UA125577C2 - Антигензв'язуюча молекула, які містить тримерний ліганд сімейства tnf - Google Patents

Антигензв'язуюча молекула, які містить тримерний ліганд сімейства tnf Download PDF

Info

Publication number
UA125577C2
UA125577C2 UAA201705791A UAA201705791A UA125577C2 UA 125577 C2 UA125577 C2 UA 125577C2 UA A201705791 A UAA201705791 A UA A201705791A UA A201705791 A UAA201705791 A UA A201705791A UA 125577 C2 UA125577 C2 UA 125577C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
amino acid
acid sequence
antigen
zeo
tme
Prior art date
Application number
UAA201705791A
Other languages
English (en)
Inventor
Марія Аманн
Мария АМАНН
Петер Брюнкер
Крістіна Клаус
Кристина КЛАУС
Коллер Клаудіа Феррара
Коллэр Клаудиа Феррара
Сандра Грау-Ріхардс
Сандра Грау-Рихардс
Крістіан Кляйн
Кристиан КЛЯЙН
Віктор Левітскі
Виктор ЛЕВИТСКИ
Еккехард Мьосснер
Эккехард Мёсснер
Йорг Томас РЕГУЛА
Пабло Умана
Original Assignee
Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=54695680&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA125577(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг filed Critical Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Publication of UA125577C2 publication Critical patent/UA125577C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3007—Carcino-embryonic Antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70575—NGF/TNF-superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2815—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/522—CH1 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Furniture Connections (AREA)
  • Connection Of Plates (AREA)

Abstract

Винахід стосується антигензв’язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства TNF, що містить щонайменше одну молекулу Fab, що має здатність специфічно зв’язуватись з антигеном клітини-мішені, що вибраний з групи, яка складається із наступних: фібробласт-активуючий білок (FAP), асоційований з меланомою хондроїтинсульфат-протеоглікан (MCSP), рецептор епідермального фактора росту (EGFR), карциноембріональний антиген (CEA), CD19, CD20 та CD33, перший та другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв’язком, де перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів TNF, що вибрані із 4-1BBL або OX40L. Винахід також стосується виділеного полінуклеотиду, експресійного вектора, клітини-хазяїна, способу одержання антигензв’язуючої молекули, фармацевтичної композиції, призначеної для лікування раку, та застосування антигензв’язуючої молекули для виготовлення лікарського засобу для лікування раку.

Description

(54) АНТИГЕНЗВ'ЯЗУЮЧА МОЛЕКУЛА, ЯКІ МІСТИТЬ ТРИМЕРНИЙ ЛІГАНД СІМЕЙСТВА ТМЕ (57) Реферат:
Винахід стосується антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить щонайменше одну молекулу Бар, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, що вибраний з групи, яка складається із наступних: фібробласт- активуючий білок (БАР), асоційований з меланомою хондроїтинсульфат-протеоглікан (МС5Р), рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕК), карциноембріональний антиген (СЕА), СО19,
СО20 та СО33, перший та другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ, що вибрані із 4-18ВІ або ОХ40Ї. Винахід також стосується виділеного полінуклеотиду, експресійного вектора, клітини-хазяїна, способу одержання антигензв'язуючої молекули, фармацевтичної композиції, призначеної для лікування раку, та застосування антигензв'язуючої молекули для виготовлення лікарського засобу для лікування раку.
Галузь техніки, до якої відноситься винахід
Даний винахід відноситься до нових антигензв'язуючих молекул, що містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, які містять (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, при цьому антигензв'язуючі молекули відрізняються тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або два їх фрагмента, які з'єднані один з одним пептидним лінкером, і відрізняються тим, що другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент. Винахід відноситься також до способів одержання зазначених молекул і способів їх застосування.
Передумови створення винаходу
Ліганди, які взаємодіють з молекулами з суперсімейства рецептора ТМЕ (фактор некрозу пухлини), відіграють основні ролі в організації і функції імунної системи. Незважаючи на те, що вони регулюють нормальні функції, такі як імунні відповіді, гематопоез і морфогенез, ліганди сімейства ТМЕ (які називають такоже цитокінами), беруть участь в онкогенезі, відторгненні трансплантатів, септичному шоці, реплікації вірусів, ревматоїдному артриті та діабеті (Аадагмаї, 2003). Сімейство лігандів ТМЕ містить 18 генів, які кодують 19 трансмембранних білків типу ЇЇ (тобто внутрішньоклітинних М-кінцевих і позаклітинних С-кінцевих), що відрізняються присутністю консервативного С-кінцевого домена, позначеного як «домен гомології ТМЕ» (ТНОЮ).
Зазначений домен відповідальний за зв'язування з рецептором і тому має вирішальне значення для біологічної активності представників сімейства лігандів ТМЕ. Ідентичність послідовностей між представниками сімейства становить «20-3095 (Водтег, 2002). Представники сімейства лігандів ТМЕ проявляють свою біологічну функцію у вигляді утворених в результаті самозбирання нековалентних тримерів (Ваппег та ін., СеїЇ, 73, 1993, сс. 431-445). Так, представники сімейства лігандів ТМЕ утворюють тример, який має здатність зв'язуватись з відповідними рецепторами суперсімейства ТМЕК і активувати їх. 4-88 (СО137), представник суперсімейства ТМЕ-рецепторів, вперше був ідентифікований як молекула, експресія якої індукується Т-клітинною активацією (Кжмоп і УУеіє5тап, 1989). У подальших дослідженнях продемонстрована експресія 4-188 в Т- і В-лімфоцитах (з5пеї та ін., 2011; 2папд та ін., 2010), МК-клітинах (іп та ін., 2008), МКТ-клітинах (Кіт та ін ., 2008), моноцитах (Кіепліє і моп Кетрів, 2000; Зспуаг та ін., 1995), нейтрофілах (Неїпізсй та ін., 2000), огрядних клітинах (МібєПпітоїо та ін., 2005) і дендритних клітинах, а також в клітинах негематопоетичного походження, таких як ендотеліальні клітини і клітини гладких м'язів (Вгої! та ін., 2001; Оіоїє5оп та ін., 2008). Експресія 4-1В8В в різних типах клітин є значною мірою індуцибельною і запускається різними стимуляторними сигналами, такими як сигнали, які запускаються Т-клітинним рецептором (ТСК) або В-клітинним рецептором, а також передачею сигналів, індукованою костимуляторними молекулами або рецепторами прозапальних цитокінів (Оіепі і ін., 2002; моп Кептрів та ін., 1997; 2папад та ін., 2010).
Експресія ліганду для 4-188 (4-18ВІ або СО137І) є більш обмеженою і зустрічається на спеціалізованих антигенпрезентуючих клітинах (АРС), таких як В-клітини, дендритні клітини (ОС) і макрофаги. Індуцибельна експресія 4-1ВВГ. характерна для Т-клітин, включаючи як ар-, так і уб-субпопуляції Т-клітин, та ендотеліальних клітин (див. огляд 5пао і 5спмагл, 2011).
Відомо, що передача сигналів СО137 стимулює секрецію ІЄМу і проліферацію МК-клітин (Виеспеїйе та ін., 2012; Пп та ін., 2008; Меїего та ін., 1998), а також підвищує активацію ОС, що продемонстровано їх збільшеною виживаністю і здатністю секретувати цитокіни і здійснювати підвищувальну регуляцію костимуляторних молекул (Спої та ін., 2009; Ешадаума та ін., 2002;
МУйсох та ін. 2002). Проте СО137 найбільш добре охарактеризований як костимуляторна молекула, яка модулює активацію, що індукує ТСК як СОа»-, так і СО8:-субпопуляцій Т клітин. В поєднанні зі здійснюваною ТСК стимуляцією агоністичні 4-18В-специфічні антитіла підвищують проліферацію Т-клітин, стимулюють секрецію лімфокінів і знижують чутливість Т-лімфоцитів до індукованої активації смерті клітин (узагальнено в огляді зпеїЇ та ін., 2011).
Відповідно до зазначених костимуляторних дій антитіл до 4-18О8 на Т-клітини іп міїго, їх введення мишам, які несуть пухлини, призводило до ефективних протипухлинних дій на багатьох експериментальних моделях пухлин (Меїйего та ін., 1997; Магазакі та ін., 2010). Проте 4-188, як правило, виявляє дію як протипухлинного агента тільки при введенні в комбінації з іншими імуномодуляторами (Сигтап та ін., 2011; Сцо та ін., 2013; МогаІе5-Кахігезапа та ін., 2013;
Тепод та ін. 2009; Уеї та ін., 2013), хіміотерапевтичними реагентами (и та ін., 2008; Кіт та ін., 2009), в поєднанні зі специфічною для пухлини вакцинацією (Спцайдгоз5 та ін., 2005; І ее та ін., 2011) або променевою терапією (Зі апа Зіетапп, 2006). В експериментах з виснаження іп мімо бо продемонстровано, що СО8:-Т-клітини відіграють найбільш вирішальну роль в протипухлинному впливі 4-18В-специфічних антитіл. Однак залежно від моделі пухлини або комбінованої терапії, яка включає антитіло до 4-1В88, описано участину інших типів клітин, таких як ОС, МК-клітини або СО4--Т-клітини (Меїего та ін., 1997; Мигйо та ін., 2009; Магазакі та ін., 2010; Надо та ін., 2011).
Крім їх безпосередніх впливів на різні субпопуляції лімфоцитів, агоністи 4-18В можуть також індукувати інфільтрацію і утримування активованих Т-клітин у пухлині за допомогою опосередкованої 4-188 підвищувальної регуляції молекули міжклітинної адгезії 1 (САМІ) та адгезивної молекули судинних клітин 1 (МСАМ'І) на судинному ендотелії пухлини (Раїа?оп та ін., 2011).
Стимуляція 4-18В може також звертати стан Т-клітинної анергії, індукований експозицією розчинного антигена, що може робити внесок в порушення імунологічної толерантності в мікрооточенні пухлини або при хронічних інфекціях (УМісох та ін., 2004).
Напевно, для прояву імуномодулюючих властивостей агоністичних антитіл до 4-188 іп мімо потрібна присутність Ес-області дикого типу в молекулі антитіла, що свідчить про те, що зв'язування з Ес-рецептором є важливою подією, необхідною для фармакологічної активності зазначених реагентів, що описано для агоністичних антитіл, специфічних по відношенню до інших апоптоз-індукуючих або імуномодулюючих представників ТМЕК-суперсімейства (Гі та
Камеїсі, 2011; Тепод та ін., 2009). Проте системне введення 4-18В-специфічних агоністичних антитіл з функціонально активним Ес-доменом індукує також експансію СО8--Т-клітин, з якою асоційована токсичність для печінки (Юиргої та ін., 2010), що знижується або практично виводиться за відсутності функціональних Ес- рецепторів у мишей. У клінічних випробуваннях на людях (СіїіпісаІТгіаі5.дом, МСТ0О0309023), Ес-компетентні агоністичні антитіла до 4-188 (ВМ5- 663513) при їх введенні один раз кожні три тижні протягом 12 тижнів індукували стабілізацію хвороби у пацієнтів з меланомою, раком яєчника або нирково-клітинною карциномою. Однак це ж антитіло в іншому випробуванні (МСТ00612664) викликало гепатит 4-ого ступеня, що призвело до припинення випробування (5ітеопе і Азсіепо, 2012).
В цілому, доступні результати доклінічних і клінічних випробувань чітко демонструють, що існує значна клінічна потреба в ефективних агоністах 4-18. Проте нове покоління перспективних лікарських засобів має не тільки ефективно залучати 4-188 до поверхні гематопоетичних та ендотеліальних клітин, але також має володіти здатністю досягати цього за допомогою механізмів, відмінних від зв'язування з Ес-рецепторами, щоб уникнути неконтрольованих побічних дій. Виконання останньої умови можна забезпечувати за допомогою переважного зв'язування зі специфічними для пухлин або асоційованими з тканинами фрагментами і олігомеризації.
Були створені злиті білки, що складаються з одного позаклітинного домену ліганду для 4- 188 ії фрагмента одноланцюжкового антитіла (Миеїег та ін., 2008; Ногпід та ін., 2012) або одного ліганду для 4-188В, злитого з С-кінцем важкого ланцюга ( 2папод та ін, 2007). У УМО 2010/010051 описано створення злитих білків, які складаються з трьох ектодоменів ліганду ТМЕ, зчеплених один з одним і злитих з ділянкою антитіла.
Проте все ще існує потреба в нових антигензв'язуючих молекулах, які об'єднують фрагмент, що має здатність зв'язуватися переважно зі специфічними для пухлин або асоційованими з пухлинними тканинами мішенями, з фрагментом, який має здатність утворювати костимуляторний тримерний ліганд ТМЕ, і які мають достатню стабільність, що дозволяє застосовувати їх в фармацевтиці. Антигензв'язуючі молекули, запропоновані в даному винаході, містять обидва зазначені компоненти і, як несподівано було встановлено, вони містять тримерний і тому біологічно активний ліганд ТМЕ, хоча один з ектодоменів, які утворюють тримерний ліганд ТМЕ, локалізований на поліпептиді, відмінному від поліпептиду, на якому розташовані два інші ектодомени в молекулі ліганду ТМЕ.
Короткий виклад суті винаходу
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або два їх фрагмента, які з'єднані один з одним пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд 60 сімейства ТМЕ, що містить
(а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або два їх фрагмента, які з'єднані один з одним пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, і (в) ЕРс-домен, який складається з першої і другої субодиниць, які мають здатність до стабільної асоціації.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що () перший поліпептид містить СНІ1- або Сі -домен і другий поліпептид містить СІ - або СНІ1- домен відповідно, при цьому другий поліпептид зчеплений з першим поліпептидом дисульфідним зв'язком між СНІ- і СІ -доменом, і при цьому перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним і з
СНІ- або Сі-доменом пептидним лінкером, і при цьому другий поліпептид містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, який з'єднаний пептидним лінкером з СІ-- або СНІ1-доменом зазначеного поліпептиду, або (І) перший поліпептид містить СНЗ-домен, і другий поліпептид містить СНЗ-домен відповідно, і при цьому перший поліпептид містить два ектгодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним і з С-кіннем СНЗ-домену пептидним лінкером, і при цьому другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, який з'єднаний пептидним лінкером з
С-кінцем СНЗ-домену зазначеного поліпептиду, або (І) перший поліпептид містить МН-СІ- або МІ -СНІ-домен і другий поліпептид містить МІ -
СНІ-домен або МН-СІ -домен відповідно, при цьому другий поліпептид зчеплений з першим поліпептидом дисульфідним зв'язком між СНІ1- і СІ -доменом, і при цьому перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним і з МН або МІ пептидним лінкером, і при цьому другий поліпептид містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, з'єднаний через пептидний лінкер з МІ або МН зазначеного поліпептиду.
В конкретному об'єкті винаходу представник сімейства лігандів ТМЕ являє собою ліганд, який костимулює активацію людських Т-клітин. Таким чином, антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або два їх фрагмента, які з'єднані один з одним пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, де представник сімейства лігандів ТМЕ костимулює активацію людських Т-клітин. Більш конкретно представника сімейства лігандів ТМЕ вибирають з 4-1881. і ОХ4АОІ.
В одному з об'єктів винаходу представником сімейства лігандів ТМЕ є 4-1881.
В наступному об'єкті винаходу ектодомен представника сімейства лігандів ТМЕ містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮО МО: 2,
ЗЕО ІО МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 4, 5ЕО 10 МО: 96, 5ЕО ІО МО: 373, 5ЕО ІО МО: 374 і 5ЕО І МО: 375, перш за все амінокислотну послідовність ЖЕО ІЮО МО: 1 або ЗЕО ІО МО: 96.
В іншому об'єкті винаходу ектодомен представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5БЕО ІЮ МО: 1, 5БО ІЮ МО: 2, 5ЕБЕО ІО МО: 3, БО ІЮ МО: 4 і 5ЕО ІО МО: 96, перш за все амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 1 або 5ЕО ІЮО МО: 96. Більш конкретно ектодомен представника сімейства лігандів ТМЕ містить амінокислотну послідовність ЖЕО 10 МО: 96.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, запропонована у винаході, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном 60 клітини-мішені, і
(б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 5, 5ЕО І МО: 97,
ЗЕБЕО І МО: 98 і 5ЕБО ІО МО: 99, і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 96, 5ЕО ІО МО: З і
ЗЕО ІО МО: 4.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, запропонована у винаході, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 5 і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 6.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, запропонована у винаході, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 5 і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 183.
Ще одним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, запропонована у винаході, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 97 і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну
Ко) послідовність 5ЕО ІО МО: 184 або 5ЕО ІО МО: 185.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, запропонована у винаході, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший поліпептид, який містить СНІ1- або Сі -домен, і другий поліпептид, який містить
СіІ- або СНІ-домен відповідно, при цьому другий поліпептид зчеплений з першим поліпептидом дисульфідним зв'язком між СНІ1- і СІ -доменом, і де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або два їх фрагмента, які з'єднані один з одним і з СНІ1- або СІ -доменом пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, який з'єднаний пептидним лінкером з СіІ-- або СН1-доменом зазначеного поліпептиду.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший поліпептид, який містить СНІ-домен, і другий поліпептид, який містить Сі -домен, при цьому другий поліпептид зчеплений з першим поліпептидом дисульфідним зв'язком між
СНІ- і СІ -доменом, і де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним і з
СНі-доменом пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, який з'єднаний пептидним лінкером з СІ -доменом зазначеного поліпептиду.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший поліпептид, який містить Сі -домен, і другий поліпептид, який містить СН1-домен, бо при цьому другий поліпептид зчеплений з першим поліпептидом дисульфідним зв'язком між
СНІ- і СІ -доменом, і де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним і з
Сі-доменом пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, який з'єднаний пептидним лінкером з СН1-доменом зазначеного поліпептиду.
Наступним об'єктом винаходу є зазначена вище антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій ділянка, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, вибирають з групи, яка складається з антитіла, фрагмента антитіла і антигензв'язуючого білка-каркаса (скаффолд-білок).
Одним з об'єктів винаходу є зазначена вище антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій ділянка, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, являє собою фрагмент антитіла.
Зокрема, ділянка, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, вибирають з групи, яка складається з фрагмента антитіла, молекули Бар, кросовер-молекули
Еаб, одноланцюгової молекули Рар, молекули Ем, молекули 5сЕм, однодоменного антитіла, аУн і антигензв'язуючого білка-каркаса.
Одним з об'єктів винаходу є зазначена вище антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій ділянка, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, являє собою антигензв'язуючий білок-каркас.
У винаході запропонована зазначена вище антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій ділянка, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, являє собою молекулу Бар, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені.
У винаході запропонована антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені. Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить одну ділянку, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені. Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить дві ділянки, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована у винаході, де антиген клітини-мішені вибирають з групи, яка включає фібробласт-активуючий білок (БАР), карциноембріональний антиген (СЕА), асоційований з меланомою хондроїтинсульфат-протеоглікан (МС5Р), рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕН), СО19, 6020 і 2033.
В конкретному об'єкті винаходу антиген клітини-мішені являє собою фібробласт-активуючий білок (ЕАР).
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій ділянка, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить МН- домен, що містить (І) СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 7 або 5ЕО
ІО МО: 100, (І) СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 8 або 5ЕО ІЮ МО: 101, ї «) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 9 або 5ЕО ІЮО МО: 102, і
МІ -домен, що містить (ІМ) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 10 або
ЗЕО ІЮ МО: 103, (М) СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 11 або 5ЕО
ІО МО: 104, і (МІ) СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 12 або 5ЕО І
МО: 105.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій ділянка, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить МН-
БО домен, що містить (І) СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 7, (ІІ) СОВ-
Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 8, ії (ІП) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 9, і Мі -домен, що містить (ІМ) СОВ-Ї1, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО: 10, (М) СОВ-І2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 11, ї (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ
МО: 12.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій ділянка, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить МН- домен, що містить (ІМ СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 100, (І)
СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 101, ї (ПІ) СОВ-НЗ, який містить 60 амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 102, і МІ -домен, що містить (ІМ) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО: 103, (М) СОВ-І2, який містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 104, ї (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ
МО: 105.
Одним з об'єктів винаходу є зазначена вище антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій ділянка, що має здатність специфічно зв'язуватись з
ЕАР, містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 16, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО: 17, або в якій ділянка, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 106, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 107.
Наступним об'єктом винаходу є запропонована у винаході антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій пептид, який містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злитий на його С-кінці з СНІ1- або СІ -доменом важкого ланцюга за допомогою другого пептидного лінкера, і в якій один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент злитий на його С-кінці з СІ- або СНІ-доменом легкого ланцюга за допомогою третього пептидного лінкера.
Конкретним об'єктом винаходу є зазначена вище антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ,в якій пептидний лінкер являє собою ((345)2, тобто пептидний лінкер, що має 5ЕО ІО МО: 13. В одному з об'єктів винаходу перший пептидний лінкер являє собою (с145)2, другий пептидний лінкер являє собою С5РОИББ5БЗБОБ (5ЕО ІО МО: 57) і третій пептидний лінкер являє собою (С145)2. В іншому об'єкті винаходу перший, другий і третій пептидні лінкери являють собою (С45)».
Винахід відноситься також до вищезазначеної антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить Рс-домен, що складається з першої і другої субодиниць, які мають здатність до стабільної асоціації.
Зокрема, запропонована у винаході антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (в) Ес-домен, що складається з першої і другої субодиниць, які
Зо мають здатність до стабільної асоціації, містить також (а) молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, в якій важкий ланцюг Раб злитий на С-кінці з М-кінцем СН2-домени в Ес-домені.
В наступному об'єкті винаходу Ес-домен являє собою Ес-домен да, насамперед Ес-домен
Ідс21 або ЕБРсо-домен 404. Більш переважно Ес-домен являє собою Ес-домен Ідсшстї. В конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-домен містить модифікацію, яка посилює асоціацію першої і другої субодиниць Ес-домени.
Іншим об'єктом винаходу є зазначена вище антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (в) Ес-домен, який складається з першої і другої субодиниць, які мають здатність до стабільної асоціації, в якій Рс-домен містить одну або декілька амінокислотну(их) заміну(н), яка(ї) знижує(ють) зв'язування з Рс-рецептором, насамперед з Есу-рецептором.
Зокрема, Ес-домен містить амінокислотні заміни в положеннях 234 і 235 (ЕО-нумерація)
Мабо 329 (ЕБО-нумерація) важких ланцюгів Ідсї. Більш конкретно, описана антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована у винаході, яка містить
Ес-домен Іда1 з амінокислотними замінами І 234А, І 235А і РЗ29С (ЕО-нумерація).
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антигензв'язуюча молекула містить перший важкий ланцюг і перший легкий ланцюг, які обидва утворюють молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, перший пептид, який містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злитий на його
С-кінці за допомогою другого пептидного лінкера з іншим важким або легким ланцюгом, і другий пептид, який містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів
ТМЕ, злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з іншим легким або важким ланцюгом відповідно.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій перший пептид, який містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злитий на його С-кінці за допомогою другого пептидного лінкера з СНІ-доменом, який є 60 частиною важкого ланцюга,
а другий пептид, який містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів
ТМЕ або його фрагмент, злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з Сі - доменом, який є частиною легкого ланцюга.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій перший пептид, який містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злитий на його С-кінці за допомогою другого пептидного лінкера з Сі -доменом, який є частиною легкого ланцюга, а другий пептид, який містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів
ТМЕ або його фрагмент, злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з
СНІ-доменом, який є частиною важкого ланцюга.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій перший пептид, який містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злитий на його С-кінці за допомогою другого пептидного лінкера з МН-доменом, який є частиною важкого ланцюга, а другий пептид, який містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів
ТМЕ або його фрагмент, злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з МІ - доменом, який є частиною легкого ланцюга.
Запропонована також антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства
ТМЕ, в якій в Сі -домені, що прилягає до представника сімейства лігандів ТМЕ, амінокислота в положенні 123 (ЕО-нумерація) замінена на аргінін (А) і амінокислота в положенні 124 (БО- нумерація) замінена на лізин (К), і в якій в СНІ, що прилягає до представника сімейства лігандів
ТМ, амінокислоти в положенні 147 (ЕО-нумерація) і в положенні 213 (ЕО-нумерація) замінені на глутамінову кислоту (Е).
Наступним об'єктом винаходу є вищеописана антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антигензв'язуюча молекула містить (а) перший важкий ланцюг і перший легкий ланцюг, які обидва утворюють молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені,
Зо (б) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮ МО: 5, 5ЕО 10 МО: 97, БЕО ІО МО: 98 ї 5ЕО ІЮ МО: 99, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮ МО: 1, БЕО 10 МО: 96, БЕО ІО МО: З ії 5ЕО ІЮО МО: 4.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антигензв'язуюча молекула містить (а) молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, і (б) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮ МО: 5, 5ЕО 10 МО: 97, БЕО ІО МО: 98 ї 5ЕО ІЮ МО: 99, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІО МО: 96, БЕО ІЮ МО: З ії БЕО ІЮ МО: 4.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить ділянку, яка має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР. Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антигензв'язуюча молекула містить (І) перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО: 16, і перший легкий ланцюг, який містить Мі-домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 17, або перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 106, і перший легкий ланцюг, який містить МІ -домен, що містить амінокислотну
БО послідовність 5ЕО ІО МО: 107, (І) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 14, 5ЕО ІО МО: 108, 5ЕО ІО МО: 111, 5Е6О ІЮО МО: 113, 5ЕО І
МО.115, 5ЕО ІО МО: 139 і БЕО ІЮ МО: 148, і (І) другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 15, 5ЕО ІО МО: 109, 5ЕО ІЮО МО: 110, 5ЕО ІЮ МО: 112, 5ЕО ІЮ МО: 114 15ЕОІО МО: 115.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антигензв'язуюча молекула містить (І) перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність 60 ЗЕО ІО МО: 16, і перший легкий ланцюг, який містить Мі-домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 17, або перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 106, і перший легкий ланцюг, який містить МІ -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 107, (І) другий важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮ МО: 115, БЕО ІО МО: 117, 5ЕО ІЮО МО: 119 ї 5ЕО ІО МО: 173, і (І) другий легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮ МО: 116, БЕО ІО МО: 118, 5ЕО ІЮО МО: 120 ї 5ЕО І МО: 174.
Ще одним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить СНЗ-домен і другий поліпептид містить СНЗ-домен відповідно, і в якій перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним і з
С-кінцем СНЗ-домену пептидним лінкером, і в якій другий поліпептид містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем СНЗ-домену зазначеного поліпептиду.
Зокрема, зазначена антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства
ТМЕ, містить дві ділянки, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини- мішені.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить дві ділянки, які мають здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР.
Зокрема, запропонована вищеописана антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить () перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 121, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 122, і два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 19, або
Зо (І) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 123, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 124, і два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 125, або (І) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 126, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 127, і два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 125.
Іншим конкретним об'єктом винаходу є вищеописана антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антиген клітини-мішені являє собою СО19.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій ділянка, що має здатність специфічно зв'язуватись з СО19, містить М|Н- домен, що містить (І) СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 195 або
ЗЕО ІЮ МО: 252, (ІІ) СОВ-НЕ, який містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 196 або 5ЕО
ІО МО: 253, і (І) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність зБЕО ІЮ МО: 197 або 5ЕО І
МО: 254, і МІ -домен, що містить (ІМ) СОВ-І 1, який містить амінокислотну послідовність БЕО І
МО: 198 або 5ЕО ІО МО: 249, (М) СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 199 або 5ЕО ІЮО МО: 250, і (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 200 або 5ЕО ІЮ МО: 251.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій ділянка, що має здатність специфічно зв'язуватись з СО19, містить варіабельну область важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 201, і варіабельну область легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ
МО: 202, або в якій ділянка, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну область важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 357, і варіабельну область легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ
МО: 358.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антигензв'язуюча молекула містить (І) перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 201, і перший легкий ланцюг, який містить МІ -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 202, або 60 перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 357, і перший легкий ланцюг, який містить МІ -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 358, (І) другий важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 14, БЕО ІЮО МО: 108, 5ЕО ІО МО: 111 ї БЕО ІО МО: 113, і (І) другий легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 15, 5ЕО ІЮ
МО: 109, БЕО ОО МО: 110, БЕО ІО МО: 112 5Б6О ІЮ МО: 114.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антигензв'язуюча молекула містить (І) перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 201, і перший легкий ланцюг, який містить МІ -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 202, або перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 357, і перший легкий ланцюг, який містить МІ -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 358, (І) другий важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮ МО: 115, БЕО ІО МО: 117, 5ЕО ІЮО МО: 119 ї 5ЕО ІО МО: 173, і (І) другий легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮ МО: 116, БЕО ІО МО: 118, 5ЕО ІЮО МО: 120 ї 5ЕО І МО: 174.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить два фрагмента, які мають здатність специфічно зв'язуватись з СО19.
Зокрема, запропонована антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства
ТМЕ, за будь-яким із п.п. 1-14, 29, 30 і 32-34 формули винаходу, де антигензв'язуюча молекула містить () перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 209, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 210, і два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 206, або (І) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 213, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 214, і два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 206, або
Зо (І) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 309, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 310, і два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 279, або (ІМ) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 313, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 314, і два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 279.
Іншим конкретним об'єктом винаходу є вищеописана антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антиген клітини-мішені являє собою СЕА.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з СЕА, містить МН- домен, що містить (ІМ СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 321, (Ії)
СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 322, і (ПІ) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 323, і МІ -домен, що містить (ІМ) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 324, (М) СОВ-І2, який містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 325, ї (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ
МО: 326.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з СЕА, містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 329, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 330.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антигензв'язуюча молекула містить (І) перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 329, і перший легкий ланцюг, який містить МІ -домен, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 330, (І) другий важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 14, БЕО ІЮО МО: 108, 5ЕО ІО МО: 111 ї БЕО ІО МО: 113, і (І) другий легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 15, 5ЕО ІЮ
МО: 109, БЕО ОО МО: 110, БЕО ІО МО: 112 5Б6О ІЮ МО: 114. бо Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антигензв'язуюча молекула містить (І) перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 329, і перший легкий ланцюг, який містить МІ -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 330, (І) другий важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮ МО: 115, БЕО ІО МО: 117, 5ЕО ІЮО МО: 119 ї 5ЕО ІО МО: 173, і (І) другий легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮ МО: 116, БЕО ІО МО: 118, 5ЕО ІЮО МО: 120 ї 5ЕО І МО: 174.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить два фрагмента, які мають здатність специфічно зв'язуватись з СЕА.
Зокрема, запропонована антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства
ТМЕ, де антигензв'язуюча молекула містить () перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 337, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 338, і два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 334, або (І) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 341, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 342, і два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 334.
Наступним об'єктом винаходу є вищеописана антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де представником сімейства лігандів ТМЕ є ОХ40І. Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій ектгодомен представника сімейства лігандів ТМЕ містить амінокислотну послідовність ФЕО
ІО МО: 53 або 5ЕО ІО МО: 54, насамперед амінокислотну послідовність хЕО ІО МО: 53.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким із п.п. 1-5, 10-24, 29, 30, 32 - 34, 38-40, 44 і 45 формули винаходу, яка містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком,
Зо де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 371 або 5ЕО 10:372, і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 53 або 5ЕО ІО МО: 54.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антиген клітини-мішені являє собою фібробласт-активуючий білок (ЕАР), і фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить МН-домен, що містить (І)
СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 7 або БЕО ІЮ МО: 100, (І) СОВ-
Н2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО І МО: 8 або 5ЕО ІЮО МО: 101, ії (1) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІО МО: 9 або 5ЕО ІО МО: 102, і МІ -домен, що містить (ІМ) СОВ-Ї 1, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 10 або 5ЕО ІЮ МО: 103, (М) СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність зБЕО ІЮО МО: 11 або 5ЕО ІО МО: 104, і (МІ) СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 12 або 5ЕО ІО МО: 105.
Зокрема, запропонована вищеописана антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТЕ, де антигензв'язуюча молекула містить (І) перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО: 16, і перший легкий ланцюг, який містить Мі-домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 17, або перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 106, і перший легкий ланцюг, який містить МІ -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 107, (І) другий важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 355, і (І) другий легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність зБЕО ІЮ МО: 356.
Іншим об'єктом винаходу є виділений полінуклеотид, який кодує вищеописану антигензв'язуючу молекулу, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ. Винахід відноситься також до вектора, насамперед експресійного вектора, який містить виділений полінуклеотид, запропонований у винаході, і до клітини-хазяїна, яка містить виділений полінуклеотид або вектор, запропонований у винаході. В деяких варіантах здійснення винаходу клітина-хазяїн являє собою еукаріотичну клітину, насамперед клітину ссавця.
Іншим об'єктом винаходу є спосіб одержання антигензв'язуючої молекули, яка містить бо тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованої у винаході, який полягає в тому, що здійснюють стадії, на яких (І) культивують клітину, запропоновану у винаході, в умовах, придатних для експресії антигензв'язуючої молекули, і (ІІ) виділяють антигензв'язуючу молекулу. Винахід відноситься також до антигензв'язуючої молекули, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, яка одержанаї способом, запропонованим у винаході.
Винахід відноситься також до фармацевтичної композиції, яка містить антигензв'язуючу молекулу, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновану у винаході, і принаймні один фармацевтично прийнятний ексципієнт.
Під обсяг винаходу підпадає також антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована у винаході, або фармацевтична композиція, запропонована у винаході, для застосування як лікарського засобу. Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована у винаході, або фармацевтична композиція, запропонована у винаході, для застосування для лікування захворювання у індивідуума, який потребує цього. В конкретному варіанті здійснення винаходу запропонована антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства
ТМЕ, запропонована у винаході, або фармацевтична композиція, запропонована у винаході, для застосування для лікування раку.
Запропоновано також застосування антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованої у винаході, для приготування лікарського засобу, призначеного для лікування захворювання у індивідуума, який потребує цього, насамперед для приготування лікарського засобу, призначеного для лікування раку, а також спосіб лікування захворювання у індивідуума, який полягає в тому, що вводять вказаному індивідууму в терапевтично ефективній кількості композицію, яка містить антигензв'язуючу молекулу, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновану у винаході, в фармацевтично прийнятній формі. В конкретному варіанті здійснення винаходу захворювання являє собою рак.
В будь-якому з вищезазначених варіантів здійснення винаходу індивідуум переважно являє собою ссавця, насамперед людину.
Короткий опис креслень
На кресленнях показано: на фіг. 1 - компоненти для збирання розділені тримерних лігандів для людського 4-188. На
Ко) фіг. (1А) показаний димерний ліганд, злитий на С-кінці з людським СНІ1- або Сі -доменом або
МІ- або МН-доменом, а на фіг. (1Б) показаний мономерний ліганд, злитий з людським Сі - або
СНІ-доменом або Мі - або МН-доменом. На фіг. (18) показаний димерний ліганд, злитий на М- кінці з людським СНЗ-доменом, а на фіг. (1Г) показаний мономерний ліганд, злитий на М-кінці з людським СНЗ-доменом; на фіг. 2 - конструкції 1.1-1.10 запропонованих у винаході антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний 4-18ВІ. Попередня підготовка і одержання цих конструкцій описані в прикладі 1. МН- і Мі-домени являють собою домени антитіла до ЕАР 28НІ, жирної чорною крапкою позначена модифікація типу «Кпоб-іпіо-поїе» (Кіп). Символом " позначені амінокислотні модифікації в СНІ- і СІ -доменах (так звані заряджені залишки); на фіг. З - компоненти для збирання розділені тримерних лігандів для людського 4-188. На фіг. (ЗА) показаний димерний ліганд, який злитий на С-кінці з мишачим Сі -доменом, а на фіг. (ЗБ) показаний мономерний ліганд, злитий на С-кінці з мишачим СНІ-доменом. Показані компоненти для збирання націленого на РАР розділеного тримерного ліганду для мишачого 4- 188. На фіг. (ЗВ) показані антигензв'язуючі молекули, які містять зібраний тримерний мишачий 4-18ВІ,, описані більш детально в прикладі 1.3; на фіг. 4 - конструкції 2.1-2.6 запропонованих у винаході антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний 4-18ВІ. Попередня підготовка і одержання цих конструкцій описані в прикладі 2. МН- і МіІ-домени являють собою домени антитіла до БАР 489, жирної чорною крапкою позначена модифікація типу «Кпоб-іпіо-поїе». Символом " позначені амінокислотні модифікації в СНІ- і СІ -доменах (так звані заряджені залишки); на фіг. 5А і 5Б - ненаправлені на певну мішень («ненацілені») варіанти конструкцій 1.1 ї 1.2, які містять молекулу Раб ОРА7 (зародкова лінія людських антитіл) замість молекули Раб до ЕАР.
Молекули позначені як контроль А і контроль Б відповідно. Одержання описано в прикладі 1.4.
На 58 -зображення конструкції: мономерний 4-188В-Ес(Кін), одержання якої описано в прикладі
З; на фіг. 6 - дані про зв'язування антигензв'язуючої молекули, яка містить націлений на АР тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес(Кій) (ЕАР розділений тримерний 4-18ВГ,, позначена зафарбованими окружностями) або «ненаціленої» одержаної на основі ОР47 антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-18В8В в злитті з (Кіпй) (ОР47 розділений тримерний 60 4-18, незафарбовані окружності) з людськими РМВС в стані спокою (наївними) або активованими. Зокрема, дані про зв'язування з людськими СО8:-Т-клітинами в стані спокою (наївними) або активованими представлені на фіг. (6А), з людськими СО4--Т-клітинами в стані спокою (наївними) або активованими - на фіг. (6Б) і з людськими МК -клітинами в стані спокою (наївними) або активованими - на фіг. (68). Представлені дані про зв'язування у вигляді медіанного значення інтенсивності флуоресценції (МЕ!) міченого за допомогою одержаних з червоних макрофітних водоростей фікоеритрину (К-РЕ) К(аб') 2-фрагмента козячого ІДС проти людського дО, Есу-специфічного, який застосовували як вторинне антитіло. МЕ! вимірювали за допомогою проточної цитометрії і здійснювали корекцію на фоновий рівень шляхом вирахування МЕЇ для «порожнього» контролю на фіг. 7 - зв'язування різних націлених на БАР або «ненацілених» конструкцій, які містять тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кі), з експресуючими людський 4-188 Т-клітинами з попередньо активованих РНА-Ї і пролейкіном і повторно активованих антитілом до людського
СОрЗ/до людського СЮО28 людських РВМС. Зв'язування виявляли за допомогою кон'югованого з флуорохромом, таким як К-фікоеритрин, Е (аб) 2-фрагмента козячого Ід проти людського Ід,
Есу-специфічного. Представлені медіанні значення інтенсивності флуоресценції (МЕ) в залежності від концентрації тестованих конструкцій 1.1-1.10, описаних в прикладі 1. Для кращої форми представлення криві зв'язування розподіляли на 4 різні групи графіків, в кожній з яких як криві порівняння приводили криві зв'язування конструкції 1.1 ( одновалентна націлена на ЕАР, що містить розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кій)) і контрольної конструкції
Б (одновалентна «ненацілена», що містить розділений тримерний людський ліганд для 4-188-
Ес (Кі) з СН-Сі-кросовером та зарядженими залишками). Зв'язування оцінювали з використанням СО3-СО8» -Т-клітин (фіг. 7А) і СО3-004 -Т-клітин (фіг. 7Б). Рівень експресії 4- 188 на СО8-Т-клітинах в нормі вище, ніж на СО4-Т-клітинах. Всі версії зв'язувалися з людським 4-188 з практично однаковою афінністю. на фіг. 8 - дані про зв'язуванні різних націлених на ЕАР або «ненацілених» конструкцій, що містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кіп), з СО4х - або СО8» -Т- клітинами зі свіжевиділених РВМС (фіг. А) або з експресуючими людський 4-188 попередньо активованими РНА-Ї і пролейкіном і повторно активованими антитілом до людського СОЗ/до людського СО28 людськими РВМС (фіг. 8Б). Зв'язування виявляли за допомогою кон'югованого
Зо з флуорохромом, таким як В-фікоеритрин, Е (аб') 2-фрагмента козячого ЇДС проти людського
Ід, Есу-специфічного. Представлені медіанні значення інтенсивності флуоресценції (МЕЇ) в залежності від концентрації тестованих конструкцій 2.1, 2.3, 2.4, 2.5 і 2.6, описаних в прикладі 2, контрольних молекул, а саме, контроль Б, контроль В, контроль Д і контроль Е. Для кращої форми представлення криві зв'язування розподіляли на 2 різні групи графіків, в кожній з яких як криві порівняння приводили криві зв'язування конструкції 2.1 (одновалентна націлена на ЕАР, що містить розділений тримерний людський ліганд для 4-1В8В-Ес (КІій)) і контрольної конструкції (одновалентна «ненацілена» , що містить розділений тримерний людський ліганд для 4-18В-Ес (Кіп) з СН-СІ -кросовером та зарядженими залишками). Зв'язування оцінювали з використанням бр45:003008: -Т-клітин (нижня група графіків) і СО045:003004- -Т-клітин (верхня група графіків). Рівень експресії 4-488 на СО8-Т-клітинах в нормі вище, ніж на СО4-Т-клітинах. Всі конструкції зв'язувалися практично з однаковою афінністю з людським 4-188, проте двовалентна конструкція 2.3 і відповідний їй «ненацілений» контроль У характеризувалися більш низьким значенням МРЕЇ. Це може бути пов'язано зі стеричною перешкодою зв'язування 4- 188 і/або більш низьким рівнем детекції вторинного ідентифікуючого антитіла, що обумовлено кон'югованим з Ес розділеним лігандом для 4-188; на фіг. 9 - дані про зв'язування націленої на ЕАР антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес (Кіп) (ЕАР розділений тримерний 4-18ВГ, позначений зафарбованими колами) або «ненацеленої» одержаної на основі ОР47 антигензв'язуючої молекули, що містить тримерний ліганд для 4-1ВВ в злитті з Ес (Кій), з активованими мишачими спленоцитами. Зокрема, дані про зв'язування з активованими мишачими СО4- -Т-клітинами представлені на фіг. (9А), а з активованими мишачими СО8 «ж -Т-клітинами - на фіг. (9Б). Як позитивний контроль застосовували специфічне стосовно мишачого СО137 людське антитіло у вигляді (ДС1 РЗ3290 І АГА (клон ГІ о0Б12.3) (трикутники). Зв'язування характеризували на основі графіка залежності значень МРЕЇ для міченого за допомогою К-РЕ Е (аб) 2-фрагмента козячого дб проти людського дО, Есу-специфічного, що застосовується як вторинне ідентифікуюче антитіло, від концентрації (в Нт) тестованих конструкцій, які містять розділений тримерний 4- 188. МЕ вимірювали за допомогою проточної цитометрії і здійснювали корекцію на фоновий рівень шляхом вирахування МЕЇ для «порожнього» контролю; на фіг. 10 - дані про зв'язування антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд бо для 4-188В в злитті з Ес (Кіп) (зафарбованими колами позначена конструкція 1.1: націлена на
ЕАР антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес (КІйЙ), незафарбованими колами позначена контрольна молекула А: «ненацілена» одержана на основі
ОРА7 антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес (Кій)) з експресуючим фібробласт-активуючим білком (РАР) клітинами людської меланоми (А) лінії ММ-
З і (Б) лінії М/М-266-4. Зв'язування характеризували на основі графіка залежності значень МЕЇ для міченого за допомогою К-РЕ Е (аб) 2-фрагмента козячого (ДО проти людського ІдС, Есу- специфічного, що застосовується як вторинне ідентифікуюче антитіло, від концентрації (в Нт) тестованих конструкцій, які містять розділений тримерний 4-188І. МЕ! вимірювали за допомогою проточної цитометрії і здійснювали корекцію на фоновий рівень шляхом вирахування МЕЇ для «порожнього» контролю; на фіг. 11 - дані про зв'язуванняя різних націлених на ЕАР або «ненацілених» конструкцій, що містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кіп), з експресуючими людський ЕАР клітинами людської меланоми ММ-3 (фіг. 11А) мабо З трансфектованимиклітинами ембріональних мишачих фібробластів лінії МІН/3Т3-пиБАР, клон 39 (фіг. 11Б). Зв'язування виявляли за допомогою кон'югованих з флуорохромом, таким як К- фікоеритрин або флуоресцеїн, Е (ар) 2-фрагментів козячого (40 проти людського Ід, Есу- специфічних. Показана залежність медіанних значень інтенсивності флуоресценції (МЕ) від концентрації тестованих конструкцій. Для кращої форми представлення криві зв'язування розподіляли на 4 (фіг. 11 А) або дві (фіг. 11Б) різні групи графіків, при цьому криву для конструкції 1.1 (одновалентна націлена на ЕАР, яка містить розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кіп )) застосовували як криву порівняння. Всі конструкції зв'язувалися з людським ЕАР з подібною афінністю за винятком двовалентних націлених на БАР конструкцій (конструкції 1.5, 1.7 і 1.8). Для них виявлена тенденція до одерження більш низьких величин
ЕСво і нижчих медіанних значень інтенсивності флуоресценції. Це можна пояснити їх двовалентним таргетингом (більш висока авідність, менша кількість молекул може зв'язуватися одночасно через окупацію двох епітопів, що призводить до більш низьких значень МЕЇ).
Відмінності між конструкцією 1.8 (повний двовалентний таргетинг) і конструкціями 1.5 і 1.7 (тільки частковий двовалентний таргетинг) можуть бути пояснені також структурними відмінностями;
Зо на фіг. 12 - дані про зв'язування різних націлених на ЕАР або «ненацілених» конструкцій 2.1, 2.3, 2.4, 2.5 і 2.6, які містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кій) з експресуючими людський ЕАР клітинами людської меланоми ММ-3 (фіг. 12А) ї М/М-266-4 (фіг. 12Б). Зв'язування виявляли за допомогою кон'югованого з флуорохромом, таким як К- фікоеритрин, Е (аб) 2-фрагмента козячого дб проти людського Ідс, Есу-специфічного.
Показана залежність медіанних значень інтенсивності флуоресценції (МЕЇ) від концентрації тестованих конструкцій. Для кращої форми представлення криві зв'язування розподіляли на дві різні групи графіків, при цьому криву для конструкції 2.1 (одновалентна націлена на ЕАР, яка містить розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кіп)) застосовували як криву порівняння. Всі конструкції зв'язувалися з людським БАР з подібною афінністю за винятком двовалентної націленої на ЕАР конструкції 2.3. Для неї характерні більш низькі величини ЕСбо і більш низькі медіанні значення інтенсивності флуоресценції. Це можна пояснити її двовалентним таргетингом, що призводить до більш високої авідності, але меншому рівню окупації або кількості молекул ЕАР на клітинній поверхні, що призводило до більш низьких значень МЕЇ; на фіг. 13 - дані про зв'язування різних націлених на РАР або «ненацілених» конструкцій, які містять розділений тримерний мишачий ліганд для 4-188-Ес (Кій), з СО4: - або СО8 -Т- клітинами зі свіжевиділених спленоцитів (фіг. 13А) або з експресуючими мишачий 4 -188 активованими агоністичними моноклональними антитілами до мишачого СОЗ/до мишачого
Ср28 мишачими спленоцитах (фіг. 13Б). Зв'язування виявляли за допомогою кон'югованого з флуорохромом, таким як ФІТЦ, Е (аб) 2-фрагмента козячого (90 проти мишачого Ідс, Есу- специфічного. Показана залежність медіанних значень інтенсивності флуоресценції (МЕ) від концентрації тестованих конструкцій. Оцінювали зв'язування на СО3-С008:-Т-клітинах (ліва група графіків) і СО3-С04:-Т-клітинах (права група графіків). Рівень експресії 4-18 на СО8-Т- клітинах в нормі вищий, ніж на СО4-Т-клітинах. Всі конструкції зв'язувалися з мишачим 4-188 практично з однаковою афінністю; на фіг. 14 - дані про зв'язування різних націлених на ЕГАР або «ненацілених» конструкцій, які містять розділений тримерний мишачий ліганд для 4-188-Ес (Кіп), з експресуючими людський
ЕАР пухлинними клітинами. Зв'язування виявляли за допомогою кон'югованого з флуорохромом, таким як ФІТЦ, Е (аб) 2-фрагмента козячого (9 проти мишачого Ід, Есу- бо специфічного. Показана залежність медіанних значень інтенсивності флуоресценції (МЕ) від концентрації тестованих конструкцій. Оцінювали зв'язування на клітинах ММ-3 (фіг. 14А) і клітинах УММ-266-4 (фіг. 14Б). Націлені на БАР конструкції М.1 і М.2, які містять розділений тримерний мишачий ліганд для 4-188-Ес (Кіп), зв'язувалися з БАР практично з однаковою афінністю; на фіг. 15 - схема, що ілюструє загальний принцип аналізу МЕКВ-активності, який описаний в прикладі 6.1, з використанням лінії репортерних клітин. Показана схема аналізу активації з використанням лінії репортерних клітин Неіа, що експресує людський /-4-188.
Перехреснозшитий 4-188, що експресується на репортерних клітинах, індукує активацію МЕкВ і опосередковану МЕкВ експресію люциферази. Після лізису клітин люциферази може каталізувати окислення люциферина з утворенням оксилюциферина. Для цієї хімічної реакції характерна позитивна кореляція з рівнем опосередкованої МЕкВ експресії люциферази, і його можна вимірювати за рівнем випускання світла (в одиницях випускання світла). Співвідношення експресуючх БАР пухлинних клітин і репортерної клітинної лінії Неї а-пиСО137-МЕКВ-Іис становило 5: 1; на фіг. 16 - дані, які демонструють, що активація шляху передачі сигналу МЕКВ націленою на
ЕАР антигензв'язуючою молекулою, що містить тримерний ліганд для 4-1ВВ в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.1) прямо залежала від її зв'язування з експресуючими ЕАР клітинами-мішенями.
Репортерні клітини Не а-МЕКВ, що експресують людський СО137, спільно культивували із зазначеними клітинами, які характеризуються різними рівнями експресії БАР на клітинній поверхні. Люциферазну активність оцінювали за методом, описаним в прикладі 6.1, після культивування клітин в присутності молекул, які містять 4-1ВВІ,, в зазначених концентраціях або без них протягом б год. Зафарбованими окружностями позначена конструкція 1.1.
Незафарбованими окружностями позначена «ненацілена» антигензв'язуюча молекула на основі
ОР4А7, що містить ліганд для 4-188Щ8 в злитті Ес (Кіп) (контроль А). Клітинну лінію МІН/З3Т3- людський ЕАР, клон 39 застосовували як клітини-мішені на графіку (А), на графіку (Б) показана активація при використанні як клітин-мішеней клітин лінії ММЗ, а на графіку (В) - при використанні як клітин-мішеней клітин лінії У/М-266-4. Для характеризації активності будували графік залежності одиниць випускання світла (КІ), вимірюваних протягом 0,5 с, від концентрації в нМ тестованих конструкцях, які містять розділений тримерний 4-18ВІ.
Зо Випускання ШКІ відбувається в результаті опосередкованої люциферази окислення люциферина з утворенням оксилюциферина; на фіг. 17 - дані про активацію індукованої МЕкВ експресії люциферази і активності, для вимірювання яких використовували аналіз, описаний в прикладі 6.1. Кількість світла, що випускається в секунду (СРБ), вимірювали протягом 0,5 с/лунку і будували графік залежності від застосовуваної концентрації націлених на БАР або «ненацілених» конструкцій, які містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кіп). Репортерні клітини Неї а, що експресують людський 4-188, інкубували протягом б год за відсутності (фіг. 17А) або в присутності клітин людської меланоми лінії ММ-3 (фіг. 17Б) або УУМ-266-4 (фіг. 178), що експресують перехреснозшитий людський ЕАР. Вимірювали СРЗ і будували графік залежності від концентрацій різних націлених на РАР або «ненацілених» конструкцій, які містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кіп). Співвідношення клітин становило: одна репортерна клітина Неї а, що експресує людський 4-188, на п'ять пухлинних клітин. Для кращої форми представлення криві активації розподіляли на чотири різні групи графіків, при цьому криві для конструкції 1.1 (одновалентна націлена на ЕАР, що містить розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (КІій)) і контрольної молекули Б (одновалентна «ненацілена», яка містить розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кій) з СН-СІ -кросовером та зарядженими залишками) застосовували як криві порівняння. На фіг. 17А представлені дані про активацію за відсутності пухлинних клітин, які експресують перехресхнозшитий ЕАР, на фіг. 17Б представлені дані про активацію в присутності пухлинних клітин ММ-3, які експресують перехресхнозшитий РГАР, а на фіг.17В представлені дані про активацію в присутності пухлинних клітин УУМ-266-4, які експресують перехресхнозшитий ЕАР; на фіг. 18 - дані про активацію індукованої МЕкВ експресії люциферази і активності, отримані для конструкцій, описаних в прикладі 2. Одиниці випускання світла (ШК) оцінювали протягом 0,5 с/лунку і будували графік залежності від застосовуваної концентрації націлених на
ЕАР або « ненацілених» конструкцій, що містять розділений тримерний людський ліганд для 4- 188-Ес (Кін). Репортерні клітини НегГа, які експресують людський 4-188В, інкубували протягом 6 год за відсутності або в присутності клітин людської меланоми лінії ММ-3 або УММ-266-4, які експресують перехреснозшитий людський ЕАР. ШК. оцінювали і будували графік залежності від концентрацій різних націлених на БАР або «ненацілених» конструкцій 2.1, 2.3, 2.4, 2.5 і 2.6, які бо містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кі), і контрольних конструкцій Б,
В, Д ї Е . Співвідношення клітин становило: одна репортерна клітина Не а, що експресує людський 4-188В, на п'ять пухлинних клітин. Для кращої форми представлення криві активації розподіляли на дві різні групи графіків, в кожній з яких (для порівняння) використовували криву для конструкції 2.1 (одновалентна націлена на ЕАР, яка містить тримерного людський ліганд для 4-188-Ес (КІій)); на фіг. 19 - схема аналізу активації репортерної лінії клітин Т293-НЕК, що експресують 4- 188 мавп ціномолгус. Перехресхнозшитий 4-188 мавп ціномолгус, що експресується на репортерних клітинах, індукує активацію МЕкВ і опосередковану МЕкВ експресію люциферази.
Після лізису клітин люциферази може каталізувати окислення люциферина з утворенням оксилюциферина. Для цієї хімічної реакції характерна позитивна кореляція з рівнем опосередкованої МЕкВ експресії люциферази, і його можна вимірювати за рівнем випускання світла (в одиницях випускання світла); на фіг. 20 - дані про індуковану активацією МЕкВ експресії люциферази та активності. Рівень випускання світла (в одиницях ОК!) вимірювали протягом 0,5 с/лунку і будували графік залежності від застосовуваної концентрації націлених на БАР або «ненацілених» конструкцій, які містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кіп). Репортерні клітини Т293-
НЕК, які експресують 4-188 мавп ціномолгус, інкубували протягом 6 год за відсутності або в присутності клітин людської меланоми лінії ММУ-3 або МУу/М-266-4, які експресують перехреснозшитий людський БАР. ШКІ оцінювали і будували графік залежності від концентрацій різних націлених на ГАР або «ненацілених» конструкцій, які містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кіп). Співвідношення клітин становило: одна репортерна клітина Т293-НЕК, яка експресує 4-188В, на п'ять клітин ММУ-3 або дві клітини УММ- 266-4. Для кращої форми представлення криві активації роподіляли на дві різні групи графіків, в кожній з яких як криву порівняння використовували криву для конструкції 2.1; на фіг. 21 - схема, що ілюструє принцип аналізу Т-клітинної активації, описаного в прикладі 6.3. Представлена схема здійснення аналізу активації з використанням Ні А-А2-МІ М- специфічних СОВ8-Т-клітин і таких, що піддаються імпульсній обробці МІМ клітинної лінії НІ А-А2 ж БАР я людської меланоми МУ-3 в присутності різних визначених титруванням концентрацій націлених на ЕАР або «нанацілених» конструкцій, які містять розділений тримерний людський
Зо ліганд для 4-188-Ес (Кіпй). Клітини інкубували протягом 28 год, останні 4 год в присутності реагенту Соїді-бор, який містить монезін. Співвідношення Мі М-специфічних СО8-Т-клітин і пухлинних клітин МУ-3 становило 1: 8; на фіг. 22А-Д і 23А-Д - результати аналізу активації, в яких використовували НІ А-А2-МІ М- специфічні СО8-Т-клітини і таку , що піддається імпульсній обробці ММ клітинну лінію НІ А-А2 --
ЕАР ж людської меланоми ММУ-3 в присутності різних визначених титруванням концентрацій націлених на ЕАР або «нанацілених» конструкцій, що містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кіп), одержаних в прикладі 1. Для кращої форми представлення криві експресії роподіляли на декілька різних груп графіків, в яких як криві порівняння застосовували криві, одержані для конструкції 1.1 (одновалентна націлена на ЕАР, яка містить розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кіп)) ії контрольної молекули Б (одновалентна «ненацілена», яка містить розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (КІЙ)).
Результати одержували в чотирьох незалежних аналогічних експериментах і встановлено, що пролонгована секреція ІЕМу і експресія СО137 МІ М-специфічними СО8:-Т-клітинами прямо залежали від одночасної активації Т-клітин за допомогою розпізнавання комплексів МІМ-НІ А-А2 (сигнал 1) і стимуляції 4-1ВВ за допомогою націленого на ЕАР людського розділеного 4-188В1. (сигнал 2). Дані про роль підвищуючої регуляції 4-188 представлені на графіках на фіг. 22, в той час як дані про вплив на експресію ІМЕу СО8--Т-клітинами представлені на графіках на фіг. 23.
У кожному разі наведені дані про частоту (у відсотках) позитивних клітин в загальній популяції
СО8:-Т-клітин. Всі націлені на БАР варіанти индукували подібне підвищення активації активованих МІ М-пептидом СО8-Т-клітин, що представлено на фіг. 22 у вигляді підвищувальної регуляції 4-188 (петля позитивного зворотного зв'язку), і на фіг. 23 у вигляді експресії ІРМу після 24-годинної стимуляції. Відмінності між кривими знаходилися в межах помилки стандартного відхилення і не були значущими; на фіг. 24 і 25 - результати аналізу активації, в якому використовували НІ А-А2-МІМ- специфічні СО8-Т-клітини і таку, що піддається імпульсній обробці МІ М клітинну лінію НІ А-А2
ЕАР ж людської меланоми ММУ-3 в присутності різних одержаних титруванням концентрацій націлених на БАР або « нанацілених »конструкцій, одержаних в прикладі 2, які містили розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кіп). Для кращої форми представлення криві експресії розподіляли на дві різні групи графіків, в яких як криві порівняння застосовували бо криві, одержанідля конструкції 2.1 (одновалентна націлена на ЕГАР, яка містить розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кіп)) і контрольної молекули Б (одновалентна «ненацілена», яка містить розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кій)) і для контролю Б. Встановлено, що всі націлені на ЕАР конструкції, які містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кіп) характеризувались подібним підвищенням активації специфічних для Мі М-пептиду СО8-Т-клітин, що представлено на фіг. 24 у вигляді підвищувальної регуляції 4-18 (петля позитивного зворотного зв'язку), і на фіг. 25 у вигляді експресії ІРМу після 24-годинної стимуляції. Відмінності між кривими знаходилися в межах помилки стандартного відхилення і не були значущими; на фіг. 26 - схема, що ілюструє експеримент, описаний в прикладі 6.4; на фіг. 27 - дані про індукцію проліферацію СО8:-Т-клітин. Представлені дані про частоту стрівальності (рівень) проліферуючих СОВ8--Т-клітин в залежності від концентрації тестованих конструкцій; на фіг. 28А - результати ФК-експерименту з використанням однієї дози конструкції 1.2 і контролю Б, проведеного на здорових МОсС-мишах. Продемонстровано зниження концентрації конструкцій протягом часу. На 28Б- результати ФК-експерименту з використанням однієї дози конструкцій 2.1, 2.3, контролю Б і контролю В, проведеного МОСС -мишах, які на несуть пухлини, гуманізували за допомогою стовбурових клітин. На фіг. 288- результати ФК-експерименту з використанням однієї дози конструкції 2.1 і 2.3, проведеного на здорових МОС-мишах; на фіг. 29 - компоненти для збирання розділені тримерних лігандів для людського 4-188. На фіг. 29А - димерний ліганд, злитий на С-кінці з людським Сі -доменом з мутаціями Е123ЗК і
О124К (заряджені залишки), на фіг. 29Б - мономерний ліганд для 4-188В, злитий з людським
СНІ-доменом з мутаціями К147Е і К21З3Е (заряджені залишки). Представлені компоненти для збирання двовалентної націленої на СО19 антигензв'язуючої молекули, яка містить розділений тримерний людський ліганд для 4-188 (711-254) (конструкція 3.3). На фіг. 298 показаний димерний ліганд, злитий з С-кінцем ланцюга Ес людського ЇдС1 із «западиною». На фіг. 29Г показаний мономерний ліганд, злитий з С-кінцем ланцюга Ес людського ЇДС1 з «виступом»; на фіг. 30 - конструкції 3.1-3.6 націлених на СО19 антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний 4-188ВІ, запропонованих у винаході. Попередня підготовка і одержання цих конструкцій описано в прикладі 3. МН- і МІ -домени являють собою домени антитіла до СО19
Зо 888-018, жирною чорною крапкою позначена модифікація типу «Кпобр-іпіо-поїе». Символом "7 позначені амінокислотні модифікації в СНІ- і СІ -доменах (так звані заряджені залишки); на фіг. З1А - ілюстрація стратегії рандомізації СОК-ділянок батьківського клону 888.
Показані варіабельні домени батьківського клону 888 і СОК-ділянки (виділені прямокутником) згідно з нумерацією Кебота. (Х) позначає рандомізовані положення. На фіг. 31Б - схематичний опис стратегії створення бібліотеки. Показані стратегії ПЛР-ампліфікації і клонування, що застосовуються для створення бібліотеки на основі 888 з А) рандомізірованими СОВ1- і СОК2- ділянками в легкому і важкому ланцюзі або Б) рандомізованими СОНВІ1- і СОКЗ-ділянками легкого ланцюга і СОКЗ-ділянкою важкого ланцюга. Вказані відповідні ферменти, що застосовуються для клонування в фагміді; на фіг 32 - результати порівняльного аналізу первинної структури послідовності батьківського клону 888 антитіла до СО19 з відібраними зв'язуючими агентами з дозрілою афінністю. Показані всі послідовності клону 888 і всіх відібраних зв'язуючих агентів з дозрілою афінністю. СОК і важких, і легких ланцюгів виділяються рамками; на фіг. 33 - результати З5РЕ-аналізу батьківського клону 888 і його варіантів з дозрілою афінністю. Показані сенсограмми, одкржані для клону 888 і його похідних з дозрілою афінністю, в яких відсутні «гарячі» точки М27а і М28 в Ї СОКІ1; на фіг. 34 - ілюстрація схеми аналізу вимірювання одночасного зв'язування націленої на
СО19 конструкції, яка містить тримерний розділений 4-18ВІ, з пи4-188 ії пиСО19 (приклад 8.2); на фіг 35 - графіки, що описують одночасне зв'язування націлених на СО019 антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний 4-18ВІ, в злитті з Ес (конструкції 3.1, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6 і 4.4) (аналіт 1) з іммобілізованим людським 4-1В88 і людським СО19 (аналіт 2); на фіг. 36 - результати аналізу зв'язування різних націлених на СО19 або «ненацілених» конструкцій, які містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кій), з експресуючими 4-188 СО4- і СО8-Т-клітинами з попередньо активованих РНА-Ї і пролейкіном і повторно реактивувати антитілом до людського СЮОЗ/до людського СО28 людських РВМС.
Зв'язування виявляли за допомогою кон'югованого з флуорохромом, таким як К-фікоеритрин, Е (ар) 2-фрагмента козячого (Дб проти людського Ід, Есу-специфічного. Показана залежність медіанних значень інтенсивності флуоресценції (МЕ) від концентрації тестованих конструкцій.
Для кращої форми представлення криві зв'язування розподіляли на дві різні групи графіків, при бо цьому криві для конструкції 3.4 і контролю Е (контроль ізотипу пшШдСс! РЗ2Уа І1АГА)
застосовували як криві порівняння. Оцінювали зв'язування на СО45:С203и208:-Т-клітинах (фіг.
З6А) і 6045:003:004:-Т-клітинах (фіг. 36Б). Рівень експресії 4-188 на СО8-Т-клітинах в нормі вище, ніж на СО4-Т-клітинах. Всі конструкції зв'язувалися з людським 4-188 практично з подібною афінністю; на фіг. 37 - результати аналізу зв'язування різних націлених на СО19 або «ненацілених» антигензв'язуючих молекул, які містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кп) з експресуючими людський СО19 клітинними лініями В-клітинної лімфоми, такими як: дифузна крупноклітинна неходжкінська В-клітинна лімфома 5ИО-ОНІ-8 (37А), гострий лімфобластний лейкоз із клітин-попередників В-лімфоцитів Маїтб (37Б), дифузна крупноклітинна лімфобластна лімфома Тоіедо (378) і дифузна крупноклітинна В-клітинна лімфома ОСІ-Гу18 (37Г). Зв'язування виявляли за допомогою кон'югованого з флуорохромом, таким як К-фікоеритрин, Е (ар) 2-фрагмента козячого ІдсС проти людського Ід, Есу- специфічного. Показана залежність медіанних значень інтенсивності флуоресценції (МЕ) від концентрації тестованих конструкцій. Для кращої форми представлення криві зв'язування розподіляли на три різні групи графіків, при цьому криві для конструкції 3.4 і контролю Е (контроль ізотипу пиЇдсї1 РЗ290 ГАГА) застосовували як криві порівняння. Всі конструкції зв'язувалися з людським СО19 практично з подібною афінністю; на фіг. 38 - дані про індуковану активацією МЕкВ експресії люциферази і активності націлених на СО19 або «ненацілених» антигензв'язуючих молекул, які містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кіп). Рівень випускання світла (в одиницях ОК) вимірювали протягом 0,5 с/лунку і будували графік залежності від застосовуваної концентрації націлених на СО19 або «ненацілених» конструкцій 3.1 і 3.3, які містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кій), і контрольних молекул Б і В. Репортерні клітини Нега, які експресують людський 4-188В, інкубували протягом 7,5 год в присутності клітин 50Ш-ОНІ -8, які експресують перехреснозшитий людський СО19, або клітин Пфейфера або без них.
Вимірювали ШКІ. і будували графік залежності від концентрацій різних націлених на СО19 або «ненацілених» конструкцій, які містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188В-Ес (Кп). Співвідношення клітин становило: одна репортерна клітина Т293-НЕК, яка експресує 4- 188, на 2,5 або 5 пухлинних клітин;
Зо на фіг. 39 - дані про зв'язування різних гуманізованих варіантів Т84.66 а на експресуючих
СЕА клітинах людської аденокарциноми шлунка. На основі одержаних даних був відібраний гуманізований варіант 1 для включення в націлені на СЕА антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний людський ліганд для 4-18В8В-Ес (КІій); на фіг. 40 - конструкції 5.1-5.6 націлених на СЕА антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кіп), запропонованих у винаході. Попередня підготовка і одержання зазначених конструкцій описано в прикладі 11. УН- і МІ -домени являють собою домени антитіла до СЕА Т84.66-І СНА, жирною чорною крапкою позначена модифікація типу «Кпор-іпіо-нпоЇїє». Символом " позначені амінокислотні модифікації в СНІ- і СІ -доменах (так звані заряджені залишки); на фіг 41А - схематичне зображення людського антигена МАЗВЗА2-амі Ніб5, що застосовується для оцінки зв'язування націлених на СЕА антигензв'язуючих молекул, що містять тримерний розділений 4-18В8І -Ес (Кіп). На фіг. 41Б - схематичне зображення схеми аналізу вимірювання одночасного зв'язування націленої на СЕА конструкції, яка містить тримерний розділений 4-188В1,, з пи4-188 і людським МАЗВЗАЗ2 (приклад 12.1); на фіг. 42 - графіки, на яких продемонстровано одночасне зв'язування націлених на СЕА антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний 4-1ВВІ в злитті з Ес (конструкції 5.4, 5.6, 5.7 і 5.8 (аналіт 1) з іммобілізованими людським 4-188 і людським МАЗВЗА? (аналіт 2). на фіг. 43 - результати аналізу зв'язування різних націлених на СЕА або ненацілених конструкцій, які містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кій), з експресуючими 4-188 СО4- і СО8-Т-клітинами з попередньо активованих РНА-Ї і пролейкіном і повторно реактивованих антитілом до людського СЮОЗ/до людського СО28 людських РВМС.
Зв'язування виявляли за допомогою кон'югованого з флуорохромом, таким як К-фікоеритрин, Е (аб) 2-фрагмента козячого (Дб проти людського дО, Есу-специфічного. Показана залежність медіанних значень інтенсивності флуоресценції (МЕ) від концентрації тестованих конструкцій.
Для кращої форми представлення криві зв'язування роподіляли на дві різні групи графіків, при цьому криві для конструкції 5.4 і контролю Е (контроль ізотипу пшШдСс! РЗ2Уа І1АГА) застосовували як криві порівняння. Оцінювали зв'язування на СО45-503508:-Т-клітинах (нижня група графіків) і 20455003-004--Т-клітинах (верхня група графіків). Рівень експресії 4- 188 на СО8-Т-клітинах в нормі вище, ніж на СО4-Т-клітинах. Всі конструкції зв'язувалися з 60 людським 4-1В88 практично з подібною афінністю;
на фіг. 44 - результати аналізу зв'язування націлених на СЕА або ненацеліних конструкцій, які містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Рс (Кій), з лінією клітин раку шлунка людини МКІМ-45 (ліворуч), що експресує людський СЕА і лінією клітин колоректальної аденокарциноми людини І 5180 (праворуч). Зв'язування виявляли за допомогою кон'югованого з флуорохромом, таким як К-фікоеритрин, Е (аб) 2-фрагмента козячого ЇДо проти людського
Ід, Есу-специфічного. Показана залежність медіанних значень інтенсивності флуоресценції (МЕЇ) від концентрації тестованих конструкцій; на фіг. 45 - дані про індуковану активацією МЕкВ експресію люциферази і активності націлених на СЕА або «ненацілених» антигензв'язуючих молекул, які містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кіп). Рівень випускання світла (в одиницях ОК) вимірювали протягом 0,5 с/лунку і будували графік залежності від застосовуваної концентрації націлених на СЕА або «ненацілених» конструкцій 5.4, 5.6, 5.7 і 5.3, які містять розділений тримерного людський ліганд для 4-188-Ес (Кій), і контрольних молекул. Репортерні клітини
Нега, які експресують людський 4-188, інкубували протягом б год в присутності клітин раку шлунка людини МКМ-45, які експресують перехреснозшитий людський СЕА. Співвідношення клітин становило: одна репортерна клітина Т293-НЕК, що експресує 4-188, на три пухлинні клітини. на фіг. 46А і 46Б - компоненти для збирання одновалентної націленої на БАР конструкції, яка містить розділений тримерний людський ліганд для ОХ40 (конструкція 6.1). На фіг. 46А показаний димерний ліганд, злитий з СІ -доменом людського ІДС, на фіг. 46Б - мономерний ліганд, злитий з СНІ-доменом людського ІдДа1. На фіг. 468 - націлена на ЕАР антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ОХ401Ї (конструкція 6.1). На фіг. 46Г - «ненацілена» конструкція на основі ОРА7 людського Ідс1 Раї АГ А (контроль Е); на фіг. 47А - результати аналізу зв'язування націленої на БАР конструкції, яка містить тримерний людський Ох40Ї з РАР-позитивними клітинами УММ-266-4. М/М-266-4-клітини експресують високі рівні людського фібробласт-активуючого білка (пиБАР). З клітинами. М/М- 266-4 зв'язувалися тільки націлені на ЕАР конструкції (зафарбовані квадрати), які містять ліганд для ОХ40-Бс (Кіп), але не контрольна конструкція 5 (зафарбовані ромби). Зв'язування представлено у вигляді медіанних значень інтенсивності флуоресценції (МЕЇ) для міченого за
Зо допомогою флуоресцеїнізотіоціанату (ФІТЦ) Е (аб) 2-фрагмента козячого ЇдДо проти людського
Іда, Есу-специфічного, що застосовується як вторинне ідентифікуюче антитіло. МЕ! вимірювали за допомогою проточної цитометрії. На осі х відкладена концентрація конструкцій антитіл. На фіг. 47Б - результати аналізу зв'язування націленої на ЕАР конструкції, що містить ліганд для
ОХ40-Ес (Кій), з негативними з людського ЕРАР і негативними з людського ОХ40 клітинами А549, міченими за допомогою МисГідпї КедфФ. Встановлено, що націлена на БАР конструкція, яка містить ліганд для ОХ4О-Ес (Кіпй), не зв'язувалася з ОХ40-негативними, ЕАР-негативними пухлинними клітинами А5б49. Зв'язування представлено у вигляді медіанних значень інтенсивності флуоресценції (МЕ!) для міченого за допомогою ФІТЦ Е (аб) 2-фрагмента козячого ІдсС проти людського Ідс, Есу-специфічного, що застосовується як вторинне ідентифікуюче антитіло. МЕЇ вимірювали за допомогою проточної цитометрії і здійснювали корекцію на фоновий рівень шляхом вирахування МЕРЇ для «порожнього» контролю; на фіг. 48А - результати аналізу зв'язування конструкції БАР-Ох40Ї з такими, що перебувають в стані спокою, і активованими людськими СО4-Т-клітинами. ОХ40 не експресується на людських СО4-Т-клітинах в стані спокою покояться (ліва частина). За відсутності експресуючих людський ОХ40 клітин зв'язування не виявлено (графіки зліва). Після активації лодських РВМСОС має місце підвищуюча регуляція ОХ40 на СО4--Т-клітинах (права частина). Конструкція РАР-ОХ40Ї пов'язувалася з ОХ40:-активованими СО4-Т-клітинами.
Зв'язування представлено у вигляді медіанних значень інтенсивності флуоресценції (МЕЇ) для міченого за допомогою ФІТЦ Е (ар) 2-фрагмента козячого ДО проти людського Ідс, Есу- специфічного, що застосовується як вторинне ідентифікуюче антитіло. МЕЇ вимірювали за допомогою проточної цитометрії і здійснювали корекцію на фоновий рівень шляхом вирахування МЕ! для «порожнього» контролю. На осі х відкладена концентрація конструкцій антитіл. На фіг. 48Б представлені дані, що демонструють, що ОХ40 не експресується на людських СО8-Т-клітинах в стані спокою (ліва частина). За відсутності експресуюючих людський
ОХ40 клітин зв'язування не виявлено (графіки зліва). Після активації людських РВМС має місце підвищуюча регуляція ОХ40 на СО8--Т-клітинах (права частина). Експресія ОХ40 на людських
СОр8:-Т-клітинах нижча, ніж на СО4--Т-клітинах і варіюється в залежності від донора і моментів часу. Рівень експресії ОХ40 на представлених СО8-Т-клітинах був низьким. Конструкція ЕАР-
ОХ401| зв'язувалася з ОХ40--активованими СО4-Т-клітинами. Зв'язування представлено у бо вигляді медіанних значень інтенсивності флуоресценції (МЕЇ) для міченого за допомогою ФІТЦ
Е (аб) 2-фрагмента козячого до проти людського дО, Есу-специфічного, що застосовується як вторинне ідентифікуюче антитіло. МЕ! вимірювали за допомогою проточної цитометрії і здійснювали корекцію на фоновий рівень шляхом вирахування МЕРЇ для «порожнього» контролю.
На осі х відкладена концентрація конструкцій антитіл; на фіг. 49 - дані, що демонструють активацію шляху передачі сигналу МЕКВ за допомогою націленої на БАР антигензв'язуючої молекули, що містить розділений тримерний людський
ОХ40І (ГАР-ОХ40І) в репортерних клітинах НеГа пОх40 МЕКВ Іис1. Представлені дані про активацію з використанням перехресного зшивання (правий графік) або без неї (лівий графік) із застосуванням вторинного антитіла. Репортерні Клітини культивували протягом 5 год в присутності РГАР-ОХ40Ї в зазначених концентраціях з або без перехресного зшивання з поліклональним вторинним антитілом, Е (ар) 2-фрагментом козячого ДС проти пиЇдас1, Есу- специфічним, застосовуваним в співвідношенні 1: 2. Люциферазну активність оцінювали за методом, описаним в прикладі 6.1. Для характеризації активності використовували одиниці випускання світла (КІ), виміряні протягом 0,5 с, в залежності від концентрації в НМ тестованої конструкції. Випускання ШК. відбувалося в результаті опосередкованої люциферази окислення люциферина з утворенням оксилюциферина; на фіг. 50А - дані про активацію МЕКВ за допомогою ЕАР-ОХ40І в репортерних клітинах
Нега пОХ40 МЕКВ Гис1 в присутності ЕАР-позитивних клітин. Представлені дані про активацію шляху передачі сигналу МЕКВ в репортерних клітинах за допомогою ГАР-ОХ40І. в присутності клітин МІН-З3ТЗ3, які характеризуються низьким рівнем експресії людського БАР (співвідношення: З пухлинні БАР"-клітини на 1 репортерну клітину). Опосередковану МЕКВ люциферазну активність характеризували з використанням одиниць випускання світла (КІ), вимірюваних протягом 0,5 с, в залежності від концентрації в нМ тестованих з'єднань.
Випускання КІ відбувалося в результаті опосередкованої люциферази окислення люциферина з утворенням оксилюциферина. Здійснювали корекцію величин на фоновий рівень шляхом вирахування КІ для «порожнього» контролю. Для більш ефективного порівняння визначали площу під кривою для відповідних представлених кривих дозової залежності як маркера агоністичної здатності кожної конструкції. Результати порівняння проілюстровані на фіг. 50Б. Площу під кривою розраховували за допомогою програми СгарпРай Ргтгізт.
Зо Здійснювали корекцію величин на фоновий рівень шляхом вирахування величини для «порожнього» контролю; на фіг. 51 - дані про опосередковану ОХ40 костімуляцію субоптимально стимульованих ТОК людських РВМС, що знаходяться в стані спокою (приклад 15.5). Перехресна гіперзшивка ЕАР-
ОХ401 в результаті присутності клітин МІН/3Т3-пШЕАР, клон 39 значно підвищувала виживання і проліферацію людських СО4- і СО8-Т-клітин. Представлені дані про кількість випадків присутності живих СО4--(ліворуч) і СО8:-(праворуч) Т-клітин. Вираховували фонові значення, одержані для зразків, що містять тільки антитіло до людського СОЗ (клон МУ, пиЇдса1), людські
РВМСО в стані спокою і клітини МІН/З3Т3-пиЕАР клону 39. Таким чином, продемонстровано підсилюючу дію костимуляції ОХ40, але відсутність впливу самої субоптімальної стимуляції антитілом до СО3. На графіках знизу (мають назву «проліферація») представлені дані про підтримання субоптимальності стимуляції ТОВ людських РВМСО в стані спокою використанні іммобілізованої на клітинній поверхні конструкції РЕАР-ОХ40ОЇ.
Детальний опис винаходу
Визначення
Якщо не вказано інше, то технічні та наукові поняття, які застосовуються в даному описі, мають значення, які зазвичай використовують в галузі техніки, до якої належить винахід. Для цілей інтерпретації даної заявки слід застосовувати наведені нижче визначення, і якщо це можливо, то поняття, що застосовуються в однині, включають також їх застосування в множині і навпаки.
В контексті даного опису поняття «антигензв'язуюча молекула» в найбільш широкому сенсі відноситься до молекули, яка специфічно зв'язується з антигенною детермінантою. Прикладами антигензв'язуючих молекул є антитіла, фрагменти антитіл і антигензв'язуючі білки-каркаси («скафолд-білки»).
В контексті даного опису поняття «фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені» відноситься до поліпептидної молекули, яка специфічно зв'язується з антигенною детермінатною. В одному з об'єктів винаходу антигензв'язуючий фрагмент має здатність активувати передачу сигналу через антиген його клітини-мішені. В конкретному об'єкті винаходу антигензв'язуючий фрагмент має здатність направляти субстанцію, з якою він зв'язаний (наприклад, тримерний ліганд сімейства ТМЕ) до сайту-мішені, наприклад, до певного 60 типу пухлинних клітин або строми пухлини, що несуть антигенну детермінанту. Фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені, включають антитіла і їх фрагменти, більш детально представлені в даному описі. Крім того, фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, включають антигензв'язуючі білки-каркаси, білош детально представлені в даному описі, наприклад, такі, що зв'язують домени, основою який є створені повтори білків або створені повтори доменів (див., Наприклад,
МО 2002/020565).
Стосовно антитіла або його фрагмента поняття « ділянка, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені» відноситься до частини молекули, що містить область, яка специфічно зв'язується, і комплементарну частини антигена або всього антигені. Фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, може являти собою, наприклад, один або декілька варіабельних доменів антитіла (які називають також варіабельними областями антитіла). Зокрема, фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, містить варіабельну область легкого ланцюга антитіла (МУ) і варіабельну область важкого ланцюга антитіла (МН).
В контексті даного опису поняття «антитіло» використовується в його найбільш широкому сенсі, і воно відноситься до різних структур антитіл, включаючи (але не обмежуючись тільки ними) моноклональні антитіла, поліклональні антитіла, моноспецифічні і мультиспецифічні антитіла (наприклад, біспецифічні антитіла) і фрагменти антитіл, за умови, що вони мають необхідну антигензв'язуючу активність.
Поняття «моноклональне антитіло» в контексті даного опису відноситься до антитіла, одержаного з популяції практично гомогенних антитіл, тобто індивідуальні антитіла, що входять в популяцію, є ідентичними і/або зв'язуються з одним і тим же епітопом, за винятком можливих варіантів антитіл, наприклад таких, що містять мутації, що зустрічаються в природних умовах або виникають в процесі виробництва препарату моноклонального антитіла, зазначені варіанти, як правило, присутні в мінорних кількостях. На відміну від препаратів поліклональних антитіл, які як правило, включають різні антитіла до різних детермінантів (епітопів), кожне моноклональне антитіло з препарату моноклонального антитіла направлено проти однієї детермінанти на антигені.
В контексті даного опису поняття «моноспеціфічне» антитіло означає антитіло, яке має один або декілька сайтів зв'язування, кожен з яких зв'язується з одним і тим же епітопом одного і того ж антигену. Поняття «біспецифічна» означає, що антигензв'язуюча молекула має здатність специфічно зв'язуватися принаймні з двома різними антигенними детермінантами. Як правило, біспецифічна антигензв'язуюча молекула містить два антигензв'язуючих сайта, кожен з яких є специфічним по відношенню до різних антигенних детермінант. В деяких варіантах здійснення винаходу біспецифічна антигензв'язуюча молекула має здатність одночасно зв'язуватися з двома антигенними детермінантами, перш за все з двома антигенними детермінантами, які експресуються на двох різних клітинах.
В контексті даного опису поняття «валентність» означає наявність певної кількості сайтів зв'язування в антигензв'язуючій молекулі. Так, поняття «двовалентна», «чотирьохвалентна» і «шестивалентна» означає присутність двох сайтів зв'язування, чотирьох сайтів зв'язування і шести сайтів зв'язування відповідно в антигензв'язуючій молекулі.
Поняття «повнорозмірне антитіло», «інтактне антитіло» і «незбиране антитіло» в контексті даного опису використовують як взаємозамінні для позначення антитіла, що має структуру, практично схожу з нативною структурою антитіла. Поняття «нативні антитіла» відноситься молекул імуноглобулінів з різними структурами, які зустрічюється в природних умовах.
Наприклад, нативні антитіла ІдО-класу є гетеротетрамерними глікопротеїнами з молекулярною масою приблизно 150000 Да, що складаються з двох ідентичних легких ланцюгів і двох ідентичних важких ланцюгів, зв'язаних дисульфідними містками. Починаючи з М- кінця до С- кінця, кожний важкий ланцюг має варіабельну область (МН), яку називають також варіабельним важким доменом або варіабельним доменом важкого ланцюга, за якою слідують три константні домени (СНІ, СН? ії СНЗ), які називають також константною областю важкого ланцюга.
Аналогічно до цього, починаючи з М-кінця до С-кінця, кожний легкий ланцюг має варіабельну область (МІ), яку називають також варіабельним легким доменом або варіабельним доменом легкого ланцюга, за якою слідує константний домен легкого ланцюга (СІ), який називають також константною областю легкого ланцюга. Важкий ланцюг антитіла може належати до одного з п'яти типів, які позначають як а (ІдА), б (190), є (ЗЕ), у (дс) або н (І9М), деякі з яких можна додатково поділяти на підтипи, наприклад, у! (ІДС), у2 (1952), уЗ (943), у4 (9404), а1 (ІДА1) і а2 (ІЩА2). Легкий ланцюг антитіла може належати до одного з двох типів, які називаються каппа (к) і лямбда (АХ), в залежності від амінокислотної послідовності його константного домену. 60 Поняття «фрагмент антитіла» відноситься до молекули, відмінної від інтактного антитіла,
яка містить частину інтактного антитіла, що має здатність зв'язуватися з антигеном, з яким зв'язується інтактне антитіло. Прикладами фрагментів антитіл є (але, не обмежуючись тільки ними) Ем, Рар, Бар", Раб'-5Н, Е (аб) 2, димерні антитіла (діабоди), тримерні антитіла (тріабоди), тетрамерні антитіла (тетрабоди), крос -Раб-фрагменти; лінійні антитіла: одноланцюгові молекули антитіл (наприклад, 5сЕм); і однодоменні антитіла. Огляд деяких фрагментів антитіл див., наприклад, у Ниазоп та ін., Маї Мей 9, 2003 сс. 129-134. Огляд 5сЕм-фрагментів див., наприклад, у Рійскійип в: Тпе Рпапгтасоїоду ої Мопосіопаї Апііроадієв, т. 113, під ред. НКНозеприга і
Мооге, вид-во бргіпде!-Мепад, Мем мок, 1994, сс. 269-315; див. також МО 93/16185; ії О5 МоМо 5571894 і 5587458. Обговорення ГРаБб- і Е (ар ") 2-фрагментів, що містять залишки епітопу, що зв'язується з рецептором порятунку, і що мають подовжений час напівжиття іп мімо, див. в О5 Мо 5869046. Димерні антитіла являють собою фрагменти антитіл з двома антигензв'язуючих сайтами, які можуть бути двовалентними або біспецифічними (див., наприклад, ЕР 404097; МО 1993/01161; Нидзоп та ін., Маї Меа 9, 2003 сс. 129-134; і Ноїїїпдег та ін., Ргос Маї! Асай 5сі ОБА 90, 1993, сс. 6444-6448. Тримерні і тетрамерні антитіла описані також у Нидзоп та ін., Маї Меа 9, 2003 сс. 129-134. Однодоменні антитіла являють собою фрагменти антитіл, що містять весь варіабельний домен важкого ланцюга або його частину або весь варіабельний домен легкого ланцюга антитіла або його частину. В деяких варіантах здійснення винаходу однодоменне антитіло являє собою людське однодоменне антитіло (фірма Ротапіїх, Іпс., Валтен, шт.
Массачусетс; див., наприклад, 5 Мо 6248516 В1). Фрагменти антитіл можна створювати за допомогою різних методик, включаючи (але не обмежуючись тільки ними) протеолітичне розщеплення інтактного антитіла, а також одержувати з використанням рекомбінантних клітин- хазяїнів (наприклад, Е. соїї або фага), як зазначено в даному описі.
Розщеплення інтактних антитіл папагтом призводить до утворення двох ідентичних антигензв'язуючих фрагментів, які називають «ЕРар»-фрагментами, кожен з яких містить варіабельні домени важкого і легкого ланцюгів, а також константний домен легкого ланцюга і перший константний домен (СНІ) важкого ланцюга. В контексті даного опису поняття «Еар- фрагмент» відноситься до фрагменту антитіла, що містить фрагмент легкого ланцюга, який містить МіІ--домен і константний домен легкого ланцюга (СІ), ії МН-домен і перший константний домен (СНІ) важкого ланцюга. Рар'-ррагменти відрізняються від РГар-фрагментів додаванням декількох залишків на карбоксильний кінець СНІ1-домену важкого ланцюга, включаючи один або декілька залишків цистеїну з шарнірної області антитіла. Рар'-ЄЗН позначає Рар'-фрагменти, в які залишок(и) цистеїну константних доменів несе(уть) тіольні групи. Обробка пепсином дозволяє одержувати Е (ар) 2-фрагменти, які мають два антигензв'язуючі сайти (два Рар-фрагмента) і частину Ес-області.
Поняття «крос-Бар-фрагмент» або «хРаб-фрагмент» або «кросовер-бар-фрагмент» відноситься до Рар-фрагмента, в якому або варіабельні області, або константні області важкого і легкого ланцюга обмінені. Можливі дві різні композиції ланцюга кросовер-молекули Раб, і вони можуть входити в біспецифічні антитіла, запропоновані у винаході: з одного боку, має місце обмін варіабельними областями важкого і легкого ланцюга Раб, тобто кросовер-молекула Бар містить пептидний ланцюг, що складається з варіабельною області легкого ланцюга (УМ) і константної області важкого ланцюга (СНІ), і пептидний ланцюг, що складається з варіабельної області важкого ланцюга (МН) і константної області легкого ланцюга (СІ). Вказану кросовер- молекулу Раб позначають також як Сто55Бар (МІ МН). З іншого боку, коли константні області важкого і легкого ланцюга Раб обмінені одна на одну, то кросовер-молекула Раб містить пептидний ланцюг, що складається з варіабельної області важкого ланцюга (МН) і константної області легкого ланцюга (СІ), і пептидний ланцюг, що складається з варіабельної області легкого ланцюга (МІ) і константної області важкого ланцюга (СНІ). Вказану кросовер-молекулу
Еар позначають також як Стго55ЕРар (СІ СНІ). «Одноланцюговий Бар-фрагмент» або «5сЕар» являє собою поліпептид, що складається з варіабельного домену важкого ланцюга (УН) антитіла, константного домену 1 (СНІ) антитіла, варіабельного домену легкого ланцюга (МІ) антитіла, константного домену легкого ланцюга (СІ) антитіла і лінкера, в якому зазначені домени антитіла і вказаний лінкер мають один з наступних порядків розташування в напрямку від М-кінця до С-кінця: а) МНА-СНІ -лінкер-МІ -СІ, 6) МІ-СІ - лінкер-МН- СНІ, в) МН-СІ -лінкер-МІ-СНІ або г) МІ -СНІ -лінкер-МН-СІ ; і в якому вказаний лінкер являє собою поліпептид, що складається принаймні з 30 амінокислот, переважно приблизно від 32 до 50 амінокислот. Зазначені одноланцюгові Рар-фрагменти стабілізують за допомогою дисульфідного зв'язку між Сі -доменом і СНІ-доменом, що зустрічається в природних умовах.
Крім того, зазначені одноланцюгові молекули Бар можна додатково стабілізувати за допомогою створення міжланцюгових дисульфідних зв'язків шляхом вбудовування залишків цистеїну бо (наприклад, в положення 44 у варіабельному важкому ланцюзі і в положення 100 у варіабельному легкому ланцюзі згідно з нумерацією Кебота). «Одноланцюговий кросовер-Рар-фрагмент» або «х-5сБар» являє собою поліпептид, що складається з варіабельного домену важкого ланцюга (МН) антитіла, константного домену 1 (СНІ) антитіла, варіабельного домену легкого ланцюга (МІ) антитіла, константного домену легкого ланцюга (СІ) антитіла і лінкера, в якому зазначені домени антитіла і вказаний лінкер мають один з наступних порядків розташування в напрямку від М-кінця до С-кінця: а) МН-СІ - лінкер-МІ-СНІ ії 6) МІ-СНІ-лінкер-МН-СІ; де МН і МІ разом утворюють антигензв'язуючий сайт, який специфічно зв'язується з антигеном, і в якому вказаний лінкер являє собою поліпептид, що складається принаймні з 30 амінокислот. Крім того, зазначені молекули х-5сСбар можна додатково стабілізувати за допомогою створення міжланцюгових дисульфідних зв'язків шляхом вбудовування залишків цистеїну (наприклад, в положення 44 у варіабельному важкому ланцюзі і в положення 100 у варіабельному легкому ланцюзі згідно з нумерацією Кебота). «Одноланцюговий варіабельний фрагмент (з5сЕм)» являє собою злитий білок варіабельних областей важкого (МН) і легких (МІ) ланцюгів антитіла, з'єднаних коротким лінкерним пептидом, який містить від 10 до приблизно 25 амінокислот. Лінкер, як правило, являє собою багатий гліцином лінкер для додавання гнучкості, а також багатий на серин або треонін для забезпечення розчинності, і він може з'єднувати або М-кінець МН з С-кінцем МІ, або навпаки.
Зазначений білок зберігає специфічність вихідного антитіла, незважаючи на видалення константних областей та інтродукцію лінкера. Антитіла у вигляді 5СЕм описані, наприклад, у
Ноивіоп 9.5., Меїпоаз іп Епгутої. 203, 1991, сс. 46-96). Крім того, фрагменти антитіл містять одноланцюгові поліпептиди, які мають характеристики МН-домену, а саме, мають здатність до збирання з Мі -доменом, або характеристики Мі, а саме, мають здатність до збирання з УН- доменом з утворенням антигензв'язуючого сайту, і тим самим мають антигензв'язуючу властивість повнорозмірних антитіл. «Антигензв'язуючі білки-каркаси (скафолд-білки)») відомі в даній галузі, наприклад, фібронектин і створені білки (ОАРРІіп), які містять анкіринові повтори, застосовували як альтернативні каркаси для антигензв'язуючих доменів (див. себрапцег і ЗКегта, Епдіпеегеа ргоїеїп всапод5 а5 пехі -депегайоп апібоду Тпегарешіс5. Сиг Оріп Спет Віої! 13, 2009 сс. 245-255 і зЗіштрр та ін., багріпе: А пем/ депегайіоп ої ргоївіп Тпегарешііс5. Огид Ррібсом Тодау 13, 2008, сс.
Зо 695-701). В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючих білок-каркас вибраний з групи, що включає СТІ А-4 (евібоди (Еміроау)), ліпокаїн (антикалін (Апіїсаїїп)), одержану з білка
А молекулу, таку як 2-домен білка А (Айіроду, 5рА) А-домен (авімер/максибоди (Амітег/Махібоду)), сироватковий трансферин (транс-боди), білок, що містить анкіринові повтори (ОАКРІіп), варіабельний домен легкого ланцюга або важкого ланцюга антитіла (однодоменне антитіло, заАб), варіабельний домен важкого ланцюга антитіла (нанободи, амнН),
Ммдн-фрагменти, фібронектин (аднектин (Аамесійп)), лектиновий домен С-типу (тетранектин), варіабельний домен нового антигенного рецептора бета-лактамази (Милв-фрагменти), людський гамма-кристалін або убіквітин (молекули-афіліни (Аййїп), домен Кунітц-типу людських інгібіторів протеаз, мікрободи, такі як білки з сімейства Кпойціп (кнотини, інгібітори цистеїнового вузла), пептидні аптамери і фібронектин (аднектин).
СТІ А-4 (асоційований з цитотоксичними Т-лімфоцитами антиген 4) відноситься до СО28- сімейства рецепторів, які головним чином експресуються на СО4--Т-клітинах. Його позаклітинний домен має укладку, що нагадує укладку варіабельного домену Ід. Петлі, що відповідають СОК антитілам, можна замінювати на гетерологічну послідовність для додання різних зв'язуючих властивостей. Молекули СТІ А-4, сконструйовані таким чином, що вони мають різні зв'язуючі специфічності, відомі також як евібоди (наприклад, Ш5 Мо 7166697В1). Додаткові відомості див. у Чошгпаї ої Іттипоіодіса! Меїпосд5 248 (1-2), 2001., сб. 31-45.
Ліпокаїни відносяться до сімейства позаклітинних білків, які транспортують малі гідрофобні молекули, такі як стероїди, білин, ретиноїди і ліпіди. Вони мають жорстку вторинну структуру у вигляді бета-складки з рядом петель на відкритому кінці конічної структури, їх можна створювати для зв'язування з різними антигенами-мішенями. Антикаліни складаються з 160-180 амінокислот і їх одержують з ліпокаїн. Додаткові відомості див. у Віоспіт Віорпу5 Асіа 1482, 2000, сс. 337-350, в О5 Мо 7250297 В1 ії О5 Мо 2007/0224633.
Афібоди являють собою каркас, одержаний з білка А Біарпуіососси5 ацгеи5, який можна створювати для зв'язування з антигеном. Домен складається з триспирального пучка, що містить приблизно 58 амінокислот. Бібліотеки були створені шляхом рандомізації поверхневих залишків. Додаткові відомості див. у Ргоїеіп Епо. ЮОев5. Зеї. 17, 2004, сс. 455-462 і ЕР 1641818А1.
Авімери являють собою мультидоменні білки, одержані з А-домену сімейства білків-каркасів.
Нативні домени, що складаються приблизно з 35 амінокислот, адаптують певну зв'язану бо дисульфідом структуру. Різноманітність створюють шляхом «пестановки» варіацій, які зустрічаються в природних умовах, характерних для сімейства А-доменів. Додаткові відомості див. В Майшге ВіотесппоЇоду 23 (12), 2005, сс. 1556-1561 і Ехрегп Оріпіоп оп Іпмезіїдайопа! Огиде 16 (6), червень 2007, сс. 909-917.
Трансферин являє собою одновимірний сироватковий транспортний глікопротеїн.
Трансферин можна створювати для зв'язування з різними антигенами-мішенями шляхом вбудовування пептидних послідовностей в прийнятну поверхневу петлю. Приклади сконструйованих трансферованих каркасів включають транс-боди. Додаткові відомості див. у .).
Віої. Спет 274, 1999, сс. 24066-24073.
Сконструйовані білки, що містять анкіринові повтори (САКРІПпП), одержують з анкірину, який відноситься до сімейства білків, які опосередковують приєднання інтегральних мембранних білків до цитоскелету. Один анкіриновий повтор являє собою мотив, який складається з 33 залишків, що включає дві альфа-спіралі і бета-вигин. Їх можна створювати для зв'язування з різними антигенами-мішенями шляхом рандомізації залишків в першій альфа-спіралі і бета- вигині кожного повтору. Їх зв'язуючу поверхню розділу можна збільшувати шляхом збільшення кількості модулів (метод дозрівання афінності). Додаткові відомості див. у у. Мої. Віо!. 332, 2003 сс. 489-503, РМАЗ 100 (4), 2003 сс. 1700-1705 і 9). Мої. Віої. 369, 2007, сс. 1015-1028, а також в
ОЗ Мо 2004/01320284А1.
Однодоменне антитіло являє собою фрагмент антитіла, що складається з одиничного мономерного варіабельного домену антитіла. Вперше одиничний домен був одержаний з варіабельного домену важкого ланцюга антитіла верблюдів (нанабоди або МНН-фрагменти).
Крім того, поняття однодоменне антитіло включає авономний варіабельний домен людського важкого ланцюга (ан) або ММАК-фрагменти, одержані з акул.
Фібронектин являє собою каркас, який можна створювати для зв'язування антигену.
Аднектини складаються з каркаса з амінокислотної послідовності 10-ого домену з 15 повторюваних одиниць людського фибронектина типу І (РМЗ), що зустрічається в природних умовах. Можна створювати три петлі на одному кінці «бета-сендвіча», що дозволяє аднектину специфічно розпізнавати терапевтичну мішень, що представляє інтерес. Додаткові відомості див. у Ргоївіп Епо. Ое5. Зеї. 18, 2005, сс. 435-444, 05 Мо 2008/0139791, УМО 2005/056764 і 05 Мо 681841881.
Зо Пептидні аптамери являють собою комбінаторні розпізнавальні молекули, які складаються з константного білка-каркаса, як правило, тіоредоксина (ТІхА), який містить обмежену варіабельну пептидну петлю, вбудовану в активний сайт. Додаткові відомості див. В Ехрегі
Оріп. ВіоІ. ТНЕК. 5, 2005, сс. 783-797.
Мікрободи одержують з мікробілків, які зустрічаються в природних умовах, що складаються 3 25-50 амінокислот, які містять 3-4 цистеїнових містка - приклади мікробілков включають
Каїазаві ї конотоксин і кнотини. Мікробілки мають петлю, яку можна піддавати інженерії таким чином, щоб вона включала аж до 25 амінокислот, без впливу на загальну укладку мікробілка.
Додаткові відомості про створення кнотин-доменів див. в УЛО 2008/098796.
Поняття «антигензв'язуюча молекула, яка зв'язується з таким же епітопом», що і референс- молекула, відноситься до антигензв'язуючої молекули, яка блокує зв'язування референс- молекули з її антигеном на 5095 або більше при оцінці в умовах конкуренції, і, навпаки, референс-молекула блокує зв'язування антигензв'язуючої молекули з її антигеном на 5095 або більше при оцінці в умовах конкуренції.
Поняття «антигензв'язуючий домен» відноситься до частини антигензв'язуючої молекули, яка містить область, що специфічно зв'язується і що є комплементарною частиною антигену або повного антигену. Якщо антиген є великим, то антигензв'язуюча молекула може зв'язуватися тільки з конкретною частиною антигену, яку називають епітопом.
Антигензв'язуючий домен може являти собою, наприклад, один або декілька варіабельних доменів антитіла (які називають також варіабельними областями). Переважно антигензв'язуючий домен містить варіабельну область легкого ланцюга (МІ) антитіла і варіабельну область важкого ланцюга антитіла (МН).
В контексті даного опису поняття «антигенна детермінанта» є синонімом понять «антиген» і «епітоп» і відноситься до сайту (наприклад, ділянки, що складається з суміжних амінокислот, або конформаційної конфігурації, що складається з різних областей несуміжних амінокислот) на поліпептидній макромолекулі, з якої зв'язується антигензв'язуючий фрагмент з утворенням комплексу антигензв'язуючий фрагмент-антиген. Придатні антигенні детермінанти можуть бути присутніми, наприклад, на поверхні пухлинних клітин, на поверхні інфікованих вірусом клітин, на поверхні інших хворих клітин, на поверхні імунних клітин, клітин, що знаходяться у вільному стані в сироватці крові і/або у позаклітинному матриксі (ЕСМ). Білки, які можна застосовувати як 60 антигени в даному винаході, якщо не вказано інше, можуть являти собою будь-які нативні форми білків з будь-якого застосовуваного як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди) і гризуни (наприклад, миші і щури). У конкретному варіанті здійснення винаходу антиген є людським білком. У контексті даного опису при посиланні на конкретний білок мають на увазі «повнорозмірний», непроцесований білок, а також будь-яка форма білка, одержана в результаті процесингу в клітині. Під поняття підпадають також варіанти білка, які зустрічаються в природних умовах, наприклад, сплайсинговані варіанти або алельні варіанти.
Поняття «що специфічно зв'язується» означає, що зв'язування є виборчим по відношенню до антигену і його можна відрізняти від небажаних або неспецифічних взаємодій. Здатність антигензв'язуючої молекули зв'язуватися зі специфічним антигеном, можна визначати за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу (ЕГІЗА) або інших методик, відомих спеціалісту в даній галузі, наприклад, за допомогою методики на основі поверхневого плазмонного резонансу (здійснюючи аналіз за допомогою пристрою ВіАсоге) (І Шеріайд та ін .,
Сіусо У 17, 2000., сс. 323-329), і традиційних аналізів зв'язування (Нееїєу, Епдосг Нез 28, 2002 сб. 217-229). В одному з варіантів здійснення винаходу рівень зв'язування антигензв'язуючої молекули з неспорідненим білком становить менш ніж приблизно 1095 від рівня зв'язування антигензв'язуючої молекули з антигеном, при вимірюванні, наприклад, за допомогою ЗРК. У деяких варіантах здійснення винаходу молекула, яка зв'язується з антигеном, характеризується величиною константи дисоціації (КО), що становить х їмкМ, х Т00ОнМ, х ТОнНМ, хх 1НМ, х 01 НМ,
О,01нНМ або х 0,001нНМ (наприклад, 109М або менше, наприклад, від 109М до 107ЗМ, наприклад, від 109М до 10-93М).
Поняття «афінність» або «афінність зв'язування» відноситься до сумарної сили всіх нековалентних взаємодій між індивідуальним сайтом зв'язування молекули (наприклад, антитіла) і її партнера із зв'язуванням (наприклад, антигену). Якщо не вказано інше, то в контексті даного опису поняття «афинність зв'язування» відноситься до властивої компонентам зв'язуючої пари (наприклад, антитіла і антигену) афінності зв'язування, що відбиває взаємодію за типом 1: 1. Афінність молекули Х до її партнера У можна, як правило, характеризувати за допомогою константи дисоціації (КО), що являє собою відношення констант швидкості реакції дисоціації і асоціації (Ког і Коп відповідно). Таким чином, еквівалентні афінності можуть відповідати різним константам швидкості, якщо співвідношення констант швидкості залишається таким же. Афінність можна оцінювати загальноприйнятими методами, відомими в даній галузі включаючи представлені в даному описі методи. Конкретним методом вимірювання афінності є метод поверхневого плазмонного резонансу (5РК).
В контексті даного опису поняття «антиген клітини-мішені» відноситься до антигенної детермінанти, присутньої на поверхні клітини-мішені, наприклад, клітини в пухлині, такої як ракова клітина або клітина строми пухлини. В деяких варіантах здійснення винаходу антигеном клітини-мішені є антиген на поверхні пухлин клітини. В одному з варіантів здійснення винаходу антиген клітини-мішені вибирають з групи, що включає фібробласт-активуючий білок (ЕАР), карциноембріональний антиген (СЕА), асоційований з меланомою хондроітинсульфат- протеоглікан (МС5Р), рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕК), СО19, С020 ї СО33.
Зокрема, антигеном клітини-мішені є фібробласт-активуючий білок (БАР).
Поняття «фібробласт-активуючий білок (БАР)», відомий також як пролілендопептидаза ЕАР або сепраза (КФ 3.4.21), якщо не вказано інше, відноситься до будь-якої нативной форми ЕАР з будь-якого застосовуваного як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди), примати крім людини (наприклад, мавпи ціномолгус (яванський макак-крабоїд) і гризуни (наприклад, миші та щури). Поняття відноситься до повнорозмірного непроцесованого ЕАР, а також до будь-якої форми ЕАР, одержаної в результаті процесингу в клітині. Під поняття підпадають також варіанти ЕАР, які зустрічаються в природних умовах, наприклад, сплайсинговані варіанти або алельні варіанти. В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуюча молекула, запропонована у винаході, має здатність специфічно зв'язуватися з БАР людини, мишей і/або мавп ціномолгусє. Амінокислотна послідовність людського ЕАР представлена в ОпіРгої (млуим.ипіргоїогу), код доступу Мо 2012884 (версія 149,
ЗЕО ІЮО МО: 20) або в МСВІ (м/умлу.пебі.піт.піпй.дом/) Кеїзед МР 004451.2. Позаклітинний домен (ЕСО) людського ЕАР простягається від амінокислотного положення 26 до 760. Амінокислотна і нуклеотидна послідовності міченого Ні5 людського ЕАР-ЕСО представлені в ЗЕО ІЮ МО: 15 і 16 відповідно. Амінокислотна послідовність мишачого ЕАР представлена в ОпіРгої, код доступу Мо
РУО7321 (версія 126, 5ЕО ІЮО МО: 23) або МСВІ Кеїзед МР. 032012.1. Позаклітинний домен (ЕСВ) мишачого ЕАР простягається від амінокислотного положення 26 до 761. У 5ЕО ІЮО МО: 24 і 25 представлені амінокислотна і нуклеотидна послідовності міченого Ніх мишачого ГАР-ЕСО 60 відповідно. У ЗЕО ІЮО МО: 26 ії 27 представлені амінокислотна і нуклеотидна послідовності відповідно міченого БЕАР-ЕСО мавп ціномолгус. Переважно анти-РАР-зв'язуюча молекула, запропонована у винаході, зв'язується з позаклітинним доменом ЕАР. Приклади анти-ЕАР- зв'язуючих молекул наведені в міжнародній заявці на патент УМО 2012/020006 А2.
Поняття «карциноембріональний антиген (СЕА)», відомий також як споріднений молекулі клітинної адгезії 5 карциноембріональний антиген (СЕАСАМ5) якщо не вказано інше, відноситься до будь-якої нативной форми СЕА з будь-якого застосовуваного як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати ( наприклад, люди), примати крім людини (наприклад, мавпи ціномолгус) і гризуни (наприклад, миші та щури). Амінокислотна послідовність людського СЕА представлена в ОпіРгої, код доступу Мо РОЄ731 (версія 151, 5ЕО
ІЮО МО: 28). СЕА раніше був ідентифікований як асоційований з пухлиною антигену (сої і
Егеєдтап, У Ехр Мед., 121, 1965, сс. 439-462; Вегіпвівїп М. Г., У Сіїп Опсої., 20, 2002 сс. 2197- 2207). Хоча СЕА спочатку був класифікований як білок, який експресується тільки в ембріональній тканині, в даний час СЕА виявлений в деяких типах здорових тканин дорослих особин. Ці тканини мають в основному епітеліальне походження і включають клітини шлунково- кишкової, респіраторної та сечостатевої систем, а також клітини ободової кишки, шийки матки, потових залоз і передміхурової залози (Мар та ін., Титоиг Віо!., 9 (2-3), 1988, сс. 145-153; Мар та ін., Сапсег Кев., 52 (8), 1992, сс. 2329-2339). В пухлинах епітеліального походження, а також їх метастазах СЕА присутній як асоційований з пухлинним антигеном. Хоча присутність СЕА сама по собі не свідчить про перетворення на ракову клітину, розподіл СЕА є показовим. В здоровій тканині СЕА, як правило, експресується на апікальній поверхні клітини (Наттагвігот 5., Зетіп
Сапсег ВіоІЇ. 9 (2), 1999, сс. 67-81), роблячи її недоступною для антитіла, присутнього в кровотоці. На відміну від здорової тканини в разі ракових клітин СЕА має тенденцію до експресії по всій їх поверхні (Натітагвігбт 5., зетіп Сапсег Віої. 9 (2), 1999, сс. 67-81). Вказана зміна схеми експресії робить СЕА доступним для зв'язування з антитілом в ракових клетках. Крім цього, в ракових клітинах зростає рівень експресії СЕА. Крім того, підвищений рівень експресії
СЕА стимулює підвищену міжклітинну адгезію, що може призводити до метастазів (Маггпаї .., зетіп ОпсоЇ., 30 (додаток 8), 2002 сс. 30-36). Переважання експресії СЕА в різних типах пухлин, як правило, є дуже високим. Відповідно до опублікованих даних аналіз, проведений авторами винаходу, який здійснювали в зразках тканин, підтвердив його високе переважання, при цьому
Зо він виявлений приблизно в 9595 зразків колоректальної карциноми (СКС), 9095 зразків раку підшлункової залози, 8095 зразків раку шлунка, 6095 зразків недрібноклітинного раку легені (МЗС С, де мала місце спільна експресія з НЕКЗ) і 4095 зразків раку молочної залози; низький рівень експресії виявлений при дрібноклітинному раку легені і гліобластомі.
СЕА легко відщеплюється від клітинної поверхні і проникає до кровотоку з пухлин або безпосередньо, або через лімфатичні судини. Завдяки цій особливості рівень СЕА в сироватці використовували як клінічний маркер для діагностики різних видів раку і скринінгу по відношенню до рецидиву різних видів раку, перш за все колоректального раку (сСоІдепрего О М.,
Тве Іпіегпайопаї! Удошигпаї ої Віоіодіса! Магкегв, 7, 1992, сс. 183 -188; Спа І. та ін., У Сііп Опсої., 22, 2004, сс.1420-1429; Ніатіпі та ін., Сіп Сапсег Кев; 12 (23), 2006, сс. 6985-6988).
Поняття «асоційований з меланомою хондроїтинсульфат-протеоглікан (МО5Р), відомий також як хонроїтінсульфат-протеоглікан 4 (С5РО4), якщо не вказано інше, відноситься до будь- якої нативної форми МСОС5Р з будь-якого застосовуваного як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди), примати крім людини (наприклад, мавпи ціномолгус) і гризуни (наприклад, миші та щури). Амінокислотна послідовність людського
МО5Р представлена в ОпіРгої, код доступу Мо ОБОМКІ (версія 103, 5ЕО ІЮ МО: 29).
Поняття «рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕК)» відомий також як протоонкоген с-ЕТЬВ-1 або рецепторная тирозинпротеїнкіназа егЬВ-1, відноситься, якщо не вказано інше, до будь-якої нативной форми ЕСЕР. з будь-якого застосовуваного як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди), примати крім людини (наприклад, мавпи ціномолгус) і гризуни (наприклад, миші та щури). Амінокислотна послідовність людського
ЕСЕК представлена в ОпіРгої, код доступу Мо РОО533З (версія 211, БЕО ІЮО МО: 30).
Поняття «СО19» відноситься до антигену СО19 лімфоцитів, відомому також як поверхневий антиген В4 В-ліфоцитів або антиген Т-клітинної поверхні І ец-12, і відноситься, якщо не вказано інше, до будь-якої нативной форми СО19 з будь-якого застосовуваного як джерела хребетної тварини , включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди), примати крім людини (наприклад, мавпи ціномолгус) і гризуни (наприклад, миші та щури). Амінокислотна послідовність людського СО19 представлена в ОпіРгої, код доступу Мо Р15391 (версія 160, 5ЕО
ІО МО: 31). Поняття відноситься до «повнорозмірного» непроцесованого СО19, а також будь- якої форми людського СО19, одержаної в результаті процесингу в клітині, якщо антитіло, бо зазначене в даному описі, зв'язується з ним. СО19 являє собою структурно певний рецептор клітинної поверхні, експресований на поверхні людських В-клітин, включаючи (але не обмежуючись тільки ними) пре-В-клітини, В-клітини на ранній стадії розвитку (тобто незрілі В- клітини), зрілі В-клітини при термінальному диференціюванні в плазматичні клітини і злоякісні В- клітини. СО19 експресується в більшості випадках при пре-В-клітинному гострому лімфобластному лейкозі (АЇЇ), неходжкінських лімфомах, В-клітинних хронічних лімфоцитарному лейкозі (СГ/3, пролімфоцитарному лейкозі, волосатоклітинному лейкозі, гострих лімфоцитарних лейкозах загального типу і при деяких гострих лімфобластних лейкозах з нульовим фенотипом. Експресія СО19 на плазматичних клітинах дозволяє припустити також, що він може експресуватися на диференційованих В-клітинних пухлинах, таких як множинна мієлома. Таким чином, антиген СО19 є мішенню для імунотерапії при лікуванні неходжкінської лімфоми, хронічного лімфоцитарного лейкозу і/або гострого лімфобластного лейкозу.
Поняття «СО20» відноситься до антигену В-лімфоцитів СО20, відомому також як трансмембранний чотиридоменний представник 1 підсімейства А (М54АЇТ), поверхневий антиген ВІ В-лімфоцитів або антиген поверхні лейкоцитів І еи-16, і відноситься, якщо не вказано інше, до будь-якої нативной форми СО20 з будь-якого застосовуваного як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди), примати крім людини (наприклад, мавпи ціномолгус) і гризуни (наприклад, миші та щури). Амінокислотна послідовність людського СО2О представлена в ОпіРгої, код доступу Мо Р11836 (версія 149, 5ЕО
ІО МО: 32).
Поняття «СО33» відноситься до поверхневого антигену мієлоїдних клітин СОЗ3З, відомого також як ЗІСЇІ ЕСЗ або адрб?7, і відноситься, якщо не вказано інше, до будь-якої нативної форми
СО33 з будь-якого застосовуваного як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди), примати крім людини (наприклад, мавпи ціномолгус) і гризуни (наприклад, миші та щури). Амінокислотна послідовність людського СОЗЗ представлена в
ОпіРгої, код доступу Мо Р20138 (версія 157, 5ЕО ІЮ МО: 33).
Поняття «варіабельна область» або «варіабельний домен» відноситься до домену важкого або легкого ланцюга антитіла, який бере участь у зв'язуванні антигензв'язуючої молекули з антигеном. Варіабельні домени важкого ланцюга і легкого ланцюга (МН і Мі відповідно) нативного антитіла, як правило, мають подібні структури, при цьому кожен домен містить
Зо чотири консервативні каркасні ділянки (ЕК) і три гіперваріабельні ділянки (НМ) (див., наприклад, Кіпаї та ін., Кибу Іттипоіоду, шосте вид., вид-во М/Н Егеетап апа Со., 2007, с. 91).
Одного МН- або Мі-домену може бути досить для забезпечення специфічності зв'язування антигену.
Поняття «гіперваріабельна ділянка» або «НМЕК» в контексті даного опису відноситься до кожної з ділянок варіабельного домену антитіла, послідовності яких є гіперваріабельними, і/або які утворюють структури у вигляді петель («гіперваріабельні петлі»). Як правило, нативні чотириланцюгові антитіла містять шість НМЕ; три в МН (НІ, Н2, НЗ) та три в М (І1, 12, І З).
НМЕ, як правило, містять амінокислотні залишки з гіперваріабельних петель і/або з «ділянок, що визначають компліментарність» (СОМ), останні відрізняються найбільш вираженою варіабельністю послідовності і/або беруть участь в розпізнаванні антигенів. Наведені як приклад гіперваріабельні петлі включають амінокислотні залишки 26-32 (11), 50-52 (12), 91-96 (3), 26-32 (НІ), 53-55 (Н2), ії 96-101 (НЗ ) (Споїпіа і І ез5К, 9У. Мої. Віої. 196, 1987, сс. 901-917).
Наведені як приклад СОМ (СОБК-11, СОВ-І2, СОВ-І 3, СОВ-НІ, СОВ-Н2 і СОК-НЗ) включають амінокислотні залишки 24-34 (11), 50-56 (12), 89-97 (13), 31-358 (НІ), 50-65 (Н2г) і 95-102 (НЗ) (Каваї ЕА і ін., Зедиепсе5 ої Ргоївїіп5 ої Іттипоїподіса! Іпїегевзі, 5-е вид., вид-во Рибіїс Неєайнп
Зегмісе, Маїййопаї! Іпзійшев ої Неайй, Веїпезаа, МО, 1991). Гіперваріабельні ділянки (НМК) часто позначають як «ділянки, що визначають компліментарність» (СОК), і ці поняття в контексті даного опису використовують як взаємозамінні, і вони відносяться до ділянок варіабельної області, які утворюють антигензв'язуючі області. Ця конкретна область описана у КарБбаї та ін.,
О.5. Оері. ої Неайй апа Нитап зЗегмісе5, «зедцепсез ої Ргоївїп5 ої Іттипо|одісаї Іпіегев5і», 1983 і у Споїйіа та ін., У. Мої. Віої. 196, 1987, сс. 901-917, причому ці визначення відносяться до амінокислотних залишок, що перекриваються, або піднаборів амінокислотних залишків при їх порівнянні один з одним. Проте в контексті даного опису мають на увазі можливість застосування будь-якого визначення СОК антитіла або його варіантів. Відповідні амінокислотні залишки, з яких складаються СОК, як вони визначені в кожній з процитованих вище посилань, представлені в порівнянні нижче в таблиці А. Точні номера залишків, які утворюють конкретний
СОК, повинні варіюватися в залежності від послідовності і розміру СОК. Спеціалісти в цій галузі на основі даних про амінокислотної послідовності варіабельної області антитіла легко можуть визначати, які залишки входять в конкретний СОК. (510)
Таблиця А
Визначення СОВ' 11111111 Кебот//// | Хоїта | Ам г 1 Нумерація всіх вхідних в СОЮК залишків в таблиці А дана відповідно до номенклатури, запропонованої Кеботом з співавторами (див. нижче) 2 Позначення «АрМ» з великою літерою «р», використане в таблиці А, відноситься до СОК, як вони визначені програмою для моделювання антитіл «АВМ» компанії Охіога МоїІесшаг
Стоир
Кебот зі співавторами запропонували також систему нумерації (номенклатуру) послідовностей варіабельних областей, яку можна застосовувати для будь-якого антитіла.
Звичайний спеціаліст в даній галузі може однозначно застосовувати цю систему «нумерації за
Кеботом» до будь-якої послідовності варіабельної області не маючи жодних експериментальних даних, крім відомостей про саму послідовність. В контексті даного опису поняття «нумерація за Кеботом» відноситься до системи нумерації, описаної у Кабаї та ін., «Зедицепсе ої Ргоїеїп5 ої Іттипої|одісаї! Іп(егев5і», вид-во О.5. Оері. ої Неакй апа Нитап зЗегмісев, 1983. Якщо не вказано інше, то посилання на нумерацію положень конкретних амінокислотних залишків у варіабельній області антитіла дані відповідно до системи нумерації за Кеботом.
За винятком СОКІ в УН, СОК, як правило, містять амінокислотні залишки, які утворюють гіперваріабельні петлі. СОК містять також «залишки, які визначають специфічність» або «5ОК», які являють собою залишки, що контактують з антигеном. 5ОК, що містяться в областях СОК, позначають як укорочені -«СОЄ або а-СОК. Наведені як приклад а-СОВ (а-СОВ-11, а-СОВ-Ї 2, а-
СОВ-І3, а-СОВ-НІ, а-СОВ-Н2 ї а-СОВ-НЗ) містять амінокислотні залишки 31-34 (І 1), 50-55 (І 2), 89-96 (І 3), 31-358 (НІ), 50-58 (Н2) і 95-102 (НЗ) (див. АІтадго і Егапззоп, Егопі. Віозсі. 13, 2008, сс. 1619-1633). Якщо не вказано інше, залишки НМК і інші залишки в варіабельний домен (наприклад, залишки ЕК) в цьому описі нумерують згідно з Кабаї та ін., вище.
В контексті даного опису поняття «з дозрілою афінністю» по відношенню до антигензв'язуючих молекул (наприклад, антитіл) відноситься до антигензв'язуючої молекули, одержаної з антигензв'язуючої референс-молекули, наприклад, за допомогою мутації, яка зв'язується з тим же антигеном, переважно зв'язується з тим же епітопом, що і референс- антитіло; і має більш високу афінність до антигену, ніж антигензв'язуюча референс-молекула.
Дозрівання афінності, як правило, включає модифікацію одного або декількох амінокислотних залишків в одному або декількох СОК антигензв'язуючої молекули. Як правило, антигензв'язуюча молекула з дозрілою афінністю зв'язується з тим же епітопом, що і вихідна антигензв'язуюча референс-молекула. «Каркасні ділянки» або «ЕК» являють собою ділянки варіабельних доменів, відмінні від залишків гіперваріабельних ділянок (НУК). ЕК варіабельного домену, як правило, представлені чотирма ЕК-доменами: ЕК, ЕК2, ЕКЗ ії ЕК4. Таким чином, послідовності НМК і ЕК, як правило, розташовані в МН (або МІ) в наступному порядку: ЕК1-НІ1 (І 1) -ЕВ2-Н2 (12) -ЕВЗ3-НЗ (І 3) -ЕВ4.
Для цілей даного опису «акцепторна людська каркасна ділянка» означає каркасну ділянку, що містить амінокислотну послідовність каркасної ділянки варіабельного домену легкого ланцюга (МІ) або каркасної ділянки варіабельного домену важкого ланцюга (УН), що походить з каркасної ділянки людського імуноглобуліну або консенсусної людської каркасної ділянки, зазначеної нижче. Акцепторна людська каркасна ділянка «що походить з" каркасної ділянки людського імуноглобуліну або консенсусної людської каркасної ділянки, може містити таку ж амінокислотну послідовність або може містити заміни в амінокислотній послідовності. В деяких варіантах здійснення винаходу кількість амінокислотних замін становить 10 або менше, 9 або менше, 8 або менше, 7 або менше, б або менше, 5 або менше, 4 або менше, З або менше, 2 або менше. В деяких варіантах здійснення винаходу послідовність акцепторної людської каркасної ділянки МІ. ідентична послідовності каркасної ділянки МІ. людського імуноглобуліну або послідовності консенсусної людської каркасної ділянки.
Поняття «химерне» антитіло відноситься до антитіла, в якому частина важкого і/або легкого ланцюга походить з конкретного джерела або конкретних видів, а інша частина важкого і/або легкого ланцюга походить з іншого джерела або інших видів.
Поняття «клас» антитіла відноситься до типу константного домену або константної області, який входить/яка входить у важкий ланцюг. Існує п'ять основних класів антитіл: ІА, дО, ІДЕ, до і ІМ, а деякі з них можна додатково розподіляти на підкласи (ізотипи), наприклад, Іде, Ідс2,
ІЧОЗ, Ід04, ІДА1 ї ІДА2. Константні домени важких ланцюгів, які відповідають різним класам імуноглобулінів, позначають як а, б, є, у і и відповідно.
Поняття «гуманізоване» антитіло відноситься до химерного антитіла, яке містить амінокислотні залишки з нелюдських НУК і амінокислотні залишки з людських ЕК. У деяких варіантах здійснення винаходу гуманізоване антитіло може містити практично всі з принаймні одного і, як правило, двох варіабельних доменів, в яких всі або практично всі НУК (наприклад,
СОК) відповідають ділянкам нелюдського антитіла, а всі або практично всі ЕК відповідають ділянкам людського антитіла. Гуманізоване антитіло необов'язково може містити принаймні частину константної області антитіла, що походить з людського антитіла. Поняття «гуманізована форма» антитіла, наприклад, нелюдського антитіла, відноситься до антитіла, яке піддавали гуманізації. Інші форми «гуманізованих антитіл», які підпадають під обсяг даного винаходу, являють собою антитіла, в яких константна область додатково модифікована або змінена порівняно з вихідним антитілом для створення властивостей, які потрібні відповідно до винаходу, перш за все по відношенню до зв'язування С14д і/або зв'язування з Ес рецептора (ЕсВ). «Людське антитіло» являє собою антитіло, яке має амінокислотну послідовність, відповідну послідовності антитіла, що продукується людиною або людською кліткою, або одержану з джерела, відмінного від людини, з використанням спектра людських антитіл або інших послідовностей, які кодують людське антитіло. Із зазначеного визначення людського антитіла спеціально виключено гуманізоване антитіло, що містить нелюдські антигензв'язуючі залишки.
В контексті даного опису поняття «Рс-домен» або «ЕРс-область» відноситься до С-кінцевої
Зо області важкого ланцюга антитіла, яка містить принаймні частину константної області. Поняття відноситься до нативної послідовності Ес-областей і варіантів Ес-областей. Ес -область дО містить СН2-домен Ідс і СНЗ-домен до. «СН2-домен» Ес-області людського Ідс, як правило, простягається від амінокислотного залишку, що знаходиться приблизно в положенні 231, до амінокислотного залишку, що знаходиться приблизно в положенні 340. В одному з варіантів здійснення винаходу до СН2-домену приєднаний вуглеводний ланцюг. У контексті даного опису
СН2г-домен може мати нативну послідовність СН2-домену або послідовність варіанта СН2- домену. «СНЗ-домен» містить сегмент С-кінцевих залишків до СН2-домену в Ес-області (тобто від амінокислотного залишку, що знаходиться приблизно в положенні 341, до амінокислотного залишку, що знаходиться приблизно в положенні 447 Ід). У контексті даного опису СНЗ-домен може мати нативну послідовність СНЗ-домену або послідовність варіанта СНЗ-домену (наприклад, СНЗ-домен з інтродукованою «опуклістю» («виступ») в одному його ланцюзі і з відповідною інтродукованої «порожниною» («западина ») в інший його ланцюг; див. 05 Мо 5821333, спеціально включений в даний опис як посилання). Зазначені варіанти СНЗ-доменів можна застосовувати для посилення гетеродимерізації двох неідентичних важких ланцюгів антитіла, відповідно до описаного в даному описі методу. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-область важкого ланцюга людського дос простягається від Суз226 або від Рго230 до карбоксильного кінця важкого ланцюга. Проте С-кінцевий лізин (І уз447) Ес-області може або бути присутнім, або бути відсутнім. Якщо спеціально не вказано інше, то нумерація амінокислотних залишків в Ес-області або константній ділянці відповідає системі ЕО-нумерації, яку називають також ЕО-індексом, описаній у Кабаї та ін., зедиепсез ої Ргоїевїіп5 ої Ітітипо!одісаї
Іпієтеві, 5-е вид., вид-во Рибіїс Неанй 5егмісе, Маїйіопаї! Іпзійшез ої Неайй, Ве пезаа, МО, 1991.
Технологія «Кпоб-іпіо-поЇє» описана, наприклад, в ОБ Мо 5731168; 005 Мо 7695936; у Віддамау та ін., Ргої Епд 9, 1996, сс. 617-621 і Сапег, У Іттипої! Меїй 248, 2001., сс. 7-15. В цілому, метод включає інтродукцію опуклості («виступ») на поверхні розділу першого поліпептиду і відповідної порожнини («западина») в поверхні розділу другого поліпептиду, в результаті опуклість може міститися в порожнині, посилюючи тим самим утворення гетеродимера і перешкоджаючи утворенню гомодимеру. Опуклості конструюють шляхом заміни амінокислот з невеликими бічними ланцюгами на поверхні розділу першого поліпептиду на амінокислоти з більшими бічними ланцюгами (наприклад, на тирозин або триптофан). Компенсуючі порожнини бо ідентичного або схожого з виступами розміру конструюють в поверхні розділу другого поліпептиду шляхом заміни амінокислот з великими бічними ланцюгами на амінокислоти з меншими бічними ланцюгами (наприклад, аланін або треонін). Опуклість і порожнину можна створювати, змінюючи нуклеїнову кислоту, яка кодує поліпептиди, наприклад, за допомогою сайтспецифічного мутагенезу або з використанням пептидного синтезу. У конкретному варіанті здійснення винаходу модифікація, яка веде до утворення «виступу», включає амінокислотну заміну Т366УУ в одній з двох субодиниць Ес-домену, і модифікація, яка веде до утворення «западини», включає амінокислотні заміни Т3665, 1 368А і М407М в іншій одній з двох субодиниць Ес-домену. В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу субодиниця Ес- домену, яка містить модифікацію, що призводить до утворення «виступу», додатково містить амінокислотну заміну 53540, а субодиниця Ес-домену, яка містить модифікацію, що призводить до утворення «западини», додатково містить амінокислотну заміну У349С . Інтродукція цих двох залишків цистеїну призводить до утворення дисульфидного містка між двома субодиницями Ес- домену, додатково стабілізує димер (Сапег, У Іттипої! Меїнодз» 248, 2001., сс. 7-15). Нумерація відповідає ЕО-індексу (Кабаї та ін., зхедиепсез ої Ргоїеїп5 ої Іттипо|одісаї! Іптегеві, 5-е вид., вид- во Рибіїс Неакй 5егмісе, Маїіопаї! Іпзійшщез ої Неаййп, ВеШезаа, МО, 1991).
Мають на увазі, що «область, еквівалентна Ес-області імуноглобуліну» включає алельні варіанти Ес-області імуноглобуліну, що зустрічаються в природних умовах, а також варіанти, які мають зміни, що призводять до замін, додаванням або делеціям, які не знижують істотно здатність імуноглобуліну опосредовувати ефекторні функції (такі як антитіло-обумовлена клітинозалежна цитотоксичність). Наприклад, одну або декілька амінокислот можна вилучати шляхом делеції з М-кінця або С-кінця Ес-області імуноглобуліну без істотного зниження біологічної функції. Зазначені варіанти можна вибирати відповідно до загальних правил, відомих в даній галузі, так, щоб спричиняти мінімальний вплив на активність (див., наприклад,
Воуміє У. ). та ін., Зсіепсе 247, 1990, сс. 1306-1310).
Поняття «ефекторні функції» відноситься до видів біологічної активності, властивих Ес- області антитіла, які варіюються в залежності від ізотипу антитіла. Прикладами ефекторних функцій антитіла є: здатність зв'язуватися з С1д і комплементзалежна цитотоксичність (СОС), здатність зв'язуватися з Ес-рецептором, антитіло-обумовлена клітинозалежна цитотоксичність (АОСС), антитіло-обумовлений клітинозалежний фагоцитоз (АЮОСР), секреція цитокінів,
Зо опосередковане імунним комплексом поглинання антигену антигенпрезентуючими клітинами, знижуюча регуляція рецепторів клітинної поверхні (наприклад, В-клітинного рецептора) і активація В-клітин. «Активуючий Ес-рецептор» являє собою Ес-рецептор, який після взаємодії з Ес-областю антитіла здійснює процес передачі сигналів, які стимулюють виконання ефекторних функцій клітиною, яка несе рецептор. Активуючі Ес-рецептори включають ЕсуВІНПа (СО1ба), ЕсуВі (СО064), ЕсуВІПа (Сб0О32) і РсаВІ (СО89). Конкретний активуюючий Ес-рецептор являє собою людський ЕсуВІПа (див. ОпіРгої, код доступу Ме РО8637, версія 141).
Поняття «представник сімейства лігандів ТМЕ» або «ліганд сімейства ТМЕ» відноситься до прозапальних цитокінів. Цитокіни в цілому і, зокрема представники сімейства лігандів ТМЕ, відіграють вирішальну роль у стимуляції і координації імунної системи. До теперішнього часу ідентифіковано 19 цитокінів як представників суперсімейства лігандів ТМЕ (чинник некрозу пухлини) на основі подібності послідовностей, функціональних і структурних характеристик. Всі ці ліганди являють собою трансмембранні білки типу ЇЇ з С-кінцевим позаклітинним доменом (ектодомен), М-кінцевим внутрішньоклітинним доменом і одиничним трансмембраним доменом.
С-кінцевий позаклітинний домен, який позначають як домен огомології ТМ (ТНБ), характеризується ідентичністю 20-3095 амінокислот між представниками суперсімейства і на нього покладається відповідальність за зв'язування з рецептором. Ектодомен ТМЕ відповідальний також за здатність лігандів ТМЕ утворювати тримерні комплекси, які розпізнаються їх специфічними рецепторами.
Представників лигандів сімейства ТМЕ вибирають з групи, що включає лімфотоксин а (відомий також як ТА або ТМЕ5ЕТ1), ТМЕ (відомий також як ТМЕ5Е2), ТВ (відомий також як
ТМЕЗЕЗ), ОХ40І (відомий також як ТМЕЗЕ4), СО40ІЇ (відомий також як СО154 або ТМЕЗЕ5),
Базі (відомий також як С0О5І, СО178 або ТМЕ5Еб6), СО27Ї (відомий також як СО70О або
ТМЕ5Е7), СОЗОЇ (відомий також як СО153 або ТМЕ5Е8), 4-188ГІ (відомий також як ТМЕЗЕ9),
ТКАЇГ. (відомий також як АРО2І, СО253 або ТМЕЗЕ10), КАМКІ. (відомий також як СО254 або
ТМЕ5Е11), ТУМЕАК (відомий також як ТМЕ5Е12), АРКІЇ. (відомий також як СО256 або ТМЕ5Е13),
ВАЕЕ (відомий також як СО257 або ТМЕ5Е13В), ГІСНТ (відомий також як СО258 або ТМЕ5Е14),
ТІЛА (відомий також як МЕСІ або ТМЕ5Е15), СІТКІ (ТМЕБЕ18), ЕОА-АТ (відомий також як ектодісплазін АТ) і ЕВА-А2 (відомий також як ектодісплазін А2). Поняття відноситься, якщо не 60 вказано інше, до будь-якого нативного ліганду сімейства ТМЕ з будь-якої застосовуваної як джерело хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди), примати крім людини (наприклад, мавпи ціномолгус) і гризуни (наприклад, миші і щури). В конкретних варіантах здійснення винаходу представника сімейства лігандів ТМЕ вибирають з групи, що складається з ОХ40І, Раз, СО271, ТРЕАЇЇ, 4-188І, СО0401 ї СІТВЇ. В конкретному варіанті здійснення винаходу представника сімейства лігандів ТМЕ вибирають з 4-1881 і ОХ401.
Додаткову інформацію, зокрема про послідовності представників сімейства лігандів ТМЕ, можна почерпнути з публічно доступних баз даних, таких як Опіргої (м/млу.ипіргої.ога).
Наприклад, людські ліганди ТМЕ мають наступні амінокислотні послідовності: людський лімфотоксин а (піРтої, код доступу. РО1374, 5ЕО ІО МО: 34), людський ТМЕ (ОпіРгої, код доступу Мо РО1375, 5ЕО ІЮО МО: 35), людський лімфотоксин В (піРгої, код доступу Мо 006643,
ЗЕО ІЮ МО: 36), людський ОХ40І (ОпіРтої, код доступу Мо Р23510, 5ЕО ІЮ МО: 37), людський
СО40І (ОпіРтої, код доступу Мо Р29965, 5ЕО ІО МО: 38), людський Равзі. (ОпіРгої, код доступу Мо
РА8023, 5ЕО ІЮ МО: 39), людський СО27Ї (ОпіРгої, код доступу Мо РЗ2970, ЗЕО ІЮО МО: 40), людський СОЗОЇ. (ОпіРгої, код доступу Мо РЗ2971, 5ЕО ІЮ МО: 41), 4-1ВВІ. (ОпіРгої, код доступу
Мо Р41273, 5ЕО ІЮО МО: 42), ТВА. (ОпіРтої, код доступу Мо РБОБ591, 5ЕО ІЮ МО: 43), ВАМКІ (ОпіРтої, код доступу Мо 014788, 5ЕО ІО МО: 44), ТМ/ЕАК (ОпіРгої, код доступу Мо 043508, 5ЕО
ІО МО: 45), АРАВІЇ. (ОпіРгої, код доступу Мо 075888, 5ЕО ІЮ МО: 46), ВАРЕ (ОпіРгої, код доступу
Мо 09275, ЗЕО ІЮ МО: 47), ПОаНнТт (ОпіРтої, код доступу Мо 043557, 5ЕО ІЮ МО: 48), ТІТА (ОпіРтої, код доступу Мо 095150, 5ЕО І МО: 49), СІТВІ. (ОпіРгої, код доступу Мо О9ОМСИ2, ЗЕО
ІО МО: 50) і ектодісплазін А (ОпіРгої, код доступу Мо 092838, 5ЕО І МО: 51). «Ектодомен» являє собою домен мембранного білка, який простягається в позаклітинний простір (тобто простір поза клітини-мішені). Ектгодомени, як правило, являють собою ділянки білків, які ініціюють контакт з поверхнями, що призводить до трансдукції сигналу. Таким чином, ектодомен представника сімейства лігандів ТМЕ, зазначений в даному описі, являє собою ділянку білка лиганда ТМЕ, який простягається в позаклітинний простір (позаклітинний домен), але включає також більш короткі ділянки, відповідальні за тримеризацію і зв'язування з відповідним ТМЕ-рецептором. Таким чином, поняття «ектодомен представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент» відноситься до позаклітинного домену представника сімейства лігандів ТМЕ, який утворює позаклітинний домен або його ділянки, які все ще можуть
Зо зв'язуватися з рецептором (домен, що зв'язує рецептор).
Поняття «костимуляторний представник сімейства лігандів ТМЕ» або «костимуляторний ліганд сімейства ТМЕ» відноситься до підгрупи представників сімейства лігандів ТМЕ, які мають здатність спричиняти костимуляторну дію на проліферацію і виробництво цитокінів Т-клітинами.
Зазначені ліганди сімейства ТМЕ можуть костимулювати ТСВ-сигнали після взаємодії з їх відповідними ТМЕ-рецепторами, і взаємодія з їх рецепторами призводить до рекрутменту ТМЕК- асоційованих факторів (ТКАБЕ,), які ініціюють каскади передачі сигналів, що призводить до Т- клітинної активації. Костимуляторні ліганди сімейства ТМЕ вибирають з групи, що складається з 4-188Г, ОХ40І, СІТІ, 2070, СОЗОЇ і ГІСНТ, більш конкретно костимуляторні ліганди сімейства
ТМЕ вибирають з 4-1881 і ОХ401.
Як описано вище, 4-18ВІ є трансмембранним білком типу ІЇ ї є одним з представників сімейства лігандів ТМЕ. Встановлено, що повний або повнорозмірний 4-18ВІ, який має амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 42, утворює тримери на поверхні клітин. Утворення тримерів визначається специфічними мотивами ектодомену 4-188ВІ. Зазначені мотиви в контексті даного опису позначають як «область тримеризації». Амінокислоти 50-254 послідовності людського 4-18ВІ. (ЗЕО ІО МО: 52) утворюють позаклітинний домен 4-1ВВІ', але навіть його фрагменти можуть утворювати тримери. В конкретних варіантах здійснення винаходу поняття «ектодомен 4-1ВВГ або його фрагмент» відноситься до поліпептиду, який має амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІЮ МО: 4 (амінокислоти 52-254 людського 4-18ВІ),
ЗЕО ІЮО МО: 1 (амінокислоти 71 -254 людського 4-18ВІ), 5ЕО ІЮ МО: З (амінокислоти 80-254
БО людського 4-18В1) ії БЕО ІЮ МО: 2 (амінокислоти 85-254 людського 4-18ВГ), або поліпептид, що має амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮО МО: 96 (амінокислоти 71-248 людського 4- 188), 5ЕО ІЮ МО: 375 (амінокислоти 52-248 людського 4-188І), 5ЕО ІЮ МО: 374 (амінокіс лоти 80-248 людського 4-1488І) і 5ЕБО ІЮО МО: 373 (амінокислоти 85-248 людського 4-188І), але поняття включає також інші фрагменти ектодомену, що мають здатність до тримеризації.
Як описано вище, ОХ40Ї є іншим трансмембранним білком типу ІП ії є додатковим представником сімейства лігандів ТМЕ. Повний або повнорозмірний ОХ40І. має амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 37. Амінокислоти 51-183 послідовності людського ОХ40І (5ЕО ІЮО МО: 53) утворюють позаклітинний домен ОХ401Ї, але під поняття підпадають також і його фрагменти, які мають здатність утворювати тримери. В конкретних варіантах здійснення винаходу поняття 60 «ектодомен ОХ401Ї або його фрагмент» відноситься до поліпептиду, який має амінокислотну
Зо послідовність, вибрану з ЗЕО ІЮ МО: 53 (амінокислоти 51-183 людського ОХ401І) або 5ЕО ІЮ
МО: 54 (амінокислоти 52-183 людського ОХ40І ), але поняття включає також інші фрагменти ектодомену, що мають здатність до тримеризації.
Поняття «пептидний лінкер» відноситься до пептиду, який містить одну або декілька амінокислот, як правило, приблизно 2-20 амінокислот. Пептидні лінкери відомі в даній галузі і вказані в даному описі. Прийнятними неімуногенними лінкерними пептидами є, наприклад, пептидні лінкери (545) п, (524) п або 4 (5564) п, в яких «п», як правило, означає число від 1 до 10, як правило, від 1 до 4, зокрема 2, тобто пептиди, вибрані з групи, що складається з ОСОС5 (ЗЕБЕО ІО МО: 128), ссово5ОосОсОо5 (БО ІЮ МО: 13), 5БСОсОоОоБОСОО (5БО ІЮО МО: 55) і ассозсаоваБасос (ЗБОЮ МО: 56), але також включають послідовності ОБРО55З5ОЗ (
ЗЕО Ір МО: 57), ОБО БОБИ (5ЕО І МО: 58), аБаБОаМав (5ЕО Ір МО: 59), СОсЗОБИаБИа (5ЕО
ІО МО: 60), ааБава (5ЕО І МО: 61), Сса5Ба (5ЕО І МО: 62), СЧСЯЗОМа Ба (5ЕО ІО МО: 63), вОоМОоБОБЗО (5ЕО ІЮ МО: 64) і СОМО5О (5ЕО ІЮ МО: 65). Найбільший інтерес представляють пептидні лінкери (545) 1 або (0005 (5ЕО ІЮО МО: 128), (545) 2 або ООСОБОССО5 (5ЕО І
МО: 13) і 5РОБЗБ5Б5БЗОЗ (ЗЕО ІЮ МО: 57), більш переважно (545) 2 або ОСОО5ОООО5 (ЗЕО
ІО МО: 13) і 5РОЗБЗБ5БОБЗ (5ЕО ІЮО МО: 57).
Поняття «амінокислота» в контексті даного опису позначає групу карбокси-! -амінокислот, які зустрічаються в природних умовах, таких як аланін (трилітерний код: аа, однолітерний код:
А), аргінін (агоу, К), аспарагін (азп, М), аспарагінова кислота (ар, 0), цистеїн (су5, С), глутамін (діп, ОО), глутамінова кислота (дій, Е), гліцин (діу, с), гістидин (Пів, Н), ізолейцин (іе, І), лейцин (Іеи, У), лізин (ух, К), метіонін (теї, М), фенілаланін (рпе, РЕ), пролін (рго, Р), серин (зег, 5), треонін (Ійг, Т), триптофан (ігр, УМ), тирозин (Уг, У) і валін (маї, М).
Поняття «одноланцюговий злитий білок» в контексті даного опису відноситься до одноланцюговоо поліпептиду, що складається з одного або двох ектодоменів зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ, який злитий з ділянкою антигензв'язуючого фрагмента або Ро-областю. Злиття можна здійснювати за допомогою безпосереднього зв'язування М- або
С-кінцевої амінокислоти антигензв'язуючої ділянки через пептидний лінкер з С- або М-кінцевою амінокислотою ектодомена зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ.
Під поняттям «злитий» або «зв'язаний» мають на увазі, що компоненти (наприклад, поліпептид і ектгодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ) з'єднані пептидними зв'язками або безпосередньо, або через один або декілька пептидних лінкерів. «Відсоток (95) ідентичності амінокислотної послідовності» по відношенню до поліпептидної (білкової) референс-послідовності визначають як відсоток амінокислотних залишків в послідовності-кандидата, які ідентичні амінокислотним залишкам в поліпептидній референс- послідовності, після вирівнювання послідовностей і інтродукції за необхідності проломів для досягнення максимального відсотка ідентичності послідовностей, і при цьому будь-які консервативні заміни не враховуються при оцінці ідентичності послідовностей. Порівняльний аналіз для визначення відсотка ідентичності амінокислотних послідовностей можна здійснювати різними шляхами, які знаходяться в компетенції спеціаліста в даній галузі, наприклад, з використанням публічно доступних комп'ютерних програм, таких як програма ВІ А5Т, ВІ А5ЗТ-2,
АЦПСОМ ЗАМ/І або Медаїдп (ОМА5ТАН). Спеціалісти в цій галузі можуть визначати відповідні параметри для вирівнювання послідовностей, включаючи будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання по всій довжині порівнюваних послідовностей. Проте для цілей цього винаходу величину 95 ідентичності амінокислотних послідовностей одержують з використанням призначеної для порівняння послідовностей комп'ютерної програми АСІСМ-2.
Призначена для порівняння послідовностей комп'ютерна програма АГІСМ-2 розроблена фірмою
Сепепіесі, Іпс., і вихідний код поміщений на зберігання разом з документацією для користувача в 0.5. Соругідпі ОйПісе, Умазпіпдіоп О0.С., 20559, де він зареєстрований під реєстраційним номером О.5. Соругідні Кедівігайоп, Ме ТХО510087. Програма АГІСМ-2 являє собою публічно доступну програму фірми Сепепіесії, Іпс., Південний Сан-Франциско, шт. Каліфорнія, або її можна компілювати з вихідного коду. Програму АГІОМ-2 можна компілювати для застосування в операційній системі ОМІХ, включаючи цифрову версію ОМІХ М4.00. У програмі АГІОМ-2 всі параметри для порівняння послідовностей є заданими і не повинні змінюватися. У ситуаціях, коли АГІСМ-2 застосовують для порівняння амінокислотних послідовностей,9о ідентичності амінокислотних послідовностей даної амінокислотної послідовності А по відношенню до або порівняно з даною амінокислотною послідовністю Б (яку іншими словами можна позначати як дана амінокислотна послідовність А, яка має або відрізняється певним 95 ідентичності амінокислотної послідовності по відношенню до або порівняно з даною амінокислотною послідовністю Б), розраховують наступним чином: бо
100 х частка Х/У, де Х позначає кількість амінокислотних залишків, оцінених програмою порівняльного аналізу послідовностей АЇ ЇМ-2 як ідентичні збігу при порівняльному аналізі послідовностей А та Б за допомогою зазначеної програми, і де У означає загальну кількість амінокислотних залишків в Б.
Мабуть очевидно, що, коли довжина амінокислотної послідовності А не дорівнює довжині амінокислотної послідовності Б, то 95 ідентичності амінокислотної послідовності А по відношенню до амінокислотної послідовності Б не повинен дорівнювати 95 ідентичності амінокислотної послідовності Б по відношенню до амінокислотної послідовності А. Якщо спеціально не вказано інше, то в контексті даного опису всі величинибо ідентичності амінокислотних послідовностей одержують відповідно до процедури, описаній в останньому з попередніх параграфів, за допомогою комп'ютерної програми АГІСМ-2.
Деякими варіантами здійснення винаходу є «варіанти амінокислотних послідовностей» антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд ТМЕ, представлених в даному описі.
Наприклад, може виявитися бажаним підвищувати афінність зв'язування і/або інші біологічні властивості містять тримерний ліганд ТМЕ антигензв'язуючих молекул. Варіанти амінокислотних послідовностей антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд ТМЕ, можна одержувати шляхом інтродукції відповідних модифікацій в нуклеотидну послідовність, що кодує молекули, або шляхом пептидного синтезу. Зазначені модифікації включають, наприклад, делеції і/або інсерції, або заміни залишків в амінокислотних послідовностях антитіла. Для одержання кінцевої конструкції можна використовувати будь-яку комбінацію делецій, інсерцій і замін, за умови, що кінцева конструкція має необхідні характеристики, наприклад, здатністю зв'язуватися з антигеном. Сайти для заміщуючого мутагенезу, що представляють інтерес, включають НМ і каркасні ділянки (ЕК). Консервативні заміни представлені в таблиці Б під заголовком «переважні заміни» і додатково описані нижче з посиланням на класи (1) - (6) бічних ланцюгів амінокислот. Амінокислотні заміни можна інтродукувати в молекулу, що представляє інтерес, і продукти піддавати скринінгу відносно необхідної активності, наприклад, збереження/підвищення здатності до зв'язування антигену, зниженої імуногенності або покращеної АОСС або СОС.
Коо)
Таблиця Б
Ше() 71111111 (бешМа;МесАюв; Рпеснорлейцин.///// їв цец(Ю 71111111 |норлейциноМе; Ма; МесАвіРйє.їдЗ ес
Амінокислоти можна групувати на основі спільних властивостей бічних ланцюгів наступним чином: (1) гідрофобні: норлейцин, Меї, Аа, маї, Гей, Пе; (2) нейтральні гідрофільні: Су, 5ег, Тиг, Ап, Сп; (3) кислотні: Ар, СМ;
(4) основні: Нів, І ув, Аг; (5) залишки, які впливають на орієнтацію ланцюга: су, Рго; (6) ароматичні: Тгр, Туг, Ріє.
Під неконсервативними замінами мають на увазі заміну представника одного із зазначених класів на представника з іншого класу.
Поняття «варіанти амінокислотної послідовності» включає одержані в результаті заміни варіанти, в яких мають місце амінокислотні заміни одного або декількох залишків в гіперваріабельні ділянці батьківської антигензв'язуючої молекули (наприклад, гуманізованого або людського антитіла). Як правило, утворений(ї) варіант(и), обраний() для подальшого вивчення, повинен(ні) мати модифікації (наприклад, покращення) певних біологічних властивостей (наприклад, підвищена афінність, знижена імуногенність) по аіддношенню до батьківської антигензв'язуючої молекули і/або повинен(ні) практично зберігати певні біологічні властивості батьківської антигензв'язуючої молекули. Прикладом одержаного в результаті заміни варіанту є антитіло з дозрілою афінністю, яке можна легко одержувати, наприклад, за допомогою методів дозрівання афінності на основі фагового дисплею, які вказані в даному описі. В цілому, метод полягає в наступному: один або кілька залишків НМК піддають мутації і варіант антигензв'язуючих молекул експонують на фаге і піддають скринінгу по відношенню до конкретної біологічної активності (наприклад, афінності зв'язування). В деяких варіантах здійснення винаходу заміни, інсерції або делеції можуть зачіпати один або кілька НМЕ, якщо зазначені зміни не знижують істотно здатність антигензв'язуючої молекули зв'язуватися з антигеном. Наприклад, в НМК можуть бути зроблені консервативні зміни (наприклад, консервативні заміни, зазначені в цьому описі), які не знижують істотно афінність зв'язування.
Цінним методом ідентифікації залишків або областей антитіла, які можна піддавати мутагенезу, є так званий «аланін-скануючий мутагенез», описаний у Сиппіпдапат В.С. і МуеїЇ5 9.А., Зсіепсе 244, 1989, сс. 1081-1085. При здійсненні цього методу залишок або групу залишків-мішеней (наприклад, заряджені залишки, такі як Аго, Аз5р, Нів, Гу і Сім) ідентифікують і замінюють на нейтральну або негативно заряджену амінокислоту (наприклад, аланін або поліаланін) для вирішення питання про те, чи буде це впливати на взаємодію антитіла з антигеном. Додаткові заміни можна інтродукувати в ті положення амінокислот, для яких продемонстрована
Зо функціональна чутливість до початкових замін. В альтернативному або додатковому варіанті вивчають кристалічну структуру комплексу антиген-антигензв'язуюча молекула для ідентифікації точок контакту між антитілом і антигеном. Зазначені контактуючі залишки і сусідні залишки можна розглядати як мішені або не враховувати при розгляді як кандидати для заміни.
Варіанти можна піддавати скринінгу для вирішення питання про те, чи мають вони необхідні властивості.
Амінокислотні інсерції включають аміно- і/або карбоксикінцеві злиття, які варіюють за довжиною від одного залишку до поліпептидів, що містять сто або більше залишків, а також інсерції одного або декількох амінокислотних залишків всередину послідовності. Прикладом результату здійснення кінцевих інсерцій є антигензв'язуюча молекула з М-кінцевим метіонільним залишком, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ. Інші інсерційні варіанти молекул злиття М- або С-кінців антитіла з поліпептидом, який подовжує час напіввиведення в сироватці антигензв'язуючих молекул, які містять тримерного ліганд ТМЕ.
В деяких варіантах здійснення винаходу антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, представлені в даному описі, змінюють з метою підвищення або пониження ступеня глікозилування антитіла. Додавання або делецію сайтів глікозилування в антитілі можна легко здійснювати. Варіанти глікозилування молекул легко можна одержувати шляхом такої зміни амінокислотної послідовності, яка дозволяє створювати або видаляти один або декілька сайтів глікозилування. Якщо антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд ТМЕ, містить Ес-область, то можна змінювати приєднаний до неї вуглевод. Нативні антитіла, які продукуються клітинами ссавців, як правило, містять розгалужений біантенний олігосахарид, який, як правило, приєднаний за допомогою М-зв'язку до А5зп297 СН2-домену Ес- області (див., наприклад, Умг'ідні А. і Могтізхоп 5, ТІВТЕСН 15, 1997, сс. 26-32). Олігосахарид може включати різні вуглеводи, наприклад, манозу, М-ацетилглюкозамин (СІСМАс), галактозу і сіалову кислоту, а також фукозу, приєднану до сісМАс в «стеблі» біантенної олігосахарідної структури. У деяких варіантах здійснення винаходу модифікації олігосахариду в антигензв'язуючої молекулі, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованої у винаході, можна здійснювати для створення варіантів з певними покращеними властивостями.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства
ТМЕ, що мають вуглеводну структуру, в якій знижений вміст фукози, приєднаної (прямо чи бо опосередковано) до Ес-області. Зазначені фукозильовані варіанти можуть мати покращену
Арсс-функцію (див., наприклад, ОЗ Мо 2003/0157108 (Ргевзіа І.) або 5 Мо 2004/0093621 (фірма
Куожша Накко Кодуо Со., Ца). Інші варіанти антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованих у винаході, включають варіанти з олігосахаридами, які розсікаються навпіл, наприклад, в яких біантенний олігосахарид, приєднаний до Ес-області, розсікається за допомогою (ЗІСМАс. Зазначені варіанти можуть мати знижений рівень фукозилювання і/або покращену АЮОСС-функцію, див., наприклад, УМО 2003/011878 (Чеап-Маї геї та ін); 05 Мо 6602684 (папа та ін.) ї 05 2005/0123546 (тапа та ін.). Запропоновано також варіанти принаймні з одним залишком галактози в олігосахариді, приєднаному до Ес-області.
Такі варіанти антитіл можуть мати підвищену СОС-функцію, і вони описані, наприклад, УУО 1997/30087 (Рагеї! та ін); УМО 1998/58964 (Каїн 5.) і УМО 1999/22764 (Каїс 5.).
У деяких варіантах здійснення винаходу може виявитися бажаним створювати «сконструйовані за допомогою цистеїну варіанти» антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованої у винаході, наприклад, «тіомМАт», в яких один або декілька залишків в молекулі замінені на залишки цистеїну. В конкретних варіантах здійснення винаходу замінені залишки знаходяться в доступних сайтах молекули. Шляхом заміни цих залишків на цистеїн реакційноздатні тіольні групи поміщаються в доступні сайти антитіла і можуть використовуватися для кон'югації антитіла з іншими фрагментами, такими як фрагменти, що являють собою лікарський засіб, або фрагменти, що являють собою лінкер, зв'язаний з лікарським засобом, зі створенням імунокон'югата, зазначеного нижче в даному описі. В деяких варіантах здійснення винаходу будь-який(ї) один або декілька наступних залишків може(уть) бути замінений) на цистеїн: М205 (нумерація за Кеботом) легкого ланцюга;
А118 (ЕО-нумерація) важкого ланцюга і 5400 (ЕО-нумерація) Ес-області важкого ланцюга.
Сконструйовані за допомогою цистеїну антигензв'язуючі молекули можна одержувати відповідно до методу, наприклад, описаному в 5 Ме7521541.
В деяких об'єктах винаходу антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, представлені в даному описі, можна додатково модифікувати таким чином, щоб вони містили додаткові небілкові фрагменти, відомі в даній галузі і легко доступні. Фрагменти, придатні для дериватизації антитіла, включають (але, не обмежуючись тільки ними) водорозчинні полімери. Прикладами водорозчинних полімерів є (але, не обмежуючись тільки
Зо ними) поліетиленгліколь (ПЕГ), сополімери етиленгліколю/пропіленгліколю, карбоксиметилцелюлоза, декстран, полівініловий спирт, полівінілпіролідон, полі-1,3-діоксолан, полі-1,3,6-триоксан, сополімер етилену/малеїнового ангідриду, поліамінокислоти (або гомополімери, або статистичні сополімери) і декстран- або полі(н-вінілпіролідон) поліетиленгліколь, гомополімери пропіленгліколю, сополімери пропіленоксиду/етиленоксиду, поліоксиетильовані поліоли (наприклад, гліцерин), полівініловий спирт та їх суміші.
Поліетиленглікольпропіональдегід може мати перевагу при виробництві завдяки його стабільності в воді. Полімер може мати будь-яку молекулярну масу і може бути розгалуженим або нерозгалуженим. Кількість полімерів, приєднаних до антитіла, може варіюватися і, якщо приєднано більше одного полімеру, то вони можуть являти собою однакові або різні молекули.
В цілому, кількість і/або тип полімерів, що застосовуються для дериватизації, можна визначати з урахуванням таких особливостей (але, не обмежуючись тільки ними), як конкретні властивості або функції антитіла, що підлягають удосконаленню, чи передбачається застосування похідного біспецифічного антитіла в терапії в певних умовах тощо.
Іншим об'єктом винаходу є кон'югати антитіла і небілкового фрагмента, які можна вибірково нагрівати, впливаючи на них випромінюванням. В одному з варіантів здійснення винаходу небілковий фрагмент являє собою вуглецеву нанотрубку (Кат та ін., Ргос. Маї). Асад. Зсі. ОБА 102, 2005, сс. 11600-11605). Випромінювання може мати будь-яку довжину хвилі і включає (але, не обмежуючись тільки ними) довжини хвиль, які не ушкоджують звичайні клітини, але які нагрівають небілюовий фрагмент до температури, при якій знищуються клітини, найближчі до кон'югату: антитіло-небілковий фрагмент.
Відповідно до іншого об'єкта винаходу можна одержувати імунокон'югати антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ. «Імунокон'югат» являє собою антитіло, кон'юговане з однією або декількома гетерологічною(ими) молекулою(ам), включаючи (але не обмежуючись тільки ними) цитотоксичний агент.
Поняття «полінуклеотид» відноситься до виділеної молекули нуклеїнової кислоти або конструкції, наприклад, матричної РНК (мРНК), РНК вірусного походження або плазмідної ДНК (пДНК). Полінуклеотид може містити звичайний фосфодиефірний зв'язок або нетрадиційний зв'язок (наприклад, амідний зв'язок, такий, як присутній в пептидних нуклеїнових кислотах (ПНК)). Поняття «молекула нуклеїнової кислоти» відноситься до будь-якого одного або бо декількох сегментів нуклеїнової кислоти, наприклад, фрагментів ДНК або РНК, присутніх в полінуклеотиді.
Під «виділеною» молекулою нуклеїнової кислоти або полінуклеотидом мають на увазі молекулу нуклеїнової кислоти, тобто ДНК або РНК, відокремлену від її нативного оточення.
Наприклад, рекомбінантний полінуклеотид, який кодує поліпептид,що входить в вектор, розглядається як виділений для цілей цього винаходу. Іншими прикладами виділеного полінуклеотиду є рекомбінантні полінуклеотиди, присутні в гетерологічних клітинах-хазяїнах, або очищені (частково або повністю) полінуклеотиди, що знаходяться в розчині. Виділений полінуклеотид включає молекулу полінуклеотиду, що входить в клітини, які в нормі містять молекулу полінуклеотиду, але молекула полінуклеотиду присутня поза хромосоми або має локалізацію в хромосомі, відмінну від її локалізації в хромосомі в природних умовах. Виділені молекули РНК включають одержані іп мімо або іп міго РНК-транскрипти, запропоновані в даному винаході, а також форми з позитивним і негативним ланцюгом і дволанцюгової форми. Виділені полінуклеотиди або нуклеїнові кислоти, запропоновані в даному винаході, включають також зазначені молекули, одержані за допомогою синтезу. Крім того, полінуклеотид або нуклеїнова кислота може являти собою або може включати регуляторний елемент, такий як промотор, сайт зв'язування рибосом або термінатор транскрипції.
Під нуклеїновою кислотою або полінуклеотидом, що має/мають нуклеотидну послідовність, яка, наприклад, на 9595 «ідентична» нуклеотидній референос-послідовності, запропонованої в даному винаході, мають на увазі, що нуклеотидна послідовність полінуклеотиду ідентична референс-послідовності за винятком того, що полінуклеотидна послідовність може включати аж до 5 точкових мутацій на кожні 100 нуклеотидів нуклеотидної референс-послідовності. Іншими словами, для одержання полінуклеотиду, що має нуклеотидну послідовність, яка ідентична принаймні на 9595 нуклеотидній референос-послідовності, аж до 595 нуклеотидів в референс- послідовності можна вилучати шляхом делеції або замінювати на інший нуклеотид, або аж до 5950 нуклеотидів від загальної кількості нуклеотидів в референс-послідовності можна вбудовувати в референс-послідовність. Ці зміни референс-послідовності можуть мати місце в положеннях на 5'- або 3'-кінці нуклеотидної референс-послідовності або в іншому положенні між цими кінцевими положеннями, і їх вбудовують або індивідуально між залишками в референс- послідовності, або їх вбудовують в референс- послідовність у вигляді однієї або декількох
Зо суміжних груп. На практиці вирішення питання про те, чи ідентична конкретна полінуклеотидна послідовність принаймні на 8095, 8595, 9095, 9595, 9695, 9795, 9895 або 9995 нуклеотидній послідовності, запропонованої в даному винаході, можна вирішувати, як правило, з використанням відомих комп'ютерних програм, наприклад, зазначених вище для поліпептидів (наприклад, АГІСМ-2).
Поняття «касета експресії» відноситься до полінуклеотиду, одержаного за допомогою рекомбінації або синтезу, який містить серії специфічних нуклеотидних елементів, які забезпечують транскрипцію конкретної нуклеїнової кислоти в клітці-мішені. Рекомбінантну касету експресії можна вбудовувати в плазміду, хромосому, мітохондріальну ДНК, пластидну
ДНК, вірус або фрагмент нуклеїнової кислоти. Як правило, рекомбінантна касета експресії, що являє собою частину експресійного вектора, включає серед інших послідовностей нуклеотидну послідовність, яка підлягає транскрипції, і промотор. В деяких варіантах здійснення винаходу касета експресії, запропонована у винаході, містить полінуклеотидні послідовності, які кодують біспецифічні антигензв'язуючі молекули, запропоновані у винаході, або їх фрагменти.
Поняття «вектор» або «експресійний вектор» є синонімом поняття «експресійна конструкція» і відноситься до молекули ДНК, яку застосовують для інтродукції та забезпечення експресії конкретного гена, з якої він функціонально зв'язаний в клітині-мішені. Поняття включає вектор, що являє собою саморепліковану структуру нуклеїнової кислоти, а також вектор, вбудований в геном клітини-хазяїна, в яку він інтродукований. Експресійний вектор, запропонований в даному винаході, містить касету експресії. Експресійні вектори дозволяють здійснювати транскрипцію стабільної МРНК у великих кількостях. Коли експресійний вектор знаходиться всередині клітини-мішені, то молекула рибонуклеїнової кислоти або білок, який кодується геном, продукується в результаті клітинного механізму транскрипції і/або трансляції.
В одному з варіантів здійснення винаходу експресійний вектор, запропонований у винаході, містить касету експресії, яка включає полінуклеотидні послідовності, які кодують біспецифічні антигензв'язуючі молекули, запропоновані у винаході, або їх фрагменти.
В контексті даного опису поняття «клітина-хазяїн», «лінія клітин-хазяїнів» і «культура клітин- хазяїнів» використовуються як взаємозамінні, і вони відносяться до клітин, в які інтродукована екзогенна нуклеїнова кислота, включаючи потомство зазначених клітин. До клітин-хазяїнів відносяться «трансформанти» і «трансформовані клітини», які включають первинні 60 трансформовані клітини, а також потомство, виведене з них, незалежно від кількості пересівань.
Потомство може не бути строго ідентичним батьківській клітині за складом нуклеїнових кислот, а може нести мутації. Під дане поняття підпадає мутантне потомство, яке має таку ж функцію або біологічну активність, що і відібрана шляхом скринінгу або селекції вихідна трансформована клітина. Клітина-хазяїн являє собою будь-який тип клітинної системи, яку можна застосовувати для створення біспецифічних антигензв'язуючих молекул, запропонованих в даному винаході. Клітини-хазяїни включають культивовані клітини, наприклад, культивовані клітини ссавців, такі як (але, не обмежуючись тільки ними). СНО- клітини, ВНК-клітини, М5О-клітини, ЗР2/О-клітини, клітини мієломи лінії МО, клітини мишачої мієломи лінії РЗ3Хб6ЄЗ, РЕК-клітини, РЕК.Сб-клітини або клітини гібридоми, клітини дріжджів, клітини комах і клітини рослин, але також клітини, що знаходяться в трансгенній тварині, трансгенній рослині або в культивованій рослинній або тваринній тканині.
Поняття «ефективна кількість» агента відноситься до кількості, необхідної для забезпечення фізіологічної зміни в клітині або тканині, в яку його вводять.
Поняття «терапевтично ефективна кількість» агента, наприклад, фармацевтичної композиції, відноситься до кількості, ефективної при застосуванні в дозах і протягом періодів часу, необхідних для досягнення необхідного терапевтичного або профілактичного результату.
Терапевтично ефективна кількість агента, наприклад, елімінує, знижує, уповільнює, мінімізує або попереджає небажані явища захворювання. «Індивідом» або «суб'єктом» є ссавець. Ссавцями є (але, не обмежуючись тільки ними) одомашнені тварини (наприклад, корови, вівці, кішки, собаки і коні), примати (наприклад, люди і примати крім людини, такі як мавпи), кролики і гризуни (наприклад, миші та щури). Переважно індивідуум або суб'єкт являє собою людину.
Поняття «фармацевтична композиція» відноситься до препарату, який знаходиться в такій формі, що він забезпечує біологічну активність діючої речовини. що входить до його складу, яка повинна мати ефективність, і який не містить додаткових компонентів, що мають неприйнятну токсичність для індивідуума, якому слід вводити композицію. «Фармацевтично прийнятний носій» відноситься до інгредієнта в фармацевтичній композиції, відмінному від діючої речовини, який є нетоксичним для індивідуума.
Фармацевтично прийнятні носії включають (але, не обмежуючись тільки ними) буфер,
Зо ексципієнт, стабілізатор або консервант.
Поняття «листівка-вкладиш в упаковку» в контексті даного опису відноситься до інструкцій, які звичайно поміщають в упаковки терапевтичних продуктів, що надходять у продаж, які містять інформацію про показання, застосування, дози, шляхи введення, комбінованої терапії, протипоказання і/або запобіжні заходи при застосуванні зазначених терапевтичних продуктів.
В контексті даного опису поняття «лікування» (і його граматичні варіації, такі як «лікувати» або «процес лікування») відноситься до клінічного втручання з метою зміни природного перебігу хвороби у індивідуума, що підлягає лікуванню, і його можна здійснювати або для профілактики або в процесі розвитку клінічної патології. Необхідними діями лікування є (але, не обмежуючись тільки ними) попередження виникнення або рецидиву хвороби, полегшення симптомів, зменшення будь-яких прямих або непрямих патологічних наслідків хвороби, попередження метастазів, зниження швидкості розвитку хвороби, полегшення або тимчасове ослаблення хворобливого стану і ремісія або покращення прогнозу. В деяких варіантах здійснення винаходу молекули, пропоновані у винаході, застосовують для затримки розвитку хвороби або уповільнення прогресування хвороби.
В контексті даного опису поняття «рак» відноситься до проліферативних захворювань, таких як лімфоми, лімфолейкози, рак легені, недрібноклітинний рак легені (М5СІ), альвеолярно- клітинний рак легені, рак кістки, рак підшлункової залози, рак шкіри, рак голови або шиї, шкірна або внутрішньоочна меланома, рак матки, рак яєчника, ректальний рак, рак анальної області, рак шлунка, гастральний рак, рак ободової кишки (СКС), рак молочної залози, тричі негативний рак молочної залози, карцинома фаллопієвих труб, карцинома ендометрія, карцинома шийки матки, карцинома піхви, карцинома вульви, хвороба Ходжкіна, рак стравоходу, рак тонкого кишечника, рак ендокринної системи, рак щитовидної залози, рак паращитовидної залози, рак надниркових залоз, саркома м'яких тканин, рак сечовипускального каналу, рак пеніса, рак передміхурової залози, рак сечового міхура, рак нирки або сечоводу, нирково-клітинна карцинома, карцинома ниркової балії, мезотеліома, печінково-клітинний рак, біліарний рак, неоплазми центральної нервової системи (ЦНС), пухлини хребта, гліома стовбура головного мозку , мультиформна гліобластома, астроцитоми, шваноми, епендимоми, медуллобластоми, менінгіоми, плоскоклітинні карциноми, аденома гіпофіза і саркома Юінга, меланома, множинна мієлома, В-клітинний рак (лімфома), хронічний лімфоцитарний лейкоз (СІ), гострий бо лімфобластний лейкоз (АЇЇ), волосатоклітинний лейкоз, хронічний мієлобластний лейкоз,
включаючи рефрактерні варіанти будь-якого із зазначених вище видів раку і комбінації одного або декількох видів раку.
Антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновані у винаході
У винаході запропоновані нові антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, з найбільш переважними властивостями, такими як технологічність, стабільність, афінність зв'язування, біологічна активність, ефективність цілеспрямованої дії (таргетинг) і знижена токсичність.
Першим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або два їх фрагмента, які з'єднані один з одним пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або два їх фрагмента, які з'єднані один з одним пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, і (в) ЕРс-домен, який складається з першої і другої субодиниць, які мають здатність до стабільної асоціації.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або два їх фрагмента, які з'єднані один з одним пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, де представник сімейства лігандів ТМЕ костимулює активацію людських Т-клітин.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або два їх фрагмента, які з'єднані один з одним пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, при цьому ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ у всіх випадках є ідентичними.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ за п. 1 формули винаходу, яка містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що () перший поліпептид містить СНІ- або Сі -домен і другий поліпептид містить СІ - або СНІ1- домен відповідно, при цьому другий поліпептид зчеплений з першим поліпептидом дисульфідним зв'язком між СНІ- і СІ -доменом, і при цьому перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним і з
СНІ- або Сі-доменом пептидним лінкером, і при цьому другий поліпептид містить один 60 ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, який з'єднаний пептидним лінкером з СІ-- або СНІ1-доменом зазначеного поліпептиду, або (І) перший поліпептид містить СНЗ-домен і другий поліпептид містить СНЗ-домен відповідно, і при цьому перший поліпептид містить два ектгодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним і з С-кіннем СНЗ-домену пептидним лінкером, і при цьому другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, який з'єднаний пептидним лінкером з
С-кінцем СНЗ-домену зазначеного поліпептиду, або (І) перший поліпептид містить МН-СІ- або МІ -СНІ-домен і другий поліпептид містить МІ -
СНІ-домен або МН-СІ -домен відповідно, при цьому перший поліпептид зчеплений з першим поліпептидом дисульфідним зв'язком між СНІ1- і СІ -доменом і при цьому перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним і з МН або МІ пептидним лінкером, і при цьому другий поліпептид містить один ектодомен представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, з'єднаний через пептидний лінкер з МІ або УН зазначеного поліпептиду.
В конкретному об'єкті винаходу антигензв'язуюча молекула містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, який костимулює активацію людських Т-клітин, вибраний з 4-18ВІ ії ОХ40Ї.
Більш конкретно представник сімейства лігандів ТМЕ являє собою 4-18ВІ.
В іншому об'єкті винаходу ектодомен представника сімейства лігандів ТМЕ містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮО МО: 2,
ЗЕО ІО МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 4, 5ЕО 10 МО: 96, 5ЕО ІО МО: 373, 5ЕО ІО МО: 374 і 5ЕО І МО: 375, перш за все амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІО МО: 96. В одному з об'єктів винаходу ектодомен представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮО МО: 2,
ЗЕО ІО МО: 3, 5ЕО ІО МО: 4 ї 5ЕО ІО МО: 96, перш за все амінокислотну послідовність БЕО ІЮ
МО: 1 або 5ЕО ІЮО МО: 96. В конкретному об'єкті винаходу ектодомен представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 96.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 5, 5ЕО І МО: 97,
ЗЕБЕО І МО: 98 і 5ЕБО ІО МО: 99, і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 96, 5ЕО ІО МО: З і
ЗЕО ІО МО: 4. В конкретному об'єкті винаходу перший поліпептид містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 97 і другий поліпептид містить амінокислотну послідовність ФЕО 10
МО: 96.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 5, і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 6.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 5, і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 183.
Ще одним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, бо де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 97, і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 184 або 5ЕО ІО МО: 185.
В іншому об'єкті винаходу представник сімейства лігандів ТМЕ являє собою ОХ.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій ектгодомен представника сімейства лігандів ТМЕ містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 53 або 5ЕО ІО МО: 54, насамперед амінокислотну послідовність БЕ
ІО МО: 53.
Ще одним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 371 або 5ЕО 10:372, і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність ХЕО 10 МО: 53 або 5ЕО ІО МО: 54 відповідно.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший поліпептид, який містить СНІ1- або Сі -домен, і другий поліпептид, який містить
СіІ- або СНІ-домен відповідно, при цьому другий поліпептид зчеплений з першим поліпептидом дисульфідним зв'язком між СНІ1- і СІ -доменом, і де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним і з
СНІ- або Сі -доменом пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, з'єднаний через пептидний лінкер з Сі - або СНІ1-доменом зазначеного поліпептиду.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить
Зо (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший поліпептид, який містить СНІ-домен, і другий поліпептид, який містить Сі -домен, при цьому другий поліпептид зчеплений з першим поліпептидом дисульфідним зв'язком між
СНІ- і СІ -доменами, і де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним і з
СНі-доменом пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, з'єднаний через пептидний лінкер з СІ -доменом зазначеного поліпептиду.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший поліпептид, який містить Сі -домен, і другий поліпептид, який містить СН1-домен, при цьому другий поліпептид зчеплений з першим поліпептидом дисульфідним зв'язком між
СНІ- і СІ -доменами, і де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним і з
Сі-доменом пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, з'єднаний через пептидний лінкер з СНІ1-доменом зазначеного поліпептиду.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) одну ділянку, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або два їх фрагмента, які з'єднані один з одним пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент. бо Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) більш ніж один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або два їх фрагмента, які з'єднані один з одним пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, з'єднаний через пептидний лінкер із зазначеним поліпептидом.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) два фрагмента, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або два їх фрагмента, які з'єднані один з одним пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить СНЗз-домен і другий поліпептид містить СНЗ-домен відповідно, і тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним і з
С-кінцем СНЗ-домену пептидним лінкером, тим, що другий поліпептид містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем СНЗ-домену зазначеного поліпептиду. Зокрема, зазначена антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, містить два фрагмента, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) два фрагмента, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або два їх фрагменти, які з'єднані один з одним пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, в якій два фрагмента, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини- мішені, зв'язуються з двома різними антигенами клітини-мішені.
Наступним об'єктом винаходу є вищеописана антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, вибирають з групи, яка складається з антитіла, фрагмента антитіла і антигензв'язуючого білка-каркаса.
Наступним об'єктом винаходу є вищеописана антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, вибирають з групи, яка складається з фрагмента антитіла, молекули
Раб, кросовер-молекули Рар, одноланцюгової молекули Бар, молекули Ем, молекули 5сЕм, однодоменного антитіла, амнН і антигензв'язуючого білка-каркаса. В одному з об'єктів винаходу фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, являє собою амн або антигензв'язуючий білок-каркас. В одному з об'єктів винаходу фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, являє собою антигензв'язуючий білок-каркас. В одному з об'єктів винаходу фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, являє собою антигензв'язуючий білок-каркас, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені.
Зокрема, антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, містить один або два фрагмента, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини- 60 мішені.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини- мішені, являє собою кросовер-молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені. Зокрема, фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, являє собою Бар, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені.
Крім того, запропонована антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, зазначена в даному описі, для якої антиген клітини-мішені вибирають з групи, яка включає фібробласт-активуючий білок (БАР), асоційований з меланомою хондроїтинсульфат-протеоглікан (МС5Р), рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕК), карциноембріональний антиген (СЕА), СО19, 2020 і 2033.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована у винаході, в якій пептид, що містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злитий на С-кінці з СНІ-доменом важкого ланцюга за допомогою другого пептидного лінкера, і в якій один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент злитий на С-кінці з СІ -доменом легкого ланцюга за допомогою третього пептидного лінкера.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована у винаході, в якій пептид, який містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагменти, з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злиті на С-кінці з Сі -доменом важкого ланцюга за допомогою другого пептидного лінкера, і в якій один ектгодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ злитий на С-кінці з СНі-доменом легкого ланцюга за допомогою третього пептидного лінкера.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована у винаході, в якій пептид, який містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злитий на С-кінці з Сі-доменом легкого ланцюга за допомогою другого пептидного лінкера, і в якій один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ злитий на С-кінці з СНІ-доменом важкого ланцюга за допомогою третього пептидного лінкера.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, зазначена вище, в якій пептидний лінкер являє собою (45). В одному з об'єктів винаходу перший пептидний лінкер являє собою ((45)2 (5ЕО І МО: 13), другий пептидний лінкер являє собою С5РОББЗОБЗИ (5ЕО І МО: 57) і третій пептидний лінкер являє собою (с145)2 (ЗЕО ІЮ МО: 13). Зокрема, винахід відноситься до антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд ТМЕ, вищезазначеної, в якій перший пептидний лінкер являє собою (с145)2 (ЗЕО ІО МО: 13), другий пептидний лінкер являє собою (с145)2 (ЗЕО ІЮ МО: 13) і третій пептидний лінкер являє собою (245)2 (ЕС І МО: 13).
В іншому об'єкті винаходу антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, зазначена вище, містить Ес-домен, який складається з першої і другої субодиниць, які мають здатність до стабільної асоціації.
Зокрема, антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована у винаході містить (а) молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, в якій важкий ланцюг Рар злитийа на С-кінці з М-кінцем СН2-домену в Ес-домені, і (в) Ес-домен, який складається з першої і другої субодиниць, які мають здатність до стабільної асоціації.
В іншому об'єкті винаходу Ес-домен являє собою Ес-домен Ідаї, зокрема, Ес-домен Ідс1 або
БО Ес-домен Ідас4. Більш конкретно Ес-домен являє собою Ес-домен ІдСс1. В конкретному об'єкті винаходу Ес-домен містить модифікацію, яка посилює асоціацію першої і другої субодиниць Ес- домену.
Модифікації Рс-домену, що призводять до зниження зв'язування з Ес-рецептором і/або ефекторної функції
Ес-домен антигензв'язуючих молекул, що містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованих у винаході, складається з пари поліпептидних ланцюгів, які містять домени важкого ланцюга молекули імуноглобуліну. Наприклад, Ес-домен молекули імуноглобуліну С (Іс) являє собою димер, кожна субодиниця якого містить константні домени СНУ і СНЗ важкого ланцюга Іда. Дві субодиниці Ес-домену мають здатність до стабільної асоціації одна з одною. 60 Ес-домен надає антигензв'язуючій молекулі, запропонованій у винаході, переважні фармакокінетичні властивості, включаючи тривалий час напівжиття в сироватці, що забезпечує хороше накопичення в тканині-мішені і переважне співвідношення розподілу в тканині-крові.
Однак в той же час він може призводити до небажаної спрямованості біспецифічних антитіл, запропонованих у винаході, до клітин, які експресують Ес-рецептори, а не для найчастіше використовуваних клітин, які несуть антиген . Таким чином, в конкретних об'єктах винаходу Ес- домен антигензв'язуючої молекули, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованої у винаході, має знижену афінність зв'язування з Ес-рецептором і/або зниженою ефекторною функцією порівняно з нативним Ес-доменом ІдСс1. В одному з об'єктів винаходу Ес не зв'язується істотно з Ес-рецептором і/або не індукує ефекторну функцію. У конкретному об'єкті винаходу Ес-рецептор являє собою Есу-рецептор. В одному з об'єктів винаходу Ес- рецептор являє собою людський Ес-рецептор. У конкретному об'єкті винаходу Ес-рецептор являє собою активуючий людський Есу-рецептор, більш конкретно людський ЕсукПШа, ЕсукіІ або
ЕсукКПа, найбільш переважно людський ЕсуКШа. В одному з об'єктів винаходу Ес-домен не індукує ефекторну функцію. Знижена ефекторна функція може являти собою (але, не обмежуючись тільки ними) знижену () одну або декілька з наступних функцій: знижена комплементзалежна цитотоксичность (СОС), знижена антитіло-обумовлена клітинозалежна цитотоксичность (АЮСС), знижений антитіло-обумовлений клітинозалежний фагоцитоз (АОСР), знижена секреція цитокінів, знижене опосередковане імунне комплексом поглинання антигена антигенпрезентуючими клітинами, знижене зв'язування з МК-клітинами, знижене зв'язування з макрофагами, знижене зв'язування з моноцитами, знижене зв'язування з поліморфноядерними клітинами, знижена безпосередня передача сигналу, що індукує апоптоз, знижене дозрівання дендритних клітин або знижене Т-клітинне примірування.
В деяких об'єктах винаходу одну або декілька амінокислотних модифікацій можна інтродукувати в Ес-область антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, представленої в даному описі, створюючи тим самим варіант Ес-області.
Варіант Ес-області може містити послідовність людської Ес-області (наприклад, Ес-області людського ІДС, ІдСе, дСЗ або Ідс24), що містить амінокислотну модифікацію (наприклад, заміну) в одному або декількох амінокислотних положеннях.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або два їх фрагмента, які з'єднані один з одним пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, і (в) ЕРс-домен, який складається з першої і другої субодиниць, які мають здатність до стабільної асоціації, в якій Ес-домен містить одну або декілька амінокислотну(их) заміну(н), яка(ї) знижує(ють) зв'язування з Ес-рецептором, зокрема з Есу-рецептором.
В одному з об'єктів винаходу Ес-домен антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованої у винаході, містить одну або декілька амінокислотну(их) мутацію), яка(ї) знижує(ють) афінність зв'язування Ес-домену з Ес-рецептором і/або ефекторну функцію. Як правило, однакова(ї) одна або декілька амінокислотних мутацій є присутньою(ми) в кожній з двох субодиниць Ес-домену. Зокрема, Ес домен містить амінокислотну заміну в положенні Е233, І 234, 1235, М297, РЗ331 і РЗ29 (ЕО-нумерація). Зокрема,
Ес-домен містить амінокислотні заміни в положеннях 234 і 235 (ЕО-нумерація) і/або 329 (ЕО- нумерація) важких ланцюгів Ід. Більш конкретно, запропонована антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована у винаході, що містить Ес-домен з амінокислотними замінами І 234А, 1235А і РЗ290 ( «РЗ32905 ГАГА», ЕО-нумерація) у важких ланцюгах дос. Амінокислотні заміни І 234А і 1235А позначають як ГАЇ А-мутацію. Комбінація «РЗ290 І АГА» амінокислотних замін практично повністю елімінує зв'язування з Есу-рецептором
Ес-домену людського ІдС1, і описана в опублікованій заявці на патент УМО 2012/130831 АТ, в якій описані методи одержання зазначених мутантних Ес-доменів і методи визначення їх властивості, таких як зв'язування з Ес-рецептором або ефекторні функції. «ЕО-нумерація» означає систему нумерації відповідно до ЕО-індексу, описану у Кабраї та ін, Зедиепсев5 ої
Ргоївїп5 ої Іттипоіодіса! Іпієгеб5і, 5-е вид., вид-во Рибіїс Неакйп Зегмісе, Майопа! Іпбійшев ої
Неайн, Веїйезаа, МО, 1991.
Ес-домени зі зниженою здатністю зв'язуватися з Ес-рецептором і/або ефекторною функцією 60 включають також Ес-домени із заміною одного або декількох залишків 238, 265, 269, 270, 297,
327 і 329 в Рсе-домені (5 Мо 637056). До зазначених мутантів Ес відносяться мутанти Ес із замінами в двох або більшій кількості з амінокислотних положень 265, 269, 270, 297 і 327, включаючи так званий мутант Ес-домену «ЮАМА» із заміною залишків 265 і 297 на аланін (5 Мо 7332581).
В іншому об'єкті винаходу Ес-домен являє собою Ес-домен Ід(4. Антитіла підкласу са мають знижену афінність до зв'язування з Ес-рецепторами і зниженими ефекторними функціями порівняно з антитілами підкласу ІдДС1. В одному з об'єктів винаходу Ес-домен являє собою Ес- домен Ідш4, який містить амінокислотні заміни в положенні 5228 (нумерація за Кеботом), конкретно амінокислотну заміну 5228Р. У більш конкретному об'єкті винаходу Ес-домен являє собою Ес-домен Ідс4, який містить амінокислотні заміни в положеннях І 235Е і 5228Р, і РЗ2гУС (БЕО-нумерація). Зазначені мутанти Ес-домену Ідаса і їх здатність зв'язуватися з Есу-рецептором описані в МО 2012/130831.
Мутантні Ес-домени можна одержувати шляхом амінокислотної делеції, заміни, інсерції або модифікації з використанням генетичних або хімічних методів, добре відомих в даній галузі.
Генетичні методи можуть включати сайтнаправленний мутагенез кодуючої ДНК послідовності,
ПЛР, синтез генів тощо. Правильність нуклеотидних замін можна підтверджувати, наприклад, секвенуванням.
Зв'язування з Ес-рецепторами можна легко визначати, наприклад, за допомогою ЕГ І5А або поверхневого плазмонного резонансу (РЕ) з використанням стандартного устаткування, такого як пристрій ВіІАсоге (фірма СЕ Неаїйнсаге), і з застосуванням таких Ес-рецепторів, які можна одержувати методом рекомбінантної експресії . Прийнятний вказаний аналіз зв'язування представлений в даному описі. Альтернативно до цього, афінність зв'язування з Ес-доменів або біспецифічних антигензв'язуючих молекул, що активують клітини, які містять Ес-домен, з Ес- рецепторами можна оцінювати з використанням клітинних ліній, для яких відомо, що вони експресують конкретні Ес-рецептори, такі як людські МК-клітини , які експресують ЕсуШа- рецептор.
Ефекторну функцію Есо-домену або біспецифічних антитіл, запропонованих у винаході, які містять Ес-домен, можна оцінювати методами, відомими в даній галузі. Прийнятний аналіз для оцінки АОСС представлений в даному описі. Інші приклади аналізів іп міго, призначених для
Зо оцінки АЮОСС-активності молекули, що становить інтерес, описані в О5 Мо 5500362; у НеїЇвігот та ін., Ргос Маї! Асай 5сі ОБА 83, 1986, сс. 7059-7063 і НеїІбіго т та ін., Ргос Маї! Асай 5сі О5А 82, 1985, сс. 1499-1502; 05 Мо 5821337; у Вгиддетапп та ін., ) Ехр Мей 166, 1987, сс. 1351-1361.
Альтернативно до цього, можна застосовувати методи, засновані на нерадіоактивному аналізі (див., наприклад, АСТІ"М - нерадіоактивний аналіз цитотоксичності за допомогою проточної цитометрії (фірма СейПТесппоіоду, Іпс. Маунтін-«В'ю, шт. Каліфорнія), і СуюТох 965 - нерадіоактивний аналіз цитотоксичності (фірма Рготеда, Медісон, шт. Вісконсін)). Прийнятними ефекторними клітинами для таких аналізів є мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМС) і природні клітини-кілери (МК). В альтернативному або додатковому варіанті АОСС -активність молекули, що представляє інтерес, можна оцінювати іп мімо, наприклад, з використанням створених на тваринах моделей, описаних у Сіупез та ін., Ргос Майї! Асай 5сі О5А 95, 1998, сс. 652-656.
В деяких варіантах здійснення винаходу знижують зв'язування з Ес-домену з компонентом системи комплементу, зокрема з С1д. Таким чином, в деяких варіантах здійснення винаходу, в яких Ес-домен конструюють так, щоб він мав знижену ефекторну функцією, зазначена знижена ефекторна функція включає знижену СОС. Можна здійснювати аналізи зв'язування С1д для вирішення питання про те, чи можуть біспецифічні антитіла, запропоновані у винаході, зв'язуватися з С1д і, як наслідок, чи мають вони СОС-активність (див., наприклад, аналізи зв'язування з С14 і СЗс за допомогою ЕГІЗА, описані в УМО 2006/029879 і МО 2005/100402). Для оцінки активації комплементу можна здійснювати аналіз СОС (див., наприклад, са77апо-бапіого та ін., У Іттипої Меїпоаз» 202, 1996, с. 163; Стгадо та ін., Віоса 101, 2003 сс. 1045-1052 і Стадд і
СіІеппіє, Віоса 103, 2004, сс. 2738-2743).
У конкретному об'єкті винаходу Ес-домен містить модифікацію, що посилює асоціацію першої і другої субодиниць Ес-домену.
Модифікації Ес-домену, що посилюють гетеродимерізацію
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, яка містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені, (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або два їх фрагмента, 60 які з'єднані один з одним пептидним лінкером, і тим, що другий поліпептид містить тільки один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, і (в) Ес-домен, що складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації, і в якій Ес-домен містить одну або декілька амінокислотну(і) заміну(ни), яка(ї) знижує(ють) зв'язування з Ес-рецептором, перш за все Есу-рецептором. Таким чином, вони містять різні фрагменти, злиті з однією чи з іншою з двох субодиниць Ес-домену, які, як правило, присутні в двох неідентичних поліпептидних ланцюгах («важкі ланцюги»). Рекомбінантна спільна експресія цих поліпептидів і подальша димеризація призводять до декількох можливих комбінацій двох поліпептидів. Для підвищення виходу і чистоти антигензв'язуючих молекул, що містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, при їх одержанні методами рекомбінації доцільно інтродукувати в Ес-домен антигензв'язуючих молекул, що містять тримерний ліганд сімейства
ТМЕ, запропонованих у винаході, модифікацію, яка підсилює асоціацію необхідних поліпептидів.
Таким чином, Ес-домен антигензв'язуючих молекул, що містять тримерний ліганд сімейства
ТМЕ, запропонованих у винаході, містить модифікацію, яка підсилює асоціацію першої і другої субодиниць Ес-домену. Сайт найбільш сильної білок-білкового взаємодії двох субодиниць Ес- домену людського дО знаходиться в СНЗ-домені Ес-домену. Таким чином, в одному з варіантів здійснення винаходу зазначена модифікація знаходиться в СНЗ-домені Ес-домену.
У конкретному варіанті здійснення винаходу зазначена модифікація являє собою так звану модифікацію типу «Кпоб-іп-поїе», яка включає модифікацію, що призводить до утворення «виступу» на одній з двох субодиниць Ес-домену і до утворення «западини» в інший одній з двох субодиниць Ес-домену. Таким чином, конкретним об'єктом винаходу є описана вище антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, яка містить молекулу
Іо, в якій Ес-область першого важкого ланцюга містить перший модуль димеризації, а Ес- область другого важкого ланцюга містить другий модуль димеризації, що забезпечує гетеродимерізацію двох важких ланцюгів молекули до, і перший модуль димеризації містить «виступи», а другий модуль димеризації містить «западини» відповідно до технології «Кпоб-іпю- поїе».
Технологія «Кпоб-іпіо-поЇе» описана, наприклад, в О5 Мо 5731168; 05 Мо 7695936; у Кідду'ау та ін., Ргоої Епо 9, 1996, сс. 617-621 і Сапег, у Іттипої Мей 248, 2001., сс. 7-15. В цілому, метод включає інтродукцію опуклості («виступ») на поверхні розділу першого поліпептиду і відповідної
Зо порожнини («западина») в поверхні розділу другого поліпептиду, в результаті опуклість може міститися в порожнині, посилюючи тим самим утворення гетеродимера і перешкоджаючи утворенню гомодимеру. Опуклості конструюють шляхом заміни амінокислот з невеликими бічними ланцюгами на поверхні розділу першого поліпептиду на амінокислоти з більшими бічними ланцюгами (наприклад, на тирозин або триптофан). Компенсуючі порожнини ідентичного або схожого з виступами розміру конструюють в поверхні розділу другого поліпептиду шляхом заміни амінокислот з великими бічними ланцюгами на амінокислоти з меншими бічними ланцюгами (наприклад, аланін або треонін).
Таким чином, відповідно до конкретного об'єкта винаходу в СНЗ-домені першої субодиниці
Ес-домену антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованих у винаході, амінокислотний залишок замінений амінокислотним залишком, який має більший об'єм бічного ланцюга, що призводить до утворення опуклості в СНЗ- домені першої субодиниці, яка може міститися в порожнині в СНЗ-домені другої субодиниці, і в СНЗ- домені другої субодиниці Ес-домену амінокислотний залишок замінений амінокислотним залишком, який має менший об'єм бічного ланцюга, що призводить до утворення порожнини в
СНЗ-домені другий субодиниці, в якій може міститися опуклість в СНЗ-домені першої субодиниці.
Опуклість і порожнину можна створювати шляхом зміни нуклеїнових кислот, що кодують поліпептиди, наприклад, за допомогою сайтнаправленного мутагенезу або шляхом пептидного синтезу.
У конкретному об'єкті винаходу в СНЗ-домені першої субодиниці Ес-домену залишок треоніну в положенні 366 замінений залишком триптофану (Т366МУ), ії в СНЗ-домені другої субодиниці Ес-домену залишок тирозину в положенні 407 замінений залишком валіну (407).
Більш конкретно, у другій субодиниці Ес-домену додатково залишок треоніну в положенні 366 замінений залишком серину (13665) і залишок лейцину в положенні 368 замінений залишком аланіну (І368А). Більш конкретно, в першій субодиниці Ес-домену додатково залишок серину в положенні 354 замінений залишком цистеїну (5354) і в другій субодиниці Ес-домену додатково залишок тирозину в положенні 349 замінений залишком цистеїну (У349С). Інтродукція цих двох залишків цистеїну призводить до утворення дисульфидного містка між двома субодиницями Ес- домену, додатково стабілізує димер (Сагіег, У Іттипої Мейподз 248, 2001., сс. 7-15). бо В альтернативному варіанті здійснення винаходу модифікація, яка підсилює асоціацію першої і другої субодиниць Ес-домену, являє собою модифікацію, яка опосередковує визначені електростатичною дією впливи, наприклад, описані в публікації РСТ М/О 2009/089004. В цілому, зазначений метод включає заміну одного або декількох амінокислотних залишків на поверхні розділу двох субодиниць Ес-домену на заряджені амінокислотні залишки, в результаті чого утворення гомодимеру стає електростатично невигідним, а гетеродимерізація стає електростатично вигідною.
Модифікації в СНІ1/СІ -доменах
Для подальшого покращення правильного спаровування антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, можуть включати різні заміни заряджених амінокислот (так звані «заряджені залишки»). Ці модифікації інтродукують в схрещені або несхрещені СНІ1- і
СІ -домени. Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій в одному з Сі-доменів амінокислота в положенні 123 (ЕБО- нумерація) замінена на аргінін (А) і амінокислота в положенні 124 (ЕЮО-нумерація) замінена на лізин (К) і в якій в одному з СНІ-доменів амінокислоти в положенні 147 (ЕО-нумерація) і положенні 213 (ЕО-нумерація) замінені на глутамінову кислоту (Е).
Більш конкретно, у винаході запропонована антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій в СІ -домені, що прилягає до представника сімейства лігандів ТМЕ, амінокислота в положенні 123 (ЕО-нумерація) замінена на аргінін (БВ) і амінокислота в положенні 124 (ЕО-нумерація) замінена на лізин (К), і в якій в СНІ-домені, що прилягає до представника сімейства лігандів ТМЕ, амінокислоти в положенні 147 (БО- нумерація) і положенні 213 (ЕО-нумерація) замінені на глутамінову кислоту (Е).
Конкретні антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антигензв'язуюча молекула містить перший важкий ланцюг і перший легкий ланцюг, які обидва утворюють молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, перший пептид, який містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злитого на його С-кінці за допомогою другого пептидного лінкера з іншим важким або легким ланцюгом, і другий пептид, який містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів
ТМЕ, злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з іншим легким або важким ланцюгом відповідно.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій перший пептид, що містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злитий на його С-кінці з СНІ-доменом, що є частиною важкого ланцюга, і другий пептид, який містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з СІ -доменом, який є частиною легкого ланцюга.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій перший пептид, який містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злитий на його С-кінці за допомогою другого пептидного лінкера з Сі -доменом, який є частиною важкого ланцюга, і другий пептид, який містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів
ТМЕ або його фрагмент, злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з
СНІ- доменом, який є частиною легкого ланцюга.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій перший пептид, який містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злитий на його С-кінці за допомогою другого пептидного лінкера з МН-доменом, який є частиною важкого ланцюга, і другий пептид, який містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів
ТМЕ або його фрагмент, злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з Мі - доменом, який є частиною легкого ланцюга.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ за пл. 21-23 формули винаходу, в якій в Сі-домені, що прилягає до представника сімейства лігандів ТМЕ, амінокислота в положенні 123 (ЕО-нумерація) замінена на аргінін (РЕ) і амінокислота в положенні 124 (ЕО-нумерація) замінена на лізин (К), і в якій в СНІ1- 60 домені, що прилягає до представника сімейства лігандів ТМЕ, амінокислоти в положенні 147
(ЕЄО-нумерація) і положенні 213 (ЕО-нумерація) замінені на глутамінову кислоту (Е). Зазначені модифікації призводять до появи так званих заряджених залишків із переважними властивостями, що дозволяють уникати небажаних впливів, таких, наприклад, як помилкове спаровування.
Крім того, запропонована антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, зазначена в даному описі, антиген клітини-мішені якої вибирають з групи, яка включає фібробласт-активуючий білок (БАР), асоційований з меланомою хондроітинсульфат- протеоглікан (МС5Р), рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕК), карциноембріональний антиген (СЕА), СО19, С020 і 2033.
Антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, антигеном клітини- мішені яких є ЕАР
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, антигеном клітини-мішені якої є фібробласт-активуючий білок (ЕАР).
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить МН- домен, що містить (І) СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 7 або 5ЕО
ІО МО: 100, (І) СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 8 або 5ЕО ІЮ МО: 101, ї «) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 9 або 5ЕО ІЮО МО: 102, і
МІ -домен, що містить (ІМ) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 10 або
ЗЕО ІЮ МО: 103, (М) СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 11 або 5ЕО
ІО МО: 104, і (МІ) СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 12 або 5ЕО І
МО: 105.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить МН- домен, що містить (І) СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 7, (ІІ) СОВ-
Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 8, ії (ІП) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 9, і Мі -домен, що містить (ІМ) СОВ-Ї1, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО: 10, (М) СОВ-І2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 11, ї (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ
Коо) МО: 12.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить МН- домен, що містить (ІМ СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 100, (І)
СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 101, ї (ПІ) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 102, і МІ -домен, що містить (ІМ) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО: 103, (М) СОВ-І2, який містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 104, ї (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ
МО: 105.
В іншому об'єкті винаходу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 9595, 9695, 9795, 9895, 9995 або 10095 ідентична амінокислотній послідовності ФБЕО ІЮО МО: 16, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 9595, 9695, 9795, 9895, 9995 або 10095 ідентична амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮО МО: 17.
В іншому об'єкті винаходу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 9595, 9695, 9795, 9895, 9995 або 10095 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО 10 МО: 106, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 9595, 9695, 9795, 9895, 9995 або 10095
БО ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮО МО: 107.
В одному з об'єктів винаходу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ
МО: 16, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО: 17, або варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО
ІО МО: 106, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 107.
В конкретному об'єкті винаходу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з
ЕАР, містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 16, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність бо ЗЕБЕО ІО МО: 17. В іншому конкретному об'єкті винаходу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕГАР, містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 106, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 107. В конкретному об'єкті винаходу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з БАР, містить МН-домен, який складається з амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮО МО: 106, і МІ -домен, який складається з амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО: 107.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована у винаході, яка містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, який містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 16, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІО МО: 17, і (б) перший і другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 5, 5ЕО І МО: 97,
ЗЕБЕО І МО: 98 і 5ЕБО ІО МО: 99, і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 96, 5ЕО ІО МО: З і
ЗЕО ІЮО МО: 4.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована у винаході, яка містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, який містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 16, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІО МО: 17, і (б) перший і другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО: 97, а другий поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 96.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, шо містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована у винаході, яка містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, який містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО: 106, і варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 107, і (б) перший і другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 5, 5ЕО І МО: 97,
ЗЕБЕО І МО: 98 і 5ЕБО ІО МО: 99, і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 96, 5ЕО ІО МО: З і
ЗЕО ІЮО МО: 4.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована у винаході, яка містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, який містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО: 106, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 107, і (б) перший і другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО: 97, а другий поліпептид містить амінокислотну
БО послідовність 5БЕО ІО МО: 96
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована у винаході, яка містить перший важкий ланцюг і перший легкий ланцюг, які обидва утворюють молекулу Раб, якащо має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, другий важкий ланцюг, що містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, і злиті на С- кінці за допомогою другого пептидного лінкера з СНІ-доменом, і другий легкий ланцюг, що містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з Сі-доменом, і де бо антигензв'язуюча молекула містить
(І) перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕБЕО ІО МО: 16, і перший легкий ланцюг, який містить Мі, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 17, або перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕБЕО ІЮ МО: 106, і перший легкий ланцюг, який містить Мі, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 107, (І) другий важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 14, БЕО ІЮО МО: 108, 5ЕО ІО МО: 111 ї БЕО ІО МО: 113, і (І) другий легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО: 15, 5ЕО ІЮО МО: 109, 5ЕО ІЮ МО: 110, 5ЕО І МО: 112 ії 5ЕО ІЮ МО: 114.
Наступним конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, і де антигензв'язуюча молекула містить перший важкий ланцюг і перший легкий ланцюг, які обидва утворюють молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, другий важкий ланцюг, що містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злиті на С-кінці за допомогою другого пептидного лінкера з СІ -доменом, і другий легкий ланцюг, що містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з СНі-доменом, і де антигензв'язуюча молекула містить (І) перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕБЕО ІО МО: 16, і перший легкий ланцюг, який містить МІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 17, або перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО: 106, і перший легкий ланцюг, який містить МІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 107, (І) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮ МО: 115, БЕО ІО МО: 117, 5ЕО ІЮО МО: 119 ї 5ЕО ІО МО: 173, і
Зо (І) другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮ МО: 116, БЕО ІО МО: 118, 5ЕО ІЮО МО: 120 ї 5ЕО І МО: 174.
Більш конкретно, запропонована антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) перший важкий ланцюг і перший легкий ланцюг, які обидва утворюють молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, в якій перший важкий ланцюг містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 106, і перший легкий ланцюг містить МІ -домен, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 107, і (б) другий важкий ланцюг, що містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злиті на його С-кінці за допомогою другого пептидного лінкера з Сі -доменом, і другий легкий ланцюг, що містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з СН1І-доменом, при цьому другий важкий ланцюг містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 119 або 5ЕО І МО: 173 і другий легкий ланцюг містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮО МО: 120 або 5ЕО ІО МО: 174. Зокрема, другий важкий ланцюг містить амінокислотну послідовність ЕС ІО МО: 119 і другий легкий ланцюг містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 120.
Крім того, у винаході запропонована антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (б) перший і другий поліпептиди, які зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить СНЗ-домен і другий поліпептид містить СНЗ-домен відповідно, і в якій перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним і з
С-кінцем СНЗ-домену за допомогою пептидного лінкера, і в якій другий поліпептид містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, який з'єднаний за допомогою пептидного лінкера з С-кінцем СНЗ-домену зазначеного поліпептиду.
В конкретному об'єкті винаходу зазначена антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, містить два фрагмента, які мають здатність специфічно бо зв'язуватись з антигеном клітини-мішені.
Більш конкретно, зазначена антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, містить () перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 121, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 122, і два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 19, або (І) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 123, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 124, і два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 125, або (І) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 126, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 127, і два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 125.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМ, яка вибрана з групи, що включає: а) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 18, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 19, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 14, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 15; б) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 18, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 19, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 115, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 116; в) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 135, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 136, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО: 108, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО: 109; г) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 18, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 19, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 139, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 140; д) молекулу, яка містить два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО 10
МО: 19, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 121, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 122; е) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 18, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 19, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 108, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 110; ж) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО: 145, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 19, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 115, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 116; 3) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 18, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 19, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 148, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕ ІЮ МО: 149; ї) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 18, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 19, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЖЕО ІО МО: 111, ії другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 112; і к) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 18, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 19, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 113, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕ ІЮО МО: 114.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що вибрана з групи, яка включає: а) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 164, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 125, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО: 115, їі другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮО МО: 116; б) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 60 БЕО ІО МО: 164, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:
125, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО: 117, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО: 118; в) молекулу, що містить два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ
МО: 125, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 123, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 124; г) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 164, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 125, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО: 119, їі другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 120; д) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 164, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 125, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮО МО: 173, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 174; і е) молекулу, що містить два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ
МО: 125, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 126, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 127.
Зокрема, у винаході запропонована антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 164, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 125, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 119, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО: 120.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій представником сімейства лігандів ТМЕ є ОХ401Ї і антигеном клітини-мішені є фібробласт-активуючий білок (БАР), і фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з
ЕАР, містить МН-домен, що містить (І) СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність ФЕО
ІО МО: 7 або 5ЕО ІО МО: 100, (ІІ) СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 8 або 5ЕО ІО МО: 101, ї (ПІ) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 9 або 5ЕО І МО: 102, ії Мі-домен, що містить (ІМ) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 10 або 5ЕО ІЮ МО: 103, (М) СОВ-І2, який містить амінокислотну
Ко) послідовність 5ЕО ІЮ МО: 11 або 5ЕО ІО МО: 104, ї (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 12 або 5ЕО ІО МО: 105.
В конкретному об'єкті винаходу антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, містить (І) перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО: 16, і перший легкий ланцюг, який містить Мі-домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 17, або перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 106, і перший легкий ланцюг, який містить МІ -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 107, (І) другий важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: З55, і (І) другий важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 356.
Антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, антигеном клітини- мішені яких є СО19
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, антигеном клітини-мішені якої є СО19.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з СО19, містить МН- домен, що містить (І) СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 195 або
ЗЕО ІЮ МО: 252, (ІІ) СОВ-НаІ, який містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 196 або 5ЕО
ІО МО: 253, і (І) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність зБЕО ІЮ МО: 197 або 5ЕО І
МО: 254, і МІ -домен, що містить (ІМ) СОВ-І 1, який містить амінокислотну послідовність БЕО І
МО: 198 або 5ЕО ІО МО: 249, (М) СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 199 або 5ЕО ІЮО МО: 250, і (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 200 або 5ЕО ІЮ МО: 251.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована у винаході, в якій Фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, являє собою молекулу ЕРар, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СО19 і містить МН-домен, що містить (І) СОВ-НІ, який містить 60 амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО: 195, (І) СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 196, і (ПІ) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ
МО: 197, і МІ -домен, що містить (ІМ) СОВ-І 1, який містить амінокислотну послідовність БЕО І
МО: 198, (М) СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 199, і (МІ) СОВ-1 3, який містить амінокислотну послідовність БЕ ІО МО: 200.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована у винаході, в якій Фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, являє собою молекулу ЕРар, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СО19 і містить МН-домен, що містить (І) СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО: 252, (І) СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 253, і (ПІ) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ
МО: 254, і МІ -домен, що містить (ІМ) СОВ-І 1, який містить амінокислотну послідовність БЕО І
МО: 249, (М) СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 250, і (МІ) СОВ-1 3, який містить амінокислотну послідовність МО: 251.
В іншому об'єкті винаходу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з СО19, містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 9595, 9695, 9795, 9895, 9995 або 10095 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО 10 МО: 201, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 9595, 9695, 9795, 9895, 9995 або 10095 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮО МО: 202.
В іншому об'єкті винаходу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з СО19, містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 9595, 9695, 9795, 9895, 9995 або 10095 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО 10 МО: 357, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 9595, 9695, 9795, 9895, 9995 або 10095 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮО МО: 358.
В іншому об'єкті винаходу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з СО19, містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ
МО: 201, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО
ІЮ МО: 202, або фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з СО19, містить
Зо варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 357, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 358.
Іншим об'єктом винаходу є запропонована у винаході антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, який містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО: 201, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 202, і (б) перший і другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 5, 5ЕО І МО: 97,
ЗЕБЕО І МО: 98 і 5ЕБО ІО МО: 99, і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 96, 5ЕО ІО МО: З і
ЗЕО ІЮО МО: 4.
Іншим об'єктом винаходу є запропонована у винаході антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, який містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО: 201, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить
БО амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 202, і (б) перший і другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 97, і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 96.
Іншим об'єктом винаходу є запропонована у винаході антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, що містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО: 357, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить 60 амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 358, і
(б) перший і другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 5, 5ЕО І МО: 97,
ЗЕБЕО І МО: 98 і 5ЕБО ІО МО: 99, і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 96, 5ЕО ІО МО: З і
ЗЕО ІЮО МО: 4.
Конкретним об'єктом винаходу є запропонована у винаході антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, який містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО: 357, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 358, і (б) перший і другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 97 і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність 5БЕО ІО МО: 96
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антигензв'язуюча молекула містить перший важкий ланцюг і перший легкий ланцюг, які обидва утворюють молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, другий важкий ланцюг, що містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагментів, з'єднаних один з одним за допомогою першого пептидного лінкера злитих на С- кінці за допомогою другого пептидного лінкера з СНІ-доменом, і другий легкий ланцюг, що містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, який злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з Сі -доменом, і де антигензв'язуюча молекула містить (І) перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО: 201, і перший легкий ланцюг, що містить Мі -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 202, або
Зо перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність ФЕО
ІЮ МО: 357, і перший легкий ланцюг, що містить Мі-домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 358, (І) другий важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 14, БЕО ІЮО МО: 108, 5ЕО ІО МО: 111 ї БЕО ІО МО: 113, і (І) другий легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО: 15, 5ЕО ІЮ МО: 109, 5ЕО ІО МО: 110, 5ЕО І МО: 112 ї 5ЕО ІЮ МО: 114.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антигензв'язуюча молекула містить перший важкий ланцюг і перший легкий ланцюг, які обидва утворюють молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, другий важкий ланцюг, що містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагментів, з'єднаних один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злитих на С- кінці за допомогою другого пептидного лінкера з Сі-доменом, і другий легкий ланцюг, що містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, який злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з СНІ1-доменом, ії де антигензв'язуюча молекула містить (І) перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО: 201, і перший легкий ланцюг, що містить Мі -домен, що містить амінокислотну
БО послідовність 5ЕО ІО МО: 202, або перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 357, і перший легкий ланцюг, який містить МІ -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 358, (І) другий важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮ МО: 115, БЕО ІО МО: 117, 5ЕО ІЮО МО: 119 ї 5ЕО ІО МО: 173, і (І) другий легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮ МО: 116, БЕО ІО МО: 118, 5ЕО ІЮО МО: 120 ї 5ЕО І МО: 174.
Крім того, винахід відноситься до антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить бо (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, (б) перший і другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить СНЗ-домен і другий поліпептид містить СНЗ-домен відповідно, і в якій перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним і з
С-кінцем СНЗ-домену за допомогою пептидного лінкера, і в якій другий поліпептид містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем СНЗ-домену зазначеного поліпептиду.
В конкретному об'єкті винаходу зазначена антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, містить два фрагмента, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини мішені.
Більш конкретно, зазначена антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, містить () перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність «ЕО ІО МО: 209, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 210, і два легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 206, або (І) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 213, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 214, і два легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 206, або (І) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 309, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 310, і два легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 279, або (ІМ) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 313, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 314, і два легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність 279.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що вибрана з групи, яка включає: а) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 205, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:
Зо 206, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО: 115, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮО МО: 116; б) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 205, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 206, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО: 117, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО: 118; в) молекулу, яка містить два легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність ФЕО 10
МО: 206, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 209, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 210; г) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
БЕО ІО МО: 205, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО І МО: 206, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО: 119, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО: 120; д) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 205, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 206, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮО МО: 173, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 174; і е) молекулу, яка містить два легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ
МО: 206, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 213, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 214.
Зокрема, у винаході запропонована антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 205, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО: 206, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 119, другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 120.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що вибрана з групи, яка включає: а) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 357, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 358, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 115, і другий 60 легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність МО: 116;
б) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 357, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 358, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 117, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО: 118; в) молекулу, яка містить два легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність ФЕО 10
МО: 358, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 209, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 210; г) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 357, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 358, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 119, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІО МО: 120; д) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 357, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 358, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 173, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 174; і е) молекулу, яка містить два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ
МО: 358, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 213, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 214.
Зокрема, у винаході запропонована антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 357, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО: 358, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 119, другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО: 120.
Антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, антигеном клітини- мішені яких є СЕА
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, антигеном клітини-мішені якої є СЕА.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з СЕА, містить МН-
Ко) домен, що містить (ІМ СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 321, (Ії)
СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 322, і (ПІ) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 323, і МІ -домен, що містить (ІМ) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 324, (М) СОВ-І2, який містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 325, ї (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ
МО: 326.
Конкретним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, в якій фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини- мішені, являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СЕА і містить
МН-домен, що містить (І) СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 321, (ІІ)
СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 322, і (ПІ) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 323, і МІ -домен, що містить (ІМ) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 324, (М) СОВ-І2, який містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 325, ї (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ
МО: 326.
В іншому об'єкті винаходу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з СЕА, містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 9595, 9695, 9795, 9895, 9995 або 10095 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО 10 МО: 327, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 9595, 9695, 9795, 9895, 9995 або 100905
БО ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮО МО: 328.
В іншому об'єкті винаходу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з СЕА, містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І
МО: 327, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО
ІО МО: 328.
В іншому об'єкті винаходу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з СЕА, містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 9595, 9695, 9795, 9895, 9995 або 10095 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО 10 МО: 329, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 9595, 9695, 9795, 9895, 9995 або 100905 60 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮО МО: 330.
В одному з об'єктів винаходу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з СЕА, містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І
МО: 329, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО
ІО МО: 330.
Іншим об'єктом винаходу є запропонована у винаході антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись антигеном клітини- мішені, який містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО: 329, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 330, і (б) перший і другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 5, 5ЕО І МО: 97,
ЗЕБЕО І МО: 98 і 5ЕБО ІО МО: 99, і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 96, 5ЕО ІО МО: З і
ЗЕО ІЮО МО: 4.
Іншим об'єктом винаходу є запропонована у винаході антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись антигеном клітини- мішені, який містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО: 329, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 330, і (б) перший і другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 97, і тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 96.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антигензв'язуюча молекула містить перший важкий ланцюг і перший легкий ланцюг, які обидва утворюють молекулу Раб, яка
Зо має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, другий важкий ланцюг, що містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагментів, з'єднаних один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злиті на С- кінці за допомогою другого пептидного лінкера з СНІ-доменом, і другий легкий ланцюг, що містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, який на злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з Сі -доменом, і де антигензв'язуюча молекула містить (І) перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО: 329, і перший легкий ланцюг, що містить Мі -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 330, (І) другий важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 14, БЕО ІЮО МО: 108, 5ЕО ІО МО: 111 ї БЕО ІО МО: 113, і (І) другий легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО: 15, 5ЕО ІЮ МО: 109, 5ЕО ІО МО: 110, 5ЕО І МО: 112 ї 5ЕО ІЮ МО: 114.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де антигензв'язуюча молекула містить перший важкий ланцюг і перший легкий ланцюг, які обидва утворюють молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, другий важкий ланцюг, що містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагментів, з'єднаних один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злитих на його С-кінці за допомогою другого пептидного лінкера з Сі -доменом, і другий легкий ланцюг, що містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, який злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з СНІ-доменом, і де антигензв'язуюча молекула містить (І) перший важкий ланцюг, який містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО: 329, і перший легкий ланцюг, що містить Мі -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 330, (І) другий важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮ МО: 115, БЕО ІО МО: 117, 5ЕО ІЮО МО: 119 ї 5ЕО ІО МО: 173, і бо (І) другий легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ФЕО ІЮ МО: 116, БЕО ІО МО: 118, 5ЕО ІЮО МО: 120 ї 5ЕО І МО: 174.
Крім того, винахід відноситься до антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, (б) перший і другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить СНЗ-домен і другий поліпептид містить СНЗ-домен відповідно, і в якій перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, які з'єднані один з одним і з
С-кінцем СНЗ-домену за допомогою пептидного лінкера, і в якій другий поліпептид містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент, з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем СНЗ-домену зазначеного поліпептиду.
В конкретному об'єкті винаходу зазначена антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, містить два фрагмента, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини мішені.
Більш конкретно, зазначена антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, містить () перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 337, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 338, і два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 334, або (І) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 341, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 342, і два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 334.
Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що вибрана з групи, яка включає: а) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 333, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 334, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 115, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 116;
Зо б) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 333, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 334, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 117, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО: 118; в) молекулу, яка містить два легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність ФЕО 10
МО: 334, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 337, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 338; г) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 333, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФБЕО ІЮ МО: 334, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 119, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО: 120; д) молекулу, яка містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 333, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 334, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 173, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 174; і е) молекулу, яка містить два легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ
МО: 334, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 341, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 342.
Зокрема, у винаході запропонована антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну
БО послідовність ФЕО ІЮ МО: 333, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО: 334, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 119, другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 120.
Полінуклеотиди
Винахід відноситься також до виділених полінуклеотидів, які кодують антигензв'язуючу молекулу, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, представлену в даному описі, або її фрагмент.
Виділені полінуклеотиди, що кодують антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновані у винаході, можна експресувати у вигляді індивідуального полінуклеотиду, який кодує повну антигензв'язуючу молекулу, або у вигляді декількох бо (наприклад, двох або більшої кількості) полінуклеотидів, що спільно експресуються.
Поліпептиди, які кодуються спільно з полінуклеотидами, які експресуються, можна з'єднувати, наприклад, через дисульфідні зв'язки або іншими шляхами з утворенням функціональної антигензв'язуючої молекули. Наприклад, частина імуноглобуліну, що являє собою легкий ланцюг, може кодуватися полінуклеотидом, відмінним від полінуклеотиду, що кодує частину, що являє собою важкий ланцюг імуноглобуліну. При спільній експресії поліпептиди важкого ланцюга повинні зв'язуватись з поліпептидами легкого ланцюга з утворенням імуноглобуліну.
В деяких об'єктах винаходу виділений полінуклеотид кодує описану повну антигензв'язуючу молекулу, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновану у винаході. Зокрема, виділений полінуклеотид кодує поліпептид, який міститься в описаній антигензв'язуючій молекулі, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованої у винаході.
Одним з об'єктів даного винаходу є виділений полінуклеотид, який кодує антигензв'язуючу молекулу, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, де полінуклеотид містить (а) послідовність, яка кодує фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, (б) послідовність, яка кодує поліпептид, який містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або два їх фрагмента, які з'єднані один з одним за допомогою пептидного лінкера, і (в) послідовність, яка кодує поліпептид, який містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент.
Іншим об'єктом винаходу є виділений полінуклеотид, який кодує антигензв'язуючу молекулу, що містить тримерний ліганд для 4-188, де полінуклеотид містить (а) послідовність, яка кодує фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, (б) послідовність, яка кодує поліпептид, який містить два ектодомени 4-18ВІ або два його фрагменти, які з'єднані один з одним за допомогою пептидного лінкера, і (в) послідовність, яка кодує поліпептид, який містить один ектодомен 4-1ВВІ. або його фрагмент.
Іншим об'єктом винаходу є виділений полінуклеотид, який містить послідовність, яка кодує поліпептид, який містить два фрагмента 4-1ВВЇ, які містять амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 9095, 9595, 9895 або 10095 амінокислотній послідовності, представленій в 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІО МО: 2, 5ЕО ІО МО: 3, 5ЕО ІО МО: 4 або 5ЕО ІЮО МО: 96, і полінуклеотид, який містить послідовність, яка кодує поліпептид, який містить один фрагмент 4- 1ВВГ,, який містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 9095, 95905,
Ко) 9895 або 10095 амінокислотній послідовності, представленій в ЗЕО ІЮ МО: 1, 5БЕО ІЮО МО: 2, 5ЕО
ІО МО: З, 5ЕО І МО: 4 або 5ЕО ІО МО: 96.
Крім того, запропонований виділений полінуклеотид, який кодує антигензв'язуючу молекулу, що містить тримерний ліганд для ОХ40, де полінуклеотид містить (а) послідовність, яка кодує фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, (б) послідовність, яка кодує поліпептид, який містить два ектодомени ОХ40Ї або два його фрагменти, які з'єднані один з одним за допомогою пептидного лінкера, і (в) послідовність, яка кодує поліпептид, який містить один ектодомен ОХ40Ї або його фрагмент.
Іншим об'єктом винаходу є виділений полінуклеотид, який містить послідовність, яка кодує поліпептид, який містить два фрагмента 4-1ВВЇ, які містять амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 9095, 9595, 9895 або 10095 амінокислотній послідовності, представленій в 5ХЕО ІЮО МО: 53 або 5ЕО ІО МО: 54, і полінуклеотид, який містить послідовність, яка кодує поліпептид, який містить один фрагмент 4-188ВЇ, який містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 9095, 9595, 9895 або 10095 амінокислотній послідовності, представленій в ХЕО ІО МО: 53 або 5ЕО ІЮО МО: 54.
Іншими об'єктами винаходу є полінуклеотиди, які містять послідовність, яка принаймні приблизно на 9095, 9595, 9895 або 10095 ідентична конкретним кДНК-послідовностям, зазначеним в даному описі. Конкретним об'єктом винаходу є полінуклеотид, який містить послідовність, яка ідентична одній з конкретних кКДНК-послідовностей, зазначених в даному описі.
В інших об'єктах винаходу молекула нуклеїнової кислоти містить або складається з нуклеотидної послідовності, яка кодує амінокислотну послідовність, представлену в одній з ФЕО
ІО МО: 5, 6, 97, 98, 99, 183, 184 або 185. В іншому об'єкті винаходу молекула нуклеїнової кислоти містить або складається з нуклеотидної послідовності, яка кодує амінокислотну послідовність, представлену в одній з 5ЕО ІЮ МО: 14, 15, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115,116, 117, 118, 119, 120, 173 або 174.
В наступних об'єктах винаходу молекула нуклеїнової кислоти містить або складається з нуклеотидної послідовності, вибраної з групи, яка складається з ФЕО ІО МО: 66, 67, 68, 69, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 137, 138, 141, 142, 143, 144, 146, 147, 150, 151, 152, 153, 162, 163, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 175, 176, 177, 178, 203, 204, 207, 208, 211, 212, 215, 216, 273, бо 274, 277, 278, 281, 282, 285, 286, 289, 290, 293, 294, 297, 298, 301, 302, 305, 307, 308, 311, 312,
315, 316, 331, 332, 335, 336, 339, 340, 343, 344, 347, 348, 353 або 354.
В деяких об'єктах винаходу полінуклеотид або нуклеїнова кислота являє собою ДНК. В інших варіантах здійснення винаходу полінуклеотид, запропонований в даному винаході, являє собою РНК, наприклад, у формі матричної РНК (мРНК). РНК, запропонована в даному винаході, може бути одноланцюговою або дволанцюговою.
Методи рекомбінації
Антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновані у винаході, можна одержувати, наприклад, шляхом твердофазного пептидного синтезу (наприклад, твердофазний синтез Мерріфілда) або методом рекомбінації. Для рекомбінантного одержання один або декілька полінуклеотидів, що кодують антигензв'язуючу молекулу, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, або її поліпептидні фрагменти, наприклад, описані вище, виділяють і вбудовують в один або декілька векторів для подальшого клонування і/або експресії в клітині-хазяїні. Зазначений полінуклеотид можна легко виділяти і секвенувати за допомогою загальноприйнятих процедур. Одним з об'єктів винаходу є вектор, переважно експресійний вектор, що містить один або декілька полінуклеотидів, запропонованих у винаході.
Методи, добре відомі спеціалістам в даній галузі, можна застосовувати для конструювання експресійних векторів, що містять кодуючу послідовність антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ (фрагмента), поряд з прийнятними контролюючими транскрипцію/трансляцію сигналами. Ці методи включають технології рекомбінантної ДНК іп міго, методи синтезу і рекомбінації/генетичної рекомбінації іп мімо (див., наприклад, методи, описані у Мапіаїф5 та ін., Мапіаїйі5 та ін., Моїесціаг Сіопіпуд А Гарогаїогу Мапаиаї, вид-во Соїа 5ргіпд
Нагбог ІГарогаїогу, МУ, 1989; та А!йЄзибеї та ін., Сигтепі РгоїосоЇ5 іп Моїесшіаг Віоіоду, вид-во
Стеепе Рибіїєпіпу Авзосіаїе5 апа М/іПеу Іпіегзсіепсе, МУ, 1989). Експресійний вектор може являти собою частину плазміди, вірусу або може являти собою фрагмент нуклеїнової кислоти.
Експресійний вектор включає касету експресії в якій ополінуклеотид, який кодує антигензв'язуючу молекулу, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, або її поліпептидні фрагменти (тобто кодуючу область), клонують із забезпеченням функціонального зв'язку з промотором і/або іншими елементами, які контролюють транскрипцію або трансляцію. В контексті даного опису «кодуюча область» являє собою частину нуклеїнової кислоти, яка складається з кодонів, які транслюються в амінокислоти. Хоча «стоп-кодон» (ТАС, ТОА або
ТАА) не транслюється в амінокислоту, він, в разі його присутності, може розглядатися як частина кодуючої області, проте будь-які фланкуючі послідовності, наприклад, промотори, сайти зв'язування рибосом, термінатори транскрипції, інтрони, 5'- ії 3'-нетрансльовані області і т.п., не є частиною кодуючої області. Дві або більша кількість кодуюючих областей може бути присутньою в індивідуальній полінуклеотидній конструкції, наприклад, індивідуальному векторі, або в окремих полінуклеотидних конструкціях, наприклад, окремих (різних) векторах. Крім того, будь-який вектор може містити одну кодуючу область або може містити дві або більшу кількість кодуюючих областей, наприклад, вектор, запропонований в даному винаході, може кодувати один або декілька поліпептидів, які пост- або котранляційно поділяються на кінцеві білки за допомогою протеолітичного розщеплення. Крім того, вектор, полінуклеотид або нуклеїнова кислота, запропонований/запропонована у винаході, може кодувати гетерологічні кодуючі області, або злиті, або не злиті з полінуклеотидом, який кодує антигензв'язуючу молекулу, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, або її поліпептидні фрагменти, запропоновані у винаході , або їх варіанти або похідні. Гетерологічні кодуюючі області включають (але, не обмежуючись тільки ними) спеціалізовані елементи або мотиви, такі як секреторний сигнальний пептид або гетерологічний функціональний домен. Функціональний зв'язок має місце, коли кодуюча область генного продукту, наприклад поліпептиду, асоційована з однією або декількома регуляторними послідовностями таким чином, щоб експресія генного продукту перебувала під впливом або контролем регуляторної (их) послідовності (ей). Два ДНК- фрагменти (таких як кодуюча область поліпептиду і асоційований з нею промотор) є «Функціонально зв'язаними», якщо індукція промоторной функції призводить до транскрипції
МРАК, що кодує необхідний генний продукт, і якщо природа зв'язку між двома ДНК- фрагментами не впливає на здатність послідовностей, які регулюють експресію, направляти експресію генного продукту, або не впливає на здатність ДНК-матриці до транскрипції. Таким чином, промоторна область повинна бути функціонально пов'язана з нуклеїновою кислотою, що кодує поліпептид, якщо промотор має здатність здійснювати транскрипцію нуклеїнової кислоти.
Промотор може являти собою специфічний для клітини промотор, який забезпечує значну транскрипцію ДНК тільки в попередньо відібраних клітинах. Інші елементи контролюючі транскрипцію, крім промотора, наприклад, енхансери, оператори, репресори і сигнали бо термінації транскрипції, можна функціонально пов'язувати з полінуклеотидом для забезпечення специфічної для клітини транскрипції.
Прийнятні промотори та інші контролюючі транскрипцію області представлені в даному описі. Спеціалістам в даній галузі відоме широке розмаїття контролюючих транскрипцію областей. Вони включають (але, не обмежуючись тільки ними) контролюючі транскрипцію області, які функціонують в клітинах хребетних тварин, такі як (але, не обмежуючись тільки ними) сегменти промоторів та енхансером з цитомегаловірусів (наприклад, негайно-ранній промотор в поєднанні з Інтроном-А ), мавпячого вірусу 40 (наприклад, ранній промотор) і ретровірусів (таких як вірус саркоми Рауса). Інші контролюючі транскрипцію області включають області, виведені з генів хребетних тварин, таких як ген актину, білка теплового шоку, бичачого гормону росту і кролячого р-глобіну, а також інші послідовності, які можуть контролювати експресію генів в клітині. Додаткові прийнятні контролюючі транскрипцію області включають тканеспецифічні промотори та енхансери, а також індуцибельні промотори (наприклад, промотори, індуковані тетрациклінами). Аналогічно до цього, звичайним спеціалістам в даній галузі відоме широке розмаїття контролюючих трансляцію елементів. Вони включають (але, не обмежуючись тільки ними) сайти зв'язування рибосом, кодони ініціації трансляції та термінуючі кодони і елементи, виведені з вірусних систем (зокрема внутрішній сайт зв'язування (посадки) рибосом або ІКЕ5, що позначають також як СІТЕ-послідовність). Касета експресії може включати також інші характерні структури, такі як сайт ініціації реплікації і/або інтегровані в хромосому елементи, такі як довгі кінцеві повтори (ІТК) ретровірусів, або інвертовані кінцеві повтори (ІТК) аденоасоційованого вірусу (ААМ).
Кодуюючі області полінуклеотиду та нуклеїнової кислоти, запропоновані в даному винаході, можуть бути асоційовані з додатковими кодуюючими областями, що кодують секреторні або сигнальні пептиди, які направляють секрецію поліпептиду, що кодується полінуклеотидом, запропонованим в даному винаході. Наприклад, якщо потрібна секреція антигензв'язуючої молекули, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, або її поліпептидних фрагментів, то
ДНК, що кодує сигнальну послідовність, можна поміщати проти ходу транскрипції відносно нуклеїнової кислоти, що кодує антигензв'язуючу молекулу, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, або її поліпептидні фрагменти. Відповідно до гіпотези, що стосується сигналів, білки, які секретуються клітинами ссавців, мають сигнальний пептид або секреторну лідерну
Зо послідовність, який/яка відщеплюється від зрілого білка після ініціації експорту зростаючого білкового ланцюга через шорсткий ендоплазматичний ретикулум. Звичайним спеціалістам в даній галузі має бути очевидно, що поліпептиди, які секретуються клітинами хребетних тварин, як правило, мають сигнальний пептид, злитий з М-кінцем поліпептиду, який відщеплюється від трансльованого поліпептиду з утворенням секретованої або «зрілої» форми поліпептиду. У деяких варіантах здійснення винаходу використовують нативний сигнальний пептид, наприклад, сигнальний пептид важкого ланцюга або легкого ланцюга імуноглобуліну або функціональну похідну зазначеної послідовності, що зберігає здатність забезпечувати секрецію поліпептиду, функціонально пов'язаного 3 ним. Альтернативно до цього, можна застосовувати гетерологічний сигнальний пептид ссавців або його функціональну похідну. Наприклад, лідерну послідовність дикого типу можна замінювати на лідерну послідовність людського тканинного активатора плазміногену (ТРА) або мишачої р-глюкуронідази.
ДНК, яка кодує коротку білкову послідовність, що можна застосовувати для полегшення подальшого очищення (наприклад, гістидинову мітку), або призначену для мічення злитого білка, можна включати всередину або на кінці полінуклеотида, що кодує антигензв'язуючу молекулу, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованої у винаході, або її поліпептидні фрагменти.
Додатковим об'єктом винаходу є клітина-хазяїн, що містить один або декілька полінуклеотидів, запропонованих у винаході. Деякими варіантами здійснення винаходу є клітина-хазяїн, що містить один або декілька векторів, запропонованих у винаході.
Полінуклеотиди і вектори можуть мати будь-які особливості, індивідуально або в поєднанні, зазначеними в цьому описі по відношенню до полінуклеотидів і векторів відповідно. В одному з об'єктів винаходу клітина-хазяїн містить (наприклад, трансформована або трансфектована) вектор, що містить полінуклеотид, який кодує антигензв'язуючу молекулу, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновану у винаході (або її частину). В контексті даного опису поняття «клітина-хазяїн» відноситься до будь-якого типу клітинної системи, яку можна конструювати для одержання злитих білків, запропонованих у винаході, або їх фрагментів.
Клітини-хазяїни, придатні для реплікації і для підтримки експресії антигензв'язуючих молекул, добре відомі в даній галузі. Такі клітини можна трансфектувати або трансдукувати відповідним чином конкретним експресійним вектором і можна вирощувати більшу кількість клітин, які бо містять вектор, з метою внесення до ферментерів для великомасштабних процесів одержання антигензв'язуючої молекули в достатніх для клінічних застосувань кількостях. Прийнятними клітинами-хазяїнами є прокаріотичні мікроорганізми, такі як Е. сої, або різні еукаріотичні клітини, такі як клітини яєчника китайського хом'ячка (СНО), клітини комах і т.п. Наприклад, поліпептиди можна одержувати в бактеріях, зокрема, коли відсутня потреба в глікозилюванні. Після експресії поліпептид можна виділяти з пасти бактеріальних клітин в розчинну фракцію і можна додатково очищати. Крім прокаріотів, як хазяїни для клонування або експресії векторів, які кодують поліпептид, можна використовувати еукаріотичні мікроорганізми, такі як нитчасті гриби або дріжджі, включаючи штами грибів і дріжджів, шляхи глікозилювання яких були «гуманізовані», що дозволяє одержувати поліпептид з частково або повністю людською схемою глікозилювання(див. Сегпагов55, Маї. Віоїесп. 22, 2004, сс. 1409-1414 і | та ін., Маї. Віоївесн. 24, 2006, сс. 210-215).
Клітини-хазяїни, які можна використовувати для експресії (глікозильованих) поліпептидів, одержують також з багатоклітинних організмів (безхребетних і хребетних тварин). Прикладами клітин безхребетних є клітини комах, а також можна застосовувати клітини рослин. Були виявлені численні бакуловірусні штами і відповідні придатні для них як хазяїни клітини комах, перш за все для трансфекції клітин зродоріега Ігидірегда. Як хазяїни можна застосовувати також культури рослинних клітин (див., наприклад, ОЗ МоМо 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 та 6417429 (опис технології РІ АМТІВООСІЕ5'"М для одержання антитіл в трансгенних рослинах). Як хазяїни можна застосовувати також клітини хребетних тварин. Наприклад, можна використовувати клітинні лінії ссавців, які адаптовані до зростання в суспензії. Іншими прикладами прийнятних ліній клітин-хазяїнів ссавців є лінія клітин нирки мавпи СМІ1, трансформована за допомогою 5М40 (СО5-7); лінія клітин нирки ембріона людини (293 або клітини лінії 293, субклонування з метою вирощування в суспензійній культурі, сгапат та ін., у.
Сеп. Мігої!., 36, 1977, с. 59); клітини нирки дитинчати хом'яка (ВНК); клітини Сертолі миші (ТМ4- клітини, описані, наприклад, у Маїпег, Віої. Кергод., 23, 1980, сс. 243-251); клітини нирки мавпи (СМ1); клітини нирки африканської зеленої мавпи (МЕКО-76,); клітини карциноми шийки матки людини (НЕГА); клітини нирки собаки (МОСК); клітини печінки бичачого щура (ВКІ. ЗА); клітини легенілюдини (М/138); клітини печінки людини (Нер 02); клітини пухлини молочної залози миші (ММТ 060562); клітини ТКІ, описані, наприклад, у Майїнег та ін., АппаЇ5 М.У. Асад. зсі., 383, 1982,
Зо со. 44-68); клітини МКС 5 і клітини Е54. Іншими цінними лініями клітин-хазяїнів ссавців є клітини яєчника китайського хом'ячка (СНО), включаючи анпіт - СНО-клітини (пацб та ін., Ргос. Май.
Асад. Зсі. ОА, 77, 1980, с. 4216); і клітинні лінії мієломи, такі як МО, МБО, РЗХО63З і 5р2/0. Огляд конкретних ліній клітин-хазяїнів ссавців, які можна застосовувати для виробництва білка, див.,
Наприклад, у Малакі і УМи, в: Меїйпоа5 іп Моїесшаг Віоіоду під ред. В.К.С. Го, вид-во Нитапа
Ргеб55, Тоїомжма, МУ, т. 248, 2003 сс. 255-268. Клітини-хазяїни включають культивовані клітини, наприклад, культивовані клітини ссавців, клітини дріжджів, клітини комах, клітини бактерій і клітини рослин (але не обмежуючись тільки ними), а також клітини, що знаходяться в організмі трансгенної тварини, трансгенної рослини або культивованої рослинної або тваринної тканини.
В одному з варіантів здійснення винаходу клітина-хазяїн являє собою еукаріотичну клітину, переважно клітину ссавця, таку як клітина яєчника китайського хом'ячка (СНО), клітина нирки людського ембріона (НЕК) або лімфоїдна клітина (наприклад, клітина МО, М5О, Зр20). В даній галузі відомі стандартні технології для експресії чужорідних генів в цих системах. Клітини, які експресують поліпептид, що містить або важкий, або легкий ланцюг імуноглобуліну, можна конструювати таким чином, щоб в них відбувалася експресія інших ланцюгів імуноглобуліну, наприклад, таким чином, щоб експресованим продуктом був імуноглобулін, який має як важкий, так і легкий ланцюг.
Одним з об'єктів винаходу є спосіб одержання антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованої у винаході, або її поліпептидних фрагментів, де спосіб полягає в тому, що культивують клітину-хазяїна, яка містить полінуклеотиди, які кодують антигензв'язуючу молекулу, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновану у винаході, або її поліпептидні фрагменти, представлені в даному описі, в умовах, придатних для експресії антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованої у винаході, або її поліпептидних фрагментів, і виділяють антигензв'язуючу молекулу, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновану у винаході, або ее поліпептидні фрагменти з клітини-хазяїна (або культурального середовища клітини-хазяїна).
В антигензв'язуючій молекулі, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованої у винаході, компоненти (принаймні один фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, один поліпептид, який містить два ектодомени представника 60 сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти, і поліпептид, який містить один ектодомен бо зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ або його фрагмент) не зливають генетично один з одним. Поліпептиди створюють так, що їх компоненти (два ектгодомени представника сімейства лігандів ТМЕ або їх фрагменти та інші компоненти, такі як СН або СІ) були злиті один з одним безпосередньо або через лінкерну послідовність. Склад і довжину лінкера можна визначати за допомогою методів, добре відомих в даній галузі, і можна оцінювати ефективність.
Приклади лінкерних послідовностей, розташованих між різними компонентами антигензв'язуючих молекул, представлені в наведених у цьому описі послідовностях. Можна включати також додаткові послідовності для вбудовування сайту розщеплення, якщонеобхідний поділ індивідуальних компонентів злитого білка, наприклад, послідовність, розпізнавану ендопептідазою.
В деяких варіантах здійснення винаходу фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені (наприклад, Раб-фрагменти), що утворюють частину антигензв'язуючої молекули, містять принаймні варіабельну область імуноглобуліну, яка має здатність зв'язуватись з антигеном. Варіабельні області можуть утворювати частину антитіл, які зустрічаються в природніх умовах або не зустрічаються в природніх умовах, або їх фрагментів, або можуть бути одержані з них. Методи одержання поліклональних антитіл і моноклональних антитіл добре відомі в цій галузі (див., наприклад, Нагіом/ і І апе, «Апііїродієв: а І арогаїогу
Мапиаї!», вид-во Соїа 5ргіпд Нагбог І арогаїогу, 1988). Антитіла, які не зустрічаються в природних умовах, можна створювати за допомогою твердофазного пептидного синтезу, можна одержувати за допомогою методів рекомбінації (наприклад, описаних в ОЗ Мо 4186567) або можна одержувати, наприклад, шляхом скринінгу комбінаторних бібліотек, що містять варіабельні області важких ланцюгів і варіабельні області легких ланцюгів (див., наприклад, О5
Мо 5969108 на ім'я МсСайепу).
