prethodno prikazana u Primeru 48.
Tretman
1 2
[0520] Studija je obavljena koristeći protokol opisan u Primeru 93. Rezultati su prikazani u Tabeli 105 u nastavku, i pokazuju da su oligonukleotidi koji sadrže konjugat GalNAc i različite biciklične nukleozidne modifikacije bili znatno potentniji od matičnog oligonukleotida bez konjugata koji sadrži biciklične nukleozidne modifikacije. Nadalje, oligonukleotid koji sadrži konjugat GalNAc i fluor-HNA modifikacije bio je znatno potentniji od matičnog bez konjugata koji sadrži fluor-HNA modifikacije. Rezultati merenja telesne težine, transaminaza jetre, ukupnog bilirubina i BUN pokazuju da se jedinjenja dobro podnose.
Tabela 105
1
14
Primer 96: Vezivanje proteina plazme od strane antisens oligonukleotida koji sadrže GalNAc3konjugovanu grupu
[0521] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 70 usmereni na ApoC-III i oligonukleotidi u Tabeli 106 usmereni na Apo(a) su testirani u testu ultrafiltracije kako bi se procenilo vezivanje proteina plazme.
Tabela 106
1
Vidite primer 74 za legendu za tabelu. Struktura GalNAc3-7a je prethodno prikazana u Primeru 48.
[0522] Ultrafree-MC jedinice za ultrafiltraciju (30.000 NMWL, slabo vezujuća regenerisana celulozna membrana, Millipore, Bedford, MA) kondicionirane su sa 300 µl 0,5% Tween 80 i centrifugirane na 2000 g tokom 10 minuta, zatim sa 300 µl rastvora 300 µg/ml kontrolnog oligonukleotida u H2O i centrifugirane na 2000 g tokom 16 minuta. Kako bi se procenilo nespecifično vezivanje za filtere svakog ispitivanog oligonukleotida iz Tabela 70 i 106 koji će se koristiti u studijama, 300 µl 250 ng/ml rastvora oligonukleotida u H2O sa pH 7,4 stavljeno je u prethodno pripremljene filtere i centrifugirano na 2000 g tokom 16 minuta. Nefiltrirani i filtrirani uzorci su analizirani pomoću ELISA testa kako bi se odredile koncentracije oligonukleotida. Tri replikata su korišćena za dobijanje prosečne koncentracije za svaki uzorak. Prosečna koncentracija filtriranog uzorka u odnosu na nefiltrirani uzorak korišćena je da se odredi procenat oligonukleotida koji se izoluje kroz filter u odsustvu plazme (% izolovanog).
[0523] Zamrznuti uzorci pune plazme sakupljeni u K3-EDTA od normalnih ljudskih volontera koji nisu uzimali lek, cinomolgus majmuna i CD-1 miševa, kupljeni su od kompanije Bioreclamation LLC (Westbury, NY). Oligonukleotidi za testiranje su dodati u alikvotima od 1,2 ml plazme sa dve koncentracije (5 i 150 µg/ml). Alikvot (300 µl) svakog
1
spajkovanog uzorka plazme stavljen je u kondicioniranu filter jedinicu i inkubiran na 37°C tokom 30 minuta, i odmah centrifugiran na 2000 g tokom 16 minuta. Alikvoti filtriranih i nefiltriranih spajkovanih uzoraka plazme su analizirani ELISA testom da se odredi koncentracija oligonukleotida u svakom uzorku. Tri replikata po koncentraciji su korišćena za određivanje prosečnog procenta vezanog i nevezanog oligonukleotida u svakom uzorku. Prosečna koncentracija filtriranog uzorka u odnosu na koncentraciju nefiltriranog uzorka korišćena je da se odredi procenat oligonukleotida u plazmi koji nije vezan za proteine plazme (% nevezanog). Konačne vrednosti nevezanog oligonukleotida su korigovane za nespecifično vezivanje deljenjem % nevezanog sa % izolovanog za svaki oligonukleotid. Konačne vrednosti % vezanog oligonukleotida određene su oduzimanjem konačnih vrednosti % nevezanog od 100. Rezultati su prikazani u Tabeli 107 za dve koncentracije testiranog oligonukleotida (5 i 150 µg/ml) u plazmi svake vrste. Rezultati su pokazali da GalNAc konjugovane grupe nemaju značajan uticaj na vezivanje proteina plazme. Nadalje, i oligonukleotidi sa potpuno PS internukleozidnim vezama i mešovitim PO/PS vezama vezuju proteine plazme, a oni sa potpuno PS vezama donekle više vezuju proteine plazme od onih sa mešovitim PO/PS vezama.
Tabela 107
1
Primer 98: Procena proinflamatornog dejstva oligonukleotida koji sadrže konjugat GalNAc u hPMBC testu
[0524] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 109 su testirani na proinflamatorno dejstvo u hPMBC testu, kako je opisano u Primerima 23 i 24. (Vidite Tabele 30, 83, 95 i 108 za opis oligonukleotida.) ISIS 353512 ima veliku stopu odgovora i koristi se kao pozitivna kontrola, a ostali oligonukleotidi su opisani u Tabelama 83, 95 i 108. Rezultati prikazani u Tabeli 109 su dobijeni koristeći krv jednog dobrovoljnog davaoca. Rezultati pokazuju da su oligonukleotidi koji sadrže mešavinu PO/PS internukleozidnih veza proizveli znatno manje proinflamatorne odgovore u poređenju sa istim oligonukleotidima koji imaju potpuno PS veze. Nadalje, GalNAc konjugovana grupa nije imala značajno dejstvo u ovom testu.
Tabela 109
1
Primer 99: Afiniteti vezivanja oligonukleotida koji sadrže konjugat GalNAc prema asijaloglikoproteinskom receptoru
[0525] Afiniteti vezivanja oligonukleotida navedenih u Tabeli 110 (vidite Tabelu 76 za opise oligonukleotida) prema asijaloglikoproteinskom receptoru testirani su u kompetitivnom testu vezivanja receptora. Konkurentski ligand, α1-kiselinski glikoprotein (AGP), inkubiran je u 50 mM natrijum acetatnom puferu (pH 5) sa 1 U neuraminidaze-agaroze tokom 16 sati na 37°C, i > 90% desialilacije je potvrđeno pomoću testa sijalinske kiseline ili hromatografijom na molekulskim sitima (SEC). Jod monohlorid je korišćen za jodiranje AGP u skladu sa procedurom koju su dali Atsma i sar. (vidite J Lipid Res. 1991 Jan; 32(1):173-81.) U ovom postupku, desialilovani α1-kiselinski glikoprotein (de-AGP) je dodat u 10 mM jod hlorid, Na<125>I i 1 M glicin u 0,25 M NaOH. Nakon inkubacije tokom 10 minuta na sobnoj temperaturi,<125>I -obeleženi de-AGP je razdvojen od slobodnog<125>I tako što je smeša dva puta koncentrovana koristeći 3 KDMWCO spin kolonu. Protein je testiran na efikasnost obeležavanja i čistoću na HPLC sistemu opremljenom Agilent SEC-3 kolonom (7,8x300 mm) i β-RAM brojačem. Ispitivanja konkurentnosti koristeći<125>I -obeleženi de-AGP i različite ASO koji sadrže GalNAc klastere su obavljena na sledeći način. Humane HepG2 ćelije (10<6>ćelija/ml) su zasejane na ploče sa 6 bunarčića u 2 ml odgovarajućeg medijuma za rast. Korišćen je MEM medijum sa dodatkom 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS), 2 mM L-glutamina i 10mM HEPES. Ćelije su inkubirane 16-20 sati na 37°C sa 5%, odnosno 10%
1
CO2. Ćelije su isprane medijumima bez FBS pre eksperimenta. Ćelije su inkubirane tokom 30 min na 37°C sa 1ml konkurentske smeše koja sadrži odgovarajuće medijume za rast sa 2% FBS-a, 10<-8>M<125>I -obeleženi de-AGP i ASO koji sadrže GalNAc klaster u koncentracijama u opsegu od 10<-11>do 10<-5>M. Nespecifično vezivanje je utvrđeno u prisustvu 10<-2>M GalNAc šećera. Ćelije su dva puta isprane medijumom bez FBS-a da bi se uklonio nevezani<125>I obeleženi de-AGP i konkurentski GalNAc ASO. Ćelije su lizirane pomoću Qiagen RLT pufera koji sadrži 1% β-merkaptoetanola. Lizati su preneti u test epruvete sa okruglim dnom nakon kratkog 10-minutnog ciklusa smrzavanja/odmrzavanja i testirani na γ-brojaču. Nespecifično vezivanje je oduzeto pre deljenja broja<125>I proteina vrednošću najnižih prebrojanih koncentracija GalNAc-ASO. Krive inhibicije su postavljene prema jednačini kompetitivnog vezivanja za jedno mesto koristeći nelinearni regresioni algoritam da se izračunaju afiniteti vezivanja (KD).
[0526] Rezultati u Tabeli 110 su dobijeni iz eksperimenata obavljenih tokom pet različitih dana. Rezultati za oligonukleotide označene superskriptom „a“ su prosek eksperimenata obavljenih u dva različita dana. Rezultati pokazuju da su oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugovanu grupu na 5'-kraju vezivali asijaloglikoproteinski receptor na humanom HepG2 ćelijama sa 1,5 do 16-struko većim afinitetom od oligonukleotida koji sadrže GalNAc konjugovanu grupu na 3'-kraju.
Tabela 110
2
Primer 100: Antisens inhibicija in vivo putem oligonukleotida koji sadrže GalNAC konjugovanu grupu usmerenih na Apo(a) in vivo
[0527] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 111a ispod su testirani u studiji sa pojedinačnom dozom na trajanje dejstva kod miševa.
Tabela 111a
2 1
Struktura GalNAc3-7aje prikazana u Primeru 48.
Tretman
[0528] Ženke transgenih miševa koje eksprimiraju humani Apo(a) su dobijale supkutanu injekciju jednom nedeljno, sa ukupno 6 doza, gde su oligonukleotid i doza navedeni u Tabeli 111b, ili PBS. Svaka grupa za tretman se sastojala od 3 životinje. Krv je izvađena dan pre doziranja da bi se utvrdili početni nivoi Apo(a) proteina u plazmi i 72 sata, 1 nedelju i 2 nedelje nakon prve doze. Dodatno vađenje krvi će se obaviti 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja i 6 nedelja nakon prve doze. Nivoi Apo(a) proteina u plazmi su mereni koristeći ELISA. Rezultati u Tabeli 111b su dati kao prosečni procenat nivoa Apo(a) proteina u plazmi za svaku grupu za tretman, normalizovani za početne nivoe (% BL). Rezultati pokazuju da su oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugovanu grupu ispoljili potentno smanjenje ekspresije Apo(a). Ovo potentno dejstvo je uočeno za oligonukleotid koji sadrži potpuno PS internukleozidne veze i oligonukleotid koji sadrži mešavinu PO i PS veza.
Tabela 111b
2 2
Primer 101: Antisens inhibicija putem oligonukleotida koji sadrže GalNAc klaster povezan putem stabilnog ostatka
[0529] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 112 su testirani na inhibiciju ekspresije mišjeg APOC-III in vivo. C57B1/6 miševi su supkutano dobili jedni injekciju sa oligonukleotidom navedenim u Tabeli 112 ili PBS-om. Svaka grupa za tretman se sastojala od 4 životinje. Svaki miš tretiran sa ISIS 440670 primio je dozu od 2, 6, 20 ili 60 mg/kg. Svaki miš tretiran sa ISIS 680772 ili 696847 primio je dozu od 0,6, 2, 6, ili 20 mg/kg. GalNAc konjugovana grupa ISIS 696847 je povezana putem stabilnog ostatka, fosforotioatnom vezom umesto vezom koja sadrži lako raskidivi fosfodiestar. Životinje su žrtvovane 72 sata nakon doze. Nivoi APOC-III iRNK u jetri su izmereni koristeći PCR u realnom vremenu. Nivoi APOC-III iRNK su normalnizovani za ciklofilinske nivoe iRNK u skladu sa standardnim protokolom. Rezultati su dati u Tabeli 112 kao prosečni procenat nivoa APOC-III iRNK za svaku grupu za tretman u odnosu na kontrolnu grupu sa fiziološkim rastvorom. Rezultati pokazuju da su oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugovanu grupu znatno potentniji nego oligonukleotid kome nedostaje konjugovana grupa. Nadalje, oligonukleotid koji sadrži GalNAc konjugovanu grupu povezanu sa oligonukleotidom putem ostatka koji može da se
2
otcepi (ISIS 680772) bio je još potentniji nego oligonukleotid koji sadrži GalNAc konjugovanu grupu povezanu sa oligonukleotidom putem stabilnog ostatka (ISIS 696847).
Tabela 112
2 4
Struktura GalNAc3-7aje prikazana u Primeru 48.
Primer 108: Antisens inhibicija in vivo putem oligonukleotida koji sadrže GalNAC konjugovanu grupu usmerenih na Apo(a) in vivo
[0530] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 118 ispod su testirani u studiji sa pojedinačnom dozom kod miševa.
Tabela 118
2
Struktura GalNAc3-7aje prikazana u Primeru 48.
Tretman
[0531] Mužjaci transgenih miševa koji eksprimiraju humani Apo(a) su jednom supkutano dobili injekciju sa oligonukleotidom i dozom navedenom u Tabeli 119, ili sa PBS-om. Svaka grupa za tretman se sastojala od 4 životinje. Krv je izvađena dan pre doziranja da bi se
2
utvrdili početni nivoi Apo(a) proteina u plazmi i 1 nedelju nakon prve doze. Dodatna vađenja krvi će se obavljati tokom približno 8 nedelja. Nivoi Apo(a) proteina u plazmi su mereni koristeći ELISA. Rezultati u Tabeli 119 su dati kao prosečni procenat nivoa Apo(a) proteina u plazmi za svaku grupu za tretman, normalizovani za početne nivoe (% BL). Rezultati pokazuju da su antisens oligonukleotidi smanjili ekspresiju Apo(a) proteina. Nadalje, oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugovanu grupu su ispoljili još potentnije smanjenje ekspresije Apo(a) od oligonukleotida koji ne sadrži konjugovanu grupu.
Tabela 119
2
2
�
21
21
21
21
21
21
21
22
22
22
22
22
22
22
�
21
22
�
��
�
�
�
�
�
��
��
��
��
��
��
��
�
21
22
�
��
�
�
�
�
�
�
21
22
�
��
�
�
�
�
�
�
21
22
�
��
�
�
�
�
�
�
21
22
�
��
�
�
�
�
�
�
21
22
�
��
�
�
�
�
�
�
�
�
�
11
��
�
��
�
�
�
�
�
�
21
22
�
��
�
�
�
�
�
�
�
�
�
41
42
�
44
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
4
�
2
4
1
2
4
1
2
4

Claims (17)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid i konjugovanu grupu, pri čemu, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 20 povezanih nukleozida i ima nukleobaznu sekvencu koja sadrži 20 uzastopnih nukleobaza komplementarnih sa delom iste dužine nukleobaza 3901 do 3920 SEQ ID NO: 1, pri čemu, nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida je 100% komplementarna sa SEQ ID NO: 1; i pri čemu konjugovana grupa sadrži:
  2. 2. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu: (i) modifikovani oligonukleotid sadrži najmanje jedan modifikovani šećer, opciono pri čemu: (a) najmanje jedan modifikovani šećer je biciklični šećer, opciono ograničeni etil ili šećer koji sadrži 4'-(CH2)n-O-2' most; pri čemu, n je 1 ili 2, ili (b) najmanje jedan modifikovani šećer sadrži 2'-O-metoksietil, ili je 3'-fluor-HNA, (ii) najmanje jedan nukleozid sadrži modifikovanu nukleobazu, opciono pri čemu, modifikovana nukleobaza je 5-metilcitozin, i/ili (iii) svaka internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida je odabrana od fosfodiestarske internukleozidne veze i fosforotioatne internukleozidne veze, opciono pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži: (a) najmanje 5 fosfodiestarskih internukleozidnih veza ili (b) najmanje 2 fosforotioatne internukleozidne veze.
  3. 3. Jedinjenje iz zahteva 1 ili zahteva 2, pri čemu, modifikovani oligonukleotid je jednolančani.
  4. 4. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-3, pri čemu, konjugovana grupa je povezana sa modifikovanim oligonukleotidom na 5' kraju modifikovanog oligonukleotida.
  5. 5. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-3, pri čemu, konjugovana grupa je povezana sa modifikovanim oligonukleotidom na 3' kraju modifikovanog oligonukleotida.
  6. 6. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva od 1-5, pri čemu konjugovana grupa sadrži:
    pri čemu je ostatak koji može da se otcepi (cleavable moiety, CM) veza ili grupa koja može da se podeli u fiziološkim uslovima.
  7. 7. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva od 1-6, pri čemu konjugovana grupa sadrži:
  8. 8. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži: segment razmaka koji se sastoji od povezanih dezoksinukleozida; 5' segment krila koji se sastoji od povezanih nukleozida; 3' segment krila koji se sastoji od povezanih nukleozida; pri čemu, segment razmaka je pozicioniran između 5' segmenta krila i 3' segmenta krila i pri čemu svaki nukleozid svakog segmenta krila sadrži modifikovani šećer.
  9. 9. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži: segment razmaka koji se sastoji od deset povezanih dezoksinukleozida; 5' segment krila koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; 3' segment krila koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; pri čemu, segment razmaka je pozicioniran između 5' segmenta krila i 3' segmenta krila, pri čemu svaki nukleozid svakog segmenta krila sadrži šećer 2'-O-metoksietil šećer, i pri čemu, svaki citozinski ostatak je 5-metilcitozin.
  10. 10. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 20 povezanih nukleozida i ima nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 58, i pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži: segment razmaka koji se sastoji od deset povezanih dezoksinukleozida; 5' segment krila koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; 3' segment krila koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; pri čemu, segment razmaka je pozicioniran između 5' segmenta krila i 3' segmenta krila , pri čemu svaki nukleozid svakog segmenta krila sadrži 2'-O-metoksietil šećer, pri čemu, najmanje jedna internukleozidna veza je fosforotioatna veza i pri čemu, svaki citozinski ostatak je 5-metilcitozin.
  11. 11. Jedinjenje iz zahteva 1 koje ima formulu:
    pri čemu, R<1>je -OCH2CH2OCH3(MOE) i R<2>je H; ili R<1>i R<2>zajedno grade most, pri čemu, R<1>je -O- i R<2>je -CH2-, -CH(CH3)-, ili -CH2CH2-, i R<1>i R<2>su neposredno povezani tako da je nastali most odabran od: -O-CH2-, -O-CH(CH3)- i -O-CH2CH2-; i za svaki par R3 i R4 na istom prstenu, nezavisno za svaki prsten: R3 je izabran od H i -OCH2CH2OCH3 i R4 je H; ili R3 i R4 zajedno grade most, pri čemu, R3 je -O- i R4 je - CH2-, -CH(CH3)-, ili -CH2CH2- i R3 i R4 su neposredno povezani tako da je nastali most odabran od: -O-CH2-, -O-CH(CH3)- i -O-CH2CH2-; i R5 je odabran od H i -CH3; i Z je odabran od S<->i O-.