Відповідно до винаходу можна використовувати імуноглобулін з будь-якого виду тварини.
Прикладами імуноглобулінів, які можна застосовувати відповідно до даного винаходу, є (але, не обмежуючись тільки ними) конструкції, одержані з організму мишей, приматів або людини. Якщо злитий білок призначений для застосування на людині, то можна використовувати химерну форму імуноглобуліну, в якій константні області імуноглобуліну одержують з людського антитіла. Гуманізовану або повністю людську форму імуноглобуліну можна одержувати також за допомогою методів, добре відомих в даній галузі (див., наприклад, Ш5 Мо 5565332 на ім'я
МУММіпіег). Для здійснення гуманізації можна застосовувати різні методи, такі як (але, не обмежуючись тільки ними) (а) трансплантація нелюдських (наприклад, з антитіла-донора) СОМ в людську (наприклад, антитіло-реципієнт) каркасну ділянку і константні області, які зберігають або не зберігають залишки каркасної ділянки, що мають вирішальне значення, (наприклад, залишки, важливі для збереження хорошої антигензв'язуючої афінності або функцій антитіла), (б) трансплантація тільки нелюдських, що визначають специфічність ділянок (ЗОК або а-СОВ; залишки мають вирішальне значення для взаємодії антитіло-антиген) в людські каркасні і константні області, або (в) трансплантація повних нелюдських варіабельних доменів, але їх «маскування» сегментом, який нагадує людський, шляхом заміни поверхневих залишків.
Огляд гуманізованих антитіл і методів їх одержання див., наприклад, у АІтадго і Егапв55оп,
Егопі Віозсі 13, 12008, сс. 1619-1633, і вони описані також, наприклад, у Кіесптапп та ін., Маїиге 332, 1988, сс. 323-329; Оцееп та ін., Ргос Маї! Асай Зсі О5А 86, 1989, сс. 10029-10033; О5, МоМо 5821337, 7527791, 6982321 та 7087409; допез та ін., Маїшге 321, 1986, сс. 522-525; Мотгтізоп та ін., Ргос Маї! Асай 5сі 81, 1984, сс. 6851-6855; Моїтізоп і ОЇ, Адм Іттипої! 44, 1988, сс. 65-92;
Мептоеуеп та ін., Зсіепсе 239, 1988, сс. 1534-1536; Радіап, Моїес Іттип 31 (3), 1994, сс.169-217;
Казптіїгі та ін., МеїШоав 36, 2005, сс. 25-34) (опис трансплантації ЗОВ. (а-СОВ)); Радіап, Мої!
Іттитпої 28, 1991, сс. 489-498 (опис методу зміни поверхні ( «повторне покриття»)); баІгАсдиа та ін., Меїподз 36, 2005, сс. 43-60 (опис «перестановки ЕК») і О5Броицгп та ін., Меїйод» 36, 2005, сс. 61-68, і Кійтка та ін., Вг У Сапсег 83, 2000., сс. 252-260 (опис підходу на основі «цілеспрямованої селекції» для перестановки ЕК). Конкретні імуноглобуліни, запропоновані у винаході, являють собою людські імуноглобуліни. Людські антитіла і людські варіабельні області можна одержувати за допомогою різних методик, відомих в даній галузі. Людські антитіла описані в цілому, у мап бі)К і мап де УміпКеї, Си Оріп Рпаптасої 5, 2001., сс. 368-374 і І опрегоу, Си Оріп
Ітітипої 20, 2008, сс. 450-459. Людські варіабельні області можуть утворювати частину людських моноклональних антитіл або можуть бути одержані з них за допомогою методу гібридом (див., наприклад, Мопосіопа! Апіїбоду Ргодисіоп Тесппідце5 апа Арріїсайоп5, вид-во
Магсеї! Реккег, Іпс., Мем/ МогКк, 1987, сс. 51- 63). Людські антитіла і людські варіабельні області можна одержувати також шляхом введення імуногена трансгенній тварині, яка модифікована таким чином, що може продукувати інтактні людські антитіла або інтактні антитіла з людськими 60 варіабельними областями у відповідь на контрольне зараження антигеном (див., наприклад,
Їопрего, Маї Віоїесп 23, 2005, сс. 1117-1125). Людські антитіла і людські варіабельні області можна створювати також шляхом виділення послідовностей варіабельних областей Еу-клона, відібраних з людських фагових дисплейних бібліотек (див., наприклад, Ноодепроот та ін. В:
Меїподз іп МоїІесціаг ВіоІоду, під ред. О'Вгіеп та ін., вид-во Нитап Ргез5, Тоїома, М, 178, 2001., со. 1-37); і МесСапПепу та ін., Маїшге 348, 552-554; Сіаскзоп та ін., Маїйиге 352, 1991, сс. 624-628).
Фаг, як правило, експонує фрагменти антитіл або у вигляді одноланцюгових Ем- (в5сЕм)- фрагментів, або у вигляді Рар-фрагментів.
В деяких об'єктах винаходу фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені (наприклад, Гар-фрагменти), які входять в антигензв'язуючі молекули, запропоновані в даному винаході, створюють так, щоб вони мали підвищену афінність зв'язування, відповідно до методів, описаних, наприклад, в публікації РОСТ МО 2012/020006 (див. приклади, в яких описано дозрівання афінності) або в опублікованій заявці на патент О5
Мо 2004/0132066. Здатність антигензв'язуючих молекул, запропонованих у винаході, зв'язуватися зі специфічною антигенною детермінантою можна оцінювати кількісно або за допомогою твердофазного ферментного аналізу (ЕГІ5А), або іншими методиками, відомими спеціалісту в даній галузі, наприклад, за допомогою методу поверхневого плазмонного резонансу (І Шебріай та ін., Сіусо у 17, 2000., сс. 323-329), і традиційних аналізів зв'язування (Неєїєу, Епдосг Нез 28, 2002 сс. 217-229). Аналізи в умовах конкуренції можна застосовувати для ідентифікації антигензв'язуючої молекули, яка конкурує з референс-антитілом за зв'язування з конкретним антигеном. У деяких варіантах здійснення винаходу зазначена конкуруюча антигензв'язуюча молекула зв'язується з тим же самим епітопом (наприклад, лінійним або конформаційним епітопом), з яким зв'язується антигензв'язуюча референс- молекула. Докладні наведені як приклади методи картування епітопу, з яким зв'язується антитіло, представлені у Могїтіз, «Ерйоре Марріпуд Ргоїосоїб5», в: Меїйоа5 іп Моїесшаг Віоіоду, вид-во Нитапа Ргез5, Тоїомжа, МУ, т. 66, 1996. При здійсненні наведеного як приклад аналізу в умовах конкуренції іммобілізований антиген інкубують в розчині, що містить першу мічену антигензв'язуючу молекулу, яка зв'язується з антигеном, і другу немічену антигензв'язуючу молекулу, яка підлягає тестуванню відносно її здатності конкурувати з першою антигензв'язуючою молекулою за зв'язування з антигеном. Друга антигензв'язуюча молекула
Зо може бути присутньою в супернатанті гібридоми. Як контроль іммобілізований антиген інкубують в розчині, що містить першу мічену антигензв'язуючу молекулу, але не містить другу немічену антигензв'язуючу молекулу. Після інкубації в умовах, що забезпечують зв'язування першого антитіла з антигеном, надлишок незв'язаного антитіла видаляють і оцінюють кількість мітки, асоційованої з іммобілізованим антигеном. Якщо кількість мітки, асоційованої з іммобілізованим антигеном, істотно знижена в тестованому зразку порівняно з контрольним зразком, то це свідчить про те, що друга антигензв'язуюча молекула конкурує з першою антигензв'язуючою молекулою за зв'язування з антигеном (див. Напом/ і ІГапе. Апіїродієб5: А
І абогаїогу Мапиаї, вид-во Соїй 5ргіпд Напог І арогайогу, Соїд 5ргіпд Наог, МУ, гл. 14, 1988).
Антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд ТМЕ, запропоновані у винаході, одержані за допомогою представлених в даному описі методів, можна очищати з використанням відомих в даній галузі методик, таких як рідинна хроматографія високого розділення, іонообмінна хроматографія, гель-електрофорез, афінна хроматографія, гель- фільтрація і т.п. Фактичні умови, що застосовуються для очищення конкретного білка, залежать, зокрема, від таких факторів, як чистий заряд, гідрофобність, гідрофільність тощо, і вони повинні бути очевидні спеціалісту в даній галузі Для очищення антитіла за допомогою афінної хроматографії можна використовувати ліганд, рецептор або антиген, з яким зв'язується антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд ТМЕ. Наприклад, для очищення за допомогою афінної хроматографії злитих білків, запропонованих у винаході, можна використовувати матрикс з білком А або білком (1. Послідовне застосування афінної хроматографії на білку А або (1 і гель-фільтрації можна застосовувати для виділення антигензв'язуючої молекули практично відповідно до методу, описаному в розділі «Приклади».
Чистоту антигензв'язуючої молекули, що містить тримерний ліганд ТМЕ, або її фрагментів можна визначати за допомогою будь-якого з широкої різноманітності добре відомих аналітичних методів, включаючи гель-електрофорез, рідинну хроматографію високого тиску і т.п. Наприклад, встановлено, що антигензв'язуючі молекули, які містять тримерного ліганд ТМЕ, що експресували за допомогою методів, які описані в розділі «Приклади», є інтактними і правильно зібраними, що продемонстровано за допомогою ДСН-ПААГ у відновлювальних умовах і у невідновлювальних умовах.
Аналізи 60 Антигензв'язуючі молекули, представлені в даному описі, можна ідентифікувати, піддавати скринінгу або характеризувати їх фізичні/хімічні властивості і/або види біологічної активності за допомогою різних аналізів, відомих в даній галузі. 1. Аналізи афінності
Афінність антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, до відповідного ТМЕ-рецептора можна визначати за допомогою методів, викладених в розділі «Приклади», за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (5РЕ), використовуючи стандартну інструментальну базу, наприклад, пристрій ВіАсоге (фірма СЕ Неайнсагеє), і рецептори або білки-мішені, які можна одержувати за допомогою рекомбінантної експресії.
Афінність антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, до антигену клітини-мішені можна визначати за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (5РА), використовуючи стандартну інструментальну базу, наприклад, пристрій ВіІАсоге (фірма
СЕ Неайнсагє), і рецептори або білки-мішені, які можна одержувати за допомогою рекомбінантної експресії. Конкретний ілюстративний і наведений як приклад варіант вимірювання афінності зв'язування описаний в прикладі 4. Відповідно до одного з об'єктів винаходу величину КО вимірювали методом поверхневого плазмонного резонансу за допомогою пристрою ВІАСОКЕФ Т100 (фірма СЕ Неаййсаге) при 2526. 2. Аналізи зв'язування та інші аналізи
Зв'язування антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, представленої в даному описі, з відповідними експресованими клітинами рецепторами, можна оцінювати з використанням клітинних ліній, що експресують конкретний рецептор або антиген- мішень, наприклад, за допомогою проточної цитометрії (ГАС5). В одному з об'єктів винаходу в аналізах зв'язування використовували свіжевиділені мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМС), які експресують ТМЕ-рецептор. Зазначені клітини застосовували безпосередньо після виділення (наївні РМВС) або після стимуляції (активовані РМВС). В іншому об'єкті винаходу застосовували активовані мишачі спленоцити (що експресують молекулу ТМЕ-рецептора) для демонстрації зв'язування антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства
ТМЕ, запропонованої у винаході, з відповідними експресуючими ТМЕ- рецептор клітинами.
В іншому об'єкті винаходу застосовували лінії ракових клітин, які експресують антиген клітини-мішені, наприклад, ЕАР, для демонстрації зв'язування антигензв'язуючих молекул з
Зо антигеном клітини-мішені.
В іншому об'єкті винаходу можна застосовувати аналізи в умовах конкуренції для ідентифікації антигензв'язуючої молекули, яка конкурує з конкретним антитілом або антигензв'язуючою молекулою за зв'язування з мішенню або ТМЕ-рецептором відповідно. В деяких варіантах здійснення винаходу зазначена конкуруюча антигензв'язуюча молекула зв'язується з тим же самим епітопом (наприклад, лінійним або конформаційним епітопом), з яким зв'язується специфічне антитіло до мішені або специфічне антитіло до ТМЕ-рецептора.
Докладні наведені як приклади методи картування епітопу, з яким зв'язується антитіло, представлені у Моїтіз5, «Еріоре Марріпод Ргоїосої5», в: Меїпоа5 іп Моїесшіаг Віоіоду, вид-во
Нитапа Ргез5, ТоїОуа, Му, т. 66, 1996. 3. Аналізи активності
Одним з об'єктів винаходу є аналізи, призначені для ідентифікації антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, які зв'язуються зі специфічним антигеном клітини-мішені або зі специфічним ТМЕ-рецептором, які мають біологічну активність. Біологічна активність може включати, наприклад, агоністичну передачу сигналу через ТМЕ-рецептор на клітинах, які експресують антиген клітини-мішені. Запропоновані також антигензв'язуючі молекули, що містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, які ідентифіковані за допомогою аналізів як такі, що мають біологічну активність іп міїто.
В деяких об'єктах винаходу антигензв'язуючу молекулу, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, тестують в рамках такої біологічної активності. Аналізи оцінки біологічної активності молекул, запропонованих у винаході, описані в прикладі 6. Крім того, аналізи для детекції клітинного лізису (наприклад, шляхом вимірювання вивільнення ЛДГ), кінетики індукції апоптозу (наприклад, шляхом вимірювання активності каспаз 3/7) або апоптозу (наприклад, з використанням ТИОМЕЇ -аналізу) добре відомі в даній галузі. Крім того, біологічну активність зазначених комплексів можна оцінювати за їх впливом на виживаність, проліферацію і секрецію ліфокінів різними субпопуляціями лімфоцитів, такими як МК-клітини, МКТ-клітини або убт- клітини, або оцінювати їх здатність модулювати фенотип і функцію антигенпрезентуючих клітин, таких як дендритні клітини, моноцити/макрофаги або В-клітини.
Фармацевтичні композиції, препаративні форми та шляхи введення
Наступним об'єктом винаходу є фармацевтичні композиції, що містять будь-яку з бо антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, представлених в даному описі, наприклад, призначені для застосування в будь-якому із зазначених нижче терапевтичних способів. В одному з варіантів здійснення винаходу фармацевтична композиція містить будь-яку з антигензв'язуючих молекул, що містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, представлених в даному описі, і фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення винаходу фармацевтична композиція містить будь-яку з антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, представлених в даному описі, і принаймні один додатковий терапевтичний засіб, наприклад, вказаний нижче.
Фармацевтичні композиції, запропоновані в даному винаході, містять в терапевтично ефективній кількості одну або декілька антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, яка(ї) розчинена(ї) або диспергована() в фармацевтично прийнятному носії.
Поняття «фармацевтично або фармакологічно прийнятний» відноситься до молекулярних субстанцій та композицій, які, в цілому, нетоксичні для реципієнтів в застосовуваних дозах і концентраціях, тобто не викликають шкідливі, алергічні або інші небажані реакції при введенні за необхідності тварині, такій, наприклад, як людина. Приготування фармацевтичної композиції, яка містить принаймні одну антигензв'язуючу молекулу, що містить тримерний ліганд сімейства
ТМЕ, ї необов'язково додаткову діючу речовину, має бути очевидно спеціалістам в даній галузі в світлі даного опису, наприклад, з довідника Кетіпдіоп'є Рнаптасецшіїса! Зсієпсев, 18-е вид., вид- во Маск Ртгіпіїпа Сотрапу, 1990, включеного в даний опис як посилання. Зокрема, композиції являють собою ліофілізовані препаративні форми або водні розчини. В контексті даного опису «фармацевтично прийнятний носій» включає будь-які і всі розчинники, буфери, дисперсійні середовища, покриття, поверхнево-активні речовини, антиоксиданти, консерванти (наприклад, антибактеріальні агенти, протигрибкові агенти), агенти для додання ізотонічності, солі, стабілізатори та їх комбінації, які повинні бути відомі звичайному спеціалісту в даній огалузі.
Парентеральні композиції включають композиції, створені для введення шляхом ін'єкції, наприклад, підшкірної, внутрішньошкірної, всередину пошкодження, внутрішньовенної, внутрішньоартеріальної, внутрішньом'язової, підоболонкової або внутрішньочеревної ін'єкції.
Для ін'єкції антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновані у винаході, можна включати в препаративні форми у вигляді водних розчинів, переважно у фізіологічно сумісних буферах, таких як розчин Хенкса, розчин Рінгера або
Зо фізіологічний соляний буфер. Розчин може містити призначені для одержання препаративної форми агенти, такі як суспендуючі, стабілізуючі і/або диспергуючі агенти. Альтернативно до цього, злиті білюи можуть перебувати в порошкоподібній формі, призначеній для відновлення перед застосуванням прийнятним наповнювачем, наприклад, стерильною водою, яка не містить пірогенів. Стерильні ін'єковані розчини готують шляхом включення злитих білків, запропонованих у винаході, в необхідній кількості в відповідний розчинник за необхідності в поєднанні з різними іншими інгредієнтами, що вказані нижче. Стерильність можна легко забезпечувати, наприклад, шляхом фільтрації через стерильні фільтруючі мембрани. Як правило, дисперсії одержують шляхом включення різних стерилізованих діючих речовин в стерильний наповнювач, який містить основне дисперсійне середовище і/або інші інгредієнти. У разі стерильних порошків для одержання стерильних ін'єкованих розчинів, суспензій або емульсій переважними методами одержання є вакуумне сушіння або сушіння виморожуванням, які дозволяють одержувати порошок діючої речовини в поєднанні з будь-яким додатковим необхідним інгредієнтом з попередньо стерилізованою фільтрацією рідкого середовища. За необхідності рідке середовище перед здійсненням ін'єкції повинне бути відповідним чином забуферене і рідкому розріджувачу спочатку надана ізотонічність за допомогою достатньої кількості соляного розчину або глюкози. Композиція повинна бути стабільною в умовах приготування і зберігання і захищена від забруднюючої дії мікроорганізмів, таких як бактерії і гриби. Прийнято підтримувати забруднення ендотоксинами на мінімальному безпечному рівні, наприклад, менше 0,5 нг/мг білка. Придатні фармацевтично прийнятні носії включають (але, не обмежуючись тільки ними): буфери, такі як фосфатний, цитратний і буфери на основі інших органічних кислот; антиоксиданти, включаючи аскорбінову кислоту та метіонін; консерванти (такі як октадецилдиметилбензиламмонійхлорид; гексаметонійхлорид; бензалконійхлорид; бензетонійхлорид; фенол, бутиловий або бензиловий спирт; алкілпарабени, такі як метил або пропіллпарабен; катехол, резорцинол; циклогексанол; З-пентанол і мета-крезол); низькомолекулярні (містять менше приблизно 10 залишків) поліпептиди; білки, такі як сироватковий альбумін, желатин або імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як полівінілпіролідон; амінокислоти, такі як гліцин, глутамін, аспарагін, гістидин, аргінін або лізин; моносахариди, дисахариди та інші вуглеводи, включаючи глюкозу, манозу або декстрини; хелатуючі агенти, такі як ЕДТА; цукри, такі як сахароза, маніт, трегалоза або сорбіт; бо солеутворюючі протиїони, такі як натрій; комплекси з металами (наприклад, комплекси 2п-
білок); іиабо неіоногенні поверхнево-активні речовини, такі як поліетиленгліколь (ПЕГ). Водні суспензії для ін'єкцій можуть містити сполуки, які підвищують в'язкість суспензії, такі як натрієва сіль карбоксиметилцелюлози, сорбіт, декстран або т.п. Необов'язково суспензія може містити також стабілізатори або агенти, які підвищують розчинність сполук, що дозволяє одержувати висококонцентровані розчини. Крім того, суспензії діючих речовин можна одержувати у вигляді відповідних масляних суспензій, призначених для ін'єкції. Прийнятні ліпофільні розчинники або наповнювачі включають жирні нелеткі олії, такі як кунжутне масло, або синтетичні ефіри жирних кислот, такі як етилолеат або тригліцериди, або ліпосоми.
Діючі речовини можна поміщати в мікрокапсули, наприклад, одержані за допомогою методів коацервації або міжфазної полімеризації, наприклад в гідроксипропілметилцелюлозні або желатинові мікрокапсули і полі(метилметакрилатні) мікрокапсули відповідно, в колоїдні системи введення лікарського засобу (наприклад, в ліпосоми, альбумінові мікросфери, мікроемульсії, наночастинки і нанокапсули) або в макроемульсії. Такі методи описані в Ветіпаїоп'5
Рпагтасешііса! Зсієпсез (18-е вид., вид-во Маск Р'їпіпуд Сотрапу, 1990). Прийнятними прикладами препаратів з уповільненим вивільненням є напівпроникні матриці з твердих гідрофобних полімерів, які включають поліпептид, такі матриці являють собою вироби певної форми, наприклад, плівки або мікрокапсули. В конкретному варіанті здійснення винаходу для досягнення пролонгованої абсорбції ін'єктованої композиції можна застосовувати в композиції агенти, що уповільнюють абсорбцію, такі, наприклад, як моностеарат алюмінію, желатин або їх комбінації.
В контексті даного опису фармацевтично прийнятні носії включають також диспергуючі агенти інтерстиціальних лікарських засобів, такі як розчинні активні в нейтральному середовищі глікопротеїни гіалуронідази (5НАБЕСР), наприклад, людські розчинні глікопротеїни гіалуронідази РН-20О, такі як гНнНиРН2гО (НУ ЕМЕХФ, фірма Вахієг Іпіегпаїййопа!, Іс .). Деякі приклади 5НАБЕСР і методи їх застосування, в тому числі "НиРН2О, описані в публікаціях патентів США 2005/0260186 і 2006/0104968. Відповідно до одного з об'єктів винаходу ЗНАБЕС Р об'єднують з одним або декількома додатковими глікозаміногліканазами, такими як хондроїтінази.
Приклади ліофілізованих композицій антитіл описані в 5 Мо 6267958. Водні композиції антитіл включають композиції, описані в Мо О5 6171586 та УМО 2006/044908, останні композиції включають гістидин-ацетатний буфер.
Крім описаних вище композицій, злиті білюи можна готувати також у вигляді препарату в формі депо. Зазначені препаративні форми тривалої дії можна застосовувати шляхом імплантації (наприклад, підшкірної або внутрішньом'язової) або внутрішньом'язової ін'єкції. Так, наприклад, злиті білоюи можна включати в препаративні форми в поєднанні з прийнятними полімерними або гідрофобними матеріалами (наприклад, у вигляді емульсії в прийнятному маслі) або іонообмінними смолами, або у вигляді помірно розчинних похідних, наприклад, помірно розчинної солі.
Фармацевтичні композиції, які містять злиті білки, запропоновані у винаході, можна готувати за допомогою загальноприйнятих процесів змішування, розчинення, емульгування, капсулювання, захоплення або ліофілізації. Фармацевтичні композиції можна включати в препаративні форми за допомогою загальноприйнятого методу з використанням одного або декількох фізіологічно прийнятних носіїв, розріджувачів, наповнювачів або допоміжних речовин, які полегшують обробку білків, з одержанням препаратів, які можна застосовувати в фармацевтичних цілях. Відповідна форма залежить від обраного шляху введення.
Антигензв'язуючі молекули, які містять тримерні ліганди сімейства ТМЕ, можна включати в композиції у вигляді вільної кислоти або вільної основи, в нейтральній формі або у формі солі.
Фармацевтично прийнятні солі являють собою солі, які практично зберігають біологічну активність вільної кислоти або вільної основи. Вони включають кислотно-адитивні солі, наприклад, солі, утворені з вільними аміногрупами білкової композиції, або утворені з неорганічними кислотами, такими, наприклад, як соляна або фосфорна кислота, або такими органічними кислотами, як оцтова, щавлева, винна або мигдальна кислота. Солі, утворені з вільною карбоксильною групою, можна одержувати також з неорганічних основ, таких, наприклад, як гідроксиди натрію, калію, амонію, кальцію або заліза; або таких органічних основ як ізопропіламін, триметиламін, гістидин або прокаїн. Фармацевтичні солі мають тенденцію до більш високої розчинності у водних та інших протонних розчинниках порівняно з відповідними формами у вигляді вільних основ.
Композиція, представлена в даному описі, може містити також більш ніж одну діючу речовину, якщо це необхідно для конкретного показання, що підлягає лікуванню, переважно 60 речовину з додатковими видами активності, що не роблять негативний вплив один на одного.
Такі діючі речовини повинні бути присутніми в комбінації в кількостях, ефективних для вирішення поставленого завдання.
Композиції, призначені для застосування іп мімо, як правило, повинні бути стерильними. Це легко можна здійснювати шляхом фільтрації через стерильні фільтруючі мембрани.
Способи та композиції для терапевтичного застосування
Будь-яку з антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, представлених в даному описі, можна застосовувати в терапевтичних способах.
Для застосування в терапевтичних способах антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновані у винаході можна включати до складу препаративних форм, дозувати і вводити відповідно до належної клінічної практики. Розглянуті в цьому контексті чинники включають конкретне порушення, яке підлягає лікуванню, конкретного ссавця, що підлягає лікуванню, клінічний стан індивідуального пацієнта, причину захворювання, область введення агента, метод введення, схему введення та інші чинники, відомі практикуючим медикам.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновані у винаході, призначені для застосування як лікарський засіб.
Наступними об'єктами винаходу є антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновані у винаході, призначені для застосування при лікуванні захворювання, насамперед для застосування для лікування раку. Деякими варіантами здійснення винаходу є антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновані у винаході, призначені для застосування в способі лікування. Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, яка представлена в даному описі, призначена для застосування при лікуванні захворювання в індивідуума, який потребує цього. Деякими об'єктами винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, призначена для застосування в способі лікування індивідуума, що має захворювання, який полягає в тому, що вводять індивідууму в терапевтично ефективній кількості злитий білок. В деяких об'єктах винаходу захворювання, яке підлягає лікуванню, являє собою рак. Приклади видів раку включають солідні пухлини, рак сечового міхура, нирково-клітинну карциному, рак головного мозку, рак голови та шиї, рак підшлункової залози, рак легені, рак молочної залози, рак яєчника, рак матки, рак шийки матки, рак ендометрія, рак стравоходу, рак ободової кишки, колоректальний рак, ректальний рак, рак шлунка, рак передміхурової залози, рак крові, рак шкіри, плоскоклітинну карциному, рак кістки і рак нирки, меланому, В-клітинну лімфому, В-клітинний лейкоз, неходжкінську ліфому і гострий лімфобластний лейкоз. У конкретному варіанті здійснення винаходу захворювання являє собою рак. Таким чином, запропоновані антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, зазначені в цьому описі, для застосування для лікування раку. Суб'єкт, пацієнт або «індивідуум», який потребує лікування, як правило, є ссавцем, більш конкретно людиною.
Іншим об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, зазначена в даному описі, для застосування для лікування інфекційних захворювань, зокрема, для лікування вірусних інфекцій. Наступним об'єктом винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, зазначена в даному описі, для застосування для лікування аутоїмунних захворювань, таких, наприклад, як вовчак.
Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, зазначена в даному описі, для застосування для лікування плоскоклітинної карциноми голови і шиї (НМ5СС), раку молочної залози, колоректального раку (СКС), раку підшлункової залози (РАС), раку шлунка, недрібноклітинного раку легені (М5СЇІ С) і мезотеліоми, коли антиген клітини-мішені являє собою ЕАР.
Одним з об'єктів винаходу є застосування антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, для виробництва або приготування лікарського засобу, який призначений для лікування захворювання в індивідуума, що потребує цього. В одному з об'єктів винаходу лікарський засіб призначений для застосування в способі лікування захворювання, який полягає в тому, що вводять індивідууму, який має захворювання, в терапевтично ефективній кількості лікарський засіб. В деяких варіантах здійснення винаходу захворювання, яке підлягає лікуванню, являє собою проліферативне порушення, перш за все рак. Таким чином, одним з об'єктів винаходу є застосування антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованої у винаході, для виробництва або приготування лікарського засобу, призначеного для лікування раку. Приклади видів раку включають солідні пухлини, рак сечового міхура, нирково-клітинну карциному, рак головного мозку, рак голови та шиї, рак підшлункової залози, рак легені, рак молочної залози, рак яєчника, 60 рак матки, рак шийки матки, рак ендометрія, рак стравоходу, рак ободової кишки,
колоректальний рак, ректальний рак, рак шлунка, рак передміхурової залози, рак крові, рак шкіри, плоскоклітинну карциному, рак кістки і рак нирки, меланому, В-клітинну лімфому, В- клітинний лейкоз, неходжкінську ліфому і гострий лімфобластний лейкоз. Інші порушення клітинної проліферації, які можна лікувати з використанням антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованої в даному винаході, включають (але, не обмежуючись тільки ними) неоплазми, локалізовані в: животі, кістці, молочній залозі, травній системі, печінки, підшлунковій залозі, очеревині, ендокринних залозах (наднирник, паращитовидна, гіпофіз, яєчка, яєчник, тимус, щитовидна), оці, голові і шиї, нервовій системі (центральній і периферичній), лімфатичній системі, тазової області, шкірі, м'якої тканини, селезінці, грудному відділі і сечостатевій системі. Також під обсяг винаходу підпадають передракові стани або пошкодження і метастази раку. В деяких варіантах здійснення винаходу рак вибирають з групи, що включає нирково-клітинний рак, рак шкіри, рак легені, колоректальний рак, рак молочної залози, рак головного мозку, рак голови та шиї. Спеціалісту в даній галузі має бути очевидно, що в деяких випадках антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, не може забезпечувати зцілення, а може тільки надавати здійснювати сприятливу дію. В деяких варіантах здійснення винаходу фізіологічні зміни, які характеризуються деякою сприятливою дією, розглядаються також як терапевтично цінні. Таким чином, в деяких варіантах здійснення винаходу кількість антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що забезпечує фізіологічну зміну, розглядається як «ефективна кількість» або «терапевтично ефективна кількість».
Іншим об'єктом винаходу є застосування антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, зазначеної в даному описі, для виробництва або приготування лікарського засобу, призначеного для лікування інфекційних захворювань, зокрема, для лікування вірусних інфекцій або для лікування аутоїмунних захворювань, таких, наприклад, як вовчак.
Наступним об'єктом винаходу є спосіб лікування захворювання в індивідуума, який полягає в тому, що вводять індивідууму в терапевтично ефективній кількості антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновану у винаході. В одному з варіантів здійснення винаходу вказаному індивідууму вводять композицію, яка містить злитий
Зо білок. запропонований у винаході, в фармацевтично прийнятній формі. В деяких об'єктах винаходу захворювання, яке підлягає лікуванню, являє собою проліферативне порушення. У конкретному об'єкті винаходу захворюванням є рак. У деяких об'єктах винаходу спосіб полягає також в тому, що вводять індивідууму в терапевтично ефективній кількості принаймні один додатковий терапевтичний засіб, наприклад, протираковий засіб, якщо захворювання, що підлягає лікуванню, являє собою рак. «Індивід» в контексті будь-якого із зазначених вище варіантів здійснення винаходу може бути ссавцем, переважно людиною.
Для попередження або лікування захворювання відповідна доза антигензв'язуючої молекули, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованої у винаході (при її застосуванні індивідуально або в поєднанні з одним або декількома іншими додатковими терапевтичними засобами), повинна залежати від типу захворювання, що підлягає лікуванню, шляхи введення, ваги тіла пацієнта, типу злитого білка, серйозності і перебігу захворювання, від того, чи запроваджують злитий білок в превентивних або терапевтичних цілях, що передують або здійснюються одночасно з терапевтичними втручаннями, історії хвороби пацієнта і відповіді на злитий білок і від припису лікуючого лікаря. Практикуючий спеціаліст, відповідальний за введення, в будь-якому разі, повинен визначати концентрацію діючої(их) речовини(н) в композиції і відповідну(ї) дозу(и) для індивідуального пацієнта. Різні схеми введення доз включають (але, не обмежуючись тільки ними) одноразове введення або декілька введень в різні моменти часу, болюсне введення і пульсуючу інфузію.
Антигензв'язуючу молекулу, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, можна вводити пацієнту у вигляді однієї обробки або серій обробок. Залежно від типу і серйозності захворювання можлива початкова доза антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, для введення пацієнту, наприклад, з використанням одного або декількох індивідуальних введень або за допомогою безперервної інфузії, може становити приблизно від 1 мкг/кг до 15 мг/кг (наприклад, 0,1-10 мг/кг). Типова добова доза може становити від приблизно 1 мкг/кг до 100 мг/кг або більше в залежності від зазначених вище факторів. Для повторних введень протягом декількох днів або більш тривалого періоду в залежності від стану лікування, як правило, має тривати до досягнення необхідного придушення наявних симптомів захворювання. Як приклад, доза злитого білка може становити від приблизно 0,005 до приблизно 10 мг/кг. В іншому прикладі (але, не обмежуючись тільки зазначеним) доза на одне 60 введення може становити від приблизно 1, приблизно 5, приблизно 10, приблизно 50,
приблизно 100, приблизно 200, приблизно 350, приблизно 500 мкг/кг ваги тіла, приблизно 1, приблизно 5, приблизно 10, приблизно 50, приблизно 100, приблизно 200, приблизно 350, приблизно 500 до приблизно 1000 мг/кг ваги тіла або більше, і перебувати в будь-якому зазначеному діапазоні. Як приклади (але, не обмежуючись тільки ними) зазначеного діапазону значень, можна вводити від приблизно 5 до приблизно 100 мг/кг ваги тіла, від приблизно 5 мкг/кг ваги тіла до приблизно 500 мг/кг ваги тіла тощо з урахуванням зазначених вище рівнів доз. Так, пацієнту можна вводити одну або декілька доз, що становлять приблизно 0,5, 2,0, 5,0 або 10 мг/кг (або будь-яку їх комбінацію). Зазначені дози можна вводити переривчасто, наприклад, щотижня або кожні три тижні (наприклад, таким чином, щоб пацієнт отримував від приблизно двох до приблизно двадцяти або, наприклад, приблизно шість доз злитого білка). Можна вводити початкову вищу ударну дозу, після якої застосовувати одну або декілька нижчих доз.
Однак можна використовувати інші схеми введення доз. Успіх такої терапії легко оцінювати за допомогою загальноприйнятих методик і аналізів.
Антигензв'язуючу молекулу, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновану у винаході, як правило, слід застосовувати в кількості, ефективній для досягнення поставленої мети. При застосуванні для лікування або попередження хворобливого стану антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновані у винаході, або їх фармацевтичні композиції, вводять або застосовують в терапевтично ефективній кількості.
Визначення терапевтично ефективної кількості знаходиться в компетенції спеціалістів в даній галузі, перш за все в світлі представленого докладного опису винаходу.
Для системного введення терапевтично ефективну дозу можна спочатку визначати за допомогою аналізів іп міго, наприклад, аналізів з використанням клітинних культур. Потім дозу можна включати в форму для вивчення на тваринних моделях для досягнення концентрації в крові, що знаходиться в діапазоні, що включає значення ІСвхо, визначене на клітинній культурі.
Зазначену інформацію можна використовувати для більш точного визначення доз, які можна застосовувати на людях.
Початкові дози можна оцінювати також, виходячи з даних, одержаних іп мімо, наприклад, на тваринних моделях, використовуючи методики, добре відомі в даній галузі. Звичайний спеціаліст в даній галузі легко може оптимізувати застосування на людях на основі даних,
Зо одержаних на тваринах.
Рівень доз та інтервал можна регулювати індивідуально для одержання рівнів в плазмі антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, які є достатніми для підтримки терапевтичної дії. Звичайні дози, призначені для введення пацієнту шляхом ін'єкції, складають від приблизно 0,1 до 50 мг/кг/день, як правило, від приблизно 0,5 до 1 мг/кг/день. Для досягнення терапевтично ефективних рівнів в плазмі можна вводити декілька доз щодня. Рівні в плазмі можна оцінювати, наприклад, за допомогою РХВР.
У випадках місцевого застосування або вибіркового поглинання ефективна місцева концентрація антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, може не відповідати концентрації в плазмі. Спеціаліст у даній галузі може оптимізувати терапевтично ефективні місцеві дози без надмірних експериментів.
Застосування в терапевтично ефективній дозі антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, представлених в даному описі, має, як правило, забезпечувати терапевтичну користь, не викликаючи суттєвої токсичності. Токсичність і терапевтичну ефективність злитого білка можна визначати за допомогою стандартних фармацевтичних процедур на культурах клітин або експериментальних тварин. Аналізи на клітинних культурах або досліди на тваринах можна застосовувати для визначення значень
ГОво (доза, смертельна для 5095 популяції) ії ЕЮхо (доза, терапевтично ефективна для 5090 популяції). Співвідношення доз, що характеризують токсичні і терапевтичні дії, позначають як терапевтичний індекс, який можна виражати у вигляді співвідношення І ЮО5о0/ЕЮОво.
Антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, які мають високі терапевтичні індекси, є переважними. В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонована в даному винаході, характеризується високим терапевтичним індексом. Дані, одержані в аналізах з використанням клітинних культур і в дослідах на тваринах, можна застосовувати для визначення діапазону доз, які можна застосовувати на людях. Доза лежить переважно в діапазоні концентрацій в кровотоці, що включають ЕЮзо, які мають невисоку токсичність або які не мають токсичність. Доза може змінюватись в залежності від різних факторів, наприклад, від застосовуваної лікарської форми, застосовуваного шляху введення, стану індивідуума і т.п.
Точну препаративну форму, шлях введення і дозу може вибирати індивідуально лікар залежно бо від стану пацієнта (див., Наприклад, Ріподі та ін. В: Те Рпапгтасоіодіса! Вавіз ої Тпегарешціїсв, гл.
1, 1975, с. 1, публікація повністю включена в даний опис як посилання).
Лікарю пацієнтів, яким вводять злиті білки, запропоновані у винаході, має бути очевидно, як і коли закінчувати, переривати або регулювати введення через токсичність, дисфункції органів і т.п. Ї. навпаки, лікарю повинно бути відомо, як регулювати лікування в сторону застосування більш високих доз, якщо клінічна відповідь є неадекватною (запобігаючи токсичність). Величина введеної дози при лікуванні порушення, що представляє інтерес, повинна варіюватися в залежності від серйозності стану, що підлягає лікуванню, шляху введення і т.п. Серйозність стану можна, наприклад, оцінювати серед іншого за допомогою стандартних прогностичних методів оцінки. Крім того, доза і передбачувана частота введення дози повинні також варіюватися в залежності від віку, ваги тіла і відповіді індивідуального пацієнта.
Інші засоби і варіанти лікування
Антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновані у винаході, можна вводити в поєднанні з одним або декількома іншими засобами. Наприклад, злитий білок, запропонований у винаході, можна вводити спільно принаймні з одним додатковим терапевтичним засобом. Поняття «терапевтичний засіб» включає будь-який засіб, який вводять для лікування симптому або захворювання в індивідуума, який потребує такого лікування. Зазначений додатковий терапевтичний засіб може бути будь-якою діючою речовиною, яку можна застосовувати при конкретному показанні, що підлягає лікуванню, переважно з додатковими видами активності, які не роблять негативний вплив один на одного.
В деяких варіантах здійснення винаходу додатковий терапевтичний засіб являє собою протираковий засіб.
Зазначені інші засоби можуть бути присутніми в комбінації в кількостях, ефективних для зазначених цілей. Ефективна кількість зазначених інших засобів залежить від кількості застосованого злитого білка, типу порушення або лікування, і інших зазначених вище факторів.
Антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, як правило, застосовують в таких же дозах і з використанням зазначених у даному описі шляхів введення, або в дозах, що становлять приблизно від 1 до 9995 від зазначених у даному описі доз, або в будь-якій дозі і з використанням будь-якого шляху введення, які відповідно до емпіричних/ клінічних даних розглядаються як прийнятні.
Зо Зазначені вище комбіновані терапії передбачають спільне введення (коли два або більшу кількість терапевтичних засобів включають в одну і ту ж або в окремі композиції) і роздільне введення, в цьому випадку введення антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропонованої у винаході, можна здійснювати до, одночасно і/або після введення додаткового терапевтичного засобу і/або ад'юванта.
Вироби
Іншим об'єктом винаходу є виріб, який містить продукти, що застосовуються для лікування, попередження та/або діагностування зазначених вище порушень. Виріб являє собою контейнер і етикетку або листівку-вкладиш в упаковку, які розміщені на контейнері або додаються до нього.
Прийнятними контейнерами є, наприклад банки, бульбашки, шприци, пакети для внутрішньовенного (ІМ) розчину тощо. Контейнери можна виготовляти з різних матеріалів, таких як скло або пластмаса. Контейнер містить композицію, яка сама по собі або в поєднанні з іншою композицією є ефективною для лікування, попередження і/або діагностування стану, і може мати стерильний порт доступу (наприклад, контейнер може являти собою пакет для внутрішньовенного розчину або пляшечку, оснащену пробкою, яку можна проколювати за допомогою голки для підшкірних ін'єкцій). Принаймні одна діюча речовина в композиції є антигензв'язуючою молекулою, яка містить тримерний ліганд ТМЕ, запропоновану у винаході.
На етикетці або листівці-вкладиші в упаковку зазначено, що композицію застосовують для лікування обраного стану. Крім того, виріб може включати (а) перший контейнер з розташованою в ній композицією, де композиція містить антигензв'язуючу молекулу, яка містить тримерний ліганд ТМЕ, запропоновану у винаході; і (б) другий контейнер з розташованою в ній композицією, де композиція містить додатковий цитотоксичний або інший терапевтичний засіб.
Відповідн до цього варіанту здійснення винаходу виріб може містити листівку-вкладиш в упаковку, яка містить інформацію про те, що композиції можна використовувати для лікування конкретного стану.
В альтернативному або додатковому варіанті виріб може додатково включати другий (або третій) контейнер з фармацевтично прийнятним буфером, таким як бактеріостатична вода для ін'єкцій (БСВІ), забуферений фосфатом фізіологічний розчин, розчин Рінгера та розчин глюкози.
Крім того, він може включати інші матеріали, необхідні з комерційної точки зору і з точки зору споживача, зокрема, інші буфери, розріджувачі, фільтри, голки та шприци. (510)
Таблиця В (Послідовності):
ВЕСРЕГОРОБРАСІ ОІГАОСМЕАОГУАОММІ ОСІ людський (пи). 4- УУ/УВОРСІ АСУЗІ ТОСІ ЗУКЕОТКЕЇ УУАКАСУУТУ 4 ТВВІ (ву) ЕЕОГ ЕІ ВВУУАСЕСЗО5УЗІАІ НІ ОРІ ВЗААСААА А
ТУОІГРРАЗЗЕАВМЗАРО РОСИ НІ ЗАСОВІ СУНІ Н
ТЕАВАВНАМОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВУТРЕЇІРАСІ РОРАЗЕ
ГОГВОСМЕАОГУАОММІ ОСІ ЗМ/УЗОРСГАСУВІТ
СОІ5УКЕОТКЕ УМАКАСУУУУЕРОЇ ЕІ ВВУМАСЕС 2. |пи 4-18ВІ (85-254)| ЗО5М8ІАІ НІ ОРІ В5ААСААА! АЇ ТУОІ РРАБЗЕАВМ5
АРСЕОСВИ НІ ЗАСОВІ СУНІ НТЕАВАВНАМОЇ ТОС
АТМІ СІЕВУТРЕІРАСІ РОРАЗЕ
ОРАСІ РІ ВОСМЕАОГУАОММІ ПОСРІ ЗМ/УЗОРОГА
СУ8І ТОСІ ЗУКЕОТКЕ УУАКАСУУУМУЕЕОЇ ЕІ. ВВУУ з пи 4-18ВІ. (80-254)| АСЕС5ЗО5УЗІ АГ НІ ОРІ В5ААСААА! АЇ ТУОІ РРАЗОЕ
АВМЗАРСЕОСВІ І НІ ЗАСОВІ СУНІ НТЕАВАВНАМО
І ТОСАТМІ СІ ЕВМУТРЕЇІРАСІ РОРАЗЕ
РМАУЗСАВАЗРОЗААЗРВІ ВЕСРЕЇ ЗРОРРАСІІ ПІВ
ОСМЕАОГ УАОММІОСРІ ЗМ/У5ОРСГАСУЗІ ТОСІ 5
УКЕОТКЕГ УМАКАСУУУУЕРОЇ ЕІ ВВУМАСЕО5О5У 4 зпм 47188 (527254) 5) ДІ НІ ОРІ В5ААСААА А. ТУОЇ РРАЗЗХЕАВМЗАРСЕ
ОСВИНІ ЗАСОВІ СУНІ НТЕАВАВНАМОЇ ТОСАТМІ.
СІЕВУТРЕЇІРАСІ РОРВЗЕ
ВЕСРЕГОРООРАСІИ ОІАОСМЕАОГУАОММІ ОСІ.
ЗМ/УЗОРСІ АСУБІ ТОСІ ЗУКЕОТКЕЇ УМАКАСУХУУУ
ЕЕОГ ЕІ ВВУУАСЕСЗО5УЗІАІ НІ ОРІ ВЗААСАААГ А димерний пи 4-1 ТОЇ РРАЗЗЕАВМ5ЗАРСЕОСВИ НІ ЗАСОВІ СУНІ Н 1ІВВІ С (71-254)) ТЕАВАВНАМ/ОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВУТРЕІРАСІ РОРАБЕС
Бо |з'єднаний за ССО5ОСОС5АЕСРЕЇ 5РОЮРАСІЇ І ВОСМЕДОЇГ УАО допомогою (С45)»- ММ ІОСРІ ЗМ/У5ОРСІ АСУВІ ТОСІ ЗУКЕОТКЕЇ У лінкера АКАСУУУУЕРОЇ ЕІ ВВУУАСЕСЗС5УВ А НІ ОРІ ВЗ
ААСАДАЇ АІ ТУ РРАЗХЗЕАВМЗАРО ОСИ І НІ ЗАС
ОВІ СУНІ НТЕАВАВНАМОЇІ ТОСАТМІ СІ ЕВУТРЕЇРА
СІРОРВ5Е
ВЕСРЕГОРОБРАСІ ОІГАОСМЕАОГУАОММІ ОСІ мономерний пи 4- УМУВОРСІ АСУВІ. ТОСІ ЗУКЕОТКЕЇ УУАКАСУУУУ
ВВ (71254) РРОІЕІАВУУАСЕОЗОУЗІ АНІ ОРІ АЗААСАААГА плюс (С45), лінкер | ТУОІ РРАЗЗЕААМЗАРО РОСИ НІ ЗАСОАІ-СУНІ Н
ТЕАВАВНАМ/ОЇ ТОСАТМІ СІ. ЕВУТРЕІРАСІ РОРВЗЕС ссоезсосо5 анти-ЕАР(2ВНІ), анти-ЕАР(2ВНІ), 8 (бра У ААВовОУУАОВУКО 1111 анти-ЕАР(2ВНІ), 9 (б емемої 1 анти-ЕАР(2ВНІ), анти-ЕАР(2ВНІ), анти-ЕАР(2ВНІ),
Таблиця В (Послідовності):
ВЕСРЕЇ 5РООРАСІ ОЇ ВОСМЕАДОЇ МАОММІ ГІрарРі.
ЗМУБОРИЇАСУВІ ТС ЗМКЕОТКЕЇ МУМАКАСУУУМУ
ЕРОГЕ ААУМАСЕаВаИавзуБі АІ НІ ОРІ АЗ5АДСАААЇ А
ГТМОГРРАББЕААМЗАРагРОаВГІ НІ ЗАСОВаТмні н
ТЕАВАВНАУУОЇ ТОСАТМІ СІ ЕАМТРЕЇІРАСЇІ РОРАЗЕС сазасасевЕсСРЕЇЗРООРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАО
ММ ГІраРІ ЗМУУБОРИЇ АСУБІ ОСІ ЗМКЕОТКЕЇ МУ
АКАСМУУУМУЕРОЇГЕГААУМАСпЕ,аБавмві АІ НІ ОРІ 5 димерний пи 4- ААСААДАЇ А ТМОЇ РРАББЕАВМЗАРСЕБОСНІ І НІ БАС 14 1вв (71-254)- ОВІ УНІ НТЕАВАВНАУМОЇ ТОСАТМІ СІ РВМТРЕЇІРА
СНІ-Рс-ланцюг зі РОРАЗЕССОСОСЗИЦасааЗАЗТКОаРЗМЕРІ АРЗЗК5ОТЗО «виступом» СТААЇ СІ УКОМЕРЕРУТУЗБУУМЗИАІ Та МНТЕРАМІ.
ОБОЇ У5І 55ММГУРБЗЗІЯТОГМІСМММНКРЗОМТКМО
ККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСОИРБЗУНБІ ЕРРКРКОТ
ГМІЗАТРЕУТСУММОУЗНЕОРЕМКЕМУ РУХИ МЕМНМ
АКТКРАЕЕОУМЗТУВМУУБЗМІ ТМ НОБОУМІ МЕОКЕУКОСК
МЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСИОРАЕРОММТІ РРОВОЄСТК
МОМБІ УСІ УКЕМРЗОІАМЕМЕЗМИОРЕММУКТТРРУ го5разЕР ЗК ТМОКЗАМООСММЕ5СЗУМНЕАСНМ
НУТОКБІ БІ 5РаК
ВЕСРЕЇ 5РООРАСІ ОЇ ВОСМЕАДОЇ МАОММІ ГІрарРі.
ЗМУБОРИЇАСУБІ ТС ЗМКЕОТКЕЇ МУМАКАСУУУМ
ЕРОГЕ ААУМАСЕаВаИавзуБі АІ НІ ОРІ АЗ5АДСАААЇ А мономерний пи 4- ГТМОГРРАББЕААМЗАРагРОаВГІ НІ ЗАСОВаТмні н 1ВВІ. (71-254)-СІ. ТЕАВАВНАУУОЇ ТОСАТМІ СІ ЕАМТРЕЇІРАСЇІ РОРАЗЕС сазасааеАТМААРБЗУРІЕРРРБЗОЕОЇ КЗатАБУМСІ
ММЕМРАЕАКМОУМКМОМАГОБаИмМмеОЕЗМТЕООКОЗТ
У5І З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМУТНОСІ 55Р УТКБЕМ ваЕС
ЕМО ЕЗОССОИЇ МОРОСБІ ВІ БСААБИагєТЕЗЗНАМОУУМ 16 анти-ЕАР(28НІ), | ВОАРОКОаЇ ЕММУЗАМАЗИаЕОУУАрЗУКОаВЕТІЗНОМ5
УН КМТ М'ОММ5І ВАЕОТАУУУСАКСУМ СМЕОМУСОС
ТІ МТУ55 анти-ЕАР(28НІ) ЕІМГТО5РОИТІ 5І 5РОЕВАТІ БСВАБОБУЗНОМІ АМ/МО 17 М " ТОКРООАРВІ ПІСАЗТВАТаІ РОВЕЗОЗаЗаИтогтІ ІА
ГЕРЕОРГАМУУСООСОМІРРТРСОСТКМЕК анти-ЕАР(28НІ), 18 Ес-ланцюг із див. таблицю 2 «западиною» легкий ланцюг
Таблиця В (Послідовності):
АРЗАУНМЗЕЄЕМТМВА ТІ КОП.'ЧатЕЗУКТЕЕРМУУЗОИ
ОЕМ НОЗАОММІМІ УМЕТИОБУТІ МА ТМКЗУМАБМ
Уа 5РОВОЕММІ ЕБОУМЗКІ М/ВУЗУТАТУМІМОІ МИ Е
ЕМВаМЕЇГ РАРІОМІ СМУЗРУИБЗКІ АУУМОММІМІ КОВ Р
СОРРЕОІЇТЕМаВЕМКІЕМИа РОМ ММЕЕЕМІ АТКМАЇ МУ
М ЗРМОКЕГ АМАЕЕМОТОІРМАМБЗУМООЕОМРАТІМІР
УРКАСАКМРУМВІНОЮТТУРАУУМаРОЕМРУРАМІАЗ5
ОЖУЕБМТММТОЕВМСГ ОМ КАМОМУЗМІ ВІСОЕВЕ ектодомен пи ЕАР МОГ ОСРКТОЕНІЕЕЗВ ТОМ ДАИСИЕЕУМЗТРУЕЗУВАЇ я полі-ув-мітка 3 З'УУКІЕЗОКОСУКНІНМУІКОТУЕМАЇІСІ ТЗОКМУ/ЕАІМІЕ 21 півв-мітка ВУМТОО5І ЕМ55МЕРЕЕМРОВАМІМВІЗІСОЗУРРОУККСМУТ
СНІ ВКЕНСОУУТАБЕБОМАКУМАЇ УСУаРІРІЗТІ НО
САТООБЕЇКІ ЕЕМКЕГ ЕМАЇ КМІОЇ РКЕЕІККГЕМОЕЇТ
ГМУУКМІ' РРОБОВЗККУМР ПОУМайРОБОБУВЗМЕАМ
МУІЗМІ АБКЕСММІА, УВСВСВаТАРОСОКІ ЇЇ МАУМАК
ГаМУмЕМЕВОІЇТАУАКЕРІЕМОИРІОЕКАІА МСС
М5БІ А АБатаї ЕКСЕИАМАРУБЗББЗУЕУМАЗУУТЕВЕМ аг РТКООМ'ЕНУКМЗТУМАВАЕМЕАММОМІ ГІНИТА
ВОМУНЕОМЗАОСІАКАЇ УМАОМОГОАМУ УВОМНаї. за ЗТМНІУТНМТНЕГКОСЕІЗоСсККкКкКкКкКа|анннн нн
Таблиця В (Послідовності):
СОСССТТСААСАСТТСАТААСТСТОААСААААТАСА
АТОАСАССАСТСАСАСТОААОСАТАТТТТАААТО
СААСАТТТТСТТАТААААСАТТТТТТОСАААСТОСАТ
ТТСАОСАСААСААТАТСТТСАТСААТСТОСАСАТАА
СААТАТАСТАСТТТАТААТАТТОАААСАССАСААТС
АТАТАССАТТТТОАСТААТАСААССАТОААААСТОТ
СААТОСТТСАААТТАСОССТТАТСАССТОАТСОССА
АТТТОТАТАТСТАСААДАСТОСАТТАТТСАААСОСТТТО
САСАТАСТСТТАСАСАССААСАТАТТАСАТСТАТОА
ССТТАССААТОСАСААТТТОТААОАСОАААТОАОСТ
ТОСТСОтТСсСААТТСАСТАТТТАТОСТОСТСОССТОТТ
СССАСТАААТТАССАТАТОСТСТАТСААААСААТАТС
ТАТТТОАААСАДАСАССАСОАСАТССАССТТТТСАА
АТААСАТТТААТОСААСАСАДААТААААТАТТТААТ
СОВААТСССАСАСТОСОТТТАТОААСАСОАААТОСТТ
ССТАСААААТАТОСТСТСТООТООТСТОСТААТОСА
АДАТТТТТОССАТАТОСОСААТТТААТСАТАСОСАТ
АТАССАСТТАТТОССТАТТОСТАТТАТОССОАТОДАС
ААТАТССТАСААСААТАААТАТТОСАТАСССАААСО
СТаСАОСТААСААТОСССТТОТТСОСАТАТТТАТТАТ
СОАТАССАСТТАСССТОСОТАТОТАОСТОСССАСОА
АСТаССтТОаттТосСАаСААТОАТАОССТСААСТОАТТА
ТТАТТТСАСТТОССТСАСОТОСОТТАСТОАТОДАСО
АСТАТОТТТаСАСТООСТАААААСАСТССАСААТОТ
ТТСОСТОСтТОатсСтТАТАТОТОАСТТСАССОААСАСТО
ССАСАСАТОССАТТОТССААДАСАСССАССАОСАТАТ
АСДАСАДАССАСААСТОСАТОСОСТОСТОСАТТСТТ
ТОатттсААСАССАСТТТТСАОСТАТОАТОССАТТТСО нуклеотидна ТАСТАСААААТАТТТАСТОАСААССАТОССТАСАДА послідовність САТАТТСАСТАТАТСАДАСАСАСТО ТОСААААТОСТ ї АТТСАААТТАСААИТООСААСТООСАСОССАТАААТ 22 вктопоме пу Едє/ АТАТТСАСАСТААСАСАССАТТСАСТОТТТТАТТСТА й полі в. мтка. я ЗСААТСААТТТОААСААТАСССТОСААСААСАААС півв-мітКу АТСТАСАСААТТАССАТТОаСААОСТАТССТССААОС 6 ААДСААСТОТОТТАСТТОССАТСТААСОАААСАААСО
ТОССААТАТТАСАСАССААСТТТСАОСОАСТАСОСС
ААДОТАСТАТОСАСТТаТтСТасСТАСООСССАСОСАТС
СССАТТТОСАСССТТСАТОАТаСАСОСАСТОАТСАА
СААДАТТААААТОСТОСААДСАДААСААССААТТОСА
ААДАТаСТТТаАДААААТАТССАОСТОССТАААСАССА
ААТТААСАДАСТТОААСТАСАТОАААТТАСТТТАТО
СТАСААСАТОАТТСТТОСТОСТСААТТТОАСАСАТС
ААДАСААСТАТОССТТОСТААТТСААСТОТАТОСТОС
ТОССТОСАЙТСАСАСТОТААОСТСТОТАТТТОСТОТТ
ААТТОСАТАТСТТАТСТТОСААСТААЙОААСОСАТО
СТСАТТаССТТОаОТОаСАТОСТСОАОСААСАССТТТС
СААСОТОаАСАААСТОСТСТАТОСАСТОТАТСОАААС
СТаСатстттТАТОААОТТОАДАСАССАСАТТАСАССТ
СТСАСААДААТТСАТАСААДАТООСТТТСАТТОАТОАДА
ААДААСААТАОССАТАТОСОССТОТОСТАТОСАСО
АТАССТТТСАТСАСТОЙСССТТОСАТСТОСААСТОСТ
СТТТТСАААТОТОСТАТАЯСАСТООСТОСАСТСТСОС
АОСТаСсААТАТТАСОСОТСТОТСТАСАСАСАСАСА
ТТСАТОаСОТСТОССААСАДАССАТОАТААТСТТОАС
САСТАТААСААТТСААСТОТОАТОССААСАССАСАА
ТАТТТСАСАААТатАСАСТАТСТТСТСАТССАСОСА
АСАСЙСАСАТОАТААТОТОСАСТТТСААААСТСАССА
САСАТТОСТАДАОСТСТОСТТААТОСАСААСТОСАТ
ТТОСАСЙОСААТОТОСТАСТСТОАССАСААССАСООС
ТТАТССООССТОаТССАСОААССАСТТАТАСАСССАС
АТОСАСССАСТТОСТАААССАСТОТТТСТСТТТОТСАС
Таблиця В (Послідовності):
АРЗ5АУУКРЕСМТКВАЇ ТІ КОП Ма ТЕЗУКТМЕРМУМІЗЕ
ОЕМ НОЗБЕВОМІМЕУМІЕТВЕЗМПІ ЗМЗТМКЗУМАТОУ
С,І 5РОВОЕММІ ЕБОУЗКІ М/ВУЗУТАТУМІМОГ ОМ
УВамхЕї РАРІОМІ СМУЗРУаБЗКІ АМУММОММІМІ КОВРОа
ОРРЕОІЇТМУТаВЕМАІЕМОа РОМУУМЕЕЄЕМІ АТКМАЇ ММ
ЗРОСКЕ АУМЕЄМОЗОІРПАМБУМУСОСОМРВАТІМІРУР
КАСАКМРУУМАУРІМО ТП"УРННУаРМЕМРУРЕМІАЗЗО
УЖМЕБМІ ТИ М5ЗЕВМСЇ ОМ КАМОМУ5МІ БІСОЄВЕО ектодомен МНАМЕСРКМОЕНМЕЕЗА ТОМ АСИагЕУЗТРАЕБОВАТ мишачого ЕАР З'УКІЕЗОКОрИачУкнІНМІКОТМЕМАЮІТЗОаКУУЕАМІЕ 24 зполі-чув-мітка я ВУМТОО5І ЕМ55МЕРЕСУРОВАМІУВІБІСМЗРРЗККОСМТ півв-мітка СНІ ВКЕНСОУУТАБЕЗУКАКУМАЇ УСУИРАІ РІЗТІ Н равтТрогвІФмі ЕЕМКЕГ ЕМ5І АМІОЇ РКУЕІККІ КОСІ
ГТРУМКМІ РРОБОВЗККУМР ПОУМасРОБОБУКОМЕ
АУМУМІТМІ АБКЕСІМІА, УраватАРОСОКРІ НАУУ А
КГ аММЕМЕВОЇ ТАМАКРІЕМОРІОЕЕВІАМ СУМУ ЗУСО
МУ5Б5І АГ АБатаі РКСИОИАМАРУБЗБЗУЕУМАБІМЗЕВЕМ аг РТКООМ'ЕНУКМЗТУМАВАЕМЕАММОМІ ГІНИТА
РОМУНЕеОМЗАОІАКАЇ УМАОМОГРОАМУ РОМНИ. завВЗОМНІ УТНМТНЕКОСЕ5І ЗрВСеКкКкКкКкКкКка,аТнннн нн
Таблиця В (Послідовності):
СатосССсТСААпАаТТТАСАААССТаААсСаАААСАСА
ААСАСАС,СТСТТАССТТаААсСсАТАТТТТААДАТО
СААСАТТСТСАТАТАДААСАТАТТ ТТ СОССААСтТасаА
ТТТСАСААСААСААТАТСТТСАТСААТСТОАДИаСАТОИ
АТААСАТАСТАТТТТАТААТАТТаАААСААдСАСААТ
САТАТАТСАТТТТОАСТААТАаСАССАТОИААААИТа тТаААтТасСстТАСАСАТТАТОСТТТаТтСАССТОаАТОССаС
ААТТТататАТСТАСАААаТаАТТАТТСААДастот авасСсАТАТТСАТАСАСАаСОСАСАТАСТАСАТСТАСОА
АССТТСАПААтТасацпААТТТатААаАСО
АТАСОДаСТоССтТСатоСААТТСАСТАТСТАТИаСТа стоасстаттаааАаТАААТТАССАТАТатТАТАТСА
АААСААТАТТТАТТТаАААСАААпАССАааАаАТоС
АССТТТТСАДАТААСТТАТАСТаСВААдСаАСААААТАС
ААТАТТТААТаАСААТАССАСЧАСТаса т ТАТаААСА ваААдАтТасттасСАСААДААТАТОСТСОТТ ТОСТОС,ТО
ТоСАСАТаСААААТТТТТасССАТАТатАСААТТТАА
ТаАТТСАСАТАТАССААТТАТТаССсСТАТТСТТАТТАТ сатаАдАтТасАСАаТАТССТАСААСТАТАААТАТТОССА
ТАТССАААСОЯСТОСОДаСстТААаААтТоСасатта,7аттсат
СТ ТАТТаТтТаАСАССАССТАСССТСАССАСИТОаС
ВСССААтТасАддатассАатССАаАААТаАТАасст
СААИТаАСТАТТАТТ ТСАСаСТОИаСТСАСАТОССЯСТаИТ
ССАатТаААСсаАаТАтТастасСАатаасСтТАААААсСАС тасСсАпААтТаТатстсАатостТатСсТАТАТатТаАТТТСАС саАддадстаасСсАтТасСсАтТаспаААТатосСААДАСААСо
АдсадаСАТаТтАпйААпАААаСАспСААСАсааАтасаИаст сатасАТСТ тат ТтоСсАСАССАИаСтТТтТАаССАса нуклеотидна АТаССАСТТСТТАСТАСААААТАТТТАаСОСАСАДИаС послідовність АТаСТТАСАААСАТАТТСАСТАСАТСААДАСАСАСТа конструкції тацпсААдАдАТастТАТТСАААТТАСААДИатТааСААаТасцнся ектодомен АсСассСАТАТАТАТАТТСОСаСатААСАСАсСаАТТСАС мишачого БАР «4 тат ТАТТСТАаСААТаААТТТаАдАдс,аИаттТАСостТаа полі-Іув-мітка У ААПААСААДАСАТСТАСАПСААТТАаСАТТасСАААСТо
Пібв-мітка тоСстТоСОаАаСААпААдататаТТАСТТассСАТСТААС
САДАпАААдааТассСААТАТТАСАСАаСААСТТТСАСа
СТАСАДАДаССААаТТАСТАТОаСАСТОСТСТастАТОС состТаасСссСсТосССсСАТТТССАСССТОСАТОАТОСаоСасС
АСАСАССААПСАААТАСААИТАТТАПСААСАААДАСАА
АСААСТасААААТТСТОТаАСпСАААТАТССАЛССТИаСС
ТАААДСТИаСАСАТТААЧАдАасСстТоАААаАСасааспАС тадсттстТаатТАСААаАТаАтотТа|асстостТСАаТттТ тТаАСАСАТСАДАПААаТАСССТТТастТААТТСААИт ататастаатсттатАаасССАсаАататТААатстТат стттастаТтТААТТасСАТААСТТАТСТСИаСААаИтАА савдасасАТтТАаТСАТассостастаалтаатсасос
САСТаСТТТтоСАдДасТтаАСАААТТОоСТаСАТОССИТ стТАТССААААСТОСИатТатАТАТИААСТТаАДасСАССА аСТСАСАС,СТатСАСААААТТСАТАСААдАТасатТттт
САТТаАТаААСАААСААТАаССАТАТОССССТОСТО
СстТАССОсСО;аАССВТТАТаТтттсСАТСССТОССССТТасАТСТ асаААстТасТСсТТттсАААТатааСАтТАаа,аСАа,атааст ссАатсТоСАаСТасаААТАТТАСаСАТСТАТСТАС
ТСАпАдадлаАТСсАТтасасстСССААСАААаадсаАс
ААТСТСИ,ААСАСТАТАДАААТТСААСТатТаАдтаасА
АСАССАСААТАТТ ТСАСАААТатАСАСТАТСТТОСТО
АТССАСИСААСАаСАСАТОаАТААТатасАСТТТСАС
ААСТСАССАСАСВАТТаСТАААДастІ ТтасТТААТаСА
СААДСТОСАТТТоСАСОаСОАїТаИатааТтАСТоТаАсСсСАС
ААССАТаСсСТАТАТТАТСТОСОССО,аСТоССАСААТСАТ
ТТАТАТАСССАСАТаАСаСАСТТССТСААДИаСААТаС
Таблиця В (Послідовності):
АРРАЕУНМЗЕЄЕМТМАВАТІ КОП'ЧатЕУКТЕЕРМУУЗОИ
ОЕМ НОЗАОММІМІ УМЕТИОБУТІ МА ТМКЗУМАБМ
Уа 5РОВОЕММІ ЕБОУМЗКІ М/ВУЗУТАТУМІМОІ МИ Е
ЕМВаМЕЇГ РАРІОМІ СМУЗРУИБЗКІ АУУМОММІМІ КОВ Р
СОРРЕОІЇТЕМаВЕМКІЕМИа РОМ ММЕЕЕМІ АТКМАЇ МУ
М ЗРМОКЕГ АМАЕЕМОТОІРМАМБЗУМООЕОМРАТІМІР
УРКАСАКМРЕМВІННОТТУРАУУаРОЕМРУРАМІАЗЗО
УЖМЕБМІ ТМ МТОЕВМСІ ОМ КАМОММУ5МІ БІСОЄВЕО ектодомен ЕАР МОГМОСРКТОЕНІЕЕЗВ ТОМ АСОИЕЕУЗТРУЕБУВАЇ мавп ціномолгус я УУКІЕЗОКрИахжхкніІНМІКОТМЕМАЮІТЗСОКУУЕАЇІМІЕВ 26 полі-Іув-мітка й МТОО5ІЕМ55МЕРЕОУРЕВАМІМВІБІСОЗУРРОККСМУТО півв-мітка НГЕАКЕНСОУУТАЗЕБОМАКУМАЇ УСМарРИРІЗТІ НОС
АТООБЇІКІЇ ЕЕМКЕГ ЕМАЇ КМІОЇ РКЕЕІККІ ЕМОЕЇТ.
МУКМІ-РРОБОВЗККУР ПОУМОайРОБОБУВЗМЕАМ
МУІЗМІ АБКЕСММІА, УВСВСВаТАРОСОКІ ЇЇ МАУМАК
ГаМУмЕМЕВОІЇТАУАКЕРІЕМОИРІОЕКАІА МСС
М5БІ А АБатаї ЕКСЕИАМАРУБЗББЗУЕУМАЗУУТЕВЕМ аг РТКООМ'ЕНУКМЗТУМАВАЕМЕАММОМІ ГІНИТА
ВОМУНЕОМЗАОСІАКАЇ УМАОМОРОАМУУ УЗ ВОМНаї. за ЗТМНІУТНМТНЕГКОСЕІЗоСсККкКкКкКкКа|анннн нн
Таблиця В (Послідовності): сасссСстТоСААСАСТТСАТААСТСТаААсСААААТАСА
АТтТаАдпАдасСАСТСАСАСТаААасСАТАТТТТАААТа ваАСАТТТТСТТАТАДААСАТТ ТП ТТОСАААСтТасАТ
ТТСАСаОСАСААСААТАТСТТСАТСААТСТаСАСАТАА
СААТАТАСТАСТТТАТААТАТТИАААСАССИАСААТС
АТАТАССАТТТТаАСТААСАСпСААССАТОААдАСТаИт
СААТаСТТСАААТТАТИАССТТАТСАССТОаАТССасСА
АТТТатТАТАТСТАСАААИаИТаАТТАТТСАААасСтТтТТа всАСвАТАСТОТТАСАСАС,СААСАТАТТАСАТСТАТИаА
СсСТТАаСААтТаСвАвААТТТатААСАааАААтТадаТст тТоСсТоатТСсСААТТСАаТАТТТАТОСТОСТОСИССТаИттТ сапАсСтТАААТТАССАТАТИаТСсСТАТСААААСААТАТС
ТАТТТОАААСАААпАССАаИаАпАТССАССТТТТСАА
АТААСАТТТААТаСпААсСАсСААААТААДААТАТТТААТ ,ваААТОССАСАСТОСИ ТТ ТАТИААСАсСаАААТасСтТтТ аСТАСААДААТАТОСТСОТСТС,СТОСТОТОСТААТасА
АААТТ ТТ ТОСаСАТАТаСОаСаСААТТТААТИАТАСАСАТ
АТАССАСТТАТТаССТАТТССТАТТАТОаСССОСАТОИААС
ААТАТСССАСПСААСААТААДАТАТТОСАТАСССААДОаС сса,авАаСтТААпйААТОСТТ ТТаТаттСасАТАТТТАТТАТ
СОАТАССАСТТАСССТОаСЯатАТОаИтТАсСатосССАааИаА дат7ТасстатсССАаСААТЧАТАаССТСААаТталгатТТА тТАТТТСАСТТавасСтТоАСсатасоа ТАСТаАТОААСО датАтаттасСсаатТаайсСтТАААААаАаТССАСПСААТат тпессватстатсСтТАТАТатТаАТТТСсАСаасААсСАСТа вСАаАСсАтТааваАТатсСАААаАСССАааласСАТАТ
АпААпААдАаСАсААСтТасвАтасвса!стаатТасвАТТСТТ тат тСААСАССАСТТ ТТ САасСстТАТОАТаССАТТТСА нуклеотидна ТАСТАСААААТАТТТАСТОАСААДааАТайсСТАСААДА послідовність САТАТТСАСТАТАТСАААСАСАСТаИатасААААТаТст конструкції АТТСААДАТТАСАДОа ТаИаСААаТасаАсасСАТАААТ 27 ектодомен ЕАРІАТАТТСАЙАСаТААСАСАСОАТТСАСТОаТтТтТТАТТСТА мавп ціномолгус 7 СААТаААТТТаААСАТТАСССтТасяЯАаААСцАААС полі-Іув-мітка Уч АТСТАСАСААТТАаСАТТаСпСААаСтТАТССТОСААЛСС
Пібв-мітка ААСОАДОаОСТО Та ТТАСТТаССАТСТААСОПСАААСАдДАСсО тТасСссСсААТАТТАСАСАаСААа ТТ ТсАаСсаАСТАСасс
ААатАСТАТИаСАСТТатотТасСстТАТавССсССАсСаТасАТС
СССАТТТОСАСССТТСАтТаАдСО,аАСасАСТОаАТСАА
САДАТТААДААТОСТасьАсаААААСААдааААТТааА
АААТасСстТТТаАААААТАТССАССТасССТАААдаАааА
ААТТААСАААСТТаААаТтАаАТаАААТТАСТТТАТО
С,СТАСААДСАТаАТТСТТОСТОСТСААТТТОАСАСАТС
АААдСААатАТОССТТасТтААТТСААСИТатАТаатТОас тосстТасАаатсАсАатТатАдаатсотаТатАта,астатт
ААТТаСАТАТСТТАТСТТаСААИТААасААс,асАТа стсАтптассттастаадтастовсаааААСАаТстТтТо
СААСИатаАСАААСтТоСтТатАтТасСАаТатАТССПАААС стасатТатТГтТАТаААаТТаААСаАССАСаАТТАСАССТ
СТСАСАААДАТТСАТАСАААТассас т т тСАТТаАТИаАА
АААДАпААТАаССАТАТОСЬС ЗЄС ТО ТССТАТИАСАСО
АТАТаТТТСсАТСАСТОССССТтТасСсАТСТаСаСААСТОаИТт
СТ ТсААДАТИатТасаАтТАаасастаастосАатстос дастапсААТАТТАСЯСОТСТаТтСстТАСАСАС,АСАСА
ТПСАТОСИТСТОССААСАААасаАТаАТААТСТТИ,Аа
САСТАТААСААТТСААСТОТаАТапйСААсСАаСАсСАА
ТАТТТСАСААДАТатАСАСТАТСТТСТСАТССАСИаЦА
АСАССАСАТОАТААТатТасСАСТТТСААААСТСАИСА
САСАТТасСТтАДАССТСТастТТААТаСАСААдатТасаАт
ТТоСАСССААТИаТаСТАСТОТаАССАаААССАСаас
ТТАТССОСаССТатсСАСИААССАСТТАТАСАСССАС
АТОАСССАСТТССТААДасСАаИТтТтаТат ТП СТСТТаТтсСАС
Таблиця В (Послідовності): ігц
Опіргої Ме РОЄ731 людський МС5Р | Опіргої Ме ОБОМКІ людський ЕСЕВ | ОпіРгої Ме РОО5З33 людський СО19 | |ОпіРгої Ме Р15391 людський СО20 | Опіргої Ме Р11836 людський СО33 | Опіргої Ме Р2О138 людський й
Опіргої Ме РО1375 людський й людський ОХ40І. | |ОпіРгої Ме Р23510 людський СО40Ї. | ОпіРгої Мо Р29965
Опіргої Ме РАВО2З людський СО27Ї. | ОпіРгої Ме РЗ2970 людський СОЗОЇ. | Опіргої Мо РЗ2971 людський 4-18ВІ. | ОпіРгої Ме РА1273 людський ТВА. /|Опіргої Мо Р5О591 людський ВАМКІ. | ОпіРгої Ме 014788 людський ТМУЕАК | ОпіРгої Ме 043508 людський АРВІЇ | ОпіРгої Ме 075888 людський ВАБЕ | Опібгої Ме 09275 людський МІСОНТ | ОпіРгої Ме 043557 людський ТІЛА ОпіРгої Мо 095150 людський СІТВІ. | Опіргої Ме О9бОМаг2 людський й
АСРМАУ5ЗОАВАЗРОБЗААБРВІ ВЕОРЕЇ 5РООРАСІЇ О
ІЇ ВОСОМЕАДОЇ МАОММИ ІОСРІ МУР дамі Тай
ІЇ ЗУКЕОТКЕІ УМАКАСУУУМУ БОЇ ЕІ ВАВУМАСЕС5а5 5200 зпи 188 (50254) Уу5| ДІ НІ ОРІ ВЗААСААА! А ТУОІ РРАЗЗЕАВМОАЕ
СЕООВІ НІ БАСОВІ аУНІ НТЕАВАВНАМОЇ ТОСАТ
МІОГЕВМТРЕЇІРАСІ РОРВЗЕ
ОМ5НАУРВІОБІКМОЕТЕУККЕКОЕЇЇ ТЗОКЕОЕЇМКУ
ОММОМИМСОСЕМІ ІЗІ КОМЕЗОЕММІБЗІ НХОКОЕЕРІ Е
53 пи ОХ401. (51-183) ЇЗДІ ККУВ5УМБІ МУАБІТУКОКУХІ МУТТОМТВІ О0є
НУМОСЕПСІНОМРОЕЕСМІ.
М5НАУРВІОБІКМОЕТЕУККЕКОРІЇ ТЗОКЕОЕІМКМО
ММЗМИМСОСЕМІ ІІ КОМЕЗОЕММІВІ НУОКОЕЕРІ ГО
54000 |пи ОХА0І. (52183) | ККУВ5УМБІ МУАВІ ТУКОКУУМУТТОМТВІ ООЄН
ММОаСЕСІІНОМРОЕЕСМІ. 5ЗИа4)2 пептидний лінкер с4(564) сасезосасзосес о5РОЗЗ55О5
ПУ лінсеер засозссосо5оосо5оссос5 свавамаз 60 |пептиднийлінеер |(40505050 сеБаво вева саеБамаво
Таблиця В (Послідовності): нуклеотидна послідовність конструкції димерний пи /4- Див. таблицю 2 1вв (71-254)-
СНІ-Ес-ланцюг з «виступом» нуклеотидна послідовність 67 конструкції Див. таблицю 2 мономерний пи 4- 18ВІГ. (71-254)-С1 1 нуклеотидна послідовність конструкції анти-
ЕАР(28НІ)-Ес- Див. таблицю 2 ланцюг із «западиною» нуклеотидна послідовність конструкції анти- Див. таблицю 2
ЕАР (28НІ), легкий ланцюг нуклеотидна послідовність конструкції 71 тв (104-309, Див. таблицю 13
С137,160,2465)-
СНІ-Ес-ланцюг з «виступом» нуклеотидна послідовність конструкції 72 мономерний ти 4- Див. таблицю 13 1вв (104-309,
С137, 160, 2465)-
С. нуклеотидна послідовність 73 конструкції анти- Див. таблицю 13
ЕАР, Ес-ланцюг з мутацією КК нуклеотидна 74 посліДдОВНІСТЬ Див. таблицю 13 легкого ланцюга анти-ЕАР
Таблиця В (Послідовності): й димерний ти 4- 1вв (104-309, 75 С137, 160, 2465) - Див. таблицю 13
СІ -Гс-ланцюг Кк! мутацією ОО мономерний ти 4- 1вв (104-309, 76 С137,160, 2465)- Див. таблицю 13
Сіл анти-ЕАР, Ес- 77 ланцюг з мутацією) Див. таблицю 13
КК анти-РЕАР, легкий нуклеотидна послідовність 79 ОРА7, Ес-ланцюг із Див. таблицю 18 «западиною» нуклеотидна послідовність легкого ланцюга Див. таблицю 18 рР4і7
ОРА7, Ес-ланцюг із Див. таблицю 18 «западиною»
ОРА7, легкий людський /-4-188- мавпячий 84 (ціномолгус) 4- Див. таблицю 31 188-Ес(Кін мишачий /-4-188- нуклеотидна послідовність /Ес- Див. таблицю 32 ланцюга З «западиною» нуклеотидна послідовність 87 конструкції Див. таблицю 32 людський /-4-188-
Ес(кіп нуклеотидна послідовність конструкції 88 мавпячий Див. таблицю 32 (ціномолгус) 4- 188-Ес(Кін нуклеотидна послідовність конструкції 4-188- Див. таблицю 32
Ес(кіп «западиною»
Таблиця В (Послідовності): конструкція 91 людський /-4-188- Див. таблицю 32
Ес(Кін конструкція мавпячий 92 (ціномолгус) 4- Див. таблицю 32 188-Ес(Кін конструкція 93 мишачий //- 4-188- Див. таблицю 32
Ес(Кін нуклеотидна послідовність 94 людського 4-188- Див. таблицю 33
Нів
ВЕСРЕЇ 5РООРАСІ ОЇ ВОСМЕАДОЇ МАОММІ ГІрарРі. людський (пі). 4- ЗМУУБОРИЇАСУВІ ТС ЗМКЕОТКЕЇ МУМАКАСУУУМ 1ВВІ. (71-248) ЕРОГЕ ААУМАСЕаВаИавзуБі АІ НІ ОРІ АЗ5АДСАААЇ А
ГТМОГРРАББЕААМЗАРагРОаВГІ НІ ЗАСОВаТмні н
ТЕАВАВНАМ ОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕЇІРАСІ.
ВЕСРЕЇ 5РООРАСІ ОЇ ВОСМЕАДОЇ МАОММІ ГІрарРі.
ЗМУУБОРИЇАСУВІ ТС ЗМКЕОТКЕЇ МУМАКАСУУУМ димерний пи 4- ЕРОГЕ ААУМАСЕаВаИавзуБі АІ НІ ОРІ АЗ5АДСАААЇ А 1ВВІ (71-248) ГТМОГРРАББЕААМЗАРагРОаВГІ НІ ЗАСОВаТмні н 97 з'єднаний за ТЕАВАВНАУУОЇ ТОСАТМІ СІ ЕАВМТРЕІРАСІ ВИСО ИаБа допомогою (С45)»- сасе5вВЕСРЕЇ 5РОДРАСІ ЇЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММУМ І пінкера раРІ БМ/У5ОРИЇ АСУБІ Тс ЗМКЕОТКЕЇ МУМАКАС
Р МУУМЕРОГЕСАВУМАСаЕазавзуві АІ НІ ОРІ ВБААСА
ААЇ А ТМОЇ РРАББЕАВМЗАРСОСГОСВІ І НІ БАСОНВІ С
МНЕНТЕАВАВНАУМОСТОСАТМІ С ЕАМТРЕІРАСІ.
ОРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІВИРІ БМУМБОРИЇ А
СУБ ТОСІ БУКЕОТКЕЇ ММАКАСУУУМ РОЇ ЕГА!АВУМ димерний пи /4- АСЕИаБОаБУБІ АІ НІ ОРІ А5ААДСАААЇ АЇ ТУМОІ РРАБЗЕ 1ВВІ (80-254) АВМ5ЗАРСРОСВІІ НІ БАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАМО з'єднаний за ГТОСАТМІ СІ ЕВУТРЕІРАВІ РОРАЗБЕСССсОаСОСІЯСЗО допомогою (С45)»- РАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММ ІрарІ ЗБУМУМОРИЇ АС лінкера МБІ-ТОаСІ БУКЕОТКЕЇ УМАКАСУУМУМУЕРОЇ ЕІ ВАММА
СЕаБаБМУБІАІНІ ОРІ В5ААСАААЇ А ТУ РРАББЗЕА
АМЗАРСРОСВІ І НІ БАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАУОЇ.
ТОСАТМІ СІ РАМ РЕІРАСІ РОРАЗЕ
РМУАУБИаАВАБРИаБААБЗРВІ ВЕСРЕЇ 5РООРАСИІІ І В
ОСМЕАОЇ МАОММІ ГІрИРІ БУМ УЗОРИ АсУБІ Та 5
УКЕОТКЕЇ УМАКАСУУУУЕРБОГ ЕГ АВУМАдаБа,азавм димерний пи 4- ЗІ А НОРІ А5АДСАААЇ А ТМОЇ РРАББЕАВМЗАБИЕ 1ВВІ (52-254) ОСВІ НІ ЗАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАУМ ОЇ ТОСАТМІ. з'єднаний за СІ РАУТРЕІРАСІЇ РОРАБЕССОСОСЗОСОСОРУАМЗИАВА допомогою (С45)»- ЗРИаБААБРВІ ВЕСРЕЇ 5РОДРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МА пінкера ОММІ ГІраРІ ЗМУУБОРИЇ АСУБІ ТасІ ЗУКЕОТКЕЇ М
Р МАКАСМУМУМУУЕРОЇ ЕГА!АВУМАСЕаВавзмві АІ НІ ОРІ В
ЗААСІАДАЇ А ТУМОЇ РРАБЗЕАВМЗАРСРОСВІІ НІ ЗА
СОВІЯаМНІ НТЕАВАВНАУМ ОЇ ТОСАТМІ СЕ АМТРЕЇР
АС РОРАЗЕ
Таблиця В (Послідовності): ий анти-ЕАР(4В9),
СОВ-Н! ЗАМ анти-ЕАР(4В9), сов-но АпаваАЗТУМАрУКО анти-ЕАР(4В9), анти РА СМУРОСЕМУ анти-ЕАР(4В9), анти-Р, ВАВОЗУТУВУА анти-ЕАР(4В9), сон? УСБННАт анти-ЕАР(4В9), анти-Ея ООСІМІРРТ
ЕМО ЕЗОССОИЇ МОРОСБІ ВІ БСААБИагєТЕЗЗУАМОМУМ
ВОАРОКаЇ ЕМУЗАПаЗаАВТУМАрЗУКОаВЕТІЗНОМ5 06 занти-гАР(ВУ), УНІ) КМТ М. ОММ8І ВАЕОТАУУУСАКСМ РОСЕМУМ СОС
ТІ МТУ55
ЕІМГТО5РОТІ 5І 5РОЕВАТІ БСВАБОБМТ ЗУ АМУМО 107 анти-ЕАР(489), М | ОКРЕОАРВАВ ІММазАВАТИаРоВЕЗОаЗзаЗаИТОЕТІ ТІВ
АГЕРЕОРАМУУСООСІМСРРТЕРаОСТКМЕК димерний Пи /(4- 1в8І. (71-2584)- 108 СНІ"-Ес-ланцюг з Див. таблицю 4 «виступом» мономерний Пи 4- 1ВВІ. (71-254)-СІ" | Див. таблицю 4 мономерний пи 4- 110 1ввІ (71-254)- див. таблицю 7 с45)1-СІ димерний Пи /(4- 1в8І. (52-254)- 111 СНІ"-Ес-ланцюг з див. таблицю 10 «виступом» мономерний Пи 4- 1ВВІ (52-254)-СІ» | ДИВ. таблицю 10 димерний Пи /(4- 1в8І. (80-254)- 113 СНІ"-Ес-ланцюг з див. таблицю 11 «виступом» 1ВВІ (80-254)-СІ » | ДИВ. таблицю 11 димерний Пи /(4- 18В'Г. (71-254)-01 115 Ес-ланцюг зі ДИВ. таблицю З «виступом» мономерний Пи 4- 116 1ввІ (71-254)- див. таблицю З
СНІ" димерний Пи /(4- 117 Шон (717254)-01- див. таблицю 22 с-ланцюг Кк) «виступом» мономерний Пи 4- 1ВВІ. (71-254)-СНІ | ДИВ. таблицю 22
Таблиця В (Послідовності): димерний пи /(4- 119 ланцюг С зі ДИВ. таблицю 24 «виступом» мономерний Пи 4- 120 1ввІ (71-248)- див. таблицю 24
СНІ" анти-БАР (28Н1)-
Ес-ланцюг із 121 «западиною», див. таблицю 6 злитий з димерним 4-1881. (71-254 анти-БАР (28Н1)-
Ес-ланцюг Кк! 122 «виступом», див. таблицю 6 злитий Кк! мономернима4- 1881. (71-254 анти-ЕАР (489)-Ес- ланцюг із 123 «западиною», див. таблицю 23 злитий з димерним 4-1881. (71-254 анти-ЕАР (489)-Ес- ланцюг Кк! 124 «виступом», див. таблицю 23 злитий Кк! мономернима4- 1881. (71-254 легкий ланцюг анти-ЕАР (489)-Ес- ланцюг із 126 «западиною», див. таблицю 26 злитий з димерним 4-1881. (71-248 анти-ЕАР (489)-Ес- ланцюг, Кк! 127 «виступом», див. таблицю 26 злитий Кк! мономернима4- 181. (71-248 нуклеотидна послідовність конструкції 129 димерний Пи /(4- див. таблицю З 18 /((71-254)
СіІ"-Ре-ланцюг з «виступом»
Таблиця В (Послідовності): нуклеотидна послідовність конструкції 130 мономерний пи 4- див. таблицю З 1 /((71-254)
СНІ" нуклеотидна послідовність конструкції 131 димерний Пи /(4- див. таблицю 4 1 /((71-254)
СНІ"-Рс-ланцюг з «виступом» нуклеотидна послідовність 132 конструкції див. таблицю 4 мономерний пи 4- 18ВІГ. (71-254)-61І" нуклеотидна послідовність 133 ВАВ (вн) див. таблицю 4 (МНО)-Рс-ланцюг із «западиною» нуклеотидна послідовність 134 легкого ланцюга)| див. таблицю 4 (МІСНІ) анти-ЕРАР 28НІ1 анти-РАР (УНСО) 135 (28НІ), Ес-ланцюг див. таблицю 4 із «западиною» анти-БАР (28НІ), 136 легкий ланцюг див. таблицю 4
МІСНІ нуклеотидна послідовність конструкції 137 мономерний пи 4- див. таблицю 5 1 /((71-254)
СНІ"-Рс-ланцюг з «виступом» нуклеотидна послідовність 138 пове рукця пи А. див. таблицю 5 1 /((71-254)
СІ" мономерний пи 4- 139 Се Бс-ланцюг з Див. таблицю 5 «виступом»
Таблиця В (Послідовності): нуклеотидна послідовність конструкції анти-
ЕАР (28НІ1)- гс- 141 ланцюг із ДИВ. таблицю 6 «западиною», злитий з димерним пи 4-188Г. (71-254 нуклеотидна послідовність конструкції анти-
ЕАР (28Н1)-Ес- 142 ланцюг зі див. таблицю 6 «виступом», злитий Кк! мономерниміи (4- 18ВІ. (71-254 нуклеотидна послідовність конструкції 143 мономерний пи 4- див. таблицю 7 1вв (71-254) с45)1-СІ" нуклеотидна послідовність конструкції ГТанти- 144 ЕАРОО(28Н1)р-Ес- див. таблицю 8 ланцюг із «западиною»
І(анти-РАР (28НІ1)2- 145 Ес-ланцюг із див. таблицю 8 «западиною» нуклеотидна послідовність конструкції 146 ВВ (71 -ва) 4 див. таблицю 9 анти-ЕАР (МНОЇ -
Ес-ланцюг Кк! «виступом» нуклеотидна послідовність конструкції 147 мономерний пи 4- див. таблицю 9 18 /((71-254) анти-ЕАР (МІ СНІ" димерний пи /(4- 18 /((71-254) 148 анти-РАР (МНСІ)- див. таблицю 9
Ес-ланцюг Кк! «виступом» мономерний пи 4- 149 188 (711-254) див. таблицю 9 анти-ЕАР (МІ СНІ"
Таблиця В (Послідовності): нуклеотидна послідовність конструкції 150 димерний пи /4- див. таблицю 10 188 (52-254)
СНІ"-Рс-ланцюг з «виступом» нуклеотидна послідовність конструкції 151 мономерний пи 4- див. таблицю 10 188 (52-254)
СІ" нуклеотидна послідовність конструкції 152 димерний пи /4- див. таблицю 11 1ввВІ (80-254)
СНІ"-Рс-ланцюг з «виступом» нуклеотидна послідовність конструкції 153 мономерний пи 4- див. таблицю 11 1ввВІ (80-254)
СІ" нуклеотидна послідовність 154 ОРА7, Ес-ланцюг з див. таблицю 14 мутацією КК нуклеотидна послідовність 155 легкого ланцюга див. таблицю 14 рР4і7 нуклеотидна послідовність конструкції
БВ |димерний (104-309, див. таблицю 15
С1605) - СІ-Ес- ланцюг з мутацією ро нуклеотидна послідовність конструкції 159 мономерний див. таблицю 15 мишачий 4-18 (104-309, С1605)
СНІ
Таблиця В (Послідовності): димерний ти 4- 1вв (104-309, 160 С1605) - СіІ-Рс-| див. таблицю 15 ланцюг з мутацією ро мономерний мишачий 4-18 161 (104-309, С1605) див. таблицю 15
СНІ нуклеотидна послідовність 162 анти-ЕАР (489), див. таблицю 21
Ес-ланцюг із «западиною» нуклеотидна послідовність 163 легкого ланцюга див. таблицю 21 анти-ЕАР (489 анти-ЕАР (489), 164 Ес-ланцюг із див. таблицю 21 «западиною» нуклеотидна послідовність конструкції 165 димерний пи /4- див. таблицю 22 18 /((71-254)
СІ -Гс-ланцюг Кк! «виступом» нуклеотидна послідовність конструкції 166 мономерний пи 4- див. таблицю 22 18 /((71-254)
СНІ нуклеотидна послідовність конструкції анти- 167 ГАР (в9) с: див. таблицю 23 ланцюг із «западиною», злитий з димерним пи 4-188ІГ. (71-254 нуклеотидна послідовність конструкції анти-
ЕАР (489)-Ес- 168 ланцюг зі див. таблицю 23 «виступом», злитий Кк! мономерниміи (4- 18ВІ. (71-254
Таблиця В (Послідовності): нуклеотидна послідовність конструкції 169 димерний пи /(4- див. таблицю 24 1ввІ (711-248)
СіІ"-Ре-ланцюг з «виступом» нуклеотидна послідовність конструкції 170 мономерний пи 4- див. таблицю 24 1ввІ (711-248)
СНІ" нуклеотидна послідовність конструкції 171 димерний пи /(4- див. таблицю 25 1ввІ (711-248)
СІ -Гс-ланцюг Кк! «виступом» нуклеотидна послідовність конструкції 172 мономерний пи 4- див. таблицю 25 1ввІ (711-248)
СНІ димерний пи /(4- 173 С Ео-ланцює з Див. таблицю 25 «виступом» мономерний Пи 4- 174 188 ((71-248) див. таблицю 25
СНІ нуклеотидна послідовність конструкції анти- 175 АР (в9) с: див. таблицю 26 ланцюг із «западиною», злитий з димерним пи 4-188І. (71-248 нуклеотидна послідовність конструкції анти-
ЕАР (489)-Ес- 176 ланцюг зі див. таблицю 26 «виступом», злитий Кк! мономерним Пи 4- 18ВІ. (71-248
Таблиця В (Послідовності): нуклеотидна послідовність конструкції ОРА7- 177 Ес-ланцюг із див. таблицю 27 «западиною», злитий з димерним пи 4-188Г. (71-254 нуклеотидна послідовність конструкції ОРА7- 178 Ге-ланцюг З див. таблицю 27 «виступом», злитий Кк! мономерним Пи 4- 188 (71-254 рРА7-Рс-ланцюг із «западиною», 179 злитий з димерним див. таблицю 27 пи 4-188Г. (71-254
ОР4А7, Ес-ланцюг з «виступом», 180 злитий зі див. таблицю 27 мономерним Пи 4- 188 (71-254 нуклеотидна послідовність 181 важкого ланцюга| див. таблицю 29
ОР4А7 (пи да!
РОГАГА
ОРА7, важкий 182 ланцюг (пи Ідат| див. таблицю 29
РОГАГА
ВЕСРЕЇ 5РООРАСІ ОЇ ВОСМЕАДОЇ МАОММІ ГІрарРі. мономерний пи 4- ЗМУУБОРИЇАСУВІ ТС ЗМКЕОТКЕЇ МУМАКАСУУУМ 183 188! (71-254) ЕРОГЕ ААУМАСЕаВаИавзуБі АІ НІ ОРІ АЗ5АДСАААЇ А плюс (С45)1-лінкер ГТМОГРРАББЗЕАВМЗАРОРОСВІ І НІ БАСОНВІ СУНІ Н
ТЕАВАВНАМОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРАСІ РОРАЗЕС саваз
ВЕСРЕЇ 5РООРАСІ ОЇ ВОСМЕАДОЇ МАОММІ ГІрарРі. мономерний пи 4-4 5УМУМБОРИЇАСУБІ ТС ЗМКЕОТКЕЇ МУМАКАСУУУМ 184 1вв (71-248) ЕРОІ ЕГГААУУМАСЕ,Бавмві АІ НІ ОРІ ВБААСАДАЇ А плюс (045)2 -Г ТМОГ РРАБЗБЕАВМЗАРСРОСНВІ І НІ БАСОВІ СМУНІ Н лінкер ТЕАВАВНАМОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРАСІ СЗЬЗСИВИ саваз
ВЕСРЕЇ 5РООРАСІ ОЇ ВОСМЕАДОЇ МАОММІ ГІрарРі. мономерний пи 4-4 5УМУМБОРИЇАСУБІ ТС ЗМКЕОТКЕЇ МУМАКАСУУУМ 185 1ввІ (71-248) ЕРОІ ЕГГААУУМАСЕ,Бавмві АІ НІ ОРІ ВБААСАДАЇ А плюс (245): -лінксер| "МОЇ РРАБЗБЕАВМЗАРСЕРОСНВІ І НІ БАСОВІ СМУНІ Н
ТЕАВАВНАМ ОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРАСИТ ДИС
Таблиця В (Послідовності): й нуклеотидна послідовність конструкції 186 людський антиген| див. таблицю 43
СО19-Рс-ланцюг з «виступом» -амі- мітка поліпептидна послідовність конструкції 187 людський антиген| див. таблицю 43
СО19-Рс-ланцюг з «виступом» -амі- мітка нуклеотидна послідовність конструкції антиген ср19 мавп 188 ціномолгус-Ес- див. таблицю 43 ланцюг З «виступом» -амі- мітка поліпептидна послідовність конструкції антиген ср19 мавп 189 ціномолгус-Ес- див. таблицю 43 ланцюг З «виступом» -амі- мітка гуманізоване анти- 190 Сбр19 (888), НУВ- МЗМОаМТ 1 гуманізоване анти- 191 бр19 (888) НУВ- КЕМа нг гуманізоване анти-
СбОр19 (888), 192 варіанти 1-9, НУВ- ТЕКРОСАМТМ нг гуманізоване анти- 193 СбОр19 (888) ГЕМРМОаМТ варіант 5, НУВ-І 1 гуманізоване анти- 194 СбОр19 (888) ЕМРЗОа МТ варіант 9, НУВ-Ї 1 анти-СО19 (888- отв) сов-ні (ОМА анти-СО19 (888- 018), СОВ-Но МІМРУМОСЗКУТЕКРОС анти-СО19 (888- 018), СОВ-НЗ сщтуиУавзА ри анти-СО19 (888- 018), СОВА КЗБОБІ ЕМРМОа МТМ М
Таблиця В (Послідовності): анти-СО19 (888- анти-СО19 (888-
ОМОЇ МОБСАЕУККРОАБУКУЗСКАБаИахТЕТОМІМНУУ 201 анти-С0О19 (888- МВОАРОССІ ЕУУМОаМІМРУМОСЗКУТЕКЕеЕОСВУТМТ5 018), МН ОТ5ІЗТАУМЕЇ 5ВІ А5ООТАУУУСАВИа ТУ УМавзА во
Уума,араттУтУзь5 анти-С019 (888- РІММТОТРІ ЗІ ЗМТРІОРАБІЗСКОЗОВІ ЕМРМОМТ МІ М 202 018), М. ММ ОКРООБРОГ ПМАУЗКАЕЗОаУРОоВЕЗОаЗОБЗИаТОЕТ " ІКІЗАМЕАЕОМаУУУСТОСТНУРМТРаОСТКІ БІК нуклеотидна послідовність 203 анти-СО19 (888- див. таблицю 47 018), Ес-ланцюг із «западиною» нуклеотидна послідовність 204 легкого ланцюга)| див. таблицю 47 анти-СО19 (888- 018 анти-С0О19(888- 205 018), Ес-ланцюг ізі див. таблицю 47 «западиною» легкий ланцюг 206 анти-С0О19(888- див. таблицю 47 018 нуклеотидна послідовність конструкції анти- 207 Сбр19 (888-018)- див. таблицю 49
Ес-ланцюг із «западиною»- димерний ліганд нуклеотидна послідовність конструкції анти- 208 Сбр19 (888-018)- див. таблицю 49
Ес-ланцюг Кк! «виступом»- мономерний ліганд анти-СО19 (888- 018)- Рс-ланцюг із 209 «западиною»- див. таблицю 49 димерний ліганд анти-СО19 (888- 210 018). Ге-ланцюг З див. таблицю 49 «виступом» мономерний ліганд
Таблиця В (Послідовності): нуклеотидна послідовність конструкції анти- 211 сланцю 18), див. таблицю 52 «западиною»- димерний ліганд 771-248 нуклеотидна послідовність конструкції анти- 212 Ср19 (888-018). див. таблицю 52
Ес-ланцюг Кк! «виступом»- мономерний ліганд 71-248 анти-СО19 (888- 018)-Ес-ланцюг із 213 «западиною»- див. таблицю 52 димерний ліганд 771-248 анти-СО19 (888- 018)- Ес-ланцюг з 214 «виступом»- див. таблицю 52 мономерний ліганд 771-248 слааатоСАдаСстасал,аСАа,атотасАсстадастТааЙтТА
АдасстасаасТтСАаТаААаАтТааоСТасСААдцваст тотТапАТАСАСАТТСАСТОАСТАТАТТАТаСАСТОаС нуклеотидна атТаААаСАСпААаАСстТацсиасСАаас?ссттаАата7ацсАТ послідовність тасапАТАТАТТААТССТТАСААТаАТаСаТТСТААаТтА 215 батьківського САСТаАСААДИаИТТСААСсасСсААаасСсСАСАСТалстТто клону СО19 (888)/) АФАСАААТСТТОСАТСАСА,ССТАСАТОСАаСТСАС
УН саласстаАдссттала,асАстта7арааТСТАТТАСТа тасСсАдадасасаАССТАТТАТТАТОСТАС,ССИЯаСССТСТТ таАСТАСТаСОаССААааСАССАСТОТСАСАСТСТО стос сАТОаОСТатТаАТаАСССАААСТОСАСТСОТОССТасст атоаатотацпАСАТСААаССтТоСАТСТОТТасСсАса нуклеотидна тТСстТАаТтСАаАассСстТаААААСАаТААТапАААСАССо послідовність ТАТТТОААСТАСТАССТОСАСАААССАсСИа7асСАаТтст 216 батьківського ССАСААСТОСТаАТСТАСАСИаст ТССАААСаАТТТ клону СО19 (888); ТСТаСОсСОсСТоСтТАсСАСАсСаттоАаатаатТАаТасАТСА
МІ. сапАСАСАТТТСАСАСТОаААААтТоАдасСАаАатТасА сестадапАттапйспАатТ ТАТ ТСТасССтТАСААСТТ
АСАСАТОТоССатАСАСЯТ ТсСОаСсСАСЯСИЦсВИасАССААдС
СстТасАААТААДА
СбОр19 ІТ, 217 зворотний див. таблицю 53 випадковий (праймер)
СО19 12, прямий 218 випадковий див. таблицю 53 (праймер)
Таблиця В (Послідовності): тат
СбОр19 НІ, 219 зворотний див. таблицю 53 випадковий праймер
СО19 Н2, прямий 220 випадковий див. таблицю 53 (праймер)
СбОр19 НЗ, 221 зворотний див. таблицю 53 константний (праймер)
ІМ див. таблицю 53 019 11, прямий 223 константний див. таблицю 54 (праймер)
СбОр19 ІЗ, 224 зворотний див. таблицю 54 випадковий (праймер)
СО19 13, прямий 225 константний див. таблицю 54 (праймер)
СбОр19 НЗ, 226 зворотний див. таблицю 54 випадковий (праймер)
Таблиця В (Послідовності): сасассастласаасСАТСИАСТАСАдасАсСаАсСаИ
АТОАСАДдаасСсаасСАТСИАТасСсСАТСАТИасАСАДА вАСТаСаАААТаАдАлаСасСАССАСССтТасАТтАасСостТ стасвасСсАдаСстТааААстатстасватасцАдСАасвсас стасСсАССАСАТСААДОСТЯАСТАСИаСАААДасААСАТСТ ссасссдса,ассатасзадлатасстасссСсАдаоСасс стаставаСсасАсСАдадаСсСАСТалтасСсааассСсАсс состТаастСсААСасстАСТТТСАССАаСсСсТаАцваИсс
АТсСсДасааттсосстатасСсАдассстТасСАССАСССА стат оСАдаСАаа,асАадасСсТТАссСсеасСАаатаста тааАААСстастадддатастаАалаттСааАсАаИсто
АтТсАасСстТАСсСсАасАаастаассасостаассСаасСААТ сссассассАассасСсасСсоатТаААААСсСсассстадас ваАААтТоссаТатассССАТТСТОАТоСССсТасССАССИО стаататотластотассассатасасаастТАСОоАа саоссастоасСатаАдАдалатасстаставссСсСАС сАчсааССАСАсСАСсТасИеСААасставаставатад тТАТССССОСАсСаАдАсоСсСсТаИтсатадаа,аатасАаАад саваспАСсСААТассатастасаХатасстадад,ааасАс стоСбаАтТаасСссСстТАСсСсСсАасАаасталсстаатссАа нуклеотидна АвАдадасоооСстААдассстсоСстаАда7астатстот послідовність сасстасстасоСстасасСАТССАТАТОАСИаССтТОтТ 297 міченої ЗМАРІ ПССАТСТОССТаТттСАТСТТСААСОСТатоссСАасА конструкції ЕСО аАТасСсСсаасттотаостататодасставасссоссо людського СО19- АТСТаДаАчАСсасттасСсАасстаасСставАССатТОдА
РоаЕВ сатааддасвАатосаасссАХаастатсосасатацчААдсат стосаАтотасассасстасаатасавассСстТадАадА
СсАСАТСТАаСОЯАсСаасосСсАа,асАаасооСАасСаасСА
ААСсТаАТадасссСсАдастатасататавасССАдаИс
АСсАВАСССаАдвАТСТаСКСЯА;амСсСССОСсОСАс,СоСстосттасс тассссСстТАапАаАСАаССсТадАССАасАасстадасс дапвАСсСстТаАСААтТаассосстаасСАасСАСАСТатаас таластатасСсатассСАссСсадстотататстАадиа сесостотадастаайАсССАСсатасСАСССТААИаИаСос
СстТААдаСАХдасстастадассСтасААСТаААааАаСаАс дасоссасСсАааАваАтТАТатасатСАТааАААССва сстастастасстАдаАаасСсСсАСАаССсСАа,аадтасся
СААСТАСТАСТасССАСАЧАДСаСААССтТалдсСсСАТОИ АС
СсТТоСсАССтТасАААТСАССЯаСсСсАасАсссатастата ссАстТтаастастадаААСсАсассаставААаатсСо
АСОААСАААДААСТСАТСТСАПСААОАдОаСАТСТОаАДАТ сстатаваСсСАаааАСсАСсасАаасАаатоАтсатаста сССАСАСТОСТТасСсСсСтТттТААлсСатаатастаАТСТСА есосАТОСТОССОСТОСТОаТастоАССАТСАТСТОССО
ТТАТСАТССТСАТСАТаСТТТОССАСААСААдаССАС ат
Таблиця В (Послідовності): ссасссассастаасСсааСАТССАСТАСААДИааАСОАС вАТаАСААаСсасСсавсСАТоаАтТассСАТСАТасАСАА
АаАСТаСаАААтТаддасСсаСАССАСсССсТасвАТАассс тотаваСАдастасАастаттасиатасаААСАацсО сСтТасСАСаАаАТСААХаСстТастапаСАААсСаААСАТО тассассадсассатавАдАлатасстассосСАасСас сатаставаСапАССАсАаасСсСАСстТадтасааассСАс сасстаасСстТСААСасстТАСТТТСАССАаСсСсТаАаас
СсАТСЯАСОСАСТОоССТатТаСсСАаССсСстТасАССАССС дататтосдасадасАааастАсоссассАааи,таст стапААдАдстТастадддатаатаддасттсасаАадась тТСАТСАаСтТАССАССАСССТЯОСССОЯСоСТВааСсСваСА
АтТосСсассассАассассасСаТтаААААССассстад соапАААТоССИЯТассСсАТТСТадтоССсСТасСсСАСС саатастаттаастотассассатасаавастАСа дасасссастоасСатаддАдалатасстастаассс дсадаавСсСАСсАаАдставчасАаасстасастасцат вАТАТСССССАСИалАСССсСТа,тсатаддастТасцяАА сАааааспАСААтТассатастосастатстаАасвас нуклеотидна АсстоСбадтааСсСссСтТАСАСАаСсСАОеСстовстатаатас послідовність АаАСАСсАХасоссттосАасостоСстТалдАсстаТатст міченої «МАР Тс СсСсТОССстТаасСАТОСОИСАТСАСААТОСОСССТ 228 конструкції со стевасАТСТООСТОСТОАТСТТСААСОТОТОСААС срі9 мавп ЄеАссассассттотТАсстататсАосстососто ціномолгус |сСсААаСаАСААдаасттассАасставАтааАССоТ
РОСЕВ стосатааАдАадасАатотасовАаастатсСсаатТацАА саеататоСбадтотасассасстасадтасаассСстТадА вААСАСАдДасСсаассаасасассостаасСАаассоСАаса
ВСАДаАСТалдАТАаСАСССТСАСОССТОтТАСОЯЯСТатасассСА дапАСсАапАдссСсададлтатасаласвсиИсвАяасстата татааСсСССССтТАСАЧаАТтАаССстТалАССАаДаССстТа дассдаспАСсСТаАСААтТаасСооСстааСАасСАСАСТаИ таастодастатааСсатасСсАссСсаастста7ататос дадсасостоталасСставАСАсАсатасаасСсСтТААа сассСстТААдсАхасасостастадасстаайААСТаддАа вАСОСЧАССЯСаЯСоСсСсвАСсСсОСасАтТАТатасатастааАтТ
АсАдса,7асстастастаАасСАаадаСсСАСАаасоСАасцАтТ ссСсаасСАдатАСТАСТасССАСАЧАаааСААСтТааАсс
ААдадасттггТАССТапйАААТСАССОЯССАаАсоСсасс статааСсАсТтасстастаАдаААтосасА,вастацсяада стоаАСсадаСАаАддастадтстСаААсАааАСстТ вААССЯССОЯТОаСсОЦоСАасАТтТАСССАааААатадтса таатасСсССАСАСССТАСССТТСААсатаатсатад тбАдасасСсАТТСсТОССсССТО!СТасТасСстТадасСсСАТСА теАассСстТаАТСАТССТОАТТАТИАСТОаТасССАСААдДА дассссас
Таблиця В (Послідовності): че
РАААБИаЇвУКОВООКАСІВАІМОКОСЕМКАТТІО5РІ.
СКІЕГ5аСЕОСІ НЕІК ЯКаТ5ЗААВАМЕМРАРААМІ.
СОаРЕРІГМОАТАМ/ МАМЕНОРЕАІЕЕЕРРМРАСННРМЕГО
ОЄЗЕТВОМІ МКГ. КУУКРИєгМІЗУООЇ ААГАСМРААТ попіпептидна ААУКТАЇ ЗаМРУРІПРСОНАУУЗЗЗОАМСсаМЕааИ АМ послі овність КЕМПАНЕСНВІ СКРОИЇ СОІРЕЕРІ МУКМЕЕСОМАМІ. міченої МАР ОСІ КаТ5РОаРТООЇІ ПМУЗАЕ5РІ КРЕЇ КІ 5І СРО СДН 223 конструкції ЕСО МАРІАМ/РІЕМУЗООМИасеЕмМІ СОРЕРРЗЕКАУМОРОМУ подо Сріа | ТУММЕСЗСЕЇЕНМ/МУВОЇ ОСІ ОСС КМАЗЗЕОРБЗРУ
РОСЕВ СК М5РКУУМАКОВРЕМ/ЕСЕРРСІ РРАОБІ МОБІ 5
ОБІГТМАРИЗТІ МІ 5БСОМРРОБУЗНАОРІ БМУУТНУНРКа Р
КБ ЗІ ЕГКООАРАВОМУУМЕТОа ГІ РВАТАОВАСК
УУСНАОМІ ТМ5ЕНГЕІТАВРМІ М НУЛІ. ВТасСУУКМОЕ
ОКСІ5ЕЕОІ МАМЕООЮТОЕМІМУ РН5БІ РЕКМУМІЗАЇ АГ.
ММУСТІЗСПЕТМІ УМОККРА
РАААБИаЇвУКОВООКАСІВАІМОКОСЕМКАТТІО5РІ.
СКІЕГ5аСЕОСІ НЕІК ЯКаТ5ЗААВАМЕМРАРААМІ.
СОаРЕРІГМОАТАМ/ МАМЕНОРЕАІЕЕЕРРМРАСННРМЕГО
ОЄЗЕТВОМІ МКГ. КУУКРИєгМІЗУООЇ ААГАСМРААТ попіпептидна ААУКТАЇ ЗакМРУРІПРСОНАУУЗЗЗОАаМСааМЕааИ АМ послі овність КЕМІ ГАНЕСННВІ КРИ ЯОІРОЕРІ МУКМЕЕСОМАМІ. міченої МАР ОСІ ЕСТ5РОаРТООЇ ММУ/СВО5РЕЕРРБІ МІ БІ С РОМІВ 230 конструкції ЕСО МаРГИамУм м гтеМЗМОоТасеЕмі СОР РЗЕКАУМОРОМУ людського Сріа | ТУЗУЕОБОЕЇІ ЕАМ/МУЗОІ ОСІ ОСОІ КМАЗЗЕСРОБРБС
РОСЕВ КІМЗБОЇ УММАКОВРЕМУЕСЕРУСОРРАЮОБІ МОБІ 5
ОБІГТМАРИЗТІ МІ 5СОМРРОБУЗНАОРІ БУУТНУАРКОаР
КЗЗ БІ ЕЇ/'КООАРОВОМУУМОТОа І ТААТАОВАС
КУУСНАаММТкКОЕМІ ЕІТАВРАСМУНУМ І ВІССУУКМО
ЕОКІІЗЕЕОЇ МАМЕООЮТОЕМІММРНБІІ РЕКМУМУМІЗАА
ЕММСТІЗСПЕМЕУМОККРА анти-СО19 (888- 5БНОЗ), СОВА! див. таблицю 56 анти-СО19 (888- 5НОЗ), СОВ-АІ2 див. таблицю 56 анти-СО19 (888- 5НОЗ), СОВ-І З див. таблицю 56 анти-СО19 (888- 5БНОЗ), СОВ-НІ див. таблицю 57 анти-СО19 (888- 5НОЗ), СОВ-НО див. таблицю 57 анти-СО19 (888- 5БНОЗ), СОВ-НЗ див. таблицю 57 анти-СО19 (888- 7нол), СОВА див. таблицю 56 анти-СО19 (888- 7но7), сові? див. таблицю 56 анти-СО19 (888- 7но), СоВ-ІЗ див. таблицю 56 анти-СО19 (888- 7но7), СоВ-ні див. таблицю 57 анти-СО19 (888- 7но), Сов-Но див. таблицю 57 анти-СО19 (888- 7но7), СовВ-НЗ див. таблицю 57
Таблиця В (Послідовності):
Таблиця В (Послідовності): і нти-С019 (888- 5ООВ), СОВ-І З див. таблицю 56 анти-СО19 (888- 50ОВ), СОВ-НІ див. таблицю 57 анти-СО19 (888- 50ОВ), СОВ-НО див. таблицю 57 анти-СО19 (888- 5ООВ), СОВ-НЗ див. таблицю 57 нуклеотидна послідовність легкого ланцюга 273 батьківського див. таблицю 58 антитіла до СО19 8вв нуклеотидна послідовність 274 важкого ланцюга див. таблицю 58 батьківського антитіла до СО019 8вв легкий ланцюг батьківського 275 антитіла до СО19 див. таблицю 58 8вв важкий ланцюг батьківського 276 антитіла до СО19 див. таблицю 58 8вв нуклеотидна послідовність 277 легкого ланцюга)| див. таблицю 59 анти-СО19 (888- 2811 нуклеотидна послідовність 278 важкого ланцюга| див. таблицю 59 анти-СО19 (888- 2811 анти-СО19 (888- 279 2811), легкий| див. таблицю 59 ланцюг анти-СО19 (888- 280 2811) важкий| див. таблицю 59 ланцюг нуклеотидна послідовність 281 анти-СО19 (888- див. таблицю 59 7нО7 нуклеотидна послідовність 282 важкого ланцюга| див. таблицю 59 анти-СО19 (888- 7нО7
Таблиця В (Послідовності): анти-СО19 (888- 283 7НнОТ), легкий| див. таблицю 59 ланцюг анти-СО19 (888- 284 7НнОТ), важкий| див. таблицю 59 ланцюг нуклеотидна послідовність 285 легкого ланцюга)| див. таблицю 59 анти-СО19 (888- 203 нуклеотидна послідовність 286 важкого ланцюга| див. таблицю 59 анти-СО19 (888- 203 анти-СО19 (888- 287 2803), легкий| див. таблицю 59 ланцюг анти-СО19 (888- 288 2803), важкий| див. таблицю 59 ланцюг нуклеотидна послідовність 289 легкого ланцюга)| див. таблицю 59 анти-СО19 (888-
БА нуклеотидна послідовність 290 важкого ланцюга| див. таблицю 59 анти-СО19 (888-
БА анти-СО19 (888- 291 БАО), легкий| див. таблицю 59 ланцюг анти-СО19 (888- 292 БАО), важкий| див. таблицю 59 ланцюг нуклеотидна послідовність 293 легкого ланцюга)| див. таблицю 59 анти-СО19 (888- 50о8 нуклеотидна послідовність 294 важкого ланцюга| див. таблицю 59 анти-СО19 (888- 50о8 анти-СО19 (888- 295 50О8), легкий| див. таблицю 59 ланцюг анти-СО19 (888- 296 50О8), важкий| див. таблицю 59 ланцюг
Таблиця В (Послідовності): нуклеотидна послідовність 297 легкого ланцюга)| див. таблицю 59 анти-СО19 (888- 5воОВв нуклеотидна послідовність 298 важкого ланцюга| див. таблицю 59 анти-СО19 (888- 5воОВв анти-СО19 (888- 2993 5808), легкий| див. таблицю 59 ланцюг анти-СО19 (888- 300 588), важкий| див. таблицю 59 ланцюг нуклеотидна послідовність 301 легкого ланцюга)| див. таблицю 59 анти-СО19 (888- 5нОЗ нуклеотидна послідовність 302 важкого ланцюга| див. таблицю 59 анти-СО19 (888- 5нОЗ легкий ланцюг
ОЗ анти-СО19 (888- див. таблицю 59 5нОЗ важкий ланцюг 304 анти-СО19 (888- див. таблицю 59 5нОЗ нуклеотидна послідовність 305 анти-СО19 (888- див. таблицю 62 2В11), Ес-ланцюг із «западиною» анти-СО19 (888- 306 2В11), Ес-ланцюг із див. таблицю 62 «западиною» нуклеотидна послідовність конструкції анти- 307 Сбр19 (888-2811)- див. таблицю 64
Ес-ланцюг із «западиною»- димерний ліганд нуклеотидна послідовність конструкції анти- 308 Сбр19 (888-2811)- див. таблицю 64
Ес-ланцюг Кк! «виступом»- мономерний ліганд
Таблиця В (Послідовності): анти-СО19 (888- 2811)-Ес-ланцюг із 309 «западиною»- див. таблицю 64 димерний ліганд анти-СО19 (888- 2811)-Ес-ланцюг з 310 «вИступОМ»- див. таблицю 64 мономерний ліганд нуклеотидна послідовність конструкції анти- 311 сланцю вих див. таблицю 67 «западиною»- димерний ліганд 771-248 нуклеотидна послідовність конструкції анти- 312 сланцю ви див. таблицю 67 «виступом»- мономерний ліганд 771-248 анти-СО19 (888- 2В811)- Ес-ланцю 313 із «западиною»-| див. таблицю 67 димерний ліганд 771-248 анти-СО19 (888- 2811)-Ес З 314 «виступом»- див. таблицю 67 мономерний ліганд 771-248 нуклеотидна послідовність 315 анти-Соч з (8ВВ. див. таблицю 72 018) (ншда
РОГАГА важкий ланцюг 316 018) Со19 (надсі див. таблицю 72
РОГАГА
МКО5УУМІЕР МАМУТаУМ5Е МОЇ ООБСОАЕЇ. анти-ти СЕА| МЕРСАБЗУКІ 5 СТАС ЕМІКО ТИМНУУКОВР 317 тТ84.66, ЕОС,СІГЕУЛОаВІ ОРАМОМОКМУМ РКЕОСКАТІТ
УН АРТ5ЗМТАМІ ОЇ Т5І Т5ЕОТ АМУУСАРЕСУ
УУЗОХАМАММУ СЮСТОУТУБ
МЕТОТ І МУМ ПУ УРазта ріМ ТОРА анти-ти СЕА|П АМ5І ЧаОВАТ М5СВАСЕБМО ІРСМОа РІ НМУ 318 тТ84.66, ОСООКРООРРКІ ПІМАВАБЗМІЕЗ СІРУВЕЗИТО
МІ. ЗАТОЕТШЮ РМЕАВОМАТУ УСООТМЕОРУ тТгасаткКІ ЕІ Кк
Таблиця В (Послідовності): тТААСССОасСтТТ ССтТАатТосСтТА даИСТадасяла апаАТтОоСтТа атТТТАаТТАА АСАдОаСАТТТТ
АТТСАССССТ ТаТоСТСТо САСАСаатТаТто
САатосСАса тсесАдаСстастТ асСААТСТОааа а,астадастаА дйдАаСсстТасатостаста я ААдЧатстосСтТ асАддсастто тапдасасСАСС 819 До -53 поступу ТТСАССАССТ АТАСТАТСАС СТОССТОССА 714309 сАда,СоСоСтТа вАСАда,аааст тадатасаАта пОААасСсАТСА ТСССТАТСОСТ ТИСТАСАССА
ААСТАСасАС АСАдАатТТоСА сСсИаСАадаТто
АССАТТАССа сасАСАААТо САСИадДаСАСА асСсСтТАСАТОС ДОСТОдаСАс ССТаАсСАТСТ аАдапАСсАСасас ссбататАТТА СсСТатТасСОадаА ад стасласСтТосй АДасСтТоАасСтТ СССАСССАсС тастТасСАТ аТОоССТоССАИСССТасссСтТАС
СТТССАСАСС ССАТАТСААТ аССТататсА сласостаса адапААСтТас ТСАИТТАсааА
СССАпАсСаасА АССАТапйАда ссССАсасСтТСА асттотстто стостТастАС ТСТаОаСТоСо даа,атадасООа ААСАтТадсат ват тасАС
АТТАатОаАдДА АСТСТТасСсСА ССТСТастоСА
ССААСАдДАТА ТААТТААААТ ТСААДАСТАТА
ТСААСААТТТ ТааСТСТАСТ СААДАСАСАИТ тТаатТТОАТО ТТОАТТАСАТ СДИТОаСАТТТ
СТаТтТТТАТТ ТССААТТТСА САТАССАССО
ІСКУЗ-11:01 ІМСТ САСАДАТТОТ аТТаАСАСАса ТСТоСАассА 320 код доступу й ссстатст атстоСАдаса ваАддадассА сесстотосСста саасассСАат сдадататтТА асСАССТАСТТ ДаССтТасСтТАС СААСАСАдДАС сТаСсСАвОаС ТСССАСасСтТо СТСАТСТАТО
АТОаСАТССАА СДСаОСОИССАСТ СМЧСАТСССАС
ССАССтТтсАа ТааСАсТасСса тотапсаАСАС
АСТТСАСТСТ САССАТСАСО ДИССтТАасдас
СТОаААСАТТТ ТаСАСаТТТАТ ТАСТаТСАсС да,асатАасСАА СТааССТОоСС АСАСТОаАТТО
САСАТОАААС АДДДАССССА АСААСАССАТ
САССТОаТТТАС ТАСАТТАТТА ТАССАОаСтТОаС
ТТОСТТТАСА САСсАДОаСстТАСсТтТ ссаатТаасСА
СсТСАатТаТтТА аСАТСТСАСС ТСТАТТТОИаС
САТТТТасСАС ТТСАдИт батьківський СЕА- 327 зв'язуючий агент, див. таблицю 81
УН батьківський СЕА- 328 зв'язуючий агент, див. таблицю 81
МІ.
Таблиця В (Послідовності): гуманізований 323 СЕА-зв'язуючий див. таблицю 81 агент, МН гуманізований 330 СЕА-зв'язуючий див. таблицю 81 агент, М. нуклеотидна послідовність 331 анти-СЕА (Т84.66- див. таблицю 82
ІЇСНА), Рс-ланцю із «западиною» нуклеотидна послідовність 332 легкого ланцюга)| див. таблицю 82 анти-СЕА (Т84.66-
ЇСНА анти-СЕА (Т84.66- 333 ЇСНА), Ес-ланцюг див. таблицю 82 із «западиною» анти-СЕА (Т84.66- 334 ІЇ СНА), легкий| див. таблицю 82 ланцюг нуклеотидна послідовність конструкції анти- 335 СЕА (Т84.66- див. таблицю 84
ІЇСНА)- Рс-ланцю із «западиною»- димерний ліганд нуклеотидна послідовність конструкції анти- 336 СЕА (Т84.66- див. таблицю 84
ІЇСНА)- Рс-ланцю
Кк «виступом»- мономерний ліганд анти-СЕА (Т84.66-
ІЇСНА)- Рс-ланцю 337 із «западиною»- див. таблицю 84 димерний ліганд анти-СЕА (Т84.66-
ІЇСНА)- Рс-ланцю 338 з «ВИСТУПОМ»- див. таблицю 84 мономерний ліганд нуклеотидна послідовність конструкції анти- 339 ГСНА). сланцю див. таблицю 87 із «западиною»- димерний ліганд 771-248
Таблиця В (Послідовності): нуклеотидна послідовність конструкції анти-
СЕА т84.66- 340 ОНА); во-панцю див. таблицю 87
З «виступом»- мономерний ліганд 771-248 анти-СЕА (Т84.66-
ІЇСНА)- Рс-ланцю
ЗА із «западиною»-| див. таблицю 87 димерний ліганд 771-248 анти-СЕА (Т84.66-
ІЇСНА)- Рс-ланцю 342 З «виступом»-| див. таблицю 87 мономерний ліганд 771-248 нуклеотидна послідовність 343 анти-СЕА (184.66); див. таблицю 88
Ес-ланцюг із «западиною» нуклеотидна 344 ПОСЛІДОВНІСТЬ див. таблицю 88 легкого ланцюга анти-СЕА (184.66 анти-СЕА (Т84.66), 345 Ес-ланцюг із див. таблицю 88 «западиною» легкий ланцюг нуклеотидна послідовність конструкції анти- 347 СЕА(Т84.66)-Ес- |див. таблицю 89 ланцюг із «западиною»- димерний ліганд нуклеотидна послідовність конструкції анти- 348 СЕА (1Т84.66)-Ес- див. таблицю 89 ланцюг З «виступом»- мономерний ліганд анти-СЕА (Т84.66)-
Ес-ланцюг із 349 «западиною»- див. таблицю 89 димерний ліганд анти-СЕА (Т84.66)-
Ес-ланцюг Кк! 350 «вИСТуУПОМ»- див. таблицю 89 мономерний ліганд
Таблиця В (Послідовності): нуклеотидна 351 послідовність Пи див. таблицю 92
МАЗВЗА2-амі Ніб людський нуклеотидна послідовність конструкції 353 димерний Пи див. таблицю 97
ОХ401І (51-183)
СіІ"-Ре-ланцюг з «виступом» нуклеотидна послідовність 354 КОН ВУК пи див. таблицю 97
ОХ401І (51-183) (він димерний пи 355 селян зі ДИВ. таблицю 97 «виступом» мономерний Пи 356 ОХ401Ї (51-183) - див. таблицю 97
СНІ"
ОМОЇ МОБОАЕУККРИИАБУКУЗСКАБИаМТЕТОМІМНУУ 357 анти-С0О19 (888- МВОАРОССІ ЕУУМОаМІМРУМОСЗКУТЕКЕеЕОСВУТМТ5 2811), УН ОТ5ІЗТАМУМЕЇ 5ВІ В5ООТАУМУСАНИТУММСРОЇІ БО ума, УТУ55 анти-С019 (888- РІММТОТРІ 5І 5МТРИОРАБІЗСКОООБ ЕТЗТИаТТмІ М 358 2811), М. ММ ОКРООБРОЦП ІМАМЗ5КАЕЗаМРОоВЕЗОаЗаБаТОЕТ " ЇКІЗАМЕАЕО МО МУ МС СОЇ ЄОРМТРСОСТКІ БІК
ОМОЇ МОБОАЕУККРИИАБУКУЗСКАБИаМТЕТОМІМНУУ
ЗБО анти-С0О19 (888- МВОАРООСІ ЕУУМОамМІМРУМОСЗКУТЕКЕОСВУТМТ5 7НОТ), МН ОТ5ІЗТАММЕЇ 5ВІ В5ВОТАУММСАВаИТтуммаоЕї ЕО ума, УТУ55 анти-С019 (888- РІММТОТРІ 5І 5МТРИИОРАБІЗСКОБОВІ ЕТЗТОИМТМІ М 360 7НОТ), М. ММ ОКРООБРОЦП ІМАМЗ5КАЕЗаМРОоВЕЗОаЗаБаТОЕТ " ІЇКІЗАВМЕАЕОМОа МУ МС ОАТНІРМТРСОСТКІ БІК
ОМОЇ МОБОАЕУККРОАБУКУЗСКАБИаМТЕТОМІТНУУ зві анти-С0О19 (888- МВОАРОССІ ЕУУМОаМІМРУМОСЗКУТЕКЕеЕОСВУТМТ5 2803), МН ОТ5ІЗТАММЕЇ 5ВІ В5ООТАУММСАВаИТтУммМаРОІ БО ума, УТУ55 анти-С019 (888- РІММТОТРІ 5І 5МТРИИОРАБІЗСКОБОВІ ЕТЗТОИМТМІ М 362 2803), М. ММ ОКРООБРОЦП ІМАМЗ5КАЕЗаМРОоВЕЗОаЗаБаТОЕТ " ІЇКІЗВМЕАЕОУМа МУ МС ОЇ ТНУРУТРаОСИХКІ БІК
ОМОЇ МОБОАЕУККРИИАБУКУЗСКАБИаМТЕТОМІМНУУ 363 анти-С0О19 (888- МВОАРОССІ ЕУУМОаМІМРУМОСЗКУТЕКЕеЕОСВУТМТ5
БАОТ), МН ОТ5ІЗТАММЕЇ 5ВІ В5ВОТАУММСАваТтуммавА ЕО
Уужма7ратТтУтУ55 анти-С0О19 (8В8- РІММТОТРІ 5І 5МТРИИОРАБІЗСКОБОВІ ЕТЗТОИМТМІ М 364 БАО7), М. ММ ОКРООБРОЦП ІМАМЗ5КАЕЗаУРєРОВЕЗИаБИОаБаТОЕТ " ЇКІЗВМЕАЕОМа У У МС ОРСНУРОТРСИОСТКІ БІК
Таблиця В (Послідовності):
ОМОГМОЗСАЕМККРОАЗУКУВЗСКАЗОУТЕТОМІМНМУ зб5 анти-СО19 (888- УВОАРСОСІ ЕМ/МСМІМРУМОСЗКУТЕКРОСВУТМТ5 5008), УН ОТ8ІЗТАУМЕЇ ВІ АЗООТАМУУУСАВСТУУУ ЗЕ! ГО
УМ/СОСТТУТУВ5 антиср19 (вва. ОІУМТОТРІ-ВІЗУТРООРАВІЗСК5ВОВГЕТВТОМТУЄМ 3665008) Мі. М/УІ ОКРООЗРОЇ ПУВУЗКВЕЗСУРОВЕЗО5О5СТОвТ
І.КІЗВУЕАЕОУСУУУСІ ОЇ. ТНЕРУТЕСОСТКІ ЕІК
ОМОГМОЗСАЕМККРОАЗУКУВЗСКАЗОУТЕТОМІМНМУ збу анти-СО19 (888- УВОАРСОСІ ЕМ/МСМІМРУМОСЗКУТЕКРОСВУТМТ5 5ВОВ), УН ОТ5ІЗТАУМЕЇ ВІ АЗООТАУУУСАВОТУУУ РОЇ ГО
УМ/СОСТТУТУВ5 антисот9 (8в8| ОІУМТОТРІВІ ВУТРООРАВІЗСКУВОСЕТВТОМТУЄМ 368 |ВОВ) М М/УІ ОКРООЗРОЇ ПУВУЗКВЕЗСУРОВЕЗО5О5СТОвТ
ІКІЗВУЕАЕОУСУХУСІ ОЇ О8УРМТЕСОСТКІ БІК
ОМОГМОЗСАЕМККРОАЗУКУВЗСКАЗОУТЕТОМІМНМУ зва анти-СО19 (888- УВОАРСОСІ ЕМ/МСМІМРУМОСЗКУТЕКРОСВУТМТ5
БНОЗ), УН ОТ8ІЗТАУМЕЇ ВІ АЗООТАМУУУСАВСТУУУСЗА! 0
УМ/СОСТТУТУВ5 антисСот9 (8в8| ОІУМТОТРІВІ ВУТРООРАВІЗСКУВОГЕВВТОМТУ ТТ 370 |БНОВ) М. М/УІ ОКРООЗРОЇ ПУВУЗКВЕЗСУРОВЕЗОЗО5СТОвТ
І.КІЗВУЕАЕОУСУХУСІ ОПОУРУТЕСОСТКІ БІК
ОМЗНАХУРВІОВІКУОРТЕУККЕКСЕЇЙ ТЗОКЕОБІМКУ
- ОМММІИМСОСЕМИВІ КОУЕЗОЕУМІВІ НУОКОЕЕРІ Є
МОХ. (51-183)) ОІЖКУАВУМВІ МУАЗІ-ТУКОКУХІ МУТТОМТВІ ОО 871 з'єднаний 30 НУМОСЕЦПИНОМРОЕРСМ СОСОВОССО5ОУ5НАУР допомогою (с45)2- Н'ОВІКМОЕТЕУККЕКОНІ-Т8ОКЕОЕІМКУОММОМИМ пінкера СОСЕМИВІ КОУЕЗОЕУМІВІ НУОКОЕЕРІ РОЇ ККУВО р ММ8І МУАВІ ТУКОКУМІ МУТТОМТВІ ООЕНУМОС ЕІ
ИНОМРОЕЕСМІ.
МЗНАУРВІОВІКУОРТЕУККЕКСЕІЇ ТЗОКЕОБІМКМО
- МІМЗМИМСОСЕМІ ВІ КОУЕЗОЕУМІВІ НУОКОЕЕРІ ГО
МОХ. (Б2-183)) НККУВВУМВІ МУАВІ-ТУКОКУХІ МУТТОМТВІ. ООН 372 з'єднаний 34 УМОСЕПННОМРОЕРСМІ СОС СО5У5НАУРНІО допомогою (645)2-| З'ЇКУОРТЕУККЕКОНІ. ТЗОКЕОЕІМКУОММОМИМСОС пінкера РМИІВІ КОУЕЗОЕММІВІ НУОКОЕЕРІ РОЇ ККУВ5УМО р ІММАВІ ТУКОКУХІ МУТТОМТВІ ООЕНУМОСЕНИН
ОМРОЕЕСМІ.
ГОГАОСМЕАОГ УАОММІ ОСІ ЗМ/УЗОРОГАСУЗВІТ
СОЇ ЗУКЕОТКЕЇ УМАКАСУУУМЕРОЇ ЕІ ВВУМАСЕС
373. |пи 4-18ВІ. (85-248) | ЗО5У8ІАІ НІ ОРІ ВЗААСАААЇ АІ ТУОЇ РРАБЗЕАВМО
АРСРОСВИ НІ ЗАСОВІ СУНІ НТЕАВАВНАМОЇ ТОС
АТМІ СІ ЕВМТРЕЇІРАСІ.
ОРАСІ ОІГВОСМЕАОІ МАОММІ ПОСРІ ЗМУУЗОРОГА
СУВІ ТОСІ БУКЕОТКЕЇ УМАКАСУУУМЕРОЇ ЕІ АВУМ
374 |ни 4-18ВІ. (80-248) | АСЕС8ЗО8УЗІ АІ НІ ОРІ ВЗААСАААГ А ТУОІ РРАЗЗЕ
АВМ5ЗАРСЕОСВИ НІ ЗАСОВІ СУНІ НТЕАВАВНАМО
І ТОСАТМІ СІ ЕВМУТРЕЇІРАСІ.
РУАУ5ЗСАВАЗРОЗААЗРНАЇ НЕСРЕЇ ЗРООРАСІТ ОІВ
ОСМЕАСІ МАОММІ ОСІ ЗМ/УЗОРСЇ АСУВІ ТОСІ 5
УКЕОТКЕГ УМАКАСУУУМЕЕОЇ ЕІ ВВУХАСЕСЗОВУ
375 упо ЯТВВІ- (527248) в) ДІ НІ ОРІ АЗААСАААЇ А. ТОЇ РРАЗЗЕАВМЗАРСЕ
ОСВИ НІ ЗАСОВІ СУНІ НТЕАВАВНАМОЇ ТОСАТМІ.
СІЄВМТРЕЇІРАСІ.
Загальну інформацію, що стосується нуклеотидних послідовностей легких і важких ланцюгів людських імуноглобулінів, див. У: Караї Е.А. та ін., Зедиепсевз ої Ргоїєїп5 ої Іттипоіоадіса
Іптегеві, 5-е вид., вид-во Риріїс Неайй бегмісе, Маїййопаї! Іпзійшев ої Неацй, Веїйезаа, МО, 1991.
Амінокислоти ланцюгів антитіл нумерували і позначали відповідно до системи ЕО-нумерації згідно з Кеботом (Кабаї ЕА та ін., Зедиепсевз ої Ргоївїп5 ої Іттипоіодісаї! Іпіегеві, 5-е вид., вид-во
Рибіїс Неайй Зегуісе, Маїййопаї! Іпвійшевз ої Неай, Веїпезаа, МО, 1991), яка описана вище.
Приклади
Нижче наведені приклади способів і композицій, запропонованих у винаході. Як повинно бути очевидно, можна втілювати на практиці різні інші варіанти здійснення винаходу в цілому з урахуванням представленого вище опису винаходу.
Методи рекомбінантних ДНК
Для маніпуляцій з ДНК використовували стандартні методи, описані у Затюогоок .. та ін.,
Моїесшіаг сіопіпуд: А Іарогаїогу тапиаї; вид-во Соїд Зргіпд Нагрог І арогаїогу Ргез5, Соїй 5ргіпд
Нагрог, Мем/ МогкК, 1989. Реагенти для молекулярної біології застосовували відповідно до інструкцій виробників. Загальну інформацію, що стосується нуклеотидних послідовностей легких і важких ланцюгів людських імуноглобулінів, див. У: Кабаї Е.А. та ін., Зедиепсев5 ої
Ргоївїпв ої Іттипоіодісаї Іпіегеві, 5-е вид., вид-во МІН, публікація М 91-3242, 1991.
Секвенування ДНК
Послідовності ДНК визначали шляхом секвенування двох ланцюгів.
Синтез генів
Необхідні сегменти генів або створювали за допомогою ПЛР з використанням відповідних матриць, або синтезували на фірмі Сепеагй АС (Регенсбург, Німеччина) з синтетичних олігонуклеотидів і ПЛР-продуктів за допомогою автоматичного синтезу генів. У тих випадках, коли точна генна послідовність не була доступною, створювали олігонуклеотидні праймери на основі послідовностей найближчих гомологів і гени виділяли за допомогою ЗТ-ПЛР з РНК, одержаної з відповідної тканини. Сегменти генів, фланковані одиничними сайтами, розпізнаваними рестрикційними ендонуклеазами, клонували в стандартних клонуючих/секвенуючих векторах. Плазмідну ДНК очищали з трансформованих бактерій і визначали концентрацію за допомогою Уф-спектроскопії. Послідовність ДНК субклонованих
Зо фрагментів генів підтверджували ДНК-секвенуванням. Створювали сегменти генів з необхідними сайтами рестрикції, що дозволяють субклонувати їх у відповідних експресійних векторах. Всі конструкції створювали з 5'-кінцевою послідовністю ДНК, що кодує лідерних пептид, який направляє секрецію білків в еукаріотичних клітинах.
Методики культивування клітин
Застосовували стандартні методики культивування клітин, описані в: Сигтепі Ргоїосо!5 іп СеїЇ
Віоіоду, під ред. Вопіїасіпо 9.5., Оаззо М., Напога ..В., ІІрріпсой-Зспуган у. і Матада К.М., вид- во допп Умїеу б Бопв5, Іпс., 2000.
Очищення білків
Білки очищали з профільтрованих супернатантів клітинних культур відповідно до стандартного протоколу. В цілому, метод полягав у наступному: білки вносили в колонку з білок
А-сефарозою (фірма СЕ Неайсаге, Швеція) і промивали за допомогою ЗФР. Елюцію білків здійснювали при значенні рН 2,8, після чого негайно проводили нейтралізацію зразка.
Агреговані білки відокремлювали від мономерних антитіл за допомогою гель-фільтрації (Супердекс 200, фірма СЕ НеайПсаге) в ЗФР або в 20мМ гістидину, 150мМ Масі, рН 6,0. Фракції мономерних антитіл об'єднували, концентрували (за необхідності), використовуючи, наприклад, центрифужний концентратор МІССІРОКЕ Атісоп Ойга (30 МУУСО), заморожували і зберігали при температурі -20 "С або -80 "С. Частину зразків використовували для подальшого аналітичного аналізу білків і аналітичної характеризації, наприклад, за допомогою ДСН-ПААГ, гель-фільтрації (ЗЕС) або мас-спектрометрії.
ДСН-ПААГ
Гелеву систему МИРАСЕФ Рге-Саві (фірма Іпмігодеп) застосовували відповідно до інструкції виробника. Зокрема, застосовували 1095 або 4-1295 гелі МИРАСЕФ МомехФ Ві5-ТВІ5 Рге-Саві (рН 6,4) і рухливий буфер МиИРАСЕФ МЕЗ (відновлені гелі з антиоксидантною добавкою для рухомого буфера МиРАСЕФ) або МОР: (невідновлені гелі).
Аналітична гель-фільтрація
Гель-фільтрацію (ЗЕС) для визначення агрегованого і олігомерного стану антитіл здійснювали за допомогою РХВР-хроматографії. В цілому, метод полягав у наступному: очищені на білку А антитіла вносили в колонку Тоз5оп ТЗКде! З30005УМ в ЗО0мМ масі, 50мММ
КН2РОЗ/К2НРОХЯ, рН 7,5 в системі Адііепі НРІ С 1100 або в колонку Супердекс 200 (фірма СЕ бо Неаййсаге) в 2 х ЗФР в системі Юіопех НРІС. Елюйовані білки оцінювали кількісно за допомогою Уф-абсорбції та інтегрування площ піків. Як стандарт служив ВіоКай сеї Рійгайоп
Зіапаага 151-1901.
Мас-спектрометрія
В цьому розділі описана характеризація мультиспецифічних антитіл з МН/Л. -обміном (МН/Л/.
Сго55Мар) по відношенню до їх правильного складання. Очикувані первинні структури аналізували за допомогою мас-спектрометрії з використанням іонізації електроспреем (ЕБІ-МС) деглікозильованих інтактних Сто55Мар і деглікозильованих розщеплених плазміном або в альтернативному варіанті деглікозильованих/обмежено розщеплених ГузС Сто55Маб.
МН/МІ-Сто55Маб деглікозилювали за допомогою М-глікозідази Е в фосфатному або Тріс- буфері при 37"С протягом аж до 17 год з використанням білка в концентрації 1 мг/мл.
Розщеплення плазміном або обмежене розщеплення ІГузС (фірма Коспе) здійснювали з використанням 100 мкг деглікозильованих МНЛ/І -Сто55Мар в Тріс-буфері, рН 8 при кімнатній температурі протягом 120 годин і при 37 "С протягом 40 хв відповідно. Перед здійсненням мас- спектрометрії зразки знесолювали за допомогою РХВР на колонці Сефадекс 525 (фірма СЕ
Неаїсаге). Загальну масу визначали за допомогою Е5І-МС з використанням системи тахів 40
ИНА-ОТОЕ М5 (фірма Вгикег ЮБакопік), забезпеченою джерелом ТгімМегза МапоМаїе (фірма
Адміоп).
Визначення зв'язування і афінності зв'язування мультиспецифічних антитіл з відповідними антигенами за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (РЕ) (ВІАСОКЕ)
Зв'язування створених антитіл з відповідними антигенами досліджували за допомогою поверхневого плазмонного резонансу, використовуючи пристрій ВІАСОКЕ (фірма СЕ Неайсаге
Віозсіепсе5 АВ, Уппсала, Швеція). В цілому, метод полягав у наступному: для вимірювання афінності антитіла у вигляді козячих антилюдських Ід, ЛЕ 109-005-098 іммобілізували на СМ5- чіпі за допомогою амінного поєднання для презентації антитіл проти відповідного антигену.
Зв'язування вимірювали в НВЗ-буфері (НВ5-Р (10мММ НЕРЕ5, 150мМ Масі, 0,00595 Твін 20, рн 7,4) при 25 "С (або альтернативно до цього при 37 "С). Додавали антиген (фірма К 45 О бБуєїет5 або очищений в лабораторії заявників) в різних концентраціях в розчині. Асоціацію вимірювали шляхом ін'єкції антигена протягом проміжку часу, що становить від 80 с до З хв; дисоціацію вимірювали шляхом промивання поверхні чіпа НВ5-буфером протягом 3-10 хв і величину КО
Зо визначали з використанням моделі зв'язування 1: 1 Ленгмюра. Дані, отримані для негативного контролю (наприклад, криві для буфера) вираховували з кривих для зразків для корекції на властивий системі зрушення основного рівня і для зниження шумового сигналу.
Використовували відповідну програму Віасоге Емаїнайоп для аналізу сенсограмм і для розрахунку даних, що стосуються афінності.
Приклад 1 111 Одержання націлених антигензв'язуючих молекул, які містять ліганд для людського 4- 188 в злитті з Ес.
Різні фрагменти послідовності ДНК, яка кодує частину ектодоменів (амінокислоти 71-254, 52- 254 і 80-254) людського ліганду для 4-188, синтезували на основі послідовності Р41273 з бази даних Опіргої (БЕО ІО МО: 42).
Як компоненти для збирання антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд
ТМЕ, поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-18В8В, розділені (с45)»-лінкерами, і злитий з СНІ1- або Сі -доменом людського Ідс1, клонували, відповідно до схеми, представленої на фіг. 1А (людський ліганд для 4-188, ((345)2-конектор, людський ліганд для 4-188В, (С145)»2- конектор, людський СНІ або СІ), або представленій на фіг. 18 (людський СНЗ, (С145)2-конектор, людський ліганд для 4-188, ((145)2-конектор, людський ліганд для 4-188).
Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-18ВВ і злитий з Сі - або СНІ-доменом людського ІДС, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. 1Б (людський ліганд для 4-188, (С45)2-конектор, людський Сі або СНІ), або представленій на фіг. 1Г (людський СНЗ, (Са5)2-конектор, людський ліганд для 4-18В).
Полінуклеотиди субклонували в рамці зчитування з СН2- і СНЗз-доменами важкого ланцюга людського ді з необов'язковими пептидними лінкерами, наприклад, у разі конструкції 1 поліпептид, що являє собою димерний ліганд для 4-188, злитий з людським СНІ-доменом, субклонували в рамці зчитування з СН2- і СНЗ-доменами важкого ланцюга з «виступом» людського Їдс1 (МегесНнапі, 7пи та ін. 1998), використовуючи лінкер (456с5555(025), що має
ЗЕО І МО: 57.
Послідовності ДНК варіабельної області важкого і легкого ланцюга, кодуючий зв'язуючий агент, специфічний для фібробласт-активуючого білка (ЕАР), тобто 28НІ, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною» (Сапег, у. Іттипої. Меїйосд5 60 248, 2001, сс. 7-15), або з константним легким ланцюгом людського да.
Конструювання і одержання зв'язуючих БАР агентів описано в УУО 2012/020006 А?2, яка включена до даного опису як посилання.
В таблиці 1 узагальнені характеристики одержаних конструкцій. Конструкції 1-10 відрізнялись їх геометрією, валентністю по відношенню до ЕАР, ектодоменом ліганду для 4- 188, наявністю кросовера СНІ- і СІ -доменів (Сто55Мабр- технологія), мутаціями в СНІ1- і СІ - доменах і різними пептидними лінкерами в поліпептиді, що містить один ектодомен ліганду для 4-188 (мономерний ланцюг 4-1881.).
Таблиця 1
Характеризація одержаних антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд ТМЕ (БАР розділені тримери 4-1881)
Валентність Ектодомен | «Схрещені» . Лінкер з 4-
Конструкці й Зв'язуючий А-1ВВІ. СсНІ-СІ- Заряджені 188ВГ. в я ВІДНОСНО ЕАР агент залишки легкому
ЕАР домени й ланцюзі 14 0одновалентна|) 28Н1 071-254 |ні/////////|ні///// МО45» 14 одновалентна| 28Н1 | 71-254 |ні (|такбліганд (045)р»..7-:З 15 |двовалентна | 28Н1 | 71-254 |ні/////////|ні///// МО45» 16 одновалентна| 28Н1 | 771-254 |ні (|такбліганд (045)1..-:ЧУС так (БАР Раб, 1.8 двовалентна 28НІ1 71-254 |злитий зі так (ліганд) | (445)2 лігандом) 1.9 фодновалентна| 2881 | 552-254 |ні (| такбліганд |(045))»..-:З (| 10 (|одновалентна| 28Н1 | 080-254 |ні | таколіанд(045)».Г-:З
З метою уникнення помилкового спаровування в більшості конструкцій одну пару СНІ1- і СІ - доменів замінювали на відповідну іншу (кросовер доменів) відповідно до методу, описаному в
МО 2009/080253 АТ.
Для додаткового підвищення правильного спаровування інтродуковали різні заряджені амінокислоти в «схрещені» або «несхрещені» СНІ1- і СІ -домени у вигляді заряджених залишків в конструкціях 2-4 і 6-10. В людський Сі -домен інтродуковали мутації Е123А О124К, а мутації
К147Е і К21З3Е клонували в людському СНІ1- домені.
Для всіх конструкцій застосовували технологію гетеродимеризації «Кпоб5 іпіо поЇІеб5» з мутаціями 5354С/1366МУ в СНЗ-домені ланцюга з «виступом» і відповідними мутаціями
У349С/13665/І 368А/У407М в СНЗ-домені ланцюга з «западиною» (Сагіег, ) Іттипо! Меїнодз 248, 2001, сс. 7-15).
Мутації Рго3З29с1у, І ец234АЇа і І ец235Аїа інтродуковали в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами відповідно до методу, описаному в публікації Міжнародної заявки на патент МО 2012/130831
А1.
Наприклад, в конструкції 1 комбінація ліганд-Ес-ланцюг з «виступом», яка містить мутації
З354С/1366МУ в першому СНЗ-домені, з націленої конструкцією анти-РАР-Ес-ланцюг із «западиною», яка містить мутації У349С/713665/ 368А/У407М у другому СНЗ-домені, дозволяла одержувати гетеродимер, який включав зібрану конструкцію тримерного ліганду для 4-188В і
ЕАР-зв'язуючого Раб (фіг. 2, графік 1.1).
В таблиці 2 представлені кКДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
ЕАР антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.1).
Таблиця 2
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.1) дададасассстадастАаССССпАТаАтоСста|астааА стасАаостас,аасСАдсаасСсАтаттасталастатаассс
АвААдсата|астастаАатсаАдтаасоооСстаТатостааТАСАа
СбаАТОСТаСАСТОСаССсТаасататСАСстаАсАл,аасасвоста
А,ВСТАСААДДаАдасСАСАССААДАСААСстТаатасатаавссСААда асссаСсата|атАСТАСЯТаТат ст тСсАаасСстТапААСТасСсасА авлатаастаасСбааСсААдссАттаастстататстстаас
ЄСбтТасСАТСТаСсСАЛас,аСсСстоталдадАд,есастастаасСсасСтасА астотаСАСТОАСсСАаатТасАаттасстостассСсастоса даассСОпААтТАааСсасСАттасвсатСААсасСсасвастаст асаостатотасСссасСсАа,вАааваСстассАатасСАТСТасАс
АСсАдаАдсасСсАасасаасТАаАСсАсасстааСАасСтТаАСАСАС сабастАсАлдатаставасстТатСАаАаТАСССССпАСсА т сСсА,аоса,аассТассСсТСсТоСААДЧАддаСОсАд,аассадоцс савАТоТОсССсавсаС,ааАасаАтотАада,аАдапаАСССаААСТ атосоСстТАСаАтосАла,асссвастастааАТСТаАаАСАС вОААТатптсассСсадастаастаасТСсАаААтТатастастад тТаАСавАСсСТСОТаАлаСстастАстоСсаАссСАавастасо дассататсоСстадстасвсаааАСТатоСтТАСААДАСАдДОА
ТАСАДААДСсСААСсТаастаатаастТААХдасСстаасатаТтАСТАТ стат тсСдасСставпААстал,асСссаатаатаасТавос дасастсдаспАттТататсостаастстасСАтоТасАасс дстасастотастастасасСсАаСсТаСАСТаасСТСТОаАСТ ставАсСсТассСАССАасстстТАаСаАдаасСсСАсСАААСАсас - а,асстсаааТтсСААда,асАас,аоста|астТасСАТСТаАаСассСса од СНІ Роланцюї З САСАССОССТОССАСТОСАТСТОСАТАСТОААОССАСАС «ВИСТУПОМ» ссссасАатаста,ааСсАасСстТАСТсАсасаасСААСстаТатаст сааАдстаттСсасСатТаАСАССТадаАтосСстТассасвАСТта
СсСАДаСССТАаАТСАСАдАасасаваСасАасадАдасаавАассї саАдспАддатастТАасСАСсСАд,асвсассСстАаса тат оссто та,ассССстТАаСсАаСААпАаСАСАдатасАасвААСАасСсСа ссстасастасСстасТСААдасвАСТАСТІоСсСсСсаВА,асоСсаТат сассататСстсвААтсотаасасссСтТаАСААдаСааСИа та
САСАСАТТТОСАСССОЯТаСстТасСсАсАаасСАа,аСаассСтТатАСТ сттТлдасАд,асатсатаАдссатасссттАасСстттасо
САСССАСАССТАСАТСТаСААСИаТаААССАСАДасСссСАас
ААСАССАдДАДИатТапйАСААдпдАааатТасААСССАдаластТас
САСАдаАСССАСАССТатоСооссттассстассссСстТаАда стастасатааооСстоСатат сс соССсСССААдаСос
ААДЧСАСАСССТаАТаАтТСАаВСсСавАСССССаПААаТаАСс тасстастаатоаАтаТататсССАСоАЧаАСССсТаАдатаА
АаТтТТсААТТастТАСЯтТасАасса7асатааААдаТасСАСААТОаС
СААЧАдССАХдассаСа,асадасАасСАсаТАСААСАасСАСаТтА ссататаатсдасатостТсАССсатоСсТаСАССАС,аАСтТОас
СТОААТааСААааАатТАСАДаИтасСААДааТСТоСААСАдА а,АсостоаасассСсСССАТСОСАСАААДАССАТСТОСААДасСсСА
АдасасАХасссСаАаААССАСАвататАСАСоСсТассосс
СсАТОССОЯОсаАтТадастаАССААДаААССАасатсАасстат се7втсстТасастТСААдАаасСТстТАТОССАаСаАСАтсассат садатасоАсАаСААдтТаваСАаССапАаААСААСТАСАА вАссАсасстоссатаставАстоСаАсаастостстто
СТСТАСАаСААдаСТСАССатасАСААдаАдаСАаатаавтсАс
Таблиця 2
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.1)
СсАд,асапААсатсТсТСАтТастоСсатаАтТасСАТаАДОСОаСтТо
ТтТаСАСААССАСТАСАСОЯСАСпАдАспСА,сстотосСста|аТтстос сОасСтТАдДА дададасассстадастАаССССпАТаАтоСста|астааА стастасАдоестассасСсадсааСАтТаТаттастАаста,тТас
СсССАВААаСсСатТастастаАатсаАатасооооСстаТатостТаатА сАдасаАтоста7асалотасстааататСАСТаАСсАсвасиаас
СсТаАаСТАСААДаАдасАСАССААДАСААСстТа,астаТастаасс
Ада,асссасататАСтТАСОаСТтат ст тсАаСсТасаААСтТас саеадслатаатсасСсаассААдаЧвАттаастстата|атстост сасбсСстТасСсАТСТаСсСАааСсСстТотТаАсАдАа,асастастаасСаст аСсАа,асттаСАСстАсАаатасвАаАттасстостассАаст сс,сАдааСССОоаААтТАааСасСсАттасатТСААдаасСАааст мономерний пи 4-188 астасСАсстаттасссасСсАасАавастасадатасСАТСТа 67 (71-254)-СІ. САСАСАЧда,ааССсСАасааСсТАаАСсАСсасстасСАасСтТаАсСА сд,асае7састАсАдатаставасстатСАпАаТаАссСоссСа
АВАТТССАССсСвасстТасстСсТоСААДаАдДасСсаАдааСося да,асавАтотТа,асСссасбсасА;асАтотатАассатаастас
АССАТСТаТтТСТТСсСАТСТТоССасСссСАТСТаАтТадасСАаТттТаА
ААТСсТасСААСТОаССТОТО ТатаИаТтассСстастОоААТААСТТ
СТАТСССАЧпАСАпаССААДАаТтАСАаатТапАдасТасАТАА
СасССсСстТоСААТтоасаатААСтТоССАасаАаАаТатСАСАСаАС
САдапАСсАаСААдапАСАаСАССТАСАаССсТоАаСАаСАСс
СстТАСасСстаАаСАААаСАаАСтТАСаАСАААСАСАААИа То тТАСОЯССТасСаААДатСАСССАТтоАсСаасстадастасссс
ТСАСААДОадаИастТтсААСАсасадалса тат вААдатасластаставААтоСсааСасаАасасстаавтасСАс сстасСссаАТтотТотаАасАстТатостасаосасстоСсаваст
ТСсАССТТСТОоСТоССАСасСсСсАТИаТОСТОСОСТоСаАСАСас тоСбтааСсАдАдсасстааААТасататСасСсАттавасс тоссасСсаАасСАСТтТАСТАСсасССаАСстотатаАдлда,авасСастТ
ТСАССАТСТОССОасйОАСААСТоСААаААСАСССтТаИтАССТ
ВСсАСАтТаААстТосСстТасасасСаАааАСАсСсассиататА
СстТАСТаТаССАдасастааставаСААСТТСОАСТАСТаС авАсАдаваСсАсостасаТсАсСсататсСАасСастАасСАССА деасасссстосатапссоостааСсСсСССАаСАасСАДИаДа
СсАСсССсСАЛааСсасСсааСАсАа,ассастотава7астасстааТСАдДа вАСТАСТТОСССОСА,ССсСсСсаВтаАассататоСстасААСАасСа анти-ЕАР, /Ес-ланцюг із) ЯАОСССтТОАССтТоСоОесСоТОСАСАССТТоСССОССОТОСТ «западиною» аСсАсАХатстасоСстТатАтАласстад,аСАаа,аСсатасТсСАСс стасстсСстТАаСсАдаССстТаааСАСССАСаАССТАСАТСТОаСА
АСаТаААССАСААасСсссАасСААСАССААДааТапАСАдаА даатапвАдаСсСсСАдаАдасТасСаАСААААСТСАСАСАТаСС
СсАСсСсСЯатТасСссСАаСАССТадАаастасаассвавАССатТсСАС
ТСТОСТСТТоСССССАДААСССААаСАСАСССТСАТОаАТ стосСба,авАсосСстТАааТСАСсАтТасатастаставАсата
ВПССАСаАдАаАСоСстТадааТСсААаТТСсААСстТаатАСата сассасатТавпАдааТасСАТААТаССААпАСААдасСсасас адапАдаСАатТАСААСАаасСсАассастАсСсататастАасСато
СсТСАсСатоСсТаСАССАааАСсТаасСТаААтТааСААдсадат
АСААдатасААдааЙТСсТоСААСААддасостаИаасасСсСсСсСсСАТ
СОАСААААССАТСТОСААДАаССАдАд,аасАаСссСпАсА
АССАСАССЯТатасАСССтасссССАТтоССавапАТадаста
Таблиця 2
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.1)
АССААДСАдАССсАсСсатса,асстотсатасасСАаТСАААсаасСтТ
ТСсТтТАТСССАаСОАСсАТОСССЯТОаАаСтТаспаАсАсаСААТа сасдасСсСсапАаААСААСтТАСААДаАССсАСсасстосСсо!тас тавАСстТоСсаАдссастостстсоСстатаАаСАдастсАс сатапАСААдсХаСсАасатасСАаа,аСАаасвапААСаТтсттсто
АТаСтТоСатаАТаСАТОАДааСТСтТаСАСААССАСТАСАСИ
САаАдаАдаСссттССсТаТатстСасатААА сАдсАтсатастАсССАатооооСааСАСоСстТаТатстстТаА асостасСбадаАдсАаСсСАссСстатоСстасСсАаАдасСсСтТоССА тосататоссаатостТАсстсасстТааТАТСАасСАсСАда ссссассдссоосстсасастастаАТСАТасасСасСсСтТоСтТА
СсСсАпдасСсАсСсаасСсАтосталсастстсаастотас стСааСАССОАСТТСАСССТаАССАТСТОССОСасСтТасАА ссссАдавАсттсасСататАСтТАСстТассАаасАа,сааССАсИ
ТСАТСССТоССАССТТ І ТаИССАасасаСАССАДастТаслхлААТ анти-РАР, легкий ланцюг. | САааСсатАСссатаасСстасСАССАТСТатсТтСАТСТТоССа
ССАТСТтТаАТадДаСАаТТаАААТСотТасААстТасстотатта татасстасСстТаААТААСТТСТАТСССАСАСАСпассСАдАаТт
АсАдатТапААдааТасАТААСасссСстТоСААТСИаСИаТААСТОоС
САдасАадаТаТСАСАаАдасСАааАСАаСААапАСАаСАССс тТАСАЛАСССТоДаСсАасАсСсСстаАСсастаАаСААДАаСАСсАС
ТАСИАДСАДААСАСАдАатТотТАСсасстасСсаААаТСАСССАТС дасасстдастассСаТСАСААДаАастТ ТтсСААСАаса ададатат
ВЕСРЕЇ 5РОЮРАСІЇ СІ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІОСРІ 5 М
ОРГ АСМУ5БІ ТС 5МКЕОТКЕЇ УМАКАСУУУМЕБОГ ЕІ АВМ
МмАСЕ,БОБМ5БІ АЇІ НІ ОРІ АВ5ААСАААЇ АГ ТМОЇ РРАБОЗЕАВН
МЗАРОРОСН І НІ 5АИОВІ аМНІ НТЕАВАВНАМ/ОЇ ТОСАТ
МІ ЕВМТРЕІРАСЇ РОРАБЕСССОСЗИаСОСОАЕСРЕЇ 5РООР
А
СО АОССМЕАОЇ МАОММІ ГІССРІ БМ УБОРИ АсаМ5І ТОа
І 5УКЕОТКЕЇ ММАКАСУУУМ ЕГО ЕІ ВАУМАСЕСаБаБУБІ А димерний пи 4-188Ї (7141 НГОРІ В5ААСААДАГАЇ ТМОІ РРАБЗЕАНМЗАБОБОСВІІ НІ. 14 254) - СНІ-Ес-ланцюг з БАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАУМ ОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРАС «виступом» ГРЗБРАЗБЕССсСИаЗОССЗАЗТКОаРОЗМЕРІ АРЗЗКЗТЗИасаТтТААЇ.
СС МКОМЕРЕРУТУМБМ/М5ИАЇ Т5ОМНТЕРАМІ 05501 МІ 55
ММТУМРБББІ атОТМІСМУММНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТ
СРРСОРАРЕАДАСОРБМРБІЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОМ5
НЕОРЕУКЕМУ УМВС МЕМНМАКТКРАЕЄєОММОТМАММ5МІ Т
МІ НОМ МЕКЕУКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКОРАЕРОМ
МТРРСОВОЕЇ ТКМОМ5І СІ УКОЕМРБЗОІАМЕМЕЗБМОО РЕМ
МУКТТРРМ О5ОС5ЕБІ ЗК ТМОКВАМОССММЕЗСОУМНЕ
АЇ НМНУТОКБІ 5І РОК
ВЕСРЕЇ 5РОЮРАСІЇ СІ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІОСРІ 5 М
ОРГ АСМУ5БІ ТС 5МКЕОТКЕЇ УМАКАСУУУМЕБОГ ЕІ АВМ
МмАСЕ,БОБМ5БІ АЇІ НІ ОРІ АВ5ААСАААЇ АГ ТМОЇ РРАБОЗЕАВН мономерний пи /4-188Ц М5БАРОРОСВГІ НІ БАБОВІ СУМНІ НТЕАВАВНАМ ОЇ ТОСАТ (71-254) -С11 МІ ЕВМТРЕІРАСЇ РОРАБЕССОСОСЗИаСОСОАТМААРБЗМРІЕР
РБОЕОЇ КИ ТАБМУМОЇ І ММЕМРАЕАКМОМ КМОМАГ О5ИаМ5
ОЕБМТЕООБКОБЗТУБІ 5517І ТІ БКАОМЕКНКУУАСЕМТНОС
І 55РУТКОЕМАСЕС ланцюг із «западиною» СКагеЕМммУЗАМАЗИЕОММАОБУКаТвВЕТІЗАОМКМ ТІ МІ
Таблиця 2
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.1)
ММ5І ВАЕОТАУУУСАКСУ СМЕВУМУСО,СТІ МТУЗБАЗТК
СРОМЕРІГАРЗЗКЗТЗаатААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБЗММЗИАЇ.
ТЗамуНтТЕРАМІ О55О01 51 55УМТУРЗББІ СИТО ГМІСМУМНК
РОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕААСИРБЗМУНІ ЕРРКР
КОТГМІЗАВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМВИМЕМНМА
КТКРЕЕЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОВУ МОКЕУКСКУЗМКА
Гад4АРІЕКТІЗКАКИІОРАЕРОМСТІ РРОВОБЇ ТКМОМБІ САМ
КагмРЗОІАМЕМЕЗМИООРЕММУКТТРРМІ ОБОСОЗЕРІ УК Т
УОоКЗАУМОдамМуЕЗСЗУМНЕАСНМНУТОКОІ І ЗРвгаТк
ЕІМГТО5РОТІ 5І 5РОЕВАТІ БСВАБОБУЗНОМІ АММООКРО
ОАРА ПІСАЗТАВАТа! РОВЕЗОаЗОаЗОИТОЕТІ ТІЗВ ЕРЕОЕБАМ 19 анти-РЕАР (28НІ), легкий УХСООСОМІРРТЕОСТКУБІКАТУМААРЗМУРІЕРРБЗОЕОЇІ Ка ланцюг ТАБМУСІ І ММЕМРАЕЕАКМОМУКМОМАГ О5аМЗОЕЗМТЕОЮ5
КОБТУБІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМУТНОІ 55РУТКОЕМ ваЕС
В таблиці З представлені кКДНК ії амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
ЕАР антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.2) з СНІ1-СІ -кросовером і зарядженими залишками.
Таблиця З
Послідовності націленої на ЕАР антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.2)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: дадаласасостадастаАаа,аССССаАтаАтоста|астааА стастасАаостасасасСАассасАтТа7аттастоала,астаатас
СсоСАпААсатастастаатсаатаасоооостатостаатА сХдасаАтТоСстТасАСсТЩастааСататСАСТаАСАсаСвас
СстТаАаСтТАСАААаАапАСАССАААСААСТастастоасос
АдсасссаСса,ататАСтТАСсасТта,атсттСсАаасСтасААСтТас сазасастаастаа,асСба,ааопААдсааАтотаастта7ататстот сасостасатотасла,асстотаАдсА;даса,астастаасСсаст асбад,асттТайСАСТаАСсАаа,атасАаттасстостассАаст ссаАсассСапААтТАаСсасАттасаТ г тсААдвасАааст сстасасстаттасссасСсАасАасастаааАатТасАТСТО димерний пи 4-18ВВІ. (71- САСАСАСАСассСАа,ааасСТАпАСАСсасстааСАасСтТаАСА 129 254) - СІ"-Ес-ланцюг з САасиаСбастАсАаатастасасєтаттСАаАатаАсооосСсоа «виступом» АаАТТоСАСОССЯВООССТасстТотТоСААаААаСасАдаасСсос даа,аса,авАТотТасосаба,асАаа,асАтоТА,аАаАа,апАСССсаА
АстатооСтТаАСаАтТоСсАа,асСса,асвастаставАтТСТаАаА сАсапААТаттсассСАаастастааСТСАпААтТа7атастас тТаАТТаАСОСАССТОТОАаСсТватТАСТоСО,САСССАСИасСтТ сасблсссататосстадстасаааАСТатСссСтТАСААдаА
АСПАТАСААААСЧААСстТастаатаастААдАда,асСстааваататА
СстТАТОаТИаТ тт тт ТсСАаСтТапйААСсТалсаасСсасяастаатааст саесвадссастсАааадтотататоостаастоТасАТСТаС дассастасестотастастасСс,аСАа,стасАстаастст саотатапАасСтасСсСсАССАаасстстАаСасАаасССАцАдА са,аса,7ассттса,асаТгоСААсаАдсасста|астасСАТСтТадас
Таблиця З
Послідовності націленої на ЕАР антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.2)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: ссс,спАсАдасасставадатасСсАТСТаСАТАСТОдАаСс дадлассссасАатасттаасМастАСтТоА,сасаасСААСТ стастасаАастатттсасаТтаАСАсСстададтосстассСо вАСТаССАДОИСССтТАаАТСАаАдАааавоааСсааАааттоСа сгасаасаасАаАтсотсатТАссватавСсТасСАССАТСТИатТсСТтТ
ТАТСТТСССАСССАаСОаИдоСоеаААаастадяатстаасСАСА сссласатсататасстТастаААТААСТТСТАСССсССОасСа давСсСАдастасадатааАда,аастапАСААтТассстасСАаА ссавСААдсдасСсАаааААдлаСсатадсСсада,аСАааАСАасСА давАСстТоСАССТАСсАассталасСсАаСАССсСсталссстада
САДССЯССИАСтТАСалаААасСАСААлсИатТатасасстасицА датаАСсСсСАссАасаасстатстАассССатаАССАДадас т сААСССССЯСваСсвАатасаАСААСАСССАСАСсСстаТатосто
САТОСССТОССССТОАДАССТаСТОССОСаСосстАааСса,тТатт
ССТатсСсССССАДАаСССАдавАСАСССтТалтаАтСАас ссадссосстаддаталсстасатаатаатасвАтататосо
АСсСОЧаАдапАСССТаААдаТтаААаТТсААТттааТтАСаИатасАсс ссатасАддатасСсАСААТаССААаАССсАлаСсоа,аСасвцАас дасСсАатТАСААСАасСАСсатАссататааАасСаТоСсТСАС са,атоСтасСсАССАсССсАСсТаСтТаААТааСААдсааАатТАСАА всТаСААДасаТСсТоСААСАААаасостоаасассСССАТССАС
ААДААССАТСТОСААдДасССАААаасасАассссвАсААССА
САССТатТАСАСССТаСССССАТОССОЯСОСАТадасСтТОаАССА
АаААсСбАса7атса,асстататасстааТСАААвастТсСтТА тосСсАавСаАСсАТСОЯСССЯТтасаиатасцАаАаСААтТасвасА соСапАаААСААСТАСААСАССсАсасстосса,атастааА стоСадсаастосТсТсСТСстТАСАаСААластоАсСатиа вАСААДСАССАСатааСАаасАаа,асааААСаТтсТстТСАТИаС тосатаАтТасСсАТаАдааСтТоТасСАСААССАСТАСАСасСАСА дала,асстотосстатстоСаастАДА дададасасосталастадассСсСаАтаАтостаСтапйА стаставАасстассаасСАаасасСсАататттастоластастас
СсоСАаАдАдсатастТастадтосАТаСсСсСсооСсТатостаатА
САаасадтоставастаастааСсататСАСсТаАсАасасвас
СстТаАаСтТАСАААаАапАСАССАААСААСТастастоасос
АдсасссаСса,ататАСтТАСсасТта,атсттСсАаасСтасААСтТас садсХдатасатааоСааовААдавАтотаастта7ататстот сасостТасАтотаСсАадасстотадасдадасастастаасаст ссластотаасттадсадатасаАтта7асстостассдаст ссадаассСсааААтТАааСасСАттасаттСААсассваст 130 мономерний пи 4-ї18В аСОТОСАССТОА ТО ТаОСССОССАсСАсСАСстТасаАатТасАТСТа (71-254) -СНІ" СсСАСАСАСАаСИаСсСАсСАасССАаасасАасасста,САастТаласСА
САаааасастАсаатастасасстатСАадаТАСосСсоссСа
АдаАТТОСТОССОСООСССТаССТАаТасссСстТАСАТСТОААаСасСася ссаласаттсоСсасаасСсааАдааАтсТастАаСАСАдДАСаИся соссдасататпсосстотаассссСстТАасСсАаСААаАаСАСА тотааСсосаААсАХассоосстасастасстаатасААсаАТТ
АСТтоссСсаАХасосатадссататоСстаААТТСТОИ,СИаС
СсСстТаАСАдасСсааСатасСсАСАССТТоСсАа,аСсСсатастасСАс даслассасстатАстототаласСсаа,асатси,атоаАдсдатас ссАдасаастттаваСАСССАаАССТАСАТСТасААСИт
СААССАСААХаСССАа,СААСАССАдас,с ТапАСаАспААсаИТт
Таблиця З
Послідовності націленої на ЕАР антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.2)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: 11111111 фОБбААСССААОТОСТОССЛС/:7777777777С1С «ідол дет 77111111 «западиною» 69 |анти-РАР, легкийланцюг|Див. таблицю? 71111111
ВЕСРЕГ 5РООРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГПІраРІ ЗМУ
РРО АСУБІ ТаСІ БМКЕОТКЕЇ МУМАКАСУМУМУЕРОЇ ЕІ ААУ
МмАсСЕабБазувбі АІ НІ ОРІ В5ААСІАААЇ А ТМОЇ РРАББЗЕАВН
М5ЗАРСРОСВІ І НІ БАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАУМ ОЇ ТОСАТ
МІ І гАМТРЕІРАСІ РОРАБЕССОСОЯБИСОЯСОЗАЕСРЕЇ 5РОЮРА
СГ о ВОСМЕАОЇ МАОММ ПІраРІ 5БМУМБОРИЇ АСУБІ ТС
ІЇ ЗУКЕОТКЕЇ УМАКАСУУУУЕРОЇ ЕЕГ ААУМАаЕаЗазуві А димерний пи 4-18ВІ. (71- ІНГОРІ В5ААСАААЇ А ТМОЇ РРАБЗБЕАВМЗАРСаРОСНІ І НІ. 115 |254) - СІ" -Ес-ланцюг з ЗАСОВІЯМНІ НТЕАВАВНАУОЇ ТОСАТМІ аг гєАМТРЕЇІРАС «ВИСТУПОМ» ГРЗБРАЗБЕССОССсБОСОСОАТМААРЗМУРІЕРРЗОВКІ КИатТАБМ
МСГПЯММЕМРАЕАКМОМКМОМА! ОБОаМЗОЕЗУТЕООБКОЗТ
У5І 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМАСЕС
ОКТНТОРРСРАРЕАДАСИаРБЗУН ЕРРКРКОТІ МІЗВАВТРЕМТОСМ
МУОУЗНЕОРЕУКЕМУ УУраМЕМНМАКТКРАЕЄОСУМОТУВМУ
УМ ТМ НОРМІ МЕКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСООР
ВЕРОММУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І МУСІ УКаЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМ
СОРЕММУКТТРРМІ ОБравзЕРІ УК ТМОКЗАУМУООСМУгЗо
ЗУМНЕАЇНМНУТОКБІ БІ РОК
ВЕСРЕГ 5РООРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГПІраРІ ЗМУ
РРО АСУБІ ТаСІ БМКЕОТКЕЇ МУМАКАСУМУМУЕРОЇ ЕІ ААУ
МмАсСЕавбБазувбі АІ НІ ОРІ В5ААСАААЇ АЇ ТМОЇ РРАББЗЕАВ 116 мономерний пи 4-188 МБАРСЕРОСНВІ І НІ ЗАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАУОЇ ТОСАТ (71-254) -СНІ" МІ І гАМТРЕІРАСІ РОРАБЕССОСЦаЗОССЗАЗТКОаРЗМЕРІ А
РОІБКЗТЗаатАА! СІ МЕОМЕРЕРУТУБУМЗИАІ Т5амМНтТЕР
АМІ О55(2І 51 55 МТ МРББІІ ЕТО ГТ МІСМММНКРОМТКМОЕ
КМЕРКЗС ланцюг із «западиною» ланцюг
В таблиці 4 представлені кКДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
ЕАР молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.3) (ЕАР розділений тример з СНІ1-СІ -кросовером в анти-ЕАР Ра і зарядженими залишками в ланцюгах, які містять 4-1881).
Таблиця 4
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.3)
АвАдаадссасосталастаАаа,аСоССаАтаАтоСста7астацА димерний пи 4-188І (71- СТасСТасчАССТОСЯСОЬЯСсАсСаасСАТатта7астодастаа!тас 131 254) - СНІ"-Ро-ланцюг з СССАсСААсатастастадтоавАтаассоостатостааЙтА «виступом» сдасаАтостасАастаастасоатаТСАСТаАСАсааСвас
СсТаАаСТАСАААаАдасАСАССАААсаААСтастастаасс
Таблиця 4
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.3)
Ада,асссасататАСТАСОаТаТат ст тсАаСстТааААСтТас саеадслатаатсасСсаассААдаЧвАттаастстата|атстост сасбсСстТасСсАТСТаСсСАааСсСстТотТаАсАдАа,асастастаасСаст аСсАа,асттаСАСстАсАаатасвАаАттасстостассАаст сс,сАдааСССОоаААтТАааСасСсАттасатТСААдаасСАааст астасСАсстаттасСсааССАсАа,аастсаАатасСАТСТа
САСАСАЧда,ааССсСАасааСсТАаАСАсасстаасСАасСтТаАСА сд,асае7састАсАдатаставасстатСАпАаТаАссСоссСа
АВАТТССАССсСвасстТасстСсТоСААДаАдДасСсаАдааСося даеаа,асавАтТотТа,аСссаСбасАасАтотАададасаАСССаА
АсТатоССсСсТаАСсОАтоСсАа,асса,ава7астаставАтТСТадад
СсАдасаААтТапсасссАаастаатаасСТСАаААТатастТас тТаАТтТаАСссаАсСстотадастааТАСТоСаАСССАсасст сеасалсссататсостадстаааааАСТатсСТтТАСААдДаА
АСАТАСАДААДСААСстТаастаатаастААдАд,аСставаататА
СстТАТаТаТтт тт тТсСАдаСстТапААСстТалсаСсааватасвтааст ссвасадсасастоАа,ааАттататостаастсТасСАТСТОаС да,ассастасастотастастасСаСсАа,астасАяствастот сАстатавАССстасСсАСсСАассСстТАасСсаАпаССАСААА сла,асассттсасааЙТсСААдсаАдса,асста|астасСАТСТадОаС ассасАсдасасстасааАдаТасСсАТСТасСАТАСТаАЛОаСС дадасссаасСсАТастО7васАа,асСстадстсАаа,асаавасСААСТ стастасаАстаттсасСаТаАСАССТаАвАТооСТассСа вАСстТасСсСсАдасСсссСстТАаАТСАаАда,асасвсасавАааААасСа авдассасасааААдатТастАаСАССАдасасссстСсатат тосссстаасССССАаСАаСАдаАаСАСсСАаСаасцвасСА сла,ассасттасастасстастаАаааАСТАСТТССССаА асосатадсса,ататоСстТасААсАдаСсаавАдассСстадсстос сасатасСсАсАсстсссса,ассатастасАаавАаатста7ассс тТатАтТАлассталдаса,асСсатаатсАассатасстстАасСАа
ССТапаСАСССАСАССТАСАТСТасСААСИаТалдАССАСАДаИ
СССАаСААСАССАдаа ТапАСадаААда,аатапАасссСААС
АПССТасСОАСААДААСТСАСАСАТассСсАсСс,атассСсАасАс
СстТаАдАд,аСстасадасасадссатсАатс осо
АДААСССАдапАСАСССТСАТаАТотоССс,салдссссСстТада атТсАСАТОССЯТОССТОСтТОасАСсаИатадаССАС,ААаАССсСтТ аАдапТсААдаТТСААСстТаататасатасАссасатаспвАдаста
САТААТаССААДаАСААддаСссасСсасаАааАасСАаТАСАдС дасдсатассататаатсАвасаТСсТсАССаТоСТасСАСС дааАдстТааСсТаААтТааСААдапАаТАСАА,атасАдааТтст
ССААДСАдДАаа,асоСстоавасСсасСсСССАТССАСААААССАТСТО
СААДаСсСААдда,асасАассССаАаААССАСАааТатАСАС сстасСссСсСсСАТОССООЧапАТадасСтТаАССААпААССАсцаИТтс дасстатастасстаайТСААдАвастТСстТАТСССАаСОАСА тса,7ссатасдатассАпАаСААтТа,ваСАаССацйАсСААСА
АСТАСАДаАдССсАСсОасстоссатастасвАстоСсАСаасто
СТТСТТОСТСТАСАаСАДОаСстТоАсСатапАСААадаСАсаа тааСсАдаСсдасапААСатТсТСсТсАтТастоСатаАТаСАТОа
ОСИасСсТСстТасСсАСААССАСТАСАСасСАпаАдаАдасстТоТосстТ атстоСасатТААА мономерний Пи 4-1вві пчАсАобарсстодастадасссссАТалтостастасА 132 (71-254)-СІ" стастасАдоестассасСсадсааСАтТаТаттастАаста,тТас
СССАСААСОаСТастастаатосАтасв;осоєєттостастА
Таблиця 4
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.3) сАдасаАтоста7асалотасстааататСАСТаАСсАсвасиаас
СсТаАаСТАСААДаАдасАСАССААДАСААСстТа,астаТастаасс
Ада,асссасСсататАСстАСатат ст тсАасСстТааААСТас саеадслатаатсасСсаассААдаЧвАттаастстата|атстост сасбсСстТасСсАТСТаСсСАааСсСстТотТаАсАдАа,асастастаасСаст аСсАа,асттаСАСстАсАаатасвАаАттасстостассАаст сс,сАдааСССОоаААтТАааСасСсАттасатТСААдаасСАааст астасСАсстаттасссасСсАасАавастасадатасСАТСТа
САСАСАЧда,ааССсСАасааСсТАаАСсАСсасстаасСАасСтТаАсСА сд,асае7састАсАдатаставасстатСАпАаТаАссСоссСа
АВАТТССАССсСвасстТасстСсТоСААДаАдДасСсаАдааСося да,асавАтотТа,асСссасбсасА;асАтотатАассатаастас
АССАТСТаТтТСТТсСАТСТТСССасССАТСТаАТСОаСААдаИттаА
ААТСсТасСААСТОаССТОТО ТатаИаТтассСстастОоААТААСТТ
СТАТСССАЧпАСАпаССААДАаТтАСАаатТапАдасТасАТАА
СасССсСстТоСААТтоасаатААСтТоССАасаАаАаТатСАСАСаАС
САдапАСсАаСААдапАСАаСАССТАСАаССсТоАаСАаСАСс
СстТАСасСстаАаСАААаСАаАСтТАСаАСАААСАСАААИа То тТАСОЯССТасСаААДатСАСССАТтоАсСаасстадастасссс
ТСАСААДОадаИастТтсААСАсасадалса тат авААдатасластаставААтоСсаассасАва7асстастасАс сстасСссаАТтотТотаАасАстТатостасаосасстоСсаваст
ТСсАССТТСТОоСТоССАСасСсСсАТИаТОСТОСОСТоСаАСАСас тоСбтааСсАдАдсасстааААТасататСасСсАттавасс тоссасСсаАасСАСТтТАСТАСсасССаАСстотатаАдлда,авасСастТ
ТСАССАТСТОССОасйОАСААСТоСААаААСАСССтТаИтАССТ
ВСсАСАТаААстТосСстТасасасСаАавАСАССасСататА
СстТАСТаТаССАдасастааставаСААСТТСОАСТАСТаС авАсАдаааСАсоСстастоассататоСсАа,СастАасатась састТосСсАаСатТаттСсАТСТСССАСССАаСаАСаДОаСА асСстАддатоСааСАСсАдассАа,асастастатасстастаААс
ААСТТСтТАСсСсСсССсСОаСсалаассСААдсастасАаатасАдаста вАСАдсасоСстасАаа,адасааСААСАаССАсадАтТоСИата
АсСса,адасАдаспАСАасСААааАСТоСАССТАСАаССТадасС асАссСстТАСоСсТАаСАдааССаАСтТАС,АдаААасСАСс анти-гаР. (УНСІ) (2881) Адаататаса,асстасСсаддатаАСССАССАС,ВааСсСтТатосСА 133 Ес-ланцюг із «западиною» | ССС ЗАССАДСАОСТ ТСААССОВОССОАО ТОСОАСА
АСАСССАСАССТОТОССССТТООССоСсТаСсСССстТОАдасСстТасС тасвтаасостоСаТтат сСстТат СсСССССАААасСсССАДа
САСАСССТаОАТаАТСсАССоСсапАСССССаААаТаАССТассо тастастоаАтТаТататсСсСАСаАдааАСССТаАА,аТалдАатТ
СААТТОЯТАСОЯТОСАСсвасС,аТасААдаТтасСАСААТаССАА вАССААХда,аСссасасаАапАаСАатТАСААСАаСАСаТтАССаИ татаатодасатТосСсТСАСсСатоСсТасСсАССАаСаадстаста
ААтТассСсААдаСпСАсСТАСАдатасСсААаатстТоСААСААдасс
СстааСаСССССАТСОАСАДААССАТСТССАДАДасССАДА свасласссСаАпААССАСАасататасСАСССсТассссСсСАТ ссссааАтТадасСсТаАССААпААССАаааТатсАасстстоата
СсасСАаЙТСАААдаасСТСстТАТСССАаСаАСАтсасСС,атасАс тасводадаСААдтасвасСсАдаССапАСААСААСТАСАдДОаАСс
АдсасстоссатастааАстоссАсвастстсттостсат чвАдаСсААд,астАсСсатапАСААсдаСАаавата,аасАасСАсаИас
СААСатсТсТоАТастоСатаАТасАтТаластсТасАс
Таблиця 4
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.3)
ШІ ПН іні ні іній
АА вАвАтТсатастаадссСсАХатстсСаасСсАсССстТадасстаА сссстааСсаАдвАаАдасССсАССсСсталастасХадасСсСАОаСс далдасаталассавдастАСстТаассСстТааТАТСАССАСА дасссаасСсАдааСССССАСАСстТастаАТСАТСССЯСасСсАа
СсАСССОЯЙСасССАССаСАТССССОаАТАаАТтТсАаСавасАас вастосааСАССОАСТТСАСССТаАССАТСЛСССОЯССТОаа
ААссСоАаавАСсттассататАСТАСТаССАасАасассА анти-гАР. (МІСНІ). (28Н1) ватОАтТССССССАССТТсааССАаСасСАССААИ,атасАА 134 легкий ланцюг у АТСААДОСДасСсАХасСсастсСАССААлАХСсаТсссттоса7таттто стстТаастостТАаСтТоСААСТОСАССТотТОасАдсСасСсАссас тастотсаОпАТасСссСстТСаТаААаСаСАТТАТТТОоСТаАОасСстТ стТаАСсАХатТатоСстТапААтТА,аСсапвАасСАСТалсстотасАла тТасАТАСТІТОСССОСТОТаСсТОаСАатосСтотТаспАСТатТАС дасстадласлда,асатааТАСАа,атТассСсАасСсАасСАасста
СаСАСССАСАССТАСАТСТОСААСОТаААССАСААасСос
АДИСААСАССААДИааСТасАСААСААааТапААСсСсСААИтТстТ тат
ВЕСРЕЇ 5РОВРАСІ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ТОСТРІ 5МУМ5
ОРГ АсаМБ5І Та 5МКЕОТКЕЇ УМАКАИУММУМЕЕОЇ ЕІ ВАМ
МАСЕСБавбБмбБіІ АІ НІ ОРІ Н5ААСАДААЇ АГ ТУМОІ РРАББЕАВ
МЗАБГСЕОСНІ НІ БАЙОНІ УНІ НТЕАВАВНАУОЇ ТОСАТ
М ОГЕВМТРЕІРАСІ РОРАЗЕСасСИБасцсасаеВЕСРЕЇ 5РООР
А а ОЇ ВОСМЕАдОЇ МАОММ І раРІ 5М/ УБОРИ АСМ5І ТИС
І ЗУКЕОТКЕЇ УМАКАСМУУУМУЕРОЇ ЕІ АВУМАСЕ,аБОаБУБІ А димерний пи 4-188Ї (71-ІЇНІГОРІ В5ААСАААЇ А ТМОЇ РРАББЕАВМЗАРСаРОСНІ І НІ. 108 |254) - СНІ"-Ро-ланцюг зі 5АСОВІ ЯУНІ НТЕАВАВНАУМ ОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРАС «виступом» ГРЗБРАЗБЕССсСИаЗОССЗАЗТКОаРОЗМЕРІ АРЗЗКЗТЗИасаТтТААЇ.
СС МЕОМЕРЕРУТУБМУМОИаАЇ Т5ОаМНТЕРАМГ 05511 51 55
МУТУРББЗЗІ ато МмІСМУМНКРОМТКМОЕКМЕРКОЗСОКТНТО
РРСОРАРЕААСОРОМРЕІЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУУМО УЗН
ЕОРЕМКЕММ УУраТамЕМНМАКТКРАЕЄєОУМОТУВУМУБМІ ТУ
ІГНОРЖМІ МакКЕМКСКУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКАОРАЕРОМУУ
ТГРРСОВОЕЇ ТКМОМ5І М/СІ МКИЕМРЗОІАМЕМЖМ ЕЗБМИОРЕММ
МХКТТРРМІ ОБОРаЗЕРІ М5КІ ТМОКЗАВУМОООММЕЗСЗММНЕА
І НМНМТОКБІ 5І РОК
ВЕСРЕЇ 5РОВРАСІ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ТОСТРІ 5МУМ5
ОРГ АсаМБ5І Та 5МКЕОТКЕЇ УМАКАИУММУМЕЕОЇ ЕІ ВАМ
МАСЕСБавбБмбБіІ АІ НІ ОРІ Н5ААСАДААЇ АГ ТУМОІ РРАББЕАВ 109 мономерний пи /4-18В) МБАРСЕРОСВІ І НІ БАСОВІ УНІ НТЕАВАКНАУОЇ ТОСАТ (71-254)-017 М ОГЕВМТРЕІРАСІ РОРАЗЕССасСОаБаИасасеАТМААРОЗМЕЇЕР
РБОВКІ КЗаТАБУМСІ І ММЕМРАЕАКМОМ КМОМАГ ОБИаМО
ОЕБМТЕООБКОБТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКМУАСЕМТНОС
І 55РУТКОЗЕМНОЕС
ЕМО ЕЗБОСИЇ МОРССБІ ВІ ХСААБОЕЄТЕЗ55НАМОУМУУНОАР
СКаІгЕМмУБАМАБавгОУМАВВУКаИанЕтТІЗАОМОКМТІ МІ о
ММ5І ВАЕОТАУУУСАКСУМ МЕРОМ ЧОСТІ МТМЗ5АБМА 135 внтиЕ лю (УНСО. (28НТ)У дДреугІЕРРЗОБОЇ КЗСТАБУУСИ ММЕУРВЕАКУОМКУОМ с-ланцюг із «западиною» | д| З50М5ОЕЗУТЕОО5КОЗТУВІ 95171 ТІ ЗКАОУЕКНКУУА
СЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАСЕСОКТНТСРРСОРАРЕАДАСИРОМЕ
ІГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОМЗНЕОРЕУКЕМУУ МВС М
Таблиця 4
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.3)
ЕМНМАКТКРАЕЕОММОТУАММ5МІ ТМ НОСОМ МЕОКЕМКОК
М5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМСТІ РРОВОБІ ТКМОМ5
І 5САУКаЕМРБООІАМЕМЕЗМСООРЕММУКТТРРМІ ОБОСОЕНІ.
УБКІТУОКБАМОССММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОІ 5І ЗРО
К
ЕІМГТО5РОТІ 5І 5РОЕВАТІ 5СВАБОБУМЗАБМІ АММООКРОа
ОАРА САБТААТаЇ РОВЕЗИаЗаватО ЕТ ТІВ ЕРЕОЕБАМ 136 анти-ЕАР (МІ СНІ) (28НІ1)) УУСООСОМІРРТРЕОСТКУЕІКЗЗАЗТКОаРБОУМЕРІ АРЗЗК5ОТ5 легкий ланцюг СОатТААЇ аСІ МКОМЕРЕРУТУБУММБИаАГТ5ОаМНТЕРАМІ О55
СІ М5І 5БММТУРБУББІ атОТМІСМУММНКРУЬМТКМОККМЕРК5 (9;
В таблиці 5 представлені кКДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
ЕАР молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.4) (ЕАР розділений тример з анти-РАР Рар, мономерний ліганд для 4-188В, злитий з СНІ-ланцюгом з «виступом», та із зарядженими залишками в ланцюгах, які містять 4-188В1).
Таблиця 5
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.4)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО: дадаса7асосталастаАдаСсСССаАтадтстастааАсСТта стасАаостас,аасСАдсаасСсАтаттасталастатаассс
АвААдсата|астастаАатсаАдтаасоооСстаТатостааТАСАа
СбаАТОСТаСАСТОСаССсТаасататСАСстаАсАл,аасасвоста
АаСТАСААДАДаДапАСАССАААсААстаатаа т аасССАда асссаСсата|атАСтТАСЯТтатсттСсАаасСстТасААСстТасСацА авлатаастаасСбааСсААдссАттаастстататстстаас
ЄСбтТасСАТСТаСсСАЛас,аСсСстоталдадАд,есастастаасСсасСтасА астотаастотадсХатааАатста|аТсстостасСсСАасСтосСа даассСОпААтТАааСсасСсАттасвсат ТСААсасСсвастаст асаостатотасСаасСАаАаАСстаавАаТасСАТСТасАс
АСсАааАдсасСсАаадасСАасасАсасстааСАасСТаАСАСАС мономерний пи /4-188І. сабастАсАлдатаставасстаТСАаАаТАСССССадсА 137 (741-254) - СНІ"-Ес-ланцю тесстассав,аостассСстТАаСССтТАаАТСтТадАаааСаасСОася з «виступом» деатсСса,асда,авсасаАааАТоТастТАаСАССАдасассс стоесататососста,аосССбАаСсАаСААдсАаСАССАаС севбапСАСсАдассастотаавастасстаатСсаАсаАСТАСТ тоссСсад,асоссатадссататСстапААСАдаСсаавАасСосстТ сАсстосаасаТасСАСАсСстсСсСсассатасСстТасСАСАСТ тотаасСстТатАТАаСсСстТаласааСсатаатАссатасстт
СстТАаСсАасСсТапйаСАСССАСАССТАСАТСТаСААСаИатадА
ССАСАДаСССАаСААСАССАда,асТасАСаАдаААастТасцсА
ССССААпАдаСТасСаАСААААСТСАСАСАТаСССАССИата
СоСАаСАССТаАдАда,аСстасАаасасааАсСатСАатстостТо
ТТоСССССААДАСССАДааАСАСССТСАТОАТСТОССаслдА сссстТаАваТСАСАТОаСОЯТОаСТаатасвАСатаАдаССАССА
АдаАсостТадааТСсААатТСААСстТастаСсатавАсасвсата пада асСАТААТасССААСаАСАААдаССсасаааАааАаСАс
Таблиця 5
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.4) кВ ОО по
ІО Опис Послідовність
МО:
ТАСААСАДОаСАСОтТАсоСсататаатоаасатссТСАССатос тТасСсАССАДсааАСсТаасСТаААтТааСААааАаТАСААдаИатасСА
АВИТСТОСААСААДаСсСстТоИааСаСССССАТССПСАСАДАА
ССАТСТОСААДаССААда,асасАасссСпАсААССАСАСаИ тТатАСсСАСССстТасссССсСАТаСсСсОвапАТаАастТаАССАДаАА
СбАсатодасстатастасстайТСАААаастТСсТАТОССС дасвАсАТсассатасаатасаАаАаСААтасасАассо
САпААСААСТАСААпАССсАсасстоссатастасвАстоСа
АСОсСаСТОСТТСТТоСТотТАСАаСАдаТсСстТоСАССатасАСАА слдасадаатасАаа,аСАааайпААСатсТсТСАТастоСата
АТаСАТОАДСаСТСтТаСАСААССАСТАСАСОЯСАСЧдАСадас стотоостатстоСасаТААА дададасассстадастАаССССпАТаАтоСста|астааА стастасАдоестассасСсадсааСАтТаТаттастАаста,тТас
СсССАВААаСсСатТастастаАатсаАатасооооСстаТатостТаатА сАдасаАтоста7асалотасстааататСАСТаАСсАсвасиаас
СсТаАаСТАСААДаАдасАСАССААДАСААСстТа,астаТастаасс
Ада,асссасататАСтТАСОаСТтат ст тсАаСсТасаААСтТас саеадслатаатсасСсаассААдаЧвАттаастстата|атстост сасбсСстТасСсАТСТаСсСАааСсСстТотТаАсАдАа,асастастаасСаст аСсАа,асттаСАСстАсАаатасвАаАттасстостассАаст сс,сАдааСССОоаААтТАааСасСсАттасатТСААдаасСАааст астасСАсстаттасссасСсАасАавастасадатасСАТСТа
САСАСАЧда,ааССсСАасааСсТАаАСсАСсасстасСАасСтТаАсСА сд,асае7састАсАдатаставасстатСАпАаТаАссСоссСа
АВАТТССАССсСвасстТасстСсТоСААДаАдДасСсаАдааСося даеаа,асавАтТотТа,аСссаСбасАасАтотАададасаАСССаА
АсТатоССсСсТаАСсОАтоСсАа,асса,ава7астаставАтТСТадад
СсАдасаААтТапсасссАаастаатаасСсТСАаААтатастас тТаАТтТаАСссаАсСстотадастааТАСТоСаАСССАсасст 138 димерний пи 4-18! (71- ааСбАасоасататосстаастасваааАСТатСсСТАСАДАаА 254)-01І" АСАТАСАДААДСААСстТаастаатаастААдАд,аСставаататА
СстТАТаТаТтт тт тТсСАдаСстТапААСстТалсаСсааватасвтааст ссвасадсасастоАа,ааАттататостаастсТасСАТСТОаС да,ассастасастотастастасСаСсАа,асСстасАяствастост сАстатавАССстасСсАСсСАассСстТАасСсаАпаССАСААА сла,асассттсаааТТсСААсадСсасстастасАТСТаАас ассасАсдасасстасааАдаТасСсАТСТасСАТАСТаАЛОаСС дадасссаасСсАТастО7васАа,асСстадстсАаа,асаавасСААСТ стастасаАстаттсасСаТаАСАССТаАвАТооСТассСа вАстТасСсСсАдасСсссСстТАаАТСАаАда,асавсасавАааТоСОа авдассасАаааАттатАссасаТаСсТаСАССАТСТОаТсСтТтТ
САТСТТСССассСАТСТОАТСИСААСТТОАААТСТасААСТ асстсотатататасстастаААТААСТТСТАТСССАСАС аасСсСсАДАДСТАСАаатТасААдааЙтТасАТтТААСасСсСссСтТоСААТ
СсапатТААСТоССАсаАдсАатТатСАСАаадаСАаспАСАасСА дапАСсАаСАССТАСсАасстоАаСАасСсАсоСстадСастаА
ССААДДаСАпАСТАСОАСпСАААСАСАААдаТСТАСсаТсстасс
ААДИТСАСССАТСАССЯОССТОАЛаСсТСассСатСАСАДАаА
СТ СсААСАасаааАсАсатТат «іш рен ланцюг із «западиною»
Таблиця 5
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.4)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО: ери НО дюн онпюнтк- ланцюг
ВЕСРЕЇ 5РОЮРАСІЇ СІ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІОСРІ 5 М
РРО АСМУБІ ТІ 5МКЕОТКЕЇ ММАКАСУУММУЕРОЇ Б АВМ
МмАСЕ,БОБМ5БІ АЇІ НІ ОРІ АВ5ААСАААЇ АГ ТМОЇ РРАБОЗЕАВН
МЗАРОРОСН І НІ 5АИОВІ аМНІ НТЕАВАВНАМ/ОЇ ТОСАТ
МІ ОЇ ЕВМТРЕІРАСЇ РОРАБЕСССОСЗИСОСОАЕСРЕЇ 5РООР
А
СО АОССМЕАОЇ МАОММІ ГІССРІ БМ УБОРИ АсаМ5І ТОа
І 5УКЕОТКЕЇ ММАКАСУУУМ ЕГО ЕІ ВАУМАСЕСаБаБУБІ А мономерний пи 4-188ЦІ НІ ОРІ В5ААСАААГАЇ ТМОЇ РРАББЗБЕАВМ5ЗАБСРОСНВІ І НІ. 139 1(71-254) - СІ "-Ес-ланцюг з БАБОВІ СУНІ НТЕАВАВНАУ/ОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВУТРЕ!ІРАС «виступом» ГРЗБРАЗБЕССсСИаЗОССЗАЗТКОаРОЗМЕРІ АРЗЗКЗТЗИасаТтТААЇ.
СС МЕОМЕРЕРУТУМБМ/М5ИаАЇ Т5ОМНТЕРАМІ 05501 МІ 55
ММТМРБББІ атОТМІСМУМНКРОМТКМОЕКМЕРКЗСОКТНТО
РРСОРАРЕАДСОРБЗМУНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОМУ5Н
ЕОРЕМКЕМУУУВОМЕМНМАКТКРАЕєОУМОТМВУМБМІ ТМ
ГНОМІ МЕКЕМУКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМУ
ТГРРСВОЕСТКМОМ5І МСІ УКОЕМРБОІАМЕМ ЕМО ОР ЕММ
МХМКТТРРМОБОСО5ЕБРІ ЗК ТМОКЗАМООСМУЕЗСОЗУМНЕА
І НМНМТОКОІ БІ Рак
ВЕСРЕЇ 5РОЮРАСІЇ СІ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІОСРІ 5 М
ОРОЇ АСМУБІ ТІ 5МКЕОТКЕЇ ММАКАСУУММУЕРОЇ Б АВМ
МмАСЕ,БОБМ5БІ АЇІ НІ ОРІ АВ5ААСАААЇ АГ ТМОЇ РРАБОЗЕАВН
МЗАРОРОСН І НІ 5АИОВІ аМНІ НТЕАВАВНАМ/ОЇ ТОСАТ
МІ ОЇ ЕВМТРЕІРАСЇ РОРАБЕСССОСЗИСОСОАЕСРЕЇ 5РООР - А моз 0707 вигрівоомеАогуАоММ ПОР ЗМ УВОРСГ АСУВІ ТО
І 5УКЕОТКЕЇ ММАКАСУУУМ ЕГО ЕІ ВАУМАСЕСаБаБУБІ А
ІНГОРІ АВ5ААСАААЇ А ТМОЇ РРАБЗЕАВМЗАБСРОСВІ І НІ.
БАСОВІСМУНІ НТЕАВАВНАМ/ОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРАС
ГРОБРАЗБЕССИБОСОСОВТМААРЗМЕІЕРРБЗОВКІ КЗИаТАБМ
МСГММЕМРАЕАКМОМ КМОМА! ОБИМ5ОЕВМТЕООБКО5Т
У5І 557 ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РМТКЗЕМАСЕС ланцюг із «западиною» ланцюг
В таблиці 6 представлені кДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 1.5) (ЕАР розділений тример з 2 анти-ЕАР Рабр, димерний і мономерний ліганд для 4-188В, злитий на С- кінці кожного важкого ланцюга відповідно).
Таблиця 6
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.5)
ЗЕ ки ОО
МО: вААХстТасластаставаААтТоСсвасасасасстаатасСАа сстааСсОпАТоТотТаАсАстТатостасаосасстосваст
ТСсАССТТСТоОСТоССАСсассСАТатоСсТвИасатТоСаАСАсас тоСТааСАДАдсаоСстаТасАдтасвсататСсассСАттасвиасс тоссаСсаАдаСАатТАСтТАСсасСсОАстотатадлдасвасСсаст
ТСАССАТСТОССОСИаСАСААСТОСААСААСАСССТаТтАССТ вСсАвАтТаАдАстТосстасацвасСаАааАСАССассиатТаТатА
СстТАСТОТаССААХДОсвСаСстастапйаСААСТТСИаАСТАСТОаС саАСсАасааСАсостааТСАсСсататсСАасСастАасСАССА дасассостосатапссосостааСССССАасСАасСАдИада
СсАссАдасСса,а,асаваСсАсАа,ассасттааасТасстТааЙтТсСАА (Є) вАСТАСТТОСССОСАДОСсСсСОЯВТаАассатаТатостасААСАасСа сла,асостадсстоса,аа,аСсатасАСсАСсСТОСсСсСсасССса,!таст аСсАасСАХатпсотасстТатТАтТАаСсСсТаАдаСсАаСатасТСАСс ат|асстстТАаСсАассТааСАСССАСАССТАСАТСТОаСА
АСИаТаААССАСААДаСССАаСААСАССААасСсТапйАСААдсА даатТпАаССсСААаАаСТаСаАСААААСТСАСАСАТИаСС сАссатассСсАаСАСсСстаАдАл,асТаса,аасавАССатТсАС
ТТ ССС ССССССААААСССААпСАСАСССТСАТОАТ стосСбавАсооСстТАваТСАсСАТасСавтастаатасАсСИата
А,ВССАСОААЧАСССТаАааТСААаТТСААСстасатАсата слссссатапвАааТасСАТААТаССААСАСАААаСсСасавс чвАдсдаАдаСАатТАСААСАааСАСсатАссататаатСАаСато т езападиноюх " Голанцюг СТСАССОТОСТОСАССАССАСТООСТОААТОССААОСАСТ 141 димерним пи А-1ВВІ. (714 АСАдОТОсСАЛООТоТОСААСАЛАССоСТовОСОССССсСАТ 254) СОАСАДААССАТСТОСАААдаСсСАААлда,асваСАасССССОаАСцА
АССАСАСОЯавТатаСсАСоСсТассссССАтТосСвасцсАТаАаста
АССААДЧАздАССАсСсатсАассттаИТтасСаСАаТСАААсвастТ
ТСТАТСССАЧСОаАсСАТоОаСсСсатасАдатапаАпАсаСААТИа свасАдаСсСапАспААСААСТАСААаАССсАс,асстоссатас тааАСТоСаАсаастосСтТстТСоСсТСатаАаСААдасСтТСАС сатТапАСсАдсАХаСсАасатасоАаСАас,аасааААСаИТтстсто
АТаСсСтТоСатОаАТОаСАТОАдСааСТСТаСАСААССАСТАСАСИ
СсАаАдАдсАа,ассттсстатстосасатасаа,а,аосааСсаА даСссадасАаааАапАтТоСАсАадасвсасостадастадас
СоСОАтТаАТОСТаСТОСАСТОаСсТОсСАССТаСОвасСсАаааСА татптастсдастаатасСсССАвААсатастастаАТСаА таассссстатостаатТАСсАасСаАтоСстасАстаастаао атТатСсАСТАСсАдс,сасвасстаАасСТАСАААСпАапАСАСС
АААпАдАастастаатааССАлсаасоцвасаТатТАСТАСИата т ст тСсАдасСставпААстТасСсасАааадатаавтассавасСаААс сАТсТаОаСТОТататтотаасСоСтасАТСТаСсАасСсСтТоТта
АвАддасастастаасастасаасттааСАСстадсАатас
АТСТОССТОСТаСсСсАЛаасСстТоСада,асСССапААТАаСОаСАТТ таваТтТСААсасасастастасСсАасстаттассаасССАс да,астасвадаТасСАТСТаСАСАСсАа,сАдаасСсСАсаасСстТАаА
СсАс,асстаасАаСсТАСАСАассаСастАсАа,атастасвас стат сАвдатадсСССсСаАвпАтгосАасссассТасстт
СстТоСААСАдДАХаСадАас,сасСс,асАа,ассасвАаттассавасацвАс
САТСТАЧАЛдадасваАСсССвААСТатосССсТаАСаАТССАИаС
Таблиця 6
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.5)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО: савсастастасАТСТаАвАСАаасаААтТатсасссАаста стааСстоАсаААтТатастастаАтаАСсасвАсстстТаАастТ свИатТАСстТоСсОАсСсСАсааста,соАа,аавааТатоССсТалдста (Є) васАсСТатСссСтТАСААДАаААпАТАСАААДАСААСстТа7аатаст свастАддастасасаТатАСТАТата ПТ ТСАасСстТасАА стадассоссестастаастасвавАасвастоАааАТосТата тосстасстсТасСсАТСТаСсАаССАСТОаСОСТоТастТастТа ссасластасАастассттаАастТаТатавАССТасСссСАССАСС сттдасСсаАаасССАСАААСАааСсасстсава г ССАДОас дсасстастТасСАТоТОХдаСсасСс,ассАСсАа,аСсасставаАатТ (Є)
САТСТаСАТАСТаАдАССсСсСАСАа,аСсоСсааСАтТасттааСАас тТаАСТСАсСасаасСААСТаТастассастатттсаСсатТаАс
АостТаАвАТОССТаССапАСТаССААдаССсСтТАСАТСАСАА вААХстТасластаставаААтТоСсвасасасасстаатасСАа сстааСсОпАТоТотТаАсАстТатостасаосасстосваст
ТСсАССТТСТоСТоССАСсасСссСАТатостасатоСаАСАсас тоСТааСАДАдсаоСстаТасАдтасвсататСсассСАттасвиасс тоссаСсаАдаСАатТАСТАСсасССаАстотатадлдасвасСсаст
ТСАССАТСТОССИаспсОАСААСТОСААСААСАСССтТаТатАССТ вСсАвАтТаАдАстТосстасацвасСаАааАСАССассиатТаТатА
СстТАСстТатТасССАдавастааставасСААСТТСОАСТАСТИаС саАСсАасааСАсостаатсАассататсСсАасасСтТАаСАССА дасваСсССАТоСаСатстоСосСсТааСАСССТОСТОСАДОаАа сАсстотассасасСАсАа,ассасоставсастасстТтааТСАА (Є) вАСТАСТТССССОаАдАСсСсОватаАассатататавААСТСАа ссассСстаАсСсАда,аСса,ааСаТасСАСАССТТоСсСсвастатост
АСсСАаТоСТСАааАСТСТАСТОССтТСАсССсАХасатастаАсс стассстоСАаасСАдасСстТапйаСАСССАЧАССТАСАТСТОаСА анти-ЕАР (28НТІ1) - Есе-ланцюї АСИТОаААТСАСАдаСССАаСААСАССААдаатацпАСААСА 142 3 «виступом» злитий з АдатТТаАДассССАААТСТТатаАСААААСТСАСАСАТаСос мономерним Пи 4-188Г (714 АСССсСТаАССсСсАасСАССТаААааСсСТасСАа,асасвсасАсСатсАатТ 254) СТОСТСТТоСССССАДААСССААпаАСАСССТСАТОАТО тоссааАссоСстТАдааТсАсАТасатаатаставАсатаА
СССАСОАДАвАоСсСтаАдасаТСсААаТТСААСстастасатас
Адса,а,всатТвАдааТасСАТААТаССААаАСААдАаССсасась
Ад,авАдаСсАатТАСААСАаасАассатАсСса тата оАаСатост
СсАсСсатоСсТасСАССАаааАСстаасСТаААтТааСАА,адатА
СААДИТаСААдааТСТоСААСААдасостовасассСссСсСАТС
САСАДААССАТСТССАДАДасССААдасасАасссССаАсаАА
ССАСАДССсТатАСАССсСсТассССССтасСАаАаАТадасСтТаА
СсСААДСАдАсСсСАсСататосстатаататстаатСАА;,ааастт
СстТАССССАОаСаАтТАтТоасСсатасалатапаАаАаСААСас;ь
ССАВССТаАСААСААСТАСААСАССАССсСосссСстата|аста вАсАХдаСаАсаасСАаТст СТ осСТатАСТОСАААСТаАСсСа тавдАСсАдсАХассаатааСАааСАасассаСААсататтсАаст асд,асатаАтТасСсАсаАааСсСсСстТасСАСААССАСТАСАССОС
АвАдатоссталассталассссвсаСасАа,аасавСаапАА ссасдасАсаАасАТоСАсАаАд,асассстаАасТаАаСс
Таблиця 6
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.5)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО: сбаАтТаАТоСТаСсТаавАастастасАаостасас,сСАа,сааЙсАТ ст"тастодастастааСССАпААсатастастаАТССИАТ сассссстатостастТАСАасСаАтоставастаастааса татосАСстТаАдСдааоаассСсТАасСтТАСАААДаАдааАСАССА
ААпаААстаатаатааССАдсассвасаТатТАСТАСаИататт сттСАаасСстапААстасСсацсасаатаатасосааСаААас
АТСТОССТОТОТатотТотТа,аСоСстТасАТоТасАХдасСсСтТотТаА вААХеасастастаассастасаасттаасСАСТаАСАатТацсА тстасстостассластоСад,вассСапААТАаСОасСАТТТ сааТтСсААла,аСАасастастасасстатстассаассСАСА састасадатТасСАТСТаСАСАСАааАасассАаааастТАсаАс дса,асстааСсАдасСстТаАСсАСАааса7асСсастАсАХаастаставасст аттсАпдаТаАсССсоСаАвпАтосАассва7асстассттст
ССААДСАдДасаАА ефе то нен ватні ланцюг
ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААБИЕТЕ55НАМ5ОУУНОАР
СКагЕМУ5БАМ АБИИЕОУМАрБУКОаВЕТІЗВОМ5КМТІ МІ О
ММ5І ВАЕОТАУУУСАКОУМ МЕ ОММ ОСТІ МТ М55АЗТК
СРОМЕРІ АРОЗ5КОТ5ОаСТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУВБМ МБИАї.
Т5ОаМНТЕРАМІ 055021 М5І 55 МРБЗББІЕТОТМІСМММНК
РОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСОРОМЕЇ ЕРРКР
КОТ МІЗВТРЕМТСМУМОУМЗНЕО РЕМКЕМУ УМО МЕМНМА
КТКРВЕЕОММОТУАМУ5МІ ТМ НОМ МЕОКЕМКСКУ5МКА
І аАРІЕКТІЗКАКСООРАЕРОМСТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І САМ т езападиноюх : Гогланчю! КОЕУРЗОІТАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ О50С5ЕРІ УБКІ Т 121 димерним и А-1ВВІ. (71- МОКБеАМОСаММЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКО5БІ 5І РОССИИ 254) сасабБАЕСОРЕЇ 5РОЮРАСІЇЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІС Р
І ЄМ/М5БОРИЇ АОМ5І ТС 5МКЕОТКЕЇ МУМАКАСУМУММЕБО
ГЕСАКММАСЕСБИавм5і АІ НІГ ОРІ ВБААСАААГАЇ ТМОІ РР
АБЗЕАВМ5АРОСЕОСВІ І НІ 5АСОВІ ЯМНІ НТЕАВАННАУМО
І ТОДАТМІ а ЕВМТРЕІРАСІ РОЕРАБЕНОСОБаИаСИЗАВЕСРЕ
І 6РООРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАДОЇ МАОММІ ГІС РІ БМ МОРГ А
СУБ ТОСІ 5МКЕОТКЕЇ МУМАКАЯМУММЕБОГ ЕГААММАСЕ
С5БОБМУБІ АЇ НІГ ОРІ В5ААСАААЇГ АЇ ТМОЇ РРАББЗЕАВМ5ЗАБО
ЕОСВІ НІ 5АСОВІЯМНІ НТЕАВАННАУМ ОЇ ТОСАТМІ СЕ
ВМТРЕІРАСІ РОРАЗЕ
ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААБИЕТЕ55НАМ5ОУУНОАР
СКагЕМУ5БАМ АБИИЕОУМАрБУКОаВЕТІЗВОМ5КМТІ МІ О
ММ5І ВАЕОТАУУУСАКОУМ МЕ ОММ ОСТІ МТ М55АЗТК
СРОМЕРІ АРОЗ5КОТ5ИасТтААІ аСІ МКОМЕРЕРУТУВБМ МБИАЇ.
Т5ОаМНТЕРАМІ 055021 М5І 55 МРБЗББІЕТОТМІСМММНК анти-ЕАР. (28Н1). Ес-ланцю РОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСОРОМЕЇ ЕРРКР з «ВвИСТупом», ЗЛИТИЙ З КОТ МІЗВТРЕМТСМУМОУМЗНЕО РЕМКЕМУ УМО МЕМНМА 122 мономерним пи 4-1ВВІ. (71- КТКРВЕЕОММОТУАМУ5МІ ТМ НОМ МЕОКЕМКСКУ5МКА 254) І аАРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМУТІ РРСВОЄЕЇТКМОМБІ МС М
КОаЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ О5РОБЕРІ МК Т
МОКБеАМОСаММЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКО5БІ 5І РОССИИ саса5БАЕОСРЕЇ 5РООРАСІЇЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГПІСС Р
І ЄМ/М5БОРИЇ АОМ5І ТС 5МКЕОТКЕЇ МУМАКАСУМУММЕБО
ГЕСАКММАСЕСБИавм5і АІ НІГ ОРІ ВБААСАААГАЇ ТМОІ РР
АЗЗЕАВМ5АРСЕОСВІ І НІ 5АСОВІ ЯМНІ НТЕАВАВНАУО
Таблиця 6
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.5)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: 0 ПСТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРАСІ РОРВОЕ ланцюг
В таблиці 7 представлені кКДНК ії амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
ЕАР молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.6) (ЕАР розділений тример з анти-ЕАР Раб, мономерний ліганд для 4-1В88В, злитий з СІ" через ((145)- лінкер).
Таблиця 7
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.6)
МВ сю 1200000 пе димерний пи 4-188І1 (71- 131 254) - СНІ"-Рсо-ланцюг з див. таблицю 4 «виступом»
АвАдаадссасосталастаАаа,аСоССаАтаАтоСста7астацА стастасваостассаСбАасааСАтТаттастоа,стаатас
СоСАпААдсатастастаатсадтасоооостатостастА сХдасаАтостасАастаастасоаТаТСАСТаАСсАааСос (9;
СстТаАаСТАСАААаАасАСАССАААсаААСстастаавтааос
ААдсасссаса,ататАСТАССЯТатсттсАаСТаспААСТаСЄ саслалдатаастаасСсасассвААасасаАттаастстататстот сесббтТасАтотасадасстотаАдадАла,асастастаасаст ссаластотааСАСТаАСсАаатТа,асатота7асстюстассСАаст сс,сАдсассбасААТАаСсасАттасаТттСААдсасАцаст астасАасстаттасссасСсАа,вАавастасаАатТасАТСТ 143 мономерний Пи 4-188ВІГ. (71- с 254) -(245)-01" САСАСАСАСИаССАсаЦасТАпАСАСсасстааСАасСТаАСА садссабастТАсАаатастасасстатсАа,вАватаАСосоосо (Є)
АвАТТоСАССсСсавасстТаТасстТСсТоСААпСАдасСаАдаассос
АдсасапАТотТоатассатааСсТасСАССАТСТатсСТтТсСАТС тоСбСбассСАТСТаАтТСасСААаТТаАААТСтТапйААСТаТасст статптататасстТастаААТААСТТСТАТСССАЧАСпСАСцас
САААСТАСАСТа,асаААд,ас ТапАТААСаСССтТоСААТСССЯС тТААСТоОССАсСсИаАасАатТатСАСАапсАасАааАСАаСААасА
СсАасСАССТАСАааСсСстСАа,аСАаСАСССстаАСастТтаАасСАА
АаСАСпАСТАССАСАААСАСАААдатстТАСсасстассААатТ
САСССАТСАСОЯСССТвАаСсТоассссаТСАСАААсСАастто
ААСсСАасСассАсАатат с» плете із «западиною» ланцюг димерний пи 4-188І1 (71- 108 254) - СНІ"-Рсо-ланцюг з див. таблицю 4 «виступом»
Таблиця 7
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.6)
ВЕСРЕЇ 5РОЮРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММП ІТОСРІ ЗМУ МБ
ОРГ АСМУ5БІ ТС 5МКЕОТКЕЇ УМАКАСУУУМЕБОГ ЕІ АВМ
МмАСЕ,БОБМ5БІ АЇІ НІ ОРІ АВ5ААСАААЇ АГ ТМОЇ РРАБОЗЕАВН 110 мономерний пи 4-18ВВІГ. (71- М5АРСЕРОСВІ І НІ БАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАУМ ОЇ ТОСАТ 254) -(245)- СІ" МІ ОЇ ЕВМТРЕІРАСЇ РОРАБЕССССЗАТМААРОМБІЕРРБОВК
І КБатАБУМСТІ ЇЇ ММЕУРАЕАКМОМКМОМАГОБОаМЗОЕЗМТ
ЕООБКОБТУБІ 55ТІ ТІ БКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РМТ
КЗЕМАОСЕС із «западиною» ланцюг
В таблиці 8 представлені кДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 1.7) (ЕАР розділений тример з подвійним анти-РАР Бар на М-кінці Ес-ланцюга з «западиною» і зарядженими залишками в «схрещених» СНІ і Сі, злитих з лігандами для 4-188).
Таблиця 8
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.7) димерний пи 4-188І (71- 129 254) - Сі"-Рс-ланцюг з|див. таблицю З «виступом» вААдатасластаставААтоСсааСасАсва7асстаатасАа сстасСссаАТтотТотаАасАстТатостасаосасстоСсаваст
ТСсАССТТСТОоСТоССАСасСсСсАТИаТОСТОСОСТоСаАСАСас тоСбтааСсАдАдсасстааААТасататСасСсАттавасс тоссасСсаАасСАСТтТАСТАСсасССаАСстотатаАдлда,авасСастТ
ТСАССАТСТОССОасйОАСААСТоСААпААСАСССТатАССТ
ВСсАСАтТаАдАстТосСстасасасСаАааАСАсСассатТатА
СстТАСТаТаССАдасастааставаСААСТТСОАСТАСТаС авАсАдаааСАсоСстастАССсататсСАаСасСстТАасСАСА
АдасаАсстТАласатапсоооостасвосСсССА,САасСААат (анти-гАР (г8НІ)р-Ес- СстТАСАТСТВИ,аСОапААСсАХ,асСсасоставасСТасСсСстоатТаАА 144 ланцюг із «западиною» вОАСТАСТІ ТоОССОСАЛОаССсоСсатаАдсСса,ататссСтТасААСТОСТ сасастоТтаАСАда,аСсааСатТасСАСАСсСсттсоСсАаасСсоатас тасаладасаХа,асаасстатАстттадасдаСсатоатТаАс датасСсСсда,асАдастстТаваСАСССАСАССТАСАТСТОаС
ААСаТтТаААССАСАДасСссССАаСААСАССАдаа ТасАСАда
АдвдатапААСССАдсАа,аСстассАса,ваСасАасавааАТСТ вассабссАавАтТоСаддатТасАХасТасСсТапААтТоСасас савлдсасстаатасАда,асстааСсавАТСТСотТалаАСстТаТтТтостТ ссассасстоСаасСТсСАССТТСТОСТОССАСОаССАТОТО (о; тасватоСаАСсАда,астоСстТайСААдАдаасСстасААдтааатат ссассСАТоТасасстюсвасаАаСАаТАСТАСасСссаАСтТо
Таблиця 8
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.7) татадд,аааССасТТСАССАТСТОССасаАСААСТОСАДО
ААСсАСССстТатАССстасСсАаАтТалдастосстаТасасвасСса,Аас
АСсАССОЯСсСОаТатАСТАСТатТасСсАд,асяистааставасСАА сСТсОАСТАСТаСОСаАСАассаТасАассстаатсАсса,ататсс да,асастТАасСАССАдасасосстсататпссоостаассс
СсСАаСАсСААдадаСсАсСАХаСсаассаСАсАаассастота астасСстааТСААааАСТАСТТОСССОСАа,ВСсоСс,атаАоссат атсТапААСсАда,аСсссАласостадсстсаа,аСаТасСАСАСС тесесоса,ассатастасСдсАдатстТааСссСстТатАТАаССТаА асаласатаатАассата|асстстТАа,аСАасставасСАСССА
САССТАСАТСТаСААСатОААССАСАДасСсСсСАаСААСАС
САдааТасАСААаАдАдаатТасаасССАдадастТасСаАСАА
ААСТСАСАСАТИаСССАСсСОвтТассСАасСАССтТаАдастасСА свапапАСсСатсАаТсТ ост оСССССААААСССААса
АСАСССТСАТаАТСТОССОаАСсССсТаАааТСАСАТОСИтТт сетаатасАСатадаССАСаААаАСССстТаАааТСААаТТ
СААСТОаатТАсатасассасатавАаатасСАТААТаССАА вАСАдАдассаСсасаадаспАаСАсаТАСААСАаСАСаТтАССа татаатодасатТосСсТСАСсСатоСсТасСсАССАаСаадстаста
ААтТассСсААдаСпСАсСТАСАдатасСсААаатстТоСААСААдасс
Стас аСССССАТСОАСААДААССАТСТОССААДаССААА савасласссСсаАпААССАСАасататаСАСССТассссСсСАТ ссссааАтТадасСсТаАССААпААССАаааТатсАасстстоата
СсасСАаЙТСАААдаасСТСстТАТСССАаСаАСАтсасСС,атасАс тасводадаСААдтасвасСсАдаССапАСААСААСТАСАдДОаАСс дсасстоссатастааАСстоСсаАсаастстстостса т чвАдаСсААд,астАсСсатапАСААсдаСАааатааСАаСАсасс
СААСатсТсТоАТаСсТоСатаАтасСсАтТадаастсТасСАс
ААССАСТАСАСОаСАпААдадасстотосстаТатстоСацватА
АД ее нення ланцюг димерний пи 4-188І (71- 115 1254) - Сі"-Рс-ланцюг з|див. таблицю З «виступом»
ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОСОЇІ ВІ БСААБОЕТЕЗЗНАМОУУВОАР
СаКаТгЕММУ5БАМАБИЕОУМАВОЗУКОаТВЕТІЗВОМ5КМТІ МІ СО
ММ5І ВАЕОТАУУУСАКСУМІ МЕОУМ ОСТІ МТ М55АЗТК
СРБОМЕРІ АРББКОТЗОаСТАА асі МКОМЕРЕРУТУБУУМ5ИАЇ.
Т5ОаМНТЕРАМІ 055021 М5І 55 МРБББІ ИТОТМІСМММНК
РОМТКМОККМЕРКСОССССОЙССБЗОСИО,ИВБЕМО І ЕБИСИЇ МОР (Є) тав |НА В С, 1 О8ІРІЗСААЗОЕТЕЗЗНАМУМУВОАРОКСЇ ЕМ/УЗАМАВСЕ
В д ОМУАОБУКОаВЕТІЗНОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАУММСА
КОСУ аМЕОМУуСОСстТІ МГМОЗАВТКОаРОМЕРІ АРОБКОТООИСЯ
ТААГ аСІ МКОМЕРЕРУТУБМУМЗСОАІ ТИ МНТЕРАМІ О55О1І.
М5І БМ ТУРУ ИаТОТМІСМУМНКРУОМТКМОККМЕРКЗСО
КТНТСРРСОРАРЕААСОРОМУРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМ
МОМ5НЕОРЕУКЕМУ УМВС МЕМНМАКТКРАВЕЕОУМОТ МА УМ
ЗМІ ТМ НОВУ МЕОКЕМКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООР В
Таблиця 8
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.7) ее певен
ЕРОМСТІ РРОНОЕЇ ТКМОМ5І БСАУКаЕМРЗОІАМЕМ ЕМО
РЕММУКТТРРМІ О5БО5БЕРІ МК ТМОКЗВУМООСММЕ5СеМ
МНЕАІНМНУТОКБІ І РОК ланцюг
В таблиці 9 представлені кДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 1.8) (ЕАР розділений тример, ліганди для 4-1ВВ, злиті з анти-РАР Сто55Рарб, із зарядженими залишками, на ланцюг з «виступом»).
Таблиця 9
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.8)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО:
Адададаса;состадастАаССССпАТаАтоСстастааА стастасАаостаса,асАаа,асасАтТаттастАастаата (Є)
СсССАПАдАСсатастастаАтаАдта,воооостаТатостаатА сдасаАтостасастаастасатаТСАСТаАСАаваСас (о;
СсТОАДаСтТАСААДИАдОаСАСАССАдДАСААСсТасатастааос
ААдсвасссаСсататАСТАСаТат ст ТсСАасСтТасААСтТаСс садалатаатаасоСсвсассвААдсааАаттаастТататсто т сабоСтТасСсАТСТаСсСАааСсСстотаАдададасастастаасСас ін аСсАд,астотаСАСТОАСсАатТавАттасстостассАаст сс,сдаассСапААтТАааСасСАттаасТтсААвасСАсас т димерний пи 4-18ВІ (71- дотослостатотасовасслоловстоволотасАтот 161 їз «МОУ еІ САСАСАСАСОССАСОССТАСАСАСОССТОССАССТСАСА
В У СсАдасеСастТАсАаатастасасстаттСАаАаТаАСССсс (Є)
АвАТТоСАсССсСсвасстасстсСТоСАДаддасСсаддааса (Є) да,аса,авАттассвсаСсааАааАтотАсАадапаАСССаА
АСТаТоСССТаАСОАтоСсАд,асс,авчастаставАТСТадаА
СсАдасаААдтатсасссаастаатааСстАсаААтТаТатастас тТОАТттаАСсасАсстталастаатТАСтоСаАСССАааастТ саслдсаеасаттосостАстаавапАСТатссСТАСАДАСА
АСАТАСАДААДсАдАСсТаатаатаастАдАа,аСстаасвататА
СстТАТОТИаТтт тт ТсСАаСТасвААСсСТООДааСссса7атастааст сасадссасастоАаавАттататостастстТасАТСТОа (о; да,ассАастасастотастастасСсасСсАя,аСстасСАСсТаасто т сАотатавАССсТасСсСсАССАасстоТАассАаассСАаААА
Таблиця 9
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.8)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО: сла,асассттсааатТтоСААл,ссАас,аоста|астТасСАТСТаАДа (о; асСбавАсдасасстававАаТасСАТСТасСАТАСТаААОаСС дадасосаасСсАатаста,аасСсАдасСсТАСстАа,ааааасААСТ стастассАстаттсасСсаТаАСАССТОАвАТоССсТасса вАСстТасСсСсААдаСССтТАаАтТСАаААда,асасвсасавАаИаТтоСа сласаСсасасаАатстаАасатасАХ,астастасААтоСвасСа слаасстаатасада,асстааСсавАТСТСТаАСАСТаТоСстТ (Є) сассассТСаасСТСсАССТТСТОСТОССАСассАТОТОС т саатТоСбаАСсАавастоСтаСААдАдааСсСстасААтааатат ссассАТСТОСОССсСТОСОСОаСсаАдаСАСТАСТАСассаАСТ (о; татддасасСааТТСсАССАТСТОССасОсАСААСТОСАдДОа
ААСАСсСсСсТатАсСстасСсАаАтТаААстооста7асацвасСада (Є)
АсАССОЯССсСОаТтатАСстТАСТатасСсСсАдасастааставасСА
А
СстСаАСТАСТОСОСОаССАас,сааСАсоСстастоАсса,татс (о; дасастдас,аТасСТаСАССАТСТатсСТтТтТАТСТТСССАС (о;
СсдаСсаАдсСбавААдаСсТААдатстайСАСАсаоСА,асатсат стасстастаААТААСТТСтТАССсССсСсаСсс,сАХаасСсСАдаатТа
СсАдатапАддааТапАСААтТасосстасСсааАасСааСААСАас
СсАапАдАдаСсатадсСсадаСАапАСАаСАДаспАСТоСАСс тТАСАСССТОАаСАаСАСССстТаАсоСстадаСААлвассСаАс
Т
АСсСОАСАДаСАСААДСвататАсасСсТасСсапААлатаАСССАСС дасеасстаттдасссСаТтаАССАдаАХастТтсААССава (Є)
СсАсТасСсаАСААпАСССАСАССтТаТатосСстТоСАТаСоСстТасСс сстадластастасссвса7асостласатат стат
СААДаСССАДаспАСАСССТаАТаАтсАа,аССасАсссста
АдатадсстасатастастаАдтататСсСАСадасАсс (о; тТОАдАатаААдатТТсСААТТОаатТАСсатасассвсаСсатасААаИат ,ССАСААТаССААдаАдССАдассасааваАааАдасСАаТАСАА
СсАдасАсатТАссататастАасаТсСсТАССатосСстТасСАС
СсАдавАСсТааСсТаААтТааСАдааАаТАСАдатасСАдаа,стТо
ТоСААСАДАДОСОССТОСОССассссССАТСОСАСААААССАТСТ
ССАДДаССАдДдасаасАассССаАСААССАСАааТатАСА состТассСсССАТИАССаапАтТаАаСТаАССААСААССАсИ т сласстатаатасстаайТСсАААдаастТТСстТАТСССАаСОаАС
АТсСассатасАХатаапАсАаСААтаавасСАаССацпАсААс
ААСТАСААДСАСсСсАСсСОасстосса таставаАстоСалдсаваст
ССТСТССТСТАСАОСААдасСстТоСАСС,атТасАСАдадасАс стасСбдаСсАдапапААСатсТсТоАТа|астоСатТаАТОаСАТ вАаасСсТСсТасСАСААССАСТАСАСасСсАаАдАа,АасстстоСс татстоСасатТААА
Таблиця 9
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.8)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО: шшншииииииІхжишш ПІІ
Адададас?е7;состадастАасСССаАТаАтоСстТастТасаА стастасАаостаса,асАаа,асасАтТаттастАастаата (Є)
СсССАПАдАСсатастастаАтаАдта,воооостаТатостаатА сдасаАтостасастаастасатаТСАСТаАСАаваСас (о;
СсТОАДаСтТАСААДИАдОаСАСАССАдДАСААСсТасатастааос
ААдсвасссаСсататАСТАСОаТатТ ст ТтсСАаасСтТасААСтТаСс садалатаатааоСсвсассвААдсаадтстаастстататсто т сабоСтТасСсАТСТаСсСАааСсСстотаАдададасастастаасСас т асдеастотаастстАсАХатасвАттасстостассАаст сс,сдаассСапААтТАааСасСАт тав тсААасасСсасо т астасасстаттасссасСАааАдаАСстТасадаТасСАТСТ (Є)
САСАСАадасоСАасАаасСАасасАасасстаасАастТаАсСА
СсАдасеСастТАсАаатастасасстаттСАаАаТаАСССсс (Є)
АвАТТОСТаССОЯСОоСстТасстТАааССсСтТАаАТСТадАаасавс савлдсатпсоСсасАаваСсасАавАтТоТаАсаАтса,атастаАс 147 мономерний пи 4-188Г (71- ССАСТСТОСсСсвасСАссСстала,ассєстаХа,асостааоцвАцАа 254) -ЕАР (МІ СНІ) А асСАсостадастасаадасСАааССАасАааса тала дастАостасоСстастТАтсАаСсАаасАдасоСаавоСАаасс (о;
СсСАСАСсТастТаАТСсАТоСССаСсСАаСАсСсСс,авассСАссСа (Є)
САТССССОАТАСАТтсАа,аСссасСАаасаастоСаасСАССаА (о;
ТПСсАСССТаАССАТСАДОСССОИСТапААСССОаАааАСТТСО сса7ататАСстТАСсТасССсАа,аСАа,аавассАааТаАТССССССА (о; сттса,аасСсАдаааСАССАдасТасАААТСААаТоСтСтТаТст
АаСАСАдАасаасоосАаа,асатапсоссттаассСсСстТАас
А вСААдадОаСАСАТСТаСССаАдАсАл,ассасостава7астасс тавтапААСАТТАСТТОСССОвбАасСосСатаАсСататостТа вААТТСТОССсОасСССстТаАСАла,аСсааСсТасСАСАССТТТОСА ссатастасадсда,асАХаСсавасстатАСстттадасСАас (Є) тсатодсАХатТассСсАаСсАастттаваСАСССАСАССТА
САТСТаСААДСОТаААССАСААДаСССАсССААСАССАДИаСТ садСссАпАдАдааЙТасААСССАдатостТас
СЯ ев ідніння с НН із «западиною» ефе Тл й нютетюг онов
ВЕСРЕІ5РОЮРАСИЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІОСРІ МУ
Таблиця 9
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.8)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО: 254) - БАР (МНОСІ)-Ес- ОРІ АСУБІ ТС ЗУКЕОТКЕЇ МУМАКАСУМУМЕБОГ ЕЕГ АВМ ланцюг з «виступом» МАСЕ,Бавм5і АІ НІ ОРІ АВ5ААСАДАЇ А ТМОЇ РРАББОЗЕАВ
МЗАРСЕРОСНІІ НІ БАСОВІ СУМНІ НТЕАВАВНАМ/ОЇ ТОСАТ
МІСІЇ РЕЕМТРЕІРАДЧЇ РОРАЗБЕННСОСсСОС5ИСОСОВЕСРЕЇ 5РОЮ
РА
СГГОГАОСОМЕАОЇ МАОММ ІОСРІ ЗМУ МОРІ АСУ ТОс
І 5УКЕОТКЕЇ МУМАКАСУМ УМО ЕІ АВУМАСЕаБаБУБІ А
ІНГОРІ А5БАДОСАААЇ АГ ТМОЇ РРАБЗЕАВМЗАБСРОСВІІ НІ.
ЗАСОВІ ЕУМНІ НТЕАВАВНАМ ОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРАС
ГРОБРАБЕССдСИБОСОССОЕМОЇ І ЕБОСИЇ МОРОСБІ ВІ СА
А5
СЕТЕЗ55НАМОУМУУНОАРОКаИїЇ ЕМ МБАМАЗаБгЕОММАОоБУКОа
ВЕТІБНОМЗКМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАУУУСАКОСУ СМЕб У
МС,ОСТІ МТУ5Б5АВМААРБЗУРІЕРРБОВКІ КИ ТАБМУМС І ММ
ЕУРВЕАКМОМ/КМОМАГОБаМ5ОЕЗМТЕООБКОБТМ5І 55.
ТІ ЗКАОМЕКНКУУАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАСЕСОКТНТО
РРСОРАРЕДАСОРБУНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОМН
ЕОРЕМКЕМУ УУраИмМЕМНМАКТКРАЕЕєЕОУМО т МАМІ ТМ
ГНООМІ МЕОКЕМКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКОРВЕРОМУ
ТГРРСВОЕТКМОМ5І МСІ УКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСООРЕММ
МКТТРРМ'ЮБОО5ЕРІ МК ТМ КЗАМООСМУЕЗСОЗУМНЕА
І НМНУТОКБІ БІ Рак
ВЕОРЕЇ 5РООРАСІ ЇЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІОСРІ ЗМУ
ОРГ АСМУ5БІ ТИС 5УКЕОТКЕЇ МУМАКАСМУММЕРБОЇІ ЕЕГ АВМ
МАСЕ,Бавм5і АІ НІ ОРІ АВ5ААСАДАЇ А ТМОЇ РРАББОЗЕАВ
МЗАРСЕРОСНІІ НІ БАСОВІ СУМНІ НТЕАВАВНАМ/ОЇ ТОСАТ
МІСІЇ РЕЕМТРЕІРАСІ РОРАЗБЕСССХИ5БИСОСОБІМІ ТО5БРИСТІ. мономерний пи 4-188Г- (71- З 149 254) - ЕАР (МІ СНІ) І 5РОЕВАТІ БСААбБОБУЗНАОМУІ АММООКРООСАРВІ І ПОАБТ
ВАТОІРОВЕБаЗаБатТОЕТІ ТІВ ЕРЕСОЕАМУМСООСОМІР Р
ТЕЕОСТКМУЕІК55АВТКОаРБОМЕРІ АРЗЗКОТЗОСТААї асі М
Е
ОМЕРЕРМТУБМУМ5ОИАІ ТО МНТЕРАМІ О5БИЇ М5І 55 ТУР
З55І ЕТО МІСМММНКРОМТКМОЕКМЕРКВС із «западиною» ланцюг
В таблиці 10 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
ЕАР молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (52-254) в злитті з Ес (Кі) (конструкція 1.9) (ЕГАР розділений тример з амінокислотами 52-254 ектодомену 4-1В8ВІ і зарядженими залишками в ланцюгах, які містять ліганд).
Таблиця 10
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.9) сста,асастататотава,абастТАсАаСссСТоТосСтТадвАТСТОа ссассАдасСсСсСАпАСстаХдаАаадассАсстадастаАасс
ЄбвАТтТаАТОСТаССОСОСАСсСТастасАтотТадаАСАасасАТ стсасссдастаатаасССАаААдс,атТастТастаАТССАТ сассссстатостастТАСАасСаАтоставастаастааса татосАСстТаАдСдааоаассСсТАасСтТАСАААДаАдааАСАССА
ААпаААстаатаатааССАдсассвасаТатТАСТАСаИататт сттСАаасСстапААстасСсасасаататасосааавАаса
АТСТОСАТСТОТаИТСОТОТООСССТасАТСТаСАаССССтТа
АвАддасастастаасастасаасттааСАСстадсАатас
АТСТОССТОСТаСсСсАЛаасСстТоСада,асСССапААТАаСОаСАТТ таваТтТсААвасСсАасАстТтастасАасстатстассвассАс да,астасвадаТасСАТСТаСАСАСсАа,сАдаасСсСАсаасСстТАаА
СсАс,асстаСАаСсТАСАСАаасасСсастАсАХа,астаставис стат сАсдатадссСССаАвпАтоСАасСапАСТасссСА асССстТАаАТотТадАадсасас,ссасАас,ааАд,аСаавАлс,васавАс сАТССССТТОССОССТОТаИтотТа,аСбасСтТАсАа,асССсТоТоСстаС
АТСТОССОаСсСАаССССАпАСстТаАдадсАасапАсСсталдастТ сАдассСсСаАтТаАтостассааАастастааАасстасавасСАС саААтапсастоа,астаатаасСсТСАСААТатТастТастаА тадСасАассттатостаатАСстоСсаАсосстаасстасс дассататосСстАстааапаАсСТатССтТАСАААДСАдДаА
ТАСАДАДОСДАСТОСТОватаастАдадаставаатТатАСТАТ стат тт ттСсдасСстТавпААстала,асосссасатастааСсТавос - дасестсдапАТотТататсстаастстасАТтоТасСАаСс 150 од СНІ -Роланцю. з тТСТасостсТОостТасСтТОСсСОсСАССТОСАСТОССТСТОАСТ «ВИСТУПОМ» стазАССтТасСссСАССсАасстотТАаСаАдаасССАпААдАСАас ассттсаааТТсСААда,асАса,ааста|астасСАтоталасасса сАсАдасасстасАаТасАТСТаСАТАСТадДАасСссСсАсАС ссссасАТастааСАасСсТАССсСАаса,асвсаасСААСстаТтаст савбАстаттсаСатТтаАСАСсСстаАаАтососастасста
СсСтТАаСССААпААа,атТадлдасасвсаАсаСацвАттааСааА сававбАТотТастТАааСАССАд,асвсасооСстсататососо таассСсСсСАаСАаСАда,аАасСАсСсАааСсааСсааСАСАасСсСа стстасеастасстаатаАдапАСТАСТТССсСсОСАа,СССатТ сАдосататСстапААСсА,аСсасАассстаАсстсаасата
САСсСАССТТОоСССсСЯссатастасСАааАда тот асстатТАТА асстАадаСсАдасатасастАассатассттотласАасстаааИ
САСССАСАССТАСАТСТаСААСаИтаААССАСААдаСССАас
ААСАССААлДсСатасАаСсАсаААаа,аатасАаСсССААадасСтТас
САСАДААСТСАСАСАТасСссСАССатассСсСАасСАССТОаАА сстасадсасааАССаТтсАаТтст ССС ССССССАДАДС
ССАДФСАСАСССТСАТаАтТотТОоССавАсСсосСсталастоСАСс
АдтасатастастасАСбатадасССАСаААсАсоСсталдиаит
СААСТТСААСсТОатАасатааассасатасАааТасСАТААТ впССААвАСААддасс,аСа,аааАдсаАдаСАаТАСААСАаСАСаИ таоесататастАдасатсстТсАССатоСсТаСАССАССАСТ вастаААтТаайСАДасАСаТАСААаИТтаСААааТСсТоСААСА
АдасостааСасССССАТСОСАСАААДАССАТСТОСАдАаС
СААДОССІОСАаССССО,ПАаААССАСАаататАСАСоСстТасСс
СсССАТОССОСОпАтТаАдастТаАССААаААССАаастСАасСстТ стаатасстасТСАААсаТасТ ТсТАТСССАССаАСАТСОЯСС
Таблиця 10
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.9) стаслдатасададасСААтТаса,аАаССацпйАсСААСААСТАС
ААаАссАас,асстоссатастасвАстоСаАсаастостст
ТОоСТСТАСАаСАдасСстТСАССатапАСАдадасСАаатас дасдасапААдсатсТсТСАТастосатаАтасАтадасс
ТСсТасСсАСААССАСТАСАСОЯСАсСААдсСАа,ассттосстаТатст сСаасТАдДА сста,асастататотава,абастТАсАаСссСТоТосСтТадвАТСТОа ссассАдасСсСсСАпАСстаХдаАаадассАсстадастаАасс
СбвАТтТаАТОСТаССООСАСТаСсТасвАТСТаАаАСАасасАТ стсасссдастаатаасССАаААдс,атТастТастаАТСОАТ сассссстатостастТАСАасСаАтоставастаастааса татосАСстТаАдСдааоаассСсТАасСтТАСАААДаАдааАСАССА
ААпаААстаатаатааССАдсассвасаТатТАСТАСаИататт сттСАаасСстапААстасСсасасаататасосааавАаса
АТСТаСАТСТОТаИТСТОТОСССсСТасАТСТОСАаССсоСстТа
АвАддасастастаасастасаасттааСАСстадсАатас
АТСТОССТОСТаСсСсАЛаасСстТоСада,асСССапААТАаСОаСАТТ мономерний пи 4-18ВІ. (52- таваТтТСААсасасастастасСсАасстаттассаасССАс 151 254) -С1" да,астасвадаТасСАТСТаСАСАСсАа,сАдаасСсСАсаасСстТАаА
СсАс,асстаСАаСсТАСАСАаасасСсастАсАХа,астаставис стат сАвдатадсСССсСаАвпАтгсосАасссассТа|асстт
СстТоСААСАдДАХаСадАас,сасСс,асАа,ассасвАаттассавасацвАс вАТСТСОСтТАСОсСТаасСТасСАССАТСТаТСТТСАТСТТОССа
ССАТСТОАТСОСААСТТОАААТСТаСААСсТасстТоТаТтта татасстасСстаААТААСТТСТАТОССАадаАдаасССАдАаТт
АсАдатТапАдАдааТасАтТААСасСсссСтТоСААТоаасаТААСТОоС
СсАда,асАпдатаТтСсАСАаАаСАааАСАаСААапсАСАасСАСс тТАСАСССТоАа,аСсАаасАсСсСтадСсасСстаАаСААДдаСАсАс
ТАСОСАСАААСАСАдАдаТатстТАсасстасСаААаТСАСССАТС дасаеасстадастасСссСаТСАСАААаАдаТастТТтсААСАааа сАс,сдатат лек ліс ТЗН ланцюг із «западиною» ефе, С печити виніяеант вовняні ланцюг
РМАМБИаАВАЗБРИБАА5БРВІ НЕСРЕЇ 5РООЮРАСІ ЇЇ ОЇ ВОСМЕ
АОЇ МАОММ ІраРІ 5БМУМБОРИЇ АСМ5І ТО 5УКЕОТКЕЇ.
МУМАКАСМУУМУМУЕРОЇ ЕГААУМАСЕаБавБмУБіІ АІ НІГ ОРІ В5АА
САДАГАЇ ТМОЇ РРАБЗЕАВМ5О5АРСЕОСВІ І НІ ЗАСОВІ УНН
І НТЕАВАВНАМОЇ ТОСАТМІ СІ єЕАМТРЕІРАСІ РОЕРАБЕСОСС аваспайО5РМАМ5ОАВАБРИаБААБРВІ ВЕСРЕЇ 5РООРАСІЇЇ.
РІ ВОСМЕАОЇ МАОММ ІОСРІ 5БМ/МБОРОЇ АсМУБІ таці БУ димерний пи 4-188І (524 КЕОТКЕЇ УМАКАСУМУМУМУЕРОЇ ЕІ АВУМАСЕаБавзмві А! НІ. 111 254) - СНІ"-Ро-ланцюг зі ОРІ В5ААСАААГАЇ ТУОЇ РРАББЕАВМЗАРСОРОСВІ І НІ ЗА «виступом» СОВГОМУНІ НТЕАВАВНАУОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕЇІРАИІ Р
ЗРАБЕССОИ,аБОаСОСОЗАВТКаРОМЕРІ АРОЗКОТЗОИас,тААЇ а (о;
ГЇМЕОЖМЕРЕРУТУБМ/М5СОАЇ Т5ИМНТЕРАМІ 05501 51 55ММ
ТМРБУББІ ОТОТМІСМММНКРОЬМТКМОЕКМЕРКЗСОКТНТСРР
СРАРЕАДССРБОМРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОМ5НЕО
РЕМКЕММУ УУрамМЕМНМАКТКРАЕЕєОММОТМАМУ5МІ ТМІ Н
ОМ МЕСКЕМКСКУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМУТІ.
Таблиця 10
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.9)
РРСОВОЕТКМОМ5І СІ УКОЕМРБОІАМЕЖМ ЕЄМСОРЕММУК
ТТРРМІ ОБООБ5БЕРІ М5КІ ТМОК5АУМОССММЕЗСЗУМНЕАЇ Н
МНУТОКОІ БІ Рак
РЖМАМУБИаАНАЗБРОБААБРНАЇ ВЕСРЕЇ 5РОЮРАСІ ЇЇ ОЇ ВОСМЕ
АОЇ МАОММ ІраРІ 5БМУМБОРИЇ АСМ5І ТО 5УКЕОТКЕЇ.
МУМАКАСМУУМУМУЕРОЇ ЕЕГ !ААУМАСЕаБаБУБіІ АІ НІГ ОРІ В5АА мономерний пи 4-18ВІ. (52- САДААІ А ТМОЇ РРАБЗЕАВМЗАРОБОСВІ І НІ БАСОВІ МН 112 254) -СІ" І НТЕАВАВНАМОЇ ТОСАТМІ СІ єЕАМТРЕІРАСІ РОЕРАБЕСОСС авасасеБАТМААРБУРІЕРРБЗОВКІ К5ИТАБМУМУСІ І ММЕМРА
ЕАКМОМКМОМАГ О5аМБОЕВМТЕООБКОБТУБІ 55ТІ ТІ ЗК
АОУЕКНКММАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМВОЕС ланцюг із «западиною» ланцюг
В таблиці 11 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
ЕАР молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (80-254) в злитті з Ес (Кі) (конструкція 1.10) (ЕАР розділений тример з амінокислотами 80-254 ектодомену 4-188ВІ і зарядженими залишками в ланцюгах, які містять ліганд).
Таблиця 11
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.10) сАТОСТОССОСОосСсСТаСстТасАТоТаСсаасСАвСаспсААТОаТТТа сссадастаатаасСсССАвААсатастастаАатадтаассс сстаХасСстаТАСАаСсОаАтоставАстастассататсА
СстТАсАд,васааСсСсТАаСтТАСАДАпАаспАСАССАДАОСАА стаатастааССААдсасСсваСаТатАСТАСаТтТаТаттсттто даставпАдАстТасасА;сАаатастааосааСаААаСсАТСТа асттататототааССстТасСАТСоТаСсАаассоссСтТададАда састастасс,астасаа,астотаасСАСТОАСАатасаАТСТа сстостассдастоСбалдвассСадпААтТАасСасСАТТТаСсаТт
ТТсААсасСсАасАСсТта7астасасстаттасСсаасССАспАсаТст димерний пи 4-188І (80- сапАдатТасСАТСТаСАСАСАсСАсасСАаааасСтТАсаАСАСас 152 |254) - СНІ"-Ес-ланцюг з стааСсАасСсТаАСАСсАа,васоастАсАаатастасва7асстатто «ВИСТУПОМ» дадатаАдссооСаАаАтоСАаССавАСсТассСАасСсСсСтТА вАТСтТадАасСаСса,ааСсссАа,асААааСавАасаасавАасаАтТоСа
АсССсСсА,аСсТасАстаставАаостассасаСАааааААтТаТаттсас тсадастаатааСсТСАпААтТатастастаАтаАСааАССТ статостаатТАСстТоСсаАассстаасстассаа,ава7ататосс таАстТасайаАСТатсоСтТАСАААаААсАТАСАДАДОСААдС тастастаасСстТАдАлаСстааааТтТатАСТАТататТтТТТсСА аставпААстадасоссатастасотасааАасвастСАас
АТСТОТОТОССТОССТотТасСАТСТОаСАСаССТоТаСаТстоТта стастасСсаСсАда,аСстасСсАастаастотаАстатапАсстасс
АСсССсАаСсСсТотТАа,аСОАдчасССАаААдАсАа,аСсасст Сас
СААдаспсАсасоТастасСАтстаАсаасСсавАСАаСасста
Таблиця 11
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.10) аваАсТасАТСТаСАТАСТаАдаССАпаАдаСССаасАТасСТттТ сасдастадссСсАд,асасасСААдстатастасваАстатттса сатОАСсАсСстТаХаАтосссастаасстТассСстАаСсССААСА датаддасассАХа,ааСасвАаттассавА;,асасаАтсТаст
АасСАССААсСааооостосатаТат ооо ааСсССССАасСА пСААЧАдаСАСсСсАХаСссасссасАсАаа,ассастотава7астасс таатбадавАСтТАСсТІоСсСсСсавВАла,асоса,аталсса7ататоста вААСсАдасавсаласосталсстосааСсаТасСАСАССТТоССС асса,;тастасалаХатстаасстатАтТАасстАаСАасСа таатсАассат|асстстТА,аСАасставаСАСССАаАССТА
САТСТОаСААСОаТаААССАСАДаСССАаСААСАССАДОСТ а,сАсададАдаатавАаСССААадасСТаСаАСАДААСТСА
САСАТаСсСсСсАсСсатасСсСАаСАССтТаАддастасСсаасвасяо
АССаТСАаТтсТ сс ССССССАААДАСССАДасСАСАСС
СТСАТОАТСТоССОООАСсСоосСстТаАдасТСАСАТаСсаИатаатас тавАсатТаАаССАСОААаАСССтТадасаТСААаСТТСААСТ сеатлсатасассасатасвсАдааТасСАТААТаССААСАСАА дассассвадапАаСАатТАСААСАаСАСаТатАсСататась тсАаСсатосСсТсАсСсатоСТасСсАССАааАСТаасСТаААТОС
САДаСАСТАСААатасААаатсТоСААСААДасссСстоава
СсасСССССАТСОАСААДААССАТСТОСААДаССАдАдасаТасА аССССОАпААССАСАаа,аатТатАСАСССстТаТассссССАТассСась аАТалдасСстаАССААаААССАааа;тсАа,асстаТтаатасста аТСсААдаасСТстТАТСССАаСОаАСсАтассатаавАдатаца даАдаСсАдтасасАХасСапАаААСААСТАСААСАССАСас стоссатасСставАСтТоСаАСсааТсСстТосСТсСТосСТСТАСАС (о;
АдасСстТСсАСсСатапАСсААдадаСАасатааСАаСАаайаААСс аТсТстТсАТаСтТоСатТаАТаСАТОАСастоТасСАСААСС
АСТАСАСОЯСАаАдАасСАаасстотосСстаТатстоСасатАдА сАТОСТОССОСОосСсСТаСстТасАТоТаСсаасСАвСаспсААТОаТТТа сссадастаатаасСсССАвААсатастастаАатадтаассс сстаХасСстааТАСАааСсаАтоставАстаастаасатТатсА
СстТАсАд,васааСсСсТАаСтТАСАДАпАаспАСАССАДАОСАА стаатастааССААдсасСсваСаТатАСТАСаТтТаТаттсттто даставпАдАстТасасасАаатаатасосаасСпААдаСАТСТа асттататототааССстТасСАТСоТаСсАаассоссСтТададАда састастасс,астасаа,астотаасСАСТОАСАатасаАТСТа сстостассдастоСбалдвассСадпААтТАасСасСАТТТаСсаТт
ТтТсАдсасааса7астастасАасстаттасссаССАаАа,стТ 153 мономерний пи 4-188І. (80- ааавАдатасСсАТСТаСАСАСАаАасСасСАа,сасТАпАСАСас 254)- СІ" стааСсАасСсТаАСАСсАа,васоастАсАаатаставасстатто дадатаАдссооСаАаАтоСсАа,аСсСааосСстТасстСсТоСАА вАдаСадАд,ааСсапвАасасавАттааСаасацвАааАтТсТо атТдссатаасСсТасСАССАТСТатсСТТсСАТСТТСССОасСсСАТСТ вАТСсСаААдаТТаАААТотТасААаста7асстотаттататасс
ТтТастТтОаААТААСТТСТАТСССАСАСАпаССАААаТАСАИТа вААдсатапАтТААСасСссстТоСААТаастТААСТоССАааА авдМатТатсАСсАдадасСсАааАСАаСААапсАСАаСАССТАСАС
ССстТСсАаСАаСсАсоСстаАСсастТаАаСАААаСАСАСТАСОА
САААДСАСАдАдатТстТАСсасстасСсаАдатСАСССАТСАССО ссталастоасссаТСАСАААаАастТ ТсСААСАасасАсА
Таблиця 11
Послідовності націленої на ЕАР молекули, яка містить тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 1.10) о ияття --- ( , (-- ее нннетнюг 1 із «западиною» еще СНО терте орки ланцюг
ОРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІВИРІ БМУМБОРИЇ АСМУБІ таці УКЕОТКЕЇ УМАКАСУУМУУЕБРОї ЕАВУМдаєаЗа
М5ІАЇ НІГ ОРІ В5ААСАДАЇГ А ТМОЇ РРАББЗЕАВМЗАБИаРОС
ВІТНІЗАБОВІ УНІ НТЕАВАВНАУОЇ ТОСАТМІ СІ ВМТ
РЕІРАЇ РОРАЗБЕССЬСГ2сЗОСсСОИССвОРАСІ ЇЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МА
ОММІ ГІраРІ ЗМУУБОРИЇ АСУБІ Тс ЗМКЕОТКЕЇ ММАКА
СУМУУМУЕРОГЕГААММАСЕаБавмвбі АІ НІ ОРІ ВБААСАДАЇ димерний пи 4-18ВІ. (80- АГТМОГРРАББЕААМЗАРОаРОСНА ГІ НІ БАСОВІ ЯМНІ-НТЕА 113 254) - СНІ-Ес-ланцюг з ВАВНАМОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРАЧІ РОЕРАЗБЕССОСОИС «ВИСТУПОМ» ,савзАБТКаРБЗМЕРІ АРОЗКЗТЗИааТААІ СІ МЕОМЕРЕРМТМУ
ЗМУМЗаАЇ ТЗаУНТЕРАМІ О550І 51 55УУГУРБЗБІ ИаТОТУ
ІСМУМНКРОМТКМРЕКМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕДАСИаРБМУ
ЕГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСМУММОУЗНЕОРЕУКЕМУ УУ СС
МЕМНМАКТКРАЕЕОУМЗТУВМУМУБМІ ТМІ НОМУ МОКЕМКСО
КУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРАВЕРОМУУТІ РРСВОЕЇТКМОМ
З/ МС УКаЕУРБОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОБравеЕРЕ
ГМ5КТМОКЗАМОСаМУЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І ЗР ак
ОРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІВИРІ БМУМБОРИЇ АСМУБІ таці УКЕОТКЕЇ УМАКАСУУМУУЕБРОї ЕАВУМдаєаЗа
М5ІАЇ НІГ ОРІ В5ААСАДАЇГ А ТМОЇ РРАББЗЕАВМЗАБИаРОС
ВІТНІЗАБОВІ УНІ НТЕАВАВНАУОЇ ТОСАТМІ СІ ВМТ
114 рокомерний пи 4-1881Г. (80- рас евенвЕоововоооавНтуААЕВУпПЕРЕВоНКК 254)-01"
СТАБУМСЇ ММЕМРАЕАКМОМУКМОМАГ О5БаМЗОЕЗУТЕОЮ
ЗКОБТУБІ ЗІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОІ 55РМТКЕ
МАаЕС із «западиною» ланцюг 1.2 Одержання націлених на ЕАР (28НІ) конструкцій, які містять розділений тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес
Кодуючі послідовності націлених антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд
ТМЕ в злитті з Ес (Кі), клонували в плазмідному векторі, в якому експресія вставки контролюється промотором МРБУ і який містить синтетичну поліА-послідовність, локалізовану на 3-кінці СО5. Крім того, вектор містив послідовність ОгіР ЕВМ для підтримки епісомальної форми плазміди.
Націлену антигензв'язуючу молекулу, що містить тримерний ліганд ТМЕ в злитті з Ес (КІВ), одержували шляхом котрансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців з використанням поліетиленіміну (ПЕЇ). Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами у співвідношенні 1:1:1:11 (наприклад, «вектор для конструкції димерний ліганд-(СНІ або СІ )-ланцюг з «виступом»:«вектор для злиття мономерний ліганд-(Сі. або СНІ)»:« вектор для важкого ланцюга із «западиною» анти-РАР Рар»:«вектор для легкого ланцюга анти-РАР») для одержання конструкцій 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9, 10. Для двовалентної конструкції 5 застосовували співвідношення 1:1:1 («вектор для важкого ланцюга із «западиною»:«вектор для важкого ланцюга з «виступом»:«вектор для легкого ланцюга анти-
ЕАР»).
Для виробництва в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 300 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 10 хв при 210 х д і супернатант замінювали 20 мл попередньо нагрітого середовища СО СНО. Експресійні вектори (200 мкг загальної ДНК) змішували в 20 мл середовища СО СНО. Після додавання 540 мкл ПЕЇ розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с і інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕ!, переносили в 500-мілілітрову збовтану колбу і інкубували протягом З год при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 595 СО». Після інкубації додавали 160 мл середовища ЕхсеїЇ, доповненого бмМ І -глутаміном, 5 г/л соєвого пептиду (РЕРБЗОХУ) і 1,2мМ вальпроєвої кислоти, і Клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали 1295 Реєеа 7 і глюкозу (кінцева концентрація З г/л). Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням протягом 30-40 хв при 400 х д. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22 мкм-фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,019 (мас. /06.) і витримували при 4 "С.
Націлену антигензв'язуючу молекулу, яка містить тримерний ліганд ТМЕ в злитті з Ес (КІій), очищали з супернатантів клітинних культур за допомогою афінної хроматографії з використанням білка А з подальшою гель-фільтрацією. Для здійснення афінної хроматографії супернатант вносили в колонку Марзеїесі Зиге (СМ - 5-15 мл, смола фірми СЕ Неайвсагеє), врівноважену буфером, що містить 20мМ фосфат натрію, 20мМ цитрат натрію (рН 7,5).
Незв'язаний білок видаляли шляхом промивання таким же буфером, використовуючи його в об'ємі, кратному принаймні б об'ємам колонки. Зв'язаний білок елюювали, використовуючи лінійний градієнт (20 СМ) або східчасту елюцію (8 СМ), буфером, що містить 20мМ цитрат натрію, 100мМ хлорид натрію, 100мМ гліцин (рН 3,0). При здійсненні елюції з використанням лінійного градієнта здійснювали додаткову східчасту елюцію із застосуванням об'єму, кратного 4 об'ємам колонки.
Значення рН зібраних фракцій регулювали, додаючи 1/10 (об6./06.) 0,5М фосфату натрію, рн 8,0. Білок концентрували перед внесенням в колонку Ні оай Супердекс 200 (фірма СЕ
Неайсаге), врівноважену розчином, що містить 20мММ гистидин, 140мМ хлорид натрію, 0,01 об.95 Твін2го, рН 6,0.
Концентрацію білка визначали шляхом вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм, використовуючи коефіцієнт молярної екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності. Чистоту і молекулярну масу націленої антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд ТМЕ в злитті з Ес (Кіп), аналізували за допомогою ДСН-ПААГ у присутності відновника (5мМ 1,4-дитіотреїтолу) і без нього і здійснювали фарбування кумассі ЗітріеВіне тм
Загевіаїп, (фірма Іпмігодеп, США) або за допомогою КЕ-ДСН, використовуючи пристрій Саїїрег
ІГарСпір СХ! (фірма РегКкіп ЕІтег). Вміст агрегатів в зразках аналізували, використовуючи колонку для аналітичної гель-фільтрації ТЗКде! 53000 5УУ ХІ (фірма Тозоп), врівноважену рухомим буфером, що містить 25мММ К»НРО», 125мМ Масі, 200мМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,0295 (мас./о6.) МамМіз, рН 6,7 при 25 76.
В таблиці 12 узагальнені дані про вихід і кінцевий вміст мономерів націлених на БАР антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний 4-1ВВІ в злитті з Ес (Кій).
Таблиця 12
Дані біохімічного аналізу націлених на ЕАР антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний 4- 18В1 в злитті з Ес (Кій)
Мономер
Конструкція Вихід мг/л) Іо
ЗЕС конструкціЯТ4 //7777777711111111111Ї1111111111114211|7111111117199с121С конструкціяТ.5 //777777777111111111Ї111111111111411111111Ї111111117199с1С конструкціЯТ.6 -/-:7777777111СЇ11117171717111112111 Ї7111717171717198с2С конструкціяТ.7 77777711 Ї1111111111173411111111111111117199с121С іконструкціЯТ.8 //777777711111111111Ї1111117117541111111Ї1111171717198с2С
Таблиця 12
Дані біохімічного аналізу націлених на ЕАР антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний 4- 18В1 в злитті з Ес (Кій)
Мономер
Конструкція Вихід мг/л) Іо
ЗЕС конструкціЯТ.9 77777712 Ї71111117117198с2С конструкція ТЛО 77777111 Ї711171717171717119877771111111Ї71111717171171997121С 1.3 Одержання націлених антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний мишачий ліганд для 4-188В в злитті з Ес.
Аналогічно до націлених антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний людський ліганд для 4-188В в злитті з Ес, одержували націлені на мишачий ЕАР антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний 4-1ВВІ в злитті з Ес.
Послідовність ДНК, кодуючу частину ектодоменів (амінокислоти 104-309) мишачого ліганду для 4-1В8, синтезували на основі послідовності О30129-1 з бази даних Опіргої (ЗЕО ІО МО: 70).
Для створення конструкції М.1 цистеїни в положеннях 137, 160 і 246 замінювали в результаті мутації на серин за допомогою стандартної ПЛР, в той час як для створення конструкції М.2 цистеїн в положенні 160 і 246 замінювали в результаті мутації на серин (С1605).
Збирання мишачого ліганду здійснювали аналогічно до методу, описаному для людського 4- 18ВІ і представленого на фіг. ЗА і ЗБ. Димерний 4-18ВІ,, розділений (с45)»-лінкерами, зливали з СІ-доменом мишачого Ідс1 (фіг. ЗА) і мономерний 4-1ВВІ. зливали з СН-доменом мишачого
І4с1 (фіг. ЗБ). Полінуклеотид, який містив димерний ліганд для 4-188В, злитий з мишачим Сі - доменом, субклонували в рамці зчитування з СН2- і СНЗз-доменами важкого ланцюга мишачого
Іда1, створюючи конструкції, представлені на фіг. ЗВ.
Для мишачих конструкцій інтродуковали мутації Губ5392А5р і Гуз409А5р (00) в важкий ланцюг, що містить мишачий 4-18ВВІ, і мутації СіШиЗ5бі уз і Азр399І уз (КК) інтродуковали в важкий ланцюг, що містить анти-РАР Раб, з одержанням асиметричних молекул (СипазеКагап
К. та ін, У ВіоЇ. Спет., 285(25), 18 июня 2010 г., сс. 19637-19646).
Мутації Азр2б5АЇа і Ргоз29С1у (САРС) інтродукували в константну область важких ланцюгів для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами.
В таблиці 13 представлені відповідно кКДНК і амінокислотні послідовності націленої на ЕАР антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний мишачий ліганд для 4-188 в злитті з Ес (конструкція М.1)
Таблиця 13
Послідовності націленої на БАР мишачої конструкції М.1
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО:
АвпвААДССОСОАДаССсСАадсоСассстаАССАТСАССАССАСС
ССТААССТОСаСАССАСАСАсСААСААСассаАССАдатТа
АсссоСаТтатсССАСАТСОСЧСАаССССААТАССАСАСАаС дасаеасдасосстататтСбассСсАадастастайсССААаААССА васСсАаССстТаАдаСААСАССАСССтТаААСТаасСАСАИССА савадтааСсасСаеааААда,аСАастТАтоталдасСсАааааосСтада димерний мишачий 4-18ВІ. АТАСИАДАсСАсаСОаАСААаАААпААСстТаатаставАСАаССС 71 (104-309, С137,160,2465) тааоСстатАСТАСЯТаттОоСтТасААСТОаАдАССТОАаСССС
СІ-Ес-ланцюг з мутацією ро АССТТСАССААСАССОаасСАСААаЧатасСсаасиастасиатат
СсАСТаОСТОаСТаСАсСассСАААССССАсатааАСаасСстТТСад сСААССТОССССТОАССЯТасААСстТаТаттсоССАаСАаТсАТаИ сААдААСААХасСстаатавАатсасаАа,астватосСсАаастстас тастаддааССацпАСАСАЧАСТОвА,аСсатасасстадацви
СсТТАТСТаСАСОССОССаСссСАаасАСасстТАСА,аАааАСтТасиА ,аСсТаАаСтТАССССААСАСААССАХСССТТССОоСсТаТаттосто стаАддасссаАСсААсссттасададассассСсасвсАасАТСТ
Таблиця 13
Послідовності націленої на БАР мишачої конструкції М.1
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: сасссда,сСапАТСТАСААСАааласствассТассста
АСААТТАССАСАТОССССААТОТаССИССАССС,вссААААСА
АТаСсСАСАТСАДаТтаАСАССТОТаТтСТтСАТАТТОССТОСОС
АААСАСТАСССАСаСАСсВвастосєюєсєаТа тТастТАААСТОа
СсТааСтТАДАААТСАСИаССтТоССтТатсСстТААСАСААСАСТОаА
АсотаасАСТоССсАасасАСсассастасоАастстТАСсСтТада тсАдса,асАСсТасастАТадапААпАТААпАААпААСТастТ сатавАТтоСссСсСасАСТаТтТАСТАТИТаИТТтотТасААСТОа
АААСТатоССсСтТАССТТТАСАААТАССИЯСИСАСАдАаТас дасадтасататсстастастасСсасастАдасстоАааат асаАСаАТТТТаАТААТСОТОССТотТаАСАаТтасААСТОИаттт
ССстТАаСАаСАТаСпСААААСААдаСстТастасАСАаААастася тоссластостастастадд,аасСсааАСАСАсСАСТадасся тасесСстададасстТАТотТасСАссасаССсСАсаАСасст
А
СсАааАдаАдСстасаАасТАаСТАССССААСАСААССАаТстт ссвасстатостоатоАддассСаАСААсоСсттааваддсаас сасссдасАатотаасСсаасАасаСасаАтоСсАааАдастадтаст есоСССстТАССаТатоСАТСТТОССАСССА,аСсАсССсадасАас таАСАТСТасОСОСсСОСАС,СсТА,аСсстоататасттоСтТаААСАА
СТТСТАССССААдаСАСАТСААССОСТаАдАатТасААаАТовАС сасдассдаСсавСАаАдАСссасатТастаААтТАаСстааАсс сАсСсАдапАСАаСААасАСТоСАССТАСАаСАТадаСАсасо
АСССтТаАСССТаАССАдаспАСаАатТАСсадаСсаСАСААС
АаСТАСАСАТИАСЧВАпЧаССАСССАСААСАССАаСАССАСО
СССАТСИТаААаТоСТТСААССапААСвАаатасри;тасссСА сладстасаастасАдлассттасАтотасассатасстад сататоСсАдасСатаТТСАТСТТСССАСССААДаСССААдааАС атастаАССАТСАСССТаАСАСССААдАа,атТаАсСстТасиатась таатааССАТСАаСААдасАтТаАСССсСвАвСатасСАаТТСА стесттбатавАСсАаСатапААдаТасСАСАССастСАсАС
СААДаАСССАсСАсСАсаСОаААСАпАТСААСАаСАССТТСАСАДа сататоСбадастаСССАТСАТаСАССАСаАСсТОастадАс всаСААдАпААТТСААдатТасСсАааАаТаААСАаа,аСсасСассттт абасссСстТАТССАСААААССАТСТОССААЧПАССАДИасцОасС
АПАСССААдСИасССССсССАсСататАСАСААТССССССАСССА
ААСААСАЧАтТааССАда,апАСААвСататооСстаАССстТасА тТаАТСАССААТ ТСТТОССАСАСОАТАТСАССИаТасдяАТОИ ссадатапвАдсасосАасссасспАвААСТАСОАСААСАС
СсСАассСстТАТСАТаАСАСАССаАСсвастосСтТАСТТоЯ,ТатАс дасаАсСстТадАдСса,атасАаААаТоСААСстТассАааассяас
ААСАССТТСАССТОатТАсаССсатастасАаса,ад,аа,вассСтТасСАСА
АССАССАСАССЯАСААИ,атТосСстТаТатоССАСАаСССтТассАА (Є)
АвпвААДССОСОАДаССсСАадсоСассстаАССАТСАССАССАСС
ССТААССТОСаСАССАСАСАСААСААСасспАССАДИТОа
АсссоСаТтатсССАСАТСОСЧСАаССССААТАССАСАСАаС мономерний мишачий 4- АсСсСОССсАс,СооСстататтбасСААл,аСсТастаасССААсСААССА т2 |18вІ (104-309) СЬССА,СОСТИаАаСААСАССАСССТаААСТаайСАСАаОССА
С137,160,2465)- 01. савадтааСсасСасаААдаСАаастТАтотадласСсАаааассСстада
АТАСИАДАсСАсаСОаАСААаАААпААСстТаатаставАСАаССС тааоСстатАСТАСЯТаттОоСтТасААСТОаАдАССТОАаСССС
АССТТСАССААСАССаассСАСААасаатасаасястасиИа тат
Таблиця 13
Послідовності націленої на БАР мишачої конструкції М.1 кВ ОО
ІО Опис Послідовність
МО: сАсТааСта,астасСАаваасССАААССССАаатапАСаАСТТСаА
СсААсСстТа,аооСстТадсСсатТапААСТаттсСССАасСАСсСАТОИа пААдАСсААдастаатааАатавАдастаатсСАастоТас тасТтаАдАдвасСаспАСАСАЧаАаСстаХда,асатавасстадассьа
СсСстТАТСТаСсСАТОССИЯЯСССАсСадСассСстАСАаАаАСТасад аДСсТАасСстТАССССААСАСААдсСсАХастсава,асстаттосто атТаАдАаСССаАСААСсСстасаАдАсасасасазАвасСТос сад,ссасаСапААдаСасСтТААаАССАССССССССАаСаТта тАесстотасооостапАТСТаССассСссСАСАССААСАСаСА тастадссстасеастасстаатаАдапасСтТАСТТССССОаА асстатадоСсатаАССсТапААСсАааСа,ааСАасстадасСАС са,аСатТаСАСАССТІ ТоСсАаа,ассатастасАаадасСалдсста тТАСАСССТОДОаСсСАОССсСТОоСИатТаАдсСсатасстааСАасСАССТ сассСбАдасСсСАпАСАаТаАоСстТасАдсатаассСАСССтТа (о;
СсАасАаСАССААдаатапйАСААаААААтсИТтасоссСасаА стОаС вААдатасластаставААтоСсааСасАсва7асстаатасАа сстасСссаАТтотТотаАасАстТатостасаосасстоСсаваст
ТСсАССТТСТОоСТоССАСасСсСсАТИаТОСТОСОСТоСаАСАСас тоСбтааСсАдАдсасстааААТасататСасСсАттавасс тоссаСадасСАСТтТАСТАСОЯаСсСсаАастотаТатадд,асСассСась
Т
ТСАССАТСТОССОасйОАСААСТоСААаААСАСССтТаИтАССТ
ВСсАСАтТаАдАстТосСстасасасСаАааАСАсСассатТатА
СстТАСТаТаССАдасастааставаСААСТТСОАСТАСТаС авАсАдчаааСАсоСстастоасСсататсСАаСаТстААаАСс
АссссссстАаа,асататаосстотаасосоСстапАтстТасса
СССАВАССААСАаасСсАтТасастадссоставастасстаатаАА саастАсттсссСса,адасстатаАСсСатаАССсТааААСАсСс сеаслдасстада,асАда,аСсааСаТасСАСАССТТТсСАаСсСата (о; тасядадасСаАССТатАСАСССтаАХд,аСАастоСсатаАСсСатТ асстАасСсАасСсАсСстааСсССАаССАпаАСАаТаАСсСтТасАА 78 з мутацєю ККУ важком СОТООСССАСССТОССАССАОСАССААОСТОСАСААСАА ланцюзі ААТСЯТОСОСССЯВСОАСсТаСсОсСаТсСстТасСсААдаСССстТасАТСТаС доссатассСссАХ,аататоСАаСаТтат САТСТТСССАСССА
АПВСССАДОСАСИаИтастаАССАТСАСССТОаАСССССАДАИТ салостасатаатаасТаССАТСАаСАдапАСаАССССаА сетасдаеапсотстаестта,атасАассАСа,атавАаатТасАСс
АСсАаСССАпАСАдАдаСсоССа,асавадасААСАпАТСААСАаС
АССТТСсАааАддасататоСадастассСАТСАТаСАССАСаИ
АстаастаААСсасСАААСаААТтСААатасСсАаАатаААСА ссассасстсаасСаСсСсСССАТСОСАПАААДАССАТСАОаСАА вАССААдсааСАаАСССААда,аассссєсАааТатАСАССАТ
ССССССАСССАДАДААСАпАТаасССАДапАСАдваТтатс
ССТОАССТаСАТОАТСАССААСТТ ТТ ТОСССОдОаСАСАТС досатасдатааСАдатТаспАдтааоСАассСасСаАаААс
ТАСААДСААСАСССАаСССАТСАТаААсАСсСса,САСавасАас
ТАСТТСИаТаТАСАаСААдаСТаААСаИатасСсАСПААаТССААСТ савадсасСспаСААСАССтТТсАсСстТатала,асатТастасАса
А вааССсТаСАСААССАССАСАССОАдаААа ТОССТалассА
Таблиця 13
Послідовності націленої на БАР мишачої конструкції М.1
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: нн Го і отототототстстої Є ПИ сАдаАтТоатастаАссСАаатооосс,васАсоСстТатстстТалх ссостааСсАд,сАд,сА;асСАсостатоСстасСАаАасстоСс
А сстосататоссвсатосСтТАсстоасстасатТАТСАаСАСАДа ссссассласоссстосастастаАТСАТСССсасСсСтТоТ
А
ССАаАдасСАсСаасСАТоСсСсТАсСссатстосаастстав
СстоСбааСАССаАСТТСАСССТаАССАТСТОССОСаСТасдАА ссссасаАСТтоСсоСсататАСтТАСТаСсСсАа,аСАаа,аааССАс 74 анти-РАР (28НІ), легкий с ланцюг ТоАТСССТоССАССТТІТ ТааССАсСОааСАССАдДаатасдьАдАТ
САдаСсатассаАТасСстасСАССААСТаТАТССАТТТТОССА
СсСАТССАаТтаАдаСАсаТТААСАТСОТаСАСИатасстоАатоа
ТатастІстаААСААСТТСТАССССААДАСПСАСАТСААТатТ
СААд!;тасААаАтТТаАдтТааСАаТаААСОаАСААААТаасСаТт
СсСстТаААСсАаттасАСТаАтТсАааАСАаСАААсАСАаСАС
СТАСАаСАТОАаСАаСАСССТоАСОСТТОАССАдДапАСаА
СТАТААСИАСАТААСА,СТАТАССТОТаАпасССАСТОСАС
ААСАСАТСААСТТСАСССАТТаТСААсСАаСТ ТСААСАааА
АТОДИатТат
ВТЕРАРАЇ ТІТТЗРМ аТАаЕММАВВОМТРУЗНІСЗРМТТООСОР
МЕАКІ АКМОАБІ МІ МУнЗОоОбадаБОУІ ОСІ АМЕЕО
ККЕГУММО5РОИЇ УМУМРІ ЕІ КІ 5РТЕТМТаНнКМОСУУМ5І МІ ОА
КРОМООРОМІГ А ТМЕГЕРЗЗМЕМКІ МО! ЗМО КАНА
І МОЇ ВАМ НаАХОБАМАОМ/ЕЇ 5МРМТТЗЕаї РІ МКРОМРУУ
ЕСсСссИа5БасоасйЗАТЕРАРАЇ ТІТТЗРМ ТТ АВЕММАВОМТРУБ
Н
ІСЗРМТ ТООСОРМЕАКІ ЇЇ АКМОАБІ МТ МУНЗОбаАИаБО
МІ ОСІ АМЕЕОККЕЇ ММОБРИОЇ МУМРІ ЕІ КІ 5РТЕТМТОНК димерний мишачий 4-18ВІ. МОСМ/У5І МІ ОАКРОМООРОМІГ А ТМЕГ ЕРЗЗМЕМКІ ЛОВ 75 (104-309, С137,160,2465) МОГ ПІ КАСНВІ 5Маї ВАМ НаАОБАМАОМ/ЕЇ 5МРМТТ5 ' б, єагг УкКРОМРУЕєССССО,ЗаасавАВАВААРТУБІЕРРРЗБЕОЇ.
СІ -Ес-ланцюг з мутацією ОО т заапАБМУСЕММЕМРКОІМУКУКІравзЕНКОМОаМІ МЗУТрО оБКОЗТУЗМ55ТІ ТІ ТКОЕМЕАНМЗУТСЕАТНКТЗТ5РІУК5О
ЕМАМЕСУРАОСаОаСКРСІСТУРЕМ55УРІЕРРКРКОМІ ТІ ТРК
МТСУММУАІЗКООРЕМОЕЄБЗМЕМООМЕМНТАОТКРАЕЕОІМОТЕ
ВАБЗУЗЕЇГРІМНОЮУІ МОКЕРКСАУМЗААБСАРІЕКТІЗКТКОа В
РКАРОМУТІРРРКЕОМАКОКМУ5І ТОМІТМЕЕРЕОІТМЕМ ОМУ
МаоРАЕМУОМТОРІМОТравмЕМУОЇ ММОКЗМУМЕАСМТЕ
ТОМІ НЕСІ НМННТЕКБІ ЗНЗРОК
ВТЕРАРАЇ ТІТТЗРМ аТАаЕММАВВОМТРУЗНІСЗРМТТООСР
МЕАКІ АКМОАБІ МІ МУнЗОоОбадаБОУІ ОСІ АМЕЕО
ККЕГУММО5РОИЇ УМУМРІ ЕІ КІ 5РТЕТМТаНнКМОСУУМ5І М ОА мономерний мишачий /4- КРОМООЕРОМІГ АГ ТУЕГ ЕРЗЗМЕМКІ МОВАБЗУБЗОЇ ГІ КАСаНА 76 |188 (104-309) 1 5 ВАМ НаПАОбБАМАОМ/ЕЇ 5ЖРМТТ5ЕИї Р УКРОМРУУ
С137,160,2465) -01 Еєвсса5асаайЗАКТТРРОМУРІ АРОЗААДОТМеМУТ СС УК
СЖМЕРЕРУМТУПМУМЗавБІ 5ББОМНТЕРАМІ О50І МТІ 555М ТУР
ЗПГУРБОТУМТОММАНРАБЗЗТКУОККІМРАОС
Таблиця 13
Послідовності націленої на БАР мишачої конструкції М.1
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: з мутацією КК СКагеЕмузАМАБЗаєОУМАрЗУКаТвВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ О
ММ5І ВАЕОТАУУУСАКСУМ ЯСМЕОУМ,ОСТІ МТУЗБАКТТ
РРОУУРІ АРаЗБААОТМОМУТІ аСІ УКОМЕРЕРУТУТУМ5Иа5
І 55055УМНТЕРАМІГ О50І МТ 555 ГТМРЗЗ ТУ РБОТМТОММАНР
АБОЗТКУОККІМРАВСасСкКРОСІСТУРЕМЗЗМУРІЕРРКРКОМІ ТІТ
ГТРКУТСУММАІЗКООРЕМОЕЄБМ ЕМОСМЕМНТАОТКРАЕЕО
ІМ5ТЕВАЗУЗЕЇ РІМНОВУУМІ МЕКЕЕРКСВУМЗААРСАРІЕКТІЗК
ТКав!РКАРОМУТІРРРККОМАКОКУ5І ТОМІТМЕЕРЕОІТМЕ
МОМУМИаОРАЄМУКМТОРІМКТравмЕУУКкІ ММОКЗМУУЕА аМТЕТОо5МІ НЕСІ НМННТЕК5ВІ НОРОК
ЕІМГТО5РОТІ 5І 5РОЕВАТІ БСВАБОБУЗНОМІ АММООКРО
ОАРА ПІСАЗТАВАТа! РОВЕЗОаЗОаЗОИТОЕТІ ТІЗВ ЕРЕОЕБАМ
А УУСООС,ОМІРРТЕаОС,ТКУЕІКАВАРААРТУВБІЕРРЗЗЕОЇІ Т5а тв анти е ВНТ), легкий ЗАБУУСЕІММЕУРКОІМУКМКІССЗЕВОМСМІ ММ ТООО5
В КОБТУЗМ55ТІ ТІ ТКОЕМЕАВНМЗУТСЕАТНКТЗТ5РІМКОЕМ
ВМЕС
В таблиці 14 представлені відповідно кКДНК і амінокислотні послідовності «ненаціленої» (ОР47) антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний мишачий ліганд для 4-1В8В в злитті з
Ес (контроль М.1).
Таблиця 14
Послідовності «ненаціленої» мишачої конструкції контроль М.1
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: димерний мишачий 4-188/ 71 1(104-309, С137,160,2465) - Див. таблицю 13
СІ -Ес-ланцюг з мутацією ОО мономерний мишачий /-(4- 72 |188І (104-309, Див. таблицю 13
С137,160,2465) - СНІ сааатасСсААата,аттасвсхаттассавАааа,астасТАСАсас стссвессатосстаАааАстотстатасаасстоСасАТТ
САССТттАаСсАатТАтТассСАтТаластасватоСбасСАсааст ссАса,авАдассастасаАстасватстсАасСтТАТТАа,ТастТ датаатапТАаСАСАТАСТАСОЯСАпАСстоСсатадлааас сааЙТТСАССАТСТОСАСАСАСААТТССААСААСАСаТстат
АТотТаСАСАТаААСАаСсСстТад,вАаасСсаАааАСАСаасСа
ТАТАТТАСТаОТаСОСАААлсСОИасСА,СасАТтТТаАдстТАСстТасися 154 рРА7, Ес-ланцюг з мутацією ССААСПСААСсОоСтТаатсАсСсатотосАаСасСстААпАССАСо
КК ссссстТАаасататасссєтстасоссста7асаттассасос
АпАССААСАасСАТОаСсСТаАлссстасастасстаатТаААдаа аСстТАСТТоСССОСАСОоСТатаАсСатаАсСТапААСАасСва салассталасад,аСсвасаТаСАСАССТІ ТОСАСсСса,аТаста
СсАд,вдасаАССТаТатАСАСССставАаа,аСсАаастосатаАдсСатас
СстТАаСАаСАССТОИАСССАасСсСАпаАСАаТаАССТасААСИТ свасбССАССсСТасСАаСАаСАССААдааТацпАСААсСАдААТ сатасссСб,аааАстТасва,асСстаСАласоСТасСАТСТасСАС (9;
Таблиця 14
Послідовності «ненаціленої» мишачої конструкції контроль М.1
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: стассбадавататоСсА5аСатТат САТСТТОССАСССАдОаС
ССААдсаАдСсатастаАССАТСАСССТаАСССССААдАаТаАс стссатестестаасССАТСАаСААдасАСсАССССаАСцаТт сслатпстотааттатапАСаАдСсатавАаатасСАСАСА
ВСССАпАСАААласосСаааАацпААСАпАТСААСАаСАСо тсАпйААХсаСсасТатосаАастасССАТСАТаСАССАСааИАСТ васСстаААСпаСАААСпААТТСААа,атТасАапАдатаААСАаСс ссасстсааСассССССАТССАСААААССАТСАИ,СААСАС
СААдпааСАпАСССААлааСооСЄсА,аОИа ГаТАСАССАТОСС
СССАСССАААДАААСАЧАТайССААла,сАСААдаататосст вСАССТаСАТИАТСАССААСТІ ІТТТоСсСсСа,АасАСАТСАСС стаслатааСАдатТасААтТа,аССАа,асоСасСпАСпААСТАС
ААСААСАСССАаСССАТСАТИААСАССаАСсасСАасСтТАС тсататАСАаСААластаААСатасСАпААатоСААСТОСОЯ
АсасСсааСААСАССТТСАСсСТОатТАа,асатастасСАСсасАсОа (Є)
ССТаСАСААССАССАСАСССОСЯАпСААатоССсТаАасССАСТОС соса,ааСАДОа
САААТсаТтаттТААСасСсАаа тСстоСА,СасСАСоСстаТатстттат
СстТоСАсСОасааАААсСАаССАссСсттттасАа,ваАасСАаТтСА слата,аттАааСАаасСсАастТАСТтТАасстасТАССАасСАСцАдА сстааСсСАасСастосСАаасТсСтТоАТСТАТасСАаСАТОСА ссдасасСАСстТааСАТОССАСАСАаСсИаттоАаатасаСАатТа вАТОСОасаАСАСаСАСТТСАСТСТСАССАТСАаСАаАСТасцА аССстТаААаАтттасАаТатАТТАСТОТоАаСАИатТАТОС,Т дастоАссастадссттсвассАа,ааасАССАААатТасАА 155 |ОРА7, легкий ланцюг АТСАААСОИатасССаАдтТастаСАССААСТатАТССАТТТТОС
САССАТССАСТО,аАаСАСаТТААСАТСТОСАСО,СТасстоАат
Ссататаст СТ аААСААСТТСТАССССАААСАСАТСААТ асТСААСтТасСААваАТТаАтТааСАаТаААСпАСААААТасо асТоСтТаААСАаТтТасвАСТаАТСАаСпАСАаСАААпАСАсаСо
АССТАСАаСАТаАаСАасСАСССТСАСатТаАССААасАС вАаТАТИААСС,АСАТААСА,СТАТАССТТОТаАСпассСАСТО
АСААДСАСАТСААСТТСАСССАТТИаТСААСаАС,СТТСААСАС сСААТОАДИТаИт димерний мишачий 4-188/ 75 1(104-309, С137,160,2465) -і див. таблицю 13
СІ -Ес-ланцюг з мутацією ОО мономерний мишачий /-(4- 76 1188. (104-309, Див. таблицю 13
С137,160,2465) - СНІ
ЕМО ЕЗОСИОИЇ МОРОСБІ ВІ БСААЗИагєТЕ55УАМОЗУУУВОАР акагЕМмУзАІЗазасе г УМАрвУКкавЕтІЗВОМ5КМТІ МІ о
ММ5І ВАЕОТАУУУСАКОаЗагОУМаОСтТІ МТГМЗЗАКТТРРБ5
МУРІ АРаБААОТМЗМУТІ СС УКаМЕРЕРУТУМ ПУМ5Иа5І 55
ОРА7, Ес-ланцюг з мутацією СМНТЕРАМІ ОБОЇ МТІ 55554 ГТМРЗЗТМУ РБОТУМТОММАНРАБ55 156 КК ' ТКУМОККІМРАЮСаскКРОІСТУРЕМЗЗМУРІЕРРКРКОМІ ТІТ ТР
КУТСУУМАІЗКООРЕМОЕЄБУ ЕМОЮМЕМНТАОТКРАЕЕОІМ5
ТЕВБЗУЗЕЇГ РІМНОСУУМІ МЕКЕРКСВУМЗААРСАРІЕКТІЗКТК
САРКАРОУМТІРРРККОМАКОКУ5ВІ ТСМІТМЕЕРЕБІТМЕМО
ММаОРАЕЄМУКМТОРІМКТравмУЕУУКкІ ММОКЗМУУЕАСИМТ
ЕТС5МІ НЕСІ НМННТЕКВІ ЗНОРОК
Таблиця 14
Послідовності «ненаціленої» мишачої конструкції контроль М.1
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: нншТТиининннининнннниннининишишишшш
ЕІМГТО5РОТІ 5І 5РОЕВАТІ БСВАБОБУЗЗОЗУ А МООКРИа
ОАРАПІІМаАЗЗВАТИаРОВЕЗИаЗИаБИаИтТОвгТІ ТІЗВІ ЕРЕОБАМ
УхУСОоОмазоРІ ТРЕФОСТКУЄІКВАВААРТМУБІЕРРБЗБЗЕОЇ Т50а 157 |ОРА7, легкий ланцюг САБМУСЕЇ ММЕМРКОІМУКУКІВаЗЕНОМОаМІ МЗУУТРОЮБ
КОБТУЗМ55ТІ ТІ ТКОЕМЕАВНМЗУТСЕАТНКТЗТ5РІМКОЕМ
ВМЕС
В таблиці 15 представлені кКДНК і амінокислотні послідовності націленої на ЕАР антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний мишачий ліганд для 4-188 в злитті з Ес (конструкція М2)
Таблиця 15
Послідовності націленої на БАР мишачої конструкції М.2
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО:
АвпвААДССОСОАДаССсСАадсоСассстаАССАТСАССАССАСС
ССТААССТОСаСАССАСАСАСААСААСасспАССАДИТОа
АссооСаТтатссССАСАТСЯИСТасСсСССААТАССАСАСАСС дасаеасдасосстататтСбассСсАадастастайсССААаААССА сассАаССстТадаСААСАССАСССтТаААСТаасСАСАИССА савадтааСсасСаеааААда,аСАастТАтоталдасСсАааааосСтада
АТАСИАДАсСАсаСОаАСААаАААпААСстТаатаставАСАаССС тааоСстатАСТАСЯТаттОоСтТасААСТОаАдАССТОАаСССС
АССТТСАССААСАССОаасСАСААаЧатасСсаасиастасиатат
СсАСТаОСТОаСТаСАсСассСАААССССАсатааАСаасСстТТСад сСААССТОССССТОАССЯТасААСТОаттосоСстТасАасСАТИа сААдААСААХасСстаатавАатсасаАа,астватосСсАаастстас тастаддааССацпАСАСАЧАСТОвА,аСсатасасстадацви
СсТТАТСТаСАСОССОССаСссСАаасАСасстТАСА,аАааАСтТасиА есСсТаАасСстТАССССААСАСААССАа,асттоаа7асстаттосто димерний мишачий 4-ї8ВЦ СТаААаСССОсАСААсССТтТасаАд,аа,асассвадаасСтос 158 (104-309, С1605) - СІ-Реї асАсСадсасСааАТСтТАаААСАсАасстовса7асстассста ланцюг з мутацією ЮО АСААТТАССАСАТОССССААТОТаССИССАССС,вссААААСА
АТаСАСАТСАДатТаАСАССТОТаТтСтТоАТАТТОСОЯТОСОС
СААСАСТАСССАССАСССсатоСССАаТатттасТтАААСТа
СсТааСтТАДАААТСАСИасСсСтТоСсСтТатстТААСАСААСАСТИад
Ат айаСсАТАаТтСсАасАСсасааотааСА,аСАастАсстТато тсАдса,асАСсТасастАТадапААпАТААпАААпААСТастТ сатаспАТттососСбасАСТаТтТАСТАТИаТИаТттСотТасльАСстТа
АААСТатоССсСтТАССТТТАСАААТАССИЯСИСАСАдАаТас дасадтасататсстастастасСсасастАдасстоАааат ааАСсаАТТТТаАТААТСОТОССТотТОаАСА,аТтасААСТОИТТ ссттастстТАТасйААААСАААСТОСТасАССастоттасА ссессалатастастастаАдддастасССАсссаста7атстат саеасАстаАдаАасСАТАССТаСАТИаСОССАСАС,аАТасстТА ссаапАтТтасааААСТатосСтТАСССТААСАСТАСТТОСТТО саАастТатоСстатТаАААССТаАТААТОССТОСВАсСИааСа слассасАдлдатасвсачааас,ааАТоСАсАастадтаста
Таблиця 15
Послідовності націленої на БАР мишачої конструкції М.2 кВ ОО о
ІО Опис Послідовність
МО:
СоССстТАССОСЯТатоСАТСТТСССАСССАИ,аСАСсССсвАасласт вАСАТСТаСЬХСОСА СТАС СЯТСОСТатастІосСтаААСААдС
ТТСТАССССАДИаСАСАТСААСОЯТтадАаатасвсдаАаАТСаАс сасдассдаСсавСАаАдАСссасатТастаААтТАаСстааАсс вАССАДаСпАСАаСААДапАСТоСАССТАСАССАтТадасдас
АссСстТахгсссСстТаАССААласаАСсАаатАСсадаСсаасСАСААС дастАСАСАТаСаАдассССАСССАСААЧАССАССАССА,С
ССсСАТСОЯтТаААатосСсТСсААСсСО,адАСсАаатасатасссСА сладстасаастасАдлассттасАтотасассатасстад сататоСАд,аСататТСАТСТТСССАСССАдаСССАдасАс стТастаАССАТСАСССТОАСАСССААдАСТОаАсСсТаТасатас таатасСсСАТсАдасСсААлдааАтТалсссСсовАСЧИатТасАатТТсСА сттесттсатасвАСссАСатапАдатасСАСАССасСТСАСАС
САДССССАСАСАасСААСАпАТСААСАасСАССТТСАаААС сататоСбадастаСССАТСАТаСАССАСаАСсТОастадАс ваСААдАаААТТСАдатасСсАасАаатаддсАаасассассттт сасасссСсСтТАТСЧАаААААССАТСТССААЧАССАдасаИас
АПАСССААдСИасССССсССАсСататАСАСААТССССССАСССА
ААаААСАпАтТааССААдапАСААдааТтатооСстТадсстасСА
ТаАТСАССААТТТСтТТоССАадасаАТАТСАССИЯТаслААТа ссадатапвАдсасосАасссасспАвААСТАСОАСААСАС
ССАаССТАТСАТОСАСАССЯАСОЯСТОоСТАСТТСОСТатАС дасаАсСстТадАдСса,атасАаААаТоСААСстТассАааассяас
ААСАССТТСАССТОТАаСсатастасАаСа,аласвасстасСсАСА
АССАССАСАССЯАСААИ,атТосСстТаТатоССАСАаСССтТассАА (Є)
АвпвААДССОСОАДаССсСАадсоСассстаАССАТСАССАССАСС
ССТААССТОаСасСАССАЧАСАпААСААСасспАССААСТОа
АссооСаТтатссССАСАТСЯИСТасСсСССААТАССАСАСАСС дасаеасдасосстататтСбассСсАадастастайсССААаААССА васСсАаССстТаАдаСААСАССАСССтТаААСТаасСАСАИССА савадтааСсасСаеааААда,аСАастТАтоталдасСсАааааосСтада
АТАСЯдДДадаспсАСААвАААаААСстааттаставАСАасССо таасстатАСстАсСататтостааААСТалаластадасссс
АССТТСАССААСАССОаасСАСААаЧатасСсаасиастасиатат
СсАСТаОСТОаСТаСАсСассСАААССССАсатааАСаасСстТТСад сСААССТОССССТОАССЯТасААСсТаттосоСстТасСсАасСАТИа . . вААААСАХДОСТОИатТасатосаАаастаатоссАдасттстас 1Ба ВВ (104-309, 1605) 4 ТОСтТОААСОССОСАСАСАСАСТОАОССТОСОССтТоАССС сні ' СсТТАТСТаСАСОССОССаСссСАаасАСасстТАСА,аАааАСтТасиА есСсТаАасСстТАССССААСАСААССАасттоаа7асстаттосто стаддасссаАСААссСсттасададаасаасавАаИасСстос смавдасасаасСсасвсАлаСасТААаАССАССоСсоСССА,Сата тТАСССТСТОССОСССТООСАТСТИаССаСССАаАССААСАаСА таатадссставастасстаатадд,аавастАСТТоСССаА ссестатадсСатадсСстапААдсАлассвасАаа,асстадасАа ссваса,атТасСсАСсСАССТІТоОСАаСсСсатастаСсаа,аАдасаАсста тТАСАСССТаАДОСАСССТОСОЯТОАСсСЯЯтТасСстАаасСАаТсАСстТ сасСсСАдаСсСАпАСсАатаАСсСТаСААСс,атаассСАСОССТОа (9;
СсСАССАаСАССААСОИЯТасьсСААвААААтсаИТтассоСсоацА стас
Таблиця 15
Послідовності націленої на БАР мишачої конструкції М.2
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: нини анти-ЕАР (28НІ), Ес-ланцю з мутацією КК див. таблицю 13 анти-гАР (28НІ), легкий див. таблицю 13
ВТЕРАРАЇ ТІТТ5РМ ФТАВЕММАВВОМТРУЗНІССРМТТООСОР
МЕАКІ АКМОАБІ МІ МУнНЗзЗОоОраАИаБМУІ ОСІ АМЕЕО
ККЕГУММО5РОИЇ УМУМРІ ЕІ КІ 5РТЕТМТаНнКМОСУУМ5І М ОА
КРОМООРОМІ А ТМЕГ ЕРСЗМЕМКІ МОАЗУУЗОЇ ГІ КАНА
І МОЇ ВАМ НаАХОБАМАОМ/ЕЇ 5МРМТТЗЕаї РІ МКРОМРУУ
ЕСсСссИа5БасоасйЗАТЕРАРАЇ ТІТТЗРМ ТТ АВЕММАВОМТРУБ
Н
ІССРМТТООС5РМУБАКИ ЇЇ АКМОАБІ БМТТІ МУНЗОраСАсаБо
МУ ОСІ АМЕЕОККЕЇ ММО5РИОЇ МУМРІ ЕІ КІ 5РТЕТМТОНК имерний мишачий 4-188І. МОСМ/У5БІ МІ ОАКРОМООРОМІ А ТМЕГ ЕРСЗМЕМКІ МОВ 160 (104-309 С1605) - СІ-Ес- МОГ ПІ КАСНВІ 5Маї ВАМ НаАОБАМАОМ/ЕЇ 5МРМТТ5
І . єагг УкКРОМРУЕєССССО,ЗаасавАВАВААРТУБІЕРРРЗБЕОЇ. ланцюг з мутацією ОО т заапАБМУСЕММЕМРКОІМУКУКІравзЕНКОМОаМІ МЗУТрО оБКОЗТУЗМ55ТІ ТІ ТКОЕМЕАНМЗУТСЕАТНКТЗТ5РІУК5О
ЕМАМЕСУРАОСаОаСКРСІСТУРЕМ55УРІЕРРКРКОМІ ТІ ТРК
МТСУММУАІЗКООРЕМОЕЄБЗМЕМООМЕМНТАОТКРЕАЕЕОІМЗТЕ
ВАБЗУЗЕЇГРІМНОЮУІ МОКЕРКСАУМЗААБСАРІЕКТІЗКТКОа В
РКАРОМУТІРРРКЕОМАКОКМУ5І ТОМІТМЕЕРЕОІТМЕМ ОМУ
МаоРАЕМУОМТОРІМОТравмЕМУОЇ ММОКЗМУМЕАСМТЕ
ТОМІ НЕСІ НМННТЕКБІ ЗНЗРОК
ВТЕРАРАЇ ТІТТ5РМ ФТАВЕММАВВОМТРУЗНІССРМТТООСОР
МЕАКІ АКМОАБІ МІ МУнЗОоОбадаБОУІ ОСІ АМЕЕО
ККЕГУММО5РОИЇ УМУМРІ ЕІ КІ 5РТЕТМТаНнКМОСУУМ5І М ОА мономерний мишачий 4- КРОМОСЕОМГАГТУЕГ ЕРСЗМЕМКІ МОНБЗУУЗОЇ ПІ КАСНА 161 188 (104-309, С1605) І МОЇ ВАМ НаАХОБАМАОМ/ЕЇ 5МРМТТЗЕаї РІ МКРОМРУУ
СНІ Еєвсса5асаайЗАКТТРРОМУРІ АРОЗААДОТМеМУТ СС УК
СЖМЕРЕРУТУПМУМЗа5БІ 55БаИМНТЕРАМІ О50І МТІ 555М ТУР
ЗПГУРБОТУМТОММАНРАБЗЗТКУОККІМРАОС
77 анти-ГАР (28НІ1), Ес-ланцю див. таблицю 13 з мутацією КК анти-ЕАР (28НІ1), легкий див. таблицю 13 ланцюг
В таблиці 16 представлені кКДНК і амінокислотні послідовності «ненаціленої» (ОР47) антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний мишачий ліганд для 4-188 в злитті з Ес (контроль М.2)
Таблиця 16
Послідовності «ненаціленої» мишачої конструкції (контроль М.2) зо 158 димерний ти 4-188Ї (104-309, С1605) - СІ -Ес-ланцюг з мутацією Див. таблицю ро 15
Таблиця 16
Послідовності «ненаціленої» мишачої конструкції (контроль М.2)
ЗЕО І . . мономерний ти 4-18ВІ. (104-309, С1605) - СНІ лив. таблицю рРА7, Ес-ланцюг з мутацією КК лив. таблицю легкий ланцюг ОР4А7 лив. таблицю димерний ти 4-188І (104-309, С1605) - СІ -Ес-ланцюг з мутацією Див таблицю ро 15 мономерний ти 4-18ВІ. (104-309, С1605) - СНІ лив. таблицю рРА7, Ес-ланцюг з мутацією КК лив. таблицю легкий ланцюг ОР4А7 лив. таблицю
Антигензв'язуючі молекули, які містять мишачий тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес, одержували і очищали відповідно до методу, описаному вище для конструкцій, які містять людський 4-18ВІ.
В таблиці 17 узагальнені дані про вихід і кінцевий вміст мономерів націлених на ЕАР і «ненацілених» антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний мишачий 4-18В1 в злитті з Ес.
Таблиця 17
Узагальнення характеристик одержаних націлених на ЕАР і «ненацілених» антигензв'язуючих молекул, які містять мишачий тримерний 4-18ВІ в злитті з Ес
Мономер
Конструкція Вихід (то/І) Іо
ЗЕС конструкція М. контрольМ.а ////777777711111111111Ї1111111123111111111111111111961 конструкція М.2 11117185... 7.11. 98 щи. 1.4 Одержання і очищення «ненацілених» антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний людський ліганд для 4-1ВВ в злитті з Ес (контрольні молекули)
Контрольні молекули одержували відповідно до методу, описаному вище для націлених на
ЕАР конструкцій 1 і 2, з єдиною відмінністю, яка полягає в тому, що анти-РАР зв'язуючий агент (МН-МІ) замінювали на антитіло зародкової лінії, позначене ЮОР47, яке не зв'язується з антигеном. Контроль являв собою «ненацілену» одновалентну конструкцію розділеного тримерного людського ліганду для 4-188-Ес (Кіп) (контроль А, фіг. 5А), а в разі контролю Б конструкція містила також СН-СІ -кросовер із зарядженими залишками (фіг. 5Б). Послідовності
ДНК варіабельних областей важкого і легкого ланцюгів ЕАР-зв'язуючого агента замінювали на
ДНК контрольної зародкової лінії (ОР4А7) і субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом з «виступом», або з константним легким ланцюгом людського Їдса1. «Ненацілені» антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд для 4-1ВВ в злитті з
Ес (Кіп), одержували відповідно до методу, описаному вище для націлених на ЕАР конструкцій.
Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами у співвідношенні 1:1:1:1 («вектор для конструкції димерний ліганд-СНІ або -СІ "ланцюг з «виступом»:«вектор для злиття мономерний ліганд-СЇ або -СНІ1"»:«вектор для важкого ланцюга із «западиною» ЮОР47
Рар»:«вектор для легкого ланцюга ОР47»).
В таблиці 18 представлені відповідно КкДНК їі амінокислотні послідовності «ненаціленої» (ОР47) антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес(Кій) (контроль А).
Таблиця 18
Послідовності«ненаціленої» (ОР47) антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з ЕС(Кій) (ОР47 розділений тример 4-188В1) (контроль А)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: димерний пи 4-18ВГ. (71- 254) - СНІ-Ес -ланцюг зі Див. таблицю 2 «виступом» мономерний пи сластасСсААататта,аса,аттасаавАаасттаатТАСАаС ставассатосстадаадстотостатасдасстоСасасАтт
САССТттТАаСсАаТтТТАТаССАТОАХССТОСОСТтОоСсаССАцвСаТст ссАдса,асАд,ассастасАатааастАасСТАТТАС,ТааТт датастапТАаСАСАТАСТАСОЯСАСАСТОССОТадАдааас
Сас ТсАССАТСТОСАСАСАСААТТССААСПСААСАСсИаСтТаИТт
АТСтТаСАСпйАТаААСАаСсСстТадаАа,асСаАд,сАСАСа,ассСа
ТАТАТТАСТаОТаСОСАААасСаСА,СасАТТТаАСстТАСТОСИаС
ССААааААсоСстасатсАсСсатстаАатастАаСАССААС сассСсАТоСсСатстооооСсТаСАСССТОСТОСААадаСА сстотасасасСАсАХассасоставчастасСстасатСААДааА
СстТАСТТССССОААСССОСТвАСсвататоатасААСТСАСИС сссстадссалассасаТасСАСАсСсТтоСсСсвастатсстАС атоСстТосАасаАСТСТАСТОоССТСоА,ССсА,аССсатаатаАССат асбоСтоСАааСАааСсттааваСАСССАЧАССТАСАТСТасСААС астТаААТСАСААлаСССАаСААСАССАда,аТацпАСААсСААА 79 рРа7, Ес-ланцюг із аттаАасСССАААТСТТатаАСААААСТСАСАСАТасссСАСс «западиною» са,атассСсАааСАСсСстТадластасаасавацАсСсатсАа|атстт
ССТСТТОСССССАААДАСССАДаСАСАСССТСАТОАТСТОоС ссаАдсссстадасТСАСАТаСсСавтастаатавАсаталисс
АСЧААСАССсСстТаАааТСААаТтТСААСстТаатАсатацАсСа ссстасадасТасСАТААТаССААаАСАдАдасСсасавааАсс асАаТтАСААСАаСАСсатАссатата,атАасСатостСАС са,атоСтасСсАССАаССсАСсТОасСстТаААТааСААааАатТАСАА всТаСААДасаТСсТоСААСАААаасостоаасассСССАТССАС
ААДААССАТСТОСААдДасССАААаа,асасСсАассссєаАсААССА
САсататасассстаТассссССАтосСаавАТтаАастаАСсСА
АпААсСАасСа7атсаасстсотатасаСАаТСАААвастТсСтТА тосСсАавСаАСсАТСОЯСССЯТтасаиатасцАаАаСААтТасвасА асбапАспААСААСТАСААаАССАСсасстссатастацА стобаАдссастостстсстсатаАаСААастТСАСсата вСАСААдСАааСсАсатааСАаСАсаааААСаТатсоТтсТСАТаС тосатаАтТасСсАТаАдааСтТоТасСАСААССАСТАСАСасСАСА даласстотосстатстоСааатАдА
Таблиця 18
Послідовності«ненаціленої» (ОР47) антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з ЕС(Кій) (ОР47 розділений тример 4-188В1) (контроль А)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО:
САААТССИТаттТААСасСсАаатстоСАсасАсостатсттат
СстТоСАсСаапАААаАааССАсоєтттасАа,аааоСАатТСА слататтдаСсАаасА;астАсттАасстааТАССАаСАСААА сстаасСсАдвасСстосСАаасТССтТоАТСТАТапАаСАТОСА абадсааССАстТааСАТОССАСАСАСсСИСТттсАаа,атТааСАатТта вАТОСОСапАСАпАСТТСАСТСТСАССАТСсАаСАаАСТацА аССтТаААаАтттасСсАаатТатАТТАСТатТоАаСАИаТтАТИаСТ дастодсса,астадсатсавассАаа,ааааАССАААаТасАА легкий ланцюг ОР47 АТСАААСаТтАСсаватаасСстасСАССАТСТатсСТТСАТСТТОС сасСссСАТСТаАтТаАдаСАсаТТаАААТотТасАаАстасстотат тататассСтТасСстаААТААСТТСТАТОССАСАаАаассСААА астТАСАСТОасаААдс,СатацпАТААсассстСААТССИС,СТААСТ соСсАса,аАасАаТаТСАСАапАааСАааАСАаСААааАСАаСА
ССТАСАСССТСАаСАаСАСССтаАдСсастаАаСААдаСАс
АСТАСОАСАААСАСААА,атотТАСасстаспААаТСАССС
АТСсСАССсСасстТадастоасССатСАСААДАСАаСТТСААСАС сасдсдатат димерний пи 4-18ВГ. (71- 14 |254) - СНІ-Ес-ланцюг з| Див. таблицю 2 «виступом»
ЕМО ГЕЗССИЇ МОРОСБІ ВІ БСААЗИаЕТЕ55УАМОУУУВОАР ка ємУЗАІЗавасеГиМАрБУКаВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ О
ММ5І ВАЕОТАУУУСАКОаЗаРроУМаОСстІ МГУЗЗАЗТКИаРО
МЕРІ АРЗЗКЗТЗаИаатАА ас МКОМЕРЕРУТУБУМЗСИАІ Та
ОРА7 Ес-ланцюг із МНТЕРАМІ О55021І 51 55УМ ТУРБО С ТОГМІСМУМНКРБМ 81 «западиною» ТКМОККМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕАДАСОИРБЗУНБІ ЕРРКРКОТ
ГМІЗАТРЕУТСМУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМО МЕМНМАКТК
РАВЕЕОУМЗТУВУМ5МІ ТМ НОБУУ/ЛІ МСОКЕУКСКУЗМКАЇ СА
РІЕКТІЗКАКИОРАЕЕРОМСТІ РРЗВОЕЇ ТКМОМ5І БСАУКИаБгУ
РЗБІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБраЗЕРІ УЗКІ Турко
ВМОдаммМЕ5СЗУМНЕАІНМНУТОКОІ І Рак
ЕІММГТО5РИТІ ЗІ ЗРОЕВАТІ БСВАБОБУЗОЗОМІ АММООКРО
ОАРАПІІМаАБЗААТаІРОВЕЗаЗОаЗаИаИТОЕТІ ТІЗВ ЕРЕОБАМ . УУСООУа5ОРІ ТРЕФОСТКУЄІКАТМААРЗМУРІЕРРЗОЕОЇІ Ка 82 |легпийланцюгОРЯ | ТАвуУуУСИ ММЕУРВЕАКУОМ/КУОМА! ОБОМЗОЄВУТЕОЮ5
КОБТУБІ З55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМУТНОСІ 55РУТКЕМ
ВОЕС
В таблиці 19 представлені кКДНК і амінокислотні послідовності «ненаціленої» (ОР47) антигензв'язуючої молекули з СНІ-СІі-кросовером і зарядженими залишками в плечах, які містять ліганд для 4-188, яка містить тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кі!) (контроль
Б).
Таблиця 19
Послідовності «ненаціленої» (ОР47) антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кіп) (ОР47 розділений тример 4-18В1І) (контроль Б) 96 димерний пи4-188І (71-254) -Сі"-ГРс-ланцюгз «виступом» |Див.таблицюЗ 180 лепгкийланцюгОрР.7 77777777 |Див-таблицюї!8./7 98 димерний пи 4-188І (71-254) -Сі"-ГРс-ланцюгз «виступом» |Див.таблицюЗ 199 мономернийпи4-18ВІ (71-254)-СНІ" /////////////////// |Див-таблицю3./З/З
В таблиці 20 узагальнені дані про вихід і кінцевий вміст мономерів «ненацілених» (ОР47) антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для 4-18В8ВІГ в злитті з Ес (КІій).
Таблиця 20
Узагальнення характеристик одержаних «ненацілених» (ОР47) антигензв'язуючих молекул, які містять тример 4-1В8ВІГ в злитті з Ес (Кій) (контрольні молекули)
Мономер РХ/МС
Конструкція «в Вихід |мг/лі (без відновл.) теоретичне значення": 179069,7 Так контроль А 97 3,7 експериментальне значення: 179116,2 Так " без кінцевих лізинів контрольБ | (699... | 154 | Щ( (77
Приклад 2 2.1 Одержання націлених на ЕАР (489) антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес
Різні фрагменти послідовності ДНК, яка кодує частину ектодоменів (амінокислоти 71-254 і 71-248) людського ліганду для 4-188В, синтезували на основі послідовності Р41273 з бази даних
Опіргої (ЗЕО ІЮ МО: 42). 2.1.1 Одержання одновалентної націленої на БАР (489) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -доменами із зарядженими залишками, яка містить тримерний ліганд для
А-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.1)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-254), розділені ((45)2- лінксерами, і злитий з Сі-доменом людського ІдДСі, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. ТА: людський ліганд для 4-188, (С45)2-конектор, людський ліганд для 4- 188, (С45)2-конектор, людський СІ.
Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188 (711-254) і злитий з СНІ1- доменом людського ІДИ, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. 1Б: людський ліганд для 4-188, (С45)2-конектор, людський СН.
Поліпептид, який кодує димерний ліганд для 4-18В, злитий з людським Сі -доменом, субклонували в рамці зчитування з СН2- і СНЗ-доменами важкого ланцюга з «виступом» людського ІДС (Мегспапі пи та ін. 1998), використовуючи лінкер (С4а5)»2 або в альтернативному варіанті (45РИ5555(125).
Для підвищення правильного спарювання інтродуковані наступні мутації в «схрещені» СнН-
СІ -домени. В димерний ліганд для 4-1ВВ, злитий з людським СІ, інтродуковали мутації Е12ЗВ і
О124К. В мономерному ліганді для 4-18, злитому з людським СНІ, мутації К147Е і К21З3Е клонували в людському СНІ -домені.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для фібробласт-активуючого білка (ЕАР), клон 489, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», або з константним легким ланцюгом людського ІДИ.
Конструювання і одержання зв'язуючих БАР агентів описано в УУО 2012/020006 А?2, яка включена до даного опису як посилання.
Мутації Рго3З29с1у, І ец234АЇїа і І ец235Аїа інтродуковали в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами відповідно до методу, описаному в публікації Міжнародної заявки на патент М/О 2012/130831.
Для всіх конструкцій використовували технологію гетеродимеризації «Кпор5 іпіо поЇе» з мутаціями 5354С/1366МУ в ланцюзі з «виступом» і відповідними мутаціями
УЗ349С/13665/І З68А/У407М в ланцюзі з «западиною».
Комбінація: димерний ліганд-Ес-ланцюг з «виступом», що містить мутації 5354С/1366МУ, мономерне СНІ-злиття, націлений анти-РАР-Ес-ланцюг із «западиною», що містить мутації
УЗ349С/13665/і З368А/У407М, і легкий ланцюг анти-РАР, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188 і ГАР-зв'язуючий Раб (фіг. 4, конструкція 2.1).
В таблиці 21 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
ЕАР (489) яка містить людський ліганд для 4-188В (71-254) в злитті з Ес (Кій) антигензв'язуючої молекули, яка містить СНІ1-СІ -кросовер і заряджені залишки (конструкція 2.1).
Таблиця 21
Послідовності одновалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.1) димерний пи 4-1881 (71- 129 |254) - СіІ"-Рс-ланцюг з Див. таблицю З «виступом» слсатасластастовАддаса,ааСасАсаАстасТасСАса сстасссасад,асстадаАста7атсттасасСсасСАяасааст
ТтсАССТТСАааСАаасСтТАСассАатаАаастасстоса,асСАавиас соСстааСААлссаАСтТасААатТавататСасСАТСАТСССОС тотаасасСсАасСАССТАСТАСОЯСССАСАасССсатадда,аавасСо ват САССАТСАССССОапАСААСАаСААСААСАСоСстТаИат
АдостасСсАпАТаААсАаа,асСстасассвассцвАааАСАССасса татАСТАСТаСасСААсасвАтТаатосасцасСтТТСААСТА стасавАсСАавааСАссСстааТСАСсАа,ататоСАаа,аСбастАас
АССААДССОСОССТОСОСТаттоСсооСстТасоССССАа,САаСА
АвАдаСсАсСбАха,аСсаабпвасАсАа,ассастотавастасстав тТСААасаАСТАСТТОСССОСАсСосСсатадсСататостасАА слас,аасада,асостаАсстоСа,асоаТаСАСАССстоСосасо анти-ЕАР (489) Ес- стастасСАасАаатсотаасстатАТтТАаСсСсталасСАасСатТас 162 панцюг із «запа НОЮ» тоАССЯТаСсСсттотАдасаа,асставаСАСССАСАССТАСАТ
Ч А СТасСААДССТИаДАССАСАДОСССАССААСАССААСИСТОСА
СААДЧадАасатасАааСССААда,аАдаСТаспАСААААСТСАСАС
АТаССсСсАССОЯтТасССАаСАССтТадАла,асСстТа7асАа,асаацпАСс
СТСАаТСТ ОСТ ТОСССССААААСССАдДавАСАСОССТо
АтаАТСТОССОСО,аАСооСстТаАсСаТСАСсАТОаСООТООСТааТтас
АсатадаСсСАССААдаАдоСоСстТадааТСААсСТТСААСТаатТ
АсатасАассабатасАсатасСАТААТаССААсСАСАдАаС сас,ассАдсадаСАаТАСААСАаСАСсаТатАссататаатТсСА ссатостоАсса,атостасСАССАс,СаАСстТаасСТаААТааСАА саАаТтАСААХаТасСААдаатСТоСААСААдАдассстоавасоас
ССССАТСВАСААДААССАТСТОСАААаССААдАспСаа,САасс сСаАпААССАСсАасататасАссста7асссССАтТоССасаАТ сдасСстаАССААаААССАсИ!тсАа,ассттса,атасасСАатСА
ААсСастТТстТАТСССАа,аСаАСАТосоСсастасАаатаа,аАаА
Таблиця 21
Послідовності одновалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.1) аСААТОСОИСсАасСсапАаААСААСТАСААаАССАСассто ссатаставАстоСсадсавастостстТСсСТСаТаАасСАА аСстТСАССатТапАСАдаХдасасатсасАаСАсаасААСаИат
СТСТСАТаСТоСОаТаАТаСАТОАИааСТСТаСАСААССАС
ТАСАСасАаАдАадассттюСєєтаТтстСаааТААА сАдсАтсатастАсССАатооооСааСАсоСстаТатстотТалд ссстаабаАдпАдсАдаСсСАсоСстаТатоСстасСсАадасстоСсСАа тосатТаАССТоСТоСТАССстТасстааТАТСАаСАСАдаС сса,ассАдс,7асоосставастасСстаАТСААдсатаавасАиатосс свАдадасСсСсАсСааСАТтоСсСТОАССЯватпсотосвастотаас тос,сасСАСсСаАСТТСАСССТаАССАТСТОССООССТО,ААС сссАХавАсттсасСсататАСТАСТаССсАаСАасасАТСАТ легкий ланцюг анти-ЕАР астТассСсСсССАССТТТОпЙССАпапаСАССАдДасСсТасСАААТС 163 (489) АДСОСОСтТАСсОСИавтТаасСстТасАССАТСТатсСТТсСАТСТТОСССОаС
САТСТОАТОАДаСАСТТОАААТСТасСААСсТа,асстотаттат атТасСсстТасСстТОААТААСТТСТАТСССАВАаАааССАДАСТА сдатапАдасТаспАТААСасссСстТоСААТСИСИатТААСТОСС дапдаАдаТатСАСАсАаСАаасАСАаСААдапАСАасСАССТ
АСсСАаССсТоАаСАаСАСсоСстаАСастТаАаСААдАаСАаАСТ
АСОСАСАДАСАСАААдатстАСсасстасСсапААатТСАСССАТС дасасстдастассСаТСАСААДаАастТ ТтсСААСАаса ададатат димерний пи 4-1881 (71- 115 254) - СіІ"-Ре-ланцюг з Див. таблицю З «виступом»
ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОСОІ ВІ БСААБИаЕТЕ55МАМОМУВОАР
СКагєЕмУ5АПИаБадоТуМУАрБУКОаВЕТІЗВОМ5КМТІ МІ С
ММ5І ВАЕОТАМУМСАКОИМУУ РОС ЕМ ОСТІ МТМ55АЗТК
СРОМЕРІ АРЗОБКОТ5ОаСТАА СІ МКОМЕРЕРУМТУБМУ/М5ИайАї. анти-ЕАР (489) Ес- Т5ОаМНТЕРАМІ 055021 М5І 55 МРБББІ СТОТМІСМММНК 164 ланцюг із «западиною» РОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕАДАСОРОМНЕЇ ЕРРКР
КОТ МІЗВТРЕМТСМУМОУЗНЕОРЕМКЕММ МУрРИМЕМНМА
КТКРАЕЕОММОЗТУАММБМІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМЗМКА
І аАРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМСТІ РРОВОЄЕЇ ТКМОМ5І 5САМ
КОЕМРБОІАМЕМЕЗБМОСОРЕММУКТТРРМІ О5ОСБЗЕРІ МЗКІ ТТ
МОКБАМОССММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОБІ 5І РОК
ЕІМГТО5РОТІ 5І 5РОЕВАТІ БСВАБОБМТ55УІ АММООКРО
ОАРАП'ІММавАВАТИаРоОВЕЗавзаватовтІ ТтІЗАГ ЕРЕОБА 125 легкий ланцюг анти-РАРІ УМУСОССІМІ РРТЕЕОСТКУЄІКАТМААРОЗМЕБІЕРРБОБОЇ К5 (489) СТАБМУМСІ І ММЕМРАЕАКМОМКМОМАГ ОБОаМЗОЕЗМТЕОЮ
ЗКОБТУБІ 55ТІ ТІ БЄКАОМЕКНКУМУАСЕМТНОСІ 55РУТК5Е
МАСЕС
2.1.2 Одержання одновалентної націленої на БАР (489) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -доменами без заряджених залишків, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.2)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-254), розділені (45)2- лінксерами, і злитий з Сі-доменом людського ІдСті, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. ТА: людський ліганд для 4-188, (С45)2-конектор, людський ліганд для 4- 188, (С45)2-конектор, людський СІ.
Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188 (71-254) і злитий з СНІ1-
доменом людського ІДС, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. 1Б: людський ліганд для 4-188, (С45)2-конектор, людський СНІ.
Полінуклеотид, який кодує димерний ліганд для 4-188, злитий з людським Сі -доменом, субклонували в рамці зчитування з СН2- і СНЗ-доменами важкого ланцюга з «виступом» людського |дсі (Мегспапі, 7Ни та ін. 1998), використовуючи лінкер (С45)2 або в альтернативному варіанті (456 И5555(5).
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для фібробласт-активуючого білка (ЕАР), клон 489, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», або з константним легким ланцюгом людського ІДИ.
Мутації Рго3З29с1у, І ец234АЇа і І ец235Аїа інтродуковали в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами (МО 2012/130831).
Комбінація: димерний ліганд-Ес-ланцюг з «виступом», яка містить мутації 5354С/Т1366МУ, мономерне СНІ-злиття, націлений анти-РАР-Ес-ланцюг із «западиною», яка містить мутації
УЗ349С/13665/і З368А/У407М, і легкий ланцюг анти-РАР, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188 і ГАР-зв'язуючий Раб (фіг. 4, конструкція 2.2).
В таблиці 22 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
ЕАР (489) антигензв'язуючої молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-254), що містить СНІ1-СІ -кросовер без заряджених залишків в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.2).
Таблиця 22
Послідовності одновалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.2) дадаласасостадастаАдаоСССаАтТаАтостастацА стастасАаостасасасСАассасАтТа7аттастоала,астаатас
СсоСАпААсатастастаатсаатаасоооостатостаатА сХдасаАтТоСстТасАСсТЩастааСататСАСТаАСАсаСвас
СстТаАаСтТАСАААпАапАСАССАААпААСтТасстааТавос
АдсасссаСса,ататАСтТАСсасТта,атсттСсАаасСтасААСтТас саадсастастаа,асСба,ааопААдсааАтотаасттататстот сасостасатотасла,асстотаАдсА;даса,астастаасСсаст асбад,асттТайСАСТаАСсАаа,атасАаттасстостассАаст ссаАсассСапААтТАаСсасАттасаТ г тсААдвасАааст сстасасстаттасссасСсАасАасаста,ваАатТасАТСТОа
САСАСАСАсСасСсАаацсастТАсАСАСса,асстааСАасСТаАСА сассасбастТАсАаатастасасстаттСсАаАаТаАСоСсСа
АаАТТоСАСССЯСОоСТасстТотТоСААаААаСасАдаасСос димерний пи 4-188І. (71- АОССсСсСОсСАТотТааСсаСасвАсааАТСстТАаАсАасапАСССаА 165 254) - Сі-Рсо-ланцюг з АСТаОТоСССстТаАСсАТОСАЛС,ССсСсСЯваеаСстТастацАтТСтТаАаА «виступом» сАсапААТаттсассСАаастастааСТСАпААтТа7атастас таАТТаАСсСОСсСАССТСТОАаССТватТАСТОСО,САСССАСИасСтТ сасблсссататосстадстасаааАСТатСссСтТАСААдаА
АСАТАСААААСЧААСстТастаатаастАААда,асСстааваа,татА
СстТАТОаТИаТ тт тт ТсСАаСтТапйААСсТалсаасСсасяастаатааст саесвадссастсАааадтотататоостаастоТасАТСТаС дассастасестотастастасСс,аСАа,стасАстаастст саотатавАсСтасСсСсАСсСАаасстстАаСсАаасССАсСААА салас,асстсавааТТоСААсаАасасстастасСсАТСТадас соасАсАа,асасстасаАаТасСАТСТаСАТАСТаАдАСаСС далассссасАатастаасАдастаАСТСАсааассСААСТ стастасасАастатпсасСаТаАСАССТаАаАТОССТаССс вАСТаССААаСССТАпАТСАаААа,сасааоавАаатоСа лассасА;а,асвАтотса7атасаватасасосастосостосататт
ТАТСТТТСССССАТСССОСАТОААСАа,аСТаАААда,аСаа,сСАСс
Таблиця 22
Послідовності одновалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.2) аестосатсатТататстасСстТаААСААТТТТАСССТтТАаса
ААДИСТААДатасаатасАадаатасАТААСасАстасСАатТ
СсСааСААСТоССАСаСААТСТаИатаАСАСпААСАасСАСТОСА
АпСаАСАаСАССТАСТОССТаТоСтТоСАСССТаАСАСТИТО
ТАДСССТОаАТТАТОАСАААСАСААдАДИатТСтТАСсасстТассА
АСТСАСССАТСАССОСОССсСТадастаСССаТСАСАААСАаС
ТПСААСАасСасададаТтатаАСААДаАСССАСАССТаИатоссс стт,атостасссСстТдалдаста7астассвасссттТататто
Стат сСССССААДАасСсССАДапАСАСССТаАТаАТСАаСс саАсссССбаАддатаадсстасатаататавАтТататсСсСсСА бвАдспАСССТаААдаТаААаТТСсААттаатАсатааАСасяь сатТапАдАдатаСАСААТасСААаАССАдасССс,аС,аапАасаА вСАСТАСААСАаСсАСсатАасСсататаатАасСатссСтТСАСС атСсТасСсАсСАаапАСстасСстаААтТааСсААааАаТАСАда
ТтТаСААДВСаТСТоСААСАААдасоСстоавасаСССССАТССАаА
АААССАТСТОСАДАаасСссСАдАасаасАасссСаАаААССАС
Ада,аататТАСАсостТасссСССАТаСсСсаааАТаАдасСТаАССАА вААсСАсатсаа,асстатаатасстааТСсСАААДаасСтТТсСтТАТ ссСАааСсаАСсАтТсассатасалатаааАаАаСААтТасасАс
ССапАаААСААСТАСААДаАССАСасстссатастааАсСтТ сбаАсвастосТсТоСТстТАСАОСАдастоАсСсатааА
СААдадаСАа,сатааСАааСА,ааааААСатсТсТСАТаСТоС стТаАТаСАТОАДСаСТСтТасСАСААССАСТАСАСаСАСААа дассТоТоосТатстСасатТААА
Адададас?е7;состадастАасСССаАТаАтоСстТастТасаА стастасАасстассаСАа,асасАтТаттастодастаастас
СсССАПАдАСсатастастаАтаАдта,воооостаТатостаатА сдасаАтоста7асАастасстассататСАСстТаАСсАасасивас
СсТОАДаСтТАСААДИАдОаСАСАССАдДАСААСсТасатастааос
АдсвасссаСсататАСтТАСИаТаТат ст ТтсСАаСстТааААСТаС садалатаатсасСсасаААдааАттаасттата|атстст сабоСтТасСАТСТаСАЛАСаСсСстТоталдадАд,есастастаа!сСсаст асдеастотаастстАсАХатасвАттасстостассАаст сс,сдаассСапААтТАаа,аСсасАаттасат тААдсаассваст мономерний ну ЗСтТОсСАССТОТоТаССсвОсССАСАСАСТОаСОАОеТасАТСТО 166 4-1ВВІ. (71-254) - СНІ САСАСАадасоСАасАаасСАасасАасасстааСАастТаАсСА
СсАдасеСсастАсадатастасиасстаТаттсдадатТадсоСосСа
АвАТТОСТаССОЯСОоСстТасстТАааССсСтТАаАТСТадАаасавс савлдсапсосасАавасааАдавАТСТасСстТАаСАССАдДАсаИ ссестсосататосттаасСсТосСтТАасСТоСААаТтоСАССТ ставда,асСАссастасттаадтасстсаТадАдасАТТА ттссталдасстаТАСАааТатоСсТапААТАаСасАсаСА стТОАсстотавАаТасСАТАСТІ ТОССССОСТОТаСстТасСАаТ ссттТавАСТатАсАа,асстаХда,аСсАа,асатастаАСАатТасСс
СсдаслаСсАдассТаваСАСССАЧАССТАСАТСТаСАДСатТа
ААССАСАДаСССАаСААСАССААдааТаТтааАСААапААСааТта
СААСССААДСТСТТаТт ланцюг із «западиною» 254) - СІ-Ес-ланцюг зі ЮР АСУ Та зУКЕОТКЕЇ УМАКАСУУУМЕРО ЕСВАМ
Таблиця 22
Послідовності одновалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.2) «виступом» МмАсСЕавбБазувбі АІ НІ ОРІ В5ААСАААЇ АЇ ТМОЇ РРАББЗЕАВ
М5ЗАРСРОСВІ І НІ БАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАУМ ОЇ ТОСАТ
МІ І гАМТРЕІРАСІ РОРАБЕССОСОЯБИСОЯСОЗАЕСРЕЇ 5РОЮРА
СГ о ВОСМЕАОЇ МАОММ ПІраРІ 5БМУМБОРИЇ АСУБІ ТС
ІЇ ЗУКЕОТКЕЇ УМАКАСУУУУЕРОЇ ЕЕГ ААУМАаЕаЗазуві А
ІНГОРІ В5ААСАААЇ А ТМОЇ РРАБЗБЕАВМЗАРСаРОСНІ І НІ.
ЗАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАМ ОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРАС
ГРБРАЗБЕССОсСОа5асайеАТМААРЗМУЕІЕРРЗОЕОЇ КИатАБУМ
СГ ГММЕМРАЕАКМОУМУКМОМАГ ОБаИМЗОЕЗУТЕООЗКОЗТУ
ЗІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМУТНОІ 55РУТКЗЕМАИаЕСО
КТНТОРРСРАРЕААСОИРБЗУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУМ
МОМЗ5НЕОРЕУКЕММ УМО МЕУМНМАКТКРАЕЕОУМЗТУАУМ
ЗМІ ТМ НОБОМ/ЛІ МОКЕМКСКМУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСИСОРА
ЕРОММУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМ5І МУСІ УКЕЕМРЗОІАМЕЖМЕЗМО
ОРЕММУКТТРРМ ОБразЗЕРІ УК ТМОКЗеАМмОВ,МУЕЗО5
ММНЕАЇІНМНУТОКЗБІ ЗІ РОК
ВЕСРЕГ 5РООРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГПІраРІ ЗМУ
РРО АСУБІ ТаСІ БМКЕОТКЕЇ МУМАКАСУМУМУЕРОЇ ЕІ ААУ
МмАсСЕавбБазувбі АІ НІ ОРІ В5ААСАААЇ АЇ ТМОЇ РРАББЗЕАВ 118 мономерний пи 4-188Ц МЗАРСРОСВІ І НІ БАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАУМ/ОЇ ТОСАТ (71-254) - СНІ МІ І гАМТРЕІРАСІ РОРАБЕССОСЦаЗОССЗАЗТКОаРЗМЕРІ А
РОІБКЗТЗаатАА СІ МКОМЕРЕРУТУБУМЗИАІ Т5амМНтТЕР
АМІ О55(21 51 55 МТ МРББІІ ЕТО ТМІСМММНКРОМТКМОК
КМЕРКЗС із «западиною» 9 2.1.3 Одержання двовалентної націленої на БАР (489) антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188В8 (71-254) в злитті з Ес (Кій), в якій димерний і мономерний ліганди для 4-188В злиті на С-кінці кожного важкого ланцюга (конструкція 2.3)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-254), розділені (45)2- лінксерами, зливали з С-кінцем Ес-ланцюга з «западиною» людського Ідс21, одержуючи відповідно до схеми, представленої на фіг. 18: ЕРс-ланцюг із «западиною» людського ІДС, (Саб)2-конектор, людський ліганд для 4-188, ((345)2--конектор, людський ліганд для 4-188В.
Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188В (711-254) і злитий з С-кінцем Ес- ланцюга з «виступом» людського ЇдС21, одержували відповідно до схеми, представленої на фіг. 1Г. Ес з «виступом» людського ІДСа1, ((545)2-конектор, людський ліганд для 4-188.
Полінуклеотид, який кодує димерний ліганд для 4-188, субклонували в рамці зчитування на
С-кінці СН2- ії СНЗ-доменів важкого ланцюга із «западиною» 4 людського ІДС (МегесНапі, 7Ни та ін. 1998), використовуючи (с145)2-конектор. Полінуклеотид, який кодує мономерний ліганд для 4- 188, субклонували в рамці зчитування на С-кінці СН2- і СНЗ-доменів важкого ланцюга з «виступом» людського ЇДС1 (МегспНапі, 7Ни та ін. 1998), використовуючи (с145)2-конектор.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для фібробласт-активуючого білка (ЕАР), клон 489, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», з «виступом», або з константним легким ланцюгом людського ІДСИ1.
Мутації Рго3З29с1у, І ец234АЇа і І ец235Аїа інтродуковали в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами (МО 2012/130831).
Комбінація: анти-РАР ПиЇдст!і, яка містить димерний ліганд ланцюг із «западиною» з мутаціями У349С/13665/ З68А/У407У, анти-ЕАР пиЇда, яка містить мономерний ліганд ланцюг з «виступом» з мутаціями 53540С/1366МУ, і легкий ланцюг анти-ЕАР, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188 і два ГАР-зв'язуючих Ра (фіг. 4, конструкція 2.3).
В таблиці 23 представлені кКДНК їі амінокислотні послідовності двовалентної націленої на
ЕАР (489) молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-18В8В в злитті з Ес (Кі!) (конструкція 2.3) (ЕАР розділений тример з 2 анти-РАР Раб, димерний і мономерний ліганди для 4-188, злиті на
С-кінці кожного важкого ланцюга відповідно).
Таблиця 23
Послідовності двовалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.3)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: слессотасластастовААдАда,аСса,асосвА,ааАСстастТасСА сстаасСссаСбАасСстаАсАСсТатота,асасСсасСАасСа еСсТТсАССТТсАаа,аСсАастАСсассСАтТалаСстТавиа оса
АдаасооСстааСААдсапАСтТавААтТавататоСассСАТС
АатсасстотааСбасСсАасСАССТАСТАСЯСССАСсА,Сата
АдсдСдасСаагтСАССАТСАС,ССССацпАСААСАаСААсСАА
САСССТаТтТАССТаСАСАТОААСАССССТОСЯВваССсАСсО
АСАССОСЯССОЯТатАСТАСТаСаССААлсСасАТаатосеас сасСТТСААСТАСТавСССАСАсСОааСАСССтТастТСАСАСТ атСбАда,аСсастАаСАССАА,савасоостосатат осот сабсбббСбАаСАаСААд,САаСАССАа,аСваса,ааСАСАасССа сттасестасстааТСААдааАСТАСТТОСССОСАаСоСа таАССсСОСТатТОоСтТасААсАаа,аСа,авАлассстадсстоСасо атасСсАСАССТТОССТССОСССЯТастасааааттстаасстТа тТАТАСССТОАс,ССсАааСсатаатоАсСсаста,асстстАаСАас стапаСАСССАпАССТАСАТСТаСААСИаТаААССАСАА
ВсССАаСААСАССАдДа,сТапАСААсаААаса тапАаСССА дадасТасспАСААААСТСАСАСАтТассСАССатТасссСА
ВСАССТаАдАсССсТаСАасСасацвАсСатСАатстостсто
СССССААААСССААдаПАСАСССТСАТаАТСоТОССааАСС анти-гАР. (489)-Ес-ланцюг із сСстТАдсатСАСсАТаСОСТООТеасТасАСсастТадаССАСИаА 167 | «западиною» зпитий З АдаАсоСстадааТСААаТТсААСсТОастТАСсСатацвсАсаваса димерним пи 4-18ВІ. (71-254) тасАасаТасСАТААТаССААпАСААдасСсасасадса Ас
САаТАСААСАаасСАСсатАсСсататаста,асатсстСАСс стобтТасСасСсАаа,асАСстТааСТаААтТааСААапАатТАСАА атТасСсАдаатсТосСААСААдАДассСстоавасрассСССАТССЯ
АПВААААССАТСТССААДАаССАААла,асасАассссаАсАА
СсСАСсСАсСататасСАасостТассссССАТОСССЯССССАТаАастТа
АССААСААССАсИатоа,асстотса7атасаСАаТСАААСс
СсТстТАТСССАаСаАСАТСОЯССОЯТтасАаа,атасаАаАасСА
АтТасаСбАааССацпАпААСААСТАСААЧАССАСаИасстосо стаставАстТоСсаАссастстстоСстоатаАаСАДС
СстТосАССОСтТаспйАСААвАаасСАааватааСАаСАсаасААСаИТт
СстТстТосАТаСТОСОСТтТаАТасСАТОАДИ,ааСТСТасСАСААССА
СстТАСАСЯСАСААДССАаСсСсТоТОССТатотоСасатацАца ссабсаАдлда,аСб,асАа,саАа,саА,ааАТоСАсАсА,сааСосСтТ сластадассоСаАтаАтостТа7астасАстастасАсста ссаСбассасАтаттастола,астаатааСССАСААСаИта стастТаАТсЧаАТасоССССсТатоСстТастТАСАасаАТОСТ сзваста,астасСсататоАСТаАСсАасасвасстадастА
САДАпАааАСАССААДАСААСстТаатаатаасСААаасСсс ссататАСТАСЯТатстттсАаа,аСстапААСтТарасАцАс тасатассСсассАдасасАтота,астотататстотаассс тасСАТСТасСАСсСССтТоТаАдсААа,асастаста,сСастТасАс
Таблиця 23
Послідовності двовалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.3)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО: стотааСсАСтТаАСсАаатТавАттасстостасСсАастоса
Ад7аассСапААтТАдаСсаСАттаасттСсААд,сасСсАаваста стасАасстаттассаасСАаа,аАд,аастасаАатасАТСТОа
САСАСАСДасоСАс,саасСсТАпАСсАСсасстааСАасСтТаАс
АсАдсса7асастАсХдатастасиасстатсдадатТадсосс
СбвАаАТТССАсСоСсаассСТасстСТоСААаАдасСОаАА сасссАасаСссадттаасавассадапАТотТАададасча
АСССОаААстТатооСсСстТАСаАтосАаасссвастасСстацА тЄтаАдаАСсАдаапААтТатсасссАа,астаатастоАаА
АТаОТаСТасСтТаАтТтаАСс,апАсСсттаАдасСстааТАСТоСа
АоссАХссеаста,сСдсссататосстаАастасаааАсСтТа
ТОоСТАСАДАСААСАТАСААДААСААСстТаастаатаасСтТАА даставсататАСТАТОТаИтттттодастасдаААСтТаАа ссасатеатсастасаваавастАасалтстататоссс т састотТасСсатотасалассАста7асастотастастаасСас дастасАастаастотТаАастТатавпАССсТассСАССАасСсСтТо тдасадааССАпАААдсАдаСсасстоаваст ТССАдДасАс сестастасАтоталасасСсапАСАд,ас,аостаааАатТа
САТСТаСАТАСТаАдАааСсСсАсСАа,асСоСаасСАТаСтТТаасСА астаАстсАа,асаааСААстатастасалдстатасат вАСАССстТаАдаАтооСстасСсавАСТассСААДаСсСсСтТАСАТО
АСААд слсатасла,астастадАддаСсаассассАХа,ааАСстастасА с7есстасссасбдассТАсАстТаТатстасасСсассСАиасСаИ аСстТТсАССТТсАааСАасСстТАСасСсСсАталастааастоСасс да,асооСтаСАда,ааАСстааААтТавататСассСАТС
АТССОСТСОТОССасССАасСАССТАСТАСОЯССаАСАаСатТа
Адс7саасСааТТСсАССАТСсАИ,аССассАСААСАасСААСАА
СсАсоСстТатАССтТасСАСАТаАдАСсАХаСсСстТасавассСаАдась
АсАССсСОЯаСсСататАСтТАСТаСсасСсСсАласвсаАатасттаас сасТтТСААСТАСТаИСсСсаАСАаа,авасСАСССтТасйТСАСАСТ стосдасастТАаСАССАдДасаСасСсССАТаатсТоССсстТ свасСсАСССТоСТоСААдсАасАассттаТасааасСАСАасСОосль ссстасастассСстТааТСсААдасСАСТАСТТССССОААССас анти-РГАР (489)-Ес-ланцюг зі ТтаАдСссатататацвААСстоАсаСсассстаАсСАасСИасо 168 | «виступом», злитий з атаСАСсАССстоСсСсвастатсСстТАСАСТоСтТСАасАСТо мономерним йи 4-188І (714 ТАСТОССтТоАааСсАаа,аСсатаатаассатассСстоСАаСАсасо 254) тасвасСАСССАпАССТАСАТСТаСААСаТтаААТСАСАА
ССССАаСААСАССАдДасаСТаспсАСААаААдАатТаласСсСсСА
ААТСТТаТтаАСААААСТСАСАСАТасСссСАССа,а ТасссАа
СсАССТаАдАДаСстТасаа,асаааАсСатсАатст сс
ССССААДАСССААДаСАСАСССТСАТаАТотТоССааАСоСс
СстАдааТСАСсАТтасатаатаатасАСатаАаССАСОАА сАссСстТадааТСААаТТсААстТаатасатааАСаасСатТ садасТтасСАТААТаССААДаАСААддасСсасСса,ас,ссавАаадас
АСТАСААСАааСАСса,атАсСсататаастАасСатсСсТСАССа тоСтТасСсАССАДаСвАСсТаасСТаААТааСААДаСАсСТАСААа
ТтТаСААДСИаТСТоСААСАААдасСоСстоаасаСссСССАТССА
СААДАССАТСТСОСААДАаССАдАд,аа,аасСсАаССССаАсцААСс
САСАСИаТтатАСсАСоСстТассєєєєтТтасСсАаАаАТаласта
Таблиця 23
Послідовності двовалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.3)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО:
АССААСАдАсСсАсататсостатаататстаатСдА;асчас
ПстТАССССАааСаАТтТАТСЯССОСТООСАсСТасададаТсАА
СсаасССАасССсТаАспААСААСТАСААаАССАССССССсСтТа тастасАдСсАдаСаАдСсаасСсАаТст СТ оСТатАСТОСААДАС тОАсС,атТасАСАда,адасСссватааСсАда,САаааСААСата тсда,астасад,аСатаАдтТасСсАсаАааССсСстТасСАСААССА
СстТАСАСССАСААХсатТоСсСсТадассталасоссвасСааАс ссаа,аСба,асАдаСбасАасада,асАапАТоСАаА,аАа,аааСос таодастАдаССССаАтаАтостастасАястастасАсСстТ ссаваСсАдсаасСсАататтастоа,астатаассССАСААСаИт сстастаАтТаАтТасооосстаТатостааТтТАСАасСаАТос тасастасастассатаТСАСстТаАСАдсасСсавасстаАастА
СААДадДасАСАССААДАсаАдАСстаатаастаасСААаассс сесататАстТАсататсттсАаасСставААдстТаСасАсАС таатассСсаСсаАда,асАтотТасттататсттааососс тТасАатотаслассттаАдсдлда,асастастасоастасСАс стотааСсАСТаАСсАаатТавАттасстостассАастоса
Ад7аассСапААтТАдаСсаСАттаасттСсААд,сасСсАаваста стасАасстаттассаасСАаасАавастасаХатасАТСТОа
САСАСАСДасоСАс,саасСсТАпАСсАСсасстааСАасСтТаАс
АсАдсса7асастАсХдатастасиасстатсдадатТадсосс
СбвАаАТТССАсСоСсаассСТасстСТоСААаАдасСОаАА
ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААБИаєТтЕ55УАМОММУНОА
РОаКаї ЕМУ5АПИБаАВБТУМАОЗУКОаВЕТІЗАОМОКМТІ МІ.
ОММ5І ВАЕОТАМУМСАКОМ ЄС ЕМУМ ОСТІ МТ У55А5
ТКОаРБОМЕРІ АРБЗКОТЗИаС,СТААІ аСІ МКОМЕРЕРМТУБУУ МО
САГТ5ОаМНТЕРАМІ О55(2І М5І 55УМ ТУРБО аТОТМІСМ
ММЯІНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСРАРЕАДАДССРОМЕ
ГЕРРКРКОТ МІЗАТРЕМТСМУУМОМЗ5НЕОРЕМКЕМУ МУ С
МЕМНМАКТКРАЕЄЕОУМОТМАУМБМІ ТМ НОЮ МЕОКЕМХК
СКМУМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКОИОРАЕРОМСТІ РРОНОЄБЇТКМ
ОМ5І ЗСАМКОЕУРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ 050 анти-РАР (489)-Ес-ланцюг із а5ЕР УК ТУЮКЗАМООаСММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКо 123 | «западиною», злитий з 5 5БРСОСОСОСОСОВИСОИСОНЕСРЕЇ 5РООРАСІ І ОЇ ВОСМЕА димерним пи 4-188ІГ. (71-254)|О
ГМАОММІ ГІОСРІ 5МУМБОРИЇ АСМБІ ТО 5МКЕОТКЕЇ М
МАКАСМУМУМЕРБОЇ ЕГААММАСЕСБИаБмМ5І АГ НІ ОРІ Н5АА
САДАГАЇ ТМОЇ РРАБЗЕАВМ5О5АБРСЕОСВІ І НІ ЗАСОВІ СМ
НІ НТЕАВАВНАМ/ОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕЇІРАСІ РОРАЗЕС сааваспйоасеВЕСРЕЇ 5РООРАСІ ЇЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММ
ГЛОСРІ БМУМБО РИ АСМБІ ТІ ЗМКЕОТКЕЇ ММАКАС М
МЖУМЕЕБЕОГЕ АВУМАСЕСБаИБм5БіІ АІ НГ ОРІ ВБААСАААЇ А
ГТМОГ РРАББЗЕАНМ5ЗАРОРБГОСНІ І НІ БАСОВІ СМУНІ НТЕА
ВАВНАУМОЇ ТОСАТМІ СІ гГАМТРЕІРАСІ РОРАБЕ анти-РГАР (489)-ЕРс-ланцюг зі ЕМО ЕЗССИЇ МОРОаСБІ ВІ ЗСААБаєТЕЗЗУАМЗУУВОА 124 | «виступом», злитий зі РОКОаЇ ЕМ У5БАПИБаАВБТУМАрБУКОаВЕТІЗВОМ5КМТІ МІ. мономерним йи 4-188І (714 ОММ5І ВАЕОТАУУУСАКОМ ЄСОСЕМУМ ОСТІ МТУ5БА5 254 ТКОаРБОМЕРІ АРОЗКОТЗИаСаСТААІ аСІ МКОМЕРЕРМТУБУУ МО
Таблиця 23
Послідовності двовалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.3)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО:
САЇ Т5аМНТЕРАМІ 05501 5І 55УУТУРЗЗІИТОТМІСМ
ММНКРОЬМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕАДАСИаРБЗМУЕ
ГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ Ура
МЕМНМАКТКРАЕЕОУМЗТУАМУМУБМІ ТМ НОБУУІ МЕОКЕМК
СКУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОМУТІ РРСОВОЄТКМ
ОМБІ МС УКОЕМРБОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ 050 аЗЕРМЗКІТУОКЗАМОСаММУЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОК
І 5 5РССДСаСаССсСЗСССИЗАЕСРЕЇ 5РОВРАСІЇ ОЇ ВОСМЕА (Ф)
ГМАОММІ ГІраРІ БМУМБОРИЇ АСУБІ ТО ЗМКЕОТКЕЇ М
МАКАСУУМУМУЕРОЇ ЕГААУМАСЕаВавмві АІ НІ ОРІ В5АА
САДАГАЇГТУОІ РРАББЗЕАВМЗАРИРОСВІ І НІ БАСОВІ СМ
НІЕНТЕАВАВНАМОЇ ТОСАТМІ СІ ЕАВМТРЕІРАСІ РОРАЗЕ
9 2.1.4 Одержання одновалентної націленої на БАР (489) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ-СІ -доменами із зарядженими залишками, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.4)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-248), розділені (45)2- лінкерами, в злитті з Сі-доменом людського ІдсС1ї, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. ТА: людський ліганд для 4-188, (С45)2-конектор, людський ліганд для 4- 188, (С45)»-конектор, людський Сі. Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188 (71-248), в злитті з СН-доменом людського ІдДа1, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. 1Б: людський ліганд для 4-188, (С45)2-конектор, людський СНІ.
Полінуклеотид, який кодує димерний ліганд для 4-188, злитий з людським Сі -доменом, субклонували в рамці зчитування з СН2- і СНЗ-доменами важкого ланцюга з «виступом» людського дсі (Метгспапі, 2Ни та ін. 1998), використовуючи лінкер (С45)2 або в альтернативному варіанті (56555505). Для покращення правильного спарювання інтродуковали нижчезазначені мутації в «схрещені» СН-СІ: в димерний ліганд для 4-188, злитий з людським Сі, мутації Е123А і 0124К; в мономерний ліганд для 4-18В, злитий з людським СНІ, мутації К147Е і К21ЗЕ.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для фібробласт-активуючого білка (ЕАР), клон 489, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», або з константним легким ланцюгом людського ІДИ.
Мутації Рго3З29с1у, І ец234АЇа і І ец235Аїа інтродуковали в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами (МО 2012/130831).
Комбінація: димерний ліганд-Ес-ланцюг з «виступом», яка містить мутації 5354С/Т1366МУ, мономерне СНІ1-злиття, націлений анти-РАР-Ес-ланцюг із «западиною», яка містить мутації
УЗ349С/13665/і З368А/У407М, і легкий ланцюг анти-РАР, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188 і ГАР-зв'язуючий Раб (фіг. 4, конструкція 2.4).
В таблиці 24 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
ЕАР (489) антигензв'язуючої молекули, що містить СНІ-Сі-кросовер із зарядженими залишками, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 2.4).
Таблиця 24
Послідовності одновалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.4)
Адададас?е7;состадастАасСССаАТаАтоСстТастТасаА стастасАасстассаСАа,асасАтТаттастодастаастас
СсССАПАдАСсатастастаАтаАдта,воооостаТатостаатА сдасаАтоста7асАастасстассататСАСстТаАСсАасасивас
СсТОАДаСтТАСААДИАдОаСАСАССАдДАСААСсТасатастааос
АдсвасссаСсататАСтТАСИаТаТат ст ТтсСАаСстТааААСТаС садалатаатсасСсасаААдааАттаасттата|атстст сассСстасАТСТаСАЛАСаСсСсТотаАХдаАтТотТастастааСаСс астастотаасСАСтТаАсАХатасАттасстостассАасСА ссадсассСапААтТАаСаСАТттасаТ т тСсААсасАцвастТ сестасаостаттасссасСсАдсАасвастаавадаТасСАТСТа
САСАСАСАДасоСАа,аааСсТАпАСсАСасстааСАасСтТаАсСА
СсАдасеСсастАсадатастасиасстаТаттсдадатТадсоСосСа
АвАТТоСАсСсСсапАСстТассасасааСсасАаттасвсаасс сАдапАТСстТАадаААдапАсоСссАаСсТат ССС аАСаАТо сласссаастастааАТсТаАаАСАсасААТаТаттсасссСА астаатаасСТоАСААТатТастастаАаттадСасАсстТоТта дастаатТАСТоСаАССсСсАассастааСасаааТатСССтТаА стаавааАСТатссСтТАСАААСААСАТАСААААСААСтТас тастаасСтТАдАдаСстасаатТатАСТАТатат тт тсАаСстТ садАасталсасасастатсастаассаА,аааСтСАааАтТо тататосстаасттТасСсАтотТасСсАдаССАСстасСсасСтстТасСА асдсассастаСсАаасАстассстаастатавАссТасссс
СсАдастстсСбаАпасССАпАААСАа,аСа|асстсаваТТссСА - дасАаса7асстастасСсАтотала,аСсасСасАСАасСасстацс ва вс сланцю з АСТОСАТСТОСАТАСТОААОССАСАСССССОСАТОСТТОС «ВИСТУПОМ» сАдастТаАСТСсАсасасасСсАадстатастассАасттсаса
ТОАСАССТаАаАтоссСсастасАястасасасхаасастТто сапвдсассаАдавАтотатаса,аатааСстаСАССАТСТИаТО
ТТТАТСТТСССАСССАСЯаСОАСсСОапАдастТаААатсТаасСА сдассда,асатсататасстастаААТААСТТСТАСССССа бадааСсСААдсатасСсАдаТапйААлааТапсАСААТасСссСтТасСА слаСбсасСААСдасСАасАдАдаСсатаАССадаСАааАСАС
СААССАСТоСАССТАСАаССТаДасСсАасСАСССТаАСоссСтТа
АВСААдааССаАСтТАСаАаААаСАСААдсаТататАсасстас
СААаТаАСССАССАСвИасстаТатстТАаССССатаАССААС
АаСсТсСАдсСсОСааасСсадатТасСсаАСААаАСССАСАССТИат
ССстТоСАТаСССТаССССтТаАдАаОестТаста,асаассстТАасСа тат сстТагтСсСссССССААДаСССААаСАСАСССТалАтТаАТ
СсдасСбапАсСсоСТАдАда,атаАдсстасататаатаавАТата тТеССАСаАХааАСССтТаААаТаААаТТСААТТасатТАСаТтась
Аса,аа,сатапААаТасСсАСААТаССААаАССАдассасСастья
Ад,авАдаСсАатТАСААСАаасАассатАсСса тата оАаСатост
СсАсСсатоСсТасСАССАаааАстасСсТаААтТасСАА,аадатА
СААДИТаСААдааТСТоСААСААдасостовасассСссСсСАТС
САСАДААССАТСТССАДАДасССААдасасАасссССаАсаАА
СсСАСАДСаСсТатАСАСССстТассСсСсСАТассвавАтаАдастад
ССААДСАдАССсАсСатса,асстатаатасстааСсАААдсаТастт
СстТАТСССАааСаАСсАТоОаССсСсатасдлатаваАаАасСААТИаС вСсАаССапАСААСААСтТАСААСАССАсасстоссатаст саАдстоСсадсаастосСсТсТссСТСстТАСАаСААасСтТСАСС атазАСсААдадасАасатасасСАаСАааааААСаТтсТсТСА
Таблиця 24
Послідовності одновалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.4) тТасСстоСсаТаАТаСАТаАХааСТСТасСАСААССАСТАСАСИС
АвАдсАассттостТатстоСаааТАдА
Адададас?е7;состадастАасСССаАТаАтоСстТастТасаА стастасАаостассасСсадсаасАтаттастдаста,тТас
СсССАПАдАСсатастастаАтаАдта,воооостаТатостаатА сдасаАтоста7асАастасстассататСАСстТаАСсАасасивас
СсТОАДаСтТАСААДИАдОаСАСАССАдДАСААСсТасатастааос
ААдсвасссаСсататАСТАСаТат ст ТсСАасСтТасААСтТаСс садалатаатсасСсасаААдааАттаасттата|атстст сассСтасСсАТСТаСсСАЛАаСсСстТотТаАсАтотТастастаасиасо астастотаасСАСтТаАсАХатасАттасстостассАасСА ссадсассСапААтТАаСаСАТттасаТ т тСсААсасАцвастТ мономерний пи 4-188 сестасаостаттасссасСсАдсАасвастаавадаТасСАТСТа 170 (71-248)- СНІ" САСАСАСАдасоСАа,аааСсТАпАСАСасстааСАастТаАсСА
СсАдасеСсастАсадатастасиасстаТаттсдадатТадсоСосСа
АвАТТоСАсСсСсапАСстТассасаасСавАааатоСсацвАцвасо сАМапАтТотТасСстАасСАСААдАла,асасссСа,аса|ататссстост сассоСстТАасСсАаСААдаАдаСАСАТотТа,аСайпйААСАа,аССас сставастасстасТасААСаАТТАСТТоСсССвВАаСсСсСата
АосататоСстТааААТТСоТаасССсассССстТаАСАда,аСсава7Ссатас
АСАССТІ ТОСсСАсССоСсатасСстасасАаасСАа,совасстатАСТо тсотадасла,асатсатадсАаатассСсАа,СсХастттавиас
АСССАСАССТАСАТСТаСААСОТаААССАСАДаСССАсас
ААСАССААДСсСатасАаСсАсаААдааТасААСССАдатостас ланцюг із «западиною» анти-РГАР (489), легкий
ВЕОРЕЇ 5РООРАСІ ЇЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІОСРІ ЗМУ МБ
ОРГ АСМУ5БІ ТИС 5УКЕОТКЕЇ МУМАКАСМУММЕРБОЇІ ЕЕГ АВМ
МАСЕСБОБ5БУБІ АГ НІ ОРІ Н5ААСАДАЇ АГ ТМОЇ РРАББЕАВ
МЗАРСЕРОСВГІ НІ 5АСОВІ ЯМНІ НТЕАВАВНАУМ ОЇ ТОСАТ
МІСІЇ РЕМТРЕІРДАСЇ ССС Иа5ааааАЕСРЕЇ 5РООРАСІЇІ 0.
ВОСМЕАОЇ МАОММІ ІОСРІ БМ МОРІ АСМБ5І Та ЗУКЕ
ОТКЕЇ ММАКАСУУУМЕРБОЇ ЕГАВУМАСЕаБавмБіІ АІ НІ ОР
І АБААСАДАГАЇ ТМОЇ РРАБЗЕАВМ5ОАБРСОЕОСВІ І НІ 5АСО димерний пи 4-188ІГ (71- ВІСУНІ НТЕАВАВНАУМ ОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРАСІ пса 119 |248) - СІ"-Ро-ланцюг з с5апИасеАТМААРЗМЕІЕРРБЗОВКІ КЗатТАБУМСТІЇ ММЕМРА «виступом» ЕАКМОМ/КМОМАЇ ОБаМОЗОЕВМТЕООЗБКОБТУБІ 55 ТІ ЗК
АОУЕКНКММАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАСЕСОКТНТСРРОСР
АРЕААДСОИРБМНІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТОМУМОМЗНЕОРЕ
УКЕММУ УМВаТмМЕМНМАКТКРАЕЄєОММОТУВУМБМІ ТМ НОЮ
МІ МаКкЕМКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРАЕРОМУТІ РР
СВОЕСТКМОМБІ МС МКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТ
РРМГОБОРОаБЕРІ У5КІ ТМОКЗАМООСММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМН
МУТОКБІ БІ РОК
ВЕОРЕЇ 5РООРАСІ ЇЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІОСРІ ЗМУ 120 мономерний пи 4-188Ц ОРГ АСМ5І ТС 5МКЕОТКЕЇ ММАКАСУМУМЕРОЇ БІ АВМ (71-248)- СНІ" МАСЕСБОБ5БУБІ АГ НІ ОРІ Н5ААСАДАЇ АГ ТМОЇ РРАББЕАВ
МЗАРСЕБОСВГІ НІ 5АСОВІ ЯМНІ НТЕАВАВНАУОЇ ТОСАТ
Таблиця 24
Послідовності одновалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.4)
МІЯ РАМТРЕІРАСІ ДСО ЗССИИаЗАЗТКОаРОМЕРІ АРЗЗК5Т вБаатТААГасі МЕОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ ТЗаМНТЕРАМІ О5
За М5І 55 ТУРІ ИТОГМІСМУМНКРОМТКМОЕКМЕРК
Зо ланцюг із «западиною» ланцюг 2.1.5 Одержання одновалентної націленої на БАР (489) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -доменами без заряджених залишків, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.5)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-248), розділені (45)2- лінкерами, в злитті з Сі-доменом людського Ідс1, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. ТА: людський ліганд для 4-188, (С45)2-конектор, людський ліганд для 4- 188, (С45)»-конектор, людський Сі. Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188 (71-248), в злитті з СН-доменом людського ІдДа1, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. 1Б: людський ліганд для 4-188, (С45)2-конектор, людський СН.
Полінуклеотид, який кодує димерний ліганд для 4-188, злитий з людським Сі -доменом, субклонували в рамці зчитування с СН2- і СНЗ-доменами важкого ланцюга з «виступом» людського дсі (Метгспапі, 2Ни та ін. 1998), використовуючи лінкер (С45)2 або в альтернативному варіанті (456 И5555(5).
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для фібробласт-активуючого білка (ЕАР), клон 489, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», або з константним легким ланцюгом людського ІДИ.
Мутації Рго3З29с1у, І ец234АЇа і І ец235Аїа інтродуковали в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами (МО 2012/130831).
Комбінація: димерний ліганд-Ес-ланцюг з «виступом», яка містить мутації 5354С/Т1366МУ, мономерне СНІ1-злиття, націлений анти-РАР-Ес-ланцюг із «западиною», яка містить мутації
УЗ349С/13665/і З368А/У407М, і легкий ланцюг анти-РАР, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188 і ГАР-зв'язуючий Раб (фіг. 4, конструкція 2.5).
В таблиці 25 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
ЕАР (489) антигензв'язуючої молекули, що містить СНІ-СІ -кросовер без заряджених залишків, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кі) (конструкція 2.5).
Зо
Таблиця 25
Послідовності одновалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.5)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: дадаласасостадастаАдаоСССаАтТаАтостастацА нуклеотидна послідовність СТаИСТОСсАСсСТаСса,аасАассаасСАтТа7атттастоала,астаатас 174 конструкції димерний пи 44 СССАСААСОЯатТастастаатоаатасосоостатостаатА 1ввІ (71-24835 - Сі-е САааСсаАтоСтТасастасотва,асататСАСТаАСАвасиасо ланцюг з «виступом» СстТаАаСтТАСАААаАапАСАССАААСААСТастастоасос
Адсасса,ааСсататАСтТАСсата,атстсАаСТасААСТас
Таблиця 25
Послідовності одновалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.5)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО: садалатаатсасСсасаААдааАттаасттата|атстст сассСстасАТСТаСАЛАСаСсСсТотаАХдаАтТотТастастааСаСс астастотаасСАСтТаАсАХатасАттасстостассАасСА ссадсассСапААтТАаСаСАТттасаТ т тСсААсасАцвастТ сестасаостаттасссасСсАдсАасвастаавадаТасСАТСТа
САСАСАСАдасоСАа,аааСсТАпАСАСасстааСАастТаАсСА
СсАдасеСсастАсадатаставиасстаттсАааАдатадссососСа
АвАТТоСАсСсСсапАСстТассасасааСсасАаттасвсаасс сАдапАТСстТАадаААдапАсоСссАаСсТат ССС аАСаАТо сласссаастастааАТсТаАаАСАсасААТаТаттсасссСА астаатаасСТоАСААТатТастастаАаттадСасАсстТоТта дастаатТАСТоСаАССсСсАассастааСасаааТатСССтТаА стааваСаАСТатосСтТАСАДАСААСАТтТАСААААаААСТаС тастаасСтТАдАдаСстасаатТатАСТАТатат тт тсАаСстТ садАасталсасасастатсастаассаА,аааСтСАааАтТо тататосстаасттТасСсАтотТасСсАдаССАСстасСсасСтстТасСА асдсасеасстаСАаа,аСАстассстаАастТатавАссТасСос (о;
СсАдастстсСбаАпасССАпАААСАа,аСа|асстсаваТТссСА дасАаса7асстастасАтоталаСс,аСсСавАсАда,аСсасстас атаСАТСТаСАТАСТОААХОаСсСсАсСАа,аСсОСбааСАТаТсттас сАдастТаАСТСсАсасасасСсАадстатастассАасттсаса
ТОАСАССТаАаАтоссСсастасАястасасасхаасастТто саадссассадавАтота,атасаастаасосастосстосат (Є)
ТТТАТСТТТОССССАТССОАТОААСАаСТОААААаСаасСА сса,асстоса,атса,атататстастаААСААТТТТТАСССТАСса
СААаСТАдАдатТасСсАаатапАААаТасАТААСасАСТасАс
ТеСОаСААСТОССАСОААТСТатТаАСАпААСАСаАСТОоСА
АпСаАСАаСАССТАСТОССТаТоСтТоСАСССТаАСАСТИТО
ТАДСССТОаАТТАТОАСАААСАСААдАДИатТСтТАСсасстТассА
АСТСАСССАТСАССОСОССТадастаСССаТСАСАААСАаС
ТПСААСАасСасададаТтатаАСААДаАСССАСАССТаИатоссс стт,;атостасссСстТадалдастастассавассстстТаТтатто
Стат сСССССААДАасСсССАДапАСАСССТаАТаАТСАаСс саАсссССбаАддатаадсстасатаататавАтТататсСсСсСА бвАдспАСССТаААдаТаААаТТСсААттаатАсатааАСасяь сатТапАдАдатаСАСААТасССААаАССАдасс,а,вапАасасА вСАСТАСААСАаСсАСсатАасСсататаатАасСатссСтТСАСС атТСсТасСсАсСАаапАСстТасСстаААтТасСсААааАсаТАСАда
ТтТаСААДВСаТСТоСААСАААдасоСстоавасаСССССАТССАаА
АААССАТСТОСАДАаасСссСАдАасаасАасссСаАаААССАС
Ада,аататТАСАсостТасссСССАТаСсСсаааАТаАдасСТаАССАА вААсСАсатса,асстатаатасстааТСАААСасСТТсСтТАТ ссСАааСсаАСсАтТсассатасалатаааАаАаСААтТасасАс
ССапАаААСААСТАСААДаАССАСасстссатастааАсСтТ сбаАсвастосТсТоСТстТАСАОСАдастоАсСсатааА
СААдадаСАа,сатааСАааСА,ааааААСатсТсТСАТаСТоС стТаАТаСАТОАДСаСТСтТасСАСААССАСТАСАСаСАСААа дассТоТооСсТатсТоСапатТААА
Таблиця 25
Послідовності одновалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.5)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО: 248) - СНІ стастасАаосстассаСАаа,асасАтаттастад,астаатас
СсССАПАдАСсатастастаАтаАдта,воооостаТатостаатА сдасаАтоста7асАастасстассататСАСстТаАСсАасасивас
СсТОАДаСтТАСААДИАдОаСАСАССАдДАСААСсТасатастааос
ААдсвасссаСсататАСТАСаТат ст ТсСАасСтТасААСтТаСс садалатаатсасСсасаААдааАттаасттата|атстст сассСтасАТСТаСАЛАСсССсСсТотТаАааАтТотТастастаСасо астастотаасСАСтТаАсАХатасАттасстостассАасСА ссадсассСапААтТАаСаСАТттасаТ т тСсААсасАцвастТ сестасаостаттасссасСсАдсАасвастаавадаТасСАТСТа
САСАСАСАдасоСАа,аааСсТАпАСАСасстааСАастТаАсСА
СсАдасеСсастАсадатастасиасстаТаттсдадатТадсоСосСа
АвАТТоСАсСсСсапАСстТассасааСсавАаааттоСасАаасСа вАдапАТСТаСтТАаСАССААдсассстсСаТатат остео састоСстТАаСсТоСААатссСАссттасАавасСсАссастаст стбавАТаССтТоаТатаААдасСАТТАТТТТОоСтТаАдаСсСстТатаА сАаатТатоСстТапААтТАаС,апсАасСАСТаАССтТТапАатТасА тТАСТІ ГОССССОСТОТаСсТОСсАатТоСтТоТаСАСТаИТтТАСАСОСС тадеасласатаатадсАаатассСсАа,аСАааСАасставасА
СССАПАССТАСАТСТОаСААСаТтаААССАСАДаСсССАасСА
АСАССАдастасАСААСААсаИатТасААСССААаТсТТаИат «западиною» анти-ЕАР (489), легкий
ВЕОРЕЇ 5РООРАСІ ЇЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІОСРІ ЗМУ МБ
ОРГ АСМУ5БІ ТИС 5УКЕОТКЕЇ МУМАКАСМУММЕРБОЇІ ЕЕГ АВМ
МАСЕСБОБ5БУБІ АГ НІ ОРІ Н5ААСАДАЇ АГ ТМОЇ РРАББЕАВ
МЗАРСЕРОСВГІ НІ 5АСОВІ ЯМНІ НТЕАВАВНАУМ ОЇ ТОСАТ
МмМагЕАМТРЕІРАСІ паСсОсСИаИасаисасеовЕСРЕЇ 5РООЮОРАСІІ ОЇ.
ВОСМЕАОЇ МАОММІ ІОСРІ БМ МОРІ АСМБ5І Та ЗУКЕ
ОТКЕЇ ММАКАСУУУМЕРБОЇ ЕГАВУМАСЕаБаИвмі АІ НОР
І АБААСАДАГАЇ ТМОЇ РРАБЗЕАВМ5ОАБРСОЕОСВІ І НІ 5АСО димерний Пи 4-188І (71- ВІСУНІ НТЕАВАВНАУМ ОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРАСІ пса 1731248) - СІ-Рс-ланцюг з С5аСОСОАВТМААРЗУБІЕРРЗОЕОЇ КЗатАБЗУМСТ І ММЕМРА «виступом» ЕАКМОМ/КМОМАЇ ОБаМОЗОЕВМТЕООЗБКОБТУБІ 55 ТІ ЗК
АОУЕКНКММАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАСЕСОКТНТСРРОСР
АРЕААДСОИРБМУНІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСМУМОМЗНЕОРЕ
УКЕММУ УМВаТмМЕМНМАКТКРАЕЄєОММОТУВУМБМІ ТМ НОЮ
МІ МаКкЕМКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРАЕРОМУТІ РР
СВОЕСТКМОМБІ МС МКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТ
РРМГОБОРОаБЕРІ У5КІ ТМОКЗАМООСММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМН
МУТОКБІ БІ РОК
ВЕОРЕЇ 5РООРАСІ ЇЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІОСРІ ЗМУ М
ОРГ АСМУ5БІ ТИС 5УКЕОТКЕЇ МУМАКАСМУММЕРБОЇІ ЕЕГ АВМ
МАСЕСБОБ5БУБІ АГ НІ ОРІ Н5ААСАДАЇ АГ ТМОЇ РРАББЕАВ 174 мономерний пи 4-18ВВІ. (71- М5АРСРОСВІ І НІ БАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАУ/ОЇ ТОСАТ 248) - СНІ МІСІЇ РЕЕМТРЕІРДАСЇ ССсИа5аИСИБАЗТКОаРОМЕРІ АРОК т
ЗаС,ТААГасСІ МКЩОМЕРЕРМТУМ5МУМ5ОАІ Та МНТЕРАМГ О5
ЗІ М5І 55 ТУРБО СТО МІСМММНКРЗОМТКМОККМЕРК
Таблиця 25
Послідовності одновалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.5)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: о они 222 - 2 (Щ- ,ь , .« . «западиною» ланцюг 2.1.6 Одержання двовалентної націленої на БАР (489) антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій), в якій димерний і мономерний ліганди для 4-188 злиті на С-кінці кожного важкого ланцюга (конструкція 2.6)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-248), розділені (45)2- лінксерами, зливали з С-кінцем Ес-ланцюга з «западиною» людського Ідс21, одержуючи відповідно до схеми, представленої на фіг. 18: Ес-ланцюг із «западиною» людського ІДС, (Саб)2-конектор, людський ліганд для 4-188, ((345)2--конектор, людський ліганд для 4-188В.
Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188 (71-254) і злитий з С-кінцем Ес- ланцюга з «виступом» людського ЇдС21, одержували відповідно до схеми, представленої на фіг. 1Г. Ес з «виступом» людського ІДСа1, ((545)2-конектор, людський ліганд для 4-188.
Полінуклеотид, який кодує димерний ліганд для 4-188, субклонували в рамці зчитування на
С-кінці СН2- і СНЗ- доменів важкого ланцюга людського ЇДСі на ланцюг із «западиною» (Мегснапі НИ та ін. 1998), використовуючи ((345)2-конектор. Поліпептид, який кодує мономерний ліганд для 4-188, субклонували в рамці зчитування на С-кінці СН2- і СНЗ-доменів важкого ланцюга з «виступом» людського ІДС (Мегснапі, 7Ни та ін. 1998), використовуючи (с245)»-конектор.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для фібробласт-активуючого білка (ЕАР), клон 489, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», з «виступом», або з константним легким ланцюгом людського ІДСИ1.
Мутації Рго3З29с1у, І ец234АЇа і І ец235Аїа інтродуковали в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами (МО 2012/130831).
Комбінація: анти-РАР ПиЇдст!і, яка містить димерний ліганд ланцюг із «западиною» з мутаціями У349С/13665/ З68А/У407У, анти-ЕАР пиЇда, яка містить мономерний ліганд ланцюг з «виступом» з мутаціями 53540С/1366МУ, і легкий ланцюг анти-ЕАР, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188 і два ГАР-зв'язуючих Ра (фіг. 4, конструкція 2.6).
В таблиці 26 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності двовалентної націленої на
ЕАР (489) молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес (Кі!) (конструкція 2.6) (ЕАР розділений тример з 2 анти-РАР ГРабр, димерний і мономерний ліганди для 4-188, злиті на
С-кінці кожного важкого ланцюга відповідно).
Таблиця 26
Послідовності двовалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.6)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: нуклеотидна послідовність САСОСТОаСбАа,аСта,астовААдлдаСасас,асвсАа,сАстаатасСАс 175 конструкції анти-ГАР. (4894 ССТОСССОСТСАС,СССТОАСсАСТа тот ,асасСсассаа,асааст
Ес-ланцюг із «западиною») ГТСАССттодасСАасСстТАСассСАаталасСстасстоСсассСсАсвас злитий з димерним пи 44ссСтапйСААлсапАСтасАатааватаСасСАТСАТСССС
Таблиця 26
Послідовності двовалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.6)
ЗЕ
КІ І п ко
МО: 188. (711-248) тотааСсаССАаСАССТАСТАСОЯаССОАСАд,аСсатаАдасасСс ваТТСсАССАТСАСССОвВИаСпАСААСАССААсСААСАСССтТаИТт
АсСстТасСсАаАТтТаАдАсАа,асстасавсасСсаАапАСАССасса татАстТАстасасСсАдасааАдтастса,васаасТТСААСТА ставабАСсАдаваСАСсССтасаТСсАСсАаататсСАа,сСа|астАас
АСсСсААдсасасосостосататоосоостааСССССАаСАОасСА дадасАссАХасааСааСАсА,ассасттавасТсстас тТСсАДССАСтТАСТТОСССОСА,ВСсоСсатаАсСаИтатосСстТасАА сдаса,асласосталсстосаасСсаТасСАСАССТТоСССсасСс стастасд,адатпстаассСтТатАтТАласстадасСАасСатТас тТсАСССОЯТаСсСсТттотАааСсАдасСстТаваСАСССАаАССТАСАТ
СТаСААСИТОААССАСААдаСССАаСААСАССААдсатааА
СААдпчдАааатасвАаСССААадасСТаСаАСААДААСТСАСАС
АТаОСССАсСсОатТассСАаСАССсТАдАд,аСстасааааааАСс
СТСАаТСсТ ОСТ оСССССААДААСССАДасСАСАССсСтТо
АтТаАТСТОССОСОСАСсССССТОАааТСсАСсАТасатаатаатас
АсатаАдаССАСОААСАСССТаАаатСААаТТСААСТааТтТ
АдсатасдссоасатааАааТасСАТААТаССААсСАСААдаС сассоаАдапАдОаСАатТАСААСАаСАСатАссататаатсСА ,ДСатссСсТсАССсатоСстТасСАССАСадстаасСтТаААТаасСАА вОАСТАСААДИаТасСААдаатТСсТоСААСАААлассстаасСас
ССССАТСОАаААААССАТСТСОСААДАаССАдАсаавсСсАасс сбаАпАдАССАСАасаататасСсАссСстасссССАТоССаааАТ адастаАССААпААССАсатсАа,аоссттсата|асасСАаТтсСА
ААдвЧаасСТТстТАТСССАаСОАСАТоОССсСсСавтавАа,атапааАаА аСААТОСОИСсАасСсапАаААСААСТАСААаАССАСассто ссатаставАстоСсадсавастостстТСсСТСаТаАасСАА аСстТСАССатТапАСАдаХдасасатсасАаСАсаасААСаИат
СТСТСАТаСТоСОаТаАТаСАТОАИааСТСТаСАСААССАС тТАСАСОЯСАпАдАасаАдасстотосстаТатстосаватавАаасСо асСсасАддаСсасАХсадапАааАТоСАЧвАасАа,авассстадас таАдаСсСССОаАтТаАтостТастасастаставАсСстСаасСА сааСсАТаИттастода,астаастассСАсасА;Асатастаста
АТсСОАТОССОССССТатТОоСТОаТАСАааСОАТоСТасвАСТОаС стасс,атТатсАСстТаАдСАдаасассСстаАасСтТАСААДадас
АСАССАААдсСАдАСстТаатаатаасСсСААла,аассвасатТатАСТ
АСсСЯатТатстттсАаасСстТавААСстТасСсасасАаатаатавоСася
СсОААдааАттаастстататтотаассСстасАТСТасСАа ссттадаАддасастастассастасАасСтсТаасСАСТаА слатавАатота7асстостасСсадастоСсадааСССасААТАС
СбасСАТТТаЯСаТтТ ТтсСАдсасАасастастасасстатстасс свасСсАасдаастасоаАаТасСАТСТаСАСАСсАпАдааССАса аСстТАпАСсАСсасстааСАаСсТаАСАСАаасааСастАСАС,тТа стасасстаттСсАд,аХатаАсоСсССаАаАтоСАасСсавос тасваСсс7ссАасаСсавАттаавосабааАапАТСТАпАпАОаа вАСССаААСстТаТатосСссСтТаАСадтосА,аоссасвса7аста|астацвА
ТотТОАОАСсАавасААдтТатсасссАаастаатаасСТСАСААТ стастастаАттаАС,асАосттадасТааТАСТОСОаАСс сл,асастааСса,ассататостаАастасасваАсСТаТатссСтТА
СААДАДпААДаАТАСААДААСЧААСстТасатаатаастАдАастас сатТатАСТАТОТаТтттттсАдаСтТапААСстТадсасацвата стаастасасаАасасастАасаАтоТтатосстаасТсТас
Таблиця 26
Послідовності двовалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.6)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО:
АТоТаСсАасССсАСТОСОЯСТОТаСТОСТОаСасСА,асСстТасАСТ састотАастатавАССсТасСссСАсСсАаасстотлаСадасосс
АвАдАдсАдасасстсаааТСсСАда,асАсасстастасАТС тад,аСсасСсасАсд,асасстаацвАаТасСАТСТаСАТАСТОА дассда,адассСсаасАатастаасАаастаАстсАсасавасо
ААСТОаТаСТОСОСАСсТатттоасСсатаАСАССТОаАСАТОСССТ ассапАСТОа аслдастаслдаСста|астовААдлдаСсааСоасвсАасасАстаавтасАс сстасссасСсдасстаАсАстатстасассасСАасСааст тТсАССТТсАдаСсАасСтТАСассСАтТаласСстасатоСсассСАсвас ссстаасСсАд,вавАСТавААТОаааТатоСасСсСАТСАТССИС тотааСсаССАаСАССТАСТАСОЯаССОАСАд,аСсатаАдасасСс ваТТСсАССАТСАСССОвВИаСпАСААСАССААсСААСАСССтТаИТт
АсСстТасСсАаАТтТаАдАсАа,асстасавсасСсаАапАСАССасса татАстТАстасасСсАдасааАдтТастсааСаасСТТСААСТА ставабАСсАдаваСАСсССтасаТСсАСсАаататсСАа,сСа|астАас
АССАДОССасСсСАТтоИаТтСсттоССССстТааСАСССТОСТОСА дадасАссттасасвасСАсХассаоостасвастасстась т
СААдаСАСТАСТТССССОААдсСссеаталссататсатасААс тЄбАсасасссСстАСсСсА,аСсвасаТасСАСАССТттССсаастТа
ТОоСТАСАИаТОСТСАаОАСТСТАСТОоССТСА,аВСсАсССсаТатаат сдссатассстСАасАааСставаСАСССАЧАССТАСАТС
ТтТаСААССТОААТСАСАдасссАасСААСАССААда,аа! Тасяс
ААСААДАаТТаАДаСССАААТСТТатаАСААААСТСАСАСАТ ассСсАссатасСсСАаСАССТАддастасаавасвасАссат нуклеотидна послідовність УТ СТТОСТСТТОСССССАААДАСССААЛОСАСАСССТСАТ анти-ЕАР. (489)-Ес-ланцюг з Є ТоТоССосАСоССТОоловтоАсАтТасотоотостовАС 176 | «виступом» зпитий з СТОАСССАСОДАСАСССТИАСОТСААСТТСААСТОСТАС мономернимни А-1ВВІ. (л1- атОобАсоОсОтОобАСОТОСАТААТОССЛАВАСЛАЛОССО 248) СсассдапАдаСАаТАСААСАаСсАСсатасса,ататаатСАас аТоСсТсАсСатсСсТасСсАССАаа,ааАСстТаасСстТаААТааСАдсаИ
А,ТАСААДИТасААпаТтсТоСААСААдасостаавсаСосс
САТСОАСААААССАТСТОСАААаССААдАасСа,аавсАассссс
АСААССАСАааататТАСсАсоста|асссєтєтТасСАаАаАТОаА аСстТаАСсСААаАХдАсСсАасататостатаататстааТСАДОа васТстТАССССАаСаАТтТАТсОаСсСсастТаслатасаАадасСА
АсСЧаСссСАасСсстТаАдаААСААСТАСААЧАССАССССССсСтТаИат а,аставАСсдасСсаАдСаасСАасСТ СТ оСтТатАСТОСАДАСТОа
АсСсатапАСсАдсАХасса,астасоАаСАасасасасСААСсаТтатто дастасдаСсатТаАтТаСАСсасАааСсССсТасСАСААССАСТАС
АСССАСАдАХсатТосСстадассталасоссаваСасиа,сасиаас а,ваддаСапд,сАХапАсадтоСАсасАаАасавооСстАаста дассССОпАТтТОАтТоСсТаставАастаставАаостасааСАца аСсАТОТ"ІТТОСТСоАЛаСсТааТа;таасСССАаААдСсата|астастаАТ
СбаАТОССССССТОтТОоСстТааТтТАСсАаСаАтоСстасАстааст сеасататСсАСстТаАСсАд,аасаасстАасСтТАСААдаАасСАС
АССААДАСАдАстТаатаастааСсСАдаасосаааТатАСТАС ататстТтСсАасСстапААСстТаС,асАсАаатаатаасСаосс
АдаспАТоТасастТотататтотаасссСстТасСАТтСтТасАсасс
ТотТаАпАдасастаставосаоасСАасТТааСАСТадсСА
Таблиця 26
Послідовності двовалентної націленої на ЕАР (489) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 2.6)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: ставАТСТаССТОСТаСсСАаССстТоС,аАасСассСаавААТАСаССЯ
САТТТОСОИТТТСААдсСаСАасастТа7астасасста,атстассстс ссАдсАасаставаАатТасСАТСТаСАСАСАЧСАсСасСАаИсо тТАВАСАСОЯаСсСсСТааСАаСТаАСАСАа,Саа,СбастТАсАатаст сесеасстаттсАд,сдатаАССсСССаАаАтоСАаа,асСааосСста анти-ЕАР (489), легкий
ЕМО ЕЗОСОСОИЇ МОРОСБІ ВІ БСААЗИаєТтЕ5ЗУАМОЗУУВОАР акагЕмУЗАПаЗадетииАрзУКОаВЕТІЗВОМЗКМТІ МО
ММ5І ВАЕОТАУУУСАКОамМ РОСС ЕМММУаОСсТІ МТУ5БЗАЗТК
СРОМЕРІГАРЗЗКЗТЗаатААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБЗММЗИАЇ.
ТЗамуНтТЕРАМІ О55О01 51 55УМТУРЗББІ СИТО ГМІСМУМНК
РОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕААСИРБЗМУНІ ЕРРКР
КОТ МІЗАВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМВИаМЕМНМА
КТКРЕЕЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОВУ МОКЕУКСКУЗМКА
Гад4РІЕКТІЗКАКИІОРАЕРОМСТІ РРОВОЄІ ТКМОМБІ САМ анти-ЕАР (489)-Ес-ланцюг із КОЕМРООІАМЕМЕЗМИОРЕММУКТТРРМІ О5БОСОЗЕРІ УК Т 126 | «западиною», злитий зі МОКЗАМ ОСС ММЕЗСОММНЕАЇІ НМНУТОКОБІ 5І БРОСОСОСО У димерним Пи 4-188І (71- аспасевВЕаРЕЇ 5РОЮРАСІ ЇЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІрарР 248) І БМУУБОРИЇ АСУБІ ТИС 5МКЕОТКЕЇ УМАКАИМУММУББО
ГЕСААУМАСЕаБавмвбі АІ НІ ОРІ ВБААСАДАГАЇ ТМ РР
АЗБЗЕАВМЗАРСОРОСВІ І НІ БАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАМО
ГТОСАТМІ СІ ЕВУТРЕІРАСІ СасИОССИВОСКОЯСОВЕСРЕЇ 5РООР
АСИП о ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІВаРІ БМ МОРГ АСМУБІ Та
С,І ЗМКЕОТКЕЇ ММАКАСУМУУЕРОЇ ЕІ АВУМАсЕаЗавУві
АІ НГОРІ ВБААСАААЇГ А ТМОЇ РРАБЗЕАВМЗАРаРОСВІ
НІЗАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАУОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕЇІР да
ЕМО ЕЗОСИОИЇ МОРОСБІ ВІ БСААЗИагєТЕ55УАМОЗУУУВОАР акагЕмУЗАПаЗадетииАрзУКОаВЕТІЗВОМЗКМТІ МО
ММ5І ВАЕОТАУУУСАКОамМ РОС ЕМ пОСТІ МТУЗБЗАЗТК
СРОМЕРІГАРЗЗКЗТЗаатААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБЗММЗИАЇ.
ТЗамуНтТЕРАМІ О55О01 51 55УМТУРЗББІ СИТО ГМІСМУМНК
РОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕААСИРБЗМУНІ ЕРРКР анти-гАР. (489)-Ес-ланцюг з КОТГМІЗАВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМВИМЕМНМА «виступом» зпитий з КТКРЕЕЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОВУ МОКЕУКСКУЗМКА 127 мономернимни 4-4ВВІ. (71- ІГаАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОММУТІ РРСОВОЕТКМОМУБІЛ М/С М 248) КагмРЗОІАМЕМЕЗМИООРЕММУКТТРРМІ ОБОСЗЕРІ УК Т
УмОоКБеАМОССаММУЕ5СЗУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І ЗРО, СОО сасазвВЕСРЕЇЗРООДРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ Прар
І БМУУБОРИЇ АСУБІ ТИС ЗМКЕОТКЕЇ УМАКАСУУМУЕБО
ГЕСААУМАСЕаБавмвбі АІ НІ ОРІ ВБААСАДАГАЇ ТМ РР
АЗБЗЕАВМЗАРСОРОСВІ І НІ БАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАМО
ГТОСАТМІ СІ РЕВУТРЕІРАІ. ланцюг 2.2 Одержання «ненацілених» антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний людський ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес (контрольні молекули)
Додаткові контрольні молекули в разі контролю А і Б одержували відповідно до методу, описаному вище в прикладі 1.4. Двовалентний варіант (контроль В) одержували аналогічно до двовалентних конструкцій 2.3 і 2.6, а одновалентний варіант (контроль Д) одержували аналогічно до конструкції 2.5 (яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-248)), з єдиною відмінністю, яка полягає в тому, що анти-ЕАР зв'язуючий агент (МН-МІ) замінювали на антитіло зародкової лінії, позначене ОРА7, яке не зв'язується з антигеном.
В таблиці 27 представлені кКДНК їі амінокислотні послідовності двовалентної «ненаціленої» (ОР47) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (контроль В). В таблиці 28 представлені кКДНК і амінокислотні послідовності одновалентної «ненаціленої» (ОР47) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кі!) (контроль Д).
Таблиця 27
Послідовності двовалентної ненаціленої на ЕАР (ОР47) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (711-248) в злитті з Ес (Кі!) (контроль В)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: сасатасСсААата,аттаса,аттасаааАаасасттааТАСАаС стссвессатосстаАааАстотстатасаасстоСасАТТ
САССТттАаСсАатТАтТассСАТталастасатоСбассСАсааст ссАса,авАдассастасаАстасватстсАасСтТАТТАа,ТастТ датаатапТАаСАСАТАСТАСОЯСАпАСстоСсатадлааас сааЙТТСАССАТСТОСАСАСАСААТТССААСААСАСаТстат
АТотТаСАСАТаААСАаСсСстТадс,сАаа,асСс,сАа,ааАСАСа,асса
ТАТАТТАСТаОТаСОСАААлсСОИасСА,СасАТтТТаАдстТАСстТасися
ССААааААсоСстасатСАссатстосАаТастАаСАССААДС сессосстосатапсосоостаассСССАаСАаСААаАасСА сслассвасбссасСАсАаассасттстасастассТасТСААца
АСТАСТТОССССОСаСсСОоСсСсатаАссататоСтасААдсАаСась дасостаАсстоссасатасСАСАССТТОСССООЯССЯВТасСтТа сАсаатстааостатАтаа,асстадасСАаа,аСсатасТСАСса тасстстТАдаСсАдасставаСАСССАСАССТАСАТСТаСАА
СатаААССАСААасСссССАаСААСАССААаа ТапАСААСаАА сатапАаСССААдадасСстассАСААААСТСАСАСАТаСос нуклеотидна послідовність АсСсСОСсТтассСАаСАССТаАдАа,астасаа,асасаАсСатСАатТ конструкції ОРА7-Ес-ланцю СТТОСТСТТОСССССААДАДАСССАДаСАСАСССТСАТОаАТО 177 із «западиною», злитий з тосса,авАСсСсСсСстТадсаатТСАСАТОСЯТОСТасТасвАСаТтаА димерним Пи А-1ВВІ. (71- ссСАСаААаАСоСстТадааТСААаТТсААСсТОастАСсаИтас 254) АдссасатасАдааТасСАТААТаССААпАСААдАассасвися
АсадаСсАаТАСААСАаСАСсатАссата,атаатА,аСатост
САССОЯТОоСтТасСсАССАСсСаАСстТааСсТаААтТааСААласАсатТА
СААД!СТтасСААДИаТСТоСААСАААда,асоСстоваТаТсасссСсСсСАТС пАпААДААССАТСТОСАААаССААДАсааСАаССССпАцАА
СсСАСсАСсСатТатасАсоСстасссССАТОоССЯвааАтТаАдасСтТаА
ССААпААССАСса7атсАаа,ассттатасраСАаТСАААс,аастт
СстТАТСССАаСОсАСАТСЯССОЯТтОаспСАатТасаАпАасСААТаС ссдасСапАпААСААСТАСААаАССАСсасстоссатаст савАСТоОСаАссчсастостєттсєтСатаАаСААастСАСс стапАСААдаАааСАасатасоАаСАаапапААСаТтстТсСтТСА тастсСатаАтТасСсАТаАХСастстТасСАСААССАСТАСАСаС
АвААаАаа,ассоттосстаттосасатасвАа,ааосасацАА ссасАаасАсаАапАтТоСАаАс,САаа,сааооствАдастаАасо сСбаАТтТаАТОСТаСТОСАСТаСТОСАССТаСсСО,ваСАсаасСАТ стптастоластаастаасССАсСААСсатастастаАТСаАТ сессоссстатостаатТАСсАааСаАатостасастаа,астаасСсоя татсАСстТаАСАасасасасстаАасСтТАСАААпАапАСАССА
ААсАдАстТастастааоСААласаССаасататАСТАСИатТтаТтт
Таблиця 27
Послідовності двовалентної ненаціленої на ЕАР (ОР47) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (711-248) в злитті з Ес (Кі!) (контроль В)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО:
СсттСсА,аСстТасАаастасСссасаалатаастаассавасСсАдас
АТСТОССТОТОТаИтотТотасооСстТасАатотТасаассСстТотТалд чвААдасастастаасастасАаастстааСАСТаАСАстТасА тстасстостасСсАдастоСосАвассСацААТАС,СОИСАТТТ авааТТСсААвасСАсастастасАасстаттассаасССАСА сестасадатТасСАТСТасСсАСАСАасСАааасСАасаастТАсАСс
АсасстааСсАаСсТаАСАСАа,асаСастТАсАаатастасвасст аттбАдадатаАсССсССаАаАттоСсАассаасстассттст
СсСАДСАдДасСсаАдАдс,аасасвсАаасСааАатстасвсасааАасА тЄСтТАааАдадапаАСССаААстТаТатосссСтаАСаАТоСАаСссСа сестаставАтТСсТаАдаАСАасавААтТатсассСАасСсТаатТ васСстТСАСААТатастастАатаАаСсапАСсСсТоТаАасСТас тТАСТоСОАСсСсСсАд,сааста,ссАа,ваавататосСсТаАСстасча (Є)
САСТаТтТоСтТАСАААДСААСАТАСААААСААСтасатастбнсас
СТААДаСстасасТатАСТАТаТатат ПТ ТсАасСстТасААСТ слассассататаастасавАасаастА,ааАтотатато сстаасСсТоТасСАТтотТасаасСсАстТасасттастастаас аСсад,астТасСсАастаастстАстТатавАССТасСссСАССАасСстТ
СстТАд,аСбадааССАпАААдсАаа,аСсассттсаас т СсСАДасАС асстастасАтоталаСсасСсааАсАа,аСсасстаса!атас
А
ТотТаСАТАСТаАдАсССсСсАасСАаа,асоСавСАатТастаасСАаста
АСТоАДасаааСААСстТатастассаАстат тсасСатТаАсСАС
СтТАвАТоСсСТаССОапАСТаССАДаСССТАСаАТСАСАА сАдааТасСААта,аттасаааттаавасавАасвасттайТАСАсаСс стасссаатТоссСтТаАдсАстотстатасдасстоСасАТТ
САССТТТАаСАсТтТАТасСсСсАТОАЛасССсСТасатоСассСАцастТ
СсСсАсСаспААасасастасвсАатасватсТСАастТАТТАСТОаСТ датаатасТАаСАСАТАСТАСасСАаАСстоСатадласас
СсааТТСсАССАТСТОССАСАСАСААТТССААСААСАСаТсСтТаИТт
АТотТасСАпАТаАдАСсАХасстала,аласСс,асАапАСАСаассСа
ТАТАТТАСТИОТаСсСОААдАдассАааСасАТТТаАСтТАСТасас
СсСАДОСААссСсТаатсАсСсатстоаАаТастТАаСАССААДО ваСсСсСАТСССТСТтоСоССТааСАСССТОСТОСААдадасСА й . сстотавсааСАсда,асасооставсастасстааТ САД нуклеотидна послідовність) д і7в в стлоМм» злитий З СТАСТТСССССААССОСТОСАССОТОТСОТООААСТСАСОС мономернимни 4-18ВІ. (л1- 8ссстоАосласоасотосАСАССТТоССвОостТетостАС 254) аТтоСстТсАспАСТСТАСТоССтТоАласСАа,аСсатаатаАССат асостоСсдасАХастапаСАСССАпаАССТАСАТСТОаСААдС ,СТОаААТСАСАДаСССАаСААСАССАДОааТаСАСААСААА
СТТОАаСССАААТСТТатТаАСААДААСТСАСАСАТаСССАС сатассСсАаСАССтТадАлдастасад,аса7авАССатСАсаТсСТТ
ССС ССССССААДАСССАДОСАСАСССТСАТаАТСТОС
СсавАсооСстАдаатсАСАТОаСОСТасТтаастасвсАсатаАасс
АСОАдАсАосСстТадлайТСсААаТТСААСстТаатТАСатааАСа авсатапвАдаатасСАТААТаССААаАСААдАда,аССасСсасаАас асСсАатТАСААСАаасСАСсатАассататаатАяасатТссСстТСАС сатоСстТасСАССАСаАСсТааЙсСТаААТаасСААСаАаТТАСАА аТаСААааТСоТоСААСАААдассСствасассссСАТССАС
Таблиця 27
Послідовності двовалентної ненаціленої на ЕАР (ОР47) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (711-248) в злитті з Ес (Кі!) (контроль В)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО:
АДААССАТСТССААДаССАААдс,сааСАасСосСапАаААССА
СсАд,аатТа|атАСАссСста|асссоссСтасСАпАаАТаДаСтТаАССА
АвААдссАаса7ататостатататтааТСАдапастТТсСтТА сссСбАдасСсаАТАТСОЯССОЯТОасАсСТаасАпАаСААСаасССА асССстТаАпААСААСтТАСААаАССАсссоссстатастасАс дасадссасАастсТосСтТатАСТОСААДАСТОАССИатТась
АСААХдадассаатааСаасСАа,аааСААсатТатСсАасСстТасСА аСбатаАтТаСАСаАдааСССтТасСАСААССАСТАСАСССАСА датосстадассталасосса,аСсасАсаа,асСсвасасААасСа авдаслапАдапАтТоСАсАааАда,асаооСстааСсТАаСоССа
АтТаАТССТаСТОаСсСАСТОСТОСАСсСсСТаСсаа,аСАаасасАТОТТ тастодастаатааСССАспААдсстастастаАтТоаАТаас сссстатостастТАСАдаСаАтоСстасвастаста,7сатат
САСтТаАСсАСИаСсвасстТаАдасСТтАСАААаАДаспАСАССААдАс
ААСТаатасСстТапССАд,сасссвсасатТатАСТАСИаТаТттстт тбАааСстапвАдАдстаСса,асаавАХаста7аастаасоСаасСсаААдааАТС тасстотататтотаассСстТасСАТоТасСАасСсСстТотТадаА дасастастассастасдастотавСАСТаАСАатТасАТО тасстостассдастоСссАаассСапААТАаСасСАТТТОС ат тТсСАДасСсАаса7астастасасстаттасСса,ваСАаАлиас стаавпАсТасСАТСТаСАСАСАсСАИ,ВаСсСАапасСТАсСАСАС асстааСсАаСсТаАСАСАасассастАсАаатастаса7асстат тТЄсАапдатаАСССсССОАпАтосАаассвассТасстстос
ААДСАддасСадА нуклеотидна послідовність во ратленийланщює лиття
ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОСОІ ВІ БСААБИаЕТЕ55МАМОМУВОАР акКагЕММУ5АПИВИаАвТУУАрБУКОаВЕТІЗВОМ5КМТІ МО
ММ5І ВАЕОТАМУМСАКОИМУУ РОС ЕМ ОСТІ МТМ55АЗТК
СРОМЕРІ АРЗОБКОТ5ОаСТАА СІ МКОМЕРЕРУМТУБМУ/М5ИайАї.
Т5ОаМНТЕРАМІ 055021 М5І 55 МРБББІ СТОТМІСМММНК
РОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕАДАСОРОМНЕЇ ЕРРКР
КОТ МІЗВТРЕМТСМУМОУЗНЕОРЕМКЕММ МУрРИМЕМНМА
КТКРАЕЕОММОЗТУАММБМІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМЗМКА
І аАРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМСТІ РРОВОЄЕЇ ТКМОМ5І 5САМ
ОРА7-Ес-ланцюг із КОЕМРЗОІАМЕМ ЕБЄМСОРЕММУКТТРРМІ О5БОСБЗЕРІ МК Т 179 «западиною», злитий з МОК5ВУ ОО ММЕЗСОММНЕАЇ НМНУТОКОІ 5І БЗРОСИаса димерним Пи 4-188І (71- асааЗАЕСРЕЇ 5РОЮОРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММ ПОаР 254) І ЄМУУБОРИЇ АОаМ5І ТІ 5МКЕОТКЕЇ ММАКАИМУУМЕБО
ГЕСВАММАСЕС5аИавм5і АІ НІ ОРІ ВБААСАДАГАЇ ТМОІ РР
АББЗЕАВМ5АРСЕОСВІІ НІ 5АСОВІ ЯМНІ НТЕАВАННАМО
І ТОСАТМІ а ЕВМТРЕІРАСІ РОЕРАБЕНОСИа5ЗЦСсСИасСеВЕСРЕ
І 6РООРАСІ ЇЇ ОЇ ВОСМЕАДОЇ МАОММІ ОСРІ МУ М5ОРОЇ А
СУБ ТИС 5УКЕОТКЕЇ УМАКАЯМУММЕБОЇ ЕГАВУМАСЕ а5а5БМУ5ІАЇ НОРІ В5ААСАДАГАЇ ТМОЇ РРАББЕАВМ5АБИ
ЕОСВІ НІ БАСОВІ УНІ НТЕАВАННАУОЇ ТОСАТМІ СЕ
ВМУТРЕІРАСІ РОРАЗЕ
ОРА7-Ес-ланцюг зі ЕМО ЕБОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААБИаЕТЕЗ5УАМОЗУУВОАР 180 | «виступом», злитий з ака ЕМ М5АПИБИаАЗТУМАОБУКОаВЕТІЗВОМ5КМТІ МО мономернимни 4-18ВІ (71- МЯ5БІ ВАЕОТАУММСАКаТм гаспсЕММм соті МІГМ5ЗАЗТК
Таблиця 27
Послідовності двовалентної ненаціленої на ЕАР (ОР47) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (711-248) в злитті з Ес (Кі!) (контроль В)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: 254) СРОМЕРІГАРЗЗКЗТЗаатААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБЗММЗИАЇ.
ТЗОМНТЕРАМІ ОБ БІ 55БММ ТУР ИТОТМІСМММНК
РОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕААСИРБЗМУНІ ЕРРКР
КОТГМІЗАВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМВИМЕМНМА
КТКРЕЕЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОВУ МОКЕУКСКУЗМКА
І аАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОММУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМУБІ М/С М
КагмРЗОІАМЕМЕЗМИООРЕММУКТТРРМІ ОБОСЗЕРІ УК Т
УмОоКБеАМОССаММУЕ5СЗУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І ЗРО, СОО сасазвВЕСРЕЇЗРООДРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ Прар
І БМУУБОРИЇ АСУБІ ТИС ЗМКЕОТКЕЇ УМАКАСУУМУЕБО
ГЕСААУМАСЕаБавмвбі АІ НІ ОРІ ВБААСАДАГАЇ ТМ РР
АЗБЗЕАВМЗАРСОРОСВІ І НІ БАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАМО
ГТОСАТМІ СІ ЕВУТРЕІРАСІ РОРАЗЕ
ОрРА7, легкий ланцюг див. таблицю 18
Таблиця 28
Послідовності одновалентної «ненаціленої» (ОР47) молекули, яка містить людський ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій), (контроль Д) с-м димерний пи 4-188І (71-248) - СіІ-Рс- Див. таблицю 25 ланцюг з «виступом» мономерний пи 4-18ВІ. (71-248) - СНІ Див. таблицю 25
ОРА7, Есо-ланцюг із «западиною» Див. таблицю 18 80 легкий ланцюг ОР47 Див. таблицю 18 димерний пи 4-188І (71-248) - СіІ-Рс- Див. таблицю 25 ланцюг з «виступом» мономерний пи 4-18ВІ. (71-248) - СНІ Див. таблицю 25
ОРА7, Есо-ланцюг із «западиною» Див. таблицю 18 легкий ланцюг ОРА7 Див. таблицю 18 2.3 Одержання «ненаціленого» людського ЇДС1 як контролю Е
Додаткова контрольна молекула, яку застосовували в аналізах, являла собою «ненацілену» молекулу ОРА7, контрольна зародкова лінія, людський ІДС з мутаціями Рго3З29а1у, І ец234АЇа і
І енг35Аїа для елімінації зв'язування з Есо-гамма-рецепторами, яку одержували відповідно до методу, описаному в публікації Міжнародної заявки на патент УУО 2012/130831.
В таблиці 29 представлені кКДНК і амінокислотні послідовності «ненаціленої» (ОР47) молекули пиїда Ра АГА (контроль Е).
Таблиця 29
Послідовності «ненаціленої» молекули ОР47 пшШдат (контроль Е)
ЗЕОИЮ МО: нуклеотидна сластасСсААататта,асааттасасаАасасттаатТАСАаСс послідовність ставассатосстадаастотостатасдасстоСаасАТТ 181 важкого ланцюга САССТтТАааСАсСТТАТаССАТОДОСТОСЯСТоСсассСАцваТст
ОР47 (пи дат ССаасадАдссаастасасаатациатСсТСАасСстТАТТАСТОатТ
РОГАГА датастааТАасСАСАТАСТАСОЯСАсаАСсТоСатадАдасас
Таблиця 29
Послідовності «ненаціленої» молекули ОР47 пшШдат (контроль Е)
Сас ТсАССАТСТОСАСАСАСААТТССААСПСААСАСсИаСтТаИТт
АТСТаСАСйАТаАдАСАаСсСстТалдаАа,асСаАа,сАСАСаасСсСс
ТАТАТТАСТаОТаСОСАААасСИаСАа,СасАТТтТаАСстТАСсТасИаС;
ССААааААсоСстасатсАсСсатстаАатастАаСАССААС сасбССАТССЯССТоттосооСстТааСАСССТОСТОСААаАасСА сстотасссаСсАсАда,асс,асоставастасстааТСАдааА
СстТАСТТССССОААСССОСТвАСсвататоатасААСТСАСИС аооСбтаАсСсАд,аСссасаТасСАСАССТТоСсСсЯваста|атостТАС атоСстТоАасаАСТСТАСТОССТСоА,ССсА,аСсатаатаАсСат асбоСтоСАааСАааСсттааваСАСССАЧАССТАСАТСТасСААС астТаААТСАСААлаСССАаСААСАССАда,аТацпАСААсСААА аТТаАасСССАААТСТТатаАСААААСТСАСАСАТасСсссСАС са,атассСдасСсАсСстТаАдАдастасааспа,асАсСа,атАатстт
ССТСТТОСССССАААДАСССАДаСАСАСССТСАТОАТСТОоС
СсапАсосСстаАдаатТСАСАТОаСЯТООСТасТа,асАсатаАаСо
АСЧААСАССсСстТаАааТСААаТтТСААСстТаатАсатацАсСа ссстасадасТасСАТААТаССААаАСАдАдасСсасавааАсс асАаТтАСААСАаСАСсатАссатата,атАасСатостСАС са,атоСтасСсАССАаССсАСсТОасСстТаААТааСААааАатТАСАА атТасСсАдаатсТосСААСААдАдассСстоавараосСССАТССАС
ААДААССАТСТОСААдДасССАААаасасАассссвАсААССА сАса7ататАСАсоСстТасоссССАТОСССЯаАтТадаСТаАССА
АпААсСАсСа,атсАаасстаАсстасстааСАААсастТсСтТА тоссАдаСсаАСсАТОСОССЯтТасАаата,ссАсАаСААтТацвасА асбапАспААСААСТАСААаАССАСсасстссатастацА стобаАс,састостсСТоСТСстТАСАаСААдастоАсСата вСАСААСАааСАсатааСАаСАсаапААСатсоТтоТСАТИаС тосатаАтТасСсАТаАдааСтТоТасСАСААССАСТАСАСИаСАСА даласстотосстатстоСааатАдА
НЕ сх сс ННЯ
ЕМО ГЕЗССИЇ МОРОСБІ ВІ БСААЗИаЕТЕ55УАМОУУУВОАР ка ємУЗАІЗавасеГиМАрБУКаВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ О
ММ5І ВАЕОТАУУУСАКазаєриУУусоОатІ МІМУ55ЗАЗТКИаРБ
МЕРІ АРЗЗКЗТЗаИаатАА СІ МКОМЕРЕРУТУБУМЗСИАІ Та важкий ланцюп МНТЕРАМІ О55ОЦ(:І51 55ММГУРБЗББІ ЕТО ГТ МІСМУМНКРОМ 182 ОР47 (пи 19201) ТКМОККУХЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕАДАСОРБЗУНБІ ЕРРКРКОТ
РОИїгАГА) ГМІЗАТРЕУТСМУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМО МЕМНМАКТК
РАВЕЕОУМЗТУВУМ5МІ ТМ НОБУУ/ЛІ МСОКЕУКСКУЗМКАЇ СА
РІЕКТІЗКАКЕОРАЕЕРОММУТІ РРОВОЕБЇ ТКМОМ5І ТС УКавгм
РЗБІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБрОаЗЕРІ УЗКІ Турко
ВМОдаммМЕ5СЗУМНЕАІНМНУТОКОІ І Рак 2.4 Одержання одновалентних і двовалентних націлених на БАР (489) конструкцій, які містять тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес і контрольних молекул
Кодуючі послідовності націлених і «ненацілених» конструкцій, які містять розділені тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес (Кіп), клонували в плазмідному векторі, в якому експресію вставки контролювали промотором МРБМ і який містив синтетичну поліА- послідовність, локалізовану на 3'-кінці СОБ5. Крім того, вектор містив послідовність ОгіР ЕВМ для підтримки епісомальної форми плазміди.
Молекулу, що містить розділений тримерний ліганд до 4-188В в злитті з Ес (Кіп), одержували шляхом котрансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців з використанням поліетиленіміну. Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами. Для конструкцій 2.1, 2.2., 2.4 і 2.5 і відповідних контрольних молекул використовували співвідношення 1:1:1:1 (наприклад, «вектор для конструкції димерний ліганд-
СІ -ланцюг з «виступом»:«вектор для злиття мономерний ліганд -СНІ»: «вектор для анти-ЕАР
Рар-ланцюга з «западиною»:«вектор для легкого ланцюга анти-ЕАР»). Для конструкцій 2.3 і 2.6 і їх контрольних молекул використовували співвідношення 1:1:1 («вектор для пиЇда1-Ес-ланцюг із «западиною»-димерний ліганд»:«вектор для пиЇдс1-Ес-ланцюг з «виступом»-мономерний ліганд»:«вектор для легкого ланцюга анти-ЕАР».
Для двовалентної конструкції 5 застосовували співвідношення 1:1:1 («вектор для важкого ланцюга із «западиною»:«вектор для важкого ланцюга з «виступом»: «вектор для легкого ланцюга анти-РАР»). Людські ІдСї, які застосовували як контроль в аналізах, одержували аналогічно до методу, описаному для одержання біспецифічних конструкцій (для трансфекції застосовували тільки вектор для легкого ланцюга і вектор для важкого ланцюга).
Для виробництва в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 300 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 10 хв при 210 х д і супернатант замінювали 20 мл попередньо нагрітим середовищем СО СНО. Експресійні вектори (200 мкг загальної ДНК) змішували в 20 мл середовища СО СНО. Після додавання 540 мкл ПЕЇ розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с і інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕ!, переносили в 500- мілілітрові збовтані колби і інкубували протягом З год при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 595
Со». Після інкубації додавали 160 мл середовища ЕхсеїЇ, доповненого бмМ І! -глутаміном, 5 г/л соєвого пептиду (РЕРБОХУ) і 1,2мМ вальпроєвої кислоти, і Клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали 1295 ЕРееа 7 і глюкозу (кінцева концентрація З г/л).
Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням протягом 30-40 хв при щонайменше 400 х д. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22 мкм-фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,0195 (мас./ об.) і витримували при 4"с.
Націлені і «ненацілені» антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд ТМЕ в злитті з Ес (Кій) і людський ЇДО1 очищали з супернатантів клітинних культур за допомогою афінної хроматографії з використанням білка А з подальшою гель-фільтрацією. Для здійснення афінної хроматографії супернатант вносили в колонку Марзеїесі Зиге (СМ - 5-15 мл, смола
Зо фірми СЕ Неайсаге), врівноважену буфером, що містить фосфат натрію (20мм), цитрат натрію (20мм) (рН 7,5). Незв'язаний білок видаляли шляхом промивання таким же буфером, використовуючи його в об'ємі, кратному принаймні б об'ємам колонки. Зв'язаний білок елюювали, застосовуючи лінійний градієнт (20 СМ) або східчасту елюцію (8 СМ), з використанням буфера, що містить 20мМ цитрат натрію, 100мМ хлорид натрію, 100мММ гліцин (рН 3,0). При здійсненні елюції з використанням лінійного градієнта здійснювали додаткову східчасту елюцію із застосуванням об'єму, кратному 4 об'ємам колонки.
Значення рН зібраних фракцій регулювали, додаючи 1/10 (об./06.) 0,5М фосфату натрію, рн 8,0. Білок концентрували перед внесенням в колонку Ні оай Супердекс 200 (фірма СЕ
Неансаге), врівноважену розчином, що містить 20мМ гістидин, 140мМ хлорид натрію, 0,01 об.95 Твін2о, рн 6,0.
Концентрацію білка визначали шляхом вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм, використовуючи коефіцієнт молярної екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності. Чистоту і молекулярну масу націленої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кіп), аналізували за допомогою ДСН-ПААГ у присутності відновника (5мМ 1,4-дитіотреїтолу) і без нього і здійснювали фарбування кумассі ЗітріеВіце "м Загтезіаїп, (фірма Іпимйгодеп, США) або за допомогою КЕ-ДСН, використовуючи пристрій Саїїрег Гарспір
СХІЇ (фірма РегКіп ЕІтег). Вміст агрегатів в зразках аналізували, використовуючи колонку для аналітичної гель-фільтрації Т5Кде! 53000 ЗМУ Хі (фірма Тозой), врівноважену рухомим буфером, що містить 25мММ Ке2НРО», 125мМ Масі, 200мМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,0295 (мас./об.) Мамі, рН 6,7, при 2576.
В таблиці 30 узагальнені дані про вихід і кінцевий вміст мономерів націлених на ЕАР (489) і «ненацілених» антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний 4-188ВІ в злитті з Ес (КІВ) і контрольних молекул.
Таблиця 30
Дані біохімічного аналізу націлених на ЕАР (4В9) і «ненацілених» антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний 4-1ВВІ в злитті з Ес (Кі!) і контрольних молекул - оконтрольВу(двовалентний). 77777711 11117198 126
Приклад З
Одержання, очищення і характеризація 4-188 5 Послідовності ДНК, кодуючі ектодомени 4-18В8 людини, мишей або мавп ціномолгус (таблиця 31), субклонували в рамці зчитування з СН2- і СНЗз-доменами важкого ланцюга з «виступом» людського ІДС (Мегспапі та ін., 1998). Інтродуковали сайт розщеплення протеазою
АсТЕМ між ектодоменом антигена і Ес людського Ідсі. Амі-мітку для направленого біотинілювання інтродуковали на С-кінець конструкції антигена-Ес з «виступом». Комбінація конструкції антиген-Ес-ланцюг з «виступом», яка містить мутації 5354С/1366МУ, з Ес-ланцюгом із «западиною», яка містить мутації У349С/13665/ 368А//407М, дозволяла створювати гетеродимер, що включає одиничну копію ланцюга, яка містить ектодомен 4-188, з одержанням мономерної форми зчепленого з Ес антигена (фіг. 58). В таблиці 32 представлені кДНК і амінокислотні послідовності злитих конструкцій антиген-Ес.
Таблиця 31
Нумерація амінокислот ектодоменів (ЕСО)) антигена та їх походження
Таблиця 32
КДНК і амінокислотні послідовності молекул, які містять мономерний антиген в злитті з Ес(Кій)
ЗЕО
ІО Антиген Послідовність
МО:
САСААААСТСАСАСАТаСССАСсСсВтТассСАасСАССТадАС тоставасапАССатсАатТсСТ ССС ССССССАДААСС
САДАСАСАСССТСАТаАТОТОССОЯВаАССССтТаАсСаИТтсСАСА тасатеастеаставАасстаАаССАСаААаАсоСстаАавато
ААаТТСсААСТОСТАСОатТасАСссаоатааАс,аТасСАТААТ
ВССААдВАСААддассасаапАапАаСАаТАСААСАаСАССИ нуклеотидна послідовність тАесататастода,аса,атостАсСсатосТасСАССАС,САСТ
Рс-ланцюга з «западиною» сасСтТаААтТаайСААасАсТАСААаТасСААааТтсТоСААСА
ААДЧСССТоССАассСССАТСС,САСААДААССАТСТОСАААСС
САДАдсс,сасАассССаАпААССАСАасататасСАсостасс
СоСАТОССОСОСОаАТаАдаСтТаАССААСпААССАватсАассто тса,атасасСсАаТСАААаасСТСсТАТоССсАасСаАСАТСИаСсСаИ таслатассАаАаСААтТасаСАа,аССацАсААСААСТАСА
АаАССАССЯССТОССЯТОСТаСАСТОС,АСсваТстосттсттТ сстоеа,атадаСАдастсАсСсатасАСАд,адасАааатайсСА
Таблиця 32
КДНК і амінокислотні послідовності молекул, які містять мономерний антиген в злитті з Ес(Кій)
ЗЕО
ІО Антиген Послідовність
МО: абадсаааААсатстстТсАТаСсТоСаТаАтТасСсАТаАСааСтТ
СсТаСАСААССАСТАСАСаСАпаААсСАасстотооСста7тсто
СасатААА стасСАдсаАсооСтасСсАаСААСсТасосєстассцвасСАССТТСТ
ВСаАСААСААССапААССАаАтотТасаасооставсоссс
СААСАаСсттоАааСстТотасссаС,асАсАа,аСса,асАсСстасцАс
АтТотТасСАпАСАстТасСсАада,асвасаТат т САпААСССацпААА слатасдасСсдаСАССАаСААСса,асСавсА,атаспАСТасАСс ссссастосСАТТатотТоассасАа,асссасбтасСсАаСАТтатТасСа дасАдааАстТасСсАда,асАа,аавасСАа,саААСТаАССААпААСца сбтасСсАдсаАастТа7астастсааСАССТТСААС,АССАСАА ссасчвасАатотассасооСстТапсАССААСТатТАаСсСстааАс саСбААсСАсоаТа7астааТСААСааСАССАААСААСвасАс стсататассасоссАа,асостасталтотаттостасава сбАдасаасаталсоостстасссстасСсАаавАадасстас
ССАСТоТоСтТоАааатсаАСаААСАСТТАТАТТТТСАаСОСаС васСТСАСССАААТСТаСАпАСААААСТСАСАСАТаСССАС нуклеотидна послідовність ОТ ЯСССАССАССТОААСТОСТОСОСОСАСССТСАСТСТТ конструкції людський УСТ СТТОСССССАДАЛАСССАДОСАСАСССТСАТОАТСТОС 87 антиген 4-188-Ес-ланцюг з СС АССССТалостсАСАТОСОТОСТОСТОСАСО ГОДОСС «ВИСТУПОМ» АСЧААСАССсСстТаАааТСААаТтТСААСстТаатАсатацАсСа ссатасад,ааТасСАТААТаССААайАСААдАаасСсасавааАсас асАаТтАСААСАаСАСсатАссатата,атАасСатостСАС са,атоСтасСсАССАаССсАСсТОасСстТаААТааСААааАатТАСАА астТасСсААаатСсТоСААСААддассстоССАасССССАТСССАС
ААДААССАТСТОСААдДасССАААаасасАассссвАсААССА сАса7ататАСсАссСстТасссСсСАТаСсСсСвВасАтТадастТаАССА
АаААсСбАса7атса,асстататасстааТСАААвастТстТА тоссАдаСсаАСсАТОСОССЯтТасАаата,ссАсАаСААтТацвасА асбапАспААСААСТАСААаАССАСсасстссатастацА стобаАс,састостсСТоСТСстТАСАаСААдастоАсСата вСАСААСАааСАсатааСАаСАсаапААСатсоТтоТСАТИаС тосатаАтТасСсАТаАдааСтТоТасСАСААССАСТАСАСасСАСА даласстотосстатстоСаааТАААтТоСасАааассСтТаАА
СспАСАТСТТсОСАаСаСССАсСААСаАТТаААТасаСАССсАс тасадсааАтотататАатААСстТассСАастастТАСАТТОСТ асТаАТААТААСАваАдатСАсаАттасаатоостаТатостос
АААТАСТ ТТоТОоСАССаСАсатацпАСААдА,ааАсСта,атаАс
АТАТИОСАСОИаСАСТатАААааТОа п ТСААаАССАсасаААс слХлататТССсТоСАССАаСААтТасАа,аАааТтатаАСстТасАТТТ
СсАсасаТАТСАСТОССТОСОСва,аСАсСАа,атТасСАасСАтТа7атата нуклеотидна послідовність ААСАССАТТаТтТАААСААдааТСсААаААТТОАСАДАДАдАса 88 конструкції антиген 4-18В ТТ ТАААСсСАСТаттасттаваАСАТТТААТОАССАСАА мавп ціномолгус-Ес-ланцюп АССЯТОСаСАТСТОТСсССоСоССТасАСАААСТаТат ст тТасцАТ з «виступом» сапААддатотатасттатаААтТа,саАСаААд,ааАсСАвацАс стаатотарапАССАТСТоСсАааСсСаАССТОТСТоСАсСаАс
СсАТСОСТСОТаСОАССССЯССТОССССТаСОчлсАасАаТссСАса
АСАСТСОТОСОЯаСАСОИТСОпАС,ААСАСТТАТАТТТТСсАаСсОваСс васСТСАСССАААТСТаСАпАСААААСТСАСАСАТаСССАС са,атассСсдасСсАССТаААСсТОоСТСЯасаАСсСатСАатстт
ССТСТТОСССССАААДАСССААДаСпСАСАСССТСАТаАТСТОС
Таблиця 32
КДНК і амінокислотні послідовності молекул, які містять мономерний антиген в злитті з Ес(Кій)
ЗЕО
ІО Антиген Послідовність
МО: ссадсссстадаатсАСсАтТасатаастаатавАсаталиасс
АСЧААСАССсСстТаАааТСААаТтТСААСстТаатАсатацАсСа ссстасадасТасСАТААТаССААаАСАдАдасСсасавааАсс асАаТтАСААСАаСАСсатАссатата,атАасСатостСАС са,атоСтасСсАССАаССсАСсТОасСстТаААТааСААааАатТАСАА астТасСсААаатСсТоСААСААддассстоССАасССССАТССАС
ААДААССАТСТОСААдДасССАААаасасАассссвАсААССА
САССТатТАСАСССТаСССССАТОССОЯСОСАТадасСтТОаАССА
АаААсСбАса7атса,асстататасстааТСАААвастТсСтТА тосСсАавСаАСсАТСОЯСССЯТтасаиатасцАаАаСААтТасвасА асбапАспААСААСТАСААаАССАСсасстссатастацА стобаАс,састостсСТоСТСстТАСАаСААдастоАсСата вСАСААСАаасСАсатааСАаСАсаааААСаТатсТтсТСАТИаС тосатаАтТасСсАТаАдааСтТоТасСАСААССАСТАСАСасСАСА даласстотосстатстоСаааТАААтТоСасАааассСтТаАА
СспАСАТСТТсОСАаСаСССАсСААСаАТТаААТасаСАССсАс стаСсАпйААСАааСтТасСаАСААСстТ,ассаассСайСАССТТСТ ссб,апААдатАСААсосСсататасСсАлдадастассссосСА
ВсСАССТТсАааСсАасАтоааоаасСАасСССААСТасСААСАТ стасадсАаататасасСаасСТАСТТ ОСТ СААпААатТТо тасдасАасСсАСССАСААСОаСсСсаАдстасаАдаТаСАТСИАа састтосАстасставасссСсСбАаТасСАССАаАТаСадаА дасАдотасдадсссавасСАааААСТадСсСААлаСАаасаст асТААаАсСстасаасставасСАССТТСААСаАССАпААСса садссасасататасссассттавсАССААтта,аСАасстТааА
Сс,аааАпАдАдасатастаААААсСайСАССАССпАпААсаА сатостатассассостоссатастатосттсдассстАас
АССАССАТСАСССЯТадоссСстаддаассасвссостаавсоваА
САСТОТСОТаСАСОСТОоСТаАИ,ТОСАССААСАСТТАТАТТТТО
АдачаСсайСТСАСССАААТСТаСАпАСААААСТСАСАСАТ всоССАСССЯТаСССАасСАССТадлАСТоСсСТаавсасявасвАсСиИто конструкція мишачий МЯТСТТОСТСТТОСССССААААСССААОСАСАСССТСАТО антиген 4-188-Ес-ланцюг з "1 СТСССОбАССССТОАООТСАСАТОСОТОСТОСТОСАСО «виступом» таАаССАССААдаАСССстТаАасТСААатТТСААСТаатАСИТтТ свассабатасАсатасСАТААТаССААпАСАддассасс савадссАаСАсаТАСААСАа,аСАСсатАссастатаатСАасСат
СсСстТосАСсСОаСтТоСТасСсАССАСОСАСстТаасСтТаААтТааСАдацАС
ТАСААД!СТасСААДИааТСТоСААСАААаСССтТОССАаСССОССА тТопАСАДААССАТСТОСАААаССАААдасаасАаа,асоССпАс
ААССАСАСОИЯтТатТАСАССсСсТаСССССАТОСССЯЯаАтТаАасСтТ вАССААЧПААССАсСИатсАаа,асстатаатасстай т СААдОаС
СстТстТАТСССАаСаАСАТСОЯССОЯТтацсАаа,атацсИаАаАаСААТ савасдасСаспАСААСААСТАСААаАССАСсасстосСата стааАСстТоСаАСаасСТоСТ СТ оСТоТАСАасСААастоСА сса,атапАСААдсАХдаСАасатасСАаСАасаааААСатсттст
САТОСТОСОЯатТОАтТасСАТаАДаастоТасСАСААССАСТАСАС
ВСАСААдССАаасСсТтТоССстТатотоСасатТАААтоСасАсас
СсТаААСОАСАТСТТОСсСАСассСАпААСаАТТаААТасСАС сАа се Деетентя тнтянннх ТВО КА КЕ
МОМЗНЕОРЕУКЕММ УМВИаМ ЕМНМАКТКРАЕЕОУМО ТУ УМ
Таблиця 32
КДНК і амінокислотні послідовності молекул, які містять мономерний антиген в злитті з Ес(Кій)
ЗЕО
ІО Антиген Послідовність
МО:
ЗМІ ТМ НОМУ МОКЕМКСКМУ5ЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКСООРА
ЕРОМСТІ РРОВОЕЇ ТКМОМУ5І БСАУКОаЕМРБОІАМЕМЖМЕЗМОИО
РЕММУКТТРРМ' ЮОБОравзЕРІ УК ТМОКЗАУМОССМУЕЗОБМ
МНЕАЇІ НМНУТОК5БІ 5І РОК
ГООРСЗМСОСРАСТЕСОММАМОІСЗРОРРМЗЕЗБЗАСИаОВТООІС в
ОСКаТмМЕАТАКЕСЗЗТЗМАЕСОСТРОЕНОСЇ ЧаХИСЗМСЕОсСК
ОСОєЇ ТККОСКОССРаТтТЕМОрОКАаіСсАРМУТМОБІ ВОСКОМ М
МаткКЕНОУУСаРБЗРАВІ 5РАЗЗУМТРРАРАВЕРЕНЗРОМОЕО конструкція людський І ХгОсСаЗРКЗАОКТНТСРРОРАРЕЇ ЇЇ СС РБЗУГБІ ЕРРКРКОТІ 91 |антиген 4-188-Ес-ланцюг. з МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМВИМЕМНМАКТКР «виступом» ВЕЕОУМЗТУВУМУБМІ ТМ НОМ МСОКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІ
ЕКТІЗКАКЕОРРЕЕРОММУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОУБІ УСІ Кам
РЗБІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБрОаЗЕРІ УЗКІ Турко
ВМОдамМмуЕ5СЗУМНЕАІ НМНУТОКОІ 5І РОКИ МОЇЕЕ
АОКІЕМУНЕ
ГОРІ С5МСРАСТЕСОММАБЗОІЇСЗРОРРМЗЕЗЗАСОСОВТСОІСВ
ОСКаТмЕКТтАКЕСЗЗТЗМАЕСОСІЗаУНОСІЇ аАЕСЗМСЕООСК
ОСОєЇ ТККОСКОССРаТтТЕМОрОКАаіСсАРМУТМОБІ ВОСКОМ М
МаткКЕНОУУСаРБЗРАВІ 5РПАЗЗАТРРАРАВЕРЕНЗРОМОЕО конструкція мавпячий ГМЕОйпОаЗРКЗАЮКТНТСРРОРАРЕЇ ЇЇ СС РБЗУГБІ ЕРРКРКОТІ 92 | (ціномолгус) антиген 4-188- МІЗАТРЕМТСУММОУЗНЕОРЕМКЕМИУ МУрИаМЕМНМАКТКР
Ес-ланцюг з «виступом» ВЕЕОУМЗТУВУМУБМІ ТМ НОМ МСОКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІ
ЕКТІЗКАКЕОРРЕЕРОММУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОУБІ УСІ Кам
РЗБІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБрОаЗЕРІ УЗКІ Турко
ВМОдамМмуЕ5СЗУМНЕАІ НМНУТОКОІ 5І РОКИ МОЇЕЕ
АОКІЕМУНЕ
МОМЗСОМСОРОТЕСАКУМРУСКЗСРРОТЕЗБІССОРМОМІСЯ
МСАСУЕВЕККЕСЗЗТНМАЕСЕСІЕЄСЕНСІЇ аРОСТАСЕКОСВАР сом ткОоасктобІ атЕмроматамоАРУТМО5І ВС АЗМІ.
КТаттТЕКОУУСаРРМУЗЕЗРЗТТІЗМТРЕССРОСНОІ ОМ МО конструкція мишачий ЕОГЇ МЕОСИаЗРКЗАЮОКТНТОСРРОРАРЕЇ І ССО РЗМУНБ ЕРРКРКО 93 |антиген 4-188-Ес-ланцюг з ТЕМІЗАТРЕУТСУММОУМЗНЕОРЕУКЕММУ МУХИ МЕМНМАКТ «виступом» КРАЕЕЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОВУ МЕКЕУКСКУЗМКАЇ Р
АРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОМУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМУ5БІ СІ УКОа
ЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБОраОаЗЕРІ КІТ
КЗАМООСММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКБІ 5І РОКИ МОЇ
ЕЕАОКІЕМНЕ
Всі послідовності, кодуючі злиття 4-188-Ес, клонували в плазмідному векторі, в якому експресію вставки контролювали промотором МРБМ і який містив синтетичну поліА- послідовність, локалізовану на 3'-кінці СОБ5. Крім того, вектор містив послідовність ОгіР ЕВМ для підтримки епісомальної форми плазміди.
Для одержання біотинільованих злитих молекул антиген/Бс клітини НЕК293 ЕВМА на експоненційній фазі росту спільно трансфектували трьома векторами, що кодують два компонента злитого білка (ланцюги з «виступом» і «западиною»), а також ВігА, фермент, необхідний для реакції біотинілювання. Використовували відповідні вектори в співвідношенні 2: 1: 0,05 ( «ЕСО антигена-АСТЕМ-Ес з «виступом»:«Ес із «западиною»: «ВігА»).
Для одержання білка в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 400 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х ді супернатант замінювали попередньо нагрітим середовищем СО СНО. Експресійні вектори ресуспендували в 20 мл середовища СО СНО, що містить 200 мкг векторної ДНК. Після додавання 540 мкл поліетиленіміну (ПЕ!) розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с та інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином
ДНК/ПЕЇ, переносили в 500-мілілітрові збовтану колбу і інкубували протягом З год при 37"С в інкубаторі в атмосфері з 595 СО». Після інкубації додавали 160 мл середовища Е17 і Клітини культивували протягом 24 год. Середовище для виробництва доповнювали 5мкМ кіфунензіном.
Через 1 день після трансфекції в культуру додавали їмММ вальпроєву кислоту і 795 Реєеай 1 з добавками, і Клітини культивували протягом 24 год. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням клітин протягом 15 хв при 210 х 49. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22 мкм-фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,0195 (мас./об.) і витримували при 4"С.
Секретовані білки очищали з супернатантів клітинних культур за допомогою афінної хроматографії з використанням білка А з подальшою гель-фільтрацією. Для здійснення афінної хроматографії супернатант вносили в колонку НіТгтар РгоївіпА НР (СМ - 5 мл, фірма СЕ
Неансаге), врівноважену 40 мл буфера, що містить 20мМ фосфат натрію, 20мМ цитрат натрію, рН 7,5. Незв'язаний білок видаляли шляхом промивання буфером, що містить 20мМ фосфат натрію, 20мМ цитрат натрію, 0,5М хлорид натрію (рН 7,5), використовуючи його в об'ємі, кратному принаймні 10 об'ємам колонки. Зв'язаний білок елюювали, використовуючи лінійний рН-градієнт хлориду натрію (від 0 до 500мМ), створеного за допомогою взятого в об'ємі, кратному більше 20 об'ємам колонки, буфера, що містить 20мМ цитрат натрію, 0,01 об.95 Твін- 20, рН 3, 0. Потім колонку промивали, використовуючи в об'ємі, кратному 10 об'ємам колонки, буфер, що містить 20мМ цитрат натрію, 500мМ хлорид натрію, 0,01 об.95 Твін-20О, рН 3,0.
Значення рН зібраних фракцій регулювали, додаючи 1/40 (06./06.) 2М Тріс, рН 8,0. Білок концентрували і фільтрували перед внесенням в колонку Ні ой Супердекс 200 (фірма СЕ
Неайрсаге), врівноважену розчином, що містить 2иМ МОРБ, 150мМ хлорид натрію, 0,0295 (мас./об.) азида натрію, рн 7,4.
Для визначення афінності до людського рецептора субклонували також ектодомен
Зо людського 4-1ВВ в рамці зчитування з амі-міткою (І МОІРЕАОКІЕМУНЕ) і гексагістидиновою міткою.
Очищення білка здійснювали відповідно до методу, описаному вище для містить Ес злитого білка. Секретовані білки очищали з супернатантів клітинних культур за допомогою хелатуючої хроматографії з наступною гель-фільтрацією. Першу хроматографічну стадію здійснювали в картриджі МІМТА Зирепом (5 мл, фірма Оіадеп), урівноваженому буфером, що містить 20мМ фосфат натрію, 500нНМ хлорид натрію, рН 7,4. Елюцію здійснювали з використанням градієнта від 595 до 4595 буфера для елюції, взятого в об'ємі, кратному більше 12 об'ємам колонки (20ММ фосфат натрію, 500нМ хлорид натрію, 500мМ імідазол, рН 7,4). Білок концентрували і фільтрували перед внесенням в колонку Ні оадй Супердекс 200 (фірма СЕ Неайсаге), врівноважену розчином, що містить 2иМ МОР5, 150мМ хлорид натрію, 0,0295 (мас./о6.) азида натрію, рН 7,4 (таблиця 33).
Таблиця 33
Послідовності мономерної молекули людський 4-1ВВ-Нів
ЗЕО
ІО Антиген Послідовність
МО: стасядасАсссСстасСсАааСААСстТасостасСааСАССтСтТасаАСА
АСАДССОСССААССАаАтотТасАаассосТассосСССААСАасСтТТСАс стсотасссаСбавАсдасСсааАоСсТасСаАСАТСТасСАСАСАатасААа саса,атТаттСсАпААСсССапААдАлдаХдатаСсАаСАаСАССАаСААСасс нуклеотидна слатасадстТасСсАассссСсвСастсСАТТИатстасавлассавастасА послідовність сСсАТОТаСО;,ааСАсСаАСтТасСсАда,аСАааааССАааААСтТадсССААаА 94 |людського 4-188- дасастасСсАадасАстастастСаасСАССТТСААСаАССАсСААасиа
Нів саасАТоТОСССОссСстТасАССААСТаТАаСсСсТаваАСааСАдадас стастаайТСсААСаайСАССААДАаААСссасаАасатсататасцассссСА ссостастаадтотаттоставассьсааСсАаасатаАсоостостас (9; сстассдадасдасстааСсСАСТоТоСтТСАаатсаАаСаААСАаИТттАТ
АТ тТсАсасаса,састТсАвассСстТаААСОАСАТСТТОСсАсСассСАСцАА вАТССДСТасССАСОсАдасстопАастсАССАССАТСАССАТСАС
ГООРСЗМСРАСТЕСОММАМОІСЗРОРРМЗЕЗЗАСИЦОВТорІСНОСКИаМ
Е
95 людський 4-1884- ВТАКЕСЗЗТЗМАЕСОСТРОЕНСЇ СХСИСЗМСЕООСКОСОЕЇ тККИасСкКо
Нів ССРатЕМООКАИаіСсАРМУТМОБІ ПВС КОМІ УМЕТКЕНОУУСОаРБРАВІ ЗР
САБЗМТРРАРАВКЕРЕНОЗРОМОЕОЇ ХгОСсССБаї МОІРЕАОКІЕЄМНЕАВА
НнНнННННн
Приклад 4
Біохімічна характеризація націленої на БАР антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-1В88 в злитті з Ес, за допомогою поверхневого плазмонного резонансу
Зв'язування націлених на БАР антигензв'язуючих молекул з рекомбінантним 4-188В, які містять тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кіп) оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК). Всі експерименти на основі ЗРК здійснювали за допомогою пристрою Віасоге Т100 при 25"7С з використанням НВЗ-ЕР як рухомого буфера (0,01М НЕРЕ5, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗмМ ЕДТА, 0,00595 сурфактанта Р20, фірма Віасоге , Фрейбург/Німеччина).
Авідність взаємодії між націленими на БАР або «ненаціленими» антигензв'язуючими молекулами, які містять тримерний ліганд, для 4-188В в злитті з Ес (Кій) і рекомбінантним 4-188 (людини, мавп ціномолгус (супо) і мишей) визначали відповідно до описаного нижче методу.
Дані продемонстрували, що як націлені антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд для 4-18В в злитті з Ес (Кій), так і «ненацелені» (ОР47) антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес (Кіп) зв'язувалися з порівнянною авідністю з 4-188 людини і мавп ціномолгус, але з дуже низькою авідністю з мишачим гомологом.
Молекули, що містять рекомбінантний біотинільований 4-188 людини, мавп ціномолгус і мишей в злитті з Ес (Кіп), безпосередньо зшивали на 5А-чіпі, використовуючи інструкцію зі стандартного поєднання (фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина). Рівень іммобілізації відповідав приблизно 30 КИ. Націлені на ЕАР містять антигензв'язуючих молекули, які містять тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес (Кіп) або «ненацелені» контрольні молекули, які містять ОРА7, пропускали через проточні комірки, використовуючи діапазон концентрацій від 0,39 до 200ОНМ, зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 120 с. Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 180 с.
Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманій в порожній проточній референс-комірці.
Для вимірювання афінності здійснювали безпосереднє поєднання до досягнення рівня, що відповідає приблизно 7200 резонансним одиницям (ВШ), антилюдського Ес-специфічного антитіла на СМ5-чіпі при рН 5,0, використовуючи стандартний набір для амінного поєднання
Зо (фірма СЕ Неєаййсагє). «Захоплювали» націлені на БАР або «ненацілені» антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кіп) в концентрації 5ОНМ при швидкості потоку 30 мкл/хв протягом 60 с на проточній комірці 2. Серійні розведення (1, 95- 1000нМ) людського 4-1ВВ-амі-Ніх пропускали через обидві проточні комірки зі швидкістю 30 мкл/хв протягом 180 с для реєстрації фази асоціації. Моніторинг фази дисоціації здійснювали протягом 180 с і для запуску замінювали розчин зразка на НВ5-ЕР. Поверхню чіпа регенерували після кожного циклу, використовуючи дві ін'єкції по 60 з 10мМ гліцином-НСЇ, рн 2,1. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, одержаної в проточній референс-комірці 1. Для оцінки взаємодії між антигензв'язуючими молекулами, які містять тримерний ліганд для 4-18 в злитті з Ре (КІМ), Її пи4-188 амі Нів, визначали константи афінності на основі констант швидкості шляхом підгонки кривих зв'язування до моделі зв'язування 1:11 Ленгмюра, використовуючи програму Віаєма! (фірма СЕ
Неайнсаге).
Таблиця 34
Підгонка до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра і константи афінності (конструкція 1.1)
Приклад 5
Функціональна характеризація націлених антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес 5.1. Зв'язування з наївними порівняно з активованими людськими РМВС націлених на АР антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес (КІій).
Лейкоцитарні плівки одержували з центру донорської крові Цюріха. Для виділення свіжих мононуклеарних клітин периферичної крові (РВМС) лейкоцитарну плівку розводили таким же об'ємом Ю-ЗФР (фірма сібсо Бу Ге ТесппоЇодіех, каталожний Мо.14190 326). У 50-мілілітрові поліпропіленові центрифужні пробірки (фірма ТРР, каталожний Мо 91050) вносили 15 мл
Нізіорадие 1077 (фірма 5ІСМА ГШПе Зсіепсе, каталожний Мо 10771, полісахароза (фіколл) і діатризоат натрію, щільність доведена до 1,077 г/мл) і нашаровували розчин розведеної лейкоцитарної плівки на Ніхіорадне 1077. Пробірки центрифугували протягом 30 хв при 400 х 9.
Потім РВМС збирали з інтерфази, промивали тричі О-ЗФР і ресуспендували в середовищі для
Т-клітин, що складається з середовища КРМІ 1640 (фірма бірсо ру Пе ТесппоЇІоду, каталожний
Мо 42401-042), доповненому 1095 фетальної бичачої сироватки (ЕВ5, фірма сСібсо Бу іїе
ТесппоЇоду, каталожний Мо 16000-044, партія 941273, оброблена гамма-променями, вільна від мікоплазм і інактивована тепловою обробкою при 56"С протягом 35 хв), 1 об. 95 СішамАХ-Ї (фірма СІВСО Бу І їе ТесппоЇодіех, каталожний Мо 35050 038), 1мММ пируватом натрію (фірма
ЗІСМА, каталожний Мо 58636), 1 об.95 середовища МЕМ, що містить замінні амінокислоти (фірма БІСМА, каталожний Ме М7145) і 5ХОомкМ р- меркаптоетанолом (фірма 5ІСМА, М3148).
РВМСОС використовували безпосередньо після виділення або стимулювали для індукції експресії 4-188 на клітинній поверхні Т- і МК-клітин шляхом культивування протягом 4 днів в середовищі для Т-клітин, доповненому 200 од./мл пролейкіна (фірма Момапів Рнапта 5спмеїі2 да, СНО В -Р-476-700-10340) і 2 мкг/мл РНА Ї (фірма 5ІСМА, каталожний Мо І 2769), в 6- лунковому планшеті для культури тканини і потім протягом 1 дня в б-лунковому планшеті для культури тканини, сенсибілізованим 10 мкг/мл антитіла до людського СОЗ (клон ОКТЗ, фірма
ВіоЇ едепа, каталожний Мо 317315) і 2 мкг/мл антитіла до людського 028 (клон СО28. 2, фірма
ВіоЇ едепа, каталожний Мо: 302928), в середовищі для Т-клітин при 370 і 595 СО».
Для визначення зв'язування антигензв'язуючих молекул з людськими РВМОС 0,1 х 106 наївних або активованих РВМС, які містять тримерний 4-1ВВІ. в злитті з Ес, Додавали в кожну лунку круглодонних 9б-ямкових планшетів для суспензійних клітин (фірма Стеєїпег Біо-опе,
СепПегаг, каталожний Мо 650185 ). Планшети центрифугували протягом 4 хв при 400 х д і 47С.
Супернатант відкидали. Потім клітини фарбували, використовуючи 100 мкл/лунку О-ЗФР, що містить розведений у співвідношенні 1: 1000 барвник з набору ПІМЕ/ЮБЕАЮОФ з фіксуючим блакитним барвником для мертвих клітин (Ріхабіе Віпе Оєай СеїЇ біаіп) для УФ-збудження (фірма І йе Тесппоїодіех, Моіесшціаг Ргобе5, І-23105) або фіксує барвник для визначення життєздатності еє6б60 (фірма еВіозсіепсе 65-0864-18) або барвник з набору ПІМЕ/ЮЕАОФ з фіксуючим зеленим барвником для мертвих клітин (Ріхабіе Сгеєп Оеєай Сеї! аїп) (фірма Гіїе
Тесппоіодієз, Моїієсшіаг Ргобевз, І -23101), протягом 30 хв при 4"С в темряві. Якщо як барвник
ПМЕ/ЮЕАОЮЄ застосовували БАРІ, то цю стадію пропускали. Клітини одноразово промивали 200 мкл холодного ГАСЗ-буфера (0О-ЗФР, доповнений 2 об.95 ЕВ5, 5ММ ЕДТА, рН 8 (фірма
Атгезсо, каталожний Мо Е177) і 7,5мМ азидом натрію (фірма Зідта-Аїагісн, 52002).
Потім додавали 50 мкл/лунку холодного (4"С) ЕАС5З-буфера, який містить різні концентрації, визначені титруванням, антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний 4-1ВВІ в злитті з Ес, і клітини інкубували протягом 120 хв при 4"С, промивали 4 рази 200 мкл/лунку при 47"С ЕАС5- буфером і ресуспендували. Клітини додатково фарбували, використовуючи 50 мкл/лунку холодного (4"С) ЕАС5З-буфера, що містить 0,67 мкг/мл антитіла до людського СОЗ-РегС Р-Суб5.5 (клон ОСНТІ, Ід21 до миші, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 300430 ) або 0,16 мкл антитіла до людського СОЗ-РЕ/Су7 (клон 5РЗ4-2, ІДС1 до миші, фірма ВО РІагтіпдеп, каталожний Мо 557749, партія 33324597), 0,67 мкг/мл антитіла до людського СО45-АР488 (клон НІЗО, Ід01 до миші, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 304017), або 0,12 мкг/мл антитіла до людського СЮО56-
ФІТЦ (клон МСАМТ16.2, Ід2Б до миші, фірма ВО РІПагтіпдеп, каталожний Мо 345811), або 1 мкл антитіла до людського СО56-АРС (клон В159, Іде1 до миші, фірма ВО Ріаптіпдеп, каталожний
Мо 555518, партія 3098894), 0,25 мкг/мл антитіла до людського СЮО4-ВМ421 (клон КЕРА-ТА4, ІДС до миші, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 300532), або 0,23 мкг/мл антитіла до людського СО4-
ВМ421 (клон ОКТА, Ідс26 до миші, фірма ВіоїЇ едепа, каталожний Мо 317434), 0,25 мкл антитіла до людського СОва-АРС (клон КРА-Т8, ІдДО1 до миші, фірма, ВО Рпаптіпдеп, каталожний Мо 555369), або 0,67 мкл антитіла до людського СОва-АРС/Су7 (клон КРА-Т8, ІдС1 до миші, фірма
Віої едепа, каталожний Мо 301016), або 0,83 нг/мл антитіла до людського СОва-ВМ711 (клон
ВРА-Т8, ІдО1 до миші, фірма ВО РПагтіпдеп, каталожний Мо 301044) і 5 мкг/мл кон'югованого з
РЕ Е (аб) 2-фрагменти козячого дО проти людського ІдС, Есу-специфічного АйіпіРиге (фірма
Уаскзоп ІттипоКезеагсі, каталожний Мо 109 116 098 або 109 116 170). Клітини промивали двічі
ЕАСб-буфером. Якщо клітини фарбували фіксуючим барвником для визначення життєздатності, то їх фіксували з використанням 50 мкл/лунку О-ЗФР, що містить 1905 формальдегіду (фірма Зідта, НТ501320-9.51). Клітини ресуспендували в БАС5-буфері і одержували дані на наступний день або в цей же день з використанням пристрою з 5 лазерами
ІЇ5А-Бопезза (фірма ВО Віозсіепсе, забезпеченого програмою ОІМА) або аналізатора з З лазерами Мійепуї Оцапі Апаїулег 10 (фірма Мігепуї Віоїес) і програми РіІом/ до (Ріомлдо Х 10.0.7).
Якщо застосовували фарбування САРІ для виявлення мертвих клітин, то їх ресуспенд увалив 80 мкл/лунку РАСЗ-буфера, що містить 0,2 мкг/мл БАРІ (фірма Запіа Стги? Віоїес, каталожний Мо
Зо Зо-3598), і дані одержували в той же день за допомогою пристрою з 5 лазерами І 5К-Ропезза (фірма ВО Віозсіепсе, забезпеченого програмою ОІМА).
Як продемонстровано на фіг. 6, як націлені на ЕАР, так і «ненацілені» антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес, не зв'язувалися 3 людськими брах -Т-клітинами в стані спокою і не відрізнялися зв'язуванням з СО8»" -Т-клітинами і МК - клітинами в стані спокою, що піддається виявленню. На протиагу цьому, обидві конструкції сильно зв'язувалися з активованими МК, СО8х - або СО4- -Т-клітинами, хоча для останніх виявлена приблизно в 10 разів нижча інтенсивність специфічної флуоресценції порівняно з МК- клітинами і в 20 разів знижена інтенсивність специфічної флуоресценції порівняно з СО8- -Т- клітинами.
На фіг. 7А і 7Б продемонстровано зв'язування конструкцій 1.1-1.10, одержаних відповідно до методу, описаному в прикладі 1, з експресуючими 4-188 активованими людськими СОЮЗ" СОВ8- -
Т-клітинами і експресуючими 4-188 активованими людськими СОЮЗ: СО4 -Т-клітинами відповідно. У таблиці 35 представлені величини ЕСво, отримані для конструкцій 1.1-1.10.
Таблиця 35
Зв'язування на активованих людських СО3-С0О8:-Т-клітинах і СО3-С04--Т-клітинах . ЕСво (НМІ ЕСтво (НМІ
Таблиця 35
Зв'язування на активованих людських СО3С0О8:-Т-клітинах і СО3-С04--Т-клітинах . ЕСво (НМІ ЕСтво (НМІ
На фіг. 8А і 8Б продемонстровано зв'язування конструкцій 2.1, 2.3, 2.4, 2.5 і 2.6, ОДержаних відповідно до методу, описаному в прикладі 2, на СО4-- і СО8:-клітинах зі свіжої людської крові і на активованих експресуючих 4-188 СбО4--Т-клітинах і СО08:-Т-клітинах відповідно. Дискримінаційні вікна встановлювали на живі СОО455:003и004: - або СЮО45:003008 -Т-клітини, і будували графік залежності МЕЇ для кон'югованого з РЕ Е (аб) 2-фрагмента козячого дО проти людського І|дс, Есу-специфічного АйЙіпіРиге від концентрацій варіантів націлених конструкцій, які містять розділений тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес, визначених титруванням. У таблиці 36 представлені величини ЕС50О, отримані для конструкцій 2.1, 2.3, 2.4, 2.541126.
Таблиця 36
Зв'язування на активованих експресуючих 4-188 СОа--Т-клітинах і СО8:-Т-клітинах . ЕСбво |нМ| ЕСтво (НМ) 5.2 зв'язування націленої на ЕАР антигензв'язуючої молекули, яка містіть тримерний ліганд для 4-188 в злітті з Ес з активованими мишачими спленоцитами
Мишачі селезінки збирали в З мл ЗФР і одержували суспензію одиничних клітин з використанням м'яких пробірок МАС (фірма Мійепуії Віоїес, каталожний Ме 130-096-334) і м'якого руйнівника МАС5 Осіо (фірма Мікепуї Віоїес). Потім спленоцити фільтрували через 30- мкметрові фільтри для попереднього розділення (фірма Мінепуї Віоїес, каталожний Мо 130-041- 407) і центрифугували протягом 7 хв при 350 х 4д їі 4"С. Супернатант видаляли аспірацією і клітини ресуспендували в середовищі ЕРМІ 1640, доповненому 10 об.95 ЕВ5, 1 об.956 сішамАХх
Ї, мМ піруватом натрію, 1 об.95 середовища, що містить замінні амінокислоти МЕМ, 50мкМ - меркаптоетанолом і 1095 пеніциліну-стрептоміцину ( фірма 5ІСМА, каталожний Мо Р4333).
Культивували 106 клітин/мл протягом 2 днів в б-лунковому планшеті для культури тканини, сенсибілізованим 10 мкг/мл дб вірменського хом'яка до мишачого СОЗє (клон 145-2С11,
Віо едепа, каталожний Ме 100331) і 2 мкг/мл дос серійского хом'яка до мишачому СО28 (клон 37.51, фірма ВіоїЇ едепа, каталожний Мо 102102).
Активовані мишачі спленоцити збирали, промивали в Ю-ЗФР, підраховували кількість клітин і 0,1 х 106 клітин переносили в кожну лунку 9б-ямкового планшета з О-подібним дном, не оброблені тканинною культурою. Супернатант видаляли і клітини фарбували, використовуючи
Зо 100 мкл/лунку О-З3ФР, що містить в розведенні 1: 5000 фіксуючого барвника для визначення життєздатності еєб60 (фірма Віозсіепсе, каталожний Мо 65-0864-18) протягом 30 хв при 4"7С.
Клітини промивали ЗФР і фарбували в 50 мкл ГАС5З-буфера, що містить в різних концентраціях націлених на ЕАР антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для 4-188В в злитті з
Ес (БАР розділений тример 4-1ВВІ), «ненацілені» антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд для 4 1В8В в злитті з Ес (ОР47 розділений тример 4-188І) або МАт до мишачого СО137 у вигляді людського ІдсС1 РЗ290 ГАГА (клон Іор.12.3, фірма ВіохсеїїЇ, каталожний Мо ВЕО169). Клітини інкубували протягом 120 хв при 4"С. Клітини промивали 4 рази
ЕАС5-буфером і фарбували, використовуючи 50 мкл/лунку ЕАСЗ-буфера, що містить 10 мкг/мл очищеного антитіла до мишачого СО16/СО032 у вигляді щурячого ІдсС-Ес-ВіоскК (фірма ВО
Рпаптіпдеп, каталожний Мо 553142, клон 2.4 02), 5 мкг/мл антитіла до мишачого СО8Б у вигляді щурячого ІдДСсабк-ФІТЦ (фірма ВіоїЇ едепа, каталожний Мо 126606, клон УТ5156.7.7), 0,67 мкг/мл антитіла до мишачого СОЗ у вигляді щурячого ІДСарк-АРС- Су? (фірма ВіоїЇ едепіа, каталожний
Мо 100222, клон 17А2), 0,67 мкг/мл антитіла до мишачого СО4 у вигляді щурячого ІдСеБк-РЕ-
Су7 (фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 100422, клон ОК1.5), 2 мкг/мл антитіла до мишачого
МКІ1.1 (лінія СЗН х ВАЇ В/с) у вигляді ІдДСабк-РегСр-Су5.5 (фірма ВіоЇ едепід, каталожний Мо 108728, клон РК13З6) і 10 мкг/мл кон'югованого з РЕ Е (ар) 2-фрагмента козячого дО проти людського дО, Есу-специфічного АйіпіРиге, що має мінімальну перехресну реактивність до бичачим, мишачим і кролячим сироватковим білкам (фірма даскКбзоп ІттипоКезеагсі, каталожний Ме 109-116-170), протягом 30 хв при 4"С. Клітини промивали двічі, використовуючи 200 мкл/лунку холодного ГЕАС5З-буфера. Клітини фіксували, використовуючи 50 мкл/лунку О-
ЗФР, що містить 195 формальдегіду. Клітини ресуспендували в РЕАС5-буфері і одержували дані на наступний день за допомогою пристрою з 5 лазерами І 5К-Рогпіезза (фірма ВО Віозсіепсе, забезпеченого програмою ОІМА).
Як продемонстровано на фіг. 9, націлені на ЕГАР антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд для пи4-1В8В в злитті з Ес (БАР розділений тример пи4-1ВВ1І) ї «ненацілені» антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд для пи4-188В в злитті з Ес (ОР47 розділений тример пи4-1ВВІ. ) не зв'язувалися з мишачим 4-188. Тому активність не вдалося протестувати в імунокомпетентних мишах. Для вивчення механізму дії іп мімо слід застосовувати або гуманізовані мишачі моделі, створені на імунонекомпетентних мишах, або сурогатні молекули, що містять тримери мишачого 4-1ВВІГ,, показані на фіг. 3. 5.3 Зв'язування з експресуючими ЕАР пухлинними клітинами
Для аналізів зв'язування на екпресуючих БАР клітинах застосовували клітинну лінію людської меланоми ММУ-3 (див. Киїйег та ін., Іпії. у. Сапсег, 48 (1), 1991, сс. 85-91), М/М-266-4 (АТТО СВІ -1676) або клітинну лінію МІН/3Т3-пиРАР, клон 39. Для створення останньої клітинної лінії клітини МІН/З3Т3 трансфектували людським БАР (МІН/3Т3-пПиБАР, клон 39). Клітини створювали шляхом трансфекції фібробластів мишачих ембріонів МІН/З3Т3 (АТСС СНІ -1658) експресуючою рРЕТК4921 плазмідою, що кодує людський ЕАР під контролем промотора СММУ.
Клітини підтримували в присутності 1,5 мкг/мл пуроміцину (фірма ІпмімосСеп, каталожний Мо: апі-
Зо рі-5). Додавали 0,1 х 1056 експресуюючих ЕАР пухлинних клітин в кожну лунку круглодонних 96- ямкових планшетів для суспензійних клітин (фірма Огеїпег ріо-опе, сеййеїаг, каталожний Мо 650185). Клітини одноразово промивали 200 мкл О-ЗФР і дебрис ресуспендували. Додавали 100 мкл/лунку холодного (472) Ю-ЗФР-буфера, що містить в розведенні 1: 5000 фіксуючого барвника для визначення життєздатності еРіІног 450 (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 65 0863 18) або фіксуючого барвника для визначення життєздатності еБісог 660 (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 65-0864-18), і планшети інкубували протягом 30 хв при 4"С. Клітини одноразово промивали 200 мкл холодного (477) Ю-ЗФР-буфера і ресуспендували, використовуючи 50 мкл/лунку холодного (477) РГАС5З-буфера (0О-З3ФР, доповнений 2 06.95 ЕВ5, 5ММ ЕДТА, рН 8 (фірма Атгезсо, каталожний Мо Е177) і 7,5мМ азидом натрію (фірма Зідта-Аїйайгіспй 52002), який містив в різних одержаних титруванням концентраціях антигензв'язуючі молекули, які містять тример 4-1В8ВІ, в злитті з Ес, з подальшою інкубацією протягом 1 год при 4"С. Після 4 промивок з використанням 200 мкл/лунку клітини фарбували, застосовуючи 50 мкл/лунку холодного (47)
ЕАС5-буфера, що містить 30 мкг/мл кон'югованого з ФІТЦ Е(аб )2-фрагмента козячого ІДС проти людського Ідс, Есу-специфічного АйіпіРиге (фірма дасКбвоп ІттипоВезеагсі, каталожний Мо 109-096-098) або 5 мкг/мл кон'югованого з РЕ К(аб')2-фрагмента козячого ЇдДСї проти людського
Ід, Есу-специфічного АйіпіРиге (фірма даскбвоп ІттипоВРезеагси, каталожний Мо 109-116-098 або 109-116-170), протягом 30 хв при 470. Клітини промивали двічі 200 мкл (4"С) ЕАС5-буфера і потім ресуспендували в 50 мкл/лунку О-ЗФР, що містить 195 формальдегіду. В цей же або на наступний день клітини ресуспендували в 100 мкл ЕРАС5-буфера і дані одержували за допомогою пристрою з 5 лазерами І ЗВ-ЕРопезза (фірма ВО Віозсіепсе, оснащеного програмою
РІМА) або аналізатора з З лазерами Мійепуї Ойцапі Апаїугег 10 (фірма Мігепуї Віоїес) і програми
Ніом до (Ріомуо Х 10.0.7).
Як продемонстровано на фіг. 10, націлена на ЕАР антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес(Кій) (ЕАР розділений тример 4-188В1) (конструкція 1.1), на відміну від «ненаціленої» конструкції, яка містить ОР47-Рар (ОР47 розділений тример 4- 1883, тобто контроль А, ефективно зв'язувалась з експресуючими людський фібробласт- активуючий білок (ЕАР) клітинами меланоми МУ-3 (10А) або клітинами УУМ-266-4 (10Б).
На фіг. 11А показано зв'язування конструкцій 1.1-1.10, одержаних відповідно до методу, описаному в прикладі 1, з експресуючими людський ЕАР клітинами людської меланоми МУ-3, а бо на фіг. 11Б показано зв'язування конструкцій 1.1., 1.2, 1.3 і 1.5 з експресуючими людський ЕАР трансфектованими клітинами ембріональних мишачих фібробластів клітинами МІН/З3Т3-пиЕАР, клон 39. В таблиці 37 представлені величини ЕСво, одержані для конструкцій 1.1-1.10.
Таблиця 37
Зв'язування з експресуючими людський ЕРАР пухлинними клітинами ; ЕСво(нМІ ЕСво (НМ) нших лиш 14111111 11111111 216111111111вив1 11111111 нн п З Я ОО о 81111112 11111111 21811171111111111422 пил ЕТ: Я ПЕ х ПОН ПОЛО
На фіг. 12 продемонстровано зв'язування різних націлених на ЕАР (489) або «ненацілених» конструкцій, які містять розділений тримерний людський ліганд для 4-188-Ес (Кій) з експресуючими людський ЕАР клітинами людської меланоми МУ-3 (фіг. 12А) і клітинами М/М- 266-4 (фіг. 12Б). Конструкції 2.1, 2.3, 2.4, 2.5 і2.6 одержували відповідно до методу, описаному в прикладі 2, а контролі одержували відповідно до методу, вказаному вище в даному описі.
Дискримінаційні вікна встановлювали на живі пухлинні клітини, і будували графік залежності МЕЇ для кон'югованого з РЕ К(аб')2-фрагмента козячого ІДС проти людського ІдСї, Есу-специфічного
АйПіпіРиге від визначених титруванням концентрацій націлених конструкцій, які містять розділений тримерний ліганд для 4-18 в злитті з Ес. В таблиці 38 представлені одержані величини ЕСбо.
Таблиця 38
Зв'язування з експресуючими людський ЕРАР пухлинними клітинами
ЕСво |НМ| ЕСво (НМ) нишнинше шишки 5.4 Функціональна характеризація націлених антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний мишачий ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес (Кій) 5.4.1 Зв'язування з активованими мишачими спленоцитами
Мишачі селезінки збирали в З мл ЗФР і одержували суспензію одиничних клітин з використанням пробірок депіемАСе (фірма Мійепуії Віоїес, каталожний Мо 130-096-334) і діссоціатора депіеМАС5 Осіо (фірма Міпйепуї Віоїес). Потім спленоцити фільтрували через 30- мкметрові фільтри для попереднього розділення (фірма Мінепуї Віоїес, каталожний Мо 130-041- 407) і центрифугували протягом 7 хв при 350 х 4д їі 4"С. Супернатант видаляли аспірацією і клітини ресуспендували в середовищі ЕРМІ 1640, доповненому 10 об.95 ЕВ5, 1 об.956 сішамАХх
Ї, мМ піруватом натрію, 1 об.95 середовища МЕМ, що містить замінні амінокислоти, 50мкМ р- меркаптоетанолом.
Для зв'язування використовували безпосередньо свіжевиділені мишачі спленоцити. Для індукції експресії мишачого 4-1В8В на Т-клітинах мишачі спленоцити активували наступним
Зо чином: 106 клітин/мл культивували протягом 2 днів в б-лунковому планшеті для культури тканини, сенсибілізованим 10 мкг/мл Їдс вірменського хом'яка до мишачого СОЗє (клон 145- 2С11, Віоедепа, каталожний Мо 100331) і 2 мкг/мл дО серійского хом'яка до мишачого СО28 (клон 37.51, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 102102).
Свіжевиділені мишачі спленоцити або активовані мишачі спленоцити збирали, промивали в 0О-ЗФР (фірма сібрсо Ше їесппоЇодіеєх, каталожний Мо 14190-136), підраховували кількість клітин і 0,1 х 106 клітин переносили в кожну лунку 9б6-ямкового планшета з О-подібним дном , не оброблені тканинною культурою. Супернатант видаляли і клітини фарбували, використовуючи 100 мкл/лунку холодного (472) Ю-ЗФР, що містить в розведенні 1: 1000 барвник з набору
ПМЕ/ЮЕАОФ з фіксуючим водним барвником для мертвих клітин (Ріхабіе Адпа Оеєаай Сеї! Заїп) (фірма І їе Тесппоіодіев, І 34957), протягом 30 хв при 4"С. Клітини промивали холодним О-ЗФР і фарбували, використовуючи 50 мкл/лунку холодного ЕАС5-буфера (0О-З3ФР, доповнений 2 об.9о
ЕВ5, 5ММ ЕДТА, рН 8 (фірма Атгебзсо, каталожний Ме Е177) ї 7,5мММ азидом натрію (фірма
Зідта-АїІдгіспй 52002)), який містив в різних концентраціях молекули, що містять тримерний мишачий ліганд для 4-18В в злитті з Ес (Кій), або ЇдДс1 до миші, застосовуваний як контроль ізотипу (фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 400153, клон МОРС-21). Клітини інкубували протягом 120 хв при 4"С, промивали 4 рази холодним Ю-ЗФР і фарбували, використовуючи 50 мкл/лунку холодного БАСЗ-буфера, що містить 30 мкг/мл кон'югованого з ФІТЦ Е (аб) 2-фрагмента козячого (Дб проти мишачого дО, Есгаммау-специфічного (фірма даскзоп Іттипогезеагси, каталожний Мо 115-096-071), протягом 30 хв при 470. Потім клітини промивали двічі холодним
О-ЗФР і фарбували, використовуючи 50 мкл/лунку РАС5-буфера, доповненого 10 мкг/мл очищеного антитіла до мишачого СО16/2О032 у вигляді щурячого ІдсС-Ес-ВіоскК (фірма ВО
РПпагтіпдеп, каталожний Мо 553142, клон 2.4052), 0,67 мкг/мл антитіла до мишачого СОва-АРС-
Су? (фірма ВіоїЇ едепа, каталожний Мо 100714, клон 53-6.7), 0,67 мкг/мл антитіла до мишачого
СОЗв-РегоР-Су5.5 (фірма ВіоїЇ еєдепа, каталожний Мо 100328, клон 145-2С11), 0,67 мкг/мл антитіла до мишачого СО4 у вигляді щурячого Ідс2Бк-РЕ-Су? (фірма ВіоїЇ єдепа, каталожний Мо 100422, клон СК1.5), протягом 30 хв при 470. Клітини промивали двічі, використовуючи 200 мкл/лунку холодного Ю-ЗФР, фіксували, застосовуючи 50 мкл/лунку ЮО-ЗФР, що містить 190 формальдегіду, і ресуспендували в ЕАСЗ-буфері. Дані для клітин одержували за допомогою аналізатора з З лазерами МАСБЗОМЧапі 10 (фірма Міїепуії Віоїес) і програми Ріом/ до м10.0.7 (фірма Ріомо ГІС). Дискримінаційні вікна встановлювали на СО3-С0О8:- або СО3-0043-Т- клітинах і аналізували медіанне значення інтенсивності флуоресценції (МЕЇ) для кон'югованого з
ФІТЦ Е (аб) 2-фрагмента козячого до проти мишачого дО, Есгамма-специфічного АйіпіРиге і
Зо стандартизували шляхом вирахування МЕ! для «порожнього» контролю (без додавання молекули, що містить тримерний мишачий ліганд для 4-188В в злитті з Ес (Кіп)). Будували графік залежності значень МЕЇ від концентрації застосовуваних молекул, що містять тримерний мишачий ліганд для 4-1ВВ в злитті з Ес (Кіп) для характеризації зв'язування з клітиною, з якою зв'язана молекула мишачого 4-188.
Як продемонстровано на фіг. 13, конструкції М.1 і М.2, що містять мишачий 4-18В'Г., а також відповідні контрольні молекули (контроль М.1ї і контроль М.2) зв'язувалися практично з однаковою афінністю з мишачим 4-188В. У таблиці 39 представлені одержані величини ЕСвхо для конструкцій М.1 ї М.2 і контрольних молекул.
Таблиця 39
Зв'язування на активованих експресуючих 4-АІВВ. СОра--Т-клітинах і СО8--Т-клітинах . ЕСво (нМІ ЕСво (нМІ контроль Ма ///7777777771111111111111111110078 Ї7117171717171717117106СсС1С 5.4.2 Зв'язування на експресуючих ЕАР пухлинних клітинах
Для аналізів зв'язування на екпресуючих БАР клітинах застосовували клітинну лінію людської меланоми ММУ-3 (див. Киїйег та ін., Іпії. у. Сапсег, 48 (1), 1991, сс. 85-91), М/М-266-4 (АТТС СВІ-1676) (анти-РАР-специфічний клон 28НІ має перехресну реактивність до мишачого/людському антигена). Додавали 0,1 х 105 експресуючих ЕАР пухлинних клітин в кожну лунку круглодонних 96-ямкових планшетів для суспензійних клітин (фірма Огеїпег бріо-опе,
Сеїївіаг, каталожний Мо 650185). Клітини одноразово промивали 200 мкл О-ЗФР і дебрис ресуспендували в 100 мкл/лунку холодного (472) Ю-ЗФР-буфера, що містить в розведенні 11000 барвник з набору ГІМЕ/ЮБЕАЮСФ з фіксуючим водним барвником для мертвих клітин (Гіїхабіе Адца Оеаа Сеї Зіаїп) (фірма І їе Тесппоіодіе5, І 34957), і інкубували протягом 30 хв при
4"б. Клітини одноразово промивали 200 мкл холодного (47"С) Ю-ЗФР-буфера і ресуспендували, використовуючи 50 мкл/лунку холодного (47"С) ЕАС5-буфера (О-ЗФР, доповнений 2 об.9о ЕВ5, 5ММ ЕДТА, рН 8 (фірма Атгезсо, каталожний Ме Е177) і 7,5мММ азидом натрію (фірма Зідта-
Аїагіспй 52002), який включав в одержаних серійними розведеннями концентраціях молекули, що містять тримерний мишачий ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кіпй), з подальшою інкубацією протягом 1 год при 4"С. Після 4 промивок з використанням 200 мкл/лунку клітини фарбували, застосовуючи 50 мкл/лунку холодного (4"С) ЕАС5- буфера, що містить 30 мкг/мл кон'югованого з ФІТЦ Е (аб) 2-фрагмента козячого (ДО проти мишачого Ід, Есгамма-специфічного (фірма
Уаскбзоп ІттипоКевзеатгс, каталожний Мо 115 096 071), протягом 30 хв при 4"7С. Клітини промивали двічі 200 мкл (4"С ) РЕАС5З-буфера, фіксували, використовуючи 50 мкл/лунку О-З3ФР, що містить 195 формальдегіду, і ресуспендували в РЕАС5-буфері. Дані для клітин одержували за допомогою аналізатора з З лазерами МАСЗО мапі 10 (фірма Мігепуї Віоїгес) і програми Ріом/ до (
Ріомюо Х 10.0.7). Дискримінаційні вікна встановлювали на живі клітини і аналізували медіанне значення інтенсивності флуоресценції (МЕ!) для кон'югованого з ФІТЦ Е (аб) 2-фрагмента козячого дб проти мишачого Ідс, Есгамма-специфічного і стандартизували шляхом вирахування МРЇ для «порожнього» контролю (без додавання молекули, що містить тримерний мишачий ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кіпй)). Будували графік залежності значень МЕЇ від концентрації застосовуваних молекул, що містять тримерний мишачий ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес (Кіп) для характеризації зв'язування з клітиною, з якою пов'язана молекула мишачого 4- 188. Як і очікувалося, конструкції М.1 і М.2, що містять мишачий 4-1В8ВІГ,, зв'язувалися практично з однаковою афінністю з ЕАР, в той час як контрольні молекули не зв'язувалися з ним.
На фіг. 14 показано зв'язування націлених на ЕАР або «ненацілених» конструкцій М.1 і М.2, які містять розділений тримерний мишачий ліганд для 4-188-Ес (Кіп) з експресуючими людський
ЕАР клітинами людської меланоми МУ-3 (фіг. 14А) і клітинами МУМ-266-4 (фіг. 14Б). В таблиці 40 представлені одержані величини ЕСбо.
Таблиця 40
Зв'язування з експресуючими людський ЕРАР пухлинними клітинами . ЕСво (нМІ ЕСво|нМІ мае 77777771 Ї1777717171717171717168111111171171111171717171711115в83777С7С7С7С2С
Приклад 6
Биологічна активність націлених антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для 4-1ВВ в злитті з Ес 6.1. Активація МЕ-кВ в клітинах НеГа, експресуючих людський 4-188
Створення клітин Неї! а, експресуючих людський 4-188 і МЕ-кВ-люциферазу
Клітинну лінію карциноми шийки матки Неса (АТСС ССІ-2) трансдукували плазмідою, основою якої є експресійний вектор рРЕТК10829, що містить послідовність людського 4-188 (Опіргої, код доступу 007011) під контролем промотора СМУ, і ген, що обумовлює стійкість до пуроміцину. Клітини культивували в середовищі ОМЕМ, доповненому 10 об.95 ЕВ5, 1 об.95 сішамАХ-Ї і З мкг/мл пуроміцину.
Трансдуковані 4-18 клітини Неіа тестували по відношенню до експресії 4-188 за допомогою проточної цитометрії: 0,2 х 106 живих клітин ресуспендували в 100 мкл ЕАС5- буфера, що містить 0,1 мкг кон'юЮгованого з РегСР/Су5.5 мишачого ІдСиік, клон 484-1 до людського 4-18 (ВіоЇедепа, каталожний Мо 309814) або контроль ізотипу (кон'юговані з
Регср/Су5.5 застосовується як контроль ізотипу мишаче антитіло (дДСік, клон МОРСОС-21, фірма
ВіоЇ едепа, каталожний Мо 400150), і інкубували протягом 30 хв при 4"С. Клітини промивали двічі
ЕАС5-буфером, ресуспендували в 300 мкл ГАС5-буфера, що містить 0,06 мкг САРІ (фірма
Запіа Сги7 Віоїес, каталожний Мо 5со-3598), і дані одержували з використанням пристрою з 5 лазерами І 5К-ЕРогіезза (фірма ВО Віозсіепсе , програма ОІМА). Здійснювали серійні розведення для створення одиничних клонів з використанням наступного методу: трансдуцуковані людським 4-1В88В клітини НеГа ресуспендували в середовищі до досягнення щільності 10, 5 і 2,5 клітин/мл і 200 мкл клітинних суспензій переносили в оброблені круглодонні 96-ямкові планшети для культури тканини (6 планшетів на кожну щільність клітин, фірма ТРР, каталожний Мо 92697).
Одиничні клони збирали, розмножували і тестували по відношенню до експресії 4-188 відповідно до описаного вище методу. Клон з найбільш високим рівнем експресії 4-188 (клон 5)
відбирали для подальшої трансфекції експресійної вектором для МЕ -кВ-люциферази 5495р
Тгапіисепі НуаоВ. Вектор надавав трансфектованим клітинам як стійкість до гігроміцину В, так і здатність експресувати люциферази під контролем МЕ-КВ-реагуючого елемента (каркасний вектор фірми Рапотіс5, каталожний Мо І КО051 з інтродукованою стійкістю до НуВ). Клон 5 клітин НеГа з людським 4-188 культивували до 7095 конфлюентності. Вносили 50 мкг (40 мкл) лінеаризованого (за допомогою рестриктаз Азеї і ЗаїІ) експресійного вектора 5495р Тгапіисепі
НудВ в кювету модульної системи для електропорації Сепе Риїзег/ МісгоРиїзег з 0,4- сантиметровою щілиною (фірма Віогаа, каталожний Ме 65-2081). Додавали 2,5 х 106 клітин клону 5 Неіа з людським 4-1ВВ в 400 мкл середовища ЮМЕМ без добавок і обережно перемішували з розчином плазміди. Трансфекцію клітин здійснювали за допомогою загальної системи Сепе Риїзег ХсеїЇ (фірма Віогай, каталожний Мо 165 2660), застосовуючи наступні установки: експонентний імпульс, ємність 500 мкФ, напруга 160 В, опір сою. Негайно після імпульсної обробки трансфектовані клітини переносили в 75 см--колбу для культури тканини (фірма ТРР, каталожний Мо 90075) з 15 мл теплого (37"С) середовища ОМЕМ, дополненого 10 об.95 ЕВ5 і 1 об.95 СішамАХ-Ї. На наступного день додавали культуральне середовище, що містить З мкг/мл пуроміцину і 200 мкг/мл гігроміціну В (фірма НКоспеЄ, каталожний Мо 10843555001). Клітини, що вижили, розмножували і здійснювали їх серійне розведення відповідно до описаного вище методу з одержанням одиничних клонів.
Клони тестували по відношенню до експресії 4-188 відповідно до описаного вище методу і по відношенню до МЕ-кВ-люциферазної активності наступним чином: клони клони збирали в селекційнійному середовищі і підраховували за допомогою пристрою СеїЇ Соципіег Мі-сеї! хг 2.03 (фірма ВесКтап СошиМйег, каталожний Ме 731050 ). Густину клітин доводили до0,33 х 106 клітин/мл і 150 мкл зазначеної клітинної суспензії переносили в кожну лунку стерильного білого плоскодонного 96-ямкового планшета для культури тканини з кришкою (фірма Стгеїіпег Біо-опе, каталожний Мо 655083) і як контроль - в звичайний плоскодонний 96-ямковий планшет для культури тканини (фірма ТРР, каталожний Мо 92096) для визначення виживаності і густини клітин на наступний день. Клітини інкубували при 37"7С і 595 СО» протягом ночі. На наступний день додавали 50 мкл середовища, що містить в різних концентраціях рекомбінантний людський фактор некрозу пухлини альфа (ТТ МЕ-с, фірма РергоТеси, каталожний Ме 300-О1А),
Зо одержуючи кінцеву концентрацію "пТМЕ-о 100, 50, 25, 12,5, 6,25 і 0 нг/лунку. Клітини інкубували протягом 6 год при 37"С і 595 СО2 і потім промивали тричі, застосовуючи 200 мкл/лунку О-ЗФР.
Додавали репортерний буфер для лізису (фірма Рготеда, каталожний Мо Е3971) в кожну лунку (40 мкл) та планшети витримували протягом ночі при -20"С. На наступний день планшети із замороженими клітинами і ідентифікуючий буфер (система для аналізу люциферази 1000, фірма Рготеда, каталожний Мо 4550) піддавали відтаванню, доводячи до кімнатної температури. Додавали 100 мкл ідентифікуючого буфера в кожну лунку і планшет аналізували максимально швидко з використанням рідера для мікропланшетів ЗресігаМах М5/М5е і програми 5ойМах Рго (фірма Моїіесшаг Ремісе5). Виміряні одиниці випускання світла протягом 500 мс/лудку (ШК), що перевищують контроль (без додавання гпТМЕ-о), брали за люциферазну активність. Для подальшого дослідження було відібрано клон 26 МЕ-кВ-Ішс-4-1 ВВ-
НеГа, що характеризується найбільш високою люциферазною активністю і значним рівнем експресії 4-188.
Активація МЕ-кВ в клітинах Неїа, що експресують людський 4-188, при спільному культивуванні з експресуючими ЕАР пухлинними клітинами
Клітини Неіа, що експресують МЕ-кВ -люциферазу і людський 4-188, збирали і ресуспендували в середовищі ЮОМЕМ, доповненому 10 о0б.95 ЕВ5 і 1 об.95 СішамАХ-Ї, до концентрацій 0,2 х 106 клітин/мл. 100 мкл (2 х 107 клітин) зазначеної клітинної суспензії переносили в кожну лунку стерильного білого плоскодонного 96б-ямкового планшета для культури тканини з кришкою (фірма Сгеіїпег Біо опе, каталожний Мо 655083) і планшет інкубували при 3770 і 595 СО» протягом ночі. На наступний день додавали 50 мкл середовища, що містить в концентраціях, визначених титруванням, націлені на ЕАР антигензв'язуючі молекули, що містять тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес (БАР розділений тример 4-188В1) або «ненацілені» (ОР47) антигензв'язуючі молекули, що містять тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес (ОР47 розділений тример 4-1881І). Експресуючі ЕАР пухлинні клітини (МУЗ, УУМ-266- 4 або МІН/3Т3-ПШЕАР, клон 39) ресуспендували в середовищі ОМЕМ, доповненому 10 об.95 ЕВ5 і 1 об.95 СішамАХ-Ї, до концентрації 2 х 105 клітин/мл.