  12. 12. Jedinjenje iz zahteva 1 koje ima formulu:
  13. 13. Jedinjenje iz bilo kog od prethodnih zahteva, pri čemu, jedinjenje je u obliku soli, opciono pri čemu, jedinjenje je u obliku soli natrijuma i/ili kalijuma.
  14. 14. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-13 i farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač.
  15. 15. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-13, ili kompozicija prema zahtevu 14, za upotrebu u lečenju, prevenciji ili usporavanju progresije bolesti povezane sa povišenim apo(a) i/ili povišenim Lp(a).
  16. 16. Jedinjenje ili kompozicija za upotrebu iz zahteva 15, pri čemu, bolest je inflamatorna, kardiovaskularna ili metabolička bolest, poremećaj ili stanje. 4 1
  17. 17. Jedinjenje ili kompozicija za upotrebu iz zahteva 15, pri čemu, bolest je aortna stenoza ili angina. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 4 2
RS20201052A 2013-05-01 2014-05-01 Kompozicije i postupci za modulaciju ekspresije apolipoproteina (a) RS60796B1 (sr)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361818442P 2013-05-01 2013-05-01
US201361823826P 2013-05-15 2013-05-15
US201361843887P 2013-07-08 2013-07-08
US201361871673P 2013-08-29 2013-08-29
US201361880790P 2013-09-20 2013-09-20
US201461976991P 2014-04-08 2014-04-08
US201461986867P 2014-04-30 2014-04-30
PCT/US2014/036460 WO2014179625A1 (en) 2013-05-01 2014-05-01 COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING APOLIPOPROTEIN (a) EXPRESSION
EP14791187.9A EP2992009B1 (en) 2013-05-01 2014-05-01 Compositions and methods for modulating apolipoprotein (a) expression

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS60796B1 true RS60796B1 (sr) 2020-10-30

Family

ID=51843959

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190682A RS58981B1 (sr) 2013-05-01 2014-05-01 Kompozicije i postupci za modulisanje ekspresije hbv i ttr
RS20201052A RS60796B1 (sr) 2013-05-01 2014-05-01 Kompozicije i postupci za modulaciju ekspresije apolipoproteina (a)

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190682A RS58981B1 (sr) 2013-05-01 2014-05-01 Kompozicije i postupci za modulisanje ekspresije hbv i ttr

Country Status (40)

Country Link
US (28) US9127276B2 (sr)
EP (14) EP4438129A3 (sr)
JP (24) JP6995478B2 (sr)
KR (17) KR101857707B1 (sr)
CN (13) CN105392488B (sr)
AU (21) AU2014259759B2 (sr)
BR (6) BR112015027369B1 (sr)
CA (7) CA3253971A1 (sr)
CL (2) CL2015003217A1 (sr)
CR (2) CR20190269A (sr)
CY (2) CY1121879T1 (sr)
DK (4) DK2991656T3 (sr)
DO (3) DOP2015000268A (sr)
EA (2) EA036584B1 (sr)
ES (4) ES2730015T3 (sr)
FI (2) FIC20250028I1 (sr)
FR (2) FR25C1033I1 (sr)
HR (2) HRP20201378T1 (sr)
HU (2) HUE050394T2 (sr)
IL (19) IL284593B2 (sr)
LT (2) LT2992098T (sr)
MA (1) MA60161B1 (sr)
ME (1) ME03390B (sr)
MX (12) MX2015015264A (sr)
MY (2) MY178929A (sr)
NL (2) NL301341I2 (sr)
NO (2) NO2025037I1 (sr)
NZ (5) NZ631552A (sr)
PE (2) PE20161430A1 (sr)
PH (3) PH12015502493B1 (sr)
PL (2) PL2992009T3 (sr)
PT (3) PT2992009T (sr)
RS (2) RS58981B1 (sr)
RU (8) RU2697152C2 (sr)
SG (5) SG11201508800WA (sr)
SI (2) SI2992098T1 (sr)
SM (1) SMT201900316T1 (sr)
UA (2) UA121017C2 (sr)
WO (5) WO2014179626A2 (sr)
ZA (2) ZA201507218B (sr)

Families Citing this family (524)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2011004097A (es) 2008-10-15 2011-07-28 Isis Pharmaceuticals Inc Modulacion de la expresion del factor 11.
RU2572826C2 (ru) 2008-12-02 2016-01-20 Чиралджен, Лтд. Способ синтеза модифицированных по атому фосфора нуклеиновых кислот
CA2767253A1 (en) 2009-07-06 2011-01-13 Ontorii, Inc. Novel nucleic acid prodrugs and methods of use thereof
JP5868324B2 (ja) 2010-09-24 2016-02-24 株式会社Wave Life Sciences Japan 不斉補助基
CA3077910A1 (en) 2010-11-17 2012-05-24 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of alpha synuclein expression
AU2012284265B2 (en) 2011-07-19 2017-08-17 Wave Life Sciences Ltd. Methods for the synthesis of functionalized nucleic acids
EP3453761A1 (en) 2011-08-29 2019-03-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomer-conjugate complexes and their use
AU2013203395A1 (en) 2012-03-30 2013-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating TAU expression for reducing seizure and modifying a neurodegenerative syndrome
WO2013159108A2 (en) * 2012-04-20 2013-10-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
US20160002624A1 (en) 2012-05-17 2016-01-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide compositions
US9574193B2 (en) 2012-05-17 2017-02-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating apolipoprotein (a) expression
RU2748495C2 (ru) * 2012-05-24 2021-05-26 Ионис Фармасьютикалз, Инк. Способы и композиции для модулирования экспрессии аполипопротеина (а)
SG11201500239VA (en) 2012-07-13 2015-03-30 Wave Life Sciences Japan Asymmetric auxiliary group
JP6453212B2 (ja) 2012-07-13 2019-01-16 ウェイブ ライフ サイエンシズ リミテッドＷａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｌｔｄ． キラル制御
CN104684923B (zh) 2012-07-13 2018-09-28 株式会社新日本科学 手性核酸佐剂
US10077443B2 (en) 2012-11-15 2018-09-18 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotide conjugates
CN104955952A (zh) * 2013-01-30 2015-09-30 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 Lna寡核苷酸碳水化合物缀合物
AU2014216137B2 (en) 2013-02-14 2018-05-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of Apolipoprotein C-III (ApoCIII) expression in lipoprotein lipase deficient (LPLD) populations
CN105164261B (zh) 2013-05-01 2022-03-18 莱古路斯治疗法股份有限公司 用于增强的细胞摄取的化合物和方法
DK2991656T3 (da) 2013-05-01 2020-03-23 Ionis Pharmaceuticals Inc Sammensætninger og fremgangsmåder til modulering af apolipoprotein c-iii-ekspression
SG11201508925WA (en) 2013-05-01 2015-11-27 Regulus Therapeutics Inc Microrna compounds and methods for modulating mir-122
ES2770667T3 (es) 2013-06-27 2020-07-02 Roche Innovation Ct Copenhagen As Oligómeros antisentido y conjugados que se dirigen a PCSK9
JP6702862B2 (ja) * 2013-07-11 2020-06-03 アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． オリゴヌクレオチド−リガンドコンジュゲートおよびそれらの調製方法
EP3022176B8 (en) 2013-07-15 2019-12-25 The Regents of the University of California Azacyclic constrained analogs of fty720
TWI772856B (zh) 2013-07-19 2022-08-01 美商百健Ｍａ公司 用於調節τ蛋白表現之組合物
WO2015042447A1 (en) 2013-09-20 2015-03-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Targeted therapeutic nucleosides and their use
US10077444B2 (en) * 2013-10-02 2018-09-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the LECT2 gene
US11162096B2 (en) 2013-10-14 2021-11-02 Ionis Pharmaceuticals, Inc Methods for modulating expression of C9ORF72 antisense transcript
US9994846B2 (en) * 2013-10-25 2018-06-12 Regulus Therapeutics Inc. MicroRNA compounds and methods for modulating miR-21 activity
KR20160083876A (ko) * 2013-11-14 2016-07-12 로슈 이노베이션 센터 코펜하겐 에이/에스 ApoB 안티센스 접합체 화합물
JP6482475B2 (ja) * 2014-01-07 2019-03-13 レナセラピューティクス株式会社 アンチセンスオリゴヌクレオチド及び糖誘導体を含む二本鎖オリゴヌクレオチド
WO2015108048A1 (ja) 2014-01-15 2015-07-23 株式会社新日本科学 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤
WO2015108047A1 (ja) 2014-01-15 2015-07-23 株式会社新日本科学 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤
JPWO2015108046A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 抗アレルギー作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗アレルギー剤
ES2917473T3 (es) 2014-01-16 2022-07-08 Wave Life Sciences Ltd Diseño quiral
AU2015217301A1 (en) 2014-02-11 2016-08-25 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Ketohexokinase (KHK) iRNA compositions and methods of use thereof
WO2015143245A1 (en) 2014-03-19 2015-09-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating ataxin 2 expression
CN106103717A (zh) 2014-03-19 2016-11-09 Ionis制药公司 用于调节共济失调蛋白2表达的组合物
RS60707B1 (sr) 2014-04-01 2020-09-30 Biogen Ma Inc Kompozicije za modulaciju ekspresije sod-1
EP3862362A3 (en) 2014-05-01 2021-10-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugates of modified antisense oligonucleotides and their use for modulating pkk expression
US10098959B2 (en) * 2014-05-01 2018-10-16 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Method for synthesis of reactive conjugate clusters
CN110903337A (zh) 2014-05-01 2020-03-24 Ionis制药公司 用于调节生长激素受体表达的组合物和方法
SG11201608502TA (en) * 2014-05-01 2016-11-29 Ionis Pharmaceuticals Inc Compositions and methods for modulating complement factor b expression
PT3137605T (pt) 2014-05-01 2020-12-18 Ionis Pharmaceuticals Inc Composições e métodos para modulação da expressão de angiopoietina de tipo 3
GB201408623D0 (en) 2014-05-15 2014-07-02 Santaris Pharma As Oligomers and oligomer conjugates
CA3215908A1 (en) 2014-05-22 2015-11-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Angiotensinogen (agt) irna compositions and methods of use thereof
GB201410693D0 (en) 2014-06-16 2014-07-30 Univ Southampton Splicing modulation
TW201613949A (en) 2014-08-07 2016-04-16 Regulus Therapeutics Inc Targeting microRNAs for metabolic disorders
BR112017004056A2 (pt) 2014-09-12 2017-12-05 Biogen Ma Inc composições e métodos para detecção da proteína smn em um indivíduo e tratamento de um indivíduo
CN107109411B (zh) 2014-10-03 2022-07-01 冷泉港实验室 核基因输出的定向增加
WO2016055601A1 (en) * 2014-10-10 2016-04-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Galnac phosphoramidites, nucleic acid conjugates thereof and their use
WO2016061487A1 (en) * 2014-10-17 2016-04-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Polynucleotide agents targeting aminolevulinic acid synthase-1 (alas1) and uses thereof
TWI710633B (zh) 2014-11-10 2020-11-21 美商阿尼拉製藥公司 Ｂ型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｉＲＮＡ組成物及其用途方法
HK1244843A1 (zh) * 2014-11-17 2018-08-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 载脂蛋白c3(apoc3)irna组合物及其使用方法
CA2970795A1 (en) 2014-12-18 2016-06-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Reversir compounds
WO2016112132A1 (en) 2015-01-06 2016-07-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions for modulating expression of c9orf72 antisense transcript
US10538763B2 (en) 2015-01-16 2020-01-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulation of DUX4
WO2016130806A2 (en) 2015-02-13 2016-08-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Patatin-like phospholipase domain containing 3 (pnpla3) irna compositions and methods of use thereof
JP6826984B2 (ja) * 2015-02-15 2021-02-10 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドＡｒｃｔｕｒｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． アシル−アミノ−ｌｎａオリゴヌクレオチドおよび／またはヒドロカルビル−アミノ−ｌｎａオリゴヌクレオチド
US11129844B2 (en) 2015-03-03 2021-09-28 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating MECP2 expression
EP3277811B1 (en) 2015-04-03 2020-12-23 University of Massachusetts Fully stabilized asymmetric sirna
MX2017012426A (es) * 2015-04-03 2018-01-26 Ionis Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodos para modular la expresion de tmprss6.
WO2016164746A1 (en) 2015-04-08 2016-10-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the lect2 gene
WO2016167780A1 (en) 2015-04-16 2016-10-20 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions for modulating expression of c9orf72 antisense transcript
WO2016172734A1 (en) 2015-04-24 2016-10-27 California Institute Of Technology Reactivation of x chromosome genes
WO2016205323A1 (en) 2015-06-18 2016-12-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Polynucleotde agents targeting hydroxyacid oxidase (glycolate oxidase, hao1) and methods of use thereof
WO2016209862A1 (en) 2015-06-23 2016-12-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glucokinase (gck) irna compositions and methods of use thereof
EP4545544A3 (en) 2015-06-29 2025-10-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modified crispr rna and modified single crispr rna and uses thereof
US10494632B2 (en) 2015-07-10 2019-12-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Insulin-like growth factor binding protein, acid labile subunit (IGFALS) compositions and methods of use thereof
CA2991894A1 (en) 2015-07-10 2017-01-19 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of diacyglycerol acyltransferase 2 (dgat2)
EP3323893A4 (en) * 2015-07-16 2019-03-27 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. BETA2GPI GENE EXPRESSION-INHIBITING NUCLEIC ACID COMPLEX
CN108135921B (zh) 2015-07-22 2023-10-17 波涛生命科学有限公司 寡核苷酸组合物及其方法
CA2982825C (en) 2015-08-06 2023-10-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Processes for the preparation of galnac acid derivatives
CN105111119B (zh) * 2015-08-14 2017-04-12 天津小新医药科技有限公司 一类卤代苯l‑薄荷醇类p2y12受体拮抗剂及其用途
CN105111118B (zh) * 2015-08-14 2017-04-12 天津小新医药科技有限公司 L‑薄荷醇类p2y12受体拮抗剂、制备方法及其用途
US10633653B2 (en) 2015-08-14 2020-04-28 University Of Massachusetts Bioactive conjugates for oligonucleotide delivery
JP6835826B2 (ja) 2015-08-24 2021-02-24 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス Ｌｎａ−ｇプロセス
KR20250145703A (ko) 2015-09-02 2025-10-13 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 프로그램된 세포사 1 리간드 1 (PD-L1) iRNA 조성물 및 그의 사용 방법
JP6877414B2 (ja) 2015-09-24 2021-05-26 アイオニス・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＩｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． Ｋｒａｓ発現のモジュレーター
EP3352753A4 (en) 2015-09-24 2019-03-13 The Regents of The University of California SYNTHETIC SPHINGOLIPIDE-SIMILAR MOLECULES, MEDICAMENTS, METHODS FOR THEIR SYNTHESIS AND TREATMENT PROCEDURES
US20210052631A1 (en) * 2015-09-25 2021-02-25 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
EP3353306A4 (en) 2015-09-25 2019-06-05 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
US20180273948A1 (en) * 2015-09-25 2018-09-27 Tarveda Therapeutics, Inc. RNAi CONJUGATES, PARTICLES AND FORMULATIONS THEREOF
US10533175B2 (en) 2015-09-25 2020-01-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating Ataxin 3 expression
JOP20160211B1 (ar) * 2015-10-01 2021-08-17 Arrowhead Pharmaceuticals Inc تراكيب وأساليب لتثبيط تعبير جيني للـ lpa
US10577388B2 (en) 2015-10-02 2020-03-03 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotide conjugation process
CN113817735A (zh) 2015-10-08 2021-12-21 Ionis制药公司 用于调节血管紧张素原表达的化合物和方法
EP3359685B1 (en) 2015-10-09 2026-01-28 University Of Southampton Modulation of gene expression for deregulated protein expression
WO2017068087A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotide detection method
EP3394258B1 (en) 2015-10-22 2021-09-22 Roche Innovation Center Copenhagen A/S In vitro toxicity screening assay
AU2016349625B2 (en) 2015-11-06 2022-07-07 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulating apolipoprotein (a) expression
US20190046555A1 (en) * 2015-11-06 2019-02-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds for use in therapy
MX378999B (es) * 2015-11-16 2025-03-10 Hoffmann La Roche Fosforamidita de agrupacion de n-acetilgalactosamina (galnac).
US11058709B1 (en) 2015-12-04 2021-07-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating breast cancer
EP3933041B1 (en) 2015-12-14 2024-01-31 Cold Spring Harbor Laboratory Antisense oligomers for treatment of autosomal dominant retardation
US11096956B2 (en) 2015-12-14 2021-08-24 Stoke Therapeutics, Inc. Antisense oligomers and uses thereof
US20190002887A1 (en) 2015-12-31 2019-01-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing ataxin-2 expression
CA3006599A1 (en) 2016-01-05 2017-07-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing lrrk2 expression
CA3011363A1 (en) 2016-01-12 2017-07-20 Interleukin Genetics, Inc. Methods for predicting response to treatment
WO2017131124A1 (ja) 2016-01-26 2017-08-03 日産化学工業株式会社 一本鎖オリゴヌクレオチド
AU2017213404A1 (en) * 2016-01-29 2018-09-20 Kyowa Kirin Co., Ltd. Nucleic acid conjugate
WO2017132669A1 (en) * 2016-01-31 2017-08-03 University Of Massachusetts Branched oligonucleotides
KR102515329B1 (ko) 2016-03-07 2023-03-29 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 치료용 화합물을 위한 표적화 리간드
AU2017229778A1 (en) 2016-03-09 2018-08-16 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for inhibiting PMP22 expression
KR20250065735A (ko) 2016-03-14 2025-05-13 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pd-l1 발현의 감소를 위한 올리고뉴클레오티드
AU2017234678A1 (en) 2016-03-16 2018-08-16 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods of modulating KEAP1
WO2017161168A1 (en) 2016-03-16 2017-09-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of dyrk1b expression
EP3228326A1 (en) * 2016-04-05 2017-10-11 Silence Therapeutics GmbH Nucleic acid linked to a trivalent glycoconjugate
SG10202008301UA (en) * 2016-04-11 2020-10-29 Arbutus Biopharma Corp Targeted nucleic acid conjugate compositions
AU2017248637A1 (en) 2016-04-13 2018-09-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing C9ORF72 expression
EP3442983A1 (en) 2016-04-14 2019-02-20 H. Hoffnabb-La Roche Ag TRITYL-MONO-Ga1NAc COMPOUNDS AND THEIR USE
MA45295A (fr) 2016-04-19 2019-02-27 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composition d'arni de protéine de liaison de lipoprotéines haute densité (hdlbp/vigiline) et procédés pour les utiliser
SG10201913477UA (en) 2016-04-29 2020-02-27 Univ Nanyang Tech G-quadruplex-containing antisense oligonucleotides
JP2019516680A (ja) 2016-05-04 2019-06-20 ウェイブ ライフ サイエンシズ リミテッドＷａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｌｔｄ． オリゴヌクレオチド組成物およびその方法
JP7091255B2 (ja) 2016-05-06 2022-06-27 アイオニス・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド Ｇｌｐ－１受容体リガンド部分コンジュゲート化オリゴヌクレオチドおよびその使用
US11105794B2 (en) 2016-06-17 2021-08-31 Hoffmann-La Roche Inc. In vitro nephrotoxicity screening assay
WO2017216325A1 (en) 2016-06-17 2017-12-21 F. Hoffmann-La Roche Ag In vitro nephrotoxicity screening assay
CN109414448B (zh) 2016-06-17 2021-10-26 豪夫迈·罗氏有限公司 用于减少PAPD5或PAPD7 mRNA治疗乙型肝炎感染的核酸分子
EP3471781A4 (en) 2016-06-17 2020-05-06 Ionis Pharmaceuticals, Inc. MODULATION OF GYS1 EXPRESSION
EP3475424A1 (en) 2016-06-22 2019-05-01 ProQR Therapeutics II B.V. Single-stranded rna-editing oligonucleotides
TWI746590B (zh) * 2016-06-30 2021-11-21 日商協和麒麟股份有限公司 核酸複合體
WO2018013525A1 (en) 2016-07-11 2018-01-18 Translate Bio Ma, Inc. Nucleic acid conjugates and uses thereof
IL291323B2 (en) 2016-07-15 2023-09-01 Am Chemicals Llc Solid non-nucleoside supports and phosphoramidite building blocks for oligonucleotide synthesis
ES2935658T3 (es) 2016-07-15 2023-03-09 Ionis Pharmaceuticals Inc Compuestos y métodos para la modulación de SMN2
CA3033368A1 (en) 2016-08-12 2018-02-15 University Of Massachusetts Conjugated oligonucleotides
JP2019532027A (ja) 2016-08-17 2019-11-07 ソルスティス バイオロジクス，リミティッド ポリヌクレオチド構築物
US10941402B2 (en) 2016-09-01 2021-03-09 Proqr Therapeutics Ii B.V. Chemically modified single-stranded RNA-editing oligonucleotides
MX2018009853A (es) 2016-09-02 2018-11-09 Arrowhead Pharmaceuticals Inc Ligandos de direccion.
WO2018057837A1 (en) * 2016-09-23 2018-03-29 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Gene therapy and targeted delivery of conjugated compounds
ES2963428T3 (es) 2016-09-29 2024-03-27 Biogen Ma Inc Compuestos y métodos para reducir la expresión de Tau
EP3522898A4 (en) * 2016-10-06 2020-05-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. METHOD FOR CONJUGATING OLIGOMERIC COMPOUNDS
WO2018081661A1 (en) 2016-10-27 2018-05-03 California Institute Of Technology Hdac inhibitor compositions for reactivation of the x chromosome
JOP20190104A1 (ar) 2016-11-10 2019-05-07 Ionis Pharmaceuticals Inc مركبات وطرق لتقليل التعبير عن atxn3
WO2018089914A1 (en) * 2016-11-11 2018-05-17 Alios Biopharma, Inc. Oligonucleotide targeting strategy for hbv cccdna
TW202313978A (zh) 2016-11-23 2023-04-01 美商阿尼拉製藥公司 絲胺酸蛋白酶抑制因子Ａ１ ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
EP4035659A1 (en) 2016-11-29 2022-08-03 PureTech LYT, Inc. Exosomes for delivery of therapeutic agents
WO2018102745A1 (en) 2016-12-02 2018-06-07 Cold Spring Harbor Laboratory Modulation of lnc05 expression
US11033571B2 (en) * 2016-12-13 2021-06-15 Am Sciences Inc Pharmaceutical composition for preventing or treating hepatitis B
AU2017376950B2 (en) 2016-12-16 2024-02-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating or preventing TTR-associated diseases using transthyretin (TTR) iRNA compositions
CN108239644B (zh) * 2016-12-23 2021-05-28 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种小干扰核酸和药物组合物及其用途
US10329620B2 (en) 2017-01-12 2019-06-25 Cardioforecast Ltd. Methods and kits for treating cardiovascular disease
US20200216845A1 (en) 2017-01-13 2020-07-09 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides for modulating rela expression
WO2018130585A1 (en) 2017-01-13 2018-07-19 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides for modulating relb expression
US20190345495A1 (en) 2017-01-13 2019-11-14 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides for modulating nfkb2 expression
US20190367920A1 (en) 2017-01-13 2019-12-05 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides for modulating nfkb1 expression
WO2018130582A1 (en) 2017-01-13 2018-07-19 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides for modulating rel expression
CN110337495B (zh) 2017-02-06 2024-03-29 日产化学株式会社 单链寡核苷酸
US11180756B2 (en) * 2017-03-09 2021-11-23 Ionis Pharmaceuticals Morpholino modified oligomeric compounds
US11963974B2 (en) 2017-03-10 2024-04-23 National Center For Child Health And Development Antisense oligonucleotide and composition for prevention or treatment of glycogen storage disease type Ia
JOP20190215A1 (ar) 2017-03-24 2019-09-19 Ionis Pharmaceuticals Inc مُعدّلات التعبير الوراثي عن pcsk9
EP3385272A1 (en) * 2017-04-05 2018-10-10 Silence Therapeutics GmbH Further novel oligonucleotide-ligand conjugates
JP7155239B2 (ja) * 2017-04-05 2022-10-18 サイレンス・セラピューティクス・ゲーエムベーハー 産物及び組成物
WO2018191278A2 (en) 2017-04-11 2018-10-18 Arbutus Biopharma Corporation Targeted compositions
IL269927B2 (en) 2017-04-18 2025-04-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc Methods of treating patients with hepatitis B virus infection
WO2018215049A1 (en) 2017-05-23 2018-11-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for galnac oligonucleotide conjugates
US11273222B2 (en) 2017-05-26 2022-03-15 National Cerebral And Cardiovascular Center Antisense nucleic acid targeting PCSK9
US11603532B2 (en) 2017-06-02 2023-03-14 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods of use thereof
JP2020522265A (ja) * 2017-06-02 2020-07-30 ウェイブ ライフ サイエンシズ リミテッドＷａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｌｔｄ． オリゴヌクレオチド組成物及びその使用方法
WO2018226788A1 (en) 2017-06-07 2018-12-13 University Of Massachusetts Anti-adam33 oligonucleotides and related methods
JP7406793B2 (ja) 2017-06-23 2023-12-28 ユニバーシティー オブ マサチューセッツ ２テイル自己デリバリー型ｓｉＲＮＡおよび関連方法
WO2019006455A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Solstice Biologics, Ltd. AUXILIARIES OF CHIRAL PHOSPHORAMIDITIS AND METHODS OF USE THEREOF
AU2018301477A1 (en) 2017-07-13 2020-02-27 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Lactate dehydrogenase a (LDHA) iRNA compositions and methods of use thereof
AU2018307294B2 (en) 2017-07-26 2025-04-17 Nissan Chemical Corporation Single-stranded oligonucleotide
WO2019027009A1 (ja) * 2017-08-02 2019-02-07 協和発酵キリン株式会社 核酸複合体
WO2019027015A1 (ja) * 2017-08-02 2019-02-07 協和発酵キリン株式会社 核酸複合体
WO2019030313A2 (en) 2017-08-11 2019-02-14 Roche Innovation Center Copenhagen A/S OLIGONUCLEOTIDES FOR MODULATION OF UBE3C EXPRESSION
CA3073213A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Tunable reversir tm compounds
US11197884B2 (en) 2017-08-18 2021-12-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of the notch signaling pathway for treatment of respiratory disorders
WO2019038228A1 (en) 2017-08-22 2019-02-28 Roche Innovation Center Copenhagen A/S OLIGONUCLEOTIDES FOR MODULATION OF TOM1 EXPRESSION
SG11202001590RA (en) 2017-08-25 2020-03-30 Stoke Therapeutics Inc Antisense oligomers for treatment of conditions and diseases
US10517889B2 (en) 2017-09-08 2019-12-31 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of SMAD7 expression
EP3682007A2 (en) * 2017-09-14 2020-07-22 Janssen BioPharma, Inc. Galnac derivatives
MX394999B (es) 2017-09-29 2025-03-24 Regeneron Pharma Animales no humanos que comprenden un locus ttr humanizado y metodos de uso
EP3688161A1 (en) 2017-09-29 2020-08-05 Intellia Therapeutics, Inc. Compositions and methods for ttr gene editing and treating attr amyloidosis
CN111226114A (zh) 2017-10-13 2020-06-02 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 用部分立体限定的寡核苷酸子文库鉴定反义寡核苷酸改进的立体限定硫代磷酸酯寡核苷酸变体的方法
UA126931C2 (uk) 2017-10-16 2023-02-22 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг МОЛЕКУЛИ НУКЛЕЇНОВИХ КИСЛОТ ДЛЯ ЗМЕНШЕННЯ РІВНЯ мРНК PAPD5 І PAPD7 ДЛЯ ЛІКУВАННЯ ІНФЕКЦІЙНОГО ГЕПАТИТУ B
AU2018360697A1 (en) 2017-11-01 2020-05-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Complement component C3 iRNA compositions and methods of use thereof
TWI809004B (zh) 2017-11-09 2023-07-21 美商Ionis製藥公司 用於降低snca表現之化合物及方法
US20200385719A1 (en) 2017-11-16 2020-12-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Kisspeptin 1 (kiss1) irna compositions and methods of use thereof
WO2019100039A1 (en) 2017-11-20 2019-05-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Serum amyloid p component (apcs) irna compositions and methods of use thereof
CN110945130B (zh) * 2017-12-01 2024-04-09 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
WO2019105403A1 (zh) * 2017-12-01 2019-06-06 苏州瑞博生物技术有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
CA3083968C (en) 2017-12-01 2024-04-23 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Double-stranded oligonucleotide, composition and conjugate comprising double-stranded oligonucleotide, preparation method thereof and use thereof
WO2019105435A1 (zh) 2017-12-01 2019-06-06 苏州瑞博生物技术有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
JP7365052B2 (ja) 2017-12-01 2023-10-19 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド 核酸、当該核酸を含む組成物及び複合体ならびに調製方法と使用
WO2019105437A1 (zh) * 2017-12-01 2019-06-06 苏州瑞博生物技术有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
CN111050807B (zh) * 2017-12-01 2024-05-28 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
US20200385714A1 (en) 2017-12-11 2020-12-10 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides for modulating fndc3b expression
WO2019115417A2 (en) 2017-12-12 2019-06-20 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides for modulating rb1 expression
WO2019118916A1 (en) 2017-12-14 2019-06-20 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
JP2021508491A (ja) 2017-12-18 2021-03-11 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 高移動度グループボックス−１（ＨＭＧＢ１）ｉＲＮＡ組成物及びその使用方法
US11459564B2 (en) 2017-12-21 2022-10-04 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of frataxin expression
JP2021507253A (ja) 2017-12-21 2021-02-22 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ Ｈｔｒａ１ ｒｎａアンタゴニストについてのコンパニオン診断
WO2019122282A1 (en) 2017-12-22 2019-06-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Gapmer oligonucleotides comprising a phosphorodithioate internucleoside linkage
CN111448316B (zh) 2017-12-22 2025-02-14 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 新的硫代亚磷酰胺
WO2019122279A1 (en) 2017-12-22 2019-06-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides comprising a phosphorodithioate internucleoside linkage
WO2019127004A1 (zh) 2017-12-26 2019-07-04 广州市锐博生物科技有限公司 修饰的寡核苷酸和可用于合成修饰的寡核苷酸的化合物
CN109957566B (zh) * 2017-12-26 2023-08-25 广州市锐博生物科技有限公司 修饰的寡核苷酸和可用于合成修饰的寡核苷酸的化合物
EP3732185B1 (en) 2017-12-29 2025-02-26 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Conjugates and preparation and use thereof
US20210095274A1 (en) 2018-01-10 2021-04-01 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides for modulating pias4 expression
WO2019140102A1 (en) * 2018-01-10 2019-07-18 Translate Bio Ma, Inc. Compositions and methods for facilitating delivery of synthetic nucleic acids to cells
EA202091693A1 (ru) 2018-01-12 2021-04-14 Бристол-Маерс Сквибб Компани Антисмысловые олигонуклеотиды, целенаправленно воздействующие на альфа-синуклеин, и их применения
BR112020013994A2 (pt) 2018-01-12 2020-12-08 Bristol-Myers Squibb Company Oligonucleotídeos antissenso que direcionam alfa-sinucleína e seus usos
AU2019207859A1 (en) 2018-01-12 2020-07-02 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Alpha-synuclein antisense oligonucleotides and uses thereof
US20210095275A1 (en) 2018-01-12 2021-04-01 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides for modulating gsk3b expression
BR112020014425A2 (pt) 2018-01-15 2020-12-29 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Moduladores de expressão de dnm2
CN111615558A (zh) 2018-01-17 2020-09-01 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 用于调节erc1表达的寡核苷酸
WO2019141723A1 (en) 2018-01-18 2019-07-25 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides targeting srebp1
WO2019145386A1 (en) 2018-01-26 2019-08-01 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides for modulating csnk1d expression
AU2019218987B2 (en) 2018-02-12 2025-04-24 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modified compounds and uses thereof
CN112041439A (zh) 2018-02-14 2020-12-04 深度基因组学公司 用于威尔森病的寡核苷酸疗法
KR20200140805A (ko) 2018-02-21 2020-12-16 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Camk2d 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 그의 용도
TWI840345B (zh) 2018-03-02 2024-05-01 美商Ionis製藥公司 Irf4表現之調節劑
EP3759127A4 (en) 2018-03-02 2022-03-30 Ionis Pharmaceuticals, Inc. COMPOUNDS AND METHODS FOR MODULATING AMYLOID BETA PRECURSOR PROTEIN
CN111511915A (zh) 2018-03-09 2020-08-07 第一三共株式会社 糖原病Ia型治疗药
US11661601B2 (en) 2018-03-22 2023-05-30 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating FMR1 expression
MA52661A (fr) 2018-04-05 2021-02-17 Centre Leon Berard Utilisation d'inhibiteurs de fubp1 dans le traitement d'une infection par le virus de l'hépatite b
CA3094020A1 (en) 2018-04-11 2019-10-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of ezh2 expression
IL277889B2 (en) 2018-04-12 2025-01-01 Wave Life Sciences Ltd Oligonucleotide preparations and methods of using them
US12263205B2 (en) 2018-04-30 2025-04-01 The Children's Hospital Of Philadelphia Methods of improving anemias by combining agents
US12060558B2 (en) 2018-05-04 2024-08-13 Stoke Therapeutics, Inc. Methods and compositions for treatment of cholesteryl ester storage disease
WO2019215066A1 (en) 2018-05-07 2019-11-14 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Quality control of lna oligonucleotide therapeutics using massively parallel sequencing
EP3790972A1 (en) 2018-05-08 2021-03-17 Regulus Therapeutics Inc. Galnac conjugated modified oligonucleotide as mir-122 inhibitor having hcv antiviral activity with reduced hyperbilirubinemia side-effect
JP7438135B2 (ja) * 2018-05-09 2024-02-26 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド Ｆｘｉの発現を低下させるための化合物及び方法
SG11202010215TA (en) 2018-05-09 2020-11-27 Ionis Pharmaceuticals Inc Compounds and methods for reducing atxn3 expression
EP3790596A4 (en) 2018-05-11 2022-04-06 Wave Life Sciences Ltd. OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS AND METHODS OF USE
TWI851574B (zh) 2018-05-14 2024-08-11 美商阿尼拉製藥公司 血管收縮素原（ＡＧＴ）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
GB201808146D0 (en) 2018-05-18 2018-07-11 Proqr Therapeutics Ii Bv Stereospecific Linkages in RNA Editing Oligonucleotides
CA3103429A1 (en) 2018-06-14 2019-12-19 Don W. Cleveland Compounds and methods for increasing stmn2 expression
TWI833770B (zh) 2018-06-27 2024-03-01 美商Ionis製藥公司 用於減少 lrrk2 表現之化合物及方法
SG11202012759XA (en) 2018-07-03 2021-01-28 Hoffmann La Roche Oligonucleotides for modulating tau expression
WO2020007826A1 (en) 2018-07-05 2020-01-09 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides targeting mbtps1
WO2020011745A2 (en) 2018-07-11 2020-01-16 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides targeting cers6
WO2020011744A2 (en) 2018-07-11 2020-01-16 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides targeting cers5
EP4512407A3 (en) 2018-07-13 2025-09-24 F. Hoffmann-La Roche AG Oligonucleotides for modulating rtel1 expression
EP3823725A4 (en) 2018-07-17 2023-05-10 Aronora, Inc. METHODS FOR SAFELY REDUCING THROMBOPOIETIN
BR112021000308A2 (pt) 2018-07-25 2021-04-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compostos e métodos para redução da expressão de atxn2
US20210292358A1 (en) 2018-07-31 2021-09-23 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides comprising a phosphorotrithioate internucleoside linkage
EP3830101B1 (en) 2018-07-31 2025-11-19 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides comprising a phosphorotrithioate internucleoside linkage
US20210292768A1 (en) 2018-08-08 2021-09-23 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions and agents against nonalcoholic steatohepatitis
WO2020033899A1 (en) 2018-08-10 2020-02-13 University Of Massachusetts Modified oligonucleotides targeting snps
CA3106701A1 (en) 2018-08-13 2020-02-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis b virus (hbv) dsrna agent compositions and methods of use thereof
US11918600B2 (en) 2018-08-21 2024-03-05 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Nucleic acid, pharmaceutical composition and conjugate containing nucleic acid, and use thereof
JP7627042B2 (ja) 2018-08-23 2025-02-05 ユニバーシティー オブ マサチューセッツ Ｏ－メチルリッチ完全安定化オリゴヌクレオチド
JP2021536239A (ja) 2018-08-28 2021-12-27 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス スプライス調節化合物を使用したネオアンチゲン操作
CA3105385A1 (en) 2018-09-18 2020-03-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof
TWI856973B (zh) 2018-09-19 2024-10-01 美商Ionis製藥公司 Pnpla3表現之調節劑
EP3862024A4 (en) 2018-09-30 2022-08-17 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. SIRNA CONJUGATE, METHOD FOR ITS PRODUCTION AND ITS USE
WO2020077390A1 (en) * 2018-10-18 2020-04-23 Murdoch University Antisense therapy for ptp1b related conditions
US10913951B2 (en) 2018-10-31 2021-02-09 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Silencing of HNF4A-P2 isoforms with siRNA to improve hepatocyte function in liver failure
CN113286885A (zh) 2018-11-09 2021-08-20 诺华股份有限公司 用靶向apo(a)的经缀合的反义化合物降低心血管事件的风险的方法
TW202028222A (zh) 2018-11-14 2020-08-01 美商Ionis製藥公司 Foxp3表現之調節劑
BR112021008967A2 (pt) 2018-11-15 2021-08-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. moduladores da expressão de irf5
SG11202103794QA (en) 2018-11-21 2021-05-28 Ionis Pharmaceuticals Inc Compounds and methods for reducing prion expression
EP3884051A2 (en) 2018-11-23 2021-09-29 Sanofi Novel rna compositions and methods for inhibiting angptl8
CA3121449A1 (en) 2018-11-30 2020-06-04 Kyowa Kirin Co., Ltd. Nucleic acid conjugate
WO2020117706A1 (en) 2018-12-03 2020-06-11 Triplet Therapeutics, Inc. Methods for the treatment of trinucleotide repeat expansion disorders associated with mlh3 activity
US20220056455A1 (en) 2018-12-20 2022-02-24 Praxis Precision Medicines, Inc. Compositions and methods for the treatment of kcnt1 related disorders
EP3899024A4 (en) 2018-12-21 2023-05-31 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of hsd17b13 expression
GB201821269D0 (en) 2018-12-28 2019-02-13 Nippon Shinyaku Co Ltd Myostatin signal inhibitor
US12496347B2 (en) 2018-12-28 2025-12-16 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Nucleic acid, composition and conjugate containing nucleic acid, preparation method therefor and use thereof
CN111377985B (zh) * 2018-12-29 2023-11-10 苏州瑞博生物技术股份有限公司 化合物和缀合物及其制备方法和用途
CN113330117B (zh) * 2019-01-18 2024-05-28 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
CN113614232A (zh) 2019-01-18 2021-11-05 马萨诸塞大学 动态药代动力学修饰锚
SG11202107399WA (en) 2019-01-31 2021-08-30 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulators of yap1 expression
WO2020169696A1 (en) 2019-02-20 2020-08-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Novel phosphoramidites
CA3130431A1 (en) 2019-02-20 2020-08-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Phosphonoacetate gapmer oligonucleotides
CN109799330B (zh) * 2019-02-22 2021-03-02 华中科技大学同济医学院附属同济医院 神经氨酸及神经氨酸酶抑制剂在慢性心力衰竭中的应用
CN113474633A (zh) 2019-02-26 2021-10-01 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 寡核苷酸配制方法
TW202540426A (zh) 2019-02-27 2025-10-16 美商Ionis製藥公司 Malat1表現之調節劑
KR20210134003A (ko) 2019-02-27 2021-11-08 스톡 테라퓨틱스, 인크. 병태 및 질환의 치료를 위한 안티센스 올리고머
EP3931323A4 (en) * 2019-02-28 2023-04-05 Deep Genomics Incorporated LIGAND CLUSTER AND METHODS OF USE AND PRODUCTION THEREOF
CA3133629A1 (en) * 2019-03-21 2020-09-24 Mitotherapeutix Llc Multivalent ligand clusters for targeted delivery of therapeutic agents
FI3947684T3 (fi) 2019-03-29 2025-05-27 Ionis Pharmaceuticals Inc Yhdisteitä ja menetelmiä ube3a-ats:n moduloimiseksi
US20220177894A1 (en) 2019-04-02 2022-06-09 Proqr Therapeutics Ii B.V. Antisense oligonucleotides for immunotherapy
KR20210149107A (ko) 2019-04-03 2021-12-08 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Angptl2 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 그의 용도
US20220251128A1 (en) * 2019-05-17 2022-08-11 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of oligomeric compounds comprising phosphorothioate diester and phosphodiester linkages
AU2020280438B2 (en) * 2019-05-22 2025-03-06 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Nucleic acid, pharmaceutical composition, conjugate, preparation method, and use
WO2020233680A1 (zh) 2019-05-22 2020-11-26 苏州瑞博生物技术股份有限公司 核酸、药物组合物与缀合物及制备方法和用途
JP7610268B2 (ja) 2019-05-22 2025-01-08 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド 核酸、薬物組成物及び複合体ならびに調製方法と使用
WO2020233651A1 (zh) 2019-05-22 2020-11-26 苏州瑞博生物技术股份有限公司 核酸、药物组合物与缀合物及制备方法和用途
US20220315929A1 (en) 2019-05-24 2022-10-06 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Nucleic acid, pharmaceutical composition and conjugate, preparation method therefor and use thereof
EP3978609A4 (en) 2019-05-24 2024-02-07 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Nucleic acid, pharmaceutical composition, conjugate, preparation method, and use
CA3140233A1 (en) 2019-05-24 2020-12-03 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Nucleic acid, pharmaceutical composition and conjugate, preparation method and use
WO2020243292A1 (en) 2019-05-28 2020-12-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for reducing fus expression
CN113905744A (zh) 2019-05-31 2022-01-07 阿利戈斯治疗公司 经修饰的间隙子寡核苷酸及其使用方法
US11891618B2 (en) 2019-06-04 2024-02-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mouse comprising a humanized TTR locus with a beta-slip mutation and methods of use
AU2020301419B2 (en) 2019-06-25 2026-03-19 Amgen Inc. Purification methods for carbohydrate-linked oligonucleotides
EP3956450B1 (en) 2019-07-26 2025-08-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating gfap
WO2021022108A2 (en) 2019-08-01 2021-02-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. CARBOXYPEPTIDASE B2 (CPB2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
EP4007812A1 (en) 2019-08-01 2022-06-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Serpin family f member 2 (serpinf2) irna compositions and methods of use thereof
MX2022001710A (es) 2019-08-09 2022-05-10 Univ Massachusetts Oligonucleótidos modificados químicamente dirigidos a los snp.