Суспензію експресуючих БАР пухлинних клітин (50 мкл, кінцеве співвідношення 1: 5) або тільки середовище Додавали в кожну лунку, і планшети інкубували протягом 6 год при 3770 і 595
СО». Клітини промивали двічі 200 мкл/ лунку Ю-ЗФР. Додавали в кожну лунку 40 мкл бо свіжоприготованого репортерного буфера для лізису (фірма Рготеда, каталожний Мо ЕЗ3971) і планшет витримували протягом ночі при -2070. На наступний день планшети із замороженими клітинами і ідентифікуючим буфером (система для аналізу люциферази 1000, фірма Рготеда, каталожний Мо Е4550) піддавали відтаванню, доводячи до кімнатної температури. Додавали 100 мкл ідентифікуючого буфера в кожну лунку і максимально швидко вимірювали люциферазну активність за допомогою рідера для мікропланшетів бресігаМах М5/М5е і програми бойМах Рго (фірма Моїіесшаг Оемісе5), підраховуючи випускання світла в ШВІ. (одиниці випускання світла протягом 0,5 с/лунку), або за допомогою планшет-рідера для зчитування кількох міток МісюгЗ 1420 (тиїШаре! сошпієг ріаїе геадег) (фірма Режіп ЕЇтеї!) і програми РеїКіп ЕІтег 2030 Мападег, визначаючи випускання світла у вигляді імпульсів в секунду (СРБ), і будували графік залежності від концентрації тестованих конструкцій.
Націлена на ЕАР антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд для 4-188, в злитті з Ес (ЕАР розділений тример 4-188В1І) ініціювала активацію шляху передачі сигналів МЕЛВ в репортерній клітинній лінії в присутності експресуючих ЕАР пухлинних клітин. На противагу цьому, «ненацілений» варіант такої ж молекули не ініціював таку ж дію при застосуванні в будь- яких тестованих концентраціях (фіг.1б6). Зазначена активність націленого 4-188І строго залежала від експресії ЕАР на клітинній поверхні пухлинних клітин, оскільки ніякої активації МЕ-
КВ не вдалося виявити при культивуванні МЕ-КВ-репортерної клітинної лінії з РЕА;-негативними пухлинними клітинами навіть в присутності націленої на БАР антигензв'язуючої молекули, що містить тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес. Дані про виміряні активності конструкцій 1.1- 1.10 представлені на 17, а дані, отримані для конструкцій 2.1, 2.4 і 2.5, представлені на фіг. 18. 6.2. Активація МЕкВ в клітинах НЕК Т293, що експресують 4-188 мавп ціномолгус
Створення клітин НЕК 1293, що експресують 4-188 мавп ціномолгус і МЕкВ -люоциферази
Для одержання вірусоподібних частинок (МІ Р) клітини нирки людського ембріона (НЕК)
Т293/17 (АТОС СВІ-11268) трансфектували з використанням реагенту І іроїесїатіпе? І ТХ з реагентом РІ ОБ м (фірма І Те Тесппоіодіе5, каталожний Мо 15338100) в поєднанні з вектором рЕТА14372, що кодує касету репортерного гена МЕкВ -люциферази-ІВІ5-СЕР (МЕ ІВ-Іс-СЕР) згідно з протоколом виробника. Через б год здійснювали заміщення середовищем ЮОМЕМ, доповненому 1095 ЕВ5, та МІ Р збирали через 4 дня. Свіжі клітини НЕК 2937 трансдукували при конфлюентності 70-80956 за допомогою одержаної конструкції рЕТК14372-МІР ії 4 мкг/мл
Зо полібрена. Клітини культивували протягом 24 год і здійснювали заміну середовища.
Трансдуковані клітини НЕК Т293/17 збирали і серійно розводили до одержання 1 клітини/лунку для скринінгу по відношенню до стабільних одиничних клонів. Одиничні клони стимулювали 25 нг/мл ТМЕ-о; (фірма РерготТесі Іпс., каталожний Мо 300-О1А) в середовищі і піддавали скринінгу по відношенню до позитивного (ЗЕР-сигналу протягом часу з використання системи для флуоресцентної мікроскопії Іпсиуїе 2о00т (фірма Еззеп Віозсієпсе). Після реєстрації СЕР- сигналу клітини тестували по відношенню до люциферазної активності за допомогою набору для оцінки люциферази Мапо Сіо (фірма Рготеда, М1120) згідно з протоколом виробника.
Люциферазну активність вимірювали за допомогою планшет-рідера для зчитування кількох міток Місіог3 1420 (фірма РегКкіп ЕІтег) і програми РегїКкіп ЕІтег 2030 Мападег. Визначали випускання світла у вигляді імпульсів в секунду (СРБ5) протягом 0,5 с/лунку. Встановлено, що клон 61 відрізняється найбільш високим рівнем експресії СЕР і люциферази після активації
ТМЕ-о,, і його також використовували для створення репортерної лінії клітин.
За допомогою описаного вище методу одержували нові МІР з використанням вектора рЕТК14879, що кодує 4-188 мавп ціномолгус і ген стійкості до пуроміцину, і клітинну лінію НЕК 29371 МЕкВ-Пис-СЕР, клон 61 трансдукували при конфлюентності 70-8095 одержаної конструкції рЕТА14879 -МІ Р. ї 4 мкг/мл полібрену. Клітини культивували протягом 24 год і здійснювали обмін середовища. Через 4 дні після трансдукції клітини фарбували кон'югованим з РЕ антилюдським антитілом, що дає перехресну реакцію з 4-188 мавп ціномогус (мишачий Ідсік, клон МОРС-21, фірма ВіоЇедепа, каталожний Мо 309804) в О-ЗФР, що містить 195 ЕВ5, здійснювали сортінг за допомогою РАСЗ (АКІА, фірма ВО) і висівали з розрахунку 5 клітин/лунку в середовище ОМЕМ, доповнене 1095 ЕВ5, що містила 1 мкг/мл пуроміцину (фірма Іпмімосеп, каталожний Ме апі-рг). Вирощені клони тестували відповідно до методу, описаному для оцінки
СЕР ї люциферазної активності, після стимуляції ТМЕ-с ї по відношенню до високого рівня експресії 4-А488 мавп ціномолгус за допомогою проточної цитометрії. Двічі позитивні клони відбирали і тестували по відношенню до люциферазної активності в присутності одновалентної націленої на ЕАР конструкції 2.1 або контролю Б і РЕАР-експресуюючих клітин МУ-3 або УУ/М-266- 4 клітини. Було відібрано НЕК Т293/17- МЕ-кВ-Інс-СЕР-суд4-188 -експресуючий клон 61-13 для застосування в усіх додаткових експериментах.
Активація МЕкВ в репортерних клітинах НЕК 1293/17, що експресують 4-188 мавп бо ціномолгус, при спільному культивуванні з експресуючими ЕАР пухлинними клітинами
Клітини НЕК Т293/17-МЕкВ-Інс-СЕР-суд-18В-експресуючого клону 61-13, збирали і ресуспендували в середовищі ЮМЕМ, доповненому 10 об9У5 ЕВ5 і 1 об.95 СішщамАХ-Ї, до досягнення концентрації 0, 2 х 106 клітин/мл. 100 мкл (2 х 107 клітин) зазначеної клітинної суспензії переносили в кожну лунку стерильного білого плоскодонного 96-ямкового планшета для культури тканини з кришкою (фірма Стеєїпег Біо опе, каталожний Мо 655083) і планшет інкубували при 3770 і 595 СО» протягом ночі. На наступний день додавали 50 мкл середовища, що містить в різних концентраціях, одержаних титруванням, націлені на ЕАР або «ненацілені» антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес. Експресуюючі
ЕАР пухлинні клітини (ММЗ ї УУМ-266-4) ресуспендували в середовищі до досягнення концентрації 2 х 105 клітин/мл. Суспензію експресують ЕАР пухлинних клітин (50 мкл) Додавали в кожну лунку, і планшети інкубували протягом б год при 37 " С ії 595 СО». Принцип аналізу проілюстровано на фіг. 19. Після інкубації клітини промивали тричі 200 мкл/лунку Ю-ЗФР.
Додавали в кожну лунку 40 мкл свіжоприготованого репортерного буфера для лізису (фірма
Рготеда, каталожний Мо Е3971) та планшети витримували протягом ночі при -20"С. На наступний день планшети із замороженими клітинами і ідентифікуючим буфером (система для аналізу люциферази 1000, фірма Рготеда, каталожний Мо Е4550) піддавали відтаванню, доводячи до кімнатної температури. Додавали 100 мкл ідентифікуючого в кожну лунку і максимально швидко вимірювали люциферазну активність з використанням рідера для мікропланшетів ЗресігаМах М5/М5е (час інтегрування 500 мс, без фільтра, враховуючи всі довжини хвиль) (фірма Моїесшціаг Оеємісе5). Визначали випускання світла в одиницях випускання світла (ШКІ) протягом 0,5 с/лунку і будували графік залежності від концентрації тестованих конструкцій, тобто націлених на ЕАР або «ненацілених» антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес. Результати для конструкцій, описаних в прикладі 2, представлені на фіг. 20. 6.3 Аналіз на основі антигенспецифічних СО8:-Т-клітин
Виділення і культивування антигенспецифічних СО8-Т-клітин
Зразки свіжої крові одержували з інфікованого НІ А-А2 ї СММ добровольця. РВМС виділяли відповідно до описаного вище методу. СО8-Т-клітини очищали з РВМС, застосовуючи набір для виділення з використанням негативної селекції людських СО8-ТГ-клітин відповідно до
Зо рекомендацій виробника (фірма Міпепуї Віоїес, каталожний Мо 130-094-156). 10 млн виділених
СО8-Т-клітин ресуспендували в 1 мл стерильного О-ЗФР, доповненого 1 об.95 ЕВ5, разом з 50 мкл міченого РЕ НІ А-А2-пентамера, що містить одержаний з СММ пептид МІ МРММАТМУ (фірма
РгоіІттипе, каталожний Мо ЕО008- 2В), і інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі.
Клітини промивали двічі З мл стерильного Ю-ЗФР, доповненого 1 о0об.95 ЕВ5. Клітини 35 ресуспендували в 1ї мл ЮО-ЗФР, доповненого 1 06.95 ЕВ5, що містить 1 мкг/мл антитіла до людського СЮО8-ФИТЦ (клон І Т8, фірма Абсат, каталожний Мо Ар28010), і інкубували протягом хв при 4"С. Клітини промивали двічі, ресуспендували до концентрації 5 х 105 клітин/мл в О-
ЗФР, доповненому 1 06.95 ЕВ5, та фільтрували через призначене для попереднього розділення
З0-мікрометрового клітинне сито у вигляді нейлонової мережі (фірма Мікепуї Віоїес, каталожний
Мо 130- 041-407). Специфічні для МІ М-пептиду СО82:-Т-клітини виділяли за допомогою ЕБАС5- сортінгу, використовуючи клітинний сортер АКІА (фірма ВО Віозсіепсе з програмою ОІМА), згідно з такими настановами: 100-мікрометрове сопло і маска чистоти сортування. Відсортовані клітини збирали в 15-мілілітрову поліпропіленову центрифужну пробірку (фірма ТРР, каталожний Мо 91015), що містить 5 мл середовища КРМІ 1640, доповненому 10 об. 95 ЕВ5, 1 об.95 сІшамАХ-Ї і 400 од./мл пролейкіна. Відсортовані клітини центрифугували протягом 7 хв при 350 х 9 при кімнатній температурі і ресуспендували в такому ж середовищі до концентрації 0,53 х 106 клітин/мл. Додавали 100 мкл/лунку зазначеної клітинної суспензії в кожну лунку попередньо підготовленого фідер-планшета.
Активовані РНА-Ї опромінені алогенні фідерні клітки одержували з РВМС відповідно до описаного раніше методу (І еміїзКу і ін., 1998) і розподіляли в 96-ямкові культуральні планшети з розрахунку 2 х 105 фідерних клітин на лунку.
Після культивування протягом 1 дня видаляли 100 мкл середовища/лунку з лунки, що містить відсортовані СО8--Т-клітини, і замінювали свіжим середовищем КРМІ 1640, доповненим 10 об.95 ЕВ5 і 1 об.9о5 СІшамАХЯ-Ї і 400 од./мл пролейкіна, під час культивування цю процедуру регулярно повторювали (кожні 2-4 дні). Відразу після того, як починалася проліферація клітин, їх переносили в 24-ямковий плоскодонний планшет для культури тканини (фірма ТРР, 92024).
Клітини регулярно розмножували/розщеплювали з використанням нового препарату фідерних клітин.
Аналіз активації антигенспецифічних СОВ8--Т-клітин бо МУЗ-клітини збирали і промивали О-З3ФР і 2 х 107 клітин ресуспендували в 250 мкл розчинника С з набору для оцінки флуоресценції РКН-26 Рей Ріногезсепсе Сеї! ПпКег (фірма
Зідта, каталожний Мо РКН2бИ). 1 мл розчину РКН2б-Неа-віаіп розводили 250 мкл розчинника
Сб ії додавали до суспензії ММЗ-клітин, яку потім інкубували протягом 5 хв при кімнатній температурі в темряві. Після цього додавали 0,5 мл ЕВ5 і клітини інкубували протягом 1 хві промивали одноразово середовищем для Т-клітин, що складається з середовища АРМІ 1640 року, доповненого 10 об.95 ЕВ5, 1 об.9о СІШамАХ І, мМ піруватом натрію, 1 об.95 якого містить замінні амінокислоти середовища МЕМ і 50мкмМ р-меркаптоетанолом. 1 х 106 МУЗ-клітин/мл ресуспендували в середовищі для Т-клітин і розподіляли на три пробірки. Синтетичний пептид
МІМРММАТМУ (одержаний з бібліотеки ТпіпКрерііде5Ф)) додавали до кінцевої концентрації 1 х 10-
УМ або 1 х 108М ії клітини інкубували протягом 90 хв. ММЗ-клітини одноразово промивали середовищем для Т-клітин і ресуспендували до щільності 0,5 х 106 клітин/мл, вносили (100 мкл/лунку) в 96-ямковий круглодонний планшет для клітинної суспензії (фірма Огеїпег Біо-опе,
Сеїївіаг, каталожний Мо 650185) і інкубували протягом ночі при 37"С і 595 СО». Принцип аналізу проілюстровано на фіг. 21.
На наступний день додавали 50 мкл/лунку середовища для Т-клітин, що містить в різних визначених титруванням концентраціях націлені антигензв'язуючих молекули, які містять тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес. Збирали МІ М-специфічні СО8-Т-клітини, додавали
СЕБА-ЗЕ (складний М- сукциніміділовий ефір 5 (6) - карбоксифлуоресцеїнацетату, фірма
ЗІСМА-АЇагісп, каталожний Мо 21888-25М-Е) до кінцевої концентрації 4Онм і клітини інкубували при обертанні протягом 15 хв при 37"С. Мічення припиняли, додаючи ЕВ5, клітини промивали і ресуспендували в середовищі для Т-клітин до кінцевої концентрації 0,125 х 105 клітин/мл. 50 мкл суспензії зазначених мічених СЕБЕ СО8-Т-клітин Додавали в кожну лунку (кінцеве співвідношення Е: Т - 1: 8). Планшети з клітинами інкубували протягом 24 год, 50 мкл/лунку видаляли і додавали в кожну лунку 50 мкл середовища для Т-клітин, що містить 2,64 мкл/мл стоп-реагенту Гольджі ((зоїді в5іор) (інгібітор білкового транспорту, що містить монезін, фірма ВО
Віозсіепсе, каталожний Мо 554724) (кінцева концентрація 0,66 мкл/мл). Клітини інкубували протягом 4 год і потім планшети промивали 200 мкл/лунку О-ЗФР і фарбували, використовуючи по 100 мкл/лунку (4 " С) Ю-ЗФР, що містить розведений у співвідношенні 1: 5000 фіксуючий барвник для визначення життєздатності (Ріхаріє Міарійу ЮОує) еБ450 (фірма евВіозсіепсе,
Зо каталожний Мо 65-0864), протягом 30 хв при 4"С. Планшети з клітинами промивали 200 мкл/лунку О-ЗФР, після чого фарбували кон'югованими з флуоресцентним барвником антитілами: антитіло до людського СО137-РегСР/Су5.5 (клон 484-1, 401 до миші, фірма
Віо едепа, каталожний Мо 309814), антитіло до людського СЮО8-В8М605 (клон КРА Т8, 91 до миші, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 301012) або 0,67 мкг/мл антитіла до людського СЮОва-
АРС/Су7 (клон КРА-Т8, ДС до миші, фірма Віої едепа, каталожний Мо 301016) і антитіло до людського СО25 РЕ/Су7 (клон ВСО9б, ІдС1 до миші, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 302612).
Після інкубації протягом 30 хв при 4"С клітини промивали двічі, використовуючи 200 мкл/лунку
ЕАС5-буфера, ресуспендували в 50 мкл/лунку свіжоприготованого БохР3 Ріх/Регт-буфера (фірма еВіозсіепсе каталожний Мо 00-5123 та 00-5223) і інкубували протягом 30 хв при 4"с.
Планшети промивали двічі, використовуючи 200 мкл/лунку Регт-буфера (0О-З3ФР, доповненого 2 об.95 ЕВ5, 195 (мас./об.) сапоніну (фірма Зідта І їїТе Зсіепсе, 57900) і 195 (мас./об.) азида натрію (фірма бідта-Аїагісп, 52002), і фарбували, використовуючи 50 мкл/лунку Регт-буфера (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 00-8333-56), що містить 0,25 мкг/мл антитіла до людського ІЕЄМу-
АРС (клон В27, ІДО1 до миші, фірма ВіоїЇ едепа, каталожний Мо 506510) або 0,33 мкг/мл антитіла до людського ІЄМу-ВМ510 (клон 45.83, 901 до миші, фірма Віо едепа, каталожний Ме502543).
Планшети інкубували протягом 1 год при 4"С і промивали двічі, використовуючи 200 мкл/лунку
Регт-буфера. Для іксації додавали 50 мкл/лунку О-ЗФР, що містить 195 формальдегіду. В цей же або на наступний день клітини ресуспендували в 100 мкл/лунку ЕАС5-буфера і дані одержували з використанням проточного цитометра з 5 лазерами І 5К-Еогіезза (фірма ВО
Віозсіепсе, з програмою ОІМА) або аналізатора з З лазерами Мікепуї Очапі Апаїулег 10 (фірма
Мінепуї Віогес) і програми БіІом/ до (РІомлдо Х 10.0.7).
Як продемонстровано на фіг. 22 і 23 для конструкцій 1.1-1.10 і на фіг. 24 і 25 для конструкцій 2.41, 2.3 і 2.4, антигенспецифічні СО8:-Т-клітини на відміну від нестимульованих контролів, характеризувалися підвищеними рівнями поверхневої експресії 4-188 в присутності націленої на ЕАР антигензв'язуючої молекули, що містить тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес (ЕЄАР розділений тримерний 4-188). Зазначена дія 4-188ВГ. залежала від дози і для неї був потрібний
ЕАР-таргетинг, оскільки додавання «ненацеленої» контрольної молекули не впливало на рівень експресії 4-188. Крім того, у Т-клітин, активованих більш високою концентрацією пептиду (1 х 108М), виявлена стійка секреція ІМЕуУ в присутності націленої на БАР антигензв'язуючої бо молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес (БАР розділений тримерний 4
1881). В сукупності ці дані демонструють, що націлена на антиген антигензв'язуюча молекула, що містить тримерний ліганд для 4-18О8 в злитті з Ес, модулює поверхневий фенотип і реактивність антигенспецифічних Т-клітин в залежності від орієнтування. 6.4 Порівняння націлених на клітину і «ненацілених» антигензв'язуючих молекул, які містять мишачий 4-18ВІ в злитті з Ес
Одержували націлені і «ненацілені» антигензв'язуючі молекули, які містять мишачий ліганд для 4-188 в злитті з Ес (ЕАР розділений тримерний мишачий 4-188І і ОР47 розділений тримерний мишачий 4-1ВВ1І) відповідно до методу, описаному в прикладі 1.3.
Для порівняння біологічної активності націлених на клітину і «ненацеілених» антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний мишачий ліганд для 4-188 в злитті з Ес, мічені барвником для оцінки проліферації (РгоїїТегайоп Оує) еРіошитб670 (еВіозсіеєпсе, каталожний
Моб65-0840-90) або барвником фіолетовим для оцінки проліферації СеїТтасе "м (Міоієї СеїЇ
Ргоїїїегайоп) (фірма Сеї ігасег, каталожний Мо С34557) свіжевиділені мишачі спленоцити спільно культивували протягом 3-4 днів в 96-ямковий планшет для культури тканини з О-подібним дном (фірма ТТР, каталожний Мо 92097 ) з прикріпленими опроміненими 50 Гр клітинами МІН/З3Т3-
ПШЕАР, клон 39 (опис процедури одержання див. в 5.3) в середовищі АРМІ 1640 (фірма Сірсо, каталожний Мо 42401-042), доповненому 10 об.95 ЕВ5, 1 об.95 СішамАХ І, їмМ піруватом натрію, 1 об.95 містить замінні амінокислоти середовища МЕМ і 50мкм р-меркаптоетанолом, в присутності 0,5 мкг/мл ЇдДС: сирійського хом'яка до мишачого СОЗ (клон 145-2211, фірма ВО, каталожний Мо 553057), і додавали зазначену перспективну (кандидат) молекулу лікарського засобу в зазначеному діапазоні концентрацій (фіг. 26). Через З або 4 дня клітини промивали
ЕАС5-буфером і фарбували протягом 30 хв при 470, використовуючи по 25 мкл/лунку ЕАС5- буфера, що містить щуряче антитіло І(дДСйг2га-ВМ711 до мишачого СО8 (фірма Віо! едепа, каталожний Мо 100747, клон 53 -6.7) і щуряче антитіло І(Ідй2а-ВМ421 до мишачого С04 (фірма
ВіоЇ едепа, каталожний Мо 100544, клон АМА-5) і 0,67 мкг/мл ІДС2-РЕ сирійського хом'яка до мишачого СО137 (4-188) (фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 106106, клон 1785) і щуряче антитіло (Д42Б до мишачого СО25-РЕгСР-Су5.5 (фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 1019112).
Клітини промивали і інкубували протягом 1 год при кімнатній температурі в приготованому
Еїх/Репт-буфері (Бохр3/буфер з набору для фарбування фактора транскрипції, фірма
Зо еВіозсієпсе, каталожний МеМі. 00-5523-00). Клітини промивали двічі свіжоприготовленим Репт- буфером і спільно фарбували, використовуючи по 25 мкл/лунку Репт-буфера, що містить флуоресцентно мічені антитіла проти цитотоксичної лінії фактора транскрипції Еотев5, тобто щуряче антитіло Ідсі2а-АІехаБіног488 до мишачого Еотез (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 534875, клон Юапіїтад) і, якщо СО137 не фарбується, то застосовували антитіло проти цитотоксичної ефекторної молекули гранзіми В, тобто щурячий ІдСг2а до мишачого гранзіми В-
РЕ (фірма еВіозсієпсє, каталожний Мо 128822, клон 16026), протягом 1 год при кімнатній температурі. Потім клітини промивали двічі, ресуспендували в ЕАС5-буфері і дані одержували з використанням проточного цитометра з 5 лазерами І 5НВ-ЕБопезза (фірма ВО Віозсієпсе, забезпеченого програмою БРІМА) або аналізатора з З лазерами МАС5О мапі Апаїугег 10 (фірма
Міцепуї Віоїесі) і програми Ріом/ до м10 .0.7 (Ріомуо ПІ С). Дискримінаційні вікна встановлювали на живі СО8-4-Т-клітини і СО44-Т-клітини і визначали частоту (стрівальності) проліферуючих клітин, а також рівні експресії СО25, Еотевз і гранзіми В або СО137. Будували графік залежності частоти проліферації, а також частоти і МЕРІ маркерів активації від концентрації застосовуваних молекул, які містять тримерний мишачий ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій), для виявлення функціональної активності. Як продемонстровано на 27, вдалося виявити підвищення проліферації СО8--Т-клітин при застосуванні конструкцій М.1 і М.2. 6.5 Зміни в печінці мишей, оброблених антитілом до мишачого 4-188 Го 12.3 (тидсі УМО) або конструкцією М.2
Мишей лінії С57ВІ /6, які несуть МОС38-птиБАР (модель мишачого колоректального раку) обробляли 5.с. один раз на тиждень протягом З тижнів агоністичними антитілами до мишачого 4-188, націленими на БАР (досвід з оцінки ефективності 020-ЗА1401: «Експеримент з визначення ефективності націленої на 4-188 терапії в комбінації з а-РО-І1 на 5с- моделі МСЗ38-
ТивАР, створеної на мишах С57В6 »). Застосовувані антитіла являли собою ГІ об 12.3 тиЇдс1
ММ (з Ес «дикого типу», клон об 12.3 від фірми ВіоХсеїЇ, каталожний Мо: ВЕО169) або конструкцію М.2 з ПОАРО-мутацією (неактивний Ес). Два антитіла вводили один раз на тиждень протягом трьох послідовних тижнів. По 4 тварини на групу вбивали через 7 днів після останньої обробки і печінку оцінювали за допомогою мікроскопа.
Зміни в печінці, що включають локуси гепатоцелюлярної дегенерації з накопиченням Е4/80- позитивних макрофагів і зниженою кількістю зміщеної популяції запальних клітин (головним бо чином лімфоцитів), що часто характеризується вазоцентричним розподілом, виявлені тільки у тварин, яких обробляли Гор 12.3 тидс1 УМ. Виявлено рідкісні один ичніклітинні некрози гепатоцитів і інфільтрати периваскулярних мононуклеарних клітин у ворітну вену печінки.
Жодних пов'язаних з обробкою проявів не виявлено в печінці тварин, які одержували конструкцію М.2 (таблиця 41).
Таблиця 41
Стрівальність гістопатологічних проявів (п-:4/групу) об 12.3 .
МІ І
ВЕ аналі НН НІНІ ПИШЕ запальними клітинами інфільтратипериваскулярнихзапальнихклітин../:/:///|77/ 14 (некрозодиничнихклітино 77111111 ЇЇ 4
Гепатит, зв'язаний з перехресним зшиванням з Есук в печінці, виявлені у пацієнтів, яких лікували Огеїнтар ВМ5-663513 (Авсіепо Р.А. та ін., 2010) ії у мишей, для обробки яких застосовували мишачий сурогат. Відсутність проявів в печінці у тварин, яких обробляли антитілом з неактивним Ес, підтверджують зазначену гіпотезу. 6.6 Визначення фармакокінетичнихф параметрів антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес
Для вирішення питання про те, чи придатні антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний людський ліганд для 4-188В8 в злитті з Ес, запропоновані у винаході, для фармацевтичного застосування, визначали фармакокінетичні параметри (ФК-дані), такі як кліренс, обсяг розподілу або час напіввиведення ( 11/2) у мишей. Для цієї мети здійснювали такі експерименти:
Експеримент А: однодозове ФК-дослідження конструкції 1.2 і контролю Б на здорових МОС- мишах
Самок лінії МОС, вік яких на початку експерименту становив 8-10 тижнів (куплені в віварії
Тасопіс, ЗОРЕ), містили в умовах відсутності специфічних патогенів з добовим циклом 12 год світла/12 год темряви згідно з відповідною інструкцією ((зУ-5оїЇа5; Реїаза; ТіегеспО). Протокол експериментального дослідження був розглянутий і ухвалений місцевим урядовим органом (Р 2011128). Після доставки тварин витримували протягом 1 тижня для того, щоб вони могли звикнути до нових умов, і для обстеження. На регулярній основі здійснювали постійний моніторинг стану здоров'я.
Для оцінки експозиції конструкції 1.2 ії контролю Б проводили однодозове фармакокінетичне дослідження (5ОРК). Мишам лінії МОСС вводили за допомогою і.м.-болюсної ін'єкції 2,5 мг/кг агента і відбирали зразки крові в обрані моменти часу для фармакокінетичної оцінки. Зразки мишачої сироватки аналізували за допомогою ЕГІ5ЗА. Біотинільований людський 4-188, тестовані зразки, мічене дігоксигеніном антитіло до пПиСНІ і ідентифікуюче антитіло до дігоксигеніну (РОЮ) додавали в 9б-ямковий сенсибілізований стрептавідіном тітраційний мікропланшет і інкубували після кожної стадії протягом 1 год при кімнатній температурі.
Планшет промивали тричі після кожної стадії для видалення незв'язаних субстанцій. І, нарешті, пов'язаний з пероксидазою комплекс візуалізували, додаючи як субстрат розчин АВТ для утворення пофарбованого продукту реакції. Інтенсивність забарвлення продукту реакції, яку визначали фотометрично при 405 нм (довжина референс-хвилі 490 нм), пропорційна концентрації аналіту в зразку сироватки. Калібрувальний діапазон стандартної кривої для конструкцій становив від 0,156 до 10 нг/мл, при цьому концентрація З нг/мл відповідала нижній межі кількісного визначення (ОС). На фіг. 28А продемонстровано зниження концентрації з плином часу, виявлене в цьому експерименті.
Експеримент Б: однодозове ФК-дослідження конструкцій 2.1, 2.3, контролю Б і контролю В на МОсС-мишах, які несуть пухлини, гуманізованих стовбуровими клітинами
Для оцінки експозиції конструкцій 2.1, 2.3, контролю Б і контролю В проводили однодозове фармакокінетичне дослідження (5ОРК). Самок МЗС-мишей, що несуть людські стовбурові клітини, одержували від фірми Часкбзоп Гарогайогіеє5. Мишей містили в умовах відсутності специфічних патогенів з добовим циклом 12 год світла/12 год темряви згідно з відповідною інструкцією ((М-Боїає; Реїаза; Тіег5еспб). Протокол експериментального дослідження був розглянутий і ухвалений місцевим урядовим органом (2Н193-2014). Після доставки тварин витримували протягом 1 тижня для того, щоб вони могли звикнути до нових умов, і для обстеження. На регулярній основі здійснювали постійний моніторинг стану здоров'я.
Людські МКМ45-клітини (людська карцинома шлунку) початково одержували з АТСС і після розмноження депонували у внутрішньому банку клітин фірми Сіусагі. Клітини культивували в середовищі ОМЕМ, що містить 10950 ЕС5. Клітини культивували при 37"С в насиченою водяною парою атмосфері з 595 СО». Одержаний іп міго пасаж 9, життєздатність якого становила 97905, застосовували для підшкірної ін'єкції. Лінія людських фібробластів МІН-3Т3 була створена на фірмі Коспе МшШеу для експресії людського ЕАР. Застосовували клон 39, що являє собою одержаний іп міго пасаж 12, життєздатність якого становила 9895. Змішували 50 мкл клітинної суспензії (1 х 106 МКМ45-клітин т 1 х 106 3Т3-пиГАР) з 50 мкл матрігелю і ін'єктували підшкірно в бічну область анестезованих мишей. Шляхом болюсної і.м.-ін'єкції вводили 10 мг/кг агентів гуманізованим мишам, коли середній розмір пухлин досягав 190 мм 3. Одержували зразки крові в обрані моменти часу для фармакокінетичної оцінки. Зразки мишачої сироватки аналізували за допомогою ЕГІЗА. Біотинільований людський 4-188В, тестовані зразки, мічена дігоксигеніном антитіло до пПиСНІ і ідентифікуюче антитіло до дігоксигеніну (РОЮ) додавали в 96-ямковий сенсибілізований стрептавідіном тітраційний мікропланшет і інкубували після кожної стадії протягом 1 год при кімнатній температурі. Планшет промивали тричі після кожної стадії для видалення незв'язаних субстанцій. !, нарешті, пов'язаний з пероксидазою комплекс візуалізували, додаючи як субстрат розчин АВТ5 для утворення пофарбованого продукту реакції. Інтенсивність забарвлення продукту реакції, яку визначали фотометрично при 405 нм (довжина референс-хвилі 490 нм), пропорційна концентрації аналіту в зразку сироватки.
Калібрувальний діапазон стандартної кривої для конструкцій становив від 0,156 до 10 нг/мл, при цьому концентрація З нг/мл відповідала нижній межі кількісного визначення (ГГ 00). На фіг. 28Б продемонстровано зниження концентрації конструкцій з плином часу, виявлене в цьому експерименті.
Експеримент В: однодозове ФК-дослідження конструкцій 2. 1 і 2.3 на здорових МОС-мишах
Самок мишей лінії МО, вік яких на початку експерименту становив 8-10 тижнів (куплені в віварії Тасопіс, ОРЕ), містили в специфічних безпатогенних умовах з добовим циклом 12 год світла/12 год темряви згідно з відповідною інструкцією ((зУ-5о0їа5; ЕРеїаза; Тіег5спО ). Протокол
Зо експериментального дослідження був розглянутий і ухвалений місцевим урядовим органом (Р 2011128). Після доставки тварин витримували протягом 1 тижня для того, щоб вони могли звикнути до нових умов, і для обстеження. На регулярній основі здійснювали постійний моніторинг стану здоров'я.
Для оцінки експозиції конструкцій 2. 1 ї 2.3 проводили однодозове фармакокінетичне дослідження (5ОРК). Мишам лінії МОСС вводили за допомогою болюсної і.м.-ін'єкції 2,5 мг/кг агента і відбирали зразки крові в обрані моменти часу для фармакокінетичної оцінки. Зразки мишачої сироватки аналізували за допомогою ЕГІЗА. Біотинільований людський 4-188, тестовані зразки, мічена дігоксигеніном антитіло до пПиСНІ і ідентифікуюче антитіло до дігоксигеніну (РОЮ) додавали в 9б-ямковий сенсибілізований стрептавідіном тітраційний мікропланшет і інкубували після кожної стадії протягом 1 год при кімнатній температурі.
Планшет промивали тричі після кожної стадії для видалення незв'язаних субстанцій. І, нарешті, пов'язаний з пероксидазою комплекс візуалізували, додаючи як субстрат розчин АВТ5 для утворення пофарбованого продукту реакції. Інтенсивність забарвлення продукту реакції, яку визначали фотометрично при 405 нм (довжина референс-хвилі 490 нм), пропорційна концентрації аналіту в зразку сироватки. Калібрувальний діапазон стандартної кривої для конструкцій становив від 0,156 до 10 нг/мл, при цьому концентрація З нг/мл відповідала нижній межі кількісного визначення (ОС). На фіг. 288 продемонстровано зниження концентрації з плином часу.
Протестовані конструкції 2.1 і 2.3 виявилися досить стабільними в організмі і мали ФкК- параметри в діапазоні, прийнятному для створення ліків. З одержаних результатів можна зробити висновок також про те, що конструкція 2.1 виявилася дещо більш стабільною. 6.7 Превалювання ЕАР в людських пухлинах
Вивчали превалювання БАР в людських пухлинах відповідно до методу, описаному в МО 2014/161845, для прийняття рішення про можливість клінічного застосування націлених на ЕАР конструкцій.
Щуряче антитіло до людської сепрази (402а, клон 08) фірма Міаех (МАВ5З1001) застосовували для імунофарбування ЕЕРЕТ- (фіксованих формаліном, залитих в парафін тканин) -зрізів товщиною 2,5 мкм різних зазначених пухлин за допомогою системи Мепіапа
Вепсптак ХТ. Зрізи піддавали стандартній СС1-обробці з подальшою інкубацією антитіла бо протягом 60 хв при 37"С в концентрації 5 мкг/мл в розчиннику для антитіл фірми бако (53022) і позитивне забарвлення виявляли за допомогою системи детекції ОКгаміеєм ВАВ (фірма Мепіапа,
Мо 760- 4456). Антитіло відповідного ізотипу Фірми Арсат (ар18450) застосовували як негативний контроль. Стромальний ЕАР « інфільтрат був присутній в людських пухлинах різних типів, включаючи плоскоклітинний рак голови та шиї (НМ5СС), рак молочної залози, колоректальний рак (СКС), рак підшлункової залози (РАС), рак шлунка, недрібноклітинну карциному легені (М5СІ С) і мезотеліому, що демонструє потенційний клінічний інтерес застосування націлених на ЕАР конструкцій (таблиця 42).
Таблиця 42
Превалювання ЕАР в людських пухлинах до випадків ЕАР"-інфільтрату від середнього до К-сть вивчених нос /СЇ77777711111111901111111111111111111Ї11111110 рак молочної залози
Ек ПИ "ННЯ НН ЗОН во св 11111119 ракшлууюку.д/ С Ї777777771111111111111111168111111111111111111111111128
МВС СГЇ77711111111111111116611111111111111111111111190 омезотелюма ЇЇ 7777777777777717111111160111111111111111111111111л1о
Приклад 7 7.1 Одержання націлених на СО19 (888-018) антигензв'язуючих молекул, які містять тримерий ліганд для 4-188 в злитті з Ес 7.1.1 Одержання, очищення і характеризація злиття антиген СО19-Ес для процесу фагового дисплею
Для експресії і очищення ектодомену СО19 людини і мавп ціномолгус в мономерному стані (послідовність людського СО19 див. в 5ЕО ІЮ МО: 31) відповідний ДНК-фрагмент зливали з геном людського Ід(11-Ес, що містить мутації, призводять до утворення «виступу» (людська послідовність: 5ЕС) ІЮ МО: 186; мавпяча (послідовність мавп ціномолгус: 5ЕО ІО МО: 188), і трансфектували партнером (контрагентом) «Ес-«западина») (5ЕО ІО МО: 86) (МегснНапі та ін., 1998). Інтродуковали сайт розщеплення ІдА (РТРРТР) між ектодоменом антигена і Ес-ланцюгом з «виступом». Інтродуковали Амі-мітку для направленого біотинілювання на С-кінець конструкції антиген-Рс-«виступ» і інтродуковали мутації Н4З5БА і У436Е в Ес-ланцюг із «западиною» з метою очищення (депаебега І. та ін, у). Іттипоіодіса! теїпод5, 1997). Комбінація конструкції антиген-
Ес-ланцюг з «виступом», яка містить мутації 5354С/71366МУ (людська послідовність: ФЕО ІЮ МО: 187; послідовність мавп ціномолгус: 5ЕО І МО: 189), з Ес-ланцюгом із «западиною», яка містить мутації У349С/13665/1368А/М407М (5ЕБО ОО МО: 90), дозволяла одержувати гетеродимерний фрагмент Ес-злиття, який включав одиничну копію екгодомену СО19 (аналог конструкції, яка містить 4-188, представленої на фіг. 58). В таблиці 43 представлені кДНК і амінокислотні послідовності конструкції антиген в злитті з Ес.
Зо
Таблиця 43
КДНК і амінокислотні послідовності молекули, яка містить мономерний антиген СО19 людини і мавп ціномолгус в злитті з Ес(Кій)
ЗЕО
ІО Антиген Послідовність
МО: нуклеотидна послідовність Ес- див. таблицю 32 ланцюга З «западиною»
Таблиця 43
КДНК і амінокислотні послідовності молекули, яка містить мономерний антиген СО19 людини і мавп ціномолгус в злитті з Ес(Кій)
ЗЕ
ІО Антиген Послідовність
МО: послідовність а,астасдатасстАдаааСАССстоСаАтааССсСстТАСсСсСАаСсАаТстаА конструкції сстаатоСсАаАдаАдсАХаССССсСтААдассстоСстадА;астатстота людський антиген иССстасстасостасвасСАТССАТАТОАДООСсСТОТтТааССАТСТООаСТ
Ср19-Рс-ланцюг з СТТСАТСТТСААСсататоСсСАаасСсАасАТтасассаа7астстТАсСстатато «виступом»-амі-.Д |ІАдаИСсСсТааССССССАТСТОАСААсСсаИсттасаса,асстаастсАССата мітка ААдсатапАдапАтоСсаасавАдастпосааТадпААСаТатосСаАТСТ вассоасстасаАдтТасСсаасСсСТААваААСАвАтТотАаСс,сАа,ваасСос
А аСсАд,асосСАаСайСАААСТаАтТадассСССАдаста7атасататавиасс
АдапАСсАаАсССаАаАтотассвсхасвассАаасстєттасстассссс тТАаАвпАСАаССсТААССАаАдаСсСстаАаСсСАапАССТаАСААтаасССс стаСсАаСАсСАСТатТаасталастатааатасСсАССсСаАСТоТатТта
ТстТА,сАаасасосттаАда,аСстаАСССАСатасСАСССТАДавасссСТтТАА сласстастадасСстТаспсААСТаАдАдсаАСсаАСсАЧвассСасСАаАСАТА татасватТСАТаСАААсСсСОссСсТаста,астасстАаАасСсСсАСАасСсССАс свАТаСсСсОаасСААаТтТАСТАСТаССАСАаАдааСААССТаАССАТИаДасСТттТ
ССАССТОаСАААТСАССОаССАсАсСсСсатТастатаасСАастаастастаА вААсАдасСсвастацвАда,аатсаАдсастласаатааТАаТоСаАСАССТ
ССаАСсСАСсСсСсСвВсаасТаа т тСсТасСАСАСААААСТСАСАСАТаСССАСС стассСсАаСсАсСстТаддасСсасСАа,асасавАсСаТтСАатстостсТос
ССССААДАСССАДаСАСАСССТСАТаАтотоССа,апАсооста7адасто
АсАТОССОТОаСТООСТтасАСатадаССАСадАаАСССстТаАааТСААСТтТ
СААСТОСтТАСсатасАСсасатавАааТасСАТААТаССААСАСАдАас сасссаАдапАдаСАатТАСААСАаСсАСсатАссататаатАасСаТтосто
АсСсСатТоСтТасСсАССАСИаАСТассСстТаААТааСААасСАсТАСААаТасАА паТСсТоСААСАддаСССстоаАасСсССССАТССАСААААССАТСТОСА
АДаССААдАдс,саасАаассссСаАпААССАСАааТатАСАСССТассссСсСА тасссавАтТадасСстТаАССААаААСсСАаса;атсаасстата,атасстаат
СААДОСОаСТТСтТАТСОССАаСОаАСАТосасоСсатавА,а таспсаАОАсасСААТа сасдасСсСапАаААСААСтТАСААдаАСсСсАСсасстоссатастааАсСТос авАссастосТсТссСТСсТАСАаСАдасСТоАССатапАСААаАасСАС стааСсд,аСАд,апапААСатсТсТсАтТастоСаТаАтасСАТаАСаТасто
ТтТаСАСААССАСТАСАССЯСАСпАдАдсаАасстотосСстаТтстоСасцсатАдА тос,саАпасСсСстТаААСаАСАТСТТСОАдааСССАСААСАТТОААТаССА
Ссада поліпептидна послідовність Ес- див. таблицю 32 ланцюга Кк! «западиною»
РЕЕРІ МУКМЕЕСОМАМІ ОСІ КИТИ РТООЇ ТМУ/5АЕ5РІ КРЕЇ КІ 51.
СІ РОЇ СІНМАРІ АІМ/Л РІЕМУБООМИасЕМІ СОРОЕРРОЕКАУМОРОМ/ТМУ поліпептидна ММЕСБОБЕГЕВММУЗОЇ Сас сасаі КІМА55ЕСРБОБЗРБООКІ МОРКІ ММА послідовність КОВРЕМ/ЕСЕРРСІ РРВОБІ МО5І БОБ ТМАРОаБТІ МІ БСИМРРОБМ конструкції ЗАВОРІ БМ/УТНУНРКО РКЗ5І І 5І ЕІ КОСАВРАВНОМУУМЕТОГ ГІ РВАТАО 187 людський антиген рАСКМУСНАеСОМІ ТМ5ЕНІ ЕІТАВРМІ М/Н І АТ СУМУКМрАБОСОРТР
СО19-Ес-ланцюг з РТРОЧО5АОКТНТСРРСОРАРЕААСОРБОМЕЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМ «виступом»-амі ТСУМУМОМ5НЕОРЕМКЕМУ УСС МЕМНМАКТКРЕЕЄОУМОТУВМУМУБМІ. мітка ТМ НОРМІ МЕОКЕУКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ РР
СВОЕТКМОМ5І МС МКОЕМРООІАМЕМ ЕБЄМСОРЕММУКТТРРМІ 05
РОаб5БЕНР УБКІ ТМОК5АМОССММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОБІ 5І 5РОК
ЗааіІ МОІгЕАОКІЕМНЕ
Таблиця 43
КДНК і амінокислотні послідовності молекули, яка містить мономерний антиген СО19 людини і мавп ціномолгус в злитті з Ес(Кій)
ЗЕ
ІО Антиген Послідовність
МО:
ШО ПО ПОП сосбАдапАдсссстаататадлдсаатасАдада,асасСспАСААтассат а,астосдатасстапАддапСАССТоСаАТааСССтТАСАСАаСАасСтоСа татаавтТаСАвАСАСсАааСоостСадасссТСсСТаААССсТатстота сесстасстааСсАтапаСАТСАСААТОСООЯСсСсСТОТаааСАТСТООаСТ асСтТаАТСТТСААСататоСААССАсСАСсСсвВаСавастстТАССТатТаТто дасстаабСтТасСсСсАда,аСсаАдаАдАдааста,ааСАа,аоСтаваАтапАсСатТа тоса,атавАдасАттасоссАа,астатсоСсаатасвААсататосСОаАТСТ вассоасстасадтТасавассСстТААаААСАпАдАдасАаа,аСсадапаСосстТ
А аСсАд,асосСбАдабапСАдастТаААтТАасСАаасоАаастатасататациасс
АдапАСсАаАссСсасАаАтатасаАсассаАаасстатататвасссссс
ТтТАВАСАТАаССТаААСсСАа,аАдасСстадасСсАааАССтТаАСААТаассс стаСсАаСАсСАСТатТаасталастатааатасСсАССсСаАСТоТатТта
ТоСсАвАдсасостотадасСтавАСАСАСсатассасСсСААдавасСсСсСтТАА сласласстастадассСставААСТаАдАдааАСаАССааосСпАССась нуклеотидна (Є! послідовність АтАТОТОССУТОСТОасСАТАСАСССТаСТасСтТаАССАсАаССАСАССС конструкції СсАдапАтассааСААаТАСТАСТаССАСАСАпаСААСтТапАССАдСаАда 188 антиген ср19 СТТІТТАССТаСайАААТСАССОВССАсСАсоСсасостатааСАаства7астас мавп ціномолгус- ТФДАЧШААТССЯСССАсСа7астасвлдасатовАсастаа,ассатасТАатоСаАСА
Ес-ланцюг з ССТССОАСАссСс,аааасТас ТСТаСАпАСАААДАСТСАСАСАТОаССОС «виступом» -амі АосатассСсАасСАССТаАдАа,аСсСсасСАа,аававАсСаТтсАаТтсТостТотТ мітка ТоСССССАДААСССААаСАСАСССТСАТаАТСоТтоСсСсОаВаАССССтТаАда аТсАСАТОССЯТОССТОСТОасАСсаталаССАС,ААаАСССТаАасСтТСАА ат сААстТасатТАасатасАаСса,аасаставАааТасСАТААТаССААСАСАА дассасссадапАдаСАатТАСААСсАаСсАСсатассатататсАяасСато
СсТсАсСатоСсТасСАССАавАСсТаасСТаААтТааСААсалаТАСАдИата
СААПИТСТоСААСААдАаСсоСстоааАасСссссССАТССАСААААССАТСТ
ССАДАаССАдДАасаасАассССаАпААССАСАсаТаТАСАСоста7ассс
СсСсАТаОССОЯСОпАТтТОАдаСтТАССААСпААССАасатсАа,асстаТтаатасст ватТСсААдаасСсТстТАТСССАаСОаАСАтТоаСсСсатавАа,атасададасСА
АТасСаСсАдаССасАпААСААСтТАСААсАССАсасстоссатастасАс тоСбОАсаасСсТосСтТсТсосСТСстТАСАаСААдасСстТоАССатТасАСАДОИаДа садастасАдаСАасасваААСаТатсТсТАТасСстоСатаАТасСАТИаАИаС
СТСТаСАСААССАСТАСАСОЯСАсСАдсАа,асстотосстатстоСасвсат
АААТССОЯаОСАаСсСасстТаААСаАСАТСТТосАааасСссССАСаААСаСАТТОААТа асСАСИДО
РОЕРІ МУКМЕЕСОМАМІ ОСІ ЕСТЗОСРТООЇ МУСАОБРЕЕРБГІ МІ 51.
СГ РОМИа!МаРІ СПУМІ ЛЕМ ЗМОТасЕМІ СОР РОЕЕКАУМОРОМУТМУ поліпептидна ЗМЕСБОБЕЇ ЕВМУМУБО СИ СС, КМАЗОЗЕСРББРБОКІ М55ОЇ ММА послідовність КОВАРЕМУЕСЕРМСОаРРАЮОБІ МОБІ 5О0І ТМАРОБТІ МІ БСОМРРОБМ конструкції ЗАВОРІ БМ/УТНУАРКОРК5Б5БІ ЇЇ 5І ЕЕ! КООАРОВОМУУМОТОГ І ТААТА 189 антигенСО19 ОПАСКУУСНАОаМУТКОЕМІ ЕІТАВРАЇ М/НУ І ВІССУМУКУрАЗИСЗРТ мавп ціномолгус-| РРТРЕИСОЗАОКТНТОРРОРАРЕАДАСОаРБМУНБІ ЕРРКРКОТІ МІБВАТРЕ
Ес-ланцюг зі МТСМУМОУЗНЕОРЕМКЕММУ УМРИМЕМНМАКТКРАЕЕОУМЗТУНУМБМ «виступом»-амі-. | ГТМ НОМ МЕОКЕМКСКМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ Р мітка РСОВОЕТКМОМ5І М СІ МКОЕМРБОІТАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ Ю
БравЕРІМ5КІ ТМОК5РУМОССММЕЗСЗУММНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І ЗРО касі МОІгЕАОКІЕЄМНЕ
Для одержання злитих молекул, що містять мономірний антиген/Ес, що знаходяться на експоненційній фазі росту, зростаючі в суспензії СНО-клітини спільно трансфектували двома плазмидами, що кодують два компонента злитого білка (ланцюга з «виступом» та «западиною»), використовуючи стандартні методи.
Секретований білок очищали з супернатанта клітинної культури за допомогою афінної хроматографії на білку А з подальшою гель-фільтрацією. Для здійснення афінної хроматографії супернатант вносили в колонку Марзеїесі Зиге (СМ - 5-15 мл, смола фірми СЕ Неайвсаге), врівноважену буфером, що містить фосфат натрію (20мм), цитрат натрію (20мм) (рН 7,5).
Незв'язаний білок видаляли шляхом промивання таким же буфером, використовуючи його в об'ємі, кратному принаймні б об'ємам колонки. Зв'язаний білок елюювали, використовуючи лінійний градієнт: стадія 1, 10 СМ від 0 до 6095 буфера для елюції (буфер, що містить 20мММ цитрат натрію, 500мМ хлорид натрію (рН 2,5)); стадія 2, 2 СМ від 60 до 10095 буфера для елюції.
При здійсненні елюції з використанням лінійного градієнта здійснювали додаткову східчасту елюція із застосуванням об'єму, кратному 2 об'ємам колонки, 10095 -ного буфера для елюції.
Значення рН зібраних фракцій регулювали, додаючи 1/40 (06./06.) 2М Тріс, рН 8,0. Білок концентрували і фільтрували перед внесенням в колонку Ні ой Супердекс 200 (фірма СЕ
Неакйсаге), врівноважену розчином, що містить 2иМ МОРБ5, 150мМ хлорид натрію, 0,0290 (мас./об.) азид натрію, рН 7,4.
В таблиці 44 узагальнені дані про вихід і кінцевий вміст мономерів злитого білка, що містить мономерний антиген СО19 людини і мавп ціномолгус і Ес(Кій)
Таблиця 44
Біохімічний аналіз злитого білка, що містить мономерний антиген СО19 людини і мавп ціномолгус і Ес(Кій) . Мономер (91 Вихід злитий білок, який містить мономерний СО19 мавп ціномолгус і
Частину очищеного антигена біотинілювали іп міго з використанням набору «ВігА Біоїіп- ргоївіп Ідазе 5іапдаага геасіоп» (фірма Аміайу, каталожний Ме ВігА500) згідно з інструкціями виробника. Ступінь біотинілювання злиття, що містить людський СО19, становив 9495, а відповідний, що містить СО19 мавп ціномолгус конструкції - 10095. Потім біотинільований білок застосовували для селекції, скринінгу та характеризації одержаних з 888 клонів з дозрілою афінністю, в яких були відсутні «гарячі точки» деамідування М27а та М28. 7.1.2 Створення клону 888-018 антитіла до СО19
Зо 7.1.2.1 Імунізація і створення мишачих антитіл до людського СЮО19 (метод гібридом)
Мишей лінії ВаЇр/с імунізували б разів і піддавали бустер-імунізації з використанням трансфектованих СО19 клітин НЕК293 (середня густина рецептора 35000 на клітину).
Здійснювали моніторинг імунної відповіді шляхом тестування зразків сироватки за допомогою
ЕСІЗА для несучих СО19 клітин на трансфектованих людським СО19 клітинах МІН-ЗТ3.
Селезінкові клітини мишей з достатніми титрами антитіла до людського СО19 застосовували для імморталізаці шляхом злиття 3 клітинноюлінією мишачої мієломи РЗХб3 Аов8.653.
Здійснювали три злиття і супернатант гібридом піддавали скринінгу з використанням призначеного для аналізу клітин ЕГІЗА із застосуванням трансфектованих людським СО19 клітин. МІН-3Т3З, і здійснювали аналіз зв'язування за допомогою БАС5, застосовуючи клітини
Дауді (20195) ї СО1: клітини для специфічних по відношенню до людського СО19 антитіл (див. приклад 1 в МО 2011/147834). 7.1.2.2 Скринінг гібридом і оцінка біологічної функції по відношенню до клітин антитіла до
СбОр19
ЕГІЗА для аналізу клітин для скринінгу антитіл проти людського СО19
Призначений для аналізу клітин ЕГІБА застосовували для скринінгу гібридом і для ідентифікації тих гібридом, які секретують антитіла проти людського СО19. Клітини. МІНЗТЗ, трансфектовані людським СО19, застосовували як позитивні клітини; нетрансфектовані МІНЗТЗ3- клітини застосовували як такі, що застосовуються в якості негативного контролю клітин. Для оцінки позитивних гібридом визначали співвідношення між ОГ для трансфектованих і нетрансфектованих МІНЗТЗ-клітин.
- Культуральне середовище: ОМЕМ з високим вмістом глюкози (4,5 мг/мл), 1095 ЕС5, Ма- піруват, МЕАА, глутамін. - Антитіла, що застосовуються як позитивний контроль: моноклональні антитіла до СО19 (9дО1), фірма Ріпагтіпдеп, каталожний Мо 555409, с - 1 мг/мл. - ідентифікуюче антитіло: козячий антимишачий Ідс (Н ях І), кон'югований з НЕР, фірма Віо-
Рад, каталожний Мо 170-06516. - Розведення 1: 2000 в 1 х блокуючому реагенті для ЕЇГ ІА. - Інші реагенти: фібронектин, фірма Коспе, каталожний Мо 838039, с - 1 мг/мл. - Глутаровий альдегід: 2595 матковий розчин, фірма Сгаде Адаг Зсіепіййс, Мо К102, кінцева концентрація: 0,0595 в ЗФР. - Блокуючий реагент для ЕГІБА: 10 х матковий розчин, фірма Коспе, каталожний Мо 1112589. - ТМВ-субстрат: фірма Коспе, каталожний Мо 11432559. - Стоп-розчин: 1М Н25О4, фірма ВіокКад, каталожний Мо 1700-6516, розведення 1: 2000 в 1 х блокуючому реагенті для ЕЇ ІЗА.
День 1: - Сенсибілізація фібронектином: 5 мкг/см" в ЗФР; 9б-ямковий планшет - 32 см"; 160 мкг/планшет в 6 мл, - ЗФР, 50 мкл/лунку, - інкубація протягом 45 хв при КТ, аспірація сенсибілузуючого розчину, - посів 1,25 х 107 клітин/лунку в 50 мкл культурального середовища в 96-ямковий планшет, - інкубація протягом 40 год при 37"С, - додавання в верхню половину планшета: МІНЗТЗ-клітин, які експресують СО19, - додавання в нижню половину планшета: нетрансфектовані МІНЗТЗ-клітини.
День 3: - Додавання антитіла, що являє собою позитивний контроль, або зразків (супернатант або мишача сироватка) в 50 мкл культурального середовища, - інкубація 2 ч при 47С, - видалення середовища, фіксація клітин 100 мкл глутарового альдегіду (0,0595 в ЗФР), - промивка двічі 200 мкл ЗФР, - додавання ідентифікуючого антитіла 1: 2000, 50 мкл/лунку, - інкубація 2 год при КТ, - промивка тричі 200 мкл ЗФР, - додавання 50 мкл ТМВ, інкубація протягом 30 хв при КТ, - припинення реакції шляхом додавання 25 мкл 1М Н2г5054; визначення екстинкції при 450 нНМ/620 НМ, - розрахунок результатів: співвідношення між ОГ для МІНЗТЗ СО19: ВП для нетрансфектованих МІНЗТЗ.
Для відібраних антитіл продемонстровано специфічного зв'язування з трансфектованими
СО019 МІНЗТЗ-клітинами порівняно з нетрансфектованими МІНЗТЗ-клітинами (див. приклад 2 в
МО 2011/1147834). 7.1.2.3 Гуманізация антитіла до СО19
СО19-зв'язуючу специфічність мишачого антитіла переносили в людський акцепторну каркасну ділянку для елімінації потенційних проявів імуногенності, що виникає у відповідь на сегменти послідовностей, які людський організм може розпізнавати як «чужі». Це здійснювали шляхом трансплантації повних гіперваріабельних ділянок (СОК) мишачого (донорського) антитіла в людську (акцепторну) каркасну ділянку, і цей процес позначають як СОК- трансплантація або гуманізація антитіла.
Вирівнювали мишачу амінокислотну послідовність по відношенню до колекції М-генів людської зародкової лінії антитіла і сортували з урахуванням ідентичності і гомології послідовності. Перед селекцією кожної конкретної акцепторної послідовності слід визначати структури так званих канонічних петель донорського антитіла (Могеа У. і ін., Меїодб5, т. 20, вид. 3, 2000., сс. 267-279). Структури зазначених канонічних петель визначали за типом залишків, присутніх в так званих канонічних положеннях. Ці положення лежать (частково) поза СОК- ділянками, і вони повинні зберігати функціональну еквівалентність в кінцевій конструкції для збереження конформації СОК батьківського (донорського) антитіла. Послідовність людської зародкової лінії МВА5Е УНІ 1 вибирали як акцепторну для важкого ланцюга, а послідовність
МВАЗЕ МУК2 5 вибирали для легкого ланцюга. 7.1.2.4А Видалення «горячих точек» деамідування бо Було встановлено, що гуманізоване антитіло до людського СО19 дикого типу має три
«гарячі точки» деамідування в НМВ-Ї1: МОМОаМт (5ЕБЕО І МО: 190). Крім того, було встановлено, що в НМК-Н2 присутня додаткова «гаряча точка» деамідування: КЕМО (5ЕО ІЮ
МО: 191). Для видалення «гарячої точки» деамідування в НМК-Н2 інтродуковану точкову мутацію М (Азп) на О (Сіп) в положенні 64 (нумерація за Кеботом). Таким чином, антитіло, представлене в даному описі, має НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність
ТЕКЕРОС,АМТМ (ЗЕО ІО МО: 192).
Для видалення «гарячих точок» деамідування в легкому ланцюзі для одержання гуманізованого антитіла до людського СО19 з покращеною стійкістю до деамідування інтродукували індивідуальні мутації в положення 274, 27Е, 28 і 29 за Кебот і подвійну мутацію в положення 27Е і 28 (нумерація за Кеботом). В цілому, створювали 9 варіантів (маг.1-маг.9) гуманізовані антитіла дикого типу (маг.0) (див. Таблицю 45).
Таблиця 45
Варіанти гуманізованого антитіла до СО19 дикого типу
Кебот 2222 Кебот (в положення 7789 положення 4
ІС: де не: маго м ОБГЕМЗМаИамМТтмМІ МУ ТЕКЕМаКАТМ маг1:Мм2г7ан ОБГЕНЗМОаМ ТМ МУУ ТЕКРОСАМТМ маг.2:Мм27а0 ОБ ЄОЗМамМТт МІ Му ТЕКРОСАМТМ маг.3:5276А ОБІГ ЕМАМИа МТ МІ МУУ ТЕКРОСАМТМ маг.4:5276У ОБ'ГЕМУМИМ МІ МУУ ТЕКРОСАМТМ маг.5:527еР ОБГЕМРМИамМТт МІ МУУ ТЕКРОСАМТМ маг.6:М280 ОБГЕМБОСМТМІ МУ ТЕКРОСАМТМ маг.7:429А ОБГЕМЗМАМТМІ МУ ТЕКРОСАМТМ маг.8:429У ОБГЕМЗММУМТМІ МУ ТЕКРОСАМТМ маг.9:527еР/М285 ОБГЕМРБЗОМТ МІ МУУ ТЕКРОСАМТМ
Варіант -
ШПеамер 00000019 12556 вв вм 11111111 в фжюрае|т|е|ви я лен
ІнМ)
Ши втн ве ввня врте хв 5
Зв'язування з людським СО19 після інкубації при рН 7,4 46 75| 84 1851951911721|83183
Чо
Зв'язування з людським СО19 після інкубації при рН 6,0 951) 95 | 97 97 91 187
Чо рясно есте рр орні
Було встановлено, що для всіх «гарячих точок» деамідування в НМК-Ї1 можна застосовувати одиничну мутацію в положенні 27Е за Кеботом, що призводить до заміни 5 (серин) на Р (пролін). Вона являє собою не мутацію схильного до деамідування залишку М (аспарагін), а мутацію сусідньої ділянки.
Таким чином, антитіло, представлене в даному описі, має НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність ГЕМРМОМТ (5БО ІЮ МО: 193). В одному з варіантів здійснення винаходу гуманізуване антитіло до людського СО19 містить НМК-І1, що має амінокислотну послідовність Ї ЕМРОСОМТ (ЗЕО ІО МО: 194).
Крім того, ці антитіла зберігають перехресну реактивність до СО19 мавп ціномолгус, що продемонстровано нижче в таблиці 46.
Таблиця 46
Для гуманізованого антитіла до людського СО19 дикого типу (маг.0) після очищення виявлений рівень деамідування, що становить приблизно 7,595. Після зберігання протягом 2 тижнів при рН 7,4 кількість деамідованого антитіла зростала приблизно до 18,595. Для варіанту антитіла з мутацій 527еР (маг.5) виявлений рівень деамідування, що становить приблизно 2595, і утворення 295 сукциніміди після очищення. При зберіганні при рН 7,4 протягом 2 тижнів було присутнє тільки приблизно 7,595 деамідованого антитіла. Маг. 5 був позначений як клон 888-018 і обраний для створення націлених на СО19 антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ. 7.1.3 Одержання одновалентної націленої на СО19 (888-018) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -доменами із зарядженими залишками, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 3.1)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-254), розділені ((345)2- лінкерами і злитих з Сі-доменом людського ІдДСті, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг 29А: людський ліганд для 4-188, ((345)2-конектор, людський ліганд для 4- 188, (245)2-конектор, людський Сі. Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188 (71-254), і злитий з СН-доменом людського ІдДа1, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг 296: людський ліганд для 4-188, ((345)2-конектор, людський СН.
Полінуклеотид, який кодує димерний ліганд для 4-188, злитий з людським Сі -доменом, субклонували в рамці зчитування з СН2- і СНЗ-доменами важкого ланцюга з «виступом» людського ІДС (Мегспапі НИ та ін. 1998). Для покращення правильного спарювання інтродуковали нижчезазначені мутації в «схрещені» СН-СІЇ. В димерний ліганд для 4-18В, злитий з людським Сі, мутації ЕТ2З3А ї 0124К. В мономерний ліганд для 4-188, злитий з людським СНІ, мутації К147Е і К21ЗЕ.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для СО19, клон 888-018, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», або з константним легким ланцюгом людського
Іа.
Зо Інтродуковали мутації РгоЗ29Сс1у, Іец234АЇа і Іец235АЇїа в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами (відповідно до методу, описаному в МО 2012/130831).
Комбінація: димерний ліганд-Ес-ланцюг з «виступом», яка містить мутації 5354С/Т1366МУ, мономерне СНІ-злиття, націлений анти-СО19-Рс-ланцюг із «западиною», яка містить мутації
УЗ349С/13665/ З368А/У407У, і легкий ланцюг анти-СО19, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188 і СО19-зв'язуючий Раб (фіг.30, конструкція 3.1).
В таблиці 47 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
СОр19 (888-018) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СІ і зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (711-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 3.1).
Таблиця 47
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СО19 (888-018) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СІ. і зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 3.1). " позначає заряджені залишки
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: нуклеотидна послідовність конструкції 129 | димерний пи 4-18ВІ. (71- Див. таблицю З 254) - СІ"-Рс-ланцюг з
Таблиця 47
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СО19 (888-018) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СІ. і зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 3.1). " позначає заряджені залишки
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: о ф«вистуломоо///////// ЇЇ нуклеотидна послідовність конструкції 130 | мономерний пи 4-18ВЦ 8. таблицю З 71-254) - СНІ" сАса,атосааста,атаса,атоссаСсасСаАааТСААпААА ссссессастсТатаААасСТ г ТсАТасСААдсасСАдаСацАТ
АСАССТТСАССОАСТАТАТСАТОСАТТаССТСсАсСИаСАцаС состааССААсСатсТоаААтТаспсАТавасСтТАСАТТААСССА
ТАТААТОАТИА,СТОСАААТАСАССОСАСААаТттсАаасАА вАаТтСАСТАТИАСАТСТаАСАССАСТАТСАаСАСТасСтТТА
САТОСАССТИТОоССЯаСсСстсватстаАТаАСАССасАата тТАТТАСТИаОТаАССАСОсОаСАСАТАТТАСТАССЯОССТСАДИаСТо татсаАСТАТТаСССсСОаСАсСацААССАСА,ТААССаТтад астобасСстТАаСАССААдсСавасоостсататоооостаас соссАдаСсАаСААсАаСАсСАаСасасоаСАСАаССастст сееастасстааТСААасАСТАСТТОСССТЬССоСатТаАСс статоСстаспААСсАаа,аС,асАаа,асоСстаАостСсвасатТасСАСА ссттоссса,асса,атастасАасАаатсотаасстТатАТАаССТ сласад,аса,атаатАассата7асстстТАа,аСАаасставасСАСо
САСАССТАСАТСТаСААСИТИААССАСАдаСССАаСААС нуклеотидна АССААДССИСтТапйАСААаААсСа тасАа,аСССААдсАасСтасцАс 203 послідовність анти- ААААСТСАСАСАТИаСССАССЯ ТИСССАаСАССТадАаста
Ср19(888-018), г сдасапаАССатсАатсТ ОСТ ССССССААААСССАА ланцюг із «западиною» |апАСАСССТСАТаАТОТоССОаАССССтТаАсатСАСАТОС стаатаатапАСатаАаССАСаААаАСССстаАасТСАда
ТтПТсААСТОСТАСОсТаОАСсОСаоасТавсАсаТасСАТААТаССА
АпАСААДАСОССсавса,аа,всаАааАаСАсТАСААСАаСАСатАСо сстатастоАаа,аСбатоСстАсСсастоСстасСсАСсСсА,ааАСсТаастТ сСААтТапйСААласАсТАСААаТасСААаатсТоСААСАдАас сстоеаваСасссССАТСВАСААААССАТСТОСАААаССАДА сабАдасоССпАпААССАСАавсататасСсАСоСсТассссСсСАТ ссссавАтТадасСстаАССААаААССАсатсАасстотата сасСсАатТСАААдаастСстТАТСССАаСаАСАТССССВТа,сАС тассАдсАдаСААтТаса,асСАаасСацАспААСААСТАСААСАСС
Адса7асстосса,атастасАстоСсаАасса7астостстсостсат сАдаСАдастСАсСатапАСААсаАааСАаасатаасАа,САСса сСААдСсатсТсТСАТаАСТОСОЯтТаАтТасСАТтаАлсаа7астстТасАс
ААССАСТАСАСЯаСАпаААсСАасстотосстаТатсотоСасватА
АА сСАСАТСИТСАТаАСССАпАСАССсССТа ТоССстототТаТатаА сосстааССАаССАасСсСТСААТтАаСТасСАдатостСТсСА
ААСтотТасАаААССССААТавсААСАСТТАССТТААТТОаС нуклеотидна ТАТСТаСАпАААСССОапАСААТОСССТСААСТОСТаАТСТ 204 | послідовність анти-СО19 АСаАааатоТСстТААаАвАТТСТСАСсСасатасСАСАТСОСТТ (888-018), легкий ланцюг | ТАаСсссастоСса,асатСставСАСАпАСТТСАССТТаААСАТТ датсасатададастаАас,асАтТатасаАатСсТАТТАСТИаТо тасдастоАСТСАТатТасСсссСстТАСАССТТІТаСтТСоАдасасАС
АААдАСстТасАаАТСААда,аСспАссатасоСбастоостосата
Таблиця 47
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СО19 (888-018) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СІ. і зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 3.1). " позначає заряджені залишки
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО:
ТТСАТСТТСССАСССТоСОАСадаСАасСстТААатоСаасСА сса,асслдасатаасттТасСсстасСстаААСААСТТСТАСССССа
СбаАдсасСсАддаатТасСсАаатасАдааТаспАСААСасСсСстТасА атобаасСААСсТоССАапААтТоСсатТаАСсСадаСАааАСтТоС
ААДПСАСАаСАССТАСТОССТатосСТоСАСССТОАСССТИатТт
ССАДСОаССаАСстТАСаАдаАдаСАСАда,аатТатАсасстаса
ААДаТтаАСсСсСАсСсАа,авсасстатоСАасссСатаАССААсаТо сСтТсААсСса,асассасАатас димерний пи 4-188В1'. (71- 1151254) - СіІ"-Рс-ланцюг з|див. таблицю З «виступом»
ОМОЇ МОБОАДЕУККРИИАБУКУЗСКАБОМТЕТОМІМНУУВОА
РЕОСІ ЕМ МОамІМР МОЗКУ ТЕКРОСАМТМТ5ОТ5ІВТАММ
ЕГ ЗА А5ООТАМУМСАВаТтУУМавАЇ ЕОМУСОоаТТУТУ55
АБТКОаРБМЕРІ АРОБКОТ5ОаСТААГ СС МКОМЕРЕРУТУБУМУМ
ЗОАЇ Т5аМНТЕРАМІ О5501І М5І 55 ГРІ СТО ТМІСММ 205 анти-СО19 (888-018), Ес- МНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕААДСИРБЗМУРІ ЕР ланцюг із «западиною» | РКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОУ5НЕОРЕМКЕМУ УМВИаМЕМН
МАКТКРАЕЄОММОТМАМУБМІ ТМ НОБУУІ МЕКЕУКСКМУ БМ
КАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМСТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І 5
АУКОЕМРБОІАМЕМЕЗМСООРЕММУКТТРРМІ ОБОСЗЕРІ УК
ГГ ТМОК5АМОСОаММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКОІ 5І РОК
РІММТОТРІ 5І 5МТРИИОРАБІЗСКОБВОБВІ ЕМРМОМ ГТ МІ ММ МІ.
ОКРООБРОЦП ІМАУМ5КАЕЗаМРєРОВЕЗаБЗаватТоО ТІ КІЗВМЕА анти-СО19 (888-018) ЕОМОМУМУСІ ОЇ ТНУРУТЕСОСТКІ ЕІКАТМААРБЗМРЕІЕРРБО 206 легкий ланцюг "ЕОЇ КБИаТАБММУСІ І ММЕМРАЕАКМОМ КМОМАГОБаМООЕ5
МТЕООБКО5БТУБІ 551ТІ ТІ 5ЄКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55Р
МТК5ЕМНОЕС 7.1.4 Одержання одновалентної націленої на СО19 (888-018) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -доменами без заряджених залишків, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 3.2)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-254), розділені ((345)2- лінкерами і злитих з Сі-доменом людського ІДСі, клонували аналогічно до схеми, представленої на фіг 294А, але без амінокислотних мутацій в Сі -домені: людський ліганд для 4- 188, (с245)2-конектор, людський ліганд для 4-188, (с45)2-конектор, людський Сі. Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188 (71-254), і злитий з СНІ-доменом людського
Ід4с21, клонували аналогічно до схеми, представленої на фіг 29Б, але без амінокислотних мутацій в СНІ1-домені: людський ліганд для 4-188, (45)»-конектор, людський СНІ.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для СО19, клон 888-018, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», або з константним легким ланцюгом людського
Іа.
Інтродуковали мутації РгоЗ29Сс1у, Іец234АЇа і Іец235АЇїа в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами
(відповідно до методу, описаному в М/О 2012/130831). Комбінація: димерний ліганд-Ес-ланцюг з «виступом», яка містить мутації 5354С/1366МУ, мономерне СНІ-злиття, націлений анти-СО19-
Ес-ланцюг із «западиною», яка містить мутації У349С/13665/І З68А/У407У, і легкий ланцюг анти-
СО19, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188 і СО019-зв'язуючий Раб (фіг. 30, конструкція 3.2).
В таблиці 48 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
СОр19 (888-018) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СІ без заряджених залишків, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (711-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 3.2).
Таблиця 48
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СО19 (888-018) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СІ. без заряджених залишків, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188В (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 3.2) -Ес-ланцюг з «виступом» нуклеотидна послідовність конструкції мономерний пи «западиною» 7.1.5 Одержання двовалентної націленої на СО19 (888-018) антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 3.3)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-254), розділені ((345)2- лінкерами, зливали з С-кінцем Ес-ланцюга з «западиною» людського ІДИ, відповідно до схеми, представленої на фіг. 298: Ес-ланцюг із «западиною» людського ІДС, ((345)2-конектор, людський ліганд для 4-188, ((345)2-конектор, людський ліганд для 4-188. Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188 (71-254), і злитий з С-кінцем Ес-ланцюга з «виступом» людського ЇДС1, одержували відповідно до схеми, представленої на фіг. 29Г. Ес- ланцюг з «виступом» людського да, ((145)2-конектор, людський ліганд для 4-188.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для СО19, клон 888-018, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», «виступом», або з константним легким ланцюгом людського дат. Інтродуковали мутації РгоЗ29сх1у, І ен23А4А|а і І ен2г35Аїа в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма- рецепторами (відповідно до методу, описаному в МО 2012/130831). Комбінація: анти-СО19 пшШдСа!, яка містить димерний ліганд ланцюг із «западиною» з мутаціями
УЗ349С/13665/ З368А/У407МУ, анти-СО19 пшШаЯс1і, яка містить мономерний ліганд ланцюг з «виступом» з мутаціями 5354С/1366МУУ, і легсий ланцюг анти-СО19, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188 і два ГАР-зв'язуючих Ра (фіг.
Зо 30, конструкція 3.3).
В таблиці 49 представлені кКДНК їі амінокислотні послідовності двовалентної націленої на
Ср19 (888-018) антигензв'язуючої молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4- 188 (71-254) в злитті з Ес (Кі) (конструкція 3.3).
Таблиця 49
Послідовності пар основ двовалентної націленої СО19 (888-018), що містить розділений тримерний ліганд для 4-18В в злитті з РОЇ АГА, що включає Кс (Кін) (конструкція 3.3)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: сасатосаастеста7асАа,атоссаСбасСаАааТСААСпАдА ссссессастстатаАдааТТсАТаСААаЧСасСсАдасСацАТ
АСАССТТСАССОСАСТАТАТСАТОСАТТВСС ТСАаСИаСАСОаС состаасСААдсСатсТсаААтТасАтавасСтТАСАТТААСССА
ТАТААТОАТИАССТОСАААТАСАССОАСААдИа тт тсАспасАА вАаТСАСТАТОАСАТСТаАСАССАСТАТСсАаСАСТОаСТТА
САТОСАССТОТОоССЯаСсСсТсаваТатстТаАтТаАСАССаТасАа та тТАТТАСТИОТаАССАсСОасасСАСАТАТТАСТАССТЯОСТСАС,СТО татсСаАСТАТТаСОСаСАцаспААССАСА,ТААССаТтад сстосасСстАаСАССААлСаСаСсСссСстТСсата7атосооставас соссАдаСАаСААаАаСАССАа,аСаабааСАСАаССастст састасстааТСААдааАСтТАСТІоСсСсСс,вАаа,асоСатаАсо статостасААсАда,аСа,асА;а,ассєтадсстсаваСаТасСАСА ссттоссс,асссестастасааАаатсотаасстТатАТАаССТ сласбада,ассатаатсАассатассттстАаасАаа,асставасСАСо
САСАССТАСАТСТаСААСИТаААССАСААдаСССАаСААС
АССААССЯтТапйАСААаАдАсатавАаоССААлсСАа,аСТасцАс
ААДААСТСАСАСАТаАСССАСсСсатассСАаСАССТадАаста сАдс,саппАССатсАаТСТ ССС ССССССААДААСССАА ваАСАСССТСАТаАТСТОСССОСОвВАСсССсСтТаАдааТСАСАТаС стастаатасАСатаАдаССАС,ААаАСССтТаАааТСАда тТсСААСсТОатАСсатасассаСсатасАсатасСАТААТаССА
АпАСААдда,асСса,асасаАааАаСАаТАСААСАаСАСаТтАСс нуклеотидна послідовність ОСТОТОСТСоАс,аСсатостСАсСсатоСтасСсАСсСАсааАСстаст конструкції анти-СО19 (888- ЧСААТааСАда,апА,аТАСААаТасААааТСсТоСААСАДАаС 207 | 018)-Ес-ланцюг із ССТССОИаСасссСССАТОСАСААААССАТСТОСАААаССАДА «западиною»-димерний сааСбАдассССпАпААССАСАаСсатТатасСАСССсТасссссСА ліганд т ссссапАтТадасСстаАССААаААССАсИа тсАасстотата сасАатТСАААаасТСсТАТоСсСсАа,аСаАСАТсаСоСсастТааАС тасададасСААтТасасАаа,аССавАспААСААСТАСААСАСо дсасстоссатастававАстоСаАса,аасТСстсттостоа т сАаСАдастоАсСатапАСААпАаасСАсатааСАаСАСа вААСОЯСТСОТТСоТСАТОСТОСОЯаЯтТОаАтТасСАтТаАлсастотасАс
ААССАСТАСАСОЯСАВААСсАасстотосСстаТатстосасата ласосаба,асАда,аСба,азАа,асАааАааАТоСАпАпАаасао сстадасталассССсаАтадтостастасАастастацпАсс тассаСсдссасАататтастсаастаатааоССАСААСаИТт сстастаАтТоасАТОССССССТаОтТОоСтТастТАСсАасСаАТОСТ сзвастаастаасСса,ататоАСТаАСсАасасвасстТаАасСтТАСА
ААСАСОАСАССАААСААСТОаСТасТааоСААл,вассваСа татАСстТАСОатТат ст тсАаСстТаспААСстТасрасАсАатаст сасссасСсАда,асасАтота,астотататтстаасссСстТасАТ стасдасстстаАдаАдАда,аСсастаста,асастасАастоТас
САСТаАСАСТОаАТОТОаССТОСТаССАаВСсТоСсСАсСассса
СААТАСССОССАТТТаСОИСТТтТсААсСасАасастастасСАСсСтТа тостасссасСсАа,САсастаа,асАсТасСАТСТаСАСАСАСАС абСбАасСааСсТАпАСАсасстааСАаСТАСАСАас,сааСаст
АсАасатаставаєсєтаттоАаа,адатаАСоСССаАсАТТоСАа ссаеаа,ассТасстСсТоСААпСААда,аСаАддс,саСса,асАасаа7асСацаАТ
Таблиця 49
Послідовності пар основ двовалентної націленої СО19 (888-018), що містить розділений тримерний ліганд для 4-18В в злитті з РОЇ АГА, що включає Кс (Кін) (конструкція 3.3)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: стаассаСбасАМадвАТСоТАаАпАапаАСССаААСТатТосс
СстТАСсаАтТоСсАдасс,асвсастастТавАТСТаАСАСАаасАА татс,асссдастастаасСсТоАаААтТаТатастастаАТТадА савАасстоталастааТАСстСаАсосАда,авастаасСАаИ (Є) статосСстТаАСстТавапаАСТаТССТАСАААОСААСАТАСАА
ААпААстаатаатаасСстТААдАдасСтасаатаТАСТАТатТтатт ттсАдасСставААдстала,ассаваатаатастаававАасс
СсТсАаааАттаТтатостаастстТасСАТСТаСАасСсСАСТОа сестотастастасСсаса,7аста|асастаастстаАстатас
АССТасСссСАССАСССТСОТАаСОаАдаасССАСАААдСАааСаТсстт саавагтсСААдасАс,аостасСстасСАттадасасСсСсацАСА (Є) сасстасосдатасСАТСТасСАТАСТОАдДОаСсССАсСАаСссСсасс
АТаСсТТОЯбСАаСтТаАСТоСАсСа,аасасАастатастаасАстТ сттСасСсатТаАСсАССтТаАаАтоостасСсапаАСтТассСАдас
ССТАСАТСАСАА садсастосластаатасастсаа,всассаАааТСААаААА сссссаастсТатаААдасСТТСсАТаСАдасСАдасасАТ
АСАССТТСАССОАСТАТАТСАТаСАТТОССЬ ТСОАаСаССАСИс соСтасСсСАдааТсСТоаААТавАТасастТАСАТТААСССА
ТАТААТаАТааССТОСААДАТАСАССалаААа ТТ ТСАаааАА
САаТсСАСТАТОАСАТСТаАСАССАаТАТСАИаСАСТОасСтТтТА
САТОСАССТИатТОоССОЯаССТІ СааТтстТаАТОАСАССЯаСАИаТа
ТтТАТТАСТОТаССАСОаасасСАСАТАТТАСТАСЯаСТСАасСтТо татссОАСТАТТОСсСОаСАпасААССАСАаТтАдоСсатаА астобасСстТАаСАССАдсавасссСАтаатстосоостаас
АСССТоСТоСАдДсСАХасСАсстотасаваСАСАаСаасоссСстТа састасстатСААааАСТАСТТССССаААССс,ааТаАСас татсатааААстТоАаса,аСсасостаАассАХаСсааСаТасСАСАС стос асСсТатссСтТАСАаТСоСТСАасСАСТСОТАСТОССТСА асадасатаатзадссатассстосАаа,асАХасттаавасСАсос нуклеотидна послідовність| А 208 анти-С019 (888-018)-Ес- ОАССТАСАТСТаСААСИатаААТСАСАДИаСССАаСААСАСС ланцюг З «виступом» АДССИСТтОапАСААСАААатТаАасСССАААТСТТатаАСАдА мономерний ліганд АСТСАСАСАТИАСССАССОЯТаСССАаСАССТОААаСтТасАа саапАСсСатсАатсТссСсТсТоСССССАДААСССАДааА
САСССТСАТОАТСТОССсаАСССсСсТаАаатСсАСАТОСИТОа стастасАасатадаССАССААаАСсосСстадааТСААаТтто
ААСТЯОСатТАСОТасАСса,ааСатапвАсаТасСАТААТасСсСАДОИ
АСАддасса,аСасадаспАаСАсСТАСААСАаСАСатАССатТ стасвтоАдаСатТСссСТСАССатТоСсТасСсАССАССаАСТааСтТаА
АТтТаССАДаСАСтТАСААИаТаСААаИТСТОоСААСААдасСос тсавСасСссССсССАТСИАСААААССАТСТОСААДаССААДОа свасАдаСсСССОпАСААССАСАаасТатТАСАсостаТасоссоста
САаАаАдтТадасСстаАССААаААсСАасататсстатастат стаатТСААсаастТТСстТАСССсСАасСаАтТАТСИвВСсСсаСТапаАстТ сапАпАаСААСсааССАасСсСсТаАСААСААСТАСААСАССА ссссссстатастааАдСсАдасСсаАдСсаасСсАаст СТОСТатТА
СТоСАААСТОАССатаспАСАд,аАХа,аСсСссаа7атаСАаСАсаИасть
СААсСататсАаастасАаасатаАТасСсАсалаассстТасАс
Таблиця 49
Послідовності пар основ двовалентної націленої СО19 (888-018), що містить розділений тримерний ліганд для 4-18В в злитті з РОЇ АГА, що включає Кс (Кін) (конструкція 3.3)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО:
ААССАСТАСАСССАаЧАдАдатоссталасстадассосСсоваса сласасасбавАдАд,аС,ааАаасА,ааАасАтоСАа,сАда,адасас сстадастадасссСаАтТаАтстастасАастастааАсс тасаваСсАдсвасАТтаттастоластаатааСССАаААСатТ сстастаАтТаАтТааСсооСстаТатосТааТАСАаСаАТоСтТ садстасстасоаТаТСАСсТаАСсАдсаСсаасстаАастТАСА
ААЧДОасаАСАССААДАсСААСстТаатастаасСАдааСсассСс татАСстТАсата|атстсАаасСстапААдстасасвАаАатТастТ сасссаспАдасАтотассттататстстаасссСтТасАТ стасдасстотАпАдАда,асастастаасастасАастстас
САСТаАСсСАастТасатотасстстассСАаастСадааСссСа
СААТАССЯаСАТТТаВССаТТТСсААасасСсАасастастасСсАсстТа тстасссасСбд,ада,асостаавАаТасСАТСТаСАСАСАСАС асСсАдсаасСстАпАсАсасСстасСсАасСсТАСАСА,вааСаст
АдсдатаставасстаттСАаадаТаАСССССаАаАТТСоСАС сс,аасстТасстСсТоСААДаАдасСаАА нуклеотидна послідовність 204 |анти-СО19 (888-018), легкий див. таблицю 47 ланцюг
ОМОЇ МОБСАЕУККРИаАБУКУВСКАЗИаУТЕТОМІМНУУВОА
РОС ЕМ МОаМІМР УМО СКМ ТЕКЕОСАМТМТ5ОТ5І5ТАХУМ
ЕГ5АІ А5ООТАУУУСАВИаТУУМавАЇ ЕОМУСОСсТтУТУ55
АБТКОаРБОМЕРІ АРОБКОТЗОаСТААІ СІ МКОМЕРЕРУМТУБМУУ М
ЗОАЇ Т5аМНТЕРАМІ 05501 М5І 55 МР ЕТОТМІСММ
МНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСОРБМРГІ ЕР
РКРКОТ МІЗАТРЕМТСМУМОМ5НЕОРЕМКЕММ УМВИаМЕМН
МАКТКРАЕЕОУМОТМАМУБМІ ТМ НОМ МЕОКЕМКСКУ5М
КА САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМСТІ РРОНОЕЇ ТКМОМ5І С
АУКОЕУРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ О5рИаБЕРІ УК анти-С019 (888-018)-Е-- І ТМОКЗ ВМ ОСС, ММ Е5СЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ 51 РОСС 209 |ланцюг із «западиною»- й51:(0сС25В8ЕСРЕЇ 5РОЮРАСІ ЇЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ЛО димерний ліганд СРІ БМ/УМ5ОРИЇ АСМ5І ТС 5УКЕОТКЕЇ ММАКАОМУММЕ
ЕОГ ЕІ ААУМАСЕСБавм5бі АІ НІ ОРІ А5АДОСАДАЇ АГ ТМОІ.
РРАББЗЕАВМЗАРСОРОСВІ І НІ БАСОВІ СУНІ НТЕАВАВНАМУ
ОГТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРАСІ РОРАБЕСНСОСИВЗОСИСОНЕС
Р
ЕГ5РООРАСІ ЇЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ОСРІ БМ УБОРИ.
АСМУБІ ТОСІ 5МКЕОТКЕЇ ММАКАСУММУМЕРОЇІ ЕІ ВАММАС
ЕС.БИаБМУБІ АІ НІ ОРІ В5БААСАААЇ А ТУОІ РРАБЗЕАВМЗАЕ
СЕОСНАІ НІ БАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАУОЇ ТОСАТМІ СІ.
ЕВМТРЕІРАСІ РОРАЗЕ
ОМОЇ МОБСАЕУККРИаАБУКУВСКАЗИаУТЕТОМІМНУУВОА
РОС ЕМ МОаМІМР УМО СКМ ТЕКЕОСАМТМТ5ОТ5І5ТАХУМ
ЕГ5АІ А5ООТАУУУСАВИаТУУМавАЇ ЕОМУСОСсТтУТУ55 анти-С019 (888-018)-Ес- АЗТКаРБЗМЕРІ АРЗЗКОТЗОСИТААІ аСІ МКОМЕРЕРУТУБУУМ 210 | ланцюг Кк «виступом»- БА ТЗаМНТЕРАМІ 05501 51 55 УРБЗББІ СТО ТМІСММ мономерний ліганд МНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСОРБМРГІ ЕР
РКРКОТ МІЗАТРЕМТСМУМОМ5НЕОРЕМКЕММ УМВИаМЕМН
МАКТКРАЕЕОУМОТМАМУ5БМІ ТМ НОЮМ/Л МЕОКЕМКСКУ5М
КА САРІЕКТІЗКАКЕИОРАЕРОММУТІ РРСВОЕЄСТКМОМБІ МС
Таблиця 49
Послідовності пар основ двовалентної націленої СО19 (888-018), що містить розділений тримерний ліганд для 4-18В в злитті з РОЇ АГА, що включає Кс (Кін) (конструкція 3.3)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО:
ГУКаЕгЕУРБОІАМЕМЕЗМИСОРЕММУКТТРРМІ ОБраЗЕРІ МК
ГУКА ОССММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ 5І РИСІ азвасасйевВЕСРЕЇ 5РОВРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММО ЛО
СРІ БМ/УУ5БОРИЇ АСУБІ ТИС 5МКЕОТКЕЇ ММАКАИ УМ УМ
ЕОГЕГААУММАСЕ,ЗИавуУБіІ АІ НІ ОРІ ВБААСАААЇГ А ТМ.
РРАББЗЕАВМЗАРСРОСНВІ І НІ ЗАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАМУ
ОГТОСАТМІ СІ РВУМТРЕІРАСІ РОРАЗЕ ланцюг 7.1.6 Одержання одновалентної націленої на СО19 (888-018) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -доменами із зарядженими залишками, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 3.4)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-248), розділені ((345)2- лінкерами і злитих з Сі-доменом людського ІДСі, клонували аналогічно до схеми, представленої на фіг 29А: людський ліганд для 4-188, ((345)2-конектор, людський ліганд для 4- 188, (245)2-конектор, людський Сі. Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188 (71-248), і злитий з СН-доменом людського ІдДа1, клонували аналогічно до схеми, представленої на фіг 296: людський ліганд для 4-188, ((345)2-конектор, людський СН.
Поліпептид, який кодує димерний ліганд для 4-18В, злитий з людським Сі -доменом, субклонували в рамці зчитування з СН2- і СНЗ-доменами важкого ланцюга з «виступом» людського ІДС (Мегспапі НИ та ін. 1998). Для покращення правильного спарювання інтродуковали нижчезазначені мутації в «схрещені» СН-СІЇ. В димерний ліганд для 4-18В, злитий з людським Сі, мутації ЕТ2З3А ї 0124К. В мономерний ліганд для 4-188, злитий з людським СНІ, мутації К147Е і К21ЗЕ.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для СО19, клон 888-018, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», або з константним легким ланцюгом людського
Іа.
Інтродуковали мутації РгоЗ29Сс1у, Іец234АЇа і Іец235АЇїа в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами (відповідно до методу, описаному в М/О 2012/130831). Комбінація: димерний ліганд-Ес-ланцюг з «виступом», що містить мутації 5354С/1366МУ, мономерне СНІ-злиття, націлений анти-СО19-
Ес-ланцюг із «западиною», що містить мутації У349С/13665/І З68А/У407У, і легкий ланцюг анти-
СО19, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188 і СО019-зв'язуючий Раб (фіг. 30, конструкція 3.4).
В таблиці 50 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
СОр19 (888-018) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СІ і зарядженими залишками,
Зо яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 3.4).
Таблиця 50
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СО19 (888-018) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СІ. і зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 3.4). " позначає заряджені залишки
СІ "-Рсо-ланцюг з «виступом» І
Таблиця 50
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СО19 (888-018) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СІ. і зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 3.4). " позначає заряджені залишки «западиною» І 7.1.7 Одержання одновалентної націленої на СО19 (888-018) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -доменами без заряджених залишків, яка містить тримерний ліганд для
А-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 3.5)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-248), розділені ((345)»2- лінкерами і злитих з Сі-доменом людського ІДСі, клонували аналогічно до схеми, представленої на фіг 29А, але без амінокислотних мутацій в Сі -домені: людський ліганд для 4- 188, (245)2-конектор, людський ліганд для 4-188, (с45)2-конектор, людський Сі. Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188 (71-248), і злитий з СНІ-доменом людського
Ідс21, клонували аналогічно до схеми, представленої на фіг 29Б, але без амінокислотних мутацій в СНІ-домені: людський ліганд для 4-188, (45)»-конектор, людський СНІ.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для СО19, клон 888-018, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», або з константним легким ланцюгом людського
Ідс21. Інтродуковали мутації Рго32901у, І ец234АїЇа і І ен235АЇа в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами (відповідно до методу, описаному в УУО 2012/130831). Комбінація: димерний ліганд-Ес-ланцюг з «виступом», яка містить мутації 5354С/1366МУ, мономерне СНІ-злиття, націлений анти-СО19-
Ес-ланцюг із «западиною», яка містить мутації У349С/13665/І З68А/У407У, і легкий ланцюг анти-
СО19, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188 і СО019-зв'язуючий Раб (фіг. 30, конструкція 3.5).
В таблиці 51 представлені кДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
Ср19 (888-018) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СІ без заряджених залишків, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кі!) (конструкція 3.5).
Таблиця 51
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СО19 (888-018) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СІ без заряджених залишків, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 3.5)
СІ -Ес-ланцюг з «виступом» І «западиною»
Таблиця 51
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СО19 (888-018) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СІ без заряджених залишків, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 3.5) 7.1.8 Одержання двовалентної націленої на СО19 (888-018) антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 3.6)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-248), розділені ((345)2- лінкерами, зливали з С-кінцем Ес-ланцюга з «западиною» людського ІДИ, відповідно до схеми, представленої на фіг. 298: Ес-ланцюг із «западиною» людського ІДС, ((345)2-конектор, людський ліганд для 4-188, ((345)2-конектор, людський ліганд для 4-188. Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188 (711-248), і злитий з С-кінцем Ес-ланцюга з «виступом» людського ЇДС1, одержували відповідно до схеми, представленої на фіг. 29Г: Ес- ланцюг з «виступом» людського да, ((145)2-конектор, людський ліганд для 4-188.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для СО19, клон 888-018, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», або з константним легким ланцюгом людського
Ід4с21. Інтродуковали мутації РгоЗ329с1пу, І ец234Аїа і І ец235АЇа в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами (відповідно до методу, описаному в МО 2012/130831). Комбінація: анти-СО19 пиЇдст, яка містить димерний ліганд ланцюг із «западиною» з мутаціями У349С/713665/І З68А/У407У, анти-
СО019 пишдат, яка містить мономерний ліганд ланцюг з «виступом» з мутаціями 5354С/1З366МУ і легкий ланцюг анти-СО19, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188 і два РАР-зв'язуючі Раб (фіг. 30, конструкція 3.6).
В таблиці 52 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності двовалентної націленої на
Ср19 (888-018) антигензв'язуючої молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4- 188 (71-248) в злитті з Ес (Кі) (конструкція 3.6).
Таблиця 52
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СО19 (888-018), що містить розділений тримерний ліганд для 4-188(71-248) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 3.6)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: сАса,атосааста,атаса,атоссаСсасСаАааТСААпААА ссссессастсТатаААасСТ г ТсАТаСААдааСААлаСасАТ
АСАССТТСАССОАСТАТАТСАТОСАТТаССТСсАсСИаСАцаС состааССААсСатсТоаААтТаспсАТавасСтТАСАТТААСССА
ТАТААТОАТИА,СТОСАААТАСАССОСАСААаТттсАаасАА вАаТСАСТАТОАСАТСТИаАСАССАСТАТСсСАаСАСТасСтТТА нуклеотидна послідовність САТОСАССТИТОоССЯаСсСстсватстаАТаАСАССасАата конструкції анти-СО19 (888- тТАТТАСТИаОТаАССАСОсОаСАСАТАТТАСТАССЯОССТСАДИаСТо 211 |018)-Рс-ланцюг із татсаАСТАТТаСССсСОаСАсСацААССАСА,ТААССаТтад «западиною»-димерний астобасСстТАаСАССААдсСавасоостсататоооостаас ліганд (71-248) соссАдаСсАаСААсАаСАсСАаСасасоаСАСАаССастст сееастасстааТСААасАСТАСТТОССССОСА,СссСсатаАСс статоСстаспААСсАаа,аС,асАаа,асоСстаАостСсвасатТасСАСА ссттоссса,асса,атастасАасАаатсотаасстТатАТАаССТ сласад,асатаатАассста7ассттотАа,аСАаасставасСАСо
САСАССТАСАТСТаСААСИТИААССАСАдаСССАаСААС
АССААДССИСтТапйАСААаААсСа тасАа,аСССААдсАасСтасцАс
АААДАСТСАСАСАТИАСССАСсСатассСАаСАССТОаААаСтТаИ
Таблиця 52
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СО19 (888-018), що містить розділений тримерний ліганд для 4-188(71-248) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 3.6)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО: сдасаАапАССаТсАаТсСТосСТСТсСССССАДААСССАА пОАСАСССТСАТОАТСтТоСсСсасАССССТаАдааТСАСАТОаС стаатастасАсатаАаССАСПААаАСоСстадааТСАда
ТтТсААСсСТОСИИтТАсСатасАасс,ааставАваТасСАТААТаССА
АвАСАДАЛАСаССОЯВСОСВа,АС,СадасСАаТАСААСАаСАСОаТАСС статаатодасатосСТсАсСсатсСсТасСсАССАаасАСТаастТ
СААтТапСАдаспАаТАСАдатТасСАДааТСсТоСААСАдАас сстааСасСссСсССАТСОАаААААССАТСТОСААДАИССАДА свасласссСаАпААССАСАасататасСАСССТассссСсСАТ ссссааАтТадасСсТаАССААпААССАаааТатсАасстстоата
СсасСАаЙТСАААдаасСТСстТАТСССАаСаАСАтсасСС,атасАс тасводадаСААдтасвасСсАдаССапАСААСААСТАСАдДОаАСс дсасстоссатастааАСстоСсаАсаастстстостса т чвАдаСсААд,астАсСсатапАСААсдаСАааатааСАаСАсасс
СААСатсТсТоАТаСсТоСатаАтТасСАтТалвастстасАс
ААССАСТАСАСаСАпААдаАдасСстотоСсстаТатстсацвата авдасса,а,аСапААда,аСасАаа,авсАс,ссАааАтоСАас,сАда,сАасас сстала,астадасссСтТаАтТалдтостассссАстастааАсс тассаСсАдаавпААТтаттассСа,астаатаасСсССАсаААСаТ астастАтТаАдтасоооостаТатостасаТтАСАасСаАТтоСстТ сеадстасстассататсАСстТадсАасасаасстТадастТАСА
АдадапйАСАССААДАаАдАСстаатаатааССААлавассвасс татАСстТАсататсттАаастасАдАастаСсасАсАатаст сесссасСсадАдасасАтотаасттаттсттаасСсссСтТасСАТ стасла,асстоталааттастастаасасосастастотас
САСТаАСАСТОСАТСОТОССТОСТаСсСсАаа,аСсАа,аСс,сА,аасссСа вААТтАаСасАттасваТ ТТ СсААдвасАасастастасСАсстТа тстасссасСсАдсАасастаасвсАаТасСАТСТаСАСАСАСАС асСбАдадастТАпАСАСсасСстаасАаасСстаАСАСсА,сааСаст
АсАХатастасасстаттсАваАдатТаАСССССаАСАТТССАС сад,асостасадасосассаадтстаассассадацАТСТА авАдаАддапсАсссасАастатоооСаАссАтоссаставаст астапАТСТОАСАСАасСсасСАтТаттсастоластастааст
СсАаААтТатастастаАатаАСссасАссттадастасТАСТ сбаАсссАд,саастасасСАасаеасвсататосстадстаавасАс тТатоСтТАСАДАаААаАТАСААДААСААСстастаатаастТА
АДОСТОСОСТаТтТАСТАТОТИТт тт сдастасляЯАсСтТОаАа ссаАстаастастасасАд,авастсАасаАтстататосст (Є) асттТасАтотасаассАста7асастотасаасСАавасваста
СсАдасАастасосстадстатааАдсстассоССАасттстТо
СбаАдсасСсСсАаАААСсА,аСсасстСсаваТ т СсСАдапАСаТсст аСстТасСАТСТаАаОаСаССасАСАа,асСасставаАдаТасСАТСТОа
САТАСТаАдАДаССАасСАаа,асоСаасСсАатастааСАасСсТалсто дасаааСААстатастасаАастаттсасатаАСАССТОА аАТСССАЛСССВваваТсто нуклеотидна послідовність САСОСТОоСсАХАаСстТаатаса,атос,сасасСссСспАсатСААСАдДА 212 конструкції анти-СО19 (888- ССССЯаСсСОЇсСОоттотатаААасТ т САтТасСААлааСААаСасАТ 018)-Ес-ланцюг з АСАССТТСАССОаАСТАТАТСАТОСАТТОСОЬ ТСАасСИаИасСАсас «виступом»-мономерний состааСсСААлсатсТаААтасАатасвасСТАСАТТААСССА
Таблиця 52
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СО19 (888-018), що містить розділений тримерний ліганд для 4-188(71-248) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 3.6)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО: (711-248) ліганд ТАТААТаАТааСТОоСАДАТАСАССИАДаААс ГП ТСАасаСалйА
САаТСсАСТАТОАСАТСТаАСАССАСТАТСАССАСТОаСТТА
САТОСАЛССТОТОССОЯаССТТСОаатСсТаАТОАСАССаСАИаТта
ТАТТАСТОТаСсСАСИасвсасСАСАТАТТАСТАСЯЯаСТСАасСтТо татсаАСТАТТОСа,асасСАсасААССАСАаТТтТААССаИатаА астосастАяаСсАССААдсааЙСсССАтаатстосоостасс
АСССТоСТоСАдаАдаСсАсстотасасвасСсАсАасСааСосСста сва7стассСстТаайТСААааАСТАСТТССССОААдсСс,ватаАСасяь татсатааААСстТоАсаСсассСстаАдсСсАХаСапСаТасСАСАС сттосссвСастТатссСтТАСАатссСтТсАааАСТСТАСТОССТСА асласатастаадссатассстоСсАаасАаастасасСАСсСсСА
САССТАСАТСТаСААСаИатаААТСАСААасСсссАасСААСАСС
АДСИТасСАСААСААДАаИтТаАасСссСсСАААТСТТатТаАСАдДА
АСТСАСАСАТОаСССАСсСсСОвтассСАасСАССТададастасАс саапАСсСатсАаТтст сс ССССССАААДАСССАДОаСА
САСССТСАТОАТСТОССОООСАСсоССстТаАаааТСАСАТасСаИата стаатасАдсатТАдаССАСсаАдаАссСстадааТСААатТто
ААСТаИтТАСсИаИтасАСсааСатапАсатасСАТААТаССАДаИ
АСААдДаСсСсаСасадасАаСАсСтТАСААСАаСАСатАССатТ стаатсдасСаТосСТсАСсСсатоСтТасСАССАСаАСсТаасСтТаА
АТаССАдДасАСТАСААДаТасСАДааТСТоСААСАдАаСоСс тсавсасСсссСССАТСОАСААДААССАТСТОССААДАДИаССААдАс ваСсАдасСссССОпАпААССАСАасаТаТАСАсоСстТа|ассоссоста
СсАаАвпАтТадасСстТаАССААаААсСАаастатсстатаа7тат статТСсААсаасСсТстТАССССАасСсаАТтТАТтсОаСоСсатасАаат сапАдпАдаСААСсааССАасСсСсТаАпААСААСТАСААСАССА ссссссстатаСставпАСсА,аСаАСсааСАастстТосСтТаТатА
СсСтТоСААДАСТаАСсСатасАСсААХд,аАасса,астааСАаСАасс
СААСссататтсАаастасааСсатаАатТасАасадавасоСстасАс
ААССАСТАСАСССАСААда тосСсталассталасооСааса авдасса,а,аСапААда,аСасАаа,авсАс,ссАааАтоСАас,сАда,сАасас сстала,астадасссСтТаАтТалдтостассссАстастааАсс тассаСсАдаавпААТтаттассСа,астаатаасСсССАсаААСаТ а,астастТАтТаАтТасоооостаТатоСстасастТАСАасСаАТтостТ сеадстасстассататсАСстТадсАасасаасстТадастТАСА
АдадапйАСАССААДАаАдАСстТаатаатааССААлавассцвасс татАСстТАсататсттАаастасАдАастаСсасАсАатаст сесссасСсадАдасасАтотаасттаттсттаасСсссСтТасСАТ стасла,асстоталааттастастаасасосастастотас
САСТаАСАСТОСАТСОТаССТОСТаССсАа,аСсАаа,аСс,аСАа,асСсСа вААТтАаСасАттасваТ ТТ СсААдвасАасастастасСАсстТа тстасссасСсАдсАдсаСстаасвАаТасСАТСТаСАСАСАСАС асСбАдадастТАпАСАСсасСстаасАаасСстаАСАСсА,сааСаст
АсАаСтастасасстаттсАаадатаАсССССаАаАТТОСТа ссасвасто нуклеотидна послідовність 204 | анти-СО019 (888-018), легкий див. таблицю 47 ланцюг анти-С0О19 (888-018)-Рс- ОМОЇ МОБСАЕУККРОАБУКУЗСКАБИаМТЕТОМІМНУУВОА 213 |ланцюг із «западиною»- РЕООСІ ЕУУМамМІМР МО а5кМиТЕКРОСАМТМТ5ОТ5ІЗТАММ димерний ліганд (71-248 ЕІ ЗА В5О0ОТАУМУСАВИаТУММабАІ ЕОМ ЧОсТУТУ5о
Таблиця 52
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СО19 (888-018), що містить розділений тримерний ліганд для 4-188(71-248) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 3.6)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО:
АБТКОаРБЗМУЕРІ АРЗЗКЗТЗИаСТАА аСІ УКОМЕРЕРУМТУБУУМ зад т5амНтТЕРАМІ ОБОЇ БІ 55БММТУРЗББИТОТМІСММ
МНКРОЬМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСОРБУБІ ЕР
РКРКОТІ МІЗАТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ МУрамМЕМН
МАКТКРАЕЄОУМЗТУМАУММІ ТМ НОМ МЕОКЕУКСКУЗМ
КА аАРІЕКТІЗКАКСИОРАВЕРОМСТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І 50
АУКИЕМРБЗОІАМЕЖМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОБОраБЗЕРІ УК
ГУКА ОО, ММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОІ 5І РОСІЯ азасасйеАЕСРЕЇ 5РОДРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ СО
СРІ БМ/УМБОРИЇГ АСУБІ ТІ ЗМКЕОТКЕЇ ММАКАСУУУМУЕ
ЕОГЕГААУМАСЕаБавмвбі АІ НІ ОРІ В5ААСАДАГ А ТМ.
РРАББЗБЕАВМЗАРСЕРОСНВІ І НІ ЗАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАМУ
ОГТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРАСІ асОСОСЗИСОСОВЕСРЕЇ РОЮ
РАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММ ГІраРІ БУУМБОРИЇ АСУ Т
Са ЗМКЕОТКЕЇ УМАКАСУУУУЕРОЇ ЕІ АВУМАагаЗавм
ЗІ А НОРІ А5ААДСАААЇ А ТМОЇ РРАББЕАВМЗАРИаБРОСНВІ.
ГНГІЗАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАУ/ОЇІ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕЇ
РАС.
ОМОЇ МОБСАЕУККРОАБУКУЗСКАВИахТЕТОМІМНУУВОА
РОСС ЕМ МамМІМРУМОСЗКУТЕКРОСАУТМТЗОТ5ІЗТАММ
ЕГЗВІ А5БООТАУУУСАВатууУавзАаі грУиусоаттУТУ5о
АБТКОаРБЗМУЕРІ АРЗЗКЗТЗИаСТАА аСІ УКОМЕРЕРУТУБУУМ зад т5амНтТЕРАМІ ОБОЇ БІ 55БММТУРЗББИТОТМІСММ
МНКРОЬМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСОРБУБІ ЕР
РКРКОТІ МІЗАТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УУрамМЕМН анти-С019 (888-018)-Рс- МАКТКРАЕЄОУМЗТ М АУМБМІ ТМ НОМ МЕ КЕУКСКУЗМ 214 | ланцюг Кк «виступом»- КАЇ САРІЕКТІЗКАКСИОРАЕРОММУТІ РРСОВОЄЇ ТКМОМБІ УС мономерний (71-248) ліганд. | УКаЕМРЗОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОБразЕРІ УК
ГУКА ОО, ММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОІ 5І РОСІЯ азасасйеАЕСРЕЇ 5РОДРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ СО
СРІ БМ/УМБОРИЇГ АСУБІ ТС ЗУКЕОТКЕЇ ММАКАСУУУМУЕ
ЕОГЕГААУМАСЕаБавмвбі АІ НІ ОРІ В5ААСАДАГ А ТМ.
РРАББЗБЕАВМЗАРСЕРОСНВІ І НІ ЗАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАМУ
ОГТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРАІ. ланцюг 7.2 Одержання націлених на СО19 антигензв'язуючих молекул (антитіло, одержане из клону 888 з дозрілою афінністю), які містять тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес і відповідних контрольних молекул 7.2.1 Створення одержаних з 888 з дозрілою афінністю анти-СО19-зв'язуючих агентів, позбавлених «гарячих точок» 7.2.1.1 Селекция СО19-специфічних антитіл з дозрілою афінністю
Деамідування залишків аспарагіну в положеннях 274 і 28, локалізованих в СОКІ1 легкого ланцюга гуманізованого клону 888, призводить до значного зниження біологічної активності.
Тому створювали 2 фагові дисплейні бібліотеки, в яких а) обидва залишки аспарагіну в положеннях 274 і 28 елімінували і б) додатково рандомізувалисСОК. важкого і легкого ланцюгів для відбору варіантів 888 з підвищеною афінністю. 7.2.1.2 Створення бібліотек 888 з дозрілою афінністю, позбавлених «гарячих точок» в
ІСОВ1
Створення одержаних з 888 антитіл з дозрілою афінністю без сайтів деамідування М274 і
М28, локалізованих в ЇСОК1, здійснювали за допомогою фагового дисплея із застосуванням стандартного протоколу (Зйассі і ін, 2005). На першій стадії ДНК-послідовності МІ і Мн гуманізованого батьківського клону 888 (ЗЕО ІЮО МО: 215 і ЗЕО ІЮ МО: 216) клонували в фагміді заявників, яку потім застосовували як матрицю для рандомізації. На наступній стадії створювали дві бібліотеки для відбору переважних клонів за допомогою фагового дисплею. Для елімінації вищевказаних положень «гарячих точок» в обох бібліотеках застосовували рандомізований праймер ГСОКІ (ЗЕО ІЮ МО: 217), який забезпечував присутність тільки амінокислот 5ТОЕ в положеннях 274 і 28. Бібліотеку для дозрівання 1 рандомізованого в СОМ і
СОН і легкого, і важкого ланцюгів , в той час як бібліотеку для дозрівання 2 рандомізовади в
СОКІ і СОКЗ легкого ланцюга і в СОКЗ важкого ланцюга. Рандомізовані положення у відповідних СОК-ділянках представлені на фіг. З31А. Для створення бібліотеки для дозрівання 1, рандомизированного в СОКІ і СОКАЗ і легкого, і важкого ланцюгів, об'єднували три фрагмента за допомогою ПЛР для «зрощування (генома) розширеннями, що перекриваються» (5ОЕ) і клонували в фаговому векторі (фіг. 31Б). Застосовували наступні комбінації праймерів для створення фрагментів бібліотек фрагмент 1 (ЇМВЗ3 (ЗЕО ІЮ МО: 222) і СО19 11 зворотний випадковий (розсіяний) праймер (5ЕО ІЮ МО: 217), фрагмент 2 (СО019 12 прямий випадковий праймер (ЗЕО ІО МО: 218) ї СО0О19 НІ зворотний випадковий праймер (5ЕО ІЮО МО: 219), їі фрагмент З (2019 Н2 прямий випадковий праймер (5ЕО ІЮО МО: 220) ї СО19 НЗ зворотний константний праймер (ЗЕО ІО МО: 221) (таблиця 53). після складання повнорозмірного рандомізованого фрагмента в достатніх кількостях його розщеплює Мсо1/Мпе! паралельно з ідентично обробленим акцепторним фагмідним вектором. з-кратний молярний надлишок бібліотеки-вставки лігували з 10 мкг фагмідного вектора. Очищені одержані в результаті лігування продукти застосовували для 20 трансформацій, що призводило до одержання 2 х 109 трансформантів. Фагмідні частки, що експонують бібліотеку 888 з дозрілою афінністю виділяли ( «рятували») і очищали шляхом ПЕГ/МасСіІ-очищення з метою застосування для селекцій.
Аналогічним чином створювали другу бібліотеку, рандомізовану в СОВІ і СОВЗ легкого ланцюга і в СОВЗ важкого ланцюга. Застосовували наступні комбінації праймерів. Для створення фрагментів библіотек: фрагмент 1 (І МВЗ (ЗЕО ІЮО МО: 222) ії С0О19 11 зворотний
Зо випадковий праймер (ЗЕО ІЮО МО: 217), фрагмент 2 (СО019 11 прямий константний праймер (ЗЕО ІЮ МО 223) і 2019 ІЗ зворотний випадковий праймер (ЗЕО ІЮО МО 224), і фрагмент З (СО19 ІЗ зворотний константний праймер (ЗЕО ІЮ МО: 225) і СО19 НЗ зворотний випадковий праймер (5ЕО І МО: 226) (таблиця 54). Після збирання повнорозмірного рандомізованого фрагмента в достатніх кількостях його розщеплює Месоі/КрпіІ паралельно з ідентично обробленим акцепторним фагмідним вектором. З-кратний молярний надлишок бібліотеки- вставки лігували з 20 мкг фагмідного вектора. Очищені одержані в результаті лігування продукти застосовували для 40 трансформацій, що призводило до одержання 2 х 109 трансформантфв. Фагмідні частки, що експонують бібліотеку 888 з дозрілою афінністю виділяли ( «рятували») і очищали шляхом ПЕГ/МаСіІі-очищення з метою застосування для селекцій.
Таблиця 53
Праймери бібліотеки для дозрівання афінності 888 і видалення «гарячих точок» 1/1 І2/НІ1 Н2 сдастасСаааст Ста АС бас тт Ста пада АТА ССА СТ САС 1 сСр19 Іл Ссат2 абз асА4 То САС АСА ТО СТ СА ТТ аСА АСА ААТ зворотний (Є. 217 . випадковий праймер 1: 40965 М, боб А/5/ТГ//Р/В/М/Е/О/У, 2: 4095 М, бою. А/5//У/С/Р/О/Е/ОУ/М, З: 2595 З/Л/ОУЕ, 4: 2595. З/Г/О/Е
СТО СА АДА ССО пат бда даб ба САС Сто Ста АТО ТАС 5 сорі9 І? атТА ТСТ 6 Сас 78 сасаттосАТСат то Аа сат тстТ сааА То . вас АС озв | Прямий випадковий в: 3096 В, 2095 Е, 595. А/5/Т/У/5/Р/0/М/О/М. 6: 3095 К, 2095 5, 595
А/М/Т/У//Р/О/Е/С/М, 7: 4096 Е, 595. А/З//М/С/Р/О/Е/О/УЛЛ, 8: 4090 5, 6.б95 А/Т/У/С/Р/О/Е/О/М, 9: 509 Р, 5090 І.
Таблиця 53
Праймери бібліотеки для дозрівання афінності 888 і видалення «гарячих точок» 1/1 І2/НІ1 Н2 її
САТ ССА СТО САа АС Ста або боа пос Ста Або ААС СсСА 10
САТ 11 12 13 14 САА 15 СТА АСОС АСА ТО ТТ аСА ОСТ САС ПТ
СО19 НІ | ААС СА ДИС 219 зворотний випадковий 10: 5295 Н, 495 СИА/5/Р/Г/М/У/0/Е/О/МУЛ,11: 3095 І, 1595 М, Бо праймер СИА/5Л/Р/М/Н/О/Е/О/У,12: 5295 У, 496. СИ/А/5/Р/Т/М/Н/О/Е/О0/У/,13: 309 Ю, 1595 а, Бо А/5/Р/М/М/Н/О/Е/О/МЛ, 14: Бо т, 495
СИА/5/Р/У/М/Н/О/Е/О/МЛ, 15: 5290. Т, 496 СИА/Б/Р/У/М/Н/О/Е/0/МУЛ сла сс сСба са с; са Ста пас Та АТа спос 16 АТ 17
ССА 18 19 20 21 ТОСС 22 ТАТ АСО 23 АДА ТТО САС са бас ато
АСа АТО АСС
Ср19 н2 220 прямий 16: 4595 М, 55 А/5/Р/П/М/Н/О/Е/О/МЛ, 17: 5295 М, 496 випадковий СИА/5/Р/УЛ/Н/О/Е/О/УЛ, 18: 4096 М, 595. С/А/5/Р/Т/М/Н/0О/Е/СУ/МЛ, 19: З09 праймер М, ТБ 5, 595 СИА/Т/Р/У/Н/О/Е/О/УЛ, 20: 096 0, 1595 С, 595
А/5Л/Р/У/М/Н/Е/О/УЛ, 21: 5295 С, 495 М/А/5/Р/У/Т/Н/О/Е/СО/УЛ, 22: 309 К, 1596 М, 495 СМА/5/Р/У/Т/Н/О/Б/С0О/МЛ, 23: 3095 Е, 1595 ОО, 595
Си/А/5Л/Р/М/М/Н/О/ЛУЛ
Ср19 НнЗ 221 | ЗВОРОТНИЙ | ССТСАССОСТТоООСОААСТАСТОСТТОАССАС константний праймер
І Мв3 САОСАДАСАССТАТОАССАТОАТТАС
Таблиця 54
Праймери бібліотеки для дозрівання афінності 888 і видалення «гарячих точок» 11 І1з/НЗ її
Ср19 Ії 223 | ПРЯМИЙ | ТОСТАТСТОСАСАДАССОССТСАСАССССОСАС константний праймер
Ср19 Ії 217 | Зворотний Див. таблицю 53 випадковий праймер
ПТ ААТ ТТ САС ТТ АатТ ТОоС ТТ, АСО ПАА СС 24 25 26 27 28 29 сорі9 ІЗ Ста САС АСА АТА СТА САС СО дАС сто То дос 224 зворотний 24: БОЮ М, 495 СУА/В/Л/М/Р/Ю/Б/О/МИЛ, 25: 5295 Р, 495 праймер Си/А/5/Т/М/М/Н/О/Е/СО/МЛ, 26: 4296 М, 1095 І, 495. С/А/5ЛМ/М/Р/О/Е/О/УЛ, 27: Б2ув Н, 4956 С/А/5Б/Т/У/М/Р/0/Е/С/МЛ, 28: 4295 Т, 1095 І, 495
СиИА/5/Т/М/М/Р/О/Е/СУ/МЛ., 29: 4596 1, 1196 С, 495 А/5/Т/МИ/М/Р/О/Е/0/МЛ
Ср19 ІЗ 225 | ПРЯМИЙ | АССТТСОСТСААСОААСТАААСТОСАААТТАДАСО константний праймер
Таблиця 54
Праймери бібліотеки для дозрівання афінності 888 і видалення «гарячих точок» 11 І1з/НЗ п астастдасАЦСАССТ ТАС астТ САС Сат сат АСС та асо
ССА атТА АТС АДА 30 31 32 33 34 35 36 37 38 ССО Таб АСА АТА ТА
ААС да сатато
СбОр19 нЗ 226 зворотний 30: 5095 1, 3.895 СИА/5/Т/Р/Н/У/М/О/Е/О/УЛ, 31: 5096 А, 4,290 випадковий С/Б/Т/Р/Н/М/М/0/Е/СУМЛ, 32: 5095 5, 4,296. СИАЛ/Р/Н/У/М/О/Е/С/МЛ, 33: праймер БО 0, 04295 Б/А/Л/Р/Н/У/М/О/Е/О/УЛ, 34: 005095 М, 4295
С/А/Т/Р/Н/Б/М/0/Е/СУМ/Л, 35: 5095 М, 4,290. СИАЛ/УР/Н/З/М/0/Е/С/МЛ, 36:
БО М, 4296 0 С/АЛУ/Р/Н/Б/М/О/Е/О/МЛ, 037: 0 50960Т, 0429
С/А/У/Р/Н/Б/М/О/Е/О/У//, 38: 5090 Сх, 4,20. М/АЛ/Р/Н/З/М/О/Е/О/УЛ 7.2.1.3 Селекція одержаних з 888 клонів з дозрілою афінністю, позбавлених «гарячих точок»
М27аіМ2вв1 СО
Для селекції клонів з дозрілою афінністю, позбавлених «гарячих точок» М27а і Мав в СОВІ1, здійснювали два підходи селекції за допомогою фагового дисплея:
При використанні першого підходу селекцію здійснювали на злитому білку людський СО19-
Ес з використанням обох фагів дисплейних бібліотек. Раунди пеннінга здійснювали в розчині згідно з наступною схемою: 1. зв'язування х 1012 фагмідних частинок з ЗОнм біотинільовані білком СО19-Ес протягом 0,5 год в загальному об'ємії мл, 2. «захоплення» біотинільованого білка СО19-Ес і специфічно пов'язаних фагових частинок шляхом додавання 5,4 х 107 покритих стрептавідіном магнітних гранул протягом 10 хв, 3. промивка гранул з використанням 5 разів 1 мл ЗФР/ЛІвін2го ії 5 разів 1 мл ЗФР, 4. елюція фагових частинок шляхом додавання 1 мл 100мММ
ТЕА протягом 10 хв і нейтралізація шляхом додавання 500 мкл 1М Тріс/НеІ, рН 7,4, 5. повторне зараження бактерій Е. соїї ТО1, що знаходяться на експоненційній фазі росту і 6. зараження хелперного фага МС5М13З і подальше осадження за допомогою ПЕГ/Ммасі фагмідних частинок, призначених для застосування в наступних раундах селекції. Селекції здійснювали з використанням З раундів, застосовуючи знижуються концентрації антигена (30 х 1029М, 10 х 10-
ОМ ої 3 х 109М). У раунді 2 і 3 «захоплення» комплексів антиген: фаг здійснювали, використовуючи покриті нейтравідином планшети замість стрептавідинових гранул.
Нейтравідинові планшети промивали 5 разів ЗФР/Твін2О і 5 разів ЗФР. У раунді З нейтравідіновий планшет інкубували протягом ночі в 2 л ЗФР для селекції за швидкістю дисоціації ( «ой-гаїе» -селекція) перед елюції фага з планшета. Крім того, білок, що містить
СО019 мавп ціномогус-Ес, застосовували в раунді 2 для збагачення перехресно-реактивними зв'язуюючими агентами.
При використанні другого підходу селекції фагів пеннінг здійснювали на клітинах, короткочасно експресованих на клітинній поверхні ЕСО СО19 або людини, або мавп ціномолгус.
Для короткочасної трансфекції НЕК-клітин створювали експресійні плазміди, які несли ДНК- послідовності (в напрямку від 5 "до 3) наступних білкових сегментів: Ріад-мітка, ЗМАР-мітка,
ЕСО СО19 або людини, або мавп ціномолгус і трансмембранну область рецептора тромбоцитарного фактора росту (РОСЕК) (ЗЕО ІЮ МО: 227 і 228). Експресію відповідних білків (ЗБЕО 10 МО: 229 їі 230) на клітинній поверхні підтверджували проточною цитометрією, використовуючи для детекції антитіл до Біад. У першому раунді селекції обидві бібліотеки експонували на клітинах, що експресують злитий білок, що містить ЕСО СО19 або людини, або мавп ціномолгус. Для подальших раундів пеннінга види ЕСО СО19 відповідно змінювали.
Клітини, короткочасно трансфектували нерелевантним мембранним білком, застосовували для передперевірки (передкліринга).
Раунди пеннінга здійснювали згідно з наступною схемою: 1. Трансфекція НЕК-клітин конструкціями, експресуючими або ЕСО С019, або нерелевантний трансмембранний білок, згідно з описаною вище стандартною процедурою, 2. Інкубація клітин в цілому протягом 48 год при 37"С в інкубаторі в атмосфері, що містить 595 СО». Виділення клітин шляхом центрифугування (З хв при 250 х 9) і ресуспендування 1 х 107
ЕСО СО19-позитивних клітин і 1 х 107 негативних клітин в ЗФР/595 БСА відповідно,
З. Передкліринг неспецифічного фага шляхом інкубації фагової бібліотеки з 1 х 107 СО19-
негативних клітин протягом 60 хв при 4"С з використанням обережного обертання на ротаторі для пробірок, 4. Центрифугування клітин при 250 х д протягом З хв і перенесення супернатанта в свіжу пробірку і додавання 1 х 107 СО19-позитивних клітин і інкубація протягом 60 хв при 4"С з використанням обережного обертання на ротаторі для пробірок, 5. Промивка клітин шляхом центрифугування протягом 1 хв при 250 х 9, аспірація супернатанта і ресуспендування в 1 мл ЗФР (8 разів), б. Елюція фага за допомогою 1 мл 100мМ ТЕА, інкубація протягом 5 хв при КІ і нейтралізація елюата 500 мкл 1М Тріс-НСЇ, рН 7,6, 7. Повторне зараження бактерій Е. соїї ТО1 на експоненційній фазі росту і 8. Зараження хелперним фагом МС5М13 і подальше осадження ПЕГ/Масі!і фагмідних частинок, призначених для використання в наступних раундах селекції. Селекції проводили з використанням більше З раундів.
Для обох підходів селекції специфічні зв'язуючі агенти ідентифікували за допомогою ЕГІЗА таким чином: 100 мкл ЗОнм біотинільованого білка СО19-Рс на лунку застосовували для сенсибілізації нейтравідінових планшетів. Додавали бактеріальні супернатанти, які містять Раб, і зв'язування Баб виявляли за допомогою їх Ріад-міток, використовуючи вторинне антитіло до
Над/НеР.
Клони, які виявлені як ЕГІЗА-позитивні на рекомбінантному людському СО19, додатково тестували за допомогою ЕГІЗА, що грунтується на аналізі клітин, в якому застосовували клітини, короткочасно трансфектовані експресійними плазмидами з ЕСО людського СО19 (ЗЕ
ІО МО: 227). Зазначений аналіз здійснювали наступним чином: через 48 годин після трансфекції
НЕК-клітини збирали і центрифугували при 250 х д протягом 5 хв. Потім клітини ресуспендували в охолодженому на льоду ЗФР, доповненому 295 БСА, до одержання 4 х 105 клітин/мл і інкубували протягом 20 хв на льоду для блокади неспецифічних сайтів зв'язування.
За 4 х 105 клітин в 100 мкл вносили в кожну лунку 96-ямкового планшета і центрифугували при 250 х д і 4"С протягом З хв. Супернатант аспірованого 50 мкл бактеріального супернатанта, що містить розчинні Барб-фрагменти, розводили 50 мкл охолодженого на льоду ЗФР/295 БСА, додавали в планшет, змішували з клітинами і інкубували протягом 1 год при 42С. Потім клітини
Зо промивали тричі охолодженим на льоду ЗФР перед додаванням з розрахунку 100 мкл на лунку
ЗФР/295 БСА, що містить в розведенні 1: 2000 антитіло до Бар-НЕР. Після інкубації протягом 1 год клітини знову промивали тричі охолодженим на льоду ЗФР. Для виявлення додавали 100 мкл субстрату «1-5їер ша ТМВ-ЕГІ5А» на лунку. Після інкубації протягом 10 хв супернатант переносили в новий 96-ямковий планшет, що містить 40 мкл 1М Н250О4 на лунку, і абсорбцію вимірювали при 450 нМ. Клони, для яких характерні сигнали, що помітно перевищують фоновий рівень, піддавали скринінгу по відношенню до кінетичних характеристик за допомогою ЗРЕА- аналізу на пристрої РгоїеОп ХРЕ:З6. 7.2.1.4 Идентификация варіантів 888 із зрілою афінністю за допомогою 5РА.
Для характеризації ЕГІЗА-позитивних клонів швидкість дисоціації вимірювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу та порівнювали з батьківським гуманізованим клоном 888.
При здійсненні цього експерименту 7000 КО поліклонального антитіла до людського Бар іммобілізували на всіх 6 каналах СІ М-чіпа за допомогою амінного поєднання (Ма-ацетат, рн 4,5, 25 мкл/хв, 240 с) (вертикальна орієнтація). Кожен бактеріальний супернатант, що містить антитіло фільтрували і 2-кратно розводили ЗФР, а потім ін'єктували протягом 360 с зі швидкістю 25 мкл / хв до досягнення рівнів іммобілізації, відповідних 100-400 одиниць відповіді (КО), у вертикальній орієнтації. Ін'єкція конструкції мономірний СО19-Ес: Для вимірювання кінетичних характеристик за один прогін ( «опе-5пої» -кінетіка) напрямок ін'єкції змінювали на горизонтальну орієнтацію, ін'єктгували одночасно триразові серійні розведення очищеної конструкції мономірний СО19-Ес (концентрації, які варіюють в діапазоні від 150 до бнМ) зі швидкістю 50 мкл/хв паралельно в різні канали 1-4, тривалість асоціації становила 180 с, а тривалість дисоціації 300 с. Ес-фрагмент людського до (150Нм) ін'єктували в канал 5 в якості негативного контролю специфічного зв'язування з конструкцією мономірний СО19-Ес. У шостий канал ін'єктгували буфер (ЗФРТ), створюючи «паралельний» ( «іп-Іїпе») «порожній» контроль для зіставлення. Регенерацію здійснювали за допомогою двох імпульсних обробок 10мММ гліцином, рН 1,5 і 50мМ Маон протягом 30 с зі швидкістю 90 мкл/хв (горизонтальна орієнтація).
Константи швидкості дисоціації (Кок) розраховували з використанням простої моделі зв'язування 171 Ленгмюра за допомогою програми РгоїеОп Мападег м3.1 шляхом одночасної апроксимації сенсограмм. Ідентифікували клони, які експресують Бар з найбільш низькими константами бо швидкості дисоціації (таблиця 55). Слід зазначити, що константи швидкості дисоціації клонів
Б5АО7 і 5808 не вдалося визначити через невідповідну апроксимацію. Незважаючи на це, обидва клони були відібрані, оскільки отримані результати дозволяють припустити дуже низьку дисоціацію. Варіабельні домени відповідних фагмід секвенували. Важливо відзначити, що обидва залишки аспарагіну в ЇСОК1 (положення 27а і 28) замінювали на серин або треонін, демонструючи видалення обох сайтів деамідування. Порівняльний аналіз первинної структури представлений на фіг. 32. СОВ найбільш перспективних клонів представлені в таблиці 56 (варіабельні області легкого ланцюга) і таблиці 57 (варіабельні області важкого ланцюга) (клон
БНОЗ: (ЗЕО ІЮ МО: 231-236); клон 7НО7: (5ЕО 10 МО: 237-242); клон 2803: (5ЕО ІЮ МО: 243-248); клон 2811: (5ЕО ІЮ МО: 249-254); клон 5АО7: (ЗЕО ІЮ МО: 255-260); клон 5808: (ЗЕО ІЮ МО: 261- 266); клон 5008: (5ЕО ІО МО: 267-272).
Таблиця 55
Константи дисоціації відібраних клонів, одержаних в результаті скринінгового аналізу з використанням бактеріального супернатанта
Батьківський 888 З3З,01Е-4
БНОЗ 2,58Е-4 7НО7 5,75БЕ-5 2803 З,2АБ-5 2811 4,37Е-6 5ров 1,95БЕ-4
Таблиця 56
Послідовності СОВ відібраних легких ланцюгів 888
Кло ЗЕО І ЗЕО І ЗЕО І
БНОЗ К55О51 ЕБ5ТОМТММ ВУ5КВЕ5 ГОПОУРУТ 7но7 К55О5І ЕТЗТОМТУІ М ВУ5КВЕ5 ГОАТНІРУТ 2803 К55О51ЕТЯТОМТУМ ВУ5КВЕ5 ІСІ ТНУРУТ 2в11 К55О5ІЕТВТСТТМІ М ВУ5КВЕ5 ІОПЕОРУТ
БАО7 К55О5ІЕТЯТОМТУМ ВУ5КВЕ5 гогенука 5ВОВ К55О5І ЕТЗТОМТУМ ВУЗКАЕ5 гОоБуєм 5рОВ К55О51ЕТЯТОМТУМ ВУ5КВЕ5 ІСІ ТНЕРУТ
Таблиця 57
Послідовності СОВ відібраних важких ланцюгів 888
Кло ЗЕО І Сов- ЗЕО І ЗЕО 7.2.2 Характеризація одержаних з 888 антитіл з дозрілої афінності 7.2.2.1 Клонування варіабельних доменів антитіл в експресійних векторах
Послідовності ДНК варіабельних областей важких і легких ланцюгів відібраних анти-СО19- зв'язуючих агентів субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом, або з константним легким ланцюгом людського ІдСі. В важкий ланцюг інтродуковали мутації
Ргоз29аху, І ец234АЇа і І ец235АЇїа для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами відповідно до методу, описаному в публікації Міжнародної заявки на патент У/О 2012/130831 АТ.
КДНК ї амінокислотні послідовності анти-СО19 Ідсї представлені в таблиці 58 і таблиці 59 відповідно. Всі кодуючі антитіло послідовності клонували в експресійному векторі, в якому транскрипція вставки перебувала під контролем химерного промотора МРУОМ і який містив синтетичну сигнальну поліА-послідовність, локалізовану на 3-кінці СО. Крім того, вектор містив послідовність ОгіР ЕВМ для підтримки епісомальної форми плазміди.
Таблиця 58
КДНК і амінокислотні послідовності клону анти-СО19 888 в форматі РЗ29СИ1 АЇ А людського Ід
ЗЕО
ІО | Клон і ланцюг Послідовність
МО: вАТаСтТаТтТаАТОАСССАААСТоСАСТСОТОССТОССТОТтСсАаТтСстТасАа
АТСААДаССТОСАТСТСТТаСАВаТсСтТАаТСсАпАлассСсТтТаААААСАаТтАА
ТтТаСАААСАССТАТТ ТОААСТОИаТАССТоСАСАААССАпаИссСАаТтстТосСА
СААСТОСТОаАТСТАСАВИаСТ ТТССАААСаАТ ПТ ТоТаааСТсСтТАСаАСА сатсСсАдатТатАатааАТСАпаСАСАСАТТТСАСАСТаААААТСАОСА свлатасдаастадапйАТТапалат ТАТ ТСТассСтТАСААСТТАСАСА татссСсатТАСАСОЯСТсапвАд,ааапааАССААДасСТасАААТААААСаТтАсС аватастасСАССАТСТаТтСсТТсСАТСТТСССасССАТСТаАТаАдаСАаТтТадА
М А легкий. ланцюг! ТГОТ3ОСААСТОССТСТаттатотасстОстОоААТААСТТСТАТСССАСАСАС 273 | батьківського с ввВ ССАДАСТАСАСТОСААСОТООАТААСОСССТССААТСОСОТААСТСССАС (Є!
АаАатТатСсАСАаАдасСАаЙспАСАасСААапАСАасСАССТАСАаССТСАасСАас
А
СсССТОАСаСТаАаСАААаСАпАСТАСОАСАААСАСААдАатСсТАСаТасстас (Є!
ААСТСАСССАТСАСССаСсСсТаАасСсТСаТсссСаТСАСААДАСАастТТСсСААСАса (Є! сАаАатат
Таблиця 58
КДНК і амінокислотні послідовності клону анти-СО19 888 в форматі РЗ29СИ1 АЇ А людського Ід
ЗЕ
ІО | Клон і ланцюг Послідовність
МО: сда,аатоСсА,аСстТасСсАааСАаатстааАасстаАдастаТААдАда,асставаастт
САаЙТОААдаАТаасССстТасААааст ІСсТасАТАСАСАТТСАСТОаАСТАТАТ тТАТаСАСТОСОЯТаААдаСАпААсАСстаси;асСАа,асвчсасстаХдатапАТаС
АТАТАТТААТССТТАСААТОАТОСТ ТСТААДИТАСАСТОАСААСТТСААС
СаСААдпаССАСАСТаАСТТСАСАСАААТСТТОСАТСАСАИССТАСАТОСЯ дастодасАХасстАосттадасаАсттасСаатТсСсТтТАТТАСТатТасСАДО асОАССТАТТАТТАТОСТАСаСЯаСССТСТТТаАСстТАСсТаИапасСссСААцОС
АССАСТСТСАСАСТСОТОСТОСасСтТАаСАССААДС,СаасСсССАТоИваТтстосс
ССтТаСАСССТоСТоСААдсаСАХасСсАссттасацвасАасАаасСсава7ассставиас т асстаТСсААааАСТАСТТССССОаАдАСсСсавастаАса,аататаТасААСТСА (Є) сса,ассСстаАсСсАда,асСса,ааСаТасСАСАССТТСсСсвастТтатСсСстТАСАатосСтТСА (Є) вАСТСТАСТОССТоАдаСсАа,асатастаадссатассстосАасСсАа,астасвОс
А
СССАСАССТАСАТСТаСААСаИТтаААТСАСААаСССАаСААСАССААапа Та (Є)
АСААДПАААИТТаАДасСССАААТСТТаТтТаАСААААСТСАСАСАТасСсСсСАССатТт (Є) важкий СсоСАасСАССТаАдАХаСстТасАдасасаАССатСАаТатст ССС ССССССАА
А
274 батьків АСССААССАСАСССТСАТОАТСТОССОСАССССТОДОСТСАСАТОСОТОС атьківського | Т вв сатаАСсатаАдаССАСаААаАССсСсТАааТСсААаТтТТСсААСсТаатТАСаТтас
А сава,ас,атпАдОаТаСАТААТаССААаАСАдА,аСссас,ассАдасвАасСАатТАС
А
АсАдаСсАСсатАссататаатАа,атоСсТАсСатСстасСсАСсСАасасАСТаС (о;
ТОААТОССАДОаСАСТАСАДаИТаСААДааТСсТоСААСАдАаасостааСасс (о;
ССАТСОАСАААДАССАТСТОСААДаССАдАда,авасСАасссСпАаААССАСАС (Є) тТатАСАСССсТасссСССАТтоСсСсаапАТаАастаАССААаААССАваТатсАас (о; таАсстТасСстТасТСААдАдаасСТСстТАТоССАаасСсаАсСАтассастасАатась (Є)
АвАдаСААдтасасАдасСапАаААСААСТАСААаАССАсасстсСсиИатаста (Є)
АСсСТоСсСаАссСастосСТсТссСТСстТАСАаСАдасСТоАССатапАСААадас да стасСдаСсАдаЧвапААСаТатсТсТоАТтастоСатТаАТасСАтаАсаастостас
А
СААССАСТАСАСасСсАсАА,алассттюєєтаИатстСасатААА
РАММТОТРІ БІ РУИБІ СООАБІЗСНОВОБІ ЕМОМОМТ МІ МУ МІ ОКРООБРОЇ.
ПМАУ5КАЕБОМІ ОВЕБаЗаватовтІ КІЗАМЕАЕОІ аУМЕСІ ОЇ ТНУРУТЕ легкий ланцюп СССТКІ ЕІКАТМААРБЗМЕІЕРРБОЕОЇ КБИТАБММСІ І ММЕХРАЕАКМОУМКМУО 275 | батьківського |М вв АГ ОБаМБОЕВМТЕООБКОБТУБІ 55171 ТІ БКАОМЕКНКУММАСЕМТНОСІ 55Р
Ук
ЗЕМНОЕС
Таблиця 58
КДНК і амінокислотні послідовності клону анти-СО19 888 в форматі РЗ29СИ1 АЇ А людського Ід
ЗЕО
ІО | Клон і ланцюг Послідовність
МО:
ЕМО! ОО5ОРЕЇ УКРОАЗУКМАСКАБИахТЕТОМІМНУУКОКТаВагї ема
МІМРУМОСЗКУТЕКЕМОКАТІ Т5ОК5О5ОІТАММЕЇ 551 ТЗЕОБАМУУСАВИтТт
УуУхУазАГЕЮУМУСОСТТТУ55АЗТКаРЗМЕРІ АРОЗКЗТЗОСТААГ асі уко
У
ЕРЕРМТУБУУМЗОИАІ Т5СУНТЕРАМІ О55(12І. 51 55 МРБЗББІ С ТОТМІСММ важкий МН 276 | ланцюг КРОМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕАДАСОРБУНІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТР батьківського. | ЕУТСМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ У рамМЕМНМАКТКРАЕЄОУМЗТУАМММІ ТМ. вв Нн
ОМ МЕОКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКИАОРАЕРОМУТІ РРОВОЕЇТКМОМ
З
ГТС УКкагМРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОраЗЕРІ МК ТУКА ме)
ОСММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ 5І Рак
Таблиця 59
КДНК і амінокислотні послідовності клонів анти-СО19 з дозрілої афінності в форматі РЗ2ОСІ АГА людського ІДИ
ЗЕОІО| Клоні . .
САТАТТаТтТСАТаАСТСАААСТОСАСТО ТО ТОТОТоСОЯатОаАсооСа,авато дассАдасаАасСАТТТСТТаСАААТССАаССААТСТСТапАААССТОоСАС
СсааСАССАСатАССТаААСТааТАТСТОСАСАААаСсСсСваатСАсАаСоо ссад,аста|астаАтТстТАСсСсататАТСТААаСаИСсттотСсвасаттосСтТаАТС аттсадассатставАТОСааСАСССОСАСТТТАСТСТААААТСАИаССС татасвАдастТаААдсаАссттаасатстТАСТАТТатТСОТОСсСАСОСТаСтТасцсаАА 2811. пегкий САТОССАТАСАССТТСИ,ИаТСААСааААСпАААСтТасАААТТАААСИаТАСса 277 пан юг стаасСстТасСАССАТСТаТСсСТТсСАТСТТоСсСсассСАТСТаАтТадаСАаттад
В ААТСТОСААСТОССТСОТОаТТататТаСстастаААТААСТТСТАТОССАС
АдаАдпасСсСАААаТтАСАаатасАда,аатацпАТААСасссСстоСААТССааТтАА
СстТоССАасаАаАдаТатСАСАаАаСАасАСАаСААдапАСАаСАССТАСАС
ССстТсАаСАаСАССсСсТаАСастаАаСАААдаСАпАСТАСПАСпСАААСАСАА датстТАасасстасраААатСАСССАТСАСССЯЯаЯСсСТОАаСстоассСаТСАСА
ААСАаСТТСААСАас,СаасАсАатТат сАсатасСсААТТааТТСсААТСОТОСТастаААаТАААААААССавасастт
ССатТТААдАд,атТаАдаСТасСАААасСАТСТаСТ ТАСАССТТСАСТОаАСТАТАТ
СсАТОСАСТОСОСТТоОСТоАсаИсссСсасаасСсАаасатотацзлатацдАатаавс
СТАСАТТААСССАТАСААСИОАСИасТ ТОСАААТАТАССОАСАААТТОСАС сасСбасСсаТтСАСВАТаАССАаСсАСАСТТСТАТСТОоСАССаСатАСАТОСЯ
ААСТаТотТАаАСстТасаттотаАСаАСАССаста ТТАСТАТТИаТасСАСа 2811 СаспТтАССТАСТАСТАСОИТССАСсАааСсТатттаАТТАСТОСОИаССАдаатТт 278 важкий АССАССЯСЯТОАсСсатТААл,аСстотастАасСАССААл,асассСАтоаа7тстоо панцюг состТааСАСССТОСТоСААДсАХаСсАсстТотасавасСАсАассасвсостасції
В стасСстасйТСААасаАСТАСТТССССаААсСссатаассататсатацААс тсАдса,асасостаАссАХда,аса,вабаТаСАСАССТТССТВастТатссСтТАСАСТ
СсСстТоАасаАСТСТАСТОССТоАа,аСсАаа,асатаатаАассатассстоСАасСАа стацвасСАСсССАсаАССТАСАТСТаСААСатаААТСАСААДаСССАасСААС
АССААССЯтТапАСААпАААаТТаАаСССАААТСТТатТаАСААААСТСАС
АСсАТаСССАССОЯТИСССАаСАССТаААаСТаСсАасас,сапАсСатСАатостТ тост ССССССААААСССААаСсАСАСССТСАТОАТСТОССасАСССс
Таблиця 59
КДНК і амінокислотні послідовності клонів анти-СО19 з дозрілої афінності в форматі РЗ2ОСІ АГА людського ІДИ тадаптСАСсАТасатаатаатацАаСатАасССАСадАдалссстадаат
САДИТТСААСТОИ,тТАСОСТасАСсааоатасАсаТасСАТААТаССААСАС
Аддассас,асалцаадаСАаТтАСААСАааСсАСсатАссататаатАасат
СсСстТосАСсСОаСТоСТасСсАССАсСОсСАСстТаасСстТаААтТааСАда,апА,аТАСАдИатТа
СААДСИТСТОСААСАдАдассстоавасасссоССАТСИАСААААССАТСТОС
ААдДасСсСсАААсааСАассссаАаААССАСАасТатТАСАСССТаТасссссСА тосСсаааАтТадасСстаАССААаААССАса7атсаассталсстасстаатсА
АдаасТТстТАТСССАаСадСсАТССОЯСССЯТтасшаиатасададасСААтасвас дассавАЧпААСААСтТАСААаАСсСАсасстоссатастасАсСтоСадса
Стос сТоСТСстТАСАаСАдасСтТСАСсСастТасАСАдаАдасСАватаайсСА абадсаааААсатстстТсАТаСстТоСатТаАтТасСАтТалааСТСТасСАСААС
САСТАСАСОЯСАПААсСАасстотосСстаТатотоСасватТААА
РІММТОТРІ БІ ЗМТРЕИОРАБІЗСКЗБОБІ ЕТТИаТТтмМІ МУМ ОКРОИОБРОМІ І
УвУ5КАЕЗамвРовЕЗазаватовтІКІЗАМЕАЕОМаМУМУУСІ ОГП ЕОРУТЕРа 279 2В11, легкий ОСТКІ ЕІКАТМААРЗМРІЕРРБЗОЕОЇ Ка ТАБУМСІ І ММЕМРАЕАКМОУМУКМ ланцюг |ОМАГОБаМЗОЕЗМТЕООЗКОБЗТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕУТНОС
І 55РУТКЗЕМАИаЕС
ОМОЇ МОБЕАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИМ ТЕТОМІМНУУВОАРИСИІ ЕУМ
СМІМРУМОЯаЗКМ ТЕКЕРОСАМУТМТЗОТ5ІЗТАММЕЇ 5ВІ В5ООТАУУУСАН
СТУММОаРОЇ ЕОММУ/СОСТТУТУ5ЗАЗТКОаРБОМЕРІ АРОЗКЗТЗИаСТАА ас. 2811 МКОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ ТЗаМНТЕРАМІ О550І 5І 55УУТУРЗЗБІ СТО 280 важкий ТМІСМУМНКРУЬМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕААСИРБЗМУРІ ЕРРКР ланцюг КОТ МІЗВТРЕМТСУУМОУМЗНЕОРЕУКЕМУ УМрИМЕМНМАКТКРАЕЕЄОУ
МОТУАМУУБМІ ТМ НОМ МЕКЕМКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКИОРАВЕР
ОМУМТІРРОВОЕТКМОМУБІ ТОЇ УКИОЕУРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМ
ГгоБразЕР УК ТОК АМОСаММЕЗСОСЗУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І РОК
САТАТТаТтТАТИАСТСАААСТОоСАСТОТСОТСОТа тТОоСОСТтаАсссСасато дассАдасаАасСАТТТСТТаСАААТССАаССААТСТСТапАААССТОоСАС сааСААСАСаТтАССТОаААСТааТАТСТОСАСААдАСССОСатсАаАаССс ссад,аста|астаАТстТАСССТатАТСТААХда,аСаИсттотосвасаттосСтТаАТС аттсадассатставАТОСааСАСССОСАСТТТАСТСТААААТСАИаССС татасвАддастТаААдсаАссттаасатсТАСТАТТатТСтТаСАсаасСААСССАТ 7НО?7, пегкий АТСССАТАСАССТТоСаТСААдапААСТАААСТасАААТТАААСаИатАСась 281 ланцюг таавстТаСАССАТСТаТСТТсАТСТТоССассСАТСТаАтТадасСсАаттТаАА
АТоТааААСсСТОаССТОТОаТататасСтастаААТААСТТСТАТОССАСА авАааССААдАдатАсАатапААла,аатапАТААСасссТССААТСсасаТААС тосСсАа,7аАсСАаТатСАСАсСАа,аСАа,апАСАаСААапАСАаСАССТАСАСС
СстТСАаСАаСАСССсТаАСастАаСАААдаСАпАСТАСПАСпАААСАСААА стотТАсасстасСсапАдАдатСАСССАТСАСОооСсТвАаСстСаТасссСатСАСАА
АаАдасСсТТСААСАасСасаАсАатат сАсатасСсААТТааТТСсААТСОТОСТастаААаТАААААААССавасастт
ССатТТААдАд,атТаАдаСТасСАААасСАТСТаСТ ТАСАССТТСАСТОаАСТАТАТ
СсАТОСАСТОСОСТТоОСТоАсаИсссСсасаасСсАаасатотацзлатацдАатаавс 7НОо, СТАСАТТААСССАТАСААСИОАСИасТ ТОСАААТАТАССОАСАААТТОСАС 282 важкий |сасСбасСсаТСАССаАТаАССАаСаАСАСТТСТАТСТОСАССОаСОаТАСАТОаС ланцюг ІААста,атостАааАстТасатСтаАСсАСАСсСсастТатТтТАСТАТТаТасСАССЯ
СсасаТАССТАСТАСТАСОЯТТоТаААСТатттаАТТАСТОСОИаССАдаатТт
АсСсАСсСОСОатаАсСатАаластстаТастАасСсАССААСаСааСсССАтааТтстос состТааСАСССТоСТоСААДсАХасСАсстотасавасСАсАассасосостасвс
Таблиця 59
КДНК і амінокислотні послідовності клонів анти-СО19 з дозрілої афінності в форматі РЗ2ОСІ АГА людського ІДИ стасстааТСсААдСпАСТАСТТОСССаААсСсвсталсастатсатацААс тбАасвасассстаАсСАасСсассатасСАСАССТТоССЯОСстатосСтТАСАИтТ
СсСстТСАааАСТСТАСТоССТоАДасаасСса,атаатаадссатассстоСАасСАс стацвасСАСсССАсаАССТАСАТСТаСААСатаААТСАСААДаСССАасСААС
АССААССЯтТапАСААпАААаТТаАаСССАААТСТТатТаАСААААСТСАС
АСсАТИаОСССсСАССЯтТасСсСАаасАасстаддастасаасяассаАасса,атсАатст
ТОСТСТССССССААДАСССААдааАСАСССТСАТОАТСТоССсааАссссо тадаптСАСсАТасатаатаатацАаСатАасССАСадАдалссстадаат
САДИТТСААСТОИ,тТАСОСТасАСсааоатасАсаТасСАТААТаССААСАС
Аддассас,асалцаадаСАаТтАСААСАааСсАСсатАссататаатАасат
СсСстТосАСсСОаСТоСТасСсАССАсСОСАСстТаасСтТаААтТааСААдааАаТАСАдИаТа
СААДСИТСТОСААСАдАдассстоавасасссоССАТСИАСААААССАТСТОС
ААдДасСсСсАААсааСАассссаАаААССАСАасТатТАСАСССТаТасссссСА тосСсаааАтТадасСстаАССААаААССАса7атсаассталсстасстаатсА
АдаасТТстТАТСССАаСадСсАТССОЯСССЯТтасшаиатасададасСААтасвас дассавАЧаААСААСтТАСААаАСсСАсасстоссатастааАСстоСсаАСа
Стос сТоСТоТАСАаСАА0аСТСАСсСатапАСАдаАдасСАватаасСА абадсаааААсатстстТсАТаСстТоСатТаАтТасСАтТалааСТСТасСАСААС
САСТАСАСОЯСАПААсСАасстотосСстаТатотоСасватТААА
РІММТОТРІ БІ ЗМТРЕИОРАБІЗСКЗБОБІ ЕТЗТОаТмМТМІ ММ ОКРООБРОГІ
ІМАУ5КАЕЗаУРОВЕЗОаЗИаБаИтТОгТІ КІЗВМЕАЕОМИа УСІ ОАТНІРУТЕС 283 7НО?7, легкий! ОСТКІ ЕІКАТМААРЗУРІРРРБЗОЕОЇ КЗатАБУМСТ ЇЇ ММЕМРАЕАКМОМ КМ ланцюг |ОМАГОБаМЗОЕЗМТЕООЗКОБЗТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕУТНОС
І 55РУТКЗЕМАИаЕС
ОМОЇ МОБЕАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИМ ТЕТОМІМНУУВОАРИСИІ ЕУМ
СМІМРУМОаЗКМТЕКЕРОСАМУТМТЗОТ5ІЗТАММЕЇ 5ВІ В5ООТАУУУСАВ атуУмавзЕ ЕрРМУаОсСТТУТУ5ЗАВТКОаРОЗМЕРІ АРОБКЗТЗИасСТтТААІ СС. 7ної МКОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ ТЗаМНТЕРАМІ О550І 5І 55УУТУРЗЗБІ СТО 284 важкий ТМІСМУМНКРУЬМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕААСИРБЗМУРІ ЕРРКР ланцюг КОТ МІЗВТРЕМТСУУМОУМЗНЕОРЕУКЕМУ УМрИМЕМНМАКТКРАЕЕЄОУ
МОТУАМУУБМІ ТМ НОМ МЕКЕМКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСООРАВЕР
ОМУМТІРРОВОЕТКМОМУБІ ТОЇ МКОЕУРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМ
ГгоБразЕР УК ТОК АМОСаММЕЗСОСЗУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І РОК
САТАТТаТтТАТИАСТСАААСТОоСАСТОТСОТСОТа тТОоСОСТтаАсссСасато дассАдасаАасСАТТТСТТаСАААТССАаССААТСТСТапАААССТОоСАС
СааСААСАСаТтАССТаААСТаАИ,ТАТСТОСАСААдАССавсватСАаАасСосс асад,аста|астаАТстТАСсСИТатАТСТААЛдаСаИСсттютсвасаттосСтТаАТ са,аттсд,ассатставпАТСааСАССОСАСТТТАСТСТОААААТСАСаСС статапйААдасСсТаАдАдсАсатта,аасаТСстТАСТАТТатТСОТаСсАатТТаАСССА 2803. пегкий са,аттоСатАСАССТТССаТСААдапААММАААСТасьААТТАААСИТтАС 285 ланцюг сатаваСсТасСАССАТСТаТсСТсСАТСТТСоССасСсСАТСТаАТаАдасСА,атТТа
АААТСТаСААСТОССТСОТОТТаТОТаССтТасСстТаААТААСТТСТАТСССА аАдаАдайаССАААдатАСАаатасАаааТавАТААСассстССААТСсВвВасСтТА
АСТоСсСсАсСаАасСАатТатСсАСАасСАаСАааАСАаСААда,апАСАаСАССТАСА аССстСАаСАаСАСоСтаАдСасСстаАаСАААаСАвАСТАСпАСпАААСАСА
АдатстТАсасстаСсаААаТСАСССАТСсАСЯССССТОАа,аСТСССсоСсаТатсАСс
АААСАЛС,СТТСААСАсасаАсАИ,Ттат важкий | ТССаТТАААдатадасСтасСАААаСАТСТасаСТТАСАССТТСАСТОаАСТАТА
Таблиця 59
КДНК і амінокислотні послідовності клонів анти-СО19 з дозрілої афінності в форматі РЗ2ОСІ АГА людського ІДИ ланцюг |тТсАСсасСсАСТаСсССТтсатоАасСасосса,асассАасасастсотасАа,атасАтас аСтТАСАТТААСССАТАСААССОСАСОа ТТ ТОСАААТАТАССОАСАдДАТТОС дасассасСсоаТСАСаАТаАССАасСааАСАСТТСТАТСТОСАССИЯаСаИТтАСАТ асаААСТаТтСстТАсАСстТаТасСаттстТаАСаАСАССаТаста т ТТАСТАТТатасА сасСсааТАССТАСТАСТАСОЯЧИатТоСАСАТСОТаТтТаАТТАСТОСОСОаССАда стТАССАССЯСТОАСсСатААдастотастАаСАССААсаасссСАтоаИаТсТТ сосоСстааСАСССТоСТоСААсдасАассттасавасАсАаасСааоссста састасстаайТСАдаваАСТАСТТССССадАсСсСЯясталссвсататсатась
ААСТСАСОССОаСсоСстТадсСсааса,ассатасСАСАССТТСССЯЯОСсТатосСтТАС датоСстоАдапАСТСТАСТОССТоАа,аСсАСсССсСатастаассатаТассстосАа сала,асттаавасСАСССАСпАССТАСАТСТаСААСатаААТСАСАДасссСАс
СААСАССАдС,атацпАСААСпАААа т ТаАДасСССАААТСТТатаАСААдАС тТСАСАСАТИаСССАССОЯТИСССАДасСАСсСТОААастасаасяааАсСи то
АатТсТосСТСТоСССССАААДАСССААасСАСАСССТСАТаАТСТОСССОСО
АосостТаАдаатсСАСАТОаССОСТОСТОСТасАСсатадасССАСОААЧАСССТ адапйТсААатТТСААСстТастАасата,асвАас,ааоаставАсатасСАТААТИаСС
ААпАСАдАдаССасц,васА,асАаСАсТАСААСАа,аСАСсатАссататаито дасатостоАассатосТаСАССАсаАСстаастаААтТааСАдацсАатАс
ААдСТасСАдааТСТоСААСАААда,асоСстовасасССССАТССАСАДААСО
АТСТОСААДДаССААдАасСаасАассссвАпААССАСАвататТАСАСССтТа
СоСССАТСССОСОСОАТтТОАХасСстТадсСААаААССсАсаТтсаассталсстас стаайТСАААдасасСТстТАТСССАаСаАСАТСОЯСССЯТОВАааСТтасаАадас
ААТвВСОСЯСАаССапАпаААСААСТАСААаАССсАСсасстосса тастааАс тобаАСсСастосСтТсТоСсТоТАСАасСААластсАССатапАСАдаАаСА сатааСбдасСсаасасаААсатстсТсАТаСсТОСИДТаАТаСАТОАССИаИстет ,ССАСААССАСТАСАСОЯСАСААдспСАаасстотосСстаТатстоСасатТААА
РІММТОТРІ БІ ЗМТРЕИОРАБІЗСКЗБОБІ ЕТЗТОаТмМТМІ ММ ОКРООБРОГІ
ІМАУ5КАЕЗаУРОоВЕЗОаЗаБаИтТОЕТІ КІЗАМЕАЕОМаМ УСІ ОЇ ТНУРМТЕ 287 2803, легкий! ОСХКІ ЕІКАТМААРЗМУБРІЕРРБЗОЕОЇ Ка ТАБМУМСІ І ММЕМРВЕАКМОМУК ланцюг |МОМАГОБаМЗОЕЗУТЕООЗКОБЗТУБІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНО
СІ 55РУТКЗЕМАСЕС
ОМОЇ МОБСАЕУККРОАБУКУЗСКАБЗИМ ТЕТОМІТНУУВОАРОСИЇ ЕМУМ
СМІМРУМОЯаЗКМ ТЕКЕОСАУТМТЗОТ5ІЗТАММЕЇ 5ВІ В5ООТАУУУСАН атуУУМаРОЇ ЕМО УТУ5ЗАЗТКОаРБЗМУЕРІ АРЗЗКЗТЗОСТАА Со
ГУКОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ ТЗаМНТЕРАМІ О550І 5І 55УУТУРЗЗ ИТ 2803, ОТМІСМУМНКРОЬМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕААСИРБУРНБІ ЕРРК 288 важкий РКОТІ МІЗАВТРЕМТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМВИМЕМНМАКТКРАЕЕО ланцюг | УМ УАММУБМІ ТМ НОБМ/ЛІ МЕКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРВАВЕ
РОМУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І ТС УКИЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРР
УГгоБразЕР ЗК ТМОКЗАМОСаММЕЗСОСЗУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І ЗРО
К
САТАТТаТтТАТИАСТСАААСТОоСАСТОТСОТСОТа тТОоСОСТтаАсссСасато дассАдасаАасСАТТТСТТаСАААТССАаССААТСТСТапйАААССТОСАС сааСААСАСаТтАССТОаААСТааТтТАТСТОСАСААдАССваатСА,сАаСос
БАО7. легкий асад,аста|астаАТстТАСсСИТатАТСТААЛдаСаИСсттютсвасаттосСтТаАТ 289 ланцюг са,аттсд,ассатставпАТСааСАССОСАСТТТАСТСТОААААТСАСаСС статапйААдасСсТаАдАдсАсатта,аасраТСстТАСТАТТатТСОТОаСсАаСсСАаатсА
ТТАСССАСОИатТАССТТСИааТСААаОаААСТАААСтТасАААТТАААСИаИтАС сатаваСсТасСАССАТСТаТсСТТСАТСТТОССасСАТСТаАТОАДаСА,тТТа
АААТСТаСААСТОССТСОТОТТеатТаИатассСтастаААТААСТТСТАТСССА
Таблиця 59
КДНК і амінокислотні послідовності клонів анти-СО19 з дозрілої афінності в форматі РЗ2ОСІ АГА людського ІДИ аАдаАдайаССАААдатАСАаатасАаааТавАТААСассстССААТСсВвВасСтТА
АСТоСсСсАсСаАасСАатТатСсАСАасСАаСАааАСАаСААда,апАСАаСАССТАСА аССстСАаСАаСАСоСтаАдСасСстаАаСАААаСАвАСТАСпАСпАААСАСА
АдатстТАсасстаСсаААаТСАСССАТСАСЯСССТОАаСаСсТассСсатТсСАС
АААСАЛС,СТТСААСАсасаАсАИ,Ттат сАсатасСсААТТааТТСсААТоТОСТастаААаТАААААААССавасаст тТоСатТААдДатТаАдасСТасСАААасАТСТааТТАСАССТТСАСТОАСТАТА тТСАТОСАСТОСЯаТТОСаТсоАасСасосоСсасаса7ассАа,асастотасахатасАтас аСтТАСАТТААСССАТАСААСИАСОИСсТ ТОСАААТАТАССОСАСАААТТОС дасассасСсоаТСАСаАТаАССАасСааАСАСТТСТАТСТОСАССИЯаСаИТтАСАТ асаААСТаТтСстТАсАСстТаТасСаттстТаАСаАСАССаТаста т ТТАСТАТТатасА
СсасбссаатТАСТТАСТАСТАСЬСТТоСсасСсСТСсТтТаАТТАСТОИОСассСААс стТАССАССЯСТОАСсСатААдастотастАаСАССААсаасссСАтоаИаТсТТ сосоСстааСАСССТоСТоСААСАХаСАССТСТаСОСа,асасСАСсАаСсаасСосСтТОа састасстаайТСАдаваАСТАСТТССССадАсСсСЯясталссвсататсатась
ААСТСАСОССОаСсоСстТадсСсааса,ассатасСАСАССТТСССЯЯОСсТатосСтТАС датоСстоАдапАСТСТАСТОССТоАа,аСсАСсССсСатастаассатаТассстосАа сала,асттаавасСАСССАСпАССТАСАТСТаСААСатаААТСАСАДасссСАс
БАОІ, СААСАССАда,атацпАСААСпАААатТадассСАААТСТТатаАСААдАС 290 важкий | ТСАСАСАТассСАСсСсОастасссАдасАасстадаастасаасавасвАсСи то ланцюг (АТС ОСТСТССССССААААСССААапАСАСССТСАТОАТСТОССОаИ
АосостТаАдаатсСАСАТОаССОСТОСТОСТасАСсатадасССАСОААЧАСССТ адапйТсААатТТСААСстТастАасата,асвАас,ааоаставАсатасСАТААТИаСС
ААпАСАдАдаССасц,васА,асАаСАсТАСААСАаСАСатАсСсататасто дасатоСстТоАсСаТоСсТаСАССАсСадстаастаААтТааСАдааАатТАс
ААдСТасСАдааТСТоСААСАААда,асоСстовасасССССАТССАСАДААСО
АТСТОСААДДаССААдАасСаасАассссвАпААССАСАвататТАСАСССтТа
СоСССАТСССОСОСОАТтТОАХасСстТадсСААаААССсАсаТтсаассталсстас стаайТСАААдасасСТстТАТСССАаСаАдСсАТСОЯСССЯТОаАаа,атаасАаАИас
ААТВСССАаССапАпААСААСТАСААаАССсАсасстоссатастацсАс тобаАСсСастосСтТсТоСсТоТАСАасСААластсАССатапАСАдаАаСА сатааСбдасСсаасасаААсатстсТсАТаСсТОСИДТаАТаСАТОАССИаИстет ,ССАСААССАСТАСАСОЯСАСААдспСАаасстотосСстаТатстоСасатТААА
РІММТОТРІ БІ ЗМТРЕИОРАБІЗСКЗБОБІ ЕТЗТОаТмМТМІ МУМУМ ОКРООБРОЇ
ІМАУ5КАЕЗаУРОоВЕЗОаЗаБЗаТОЕТІ КІЗАМЕАЕОУМаУУ УСІ ОРОНУРИТЕ 291 БА07, легкий! ОСТКІ ЕІКАТМААРЗУРІЕРРЗОЕОЇ КЗатАБЗУМСТ І ММЕМРАЕАКМОМК ланцюг |МОМАГОБаМЗОЕЗУТЕООЗКОБЗТУБІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНО
СІ 55РУТКЗЕМАСЕС
ОМОЇ МОБОАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИМ ТЕТОМІМНУУВОАРОССІ ЕМ М
СМІМРУМОЯаЗКМ ТЕКЕРОСАМУТМТЗОТ5ІЗТАММЕЇ 5ВІ В5ООТАУУУСАН атумУавзАГЕрМУаОСсТТУТУ5ЗАВТКОаРОЗМУЕРІ АРОБКЗТЗИаСТААІ СО
ГУКОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ ТЗаМНТЕРАМІ О550І 5І 55УУТУРЗЗ ИТ
БАОІ, ОТМІСМУМНКРОЬМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕААСИРБУРНБІ ЕРРК 292 важкий РКОТІ МІЗАВТРЕМТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМВИМЕМНМАКТКРВАВЕЕО ланцюг | УМ УАММУБМІ ТМ НОБМ/ЛІ МСОКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРВАВЕ
РОМУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І ТС УКИЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРР
УГгоБразЕР ЗК ТМОКЗАМОСаММЕЗСОСЗУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І ЗРО
К
Таблиця 59
КДНК і амінокислотні послідовності клонів анти-СО19 з дозрілої афінності в форматі РЗ2ОСІ АГА людського ІДИ ланцюг ІпїдасСАдаСаАаСАТТТСТТаСАААТССАаССААТСТОТасАААССТоСАС сааСААСАСаТтАССТОаААСТааТтТАТСТОСАСААдАССваатСА,сАаСос асад,аста|астаАТстТАСсСИТатАТСТААЛдаСаИСсттютсвасаттосСтТаАТ са,аттсд,ассатставпАТСааСАССОСАСТТТАСТСТОААААТСАСаСС статапйААдасСсТаАдАдсАсатта,аасаТСстТАСТАТТИТСТаСсАастаАССсСА
ТтТаААССАТАСАССТТОСИаТтСААДаСААСТАААСТасАААТТАААСИаИтАС сатаваСсТасСАССАТСТаТсСТТСАТСТТОССасСАТСТаАТОАДаСА,тТТа
АААТСТаСААСТОССТСОТОТТаТОТаССтТасСстТаААТААСТТСТАТСССА аАдаАдайаССАААдатАСАаатасАаааТавАТААСассстССААТСсВвВасСтТА
АСТоСсСсАсСаАасСАатТатСсАСАасСАаСАааАСАаСААда,апАСАаСАССТАСА аоСтсАаСАаСАСоСТаАдСасСстаАаСАААаСАпАСТтТАСПАСпСАААСАСА
АдатстТАсасстаСсаААаТСАСССАТСАСЯСССТОАаСаСсТассСсатТсСАС
АААСАЛС,СТТСААСАсасаАсАИ,Ттат сАсатасСсААТТааТТСсААТоТОСТастаААаТАААААААССавасаст тТоСатТААдДатТаАдасСТасСАААасАТСТааТТАСАССТТСАСТОАСТАТА тТСАТОСАСТОСЯаТТОСаТсоАасСасососасасасса,асатотаслатааАТас аСтТАСАТТААСССАТАСААССИСАСОСИ ТТ ТОСАААТАТАССОСАСАААТТОС дасассасСсоаТСАСаАТаАССАасСааАСАСТТСТАТСТОСАССИЯаСаИТтАСАТ асаААСТаТтСстТАсАСстТаТасСаттстТаАСаАСАССаТаста т ТТАСТАТТатасА сасСсааТАССТАСТАСТАСОЯИаТтотТаААСТаТттТаАтТтАСсТааааССААС стТАССАССЯСТОАСсСсатТААдастотастАаСАССААлсаасссСсАатсаватстт сосоСстааСАСССТоСТоСААсдасАссттасавасАсаасаасСоста састасстаайТСАдаваАСТАСТТССССадАсСсСЯясталссвсататсатась
ААСТСАСОССОаСсоСстТадсСсааса,ассатасСАСАССТТСССЯЯОСсТатосСтТАС датоСстоАдапАСТСТАСТОССТоАа,аСсАСсССсСатастаассатаТассстосАа сала,асттаавасСАСССАСАССТАСАТСТаСААСатаААТСАСАдасСсссСАс 5ров, СААСАССАдааТапАСААСпАААа т ТаДасСССАААТСТТатаАСААдАС 294 важкий | ТСАСАСАТассСАСсСсОастасссАдасАасстадаастасаасавасвАсСи то ланцюг (АТС ОСТСТССССССААААСССААапАСАСССТСАТОАТСТОССОаИ
АосостТаАдаатсСАСАТОаССОСТОСТОСТасАСсатадасССАСОААЧАСССТ адапйТсААатТТСААСстТастАасата,асвАас,ааоаставАсатасСАТААТИаСС
ААпАСАдАдаССсас,ваавАда,асАаСАсТАСААСАа,аСАСсатАссататаито дасатоСстТоАсСаТоСсТаСАССАсСадстаастаААтТааСАдааАатТАс
ААдСТасСАдааТСТоСААСАААда,асоСстовасасССССАТССАСАДААСО
АТСТОСААДДаССААдАасСаасАассссвАпААССАСАвататТАСАСССтТа
СоСССАТСССОСОСОАТтТОАХасСстТадсСААаААССсАсаТтсаассталсстас стаайТСАААдасасСТТстТАТОССАасСсаАСсАтсассатааваатассвАадас
ААТВСССАаССапАпААСААСТАСААаАССсАсасстоссатастацсАс тобаАСсСастосСтТсТоСсТоТАСАасСААластсАССатапАСАдаАаСА сатааСбдасСсаасасаААсатстсТсАТаСсТОСИДТаАТаСАТОАССИаИстет ,ССАСААССАСТАСАСОЯСАСААдспСАаасстотосСстаТатстоСасатТААА
РІММТОТРІ БІ ЗМТРЕИОРАБІЗСКЗБОБІ ЕТЗТОаТмМТМІ ММ ОКРООБРОГІ
ІМАУ5КАЕБаУРОВЕЗОаЗаБаИтТОЕТІ КІЗАМЕАЕОМаМУ УСІ ОЇ ТНЕРМТЕ 295 5008, легкий! ОСТКІ ЕІКАТМААРЗУМРІЕРРБЗОЕОЇ КЗатАБУМСТИЇ ММЕМРАЕАКМОМУК ланцюг |МОМАГОБаМЗОЕЗУТЕООЗКОБЗТУБІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНО
СІ 55РУТКЗЕМАСЕС
БООВ ОМОІЇ МОБЕАЕУККРОАБУКУЗСКАЗОИМ ТЕТОМІМНУУВОАРОСИІ ЕУМ
296 важкий СМІМРУМОЯаЗКМ ТЕКЕРОСАМУТМТЗОТ5ІЗТАММЕЇ 5ВІ В5ООТАУУУСАН ланцюг атуУмавзЕ ЕрРМУаОсСТТУТУ5ЗАВТКОаРОЗМЕРІ АРОБКЗТЗИасСТтТААІ СС.
МКОМЕРЕРУТУБУУМЗСИаАІ ТЗаМНТЕРАМІ ОЗИМІ 55УМ ТУРБО
Таблиця 59
КДНК і амінокислотні послідовності клонів анти-СО19 з дозрілої афінності в форматі РЗ2ОСІ АГА людського ІДИ
ТМІСМУМНКРУЬМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕААСИРБЗМУРІ ЕРРКР
КОТ МІЗВТРЕМТСУУМОУМЗНЕОРЕУКЕМУ УМВИМЕМНМАКТКРАЕЕЄОУ
МОТУАМУУБМІ ТМ НОМ МЕКЕМКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКИОРАВЕР
ОМУМТІРРОВОЕТКМОМУБІ ТОЇ МКОЕУРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМ
ГгоБразЕР УК ТОК АМОСаММЕЗСОСЗУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І РОК
САТАТТаТтТАТИАСТСАААСТОоСАСТОТСОТСОТИа тТОоСООТаАсссСсваато дассАдасаАасСАТТТСТТаСАААТССАаССААТСТСТапАААССТОоСАС сааСААСАСаТтАССТОаААСТааТтТАТСТОСАСААдАССваатСА,сАаСос асад,аста|астаАТстТАСсСИТатАТСТААЛдаСаИСсттютсвасаттосСтТаАТ са,аттсд,ассатставпАТСааСАССОСАСТТТАСТСТОААААТСАСаСС статапйААдасСсТаАдАдсАсатта,аасраТСстТАСТАТТатТСОТОаСАСаССТОаСсСАТТО
БВОВ, легкий ТТАСССАААСАССТ ТССИаТСАдаспААСТАААСтТасСАААТТАААСаИтАСс 297 ланцюг сатаваСсТасСАССАТСТаТсСТТСАТСТТОССасСАТСТаАТОАДаСА,тТТа
АААТСТаСААСТОССТСОТОТТаТОТаССтТасСстТаААТААСТТСТАТСССА аАдаАдайаССАААдатАСАаатасАаааТавАТААСассстССААТСсВвВасСтТА
АСТоСсСсАсСаАасСАатТатСсАСАасСАаСАааАСАаСААда,апАСАаСАССТАСА аССстСАаСАаСАСоСтаАдСасСстаАаСАААаСАвАСТАСпАСпАААСАСА
АдатстТАсасстаСсаААаТСАСССАТСАСЯСССТОАаСаСсТассСсатТсСАС
АААСАЛС,СТТСААСАсасаАсАИ,Ттат сАсатасСсААТТааТТСсААТоТОСТастаААаТАААААААССавасаст тТоСатТААдДатТаАдасСТасСАААасАТСТааТТАСАССТТСАСТОАСТАТА тТСсАТОСАСТОСОТТоОССТСоАасСасососасаа7асСсАа,саатстаслатавАтас аСтТАСАТТААСССАТАСААССИСАСОСИ ТТ ТОСАААТАТАССОСАСАААТТОС дасассасСсоаТСАСаАТаАССАасСааАСАСТТСТАТСТОСАССИЯаСаИТтАСАТ асаААСТаТтСстТАсАСстТаТасСаттстТаАСаАСАССаТаста т ТТАСТАТТатасА сСсасСсааТАССТАСТАСТАСЯСаТтоСАСАаа,аСсСТаттаАТТАСТОСаасССААДС стТАССАССЯСТОАСсСатТААДаСстотТастАаСАССААсСаасссАатоцватстт сосоСстааСАСССТоСТоСААсдасАссттасавасАсаасаасСоста састасстаайТСАдаваАСТАСТТССССадАсСсСЯясталссвсататсатась
ААСТСАСОССОаСсоСстТадсСсааса,ассатасСАСАССТТСССЯЯОСсТатосСтТАС датоСстоАдапАСТСТАСТОССТоАа,аСсАСсССсСатастаассатаТассстосАа сала,асттаавасСАСССАСАССТАСАТСТаСААСатаААТСАСААасссСАс 5вов, СААСАССАдааТапАСААСпАААа т ТаДасСССАААТСТТатаАСААдАС 298 важкий | ТСАСАСАТассСАСсСсОастасссАдасАасстадаастасаасавасвАсСи то ланцюг (АТС ОСТСТССССССААААСССААапАСАСССТСАТОАТСТОССОаИ
АосостТаАдаатсСАСАТОаССОСТОСТОСТасАСсатадасССАСОААЧАСССТ адапйТсААатТТсААСстТастАасата,асвАас,ассатасАсаТаСАТААТОаСС
ААпАСАдАдаССасц,васА,асАаСАсТАСААСАа,аСАСсатАссататаито дасатоСстТоАсСаТоСсТаСАССАсСадстаастаААтТааСАдааАатТАс
ААдСТасСАдааТСТоСААСАААда,асоСстовасасССССАТССАСАДААСО
АТСТОСААДДаССААдАасСаасАассссвАпААССАСАвататТАСАСССтТа
СоСССАТССССОСОСОАТтТОАДасСстТадсСААаААССсАсаТатсаассталсстас стаайТСАААдасасСТстТАТСССАаСаАСАТСОЯСССЯТОВАааСТтасаАадас
ААТВСССАаССапАпААСААСТАСААаАССсАсасстоссатастацсАс тобаАСсСастосСтТсТоСсТоТАСАасСААластсАССатапАСАдаАаСА сатааСбдасСсаасасаААсатстсТсАТаСсТОСИДТаАТаСАТОАССИаИстет ,ССАСААССАСТАСАСОЯСАСААдспСАаасстотосСстаТатстоСасатТААА
БВОВ. легкий РІММТОТРІ БІ ЗМТРЕИОРАБІЗСКЗБОБІ ЕТЗТОаТмМТМІ ММ ОКРООБРОГІ 2993 ланцюг ІМАУ5КАЕЗаУРОВЕЗОаЗаБаИтТОЕТІ КІЗАВМЕАЕОМаМУ УСІ ОЇ О5УРМТЕ сОостТкКІЕІКАТМААРЗУРІЕРРЗОЕОЇ КЗатАЗУМСТ ММЕМРАЕАКМОУМУК
Таблиця 59
КДНК і амінокислотні послідовності клонів анти-СО19 з дозрілої афінності в форматі РЗ2ОСІ АГА людського ІДИ
МОМАГОБаМЗОЕЗУТЕООЗКОБЗТУБІ 5571 ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНО
СІ 55РУТКЗЕМАСЕС
ОМОЇ МОБЕАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИМ ТЕТОМІМНУУВОАРИСИІ ЕУМ
СМІМРУМОЯаЗКМ ТЕКЕРОСАМУТМТЗОТ5ІЗТАММЕЇ 5ВІ В5ООТАУУУСАН
СТУУМаРОЇ ЕОММУ/СОСТТУТУ5ЗАЗТКОаРБОМЕРІ АРОЗКЗТЗИаСТАА сс
ГУКОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ ТЗаМНТЕРАМІ О550І 5І 55УУТУРЗЗ ИТ 5вов, ОТМІСМУМНКРОЬМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕААСОРБУРБІ ЕРРК 300 важкий РКОТІ МІЗАВТРЕМТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМВИМЕМНМАКТКРАЕЕО ланцюг | УМ УАММУБМІ ТМ НОБМ/ЛІ МСОКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРВАВЕ
РОМУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І ТС УКИЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРР
УГгоБразЕР ЗК ТМОКЗАМОСаММЕЗСОСЗУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І ЗРО
К
САТАТТаТтТАТаАСТСАААСТОСАСТОТСОТСОТатОоСООТаАссоСаваатТо дассАдасаАасСАТТТСТТаСАААТССАаССААТСТСТасААТСТТССАС сааСААСАСаТтАССТОаААСТааТтТАТСТОСАСААдАССваатСА,сАаСос асад,аста|астаАТстТАСсСИТатАТСТААЛдаСаИСсттютсвасаттосСтТаАТ са,аттсд,ассатставпАТСааСАССОСАСТТТАСТСТОААААТСАСаСС статапйААдасСсТаАдАдс,сАасатта,аасаТСстТАСТАТТаОТСОТаСАасСтТаАТСИА
БНОЗ, пегкий ТТАСССАСТТАССТТСИСТСААаСПСААСТАААСТаСпСАААТТАААСатАСаИ 01 ланцюг стаасСстТасСАССАТСТаТСсСТТсСАТСТТоСсСсассСАТСТаАтТадаСАаттад
ААТСТОСААСТОССТОТОТТатТатасстастаААТААСТТСТАТОССАС
АдаАдпасСсСАААаТтАСАаатасАда,аатацпАТААСасссСстоСААТССааТтАА
СстТоССАасаАаАдаТатСАСАсАаСАа,асАСАаСААапАСАаСАССТАСАС
ССстТсАаСАаСАССсСсТаАСастаАаСАААдаСАпАСТАСПАСпСАААСАСАА датстдсасстасСспААатТСАСССАТСАСЬЯССОСТОАДастаСССаТСАСА
ААСАаСТТСААСАас,СаасАсАатТат сАсатасСсААТТааТТСсААТоТОСТастаААаТАААААААССавасаст тТоСатТААддатаАдасСТасСАААасАТСТасаТТАСАССТТСАСТОаАСТАТА тТСАТОСАСТОСЯаТТОСаТсоАасСасосоСсасаса7ассАа,асастотасахатасАтас аСтТАСАТТААСССАТАСААССИСАСОСИ ТТ ТОСАААТАТАССОСАСАААТТОС дасассасСсоаТСАСаАТаАССАасСааАСАСТТСТАТСТОСАССИЯаСаИТтАСАТ асаААСТаТтСстТАсАСстТаТасСаттстТаАСаАСАССаТаста т ТТАСТАТТатасА сСсасбааТАССТАСТАСТАСЯСТттотТасАСТатТ тТаАТТАСТОСааССААДС стТАССАССЯСТОАСсСатААдастотастАаСАССААсаасссСАтоаИаТсТТ сосоСстааСАСССТоСТоСААсдасАссттасавасАсаасаасСоста састасстаайТСАдаваАСТАСТТССССадАсСсСЯясталссвсататсатась
БНОЗ ААСТСАСОССОаСсоСстТадсСсааса,ассатасСАСАССТТСССЯЯОСсТатосСтТАС 302 важкий датоСстоАдапАСТСТАСТОССТоАа,аСсАСсССсСатастаадссатассстосСАа ланцюг сала,асттаавасСАСССАСпАССТАСАТСТаСААСатаААТСАСАДасссСАс
СААСАССАдааТапАСААСпАААа т ТаДасСССАААТСТТатаАСААдАС тТСАСАСАТИаСССАССОЯТИСССАДасСАСсСТОААастасаасяааАсСи то
АатТсТосСТСТоСССССАААДАСССААасСАСАСССТСАТаАТСТОСССОСО
АосостТаАдаатсСАСАТОаССОСТОСТОСТасАСсатадасССАСОААЧАСССТ адапйТсААаТТсААСТОСаСтТАСсСОСТасАаС,ассоастасАсаТасСАТААТИаСС
ААпАСАдАдаССасц,васА,асАаСАсТАСААСАа,аСАСсатАссататаито дасатоСстТоАсСаТоСсТаСАССАсСадстаастаААтТааСАдааАатТАс
ААдСТасСАдааТСТоСААСАААда,асоСстовасасССССАТССАСАДААСО
АТСТОСААДДаССААдАасСаасАассссвАпААССАСАвататТАСАСССтТа
СоСССАТСССОСОСОАТтОАаасСстТаАССААаААССсАсатсаассталсстас стапТсАААдассТТстТАТОССАдаСаАСсАТСОЯСССЯТОаСАасСТтасаАадас
Таблиця 59
КДНК і амінокислотні послідовності клонів анти-СО19 з дозрілої афінності в форматі РЗ2ОСІ АГА людського ІДИ
ААТаСОаСАСССОапАпААСААСТАСААаАССАСса,асстоссата,астацАс тобаАСсСастосСтТсТоСсТоТАСАасСААластсАССатапАСАдаАаСА сатаабАаСАсаааААСатстсТоАТаСТОСОтТаАТасСАТОАСИаСТОТ ,САСААССАСТАСАСОЯСАСААдспСАаасСстотосСстаТатстоСасатТААА
РІММТОТРІ БІ ЗМТРЕИОРАБІЗСКЗБОБІ ЕБЗТаТмМтмМІ МУМГОКРООБРОГІ.
ІМАУ5КАЕЗаУРОоВЕЗОаЗаБЗаТОгТІКІЗАМЕАЕОМаМУУ УСІ ОГПІОЮМРУТЕРСОа 303 БНОЗ, легкий ОСТКІ ЕІКАТМААРЗУРІРРРБЗОЕОЇ КЗатАБУМСТ ЇЇ ММЕМРАЕАКМОМ КМ ланцюг |ОМАГОБаМЗОЕЗМТЕООЗКОБЗТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕУТНОС
І 55РУТКЗЕМАИаЕС
ОМОЇ МОБЕАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИМ ТЕТОМІМНУУВОАРИСИІ ЕУМ
СМІМРУМОЯаЗКМ ТЕКЕРОСАМУТМТЗОТ5ІЗТАММЕЇ 5ВІ В5ООТАУУУСАН атумУавзАГЕрМУаОСсТТУТУ5ЗАВТКОаРОЗМУЕРІ АРОБКЗТЗИаСТААІ СО
ГУКОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ ТЗаМНТЕРАМІ О550І 5І 55УУТУРЗЗ ИТ
БНО, ОТМІСМУМНКРОЬМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТОСРРСОРАРЕААСИРБУРНБІ ЕРРК 304 важкий РКОТІ МІЗАВТРЕМТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМВИМЕМНМАКТКРАЕЕО ланцюг | УМ УАММУБМІ ТМ НОБМ/ЛІ МСОКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРВАВЕ
РОМУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І ТС УКИЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРР
УГгоБразЕР ЗК ТМОКЗАМОСаММЕЗСОСЗУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І ЗРО
К
7.2.2.2 Визначення афінності відібраних антитіл за допомогою 5РА
Для точного визначення афінності за допомогою РА відібрані антитіла до СО19 одержували шляхом котрансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців, використовуючи полієтиленімін. Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами у співвідношенні 1:1 («вектор для важкого ланцюга»: «вектор для легкого ланцюга») відповідно до стандартної процедури. Через 7 днів після трансфекції вимірювали титр антитіла в супернатанті і всі тітри врівноважували до 10 мкг/мл.
Афінність (Ко) батьківського антитіла 888, а також його похідних вимірювали за допомогою
ЗРК, використовуючи пристрій РгоївгОп ХРЕЗб (фірма Віогаї) при 25"Сб. 7000 ки поліклонального антитіла до людського Раб іммобілізували на всіх б каналах сі М-чіпа за допомогою амінного поєднання (Ма-ацетат, рН 4,5, 25 мкл/хв, 240 с) (вертикальна орієнтація).
Кожен супернатант НЕК, що містить антитіло, фільтрували і розводили ЗФРТ (10мМ фосфат, 150мММ хлорид натрію, рН 7,4, 0,00595 Твін 20) до концентрації 10 мкг/мл, а потім ін'єктували протягом 360 с зі швидкістю 25 мкл/хв до досягнення рівнів іммобілізації, відповідних 500-800 одиниць відповіді (КО), у вертикальній орієнтації. Ін'єкція конструкції мономірний СЮО19-Ес: Для вимірювання кінетичних характеристик за один прогін ( «опе-5пої» -кінетіка) напрямок ін'єкції змінювали на горизонтальну орієнтацію, триразові серійні розведення очищеної конструкції мономірний СО19-Ес (концентрації, які варіюють в діапазоні від 150 до бнМ) ін'єктували одночасно зі швидкістю 50 мкл/хв паралельно в різні канали 1-4, тривалість асоціації становила 180 с, а тривалість дисоціації 300 с. Ес-фрагмент людського дос (150Нм) ін'єктували в канал 5 як негативний контроль специфічного зв'язування з конструкцією мономірний СО19-Ес. У шостий канал ін'єкгували буфер (ЗФРТ), створюючи «паралельний» ( «іп-Іпе») «порожній» контроль для зіставлення. Узагальнення відповідних сенсограмм представлено на фіг. 33.
Регенерацію здійснювали за допомогою двох імпульсних обробок 10мМ гліцином, рН 1,5 і 5Х0мМ
Маон протягом ЗО0с зі швидкістю 90 мкл/хв (горизонтальна орієнтація). Константи швидкості дисоціації (Кок) розраховували з використанням простої моделі зв'язування 1: 1 Ленгмюра за допомогою програми РгоїеОп Мападег м3.1 шляхом одночасної апроксимації сенсограмм асоціації ії дисоціації. Константу рівноваги дисоціації (Ко) розраховували як співвідношення
Коп/Коп. Узагальнення результатів кінетичних і термодинамічних досліджень представлено в таблиці 60. Константа дисоціації всіх клонів з дозрілою афінністю покращувалась порівняно з їх батьківським клоном 888.
Таблиця 60
Узагальнення кінетичних і термодинамічних даних, які характеризують взаємодію між анти-
СО19 пида і людським СО19 сапме | ко ком батьківський 888 5,66Е-4 1,34Е-4 2,36Е-9 5нОЗО 7,91Е-4 1,50Е-5 1,895Е-10 7нО7 7,А45Е-4 5,57Б-5 7,АТЕ-10 2во3 6б,02Е-4 5,00Б-5 8,91Б-10 2811 6,34Е-4 3,14Е-5 4,955Е-10
БА 6,98Ег-4 3,07Б-5 4,40Е-10 5воВв 6,81Е-4 5,26Б-5 7,12Б-10 5ров 8,88Е-4 8,44БЕ-5 9,51Е-10 7.2.2.3 Одержання і очищення анти-СО19 Іїдс1 РЗ2ОСІ АГА
Відібрані антитіла до СО19 одержували шляхом котрансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців, використовуючи поліетиленімін. Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами у співвідношенні 1:11 («вектор для важкого ланцюга»: «вектор для легкого ланцюга»).
Для одержання в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 400 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год до трансфекції. Перед трансфекцією клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х ді супернатант замінювали попередньо нагрітим середовищем СО СНО. Експресійні вектори (200 мкг загальної ДНК) змішували в 20 мл середовища СО СНО. Після додавання 540 мкл ПЕЇ розчин інтенсивно перемішували протягом 15 з і інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕ!Ї, переносили в 500-мілілітрові збовтані колби і інкубували протягом З год при 37"С в інкубаторі в атмосфері з 595 СО». Після інкубації додавали 160 мл середовища Е17 і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції в культуру додавали 1мМ вальпроєву кислоту і 795 Реєй 1 з добавками.
Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням протягом 15 хв при 210 х д. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22 мкм-фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,0195 (мас./об6.) і витримували при 4 " С.
Очищення молекул антитіл з супернатантів клітинних культур здійснювали за допомогою афінної хроматографії з використанням білка А, описаної вище як приклад очищення злитого
Ес-антигена. Білок концентрували і фільтрували перед внесенням в колонку НіТгтар Супердекс 200 (фірма СЕ Неайсаге), врівноважену розчином, що містить 20мМ гістидин, 140мм масі, рн 6,0.
Концентрацію білка очищених антитіл визначали, вимірюючи ОГ при 280 нм, використовуючи коефіцієнт молярної екстинкції, який розраховували на основі амінокислотної послідовності. Чистоту і молекулярну масу антитіл аналізували за допомогою КЕ-ДСН в присутності відновника і без нього (фірма Іпмігодеп, США), використовуючи пристрій
Зо Гарспірохі! (фірма Саїїрег). Вміст агрегатів в зразках антитіл аналізували за допомогою колонки для аналітичної гель-фільтрації Т5Каде! 3000 5УУ ХІ (фірма Тозой), врівноваженої рухомим буфером, що містить 25мМ К2НРОЯ4, 125мМ Масі, 200мМ моногідрохлорд І -аргініну, 0,0295 (мас./об. ) МаМз», рН 6,7, при 25"С (таблиця 61).
Таблиця 61
Результати біохімічного аналізу клонів анти-СО19 РЗ29СІ АГ А ІдС1 ши: т: я пох по ОО: Т Хо ПОЛОН Є То Я
Для одержання біспецифічних конструкцій відбирали клон 2811, так як в ньому були відсутні три «гарячі точки» деамідування.
Послідовність ДНК, яка кодує частину ектодомени (амінокислоти 71-254 і 71-248) людського ліганду для 4-1В88, синтезували на основі Р4А1273-послідовності з бази даних Опіргої. 7.2.3 Одержання одновалентної націленої на СО19 (8888-2811) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -доменами із зарядженими залишками, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 4.1)
Конструкцію 4.1 одержували відповідно до методу, описаному для конструкції 3.1 (фіг. 30), але використовуючи послідовності ДНК, які кодують варіабельну область важкого і легкого ланцюга специфічного для СО19 зв'язуючого агента клону 8888-2811.
В таблиці 62 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
Сбр19 (888-2811) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ-Сі-доменами і із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з
Ес (Кій) (конструкція 4.1).
Таблиця 62
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СО19 (888-2811) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -доменами із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 4.1). 7 позначає заряджені залишки
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: нуклеотидна послідовність конструкції 129 |димерний Пи 4-18ВІ (71- див. таблицю З 254) - Сі"-Ес-ланцюг з «виступом» нуклеотидна послідовність конструкції 130 | мономерний пи 4-18ВЦ И8. таблицю З 71-254) - СНІ" сАсатТасСААТТааТТСААТСоТОСТастаААСаСТАААААдАС сссасбастоСатТАААлатТадасСстТасСАААасСАТСТаа!ттТА
САССТТСАСТОаАСТАТАТСАТОСАСТОССЯТтТоСТСАаасСс нуклеотидна ссесасСсАдсааттасАастааАтТапасСтТАСАТТААСССАТ 305 послідовність анти- АСААСЧИАдСасаТТОСАААТАТАССАСАААТТоСАИаСааос
Ср19(888-2811), ге асатСАССАТаАССАаСаАСАСТТСТАТСТОСАССИЯСОИТА ланцюг із «западиною» | САТИСААСТОТСтТАсСАСстТасатСстТаАСаАСАСсСса|астатт тТАСТАТТиТаСАСОСОасТАССТАСТАСТАССОСИТССАСАСС таттаАТАСТаспвасСАдааТтТАССАСИваТаАССатАда
СстоТастТАаСАССААлсоса7соостосататтоссостасос
Таблиця 62
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СО19 (888-2811) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -доменами із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 4.1). 7 позначає заряджені залишки
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: сосАдаСАдаСААпАдаСАССАа,аСасаСааСАСАаССа7стста саетасстаайТСААасАСТАСТТСССТА,аСосСатаАССа татоСтасААСсАаа,аСсспвАаоостаАсСстоСааСатасСАСАС сттоссс,асссест,астасааАаатотааостатАТАаССтТОа дасаласатастАссатассттотАа,аСАа,аоставасСАСос
АПАССТАСАТСТаСААСИаИТаААССАСАДаСССАасСААСА
СсСААвпатапАСААаААд,аатапАаССсСААсАасСТассАСА
АААСТСАСАСАТаСССАССОЯ ТИСССАаСАССТОАДастТас дасасапАССатТсАатсТ сс оСССССААААСССААС вАСАСССТСАТаАТСТОССОСАССССстТаАдааТСАСАТИаСИ тастаставАасстаАаССАСаААаАсоСстаАааТСААатТ тТсААСТОСТтАСсатацАассаса,атасАа,ваТасСАТААТассСА
АпАСААдда,асСса,асасаАааАаСАаТАСААСАаСАСаТтАСс статаатсАааСатоСсТоАсСсатоСстасСАССАсССсАСсТааТст
СААтТасСААасАсТАСААаТасСААаатСТоСААСАдАас сстоасасасссСССАТССАСААААССАТСТОСАААаССАДА сааСбАдассССпАпААССАСсАасататасСАСССсТассссСсСАТ ссссапАтТадасСстаАССААаААССАсИа тсАасстотата сасАатТСАААаасТСсТАТоСсСсАа,аСаАСАТсаСоСсастТааАС тасададасСААтТасасАаа,аССавАспААСААСТАСААСАСо дсасстосса,атаставАстосаАссастстстсостсат сАаСАдастоАсСатапАСААпАаасСАасатааСАаСАсос вААСОЯСТСОТТСоТСАТОСТОСОЯаЯтТОаАтТасСАтТаАлсастотасАс
ААССАСТАСАСОЯСАВААСсАасстотосССстаТатстоСасватА
АА нуклеотидна послідовність анти-СО19 277 (888-2811), пегкий ДИВ. таблицю 59 ланцюг димерний пи 4-1881. (71- 1151254) - СІ -Рс-ланцюг з|див. таблицю З «виступом»
ОМОЇ МОБСАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИМТЕТОМІМНУУВОА
РПС ЕМ МОамІМРУМОраЗКУТЕКЕОСАУТМТЗОТ5ІЗТАММ
ЕГЗВІ А5БООТАУУУСАВаИтуУУуаРОЇ ЕМУсСсОосасТТУТУ5
АЗТКОаРБОМЕРІ АРОЗКЗТЗИаСТААГ аСІ МКОУМЕРЕРУТУБМ М анти-С0О19 (888-2811) ЗаАІ Т5аУНтТЕРАМІ О55(011 51 55УМТУРБЗББІ СТО ТМІСММ 306 | Ес-ланцюг Х МНКРОМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕАДАСИаРБЗУНІ ЕР «западиною» РКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУМЗНЕОРЕУКЕМУ МУрИаМЕМН
МАКТКРАЕЄЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОВУ МСОКЕУКСКУЗМ
КАЇ ЧАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУСТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І 50
АУКаРУРБЗОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБООЗЕРІ УК
ГУКА ООСММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОК5БІ 5І РОК легкий ланцюг
7.2.4 Одержання одновалентної націленої на СО19 (888-2811) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -"доменами без заряджених залишків, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 4.2)
Конструкцію 4.2 одержували відповідно до методу, описаному для конструкції 3.2 (фіг. 30), але використовуючи послідовності ДНК, що кодують варіабельну область важкого і легкого ланцюга специфічного для СО19 зв'язуючого агента клону 8888-2811.
В таблиці 63 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
Сбр19 (888-2811) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СіІ-доменами без заряджених залишків, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 4.2).
Таблиця 63
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СО19 (888-2811) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -доменами без заряджених залишків, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 4.2)
ЗЕО І . . нуклеотидна послідовність конструкції димерний ліганд (71-254) Див. таблицю 22
СІ -Рео-ланцюг з «виступом» нуклеотидна послідовність конструкції мономерний /- Пи 4-18ВІ. (71-254) - СНІ Див. таблицю 22 нуклеотидна послідовність анти-СО19 (888-2811), Ес-ланцюг із Див. таблицю 62 «западиною» нуклеотидна послідовність легкого ланцюга анти-СО19 (888- Див. таблицю 59 димерний ліганд (71-254) - СІ -Ес-ланцюг з «виступом» Див. таблицю 22 мономерний ліганд (71-254)-СНІ Див. таблицю 22 анти-СО19 (888-2811), Ес-ланцюг із «западиною» Див. таблицю 62 легкий ланцюг анти-СО19 (888-018 Див. таблицю 59 7.2.5 Одержання двовалентної націленої на 019 (888-2811) антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 4.3)
Конструкцію 4.3 одержували відповідно до методу, описаному для конструкції 3.3 (фіг. 30), але використовуючи послідовності ДНК, які кодують варіабельну область важкого і легкого ланцюга специфічного для СО19 зв'язуючого агента клону 8888-2811.
В таблиці 64 представлені кДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на
Ср19 (8888-2811) антигензв'язуючої молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4- 188 (71-254) в злитті з Ес (Кі) (конструкція 4.3).
Таблиця 64
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СО19 (8888-2811) антигензв'язуючої молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 4.3)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: сАсатТасСААТТааТТСААТСоТОСТастаААСаСТАААААдАС сссасбастоСатТАААлатТадасСстТасСАААасСАТСТаа!ттТА нуклеотидна САССТТСАСТОаАСТАТАТСАТОСАСТОССЯТтТоСТСАаасСс нуклеотидна, анти- ссесасСсАдсааттасАастааАтТапасСтТАСАТТААСССАТ з07 |Сп19 (888-2811)-Ес- АСААСО,ОАСаспТТоСАААТАТАССВАСАААТТОСАССИООСО ланцюг із «западиною»- абатСсАСаАТаАССАасСаАСАСТТСТАТСТОСАССОаСаИатА диме ний ліганд САТаСААСТИатТСотТАпАСсТасаТаттотаАСсаАСАСсСа7статт
Р тТАСТАТТиТаСАСОСОасТАССТАСТАСТАССОСИТССАСАСС таттаАТАСТаспвасСАдааТтТАССАСИваТаАССатАда стотТастАаСАССААлссвсасссостосастаттососстаассс
Таблиця 64
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СО19 (8888-2811) антигензв'язуючої молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 4.3)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: ссАдаСАдаСААпАдаСАСсСАа,аСааСпасСАСсАа,аосастсотациас тасстааТтСААасСАСТАСТІОСССОСАХ,ассСсатаАсса7ататос тасвААсАда,аСа,асАааоостаАсСстСаасаТаСАСАССТТОоСС сессстастасСАааАаатстаасостатАтАласСстадасАасат сатоАассатассттстАаа,асАаа,асстаааСАСССАСАССТАСАТ
СТаСААСИТаААССАСАДаСССАаСААСАССААСаТтасАсСАА вАдсатацдАаСсСсСААдаАдаСТасСаАСААААСТСАСАСАТасСос
АссатассСАаСАССТаАдАдаСстТасаассаавАсСатСАатотТ тост оСССССАААДАСССААасАСАСССТоСАТОАТСТОСО саАасооСстаАдаатТСАСАТОаСОЯТООСТОсСТтасАсатаАлаССАС вААДСАдСосСстТаласТСААатТСААСсТтаатАсатасалосаситоа слдастТасСАТААТаССААаАСАААаССаСа,аааАа,аАаСАстТА
СААСсАаСАСсатТАсСсататаа,атсАаа,аСатостАСсСатостТасА ссАдааАстТааСсТаААтТааСААапАаТАСААдатТасАдаатосто
СААСААдАдасоСстосасасССССАТСВАСААААССАТСТОСАА даСсСААд,а,сасАаССССаАспААССАСАвататасСАсоСстас
СосСАТОоССОСОсаАтТаАдаСТаАССААпААССАватсАасстотТ сатасасСсАаТтСАААдаастСстТАТоССсАасСаАСАТСИвВССаИатас датассАсАасСААтТасасАаасСацАпААСААСТАСААСАСо дсасстосса,атаставАстосаАссастстстостсата
АасСсААластсАсСатапАСААсСсА,САасатааАаСА,ассаАА сатстсТсАТаСстТоСсатаАтТасСсАТаАаастоТасСАСААССА
СстТАСАСЯСАСААдССАаСсСТОТОССТатотТоСсасатацпАцваса сбасАдласспАа,ааАа,саАааАТоСАСАсСАсааоостаАастТ слабсоСаАтТаАТтоСсТаставАстаставАасстасрссасСАца аКСбАТаИттастодастаатааСССАаААсатастастаАТтос
АатасоссостатостаатТАСАааСаАатоСстасАстаасТасо атТатСсАСТаАСАСсаса,АасстаАасСТАСАААаАасАСАССААДА сААСсСТОСТОСТОаССААЛСаоСвасататАСТАСОСТаИатт ст сад,астапйААСстаСа,авсАасАстаатаассавассААааАТоТас стотататотстаасоСстТасСАТСОТаСАаССтТСТаАаААаСас тастасссеста,асаасттайСАСТаАСсАаа,атасАтоТа7асстос тассяластоСбаАдсасоСазААтТАаСасСАТттаваТтТСААца сасаеастастасасстаттасса,ааоСАсАсастасаАаТас
АТСТаСАСАСАСАСОаССА,СааСТАпАСАСсасстаасСАастТа
АСАСАССХССОЯСстТАСАСТОСТОСОЯОССТаТттоАсСАаТаАСоСо баАВАТТОоСАСССОЯСИаОоСтТасстТСстТоСААСАдАдасСсаАдАлсаса сласссаАтотааса,вабспАааАТСстТАаАсаАаапАСССсаАА статосССстТаАСаАтосАа,асссесасаобта7астацпАтТоТаАпАСАа ааААТаттоасссАаастаатаасТСАаААтТа,атастастаАТТ сАса,асАсстталастаатАстоСсаАсоСАаа,савастаасСАца сататоостаАстТаваааАСТатосСтТАСАААСпААСАТАСАДА
АаААстТаатаатаасСстТААдАдастаавааТатАСТАТИТИаТ тт садастапйААСстадсассаатастсабтасавАаадастосАС салтотататосстааСтотасАТСОТаСсАаССАСТОАСасСтТоТта стастасСсасаа,асСстасАастаастотаАастатавАсстассСАс саа,асстотАааСа,ада,ааССАпАААСАа,аСасстаайТ т ССАда салс,есста|астасАТтотТал,аСсассс,саАсАаа,аСсасстасаАатТа
САТСТасСАТАСТаАдАаССАсАаоССааСАтТасттаасАаста
АСТосАсСасаасСААСсТатастасаАастаттсасаТтаАСАССТ сАаАтТосстассавАСТасСсСсААасСсСсСТАпАТСАСААд
Таблиця 64
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СО19 (8888-2811) антигензв'язуючої молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 4.3)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: нн ння сАсатТасСААТТааТТСААТСоТОСТастаААСаСТАААААдАС сссасбастоСатТАААлатТадасСстТасСАААасСАТСТаа!ттТА
САССТТСАСТОаАСТАТАТСАТОСАСТОССЯТттСоИСТСАцвСасс ссесасСсАдсааттасАастааАтТапасСтТАСАТТААСССАТ
АСААСО,ОАСаспТТоСАААТАТАССВАСАААТТОСАССИООСО аСаТтСсАСаАТаАССАасСаАСАСТТСТАТСТОСАССОЯСаИтА
САТаСААСТИатТСотТАпАСсТасаТаттотаАСсаАСАСсСа7статт тТАСТАТТиТаСАСОСОасТАССТАСТАСТАССОСИТССАСАСС таттаАТАСТаспвасСАдааТтТАССАСИваТаАССатАда стотастАаСАССААлДасааСССАтТоватотосоостааСАСС
СстТоСТоСААдадасСАссттасасасСАсАа,аСасоостааваст состаатсААапАСТАСТТОССССОСААСсСсСсОоста,аАсаа7ататсат ааААСТоАаСОЯСЯаССоСстаАсоСАа,аСса,аасоаТаСАСАССТТоССа естатссСстТАСАаТоСтТСАсааАСТСТАСТОССТСоАД,аСсАа,СаИата стадссатассстосАаа,асАаасттаваСАСССАСАССТАСАТО тТасСАдсатаААТСАСААХаСССАаСААСАССАдааТацпАСААс
АААСТТаАаСССАААТСТТатаАСААААСТСАСАСАТасСсСсСАС са,атассСсдасСсАсСстТаАдАдастаса,аспа,асАоСа,атАатстто
СТСТТОСССССАААДАСССААаСАСАСССТСАТОАТСТОоССИ,с
АСсССсСсСсСТОаАДаатТСАСАТОаССсЯТООСТвИАтТапАСатаАаССАССА
АаАссСстадааТСААаТТсААСсТОСсСТАсСатацсАаСасаСатааА нуклеотидна сатасСАТААТаССААаАСААдАааССассваасАа,сА,САа,тТАСА послідовність анти- ДеласСАСОТАССОСТОТОСТСАССОТоСТСАССОЯТОСТОСАСО зов |Сс0о19 (888-2811)-гс- лЯСАСТтООСТОААТОаССААОСАСТАСААДСТОСАЛОС ТСТОСА ланцюг з «виступом», АСАААССССТСООСОСССССАТСОАСАДААССАТСТОСАААО мономерний ліганд ССАААдспсасАассССаАпААССАСАсСататАСАСоСсТассс соСстТасСАпАаАтТадасСстТаАССААаААССАсататоостатас татгтаатСсАдасастСсТАССССАасаАтТАТоСсСоССсСаСТацсАс тасададасСААСссасСАассТаАаААСААСТАСААСаАССАСо ссссстатаставАасАда,асаАСа,асСАастстоСстТатАСТОС
АААСТаАСсСсСОатасАСААдцЧАа,ассасатааСАа,аСАс,сааСААСаИТт сттода,астасда,асСсатаАдтТасАаса,адааСССтасСАСААССАСТА
САСССАЧААСТОоССТавАаОоСстТала,асосс,всабасАсасаасс вАдаСбасАасаАаспАапАТоСА,САаАа,аааооствАастадас
СоСаАТаАТОСТОСТОСАСТаСТОСАСсСТаС,асаСАс,саасСАТ сттастолдастаастаасССАсААдса,атастастаАтТосАТтаС ссссстатостаатТАСАаСссАтоСстасаАстааста,са7атато
АСстТаАСсАасСаСса,ааосТаАасСтТАСАААпАапАСАССААДАСААСТ сатаатавасСбАлд,сасСссаСбататТАСтТАСИаВТаТат ст тсАаСстТ ааААСсТаСса,асчАаЧАа,атаатаассвасаАда,авАтоТаасСтота татгтота,сооСстТасСсАатотасадасстотаАадАла,асастаста ссстасластотайСАСТаАСсАаа,атТа,асАтТоТасстоСстТассСА сстобадвассСасААтТАаСасСАттаваттсААсасАца стастасАасстаттасса,ааоСАсАсаСтаасАасТасСАТСТ всСАСАСАЧАасасСсАаааасСтТАаАСАСсасстааСАасСтаАСАС даса,асастАсАастаставаєєтаттСАаАатаАСоСССаАс
АТТоСсАСОССОСаСсСТасстТСТоСААСаААасСаАА послідовність анти-
Таблиця 64
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СО19 (8888-2811) антигензв'язуючої молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 4.3)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: нн рктктптккаветттянняттх - ланцюг
ОМОЇ МОБСАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИМТЕТОМІМНУУВОА
РПС ЕМ МОамІМРУМОраЗКУТЕКЕОСАУТМТЗОТ5ІЗТАММ
ЕГЗВІ А5БООТАУУУСАВИаТтУУУаРОЇ Ерима,осттУТУз
АЗТКОаРБОМЕРІ АРОЗКЗТЗИаСТААГ аСІ МКОУМЕРЕРУТУБМУ МЗС
А Т5аОУНТЕРАМІ 0551 У5І 55 МУРБББІІ ЕТО ТМІСМУМНКРБ
МТКМОККУЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСОРБЗУНБІ ЕРРКРКОТ
ГМІЗАТРЕУТСМУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМО МЕМНМАКТКРАЕ
ЕОУМ5ТУВМУМУБМІ ТМ НОМ МЕОКЕУКСКУ5ЗМКАЇ САРІЕКТІВ анти-СО19 (888-2811)- КАКСОРАЕРОМСТІ РРЗВОЕЇ ТКМОМ5І БСАУКИагМРЗОІАМЕМУ
Рс-ланцюг із ЕЗМСООРЕММУКТТРРМІ ОБравзЕРІ УК ТУКА ММУББ 309 «западиною»- С5ММНЕАЇІ НМНУТОКБІ 5І ЗРО ССИсЗасСИааеАЕСРЕЇ 5РОЮР він АС ОЇ ОСМЕАОЇ МАОММИ ра РІ БМ УБОРИ АСУБІ Та. димерний ліганд ЗУКЕОТКЕГ УМАКАСУУУМ ЕКО! ЕІ ВВУМАСЕОЗО5У5ГАГ НІ О
РІ ВБААСАДАЇ А ТМОЇ РРАБЗЕАВМЗАБРИРОСВІ І НІ БАСОВІ.
СУНІ НТЕАВАВНАУ/ОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРАСІ РОРАЗЕСС савасасевВЕсСРЕЇЗРООРАСІИЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММ СЛІЮ
СРІ БМ/УУ5БОРИЇ АСУБІ ТИС 5МКЕОТКЕЇ ММАКАСУМУУМЕРЕОЇ Е
ГААММАСЕ,БавБмБІ АІ НІ ОРІ В5ААСАААГАЇТУОІ РРАББЗЕАВ
М5ЗАРИРОСВІ НІ БАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАУМ ОЇ ТОСАТМІ С
ІГЕВМТРЕІРАЇ РОРАЗЕ
ОМОЇ МОБСАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИМТЕТОМІМНУУВОА
РПС ЕМ МОамІМРУМОраЗКУТЕКЕОСАУТМТЗОТ5ІЗТАММ
ЕГЗВІ А5БООТАУУУСАВИаТтУУУаРОЇ Ерима,осттУТУз
АЗТКОаРБОМЕРІ АРОЗКЗТЗИаСсТААЇ СІ МКОУМЕРЕРУТУБМУ МЗС
А Т5аОУНТЕРАМІ 0551 У5І 55 МУРБББІІ ЕТО ТМІСМУМНКРБ
МТКМОККУЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСОРБЗУНБІ ЕРРКРКОТ анти-СО19 (888-2811)4 І МІЗАВТРЕУГТГСМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМрИаМЕМНМАКТКРАЕ 310 Ес-ланцюг зі ЕОУМЗТУВУМБМІ ТМ НОМ МСКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІВ «виступом»- КАКСОРАЕЕРОМУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМ5І МУСІ УКагМРБЗОІАМЕ мономерний ліганд МЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОБраЗЕРІ ЗК ТМОКЗАМООСММЕ
ЗСЗММНЕАЇ НМНУТОК5БІ 5І ЗРОССОВСОаЗОИСОСИСОВЕСРЕЇ 5РОЮ
РАС ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІрарі 5ММБОРИЇГ АСУБІ ас
ІЇ ЗУКЕОТКЕЇ УМАКАСМУУУМУЕЕОЇ ЕІ А НУМАСЕаВавзмві АІ НІ.
ОРІ В5ААСІАААЇ А ТМОЇ РРАБЗЕАВМЗАРСРОСНВІ І НІ ЗАСОВ
ГаУнНІ НТЕАВАВНАУОЇ ТОСАТМІ СІ РАМТРЕІРАСІ РОРАЗЕ легкий ланцюг 7.2.6 Одержання одновалентної націленої на СО19 (888-2811) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -доменами із зарядженими залишками, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 4.4)
Конструкцію 4.4 одержували відповідно до методу, описаному для конструкції 3.4 (фіг. 30), але використовуючи послідовності ДНК, що кодуюють варіабельну область важкого і легкого ланцюга специфічного для СО19 зв'язуючого агента клону 8888-2811.
В таблиці 65 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
Сбр19 (8888-2811) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ-Сі-доменами та із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з
Ес (Кій) (конструкція 4.4).
Таблиця 65
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СО19 (8888-2811) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -доменами із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 4.4). 7 позначає заряджені залишки
ЗЕО І . . 169 нуклеотидна послідовність конструкції димерний ліганд (71-248) Див. таблицю 24
СІ -Ре-ланцюг з «виступом» нуклеотидна послідовність конструкції мономерний /- Пи 4-18ВІ. (71-248) - СНІ" Див. таблицю 24 нуклеотидна послідовність анти-СО19 (888-2811), Ес-ланцюг із Див. таблицю 62 «западиною» нуклеотидна послідовність легкого ланцюга анти-СО19 (888- Див. таблицю 59 димерний ліганд (71-248) - СІ "-Ес-ланцюг з «виступом» Див. таблицю 24 мономерний ліганд (71-248)-СНІ" Див. таблицю 24 анти-СО19 (888-2811), Ес-ланцюг із «западиною» Див. таблицю 62 легкий ланцюг анти-СО19 (888-2811 Див. таблицю 59 7.2.1 Одержання одновалентної націленої на СО19 (888-2811) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -"доменами без заряджених залишків, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 4.5)
Конструкцію 4.5 одержували відповідно до методу, описаному для конструкції 3.5 (фіг. 30), але використовуючи послідовності ДНК, що кодують варіабельну область важкого і легкого ланцюга специфічного для СО19 зв'язуючого агента клону 8888-2811.
В таблиці 66 представлені кДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
Сбр19 (888-2811) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ-Сі-доменами без заряджених залишків, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 4.5).
Таблиця 66
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СО19 (888-2811) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -доменами без заряджених залишків, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 4.5)
ЗЕО І . . 171 нуклеотидна послідовність конструкції димерний ліганд (71-248) див. таблицю 25
СІ -Рео-ланцюг з «виступом» нуклеотидна послідовність конструкції мономерний ліганд (71- див. таблицю 25 нуклеотидна послідовність анти-СО19 (8888-2811), Ес-ланцюг із див. таблицю 62 «западиною» нуклеотидна послідовність легкого ланцюга анти-СО19 (888- див. таблицю 59 димерний ліганд (71-248) - СІ -Ес-ланцюг з «виступом» див. таблицю 25 мономерний ліганд (71-248)-СНІ див. таблицю 25 анти-СО19 (888-2811), Ес-ланцюг із «западиною» див. таблицю 62 легкий ланцюг анти-СО19 (888-2811 див. таблицю 59 7.2.8 Одержання двовалентної націленої на 2019 (888-2811) антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 4.6)
Конструкцію 4.6 одержували відповідно до методу, описаному для конструкції 3.6 (фіг. 30), але використовуючи послідовності ДНК, що кодують варіабельну область важкого і легкого ланцюга специфічного для СО19 зв'язуючого агента клону 8888-2811.
В таблиці 67 представлені кКДНК їі амінокислотні послідовності двовалентної націленої на
Ср19 (8888-2811) антигензв'язуючої молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4- 188 (71-248) в злитті з Ес (Кі) (конструкція 4.6).
Таблиця 67
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СО19 (8888-2811) антигензв'язуючої молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (711-248) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 4.6)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО:
СсАватТасСААТТаСТТСсААТСТОСТасСтТаААсСТАААААдААС сасасбастоСатТААдАатТадасСстТасСАААасСАТСТаатТА
САССТТСАСТОаАСТАТАТСАТОСАСТОССЯ ТП То ТСАцСасс ссасасСсАасаатстасаа,атавАтТавасСтТАСАТТААСССАТ
АСААСОАСаспТТСсСАААТАТАСССАСАААТТоСАаСИасос аСатСсАСаАтТаАССАасСаАСАСТТСТАТСТОСАССОаСаИатА
САТаОСААСТОТСТАсСАСсТаСаТатстТаАСапАСАсСаТстатт тТАСТАТТиаТОСАСОЯСОвИТАССТАСТАСТАССОССТОСАСАСС таттаАТТАСТаасСасССААдсаатАССАСааТтаАССатТААа стотасСстАаСАССААлДаСсасосстьтсата осот, ссАдасАаСААпСАаСАсСАа,аСасоасСАСАаоСасттавас тасстаайТтСААаСАСТАСТТОССССАХсСосСсатаАссататос тасвААдсдасСа,асАаа,ассосєтадсстоСса,ааоаТаСАСАССТТОСо с,асса,атастасСсАасАаасотаасстатАтТАасСстадаСАасСат сатсАассатасстстАаасаасстапаСАСССАСАССТАСАТ
СТаСААСИТИаААССАСАДаСССАаСААСАССААдасатасАСАА сАдаатапАасСсСААаАдасТасСаАСААААСТСАСАСАТаСос
АосатассСАааСАССТаАдАа,астасаа,асасаАссатСАаТтст
ТОСТСТТОСССССАААДАСССАДИаСАСАСССТСАТОАТСТОоСС саАсооСстТаАдсатСАСсАТасСастТастаставАсатадасССАС нуклеотидна САдаАдсоСстТадасТСААаТТсААСсТастАСсатацвАаСасссата послідовність конструкції САССТИСАТААтТаССААаАСАААаССассппАс,саА,сСА,тТА 311 анти-С0О19 (888-2811)- СААСАааСсСАСсатАссататаатсАаа,аСат СТАС, ТоСтТасА
Ес-ланцюг із ССАСОСАСсТвДасСтТаААТтТааСААд,аАаТАСАдатасСААлаИстоТо «западиною»-димерний |СААСАдАддасостсаавСсассСССАТСИАСААААССАТСТОСАА ліганд (71-248) АаСсСААд,аасасАаСоССаАпААССАСАасататасСсАсостас
СоССАТСССОСОСОсАтТадасСстаАССААаААССАса7 тСАасСстоТ сатасасСсАаТСАААдваастСсТАТСССАаСаАСАТСЯЯССИаТтОас датассАсАаСААтТавасАаасСавАсААСААСТАСААСАСС
Адса7асстосса,атастасАстоса,сАасвсастстстостсата
АаСААдасСТсАсСатапАСААдсАа,аСАасатааСАаСАааасАА са,атстстТсАТаСсТОСОСТаАтТасСАТОАдСастоТасСАСААССА
СстТАСАСОЯСАСААаАаасстотосСстаттосасатасАсасСа ссапАлдаСсспАа,асаА,саАааАтТоСАаАсаСАаасааоостаАаст слассСстТаАтТаАтостасссассАстаставАаосстасрссасСАца сААТаттт,асоса,астаатааСССАаААсатастастаАтса
АтаасссостатостаатТАСАаасСсАтоСстасастаастаас астатосАСстТаАСАасасвасстаАасСТАСАААаАасАСАССАДА сААСсСТОСсСТОСсТааССААлсСаСС,ааоататАСтТАСатТаТаттстт сдастапААСстТаСса,асасАа,атаатаассавассвААа,сАТСТас стотататостотасооСбтТасСсАТоТасАааССтТаАсАТСТаС тастасвссосаеаст,7астотайСАСТаАСсАаа,атТасАтоТасстос тасслда,асда,асСсасАа,вассСацпААтТАаСасСАттасаТТтСАдИаС саса,астастасаостаттасссасСАсвСАсастассАатас
АТСТаСАСАСАСАаСОаССАс,СаасСтТАпАСАСсаостаасАаста
АСАСАСССОССОССстТАСсСАСаСТастасасстаттСсАаа,сАатаАсосс
Таблиця 67
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СО19 (8888-2811) антигензв'язуючої молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (711-248) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 4.6)
ЗЕО
МО:
СсвАаАтТоСсАаасСасасстасалсасСссааСаеасАттасвсс(ас савадаспАТтотТАаАдаАдАда,асасАссСссАаастаТооооСаАСаАТОоС саставастастапйАтТСсТаАаАСАассасСАтТа7атса7астоАаст сатааСтТоСАвпААТатТаста,астаАаттаАдСасвАСсСстоТадаста стТАСТоСОАССсСсАаасаоестаасСсАасассоататосстадстасвцо
САСТатоСтТАСАДАПААСАТАСААААЧААСсТОИТаатаасСтТА
АдастассататАСТАТатТаТаттттттСАаСТапвААСТаАсаао саатастасастасоасАасассастодасАаттататсстасст стасАТСТасСАасССсСАСТОСЯСТСОТаСсАаСсАасСааоСстасАиас дстаасостаАдстатасаостассссСсАаастстоСсадовас
САвААдАсАааСсасстсаваТтоСААсСаАСсасстастасАТСТ сласасбасАСАа,аоасста,аавАаТасСАТСТаСАТАСТаААС ссАасАадассСсаасСАТасттаасХастаАСтТСАсавасСААСТ стастасасАаста7аттсараТтаАСАССТаАаАТОССАаССОва асто
СсАватТасСААТТаСТТСсААТСТОСТасСтТаААсСТАААААдААС сасасбастоСатТААдАатТадасСстТасСАААасСАТСТаатТА
САССТТСАСТОаАСТАТАТСАТОСАСТОССЯ ТП То ТСАцСасс ссасасСсАасаатстасаа,атавАтТавасСтТАСАТТААСССАТ
АСААСОАСаспТТСсСАААТАТАСССАСАААТТоСАаСИасос аСатСсАСаАтТаАССАасСаАСАСТТСТАТСТОСАССОаСаИатА
САТаОСААСТОТСТАсСАСсТаСаИатстТаАСапАСАсСсаТстатт тТАСТАТТиаТОСАСОЯСОвИТАССТАСТАСТАССОССТОСАСАСС таттаАТТАСТасСсасСААаатТАССАСа,ватаАССатАда стстастАаасСАССАд,аавасссСАаАтовИаИтстосоостаасСАСо
СсТоСстТоСААСДасСсАССТСТОСЯвосаСАсАаа,асоса7асоставаст состааТтсАдапАСТАСТТСССССОСААСсСсЯ!СОостаАСссвса7ататсат ваААСтТосАдаасассстадсСсАа,аСсаа,аатасСАСАССТТСССИА астатссСстТАСАаТоСтТСАааАСТСтТАСТОССТСоАДа,аСсАаСаИта стадссатассстоСАасСАаасттааваСАСССАСАССТАСАТС нуклеотидна тТасСсАдСатаААТСАСАДасСсССАасСААСАССААДа,атасАСААС послідовність конструкції АААСТТаАаСССАААТСТТатаАСААААСТОСАСАСАТаСССАС 312 анти-СО19 (888-2811)- СяОТаИСССАаСАССТаААаСсТасАасасааАсСсатсАа сто
Ес-ланцюг з «виступом»- СТО ТОСССССААААСССААасАСАСССТОАТОАТСТОССОСО мономерний (71-2486) АССССТОАсСОаТтСАСАТОаСС ТС ТО ТаСАСатаАаССАССА ліганд АвАсоСтадаатСсААаТТСААСстТастАСсатацвАаСса,ваСатацА сатТасСАТААТаССААаАСААдАааССаСа,асаА,аА,САа,тТАСА
АСсАаСАССЯтТАСССЯТатаатоАа,аСбатостСАсСатостасАсс
АдсаАдстааСТаААтТайСААасАсТАСААаТасСААаатсТоСА
АСААДАДСОСССТСОСОасассссССАТССАСААААССАТСТОСАААдС
ССАААсаасдассссцвАпААССАСАСвСИатТатАСАсоста7ассс соСстТасСсАпАаАтТадасСстаАССААаААССАасататоостатас таттастсАддавастСстТАССССАаСаАтТАТтсаоСсастТаавАс тассАсАаСААСааССАассТаАпААСААСТАСААПАССАСО ссссстатастасАсАда,аса,аАаСсасАа,астстосСтТатАСТОС
АААСТОАСсСсОатТасАСААавАаасССватааСАаСА,ааСААСаТт сттсдастасдаСсатаАтТасСсАсаАдааСССстТасСАСААССАСТА
САСССАСЧСАЛДИатоСсСсТвАассталассссвасСасасАасасаасо сАдаСса,асАда,асАааАапАТоСАпАвАаа,аасасостаАастаАас
ССстТаАтТаАТОоСТаССОСОСАСсТаСстТасАасстасСасасСАсацААТ стптасссластастааСССАсААсатастастаАТосасАТас
Таблиця 67
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СО19 (8888-2811) антигензв'язуючої молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (711-248) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 4.6)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: ссссстатоСстаатТАсСАдасаАТоСсТасАСсСТОССсТОа,СсаТтато
АСстТаАСАСсаса,ааоСТаАасСТАСААДАЧАапАСАССААДАСААСТ сатастааСсСААдса,асСса,аасаТатАСтТАСатаТатсттсАСаСТ ааААстасасАасасАаататасосвсассАда,ааАтотаа7астота татототааСоСтасСсАтТотТасаасстстаАаАтста7астаста ссесссестастотааСАСТаАСсАаа,атТаспАтТасстосСтТассСА ссдасада,ааооСацпААтТАаСасАттаса т тСАдааСАСцо стастасаостатотасссасСАсвСАсастаавАстТасАТСТ сСАСАСАаСАаасасСАассвсастТАаАсАСса,асстааСАасСТаАСАС
АдссасастАсАастаставасстаттСАсАаТаАСоСССаАс
АТПОСТаССОсСаваСтТо нуклеотидна послідовність анти-СО19 277 (888-2811), пегкий ДИВ. таблицю 59 ланцюг
ОМОЇ МОБСАЕУККРОАБУКУЗСКАВИахТЕТОМІМНУУВОА
РОСС ЕМ МамМІМРУМОСЗКУТЕКРОСАУТМТЗОТ5ІЗТАММ
ЕГЗВІ А5БООТАУУУСАВаТтуУуаРОЇ ЕримаОоастТтУТУ5о
АБТКОаРБМУЕРІ АРЗЗКЗТЗИаСТАА аСІ УКОМЕРЕРУТУБУМЗСИА
АЇ ТЗаУНТЕРАМІ О55О01 51 55УМТУРБББІ ЕТО МІСМУМНКРБ
МТКМОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСОРАРЕААСОИРБЗУРІ ЕРРКРКОТ
ГМІЗАТРЕУТСУММОУЗНЕОРЕМКЕМУ УМО МЕМНМАКТКРАЕ
ЕОУМЗТУВУУБМІ ТМ НОВУ МЕ КЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІВ анти-СО19 (888-2811)- КАКОФОРРБЕРОМСТІ РРЗВОЕЇ ТКМОМУ5І БСАУКИаЕМРЗОІАМЕМУ 313 Ес-ланцюг із ЕЄМСОРЕММУКТТРРМІ О5ОСЗЕР ЗК ТУОКЗАМУОСаММУБ5 «западиною»-димерний | СЗММНЕАЇ НМНУТОК5БІ 5І ЗЗРОССОВИаСБаСОИЯСОАВЕСРЕЇ 5РООР ліганд (71-248) АСИП о ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІраРІ БМ МОРГ АСУБІ ТИС.
ЗУКЕОТКЕЇ УМАКАСУМУМУЕРОГ ЕЕ ААУМАаЕ,аЗавмві АІ НІ О
РІ АЗБААДСААДАЇГ АЇ ТМОЇ РРАБЗЕАВМЗАБРСОЕРОСВІ І НІ БАСОВІ.
СУНІ НТЕАВАВНАУОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВУТРЕІРДОІ ас сОа5АЕОСРЕЇ 5РОЮОРАСІ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІЮСИРІ УМ
ЗОРИЇГАСУБІ ТИС БУКЕОТКЕЇ УМАКАСУУМУМУЕРОЇ ЕГАВУМА
СсЕс,БаБМУБІАЇІНІ ОРІ АВ5ААСАААЇГ А ТМОЇ РРАБЗЕАВМЗАРБИаЕ
ОСВІ НІ ЗАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАУМ ОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТР
ЕІРАІ.
ОМОЇ МОБСАЕУККРОАБУКУЗСКАБВИахТЕТОМІМНУУВОА
РОСС ЕМ МамМІМРУМОСЗКУТЕКРОСАУТМТЗОТ5ІЗТАММ
ЕГЗВІ А5БООТАУУУСАВаТтуУуаРОЇ ЕримаОоастТтУТУ5о
АБТКОаРБМУЕРІ АРЗЗКЗТЗИаСТАА аСІ УКОМЕРЕРУТУБУМЗСИА
АЇ ТЗаУНТЕРАМІ О55О01 51 55УМТУРБББІ ЕТО МІСМУМНКРБ анти-С0О19 (888-2811)- МТКМОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСОРАРЕААСОИРБЗУРІ ЕРРКРКОТ
Ес-ланцюг з «виступом»- ГМІЗАТРЕУТСУММОУЗНЕОРЕМКЕМУ У раМЕМНМАКТКРАЕ 314 мономерний (71-248) ЕОУМЗТУВУУБМІ ТМ НОВУ МЕ КЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІВ ліганд КАКСОРАЕРОМУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМ5І МУСІ УКаЕМРЗОІАМЕ
МЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОБраЗЕРІ ЗК тУркКЗАМмОВамММЕ
ЗС5УМНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І ЗЗРОСОЯаа,саЗИаСОССЗВЕСРЕЇ 5РОЮ
РАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММ ГІраРІ БУУМБОРИЇ АСУБІ Та
ІЇ ЗУКЕОТКЕЇ ММАКАСМУМУУМУЕРОЇ ЕІ ААВУМАСпЕаЗавзмві А! НІ.
ОРІ ВБААСАААЇГ А ТМОЇ РРАБЗБЕАВМЗАРСРОСВІИ І НІ БАСОВ
ГаМніНнтТЕАВАВНАМ ОЇ ТОСАТМІ СІ ЕАМТРЕЇІРАСІ.
Таблиця 67
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СО19 (8888-2811) антигензв'язуючої молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (711-248) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 4.6)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: анти-СО19 (888-018), див. таблицю 59 легкий ланцюг 7.3 Одержання «ненацілених» конструкцій, які містять розділений тримерний ліганд для 4- 188 в злитті з Ес, і людських Ідсї як контрольних молекул 7.3.1 Одержання «ненацілених» антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний людський ліганд для 4-188 в злитті з Ес (контрольні молекули)
Зазначені контрольні молекули одержували відповідно до методу, описаному вище для націленої на СО19 конструкції 3.1 (позначена як контроль Б), 3.3 (позначена як контроль В), 3.4 (позначена як контроль Г) і 3.5 (позначена як контроль Д), з єдиною відмінністю, яка полягає в тому, що анти-СО19-зв'язуючий агент (МН-МІ) замінювали на контроль, що являє собою зародкову лінію, позначений ОРА7, який не зв'язується з антигеном (див. фіг. 30).
В таблиці 68 представлені відповідно кКДНК і амінокислотні послідовності одновалентної «ненаціленої» (ОР47), яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з
Ес(Кін), яка містить «схрещені» СН-СЇ із зарядженими залишками молекули, що являє собою контроль Б.
В таблиці 69 представлені відповідно кКДНК і амінокислотні послідовності двовалентної «ненаціленої» (ОР47) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес(Кіпй), що являє собою контроль В.
В таблиці 70 представлені відповідно кКДНК і амінокислотні послідовності одновалентної «ненаціленої» (ОР47) яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з
Ес(Кій) яка містить «схрещені» СН-СІ із зарядженими залишками молекули, що являє собою контроль Г.
В таблиці 71 представлені відповідно кКДНК і амінокислотні послідовності одновалентної «ненаціленої» (ОР47), яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з
Ес(Кій) без заряджених залишків в СН-СІ -кросовер-молекули, що являє собою контроль Д.
Таблиця 68
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної «ненаціленої» (ОР47) молекули з СН-СІ - кросовером і із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (711-254) в злитті з ЕС(Кій) (контроль Б). " позначає заряджені залишки
ЗЕО І . . нуклеотидна послідовність конструкції димерний пи 4-1881 (71- Див. таблицю З 254) - СІ "-Ес-ланцюг з «виступом» нуклеотидна послідовність конструкції мономерний пи 4-188ВІ. (71- Див. таблицю З нуклеотидна послідовність ОРА7, Ес-ланцюг із «западиною» Див. таблицю 18 80 |нуклеотидна послідовність легкого ланцюга ОРА7 Див. таблицю 18 98 Їдимерний пи 4-18ВІ. (71-254) - СІ "-Ес-ланцюг з «виступом» 99 |мономерний Пи 4-188ВІ. (71-254) - СНІ" рРА7, Ес-ланцюг із «западиною» Див. таблицю 18 легкий ланцюг ОРА7 Див. таблицю 18
Таблиця 69
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної «ненаціленої» (ОРА7) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-1 88 (71-254) в злитті з ЕС(Кій) (контроль В) с-м нуклеотидна послідовність конструкції ОРА7, Ес-ланцюг вив. таблицю «западиною», злитий з димерним пи 4-188ВІ (71-254 27 178 |НнУуклеотидна послідовність конструкції ОР47, Ес-ланцюг з «виступом», Див. таблицю злитий з мономернимпи 4-18В8Г. (71-254 27 во нуклеотидна послідовність легкого ланцюга ОРА7 тав. таблицю
ОРА7, Ес-ланцюг із «западиною», злитий з димерним пи 4-188ВІ. удив. таблицю 254 27 180 рРА7, Ес-ланцюг з «виступом», злитий з мономернимни 4-1881 (714 Див. таблицю 254 27 легкий ланцюг ОР47 тав. таблицю
Таблиця 70
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної «ненаціленої» (ОР47) молекули з СН-СІ - кросовером і із зарядженими залишками,яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71- 248) в злитті з Ес(Кій) (контроль Г). " позначає заряджені залишки с-м нуклеотидна послідовність конструкції димерний пи 4-188І (71- 169 248) - СІ "-Ес-ланцюг з «виступом» Див. таблицю 24 нуклеотидна послідовність конструкції мономерний Пи 4-1881. (71- 170 248)- СНІ" Див. таблицю 24 нуклеотидна послідовність ОРА7, Ес-ланцюг із «западиною» Див. таблицю 18 80 |нуклеотидна послідовність легкого ланцюга ОРА7 Див. таблицю 18 димерний пи 4-188ВІ. (71-254) - СІ "-Рс-ланцюг з «виступом» Див. таблицю 24 мономерний пи 4-18ВІ. (71-254) - СНІ" Див. таблицю 24
ОРА7, Ес-ланцюг із «западиною» Див. таблицю 18 легкий ланцюг ОРА7 Див. таблицю 18
Таблиця 71
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної «ненаціленої» (ОР47) молекули з СН-СІ - кросовером і без заряджених залишків, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71- 248) в злитті з ЕсС(Кій) (контроль Д) с-м
ЩЕ нуклеотидна послідовність конструкції димерний пи 4-188І. (7 див. таблицю 25
Тл 248) - СІ -Рс-ланцюг з «виступом» Див. таблицю 25 нуклеотидна послідовність конструкції мономерний пи 4-188В1Г. (714 172 248)- СНІ Див. таблицю 25 нуклеотидна послідовність ОРА7, Ес-ланцюг із «западиною» Див. таблицю 18 80 |нуклеотидна послідовність легкого ланцюга ОР47 Див. таблицю 18 димерний пи 4-18ВІ. (71-248) - СІ -ЕРс-ланцюг з «виступом» Див. таблицю 25 мономерний пи 4-18ВІ. (71-248) - СНІ Див. таблицю 25
ОРА7, Есо-ланцюг із «западиною» Див. таблицю 18 легкий ланцюг ОРА7 Див. таблицю 18
7.3.2 Антитіла як контрольні молекули
Одержували два контрольних людських ІДС, які містять РОЇ АЇ А.
В таблиці 72 представлені кКДНК і амінокислотні послідовності анти-СО19 пида! РЕГАГА (клон 888-018), тобто контролю Ж.
В таблиці 73 представлені кКДНК і амінокислотні послідовності контрольної зародкової лінії
ОБРА? пшЯса1 РОЇ АГА (контроль Е).
Таблиця 72
КДНК і амінокислотні послідовності анти-СО19 (888-018) пиїда1 РОЇ АГА (контроль Ж) сасатосаастеста7аса,атосвсаСса,асСаАсат (9;
ААпАААдссСа,асаас тотатаААдааТТТСАТаС
ААдсСасСсААласапАтТАСАССТТСАССОАСТАТАТС
АТаСсСАТТаСТСАСаСАСсСаСоССтаасССАдаатТ
СТоОААТаАСАТапастАСАТТААСССАТАТААТ вАТааСТОСАААТАСАССаАаААс ТТ ТСАвацА
АПВАаТСАСТАТаАСАТСТОАСАССАСТАТСАСС
АСТасСтТтТАСАТОСАССТОТОССЯСсСТТсватстТ (Є)
АтТаАСсАССЯаСАаТтатАТТАСТаТаСсСАсацвасА
САТАТТАСТАСССаСТоАДаСсСтТоТаТаттСсаАСТАТТО сасаСсАдваацпААССАСАаТААсСсатадасСтоСа
САДИаТАСТААХССЗИСССАТССКЯТОТТОоСооСстас
САСССТоОСТоСААсСАаСАсСТЬТООИОапаСАСАС ссесостасастасстааТСААасСАСТАСТТОС
СсСпААдсСссвсатаассататса7атавААСТоАс,аас (Є)
ЄоСстТАсСсАааСссасатасСАСАССТССваста
ТОоСТАСАСТОоСТСАааАСТСОТАСТОССТСАаСА сстаеастаадсса,атассстосАд,асАа,астасасА нуклеотидна послідовність важкого СССАВАССТАСАТСТаСААСаТаААТСАСАдаС 315 ланцюга СО019 (888-018) (пидСІ ССАаСААСАССАдв,атацпАСААСпАААатТаАа
РОГАТА) СССАААТСТТатаАСААААСТСАСАСАТаСССА сса,атассСдасСсАсСтаАдАд,асАа,астааввапАСс (Є)
ТСАаТСТТОСТСТССССССААДААСССАдасАС
АСССТСАТаАТСТОССОССАССССтТОаАсСаИтСАСА тасатеастеаставсАассастаАаССАСаААаАСОоСтТ адапйТСААаТТСААСстТасастАасатасвАсасссата сластасСАТААТаССААаАСАААлаССасаааА сапАдаСАСатТАСААСАаСАСсатАсСсататаатСАС са,атоСстТсАсСсатоСТасСАССАСаАСТаасСтТаАА тааСААласпАСТАСААдаТасСААдааЙТСТоСААСАА дассстсапАаСССССАТОСАСААААССАТСТО
САДАДаССАААдс,аасАасоСЄаАсААССАСАсО татАСАСССстТасссССАТтоСсСОвСасАтТадасСтТах
ССААпААССАсСа7атсаасстаАасстасстаатСА
ААСИАСТТСОТАТСССАССОСАСАТСОСССОЯТОСАСТ сасАсАаСААтТасаИаСАаа,аССацАсААСААСТАС
ААаАсСАсасстоссатаставАСтТоСаАСсас
ТоСТСТоСТСТАСАаСААдастТСАССатацАСА дадасасатааСАаСАсапаААСаТатсТсСтТСАТ сстобатаАтТасСсАТтТаАсСастстТасСАСААССАСТ
АСсАСаСАсСААдсСАаассттсостатоооСасвасСА
АА
Таблиця 72
КДНК і амінокислотні послідовності анти-СО19 (888-018) пиїда1 РОЇ АГА (контроль Ж) о ІланцюгаСОт9(8ВВВ-О18)///77/Ї71111111111111111
ОМОЇ МОБЕАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИМТЕТОМІМ
НУУВОАРОаСаї! ЕУМахмІМРиМОаЗкКУТЕКРОСВ
МТМТ5ОТ5ІЗТАММЕЇ ВІ В5ООТАУУУСАВИТтУу
УхазАІ ЕрУМаОСТУТУ5ЗАЗТКОаРБЗМУЕРІ АРЗ
ЗКЗТЗаатААІ ас МКОМЕРЕРУТУЗУУМЗИАІ 5
СМНТЕРАМІ О55О01І. У5І 55 УРЗББІ аТОТМІС 316 важкий ланцюг СО19 (888-018) МУМНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕА (пшдат РОГАГ А) АСаРБЗМУБГ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСУУМОМЗНЕ
ОРЕУКЕМУ УУрамЕМНМАКТКРАЕЕОСУМЗТУВМ
УМ ТМ НОРМІ МЕКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІ
ЗКАКОИОРВЕРОМУТІ РРЗВОЕБЇ ТКМОМУБІ ТС УК
СЕМРЗБІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОБраВЕЕ
ГМК ТУЮКЗАМОО,ММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТО
Кб 5І РОК
Таблиця 73
КДНК і амінокислотні послідовності контрольної зародкової лінії ОРА7 пиШдСаІ РОГ АГА (контроль Е)
РОГАГА 23
Шо ССП інший 7.4 Одержання націлених на СО19 антигензв'язуючих молекул, які містять розділений тримерний ліганд для 4-1ВВ в злитті з Ес і відповідних контрольних молекул
Кодуючі послідовності націлених і «ненацілених» антигензв'язуючих молекул, які містять розділений тримерний ліганд для 4-18В8В в злитті з Ес(Кій), клонували в плазмідному векторі, в якому експресія вставки контролюється промотором МРБМ і який містить синтетичну полід- послідовність, локалізовану на 3'-кінці СОБ5. Крім того, вектор містив послідовність ОгіР ЕВМ для підтримки епісомальної форми плазміди.