EP4013870A1 (en) 2019-08-13 2022-06-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Small ribosomal protein subunit 25 (rps25) irna agent compositions and methods of use thereof
EP4013767A4 (en) 2019-08-15 2023-10-25 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Linkage modified oligomeric compounds and uses thereof
US20220290156A1 (en) 2019-08-27 2022-09-15 Sanofi Compositions and methods for inhibiting pcsk9
TW202122093A (zh) 2019-08-29 2021-06-16 大陸商蘇州瑞博生物技術股份有限公司 化合物、藥物綴合物、試劑盒及其用途
WO2021041884A1 (en) 2019-08-30 2021-03-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Neurofilament light chain (nfl) as a biomarker for transthyretin amyloidosis polyneuropathy
EP4026567A4 (en) 2019-09-03 2024-04-24 Sovargen Co., Ltd. Composition for diagnosing or treating conditions associated with increased elf4e activity comprising elf4e inhibitor
EP4025252A4 (en) * 2019-09-03 2023-10-18 Arcturus Therapeutics, Inc. ASIALOGLYCOPROTEIN RECEPTOR-MEDIATED ADMINISTRATION OF THERAPEUTICALLY ACTIVE CONJUGATES
WO2021049504A1 (ja) * 2019-09-10 2021-03-18 第一三共株式会社 肝臓送達用ＧａｌＮＡｃ－オリゴヌクレオチドコンジュゲートおよび製造方法
US12365894B2 (en) 2019-09-16 2025-07-22 University Of Massachusetts Branched lipid conjugates of siRNA for specific tissue delivery
US20220370447A1 (en) 2019-09-20 2022-11-24 Hoffmann-La Roche Inc. Method of treating hbv infection using a core protein allosteric modulator
EP4038189A1 (en) 2019-10-04 2022-08-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for silencing ugt1a1 gene expression
EP4045062A1 (en) 2019-10-14 2022-08-24 Astrazeneca AB Modulators of pnpla3 expression
WO2021076828A1 (en) 2019-10-18 2021-04-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Solute carrier family member irna compositions and methods of use thereof
TW202134435A (zh) 2019-10-22 2021-09-16 美商阿尼拉製藥公司 補體成分ｃ３ ｉｒｎａ組成物及其使用方法
CN119499394A (zh) 2019-11-01 2025-02-25 阿尔尼拉姆医药品有限公司 亨廷顿（HTT）iRNA药剂组合物及其使用方法
KR20220115946A (ko) 2019-11-13 2022-08-19 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 안지오텐시노겐 (agt) 관련 장애를 치료하기 위한 방법 및 조성물
WO2021102373A1 (en) 2019-11-22 2021-05-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Ataxin3 (atxn3) rnai agent compositions and methods of use thereof
CN112876534B (zh) * 2019-11-29 2024-02-09 苏州瑞博生物技术股份有限公司 肝靶向化合物及缀合物
EP4073251A1 (en) 2019-12-13 2022-10-19 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Human chromosome 9 open reading frame 72 (c9orf72) irna agent compositions and methods of use thereof
TW202138559A (zh) 2019-12-16 2021-10-16 美商阿尼拉製藥公司 含類ＰＡＴＡＴＩＮ磷脂酶結構域３（ＰＮＰＬＡ３）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
CN111041025B (zh) * 2019-12-17 2021-06-18 深圳市瑞吉生物科技有限公司 基于结合N-乙酰半乳糖胺多肽的mRNA靶向分子及其制备方法
CN114829599A (zh) 2019-12-19 2022-07-29 豪夫迈·罗氏有限公司 Scamp3抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途
CN114901821A (zh) 2019-12-19 2022-08-12 豪夫迈·罗氏有限公司 Sept9抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途
JP2023506954A (ja) 2019-12-19 2023-02-20 エフ． ホフマン－ラ ロシュ エージー． Ｂ型肝炎ウイルス感染を処置するためのｓａｒａｆ阻害剤の使用
CN115516091A (zh) 2019-12-19 2022-12-23 豪夫迈·罗氏有限公司 Cops3抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途
JP2023506550A (ja) 2019-12-19 2023-02-16 エフ． ホフマン－ラ ロシュ エージー． Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するためのｓｂｄｓ阻害剤の使用
CN114828852A (zh) 2019-12-24 2022-07-29 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗hbv的靶向hbv的抗病毒药剂和/或免疫调节剂的药物组合
EP4081639A1 (en) 2019-12-24 2022-11-02 F. Hoffmann-La Roche AG Pharmaceutical combination of a therapeutic oligonucleotide targeting hbv and a tlr7 agonist for treatment of hbv
KR20220119616A (ko) 2019-12-24 2022-08-30 에프. 호프만-라 로슈 아게 Tlr7 효현제를 이용하여 바이러스 감염을 치료하는 방법
EP4071163A4 (en) * 2020-01-30 2024-03-20 Eisai R&D Management Co., Ltd. NUCLEIC ACID COMPLEX AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING SAME
MX2022009763A (es) 2020-02-10 2022-09-09 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodos para silenciar la expresion del factor de crecimiento endotelial vascular a (vegf-a).
KR20220143106A (ko) 2020-02-18 2022-10-24 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 아포지질단백질 C3 (APOC3) iRNA 조성물 및 이의 사용 방법
CR20220485A (es) 2020-02-28 2022-11-10 Ionis Pharmaceuticals Inc Compuestos y métodos para modular smn2
KR20230011913A (ko) 2020-03-04 2023-01-25 버브 테라퓨틱스, 인크. 표적화된 rna 전달을 위한 조성물 및 방법
WO2021178607A1 (en) 2020-03-05 2021-09-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof for treating or preventing complement component c3-associated diseases
KR20220152270A (ko) 2020-03-06 2022-11-15 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 트랜스티레틴 (ttr)의 발현을 억제하기 위한 조성물 및 방법
BR112022017822A2 (pt) 2020-03-06 2022-11-08 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composições de irna de cetoexocinase (khk) e métodos de uso das mesmas
EP4121534A1 (en) 2020-03-18 2023-01-25 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating subjects having a heterozygous alanine-glyoxylate aminotransferase gene (agxt) variant
EP4126967A1 (en) 2020-03-23 2023-02-08 Amgen Inc. Monoclonal antibodies to chemically-modified nucleic acids and uses thereof
WO2021193965A1 (ja) * 2020-03-26 2021-09-30 国立研究開発法人国立循環器病研究センター Ａｐｏｃ３を標的としたアンチセンス核酸
WO2021195307A1 (en) 2020-03-26 2021-09-30 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Coronavirus irna compositions and methods of use thereof
WO2021202902A1 (en) 2020-04-01 2021-10-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. ALPHA-2A ADRENERGIC RECEPTOR (ADRA2A) iRNA AGENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
EP4133078A1 (en) 2020-04-06 2023-02-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for silencing myoc expression
CA3179678A1 (en) 2020-04-07 2021-10-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for silencing scn9a expression
EP4133076A1 (en) 2020-04-07 2023-02-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Angiotensin-converting enzyme 2 (ace2) irna compositions and methods of use thereof
WO2021206922A1 (en) 2020-04-07 2021-10-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Transmembrane serine protease 2 (tmprss2) irna compositions and methods of use thereof
AU2021260934A1 (en) 2020-04-21 2022-11-24 Flagship Pioneering, Inc. Bifunctional molecules and methods of using thereof
KR20230018377A (ko) 2020-04-27 2023-02-07 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 아포지질단백질 e (apoe) irna 제제 조성물 및 이의 사용 방법
CN111575279A (zh) * 2020-04-27 2020-08-25 江苏为真生物医药技术股份有限公司 利用asgpr小分子配体特异性捕获肝细胞外囊泡或循环肿瘤细胞的方法
MX2022013606A (es) 2020-04-30 2023-01-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composiciones de ácido ribonucleico interferente (arni) del factor b de complemento (cfb) y métodos de uso de las mismas.
MX2022013707A (es) 2020-05-01 2022-12-07 Ionis Pharmaceuticals Inc Compuestos y metodos para modular atxn1.
BR112022022889A2 (pt) 2020-05-11 2023-04-04 Stoke Therapeutics Inc Oligômeros antissentido de opa1 para tratamento de condições e doenças
WO2021231675A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of argininosuccinate synthetase (ass1)
EP4150078A1 (en) 2020-05-15 2023-03-22 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of argininosuccinate lyase (asl)
WO2021231679A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of gap junction protein beta 2 (gjb2)
WO2021231673A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of leucine rich repeat kinase 2 (lrrk2)
WO2021231692A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of otoferlin (otof)
EP4150089A1 (en) 2020-05-15 2023-03-22 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of retinoschisin 1 (rs1)
WO2021231680A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of methyl-cpg binding protein 2 (mecp2)
WO2021231685A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of transmembrane channel-like protein 1 (tmc1)
CN113683651A (zh) * 2020-05-19 2021-11-23 上海京新生物医药有限公司 一种GalNAc中间体的制备方法
WO2021242883A1 (en) 2020-05-26 2021-12-02 University Of Massachusetts Synthetic oligonucleotides having regions of block and cluster modifications
AR122534A1 (es) 2020-06-03 2022-09-21 Triplet Therapeutics Inc Métodos para el tratamiento de los trastornos de expansión por repetición de nucleótidos asociados con la actividad de msh3
CN116075592A (zh) 2020-06-09 2023-05-05 阿尔尼拉姆医药品有限公司 用于沉默gpam(线粒体甘油-3-磷酸酰基转移酶1)表达的sirna组合物和方法
WO2021252557A1 (en) 2020-06-09 2021-12-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Rnai compositions and methods of use thereof for delivery by inhalation
US20240033278A9 (en) * 2020-06-10 2024-02-01 Medshine Discovery Inc. Conjugate group and conjugate
TW202214856A (zh) 2020-06-18 2022-04-16 美商阿尼拉製藥公司 黃嘌呤脫氫酶（ＸＤＨ）ｉＲＮＡ組成物及其使用之方法
KR20230043114A (ko) * 2020-06-24 2023-03-30 사프렘 테크놀로지스 비.브이. Galnac과 사포닌의 접합체, 상기 접합체 및 galnac-올리고뉴클레오티드 접합체를 포함하는 치료적 조성물
AR122731A1 (es) 2020-06-26 2022-10-05 Hoffmann La Roche Oligonucleótidos mejorados para modular la expresión de fubp1
BR112022024206A2 (pt) 2020-06-29 2023-01-03 Ionis Pharmaceuticals Inc Compostos e métodos para modular plp1
CN111744019B (zh) 2020-07-01 2023-08-04 深圳瑞吉生物科技有限公司 基于甘露糖的mRNA靶向递送系统及其应用
KR20230050336A (ko) 2020-07-10 2023-04-14 인스티튜트 내셔널 드 라 싼테 에 드 라 리셰르셰 메디칼르 (인 썸) 뇌전증을 치료하기 위한 방법과 조성물
AU2021315992A1 (en) 2020-07-28 2023-02-09 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for reducing app expression
IL300258A (en) 2020-08-07 2023-03-01 Ionis Pharmaceuticals Inc Compounds and methods for modulating SCN2A
PE20230993A1 (es) * 2020-08-13 2023-06-23 Amgen Inc Construcciones de iarn y metodos para inhibir la expresion de marc1
JP2023538630A (ja) 2020-08-21 2023-09-08 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するためのａ１ｃｆ阻害剤の使用
EP4217489A1 (en) 2020-09-24 2023-08-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Dipeptidyl peptidase 4 (dpp4) irna compositions and methods of use thereof
JP2023544413A (ja) 2020-10-05 2023-10-23 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｇタンパク質共役受容体７５（ＧＰＲ７５）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法
US20240035029A1 (en) 2020-10-16 2024-02-01 Sanofi Rna compositions and methods for inhibiting lipoprotein(a)
JP2023546103A (ja) 2020-10-16 2023-11-01 サノフイ Ａｎｇｐｔｌ３を阻害するための新規のｒｎａ組成物および方法
EP4232582A1 (en) 2020-10-23 2023-08-30 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Mucin 5b (muc5b) irna compositions and methods of use thereof
KR20230107625A (ko) 2020-11-13 2023-07-17 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 응고 인자 V(F5) iRNA 조성물 및 이의 사용 방법
EP4136092B1 (en) 2020-11-18 2024-07-31 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating angiotensinogen expression
WO2022106695A1 (en) 2020-11-23 2022-05-27 Alpha Anomeric Sas Nucleic acid duplexes
WO2022125490A1 (en) 2020-12-08 2022-06-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Coagulation factor x (f10) irna compositions and methods of use thereof
GB2603454A (en) 2020-12-09 2022-08-10 Ucl Business Ltd Novel therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
JP2023554346A (ja) 2020-12-18 2023-12-27 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド 第ｘｉｉ因子を調節するための化合物及び方法
US20250304966A1 (en) 2020-12-23 2025-10-02 Argonaute RNA Limited Treatment of cardiovascular disease
EP4273245A4 (en) 2020-12-29 2024-12-11 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. NUCLEIC ACID, PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND SIRNA CONJUGATE WITH THE NUCLEIC ACID, MANUFACTURING PROCESS THEREOF AND USE THEREOF
EP4274896A1 (en) 2021-01-05 2023-11-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Complement component 9 (c9) irna compositions and methods of use thereof
CA3204340A1 (en) * 2021-01-30 2022-08-04 Ahmad Ali MORTAZAVI Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof
WO2022162157A1 (en) * 2021-01-30 2022-08-04 E-Therapeutics Plc Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof
WO2022162161A1 (en) * 2021-01-30 2022-08-04 E-Therapeutics Plc Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof
EP4175964A1 (en) * 2021-01-30 2023-05-10 E-Therapeutics plc Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof
CN116848127A (zh) * 2021-01-30 2023-10-03 e-生物有限公司 缀合寡核苷酸化合物、其制备方法和用途
TW202246500A (zh) 2021-02-02 2022-12-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用於抑制 ｒｔｅｌ１ 表現之增強型寡核苷酸
WO2022174000A2 (en) 2021-02-12 2022-08-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Superoxide dismutase 1 (sod1) irna compositions and methods of use thereof for treating or preventing superoxide dismutase 1- (sod1-) associated neurodegenerative diseases
EP4294449A1 (en) * 2021-02-18 2023-12-27 Oneglobe Holdings Limited Compositions for conjugating oligonucleotides and carbohydrates
CN117222739A (zh) 2021-02-25 2023-12-12 阿尔尼拉姆医药品有限公司 朊病毒蛋白(prnp)irna组合物和其使用方法
TW202302847A (zh) 2021-02-26 2023-01-16 美商艾拉倫製藥股份有限公司 己酮糖激酶（ＫＨＫ）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
IL305442A (en) 2021-03-04 2023-10-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc Angiopoietin-like 3 (ANGPTL3) IRNA compositions and methods of using them
WO2022189861A1 (en) 2021-03-08 2022-09-15 Tollys Carbohydrate conjugates of tlr3 ligands and uses thereof
PE20240696A1 (es) 2021-03-08 2024-04-10 Servier Lab Oligonucleotidos antisentido para inhibir la expresion de la alfa-sinucleina
WO2022192519A1 (en) 2021-03-12 2022-09-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glycogen synthase kinase 3 alpha (gsk3a) irna compositions and methods of use thereof
WO2022212231A2 (en) 2021-03-29 2022-10-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Huntingtin (htt) irna agent compositions and methods of use thereof
EP4314293A1 (en) 2021-04-01 2024-02-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Proline dehydrogenase 2 (prodh2) irna compositions and methods of use thereof
US12084662B2 (en) 2021-04-14 2024-09-10 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating PNPLA3 expression
MX2023012586A (es) 2021-04-26 2023-10-31 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composiciones de acido ribonucleico de interferencia (arni) de serina 6, proteasa transmembranaria (tmprss6) y sus metodos de uso.
JP2024519293A (ja) 2021-04-29 2024-05-10 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド シグナル伝達兼転写活性化因子６（ＳＴＡＴ６）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法
WO2022232650A1 (en) * 2021-04-30 2022-11-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing agt expression
WO2022245583A1 (en) 2021-05-18 2022-11-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Sodium-glucose cotransporter-2 (sglt2) irna compositions and methods of use thereof
EP4341405A1 (en) 2021-05-20 2024-03-27 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for adar-mediated editing
WO2022256283A2 (en) 2021-06-01 2022-12-08 Korro Bio, Inc. Methods for restoring protein function using adar
EP4347823A1 (en) 2021-06-02 2024-04-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Patatin-like phospholipase domain containing 3 (pnpla3) irna compositions and methods of use thereof
CN117561334A (zh) 2021-06-04 2024-02-13 阿尔尼拉姆医药品有限公司 人染色体9开放阅读框72（C9ORF72）iRNA药剂组合物和其使用方法
EP4351541A2 (en) 2021-06-08 2024-04-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating or preventing stargardt's disease and/or retinal binding protein 4 (rbp4)-associated disorders
KR20240023602A (ko) 2021-06-18 2024-02-22 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 Ifnar1 발현을 감소시키기 위한 화합물 및 방법
AU2022299169A1 (en) 2021-06-23 2024-02-08 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Optimized anti-flt1 oligonucleotide compounds for treatment of preeclampsia and other angiogenic disorders
CA3224134A1 (en) * 2021-06-24 2022-12-29 Patrick Joseph ANTONELLIS Novel therapeutic delivery moieties and uses thereof
CA3224145A1 (en) * 2021-06-24 2022-12-29 Melissa Ann Bellinger Novel rna therapeutics and uses thereof
US20230194709A9 (en) 2021-06-29 2023-06-22 Seagate Technology Llc Range information detection using coherent pulse sets with selected waveform characteristics
WO2023278410A1 (en) 2021-06-29 2023-01-05 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for adar-mediated editing
IL309296A (en) 2021-06-30 2024-02-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc Methods and compositions for the treatment of angiotensinogen-related disorder (AGT-)
CN117377765A (zh) * 2021-07-02 2024-01-09 上海拓界生物医药科技有限公司 一种核酸配体及其缀合物、其制备方法和用途
US20240285547A1 (en) 2021-07-08 2024-08-29 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Nephrotoxicity reducing agent
US20240285770A1 (en) 2021-07-08 2024-08-29 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Precipitation suppressing agent
CN118475355A (zh) 2021-07-08 2024-08-09 日本新药株式会社 肾毒性减轻剂
WO2023003805A1 (en) 2021-07-19 2023-01-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating subjects having or at risk of developing a non-primary hyperoxaluria disease or disorder
CA3226878A1 (en) 2021-07-23 2023-01-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Beta-catenin (ctnnb1) irna compositions and methods of use thereof
JP2024529437A (ja) 2021-07-29 2024-08-06 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド ３－ヒドロキシ－３－メチルグリタル－ＣＯＡレダクターゼ（ＨＭＧＣＲ）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法
CA3227852A1 (en) 2021-08-03 2023-02-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Transthyretin (ttr) irna compositions and methods of use thereof
JP2024530647A (ja) * 2021-08-03 2024-08-23 ヴァーヴ・セラピューティクス，インコーポレーテッド 標的ｒｎａ送達のための組成物および方法
IL310295A (en) 2021-08-04 2024-03-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc iRNA compositions and methods for silencing angiotensinogen (AGT)
KR20240045300A (ko) 2021-08-13 2024-04-05 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 인자 XII (F12) iRNA 조성물 및 이의 사용 방법
WO2023034837A2 (en) 2021-08-31 2023-03-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Cell death-inducing dffa-like effector b (cideb) irna compositions and methods of use thereof
WO2023041508A2 (en) 2021-09-14 2023-03-23 Argonaute RNA Limited Treatment of cardiovascular disease
JP2024535850A (ja) 2021-09-17 2024-10-02 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 補体成分（Ｃ３）をサイレンシングするためのｉＲＮＡ組成物および方法
JP2024534508A (ja) * 2021-09-18 2024-09-20 成都心正合医▲葯▼科技有限公司 Ｌｐａ阻害剤及びその使用
AU2022345881A1 (en) 2021-09-20 2024-03-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Inhibin subunit beta e (inhbe) modulator compositions and methods of use thereof
KR20240082358A (ko) * 2021-09-23 2024-06-10 상하이 아르고 바이오파마슈티칼 씨오., 엘티디. 치료제의 표적화된 전달을 위한 디아민 스캐폴드를 갖는 다가 리간드 클러스터
KR20240067943A (ko) 2021-09-24 2024-05-17 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 미소관 연관 단백질 타우(MAPT) iRNA 제제 조성물 및 이의 사용 방법
MX2024004011A (es) 2021-10-01 2024-07-01 Adarx Pharmaceuticals Inc Composiciones moduladoras de precalicreína y métodos de uso de estas.
US20250352667A1 (en) 2021-10-22 2025-11-20 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for disrupting nrf2-keap1 protein interaction by adar mediated rna editing
TW202333749A (zh) 2021-10-29 2023-09-01 美商艾拉倫製藥股份有限公司 補體因子ｂ（ｃｆｂ）ｉｒｎａ組成物及其使用方法
WO2023076450A2 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. HUNTINGTIN (HTT) iRNA AGENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
CA3234478A1 (en) 2021-11-11 2023-05-19 Souphalone LUANGSAY Pharmaceutical combinations for treatment of hbv
IL312811A (en) 2021-11-16 2024-07-01 Shanghai Argo Biopharmaceutical Co Ltd Composition and method for inhibiting angiotensinogen (agt) protein expression
WO2023102188A1 (en) 2021-12-03 2023-06-08 Quralis Corporation Gapmer antisense oligonucleotides with modified backbone chemistries
GB202117758D0 (en) 2021-12-09 2022-01-26 Ucl Business Ltd Therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
WO2023109935A1 (zh) * 2021-12-16 2023-06-22 上海拓界生物医药科技有限公司 一种dsRNA、其制备方法及应用
WO2023109940A1 (zh) * 2021-12-16 2023-06-22 上海拓界生物医药科技有限公司 靶向lpa的sirna及缀合物
EP4448106A1 (en) 2021-12-17 2024-10-23 Hoffmann-La Roche Inc. Combination of oligonucleotides for modulating rtel1 and fubp1
WO2023131926A2 (en) 2022-01-10 2023-07-13 Ausper Biopharma Co., Ltd. Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression
US20260076990A1 (en) * 2022-01-20 2026-03-19 Tuojie Biotech (Shanghai) Co., Ltd. Dsrna, use thereof and preparation method therefor
TW202345865A (zh) * 2022-01-24 2023-12-01 大陸商上海舶望製藥有限公司 抑制LPA(Apo(a))蛋白表達的組合物和方法
WO2023141314A2 (en) 2022-01-24 2023-07-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Heparin sulfate biosynthesis pathway enzyme irna agent compositions and methods of use thereof
EP4471140A1 (en) * 2022-01-30 2024-12-04 Rona Bioscience, Limited Targeting ligand containing n-acetylgalactosamine
US20240167040A1 (en) 2022-02-21 2024-05-23 Hoffmann-La Roche Inc. Antisense oligonucleotide
CN120129745A (zh) 2022-03-10 2025-06-10 日本新药株式会社 抗病毒反义低聚物
CN114703184B (zh) * 2022-03-11 2024-06-18 厦门甘宝利生物医药有限公司 Lpa抑制剂及其用途
EP4493570A2 (en) 2022-03-16 2025-01-22 Empirico Inc. Galnac compositions for improving sirna bioavailability
JPWO2023176863A1 (sr) 2022-03-16 2023-09-21
KR20240161967A (ko) 2022-03-16 2024-11-13 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 트랜스페린 수용체 2 의 발현을 억제하는 siRNA
KR20240163743A (ko) 2022-03-28 2024-11-19 엠피리코 인크. 변형된 올리고뉴클레오티드
CN115028670B (zh) * 2022-06-24 2023-07-28 四川大学华西医院 一种n-乙酰基-d-半乳糖胺三聚体前体的制备方法
WO2024001172A1 (en) * 2022-06-27 2024-01-04 Ractigen Therapeutics Oligonucleotide modulators activating complement factor h expression
WO2024013360A1 (en) 2022-07-15 2024-01-18 Proqr Therapeutics Ii B.V. Chemically modified oligonucleotides for adar-mediated rna editing
EP4555086A1 (en) 2022-07-15 2025-05-21 ProQR Therapeutics II B.V. Oligonucleotides for adar-mediated rna editing and use thereof
CN121271867A (zh) * 2022-08-05 2026-01-06 厦门甘宝利生物医药有限公司 一种抑制apoc3基因表达的rna抑制剂及其应用
JP2025527531A (ja) 2022-08-18 2025-08-22 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド ユニバーサル非標的ｓｉｒｎａ組成物およびその使用方法
JP2025532593A (ja) 2022-09-15 2025-10-01 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド １７ｂ－ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１３型（ｈｓｄ１７ｂ１３）ｉｒｎａ組成物およびその使用方法
JP2025532127A (ja) 2022-09-23 2025-09-29 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド Ｍｅｃｐ２発現を低減する化合物及び方法
WO2024098061A2 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Genkardia Inc. Oligonucleotide-based therapeutics targeting cyclin d2 for the treatment of heart failure
WO2024106539A1 (ja) * 2022-11-18 2024-05-23 株式会社ボナック リガンドコンジュゲート物質及びそれを含む核酸並びにその用途
WO2024108217A1 (en) 2022-11-18 2024-05-23 Genkardia Inc. Methods and compositions for preventing, treating, or reversing cardiac diastolic dysfunction
IL321006A (en) * 2022-11-23 2025-07-01 Pretzel Therapeutics Inc Compositions and methods for treatment of cancer and metabolic disease
CN120225676A (zh) 2022-12-02 2025-06-27 上海舶望制药有限公司 双环脱碱基核酸类似物以及由它们制备的寡聚化合物
EP4592432A3 (en) 2022-12-19 2025-10-29 Arnatar Therapeutics Arnatar compounds and methods for enhanced cellular uptake
AU2023408479A1 (en) 2022-12-19 2025-05-01 Arnatar Therapeutics, Inc Advanced rna targeting (arnatar)
AR131419A1 (es) * 2022-12-21 2025-03-19 Lilly Co Eli TERAPÉUTICOS NOVEDOSOS DE iARN DE FAS Y USOS DE ESTOS
IL321969A (en) * 2023-01-10 2025-09-01 Ausperbio Therapeutics Inc Multi-stranded antisense oligonucleotides modified for use
EP4662311A2 (en) 2023-02-09 2025-12-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Reversir molecules and methods of use thereof
EP4671371A1 (en) * 2023-02-24 2025-12-31 Yaopharma Co., Ltd. DOUBLE-STRANDED ARNSI ANALOGUES INCLUDING R AND E AND THEIR CONJUGATES
WO2024220930A2 (en) 2023-04-20 2024-10-24 Adarx Pharmaceuticals, Inc. Mapt-modulating compositions and methods of use thereof
WO2024220746A2 (en) 2023-04-21 2024-10-24 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Rnai agents targeting fatty acid synthase and related methods
WO2024221135A1 (en) * 2023-04-23 2024-10-31 Ausper Biopharma Co., Ltd. Oligonucleotides for use in modulating immune responses against hepatitis b viral infection
US20240374741A1 (en) * 2023-05-11 2024-11-14 Synerk Biotech Limited Compound, a conjugate and uses thereof
CN121398851A (zh) 2023-05-12 2026-01-23 阿达尔克斯制药有限公司 Nmda配体缀合的化合物及其用途
UY40743A (es) * 2023-05-19 2024-12-13 Shanghai Argo Biopharmaceutical Co Ltd COMPOSICIONES Y MÉTODOS PARA INHIBIR LA EXPRESIÓN DEL factor de coagulación XI (FXI)
IL324720A (en) 2023-05-26 2026-01-01 Adarx Pharmaceuticals Inc SOD1 modulators and methods of using them
CN121079106A (zh) * 2023-05-31 2025-12-05 上海拓界生物医药科技有限公司 一种靶向LPA的dsRNA及其应用
CN121358748A (zh) * 2023-06-12 2026-01-16 大睿生物医药科技(上海)有限公司 包含糖的寡核苷酸递送配体
EP4562158A1 (en) 2023-06-13 2025-06-04 Arnatar Therapeutics, Inc Advanced rna targeting (arnatar) for angiotensinogen
TW202503061A (zh) * 2023-06-16 2025-01-16 大陸商益杰立科（上海）生物科技有限公司 靶向ｂ型肝炎病毒基因的表觀編輯工具
CN121712891A (zh) 2023-06-20 2026-03-20 阿达尔克斯制药有限公司 Lrrk2调节组合物及其使用方法
CN119219716A (zh) * 2023-06-30 2024-12-31 上海维申医药有限公司 新型GalNAc的靶向递送片段及其制备和应用
WO2025015338A1 (en) 2023-07-13 2025-01-16 Korro Bio, Inc. Rna-editing oligonucleotides and uses thereof
AU2024287308A1 (en) 2023-07-13 2025-12-18 Korro Bio, Inc. Rna-editing oligonucleotides and uses thereof
GB202311334D0 (en) 2023-07-24 2023-09-06 Astrazeneca Ab Multivalent cargo-carrying complexes and uses thereof
GB202311324D0 (en) 2023-07-24 2023-09-06 Astrazeneca Ab Multivalent cargo-carrying complexes and uses thereof
US20250051771A1 (en) * 2023-07-24 2025-02-13 Astrazeneca Ab Multivalent cargo-carrying complexes and uses thereof
KR20260049597A (ko) 2023-08-04 2026-04-14 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 Ctnnb1-관련 질환을 치료하기 위한 방법 및 조성물
AU2024321098A1 (en) 2023-08-09 2026-03-19 Beijing Foyou Pharma Co., Ltd Sirna for inhibiting dgat2 gene expression, sirna conjugate or prodrug and pharmaceutical composition thereof, and use thereof
WO2025036916A1 (en) 2023-08-16 2025-02-20 Les Laboratoires Servier Oligonucleotides for modulating kcnt1 expression
CN121729496A (zh) * 2023-08-31 2026-03-24 正大天晴药业集团股份有限公司 靶向凝血因子xi的双链核糖核酸
TW202526017A (zh) 2023-09-14 2025-07-01 美商Ionis製藥公司 用於減少ａｐｏｃｉｉｉ表現的化合物及方法
CN116925160B (zh) * 2023-09-15 2023-12-08 天津全和诚科技有限责任公司 一种GalNAc含糖环中间体及其制备方法
WO2025064819A1 (en) * 2023-09-21 2025-03-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for inhibiting lpa
WO2025064821A2 (en) 2023-09-21 2025-03-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for inhibiting lpa
GB202314724D0 (en) 2023-09-26 2023-11-08 Astrazeneca Ab compounds and methods for reducing psd3 expression
WO2025072748A2 (en) * 2023-09-29 2025-04-03 Insitro, Inc. Compositions and methods for treating nonalcoholic fatty liver disease
CN118680948B (zh) * 2023-10-20 2025-08-22 思合基因(北京)生物科技有限公司 寡核苷酸及其在抗乙型肝炎病毒中的应用
CN121909203A (zh) 2023-10-31 2026-04-21 科罗生物公司 包含氨基磷酸酯核苷酸间键的寡核苷酸
WO2025113470A1 (en) * 2023-11-27 2025-06-05 Shanghai Argo Biopharmaceutical Co., Ltd. Compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin (ttr)
CN120098993A (zh) * 2023-12-05 2025-06-06 广东东阳光药业股份有限公司 一种新型的双链siRNA、其缀合物及其用途
CN117568313B (zh) * 2024-01-15 2024-04-26 上海贝斯昂科生物科技有限公司 基因编辑组合物及其用途
CN120309684A (zh) * 2024-01-15 2025-07-15 武汉人福创新药物研发中心有限公司 靶向化合物及其用途
TW202546227A (zh) 2024-01-18 2025-12-01 荷蘭商Ｐｒｏｑｒ治療上市公司Ｉｉ 用於治療賀勒氏症候群（ｈｕｒｌｅｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）的反義寡核苷酸
WO2025165891A1 (en) 2024-01-29 2025-08-07 Arnatar Therapeutics, Inc Translation enhancing nucleic acid compounds: aso coupled translation - upregulation 1 (act-up1) and uses thereof
EP4671372A3 (en) 2024-01-29 2026-03-11 Arnatar Therapeutics, Inc Translation enhancing nucleic acid compounds: aso coupled translation - upregulation 1 (act-up1) and uses thereof
TW202602463A (zh) 2024-03-22 2026-01-16 日商武田藥品工業股份有限公司 用於抑制細胞色素ｐ４５０家族７次家族ａ成員１（ｃｙｐ７ａ１）表現之組成物及方法
CN120173947A (zh) * 2024-03-28 2025-06-20 施能康医药科技(苏州)有限公司 靶向凝血因子xi的核酸及其用途
GB202404661D0 (en) 2024-04-02 2024-05-15 Proqr Therapeutics Ii Bv Antisense oligoncleotides for the treatment of liver disease
WO2025224230A1 (en) 2024-04-25 2025-10-30 Proqr Therapeutics Ii B.V. Antisense oligonucleotides for the treatment of fatty liver disease
CN118146284B (zh) * 2024-05-08 2024-07-26 北京悦康科创医药科技股份有限公司 一种GalNAc化合物、其与寡核苷酸缀合物及制备方法
WO2025242702A1 (en) * 2024-05-23 2025-11-27 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Enzymatic process for producing n-acetyl galactosamine clusters
WO2026006436A1 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of tar dna binding protein 43 kda (tdp43)
GB202410081D0 (en) 2024-07-11 2024-08-28 Proqr Therapeutics Ii Bv Antisense oligonucleotides for the treatment of cardiovascular disease
US20260015617A1 (en) 2024-07-12 2026-01-15 Novartis Ag DOUBLE STRANDED RNAi AGENTS, COMPOSITIONS AND METHODS OF USE
WO2026050243A1 (en) 2024-08-26 2026-03-05 Korro Bio, Inc. Galnac conjugated oligonucleotides for rna editing
KR20260032888A (ko) * 2024-08-30 2026-03-10 올릭스 주식회사 APOC3 유전자를 표적으로 하는 RNAi 제제 및 이의 용도
WO2026080323A1 (en) 2024-10-09 2026-04-16 Quralis Corporation Treatment of neurological diseases using modulators of unc13a gene transcripts

Family Cites Families (385)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4500707A (en) 1980-02-29 1985-02-19 University Patents, Inc. Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides
US5132418A (en) 1980-02-29 1992-07-21 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US4973679A (en) 1981-03-27 1990-11-27 University Patents, Inc. Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates
US4668777A (en) 1981-03-27 1987-05-26 University Patents, Inc. Phosphoramidite nucleoside compounds
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
DE3329892A1 (de) 1983-08-18 1985-03-07 Köster, Hubert, Prof. Dr., 2000 Hamburg Verfahren zur herstellung von oligonucleotiden
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
USRE34036E (en) 1984-06-06 1992-08-18 National Research Development Corporation Data transmission using a transparent tone-in band system
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US4751219A (en) 1985-02-05 1988-06-14 Nederlandse Centrale Organisatie Voor Toegepast-Natuur-Wetenschappelijk Onderzoek Synthetic glycolipides, a process for the preparation thereof and several uses for these synthetic glycolipides
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
DE3788914T2 (de) 1986-09-08 1994-08-25 Ajinomoto Kk Verbindungen zur Spaltung von RNS an eine spezifische Position, Oligomere, verwendet bei der Herstellung dieser Verbindungen und Ausgangsprodukte für die Synthese dieser Oligomere.