Антигензв'язуючу молекулу, що містить розділений тримерний ліганд для 4-188 в злитті з
Ес(Ккіпй), одержували шляхом спільної трансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців з використанням поліеєтиленіміну. Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами. Для варіантів 1, 2, 4, 5 і відповідних контролейБ, Гід застосовували співвідношення 1:1:1:1 («вектор для конструкції димерний ліганд-Сі -ланцюг з «виступом»:«вектор для злиття мономерний ліганд-СНІ»: «вектор для анти-СО19 Ба з ланцюгом із «западиною»:«вектор для легкого ланцюга анти-СО19»). Для варіантів 3,6 і відповідних контролю В застосовували співвідношення 1:1:1 («вектор для конструкції пиЇда1-Ес- ланцюг із «западиною»-димерний ліганд»:«вектор для конструкції НиЇдс1-Ес-ланцюг з «виступом»-мономерний ліганд»:«вектор для легкого ланцюга анти-СО19»). Людські дз, застосовувані як контролі в цьому аналізі одержували методом, застосовуваним для біспецифічної конструкції (для трансфекції застосовували тільки вектор для легкого ланцюга і вектор для важкого ланцюга у співвідношенні 1:1).
Для виробництва в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 300 млн клітин НЕК293 ЕВМА за
24 год до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 10 хв при 210 х ді супернатант замінювали 20 мл попередньо нагрітого середовища СО СНО. Експресійні вектори (200 мкг загальної ДНК) змішували в 20 мл середовища СО СНО. Після додавання 540 мкл ПЕЇ розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с і інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕ!, переносили в 500-мілілітрові збовтані колби і інкубували протягом З год при 37"С в інкубаторі в атмосфері з 595 СО». Після інкубації додавали 160 мл середовища ЕхсеїЇ, доповненого бмМ І-глутамін, 5 г/л соєвого пептиду (РЕРБЗОУ) і 1,2мМ вальпроєвої кислоти, і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали 1295 Реєй 7 (амінокислота і глюкоза). Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням протягом 30-40 хв при принаймні 400 х 9. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22 мкм-фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,0195 (мас./Об.) і витримували при 4"С.
Антигензв'язуючу молекулу, що містить розділений тримерний ліганд для 4-18В8В в злитті з Ес (КІЙ), а також ІдсС, очищали з супернатантів клітинних культур за допомогою афінної хроматографії з використанням білка А з подальшою гель-фільтрацією. Для здійснення афінної хроматографії супернатант вносили в колонку Марзеїесі Зиге (СМ - 5-15 мл, смола фірми СЕ
Неайсаге), врівноважену буфером, що містить фосфат натрію (20мм), цитрат натрію (20мм) (рН 7,5). Незв'язаний білок видаляли шляхом промивання таким же буфером, використовуючи його в об'ємі, кратному принаймні б об'ємам колонки. Зв'язаний білок елюювали, використовуючи або лінійний градієнт (20 СМ), або східчасту елюцію (8 СМ), буфером, що містить 20мММ цитрат натрію, 100мМ хлорид натрію, 100мМ гліцин (рН 3,0). При здійсненні елюції з використанням лінійного градієнта здійснювали додаткову східчасту елюцію із застосуванням об'єму, кратному 4 об'ємам колонки.
Значення рН зібраних фракцій регулювали, додаючи 1/10 (0б6./06.) 0,5М фосфату натрію, рн 8,0. Білок концентрували перед внесенням в колонку Ні оай Супердекс 200 (фірма СЕ
Неайсаге), врівноважену розчином, що містить 20мММ гистидин, 140мМ хлорид натрію, 0,01 об.95 Твін2го, рН 6,0.
Концентрацію білка визначали шляхом вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм, використовуючи коефіцієнт молярної екстинкції, розрахованого на основі амінокислотної
Зо послідовності. Чистоту і молекулярну масу націленої молекули, що містить тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес (Кіп), аналізували за допомогою ДСН-ПААГ у присутності відновника (5мМ 1 4-дітіотреїтолу) і без нього і здійснювали фарбування кумассі бітріеВіце "М Загїезіаїйп, (фірма Іпмігодеп, США). Зміст агрегатів в зразках аналізували, використовуючи колонку для аналітичної гель-фільтрації Т5Кде! 53000 ЗМУ Хі (фірма Тозой), врівноважену рухомим буфером, що містить 25мММ Ке2НРО», 125мМ Масі, 200мМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,0295 (мас./об.) Мам», рН 6,7 при 2576.
В таблиці 74 узагальнені дані про вихід і кінцевий вміст мономерів націлених на СО19 антигензв'язуючих молекул, які містять розділений тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес (КІН).
Таблиця 74
Результати біохімічного аналізу націлених на СО19 антигензв'язуючих молекул, які містять розділений тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес (Кій) . Мономер (|9о|| Вихід одновалентна націлена на СО019 (888-018) яка містить розділений тримерний ліганд для 4-18В (71-254) в злитті з Ес з СН-СІ -кросовером із зарядженими залишками (конструкція 3.1 двовалентна націлена на СО019 (888-018) яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес 100 11,3 (конструкція 3.3) одновалентна націлена на СО019 (888-018) яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес з СН-СІ -кросовером із 114 5 зарядженими залишками " (конструкція 3.4)
Таблиця 74
Результати біохімічного аналізу націлених на СО19 антигензв'язуючих молекул, які містять розділений тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес (Кій) . Мономер (|9о|| Вихід
Конструкція ФЕС Гмг/лі одновалентна націлена на СО19 (888-018), яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес з СН-СІ -кросовером без 97 13 3 заряджених залишків " (конструкція 3.5) двовалентна націлена на СО019 (888-018) яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес 19,9 (конструкція 3.6) одновалентна націлена на СО19 (888-2811) яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес з СН-СІ -кросовером із 992 212 зарядженими залишками " " (конструкція 4.4)
В таблиці 75 узагальнені дані про вихід і кінцевий вміст мономера «ненацілених» (ОР47) як одновалентних (контроль Б, Г і Д), так і двовалентних (контроль В) молекул, які містять розділений тримерний ліганд для 4-188В в злитті в Ес (КІМ).
Таблиця 75
Результати біохімічного аналізу «ненацілених» (ОР47) молекул, які містять розділений тримерний ліганд для 4-1ВВ в злитті з Ес (Кій)
К . Мономер (9 Вихі онструкція д (ЗЕС)
Імг/лі одновалентна «ненацілена» (ОР47) яка містить розділений тримерний людський ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кійп) 15,4 (контроль Б) двовалентна «ненацілена» (ОР47) яка містить розділений тримерний людський ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кіп) 12,6 (контроль В) одновалентна «ненацілена» (ОР47) яка містить розділений тримерний людський ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кійп) 99,5 25,9 контроль одновалентна «ненацілена» (ОР47) яка містить розділений тримерний людський ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кійп) 93,3 41 (контроль Д)
В таблиці 76 узагальнені дані про вихід і кінцевий вміст мономера людського анти-СО19 (888-018) ІДС РОИгГАГА і їдС1 РОГАГА зародкової лінії ОРА7 (контроль Е).
Таблиця 76
Результати біохімічного аналізу контрольних людських ІДС РОГ АГА
Конструкція Мономер (95) (ЗЕС) як анти-СО19 (888-018) пш901 РОГ АГА людський ІдДС1 РОГАГА зародкової лінії ОРА7
Приклад 8
Функціональна характеризація націлених на СО19 антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для 4-18ВВ в злитті з Ес 8.1. Поверхневий плазмонний резонанс (афінність)
Зв'язування націлених на СО19 антигензв'язуючих молекул, які містять розділений тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес (конструкції 3.4 і 3.6) з рекомбінантним 4-188-Ес (КІМ) і
СО19, оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (5РК). Всі експерименти на основі РК здійснювали за допомогою пристрою Віасоге Т100 при 25"С з використанням
НВ5О-ЕР як рухомого буфера (001М НЕРЕЗ, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗмМ ЕДТА, 0,005965 сурфактанта Р20, фірма Віасоге , Фрейбург/Німеччина).
Взаємодія з 4-188 людини і мавп ціномолгус
Антитіло до людського Раб (фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина) безпосередньо зв'язували з
СМ5-чіпом при рН 5,0, використовуючи набір для стандартного амінного поєднання (фірма
Віасоге, Фрейбург/Німеччина). Рівень іммобілізації відповідав приблизно 8000 КИ. Націлені на
СОр19 містять розділений тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес молекули «захоплювали» протягом 60 с в концентрації 2 і 5НМ (ін'єктували також контроль Г). Рекомбінантний людський або мавпячий (ціномолгус) 4-18В-амі Ні5 пропускали в діапазоні концентрацій від 2,7 до 2000НМ (З-кратні розведення) зі швидкістю потоку 30 мкл/хв через проточні клітини протягом 120 с.
Моніторинг фази дисоціації здійснювали протягом 180 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, одержаної в проточній референс-клітині. В цьому разі антигени пропускали по поверхні з іммобілізованим антитілом до людського ЕРар, але ін'єктували НВЗ-ЕР замість антитіл.
Взаємодія з людським СО19
Антитіло до людського Раб (фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина) безпосередньо зв'язували з
СМ5-чіпом при рН 5,0, використовуючи набір для стандартного амінного поєднання (фірма
Віасоге, Фрейбург/Німеччина). Рівень іммобілізації відповідав приблизно 8000 КО. Націлені на
СО19 молекули, які містять розділений тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес або контрольне антитіло (анти-СО19 (888-018) пиї9дО1 РОЇ АГА) «захоплювали» протягом 60 с в концентрації 20
НМ. Рекомбінантний людський СО19-Ес (Кіп) пропускали в діапазоні концентрацій від 7,8 до 500Нм (2-кратне розведення) зі швидкістю потоку 30 мкл/хв через проточні комірки протягом 120 с. Моніторинг фази дисоціації здійснювали протягом 130/1800 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, одержаної в проточній референс- клітині. В цьому разі антигени пропускали по поверхні з іммобілізованим антитілом до людського Раб, але ін'єктували НВ5-ЕР замість антитіл.
Кінетичні константи визначали за допомогою програми Віасоге Т200 ЕмаЇІцайоп (мМАА, фірма
Віасоге АВ, Уппсала/Швеція), здійснюючи апроксимацію шляхом чисельного інтегрування рівнянь для швидкості на основі моделі зв'язування 1: 1 Ленгмюра.
Біспецифічні конструкції 3.4, 3.6 і контроль Г характеризувалися подібним зв'язуванням з 4- 188. У таблиці 77 представлені середні значення і стандартні відхилення (в дужках), одержані в двох експериментах (в яких концентрації конструкцій в розчині, в якому здійснювали «захоплення», становили 2 або 5нМ). Біспецифічні конструкції 3.4 і 3.6 зв'язувалися з людським
СОр19 з такою ж афінністю, що і дос. Константи афінності, що характеризують взаємодію, визначали шляхом апроксимації на основі моделі зв'язування 1: 1 Ленгмюра. Дані, отримані при оцінці з використанням Ппи4-188 і су4-188, представлені у вигляді середніх значень і стандартних відхилень (в дужках) (два експерименти, в яких концентрації в розчині, в якому здійснювали «захоплення», становили 2 або 5нМ).
Таблиця 77
Зв'язування націлених на СО19 молекул з рекомбінантним людським (пи) 4-188, мавпячим (су) 4-188 і людським (пи) СО19, які містять розділений тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес ен фо ТкоюТют, (1/Мс) на СО19 (888-018) молекула с 5,9Е-4-03 1,0Е-05))(2,8Е-08 зарядженими залишками, У 8,6Е--03 1,8Е-04))(9,9Е-09 яка містить розділений тримерний з Ес (Кій) (конструкція 3.4)
СО19 (888-018) молекула, яка містить 1,7Е--03 1,5Е-04))(1,1Е-08
Таблиця 77
Зв'язування націлених на СО19 молекул з рекомбінантним людським (пи) 4-188, мавпячим (су) 4-188 і людським (пи) СО19, які містять розділений тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес тен до Те ют, (1/Мс) для 4-188 (71-248) в злитті 7,7Е-03 3,1Е-04))(1,3Е-08 з Ес (кіп) (конструкція 3.6) одновалентна «ненацілена» (ОРА7) молекула з
СН-СІ -кросовером і 3,9Е-0З3 6,ЗЕ-04)|(1,0Е-08 із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний су 4-18В 12Е-05 1,4Е-02 | 1,2Е-07 людський ліганд для 4-188 (71-248) У (1,9Е-03) (1,0Е-04)|(2,9Е-09) в злитті з Ес (Кій) (контроль Г) 8.2. Поверхневий плазмонний резонанс (одночасне зв'язування)
Оцінювали здатність одночасно зв'язуватися з людським 4-18В-Ес (Кій) і людським СО19 за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК). Всі експерименти на основі ЗРК здійснювали за допомогою пристрою Віасоге Т100 при 25"С з використанням НВ5-ЕР як рухомого буфера (0,01М НЕРЕ5, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗмМ ЕДТА, 0,00595 сурфактанта Р20, фірма Віасоге , Фрейбург/Німеччина). Конструкцію біотинільованого людського 4-18В8-Ес (Кін) зв'язували безпосередньо з проточною коміркою стрептавідінового (ЗА) сенсорного чіпа.
Застосовували рівні іммобілізації, що відповідають аж 250 резонансним одиницям (КІ).
Націлені на СО19 конструкції (конструкції 3.1, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 4.4), які містять тримерний розділений 4-188І, що пропускали в концентрації 200Нм зі швидкістю потоку 30 мкл/хв через проточні клітини протягом 90 с і час фази дисоціації встановлювали на 0 с. Людський СО19 ін'єктували як другий аналіт, пропускаючи його зі швидкістю потоку 30 мкл/хв через проточні клітини протягом 90 с в концентрації 500Нм (фіг. 34). Моніторинг фази дисоціації здійснювали протягом 120 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, одержаного в проточній референс-клітині, в якій не іммобілізували білок.
Як продемонстровано на графіках на фіг. 35, всі біспецифічні конструкції мали здатність одночасно зв'язуватися з людським 4-188 і людським СО19.
Приклад 9
Функціональна характеризація націлених на СО19 антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для 4-18ВВ в злитті з Ес 9.1. Зв'язування націлених на СО19 антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес (Кіп) на активованих людських РМВС
Для оцінки зв'язування антигензв'язуючих молекул з людськими РВМС, які містять тТримерний 4-188І, в злитті з Ес використовували в різних одержаних титруванням концентраціях націлені на СО19 антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний 4-188Ї в злитті з Ес, здійснюючи аналіз, описаний в прикладі 5.2.
На фіг. зЗбА і 36Б продемонстровано зв'язування конструкцій 3.1, 3.3, 3.4, 3.5 і 3.6, одержаних відповідно до методу, описаному в прикладі 7, на активованих експресуючих 4-188
Сбра--Т-клітинах і СО8:-Т-клітинах відповідно. Дискримінаційні вікна встановлювали на живі бр450033004- або СбрабБСр3:008:-Т-клітини і будували графік залежності МЕ! для кон'югованого з РЕ К(іаб')ї2-фрагмента козячого ДС. проти людського ІдСї, Есу-специфічного
АніпіРиге віж одержаних титруванням концентрацій націлених варіантів, які містять розділений тримерний ліганд для 4-1ВВ в злитті з Ес. В таблиці 78 представлені одержані величини ЕсСрвбо, визначені для конструкцій 3.1, 3.3. 3.4, 3.5 і 3.6 і контрольних молекул.
Таблиця 78
Зв'язування на активованих експресуючих 4-188 СОа--Т-клітинах і СО8:-Т-клітинах . ЕСбво |нМ| ЕСтво (НМ)
Таблиця 78
Зв'язування на активованих експресуючих 4-188 СОа--Т-клітинах і СО8:-Т-клітинах . ЕСво (НМ) ЕСво (НМІ 9.2 Зв'язування з експресуючими СО19 пухлинними клітинами
Для аналізів зв'язування на експресуючих СО19 пухлинних клітинах застосовували такі експресуюючі людський СО19 клітинні лінії лімфоми: клітини дифузної крупноклітинної неходжкінської В-клітинної лімфоми (В-МНУ) лінії БИ-ОНІ-8 (05М2 АСС573), клітини гострого лімфобластного лейкозу з клітин-попередників В лімфоцитів лінії Маітб (05М2 АСС-128), клітини дифузної крупноклітинної лімфобластної лімфоми лінії Тоіеєдо (АТСС СТІ -2631) і клітини дифузної крупноклітинної В-клітинної лімфоми лінії ОСІ-їу18 (05М72 АСОС-699). Аналізи здійснювали відповідно до методу, описаного вище в прикладі 5.3 для експресуючих ЕАР ліній пухлинних клітин ММ-3 ї УММ-266-4.
Дискримінаційні вікна встановлювали на живі пухлинні клітини і будували графік залежності
МЕ! для кон'югованого з РЕ Е (ар) 2-фрагмента козячого (ДО проти людського Ідс, Есу- специфічного АйіпіРиге від одержаних титруванням концентрацій націлених конструкцій, які містять розділений тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес.
На фіг. 37А продемонстровано зв'язування конструкцій 3.1, 3.3, 3.4, 3.5 і 3.6, одержаних відповідно до методу, описаному в прикладі 7, з клітинами дифузійної крупноклітинної неходжкінської В-клітинної лімфоми (В-МНІ) лінії 50-ОНІ-8, на фіг. 37Б - зв'язування конструкцій 3.1, 3.3, 3.4, 3.5 і 3.6 з клітинами гострого лімфобластного лейкозу з клітин- попередників В-лімфоцитів лінії Ма!тб. На фіг. 37В продемонстровано зв'язування конструкцій 3.1, 3.3, 3.4, 3.5 і 3.6 з клітинами дифузійної крупноклітинної лімфобластної лімфоми лінії
ТоїІедо, а на фіг. 37Г - зв'язування конструкцій 3.1, 3.3, 3.4, 3.5 і 3.6 з клітинами дифузійної крупноклітинної В-клітинної лімфоми лінії ОСІ-Їу18. У таблиці 79 представлені одержані величини ЕСво, визначені для конструкцій 3.1, 3.3. 3.4, 3.5 і 3.6 і контрольних молекул.
Таблиця 79
Зв'язування з експресуючими СО19 пухлинними клітинами . ЕСво (нМІ ЕСво (нМІ ЕСво (нМІ ЕСво|нМІ 111783 777105 77711014 7771 оло | 6б09 2 77117786 | 074 | 012 2 | 009 | оо конттольижЖ | (009 | ол | 006 | що
Приклад 10
Біологічна активність націлених на СО19 антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес. 10.1. Активація МЕ-кВ в клітинах НеГа, що експресують людський 4-188
Зо Клітини Нега, які експресують людський 4-188 і МЕ-кВ -люциферази, створювали відповідно до методу, описаному в прикладі 6.1.
Активація МЕ-кВ в клітинах Неїа, що експресують людський 4-188В, при спільному культивуванні з експресуючими СО19 пухлинними клітинами
Клітини Не! а, експресуючі МЕ-кВ -люциферази і людський 4-188В, збирали і ресуспендували в середовищі ОМЕМ, доповненому 10 об.95 ЕВ5 і 1 об.95 сішамАХ-Ї, до концентрації 0,2 х 105 клітин/мл. 100 мкл (2 х 107 клітин) зазначеної клітинної суспензії переносили в кожну лунку стерильного білого плоскодонного 9б-ямкового планшета для культури тканини з кришкою (фірма СОгеїпег Біо опе, каталожний Мо 655083) і планшет інкубували при 37"С і 595 СО» протягом ночі. На наступний день додавали 50 мкл середовища, що містить в концентраціях, одержаних титруванням, націлені на СО19 антигензв'язуючі молекули, що містять тримерний ліганд для 4- 188 в злитті з Ес (СО19 розділений тример 4-18В1І) або «ненацілені» (ОРА7) антигензв'язуючих молекули, які містять тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес (ОР47 розділений тример 4- 18813. Експресують СО19 лінії клітин В-клітинної лімфоми (лінія клітин дифузної крупноклітинної неходжкінської В-клітинної лімфоми (В-МНІ) 50-0ОНІ-8 (05М2 АСС573) і клітини людської неходжкінської В-клітинної лімфоми лінії Пфейфер (АТСС СНІ -2632)) ресуспендували в середовищі ЮОМЕМ, доповненому 10 об.95 ЕВ5 і 1 об.95 сіІшамАХ-Ї, до концентрації 2 х 105 клітин/мл.
СО19 клітини В-клітинної лімфоми, що експресують суспензію (50 мкл, кінцеве співвідношення 1: 5) або тільки середовище, додавали в кожну лунку і планшети інкубували протягом 6 год при 37"С і 5956 СО». Клітини промивали двічі 200 мкл/лунку О-ЗФР. Додавали в кожну лунку 40 мкл свіжоприготованого репортерного буфера для лізису (фірма Рготеда, каталожний Мо Е3971) і планшет витримували протягом ночі при -20"С. На наступний день планшети із замороженими клітинами і ідентифікуючим буфером (система для аналізу люциферази 1000, фірма Рготеда, каталожний Мо Е4550) піддавали відтаванню при кімнатній температурі. Додавали 100 мкл ідентифікуючого буфера в кожну лунку і максимально швидко вимірювали люциферазну активність з використанням рідера для мікропланшетів 5ресігаМах
М5/М5е і програми ЗойМах Рго (фірма МоїІесшаг Оемісе5), підраховуючи випускання світла в
ОК (одиниці випускання світла протягом 0,5 с/лунку ), або планшет-рідера для зчитування кількох міток Місіог3 1420 (тийабеї! сошипіег ріаге геадег) (фірма Регкіп ЕІтег) і програми Регкіп
ЕІтег 2030 Мападег, визначаючи випускання світла у вигляді кількості імпульсів в секунду (СРБ), і будували графік залежності від концентрації тестованих конструкцій.
Націлені на СО19 антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд для 4-188 в
Зо злитті з Ес (конструкції 3.1 ї 3.3), ініціювали активацію шляху передачі сигналів МЕ В в репортерній клітинній лінії в присутності експресуюючих СО19 клітин В-клітинної лімфоми. На противагу цьому, «ненацілені» контрольні молекули не ініціювали таку ж дію при застосуванні в будь-яких тестованих концентраціях (фіг. 38).
Приклад 11 1111 Одержання націлених на СЕА (184.66-І СНА) антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для 4-18ВВ в злитті з Ес 1.1.1 Гуманізація клону анти-СЕА Т84.66
Нові гуманізовані варіанти мишачого антитіла Т84.66 (У/адепег та ін., У Іттипої 130, 1983, с. 2308, Мешйтаїег та ін., У Іттипої 135, 1985, с. 3604) створювали шляхом трансплантації СОК в послідовності людських акцепторних каркасних ділянок зародкової лінії.
Гуманізація антитіла нелюдського походження в основному включала трансплантацію залишків СОК з нелюдського антитіла (донор) в каркасну ділянку людського антитіла (акцептор). Як правило, акцепторну каркасну ділянку вибирають шляхом вирівнювання послідовності донора по відношенню до колекції потенційних акцепторних послідовностей і вибору однієї з них, яка або має прийнятну гомологію з донором, або характеризується подібними амінокислотами в деяких положеннях, які мають вирішальне значення для структури і активності. При створенні винаходу вибір акцепторної каркасної ділянки здійснювали шляхом вирівнювання послідовності мишачого білка 784.66 (МСВІ, код доступу Мо СААЗ6980 для важкого ланцюга (5ЕО ІЮО МО: 317), і СААЗб6979 (ЗЕБЕО ІО МО: 318) для легкого ланцюга) по відношенню до колекції послідовностей людської зародкової лінії і відбору такої людської послідовності, для якої характерна висока ідентичність послідовності. При створенні винаходу послідовність ЗНМ1-69708 з бази даних ІМСОСТ вибирали як послідовність акцепторної каркасної ділянки важкого ланцюга (ІМСОТ, код доступу 214309, 5ЕО ІО МО: 319), а послідовність ІЗКМ3- 11701 (ІМОТ, код доступу ХО1Є668 , ЗЕО ІЮ МО: 320) вибирали як послідовність акцепторної каркасної ділянки легкого ланцюга. У зазначені два акцепторні каркасні ділянки трансплантували три гіперваріабельні ділянки (СОК) варіабельних доменів мишачих важкого і легкого ланцюгів. Оскільки каркасна ділянка 4 (ЕК4) не була частиною варіабельної області гена М зародкової лінії, то порівняльний аналіз первинної структури цього положення здійснювали індивідуально. Послідовність УН4 вибирали для важкого ланцюга, а послідовність бо УК2 вибирали для легкого ланцюга.
11.1.2 Зв'язування різних гуманізованих варіантів 784.66 дО з клітинами
Зв'язування різних гуманізованих варіантів 784.66 (Дб тестували на експресуюючих СЕА клітинах людської аденокарциноми шлунка (МКМ45, О5БМА АСС 409).
Клітини збирали, підраховували кількість, оцінювали життєздатність і ресуспендували з розрахунку 2 х 106 клітин/мл в РАС5-буфері (100 мкл ЗФР, 0,195 БСА). 100 мкл клітинної суспензії (містить 0,2 х 106 клітин) інкубували в круглодонних 96-лунковому планшеті протягом 30 хв при 47С із зростаючими концентраціями анти-СЕА дос (4 нг/мл-60 мкг/мл), двічі промивали холодним ЗФР, 0,195 БСА, повторно інкубували протягом ще 30 хв при 4"С із вторинним антитілом, що являє собою кон'югований з РЕ Е (аб) 2-фрагмент козячого ЇдДо проти людського
Іс, Есу-специфічний АйЙіпіРиге (фірма Часкбоп Іттипо Кезеагсй аб, РЕ Ме109-116-170), промивали двічі холодним ЗФР, 0,195 БСА і негайного аналізували за допомогою ЕАС5, використовуючи пристрій ЕАС5 Сапої! (програма ЕАС5 Оіма). Одержували криві зв'язування і розраховували величини ЕСвхо за допомогою програми СсгарпРаарРгізть.
На фіг. 39 представлені різні схеми зв'язування відібраних гуманізованих варіантів 784.66 дО з людським СЕА, який експресувався на МКМ45-клітинах. На основі розрахованих характеристик зв'язування величин ЕСзхо (таблиця 80) для додаткового дослідження вибирали гуманізований варіант 1.
Таблиця 80
Зв'язування різних гуманізованих варіантів 784.66 до з клітинами (величини ЕСбо, отримані на основі кривих зв'язування, представлених на фіг. 39, для розрахунку яких застосовували програму Сгарії Раа Ргізт) 11111111 ЕСво(мкимлуГ//З: (батьківськийхимерньй клон Т84.66../юЮЙрЛ777777777777777777711111111111111111110099721щС огуманізованийваріант2 71111111 Ї111111111186ссСсСС огуманізованийваріант5д//-/-/:/11111111111111111111111111Ї1111111їс1 (гуманізованийваріантбї 11111111
Гуманізований варіант 1 позначали нижче як 184.66-Ї СНА. Амінокислотні послідовності його
СОВ ї МН і МІ, а також амінокислотні послідовності МН- їі МІ -доменів батьківського химерного клону 184.66 представлені в таблиці 81.
Таблиця 81
Амінокислотні послідовності варіабельних доменів анти-СЕА клону 1Т84.66-І СНА і його батьківського антитіла 184.66
ЗЕО
Опис Послідовність ІО
МО:
ЕМО ООБСОАЕЇ МЕРСАБЗУКІ 5БСТАЗОЕМІКО ТУМНУУКОВРЕОС батьківський СЕА-І. 327 зв'язуючий агент, МН ЕМІСВІОРАМЕЕМЗКУМРКЕОСКАТІТАОТ5ОМТАМІ ОЇ Т5І Т5ЕОТ
АУУУСАРЕСУМУВОМАМАУМ СОС УТ батьківський СЕА- РІМ'ТО5РАБІ АУ5БІ ФОВАТМЗСВАСЕЗМОІРИ Маг НУМООКРО зв'язуючий агент, МІ. ОРРКМАВАЗМІ ЕЗСІРУВЕЗОТаЗАТОЕТ ПШОРМЕАВОМАТМУМО | 328 ' ООТМЕОРУТРСаСИСИТКІ ЕК
Таблиця 81
Амінокислотні послідовності варіабельних доменів анти-СЕА клону 1Т84.66-І СНА і його батьківського антитіла 184.66
ЗЕО
Опис Послідовність ІО
МО: гуманізований СЕА- ОМОЇ МО5БСАЕУККРОЗЗУКУЗСКАЗИаєМІКОТУМНУУВОАРООС зв'язуючий агент анти-! ЕУМавІПРАМаИМЗКУМУРКЕРОСАМТІТАОТЗТЗТАММЕЇ 551 В5Е | 329
СЕА (184.66-ІЇСНА), МН | ОТАУУУСАРЕСУУУЗОМАМАУМ СОСТІ МТУ гуманізований СЕА- СТО вРАТЕВІВЕЗЕНАТВовАВЕВурІвУви НУ УСОКрО
СКАТ БІ СНА) М. АРАШУВАЗМААТСІРАНЕЗО8ОС ТОРТІ ТЗІ ЕРЕОРАУУУ СО 330
І І ОТМЕОРУТРСОСТКІ ЕК
11.2 Одержання націлених на СЕА (Т84.66-І СНА) антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для 4-18ВВ в злитті з Ес
Різні фрагменти послідовності ДНК, яка кодує частину ектодомену (амінокислоти 71-254 і 71- 248) людського ліганду для 4-18 синтезували на основі Р4А127З3З-послідовності з бази даних
Опіргої (ЗЕО ІЮ МО: 42). 11.2.1 Одержання одновалентної націленої на СЕА (1Т84.66-ІСНА) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН1і-Сі-доменами із зарядженими залишками, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (711-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.1)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-254), розділені ((345)2- лінкерами і злитих з людським Ід(11-Сі-доменом, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. 29А: людський ліганд для 4-188, (245)2-конектор, людський ліганд для 4- 188, (245)2-конектор, людський Сі. Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188 (71-254) і злитий з людським ІдДС1-СН-доменом, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. 29Б: людський ліганд для 4-188, ((45)2-конектор, людський СН.
Для покращення правильного спарювання інтродуковали нижчезазначені мутації в «схрещені» СН-СіІ. В димерний ліганд для 4-188, злитий з людським Сі, мутації Е12ЗВ і
О124К. В мономерний ліганд для 4-1ВВ, злитий з людським СНІ, мутації К147Е і К21ЗЕ.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для СЕА, клон Т84.66-ІСНА, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», або з константним легким ланцюгом людського
Ід4с21. Інтродуковали мутації РгоЗ329с1пу, І ец234Аїа і І ец235АЇа в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами відповідно до методу, описаному в УХО 2012/130831.
Комбінація: димерний ліганд-Ес-ланцюг з «виступом», що містить мутації 5354С/Т1366МУ, мономерне СНІ-злиття, націлений анти-СЕА-Ес-ланцюг із «западиною», що містить мутації
УЗ349С/13665/і З368А/У407М, і легсий ланцюг анти-СЕА, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188 і СЕА-зв'язуючий Раб (фіг. 40, конструкція 5).
В таблиці 82 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
СЕА (184.66-ІСНА) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СІ і зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (711-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.1).
Таблиця 82
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СЕА (Т84.66-І СНА) молекули з
СН-СІ -кросовером із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4- 188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.1). " Позначає заряджені залишки
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: нуклеотидна послідовність конструкції 129 |димерний Ни 4-188В1І (71-| Див. таблицю З 254) - СІі"-ЕРс-ланцюг з «виступом» нуклеотидна послідовність конструкції 130 | мономерний пи 4-18ВЦ ДИ. таблицю З 71-254) - СНІ"
САсИатасластастасаатстааоассаАдАдатаААаААА ссссасХдасадасСсатадлдсататостасАалаассАасаиао
ТТСААСАТСААССаСАСАССТАСАТОСАСТОСЬ ТОСасССАСцИ сссстапвАСАааСсСаАСстТапсААатааАатаавасСАаААТСаАСс
ССасСссСААСааСААСАасСАААТАСсатассСсААатсСАцсИ всСАаАСТаАССАТСАССаССаАСАССАаСАССТОСАССИС
СстТАСАТаСААСТОДОСАССССТОАСОССАасСоаАасаАСАССас са,ататАСтТАСТаТаИСССССТТОоСасСстТАСТАСЯатТатосСаАСТ
АсасССАТОСССТАТТВСЬХаСТСАССаасСАСАСТССТОАСсСИт стостотТасСстТАаСАССААлсасоосстсататоооосста соссоСсАдасСсАаСААдаАдаСАссАасаасааСАСАаССастТ ставастасСтасТСААсаАсСтТАСТІоСССОСбАааСсоСаТатахд ссататоСстапСААСАааСсосспАа,аооСстадсстосвасатТасСА сАССТТоСССОЯСсСсОЯтастасасАааттсотаасстатАТАаС стадасдасатастоАассатассттсотласаа,асстасвасА нуклеотидна СССАаАССТАСАТСТаСААСИаИТаААССАСААа,СССАаТсА послідовність анти-СЕД| АСАССААОСТОСАСААСААООТОосАСССсСААОаАОаСТасо 331 (т84.66-І СНА) Ес пСААААСТСАСАСАТаСССАССОТОСССАССАССТОААОС ланцюг із «западиною» тасдасаааАССатсАаТтсТ ССС ССССССААААССс
АдапАСсАСССТСАТалдтотосС,ааАссоСстаАасатТСАСАТ ссатастаатасАасатадасСсСАСаАдаАдсоСстадаатсСА
АаттсААСсТаатас,атааАаясасасатапА,аТасСАТААТИаС
СААСАСААДАасСсасСсасвссАаааАаСАаТАСААСАасСАСаИатА ссататастода,асатоСстАсСсатоСстасСАССАСЧИАСТась
СсТтТОААТааСААпаАаТАСАДатасСсААааТСТССААСААА ссостосавСасссСсССАТСОСАЧААААССАТСТОСАААассА
АдасасАдаСССсСпАаААССАСсАвататасАсостасссс
СсАТССССЯДСаСАТаАдасСстТадССААалАССАааТтсАасстсТо стасасСсАдаТтСААдАааастСстТАтТоСсСсАасаАСсАтсассата сдатассладаСААтТасасдасСацвАаААСААСТАСАДаИ
АссАсасстоссатастасвАстоСадсавастостстост сатадаСААлДаСстТоАССсатапАСААдаАааСАа,аатаасАасСА савасААдсатстстсАТастосатаАдтТасСАтТаАХаасСтТоТа
САСААССАСТАСАСасСАСААаАЛаССсттоССстаТатстосавоа
С,ТААА
Таблиця 82
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СЕА (Т84.66-І СНА) молекули з
СН-СІ -кросовером із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4- 188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.1). " Позначає заряджені залишки
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО: сАдаАдтсатастаАСССАадаССсСсТасССАСССтТатсАСТатТ
СстТоСАсСаСадсАадаСсСАсосталастатаа,алассаваса да;адасатавАСсАТотсосасатаавАТттоТасАСТастА
ТсАаСАпАХда,асоСсасСАаа,авассСССАаАСТастаАТСТАС
АдадасСсАаСААсСасасСсСАСсАааСАТССССасССАаАТТТТ стаастотааСсАдаСссасСАССОАСТТСАСССТОАСААТСАа нуклеотидна СсАда,асстапАдАдсСсСвАасаАдстсасСсататТАСТАСТассАа послідовність пегкого САпСАССААдСсАапАССССтТАСАССТТ ТасаССАс,СассСАСс 332 ланцюга анти-СЕА ААДИСТасСАААТСАдаСатАаСа,аатаастасСАСсСАТСТатст (Т84.66-І СНА) ТСАТСТТСССасССАТСТОАТаАдасСАсаТТаАААТСТОаСААС
І тасстотаттататТасстасСстаААТААСТТСТАТСССАСАС
АсасСссСАААдаТтТАСАаатТапАдАдсаатацпАТААСаТассстТоСААТ сапатТААСТоССАсаАдс,сАатаТСАСАасАаСАааАСАасСА
АсдаАСсАаСАССТАСАаасстоАаасСсАаасСАсоСстадСсастаА
ССААДаСАСАСТАСОАСАААСАСААдаТТСтТАСсаТасстасс
ААСТСАСССАТСАСКВЯИаССТаАаСстаТасссаТСАСААДСА
СТ СААСАаасаасАсАстТа т димерний пи 4-188В1. (71- 1151254) - СіІ"-Рес-ланцюг з| Див. таблицю З «виступом»
ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУЗСКАБОЕМІКОТУМНУУВОА
РОСС ЕМУМОВІОРАМИИМОКУМРКРОСАМТІТАОТ5Т5ТАУМ
ЕГ55І В5БЕОТАМУУУСАРЕСУУУ5БОМАМАММУСОСТІ МТ У55
АБТКОаРБОМЕРІ АРОБКОТЗОаСТААІ СІ МКОМЕРЕРУМТУБМУУ М анти-СЕА (1Т84.66-ІЇ СНА)) СА ТЗаМНТЕРАМІ О550І М5І 55 ГУРБЗББІ ИТОТГМІСМУ 333 | Ес-ланцюг із МНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСОРАРЕАДАСОИРБМРІ ЕР «западиною» РКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОМ5НЕОРЕМКЕМУ УМрИаМЕМН
МАКТКРАЕЕОММОТУВУМБМІ ТМІ НООУ/ЛІ МСОКЕМКОСКМУ5М
КА САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМСТІ РРОНОЕЇ ТКМОМ5І С
АУКОЕУРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ О5рИаБЕРІ УК
І ТУОКБАУМОССММ Е5С5УМНЕАЇІНМНУТОКОІ 5І РОК
ЕІМГТО5РАТІ 5І 5РЕЕВАТІ БСВАСЕБМОІРИМОагРІ НУМОС
КРООАРВІ ПИВАЗМААТИа РАНЕЗИаЗабБатТО ТІ ТІ ЕРЕО 334 легкий ланцюг анти-СЕАЇ РГАМУУУСООТМЕОРМТРСОСТКІ ЕІКАТМААРБМУМБІЕРРБОЕО (т84.66-І СНА) І КБатАБУМСІ І ММЕМРАЕАКМОМКМОМА О5аМЗОЕЗМТ
ЕООБКОБТУБІ 5517ТІ ТІ БКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РМТ
КЗЕМАСЕС
11.2.2 Одержання одновалентної націленої на СЕА (1Т84.66-ІСНА) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -доменами без заряджених залишків, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (711-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.2)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-254), розділені ((345)2- лінкерами і злитих з людським Ід(11-Сі-доменом, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. 29А, але без амінокислотних мутацій в Сі -домені: людський ліганд для 4- 188, (с245)2-конектор, людський ліганд для 4-188, (с45)2-конектор, людський Сі. Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188 (711-254) і злитий з людським Ідс1-СНІ1- доменом, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. 29Б, але без амінокислотних мутацій в СНІ1-домені: людський ліганд для 4-188, (45)»-конектор, людський СНІ.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для СЕА, клон Т84.66-ІСНА, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», або з константним легким ланцюгом людського
Іа.
Інтродуковали мутації РгоЗ29Сс1у, Іец234АЇа і Іец235АЇїа в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами відповідно до методу, описаному в МО 2012/130831. Комбінація: димерний ліганд-Ес-ланцюг з «виступом», що містить мутації 53540/1366МУ, мономерне СНІ-злиття, націлений анти-СЕА-Ес- ланцюг із «западиною», що містить мутації У349С/713665/ З68А/У407У, і легкий ланцюг анти-
СЕА, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188В і
СЕА-зв'язуючий Раб (фіг. 40, конструкція 5.2).
В таблиці 83 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
СЕА (Т184.66-ІСНА) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СіІ без заряджених залишків, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.2).
Таблиця 83
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СЕА (Т84.66-Ї СНА) молекули з
СН-СІ -кросовером без заряджених залишків, яка містить розділений тримерний ліганд для 4- 188 (711-254) в злитті з Ес (Кі) (конструкція 5.2)
СІ -Ес-ланцюг з «виступом» І «западиною» І 11.2.3 Одержання двовалентної націленої на СЕА (184.66-ІСНА) антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.3)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-254), розділені ((345)2- лінкерами, зливали з С-кінцем Ес-ланцюга із «западиною» людського ІДС, відповідно до схеми, представленої на фіг. 298: Ес-ланцюг із «западиною» людського ІДС, ((345)2-конектор, людський ліганд для 4-188, ((345)2-конектор, людський ліганд для 4-188. Поліпептид, який містить один ектодомен ліганд для 4-188В (71-254) і злитий з С-кінцем Ес-ланцюга з «виступом» людського 4021 одержували відповідно до схеми, представленої на фіг 29Г: Ес-ланцюг з «виступом» людського Іда1, ((345)2-конектор, людський ліганд для 4-188.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для СЕА, клон 184.66-ЇСНА, субклонували в рамці зчитування з константним важким ланцюгом із «западиною», з «виступом», або з константним легким ланцюгом людського дат. Інтродуковали мутації РгоЗ29сх1у, І ен23А4А|а і І ен2г35Аїа в константну
Зо область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма- рецепторами відповідно до методу, описаному в МО 2012/130831. Комбінація: анти-СЕА пшШдСа!, яка містить димерний ліганд ланцюг із «западиною» 3 мутаціями
У349С/13665/ З368А/У407М, анти-СЕА НшидСсі, що містить мономерний ліганд ланцюг з «виступом» з мутаціями 5354С/1366МУ, і легкий ланцюг анти-СЕА, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188 і два СЕА-зв'язуючих Ра (фіг. 40, конструкція 5.3).
В таблиці 84 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності двовалентної націленої на
СЕА (Т84.66-ІЇ СНА) антигензв'язуючої молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 5.3).
Таблиця 84
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СЕА (Т84.66-І СНА) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188В (71-254) в злитті з Ес (Кіпй) Ра АГ А (конструкція 5.3)
ЗЕ
ІО Опис Послідовність
МО: садастасластаатасааттаасасСаААатаАДОаАдА ссссаСсдасАд,аСатаддсататСстаСАл,асаССАаСссас
ТТСААСАТСААДИаСАСАССТАСАТОСАСТОСвТаСассСАсаа сссстапвАСсАда,ааАСтавААтТасАтаваСАСААТССАСС
СсСасССААСаасСААСАасСАААтТАСаТатасссААаТТоСАса вСсАвАаТаАССАТСАССасСссаВАСАССАаСАССТОСАССас
СстТАСАТОаСААСТОАХДаСсА,аСсСстТасасКиаСадасАСАССас сататАСстТАСсТатТасссссттсаасСстТАСТАСОСТаТтоСОаАСТ досасСсАтТаассСтТАТТаИСсСаССАаааСАСАСТОСИ,СТаАССаТ стостотТа|астАаСАССААлсааЙСсостсатат осот
СоСССАаСАаСАдсаАаСсАсСАааСаа,аСсаваСАСАасССаТстоста састасстаатСААсаАСТАСТТОССССАВСсоСсатТаАССаИТт атстТаААСсдаСсасласостадсстосааСаТасСАСАССТ тоссса,асса,атастасСсАасАаатсотасасоста|атАтАласстадасА ссатаатТсАасс,астасстстТА,аСАдасстасаСАСССАСАССТ
АСАТСТаСААСаТаААССАСААдаСССАаСААСАССАДИа,СТас
АСАДаАдАд,астапАасСССААаАаСТасСаАСААААСТСАСАСАТ вСССАсСсатТассСАаСАССТаААдастТасасасвааАСсСатсА
Сто оС оСССССАААДАСССААааАСАСССТСАТОАТСТ ссСсапАсооСстАдааТСАСсАТасатаатаатсаАС,!тадас
САСОАДАсСАсоСстТадлааТСААатТСААСстастасатавАсао стасвАдааТасСАТААТасСссСААаАСААдАд,асСса,аСсасвсадасАасСА нуклеотидна СТАСААСАССАССИатАССОЯтТатаатоАяасатосСсТСАССаТтост послідовність конструкції ЄС САССАСТООСТОААТОССАДСИСАС ГАСААС ТОСААОСТ анти-СЕА(Т84.66-І СНА)- СТоСААСАДАОССОССТОВаСаСССССАТСОСАСААААССАТСТО 335 Рс-ланцюг і СЛАДИССАДАСОССАСССССВАСААССАСАССТО ТОСАССС «западиною» димерний ГЯСССССАТСССОВОАТОадОС ГОАССАДОДАССАСО ТСАОС 4-1ВВІ. (71-254) стотса,атТасСсасСАатсСААДАваТстТСстТАТСССАССОАСАТСОЯСС стаслатасададасСААтТасаСАаССацйАпААСААСТАСАА вАСсССсАСсОСсСсТОССсСОЯСТасСставАСстоСсадсава|астостстостТ сатадаСАдасСсТоАССатапАСААдсАаа,аСсАаватааСАаСАСцаИ ваААСатсТсТСАТастоСатаАТасСАТаАвастотТасСАСА
АССАСТАСАСОаСАСААдсА,асстотосстаттсава7атасла сса,аСба,асАдаСса,асАасад,асАапАТоСАпАсАа,авасссСтТалд астадассСсСаАтаАтостастапАдстаставАяостасиавиас дасаСсАТатттастоа,астаатааСССАаААдс,атастастаА тбаАТаОССССССТОатТоСстТааТтАСсАаасСсаАатоСстааАстаастТа асататосАСстТаАСсАд,аассасстАасСтТАСАААаАдаспАСАСс
ААдпАдАастаастаатаасССААлЧвасссаСататАСТАСатТатто тСАХ,астааАдАастасСсс,асаавАХатаатааоСвасСаААдааАТС таастотататтотавассСтасСсАТоТасСсАасСссСтТотТаАСАда сеастастассастасаа,астотаасСАСТаАСАсатТасаАТСТасС стостассластоСаАдсассСавААТАаСасСАттасиаттто
Адса7асасастаста,асасстаттассавасСдадавасСсТаааА стасСсАтТсТасСсАСАСсАдадсасСсАаасвастТАаАСАСасстаасСА аСстТаАСсАСАсСааСсастАсАастастасвасстаТТАСаАатаА
СооССОпАпАТТоСсАд,асСсаасстасстТСстТоСААпААасСаАдАс ссаслдасоавАттаассаСбазАавАтотАаАдадасаАСс
СсОААстТатоссСстАаСсаАтосАаа,асссасастастааАТСтТаАа
АсАдаппААтТатс,асосАа,астатаасСсТСАСААТатаТастаст вАТТаАСОасАСсСстТоТадастааТАСТоСаАСССАасас тОас
Таблиця 84
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СЕА (Т84.66-І СНА) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188В (71-254) в злитті з Ес (Кіпй) Ра АГ А (конструкція 5.3)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: сасссстатсостаАастасваааАСТатоСтТАСАААСпААСаАТА
САДААпААСстТаатастаасТАААаСтасасааатАСТАТаТтат т тІПсСАаСТаСвААСТОАаСОСсосватастааставаавАсассс тсАдасАТОТаТатосСстаасттасСсАТСОТаСАаССАСТОСОаС тстастастасбасАаа,асСста7асАстаастотадстатавАсста
СсСАССсСАасССстТотТАаСаАпасСсСАпАААСАа,аСсасстсасвИто
САдасАсасстаста7асАатотад,аСсассасвАСАааСасстацоя датТасСАТСТаСАТАСТаАдАдасССАЧвАаассСвасСАтастаасСА собтадгстсАассапасААстатастасаастаттса7асстаАс
АСсССстТаАаАТОССТОАССООаАСТассСААдасссСтТАЧАТСАСАА сасатасаастаатасастотсасасСспААдатаААСАдДА ссссасбАаа,аСА,аСатААдсаа,ататостасСсАалд,вассАасСсаис
ТТСААСАТСААСаСАСАССТАСАТОСАСТОССТаАСаССАСЄО сосстТапАСсАсапАСтТасААтТасвАтасаСАсААТСВАСС
СаССААСааСААСАсаСАААтТАСатассСААаТТОоСАСса вСсАвАаТаАССАТСАССасспАСАССАаСАССТОСАССОС
СстТАСАТаСААСТОАааСсАа,асСстТаса,ацсА,аСсАа,аАСАССас са,7ататАСТАСТаТаССсСсСсСсТОвастАСТАСЯТаТтоСаАСТ
АсасСсАТаИССТАТТаОСОСаОСАсСааСАСАСТССЯСТОаАССаИТтТ стостотасСстАаСАССААд,СавассСАтосатстооооставас
АСССТОоСТоСААДСАХаСсАСсСТОТаСОСаВасаСАСАаа,аСааСоСтТас сстассСстаатТСАдасвАСТАСТТССССОаААСсСсСОСатТаАСаатат са,атапААСстТоАд,сасассєтадссАаа,асСсвасаТасСАСАССТТО сссаста|атссСстТАСсАатосСТСАааАСТСТАСТОССТСДИаСА,аС стастаадссатасостосАа,асАа,асттааваСАСССАСАССТА
САТСТаСААСИаТаААТСАСААасСССАаСААСАССААааТтасА
СААДПААдАаТтТаАаСССАААТСТТатаАСААААСТСАСАСАТаС нуклеотидна сСАсСсатТассСАаСАССтТаАдАл,аСста7аса,аасацвАССатСАатТ послідовність конструкції СТ ОСТ ОСССССААААСССААапАСАСССТОСАТОАТСТОС 336 анти-СЕА(Т84.66-І СНА)- | СаСАССССТаАдаатТСАСАТОаСЯТООСТОСТасАСсстТаАасССА
Ес-ланцюг з «виступом»- СИМААЧАССоСтадаатСААаТТСсААСсСТОСТАСсСИатТапсАСва,7сат мономерний 41-ВВІ (71- асвАацатасСсАТААТаССААпаАСААдАда,асСсасасаАспАаСАатТ 254) АСААСсАаасСАСсатассататаатоа,аоатоСстсАсСсиТоСсТас
АССАсСОаАСстТааСтТаААтТааСАда,ааАаТАСАдаТасСААсаТатст
ССААСАААДасоСстосасасССССАТССАСААААССАТСТОСА
ААдаССАдДАДС,аасАааСоССаАпААССАСАаа ТаТАСАСССтТа соссоСтТасСсАпАаАтТадасСстаАССААаААССАасататосста тастатотаатТСААда,аавастСстТАССССАаСсаАТАТССЯаСССата слатасаАда,сАдаСААдса,аасСАаССсТаАспААСААСТАСААСАС сАССсСсСсСССТатТаСставАсАда,асСса,аАаСса,асАа,астстосСтТатА
СстТоСАААСТОАСССОЯТасАСААдвАаа,асСсвсИатааСАа,аСАв,аасСА
АсататсАад,астасада,асатаадтТасСсАСсавАа,ааСССТасСАСААСо
АСТАСАСССАСААЛССТОССТОАаа,аСсСсТвАа,асооСсвсаСбасАсос сабсаАдлдаС,асАа,саАас,саАавАтТоСАСАсСАсасасоСсТаАсас тадасСССаАтТаАтТоСсТастасАаста7аставасСстасцвсасСАа саСбАТаттастода,астаастааСсССАпААдсатастастаАтТо сатаассооста7атостаатТАсАаа,асСсаАтоСстасвАСТОаСТаС са,ататосАСТаАСсАасаса,АасстаАасСтТАСААДАаАасАСАССАА
АаААстТаатаатааСсСААдвасса,васбаТатАСТАСаТтаТаттстт тсдаставААСстасасАасАаатаата,асСа,ааСаААааАТсСтТа
Таблиця 84
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СЕА (Т84.66-І СНА) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188В (71-254) в злитті з Ес (Кіпй) Ра АГ А (конструкція 5.3)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: сстотататототаасостасСАТоТаСсАасССстотТададАласа стастеасастасХастотаасСАСТОАаСсАХатасАатотассто стассластосасда,аооСеаААтТАааСсасАтттасиа ТТ ТСАДО сслдаастастасаостаттасссасСсАсАаа,астаасАата
СсАТСТаСАСАСАСАСсСОаСсСАсааСстТАсАСАСасстаасАаст вАСАСАССОССОСЯСстТАСАССТОСТОССЯССТаттодадатадссо сСбадаадтосАаассавсстасст СсТоСААпАдасСадА нуклеотидна послідовність анти- 332 СЕА(Т84.66-І СНА), див. таблицю 82 легкий ланцюг
ОМОЇ МОБЕАЕУККРИЗЗУКУЗСКАЗИЕМІКОТУМНУУВОА
РОС ЕМ МавВІОРАМаМОЗКУУРКЕеОСАМТІТАОТЗТЗТАХУМ
ЕГ55І АВАБЕОТАУУУСАРЕСУМУБОМАМАУМ С2МИОСТІ МТУ
АЗТКОаРБОМЕРІ АРОЗКЗТЗИаСТААГ аСІ МКОУМЕРЕРУТУБМУ МЗС
А Т5аОУНТЕРАМІ 05501 У5І 55 МУРБББІІ ЕТО ТМІСМУМНКР
З
МТКМОККУЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСОРБЗУНБІ ЕРРКРКОТ
ГМІЗАТРЕУТСМУУМОУЗНЕОРЕУКЕММУ УВО МЕМНМАКТКРАЕ
ЕОУМ5ТУВМУМУБМІ ТМ НОМ МЕОКЕУКСКУ5ЗМКАЇ САРІЕКТІВ анти-СЕА(Т84.66-І СНА)- | КАКООРАВЕРОМУСТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І БСАУКаєМРЗОІАМЕМ 337 Ес-ланцюг із ЕЄМСОРЕММУКТТРРМІ ОБравзЕРІ УК ТУЮКкЗАУМУОСаММУБ5 «западиною»-димерний | С2ММНЕАІ НМНУТОКБІ 5І ЗЗРОССОСОСЗаасСазАЕСРЕЇ 5РОЮОР 41-ВВІ. (71-254) АС ОЇ ОСМЕАОЇ МАОММИ ра РІ БМ УБОРИ АСУБІ Та.
ЗУКЕОТКЕЇ МУМАКАСУМУУЕРОГ ЕІ ААУМАдаБ,азавмві АІ НІ о
РІ ВБААСАДАЇ А ТМОЇ РРАБЗЕАВМЗАБРИРОСВІ І НІ БАСОВІ.
СУМНІ НТЕАВАВНАУМОГ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІ!РАСІ РОРАБЕСС савасасевВЕсСРЕЇЗРООРАСІИЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММ СЛІЮ
СРІ БМ/УУ5БОРИЇ АСУБІ ТИС 5МКЕОТКЕЇ ММАКАСУМУУМЕРЕОЇ Е
ГААММАСЕ,БавБмБІ АІ НІ ОРІ В5ААСАААГАЇТУОІ РРАББЗЕАВ
М5ЗАРИРОСВІІ НІ БАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАУМ ОЇ ТОСАТМІ С
ІГЕВМТРЕІРАЇ РОРАЗЕ
ОМОЇ МО5БЕАЕУККРИЗЗУКУЗСКАЗИЕМІКОТУМНУУВОА
РОС ЕМ МавВІОРАМаМОЗКУУРКЕеОСАМТІТАОТЗТЗТАХУМ
ЕГ55І АВАБЕОТАУУУСАРЕСУМУБОМАМАУМ С2СОСТІ МТУ
АЗТКОаРБОМЕРІ АРОЗКЗТЗИаСТААГ аСІ МКОУМЕРЕРУТУБМУ МЗС
А Т5аОУНТЕРАМІ 05501 У5І 55 МУРБББІІ ЕТО ТМІСМУМНКР
З
МТКМОККУЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСОРБЗУНБІ ЕРРКРКОТ епанцю з «виступомо- ІМІЗВТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕМУКЕММ/УМОСУЕУНМАКТКРАЕ 338 мономерний 4-1ВВІ. (71- ЕОУМ5ТУВМУМУБМІ ТМ НОМ МЕОКЕУКСКУ5ЗМКАЇ САРІЕКТІВ 254) КАКСОРАЕЕРОМУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМ5І УСІ УКаЕМРЗОІАМЕ
МЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОБраЗЕРІ ЗК ТМОКЗАМООСММЕ
ЗСЗММНЕАЇ НМНУТОК5БІ 5І ЗРОССОВСОаЗОИСОСИСОВЕСРЕЇ 5РОЮ
РАС ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММІ ГІрарі 5ММБОРИЇГ АСУБІ ас
ІЇ ЗУКЕОТКЕЇ УМАКАСМУУУМУЕЕОЇ ЕІ А НУМАСЕаВавзмві АІ НІ.
ОРІ В5ААСІАААЇ А ТМОЇ РРАБЗЕАВМЗАРСРОСНВІ І НІ ЗАСОВ
ГаУнНІ НТЕАВАВНАУОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВУТРЕІРАСІ РОРАЗЕ
Таблиця 84
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СЕА (Т84.66-І СНА) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188В (71-254) в злитті з Ес (Кіпй) Ра АГ А (конструкція 5.3)
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: анти-СЕА(Т84.66-І СНА), 11.2.4 Одержання одновалентної націленої на СЕА (1Т84.66-ІСНА) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН1і-Сі-доменами із зарядженими залишками, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.4)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-248), розділені ((345)2- лінкерами і злитих з людським Ід(1-Сі-доменом, клонували аналогічно до схеми, представленої на фіг. 29А: людський ліганд для 4-188, (с45)2-конектор, людський ліганд для 4- 188, (245)2-конектор, людський Сі. Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188 (71-248) і злитий з людським ІДС1-СН-доменом, клонували аналогічно до схеми, представленої на фіг. 29Б: людський ліганд для 4-188, ((45)2-конектор, людський СН.
Поліпептид, який кодує димерний ліганд для 4-18В, злитий з людським Сі -доменом, субклонували в рамці зчитування з СН2- і СНЗ-доменами важкого ланцюга з «виступом» людського ІДС (Мегспапі НИ та ін. 1998). Для покращення правильного спарювання інтродуковали нижчезазначені мутації в «схрещені» СН-СІЇ. В димерний ліганд для 4-18В, злитий з людським СІ, інтродуковали мутації Е12ЗА і 0О124К. В мономерний ліганд для 4-188, злитий з людським СНІ, - мутації К147Е і К21ЗЕ.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для СЕА, клон Т84.66-ІСНА, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», або з константним легким ланцюгом людського
Ід4с21. Інтродуковали мутації РгоЗ329с1пу, І ец234Аїа і І ец235АЇа в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами відповідно до методу, описаному в МО 2012/130831. Комбінація: димерний ліганд-Ес-ланцюг з «виступом», що містить мутації 53540/1366МУ, мономерне СНІ-злиття, націлений анти-СЕА-Ес- ланцюг із «западиною», що містить мутації У349С/713665/ З68А/У407У, і легкий ланцюг анти-
СЕА, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188В і
СЕА-зв'язуючий Раб (фіг. 40, конструкція 5.4).
В таблиці 85 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
СЕА (184.66-ІСНА) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СІ і зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій)
Зо (конструкція 5.4).
Таблиця 85
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СЕА (Т84.66-Ї СНА) молекули з
СН-СІ -кросовером із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4- 188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.1). " Позначає заряджені залишки
СІ "-ЕРс-ланцюг з «виступом» І «западиною» І
Таблиця 85
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СЕА (Т84.66-Ї СНА) молекули з
СН-СІ -кросовером із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4- 188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.1). " Позначає заряджені залишки 11.2.5 Одержання одновалентної націленої на СЕА (1Т84.66-ІСНА) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СіІ -доменами без заряджених залишків, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.5)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-248), розділені ((345)2- лінкерами і злитих з людським Ід(1-Сі-доменом, клонували аналогічно до схеми, представленої на фіг. 29А, але без амінокислотних мутацій в Сі -домені: людський ліганд для 4- 188, (с245)2-конектор, людський ліганд для 4-188, (с45)2-конектор, людський Сі. Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188 (71-248) і злитий з людським Ідс1-СНІ1- доменом, клонували аналогічно до схеми, представленої на фіг. 29Б, але без амінокислотних мутацій в СНІ1-домені: людський ліганд для 4-188, (45)»-конектор, людський СНІ.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для СЕА, клон 1Т84.66-ІСНА, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», або з константним легким ланцюгом людського
Ід4с21. Інтродуковали мутації РгоЗ329с1пу, І ец234Аїа і І ец235АЇа в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами відповідно до методу, описаному в МО 2012/130831. Комбінація: димерний ліганд-Ес-ланцюг з «виступом», що містить мутації 53540/1366МУ, мономерне СНІ-злиття, націлений анти-СЕА-Ес- ланцюг із «западиною», що містить мутації У349С/713665/ З68А/У407У, і легкий ланцюг анти-
СЕА, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188В і
СЕА-зв'язуючий Раб (фіг. 40, конструкція 5.5).
В таблиці 86 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
СЕА (Т184.66-ІСНА) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СіІ без заряджених залишків, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.5).
Таблиця 86
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СЕА (Т84.66-Ї СНА) молекули з
СН-СІ -кросовером без заряджених залишків, яка містить розділений тримерний ліганд для 4- 188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.5)
СІ -Ес-ланцюг з «виступом» І «западиною» І 11.26 Одержання двовалентної націленої на СЕА (184.66-ІСНА) антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.6)
Ко) Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-248), розділені ((345)2-
лінкерами, зливали з С-кінцем Ес-ланцюга із «западиною» людського ІДС, відповідно до схеми, представленої на фіг. 298: Ес-ланцюг із «западиною» людського ІДС, ((345)2-конектор, людський ліганд для 4-188, ((345)2-конектор, людський ліганд для 4-188. Поліпептид, який містить один ектодомен ліганд для 4-188 (71-248) і злитий з С-кінцем Ес-ланцюга з «виступом» людського 4021 одержували відповідно до схеми, представленої на фіг 29Г: Ес-ланцюг з «виступом» людського Іда1, ((345)2-конектор, людський ліганд для 4-188.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для СЕА, клон 1Т84.66-ІСНА, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», з «виступом», або з константним легким ланцюгом людського дат. Інтродуковали мутації РгоЗ29сх1у, І ен23А4А|а і І ен2г35Аїа в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Есо-гамма- рецепторами відповідно до методу, описаному в МО 2012/130831. Комбінація: анти-СЕА пшШдСаЯ!, що містить димерний оліганд ланцюг із «западиною» з мутаціями
УЗ349С/13665/ З368А/У407М, анти-СЕА НшидСсі, що містить мономерний ліганд ланцюг з «виступом» з мутаціями 5354С/1366МУ, і легкий ланцюг анти-СЕА, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188 і два СЕА-зв'язуючих Ра (фіг. 40 конструкція 5.6).
В таблиці 87 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності двовалентної націленої на
СЕА (Т84.66-І СНА) антигензв'язуючої молекули, що містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кіп) (конструкція 5.6).
Таблиця 87
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СЕА (Т84.66-І СНА) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.6) сасатасаастаатасастотсасасСспААдатаААСАдДА ссссасбАаа,аСА,аСатААдсаа,ататостасСсАалд,вассАасСсаис
ТТСААСАТСААСаСАСАССТАСАТОСАСТОССТаАСаССАСЄО сосстТапАСсАсапАСстТасААтТасвАтасваСАсААТССАСС
СаССААСааСААСАсаСАААтТАСатассСААаТТОоСАСса вСсАпАаТаАССАТСАССасспАСАССАаСАССТОСАССИОС
СстТАСАТаСААСТОАааСсАа,асСстТаса,ацсА,аСсАа,аАСАССас са,7ататАСТАСТаТаССсСсСсСсТОвастАСТАСЯТаТтоСаАСТ
АсасСсАТаИССТАТТаОСОСаОСАсСааСАСАСТССЯСТОаАССаИТтТ стостотасСстАааСАССААДС,аССаСоосСстТоСсататосооста асообССбА,аСАаСААдадаСАСсСАааСссаспасСАСАаССаст ставастасстаайТСААдаспАСТАСТТОСССОСЯАаССССатах нуклеотидна сса,ататоСстасААсАда,аса,аса,асостаАсстСсвасатТасСА послідовність сАССТІОСССЯаССОЯСтТтастаСАсАСТТСТДаССтТатАТАСС конструкції /анти- стадаСсАад,аСсатаатоАссатассттстА,аСАа,аостацвасСА
СЕА (тва4.66- СССАВАССТАСАТСТаСААСИаТаААССАСААдаСССАаСА 339 ІсН А)-Ес-ланцюг АСАССААДСОИтТапйАСААаААХсСа ТтасАда,аСССААспСАастасся з «западиною»- АСАААДАСТСАСАСАТИаСССАСсСсатассСАаСАССТОаААСаС димерний 4-188І. таСасасасапАССаТатсАатСсТоСсТоТоСССССААААСоС (71-248) ААСИАСАСССТоАТаАТСОТОССОПСАССоССТаАасТСАСАТ сстаестастасА;са,атдаССАСаААаАСССТаАааТатсА
АатТсААСсТватасатасАассаСса тасАасаТасСАТААТаС
САДПАСААдАдасСсасСасаАапАаСАаТАСААСАаСАСИТА сса,ататаатсАаа,аСатоСсТАсСсатоСТасСАССАа,САСТас
СсТтТОААТаСААпаАаТАСАдатасСААааТСТССААСААА аоостаасасССССАТССАСААААССАТСТОСАААаССА
АдссасХдасооСаАпААССАСсАасСататасСАсостассосс
САТСОСССОСБАТаАДаСТаАССААпААССАватоАасстсто стасасСсАатТСсАААлдаасТТСстТАТСССАасСаАСАТСИаВССаИта слатасаАдаАаСААтТаса7асАаССацпАспААСААСТАСААС
АССАСЯССТОССОЯТОСТОСАСТоСаАСсвастостттостТ са,атадасСсАдасСсТАССатапАСААсСАаСАасатааСА,СА сасаАдАдсатсТсТсАТастосаТаАТасАтТадаастТоСТа
Таблиця 87
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СЕА (Т84.66-І СНА) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.6)
САСААССАСТАСАСОЯСАПААспСАассттсстаТтстосас стасвдасосабсаА;да,аСс,асвсАа,асАсаАапАТоСАцпАспАС сасостадластадасссСТаАтТаАтостассавАсТастась
АостассаСАасапйААТаттассСсааСтаатааоССАСАА са,атастастаАтоаАтасооосстатостасТАСАасаАТ сстапвАастасСстасоатаТСАСТаАСАасассасстаАаст
АСААдДпАпИаАСАССАААпААСстТа,астаатаасССААвасса ссататАСТАСЯТатстттсАаа,аСстапААСтТаСрасАаАат сатавсаобсаспААдааАтотТастотататстстаасостТа
САТСТаСсАСаСОССТСОТОАсСАТСТОаСТОСТОСТССОСЯСсТасто тааСАСТаАСАаатТасАатотасстстасСАааСАааСаАвас сбапААТАаСаСАТТТасааТттоААдсасАавастастасАс статстасссасСАсСАасастаа,асАсТасСАТСТаСАСАСАС
Адаассд,аавастТАайАСАсасстаасАасСстТаАСАСАИаИааоСс
СстТАСАСТОаСТОСОаСсСсТаттСАсАа,атаАсоСССаАСвАТТОС дасадсасставцсАасаСса,ассосаАттааса,ааСбсапАааАтТо тТАСАпАдАд,ааАссссвсАа,астатооооСпАСаАтооСастаа сстаставпАТСТаАаАСАасаасатТа7атсастсАаастаата есСтТСАСААТИаТОСТОАСТаАТТаАСааАсСстТоталда7астаат
АСсСТоСсСОСАСсСсСсАасСааста,сАассессататостаАСстациося вАСТатоСтТАСААДАПААСАТАСААААЧААСТаатаа тая
СстТААДОЯСТОСОСС,СТтТатАСТАТаТИттттттодастасдААСТ лесссссатаатсастасасвАассастсАа,ааАтота,атато сстаастотТасатотасдассАстасастстасАааСАсаас сстасядасАастасоостаАстТатавАасстассооСАастт сттоСбаАдааССАСААдАСсАа,аСсасстсааТ т сСАдапАСа сстастасСсатоталаСасСапАсАаа,аСсасстасаАатТасАТ
СстТасСАТАСТаААДаССАсСАа,ассСс,ааСАТастта,аасАастаА
СстТсАасссвасСААсТатастасаАастаТттсасаТтаАСАСС таАВАТОССАССССОСОвасСтТо сасатасаастаатасастотсасасСспААдатаААСАдДА ссссасбАаа,аСА,аСатААдсаа,ататостасСсАалд,вассАасСсаис
ТТСААСАТСААСаСАСАССТАСАТОСАСТОССТаАСаССАСЄО сосстТапАСсАсапАСТасААтТасвАтасвиаСАвААТССАСо
СаССААСааСААСАсаСАААтТАСатассСААаТТОоСАСса вСсАвАаТаАССАТСАССасспАСАССАаСАССТОСАССОС
СстТАСАТаСААСТОАааСсАа,асСстТаса,ацсА,аСсАа,аАСАССас нуклеотидна са,7ататАСТАСТаТаССсСсСсСсТОвастАСТАСЯТаТтоСаАСТ послідовність АсасСсАТаИССТАТТаОСОСаОСАсСааСАСАСТССЯСТОаАССаИТтТ конструкції анти- ЗЯТОСТоТастАОСАССААООССЯСССАТСОСТСТТОоСОоССТО
СЕА (тв4.66- ССАСССТоСТоСАЛОодОосАССТоТООовоСАСЛОСОВОССС 340 І СНА)-Ес-ланцюг 3. ОО СтОаССтОвтсААОСАСТАСТТОСССОЛАССОСТОАС «вИСТуУПОМ»- саотатбатапААСтТосАсасассстаАсСАаассаСатасАс мономерний (ті АССтТоСовОастатостАСАОТОСТСАООАСТСТАС ОСС 248) 4-1ВВІ. сала,аса,аса,атаатаадссатассстСсАаа,асАаасттасваСАСо
САСАССТАСАТСТаСААСИаТаААТСАСАдаСССАаСААС
АССААССЯтТапАСААпАААатТаАдаСССАААТСТТатаАс
ААДААСТСАСАСАТаАСССАСсСсатассСАаСАССТадАаста сАдс,саппАССатсАаТСТ ССС ССССССААДААСССАА ваАСАСССТСАТаАТСТОССОООЗАССССтТаАдааТтСАСАТИаС стастаатасАСатаАдаССАС,ААаАСССтТаАааТСАда тТсСААСсТОатАСсатасассаСсатасАсатасСАТААТаССА
АпАСААдАда,асСса,аСсасавАааАаСАсТАСААСАаСАСаИТтАСс
Таблиця 87
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СЕА (Т84.66-І СНА) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.6) статастоАдасатостоАссатостасСсАсСсАааспАСсТаастТ
СААТасаСААдааАатТАСААДатасСААааТСсТоСААСАдАас сстааСасСссССсССАТСОАСААДААССАТСТССАДАИаССАДА саваСсдасссСсОаАпААССАСАсаатТатАСАСоСсТасССССсстТ вСАвАвпАтТадастТаАССААаААсСАаасататоосстатаст стотаатТсАдапасТСстТАССССАаСаАтТАтаоСсатааА стасададасСАдсааСсСАассСсТаАспААСААСТАСААСАС сАсссосссстатаставАСсАдаСссАассасАастстоста
ТАСТОСАААСТаАСсСсатапйАСАдаАа,аСсосаатааСАасСАс саСААсататсАа,астасСсадасатадтасСсАаса,аАда,ваСостас
АСААССАСТАСАСССАСпААатосСстадасстаАаССоСась саавдсассаСсапвАлаСспсАаа,авАа,ааАааАтоСАаАадас сесосталастадассСсСстТАтТалдлтостасс,асАстТастааА сстабасСАваапААтТаттассСса,аСстаатасСсССАСсААС стастастаАтоаАта,сооооста|атостастТАСсАасаАТС стасвастасстааСсаТаТСсАСТаАСАд,ааавасстаАастА
СААДадДасАСАССААДАсАдАСстТаатаатааСсСААаассСстс сататАСстТАсататстАасСтпААстассададатТа стасоСсасасСспААдасвАттассттататсттасостас
АТСТаОСсАСССТОТаАдсАТОТаСТОСТОССОСоСаСсТаТстТетТ сасСАСстТаАсАадатасАатта7асстостасСсАа,асАасСаАаасСо
СаОААтТАаСсаСАттасватттсАдасСАавастастасАсс татстасссаСсСсАсАа,аастсалаТасСАТСТаСАСАСАСА сасСбадс,7састТАсаАсАасасставСАастТаАСАСАаасасСас тАсАСсСТОаСТасасстТаТаттсАаАдаТаАССсСССалдсаАТТОСТ ссасасто нуклеотидна послідовність 332 анти-СЕА (1Т84.66-| див. таблицю 82
ІЇ СНА), легкий ланцюг
ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУЗСКАБОЕМІКОТУМНУУВОА
РОС ЕМ Ма ВІОРАМИ МОЗКУ РКЕОС ВМТІТАОТОТ5ТАХУМ
ЕГ55І В5БЕОТАМУУУСАРЕСУУУ5БОМАМАММУСОСТІ МТ У55
АБТКОаРБОМЕРІ АРОБКОТЗОаСТААІ СІ МКОМЕРЕРУМТУБМУУ М
ЗОАЇ Т5аМНТЕРАМІ 05501 М5І 55 МР ЕТОТМІСММ
МНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСОРБМРГІ ЕР
РКРКОТ МІЗАТРЕМТСМУМОМ5НЕОРЕМКЕММ УМВИаМЕМН
МАКТКРАЕЕОУМОТМАМУ5БМІ ТМ НОЮМ/Л МЕОКЕМКСКУ5М анти-СЕА (Т84.66- КА САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМСТІ РРОНОЕЇ ТКМОМ5І С
І СНА)-Ес-ланцюг АУКОЕУРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ О5рИаБЕРІ УК
ЗА із «западиною»- І РУКАМ ОССММЕ5СЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОІ 5І РОСС димерний 4-18ВІ. авасасеАЕСРЕЇ 5РООРАСІІ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММО ТО (71-248) СРІ БМ/УМ5ОРИЇ АСМ5І ТС 5УКЕОТКЕЇ ММАКАОМУММЕ
ЕОГ ЕІ АА!УМАСЕСБаИавм5Іі АІ НІ ОРІ В5ААСААДАЇ АГ ТМОІ.
РРАББЗЕАВМЗАРСОРОСВІ І НІ БАСОВІ СУНІ НТЕАВАВНАМУ
ОГТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕІРДОЇ ОпаСсІОСсСсСзИаСИСОАВЕСРЕЇ РОЮ
РАС ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММ ТОСРІ МУ МОРІ АСМ5І ТТ
Са 6МКЕОТКЕЇ ММАКАСМУММУЕРОЇ ЕЕ АВУМдаБаЗавм
ЗІ А НГОРІ А5ААОСАААГАЇ ТМОЇ РРАББЕАНМЗАБСЕОСВІ.
ІНІЗАСОВ СУНІ НТЕАВАВНАМ/ ОЇ ТОСАТМІ СІ ЕВМТРЕЇ
РАІ.
Таблиця 87
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СЕА (Т84.66-І СНА) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.6)
ІЇСНА)-Ес-ланцюг зі РООСІ ЕМ МавВІОРАМаМОЗКУУРКЕОСАМТІТАОТЗТЗТАХУМ «виступом»- ЕГ55І В5БЕОТАМУУУСАРЕСУУУ5БОМАМАММУСОСТІ МТ У55 мономерний /(71- АЗТКаРОМЕРІ АРОЗКЗТЗИасСТАА аСІ УКОМЕРЕРУТУБУУМ 248) 4-188 ЗаАІ Т5аУНтТЕРАМІ О55(011 51 55УМТУРБЗББІ СТО ТМІСММ
МНКРОМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕАДАСИаРБЗУНІ ЕР
РКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУМЗНЕОРЕУКЕМУ МУрИаМЕМН
МАКТКРАЕЄЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОВУ МСОКЕУКСКУЗМ
КАЇ ЧАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМУБІ УС
ГУКаЕгЕУРБОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5БОСОЗЕРІ МК
ГУКА ОССММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОК5БІ 5І РИСІ азвасасйевВЕСРЕЇ 5РОВРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММО ЛО
СРІ БМ/УУ5БОРИЇ АСУБІ ТИС 5МКЕОТКЕЇ ММАКАИ УМ УМ
ЕОГЕГААУММАСЕ,ЗИавуУБіІ АІ НІ ОРІ ВБААСАААЇГ А ТМ.
РРАББЗЕАВМЗАРСРОСНВІ І НІ ЗАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАМУ
ОГТОСАТМІ СІ РВУТРЕІРАСІ. анти-С0О19(888- 334 018), легкий див. таблицю 82 ланцюг 11.2.7 Одержання одновалентної націленої на СЕА (184.66) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СНІ1-СІ -доменами із зарядженими залишками, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.7)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-254), розділені (545)2- лінкерами, і злиті з людським ІдДс1-СІ -доменом, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. 29А: людський ліганд для 4-188, (с45)»-конектор, людський ліганд для 4-188, ((45)»- конектор, людський СІ. Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188В (71-254) і злитий з людським Ідс1-СН-доменом, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. 29Б: людський ліганд для 4-188, (с45)2-конектор, людський СН.
Для покращення правильного спарювання інтродуковали нижчезазначені мутації в «схрещені» СН-СІ. В димерний ліганд для 4-188В, злитий з людським Сі, - мутації Е12ЗВ і
О124К. В мономерний ліганд для 4-1ВВ, злитий з людським СНІ, - мутації К147Е і К21ЗЕ.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для СЕА, клон 184.66, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», або з константним легсим ланцюгом людського
Ід4с21. Інтродуковали мутації РгоЗ329с1пу, І ец234Аїа і І ец235АЇа в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами відповідно до методу, описаному в УХО 2012/130831.
Комбінація: димерний ліганд-Ес-ланцюг з «виступом», що містить мутації 5354С/1366МУ, мономерне СНІ-злиття, націлений анти-СЕА-Ес-ланцюг із «западиною», що містить мутації
УЗ349С/13665/і З368А/У407М, і легсий ланцюг анти-СЕА, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-18В і СЕА-зв'язуючий Раб. Конструкція 5.7 відповідає конструкції 5.1, представленій на фіг. 40.
В таблиці 88 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
СЕА (184.66) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СІ. і зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (711-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.7).
Таблиця 88
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СЕА (Т84.66) молекули з СН-СІ - кросовером із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71- 254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.7). " Позначає заряджені залишки
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: нуклеотидна послідовність конструкції 129 | димерний пи 4-18ВІГ (714 Див. таблицю З 254) - Сі"-ЕРс-ланцюг з «виступом» нуклеотидна послідовність конструкції 130 | мономерний пи /4-18ВЦ ДИ. таблицю З 71-254) - СНІ" сластасластасаасАаатстасоасспААСстастасацАА сстаасасстотатаддасталастатассассдасцкиаст
ТСААСАТСААаСПСАСАССТАСАТОаСАСТОИСТСАдасСАас сассталдасадссасставчААдтТаспАтсасСАаААТСаАСо
ССасСссСААСааСААСАасСАААТАСсатассСсААатсСАцсИ
ССАдапсССАССАТСАССаССаАСАССАасСАасСААСАСАС
СсСстТАсССТОаСсАасСстТадсСсАаасстАасстоСадааАСАССас са,ататАСТАСТаИСОЯССОСССТТОавасСтТАСТАСЯТИОТОоСадс тТАСЯССАТОСССТАТТВСООСЮОССАСааСАСАДасатаАсс статостотТасСстАааСАССААдасассостосататтососс таассссСбдасАдасСсАдаАаСсАсСАааСсааСсааСАСАасСсСа сттасастасстаайТСААдааАСТАСТТоСССОвбАсСоССаТт сассататостапААСсАааСсасАаасссталдсстосавсасата
СсАСАССТТОСССОЯССОЯТОаСсТасСАсАааТтстаТаасстатАТА ссстадасдасатаатсАассатасстстТА,аСАасстаца нуклеотидна САСССАПАССТАСАТСТаСААСаталдАССАСАДИаСССАаС послідовність анти- СЕА ААСАССААСИатасАСААаААдс,атапАасССААасАастас 343 (Т84.66), Ес-ланцюг із САСАААДАСТСАСАСАТаСССАСсСсатасссАасСАССТадА «западиною» сстасдасаааАССатсАаТтст ССО ССССССАДААдС
ССААСИалАСАСССТоАТаАтТотоСсСасАсСсСсСстадаатсСАс дтасататастасАаСатодасСсСсАСаАдАвАсосСстадаст
САДИТТСААСТОИтТАСОСТасАСс,ааоастасАсатасСАТААТ
СССААвАСААдАДаСсСсасаасвсхасАасСАсаТАСААСАаСАСаИ тАСсСсССОататаатодасатостоАССаТтоСсТасСАССАСИадст сасСтТаААтТаайСААасАсТАСААаТасСААааТтсТоСААСА
АдассстосасассСсоССАТСИАСаААААССАТСТСОССАААИаС
САААДССТИСАСИССССаАСААССАСАасаИататасАсостасс
СсоСАТОСССОСОССАТаЛдОеСтТаАССААаААССАааатСАассто тсатасасСАатСсАААваТстСсТАТСССАаСаАСАТСасса таслатассАаАаСААтТасасАа,аССавАсААСААСТАСА
АдаАссАсасстоссатастасАстСсаАдсаасТостТтесТт сстса,атадасСАлдастоАасСатапАСААлсАааСАааватаасА сСсдасасААдсатстстсАТтТастоСатаАатасСсатадааст
СстТасСсАСААССАСТАСАСЯСАСАаАсСАаасстотосстатсто
СасатТАдАА вАСАТСЯТаСТаАСССАСАССССТаССТСТТОСССОЯТат нуклеотидна стотавсАСсАаАаасасССАССАТИАТСОТтТасСАсАассвасСа
ЗА послідовність легкого АСШАСОССТасАаАСАТотТосасСатаааАттотТа|асАСстаатА ланцюга анти-СЕА ТСАИСАпААлаСоСсвасАасСССССААаСтастаАТсСтТАС (Т84.66) дадассдасААсСстапААдлаСсасСсАатосссатасастт дассасАасса,САасСАСпААССсАСТТСАСССТаАТСАТСС
Таблиця 88
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на СЕА (Т84.66) молекули з СН-СІ - кросовером із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71- 254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.7). " Позначає заряджені залишки
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО:
АоссСсатапвАласСаАСавАсатааССАССТАСТАСТаССА вСАСАССААСсСАапАССССтТАСАССТТТваСасАсСасАс
САДаСсТасАААТСААдаСсаТтАссиатааСТаСАССАТСТИаТтО
ТСсАТСТТОССаССАТСТаАТтТаАаСАСТТаАААТСТацсаАА стасстотатта,ататасстТастаААТААСТТСТАТОССАСА авАдааССААдАдатАсАатапААдаатасАТААСассстоСАА тсасатТААСТоССАс,СасАсА,аТатсАСАсСАа,СА,сАСА,аСс
ААдСИАСАаСАССТАСАСССТСАаСАаСАСССТаАсаста
АЧВСАААдаСАпАСТАСИ,АСААДАСАСАААИаТСсТАСасстас вАДИТСАСССАТСАСЯСОССТОАДИ,аСТСассСатСАСАДАС дасСсТТСсААСАа,аасаАаАатТат димерний пи 4-18ВВ1Г. (71- 1151254) - СіІ"-Ре-ланцюг з| Див. таблицю З «виступом»
ЕМО! ООБСОАЕЇ МЕРСОАБЗУКІ БСТАЗОЕМІКО ТУМНУУКОВР
ЕОСІ ЕМО ВІОРАМЕМЗКУУРКЕОСКАТІТАОТЗЗМТАМІ ОЇ.
Т9І Т5ЕОТАУУУСАРЕИУУУБОМАМАУМУСсОСТЗУТУБА5
ТКаРБЗМЕРІ АРБЗКЗТЗИааТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУЗУМЗИа анти-СЕА (Т84.66), Ес- А Т5аОУНТЕРАМІ О55О1 51 55 МУРБЗББІСаТОТМІСМУМ 345 ланцюг із «западиною» НКРОМТКМОККУЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕАДАСОИаРБЗУНІ ЕРР
КРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУЗНЕОРЕМКЕМУУМУрамЕМН
МАКТКРАЕЄЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОВУ МСОКЕУКСКУЗМ
КАЇ пАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУСТІ РРОВОЕЇ ТКМОМУ5І 5
АУКаРУРБЗОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБООЗЕРІ УК
ГЕ ТУОКЗАУМОССММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ І РОК
РІМГ ТОЗРАБІ АМ5І ФОВАТМОСВАСЕЗМОІРСИМагІ НУМО
ОКРООРРКІ ПМААЗМІ ЕЗСІРУВЕЗОТаЗАТОЄТ ПШОРМЕАЮ 346 легкий ланцюг анти-СЕА ОМАТУУСООТМЕОРУТЕРаИаИтКІ ЕІКАТМААРЗМУРІЕРРЗОЕ (Т84.66) ОЇ К5атАБУМСТ І ММЕУРАЕАКМОМУКМОМАГ О5аМЗОЕБМ
ТЕООБКОБЗТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОІ 55РУ
ТКЗЕМВСЕС
11.2.8 Одержання двовалентної націленої на СЕА (184.66) антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 5.8)
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду для 4-188 (71-254), розділені ((345)2- лінкерами, зливали з С-кінцем Ес-ланцюга із «западиною» людського ІДС, відповідно до схеми, представленої на фіг. 298: Ес-ланцюг із «западиною» людського ІДС, ((345)2-конектор, людський ліганд для 4-188, ((345)2-конектор, людський ліганд для 4-188. Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для 4-188 (71-254) і злитий з С-кінцем Ес-ланцюга з «виступом» людського СІ, одержували відповідно до схеми, представленої на фіг 29Г: Ес-ланцюг з «виступом» людського Іда1, ((345)2-конектор, людський ліганд для 4-188.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для СЕА, клон 184.66, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», з «виступом», або з константним легким ланцюгом людського дат. Інтродуковали мутації РгоЗ29сх1у, І ен23А4А|а і І ен2г35Аїа в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма- рецепторами відповідно до методу, описаному в МО 2012/130831. Комбінація: анти-СЕА пшШдСа!, яка містить димерний ліганд ланцюг із «западиною» з мутаціями
У349С/13665/ З368А/У407М, анти-СЕА пшШЯс1і, яка містить димерний ліганд ланцюг з
«виступом» з мутаціями 53540С/1366МУ, і легсий ланцюг анти- СЕА, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для 4-188 і два СЕА-зв'язуючих ГЕар.
Конструкція 5.8 відповідає конструкції 5.3, представленій на фіг. 40.
В таблиці 89 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності двовалентної націленої на
СЕА (184.66) антигензв'язуючої молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (711-254) в злитті з Ес (Кі!) (конструкція 5.8).
Таблиця 89
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СЕА (184.66) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188В (71-254) в злитті з Ес (Кіпй) Ра АГ А (конструкція 5.8) слесстасластасаасСАаатотаасасСсвААСстТастасцАА сстааса,асстота7атадлдастала,астатАасСсассАа,сваст
ТСААСАТСААаСПСАСАССТАСАТОаСАСТОИСТСАдаСАссо сасстадасадассасстацвААатТасАтааСАвААТОоСАСС
СаССААСааСААСАсаСАААтТАСатассСААаТТОоСАСса вСААДССССАССАТСАССаССа,АСАССАаСАаСААСАСАС
ССстТАССТаСАасСстТаАССАаССтаАсСстоСадасАСАССИаС са,ататАСТАСТаСОСССССттОвсастТАСТАСЯТатоСОаАС тТАСЯССАТОСССТАТТОССОССЯССАпСааСАСААда,аСсатаАСс статостотасСстАасСАССААлсвасоостосата7атоооос таассссСбдасАдасСсАдаАаСсАсСАааСсааСсааСАСАасСсСа сттасестасстааТСААааАСТАСТТОСССОСАИ,аСССаТт сассататостапААСсАааСсасАаасссталдсстосавсасата
САСАССТТОССССОСССОЯТОСТаСсАсСАсСтТстТааСсСтТаИтАТА сссталасаа,аса,атаатсАассста,ассттоталасАа,сстаава
САСССАПАССТАСАТСТаСААСИаТаААССАСААаСССАсо
ААСАССААСИатасАСААаААдс,атапАасССААасАастас
САСААААСТСАСАСАТаСССАСсСВТассСАасСАССТИадА сстасд,аасаааАССатСА,ТСТТОСТСТССССССААААС нуклеотидна ССААапАСАСССТСАТаАТСОТОССОИАСсСоСсСсТаАсатсАС послідовність дтасатастастасА;сатадаССАСаААаАСССстаАсаИт конструкції анти- СААСТТСсААСстТаатаСатавассиаСсатацпАватасСАТААТ 347 СЕА (184.66)-єЄсї- асСААпАСААдасСасаапАапАаСАапТАСААСАаСАССИ ланцюг із ТАСССсТа,атаатоАаа,абатоСтТСАССатосТасСсАССАСааИАСТ «западиною»- сасСтТаААтТаайСААасАсТАСААаТасСААааТтсТоСААСА димерний 4-188Ц АДИаСОСОСТОоСВЙСаСССССАТОСАСААААССАТСТОСАДАСС (711-254) САДАдсс,сасАассССаАпААССАСАасататасСАсостасс
СоСАТОССОСОСОаАТаАдаСтТаАССААСпААССАватсАассто тса,атасасСсАаТСАААаасСТСсТАТоССсАасСаАСАТСИаСсСаИ таслатассАаАаСААтТасасАа,аССавАсААСААСТАСА
АаАССАССЯССТОССЯТОСТаСАСТОС,АСсваТстосттсттТ сстоа,атаАдаСАдастсАсСатаспАСАд,сАасСАааватаайсСА абадсаааААсатстстТсАТаСсТоСаТаАтТасСсАТаАСааСтТ
СсТаСАСААССАСТАСАСаСАпаААсСАасстотооСста7тсто ссастасадсассаСоеспАдасаалсадацАааАТССАаА ласаеабостала,аствАаасооСаАтаАтстастасАстас таслстассаСбАассасАтТа7аттастоа,астаатааСССА сААдсСсаСтастастадтосАта,аооооста7атостаатТАСАС,С сАТОСТаСАСТОСОССТвОаСаТатСАСТаАСАСсавСсаваСсСтТад аСтТАСАААдаАдаспАСАССАААаААСтТаата,атаасССАдас сссесататАСстАаСсататстсАа,астапААСстТаСрасАс датастаассСсасвпААдааАтотаастотататттаасо
СбтТасАТтотТасадасстстаАдаАдАаа,асастаста,ссаСТасАс стотааСАСТаАСАаатТасАттасстстасСАастоСаА сасбСбапААТАаСОаСАТТТаСОТТТоААлдсСасАас,састаста сАССТОТоТаОСсСсСЯвСасСсАасСАас,састаааАдаТасСАТСТасСАСА
Таблиця 89
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СЕА (184.66) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188В (71-254) в злитті з Ес (Кіпй) Ра АГ А (конструкція 5.8) сАсдАасасбАа,сааСТАпАСАСсасстааСАасСТаАСАСАСса сбастАсАаатастасасстатСАаАатаАСССССаАсАТ тосласссасста|асстТСсТоСААпйАдасСаАда,ааСасАсса сессАТотТасссаСса,асвАааАтотТАаАаАа,апАСССсаААСТ атооСТаАСаАтТоСсАа,асСса,асвастаставАТСТаАсАСАС ааААтТатсасссАаастаатаасСТСАаААтТа,атастастаА тадСсапАсстоталастаатТАСТоСаАСССАа,асавастасо дассататостаАстасаавАСТатоСтТАСАААСПААаА
ТАСААДААСААСТаеастастаастТАААаСтаавастТатАСТАТ статттттодасСстапйААстТал,сасссатаатааСТасос
АдасастТсАасалдтотататсостаастстасСсАТтСоТасАасс дястасестотастаста,сСбаСбАа,астасСсАстТаастстТаласт стапвАсСсТасСсСАССАа,ассттАаа,аСсаАааССАСАААСАсСо соссттса,асатТосСААсаАСсасста|астасСсАтотадаСасса сАсАд,асасстасаАдаТасСАТСТаСАТАСТаААдасССАСАС ссссасАТаСТОвчЕаиСАСаСТаАсСтТоАасасасааСААСстатаст сазАастаттСсасСсатТаАСАССТаАаАтоостасСаавАСТОа
ССААдасССссСтТАпАТСАСАА слесстасластасаасСАаатотаасасСсвААСстТастасцАА сстааса,асстота7атадлдастала,астатАасСсассАа,сваст
ТСААСАТСААаСПСАСАССТАСАТОаСАСТОИСТСАдасСАас сасстадасадассасстацвААатТасАтааСАвААТОоСАСС
СаССААСааСААСАсаСАААтТАСатассСААаТТОоСАСса вСААДССССАССАТСАССаССа,АСАССАаСАаСААСАСАС
ССстТАССТаСАасСстТаАССАаССтаАсСстоСадасАСАССИаС са,ататАСТАСТаСОСССССттОвсастТАСТАСЯТатоСОаАС тТАСЯССАТОСССТАТТОССОССЯССАпСааСАСААда,аСсатаАСс статостотасСстАасСАССААд,аавассСАтсастстосооо тааСАСССТОСТоСААдсСАа,аСсАсСсТотТасавасасСАСАаСоОо сставастасСтасТСАдадвАСТАСТТСССС,ВААСсСаа,та
АдсаататсатавпйААСстсА,сасаосєтаАссАа,асва7аса7атас нуклеотидна АСАССТТОССОЯСаСтТатосСтТАСАатосСтТСАааАСТСТАСТО послідовність сСстТсАаа,аСАа,асатастАсса,атассстоСсА,аСА,астасвас конструкції анти- ЄССАСАССТАСАТСТИСААСОИТИААТСАСААИСССАССА
СЕА (Т84.66)-Рс- КСАССААОСТОСАСЛАСАААСТ ТОДОСССАААТСТТОТО за48 ланцюг І з АСААААСТСАСАСАТОСССАССОТОИСССАССАССТОААОС «виступом»- тасбасассапАССаТатсАатстСосСТТоСССССААДААСоС мономерний 4д- ЛАОСАСАСССТСАТИАТСТоСоОаАССССТОАОСТСАСАТ 1ВВІ. (72-254) сстаестастасА;са,атдаССАСаААаАСССТаАааТатсА
АатТсААСсТватасатасАассаСса тасАасаТасСАТААТаС
САДПАСААдАдасСсасСасаАапАаСАаТАСААСАаСАСИТА сса,ататаатсАаа,аСатоСсТАсСсатоСТасСАССАа,САСТас
СстТОААТааСААдпаАаТАСААдаТасСсААааТСТоОСААСААА аоостаасасССССАТССАСААААССАТСТОСАААаССА
АдссасАдасооСаАпААССАСАсСататАСАСоСстТасссс сСтТасСсАпАаАтТадасСтТаАССААаААССАсататоостата статотаатТосААлд,саастСстТАССССАаСсаАТАТСОЯССИатОа слатасаАда,сАдаСААдса,ааССАаССсТаАсААСААСТАСААС
АССАСССССССТОТаОСТОСАСАССОСАСОаСАаСТТоТтоС татАСТоСАААСтТаАдсСатапйАСААдаАасосатасСАсо
АсдааСААдсататтсАа,астасаа,аСсатаатасСАСсаАааСосстТ ,САСААССАСТАСАСССАСЧААатосСстТадасСсталасссс сасссАас,саСс,асосасаАддаСсаАаасАаааА,асАТоСАсАсА
Таблиця 89
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СЕА (184.66) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188В (71-254) в злитті з Ес (Кіпй) Ра АГ А (конструкція 5.8) сасосталастАдасооСаАтаАтостТа7астасвАСстТаста салостассасАа,сааСАтТаттастоа,сстаатаасССАаА
АдсатастастаАдтоасАТтТаасоооста7атостастТАСАдасСаА тостасАастаастасСбататСАСТаАСАсСассасстаАас
ТАСАААСАСаОаАСАССАААСААСТОИ ТасіТ ,ааССААсаСо саессата,атАстАсСататтсттсАа,аСстТасААСТасапАцАс тасатассСссассАдасасАтота,астотататстстаассст аСАТСТаСсСАСаССсСсТтотТаАсСААХд,асаестТастасоастасАаст стаасСсАСтТаАСсАсаСтТасАатотасстостассСХастосасАсаоа собапААТАаСаСАТтТа,асаОаТгтСААсасавса7астастасА сстатстасссасСАсСАсастаасАсТаСАТСТаСАСАСА слапасСАсаастТАпАСсАСсасстааСАасСТаАСАСАвасо аСстТАСАСТОаСТаСаОоСстТаТаттСсА,аАатаАСоСССаАсСАТТО сал,асс,аассТасстСстТоСААСАдДасСаАдА нуклеотидна 344 СЕА о (ТВ466), див. таблицю 88 легкий ланцюг
ЕМО ООБСОАЕЇ МЕРСАБЗУКІ БСТАБЗОЕМІКОТУМНУУКО ВР
ЕОСІ ЕМО ВІОРАМЕМЗКУУРКЕОСКАТІТАОТЗЗМТАМІ ОЇ.
Т9І Т5ЕОТАУУУСАРЕИУУУБОМАМАУМУСсОСТЗУТУБА5
ТКаРБЗМЕРІ АРБЗКЗТЗИааТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУЗУМЗИа
А Т5аОУНТЕРАМІ О55О1 51 55 МУРБЗББІСаТОТМІСМУМ
НКРОМТКМОККУЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСОРБУНІ ЕРР
КРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУЗНЕОРЕУКЕМУ РМУрИаМЕМН
МАКТКРАЕЄЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОВУ МСОКЕУКСКУЗМ
КАЇ пАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУСТІ РРОВОЕЇ ТКМОМУ5І 5
АУКаРУРБЗОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБООЗЕРІ УК 349 ГУКА ОССММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОК5БІ 5І РИСІ азасасйевВЕСРЕЇ 5РОДРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММО ЛО
СРІ БМ/УУ5БОРИЇ АСУБІ ТИС 5МКЕОТКЕЇ ММАКАИ УМ УМ
ЕОГЕГААУММАСЕ,ЗИавуУБіІ АІ НІ ОРІ ВБААСАААЇГ А ТМ.
РРАББЗЕАВМЗАРСРОСНВІ І НІ ЗАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАМУ
ОГТОСАТМІ СІ РВУТРЕІРАСІ РОРАБЕСССОСОООсСБВчСОССЗВЕС Р
ЕГЗРООРАСІ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОМУП ТОСРІ ЗМУ УЗОРИ
АСУБ5БІ ТИС ЗМКЕОТКЕЇ ММАКАСУМУУМУЕЕОЇ ЕІ АВУМАа
Е,БОаБУБІ АІ НІ ОРІ АВБААСАААЇ АЇ ТМОЇ РРАБЗЕАВМЗАЕ
СРОаА НІ ЗАСОВІ УНІ НТЕАВАВНАУ/ОЇ ТОСАТМІ СІ.
ЕВМТРЕІРАСІРОРАЗЕ
ЕМО ООБСОАЕЇ МЕРСАБЗУКІ БСТАБЗОЕМІКОТУМНУУКО ВР
ЕОСІ ЕМО ВІОРАМЕМЗКУУРКЕОСКАТІТАОТЗЗМТАМІ ОЇ.
Т9І Т5ЕОТАУУУСАРЕИУУУБОМАМАУМУСсОСТЗУТУБА5
ТКаРБЗМЕРІ АРБЗКЗТЗИааТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУЗУМЗИа анти-СЕА (Т84.66)- А Т5аОУНТЕРАМІ О55О1 51 55 МУРБЗББІСаТОТМІСМУМ
Рс-ланцюг І зі НКРОМТКМОККУЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕААССРЗМЕСЕРР 350 «вИступОМ»- КРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУЗНЕОРЕУКЕМУ РМУрИаМЕМН мономерний д- МАКТКРАЕЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОМ МЕОКЕУКСКУЗМ 1ВВІ. (71-254) КАЇ ЧАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМУБІ УС
ГУКаЕгЕУРБОІАМЕМЕЗМИСОРЕММУКТТРРМІ ОБраЗЕРІ МК
ГУКА ОССММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОК5БІ 5І РИСІ азвасасйевВЕСРЕЇ 5РОВРАСІЇ ОЇ ВОСМЕАОЇ МАОММО ЛО
СРІ БМ/УУ5БОРИЇ АСУБІ ТИС 5МКЕОТКЕЇ ММАКАИ УМ УМ
ЕОГЕСААВУМАСЕИ,ЗаИвзувБі АІ НОРІ В5ААСАДАГАЇ ТМ.
Таблиця 89
КДНК і амінокислотні послідовності двовалентної націленої на СЕА (184.66) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188В (71-254) в злитті з Ес (Кіпй) Ра АГ А (конструкція 5.8)
ПИШИ НН КЕ ісленсоЗннівй
ОГТОСАТМІ СІ РАВМТРЕІРАСІ РОРАЗЕ легкий ланцюг 11.3 Одержання «ненацілених» молекул, які містять розділений тримерний ліганд для 4- 188, в злитті з Ес і людського Їдсї як контрольних молекул 11.3.1 Одержання «ненацілених» антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний людський ліганд для 4-1ВВ, в злитті з Ес (контрольні молекули)
Зазначені контрольні молекули одержували відповідно до методу, описаному вище для націленої на СЕА конструкції 5.1 (позначена як контроль Б), 5.3 (позначена як контроль В), 3.4 (позначена як контроль Г) і 3.5 (позначена як контроль Д), з єдиною відмінністю, яка полягає в тому, що анти-СЕА-зв'язуючий агент (МН-МІ) замінювали на контроль, що являє собою зародкову лінію, позначений ЮР47, який не зв'язується з антигеном (див. фіг. 40). кКДНК і амінокислотні послідовності контролю Б, що являє собою одновалентну «ненацілену» (ОР47) молекулу зі «схрещеними» СН-Сі із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кі), представлені вище в таблиці 68 (див. приклад 7.3.1). В таблиці 69 представлені КкДНК і амінокислотні послідовності двовалентної «ненаціленої» (ОР47) молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кіпй), що являє собою контроль В. В таблиці 70 представлені кКДНК і амінокислотні послідовності одновалентної «ненаціленої» (ОР47) молекули з СН-СіІ-кросовером (із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (711-248) в злитті з
Ес (Кіп), що являє собою контроль Г. В таблиці 71 представлені кКДНК і амінокислотні послідовності одновалентної «ненаціленої» (ОР47) молекули без заряджених залишків в СН-СІ - кросовером, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій), що являє собою контроль Д. 11.3.2 Антитіла як контрольні молекули
Додатковим контролем, застосовуваним в аналізах, який був позначений як контроль Е, був «ненацілений» (ОР47) контроль зародкової лінії, який являв собою людський ІдС21, що містить мутації Рго329с1у, І еп234АЇїа і І еп235Аїа для елімінації зв'язування з Есе-гамма-рецепторами.
КДНК і амінокислотні послідовності контролю Е представлені вище в таблиці 73. 11.4 Одержання націлених на СЕА антигензв'язуючих молекул, які містять розділений тримерний ліганд для 4-188В, в злитті з Ес і відповідних контрольних молекул
Зо Кодуючі послідовності націлених і «ненацілених» антигензв'язуючих молекул, які містять розділений тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Есе(Кіпй), клонували в плазмідному векторі, в якому експресія вставки контролюється промотором МРБМ і який містить синтетичну полід- послідовність, локалізовану на 3'-кінці СОБ5. Крім того, вектор містив послідовність ОгіР ЕВМ для підтримки епісомальної форми плазміди.
Молекулу, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес(КкКіп), одержували шляхом спільної трансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців з використанням поліетиленіміну. Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами. Для варіантів 1, 2, 4, 5 та їх контролей Б, Г і Д застосовували співвідношення 1:1:1:1 («вектор для конструкції димерний ліганд-СІ-ланцюг з «виступом»: «вектор для злиття мономерний ліганд-СНІ»:«вектор для анти-СЕА Раб з ланцюгом із «западиною»:«вектор для легкого ланцюга анти-СЕА»). Для варіантів 3, б і відповідного контролю В застосовували співвідношення 1:1:1 («вектор для ланцюга пиЇдс1 Ес із «западиною»-димерний ліганд»:«вектор для ланцюга пиЇдсі Ес з «виступом»- мономерний ліганд»:«вектор для легкого ланцюга анти-
СЕА»). Людські ІдС, застосовувані як контролі в цьому аналізі, одержували методом, застосовуваним для біспецифічної конструкції (для трансфекції застосовували тільки вектор для легкого ланцюга і вектор для важкого ланцюга у співвідношенні 1:1).
Для виробництва в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 300 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 10 хв при 210 х ді супернатант замінювали 20 мл попередньо нагрітим середовищем СО СНО. Експресійні вектори (200 мкг загальної ДНК) змішували в 20 мл середовища СО СНО. Після додавання 540 мкл ПЕЇ розчин інтенсивно перемішували протягом 15 з і інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕ!Ї, переносили в 500- мілілітрові збовтані колби і інкубували протягом З год при 37"С в інкубаторі в атмосфері з 595
Со». Після інкубації додавали 160 мл середовища ЕхсеїЇ, що доповнювали бмМ І -глутамін, 5 г/л соєвого пептиду (РЕРБОХУ) і 1,2мМ вальпроєвої кислоти, і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали 1295 ЕРеей (амінокислота і глюкоза). Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням протягом 30-40 хв щонайменше при 400 х д. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22 мкм-фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,0195 (мас./Об.) і витримували при 47С.
Молекулу, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кій), а також
Іц9б, очищали з супернатантів клітинних культур за допомогою афінної хроматографії з використанням білка А з подальшою гель-фільтрацією. Для здійснення афінної хроматографії супернатант вносили в колонку Марзеїесі Зиге (СМ - 5-15 мл, смола фірми СЕ Неайвсаге), врівноважену буфером, що містить фосфат натрію (20мм), цитрат натрію (20мм) (рН 7,5).
Незв'язаний білок видаляли шляхом промивання таким же буфером, використовуючи його в об'ємі, кратному принаймні 6 об'ємам колонки. Зв'язаний білок елюювали, використовуючи або лінійний градієнт (20 СМ), або східчасту елюцію (8 СМ), буфером, що містить 20мМ цитрат натрію, 100мММ хлорид натрію, 100мМ гліцин (рН 3,0). При здійсненні елюції з використанням лінійного градієнта здійснювали додаткову східчасту елюцію із застосуванням об'єму, кратного 4 об'ємам колонки.
Значення рН зібраних фракцій регулювали, додаючи 1/10 (об./06.) 0,5М фосфату натрію, рн 8,0. Білок концентрували перед внесенням в колонку Ні оай Супердекс 200 (фірма СЕ
Неайсаге), врівноважену розчином, що містить 20мМ гистидин, 140мМ хлорид натрію, 0,01 об.95 Твін2го, рН 6,0.
Концентрацію білка визначали шляхом вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм, використовуючи коефіцієнт молярної екстинкції, розрахованого на основі амінокислотної послідовності. Чистоту і молекулярну масу націленої антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес (Кіп), аналізували за допомогою ДСН-ПААГ у
Зо присутності відновника (5мММ 1,4-дитіотреїтолу) і без нього і здійснювали фарбування кумассі
ЗітріеВіце "м Заїебіаійп, ( фірма Іпмігодеп, США), або аналізували за допомогою КЕ-ДСН, використовуючи пристрій Гарспірохі! (фірма (РегКкіп ЕІтег). Вміст агрегатів в зразках антитіл аналізували за допомогою колонки для аналітичної гель-фільтрації Т5Каде! 53000 5МУ ХІ. (фірма
То5о!й), врівноваженої рухомим буфером, що містить 25мМ К2НР 04, 125мМ Масі, 200мММ моногідрохлорид І -аргініну, 0,0295 (мас./О6.) Мам3, рн 6,7, при 2576.
В таблиці 90 узагальнені дані про вихід і кінцевий вміст мономерів націлених на СЕА антигензв'язуючих молекул, які містять розділений тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес (КІН).
Таблиця 90
Результати біохімічного аналізу націлених на СЕА молекул, які містять розділений тримерний ліганд для 4-1ВВ в злитті з Ес (Кій)
Мономер | Вихі
Конструкція Іо д
ЗЕС) (мг/лі одновалентна націлена на СЕА (Т84.66-І СНА) молекула з СН-СІ -кросовером із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 1,4 71-248) в злитті з Ес (конструкція 5.4)
Бест ПНК лкінелекйвйй ШЕЯ тримерний ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (конструкція 5.6) " одновалентна націлена на СЕА (184.66) молекула з СН-СІ-кросовером із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для 4-188 97 15 71-254) в злитті з Ес (конструкція 5. 7
Бен сі ств вій НС тримерний ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (конструкція 5.8)
В таблиці 91 узагальнені дані про вихід і кінцевий вміст мономерів «ненацілених» (ОР47) молекул, які містять розділений тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес (Кій), як одновалентних (контроль Б, Г і Д), так і двовалентних (контроль В), і людського ІДС РЕГАГА зародкової лінії ОР47 (контроль Е).
Таблиця 91
Результати біохімічного аналізу «ненацілених» (ОР47) молекул, які містять розділений тримерний ліганд для 4-1ВВ в злитті з Ес (Кій)
Вихі (ЗЕС) Імг/лі пет людський ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кіп) молекула (контроль Б) "
Бей «ДЕК Кейн «НСС людський ліганд для 4-188 (71-254) в злитті з Ес (Кі) молекула (контроль В) " людський ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) молекула (контроль Г) " " людський ліганд для 4-188 (71-248) в злитті з Ес (Кій) молекула (контроль Д) " "
Приклад 12
Функціональна характеризація націлених на СЕА антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для 4-18ВВ в злитті з Ес 12.1 Поверхневий плазмонний резонанс (одночасне зв'язування)
Одержання пиМАЗВЗА2 як антиген націлених на СЕА конструкцій, які містять тримерний розділений 4-1881І.
Антиген, що застосовується для аналізу зв'язування с СЕА методом 5РВ, являв собою гіоридну молекулу, що складається з доменів АЗ і ВЗ людського СЕАСАМ5 (СЕА) і доменів М і
А? людського СЕАСАМІ (ВОР'І), аналогічну до описаної для МАВА (ЮОитбіп Н. та ін, Ргос Маї!
Асад бсі ОБА, 91(10), 10 травня 1994, сс. 4313-4317). Антиген позначали як МАЗВЗА?2 і його схематичне зображення представлено на фіг. 41.
В таблиці 92 представлені нуклеотидна і амінокислотна послідовності ПиМАЗВЗАг-амі-Нів.
Таблиця 92
Нуклеотидна і амінокислотна послідовності ПИМАЗВЗА2г-амі-Нів сАдаСстТаАССАССаАаТССАТтассстСААСатааосСаА сааСАААсСсАса,атастастастааТССАСААССсТасссс дасластагпОссастТАсАда,астааТАСАда,асвсасавАасос стасАдбсаСААдсСс,сасСАаАтоатавасТАсасСАтТосво
САСССАаСАсасасСАСАСССЯвасоСтасСсСААтАасСассСА вАСАСАСААТСТАССССААСсСасСАаасстастаАТоСАС
ААСОСатТаАСССАпААСОсСАСАССИ,аасСТТСТАСАСАСТОСА
АаТСАТСААДСАХ,ССаАССстТастСААСаАдапААасСсАСсСся асСсА5аттоСсАСсататАасссСсавАдаСТассСАлаСсССА,С
З5і |НУуклеотидна послідовність АТСАХОСАССААСААСАаСАдасоСатасААСаАТААаалА
ПиМАЗВЗА2-амі Ніб сессстаассттТАсСсТас,всАааСССаАаасССАсСААСА
СсСАССТАССТОТОСИТаСОТСААСссасСАасА,ассТасосо атаТатосСССАВАСТОСАаСстТаАдаСААСааСААСАсСААС
ССстТаАСССсТатТСсААСатаАСССапААТаАСассСАцАс сСстТАсСсСтатасааСАТССАСААСсАаа,аСсататоСассСААС сасадассАссссатаАсоСстасАататастатАсвасосс
СаАСАСССССАТСАТСАСИаССССССтТаАСАаСАасСтТАССТ слабсаСбасСсСААССТаАдАсСстадасСсТасСАСАаСассСА
ВСААССССАаасоСсТСАатАсАа,аСстааСапАТСААСИаСссо
АТСССССАаСАаСАСАСССАС,СИаТаста ГТАТСаССААС
Таблиця 92
Нуклеотидна і амінокислотна послідовності ПИМАЗВЗА2г-амі-Нів
АТСАСССССААСААСААСИ,васСАССтТАСасСста7асттсата
ТоСААССТааССАСсСссаССаспААСААСАаСАТСИТадА аТоСАТСАССОЯТОТоСООСТОССТОАаСССССсасТасТас (9;
САДАССТСАСАТСААДСаССА,СААаАССАССИ,сТаАССа аСбаАСАдааАСАаСатаААССТаАССсТастоСАССААС вАТАСССаСАТСАаСАТОСЯаТасаТ СТ СААСпААТСА стоостассСсАда,аСАаа,аСссАаСапАтаддасталасСАса ,ССААСАТСАСССТатоСАТСААССССО,ТаААААсСАсСАс сАсасбааСАССТАТТОСТОаСсСАсСатаТ тСААССССАТОС
АаЧСААпААССАаАдасСсаАССССАТСАТасСтТаААСИТадА
СТАСАДСОИаСССТасССССААСААААССТаАТСААТИаТтТа
АТсТОааААастТастаттоСАа,ааассСАса7асАаасвасста
ААСОСАСАТСТТССААХаСССАСААААТСавАатайСАСсаА саССАпАаСССАССАССАССАТСАССАС
ОГТТЕЗМРЕММАЕСКЕМІ ПІ УНМІ РОСІЇ СБУ УКИаЕВМ рамвВоОомамАІйТООАТРИРАМЗОаВЕТІМРМАБІ ПОМУТО
МОТагмтОмМІКБЗОЇ ММЕЕАТаОЄгНМУМУРЕЇ РКРОЗІЗЗММЗК
РМЕОКОАМАЕТСЕРЕАОМТ ТМ ММ УМОСОБІ РУБРНАГ ОЇ 5
Мама т ЕММТАМОАВАМУСС,ИІОМЗУЗАМАЗОРМТІ ОМІ. 352 |людський МАЗВЗА2-амі-Ніє. | УАРОТРІЇЗРРОББЗУЇ БСАМІ МІ ЗСНЗАЗМРОРОУЗМ/ВІМИІ
РООНТОМІ РІАКІТРМММОа ГМАСЕУЗМІ АТИавММОІУКОІТ
МБАБІ БРУМАКРОІКАЗКТ ТУТаОКОЗУМІ ТОЗТМОТИЇБІ
ВМ/РЕКМОБ5І РОЗЕВМКІ БОСМІТІ БІМРУКВЕВВАДИТатУМУМ СЕ
МЕМРІЗКМОБЗОРІМІ МУМУМАСРОЕМ ІММОГЕМІ ЕОСРИаБ
СЕ МОТгЕАОКІЕЄСМНЕАВАНННННН
Одержання білюов здійснювали відповідно до методу, описаному вище для одержання злитого з Ес білка (приклад 7.1.1). Секретовані білки очищали з супернатантів клітинних культур за допомогою хелатуючої хроматографії з наступною гель-фільтрацією. Першу хроматографічну стадію здійснювали з використанням картриджа МІМТА Зирегоми (5 мл, фірма
Оіадеп), врівноваженого в буфері, що містить 20мМ фосфат натрію, 500Нм хлорид натрію, рн 7,4. Елюцію здійснювали, застосовуючи в об'ємі, кратному більше 12 об'ємам колонки, градієнт від 595 до 4595 буфера для елюції (20мМ фосфат натрію, 500Нм хлорид натрію, 500мММ імідазол, рН 7,4).
Білок концентрували і фільтрували перед внесенням в колонку Ні оай Супердекс 75 (фірма
СЕ Неайвсаге), врівноважену буфером, що містить 20мМ гістидин, 140мМ Масі, 0,0195 Твін-20, рН 6,0. У таблиці 93 узагальнені дані про вихід і кінцевий вміст мономера білка людського
МАЗВЗАг-амі-Н ів.
Таблиця 93
Біохімічний аналіз людського МАЗВЗА2г-амі-Нів . Мономер (92) Вихід
Здатність одночасно зв'язуватися з конструкцією людського 4-188-Ес (Кій) Її людським
МАЗВЗА2 оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (5РЕА). Всі експерименти на основі 5РА здійснювали за допомогою пристрою Віасоге Т100 при 25" С з використанням НВ5О-ЕР як рухомого буфера (0,01М НЕРЕ5, рН 7,4, 015М Масі, ЗмМ ЕДТА, 0,00595 сурфактанта Р2гО, фірма Віасоге , Фрейбург/Німеччина). Конструкцію біотинільованого людського 4-188-Ес (Кіп) безпосередньо зв'язували з проточною коміркою стрептавідінового
(ЗА) сенсорного чіпа. Застосовували рівні іммобілізації що відпеовідають аж 250 ВИ (резонансні одиниці).
Націлені на СЕА 1ВВІ конструкції (конструкції 5.4, 5.6, 5.7 і 5.8), які містять тримерний розділений 4-18Щ8І, пропускали в концентрації 200Нм зі швидкістю потоку ЗО мкл/хв через проточні комірки протягом 90 с і час фази дисоціації встановлювали на 0 с. Людський МАЗВЗА2 пропускали як другий аналіт зі швидкістю потоку 30 мкл/хв через проточні комірки протягом 90 с в концентрації 500Нм (фіг. 41Б). Моніторинг фази дисоціації здійснювали протягом 120 б.
Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, одержаної в проточній референс-комірці, в якій не іммобілізували білок.
Як продемонстровано на графіках на фіг. 42, всі біспецифічні конструкції мали здатність одночасно зв'язуватися з людським 4-188 і люодським МАЗВЗА2. 12.2. Зв'язування націлених на СЕА антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес (Кіп) на активованих людських РМВС
Для визначення зв'язування антигензв'язуючих молекул з людськими РВМС, які містять тримерний 4-1ВВІ. в злитті з Ес застосовували в різних одержаних титруванням концентраціях націлені на СЕА антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний 4-1ВВІ в злитті з Ес в аналізі, описаному в прикладі 5.2.
На фіг. 43 представлені дані про зв'язування конструкцій 5.4, 5.6, 5.7 і 5.8, одержаних відповідно до методу, описаному в прикладі 11, на активованих 4-18В-експресуючих СО4--Т- клітинах і СО8:-Т-клітинах відповідно. Дискримінаційні вікна встановлювали на живі бр45003:0045- або СбрабБсСорз3:С008:-Т-клітини і будували графік залежності МЕ! для кон'югованого з РЕ К(іаб')ї2-фрагмента козячого ДС. проти людського ІдСї, Есу-специфічного
АйНіпіРиге від одержаних титруванням концентрацій націлених варіантів, які містять розділений тримерний ліганд для 4-1ВВ в злитті з Ес. В таблиці 94 представлені одержані величини ЕсСрвбо, визначені для конструкцій 5.4, 5.6, 5.7 і 5.8 і контрольних молекул.
Таблиця 94
Зв'язування на активованих експресуючих 4-188 СОа--Т-клітинах і СО8:-Т-клітинах . ЕСбво |нМ| ЕСтво (НМ) ниж: пиши пили ур 12.2 Зв'язування з експресуючими СЕА пухлинними клітинами
Для аналізів зв'язування на експресуючих СЕА пухлинних клітинах застосовували такі лінії
Зо експресуюючих людський СЕА клітин лімфоми: експресуючі СЕА пухлинні клітини людського раку шлунка лінії МКМ-45 (АТОС ТОСР-1008) і клітини людської колоректальної аденокарциноми лінії 5180 (АТСС СІ -187). Аналізи здійснювали відповідно до методу, описаного в прикладі 5.3 для експресуюючих ЕАР пухлинних клітин ліній ММ-3 ї УММ-266-4.
Дискримінаційні вікна встановлювали на живі пухлинні клітини і будували графік залежності
МЕ! для кон'югованого з РЕ Е (ар) 2-фрагмента козячого (ДО проти людського Ідс, Есу- специфічного АйіпіРиге від одержаних титруванням концентрацій націлених конструкцій, які містять розділений тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес.
На фіг. 44 представлені дані про зв'язуванні конструкції 5.7, одержаної відповідно до методу, описаному в прикладі 11.2.7, з експресуючими людський СЕА клітинами людського раку шлунка лінії МКМ-45 (ліворуч) і клітинами людської колоректальної аденокарциноми лінії І 5180 (праворуч). У таблиці 95 представлені отримані величини ЕСзхо, визначені для експресуюючих людський СЕА клітин людського раку шлунка лінії МКМ-45.
Таблиця 95
Зв'язування з експресуючими СЕА пухлинними клітинами . ЕСво (нМІ ЕСво (нМІ
Приклад 13
Біологічна активність націлених на СЕА антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для 4-1В8В в злитті з Ес 13.1. Активація МЕ-кВ в клітинах НеГа, що експресують людський 4-188
Клітини Нег а, які експресують людський 4-188 і МЕ-кВ -люциферазу, створювали відповідно до методу, описаному в прикладі 6.1.
Активація МЕ-кВ в клітинах Неїа, що експресують людський 4-188В, при спільному культивуванні з експресуючими СЕА пухлинними клітинами
Клітини Неїа, що експресують МЕ-кВ -люциферазу і людський 4-188В, збирали і ресуспендували в середовищі ЮОМЕМ, доповненому 10 об.95 ЕВ5 і 1 об.95 сіІшамАХ-Ї, до концентрації 0,2 х 106 клітин/імл. 100 мкл (2 х 107 клітин) зазначеної клітинної суспензії переносили в кожну лунку стерильного білого плоскодонного 96-ямкового планшета для культури тканини з кришкою (фірма Сгеіпег Біо опе, каталожний Мо 655083) і планшет інкубували при 37"С і 595 СО» протягом ночі. На наступний день додавали 50 мкл середовища, що містить в одержаних титруванням концентраціях націлені на СЕА антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для 4-188 в злитті з Ес (СЕА розділений тример 4- 188) або «ненацілені» (ОР4А7) антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд для 4 188 в злитті з Ес (ОРА47 розділений тример 4-188І)3. Експресуючі СЕА пухлинні клітини людського раку шлунка лінії МКМ-45 (АТОС ТОСР-1008) ресуспендували в середовищі ОМЕМ, доповненому 10 об.95 ЕВ5 і 1 об.95 СІшщамАХЯ-Ї, до концентрації 2 х 1059 клітин/мл.
Суспензію експресуюючих СЕА клітин В-клітинної лімфоми (50 мкл, кінцеве співвідношення 1: 5) або тільки середовище додавали в кожну лунку і планшети інкубували протягом 6 год при 37"С і 5956 СО». Клітини промивали двічі 200 мкл/лунку О-ЗФР. Додавали в кожну лунку 40 мкл свіжоприготованого репортерного буфера для лізису (фірма Рготеда, каталожний Мо Е3971) і планшет витримували протягом ночі при -20"С. На наступний день планшети із замороженими клітинами і ідентифікуючим буфером (система для аналізу люциферази 1000, фірма Рготеда, каталожний Мо Е4550) піддавали відтаванню при кімнатній температурі. Додавали 100 мкл
Зо ідентифікуючого буфера в кожну лунку і максимально швидко вимірювали люциферазну активність з використанням рідера для мікропланшетів зресігаМах М5/М5е і програми ЗоЯМах
Рго (фірма МоїІесшаг Оемісе5), підраховуючи випускання світла в КІ. (одиниці випускається світла протягом 0,5 с/лунку ), або планшет-рідера для зчитування кількох міток Місіог3 1420 (фірма Регкіп ЕІтег) і програми РегКіп Еітег 2030 Мападег, визначаючи випускання світла у вигляді імпульсів в секунду (СРБ), і будували графік залежності від концентрації тестованих конструкцій.
Націлені на СЕА антигензв'язуючі молекули, які містять тримерний ліганд для 4-188В в злитті з Ес (конструкції 5.7 і 5.8) ініціювали активацію шляху передачі сигналів МЕПВ в репортерній клітинній лінії в присутності клітин людського раку шлунка лінії МКМ-45. На противагу цьому, «ненацілені» контрольні молекули не ініціювали таку ж дію при застосуванні в будь-яких тестованих концентраціях (фіг. 45). У таблиці 96 представлені відповідні величини ЕСзбо.
Таблиця 96
Зв'язування з експресуючими СЕА пухлинними клітинами й ЕСвхо (НМІ ЕСво |(НМІ
Приклад 14 14.1 Одержання націлених на ЕАР антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для ОХ40 в злитті з Ес
Послідовність ДНК, кодуючу частину ектодомени (амінокислоти 51-183) людського ліганду для ОХ40 синтезували відповідно до послідовності Р23510 з бази даних Опіргої. Для зниження гетерогенності людського ліганду для ОХ40, обумовленої глікозилюванням, залишки аспарагіну в положеннях 90 і 114 замінювали за допомогою мутації на аспарагінову кислоту за допомогою сайтнаправленного мутагенезу (згідно з Сотраап О.М., Нутомуй» 5.0., Зігисішге 14(8), 2006, сов.1321-1330).
Поліпептид, який містить два ектодомени ліганду ОХ40, розділені (с45)2-лінкерами і злиті з людським Ідс1-СіІ-доменом, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. 46А: людський ліганд для ОХ40, ((345)2-конектор, людський ліганд для ОХ40, (с45)»-конектор, людський СІ.
Поліпептид, який містить один ектодомен ліганду для ОХ40 і злитий з людським Ідс1-СН- доменом, клонували відповідно до схеми, представленої на фіг. 46Б: людський ліганд для
ОХа40, (с45)2-конектор, людський СН.
Для покращення правильного спаровування інтродуковали нижчезазначені мутації в «схрещені» СН-СІ. В димерний ліганд для ОХ40, злитий з людським Сі, - мутації Е12ЗВ і
О124К. В мономерний ліганд для ОХ40, злитий з людським СНІ, - мутації К147Е і К21ЗЕ.
Створення і одержання ЕАР-зв'язуючих агентів описано в М/О 2012/020006 А2, яка включена до даного опису як посилання.
Послідовності ДНК, які кодують варіабельні області важкого і легкого ланцюгів зв'язуючого агента, специфічного для ЕАР, клон 28НІ11, субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом із «западиною», або з константним легким ланцюгом людського Іда1.
Інтродуковали мутації РгоЗ29с1у, І енг34АЇа і | ен235Айа в константну область важких ланцюгів з «виступом» і «западиною» для елімінації зв'язування з Ес-гамма-рецепторами відповідно до методу, описаному в МО 2012/130831.
Комбінація: димерний ліганд-Ес-ланцюг з «виступом», що містить мутації 5354С/1366МУ, мономерне СНІ-злиття, націлений анти- ЕАР-ЕРс-ланцюг із «западиною», що містить мутації
Зо УЗ349С/13665/ З368А/У407У, і легсий ланцюг анти- ГАР, дозволяла створювати гетеродимер, який включав зібраний тримерний ліганд для ОХ40 і ЕАР-зв'язуючий Раб (фіг. 468, конструкція 6.1).
В таблиці 97 представлені кДНК їі амінокислотні послідовності одновалентної націленої на
ЕАР (28НІ) антигензв'язуючої молекули зі «схрещеними» СН-СІ і зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для ОХ40 (51-183) в злитті з Ес (Кій) (конструкція 6.1).
Таблиця 97
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на ГАР (28НІ) молекули з СН-СІ - кросовером із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для ОХ40 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 6.1). " Позначає заряджені залишки
ЗЕО
МО: сАаататоССАСАВАТАССССАСААТССАпАаСАТСААС стасАаТтТСсАССпАатТАСААДЧАААаАсаАда,аавасТТСАТС
СстТаАСсСАаССАпААддадапАСпАпАТСАТаААсаТасСАс
САСААСАаСаТаАТСАТСААСТаАС,аАСааст т СстТАССТаА тодасстаАдАласастТАсттсАаа,аССАа,апААдаТацАСАТСА нуклеотидна асстасСсАСТАССАЧААдапАСаАапААСооСстаТаттоСАаст послідовність конструкції ШААШДАААХИ,СТасс,асасАа,аСатаААСАаасстаАатастаасСАса 353 |димерний пи ОХ40І. (51- ССТаАССТАСААапСАСААлаа ТаТАССТаААСатаАССАСС 183) - СіІ"-Рс-ланцюг з ФАСААСАССАХаСсСстТацсАСаАСТТоСАСОаСтТаАдАСвасиасо «виступом» слдастаАТоСсТаАТТСАССАСААсссСсвасаАд,ттоТасс тастассасаСсссАаасаАтотаабасАасасавАТСТСАца татСсАСАССастТАСССССацАТТСАаЙТССАТТААаСатасА
СТТТАСАСАСТАТААПАААСАААААСаТс т ТТАТТСТОаАСТ
ТОоССАСАДАСААпАТаАаАТТАТаААсСатасСАсааАТААТ тотТатаАТСАТСААТТатТаАаСсасаст ТСТАССТаАТСАаСсСтТ
Таблиця 97
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на ГАР (28НІ) молекули з СН-СІ - кросовером із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для ОХ40 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 6.1). " Позначає заряджені залишки
ЗЕО
КУ ПО УДО
МО: вААдСсСОаасСстТАСТТСАааСсСАсадАдатаспАСАтоАасстасА
СТАССАСАдАдасАСсадапААСосоСстТаТаттсСАастадАадА датасасдеСсатаААасАадасстадлтаатаасСАасстаАс
СТАСАДОСАСАдДаататАССтТаддсатаАССАССаласСАА
СсАССАХАСССТапйАСОАСТТоСАСатадАассаСсовсасаАаст вАТССТаАТССАССАСААСССТОССОМаттсотТасатаста садсаСссессАааастоСацсАаасаавАасвАТоТСатТАСаста еСстТасСАССАТСТатсСтТттТАТСТТСССАСССАаСадсСсацсА дастадлатотааСсАасАаассаасатсататасстастадА тТААСТТСТАСССССОЯСОАаСаССААластасАаатасаАаста вАСААТОаСССТАСАсСАааСааСААСсАаасССАааАддасата
АоСбадаСсАСапАСАССААааАСТоСАССТАСАСаССТадас даСсАссСстТаАсостадаСААсасСсаАСТАСаАаААасСАСс
АдастатАсасстабаддатаАСсСАсСсАасаасстатстА ссссбатаАСсСААсАастТТСсААсСсасаассвсАатасаАСА
АВАСССАСАССТИТОСТоСАТОИСССТОАССССТтаддастас таассассстАдас,аТаТсСсТат СсСсССССААдасссСАдДа вАСАСССТадтадтосдасСаспАссСєстаААла тТадсстасо таатастасАТататоСсСАСосАавАСССТаАдАатадАстТ
СсААТТОСТАСОаТОСсАСОаСатапйААаТаСАСААТасСсСАА вАССАДОССОЯСОСОСсАс,СадласСАатАСААСАаСАСаИаТтАСсСа татаатсАдасИ,аТоСсТСАсСсатоСстТаТасСсАССАСЯАСТОИаСТта
ААТОИСАдаспСАаТАСАдатасСААааТСТоСААСАААаСс стсааСасСССССАТСИАаААААССАТСТОСААДДассСААА саасдасосоСаАдаААСсСАСАаааТаТАСАСССсТаТассоссСАТ ссссасадтадасСстаАССААаААССАсаИатсАаасстатаат состаатсСАААлдаастСстТАТСССАасСсаАсСАтоасСсатааА ставададасААатТасасАасСацАвААСААСТАСААаАС
СсАССсаССТОССОСЯТОАСТасСАСсТОСвАСОСаСТоСтТТСТТосСтТетТ
АСсАаСААХдастоасСсатапАСААсАааСАааатаасСАасСАИс ваАдАсатсТсТсАТастоСаТАТасСАтТадасвстоТасСА
СААССАСТАСАСЯаСАСААСАСОоСТОТОССТатотоСасат
АДА
САСИССТаТтоССАСАСАТАССССАСААТоСАаАаСАТСАДИ стасАаТтТСсАССпАатТАСААДЧАААаАсаАда,аавасТТСАТС
СстадсСсдасСсСсАаАдАддадааАСаАаАТСАТадАастасясь
САСААСсАдасСаТтаАТСАТСААСТОСавАСаастТСсТАССТад тбаасСстадалдааасСТАСТтсАа,аССАаасААатасАсСАТСА состТасСсАСТАССАаАдАдасАСадапААСоосСсТаТатТСсСАССТ вААсСдААдатасасасалаСсатадасаасстадлтасастаассСАа нуклеотидна ССсТаАССТАСААасСАСАдаататАССТаААСИаТаАССАСо
ЗБА послідовність конструкції ШАСААСАСсСсАаасстасАСаАСтоСАСатаАадссасвас мономерний пи ОохХаоЦачсАдастаАТоСТаАТСАССАВААССсСсСсСВсИ,ВсвАатТоТасСсо (51-183) - СНІ" тастассвдсаСсесАасаттоСаасАасаСсосадааАТСТастА вССАСАДАССЯСсСсСсСАасататосстота,оСоСстАасСАа
СсСААДСАаСАСАТСТСССЯСААСАС,СССЯСоСсТасвсастасст сатапААдаАтТТАСТОСССЯЯАХасосатадссататосСтас
ААТТСТасССЯСССТаАСАДОаСЯ асатасСсАСАССТТТОСАС ссатастасаадасаасСсаасостатАстоттадасаасат сатадсдатасссласХастоттавасСАСССАСАССТАС
АТСТаСААСОаТаААССАСАДассСсАасСААСАССАдааТта
Таблиця 97
КДНК і амінокислотні послідовності одновалентної націленої на ГАР (28НІ) молекули з СН-СІ - кросовером із зарядженими залишками, яка містить розділений тримерний ліганд для ОХ40 в злитті з Ес (Кій) (конструкція 6.1). " Позначає заряджені залишки
ЗЕО
ІО Опис Послідовність
МО: 77111111 1ОАСОАСААССТОСААСССААДсТоСТаС 777777777777777/:Ч нуклеотидна послідовність анти- ЕАР (ВНІ), Ес-ланцюг із див. таблицю 2 «западиною» нуклеотидна послідовність легкого! Див. таблицю 2 ланцюга анти-ЕАР (28НІ1
ОМЗНАУРВІОБІКМОЄРТЕУККЕКО РІ ТЗОКЕОБЄІМКМОЮМ5
МИМСраИаквгм' Іі КОЕМЕБОЕМОІ5І НМОКОЕЕРІ РОЇ ККУВ5У
МО МУАБІ ТУКОКУМІ ММ ТОМІ ОБЕНУМасЕ НОМ
РОЕРСМ СсСсСЗаИаСОЗОМЗНАУРВАВІОВІКМОЄТЕУККЕКИаЕ
ІГТЗОКЕОБІМКМООМЗМІИМСОСЕМІ ІІ КЕМЕЗОЕМОІБІ Н
МОКОЕЕРІ РОЇ ККУАЗУМ5І ММАБІ ТУКОКУМІ ММТТОМТ димерний пи ОХ40І (51- БІОСЕНУМОСЕПІНОМРОЕЕСМ СсаасазОСОИСОЗАТМААРБ 355 |183) - СІ"-Ес-ланцюг зі МЕІЕРРЗОВКІ КЗатАБЗУМСИЇ ММЕУРАЕАКМОМУКМОМА ГО «виступом» ЗаМЗОЕЗУТЕООЗКОБЗТУБІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТ
НО 55РУТК5ЕМАСЕСОКТНТСРРСОРАРЕААСОРБУРБІ ЕРР
КРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУЗНЕОРЕУКЕМУ РМУрИаМЕМН
МАКТКРАЕЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОМ МЕКЕУКСКУЗМ
КАЇ ЧАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМУБІ УС
ГУКаЕгЕУРБОІАМЕМЕЗМИСОРЕММУКТТРРМІ ОБраЗЕРІ МК
І ТУОКЗАУМОСОаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУ ТОКБІ БІ РОК
ОМЗНАУРВІОБІКМОЄРТЕУККЕКО РІ ТЗОКЕОБЄІМКМОЮМ5
МИМСраИаквгм' Іі КЕМЕБОЕМОІ5БІ НМОКОЕЕРІ РОЇ ККУВЗУ
З5б мономерний пи ОхХ40Цу М5І ММАБІ ТУКОКУМІ МУТТОМТ5 ООЕНУМас вешІнНОМ (51-183)- СНІ" РОЕРСМ СсОсСОвЗСа,ИаСсЗАВТКаРБЗМЕРІ АРЗЗКОТЗОСИТАА.
СС МЕОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ Та МНТЕРАМІ 0551 51 55
ММТУРБЗБІ ЕТО МІСМУМНКРЗОМТКМОЕКМЕРКЗС ланцюг із «западиною» 14.2 Одержання «ненаціленого» людського ІДС як контролю Е
Контрольна молекула, застосовувана в цих аналізах, позначена як контроль Е (фіг. 46Г), являла собою «ненацілену» молекулу (ОР47, контроль зародкової лінії) людського ЇдС1, що містить мутації РгоЗз29с1у, І ец234АЇїа і Іец235АЇїа для елімінації зв'язування з Ес-гамма- рецепторами відповідно до методу, описаному в публікації Міжнародної заявки на патент УМО 2012/130831. Її одержання описано в прикладі 2.3, в таблиці 29 представлені кДНК і амінокислотні послідовності «ненаціленого» (ОРА7) пиїдат1 РОЇ АГА (контроль Е). 14.3 Одержання націлених на БАР антигензв'язуючих молекул, які містять розділений тримерний ліганд для ОХ40 в злитті з Ес і відповідних контрольних молекул
Кодуючі послідовності націлених і «ненацілених» молекул, які містять розділений тримерний ліганд для ОХ40 в злитті з Ес (Кій), клонували в плазмідному векторі, в якому експресія вставки контролюється промотором МРБУ і який містить синтетичну поліА-послідовність, локалізовану на 3'"-кінці СОБ5. Крім того, вектор містив послідовність Огіг ЕВМ для підтримання епісомальной форми плазміди.
Молекулу, що містить розділений тримерний ліганд для ОХ40 в злитті з Ес(Кіп), одержували шляхом спільної трансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців з використанням поліетиленіміну. Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами. Для варіантів 71, 2, 4, 5 і відповідних контролей Б, Г ї Д застосовували співвідношення 1:1:1:1 («вектор для конструкції димерний ліганд-СіІ-ланцюг "з «виступом»:«вектор для злиття мономерний ліганд-СНІ»:«вектор для анти-РАР-Рар з ланцюгом із «западиною»:«вектор для легкого ланцюга анти-РАР»). Для варіантів 3, б і відповідних контролю В застосовували співвідношення 1:1:11 («вектор для ланцюга ПпиЇдсї1 с із «западиною»-димерний ліганд»:«вектор для ланцюга пиЇдсі Ес з «виступом»-мономерний ліганд»:«вектор для легкого ланцюга анти-РАР»). Людські ІДС, застосовувані як контролі в цьому аналізі, одержували методом, який застосовували для біспецифічної конструкції (для трансфекції застосовували тільки вектор для легкого ланцюга і вектор для важкого ланцюга у співвідношенні 1:1).
Для виробництва в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 300 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 10 хв при 210 х ді супернатант замінювали 20 мл попередньо нагрітим середовищем СО СНО. Експресійні вектори (200 мкг загальної ДНК) змішували в 20 мл середовища СО СНО. Після додавання 540 мкл ПЕЇ розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с та інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕ!, переносили в 500- мілілітрові збовтані колби та інкубували протягом З год при 37"С в інкубаторі в атмосфері з 595
Со». Після інкубації додавали 160 мл середовища ЕхсеїЇ, яке доповнюють бмМ І -глутамін, 5 г/л соєвого пептиду (РЕРБОХУ) і 1,2мМ вальпроєвої кислоти, і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали 1295 Реей (амінокислота і глюкоза). Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням протягом 30-40 хв принаймні при 400 х д. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22 мкм-фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,0195 (мас./об.) і витримували при 470.
Антигензв'язуючу молекулу, яка містить розділений тримерний ліганд для ОХ-40 в злитті з
Ес (Кіп), а також дО, очищали з супернатантів клітинних культур за допомогою афінної хроматографії з використанням білка А з подальшою гель-фільтрацією. Для здійснення афінної хроматографії супернатант вносили в колонку Марзеїесі Зиге (СМ - 5-15 мл, смола фірми СЕ
Неайсаге), врівноважену буфером, що містить фосфат натрію (20мм), цитрат натрію (20мм) (рН 7,5). Незв'язаний білок видаляли шляхом промивання таким же буфером, використовуючи
Зо його в об'ємі, кратному принаймні б об'ємам колонки. Зв'язаний білок елюювали, використовуючи або лінійний градієнт (20 СМ), або східчасту елюцію (8 СМ), буфером, що містить 20мМ цитрат натрію, 100мММ хлорид натрію, 100мММ гліцину (рН 3,0). При здійсненні елюції з використанням лінійного градієнта здійснювали додаткову східчасту елюцію із застосуванням об'єму, кратного 4 об'ємам колонки.
Значення рН зібраних фракцій регулювали, додаючи 1/10 (об./06.) 0,5М фосфату натрію, рн 8,0. Білок концентрували перед внесенням в колонку Ні оай Супердекс 200 (фірма СЕ
Неайсаге), врівноважену розчином, що містить 20мМ гістидину, 140мМ хлорид натрію, 0,01 об.95 Твін2го, рН 6,0.
Концентрацію білка визначали шляхом вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм, використовуючи коефіцієнт молярної екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності. Чистоту і молекулярну масу націленої антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд для ОХ40 в злитті з Ес (Кіп), аналізували за допомогою ДСН-ПААГ у присутності відновника (5мМ 1,4-дитіотреїтолу) і без нього і здійснювали фарбування кумассі
ЗітріеВіце "м Заїебіаіїп, (фірма Іпимйгодеп , США), або аналізували за допомогою КЕ-ДСН, використовуючи пристрій Гарспірохії (фірма (Регкіп ЕІтег). Вміст агрегатів в зразках антитіл аналізували за допомогою колонки для аналітичної гель-фільтрації Т5Каде! 53000 5МУ ХІ. (фірма
То5о!й), врівноваженої рухомим буфером, що містить 25мМ К2НРО 4, 125мМ Масі, 200мМ моногідрохлорид І! -аргініну, 0,0295 (мас./об.) Мам3, рн 6,7, при 257 6.
В таблиці 98 узагальнені дані про вихід і кінцевий вміст мономерів націленої на БАР антигензв'язуючої молекули, яка містить розділений тримерний ліганд для ОХ40 в злитті з Ес (кій) і людського ІДС Раї АГА зародкової лінії ОРА4А7 (контроль Е).
Таблиця 98
Результати біохімічного аналізу націлених на ЕАР молекул, які містять розділений тримерний ліганд для ОХ40 в злитті з Ес (Кій) онструкція д (ЗЕС) мг/л одновалентна націлена на ЕГАР (28НІ1) яка містить розділений тримерний ліганд для Ох40 в злитті з Ес молекула з СН-СІ -кросовером із зарядженими 93 8 197 залишками ' ' (конструкція 6.1)
Приклад 15
Функціональна характеризація націлених антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд для ОХ40 в злитті з Ес 15.1 Зв'язування з експресуючими людський ЕАР пухлинними клітинами
Зв'язування з БАР, що перебувають на клітинній поверхні, тестували, використовуючи клітини УММ-266-4 (АТС СВІ-1676). 0,5 х 105 клітин УММ-266-4 додавали в кожну лунку круглодонних 96-ямкових планшетів для суспензійних клітин (фірма Огеїпег ріо-опе, Сеїїєтаг, каталожний Мо 650185). Клітини фарбували протягом 120 хв при 4"С в темряві в 50 мкл/лунку холодного (47"С) ЕАС5-буфера (0О-ЗФР (фірма сірсо Бу І їе ТесппоЇодіе5, каталожний Мо 14190 326) з БСА (0,1 об. 95, фірма бідта-Аїдгісй, каталожний Мо А9418), що містить в одержаних титруванням кількостях конструкцію антитіла до Ох40. Після трьох промивок надмірною кількістю ЕАС5-буфера клітини фарбували протягом 45 хв при 4"С в темряві в 25 мкл/лунку холодного (472) ЕАСЗ-буфера, що містив кон'югований з флуоресцеїнізотіоціанатом (ФІТЦ) ЕЕ (аб) 2-фрагмент козячого ДО проти людського Ід, Есу-специфічний АйіпіРиге (фірма Часк5 оп
ІттипоКезеагсі, каталожний Мо 109 096 098).
І, нарешті, вміст планшетів ресуспендували, використовуючи по 90 мкл/лунку ГЕАС5З-буфера, що містить 0,2 мкг/мл ОАРІ (фірма Запіа Стги? Віоїес, каталожний Мо 5с-3598) і дані одержували в цей же день з використанням проточного цитометра з 5 лазерами І 5К-Ропезза (фірма ВО
Віозсіепсе, з програмою ОІМА).
Як продемонстровано на фіг. 47А, одновалентна націлена на ЕАР (28НІ) антигензв'язуюча молекула (ГАР-ОХ401І)), яка містить розділений тримерного ліганд для Ох40 в злитті з Ес (КІій), на відміну від негативного контролю Е, ефективно зв'язувалася з експресуючими людський ЕАР клітинами-мішенями. Величина ЕСвхо, що характеризує зв'язування з ЕАР-позитивними УММ-266- 4-клітинами, становила 6,9 нМ. 15.2 Зв'язування з ОХ40- і ЕАР-негативними пухлинними клітинами
Відсутність зв'язування з ОХ40-негативними ЕАР-негативними пухлинними клітинами тестували з використанням клітин А549 Мис їдні м Кеа (фірма Еззепбріозсіепсе, каталожний Мо
Зо 4491), що експресують флуоресцентний білок Мис ідйї Кеа, фарбування яким обмежено ядрами, що дозволяє здійснювати поділ з немічених позитивних за людським ЕАР клітин
М/М266-4. Батьківські клітини А5б49 (АТСС ССІ-185) трансдукували лентивірусом Еввзеп
СеїРІауег МисГіднІ Кеа (фірма Еззепбріозсіепсе, каталожний Мо 4476; ЕР1а, пуроміцин) при МОЇ
З (ТІ/клітину) в присутності 8 мкг/мл полібрена, слідуючи стандартним протоколом Е55еп.
Суміш 5 х 107 немічених клітин УУМ266-4 і немічених клітин Аб549 Мисі ідпї м Кей в ЕАС5- буфері Додавали в кожну лунку круглодонних 96-ямковий планшетів для суспензійних клітин і аналіз зв'язування здійснювали відповідно до методу, описаному в розділі 15.1.
Як продемонстровано на фіг. 47Б, конструкція БАР-ОХ40Ї не зв'язувалася з ОХ40- негативними ЕАР-негативними людськими пухлинними клітинами. 15.3 Зв'язування з експресуючими людський ОХ40 клітинами: наївні і активовані людські мононуклеарні лейкоцити периферичної крові (РВМС)
Лейкоцитарні плівки одержували з центру донорської крові Цюріха. Для виділення свіжих мононуклеарних клітин периферичної крові (РВМСО) лейкоцитарні плівки розводили таким же об'ємом Ю-ЗФР (фірма Сірбсо Бу І їе ТесппоЇодієх, каталожний Мо 14190 326). У 50-мілілітрові поліпропіленові пробірки (фірма ТРР, каталожний Мо 91050) вносили 15 мл Нібзіорадце 1077 (фірма БІСМА Ге Зсіепсе, каталожний Мо 10771, полісахароза (фікол) і діатризоатами натрію, густина доведена до 1,077 г/мл) і нашаровуються розчин розведеної лейкоцитарної плівки на
Ністорадие 1077. Пробірки центрифугували протягом 30 хв при 400 х 9 при кімнатній температурі з невеликим прискоренням без перерви. Потім РВМС збирали з інтерфази, промивали тричі Ю-ЗФР і ресуспендували в середовищі для Т-клітин, що складається з середовища КРМІ 1640 (фірма Сібсо Бу ІШйе Тесппоіоду, каталожний Мо 42401-042), доповненого 1095 фетальної бичачої сироватки (ЕВ5, фірма Сібсо Бу І йе Тесппоіоду, каталожний Мо 16000-044, партія 941273, оброблена гамма-променями, вільна від мікоплазм і інактивована тепловою обробкою при 56"С протягом 35 хв), 1 06.95 сіІшамАХ-Ї (фірма СІВСО Бу
Іїе Тесппоїодієх, каталожний Мо 35050 038), 1мММ піруватом натрію (фірма 5ІСМА, каталожний
Мо 58636), 1 об.95 містить замінні амінокислоти середовища МЕМ (фірма ЗІСМА, каталожний Мо
М7145) І 5ХомкМ р-меркаптоетанолом (фірма 5БІОМА, М3148).
РВМС використовували безпосередньо після виділення (зв'язування людських РВМС в стані спокою) або їх стимулювали для індукції сильної експресії людського ОХ40 на клітинній поверхні
Т-клітин (зв'язування з активованим РВМС). Для цього наївні РВМС культивували протягом 4 днів в середовищі для Т-клітин, доповненому 200 од./мл пролейкіна (фірма Момагії5) і 2 мкг/мл
РНА Г. (фірма 5ІСМА, І 2769), в б-лунковому планшеті для культури тканини і потім протягом ночі в б-лункових планшетах для культури тканини, попередньо сенсибілізованих (10 мкг/мл) антитілом до людського СОЗ (клон ОКТЗ, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Ме 317315) і (2 мкг/мл) антитілом до людського СО28 (клон СО28 .2, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо: 302928), в середовищі для Т-клітин, доповненому 200 од./мл пролейкіна, при 37"С і 595 СО02.
Для виявлення ОХ40 змішували наївні людські РВМСОС і активовані людські РВМСО. Для одержання можливості відрізняти наївні РВМС від активованих людських РВМС наївні клітини мітили перед аналізом зв'язування за допомогою барвника для аналізу проліферації клітин еБіцогб70 (фірма еВіозсіепсе, каталожний Ме65-0840-85).
Для мічення клітини збирали, промивали попередньо нагрітим (377С) О-ЗФР і густину клітин доводили до 1 х 107 клітин/мл в Ю-ЗФР. Додавали барвник для оцінки проліферації клітин егіногб70 (фірма еВіозсіеєпсе, каталожний Ме 65-0840-85) до суспензії наївних людських РВМС в кінцевій концентрації 2,5мМ і кінцевої густини клітин 0,5 х 107 клітин/мл в О-ЗФР. Потім клітини інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі в темряві. Для припинення реакції мічення додавали 4 мл інактивованої тепловою обробкою ЕВ5 і клітини промивали тричі середовищем
Зо для Т-клітин. Потім в кожну лунку круглодонних 96-ямковий планшетів для суспензійних клітин (фірма Сгеїпег ріо-опе, сеїЇбіаг, каталожний Мо 650185) додавали в співвідношенні 2: 1 ж- 1 х 105 суміш мічених еБішогб7О0 людських РВМС в стані спокоюі 0,5 х 105 немічених активованих людських РВМС .
Клітини фарбували протягом 120 хв при 4"С в темряві в 50 мкл/лунку холодного (4"С) ЕАС5- буфера, що містить в одержаних титруванням кількостях конструкції антитіл до ОХ40. Після трьох промивок надмірною кількістю ЕАС5-буфера клітини фарбували протягом 45 хв при 4"С в темряві, використовуючи 25 мкл/лунку холодного (477) ЕРАСб5-буфера, що містить суміш флуоресцентно міченого антитіла до людського СО4 (клон КРА-Т4, ІДС1К миші, фірма
Віо едепа, каталожний Мо 300532), антитіла до людського СО8 (клон КРа-тТ8, Ідс1К миші, фірма
Віо едепа, каталожний Мо 3010441) і кон'югованого з флуоресцеїнізотіоціанатом (ФІТЦ) Е (аб) 2-фрагмента козячого дб проти людського ДС, Есу-специфічного АйіпіРиге (фірма Часкзоп
ІтітипоКезеагсй, каталожний Мо 109 096 098).
І, нарешті, вміст планшетів ресуспендували, використовуючи по 90 мкл/лунку ГАС5З-буфера, що містить 0,2 мкг/мл ОАРІ (фірма Запіа Стги? Віоїес, каталожний Мо 5с-3598) і дані одержували в цей же день з використанням проточного цитометра з 5 лазерами І 5К-Ропезза (фірма ВО
Віозсіепсе, з програмою ОІМА).
Як продемонстровано на фіг. 48А і 48Б, конструкція БАР-ОХ40Ї не зв'язувалася з людськими СО4--Т-клітинами або СО8--Т-клітинами в стані спокою, негативними за ОХ40. На противагу цьому, конструкція ГАР-ОХ40Ї зв'язувалася з активованими СО8:- або СО4-5-Т- клітинами, які експресували ОХ40. Зв'язування з СО4--Т-клітинами виявилося істотно більш сильним порівняно з СО8--Т-клітинами. Активовані людські СЮО8--Т-клітини могли експресувати тільки частину від рівнів ОХ40, виявлених на активованих СО4--Т-клітинах. Рівні експресії ОХ40 залежали від кінетичних особливостей і сили стимуляції і при створенні винаходу умови оптимізували для експресії ОХ40 на СО4--Т-клітинах, але не на СО8:-Т-клітинах. Таким чином, на СО8-Т-клітинах індукувшлась лише незначна експресія ОХ40. Величина ЕС50, що характеризує зв'язування з ОХ40-позитивними СО4-- або СО8--Т-клітинами, становила 0,15нМ. 15.4 Активація МЕ-кВ в Неї а-клітинах, що експресують людський ОХ40 і репортерний ген
МЕ-кВ -люциферази
Агоністичне зв'язування Ох40 з його лігандом індукує передачу сигналів в прямому напрямку бо за допомогою активації ядерного чинника каппа В (МЕ-кВ) (А. 0. УмМеіпрега і ін., У. ГеиКос. Віої. 75
(6), 2004, сс. 962-972). Рекомбінантну репортерну лінію клітин Не а пОх40 МЕКВ ГІ ис1 створювали для експресії людського Ох40 на їх поверхні. Вона несла також репортерний плазмід, що містить ген люциферази під контролем чутливого до МЕ-кВ енхансерного сегмента.
Стимуляція індукуючої Ох40 залежить від дози активації МЕ-кВ, який транслюється в ядро, в якому він зв'язується з чутливим до МЕ-кВ енхансером репортерної плазміди, підвищуючи експресію білка люциферази. Люцифераза каталізує окислення люциферина, що призводить до утворення оксилюциферина, що випускає світло. Це можна оцінювати кількісно за допомогою люмінометра. Таким чином, аналізували здатність різних анти-Ох40 молекул індукувати активацію МЕ-кВ в репортерних клітинах Неба пОх40 МЕКВ Гис1 як запобіжноїо біологічної активності.
Прикріплені клітини Нега пОх40 МЕКВ Гис1 збирали, використовуючи буфер для дисоціації клітин (фірма Іпмігодеп, каталожний Мо 13151-014), протягом 10 хв при З "С. Клітини одноразово промивали О-ЗФР і густину клітин доводили до 1,33 х 105 в середовищі для аналізу, що містить МЕМ (фірма Іпмігодеп, каталожний Мо 22561-021), 10 об.95 інактивованої тепловою обробкою ЕВ5, 1мМ піруват натрію і 1 об. 95 замінних амінокислот. Клітини висували з густиною 0,2 х 105 клітин на лунку в стерильний білий плоскодонний 96-ямковий планшет для культури тканини з кришкою (фірма Огеїпег Біо опе, каталожний Мо 655083) і витримували протягом ночі при 37"С в інкубаторі (Нега СеїЇ 150) в атмосфері з 595 СО».
На наступний день Неа пОх40 МЕКВ Гис1! стимулювали протягом 5 год, додаючи середовище для аналізу, що містить в одержаних титруванням кількостях ГАР-Ох401Ї або негативний контроль Е. Для тестування впливу перехресного гіпер-зшивання антитіл до Ох40 додавали 25 мкл/лунку середовища, що містить як вторинне антитіло Е (ар) 2-фрагмент козячого ІдС проти людського Ідс, Есу-специфічний (фірма Часкзоп ІттипокКезеагсі, каталожний Мо 109 096 098) в співвідношенні 1: 2 (2-кратне перевищення кількості вторинного антитіла по відношенню до первинного антитіла). Після інкубації супернатант аспірували та планшети промивали двічі Ю-ЗФР. Кількісне визначення випускання світла здійснювали з використанням системи для аналізу люциферази 100 і репортерного лізуючого буфера (обидва фірми Рготеда, каталожний Мо Е4550 і каталожний Мо Е3971) згідно з інструкціями виробника. В цілому, метод полягав у наступному: клітини ціалізувалися протягом 10 хв при -20"С шляхом
Зо додавання 30 мкл на лунку 1-кратного лізуючого буфера. Клітини піддавали відтаванню протягом 20 хв при 37"С, після чого додавали 90 мкл на лунку реагенту для аналізу люциферази. Випускання світла негайно оцінювали кількісно за допомогою рідера для мікропланшетів ЗресігаМах М5/М5бе (фірма МоїІесцшаг Оемісе5, США), використовуючи тривалість інтегрування 500 мс, без будь-якого фільтра для обліку всіх довжин хвиль. Відносні одиниці випускання світла (ШКІ) коректували з урахуванням вихідної люмінесценції клітин
Нега пОх40 МЕКВ І ис і будували графік залежності від логарифма концентрації первинного антитіла, використовуючи програму Ргізіт4 (фірма СгарпРай Зопймжшаге, США). Криві апроксимували на основі закладеної в програму сигмоїдальної дозової відповіді.
На фіг. 49 представлені дані, що демонструють, що обмежена залежна від дози МЕКВ- активація індукувалась вже при додаванні ЕАР-Ох40І (лівий графік) до репортерного лінії клітин. Перехресне гіпер-зшивання ГАР-Ох40Ї за допомогою антилюдських ІдсС-специфічних вторинних антитіл підвищувала індукцію опосередкованої МЕкВ активації люциферази в залежності від концентрації (правий графік).
Далі при створенні винаходу тестували здатність ЕАР-Ох40Ї активувати МЕКВ на основі перехресного гіпер-зшивання конструкцій при використанні ліній ЕАР»-клітин пухлини.
Тестована лінія пухлинних клітин являла собою лінію МІН/3Т3-пигАР, клон 39. МІН/ЗТ3-
ПЧЕАР, клон 39 створювали шляхом трансфекції лінії клітин фібробластів мишачих ембріонів
МІН/ЗТЗ (АТСС СВІ -1658) експресійним вектором рЕТК4921 для експресії ПИЕАР при селекції пуроміцину в концентрації 1,5 мкг/мл. Експресію БАР на поверхні кількісно оцінювали за допомогою набору ОицйїйКкії (фірма Сако, каталожний Мо КОО078) згідно з інструкціями виробника.
Первинне антитіло, що застосовується для визначення експресії ЕАР на клітинній поверхні, являло собою перехресний реактивний людський/мишачий клон Е11-24 (мишачий Ідс1, фірма
СаіІріоспет, каталожний Мо ОРІ188). Рівень експресії на поверхні МІН/3Т3-пиБАР клону 39 становив приблизно 90000 ПигГАР на клітину.
Відповідно до описаного вище методу прикріплені клітини НеГа пОх40 МЕКВ Гис1 культивували протягом ночі при густині клітин 0,2 х 105 клітин на лунку і стимулювали протягом 5 год середовищем для аналізу, що містить в отриманій титруванням кількості ЕАР-Ох40. Для тестування впливу перехресного гіпер-зшивання в результаті зв'язування з присутніми на клітинній поверхні ЕАР спільно культивували 25 мкл/лунку середовища, що містить ЕАР"- бо клітини пухлини МІН/3Т3-ПпиРАР, клон 39, в співвідношенні 3: 1 (вміст на лунку БАР « -клітин пухлини в тричі вище, ніж репортерних клітин). Активоване МЕКВ кількісно оцінювали, вимірюючи випускання світла за допомогою системи для аналізу люциферази 100 і репортерного лізуючого буфера (обидва фірми Рготеда, каталожний Мо Е4550 і каталожний Мо
ЕЗ3971).
Як продемонстровано на фіг. 50, присутність експресуюючих ЕАР пухлинних клітин значно підвищувало індукцію опосередкованої МЕКВ активації люциферази, коли додавали ЕАР-ОХ40І.
Визначали площу під кривою для відповідних представлених кривих дозової залежності як маркера агоністичної здатності кожної конструкції. Як продемонстровано на фіг. 50Б, присутність на клітинній поверхні БАР гарантувало більш високий рівень перехресного зшивання і в результаті більш виражену агоністичну активність ЕАР-Ох40ї, ніж додавання Ес- специфічного вторинного антитіла. 15.5 Опосередкована ОХ40 костімуляція субоптимально індукованих ТОК людських РВМС в стані спокоюї перехресне гіпер-зшивання за допомогою ЕАР, присутнього на клітинній поверхні.
В прикладі 15.4 було продемонстровано, що додавання ЕАР:-клітин пухлини може призводити до сильного підвищення активності МЕКВ, індукованої націленим на ЕАР ОХ40Ї, в людських Ох40-позитивних репортерних лініях клітин за допомогою вираженої оігомеризації рецепторів ОХ40. Крім того, при створенні винаходу тестували конструкції ЕАР-ОХ40І в присутності клітин МІН/З3Т3-пПиБАР, клон 39, по відношенню до їх здатності підтримувати субоптимально стимуляцію ТОК РВМС-клітин в стані спокою.
Препарати людських РВМС містили (1) Ох40-негативні СО4-- і СО8:-Т-клітини в стані спокою і (2) антигенпрезентуючі клітини, що несуть різні молекули Есу-рецептора на своїй поверхні, наприклад, В-клітини і моноцити. Антитіло до людського СОЗ людського Ідс1-ізотипу може зв'язуватися за допомогою своєї Ес-області з присутніми молекулами Есу-рецептора і опосредковувати пролонговану активацію ТОК Ох40-негативних СО4-- і СО8:-Т-клітинах в стані спокою. Потім ці клітини протягом декількох годин починали експресувати Ох40. Функціональні з'єднання агоністи Ох40 можуть передавати сигнал через рецептор Ох40, присутній на активованих СО8ч- і СО4--Т-клітинах, і підтримувати опосредковану ТСК стимуляцію.
Мічені СЕБЕ людські РВМС в стані спокою стимулювали протягом 5 днів узятим в субоптимальній концентрації антитілом до СОЗ в присутності підданих опроміненню клітин
Зо ЕАР:-МІН/ЗТЗ3-пиБАР, клон 39 ії ЕАР-Ох40І. в одержаних титруванням кількостях. Аналізували вплив на виживання і проліферацію Т-клітин, здійснюючи за допомогою проточної цитометрії моніторинг загальної кількості клітин і концентрації СЕЗЕ в живих клітинах.
Збирали клітини мишачих ембріональних фібробластів МІН/3Т3-пПиБАР, клон 39 (див.
Приклад 15.4) з використанням буфера для дисоціації клітин (фірма Іпмігодеп, каталожний Мо 13151-014) протягом 10 хв при 37"С. Клітини одноразово промивали ЮО-ЗФР. Клітини МІН/ЗТ3-
ПЧЕАР, клон 39 культивували при густині 0,2 х 105 клітин/лунку в середовищі для Т-клітин в стерильному круглодонному 9б-лунковому планшеті для культури тканини (фірма ТРР, каталожний Мо 92097) протягом ночі в інкубаторі ( Нега СеїЇ 150) при 37"С і в атмосфері, що містить 595 СО». На наступний день клітини опромінювали в рентгенівському опромінювачі дозою 4500 радій для попередження подальшого надмірного розростання людських РВМС під впливом пухлинних клітин.
Людські РВМС виділяли шляхом центрифугування в градієнті густини фікола згідно з процедурою, описаною в прикладі 15.3. Потім клітини при густині клітин 1 х 105 клітин/мл мітили
СЕБЕ з використанням СЕОА-5Е (фірма Зідпта-Аїйгісй, каталожний Мо 2188) в кінцевій концентрації 5ОнНМ протягом 10 хв при 37"С. Після цього клітини двічі промивали надлишком О-
ЗФР, що містить ЕВ5 (10 об.95). Мічені клітини витримували в середовищі для Т-клітин при 377 протягом 30 хв. Потім видаляли неконвертований СЕЮБА-5Е, здійснюючи дві додаткові стадії промивання Ю-ЗФР. Мічені СЕЗЕ людські РВМС в стані спокою додавали в кожну лунку при густині 0,5 х 105 клітин/лунку. Додавали антитіло до людського СОЗ (клон МО, людський ІДС1, описаний у Коагідцез та ін., їпї У Сапсег Зиррі 7, 1992, сс. 45-50 ії в О5 6054297) до кінцевої концентрації 20нм і додавали БАР-ОХ40Ї в зазначених концентраціях. Клітини активували протягом 5 днів при 37"С і в атмосфері, що містить 595 СО», в інкубаторі (Нега Сеї! 150). Потім фарбували поверхню клітин кон'юЮгтованими з флуоресцентним барвником антитілами до людського СО4 (клон КРА-Т4, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 300532) ії СО8 (клон КРа-тТ8, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 3010441) протягом 20 хв при 4"С. Після здійснення стадії промивання ЕАС5-буфером клітини ресуспендували в 85 мкл/лунку ГАСЗ-буфера і аналізували з використанням проточного цитометра Еогіезза з 5 лазерами (фірма ВО Віозсіепсе, програма рІМА).
Як продемонстровано на фіг. 51, перехресне гіпер-зшивання конструкцій ЕАР-ОХ40Ї. в бо результаті присутності клітин МІН/3Т3-пПиБАР клону 39 виражено посилювало проліферацію
(див. Графіки, озаглавлені як «події», на верхній панелі) та виживання (див. Графіки, озаглавлені як «проліферація », на нижній панелі) стимульованих ТОК людських СО4-- та СО8:-
Т-клітин. Агоністична дія РЕАР-ОХ40Ї. була менш виражена по відношенню до СО8--Т-клітин, ніж по відношенню до СО4--Т-клітин, що узгоджується з більш низьким рівнем експресії ОХ40 на людських СО8--Т-клітинах.
Процитовані посилання:
Азсіепо Р. А., Е. бітеопе, М. 52пої, У. Х. Ри і І. Меїйего, Сіїпіса! ехрепепсев м/йй апіі-С0137 апа апіі-РО1 ІШНегарешіїс апіїбодієв, 5етіп Опсої! 37, 2010, сс. 508-516.
Аддагма! В.В., Зідпаїйп9 рашШшуаувз ої Ше ТМЕ зирепатіму: а дошбіє-еддей вумога, Маї. ВНем.
Іттипої. З(9), 2003, сс. 745-756.
Ваппег 0. та ін., Стувіа! вігисіцге ої Ше 5оїШріє питап 55 Ка ТМЕ гесеріої-питап ТМЕ реїа сотріех: ітріісайопв їог ТМЕ гесеріог асіїмайоп, Сеї! 73, 1993, сс. 431-445.
Водтег 9., Зсппеїдег Р. і Твеспорр 9., Те тоїіесшціаг агспіїтесіиге ої Ше ТМЕ зирепатіу, Ттепав іп Віоснетіса! бсіепсез 27(1), 2002, сс. 19-26.
Вгої! К., Віспіег с., Рашу 5., Ноївіаєдіеєг РЕ. і Зспмаг2 Н., СО0О137 еаргезвіоп іп Штог меззеї маїїв, Нідй соїтеїайоп мА таїїдпапі (тогв. Ат У Сіїп Раїної 115, 2001, сс. 543-549.
Виеснеїе С., Ваеззієї Т., 5Ссптівдеї! В.)., зспитаснег С.Е., Сто55е-Номезі І.., Вінід К. і Заїїйп
Н.В., 4-188 Іїдапа тоашіагтез аїгесі апа Апихітабр-іпдисейд МК-сеї! геасіїмпу іп спгопіс Іутрпосуїїс
ІеиКетіа, Єиг У Іттипої 42, 2012, сс. 737-748.
Сної В.К., Кіт МУ.Н., Кижоп Р.М., ее 5.0., Капд 5.МУ., Кіт М.5., ее М.9. і Кмоп В.5., 4-188
Типсійоп5 аз а 5игмімаї Тасіог іп депатііс сеїїв, ) Іттипої! 182, 2009, сс. 4107-4115.
Сцадго5 С., Юотіпдие? А.Г., Гопі Р.Г., Стой М., Міцег ВА.5., Вогудвігот Р. ї Гивідапеп ..,
Массіпайоп м/йй депаптйіс сеї риївей м/йй ароріоїйс їитоїв іп сотбріпайоп м/йй апії-ОХ40 апа апіїі-4- 188 топосіопаї апііродієв іпдисез Т сеїІ-тедіаїеа ргоїесіїме іттипйу іп Нег-2/пеи мапздепіс тісе,
Ії У Сапсег 116, 2005, сс. 934-943.
Ситап М.А., Кіт М., Мопіаїмо МУ/., АІ-ЗпаткнНангпі А. і Аїізоп У.Р., Сотбріпайоп СТІ А-4 ріоскаде апа 4-188 асіїмайоп еппапсе5 Штог ге)есіоп Бу іпстеабзіпа Т-сеї! іплйгайоп, ргоїїегайоп, апа суюкКіпе ргодисійоп, РІ о5 Опе 6, е19499, 2011.
ОієніІ С., мап Мієпо С.9., деп Воєг А.Т., мап дег Мооп Е., Егапзєп М., мап Возівїєп Ї.,
Зо Ктітрептогі Р., Меїїєї С.)., Мішег А., Тое5 В.Б. і ОйПіпда В., Іп мімо Міддегіпд (годи 4-188 епарієз Тп-іпаерепаепі ргітіпу ої СТІ. іп їйе ргезепсе ої ап іпіасі СО28 совіїтиціаюгу раїймжау? у
Іттипої! 168, 2002, со. 3755-3762.
Бибгої у., МіІНеїго Е., АМаго С., Раіагоп А., Мапйіпе2-Еогего І., Реге7-Сгасіа 9.Ї., Могаїев5-
Казігезапа А., ВКотего-Ттєме|о 9У.Ї., Оспоа М.С., Негуаз-5іШЬр5 5. та ін., Ттєайтепі м/йй апії-
СО137 тАБре5 сайвзеб5 іпівпбе асситшиайопе ої мес їТ осейв ом/ййпоці зеїесіме апійштог іттипоїНегареціїс еПесів іп їпі5 огдап, Сапсег Іттипої! ІттипоїНег 59, 2010, сс. 1223-1233.
Ешадама Т., АКіра Н., Кодата Т., ТаКеда К., Нозода У., Мадіїа Н. і ОКитига К., Ехргезвіоп апа тпсїйоп ої 4-188 апа 4-188 Іїдапа оп титгіпе депаніс сеїІв, Тиї Іттипої! 14, 2002, сс. 275-286.
Сицо 2., Спепад 0., Хіа 7., цап М., Ми Г., Мапд а. і 2папд 5., Сотбріпед ТІМ-3 ріосКаде апа
СО0137 асіїманоп аногаз Те Іопд-їепт ргоїєесіоп іп а тигіпе тоавї! ої омагіап сапсег, / Ттапві Мей 11, 2013, с. 215.
Неїпізси І.М., Оаїдіе І. КпоріПї В. і бітоп Н.О., СО137 асіїмайоп абгодаїе5з дгапиіосуїе- тасгторпаде соІопу-5іїти|айпо Тасіог-теаіатей апіі-ароріовзіє іп пешторпіїв. Ек ) Іттипої! З0, 2000, сс. 3441-3446.
Нотід М., Кептег У., Егєу К., Оіероїідег Р., Копівєптапп В.Е., Миеїег О., Сотбіпайоп ої а рівресіїс апіроду апа собвійтшаюгту апіїроаду-їдапа Тибіоп ргоїєїп5 ог їагдеїєд сапсег іттипоїПпегару, у. ІттипоїНег. 35, 2011, сс. 418-429.
У 5.А., Спеоп 5.Н., Рак 5.М., Тат М.О., Кіт М.М., Ап МУ... і Кіт В.5., Егадісайоп ої евіаріїєпей гепа! сеїЇ сагсіпота Бу а сотрбіпайоп ої 5-Пиогоцгасії апа апіі-4-488 топосіопаї апіїроду іп тісе, Іпі У Сапсег 122, 2008, сс. 2784-2790.
Кієпле с. и моп Кетрів 9)... С0137 (ПП А/4-188), ехргеззед Бу ргітагу питап топосуїев, іпдисе5 топосуїе асіїмайоп апа ароріовів ої В Їхтрпосуїев. п Іттипо! 12, 2000, сс. 73-82.
Кіт О.Н., Спапа М/.5., І ее У.5., І ее К.А., Кіт У.К., Кмоп В.5. і Капу С.У., 4-188 епдадетепі совійтцагев МК сей асімайоп ап ехасефбафє5з МКТ сеї Ідапа-іпдисед / аірмау
Ппуреітезропвімепе55 апа іпїтаттаїйіоп. У Іттипої! 180, 2008, сс. 2062-2068.
Кіт У.Н., Спої В.К., Оп Н.5., Капа МУ.)., Мішег В.5. і Кмоп В.5., Меснапізтв5 іпмомед іп зупегаїівіїс апіісапсег еПесів ої апіі-4-188 апа сусіорпозрпатіде ІНегару. Мої Сапсег Тег 8, 2009, со. 469-478.
Кмоп В.5. і М/єіввтап 5.М., СОМА зедиепсевз ої їмо іпдисіріє Т-сеїЇ депе5. Ргос Маї! Асай 5сі (510) у 5 А 86, 1989, сс. 1963-1967.
Ї се Н., Рак Н.У., ЗоНп Н..., Кіт У.М. і Кіт 5.)., Сотбріпаюгіа! Інегару юг Імег теїавіаїййс соЇоп сапсег: депатйіс сеї массіпе апа Іом/-дозе адопівіїс апіїі-4-188 апіїрбоду со-віїтиіаюгу 5ідпаї!. У 5иг9
Вез 169, е43-50, 2011.
Ї еміївКу У., де Сатроз-ї іта Р.О., Егізап Т. і Мазиссі М.С., ТНе сіопа! сотрозійоп ої а реріїде- 5ресіїйс оїїдосіопа! СТІ. гтерепоїге зеїесієдй іп гезропзе іо регзізіепі ЕВМ іп'есійп і5 5іабіє омег ійте.
У Іттипої! 161, 1998, сс. 594-601.
Її КЕ. ї Намеїсп ..М., Іппірйогу ЕГсдатта гесеріог епдадетепі агїмез5 адіимапі апа апіі-шШтог асіїмніез ої адопівіїс СО40 апіїбодієв. Зсієпсе 333, 2011, сс. 1030-1034.
Мп Му., МозКепе5 0.)., 7Напд Х., Зспіпаієг О0.сх., Моса А., Вигсп Е., МУ/вї У., Спеп І.., Тіап (.,
Татада К. та ін., Ес-дерепаепі ехргев5 ої СО137 оп питап МК сеїЇв: іпвіднів іпіо "адопівіїс" енесів ої апіі-СО0137 топосіопаї апііродієв. Віоса 112, 2008, сс. 699-707.
Меїего 1І., допп5іоп У.М., Зпийога МУ. Мішег А.5. і Спеп Г., МКІ.1 сеї ехргез5 4-188 (СОмж137) совіійтааюгу тоїесце апа аге гедцітєй ог Штог іттипйу еїїсйей Бу апіі-4-488 топосіопаї апіїбодієв. Сеї! Іттипої! 190, 1998, сс. 167-172.
Меїего І., Зпитога ММ. Мембу 5.А., АгиМо А., І едбрецег У.А., Неїївігот К.Е., Мішег А.5. і Спеп
Г., Мопосіопаї! апііродієз адаінві Ше 4-188 Т-сеї!Ї асімайноп тоїіесшіе егадісаїе евіаріїзпейд їтогв.
Маї Меа 3, 1997, сс. 682-685.
Мегснапі А.М., 2пи 7., Мцап 9.0)., содаага А., Адатв С.МУ., Ргевіа І. і Сапег Р., Ап ейісієпі гоціє о питап Бізресіїіс ІДС? Маї Віоїеснпо! 16, 1998, сс. 677-681.
МогаІе5-Казігезапа А., зханМатеа М.Р., Воагідне? І., Раіа2оп А., Мапіпе2-Рогего І., І аріапо
З., Негулаз-5іШрО5 5., Запдго В., Оспоа С., НКоигаці А. та ін., Сотбріпед іттиповіїтшіагу топосіопаї! апіїбодіє5х ехівпа зигуїма! іп ап аддгезвзіме Маподепіс пераїсеїІшаг сагсіпота тоиве тоадвеі. Сіїп Сапсег Нез 19, (2013, со. 6151-6162.
МиеїІег О., Егеу К., Копівптапп Н.Е., А поме! апіїбоду-4-188І Тивіоп ргоївіп ог іагдеїва со5ітшайоп іп сапсег іттипоїНегару, у. ІттипоїНег. 31, 2008, сс. 714-722.
Мигійо О., Оибгої .., Раїіагоп А., Агіпа А., АгріїїКкиєїа А., АМаго С., 5оїапо 5., Оспоа М.С.,
Вегазаїп С., Савбаїгі І. та ін., Іп мімо дерієїоп ої ОС ітраї5 Ше апіі-штог еїМесі ої адопівіїс апіі-
СО137 тАБ. Єиг У Іттипої 39, 2009, сс. 2424-2436.
Магалакі Н., пи М. о Її. йНи а. ії Спеп ГО. 00137 адопіві апіїбоду ргемепів сапсег
Зо геситепсе: сопітршіоп ої СО137 оп роїй Петаїороївїїс апа поппетаїйороієїїс сеїІв. Віоса 115, 2010, сс. 1941-1948.
Мівпітоїо Н., ее ЗЛМУ., Нопа Н., Роцег К.а., Маєда-Хататоїйо М., Кіпозніа Т., КаулаКаті У.,
МішШетг А.5., Кжоп В.5., Маге С.Р. та ін., Совіїтціайоп ої таві сеї Бу 4-188, а тетрег ої Ше їмтог песговів Тасіог гесеріог зирепатіу, мій Ше підп-аніпну ІДЕ гесерюг, Віоса 106, 2005, со. 4241-4248.
Оіоїввзоп Р.5., Зодегвігот Г.А., УУадзаїег О0., ЗПпеїКкіпе У., Осауа Р., І апо Е., Вари С., Спеп Г.,
Ацаїїйо М., А!йКгтибі Р. та ін.,, СО137 ів ехргезвей іп питап аїПегозсієгоб5із апа рготоїев демеіортепі ої ріадне іпПаттаїйіоп іп пурегсПоіевіегоЇєтіс тісе. Сіксшайоп 117, 2008, сс. 1292- 1301.
Раїагоп А., Теї|вїга А., Мапіпе2-Рогего І., Негу/аз-51Шррз» 5., Вопсаї! С., Репивєїавз І., Юибгої ..,
Могаїез-Казігезапа А., Реге7-Стгасіа 9У.Ї., Осноа М.С. та ін., Адопівї апіш-СО137 тАБ асі оп Штог епаоїНеїа! сеї Юю епрапсе гестийтенпі ої асіїмаїєд Т Іутріосуїез, Сапсег Вез 71, 2011, сс. 801- 811.
Зспуаг? Н., МаїІргасні у)., ТисКууеї! У., моп Кетрів .). і І ої М., ІА, те питап 4-188 потоіодиє, ів іпаисіріє іп Їитрноїйа апа оїнег сеї! Іпеадезв. Віоса 85, 1995, сс. 1043-1052.
Зпао 7. і Зспула!?7 Н., СО137 Іїдапа, а тетбег ої Ше Штог песговів Тасіог Тату, тедшіатев іттипе гезропзез міа гемегзе 5ідпа! апзаисіоп, у ГГ ешКос Віо! 89, 2011, сс. 21-29.
Зі МУ. і Зіетапп ОЛМУ., Ацдітепієйд апіопухолев ейесів ої гадіайоп Іпегару Бу 4-188 апіїроду (8М5-469492) ігеаїтепі, Апіїсапсег Нез 26, 2006, сс. 3445-3453.
Зітеопе Е. і Авсіейо Р.А., Іттипотоашіайпу апіродієє іп Ше ігеайтепі ої теїавзіаїййс теїапота: їШїе ехрегпепсе м/йп апіі-СТІ А-4, апіі-СО137, апа апіі-РОТ, У Іттипоїохісої 9, 2012, сс. 241-247. зЗпеї! ГОМ., іп С.Н., МеРНегзоп А.)., Могаєз Т.. і Майзг Т.Н., Т-сеї! іпігіпвіс енесів ої СІТА апа 4-188 дигіпа міка! іптесіп апа сапсег іттипоїНегару. Іттипої! Нем 244, 2011, сс. 197-217.
Зіа9а9 «., Гої 5., ОімізеКега О., Мдіом 5.Е., Оигеї Н., Мадіїа Н., Тепа М.МУ. ії 5туїй М..., апіі-
ЕпЬВ-2 тАБ ІНегару гедиігев їуре І апа ІІ іптепегоп5 апа зупегдігев м/йй апіі-РО-1 ог апіі-С0137 тА ІНегару, Ргос Маї! Асай 5сі 0 5 А 108, 2011, сс. 7142-7147.
Тепд ММУ., ЗНагкеу 9., Мсіацдніїп М.М., Ехієу М.А. і туї М.у., СОТа-разед сотріпаїйоп
Іегару егадісаїез евіабіїзней Шштогтгз іп тісе. / Іттипої! 183, 2009, сс. 1911-1920. (510) моп Кетрів .)., Зспмаг: Н. і І ої2 М., Ойегепііайоп-дерепаепі апа віїтии5-5ресіїіс ехргезвіоп
ОГІГА, Те питап 4-188-потоіодие, іп сеїЇ5 ої тезепспутаї огідіп, Озівоаннтййв Сапііаде 5, 1997, со. 394-406.
Муеї Н., 7Нао І... 1 МУ. Рап К., Оіап МУ., Нои 5., Мапа Н., Оаї М., Неїзігот І., НеїЇвігот К.Е. і
Сицо У., Сотбріпайога! РО-1 ріосКаде апа СО137 асіїмайноп Назв Шегареціїс ейісасу іп тигіпе сапсег тоаве!5 апа зупегаі2е5 м/п сівріацйіп. Рі о5 Опе 8, е84927, 2013).
ММсох В.А., Спаромаї! А.І., Сбої5Кі К.5., Оївції М., піп Т., Ніез О.В., Татада К., Мішег В.5.,
Твиспіуа Н., Рагао!! О.М. ії Спеп Г., Сиціпуд едде: Ехргезвіоп ої Тпсіопа! СО137 гесеріог Бу депанйніс сеї, У Іттипої! 168, 2002, сс. 4262-4267.
Мсох В.А., Татада К., Ніїез О.В., 7пи с., Спаромаї А.І., Віалаг В.В., Кавзі М.М. і СНеп І.,
МПдайоп ої СО0137 гесеріог ргемепів ап гемегзе5 евіабіїзней апегау ої СОва суюїуїйс Т
Іутрпосуїез іп мімо. Віоса 103, 2004, сс. 177-184. 7папд М., Задип В.Е., Ага В.5., Нападап М.І/., Заспзтап 5.М., Міеп М, Кнамлі Г.А., Ни Р.,
Ерзівіп А.Ї., Тагдеївйд апа ипіагдеїєд СО1371 тивіоп ргоївіп5 ог Ше іттипоїНегару ої ехрегітепіаї! зоїїа Штогв, Сіп. Сапсег Вев. 13, 2007, сс. 2758-2767. 7папд Х., МозКепв С.., ЗаїІп М., Мапіаг А., Мопієв С.І., 7папо М., іп МУ., Гі с., Витгсй Е., Тап
М. та ін., СО137 рготоїез ргоїїТегайоп апа 5игміїма! ої питап В сеї, ) Іттипої! 184, 2010, сс. 787- 795.
вАт-Я ЗИ
ПЕРЕДІ ПЕСЛІДОВНЕЄСТЕ Й
«фН жо хоОФЕаМмАНН-ЙЯ АГ - «ЗЛО» АНТИГЕНЗВ'ЯЗУЮЧІ МОЛЕКУЛИ. ЯКІ МІСТИТЬ ТРИМЕРНИЙ НІГАНД лХЕМЕКСТВА ТЕ «Мо во що «Бк квІАЇЗІ0О. «11 2014-33-14 «МНЕ кві чіи3735.5 «Ві 203-05-45 «850 овВіБіВаі147.и «15ї» 2015-04 «МЕ: 375 «Ви» оБасептівй, версія 3.5 ке М «ВІ» ЗК «важ КНТ чаї» вом Варта
ДІМ,
Ох 3 дга) біз біт го бів рем бевс его Ар оАВИ Бе АН ОБІіЖ вва вк) АЖВ я т з й хх. х З їй 15 зей ага пі пі МековвБже Аів бів без о Уаї Аїз Фів дал уві ім вм ой не і о КД за кл -х б м . Фодлати се ку сек і ша п пучку лету з ц з ги Се щі АВ сіу Бгто їви бе отв Тує ет Ах о вго бі ев Дів 3) ма о Ах жк оіжв о тТНЕ о б)іУ біу ви пеготук бує пів Абротвк вуз Фіз сей уві
За БЕ щ ха а ії :,5 З ках фе ту сг в щі: ЖЕ: - їх Ка КБ их
Уві Аїа уз Аза біу Уві Туг о Туг маф вна йо» Фів гец Б о реб Ато цх т та БВ ака Уві Уві Аїд обі бів бі ве о біу его УІ баб ов АТ БИ МІВ
І 85 що ях ів бій веб рев Ага Зако аій аїв бі вій дів Аа ее 8ій рев о таг
Ммю М ца че . ех З страниц ох вАТ-З17О-5ЕВ
Уві др іо Его бго дід БР о пег бі АТ Ага АВ 5Ве АЇВ Ве іх 7 Зк пох М ре й 115 їх 125
Ре бів Шіу Ага фев оіФц нів іФи беагоАіа 5іУ бів дгф рем цім ді
Мі бе нів тТвгеоБів дів АкО Аа ка ні» дів тїКробій ев отак бів зах ії 155 ї165а піУу Аа те УВІ вч Біх ізо БЕ до УВІ ТвгоВе бін Хі РКО АТА ще КК КИ
МО 17 АТ
Зі де вгОо Бак овга Ага вк ТВ м логуг й ї5о
Вар ток «ех ММ «вії ВИХ «13 Ново сарі «НМ 8 іжи Ар оман Ага Бій сі кет БВ Аа бів гло Уді Аїв оціп дв ма ів рем ЩІ18 Азвобіу Бо сен Ваг отРи Тук Зег дев Бго 1у ем АТВ
КІ 25 їй ж сЯ «03 УКХ ще при чин . Зм еліту 3 кома ширу туя зв лах ма тм шоу бі уУуді пЕР БеЗИц ТТ: бі іх Ба баг тТУК БУ ЦІМ Ап ТИК бух ОЦ зе ки 7 й ях Й
КІ хи ЗУ мам УВІ мді А1В КУ Аїд 15 ав тую ТУук о уві РБе рве пія Бон о біцч ща 55 Ба кої: - п щі че НЕ м щу п и о и чн и кече чн з ім Ага АТО Ві Уа! АТа сію січ біу бек біу бекочаї Зебове; дів
Ва Уа зх що ів мів фаз Бій ргОо ем ага ог Аіа АЇа Фіу Ав із АВ їву АЇВ івем тнк чаї АБО ім го РКО віз Заг ошег бін Вів Ага дяп хак дів
Ач арк -- рок. іо г 310 стІзницВ г
НН Й вата лек І вве о біу вай осі бі Ага фен оїаз Ні зец Заг дія Сім со1в Аг вфац 135 й щі 32 ж УК З
ДОМ І Уч чів ма вче ги мі: чівкозівз йід дгб дів де нії дід Тут бі івц щвіІіУ УВІ Ні СВУ мі отТийК Бі мій дер АВ г МІВ Дія Тр обр оСоц
Те ошій ім АТвотТвгоУві іевц біж феци вве оаго Уді тТВе Бо Є» Ті 150 155 і5 кто Аів бі ви Ву бек ого Ага бер обін їв їт0 «аіМ ух «Вій» БЕ «Ії Кн жави
Акробго АЇВ Оу зем їли Ароіїеу Ак біз 0іу мах вве дів одій ке) ї 5 їй 15
УВІ АТа сів ап ві фе ізн їі азо пі РКО ви Бек тер отТук Зах чех БУ 7 зу 7 ки «У Б
Ази вка пік іч від бі маї Зегбове)в ївВе обі сі вки бек Ту рух
Зк і ях 7 "ак й ї ше 5 шім Ахо о тТвк гу бір офіц за) Уві АТа гу АТ бі та) тує Тук уд вна вна сів ваенозіс ви аку дк уві уві дід піу бів бі Зак обБіх
Ба 7З 75 М цет Уві Чет оіши вій фе нія рев бій Рго іву Аго Уег о АЇз дій сію
Аіа аіа Аїд івц Аїд ген твг о Уді Аз оре рго Ко АТа Кжковжг 1 їй че та ліз Ага аза ог дів вВбе обі вНе бів бі ага їву вм ніх ів чег бук оз х м п 115 АКИ АК із обіє бів Аг фен обі ма! Міз шо ніз тТВу із Аа дгу АТХ АКГО сплювнича З
ВАТ КЕ
130 135 її ні5 ів Тео бів їжи ТВ ойій піУу Аді твВтг УВІ Бец обі рец вне ага 1435 15 355 і50
Уві твЕ вро Фіц ті орг АЇв обіу ев оБго Зако Ага щеє Фі жиЕх 7 м М чУд
ВЖИ 19 Ко Ма «я «Еф В
Фе пе хаїйе БВ ча их штат их -- «213» ноше хаб аЙпк «У 4 вто стг» оАЇв ма! 5агошіу Аіа аго діа пог Бро бі Зак одів дів ак ї 5 3 іх що то г кміо й ри ут: яв» суне М; лок; йуг ни: хг ко и М
Бго Ага без Ага ОБ Оіу рга обів веб Заг орРео др дев о Кго АТа сіУ й Кей Й ЕК зо и Се ке ен їв; Азрогво Ага бів сі Меї вйе АТХ Фів ев АТ АЇВ ців дп 35 48 5 чаф емо ваз їі дер одіу Бгто о фвц чего Тк оуук бек АхвовкОо шіу веу 50 5 БО в я чо кг й сі т сті умію Між тях мч ь зу кі її
Аїа шіу уві Жагофем їВгопіу бік бац веб о тук вуз З1М АБО ТБг рух
З ЩЕ У
55 То 75 БО
Зів бец Уві Уві вів Був Вів Бім УКР о тТуг Тук мні вва ввж Обі фе
В ЗУ ів бер око Ага ді УР Аза сі бій б1іу Заг обіу бег уді 5вг о гг до Ак уче
МЕ 105 що дів ів) Ні зв» одіп вко ім Агеб о дег Аа АТ бі АЇв лів АВ КЕО
ХУ ї8 125 3 г сук шт п з м п "и мі ше. ліз іє тне Уа дкроіви го вко дід чего одек о Бів Аза Аго дк щвР 130 143х зай 7
КИ А З хх з х р ше БУ кт голи чи Її дує: 1; а Фоми у КІ ех лід вна сі це сів сту аг іец ієц нів рви Зег о Аіа бі сій Ага 145 150 155 і птоаница Я вАтТ-а170-5БО їев о оіу таї ніх рез нів ТвБгобів АЇ8 ге АЇа АгФфоміз аїа тро
ЗУ ї75О 375 івиотнкобів б5Біу дів о тне Ууді ви (іу вец ве ар УЖІ ТВеоБго бів їв 185 130 ті вго Аді йіу реч Бу бек обго Аго бег о бів іа: за «3 5 «1-2 УК «ЕЩ2» БЕ І хиї3» штемна тес ідсність «Й рх «23м ви 4-1 1-34, з'єднаний за допомогою ОО 1А о Ви яв (7-5 и543 «ЧОПА 5
Ага сін щіу го сіц о ї»е бегорт азв Аз о Бго АЇВв осі ем їец А мен агеч сів бі мех РМе А! Бій рез ма АТа іп аб та ге грец і 25 БІ їі Ап обі Бга вбе«в ЕК отТго отТУК Хегодпв о Вго пі фев Аїд біб У!
Загофен тис БІУ Б1У цен Чек тТук рух сів айв ОТВк кує ів фев Ук! ща па 5 чаї ій рух Аа піх уді тУБ тТуУк уді ве вфре бій жор ців ри де хі ді СУ па ву Ух хї УК оЖді БП Брле зів но опімМ сви да ро Кеку -ко у 55 Я 5 Б хг маї ма? АЇв обі Біо йіу бже о щіу бвг жа) дет івци Аїд рен ніх
Зх що з5 зви о бБіп Бго фер Ага вк дів АТ щЩіУ аа Аїд діа ген ат грец тТве 1025 ма
Ві дружу его бко діа дає сег О1Б АТЗ Ага Аза Берг дів вве обі 115 зап Й 3725 Й чу Ба ек странице 5
ВАТА УКИ мі но -л я. м і: НКУ зх: Мах дм ет «вуду ри ки вве іп щіУу Ага ем оіву ніх іец Зег ай іх Біб АТО ви Біу ма! 130 55 іо
Ні бе ні тТвт пін віз Ак АЇЗ АБО нія вій тер обій беру тТВг оФій 145 150 РІ 150
З чо зле ск ті кі Ммх ще в я че чо ня -
Пі 8іа ТВгоУВЛІ Без бі кв НЕ АК Кі ТВ вгО ОТв ХР орто Аза 378 175 сі іши го еко ВгоОо дра чоегб бій біУу пі Бі бі Звг о щіу Щіу «У
ЗіЖ вм вто ЗК о вгОо Ага оо БІБ оту оту Оу бу УЕгопшіу хіу щу щ х хів еф тд у пью о Жл фучу лк лу ни дя : віх -3г ака ОРБч о іх Вгоойі) фши баг о БгоОо де) дав о йпго дій ої У ев іх дж ти Ддгй ів сі БМ БВ АД Зі еп Уаї ів Щі де тд
М дя ЕМ Од г КБіУ ЖОМ бл овІ бі Бебі лів БІВ АЛ ОМА «й 15 ве їевцофіяч її азр опію Бго ау Баг о тТгротТук бек о ляв Бго біУу Бач дів м 230 рас вет бі ді баг Бенц тк обіУ Фіу іжи Хек Тег фе» сія АБ ОТГ Куб 51 кож Ї 253 за ке хх чина Я й ел кеВ я ат ях мо и міх 71 цем ма! Ма! Ав ру Аіа сі мві Ту Туг уві рве обВня іп огши 516 зо ЕВ ат ге ки йех юшка м ри махи слі кк пи м Че х. івм Ак Ага мафії уві дів БіУ бій 5іу вегобіу бек ожаї 5вгоїви ЇВ що ЗА мам
Кі У «ЗУ зав о Ніях іев о бів ру іщи де Звгодія дід ЩІіУ дід Аза вів фо зів
Б 5 ев біт пок де згоді лій ЩІУ ЛІВ ЛІК ВІ ви МВ вен азу КБ чі їйк УВІ аА5робев о вгО РгОо ХАІ ее хек пім дій ако Аза бак Аїд їпх ща хх 35о мі ок чи чне Урхи моух, ім: а: че о ЯЗ шоотрі, ит ау що й
Він оіу ВБе іп о біу агдФ ів фем Ні іем о бег дія біж Бій КО ее
Щпіу хат омі5 вм МІВ ТВг оСія Аїв овго АіЯ АКоОо мів АВ Ттроцівй во
ЗО 143 Бо станина й ват-3170-5ЕЗ
Тве дій сі АТв оте Уа) іву Ту фец вва ака Уві ТвВроБго бів їв 355 ЗХ 355 га) АїопіУ іс о бгоОа Яак орг ви Заг оєт;
ТО міч зі СМ ого ОВК вБКО АтОрК Бо
Зо 375 «ВІК З Я «йо» РЕТ «иа» Штучна плідоавність «г «ЖИ Х хгйїх ни 45188 71-85) али спа? «МН: Б ага бін сіу Бго бів рев Заг о бго АЖхю Ав о вго АТ ЗІУ бац Бещ А їв хек в в Я и ВИШ Я ойлм кат лику щі рі зм Абш віп бі Ммеї ке Ааїа сій івч хз АТа ів 83 УудІі ба овеу хів АБЗ Осіу Бго іецз о шеК тїкроїук баг АЗВ овко Бі рен Аїв осі ма «В 4 пет реч о тТвеосіх сої» хрродів те; мк ор; дев те вх ок іюрома чегосецч тв ді сту во Заг о тТУК Бу БРВ АХ ОТГ Ку фіц Се ма ма вів МкУБ АЇВ бі Узі Тугк тТук Ууді впе вне сів бвм о бім К9и АгО
Б Б. ух що - кі г роту ше жи дви у ви пли гоже й З щи - ага жа чні дів сіу шім шіу ет пфу мегоУуВІ Чет рев лів рен онів ох меч НКИ пре х том ч чо ч.. з. ох и ігм бій вро іву АгО дет АТ Ач біу Аі яфб аАта рев АЗв о вез твк 3100 це що
УВІ Ай іеу Кге Бу Аза бег обЗек бів А) Ага АХА Бек одіа ВВе су
Би СІВ Бі АБО фец грец іє фей Зак Аза обБі бів дга івц сту уд 130 А 10 ніс ів ні ТВг ців із Ага дій Ага ні Аїв о тев іл іец Те щі чі Меч пі повія вія АТ АВ АГ НЬ ЛІВО ТГМВ ІЙ емо БВг КіІЙй 145 150 155 ї50 стваница 7 вАТ-Я170-5БО т «С імах лин ох оз ме: се ха воски хом З ча и АТ віж АїТа о твгоУаі ер озіє вано вна ду Уві тн о Бга бів (Рв бро АТа 155 ї70 ї75 ціУ ви вБбО хар обка дгор о вег піц бі пі Фі Зі Ук обі ші Фі1у
Ру ЖЕ ОКО З го дгу зб Бі Ру КРУ су мРу ЗЖг Ку Кшту сту ік 155 ї50 біу дог «іх ой «вІ1й2 ВВТ «кі132: Штучна нУлідаЕНість
ЕТ, ее «гкїх вити БакоаЖнНИю ОК «ВН У
Заг о нін ід мех бак «г б ста ВЕ
МВА х ся 2 ся Ся о тік «Екие тТУЧчЧНа ПОСЛІДОВНІСТЬ «ех «Киї» АНТИ КАБІНУ, сСрпВ-еНа «Не В зар жи Зі офі ФУ ві о жу рин Ап кк шум А фах ши кіз їте Тгр АВ Хв Чу піч бій Тут ТУуК АТБ ОАВА Зак УВі уз БУ «ИН З «1 ват хай шуУЧчнНИ ПМІлІДОшНВіЄТЬ
УНН
А
«823» АВТИЗЕАРТІВМИВ, сЄПВеНа «НКУ я піжЖ Тевоіва сіу дв Не доротук я Е У і
Страница В вд 4123-52 «ІМ 5 «кій» ЕТ «АВ» щууУчЧМНа посліднаніст» «Ех хидйх дМти-БАРОІКНІХ, ср «а
Ага) від йвгощіпй Зегомні бар Ага баб Тур фем А
КИЙ х й ій нт з хек МА вин х «іх 7 «ім ВАХ «13» щуУчми лоснідошсть
ОТ, я Й «ВАЛ» АВТИЗБАВСІЖНІВ, СОК-їА
Без НИ
Бі Аіїв фер отвг ага Аза тне «Ех 12 «їі З ее БЕ «й13- щтучна пОплЛіІдДднМ ит» «ех «23» анти КАВОВИХ, с «НЮХ І? сів сій шіу сбій Ві їі бро Бр тТвг ї 5
ЗНННЯ З
А їх ку М «Ві10х ВАК ту пклруви хз і Миті «ша щтУчнвВ посідав «ИЙ» «Вййх пептидний пінкеп 32 сть з
ХУ й іх ї 3 ту и их их оч но ту не и и сіу ші сіу сіу дяк о соіу бі біу Бім за ї ій 10 стівницВ З ват ЯК «Ох и «Вій» БАТ «йїЇїз штучна послідов ість «ах «гі» Диякарний Ме ЯЗ бузок ая) вам сні плює Бесядніцюг З «ВУРТУПОМ» «М 15 зга біш пі веб бін мев баб го до АВ о вго Дія щіу ввм о Боц АБ і р: ів 35 їжу Ага бів бі Ммеї Ре діа піп івм уві дів біб Аа маї ве ве
Тіж АЗОТУ Бкоа бен бак тер оТук Заг о зкр о Вго «1у вм АТа спіх Уві ї5 я Бе
Баг овви ТР Обі бі фжм хат тут фух січ АзвотТвг о буз бів ев охаї
Уві АТа У Аа сіу ді Тук о їжк о маї БвВе вна бБіп рено озін гей Ага 65 ТО ТВ що
Агц о УДі Уві вів бі бів бі бак об фу Ек оУЬ Хвгогбеуа ді ви нях 55 п 5 івниозів Бо баз АКО Мег лід Аза сі АТа Аа дів бе дів вв ТВг 105 ца ча АБЕ Цва БгОо Рг) Аїда Хег о хег Піч діа Аг ах Зек ові вве бі
Бве сій шіу АР беч о іфез Бія феб бегоаіф сіу бій ака о мев о біу ха 150 М їі
Ні іеч Ні ТР ОоФіч й Ага із Ак нія ді тер обБів без Тк іа ії зх 155 і оіж АТа ївВеоУа)| бва о біу Бевз Ве Ага маї ТВробко хів хів вго Аїд 155 178 175
Зіх фев вт баг орто Аг зак обБіц зі фу біу бі вс пі Ціу У
Страница 10 рат-ЗЩ170ОЗКа
ІВ ї55 1 оіу заг Ага біз Оіу Рго Бін о вецобег о Бго ар оАжр о вго АТа Ту ви 155 М зп
Ах щи «АКУ мен др овен го ів осі меї внз діз бій івм ой) вів Бій дхпоУді
Їх чер Я 1 іх ЕО ви ви ТЗ Ав ші го фен его отТго ТуУгб Заг АЖ оКгОо сіу іви діа
Ек й рай І ва ХВ 235 жені щБіу ча ак цен тТВгоЗіу ФіУ зіва хек тує бух біз 53р ТНК губ бів ах ке з55 - и яв ЧИ ще З тр, тю ж Й сх ї- хну т: паї (115 ів ці ні АїВ і Аіз пу уд Мк ті Уві не вне дій вм о сіц я га ка дуг щи з ох ті у. их шесі и Кл ще « У го АЛЬ З ів йга ага УВІ Ма1 Азв осі бів біу Баг сіу хег Уді беб бзу лів ау дО 285 іемоніз їжу Бій овго іву аго пек вій дій бі Ав АЇВ АВ Кен ДІВ - ща Ух М івмОТНе Уа Акрорем кКко Бо Афф Зог бегооів АЇВ Ага Аяй бего дів ах ща 315 ї25 важ Оіу вав ств ОіУ Ко ваз оїгав нів ви Хвгб Аза сіу бій аго фен 325 330 335 ж вені . ж сн 1. - а . ч чі ж. З труси КУ :
Зіу ді нія рецй нів тек осів дів дго Ав др вів дій тк; обі фев 340 345 350 фр «лу кістка З ін же он Тр ли хм у ой Ял
Тео щів зі АТВ ТНК УВф івц біу зач ББе Ага УМІ ТВг ово 510 їїв ї55 ЗО 365 го дів сію ев Рго Хег вро Аге пог піч бі бі 3) ту Баг осІ1у 375 їх ЗО
Зі сі сіу Ше дій бек о твгоїу5 бі бко Заг о маі Ве Бго фец Аїа
ЗК БЕ За я ших два Му ок мом ж. и, як, мух хе т її: миши ЧОН вго дегб бог рух бек твРг заг обіу піх те АЇВ Аїд іврц бі Сух ем стознивя 1
РАТ-ТРУО-щЕЗ
Уві фу» Ав тує Ве бко піц о Вро Уві ТВгожві беботтр о Ахв Заг обі діа іви тТбг Зак осіу ві ні твгоРае Рго АЇВ ма! ід бів хек о хак 335 а5о Ах
Зіу фен жук баг демо жег ет Уві мві ТВгожві Бго бег баг бегої ви р чу я і тТвкК осі тТвкоТук Хів бух Акхп о Уді Ак» Міз бух Вко феб Ази ОТВе
ЗЕ ато 475 Я
Куч УВІ аАзб о сує вуз Узі сій Бго уз Зак су лаяв обу ТВйРОНіЄ ТВг зх Я ящ5 щу ко Еге був го віз кко піч дів ія бі Бі вгеа бак У; вна
БО Бе 5 зе рве рго Бра гу вго був дер ОТК їв) МЕТ ЇТ8 его Ага тв вге зії 52 ах зів ма! твгосСув уві Уаі уді АБО ма? Заг онміз із азровко Біб хв! 53о 535 5-40 же вне АЖи ТК тує Уві АБроспіфу уві Фіц Уві нія Ав АЇВ У ТК
БУ 4 5 х ча З 5 У 5 щі
Бух бго аго бім біб бій Тук Ах баг отТйг туго дк хаі Уві яв омці
ЧА 5 575 меє ївгоУВві ребонт бів Аквоїє» жо Ахи 5іу бу Фі тує ух сСух
КТ 585 ще їж У! Звг АЗИ Муз Аід ва бі АЇа бро їз ШІ БУХ ЇВЄ ів дес 585 ни що їУув Дів ку біу Бій бго ака піц вро біз Уві Тує ТВРоїев РКО рга
ВА ціх ве
СТУ АГРО АВ ОЗ3із іви Вгору АВ піз Уа) Зего фен тер обу зво худі странина їх пат-а3а-чКкО пе5 ЩО Вуз Ні: щк - шк зе г чин пе о ч -: тр - чи . КУ й ів бі Бін тук о Вго Шаг яз тів Аіз Уді бів тго Біб бек дей ду пах Хо п55 срз о вгРО шіЧ Аа Аза оТуг буч ТВК Отак Бго Бе) ді ви дар оЗеє др
ЩО 5 що сів бегорЕ Ре бен оТує Жегобу феи ТВгоУВі АБО Бус бак Ага те т БО й р Ом дУ х вх БО Б піп сій сіу дай уві Бре зегкодув Вагомі меб із бів від бево нів о ех БО йди оМів Тук ТвроБів бух Жнгобеи его бу ек о БрРо фіУ вух й 15 «Ух 15 «311 МИ «12х ват «Ії» Вжтучна поеслідовністм «ВО «ВВяУ би Я-ІВЬ СУ1-ВУаСЬ «КН 15 ага Бім сту вк бі вени о зековгоОо Ар о АЖВ Бго дів піу іеу ів Ар
З З 10 15 ів Ага бБіп біу мМеї вне дід цій іва уві АТа біб Аза Уді ев оїед і Дж її за «У З ї18 Ав обі вга о цен о шЖес о тгвотує его Ар овко біх Бен Ав обі ді
І 45 деб во тв Чі сФіу фей бек отук вух ОБ АЗО ТВРоруз Біц без мщі що 5 ЩО
УВІ Ав У» АТа сім Уві туК тТук Маї бе бе бій йбем шій ге Аг
ТО Нв Б зга маї Ма! аіїз бія є1р біу 5жговіу ек ні Жак бе АТ рам НІХ 55 ща з5 птраниці 15
БАатеазУйе НЕ
Мен сій Кг бен Ак Бек о аїв А)Їв біу Аза дів АТ Беч Аїн рев о тВе ню 105 М гаї дк осн БТ бтбо дів хв ки Фі лід йгоа ав дег Дід це бі чі АВ Оса РтТОо МтО Аів ЗВГ оМег шій дід др АВ ек АР о Бе бу 1:20 175 вве осів СТУ Акдфоіец фев Ніє ев Заг зів біу Бій дк обец Піх Уві чий ! й п - ах їз їх5 Ка мів їн Ні Те обі: й15 АКУ Аїд Аг ніх АТа твробів без тк бів 1435 Її ї155 і
ЗУ Аїа тТнт маі фено Уіу гео Райо ак о Уді ТВкЕобкОо «ТЦ Тіт Бго діа її 170 ух
Біу ем Рко баг ого Або бек озіз Бі біу сіу сту лек обіу бі б1у іно 155 що
Піу шнкоаго тб оУні Афз Ат ріс пвгбоУВі вне їїв вне го БгоО 5вк 135 ке го зв бі ої се фіуч Звгобіу ТвВгоАів баб чаї ді Су івщ о фец Аза
Ка Й зх а
ЖАХ КАХ «кі дхповНе туго Рго АгО Зі Аіа гу ві сій тб о вух каф Ар ах дів
ТЕХ вт 5 240 зіжмосшіп бак о біу Ав о хегодів біб ЯЧеє уві таб бів Бі Ак» о5аг обу ах 5 255 вав лаг Тнг Тук бЕг бе бег баг о тВг оїец твРг оман бек вуз АВ Ахр з 245 КН ря Сея А
ТУук бім їж ніх їух Уді Туг Вів був піц УВІ Твг о мі сів діу їж ту ім ух НІ фу УДІ ТУ у у вх -БО 285
Загкошег Бгто ув) ТВКофує бек рве Аза вагу біу 1» Суз «їз 135 «зах БЕ сСтраниная 14 кАт-а170-5Е «ЕІ штучна же лідоність «РЕЙД» «ЕФ АмтмБАВСОВНіВ я «НІХ 18
Зі чаї бів ген їн сім шЖек о щіу «Ту ші івцо Уві бів бго біж біхш ї 5 їв 15 цегоіви ага фізи пек обу Аів АЇв Зак обБ)іу че ТНг вна деє Чет ніх бо в ще хів мат бак оте Улі Ага сій іа пкоа сіУу фжх біж ев бів тер оУаї їх «0 4х пек АТа їі ТгвоАЇа баг обі бів біп тук Тур Дів АБрощет уві іх
Ки Ух по
Зі Ага вве ТВгОоЯія баг одга АБроАка щегоіух АВ ТвК орав туго 8
Бе та 75 що дій Меї дев о Зероїжи ага дів бій ар оївг від уві зук о тук був 518 я о ту їх СТУ тТкроїецч сіу аз БАе аз о тТуг Тер оБіу Бій діу тк обви ма 100 135 ща
ЖТвгома) Бег обо 115 «ТЛ 17 «її» ЗО «кіхе ВКТ рт пух г. я ї поч «Пі» штучна тжшлідовНієть «КИ» хай» АНТИ кАРОЗВНЬ Мі «Нюх 19
Біб жів жаї фев ївгобів 5еговбго біу ТНК орво хек офїву его рро ЦіУ 3 5 18 15 бів дта Афін о твгогез баб обу Ага Аїд бет сій Чаб Уві Заг обкоО Заг
І 3 25 БИ ще 45 МІ
Птранний 15 ват-дч170-КО
ТжкоКеб АТа їгвотТук біп сій зу бро ші шій Аа БкО Ага Бец о Бев 35 ЗО 45 тів тів Бі дід бе ТВК о АРФ АТа ТТГ ООіу ХЕ ОрРгО АЗр Ага БНО ет 5 в
Сіж Чет шіу Зег Піу ТК Ахв вне тНк фев тк Кіз зе ак фен пін ве 75 5
Без зів АзровВіНе діа ув! ТуУБ тук ух бів біп біу вів Уді тів вга 85 Зі З вгш отвг вве піу Бій Бі тТвкБогсуз ма бів Тіз гУ5
Зо 105 «230» КЕ «83 «3 «їй» БЕТ
За Фе зчухис у вит и «Кі» Штучна тоспідсвність «йиіз Важкив ванцюб анти КАРСІВНІХ. с ОЗ «ВВпадиноют «а» 18 січ Уві зів ем оіецч бів бек обі біф біб ов о маї вій бе Біу щу цег івгч аго івм дег гу Аа діа 5екобіфу Бе тн еБЕЖ щег чеб віх го тя 30 ків мет Заг отгв Ух! Ага щі) діа вро сім ух О1у ев бів ттв чаї
ЗвгоАТа їі» тро о Аза хає Оіу біз бій туго ТУгГ АТа яр бер омаї куб 5 15 що 1 Аг ВНе тв їЇ3 бег Ага АЗОВ АЗИ Заг о їубє АБИ ТВг о ржЖе тує Бред йй Та ТУ ко са меж деп Хек іецч яко Аїд бів АзЗв о їТВкоаїв о маї Туг тук су А1їа 55 Б в іжх ПУ ткроівм сіу аз вве аза ту о теробім бій Ту Тк оівц уд странице ЛЕ вАТ-Я170-5БО ї0п В Гл
ТвВгоУдДі йекоцек дій Зак тк оку Зі ВгОо БЕК уні Ве вро фен Аїд 150 їх вВго бегобаг о вуз баг оте Каб біУу сфу ТВг о Аїа Аа рев бі Суб з щЕ 135 мо зві Ух АЗи ОТук БЕ вка ів Бго еа| ТВгоМаї Зак тер одяп вк осі1у 145 150 155 і дів они тТвР Зак дію чаї Ні ТБ вна вго Аїда Уві фев бів бек баг пі ген отук дек ви его баг тар маї тТве ода вго хаб Бак о Чрк ву 150 155 ї30
Біж твг оса твготук рів бух Ах оці АЗИ МіЗ ів Бко Зеєб аз ТВг 1 Зав Ме іуз ві йогу був Уа! ід Вго бух чег СУуЖ Ав обує ТВгОВНіВ тВК
КІ іх М
Су Рго вБго сСух Рго ді вто Бін віз із Біу Біу все Уго хві вна кед А; іх ке
ЕТ о 3 М їн вве рр Бк бук БРО БуБ ВХВОТВР орав Меї її Хег одга ТВг орго га БВ Ух
Фів ові тв обу Ущі хі уві дев уні дих мії сій дар без бін та пром ді Так обу щі ці Уві АВ ОУН Ват Мі Фіз двробго ОРц жд що їх та ів вне дев тгИ отукК ві Аярошіу жві шій уві МНі5 яз АЇВ Бу ТВ
Зк її КУ Й
Же «А КІМ
Куб РО АгЯ вів б1ц сій туго дай бек їВг о їг Аг Уві Маї Зако маї
З 235 МЕ інши твтоУВі ем НІ О1й Аз оїтвоїсв за бі уз Біб тук о іж3 сСуй
Ох 15 315 32 іже Уві ет деп іх Аа фев Оу Аів о Бга їі Є; був ТНК ШТ 5ег птевницв її пАт-Я1У0-ЗгО їУуз дід цу ЗіУ шій о Бго АгУ йіз Бго піп уд Су ТВгоївц вгОМУ Бгу
Й 7 в г й зай т мч еВ 345 350
Зевбоаго аз ойіч беи ТК обу Ах обБів хаї 5Зар о іви бЗвгоСух Аї УВі
ЗО ВІ іуз Бі ве Тук орто его дар ХІТ діа узі січ Туга бів Зародяав Біт
ЗУ їКх ЗБ
Зі о бго сіб Аза Аза Тук Бу ТВРОТВк Бі Вб» ді фез АВр Заг ар щі Зако Бе р; оїшм шві хегофух ісц ТНРг о УВІ дай Буд ЗК Ага Тр) " г ж м їх т ФВ їх М 05 З 315 ів ій с1уУу дп очаі Рв обер бу бЗегоУуді Меї ніз Ффіч лій спец Кіх
УКХ дл лхл три зх А дев ні тТуг тТвгоБів суб Закоіжи швкофви Зак го біу Бу 335 з 445 сІайз ЕТ «йії» щЩтУузчзна послідовність
ТАТ закікх «ей УМ лпеский вами внти-БавсоБнія «МН її я дачу сзаї ж а у ку іа, ем . шах я уче дих г біб хів Уві ем УВК обів ЗагоРго біу їВговеи Заг о їец хаб рРго с1у ї 5 30 15
Оів ага дід ївпкоіво багоЄбуб Ага дів бар Бій 5вс Уві Чек Аг ще о 25 Зо
Тук зви іш ТКротук бів бів вуз Бго бі біп дів ко агро ізц їви
З зе х 7 хх Ш Б й
У ве У її їі БУ АЇВ баг о тТвг о Ага лід тнк осі їі РРО ар ака вне Бак птванина 15
РАТНЕ Д щіу бек о ціу 5вг о йпіу ТВгОоАБЗБ БВе о тТвгофоц ТВе тів Заг дк ву 51 ці то 75 ко
Рго бій АБЮ БВе дів маї туго тує Су Бій бій Бі бів ша ЖХ1в БгО
Б Зо ща вт оїйє ви бі бів З3іу Тнк зу чаї (їв ї12 в вра уйгоУді яів
ЩІ ! 15 й ОІВ
КУ А ОК
Аїа во ие оУаі вве їі вав вро вБгОо заг аз обБів бій фр груз Звг
РЕ З гу 125
УКЛ Мох Б;
БЗіу твк ові бек оуді чаї Суз ву фо Ам дп о РВе тує вео аг оОТи 138 135 о дій бух ма! ціп тк оіу5 Уві ази амп дія Без о Бів Зак сіу депо хве бів біз беб Уві ТВгобБів бій хо Заг офуз йчробек ТВ тує пек офом
Ужг 5ЕфЕ ТВЕР о Бац ТВгофїец дет бух АТа АЗроТУЄ Бі фу ніз муз УдДі 152 їх З
ТУ Аїв Суз Фів мані ТВг ові бій бі фе его бек оБго ді тТвгофУуБ тег орБе Авп о Аго Оіу Бі Суб
ІЗ 215 «М во «ей1їз т ха10» ВЕК «из» не заріввх ех о
Мек же Твг о Тгроуаі рух їі УДІ вве обі ув! Аїв тТВг бак дів тд ї 5 о 15 мев Аїд фвц фени о Ууді Мекосбух їів о Удї рво Ак Вге Хек о дгф ма! мів
МН вЖ ти ко Гак ЗМ дп озегобіч біз аа ТНБ омеє Ага о АЇВ Бей оте нм офУх Аз хів їви сСтрианвцв 19 ват я170- КО 35 й 45
Аза осіУ ТВ КВа дет ТУГ Бу ТВгОБВе вве вто дк тк ті Чеб «ФУ ща 55 ща «іп обі туго без ні іп бек дід Ар дБА АЗзп ої маАї грев тТук АВ та 5 о її бін тк обіу бій чЧеготує тВг хів ре баг Ахи КО тТВРОМеЖ уз 5 З ЗУ заг уві а5п лів бБег дп Тук щі іш беж Вго Ази ага бів Вае чаї щю 105 3
Тут ем сій Бек АБО ТУуг его гу5 грец о їтв АТО Туг о Жек Тег ТВ дій хх ї-о 335
Твготує ТУуб Хе тег дер) зо его АЖа ФіУ СІЯ ВВЕ МАЇ Ага бі аз 130 135 Мк ім обжновто Аг) ого їі сій тус беч Сух Укр о Зеговгео УуВР о сіу вк 14: ї5а 155 ІК
Муж вч Аа Тут Уві Туг бій аАзп АХУВ їв Туг ем оф ж «ій Аго Бе
ЩЕ 172 їх бі ар о Бго Вк вве бів їі» тТвр обо Аки сім агер бін Аза був 318 158 185 їі ін Ап опію їіє Бго АжВ ТгЕ ож Ту ЗТ 01 56 меж ве) АТВОТВЕ це Ов 25
КУ ТУк АТВ Сен отїгроткрозлек Бус ява бі Бу Бе гео АВ Тук дІВ 210 215 Ре сії ве о А5ап дЗе ТВг о АЗОВ їів рго УдДі їів хів Туг Хег о Туг Ту сіУ
ЖЕ я 215 Ко зав обін піч Тує Бго Ага тТвроЇів Ап їі Без Тут о Бго Бех АРІ РУ 7 зак 7 Зк т 7 зе й сті що «УЗ
АЇВ КУБ Аза РгО Уа! Уа? Ага Кіз Ба їі Ї15 АЗВОТВРОТВР Турко реко слтрамима 50 вАт-4170- 5
БО КЕ Ка він туго Уві йіу Буга бБіп Бі Уаї рга уаї вго діа маї ЩЇ18 АТ дв я РЕ 3 ек Ар отуг туг Бі» Хеє тгвосецч о тТве тТгроУуві ТВг о АЗе Біч Яку ді! ка ак мм
Сух сем пів їгроівв губ Ага Уйі БІВ Ап ха! 5ероні рем его Х18 310 М 380 сСуз Ав Бе Ага 5іч АЗОВ Тк бій Твт о тТгвоАзВ Су рго Був ТК БІВ ех З 3 піч ні їте пім пів Зегкгодко тВгощіх тер дів 5іу Фіу РБе РБе ха з 145 хо его твг орто ді Біне бек о Туб дер АТ ЩЇТа Жеє тує Тег Буг фін РВЕ 355 ЩО Зпх щег ажхр оту дерохіу Тує ку Ні Хі НТ тТук жів бу Ахротнг ма
Хл 325 ЗКо піч ахй дів ї1е дій їфа ТвгозЗег Бі був жРробів Аза гів дай Ї15
ЗБ ю ЕІ о раб ага Уві Твйгобів а4хробег вам Ве туго 5агобеЕг деп сі РЕ ОСТ у 3 о їх
Зіч о Тук вБга вБіу Аге АгФф аби Її Туг АБ хів бег їж біу ЗекКотує
БУ 421 3 вко вко Бек о буз бух Сх УВІ ТВ оСух НІ Ре Аг БУуЗ ЗІБ Ага Суб
БЕ 445 піп тує Тук ТВг дія его вве заг о авр туго ів Му Ту Тук дів іти хо З5 мМ зді Суз Тук біу вго біу їв вго їі 5ег отнг обевр ніЗ АВ щ1у Ага ме т т й як; зх й т, за 478 З 480 твгоавоа бій бін хів вуз 3 емо і) бі Ап обжа Фіч вфец бі Аза стозница З
РАТ-Я1У0-О5БО ах А 435 т Її чі ил Ззокха жін кож Гл . С к 5 ххх. ч г ' я
Аїйа зви фу азпоїів бів рез вг гбуз Ф1іБ сів її ух рух Гу сім мю БОБ 10 ча! Ачробіз Жіб тТБгофбец тгротує ру МОХ ів рев о бто Бгбо Фій це 515 ав 25 азвВАгоа Заг ух рух ТУР ОБО фан оба 18 бій Уві тек су Оу Вго
ЗО 515 МІ
Суз Заг пій 5агоха! дра щеР уві ВВЕ АТ Уві Аз о ттгй ї15 За о тук
Бия 550 55 КО мви Аїа о зегогбу« бів біу Мет УЕ їі лів лю маф АБ ОФТУ аг Фу зву 570 зу
Ти діа вве Біб Бі АБрофех фен офісу Туг Аїа Уві Туг Аго Був вв
ВИ За 55 пі ат тТУк оіц зві 5іцз ах Бій їфв тве дій уУухі дга іух вве її ші а ТУ січ ві ОР АЗО Бій Рв так ХіВ жі Ага бух па Щі 555 ЩЕ ща бів меж піу рБж ЇВ АробБіз ку» Аг їі дів зЗ1е тТРр ОЄіТУ Ткрродеє
ІЗ БІ СЕН
Тк Бі пі Туг чаї баг зак ій діа ве Аїа хвг обі ве біх фа пе а віх що
Ре уз Суб цію ї1і8 Аа уд) ата БрРо УВІ Зеаб обЗак тв Є Тук Ту пах ВІ 5 вій зЗег Уві Тук ТВг Обі Аго Ре мех бі рен овго ТВк ої ув Або Ар во 555 То зва сви дія Між туго Бу Аки 5екотнь ді Мей АВ Ага АТа іч Ту
ВІ ВО 3х вле вто АБи УВІ я о туУБ вен іди о їіз мі5 сіу ТВгодій Аз Ази Ази с ягоЕК я
НУ п У м сі ше М хе доку ї и з ще КУ мине 1737 кт тр ма! міз вМе 5іп Ап Берг Аїа сій Ї18 Аза фу діа ім УВІ ахп дід стрвницв ке
ВАТ лк
Ме ма ІВ чо; іє мі АБЮ БВа сів діа мек їго Тук баг о Ажр ов Аза Ні оту ву т а 735 ек бік вфац баг жі Аа Мі ів Ту ТВгбоніх Меж тТвВг Овнів вне зву
Й Зал "А кам сли Пе ЯМУ ж стй Су5 БИ хвгобеу Бог АхО
І 755 Та «ВО 1 «із тав «вза ЕТ «13» туУчна послідовність» «ВОМ «23» Битодомен о Ви гай оеповіс ік мітка бемітка ен З щМга вто бек оаго хаї Ніз вчи Маг Бін 1) дчп ТВг о МеІ Ага вів Бер їі 5 за її
Торба вуз Аза їі їжи Ая» пі ЖХВгоРБе баг туго вуз тТвгоКНе вБе 20 й Ко)
Бго дай ткротіФ Щет «іУу бій бів тТук рев Ні бів Зак Та дер Ап
ІЗ З 45 зз3й її Уа рен тк ап озіа Бі: тТвК пі дек отек Уве їі ві ам їі Ууді Бей туУуК АЗИ ОзЗів Зін тТВгоБіу віп бе ху Ко ХІв Кен
Кк Ба
Зак оАВа Ага тївк має цу» вк оМаф Ачий АївВ Бек Аа тує біу фев бог 5 ЕК 75 30 га Ах Аг БІБ БНе Маф отТук рев осів Хе Ар отТуг БЕБ обу вен отер
ЩІ в з
Агбфротує баготук ТВт Аїда Твг туго тує їв туг АЗВ гам Баг оджп ЗУ
Мк 105 Мо
Чім вВБе ук! Ака пі А5п січ іс БгО Аг га жі бій отТук гам Су 115 120 125 стваница 21 вжт-а170- КО ттео заг овко маї піх Заг овбжз бе) дів туго Уві Тег пій Аа дап її
Я ча тай їх У 4
Тугк зви су бів ага го Шіу яр око ге вва осіб Хі Твг Ра ах 155 Ії 13 1
Обі Ага січ Ази фу жів Бо дев б) Хі без Акроткр Уві тує ОМ їБУ їі КО ім (ів мес офам АТаА ТВ ож Тут Афд боб Тгроткро Зако бе джи ос зво 355 з
МБуч рве іви Аїд о тТук Аіа Бін вне Ак" Ах» оте дер хів вро УВІ тіте 155 а я «уко бо сі рює до ж ух сон ана чн чн АН АН и дій тТук Заг тТуг Ту ЩІУу АБ Осій сій Ту Бго ага тТАаг ої) Ахва їв
Ка Й 215 Й за «АС КО ки втш тує Бго су Аа і Вів зуб вп Без Уа Уа Аг Її2 рна тів
КУ Ка: 235 250 жів ази твготвек туг ВБГО Аза тук жі сі вго ів піц Ууді Бко уд) 245 З га із» дів мас їі АТ Хе хег АБ отТУуЄ Ту ВВЕ олег тк грав так ОттВ го БЕ то ві твк дев осів дра ді бух ім бій їкб івиц ої Уує дга ма с) де
Ві ТпкК АБИ біз дгоп о Уді Сух себ б їго ін 1 уУЄ А: З У бів дев яр що що - ІВ У й би
КТ га ТВУ
Аі дет Уві рен бек їів бух Ав овце Аг Би Ар отгросСій Тпк о Тга що 235 Ка лк тнє ут фр свт сті З іє Ку 3 фу кю ум у о УциНеН
Ав Вко бух ТйгобБів біз із Щі бів бів 5гб о дк ТВгобіх Тер
Бан Ма 315 30
АВ бік біу рне о рйе Уві хеготнк Бго уві вве яег Туг АБ Аа те 7 й че з 7 бок
КУ КІ ЗУ жк отуУукК Туг їм Щїф8 На шегоАщКітх АБ ОСіУ тує ух НІ їів нів
З Ах 350 стриниця 2 ват 170-5КО
ТуУк жіє Куб аби тТВРк о УДі іп дяй дів Ї18 пів їі ТВРобеагБ о ЗіУ мує
КБ ди за25 ла ХО ат
Тгрохі» Ав ї1е дев їі ББа Ага омві ТВ бів аАзв Зак гу ВНо Туг
ЗО КК 3КО
Зек дег азпй бін БвеобБів бів ТубБ Бк Фіу Агб АКу да жів Тут агу
Ії вг Щі ші ЖвготУєЄ вро Бе пет Куб Був си ма Те се Ні
ОУН їй я ух Аля ув
Бе Агерфух біз АКо Су біз Тук о Тук ТНК АТ его вве Коеб АБ тує
ЕК 525 38 дій куз Туг Тут Аїд бец узі Сух Тут СіЖ Рг обі ЖХ3)ів г д1ю ар 435 «8 345
Твкоренч нія аз обіу вго тб оАхр ців Бі» їі бух Ті фев бін бів
Аа 455 «Ба
Зав був біц бен бів Ачи АТЗ їни фу5 яв оІї1і Чі бву вга фу 516 го 45 ЗНО дім Т1е уз вуз ем сім Уві язв бін Ті о тТваК ОБ Тер оту уз МЕ «вх 350 ах їі рем рго РгО Бій РВе АБО Акц заг оБує Був тук вго Ем яв ЇЇ18 щО КН о бів ув! Ту біу біт Бго був 5аркобій звроУа? Ага деб УВІ реве АТа 1К 5 МІ
А ком ех ма дкп тка КУ ха остек бив З деку їх пох вує (бі жи дя
Уа Ах ТгроЗів Бек отук грец дів жк обу шій опію ек о Уді те лід 3 515 5 їжи заф Ахропім Ага Бі ТВт Аа вва дів Оу АВ Був БЕ сви Туг 545 кН 5 БО дід жар Туг Аг оїуз їем осі Уві туго сів ві 5ів ахробів дів тає 555 ке У75
Страница 25 ват-а37а-чка вів уві яке бує РВе жів Б5ів мех біу Бі їі АБ осі рух ага їв
ІКО Ех З ків охів тов обі тгробак Тек осіу Шіу тк ув) Зв ває веб дів КБев
З95 що вх
Азїа двт щіу ТТ о СіУу ібве рве бух Сук бі їі а18 жа Аа бго хві ща БІ що етан а нн ЧНУ зжмкоскеу ду дн чі стою те с доти Вр з мив у
ЗзакОоУаГ ІГОР Туг Ту! дій ЗБгОоХВР Тут ТпгОбБРіч АГО Блае мех вІУ цо5 о Чі ва іч овгоотвК уз АБ оазроязв рев бів Ні Тугоцуз ди ве отвг хв ща вхо ах мек аіз аго ві бів Туб ве ака АлЕп ма! дяротує фено огрев бів віє
БО) БУ УЖ
О1У ТВЕ АЇа АВ Аз оАЗАа МА Ні вве обів Ай 5вгодів сій Хі Аїд
БТ КО БЕХ іх віщ ізи ув) дп АТВ бів Ммаї Ав зе бій АВ ОМек тк туго ну т дл ох сем й 7 ва вУУ дю дхрозіп Аза нів бі ги Хек о чіу гру бет ТВ ам нія ев турбо так чи 7боечА 7 зв 7 сту
СУ СД ККЗ ТЕО ні Меї тег нНіз Ве Бен рух Бій Сух БВе бегосце)у Зк дев о оіу уз
У та 735
Який ША ко. їж Ку те фжк був біж нія Ві Ні Біб Ні міз 730 745 «вх 52 хафі» й «З» ДНК «15 штучна послідонмість «их «Вей» ЕклтодОоМен Ви вАдвепоніс ухемітнасвпізаоміткиа «МН «чести ксва заокісаїав скспиннмвМм заїасаніза Факт Асі мНнирах - страница 28
БАТ-АЯЮМЬ БЕ зітїтазакха ззасахтхтл сптаказана хек ссза астенракткс азс 120 твхсстовтс заксткапле таасзаката Фгкасжсезув вкаттоаазває возагавкеся їахассвихЕ хоаціватаз вассакоззваз зусоакозако стусжеанека «сен КаКсвВ о ше З З Ко З З пкзватсзас застІзчсаїа кссвзразаце звттаїксав всем вевоиксЕКає вивпсчзсах зекасвкита еахсока забривниах стою завнесе
І сстсоїскЗа фкозахатеї актасчруо сотка чіаваїкавс асахатетах хо сзаваєсантв сстаїттоава зсздаркей зоафрасспає «кт сазах захатттавк яко цпозацазава ахававивиї їавкоцавжє ссвн За Кі квіснваза звзавакюке ай жївсваваї вир стева піеакстск авбуваваї фета Брак мицаханова асасассваї бвжЕцєскат ксоствІсат спас овасе ааксетаов всавтнавлив хтссвлвсси зазопссча зчствасйпавтя сбеактаККосв пахатстатх т8О вісозивика «сіївсосім етакокавче сесовоамь апскеєкесс азсваказхв.
ТЩо шкі сваз зекхаствЕїї сдчскоаЗстс асани шв стоачеЗався звохакикко
З сет тва азазацтсєсв задкакетсо сок тста твтакансе свинка щю тпосацатак Зоузастоагсс зазаакссзеа сесатаказ задання засно
ЗБ Й
Іще фест тісЄ васаєсаче рісвОстацр візссвтжтє зкасізсзаа 102о захахтсаФф зсавозатош схвсвааних абжсвскакеа пеаеацасвео котпузваває ща
Чекагісвав стасва спон щесвівазка їа1повщенЕ васдсадца її ссвсЕчЕКЕК аессівесав товнткіжваа пватассско зваравоаяча сові еНс страница 27
ВАТА З 0 ік кЕхвах акту мн Вляс Кенія везе Кл АКСЕ вазона і зофатвєавт актасвсовоєю везктксвує оасжасюєє жугвобаїаєс асттакскеє 1320 квсцуєсказ дсвкосссвк кессвспоже саіцакудає ясвстовжся вовазт ема 88 аксираао зазасажюа ахтодазаає оасексзазан зсасссвщи зсестаааока
ЗА пазастзваца десттзазає зодієнеех зстекаєни алсававтове зесекестсстх ую пваїтстсма пассвазова зіаїжшсстка ствеїсав кат ков копскоюиу: із сера ква загетажакі битва бнвеаєсск січна гавадзвавоє з зма сс міни всеж века Вексоце щшвсісіас звавчо мн са грабиав збе жнарве с аа бевеаєс педа 13 псвівуваз са КІсах тазіразава адавівоєв сацинита зістаєкюа шпиаквосакЕк сага стіна сє евастваєс Кікісвааса кочсасався
З шик со ссЕсСпацоїо сзавтакмаєс зсакскоких возом вікова: іч2га сттжесавсва мачвіоатав ссітоавоєсає какАаноаАКЖ свастагаве засада
Мо чвасастеся одаедкоакаа статсікевс вкссвстоаЗ сазсВвоавтах казус чо тсковаааст свосасвуах спставаце стоЗтїанн сасчзаоіова ЕтЕспаВОєаХ ещю зкакеачем седвссацав ссвосоцєків косе сте сбаєссвасив скжасаенсє зі свовіваєсє аскжсссвааж деаптокоє отУцреяо серопавава даавкацааа. кам зарниксвсс вслаїсассВ КВ аа сдловниця ХХ пат-а170-55О «Емі 85 «812 ВАТ «2133 Ма шиежоцінь «Вт: х3
Шет рух ТВ ОТгрогец вує так омаї ве біу ВЕ отак Твгобео дія АїВ ї в 13 35 зни АЇв зве Мат за! їі Су» Хе ув) ізм ака Бго Баг одга ма тук га 25 Зо
Муч рРго дім піу азпотТВг Куб Ага АЇд цен ТБ і бух аз о їік зи 35 ча 45 акйи бів тб о вНе Яве туго фу ТВг оТкг вве Вуєб АБО Тгр одів вк сію 5 5 аб осій Тук іви ніх бій бег о бів Аз АЗо Ахв їі Уаф Ве тує Аз жів біч твг аг бін Зжкотук Хі Щі ро ве дя швтоїВг о Ммек їж
ВЕ НК З5
Зиакоуаі АХ ОАЇВ ТНг Ар тує Кім іо шеє ВРО АЗИ Ак БРІВ не ха це З Мо
Тут іжи б) Баг оатротТує его їв іву Тр оАкц тує зекотук ТНК Аїв, ер Н "У х щі Ки т 115 їх 125
ТвКЕ Тут Тує Хі тТук яв рев бій АзпоБІМ сів вне маї аку с1у тут 5 115 140
Оін о беи вк ага Бк Вів бів тТук окбжв су» ТР» бжб о бго уз) пім ше 1435 КЗ 135 ЩО їУув5 ів від туго УВІ Тук бів Ах лЕВ ЇЇ Тук фа вух Бій ак Рг 355 Кя 175 пі дж Бгто ве вче ій Кі ТВ тує Твгосіу аАго бів Аза АгЗ їв 150 18х юю сСтравица 29 вут-а170-БО ве апа бів жів ВгО АВ Те оУВі ТУуг зі оте бів Меї ім Аїд тег іжх тТук АЗй вац тТкротТко о пег орга Аза обі вух Бе ім Аіа тТуг ув) з 215 зга сій рве аз азр Заг Ар Те ву Хі ті Аїа туго Зекотує Тук оі1у мА р че М - 7 хх 225 23о гії ве аз осіу щів тук Бгто аг тТвК о їіє за їі бго о тук кто» Ух діа Ту дів ух аз рРго Маї маг Ага ні Кеті Уві АБ ОТвК тТвготук орто ав ях КО міз мі Ууді бі Бго меж бів та) Бгто уді Рго бів меї КЗ Аїа ет хт5 БО 28 пог АД ОТУЄ Тут ВВа о цег тер орев тк отгроУці бек шаг Об) зга уд ж 295 Бе су це бів тка ге) муз Ага муці БІВ деп жві Чек Уві зев Зак отів 305 Кох 315 Зо
СУБ АБЮ ВНе Ага бім дар о їгровів аїв ткб біб Суб Вго ву5 АБ б1В т Е їз» з т Й чат
З 50 ях
Оін ніє Уві сім бін бек оАга тк обіу Тр оАЇвВ біу шіу вва вва Уві з 345 з
Заг отвгобго дія вве зфргобів Ах о АівВ тв охакотує Туг їу5 їід рве
Баг оАхв оду АВ бі Тук фу Ні Іі ніх Туг Її Бу азрв о тТвг УДді зо Ях ЗО сів дхвап Аів тів бій їТе тВе о Жогк ці Ух їрРб сб АВ жів їуг їі1в 385 щі КН мк тн ага маї Те біло одаро чего вен РВЕ туго баг пог яба ів ве 51 ча 15 птрраница 3 рАТ-ЯХ-КО І чіУу Туговго щЩіу АгО Агу ап їв тТук агро тів еко її Ту Ав жає
СУ яка 430
Вго без ве офух був Су УДІ ВГ ОСУуб Мі5 фей АГ іж5 ОН Аг Сук 848 445 зів тук тує тТвгоаів Зароббо баг о Тує Бе АТа бух туго тук дів цей
Ах 5 353
Заі сСуУух Ту Шіу го спі Бош Ве Хі ЗвкКотвак р) Ні др шу Ага
У 7 М - и че шй а ао а ЯКО те Азв бів бів тів бій жі ем ошім Пій дяйп о Бух бін Бен бів АВ 4385 453 з95
Че івц АК Ап Хі бій без ба бу МАї бів із фу ух ем ух м Зх 5
Ахробіх бі беб тк оБне Ткротук рух Меї ТТ фіву орга Вго бів бле 515 що 525
АБО Ода ЗК Був бух Туб Бго ісм без їі бій Уа тТугозіу піу Бго
У 435 З
Сх Чет ій деко мі ух Чек о УдІ раб дів Уді Аж ткротіа твготує а З5О Зх ВО
Мзи АЇа Баг фу» Біц фу Те Ма! ів Аїв овен ма АТО О1У АгУ Ту 5 кт тт тінбАРВ те бів ді АВ обу Ве ем Ні АТ уві тТук ага бух Бер зо ах за сі уні тук вів ВР отв Бр обіп без ТВг АТя УВІ ага вує вне тів
У щю У сій Меї біу Не Тіз АБросів ім Аго їі АЇВ іє тТеробБіу тер ог що БІ ВЕ
Тут шіу 5іу Тук уві бек дег фер діа їец вів Заг оБіУ ТВгоіу ву я щі пай
Суранице З вАТ-ЯЗТО- КО 4 4 - й пе виго пав остей Ті стик сту ваг ру Сує Бі жів дід уві діда Вго Узі дег зак оттр бів Тук Туз
Аїа баг ої тук Звго щі АГРО вве мет бі 8 вго тВК гу АБроАВе дай обец сіц ніж тує був Аж баг ТНК оУщі ме лі дку вів бій туг
Б Зо 85 вне Ага Ахи Уаї деротує ів бен жі нь біу їВгоАЇВ Ав Анро дей
Ва БО Т чаї Ні вве біб за Заг Аіз «ів їі Аїв ж АТ ін о Уді Ап АВ.