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
GB8712540D0 (en) * 1987-05-28 1987-07-01 Ucb Sa Expression of human proapolipoprotein a-i
AU598946B2 (en) 1987-06-24 1990-07-05 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Nucleoside derivatives
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
ATE151467T1 (de) 1987-11-30 1997-04-15 Univ Iowa Res Found Durch modifikationen an der 3'-terminalen phosphodiesterbindung stabilisierte dna moleküle, ihre verwendung als nukleinsäuresonden sowie als therapeutische mittel zur hemmung der expression spezifischer zielgene
US5403711A (en) 1987-11-30 1995-04-04 University Of Iowa Research Foundation Nucleic acid hybridization and amplification method for detection of specific sequences in which a complementary labeled nucleic acid probe is cleaved
WO1989009221A1 (en) 1988-03-25 1989-10-05 University Of Virginia Alumni Patents Foundation Oligonucleotide n-alkylphosphoramidates
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5194599A (en) 1988-09-23 1993-03-16 Gilead Sciences, Inc. Hydrogen phosphonodithioate compositions
US5256775A (en) 1989-06-05 1993-10-26 Gilead Sciences, Inc. Exonuclease-resistant oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5721218A (en) 1989-10-23 1998-02-24 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides with inverted polarity
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
ATE269870T1 (de) 1989-10-24 2004-07-15 Isis Pharmaceuticals Inc 2'-modifizierte oligonukleotide
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5264562A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
US5130302A (en) 1989-12-20 1992-07-14 Boron Bilogicals, Inc. Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US6005087A (en) 1995-06-06 1999-12-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US7101993B1 (en) 1990-01-11 2006-09-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides containing 2′-O-modified purines
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5623065A (en) 1990-08-13 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped 2' modified oligonucleotides
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5457191A (en) 1990-01-11 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5859221A (en) 1990-01-11 1999-01-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US5220007A (en) 1990-02-15 1993-06-15 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of RNA and production of encoded polypeptides
US5149797A (en) 1990-02-15 1992-09-22 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of rna and production of encoded polypeptides
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
GB9009980D0 (en) 1990-05-03 1990-06-27 Amersham Int Plc Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides
ES2116977T3 (es) 1990-05-11 1998-08-01 Microprobe Corp Soportes solidos para ensayos de hibridacion de acidos nucleicos y metodos para inmovilizar oligonucleotidos de modo covalente.
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
US5378825A (en) 1990-07-27 1995-01-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5223618A (en) 1990-08-13 1993-06-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
BR9106702A (pt) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Inc Analogo de oligonucleotideos e processos para modular a producao de uma proteina por um organismo e para tratar um organismo
US5386023A (en) 1990-07-27 1995-01-31 Isis Pharmaceuticals Backbone modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through reductive coupling
ES2083593T3 (es) 1990-08-03 1996-04-16 Sterling Winthrop Inc Compuestos y metodos para inhibir la expresion de genes.
US5177196A (en) 1990-08-16 1993-01-05 Microprobe Corporation Oligo (α-arabinofuranosyl nucleotides) and α-arabinofuranosyl precursors thereof
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
CA2092002A1 (en) 1990-09-20 1992-03-21 Mark Matteucci Modified internucleoside linkages
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
US6582908B2 (en) 1990-12-06 2003-06-24 Affymetrix, Inc. Oligonucleotides
US5948903A (en) 1991-01-11 1999-09-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of 3-deazapurines
US5672697A (en) 1991-02-08 1997-09-30 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside 5'-methylene phosphonates
US7015315B1 (en) 1991-12-24 2006-03-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligonucleotides
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
EP0538194B1 (de) 1991-10-17 1997-06-04 Novartis AG Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
TW393513B (en) 1991-11-26 2000-06-11 Isis Pharmaceuticals Inc Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
AU3222793A (en) 1991-11-26 1993-06-28 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
US5792608A (en) 1991-12-12 1998-08-11 Gilead Sciences, Inc. Nuclease stable and binding competent oligomers and methods for their use
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
KR940703846A (ko) * 1991-12-24 1994-12-12 비. 린네 파샬 갭(gap)이 형성된 2′ 변성된 올리고뉴클레오티드(gapped 2′ modifed oligonucleotides)
US5700922A (en) 1991-12-24 1997-12-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules
FR2687679B1 (fr) 1992-02-05 1994-10-28 Centre Nat Rech Scient Oligothionucleotides.
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
US5652355A (en) 1992-07-23 1997-07-29 Worcester Foundation For Experimental Biology Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
CA2140542A1 (en) 1992-07-27 1994-02-03 Abeysingle Padmapriya Oligonucleotide alkylphosphonothioates
EP0673559A1 (en) 1992-12-14 1995-09-27 Honeywell Inc. Motor system with individually controlled redundant windings
KR960701077A (ko) 1993-01-25 1996-02-24 다알렌 반스톤 올리고누클레오티드 알킬포스포네이트 및 알킬포스포노티오에이트(oligonucleotide alkylphosphonates and alkylphosphonothioates)
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
GB9304620D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Compounds
AU6449394A (en) 1993-03-30 1994-10-24 Sterling Winthrop Inc. Acyclic nucleoside analogs and oligonucleotide sequences containing them
CA2159629A1 (en) 1993-03-31 1994-10-13 Sanofi Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5801154A (en) 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5446137B1 (en) 1993-12-09 1998-10-06 Behringwerke Ag Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides
EP0733059B1 (en) 1993-12-09 2000-09-13 Thomas Jefferson University Compounds and methods for site-directed mutations in eukaryotic cells
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5728518A (en) 1994-01-12 1998-03-17 The Immune Response Corporation Antiviral poly-and oligonucleotides
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5627053A (en) 1994-03-29 1997-05-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
US5646269A (en) 1994-04-28 1997-07-08 Gilead Sciences, Inc. Method for oligonucleotide analog synthesis
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
US5599706A (en) 1994-09-23 1997-02-04 Stinchcomb; Dan T. Ribozymes targeted to apo(a) mRNA
US5681940A (en) * 1994-11-02 1997-10-28 Icn Pharmaceuticals Sugar modified nucleosides and oligonucleotides
US6908903B1 (en) 1994-12-07 2005-06-21 Aletheon Pharmaceuticals, Inc. Cluster clearing agents
US6172045B1 (en) 1994-12-07 2001-01-09 Neorx Corporation Cluster clearing agents
US5652356A (en) 1995-08-17 1997-07-29 Hybridon, Inc. Inverted chimeric and hybrid oligonucleotides
US20030119724A1 (en) 1995-11-22 2003-06-26 Ts`O Paul O.P. Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
AU1039397A (en) 1995-11-22 1997-06-27 Johns Hopkins University, The Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
US5998203A (en) 1996-04-16 1999-12-07 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures
US6620916B1 (en) 1996-09-26 2003-09-16 Ajinomoto Co., Inc. Modified physiologically active proteins and medicinal compositions containing the same
US6770748B2 (en) 1997-03-07 2004-08-03 Takeshi Imanishi Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue
USRE44779E1 (en) 1997-03-07 2014-02-25 Santaris Pharma A/S Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogues
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
AU9063398A (en) 1997-09-12 1999-04-05 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US20040171564A1 (en) 1997-11-20 2004-09-02 Honkanen Richard E. Antisense oligonucleotide modulation of human serine/threonine protein phosphatase gene expression
US20030228597A1 (en) 1998-04-13 2003-12-11 Cowsert Lex M. Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation
US6300319B1 (en) 1998-06-16 2001-10-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Targeted oligonucleotide conjugates
US6043352A (en) 1998-08-07 2000-03-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-Dimethylaminoethyloxyethyl-modified oligonucleotides
JP2004505885A (ja) 1998-08-19 2004-02-26 ノース　アメリカン　ワクチン，　インコーポレイテッド Ｎ−アクリロイル化ポリサッカリドを用いて産生されたワクチンとして有用な免疫原性β−プロピオンアミド連結ポリサッカリド−タンパク質結合体
PL346645A1 (en) * 1998-08-19 2002-02-25 North American Vaccine IMMUNOGENIC β-PROPIONAMIDO-LINKED POLYSACCHARIDE PROTEIN CONJUGATE USEFUL AS A VACCINE PRODUCED USING AN N-ACRYLOYLATED POLYSACCHARIDE
US6166239A (en) 1998-09-04 2000-12-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide protecting groups
CZ296576B6 (cs) 1999-02-12 2006-04-12 Sankyo Company Limited Nukleosidový analog a oligonukleotidový analog a farmaceutický prostredek, sonda a primer s jeho obsahem
US20030170249A1 (en) 1999-02-19 2003-09-11 Hakomori Sen-Itiroh Vaccines directed to cancer-associated carbohydrate antigens
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
US6159694A (en) 1999-04-08 2000-12-12 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of stat3 expression
US7098192B2 (en) 1999-04-08 2006-08-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of STAT3 expression
WO2000063364A2 (en) 1999-04-21 2000-10-26 American Home Products Corporation Methods and compositions for inhibiting the function of polynucleotide sequences
EP1178999B1 (en) 1999-05-04 2007-03-14 Santaris Pharma A/S L-ribo-lna analogues
US6525191B1 (en) 1999-05-11 2003-02-25 Kanda S. Ramasamy Conformationally constrained L-nucleosides
US6383812B1 (en) 1999-05-28 2002-05-07 Academia Sinica Anti liver disease drug R-YEEE and method of synthesizing branched galactose-terminal glycoproteins
US20080281041A1 (en) 1999-06-07 2008-11-13 Rozema David B Reversibly Masked Polymers
US8137695B2 (en) 2006-08-18 2012-03-20 Arrowhead Madison Inc. Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
US8541548B2 (en) 1999-06-07 2013-09-24 Arrowhead Madison Inc. Compounds and methods for reversible modification of biologically active molecules
US6656730B1 (en) 1999-06-15 2003-12-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides conjugated to protein-binding drugs
CA2379152A1 (en) 1999-07-16 2001-01-25 Hyseq, Inc. Novel angiopoietin materials and methods
JP4151751B2 (ja) 1999-07-22 2008-09-17 第一三共株式会社 新規ビシクロヌクレオシド類縁体
DE19935303A1 (de) 1999-07-28 2001-02-08 Aventis Pharma Gmbh Oligonukleotide zur Inhibierung der Expression von humanem eg5
US20020082227A1 (en) 1999-09-30 2002-06-27 Scott Henry Use of oligonucleotides for inhibition of complement activation
US20050112118A1 (en) 1999-12-02 2005-05-26 Myriad Genetics, Incorporated Compositions and methods for treating inflammatory disorders
WO2001042499A1 (en) 1999-12-09 2001-06-14 Sankyo Company, Limited Method of testing remedy or preventive for hyperlipemia
ES2261270T3 (es) 1999-12-30 2006-11-16 K.U. LEUVEN RESEARCH &amp; DEVELOPMENT Acidos nucleicos que contienen ciclohexeno.
US6261840B1 (en) 2000-01-18 2001-07-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of PTP1B expression
US7179796B2 (en) 2000-01-18 2007-02-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of PTP1B expression
US20020055479A1 (en) 2000-01-18 2002-05-09 Cowsert Lex M. Antisense modulation of PTP1B expression
US6602857B1 (en) 2000-01-18 2003-08-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of PTP1B expression
US7491805B2 (en) 2001-05-18 2009-02-17 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
US7833992B2 (en) 2001-05-18 2010-11-16 Merck Sharpe & Dohme Conjugates and compositions for cellular delivery
US8202979B2 (en) 2002-02-20 2012-06-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid
WO2001060860A2 (en) 2000-02-17 2001-08-23 Millennium Predictive Medicine, Inc. Genes differentially expressed in human prostate cancer and their use
WO2002018388A1 (fr) 2000-08-29 2002-03-07 Takeshi Imanishi Analogues de nucleosides et derives d'oligonucleotides renfermant ces analogues
US6426220B1 (en) 2000-10-30 2002-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of calreticulin expression
US6906182B2 (en) 2000-12-01 2005-06-14 Cell Works Therapeutics, Inc. Conjugates of glycosylated/galactosylated peptide, bifunctional linker, and nucleotidic monomers/polymers, and related compositions and method of use
US20030077829A1 (en) 2001-04-30 2003-04-24 Protiva Biotherapeutics Inc.. Lipid-based formulations
IL159153A0 (en) 2001-06-08 2004-06-01 Sankyo Co Methods for testing drugs for treating or preventing diseases such as hyperlipidemia
US20030158403A1 (en) 2001-07-03 2003-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US20030175906A1 (en) 2001-07-03 2003-09-18 Muthiah Manoharan Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
JP2005504020A (ja) 2001-07-03 2005-02-10 アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド ヌクレアーゼ耐性キメラオリゴヌクレオチド
US7425545B2 (en) 2001-07-25 2008-09-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of C-reactive protein expression
US6964950B2 (en) 2001-07-25 2005-11-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of C-reactive protein expression
US7259150B2 (en) 2001-08-07 2007-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of apolipoprotein (a) expression
US7227014B2 (en) 2001-08-07 2007-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of apolipoprotein (a) expression
WO2003014397A1 (en) 2001-08-09 2003-02-20 Biomedlab Corporation Probe for detection of enteric virus detection kit and method for enteric virus with the same
AU2002334307A1 (en) 2001-09-04 2003-03-18 Exiqon A/S Novel lna compositions and uses thereof
US7439043B2 (en) 2001-10-10 2008-10-21 Neose Technologies, Inc. Galactosyl nucleotide sugars
JP5105696B2 (ja) 2001-11-16 2012-12-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド アンジオポエチン様タンパク質３Ａｎｇｐｔｌ３含有組成物とその使用方法
US20100240730A1 (en) 2002-02-20 2010-09-23 Merck Sharp And Dohme Corp. RNA Interference Mediated Inhibition of Gene Expression Using Chemically Modified Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
EP1540004A4 (en) 2002-07-31 2007-10-03 Nucleonics Inc DOUBLE-STRING RNA STRUCTURES AND CONSTRUCTS AND METHOD FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF
WO2004014933A1 (en) 2002-08-07 2004-02-19 University Of Massachusetts Compositions for rna interference and methods of use thereof
EP1543019A2 (en) 2002-09-11 2005-06-22 Santaris Pharma A/S Modified pna molecules
AU2003284323A1 (en) 2002-10-18 2004-05-04 Alnylam Pharmaceuticals Inc Double-stranded rna structures and constructs, and methods for generating and using the same
CA2504694C (en) 2002-11-05 2013-10-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
US8604183B2 (en) 2002-11-05 2013-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation
EP2336318B1 (en) 2002-11-13 2013-04-24 Genzyme Corporation Antisense modulation of apolipoprotein b expression
US20060009410A1 (en) 2002-11-13 2006-01-12 Crooke Rosanne M Effects of apolipoprotein B inhibition on gene expression profiles in animals
US7511131B2 (en) 2002-11-13 2009-03-31 Genzyme Corporation Antisense modulation of apolipoprotein B expression
EP2305812A3 (en) 2002-11-14 2012-06-06 Dharmacon, Inc. Fuctional and hyperfunctional sirna
CA2941594C (en) 2002-12-20 2021-07-06 Celera Corporation Genetic polymorphisms of the protein receptor c (procr) associated with myocardial infarction, methods of detection and uses thereof
US6673661B1 (en) 2002-12-20 2004-01-06 Taiwan Semiconductor Manufacturing Co., Ltd. Self-aligned method for forming dual gate thin film transistor (TFT) device
WO2004063208A1 (en) 2003-01-09 2004-07-29 Postech Foundation New phosphoramidite compounds
WO2004072046A2 (en) 2003-02-12 2004-08-26 Carex S.A. Quinoline derivatives and their use for modulation of lxr activity
US7803781B2 (en) 2003-02-28 2010-09-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of growth hormone receptor expression and insulin-like growth factor expression
WO2004080406A2 (en) 2003-03-07 2004-09-23 Alnylam Pharmaceuticals Therapeutic compositions
AU2004227414A1 (en) * 2003-04-03 2004-10-21 Alnylam Pharmaceuticals iRNA conjugates
US7598227B2 (en) 2003-04-16 2009-10-06 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of apolipoprotein C-III expression
US7851615B2 (en) 2003-04-17 2010-12-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipophilic conjugated iRNA agents
DK1620544T3 (en) 2003-04-17 2019-01-14 Alnylam Pharmaceuticals Inc MODIFIED iRNA AGENTS
US7723509B2 (en) 2003-04-17 2010-05-25 Alnylam Pharmaceuticals IRNA agents with biocleavable tethers
US7399853B2 (en) 2003-04-28 2008-07-15 Isis Pharmaceuticals Modulation of glucagon receptor expression
US7750142B2 (en) 2003-04-28 2010-07-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of glucagon receptor expression
JPWO2004101619A1 (ja) 2003-05-15 2006-10-26 塩野義製薬株式会社 機能的糖ペプチドの合理的設計および合成
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
EP1661905B9 (en) 2003-08-28 2012-12-19 IMANISHI, Takeshi Novel artificial nucleic acids of n-o bond crosslinkage type
WO2005027962A1 (en) 2003-09-18 2005-03-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4’-thionucleosides and oligomeric compounds
KR100750788B1 (ko) 2003-09-18 2007-08-20 아이시스 파마수티컬즈 인코포레이티드 ｅＩＦ4Ｅ 발현의 조정
EP1687410A4 (en) * 2003-10-07 2008-04-09 Isis Pharmaceuticals Inc ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE OPTIMIZED FOR KIDNEY TARGETING
US7959919B2 (en) 2003-11-19 2011-06-14 Novelmed Therapeutics, Inc. Method of inhibiting factor B-mediated complement activation
WO2005065686A1 (en) 2004-01-07 2005-07-21 Adipogen Pharmaceuticals Pty Limited Differentiation modulating agents and uses therefor
US20050164271A1 (en) 2004-01-20 2005-07-28 Sanjay Bhanot Modulation of glucocorticoid receptor expression
DE602005024779D1 (de) * 2004-02-05 2010-12-30 Japan Science & Tech Agency Linkerverbindung, ligandenkomplex und verfahren zu deren herstellung
US20050244869A1 (en) 2004-04-05 2005-11-03 Brown-Driver Vickie L Modulation of transthyretin expression
JPWO2005097155A1 (ja) 2004-04-08 2008-02-28 タカラバイオ株式会社 神経突起伸長誘導剤
EP1752536A4 (en) 2004-05-11 2008-04-16 Alphagen Co Ltd POLYNUCLEOTIDE CAUSING RNA INTERFERENCE AND METHOD OF REGULATING GENE EXPRESSION WITH THE USE OF THE SAME
AU2005252663B2 (en) 2004-06-03 2011-07-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double strand compositions comprising differentially modified strands for use in gene modulation
WO2006014678A2 (en) 2004-07-20 2006-02-09 Genentech, Inc. Compositions and methods of using angiopoietin-like 4 protein
WO2006014729A2 (en) 2004-07-20 2006-02-09 Genentech, Inc. Inhibitors of angiopoietin-like 4 protein, combinations, and their use
PL1786472T3 (pl) * 2004-08-10 2013-06-28 Kastle Therapeutics Llc Antysensowna modulacja ekspresji apolipoproteiny B
EP1791567B1 (en) 2004-08-10 2015-07-29 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chemically modified oligonucleotides
US20090203132A1 (en) 2004-09-09 2009-08-13 Swayze Eric E Pyrrolidinyl groups for attaching conjugates to oligomeric compounds
WO2006044531A2 (en) 2004-10-13 2006-04-27 Isis Parmaceuticals, Inc. Antisense modulation of ptp1b expression
US20080261905A1 (en) 2004-11-08 2008-10-23 K.U. Leuven Research And Development Modified Nucleosides for Rna Interference
US20060148740A1 (en) 2005-01-05 2006-07-06 Prosensa B.V. Mannose-6-phosphate receptor mediated gene transfer into muscle cells
EP1841867A1 (en) 2005-01-24 2007-10-10 Avaris AB COMPLEX CONTAINING SiRNA, ShRNA OR ANTISENSE MOLECULE AND FUNCTIONAL ENTITY, FOR IMPROVED SPECIFICITY AND DELIVERY
AU2006291836B2 (en) * 2005-09-15 2012-02-23 Santaris Pharma A/S RNA antagonist compounds for the inhibition of Apo-Bl00 expression
BRPI0616370A2 (pt) 2005-09-19 2011-06-14 Johnson & Johnson Pharmaceutical Res & Dev L L C modulaÇço da expressço de receptor de glucocorticàide
WO2007035771A2 (en) 2005-09-19 2007-03-29 Johnson & Johnson Pharmaceutical Research & Development, L.L.C. Modulation of glucagon receptor expression
PT2161038E (pt) * 2006-01-26 2014-03-10 Isis Pharmaceuticals Inc Composições e suas utilizações dirigidas à huntingtina
JP5342881B2 (ja) 2006-01-27 2013-11-13 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド ６−修飾された二環式核酸類似体
US7569686B1 (en) 2006-01-27 2009-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs
ES2366973T3 (es) * 2006-05-05 2011-10-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compuestos y procedimiento para modular la expresión génica.
EP2023940B1 (en) 2006-05-05 2011-06-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating expression of sglt2
US7666854B2 (en) 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
AU2007249349B2 (en) 2006-05-11 2012-03-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-Modified bicyclic nucleic acid analogs
US8101585B2 (en) 2006-08-04 2012-01-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the modulation of JNK proteins
US8658211B2 (en) 2006-08-18 2014-02-25 Arrowhead Madison Inc. Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
WO2008036841A2 (en) 2006-09-22 2008-03-27 Dharmacon, Inc. Tripartite oligonucleotide complexes and methods for gene silencing by rna interference
WO2008049085A1 (en) 2006-10-18 2008-04-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense compounds
JP2010510807A (ja) 2006-11-27 2010-04-08 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド 高コレステロール血症を治療するための方法
US8093222B2 (en) 2006-11-27 2012-01-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
PL2121751T3 (pl) 2006-12-08 2017-07-31 Lexicon Pharmaceuticals, Inc. Przeciwciała monoklonalne przeciwko ANGPTL3
CA2839162A1 (en) * 2006-12-20 2008-06-26 Xoma Technology Ltd. Methods for the treatment of il-1-.beta. related diseases
US20100190837A1 (en) 2007-02-15 2010-07-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-Substituted-2-F' Modified Nucleosides and Oligomeric Compounds Prepared Therefrom
EP2604284A1 (en) 2007-02-16 2013-06-19 KTB Tumorforschungsgesellschaft mbH Receptor And Antigen Targeted Prodrug
CA2678774A1 (en) 2007-03-01 2008-09-04 Advanced Vision Therapies, Inc. Treatment of diseases characterized by inflammation
US20100055782A1 (en) 2007-03-02 2010-03-04 Mdrna, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting myc gene expression and uses thereof
CA2685127C (en) 2007-04-23 2019-01-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glycoconjugates of rna interference agents
EP2170917B1 (en) 2007-05-30 2012-06-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
EP2173760B2 (en) 2007-06-08 2015-11-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
WO2009003009A1 (en) 2007-06-26 2008-12-31 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted pyrrolidine as anti-infectives
CA2692579C (en) 2007-07-05 2016-05-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-disubstituted bicyclic nucleic acid analogs
WO2009023855A2 (en) 2007-08-15 2009-02-19 Isis Pharmaceuticals, Inc. Tetrahydropyran nucleic acid analogs
EP2192924B1 (en) * 2007-08-20 2017-10-11 Protalix Ltd. Saccharide-containing protein conjugates and uses thereof
WO2009046141A2 (en) 2007-10-01 2009-04-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of fibroblast growth factor receptor 4 expression
CN102076852A (zh) 2007-11-09 2011-05-25 Isis药物公司 因子7表达的调节
US8546556B2 (en) 2007-11-21 2013-10-01 Isis Pharmaceuticals, Inc Carbocyclic alpha-L-bicyclic nucleic acid analogs
WO2009082607A2 (en) * 2007-12-04 2009-07-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Targeting lipids
KR20100111282A (ko) 2007-12-27 2010-10-14 가부시끼가이샤 스텔릭 사이세이 이카가꾸 겐뀨쇼 당쇄 관련 유전자, 및 그의 이용
MX2010008394A (es) 2008-01-31 2010-11-12 Alnylam Pharmaceuticals Inc Metodos optimizados para administracion de arndc focalizando el gen pcsk9.
WO2009100320A2 (en) 2008-02-07 2009-08-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexitol nucleic acid analogs
US20110130440A1 (en) 2008-03-26 2011-06-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Non-natural ribonucleotides, and methods of use thereof
WO2009126933A2 (en) 2008-04-11 2009-10-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components
WO2009143369A2 (en) 2008-05-22 2009-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Method of preparing nucleosides and analogs thereof without using chromatography
WO2009148605A2 (en) 2008-06-04 2009-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
EP3093351B1 (en) 2008-07-09 2018-04-18 Celera Corporation Genetic polymorphisms associated with cardiovascular diseases, methods of detection and uses thereof
WO2010017509A1 (en) 2008-08-07 2010-02-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of transthyretin expression for the treatment of cns related disorders
EP2342616A2 (en) 2008-09-23 2011-07-13 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with cycloaddition
US8604192B2 (en) 2008-09-24 2013-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Cyclohexenyl nucleic acids analogs
WO2010036698A1 (en) 2008-09-24 2010-04-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted alpha-l-bicyclic nucleosides
MX2011004097A (es) 2008-10-15 2011-07-28 Isis Pharmaceuticals Inc Modulacion de la expresion del factor 11.
EA036772B1 (ru) * 2008-10-20 2020-12-18 Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. Композиции и способы для ингибирования экспрессии транстиретина
EP2358398A2 (en) 2008-10-24 2011-08-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds and methods
WO2010048549A2 (en) 2008-10-24 2010-04-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5' and 2' bis-substituted nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
HUE037082T2 (hu) 2008-11-10 2018-08-28 Arbutus Biopharma Corp Új lipidek és készítmények terápiás hatóanyagok szállítására
CA2750561C (en) 2009-01-26 2017-10-10 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing apolipoprotein c-iii expression
EP3243504A1 (en) 2009-01-29 2017-11-15 Arbutus Biopharma Corporation Improved lipid formulation
EP2669290A1 (en) 2009-03-02 2013-12-04 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Nucleic Acid Chemical Modifications
FR2943060B1 (fr) 2009-03-13 2013-01-04 Commissariat Energie Atomique Agents chelatants d'ions metalliques, leurs procedes de preparation et leurs applications
NZ595891A (en) 2009-04-15 2013-06-28 Isis Pharmaceuticals Inc Modulation of inflammatory responses by factor xi
KR20180094137A (ko) 2009-05-05 2018-08-22 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 지질 조성물
ES2804764T3 (es) 2009-06-01 2021-02-09 Halo Bio Rnai Therapeutics Inc Polinucleótidos para la interferencia de ARN multivalente, composiciones y métodos de uso de los mismos
MX342785B (es) 2009-06-10 2016-10-12 Alnylam Pharmaceuticals Inc Formulacion mejorada de lipido.
NZ597504A (en) 2009-06-15 2013-10-25 Alnylam Pharmaceuticals Inc Lipid formulated dsrna targeting the pcsk9 gene
JP2014501097A (ja) 2009-07-06 2014-01-20 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 生物由来物質の産生を高めるための組成物及び方法
WO2011005861A1 (en) 2009-07-07 2011-01-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide end caps
US8927513B2 (en) 2009-07-07 2015-01-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5′ phosphate mimics
US20120214862A1 (en) 2009-07-16 2012-08-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of factor 7 expression
EP2462153B1 (en) 2009-08-06 2015-07-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs
WO2011019839A2 (en) * 2009-08-12 2011-02-17 The Medicines Company Glycopeptide and lipoglycopeptide antibiotics with improved solubility
US20120270929A1 (en) 2009-09-25 2012-10-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of ttc39 expression to increase hdl
TWI458493B (zh) 2009-09-25 2014-11-01 Iner Aec Executive Yuan 新穎肝標靶藥劑與合成方法
KR20120095397A (ko) 2009-10-16 2012-08-28 글락소 그룹 리미티드 Ｈｂｖ 안티센스 억제제
TWI391144B (zh) 2009-10-26 2013-04-01 Iner Aec Executive Yuan 一種定量肝殘餘功能的檢驗方法與其新穎肝受體造影檢驗藥劑
TWI388338B (zh) 2009-10-26 2013-03-11 Iner Aec Executive Yuan 對聚合醣鏈進行放射標誌以作為肝受體造影劑之方法
US9101643B2 (en) * 2009-11-03 2015-08-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin (TTR)
WO2011072290A2 (en) 2009-12-11 2011-06-16 The Regents Of The University Of Michigan Targeted dendrimer-drug conjugates
US8653047B2 (en) 2010-01-08 2014-02-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of angiopoietin-like 3 expression
US9198972B2 (en) 2010-01-28 2015-12-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s)
DK2539451T3 (da) 2010-02-24 2016-04-04 Arrowhead Res Corp Sammensætninger til målrettet tilførsel af siRNA
WO2011115818A1 (en) 2010-03-17 2011-09-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-substituted bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
US8349308B2 (en) 2010-03-26 2013-01-08 Mersana Therapeutics, Inc. Modified polymers for delivery of polynucleotides, method of manufacture, and methods of use thereof
US20130109817A1 (en) 2010-03-26 2013-05-02 Mersana Therapeutics, Inc. Modified Polymers for Delivery of Polynucleotides, Method of Manufacture, and Methods of Use Thereof
MA34097B1 (fr) 2010-03-30 2013-03-05 Novartis Ag Utilisations d'inhibiteurs de dgat1
WO2011123621A2 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Alnylam Pharmaceuticals Inc. 2' and 5' modified monomers and oligonucleotides
US10913767B2 (en) 2010-04-22 2021-02-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs
WO2011133871A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5'-end derivatives
WO2011139699A2 (en) 2010-04-28 2011-11-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5' modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
KR101869570B1 (ko) 2010-04-28 2018-06-20 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 변형된 뉴클레오사이드 및 그로부터 제조된 올리고머 화합물
RS56011B1 (sr) 2010-04-29 2017-09-29 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulacija ekspresije transtiretina
WO2011163121A1 (en) 2010-06-21 2011-12-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery
CA2812046A1 (en) 2010-09-15 2012-03-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified irna agents
US8603994B2 (en) 2010-11-11 2013-12-10 Valted, Llc Transcriptional repression leading to Parkinson's disease
WO2012068187A1 (en) 2010-11-19 2012-05-24 Merck Sharp & Dohme Corp. Poly(amide) polymers for the delivery of oligonucleotides
US8501930B2 (en) 2010-12-17 2013-08-06 Arrowhead Madison Inc. Peptide-based in vivo siRNA delivery system
EP2652134B1 (en) 2010-12-17 2017-03-01 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Galactose cluster-pharmacokinetic modulator targeting moiety for sirna
ES2605990T3 (es) 2010-12-29 2017-03-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Conjugados de molécula pequeña para la administración intracelular de ácidos nucleicos
US10017764B2 (en) 2011-02-08 2018-07-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
JP5943993B2 (ja) 2011-04-01 2016-07-05 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッドＩｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． 転写のシグナル伝達及び活性化因子３（ｓｔａｔ３）発現の調節
WO2012142458A1 (en) 2011-04-13 2012-10-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of ptp1b expression
PH12019502377A1 (en) 2011-04-21 2022-11-14 Isis Pharmaceuticals Inc Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression
WO2012145674A1 (en) 2011-04-21 2012-10-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression
CN107854478A (zh) 2011-04-27 2018-03-30 Ionis制药公司 载脂蛋白ciii（apociii）表达的调节
WO2012174154A1 (en) 2011-06-13 2012-12-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of inflammatory responses by factor vii
WO2012174476A2 (en) * 2011-06-16 2012-12-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of fibroblast growth factor receptor 4 expression
CN103649103A (zh) 2011-06-21 2014-03-19 阿尔尼拉姆医药品有限公司 用于抑制载脂蛋白c-iii(apoc3)基因表达的组合物与方法
ES2923573T3 (es) 2011-06-21 2022-09-28 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composiciones de ARNi de proteína 3 de tipo angiopoyetina (ANGPTL3) y métodos de uso de las mismas
WO2012177639A2 (en) 2011-06-22 2012-12-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Bioprocessing and bioproduction using avian cell lines
US20130017250A1 (en) * 2011-07-15 2013-01-17 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods For High Density Lipoprotein Cholesterol Regulation
WO2013032829A1 (en) 2011-08-26 2013-03-07 Arrowhead Research Corporation Poly(vinyl ester) polymers for in vivo nucleic acid delivery
EP3453761A1 (en) 2011-08-29 2019-03-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomer-conjugate complexes and their use
ES2796556T3 (es) 2011-09-20 2020-11-27 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulación antisentido de la expresión de GCGR
JP2015501155A (ja) 2011-10-25 2015-01-15 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド Ｇｃｃｒ発現のアンチセンス調整
HUE048622T2 (hu) 2011-11-18 2020-08-28 Alnylam Pharmaceuticals Inc RNSi szerek, készítmények és alkalmazási eljárások transztiretin (TTR) asszociált betegségek kezelésére
HK1205189A1 (en) 2012-02-08 2015-12-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating factor vii expression
US9340784B2 (en) 2012-03-19 2016-05-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating alpha-1-antitrypsin expression
WO2013142571A2 (en) 2012-03-20 2013-09-26 Cornell University Assays for the identification of compounds that modulate lipid homeostasis
US9133461B2 (en) * 2012-04-10 2015-09-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the ALAS1 gene
WO2013159109A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression
WO2013159108A2 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
WO2013165816A2 (en) 2012-05-02 2013-11-07 Merck Sharp & Dohme Corp. SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) COMPOSITIONS
AR090906A1 (es) 2012-05-02 2014-12-17 Merck Sharp & Dohme Conjugados que contienen tetragalnac y procedimientos para la administracion de oligonucleotidos
US20160002624A1 (en) 2012-05-17 2016-01-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide compositions
US9574193B2 (en) 2012-05-17 2017-02-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating apolipoprotein (a) expression
RU2748495C2 (ru) 2012-05-24 2021-05-26 Ионис Фармасьютикалз, Инк. Способы и композиции для модулирования экспрессии аполипопротеина (а)
US20150322428A1 (en) 2012-06-18 2015-11-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for improved cellular uptake of antisense compounds
AU2013299717B2 (en) 2012-08-06 2018-06-28 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Carbohydrate conjugated RNA agents and process for their preparation
WO2014059353A2 (en) 2012-10-11 2014-04-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleosides and uses thereof
US10077443B2 (en) 2012-11-15 2018-09-18 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotide conjugates
CN104955952A (zh) 2013-01-30 2015-09-30 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 Lna寡核苷酸碳水化合物缀合物
WO2014118272A1 (en) 2013-01-30 2014-08-07 Santaris Pharma A/S Antimir-122 oligonucleotide carbohydrate conjugates