ТУ о т15 ТЯ зЗіп ом? деровво дій діа мех Тгр оту бек Аза бів да Мі сім Ї18 цес баг шіу аг обег бій АБИ ні рем Тут ТВгОнНіх мех Твк нія вве тай 745 ха зав суб бів Суб Бе хар офівм о Хне дяр хх ТИ «ах ся «21із тЯ8 «2105 ЕТ «її» штучмна поблідовність
КУ киаУ» Ектодовев шмщазого ЕАБеполі- уземуітка ЕКО ем кн «МК Я дго Рга чего ага Уа) туго фуз Бга обі б1іу Аха Та оїу5 да від грец
Твкореногбуч Аза Хі ве) о Ачи ЩІУ ТВгеоРНе еко тет фух ТВготук вав го да о тТгр бів баксів пів шім тТжг о бем НЯЖ біб Заг бів Аза 85в ча 5 дв Кіз Уущі Ве ТуУук АЕп оХів 018 ТВвгоаКБ Сів Заг отук Ті Ті рей хо І щі тож : їх ДУ сСтвамицаВ 3 вАТ-4170-5ЕО ек ода Хв о ТВйг Мек о іт5 Заг оУДІ Ахи АТВ ТВ АБИ ОТУЄ біу БевоБак
У вки та ЩО
Рго азвоаго бій ве ма тже рем спім бег АЗОВ ТУР Баг окуЗ Би тр й КЕ За че ее ЕК НН
Ага ту его Тк ТВ АТ ТВК тТук тук хів тук джро гам сів Ази ТУ 180 105 юю
Зін вве ха) ага пі Тут Шім їжи БгО Аг Бко хів бів тук ква) сСув 3115 І Вт 125
Тга о Чеє вго уві сіж Заг овБух рев АЇва о тук ом Тук Фів Аа за Та туго гей вуз Бій Ага КгО ФІ ар оВге вро БвВео бів жів Те о тТук Те 145 ї50 Зх ї1щ
Шіу Ага сій а5а ага їі вве аха Бі ів ко дкротгр Уві; Тк сів
ТЕ ї75 175 бів біб Мек оре Аїв тв обу» Туг дів ів о ТгротвроЗек о вБко я5роБі1х мух ВМя в8ц Аїв туго Ууді сії вБбе АЗп ав лек Аза жів Бго їїв Щі)
Алі тує ЖЕе Тже Туг іх аао бі біб туго вго дев так ЩЇ3і8 дом ЩЇ18
ВГ о Тут Бро Бу Ав біУу Дів їв Абп Рг УдЛі маф Ага УВІ ББа їв чаї Аза тб отвкК отук Вго міЗ МіЗ УР о сіУ бго ме ойіц Уві во уд! ле хіх дих су я ЗУ
Вго зін МЕ їі Аїд Жег чего АЗроТуг ТУуб БВе бек тт орви ТВгоїтр
З Ки г уві яеє Жек сім АгФфожВі Сже фев біб Тер обено обу Ага омаР шій чл ьо Ул сСтивнина 33 врата
Уді бек уві рен бек ї3)о Су» АчЮ БЕ ака ЗіБ АЗОВ ТкКо ніз дів ттр
КА 235 цю сій сСуз го вуб Ат Фіз біч ні ма? Біб бів Зак одга ТВг Фу ткв сег 7 х -; БУ Б 535 за 15 ЗО вів біу сіу вве вве маї Зак отТнговко дід Бе жег сія Ар одів твг 325 335 х35 хаб Тут тТук груз Ті БЕ оЗок ази Буг Аза біу Тук уз НІВ ЇТе НІХ
Іо 343 50
ТУг їв рух аза о їВвг оЗаР Фів дев АТа зі Фів їі так обЗекобБіФ кує 355 ЗБ зах
Тга бін Аїд жів Тук ЇТе БЖ ага Ма! ТНг обі Або) 5егобем ВН Тут їв 375 зо заг ваг ода Фіц РВЕ 51 о 5іу тук вго (1іу АгФ Аг АЗИ Їж Ту АК піхе ца в Н їхміхх. мах їу ут сок іх х ка дра ха т З гуг Мк їїе баг їі 0іу Ах 5вг ов» вВко Квгофух Бук Суб УВІ ТК СУБ НІВ ах БЕ ЗІ ів Ага вух БВ АМрОСУХ 01 тує Туг ТВг зі его вне зве о Тук рух 2 аг 3 вій бух Туг тує АТ бен УВІ бу: тТук бі Бго бі івмовко їі яег твгозез нії Ар обу Ага тТВг ОА віп бі їіе сій Уві фев сів 518 що 45 З ди куб Бів вевобіз да ет фірм дра ТіФ бій феб Бго бу Ма 355 то С Зо сі Кі рух їж ієц бу5 азр оспіу піж без тТвгоОвБа тег) тує у МЕ 85 ща 95
Ті ів вка йго пів бве Ав оаго бек ву цуУуб Тук вка фрц о гец Те 500 У М
Стоаница ЗА
ВАТ. -5КО сів Уді тук обі 5Зіу Бго сСуз вт о шів баг ма) рух его УДІ вне дід
ЕЕ ЗО 525
Уві Аяа їТгв Ті ТВЕотуг реє ів о Зековже біз бів їз Уді їі АВ щі З ад мес чаї аа бі Ага біу ТВ Аїд вве пів біу АЗробуч Бе вав НіЗ 545 БИ ВА БИ
Аїа УВІ Тк Ага іжх Бен бі Маї тукобБів маїф біз дер сів гом ТВг ща Уа 575 дів чаї заго суб Ве ї1е щід Меї Фіу Не ті азвобів бів ага бів
ЗО «ах М дів жів тгробфу тррочає Тут бі бі Туг о уді баг обзак ів дід іа ах що 5
АїВв Заг біУу ТВгобБіу фей вне іх сСух Фіж Ті Аа ма Азв вс чаї ща НІХ ЕВ
Жте Зако Тг) б)ів Ту Тег о дія бет її тує Берк Бін Ага БНе меї б1х пг5 езха 53 пай «ВМ о Бго Тк о сУуз Ав о азЗр аз їв бів Ні Туг губ Ахп Квт о тТНг ха зе Рга Твк Гуз АБ А зп іец бів нія туго був Аа ет тВг УЗ 545 хо 55 мех аАта агу від бі тТук Ве Ага АхВ Мат Ак оте бемоїем їте ніх
ЩО вих па
Зіу тТнг із Азов Ав Ап УВІ Ні» пе Фів дж Зак дів бів їі ав 5/5 вай БО іуз дів ви маї дп дій шів Уві Ар ово сій аАбд Мек Тер отуБ 5ар а ва ме ак осів дев Ні су їі ву зе піу аго заг обіб АВ Ні рев отук че хх "У хіх зби 75 230 715 НВ тТвгоніЗ меж тет Мі« ВЕБ оБев бух біп бух Ре Баг офЕМ Кеє дер о біх
Т2х Та 735 сСлторамииа 45 уд. В. КИ
БАТ-ЗЛЯ 0-5
МУЗ Муз Му їз Куз уз «іх Ні ніх Ніж НІЖ Вів Щі 82 Й зах го нан
ЕСЕ, ЗЕ «Ми З ва Кддя кі ВАК; «іш ДЕК «є - ще пом журі «ка ту чМмВ ПІНА СТ со
СУМ дис уник вео Уест домі сг сук ще з х «ва» ЕКТсумНанМм меачого КАРЕ 1уБеМмітЕд Ніякі тка «би их клдчевеу са папкккаєцЗ Зегкойаних аакагаавиа пливе ква еткмадичак срхстісав пайтітасаз зсстоавмнвюша звсвсвавов сети асє «сце 56 : ще авкжкаянк попку вав авадзи акт ц пефоакіє пає акжетамия Част кссс абатававсв їі ВссоЗайкіс вм ВадаВ
ЖК сфор педаг везе ви ямі векеака вав тяа цк ли г тетсв пс вассізьчвв сФвизасата чіткі кака аЕжБааваЄ вне їКО вакакиажтре фер перці гірке во ияа Кеди рег ктите ївЕВССАК їх о певзхавтвеУ свссівав виїптамито ствсвуивтїя татка
Р певен а КІ чУуа веф спадок паеаеке фе уки ра свое хаїститівка сксізананак сахінтсва Маск стнв о вквЕТлаає пе зелене п вив го дія зажити цж фе ід педепзліве шо х всхалвассоа сової аацнннаа: стакана вас зБо Й етери ВЕДИ при тенукс Сов пРаадвкаи зкагиЕ :
МК ще пкав гжснакаКсх вилок сота кооа чав кноє зиакшквтах
З2О сваваєвата тікав хаза асавайаєсв зововиомсає стежесвави засів вех й рес прмрмима вівоватавЕ хазвтниата ссоапастюца сгізїЗазов собвавтосте тай паза Ох ї схе адае пецевервЕРУ пРпдьексгКа плач ааа КЕКеОпеУка З - десвсева Оз ТЕ КО ФЕВ пасив. ОКХ тзагпата ТО касах Х
А І карпати йи ЗзкЗтакраді гарветевак кевеаткда пизда педаг васвикоете зквІвсякчак кактоссіах ссосвковто іч запо Вув.
УК Й девавайака фкрийфхви За євниМм сокир секр ке евжке вссаєвевка ккссВКаКсс вавочцотово сота нахе сама са ЕН гам ориг ге КаесКтка сага талие срздтчийз експе пила тиа и зЕщцрмовска ссоквсосжеєсй ссасФсюде созаєним соссвустсс зоавасвиа о І ти етеаЗамлти дгтатіІзЗиВе єсазс леви века ЕК гг аце тих шк ща во овохахевжЕК са КК Возна повчав нак ка во Й ши Ії Й гапітптєтяи згдефецой папери ве втк га пф сесісзсіав вазона завер риІвиа чіпом кв інж атнІ сжкищавсн: сСтваницв 3 й ВАТ-2370-УКО ще тов ще зчзазкохсс завааксво чабснізіза авозвааосн авсвоазакоче
Ветеа Ева х коскіхвкїЕс Засассвасе ЕхевоассВоа) втоссеккк хевсхалаза
М втаг кон всадловіцча їгасазасах нстезскаса сезашсяс Єзізоававдх
ЗА петатксвая сезсвастой сазан зисвЕвиВиВ ат ксковох васакавоах
ММ їхасіщіктк зекстзасва таавкккоуна сг хвокиїо давувацава свплсквовоаВ що витадее Ма о зЗавасксксє сова савоа звесчізіка ссасссю вемвавоуви ви шк зіквомамес завоУккесвВоас асани а аа еко и сапдя Фопскспспае ЕпесВессюс сактанек зееасмеса зпанакапая
У веКл екв зазвзсаниа зосрврававт толстпадев вже ошотВІхе ка вадаствавв щМитсеавча секешастоп зх зсзацакане спіл Тскх
ЗЛУ; свогргдаса звиісазадшва касет сиза їксовавУ катасоцію пкжіхаКває
АЗХУЙ шу кв овиісічіе бассаіаве брюрвсвасе вксєсрвова) тав зале ша писцневана мч вопвлеце аозкозова аїшсесіцках
МК песока кате зпазессни стосататва зло васкеововаст хахсвоавана
ЕК ттсотввава мчкшщІхтсаї сзасаачая жавкаосса їатаЧчаУєка зсув звук застасвех саккссснвК секрет атсї повастачіс піттєвадк юс
АК ее сс опатасевос спасе вставав ЗВ КН ство щас са засас кахваавахе сват каяє сауна вЯАХ У сСтвавина ЗУ ват ума цазтатвкїєв заезатвівча схвксхтсте атссворзова слесвчатоє хека
ЗВ жЕжТсВвмОх сЄвесасвови каставачиї бер іавтя «асан скоса гц зкатаУсаєж седан ссвкчотата ктазетеннє зсксссвова театжтатає іо асовков сосеаскессх павосавтає кігістктаї сзозвсвсия два ом ах ззазаецеєс псоспижесвкиа сеіови
Ту «30» тв «и УК «аз ВЕК кАї3» шШтУмна тповідавність «КОХ «ТАЗ» Бвктодоменч КАБ зайй о мімамоягує «палі фу мітканнів-мітка «у 05
Ага вВге вка АгО Уві ні Аха бек обів 5ів Ах таро Мет Ага діа беи
Х БІ 10 15
Ткг огец У ар ої фаз Аа Біу так оБбМе век отТук ух ТВ РВЕ РБЕ й її Її го ажа Тгв Жів Заротіу ір шім Тук ім Ні біз дек о аід ав Аза ча 45 пу Ж г я дах Суди сх 5 "щи жі гі, оц по стфрждяю тТн т с
Ави їі ці ем туг ази її Бін твг пі бів Зак отує ТНК БВ ев
ОК ОА АГО ТВгомет фу еко уді Азв о Афд Заг Ак о ТУуг РЖ ем хе
ТО их що
Бго азроака бій вва ма! Тук фев; обід зекоаза тує Бвг фе фем ттр зга туго заг оТук Тваг дів ТНК отТук Тугк КЗ Тек Аве обей баг аза ціу ща їх 13
Оів бе о Маї Ага бі деки піц єни; бге дгу Бга Ті бів Тук о їев сув 115 т й за й чт 7 7 ке; жк Ка страниц Ї5 вдтеЯ370-9КО тТев фак вто УЩі дію Заб бує ев оаій тТук Маї Тук Бій Ан АНТИ ХЕ 1 їх їі
Тут зем іх Фіпй ака вгоа Біж Ахровго кго о бне сів їі ТР оБВе АВ
І: 150 155 іо іх да хів дсп оіш Тів Ре дала Бі їі тоб Ах» ОТ в) Тут сіц шіу ага бів дев фу Ті Бе амР і хр БТ Ар ОтТгВ УВ) їж Фін
ІК ї79 і/х йон ху; мог о згсує й ну б су ю А; Ток бач Вот, сего ошнск де хи
ЗІ оБзіц шок бе мія тик оку Ту лід сну г орг ОК РО АХА 5іх їн 155 їз
Круз Ре іву Ді тег АТа піц вве Аза АЗО ЯВг АХА Кіз БгоОо жві Ї18 155 Ка У ій ту черг жук тує біу Або оціз бій Тук о Бго Агф о твг хів Аза 16 218 15 328 вго тує вто вуз йЗа іу Аїд о гух апа Бге вве Узі аг ї3е вне дів тах ІЗ ! зч5 й зав жк ше Хо ськ
Ті« Ар отТВе те туго рус АТа Туг УВІ Зіж Бго зів бів Уві РКО ма т й и Зк ка ща а вт ойій Мет їі ін бак бек о Ахв о Тук Тук Не жет о Те офдви Твк Тер вно 255 ла
УЩІ тТНг або бін дга Ущі Су ви сій Тгбвогем Бу ака УДІ бій Аза
ТЕХ ВО | ШК шк. пол Дю
Уві его Ущі іши бек Хіа бух АзрОББЕ АгФобів Азов оїкв Бій Твготко кН т З
АБроСух го вуз ТВеобій сів ніж За бі іш бек дб Те оту тер цк ща 315 З бик ит; ги щ К- сту ме пи НИ ОДкЯ ц з -
Аа іуУ Фіу Ра вБе та) 5еготвгоРго узі ре его тук Ар АТ Її я зі з по зУЧ 2 ЖКУ
Зак отук тук гриж Хі вВо бак оАЖВ ву» АХВОБіу тек вм нт ЖІ Ні сСтвавива 15 вАТ-ЯЩЗ7О-БЕО
Зуе ЖЕ ік му чкоузі бід дха дід тіз сій її їВг обер бі і у5
Тут її2 іу3 Аа тТвгоУАІ бів Аха А)За їі сів їі тТАгобаг о бім суб
І КН з тгвобіч віз їі Ап жів Ве ага ма ТВт бій азробег о вев вне ту
ЗУ її ак «вт о хвк дев бі) вве ців ар тук РКО Біу Ага Ага Аа Т1а Тут Ага 355 за) 35 чю тів баг жів Біж баг отук Вко Бго дек фех Бук Сук МДЕ Те Сув мів но 15 іви ака уз «1: Ага бух ів туго тТуг ТВг оАЇВ его обНе пет АЗВОТЕЕ 7 Й за ВИ 425 А 7 о ве ОМ
Аїв бух тТук тук Аїд зв) маф сСу5 Тук ФіуУу Рг щіу ів вро ї16 Заг 435 ай 445
ТВгоїжу Мі5 дер Шіу дгу тТвго ази бій бі Яіє Бу К)ів ву «з си 430 455 450 ам іфух ім іч 010 азп із гео зу хи тіб кій ем Бр бух с
ЯЗ А7О Ух БЕН зів ї1ів Буч Куя рев бів та Ар осів Щї1а ТВгорем Тр тує вує мех аву Я а
Ії їжи Бгто вго хіп Ва АББ АР свК ух ух туго Бго вв гео ї1е спів хві те шфіу шіх вро Сук Бек обій Баг оУві Ага ЗК ома! Не дів
Горе 7 ко м ух хї5 ЗЕ ех
Уаї ази Ттр жів бек туго гео дів зегофуз Бін бз1у Ммаї Уа їте 418
З 315 НУ ев Уві Азробіу Ага бі те дів вне сій шіу АБроржж вн фен отук ід ма! Тур др вд бі Уві тує БІВ Уві Бів а5робіпй жів тТвг хх 17 т
Стизнвив о еИ вдт-а190-5Е
Аїв Уаі Аго ії вна їі біз меж сбіу вна їі Азвобів цу Аг їв зщО роза УЮ
Аїва їі тер обіу Тврошег тує біу піу туг маї 5вг ЗБК Цей ліа іви 535 МЕ 55 ій шого сі ТВг обі бен вве куб бух б3іу тіз дів тд) дів вко тд
БІО БІВ па ка? Зако тТгв о с1іа тує тує діа Бег уві туУг їВг обі Ага Бе мех сдіу 825 ві хо ща мен Бей твВгобух я5р АЗИ Аа мер осів Мі Тук ру» аза бБег тваг Уві 54 в Б
Ммеї АіЗ АТ; АЇВ ів Тут КБ Аго Аза ові АзЗотук Бер овви гів МІ5
БО и Вч
Оіу тТВкБоАтТа Аз о азр аз Уді нів вне обіп Ази его діа бій їв Аа
Бгї ЩО БЕХ
Муй бін іац УВІ ап дів Зіпоеаі дев вне Фій Аїд МУК тре тує пег
НУ БУ МН: дев оБіп Ахи НіІЗ Щіу ви Жає ФіУ ви бек ТВг Аза нів вевотує ТВ тах о 1 То
Ні меж їпг омі5 вБе орви Бук іп Сх Бе вого ген Бек ав дію Ку5
Е їх У -чА "о5АВ 7
КУ м гу
КМже бух Му фжк бух оіу Ні о НІ НіБ Ні о Ні нів
Й з Й ак як же «алу
Коен а
Уся гопака халва ДАК й «213 Штучма песлідовністьк ех г хх залу ри . ок у пунк том ЩА пек -- ух печі «ЗХ» Ектодомен КАК мав цівомоелгуєьолі іув-міткае ві мітка «НН 7 сссптсоза дзактсатав сістоазоаза загасазізв заскенсе всосовасюах
Странвца 1 ваті еЕО о вкектаватя рес жЕжкс птах ТСКЕТЕсСсаВ ВСТИК мщррасчацая и сах уовке ватствсзоаз їавсватитїв Зіасігбктакса зкчЕхаавас ззавсвВтса
КО такареатих куватавсво свєснічаза за твааке сстсавакта бруска ксе
У ства кНс авиїкцівЕа ксівоазавае Фаскакксва вас ювнво взасос еає що асесвас вкжнсвіста засо затюачаве італ азахзвуєте сеткокссав тїсацтвтіжЕ Брока ксЯа сстаткжк халата оє вквкекекак
Зако севавевАта повії таив всазацацов сви исви сік кснавк вовка
КО поввдвоваз зтзаватат: хазвжозваїс ссожМмезМн СетвімНни оваакасЕх ж аетаснавнвх зм скска Зеник ке ваїчзавнах баба сова щем ватавтасвв звівжтвостає хакствнжтви псів зсЗагЗавсв вивкосюа і: всавкаавти тіссаїмнс ан поїбавоватЄ сестЕчежсц ПВ Ії
У ук кссовЕвесВ стттІасссжасє ЗзезБатаснь спссапцоавай щеесжУксоп зЗчсавтнаха го зосксовота зітвтсабке сват всплниа стпакоавасо аорта тик саучюєтвв заавипціссв зазтоцтітко пісхстатста їатЗкааттї сема жи шо щини ссо азвзовосссВво пам аіаіщ авовавесв вас зековЕовах сті кис завсвоскі зоре ваті с віз хвовав
МІ
ВЕКеЕЕвото зсваочавтаа стзозавсві атхїсасівта їсавацасєво кроврааавх
АМКУ весастоваа зтасааціча сні ово о пси канака Как ввсаснацах їхно пувимива ЗХ вАТ-А ДАЕ зсдстЗикеЕ абставсза тозаімнва затеапснкто Зазоавшниач саксотаєвиця
ЗО чітвусаста павоскаксс сссовмвкеву засос ека строга авравацав їм : зазкастави: зтасасвоє авчекісв застасассн аахалкакає ЕКС ше швіцесссзва зЗсаксосксвї жкссассиВЕ саке чсаскиавієвй ааваєтвав ї38О ліпаза) вазвасавнм атіцзававе зсБетааваз зивЕссаас вссквавуву 1445 щезає авсошниМ заасзвавко восків асаваакак кеКесекесЕ
МН савісісоаса знісаваова дкакссско ствастсава ботвтацее сосок
І1АВИ садаодтоатав фото таєк косжоєтавх боже кх втсжеосвар савогриюм 1525 віщо сс оз спаксюов аспуєеекесє авутиссай СБС КУкАХ зон акс завше такі кахоза зефомнес вав кавсзЗзаача
НЕ кісвІвовяВ їЗаЗікісвЕ єЗакозаааач заватавсв зніодчоЧета ста 1МЕ поивкахвкек сатокошн согозснсх зувастечес кекісзавако пеузаазса 1855 зіпасісов ссср оче астас засо вом: ВКОВЗоВ ї1зло «хи скзасва винах жегрснивкеас: сасавчвайх свасіоасає часвазацєов цвесаїКсов здавасотавв ставте Есс асо пазсвнакоав савсзасве 2 їтІсзазаєх сзусасацаї фостазазск стозкізато сзосваотаЗа екессадцев еМмю ах нок стуассазчав сеаєнвКека ссасетак ссочекняеста ство
І спвоивиаиост асжткстива спос тет зсщрвкаазаз пазазапаза еВ вжив асс ассвтсассв їсАЄ "ЗА до
Страняца 43
АТ ТУВОКО
Ах хи. кю АВ АК хгАЯх нео заврізих «ММ 38 мет зін звгоБро Зак олія бро вгооміх ага туго Су жів бо Тк обій дуфоіец іжи ем ТВгб ояів Баг обенорен о тве Бе тр оАБа Вро Бго Тег та Ку ЗО
Те Аїд бує ївци тн Хі бі дев ТВгоБго РВЕ вх маї АТ ІВ шу ї5 ре 45 іув пім уві бецоівм ізн УДІ Міб Аяв Мен овга бів ні5 фе вве о1у
З Б що чук Зак тера туго руб Бі бір ака уві аяр о піу дай аго бів жів Жів
Фіу тук жаї їі Біж Те обі бій Аіа ТВгбоБго бі Бго АТ Тук ве 85 що КЕ: пі Аг пім тів Її Тук о вБго Аа вліз его фев рев жів бів» де Хі зо 155 їі їів осів Азп аз о тТве йдім ве Тег Тег огнем ніз Уві їі рух бег 85а фемножаії Аза бів бів дів те оцФіу Фів вве аго УВІ тук о вго 53 вед ї у с З и вЯкЯ 235 їх го уз Кга бек отіз ве о Жаб Аби о АаЗп Шяг ух Бго Уві 51Н Аа Кув
Аве Аїд ма?! дів вне твпе сСух ФРН о вРО бів так бів хр Аа тТВгоОтуг 165 178 175 і»м о тгроткромві АБ Аза біб бегбофев о бго Маї Зако вг» Ак ви цій і 185 130 стеввницв 8
РАТ-АДИ-АЕВ цен Зак Аа біу АВ АРО ТБг о іеци твгоБев РВе АР жа! ТНК АРЯ АХА 135 КА 205
АВй тТнт Аїд бег о Тут бух Су бів ТВКобів 3зва вго Ві жвт Аїд дгО туту М 7 хх чт Бі
КК «З ЗУ
Аго баг оазв бек о Ууді їі ви оджп ма? ні Ту ШІУу Бк Аза ав вгоа хх 2305 235 240
Твк о Ї1а Хжговго ву Аз УВг Заг туго ага Зак обі бів дя» ем АФ тах 355 755 ізн 5агобуй Ні Аів дів Хего Аа Рго вко дій пій тує Закоттвр впе
Віз А ХА ща їБх ат
УЗ Ах ді тТВУ ВВЕ осів біб бек ТВг бів бів ве) РН тТіФ вго дій ах го 255 її твгоуУуВві ам АХА Мак обі хек о тук Те осСузх ФІ аАїВ нів Ах баг зо 295 ща
Ар отнг бі ев дей аку тТВг о тТвВе Уві стВе ТВ о їів твкКоМаї тук Аїд 325 ЗІ 315 320 16 о Бго нго ух РО РНе їі ТВгобег дза АБп Заг о дів о вго ві 51 ле Іа У де З Ух
АЗИ біч аЗо дія Уві дід рев тк обу бів Бго бів їі Фів доза ТВ
З хе Зк
ІК ХУ 53 тТвВготУуК рев тго тр У! Ах Аа Бій Зеговец ВгОо Уві баг о Бго аг
Зх ї5о ІК і зів їен баг Ах АХ АчАиИ Ага ТТ оішци ТБгоібц ів бек уві їТДг 390 375 ЗО дгаовьв Азромаї бі бо Тук Шів бух ШІіу 118 сі Аза фує фев бек з85 КЕ їх мю
УЗ АЩУ Ні бек одевВ ГО Уві їі рез дк уві ра: о туг Бі Вега Ар 05 СУ 15
Страница 45 витка
Ази орг ТВ жі бек Бе Зак оСук ТК ОтТук Туєб дгу Бко бі Уві яп
ЗИ я й ай чес У ЗИ іжи йвгоїау баг оСуз Ні Аїа АТа чек дз Бр Бго Афз дій ту ее їтр би їі Аз обБіу аз бів бів бій о ніз те бів дім іве вве ТіК 435 ау Я -жк дж Ті ТВРОБ1іВ іх5 АБА ЗВ сту вч Туб ТАК був Єв АВ ОАдЖВ яБх Кл 475 «Во аа сек Ата дек біу Ні Заг о Аго тТВготТВг УТ уз ТВС Зв тТвЄ хв)
Зх 5 355
Зекг дів Біц рен вго вуз Бгб Зв оЩї18 Зак фиг оазй АЗОВ ор УБ РКО ря Є ої м Ох 510
Уві сім вору» або яін ма! від Бе зве бує зів го сім Аза шій пт: кгх т: ж й «ОЇ
Аза отв отвгожжК раз те» тТго Уа? дАхи Біу Бій шет їси Біо Уві Чек 550 535 та го Ага овен бів бен 5ер анп с1у Ап Ага Тео Сеу ТВКоБеб КВе Ам 545 Ко: 55 ЗО
Уві тВгоАго АЯа Аяр оАЇа Ага Ата тує мві Су біу ів ій деп Заг
УА бег Аа Ази аАгО Заг о АВроБго УВІ ТВг овен АЖВ Ома? ев отже щу
КО ХУ Уа
Бгто Аз Те вго іє їфє Заг око Бго Ахробає бак Тук фіви бек оФіу ах РН 5 дів аз ївц Ази Бевз Зегосув мів ЗВК ОАЇВ Баг о дяп Кр бе вро Фів
БІ 515 ХО
Тук Жег Тер Аго І116 дЕВ СТУ Х18 о рго Фі» Фів Вів ТВгобій Ма! вец цих 3 пІ5 Б ствавмаа 4 пАт-ЯЩ70-чЕО ква хі Ата ру Ха ТВРОвБгоО АВ Аа Аза пі Те тує Та Сує РВЕ 535 У 6555 чаї Зек азп о вев Ав о тпе о сіу АКФ ода деп Жег Хе Уві вує век тів
ТІ В 52
ТвВк Уві Кегодід че бу ТВгобакорго біт без баг о дів щі діа тТВг
ВУ ВО Ах чат бі хе меє тів фу ма! вемома? шіу ві діфово хів
НВ 5 ча «ем: хЗ «ВІЇ РЕ мОчь яз ет зу х. «А Най парів «НК ка
Мен сія жег сіУу Вго аАго во Вго баев обтє Аів Без «іу ем діа ви ї і ій ї5
АЇВ кер твгоїенв ТВгОМЕЇ і Аїд Ага ієц Аїд де АТа Аз бег оре
Кан Ка Б вне сі бів ахап мі зм ошім ха) ко УуВі Аїд ївг о АТеЕ Бе) ТВК Аз їх ча 45
Ті АБр о Мнв бів без сій Ве бек ТВг обеє шій Бко сія аїв вен веб ща 5 в
Ба їеч іа діа піу рга ві вза ні Беб фев ев ід ім Туг Жат що ТО тх хо оіж Ато беє бів ді ато вве УТ Мен овіж бів Зі ст бе) Аг ем
Зі отв оКео АЇа бів тТвг орав овен баг одхро Баг тів вро ніх ТйкоУді
То 125 Мр
Уві емо твгоУаі уві сії) сію їгр о АТа ТБгоїем бег уві да бі вве 120 125 птвавмца 47 ват-з16-ЗКО їжи ах дій бек оЗек о А1ів Уві Рг піу Аза Бго їв Бін УдДі Бгто о тук
ІН 1 ї4й су сем овБе уві «ФУ сфу тТвгобіу ТВКобеб біб ев ово Туб ем Агу їх 156 ЕТ 160 бі твкобаг або Бе; зав АКа дім Суз вм ніх аа Аа ТАг ген Аз
Мт КУ
ФІУ АгЧ Жвг ої ву іо агоа ргоа ев отак оБго зв мар о міз шФім ФтТу сСуз 15 185 90 ів обБів бів вле Заг дів Хвб АєроАкр ові дій ем біу ває богу у зх З В
КА Ак а
Вго ніз ЖК їжи дід Аіа ве РБгО АТа Тгв обу ТВгоБіп АхроБів о віу «ій 15 г-О твгокевр біз вве твгоїав о твготТвк бів Зек дра зій АТа вго греч дій
ІВЕ БЕ ме й 2х5 230 335 30 вне зів Аів обі бі Агу Аг ші деревне ї1а тує Уві Аз ож РВЕ 345 КВ же зім «1 Мміз Бер Ага діа уві ві Січ фе оту бів Бім твеб Оу зву нен АВ М 25о 55 27 ізн ні дн обег о уд) вго маї дів язр обі бів рго нія сіру Уаіф Бак
ПУ пек за
КЗ го «5
Уаї ній хів Ан АЇВ нів Агробеи Бі жів Зек ма? АБО ос1» тк обто
Б 235 ЕНН тТЕгонів твгоЗеє Аза Ага бік жаф рез Заг отук фа фі бро Ааго соїу зак ке хх хо
МКУ МО 315 зе
Маг обем ока сен озіу 5іу без АВ о аіа сій дів ВГ оАгУ Нік ген сій зх зи Зк
ЗК У: о пів ніУ да івц сім Не т -е- о Ву пі - їх тнКр хи АЇц цого: іс ші нт Агар рев оБіУу и таг оККО сій діа тТпг аз АВ ар фації
МН тах 350 страница Як
ВЗ ААУ щіу Ссуз мех сій Авроіви зок о Ууді Ап обі Вів АКО Ага о1У ге) Ага 355 ЗО ї65 біз аїв реву івм ТвкКоаго дв Жак дів Аів бі Су» акорбец Фіц М бут» пох оз їй ниж 22 ІННО ів бів тує бів «хро Ар Аа Туг «Ту НІіЗ Туг Фіц АРА ОРАЄ бек отак 385 350 Зх щк іги аАїа вко Фі Ат туга Бго 3із ме бів фев веб ші вко сСух Ма! 05 ХВ р вВгОо бів вто бі мемобчу вк хі Бе дій деп вве о твг бів грец ів
Аа ЧЕ ХО тве хі жак о Бго іем ові мдф Аїа біб бі Фу ТВРгоАЇВ тТгроре; ви «35 Зап 335 тер оАга нів Уаї бів вго ТНг гей дер іа Метб січ АТ біч ген ака «що 5 А іуб Звгобів Ма рев обНе хе оуа! Тео АКУ сту АТа ага Мія біт 019 455 470 475 ЗО івм ім ім дер оті вро бі Аа бів лій АК УЗ МаХ ВН ТК Ме 455 а 395 і2и а5В УВІ Уа) Аа ако уз ав ага вве їв мів ахро ші Хек (и цю 0 У
Ахротвк о Зег аз бів цен ма! ран Бін Ух! Зекомаі ТВе Аа ак Уві
ХК Ек ой х
ЗІЗ КУН 525 те мет вго Заг суб ев Ага Аг Зіу щій тТНготТУуг зец вві бро Її йо : о: о, КЕ хо 515 ХА
Ззіпоха! дзп око УВі Аа АБ ОБгГО РгОо міз Ї1е Її БВ рез нія Оу хах Б 555 З щегорнм о МЕї Ма! тів ви сі міх ТВк осів же РКО о іец Бі вра ЗР 6 м М, страница «й
ВАТА КО
Уві Ба віп Аїд туг дер БгО АБо оЗаг АТа су ЗіН біж ву ТВгОБня
ЗВО 585 ЗБ іп мат ви Фі тТВгощег ще оту ам Бе о Ущі бів АгО АКа АЖрожій 525 мк 55 тб о біу 1. Бк АЇВ ОК Зі) вве БВ сСу5 ага піч емо бів АТ Оу п15 БЕ) ет обем ма туго уві НЗБ о Аг Бі Бі Без дів бів дяроінм тТВе бе
Вих 30 БІ 5.52 згромаї баг Аза обі свв шій АТ Баг орго го дід ТК офенорує УЖ!
Уа дід 12 да вгО АЇа ті бій ТіК ніх Ага бек ТвВбоБі вер Ага оо БЕЗ ТО ценоваіа бій бу бек о а)в Маї го їі фви Кг дія Азпоіви боегомві
БЕ БЕ Ех бів те Аха вій Ууші бі бій Авр Оу хаб ма! Сем Рв Ага УВІ ТВг ща пЗ5 Мю
З 1і1у Аїд іву Бій вве Фіу Січ ін бій бух бій обі афв бі зік Уді тах 738 т ТЖО ів біу ат сін тк оїтр вів тТвеоЄЇа лів вве нія 53ів Ага двома
МЕ ак я хе ге УМ «У іх ти ех: бач їі ду сут фо ск ме де ке х мк ах Не
Бін бів бі ага Ууді АгО Тук оїву 5аб ТВг о Ахр го дій ні нів діа 740 7тЯх Ж тТук Ава о тТвгоУуВІі 5ів Ав сви дів ви осів ні шій Узі сі Зі сої
Т5У Я ТВ їі ре; звг деп орец Вей шт вру чаї Ту ої1в щів дго Аїа ТБг уві лег УК тва й о ЕК їх
Тер мет ме Аго мен бій вго сен мів Тк Фі» дай ТВгобія бів ФМ 285 тва ЗУ БЮ сСтваница 0 вВдІ-Я1У0-ЕО «У сук оче и Но можн а свв щ прут т тку ічковен тТве отвК із нів вже 515 АТа ТВг оз) 5)З іч АТМ Фу вк» его вга вто їйгоБае Мі» Ту «іш ма? УКР ошіп Аїй го вка вух Оу
КУН 25 30 дЕп обєм шій жу шій Фі ТВ Агц о фец зег Я5А бі бів іму вче с тне к35 вад ще5 7 КК 5 бок ВИ ха ВИМ стаю г Зх Пе Зк ак бів аз Аз ожіє бі? Азів о Є1 Аг У ВК о тТуг Фі АТа Твг Аа Ага
Зо 55 БО лід бегобів Аїв ма Бін АБа о тТваг вва Аго рБе агро уді ТР ОАТВ бо 555 я 87 хво
Вго тує вне свкобко ре Туг їТВеоБвБа окго Зв нія Тіз сіу сту дер
ВК ще 5 вга Ах дій вро маї рев оте Ашвохаії зві фем ові чаї Бго бів С1у
ЗО що5 зів пу «Ти і Ма? обем чає АР АЗрвонія фев ВВЕ УдДі був Зак оїжю Ат
ЩІ Зо 925
Зег дів ак Туг фвцу туго піц Узі Мас іш Або Бга Ага мі оту Ага пев Ав тев ага оіу тТВКоБій Ажровуз ТВ ТВе мес узі Тв бер ВВЕ
ЗУ Зо За5 ко
ТВКоАхп бів Ар орен ої Ага су Ага вав жа Тує ШІЙ нія Ах о АВЕ шегожіц Тег ОтТНе Бім А5В АЗБ ОЇ рРрОо РБа УВІ діа їАг Аг Бій БіХ цім жвк Заг обі АкроМет Атїа тгро бів бів Уа? АБУ Фі Уді Бйв Аг
НО щаО5
УВІ АїВ жів біповго У«і Аєв о азронія дій Без омаї Біб зувг жів
ІНН 1015 1охо страниця 5 ват-а178-55О аб Аг) ї1іа вве ві Уві АБа дк піу Ту Аг Ага ем офец ТВ
ТВг АБО Ав ОУді Аїв о бНе Хвб о Азв о Аів дав бар оєім Бе аа Аза о цеУ 158 ів бій иа шві рец ТвК АК УЗ АБроївц фівц БвЕ о Біу Жак І1е
УВІ Аїда жаї АВ Обі вгоа тТне овга рез їфе Тук Абе рве тВгобів 308 1075 іс зів аз ів Ага іх аго ага о маі іт; йве Уві нія жЖег Чіу Аа піц ам М оАга фу Ага АКа о Маіф іеза Ба ма НЯ ек сі Ай
Мних НН цих акороАга бі тк жів 5іпоїено бій маї бек азо віх бій нів бів
ТМ КН ца дід тВг о АЇв о кев мен опім уді бів АЇв ек бів БгО Бук ме) Ага м 1420 МУ
Уаї аі да шіу дет бек офеє шві уві йКко бів о біу щіу біта біУ
ТЕ ї153х ло тк о ЖХівз азвотвг о аів маї їй)» о ніх бем Аз ївг дп фен аз їі їх 1158 1155 ве оцет зіу ар шій ві Мі Бук Мі аб о тне даїй бі бо Агу
НЕ: іх ТАТ тТтроБіх бів гай ожаї аку із діу сій Бго АїТа ТВКо А1а гне хек щіп бів АБ сем оівц айв Біт Аїд УВІ Кец оТук бако НІХ Ав одіУ
Закоїаз о шег вгРО Аг; АЗО ТВаК о Мет Аа вве пок УДІ Фіз АТа сту
Рго уві Ні ТВг ОА АТа таб о феб бій ув) твгоЗ1ів Ах фозц Фі і2хо зах за штраниці 52 вдт-Яз7И-ВКО ях я гм я щи чн А фу хи ж учит фак -х пи ин
Віу вВго іви діа Рг рев оруб фечожві Ак нія Бу бух ЖІ тує 1835 12450 та чаї вве бів бі бів Аід діа бів їі АКБ ОАКО АБУ Бій їв БІВ 1350 1255 МО іа вій шій сім Аїж ув) Бро Рг АВ Аяв ої ува) вне 5вК жі 37 275
Ух Же" Бго Бгто бек оАів обі туг рев уві меж міф Бек Ага Бі іга 1255 ї2ю
Аів о бес дів дер піц о вго вго о хег о кем АБ оБгО Ма бій беє вва ї12ах їщю іх шет о щів бів Аїа Уа АЮ отв бі Ага УВІ ев отук Бе; нія 5ег
КАЗНИ 1315 ізо г Рг ів АТ тео Чет о аАЗі дДів Бе Хег о гви аз ді Аа ве 3535 1535 1535 я ті З ту прожи хіх хи фу й ке УНИ то-Ні г ік їв о біу і вго вв ЗІ» 0іу Уві ев охаї бів без бів Уа! 13:50 1345 ї350 іжу ву АВ АЇВ Ті» Вб) оіжу бів Аїв о Бів Ав вне ВакоУді Бго ї555 ї353 із355 ів бі шіу его цец ТВг оре) Аїд вга кга зва сечо Абу хі Щег зн 175 ї138о
ЗРГу вс ТУг Ве оВко ТвКорев о ївм кі фра ог їв цій уві ем і385 БО 15355 сій овго вхо бій нів Зіу Аїа без бій рух Бі Ахе пі Бко ція ічю з з
АВ Ага ТВгР ог баг Ай Ве бек оїкв ака мМекома! бів бін бій зАїЇх заз за
ІІ ї1я5О КЗ їец ті ду тує УНІ Міз деро біу 5вгобів Те оїжм тТвг АК Заг
ТА 1335 і жтжухзьчазі МА сСІвамица Зо дж... СК вВдІ-аРИ- ЕС : а с ре їх т т хх ТУ Ко Ка уж яке Ух еру Мох вве уді жи ме А18 Аяп АТ обегозуів Меї АБО АгОЇ хів Зак НІХ і5 ЗК 1455
Без оуаї діа вве ТвгоУВІ ТВго Узі ірц о Кгро Уві Аза Аз обій Вре зЗаБ5О іч Та вкОо жі оревб ївк о тТвВге да ТЯ бі бевобвійп Меї Тгтро бів бік 8ів 1473 їаКО ІЗ те овів овго їі Бге Ав бів дід іву до Че ТВ о АБВОПІУ АБо за і ЕЦюЮ шаг обіу Баг бів Ахроіши ма) оТук отаке жів сіб сій ббе баб Ай
ТУ 151 І515
Зі дг: ба чаї рем яку Біу АТа о вго оіу ТВгобів Уві Акц обер 152 1525 їх вреотн о сів від бів без» йди Бім бі їв ма? й) о Бе баб нів
ГУ ї1530 Во ага боіу тнгоіви дев сі бі вне аг Ре аг іон о шеб Ач о шіу і їз 1550 бін нія тВгоХек о Бго Біу снів овВе ра Ага УВІ Твг о Аза біб Кук 1555 за ї575 щі Уа! фен фен обекК ваз вуз о обіу вегобій ТК рев о оуУвгб маї сСує
ТУКО їз і
Рг обіу бЕго уггі сій БгоОо ім о Бек обек о 5івй Тк обецч Аго АТа аг їх95 що БО
Зак бек дів шіу ТЇВг ав Бко дів бем бе сем тує Ага Уді уді
МУ ї5Б15 152 дга щі ого бій Бен обі г; без вве нія зі біп бів АЗОВ дет 1525 15:50 1555 твгопіу БІ АЇв бжз Уві ав ве тик обів Аз ство Уа! тує дід
ККУ їі1ка5 і155О0 страниц я до Я окр
Мещ ши п РАТ-Я Кто Ка цк І шіу Ачи Ті фое Туг ОТ Ні піц мет Бре Без бів Бгто Би тре ї155х і1550 їа55 пім йта ні або о твкК рев бів фзу бів за Зегобжко вко рко 518 в Зах пи 10575 16550 дго яви хаї Ав ліва отвг орви Дів Уа АТВ Уа шего вне сти дів 16585 М ї5З5 діа су рус бій Ат вто еко нт Беноїгр обу Аа о фуя Бі Мав лбулох иа за
НЯ ТП ГІ за цу гунум зи хи г Мі. хау су сивих ще - - г.
Тгтво УВІ орто Бім БЩіу «ій яку АЇїз дб ї1з тТБгожа) АТа АВ Яеи 1715 ТО 1/х5
Му Адів бог аз бен ме) Аїв Зоб о Ууді вто ВековРОо Бій бгбБоБег 1750 І735 1740
Зів нія дев оУуйі фнрмовБнЕ Сі УДІ ТВгоспів Ре кро жег Аг шіу - Кк стаю их ох М т ях їгюи 1755 бів овен їжи Уа его біз бі обро ву ніх АВ пі бій Рг Ні
Зк ще зом 1750 1255 зт вне іти бів бек обійв їви 413 від біу бів ев жа! отук дід НІЖ 1775 ї7ко 1753 піж і бі бі те сій сів Ар озіУ Не ніЗ впе Аг Аїд нів . - тд - до З СИ м С ре Ко нт їх Мк я фо пап бів щіу го АТа бу Аза о же мі Аза Фіж Бо ощівйв ТК же сія діа РВЕ Аа жів троха! ага ав АР Аза Бін Ага Бго Рг 18558 1825 і835 пі овго бів Аїз Зако го дев Ага ев тТвг ода біу Зак Агоу
Ко. ща В шк З 1525 1840 1845
Аів вто їі баг Ак Аїа бів іш шк УВі уві Аз Кг АЕрРОХеК ім іл іо сСтозницав 55
КАТ-Я УВК) від ге ші «Рв жів ЩіЦ тує бін У сі? Агу дія РКО МІХ АчИ і555 ЕК: 1595 зі Ме іви чаг оре мі Бім бік сіж фе о біУ ро Уві ТВг Ага 18кО інЕх їі
Рве ТБго бів АїВ АжхроУВі Аз 5Заего Бі Ага їм діа вне уві дів ї18щ5 КК 5 дхв обі одеб сег та АВ Бі ші вве бій фе) бер о Меж бог Аве
ТО Зх ко
Піх Аа озег ово ВБгОо цем РгОо омМеї заг оби Аїа мі Ар ців ів; 1225 із50 1335 зго бе" аа їте піч УВІ Біп ем Ага АТа бу рази соів Уді Ргш 1950 я 150 піп оАта фен обі Ага Зеров ве заг обів вів сів ев Ага уд!
ІїЗх5 ЗХ із55
Уві баг о дз Ага іш ФіЧ РБго із АїВ Аїд ту Аг вжи Тв БІЙ ії 1575 ізо
Біж Без шій Туб піж нія Бево вки Уві піу «фу аку о Бко тВгоБег 1985 жк 1385 діа ве баг бій Басів" їі Азвобів бі бів ар о Уді рве Аїд «щю НУ о вве ТВг Ахповіе Зак аг чек Ні Аа ні вне дга Уа ваз дів зак Ази дек
МЕН ЕН хи У ав Аїн Ага діу ма) АзпоАТа его оАія Уді уві АБ мі тВг ох!
Зо КОХ НИ !
ША й ше ц- А НА п - вчдока
Аг Ага демо ем ніх Уві тва вів шту Шіу вко оте о во дій діу 245 ак сп5
Ата тв фен ага бе ахроБко ТВБгоМВі Боб аз АЇвВ біу бів ев
КАЗНИ ЗОН МНО чттваница хе
ВАТУ ВЕО дій АБ АКО ТНК о щІіу Хв Уві го Аг вне АгЯ ім феножій щіу ах 205 2055
Рг аку; Мі шіу адко уві Узі ага ові Рго Аге дія Аг отпг шій
Зоо м 2 вко піу бБіж зегкобів мен жа БР біб вБМе о тНк сій о5ів Аа кеш 2115 я11о Ка ще ще ую ук К ке шу озац шли км учи ль і леж зЗівз о ави Бі АКЯ Сни спіх би Іі УДі шІіУ АК ОВК чів міх АгО гї2й 2125 2К
Аїа вго бі Вго АзвВ осі деро бек овен тк озбеьв і) о евро отев дід тіх5 Не ву ау ців бі ожаї Бго Бге АТ У! АЇа Жет бем АБИ ББє АЇВ ТВК піц
КА 2135 г вго Тек азв 5ів 5івз дга вко їТук бер ха дів івмо Без Зверомщі тій 2178 пРх го опім дів Аа Агар тве ів Аїд оіуУ бі Бго бра вк баг ТВг 2180 2185 АВ вео Лв жу ін вВге біу Бго Веб дій ет Мек Бо йім вко Аї 235 ДЕ 295 за діа бух Фіу Бфу Бе рен о бего рве рез біз Ав АБ мет вве
Ка що М я ту стулья кг ААУ кий шег Уві Жів жів все Меї су обев о маї бен овен офни Бер дів ев аа ва їїв без Бга бец ів РАБ ТУГ ЕМ Ага і дк одяв о буз ТВкосіу з дих ява їж НіБ АБрожві сім УВІ Беєбє ТВ лід ух Вго АгО АБ Фі ви акя ТеБ КЕБЕ
Аіа ді Аза ОТВК бів тве вне дгз їух У) Бін о вго щі бів дів
АБ нн ей жа пк ЗБ страниц 57
ВАТУЯ1МА КО
ЖТє Кри о їв оту дів ді рр ді сів сіу ркгу рко ве; ФіУу Кі
Ті оКрРа ев о тТнр дів ді Бго бі Бій сіу го Бк вБгбб осіу пі 225 зІчО 2295 з в ме че мі им Єв пі бик ач те пуче х ще іп овго АБ ОБго Фін фев оїав сій Вбе Сузх АгО ОТАК о Бго лей вро ще «05 КЕ зх паї ми й хе У тран чех лу аа ів ву Ах йіу щі Тут о тк» оУді
ЗО
«ек ЗО «їз 810 «ай РЕ «2135» мо жхарівве «ар Зо
Ммеї Ага рго Заг о шіу ТВг о АфЇ пі іа вій феи ів АЇВ зв оївь АТа ї х ІВ 15 ча йо дви ча вл дит ді тб 1 ке се ми бе тім віз ів Му БгЗ вка ЗВГ АГ АТ БЕИ ІМ БІ МУХ муж Мді СУБ ОТО
КН 45 3
Зі Твгобет" дв вуз фец о тТВК офів ек ошіу ТВГ ОРЕ Бій Ажхроніз ВБе їх БА ак іч хг орем ів о дга ВекоБве дзп аз буяє бів мЩ ха рм шіу Ал хо ЗУ 50 ем о шім Х1е ТВ отТуг УщІ біп Аго Ап о туг АБО Бец аг РВЕ їяБ рух
ТвРОожіє 5ів бів жаї дів о с1у Туб уд рем її дія фен ваза твкоОУМ що 5
Піч ага їі бгоОо ївз біч Аза грец біб Хі Ті ага бік Аа мех тут їй чт Щ оче д й
Аа Мел ОМ
Туг Бім Аби ше о Туг АТ бец від Уаї рец Бек Абв тТув др АТа АВ мух їВгоБіУ Бе бух біз вжи ВкО Мет АГ АБ ру ОБ бів Хі ев
Алло 155 10 ніх фіу АД! Уді Аку БВа сег Аза аз го аїв їец о буз дхп Уві пів сСтваница ЗК ватУч12О-ЕО 145 Кн 155 іа
Веак рів Бів тТКр о АгО АБО ЖЕ УВІ бег о бег АВО РАВ р8 бек дев Мет его мем дер Ре сів аз нів вер обБіу бек оСуї сів рух Сух ар вго 155 КО
Зжр суб БТ АБа бі зве су Тгросіу аіа 1у Біб бів ла сух бій 135 дю зх
МУв о іеи твБгобУу5 Хі зів суб А1а зів бів Сух дит біМ АКО СУ АгО
І 7 із І 1 Сх Й лю Й Щ щі ко БУ жо сі суб Зак оБга зве одно Су Су» віх амРпій суз від діа сіуУ сСуз рухи 3 | 235 ав м дом Оля НЕ
ТВк о сіУу ВгОо Ага сія бог Аз осус фев оУді уз Ага фуз Не Аго АВ гаї 35 кчи із аіз твгоСуб сцуз дже» ТВгоСуз Вго вВгб ів мех фаєа тує АВ го 25О ТБ дув їв о твВготук Бій Меї дяв Уа! Аза го із Сіу уз тук бак о йве діє
АТа тв Суз уві ік фу Суб бго вага Аа ТУК ма! Уа) ТБг о АЗВоОНІХ ке 5 БА іх ваг оСух уві дго від буз бі Аїв Акиохар о Тує шій ме оБіц біц
ЕН З 315 БАК.
АЖхробіу жа) ага уз Буз уз уз су5 біЗ сіУ вс Сух аго іУБ Уді пл 735 зх 325 З 325 сув ахп обі жів бі їі «1у ща Не Ух Ав обеб фе Заг оїів Ах
Б 345 У
Мів те Аз їі)іб їж Мі Ра бух аз Сух ТР оЗБг їі ЗвросФіу АЖ ге й ЗЕ; 7 жк й й 555 Бе 305 іще мі Хів осо вго ун) АТа вве АгРЯ сту Абе обак о вве тк оОМмі5 Те страница хЗ
Аг У0-5ЕО 370 375 БИ вге о вго рен) Або ге бів сіб фвацч аз хів Бо бу ТК от Буз Б 335 ЗО Уа за їі твгодіу Ве іен фе; ї1е Біб дід тго га сії Аза АК ТВг аЗВ я М зі із ніз аід бе ій азй фер бів хіє Зі Ага бі АК тт овУуз Цій
СУ Бе в нів пік бій РВЕ Заг огав дів угі ма Зк офеб Аяай ЖіЄ ТВгоЗег ге 415 «8 ща п3ім вк с скік геощі тхір о зег Аза і до» о маі тів ті лит
Чіу св дар фжк тео бу Вів хе баг Аз БІ АЖ ОМЕІ тів ів по ам 355 а
Зі ввпоіух дви бвц о сСує Тук Ай Аа ТНК Ї13 АБИй ТК рух вух Бец 4855 47 ХВ АКкО вне бі твкозЗекобіу шій орж тТВгоїух Ті їі его ап Ага ду 485 я 35 випив дак см мк Зх Тв ці З то еУХ г мах Ло у На й оЖХаг Су куб Аа ТВг Бі Біп Уді СУБ Вів лів ж Сух Чек Бр ве У що
Зі біх Сух Тк обіж ве бів вто Ага Ахросувх Уа его Суб Аку АЗА щі аа Не
Уві 5вр вка Бі дк пін СУ Ві див і 3 СуУух ап із із Бі пі
У: ЗВГ ОА БУ АК МІН о Сух жНР АБ Оу СМХ АБИ баб бер БР Бім 530 535 ЗО щі БтО АС ОЗ: РІ ха) КР АБ Олек бі см КІВ ів си БІВ ЕР 545 55 Ух ЗО піц Суз іш) о вго сів Аза меж дай Хів Твгб обу ТВК обі дез о біу во 555 ЗУ 525 вар одна сСуз їз сіб Сех АТЗ Ні Туг їфє Ар одіж те ні Сх хв 585 ке їх ТВгосСух Бго АТа Зі мафї маї Біу бів деп Аа тб огец Уві Тр сСтравина 50
ВАТРА
«а ОД БО їу5 тТук о АївВ Ажр дів зтіу ніх жа! Сух Ні ре суз НІЗ ВгО АБ Су ! ВІ 5І5 пе
ТВк тує Шію Су ТВг обі ве щі ев зів с1іу Су» ге твг аз Бі шфечу іх Кіа вго ср хі За тар опіУу мат Ді у лід івцісєцн ій
КкгОМ УЗ дів вро хв хі АфаІ тТВагоБіУ ВХ о ЖдРі о іу вій освц Сем о Сец теноівц Уа чаї АТ ред овіу Їіз сРу ібц ВБЕ омМек аг Аг А МІВ
ВО Ех щУЄ
Їт Уа Аг МУЗ АКО ОТВг офом Аг Аг Мав зано БІВ ТО АБ ООН ех ек 7 М ЕІ; М кчу о яТУ БВО БЕХ
УЖІ біч вро фу Уйг об Зак обіу біз А1В РРО дав пів дів фев аб
БУ 55 БК
Ага тів ке» ому» Шім ТтВт Бім ваворує бух 16 вуз хаРф о іжу су баб то 210 т 723 шіу дія РНе Фіу ТНВгоуаі ТУ МуБ УРУу вае тТгротів вго бів біу 16 іїзми злу Кк: За фник мав дії; сх ех щі си дк Бій дід тТвг хек
Бе ві бу бів реа мщЩаії дів їі бе5 шій Сем дгЗ сій дів Тато 7 щі туї ча їй ти 40 ах ЕХ вБго фуз АіВ Аж уз ПІЧ Хі іо яз озів вів Тук ді Меї Аїд Же та дяроаяи го Ві УВ) Схух аго Беца ренобіу Кіз суз ен о тТВг ше
У чек яд
ТО ТРУ ХВ тТве Уві бій рев ів твеобійп ієь Меї го квесту Сук Бей без Ав
ТКУ о Тт7З5 53
Тук УЩІ АгО Біб» Мі5 фУ5 АБроАБа Ї1е біу Бег бій тУг фен без Ав
Ох Ів 15
Ттросух уні шій Іі вів Бус б5іу Мек ази тут ваи ім Ар оАКО АКФ
Страница БІ
ВАТ-ЧІРРАОА ЧЕ
Зо вах 536 іжу чаї Ві Ага Ар оіем дів Зі АФ АЗИ УВІ ревоуді був ТНК го 5 шій ні Уві рух жі ТАК АБО вче бік заз АВ рух ем обоем бі Аа
ВО 55 БО щім жі мжв сів тт ні діа ім біх сіу вує Уа вго Дів був тер 5 а 75 БУ мех вій Ми Бін Зег о ф3івоіжи Ммі5 АР їі Тут ТВгоОНів Біп о 5его дар ви Зо ках мні тгро5вк Тук фіу Уві Тк УВІ ТРробівю Бен меж тк впе оту ет щк щи я пух Рго тТУк АЗвВобіУ Хі рео АїВ бек (1) їі его Заб 316 вен оБів піл аг зи їх віУ 1» Ага вжи Кго бій Бк Бго хів Сук Так о їів дероуві Ту
Я з5 З
Мек оті Мет ма! ру Сух Тер омМеї Зі АЗр АВ АБО БЕК АК РКО Ру
Ко з5е 55 ЗО вве аг ів рев їі їіфе о єтй Бо Хе об у МОЖ АТ АР АЗВ ОБгО БІВ зах я 5
Ага туг мжо УК ті8 бій оту ав о сіш аку Мек нів Бен о Кго вк ог пи З85 пОй
ТВг одер ожиг Ат ВВа туго Аг Аі фем меж двросіч бів Ар оМеї АБО захв оМа1 жа! АР ОАЇдД АББОБІНО ТУК офшу Ті вРУ сій ів Бі. вне
В МІК ние
КНе его бег Бго хег ївгоЗег АБО ІВ о РгОо ем оїеу обег кеЄ бом ще зак КНЕУ вегодій ЖАБ о5ек Ах АЖхп бек о ТвгомАї ав був 1165 АВ Ага аз страница БУ й вАТЯІТКО
Мо ща щи
Зіж ван осів» бек сСуж Бе її6 фу б1М Азр о Бег о Рв фео 1 Аге 1955 Не Мк
Тут Жак дег о Ар о БгОа Тв ші Ав рев отвк бів Абе о Бек о рів дхй
У по ж» Че ча
МО 1075 Бо
Ази оТвг о РнНе ем овко Уві Бра о шім тек Хі аб опція евгохві Ро
КЗ ВО Зп5 це ага РКО Аїв о 53іУ баб ува? оБіп о дхп о вга Уві Ту МіЗ Аа вів 00 325 о вт бе) о Ачи РКО діа вко Зего дк яв о вКо Ні тує Бій дар о Бго
ЛЗ зо 125 ніх аг о тТВгоАза Маї бі жи оБго біб Тук ев Ах» о тТвг Ма бів и зчїх Зла
Кашу 31
Бке ТВГ о бує Уді дев жає ТВ Ве дхр о Хаг о вгО Аїд ОМІіЗ тТкр Аїд 85 М 1155 вів кує шіу ве Ні пі жі Же рве Ахо дай Вк Ачротує Сів 1165 їз365 ЕН
Чіп одеро Ве вве орго зуб Зі АТ бує без Аза пі жів вве гук
ІВ їКо зї1К5 піу его твкояіа 5ів АБ" дів бів тТуг рев Ага ві ів вга вів
Ії19о ВЕУ з ек бек щі» РНе Хі «Фіу дій 1235 ї21о «ккаОз ЗЕ «аз 556 крій» ВЕК «Аа» нсвю зЗаВріеих «МН мех Вго Бр веб дк вево се) вне ве фу фей Ве іфви ТВгоБго Меж 1 ї 1 15
Страница Б
РАТОЯБИНЧКО ще ще В ях ме з хро ЧЬ ШЕ и щи дк -ьИ ре ох х зів жа Ага вго сім пів Ре бен о Ууді Уді вуз ма зі сіб о01уУ АБЕ
КІ 25 Б
Аз Аїа уві їви біп був кер о вуз су Ті жає Апродію во таб Бі 35 І 45
Зіп овви ТВг оте» бвгоАага біз Чек Бро фев о гБуч бта Бе їв Буз їжи 5о У 50
Ззегоіец біу фе Бра обі без біу хів о мі5 Мет аг Вго бев Ав тів 55 ТО їх 5 тгроіви Бе ті Ве ап оуві Боб обі біб Ме бі бі Ве Тут ем й п ЗУ гук бів о врга бі Вгз оВк) Заг одім і ух їв Тго дій вро бі тка ще
ЖЖ обі оБгО бі БгО РТ УукробБім Кух дів ОтКкр іп БгО 1 УКрОТА: - кА авт чай
ТО 1025 о
Уві Аза уві Біц бі бек бі сіц іац вва АгО їгр оз Уді Баг Ар 1 їі 155 іш ЩІіУ пі ів ші СУ Шіх івц іУх ах Ага Заг о зар ойі) щЩіУу йЙгКО
Мам ожіу їй чо ші С ші Кеш СУ ап АГ Заг ОЗаГ ях І го що 155 4 цег дат вго хаб біу уз ев Мах Баг о вгОо Був без ту ува! тТгвВ о АТа 145 ї1хо 11 БО іух яз агоа Вгоа обін їі тгбробів бі Бір бгоО Вго Су фан о бго Бго
ЕЕ: 175 175
Аго АБробБег зізц Аа оЗів Бек ово чек сій АзЗБорен тївг о Мес дів вго 155 5 піу ве о тТнкоїви тгробем зЗег о Суч біу ві Бго бгб Ажхвобаг о Уупі Баг ака бі Бго ібсц бек оїРротвйк ні Ууаї нів во уз біу вро уз щве 238 215 22 зви сзи Бег ізн бі ій вуз АБю Ар оаАгО КО АТа Аго Азо Меї тер сСтраницв Я
КАТЯ КО чаї мах А Зв У іюц івч Ву дк від ВК Аїд сій дою ді; маФоМаї БРВ Те ші семоїіву еМО ВР АРУ Алі ТНК АВ іп Ар одіВ зах 258 й
ЗУ бух Ту Ту Сух Ні Ма бі Ахв о вав тТве Ме ет вва нів Ген що 85 27а
Щім їі тк о аАТВ Ага вко Узі їла Тут ніх Тк обев бе) Ага те сте
ХТ5 БО 85 біж тки оїув Уві бег АЇв о маф те овен АВ Тук во т вва був Мен з5О хх Зп
Суз бар оїав о заф 1у Т1і4 івемд ніх іно сій ага ів рев озаї вм АгО 305 по ЗІ ЗО акп о гух ака іх Ага МОЖ ТВК ОА РКО ТВгОоАга АБО ве вва їух Уві за З ЗІ
Твговко Бго Бго Біу бак о сіу вго сій дай ів о Тук бБіу кп оУуді ур 340 45 М ис офжв бро Те ойко тТВЕ оЧек сім іец сФіу Ага Афв бів дкоО ткр дів 355 з 555 ві бі їец біУу Оу твгоАЇВ ККо паротуг щі Ап го хаб ВК АБЕ
ЗА 7 7 Зк й 7 ждв
ІМ 3 же ха бів АТН АВ бі дів вев о біу бак оАгО ве го РКО біх Уві! біу
ТЕХ З 325 МЕ
Рг осіз бів бів єї Щ1у Фіб сіу тує біч сії Бе Ах Зак о дів 51 305 30 15
Ази лет Січ Бе тує бів Аза Ах Заг Аза ів ЗіУ щій АБО ОСІВ фу а Ай 30
Закобзів ав бі 5акойіу Тут Щій дей вгоа сії Азрвобів Рго із біу аа а45
Бгто Ф1Н Ар ФшіЬ АБО обеЄ РВе бег дав дія піц Звб оТук 5) АТ СІВ а акт да в ях я стадниця БУ
ВАТА КО
Аза ців Бів цен тв дій Бго Уві дід Яку ТвВгоМеб Аж» вне фіни Же 355 СУЯ лу 480 рго міз бЇу бек АТа Тгр АЗо орко Зег АБО БІВ Алі тн Зег демо Ту 485 ЩІ За
Зековів 5акотут ід АБ МЕТ Ага біЖ Її беи ТУуг АТа Аїд вВго БІВ їеМ ага жеє їі дк бі Біп Бго ові вго Аха мів ші а1ч дар АВ
ГА то ще
Авробагє тує Бі Аа Меї дер одяй РКО Асропіу вк аБи орга 318 тер 3 «ЗЕ па
КНУ 515 МВ, піу шіу ші Фі дк мек бі ВР тт Бек отвК Аг пак 55 355 «ФАО 0012 «аеКМух 8255 «ах ву «813м БехО зарієнйх «00» 0019
Ме о тве о тне го Ага ай Зег УВІ Азпобіу ТВгоБАйе бго АВ жів его ї 5 10 15 мех рух сіУ вго їі вів меє бБіп Звг обі Рго бух ВБго іч Ра Аг й за Ук Й й З 7 хм У АХ зга мес ве Бек ів У бі его Те одій Зб вБе кВ меж ага ст 42 45 хг ої ТВгбосеуц віх Ата Узі сій її Меї дай піу івша вва нія жів м 55 Би
АІВ їж «1 пі ій фату Му ті уч Аа піУ га хв іа пут чзід
Атів Кен обі біу Кам Бемометб фіз Кго діа сіу Хі о тТуУук дід БрРОо їі п ТО 75 ко буз маї твкоУаї теротук ге дви тра о б1іУу Су їїа Мек Туг їв оїів станина ОК пБАТ-4РТ НК О
Здег пі Зо оівц бвц дій АіВ отвК Зі Ку Ави Бвгб ага Був Суб Мен ню 16 Мо чаі зфув бі муз мМЕаї БТів Меж дез Заг оісц бог фен вве АВ АТ 1 315 ї20 125 чау пі» Мат жі ів хро тів Ус дз їійп із деп тів ех їі до
Заг осі Меї тРш сви же Кі МеК АБ хів Кей АВ діа БУ ІВ пі 155 140 нів вВбя вацогув мет біз ек івц деп На хів Ага АЇВ нів тТвВгобто 145 їі 155 150 ту ЩЇ18 Ай їі8 туго вазй су Бін РКО Аів о Ахп Кг бак о бін Бу Ав 15 170 МВ
Заговга Зеакоївк ів тук Су» тТук Жвк о ї1в діб бБег о бе ве бен оту 18 її 190
Іі єси хХвкоуві Ме ігри Зі рйе дід вве вве бів 53) їм оуді Х1Е ча: зп ак
АЛЕКУ че АК з - ко ку ит м Міоччя го йти СВ би ку хх у ке ків біу їв У бів азп обі тбр обу Ага тТВкКосух Ще ага бго ух 1 215 Ва сао й и злу зв оі«З зак дів ін 1 Ух ех бін бів тк зів егоАМа бів Уді бевокбео бак дів сім ів мух ух іч бі зло
Ти 23 БІ 258 сім т1іе уз Щій шій мзі уві! Оіу фяц тТвгРоОів твВго5ег о бвг дій го ук щч Го за чо ет мк чн ч. пін Чиж и ще . и - - бух деп осіц сіЩ АВр осі Бін і зів вБуб Зв Біп біб ім ст ші
Ки зах Зп мол «а п киш и ОНИ "зу ран КН чи ВИН ре, я чи М рани бів біч Твгбобіч Твг ад вва оБгОо Біб вго вго Бій А бій і ах хе ЗздаАа КК
ЕК УМ А
Заг овго Зі ори Аза азв бар о Увк о ВгО вща 235 «Ав 5 ат. за «я Алл зи «Ві ВЕ сСтвавина 57
ВАТА Я У ОЕКО
«Кі» овВуко Зарієих «ех 3 меж го фву фом о бец ев ба б вжи рез тТгродіа сіу Ві бод; АВ ін У 12 | 15
МЕЖ Ахровко Аа Ре тк оівц сій уві бій Бін бак о маї тТВРоУді хів т 5 КЗ бів біу іч Сух Уді зу щі ве Сув ТБ Окна Ве ні Р Хію вго а 45
Тугк Тук й5ромуз Ап шт Бго жав Ні ФіЖ Туг Ткворве Ага бів Бу 5 55 5 ів їі Ті его ака АЗроБаК РО УЩі АТВ ТВК о дЕпП ух фон аз овів 5Е то 75 о зів ма! іп бів 5ів тТне сій сіу Ага РБ8 Аг ем ої БіЖ 85 го 5 ЩЕ п
Соя п У -вгОАгО Ачи Аа Су» шесб фу чего тів УВІ Аза оаіВв аг АгО Агар АЖр й тегу й чук 7 худ п це КР 11
Аза Оіу жаб Тут ВЕБ о РВе Ага Меї Біб АгО БУ бекотгк губ Ту Хакг м: їхО 125
Тук Куя йаг ово бів ев зак зар ніз шві ТВг Ар оїем УВС ніх Аге 130 135 15
Бгто о їУ» ів веб жів ту шТу ТВт без фіз Бко оіу нів Бег Був Ам 135 Ко 155 тво фен Тк осСуз Загомві чего тт Аїд Сук сіб бія Бі зТвВроБко без ї1» 155 то 175 вач ово Ткробру Чек АТа Аїд Бгто тТВгобег оїзи бі вВга Ага таротар ху зах М (У 150 155 134 нів баг обег Уді сен Зв рів тнковго Ага овго сій дар ніх сту ТВс ке Ой 25 сровНничв БВ ватеЯІ170-5ЕВЗ т ач з їси Кт Е тон г Тож тк лу жу сема амп обец тпгоСу зів У їж кН Аа сту Ат оту Уді тнротвк сти гів іх жо
Ага твг тів шій сем деп Уві тк оту Узі Бго бів да рго тве отв тіу жів віе вго бБіу Аж осі Зве о шіМ уз шій біб Твк ага дів Бі
Уві жні ніх ціу діа Хі бі оту Аїд бі Уді Тв АТВ фемофнм Аа
Би з ат
Бен осут фев о Сує рев їі вне бе їі мні ру» ТВгоНія Ага Ага Бук 7 Зх чай М 25 М М кий ЕІ СІЙ дід дів Аго тб Аза УВІ піж аго аа Аза ОТАК Мі овго тТве о тТнгоФіу
Зег 8ій чего рка ру НІ ів уз ух бе г вуз каш нії Оу Вго тТВг зін твг заг Бек осбуз ак о діу дія дів РгО ТБгоуа)! Сів меї аа 518 пім ож» Мміз Тук діа же іч Азп рвані бОіу Мей ахп о вБго бЕгокув з зах вени
АВ ОТвК Баг тик сію туго Баг обіц маф др отйг бів
Ух ЗО «й1їз ОХ «ази» РЕЖ «813 нНехо 5звріФпх
Мет ТВгоВго вго оч Ага Бец рве грец кре Ага Уді Су с1у ТВеотне
Кен нів цен сен ке бер обіу ев о бею цев чаї кни ім Еге сіу дід 2 КО Б зів біу ев овго фу а ту їем оту ге зек Аіва Аа сій ТВ АТА страница ца
ВАТИ УКО дге жіп Міз вто рух Мет ніх фен Афоні баг оїТвг зви туз Кко Аїй ха 5 ва вій віх фен ув Оу 45роРгО его одуз Фі дв Заг іч фев тт гу щх й ще 7 З ие сх У хх Мі
Аіа ля тТиг Ар Ага аа вв фен бів Азов біу РНе Бек оїеви дек Ал й а ЗЕ хи бак оівн о івц чаї Бо тк обакощіу Кі тут Ба Уві Тук бер бів 188 МЕ Мо чві уві вне бак о сіу ух АТ Туг баг орео цу АВ ТВ Зако бек вго 115 тео 155 іч туг ем Аа нія біб УВІ бів рез вне ек о5ак хів ТУ Кго вБе їх 135 ій ні УдІ ргз рев оре) бак обак хіп буз МБТ хв) Ту рго бі бебв бів 155 що 155 15 сім окго тер фев оміз бЕє мет тТук нія пі зів аі8 Бе бів іецотне
Пій ді дв шій реи щи; ЗТвроНніє ТвВг Аза бі жів вра Мі іє уд
Чі ошіУ Ар ошжіп фе жи НбоНнтТх тпг ОА бі Р ОВО МІВ НИ МД, ав обек орга баб о твВгоуді вве вне 5іу Ав вів АЇВ іви 155 290 2о5 «230 35
Кіл вт «Еш ВК «Ай» неже 5арісйпх «ВН меж Зег Тве січ бег Мех їв Ак Азо УВІ бів ев Азв Фів Шім АЇВ я се З ц «Кк
Кх ї Я З
Мановто Бу фу ТВКоБіУ бі бВго бів Ту баг Аг Ага Суб іец ве за й Зк Й й поз жк Кк схе странице З
ВАТА г рев Зак обец рве бак вне жу їі хві АТа Фі АТа ТВР о тТвВг ге вве ї5 ВЕ 45 сСуз цемоіжєм о Ніз На сі ві Хі бі рго обів дез хім Фів ва овго ага азпобенобег рев їі Баг окго їжи Аів сіп Аіа Уві ак бег бак
БЕ т т 5
Маг ОАга тТйг ого его ав їж Бгоа УВІ Аїд нів маф Уа! Афа Ак вго
КУ за З
Зів ін бів бі бій ме вів тТРр ем Ап АРІ Ага АТ Аза із Фев мю МЕ цоО ме АЇВ Ата о зіу і сій вм о Агч АБО ав сій іви ма1ї УдДі БВга ер 315 ї2й тих кож не м піч піу бен отжк рен бів тує баб озій Уві вен він бух Фу Бій діу 1 135 їі сухо Бго Бек ТвВгОоНів маї зву мем те Мі Тве о ХТа Заг ага їв АВ 115 ї5о0 155 ї50 чаї бек о тук Бів тнеоїУу5 Ма Ап огвм їв Шев АТа жів Був Зак оВго сСух ЩІ АКа шій ТВ вВго січ бі АТ Ов Аа ру вто тро о тук Я
Ркго їі Тубофем о зіу піу Уві вве бів рев бів буз б1у АБо АгУ ем
З Аг Ка и М
ЗЛУ НУ ФУ с че нен Че о ке й ср пу Кене Ії уч сійля Й я ки щи
Заг ові пів Жіє Аза Аг обо Ар отуг ви АБО ВНа АТа дів Зег о діу 23 215 вані: сю а рн ма хіх 11 уУїх зу п зів ома: Туг Ре Бі діз ї1із дід ви
ХЕ 230 «ФА аа сСтраннма 71 вАт-а120-5КИЙ «ій» ВТ «и» нетто бдвіайо ках 3 меї Фі дів їі Фіу збе увь бі ато бі БіУ Ат) їни ФР СОІУ Аг ї 5 іо 15
Зіу его ви їзм бен Афа УЩі АТ сі Аа ТАЄ лег фев Уді тнгову за Кая БО
БУК Я й їжи ми й1із аф во ів тВгоУаї сцен кіз Уаї зфемх дія фец уві го
ТУ кі 5 ів дха вій віх біу зи о уді тк о сіц твР Аа аз о рко піу дів шій зіп Аи обіп бі Біу вац о УвР тп о сіц Твпб лі Аз ОоРЕО БІ АбВоМИ 5 дії щій сів бік ієм ші вва пі вк фен вго Бі 5ів січ РгРОо сту ц5 о тт во
ТвгоаАзв обено зак оБев бік жу Рго А1В аа ні ее їв Бі дів га
Шви бу ЩІіЖ БІВ ЩіУ фам сі Тгвобіш ТВе отв бух 1 Бів АТА ве ее Ми Мо івмотвг бек о щіу ТВг осі вве бек Аза вів бів бі ів дів гом Бго
Ул: Й п Таз
Аз МК її
Зів зв о оіу ген тТук туго ау Туг Суз ім ома) ФіУу Туг Ага іх Аго о 135 1 лів овго вгО біу |У сіж дер ого бій сту Агеролег УДІ тговен ага
У ше хх зу іл іх 155 і50
Зв ошШег оіву ТЖе АгУ АТЯ піУу бі АТ тує ОЇу вв є Ту ТВ Вко Щи
І ЗБ А їх
Мав бен о їев бів бі Ав сію те ма! ТВ йо Уві ів Аза рт Зв 15о 185 ме
Аг Ага вій Біу тт о сіу ВгРО фен ТгротТуг ТВгобег о жаі Біу вве 1уУ пемзамима стеми ле
ВАТ-Ч1У0- КО ах че НЯ хх -2 мл У 2-7 с сх докт те пу піу ев оУВі зійп беЧ АКУ Аг БІ БІВ Ага ма тик Ві Аа ї1в дек 210 215 КК міч вго Азромех Уа Ач БВ АТ АК о піу бух ТВгОРве вве біу 818 25 я ХА і та мех Уві «у «іі ЛАЗ «2122 ВЕЖ «АЕте ж зві Е «МНЕ ХУ мес зів Аго Уа! Зів зго вм Фі сім дай усі 4І1уУ АБпоА!в від Аго 1 5 Іо 15 іухчих що сбвх є х ге ії сх з АЖТ А ди ж - вго АгО Ре ОМ Аг АБ БУЄ Бенорен бен УЗ А)Їв бак маї Хі «іл
МТ Ух З
Кк 7 щі дих пт Кк я . пе Ко Яеоаж остан пан фо фати що Фк бі вен бі бен рев осн о суз Не ТвготТук Хі Сух фе НІЖ РВЕ СМ 35 ЯН 45
Ге ку Міф Узі бек ніх дей тТУк різ) дк її Пій пек о Зів фс уд діа кви піп Уді бек Ні Ага оту КО Агб дів ан аек бів Бут Уді 55 5 я збу жала гла оту чно ин ни щі рій Мурко ій вве отве щі Ту Ех Кук ОІВ Кух оту влеЕ їів ит ках їв а о 75 що бу» Бі Ав» опію Хі ме офух УВІ бій АзЗп яз Зако Ж ї1е їі дей пух АВ СТУ ББе о тТУК фев жів Зегоїву фу БіУ Туг Ба аб шій Кі
А дк й 305 1 гЯ У ж с А АЧАН ху Же охугує Ач 7 ур гиче ої КИ й
Уві два хі Чет фено нів Туг бій їу5 АВ ОБін ЗіБ вгоОо фев о РБе щ1в 115 о 125
Маномує бух уві яко бек о Ууді дж 5врозши Меї мафї Аа зв бен оте
КЕ: : вай й 130 115 15 сплтоамаця 73
ВАТ- ЯМОК й
Туг їуз Ахвобуз Ма тує їжу дай о уді ТВгРОТНР ОА АБА ТАК о двк Бан 185 ї3а 155 1 дероави Бне ні ма? азй бі Бі Біб фа) їі» Вей їі ніх біл АЙ
Ії: 175 її вга ові Зіб Бе Куз жі фец іо «ЙО: В «23» БІ ках ВНТ
Іа» ново зарієвх «Ам ЯК
МаАЖ Кі бі Твготук Аквойіюв Те баб о рго АБО о Жес АТХ яв Тв Біу
Шви Кге їі 5ет о Меж рух їі БВ Ме їжК фев рев тк о Ууді Не ем з й 35 Й ха ее ке те; їі тВгобів Меї Хі іх веагодів рен Ббе віза маі Тук бем Ні АгО зга бен азвобух ХТ6 Біб АЖо Ж1М Ага Аха ем ніх бін аз рве уд
БІ 55 во шо мат ра ТВг жів єЄїй два Сех дай Твг оці бі Ху дів хе дух на мет Бу тигофів Бі" АгО СУ Ай ОТГ овіу БР ак БЕК Кер У
ПУ ТО 75 що івц ів да Сух ФІіЧ о Фіцч ів руб бек обі Бе обі сі Бе ма? фух кх За 335
ГО 2 У
АЗВ ІТ Меї івц аль і Бі Біб ЗВгогбує бу БІВ Аки бегб вБе ошім
НН 105 що мет бів уч 5гу Аза бій чи вгоО о вів їі» Аа Аїа нів Уві їів Яег бів аід Ваг овег рус ТВКотТар о Зке Уні іви шій Тк АТ бін бу Сі 133 115 1-х
Тук Туг ТКг Меї ЗБ АБИ дя" фвц о Уді ТБГбобео Біц АМп о БІУ жа БІВ сСтввняця ТЯ вАТ-ЗБА-КО
ТА 150 155 ії ї2ц тв чді зи да по и оту Ха ке її ЗКУ С -з сії Уві тв м
Мав оївгомаї бух АтпоБіп іх бемотТутє ТУГ ів Бук Ага вій Кон 155 о 375 тва сСуї аг АВ Аго бів аіз бек о 5аг бів 3ів Рго РВае ті АТа це 150 155 ща зма був бац цу баг ока Фі Ага вве січ яко Хі Без кв Аг дів 135 КА 205 вій Аза ТВ оні Зоб Зак вів Був го Су Зіу пів іп опер о Зі НІ ізн Біх Бі УВІ Бе ій їй бій Бго діу АТа бек уд ве ма Ащи
ТИХ Ки К й чі ствВе др овго его пій маї загоні Біж тв Бі вив отТВг бек вав
Зіу ев ев рує кеВ «Аз З сиїїз ЯКУ «Й ВИТ «Я Ото харіепе «МН 3 меї бів Бі Бго Бе Аква о Туг го тжг о рРГО щі сте тук тТге УВІ АВ 1 5 Іа 15
Бек бег діа веб бек оБгоОо Тгр ОА! Рго го пі ТВЕ Оу фе вВга був 28 25 Й за Й
Ом ка и ко ТВе хаб ча! ро агр ато Ве Ві бів Аг Ага его РКО Ко Рго
Вга ргаз Бгто о БгЗз Бета Без Бо БгоО ве фччЗУ гу КгО бро Бк фа го
УЗ 53 5 вго вен ВТО ре) вго Кг грец фе гу Ага піу аа нів хек тк обі ца та зх ва
МЕ то ТУ о стівницв 5 кАтТ-а197-5ЕВ івц Се» кни фей уз) Мас Бе вБбе меї Уа? фе Узі вій бен маї біу 7 Зк За Зк м м ТУ ев бі ев бі Жеб бі сів бем РБе ніх без пі бує дів цец АВ
КВ) ЦЕ 130 січ феч о АКа сіб веб УВК бек бів Меє Ні ТНК Аів его бег ен Бім ії120 185 їжу шій хів С1у Ні РгоО бет Рг Бгоб Рг Біб вуз уз щіч сем ага
Муз УВІ АТа ні фев о тТвагобіу бух Зак Акв БЕК Аг оЗег Мах вто ї8ц 14553 158 155 150 шій тто бів Ах» оте о ТуУк ПТУ Хіа Уві зи бен баг бів а вух Тук 155 їУа і175 їух Ух сту Фі вен Уві Хі Ахпобів ївВбоБіу жу Тег вве уві Тує 150 1855 ії
Зегкгокуч Уа| Ту ББе Ага зіу зіп бек сув Ави дя реч о Рго Ба ощак
Тв М М
Міз їж маї Тук Меї Аг Аа сег о їуз Тут бго біб ах іви маї ма 1 Ах КЕ меж сі сі їх» Маї Мекобег туго Су ЯВготТвг Біж пів Меї тго дів 355 й за й й зх й зап
Кк КО са щу ага Зебопеє Ту фви біт вів Уаї Бе дхй ої» о тТВе Жег АТа АВ ОН 24 Іо 755 ін туго маї азп Ома! 5шго зів їв ек оце) Ма Аве» ве дів сім ща 250 5 У пів ТВ вне вбо сіу Бей Ту рух бе «МЕ: о «АЖКіз 133 сптваница Її вАТ-ЧФУО-чЕО хадем ВЕЖ «ВМУМ маю зарізгвх «ЯМ ОК меб рео 5ів бів бі Зк сі Суб Яег уві АР АГО АГО го тує бі1У сх уві ви Аго АТа аїй рев Маї бко вев о аї дів сім ру уві ТЕ та Тх ВІН
Суб мевомаі Маї був Хі дів дру Бе ді Фіяй вів 5ів бів сій мед
З: 3.3 5 вро ім ші) Чек фец бі Тгв о Азв ота! АЇв біз гам зі ем АБ Ні твгобіх рез бів бів Ахробга Ага ви Туг Тк осі бі біу бо хів
Ка ха 75 щи
Кен с1уУ Ага Зет РВЕ гео ніє бі го бів веб Ач обу пі сія іец 85 ча 5
Яга жів ніх дгоу яз Біу жів тук о Ммеб ні нів фі шій уді Твг ов цк 105 ЦО ліз їі бух бЗек Заг те тв аіа Заг агу ніх ні Бгто ответ мав іа ні сіу їіз Суз жвге рко діа бег дк Зак ОІВ ек раз ву Ага
БУ 135 її ід шет вва Ні сіз біу Суб Вб ожів Аіз обеє Бій Агоргец ТВе о Вго 145 хо 155 158 ів Аів Ако біу Ар ОТ без су ТНК одЕВ Баш ТВК ці ТВгогвб із 155 170 175
Бгто баг оАгО Аа тн дерошім тТВт вне ва сі ві бій те о маї Аг 1 І: їю вке сСтвамица 77 ват-а17й- Ук «Оз чі «і 234 «ах ВЕУ «ДУХ їнмн) зріє «НОЯ мак азв вга біу ев бБіпожів дід іжм дела Фіу Мет АТа вто бго бі ї 5 13 3х дзротВК дій меж ніх уві вто Зі бі Заг Уа АіЗ Хегс Ні рем «ТУ їй І: ЗО
ТК ОТвг Зак Ага ЗароТує ВВ те вм ТВ тве АТа о тТВвк вен АЇВ ка 3 Б Ся су во о уці вне твг Уві Аіц твВгоїів мет Уді їдю ма) Ві сі Аг
Ткг Ази Зег їі ро дев оБег о вго АБ) Аза МВі бро рев о буз біу Біу
АхпосСув Заг бів Ахороінм ім Сух їі івм о фжх Ак бів вго БНе Мух ко БІ За їж зве о Тер о Аїа Тег о фем бів та! Аа Бу5 Ні фев Аша фу5 ТВРорух з ц 130 іеношет тТКроАБлоіїжк АБ Обі Хів мер ові б2у Уа Аге тує ій АБ 115 320 їІз
Зі «за цен уУаї їіє зів Не го сі цец ТК вБе Хв їТа суз Бій їх0 135 ї149 івр зів Ве зво мав піп Су» Бго Аза ав Баг УДІ Азвозвм о зух НИ 145 Іо 155 ї50 ім іі Її АБа бух нія їфє руб гу Бій дів бер мі твгоУді 125 ї70 175 су бів Бегосіу мех о5ів тросу мі ма о Тув СІЙ АБ фу бек ОоФія 1850 135 ї30а
Страница 5 вАТ-З1ТУ0- ЧЕ ви іен фе АЗо Тур же БІВ о ма дев о тат ТНК Її бег Уа) Азп од 195 2 ЩІ
Ао ТвК ов бів Тук Ті АщОо ТВ оЯек ТВг оБва Бу бен бін ап ха ож же 7 Мен ж
То «Ах КО ін чат хі НО івц о Тук бек вв Заг Аз
Кен 250 «ві ад «1» х5а «вій» БЕТ І «ВІ» немже хврівпх «ВЕ Я мет щі тує АЇВ бек о Ар Аїа Чет іоу ази о Бга бів азів вко тТгровго 3 « че їх
Бко дів Рго дгоа Аза ага ід СУ дра Уа? за ВМ ТгтоАТа рев уд!
М ЗЕ За
У Я дм іа бБіу Кец бен о гбев вен осей фер обем Аа Аа ді сСує Лів Уві вКе зіжши дід ге о вго Тк» діа уві Чет сі аій ага зів Заробго ЩІУ ве мер дів був Бго тга діа мві чек б: лід Ага Аза ар обі хім Бек віз дія бег о рго ак їз Ага Бі Біу Бгто Бін ви бек Рез аз АВ
ВХ ка т 2 зга Аів бі рей фев Ак» о бемодга о шів Фіу Меж вве дід бів рев ові щі Зо
АїТа сій джп щі вац овБиц ЖЕ аз Оу Бе їз Заг о тТгр тек 5ет дер цю Ме що
Кго піу іви дів піу Уві звкорен отвг обі Зі рез Жее Туг бух ІН - ЗА т 7 З - - іх В їх
Алеротнг о куз Зів йіша Уві хі Аа рух Аа бі Ууді Туг тук ма) вна в МІ 330 ква вів сечо бім сем АК Ага Уа ді діа бі ст пі Бег діх чер страница 78 пАт-4а170- 5 155 150 155 і
Узі) ет їжи Аїда сец нія дев бів го Без Ага 5вго да Аїд пту дів їі55 170 17 ів вів бе вій феи тйг Ома; ААУ ішиау Вго го АТ баг бек бів Мі їі150 185 15
Ага АБ Зег о діа Ва Фіу Ра іп бі брав вер Ні ій Чет Аїд ї935 па 25 ту зу фам; ту у ца нія зп мМ3Зх ту ОЦ дід Кі: мі з дут пі іж Бій ага бец обі Уа ніх зви МІ ТВ сій АТа АТО АВ АГО НІВ 218 тїх КЕ
Ав тер обів мезо ТВе дів біу дів твгоУді раб БІУу ша БНа Ага Уві
Твгобео січ їі Бго аз Сі мезо вго Зак Рго заго Бак Бі «й 3 «Аз ВХ «Ру» ВЕК «І» намО возах «ВщНіх 43 меж від мех мас Зів Уа іп пі ші Бо дир оірври пі Бі тТВкКобуй меж від мех мех Ов Уфі Бій сі Ру КО баб о бвМм обі бБіотакК оСує 1 х і8 15 ча! фец їіє Уу3і Зв ве тт Узі сечо фвц бів его із буз У АВ уні ск сту в ожккзя Мних ее ме ув ме вив яко хі: аж чині тТНротук ді Тут ВВе ТВ Азпопім із бух ів меї сів ачро бух пі поофданю щу ан пи Й чи чи щі соя туту їже его ру» Баг ощім ХІТ дія Су вве сво ув 5іВ АБО Авяр баг Ту 5 БО їгв ав Его аБй АБ; опіц пін бег мет аз Зако овВгОо Сух Тгробій хв! цу ТХгробівп іви ага Пій ен УВІ Ако Бук Ме 318 Кен Ага ТВг бек стовница ВО
ВАТА ЯКА Е із біз твгохів Зег о таг ма? щій щіз уз Фів бій аа Кі бак оБго чю 195 То їжи маі Ага ів ага оту Бгб обі ага хаї із АВ о Міз ів тв о сіу 115 120 125 тТВгоАга біу аг Заг о Аа ТК офіц деб ет Бра Аз бек губ вх обБів
АТО Оу РОЗ : ) 336 Ух о
Ук лів їжи пе» вет хи те хоп ода тем Ж сю жу зи Са піУ іїуУу5 вів сац о сіУу РО бух ХР Ап Баг отв бів заго Бак АКЯ хе ошіУ 145 їха 155 ї150
Міз 5ер о бна рази Заг дя іди НіЗ сез АгО Аза Оіу біз гав у! їв 155 о 175 ніж бін вух сію ВВе Туг Туг їі туго Бегобіп Твготук ВНІ АР ОВНЕ їі 155 їз пів біз біб її Бу Біб Аж Ваг обу АБ о АБр вух пів меж Уві біта з БЕ Ох
Тук Те Туг був Тук Тр оХат тТук Бгоа ар Бр Тів фев рев Мет же 2 ге Б ко его аіз Ага АхвВ о БВК оСез Ткрочет о іух Ар оАР Лів Тук обі зевотує ле тів тує «Фа сту БУ Жіє вве бів рен оїу5 біз да АБО АгО Ха 245 з хх ме уві баг оуді Тв ов5ап бів Ні вед дію Джо о Меї Ар ОНіх Січ Аїд га ї5 та
Заговле вве бі АЇв ве сви узі У
ЯЗ «Й «аз 44 «йїїх Щ3У «аЕїкз БЕ «РМ Нево зару «Оз 4 страница КІ ват-а190-5ЕО мех ага ага дій бег Аг АВ ТУК ТБ оруУХ ТуК ів Ага бію бек БВ ї і: 10 15 сЗіз меб Бі 5іУ зіу го біу аіа ко ні Біц іч вге зей Мі5 дід 2 Х в) го Бго рго Рго дія Бк нія бів Бгто Бго дів АТВ хег Аго щег яеж чім лі ді д в еч ща) ім сіє Фі зу Мі пів чві Ві бУу й чаї ще чаї АГ оГав ск щі ви щі їни ші біз УВІ щі Су Бак Ома ща 15 в аій іви вве кбе Тек вре зга о АЇв бів меї дер ого дав аге їв Баг ло 75 З зів Ахп обі те нів суз Хі туго Ага ліф фу яко фев віз бій Ав
БУ Фі Бу діх а5о ВВа сій Аз оїВг ТвКогев обі 5акгобів АкротВг гук фен ТЕ 155 105 що рт ав оцеє Су го Аго тів уз бів Аіа вва осів піу АїВЗ Уві бів 315 120 125 їуУуз Біц сен обБіп о ніз Біб уві сту дет сів ні5 Хі Аг АВ ОВ ув їхо 155 143 хів ме ха Ар сіу хво оїгроіец АБроїец АТ фу Ага Бек оку В 135 353 і55 150
Бін від спіпй вро БВеб Аїд Ні бев о тТвг о їі Аки Аа ТВг Аз жів бго 155 іо 175
Заг бі бег нів муз УдДі 5ек без Зак обеу тре отТУг нія яз оако віх їКо і155 З тер одів їух їі 5вгодяп о Мек ТВК вва дог Ахйа обі Був вай жів ха 135 М: ЗУ
Ави сій Ага ощіЖ Баг оТує Туг регу Туг АТЗ АХА Же Су ВНе Аг Мі іа а Фа страница ко рат-З1 7 жа міш ел: ве мат м ах щі ху сту: т тич лк то гуму є их
Мі пін твгозеак УіУ Ар озец дів Те сім тує бен бій фе: мех уд! зах Б їх 240
Туг мі ТК обух Те Жег Хі Бу Зі бро Зекобак МН)» тн жу МЕТ. 4 па зом й
АЙ Ох моло бух бБіх біж бек отТвгобуб тує Теро5акК Ту Аяп ет сту вве нія вав ве 5 а
Тугк баг ї1е аяп ма) Фіу Сіу ВВЕ ОБВЄ рує рен Ато Зак ошіу «ім шим 275 ещо «85 її Заг о ї1б бів чаї Зв о Ачи вгОо его) іви АБ Бго Ада овів АЗИ
РЕ 25 мю дід тв о туг Вре о б1у Аа РЕ рух Уві Ага Аз їв АЖо зах а ЗУ «ам Я «ім 2 «ВЖ2з РА «2133 Вбіишю варієна «нт ах
Мат АЇА Аза Ага Ага сег бів ага Ага ага бі Ас Аа діу ім Бо х 5 10 15 пі твг дій рец ів УВІ Бго евро дій саз о бі зви біу ів віз ів о 85 БІВ дів см бер біу дви ім вм о Аіа уві Уві ет ін Бі Бер оАга дів їх ча 45
Закоієд ваг Аїа зів Фіц Бгто АТБ бів бів бів їз У діа січ оц що 15 І
Ази піп оазр кро пе бів фев Аа бга бів те ів ім Зеб біз АБ мя Ка Б вго АЇВ БгО Рве за Ак Ага фен маі Аг Вго Аг ага Зек АВ РгО 55 за З птрраница 8
ВАТУ КО кс О1У Ак уч ТАК оАго АВ АКе о АгО АТ 112 АТа від Ні тТук бів це 105 ма
Уа нін Бго ага вго с1у бів Або оФфіу ав бів аАвїа Бі УЗ Аврофу 125 155
ТвЕ ові Бвго ці тк Бін Вів дід дга їі6 АЕВ ар ошег бегорто он хо 135 ва
Ага тук Аз Ага БІВ Їїз сту ПІБ РВе Іі уві Твг Ага АїВ обіу ев 145 і150 155 і1650
Тут туг іви о тук Сух бБіп УВІ нія вне Аж бів со1у вуз дів Уді тут мезо МуБ ев ав рев мих ЕР АБрОШіу Уві гемо діа фев ага бух ве
Ів 1855 195 «Фіз Те вБе его Аа ТВгОАТи дів бек бек мезо біу ко шій ом Аг їа5 20 АН
Мен су бів Уві Зек Бі вжи ши Аа ех аку Бго О1у бек бег їев 218 25 го щго Ті Ага тТвг каз Рго ттр лід МІ вом бух АТ АтВ о БгО Ре мес
Ка Б 35 250
ТВг ОТЖЕ Не (фу іец о БвЕ бів Уді іх хе: «КЯ302м РАХ «2135 оц яарпірпхй ха а
Мет вго діз 5егоЗЕК ГО РБе ем обем діа го ух Фіх бго вго бі»
ВЗ х НН 35 й дай вв: Му шу Рго Уві Аго біц Бго Аза фо баб Уа Аїд шим о тКо ки 25 39
Мен пек ТгЕ о біу А ав рев бік АЇВв ув! азів бух Аа Меж АїВ ЕВ
Страница Я
Що вАТ-ЗБ70-МЕ 15 Б 45
Бен о твВгоспій Ффій тТвгобів рено бів ер оївз Ага Ага січ УВІ бог Аге ін іп у тТВгросіу «іу ре Чет сій аз і БРІВ біУ Тук бе) ттр й То 75 о пів чек іївцо вро бів бів зар бар АчроАЇВ Ен ч1М Аа туга Біб АВ дк За а:
Фо ше іо щіу піз Ага Зб одга їух Ак аг вів УЗІ фев отвк сів ух ів бух що ах що
БУ ів ніх да ові ва о ніз рам о Уді Бгто ї125 деп аа тТвК Беговує 150 їх лев вер о Зегоджрові тає бін жа Веж о їгтв бів вто МІВ ов) Ага АгО
ІВ 135 КОТ пі дга фіу іви бій дів іп обі Буг бі ві Ага її 56 835 Аа 145 158 155 153
Зіж маії Туг рев рев тук бек Бій ма! фжм о ВВе сій Ар мА Ве вне 155 Мо 175 тве меє Бі бів Уші Уві хек ага бін сту цій піу Ако вів бів о твк 150 185 190 іви ВБе Ага Суз ЇЇ АКФфосег о мМек Бго Звк о ні го дкхр о АКо Аа тує 1955 ВА ЗО ява бег Су тТже чек одіз бі У! Ве Мія ген о ніз зів о цпіу дзюр Її із а1 Р
Мен бек ма? жів їі го Ага АТХ АГРО Аїд із івц Аза ів ер обго
Ні Біу твговне рев бі Ре ха? бух во х45 я хе Му ВЕ страница 85 вАТт-ЯТ ЛЕВ «ам ЗКУ «аа ВНІ ту ярих. - сімку і шчужс: «йїйз мн ВТ ха 47 ме Аж Ар оБег тн січ Ага бів 1 Зег о ак рев тТвР Заг груз ве ї 5 ща 15 іже Бух аг о Оін Бі Меї буз іви муз Кір Куз Уві Чек їж фев вра й І ше 5 Й Зб кАх 4-Й ще
Ага уз щі баг го дат УВІ ака опеаг бек обу Аза обу уз Ем оржим
Аїв діа ТВт цер бер гео АВ вав вер ЕТ Суз Сух бом ТК маї ха
ВЕ В що
Вагове тТук бів Уа? АТа АТ фви Фів піу АЮ оіец АтБа о бег вен АГИ
Ба 7 ТУ ща діа бін івм пів ціх нів нів вів Бін вуз веб о вго Аза ою віз віх ща З
Аіа вто збу аіа біу кв ожів Фі дій го іа ві ТВгойів бі ке
Мю ї05 138 іх їі вве бів вгев обго Аїа вго йпіу піч сіу азп зак озаг бів Аза 115 зга 125
Чет оАга деп іх го АЇа Ууді бів бі без бін йії тТВгоУузі Тк оді; твбодга да сх ага лій ді БР бі БгО обр ттгоУД гій
ЕХ КО іо
Ази оСух ем бій Кв; жів Аїд АЗО о 5ЕкКк біз так вро тТвг їі бій Ух 145 Мн 155 зо «фу Бак отТук ТВК Овна Уві Ро їгріосм бом Беє ВВЕ ру Ага бі аг 155 178 ї75
Аїд сви Шім сій бух біб за Бу їі вен омаї вуж Щім ТВб о піу тує 150 КУ кю бів ве жів тТук обі (1й УР їжи тує ТВе АБ обу ТВгоїУуК Азв мех і55 РЕ гп5 страница х5 вАТ-ЛІТУО-УКО піу нів іву її піз Ак Буй бух маї мі Уаї вне с1у Ар шій ни а м за І І
КУКА 213 КЛІ век ван УдІ ТВгозев вна Абу Су Тіз йщій два Мет о Бко бів тТВкогБев х25 НО 235 КТ
Кго о дяподчи Хв о Сух Тут бек Аїд обі Жів АфЇв бух шу ім біб ту
МУ Й пе за: худ МКУ. Шу
Ахвобів бен бів іФен дів Хі вго дгу Бім дай Аї біб Жів Зак ев
ХО Ат ях ск 55 с
АБВОШІУ Ахроуві ТВт Бе Рве бі АЇв ев обу ви о беи «в» 48 ких Я «ліфа ВК «215х Ноже зарієвавх «МН ах мек січ сім о бег Уві Уві Аг вВга бек оуаі Бе жа жа) АВропіх Сів ї З 10 15 чвг аз їі Бреб вве ТР одер ім о щіу Аг шеє Ні Ага бага бів Зак
Ж 25 З су» ЖагоУді АфЇв аг уві Фіу іври о сіу іі Бе вер; їж мек ЄТу 35 а 45 віз спі ім лід уві бік біу Тер о БВе бецпобев бій ве) НІ5 Тра Агу ве 55 ЩО ів пі шім мех узі тТагобго рев обго аз обіу Бе Аїд діУ его тео ім шій ем тів сій біз або Ага беконі бів Ущі Аєп вго діа діа
З 5 нів сем тТВгоціу Аіщ дж БЗЕКОБаг ідча ТК оЗіу баб сту пТу Вр гам 1 305 це стваниНця 7 станина В
БРАТ АДЛЬВКО іам ткрошій тик сій фен оіу гли ді Ве ен Ага БіУ вав жу тук
З 1538 1255 нів дав сіу АТ ву УВІ Уві їВБкК обу Аїд о діу тжк отже Тук Хі Тут 150 135 і жк омуй Уві біп о баз сбіу Фіу Уві щіу Сух РКО Кви Бі фен дід Зак 155 іх 1355 15
Увгоїїа твгонія Фі фев тує ву Ага тТйе вго дешотУє РКО Фіц щі їп5 17 Ту зіва біз бевобсез маї ве шій ій Чек бго Сух бі Ага лів твКоЗау іо їх 130
Чек окаг Аг мні Тгроїгтр ав Зако бек Бе рез бі шіу ві таї ніх їз: я ях мви пів вів Біх бів їуз мапі упі хв)ф ду узі івч Аза бів Агробез 21 гу 7 й ЗЕ й Зх т 4юЮ «У Кс
Уа Ак овев ага Ав ошіу ТВг аку щеє тує БВ обіу Аа вне Меї ха 225 а 235 ай «ВНІ» ЯЗ кі 853 «22 РВТ «ЕХ» Нове варів» «ЯНВ 45 меї А1їа бів дер окки фі реч жет вве шіу іш твговів баром 51 1 5 ї0 15
Маї іо вБго Бій ні сіу чек сСух аго рез іУБ ДІВ АГО Заєб о звк Зак 28 25 10 діа Аг Тгр Аїд івц твг Су сухо рев о Уді рев гей Бех вне івц лі біу сец тВб о тВг туго бе рев уді бек обів без ДГ дів бій сіу біч ха 35 що
Страница 55 вата Ко
Аїа Су Уа! йіп вБе сій діа фев бух О3фу пів Бій Бе дід Его фак
У ТО У ко нів дів цій уд! туго АЇВ вро веб Ага діа Ав обі Аяро фу вто АК 8 ЗО з із нів фею твгомаї а Ку ів тб овго ТВе осі НТ Рв фу АВ чо ме 1 сій вве вго дія зи НІ тт бів ні 53 гав о шіу ем дія вик отТве 1135 І 125 іж5 Ап Ага мес АНчи Тут ТТ Аа бух РВе Боб із жів вгеа бів ву ке 135 140
ФУ АБр о ТУук ВВ Хі Тут бек бі ді ТВг озна Ага шіу ме отвг че 145 їхО 355 15 ів сув бегобів ів АБЗ ків лід «іу агу Бга два Бу ВгО АЖе ЗВГ 155 їла 175 тів сту чаї чі хів о туве ру | твкг до Заг орг ри сі: просте їз тр ар мар тів тТпг ру УЗ) твг ОА Баг тТуУуг Вр БМ РО СТВ; 180 15 190
Оп фецоівц Мет біу ТВ обу баг озаї Су КТ Ма! Фі де Аза ОтТгЕ
Т З 20
Вря зів вуб їів тут ре) БіУу Аіа мет ба свт сер ій біз іш Аз гій 24х йо і Ман оМех Маї Аж» жа! Шег А Ті Зб ів УвВ! Аз оОтТук ЖБК Му 285 КИ 35 20 сім АБО сх5 тйг вве вве бі Аа рве івм їв
ЗЕ ЕЙ
КО 5 «А1ї» За «ЗійМ РК «8135 Ношще парів «З хо меж Ттнг оішжц ніз БгоОо баг БгоО їі ТВг обу Бі Бе оре; сеча Хвб отаке страница 8 ват-а1-5гО ії 5 КІ 15 дів ем їі Маг о Бго вує мех Суз ве) ех Мі5 жи щі дез Ме Вге 2 Її БІВ
Менпоберк нія баг ага тн оМів щіу діа шій Ага Чет пет тт бух ге ух «0 35
ТгРЕосем о вВВе Сех Чет Х1в УДІ Меє ев огев Бе раю Сух Жет КВе дет
І 15 п
Тгроіжз жів не їі вОеБ фец сій івие біч таб АТ Ку бів вго сСуз па 7о 5 о мет Аїд іже Вйе Сіж Бгто рев б баг ої Тго бій Ме діа Чет Чее 85 Зо 35
Оіц о рго Беб Суб Уді ахп о вбуз Зі ет да тро їж ев бів За ев
Мю 1 130
Шоохем є щи сту хро ох дно ух шу ді; пек сій Ажв є) вав оту рем тіє туго шіУу сій Уа? Атв о БгОо Аяв АТ АЕВ їуг АБ АБИ УВР АТ БгОо вне бів уза) ага ау туго ру АБ Бех АБ їх5 140 мех їі Бій їВгоїзи ЗвВк о Ахв оїуз 5Звговуз Кіз сій ай У) бі піу 1435 15 155 іа
ТвВготук бів рев оніз хі і дБ о ТНе Тіз АБ оіен о Жів Бе Аха Заг їх та 175 сій мі б) Уа фец бух дай АБ ОТВг отТеЄ тТкробію жів ї)е вв оївв
КЕ 15 ї90
Аій Аза Вко бій вв ОХів Зак їз: «0 «К3їз 3 «їж» ВАК «815» НоМо зерізпх сСтианица ЗО вАТ-Я70-5Еа «ян нЕх 51
Меї бі тук орто бів ха! Біб Ага Ага сіц івц фею Рго дів від Аа 3 5 18 15
Бго АгуоБін Ага сТу Жеє пів Ту Су СТУ Суб бі бф АЇВ Рг АТ, о 25 3 ага вів піу іш бі да бЗакобу рев оце вне їни о щіу КВе о вББа сію
ЗК КУ я
Км Б У іви бек сен Аід си МІВ Сем Сеи Твгогемч сук пу туК оцей зів сей пу ЩО
Дт ойвк фа івц Ага вата бів Аг обі із би ит дго фея бі бі ка ошеЕ піМ Су Аг от бі АТ бр ВІВ бом вет АгУ веб бБіУ соту т т Що ще З, і бе лм ст дк в ж її; йо пакої ам «бух хх вк 5агобБі те во обБфу ТВгОоЖет СТУ ТВгб оф леб оба вав бі Бі зем
Азв о вгОо АБ ЗВ о БгО хів птвго5агб нів їз Бі 5іВ вго чек о рго вух 100 Ме що та й кро із біб Бга бі зів із ді; пи оМміЗ ше дв дек Пій зі оль Кро фГеу бів Бга бі зів Аз мів фам Мі Меб др омеК Ффри
МК 123 зх йзропік ні бів Меї Аа іец ісц ди Бе вве ВВЕ Бго АхО Бі: Му
То їУ ет
Рго Тук бак обіз «і» сі) его АгФ дру УЗ) Аг о АКО Ах МуУуВ Агар Бе
Му Щег о АБ ій Фі Аа аа Бі Вго ді БуУБ АХА дув ку і с1уУ
Ех Що 35
Муз рух віз пі Бі рт бі Бгто Аа біу Рг кто діж Бро вро сту ї15о 135 іч
Бгто Рго бік Бгто біб б1іу го бго Ф31у Ж18 вго бТу Хі вко бБіу Те 135 ОЇ Не го бі ткотйк уро меї піу го вро Фіу вко о Бео бі вго Бе обБ1у ха ВХ шко страница З
Ат Ие ЕЙ
Бмьбіб біж Бго о бго бі без сій сіу Бго Хег ціх від Ан Зв був аз 230 435 4 діа щі ТР ОоАКа В Аза біт ргЗ АВ ові Ма ні» зви ЩІів о Біу ій 7 поза: зум КЕ «Ах м «У біу пег АТа жі бів ді їуб Ах дкроїви Бак одіх ОБУ Уді Бен Ах й КІ КУ за
МО 255 КУ: лЕВ ОТО ХвгоАгяЯ Ші2 ТНК о Меж аа орга фу Уді пе зуз жи Ні го 275 ко 285 ву ет Біу 0 фев бів ча? ужи Маф АБ Осіу тТВготТує вве зів тур 2 235 ЗО зако оБів маї Зів У ТУ Ту ті азй рВе те АхровБе дів его оту 305 Зо ЗКУ 2 сій узі Узі уві Азробів був Бго Бе рез б їй су» ТВГоаку Беє їв
ЗІ 33о 355 ім ївг обі іїу Твгодза тук Ажа Ту су) ту Твт о АЇв Бі маї Суб
З4О 145 358 і«в баз ух із Ага шій фу» Ті Аїд Уві гук Мек о УДі НІ АЇВ АЖЕ 350 35
Тіз Зак ЇЇ8 АБ мех бак орує Ні ТВготТве вне вне щі АїхЖ 18 Ага зга 25 зв
Вам оці Бім дія ко лів З 385 уза «и» Ох кл» КТ «аїУх Ново зврігах «НН Бу віз сухо рко ТКроАТа Уві Зек обіу АЇа Ат АЇВ о 5его вого су щоб АТЕ 1 З їі2 15 птвавина ЗУ вАТ-ЗЯ170- Ка
Аїа бег Рга дк ізи Ага 5ів бі го бів їжу Звг о Бго Азб аз го гоп й ЗО
МІВ осі веб осев Ажровта Аге сій Фіу меї вве Аїа сій ів; Узі дід зх еЩ 45 бій яза уві ем оіен Хі аз біу РО із баг отгр тТуг щеРк або Бго г. 5 КО
Й «о в пі із віз пі мі щафкоідвд о тк ді бфіу ви чего отут гу фін ах пІУу вага віУ УКІ ЗК Дав Б Бі Бі вм ох Ту КУ ФсРМ ОАЕ
ЩО ТО 75 ай
Тег вуз біз їз Ві Уві аїа іх віз піу уві тТук о тук щі ве вно х Зо ца
Зіб фез біз ізн го ага Ууаі маф Аїд обі Фів Зіу беє біу вакоуд! че 5 іх
ЗВО їп5 310
Бигоїжи АЇв ев мів Квм осів БрРо із ага Заг дій Аіз бі дів АВ
З Би ГУ ЯШНЯЗ Я ве щх ї Сх Х 115 іга 325 аа ви АЇїВ сви твг Уві аз се Бго Руб дів его обер біч Аа Ага ї 1:35 135 двповеє дід віФф обі вне бів біу Ага мезо вв міх ей обег Аїя су 135 г 155 15о а ді хе ТЕ чНННИ «де же А З уч жк ду ців їв іп АВ ген обі ді НІЗ Бемц НІХ Тит січ АР АКОЇ ВІЗ Ага нів АВ 1655 ї2о 175
Тге бій ішов твк осів сі АТБ о тВвгоУді бе бік вен Ве агарі Те 155 і30
Рго бій їі кго від біу Бевобго Заг обтгб Аг Бек Бі
Кг цю 85 «ВІ 3 «кіз 35 «зе ВК «ЖІ1З: нео Завішпх «ЯЖКіх 5
Страница 93
ВАТ-ФЕИВАЧЕО се ЧИЯ пи їз ч- не й ща - с : й що ГА біп ов) вегонів ага тує вго Аг їТв бій" баб її рух ма! бів реа тегобБіз тук о цу5 УЗ зів фу С1у Не о ї18 ви тВгоег обіп ру си за й 35 зв гу м М апродію Кіз Меї ре Уа) іп Аза Аза его УВІ Жів ЖІ Ап сСувх Ар «і а біу вв о тжК фви Зір Зак оцев оку» іу Тук Не чего дій іч УВІ яз м 55 5 хів шаг орви Мі Те Бій б Ази біз біз ве фішц вве сій гло вух 53 та ТІ ВИ
Мн УВІ аку ще УВІ Ажв Жак оїаи Меї а? дів его фрец тВгОотуг Був дарів Уа Туг ржи два омаі ТВ Твг Аза Ази ОТВК Заг оіве дяр АБО з 7 ай чих ях т 10 КН вве ніх Уві Аби сіу Бі Бін феб їв Кен бів НІЗ бій аБа рез Оу ї15 150 ї25 их х я 5я а ДАН І бів ваг Сує УВІ фев чт ке «І 54 «від 13Х «ик» РЕ «РІЗ» ною ЗаателЕ «ЯМ» 54
Ууді вет нт АРІ оТук орто аг їі Бій баг обі вух тв) бій вве ТВРг тів ТУ о бжв обу бін ув бі ро їі» бе) ТБе о Жег Фів фу біб Азр
Й А Й ких х -шо г ге
ТЕ чл Н очих маш г т ск ке та у же шо се ема я зів жів мех ге уд! 5іВ АЕЗ дев 5ер уні 318 Хі вай су ароБію 35 ай ах бе Тут їец їі зак оферр вуз бі Тук Бо Яве пі фіц Уві Ап озів слрзница За вАТ-Я410-5БО щи 25 5 еко вец ніх Тук біб губ АХ ОБіВ Зо вто вец ве сій рем оре кв та 75 що
Уа! ага 5ег У! Аа Жак фен Меї Уві Аа бегобецч УВК ОТуг вує АЗо
Ко Зо 25
Уж жав! ТУ ер ази УВІ ТВгоЗВКг АВо дз ВК оБек іні йно дно ве і М тм зх 4 7
ДАМА КУ и мів ма! дп бі бік січ фею хів вям гів мів біз два Бго бі Бу зх яв зт
Ка мем Мк вве Су» УДі ви
БЮ
«2135 55 «вії о «им ВАТ «13» штучна песлідовні сть
ФсТИдх «ЕІ3» йвпитидний лімкар СВОЯ «Ок: 35
Заг біу Біж ЗіУ Біу бак сіу Фу шіУу Іу 1 х 1 хе Міх 35 «кім З агїЇ2з РВТ єжіїз штучиа МІЛіІДПВ і КЗ «КОЇве хйУМ Пептиядний лінкар «НН ХВ
Фіу Фі У іу хет «Ту біж біу біу зок бі бі біх між ї 5 | їй ї 5 15 «ЕМ 5У «КЛИМ 15 «гід» ВЕ «й1йз щручна порлідожність сСтванива 35 вАт-ЯІ1 ЕВ «ЗЕ Дх «еале пшжитТидниМ лінЕФИ «Я» 57 те цу і Лк арк Ком Фсезя ім як х щід иг оргОо щіу а же Зоеє бе ру пек ії х їй «Ме 55 хай БЕК «ех» Штузив пщоспідавність «ВЛ Пх «Ф3х пептидннИй лінкею «НН 5 ці т хім пі ім спаде іх «Ре те "Те дек тлі «іх сі пі дви щі пРіу пі зЗіуУу ші Баг опр рРжЖ бі РУ УВК ОБІУ ві Біу зіу БЯГ о зігу 1 5 10 15 бік Бі біу бак 2 «831х 8 «2125 ти - "Ж. пар метки пажих Ж качку «й1л» штучка побслідодність «АУм Пептидний лінкер «че ші аг сі чего пім дп обі ек мі з гошіу ЗБГ ОПР АВМ (ЕМ со «10: а «11» В «Ех ВЕК «135» Врузнв постідавнтств его х «223 пйеитидиий лінк «ННІ» ОКО
Зі віх Баг обі завкоб)іуУу вро очіх хе «3їМ Б
Слтованяцв З
ВАТАЧКОО КО
«їй КТ «ВМ штучна послідОВнсть ка «гйЗ3» Пептидми лінкер «З: 83 ати вин че нн вини чн чне
Оіу оіу пет сі его бу з и «2 5 к у «а
Кок: к «вій РЕ
А, зу тужити лезі гу «кА штучна БОЛІ АЦВНІЬТЬ
Ук «оаЯх пантидний лінкав «ЯН БИ оіу бі дек Бі і
Кая пок я «ЕЕ М БІ «іх З ек» ВВТ «і» тучна послідовність нищ ня «ОХ пептидних півхе я - сечо и мо ти щує, пі біу зег сту Ай піх дагощіжю
З т 3 Я 210 БИ «211» ХК «кЕій» ВК хІїй» ШрУчнаю послідовність «Кох «иа» Пейтидний пінкед «НН Ба сх ке - жу клихамо мови мах ие сі шіУу дсп о сіу чик ші дек о Ффіх «ВМ п хеї7е й «их РАК «Фі3з штучна послідавність стивницВв Я пАТА Я ВУ
КЕ» «Ф2Ух Пейтиднив яїнкар «НМ п пі піж дап ціх век оміє іх БРУ Аап піУ Бек осуу ій Б: «402 55 «МЕ 2154 хаі» НК «З» Штучна поспівсвнішть ке «25 димеюрнив ви З-ЩиМ СУА сні ЕС-ланцює З «вистУпОМе «з БК важив с стоазосіцав сееосоаівах сессоассюи свое зсоцевоюе ахектоєте засто псадпасако сЕзсеасов злвзисесжсе зтссЕовкає го ачсчвтссотя ФстеУвстца спасе всщеиУукс хаеоєтасва аорадвсвся ї150 чвазазсков спізчсєсве сдеснвУсако засос птах зУувастасоЯ
А зувати ссср весною зе сс сао жето ще кзавосуєто соквкчстас «ососкоуєх стузсоваєсю втсляссксос каповеотие
Ка зпапусссоза аказсосзтї споЗіКЕсаВ оЗсає сасвсепакс ассодссва зминтозааз коасатстна сасачацЗаєс ас ввово веосетазса зековсясаа
Я час цна сне ех ОЕсВниКО зсскссчаЗа скоса СОСКИ 52 сказуаваасо заЗасозазо совка дуснимечах сівоавовоаза воссзваєка щі спека асан посктааак сезвззасвою павкасву совно
БО етедувасу тасчржанЕ совок стос: асп є соус козсв еВ ша кске фЧВЄЕКвКЕ ВСХВЕСстаєЄ везоавовсВ савзвомасх пек
БТ сСтраняце ЗК рат. 5КО вавдстою спївскакк акекІКісвВО сім ва фс сосна дастсаднах статок сскх Фе сцвовї совок же кокає Косі
АВ вето мк «хспс ас заассетссв ссвоасскств сказ кай ваампаасцсє жо екрана звазоавсоєсї зфстоасатста апсаосоває аарсоросстецю все
Мах так цню спенннижко каси ктша сс водузУсаве коків
Кая) ста КЕКсКе тивсасстза загалі пс сваа зсссхаоМс кахадицчове
АКА походвався пассмими засо скатє ассовннюс стазсасаке сеслом є
КИ сетвосвека зипзосвсвача созвдЧоавов зоодекстав пекоссни свазаасвас. 1255 кЕссгецвоє септзасесок зксстозази ссжхорасцеєс фрасазцеца собоопевоея
А петесаєся кастценв своссрссто тасжтетевнм пово аа
Ма ве сп алесз зЗасствса пово асоВовайсє сапсаасоє
НО ваадтрраса чааминнеза зссгавоває їплозеважа сссвсвлеВа косе ссКеце жщаМми сстрсссето застою Мис тес чес Бссссосовав ососвазоВе
АК весоцняв тсваосс соссодащнНо всстосаіоо пачсаааї зсесасиха ак пасссеваво казвоїтхсаа КіоузсвсаКа паса кча веазбовова удо
КУ варссосвов пап авіа савсвосяв мові беаннзрє саспокески ли сасеаЕжх ФжКкпочвацвю свазозоїас зацізсвазча кскскавсва азот ооце
КАР веостнеся випвавщнсжах степажмне жинмнвивеаєс сссЗазавсс асмвІаає ад весен свист бвавстовох зазавжаза ковоапскоатоа зіпсстове страница ЗО
ВАТУ НЕ іЗКЕ вами екекх «псрвасва свієчссвтв зазічиинни Зсзашенка фсзчацає 1550 весвсавав «сбмавІЕсс срішезеве кепоебсввІ сбЄКІсежсее стаслосиа о сесвссоіду асавозаовУ ччосвцса Фора а Ес ЖексВласвЄс сети фар кстас асевссвота сворсвовев векстстссс кахехссовю каза кІАЛТЕ хеМія Ву хаеЩї» «ких днк о «гії» щЩтучна пеЕфвідавнсть «рей» «Ії» МенОомерний ни Я-Зввьги- 8553 «ЦИ Б мраразоцеє стоваскоувоу сессовточ сбцвколоюває сЗстмемх всдосаоуве во вкасскоскс вискаціачи ссвивесцві сна асо Зк 12
Макс пас соціа вемнизнКаи саезасвсва нив Вее ем мов сі Іа в ТМ щі КО зазачааєцв чикоазсстаз пЗссоцся гасі тебе зразок арен озкос ссозсоваца асстзастесх ока жекоев состав Зевса
Зо зазанаста сикастесє вцстстмвка сталевою акшхосевес мрсацекеє
З ззезсссзва анвсаке топос осяє касапес пасе ад ворс ш астоса сасвомодес зоЗоасізавс всзссхооса сезаесвево яко кл твова тоасСіюксх зіїсадацто весссореда віск адипсвоа соках ксаваовавзсо вмер сзвзакстни ссоововаї сексі Вс сво
Мю
Кежекежхка схе зстовкмнЬ саке х сіенмно стежка ен сСтваница щЮ
КАТ-АФАУЧЬН ОВО тассксїцчвВ влваскіска ксоссвснмимі песвавитиає ауїааочЕ азам
Ти скссовнісва зіавстєсєсва Ффренеута тс всвовосчаЗ зозвзсазвнюа свв сещ
ТВО щих жснкиВв зсвссеіває зсхснинава фонового адазвасасав вес що тасдаатесв сссвЕсве сокоавоасіко ссспієвсва вовУскїєва сммщавена «о за ща «Мі а «ей ДНК «Іі3» ШщтТуЧчНІ посліді сте сеХОо «йо» Важкий ланцюг анти-КАБІЇаНІ, вс ої «западинах «ННІ БЕ вчацсоскос тоскцуднакс скиощечє «спкижкеєє ссвкеезатє кемачннУки
БО теп оссв ссісствьх сассіжоткс осо иа секс о сова кесрсвава зессчаавко заток вісі сонна зма се часксєице афесячех сасєсвтєтеє сруалавою ссвжраєве пстоєвоска
М сезасіваси сс совно сс вика каска зро с су З де З ТУ ве їх їх З їх ДЕ хх її ї0о5 Що й єИКи «саше аскасіоовУ асо вок «тів саексокавсве маса
В іисектксв жк Спас пасВнмна селен саше же стядЧассчес сЗчссвеаеча стасіскосс дами ссоів сеасеко зизмсода «ЧчеситовВссх сепцасюкЧка свсстіскосс осі стоє вовче ков сота катаоє зай сіпвеаєявр пре ассех сс кстаює аосстоЧесв сссаасста сасстцедве щкЕ сСтранямиа З ватеЯІтО-5ЕО пглдзгедей дигсгейедя сВесазпити пабазмиг Фуцідлеет в г зни жрлсВсаа свостазоої засавовазОа Уа защчице звавстсвоВ сацужеп прсссвна ссотвавоста сервера пісвоїстхЕ шо І стеки кстгг завис туту и и ку кит груди кутя е ке сх ши сзаздсссад заакассстє вісвхссско секс стоа Зої сВосвЕшо
Да й всдетодтво ведтовеєсв совазпасксс ззоаптсавоаї фсавстчоїа сохдосвох ків о шк чевохаиче зізансва звоващся срзчвоаоас вус авиви спе КИх що Й Й сан севнся МсестсвИсе сова одеса зСвКжавюа зас ке 7 Й ми звдвкссВ всмицнкесх сел віспразанвав скаКекскаВ во вавню
Аме Що серссскава звссасвоці озкасасссто сссесатссс подзатозаєт завссавоаає кА еко сесцксншес тс єеє вехсоващмн: пістаїссЄа збсасвксоє сонну ті З МЕТ З ЩО МІКИ
КК І васдвувата своссоцяи звасавстає запассвовс стсссабаст пфоастесоає 1205 І Щ воєтее СТ жсстсоав сазоєтосвок сфинреавов освютюєа освдодовнє 1 що оКстісісВх фотесоєові фоасдвовсї стсвсваєст асжаєвооса зваравкктх
Маки І т кесетвтстеє сода ава «іде ВЗ «Кіз пЗ5 «Кк ех дик
І кни кт рам Я міх я «сім це УчнВ поса дОовНістк «ТУ ж: «Кай» йвгжЖнЯ язвнуюгє анти БАРОЯВНІ) веБат о Мрі Бен мок спесодсвеп перси сок соа ЧаВо хо стара пассткссв зкоесаклк сс ес а В соВвоеаааВо ем І
КС ря «кс застане звсасексока ссмвесечи ев
ЗМ й сСтавницв ЛОХ
АТР зассаакссх ссодскссод стссюєвсс дастковссс тодесакоко сснксдоаа
МЕ спав епоха скветеасса сезасовоая тоатосстше свое ще спис ассв вору ецвнах сажу ас засо цене свое світо зво ссахсїавіо васаріїтава Вста Заєст пк кцчхто прах бааіаастее таїсссвово азоассвавах асазртваває птвовлачь побтссватс опе сє зо саповозако ссвсвовоса одасваокаво засвасвсяк зежасскова садевсскто
Ку зпчетовосв авцсздаска спадавасн вазі сс сасссвесво ще Ї Її озсстзвоаєтї сосссозтсас анапавсстс аасвеоопво папа
ЗХ
«Ми 0 «їй» БЕ «із Ми5 тивоміци «НН меї АВровіп нів ТТ ваз АБЕожВі 1 аз» ТАг ліз АЗо АТВ Ага нів 1 5 16 Й 15 - ях АЙ ох тго дів сіу Те жиє Су Бра йог ар дів від Бевз о сво ага дер те зв й 25 КН км ке З
Зч паї їх Я чи З. Зх іх -к ч й бах сг хе ьо
Оіж фіем оівч Аа ази аів аз Бен гео Заг Ар отТНК Уа АРФфоРКО СТВ: ве 45
Ах віз АТЯ Сец во тТвВК Ар дів дів тує ВгоОо Аїд ув) Аа Уді Аго 5 5О
Дара; Бів АЇЗ АТ тТКровго Бго лій фен Аа РВЕ о гуУБ ЗВГ ОАгО Ні 3 ТВ 75 З
Бгеа фух фай Ту О1у ів о Уді АТй ізн о уді ев без тан ем ї1е дід стуванива 103 вати ВЕУ, вій Сук УВІ Вго їв ве тв Яга ТУВгб обі Рго ага его Аїа ее ТВг
Її тТВг оте охег о вко два іец Бі ТНК дб 31 АБИ Аз Аа АВ ОБІВ їх 1350 185
Уді Твгогув уд Зак оніз Жх1е ші Сух вко Ам ОТВК тТвК бів іп іу 138 135 ї30 пог орто уві вве ав фс ве) фФоа АЇв гу деп осів Аза Берг оівц Сув ее 150 155 ї5о даси тн отТНК зви дей тТКкроНів бБег пій ами біу ів бБіу Херо5ак ту 355 170 175 ін о бвгбосій сіх фе Ага Тук піз бЄЇв Аквогуз фуз Фіц о івц Уві Узі їво 135 М ачробагорго бі ба» Ту тТук уві Ба іви січ бео фух ев бак обго
Тве Овна тн одеа так оФіу Ні Бех уві сів сту Тер Уві бек кез ха зай вх за
КЗ ЯКІ ак їец піз Аіа бух Вк обі Уві 8х5в АзробВе АЗО) Ап їжи Аїд ів тНт зу 230 25 ке: чаї бів без рве Рго Суз баг омес 5Ца деп вуз сви о Уді або АгО ща ах й шик 7 бах
З У «ТУ
Тер ак оБій ве) овен о еи їжи бух Дів шіу Ні Агаффісн бак очаї Біхш
Ач Он пу "7
ЗБ -Хух Р ім АБУ Ай Ту" во Ні сіу дій сію аз оАіа туго Ако ар отев бів 75 ка 25 іеи шег тує вгОо айя ТВг о ТвР бек ББе Зіу феб вве бе ма? Був га
Ж ех Мю ази ази ко тка зів
ОАЕ
ЗУ сСтрамина 0 вдАІ- Я «30 71 «Ві» еВ «ох ОДНЕ І Й «їх втучна послідов» «ваз «2232 димерний Ч-ї1ВЩБ71- 2583 ЮНіокоспавцює З «вистуломе «НАХ 1 зазасссоа ссвадасскос сстоцвисвіх восассвесс сізщсБ сасевова
ЩО завсваєссв вопаватво ссссямакес свовечнва дссесавево свовсвуєту засвогскито укісспесва скат ееаєс авоавассвой спасе сем овоє г мае сипавлеює агафсгаав току воасавостас приво сохне зі еко звапазовсв зазазвоавасх зе екс цаи такгасеасої зЕтлскооаа
МАК БУ е ОМ їз Б З Ве че
У симекетоа чесссвсске «свспевсвос доссвовеа кс цет зе снсо
Нау о піцвжасвов ссвавссссв засн вм гісдасаммєс баса свв 325 кссссазса зас свадсцвуа аззднмеок зуксссвсх ком тасКу
СЕЧІ хе звпоссоозас зсвувссочаЗ сзсазассто аочасттвтс ссзсочєнє ссводесвеє я
Кок хасеововсї Фодаостона сквсссезає зеаассвєє КОКСУ сер оадя
ЇМ ссосовсваєє сіщоаа сесочаоов сни зсзоахсте ажіжааоссх о щиюсстостс їпаЄвакес свсвТссеск важсхчея ссссаана сазан
Ей свезгвасає піст а какхтооссєєс спаваєаєта спол сосок ех - о ваш со ке шнм: Тоспоосаз завкояоесе тсосскаиска всазпавсвих завсмадев 54 Й Й іссвезасти че кцасво сІствоста заБомнвє капчсвіа зоазвцакана
ЯМ ши й тт Щі Щі
ММ ваадавстцю Чула жже сепсовВстЗ каста кис значу кеє
ЗО страница ЗКУ
ВАЖКУ пеквсстіка сзавівеству Фсасавариа семнничЯвн ОК сссїоЗ СОН авжссесвоюв созрасоахтх раї стов вскставсвУ поваесіУЄк сестра аказазавса всю оза свовазсіе тсспеесксс зрос таза зако земна Маска встане сецнвкесес аенричееа саодааастоу 120о павастзавсе ассссвасве аассвескес дасскаскос ссоізаваєс спасавопох ї2658 тодзазвоацеа вс атс кедсоонн зааксосазав скоаівскеє соствокУєо ї32о їсхавсЕвис сховав «совоесазета всовісїзуцу своскек саппске 1550 птІцзасавсю жостассссве пдасажєаас Затв ацажхсЗаков сани саривчююо мнхоазатайв сконаєствас сазвовоха аппаєтеєсвос стапаової
АЮ авсвоасвссс среетоавВо сишиаєтна ема зовасезств пасахопово їО посассстаєса арапсцовсе садєсссовжс дферинвсяї теаассзова спас
БО сосвавувся дсустасва есткуєакс ссовокасає стопа сапсоК о і6559 вжсттсссас ссацосессаз повсоавеасв зосатеВвосс іпасасссза аабчВсскає іо І чеки озтоз ссзісвоосва поаезасссс фа ховЧевоаЗіх сацВне зей " й їко я звомамнЦс всассзсоксов зассвасос Заемевшазс вовіснаюча сви кенах їй зкчациссоЗ засто сятрсвосяв васівяи та вхвианваза згссавотує виеуразаса ссросесткх кососесст ассдцацавав ссакскссав дагсовацчає їі350 ачвсксвянні сесосск повсвенафе Єсбсєвссса авовасеазае жрксазаає 2ОчИ зашщататксоє пеасетоасВе пава Е бЕстІєссаз ззочвсВс соазавоо страница 308
РАТ-ЯЗТМ ЕКЗ
Мк с«еахвзоанко Зксвосссос созоазасіяс дасвасаєссс восстасиат опвовсодве
МЕНЕ пек иВих саке совссханвс зав созасеосгоа зОсецЧоакае
КАФ зсткевссх дівосацчкжх зсасомню сооалевсо дссозсвссов авессско пе
ФАО зессасємни сину чу що М соч ки Ух «їх 54 кхеМх ДМЕ кі щтучнаА Пі ДОВнНІИТЕ «20 «Щи» Злиття вовномерний зи азів, «НЕ 7? здадосоває ссвовсссес пехоавсстасс ассвосацес сказссточа сассвавоа двсадсевсто зосвалкзас соссо ес сао Зссопавевс сасвесвосаз тю
М прсассссто спстсоссва дсхостоесє ааммассвцо ссадсстоувм савовесвоє зх
ІН стовавоствс азсадпссеооа спасасс засвоесхвІс тозассюри ссічаовие я чзавцвмниася зовалевакк Запас азссокарє кекастасвк згкестоав
Зо ставасктца зсссквссжкЕ сассвасако Осені тоасвоуроєта зво
МЕ чезстосв сезавссоса зба асанс козеня просто сховає їтхссссзЗсв зсахтцовава сзауствУє дасссмиви зпеїссацсї тохастст
Бу заачеставс акт сіє та сек стаксо сасвюжкас спацчнсцєє хкасвозхЗасє мер ово сиаслссавс онинвої овес пссовтоаавВо ж стспасавсс скан сек сс мекни; ссомнемнаи пвапассовоє ще сСтезвица 307 вати ульИ псепсжонаса іоівосстсх сс оцВ ісіцерсеоє вувскавсво ска сенс поса сІасЕтлсс савосостаа сек Впетю НМ сСои 7 звзссховоса зсезосааса савеетітссв сові остає зазенхвмся вевовссско засластссв хавссасс там Єнвесачкс азагацкцаєс сеусчасака зна честассктв бсесопазсво сведакачас «воваакс боспеовча с з54 «і» 33520 «кій ДНК І «АЗЯ» Штучна сосвідсвність ях МРІЯ о Я С и Й Щ . «йй3» Важкий панчюг анти БАР, Б З мутацією КЕ «Нюх 83 чазакасас цекащавІсє сдосачацвс сеузсрвае смнсочак ксацаєто сота спін Е Сас ссср кекс ска їх піни авав ожини о песо зп х ссщосовхвВ яиВИННЄ ї5а астстатоа ямкносчакї свсоєакскос созовосвакт ссоааоаасвс сота а свовкзався сеспнзнни сковозасаєс зссзаквої всциескав зивсмнио
БІ ши нВвоттКЯ аствомицв виаеозовсх спр свссе каско мав пило аер пеакасслтск сестра гогспетс звоавссчасав пане ії
Ей ста фена етавсЕтессс асо ссзхувосско заасаасУ «КО вЩескЗацєА зсосіав соки совВ док мис чага ав заст ссУ несе тафомвсс сасссацсс вдасаосаає спраасаха
ОО чисстаптоа ссзЗ9саДЗсвс Смик авчзаваесов с жссоча печах сбтраници ОВ вдт-З170-5ЕВ
БО звавсссіха кехасвесак псоссацако бесвмн зоассеККск вовк е же й ши зазнсечім фовсеавтсвс спаси шес везвота зер ех сс завозасавсс сеї зиітстпімо) пух орако емо аак засакався
КИ свозвсаане сспошовоца ес єваєс воасасстісв звассотаке сМскассє «о вксзічеєс жюасеЗоаст звасозсааа Задкїсанох пововеєае сммеке
БАН
Щек ссаксзазаз вассвисвоє звовсснвНЯа запаска осо осо що жчезтасвсса пебсЄсссакс спминмс абсо сазвоз восвашає секс 3050 вжхзпасиса дежжтет сомннсас восоасазе сової вай казкових мав шо І І І чкесоаваавсе зосовавевиви св акс зав волоска скоса кеакае 120 щВнавоастоа аєсчінацав чессаастоув задусска вовситесво се аска їз5о птрпаєним: зестасвова ссвсесВевсс ззааацессс сема сссоцусаве 1520 «ЙМ 74 «ХЕ А 5 «еїлм ДНК й «435 штучна послідовність «дО» уч дл іль Та чим ому тт «Я» Дегкий ланцюг антисЕАВ ще хх «Яр Уа чвчвтсахас козссоваке собори асс стежте кав псосБоєсаЗ давазссвс щі ств засос зтесатетес сеесотаск спосо жка совасазаву
КЕ: й сни аде сссптевої астоатсовтєЄє зесосскока сен сово свпатскої ї5а чес сера тстао стос с оноктиатсс севосатете сорасцова
АД полоевснасє соассазїцтв ства сао тоаіссостск св сж оц страница ЗОЗ
БАТ-Я170-5Е
Мю «сащсвсса вюодавави саасасоуєс звпасіоВс саастукакс свт ов ссвітсвва азсзатюмо авсстовасуї зсоксоааксо кзкоскесте завсваєстіє ча кдссоссаваз восвксонвакої сазоізнм) зікщаїацеа зсзавсоасе зазішасаке ка сіднасвиїЕ осдасідеакея дзасзосава Звсвасассе всаосвІомНу ссаєеСЕЄ асякізасса зовсозата сбазсовсаї васааєстата ссхаснмви: сесісвсаву
Ов зсзЕсєдаскх спсбссвіїоаї спзмовоаскіє набсаецаако арх ща 5 «Ох 7 «81їз Вб «ій» ВЕТ «еф» щтучна послідовність хагИх чх « сухо ми КЩеч "ту тк уми сечу а я а квіжладиттккои «вих ДдиМмерниий ши а-І1ВВБСТІ1- Я АСНЬ-КсС хх мутацією 0 У важкому павцезі «0» ту
Ага тт дім го ака Бге вів фев ТНК хів ТВг о тТвг бек вка дБлоїеу ї 5 ів 15
Ппіу ївВг Ага сів ваза Аза Аа азв вів жі тТВКоБеб) ві Фев ні ї1е й Ой З5 Зй я 5 З сіж бегоБгоа Аза тне о тне іп шій Шіу ет вка уві рве АЇв бу МеВ чо 35 іти Аїд вуз А5ап Осій Аїа лег орви бек оазй ТВг о Твг оре) ажВ ТгЮ Ні
Баг оці» дер о піу Ата пі ЗК обек тує рев баг обів Зіу ем дк тут то КУ ща
Зів бів Аз бує Був о біц рев жа! маї дер Жак о вго біу се Туг Туг 35 за з сСлюванвца ЩО вАТ-ЗИ-ЕО чаї Бне ценозів ісц рух фев бер орто ТВРОбНе ТБ одей ТВ оЄіУ Ні 100 цю за мук уві спі сіУу Твої Зероцвва і без сій Ала вуз Бгто Бій бай 115 іо МУ др аки пе АВ длй зи аів се твгомаї ів Би ВН Ре чего лає мек зіч аз бух Мер оуаі АБВОАгу Жабо ТгроБає Зів ев о вац ве без їх У 155 цу, їу5 дів сіу мів ага ім зег ма? бі фен о аго дій тую ву ні Ту 1 17 5 4ЛКХ Ко К 3іа біб азро бій тук Аг аАвротТгр опію фев бе тує вує дУВОТВРОТВг 150 155 150
Щег вне дім їжи Бе іви уві фух« Рго ази аа Бго тер Фін шіу ту 125 че хО5 пі пім чего бі бі піє ім йвгродго ТВг оці) го Аго рго дід з: пі бі вт 0іу Біу біу Бі ЗвВгРодКОа тТйг ові ке Ааго БгО дід б мае 215 че
ЯвкожЖіє ТВготвг бек овсо дяпогям цію ТБг дк піч аа АБО АВ АВ зх зо й ча заг 325 їО ЯУ 230 іп жа тк обео мпі Жек ніх Зв сі дег РРО Аза ТК ТР обів іл пі бек орго мні Ре вій фу бен о рец АЇв Був Ап шій дід ше фам
Бо оз То
Зек Аза ТВгОТвг ог Аза тер мів Бегожіп дер ші АТа Оіу бегоЗеак тук вец бег ощів 5іу ква Ага тує сім Зі Бр огух бує Бів Бевз оУгі що КУ ню зві Атрожжк бго с іу ем отТуг тує УВі Бе офев бів бе) бух демо ожЕг
М по 315 130
Страница 11
КАТЯ Й ре» Тр о ЕЗа ТНК Аз о Тїйг обіу Мі був а сій пРіу Ткрома: БЕгОБНИ
ЗЕ Й пода 335 ле о 35 таї їж бій дій му Вго бій ві АБ; оазр вве Ар оАХи бем іх ем з Зах КІ твВгомаї ів їм Ве бус йог овес Меї біб Ап бух вад Уді ар Агу
Заг оттв о Зег бів рез іо офвц ем бе Ав ціу ів Ас їжа его ожа? 32 зт З8О
Фіх сем дга аа тугоїву нів віх лів Бій Ар о Аїа Туг Аг ар оттгв
Би З 95 яю бін ван обаек о Турко вро Ап ТВг ЇВг обег Ве о піу Каб Бе без ні пух зах СУ 15
ВУ АБроАНа Кго Тгробіч бБіж бі бі бі Зек о сіу «Ту «Ту Фіу 5ег
КУН ау 433
Ага зів азов оАів АЇз о вго тв оУНі хек тів вве обго Без бак бак бів
А ве 345 ів овес твгоБек обі сім дів бегоув)| Уа) Сух Кйж Бе Аа дев БНе
Кщ 455 ЗО тук Вго Куз Ахр Хі8 Ази Уд! Сух Тв бу ів АхроБіУ еко осі Ага чБ5 50 3у5 480 піп ам пі Уві оц Аза Зако отв ТвВг о Аа бів АБробт ух Аз ожеє 455 ЯЗ ч95
ТнгоТук бБегоМмек баг хакі ів отВк бе) отв ге АЮ бів тує Фу
МюЮ 50 510
АРГО НІ АХА БЕР ОТук ТР ОСУВ ТБ АТ ТВгОВІХ рух Тк Бак о ївВе Зак то тів УФ! бух кХег вБж азп ага Аза бів Су МД Рг Ага АБросСуз
Страница 132 вдтТ-4170-чКЗ
Зі Суз ух Вгоа сСузх Жів бує тк жі вго сі ожві бего5акб У она 545 За 555 55о їіїв БВ орго Ро фуз го і хх Ав оУВІ фа Звгозїів ТВеоівц те Рг 555 78 З іт Уві твгосСух Уді ді ді АЇв її бвгоїУ» Акроазр Бго 52 Ма! ко 585 ща
Фіа вне баг тгр о ВНе уві АЗИ АН УВІ бів ма нів ті Аїд шій ТВ 55 БО 505 су Б) Ага бів бів ій їі ам) бег ТВговВе аку Баегомаії бак оФіц іц вга ї1е Меї нНіз бій АЗротїгв ав Аза Біу дуб 410 Ве ух Сух
БЕХ ю 55 ІБН зго Уві аву чего вів АЇВа вне йіу Аїа вго жі Фій фу таг їі бек 55 я ІБ муз їв вух б3іу Ага Р» Бу дід рго шву жа! тує тк Фів га вга
З БЕ 5
Кго бжа дій хіп меж діа ух аз гук Уді бЗагоїав ТВ о Суз меж Ї12
ГУ еко ах ївг Аза вБе ве вк біц Ар жів твкомаї бів тТгрозівй трроаза «ТУ їм 5У М іа вт аа бів Аха Турко джхр одхв ТБ одів го Хі Мет аз тТвг о Аза
Те х ХУ ' х т З ол У
Не 1 715 728
Бек отук БНе хуцаі Тук шаг аБрофям доп узі бій рук Зек дев о тгв «іч АТ ді дев тТВг о БВе ТвР Сук бог оуУв) їв Ніз Бін 51у свй мії 740 таз У5і
Аза ніх ні ТВгоОім ув его ржн бек нів Зеговго сту Сех 755 тей 7
Страница 113
РАТ-ЯКАМЕКЗ «ВО» їв «13 318 «ВІійз КВТ «13» щштуУчнВ послідовні сти «ЕВ» «Ле Злиття моночернвй ви азів АЮ дга твг оз): вко ага о вго Аїя ізо тТвкобіяа Тк отвк его бго ви фец сію ТВ оАга ОЇ Аза Аа Аз АБр Осій Уві ТВб о вго щі вагонів 16 сФіу хег о бко дай тТВе о твеобів Бій Біб беговко маР о внБ дій бух Се 45 вв Аїа бух аз бів Дів Зако обем о бегодяв ТВе ТВ зв ода тга нів
У 55 щі
Мег ощіп дхрожіу АТА СіУ бег бог тує рено обеакобів бі зем АК тут т та Б січ бім дер рух ру Бін зе Уа! Уа дер охег о вга біу рем Туг тТуг
ВУ 5 зу чаї вве рев обів цен офуз іжм оЖек о Бго ТВговВа тв ха твкоб)уУ Ні
КА 105 11 іх» Уві іп шіу тро омві Заг огбацв тд їеб бів АіВ вуз Бге дій хв
АВ Ач вне дар оди ів Аа бер твкоУді бів рец о бБе о бго Бевг ощег їх 115 ій мат бій азп Бук ев ай дер ді Маг открошек шій фо орев фев рев 1515 їз 155 їі іуУЗ Ааіа б1іу НІ Ага фей швг о Уа) піу ізч о вго вів тТУкК ме) НІЗ пі1у їх 170 ї75 дід піп др Аза тує Ага АВ ОтТгВ о бів рев Зак Тує Бко де ТвгОТВЕ ідо 185 ва страчвив 134 рАТ-ЯВ-БЕД зак вве Зі фев Бе ївец о Уаі реж» РгО аз аз Бе тТгр Бій СТУ щу 155 М гу щіу Щіу зег о піу шію сі бі бек АЇВ фує тв о тВК о бго ка бек уд я лад 7 7 54 й за «А «са КО
Тут рез рен вій Вт Зі виб дід дів пів тВгоаза Закомеє щі те 25 х3о 235 4 іа пі Сузх ізи ув) Бу біт тук вне вго єЇш го Уді ТвБоУді тТВРг ши за 7 й Качу зцх «а Р КІ
Тгроаха Заг обі 5Зеароїжм о Звгожек піу Уві нії ЖК оББе вго АзВ мні
Й зай 255 Ж
ФК яка Ра зіва дій зе одзроіви Ту ТВгоїсев бак Заг баг оса! ТВгоуві Бго бек заготаг ото РКО Заг одів Те Уві ТВк о сСуз Аза УВІ Аз Ніз го АВ. що ІЗ НУ ак обак о тВвг обу Уа дрож іх Ті уві вка Ага Аа Су «2115 440 «2ігз ВТ «РІЇ» штуУЧчЧНО ПОоплІДОВНІСТЬ «ие» «2иї» Важкий ланцюг амти-БАР, Ес З мутацією КЕ «А У бін о жві дій іч ів бів бег обі бік Бі брав о Уді іп Вгро сту Ту і х іб 15
Че оівч Ага фен лег Суч дів Вів бер обі Бе те о БВах дебет НІХ зв 7 зх ! зв дід меж жшеє ткроУв)і до бів дів вВга бфу гу» щіу Єви о пім їкроУуді 3 у заг віз їі тт оаіа8 Бек обіу бів бій Тук о тує АБ дарозег УВІ ув страница ТІ
АТЗ МЕ пу 5 піу дго пе ТВ її Заг оАгО АХ АХИ ЗВгОофуз Ат ТВгОфи тує фе ву І та ХВ ВВ ло г: їй 8 5із же аз йевгоїев ага А1В сію Ар те дата та) Туб Жуг Сув вів не Е М с
ФО Ес у ШУ Тгроівь сФіу яп орвйв Аа тує тгрозіу віп дію тнгоеє Уві
Мю мух що
ТНК Ма Вегозек дій фу» ТВ ТВг о РгО РКО Бек о Ууді тує Вго вен дів
Кго діу хег АТ діа біб ТВ Аа бак омеє маї вк офем «Ту Су» ем її 135 їі чаї бує бі Тук Ве Бгз хін вг)о Ми! ТвВгомаі ТЕ тер оАза бек обіу 145 Тю 155 158 кет ей бжи бегоБіх УВІ ні ТВговрЕЄ РКО Аза УдДі ви 51 Хег дер 185 Му 75 ім от ТВгогви Чет пок деко уді ТВгоУдДі Бе) Зваробше Те ТгКровго 150 155 Цю его бів тв оУуді ТВг був дявп ма! дій Міз го Аіа Чеє бек ТВгоБух 155 р Кен:
Ні Ар обуя Бу 115 хі бго Аг двросСу» ШіУу Сух фу Вго бує Ті тут, 15 й І; ух й й жа КОЛУ ло
УЗ ТВгомаї вго Бій Уві Зв чего уві РНе тів РВе ово вго ру БгО ве чужу мчсчря т уд
Ех 3 ХУ 24
Гуз дрома! їжу ТВ ОЇіе ТНК огфеви тТвг орго рух Ууді ТвгоСув маї ма! зах 50 ех
Уві АТа Її бек фу АБ АЗИ БІ бі УдДі Бів вве 5акотгр вне уд!
Р Ен: ат
АввВ Аве оЖВі сіц жа! Ні Твг ОА бів ТВ офрує Ве; Ага 10 ІМ ІВ
Странина 116 зо СБ
Ті Ай Жак о Тве вве ага Земні Маг дія іецч о вгбе їі меї мів бів
БЖ 395 зп
Ар оттроіец ап бік ву» ім Ва рух СЕ Аг УЖ! АВ Ха да діа
Рв обіу АТа вко Хі бів цуз тТве їз жаб же ТВг ОБУ БУ Аг ОКТо
КУ Дів Рг (ів охмаі ТуУгб ТВР ов вто го Вго Куз цу5 бі зе Аа
За 345 35 суб Аза бух Уві бек цен о ТВе Су» МЕР Ї18 ТВг ода БВ о вБнНе вВга бі) 355 я 3855 дротів ТегоУаі іш тквосів Тге Аза бі бів Бгто а)в шім Ан тут
Кк КУ УкО їу5 дяй ТБРОшФій РКО їі меї уз ТВгоАхровзіу Зак оїжк ВВЕ о Ууді Тукг зві ЗВО 395 Апо
Заг рух Кеш Аз Уді бій Був Бшг Ач ТКрошім АТа біж Аза таб вле
БУ І іх
ТнгосСуз Зекомаі фев нів об біу фев нія азпонів ні тб обіш вух
БУ 425 БУ
Щек оівц шетг Ні Чек вто бі Бук 235 ща «вій ОК «Ії 215 хизях Кт «У» Штучна послідовність «й х «екз ДЕгКиЯ пдедюг антиеКАЙ «Ох ТВ сім тів жк! ем ТВт сій беб ре бі ТВКовБев баг іш хХег вго фу
О5ів ага АТ їВг осв баг обу Аг АЇШа Зегодів 5екожаї его ак баг сСтравина 317
ВАТУ ИНОКО ях, мч пу ту оїах Ат ЇКГЮ тУук іп овійф буз ка сім бів Аі рез Або оБевоїеу їі хів пі Аза баг їнк Ага А1В ТВг о щіу Ї1а вго АВ Ага вве Заг
Зі 5 во сіж фег о іу шт обіу ТВ зв оРвве ТВгогец їТвк о ї)Б хаб АР ей ім вко Біч Азвобве ів Уа тТук Тугосуз вів о зів «Фі сій Уді їів рт 8 па Зх ге отв вне Біу віп сіу ТБгорух мі бій хів вуз Аго дій АВ Аїд 1 305 з
АТа вто тВг Уа) Бер ожфів вне вго Вб) Зак о Зег бів сій грец тТвг зе 318 за 125 кю кА ва)
БіУ біу вів бек Щі Мі СУ ВБе ем АЛ АБИ БВа тТук Рго Був Ар 18 135 ню її2 дев УЗ! вуз Тгрофух їі ар опію бег пів АгФ БІВ Аа біУ У 145 Іо 155 ії івц деп Хеготїгротвг я5робіб Азов о бег о бух 83 Зако тТВг Тег о Жет Ме ї5з ко Щх
Заг бек ТВг оре Твг ов) ТБ орбуг Ахв вів тук ЗБ Ага Ні дай бог їко 185 130
Тек ть обуз зів Азіа те ні ру ТВе хек ТВг Бек Бе тів чаї вух 195 20 во
Ще Ве дий АРЯ АЗИ сім Сх хаЩМі» 79 «ВИМ ДНК «Вії» щтучна пзслідашні шт» странмама 115 вжт-Я170-5ЕВ иа» й «ВРї»У Зашвкий ялвнивв БОЯХ, Кс ота хзападимоше пазціцсавї звична пефрвимевв ікоціасвоє сімки єства хожтВіцеаа кпіпкоцчавже се сік вата їоасоа мн сс 1 ілМ ссмиюовази остов О Засстсваст аствчюта зюрфрозчіао сасасвстає
Кк Й Й Й Й Й
ДО песачестссто тозвоааассЗ зсбсассвтс фссараспса ВЕЕспавова сасзсїзтаї
ЗА
-ТУХ
Кіцначів зсвеассїна воемзмнВє всвнсзвіах асвоБнеає засо па зни чзвасттесх пскжвисся ззвассст) зЕсассесю сфвоієстав саессвавцає
ХО кові сесеюе всссіссксє ваормесескх стадо ета
СІК чаю часте скоц ксоавоацаста сіла споцідаєчв ЗК сакааВ КТК зо кідассося ссокаєатас скіссєщк зісстапаак сем со иет 540 аршопан: мм жеакапс стос ми бкоцоєвссс вУувпкжвовЕ ЄєтОсааєУко що заксвсплає ссвосаасає ксазпотоцає заоваааїко азсссвавкс стало зсааа
БО асієвсвиах ссесссукЯ сессії зада сао рр шсс «Кекс
Га «жссссссав васссвацав пассстсаїї пістКесода сссслоаначе сасЯс
КО сени ниви еасзЗа араксстоа сотка ЗО ВсО чес я заноасвів втрвссваає заваоссосоо забовосаає восвасвяає зівссакаки
Ба От ШИ й й
АХ бксшситсс іа ФсвссвсоВе пні аватоа зсеака спаді сао
БЕ От Й Й чЕстссазсв заоскстсяч саписксвие зибнанакси їсессавийе паса
ТКХ Ме х чено
АК М сСтранецав 32
ВАТУ сессоридавс сасацакчєЗ пвосстасс совісссоцуЯа алича свадазсюі
ТОБ ісдасстсї сасцсвуї сазадоск спфсссВвкоа зсатедясЯю заз коуч що азвсозваєснюшющєе поссвозоава санвсезова ассвсесске сс стеЗа скспоаВсОУє 1 сс кесекеєс созкавасва цетевссеко сонна внроз пеаєвосв фщовасекс з25п тЕстпакєт ссоаказносв фоазоаєтетв сасавоссвсх зекасвова зач с їЗ50 спір стскоЗ зав 1335 й ї3уз «ах ОВО «Ії 54 «ій: ДНК ка13» В учна послідовність «ий «йкї» Ддеагкий замав ВРЯ? «М ОВ пазватсокаї задсдсваоке фссрровсс си текиЕ Єєтисвоооа звовассвос ста коса ксоа заз аризаствех феорсссатв сс а сем са сткссВоесх сстсатстаХ дався осн свВс пока
Во чесвоцікса січасвотоу жсеоувсв звостеастс ссвосаїсво своветоча щи с«есцпиасвті іхоасзаїаа Єкасісісви сщиасеа сс кенос зас с«ашнааксиа ззвпіочажак сазвозувей ЗспосЕЧес салі сво Коо
ІБ псатстовку заказкізав зтстооуваск чі татасствиї авхваси з4и інісссвова азвассвавНе асани: зтачвквасц сс ссвако Заши пвошІвМмНний: си нМмвВ бфовиаі счвовошасей всжрвжеад спос
КВ водстнвиа азчлазескя сзазазаєас вами сівсо секс чваЕ сВжссвКК у
НЕ страница 120
АТ АД КО жксевасЕ сасспоїево жмнуаєтес азсводемн ато ца «АВМ»: щі «її 545 «32 РЕ «13» Штучна песдідовність «ДЦ «й2Зеа Вагкма лпанцют ПРЯЖ. Бо ЯЗ «зВплиДеНОВе «ак: 1 іш оУуві сій їе»ч іем бів бак обі біу бі ву ме Кіма Бго Фу РУ ї У ї18 35 баг ген ойга Ко баг Су АТїа дій Чат пі БВ отйг БнНое 5екобвротук
Тпозаиа, й зе І «о 3 М дій Меж Чет тТгрохві ага біп ів обго бік вуз щіу ем осін Тгр о Уві 35 Ба 45 заго дів ія Заг озіУ Зако Зі сі Заг ТВКоТуєЄ Туг АЇВ АхроБає ма їз Щіу Ага вне те Та «пт Аго АЗИ Аа бок Був Ап о тТВгоінМм отже п то 75 во іеч бів Меї дей бегогви дк АіВ бів ар о твг о АЇа ха ТУ Тує Су их Ех хм) щк ів Кук пі юг обі рлю АЖ» Ту Те» Оу ів Ту твгобеє УВУ тВК їх 305 ме
Ма: Бех Заг АЇв Баг тік рух дім ВБрО Чек ові ле вто ев АВ РгО 115 її 175 бегобег рух Звб ТНг его біу біу ТВг о АЇа аів фев обі Су вм хді
Іо 135 140
МУ Ар отує КВВ овго бів БгЗ УщіР тн Уа? Хе тТКроаАБа Заг обіх Аа 145 я 155 їй фжмотне жк обі У нії ТВ ВВА о Бкбо Аїд мві рев бій 5Звко5ек 51
Странмяца 121
АТО зївц о тТук баг фіши Щек дек о уді Уві ТвВкобаї Бо бак ожЕг жаб фец сту їі ї155 130 твгоФій те туго хів Куб Ап Узі АБа МіЗ іуз5 РгОо баг Аза г вуз ур ЕВ ЕН заї дко цу уз жаф Бім кб зу ЗК ОСУВ АЗО бує ТК ОМі5 ТВг ОСуВ
З3а 215 зай
Мох ро ОКУ вго вго бух Рго Аїд вто Фій Аіа дів сі Сіу вго 5Звгочаї Кв о гвц 235 КІ 15 ЕН тБе РРО го бух РгОо був аз отВг о мец кеї ЗЕ ЗвгоАга тик го сім
Я 250 Й ах
Уві тйгосСуж ві уві Маї Азов ожаї бак нів «1 Ар о вго Фін УВІ Гук 250 285 275
Бне Аа тер туго заї Ажр ші уві піц уві ніх ази віз їцУБ ЯТЬ ув «5 ВУ
Бко зга бів За бій Тугоавй ЯЧег ТВгб о Туг ака уві Маї Зак Ні ви
Зо рай 3
ТкгоУві ів»м Ні біз Аза Те огев Аза обі буз Біб Тук уз сСух Гуз
Уа зм 315 2
УЩі Бег оази су Зів бен о біу дів Бго 38 шів ве ТВг о їіфж щоб фу
ЗиХ За 355 ліз зм її ї Вглоде ду ре їх Уа ІН тік Ск 5; о їЗки у біг
Арв обу біу бр оБго дкаЯ ід кра зіп ЗР Су ТВП обецу Кго Бро Заг
Зо 45 з5о
Ага Ах обБів бев тн оїуз Ап сій ув) чЧвс іву дет Сух віз Мат оку
З» х65о зв их, жту Ст ууечту бу г що х ПЕК зх яра ах ме у ям
Зіх вне тТуК БТ оЗеК Ар оті дід уві ші тро бів Бек ода бі бій 578 375 за
Віз; Бін АА Аа о тТук фу ТВгоТВК о бко Бго Уві ізн Аз Зак Ахв бі
Кеш Мк 35 яю стравива Зи2 рРАТ- 4120 -5ЕО
Заг овВа Ре фей ді Зекоїуз вм отв Уві Азрофув Чек оАгу тгробівй
Ай5 БК Ба пів сі де уві вва пек бує Заг УА мав о ніх мі: й міч дог зіп о зі да У Бпе Чек Су его ді Мах Ні оОІів дід ши Мі деп аг 425 5
Ніз Туг таб обів був Хек іа Чеє зіву де вро Оіу ру 435 34 445 ха ВЕ «лез ВАТ «ФЛ1їх щтТУчМа песятдоБМотк «кое І «й2ї» Явгкий дану ПРАХ «але ВО т БІ Зк ім її Уаф ваенв Те шій ше вро Піх ТВгбобец ек обев баг о Бго біу 1. 5 ї0 іх бін ака АЇТа тТнЕ іон Зак обу вга вів Зак обів жк мані шоб Чет чок 20 їх ще
Тег о іви від тео тує ів ощівп ух вВго б1У бій дів бко вра ів їв
ЗЕ л І й Ка Б ніх Зх їів тук обі зів Зак Хнг дку дід тн Фі Ї18 РКО Аза Ага вва баг оту чат сі Зако ошіу ТВгОАЗЮ РВЕ ТВР рен Яйг зів Зако Аку ав ІВ 55 т 75 що
Бгто біз ар вва Аза уж: тує отук Су бів обів туго зі фак хв та івц о твговве Фіу Фі обі Так обу ді бів їТів був Ага твг оУузі дів це 130
АЇЗ РКО бегота| Рея їв ве о вго ве Зак оАр бів щій емо рух зве
МІ і1ха 125
Оіу тТвк АТ бег о таї Уаї Су вжи ден о дха АВ вне отже РгО АгУ дім птрвавица Ти
ВАТ ЯКО
130 135 1 вів муз узі віп терору Уві АбБоАЗВ ОАЇа фон бів Заг ожіУ дев ха 1435 їх 155 150 сій січ ек уві тТвкгобів ЗіБ Ах о Баг офуз АЮ его ТВ Ту чего ген
Зег бас Твг орви ТВгобец бе фу Аза АВ ОТує ОЇ 3 о НіЗ їуз ха ж До тм ки ді чі Мам ла 1 тах Му Шви ра; хх же ог чЕ
ЖК Ат СУК бін ді їпб наз МіпожшіУу Бей БЖ Мет Бре о Уді тТАагоБук
Й зах ГК Й ги Й пи реа жк
Заг ВН дхп Ага ші сій Сух
КН Щ Й 215
У хоК «Те 83 «Кі» 1653 «ам ВАТ «ВІ1їМ Непо зарівиі «Не КІ іч пів одер о рго Сех его Ап Суб Річ АЇ бі твК о бНе Сух дер дей ази Ак аз сій ї1е бує Баг оБкоОо був РгО о вБгО Аж ЗвК ВБЕ Жег ше
КІ ЗЕ г
КУ «У й зів біу оіу біб Агро Су» Апрожіе Суз ага сів сух Бу біу Уві 35 ве 45 вна Ага ТНК Аго вуз Зі сСух деб чего тТвК о схеє Ази Аів 5ів бує 850
Зо 5 ви
Сх ТВе о Бго сіу Рбе ніх Суб сво Ту АТ Оу Суб баг Меї Суз 55)
ТО 75 ГУ
Бвіб АВ Су бух бі бі. бів біз ван тТВгоїуз БУЗ З1У Суб вух дар суз сСув ВО біу ТВгоРне Аха АхВ осів уз агй сту І1Е Сук аг вгео
Мю 105 мо стианяца ЛЯ рАте ЗЛЕ тк оТБе о АБлосСмх Зегорев Азрожіу ру Зак омаЕ)ф без уві Аза біу ТВРК 135 335 чи ож КУ вк сУу5 бів Ага Ахрохаї Уві Сух Біу Ртб бог орто вів Ар оржЕм ет га 13 зи 3 піу аїа чего баг о мдї тТвРОоБго вго Аїд га діа Ага бін Река біу Ні 345 іо 155 Мю
Ха Вга К1л ке: КА хкіїз 46 «Вій ВИК «2і5х ВЗавла цінавовгує «МНК Ві ізги біз вав зи суб Зако давав сСуз вга Аїд бі Те вве Су взв дай 1 З 18 15 дяп ода Бек овів Ж3ів Суз шего ко Сех вго віч АБАа Бак о рію Заг бек
Аіа іх щіу щій Ага ТвгосСуз АБО Ті Суб аг бів Суб був обіу Уа
Ме бу ТБГ ОА гу Бі Суб Заг обеє ТВК бек о Ахв дів щім Суз дер
СЕ Кіш пегобіу Туг ні суз вен обі АТ бів Суб бве меж Се тм то 75 да
Зіп Ар осу Ку бів біу їв» шім бвм отв бух жк Оу Суб ву А5в 55 ща зх
Су5 Суз Ре сіу ТВговБбе Ап оАЗВ бій рух Аг Оу ї16 Суб Ага кто що м ТВ
ТЕ тт Аза Су бег оре АЗВ оБпіж уч дек оУуді Без озві Ав ошіу ТЕР
М їх 125 тлу вх ЗЕ страница дк вАТ-Я1У0-5К іх пін дга доро чаї Щі буз Ббіу Бго бак оБгО Аді аАзЗвоїаин Баг РгОо ж В 150 зіу АЇв бек Зек АЇв о тТНгобко Бго дів кко від Акор о бів вго сбіу нів 155 їіхо 355 їщо вк орга дій кг» 85 «Фі ЗА «аа БВУ . «Вії» Мих шизсціна «ЗР» КЗ чаї дів дяв зву Су ав оаза Сує біб Бгто обі ВК о вНе сСуз ака їх ї 5 32 15
Тук яви Вро узі Су був ЗФр обу; ВГ Бе Зак о тТвНг о вва чего пог тів 7 зи 7 й Й Зх за «о 2 хо
Зі Бім бій го ди Су Аяа їі сСе5 дга Уві Сжх Аа бі Туг ввв 35 ЕВ 45 ко обне муз КУБ Вп Су» Же о Хег ТВЕ МІХ Аз АВ бів СУБ бів був ті сій зіу йбе мі Суз се бі Рго бій СУБ ТР Ага СУ 10 ух 55 то Т5 що
Аза суяє ага вро бі ів бів жі ТНК оїУу5 сій піу Сух іх ТВк осСух
І Й 7 ВЕ ГУ ши ШИ й
Кл це реж
Баг овев пі ТВеоРМе ЕВ АВ дів де ЄїУ Не о діу ха) бух АР ОРуЄ
МюЮ 105 мо тТРВ оте аа бу Зак о іви АкрошіУ Аг ожег уві фев рух ТВРОБІУ ТВ ївВгодім буз дярома)| Уві Сух біу Рг Бгто Фа) уді Зек о БНе Зверобго за т че й З ягх
Б Не страница ЗК вАтТ-ч 145
Зек о твВк зве озіїв Закомаф те Бго ші су бі Рго Бі 1у НіЗ Щег т їх 1503 ід «ій м крем «10» КВ «ії» ВМ «ефах ДНЕ хі4Щй» шШтечна песлідовністе «ох «УМ о Бесланнюг ії «западина» «Нюх Ок заксавваскс впвпйЕчксй весна фечофценні писіоЗаОвО асо еао о шжсстЄтксес ссссваваєє свазчвсвсс скоса акек ссючансксє сус виа
КУН сна бозВсовіваз ссвозавомс песеловзаїса зкісвесто зеапоаковзає 159 жрстодес Єекатавт сапуасваєу ссукодовоз восадкаєяв казсвовитве
АЙ сесатвіта зпзксстсвс соїссжеєає бсадазссв поавіозсва Фасад
З00 масвавахсх ссватавасс сетесес сссосвесзааз завстаєсес газварвеаза пжекрозаксс сваааєссвов попка сс сосок ссспиозіза чсеаАссзад 23 жвижавоксе пестЄтса КЕ слов сава оЗскестаЕс псовонаасах сосна «БО та нннима акоцасасс оннаєсзає тасаеюевсса соска саке
Зо
Зак Ессх кижесетсУх оносаацвкій аспевнвана Яну засво
ЩО засво ттск свічок чзвизсвіну зстеїсасвВ воссактвевВо своє стежці ккосооеаВ З.
БЕ
«ВМ 87
Страница 4157
РАТ-АКИ-щКО «Вам дн «813» тучна послідовність «вай» виття Ми Я-3ВВ-АБе З «виступи мо «ДЖЕ» КУ сцнамкнкж «стусавсва стсбскоєс зсвоскесе дефасваєваа соеваассва
Б зсув «сспвосостоє савсаосЕКо аскектаКсоу зсопласв Зассокасен ї120 вісцране ванрааоци с ксноаз зессодозава айпаосасва сасшиасвАє їКо печннично звскосносє совсекесак кокони скоса саке
Зх свюавсіна ува знмастчасо взаащмешех ссвааЗасто піст всжімсавсоя вссжмем сво срср сеаВсхОВа син
З виникає пауссвасоцч свосчачача сввжасатсо тчезассс сацоптетасе вх Яо в З ча Хек 5 з
ЗО цетсскакетс скооЧоссво саасатнкс ссксосеоссс сорссацаца острах за тс кеснслався ЗзаКакеке сжркрчвк сеоаваєи правова
А шесвси М цоспассНТв ссоавовсс пава сіцО звовассеке вої
МЕ їхкекксксва мо онура свосстсвах вхо сме соки свому
БО ча коОвсв щиинеовшм азвссстоавУ чсвархсв воїн алеє призво шен о сУуве х 5 5 З ще ККАЛ КІКО
У зашоїеака ацнизмнмино веаацссУпою сере и: аовасаЗсВос счкассВохО
РЕ шісвштИе світи здовссазовс мачстзавта сома савотосаво
Фест свноя авесосскос що хжеовнк падазавика текспававс свазесао к І І Й тксзазавс сасерноам сеассокескс ска віче кавова иви
ЗВО чЕсвесетох паща сага вко васссВвцко ве азам
Стивницв 12
БАТЬКО засгвацнюе запсоовоава сазстатаве висилає соку сксошанне тост ККИС жотВсеВвсад бЄжеєсассат пасавоавща даторосвчеа попався
Мо тІпісвиви ссабаацна козозскско свовассвої веміижацав задшетекеє «цеха зіва рве ств засвісїкс всаова зво
КО сало «ЩО В «КІ» ДНК І «її» Штучна ПОСЛІДОВНІСТЬ «З й «Ам шк «йа3» Злиття мВвіазячий сцівомовгтуєії 3-1ВВ-КЕ З «виступом» «МІ» БВ мчав кеВ срок зуїасахтс зіоаказтва свя що сх ацкс ссохетшсвкк пантвеККІс бссовоасосво пкоЗасваадо пасок
ТІЙ ее З 5 ие втвирзмни азбасвавчо сі кбксвзаз зссзазааза аотогесск кнссвок ав
ЗО швом зсеесато вода засн саразкасво салат свої а авсзазмисв возастазсовз зазазащнеро зсавааазчеа ин іо зпахттавто зссдзазає баса стє сесссстоза свавстаес сет соЧа ке засн срреаавт салона ародасаков осел весен о цассксксксо снррчкае скстосонсє ссмесесє стусоввов дсставуасве
Б ссхссозскоцч точастаасв Ва КЕ спекою свосєвмкє бсзоазсяав 40 асіжксВск есе ссовасасет оаасіссвио заз еЕс авеекЕсие тхссссксва ЗзВсксвезма свостостосвт висассоЗаа ссосствоя сасассвко страница 125
ВАК вай
Гееах пкхзахоузака таазскасцв «асом ківі ккВ вес асчХ КН (ЧЕ щЯ звоаптвовев ззссазає вавассову чачавасвВих асаасачас засо
КИ
Фесаосуккс кожовксЄк зЗовссвас бЧрерозано пса ювОка стави цнавоі
Бе пісі оввса авцессіссс арсєсксвеє паразавеса тскстававзє оваводаєао що ссессцаоває апа сассктасоо пса вкзаєкаис садовнссву «І
Зк секаскох свв ї ке ініссосвоса везе вок іо восвние востереааз савстасаве встає схес сефоокова сессцвсоц
НЯ есе Есо хсіозасаЗ петсвссак звсзаза збчсеннв оуооаасцє 1140
КЕ клеми ссеузвиза са мсто сесавссвесх асвоЗсвоава зе.
На сечо діваатссЗо кп зас заст Еся вессвова ато
ЗУ щу їх «ЩЕ 85 «Е4їх ЗІБ хі» штучна послідовність ких «ВЗ» Злиття зміщчив Я4-ЗВВ-КК З «виступом» «НН КЗ жчкзомасе схаечасва сувомиеєс зрсесевкоя зссоцавоа самок в текчнумоєх зссссжссав папі ово ревно зсовассусвв слава
За т Й 7 в црказавім чиста стос аа сок совка. 1 й й й НИ й й
АК
Ччаезвсзссово: чзсееісзазач серосвстчє схечдсскос вус ассва абс
БА
- я
Стринвца
ВАТА ВІНОК заскасвовос соцоассва асаассве сем їчіє ЗаВсокасва СсоКОНОЄАИс.
Мо ткпвасовис шМмачКее сесаЕщл сопскіхода ссавкмка спец чазааЗсатн хтовамзоа сассвсост дацоакчися сан сспсЗцОКо дей іх Оки» Ве тесті свосє сівпсвесес свісайсоба воссстоааа Зоо сстаа сеасвсесх 8583 пішсвоацієс зодісрвков вовчі квивк кіс зпсасссай вес е звавстсвся саке ссткс зн ссяесв кстизасксє сни Зі
Як секс свавасесча зувевсссс віск сек чия Ос Кщ що чедатозю всосваесея созачасссх пазотєсващх сода Яа ско асває ї 25 зтоцацотос аїавкуєсза заосзавеєсо сопевооеас закасавсву свсвтаскої чин саоко хсстевссак сепосассво звосмюста втаесавцов зтасеци вач стссв зсаавасяст сосни жопа в сбакскскав вассваи сащесссоуво васкзеннУє чесна косо прасок пасом стацоахсВи рочсх яЗксвазезе піт аксков зсзвсакеси сени
МО шкниказва пзсаЗсспов завесвааскає вацассвсови сісссукУуєт сзастссат
МО щи осХ кссКскхВовВо самклевсс крвщатавцв схов зсовоивзаве ма І І т шкі стсвк скоса Зеаковсвосх смрозовастс вствсасага запас їх кессокакоте чена сецаоуєско апсзасаксх сова ссвВ зазазЕкоаа ї250 квас стоанвма 131
ВАТА ЯКО
«105 З «1 слу «віха БЕТ «Ж: штУЧНаЯ пОСслІУДОВНіСТЬ «ва3» Бсевануює З «виступи» «В дробу ТВгОНія нг оСуз ВР вгОо бух БгРо Ата бго бів бви мецб у
Ціу Бго час оУві БВЕоіен РВЕ РгО БгО фу БРО фу Азй ТР фен Мет
Й КА зЕ З мм ох Ж
Бі фег Ак Твгокта «їй уві тТВк о сСух ві Уві Уві Азвомаї Бер нів о Зх пім ажрорко ім Уа ре вве ази тр отук ув! АБО сту ді от ді по 5 5 ніх Ал Аа бує ТАК оБуз бе» Ага бін ім ФІЙй тТУГ о йБва Зак ОТАК Тур
БЕ ТО 5 І
Ага уаі УЩі багоуві еци ТВ УВІ фено ніх бів азр о тТКо бен Ахп У їж пів Те їж СУ бух Мі его дз бує вій фев Бе) дів ба Ті1є їх і - Та - чик щі запА аАХВі ЕИУ В бів вух ТВг ХТЕ бегогуз аз ву БіУ іп о Бго Ага Фіц Рго сів ув! ме 120 125 су г Би вто рт Звг о др А с 10 ів те 5 доп бій Ууді Баг 13 5 зе 130 Ї1У 1 іжм обжве буз дів ма? уз СТУ вБа Тег РРО бек аа їфж АТ жа! БІО 135 М 155 ї50 тт оо1м Заг оаяв піу Бій ов ОР ай Аа тує Бу ЗВ ТНК го РКО 15 тла 175
УВІ фе Ахрожоє Аз обім баг обре вве оїви худі ХЕКоїу5 іви Те Уві 150 385 ізо
Стрвница 132 ваг УК дптр швг Ага тгр осі бів Бі ахп о УДІ Біне Заг о сСух бегоуді мех й РЕ Й З Кая 135 0 Об ні 5іц АТа фев нів ахп ні Тук ТНе шій уз Чет фено бег офгн баг 218 815 ках; - Бе йкта щі Куз ех «30 81 «231 435 хи» БЕК , «33» штучна посвідаевність «вЕОм «003 ЗдитТРя людський 4-1 З «ВИСТУПОМ: «Ой ім дів др о вго Сех бог ах пуб Ба Аів ої те Ба Су во АНА ї х 10 35
Амі йгоа азв о оів ЇЇ Суб бек оВго Сбуз го Вга Аїп Чак РВЕ Заг о бак я 8 БІ
Аіа обі Бі бів ага тн се Ачр ої Сех дру бій ськ буб бі маї за 45
ТНе АгЯ ТВК Ага су СТБ Сук бек бек їВг о бзг Ази АВ ОІВ СжЖЗ АВ
Суб ТВгобго піу вва ні Су февобі ів бі Су» Хвг ме Се Чи
Та й Б біп Ар Сує кує бів бік бів щі фжм ТВгофуз рух СТУ Сух бух 456 8: НВ з сСжа су вів обі тТвВрОоБчо Аве длроціп ж» АгУ сіУу ї1е Суб Вт бо сих уч 7 ча У х х геше - ох ло ща
ТтКвоТВг о дни Су Як оіву Аз обіу бух дек очаі іФгв Уа дев Біу тНг
РЕ зав з Й
ККУ НЕ 5
Ух іч АКа АЗв ові Уві Суб біу Бека веб оБго А|В Ароем о шег вго
Птранича 131 вАТ-Я КОКО їх 135 о
Зі Ата бак обек о маї тВг вго Бгто Бій Рг Аа Аброій Ре сіу НіЗ 145 155 ї1х5 ї50
Чвеговко Фів ха! АБО Біц піп грец) туго ББе ів сі бу бек оБго бух 155 ня 175 хвг Аїд джробуз тВт о мія« Твгосух га Бгто був го» АТ вгО шій Гец ізн Біу ЩІіУ Вк обег о Ууаі вне ід Не бе КрРо бух Рг о Буз 350 ОТАК цен мет Ті зек дра тк о бкгО пт жа) ТВгосСух МАР ар жа Аа Ха шег ніх сін дар овко бів Ма? вух ВНе о джа тгРО ТУук Уві Аз ОБіх ді га зо 35 а сів чаї ні Аза Ав гу» ТвВгоруХ Вго АгФфо січ Бін бій Тук Аж Заг
Твг Отут дго узі Уві сег Ууаі ізо їВгоУуа) вео ніз Бій АБО Тгб ви 2 5 Р: ав опіу ри ім Ту Бук Сує Бу уд Зекг ах гу» Дід рец о йго дій
ТИЧ зВо ях
Бко іє бів фу ТВРг Ов декогух АЇЗ куз піу сів Рго аку біз Бк го 2385 Мю зів оаї тук ть оїев вро Рг Су Агб о АБрОоФіч фе ТвйКобуз азпобів
Зах ЕВ іх зЗха
Уа бет фев отероСух фей та бу іу ве оїУК Кро зекодев 32 АЇВ
Уаї шій їгр осів бе ан бі біб вм; бів аз Ахап Туг оіух ТНгОтВг ве 343 БК
Бк о рго УВІ ївб АЗОВ Берг Ар обі ЗегковБне ве рей отк бегорух ем страви 134 пат Я1У0- ЕВ 355 5 3855 тТВтгоча! Ахо Ку» Мис дгеЯ ТкБобій бів біу зв маї Ве Хв Сух щас
БУ КУ Зщо
Ууді мех нія бін 813 ен) ні Аа Ні ТУ ТВ сій Бус баг ої бак 5 ЗЕ І мМ іви Жег о йго шіу ух дек обі біу Бен о аза Ар тів вве о піч Аїа бій за УНН 315 ву Тів бів ттво ні Бір
БУ
«Ох З «8115 422 «вій ВВТ «13 М тТучма пОплЛЯДОВНІ СТ х «ХА» «кАРЯх Зянття міащивзиий Сцівовопгує)у ЧІВ оКИ З «виступом» «КК ЗУ ман бій аз оівц ба йегодев Суз Бго Аїа дім ТВгоБВе Суз Ах АХА 1 5 10 ї5 хи Ага Заг обБів гів Суз Жеб вго Сух Рго ВГ АБ обак о Бе 5ву Бак га КУ За а1а біу сіу ій Ага тк обу ав оїфе Сбуз Ага іп Сех рух сіж УВІ 35 І 5
БВ рук ТВ Ако Буг БІВ Суз бек обер оті яве дяп дія Бін Суб АЗо ик ну ом 3 Ух БО
Схз їі Зак обіу Те Міз Сх іму пі діа січ Сжя бек оМеї сСуз сію во та 75 ВО піп ази осСух Бук обі бі бів бів ра; тег офуз уз сіу Сух фу аз буз Суз Ва біу Тег вне де АшО бів іх др пі їі бує дтп ргО буз Ку вп обі ТМг БНО АБ АБО віп 5 АБФопіу КР Суб АГООРГО щю ї05 це
Ктраница 135
ВАТ-ЧКРО КО
ТгротТНге дя Суз Жегорец Аа йБіж вух Бек оф дав ма? Ап оізу ТВг 115 ДНУ 125 їж сів Аг Аз чаї Маї суз ЩІУу рго бек оБго діа Ар оре Зек вго й КН й 135 345 о ве ль сі дій Зег о бшг А1а тв рго Ба аід о Бго 4) Ага ім вго Ффу ніх тах ї50 355 їКа зак орг Бій уві зво зім іп їжи тУг Бе Фів піж біу бек Бгто Був 3855 їі 175 щег Аїд АхОо уз Ту НІ ТВКоСук ВгО Рга Су БО Аа йго ФБх гом їй зн5 ЗО ін йпіу Біу Ркб пек УуЩі ББб фез ВНе вгО Бга ку Рко уз АЗр ОтТВе ща кВ КИ ви омМеж тів ав деко те рко іч Уві твВгосУ5 Уві мі ді Ай уд зап омеК дв Заг Аг ТИ то Бім ді тмг осСУу УЗ: Ма р АВ ха зд З зах уза
ВО кА шк ек оніх сім АБ вк бів Уа? Бу рве ах тео оТуб Ул) азросіу Уві сій Уа! ніх АБИ АЇЯ БУЄ ТР овуз го АгУ бів сію бій тує аБа Вег ах НЯ тех
Ач Ки КЕ: бух те о тТуг ага маї ді Має ма? ішм о тВг узі вм ніх Оій Аз отгроггу в 255 ув
Ав" ОсТУ Буз пів тує ве Су вух Узі) чек дай вує вій вер овго 18
Т75 БО МЕ
Бга іа щім вуз ТВг їжте баг гу йіз вуз іу ій Вга Ага б вго 290 а М
Зіп ха! тТуг тВйговбец БгРо РгОо су Ага оАжВ сів іец тк ОБУ АВ БІВ 05 Зо хіх з2О
УВі его вЕц тТгросСуз ішц уві бух ТУ РВЕ Туг Бко ек оАхр ї1» діа стравица 335 ват-Ф170-5КО уві аіш о тгв ші чего азпй пі бій Бгто Бір дев дев тТУкК фух ТВ ОТНЕ зай 345 М реп орг Уві фен Ази Заг о Аквобіу Зако бБе Бе гемо Ту боб огрух ес 355 35о КЕ
Твгоуві вхро вуз Жет ака тгвобіб Бій бі за маї вне бегосСух Жиг 7 Зх 3Зщо каї меб Нік 5168 вів іо Ніз Ахп мів Тут ТвгоФів фу Заг озбев Зак
Б У 9: БІ ви ожвг о рту Щіу іш ет Фіж Фу Бев Аа аАЗи хів вве сіб Аа щіЙ 40 10 315 вв жів бів ттв о нів 51»
Аг «віз 23 «2323 ВЕК кій» штучна тнслідевність «Кох «823М Здлютта мишачий 3-13В-Бс З «виступом» «НН: ЗІ
Уві цій ди бжг оС Азродзпа Сух ів Бгто Оу Те оБВе Суз Агаргуз
Тук аз века Уві Су ув Зак оСух Бгто БгРОа бек оте вна баг о деє Її за ЗЕ зв ки я ли піж бі бій Бго Аз обу» Ахпоїів Су га жа бух Аа бу Ту РНе 35 0 У
Ага ВВ оБух Бук Бе обу Ук обак Тк оМміз дв Аїда сін сСуз бів Сух
ЩО тів Бі: біж вве нів сСуз меш о є1у Ро бів Се» ТВг аг сСує бів Кук
Б хо ту 0
Ар осуз Аг оБго БІУу Вів біз ів ту груз ій пі бує Куб тк о сСув страница 137 ват 10-50 85 а ЗУ
Заг огбен бі тТВКоБне дп АБробія ай біу ТвКобіУ маї Сех Аг га зл це мо
ТгЕоТВг одна Су» Хег ге; Аа Бі Ага Зег ма сем бух ТВКОСТіу ТВг
ЦЗ 12 125
Твкобів бух Ав ові Уві Су біу Бр Рг омаі ма: бек вне хак го я 155 140 закотвге отвг о їів Бак оуаі Тк оБго бі) біу сіу Бго бі біу нів баг їх ІМ 155 155 їец сій жа цеи Узі Азв біз бів рен отук рве о Зіп о Зіу З)уУ хек БгУ
ЗЕ 172 І75
Ку щег АТ АББОБуУє ТАК ОМіБ Твк обу» Бго Бго Суз Бго діа вро сін 185 і55 ке івь вфац обіу бБіж ве» бж»" мі вне іш 2веа бго Бго фу5 Рг Му АВ і35 ЩО Ес
ТВг раз Ме Ї1ф2 хаб Аг Ве оРгО піч ча) ТВ Ку Ууді хар УР АБО
БЯЕЯ поуф зав
Ко тій ж
Уві вет ніх Січ Азробео бів маї суб вне захи Тр отже УВ)| АЗвВосТУ
Уві Бін чаї Ні ази дів уз Тйг обу Все Ага Єїм Пів Пій туго Аж хаб отнеотук дгу маї маї хек узі ви о тТвгохаі феч нія бій АЗо Тго
З г5х тв ім азпожіу уз Бій ту руб Су фу» ма! Жег Аза Ку З1іВ рев овго
Аів его Хі пів фу ТвгОжів бек вує Аів руб Біу Ів го Ага су чо ВУ ще
Бгто біб Уві Тук ТВ оїаб Бго го буз Ага дхвВ бів фей о тВгорух дай страва 135 вАТ-ЯТ КО
Б Зв 315 320 бів уаї бек рен їгрр о суз їм Уві рже ші ве тує Бго бег о Азю їв 325 І 335 та уві ім тгр осбіц пег Аза бі бів вто бів Ачи Аа туго жк ТВ
ТнеоБта Бгто маї мен держак Ар діу МегоБМа Бк фс тує бек офБувб
Ух БО ЗБ» зви о твгоУуві Ар осує бак Ага тгрвобів бів бір Акбожаві вне деє Сук за 375 З
Багозаї меж нів бій ді і НІХ АчАа ніх Ту ТК обі був Зара) 385 З з Б
Се і дошк Кк с ку: мч бе жі сіє (сх зе йдем т ма єс і заг оівиу Ваег зго Сі вух бег піу 0іу 8 вза Азв бів Бе Сі АХ іп бує тіж піц тер нія бів ча «Ай А «1» УВА «КЩзй» ДНК «й15» штучна посвідзвність «2МЗ» людський 5-18, міченнив Ні «ані» 8 сечсазенс: сстасавсва сспрестєє зркассес: зсзасавсва ссззааоссна зЕплеснсє «сеецссссст саке сс сся зсдоВсвасВв Васко 120 акстеасазає затасаюа сотої свчв вссосорзааву чзапасвасво свосавсває ї80 ковзає ас аессо сере тсах паїстодвар ссопоскаєао сао 2 своастса «асан са Фовастувсс азоввовеєт зсавоноте стем Есоє щі авсстгсавсо восвовацєо зак аїсі соодсссіню ссовастотао сстодасаде страница 135 вАТ-Я1У0-КО дазазпатс пашіювовоа свосавацаа спро ккЯ сб сце аг закстеаїскс сени ча свосзсзас сскссжтассс сіло зссксВе
Яка зкєстсвцо єсозсочвеся оТївІщЕКОК санках сзаосстана савсакекеє що зви ссвюа азасовата псасоплеюєт саавстсвсс весафєлесв хе ща «230» З «Ей» БЕТ й «їх» шШтумва пчосвідовність «ВО» й | ; «йе» людкзкий 3-18, Вічевив Ні «ЗО» ін дій Ав о вВго Сух Заг Аза був бго віз бі ТвкК о КБе Сух АБ А ії 5 їа 15 ап ак ами вій Зі бух ех Вго Суз ВГ БгО Аби обеє Бе бегб Бер
А1з бік бі бів Ага тк осСух АБроОЇ1е Суб ак бів Су муз пі ха 35 «0 35
БМВ АгГО ТВг АгУа ух бін Су Заг озаг о ївге Бар АВ Аза бін су АБ; тв їВРг вус пі рвав оніє бу рев бі дів сі Сжз шик Меж СУ СК
СВ о ЖиРг Мт віх кп ові Сук кеВ бРіЖ дів бі Су мит Ме Сух Су 25 т їх що зів вв сСух у бів Бім ів озій ве) твг обу вуз а1у Сух рух ай су су вне о біу ТНК вне Аєп Атрошіп бух вка біж жів бух Ага Рго 100 лох її
ТРВОтВголЕп Сух ет сечу азр о біу вжж дегома? вза УВІ дев с31у ТВ
ЕВ 175 страница 170
ВАТУ КО
Гу шім ага Ар ові Уві Сує біу Бго Заг овгао АЇЗ Атв огем Бог вго 130 135 140 бБіу Аів Зак оБек о ужі тного Рго дів РКО діа Аг бів Бго обі нів іч їі 15 в
Ше о вго сів мар Ар ошім сій рей тує Бе бів біу Ру Зег ціу ем 1655 178 175 аза Аза хів вве бів АЗівобБівп куз Хі ім тРроНіх сін аіа ага Аа 1Ко І85 93 ніх ні Ні НіЗ Ні Ніж 185 «830» 95 хаіх УК «каш ВАК «3» Нехво зарієвах «АНІ ОК акгч 0аіЧ біУу Без бів рец его Рго Аз Ар го дів Сіу гів ів ар мер ага біб біу має вно дів щів ем ог! Аа сій аз уді бен обев : А Ме зба
КН БУ 3
І1а Ар о шіу го бжм одек тер отТує пек аз Бгто бік ів аїа щі У! їх Я 5 свт орец Твгосіу ші фени опег ту кує Бін Аза ТАК ЗУуз щім Сем ож!
ЗО 5 5
УВІ АТа фух АТа бОіу маї Тмготуг уаї ве ве бів рев осів фей Ага 55 КЕ ТЕ ЕК демії Ма Аїд пі З Зі хаг ші Заг оУуді кат іп Аза фон он
АГ ВІ АТ Оу ЗноБім Заг ошжьу ЗБ о Ма ЗБг бе лі бец НТУ
За з5 зво осів Бго зву АГРО Бе АТа АТа сіу АВ АТ АТХ ром АТ бен оте 105 1 сСтизницв 141 вАТ-Я ОКО
Уа дя зе вс вгО АТ ес ос піч Аа вва о АЗМа Зак АТВ Ро Му 115 їх 125 вве сія сі АКо о фец фев Вів їев бак віз Біу віп Ага івч Фіу хв
Ніз ман онів ТВеожіб Аза Аго АЗа Ага мії аТа тр обівй веб тТвговБівй 145 150 155 ї15о
Оу Ай тТВк Уві іво біу ав вве АБО Маї те ге Фін Ха рго Аа щіу ЩЕ «Ми 57 хіх ЗБЕ «гЛахМ ВАТ «Вії» Штучна послідовністие «ЕВ «23» димерний Бу а-івВ.. н'кананий за допомабою сса5зікопінкара «Я» ЗУ дга о 5ів іх Бго Щім о їеоз Ха Бго АВЗроАВБ ого віз бі ау оїви джр 1 5 16 її ів дка шій ші меж вве дів бій гбви Ууді вій бів Аши Мі фер зіву
У КИ ЗК за «М : У тів А5р обі вро Бер Зекг тео Туб 5ег дхр око шіу івм о АТа Оу жй ай й ав І вегоранй тВРобіу Бі їжу Ве отТук фу ЗіБ двротВР Був оїЗін Зно Уві хо 5 5 ма! діа ву» дів сіу уаф тує туго УВІ ВВЕ оввВж бів ев обі вжм Ага
ТВ 75 ко
Аг Уві Уві Аїа біу Біб біу Заг обі 5агомаї зегоїшчи Аїа іец нів іжи Щі оБго із АКо его Аїйа АЇВ сіЖ Аза Аа Аїд іец Аїд ве; о тТВРК
Мю Тх ї страница 195
ВАЖКО
«ВІ Аз оец Бго Бк аіз Зегобегр осів АЇв АК Ачап ет ата вве соту
ТІ ї2о 25 ле іп біу аку Мав оїжн Ні ви ак о Аїа сіу 016 Ак зво біж ма! що 15 що ні фай мі тп осі Аа Ако дій Авц НТ Аїд те оЗів ви тТВеоцій 145 їхо 155 150 пі Аїв тїВг Уа) ву щіу ішц Ве Ага ові Тве орг бів ів вго АВ їх їла 175 губу ги ту сі бі цію дар ту Бі г селу бак дк і пі врге мі КЖМ ОшІХ ші зЗіжЖ Зіу сег оту бБіу оту ту зшК АГ зів жу КгО
Іо ї55 юю
Біб фізи его ово Аза дв овгеа Аа бі ціну Азрорбвц яко Біпобіх ке що Да
Мах рРне дів дій вм ові дів бій азп Уві фей оіФфи ів дроту РКО й 215 кон іец лес ТгроТує пог АзЗВ орко Біу се АВ Бі ма? Бек фац о тТве соту віх Кен Баг тує бує бів АВ о тТне су біб їв» Мі ув) Аїд Був бів спі жар туго Тук мар Ре Рбе дій ву сім іеч ака ака Ууді ма АЇВ. 2 Ко 270 сет З тури хе ях « ах з Ем ЗІ АЛЕ ї Н САНИ ШИ т рах. «
Оу сім су бек осіу щег уз) щег о цзи АТ іви Нія рез обій гро фу 75 Іо ї5
АгФфошет АТа Алі Сі ата а? вів їв аЇв ів тТве Узі Аяроцви го ай 25 ЕВ ах Кк а вч АТа шет шет піц Р Ага ваза 5ег Аів вве піу БВе Філ сх АРФ
КН 313 115 Зо іч ім Ні іви его Аїа бі біб Аг Без о бБіу УР ОНі5 рем нік тВг
БЖ 335 страница 343
ВАТУ КО піч Атв о Аго Аа Ага нія віз тТгооБів дец тнКозій біу АТО тТВг УВІ! 350 34х ща ев обі реи БВ Ага у) тпкоБкО зі ї1е го дія сбіу Мед 35 щі ЗУ «сах ОБ «їх ЗБ еВ ВАТ «жі» шщуучна послідовність «ее і їх ме зу чі их мя К мя ткож кн чн «Ай» Ддимерний Ми я5-1В8РЬ (8Б0О-255Ю, з'єднанни заз депомогею Са пінкера «ник ОВ ди оБга дів Бі фено оівц о аяровм агш Фів пі Мек о внв Ав б5іп рев
Уві вата піп дей Уаі фец гви їі ази обі Вга зе) Уве ТгроТує Жве за 25 Зо аа овго біу ве Аа бі чаї бек бен о тТвгошіу щіу сви оек туго рух зх СІ 45 сід ма твР оКу« Бів зач УуаР Уа! АТ Бу їх Фіу УВІ Тук тук жа!
КВе ве шіп ем ій івц Агф Ак оУві Уві Аїв бі бів о Біу бек обу то ТУ ко ко сх МІ Си . Ж ої мі 4. УА с с ве шк - я чи : егожві шик ви Аїш Бец нів вБевобій Бе фев Ага 5жЖг АТ дів іх 47 вич : шоу Ку еп ї ге ст Е чан и
Зій дід а! ів Аа їв ТвгОУДІі Ар ої ге вВга Аїв шаг як пів мк 305 о ів вго ав бог іп вл бі Ве іп обіу ага іши івц ніх Бен обег дів ку іп о АгГО зи біУ ма? міх зи міх ТвБек о 55 ду АТ деку дів Бім біпоАКО Кен оЗіУ Ні мі5 Бей оні5 Тпб обі ль Ага АТО АгО
ЗВ Й "аз і4п й 7 ї3зи 15 І) страница 184
ВАТ АУД О
Ні5 Аа Тгв Осій Бей Твг осів 5іж Ай тема? ми сту ЯМ Ве АКо 14 159 155 15о маї жовто бів їіз го дів піу бо еко Бег вка Яга бакобіз бі 155 ХУВ ї75 «іх Біу ШіУу его піТу Сіу пі бі Зегб о Аза о Бго дів о щіу ем ем АБЕ
Уа 1їЗ Ма зіаі бага бів бі мет Ме Аіа іп бем оуві Афа біб аа маф цез ве
ВР й 205
Ха дер жі ко івц йог о тго тТук бек АзвоБго біт гемо діа Шіу уві зв 215 32 218 35 82 заг оцец ТВгобіу бі вар Хек Тут уз СТ АЗротТВг гу бів ев ож 2х5 «3о 55 240
Ві Аїа ку дів Ф1Уу уві Туг тТуг ді рвж Бе дій зи іч пч АгО
І 45 І ! зу зкх й ях Я. За дра уві уві діа бі бів 51іу бек обів звег о маф хиб оіяк АаЇЗ і8ц нів 250 ох ка: ів піп орто ев Ага Хегт А1д Аа сіх АТа А АТ Бевз АВ Бжз ОТ
Ві Ав обо вго Его дій чего ве сій ді до азпозек діа впе сту
З вав ще
Ева біз ЦіУ Аг ізн рев Ні вв оЗак із біу ів одгу іва сіу Уві
М 210 35 20 нНіз кец нів їВгобів Аїд Ага дід Ага міЗ АТа їгвоуів рев о тТвРобій 325 ЗМ 335
З іу ЇВ тн Маї зви сім ем вБе дру ув) Тв ве бів Ж3ів Рг» АВ
З Ж у сіу івц о Вка баг Бе ага бек ів сСтоаваци 145 вАТ-ЯТУО-ЧКО «и В «аіз паїв «Вфою РЕТ «2135 штучна послідовність «Род» що «В2ї» дДимерний Ви Я-І1ББ (592-543, з'єднаний за деапломогоюЮ пмБ534- вінкари «Щука
Ргостгв о АЇв Жаі Бак о оіу АТа вагу дій Заг вро Бі Зерк Аа1в дія шк ї 5 їй 15
РгО Аг беза АФ Обі Біу вго об) вен вк овго Ар оАБо кро ів біу й ЗА" у й За Й кХ ка ща їжа ів; о Ахвоїви Ага бій птбу мес вве аі біб Бен ма! дів сій дев
БЕ Й «Ці ЕІ
Уві зви їси їж зв ові Вте сен Уа тТборотже кт Аз овго біж вен
КУ У ей дів пік маї Зак фай ТВе обі СіУ рез Чет Тук бує 1 АЖО ТК гу ні 70 ТУ Ко пін їз ха мні АТв ву» аАТа піу Уа) Туг о тТук УВІ ВНе вне сій ви
Ка за КК бін івч АгУ Аг Уві Уві Зі Біу біз біу Зегойіх бек уз! цегоїву
Мю 105 о
Атіа вец нів Бенц бів Кго цез аг бак Ата АВ ТУ АТа АТВ АТ Бен 315 131 З дів Баец отае Уві Абробеч вко Рго дід пог бек бів ів АГ АХА БЕК ї30 ї1у 133 дій Бе сі вве бій От ат оренч їз Ні мви бек АЇв сі ФІій Ага зах тк; Щ 55 Й ді ка їхО хЗ і їв Оіу маї нів ве Міз те сій Аів Аго АВ Агеу ні АТа тТкробій з65 То Ти вва тн бів біу Ків о тне ма? ри щіу спц На ака Уді їВгоБрго СЇц сСтванича 136
БАтТ-4ЗІ17О- КЗ 150 і855 КБ тів овко діз Біу вм кго бег Бго аку дек обів бі фу Сіу Ту де 135 Ка 05 біх ЗіжЖ 01Уу Фіу паб о вго те А3Зв чаї хг кі Аіа АКЯ Аа Зег о рга ів 15 я пі Хже щів АВ Зегобго аг іву ак обіч Зі Бга біз ви хХвгорго 485 230 23 238
Аз ази Бго аАїа біу ев озаз аріїв дб жів щшію мех рве АВ бів 243У І з вч іви ма! дів бів дз» ха) івц фен біє Аз обіу Бк рем о бйг тТКо тує 250 вх ЗУ
Заг оазв Рг біу івв вів біу Уа: 5ер ово) тТВг ошіуУ птіЖ вою бек отук вух Бій АВ ТВгоБубє біз ув хаі хі АТЗ бу ді пі Узі тує тук то 235 Мю
Уа вве вне Бій ма біц іеи ага ага УВІ УВІ азів бік ім щ1у кет хо ка ке ЗО піу его уві Заг оівца дів ва нія вБеноБіп Вго ве Агбйобег дів ді
Ббіу Аза ата Аа ев Аів зам Те Уі джроіши Вго Бео Аїп Зак оЗек 340 335 358 сій Аза го Аа Бек о дів Рнаа О1у Бе бів піу ак їв їн) ніЗ ев «г вів іу «іп Агоріви біж мВі нія Бец ні тТВгойі: дід дга дід
З Й й зЗУК їрий 7
Б КИ ко ага ніх Аїда Тгросбів бен тваг Бій Бі АТ тТвг о УДІЇ фацй о біу рев вва їх5 З хх І
Ага УЯІ Тв оБго 5ів їТів го дів пі фем о рго Хеб Бо ага бек бів страница 157 вата 5 о
А 315 «ОМ ОНюЮ «г11х 5 «ВІ ВВ У «й1З» ШтучнВ посяідОоВність «их «и» днтни БАВЕНК, СОВ-МІ «ОМ
ХегоТук іа МЕї бе їх їх «10 «ВЗ 1 хаїй» ВЕК «МУ» Штучна теасвідовність «вИЗа дити ТАВТЯВЯЮ, срЕено ха»: 13
Аїза хів ї1з біУ Чеб бі 8іа Зак отврРотук туУук а! Ар обер оудї Куб
З т х М ай 7 де 1 5 10 ї5
Оу ся нок «Вій ЦІ ет - М ви вя «81» РЕТ «ВіЗУ ВЖтуУчнЙЙ ПОСпПІДОВНІСТЬ «Во» шо «ей анти КАРОЯНОЯЮ, «ФОК-НУ «НКУ ЗХ
Щ1у тгв вно бі Ф1у ва Аза стук кИМк» 03 «Вій рРИТ «кій т УчнВ ПОСЛІДОВНІСТЬ
КІ ау «їх АКТИ БАРОЯВОЮ, СВК, страница 18
ВАТА КО
«Кз це дано Аїд его бій бегома! ТВт о Жег ек Тс бе АТа 1 5 10 «оз ВИ «Ії 7 «їй» БВу «313 штУучнВ ПОСЛІДОВНІСТЬ «Й ВХ «ий3» Анти КАРВСЯВ. СДН «Не ма щі Баг Ага Ага Аїд ТВЕ і: : я ог «ЕМ МЕ хіх З «їй ВДТ «І» штучна ПОПЛТДаВНІСТЕВ «ам» кий» АМувеКАРТЯВОІ,. СОВА «Ам ОВ біп бів біу їіє має бец обро бго тТНе ч М 5 «ВМ Об ет. 1
Кк Б Ах «й РВК «ФЛ» шручна послідовність «ВО» шк «ХМ» дити БАВІЯНЯУ, ММ «Не ОМЖ сім ма! іп оф оби оіЧ бек Б1у БУ іу ев заз бів о вго сі вію ї в їй 15 его бяч ага фви его се АЇя АВ ет бі Бйе тТвр Ов в о Жог о тТуУг за 25 3а діа мех пег отїкр Ук! Ага сів АТв Рео «Ту їж ШІТУ ізо бін тер оУд! сСтримнце 348
РАТ-ЗО-ЧЕО 35 С Зх заг оаіз їі іє Бі Бак ЩіУ АЇВа Щек ТВ тує тТУуб 51 Ахо Зак оц
УЗ СТУ Ага Бе ТВЕ Її1є бек ага а5р ах Заг обу Ай ТВ о беву Тут т ла ВО зер бій Мет Аза Зако озєм АКфоАЇА Сім АЗе ТВ о АіВ МА ТукоТук Су»
Аа їх шіу тк вве бі бі вве Ах тТук Тер Біу ЩІв біу ТВгоїо 0 305 Тр
Уві тТнгоУді Заг бе кщЯ «з ОМ «кім ЗОВ -й1й» ВЕТ «КіЗ2 Штучна пОслЛІДОВНІСТЬ ках «Й» АВТИ-КАРІЯВО М «Нюх 10 цім їі Уві фев те оса БегоРро Фі тТвгоїен БеБогвеи яве рго Фу 1 5 за 15 біб Ага АТа Тв о іви баг обув Дт дів баг обзійп Баг оуві ТВг пет бек
Туг зви дів Тер ожук бів бів бух бго б) бів ата вко аго мен Кве ча 45 ув ак Уді «3 пк й да А Те сі» тів бо вай да Ма зве
ЯТІ АУДІ бліу ЗК ОАГБ АГА лід Тр обі Бі ОУКО АВ АгО БИК ЗЕ в 5 Б шІ вк біт дек ків фе дев шШие ТНК офец ТВе їі зар одро рву КТ пі 5аегобіє бегоБіУ БК ОА бпе тТпг офацч тп їі бек обро бе УТ; 5 ТО ух ка
Рго біз ав оРвВе дів ма! Тут Туг Су сій бів бі зів мМеї рев овго
Б 5 птраницав 150 катів ЕВй
Ро тве вв піу бів піж ВР обуз Ууді Біб Хі бух зак
ЛАМИ ма «фі» М хиїй» ВКТ й «Вї3» шШтемна послідовність «-2У5х Димервний Ви я-1вВі ГТ яхаА - сві кс-явМмуюк З «ВУИЄТУПОМе «км цю хка вів бі вго бів сем обег го др) ар овго АЇа Бі рев ев АЖО 1 5 1 15 івц Ага пів біб Меє вве о аАїа Зі рев Уаі від бів Аа Уві пече їх І їі аз пі го ів Зак оте отук ЗК о Азор овго Зіу їеч Аза бБіу Уді 8 35 хакоїез ївк обі «і кжм ожЖетє тег офух фіз Ази отак Був бів сев ма чаї ді8 уз АЇВ осіу та! тТуг отуг уз) вве вве бій рез бів сей Ага
З о 75 во
Ага Уві Уві АТа бі бів Оіу бек о біу бЗег маї баг оішвм дій бец НЯ х 85 яІ 35
Ме сій его сем Аго его лів Аа сіу Аза аїа діа сем Аїд рем ТВг 3 125 ма ат АЗровец вго Ргш дів 5ег бек сь Аа Агд Аве его АїЇв вав о пфіу 35 120 125 вне бів бі вага ованофем міз їбц свт діа сім біб Ага фев обі ма 150 135 140 ні бер мі тТвк обів 18 Ак АЇз АкФф нія Аді укр обів ве) ТНК бій 155 іа 152 150
Страница 15 ваті 70-5Ей ц ц біу від тТВкК УВІ реб біу це) вва Ага ові ТВгоРгО Біб фі еко дів
І 155 Іа ї7х
Зіу ви бго Беговго дгФфолег біб біу З5іу біу бфу 5 Ш1у фу ФУ 1850 їв» о
Піх его дга біз біж Бго зів іє) его бго Ав Аз овКо АЇВ Бі Бед 200 205 зем дЕр іже Ага бій біу й вве Зі бів рев Уа Аа сій доза уві 2 ій пеЖе мен обеноїів аз Бі вВго іа Хек отТКротук его ав виз БІ мен вів 225 830 23х в
Зі УЩї хек ден тне сіу біу бен бек туго буз Бі АхротТНК рез січ 245 жо 55 івм уві мні дід ух АТ обі Уді Тук о Тук Маї вна бве пі реу СТИ ява з55 ж мн аг ага ха Уаї Аа йіу міц о зіу Мвт оЗіУ беє Уві бегоїев із
У» 8 ак вки мів бен бів Бгб фни адге шег Аа Аа ші аів дів Аів їжу АЇВ
Зо ах зп івм твт Уві Ащрофец реко Бго АЇз Зеко5ег бів АВ АгЯ Аза дег Аа 05 310 315 З2О
Ра піу вва сій Біж Ага бен оїез Мі5 їв) Зак Аа біу Бій дк ї8у зих зай з їх УМ 335
Зі заф НБ обев Міз ТНг осіб діа Ага АТа Аг ніх Аїд те» БіБ рев 14 зд й згу
І Ах У
ТВе дів 5іу Аїа тТВе Уві сви біу рей вве дго Уві тк овгУ бів Хо
БЕ Зв5
Бго віз аіу івм о рго бог орто Ага Закобів бі біу «іу біж бек С1У за 375 350 сСтванаца її
БАТ- ЯВАО-ЗЕВ спі пт пір бег дів Беготвк рух с1у Кге бак охмаі вве Рго ев ді8
ЗК З 5 м го Зег бек руб 5ЗвгоТВгобве Фі піу ТВтг о АТа АТ ген бі Су рем
А5 в 15 ті 13 Аа тТук Ве вхо бін орто уд) їТвВгоУаї Заг отКр Аза Чек Фу
А1а меюц твг о баг ціх Уві Ні ТВе вва вБгОо АТа Уві їФгоб бів бак Зак
Б ах
Зі бен Тут Хто іс о бегоЗек маї чаї Тр жа вго Хег бог Зак бем 5 455 Я
Зі твгопів твготуг фі Суб АБ Уві АБЙ НІХ вух РгоОо Заг Ах ТР 655 БУ БУ: зо
Су» тні Ажв бі гу Уа оіц Рг мух БегоСув яр ову5 ТВЕОМіІ5 ТВе я ящо 495 їух Рг Бгто Сух Бго діа Бгто бів із Аїв шіу йіу го Зоб ув) ВВЕ ще 505 КЕ
Без вва вро вро Був г бу Айо ОтТнНе фев Мет ї1ж Баг око ТК ОБЕ,
Кк БТ па ші ма: Тне Суз Уві хаї ув) ахвомві февб кт бів Ав без сію У 5 3Іх КК іх РБЗ АБ Тго тує Уді аЗр обі уві Бі Уді МНіЗ дБ діа ух ТНе
ДО ЯНЯ а с да чл ам а «М
Бут Ре Аг СІЯ біб бів туго Аєв Баг о твг Тук дгаромві Уві Чек о УВі
Зах КУ 55 жи тТвВкохаїф ран онів БІВ Аж ТР) деп Єс1у і піц тує рух сут 5що 585 У іж5 чаї зек дев туз Ах вм пік діа вуФ ЇВ бів вуз розв 5 595 ЩЕ БО птоанива 155 ват- ЯРУ УКО їж ВІЩ фу Оу бів Рг Ага м Рго дій та) тТуг ТВК рев о вго г
МІВ тів вий бу» Ага ази біз ій тТвг вух аз бів жаї Заг обво» ТкросСух ем жа 25 5 55 5 ту ШІу ВВЕ туго вко БВ АЖр ОЇів Аїа хі сій Тгв біб Заг о дяв віє ца5 БУ 55 ій о Бго сі) деп Ай туго був ТВРОЇВроБгОо Бо Ма? фей АБЮ Хеє АБ во М МК а вах УК
Біу бег обве рве фа) о тук хек оіу5 івц тв ові Аза Був багоде тер
Бу і БК піп дій біт деп уві ВвВе бог бух щоб в) мех ніє 53ю діз ів мі що Ба мух
Аза Ніж Тут ТВ Бін КБує Зак оїаз зер зе) Зв о РгОо ПТУ Бук
Мр ІД 71Х «АЛ ОЗ «иїї» 301 «ай» ВЕК «ах Вбузна посліДОВнНіІСТЬ «ва» «ваЯ» Мономеврний Би яв су сх «МЕ ОЗ
Ага бів бі вгеа ЄїЬ вец бек ВГ АБ Ар Ов АТВ бі зано фен Ар ї 5 їй 1 івч ага зіп осі мет вве аіЗ бів ів Уаі Аз вів дха ма фей осви их г з ка Кк. У
Ті ав о ціу Бго Бон о Зеко отв Тук бек о Ажа Бо Зі вец Ата біх Уві
С 5
Зак се так бік бі зи бек тує ку із АБр оті рух пів фемоуді зі 55 и
Уа АЇв бук Аів бі хаї Тук Тут уві Бе Ва бів Беб бів рев Ага сх оз й й зе - ти г г КЗ странице ла вата Ое КО аго Уві маї АЇв осіу ШТ ФіУ Чет сФіу боб Уві Бек овен Ав ія МіЗ
Й В в 95 іви 1 о Бго фец аАго зеговіз АТв о 5іу ів Аїа дій іец АТа бов ТВ ї100 105 мо маї Ар бец рго вго Аза Заг охак ОМ Аа АГРО АЗИ ЗР АВ ВАйя іх т1Х т й 325 ож ух ж о вве бій бі ага бен ве нів Кви бек ліз Ту хіп ага ін бі Уді 4 м па мочащно м - ще ж. чек фа дах ме а освках т мі вер ні тТНгоЗій дід АгФо о АТа ага нів Аа їквоБій бен тик о5ів їх І 5 155 шту діа тТне жар фам пі бем о ввЕ дру уві Звг око б) 318 Рго ДІВ
Ло 17о Ех
Зі бен вк бог оБго Ага зер осів іу іу Чіу піу Зв сту біж бу 18О іїх5 1 щіу Баг Аг ТВг Оу! Азфа Аа Рго Зак охаї вБе Хі Ре Ббо Бе ЗР 155 ЗК 25
АВ ОАгУ БУВ ішм БУ» Жег осіу ТВ дід дес ув) Уді Суб ву фши дЖп о ії КО дви о РБа тує вгоОо агч піз зіч ух УВІ бій тер обу зді дер дп діа
КРУ 250 23У ляй 3: пів сок пі х дамо тих дак ху раз У Ал Фет їх мзи сій ет лі Аза Зак бів бів бек охаї тв обів Зіп АБЮ Чет фу 24 зо КУ кхроЗек ТВг оту БЕР оф) Зк Зак ТАК вва Те їни Жеб уч АД АВ жо хх ат
Тит б)ів ву Мія му» Мі ТК АЇТа Суз сім Уві ТВгоні бів бу ї8и деє дет вко маф ТВ офух бвг оре дз ока сіУ бів Суб
За я за сСстівнимЗз 15 ват-ЗУО-оКа «81 ВАТ «ДіїЯз штучна поспідошніств хе» , «кої мМеномерним о ни Я-1вВМ 7150543 со сь «НЕ А
Ага бів Зіх вто Фіц ієц дет Рг аз аз о Рто вів бБіу Бен ої дер їм ага пів біу Мех брав АТа Зі би Ма! Аїд сій Ази УД) фе во
Ме 85 З жів Аза Бі вго бец ве отр оте ет дар о Рго бі зн АЇв фу Ма 3 БІ ах де оіем тт ші шік фен бек отТук руб бів Ар ТНК уз Шім рем шві
КВ. Зх ща
УАї Аа бух Ав пі Уві тук о туг мщі вне Не сів сем Бі їв Агу ке ї5 Ва га Мат Уаі Аїв обі бів фіу его шіу «его ові щеб фев Аів о вев вів їх щИ зак івм офі вго іже Аг чет АТ Аа біу діа аіЗ вів бевоАдіа фев т 103 105 що
Уві ахр сви Бго Бгто АіїВ аекодеакК обі ів Ага Аа Звг Аді ве шіу
МА хи їх вне біє Ту Аго фев оз) мі і.» Квге А1в Кі дій Аге рев Оу Уві!
Мі вжи Міз ТВгоБіб АЇВ АРФОАТА АгФОНі» АВ ТРробів ев твк бів
Ах їх 155 і15о чі ків Твг од зе опіУ фар рве ага уві тТвк Бер; «и ї1Зе ко дій зі вів Те ні: ви пі ер Бр Аг ОУдІ агоБтоО бі жів КгО лід
ТЕ тт ї7х кА МК ОК; сСтрамацв 1165
БАТ-ЯРРИОВКО
СТУ іви вго сег овБро ако бакобів бБіу бі зіу Ф1у Зег Аго тТвг УВІ віз азів вго зЗег о Ууді ре Тіз ВБе кго Бро ет дз ага мжв бен Ку
З щю -х бак опік так одіа хаб ві Уві Сух беч їз Аза о азп Овна тТУукК бгО Агд
ЕК уж ха
Зі дія іже уві Біб тгробух маф Ар оает дід бвм сів заг о біж ах и 23 235 24о его обБів бів Зероуді тВг сіб Сі АБ сег іх два бек о ївВротує Зак 345 5 Як5
Мен бек лег тТвЄ Бен о тйК рез 5екогух АВ о дкр оту ФМ бук ні Кук 255 Ка) чаї тТжк Афв сСув Бім ма| ТВгоніх бій бі Кп заг Зак обро Ді Те іуз Жир рів Аква Ага пі піз Су й ОЗ «а ЛІ
Так, жи ках ж «812з ват «г1ї» щжучна послідовність ех
ТОКАТИЕ
«ВАЗ» димерний ви ЯЗ 52-Х З сніеве-пання з «ниступом» «щи З
Бго тга Аїва Узі аг оту АїЗ Аг від Баг вго Біх Зако дів дів баб 1 5 1 15
Рго Ага фецз АгФ сію біу Бко бів рен опегобго Ар Аа вБго АТа су ту ЗЕ зі «о ОЗ п івм о їез аБродем Аке біб біу меє рве ів обБіп ве) УЗ) АТа сій АБ страница 157
І ВАТ-ЯТТИ- БЕ ма! ми зви 318 Ар оБіу Бго івц Чет ТргротТує баг о Аха Ве у ве
БІВ 5 5
Аів ші ав бак офжм оте пі сіу ізо Баг зує бУуз зів дер отпг ех ць М т во бів бен оуді Узі лів кух Аїв ші маР туго Туг маі вва о вве бів гев ші іви дга ага Ууаі Уві Ав бі Бі бі бегб обі Заг Ві ав ви й 12ай чл їч4А «ВА МОХ М зід згини ніє ів пів Вга рец о дга хкве дів дів сіУ аїд від дід зви ана бер онтє бен бів гл Ка Ага ВК ДІВ дів кІіУу Лід Він Аа Се
Аїда їни тТВгоУві дев оіви Бго го від бек чего бів АВ АБЗ Ай Баг
ЩО і35 15 зів вве біх вве обів біу Атріжн о вви ніз шу бик АТа сту бів Ага ев Біб УЩІ нія мен оміз те осів АІВ аго а! ага Ніх Ав тросів ім те дій пі Аїд ТВе хві фсе о піу фец бе ака Ма Тк оБго 51; з їх5 16 їтв рРго іа Фіу ви о Бго БекоБго ака век обі Біу бзіу б1у сіу бек
Біж бі сіу Сіу бек орго Тгр о Адвозаї Заг о б1іу АТО АГО АЇа бе Бга
Зі т5 Ой й
ЖАХ Гео аж
Зіж Зак АЇВ АЇн феговга Ага ве) Ага Фі) сіу го бім фев бевгб вВко 230 235 ям)
АЗОВ АХІ Бгто віз бБіу рец оїжвз дЕо ідо дра) сій пі Ме вве дів бів 245 | 50 І 255 маи чаї ів бів ди УНІ фо бец Ті АБО ОФіУ бро без Заг отТер Тур х Я р
СВО Ка 270 сСтизницчав 158 вАТ- КИЕВ мес одер обго піу свв вів Бі уді Заг орен о тТВе сіж біу ев баг оту
ЖУх «ВО ак зх дес жи міх 1, сю хг т АТ У ук Зм тру укю ср скхим цу Вів взвотаг оцуб бід їжи о хві мі Аїда бух Афа бі Уаїф стук Тух що зах ОВ чаї ве Ве іп орви оц ів зга аг аї УЩаї Аїв о йіу іч сіу хек 305 310 315 з2о
Кі, поза їнуї був ої зі АЛ с чи ач фам, хе пт хіх» хх сім Заг охді баг оїзи АТ оїшжМ Ніз їжи дій Бго іс о Акоа бак Ав АЇВ 3и5 БА 315
ФУ Аїа Аїд Аіа іди діа рен тТВгоУуді Азов оба о вкго га дій баб цер зай 345 350
Бін вів аку да Бег АТа Бе біт вне бів З1у Аг фев фев нів рем 355 ММ За жк Аза біу бів дк) бен дім ар нія без нія Звгобів ліз аву Аїз
З БІ зво агое ніх Аза тер осів веб їв бів біу із тврОУФі ем су вм вве
ЗЕ за 55 БІ
Ага УВІ ТВк орто бів ї1і6 вге діа Єту і«в БгО не рго Акф опегб о бім 455 мо 415 іх бі бі бБіу Заг о Зіу щіу ді біу Бек Аід чеб ТВгогуз бі Рго 420 пе АЛ ак охні БнНе вго цен Аїд РКО Щег его гу его ТвКоЗак бі бу тТАг м Б У
Аа діа ем іу сук фен Ууді бів Азротує Рне ве) ід йге хмві тТНе а50 455 450 маї бек ткб йхй его біу діа ев тв Зекобфу зві Мі ТВЕ РВЕ о вге ато АТ5 Б
Аїз Маї ев бів Зеко5вгК іу івм Тег хеР ори цеє бек оУді маї ТВ 85 ща 5 страница 159
ВАТ-ЯЮУ ЧЕ І
Ві Кго щег вет заг фен обі тк оЗів тТНе тую Хі Сук аза о Уді АХА ню що 515 нів ув вка Заг Ахи ТВгобех уві АБ Фіз бух мві бів Бго муз Зак 515 2 525
СУМ АБО Оїух ТВКОНІія ТВгРобух рРго ро Суз БбО Ав вго січ Аїа АТа 30 За аа щ1у БУ вро Заг оуаії ВНе ієц КНа го вгО іф5 га фу АЖр ОТ ве 54 5 355 5БО
Мет Хі8 хат Ага тТВРеовго бів маї твР обу У а Уві АБ охві ха
Т Б их міх ії чи ШНМ хг ЧНІ - ти. бух її пі «сх по ен ніз Зі; Ахровго 53а Узі цу ВВз АБа Тгюотує Уві азб ові маї БРВ що Кх У заі ніз адап Аівз у ТВбо бух Бгто аг із бРмб бів тує Ай Хв тн 5ЗЕ ке Ох
Тут Аго уві уві его МАї рев тв; ма? цер нів бів абр отр ої ец Аза
МІ 515 БЕН
Бі уже бій ук бує Суб цу Ма фак Аяи зр діа ем біх АТ вКо щи 3 п15 пав
Ті Біб вУ5 ТНК ОЗ1е 5етг бе Аїа фу сіу сій Рг агУ бів рго бів
ЗХ УМ БІ
УР отТук ТВг ому бго Бго Су го Ав осі фе ТВгобуб Аза бів чаї
БО Ба пт
Ваг ограм о їгвосСух ів УдДі бу бі Бе Тук рго баг одбр Хі Аа уві
Кен п хе ух 5 пе ів тк обіц баг Аза Біу вів г бів АВ дяй ТУуг ух ТВе ТВ вго ва ЛІ го МИ бен Ав Зак Ачр ошіу Чет БНО КВ іви Тут бе обу Ба ОТВР 5 БНО 3 Тео страница 150
І оООВАТАЯРЛІЬВЕЙ й чаї Ахворув Зак оАга тгв осіз сіб біу два Уді Бе бек о Сух Хек ме меї ніз «і: АТ ве ніш Аа о Нтя Тук ТВРГ БІВ жо ЗВТ бви его еВ 740 74 Тк
Заковго Бі кує «ЕМ 1 «аіМ ЙО «Їй» ВЕ «ЖІ» йуучма посяіданність «ик «ЕХ» мономеркий Ви азів ЗИ «м 113
Зга тга АВ Маї баг оці Дів Ага ад Хвгобко Піу Заг оАів Аїд Зак 3 У ї10 15
Вго дга їжи дго щЗіз Фіу Бго бін фев ЗекК орто аАзо Ач Вго дій К1У 85 БІ ву ам дтроіви дру бій 5Ріу меї відає лів біз це) Уві Аа сів дай
Маї реноіен їі АхО Бі в) ре) ЖХег Тгротуг Заг Аз око Біу Без що діа бі ді Бековец те біу пТу гемо ошвготТуУгЄ рух Біб Аа твг вуз - й че М т Ба "7 и я У 75 о піч іем мані уві дія ух Аа бі Уді Тук Туг Ммаї пе кре бів ец
Ко Фо Фо бій рве Ага Ага Уві Уві дів Бі бів біу Зак обі Заг уві шро ви
У тк т лиху т х -в и 145 ць ЦО дід та: Мч мі: ім суєту ік лечу ск аз пл ТЕКУ іх ом: 3 т т: яз ей нт сш о га Сео Агп Заг АТЯА дій хіжЖ ді Аа Ага
А!в фани тпгоМаї АЗрореоз ВгОо вро АЇїВ хвг дет Сіц АТ Аго Аза Заг сСтриняца 151 ват-а170-5Еа 1350 1Х5 140
Аза вне ці Ева сів Оіу аг обер ве) нів ген ве АТаА СТУ Ра Аг 145 158 ї455 15 їзи біу Уа! нів рез нів ТЕК ФТм АТа АгУ АТа ага ні Ав о тев бів 155 ід 175 їжи ТНК осів Зі АТа ТВг о УВІ рев обі без вне ага Уві тТВг Бк бід 150 185 їж
Ті Бко аів Бі зи вКо Хек Кго Аг дег о отн Бі бі бі ді Бе 135 ОО зо
Фіу шіУ сі» сіу ярг ага твгомаї Ав АзВ оБго Заг ха) вва хів вве ж 815 го
Бгто орго Бог двроаго Був зва був хвк о Фіу тат о АіВ Заг омаї ма! Куб пк й Од Й зх КК 4 ЗИ КОТ «КИ іжю їжи Ахи ди Бе Туг Вго алго бін дів руб ат бів тТРр обу ма 250 55
Авроавп із іви сів бег о біу Ахп о зеробів Зі его мві ТВе бів бів
Аз обег о фуУух АБробекотвг Тур о 5ерофжв Звгб о бе ТВГОоїви ТВб рен бер
Куз АЇВ АБО ТУ 51 ха нії фу хі ТУ АТа Су 3 УДІ тТВгоОНівВ ще 35 Мю
Пів ту баз баг оЖвк о Кго хаі ТНК Бук ек ББе АВ Аг піу пів Се» «МОХ 115 «їх МЮ «вам БВ «ЖІ1ї» штУЧНІ ПОСЛІДОВНІСТЬ «Ох «каз Димерних Ви яЗівВЕ сБО-о5а - снНіз-Ксееланним З «виш тулом» страница 155 кАТ-ЗІ1ТО- КО «іх 113 ах обго Аів обі зей їн деробец аку бій біу Мех ве Дів ій ме 1 5 10 ії
УЗ Аїд шій деп уві фбц офсев їік Азв оБРУу Бо ув) 5вгсоткроту Яр 2 їх хо
Аж Бгтб біу ев АЇВ біу ма? бек іжи ТВеоФіу СТУ фев баг о туг ку
Зіч яз ТВг обу бів їевн о муаї Заї АівВ куб дів сіу ма) ТУуб Тек Уві а т що
Біне оба бів ев бів зам АКФф о Агу ві ві АТа сі ЗРіа біу Зак обіх їз ТЗ 75 5 цеб маі хан бви Аза бец нів фев бій рго рев Ага Зег дід Аїа 1 85 З я
Аз Ав їх бом вів бен о твго ма! Ав оце) кго вго аїа его сек ЗВ
ЕК 185 138
АІв Ага Аза Зегко АЇв Не шіу вБе дій сіУ АгдФоїец фев нів рев о Заг
АТа сіуУ бів Ага іви сіу уві ніш Без ніх ївВб обі Аїа Ага АВ Аг м М 152 нія Аїд тТкро піп реч тйБобБіє біУу Ав тв? Уа без Ту вен Бе гу 145 155 115 150 зав овк Бгто бів Зі Бгто Ав о бБіуУу рен о Бга Зако вро ака бегопів піу
Зіж зіу Бі вакобі сту шіу ЦТу Заг апр овго Аїа біх рев оров Ада 156 185 щМю іеч Ага цій піу меж вве о АЇа біб веб баї Афз бів дхпомаї ри їжи їі» Азр о Оіу Бк рев Зек тТгротук его джр го сі фечм дів сім ува 21 215 у: птиавина 303
КАР-ЯТУО КО
Зековац тає бік бі ем ошеє тег бух СБ Аза ТК о вув бів жо! 255 КВ 255 за "Ві 813 УЗ Аа сту ді Тук Туг Ууді Ве рпйе бів жи сім феч АК
І 235 І що 255 хо -. Шо Кеня вга оУВі Уві Хід бі зів біу бак о сіу бек ні его офеу дія Бен вів 250 У 25 іви сій Его ей Ага баг ліз аіз Біу ів дів ів жа Аїа фа тве ччг що туди й ет,
Ка НО «хх
Ук 5 омац кко го діа Зак хаб січ АТа Агро дай баг о АЇВ вве о Біу 23 ЗХ ЗО вве бів Бі Ага веу фем ніх ем Чеє дів сі біб Ага ваз сім щі 305 що її 325 нія грец ніх ТК обі ав Аг АЇв Атброні АЇв Тер Фів феч Твгобій 323 У3о ї55 5іж АТа їВгоУуВІ цен оБіу вв вне Ага оущі ТВе Ро ім ЗТе вго вд
БЕ У 358 іу вапобто Заг обго дга зек січ сі сі сту біу багобБіж Бі біх
Й Кк Щ зво зу Й Й Й 315 50 35
Зіж Баг о АЇа Бек ТР фу» пі го Бег оуві вве вро Бер дій вс) Заг зв Й З7У5 зп
ЗУ КЕ ах де рух Зегк ТВ бег о б1іу Сіу твгодіз ів івц бу суб ве жи сів
ЗЕ 350 МР М
Азр оту Ве вго сії Бго АР тТвг о УДІ Заг ото дяй хегтобіїУ діа ад ча5 10 415
Твгошес «Ту а| ніх уБг Рв Бго Вів Маї рез іп Хшт Чак Сім фву
Уч 325 В туго жегоїем о жеє ет Уві Уді тк омді бго бер баб его сечо сім ТАЄ 43х яко ча стиавницв 154 вАдтеа370-5ЕО дій тс оТук 118 Сузх АБ ' УВІ АУБ Ні Буч го Зак ода ТВгогух Уа
Би Уа Би: азв оч уз Уві Бі Бгто їх ЗББоСуз др Куз ТВт ніх Твг о Сух Бго 455 АТО Зх зво
Кго сСуз кто дід вго сім Аза АТ Оу бі Ва бак ота вве задо Біне а55 453 ях
Бе вра бух Бк Буб5 арте гам Меї 125 Бег аку ТВг орга Бін Уді 303 505 зів
ТВгоСуз маї Уа! міф АзвоУві чего ніх біб аАзр ого Бі) Уа! ух вне 525 аз тгюв тк уві аз обі уді бій омЩі нія Аа А)ЇВ Бе ТВг ож Рго
З 535 Б ага бів бів бій тТук Аза бак ТНК Тук дра Уві Уві жеє Уві рец тв 545 За 535 в
Ві ши НІЗ іп Ач) ТРО офач оазий Оіу фе бі6 ТУЄ фу сСуз гу уд
Берг Ап УЗ аід ем пі від вк отТіє Бін бує ТВг ої) кер окуз да
ЗВ УК 5 вже Фіу бій Бо Ак бів бо біз ді Тук ТВРоіїшин о ВгО БгОо сСух ага
З мВ 05 дЕроБіш ізц ТвгофУє Аа о біп ві ЗВБ ве) тер бух ів Уа ух ФУ що віх Кк вне ТжКоБго бек Або їі діа щі бів те бів Хве дез сту піп во сів Аква ап о Тук гу ТНК отТВК овго Бгаа уві іец Ар бег дав обі ваг по 55 вне вне рев о тук заго овуз вм ої" Узі лдЕроіу5 де Ага Тко бів бів
БО пох БУЄ ствавива 105 вжт-а170-ЗБО сіж ап уз) КВе о дег Суп Бек омаї мес мі сі Ата бяц Ні Аа нія
КУ АК, БЕЗ
Тук тТВгобів уз Загофжи Хегоіву Шетє вро сіу фут кю во не «АМіх 14 «ЕЖКіх 29 кафйх ВЖЕ «іх тузна поиснідовМмість «КАК «й» о мономевний Би 4-3 СБ е5ар-Кя ках 115 дер овго дів біу єм ви дб іч Арк бій біу мМеЄ Не АТа сій гей і шк за 15
Кк 5. Б КУ
УВІ Аїд бі Ап УВІ Бев о вев 18 АБО о сіу го рем бе То Туг Баг в: З джЕровБко Бі ван Аіз йіу маф дет о івц о твтг біж біу Бе баб Тур Ку 30 ях бій одяр о тне фу» сім беви мві Уві Афв Буб Аід біфіу ві стук о тТук ді ха З5 БО
Рве вве бій вБецч бів Беб Ав Або ма а Аів шу Чі біу Зет Фу его Ууді Бег бец Аа фев Мі із сію бро Вр оаку Бог о аін АТЕ Обі Є дів дів АЇВ кг Ав кеи ТВк Уві Аввоіву БгО Рез Вів Заг обаг Бі що щУх 3
ІВ Ага АЮВ Зак АТ вВе ФУ вве сі СіУ Агеофенобев НіЗ їв Заг х 150 325
Ата спіу сій дгу ів біу Уаї нів рев Ні ТврРОБІВ АТА Аго АЇВ Ага ї150 155 ї13а сСтрамниза 15Б шк вАтТ-4170-55О пі дідок бів реп зву бій сів аз вк би рецогу
ВІ оАТв тев бій веє ТК ЄТв ву АТ ТВЄ уві веб бу вве бле Аг
Еч іх 135 І 159 150 155 150 зх отв уж кр т ше ж ок Н «в ;
Уа таг вто бів тів го АТа зі боб Без бек оте г яег пі щу ї15У їх ДУХ пн Еш ши бе щі сови зт Ку ки ви З З су «ТУ ТУ Бе СТУ ТУ ЄТУ ТУ Зегодгю Тббоуа) лік вов рга Бек ж МОЗ ї9а
ЗЕ ші л73у міх ЧИЙ лу КІ З маї ве ффів Бе Кт) вго щег одер о аго Був рез вуз Баг Шіу ТВт Аа ї13х во пол Я ви пи ТЯ 195 СО щ5 атом; 2: ко їм с я Ах і ух КУН С и К ща ха уаї Сув змен омши деп Ап БВе тТуг Кго Аге Ов АВ о мув УЗ 4 с за і ка У іп Тев бу» ші Ай ай ій ін ій Зве Фі й - і і
Біп Тер овуБ Маї Ав дЕМ лі цем пів обегобі Акпозек бій сім дає «У К ха хх А
КІЯ ХО КЕ чаЩ1 жтвкосіз сій Азвобег о вуз Аз Зав отар о тук пеє 5 Я
З Н м оче ах Заг овув Мр ак те тує дег без Беговер ТНК
Ач хг ск
У КН 5 щи ТК оо аг ско й сйтуу то ПЕН : «р
Би тАг сен бак му А1їа АБО Туг дім ух Ні Бух Уді Тук дів Суб 25о 55 хг шт ватостне ціх Кі» сфе ізн освк 5 хім Уві тн нів цій шіу їец Зог ох Бгто уаі ТМкгогбуз бек вне дЕЙ
У Б 5 ч сих ку ага бі січ сук зим и ки «аа 1 ел» зл «кл ск «ай» РЕЖ «Їх щтузна послідовність «ваШх
За 0 пиюрамний В Е г зка «а2Я2 диверний Би о а-1В8і 3-54 тів панНиВН З і а4Яз димерний ну 4-1 СТІ1-5и54) - своп аМНцЕН З «ВСТУПОМ» «Не ТУ ка іч і бБржи і н о г де су Я ск К дгу бів еіж Рго цім ве хеє га Аз АБ Бге азфв бі вен овав АХ і 5 10 що Еш їч ви ага сбіп бі Ме рве віз віп зи У тд її з
Сен Ага сів сту Меї вве АЇВ Єїа рев уві АВ оБів дей Уа вки ем
МО 25 г й ТУ стезвницв 1657 вАТ-ЧЯЩТУЮ- КИ хів др шіу Рг цез баб тре о тук аг о АБА бго сіу гва Зів пі ча їх ве ах авг озїен тТВгобім Зіу ем ошег тує Був ін аз тег обу сім іфвий жі
Ві АТа бух АТа Оіу УудДі тТук о тТук Уаф вно вна сій ем пін Бевб Аг 55 т м 80 зАгпрожді а Аів о сіу шім Фі Чек сі ого УВІ Зег оре АТ бем мів ях щи КІ зен о Оій Бк івч Яга Зек АЇв Аіз сік АВ ДІВ Аїщ фізи о аів фев о тве
ВАК 15 ща ма! Ав ої го Бго Аза Хег о Зеб січ АТа йго йза Зак А!В ве у ї20 125
Рре бів зіу Ага бем оон нів ів баг о АїВ БІУ ів АКор ів оту уві їЮ 335 1
Ні: фев нія Твг обід Аїзв одєЗз АЇВ Ак мів АТ тТРв Осі веб о твк бів
ЗіУу Аїд тВвг Уа! зір Біу сем ва ага Уві ТВ оБго БР їв го дів 155 ї70 175 щіу вем го 5ег о Бго ак Бек осів бі бі бі біу баб Фі ТУ Ту
Оу бек ага бін біу вто Бра; ЗР о БгРоО АХр АБО вро АТ спі ви
Мен ащи ісч ака бій біу меї бле Аїв о Зіп їжи ма) АТа бів Ази хв зій й ох 5 ав
КК ель че ін йецз бів ах» о БіУ гео їз хаб тТгротує бег Аяр ог Сік бе Аля ск5 23 7235 230 шіу жа ак оуви ТВе «ТУ піу феч ек Тук руб бів рот вуз 51 ах 5 «5
Страница 355
ВАТЯНІ КЕ цевомаї щі Аїд їж АТХ сту УВІ туго отуг маї ве ве сій іфбч о сФіц їм чу дк у 3 Аді ів сів Ха Сі Чет ді Зароїіву АЇ: ії2ц Ага ага узі Уваф дів біу від бі Хет сіуУу че ді бак оба АВ
Моє й ЗАЙ 7 звк
КОКС КК ко іжроміз «зв б5іп вгОо бе аго его аів із Бі Аїд дій лід ів ла аа 2 00 іви ТВгоУуВ)і Аврокви о вБго вга діа хек охеб сій Аа аг аа бек дів
М Що І ЗО вве сіу внз бій б1іу агеіем фено нів ра) 5вг Аза біуУу бій агоріви 325 з ЗУх нету 4 1 ця зі СГ 1. - я - сг Чат, Ул су бЗіу Уві нт Гец НІ5 тео біз дів аг Аа Ага Ні дід тТевоБій у
У - . пак Би г о 145 о те обіп пі Азв оте УВІ ібу біу Бецч Бве Яги Ууді Тк обгО пів Її 355 ЕЕ 355 ях : пу п и о а НН о Кс ви ви о
Рге дів Ту вм орко Зег око аг вегоїБів Зі зіу сіу су бег о оіу о КУ За іх йіу біу бег оаАгоа ТВгоуаї дів дів вго Хек ові ВВК оті вл Рг
ЗК: ю Зах 30
Бго его дзр Або був вав овуб Хек Фіу ТВ Аіа хег УВІ УДІ Суб бен я 1 Я1х
Км Ажп о йхи не отже Вго ага бін ві бух Уді бів тгрогу5 мі дяр о 425 430 ази дів ви піп бе Бі Азй зетоБів 5ів Зекозві Те обі об А 415 зо 445
Зак ор Ази Чек ТйготТук Заровви Заг о5вг ТК ори ТВР офсн Заг офрує а5о 5 яв дій АБО тур У фу нів Ку Уві тут АТМ Сух піц уві твк Ні 5ів «55 БУ ях що страница 35 вАТ- ЯКЕ ік ів Баг заго кго Уді ТНК ої де Ра Аза ага Бі Бім суб Акр 485 Бе 455 рж тв оМміЗ тк се вго Рг був о Бко АЇВ Бгто Бім Аа АТа сту СТУ
ЩО 5 що
Бгто погоУВІ ква ін Віе Вго БгО фу вгО фу Аза лВе ге) Мет їі 315 520 525 чагодка так оБго бін Ууді Твгосув маї маї чаї др оуві Чет нія піМ 535 515 5 зв обго бій Ууді дуб Не дей тр отТУуб ві дер опіу Уві Бі Уві НІВ
З4а5 ува 555 580
Акподів муз ТВгоїуХ Кго ака біб бів бій тТук Аа Жвг Тег тує АКу
Зв 37о 575
Уві уві бег ма! ве ївк Ма? ве» Нів йій АЕротгроїее Аза бі Кук ко 585 За и й й гео ще и бів тує Буг Суб Бу Ма 5акоднв ев АТВ ви о піу ді вгОо дів 5ід ще ІК ЩО ім тТНгої1в Загої зх Аїа ін Фіу біт Бе ака бів вто шій уд! тує б ії г
ТВгоіям Рго ро Су» ака АБИ оБін веб їйг вух Ажа сій Уві его ге щі 230 БІ що ттвобжно ген оуві вує бік вне Тук о Бко бек одер їі Аїа Уві бів тер 535 по Би
Ім хек хи ві іа бго сій авй ази ТжЖг о рух ТВгОТвК о вго вга У що ех Бо ев аз сег оаярв бі его вва Бе фен отук Зекоїж5 ви ТНК ожаі дво 525 кВо 585
Муз Зегоасц тгробів бій Зіу дяп мі вБе вто Су бек Уді Мей Ні
КЗ яю страенана 190 вАТ-Я437-ЕО сіб АТа фе) Мі азп нія ТР От бів рух Заг офау бек офіц Чер йте то 230 ТІї5 Те
ОТУ ух «віз й «Ві2» ВТ «й1й» штучна послідовність кер» І І «Кй3х Моновмеврнвий яз Я-З1в. гаю мух ню 1315 ага бін Фіу ге Біб ау Заг оБгО Ар Ар о вго діа сі ва ів Азр
НЯ 5 М 15 вай Ага щів віу меї вБе аїа бій фен уві АЇз Бій дп Уві бер рей за 25 щи їі Ачрошіу го брм зе уки Тук зак о азв о Бгоа Бі ім ді Шіу хв
Заг орєев ТВг осі БіУу ау баг тує вуз 5ів Ар) о тнУ рух сій ви уд! що 55 що
Ма! 518 Був вів бі Маї Тук Туг Уві вне ве пій ім бів бе ага щі та ТУ о
Ака ма! ма АїВ БіУ Зі сту бек о шіу ше ма) яег оре від Бевонія
В ЗО з5 ів вів Веб ши дго Мет Аза Аа бі АТа АТ дій іен діа гео стнк
КЕ 125 зій во, АК як
Заї Ажкрогво Рг вго Аїд чо Чат біб АТ Аг Аза зар ав ББе у 115 в: 125
Рипе сів бі аг їжи ем Ніз івци шег діа су бій аг і8з ту Уа
Тука чу і 7 - 130 135 ї15а сСтвзницв 171 вжт-4170-5ЕО
Зк зі якости т АЛ У хм Зх ке Як З остуи: их ач и
НІ ев нт Тк осів із АгЧ АТ АгЧ НІ АТ тер остп бен о тйК бів 145 150 Ух ї50
Я в С зх - ск щи щи з: ет ях Зуб куту т хх г -
ПТУ Ав те мані брц піж грец рве яке Уві ТВкоБго ів тіФ вго Аїд
ЗК Тв ж
ХУ КО їх
Оіу рев реа бек ого Абу Баг о пів щі «у «1у ФіУ его біт бу Бу ік 185 ї50 спіу бек дів 5егоТБг ух Ту Бус деєб Уві вве вгоз рев АТВ Ко 5аг
Зак іух Чек тйг баг о біу ік так дів АТв їжи «і Суз Кен оУВІ ОН а 25 ЕВ г чу я Усі (73 те ге» фі пі за ж у ху ц я вух ще ші; аж) тує вне вто Бін Бго хз; ТВ оУві Его Ткр Аза 5акбоБі лів ме 3 35 240 твВгосве ші ді Ніє ївВроврни ра дід узі зх 3 сакоуак Бі» ги
ТВвгоЖег о дчіу жвР нів їВгбоБМйв БКа дій Ущі рЕец оїзів Заг Вб осіу ву зай Ж зе хо ОК КО туго Зек рен офет баг оаь ар тн Маі го Жре о шес ек рен обі ТВ
ЗНО 255 275 зЗіаотве тує Зі Суб Ашп охаі Ай оМіЗ ру РгОо щег Аза ВК зує ХВ! 275 яко 285
АБ ошім же Уа шім вро рух бек о сСух «АМ)» 3 «ЕійхМ ВДду «її» щтучна пОсЛІДОЮВІіСТЬ
СН
«есаїЇх о дименний Ви Я-1БВЕ СРО я ЄреБо-паниюг З «виступом» ко Б З Це сх 11 7
Ага іш су БгОо Об бецч бего вро АЗО Аз ВМО АЇв о біу рев офвку Ар ї ї їй 15 іев АКФф бій сту Мек вве віз Бій оф ма! Ав ів лап Уві фец ву сптранина Б?
ват-Я 1-5 ЕВ їіє а5и пі вко рев озвк о ТгРО Тук Зак Аве вгОо бі Бфец Атвовіу ма! т А ке
У ще т его офжи ТНК Ойік ші івм бек тук Кук Біб АБр тк о вуУБ ім ем м! за 535 що
Уді Аїа руч аїа Бі маф Тук Ту уві Бе Рв бій рзци ОТ Би Аго
БЕ ТО Ко ко лагу уві зві Ав спіу пін бі заг о Зі заг о уді Его фіви АТ Бе Ні їв пів Без рев Ага Зак оаА)В АЇВ осі Аза ів АБ о Кзи Аза овеювотне цю 1 110 чаї дЕроіжу Кге го Аіа сег чек бів й)ів Аго Ап баг ді ве су 115 13 Й 355
НА: МАК КА вва бій біу аг ев вано оніз зни ет Аза Фі сій Ак фен обіу Ук! 350 135 їх нів цев ні такобів д3з АгО Аа АК МіЗ Аа їкробів без о тнк 53в 1-5 15 155 150 сі Аїд тНгоУаї ів оіу Бена вве Ага УВІ ТВРоБго Ти Хі го Аїд і85 ї7а ї75
ЧФіу вм обко Хе о Кко Ако век бів бі бі бік бік ве дію «фу у
Сіу заго оага бів бі Без ощів ре) бег о Вго АБО Аз обере йіз Бі ев 155 що я
МБО АВ Бен Ага бів сіу мек бВе Аа цій сечо уз! бід бів Ажвомщі що 1 ший івцовнм ї1е дпрохіу Бго фе о зег о тгв о тТук бак Аж» реко щіу ів Аа
Ех Бу гї5 ЗАВ іх а! его гав ТВгООРУ РУ вжи беготук вуз січ Алротвгоїух БВ
Т зах Й Й уз ве а вк З страница УЗ здІ-ЯТИЬчКО заз маї Ма! АЇа цу АТ Оів УдДІ Ту? Туб маї ве еф щіп рем дім
З КІ ка зви Аге Аго уві уві Ав Бі 5ів біу бекобіу Зак оуді бегорем дій
МАСУ т ик 7 й за е
Р «і 55
Кей міх вен бів вго кем аг яег АТ АТа бі дія АВ оАТа ев Аа ж а Б уаи твготУаї а5о зе; го го Аїй Зак офаг о сій АТ аку ях Зог Аїд ще о щх Зхо тва Фіу вне бів сту ага фец ім Ні ви бег аАта 5іУ бів Агро омев
Оіх уві віх ів нія уВгоб5ів АЇВ Або АЇв Ага мів дів тТкр дів ем 348 35 25 те обзів бі Аза те Уві брем о іу цецч Бе Аго мві їТВгоРго бів їв
Рго Аїа біу рев обго его бро дк чего сін (іу піу Оіу бі Зак обі
З ЗИ Зо
Зі піу Шіу Чет дго ТВгб УВІ АЇв Аід бує баг о маї вію» їі Кцо Шк зіу СІУу Фіу Чет Аг тТаис оУВІ Аз Азія Бгто Зак о Уді ВБео Ті пе го
ЗЕ я 55 зап
Бо Зег Ав Біч біп вжи вуз 5егобіу твгодів бек оуві уві Сех ри ях А іх
Мав Аза азп рве Тук Ре Ага ін Аза муз Уві бій о Тгв рух чаї дар
Сич СУ 433 йва Ав рес бів Зег обі ачаи єго шів ід Бек омаі ТвВе бін вій але ау а За
Жак їжа Аза обак тр оту Жнг реву швт Хек ТНК оїву тТВкгобев зег губ діа Ажротуг бін вух ні ж жі тує АТХ Сух бім УВІ Вк нів БІВ 255 ат Ся акО странице 174 вАТ-Я4170-5ЕЙ пі ревобек о Зек обБто Уаф твгогух Жег о вБбе дп ака Біу бів бу5 АВ 7 ди Й «90 335
Бу тТВк о нНіЗ тТВг Су Би РРО Єуб бго АЇв Ро пів діа Аа У ФТу
В У хо
Бео баб оуаі рве фа ке го вВгОа фу5 Бг3 фу АБ ОТВРогец меж їв 515 52 525 зак оага Те вро Бін ді тк Су Ууаї заї Уа? Ахр УЗ? хеє ніх сїц 555 535 Ай
Азровто Бін Уді зфуз БНе апа отр отТУк хі аво пі Уа бін омаії нію ах КВ 555 ЗВО деп оАЇВ фу їйг обу Бго аге біз бім бій Тук оаза Бек Тк Тук гу паї Зло 5
ЗАТ Уві доб УВІ Боб тТвВеоУВР ів ніз бій Ахр о Тгтроіви Аза сту Ух зів туг бух Сук Ку« ма Зак демо гу АЇВ ву «ТУ ді вго Ті ФР
Ой Ох іже ТВкК жів бек бу Аїд рух ФІУ піч БРо Аг бів Без об)ів Уа туг що Ії Вей
ТБгофеч вро вгО Сух ага аз Бі Без ТРг був Аза бів маї Звк оре 525 85 ля вав
ТРвоСух фец уві фу бі Раб туго Бко Зак оахо їі» Аїд ма сіЗ тв 4 ОО п55
Бін пек ода пі біб оБго бів дв д53 Тур офуб ТВКОТНЕ вго Вга хв
Ба 555 БТ іви ахробег ахо біу Баг овфбе це зве туг 5ег бух ем ЇВг Уві Ар а Ві Б: муз Заг ага ттвробів бів шіу дп Узі Бе его осух Чег о уді мет нів 5 Зх то ттравива 175
РАТЗАДНІ-ЖКОИ біз ків без Ні дей мі5 тт їВгопйій бух бег о ваву Угоіщши Зетг вра тах о ТРУ Уго сТЖ уз «ох 18 «1 ЗУ «їй» БЕК «и» штучна жилідовнуть «й» Й «йеї» Меономерник Ми 4-1 С?т3- АХ СНІ «НІХ ЗІ
Агов бі Бгто Біб фев озег го дід) дБ вго діа Зі іец сем АВ 3 5 ІК 15 іє Ага бів бік Меї Ре ді сій рем в) дія біп Аза маї ев овев о 25 30 їТе АБросіу Бго іен бек тео о Тук бег азр орто Бі ім АТа Ф1уУ ма
АВ я
Заг оре їВг осі біу мен обегб тує бу фо) дя) тв оБже пім ем уві 5 5 па заї аів ву аіЇв бі ма! Туг туго хаі Вбе вва сій зіва бів Бе ака п та ЇВ 5
Ага хі УЗ АТа бі сів шу беєб ціу бегожв)і лек оген о АЇа фей нів
Кк с 2 85 а З5 вен сій вко їз АКБФ о бег Аа Аа Оу Аза Аа Вів вен дів бе) отве 100 Не що уаі! дер івм рго рРго АТ лог бог Біб дій ага Аза Зак дів Ве Бу 115 150 175 вве бів біу ага фев о сец нів ген озек ліз бі бів ага фев сФіу Уа іа 335 14
Страница 175
РАТ-ЯАВІООУ мів їхав нів ТВ одіч Аа вс ів Аго нів Ав тер одіяй бе ївгосів 145 їхо 155 ЕЕ
ОТУ АТа твгоуа) із БіУ ей ВНе Аг Ущі ТНК орго бів тів вто дів ки - сах сир дк у пе Кі кр жі кр мя крб т й у, і їв орг бак бго ага Баг обБіц іх Біу бі віу Бак осіу сіу О1Ту 150 185 Її
Зіу 5ек АТЗ баг от вуз Фі Бго вк Уві РВЕ Бе рев АЇВ РРО Баг 155 м 5
Бег іуз дек ТВг бек пі бі ТР оАЇВ АТВ Кен обі сСух вен ожві Бух ке 215 ач
Ав оту вве вс озів го Уа о тТБе Уві ЖегоїКо ай зер обту вій іє
ЯЗ 235 280
ТВтТ ожет ші Ма міх ТВгоБйе РгО АТа Уві Боб біз Зк Бек ошіу їжу їУг Заг ів баб Зег о чуді узі твг ма? Ба Заб о5ег ау йо сі1У Ве
ВО 255 ке зів Тк отут Яів Суд Аква Маф о дев ні фу Ве» жвг дай ТВгогрук Уві лк й чи й зе и ах ВО З
Ар обу уз ма! Зі БгРО фу ак Суз що ах «13» щужчна послідовність «Зх «Вйй» диМмЕрний Би Я-3БВ (УЗ оЯйУ - секс памиюг З «ВИПРУЛОМ» «ННІ: 118
Ага сів сі бгвошій ви беб Бга ази аз оБго аівз о біу аб рам Ах х 5 10 їі5 ін аг сів сію Мет вве АТВ Бій грец УЗІ дія бів дяв УДі жу зви йо 25 30
Ствамицв 177
ВАТ-Щ17О- ЗЕ її: дев біу Вга рем обог о Тгто Ту бак аз ого пі веч діа пі Уві
А 45 заг офем ЗВг о біу Біж рез зве тує уз 15 ав отв о Буз БР вев ма зо 55 5 за дів ув дів З1іу жаї туго отуг уді вав рве Зіп веац біц гец АКа
Ага Уа УВІ АВ БІіУ бів сію ак сіу ВК оУві хХекобен АЇїВ грец нів ім шів о вгОо рез дк его АЇВ Ав біх дів від діа зви дій ів о тве
З Аа ре; вс; рго АВ ба бек сім АТ АГФ АБ Бак АВ вВВ Обію чі 13 й 325
ЕИКУ дю я.
Ме іп кіЖ Агдієм іви ніх бен чек АТ Бі бів Ага їжу ім ма
ЩІ 1535 що нів блю міх тв пів дів вагу вів аг нія від їгвозій во тТВвКодій ї45 150 її 10 біу аій ТвгбоУві ев бі мав бе Ас у Те о Бозх Зін Зі Рг Аа 385 122 зт м жк ки и
ЗіЖ вен оз Біу біу бі вве одіу шіу ТУ Шіу явг АКБ бів біу рго 180 185 іх я їх Ям ех лету дп пр ААУ ті Кт паї жхтуї 1 ки нини зі ев ЗЕгО БО АВ ОА ОВКО лів сіУу Би бе др оізц А БІ ОІУ меж вне дів бів ем о УВР АТа бій Азпоуві бец фс фе Ав обі вка 83 15 Тео івц шаг о тгротук его дар оБго бі зве а? бі Уді Зеробпь ТНК Ох
Вед в: З 0 спіу ем жа Туг ух піц ав тТвгобує Бін зів ді а Ав фж Аїд иа 5 255
Стваница 375 рат ЯІТОО В
Зіу ж! Тує тує Уді вве вне сій фівь сі: бе АК АК УДІ УЖ АВ
Й зи зщ: У
М КОМИ ГУ
Зі бін бі Зекобіу Же Уві бог огсо вія Бе) нів їжу шій вго ем 275 БЕ 85
Зкз его АТа АТа іх АЇВ АВ АТ іжи ДІВ ем ТВг Уві АзвВ фев овга ща 285 за го Аїд его бек сій Аа ага Аза бег Аза ре бі ве шій «1іУ Ага зах що ЗУ КА
ЧИН З фон баг ав ші ів дга іви шіу хаЗ ні ха Нік тик
Шеносею ніх фен баг лів Бі Бій о дгаУ Бад щі Уві ва; ев Не тА! 325 50 35 січ Аа Аго дід Ага ніх Аа тт бій фено твг бів дію діа тве ма
АХ и кі аа У ЗУ зи сіу йви Бе Аго УВІ ТВг Бгто бів бів вга дів сім ем стю ЦТу кі ак ЕХ
Ух У 55 пі піч баг бі бу пі щіу шк Ате тег узі Аа Аза го бекоуді 37 їтх КЕ вне ї18 вве вго о БгОо бег АВ дк рух івц рух дек о біу тТВе вів Зак 385 З їх м
УВІ Уві Суз ви івц Азй аз еле бук Бк агрбії А1д іш уві Фів а 410 х
Ткрогух жві ар о дап ан фен обів Зак обіу Аа Зак сів щі хек уві зго 325 30
ТвВгоцію бій Азов о бегогбує Ар Зак тк о тук ак овфец Баг Бе ТІВ ви 455 Б 445
ТВг осв бек їх АВ АЗо туго бів вуз НіЗ вуз щі їуг аїз Су 01 хо 455 КУ чаї твгонів зів бу вец 5Ег Бек вго У! ТК Муз баг РВе ал Ага а55 470 475 480 стрваннца З7З вАТУЧ АТО іх ім Сув ачо із ТВКонНія Увгобує Бго Бгоа Суз Бго АТ вте Обі зх ай 435
Аів Аа бу 0іу вго Беєб чаі Бе грец ве вро вро бує ВТО вУб Ахр
МЕ 505 10
Титова меї Хі Хе яаго ТВК оБрго бів Уді Твгеобуз ма! ха? Уві АБр іх 528 За
Уві бегонія бів Азр оБго щіц ві рух Вне Аза тб отТук маї Аз обіу ке "ві сій уні Ні5 Ам Аа ух ТАгГогбуб Рго ака БР ім сій Туг дова
В УхО 535 КІ
Вег о ТврР тує Агу УВІ! Уа Зак ві іа отв мві фев Ні Біб АЗОВ ОТеВ
БЕ ща 575
Кец ай б3фіу їх Ф1м о Туг рук Су цу5 ма Бек оАба вуз АЇа бен Фу 58 ЗУ БИ зіва вго ІТа Січ Бу ТВг ої) Зак обу АЇВ вух йЩІіу ФІЗ Бк Ага сти а щю во вто бій УВ) туго Твг ока овгОо БгОо Сух ага АБрОФІЮ Бенц ТВг бух АЗА
БУК 15 Іо зі оУаї Зак ої) Ткро бух іп Уві вух СТУ ВиБ о Туг Бгто Зак оАЗо Щі
ІЗ Б 535 ко ків жав сів тгрошім бек да пі бій вро біч аз да туго фу те
ТВтговгОо Вро чаї ів Ар заг АЗО Біу зоб о БВе ве ве о тук ВК ОовУВ
НІ Бо ото івн ТвВгоУзі Аз; обу бЗегодко Тко бій біб бі Ап узі ква хек сСух
НУ ВО 585
Зетє омві меж Ні 16 вій фев Ні Аа нів Тур Те Іа фу хат щем
В 55 тов стрвницв 180
РАТ-Я170-5КО
Заг оіев бек рго бі вух тО5 а ках оо «ех хдісгх РЕТ «2335 Штучна песнідавнаіють «Ех І «ййй» Мономеавний Ви о я-аЕВі (73-24 ю - сії «а» ІВ
КН т сойки ит зак бе де демо бе й ші роз із: ит зга біз сій Бгто бів Бе б5ег Бгто хр о Ако вго дів шіу ем о гец АБО ї х 18 15 іти ага пів Бі мМеї Не аіа сій іву Уві Аїв бів аа Маф іФв вав 20 5 за хів ар о сі1у го іку шаг їкО ТУЄб Ба АЗИ РРО ЗіЖ ів дів сТЖ ма
Зак овен УВгобОтіУу Зі Бевз Зек Тк КУ бів Аяротне рух біз їни Уві
У За 5 ха! Аїв уз дів Зі Узі ТУук тек УВІ вБЕа о бБе Бій без бій ви АгЗ її то 5 КО дгу жа жа АВ хім ші Фу пет сіу Чеб уві бек оїФв АЇв рев Мі
Б що 5 ен обі Бго івец ага бег о віз АТв сік АТ Аїв А1З фай АТа іву Твр пох 7 чих зх Й це іп що чаї ахр ізн рго бте аА)а бак о5вк 1) АзВ де АР Щек діа ВВЕ Оу з ї25
Вл віп обіУу Ак їв озев мів із 5вк о Аів сі пів аку ів біх Уві 130 У ідо
НіЗ бен мі ТВг ОЗ дід ага Аза аАго нів АТа тт бів ви тТвНг осів 145 150 155 150 сзрраБина 18 рт УКУ
І - Уч яки С . ; мі ч пак Я Ук я . й те 3:
Зіу дів твгоУаї рев о біж цем ВББа АкФоУуві ТвВКоБго б3)в їі» его А1В. 155 17 175 піУу ль шІМ сіу Сіу піу вегобіу Бі Біу Бі бек ді ве ТВР оРух 15о0 185 180 «у Вга заг охаі Нео вгОо км йіз Рг хег боб фу бек тв о ЗвК віх 195 МК Ко їіу Вк Аїд ді їз бі Суб фен ома1! 5ів АВ Тує Не РКО ШЩІц ВКкО 2іх 2 зві тк охаї ек отр од хе Біу АТд оБбвем о тїВгб его бі уді ніє ТАК з: за Й ри й 242
МО А ДОДОЯ ЗИ
Бва о кго Аа Уві із біп бек зак обі реротук бар оїшв шви Хек омд 255 М «55
Ма твВвгОоУДІ Рг бего5ег о бег оіву Ту ТНгохів ТК отТує їв Сух Аве
ТО БЕ КО
Уаф Ахп Ні5 уз вгОо Щаж АБО ТВ Бу УВІ АБВ Обі фу ма! Бі вго
Ух КО 285
Був вес Сех 290 «Рій» 131 «їх 533 «Мій ВАТ -213з мучна послідовність «Й хай» аМмти-КАР СО8НІ, Босванцює із «авладиНною». зЗлитий З дамерним Му аз-1Б СУА «ВН 151. «іш ма! бів Бен оіни Зіш Зак сіу сі сіу їв ові піп рго Бі БЖ ї х їй 15 щвг огвч аго їн Бек Сух діа дід зе сі вБВвОТВвК ВВЕ Звгобар нів яорА іх зе т хм
БУ З ЗУ діа Мет чит ТК УВІ аг бів віз вк сіу уч бі ев обі тре хі
Стрпдницвз 185 вдтеЯ КО зх 3 45
Заг Мій Жів тер Аїд ве о біЖ ів пів туго ТуУуг віз АЖробег ха ух
З
ЧІХ Ага ББе ЇВ її БегоАгО АВ АЖа Зек вух АБИ ТВг оре тує меу «іп оМеї Аза зебр о гац АБ ОАіз Біч азроїВг дів ма? тук тую сСух лів 55 зо З зі. щі ху і: Тк, хіх Ух лк М пек Я БЕН ов ки ле -
Був БіУу їгріза Бі АЖп о ВПе АБО тТук тТгвосіу Чій щі ТВгоїев мА 150 зх що
Тео Хек хек АТа Же ТВг ог піу ко его узі Бе вгоОо без Аа 115 120 125
Бе дет Хе ої ух Кеб о тваг обекобіу бБіу тве А41ів дів іжм Фу Сух бом ї50 35 135
Уа іт ви ТУР ВвИи Бр ід га ші те чаї дає отгй Аза пар опію
Уа УББ АЗОТУ ввпв вро Зі вга жі тТнеоУЗі аб о тТг Аза Баг оОбіх 145 Ки 155 18 лів о іши тк обер осіу ма)! ві ТвгоРВе Рго дія Уві мед бів 5ар Бер і55 та 175 іх ів тує Хек іс бек обек о уді Уа ївк омаї Кко Бек бек ек іеу їі їх5 То щік їве бів їйК о тТуУуб з18 Суз Аа Уві АВ НІ Ку» го баг АВ ТВК ї155 200 КЕН іїУ5 Ві Ав фу із чаї сім го бух шШеє Су ав Був ТК ОН ТК 21 515 ка ск го вго сух йго Аза РКО пів аіз Аа ціу піу вго зак омді вне ев РВЕ РКО БгО рух го Бук АБИ ВГ орев меж їі 5ег Агу ТЕ о Бго 4 їх 255 бів Уа: тТвгосує Уді чаї Уі аю» ма его ніз сій АзЗвоРКко бів ді странива 353 ват а17О- вка їж» бно Ав Тер отУ маї ав бік УВІ Біб УР НІіЗ дей АТА рух ТВг
І75 го ВХ їух Вго ага біз пів бів тук дкв зве Тне тує Аг Уа) УЗ) Баг уд!
Як КЕ. 5 май я
Ба 95 За іш тТвг ха? вен мі «ій Азротгр без аа біу Куб бів тує бух Су
Зах що Зх 325
Ту Уві «еб Аз фе АЇв без обі дів вБко тів ім ру УВК отв Зевк
І з5 ! З 335
Гуз АТВ уз Міу Щіп ов АК бім Вко бій УЗ Су ТК офви го РКО з 345 330 чего дка АБ іч фею їВвгоїуз аа Біп маї баг офжи Щек Сух АТ УВІ ї55 ЗБ ях
Був Бі Кпж тТук ро Зек дно їі Аді жа 10 тТРр обі Веб Аа БІ
В 7 Кажу зкаАа ву З о щіп бо щім дев Ап тує бух Так о тТве о вРо ВР оУді «в дер бек Ар ї55 Бе ЕК о ау Бяг Ра вве без Ві его рук мем ЇЇ Ма1 АБО вуз Баг Аг Тгр а ЗІ З бів Біб бі ап о УДі вве Заг осСуз Звк о Зеї Ні Фім від фено нів а й 425 чи
ОКУ ЗЕ ЧУ
Ажпоніб Туг тТагоБів УЗ бер оійц хау іди хаб рго пі Бі бБіж Б1у 375 44 2485 й й й піу бак обтіу 5іу Бі шіу Зеб Аго сіб сту Бго бів ї8ц зер оБго Ахр о 5 що
Аз орго лій сбіу фен фев Азов ізч агу Бій біб мет вне дів кій фу
За 470 475 ЗК ті АТЗ ія ак ге гі ст «у ех що сСезе сук ее а! АЇя сій Ап УВІ Бен овен ї)фв Ажросіу Рсез о рвм ощеЄ Тр Тут З бтранянца ЗБ
Й вАт- Я БЕВ й 455 а 495 зво оРгО Фі реч аз ої Уді Загогео тТВкобіу БТіу без очек тує рух що КУ 51
Бін ази ТВг обу бів вез міф зі дів їж АТа сіу уві туго туг уд! 515 ко их
Ве Ре сій ем сім ем агу Аг Уві УщІ АТВ оо фу біз сіу хекоФіу 30 5їх БО
Заг омаї Заг офщи Аїд із Ні5 ів шій вгОо іецч Ага зЗег о АЇВ АїВ Бі ді аїз вів ім дія їео твгоУув! язвроіви Рго вгО діа чає Бек ОТ
ОБ Уа З
Мі Ага Аза его АТ Біне сію Бе дій хі дк обемофец Ні Баб о ває дід ШУ ЩІп Ага фа біу хвфо нт фецоні ТВк обі АЇВ Аго Ав Ага о Б ніх Аїд тТкросій феч отв бій бі аа ткгоУДІ фев обію зем РО Агу
ІЗ ІЗ БІО маї Твт ов пів Хів Бо АЇВ Оу вао вто Бак о бго ага оБег БІЯ Фу 525 5 ЗХ -- вік щі Бі Баг оціу зіу сіу с1жЖ чеБ Ага сім БІ1у Бго Фів рве бек пах Б БІВ
РКО АБЮ Ар ОКО Аа шіу ец фвц АЗвоієм аго біб Біу Меї Бе дід
БО БЕЗ БУВ бів іец уві АТа бій Ап Уві ів ів Зі А5аоБіж бгооіжу 5веотРго
З м Ві БУ 7
ВХ Бо БЕ5
Туг заг АЗровко біу мен АіЇз бі маї 5акофжи ТНК шіу Ту іеч ща
ЗО щз5 тов
Туе Був б)в Ар оте куз біз ієц хв? маі АТа рух Аїд спіу УВР тує страница 185
БРАТТЯ яКО тер очАї Бе вве бій ов) Шіб ЄМ Аг Аго омві УДі Аів біт сів су й пе М ехх 7 жу з зх У ау ве осі Жеко узі Зако їн аїщ рев ні ев бій вго ри Аго Чет Аа
А га 50
Аїв Бі віз 5із ав ве; Аїд сви о твгоУВі Аз офбез ка Рго АЇВ Заг
ОВ га ат СіЧ Аа Ага Аа его вів рве обі рве бій БіУ Ага іем о іви нів 778 ТТ То іа заг аіз бі бБіп Ага іо бі узі міх іеч ніх ТВг осів АЇВ АК
ВХ лю м щюЮ
АТВ Ага ІЗ дід терій фе ївРобів сіу їв Тег маї зе) біу вед що що 815
Рйа ага уві Вб окРО іш жі вго АЗз Бі ве вгО Жег РКО АКФфощек
КВ: гу 5 о,
Іі «2310 98 ії» 533 «їй» вЕТ кій» штучна НОсвіДОВНісте «ех й Лента соКії нин но см ж З ке» дДНТЕУБАВ СО5НІі), БИсВаНК З «виступом», апиТиМ З мономенним Ви 5-і1КВвЕ «711-543 «НЕ 155 сів о Уущі бій вед фев бі: Заг оБіу Щі Ту рей уві бій его біу біу тт о їіжв Ага їжи хек Фу АТ аа его піу ве їВкК о ває бек озек нів го ХХ 3а ді Мет Бак Тгроуаі Аг сіб Аїд вро біУу рух Біу вве о 51В тер ом!
Я 45 сСтраннув 185
Заг ові їі тгровіз Бегопіу зів дій туго Тує АТа АЗОВ Заг омаї Ку 55 ща сі Ага Бе тТНе ї1і8 ек агоО аз вай его огуб АЗА ТНгозац туго ги дк 7 зе й чЕ г па БЕ 5 и сій мех дай бегоіФ8гв Аго дід ій дер отВК Аїд о УВі ТУБ Туг був АЇВ із Чі тгровец Фіу Або вве азв отТукотго бі бів щі ТБ офец уві що 105 ща твгомаї бек обег Ааїв 5вт ТВг ої діу Вге це Уві бвВе Ро зе Вів 315 І за 5
КІ жкіу я го Бу зер мух Жег ТВг оБег піх щіу ЗВг ОА Аа ве ЄТу Суб кмвй іп 15 148
Уві Му5 ар тжг вве вго бів го Уці те ох ЖХве тк; о аза дак о сіу 135 155 і55 15 дів дев тТвгобег бі чаї Ні ТНК вбе вго АТа уві рев бів 5ег Зет 1855 їй 175 сік цевотук Закоївн ово Як уві жа) ТВК ов) Вго Зек обер зар ге 185 380 сту ТвВгошів Твг тує Зіє сСу« Аза Уді Ази нів куб го Зак ол ТНу ї95 яю ох су Маі Аз бух фу УВІ бів вгОо Бук Зек бух йвробу» ТВгоНія ТВ 210 215 20 сх го Веап оСув бог Аів без ід дід дід шіУу С1у Без бег бді БЕ їх гло 255 РА іа вне вро оБга Бу вро фу дар отТВгоєси Ме оїів бак Ага ТВ ОБго іш ожа! тне бух мні уві ві аз УВІ бег ні бін ази овга бів май яко ЗК з'й «У КВУ ші
Стримеца 157 ват-аум ва іже РВЕ дав їкКВ о ТУК УАї Ар оіу Угі іч узі) ніх яз Аа ру5 ТК очей тах зе кі «і хі цУуз ВГ Ага вів Зіц бій теКовай Чак отвкотТуб Ага Уві узі Заг ох
З а Ме цеви Твг ові без Ні іп дев о тТгроїня джп осі фу ів туго ру см
З ен Зх ЗО туз ЖЗі Щек А іх Аза Би ві під рт о їіє БІ; р тк ІТ хаК їж Зі ер о АшТ ГУ лі ем Бі АР БКОо Ре бр Бу ТК ГІЇ ХВ 325 350 35 цуч« від фу» Бім піп Бго дб Бі Бгто віп хаіф Тк ТВРгР орец ргб о рка
Зо 345 Зо су йга Або БІВ Ммев Твб фу Ача сій уві его сен Тер обув вбев ма ух З ЗМ іїУу« пі Ева Тек пра Зргб да жів Аїд чаї ів тко ів чек чт шіу бух Фіу вве тТУг Вро пек оз бів Ат ді бів отр ошжім Мет АВМ РУ
В ЗУй є ач жі ев режшУ в йЗіповБто Бій Аза Ази о Туг муз ТНК тТВг о Бго Бго Ві рен ах заг ав
Зи5 о 95 300
Зі Бак оБНе вне обу Тук Яегобех фіву тТВгоУуз) Ази був бак одтр отв чі щі сія спів сіу АБ5пожвзі БВ обег бу бак ді мет нія 53 АЇа їни 35 42а 455 3
Аква о Нів туго тТаг осів уз шк вер зегореа Заг го ціх ФТу ст (ТУ 355 4 за сті» Хе оті 51У 3 се «1 Кт т лю и пі мі ще б» ко
ЗУ ЗК оБІіЖ РУ зЗіу міу Мт Дт шій Зі гео Сі фев бек вто Ко я 455 Б дер рго дів шіу бе ісц азвобем Акоа бій пі мех вве АЇвВ бів вед аа Б ау 480
Маї вів бій аз ді і8цвоізи ї1в да обі Без іє оХве о Ткротує ог
БІ о «5 страница КВ взяте яКО йе г оФіх ки дід ді Уві ог оп о ТвВкК оці піз іви хв тум Ру
Ар овга Бі шу дій діу УвРочеє ев о увгосФфРу бі ки Бек тує Ку ів Аз тТВК ог бін бев о аї ді ДІВ іув дів шіУу Уві Ту тук уд хе За
Не бе біпогбво БІБ Би АгФ о АгФ о ЖВі тв АТа бі бів Бі Зак оіу
Б Б аа
ЗевгоУуві Чек фен ліз рев нів см обіп вКо рем оАгу Щек АТа Аа ої1у
Зо хіх БЕ дід АІЗ АВ і ви ід ра; ТтвкК Узі дов оідйр;р ем ре зЗз3 дав щи дій АгВ АВ їі дід бац тп оУВІ АвЗЕ офіц БгОа Бга ліз Бер о Ууе Зх зх КК вх віз Аг Ави Жеб АТа Рв біу вне біп 5РУ АБО ке) мен Ні ем обе
КО 585 За вів бБіу Бій аку фен бі маі ні5 єв мі5 Те дім дів Ага Авіа Аго
ЕН ОО ВРХ
Ні Аїз тк бів ви Твк сій З01У АТа тВк оба фев Бі аб ве АРО
Іо віх го
Мі Те ов) бів ї1е Рго Аїв сіу сец Бгто зоб Бема Агбаро5ве п1ю 5 3 653 «аз 123 «вве За «8305 ВАХ «еІ13х ШТУЧНІ пОослІДОВНІСТЬ ет»,
ЖАХ
«ах днти- БА С4БЗУ, ЕС-АДаМНКМ фа кЗВиИпуннОВе 0. ЗлИТИиЙ димерням лав З-І1В8К 71-85 «ЯЕНЕ: 123
Ззіч маі бів ев о іви сім єег ПТУ Піх шіу фзц УВІ бів о вго біу біу з м з Кк з З ї 5 10 1 хаб оце) Ага фе хаг су5 Аїа АТа авг обі вве о твг Овна 5еробек тТуг за 25 КІ страница ЩО вАТ- УВУ вів меж пек отгтр о Маї дга іп ліз бго щіу бук (ФУ грец о бів тгрожаї їх Б 35 фак Аїд ті БКЗіе сі чЧеб 51 Ай бек тТвВе Тук Туг АТ А дег Уві ке щ
Не ПпіУу ака вва ТВагозЗів Баг о Ага дер оаБА даб бух Аза о тТвК бе тує 55 то 75 щі їжи діа меї деп охат ін о аго аій бін аа ТВвК АВ УЛ туго тує СеЖ 5 З 35 віз іш пу їгроввЕ бі бі ВВе деп тТук ТР осіж Бій бі тТвкосев цю 305 Мо чар отни Уа Зек Жак АТ его їВгоцу5 фі ркго бБегомаї вне вго ву її ї58 їх дів Вкго чвгоег уп Заг отве ЗаробБіЖ ді ть АТ А ев Єїу Су5 їх 135 153 івь УЗІ суб аЗр о ТУг Ка го шій вго ув) ТвК УВІ бЗего Тер Ах Баг 145 щі їх зо пі дів ів» Так обве піу уві нів Зб орва рго Аа Уа ів сій 5еР 155 ї7о 175 его Піх фе тує че фе бегозег Уфі чаї Те о Ущі вгеа о чеє цетб Чер їхо 135 ї30 рецобіу те обі тТвготук Ті був джп а ди мів Беж Бго дег АБ ік М щу
ТКговфух Ууді АЗБ Муз Муз Мі зів Бго іух Хек о Сух ав груз ТВРОНІЄ 210 АХ паз те су тв г) Сух бета дій бро січ Аа вій бі бі Вт Хар омді т МВ окт ОКО СУ КО лій Кг ср АІВ Вій ОБУ бу РТ ЗВ Ма
М по ях З Ь а 225 23 235 45
Ре їз о ВНе вБгоо БгО рух вКОо Ух Ар оїВе бом Мах дів бер Ако оте
ФУ п5У птримУува ЗО ват-З170-5ЕВ вт бін УВІ ТКкК Суб маї уч Уві Ар ов! бегонія БР ар го Зв
З ри и а! ку Ре дж ОТГ) тує уві азвоОію Уві бів маї ніз дев А Гуз 275 КО 2Е5 тТВе вух Рго аг пів 6фв ців тук Аж хек тВг о Туг аАго Маї хаї Бек о 255 ще чаф жу тв оУді сем ні сіб ази тер обен Азов біу бух ім тук ух 50х що 315 2
Сук іжв Ууаі бБег аз іуб Аїв іа з1іу Аїа вгоа її боб бух ТК їв 35 Зп 315
Закгоїу5 Аій рсуз бік сів Бго аг обіц ргз бів маф Сбуз ТВг орви мга їй За5 ї5а вто заг оаго аз обі фен отвК о їУ5 Ахп бів хЗі баг веб бег обу 513 з55 ЗБ зва чаї вм бі зве їж фе) ет АБо тів діа УВІ Оіц їга о б3іЗ) ее дя
ЗВ Я 3 сі1у сів вго біб Аби аяй Туг огую ТВРОТВК о РКо Бго У? рей АБЮ Щаг 385 З З Я
АзБосОТУ Же о вбе Бве гео Уді бек о ву рев їВг о Уаф дев ім пет АКФ тТтробБів бів оіу азп ма? вне бек осСуз бшко Уві мат нії 6іц АїЗ се
АТО ях 430
ІБ Аж МІ тТук Твг Осій бух бек офївможетє фвц Заг обгв бф сі Ту щі ЗУ сіх сі Хетг о Фіу ФТУ сіу Оіу бег аку бів бі вко 51) рез хаб его 5 хх з ав АЗО Кг Аа Бу їі фен обр вв Ага біпопіу меж вне Ат бій 485 478 А? яко
Кливнмицв 13.
РАТНЕ івц чаї Аїда біп дал уві бен ге їіє збою вВго іє де ТгвотТує ах А зх зак АВ Ко сіу зи дів Бі УР хак сей тТне Фіу піу рев Ваг оту
М м З їж ів АВ оте ру» і фіву Уві уві вія БУ Аа Бі Уві стує тут уві ває рве біб цен щі рез Ага Ага ві Уаї Аза паіїу сін біу баг 30 535 ЩО сли шим а бжк о вж Й ту Яке: пі; Ву іі дез чеку І Аз тім Бак од Бак їжу дів Кен Ні беу бін Бго бе Ага 5ег дів дів 4 553 355 ЗО
Фу аіз Аід Аа ів Ази овен о тТвкоЗаї Ав оба го Кко Аді Явгб йог
ЗЕ Уа з7 ів АВ дт; ака баг одіа ве сіу вва сів бі ака о Бевьогау Мі феу вт діва сі бів до бер о діу уві нів емо онів зїмббіо Аа РО АТ 535 щю 505 ага ніх Аіа тго осів фев ївгобів бі АЇв отТве Уа! іви Сіхж фец вве
БІї йо де злу же зу вузі ср хг дів У івц вро Ха ру Ар пер оп ага УВІ їВгоБко Біб тів вге ліз б1Уу ве) обро хвг о Кго АК бег осів
БІУ я 535 Ба піу БІіЖ біу бів баг оєїу Фіу «У «у Хеб ага бів Бі го ів їі
ЗК ОВгО АВроАБр обро АТа бін фенів Ар оз Ага бів с1у Мет вБе
Аа піч феч ув) АТ фіз аа Уаї дев оваб їв АврошімМ Вко іем дее
Вуз БІО БЕХ тер тук бег ап Рго Біу вец дід біу мі хек зем ТВг обі бі ва
БЮ 595 дю стизвница 155 вже я170 ЕВ баб отук орех шій ав тк оїм5 бів фан ха? Уа? Аїд іє АВ пі уд ча отут Ух іч АБИ тик бух бів КВУ ар жжві ді УЖ ДІ БІ Ук: зав й й ти тат Й жагу
КЕ ах й Мо ки
Тук Тур Ууді Ре бе вій Беч діц їеу Ага Аг Уві маї аїв ім «1
Тих Т5и 73х
Фіу чхвк осі Жак омаї бег оте Аів оса нів вв щЩіп Бе фен ака Зег
І 785 тка «зн діц міч Аз дід Аді Аїа ік увеоУаі дав оси вро бро дід дів АРід Бі дів АВ лій іа ліз ви тА ол ЗВ Бен кто КО дід 255 я 755 тег оче Фів А1в ака ай заг о АЇВ рРБе Бі вне о 5іп біу ага бен без 27 ТУ 750 ні рез бат вів б5іу піп ака ваю «Ф1у ма Ні гер онів твкоБів Аїд /КЗ гай ВЕ М лагу дій Ага Мміз Аїд Ткробів беб ТВгоЗівБ бі Аіваотне чаї гром о шіу їм зи мет оц жі зи 1: Та ух пох щіУ їн ЯМ. іі Тури й кт іви вне ага Уві твйговго Біб бів вгоОо дів жіу сем о БгО бег рто Аг
Зак офів тез 24 «211: 60 «10 ВВ терти пафеуч й ся У ї м. іже «й штучна послідовність «ЕЯх -й3з АНТИ УКАВ СЯВЗУ, ЕСОЛаМНН З «виступом», Злити 5 вововерним
Ки Яя-авя 1711-55 «НЕ 154 зіц ат бів ан рев оіз Зае «Ту щі піу ви ув) біб го біх біу і 5 1 і5
Хв" оїжуи ага вам бетг сСУх АТа вій сек бі Ре ТВРОоББе его обет тук
З 5 хо сСтвравица 195
ВАТУ КО
; к ге - пе нн чн и ЧК НН АН змо жк уз сни чу
Аа мат Заг твор оУуві ага бів АївВ о Бго (1у муз іх ім бін о Ткт Уд! «й 45 егоаід їж жів бі Зек о іу АЇВ Жак о тВК отже Туг АЇВ АЗОВ Заг Ук
Бе 55 БИ іж» Зі Ага бе ТВгогіє бвговгФ ав яви паб обу АЖА ТНК (ще тує ща То 75 о ів обі Мет Аза пет рев Ага АВ ОС) Аве оте Аза УВІ тує тує Сук
ВЕ п ах
АТв о їуУз сі тТеюв Не ШІіу Фу вве аби зує тТкр обі ій сту тб бек
М ОН Мо уві тТвкЕ ові Ше дог АЇВв бер ТВроіз 1 кро ек УЗі Ба рез зе
Уві тпг ові хе ог АВ Мер аг оку ту вго Же УЗ 1 гер 115 ї1950 їх дід вга пег опаг був Зак отнг Зек Фіу «Фу тТВг о АЇВ АВ Без овіу Куз ї3а 135 ща іжи маї уз дже туго вве КгО біо Бр оУуві Тв ді Зак тер одеп бас 145 159 ї55 150 ці аїйа гацотйк дит бі Ууді нів Твровне реа дід уві зи осік дае зіу ліЩ кад отак заг о Б5ішЖ Уді НІБ Їїпрокмне реа дід УЗ; бецосоій 15 7 195
Жагосіу фавб їує Зековев Зак бак о жар мні тТВи меф Бе беб фек век ішн осі Так бій тТВготТег ТЇ12 Сух ав мВ! Аа Ні руб ВгО баг АХл
ТвгофУу5 ВР АБр обу» бух уві сій БР Бук Бак обу АВробуз ТБ Ні как. І ве
ТвгоСуз Вго вго Суб его о аіа Бгто біз вліз Аів Зі бі вгоО Заг охді! 225 КО 235 йЯ типа цем вВж Руо Бе бує га ку Ар отТНе вв Меблів его Аг о тТве 245 М 255 стеваница 154
РАТеЯ І -ВЕТ
Кге о Зін УВі тТйгосСух уві Уві Уві азв Уві бег нів 51в АБО Кго 1 зі З СВ!
Узі фу Бе Ап тТкротуг Уві яз обі Уві бів Уаї Міз дела Аїд ух
КТ еко 85
ТвВгокує Бго ага бів бів сій Туг Аа его тТВг отут ако Ууді маї бак
ЩО 295 ню
Уаф о беми тТве ома?ї нм ніх біб яз отгробев о аза БУ уз ід тУк Су зах що 35 зго уз руб УДІ Зег о Аха їуз АТ іни Шіу дів ко їі Фін вує тТВроїі1в 325 835 БЕЗ
Щек о куз АїВ уз ЗУ Фі БгОо Аг О1ц го бій Уа) тТуб тТВК фев о вгО
Ка 34 о
Вк Су Аг Аяю Цін їва тТвг обу дп Бір Уущі Берг оівь їго Сух ви 355 15 з55
Маї Бук бі вве тук бу» Заг о Аср ї12 Аза шві) Фін їги 516 Зек Аза 37 325 ЗБИ
Зіу іп вто Бій АхАа АБ Тує 15 ТНК о ТВг о бго вго Уві ви дер бат 38 ве За 00
Ав ошіу жЕг вна ве рем тує Зего бух рев їйг о УаЗф йхробуз Щег Ага а 10 1 тТев бі бі бі Аза Уді Бе Заг уз Заг УВІ Мес Мі СОМ АТ ву 82 415 138 за тА ву
Міз ажп нів Туг Твкобів ух бак їз Заг оішц бат ге сіу 01У су 455 Б чат -і1у ші Баг обі Бі щі Фі Ха Ак СТ су бко бім фев оувк Вч 450 455 ке
АБИ АБИ Ого Аза сіу гл грец азвоізч ака бій бі Мет вне дів сій чу 473 залу 50 суранаці 155 рату
Ме ма! Ав сів дв Уці івц ін їі лав обі Рг Мен бек тр Тук ч8х З 55
Зак оАкровго ім ів Аза бі ві его бен їВгобіУ бі вну 5аготує па щі «та бух О1іч АЗИ о тТиг бух бів їв Уа! Фаї АВ буз Аїда дію ма! Тук Ту й щк 7 За хи Й Й зі зи ал ча) Рпе вве шій бем піз ів ага АБО Уві Уві А)ів обіу ім Фіу я 530 535 У
Оіу дет о мВі чех фев Аів рез Ні їжу бій вро ву АгФб зоб овій Ав
За М Зх за
Зіу АїВ АВ АЇВ їжи дід івц Твг Уві дев іви бро Бга Аїд Баг обег
Віч Аз Ага Ази о хег о віз рве обіх вв Бій Бі Ага ем фев ні ем
БК 55 що ек віз «Ту бій Ага бев обі заф о ні5 ба: МіЗ ТБгоФім АТ Аг АТА
Зх ще щі дга ніє діз тро Бій фев ої сів сіу АВ тТНеЕ Уа вм о біж рен рве мч ак з
ЕН 515 52 дгаомеа тн ов» жім Бі вго АТа сіУу Кв ре бек рго АКо о 5ЕК бі; паХ ЩО 5 що «їх 395 «вій» ВВЕ «ААЖ»е туУЧНІЯ НСВіДОВНіЄть
КАТЕ, ле й й що «ба» ДегкМО ванцює анти кА гак «а» 125
Зін тів щі вец отаке сій бе РКО Фі ТВгоіви Зеговев зве РКО О1уУ 1 5 ів 15 сім Ага АЇВ так овен Жег Су» АРФОАЇЯ его бій бек маф тн би ек
Ку 25 БО страница КУБ кат-а170- 55 туго сен від Тгротук бій дій бу» Вго «1іу шій АТа Бк АТ вав оце 35 Б 35
Ж1З деп ом БіУ бек АГ АК АТ ТВг Обіу Хі РКО Ар оАга Не бек 50 5 5 спіу шег дФіу хве піу твг або Бе тик рев Те ЩЇ1з Зеб ака ви бів 25 То 7 во вго шій Ар вне діа уві Туг Тег о Сух бів бій біх 316 МЕ ій га 85 З З5 кро ТВге о РБЕ ші Ра ОбіУ Аг овБує УДІ БІВ ів був Агар тВг Уа Аа 300 135 110
Ав вто Заг оМаї ве іа Бе го го Хег о АВ Обі бів бев обу Заг
ЩО 180 125
К- ож . Фу г» з ук хі з дк дк їі сю І дою ут су тВк Аза хегомві Уві Сук Бен рев Аза ам ве Тук Вко Аг ФМ віз їх тай цій ткроцує жа Ар дв А1а фар бів веб ціу ака бес 345 150 155 їБа
БЗіпойів бек омаї її іш дій дер его ух АБ Щеє ТВгоТугк Зак о гво 155 Її 175
Веб его ТР вжи ТЕ Бей хег БУ АТ АБр о Туг Сіно Бу Мі Бук ха 155 155 тує діа Су» ШІіц мі тТвт о ні бів біу ев Зег заг орга маії ТВгогуз его вБе дяп ага шіу СТИ сСує тій Я
Дол же «В4їхМ Бл «05 вВТ «І» штучна побслідожвіст» «ВИ3» вити КАК гащЗ), Кс-яВнцюг 13 «Здпаднною», ЗлЛИихий З димерним сСхраниаца 157 вата КО
Зав ЯВНО СУЯ «мюх 125 бів уаі бій бен огФев бів Яегт щіу ші шіу вч мі бів его об) біф 3 х 10 її хаг оре Ага енд Ха сух АТ аа Зек біт Ра Те о вне ет Чеб тує о сх о
Адіз мек бег о їкоомді Аг бів дій Бге Фі ух бРУ Бан обів тер оуді 35 ча Б
Звт діа тів їі8 сту бег бі ліз Зако оїве Туг о Туг діа Авробек УВ! зу Біу аг вне ТВг от) бек о АгФ о АБО АБИ ЖЕК фу5 аБАаА ТР Овен тур та 75 З зви осів Меї деп 5вгофем АгФ о АЇВ ФіЧ дав Твг АТа УЖ туго тТуК Сух аїа фу сі Тр рве уіу біу ово Аа Тук Тер оБіу іа Сім Твго ів 105 155 що
Уві тТвВг ода) чего аг о АЇв Зако тТне о гуз «1у Бр чає уві Бва вро ви
Ав овго 5еробаг був бек тт шет ді сіу Тв АТа ав ка цім Су з30 135 ї159 ем Уа су АК Тук вве вКо піЗ Бко Уві Твб ма) ЗекБотгбв дяй Ве
ФУ АЇа іни тв чає Ффіу жаї Біб ТВРОРВа РРО АТВ УВі івц сів хв її 370 175
Вегопіу ем тує бБеє бен бек бек маї маф тк о тді го вт Яит дає ї150 155 ТАеІ вен обі тА" бів ТвВготук Хі Су да УЗ) АяЕЛОНІВ ую Бр баг дз 155 КЕ Не сзранмичв їЗ8 ват-4з7О-5Ей зві . х го я во чех чо : е-кщ їмо дм У й а сту їж
ПК овуз МВ1 Ахробуб цу маф О1ш Рго рух бег був Азровуз тТВк мів зд Й Й зЗ5 й зе 7
БАХ ОМА КА.
ТВЕ оСуз Бгто бго СуУ Вго дія Бета бів ід ліз бі сіу Рго Бег уд р позі зак Й Й 24 «Ка «и лу я
Рваг овФев Ваш БгОо Рг Му» Ре Куз АБротнг Бемомек ів Бек оАго так х45 5 БУ
Бго Зім чаї тв оСузх уві Уві Узі ав Уві Зак нів Бі Ар обго ій зх ЗУ
УВІ вух РЕ ази ТКротук маф Ах ші Уві ім уві нія дув дів ву 87В 280 25
ТВк ув вВгО Ага зів біб бів Туг аз бек о тВг тує Ага ха) хі хек 295 ах Мю
Уаі іеч твбб Уві ром ні Біп аа тей вжи Аа о Зіу із БЦ тує вух
ЕІ зі ї15 328 пу ух Ма! Зак Аза уз Ав зем щіу дій во їТа сім вже ТВКоОжів 325 З 35 хву їжа дів буз ші сій вго дга бів Ргз бій Ууді суб ТК дез го ве Бе їУй вго шого Агар АНроОпім фе ТВКобух Аза обіп ді 3Зжак о бвМм жЖек Сх дів ї55 З 555 чаї їух піУу рРвВа тур Бк 5вгодев тів дій хі сів їт» бій бог АЗВ ат і бі Важ о тУК ВКО 5 АЩО Тія лід мі сії ТгоО біб бог Аза 37 375 Б зі бів Без Бі Аза одяй Тукоіу» ТВ о тТвг вгОо Вкоа УВі зен аз Зак їБ55 З Оу Б
АВ шІУу баг вне КНе ів Узі шаг рух ем оТВе Уві Аза бук Зак оАго «05 15 щі
Тгвродій шій сім ал уві вве овек сСує баб оді меє мів «й дід ви
Я БУ М странице З
ВАТА ЯКЕ
Мі да о ні тук ТНР ОСТ ух баг оїец Зак мар щагб ого сіу сту сіу
АЗУ 440 ях сі СТУ хек сі сію біуУу біу бак Ас сів пі йо Фіч ів Зак рр 50 АВ 450 ар оахр Бге АЇВОБТУ фо мем АБЮ Кер Ак осів біу мех вве АТ зів 455 7 475 ЗВО іо уві АТа бій дав ді ев оїев їі Ах зі Бгто без хеб ТгвоТук
ЯК зо а ваг оАзр Бгто Бім вай діа Фіу Уві бек обва ТВг ОБУ бі ва баг о туг
Б ЗЕ Й ов макс хм ям їз Фін Авр о Тнг фу січ івзц ві Уві дід суб д!а бік Уа Те тТье 535 БУВ 5
Уві Бе вве біз бе бів зе) згрАга чаї УР Аза шіу сф біу ЗК 538 535 аа
Ру Бек Уа! бек їжи Дій Мей Мі5 ем сій Рго бен аго Бег АТ дів 435 5 555 БО с іу Аів АЇв о АЇв зви діз ем тТВг уві Азов; рго Бгто АВ о 5Жк аг 55 ЗЕ 575
Бін аіа Ага Ази чего й РВа біу вва сів Бі Ага їжу рец Ні ви
ВО 585 5 зве оАїа Оіу пі аг венобіу маф мі пев ні ТВе фіз Аїа Ага АТа
Уа щю ох
Ага мів АВ отТгробБівй їжа тве осів Фі АЇТа тв Уа! фев біу їз рве щі віх БІО
АгОоНі Тве вто сі: їі8 кто Аїа біу вч бу бі бу 1 багобїу
БІО 555 о піу ші Ту Жег о дка січ біу рко бід їец бер оБго Ар одер о вго 418 сСтоанинве МК ватеа1УпАвЕа іу сс ов азр омен о аго Біпоб1у мої КВе Аа Сів фїви о мді аіз пів опо ц55 о
Ап о чаі бе) бен хів дер оціу бко фен баг ТР о Туб Закодяв о БгО сі1у 575 БО БА і6би Аїд щі Маі Чвк із Тв пі біо ге) Зар отр ЕН за ТВ івги дід щіу ар Хек ех коту бр ев ом їуУг Ку «РО АБНОТВЄ ща 55 кю
Муз бів ев Уді чаї ді уз Аза піу ві туго тек Уді Бе ін: бів
ТО І РАНИ Ка
РУ ям «АТ як ім сФфій нмоАгу Ага Уві УК1 ів біу бів біу его опіу Хег уві ет тгз то 75 ец зі без нія їев Бій вто) ре) одга его дід Аза біу із АЇв ів 74 ТАХ ТО ев ліва врец твгомаї деробви бго Рго аа бег оБег бів АЇВ АГЯ АхВ т ТО т дет Аїд вне щі вва осі біу Ага бен обер Ні їФо г АТа сіу сій
ТТ ТЗ ЩО
Бец се сім Уві нів рев ніх твВгобів АЇВ Ага ДІВ АГЯ НІЖ АТХ Тгр
ТК? 23 795 Зо бів ев ївкобів бі дів те жа) фти Фіу зви ВВа ага Уаф Тк Бго вах У 55 іч їі вго дів бБ1Ж ік
ЕУМЕН
«ЕМ 125 «Фі» 53 «1 0 вет «кат ВН
У пвеваімо поля пли о «аа оЩщрТУучна ЛІ ДОНІсТЬ
ЕК» кй3М вити Ай га) гс-пдкци х хвисухво зпіумй хо свунім ; хекйїМ ВнтТИ-ВАВОСЯКЗ). БООМаЗКНцЮг хх виступом», ЗЛиТиИх 5 ВОНОоВарним
Ви 4-їаВЬ С71-24КУ «НЕО 127 піз ма! бів ге вем щіч ак сту бу Шіу івц шаф бів вБго бі бу страница 231 вАт-ЯІ Те
Н х : с 4 х їз і5
Бег мем аку цем оЗагосуз Аа Аїа зеб Фіу БВе о тТвг Ре Зако Бек тук з 25 с І дів мет зар оте теці дга пів дід вро щіх 5 Бі фішо Фін т ді
Атв мет Заг оттр Уві аг Фів АЇ кко Фіу був о 5ІіЖ во Фів тТгюоха! ї5 ай «5 аг дта їі їте біж бегобіює АРа Бак ТНК отук тує віз АВИ БК У! що 55 ЕС їуз ік Ат бне Те Ті Зег АгФ АБИ Авп' Век Був АВ ТНК Без тує ва ТО 75 во сх о чи уча хм Во - 1. ФУ зу їх з ч- вен бій меж Аз Зегофбсев Ага АЇВ ОЗ Ав отне Аза Уві тТуг туго Суб
СО пу " Кк т
ЦЕ 55 ме за жі сет В кеш и ЧАН г. м ук
А1я ув ТУ тероббе єіу Фіу Ре Авп тує Тер бі бів бі тр оіек
МК них Мо уві твг а! 5егб шаР дід веб отвкг ому Зі Его Макові РВЕ о бго гео 115 120 125 ід го бек о бег бує баг тн 5ег щіу мі ТВг діа дід фев бі Сук їхо 135 ши то шо ку -7 га ох й с кім вх ій : сн. зувиі Я г ц Ь м ме Уа вух 85р о тук Ба РГО ФіШ вгО Уві ТВгожа! Беготер АХА ег 145 їх 15 150 т х- піз ах Жук ук: и іч ж г У ВА х
Щіу Аїв вжи отнгохег о сФіу УВІ Ні ТвгоББе вБго АЇвожжР Бе бій 5еє їх 178 195 аг одіу фен ТУ бегоіеу Заг озвгоУді Ууді ТВгомаф Бго бек бЗегошяє 1 185 180 ан шо и ШИ Зі жх - г що Н
Без обіу ТВгобій тТвВкотуг 315 Суб Ап ма! Ап Мі ук вго Зак о леА
НУ зн зах
М ке: ММ и ух пе и ь У ук пе сь ще - :
Тговуз УЖ Ар оку уз УуВР сій Вго фе бек сух дробу ТК ОНІв 210 з15 З п з так ат хх їх. кл З их и Точх шо с см «г З
ТВгоСух вгОо вро Су» РК Аза Бго Біб аАїн вів бі бфу Кк) чек ма сени Нчяа 202
РАТ-ЯАДЛЬВЕО вве сер РВЕ РО РКО Муз го Бу АБротвУ іви Мет хів бек дк тТвг га бів ма! тн Суз Уві Уві Уаії Аз оУді баг нів ів дев овгГО сі зо 25 ТО
Уві у» вве дай їКО Туг Уа! АБа Бі Уаі піч уві ніх Аза АЗВ ув дз 25 Ка тТнгофуб Ве Ага сі Фін о пій тб дв бег оївс тує Ага маф маф ер 90 а З
Уві сом о ївгб Уві ізн ні Біб Або о тгробев АВ сбіу вух Піч ТУР гу
За Зі12 315 за їх іме Маї Зак ака г під іти ШіУ Ав шо ті Бі а тв ків бух ув оУщі Зак хи зу дів Сем Ту дів Р бобів БЖ о дів 325 330 У5 «пт оії дід ім пі ів обкоО Кк пі вус оці маї тек тек о іву ка зв о кжа діа бух шіш зі Бк ягО бр вго бі о? Бук таб сем окго 3 за ЖМ го Су» Аг дер піч іф»и вт огучз Аза бів Мді Зак обши Тв ОоСух им
Маї ву Оіу РВе тур Рго Заг о дяр тів діа Уущі сі Тгор піц Бег дай 378 КІ ЗВ сіУ вів го БІВ депо дЕМОТуг б» ТВ ОТвЕ вро во УВІ рев ар Заг 385 Зо 135 щюЮ
АЕрошіу Баг о БКМе Не фаз Тук Заг вуз ву ТВг УА) Азробух Мекодгд х о 515 ту млн ші їжу вх та пе Сім бу сум зу їмук о ца и і вк тгвоціп о зіп біх дев ма) Бве свб сух его уді Мек ні 51 Аа ке здо 325 Б ніз Ак» мі Туг ТК оЗій ух аг рен дег офею бек овго Б1іу Бі Бу щік ЗАЙ лах хе жо Ах і Біу 5вкобіу Б1іу Біж біж Жак Ага б1ч оту Бго бів ішу бак овго
Страница 203 рдТ-ЗІ2О-5ЕВ зу, м др одер бго АТа спіу ев о ї8и Арон) Ага вів о зіу мах вве Віа бів а 70 СУК Зко їз Уві дій біб Ава тні ем рей їв Аз пі РО ев обег тер оту 45 З Ф9Х ср оди усу і у Фа Фут їла хи зи тв ді сію зі; о бузи тм
Бат одав ого чіу Сем Аз Бі уд! Зак бе так озіУ сіру івц Бег ту?
ЩЕ 505 Іо
Бу: бів Аза тйк оку 1) бем ма! та! АТ БУХ АТ сію УК Тук Тук хо ВО КУА
Уві вбе вве шій боці Бен Ага Ага Маї ма діа щіу бі біу бер
ЩІ х3Х а бі Зак уаї Зек їв АТ іем Ні ем пій вро бази ага Зеб лів дів 55 Б Ах кі с1у АВ АВ АЇВ іо Аїд ви ТїВгоУД! Ар обец рРго Бго дій Чак хат ща5 52 5
ОЇ Аа АК АБа дек АВ Бвае бі вно бів біу Ага овемогец НТ Грем 50 585 щю заг овіз іх бів Або зевозіу Щі ніз бео о ні5 Ти обФіо аіз зго ліз п й Кер у
РК НН 5
Ага Ні Аза о ттеробів їм о ТВгодівз «1у Аа тв ові веб бі ев о рне що 5 БІ
Ага Уві ТНК о вго біб Хі РКО вія піх їви що «ВЕ оЕ «815 5 «212» ВВт «ії» штучна пОослЗздОовВнНість «ВЖЕ «203» Прптидний дінкиав п «сказ ПейтидниМм яжнЕгро сере «т В птвавмца 0 вата У0-БЕОй ої Бі сі піу пек ж к «А» хібВ «Й» ДНЕ «33» тТеУчна гпесліданість «Ех «еиїх Димерний Ве оЯ-ЗівВ КУА ачАЮ я Срхевс ланцюг З «виступом» се ї85 здано «кЧаЧчитов сссосазвУуакх ссхосецови косі сапу щи сіє восіза асЄс севозаслКо спа со акЧадскскої дЕсстакВ
ККУ - я шо м вето чаю сбЗа сатана восвещфосоосє совусєсвсва видов со зді Й жим занесло їпрінксаз поасспусеато; ктастасеває Богетен заанскаеча тис Й чо ззвцчотоп соосаао ато ї перккекев песо сх онко
ІН м. - їх -
ЗАМЕ азарт тлацецскоє вептслий сіовсвле аксон иїс асп ся
ЗО заеессоса зЗіасосакх КоЧотіксав осн жає касассс кессцапсноу
КУ ши й І т Й я зате часто сасзоаоцєєс згвовстезас асо а св сВедо
Зо І пф асва тс зітбсапаото воссскеваах Кессяопою соКасскесх
Я севадвласе зх лнмемі сові сЕчас засне Ує спасвоВацчея скоса ско що шссстоВстЯ зхссоюн м зт стах стокоасзаз занитсвс ссзаста ко по І І детевехата цпитасізаи пансодасе сен таЧчх воском венах ж пезчкнсєс состав всосцїсскає зажкома а сажменьмо Фасаасвс жк: зазасквва тази тасви чі ксСкен смачно пемзи ЗускооЗчвО
БЕ
Страница 205
ВАТИ ЬУКИ посісвочви сії сссх чостЕщцеаї спас СОПКО СКК ще ласо стос кеах оздвсстисст сс жека фени сно авасаЗсвся о тксврюЕксс задзасосст солесанеоа мщвасстоває весна вес
Що сатастідий соМмрикеса зовхзсїко) саескевскс еоеааєс патесеа 10о85о стзЕжксвКЯ соавсВосства пазисссокопс здорастассяа асепевае аа 1358 зозезкессо зазззаозвоз) вЕстсокасо зказусвусєаєс сахстзеєею каксеекесох їхов посвосзвос Яовааастова Зістацечсв Зссдсоїсо Котасскаєт днакавсяки 1250 івано жк газаць сі мочаня якоазЗасазвеа сссжоаЄєвОАа сема т32а Ії капопвазаста їбпасспазсв зумсвазсваз пастссвост зсвосссово свесакое ка зссстомна аск їа созазаовсво авозтасвов ссіесвзавух панове 3 пекстщіста чсспсотовс сааваачстес засни оа аакоеєенова звсксвосвся татсестсках сс ссс пазах зосоешств осока ех пихсоскоса о звпстовац звсассостаах забсавмв звессостааа таз зач
КЕ ші соВва Зоадассстов закааваєто авішнизсо ивмичнкає давав е зашщнсвзвоа сставжоєсвов суаЗзаесаЗ тасавасвзса саавсех стос 1748 «Ісаспас сасвсевота свт увах зосзазонах асааотеєва пакетесвнх 1 пава зпоссскссвакх бововавастс акстсснМмв спав декссоки
І1885О ксвсартк вожссхаєє сосводскоз загзвоаушеа ссвазавосса закона
А тої св свати Єжпафкскав звовтечеєв знов засвац страница 0
ВАТА серии апавсінова фас асосеї схов востосом се кекЕс
Я сЕстастуєв веастсВвокУх зовсвминоє вона зашооває секекеа це о босвтдакоє візацзєкох зсасвассвс басасзсвув апазеежеке сосок косо г зртаза гі «іде З кАїїз 891 каїйм ДНК й «13» шчтучма песдідОансть «вах й «З2їз Моевоверним пи ЗіБ лох СН «Ов Зо замовив стоаоастцвмр сспеозастрих ссостиме зво єї мно ака тЇтосіс псів созаавсака скапіовіс аачссксссх пісок їко зрКоа«ссто паст тоаЗ сецисвста аксдоцюн тезі дохачасася вазвспвастоз ми шоссза зе саствсвак КеожжесовН нем ацічекои сеодезам зестоцее зо соска ие
ЗО здайасостоа сідає застесвох стає ассжекекеє косе чацксссоцоа вра к мете саа зосмисКоє ас всетакІ списав зоавсканни фосаїствов кеснниике врннсовоаЗс арка зстоапасад
ВК і
Засосивесво пиво чеком восссезннив осн сосна я соки киш вази вешхіпсоцеа сизим січе квосаєЄ ааацоцекоє
М чиї ссцвсопс пасмом) маса цезцвасвє спос по уч му - ут сСтдачиня си
ВАТИ хЗсстві зачакузоет сепсис зеоавскчми ссіозаєки КзпосКсТо ке вівацдсдоюа засасвВсетЕ фест стасвувчса сосок ка спосо вує «ЩО пасе сазжасписво саасесксто сФсвсссвув спбновкока савсзиаа кВ сеавомохта савовссва зЗакачвсве аванс сеанс є «ам» КМ «Ру хіба «дід НЕ е8КІх Штучна послідДшвнНість «ТЕХ «ех Й ц я г. педа фа: зує кх тре мах мч Не хочу «айй» димарний Би я-їв (уз е54ЯЮ я снІіз-Бс-данцюг З «виступам» «ах ІІ аааовшцеєс сіцвосечач сессоахчае солосцчюає чклазассо века о звтатттеаттс васІдопнк ссазавсвмь піхов лец ав есст чіпом ає о жопа асо состав свото апа салоастайлав вінцнмн есе завцзавасмнр мрронижзча посол о саставсот оте ковосї асо ам 238 мисісвию ссоцсовазо зЕстнрвсї пса хКхчи сосспасвисх сви
З занарсеска станок акта ство віскі Там іо задоасссн ана Мекка песни шеє каса стаїє рисове
Кох в 5 з 5 УС З вч шЕстоца сусаїстоса сажа с вресєтаЗає асепскюсв остео диссхвове касічаНеке збив воску КессВассоо сопасоКсх 540 сеазвоваено вживу: сеатстеас «роми стазаодоча всксапаєта
М мисстзакте ахссвассца Збсастеах ссожшнеснн зазізехгас сс
БО чиксазавсоз хапістовк сезсоавсс сов оЗає всеосовосо вопоотоциа страница Об
І ВАТА КО
ТЕО пазах ферасіаникнІ всївіеекає вавовазака свевааєь кача сх ща азацитчой какаствчвт зікмЕбкоВво сстодавсоков лю заЄ вусів ща песто скутер Юосестекає ср во косестстає прцнвкаоаса
В ше авссоца сксннеохоЯх оувссотесся совесотста зсчазассе адасачке ттспадттсс вабзасоссж дохосакска адсоссодає восестсюа зотокассте охо сатхастзаза совно зсакоєеков секс с зма пкастУзов. ве що І пісі зма сузвсвоства пахсссосес зЗвастаскав зссктачвке века 1150 повозавеко звсезенщо азс євоє всснивнвве секс сессквсе
ОА шк | І пакпнонков аозвеснвоа созсачусаса епос стае ачє скнивНкАє
Ба зеркс семи оксєтоуває вес ковсптксве спаси їз кн ХЯапкосвово МіЄбоссто Баба скоав поивеоВівУЄ сапстилї спін мКевоссв сесії: ЖЗсанака авсшвовадес свосазовоє 1440 що І І шк І І «варі зузав аа сссавЗаас Зсоасазав стласчсвеЗ ссспассКоє щюв ковоєассту мережа сжнІ нн секея зесЕкссвсї всоксксвав всосваЗчае
АБО зиплтпаксоВв кскссснм сестоадДеє самє сн озвосяк звоссвсодав ї520 шо песо бсаауктсав сточсЗа засввкача ворс ва фасований їБКО званню ззраосвоата свасеася ассакакою кеВ свої ссто і750 чтапсвФфрвєст Фскозакчо самнвчає заз піссваєтав во кее 1500 І страница З вдТЯ Бл щесжксвсоЯ ядававлсвк сіссавацис авмнисвУує сссоспвовасс вовоазтякає
АБО всесствиєс свБасеуваа состав вздавссоае ковку за скке їв авшввксе вткссасза свісоссосо зву чопвамина зссоваає 1зКо ажвжкасааой севсссксс сотосцюе сссзасеекх сехжетієск стояв каве ктсассацв всваувуєво шко рами Коток с саакуєах
М задаскскає зказисвсїя спос мвч щасті схожа база важ «вій» 113 хажіх ЗО «ЕБйх ДНК о «еї13х тузнв пекогідавність «ВАЗ» мМеномернив Ви Я супах «ФОП» ЕІ даазаелНсєс стомоскоза сосочка сети тас соастосаво вс сВеоє зЕцЕКектє мрскодіює ссвоеаєчєу ссзстоесея аксссесю окесеувкає
Мем щсчвакссто застає сабптсасто зовн тези ївовеа зминасвсє
І пвадавссв Зона осо всі ВСЕ КІсВОсх ооаастасов зай ші ше т ши
КТ вовча чне сина актової ми сіє спо зп ста завезсостя сФикнас азсестосв срака Вішак писав
ЗО пводсссЗаз аква жЕ кер жхсва зосвоаоехає вс стОтИ сис сНу
Я2о | п вас свт стоаса сасввечс авУуйпстацає авсзксєврв ппіоавосвово ак жнчетасва соскЧочсс агтісвоаЗка зсссссовцв сЕссасков есте ких
Бад ссвазазако засо созекестцоє посох стсЯкасех «ав стваница 2 вАТ-Я170-КО
М тсежхатстксв епос вістоакєсву авозєтоаваї строваскоє стики то тоастоа асавст хека фессраа дсставаціс афксразвеах зааеавсасе
ТхО сеслазтс зівастсссвя ривка с апа войасзаув сазесвссяае вк сверз саке тов ос асвав зсвовстаесо воававсвсвя ЯКОС щас хоасозацісєва ссесатсавоо ссізаосвс ссосзссовсова ацазстксза свое о тої хи» 133 «А» 1550 киїйУ НЕ й й к«аКМух Штучна посліДдшаВНІСтТьЬ «ВИ» АВтТИ-БАР СУНСЬ БОБНІ), ЕсеядніюЮгє ї3 «запЕДиНОЮ» «ак 133 завваїцеває касова сне срок соаает Кехаааоу стискати сассеКевос песо ТоТссКОВЕ кеонцНх сок азва зсссакиа затаесасо визнивІх ссрнзвока запвоих і155 звсссозкза азс сассатитес «зима азсу сосвацаасде сскУукасеко 240 сараекваМк спскесннк сонне асс сосок каєх астотоссай засос
Б
Чосваскексо всхасеним: весни асс си совосо сакссеасвє Барі чси
З чеккссчвася ЗЕВС себвассамо Засопасоває свекор сапаропає 2 піки осдєсє тастувакав сктсіксє сосозавсса зоецевуко ззазочкоцає
Б жи ести: шщненовсва споссаоаа сеозрозассо восвазцасаЗз свжющас
Бе сСтвзнацв 3
ВАЗІ ЕВ весествовНес мрнноаасвс состав сста зосвоазксоВ восени оса
БО хво вази сев сома пос сога фоассвв СЕБсвасОО спвеовзсішко асгавовосса свсстатесе «піка ссї сосстовм товка о
То псжіссЗічЕ спека ктеси сопсозевннцо звозаос зов сови
Зах и причин сХ сспташе свт своснювнє сказав вихсааКкоє тесвтовеся шив ФізвсаваиЗ вада сессввнмина нка
ГУ НИ Й Й Й Й Ії й 7 Й
МА зу всвивсс пуппоцесав сесоктеакс зссствсвос водастової Зажкуоває «м «Февкасвави зсамнускс свасазвацсх сусп Єсакковиава мс.
Ммео свашиснмив доесашсссов вовасцовова зчкєс еисковжх ссороочт ово скшщксваа аспвоесну сети сові сваво аск вки сни ВКо 1180 пепокоовнх звпадиосав рр азс звозасаї всваноєвс песлєКец
ХК)
НЕ скрдавстссеа асо соке секкстовто зоасазцетяа со зсза зеамаео
КЕ
ПНеТ В. звосптсЖтЄтс Віск ссок а ахцсатовов стекоасасав соевсевпалИ 132 «евавчачес фежссктокс ссср ада «а 34 «21їз о53 «від» ДНК и» пгтухиза висі думі ит хх лю 0 шЕУчВа оплат «Ах «23 Легвив ланцюг СОЛОНІ) дити каАвгоКнНіІЗ «М 354 пепасово Щщрвсссаціє ссср сере пеоав зиспіцоасаЗз пападсиасе ре сфе Часова зва стриж аєс боса геоадсвоавав сСтовнацв 515
РЖТ- ЯК ЗЕД песо сскссваася зстоавтсаїс Фран споВодссає сдасвткшєе зЗаїазаїткев Ффнноми стсцпвмаєс заскісвсси Кавсоєсатсво ссоостцоаз а Й піжпазозвої ссассцііа стаствивО свозУссвов факсорессок саппЕКое
ЗО савдоасвосся ааіоаава саанмває пт косвосса вабзєсстЕс патакікесї стофстсска зскссзавіс свстсмнив зЗсассос сісксааама соту зо свиїатстесс стпайсстох засавіотсс боззасннво пазсвсвово стотоавохо
ЯКО
«аїасМІвкс ссостотвої зба пессї здзассокаса зпсесіпазсвО стаз. 530 шин ссава сво ста сапсоказайс квовіжев всзкЗзааєсв сажа що васассвао паЗзвсовазах звтоаузаєсс зазтсктаЕ 53 «ВМ Іх5 «11х 450 «12 Вт тії» штучна послідовність «арх ле К их вкамімю пек ух кл я яко ул «хх х от «ВЙ3х вити КАВ УНСО СаБНІ, всоламив їз «зайаденоке «НІХ 135 піч Уві кій бемоівем сіц бек обіу 0іу бі сви уві Біб Бга б3іу бю
Баг овеоз аг фен его суб 18 вів его обі рве ТвровБе хек хат Ні
Ка 25 їй діа мек цого гр озаї ага біп аїв о Бго Зі муз бфу ги цім Тетроуд! 35 У 35
Хевгодів їі ТРроАїв жвК сі єТь сій Туг Туг АЇВ Аз бек оуді рух о 55 БО
Стоаница 813
РАТ-ЯВИ-КЕО
СТУ Ага вне тт їі пег Ак зЗа Ах Зак обу Ай ТНгогец туго ву
ТО їх що
Пій вжи бегогву Ако дів біз АВ ТНК о АЇв Уві туго туго сує лів їУуз пі їтпоі«а бік дз Ве два ТУг о тго пі Зіп Бі гне фіни хв З
У оїбУ Тр оз «В бім днк ква АБ ОТЖг ТК обБіЖ Бі оБРІУ Її оКЕш жі 100 КЕ ї130
Те ожві дес ет АТй Бек маї АЇа Афвокго жаб жві ве Хфв вве во 31: їз їж вго Зак Ав осів бів беморух Бвг сту Твк ові БЕгоУі Уа Сух рем їх їу5 14 іен Ах аз вне о тТук Вга Ага сів дів бух ма бів ТК оду УВІ Ах 145 о 155 150
Ачп Аїв овен бів 5еб щі дей Чет сі січ веб маї Тк оЄїВ сів АЮ» 155 МО ТЕ
Жвтгорж дра То Тут вт веви его аек о їйК ев твгозе) шве рух їв ї5У щю
Зі Ази Тут дім гже нів буз Щі туго дів Суз ім уві ТвВгоні діє
Віж зи ваг оваковго маії Тирогру» Заг вно дя» Аг Пі бів Сує Аза о ІЙ Кк зай й Й «Ії КУ КМ
БУ ТК ОМНі5 Те бух вко вго Сух Бго Аїа вро бін вів АїВ пі Бу - з Е У у 225 83 їх 30
Рго Заг маф Ва зви Ра Рго Бго фух кро бує АЗА Отак гу Мет х18 ах 250 235
ЗегоАго Те кро сін Уді ТВг обу Уві Ууді Ма др омаі чер Ні ДІЮ 250 205 7
АХ Бгто піша? фу Вре Ав о тТго Туг Уді Акор о щіу ма) січ УВІ Ні бле У А 7 с треб
ЖЕ «ВО же сСтваницв «14
РАТ- ЩО
АБп о Аїа вуз Тйг офух Бко ага бін бів бів тТук Ай Хек ТВт тує Аг а 5 Бе чув) Уві бег уві бен ВР ОУВІ ев НіЗ сів АБО тгроіец аа Бім був
КЕ зм ще Зо тів тук фже бу уз ні ет ай ж дія фец Бі Ав Бго тів сів
ЗЕ 3 зах 325 Б 155 іже ТВгоХхіе ше бух лів му Бі бів вга Ага сіб Рго бій Уві Сух 340 345 350
Твгосаев Бге Бгто) Зк дра дер піц ів тт обу два оБів Уві бе ке 35 БІ зах дет осСух АТа ма) фу бпіу Вів отук орга Зако АБ тів Аїа Уві ПРЕ Отгр за ЗТь ї50 піз Заг вза бі біп кто Бій аа АБ ої гук ТВ о ТйкК о вго Рго ха 3в5 ІЗ ЗО щЮ ін йжкрозег дв о біу ве о РБе вве ів Уа) его огфує ев о тТну хі АБо ща 315 ії пес Аг Тгте Фіз біб бі вза о маї рве Заг осуз Хвтгоуаі Мет ніх 28 425 за би АЇв їец нів Ап ОнНі тук о тнроОБіВв УЗ ве оїва чего зи бек овге сім ув мВ; «Ох 356 «вії 2 из тал «їй МК «КЗ» штучна посвзідовнЯсть «Ох «беЗ» йргкиВ павцют СУБОНІХ анитиеКАВ СІВНІ «ННІ» 136
Фім жів ма? бен о тВг дій бег Бгто О1у ТВгобеь бЗакобен о хак о Бгоу с1у ії х 18 15 стонница 215 вАТ-Я170-5БО піз ага від ївгобеанб ЗБК оСуУЗ Ага діа Зег бій бек о Уді Заг о Аго Заг о їх За туго каб вів тер отТжрожів щіп рух го біу бій АТ Бга Ага фен ес 35 Са З їТе їі Ф1у АТа лег тТВгоАга Аів тн бік жїів Бо А5б ако вве Баг ща Зх щк щіу Заг обі 5агошім тТВгоАЗВ вва твгб їз твгоОуів ек Ага бен сію п Й ших ТЕ й ЕН
М ме Тл 5
Рг; обіз ази Би ів Маї ТК отук був зійп збій азу сів омАР ів го 85 Зо 55 вгео те вне бік Бів о щіу ТВ рух Уві бі ТіК бує ЗР о5ак дів бе ий и чих 115
МАМІ мод Кк
ІВгоруУ5 с1у Рго Заг оУуді Ве РКО Мао дів Вго бек ет іх бек Тве і115 Ко 2 зак обіу бі їйг діа АЗв іди щіу Су фемоуді рух АВ тує Вр Бга 3 135 1 ій га уд те омаї бег Тероава аб 1у Ай рою їВго Зак о щіу май 14Х 150 Ж 155
НІЖ Тег о РБе Ре діа Уві Бец о бія пег зак бі рев отук Жвкоіни ХВ
Іа Кл ТУ
Зек о Уді Уві ТБг УВІ Бго Зак обагб Янроїви ЩІу ТВК Осій тТВК о Тук ЇЇ 158 1855 150
Суз Ахп Ма! АхВ ОМНіІЗ вух ВРО бер о Ави ТВРорузх жа) АБО вує Кух уд!
ЩІ Б о цім обвеу їу» ве о сСух ках дик страница 8 ват ЯІ ТО 5Еа «213» штучна пеклідваиність хе шк І «иа Моновернви ми а-1ВйБ стїчаЗА - СсМізеКсепавцює хх «вМметупоме «Нюх 337 вивовчачєєс стзваскову сескозвіає солесконВо ХК аВосх фев ох щі ри цнтє врелодіцоє ссвовжчно сФмтрвеса ассссссє зсестовкає 2 вису овснніНа саксооКе асавозсокс хо касае вас 150 зазлдваєтоз базис ай фссосоа састзсаа боже завше 240 вад) поочсовню аеских чес ссскоасатсї пиВвосотсто
Ки вивавоцстУ сере стас дескетцех салат ст асжис бопиавсхсе 360 звоазсссвов зовесосатЕ соезаїссва завопеЧосіоє зрсоЄєтатс гессшоесво вита масвлєтасй саспневри: асвассни зеопаоаса стопа чо писар сЗстоцвсся чЗексовозвокО зсспспевоав їжососпов песто
Янь о «кипхавакска жменю аоЗзктєсюва сзсоазаочах стос тваса сааоцацеско ще тссотцЕксс ссостчисксо сацоесан венесвусу пшоно спі сни щистоурсЯ аЗазстастх ссосоВкс зовсочеі ссідунанав спезавосссо ко вислкКеа пасасвисих ссспоеовка сбивоазачЕк стесскота твосстовоє
Я кан сов ссорбссККс твоасцсто зевсссваЗ сет сао сасвадссса Ясаченссва пзкчоаасово «афаозває комент повсваваєте
ЗО касами сассчкксс ще асстава ско мнІа Часова СЕКС
БЕН сисссвазвс сСеамнвеас сстсвечатє ксссечвсхо сосни евс зок
МИНЕ стран 21?
ВАТ ЯЩУК засво а Зевса щню ссстувуко веде саах самка са уа зинаїгавів сова ава шокова Ззвасанасв всвисасака соска
Ба васоссскса ссоссстоса себавувств стозакдся вфовотаєва дезснвоако 1800 шсгавсвн «соки ссесатсзач зазассвест сеааенєсва адаусоє і855 срацавссає зобі твсвс секассссса фоссоозо васлонссаа азс
ВУ
320 шасі зон ав вози стакх сспеазсзата хооспоасоза зсозовават і ММК ЗУ Мем ке ке Из дак Аа 1350 заташщевоє с«вренасав скасовано всфсстсксоо бостваєке соВосвоскоє іо
МЕСЕЕсотх зереВаєВ сассцвме ажресаух сосвосводе звасстке 500 кевтдскскоа присжкасцюв озсжтсокозсас зассзвотаєв сосавовеню «сс ссс 1550 хетесоока аа 57 ке жНК «ВВ 138 «ак» (485 «2125 ДЕК й «135 штучна пеоглідОВНіІСсТЬ ка» дДимервнви Ву Я-ЦНН г т10Я ех вазчвинврє свита посох сонне ств сх зодоєацчає щи зкркттасес саесКвин сс стостзаїсо атом ес зкостоакає 120 жикааскжі ати ствксоаста всмнчнкс тавзцстасах звазоасвеяе зажив цю пизиКсав зЗоассо каса с сісвасі мас а аЗзачецатох сСедостчнр вики ех пік спе ФВ ще страница 515 вАТ-Я ра візватска стос тоає дасксторюв стає ністваескис мрсовасТсо
ЗО зацосссозЗ зезоаєчентк кеахтЕсва зФрвевстає басвсстак мнкооесво 49 ви зцостдодве сасвжскаєв свовдефс веруєтачвє всофсстеюса осконозу
ЯМ. 450 вшизсмназ их зсссвова всссссоаЗа кессвоассВа сота ссваоваосо вапвиею сазахстнє зосзовоаває сквазаомаюа всссоавеста хх
ТК тссссіонсд піс стос їозаї січною база сопосіука во
Ослсндавто зостеєтваає сувсоувск сп реа є астсвасоє вофоскваєя ев
А завіс треокороЗо зстиеєтає вами самеесвеєх паковуауєі 25О зазуєсєтезоо іїтассвкеє Фет кїсво сіцоввкваа ФккНижни засво що і своцак статті стосвї сбдпвоаскає КСО КОКОС
СНІ й Й Ї Й скоса сіо) скоса сках завосстасса сег кска зсевеостну вес
Фа їссдацекес шміуаеюсєх осжасвлсєка вососсоаає засоєству векосвтску
КУ какасісваєсюв стасаестов одсвтасттов своєтаєчєтео аодососває проста
ІННО акижК «ЕЕ КОасноєтиаа ФВЕспЄтТасс завосмКеаа пссстапатс задане щ.43О5
ПЕН ТоСо пецнкиюю зсстсоталсе зіпоєтцеве свЕсСецтсКе сажсткеско
КК
«едкстоЗаїс савоаскааа асстоезЗавсх поспіх гтакасехт заасаасеє лабо хкахксксаоІ здиссавеак зовастеоаво Зірок авсв ссстссваїє оба ли : 5 Ех ве
МУ свинини р гсасаовоса буасазсаау увсвокасєсю асерсссеюо савесасссто
МАВ Й лики ж твазса звосвьста сСоззавасеє зав сів сскемнри свиссвкесні
Б Ки й т- и їх страница 815 вАточІі РО УО жив сусскеатстас вавомекжієс авсмкиюа мах «210» 3 «ВЕ» РІВ хаїй» ВК «213: Штучна пеислідовність ку са» . за чих вич «Фй3х мМономерний Ми 4-3 ЄРІеИЗаю я СувевЕейснцЕ З «виступом» «КН» 595 ага віз іу вго Зім ем о жхег вка Ази ази о Бго іа бі бе ївв дю ї 5 І 13 івм ага бій біу Мек Рйе аіз Бій іван уд! АЇВ йіп дей Уві Бвц о бец й ле г Ка р ОХ ха їів ав обі Вгоофен бек отТго Тук фак Аяр о Бго Оу ев АЇв Бі м! 430 ах шегоЕйн ТБКОшіу ПІЖ Без пе Жжб бує ЗіБ Аза тТвК вуз Фім вем уві
З 5 5 чі аа бух АТа бі ді Тук тує Ма Ве ве шій іли Фів фо Ага
ВУ КЕ 75 щі зга УВі Уді Аіва бі бів бі ве сіу 5еб уві шеє фац оАта веб НІЄ
В що З5 іт) бів Бго їжу Ага дет Аїа та сіу АТ Аа АВ ав АТВ ОБЕм ОТВг що о їх
Уві Авроівм РгО Ро АТ Бек вок Бій А Ага Ах Бак АВ ве Ту
МК 155 1755
Бве обі 01 АгО Бебвовеов ні бен обег АЇВ о БіУ вів Ага фвз ОРу тд!
А 315 35
Мі: Бен нів твгобів діз ака оаїв Аг мі аіва тропів без тйкКобів 135 15 І55 18 пі АТ Тнг УНІ іш одіу без вне ага УВІ ТВг орг ії ї16 го дів сптрамица Я
ВАТ-ЯЛУО- БК І
МЕ ІТ 355 пі фен вес век о вго Агар Звк бів о шіу шіу 21у біу Бегб вію вію у ік 155 130
ФіУу Зек о дго щі щЩіу Кг обін фев бек орго АзЗр ОА Рг АТа піу ем їх КЕ ОВ вв оажхв о їев Аг бів сі меж Ре діа цій без УВР Аза бів Аха ма 213 Й повне ру 23 ах ки ієм фей її дер о шіу Бго бен оЗек тт) о тук зер одар го піу фев аїц але лю ЗК а ше -М «Ох ге пі Ууді бЗегогев ТвгоЄб1іУу ЖІіу ем обеє тек рух сів Аза ТНК куб бів 245 25 5 іжи а Уа дів їж ав дію уді Тукоїук ді Бе Бе фіз івз СТ іегци Ага ага Уа) Уві Ан обі зів бі Зк сі Хег о Уді Заг оїгу Ві
ТОВ, з ї зх
Кк Мох ху мепонів сан бів го зец одго бек дій лій Сіу АТ АЇВ АВ їм ЇВ го З КК) ім твпРожаї дер Ювм о Рго Бго АЇн БОГ оБеє бі АТа Ага Ап вк дів
Бра сі вНа сій біу агарі ів ні рзо Заг А!В о БіУ бій дго ів те ль 735
ЛЯ ХМ А піу уві ніш Бецо ні Жйг бів АЗв Аго АЇВв Аг мі діа тво обі Яви
За 355 З50
Твгобіп біу ів тТвгоУДі без о3іу в; Не дго уві ТВгоКко Б: 31в зх чих ам
БА 35 ЗУ ко аїа Бі веробго Бет вго ака его біз Оу біт бік ші Звкосіу
З? БЕ зкО су бі шіу ек АТа бег ТВгорує піу Рко Заг уд! ВНе его сец Аа
Стивница хо.
вАтТ-ЧА70БЕО 355 ю Бе ой
Бізромек заг обу бжк ТВ бдег 5іу біу ївйгойаівз Ав обжм о щіу Ск ви зх зі 415 чві піз йбр ої Ре го ів Вгеа уві тТвВг Ома) дет Зсв вм Зак обі 420 ЧЕ ща ліз каз твк озек су ді ні ТВР РВЕ РРО АВ Ома їжи ЧР Чет вот 435 440 ах
ОіУу ви Турко бек їз зв Бек омаф ма ТТ Уві Бго бЗег о Заг Зеров 5 зако шіу тТнкобів тек Тує хі Сух яза уві аа Ні вуз вто Хе аби Те я65 З аАТУ БЕ іїук МВЇ Аз оп Бе Уві ів ге груз БК осСжЗ АйвВ обу ТРОНІ Тир
І Зк а 355 сСух Бгто Бго Суб Бго діа вто січ аїа АТ бу Бі вто Зварні Бе
Б щи З ім Ре ЕКО бро фу Рго іуУую АБО ТВК їв; Меї Ж15 Зеу АБш ОТВг вгО
ЗЕ5 зл 525 бін уві твк о сСух Уві мі заї Ав ма Заеб Мі ЩІ АВ Бу бін У!
КА 525 ЗА
Ук Ре аа терожтук МА Ажродіу ма дз; маї ЯЗ Аа дів дув ТЕГ 545 КН 535 ЗВО зу Бго» Ага пів зів шій ТУ АЗи Злт ЗВе о Тук ато ат маї бета 555 5 Ух
СемотБг ота! фер ові шій аАБроїгроїее Аа Оу Бу бів ТК ку Сух мк УВІ аб Аза бух АЇв їв бік Аїв Его фіз бід ім ТВг о їіє Зак ціх ші щи їх тром сл бух від ву Фіу Біп о Бго Ага Єв вго бів жа ТБ ТР офен Бгто Вго
Сни и ват. ау Ео
СЕЗ АБФфОанрОШІВ івч ївгокуб дзп бів ма? Зк оцез тТгвоСуз ія ді пе а5о 535 М уз Бі Вів отук Кгео зве о двроїш1е Аїа ові піц тий бін бек дев Біу ца5 хо 555 дій вко «ім дай аа тТуУБ вБуй ТВг отак о Бго вго Уві ген аз Заг Аз ва Зх 570 пі Зак Ве БВйєе їі Тук его рух дви ТВг ода АЗрогуз ек Ага тра
БУХ БО ВХ
Зі бів ш1у дп Уві рве Зекобуб Зекомаї меб мі пів Аїа вен Ні
Ба 55 кю зповнів Тур ТАК ОБів уз бек рим ет Бенц его Ву обі кув тО5 го ТІ «Ох ЗО «Ії Я «кій» БЕТ | й «ВІЛ» оштУЧНІЯ посяздОВНіЯсть
УНхи «ФАЇ» дямернмй ви 4-8 СР сь «ЗО» ВНІ
Ага дія Фі вке січ фен обеговго вхо Ах оБго дів о хіу фецоівм АБ
А 5 10 15 ев Акад віп бі мех Бе АЇа ів се) ні дів ій Акп уді ву ем
ЖТе АЕВОФІіх ВгО фам оХиг о ТкроТУє Ше Ар ВРО Бі фев А)ів бік У
ЗВ ях вегоіви Тк осіу су бец бек о тук Був бів ах ТР окуУЗ бів іви хв з0 5 ща
Маї Аз куз із бі чаї тує туго уаі це вне Фів» рем піц емо Ага
Б то У КЗ
Ктодница 2 вдіеа370-Зка дге жаї мі А1в іх біб Біу Зекошіх Мегома)! дег фен Аїда рев нів я що Зк сво бів бе офоев зго зЗагоАів дій спіу Аа АТа ві ев лів без те 18 185 й ві ар оівц го Его Аїа бек обеко біз 3із Атброажи Хек дія квесту вне обів Бі агро обжу їм оніх ім о шег дія піу Біб Ага вен сту хв 0 їх 148 нія івч Мміз тбг сіб аій аго Аів Ага ні дів Тр шій фец тве осі 145 150 ї55 150 зі віз їйг о маї без Бі дей Ка Ага УВІ ТВ орг бів ів его АВ. 31655 179 і75 піу ви вро Зак ого дгу Бег біз біу Біу біу БІ Зк сію сту сіу іо 185 ї190 піж бет ака ОТ ОРУу Рг бів рез ЗароРго Ар одяровго лій Ох Цец ізх 20 «05 ів; ар мвц АгО БІВ о Біу меї ВН Аа сів рем уві дів Бій о АЖпа Ук 215 15 33
ЦК че І о іжю їжи ї16 АЖВОФІТУ ко ібц де ТрЕ У пет Аза о Бго іу іжн дів
ВІ Й сда Й хх 7 КИ поши яко Хв ес
Сі мві ето фац тв іу ФТУ рез оБек туг руб 1 АЮ ТНК Суб Фі 25 155 іец уві УЗі Аїа фу Аїа біу маї Туг Жуг ма? Бе Ва сій фев ості ак 5 зах
А «Та йо іви Ага Ага ма) Уві аїй пі біз біу его біж деко оці Заг сец АТа їм ніх во сій Бго рев йга бегодіз 18 БУ дій АЇа Аа фец Аа ка ж М
Страница 874
ВАТА АТО рез ТЕ о УВІ Ахр ої ВгРО ВР Ав чего Заг ін із Яга Аза о хетг Аїд 305 їй хо 2 сне Фі вБе цій Фі ака бе о бев нія рев бек А1в і ціп Ага ем ах з5ха 335 іх уві нія рев онів ТР оОЗій АЇа АГЯ Аа АгГО ОНія АТ тТктВ обів ев о Ах 3ща
Твгеосіа Ф1х АТа тнго уві вен обі ев обве Ат а тт кто сту ті
МО ЗБ газ Аіз іс ів бо хто йга йга кот ші сі бі біб пі З5ар бі
Кгп АР бу баз ото ЗБгоКга дгЯ жЖет Фі очі біУу Обі біж уро еу 370 КУБ БО пу сіу «1у его Ага тТвВК Уві ліз віз Рко баг ма! Бе 18 вне го
Зк за 315 НюЮ вгО БагоАЗО аАго був фер овгуї Зек осі ТНК АТа хвг Уві Уві Сув фев
Бе що 415 іср Ав Аа че Тугк ГО АКУ січ Аїд ух 58) Фів тр оїув Уді Ар яко ад АЗО ази Аїа івц сій Жає ОіУу Аза заг Бій біб баг жа? твР обі 1 АБО 535 45 445
Баг ої Ар ожег ТвготугК бегобев баб баг ТР ОБжи ТВгоіїви Чек рух діз аз туго біц цу ніз бух УЩї тТуг Аїд сСхув бів та? ТВг ніх сій
З Яга 25 БО бік мею Зек бек рто Уа! ТНК уз Бак вне Аа Ага С1У Ом Су ак5 а БИ «2103 І «ії» гава «ків ДНК «і3х шШттУуч«ва посвідовність «ХО» «ВаЯ» АНТИ КАВ ГоВМІ», Есепамиця їх «зайпадиноюи», Зпилти З
Страница й вжт-а1703- ЖК димерчим в я ЩнВ СУ «м» 341 двазісж касозанахо сеча соска степова колемнавит ща кпк секс пасом кесосасВ сте ссрЄ сопрааВасх їй сиве азачз зссеоавах саке акне сецдловоуєа засо ї50 цпастстетЗа вщоскч сассакскес снрмикоаасе ссазчансво сс «я свувкзався ссср янинраєкио зов Вої восїафссав укусу нН шоікавсетсоя астастузо всжесвовсоє соч ксвоско мопс пп асосвав фас свВ Же сюх оопосссдвс звсвазанов ссозосачеов каса Єк со: І сицки с тачосвавев скасваснеєє зазсссязкаа сопе зва а
Ем Х ссрасска паж тєсто зсос ес Вова сков пох атад
Бе схващкавео са свої десоктстває восскезека ссосвівиста свисюсває
ОК шазвассвсов вакесева свмесовацваєо скзазавоз гезасспав зазсбеєав
БО ваветтсака сеїовсвох дкосссаеся сскдаиоєте свомвнраєє збсвокскеє вки птшікссксо сазавссова пдасвссскс ває позвссостов засос
ТО піч всакавоапов созадассст заооксваче озна сховає я жшфічоаоукає аїзакаєсва свсаажмксВ сучасна єс заквсвасна сасвкасооє
ВА ривиснюа сссгтсассек сстдодссао Зассзостав звімроаводе вовсвавтє зва аавочакстсяа зпщажассиї сефнинисє віббнцезаа ссаїстссна зропанацод
Мо садссссаво вассвсвек Зірсасскте сссссатесє фупратеавкк дабсааоаає 1050 стванница 228 вжт- я -5КО сафіисвасс фсесякасос зпісавазоає кіЄтнЕсска епвсвксовс сова)
То царина засвоссоов чеесваасеас явне сасес пісссОт фе кссаВе задо І шстсскс сотої оа снаЗскеВвсс Феркваца доза єЗаєа зсводооаає оТ50
Та ші ткає зсссцеовх псасравчих сецпаставс всеїасвВеовВ пав їз іст їстос срака соусах довуаарая чассокаваза Фоасохлеме і сгтовосскоо акааїксти фаза то засокасаос моЧчасєви остео 1445 зим ссвоав зсопіпстцск заксааєнвко сссиатисх основ хесіЗавсха
МУНюЮ пижмо сво ВвовВаВ) сеЗзпстовас стаказазазо аспссвааза асо са 550 цесвезцеєст осатотвеа сасостсткє своєтсчаає сосок ово 1555 авчажскеа чптитоакоке фс сао состава соска
Зстосвотє таосовотове закоЗакске сстсстассв осессамиє сспахацє се ве ь 1 певтттвшщї схсзаоцеавз стос сеціІстосо опссовувоцсї зу тасак
МОЮ сивасвсає жнисвозасє базасвсвої Меса свпаЗаВеєс пвовотос 18 стрес зференкекк свое сса зссист ство свав васоан їзбо
Фа ааак ссасаас ав водаетстаца задоуваєссо встає ос суасажиев
ІЗ зесачасеє їЧчаВстово асеснеака жкеЗссс соте За
Кр ї - З з НУ З Уч Кя
ЕС
«кір ва енностя рані скопіаекеє часссае Кома н пес тааи 2100 чачовсеє сехасавазя зоатасаваа вавсцювм гоадстааазє Бвезвіоках тво шо тах: тс їооав воценничн зго пУшненїе вовасссоєо стрази ся
БАТ-ЯТУ0-БЕВ з
КК
Кесевммнте сс сїасвВ во Бора «винна єЄ висо витати: Мр асивес стосщнеа зпсаонвасєв сок ісо зікспавоцв
І совіти ВІКСЩНКає сно сіодовотос зестосвево товаоссвов да зЗесчюката ства ст зДсжсжним зсавохацає фрак гос аа «ссізацвтке спон аєх зспвавооєії вовка 495 шт «йі0г 145 «ваї МИ? «ее не Й «гійх штжЗНна пеаспіДдоВНе ее «ЕЕ» днти-вАВ СОБІ), Бон З «фастУуИМе, ЗВИТВИ З маномернюв Ви Я Цв КР-и5Я «ММ 142 зааасоаєгос сосна срмненноюше стодічсевас серовВіє тегозожто о костцееКо писк соски ос фссСоянса кекссклоВЕ ссасааН
МО чЕчасвав зссрвавн звівілс іі ннвя «низин зма яке Е УС КНЕ З 5
Ії часта Ваш соачЕК свого созовосвНся сезацавово семакаеку
КУ х іх В З іє з о сеанс ссстоє сової осо квек часте масоав посі о о пика вствсїщнве аснинивсс стві свмссо кекс азозЄ квонєво
Б аЕкссвиса сук сжск опали песня сс ю асан
Я сІдорестоакс срвесмннва скаєжкоссс зазссовіае соц даасісводє 48 і щегсоматсов пса сасскесссЯ засос скає засо ЗСЕСКасс
Ки й ютер Я бЗвренк зсссессвас засни еєв сбововсств саісцваве птраница ЗЯВ вАт-ФТУ0- КО вис качаксмиа емссвесова своссемира Засзваовааа стає Вже зазваєтсвсвя саїцдсновос зквессвися пебоелацеку свопознвес зісвасЕе а у пЕсЕзксюкє сазєаасоосва поасаскеко аковкекеке писок своє казка асосчазссв сова паоксвавк козвежоачех сука
ВНІ мат ос аказчізвс пав дасозаавска смвнмецчазс апізсвасна) свсреаспУє
ЗЕ чедоїтсака кестсаєсаи соекосассво оаскзаскавз вкозсавцЯа зас наВКає
КЕ взаюисїста всававскої «сенс вісовававнае сенієттсва аасоаюв
Того . пивосваз васововоЗУ псасвссеске скоспеосяов нм зассвазаво і105О «аввчЕчЕсИс Ба цс дого Є асксся совок са Чув їмо зЗавозводкаве дспоаасккаа двесвистаєс ваувскаєск кокс вє позсвокове 1-х пчстазсктиж бисеУкаєкєо саевастеноє пзрнеозваза честі оуєа осазудсває
КЗ чІчтсасх дсвосотовк псзвснаваєс схоепаєсавск зстасастссв занасссоку
ТО І І васстовукс сеоцрсооаок) ссоаває зожоаацюа чаєсвчаца рес оав і5кО ши зтвраксижос топос та зассБвавює здо ктасісвОса
Та) пПеоюусссвий всЯкассвох сахсоааее сссокекссю зсінвсвоєоув коса о
ММю жене свстзасвча «созсстовує сапбмежедоя асассвевох ато їзой зссазачссв встав спе е сват КеониНмНнух час певазааЕсха зії сстрессств саксовєвеє стехоавивав соска сКє
ЩОКИ Й Й стваница РІЗ пат ЯР -5КО щотУусннс тоусескаяс вотозвістеа ссесстаскз пшохсковаає сосна каче чаї ктоцаЕ срсещесву пстщєтасво сс зпсваЧасе знеукесях 1805 кпрсасасво зооссвечос тачасасєвсс врюавеєкоаз сасвнває касазідска 155 звчстактса заахавссся семи еєсся дсп сттокссвао азвосоева іі; «Ох 4345 «Лі» БИ «й17з УК й «Я» щтжУнВ ВОосАЗдОоВнНіста «ТТ
ЖАЄ кю г м « с «23» Мововерний Ми 8-І1ВвЕ ТР) ав Сх «Ж 345 вмимнини седвоєтава сбосавіває ссєцеказво каєбеавасєт финмвоц ар тідкке азсказмнни єсачдаацоа сезсааЯксо вн жексоя зсесвцкає
Ти висвижсФо звсмнииїша сзбвієаско зов птаащикасва нм мвсє і35 звапавстоВв оз сва зуссдзсеакоЯ свохастеаках зпіжісацоє завассие ем вувати ссзуооннІ атсіеекесх засос сосхосажеЕ зсвоксоа
Б виемечи ство тає зобтсіиа сковсовахо) влотасстеє соповасісх
Бо шевческода абаасоовії фаду кесва Запас посвестекс мртозссад а 12 заустннмюе сусатстока сасадаєєє афюстацає всосстовса декоасвсву ще тасаЗ щасковчисх зкОсваВно зоссоссвауа зікссаво Коен 5420 педзузася але сааакекеаЄ всозічасоа свссвтокУк секс
МЕ юкотссасксотоа асвузації завеїсїнн вокхЗксхстоа тіотНїЗесЕ зстоззіває щі кЕсЕНЕсСсса дадацУуюсва збоїв ваду а зспссетесса вЕсоЗатаве стванячца 230
АТОМА ЧЕО зи :
Та їсєсводава зсуєсвсвоа дезодасавс вадуасаюєв сстасноєсх садсвоєаєє ве : :
ЩО сіовсасіЗа зсазавсвов стасовозаз сасазвазтех заероєтасоа жука есах. кад й 4 «вик стаа дстсодсссох сасачацазє бковасаюсоі пеезкаї вв ям «ий з «зр ВІВ «ай» днк «йЇУ» Втучна послідовність «АЙ Щ «Й» іАнти-кАВ ОТЯВМІІ- во-яЗнвиК за «звпадемовке «а» 344 звайтвсвас састопцваїє сере: стане скуренан: зт овоаВоТИ
Й
БО тсстосрека си пваеке свесжЕсЕсо їссововоса КуКоКаюи соска. 125 сосни азаз зсосм печін зі спас в ел тасосе застствкоа желе свеспатоксс ссвовеаск ссвававсво сскукВсску зай Е «о свавтравеї сестоствє севовасасєс зссптаМие астанроаз пса єти ря о СН ке посавствсо астзачнню асамривоес стос вок таксопеацсос касасаваа
Щ6о зазлсїдлосо Косжеессск соусссссапе освоїв сабо васвосеоке і о ах 330 го сівостоєх хофідавоца скасткіссо увусссвив сеобсссто заастетоце
ЗИ поїісіовсва Фета свестітлов зокоїоскає авось сок ЕАсТеої. стозасгазсо ссотовсат зсссзосвВос тостстюєв сссвавсятв саїстцсаає хх що шфЧвщнсвсв весеєва касова о зов праска саше ас
Би ощсзрарозо Часстроєюю куажруаксс равосаєтає мртозваєс емкювоє
С Є ще Наче КИ КОХ АН
Я й сптоаняця ХЕ
АТЗ МК
«сід свас сиКихе кожно боса ссфеснї сві соска саїссхпЗа ссозсВвоазех ссснизамеаксіоават паакосвек. ас ниКсх ссзоалоавсоВ Зізвстасоєс пвотсїоіцв адорехНК саспаАкеКоє
ХХ КН З и ; ї й созововаєх ссашвмас сствівосМа сазатовах сспіовези соадовесває во пссоакциветї зсїососсав зеастоасто оосвавсстоЗ ассвесоФфнь асмнюесняєє 1052 січвісаесса срссзасеє харсвссаво сдссосетеєу ах скКсох ксессно 1050 зваззавцса своє сво сЗсї стос тапссавмнм саке що завасссоваа ссякакссто савевоєдай Зссстайссе ссфгоаммаА сасЄфкс їм
Ффсонщстос воаажестою сстоквтвоє стаємо суфесассек есте 1950 заст ссошнсів сацізсавс чіовассвса дасстопвасва своя 1375 дфесвацав мрфуавеоссва фаФотосоає аааастснев сакдпєсасє виресвоєв 1350 «ссроазачста сонне асс пісвоїККес сестро сс сзавасссая заасвсссе 140 зівассксто зцаєскскча ясісвсвкє сіозіоае астоавосса свававВссх 1500 ззоазісавзє ковастаата сзтдЗаєовс зав кУує зтваїЗссав асаваесу їч50 сззазинвязс воасасваєаз сасоснссакх чітко фессовоеН ссщсвесао 152 дветоЗстех зедесавоюа зхасвацєє захмсессв зсвавцєсск срросесеє ексозаззаза ссвістссаЗ Фдссвааво сауєсссвна вассас якасВсссо їі посипте озима сї ессвловає саозкее Кеитеціасво авпозаааоє їі хкстакскси Зсзасаксос сопе Зо сачосазко оппазссзоаа здазоваєеве
Страмаца хх
БАТЬКО
ЗБ авовссзсвс сссвтВ два вес сіКсх сетер ово Кавятевох ізо знвасазвцв кана зсводозаве есе ксопкає датосвеаї чсасоавадех ко сивдевсвасс зсвсвозса зазнає шоссе од вав.
ВОК
«а» 145 хаїів ЯБй «вій ВЕЖ «13 щрУЧНА песлідОВнНасТть «КЗ» фідмумеКкАВ СНІ, Ес-йанцюОг їЗ «заладеМНОВ «НЕ 145
Пімоуві ів рем рем січ бекоБі БІУ Бі ей хі сік рго біт о1у х : Й з ЗЕ
А їх жк ЧА баг огев Ага Боб Заг су АТ АЇа его піу РБе тТвгоББе жк Зет НІ5 зо 23 ха дів мех зегкотгр УВІ Ага ів Аіа вв бі груз Біу жа січ тгроуді 3 3 я дек Аїа ЇїЗіе тер оАїа бек обі бів бів тук Тух дів авроБВг УВІ) ух ща 35 ца сОіу ага рве твг о їіїв 5ег Ага Ар Аа щетг о іух Ази ОТВРг орав тк Ме та З 5 бЗів меє Аа Заг орав ага дів піч дер ТВг о Аів УВІ Тук о тук сСуз дід 85 Зо 5 бух сі тТкроївч Сі яза Бе Ажю тує о Тго обі піп Ффіу ТвК о геу Уві 1015 це
Твгоуда) бег обег дів авготвг оту зіу зго бак уві бе рко вен АЇ 115 і-й ага
Бгто 5акоЗак Був Зак тНг бро Фу «фу ТВ Аїд вія Бер обпіу дух ва 135 135 і48 ствиница 213
ВАТА
Уді губ Аза отук Біне бтзз Щіц го ув) тТвкоУуді дек оїтюв дев Бак оФіу дід іви тк окшк сі Уві Ні ЖВгоРве бе вів уд гемо іа ет яек 155 170 Тх іх вав тує бегоїев Заг обжг о миі Уві ТВтоузі Бко Зего5ер зв ої їх 355 Б сі тато бів твк тує 1 суб база о Маї Ах Ні» вуз вБго Бе о яхА ТВг 135 Яну Ка муч ма) азів ій маї біз БгО уз Зшк Су Ав обіу біу піх бу
Зне ші сі бі «зу Бег Фіц уа) бів фено оваь зів бек су Ту ТУ 225 23О 235 КТ іс уві сіб вге о біу біт Заг оце Ага ів да? Сх ІВ АН Зак Бу 2345 А зх
Бе тйговвВе Зак обаг НІ Аїд Меї зв Тр оУмВві Ага бів АзВ о вгО ФТХ зей ЗК Щ ха Й
М Ми км іуз шіу і бін Тгрові Зег ді Хі Тко віза бак обі Фім сів тег 275 ФВ «85 тек іа Ар Жак ожві уз Біу Аг рве ТР ої Зак Ага Аз Ай Ов я 235 ЗО іже ази ТВгофен о тук ваз бій Меї Ап обег їви аго АЇВ бів Аа ТК
За 310 315 зха
Ав Уа! ТУрг тТуг уз Аїд цу СІ1У Тгвоівц 01у Ай Ре Ахр о тук Тгр
КЕ фу 13
КУ З І
Зі дій бі тТвВгоїжи Уді ТВ уві чЧеб Зек дів Зак отр оіуз Шіу РКО 340 За ЗМ; баг оУді Ба вро рев дід БК аег баг фу Зв те Зв обіу Бі ТВ страница 254 вдтеяфтО-еКО
Аа АТа іви Фі Сук Бен удї бу АВ отТук вна РГО біб вко Уві тв
ЗУ 375 за
У Ка я сто щих и хх же де У я ма мод ств о йва) тем чі Баг ттр Ах Заг охжіМ дій грвм о ївтТ о меЄ бі УР оВЗБ Та На ВгО 185 КН З щю ав Жжаі іч сій бек чек бі вен отТук бак оба) бжтгожит уві Уві тв щу 10 ЗІй чаї вх зак озаго5вгоівм о щі тТВг о пій твР тує Зв сСуз Ап Ха АЙ
ЩО ах 43а 8 ще 3
Ні ж Бго Ха дай їВгоїув Уа о АКвоїуз вуз ді сФіц Вго бух Бе 435 345 ча пу ази Мк ТвгоМія тнк Суб го Бго Су го Аза Бк Бі Аїв їз
Я 35 Бо шіу ШІу бгО 5жеб ома)| ВВЕ рем БВвовко Бе вує ВО фу ачр о ТВг ву ч5х та За ЗВО
Мяк хів ба Аг їВгоРго бів ма? тТвг обу У! ма Узі АВроУВі беб 3 45 аа
Ні біз Або вка бів Уа вуз ЕБо дев ТгроТеК Уа аз обі УІ вів мк 505 а маі міх дп Ав вуз ТВгогух Вго Яга біб бін бій Тур Ай баб о тТКе 515 520 ЗхВ тжг Ага ха охаї хек ові гру ТВг ов! гец ні Біб Ахротгр ву дай 53 135 Ки
ПФУ БЖ ФІ ТУР Бу Суб іх Уві его оазп фу АЇа ів) «Ту АїВ рго 145 250 353 ЗБ) хі січ фе Тв жів бекоку5 АЇВ му Бі ів Ве Аго біц Бгз бів
Маї Суб ТВР оре о Вічр орг Зегодга дер омім бе ТВ бує Аа бів Ма!
ЗВО 585 За страница Ух рАТ-ЯМИООКЕ заг офжи его сСув Аза УВі бж5 сО1у ВБе тує Бк бог азр тів АЇВ хв ім тер обі 5вгб дк шіх бів Бе біб Аа Аж туго вув ТВРОТВЕ РКО 3 515 БВ
Рг таі гли аАзв оЗаг ах оміж его овНе вне обем уві Бекогбує ев тт
БІ НК БІ й заф Ар овуз Заг о дгФ тт бів Зів Оіу деп оУщі вне Заг осух бег уд! пах з ВІ меж ніх пів ліз рев ніз ди нНіз Тум ТВ шій фух Зего фев еко овев
БО йо БУВ
ЗвгобВга Бі Ку
БТ хеМр аб «гії З «2ї2з ДНК о «13» оптучна посяздюовність иа Що «йеЗм Диверний Ми 3-18. 711-834) - антвеКАР Сус), КЕс-яанНюК З «ВИСТУПОМ «НН Ід ааозоювсє птвазсточао ссессодаковк ссопеста зокізовисї зсазсЗоЗас
НЯ зкакІтасЄс ас ссаоаасвя стасічаКК акне Ясон і20 жрватссів дастчскае соабаксовсто асан ми тасаз возвозасаєс зазвзавастза суацюссав озссзЗсЗко касевсзивї тсотесоаасх сового 250 | І і зувотозтзе ссбозвсачаов васссовсксї ера сеопівсако Зевса
Б ззазасжта стоЗсчсте всестоозса скзавовчю втсвзссск писВвцсцес
КМ
«ВАХ. завсссзоуз зказсчквії Єевитісва засвоастоС тасасеотак тоссцосеао 320 страница о ватечі190-5ЕО вика насе самим є заозстнвє асзпоцюсв зсіЗасасау фрак авсвоа ср зчетсанаото вссспсоаяа КЕссВцесО са сЕ ссзвоаваси заочстнивв сутки фе скаозовача всссоааску
МО
Кессскавса піссвесе чихОещнм схов пазтаісоє ссвостка
ВО детсацевко ївскКтва соведевисх соска аск аооЗссося
Чака савсснво встає кас важоаацчака сававовасе зако
ТК застав батасеакує зі ЕивВо стола сс а зас я часссвлахх стат ссек сс ска сс Срна «и й І й
АТХ факси ско сКУх овес са сс с са чани сво дааМаасВк
ВІ хеслочвексс насдасасск ссосвиста мли содає вес век 1025 «актова ссовоавассся засахасесюв савсомес заоч секасковов
Мо стзЕтсТсКОо ховсвсекяя заксскскосс засів дспстацаїс нище їм азадоткося щи чннивю акепламнвиа свчустміце аабссвч возом «БУК свасст Фавликканн Є иски почи соска се сассхх шесстосое шесВірКсї Фодессовсв Застсстезс аванс аашааєїс соссасоа 1320 ясстсося весвостя сзссяаи зн ех зак своссах пн ї18а ванптесваца абаДссекоатв ссісааз застесстцс мкс квссаскоо їаго їастасівса сезаЗазска зстофсая срезвстВсх пзоуссВОчч свсосіов 1500 чесна свз ск азсо: зосбсзсса стос ххВ КС КсссВоОЄ парках
Сливницв 217
ВАТА ЯКО
Вмюинмнм спвчснкчн сеазсевкоч парпсокоасїтов дкЕавсенека Спок 18521 дссавоо тає жревнви ззЗасавівск спосвоавоко ссвхска Фааанациа зсспзазсвУд вовосавоза стсосвоскво рокта Ууса пассскаВс селосва
Я жваєстасо зоавосвсва заатасаєє спозазвчц сссвоссавов сстостам: 1800 посжзсоасса асвостівова спосо ссовсваце ссбаєатсте костпоятою і850 сетассссто вас созсссни цес фесксксвия осока ове ї9583 ков ассствта кеазсео «кставазів восрсвкоО Чака ЯКЕ 1550 цассстваей іїзвазкксяа бив асзій сапоассвтооа зазсвкНсва тассеавоаВук ча ансвов мнрвавсвУсєа свасадевио асо саосоїесе сао 2100 сасспоецаєст оасканаєв смнмнує «вої цсеваца Тек свав все сое щі чисекиакоВ звоаваєсви сіссмини: аа соскововасс вовка 222 вссстеасссс саїцеєуВ товсте нс вва теза зако заазасекек весссвлеса світа пз асан зссоЗазАне ої ват жавча «есвовсікес состав тест соте стасадк аа
ВК пттеассвіца всжезавоасяв зона євеа почне песо св аеа
А звазсксмв асаассвВоста слсзсвцана ві сєтесс са сієсщО їаза з3Я Же «В х 147 «г4їх хі «312» ДНК «Їй шщтуУуЧчЧНА ПОСЛІДОВНІСТЬ страница 258
ВАТ Я БИК
«З ев «АЇ» Мономерний Бе Я-іВБЬ СТІ ча) еантневАВ ГУССНІ «Аз 14У вдарив скежасінвЯ ссбораєове сетостоає фостедаєссї зсоосКює
Б ахтвтттивс жвлсозкаас совно спро аїсорискссх сс ичЕа ше се З сх ее х ще 5 ее завіт сскУ фест «сБросасто всех бозосева армщнневеє їко авапавсто соці чесва пассоасУко аскакоусх хостес ца тас
АВ вивча ссрнанмемщ вкстенкоксх пес жио сееасив зиск
З здазвусуста стос аустевооєт ссвсвуєод вксожеєсюсє суссоветоо
КУН пезчсссоза асазсвсвих боро ктиав зуп кесассвеєє процесса 420 зас тнвч; хесаісіка Євою жзадскацюо:є всрескусВ фотувовову
БО шщІНЦНИВСВУ Ос КНХ вт азацт все Заза тескекцо соски Ноє сптІвавієта заззсчзсово азаїксосаза зрвозмювах стояк оса ще тпісск чна ссср зазсссмнє Задазааасса ссстолостеа сваВссн 56 спвоавсу пссжривота секроцкстою сесацкаая врсствсия опсксксвоа їх ї : як праски в ссодскиаз сассеике зсосаєсєс ссанівуаке сазсцусевє
ТК жна сеозВсеКВК сс сакс вен тоаЗз авсссовуда стику вАЙ їні кассвстасє ккацУзска свині жерс «желе спини ває сазоВача
З нах Бе Ч ПО ча
ЖК зксавукоєях стостиасвас зазооникос осот гЕсс ско сес гедсвуєаве
ЗО авто пози аасвУє есскукамє гассохааав аасвіаскк сооповсоє чЕчассюкакх сспвБавтЕс рн та вони чнКа соасвсасевЕ коепацссато страница 253 й вАТ-Я1У0-5Ка сідсвовмиа зсепесічіа стстсавс аосоісотв стзсассеав сазсзсесто їн пасвсесвоа «сінсвієто застає сасгавоєссса зсаасваєсва питво знуюісоавасє сезацтєс с
НК : 1281 «кіз ВІВ «Аз РЕЖ «Й» штучна песлідащність «СЕУ «акМх и тее Кк Га Ти їх ки 7. ик х. м с РК Аж «паю димевний йвоЯ-ї1в8Ь 71-84» 5 анти кА су, Кеспанця З «ВИСТУПОМ» «Нюх ОІВ с у г ще ; пом їх де а ха чиьЯ Ї т акФ ам ші Рго цім бец бБегб вро Ахроахв вго діа зі ден ів о АвЗЕ ї 5 15 їх їев ага бів біу мех вче АЇВ сів без УР дів йій аапоУуві Беногец й зу ЗЕ 34
Ї1е дер Щі ЕГО фей чаї ТгБ о тТуЄ бек Аза оБгЗ ЗРУу ваи АТВ щіУ Ма 35 З 45 дпегофем о тТне піу шШіу гей о вакотує Бу Біб Аза тТВг їжв 10 ви тв па 55 Ба
Маї Вій и АТ біу маї Туг Тук Уві Ре вве дів іеч 5УБо реб Аг то ТУ о
Ага УдДі УВІ від бі бів бі вк дію бжег о жві Кг офісу афв рено Між с їх Зк ще в ще с. н не т К : ча с ах
Мевовіп Бо ів ага Зек А18 Аа ці АТ АТ Аа івц Аа Бе КЕ киш це ща миі Авроівь Бго го дід ет баб бів Аа Ага Ап Заг о А1А вне діу зі5 180 1355 не піп осіу АБ овжмогГец Ні їв бек о АТв Оу бів дев бемошіу Уві
Страница 538 вАТ-Я370-КЕО 1х5 140 нів рев нія УВК обів АТа акф А1а Аг Ні АЇВ Тео Бій зв тат бів 145 їх 155 їм сіУ Аза тк ох сечу ЗіУ фев рве Ага чаї Тр обго (1ц Хі Бго Аїа їх ї7а 175 пі фев; Рг баг оБго Агуробат бін Бі сіу ші сбіу бег обі бік бів
Ко 18: 198 сі Жак о АгаЯ Зі) сбіу вк бін Бев бак го Ах» Ахр ого Аїа піУу ем 195 ве зах зе АЗВоіФен ага Біп шіу меж Вбе діа піз ізц уві АЇв бій деп ча 210 їх КІВ ів оіФз ів вх) у го фемобег їкротув 5аг азо Вго єїу фей Аїд
О1хж мазі хег о ец твт бі бі рев обер отук дув сім аБр отв Куб СН аз КМ ФгУУ вер оУуві Уа) АїЗ ув Аа ТУ мі Туг Тук Уві ВВЕ РВЕ бів вв ОБ й зда 7 з з а м. АК іл аг ага ми Уа? Аз «Ту сіб сіу бек біу бек Уді 5егоїви «13 гУУ «БО а іїеа ні іец сів Бго Бен дго бек о Аіз АЇЗ бік А1В діа Аїа івм Ах
Ка жу їз ів ТвгоУВР АБроїзеа Бе овго Мів Звробек бін АТа дго Аза его Аїд
З З 315 320 ква сік кВе Філ сіє ага Без обев вів пев як одіж «Ту сій або меу
КУ З 335
Бім Ууді Ніє севонів Тит біб АЇВ АгОФ Аа Аг нія АЇЗ Тер оБій зви
Ба 345 КН
Тне бів біу дів твгохві зем піу ем Бе ага МАї тТве о вгОо шію Хв страница «83 вате ЯРУ 355 ЗБ 355 го аіз бі їз ро аг орго ага Бегобічз Бі бік я3у сіу чеєб оїу
КЗ С І
Зі Отфу піу зчеб бів Уді сів цез їем Фіз его шіу іу Бі Бей ха!
ЗК Б а о ів око у Бі анг ів АБо ізи зегосує Ра Аза хек о Фіу РЕ ОтТве зах ЗА я
Біжфж бЗег зве ні Аів Мей ер Тгрожаф АБО бів Аа го Ру Був му 32 495 439 із ім Ттромаії ет о Атїа жів Тебробід Заг обі бів бій ТУк Ту ді 35 що 435 ар шаг в! вух піу йго Ба тмг оф) Бек Ага АБе Аза Яег Бук Ам хо а Я
Твг оба тує вер о бів Ммеї дей бе ів Ага А обі АЗОТ лів мА з5 470 375 80 тут Тук Су дій Круз Сіу Тгвоіев біу Ах Ве Аза Тугк Тер о Шіу ЩІЙ 385 453 ах р же їмо сі їхве ма цим хх зд хек ма хід дів бкОУ баг од піч ТВгоїсца таї ТвВгоУв! Зеагкозек о діа Зек о мВі Аза дів ко его Уді щюЮ 585 518 ве їіє вве орг Бгто Заг дер Аг із ів іх ет Зіу ТвВгодів Заг че най 7 7 цих
ЗАЗ Зк «о чні маї Сук бер мев асп аяи ВНе тує рго АгУ Фіз Або бБжа УЩі бів тТго вуз УЩї ахр оАхв дів ем пій бег о оіу Аза обЗев о Бів ін бек ма «5 55 5 55
ТВ СТ щі дер охаг їух АЗВ бек о Твеотук Заг оїву ХвгоХет ТЕ іву 578 Ех
Тв оіви Жек Ух АТа АЗОВ ОтТуК бів Бу Ні бух Уді Туг ді сже БРУ стоаница Я
Ще ват-ЯітрекКо дк
БО 535 З
Уві їв оніб5 дій бі рев Зак оявк о вго Ві ТВгореж бек ре Ап Аг
У Ой У шіу ів су» дрож» ТВРОНіх ТВ оСую ко вго був ВгО АТа вго 15 що щі Бей
Зі Аа «сЧіу бі Вго Зк щі вна фей вна БгО вРО о БУу5 РКО Куб Ах
БІх Б 535 яо
Те ів мет їі Хвгоагу Твб о вРо біц Уві тВгоСуз ма Уві хві Аз ва Во 555 чаї бек ні« бін азва Бгто бів за бу» Бо дев отТгр оїуг уд! д5а БІУ
БВ Б БУВ
Уві Бін Удаї Міз деп оАта ік ТВ Бук Бгто Ага бів бі) пів Туг дей 75 ЕН 55 баг о тйге тТук Ага уві маї Звгомаї раю ТВгожа!ї фу ні бів Азв о їго
МК я То ен аз обі вух бів Туг обу» Су» Ку» Ма Жег ай фу вів фев біф
ЕН що ті15 ТВ
Аїа вто ї16 сіро фуд Тк ої) явб бкз Аів рух Фіу Бій вга Ага му 5ЗЕ ОА ЗЕ
У НК зу вка шій Уді Тук ТВ о февц Бго Бго бух Ага АВ ОБів маю тВгоБуз АД
Та Та т
Пій Уві его фіем тр оСух фен УВІ Куб Сі БНе Ту рго бег аю хів 555 53 ТБ
Ах ча! сію Тгрос?фб зег яма бі бів вго біз деВ ди туго ру ТВг
ТО Ту тво
ТВгоРКО РгО УВІ івц вази бегоазр щі Бего РНе сне фе Ту бек о сух
Тт85 кЕ 75 иа їец тТВг Уві БВ бух зак оАКа тТерозів бів біу дев Уа) Ба бег СУБ страница 24 ват-яУлІ-ЕВ
Зегоуві ет ні 518 Афівобаз Мі Ай Міз туго Тв сів ух бек о рац 825 25 вхо
Зег уен заг о вго З1Уу Ух 815 хаМи 145 «ах БЕХ «813» щЩтузна песлідовністе «ой «й» Мономерняй Ву 4-1ВВЬ 751-254) амти-КАК Мідні «НЕ 148 ага Зіз щіх кго зів сви чЧеб бе Аза Аза о Бго віз БіУ ви Беца Ар цви ага фік с1іу мех Рвве дів вій бар маї АТ ів дей Уві Рец ге 7 ЗА п за йо 4.6 Ре їі Авросіу БР рев Зак тк оТук заго др оргоОо щіУу ва лід оту Уд! за 45 его фен тТвг обі Біу ву хак отут Бу зі Ар отТВР бує Біб ев уд! хо 55 Во таі ді ж АТ щіу ув) ту тує Уві ВБже Бфе біп вер; о щім Бжм Аіу
В т т ко ага Уа! Уа! АТ сію бБіч Бі ЗегоБіу заг омщі Зегоїж» АТМ ем ОНіЗ вх в 5 іев біб ВгО іс Аг Зег АЇВ дів ЗіУу дів лід діа ви АТа рен ТВг
ЗгМ зах їла
Ам Ам А
Уві Азроіви вго Бго йіз Заго5аг Бі» А1В АБУ) Ажа чего Аді РАВ О1у
Це 120 125 вве бі сіу го фев рев мі фен бат дів БіУ бій Аг рев бі уд ще з15 іч страница й
ВАТ ЯКО вів сви ні» Те пім вій ака Аа Ага Мія дів тТевосій іа ТВг ІЙ 145 їх 155 їБО
Біу дів тТвг УВІ рев бі іже ВН дк уві тв вро сін Зі Буз АВ т165 175 175 жіу ав Бго Заг вгО Ага Хет спа сіу Сі бі біу баб одіу ім іх
З Ї З УР, У Оу 5 у у у 182 185 Тк
Біу ет біц їі уві реє ївВгобів Зековго Бі ТБгоївц яаб ем че
М вх : цим ї95 Ра ах вто віу Біб Або Аа ТВг офіц дек СУ АБО АТа дек оій бегоУаї Баг
ІЙ 35 Мч дру Жег тує Сем Аа тр отУК бів біл Був во біх бій АТа РгО Ага
На Бай то й о 230 835 яЯо
Мер обец жів жів біу АЇа ек їпк Ага ДІЯ ТВе діу її Бк а5р Ага 285 р 255 вне Мжг БІу бегофіу его сі ТВР о АБроРВЕЄ ТВРОБев о твк ів Бак АКо а5О З 70 сем оаін кго 4іш Ар вва дій уві тує тує буч бів бів сіу шіп о уді
ЧЕ ЗА " Й г 7
Ко «УМ са
ЖУів ве вро ТВб вве бі бів бік ТВкокфуз Уа ім жів вух чего чат
КА 235 кю від пек отвг бух БІУ Бгто Зак омаф вне бе ем АТ Вро щеає бог о фух
МУ 310 зі за
Звготвг заг піч у тн ді; дід те іє ськ ви уві бів У тут зЗеготїпРоЗег бту біу і АІіВ АВ Б Бі Су ВО УВІ піч АБИ ТУТ 125 Ук 355
Вме вто біз Бго мат те ма Зак Тго Ап" Зак ошіу АЇЯ ри ТВг Баг 340 345 355 т чаї зі: тТвр ово гу» ДІ; ІЗ |! бай сів бдю са пі г ви беєт це
Ііу щі НіІБ їІйг о КпЕ БгОе Ата УуЗр ам осійп аб охег Фі Се; отук ва 355 зо й
Стизнинця 545
ВАТА іжмобже 5Звргохаї уаі ТВ оУВі го бог о Зег бек обер бім Те шій тв до г Б
Тук Хі о Сух АЗй Уві Аза Ніз вуз БЕО 5ЗЕг о Аха ТВ оіух Уві зв оо ік ЕВ їз БІ
Муз уві Бін вгОо вБуз Зак сСух ! А ?
КУ
«Мі» 150 ке АХ РУ «ам ДК «Ф1йМ ШтучнВ послідовні ст «а» хі» дДямайний Ми 4-1 За -вЗах З СНі-КсопаВмжшгє їх явЕгтуєма «ОМ «сеї жхоцосіо капекове фафинсїсї соцюшассто ссаросавоко свовостозив. «спттоцесто мист свв стох сссбюватсто ссвссаз своавостувиув їщО зазчцаєстоа зоставєсс кеВ сс аєс козака впаде ке соерсссає сштшєска свасоснтв сквзаїсзаїа Зососостціє са жкссссваєс тЕЧбцеєсса давав стватсЗає ак ас стодівово що цакеєтнмм. неви зісастовса пасом зсезсвав завсвосада паксєтснми мнениеє зісастовса посооосєтоава зсбзсвавов зивсвосада 240 пфеівсіЧчатоп точссвчецє сочсптчіас тасцсстск ЕсаЗскооа ВІЖОСопВВ пп сонне є тозахстасеа тстїстофесє беажсеоев осссставаа
За й
ДЕК
Вч токІцп сна стос зозщіаис Басепкестіцо свосіссвау о сссоваатя пак зКгрІсвенви вовсЧиКє сс Кике цес їкл й Й й 7 зо сіпбовосче вбшаеєвеає вофкесаз сталася сстоасаех основе аоцає
МАХ мя пстаеаоч Чвюшсстотї свв каноє сссовоааїхс садссоовсї дессвосскх
МЕ вовкстанао Фо аазукозвазає погинаски сткорчстах піс.
Я азазспетстк сточатстоє соссвосссс звовстовово водевасстоав асо сСтрпаницв 545
КАТА ДЛОКО ти зЗакчамсств сиза астисї дощок сміє ке засво щі затактасєсю сзеассзвсвОа вісті боків вес мНнЕ посадок йх шо Й Й 7 ва) ксосодеста чоти ствпазаспав свіасавам паста ас щх поботогаєї зкотокККЕх соснова сєтезоосово тоотостпо памвнюксв
Й ЕІ
МУ зЗаакскокак сесіоижежк засво) сстсвсосж стек нстоВ сс та і ; й: Е Ме и сжцвчсісіцв слав асся зппасеєвеє ксетаизсчача сбаЗавасею сосстксвОє ї10оКа тессвеоцяє штастена Килини Фовсевшсзсєс сорувчсосе кекосвкаєї.
ЗА
Ка, авессазна спсозсак Сова о всссвцви свастаких сс 500 сеВсясоасяс сісвакіссс Сас ка ссівосссве зав оаваа попав ка 7 7 7 й 7 Й
КК; кетовсвна пев СК їн вссавзоа спосо висі поса ц ки аасевовцка ссеашсоасву свсмнвої спо бтсчааа стек тА х Е вх вт ма
ОВК сів ссоцахеЄєтеа дазсвеснн зошитах сосок пасік
НЯ м З шесцтше ох зааокістоа сстосатас сток таз свссої чок сщ
АВ щистооосВ ссслодеста саксокав дтоаасенсв посссвасвя свесавовку з й 7 7 ми
КВУ засвклава Хопаоєскаа застосо вВос Мн їсвсм «рок освсс зтоєссваса «єтіовазсїч сви збсветехки стсттслесс сдадасссва поаоаскско
НЕ зіцвлктисє пувссослев зассвосвев чо нво всзкоазассв сових ї1740 парчі свазї бсазсечатв син чв знос звзакассва дасавваско жклИУ їх ке т в страница 847
РАТ-ЯІЛООУЕИ симикнеаас апіївсвас сао пт сєвосв Кок тиассвк скоса ег їх паси їз вісцєшмчющеа зезсвазеас змескесв всависет сире 1520 зксовиаааа соаїстиссияа абсо сапссопозає папсвосвооак яаїасвсксоко сссоесатм с зніс зассвазави сасобесачєєс ккеріоасск заксеаАне кН фкствісска зсоасвВісяс садово задвосавка овоч озпабвескає зних штока Фовалтссаає пост жЕСкх КссжитВова СКК
БІБ зедзасеава поем девооЧчаає зсжксковВЕ зпбссн касу ачНсх оч о скрасваєс зокасвсЯса зване жиссКаКижо сеча «Ме КМ хазіїх ЗБ «СБох ДНК й «213» штучна прслідовність «Ей» Й ка23х Мововерний пи Я5ї1вБЬ Сея «Нюз 353 тост пани ас сновок сем сто сосок саовстовоа о
Фжинщюовсста восіцавике сепідаксст косе сїчс сзпаїсівав вовна 120 хи Ччсссвос оо св паска сбезаксваточ «есе ств ово іо
Чалестюас касок зісастзаса Фавст чв осізсзазов позвовоказа заяча бузссавоє сзЗсятукас касоцртсї кесазстода астососчаца
ЗО
Зикиекко зве цента ссср с квест а сссссовоа шишевна зезстчкеУ жо вовоко ака иє фот січи ст ово 2 цессоазака чесати вероетає асо сацссач
Страница 238
ВАТА ка «пк весеєеах вовоуєсача ассчунежя сота засасвавує 550 чеижавсвакає садок счех сової ааєєс ссспавмезє сессцкосю все сеска ее вавакоцваа Форазос віскоосвче оамнвесес засос касасеаих
БО чесна фссосвссВЕс хЧатовмаєч тепаааксКа зааткоєсте ЗК кОкУє
То познізазеа зІкжстнск свовоМмнис вавотасаує поза оов Аве
ТВ свассодев асісссаваз зазтатсасВ сивсннвєа зпажмнмнсмросвостасаоє що сксвосвеаса ссостасеєст смикає фсталоавов засасемн «ивооккцє
БІ зазаєссвссс вссвоаЗассї дазсісоссє зісасаназа зокісвасаЗ зорову
Зк «11 2 «212» ДНК «кі» штТучнО пОслідОоВНність си фх «2И3» дДимерзий пи 4-18 хг) - СНІ -КуеланНцІг З хвВИТУуВОМ» «НК 152 захв са воствксбаа ссср авсау зааакакеа сссвостач сиве
БО фирсоктаа шесувтачксс ссмрвмєто3 сасбсжнжаес стоваствє Зуккеєсв і505 стазскеса осстоазста сааазаоас аесанаває тоаштаЧеаЄ саке зссстасі сркекіксов оссюваєту савувовесса сущесвеєов вето са щи вита св Фсбасваєсє стоарани пис КасВеи
І
Мхю
Чевастаасв шрражокчиє ток свє со сс повар еє зх сгазодЗсааа Бктесвсст оістассзас сазаозастоз зач несї зсвоасвово
Б слрпаницв 545
РАтТеяТУйнКО чЧесвенииа засасуєсто своє свудуєчєка саше стуки 45о піпасссспо ває тисвос соуцаскоксє азссстацве сс самими ує
У жмнюсова! Закссовоки знустазвста сезаоци досеаве зкссосесве а «ктрФкірсєс возвакаєвої ЗстїовЕтаає оовсстекек схов сеассскодє
БУ стозвсвекнЬ КрЕсствВс пимючасеа геосовеоаава азочавтнсвай веж т2й зкоазствавоа сснивахта сік Кітедастуа засно зе
ТБ пзоазаазасх споаЗасєскає сптсосскоацеся сбасвестеє зрос сеССКх
НО
Часпсваста свстаоижекх спзасфцінно ссровставз ссісіаокоав зссвуааас
КІ ще Етеч зх ссжмнІ вес кт сахссвино ссравсвуєе секр зв свісльвІв стравсєсва зоассстозсяе чспснвоао бовессвюа сс сточовстає ста сотоао ассінеювє сосен е хасстави:с авпвадквав 10п8о чодопалосо засссзосео вве ахсх зстведесв авиркесптс сце осе
ВИ : У
Ід сткачисссса зфоводсваава сассвечв дасвсвокко СЕС соло ке пактвсекКс сспакссм засос расова пс сісссахе
ТЗ І своивсстЕся сорочка заст вив песхевеа сецикеноє ї120 птвсстхста зсазсстша сесссожжкнс касахстня возіЗзазсиа см. ї38о шо взчносвоя мрівсзайай зач запосх вайзпстса всваваскея свое за «ссахщсксвВо сво Каса сов сс песаваВосє їМщюЕ «водасатст свое є ссооовсссс зво зп зап оВУє странина 50
БАтТ-Я1У0-ЕД свривниє сразоассва зіжспастоя свспточво) зозкщазеяї зосвлвасцє 1520 зазасаза «сао ссоває вопаксзсасс зіву єсво сакоптсвок 1550 зчЧЕссїісасс поуЗаєтеачек зватаосаву зас евах зсввчНкике «часа 1 піссфщаскс спассвавав вессаесвсх вавоссазаз засвоскосо жвссоВоЗу ї500
Фін Кресссснів ссоуааезає стоассваоя асо ксвоа сетатакає і850 «кн савав зохествісс спекоасако зссааоах позаоувоєев сечо ее зазавсзаст асазовссас зсстессо стодастскеч вороміеек сіккстсне заспвзстся ссозбансва опаосжвез сосна всаксжжеке ворс
ІКНІ зкосвінк: сістсЧсвасаа ссастасвсп сами кежксксотУкс косопахаиа
ЯН
«М 155 «г1їх Б/В «аіїйх ДНК «Із ВітУучЧнНа ПОСЛІДОВНІСТЬ «ВИїМ Меономерняй Ве 4Зівве Сея сх «Ку» 153 звісстсассв пса сорусосвоа свазкоІка сссовУуєкаЗх песен аве отвекЧстща сан ся собакою хасаосоВвіє спра с топа ісв 150 сивини Зссмним та свавовцан вскзвазавє квкачеає свашссооє ще жІвствсо Хассе дфокеазанекоа синшаЧчеце прочее ов захо чи й
А котика ки спос Ка кепі сти скЗустенЯ фасвєтото зсвстовзва соЗзатстосе «сеЕтоскває кесЗаЗзасес Зазахвосає аСЕХОНеКЕ
З странице 25 вАТ-ЯТИ- КВ пшМмрчкецеє чо сВвесх звістассає сафин це чека повсвсвуво й М:
АС зссезоаска дасвофесско Фавст Ззвсв севеизна свотасіво сет свуВ
ЗО шіпвовосоЗ зовкіссе сезсоасе песссавана дез вв снрахех шк К Ве З зи З :
КУ песо чакссснївс зазказстса ссахскатс БсакоКжеєсо псосатстови
ЕН
КО сізазастоа азтстоаває рост теме внз тас коаватавоїк півссссвов
НЕ УН в пі сааво їзспдкорав Заказ авс есе тсосваї совка сен чув МУ Ве З
НА чЕсвсвмиас вррвасвосаа фрвеюрвсс басваессхов осв асе сх аж
В ; : :
Ка як ааадсвааст всдазавасв севазкехавс сксіосовноа товсссакса ЧО
З що іс уки спмеМмНМоК свахи рах
Те Ії ж х «аж Іа хейіх З31У «гад ДЯК «їм штучна послідавніств «20» хе ДНЕ, ОБЯХ, Бс-аанцюг з мутацією КЕ «МН» 155 запаска со чимчнє срвемнмин стівсвоає су сстовоое тестцроєво секс свостітвн: воїхвкасса кози качак соска
Кв: З Не З З З КУ У Му вич псвоцоавов паставоаваа очко свакт аствациа зач сасаїаствВе
КО ке шщвоавстссо тозваоусся зесвоссвніЄ кіосвозовса ВаЕвесавИав св зах
Км серомратоя садову жржчвапає вс иах абжашттнає мин ще цес всх зсїдоЗасся жвжавєстоа зесвскас сзазсостав яасосвсоссс у
Зо гу - СЕ странице яли що ВАТ ин КО стежвасчКак зосссоссвю состаЕКх ссср овВя ссаасВсах ска звтокства боавоюоста севсссспад соте оавеооа созвсстОдаа со сво
Й БЕ х х, «езвасаво псотосвове ЄжЕжессвосс за свеазв сенс тотв сассстоаох ча вастссакоа сс ста свусассто сосаосава савіоассто свасоговиє ще свбессісссв ЗсвОсвстая десни азу ззавхсмцн сосок сви тоагави
БО сесії зовн сажі тсс восотота фсЕксссвВсс савокесаво пасзіетов ссвтсвсссї овсссссвав отозсеткоа бафеочоє свтевосвка кА
Ве зчзасваєсссоо азоптасвзЕе сісти зспасовов мет осв сасвососво чесоасскос ап са жо УМВС Су ю З 5
Ка зсавассе додаливаса зассазсває востховова форту досто
Ж
Мвсжассвао во век заа срзсзаназа схованка пезіечасво спе ода й песосісссв їсдадаваає сзісвосва; зссавцодев часссвнаас сссосоВвоацо ау
ЛОХИ тасвссахкс ссссовсссвае занасазака зсезаоавка зві свист ко : ох Кв У у З
НН вісвссавиї їхксссоа вчвсвксне зимно вабив сп осє 190 цашевстакя заавсвикюа зсскаїсвка везмесанка осаоєтвотх сотої 1 «воастравсов сопадаваїє савсстчва з авев сстковссто їаосотоасто чих ; ВССУ з сасовочсс сровсвавеоса ссасвссово авоїссстоав сссвосо соєву
ІМ
«В 15 хЕіїе ВАХ
С ря «й1й» днк «3» тУузна послідовність є
ЖЕК
«йайе ДНК. який памци ПРЯ? ткач «с п тран ла
ВАТ УВК
«НН І5У заваїсвкох пвесцсваєєс песвозеєвсс скукеокіжУє ЄБесвонум: задане аєє
БО стєїсіксВ змов вадгакіашє засвоствек газесіовЕв спадсацаає
Тай ее ссемнисао стсссваачек секта сіяї срмювієсв зосвемнЯ м кові ссиВ
Не пасацазкісв пише сеакчв весна своє Бевза «ока 24 чо сскзавочатт стосацтва ствстассво своасатовюка дстевєсост дасрековоє
ІЕМ
А
«саудечвсса авоїваазї сзазсотзее загс кеєиє савстатаїє оажтевессв тснісста звпсаажтаає звісток сФсстоМмиса тс замиваск:,
Зо ївспссвимь саван свазімн віїсвинка зізавовися сени стразвсацкї довзсідаєса довсвосава оаовосвокт асонвасвтани сесвисее всфетцвсся пвовсзвака пазазсдасні васвастата «сховає пастеасаеа
ОО звснісвасте сасссвтєах казозоаєтіс авсволавтЯ а
Ба «ій» РЕ «ЄВИ» вщтУучзнНА ПОСЛІДОВНІСТЬ «ВО» «Я» БРЯ?, Бсопаецює з мутвмією КК «НИхе І15Е пів чаї 51 мг: х ще сСау сім сім їх зує ді ТЕ о дуту хи и зів щі Біп о бец бе; ЗР ек сіу ші Біу ем ов) бір оБгоа бі біу
А 5 1: 15 хвгобжи АГ баб бег о Су» Алі Аїа чек с1у вве ТВг рве Бегб о Звг тує 26 25 КІ
Аа мя Зак о тТго Уа! ак бій діа вро сту Буя Офу їФв бій ткромні
КЕ БІ ах страница 254 ватеч170- Ка евгодіа їі его пі зак обі Біу бак оте о тТук о Тжг діа ак чек Уві
БІВ Ух БО туз біу Ага вве тТвВгоЩї1і5 Заг АгО Ар два его бух АВ ОТВК Обаед тує щЕ 7 " зв й ЗЕ з аа г У ВО цем дів Мет Ап Зако іем о Аго вія бів АЗвотТВг о АЇВ Уні Тетб тує Сух но Зо ЗУ
Зв пух біу бег бі вне дер оте тТгрошію сій пі УВКобев ма тв зо 135 КК
Зі Зег бек діа ух Ти Так оБго Рг бак омаї тує го Єву дій Вго
ЩА 328 1255 пім чего аїа дія бів звгоаха его мес уві тб огсвч бі Суб ге ді їх 13 150 їж Бі Тук Бе вс Фім о бко чаї ТвВгоУуаі! ТВг о Тгр ода Зак обі ще 155 1хо 155 150
Би шаг дек бі Уві Ні тВговае рго дів ма? рем шій цеб аз оїфоц 155 170 ї75
Тут твт бец перс Бог бек Маї їйг о хаї вго УвгоБАК ТВ ТрРроРБКО даг 150 185 Та іп от маї так осСуз Ап омві діа ніх Бго Аїд Зег бак отв іух ха 135 КЕН сх дар оьуз бух ДЛ) мі бго дго азроСух Бі шуб Бук Вс) Су ХІ18 сСуз
КАхИ 215 258
ТВг узі Вгоо бій жві бек бек Уаі РВе їЇїв бае обго о вго фу5 Бго ух два уві бец тТВе їіте ТВгорев ТВе Рг муБ МЕР ТВРОСУХ УР мВві Уві дів їі бегоїух аз Ахр вро бів Уві бів вце хе тк орйе маї АЗо
Р КК зв «ТА «ВУ СМ стизницв Ка5
ВАЖКА МО дерма ші) уаф мі ТВге АТ ОФУНЮ ВР о цув РРО Ага бів сії сій ї1е й КО 2ВХ
Ахпощеє ТВ вне аг Заг омаі Звгоб)ів де) вго ЩЇ1е о мек нів бій Аз 235 з
ТтТсроіво зв бі буз Бім вве іх Су5 Агу ув) азп бак о АЇїа дів вне зпк 7 7 а й й осв ЗА
Мк БО 3 32 біуУу іа вВго ХІТ бі рус Те ожів Зегогу5 ТК бу» ПТУ Агрус їж й зе КІ Й бод
КИ МК ха дів ро БІВ ха! Тук ТВе Хі вко Бго вро фу фу бів мет АЇВЗ СуЗ 340 345 350
Аз оіух уві бек о бец ТВРОСуб маї їі) тТве дхи вне вне вро січ АБр 355 за ІБ
Ті твгоУВі Бін теробів Тв оляп о сіу сій РРО Ааїа бів Ахи о Туг ув о їх зка да отТНкоів Рез ї1їе меж бух Твг АБ Ру его Бук рве Ущі тТуК же 185 Б 355 ЩЕ їж феч ав ма! сів бух бек ояуа тео біз Аа ОБУ Ава тТне вва ТНе тн 316 5 пує Вегоуві рен нія бів бі фжмоМмі5 Ази Ні Ні ТВ бів фу зер
Б ча а їви ваг онія ваг оБеа ЗУ ту 435 «й 12 х ї 5 7 «аРі» ХК «ВЩй ВЕК «ВІЇ» ощтучна послідовність «вад «йв3е вагжВвИ явнцює ПраЇ «Я» 157 зів тій уаї реву тік дій дет Бра сіу ТВг ген обег орга баг овто щу 1 5 10 15 птраняца 86
ВАТАКЮЛЬ КЕЙ
Зір Аго АЇВ ТИР офжи Зак Суб Аг діа бе пів бБеб Ууді Зегобек бЗег 20 я 10
Тук фяи дів те отТжК Пій сф обже вко бі біб 5із вго дк обєм ем 35 ай 45
Хів тує Сіу аій бек бек аб АЇВ ТНК 1у 112 Кко АБроАгОа Ввае оЗег
КН ха ща ші хакі хро ші ТВг ді вва ТВгоїгн УВК хів Зародки ЩІ міу БЕК БІ 5БФгОопіУ їмг ОА ОвВва тТпгб бе ти ХІівоБар де Би ОІВ
Ба та 75 ВО
Бго біз аАзВ вва вій Маї тук о тук був Бій осбій Тут ФіУ зве обве ВБко 85 че 25 зем ті вва біж віп Щ1іу твгоїжх УВІ! Оїч Х16 їж Ага Аів АкроАїв. ще МВ що
Ата обгово Баг Хі вВе вро вро его опек бів бів фам отв бак 135 їх 125
Зі біУу Аїа деб Ууді ді Пув ВНе о їез Ачи ха о кНа Тут Бр бух АЗВ 135 140 ее КАС - -Х їі Ахп оуді цу тромбу 138 АБрОоСіУ вк о сФію Абф ців Аа біу Уві 135 То 155 1600 ем оАчп 5акоїєр ТвК Ар піп Аз очи іу5 АБр обЗег ТВгОтуг 5вг Мех 155 іо 75 зас ожак ТР озжц ТНг ем о твВгоїжх Ав осій тує бів ага мів Ахи 5вр іо 155 мю
Тут ТвЕ сухо зів АЇа тТвгОНіх рух ТВГ ОБГ ТВг о Зекорго Ї1о ма цу 135 2 ПУ
Хег ВНО АхВ Ага ДЕЙ ОТ Су а І 5ії «Ем 55 е«гїіз 0595 сСтранива 252
ВАТУ ЕО
«Ес» ДНК кій» щтуУзЗна послідовність «ЕК «дйЗз ДНК, димернняй мишачий Я-ЗББЬ СМ, СІ15053 пюеЕпраниюМ З мутацією ТО «Ой» 1 азашстену севБреєвс сесрвоєвос вссвоєааєсє ства саессвувЗау
БИ засавсоссю вссачаес ссссчцвес сасабзнКк ссспавтвс сасасВОсвО ї2а сасвчесета фаст сав пссктяеє авасоац спапестова свасасовеоя «козаст асан зосцеКоди ас Кене естоевеає ай зЗзазазоазчаса воаваспавсх оз вазає асссїЗзУуєс соатасіасзе Ууєтсскудаз
УЮ скЕонавскан зессосаєсек євсонааеє сао сзсчОеосва ес су ї50 цпівсснівод сбмемісоВв Зоіошщисаве стсуасаакс КачесскОас СБК зга тЕсспсєввка зсвізозаза свазсцно заток засво Ко у
І зазуєсизас всаЗаєтааз собнвкЄва афозсжкаєс срвсоеВє спав єє
З вовк дезпастова стасссоєваасє вався ск точи ссоксоЗоаад що ссстозсавсс ства сенвонннни косззазоза спасе анонс чека траса свсвтясксс васссауса собоцоаава сви є
У свадіваєає єтоїажеккя кхвібоФфатеас сбсваєаста сосззовозв ток овУк 750 кекс ехайс п тацсказ зазтсдацеє Кесстакста асасавесвосх зпавкезаках вав звоахсвоевасо фс таусар сеєтисств єстсвУзУВс мзстатаа Фред
ЗО авазазцттоє! паче сссмвмка баскакаках хістазазс зазастотсе чо сСтравива 255 вАТ-417- КО пставсстств сззаїассзв бсвсваезеєо свозпахщоаг пакесктоці декасаВасх
ІННИ застою сззасоави: тачезакові зстсоасаєв хдозасезйх хостсскох
Но чіцдававов заспачіцве ссасесмю не св тоскОскоава ав еає
ТІ сувси сто тачазскову захасста сн ає за ссев сеча
ТА завссцвсєх асссївапає саскжесквс ск ккс Хсотуавасєс каві авкКое зужинемнн оаозсоравоа сум нивМ асо схов асн ссКхвссОО зссаїстмс своссщКоаюр сао воска вовксмцниОо вдос саке підвалом їссїассссав здовсвксоває Зічваекщава азаексоако своєю 1448 садвастюсо гастоватау ссрувссас свопаєавєв вофасксєає ствовк ат
ТНю зжвосассї: іїпвсссіесє савасово сасовост аснаєдаста свв сисвосссвса вк с свчссєвко Зіоазаотлех ссвессоовв сао ї2о п«сешачачаєт ос жеєав аск кіснес пусвссаівс сова сс хоК се ї1БхО акскжссжвс ссадосссва чоасчБето вмесаїеєвосє казвовосова вай 1745 черизякоав ссаксеосав пиві е спе лаНче оса цвЕ су ї150в зююачатос вевссостса зассавоєсє зааОмюаає Ффаісваєвоа сасскесвоа
АБО хм оаісси щеїкссвВи свізовесаб пасток вомнаваица акісваакаЄ возоаконасв оКассКсКХ спзовсссек вінаейвна спахстссва звемо аКО зовсссааяд сессссиЗчї дівсвевате сссессвссся зазавсваак зассовацає
Уа мюющНтсс мні сви сзвгсвесанЕ КЕсСЕжесс всех вієає педа 210 сСтрзницв я
ВАТ сзвацчюавке сс ссвс смеастас овсзасвокЄ вмстНесвЕ додовксда 815 екжсскасх їсаахасво сЗасстоазає збзсзаавох ссеавстзоа моде аас
З: ассттсвсск чере косі поса стозсвсааес зсолоассза завис кшЛОСВСЧНВКОЄ СПІВАЙ
ЗВ
«а 155 «Кіз ЗІ «іст ДНК «13 штучна посяїдовність «ее й й Й І «ий» ДИМ, момомевнми мещеней З-4в 104, сі сі ех 9 вавассвн: ссоазасссв секеаассвіх всепаєсьв сова свокацацав засинався вссавесаво сосен свовисоузосе дссссвакає сасаощове 120 века сско Кекси ав зстастовся вазазссацея ссср свапассвиох іх сЕуванаеов асаднпововза кКопсовскоевва вс жати совоасєВю сс
А зпавооччаєа водаааравсї зує азсссеозсс сотвохасае зиск
Зо сковазскав фксстакст свесайсвсс яуссасанаЗ асо срзксастя ї5О проси ссвадссссв фцсюксцає кове бурсстває сустравсу «о шксссстка позхоозаза савоскЗита панни є висоту асо зо авдссвваєс аспюзсстево сотооюєсто везе кенеє сасчосає сскофвсоєє
ХА І тасачаавсї смс ствссссавс зопвассаасх Бест ксісцточао 5юЮ секоавсам «подо секливнимни Кен рмюню земним байаассвс
БО стааницав 5
ВАТеЗРУ0АЧКО пепсоссвосе баїасссесї пеасесєтву ссїниявос апапсавоа сао
У ге КЕ стозвасс СЗнизазадо сівсокіссос снвистеков сспісосо панове
НН засіки а зседсахосвз сассікієса пссакаєтаєс авассоасєст зФеасаєссхо
В аасаостссо мнижекеєс пвесневеє фс зовосвесає сівсвасує
ОО цпепсссска сссовосає савовіднає вадазавієз прова с
Зхя «Кх ЦНМ «їх лю «125 РАІ «ФІ13з штучна постдідовнмість «ва» ц «К2і» димерний мишачий ЯЗ ЩА ЗВУ, СБ З Кфево-ланцюЮ 5 мутвцією ВИ «Нюх 153
Ага твг обі Рг Аг РКО Аїд іжн оте тІ1а ТВР о ТВг бек обго Ахп бе 3 5 1 їх
Зіу тв одга бів два Ана АТ Аев опій ув) ТВговко Ущі бек о мі Щі го 5 30
Зіу сСух го да тТне ЗВе бій бів оіу бек вто Уді Не АТа уз Цеи
Б 4 ізи дій їух а бій аАіа Звкгобев Заг Аз о їВрОотТнг івиа дай Тк НІХ
Заг піп ар осі віз Біх ек озек тук рен бар осів пі бе АгФ ТУ
ВЕ 70 а КІ бів бів аз обу ру БіЮ зец ці Уві А) Бак бро оту фев туго тур 8 ща З5 чар вне вер бів венобу» ем ожек вго твВт вве о уве Аха ТНК обі мі ме 105 Мо из ма зів о 5іУу тгв ові бегоген ха! бен піп ав вуз вго б)ів хці сСлизница БІ вАт-а1гП-5ЕО
Ар АБ РВЕ Ахр АЗИ Ме; АТа без ТНК Ущі біб вв РБе вро Сук Бег 15 13х ій мес бів Ав бух ши Уві АВ о АкКе БК То о БеТ бій бен вен ге ве 145 ї5о5 355 150 цУБ АТ Оу Ніз дк зн Зег уві б1у ев Ага Аза тує ів нії О1У
Уха 375
Зів бів Аа дій тук де Ар оїко пів бен Яег тТуг ВКОа Аа тв отНе 15О0 155 19п ет ВВж опію іви вве зви УЗ! вує ВгО АЗо деа го о тТгр оБіц сіу піу 2 205 бі« біу Заг о оіу бік бі іх Зако дга ТВ ім вБго Ага бго вів без
Рак 215 го так оті твгботвк о бак Вго дви бен одіу ТВкодкч Біц Аза лав АЇВ Ахв
Тс5 3 235 х п іп жа? тТВгобко ув) пек ні Зі бі був о Бгб Ажа Те те оФій «іп біу бек обрго уві Рве АЇВ Гуз вед о фбо» АВ уз АБ" сій аіВ Заг о рец
М 255 КВ
ЗакоАхАа Твгожвг мен Аква їго» Мі 5ае ів одер Ці лів фу бог дек 275 ШК о ЗК5 І
Туг ши явгоБіп Зіу ва Ага ту Ш1М дію Алробух фу Бін ім: Уві з вЗ5 ЩЕ маі дер баг о рго З1У вен тує ТжРоУаі РБе рем бін беб вує рев озек 135 Б 315 ЗЕ его тв ові тв дяк тТВе сі нт ім Уві біб біу Ттромаї бак одем
УВІ фем осів Аз фе Бго біп Уа) ЯЗ ар вве АВ деп рем АТА реву стианица 252
ВАТА ЯМОК що 345 з5а
Тв оУВІ біц Мец о вБре вго Суз 5яК Меї сій АБЙ бух Се й Ар АгО 355 ЗО Зп5
Жег отр обак сій бед бец івцч о іви бух іа 5іУ НІ Ага фец о чеє хді п ат 7 3 ко жк КЗ
Оіу фей АГО АЇЯ тує зев Мі су дів осів АБО АТа туго Аго АБ Оттр
ЗЕ, Зо за5 що шім їжи бек о Тук о бгОо дай тТВг о їВг оБеє вве бік Без; ВНе ген охві ух 325 з1й з
БР Ази оАза Вго Тр обів бік бік Є1іу 5іу вк о піу ФТУ біх 5Ру Берг а 425 АЗИ
Ага діз Ахр о АЇВ Аа йго ТвгоУві чЧеаб Її ВВЕ ОВгО Вб Зак бак оєу 435 Би 445 іп фено тнг о деє оіу біу Аїв 5егоУуді Уді Суз ВНе івц аз апа РВЕ
Б а «М тук вга бу Ар Ожів Аква Ма! їух Тгробуз Хі Бр осі Бек обів Ага 355 БУ Я Зо сЗіпоаха о віу Уді ішов депохаг Тго ТВР одер Зій аз оЗег Круз дЕр о щЕг в са Е
ТВ отуєк бар МЕї Хегощетг ТВг о фу ТВ фен ТВгогГБуз АЗОВ Бін о тТук БУ 50о ох 5 ака мі» дсп ож Тег ТВЕР Сук сім АТа ТВгоні Був ТВК Бак ТВ Же 515 КУ 525 у у СБУ сода с ех «зву кх си их п дики Го сік зЯ х ЗРК
Рго із Уві Куб бег Ре деп ака ав бін був Ууді го АЮ АБроСух 530 535 МВ піу сУ5 уз вго суз Хі Сух ТВг УВІ Вго о 5)ін Зі хаб баг Уві РВЕ а 5 5 БО тів вве. вро ВБгО Бу Ро уз аа уд? юзи ТВгОХіз Твб ге ТАг оре
Страница Б
РАТ-ЯТЛІ МЕ ва та их
Му УВІ Тв Сех УТ УЩі Щі А1в зо его овуз АБроАБЕ Бо бін о УВ
ЗО 585 5 іп обне баб отсвр вне Уа! АБроАщо мВ) шім уві нів Так оАЇВ бів те
УЗУ що 55 бух го Ага Фіч бів бія ів Ахв Зак їв вне дб хе уві Чеб Фів
З вБІі5 БІ свв Бго» Хі» меє Ні сів дар Тр офям аа пі Бу Бі їв вух СУ пЯ25 5 53 ай
Ат Уві АБ Щек АТ дів вве бі АЇв о Бго 31е сій ух ТР хів Чек
Не Ух їжа ТвгоБуУ5 Ціу аго Бгто куб Аіва о вга сій ві тк ТВгоЗів вБко Бра що пе Бу
Рго вух бів бів Меї Аа ух дар ож Уві его бен тТвК су» меб Т18
Ба ви
ТКб Аза Бе вна Рго 5ів азроків ївкоУді Бів тк» бів Тв о аБа о1у
Б 5 лю іа вк ай піч Аза тук Аза Азот БІВ Бгто ї15 Ме АБИ ТВг АЗе
Та5 21 15 г іу Заг оту вве Ууді Тук Му Аж) цей Ап УВІ сів ре Баг ОА Тео
То т3й і ТІ тк ххх ТУ зів АЇв о біу аха те вне те оСез бегоуві іем ніх сів біт рев ніб м 735 т
АЖ НІВ НІК ЗйК бів уз ек оіви бег НіЗ Хе Бго Ту фу
У ТБ ТБ е-гі1дз ЛЕ «Ех БК І хеУх штучна послідовність страница га вАТ-ЯІ170-ЗКО
Вих «КЗ» маномерннй кивени 4-4 СНвАНВ; КАБ - єн. ха
Ага тт бій го ака Бго Ав Бевз ТВе о Жів ТВ о тТве Хег о Вго два ем ї х 10 15
Піх твг ага бів аз Аза ав ахо вів ха! тег о БрРо Уві бек нів Її о ка З зі Суб вео Аа тв оте дів о1й біу бек орто Ді Бе Аїд бух бе
БІ 45 іви віз ух азй бій Аїд Бек оі«ну Бе лЕВОТВК ТВ фен Аз Отто Ні
З 5 о хек обіп аз» обіу Аз о шіу бите чего тує фем ес Біб БРіУ ваз дра туг
Фі січ Ав ів їух бів бен маї Уа Ах Зк око ЧІЖ вфещ тує Туг ще А ЗЕ 5 ЧО зЗ5 чаї вав сен бін вео вуз ев Зако вро тв о впе ТвВг Аза так осУ нів ню 105 їх уз чаї бБіп бі Ткрома)| щег осв Уві ву біб Азногбув вс» сій хв 115 ї20 125
Ар АБ ВВ АБО Аяй івц дія ам Твгомаї Зіц зуеу ве вго Су чат їю їх 345
Мет Пім дп ух іч УВІ АЗОВ Аг бек тт» Бек обіп ши фвц сем гем іч хо 155 і50 іже АтТа піу Ні Ак фено оЗек Маї бі бев Аг АТв ТУ фецч ні сту 155 178 175 дів шій Ав Одді тує ага Ав оїто бів ев о5ек Тук Вко Аза тТвгбОТНЕ ї5а 1іх5 ТО пес овВж піу беу вве оренді ту Рго Аж ди Рго тт обіш Бі Ж їх о) Ох страница 285
РАТ-4170-5ЕО іх кох жор я г вол іо дог діц іп о тве тку ек уч ши Ки З сі віх Баг ощіх ФіУ бі 0о53Уу Бер АР обу тр отТне вго его ог УВО 230 іх з38в
У Ха я кОм тУук вка реа Аїда Бго Бім 5ег АТа Аїд шій тТВг Аза баг мес маф те ди 28 235 ЗА ти обі буд вав а ух біу Тук вве р Вів го мні твгоуві Те пи ші ку ке їх у шіу К; 250 255 чтвроаза Заг о біу баг орши ес хег сіу узі нях тТвг о вде рго дів ми 2 255 и їни бів бег А5Д оівц о Тук ТвКогїею бак бак Законі ТВгоУв)і Вго щег
Кая ТО «655 ек ТВгоїгровкко Берг обійв тако омаф тВеосух дей уві Аа нів его АЇВ оо 85 юю
Баг о баг ТВгосУув УДі Ар ж фу їі ув) Бго аг аа Кух 305 що 315 «алі» ЗА «12 ДНК І «йї13: Штучна ПОСЛІДОВНІ ИТЬ «евОх , кекїх НЕ, анти кА САУ, БоЗИВНуЮг 13 «ЗапалдивОоЮ» «Ох ЗЕ завчцни асксдавав сзоасозазав строчка сідасовсовоа осла 5о чит сснастк сассктсвОс вусхасскв авОсто ссосеВе
Не; пса засос век зага сн сві ас во
ЕК СИВОЗКИ ення сс апсовии вапна псешсазваза свита
Вссцпвовоєоа оазис зе з: вассроваса пслосавоза свої тоаїас 2430 соска асадескоєю фсоваоаас вссорсоокух весакстюєвє сежювзатов и кед чЧосх їсваствобо оаЧаакаМни: асп св свзксссеай «сосквоасасє з папок сксї сезпекієст сосок ос надсвоказай зас свусов спос ся й Маші ЕЗОЧИСНЕ г м ст щ Мати і: ЗІ іх се ста Зо пе Ко а Ся странице 355 вАТ-ЯЗІНЬМКО 2 шток зссснисав єастаскес сссовоєссо преосекоатс стдодвевоє ако зшарссстаа сскссФосех ес сЕкс сосорсосесчє фсазнактс свисток
Б зусснвеаса дсакурікає сфере западсківроєвеєсвовс стсаєасстою ве що заводі зсвеинжсво свмесаву чевщагавов вазі авсо савчвОстає
ВЕ й
У знавевсяс вози с восакассса зпапекавас созслооас вссоковокє тА Й
ДЕН тік КІсК сосксваааВсСс ск акс стсатаВіст сСеседаАссКс МНН сВСВ. и Ех ко тосві ою крувспхова сезон кстоаочсвВ зцЕксЗаста ствеотоцае
Ба пвааоаоа сосатаатцє саауасанамр сспрокнотг часадтасва свусасотао сатетофка шшатесісвс секссстосвс сзозасим фовабоасав повотасево ак ск Вк сті ссавсвавес сосен сссахсмаа зааспахсс свавциенах ла т
ОАТА М чессавсссс дваовассзся зудсакосвсс схосссссаЕ ссчкюахов остпвосано тиЕК : :
КОКО васцмєта чЧесісісака сосна сав пасе сома сессаово зла ії: ТМ»
МА кочововекя чним Фаавсвас засавовисов ЄС пси
Я м
АЮ засвестист сте сієУ даровазсто ассріюовов воадсвон пси
Тед ее ки мимо ІтКт світ заз азов ссхКхасвса вссасеВІВо они
ДЯ чека цац лк сЕстсстак сіссововая а і343 «Ех 303 «Ліз У «210» ДНК «аіїз Шуучва послідовність»
Страница Я?
РАТ-АЇЛ-ВЕВ «кір» І «ДЗ ДМК, легкими завцюг анти-Как (433 хчООх 165 зазаксці газо кссоасс ства физлюинкава зване скчкссіоса опвоссієсопа зов с фс гос кеВ пежозссвию ссокієсф зсіуаксвас знос св соч Кеєс
В зассзаттЕї сепестєкоз стоссозчлаєс заветтсоасис Таассвисте соопєтоцаа в «серии к овосокта сівстшссовоу саворокаксВв Есе свосЕреє
АН й щ садчзевсосв ваза снився піц теасає сакокахех савкгісся
МЕ ссакстовіо зосаоісова зісіоцавсї асссскщЕТа Ек сіосх паатавитЕє 40 таксссвово аодссваззє авевзісова) пмиаівасе сесіповахс «рКаасся. ре своаззвасіз ссвсазавеся ззасвасава дасецєвисю асвассісва садово що всастоазоєз вадємааєта козовавсво авакстамоо сстасоравеї свобсвієво
БО0
Фсстцацех єп аксве змнму о вас еирмЬ зоаєх
Бк «Ве за «і» 447 кий ВАТ «213» штучка послідовні кт» кВ» хижа» дмти-КАР (ЯНЯЮ, Есеоявную її азападяном» «АН ОК
ОМ УА ій вевобе» Фів Бегобію біх бі вев узі бій вто Шу Фу
З ву Овну ГБ І
Зак о баву АКо іви бек обу вів ліз заробіх Ве тео Ба шаг бат Тут дід мех ваг трромві Ага бів дів бо піу бух Біу ів бін о ттв уд! птраньа З8 вАТе-83170-5Ка 35 Б аа его Аїа їі ті сту баг обіу Аїв Баг о Твг о Тук Тук АТа яр оЗеК уд! що Ук о мує біу Аг вва тик озів жекК о АгО АБЕОАВй Же вух Ап о твк овен о туг
ТО т ща їем Фів меї Ам бег реч аку аіз Бін Азо ТР олія ві Туг тує сух ях ща 5
Аїа ву Ту Тер оБМе сі сіу БАЗ АБИ Ту Трвобіу бів Бі тТвРговеу
Ме ї105 мо
УР тоні баг охег АТ Бег Твб бух біу Бго 5екоцР вне рго ву 135 3728 125 вій Бго пет Щоб Бу Зак оївВроБжекоФіу 1іу Тве о АТа Аїд бе Оіу Сме зад 7 зе 7 7 аг Й
КУЄ 315 ТК ви Маї був Або Тук Не БгОо січ БгроОо Уві ТвВКеоУдДі баг тер Аа баг 13Х ї5а 155 355
Піх дів сви о тве жит цім Уві вт тТВг вБв о Бго ів маф зви ій хв я го Та 155 25 З его іх пи тує бек огренв Заг баг уаї Уві тре уві Вго дае аб щеЄ її 185 Мю ін бБіж Твс пі твВготук жів був кп УВІ АИ НІЗ ух Бе оЗОК йхи 155 МЕ Р
ТВгоїж5 ді Аз о гуз бу маф Фів вгру ув аб Се дз уд ЗВгОнів а 735 За
ОК. ше я дк
ТикоСуБ РтО Рго Суб го лід вго біб АТа ліва су піу бго Зег узі з3О 35 240
БАа іа) вне вБгО вго фу РКО їУЖ АБИ ТВ бец Мех тів 5ероАКО ТВг 245 250 85 вро сів Ууді тк остхї а чаї еаї дае уд дзконіяє Зі) дов бро» Фів кра зім Уа отак осСуУХ В: ах Жаї Аз о Уді ВЗ онітб Бі даронко ім сСтизничв Я ще АТ» «170-5 ко ЩО 2 за Ка чаї Бу РВе о аАБа те о Тук чаї др йіу ма? шій уві ніх Аза Аїв гу
КИ: «80 вк
Те оБуз фу Ага хі бін сій Теб АЗй ог о ТВг тує до Ууді ма? бег
ЗВ во Мю тУаії ем тТБг ові рей нія Біб або тер обав Аа БіУ уз СІ тує вух
БІ 31 А 328
Суз Куз чаї Баг одяв ве АЇа іец оіу АТ Без хів Бів вуз те їв
ЗЕ з 35
Звгоржь АТд оф пі віп ркео вго Біб вго Бій маї сСух Те орен о рго за 345 350 вго бегоаго АБрРОБІіВ вен о тнпк фу» дяй сій Уа бек оівц зег о Сує АТ
ЗБ За
МаЇ уз бі ве Туг вго Чеб Ази ожів АТа Уві бів тт біб аг оди
КУ 75 зва
Оіу бій Бгто сім Ай дай ТУ бух ТВг УВК Бго Бе; оМаї фу АЮ Баг
Б щю 395 ше
Аза Бі дет вве о врє рев оУуді его обу ма ТР ОУДІ Ажр обу чаг Ага ях 3150 315 ттроБів бій бі Ахв Уаі вне ву був 5ак Уві меї і сім АТа рем
З2О 425 58
Мі Аквонів Туг ТВЕР озіп ух бек оієц ВК оба Заг о рго СіУ рух 435 зад Ах «З» Ом «Її» фіББ хкїй» ДдНЕ «ВЇЗ» штучна послідовність «КО «К4ї» ДНК, демернми Ви Я-188Р СІ 54 - КР-вс ланцюг З «ВиПтТУпОоМмУ сСтвавица 270
ВАТУ КО
«еНю: 155 аазовоасе сіпвааскЗве сесспахон себБосоуає састеваєс фарюравдє
Бо засво що вірші ссаззаіо сісскантса ак ескиї зЕспНкає
Т2О кис засо сахаковска авсМмниаск соачсктаисаа во звазлвасовь зр овссай сдеспоезса хастевсотаЕ хожжсзвосх поза «3 ззаціпчіЧа споосминнюр ахетачеких Фі сістНв сс довассТсТо жмриоВОМЬ СОУ аасестцвоВ схожу атежеаскєс кас се ззхачсссоеча вувесосаєе сузеккісва засвовст фасок цеоооссво
ЗАК зачсзочавоа прив чся сасвовасе аоппоствоаВк воасекацеа аскнноасво з пикссізовО ска ісваВео вес сковиВ ТЕсспадскец спі Кох 346 ссавсаанся заозсдемю сеча восувазчах ставом асссоваску щЕ сс ссовса Вксосмаюе Ясічстачви сови) ес Епсо соч чпїсвувако мтс канЕ Горасмюматсх ставок песен с апЧчаскЧасв те ше чнно хоазвстовдеча вскоасссКвос аваоазвоавхв сававоавсо засо тоцех т5о вивести тосвстасцї сокекжкїсяЗ сбкрмастоа часах зм поацочаз
БЮ чи тсвоЗзак стекти ссх ЧассстЗсяЄ спраннвисвс кос еає пестсеоасв.
Оп чом аскЗа слати авспіянопа спожив сна вази
ЗБ косо акоЗзасаскх пса зр вовк еотвоВ вес 1050 кагастеваєдф «себе дозкосткєу; слосінеко зосаовсяаве захо 1095 «как тес сто звіссстасс зас сва ск ссЕЗаЕС же стванаца 671 шк ват Я І О-аЕай
Ма ж ко) нина агента чек ссієові ке Ід сЕКІсК і23а ссзвиссрдакч авсачктоав аачсоУузсвос зсетосакко саке стоскх звасазкІкх іх кассссевОа весна всщгуозчаз ЗзоЗазевасе своє сем авскк і3х8 сперранінстЯ ковсевоазаса засоба сво сассе зетсоски сессес ї35О всовотзеста здесіваїив бабазаєає завокстасо пстаєсоваці ово часове сс сво сеча ес засни аа вЗзіваса осо їх жотсссссЕк секс теза зе х стохакесск пк запссснинр асвсссівах яЗсвцссоЯЗ зссоссоажь совка фрРОЧКОЧаАХ ча сссзо) вуоаксстов звтоааОко ваетоаЗЕвсО спювозасах зазавтосве 3650 зацюсева ссавасєсоо фізчазаєсвоа сасайсвася сиасчнає вагсвециє зго спис есекес кесассвчов сеЗоскозає зоасааоааЗх саватасай зап сває 1500 зашвесест зспрексксвкх сосозавакєс ассксокАавад совамниса сечова зо ссасазакак «саксекасс сссвікгов заковуєтой ссавовикса засво
НН печиво єсванвовстт статсссмК ссвісеско каоаотаЗаа заоч ко 1950 плессочачца зсааскасав пвпсвсвс состав всіссвасов писсетекеє ай й ШИ Й Й мч «Краса ваисЕсвсяЯХ повсмНимУМ п ланаоє ефек сктстгакє
Ада пес затоє МНС Зевс Касомоуєюеа мне СПО СВ
ЯМ
Фа
ШУ сСтванниа 78
ВАТ-З17- КЗ «аНЕ ІБ «їз ЗІ «81Оз ДНК «Ії бБбучзма посснідовність «ках «каз Дек. меонеменрний йо оаезНВ УЗА я СНІ «3» 155 хопздавкс сспацсховоа ссссЗакве сехастецає свокечассх псодеац не вівтстзстс мрожчовнк ссававсрв стотовкке аіфвюєссссє зсокцоуєає 125 виші сс в дан о ск сВоскоа вух товистасав зов сє дазизасто вони саа сок оа тато зе свВоКх паавсосуВ
Я звід ссдосчню акогецсток Зевс мнР сс свои кааафсаєтц ссдеветоє «ссср спе що втетасетеє сассвастсе
З шими ссача аквусасвіх соч сая дарсчНно мскелак прос 42 зазстощУау касвхскчєв сасвувевсх ав свщни асосстооса дсковоказ
З шасі не рас сх веЕсовакоч асссспоавов стос спУуа сосках ке «сЕтїаватстО авсервеєсоо азасессвуз ппгооавн стостаЗзево сзазчвсссх
НІ хкжиркЦежи сек ес кАарстосаза совсстста ОВО сеє пісі сода
І
А тЧкстсовОа адазЕкАстх осла сх зсчасвоі ссбозачіа нм сїо
Ух х ; Е КО -
ТхО
Мити сюач касакастке сбобостюв спро соку стос а свист аВоє не : реа цено ЧЕ З З ВУне:
ЩО миоточем саЗзїасссво сс сФрссваВ согасВесо спакВіоаа я І ши І пвсвшннвжсв свати ва пдборасаво ав ває сс еха їх с стравмна 273
ВАТУ КЕ хе 157 ан НН «12 ДНК «єгі3» штучна послідевні сть «Е0о «Ай» ОДНЕ, вити-ЕакВ тав», сепанцюМ За «запавдинов». ЗЛЕТИ З димернич би ЯК КТ а54Х «ММ 167 внисазс пастами сни нМмнва спасає кіз сво погас 5! ксківзсцвесо ссаЗсаНаиЕ спі конУ важ Басеасе Мем секс і258 стлдосваов овоча пек схке вакеве сксзесвссовае сеоповсюає їдо пссзасвоєо товарна Фітсессатс дос возвсасавоаа спосте ай піцвзнниса аск вкоо зпссорашчає ассоссуає аствежсає сват
ШК
ІсоЧезск кеаАєсВвсото оЗавсаЗоє ассстаоєов секс кУпивепике
БВ завнкских «соками сеанс звокацсваца зонвсмо сапки ався
АВ чесних сс сва ос тастксо сссоазсоссо хавссоіянме сцвкаце щі фс стча ксксснвак зсасассек сесесец сосок Єдасеокекак
З ависсеІЗацзи Зсчкошксаво света васчасетао освосссачас сіно
М» зе аа ех м. х УЗ; м М засасазасс асачзасковВво саевсасоаву чим воЗзкчамасє савевУєкає
БО ваказвекс апасасист весцічсопоа свсєстозаза стнвщоаЗа асовтиаеке зу »; о» З щен УЗ ЗІ ш Кн тео
ХЕ ксс ссссзаваце сааззасасс сковезратех ссср сок хееКнросака
У крах созасчово ссвсовавовс сонне в щатесвате апквсехщ ще ч За тасзівасоє сапазабсаааа песни зоба свова свчкакукак жю щичмчвика поси кас сатсстпає ечасічс певасасва мого у сСтввмица 74
ВАТА ЯНВ скат спазвсвамв ссесезсвск посапаоа айлессахсіс саавпоовав. мно
Часи сп вими аса рек Зхаис сти спсесс сєсовоза ов воза 105 васксомериа чсстсїсвІу сова свав зак сівіс ксазсовсах сесоптова а апа а аполсаосє зпачавсває тасавоавспа сасеокспсох спос їз
ММ насзаєтесї піт іЄаЕ падсваЖвїс вс каовов воавосвВоцко зсвосацощи
АБО вис кик свині єсв зав апіпнея все аИяє оси вовок 1390
Тит стос коВ перщказа зп ФеФфрахск вичок чацсіовасс сові пе озастоа смрасоскає зи иках сс тева 1 тичних: зоавскасе зстзассоах зиск сла секоазіасво соска сівестачеч кассвоковс жна ко аосхвсвавоа верес чесва взазстцака
КОЮ шраФссавов косо сплавом є кекс васЕемнн вагу:
У часопаассви синте: зкскствис стосвкотає азссестоаво мсек їБ5ВБи паса слово пасе тача сок ссска ссавсвогоВ песо аВх і1745 щиссочікІо Факс аму своцстасто сасстоасса ссроссвава соц оо зЕих т тк ТІВ ї: І и х тк УМО шМУКюЮ у свілнвовз савлочесва часа зсскозкає сгувосвсвузо сопіненака стиск сво сс сежнзлн фаски ваниемнова іл панно зако сезавопаксх зоевсмнини єсоравстотс пестоазовах та пкаоссжує косточвтсх падаєжнвва акчессс вас с сововахцосо
М І путі СЕК стннница 45
РАТ-ЯІ1 0-5 птоз із аковахтсісі Фествоакає ссовососво пзстпУхасе кис цю асияююає куксскасвя заайодічся чаававсіа почав во ца о
МН таствецкаї їЕКЕкснаєсі дазастзача звер; ставом стявоавтсх зи ссстз стсокасахсї псаЗссасть сестсско сіє савоветоасх сІЗзетков пссївесасеє азссЕскВ звоавскацав вок менрокксва 2 зчвезсствс ззсатеова сассЗонезчв сзсстозоаа сс свасВЗ каста
М З ж КОС зе хи з ие втсокоцсе асеасхсву ан БУЧКО КК о заБО вивссІщннМме касок сац асресинив сосна їсво ах 2505 ха: 365 «ії: 1ЗхО «12» ДНК Й «їх Шбузна полідоВМНсть «аг «43: НК. анти»еКАР (ЯВНУ), сову З «ниступоме. зпитТнИи З мономесвим пи ав УК «НІ ЗВ паежіака состсоавмо) соус стоасеаос сіцассюсВо сотодовето що ше ше псздпЗосЕк сасотісвас восівесдес а гато сеоосєвОадее 2 тек амрв азсказаато зЗБксстеко Есви ово сно сексі за сказ своко меми со зетсаєсвіє зопсвервана аснавова свосєтціає зай стдсаватов вва цкоЗ ссвнас зссоксч востасксче савороавто
ЗКУ хседасае ссазвстасто жникезнн азс са сво сосевасВсе
З звис сак сазаКст пс сепсис ксспесваза своею син агу ях З Я ЗМ а
ЕХ страница 875 іа или
РАІ
ФфисетннвоК Кто чєсва спеастаєсвкс сссцраасстев має зідозасееа а
Затессстоаа ссдсвакех ссакесжже сесрестатиєс звоважисіс ам стах
В тисстТєвКка зсетачсовс сексі вадсвок іч зсвсссмнме каско є ще засзсзааЕс апавосссвоа свасассван) пає ЗАМ саадЕсеКОї що пасазавттс асвпатосшс вес са повосскава пісню асосвкояке
ТО смс Кессвавасє Єєдадрасхи сЕсВіжНЕ ссопевоксє газо кчея тва засасКе ЗО соЗвсзиаа сезон сесуВеакоя зок авс зсоуєе ді ша соч зізакще «звоавсваВа сорок зпсвНювкача сащрасахає «іЗМмиюксВ зсасссхоВЄ свкестсає сзопасвоас топа юсав завакасаво вай мЕшавювЕсї ссазозаащяи сон сссакорава азавасесвксє свазасоваз
МО шщшимассско заоавссвсеа зЗекекасвос спессссех повчань оса зав закснвеє коси соток фас кевок «см ає кокс пово 1138 теадовов а ванни бвазавсває сасавевоски спесепеевк часове 1 своєї жсЕксетНта Сстссвавска асосріочаев віза сео осв 1250 засасчевса ченка опсасоаво Зсссрзвкаса вссвстсвс ссвовнете к3хо «хзвасстав сосною заБсса вра нкваво пад сво пн 1350 пзцкиМмесс ссаатаавккс греко страсті че псує ах піка сво 115 пики ссс ззааснх ссеЗатечак узссслостУух «сток каско а їжа «пк нн таки моста воствове ащрасАКОСВа Ват 1550 страница 277
РАТ-4170-5ЕО
Ффізуассвамь сепосоюука стасукитє сСресвустов засіосоано ватЗокоЗеє
НЕОН посоазиацах стпеастежеак зестсмннек спас вас сісіово пхсео ех У щен оо щік лвосВво сІстХАЄТ Фа саХ сеесств сс ссва посох
Ще зоасесактта зптгзсваув сах своспуисв сенс авна оса
МК саціценка свовицссаЗ дзссемнає зосхшосає Єзавсвосводи сесівСвУКу свх є Є 5 Е М :
АБО квас Мми ссвоваакаає ссесанавех сени Кесекесте звБавадсова
ІЗ ками 153 «іх ФК «ві» ДНК «сеї» штучна послідавність «ЕВ «й ам имерний пи 4-і8вр 71-24) - среУ-Ес-ванию з «сах ДМК, димернив пу Я-ЯВВЕ СлІеюО м св С МКУ «нНИиЄтТупом» еко всевникес сла всЇОаЗ псподатквх сФеожасівно сЗзскозао сосни
ЕХ акзкікастс восіцвакавс ссаразсато стзеставкся Зм ек состав ає в:
КМ засос то оассваз сах свото зсаоссосє фраЗствова вно і вадуваєь мис ечА ФОН астма Бекеке Заавсцуєа «Я жкчиніоа спосо січі бін сЕскуЗ сок ЕсК ово есКу
З щи ісшк піка Яє сапкечвна стовсвацнроакскеотє рес ни МН є о: - м з З ко
ЗО панк ссоох асаосасВке Би хтсаа пшоминає касасскВіє мес
СУ пинлсосово писвкскаєса свововеннио вошевив весно зскрнвсво речи шеЕостасаа состаЗасск зексвоааз зссекссоаЗа стосвмоЗа ВсеЗоауАЗає мера : :
БО страница «45 вАТ-а170-5БО
Фр весва сс Віста аа змова каіспоства саатссазоє
ОО Й І певккосеца втстезуасвз зпоавтаес чсссзас зоЗзсіпсазав агат аетвасецає сістоацсто Фіастекяане соми каз смс сопе коао
ТЕО
Завсечкскї всвоеходчаоУв івсавевоааа сіаоасавкоа сіє твО затоках ща чЕчЕКЕКЕКо устано х воші час ачпосісвод ака о скоаЗстскас ажстцсчоаєс встає сема сепсвасась арок
Б зтодаесіве списи шкссоНє почався сет сеукт сеаподаєє
ЗО стр свіє твадсуєсов есазеєвеєсте дацісзс сасатасков зоссвавуєє
Зо пек даси таах свинка всех зво «Орасанкк
НИ завазісссс сода сте смнмикоКи зсспазазоЗ зада тевео папа
ТБ зсвссвтста хсТгеаЕсЖК сссасковис даосоньм хааза ска сс що
Чесна цкс тостовеїза сттстасссс сосдазасся вносив дачею їт50 закттассскщн авеню аа сапссвосна восотоакся ач вска каву атиє іа дсстасащес брас ає ссіцвоссі) посавоско асжвсвиам фе басесстосоа авоцрамєсса семи сфнссся козосевмем стксаассо ха осовотосо зсваоассса сасстссЕ севВівесста ссостоваце сн іще пежвоаксох пт сс ссопазакес заЧчинсасссє Затон сову ес ї1555 заевта зош тазе зувати своем сроазапвівай зкісаАнеКОВ
УЗ
ІБ їЗеЧідозсе зсзсаоааЗ зсасавіссс паовссавас сс зсевтасахе: птрамицеа З
І БАТ-ЯЗРУО ЗЕ
ТБ ящвсатвск зкЗзкачсвоа секссткакс зесстасавсє вошастивКх пазівосава іа завивсваві саме ко сеасанееєк песо сеаіжнова азспажскои лак» їхоб Ко. з За іх Я ТУ чи
КУ ааздссвнея есе ссо ми свосвЯ часа с плеса сек аа
МУ ї855О . стйзссавоаа чссвЗУуссвоа ссжеанвасє стзоасава зоитхетатс садсаавоа сто свх дажнкнчсаа менввовоаєся дазавсваск зснадалсвос зп
ЩО пешидаи тис вевЧчтоетЕ со вс заросвавзсісв сосна как
МО кнісвовюва зкчспекеко акостисяка апасвіаая сістосасвиа созасасЯ й НАНУ спвавжааєх окис сок ава ді ТЕХ Шо
ОБІУуМм «лох 37О «її» ВИЗ «кіз дик «З БтучНнаАа желтААНІЄСТЬ» «ва3х ДНК, менсмернив Ви Яя-івш. С71-а5Р е сії «НЕО 170 запоажес сірастааз сессоакочах соло оас верх псоЧичОшас зи ктєте зесхшомн ссазаво сірка все сс ає
ТЕ : З Ух шив звссннз сага аета вовцшсоНсЄ кавою тасва ян Аск
АК звелазссовр сс аа оз сзвсІасоН СТ КесаВх опа оо пак зе ях М НЕ: мене тки венохоНцо «авцреаваца ВЕКлЛеННеМ ЗБ Кепка звис ка вовтєтостя шпиннлнчає оасксснров смак оЗ Віа и Каса
А танк ска Зі КЖК МнуКткаВ нини КОКС СОКУ чай страница 23
ВАТ-Я РИБ КО зацетпев сзиаїптсв папа сс кни мес ів зстовеВиВо
АБ поле вова Касівннеї зросавка восссксцаза хжпсаНсоО венах 550
Кві зн оза асом ежК зонашннв севазсекет шксхсаси
МОЮ
«сівдеавсз зозвосасаїєс коЗсвоаваса зксрессте зстаестчї поеми кас ко кс соуібассеак зксокааНЕ ссБкКоесс спвсанаєо сосни оє 552 з а: Кк не т жтістваоссо тосКОсаонНІ сон Кастожстов Іо петсвк гм засацчсістс коаруєзссся запсехвеахтс сова воссасваос сера ваеє
Во заоч овсо воаачоточа асссавчусе ЕЕ кт «ЕМО 73 «віх ВВ «кій» ДНК І «йії3з штучна пюосліДдОЕВіКтТЬ ках «В2їЇ»М ДМК, димервив ви ЯЗ188 715 й38У З рос звеншер оз «ВИСТУПОМ» «НО АТХ прнннуес сіеастоае соссаасєцях сехостааає каста пово
У акоатІітоскс ВМ цкМмано ссавців слостоависе юс Зісскащає ї2о змиазкссто частоцетяч соакахевоко звевоЗеЧчасс соазастасав вача
Іо вайвавсетн чврамкзаа нн свсїниае беиЕКсНасї зддавск оо 248 І І І І Й завіса ч синю асссн с песто ссстосвисж певаєссксокая апаксіто сірпоссяс каста стовсмнЯев ака скск сесаичає
З пе ссовов вЕвосасаКЕ сф жісва зов еаЄє Каовосчзакс роса
Ех
Я
Страница 53
ВАТА ВЕ вестоцене беасаїсється свсазаєсє везе тауво асорсствоєа зекаас ас що
Чавес акеа каста піссачаку есссссзааа ссср асснющазас 548
Фан Фоасозак асставаа довсссоває сехсессков совтсеовчее
ОВ зжккУстце акскувовов зодавжакеє сссвоєтая брексвцва сао теєто
Бай зекаасеє ско отассскцчас ссжвес сни ям сажею тя
ФЧоастатсст звсзазузаза касававомна ско ствемвоо) поекчЕасквх я пк жКЕКс достюавст онко зіЗопіннв сі сацв аск щв сни скає зесонасс астясесієсх зпавсвкКю птоспкасе осот
Ж зинссває сесссаЗсткс стос нииє пулавсана сетісвезке сбавоазасяє що стзссвовїє ен чссво вснуююска зодатусвки тасетискоЗ воссвУВчеє
М посзласкх Фр: їсаЗоцоЗса зосохастоо заст Ео спинка 1050 звазескосо стаз сацвоєсюе весен зав ев кає 15450 пихспсоксга щркжнтсо прсосссаксс закоазасазс тозвавє своє іп чес зчуксзаасяа ЖОжЕжКАсоЇ водчаеайнста зач Зс ззаззтоваї
Ти зи аскчс века піеспацзва зктоабеаєсавз засннрактє базова аве 13хо виштвсотссс бвжсстккис сстоасаєї сстазоуастоа аїтакозоаза апгасазадте 1УКхО звсремнкоа зазїсвссов ссаацасстоа зе соасвавзво сепсавсвов їла денно кокта всажаассов сассцнессс сек сссстачаеє сазан їі сескстакат тести Кесе сссавафсє заЗчвсвоско павіоаеово «рве
ЕН
Стоначива 285 5БбО
АТЗ звазсвссх єсзютачє ачасуєуксос сасожннєс сбвауєва Фета
ІБХО тасоївоасЗ осртодааох дсвозасзєс авовсоовє свкофннме осмиасаає 185 зцоасеїасс згоду тсав сркестхни зксостасє вацаєкочех свиюсвао 1750 пцвоїнозни зсвазс іє саасвивусс сісвчнес сеассанана вас ззацссазавз садсоссоа зозассвосвоа зсосасаєст Врежексвта ссздоатово
Ма кіс сва)а агозвнУ сво сбтвівоїос спі сваво осЕтЕтвисс саосовсаке 1920 песокачвох орнєхм ксуудоєазссоя Звовзесавсї звбазовскає фсслесеціо
КК ж скзавитоко акововискк сігесестао восавослса ссоціцавова смсваену паосавоюоа зсфоктєтє айс єусатоаою скскукчова севстнсасо
ВМХ свувавовкс кегесстаЕє тесооевав «ВМ 372 «кеі» ДНК «31 штучно посмів іст ше ле щуУчна пепліІдаВнНІЄть
Кл ви
СИЧ щи ач «г до хх ку зах ку «Фйї» ДМЕ, мосномерний Вч 4-38 С71-2483 5 сні «ал 17й занНєки стовастфм: ссссвасовк сткуєстою: гтоваєсе осодеводоє тА зковтівїс аввсстріс сслвавсоа сецставтсо віасссксї зксстовках 125 досзахссто заст тоз сятатоетоа асаасвчос язазсгвсва аоадивосвее і150 зазвзнасса сзакачхсва осока пвесац фенериавсї щрмокасод 24 звреогчзкц ссоовсвацо ахскзвстсї зп лстаа ссстасВвиск са ееко
Зо птраница КЗ ду - АК азасстосіоа стдєоєсвс ссісїдесєа сєдасаоєую висетросксс куссвокадє їБО цазоєсссеюва шкацсвсвкі мої кіжва оса: пасвоскееєс кесцзнав
СВ мкилозаво сві а сасвовннос змія асасссосв зстзасвсяе дкаскаєва коєстеасссь детсадаюко воспссовов кжссвоєсов вскововуве кА певчассскоу задасозаса вкскаєтаує вссаввовеє скоса посі
БО сетадсткса зукссассЕс сровоцоває Зстосескся фагосстеЗЕ озадоешеках
Б) скл серзасачх чистооаває васоочесвс кавсстолумр з акАСЕ
М. кжЕссссЗста сита сВОаєс сістозвсха все ясаас пса 758 зиафсацс минюкассса дассівсвїє гсвасоатая зосасвамикс садеваєвся
Ай зазаказаса зчзавоазкаВ всссвацкк Ку ке ; : : а «210 173 «ії УМ хЕфб» БЕЖ , «33» штучна поспідевнішть «Й «бай димерний ни «-їВвщО с71-0ЯКР - СЕС адницюг З «вяступомхя «МНЕ 175
Ага бів обі вто бів мав Же Рг) Ар оАчр го Аза Фіу Ге грец АЗОВ 1 З 10 їх і«з ага бій бі меж вне дів сій рем маф Аа бів азп уві бе фев о 25 30
Тіз Ав о Біу вгО мжа бек тер оТує Швг Ар о Ркго Фі фви вів Бі Уді
Мжгоіво тнгосіх Бім фей де Ту їж діб йо ТВг обу ів ец ма! хо 55 ща сСтраньива ЯБЯ
РАТ-АЯУЮЛЬ ЕВ г За чи ча ЧИ Щ осрллую суку ху їх шо я щік з ж гг
БЕН А1а мув аіВв БТіу щі Тук о тТук Уві рБЕ вве іп свв ов мед Ага де га т в щ ш зх їз ки ураху пі мі пох їх щ км гук Її дго Уа? Уаі КІВ «Ту іч сіу двб піу зЗег УВІ Бак ому АЇВ івм нів да БЕН зх їеробіпт Бго їв да зер Аїд дів ші» Аза ала дія ів дів фо те
На 1 З осен АГВ ЗК лід Мій ЗІіМ Аа йза лі СЕ Аа же пт ке Мк Іа чаї аАзв ово вго вуз віз баг о5вг Бір Аа Аг да хвк олій РАВ Фу вне бів бі Ага бен окев Мі5 вв о Яаб АТ ШТУу БАКУ ев обі Ук
ЕІ і що ні ви мі ТВ ши Ата аго вів АКо о нія дів о тгвобій зем тв ств 145 ї5а 55 150 зіо від ств Аді їм ху іо ВВ» дгий гдї те вго ОЗ Зв орга Аїд біу бів уптТ мі Бред обі МЕУ Ве АБО ютіІ мвВго сбфн о ЖРіє БгО Аза
БіУ ке вік бі біу бі Бак с1у бі бік шіу бе Ак бів бі вго 185 185 і50
Щім жи бек о Бго АпроаАБо Бго о АТа Оіу зво фе Аз оман АКа Бій Бу ж ф я р и с цк З дому чи у с віх - и т
Мак рве аїва бій гемо ув) віз піп азя Мві Бевофбев Х)в Ар ШІу вКо зап 215 Ід, й Й км «4 «А
З шь я бе сим ке туту МО показ кл т баку з: ких тт іен бек Тр туго бог аз овко Біу цви дів пі Уді Зако обем о ТБК біу вах М: 235 що
ОЗіж бен деє тує бух бів 4ахр о твг губ біб їв» У! хз) ді ух Аа зак Кг ки кл и ТК км кт х - ча «г є що о є (є ї в ч хі уз) Туг туго УВІ Бе вне БІВ ав бів ім Ага АхФфоуВІ УВІ Аїд ща 255 3 сі «іч Фі Чек о біу бегоуді бек ої ів ішу МНІіЗ цец бів Бго Ба сСтраници 585 ват-ФіТО-яКО ага Жвг дія іа соту АТ АЇВ ІЗ веб Ав зви те УВІ Авробвми вго
ЗМ 255 хой
А ще а ОО рго АТа дет в обі АЇв Ага Ази Зав ДІД вне о спіу Ве обіяй біЖ Аг
З у у свищ ря ; чу т ех
КУ ВЗН ЗКУ ККУ іч сви мів бви ше АТВ бі біп яко ра Бі Уа мі Камо оні5 ТВт дп 7 порох Й зчо
АХ злу дал він дів дго АВ Ага ні Аіа тТгробій ібц Твг обі Бі лів отв ма! 346 345 З
Чем Ффіу ац вве дк ді твгР ого біц їі кго лій Фіу без Ту ФУ
МО Зах біу біж бЗег СР біж бі бі 5ароаго ТнеоУді дів Аа Бго Бек У
У 5 Й 35 не їіз ба» бек» го жак дз піч бій і 2 «ее ек пі ТВр АВ Зв
КМПе фе яз КК Кг Маг АБ о сРМ «ФфІій іш бух лек обі г ОАВвоО ЗЕ:
ХХ 9 Зк що
Уві уві Суб бен івц Аа АР РВЕ тує вго вага Біз АЗів бух мі сій 305 З10 І тва Бук Уві дБ да ДіВ Фев бів Зак обі Ажхлп о Хвг Фів бі бек Уді
С: 425 БАН тнгоБів віп Аза его уз АБ оЗвК о ТВр о тує его офем ет бек УВК ої ви
Се я БМ 433 Я ч45
ТР омецз бегоцув АЇВ Ар отТук сій уз Мі вуз ха Туг АтВ Сук БІ ао Су з чаї Тк ні бів бі ем Жетє дет вро узі ТВК рух баг РМЕ Ах АгО 465 еВ 425 ЗВО сі бів був Ащромуз Те ні ТВгосСух вко вго Сух Рго вів вто вів «85 аа 455 дід дід пів бір ше баг ді ре оїри гак о йура Вей рук бра фу дв ді Ага зу бу га ве Уві вже; Ве Бре оБго бу БО Бу АХВ 500 505 аяи страница ЗЕ
ВАТА ВИР УКИ
Трої меї фі шк Ага Твг оРгОо Біч УДі ТВгосСув Ууді Уугі хі АЗр
Уві ет МІ ІМ АЗЮв Орго Біб Уа! буз БНО да тр тує Уді зв У
З 535 АВ
Уа бів Уві Ні де дів фу ТВ ож Бго Ага бів бів вій туго дей тег твг оту Ага Уді маї Бек омаї ей те ма?! без ніх 536 Аза Тер
За5 й У75 ім Ах зі уз Бій Туг фух сСух рух УВІ) Зак Аза ім дів фа су
Аїд рко її сім оїу5 тТвгоу16 Берг оку АЇв вка Б3іУу Сів Бго Ага ОБіВ ой 505
БтбобБів Ууді Ту ТВгомжн обо го Сух Ага Ав Чім Бен отТвк вух АВ сій уві бежгофка ТгвоСух вач Ууді бух піу Ве отук Рго баг АВ Іа
КІ Б ві ще
АТа уві (ім тк осіб Звк Аа біт біб Бгто бів ха Ачи Тут і ТВг ах 53 іх
ТвкоРте Рго Ууді без аз Заг Ар оБіу беаговНе вна емо туг бБег кує ока цех 673 зав тТвгОУЖІ АЗИ Бу Заг о дг то шій зЗійп о Біу дм УВІ рве Зек Сук
Зже мі Меї Ні 5ів ів їн о ніз дей Мі ТУг ТВЕР Обі бух Зегогев вче ши ваг Бгто 5іу уз 75 ги «ЩО 178 «ії 1 «ИЙ РЕК сСтранина 257 вАт-4170-5ЕО «ЛІЯ» штучна пПОСЛІДОВВІ ЮТЬ какнх хеййх мономерний Би ЯеівВвЬ ся я СНУ «ах 174
Ага зін бі кго Бін Кей бве ВРО Аз о азр ого Аїз бі мен вен Аза іец агш осів Оу мех рве АЇВ Бій рас ува! Аїа шів АБа маї ре ів
Ш ЗУ З за кі г ж тів де Щім г) кг Фет тк тТме пет аз річ; іу іви дід пі хлі
ЖІ Ав оміМ Рг іо ТК отТує бек Аза о Бго о бРу ви діа щіу ма 35 Я да
Зег рек тпе сту Сіу ев заг отуг куб Бін Азр тк рух біч рем зві 50 55 ЩО маї вій Буч Аза біт маф ТуУуг Тук маф вве вБе шій фізич ОРе бен ого
Б й 55 во дге Уаї а: АВ ОіУу Січ Сіу Зоб о біу бек уді ЗекгофФвн дій Бемоніз ви пів Бго іви дра беє ліз із бі від аіва вів безпо дія фжм отв цю 105 Що дк і Мих їх ді: так їла ж іх и шу ще зве тт щі АВИи Мен БО Бга А)Зз 5Зер обЗаєб пів АВ Од З ща ик Аді впЕ іх
А 125 125
Біе іп зіж аз ви би Ні5 Сеи хаб АтТа сФіу бін Ага ев обі уві 130 ї35 150
Мі5 ев мі Те обі Аа Ага Аіз Ага ні АТа Тго обі во тб обів їх М 155 Мо
ЗІУ дів ост Ма? вжи З1у фей ВНе Ага мві ТВеб о Бго ЗіБ їі бро вів сі ви обі бі діу (1у жеб Фіу ФУ біх Оіу бек А)в Зеротвк Був
Зв їх о
Зіу вго Уго вне бго іем Аїда ВРо ог его фує баг Твк бек о О1уУ страница ЗК ват-а170-5ЕВ пі їВгоАта дів ів Біб був бен о Уупі вуз дротУЄ ББЖ Бгто бів вто 2 З а Зк - КЕ коки ких ох чаї так УЩі бек тер одяй бек о оіу ай фен тагобек Біу маї Ні ТВг
ВЕ Рго АТ У) їец бій 5егобег щі фен) тує дет фен бек обек ма 235 м 255 заі тв охуаї ге щеє бек бек оре обі їйг бів те отТує Хі Сух дай
БО за та ча! дай ніх бух РКО Загх Аа тТнгодуз ха) АБО бух фух ді бів рго й 5 ке їх» Бак Сук ка «каМу 475 «2131» 85 «Ф125 МНК І «1ї» штучна послідовність
Зх
А ІМИВ
«йЙУУ ДНК. дити КАР СаО). Бсоланцюг ї3 «западиноше занцюг, злити з димервзим ви 4-3 ЄРАУ «ек у часте: сустсоваво сосна сен асаас скоса ссср й мно сеардсвок ит савосгесвоє вує а тенета сего 150 сптвзоасавев застосо затетесвс абсвеки її соозасоссад сасскаєтає з чесне аа свое вітсасскіс мк овуаса вовосааваа своє гай «касвовіва асадсстесюя зассоводає воскова аскмощювє свавенноз
ВІ пепозсовся ссоваствоїо поеми абссосіощесв садкаксосгаз соска аєо
ІБ зашиссст ссоїаЕсос сс кссс осад а содової сосок сСтваница 88 вАТ-ЯТАПОВЕВ
Уч п коЗВес зсстацесаз павсІвсвіс сесовоуєсто саке кс став овВух 450 здовоссства ссжовсвї фсовсасскЕс сесрожне месник Проте ках
А щврсеснна ков ас спос сю врХазсокао оквсссвове сеасвЕсТоє
Б засзтнасс деваоєстац савесвосааа зіоасваза зоре серестує
ЩО пвсзазаєтє всвсатви є зссаккска фак сова восцкпауєє тка
Ікс сІтКс соссававос сеавововос стояв сеча при иапа
Во зро пюкув семеоеово ссворавово сокаааісв воскссвасєтор пса що ост ззсахтаявтоє саазасза ссср ав кастав сапевоеве
КЗ пакет тся асист кекс касВс сафівсн тозатесза чоааосвева цекемниреж сезвсвавеєс стрес кскВвінмна завссчісес свавцсєвва що шивевсос зазавссвов зоасасакс стос сова засво аассвжщви а спісісуко сов свавз пп птаїє совакавовк спон
Т150 точЧенняесЗз зтзчосвНсс спзазаасязу фасвавассВв сессжсспої оси 1200 папа жесксетеВЕ оазсачскс зссоквіаса хохусаце чи 1250 звсотсЕкк сапртскоїє звізсвісеа посгсіз:всв всевскаєвос свое за ши І І І пшістсКсН ск Кноо еаасдоеа «зимно еракска) вещнКсех 1350 шериовакс споззтаатес мркжоазаєста стрес тоє паз овВи пита х 1450 «крщичссс зоазасчх зас досссскц сстпакасаз сову страница 8
ВАТА НЕО киостаео тетсасканс зоцсдоєсто аостасазав зозалассваа зазмаєота їх8В часом соспоусеєаєв сівсатевес кіксєювр азстаеоюоу аску 1559 рова зави сіасжсвах честі цаєсс стосахскоє васштеївМм: вк Ко 1555 шипа сЕстоевсвої засазЕчнак свое ске певасієсва зсув 175 ува зУстІсавню сао сосок коте спосо зскОцЗ 1500 спвлсснвлюз сайаозесво засїненсвс сссковсвас всововао соствовото
Її стека соазавтоаас сессоовВех ссвопсрУєс пючосоцацоа сао тоУє ї2о чех сів аспсоааска феспсенма воску зсув 1950 стайню чвахзїкицо ссавссова звесесвовасо сасівсковВк пед
ОО птсзаста встесеногос вивіз а зп еес савсмвнюВ встає гм завозадакта сзазацавсї ззосУвск зазасекнке овес зад 150 стозавсєв зеседчесх застпецоа зЗсксведає ствтавжосех застскасвх «хгй пжоснрфсас есте срок остасасіве схсхавоах зувссотся еко севассісе Зсзацассмі зазсоеасясо Кар заошасВсек зскасвкокоу
ФМ аасосковає Вемхристнв: ватоєакска сабассовав спвовско пово тоу
Аг у ! й Мой
ПУ сна ссс азудзузсвеє сова сесктесдсо басасства закссстасе
Ре
Фастов зу «Мун 175 «іх що «2ї2з ДНК «ВІЇї» штучна послідовність ствавина 2
ВАТА ВЕТО
«аа» «Віз ДНК, анти-КАВ гаВЗ, Кознднцю з «вистуоме, ЛИТВИ 2 момамевним ви З-ЗА СУ еВ «НН 17К овозізсавєс тосІсавава спосснмем стопїасов: сн ошва сскнюнеоко
ЩЕ дКуХ - щ їх 2 ПЕЖО ЄИХ ЯМ ТХ че ЩО т аа ч
Бо асо ссвасачикі свсптікснає вастїасвсоєа кеВБрчак созуксвувся їі состава паска Аава соц агат сВ стриоа сасстастає їхО
Фисзасвсо косвоЯцсоа чексоасовис весни асаусавове пассозц стівсвоавіав вещеассївзся поса ссюбсвтаї засів садова за кісафНх хсваєтаску заовсаооос весстцуєсв сек ссва суєта з зазчасссове своксктеск «сіємо жсостєсваца зако гоя «усе
Аг чисківеНск зссптоуєсва синок жкс спсрмигоав бно цє зіддвасієа песо іза спосо зсвевсскяє ссопасжатес бвоваїесвс ваоовстстає
У н ЦК С З Че а
Киссткася есатТоуковс спі вус ї ков зсевссомаяє се сТОЄ
ОВ звасукоавис всипгусссяв савсовссава зо озсзвза азозктзавсс свазеесеках
БІО
Фдазвєсїе асвсвівссє ассохосеса осасствавоа сезсаннювВ зесавиаає
Мч тсстстЕсИ сессвавасс свазовсвВос стбаївЕсх сссооаассє кова
ТО хапукаооа інша повснеміЄ сстреаоцісєя вобесзастоа азкасвіоцає 8 асом тосатавцк савовсваве собоцвовму засватасна саусвеокає
ПО
«на сака сток свЕссксас сазовссЧвс казахчосва спонук свае
НЕ х МО Є твсвжКисх ссвасаваас ссексрсвсс сссаісзнма анасезісїє сваазассвая
Мо
Страмица 95 ват. 5Ей лпипчеазсссс адавссаса зас секс оски Зсазазаиа фетовосваЗ зассвоне сссіцізако сома свана Фоскісївсх ссароаатає сн кзадезазсв всуоссвесс здадавсває схасавовеса сеобссосккає ска 19550 зЗзаслйсавктх сетер птссвавотоа аспуювивєв адавоссчнно зсавсвоцеє авсатоїкса остоєесюх звкосвеоно зссстасвся всовохасає ссвудазтсю 1 Б ктвдаоссіов дес зечсчосоца зукдовоацвя дафучвессво винне се 580 І зазсївасс ссовенатос цпрктопвсті стдоасев рони аї кекс сяз ії ствчиансскс возвсвкасе астадісває засссостоах сссовтвова совка жк, Ба і; ії: і: 2; її ех їх ХЕ 7- з де 1500 стідзстоазсв ассастоде восоеста засос азразвсевесва верес соцко 1555 зви счюсаца ссср екесвЦскю застасоцаЗ засо 18205 . засзавоцах стає коках птетолекс сс ссує восететава ваерЯсеосх 1550 десзскасво сксксвої Засазеаає ствсскеєсто севцєтесв фассорюавае зу зкасаисе з есавю саецстасто своскакока соду зсуву
ІщюЮ каксіцтаєа своувевссо) фаскеаоаове зоктвеєа каасасвовю састака і55о шишнрвесжЯк кове зенм ссоссцаваке ссасссрои то їх «АН 177 «гів БЕ «210» ДНК «ЇХ» Штучна ВОсліІДОВНІСТЬ «вх І «23» ДНК, ПРЯАУ-Бс-ланцен їх «здпадивсою», ЗлитиВ З димерним БИ ззвВ СЕ сЗтезаница З
ВАТА ЯК
«ох 197 ще осеах паксодацчис тео смачна Єтецоаке єство
І ї«ссіркосва «сессрцае сасосеккнає здкенцьксв тобостає сс хо спезимиазца пзпіниноа зокскозаєх актзоасвиз зпозізУуказ сасеастве зчсвавсіссе кавун ЗксносаКо Кссвренее зх зава свсасіі НЕ
Де І І І ствсвовтаа аєасстону адсоовуцає воооесвквх актив какає ававезсває
ЗК ши лічВої всочнкнни са проса чсВвосЧКої рам асеаЗ касоВКиК: кисхрук пЕсксоцн ссср варнновека екв аюво папки
ТУ Е Е вач шип оссме свита сгесссковоа ссавці сссЗаа сова за сЕцвстіскУ ссвісвсве секс пива ВККС Яку рю вевосціцв ссвсосціої ктожвесюрв сівчуєвкосс воместакю кис
МЕ вессвсвазс созвсвасас свазоустезає вазазвоіе зассснв спо вовав.
ІНюЮ звсексасасат восивосоа сссаесзссе ззазстоасвао пзиавссзшо ваше га ікс сва азсксовеаров сесссксвка Зестсссзоа ссср сов
ТВО сич св своое зачесстоачя зкезачекоВ зостЧокасЯк заакасака
ВНІ шими звкакта акассавовс паззссвовОа зворавсвУх всавсосвоеає зиск аю пісжзсакКс теасовтесї дово пк козає зеавнноєа свазбосвАє ве пФкстссавсв вас сстер кпссорссвти паста кекосвиаає свавоцоаа аго стдвннає сабо єю свосстассс ссакоссроюв візастває сазоуваєсво 105о пс сс нЯкх сазаоцемЕс їбвісссавсв воВЕсосоє ЗУ УЗоВо страница ще
РАТ-АІТ70-ХЕО мо ззсазічавс мекгодазав савсіесааа пепашоеесес соечосіцаа сесозВсух 1200 чисте жжксє сома застосо Засаневма орбоцсноєа оз і250 зи ксвішек состава мин ско свсоаайсвст вовсциаав авохети зх20 ствкстссЗа УЧ сао змен и совозаацав сосіцаек іх зфссссовкоа аксстосто восбвоаає сера асетакекає озна псссазано касервоічвк севбоаєсюс сс вовасваєся сова пчсшсцвевс фЗасВищвчМ сомрестає завоврфуаєа сенаезааєт суку їхБо «ваоссаоко соатаствск чекетЕксва ссжреноне доаваазтачї звоссоцецва 155 зіавтстоцех сІсзцесеК соски пи вВеКее жену кеси що пн жстЗо састоаснуУє опазлеасст сствосноєх спокою ска ися
Її ттеЧофіексо аводсаовсє Зсезсвсосов кер срес алу астосвтсто 1КО0 свивсвищ сопла ссср савпсіовсве вас вче точОоє їв стан сувсссссза ззЕхссвого фескоисЕК сесезававні спас а
Не часі фс зісіщено зопвсссЗаає се сехаа са
Ко паста виснов позавкктє пссспасіца баса ак асте «ОО М І Ши звттпвсоцає стсхцВта зкастссоас ссворостоЗ сао сота оцо
МК завезцісх асавацавоя басвавацав стипЯ сзвавоаста поки тах 2Іі6о чЧЕчссстс восточаасх дари зцюсцекю кисті свЧа акскуєаксс й слрамица 595
КАТА АМКУ сот ествх зіпаичмня воски остов сво свої зе Жкааек
Ага зи асстас свссеаскІс такзаУзсс воваасаосо ссср сезаоаКох и й й й
Оу січртоакаєс сприсассо) всжмсвсоста ссвакасаїс Босакаєтаа аосацаВсс ва пзчсасцеку досавстцає коведуцуєа аставотю застокжеєсю сотавсвосе а зчапвтссл соч щис зафсскаца сао база «Ех ЩА «іже ДВК «Из Штучна пОспіДдеВністТь «еКИКУ «айух ДНК, ББа4У-Бс-панНию З «виступом», Злитий з моноюмерним Ви з-їі88 71-54 «кає 198 чвдотасавЕ ктексЗаас свв срачееннв сосцошачс соках нн статок ксвссат сассі пе ке а св ізвастчк косих ссавдоааЗу часні щебстиоався зехазтвУїа за єне свовсастАє 155
Фр св фена Нік снссвис фссонвоузсов зехксавова сасасечечЕ
А хлхрсвавіта асвасстУмнІ вес мнинУ: асоасоває акххасхазк зва щі МИ ча ЕКеднех аскорувсса аообваєсста ссозссксх саззкастац савставодЗеє
БО І сс жест с ЗссстсстЕс ваЧацевиоя спПрнннмає верх яКеета 320 Й ечустоскцн і свацовєта «птссссови Секс Ззжсаоав сте сІчвсомка позбцсвовос стіп х птссінсВОк сстоВваВек Се сике 550 засаосоствІ савсспецеє стссвосваос ин алесс вовссІквоВЕ ство
МЕ страница 89
Ат яп ЕЙ засвсвааст ссашсвасає салечсає ванмнмнрта восссазаеєє епбавсвай що аплодсасах пива сесенцеск зва ад свенковс ати ЕкиКи
В ікси сссви звсссВващва свосссІсако вхо соссВх сапу яд й я ізакачася спвоссасза вовсспоцао стсавоттка асокозсвсох дався я зазатоквів звтвссавцає зазвсосесвовоа пзалпазеєвиає асазовокає зими щі щи своє дс пк жк Чевссвода сії оваєа асан та са нави
МЕН І І ієіссавсв ващессіє соссоспса памваавасса гоКссвавоає сваха
За20 сеседаднє паспачечЕя сао ссссвавез акаеастови пава 10855
Канава зів есстах зиск еє сем кїє салсловоюо ЗЕ сесак скан 1142 й
ОК аасаассесе з3ссхоувува сазстасваа асесяесссесо стро садсацає й зла й й не й
КАХ
ВЕ сктис циаскссав вони пасинок с загачсаєх Фараон їзей Е
КИ кеЕсВоєЄТОсСя пеотовека саночесеохе сасавесяся вовоссвова втсссЄтааНє 1325 кто шевовмМио перевода свмндемВе й сбпенимНнив спосо і58о хм сшніч віпсокаєОУ аствотвн скзоошвсня вовжахікоє ковтка песо стос шЧак поз схо тч асо по
НУ а
ЗЧпстчсщсвс совасвоцсЧа ссспасекакє заададовов созвацаМеи заесачЕвсє
МУ вени поквоїаск усе ккча сюнаскоє зав осока їв п сх шик ехсЕ вепсишвіви стопі сс бодопавлнє сан сх ів
ЗАМАХ поп во свотовоВих Факекосек сот ссоавочесі заанкаса хг
АЙ страница 97 ват-4370- КО кис екк вазосвацтї зсув кохчссєс аа зак атко їщбо свсвсжннвм; стазоастаа асеакса сртовсвс водоєває вахасче стзтссзавоа бовасскссов зЗеессазсс осот есЕх стссаанаво сваЗ 18515 «йо» 1925 «1 а «айЕУ РЕК : : «13 шщштуУчЗна послІДОВНЯСТВ «ай» ОБРЯТ-КкК-ванци їз «Западивою», зяитий З дивФрмам ви 4518. 171-254 «НМ» ТУ цім маф бів ваз вжи щім жбег піж Фі Фіу во уві бів Без бік біх ї 5 та 15 баг офжу Ага івц Зег о сСух віз із багоБіу ВнжотТвг вне Бак оявк о тук
КВ. 25 30 ід Ме йвб тт Ууді дАка к) Мід Во пі їм йіУу фаросбів їх: ма відоме пет Тр оУВІ АГгО бів АВ о ВевВ ові КУБ о хіу Се сі ті хв
С Я5
Заг вів їів їі 5іу Зек ові» Аїд Заг оті Тук Тує АТа АВ его Уві що 5 БО іу5 бі Ага вве те її Же Ага Ар ОАЕ баг ух дви о ТВгоїац Ту п ТО 75 ща ім сбіп МаЖ Асв его офем ака діа ім а тТве Аїд о УДІ Тук о тТук СУБ що зу
А ік ЕК бр бі т, іх» Му дома о сжлує учи ми кі Зо су кі
Ат ку зіж ТГВОБпЕе сіу шіу вве дей ЗУЄ ТК бу бів оіу Ток зва іо: 1 чаї ТНК жар его Бек лів щег ТР обу Щ1у Вро ЗегоУаі Ве вго ред 115 зх 125 дій Кго бег о бек офуз чек тТвйг о бек бі 5іу ТВг АїВ аа їв сів суд
Іо 115 140 страница 85Е вАТ-ЧАТО-ЗЕВ їжи ові Був дер туго вве ро Біб вго Ма! тТнгоУві чат Тк Аза 58
ЗУ Ай Кен отвгозек бі Уві Ні ТВ Ра Рг вів ма! вен бів Бех 155 178 ї7х
Зак оБіу бен отук бек рем баг вт оУді жі ТВє Уві рей бек о5ак бек і1ха 155 ї50 ішуи ші тве ів тв ТУ жі бух зт УДІ Ах 5 г з Вр шик де вм о фіу так ошій тТВготуУуЄ Хі Сух Аз оУДІ АВ НІВ Гуз га жаги 135 ІЗ 205 в. бух чаї Азвоіув му Ма! Зі: Вго зуз Мг Су» дер фу ТВгОНіЕ га 25 20
ТвгосСуз вБго вБго Сух го Аза реко ців віз дів бі бі Вге зако Уді ях Й зай 25 Й й заг
КАХ КМ А лі ква рем вбае во вго бух рго Бу АзЗвотвК фев маї тів его дгУ тТВг
Бгто бів ді ТВгоСуз Ма? У! Ууі дьромаі бек о Ніз сін аз рго піц
М 365 й7о аф вбух ВВЕ АВ те отв ар о Ахрошіу мні іш уві ні« яз Аїд гух
Твеовуз вто Аг Бі біб сі» Тує дев» бат ТВ їує ак Уаї Маї Заг
ЕВ зи БІ чаї ем ТВгоУуді Бей ніх бій Аз оїгвоіен аза бі уз Щ1д туго ру ще 315 Зо
Су ж жі баб деп бух дій фен бі дід ово Хів біб буз Те охів з зав й 35
Зк. ЛО їла жигорж» АВ був ЩіУу сіб вгО Аго бів Бго бів Уді Суз ТБ рем Вго 340 зах 5
Рго баг оагу до ім о Беи Твбофух АБпобів Уді бЗегозїви бек Су» АВ плраниці 299 кат-4у170-5К)
Уві ух піу РВЕ тТуУгорео Баг оджр тів Аїа хз) ФМ Тга бів бек Аз сі бів вто 510 Ап Ази Туг бух ТВгОТВР вто Бгто УуБі без АБ жа 85 385 Уз5 БІ ами Бі Берг оре Ре їви ма Кжг обу іву тТвк УВІ Аза оїУуБ Баг аАКО 05 БО 5
Тк сій із біу дало уві Влк бег обух Зако мар Меї із Фіз АТа ії
Би 25 5 нів вазонів Тук ТВг ОІВ уз щет іжшна Чат офкц дек вго бі бім і «4 445
Фіу сФ1уУу бнгосіу с1У піу біт его ов Бін біу вко від цец чвк о вго
Ам ау 450
Ази аз овко дів оБіх ве; окев Ав обен Ага бів с1Уу яв вва Атв дій зх за 375 50 іги маї 43із бів хай Уві ши ій Ті Азв обі Бго фев бер ото Тур
Зако оАжхвоБго бі їжу АТ шіу уві бек огбем ТВб фу Бі Фев бак отТук що пух У іже пім АБО тн Ух бін іс тді Уві віз груз АїВ Бі маф Туко Тур уві рве вве вій ін бів фев Аго Або Уа чаї дів Ту Фі ТУ дет
Б ЗХ 5 пі Зег ота! чего оїен вів рев оні5 бер о бів бгбз вже) дк бек Аїд дів с«іу іх діх Аїд іву Аїд рен їй уд ав осей бго бго Аа щеє ег із дів Аг Ай Баг я ве бі ве бів бі Аг бен іец НІЖ іги
Страницво вАТ- ЯКЕ О ваг Азв обпіУ бів ка івмошіу жаї ніх ремонів зве Зі із Ага Аа 595 Ммю БОх
Яка нія аа ткробів рен отвВек сій с1у АЇа о тТвкоУВ1 рев обу ви вне
БІВ піх го дгу ма! ТНкоРгОо ім Хі Бко вів Біу ве Бо ее БгО Аг Бе ОМ віу біу біу Бі Бек офі ФіУу «Ту О1у шаг ага бів Бім ко хів во нах 55о пт5 чес оврго дар др рРго віз пі їв із) Або) ага зій бу меж вве
БО) БО 570 із ві хе ві іа дій депо ожаді ши іо Ті два бі Біг г) Зак із БІВ ев УдДіІ дра піп о Ачп жа: шим ви тів АБИ о сбіу прое За!
БО 58
ТгОа отТук Заг одер о вго сіу фе Аа бі УТ Заг орев Те ші щі вм
Ва Ох У
Баг о Туг ух пі» 455 ТВг ОБУ біб зен ові УФ Аїа фу дів бу ха!
Каже тів т ТЕО тур туУуК ді ВВи Ва бів ори Кін ів; дра др Уві ві віз біу ді
ТУгоїук ді важ о вБпЄ бзіпофши 5: БЕ АГЯ Аг УВР Ві Ві ОБУ 01
ТЕ5 23 755 5іУ баг Бі звгоуаії фак рем Ав фев Ні рен сій вто рев Ага Зак 748 745 Що
Аїа дів щіУ АЇїа Аа АВ ів Ай іец твгоУді Азов ів Вго вка дів 755 ТО т дес бе? ів Аза АгО Аз бег Аїд ВВЕ біу вве біз щі дгарівц реву
У Й хх й Ом 7 Щ
КУ гій го ніх іжм бек АТ Фі бій ак фено обіу ві нів їФв мі ТВгопіц Аа
Ага АТ Ага ні Аїа тгробів веб їй обі біу Аїа г Уві) ів оту дв ке їх
Ох УНН щі
Страница 301
ВАТА БЕ іжц ви дгбаом тТБг обко бі зів Бго АЇВощіу бо го сег орга АК "Во Щ25 358 зак БІВ «ЕОМ Во «1їх 55 «ві25 вт | І -2ї135 щтучна песлідсовність «ВІ» «ВІЯ3х ВРЯ7-всС-яВнНцюЮг З «ВБІгУломе, ЗпИТИЙйЙ З кемзмерним Ви Я Щщ с71-2543 «НН ЦЮ сів маф бів рез вжи сім веб Ту Біу біх зб уд! дій вро сію с1у
В 5 30 15 дого івц ага ів беб о був АіВ А)ЇВ о 5ек о біу БНО ТВ РЕ Берг оЗек тує
Б Зв й Зх зл з; м 2 хід Мет заг отгор ма! Ага бій діа пго сі Ух сі рев о бів тгю»оУді 35 зо Ах
Хвг дів дів Я біу щег Фіу діа пе ТВг тує тук Аів дкрожвк худі | 15 БО
МУ О1у Ага ва о твг їі Заг оАгО АБО Аз ЗВГ ОБУ АЙ ТВгофве тує
Та ТВ о
Кен обі Мек аа бекогбез Аг АівВ оЗіз джхротвВг дій уві ту тує Сує
Зіз уж пі ткр вве бі біу вне деп Тук Тге сіу піп бі тТвгоген їде ве 1
УВІ ТВг ові Багобек Аїа бек їнК фу О1у Рго бег ді Бе вго рев 115 і20 1-5 хів вго ЗегоЗег о цбуз бек тТВк Жак о сту сіу Тр Аїд Аз зав опік Суз 150 155 140 штраницв З вач 05 іри ді г дер ої вна рез ін го уУулі тв Ві об Тгі 4з3п бе іїви жа: ж дер отуг пе ОспоБіц го УР тв ові аб тт АВ 5 145 152 155 ї150
У АЇв їв тТвго зве ШІУ Уві Ні ВК оРває Бе АВ Ома івни спі же
Зх 170 їг загобіж кеч туго бак озамй его Хек ов) ма) тТнб о маі вто Заг обекб Баг 150 їх іо
Бен ПіУу ТВ одій ТВКотТуг ів бу Ав озаії ди Мміз вух Бра пек аа іх Но я тТвВгогу5 хаї АЗромкув вуз Упі сіц Вго іжх Чет оСух АБО Бу ТвгОНів 218 215 ве
ТвгоСу5 Вго вго Су» Бгто дів кто віз аїв віз Біу біу го Жак мі
Жа5 Те їх їй
Бе зви ВВе вро Бго Бук Бго Вуз АЩООтТНК іди МеБ ІЗ Бе АБО ТВг ах г -Е га й а вто Зіз Маї твгосбуз УВІ Уді хаф АЗзрожзі Законі 5ів Ах Рг вів аа зх з
ОМ. МА Ж та ку Ва Аж тТгр оту Уві ав біу уд) біц Уві НІб5 Ахва діВ у 225 КІ зах г; кокумх ГА
ТВ фу ВО АФ ОСТ бів біз їуг Аз баг тТвк о Туг дка узі мі Зак
КЕ 25 що чаї ей твгбомві бо Мі бів Ахв о Тео ори дви оіу Ух бін Тут гук
КК: що 315 20 дув мув Уаі Бег Ап ОКУ АЇа баз Фі дів со ЗТ піч вух ТВкКоїіє 325 330 335
Зв оБув АЇв обу б5іу щЩів вко ака сіц вге бій ві Туг ТВргРозвв орто
Мо ке 35о0 го су Ага Аа Зі фен тВгорух дай спів Узі векКобев о тгв су Кай
ЗБ зу ставив вата 5КО тУаї іжх Оіу вве тук обго Жнгоднр Її Аа Уві біб жгробзів ек ЗВ 370 Ух то сіх сбїв го іч Аз Аза Ту Бу ЗК отв орго го Уві ву бер ощег
ЯК У 335 ще ачроіу бак КнНе вро ем тег Заг бує Ба тТвг о УЩЬ АБО фу аг Агд 405 312 5 тТта бій біп біу Аза ма Не зЗек Су» явгб оті Мем нів бів Ата Бе зх 4325 аз
Мі5 дж» Мі Тук ТБгошія фух бер фра фег фен обек Бго «іу «Ту шу в 445
Зіх біу йпег біу О1у сік бік 5акоАгу зів сіу го ПТУ Бен оБеб вро 3552 5 ЗБ
Анроажр о вгоз АВ щіу фецч іч Аз оКеч Ак біб бі Меї ме АЖ дій ч65 ал аа 450 їжи мні Аїв сій Али та ман оісги 16 АзроБіу Бга іши аб ТК оту? 4855 АВ за
Хек аз о Бго сіж ібн 3ів бік ді Бар оїжиь Те щу Сім рен обет Тут
ОЗ 55 а
Муз біз вза тТвг обу бів мно Уаі жа АТ фу діа пі УР жук тук 315 520 Зах І чаї вве вне Бій обши «іш фе Ага АБФ УВІ Уві Ав бік Зі Б1у ет
Я АКЯ У у
У 3 ЗО з іу дер оуді бак бе» АТ Бец нія фе бій Бо бев Ага бжг АТХ Аїд 545 5 55 о пі АТХ Аа дій івм Аз ізц ївг УВІ др орец вБгО БгО Аа бег бог 555 зи 55 січ АТа АкФф ода Зет АЇд Ра бі Бе бій біу дкщоівцч фев онті ав «й зу ща странича З кат а1705ЕО
Заг Аїв Бі біп дев бни (Ту уві Ні цеч Ні тйг обі АТа Аго АТа
У мю Ох
АгФ ніх АТа тк обіп без те бів бік дів тТвпе Уві ре» біу ву вне що Ві вгз де ма тТвгоБео «ім КТ Бгто ЇВ бу Кв Бо век овго Агу бег оту
Іо аз щі 543 аз ЗК «із 135 «ий» ДНК «Ай» щтучна послідовність «ах «ВІЗ» дик, важкий дзанцює ПРЯХ (Ви Тахі РЕБАБАЇ ен 81 ззаатасанї циаЗзазек сдоцФовНає керютасанє сенкниює сего
За тсскатоаса сежесяоатт свостігвас ваїкакосса казоасавах сспссаВаєсе сесежвфназа зга на паїстсвоастх Вітацнва зерна сасозувекає жазвстомр поза со чотеассаке ссевнемко зехссаацва сасостНенч
НЕ стченницЗа всачкстоаво вих еазмаєс зсессєче ака Завуч ню зчакЕтаєх «оч св вом зіхассвис сяє тво свопавоцоє сеаксовеся спек еп Кес весни піки ає ВОК ока
Я м пчсеоссіца фсачцоцаска стїшсссава соознизв котам стос ака скерсве Зеусче сх совок соком соте
ЗО виливок копссетоакс піни восє інн аєсє зевсстасак стооваєакоу
МОВ зчакскевчс ссвосаасас сазвуагтоЗас задачачікУ версссваакс Єкекозсвай
БО зстсвсвсене дессаксі сосок рин ев оосвассекс аа КЕсеКе странице МР
ВАТ-ЯІТО-ЗЕО
Ме Й що Й
ЕІ тиесссева авсссаадва свеспієвкоа віскорсвав сосстоВац сесаксує шиюказає тсаварсставов вовессмвиа зве вка КАсЯх засо «й що звозпвсвка візносавовс вавассасю завнесазх алавсацсвс зтасоВаО
ЗО
Ісав КоВссЗКсх псвссацовс сЗоасівазко зсваоцазтз саззтосава
З ппстсесвзаха азвкссхсва сврсоссксвис Зазававска хсоксопавацє свазовчкаа заго сесеовоВає паса папектюс сечісссча Вхнеккаас кавова сВу 1050 дфеісаи сеокасехще свавоцееко гагссовоак всвїексах фахова щі вусанвцчник воесс3овива сезскаоввуа зссвозсскс сок каоа скоса їм зсскістс сскасвосва спос ка засзацавсов почсосазов ока асоке за " - ; : :
МАХ кісїісвівст ксакантоса сововсісвЗ сасвасовсї азсвсозсвана засо кекє мо «такс кава калію ал5 «Во вВІ хизй» штуУЧНЯ ПОСНІДОВНІСТЬ яко «Її» Важкий завцюя ОРЯ? СВ ТІЇ РОБАТАХ «ку: 155 сів Ві бів уже окем пі ек Ффіж біх Фу Бе уд бів го біу щЩіу
Ї 5 не М -ко м - А
Зак оїев Ага іФо ЗК о Су Аїд Аїд о бег піу БЕ ОТВК вне хаб обвк отже
З В КО дів мех Зек о тго заї АК сій АТа вто біж бух ОіУ Без ба ткромї страница З
БАТ-ЯРУ0 КО дет Аза Хі чего Офу Заг обі пбіу 5Звроїне Ту ТУР АТЗ АВ о ЗВК ож
ЩО З 5 іїуз ік Ага не ТВгожіє шШеб аг Аза АБИ Ваг о Був Ажи ТБ орав отже де І Й та 75 во
Тен бій МО ай Закобец ага АВ ін Аяв ОТВгО дів Уві туго тук Сук
Аїд уз ту баг піу ква АЗв отук тгровБіх ів 51У ТВРгоремв УВІ ТВЕ
Ммю 3ох Мр маї бак бек дій Зег ТР обу» шШіу Бко жхвгомаі ВВЕ оБго ев Аїд вго ак обег о фуз Маг ТБ Ше бі біу Твгоата АТ бе бі КСуз емохві
УМ 35 ке
МУу5 аз тує ВВж о Бго бів вго ма) ТВгоУаі хат Тер о Аза Заг обію 813 115 10 ї55 тво мен оїйг бек обі Уді мі Те Ве о Рго діа уві ів біб Зак о5ек о 5 ї55 ії ї75 івац о Тук ХК оїши Маг оЗеє Уві ті так оУді рго баг бак хжгоі вд Фу 1 18 19
ТВкЕ дів ТВкЕ Ту Хі су« дп о Ууді Аа нів Був вт 5ве о дяв ТВг о Бух 105 я 225 чаї азв о іух рух чаї січ вго Буй зег обу Ав обу Те НІ ТНК Сук
Бге вго Сух Бго йіз бго Біб діа ав Біу БіУу вго хаб узі рРВв грец
ЖЕ 230 «35 АНІ
РВЕ Рг Рг ух Рго Муз Ар отйг о Бем меж Кі Бек Аг ТВРобко бів
ЯК ах 5 чі твВгоСух Уві ді маї Ахромщі 5ек НІ Шій АБЮ РКО Бі Ма Ку
БО 05 аа сплазняца 3 рАт-З17У0-5ЕД вБе ап о ЇїгроТує Уді Ах обі Уа Бін ха! Мі5 деп АТа бує ТВгогух їх А. т, пої; тут вх ща Тег тм -тз хіх ТАН Зм чі 52 вга Ага ів хім шій Тут за бек Твг оїук ага Маї Уа баг уві ем
Ра во Зо
ТВкоУаї ев ні бів Ач ТКробем о Аяв щіу Ух іч тує Куз Суб Куб 315 З З Уго
УВІ Бегодп бух АТ Бен о БіУ аів бго зів бів куз ТНе її ог і ех ав цу Бі бів вто Аг ім бю» Фів жаф тує ТВ обов го Бгто Зак
ЗО хх зх
Ага Ар Оці іши Те уч аз бій ба) бек офраз тв був рей УЗ руд
Обі вне туго рко Заг Ав 116 АТ УДі Бін тгродіч баг о азп біу бів зго ї75 КІ вгОо бів АЖ Аза туго гюже Те отТВг овКко Вго уві івц аа бек Аз обіш 385 зо 35 яю заг вБНе КНе фей тує Зак рух ем тре Уаі Ар У Зак оАга ТРр бів
Фх 10 зі піп сФіу дяп о УВЬ БЖ олег Сух Заг о Уді меж ні бів ДІВ ша НІВ дей
Іо Зи5 вн нів туго тІВг ія буУ5 зегборец зЗекобен век орга біу вуз
ЗІ З4а 45 «10» 183 їх 185 «ЗЯЇх РВТ «еАйз щтучнНА пОосліДдошНістЬ «ах «К2їМ вономерний Во З-і8В (751-854) плює се) лінкеВ «е«НюЮ» 153 страница 308
ВАТ ЯІТП-КО
К ще кі ост му че т лено А пе хх ог; Ім: 5 їх
Агар бів бі вс біц ге сег о Рго АЗОВ АЗОВ РКО А1В о ЗіУ вмів АЗЕ
Є зі У е ау - ї 5 з 15 мен аго сій обі меж вне ліз сій раці АТа бів хв о Уді веб ори
Й 2 5 3 ї18 ав: о сіу вго іено заг Тк Тур баг о АхровтоОо щіу реч дій соту уд! ї5 З 45
Заг офши ТВгОБік щіу фей дек Тег рух УРН АВ ОТВг ої Мін їжи ма ді Аїн руч аз бі Уа Тук тТук угі Ве Ме дій ген бів ев ага то 7 о
Ага Уві Ма! Аа бі бі шіу Жег ціу Зв? Уві его оїзи АВ Бен) нів 85 че а іври шіп Рго ев Ага чего АЇа діа бі Аа Аа АВ гами АТ іви ТВ зга 7 ча за
ЗАМЯ КУ Кк
Маї аз без Бко Рго ів баг хек Бій А1а АКО АБАа бек Аа Рве бі
МІ 120 125
Бе піп обі де зав ої Мі вм обеб дів спіу Пів ака рев о біу У 130 135 ідо
НіЗ жи Ні ТК Бі АІВ АБФ АТ Ага НІЖ АЇВ ТК Вів їжи тв Бій
ПТУ АТ Тпг оУаі івч сі Боб Бе Ак; Ууді Тйговго Зі Ї1е РКО А1а ї155 7 Ух
Оіу ім ргОо Ше о Брго ака о ЗегобБіб бік Бі Бі біу 5ек хі» 184 хе 18 «віз РЕ «Ай» Шуучни пюспідожВість ко вче щ с е ч «йїх омономерими Ве 5-188і (971-238) пл: гос ятниео сСтршнвца ЗМР вжт-4170-5Ед «З» 184 ага бів сіу Бго бін ев Зако вгоОо Ач АчровКо Аа сіу Бен Бе АБИ 1 К- 12 15 ім го Бір щіу Мв3у вБае Аза бів іс УВІ АЇв бів дки ма! ри ви
Й Кай 25 хо «ке ве вже їів азв Оу Р іФв Заг Тер отТук Жак о Аяробго ші їв о аїв біу Уді 35 С 45
Шевгоіни ТВ щі Шіу Бец бек Ту бу бів Азвоївне ух ім гемо уві з5 ща
Маі Аза бух Ав бі чаї Тук ТУг УКР Бе ве сій фен бів о Беб Аг
БЕ та 75 50
Ага уні ха дій Зі діч біу чяг 01у бег оуді 5Зег фев Аїд рем нії зо а іч піп Рго бо Аку его АТ Аа Біу дів АВ Аза кем АТ вбец отв юЮ В що чаї Аза бен око го АВ бег бег ІМ Аа Ага Аза Шаг Аза РВЕ Оу ца зо 125 вне зів ві ага кбжц вац мів вм ожвг Аза піу пій га Бевз обі мі ру - чи заг Бе і
Іо 115 12
Мі ем Міз Те оБТЧ АТа Аг Аа Ага Ні дів о тТкроУій бенотни" бів 155 150 155 ч60 «іу діа те оУВі Бе ФУ Бе БВ оАгО УВІ ТВ? ого бі ї1о йго Аїд 155 12 175
У зи пі ді Бі пі пат Бі Бі Щі Біб ца зі бен осіу сбіу Ту пРУу ват о 5ІРіУ Фі бі ОбРУ ЗКУ сжЕї10о 185 «10 ВАК «тії» Ви учма послідовність
СІЯ
Очки птраниця 310
ВАТА КО й «23» моноварйнви За ЯЗі1ВБЬ СлЬ-ЯКі влюєс МІ -лінкав «Ю» 1К5 вто пів біх вро ЄЇ5 ме) бег БгО Ав оАЗе во ій Бі Ме овен АЮ 3 5 їі 15 іти аг ціп біу Мет Бра зіва бів ев заї Авв Бій де хаі бе беи
КК р щі ї1е Ажр обі без їжи ес Тее отут Звк ах БРо БіУ фев дів ші ві 35 а 45
Щек оіви ТВ о птіУ сію фев о Зекотук обу бів дер оте Ух Бін бе УВІ!