AU2014216137B2 (en) 2013-02-14 2018-05-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of Apolipoprotein C-III (ApoCIII) expression in lipoprotein lipase deficient (LPLD) populations
DK2991656T3 (da) * 2013-05-01 2020-03-23 Ionis Pharmaceuticals Inc Sammensætninger og fremgangsmåder til modulering af apolipoprotein c-iii-ekspression
US9884045B2 (en) 2013-05-16 2018-02-06 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. Transplantation adjuvant in cell therapy using neural progenitor cells
WO2014205449A2 (en) 2013-06-21 2014-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating apolipoprotein c-iii expression for improving a diabetic profile
EP3564374A1 (en) 2013-06-21 2019-11-06 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulation of target nucleic acids
ES2770667T3 (es) 2013-06-27 2020-07-02 Roche Innovation Ct Copenhagen As Oligómeros antisentido y conjugados que se dirigen a PCSK9
EP3017044B1 (en) 2013-07-02 2020-02-26 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of growth hormone receptor
JP6702862B2 (ja) 2013-07-11 2020-06-03 アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． オリゴヌクレオチド−リガンドコンジュゲートおよびそれらの調製方法
DK3043827T3 (da) 2013-09-13 2019-08-26 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulatorer af komplement faktor b
WO2015042447A1 (en) 2013-09-20 2015-03-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Targeted therapeutic nucleosides and their use
KR20160083876A (ko) 2013-11-14 2016-07-12 로슈 이노베이션 센터 코펜하겐 에이/에스 ApoB 안티센스 접합체 화합물
US10150965B2 (en) 2013-12-06 2018-12-11 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the specific inhibition of transthyretin (TTR) by double-stranded RNA
JP6482475B2 (ja) * 2014-01-07 2019-03-13 レナセラピューティクス株式会社 アンチセンスオリゴヌクレオチド及び糖誘導体を含む二本鎖オリゴヌクレオチド
PT3137605T (pt) 2014-05-01 2020-12-18 Ionis Pharmaceuticals Inc Composições e métodos para modulação da expressão de angiopoietina de tipo 3
US10098959B2 (en) 2014-05-01 2018-10-16 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Method for synthesis of reactive conjugate clusters
EP3862362A3 (en) 2014-05-01 2021-10-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugates of modified antisense oligonucleotides and their use for modulating pkk expression
CN110903337A (zh) 2014-05-01 2020-03-24 Ionis制药公司 用于调节生长激素受体表达的组合物和方法
SG11201608502TA (en) 2014-05-01 2016-11-29 Ionis Pharmaceuticals Inc Compositions and methods for modulating complement factor b expression
US10570169B2 (en) 2014-05-22 2020-02-25 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
WO2015188194A1 (en) 2014-06-06 2015-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for enhanced intestinal absorption of conjugated oligomeric compounds
US20190046555A1 (en) * 2015-11-06 2019-02-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds for use in therapy
AU2016349625B2 (en) * 2015-11-06 2022-07-07 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulating apolipoprotein (a) expression
US11511972B1 (en) 2019-09-26 2022-11-29 Versatile, Inc. System for tracking lifting events at a construction site

Also Published As

Publication number Publication date
NZ740338A (en) 2022-04-29
EP4438129A2 (en) 2024-10-02
EP2992009B1 (en) 2020-06-24
KR20160002976A (ko) 2016-01-08
AU2017200365A1 (en) 2017-02-23
MX2020002184A (es) 2020-07-14
BR112015027369B1 (pt) 2021-06-08
AU2017200950B2 (en) 2019-01-17
JP2024010070A (ja) 2024-01-23
RS58981B1 (sr) 2019-08-30
JP2021107408A (ja) 2021-07-29
NZ631512A (en) 2016-10-28
JP2019056001A (ja) 2019-04-11
AU2017200950A1 (en) 2017-03-02
AU2018267625A1 (en) 2018-12-13
KR102558571B1 (ko) 2023-07-21
EP2992097A2 (en) 2016-03-09
EP3633039A1 (en) 2020-04-08
IL272617A (en) 2020-03-31
HK1221485A1 (en) 2017-06-02
JP2020007361A (ja) 2020-01-16
JP2016522817A (ja) 2016-08-04
MX384824B (es) 2025-04-01
JP6995478B2 (ja) 2022-01-14
US9145558B2 (en) 2015-09-29
US9714421B2 (en) 2017-07-25
KR20160002977A (ko) 2016-01-08
AU2019204784B2 (en) 2022-01-27
JP2024116224A (ja) 2024-08-27
AU2019200820B2 (en) 2020-04-30
DK2992098T3 (da) 2019-06-17
JP6866459B2 (ja) 2021-04-28
EP3524680B1 (en) 2020-11-11
IL264241A (en) 2019-02-28
PL2992098T3 (pl) 2019-09-30
FR25C1033I1 (fr) 2025-11-21
IL284593B (en) 2022-10-01
IL315582A (en) 2024-11-01
MX2015015239A (es) 2016-10-03
JP2020074787A (ja) 2020-05-21
CN119913147A (zh) 2025-05-02
ZA201507218B (en) 2023-09-27
IL274064B (en) 2021-06-30
MX2021008901A (es) 2021-08-19
WO2014179627A3 (en) 2015-04-16
JP2026053619A (ja) 2026-03-25
US20180044676A1 (en) 2018-02-15
NZ753018A (en) 2022-01-28
US20150176007A1 (en) 2015-06-25
RU2015151200A (ru) 2019-01-14
HK1221486A1 (en) 2017-06-02
HRP20201378T1 (hr) 2020-11-27
US10927372B2 (en) 2021-02-23
AU2014259757B2 (en) 2017-03-02
JP6456362B2 (ja) 2019-01-23
PT3524680T (pt) 2021-01-04
EP2991661B1 (en) 2019-03-13
KR20180051678A (ko) 2018-05-16
ME03390B (me) 2020-01-20
WO2014179629A3 (en) 2015-01-22
RU2019110030A (ru) 2019-05-06
EP2992098A4 (en) 2017-01-11
JP6652602B2 (ja) 2020-02-26
MY178929A (en) 2020-10-23
KR20160003723A (ko) 2016-01-11
EP2992097A4 (en) 2017-01-04
IL264241B (en) 2020-04-30
RU2670614C9 (ru) 2018-11-23
JP6592486B2 (ja) 2019-10-16
US10883104B2 (en) 2021-01-05
EP2991661A4 (en) 2017-02-15
BR112015027321A8 (pt) 2018-01-02
IL270464B (en) 2021-07-29
JP7799103B2 (ja) 2026-01-14
ES2730015T3 (es) 2019-11-07
CN112921036A (zh) 2021-06-08
CA2921514A1 (en) 2014-11-06
BR112015027319A8 (pt) 2018-01-02
KR20210151260A (ko) 2021-12-13
DOP2016000287A (es) 2017-02-15
JP7177127B2 (ja) 2022-11-22
AU2020217347A1 (en) 2020-08-27
EA201891479A1 (ru) 2018-11-30
IL296543A (en) 2022-11-01
US12291709B2 (en) 2025-05-06
MX373306B (es) 2020-05-20
CN108064162A (zh) 2018-05-22
CN112921036B (zh) 2025-08-19
JP2020039355A (ja) 2020-03-19
US20260035695A1 (en) 2026-02-05
US11299736B1 (en) 2022-04-12
JP2021020901A (ja) 2021-02-18
US20240352455A1 (en) 2024-10-24
FR26C1005I1 (fr) 2026-03-06
MX2019010443A (es) 2019-10-17
AU2014259756B2 (en) 2017-02-23
EP2991656A2 (en) 2016-03-09
KR20240042220A (ko) 2024-04-01
WO2014179627A2 (en) 2014-11-06
KR102919162B1 (ko) 2026-01-29
AU2020233603A1 (en) 2020-10-01
KR102212275B1 (ko) 2021-02-05
RU2686080C2 (ru) 2019-04-24
BR112015027377B1 (pt) 2023-01-10
IL264580A (en) 2019-02-28
DK2992009T3 (da) 2020-09-14
KR20230113835A (ko) 2023-08-01
JP6639629B2 (ja) 2020-02-05
JP2018183184A (ja) 2018-11-22
SI2992009T1 (sl) 2020-10-30
CA2921514C (en) 2023-10-24
HUE043697T2 (hu) 2019-09-30
SG11201508870VA (en) 2015-11-27
KR102138781B1 (ko) 2020-07-28
US20220275365A9 (en) 2022-09-01
EA031393B1 (ru) 2018-12-28
AU2018267625B2 (en) 2020-09-10
BR122018009831B1 (pt) 2021-12-21
DK2991656T3 (da) 2020-03-23
AU2019202598A1 (en) 2019-05-02
ES2885174T3 (es) 2021-12-13
BR112015027369A2 (pt) 2017-09-26
ES2819213T3 (es) 2021-04-15
US20210395734A1 (en) 2021-12-23
PT2992098T (pt) 2019-07-05
KR20200090966A (ko) 2020-07-29
MX2015015234A (es) 2016-10-03
PH12019501191A1 (en) 2021-03-01
US20190055554A1 (en) 2019-02-21
RU2697152C2 (ru) 2019-08-12
KR102235678B1 (ko) 2021-04-05
MX2015015264A (es) 2016-08-12
EP3690049A1 (en) 2020-08-05
PH12015502493B1 (en) 2019-09-25
CA2921167A1 (en) 2014-11-06
IL261901B (en) 2020-05-31
US20200224198A1 (en) 2020-07-16
PH12015502493A1 (en) 2016-02-22
JP6387084B2 (ja) 2018-09-05
CY1123369T1 (el) 2021-12-31
BR112015027322A2 (pt) 2017-09-26
EP4529927A2 (en) 2025-04-02
AU2019203674A1 (en) 2019-06-27
CA3253971A1 (en) 2026-03-02
IL296543B2 (en) 2025-02-01
CN110042098B (zh) 2023-02-24
IL284000A (en) 2021-07-29
AU2014259750B2 (en) 2019-02-28
EP2991656B1 (en) 2019-12-18
IL284593B2 (en) 2023-02-01
BR112015027369A8 (pt) 2018-01-02
LT2992009T (lt) 2020-11-10
AU2014259757A1 (en) 2015-10-22
RU2650510C2 (ru) 2018-04-16
US20230151365A1 (en) 2023-05-18
EA201592093A1 (ru) 2016-06-30
RU2670614C2 (ru) 2018-10-24
IL296543B1 (en) 2024-10-01
SI2992098T1 (sl) 2019-06-28
JP6216444B2 (ja) 2017-10-18
JP2020058370A (ja) 2020-04-16
CN111593051A (zh) 2020-08-28
US20160090596A1 (en) 2016-03-31
RU2015151202A (ru) 2017-06-06
JP2016526874A (ja) 2016-09-08
EP4155403A1 (en) 2023-03-29
AU2014259750A1 (en) 2015-10-22
PE20161430A1 (es) 2017-01-06
US9181550B2 (en) 2015-11-10
AU2019204784C1 (en) 2022-11-03
JP2023012548A (ja) 2023-01-25
CA3257251A1 (en) 2026-03-02
US20210024923A1 (en) 2021-01-28
AU2022202770B2 (en) 2024-10-03
SMT201900316T1 (it) 2019-07-11
CN105392488A (zh) 2016-03-09
AU2020207820A1 (en) 2020-08-06
MX381034B (es) 2025-04-01
RU2015151204A (ru) 2017-06-02
US10844379B2 (en) 2020-11-24
US20160017323A1 (en) 2016-01-21
BR112015027321A2 (pt) 2017-09-26
US9932581B2 (en) 2018-04-03
US12509684B2 (en) 2025-12-30
US20240401038A1 (en) 2024-12-05
US9957504B2 (en) 2018-05-01
JP2021074021A (ja) 2021-05-20
AU2017200365C1 (en) 2019-04-18
NO2025037I1 (no) 2025-08-13
JP7429103B2 (ja) 2024-02-07
EP2992097B1 (en) 2019-11-06
MX2015015263A (es) 2016-12-16
SG10201906382QA (en) 2019-08-27
BR112015027322A8 (pt) 2018-01-02
ZA201507216B (en) 2017-08-30
UA121017C2 (uk) 2020-03-25
IL264580B (en) 2020-04-30
PL2992009T3 (pl) 2020-11-30
RU2018112167A (ru) 2019-03-07
US20190367914A1 (en) 2019-12-05
AU2022202770A1 (en) 2022-05-19
SG10201801507RA (en) 2018-03-28
CN105377887A (zh) 2016-03-02
CA2921162A1 (en) 2014-11-06
WO2014179626A3 (en) 2015-02-26
US20140343123A1 (en) 2014-11-20
RU2018136140A3 (sr) 2022-04-27
US11851655B2 (en) 2023-12-26
WO2014179627A9 (en) 2015-02-26
RU2018136140A (ru) 2018-12-17
IL273205A (en) 2020-04-30
CA2921509A1 (en) 2014-11-06
LT2992098T (lt) 2019-07-10
AU2014259755B2 (en) 2018-08-30
MA60161A1 (fr) 2024-09-30
JP2016522683A (ja) 2016-08-04
CN105392488B (zh) 2021-04-30
JP6769866B2 (ja) 2020-10-14
US9932580B2 (en) 2018-04-03
AU2024266799A1 (en) 2024-12-12
WO2014179626A2 (en) 2014-11-06
KR102315836B1 (ko) 2021-10-22
US20150126719A1 (en) 2015-05-07
KR20160002974A (ko) 2016-01-08
US20210130823A1 (en) 2021-05-06
RU2015151200A3 (sr) 2019-01-14
EP2991661A1 (en) 2016-03-09
IL242126B (en) 2019-01-31
CR20150612A (es) 2016-03-03
MX2021008899A (es) 2021-08-19
FIC20250028I1 (fi) 2025-08-18
JP2025174962A (ja) 2025-11-28
JP7339294B2 (ja) 2023-09-05
KR101857707B1 (ko) 2018-05-14
MX2019010441A (es) 2019-10-17
ES2778442T3 (es) 2020-08-10
AU2014259759A1 (en) 2015-10-22
AU2019200820A1 (en) 2019-02-28
CL2016002262A1 (es) 2017-06-09
AU2014259756A1 (en) 2015-10-22
KR102424855B1 (ko) 2022-07-26
US20210087566A1 (en) 2021-03-25
RU2015151199A (ru) 2017-06-05
US10683499B2 (en) 2020-06-16
CA2921518A1 (en) 2014-11-06
IL263843A (en) 2019-01-31
MX2015015220A (es) 2016-01-12
MY198359A (en) 2023-08-28
CN110079524B (zh) 2024-09-24
NZ712737A (en) 2021-08-27
PT2992009T (pt) 2020-09-21
CN105378082B (zh) 2020-06-09
JP7633311B2 (ja) 2025-02-19
BR112015027319A2 (pt) 2017-09-26
CA2921167C (en) 2025-05-20
RU2699985C2 (ru) 2019-09-11
HUE050394T2 (hu) 2020-11-30
NZ631537A (en) 2017-05-26
EP2992009A1 (en) 2016-03-09
JP2020039354A (ja) 2020-03-19
RU2015151204A3 (sr) 2018-03-27
US20150126718A1 (en) 2015-05-07
DOP2021000095A (es) 2021-09-15
AU2017203436B2 (en) 2018-10-18
IL274064A (en) 2020-06-30
EP2992009A4 (en) 2016-12-28
HRP20190987T1 (hr) 2019-09-20
JP2016526018A (ja) 2016-09-01
JP2018027091A (ja) 2018-02-22
UA120287C2 (uk) 2019-11-11
IL242132B (en) 2018-10-31
EP2992098B1 (en) 2019-03-27
EP3524680A1 (en) 2019-08-14
IL273184A (en) 2020-04-30
KR20220108195A (ko) 2022-08-02
AU2026201390A1 (en) 2026-03-19
MX373334B (es) 2020-05-04
US20180002693A1 (en) 2018-01-04
AU2014259755A1 (en) 2015-10-22
KR20160002975A (ko) 2016-01-08
HK1221403A1 (en) 2017-06-02
IL242125B (en) 2019-02-28
WO2014179629A2 (en) 2014-11-06
US12516319B2 (en) 2026-01-06
EP3828275A1 (en) 2021-06-02
RU2019124314A (ru) 2019-08-21
SG11201508800WA (en) 2015-11-27
AU2019204784A1 (en) 2019-07-25
EA036584B1 (ru) 2020-11-26
IL263843B (en) 2020-03-31
IL273184B (en) 2021-07-29
MX2020004209A (es) 2020-08-13
WO2014179625A1 (en) 2014-11-06
CA2921509C (en) 2025-10-07
PH12018501963A1 (en) 2020-07-20
KR20240147701A (ko) 2024-10-08
WO2014179620A1 (en) 2014-11-06
AU2017200365B2 (en) 2018-11-08
NZ631552A (en) 2017-02-24
BR112015027377A8 (pt) 2017-10-03
RU2015151202A3 (sr) 2018-03-27
EP4529927A3 (en) 2025-06-18
IL261901A (en) 2018-10-31
US20240247260A1 (en) 2024-07-25
WO2014179629A8 (en) 2016-06-02
NL301361I2 (nl) 2026-03-19
SG10201801813YA (en) 2018-04-27
CN105377887B (zh) 2020-11-03
MA60161B1 (fr) 2025-02-28
JP2025072530A (ja) 2025-05-09
NZ725538A (en) 2021-02-26
CY1121879T1 (el) 2020-10-14
CN110079524A (zh) 2019-08-02
AU2021204244A1 (en) 2021-07-22
US20160076032A1 (en) 2016-03-17
AU2019203674B2 (en) 2021-03-25
HK1221475A1 (en) 2017-06-02
JP2016523515A (ja) 2016-08-12
KR20210037752A (ko) 2021-04-06
US20150126720A1 (en) 2015-05-07
IL242124B (en) 2019-02-28
NZ728517A (en) 2021-12-24
US9127276B2 (en) 2015-09-08
US20160090595A1 (en) 2016-03-31
KR20210129257A (ko) 2021-10-27
BR112015027377A2 (pt) 2017-08-29
DK3524680T3 (da) 2020-12-14
FIC20260001I1 (fi) 2026-01-15
EP4711459A2 (en) 2026-03-18
RU2015151203A (ru) 2017-06-02
KR102482890B1 (ko) 2022-12-30
CN105378085B (zh) 2019-02-15
NL301341I2 (nl) 2025-10-02
CN114058617A (zh) 2022-02-18
US9181549B2 (en) 2015-11-10
AU2024200296A1 (en) 2024-02-08
NO2026003I1 (no) 2026-01-15
US9163239B2 (en) 2015-10-20
KR102712053B1 (ko) 2024-10-02
PE20152002A1 (es) 2016-01-21
KR20210014758A (ko) 2021-02-09
CN110042098A (zh) 2019-07-23
DOP2015000268A (es) 2015-11-30
JP2022017514A (ja) 2022-01-25
IL273312A (en) 2020-04-30
EP2992098A2 (en) 2016-03-09
KR20230006933A (ko) 2023-01-11
CN105378082A (zh) 2016-03-02
AU2017203436A1 (en) 2017-06-08
CN110066795A (zh) 2019-07-30
KR20190084138A (ko) 2019-07-15
AU2014259759B2 (en) 2020-06-18
CN105378085A (zh) 2016-03-02
KR102651423B1 (ko) 2024-03-27
CL2015003217A1 (es) 2016-07-08
CN108064162B (zh) 2021-12-03
CN113293163A (zh) 2021-08-24
US20250346899A1 (en) 2025-11-13
AU2021204244B2 (en) 2023-10-19
CR20190269A (es) 2019-09-13
JP2023113843A (ja) 2023-08-16
EP4438129A3 (en) 2025-01-15
IL283660A (en) 2021-07-29
EP2991656A4 (en) 2017-02-22
EP3546579A1 (en) 2019-10-02
IL284593A (en) 2021-08-31
HK1221404A1 (en) 2017-06-02
US20180273953A1 (en) 2018-09-27
RU2015151199A3 (sr) 2018-03-27
US20180273952A1 (en) 2018-09-27
US20160076030A1 (en) 2016-03-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12291709B2 (en) Compositions and methods for modulating apolipoprotein (a) expression
RU2824214C1 (ru) Композиции и способы модулирования экспрессии аполипопротеина (a)
HK1221475B (en) COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING APOLIPOPROTEIN (a) EXPRESSION
HK1221403B (en) Compositions and methods for modulating apolipoprotein c-iii expression