КН Ух ЕН чаї із був Аіз о я1у маї Тут Тук ма) БВа вве бів ев оє1ів мем АгО
Гери то 75 Б ага Ві хі дів сі бів біу Заг Біу Баг чаї Заг оївч АТа ем нії що пу зфенопіа Бго бен йго Заг оАіз дів бік Аіз дів Ай фем АТ фен о твг ща Зо з чаї Азроіви вго вго дід Хеєб чес біб АТа Аг Ап бек АТВ вне Ту 315 іх 125
Ва осів бік Ага фіни офіем Ні івц жег АТБа о біу бів Ага без бі Уві зд 7 т зак ай Щі Й їюЮ ї5х 10 ніх фен Ні Тк оту АїЗ аАко вія Ага нія Аїд тТгробів вец те сій ї4х5 їхо 155 150
ОіУ Аа тбт уві ви бу їец ав о йго Уді ТНК ого біз їі его АТ 7 Ж Й тпоазА Ж ва 370 ДТ піу зи сію піу сту біу Зак «М» 186 хіЩфже 1502 ках» ДН «2фУх тжчна послідовність сСтовнима 511
РАТ-ЯІ ТАКО «Его «823» ДНК. кеанстрУкція вюдсвкнИ антиган НО Бссяануює З «виєтутими- ачі-міткиа «КН 185 «сиспааавс сссбксвх два товав дафннанка ажесочіех повакоєско т виживскІ споВвтксс фвсссвеао стпасстао ссзоазазЗавц соссстзаао
КМ пеесжессіов васТщксКсЕ зузсскасек сс жоКн Тесзвквлеу десжстаце
КЗ
ЗІсЕцасЕНЕ че есва секакосс скнозасв зсскоквеск зе иавосї о акспесеаї скщащму Кан сил ацасва базові гмів ваза
МІ зацешкотксс сзсцоаасяк ЗзЕссчвКсок сли схва зав пездавсвив тк МОУ 5 :
КО сс еМсечн зесксисн сспссаосюос завстчаіва сссосаас ЧЕКИ
СУ яссвацовся псМмисававк свинки нем ке ско кавову веВо зх со стовассвов сонне св звонка арок опазсвовиї поета темне свсссевскс Мр твов пфесскокцв зскурасиска сотасвсесї аМмнкиклекта вовосЄтНсСя Заветосва сснишевса вовачессоє совок ще ївоачісвтоу авассзнксє здссескассх задассвов ссосвозасє содсватве
Еш твстесвоВ Ффнюредасят засос скесвсспво аааїеаєсюи: свеосєпко
ТВ ств щі засне час поза си везЄсїаЗсе вас
Ген во жесова свсоссин перс Зз засазавоко вовоаккос весен а -юЮ жсвсстевза сеочсжкив абссвісавіє кжЄскотткс ссссаавасс св
З стсвіцаєск сосоЗасссс тозшеесвса чи оасуєзву ссвсоваца в сСтозница 315 кат-Я170-5КО «сорок св вастсвастр дтвосотозаАє сусокораце тосвиметає свадаєчвав корннчн восвоуєьва свдєезсвіас соц ксв оосптеєтеає сексоскосве
ЗАВ як; сававст воазосзасав ци асааа сосавеиик ссавасваацє сопсозасє ї200 спссвтсозвов завсозісіс садазскави сао ссе зааавассвоВ зів 1259 сіІпссссажх скпоцоавкоа псжовссано взсесацутсв зпсжоаз состзрнрксава 320 щас асс скавсвасаї сема кава васа зас среавсвах і5що тасзазассв сесстсссяЕ пстозаєтес звсзоактосі сток тека сао ії зссечсваса авасвойпка зсавсвозУз васзксевих саихоєтесях звкасВко жопелсвов вохасквовє зсвовазас сосок копав втксав
ТО стодвовата темну ссацавозее дався чу «ох У «ех У «ай» ВЕУ
З штУучНнОЯ ес зазпЕРІТЬ хх ди штТУчНИ числі дДОсЕНІСТь «ай» КонствВукція людський автвгем СПВІЗоРсзяЗнихи З «виптпоам»-амі-мітий
НН вро січ сій вго івц уві Уаф рух та) січ біз біу а5й АВ АВ МВ 1 і: Що і15 їеч дій сСуз без рух О1у ТВгобег азв біу Рро твгобБів бів геб тве
БВ. 5 За
ТРВ хек Агу сій фак о РгОо фец іу вБга КВе фу фу рев ек іа Ту
БУЯ 40 як івз вВго ві фен ооіу Те ніх Мек аг Рго фе вів тіе Тгброіви РЕ хо Зх М
Страница 313
І ВАТА ОКО її вно Ахв о жаф Звгопів бій Бек бі бБіж Ве тук цен су бій Рг ца То її 8
Оу вгоа вро Бек обі вуз із тТгросій вго 01у тТКб о тТВР Оу! Аяп Ма! 85 що ат
Зі 1іу бак осіу Бім бе БвВв о ака тТко ява ма! Зак Абрам шіу 01у
Й зе зах за аАМИ ке «Ме мчвобіу бує Біу жи щУХ АВи Агф лег Баг ОТ піу вто бек обек о вга пет пі їж рем Мем зетб БгОо жа Бе; о тує щі го дів іх АВ аг ії 135 іч
Бгто бів жі їгв бів Бім зір йке Ве» Суз ви вго Бко Ага ази баг 345 о 35 15 іай дей дів Жак оіец Чеє ців яз рем ТВгоМек вій вто діу бет ТВг 155 178 т х я вх БУ ім тгроінви его бух Су УВІ Бга о Бго Ар Заг омаі Заг дке піу вко ман бек тка тТВг о нів Уа із Вго руз 5іУ йго Сух Щег оре ів баг іа з ю уки ів Кец Куб АЗОВ дер о дга Рго діа АКа Ар ОМек тер мат Меє бів тій Ох Й 22 - Мо ча
ТВ оту їжи рев фей бго Агб АТ ТВвг Аз цій Азов АВ Офу ма тук кут хи - бур У 7 зр
Кей Б «УЗ І
Тук Суз Ні Ага Зі АБ фен тТВгОМек беє Ра нів фев обів тів те
АЇЗ АгО га маї ев о тгромі5 Ттроіен ем дгу ТВгосїК бу тго ку
Бо 255 то
Ук «с одд дак ох Зі «ак оргоОо їв о вкоО вБко твер бі пі бі
УЗ АВ Аз БЕгобІіЄ біУу 5вгоргО тн РКО кКкБо тТвпб ого бРУ біш бух ствавмна 314 ват-л120-5БО «г одів дяроіь ТВгОНіІБ ТВР обу вго Вго Сух ВрО АТ вга бів Аїд о 295 ВК дів бі Бі Бгто Зак Уві РВе фе РВЕ Бгто БУ БУВ БгО Му АБО ОТИг 3З05 Зо ЗУ зга іри меж Хі чего дуб Твк ого бів Уві те оЄуз ха Уві уві Ах Уві
КО ум Ух аг міз чів Ар овгО із Уаї бух рве аа тТко о тук Ма? АВ Фі Ущі ке 345 50 зів Уа! Ні ап АВ Муз ТВгофуз ВгО Ага зіц січ бій тТук Ахй Бер 355 5 ЗБ
Тк отТук Аг хаї жа кг оуві іеу тТВгбоУуВі бец Мі бів Ахроїкр ме зо 75 зве
Авіа ТУ 95 ФМ Тут фу Суб Бу Заї баг ах хз дій ви Ту АТа ї5х Б 335 КН:
Рго їі бі ух ТВг ої его муз А1а вуз бі сію Рго дге ціЩ вко ях З 15 бів жаї тТук так омец бго го СУ5 Ага АЖр Фін фей тТвгоїує ваза бій
ЗО чІх 430 «ві дак іша тТгр осСу5 ів Уа) бу ШіУ вВе тує Бро Зак оАзр хів дів 450 ще зві сім ткр обім щет Аа обіу бій вто піц аа а5п тує бу ТЕ ОТВе 355 аа кита хи Уа вго Вгооуві ем АБО Чет Аз Оу бег РАВ РВЕ гц Тук Зак гу ме з55 ту жи Б
ТВг уві дер огуз ет яго тТгвобів бів піу ахп о Уді Бе ХекосСуз ат 455 Б 455 уві век: о ніз ім Аїд оїеу Мі Аза Ні Тук Твг бій бух Хегоіви Же
ЗІ це 53 сСтрвізнаца 315 бог
АТАКИ ев оЗег орто бі їх Зв опіу ці іец лай азбозі вде біз лів сій іже Хіє «ім тТгронія Зі «Ф10з ЗК8 «ах 3505 «2122 ДНК «Мій» втУЧНЯ ПОСЛІДОВНІСТЬ не хжеми є їх . «ИЙ: ДНК. кочстрЕкиітВ амтитев ЄБІЗ мав ціноман ук КИ яВнНиВВ З «вистУпоме- вУїсміїка «ню» ЗК кесссвщиразвс спос паза дме васзосвиЕ сеацрКико
Бо звана ссзасивєсє тасатаасво стопки осваазасат соссІтеоо 12 коснесхкЗа аестосотсї зазсскоссє засакоазаса ссвопакаЗа соссксковає 156 зксхоазстасЄ кзаїстссва саксан сшвесаосз зсттстасс з своасї щасстоассва евеачаццє точсВассВ званим соїссвтваз зоваско
БУ каже жирах с Закоазаасої чессзат дос ков звівсзвосст ззазазсвув. 050 звасмкоаВ зсосесвО сову звзсіцавв повщєаасє пово
КО дссзвоваса дасссрвааї зкщднннинн папсєзН Фен кесс сзодазевоє
ЕН ставав зсостааасса сасБавса атецреслев Зсвзасаєво ЗуЗсеЗаде
А кекс сасссовосс хасшкссвех фссскстЗа дсіруасвсоя суєоуєовока щи аавмнсстій зовасазисї зсцича з пак лтоваоо асчвечне сЗассах
НІ вежа а точатвосвя сстустцето вссзовоаска сазсоссвуах пассздсат
НЯ стрденва ЗІ мат 4170-5Ка зветасліс всвовошева стався всіх асє глодзаксВо сасечося дессівіас австаОскаєк звоваїсєоов ФосхЗоаамнь сао Зах що серасвсско сов за аиІКІ псвоавсваева стсасвсах сесасоцчце що ссвркассте везссасзВе дораспахсв НтЄтЕсожтєВ Кессссовевй асставеває
Зо акжісвкча ксесссвово сосіовачес асакєчсочв бузковеоє вазссасоаа зо зЗавсІссімн гав ксвЗа стпотасма печами аказ заптосатава тессаауаєй
Зо задссосзаа восисвотв садово тассзвоаз тстазеокеєв сасстокеото іо свосацдеех зЗстЗазвій сваодаотає аазтасавов сстссайсаа поссстесоза
ЗОВ зипіновісо воазавосаї сксопавммж завнюжазс сксаадавєс смикає що зкссжвссс: бакчєсооцоа аз сіцаєс авззваєсовув гост веоостоеє їх зажезстестї аксссвоасЯав сао пазбозцчаза зсазтоєа зсоданепає ї15Бо І І І І азсхтасацаа ссасасстис согасенк сс сет се саНа
З сткасксоїзо дслеадзоаса іоесаосаа чацаасзсю сстсацє сага сях заваастскяЯс зсаассноха свсосвовем асо хакежосове кававкесуоа 155 зстаався асвікЕса досксаоану дЕтавїує воспа і «ЦІ «Мій м ВАТ «2і3з щтучма прослідовеніктв кЕЕЇК» хіей» Конструкців антиген СВІЗ мава ціномадгує Кс яднцюгє з «виступом»: виї-міткй «Не 1855 сСтвивина 317 ват-ч370- ЗО вго бій пів бко ів Удт У? уз маї сів січ сі зр о Ахп дів ді ї У ВЗ 15 вобія ми раз жім о опім жЖвек се ша ж каз «і: 1 піхва івв пів Суб грец о бім щіу ТВгоБег аз обі вро твК бів сій фен о хві хо 25 Зо ттв Сук вго АБИ его Бго Ве бфц вго вве вай аз бе еко веносіу
З ча ах іївч вро біу Мах сіу їі ага мес Бім вто їв Біу 18 ТК оіль ів й ши" Й ту пи Кс о
Ті вне азп о уді еко одевп свй Те СТУ сСіу ВВЕ ТУК їзу Суз щі то
Б то ХХ ко
ПУ шу Бко Зве піч був АЇз згробій вВго Бі теротне зві дек уд в що щк
УМ А гу тич мем ках хе ха вує дамо в зу: т их
БР обі пек о Оіу бо фев Бе Ага тб о АХА Уді БТ оАБИ Бе РУ бу щю 105 о
Мен вік су Біу цен куз Абпоагф аг Жак дію сіу Ро зекозековго 115 і85 125 щит опіу зуз вм о дяпошек Чек обі Бец тТуК УДІ Тер АЇВ уз дер дк алуд, т Злх " зак 5 З ТІ
М аа о
Бте бі Маї Тв оз? біт Біц Рго Уа! пух Біт Бге вро агу АБУ че 350 55 155
Бен ап бій бог рев бак обівз Ач ван о ТВго Мет Аїв бго 0Оіу пес ТВе
Кенотеробвц его осСує Бфу міф вс) бго ар жає уді Же Ага пі ред
За ж й її 155 10 іжю обБеаготко ТВгоніВ хаі Ага БгО іуз Фіу вгору» баг пегоїен о зфеи
З5 щі га тт о ївши Зі зв о їуз5 АВ ОА АБО Бго АЗрБ оАго Азв Мет ТРромаї худі
Р «їх Іа сСтракица 318
КАТ ДИКО до отак обі Бе) іє) ів ТВг о Ато зів ТВг Вів бів др о Аїа сіу ух
З 25 Аа
Ту Тут Суз Мі Ага біуУ Аа о тгвотнк вух 5Ек вве о туг БеО БР ХіВ
Аз Р 255
Те АТЗ аг вго АїВ би ТРрОоНіх Тгбоїву іву АБО бів бу Єіу Три - ми веКя Бе ек х ' зо ва кт зу Уві аз оАіа пек обі Біу Зак ого Тег овго РКО ТВгоБко оту біУ пок ва Ох их ЕК КТ
Щіу баг о АЇз ах огже ТВ она ТВг Сук Вго Буєб Сує ве) АфВ бко «Ту
ЗО ЗЕ М зі аа сі сію Бра бек оУаії вне їв вне бо бго ух ВК Бук АЗИ
Му З 315 Зв
Твгеогеномек зіж бЗег Ага ТвВковко сіц ув! ТБб о Сух маї Ууаї ма Ар 325 Вк 335 маі баг о міз бін Ар овго Січ УВР рух БВ дай Теги тТук ма дврожу
Бе зах СНИ ль ке о чаї пі уві мі ай віз Був ВР обу Ро Ага Біб Зіц бій тує Аве 355 ЗБ 355
Закотвг о ТуК Ак Уві ді вк ота рано Тв ма! ремонт бів аз Тева зо 3975 І ев оаза ФіЖ Бу бів тТук ої» Суб Був ма ше Адм рух АТЯ Бе бік
Аів вго Зв Біб ву тт ї13 нг офі у дів ух піу Бій Бга Ага Бій
Ох о Я15 вта зів маі Туг ТК око Бго го Су» дго азр пі їн о тйг о Буз АВ
БУ 425 430 з хе дк вд Ст сич «з сао щі Ми ХУ їхету Ха т зів жа: Заг овен тгросу5 Кви ові бу оту БлЛЕБ ТУ РгОо ЕТ ОдЕВ ОІВ й зай ак аа За ве У страница 319
БАТОН
Аїа та! зів тТгр обі бегб о ап Бі біб вго Бір Аа Аяпотуг рух ТВ о 355 І
ТвВе ово Бе УДІ рев АЖ 5агоАжрощіу бик ВНе Ба фев о тТук Звготух вх АТ Як Ако іпи твгоУЛі дробу хек аку тТгробів дій Бім аза Ууді Ве кагосуз 8 БЕ 495
Заг Ма! мех ні бів АВ фу НІЗ дяй МІВ Те ТВ ОІВ рух пак огбев
КН 505 Уа ет іти ее йго ші іх Зв обіуУу 01У фей аз о Ахв їі Ве щі дій
Ах За 55
Зіай іУує Її ій тк нія БЮ пРрорУВ ЖЕ Зі ТК НІВ бу 530 535 «23003 В «Зх б «Каже ВЕК зу Мем уєстит умі висі нні
ЖЕ Уух шт НнА пОсСпІДсВНРИТЬ «ХО «КЛ» буманмізавиаме звнити- сові Би, Уві «Я 90
Ав ак аа біу АВ ОТВе «иМЕе 191 «ІМ в «230» РЕ «21» штучна послідовність кер «223х гуУуМанІЗОВаме діти (І ККЕВБ), БУВ-НО «аа КМ уз ЕНе дапощіу 1 «Ух заз «3 о «ЗИ» БЕК стваница ЛІВ кате ЯЩУ0-5ЕО - ся Зкууєьт - зла - га 3 ху «йїїе туУучзна гпобплідовність «КОХ
Б чи і поожи. з, Н щі я КУ ч те ч. ї тую Є 3 хі «823» Гуманізовдна анти сі ТВі, варіанти 1-5, НУВОНО «Ні Та твргоБічц ух вве бів Зіх Ага ма тв мех 1 5 10 «М 3 кед: 5 «Із ВЕ «вії» штучив вослідовніст че «К2Я» Гузавізоване анти (ві (85аАЗ, варіант 5, уд «м 133 заз бів дк бгз дк ім дк тв мезо ОНА БО АКМ Хі Аа ТБ і 5 яаці нКв «231іх 5 «2125 РЕт «3» штучна ВесліДдоВНність «Есе «3» Буманізоване анте- прі КМ), ващМмачт З, нУВ-Ві «з 154 цез дім аа го ет ОБУ Ах ТВА ї В «Ві ОЦ «К3їх РЕТ «кеії3» штучна поплідоенікув «ах: хІйУу» анти СВО гйви-ОІйк, соні «НЮз 05
Ат» тТук Хі Мах мів о й « вх х «иаїМ 17 «й1йз ВК сСтианина 3953
ВАТ-Я РА ЯКЗ «ії» штучна послідовність «ЙО» квжїх АнтТВесоріІО Свв 0153, СКАН «ак» 135
Ту Їів ах о РгО ТуУг АЗА Ар ОбіІЖ Заковув Туб те дім фж КИеостя 1 5 18 35 сту «Ве 137
СКЗ хх «кіл АЙ «ай» РЕЖ «Ім штучна тил ДОВНСТЬ «го» КК е - ть, т та «23» днти ІЗ СнЕЖ-ПІА, сри-нУ «НОЮ 13У шіу те отТУК ТукотТжге ціх щег о від зви БВ АЗИ отук хіх 15 «ІМ ВАТ «еій» Штучна пОСЛіІДаВНІСТЬ
Сея киКїх дити сві г4в5-ОІ15У, сові «ВН 15 пуп оба дек бій бЗегогео біз Ачи вго Ах ЩІіу ай тТве о Тук ев Аза «Ку її «Ех ВЕЖ «ії штучна постідавніств «ЕМ» й хай Жи амти-сВіО са). СО
ІН ВНУ ага Уві его ух Ага ре Баг 3 5 сСтвамица 32
АТЗ
«105 МЕ хіх 5 ках ВК й й «Ех ще чнВа послідовність «Ох «83» дити КИВВ-АО153. СОВА «НЕ дО вВац піп кез твВговів чаї го тТух ТЕ «а» 3 «і 373 «лем ВАТ «Ії» Втучниа послідреність «А І а» дити спі ска аю, МН «з іп оУат вів вав ма? ід хек ФіУ Аїа сіб зі бух Був рго бік АВ ї 5 В їх аг омиії муз Маі чає Су ув Аіа цегб біу Тує ТК о вве твге дев тує
ІВ 25 3а її мет ні Те ові Ате бів зів Бго бік бій 5іх ей сім Тгв Мет
І 45 вік тже ж Аа вро Тук Аква др обі Зак ух Тук ТВ ОСін Бує ВЕК іп опіу ага маї ТкромМеї тнк дат АБО тТВг дак їі бек о тТвг о АіВ тТуг во ТО 5 КВ
Яні із заз ек Ага ім оаАге фог АБ АЗИ ОТВг вій ді туго ТуК ЄУЗ дів Аг піт Так ОотТук Тук Тут Фіу ше Аід їви ВАЄ Ар отУук ТК Опіу
Мю їх Ка шій ші тве так озаі тВгбоуді сег ощокг 15 2 страница 355 вАт-я У -КО «2302 202 «кій» ВЕТ й «Кум штучна посвідсвнієть «йхОх «вий» днти-свіЗ Сави, М «Не 202
Авт отіе уві Межт тнт бів те оБеко рев бек орев Заг ма! тв обго З1у ї х їд її вів оБго ів бек ів ЗвгоСез рух его жЖек Фі дек фев бів Ахап вто га 5 за ава зі да твйг отут ів ойат тр отук без обів цу ко щіу ій ет вко пій бен без яЇя Туг Ага о УЩі Зжгобуз Аг вна дес біу чаї рт кВ кЕ Ви дер Ага ве барбі хве йіу Жеє Щі ТБгодще вве тйг овев гуд ів шак Ага Уві бій АТа сів Аз Ууді біу Уа) тТуг ТУР Куз й дій Мав 85 Зі ем
Твконіш жв)і вро тек тв Бе біу бів бі тВк ку ем (у Хіт рух ща 395 що «10» 203 «вії» 3353 «їй ДНК «8335 Вмучна вослідовністе раз чи «й2ї» ДНК, анти БЕК ке апдвуют З «зВлаДдиИНОЮю» «НВ сазвчкссвас аа касамк спасе Зісааочавс сосок казав зсакцнащшю сажпрсваха свсстісвсс пастакакоЗ хосвітоВає сасвоссх 2 сстодесаза зкстсзазо оатзоостас ваеказоссеї ахтваїааз скосваавкас ї5о страница З вАТ-ЯІ190-5ЕО всгсооащасную кесаввКни зотсеаєтака асвксопеачся сепоакаксво своїостеає зу Я; т. З З
Ре акожєтє сссецркстхсо отсотаекоаас зссоасяетої вкіаскокоє сазузоєсаса ве вскастасу Зсксовапест зво Чин увассаєтає авсоотовує тсапоастнваєй сбазвудапся скошекес ссоскеазсес пеаосасза зврасеває
БУЖИ чкиусасац повсесчне стасктакс ваовактасі сссопсааск скавссУкоу
ЗК іскзМимиа земної застосовує засос песелІксяк зскасвоВХ
За кенки ста зтвОусставо свасотазс ассаасоку скани пфусвосксвоу
МЕ асстасакск чсзасоакоава седгсемкеос восзасасся ваптачаєдя заааЗс я сссазавсї зсазсзазає їсвсасатеє ссср свосасстаа арок усанкКв пуассуссво кептсотсте сессссзазча сссовадуася ссстсаєвак стоессфвасо ща секс сасзсчмкних щас зассасоуваа зссостдазЗє вавчсксаАс
В ічуивоЗзкач сс освсщза соптасвиває зссавучвова зиск лнища засн
БІ авсвокагоє змизчічішик сваесаЕискос зв скоа вісн та Зотова:
Б вапозасаста азвтосвацче стсосавсава ссср споссакоза пзазасевис і102о0 тисзазустсе яжмвревис сезаЗазоса сера сестассссос вто 195 зааставсв вчазссаоах саассткоЯя квсясвзссаА ведосенкта пово с ї15о зккуссвтаУ зи очцазав свахудоєча сспозвовяса зсхасваувс свофсетесю з290 чЧІЧ.ІКЦЧВск сем тек ЄсКс зро павчє ссвоссозаЗ паза 1250 сива опа стх стос с зезатоасахо водстекаса саапсасхае страница 355
ВАТАЖОК асосапзаваз сстетессж зе ссв аза 1155 хе жо
Ух ши «азів 57 «Ра» дНх «еї3х йтучва послідовність «йо» й й «ск» ДНК, легкий пануцює антвебоізс ав оз пасахсоїса сдасссвовк вссоссжекс сестсхооаа спсстаатов соаципютив
СТ каст реа екс тла зашссвная вагова совакаєкеа сеча ї180 їаїстсяаа авспсороавсв аккссесесяв сосскст асаоцатото сзацачатеє 180 хсвцасеатає сазатсзоїк кас зр схоасв сацаскесає сіхоавазате 24 виспоазітч авастоазцв Ммаинвнвє кабєжаскакс хосвіаєовс бпахакцосє
ЗЮ твивсоєска фсаочосве зазастнни аковаса сс песо тт сасипсхсса совЗсаасЗ звакссасв соц пику
Яка «тзпавеваскх кекдскссо сами сваз піки аа ни оЗвосва со 480 сксерсавс скла пасоавосово свудаєтков вінмнзнаови певоксотоко е іже ВИ Брак: самєсває клеснюаєє асшмната сотка щю тво вим стехс сщнессом асозатссх ховассм см 5; ха 05 «дії А «12» ВЕт «кій» штуУуЧНІ ПОСЛІДОВНІСТЬ «Ер х «23» днтІв спіЗЕяБН-ОТВК, КеелиМмин ї4 «запидинино сСтравмца ЗВ
ВАТ-ЯКЕТО-ЗКВ «ММ ОКУ бів УЩІ іп бен омаі бів Загопі дів Бім Уві уз ух вго оіу АТ
БжагоМафї іш та бат Суз ух АТа Чет біу ТуБ ТВгОбце тТвг Ах; тТуг їїв меж ні« їгв о уд) гр озіп дів Ве хі щіпй сім іеб бів Тгр Меж 35 з 45
ЗіУ тук ЖІб Ахап о БгО туУК АБИ АЗВоОіУ чего бух тТук тТне мін фу ЕНе що 5 Би пів піу ага ді твВгомеє твг оявг дер оте баг о жів чек тТвгоАЇд туг то ТУ да мех бів ре) Зек Аг) зви АБ обег о АБр дев ТВгоАія ді тук о тТуг Сух 85 ща ЕІ від Ак шу ТВи тує туУук Тук бу Зак дів вен вне Ар отує тїкроФіу 100 125 ма - їй з В отТвЬг о УАі тТве Уа хаг как дід квт ТВКе че щі Бгюж Заг віп обьМ тА: вгождр їпгоМаю ех ЗжЩг олій УВО Кг бух бі го 5 115 КВ 145 а овйе вто ве) вів бо бе Жего бе шеє ТВбоБеє біу біу Тк вів 150 135 148 віза ін 5іу Сух бай охві бух аав о їуг вве Рг Біц Кг маф тк ох ї35 150 155 ї15
Щек ТгВ Ап ожег сі ій без тк оЗагб обіу ді Ні тТВК вва вго діа їх 175 КУх
УВІ ім шій ес дет біж фаз тук Зак обез бек ве мні ві) тТвг о Уді іа 155 ще
Бге о бдеє хегобес оівц бі ТК оБів тне Тук Хів Сух дай Уві АБа вія їх дю Ох іУух Вр саги п тиЕ яко дух гм орг ЗР ож Ве іЗ« лк мує
Ух Бга ек деа їпг бух Ууді КАМ Був цу УЩІі Зб: Кга уч пет Сук 23 215 І КН аква ко АКТ стваница 32?
ват. а1У1-5Е «росу ТВгОНів твгроСуз го Кг Су ВБго діа го біз АїВ вів іх 225 23 235 240 сі Его хек оУді вне реч РВЕ ро о Бго фу Ро фу АВ ТНК фац Мах 45 КО Ух жів дек Ага Твговго біз щі с тнг ос Уві Уві Уві Азоомаї баг онів "7 зав ЗК тк му жк НУ
Чіп дявовго Зі ча)! і рРВае аа тео тТУуг Ууді де пі Уві Бім о Уді щшіц дкробго іш жар фу ВВЕ Аа тгр о тує МщЬЕ АЖ ші УВІ: сім Уві 275 за Ка ні вп вів мує ТВБгозух РгО Ага сім сіб бій Тук ав бак тТНге тує за 795 за дга маф маї баг омі су ТВгбоУВІ Без нія 5іБ АЖ Тгр осям АБ О1у ах КК У 385 їв бів ТУР уч Су фу» Маі ЖХвгодяп о гуз АїТа беч сбіу 8іа вга дів 325 Її Ух «фу же чну жк ках А ч« т ія Ок» дух г У 2. З сів куб тТВгожбів бек був АТ Бк біу 05 Рго Ага Вів о КгОо бій Ув та Й й хх т пк 34 лах А се ТНК вно Его Бго бег Ага АВ обів їв тТВгозух дей шій Уві) ще їх за 3655 ізма Шек Суз Аїд ув) Бу бі Ве тук о Бгао Зак о дев її аз а Бін за 7 Й ЗХ ча у Ії УМО что біц зег вай піу бів о вкгО Біб Аа дя Тут о фух ТВК ОТАК Бго ВгОо 385 КО 395 щю
УДІ Без АЗвВ Заг АзпоБіу хг Ве вна ів Уві Ше був рев р Оці ях З 35 ази рух Баг ах Тїго Зіп зів БіУ лап хз вве бег бу Зара Меї : «ай 325 430
КО 125 Кі. нів ів АїВ ен нів Ахп мів Тут ТВ сія Бу бегорев Зак офем о бег лах БІ Й 4345 зх КАХ КА птраница 305
РАТ- АД БЕВ вго Зі рук хів ОК «Тім РТ «2133 штучна послідовність «вай» йегжний йаниают анти ІЗ БВ «ВЕ: ОК дви жів уві Мей ТВ осів тТвБгоБгоа мен бек овен оЗак Уві ТВг око і1у ї х 13 їх щів рт 5із Зак їі Баг Ку Ух щатг его осій его бен бів дв вго 8 25 30 дяивосФіу дав тн ту іна адап о їгр отУК свв Бій ру кто Фіх Фів ж
ХУ 3 я го бій ів іви тів тук ас ха 5ег су» да пе Зевгобіу кдд) рко
КІ У: ЕЗ
АЖ Ага РвВа БагоФфію Мегозіу ет сію Твб о АЗрОБВЕ Твг ори Був ТІВ щі Їй 75 5 хекоага чаї Біб Ав «ім Аврохві стРу уві туб тТук бух ем сій ви
Ка Зо по їв оМі5 Щі Бго Тжк ТВРоБВе бі бів біх ТР куб вв осів Хі ж іо нь То
Ага ТВтг ож! Аїа діа РКО Зако УЗІ Ре їі Ба Бра бге баб йзр Фін ї15 зх ЗК
ЯК. же ЕЖУ пів оц фу деє о біу їВгоаів Заг ові Щі Сузх ім ем Аза АЗИ ВВЕ їх 135 їй тТук рго вго бін аїн вуз УДі бі» тб» буз ді ай АЗА Аа ев бів їд5 їх 15Х ща
Зак обіу азп бек бів бів 5аебоУщі Тк бій щі АБроЗог фу Аа Зак страница ЗЕ
ВАТОЯ ЛЬ
Че тук век бен ек ер тв гів» Тйгобеиа Хек ітх Аа Аа Тук 616
Шу Мі же Уві ТУг АТа Су бів Уаї г оніБ біп сіу фей хе бат 355 гпй 305 ге УТ тТвг обу Бак обне дп дга сіу ЦІМ Су «3 Кая хаМЕ» 207 «ії» 85 «кій ДНЕ егіїз штучна ПОКАТДОВнІСТЬ «Ах «КТйЙж ДНК. внтес віз -ОіБексопаницяя їх «западиною» димерний я1гамниа «Ммюх 5 кадчіссавс сожоєвате соус сово пісановених сс тЕсє бтатоазцаке щИ паца савмнозеа сасохієвсо засбзЕакса сну садах їй Е З пи чЕовсесвад зксксваага сани тає аіжанссові атазкоямнм стссааакає аксцазвадх кісввщаазоа аісастажка всвжоюмиа ссовосасово сасскев і звіра стая ссезссексоо обста звс зссоснає аксона ск че за твЕтастако Зстсазстсх ЗКісзаскаЕ суодоосаоюх Ззаавсвової: вавссуєувоє 360 масо мнЯ ссваачвсюес сіСсвіЧеко сексі єЄ севчсазсви зацдсасевцк 480 женкасн спвсіствкю стазссточес заводах ссссспавєє сезвсса 350
Есстодався своєї дассіссас чіокасаскь Кесксвссці зстосадацЕ
У тЖазнесв: вівса свокотовиє воссецежк ствах урскгсва
ОО зостався стІ освасоасзаз ссзсваоссс зопсвасассвя возсодасва охацогоЗау страница 238
АТЗ
ЩО сскавоваєе чкічвсваває їнмомзакоєк Єсвсосакаєс своаєсосєеоа ласо ававссзо БопшкесісВЕ псессссвавна сксвлчаосв сссясатаах стсссцоВих
Бо сетоамннсз сакоасехач зЗазмоазасзка вссвозаао вс скаваВи связи паю асо тзаа за твах дотазовова асо сно воахаи о засно весчгчсЕ сша с зиск вес остова
Зо амнюзвчїата ака сваВот сеспаасвав ессссвчио сссссаксова заавасвих їде косвазексв вадесвосє сспазавсся сефуюдтрв ссскухжсе втсссрмнах ї105о вн їовска адавссанач сво брав винкс косо
Мао зисассцчюа менша сан ач сезсФезаапа аетвеаацас кас ізо писк сосни ко сек Уессто зканевацєс коасезцн свнзазсвов 1255 кпзчсаосвов Зозапаїстх стаєте зкоавжасвія воадежетасв саевосаикв вспсзазава чсетстпсст зЕскссоцах зник о пвазсоцраце адап атес 13 вени стаж точвоа ссоссодЕЗаж спасе сосзНІссХ Ки КО я я шишечки с мона ссаЗачсоЗса ство с ан ес песто ім вшкоакксЕо часов сатанссв вовна с мн жасва вас вовоє ї550 чмнавстУЗ сбдівнсва ессвоасоке твоесаєсаках сект Х пава 152 вину спас азов всяк сх зас мМЬ сссеасвВест саше звазвчестоа счврастос езстсцчнвка сезон кчо вісжассекке пев е 174 ект міти ме с ца
Страница З кат-ті70-ББО зпапчсссоца вклсовкх оз кієваа Зосадасевс косвостаїс гос з астми тосакскоаса сасповозсс аадЗстазцає вопсслезсз зетавевиВо їхБ5О пчсчкічнаа асевюссї зЕтсазавтв восссссодаца пессвнихще сети сх
М192о скавзовазсв задеянню совакстовс засув скани всососпавосто 13Жо земне зксснассоО дегасечаанє спменноерю зависає сс
ІКНІ зстсвазака бостоєтоват мрмзнраєсе стоаостоах чсексжеосо кис що чаша касти астувсстас авадазузеа сазазоавсї зага засво тасастатї Яке саз стозидекоя сросеох часта я2йО здстсвовзакх стзтотссек дастстоове стопарссає асвосєстдєе соска есв псмнастоо ссстІовВсми заасстзксв сова іста водаззєства дай зксодзотїісс засзвстотк зссозпатста апопсснно вза вето 2405 сатвсізвав сов ся зсакассв сс цаВсЕс шко кока свА лаБо свт; хласвоКіоа захсссхесс човстослав осссвсавк йде 2514 «10 208 кі ІЗ «В12М ДК «ій» штучна послідовність «ВП» «ай» ОДНЕ, ДНнРи ІВ ОІКУ ке ланцює З «висТтУПОВе МОонОоМмериВ тМліганд «ща ОВ сазптєссвос с асВНЄ сососеа пса Ммео ссооЧчОосс ставах
ОО хсвікавов) савосозака «ассіссоасєс оаствкався каси кн саван
ЕН страница 332 вАт-аТ70-5КО сних зісісчаас ча тасє вебеависсмі вва стссвавтае вскввовх тісваував зотсвсіаба вит стТоамиа сеапквтсву сс кас
Заг из здох х сосок чстопвхшес всех век см ея
З саскассВк зстсависоє писок ах косе звакомцм аск ковоє косо стаоВ ссаниКм неси сажа киска НАСК зов Мч чо вч ке ща євИа поси ссова сік ваЗаветаєск жоссскчвасєс обнкаЗкоу точні сеещецсносї фени пинлаЛн піцсесвеее исповежОа сів в їжадеастеск асккссссно свусчіїцаха всосеасес єсвоснєвЕ опоовосова
ЩІ всетасаїєт збавсвтЗзав ссвсеаавик вобансовска ау сва звана
ОО
«есвавістк пвіпасававс техіасаїе ссвссНеасс садосвсокая вас
У павссаксво сСтКеСтеЖЕ солсксвава ссесвадавех состовтаеє скосодааоє що «шЕЗаНкевВ сатосакоЗ самаспвосваа вссвооаао зобом саке ході во во счеоза оЗзсссаїавх есе веспесоні зас кАЄ
ЗО зяевасвст аксакамеацче сазсшкстя ассеесквас зсвоцаскО чскоаакеце хі зирюмоатаси оксана сІссавовав щсссіноВ песо Браво ї02о
Есе мКов ЗвадоЗсВкс сонна сша твсв соска стосацвавх щЩщекстннв воавссеУх писк кцоа мзсокНіса звис а сосна
МО аквзчежекво засн свасочпесад сстоавівмив ассасавове сассссоюсо зо зесказвсвя осохсодсав стксхіссто тастссзаеє суассасача сазаваксо
Ак страница 333 ват хцосвоєвої зезасавук: сзвастзовоає ото нкасз вжкроесска сазссаскес 135о апссарвевх сестовосєх двоксссює фрумнчцнюо пааесочазо музозаксс 135 зоазовосчсс сота ню ссссоавтоах сс тоачас кеставест дес А ЧО жа30 віщнянх меми сосен смлавкоа або зт
Іо засзасскіо ааетвчєскаЗ сок свокЗ всмновех сзацсхваска вовни іо завачзаветод сЗочЕдосева Фоссреото саствсаіаЕ токековщет дозастоєою хаватодедо ссодсцуачає зкстоЗсьсі ЗсІСтссо ссоскаєвесї освукстстВ 1550 азазоасяста ссосвскас востстдоса стався жестосптес Оссавсес 17 3 Її пас освов вівса ЕЕ Зими тїсва ЗасвОстчє госвсстоїс гас єяо лін
МюЮ авксіЧозчво тосаїсотасв своє вне тачас жакета зставеввка
М шасасталав хЗстоЧасох піксвовуко всссссувуа кпксвосєою кепки іч «сварено ав 1939 ха х ЗП «КЕ ВЗ
СК ру ж АК Ук ех я у с - дп Бе К. зі ее «ЯМІ штучна послідовність лют «Ех о. й «вай» днти Віза ОіБ1ексязвнрвау її «запи денОовеедямерний піганд «НО фі Оу сій без уві бій бег Б5іУ дів Зі Ха! ку ух вто Оу дів 1 ї ТО їх
Зек уві бух Уві бег Су Муб АЇВ ЗвгоБіу Тук ТР о ВВа тТВг о ЯЗ ТуК
КО 25 3 страмаці 33 вдіІ- азу ЧЕ їі мем ні тгроуа) ага біб вів Бгто бік бів бі ей сбіч Тер мах
Ал я
Зі ТУг хїї6 Аза вує туг АЗВ АВ о БіУ Зк оку ТУуЄ ТВг обі вух вва
Б 25 во зів 5іуУ Ага УВІ тнкомвї ТВ очи АФфо ТВгоБетє ік Бек отр АЇВ тТук мек січ ец аг ао фе Ага бе АБО АВ) ТНК АТ УдДі Туг Туг Суб що ЗЕ дів Агар біу тк отук ту ТУР Шіу бег дія ред РвВе джхротТук тре осіТу 100 М о сів оФіу твготВе Уві ТВгомаї бек бак Аіз Баг о твг Бу СТУ Бгс пек це їі52 їй чаї рве кго рев Аїв вто бек обего бух ЖеготТнт пеб обі біу тне дів їю ї35 1453 дів ів обі бух семи пф ух АБроїуг ВВеоБкОо бів Кг маі ТВе мВ таб отгв йва Маг одіу іа їео їВг обегоБіу Уаї Міз ТВт вве вБга Аа
УВІ іеч сій Ще обегобіу рев отТук баком охеб Хег уві Уді твВкоУді 150 185 ї5о вга заг озер Зег оре) Бі тв бій ТБ Тур Ті Су ВВ Ма деп нів
Муз Вго Заг одхв Твг ох мі Ав о фУух фу УВІ бів бго фуз бвго Ку» 210 хіх ке а5ромуз тнгоніз ТК осуз Вго Бго сух Рг Аїа го Біб Аза дів щу бі вго заг УВІ ве рей вне вро Бро фік Беж гу Ар ТВ ем мех 245 а 55
Страница ЗУ
ВАТА -КЕЄ тів щит дка тТвговко біц Уді тТВвг обу ді чаї ха Аброуві ет Ні 250 зву Уа
Ой Ам реж сів чаї мух Не дев тро туго УЗІ Аяр о Зіу Уа сів Уві п А; зах
М 250 й ніз АБ АЇа буз тТвг фу таз вк вів Бі бів тує джвВ Зак оту тук зЗа Й й зах й Зіна Й ох Ге чи
Ага чаї чаї Заг омаї зец тТВу жі фе ніх бів аз отв оре А пу
КЕН З іх За і85 О1з Тк 1уз Се5 ух Ма) его зай ув АТ їв о Біж лі го Ті й Й Й ех 358 І 235 лк зу ЛАТ
Зі рук ТВг Хі пог офуб Азфв туз Бі Зів бго ага шіш еко осів уд!
ЗО 345 350
Су Те огево вро вбо бек Аг Ар одіч ем ТВ огБує АзВ бів шаф баг 55 ЗБ зв іч вк осСу5 Аїда уні рух Оіу Ве туго рко зар одв зів Ав Уві о г з ТУ зе ЕЕ зи
Ткробіц вес Ап Фі біб бго бів Ахв дв Турко ру ТВ о тТВг Вго бго
ЗЕх з5а 35 00
Маї зер АО бег Аз обіу же ВНе Вне ваз уві жк бух гец ТВг уд) пу І 15 ха зуб Заг о Агротгв піп о щів Бі Ахп Узі КМНе да Су баг оУді Мет ча 350
НІ» бів діа фев о ніз ап о Міз Тег ТНе шів рух Ще фе бек оїев Заг азу а за»
Бго ові бі біт бі б1іу бек осіу Щі Фіу Фіу бог агу бів бі вго аа 455 яко зів ве ВековБго Аза Ачор о вгоОо АТ шіу ем обем Ав офев Аго бів біх пах 47о 5 яко страница 355
ВАТУ ВК
Меж рве АТа сій се уд! АЇВ бів Ахп о маї вео вев Ж18 аль сту бго
ЗК: Зо 5 зви вет отри тТУуг Бак Азот бі зва Ав о хіу Улі тк фев ТВг Оу мю 505 що піт гав Зако туго фу» щіМ Аза Те ух біз ісч Уві Уді АВ о куз АТЗ 515 80 525
Оіу Уві Туг Тук УВІ вве вве бій зев обів зав Ага Ага Уві Уві АТа
Можу М " шк шо т ке Зі» За лук ах шує чи холу 37 піз і ск . ше ту м сушу М ім ів бік бак обіу ет шві «об ів АЇЩ фев нія ев бій вто ву 545 550 55 550
Ага баг АТа АТа сіу аіз аіз із ман АЇВ ївиу ТВК Узі Аврогец ве
МЕ 570 КІ ве о Аїа его щоб обін дій Аг оди» ве дів вйе Фіу Ре оБів Зіж АБ
ЗВО 585 55 іви вени НІВ ан заг Аїд діуУ бій ага гвм осі УВІ Ні ев НЕБ ОТ 555 ЩЕ 505 пів дів Аго аїва дгФф Ні Аді тТгробій зу тйгоБів біт Аа тТвК жі
І ІЗ БВ ів бі їіви ВВ: ака УДі Твровко із тів шко Дід бі» іс; орг бак ін обі бе вва о АгО Уд ково Би тів го лід ФіУ фійц вгОа бИ?
Ба 5 35 5 вга Агу Вег Ота бі о1у б)у сію Заг обфу сіу Ту сі Бог о Аго Біб
ІЗ в 5535
Бі Бе Біб фе Бек ВгО АВ АБв о Бго 413 Оу Бем оїеи Аза Бей АгО по пЕ5 КУ
Зіп єїу мес вве АТа Зіп іши уві Аіа сій Аза Уві веб оба 18 Ар
БУХ З ОКХ дім без Фо бек отр оту Же оАБа Бго біу ген АіЇв бі чаї бак бе ва Зх чю странице 337 вАТ-4У0- КО ївгоОіу СТУ фснобег тує вуз бів АЖроОТНК фу Бім ізч ув! Уді Аа
ТИ тів ТВ ТО мук діз піж УВІ Туг тук м3Зі БНе РБа сів оївю бін ї8н ага ваго Удї
Тих МА 73 с їз бі сім пі зак ойі 3арг о узі аг оіви дій рацоніх зобі
Уві Ав сх сім пі бегобі баб о аї заг овен) діа фац ніх рем оо1и чу 7 7 має Ук 740 та5 зх
Вге фен вгу Ваг оАЇв АЇЯ б1Уу АЇВ АЇВ дів вм АТа фу о твг УВІ ЯЗо жо тал тих
ТУ ях со їли Рго вгО Аа бек обаег бів АТа АБО Аза Заг одіа вВае о с1у тва дій чат зх Щ зда й ту ТУ го
Бі аг бо фе НіЗ ве) Зв АїВв щіу цій АК рем пі Ууді НіІЗ веб 755 90 7а5 ще
НіЗ те «Тр АТВ АБУ АЇа Агоа ніх Аа тб бів ев тт «ів щіу АВ
КОХ 10 кі
ТБг ові іви сту сей вва аг Уа)! тВгоБгоО Біб Зі все АТ су ви
ОО 8535 ВМ вга вого оБго Аро Зек обів мам х дб «Ох ФІ «кіз 5 «ВІЖх РЕ «аа» штучна жлідовність «лай» АНніІМ- СВІ ЯВВ- 18 -ко-яВНиИ З «виступоме- моноМмерний ЯзгВнА «НІХ 210 ма МУ ж їз; пз ох чок (71 1» 3 Мч з нич. ж ние віпоузі бій їец о Уді Бій зекобію А)Їв бів маф уз гу вто біу Аїа 1 3 10 15 загозаї кує ді Заг оСуз уз діа Зак о б1у тує Тр оре тТВг о АБИ тує чі. Ж 3 хів ме міх тез маї ага цій діа бго бі біз Зі без біз тт» мех стизница 33 рат-З170- З 3 БІ А5 і Тує Хі Ап БгО Тує дей АВ пі ЗВГ офує тує ТВ Обмін буз РНе 5 БО
Біпобіх аАго УВІ Твгомеє те о 5ак АБО ТНК жк ОїТа ее ТВК ові Ту 55 та 75 Во
МЕї сій без ак Аг ем АгО ОБВГ АВр АБИ ТВг одбів маї Тук о Тук Су»
Б За В від Ага бі ТвК тує Турко тук б)уУу бан дів ій вБе дзротує жтвр дію ню 105 Ма піп сіу тпйротнк Уді тВг уві щоб паб АР Бек отнк вух сіу его яв 115 їх 125
Уві вв о бга іви Аза го Заг о Зерогуз бак о ТВг Мег Фі БУ Твг Аа 13 155 135 дів кео бі св вен мЩі уз Ав отеє РАВ бго ОР РКО Маф тк уд! 145 Кн І55 162
Хат Ткр о джи ЗвК Оу Аза іши ТВКЕ Зеб ОБУ шві нія ТВРОобінх фіз» АТВ 7 дат й Й я ї55 17 ЕД чаї во сій ек оЖет СТУ фом отУг бог реч бек бек чаї маф те худі вгаопег Чет чес фен обі їТвгобів таб Тук Тіз СУБ дя Уві Аа нів 205 уч вКгОо Бег ода ТВг обу Уаі Аа кух вже У шім Бо Бу его Сук
Ех ії ум З
Ах їж тТвгонів ТвВгоСуз Вгео бгеа Су вго аїд Бго піц АВ лів віх ах Зх зх ха
ТИВ «ЛІ йї5 БЕН піу вто баг охаї Бне о івм ББе кга Бра рух Бе бух Ах ТВг іш МЕ 245 50 255 їїе хаб одга так вро пім ув) Твгосу уві Уві Уві Ахрома? хво мів
Стванина 339 вАТ-Я17О-ЕД
Ме 255 то бЇв вхв орга бів хаї уз РБе Ав тк отТуг Уа)! а5р обі УЗ є хз
ТУ Ева ВХ ніх Аза дід іх ТВг обу Вга Ага бів бів бій тує дяк Зег твк тує га 295 Б зго маї маї зЗекожаф рем твВгоУв! сем онію бій АБротго вен АхВ с1у 305 Зо 315 зга муч бін тує еб5 сСує бу мі Зк оАха суб АЇва ін ші Аів рго їв зи и 335 щи пу Тр ої3о Звг ої ух дій ів пі піз Бро вка бів Вт» бі» ді їм о юж» о тТвр Я БК обу дід су іх біб БгОо АкКа обі БгО біз жі
Бе зах Зі
Тут Тк оівц Его вго Сух ака ах бів ец їВг огуз деп дій мзі ет
МО ХХ ігн Тгросу5 ізи УЗ! фу Бі вп Тук вго За АЮ їі дів УВІ ЄЇц 378 375 ЗВО
Тер ів Зак оАча іу Бій овгО Фі АЗпоАВа ТУ фужх ТВ ОТВК ВгО Рг 385 КАН зх дО чаї ваз Аво Хек о Аво о діу бег о РВЖ ВНЕоїеу туго ваг був це Твг оц ах 10 415 азпосуУух шаг ака тк обів бів Бі зв худі вче ек сСух Маг оуві Мах
А лих а жи тА у нія біц діа івн нія Аза Ні тук Так оБІіВ бух бвгоіжц Яеб Бе Чаг 435 Аа 445 вка обіу сіу іх бі 5іу Закобіу пі бфу бі бек Ага сім сім вВге 58 455 ЗБ іш кец бег рго АБ арго ліва біу вез ого Авробез аг сій сту зпх 30 475 яко мех вне АВ піп зи Ущі Афіа бів дей Уфі іжмофївм її азап обі рго птраница 340 вдтТ-Яз ча їли его тТгротуг бек АВ обгО піу їез азів піу Уві Зеакорео Ту єїу
Во МІ У ці вец бас тує рух Біб дер ог цу бів цез Уві мві Аїа ух АТ
КІ: ; ву ТЕ Е
Ії з Зо зі маї тує тТук щі вве Ра спів іви шій івч Аг Аа маї маї АВ
Й Кг 7 пт ках що
М з15 а
СТУ Бі ПіуУ его сіу їег ові Зако гео Аїв їв Мі жа Фів Кг Сем
У з5а ЗІ5 550
Агу бегоАіа 8ів обі АР АТа Аїд рем дій їв таб оеві азрогев орто
Бго Аїд Хег о хак Зі Аій Ага ази бек ойід Ра о біу Бе дів сФ1уУ Ага 580 ЗК ко мен ів нів іви бег АЇВ о Біж зів дгЯ ем осі ні ніх фе) нів тТВг що що оо біз вів ага 8ів Ат нів А1в тТгро о щій ей тв бій Оу АВ о твг жа 510 віх вп ічц Зі бе) Вбе дга ха! ве о Рго пім їЗк Бгто Афн о Фіу рев о Вгро 5ек цех М її Ба вто Аг жвг шій хан ЗМ «ЕЕ ДНК «їй» штучна вослідоаність «ее х сайЗ» дик. анти сві ЕВЕ-ОІ1ЯхЕСЗлиМНЦНН їх «Западемове диверМмаИ ззгана С71- АК «НН А «апоїіссавоє гтодіосс соосессова птсаазанає сс тіс пасзаазаЕх зпасасвмню свадезнчака свое свос здасжхакаксв Хассе тоЗах садзпавоис сСтеваница 341 як РАТНЕ оесВиссвАх зкісозака чзамини ат віївасесак абазвхзаква сокаваєає
МК восени хтсанназ зассвсїакч всвестоавса ссаосаіїсво саптасетає втоводетох сптжасетЕсв чисто вссосаввЕ засів тас сера са
Клео тастесквся ясїсваскск косах рюОясачю зчаассвсВ авссоакаоє ме тксасищка пеЕвминво соска кессішнуи Ковакавєва паесасеАЦ поасорсвсяв «сесією стоасекаЧіс амрвметаєт мирних сеааессато кесорюваса нини звсккос: ЗЕшсвевесЕ сх щссвк екосаОаНї.
КО поносетви відосетяес смаки спасе се веск се
Кк шин зевзвсзЗаз ссвсвавек авосажесвВссв зесзрвавсва завчатача
М сссваданся зсавсвавеак Єсасвсвкив сснесвкаеєс сазсаксіов вис аАчОу им засо кскІсскоки «сс авав сссожмнюаса сестгакви пфсссое коковофися свтоснаає зУусазсча вассзсова яосстонї савпгсаве
Мас івзкаск аднишинва змввовах зспавмнива аасскоачоаа зозосаце
Ко васвокатох івскахлічак саЗсїсско ассросє зсседчвстоа фокоаатац
ЗМ зар аса зазусавичя стлсвасава зссспосв спссатков завазвссате
ККУ тестя жкефчкашцес сежнвкасся садах сестуксссє віл
Ка вадствеся засн сс сс Веста КІНО цає 110 ше азкзочзчаа сварка ссання вс аааВо пВОцсКхК сх. страница 342 вАТ-З170- КО чтрстннсх «ссаавсите спос косес Зо вас оз хаца савоВесаою тс соазасекхк сісакоєтосс засво вас істосв савссвстає 3: зспевааца зссксктесск апекесещцак осрерсаєо феалсоуаоє зов хке ние реох сов ово ссствакоах сетассоузах сосжочАєсЕ пса їз хх ФС сера скастзвкоя зве ЗЕсЕкОО 3505 засцатсско застосо січе свосву зок спасає Вова їхео заазавств кое сва скоса взскаса сі свасх з3завсоннкоЗ ї52о І І зіва ссозсзавце акесдскск зорею ссесксвесе ссавосесто іо часа птапесс коасесвоазса скоса зола нос позою 175 фнкжоеда аксжнвеасвтї реак сав ЗсазастЗс гоЗсвсостево нриехюесаО іо зочеїзоузає тесажссола свевавчесє афнктачає зоссмчкия звис з прес СУсСКовЧсСх еКЕсаЧацКу апсстсковоав скосвосвоВ «отв н 1928
Чин КсКу касу вЕсешщвчвмч пувсссвазс татсссоссва соакосовсєе
Ще ши тассвІ вістоазаю ннснтаткс осісастов ск ісвава кокос стя
ОО зкцнесвавс схстувоєто твстєсвє севоуасеа скрови «стос а рану
Заст жіазвазавоаа сзсваааоааа сивина ч сс зас
КаКНИ
ЧЕК кТс ерсзоюваєх звазсЧчото отоостозоЗ зедостсво есте сін стас змІстасвас зі сІ сова стсвесестк ссостцасї
ТІК пічассіцк «сесвосжеє ктссзаззс возавасаоса ссср ссвадзнсо «З
Страница АХ ваті скквсіЗЕаєс вра ссоо зсазсасокоа заз іс ховав зас е пащі чЧІКЕ сн ови сс воака ска см часі сЯ кота або ззавісссаф се аЯтВ хи» віг «ві» 1314 «їй» ДНК «Ай» Штечна песпІдОавНнуТ» какИх путі в вжи де І» т «зиму ує м важ ху й пе хакчаме уколи кеййх ДМК, вмти смів ої -ЕсояВвниюг З «виступомесмовоеварний
Чу майки пух ж піганд КМК-оЯВІ «ВІН» їх сводтссвоає сацішосвщвєс сазооссово зесзазазвасє ссрасккс сс
І жсвимлнмим спвонномнака сеспжесвос застзживжеа косвЕюх свопи
ТО птн свав остова Заст аттааєссаї зтаатоакоо сіссвавіво
АК весна сссзоадчаао аЗтсаста оз стовса ссожекакоу сне тає
БЕ зи сках сс ЗстЗак вссосаках вкеастакає свобоЗсвсВ
Зоо хасвотаса есссВвмКо ЗЕ сяаи мине воЗ шеджеоВосВаХ вас аеє 38 зсцпнлара соавеосос ваесрУувсекЕ сспомнримо сстсстесва зво асетех 420 чан сузсестоВо стесстекс азуасеВсї тесссоваасс ооо хпортеаузаєт свопсоскої ессаосає зі сх фсссовстОї ксіакВакос
У
СОВОК Ж жсзжсспева свою ка вссекаєсск сеча сек зп ау що зчистасакся зсвасоаєова ксасаякєєс восипаєвссв вобтодасавВ давав
БО скттацатскх зтечсзазасє хевсвсакас сожсосямасс саосвксоа васкасвю в: сСлювница Я вАТ- ЗІНЬКО фзассаісвсо тектеЄскскх сескєсвала сосен состевічає сісосоУВих
ТК І ха ссежвося саиацкзчах засос ссасме асссїоваче сазазіеаво чо тоакасоров в«сюкчсеза завкоасвиває дссвазаєав винна свевоВ
ОВ зав:йзсвсяь еКссвкакоцї спе ксстє всопбежксєтває ассменнла зстадноє
В зарзавтаса вуса сіссваєчеа Фсссбеосв косссатсов пазавскакс 19550 соч заЗпесевс сечадваєсса соч сесптоскомєс сеосчдхвах
З
Чпадстечеса вовассааух пієсстатац тякозннса ярок та сессащчаї
Що аксессве «акацашнею свасстоссва сстпачвеся звстасавоаве свссокссся 1200 чЕзсмзнвса ЗсоасчасвЗ стесткосхоа твстссавас ЗассотаЧча сао ї250 заасвосвоз чевасекох сацетосає псоасдкаєв вен ссчка савссвстає
ЗЕ зеЕсснМНМ сселЮенєсх оавосссцає нн чюса заавоснкев аа їзка ззваменке сечачемаН сссховтавЕ скосу масок згосвовуа тай
УА зЕчікткс вас Зсуцє село скоасіваєсв ага весна є
Зм звоааповіско сестовсков пз пен єс бааостасай додано ї15590 зазувасто) хадіоассва досописота састасває тектссвцст оааастосоа іга вики ссоусЗазав восичктс зксесеЗа сосок зсВес ї155О вові сно їпсксохнков Ємралоно ашпіцсетес ска 1740 чвоезсссоов піс ах пунктах дсп цсвоає хз тосцуєсвВу ї500 нзузскжнн фосаїсзсв сасашмнинє зопастовас асоскосА зебоасвасво стеавица У
ВАТУ УВ КО і855 шосе хасву тасецоцкосї Ззстсацавте) асоєксоада куєскоссв го ївна кА 313 «1їх 55 «812 вит «213» Штучна пНОРЕДОВНІСТт м хг лю х хе Б ке - паз нд ту о кикеу кактуси Фе «ий» Амти СВІ ВВ 01831-кссяВМную а «западиноще димевний язгсЗна 1-48 «ВМ» 213 іп Ууді ій ізи Уа? 5івп бек Ф1х Аа бін Узі р руз Во біу 41. 1 5 як 15 ее ма вуз чаї его сСух їх вів бер оБіу Тук нг ве ТВг Аз тТує 7 зе Й ЗЕ Й Ка
КО їх о
Тіє век нт ТКроУВІ ага бів АТ вго біу Фів пі Кеч біб тТгромеї жа 45 і туг 18 Ап кгО Тут АБ ав ООТу Шет рух Тук ТК Бін вуз ЕНе іп оші Ага ма! ТВеомМет твг обоє АБ ЗВ Бек оїів 5ак ТНК ОАТаА Туг
Вь КУ Т5 о
МеЖК бів івц ше ага фев Ак его аво аа о тТВг о Аів жаї Туг Тк сук вх І Бе Зх
Зій Ага сту ТВг отТуг Тук ТуУук Біу Жжк о АЇВ їв Ве Аз тує Тга о біу 105 ЩІ Мао бів бвіж твг оувВг охаї твкожаі хаб Зак о дів Хек ТВгбофух бі Бгд бек ца 125 і25 маї вра Рго Кз від вгоОо Зав шиє ж Жде ТВгобег о біж Бі тТВК олій 130 135 158 дів джю Біт пух мер за) рух азоту вве Бгто бів бо» Уа) ТВ ма страница ЗБ
АТЗ) ще ТгроАза жег обі АїВа бе тн бак осі У Ні Твгб вна БгОо АВ 185 ї7 ї75
Уа! бас Бій Зак ве цім беа Ту бевбоібец бег бек чаї жа тк ом 185 85 Каже
Без дек о дег бег рев біу тТнгбобів Те Тує Хе Суз два УВІ аа НН
Її кю 2 із Вго 5аєб одхп ТВг ож мві аз бух Бук ді бів Бгб уз не ух
Ух тя Як : зАє з 21 215 ра азворУн ТйгОНія ТВгоСув Бго Бго Сбуз го дів ко біб аїй а1а біу баз го 235 БУ зіж вго заго ма! Ве без РВа его Рг бух БгО вух ар їйе Бей мех 245 я5о 25
ХіФ шет ага о ТНг о вгО піч УВІ ТК оСує уді Уа! Маф Ав уд! Жйг НІВ
БО 265 М 3; ха бе би ца ух йно деп тем тег очі дев пі» узі бід уд їні аз Рг бі ді У Ко дев тТгр тує Р АВ осі Ві ОР уУді зх5 85 КБ
КБ ль їм нів вав ін був Те оку» Рг Ага ші цім шій ТУ Аа Бек ТвК тує
М В; К Ноні Х мо Щ
ІЗ 5 ще
Ага омаі маї Жжет ма? фец тб Уві рев ніх бів зв тТгроїви дев З1у ох Зо 315 Ід пече Я жо фах рус «1 цим дкеа ее кіло сін дів шт ге ух ші гук Бу Сух Ж УвР ов А Як вів ока БУ дід ока тів
ПР фу» тат її шегоує Дій фу Бі бів Бго Аг) бів вко пів Уві 340 345 35
КУ ТВГовБеч Бго РгО сег АгО АВ БІВ вен отнгову5 АБ сб1й Уві дев 355 зпо 355 ев бог сСух Я! тУаї бує бі Ве Туг го Мег АБр ої Аа УАЇ бів 37 375 З
Ктранаці За
АТЗ -ВЕЙ
Тв бів бек Аза Оіу бів бго фім Ай Али Тег ог ТВРОТНе вго БгО
З УЮ щу ОВ чаї бен да Зак о АБА ОсТу бег вве вве еп о Уді бак обуз ем тет хв ях щю ни дхт іт бек ода тка ів 5ів і деп Маі Ва дек бує бер омаї мет ва ух зго дкОа ТК обі БІЙ о щіУ дБА УДІі Ка ме Сум зек о клаї мех що аг хо ніз Фін дій іа НІХ Аз ОНія Тук так бів Куз его ред шет фец ше 435 Бе Ах ко бік біу піу бік Бі бек фі Ф1у ШіУ сту дек Ага бів бі Бго 458 55 яко і: ії) Заг обго Авродар Рго дій сіу се мец АМа вже Ага дій сбіу 455 СЯ аку з
МУК тва о АТа піз ів УуІ зів озіп Ап маї ми їни Х1« аз Оу вго -ї Ха жи сечею ди Фі Сени Ж хі че таз му ХА
Мер обегоїк тТуг Бек о Аж Вго сбіУу ем оАіа оту Уві Зак вав о їТ жу
Б 5 5 я прогр ср ре і з твкК оре и во хе ї 15 сх йти піу ав Баг отуК бух КІМ АБ ОТВК бух бр еп Уді Ма АВ Ж А 515 зе 525
Оіу ві тує тує Ууді Ре вна бів зву сії бви аго Ага Уві Уві Аїа
Бе 535 ха
Оіж фіч сту Чек о біу баг охаї зегозман АЇВв їжи Віз Кен дів бро фен де; пер овід Аідн пі Аїд дів дів іву АЙ; ту отве жв) дзп ген га аги БЕК від АРІ Аа АВ ОАТВ ОКУ АІВ бНм б Уві АБИ бен ого
БТ АТ пог ояог 5іб АЇв Аєв Акхи Зваб дів РЕ піу Ва Ообів бі Ага
Мен омецз ні грец зак Азв о біу пів др овем о Фтіу уві вія без Ні тНг слваница ЗАВ ват-а170-5ЕО піц Аза дк Аза ака нів ів їтроБів вен отв обій Оу ліз ївготаї
ВЕ ЩІ йо ев обі без РВе ага маф ТБгоРбкоОо йім їі бго АТа біУу ев Бі бу 55 530 535 ща
ФУ іу бат щі ПіУ 0О1У біЖ бек вт обі біу ве бі без шетє вто
У вч по
Ав оа5а о Бго ліз бі ши ем о дерогеч АгУу шій сі мет вве лів бів
ЇМ МЕ вт іч Уві діа «Їй Ба УВІ КБевоібев іє а5в о БІіУ го ви чес тгеотуг
І вка БЕХ цег АЮ Бго піу аа АВ щі Уаї бек бе тВе осСтіу шіу зе баг оту
УЮ Бах ми ту вів ав отвкК гу дім інц ожві шві 13 їух віз бі Маї о тук тук вх тій 715 ТОД
Ки КЕ їх КК
Уві вве вне шіп гей бін ген Ага Ага маї ді АЗВ ОДУ дій ФіУ Ще ча Й т ос хо КО пік бег о уді хегоїец від вен нія Бевз бів вБга рез Аг сег дія дід
Та тах Тт5 й тіж Аїв зів АЇв о сев Аїв рем о твг ожа)| Ар оівам БроОо рго дід Зег баг
ТУ ТБ ШО сіз АЇв Ага Аза Заг Дів вве шіу Бе ців біу Ак іс бев о нів ев чук - ЧЕ Зсзах ка 5 75
Заг Аза віЖ Бі Ага ве сіу Уві ніз вм нія Твгобін АЇв ага віз 785 м За що кг ні авіа теробів іа те дій «1у діа Тв оУуВві Бенобіу це) Но 85 БУ 515 ага Ма! ТР овБго бів її Рго дій щі беи страница ЖК вАТ-Я ТУ КЕО «ВК» ща «кі 35 «айв ВЕК І «Й.3» Щтучаа тоспідовність «ей» вити спі ВВЕ Есепонцює й «мету пОоме-моМмомерими ліана
СЛЮ-дАКУ «НЮ л18
Ффіб ві сі сви о Уді Бій бер обі АЇВ ів Б ж вух вго ЗУ Аїд
ЩІ х 18 че
Х 5 ж МУ еко! фу маії Мет сСух ух Аїд о пеє діу тує Твг ОБО Тс Ач тус 20 5 КІ їі меж ні5 їгроуа! ду іп дів Бгто Біу віп зі сви сім Тгрощех 35 я 45
Зіу Тук жі Я5п о вгОо ТтТУуг АБИ др осіу ак іже Туг ТВвгоБіц Був ББВ хо 55 5 чіп ші Ага ма! ТВгомек тТве чего азо Твб о беє Хі Зако Тве одІВ тує 55 о 75 ка мек піц ем де дк ів Ако его АЗо Ахо отйК АЇв шаф туго тує Суз аїа Ага біу ТВгоТук Тук Туг пік бар АТЗ вн Ба АвротТуУРє їгтв обу у 35 ци Й шиє ЗХ ЯК сів БІУ тТвгеоуВг Уді таро 5ве 5вкодів баб ТВг фу біж Бра Зег їв ї25 І
ВАК А Ах
ЗВ вне вго бен А! вго Зак об фу Хеб ТК оЖХег «Фу біх тТВг Аїд 130 135 їщО дід розі бує за Мі їм до ТУуК ве Бко щі вра Уві тТВг о уд! дів рес о сбіжЖ Сук Бе о Ущі Му яко ТУ вне Рго цім Вго УВІ ТВг о УДІ 145 іх 155 Ба его ТтТгроАУп Баг оБік АЗа фец те хвеосіу жаі Ні ТвВг оББв вро Аїа 155 150 175 стованица Я вАТ-Я170-5Е чаї сез бів 5Зек жк сіу гемо їут его рев зав заг о УДі Узі ТВ ма 150 155 і80 вВго дку Хакохак ів біУу їТВгобів так о Туг ЗТе Куз дп УВІ аАзйа нік 135 З Ох
Му Бкго Заг оАжиИ ТВгофух маф Азр ок бух ві бів Бгто Був бже Су 243 іх ка аз бух ТВг ні Так обу Рез їм; Суз Бго дід бко ім ді від бі віу вго Бег оуді ре мем Бие рго вгО уз РРО Бу АрОТВК ви мех «45 ке 55 їїе жжее ака ТНгорко бін УВІ тТвВгосСує уві маі маф АБО УВІ зегонія я 255 Ка зів Аза овго бів Уві ву вне дам о їБроте жі Ав пі УВІ 5іб хв
ТУ Й КН І 2К5
МІ АХВ Аа вуз ТНК вух РгО Аг ОН ої біз Тук дп его ТВК Тук ща да ЗО
Ак ожеі ма! хего уві цеу ТВгоОУВІ Бе о ніє біб Аж о Тгбробем Ай Фу
ЩЕ БА 315 о
Ку біц тує бух Суб буз чаї баг Ап уз АдЇй бец сі АТа о рго тів озін куб ТВгОоїі6 его ову» АВ вуз Щім піп вко АК бів Бго бій Уді тукК Тк оївр вго о вгОо Суз АБФ оАяв осі ем ТВг рух Аа бів Уві Бек цей о тгтросдуз жи чаї ту» Оу ВЕ о туг Бра 5Зве АзО ї1а АТ Уві їй
Іо 325 ЗК тгю ощін жк одяп о йіу сій Бко Біб й» Аза Тук гу ТВкОтТВЕ Вко ко 185 8 З 00 сСтваннуа З5Х ват За 5ЕЗ чаї іну АБ Хет Аз обіу баг оввйе бе оба Туг бек бух Кен ТВЕ Уві! 305 515 315 ав осух лаг АР тгБ бів бів бі Аква хаї вне беб Сух чего уві Вех нів Зів Аїв цен омібз дя Ні Те ТВг Осій Бу« БегоїФв Звробву 5аК 435 Я ах
Бга о біу (іх сФіУу бі бі его обі бі бів щіу бег Аге ТМ біх рго а55 ау 450 ій вар заго вгОо ляхр ор Кго Аїд біу ів фев ЗВ рез Ат шій му чех Я зи «50 мех вйе Ааіа бій ісв о хаі Аівоій Ак ма? вжи їжи Ї1е АБ ОСТ вра
ЗК СБ 455 іши бак ота тТУК о вак дев бро пі іс дід Зі Уді баг оіши ТВродіу ев овег то тую ек АЕОвгО сту іец лів сі Уді Баг офш Зо ту
Б щі що
Піж їжи о Зег о тТук і» січ Азов бух ін фон маї мав АВ уз АТА
У з 525
Сіу жа! туго Ту уві РВЕ вва фій бо Біб Бо Ага Ага УВІ Уді АТ
Б 535 Ай
Піу бів біж его обі Зак а! Зек вжи дід бем оМміз ім Ота Вт фев
Зо хх Зо йгчу им Аа йогу дід А3; 51: пі І: ух їБг БЖ Ах Кок га бек ойаіа дід БіЄ АЇВ А13 АЇВ ву Аїв о їем о тТВг УВІ Аа рев вго 555 о КУ йргО Аїд Зег 5есг БІБ АТа АгФ ай бЕг о АЇВ РВЕ ФіУ РВЕ ОІВ Біу АгЗ
ЗВО ЗВ У ід оіжи міз ви бжг о Аїа ді біб агро зіву біУ ді нНіз мен нії тТВг 555 ЩЕ 55 січ ата аг діз ак ні ід о ткробіп беб отйг бів біу Аа тТВг ох 515 У стумінниа 352 вда 0-5 їни і ки; іно дра мді твгортгв З тій Бей За єїі»в іде
Ма Бі жу пз дгОа Мі Тваг орто бр ХЕ РКО Аза зу ках «Имя х15 «г3їх ЗМ «812з ДНК «Р1їх йзтучна песлідовність хе ДНК, нУукнвотидна посяіденвність батьківського кину СБ свщи щі
ВИ), М «у: х15 поши тссво: тугазсвоїє кораєсетозу сізтвавшє стоадовостс ватовазака
Б песктосвяю сіток свовитоВсї васжвевеа кеєсаєтуа пмнн вав іга если песто застав евж астватсотї всвебаєог слоквауєвх: всїсзовзаве поазсзипсав звсесаєско всежсазата авжектссве своваєстає
НЕ І 7 | Й яциместса вфсафістовс стетоаеес єскосучесї втфастоєоє зарерюраєє
КН. заїтвтсат3 зтазсвшсст сетковстає суссава аслесаєтех сват стос
ЕН я меч ай «ее щі «її: 355 ер, вце кА Ем днк й І «243» Втучна пспаідовністх «ех хі» ДНК. мукаемтидка посглідевність батьківського хлзну СОЇ
СЕВБІ. М. «НІ 216 висУсіЗсоа овоссаває сссеастстсє сосни св зга овес що атсксктЧеа ше тазксв дедссктама засиеїваєу звазсвоска Ед 120
Квсожсвов ваєсавсчска чоссвсвав стестоакох зовсозЕКес сазан еКе 150 сестро сх їнаасаовех саптоцівах чазесавеча сват вставав зай сСтрванвця 53
РАТ-ЯУВАБЕО васаовозоа арасівЧа Егеосовоїх хакіксокуєєс Таовасттає вовка бспоє ів звжиниас свазсіззаз ввава щ3я су 01 еру За «аю я
ТИТА Ту, УМ -Я Би Кк . каКУх Втучнв послідовні стм кох «леї» 43-45: ОБ У, БЕ АУБАТИЦИВАМАкАпИм. 49-13: «Пп М, ПЕ
АеБИТИчИвИРИВеКИдиМ, 55-25 ТИВ, БІ-ВЗ: ЖЕ 5ИТИОУК «вх хай вик тавжоеке «Кай КАР С «иай» а овознамає в, с, 9 ВО кикох каЖіх ові екотеакиге «ЕййМ ЯЗ ОСА «ий» позначає в, с. й 80 «Ко» й «ааї» ізс тієдЕиек «й КЕ СХ «3» й опозвачах в. с, й або ї хЕох «ее» вівс тТеджига «дико ВР .В3 «йи)» й значає в, с, й ово їх «каре 517 свити цоЗ сістуаєскоа зх ссозо асассмис запас поссполуда 5О зваастссвов зак а атісіссавов аа «си 71 «лах НК «кА» штуУЧНЕ ПОСАДІТЬ кхакх а моя, Зуєу фуци у ице й йо йчй ко ух хх рик г рин нАшШ Я дек Я» Яд: ЗоЖх Бя зОох Кк, Б допити жасАвІвАмМопих. ЯБ-ЩІ З0Ж Кк, 2 5, В АМІАКОМ. 55-57: Я0Ж КЕ, 5
ААУ чи КИ, меч За р чок вач ах Ач чи шичих . сек
ЗО: Я» х, В.Б АТАКИ ВАМ У, БР-ВЗ: ОК ов, МЕ |.
Страница 358 вАТ-ЯІУО-БЕ меча яани вже «В3їш із вати «авйм НО). КІ «иї»х й очоавачвЕ а, с, 4 ОВО х «век вс Гавро «ай й КАР, жу. (ч м чи «я. С о ЗУ «ва» й позначає в, «с, 3 КО Її
Ух
МАМ
А паж ня ох «айЕМ ве тиск «Ям 3553..:5573 «83 б'чоззначає й, Кк. Фа ек «бекіз тізк о Генінге «Йд» НМ я НЕЗАЖ «ай» вп опозмачає я, ї. З або їх «2205 І «виам німе о Теаївго хойжт МБТ. .БО «хвої пов, С. АВМ ї «ай 15 схссазахає сеатоваза сесосваста стозістос пвобсвієтав поркеалпипал
І зкакичню ашечкісво соогісізаа тосоЗм «2105 515 «ії а хів» ДН «ії» Штучна песпідевність «йгйх «й» 0-й: Ж Н, Ж щу ТІМИтУВУЄ тич, ЗБ-АВ: МЕ Х, ТУ ж, БК АСТРА; Х, ЗВУК І М Як олАДОВуУТУМІВЛКВАд МИ, зве: МУ, 555, ПЕ 8ИХИВУтАВІ НАМ ЕН ОІчИХ, 55: ЗИ т, Ж подути. ВІ-ВІ: Зх її, 45 пААКІ ВЖИВАНЕ МИХ «ее «їм о піне товіче «ВРХ СОЯ й «кіз попезначає 8, с, З йо Є «Кох «гії» віх. Тевтаге сСтозчиці 355
Й Щи щу вАТ-Я 1705 «лоз са. СІВ І «ай» в 'изаначає з. с, З аа ї ках «ау іже Тедкике «вка КЗ, КМ І «вий» поиозначає в, с, подо Ж хх ке «ВІЇ ші Теакцрж «ай г5335.. У «кім попозназах й, й, ЩО ЗО Ж «202 «ва» мізк Ген «вій КВ. 5 Й «кий» в'позначвяє з, с. З ба їх «аж х «їх ак Теавкога «вка СВБ. С й «ф232 в пезнанає з, С, з Ва їх «ВНІ 31 «вІссаскес сс сскоє сенс всуаасссав пасаїнпеави плапвавпаа зппутажоса засос востевсоті: засойпааає ща «105 230 «ії: З «вфй» ДНК І хиії» штучна гпрезідсвність «дою ши «ВИЗ ЗЯ-3Б щи М, УК о знеях. 0-48: МА М, 45 інших. 45-38: Я
Не хх г с ща сич сомах У 1 5 ке зась. У
Уж тнших, 451: МЕ ОМ, 1УБ Х. 5Ж іншех, 58-54: МЕ б, 13
Фк, у інших, 55-55: ЗА о, 45 імщих, 51-63: 305 Кк, 155 М, «КЕ
Лях, У-УгІ: ЗО ОБ, 152, БЖ інших «ам Й сей вве Твафнив «вай 343, С «КЕ» й овзазначщає д. с, фо т «ос хе ВН теакнКе «ИДЕХ НЕ ННН х НЕ й «ей попозначає а, с, й Ві ї ках
Страница 555 ват-а390- 5) «їх ім Теаригв «йаз (аБ..ї хай» п позначає З, ск. п вбО ї «Те Пх «вЕїМ тс о Теакнга «баб С. (5 й «ВИЙ» п опозначщже в. С, довів ї «ех «каїв міс театцге с ау ех каш їз. 3 І «КеЯ» повезе ва, с. ОВа Х «Вей» й й «й3Ї» ші тевтнго «й» 5.57 й хай» йпопозначає З, сг, п або їх «ДеИх «їм щі5с о Теакнга «вид БІ. ВЛ й «Її» попзазначає в, с, п ово Ж «Кох й «беїм міс тедкцге «ий РО. .ГУ23 І «Из попозначає з, с, в о аба Є
Ки ЧИ. учи кА са лссоЯЗ зссаЗоцсх зара козака дсп засовумаийй апопапиабссє 2 повбвевсосп пвазаєтесв мсек асан
З
«230 І «21 33 «ей» ДНК хі» Штучна песвпідсавність «ХО» «Я» СІЗО НІ зворотним комстантмий ігподимері «Ні ЩІ срсасеЧик тодЗудевУї весь сад «хх вх «її ув іх та хі» ДНЕ ху, М ї РШМ хиїїх Штучна мнаспідевність «ВрО сне ЗУ
КАт-Ч173-А5ЕО «пай» КВ «НК й? сздоазвавсзоа статовсене ев ак «Ох 225 «Ві» 33 «З430М дик Й «ЗЖ3х тучна пестідовністьв «вах ейе3з СІ Я правив ковстантнми спраймев) «Не дЕЗ
Кеацкакстсс аздааассовОУ Кеацсо су ей дае «иїї» В «Мбх ДНЕ й «ЕІ Ббучна пеклі дов нть «ох й во я ле Я мм лить ЯМ аз гзвках Ям АЩ А слеЗз З4-3Б5: ЗХ ж, ЖЕ імшеях, 37533: ож в, ях інших, ЗУ Яй: ХВ
У й з у з Я зак ДК ме 4: кю пло ДМ чанах ід Мк Аж гУЖ
Но, ах інших. 43-45: им М, ЧЖ інших, «ФБ-ЯВ: Я у, Ох д ях їнавех, 8-3: 55, 155, Ж їмещях «Ех «ВЕ» Вінс тТедкуга «ЛЮТІ МК и
Ким за ах 155 й «З» м» позначає в, с, а Він ї «Й «кі» Вінс такое «а2Ях й позначає 8, с, ц або ї г «й бе 7 йкко ЖК «ам» між тевкуге «ейв» (403.08) Й «лей» п опозмамає й, с. З ОО Х
КК й и
СН пи КД а НЕ и У НИ ЗІ «ках (А.
ТЕТ, е чо яри я ме є НИ «ко ВОопПезЗвреЗЕ й, с, ОМ «еко «2» тізсо Беца «ий ЯН). .ЯВ
Стванина 58 вАТ-8І МН яКО і ІБК «лих п овозначае а, с. ЦО ЗВО Ж «ВИК хай» щівс о тевецев «аби (ЯК. «Вау» а пазначае я, с, 4 ЗО Ж «гла хтхтазвшктсс аасківа те сифдасспаа укаапипай лІччнчюйа ВожОЗОВаК о зіренко совасчесткх сус щЯ «105 255 «й І х З 5 «Кік» ДНК «її» штучна поспідавністае «оКОх «гі» СВІ З примий комптамінний Спраммевз всстхсозе азоазавстав вста зАчЕ зАажао хе сив «Ах В -81йз ДНК «иК3е Штучна чоспідовніксть «ехо «ай» їх. УЗА МЕ, З,ЩЖ інших, бЕ-БЯ: Ж А, 5, інших,
ЗаЖ 5. 4,йЖ чних. Ба М, 5.55 івшзих, 71-73: 5 Ж,
СУ
: ба жк. тлх ху с оз, прим лю я змозі інших, 54-75: 505 Ж, 4,2 інших. ТИВ: БК Ж, 4.5 іншик,
СУ рум су ЗОМ гам п ОА прю ЙО Я азнох м
Зоо 5ОЖ СтТ. ЯЯМ чних, 8-5: ЩО, Я. інфах. «ВеКе «Кеди тік тезвкиге «вій» 54). (58 «Ей» попозначає з, с. й, о «ВХ «Феї отізп ТЖвжНК «Йййк СБК (БІ «ка» п позначає з, с; З ба Є «Й йх «Фийїх тів Тевкнго «вий Би Ква «Кей» в позначає З, с. а аба є
Слраница 355 ват- Яру вЕа «ВО хкаже вра с ТеяЕНге хиба (БУ. БІ «дЕУх воазначає а, й. З ОБО К «ех хай іс о теакга хиби КВ. СЯ Й «йух аз позначає й, с. З 850 «Фах «ай» жізс тевжнев и НЕ НЕ ДК Й «иа» в'пеаначає в, с. п ОЗ Х кас» й Й «ві» іс тезкмеє «Вам СТАТ «Фк» поІняначає в. с. 4 ЗВО Ж «ах «гі» тів генЕчив «ин СТУ. хайїх па опазмачвЕ а, с. ц ОЗщО Є «ВЛК» | Й «Її» щізе о тавкига хви КВК. КВК Й «аа п опоезначве 4, с. ОВО «кох , й «ЗИ» ощі8со Тевкуке з МИ «аск ВЗА. Й «А2й» в опозмаеве 4, с. 4 о Вбо ї «НК 25 ікс тво своувосєтає дакеаесо возсостев сесєватавеє заавопллей що плтчпалавна вививийапе оасоїасасаа Єазбазасаа созкоке
У
«М й «211 БЕК: «ІМ ДНК , «213» штучна послідовність «ТЕ» «ФУ ОДНЕ, вічена ЗМАР жонетрукція КСО людсввого 013»
БрОоКе «кН о чар є зфсссвтсо всобмсавона сракевеває вадоссевсв їсааєоєсві т «ацюасвна щзаскоусозав совно сАє сдссстоови апссстстод оса ов сСтвчаница 350 ват- 170 -КО
НК зсІкрствжа пекоазвсозвцо осетасвсяа Зате та супом завсакеке
Зо чес зірнасцтоє сецссссвк сс каста сосоесаа засне
АД пов рнКксасс ЗзссокоЗсков водескАЄЕ КоВссаВскТ зво ро азоавУккося за чатзспацеє стран аєс свазаїтсоса дсацовонвеє ЕК воЗіастока лаваскасхз звазвича вотссвовЗа взессвиєає касова мвКсасссе 2 пцеснквае ссодософєсев ссассоск дазавсюсо стфвєцана акоссвссє аАВО «віха соски пасує меми слав Зоо сенс пкдаачаВах спас ссзсзаззє сво пачок
ВЕ четозуєак зессссоВ касссстаЗе «зсзазаемо зазоветеє зовакоєсує й прихасве с стеазаоарсв сссссЗаказ соска сваєтаакке зксоваи
ТхО чно авексе кі вима сон сепецесста згагокатах ве ї Е :
ДА пос сте щока січаг хост АХсЕК спас сового ЗзсЯУєЕска о шо Й стесваю сенси себсіоаоаз зескеЕозсво сетаостуза скдтозасУє що чаавоазакси песоувоп ви уссоцічнюка свебссат сткнчсс седана
ЗО свв аамЕсказсв вн сссву свесссосаас зосваастза бзазосссва 1059 шсехчіжиЧКу Гачок пощвм ей пасстозовВа ФМС се охо ссстваовчає посскоувасс апрдосетоаа ссачоакстоа ясзаІзассс сус зекокате щЕтегачко кс ва соках вВевссостє коезУусечає 1200 страница 351 ват а 5ЕЙ ссасатосає сетащочаяасс сквачЧачисю ассЗаска звасказає асововоцоє
ЗИ свссмрвиво звтобочатсЗ кодовавссов ссмасесі ксеіновцєса секисвоуда 139 мвкосвкави свої асвзсс асазазосаз сставссе ап сспасс годавакеве сусалассс Ззіостакаак зстоавстк ззоазвасенно зассодавой бозесдався ї1434а зивасктсакс сао нвщао агстоватає миадвосаа пасасасаца зорі коц: 1500
Зк свсво тесеіоссї сквафЕ оФфсовтктла чксвхостац соска
Т35а3 чес віЄтесскея козі сксвЕ сатасекев садами кас 1515 «Зх СЕ «жі» 1520 «хіх ДНК Й «ЕіХм штучна песвпЗдоевнЯ єть «ВЕО» «вАй» ДНК, вічена МАР ковнструюцвій С СО3ЗЯ мав півововгуєчвОосЕк «ММ ЗОВ секс сіаасоцсови соагстасива заспасявта вовазоссоЗ паса вісашнюаса азззоссов мезаазсасЄє зссассстбв вхаоКлсс пегсавчоо 32о часто чамзнзааця фс зкеесанв хастодесав зазааовся 1 чес косами честаспска зл евеочас вавассвеу гад виника сеепскивії савсопскає кто арвІ свище свї содоУуЗести
Мю сстусЗссав сестусвсоса сесвекастс сзвсву оси ску сен
М чмркеазскоає мимо: оаевкісоза перс аков осів поки річ кі сівщессчаса відпо сво пассоцпссе ховав сосхдажчи аа
БВ псСАКЕСВ ССС СВ пе КеОпАацекеко зп очи Всп АВ сСтуваниза 352 й вАї-аіУИй- ЕЙ часЗаскса сеоціаае зм асєо ФфоскесовУв вссасвувох зезосвеиє щюЮ фест пежесксососвВ повасссста іє каоваочаочво сазкавтвох
Нм чі свцЕ пане ЄакскскоааВи зво сеасе воснвивиє за а
Б т й 7 їж
Чисавсссєт тсодаусссхї сстовзассто сесії кассеоасак фе своув
НК зтодасссте вик ассто зсфастонє кесвмнлКає сетазвссааВо сю
Бо твссиа засскк попав чо вена насе засо з зтвзазвазавж скоосзеазсх зкссзоЗз забакекссоа акстозЗсЗя сестЗЗцакоє яю ча таває асвузавсво санюсеєт аасвоєсисв осв аасх зазтазитадє їаха кекізкасу пободассах доасаваєсс дарахосово звоосовоєє кусає
НЕТ писєсстававз зВінистчва ссоавоноєска азсосаєооє Хоавсвасню ссср 315 вовсскозс сдадскоатою соцксвссс засво ссвожочесс кссоацю їм асасгаєакає Зсекажщни: ссескавЗає вЗксохостаВ зссюонаєв звавцувоває
ЗА тавссевес здузаско пеня асазессн спав воупсвВовХнх:
І55уУ | І
Мк зехачечкнпя скщосасаоцн сном стода ссамнмет тезсесопаАя жо овес звевостаа стостзацчва кед с зас зай : З М КК 1445 чазсннацє хдатстессез зцаловеско аасасстодз Зссадовівс ссзодавока тю ває Я З ВЕ мачо віха озечо секс пспсттсаво зіпотсзеча ссазсосеаЕ Боасесо псазсостоа севісате сстцвксоаїс ставків сроруєнова вамросокоує зва
Страница Хе
АТ. Я170-УБО «вх З «ВЕ З «вже ВК «ЕРУх бтунна песпідсвність «али і «ЗД» омічена ЗМАВ конструкніяв ВО нюдського СОЇ -ВОСЕВ «ЯК І вго Аа дід дід кає бі їів азвотТук бу АВ хр АБО АВ ж Аа
Зі їі Аза АЇв 112 Меї азріУ Ав сСух Фім Ме бух АТ ТВвКОТНг й ех че 2 З КИ їм аа Зак овгО їва піу же фев піц без его бі сбжз зій бій сі1у
СІ 45
Мен нів бів їЇє був ке ер пі ж зі Тк хеб дії АїЗ Аз АЇВ
Б «5 й
Я я ще за ів маї Бгто Аів го дід дій узі ви о піу біу Бго бів бо во ка Та 75 5 меї сів Аза тик а! Ткроівм яви АТа тує вва ні бів ве 513 418 да З а
Жів піц січ вве о Бгз Уйі руб із еп нів нів вБго Уйаі вва о дій с; бів сім сіц вве о Бго Уді Бк дРз це НО нів Бго мар впе дій сій іо їп5 о
Зі Бек вве ТвК аг біп Уді рев о тгромув їжу фвмої ех уві Уві фу т: 120 щх
Ме піу пів уві їі заеакотук бів бів сен дів ад ем дід біУ дей 150 115 150 го ліз Аїд тВгоАіВ Ата УВІ ух ТйК о АЇа зец жаб О1у АЗпоРКО У 145 150 155 то вто ї1а їн о ї3фв бро бух Ні5 дга Уві уці Хеб чає бегойіу Аа ма 155 іт 175 бі сію туго віз бік Б1У ен Аїа уві фу СТ Тгрорев цен АТЗ нів страва ЗА вАТ-аТТО-УКО 180 ка їз діб шіУ ні5 ак іев Бі вуз Бго біж збо о сіу АБО їі Бго БРц бів 385 Об 2
Бей сен Уві ді був У! шім Чт ші Ар одап лів УДІ ев обів сСуз 23 Каня 272 ів вуз Ру Ту пет Азрвобіу Бео їв бів бів во тВт о трроцеє ду що 235 ве зів Вег обга ев ому го Ва гемо рУухХ івц щеб бе бі баз Вга іу 235 я 235
Бен осів дів мів меж ага буз рев Аіа їі Тероіж» БНе Т18 БВЕ Авл
Й ЗЕ Ш 255 й З
ХХ «ОО У маї Баг бів ів мет щі сі Ббе тує сви о сСух с) Без бі вто Рго 275 ве їК5
ЗегоБі) вуУуб АЇв о їгрошій Бро сіу Трроївг Уа? да Уді сім Фіу баб 2 За ню іє іч ївдц; вва: аг їКв зхй ді баг о Ах ви ЩіУу сію івц бі Су піу Фіз фе) вп оАгО їго Ахй УдДі Баг А Би Б5ІУу ші дам осі сСух
За З 3і15 329 зі зем іух Аза яко ЗВгоЗвр обі біу ве)» ЮвК о хвгоБгоа Беб Оіу фу
ЕР З 335 вен мат Заг РКО Муз фен тег Уві тТгводів рух дар аг вро зів тів о 345 зо тгвозів бБіу біз вт) БМ сСух іви бго Бго Ага АзВ бак їв джип вів
ІК й ЗІ т зщє 355 5 385
Жжтоїжо» Бегобій Ар оіву тТве Мет Аа Бк бі бекоївк км отгро іє
Зо 75 Бо чебосу5 бі маї вго вго АБ олег Уві боеб Яга біу Бго ЕМ ЩЕ ОТГ
І55 ІЗ КЕ чю
Тео нів ха Ні5 вк фу СТУ Вго бук бог океб рев Зак гемо піМ де
Страница ЗБ вАТ-Я170-5ЕО
БІ 38 515 цужх Азв аз Ага го ів Аг Ар оМмеє тгр Уа Меї сім ТВЄ Фіу ву 388 ру 430 їв мен о Бго ага лів тне дія бій аво дія ту дже туго тТук суз НІВ
Я 340 35
Ага піу дя іям ТБгомет звг окре Мі5 вен Бі Хі Твг ОА Ага о ВуЮ
А Я з
Зако вве тер оні тТРО Вей ее АК Тв опзУу Спту ТкроМух УВф да вів 355 475 Зх я
Пів ох нм о Ківе ес січ біс 85 о бев аАха аів маї 1у (ій дер отВг «ЗК за ах зів бів Уді Яів Дії Уа бко Міз его фрі Бко КВе Бу Мді Узі ма за 505 з18
Її2 5» Аа Ів Кез АТ ев ота! Уві без ТВРОХіє тів Зеко бе) хів 515 за КУ
Ті реа т1е Меї реч тТгробів Бу бух Бгто Ага
ЗЖ» «аа ЕМ хащі» МН хафйМ ВАТ кажух штучна послідовна стм «вид»
Ей» Мічена МАР вовструКкЦія ЕС С0БІЗ мавп ціномонесує - ВОСЕК «з 3
Бга АТБ АТ АТ Заг опію жів а5о туго вує аз Ав о ахр акроітз дій 3 5 та яе бі жів Азе ай Жію Меї Ахробув а5росув від меб це Аг тТвгОтТВг
КЕ 25 30 сер Аа Ваг овкго рен бі муз вжи обі ем бек Щіу Сжж бів бів біу ай ях страница ЗБ
ВАТИ КО іч ніх Фіз Тіз БУ фей ів Бі мбу5 Бік тТйг баг А1а ді дар дів що 25 що
Уві ів Уві Кко від вга дів дід Уві ви Фіу 0іу ко бів Бго вер
БО то 75 во
Мет хіп Аїв оте ІЗ Тгробем дай яїа тує вве о нія бБіп ко чім д18 ях за 55
Хів сії сії вва Бра УЖ! вго а)з цез мі мі го уаі вве оБіб БР цю 105 ЗІ ім бак бе ТНК оАка піп У) ем отр ож Кв без» вуз Уві жа Ку ії5 їх 125 вав осі Фі Узі їі бак отУб бів бів баз дв АТа беч АТ ФіЖ АЗИ 133 155 130
Кго Аів Аів тТВг Аза Аза Узі) вух УВС АТ фев бог о біє Ажи РГО МВ їх їх 15 150 тка їі іво ї1в рго Су Ні Аг Уві У? дегобжт Зв ооіу дів уд
Іде 170 КІ сіу біж тує біч Оу БішЖ мез АВ хар оіуз 1) Тк оіец фен АТ ОНІЕ бів біу ні аго Бенобіюк бух го шіу рем ошіж др ожіє вро бів 519 зах й й зав Й І пах
М АЛІ ка го вера! Уаї руз Уві ОБ 1 01у Аз Аза вів чаї рев Біп Суз ва й 235 й 753 Й и я ї р Же КУ іжин Зі: бік Те его Ав сі Вб о Тве обі бів рев маї Тер се Ага
ТА 5 215 І дер шен го вне сім Бго БВа зв Аза грец зегоржношіу ем оркаУ Чіу 245 250 5 мех оту Ї18 ака мех бі го їшцб Бі ї15 тТгробец вве Жіє РВЕ да жо 255 Ка сСтюаница 357 вАТ-ЯЩТУО-ВЕО
Уві йег дай шій ТВ обі бі вве туго кан о Сувх бів рКо Фіу зе вух
С за й вакобів бух 8ів Тгв Фів ко «Ту ТгвоїВгб ув) заго уві бів Біу хек що вік Ме сі бій йдем Ве Ага тв Аза Уді ек ар ов б1іУу щі ву СТРУ Сух 305 з1а 315 Зо
БіУу цен орух аз АКО Зегожвг шій ціу го Хеє йег Бго зер обі бух
ЗЕ ї350 355 їен АБпощет ет бій фев туго маф тт» АЇв мух АБроаАгу ко Фіц мак 340 за5 50 тер обі бі біз вео хі Суз біу га га Ага Аз обак орав вх бій 355 в 35 шет ійу бер бій Ах ев ївВг о жех вів Бе бБіж Зб тат сем Тк орец жих ЗЕ ям
БЖД ЗЕ ІІ
Зег Су ОБУ Уві рт Бгто Ажор обер а 5вг о дга піу Вр офео Зегб ота
ЗК Б 335 405
Твкомія ув! го Вгаовуз б1іжЖ рго ж Жаг шег о гец іец ває бев бів
Ох що їх іжи Куз Ар Ахр Ага Вго АБ ОАгФфоазр оМек туга Уа маї джр ТНК щу о За 3 ви ре їви ТНК о Аг АТ. ївВг дів бів Аа діа Бі куз Тег тує СУХУ
НІЖ АгчЧ сіу аби ТгроТВгоцує Бегорне Туг мен осів Хе ТАг о АТ АгО 455 а я вгз Аїд ем їгв Ні тт рез кв Аб) 315 Бім Ш1У Тр офу5 мві Аз
ЗБ 470 475 ЗО ов бій вуз феви жі Заг обі 51) Ар бе) деп АТа УВІ Зіу бій АЗр
Зк: як 495
Страница 35
Бдт-Я37УИ Ей
Твг офі ім узі їїв Ма) Ущі вВга мії его бви Рго РВа іуз Уві УВІ
МюЮ 55 518 тТаї бів Зак А)їв ті ем АТш іец та! жа) ен отвг тів Хі дак ву
Зі ЗО ВЕ їТа тів рем хі Кех ев тгообів вУБ МуБ Бго АКа 53 525 а «30 23 «ЕЕ і5 хвзк» БК й й «й1фї» штучна послідовність я. й КУ У «Ейїх внтиЗсоіЗ сив -АЗНОчЕ, ср «ВОла к3ї
Мут док очеє сія Зек овен бів фак ве їй оФіу дя тТВРотуг іо дув ії 5 Ів 15 скік «ОМ 3? хі М ї «Л1й» ВНТ «Вії» штучна послідовність «ЕЛОх І «ДИа» днти СЩМІЗСВАВ-УНОВУ, Со «Низ 015 дке Уа! баб бу» ака КНа ет 4 х ки» 23 «Віа ВВ хх, я ху Її: см чі їн «її щуучна послідов сть «Ох «жйй» анти СВІ ВАХ- НОВ, ср «а» 235 ін піп рез її Ар тут вка Уаі ТВ «іх й птраница 355 й РАТ-ЗІУН КО хеЗіїх 5 «Із вер «1» ШтуУзна послідовність «г8О» ей антТиЗсВІЗГЯВиНЕМ, совені. «Ох 234 дар отже їі мет ніш 1 У «іде ол «лаіїх У «ІМ ВЖЕ «2ї3» шгузнаА. послідовність «ай «883» АНТИ СВІЗСВ8В- ЗНОВ) сриено «НЮХ 285
ТУк Хв яхповго Турк деп Азрошіу же вує Туг о Твг о стм БУ вл о пія і 5 Я 15
Зіу ха Мін 236 хаіМ 3 «Ада ВЕК «еі3» штучна поспідовність «Ех «Ех АМТи-КОВСВАВ-55083, сові «НюЮз е3В
Фу ТНготує тує туго біу зак дід Кв о РНе Аа тТуг х с ри
А о ї12 «ЛО й3У «ка: 18
Хей» ВВЕ «І шречна послідовність «ТЙйх ск» «бЕЗ» АнтвУСВуНЯВВ-тНаХІ, сові «Ж» 83;
Туз Щек бег вій зекогви бів ТВгохекотве віх яза тВе Тут їв Аза странина ІЛ
ВАТУ КО
1 5 ії 15 «ах ТІВ «Й «Ем ВАТ «кій» Ву чЧВАЯА послідовність «Й» «йаХУ вити сві свв, ср «Ж 218 ка Уді Зак оіуб дки Вба кат
Аго Ущі его обу Ап о БНя УЖ ї 5 «Оз 233 «Ії З «аййт БЕ «А1йе: штучна пМлЛІДОВНІЄТЬ хаедкх «к3х авта сВВА-ТНОУХ, Сранії «ВК 239
Кгц Фіз АТа твВг нія іє га оТук ТВ
ВІ й «ВВ «ків 5 «ЯРль БКТ «Ві» штучна послідовність «ФА хай» АТМ СЮ гЕВК-УНОУ, СЖ-НІ «ЯКІ ОО др отук Хів мех нів 1 5 «103 21 «ії» 17 «кій» ЕТ «2132 штучна послідовність «Аме «В23м вити сві гаав-тнНОй;У, соА-НЕ «НЕ ОЇ
Тут ЇТ2 Ахпй БКо тТуК Ах АЗВ ОбіУ бегоБуз Тук ТНК БТ) руб ВВЕ ОСИ страмаца 371
РАТ-ЗКИЗКО 3 5 16 15 у «Ме ЖАХ «арх 3 «ад вт «213з штучна васлідовність «кгц ха» днти са явно ХУ, СЕВ-На «ЯК» 247 піу Твкотжу Тут Тут Ру бак обі рен) вве Ахротує і: 5 30 «10» ла3 «аКЕх І ха» РК «ФАХ» щтучна песлідовність «ей днти рі іБвЖ-аВОЗх, СОВА «НІ су їуз щвг о Зваго бів баб їжи Фіз тТвб де ТВ обіу Аза о тТвК оТук рем о дяп ке 244 «ВЕ 7 есеїв РЕТ «21їз штучна рслідожнН ст»
КИ
«АйУх вмти СВІЗ гшВва-оВИаЗ, сОойЗ «Чл Яй ака ма! Хег ОБУ АК Ба о жУє і х «ЕМ 245 «гії В -ВЩ1їз РЕТ «13: премчмл о пики пізні гу «ау» щтУчнНеЕ поежліІДОВНІСТЬ «КЕН шо «Вй3» йанти КОМ Сава еВОоУю, «ОА
Страмнца 37
РАТ-ЯБРО-5КО ем ОБія фер отвре віх МЕР вк терте «еі0» сб «Аж 8 паз ур хЕмеМ ВВ «2ІЇЗх ітд ГТ езууиї я хе их втучн послідовність «и хай» Аитиесвій СВВя-сВО, соні
ННІ гав
АЖВОтК їв твк нів 1 х «Я 247 «3» 17 «21 РТ ««АїїМ втузнВ жлідовність «ар» «аЙХ» детиесоІВ «ВВВ-гвОЗ3, св-нНо «ННІ сах
ТУК ХІТ Ах вро ГУК АБ Ав Ві У ЖЕ Му Тукє Тк діц Су вве сої»
Її 5 о 15 сту «еАйь зав «иЯ3» 12 «вай РАХ
Мк дея СІК Ге ся 5 і з хАУх ВШтечна поспідонність «хке3» Амти-свіЗ СдВЕ-свО3, соні
ХМ» ряд
ОТУ Твр Ту отук тур сі У го ар рек АБВОжутє «10 ав «кім 35 хи» вет страница ЗиЗ ват Яулька хе) щтуУчна песлідовнсть «аа чл: вчу о піч шиї «83» дити са сБВБ-лВІх, СОВА «НН 245 їуз 5еаг Заг оБіп Зе о бен січ тТБс ес ТВ Обіу тВгоТВе тТуг фер дУп їх 5 ха т5
А. а - Й как 8 хЕіїїв 7 «лах ВАТ «13» щтУчна посвідевНі сть «виб І «ЯЗ» днти- сВіЗ САВА -аВІДУ, СБВ-Я «а ЯЗ
Ага мві хаб вуз Аго вва чек 7 7 шо
ХМ й «Ме Я5У хеїже З хеїхм ВАТ І «8Щ13з йтучна пожлідоВвність «ЕЕ «ВХ» дмти-срвівБ савані, СорА-і менобівй бен бе: бів ВЗ овео тТук тТвг «2105 ЖАХ «11 5 хЕзек БЕК й , «ЕКАх о Штузнв піз довняств дО й «ЖІ Анти-соіО СВБ, среені аза тут Ті Ммеконія «а 53 «і» 17 ках РТ ставниця 375 вАТАЧІ ЙО «йіі» штучна послідовність
З гух какМмх Й Й «ай Хх вити саВва-е31, сОКена «нюх и
ТУг Хі Аза Бгто туго джв дярощіу беборух Ту ТВК Осі Бу рев обіє 3 5 їз 15 іх «810: 254 у ННА «їж ЕТ «йфа» щегучнЯ послідсавністе «ВЕОм «ги» днтвУсвІіЗ гВВяоаВа1, пОВУНЗ «ян ЯМ бі ТВ тує тТук Тук ФТу вга бів рев вве аз ТУг 1 5 їв «ат Ех хліїіх ІВ «812 РЕ «Ра» штучна посязДдоевНнієстТЬ «А «аа3» дети сві са ЗАС, «СОКЛ «НІХ 255
Бу авг ожог Фі Баг офен бів тео обек о Тве обі два тТНг Ту ви дя
В 5 ЕЕ ке «з БУВ «ар «йо» вАЛ ож пі ІН З Іуди «ЕМ штучна посадку м
Мате
А ЛИМ хай» автисрвіЗ СВВЕ-ЗАОУУ СА «НК був вагоні баг огУх Ага вве пет
У 7 ОТ хх У сСумвица 375
ВАТА ОКО сек ВВ
Мк -- г - ужиті ги ух «ЗІ» штучна послідовність «Ще «й» дмта- сві СБЖ5-5АБУЗ, СОВ-13 «НМ 257 іввобів вго Біу Мі5 Тук Рез шіу ТР 3 5 «іх 5 «іх БЕ І ще Щтучма послідовність «КД «Я» дити свіЗ сББК-5мІ3, СКАН «НКУ КБ
АкротУкК Жів Мей Мі и т -
Х У
«М» 233 «Мі її «210» ВВ «Кіз Штучна ПОСЛІДОВНІСТЬ
КН
Тк «ВАУх Анти сіЯ Тв е ОА, «ке нІ ен 5 ттг Хі дав го Ту ахп аз біу Заг фу Туг ТБгофін рух ББЕ бів
Бі «МН «12» ват «133 щтучна побгліданнієть
СЕ
«хіх Й «223» дити СІЗО ТиВЯ-ЗАСРУ, КОВАНІ сени ВИ тек т х ше ствавина 356
ВАТ-Я1У0- ЕЙ шЖіж тВеотує Тук Тег обіу жегоАід ей Ве АБротук ї 5 10 «А» 23 «ії 15 хай» БКЕ туту. У вт зач и що Фовжє, «Але ШтЖчна плід ЕВНІСТЬ «а» «АЙ» дити со (АБ ЗОВ), СО «нм 251 вуз ХвгобагБовій бек орец сім тТБе чає ТВгоОіу Аза ТВгроОтук ви дев і 5 їх А «ЦЕ 255 «Фіг» РА «ЗІ» штжчМА посадок» «саке «йеЯЇхУ Анти срів св ЗО), срЕ- «Ми ЗБЕ
Ага оУді пет бук вка Бе Зак 1 й «11 В «АК РТ «3» щЩтучна послідовні ста
ТЕХ
Я КеКИ залу ху вч о нн чук «ЯЗ» Анти сів СБК -5ВОВ, со ін сій бощ Ай йегб тТук о вгОа АВТ пе за «аз ва ке 5 «12з вв хиії» штучна чослідосвність «Ох тут уче ет его гімух штуках я «Ей АНТИ С СЕБЕ 5ВОВІ, САН «й» ВА сСтианицв 377 вдАІ-ЯЛІ-яЕО хо» оТУук Хів меж Мі5 ї 5 «ох 255 «ех 19 хеаз ВКЕТ й й «2І1їМ ШчуУзна пені довМмісте «во «ий» дити КиІ1й СЕБЕ, СЕВ-Не «ЮК туг хів Авип о вгО Туг Аа Ар ОБіУ ввговбув Тук Тео шія ух РАБ ОСІ я
Зі «а 65 «Ім їй «30» ВЕУ й Й «ії» штучна послідожвість хе» шк щ о «Їх Анти-сОіЗ га2в58-ЗВО8), К-нІі «НЮз сБ6 ціу ТВг тує туго туг Бі вгоО БІВ рев ве Ахд оту
З п та
Я Ж ж «2М: 867 «23ї» 16 ек. ї 12 м Кт , «К33М о штучнв паспідавність «ак «8У» Анти СВІ СБКБА5ЮОВУ, ср «вх 207
Муз бегобЗег бій бекоцев бі) Те бек ТНК охіу АБ ОТВК Ту грец Авт «гм ТЕ саій ВЕЖ «ії» штучна послідавність страница ХК вАТ-Я1У0е КО кр «2АЯУ АНТи-СОМО С8В5-АМЮЬ, СВК я «НН ОБ зга УВІ ет рук АР; Бе Заг я як «211ї1х 8 «й ВАТ єйАз штучна послідовні ств «ВО «й» дети са СЕБЕ, СОЇ «МН 258 шви дів ев тк Мі сім рко тус ТВг 1 5 «ах ст «еїх 5 «гл РА «213» штучна поплідонність хе» й хЕаЕе Анти ср сЕвВВУбвой, СОКоНІ «АЮ» суУ0
Аз ТУР Хі мех ніх 3 п «ВА 21 «з ї7 «Еїде ВКТ І хкі3» Штечва песпідсвність «20» | І «ейЛе дети спі С5ВВ-УОД, сов «ах от тук їіє аха Рг тТук ахп Ар Бім его ої Тут ТВк оФіш Був вав бів 3 5 19 35 1у «ВОМ 372 сСлрамаца 375 вдт-аО5ЕО «їз 12 сей РЕТ й «вії штучна пазсліданість «ех й й «ЙйЯ» о днти- КцВЕР СЕВЕ-ООБУ, СовеНа «ще и; піж ТБе тує тує тк бі баг бів зец бів: до тут ел. алка
ККОАМИХ кі «Рі» Ву «Віл» ДНК й «Ей» щтучнй послідовність «ВК «23» ДНК. пегний занцює бжтьківсвиого антитіла де СОЖО СБ «НЮз 293 закчсмиза цімссгаває хссастевє смкетарса зсісорваа козак сЕсх акхсЕсЕваса Зижксказкиа смт юма весну аата завнасків кова тапстссаза вессврюссв Язкстссаєав стос вада ес саавоваєке ка стос казасвочих са аАВх сраксвокв пазаїієває воскова зва ця воаистчааз сіпозазск кажткскаєс бавоваскеасє саке хю хвгвсоасксоЗ дадакніс свазсевна аказавср спо теє зспаксскоакс 50 хтпахтсккес свкгакхскоав присут зазістоЯза свое хата еко
БУ сЕзадІавстк котакссосву зазаЗссваа зкавсамчна ваорааказ сессстесва какввасе ссеозовова сУксвсвуву сводаєчасв вувасачєає скасвеКеко
За вшсзасвосс паасчекоеу свавоєацає сасоувовавс асавачста сво тосвив
ПОВ чисвовій звозосстава Єопсепекс асазвеенної ссвасазвоав зоВатох сСтоаница ЗО вати яКО «іх 3353 «лем ДНК саїїз йтуУЧМИ ПОСЛІДОВНІСТЬ «ак» , хІейі» днеЕ, важинй ланцюг батьківського знтитіна йо СВІіЗ 858 «АНЖЕ 274 жа ссаве касвоасаУєс смт соціа синє ваза зиск авов скістЗоааа сасаїткасю ставте жка БровотаЧчає умесвУваа 1533 заккоочаснн пссттовчтеа звкмннак аббазесске асавтоваецю кока кає ї5о астоазанук тсздсвваа Чпаслеаснекоя всекснно затстксжак птапазсекас
АЙ зеовжннса яЗсвасскаає стстеває ксопесоєх аствсвзниос авозУЗувся ще
МюВ твитахсмоз зізасочссск стптоастас оо сва ппвссовсКИих сао таке їв3зеа ссашенся веоЗекскЕс сосок Во шеюсстссва си асстсх яко
Чен асаа сазсссо сомсвоа вазаастаскх фшоссоаасс пово я чив асі са ссосх зеасазсезс сус тесевечє спос 550 ссвраскек зопосекае садова соки сера Фокса
Б ассовся евакоїсва ксвсвавскс вовасассв возспюасав замети
БО
«касі чзсваває фсвсвсвечє севсптатетс своснеоєтоа Фр ао м шимехняав ЄсттесЕсІ сСессоснааа сссозаасв ссстозевах стсссчаАсє 75 кожним жха сере: по вчно зеассзсзан ассстоазчає са ксаас 5 садтасотов вла дами твакє пссоавуасва вассосвоУза са асвоках по І засвкасої зссочкчєси свосцієско абсо: восаораєта зоехоазаоЗс
БО стваница 481
ВАТА ЯКЕ задовтаса зотосаадеє стссавсвав пессісвасо єсосеаісва даквассвке 1Оло тссвадессв вадазсАЗеє сонна света таєв сбстесссмс актоссцах їоКхО заасєтовсся воамесвови свуссісвес фоссіцакса заоостІств копсовоєуєє 1 візцничумод воїоднме савхвоодсво ссомоваєв зсквсвацає сводсстесе ов чЕстозаст ссрамецасес сттсхісстс свовосамек Сас савовосвох
НО тадсаоскою почасокске стсзовісс отозссака зодссстоса саассвстає 1583 вспсвсваєв обежевсокої псом аа ї3УЗ «ЄЯОх др «1 ІЗ сезійх РЕТ «КЗ» штучна послідовність «вх «вйх песний ланцюг йатьетвсвчво антитіла до СБіЗ св) сг й? азв АТ жі Меї ТВгопій твкоБео фено его рен оБге чаї шаг оіви ЩІУ і г» НН тх Й - Б ро хи
Азвобіп діа пек жів баг обу АГ Заг Заг оБів Зегобва бів дев хе
Ка 25 о
Ап оБІіЖ ап ОТАвК Туг їні джи Тгротук Ем осіп Ух Вко о бфішж Фів дя 35 аа Не го бій зіва бе Щі туго аг жа 5агоіу5 аб РБе хогобіу Уві грец 5 ЕХ дкр Аг Бе Зег о біу баг ш1іуУ Зегосіу ТК АБО ВВЕ ТВР о ваи фув Зв
ЗІ ТО 75 80 звк Ага омаї зів Аів ім дво івм о Фіу Уві ТУ РВЕ Суб зівц бів ї8ц я ж ЗЕ
Стевниця 282 вдт-а ач твгоМіз маї вк Тут тТйк Бе бі бі б5іу ТВе фу рев бів 36 ву зп 105 ак;
Ага тВг ота)! АЇв АЇВ го Хегоузі КВе Хі ВНЕоБеЗ Бго вк Аяр осів 115 ї21 125 «іп орви уз хек сі ТВго8із баг омаї маї СУ ем оїеч Аза Ава ВВЕ 130 ї5 145 туго вто вга Бі А1В БУ ма) сій Ткрофух УВІ Аза аа дів їжв сій 185 У 155 150 аг біу да дак бі біб бек ома| ТК обів бій АБробег рух Би пек що 170 25
Тк оту вег обме; озего бак Твгоїец о твб іс бег рух АЇв одер Тук ТМ 182 185 що іу5 Мі руб ві Тут Аїн Сув сій Ууаі твгоніб 5ів Бім фец о бег бок ю 20 ох
БгзоМА! ТВгофбує« бак оБне джйп Ага о шіу ші Кух 713 ках !
КАХ «ОМ «102 575 «Дії Я хЕЗфЕх ВЕК «13» штучна песвпідавність «Ко йижкив оланакн батьківського аевтетіяв де СВІ СБ «НН яв «ін оУущі Бій бвь Ба сій Заг Оіу Рг бів фев УдДІ вуз го Щ1уУ Аїд 1 5 М їх дет уві іж5 Меж діа суч сук АВ баг обі туго тр овБа ТВг ОА Ту 28 5 ЗО
ІТе Меї мі5 тТгромві гук біб фу ТВг обі бів бі рем цім тгрош1Е 35 Я 4 піу тут їв деп вго туго Аха Ар обіу бек обу тТук тТВкЕ піц т вва 5 межу: М, сСтоизнНвцЗ УЖУ вАТ-ЯУ0-ЕВ
Аз піж БУ» АТШ ТВ орац ТВ ЗБК АБ Огух хаб бег хів твг о АЇВ тТуг 55 то 5 кО меї зів вкз баб хе ем тВтг о бБег Бі Ар заг Аза Ві тує тує Су5 дів Аге ту Таб туго Туг Туг Сію 5ар Аа вжи Ре ази туго Тквобіу
МЕ 125 ще сій ші ТвротякК фену ТВе жа) его овег АТВ паб ої фу» сбіу вро дек 135 їхО 125
Уді вве Бк іви дід Бгто Заг ар огух Зак ТНе Хвк Фі біх ТВг АВ 138 їіх5 і дів іжу бі бжз їіжм Маі ух АзротТує ВВа о вро бін Бто УР отТвг ма! 145 15 155 ї52 ет Те Аза деб біу Аза Бев твер обак обі маї нів ТВе вна вко Аа поч шт їх Ки щу пах су ну ще пд кажу му те жа
Уві Меч бі заг овеє оіу ев їугк фер ої ЖХет хаб ув) Уві жтвгоУді 152 185 їх
Бго Заг баг заг оман ові Так осів ТВе отує її Сух аз ма) дзвонів 135 ав як у вРа жк Ап ТНК фу» Ууді аАщ Ух і уві ЗР Бгто Ку 5аробув
Б тую й -Уучу 7
КА іх ЕВ дав огжа ТНК Ні ТВ о сСух БгбоБго СУЖ РКО Аа вко 5ів дів дів сіу в 3 Ух о
ФУ Вго хек оуві вва фс РВЕ Ру РКО оїу5 РРО зу Аа ОТВк ви Мах
Ха жЖег дк таговко Фіз Уві ТвВге бух Уді Ууаї Уді Ахромаі Якг НІЗ а 7 піс ар овко цім Уві фує вве Аз тТтрвоїжк ожаї ар оБіу узі біб ма їТх ЕКО вх страница ЗК
ВАТА нів вза вів Був тк о гуз вгО Аго бів бів бів Ту Акла яег ТВг туї 29 и Ба агФфоуві Уві) Зеб уві ред тк омаї без ні сів АзВ Отто веб Ахп у
Зк БЖ 15 За
Вуз Бін тТук оцув сух вуз маф шег дм руб АТ вен віх Аа Бро хів
Фів вух твг її Заг овуз АЇВ гу» б1іу сій КгОо аКЗ бів Рго зів уд! 348 зах Б
Туг Тег оїФу ко вго Хег АК АБИ обі беи Твг фу Аха бій УР Бак 335 Зо 385 рев ТВйг осСух бу уді дуб бі ВО Ту вгоОо Знб дор Хі АТ Уді бів 37 З7У ІБ тгрозір баг озхап міу Фіп вро січ АзЗп АЗИ Тут Був ТВгОТВг бго РгО 355 З жу щю
Уві ем одер Яеє АБЮ Опіу Баг ОРВе ВрЄ фе) отук Зег рух ба ТВгоуді ср УНН 15 ав 'іуУух бек о АгО ТгвВобіп бів Бі Ахи Маф вБе хет о сух сег оУДІ меж 328 425 430
Ні бів Аа бен Ні Аа МІ5 Туе ЇВБ осів бух шегб бец еф фев Зек а зах вга Бі фу а «Ві пл сй3із 557 «212» ДНК «813» штечна послідовність «аг «ИйЯ» ДНК, легкий лав ант сія СБЕБ-2ВЛІ каОйх 77 зеаїтоїка куастсоваєс кесвсїіаїеЄт статопдков сосок дспавсодає во сттозница 385
РАТ- ЯКО зіжстіоса автсесвоста асісіцдав восіссвссоЯ зсасовсока ссбавастоВ хатстесвия авспуЗуєсв зер соєма стос веск зссецНє баюкеєтеє їхо тес ек: сідраЕсвКІк свое чаакессма спасе тер
Меч места заасканаоа сок осаксо жавстактеки сосен озвався
М тасассттса зсзазсовас Фвазссвоаз зссавзста стаєте как з тЕсвкстис сессвжскає нив ко авасстрав стос ско ко я стзавтаваиих Кепссва Зевс свав сивсазіоав язакачатав спекстссва зо ксцеціасї сссауоараз фФісвсвово сауавсвуєа зеасацеве сувоВмаєктє за всем восс пачок сазасниас сасуавоанає всвавчеств сек гва
ЖК) чЕсвсссвхс ВоЗосствая сксосКкчіс якаавоавчкт тозасвоеФги: зожота
І? кам й «лій» ДЕК ке» штучна послідовні лть «ав Ох «ОЗ» ДНК. важкий ланцюг анти сі ВЕУ «АН ЛІВ суми ваї цвуктєватс че ціва Фсавазававе сор скан
ЕЕ зстасават свістаЗека сзксехсаск спастінжвтєв тасвомкни: сезксввсе
АЙ сжющессаво пісню Чавтесостас вхтїнАсссак вснцнизн крисваатН зсслецаває сн сассвсааа зссвоєцвса сЕствтскс спосо ЯхАє
БЕ зточавстаї стапастася встав уВс Веста зскастокає зоЗсоогасе
З шк тв«сжисіас чіссасо зі БтовКіас бозодесеав вевоссасаЯ застає страница 38 рате Я лька тятоєтазов соваеМвнож аспек сессокшесне КекосЕссаа нас схсх щшнмннсвова спос ос тов секс вазпвеНсх сопскоувасс сша чо сиооавсї снашенссоє зассвасє чіосасесек соссоаєт: сегасаксє 543 коевжастсї вссссстісао савсотоото асесакоєссю ссацсваккї пдосасесяд о вествивкек пеавсожеза пес є восжвовисй аУузізаВова фадваціекано песесасакскі вкаасвавіає ссвовсвВає сеесаЗнаєс своасасстх аск са 5 часів кссБосЕсУК сесессавав сссоазоцаса сек аїовЕ стос то сеецвсатка свтосЯкаЗУ оточасова вссвсваве екс хаВак сваукесва
В ковкаевцю змчниксвм аква зсвацеєсаа вед повчсанкас
Зо засиасаса всесоатЯцЕ сзоасвкссїє асо ас зосвозаску за киує
Зо жирна са вок к сіссавовав дсссїсесв ссоксеаіоце фааавосаєс ле ех
Мо їссаваосєв ваша сосзиавеса смаком спохкикиє вісосецоапах 1Оо80 ще аевссецЕ свопи свесовЕса зазЗстІста тес сое
Ав
КІ вісассосв взіпоазлоавоа сазтоозсва ссдововаса вссасавови пасок
ІМ ях засто сени Кс скісСесс хасцнкаває бета ов сващеасацо
ТЕ щН бо кеусвоскю чЧавасщксКК сесвинсх зкзацекаїв адосЕстоаса сс инх 1320 аВшиззавов зп тсосох ге КисвНни аа
ЯСНИХ 5 у КЕ ло «ках ВВ хаїїе 5 «азйз вит страница ЗК?
ват-а1 То 5ЕК «233 штучна поплідовність «о каб3» йогкни яавнмию: днгисоіЗ хви -2в13 «ах 278 хво їі ма меб тн осів ТВгб ово рец бЗег бан баг УР Тег Бго Ту 1 5 3 15 іп орто віз баг оїїя Заг осСух уз чає чає бій бек офаев пів Тебе га 25 за
УВгОоСТУ ТЕ так Тег ів Ах тро Тур осв бій бух вго сту бій дум ка 45 вго сій зи іен її туго Ага ав бек огуз де рвав Бек Бі ма! Рго
Кк 7 7 "ик 7
ЗУ 5 їх
Ачродго вне Заг ші шес Фіу Чет Сіу ТБгб АБО Бйе тнк сам обу ХЕ
Та ТЕ Ж
Зекоаго уві біб аіз бів ахр Уа Зіу Ууді Туг Тут Су« фев бів Бев 85 п 5 ів зів Ав овгОо тТук Тр вне щ1у шій шТу ТВР ож раб ів 116 Гу то 105 ма
Ага те ма АЇВ АД Вго деб уві РВЕ о у1В рбе Рг РКО Бек одеровій сій фівц іш Хвг іх їВг діа йог уві УВІ бує хв і) ач дач На чівповжи Ку ЗК жі 1Вб Олі лег УВІ УВІ: Сук МеВ окен дчИи деп т їв 155 150 туго РгО Агар січ Аіа ух чар бів тер овбує УБІ Ахр ОАЕ АТХ фе ій 145 зо 155 ї1БО ак обі авпочеє бів бів баг оУаї ТАК Обі Бій дв о Жеє фБух аз дат шк 17 І Й 5 дах ОО НО
Твг оту БОРГ фец бек бак отв вв о тТнроїку хг орух Аа Аза тук 5ів 152 135 рН: іж5 Ні губ жаї ТУг Аіа Се б3З3 мі твУу мі бів Біу веробег Зак ї35 ОВ 25 птраннца ЗХ
ВАТеЧ АНУ вро хі Тнгоіж» бег рВВоАБиИ Ага Бі Зв Куй зїа й БИ ло хо «аю ЯВО «і «ази» ВЕК «Ж3ї» штучна послідовність кібОх «де3М Бажкни ланцює вмти- сор (8 аКМУЮ «АЮ» КО бів маї біп ев Уді біп бжт щі дів шій Уві вух уч рег бі АЇВЗ їі х 1 їх
Хег о маі уз Уа! Жеб Сух рух А1а чек бі Туг ТВаг бно ТВг одер отже їі мек ніх тк Уа) ага Бій Ав вБге зіу зів Ту (ву ЗБ тк век чо 45
Зі тТук Яіє 35 о Бго Тег Ачва дер окіу Хегобух Ту ТвагоЗів був Блю
ЗО Ух ЩО зів чіу Ага ма! тТве мес ТБг обег аз їТвгобек їів баб отвг діа Тук то т хо
Же пім іжши бог одго вч Аги; бек Аза Аза їйг лів Уві ТУк Туг Сух
Кк З 35
Зіз ага бі ТВготУР тує Туг Бію вго зів цен ваз Ав тек їгВ Оу цю 30х ща бів бі тТВеотвКомді ТнРоУді Хвге обеагодія Жак ТЕ фу Ту РК Заг
К. чл5 за їз т 7 кА як ни
Мі БА Бо рев Аів обго 5акобвк о буз ж тТВг жає біу бі твгозЗід
Аіа обео бі Сує ев жа ж дер тує Ра рго бім Вго маї таб Ма 155 Я 155 і595
Зак отге ази заг обіу А1в о іец Те чего піу уз) нія увг о вре вгао дів
Страница 585
ВАТА КИ
165 ї7а 175
Уві фе ій Яре шег обі фев отук ваг оієцй дат щет Уді зд т ма ї15а 155 130 тт» Загобаг бак іно ШІіу ТВ опіа ТвготТуєк їі Су АДюВ УВІ АБИ нів 135 чкЕ ах
Ух Бго дек Ава ТВг ому УДі ар обуз Куб Ж? щім Кго був Бег оСує хо 815 го
Анробуз Те Мі ТВгоСух Вре вро Суб Бо АтТа вго бін АіВ АТЕ Ту 225 3 835 чо бЗіу рго бок оУуві вве вже Бне бо БО БЖ го бух АБ ОТВК о Бец мет їїв бек оаго Тнг оте сій уві ТпгосСук Уві Уві Уді дхроуді Жегоніз р. а г. зх Р мк ЕКО іх пім дер вго піц жа) бує БНж о азп тТеротуг маї Ак осі» ха! біз Уві нів азй Аа бух ТВгозцуб5 Бго Ага щіМ ій Фів тук Аз бек ТВРК ОтТук
РЕ 235 щю
Ага УА! Уві Бек Ужі ев ТнгоУні! демонів сій аве тр їж Аха сію 35 З 315 ХО уз Бін Туг гуз Сех рух хмві его Аза бує Аїд рев пі Аїд Кго ї18 шім фу ТБ ІТ четб фух« Аїд вже бі бів Бго Ав 51 бо сій уд! 40 35 ЗУ
Туг Тег оївь Рг Рго йегб аго ЯЗв обіц фено їйб був ахп дій Уві Же
З ї8х
Кеди отвг оСуз впли Уві рух бі вве отук вто Зак одер їі Аз мві пім
КИ Зх й КЕ
Киж ІЗ ЗО тк цім швед піу Біб ово Бін Аа Аа туго фу ТВГОТВг РКО РК страница
ВАТ ЯВИ
85 50 хх я
Уві ем Азр о дег йзв бін бЗвг Бе Бе фе Туг Хеє рук вед Те Ма
МТУ 1 щ1У дер о вжа Зегодгу Тгтвобіз Зі біу Аза о жаї Бе баг о Суз щегоуві мех
КУ 25 5 ніз біб ві ев нів Ази МІ5 Тут ТВкК Фів іух Чеб бо бак обев баг злу «А з45 вБко спі ких «50 хз» 51 «аїр: а «аа дНЕ Я й «2155 тучна послідовність «ек й «ай» ДНК. легкни язнцюг дит сі СБиБ-яНОг «Я» 5 ззлаксУєти козсесвнм кесвстнНаке скоса ков сома ов зона с зиттсттса дажссеєссв вкстскоудаа пс тисвокоа ссавосвеоака сствазотоу 150 ївтстссв засос са звасссосвоа стзстоакек волос кави ке ї150 пев стресі сасоеекек дазессоуса сооавстккас ставав о зоссаточ задстоваов саке авсКактїс сдсвецкавс сеатвессев
З0й квосвосстісв ЗбсаоеВо хазаствова ассвавсекв соатоевскУє випас: тжгахксквсс свсаксхоав миска зазтсевюаа стесстс татом пкааВвІваст тес мк сваа зезсвВацюва вагу вива спа
Зо ре тазск сссазчвчво сакозсвоЗоа сзоазасаев воззосає ствовоассте мі ладсвосаксс хзвсвсїсчво саааесововос пвозазЗаває воавати в сескіцсова
ОО сСтовнини 381.
вжт-я КО БЕай жевсссВжс вве свва смсесссоїс зовазавсасе ткзасан аа тох 557 «иа ЕВ «Ії 1353 «л1й ДНК «ВЕУ» гучна тлі дОовВЗ Км «хІйїх ДМЕ, зажкий взавцюг звнтиесоМ с88В5-УНОгО «ММ СЕЗ сиза їасеви топїксозаєс бТоціцпстоав шквавававс сенсі соках ща щі вава сеїитоачікв своя ксасе одетакаАКкса касета к кеша 125 сід саВо Віста овхдоЗстас згтвасссе асавсомю вксосанакак їо впкчвовавь фбссвекнсов спідаєсцака асо спексхаЕеес своє
БЕ зкрщазсічЕ сівуувовосо хістозвсчВс зосястаке асізсацк асесцеасє ню каско чествавсії зі гіає соуссвау загс засо сАВЄ
ЗМ
БеІтаставсв сени Фени Ес ссссіцуєи костссетспав ас ске ага щфивикасву «соусі сосок зав аєє сере ака
ЗКО тео оцавск саодесоссст осла сеВс зкопапасих хоссрсак сек асаки хсзвоазастсх ассссстсво салони зссекасссх совосВцске Фррассса щю всетасатст чехасасоаа їсвскекс вчесассє шлдасах зазваєкеві щі сисвавієїЕ зпібасвазаве тоасасамє спасе сапсвосіова воскову
ХВ чаассатева ксттссссЕк сесессваах сесазвувсв сссховіа іс
ТБ ксЕодкнИижа сабоасуаНх ожини осв всесжленоце свапессвАє що пррасокох зсдчасасаЗа дотосаівас зсовазасая зассосауаа зазасаове
Стрзнича 33 вАТ-ЯВ КЕКВ
Ва. засаасвсякх сатана слесаілекс апсаистаєЄ манеж еще пиво КК КЗ Е: З чо МО БЕЗ шк ваоовзатаєа аптсвадейї сіставовав осот сопе соав дааавссєВЕе сере ко я і Е жикиМ їссвевксв везраєаоєк ссоререаскса свефкакаєв ссстуссксс зесосодовх
НА Її ям завасісвсса ззавссаоув сарссіопвсс іссіосзіов ведвсктста ссссвосове
Т15а ; : :
ЗО аксчксготой ззтзвоаозо сзасевса) сосзозоваси всеасавове єм косе чзий
А тасенвї ссвасреєте сттсікестє квсвосами тодесакоця сезавосвча че щас фоама Іо Ччадсеча
ВИ Ж зосвосаоц боавсаксЕт сксовтстсс зкаааокато вестстасв савосмтає іо везрчнинмра Зссжсоксох зксмсязмеук аа 1353 «ФМ 253 «211 518 «ій» ВТ «3» штучна паслідовність «ех «Я лЛегнив лавцюг знтиЗсовіЯ 858-705 сн» ОК
Авр ої Уві меж тВг обі увеовБео рев бек рев як Уві ТВ овко У ї х 10 45
Оів Бгто Аїа бек їів Заг о Сув вуз бек обек бій ет оіец 10 ТВг бек й вх За
Твкобіу дп отит тТук заз дахи ТКгр оТук ім ощівз іх вро 51у бів баг 25 35 вгообій бен вен жів Тук Ар оУні Хегозбуз аку вве Яо»г бі Уді вго дер оАко ва бБегобіу бек осіу баг ші ТВ ОА РВа тТвгогБез вуз тів
Б І | Її Що
Стримицв 593 вАТ-Я170- КО й й
Кк не - тих Чак -к ЕЕ пи не с и ЧА ож тр-х его агц УВІ сій іа 5ів Аврочаф сію Уа отже ТуУК Суб ве овзів діва щ 5 тег ов їі бго Туг ответ вве сіж сій Ту Ве ОБУ Мав 51» Хі Кув
М щх МО дка тБт оса Аа Ав ко его мВі вве жія вва кго кго Заг дев 1 115 180 125 вів бен іт Вегобі тег о АЇв вк он Уві Су ем оц Ап АЗИ Вл
Кен 135 140
ТУР РО Аг сім АТ вух УВІ Бій тТгробуб УВІ Ар АБИ АТ ем сти
М 150 155 150 век обіу яз пеє вів 5ів або жа те оів сій Ав оБег вух аа ек 155 170 175
ТВЕ Тег Хвроівми его щеє ТВКБ Бен тТвг озер Зегоїуз АВ АБротуЄ ШІ 150 ек: 4
Бу НІЖ фу ув! Туг віз Суб Бі Уа! тТвгоніз зів біуУу зіву бег о Зег
Й т Й й тугу, чиї
АЛЕ ЗНУ ит лкя вгооУді ВР обу Зак оВве Аа дру -іу 1: сСух
БАН Т15 318 21 «Ом ва «і» 5 «й1й вит «ліЗ» штучна йослідовність «Ай» «кий» ВИЖКниИй овамцеб внти СВІ ЗВАНИХ «НЕ: Ка стій ха бів цен Уа мів хек бі Аа сій Узі ж фу бро Біу АЇВ 1 5 їв 15
Зак уві був Уа ЗвгосСуз бу5 дій чеє Шіу тує ТВК о рве так АхротТук 28 5 30 тів меж оміз тер оУа) Ага бів АТ ккб біу біб біх без обів тгр мех
Ії За 45 странице За
ВАТ ЯКО бЗіу тук ї)і6 Аха вВго ТуУук дяй дав Оіу баг овБув Тук ТВКОсіч фу вна ца щ сів Ф1у Ага Уві ТНг мет ТВКобЗег о Ахр отв баг гі ек Тв АТО ТКЕ
То їх що мех пін іец бег Ага мвВи Ага обег Ар аб ТВЕ Аа Ма Тук Тук о сСуз
КБ Зо ЗУ
Аіа ага с1у ТВготТує ТуготТук б3іу бек бів ре) вБе АБротує ТкроФіу їй 345 цо іп оєЇу тТвгоївг Уа! тТве ові кв о Хет АТ дев ТВ обу Бі вто баг 115 а 125
УВІ ве вго фер Аа Рг бегобаг рук его тТвг о Баг о Фі Фіу ТБ АТа 158 15 130
Аіа їви бік суб ін Уді гу дя тує вне еко піц о вБко Уві тТвк Уд! 145 150 ї55 1650
Заг тер оаза Баг обБіх Аїда фаз ТвВк ау сіу уві нія тТве вне Бгто АВ 155 і ї7х чаї івз сів бер бек піу гео Тугб Бог офбец бог о Зег хар ві тк ма 150 ЗВ; 135 ко о бет щет дет фен обі ТвРобБійп Твротуг ЗР» Суз дп ві Аза оНіх
Кк Зо ах
Му5 ВКо бог Аз ЗВГ бує Маї Ар обу ву Ді пів Кг фу бер сук гів 215 2230 вору тВвгОНія тТагоСує ВБео вго бу» вгз А) Бго пін аАїв він бі ху 230 235 ве зіу Рг бек ді вне ржи Бе го Кго фу вгО ух а5р та мен Меї 245 У 255
Тіз хек ага тнговго 1) мВ! ТБгоСе» уві ві Уві Ахромаї бер Вів за 55 270 страница 45 вАтеЯя Уа
Фіз АБО го сіб Ууді уз ВНе Аха тРа о тук Ві яр опію Уві Біб уд! вх зай БВ нів аза вів рух їй буз йгто Аг бій біз бій тТук аз баг ївВРОтуе
КЕ й зах й ЗНУ «ІА ану МОЄ
Ага жві мві хаб уві фев отТвк чаї зво нів ій дер отгв бац деп о1у 325 310 ЗУ 320 зуз Бін Туг цуз Суз из мі Хег Аза бух АТа іс бі АЇВ Кго ів 325 30 335 ін бух тнг їі ясег обу Аів рух пі Бій БгоО Ага бів вго сій мні 340 345 350
Тег о тТвгобац Вго ро БЕК АгЯ АВ біз сей ТНе без дп дій Уві ще 355 за За ів Те Суб іш ма фу піж РВЕ тує Кг Щек АВ тів АзЗв оз пів зла їх зи
ЗУ РЕ і
Те сій Жетг да сту бія Бга біб Аза Аза Турко руб ТВКОТНК Его ВРа зях З 355 м
Уві цем дБр о шек АЗОВ СТУ Заг оБрНе рве рев отук Заг оБуз вед тк уд чВ кв 415
Акпобух бек ага тгробБів бів озіу Ахп Уві вне ЗвкосСуз его жа) Ме я 5 30
Мі5 бів Мій ев Ні Ап Мі ТуЄ ТВг офі ех Хек фею баг осец бер
ФІ З4ї вге З1у фув
С
«а КВ саліз БУ; ке КМ х ДдНЕ . й «1.» Штучна послідовні ить «АВ киЖІ» ДН, явгкий лазвюг анти-срів гс8аа-2в03 стеавница Ж
ВАТА Я1УЗ-КЕВ «ЩО «аг вщР5Е. ТТГ е «аа ГЗМУЮ.. 81 о «й2ї» попззнамає з, с, пово їх «Ну» ей зататкакта Кеавсжсвавио вот цієт сіусосакоав сс єсВ попадає
БО виіжтсткзка заїссвчтсв втсжстоваа ассзксассо садка ка секс ї20 какслсосвоя авссоратов оаасссосвоа сезслезсВ ассутакаїє аа ї5о
Тесс кжис страксЗеКк спсесцикІЄєт саке сс кАЄ КоКоЗАНаАКе «А заскщіціна зазссзавчв сої дкаїє саствтакс паоваєкавс спа Кесо
Мо ївсовссвксоВ зтсваоцениР пнннМмобвніа астааасаба соупв'зисєкає восакскае
ЗО кжиаксксс сресактств їоваослоактоа паз стоЗай стежок аа ко скозакааск хскаєсссова адазассваа Якасазкоов зоаптоапатаз сассстссва 0 какиавсе сесооачав спЧісвсвоааа садазсома веізсваєзк сивсацисс о васнусвсс тадпсеЗзсюнер свавосаомо Євасдацчаавс зоВваннска сасстасоаа
Ж
Зссасссвиє вик ссЧчаз сс жако вбвааначосє сова век 552 «10: ЗВ кВ» 1353 «10» ДМЕ й «Фі13» штучна послідовність «ІП» кхІйї» ДММ, важкий зазвцюг анти-свіЗ кв «А» я спвоайтпсоваї сювїсваєс сзотоссова ціазвайаає сЗодсвкїтс суставаца
ЩО вита сс та смисеконк Чавес своЗосКц фс не пихи ацУ чесно застає зіїхвасссак зозасонсзу тессвавів птуваница 357 ват яд БЕо зсспазават кссжнниа соссвовако апсвеався стеки спор і зтозазаєїат старвзаєтно бессвнихмн все каКіх асЕаєтекии пецеФукам
З цийасквсо) зкопаоакс зи кВо Чикнмевао засос ас Оує їсіасівкя сени Вес сосна ксЕсоєва пасе го прннсасва сопкссввщма скоса с запасах кессосаааеє загамо жа ксатозавеї саден зассвоєс зісасасєт фессонтце ссіасаасє кю їсвщчшастек астесстсву своє ворс соусах одеса псбіасаїпіІ повасцієаа Есвовннияхс розвага аЗохозасаз пава
БО
«саван пІх Зісвивасє Бо а ксВви ак баровоптва зи цо ак : Е: де го пасок СКК ТЕ соксесвава сесвеивесв сссксвлоах сторо сни ка свісспкоЗе забаозсна зесозспава асо т сват сває
БЕ мзсагао зсрмреесни пвкосаказе зссваовесва зессасвоца засво
КН І вас апсовскаЕ саесакссес вка мци восвоузаєк ит хни: паорудея закнамнк стсозасвав зсспісн сопскатова паваВвасевк це тесвавцуссв ванровосс ссравазвска сзоавтаквсов ссскоєсссо вісссоіВх 1080 паростка аЗзазссаочї смикає ксссюіса задасевитв ссср цво 110 авпкеоцоу ен сСедкоОєаЗ совфнеаса чпІжасааВК сВЖОКИТиКСИ 12 і
Сен сеЧчасаасхс КЕ сао певспецве сварнров
Не страница ЗОВ пат кв тацсзоєвоз завасексве стсаїосєвос піпатоваєу ззасістоєвй сзассвоває ізо звсЧемьмнша зссжЄВесс ЗІсТес НН дев «10» ВУ . х 1 Їх тії «ій» ВЕК й «Вії» шШтузна поспідавніте «ВХОх «дй3» дегкиб вавмює анти-свВіЯ гава-28О3 ха «аеМ» тіЗс тТевічКе кадах СМ 3.. 007 Й «Ва» Хвоа може позначати Будь-яку амінокиєсліту, яма зустрічається в 'широднях умовах «А ЖК азп оХів Узі Мекх твгРобБій ТК оРжОо вен о5ек оби Хак уві ТВ овго щіу сів вВго Аїв заго оїів хаб Сех фе его жвг шій Зег без бів тр оЗек 20 5 за
ТВгошіу дчи тег отут фам дз Тго отут рлю бів був о вго Бі дій хек
Я Зо 45 вко пів ве вжи Її тує ако УВІ Зекофу« Аг Бає Зегобіу чаї бо
Б 35 БО
АЗВ Аг вве Бек обі бек обБіу бегозік тТВгодхр о ВНе тТпрогви фу Ї1е т 75 Б его Ага УР бів дів бів джооУа сфуУу Уа Тук Туг Сух рен бів фев тТвгонів Уа го Туг тТваговНе бі бів бі Хай бу їеу сіб хів фук ню 105 о дго тако оуУаї АЇв Аїа вго бек омаії вно ї18 ре рго бро щоб АЗВ ОЇ 1260 ЩІ бБіпоіео ух бег о біу ТЬРОАЇВ бек уві УЗ Суб речо гец Ахл о АБа ВВЕ їо 15 їдо стваннца Я ват-АЩ170-щЕО туУук Б) Ага із дів іУу5 Уві бів їго Бук Маї Ач дахи діа ем дів 155 150 355 іх
Чек РУ АБ Ме бій бін Зет маф тт зіМм бів азЗр о Бег Ку АБО Зак іп І 175 тТВе о ТуУуг Заг о їво Зб ожвт ТВгб фо Тиг о беу Зег обу АВ Аяротжв Ту 180 її їз0
Кук ніх фт Уві тТУкК АЇд був біз жо тнрРоМмі5 сій піу вве заг озер 335 ой 20 йко ма тТнНрову» его вва дай ага ОБУ Січ Сук що м: Си «НВК хивіх 53 кедах РТ «ВЛІх шщтузнв посліДОаВнИте ут кож «каеЯ3» йажкий ядер антвесиіЗ сВВЕ-УВІ «й» 285 віп ма! бій ев ма! іп аб сі Аїа сім Уві ух руб го Бі АВ 1 х КИ 15 хв оУВі ув Уа ЖХвг Сух ух АТд зо пфу тує ТК Бе ТНК АЯротує че 7 ЗЕ й ле 7
Ра 75 І їіж твкКоніх тТкрожві аАго бів вія рго Бі Біп о Б5іу без с; ТгвоМеї ї5 30 35 біЖ тує Ті АБ Бк тТук аха Ажо бі 5агофуз ТуУуК ТВк осі ух ВВЕ
З 5 ЩО віп обіу вго уві ТВгомеє б о 5ег о АкВ Те о 5ве її ет ТАК ав тує а 78 Ге меї Бім бец его Або без алго Зак АБ оАвротТВе АТ оУВІ Буг тТук сСух дай ; Б У О 55 що 55 ів Ага бі ТВРОотує Тук отук СТУ вро апробев о кВж аз отТук тер обу сСтраннцва ЗО вит а170-5кО мюх 125 мо зіпо5фіУ тТнготнг мці Те Уді бек обег віз Бак тар фу ші вго бак : М 158 15 уаі! Ре Рг іви Аїд ро зве озеко ру Вакотвк Бак о діу оіу їВг Аїд їх 135 140 ліз іа щіу Суз зви ма! рух ав туго ра ро Бі вто маі ТНК охВі 145 їі50 155 15 заг о їтв аза бек обі аРвовевотвг бек фі жві НІХ ТВг орав Рг діВ і55 КР 175
Зі зев бій ек бак Фіу ем тує бег о рец его зав о маї маі те м 180 ІК: 190
Рго бек щег бек зи Оіу Те обів твготук Хе су Аєп уві да Ні ще вЕКДИ Я
Мув Вго ЗегоаАза Тег обу Уві Ахробух рух ві піч Бго Бух Заг обу зо 215 Ки дви ку тт Ні тне сСух го БКго бух ко ді вує Біб дів дів бі
ЗЕ ззаа зх зай ше хо жу чо)
Піу вго же уні ВВе бом ВКЕ Бра Бго фу Вго був Ахо ТВ бец ме їх жа рак їіє бегоага ТВгорго бів уві їВгосСує УЩі Узі Ма дер уві шпег Ні
ВО Раз Е: то
Біб азр ого ЗіБ о бді цуУ5 ве Аха Тер отук Ущі АБ Сім Ууді піч уд шКВ зно я
Мій ап вій Бут ТВгогбуб Бо Аг зів Зі Зіп о Туг дзй бог ТВКотує ща 235 ХО
Ага ат уаї Баг омаї фе) отне Узі ви мі сів аа Ткрорев дзв обіу
ЗУ ЕК Зї5 Ки їж» зів тТук куб Суз бух маф Жак о АБа Гу АТ ев бі дід вгОа зів
Страница 401
ВАТ-Я320-5БО
ЗБ оїуз твг о ї1е Жоб фу вів буз біт бів вгО ага пів Рго віп У!
КЕ 345 З туго тТВвгР ов РгО БгОо Щек Аг АБроФіч іву тТвг обу Ах бій ар хв
ЗБ 365 ім о твк о сСух ієц Уві Бу біу че о тТук го хиб дв тів дів уді бів
ККУ ЗУ Зо ттроБів зегоаха віх вів вгРО січ Аза Ава Ту бує ТК ТНК РКО Ко 38х Б Ух ОО чаї фреш аз баг дар о піу заго вне вве фаи туго ЗЩакогуз рен ТВг оУді ще ЗІ БУ
Азровжя Жеб аг Тер обів сій с1у дяй УВІ ве баг Суб век Уа мет що 425 30
Мміз і» дів се) Мі девпоНія тує ТвВг обі Бу бак орву Бек оіем хв 35 За 4435 те діу вух ка века «3 ЗВО кві Б І «83ахМ ДИК І «Вії ощтТуУчЧнНВ пОпЛІДОВНІ СТЕ «20» «Ве ДНЕ, явгина лаваюгє зитиЗсріО є8В8-5А0У «Кн» й раї) ета тоасжлавеас зссвстер т стіссотва соссоцвтсв сссадковоє
КЕ : ї
ОО іт МКаз застосаосся зссістодав вскпссвссо вовасасова сескоааєто ек Е У з це 1255 таїстссвуВ внз св зара свзсви смпиллавеє: абссутакако звасовскє іо
Тесснмвитс СТВ спосо сї оопвтієсвцєа сспасжітве топоназакс
БЕ ми сота застоавва сокира ізсхвЕтоїс зосзассВцЧа СВК Едосиа
Страница 02
ВАТУ ою здетассіжксоа Зксащвюваас тазом асжазасеЗ сероуртУє вскаєсєає. 3
Кесатскісс срвсакскоав їЗваснукт зазеєува стека таку
Б сттопзатавсє сстакспова абфникжсаза засо зазховасав песо ова ча тка твастх спововадаа таїєасенав садовсвоса зас авово ств ке
УА т Й 7 Й й зшсвцевесс увсесіоща савазвсвовос ворення довааавнкотв стокове ще зи всссНс заозсссава сесеасссако всанаранох совасазооч вазакак 55У «й 353 «йійе ДНЕ «МУ цтчтузна поклідОвнНість «ВАХ «МІЯ» ДНК. чважкий панцюг анти СКК -5АСИЗ кА АУй «дО 90 стапотоовах састтсваїс кобтосхаза Фтазааавас Єв есттє сахтвана щі вис заза сазЕссив саксЕксонсК ас ЕсВ зпКасеЗК пре 120 сне Зсстзанака засовозскає акозвежсве жов засво сессава ах 16 | | шк І аксон ввас секс сзковсвагу асовасевев Єктставитс сабо «І вувати: стадаєскоса фЗекузсас зопесжоткх вастатеізкос вс асх мю ївстастізсоЗ збтекассст секевакеяє бе сЗВо сівссх двссотавоє
Зк петастацев сових с іс спосо ас сстспкесаВ пав
Б І й
Кмсакко ссср стосу єс задаєте зссссовааси пчукувсвУєе
АК ке нВМК секс песо зеосасаси косе собаоЗекс 540 тА странина 403 вАт-ЯТИ- КО садовсїст астссстево своасецюк) вссцівсссю ссвосацєтЕ сфровсссва
Іа жескасасї освасчзаз хсвсовиазосє ссаасвста зач асва звавуєтоав сесаваїсїх оідаєсанавєс подсововіше сопаєсвісс сезпвесков вестасвоЗа
Ей коса ССТЕССТИКХ сбосскаеаа ссравоаєа сесісєвеуае сесосдовоє
КО сспвавауюсв качки озимини ззссасов вссстоазеє саазіконас
КЕ їзакаси зсозасакава Зотасвтавї зссзазасаз зассосороа зас що І засгацсзсаї ассиобоазаї сазеойссєс зсевсстоас ассзвозаста зседавтацє
Зо жвинчнокоеа затосавовт сіссзаєава Зсссмнклр пссссаїсов дазавскате ас кхссазавсса дари авсс сізраєса сазукУуєаєа сспщвиосис аксесвюаак що зве їзассв зазаєсвою смт меха звежетіствВ соссвосоВе
ТБ зиск сзмкю азеофовово саанвказ сесквезвеа встасанає «воски ісКе і знов ссоЗастсто сежеКЕшеке Сова ковссоаи сема свуа сказав яЗаасатсех ства тєс із свВие вощетотосв савоканикае і13со згдсвчами зстскссї дескосувою вав їу53 «Ох 2951 «е1із 518 «Йо» ВТ хеіЗ» штжмна послідовність «КО» кг» лЛЮЕгкиЙй панк анти СБЕБ-ХАЦТІ «НН З
Ахв їів уд! мех так б» Те окго ем бат фей дек Уві ївВК орто бі і і: 10 15 стравива М
ВАТА КО
-х і: ме я м Ко 5. : сх с " їй 7 я Го сх; я ї-
Біпо вто Аїв 5аг жів хес Сух фу щег Зег о біп Берг жи січ ТВг бе за 25 зо тв шіу деп отнк о тТУуг ву аа Тко Тук о венозів бух Вго біу біб Заг рга обі фец ізо Хі тТук Ага Уа нг ву ага вве багошіу маї го
М ЗУ 5
Ах ака ва чего ціх заг ові бак ойіу ТВг одер КВа тТвйгобев вух ТЕ вії т 78 50 даємо джу ци кг: аа с; васм мі мли дві ти тер оту кі щі че
Загодего Уві Бі А1В біб Ар оУВі 0іу Уді Туг о їУук Суб бен) Бій йга
Ка ву в «Ту Ні тує рго Піфу ТВК вве БІіУ Бів бі тНе БУ Квиа бів їтє рух 1 1х МО
Яга тт оуді із віз овго Зве уві Ре тів Ра вро Бго зер дв зів піп бе) буз век озіу ТВг діа бек о уУуді Маї Суб бер Без дев АспоКНе
КМ М 140
Тує го Ага іч Аіа зу УІ біп о їтв уз Уді Ар одн діа геи цій ії 159 ї5 150
Зако біу ази бег бій Біб бек оУЗі Твк обі бів АБЗ осег рух аЗо бег
І зах Не; І Зх
ТвВготТук бек огрев бак о бве ТВБг они ТвВгоіву Ше бух ів Ар отТук о бів 15о 185 іч зу нів кує маї тТуг аїх Суз піц уві Вб віх біб біу хево5ег Заг 335 ІВ ОХ кга ма! тс вує 5агб вне дя Ага щіу пів сСух 810 21 «2103 Ж «вії» 45) «Ел ВК І «гі3» щтТУЧчЧНА ПОСЛІДОВНІСТЬ
Страница 305 ват ато «Ох «2» Важкий ланцює айти-св сви ЗМУ «НЕ: РО сів жа бів Бей уві бій бек обіу Афв сів маї Муз вух Рго сіу Ат 1 5 ій 15 заг оУа! ух Уаї Заг сСуз уз діа хве Фі тує ТИР ОРВЄ ТАГроАЗВ Туг а 25 За їі мет віх Тгромві Ага бів Аіз Бго бік бій сіу бец Фі тро тк хг М Й хх
З У і Туг Жів Аа Бго туго Ак АБрОСіУ Заг рух тує ТВ Обі Був вне бів Ту ага уці те о Мех твВгобег Аз ОтВвг баг їв ек ТНК АЇВ ТукО 55 і Т5 КО мах бін їзча зог о аго ев Ага Звг о АжроАЖе те дів Уві тує Тук Сух
За 35 дів ака сі ТвВготук Ту тут ФіУу жет ліз зіву Ба АЗОВ Оїмк Тер Б1У 100 105 гак зіпосіу твеотнр за їБе ув) ев зок діа об ТВгофує ЄЇу Ве бек
УВІ БвВе го ей АТа БгО бег о бегогбух Зег о тТВг озер йМіу б1їу тТве АЇВ
І530 1 ас дій івц шіу Су» іви Уві же Аза о тТук ВВж орто Бі бБгеа о уаі ТнНу ма ї45 159 155 15
Зегоїкв аз шегопіу дів ревотвк бак обі ді ні те бе вро дій 155 ї7а ї75 чаї рев сів бег бевг фу рве тТук зег овен озеб Зако омаї Уа) те ув
Рго бег баг сег без сі ТвВгоБів тигботук Хів Суб дев ота) Ав ніх 155 ТО Ох сСтриница «05 вАТ-Я170-5Е рух Рго вк АЗИ ТВг обу УДІі А«робув муз Уаї щіч вБко фу бЗег Сук сова 235 ЗА
М ки г
Аби Бук ТвВгоНнієя тк обу вРО Бго суб го Аа Бго сів АЇВ АВ О1У я Е їла кам Я
КК ОО КОД У
Фіу вго нг ома! Ве бец вве Бгто Бр бує ВгО Куб Абе ОТГ бе Ме їіе бек аква такого бі ма! ТВгоСух ув! чаї ув; яр оУуді Законів га аБІ 27 пім АБ ого піз Уві бує Бе оз тв о туг Маї Аве Фіу Уві ці уві
ТЗ ФО КВ5 нів аз вій бук ТВгГоїув фе ака фін ші Щій тує ай Зак тв тТук 250 ВЕ З лаг ві тупі бжго Уа) іеч ТВгоУдДі ев нія бів Ах тТероіни деп Фу ув ОМ туго рух су зсув ма! бек ода губ АЇа сво сту аїа Бго Хв
ЗИ І 335 пів бує ТВ Ожіє баг оцув АТ уз Щіу Щівй ВР Аке О16 Рго бів ха!
КО хАХ Зо тТук твг фе вто вго хаг Агф ато Зім бем ТВг цу аа бів мафобер іви тВтоСух цем омаф рух О1у РВЕ Туг рго бег ахо Те А1їа уд Є
ТО 25 зко тер оцім шег дяп шіу біпоБРа бів Аз оаза Тук о гсуб5 Те о тТВК Бкеа бга я 35 щи
Уві ек дер ще Ар ошіюж бек о вйє ВйБ фсео туго бек о Гув бец о тТвг ма ях 19 1
АВ бух Хек одго тТгроді біа біж за Уві Бе бак осув Же уві меж 430 БУ 3 страница «У
ВАТ-ЯДУОВКО нів шій дія рен нія Аха о Мміз Тук ТНЕ Тай вух Бек їв 5ег ве 5ег
Кк да у дк --Ай АНІ дах вто бі був кщц Й
НН
«и» 233
Кия пкт кал 3 каїйх ДЕ ках тузна послідовМість хайОх | Й кайї» ДНК, яаагкий яднцюг анти-спіЗ сявЕ-щО0Х «МИ» ж акасічікв їазсісвавк сао пілорі ссскодуїсв зксацоцаце
БО зЕжЕсктТосВа накопи «ст ссріва вссжосаєсо поса Коха Кок 120 Й зкскссвув засос са сесссеасво стос ст восежаквко зав
У ке, ; Е хе ке кесодеакіс сіпатсакек сафсактсї фовхссдесв ссрчокктвє ксховандхе зфесоівіча анастоваца суші с свсїаїбкщЕс засво ає ссвтаНаМ а
Ме ОКУ з шк ку З
БУ тасвссіт о Фісвапазаєсє сазвсіозаз вібавасоїВ соді ВсшвисКаКо
У: ДХИ РІ х ДИС ТУ х 7- - са кісю сЗссвтетоЗ севусаресо зваспторав скосскокає ген сссто
З сІдавтаник кеохвусссво деаеуєсваз зіва а наабозасва соссстссавз зо їерокався ссесаоаово тексзвсевва свюасаса вужеасвс совок за У вМіжасвссс хоасоссова сазвесачас гасзазаває всввазієтв соснова
МЕ кс ечес заЧасінІ сксосресеціє вевимивинї геавсщнюю заз
ККУ : В ї З з р НН КУ «АМЕ З «їх 15 «їй» ДНК «213» штучна послідовність страница 0
ВАТ-ЯІАООВКО
КУА как»
ТЕ їх гу. Сх р іди тра. т, цк "б: ре се «ах їх ДНК, важкий ланцюг анти-сОоТЯ Свв ОО «ВНІ га сазана свртєавтсо база стозав птзазававе сазан скан
ЯКЕ пе З З Е Є Е щи що з«потоасазаз сгаїсідоіїа свесЕККАаЄт зветасаїсв фест потен сини чіпси ов встаю вкіжвессві всвасовслу стесавнтнї
ШНЕК ша ЯН УЗ нан
ЕН зссововває їссоззоЗєсВ сУксвозас жссацееася серокакоко ссср 28 Й Й І І 28 «засво тат ствовсвка сестозасзавс асстостоїт астатоие всзсоціасє мю жвстастас чіпає чЧеМецвитас пившесави пн асцих пвссчтаває одер що ке ацев сови Зк тхс сссплук ве стекла СВК ах
БУ пазовсвовоа сдоасослмню седчсскоюКс ват аєк тобссовасс пагоасоот ксипїчаавотї сжнкрввист пассвчсозвс чес се гсссовихах скІВсатсЕ у
КУ тсвврастих вапстссстсву сс вссетсст сеєусаосте додкасссво
ЕНН честасатсх дозасоезаа кезсзацсосю восзасвоса вгаоувсва свавотеао
І сссазатсхї чкозквааає сасвосвкоаєс скоса сао іча востасвови и З мекв
М поассотсаЗ косе сссссоввав сссавовчке ссптсакови сепсис похрккесв «ацвецнв зЗзсриасекоа аоссаєстнмнІ весетааучї севрттсаве ща ж квас абуветоча згас аак зссазоанова аосскзацча завоасн ве о засидсасоє зем сачищЕситя восчЕсктас апбвозаскоЯ зспааЗКоце
М звапатаса аакчеваеЗи сіпсвасляаВА посі совров песссаїсуз зазазссато 1079 кссоеадосев ян сіна вес саозтакаса ссстасессс апссодоах сСтуваница «в ват ЯЕлРьЕг заостояеса возвассаочЕ садсстовос поста кса задастеста коссадсове
І зсоескатоо зосоозазву сазіозосао ссзваоааса астасавоає саспсстсою ї20О дкастзовст сезвсоцово сттстісстс сасавсваєює ковсосао сваоаоєвов
МБО хапає пове стоаїастеє цідвазсвія вЗоаєтоаєся садосасжвє їм зсзсвнвцв зссжексосох дісіссро: зва «8305 Я «гії ВІВ «12» ВВ «ЗХ» штучна йоспідовність «го «223» легкий лавцюгє вмуи-сіь С8В8А ОК «а ло аз жів жа! меж їІВгоБій ТВеоБРО Бен бек ореюв зако уні ТВг РКО О1у бів веб Аїн бек їів Зак обу губ Жак обегоєїв жк фам бін ЇВгобег ши 35 За
Тнкоіу ди тТВг о Тук газ Аяи Тгротуб вм ців вух вв обі бів бек
Зо АН 5 -35 гж а вка шій рем бви ІТ ТУг Аго Узі чЧеб ух Ага вве баг щіу уві го за 55 5 аЩо Ага Ра баг о шіу чек сіу Зк о біу УБг о Азо вве ТВкогжи уз Кв 7 75 КО зе Ага УЗ СТЕ АТ бів Аве УВІ бішж ув! Туг тТук бух бер бій жо ївеоніх сів вго тує ТВгоРВа сіу шія бі ТК обу жо о Фім Ї16 вух 100 зах чн агФфотвг Уві АЇа АТа вго бегоуві вве їі вве орго бго бек одяр Ту 115 120 125 птраница Я
БАТ-Я І-Й
Фі бем фух бег піж ТВ ОАЇв зер оУді жар Суз бен о ївца Ап ах вне ї5а її Ії
Тук Бгто зга бів АЇв Буз мані Фій Тгроіух Уві ав Ахв Аїв їв фій 135 ІЗ 153 іо ек пі Ах дек бів бів Заг о тУаї Те ів хіп др о хет бух аз Заг 1605 ї170 ї75
Та оТук 5Закокжу Жвб оШек ТВгофом ТВг оїбзи Зек бує Віз АчЮ о ТУК 1; ї180 1855 ЕЙ ух НІХ ух мві Туг Віз суб Біб Ві ТвгоОНіЗ 5ів зу фей баг одяг їз о 205 вто о маЩаї тн був Заг вне Ахп агу сіу 013 Су то І 235 й як О.М. «Ві» З5 «ви» ВАТ «йї3 Щучна песлідовні сть кре пак шх и о й . «га ВвжеЕМи ванцюрб анти сві Сава Зо «ВИХ ЗВ сіпоУВР; ій ісцз уві бів Зек обі АЇв біз Уаф о фуз уз го бу Ай «ву Уді ії5 Уві Заг гу У ДІВ бар біб Тур ТВк о рРВа ТВРг два Тук зак охуаї БУ уві Зег Су Ку АВ ЗК о бІіЖ ТУук ТП ква тТйпб Аа Ту?
БЕ лї І Що їів Ммебє ні тер обАТ Ага зів Аїа вВга Бі зіп о сіу емоція те омек чо 45 цію тує Хі ап РКО Туг АХ АБО БІУ баг бух Тхе ТВг оч вух ВВЕ
ЗИ ЗЕ ЦО пів оіу ага уд? тТВгоМмах ТвКоЗег ар о тнК Бех Тів Явг ТВгоАТа тує щЕ за Ук рай с го вх що
Мек бів Бе баг агфізц АБО заг Ар о АЗВ ОТ АТ УЛІ Туг тк Сук бтрачмнца 411
ВАЖКІ ЛИ а1а ага бБіу ТвВгоТує туго тує біж ваг бін вен вне Абе о тТКг о Тгр о бі1у що 155 ща спів сіу тв оте Ууді ТвВромаї баг обак Аа бет ТВг о фує ОРЖ Бго бер їх 12о 125 чі вва вРо рем Аза вро обег бек озбук баг тТвг о5Зак сі Піу ТВРг Аа
Її 135 140 дів іво біу Суб їзо о Уаї муз дяротут КБВе го сія Бго о маї їак маї 145 КК: зх і50
Зак тТтродза бек пі Аїа їв тВгобег обі чаї із Те ва кг АТа 155 170 їх маї ва бій баг Зак опію фан отук его їжи хат дак оУді маї тТвВг Уа! 1ко 185 що вто Зак бек о бак орви Щ1У тТве діва ТВг отут Іф суб Аза Маї дя Мі5 195 «ВО ОХ її БГО Зк джЕВ ТК фу ма! дев Ух бух жа)і Біц го фу Жак осСуз
ЗИ ах КН
Ге МА АК ке аз бу ТВг ові Тв оСує Бга Бгто бує Рг; одів го іх Аїа Аїд ФУ 28 3 255 ке їхіх рт Зег о Ууді Ра сви вне бга Вга іуз ВгОо ру» дар о їВг о фац мах й зак КЕ Й з«5
СЯ і «с
Тів его ага ТвбоБго Бі» ма тт сСух уві узі уві Азв чаї 5еконів
БО з 27 біз а5ровго бів Уа? вуз РНе деп Тгр отТук У) АЗробіюк чаї Бірма
Ніз азап вій рух ТВг оБуз бКо АКа бій зіЗ ій Тут Аза Зак отв Отук 2 зах щю дет хг У див ху що Кох зи у їх ах. їм дам мл,
Ага ді ув! баг о Уді їв тТнгоУДІі Беац НІЗ сій АБО ТМ осец Ап БІР
Страница 412 ват аку ох ща 315 130
Був пів туго їж Суб вуз Ма Мак АБ іх Аїд іє бі вів бго ів
І 325 ЕКО 5 пім ру» Тне ї1і2 явг о Бух дія вжб пі Бів Бго ага бін вго сій ха! зай З 5 ту твгогрец в Бо зек ода Ахв о Зін фаз те вуз дай Фів ма Заг 355 З За
Мем тп осСуз рем ожді бух сіу РВЕ тує Кго Заг о джхвВ Бі аз тд обі 358 ех ча
БК ЗИ З теробів веб Аа бі бів Бо сім дей др отже ух УВГ ОТйК ВКОо Бго
КУ ЗО 335 ЕН ма! іже» дк обжг о дкр о шіу бог ББе о вве фо Тут Бак омцув фівмотТнг хв
Я З10 15
Аз іуУ Шек Аг ТКгр бів біз бі Ахп УВІ Ре бек осСузх жаб уві мех 420 ай 330
Нів БІВ АТ рев НІБ два мів Тук ТвгоФію рух Хве ем Зеб Бе бег йко 5іу ку
ЕТ су «іх В? хкій» ДНК
Зх їУ ї и ї 3 ек «213» штучна послідовність «ях тка ДНК, легкий панцюг анти «кн «НК: КВУ
Затхаєскеа тавксвавс тесасічЕсх «спаксосдтая сесодува ссосмеоМе
Бо вихІсттасв засссзвося вето зчва авсссссВисв зовасвеВ сова о х ще 2 хахскссаза авссфнкисв смс саЗз сота т зебра такс їхо
Стивницв 413
ВАТ АУВ КО зесооесвніс сіоавксНКек свосоцхтсї зчоаасссса ссазсттеає сетвааас зессоавю зі торавзв спікнняекє хастакекс коасвосин кЕсекасесоа ню дасассттса Зісавоцаво квевсана асбюасов кас вс
БО хаос сроссаєсіоза зохосвеєта вавкокава стрстклах кекс піззаєчасЕ стчЕсссао заВвоссааа чес кОоца Вр шдовіза секс саАВ тсозокавст сесацовова зусовововеу свофрасавсв зозасвуєає створе
ХМ все всяс ментів сазавсюми сасувзанає зсаааскВ сесстоєаа
ОО чиста вивркетааоа стос возах спавсвоеми оче «аю за «ії Ух «віх» ДНК й «КВУ ШТУЧНА глід СтТь «Я «ей» ДНК, важкий ланцюг днтя СІ СВК УВО «й. 98 хи ее пвовває соЗтсваїс катера Зкачаваздє сере кес сакезавака шу
ТІ водстосвану сВвтїссодекв сестро зассченса Тосвскеї ссахоноцкс 125 пЕодУєсво пса овієоасеас акізасссах зовасзаєзО Іссазатах 150 воцчнивн сс уко сзасоаз авосасоузасв сс Кекео сс свВе
БЕ аква стане тесе бтскасає весопіНиек асхвимає акгозпеісє
ЗО їзстаствко фіссасвчс сток сзаоазссааз оівссвасЗа часів хай хсКасеаоса ссвеанс зісщотетЕс ссскішни ак пет ораВ ово ага ікниеасасвв сис аню стека ФацроаскАЄХ пос вайсо щу пуранмца 3
ВАТА КВО сени «крово вдасевкоеє ябасвсвоки ксессоцусУх сокасаЗКсє
М тказзасксок асхскстосво сазсеЗасу асвасксх ссаосвуе дезсвососве воктасаїиї зсазсвкзав тсвпавоксс аоспавсвска мюозвсва зазвуєкана
Б спесвавтєке дквеасаааає ссасвсакає сезон єс смвкасстоа авекасадув
То здчовссісвоа пептєссксотт ссосспевааА ссслоавоВ состсеаадк пісок т сснмнитиа сві заказзсяеа ваковсВаво ессснини свавжесвах не хаЧчінкмВ всвиетоза возсзсакаае зссваваяаа змова зувосакве звасврасек жк кащє свусеєссте весеєсстес осавувсто остова тоує
ЗБ звозацівсов зЗбчсевеаах сіссвасава Фокс сосєссвієцв мн ак ї2аха зесниннжа винвназиєо ссзчвоаваєсв савани сего атсесвощаї
ЗВО пацоннесв аЗаассводх сасстзаєс симвнсв ведасттжев тсссвусово ма акоециквеа явна саакоцасав соб наса аотвсалаВс своє
МА шк таавВсх ссдасочвосїє сжкскжесес маса ссвссоєоаз савжкенвоЗ іс чвсвосаво фіазвстктІ сткафостсс учниогсахо мсеаса сзассвотає 1528 зп сс зсескаОх ваз 3555 ке МЕ 2 «2іїх 235 «Фіг Рв «217» щтучна послідовність «гвУМ дегкив ланцюг вити-саМ се ЗБОЮ «Нюх Ов сСтванина 515 ват-ЯІ1 КУКИ аа їі уд) мех ТР оБів ТНЕ о Бго ілі дек фев Зак ма Те бго щу
ЕЕ 5 о 35 : ціп Рг Аїв Зак її Жег о Сух ук Вег заг обБів Бвкосжиц «(іч ТВг час
ТвВгОбіу Ах ТК отТук фев дж» Тер о Тув орвмошіп Бу Бк Бі Бій ек 30 35 пйпга віп вав зви хі тут Аг о мві Зоб ід Аг Бе Зак ощіу жа! еко хо 55 БО 83 ака вве бек обі Зак обі баг ші ТВг одер о ВБе Тв орено бух Хв
ВХ РЕ КН в
Заг дга ма? ів діа ші Аа Уві Оу Ув3 Туг Тук осуз вим одіп їеи з3В бог о тТуК Рга Аха ТвВрРовНе і шів шіу Тк їх роб ів їв губ і, 305 ках дга їтвгоУЗІ Аїв о АЇв о Рго Щбнге ді Ра їі бБе вра вро Закоазва бій й лі за 335 й
ААУ М мА зіва дей вуз Хек обіу ТВгоаід хе УВІ Уві Єуб5 рен о вБи дя лЕВ Не 135 ща 350
Туг го Агф шій діа фу ві Біб тТгрозбж5 щі АзроАЖа Аїа ім Фів
За ЗА Й іа Й кі їх 158 5 ї50 5ег поіу ази бег оів бів звг уд! ТВкоБів бій дю ЖХвб рух аЗрошеє ів5 170 ха
ТВкоТтТук бек рен бак о 5Вк о тТвг ви тег Мен Бек бу Аа яд Ту бі 1 185 що
Буй Ні р уві тТук АЇВв Су» бів ді тТвгоМіз дій сіу ев бек баг го о маі Тнгомує Бек Не дей ага пі сім Сух г ЗЕ й
У КОМ. странина 515 пат ад. ко «ЕМ ЗО «ек 451 ка1ох ВА «813» штучна пПОсАЗДдОеВнНИтТе «вх «й2Яз Важкий явецюг двтаеуріЗ свя тВОВО «Не 30) пія жа! бій іви та) сій 5вг ові АТа Бін уні рух фу рго бі АВ 3 З 33 Ах
ХвгоУа! уз ма! Зак Су ух Ві пек бу Тук ТР ОРМЯ ТНК одер тує а Ех КІВ їів меж нія Тка чаї го віп Аза го Бі іп осіуУ фено У тгй Мах сі тук Кі Аза все стук дяп Аз ші ше? бух Туг ТВРОбів вже Ве «о 55 ща піп біу ака ув) ТВгомек ТвгоЗек Аза отвК бек Жів жег о тТВг дія туг мес бів без бек аг ішу Аго бегоАкр дер Те Аїа уві Туг Тук СУ щО Зх
Аів ага бі тТвВготує Тує Ту шіу Бго піл іем вВе о азоа тТук о тгр ох 358 зах 3 сів чіу ТВг ответ ма) тТвВгоУді баг о бег АЇВ Зег о тТвгоїуз БіЇу вга бек 11 ЗЕ 155 хв) ве рко ем Аїд вро Бегбобег о Буч Зак ої б5аровБіМ піу тВт Аїд вів іез іу Сже (ем омаі уз 85 тує ве зго Бі) Рг» уні ТВ Уві
ЕЕ: 150 115 їв
Зек їке оавй баг осіу із фен о твг охегє Бі Ущі ніз ТВг оре еко Аїф ї1655 173 їх:
Уаї ія піп бег баг Фіу во туго его без бек бак о уаї уві Твг ов 150 їі УЮ стовзница 537
АТО КО
Бгто Зегобюг о зекомец «У ТБгоФій їБгоїуг Х1к о Суз АВ Маї деп МІХ 195 Ма Я: бух Вго Жетг доп о твг обу Щі Аа буд куб МР обіш ко бук Бог су а 15 2
Зк» оку ТВКОНів тв оСузх РКО оБко Сух го дід ко 513 А)ЇВ АЇВ СТУ 225 3 235 280
Фбіж Бго шегк узі БвВворев Бе оБго Вб оїУу5 го Був деротТве фоец КВ: я ах ї1їе бак Ага те вгсо шім Уві ТВг оС уз) Уві Уві Ахромаї Харк нів що Ме 7 бін Ах оКго піч Уві Був Ра Аза о ттвотУук Уа? Ар оці Уві ст хв пі5 Аха АївВ о буз ТО фуз КгО Аг Фі сін сій Туг аз баг оте тТуг 29 ТЗ жо
Ага маі ші бек уві вец ТВгоуа) Сом ні Бій Би тгроце) Аква «1у 305 ща ЗІЗ 3 іх біц тут ух Сух ух Уві Зог Аза ух Вів ів (1у дід вго ї12 7 У 7 УухЕ я зі зле
Зх 59 Кз іч ух ТВгоїів вегобух Аій ву Біт бів зго ага щЩ1ім ко бій Уві щю зу 35
Тук таКорев Бго рРгО Зах одга Ар обів ев ТК оіїув деп пів уві че 355 36о 363 ев от Єже фен оУаф буУуз Щі Не Тук вго Хек одер Кі АТ уд) віч зу 75 зво
Тев бів сег ази бі піп Бко бів 45а Аха стук вуз Те отТВг орко вго
ЗК За 385 а
УВІ фен АвБ баг дар ціу вагове вве рено тук Заг обуз ви ТВ Уві ох 1 СН сТтраннце 315
ВАТАЧІТКО
З5рогуп бегоАгта тгробів шій сб3у дай у) вве цег бух хек ожві мех я щу М рю ле 32 ак КІ ні сій дід бец нів Аза Мі тук тр обів куб Жвгборец Бегофец век ра В Зюх го зі КУБ
АБИ ха МЕ 301 «АКЕ» БУХ ке ДНЕ й й «КУ» Щтучна пестійдовнсть как» «ай» НК, впегкиюв язвнцюг анти-сіЗ ЄБЕБ-5НОМУ «Як» 50 паівітаттВ хоазстсВваВе тесаставст стахесекав сосок сс
ТУ вистсттвфа азвбссвсв акстслозая кокіссвосо псавсвозив «пт іо твтстпсзуа зассвюса паасссЗсна стоастпакох воежеОаіс танках 150 сс стиках сесачзекек ван ксдаскріас това зав шксохакоа заЗстазана сан єапакеє промов саасвоисв 00 цітасстеса зксзаззнає зааасівова аетазасцв ссивстос восасстаєс 380
Есе Кес соска стов їощеасяаків паааїстооза ст стста За се
ІВ стчваюансх хстаксесву шмнижевеа каса заотодатая соска 385 кс аВсЄ сссзочача коссасвова садовсвоа зузасадсвс стВеВеоКо
ОН зує ассс сзвсостчаз сазацсвоавс гасовохаає асазаотста сзкстокова о шк птєасссатк миюкстоа стос їс асавлнвсх бсазсвооо Виза 557
Ктранице 413 вАТеЯУУВВКВ «еЩ» ЗЕ «Кі ТУ хафіх ДНК «813» штучна послідовність жи «Е ги чт зх зусхлюкктнй о Фах -- зачу ек ооо «3 ДНК, важкий яаяцюг дните киіЗ св «ВК: ОО сюакасвВиї пррїєваве цЧружчсізав зінававввс саЧасестеє себтавацто їм чатзчсазац саспокіз сассктсасх звІтатасв асо кооа сот адцє вч че 5 ще ве сивим чна ззсзочвстасє звтіавоссви зспасемме піпсадатах
Тк Ме: Е:
ЩО зсннезаваї тссещнЗ пУсхсвовиса асовосгивеа стежите «сн Ве
Заг що й Щ й ТОМ ви
ЗК зсзомасках спін оео сестувосас вста кІж есеахкакас неси
МК пасе шиістасвох піка Кво мини евно чЧесвової асп
Бо милеассомиа сезмиивє зчЗюсске спосо ово ссхсотсва пав 325 І аооросве чн естеаув скассмлкис зщимнкаЕ фесссвравоо зетовесвитИ ке : Е і З шу Мито
Зх ю теесцваскх сводевесиї засожмзк візсвовми кс сокасМмиє. й
Хсавовскої воїссстсве азс ясспкаесксї сс очосвсесве
ВК асскасВиК я жфавсвкува бсасависк васавсвоска мим зазева зва тово
ХК сссваВте тя птдакавааєс кезсзс ес сосаскомос пвадсвокпаа Виза
КНУ вас, сек еощосвава ссосважров сеексвеаах песо
БЕ ши ШИ свівсоточі св зассвсозазва ассскачазх савціткавео
КК У й ме х ачпю твахасако жавсотича Заасатває зсптавовсва ву свсвоза чиаосва ще ще касвасесе ї зссоатасчої свосабсстє вссчксстає вссвозасєо зітре жо страница ЗХ вАт-аЩУ-КЕВ дазозатаса аутаєсвадає сіссавсвав зосссісодосв сссссаісда пвавасевіх щохо ксосвавосєв ВефоОсвВосс ссдаравоса сврохатаєсв сестуєссссє віссспудах
Б чаастовсся мн свое своє беассіроксв вари кіс КесоВовцнь
Іо аксвсякоЗ заминкемее сзасЗоцеав соповуачка зохакавцвс сасасекеся їг00
Фпидсеуцаєт ссевсраєте стежте Єасмовеацє сежосокоца свадаєсво зга зусазсвоюв дозаєоік сієвКОєтєє зкувіаовкО вереєтоасв савосаєтво вопдсвервава сссЕсепесї исокенкоук ав 1355 «ким Зах «вії ІЗ «1Их РКї «ВІі3з штучна паеслідовністим ек» «Ке3» йагкви даму звнте- сві сих 5НОЗІ «еКню ЗпХ
Ах зів маї мак так бів тТвВговга ій 5агоїви чає ві ТР оБго Біу 3 З ї0 і5 іп оБго дів зак фі Зевг Сух рух чего ек дій веб огбев бів Зек бак ноя зе й 2 я ха
ТВгОСім АНлотТВе Ту бен азйа Тео о їжко фев бій уз Вко о діу Фів Зак ї5 я 435 та бій сем ім ї12 Ту Аг Маї бегогув го не бегодФіх Уві Бго
КІВ Зх БО
АВ АгО РН Жег сію баб обі бек обі Те Ако вбне ТВ оіву Бук ЖЕ
Но їх о ххх у узі мк Я хм х її гі т сукує скани ять сс З х заг аг уУуаі піц діз Бін Ар о УДІ БіУ УЩі Тук Тег Су вви сій Ме
ЩЕ а 35 їі дуб ТУР Бк ма) тТвговве бі сів зі Так оїуз беч біз тів вує їтравица ЗЛ вАТ- алко 100 Нв їх дга тТВгоУуві діа вів вго Звк о маї Бе хі вВбеа о вго Бгто Зак АВ вів 315 здо і1х5 ців омев о вбже Заг о Є1у Те о Аіа ет ча) чаї Суб ра Вей деб АБ ВвВа о 135 їі тук вге га січ Аїв був ма діа Тгр бух Уві аАзв ази АЇВ вявофій 335 Ух 155 Іо хв ціу ди зве щі пін ес УВІ ТВг обі Вів о дЕр хаб фу АЗОВ обоє 155 ТО Аа
ТВгоїжг Заг фен озегобаб Те озїжи Те іль Хвг бух Аїв Аза тую біб 1К8 155 152 іжз Мібз фу маї Тук АТ Сух бій УВІ тТвгоніє бів сіу гемо шаг ба й тО5х й й гу зи
М КУ Я
Бко уд ТВгофух баг о Рйе Ап о АгО Зіу 51 Су ій 215 «30 0306 «Еф Я «ах» ВК «ФІ13Ух Штучна тпесвідевнить «ех «0» Шажкий занцюг анти сі тиви НКК «а» ЗЕ - о ях ще --ї т Фах кто хи Я ху дих Чим МН их сіп хі віп вав уві сік 5вгб біу аіз біц УВІ уз муз Бго бі дїд ї 5 їй 15 чає маї уз маі хаб сСух бух Аіж бек бі Туг ТЕГ ВНе тТВг АБ ТУ що г ке
Тів мет ні» ТКроуві го бів Афз о Бга Бі зів біу бом піч тки мек
ЗО 45 щік тує тів джип вро Тук Ах АБО Бі Зак фу ТУуК ТВгобіц був вне з 5 ВО
Странимв 422 ват 10 5КО ще я Й НЯ пе дич й щи ша краше ния Зоо фукт іп обіУ Агя ущі Тк Мет тТвгобБек Аз Тв о 5агб їі Жеє ТБ АТа тує що 7 їх Що
Жак о пім івеи его ага бен ага Зако Авв ах» Те АТа Уа) тує туго Сук
За 55
Ав АТО Бу ТВготує ТУК Тек Єіу Хоб АТа іец вве АЗОВ тує Трр щу
КО Кк мо сів сіу твготТВг о мві ТВгоУаї Заг обак АЇЗ 5ве ТВтТ ож ОРу Ве бег зд їв опе 1315 х1х КІ. Іо вн а ШК Тов Ка волає 3 ч «й х тк т І аг кпи в; а) дів гу Важ Мет Сх о тТвпкочдаг 5 ву ТЕ дід 3159 135 148
А1а фвц діу сСух івц о тУуаї ру АБО ТУР БВ оРКО Зі о вБго Уві ТВг Уві 145 1ї50 Ук 150
Щек оте ода Чек обіу Аів рев о тТне 5вкоєіу уві НІ ТВг о ББе о вБго АїВ 155 153 175
Уві їец бів Заг бек ощіу ецз Ту аб фен о бег бок оУуді ма! ТНго ха 155 ї1К5 390 го Ко Баг ее ішва ШІУ ТВб Бін ТВг оУує 316 Суб деп ом Ай ВІ
Гу РгГО ЕК АБИ ТВРоБУБ УВІ Ар муз уз ма) Зі вгО фу бек сух 210 215 2 ази обу Твг ні ТВгоСув бго Рез Суз го діа кго Сів Афв вів бу
Зі Бго Зегоуді Біб їжі бе бро вбгОо рух Вго Бу ази тТвкК Бен мет їі вегоадєц твого бій узі тТНгосСу5 ув! У) таі АБО УДІ 5ег Ні я па а7а щів Ахровго біз мат із БНе АВ тб тує Уві Аз обім маі дій уд! уз Е з
Мтраница З
РАТ-ЯБУ0О-УКВ ніз яха аів дув Тагору5 Бго ага біз біз Бій Тук деп Зве о ТВе ТУР за КЕН Мщх ага жа Уві Зоб Уві рев ТвВгомаї фо міз ів дев тр фен Аха Оу су Бій туго із Ку уз Уві бег ази рух АЇїа бен бі АВ Кго ї15
Й Й й ча за Й ч3х
ЕТ ам ІЗУ піц ж ТВ ТіЕ бегоїуб5 АВ вує 5іу БІВ БгОо Ага січ обко пі тв 343 ах зх
Туг тТвг їв вгОо КгОо Мет о Аго АЮ дім фяц ТВгоБбу5 Ази піп хі бак ієм Тбг су ів ов) Був Сіу БВ Туг Бго Бек оАар) ЖІ АТ Уві ати
З 175 ЗВ
Тгтв бів Зег аза бі бій во 51) Ахй Ах туго іжх ТВг ТВК рез о бго 38» Мю ї9З5 щю чаї вес вхровег Але) зіу бек РБа РНа ву ТуУЄ Веб бує рев тк Уді 35 1 1
Аяровув БЕК ака тТгробів бін Сіу Ап УВІ РВЕ бек обув Зб омаї Мах 420 55 430 ні ім АТа сечо нія аз ОНів Тугб тТВгОоЄбів фу ЗК іі вк офжм бег 35 ай й 445 їх НУ КТУ
Кгеа біу і жу «ків ЗОВ «й1ї1з 1353 хелЕв ДНК «Ії» ШшШтУЧчнВ посятдОовність как» «й» ДНК, анти сі ЕвЕ-2в31, Есоявнувю 13 «зваадиноюв» ех ОБР сардцтсаає срексвааїє суатосіува зіззававає свудсвої ке «цікаву ти зеснввана сабсжочекв сассттсвок засів твсассДх тео страница 425 вАтТ-4170-55О зав сени своЗ чісточн о зведоюитас «сгаасссаЗЕ звсавсеас стссазахах
БО вже зисвозаєся ссісвезака асом секта сс
ЕНН І Ши І І верщмастЕ сраЧчастоко стстовакває зссасіЧЕко аствсе асосоЗеас
МюЮ твехасІвсо зчессовсвЧи ге зактвс срвесваз зво пассотаа кокс воєа «ссаворчсКс стосу кекКи ЄсесокУурсо севопаосва звело вВИє жна сс ісмв сіассіЗас авсерассвсї їесссорвасе сиву зсскочава фено Звосстесачк Ягасвсвомк кесссревк екасвУвох ке плвУссІ атаасстічао садове зесвеасккї схвосвї здозсвососве а зссквсакк ченасоауех сопе весевсВвоса зоаБаЧавсва званим
Б сссвававсї всзасававои жсовсесВтає ссасосЗос сасвєстов весну тей дфувссоцтсву їжжесетекі сСеспсжбавав ссбавуювоа сестсахуак стсосочасо
ТО
«сетцацчкся сакасаєав заказов ка доссасазаз всссічаЗах саваитсаве
КО кава всерсооеюа пацасаах Чесазжк ва воседєдчаов зов ие 00 азсеркасак зссекакац свесчесеке ассозсекас сво све чопаавх
Бе зве тасе патоуєвааск сіскавовеай сої сесоссаїсоа пазавссате зго кссвааоссв зваоссазсс ссововасса своя касв ссстасссся вкесскодУах мкс св ве сВОЯЄ савсстсто бизсваєса авочстсока тес їж віцнсвтої арскхювоє) савахоучасао ссрдезваєя зсхвсвацає свсовостося
Ствавица 455
РАІ -ЕЙ шіпствуВст ссфасодєте сттстксстс отовоєвадє совссофідюи савувуєаюю ізБІ
Зассвосавоа озавссовск: сісвтостсс іовтосвта возстстоса саассастає
ОР зсрпсадавов Зссесєссся зкстєсорої аа 1553 «МІУ Зоб хан Я «ай БАК «33» Штучна поспідавність -ваО» єга3» одДнтесвВіЗ( Ва 2В11, Бсеспанцює 33 «задпвдиною» «ОП ЗОВ діп уві Біпоіжа Уа) сій бек оОіу Аїй біз Уді ув вуз Вго сіу Аїд х х Й зії 15 ня 7 Ко КУ пек отаї уз жаі бег оку бу йаід Заг обі Туг Тв РБе тТВг дав тТуг ів омек нія утро омаї Ага іп Аїд го (іу шій Сіу фев бів ттв має
СІ 35 пі туУуБ Тів Ахп ого Тук Ази АБропіу его бук Ту ВК Обі вух ВНе хо 5 щі піп шіу ага Уаі ТВгоМетї тТвг оЗег Аз) їйгК Заг їфє ХаготвК о АЇД Тук 5Х то ТХ що
Мек ім іем хег акфівц Ага Зекоазр аа тс й)в о Уаі Тук Тут Сух
АТ Аг Сіу ТВг ОТуг Тург ТуУК бі Кто ів вец вне дер тег Тк ціу цю 15 що іп біу тат тТвг УВІ ТВгоУВІ заг озег дія Зак отнр ої ж сіу вкго дає 115 12 125
УВІ вира о ргОо бен Аді Ру Заг озер оїув явготВк 5жк сту дім твг від їх 15 їй птраниця Я ват-а1у0-5КО І
Аа бен бі Су ге ді був абротук ВНе обко шім Вго мії так уд!
Ко яе і 155 їі щаг оїга ай Баг ощіУу Аів іви тТВг ошяє біУ ді Ві ве ве Зга дів 155 17 175
Ууаі ім «ів аг ве о піу ве отТук Бог фен бак о Зак чні уві тТвг Уві їко т8х 130 го зер баб Зеко вав ші ТВ одій ТНК о ТУг 11 Су Ап Маї Ахвонів їз: НО 8205 їз реф бег Аз ТВг оду УТ АЗИ фе ух Мф 03) вгору брг о сСух
Іа іх Хо кА жалкує жк
А бу ВК МІ СТВ ув вго рго Суз Рго дід вкРо бін аЇв віз Бі х25 й 3 245 шіу ко жк уві Ре іец Бе Бе орг фу Бго ту АЖ тТВК їжи меж ах що 215 хів бек агф тТве Бго біз ма! ТР осСує УТ УІ Ущі Абвоуа| его НІВ во 205 ЗУ бів ази Бр біб УдДІ Бу РН Ахи ТРо Тугб щі дЕроєі Уві ім ма! ау Во 235
Ніз джми АЇТВ Куб ТНК вуз го ага сію «їм о Фій Ту Аа ЗеК ТВготТує ще 295 КН зго маі чаї ек озаї бши тТВеоуЗі дез омі5 сій Абротгроіец ап бік 3 вЗ 335 зе вк сів Туг оцух сбуз вух уаі «егодап ік Аїй фен бі Ав вто їв 325 їх 555 зів бух тк офі 5ег обу» АТХ У шіу піп рго Ага бів вго бій уд 34а Ах У
С ТНК рев вго Бго бак Ага Ар Бій фей Тв бух апа біп уді Баг
БИ Зо сІврвмицв Зах вАТ-ЯАУ0-КО їв бек о Сух Аа УДІ Був Бім Ре Туг бр) чего АЗЕ Зі АЇз мат 61 аа 375 зо тро Зекодяп о віу сій вго бін Аз Ази Ту руб ТВг о тБг о вВгОа га 355 90 395 вав маї сен ар одак АзороБію Зегофббн вне рев узі Ще бух ем ВК ожа
Бляжи С ЗІБ
АЗВ буз Баг оАгОа тТга сів сій Оу лей жді вве Заг осСує его усі Ме
УЖ 485 КН
Ні бів АіЇа фев Ні Ахп о МНіІЗ Туг ТНК оБ5іВв ух ак фей бек оце щег ах «а 345 го біу кує ж
КиМУ кха3їх 8514 «ії» ДНК «еі5з шщтучни послідовність» кет» «їх ДМК, внти-спїіЗгаВа-евІі1 вс ї3 «запрадинОоюз диверний лігамд «Не ЗУ памщезсває оакжєсанес сюбосіпва зсазазаває сени сосрааазсо
ЕК хаскосваво света свсосттсвеї оастатавиа геасвсвоВах озоВВсє кодВІ сВан пси зашнннтас акгтавоссві всажчоо пісовваїні 18 вссцвоавант сесннжа сзссваосзчніо зксвос ово сЕфЕтвисте сассосекає
Я казана сіженіа тЕсеЗасвах звссостатек астактатос вові
ЗО квстаєтасо зсссзсвочст остЕчакеас ср аво зіассвкоев звскотавох
ЗБ тече а ссвеврюкс сіссвівкЕс сессжаческ ссаосвуаз озон
Б: І І аусузвсвсво ссбостесзУє стасстеНіє задоазскаєї бесссоавасс соіовсовід
АКО стидДвица ЛАВ нате а390-5БО жхеставався дсдовесссх овосіскчас зссововост тосесеєссцє зетосваВаї цем)
Мр так іже тао са кс всооішсеКе скацевесх пово сво
ЩО вів сї зпваснптдва ссасавзсєсс загпавовсса вивраюєва чага сесазааист псолланаає тозсвовтаєс ссассптяєс саЗпасстов вастніаосю тех
Ззассабсво тежессксовК ссссімазвав сеЖсниюеся песик сзспоцаКе
ТВО кохав св сао сені афесвсзаао ассокоав сааакесває
Зо тозсасок сп чковя часова т фссяаоаєав воссоаєцоца вка є
ЩО І заацсвс вссеКакЗУХ каско вес зсосвопасо зокячакацє зво авсозваса вокзсчасах сіссвакава зксскоВоєя сссссвтеза ззазаєсвяЕє іо сосни ник овес ссововаиса сек сосіоскКко ВК 150 часто езвассвоевк см жісіІК бвсвсвасВ вени та сову звісессвіца васиазаз савхдросво ссаодасваєа аствоваває сводсеїжеє їз жкстадаст сспасоЗскс стІжеКтєсс ЗкопоєВає товсоснв сазузуєаЗу 1259 зви зсвов сова стсаіцстсє Зіозтасака ачстстасва севссяскає ї3ко зсдсацавов чесЕсЕскся ЗкстссовОХ оозасоцео умова сруВенея
І І позов стоваскове сесозвЄ себаосюмІ кс Зо пшацОВ 145 зи тс шестоаціяє совно сао аю сссх ЗзБесмникає азсзакссі зво сотохсаєста вовна пмркнтасва сала с 1560 І зашнвястчо (пове сва прочее тастакекеє тсїкісасе заваеУасоу страница 459
ВАТИ жк їв зувосдоіас ссюсозава ассіастсї отокстсокою сествсвтск свєстоєа ча зазавзсаста спосо восжсвнка стзасачмв ахстасесис каспротоє
ХРО овосессдов автвосочсаї рук ексва освовстоє зоасассват ги све
ЖК їЗ ай леж ІЗ ли У У їз т У х ії вимлозова касвтсстаєсв сова вузов веасозаюка ссхавеасна засн ка х че У З 5 Зо КЕ я
З8 шапоасечса сзсКазчесх зісвчмнУ жссоссцаЗаА ссср ше ех
УК Ос Кае ЕХ чацез Чак КК е 5 1350 ссаванавсо завасопазиа созаксле сла ствол всссчавсто їз кхссссїозасоз акссапсодцо стопах сідазаєсан зва сс сошко
ЧАсе ЯК еко ЧА ЗУ З З З шехеако пли
НІ) згжтсазаві) состав тазових сктвоастоцчі веїссвайтсс мно цеа
ЗТ ща пав какоє тоаасианнКки астаЕоскає заеоузазаха своваааих «фас
З 5 кежж завастєафю сакаствтот зестїтексяа скодавстов обсєече еостоозвове
ТЗ - . зай ск
Васко «фа ккесІ зчсасак сбквоасквс сосок зоскацкосВ
ВІКО еВ поесвсвяю стстоасьех Ффуасствссва сксвеосіста есораобосво авесасвсю іо х х : ; в кЕсакеоє завоевмчнкх зсезпакскоа жанр воисескіє; зеїчсатсід ям катастоаву «ссшревжсв обакаєтев сескаасхс жнив авс тато
Я
ММ пси ссвса созсзсостова Ззакееєскаєс зоасмноза псосіЗазтс ща з «М» 305 «гіїх М «еї2з ДНК й «еїї» штучна послідовність
Уа «23 ДНК, вант сіічг ав ивВІі-кссаанцює х «ввстувом»-мономарний аікавА стезмича ЗО
ВАТ ЗІ О
«ЗО» ОХ свочкасває Зарзттсавжс скоса згвеазазавс соосеєтЕс секта ви с кою ж " -: х КЕ су їх т т що застсзвао папства баесттивех звотатнікса басвоциви пок овщуосє ссцасса чна замкнртас вхіавсссвЕ асвасчасво хтєсаватнх вс нії сссвнннро сої свовато аспасовсв сеКетахккє своє. з4а змювасіщЕ сівоавсвкЗ хтстовсоВс ассвоасте асеЗжхчоє воза їзскветако зе Ффибсовтеає пеню зЗЕвссанк ЗассовкаАВе 18 тежаствса ссавашнньсс вес теУЄ сопел сбжсетисав опосаКскся
БУ жи всва спрвсскоЗЯ сцен вна Ксопсосовасс оугасЗОко 80 тчразавсї сан щасссх пассвоан пішсасвоййх сесосстак сствовекее 5-3 тсаофоасток все сскоВа сВососЗоавоа восцрцвеек совосацее подовспоцо и всі ас освасрвова совсааоссс засаасвяеса возах овсва заазатва
В ссивавчЕскт чЗсочазсананх їсвевиаКє севси сао каа зас ЗсНю сг
ЖИ частка ксктостсЕК сессссвава ссбсваццвов спека Е схе вае
ТО сспЕорнвив сах пн мК ета вокевсаво всспзнаух сааекесавє о звкасоає море каза звів зссвацзасав зрос асан
БІ
«асан Е всезКЧевк свое весоїжескс всехннвита ЗссЗвасоде че завкнтвсвВ вожоаслацеЯх стловасавеа пессксоєе сксссаксоа Фаза 1358 пссзавосгя двоє созалавеса сеча сс СЦКК страница 553
ВАТУ У0-БЕО звостовссв звоавассвОаЯк Челсі коач такса доста ссссаЗсоде аксчксвк заново свенжвуєсо ссіамрансов воза саисжоксосе ї800 аждскося Фен ТІСТО сасімваВс посох ода саадацото 1 звесхисвов зсозасечекх сохне є зкааевоВ звессміасв савссаєта кс а ре : іх асссачавох сис нка земна ово зов акся зазоазчесс стента ссссвасах сежасас зр зок аа їм акасетстєс заст ссвовасата сізсвоавісо «косо зЕсокаає ії зактоузесєско заскацсхче соц саста зсенвкоЗссе фувосовона ве ї58во защвечкхви пацічцеєсва свосцосоки састмзукак кектееВщх зааАасмко їі: зей ссср: вістацетсох сет сво сссмнавсе асазсссео їБКО хавааасас сопюсассвк жо соса стосу сс асо
З зчацесссвов віск хаос осо гУпассїНє коповуєсво з взассиннк басвїєтаса сасвнинмс вацепіяає апЧчестнй осів часесувево пасті асек зупинка восшсмнм сесовчссо соток та пеавовннчЮ ва 1552 ха ОЗ «83їх БІВ «212з ВВТ «іі» шщЩтТучна послідовні Єть
БУ І сек» антв-еспізсйВБ-сві11-гс-яВнцюг 13 «западивОою» димоиних пігана «Нюх МВ
Стваница Я
ВАТУ Я КО БЕО
Зівпожаї дій дви жаі бій бек обі лів Біб Уаї уз су Бгто пі діа зак уві Кук уві Зекобуз су АТВ ха ші Ту ТВ вва тТВК о АЗаА Тук за 7 7 чЗк т х за т
Ка а вжи
Хі меж ні ТгтроУаї АР бів та рго бі Бів Б3і зви Фім тгроМмех що 43 біу тук бів Аза БгО Ту Акп Акрощіу щжгофух Ту УВК Обів бу БВ
ВЕ щіпошіУу Аго жа! ТТ Мет тб о бег АЗВОТвг бек Кі бак отнкК о А1В тТуг ц5 Но Тт5 Ко ек пів бен чер Ага із Або Бегодр дар тк Аа Уві ТК тур Су
АЇВ Ага щіу тВготук Тук тує Біу Рго бій бен РВЕ ав отук тв оду 100 125 1 чіп ошіу Те оте уві ТВгохві бок бек вій бер ТВКоїуз Щіу вро жег
Уа вБа Рг ів Аа бро Заг овек іє ек ожтвк бар ді цім отвг дів чаї РпЕ КгО БЮ Аді ККОо заг обовкК Бук бек отак зебр ЄБу між ТВгодів
УМ з 150
Аївв бен біу Сух ев о Уді ув деротує Ме кго 5іц Еро Уві ТВг од 145 і5о0 ВХ 153
Ек отгроаби Зекобіу дів їжи Тр оБее шіу мі Ні ТВ о Бре бго від
Ма! вер бій БегозЕк бі ви о тук БЕ ву Хег о Шег ув! Уді зго уді
Рго бБег озаг о бег о цен о біу ткобів тТнек те ї1е Се дап УВІ Аза нія
І МО ох
Куб кко Заг дай вк овух Ма Ах оїуз бух УБІ Шіц Бк Сук ек Сук іо гу ай ту с еотваница Зла
ВАТ-ЯРТЛЬЧЕО
ЕВ рух Так ОНіЗ ТНК Сує рга орга буб Бго дів ко піц віз Ат віх 225 за «35 240
Фіж Бга кот уві ВВ зве Ве вго БгО гу» вгОо бух АБО УВГ оївц Мах 245 я ах
Іза хнк Аг ТНе рго Фіз УВІ ТвВгосує уд! Ма) У АБроУВІ БегоНіх
ЯКО 255 то ів Аза вто бін Ущі був ЕВ дей Тго Туб зді дароБіє уві Біб ма 275 КО 285
Ні дявп о А1В ух ТВгоБуч Бра Аг; біб біб бів тТук джй ЖХеб о тТВе отут
ІЗ 2 що
Ага Ууді Уві беботУаї ваз Те омаф ем Міз щій АБротко бе азп бію 305 Зо 15 Зо бух ін Тук ку» бух Кук Уві бек дз фу ів бевобім АТ Еко Ї12 тах УА що хх о Зх шіш обу» ТР ої вгору дід Бук Бі біповга Ага сів Ркго пів Уві за зе ї5 бух ТВгоіен Бго Бга Заг АгО АВ ОЗів ви тТвгобУуз аз обів Ууді Заг 355 ї655 Зо ваз зак бук вів Уаї вуз піу Баш отут ко бек Аз оїіє Азв омаї бів 370 325 ЗБЕ ттвозіз зегодха бі біп вго атм дей дай Ттб фу ТВРОЖАНК Бго Вга ї8х ще БУ що
Уві ін Ар бек дж піУ де ББе Рв: ів тді его огже ред отнк уд! зах що 515
АБЮ Муз жвгоАга Тгр осів сів біу йзп о Уді рве баб Суз Хвгомаі Ме
Я 425 а30
НІ Зв АЇВ ву НІ АБа Ні Тук ТНК Пів рух 5агоївв зер оба ще 435 450 45 страница 434 ват Зі КО вко піу пі бБію бБіу Віу ет Фу сту бі бік Зег акту бів «Ту рго «50 Я5х а ін іви 5вгб овго Ар оАЗВ РКО АЇВ оБІіУу Бевз» дЕросеч ак бів Зіу че 470 475 Зо мес ББе дів Зіп ій ма) Аза бів Ай Уві рев фев їі Ар охіу го чт85 Б зх сви дес тбротїуг баг о аАзо РО Зі іще Ав Зіу мі че фев так ооіу щю 505 зів
Зі вбац вк Тук їм ФІН Ач ТВгофух іш ів Уа! ув! Аїд вуз Аїд пі Уа! туго туго уді ве вне бів вен сій рей ага ага уві та) дїз
Зі бів бі бек обіу Зако оУуді бак оіви діа шо Ні фен бів ргб Бев й Й ек 55 чу
Ул» У зо ЗУБО
Аг его дів аів о 5іу АТа Аїв Аїа ва АТа Сец Твг УВІ Аза Бе вга
Бах ЗУ 575 ге Аїа хек очет січ дій Агро Аза Зег азів бле біу Ве Фіз СТУ Аго за знУ що їац іеч ні бац баг оАТВ о БІіЖ бів Ага ев о біу жі міх Бец нія ТВе 555 5 ї5 5зів 5із ага 13 Ат ніз Аа тТкрозів рем отвк сій біу віза Тк уд! мезо бі ей вве дго о хаі Твг ого біз її Бро Аа бі рев без Заг пг5 КН вух чо
БгОо Ага Загобів біу біу Шіу шіу бег Фіу «ТУ бі О1у еко Агу 513
БІ в БІ
Зіу вто Бін шу хек вго дер ахр обо ді Фі Це дев АБрорни Ага
БО БУ ат страница 425 ват 4170-59 пів біу мех вве аЇа бів іжи Уві Аа шій АБпоУв) фо вев тів Акр
Зіу вВго вер век о тг) Туг Чек дер Рг піу бен о АЇВ о Зіх маї жакофец
ОВО щі мк
Твиг обі шіу їн баг тую кух із А те фу Фі о фвв Ууді маї АВ. в рах тії ТЖо іуз Аїа діУ Уві теє туго жаР РВЕ о вве ій зв обів Бевз ага Ага хай ха 230 735
УВІ дів сіу Бі біу Бек обі Зак Узі 5ЖК о їви Аа рем Вів Без Бій
ТА та5 25
Рго сви Ага 5ек КАТЯ Аза піу Аа АР о АТа зб АВ рев о їнр чаї АЮ т5 ТЗ 55 івч Вгро Бго АТа Чет бек б) дів Ат Аза баг Аїд Бе сі вве обіти 778 Тт5 28 бішж Ар івв ген нів фец о зек Аіа 1У б)ів Ага вей дію уд)і ні ї2у
ВХ ТО 735 ще мі їнк бів АЇз Аг дів АКУ ніх діа тгрвосій сец тТвеобів бі АВ щО5 ЩО 515
ТвРОУЗі бен овіу без бе акф уві ТВгоБко біз їіфв вБга Ада бік ев
Бра Ше КО Агу о щеє «си «МЕ Що «Вії» Бай «212 ВЕТ «2і3» щтучна послідовніять как» «йаХ» анти СПіЗ(СЕВВ-2ВІ13 Ес-ланцюг З «виступломе-мовомеоний віганд «Не ОБО стваница 43
ВАТРА ЧЕЙ сій уві дій бом Уві Біб зекоб)іУ Аїда сії хв! бух уз ко Бім дів х ї 10 15 ї ї 1 15
Зег УВді цу мдї Заг оСуз іт5 дід пеб сту Ту ТВК ОБО ТНК Ар отЖе га 25 3о її меї ніх Тгб Уві ага бБіп Дів Бгто у іп щіу їдемо бін Тгромех зк й ай ! 45
Кк Б У «Ту Ту ЖХіз дп вто туго Аа АБ ОПіу Явб бук Тук ТНК ім вуж Ра за 55 ва
Ві обіу аго Уві ТВгомежх Тр обак Ар отв бек хів деє ТВг Вів Тут та їх хо меї Зі їз) Заг о Ага іа) АКб одег АБроазв о тТйг о аіїз Уві ТУБ Тук Сув
АїЖ Ага ошіу те отуг ТУ ТУ біу Бо біб Бен вне Аяр оту їгр су бів б5іу увВе ут оУаі тв омаії бако5ве АТЗ бег тт Бук бі Вга обеак її 120 і25 ча! вна вро бен о ді3 Вго Зако озЗве Бу5 ве ТВгобег сім бі тк Ав ї13а 135 ії діа вв» РУ Су» їжи Уві ух АЗрБотТуг РВе обго бів вго уві тТвК ха
Заг оТгтроАзи пеб о зіу віз фе твг зак обі У ні Те о РВа рго Аа
ЕЕ ТВ ЕЕ
АК я Кн
Уві фец сій Чек дек біу їв) о Туг бек оївер баг обек о мві ді ТБ УВІ 150 185 180
Бгоа оВегобеє пет фен о біфіу тТвВгобій те тТУБ зів Сузх Авап УВІ дай НІЖ із5 Мю 05 дув ко Заг ой тТвК офух Ві АЖвобУу5 Її» УНІ пін ЕРО вує Зек гук 218 тї5 «ЕЙ страмича 437 вАР-З170- 5
Ав офуз ТВе ніх ТВ Су Бгто Вго су» вго дів бко Пій Аза АТ ОТУ 230 235 240 віх Рго закомаї ве вжи ВО Бго БгО іу5 БгО ух АБО ОТГ о іви Ме
Ї18 хаб ода тако РКО бій тді їтвгосСуб маі уві Уа! др о хВі вк міх пів азровго ЗіБ Уа! уз вне дви ТРВ тує Уа дво ші УР пів уд! 275 УВО Ка
Ні АБ Та цУ5 ТБ ОБух Ро дру Біц іч бій Гук був баб о тТве отТух а 235 хо дго УВІ УВІ Бек оУві рез Тк жаї мезо Мі сій АНр о Терофбеу Ям; оту
МУ У Зі5 2 із ім Тукг вуз Куз бУ5 маві Чек азп оф у Ай Бен бі АВ о РгО зів 325 30 35 січ бух тТВк Ті баб рух іч рух біх бій вго Ага бів бго сів Уві
Тут ТВгогву вРо оБгЗ Суб Ат Ак обБіз се) тТВгогуз деп бів Уві дат
Зо 165 ман оїко суб ізц УЗІ Буг б1іу Во тТук пе) Зак Ак Її Аі Уві Фі 370 375 350
Тгвобів бек ав бі зіп вгооЗ3іц деп оляв тум фу ТК ТВг ово вро
Зи5 ЗВО 335 чі
УЗі нен ар бек Ахробіу Хег о вБМе Кбе ер тТук бак ух Бец тВг Уві 3015 БУ чі
АБ вух его Ага тго бій дів щіу Ап омиі ВВе Хеє Сух бегоуді кек 32о ах 310
МіІ5 вів Аа вен Мі дей ні Тее ТБ цій ж Щек рев бек рев Зак 3 345 сСтринииа «385
ВАТА КЕО
Вга Бі йіу КіУ БТ сіу бяг біу біу Біу біу Заг Ага б1ц сту го ще Зх 450 сім івц дет вко АБ яз БгО ЇВ бі ав ва) Авроїем Ага сій ФУ
Зах з7а АУ5 ЗО
Меї вне віз бів ца ма) А1й іа да ма іем ів їі Аз» обі во 285 90 5 іви чав тго тує че Аза вка бі ев із Бі ма Щек фівц о Твє Ф1у
В МІХ ки пі вев озер туго гу» (ій АбротВг ог Ух сіц о геу Узі Уві АЇВ зуб АТЗ 515 КУ. 25
ФУ уаї туго тує уз) вве вве бів ге Бін їз) аго дгорхуаі Уві Аза сіу піч біу Баг обі Заг омаї ек осв АЇВ вен мі ем сій Бере о фец 545 5 535 за дгоа Зеко5ів Аів о біу Аїв дід дід ів Аїда цем ТВ о УА1 Ах їв Бко 585 570 ЗУ вВго Аза бБегозек бій діа аку дай Хек оАїа вве о сіу Ве бів бі Аго
ЗІ БЕ Мю сем їни Ні бен Хег АТа оту Бій акфоіем сію чаї нія вер нів ТВ 50 мух піч АТ АгФОАТа АКе Ні Аїд отТтвоЗіп рез тв обів Бі Аза тне Уві
БО 515 БІО св піу дво вБе аг УВІ УР ОБ бів їів о вго А)ів о ЄТу ем вро Баг
І аа 55 ЩА
Рг Аго бек с «Ох З «11 2578 «бій ДНК «кїЗ» ШтУчНЯ снпідовВНЯєсть шШтранина 439
ВАТА КЕО
«З5Их «виз ДНК, змтис сов ові всеванцює 13 «западиною» динарних зігавд 71-24 «Ой» ЗХ своащіноває свт сватс Крурассова зсазаваемє сарувсвостке сзгквавосо
БУ вестосвяао свитсстззха свосжісвої заскавивкея каста кеВ
БЕ чно зколазазто сачвестас ветанссстаї всавсоан) сховав ах їх асспазацах поса секс озватоа асо стесовЕстс сао кокВх ве визмнаскоє стазаєтася бускозорає звссреоех вдстакеакоє мент аоє
МЕ твсхаєствсв зссвсвоаєх зЗекізасеас БазЗассвав півесвак папепвазе 350 пс тавоаса ссазвовоссе скоса сосок ссазсваасва засо
Я
Фрчкаєсав ссср стчов стро анюфастзсї сссссзаес сеча тспізЗааса ЗсаЗасссх Засстецн ЗсчК Тс ото: зла киш сах зеркс св ако асцит сівопацсси Факс 500 зестжвсВСсЄ зсавсоав ссасвнкос зсвасцесв водсовВасав завозу 5 кис феЗасанаак ссВсведЕе своп какс свонзжнтаа сік ох ях ас ва кссТЄстсЕК сеесстмва ссоааюнсВ ссстеаецак сесссвасе пскрномнеа саке осо воассасов всеісіововє савчеиоаає
Б аа всдосвінв озцааве пссваазсва адссоссаца ооазОсаакає й і весни авссатзюї сзасвисстс вс соствс ассводаско зспаавецоє хабовстаса звтосвНнаМ ссссазсзав пелстсма ссесссаїсва заааассвЕе 1056 ши ше странвца 40)
: ватри -5КО хссаадцєсв вадцосацеє ссодоивиса сни акоаєа сесмкжссс асомхщоудає 1050 заосізасса прадоссовт свосетєтїсо фасосуксв зар жІЄєжа копсовоєоас
Мао вікоссовіЗа васЗозазаз савтацоєве ссоовоазаса аствсвааавс сворсижисо їзмю час ачасе ссзассво стек скс зво аває гсвскЗіоов савозосацо 1269 тоЗзгазсчнр насос стсвкаСісс я ева жи іссцеа сСаАВКСВСВ: ке всзсвузаза зессостскої окссссозУє дузузсзасЯ сзвосозчаза аочаачаксє і5що ззазавоцеє спраестова ссставоає ссіскозає сасхроавес дсоззсазаза 1440 зкатетеассс микозіцеє ссзаваснта снктаавсо асо сх окосту кає засашссто заставу сококсвско асваооєузсс счвостаєва зузоудасасе 1560 завовасізи таб азскав со зиКи кастасЗЗЕ тост їсєвшнї зпайстосов ву засіцакоз сспосовавоч ат птаготокац сестра скит ї15505 зузтсєцкжа синкоссои хастсока сіцасаВо акосевсє косовосавє їтао чесфсссова зни саєе копоїттсаз псвозчстас касасскакс басподскао їКОО вк лоцом хщоасКщКВ сасвовммх мозцеюмраи вороєіка зсхзаевсво іо аск тасв фас зсксовот асссоссовов скссазсвов сс 52 засне ста зсвминю акстадазаз заасссМєЄ тврссксков сок ізо поЧстостав зістпвомсв Ффесагчіке поссвоастаВ мкс своавае тако
МН аттрмевє стсбпаосЕЗ Зсастосаа ссвериокво саоетчкє скепоаетоєі
РЕЯ щас Х асвазоваза квсвианона стзЗестоз ставаЗзстоє ск аст сСтюовницча 441 ват ЯМ -ККоа гц ші ах вастазавсх заздрю заст нкни доастсава азс се аа тав є вЕстоасвмсє аскесоаскех зерно стасвсвсх осот тоаасх ва казок спосВасекс фессомнс зозавсвоасе пекти сови й38О сішохюсвк: сама асвасеєсто осозазтаовио їабвсотеав зоасовавоєє скат досвоєтцає козирка ассучвкзо застав срмнеассї
ЯКО зпедацссва сс дат ля ках ЗІ «ех А «Мій» ДНК «ій» щуучна ПОСЛІДОВНІСТЬ» «Аве кежім ОДНЕ, анти-сціЗ(3Б3-25111-вс-ванцює я «виступом» мономенний впікавнд 715248 «ВА» 3 сгашатасваї соді свні: кодтостова фоавазазає сшнвоастжє сегтвазоко о щМиткосваво свкскосіка ссЄжксвосї заствовісва гасвскагаї сш секс пси. паж ас акжзасссве восвасзвояо птіссвватві ї5о вссЗвувавт тесвсвсп смесазкиа звссаосчвса «пістаїєс касове 4 ацчнрваскЯк сенс Бісеоасеає асо астахтво асокеивсе
В пасе ьвсв пієсвовУуст зем тас чинни сваЗз повела засос
З хскстнсв сова ЗісєвістІК ссср посфскисєма паосвосіи жвкнисвсаф сощесета коси кецє вадаскаст ссслоравос засо їсукацвакт свофосвссеє зассазсоє втосвсвосх кесмзвнжає ссгасавісє
МО птраница Я45 ват-я170-вка теовасекх зстсссісво падсріно асп ссецсацк и ропи всстаєвєя чавсозкчва оз Ннивсос миаезасса зах одасва пава кецая що песо зкпасаваає єсасвоакає сосок єс садскстоа Вас ЧеВацо сеасорєсео кежвистсК песссоваваа сосавоавсв поета стен
ЕН
«страдоеса савзеуче зоітвовсо воссвсоааа зссскзаяк саке о совтеоєю всеросціЗзоав зацнатазве пепіавнинав виссчсчаив сина чЮ заседсвсюй кексу спе ско весцісскоє вссавовстяа ставав веодвутася ваїїнчмеут скспвасайаа ЗспсссорУкое сесксаксвза Звавассвиє посовеека еМинивсвакс ссеининоса севозівасв ско кною соавовОВОВ
КУЄ пеостовссь вовесиаЗУї зпіпокакцо тоустопієв часі ска сбсопаНСЯАХ
БА аксоссатов враз свв саз ксщмнивмиа аскасавоавє сасссссосх яд пн торяся сжедасоФєВа сісти жхвессавас рисова само
ЯЗ песен зсавсакакх свртсвоє отавідевсо зр ескса сваповсеае
ЯК осо сестошссх савроксссоє чоамеася зазчсовмню апа вавдовоєх стшацетема «остані сек свеНо есть осоцсаи
ЯНА вкогт сах т щи нуЗни спазЗазса стпетавтсо щи со зсолне
Мо засувЕсК кВ засто) соахатсвокоа асежниссс сЗаастасваа Вова ваацвастю тоахспоссва зЗссочосоо хасівспак кекЕтіавит заавсіиоа
КУ
«шк сном сні виш Коси ВЖек сносскско страница 443 ваг-ч170- КО арвкстасів сіпЗсоєово хастсіозив стозсауєв зиск сє сеассвосацє падесссповм вівосвсакі Фоззі жїєва поємвоєтас ровсскЯєс поссозвоссаЗ
АБО юрюсивюезо хасВксеЗсВ сасвовоцєє зодастазає всзссіЗасв зстоасасво 1353
Ффостасєво тосеЗаесєсх зітеваавто всесссв кіссеєсве зок «ифї» БІВ «зх ВАТ «8і3» штучна послідовність елаОх «еаЯ» антя-свіЗгива- еВ всоАанцюг і3 «западиноют димарний пігана 471-0АК «Мн 313 бЗів жі вів беає маї ій 5ег ш1Уу Аїй Біч уві ух бує вто Бі АВ. і У 10 іх
Зег ха! Му ві Заг Су ж» дів Хваг о ціу ївг отв вве тТвВг Аж о тТук її меж ніз Тгроуві Ага бій Аїд без бі бів біу сем ожій тка мех 35 Я Б біУ туг Ї15 АБИ Руб Туг Авп АЗроБіУу ЗБК огув тТук ТВ іч БУ Ве 30 55 БО бів обіу агу мві ТвгоМеї Твго5Зек Азротвг о жегк о Кі» або ївВе діа тує
БЕ НЯ ї5 ЩО мех іш і8ц пег ого фев одга вк одер до ТВг о діа уві Тукотук був о зх дів Аго обі ТВготуг ТукоТув ФІ1у рго сій рем РБе А ОтТук Тер обі
Ме 1655 ца
Зіпобіх твготве Уді ТВгоха)ф его Заг діа бвг о ТВгору5 бі вго Зак 115 їі їх5 птраннці Я вАт-Я 10 - уко
Уві вве вго бец вія Рго Мек баг офух заг тТвг бек бі біу тваг лів іх 135 140
Аів кан о біу суб вемоУні ух АБ тує РВЕ оБКОо бів Без а тк Ох 145 150 155 155
ЩеготкВ АБподеє Бі ів ев пк баг обі жа? мі Те вва о Бго лі 155 гл 15
Уа дез озів Зак жк шім рем оїТУК бек о гфецч ее щеб Уді Уаф твроУуді ік 3855 іч
Бо ще чає Чет бери Оіу ївк бів ТВг о Тук 112 Суз дев уві Аза нів
НК 20 Кен їУу5 Бго бакоахв Тне о фуз уві АБ іх ух мі Січ го ме Зак Сув ків хіх ад
Азії ТНК ніх ТВ осСух вка Бк Сук Бус дів го 5ів діз АТХ су ках КЕН 235 ай
Піх вто его уві вве рен рве бго рго руб РгО вуз Ар оТВкК о іву Меж
Ме Ехо 255 їів 5ег зако чТВгоРго Зі Уугі тн бух Ууцчі мі Уві дер ув) пегоніх ккд ЧАК туту я ту та
Зв Аа го Бів Жаї вуз бе дна Тгротук УЗі Аз осіу туаі бів тд!
Лоу М ЗУ М зе хх
Ки шк МАМУ
Мі Ап АЇВ вуз тТВК огув Рго аг бім ім шій ТУР Аза бег твг туг
Коее 295 КЕ
Аг маї ат Баг ожаі ву ТвВгоУВі ви віз шій ах отр обез Аза о біу їх БК ване зай їжз щім Туг уз Суз уз мві бег лап ру дій сви оіу бів вго їі
Зах зв 335 сім овфж» ТвгОоїїе 5егоб»5 Аїа фу сіу сій вго акбф бів вго бій май 340 345 захо шптраница 445 вда Ей су ТНг ока: га Вго деб аг Азв бів Бей так обу» дей біб ма)ф я 355 з 355 івц Бег Суз Аа Уві Бу бі Вйе тує Б) Зв Айр її Аів мі Б 370 575 Б тквосіз ек оАлЕВ СіУу пів Бго Біц азпй аа тує Вуз ТК ОТйР РгО вгО ї55 353 Зо кю ча зи аз Заг Азроші бек о ВБба па івцо Уві его офув гац Звг мВ!
ЗУ 30 415 дару» Зег Ага тгв пів біз піх дз уві вве одак обу Звгомді мат 42 айУ 435 ні« піч дій іву ні Аза Ні тук о тТвгеобів зу 5вгофац щеб фец пет 3 з 445 вго пі бі бі 5іу щі бек сію Фіу Ф1У СТУ бог аг біз бік вто о 455 ака зів Кк) 5егоБго Ахродар о рго дія шіу іви івц АЗрогрев Ага віп сім 455 47 475 йо мет вве Аїд дій фбец о Уйі 3із бів Аза Уді їв бен Ї38 Ав осіу Бго
ЗК БЦ 435
Мен одег їгротує дет АхИ Бгто о біу свв АЇв бім маії хаб о івец твб осїТх мюЮ 505 що
Бім Кен бек туго гу Вів Аз отак ву бів їз УВІ узі Аїж фу Аа 51: ле с Й аа ЗО ЗА пі чаї Тук тук уді ве вне ІЗ рев б3з зец аг дгоа Уа) уві Аїд пі бів біу бег піу Баг оУді Загорев діа сер мі гемо йпій вра грец
Ага дер дів дід сі аіз ів аів рен дів без тТнг Уві Ащрроіву го
Ба ув ЗТ словница 445
ВАТИ КК вВРа Аз заг бак Мій Аїд Ага Аза бак оаіа РВЕ біу Ра щів дію Ага
Во Зх що ее рей Ммі5 ви бег АТ Біу Зіп Ага бе) Біу Уві Мі5 ем НІЖ ТВг ща Боб БОХ зів дів Ага АВ Ага Ні діа Тгв осів бем о тТВР пів бі а)а тик Уа
Бо 515 го іжч шіу дв» Не Аг ож) тв овБго бін їі го АїВв ту сем шіу Фу 55 53 БІ о іх біу Бегобіу бік бі «Ту хег Ак озім «Ту кг Ов беюб баг вго ах В: 55
АЮ Ахр ого АТ «Ііу іпвч ів АзБоісен ага Ов бі Мат ке дій щБій
БО Б кл ев оУді аій бів Аза Уді зав оїіву Т16 Аа ші ВгО ву его тто Ту 5/5 ВО БЕ:
Заг о ахр орто бі зевн дів су ні Заг оіву ТНК оту бі фев бек отук
БЯЕ 55 ТОВ іх ші АЗротТВк вуз сіц іви Уві Уді Ата рух Віз бі Ууді Тугк о туг тах тв 8 Й тав
АК ХЕ їх С БА ма! вне вно бій ім (ій ібм Агб Аго Уві УВІ ав біу Бір пі ет 725 75 тах
Оіу бег ма хе фам Аїда івм нія реч біб веО фев Ага Заг о дів дід тах Кві зх жк: ки че са щи божа жаче с чин сІ1Ж АЇЗ Аїд АЇа іец Аїд івн ЇВг о УВ) ЯЗп ої Вб Вго ДІВ хек ще 755 ща 755
ОЇ АЇй Ага Ай Зег Аза Рв Біу вне сія бі зга зви інш МІ5 ви чжту й Аж т х се
Не ТІ КО черг АТа дію Бій АкЧоієн бім Уа Нія реч нія ТВКобів Ав Ага АЇВ
У чо Р во сСтаамива 447 ват Я фл Ег ага ніз аіз Тгр бів мен о тве Бій «Ту АТа тс оуві рев обі ев вне 805 щі 85 дга чні тнковга ід їі Ркз діз бі оо го 525 «КЗ: З 14 «ії» У «вій т «КіХ» Штучна песлідсвність «й» «ейиї» анти сріЗСВАВ-сКІЇ1еКсСЯВМНЦИг З «ниступомає момомерняй піганд 711-248 «ВН 14 бів уві «(ій бе Уві Біб Зег обі АЇз зів та? бух бух Кро бі Аїд ї у: за 15
Баг омаї уз ді баг осСух ку АТа ек опію Тут ТБгб о РВе ТВг АЗОТУ г 5 БІ хіз мет нія тгроещі Аг сій діа Бко бік Фі біу ев бів Тер меї ла 45
ФУ Тут Хе АБЗ Рго туго Аза А біу бегогуз тує ТНК Об) вух вне що 55 ЩО сій бі» Аг ув) твгомек ТвгоЗек АзоотТве баг Бі Хеб ТвК Аїа тує 55 то їх ко мех бів ер бек Ага мен Аго Зак оАВВ Аа ТНК дів та Ту Тут Су 3 тн ЗУ
Зів ага оту тТваготуг Туг Туг Біу Бо БІВ ре) ВН дяр Тут ТР ОШІуУ мю 125 що бів бі ве отвгоУді Тк Ома! Заг о бег о Аїд бек о тТвг офу5 Піу вко За мо І2О 125
Уа! РвЄ ре зе АіЗ Рго заго хег вуз еготТвК Заг осіу пі тВг лів їв 135 140 страница Я кА Яі70- 5 І щіз іш) Сіу Сух ірври Уві Суб АЖр оту бічна го піц Ро МАРОТНР о УдІ 145 150 155 152 цес тк вза поврК от дід іш Твк Чак дім май че тро Ме тую ді;
Заг озк: вай БВг обі АВ мецотїапк ВК осіу МВ НТ ТВрОБпе РІЗУ АЛІ чиї пз; ем са су Зі «замі ее Щщлк хг Ша Музи ма ми тйг з
УА: вм сім Звгб ошає біу рвав отТук Баг Оки БЕгОБеат УВК Уві тТапК ові їз 185 ї50а вгл хег баг заг іє Фі так осів Твк тує Хі суб Ахп о маі АХА ВІЗ 155 З 205 ух рРгОо баб ач ТВгоїуб ма! Ахо муз Ку Ма біз Вт ух баг гу 215 22 хво БУК ЇВРОНТЯ ТАК Су его кгОо Сух рго дів вго біч аів Ав оту зи5 За я 24 шіу йго ХвгоУуві Не гемо Бвворео Рг іже Бго Бу Аж» о ТКгобем мех
Ах за У хів его аго ТВг века Бі ма! твВгобув мві ма ММЗ Аброуві сек Ні
МЕ ня ме
БО КУ 27 бів Ази вго бів Заї губ Рі да ТгротТує жа) Ащродіу зді бів чаї 275 ІВ У
НіЗ АВ АЇВ Му» ТНК зу ВгОо АГФФ ОО; піч бій їУг Ай ВВЕ ОТНК тут зд ах щю агу уаі мар нг хв цец о тв УВІ фено ніх біб Ах троем Ат пу що 10 315 БУ вуж ОіМ ТУ рух СУух був Уві 5ег Аза іме Аіа вжи) б1у АТ йго її
З: КН й 45 п НКУ ХО піч 5 тТпк ї18 хегозув діа бує БіЮЖ Бі овго Ага бів Бк щій Уа 340 345 зо
ТУР ТВб бец о вБгОо Без Су аг АЗО Бі Бер й БУ Авп бій уаі дет 355 БІ 355 сптранивеа ЯЗ вАТ-Я1У0- ВО ін оТтр Су єм хаї руб Бі ББе туго вго ек або їі АВ Уві ців 375 Ко За їкв Зі) сег ази Біу Бій ВБкоох1м Аа А ту рух ТР ОТВК РКО Вго 355 МЕ хах БІ чаї дез аБрозег АВ сіу Євг РВЕ РВЕ Бл туго Заг ув шо тк ма 405 а 35 азо суб его аг тгвовіб віп щіУ лев Уві Ве чего Сух бергохді мех
Б 425 ву міх Фіз Аїд іє) Мі Ази Ні Тук твгобів муз 5Вгозїем де фу дає з а чАх
Бго піу Шіу пі Біу біж 5ек ові б53)іу Є1у біу чаг АгО біз біу Бе аа ІВ що ім банв Зак оте Ах Ар оКко Аа піу сви ів а5роїев Ага бів біу 455 жа акЗ А шмат ВВе Аїа сів ісгцч ді АїВв БІВ азп Маї рев зви Кіа АБЗ обіу вБго
В о Б ін о Бег ТК отит Зак ода вге біт цер АЇВ о бім ха! Жегофоц тв су м ЗО що еіу мгв баг оТук уз 51) джротВк губ Фі івц о мві У вів мув Аз сіу жі тук тує жа ве ве Фі іви бід іс Аго Ага Ма са 413. 530 555 щю сі бін обі закобіу его Уві зебри Аїд оіїви ні фев обів Рерогев 545 550 5 ЗО
Ага Жек Аїа Аа сі А! Ат Аїд ів віч фен тТве Мі Або ів го хБ5 57 525 го діа хег чего біз вій ага АзМа Зег о Аіа бнае Зіу БВе осів оту ага
ЗБ зн ща стеваница Я
ВАТА іжмоіжши Міз бу Жег АТа бі сіб ака ев обіу щі мі іже ніх ТВ 555 БО в іч Аа га АЙ Аг НІВ ВІВ тТероЗів вжи тну бій сту віз ївВг уд що | ВІ ай ев оБІіу Мен Бе Ага жа ТБ ОРгОо піб їі вро Аїа Бі ве
ЕР. 3 «кі» 3555 ккзйх ДНК Й «Ух шщтучна пфсвідсвність сей «Ко ДНК, вйжкиай ялзмуюг вите- соМмнНявВи-О183 свиїівоі повага «а З саззіссво: са сВчїс срсова зесвадаває сіоавсєтс соакозаве зсвізсввод свазсцувив сассітсеси пасіка осв аЯаце свв сазУдес ї20 сек сван пістсовасу двлнвнасЄ зкінисжає зезасат Євессоааває 5 засне їісвоорзваз заїсасівів асаієстваєа ссавтвтсво своКостеає
За акнравстук сссессктко чісіовжаає вссвснуєак зехастотяс сауаЗасася тактом ветсвесксх пи знежах миннщемю заассвсває вас зо
ВесвсавНціа птн жс дес стто сссемивКас ссккстесвя засво
Ей пеннинасао спекою сеЗссв ваедни ас соком зако ко 350 щ«атопавсї свзисасоосх зассвос пасе осот сосок іїсвпааскет актессісву сага ассзїцесссї ссоарсвоске допсаєсаа
Що І же ахсх дсоваєцсзва тозсващкес впсаеасаксв зоЗпосвсва заваці сову тсттазакскеї зкачсазвавс ксвовосвтвос ссзсорини савасассїчв васаастОою
ТхО
Стрвнима 45 вдт-Я1л-УКИ своє сісвВое Хот ссксЕК сесптосазав сссвминов ссостсатаве Єтессове сни сставонвісєв сацвкаах ппріадас поссасван апссібевзч; савуєтсває ко тооасасєаков песни осова фу акаай дссвадцаєва воссосоцяа повоасавтає
Ю закадвсвсві вес оУх кавсокеєсти аспкоєіє асозораєто устано че
З звозаздіаса вассавукх сіпсвамсвая Фисстоссав соссссаков панвавссакє ї020 тссадацсся звопдосеюс ссзаааассв семраеасв сосни ВЕссосецоде
ЗБ зазскозвссх вовассацаї сарсстасєс тасскаціса аздаокітста бсссаЗсзає ца аксвссчко) ваза свзаїсиняні созазазсз зотасавовс сабо 1500 чиЕскоюаєї сами сттстїсєТс квомстм їсассотов савоацєазу зезсвосу мн цажеЕж схов сс попаде пос счия своє асчкацеавив писжекееек акссссни пад нсафавоВ З що
НЕ
«405 316 «й1їз Я «40 ВЕК хИАї» ЩтУЗнНВ гпеспідоВвнаств хг хи2З» Важкий яаницюг анти СВІ ЗСВВВЯ сито сІ вм АБАЗ «АК» ЗІ
Біп уві сій фецч уві бів бег обі» їз біз Уаї мух вух вго сту дів ї 5 їй 15
ВвгомВі Бех ув) Зег о сСух гує із Зако обі Тук ТЕГ ОВЗНе те Ар оту
Й за Й Й ЗЕ й за й «Й сх 30 їі мек Ні тгроув) аго бів Аза вго бі бів біу іш єЗ5 тге мах
І й 45 сбтвавина 452 вАТ-Я170-ЩЕВ ще -к я пк пах. сжрлк сх шко ув я ватки «КЕ - «Кк. х
Зі тТуг хів ахв о Рго тк АБ АЗИ піу авг обу тТук ТТ Я1Ю бу РНе 5а 5 БО пів Ту Ага маі ТВГ оМек ївго Зако Ар о ТВг 5вг Ї1фа3 бе Тв Аза Туг 2 та щи мет пів еу 5ег Ага ів Ага лег АЗБоАЗе ТВг о АР чаї Туг Туг о Суз хо зе Зь «ів Ага Оіу ТВготТУг Тур тУК йіж его АВ іу Ка Аз оТуг о їКо Оу іо 10У ма віп овіу тТвг о тТвгожаї ТВК УВІ бек сег АТа бек ТВговув піу Ро Баг 115 2 185
Уві РБе ко ши Аіа рує баг озек фу его твк бек обіу бім твг олії мо 135 140 ів їв бі сСух ев маф обжв Ажротує ве чу шім Вк о УХІ Тл Уві
Зек тега азп озеро озіу дів ви ТР ошег бі уд! ні Вб вне бго дід
Узі ши о щіп бек сиг о бім сви Тук бек огрецн бек баг о Уді мі тек уві 150 їК5 І
Бко бе бек баг бе пі ТВгоБів ТвВгботує бів Су заяв уві дапоніх
Мже Бга бег Аве ТВгогув чаї Ахроіуз вуз маі СІЧ БгО рух баг огує
А5ВОМуУб ТВКОНіЄ тТвК оСух РКО РгОо Суз Ро дій вго бів Аа АЇВ су біу Бги беєб Уві вав орФфе не без) го ру» ко рух Аза ОТВК рено Меє
Тіе бек оаги тв овга сів Уві ТВгоСе» ул) ча) уві Аа ма! 5еконів по 255 жу страница 455
КАТ-ЯАВАЧЕО бін ази кго піц Уві був Бе Аки тТевотук Ууді Аяб осіу й! бів Уві ех КО міх
КК: ІВ 5 нія дхп АЇВ вуз ТК уз ВГО Ага бів 51 Оів тТуг да Бек о тТВготук що ЖІ МюЮ дга ар хат ек УВІ рев тТВг УВІ рено нія БІВ АЮ ОтТгр ові Ап о с1у вен Зо 315 330
Бу БВіц тує бує Суб уз чаї Жабо Ани іуз аів фем Фіу вів Бга хів 185 3 15 сім вух тТвкОХів баг рух аз фу бі біб ВгОо Ага о зій бе іп мді зай за зкаАа о ча паю
Яук Твг їв Бко БгоО Зак АгО АЖВ бів ж» тТве офУХ Авп обі УДІ щК іа Тнг гу» ви отді ре пі БВ: тує го дег о йхи тів їй ді «к їж те Ку ви ові Ух сі БВ ОТує Бго 5ег 850 бів дій УвЬ ід
ЗУ 7 ЕН
Тв біз чего АБ ООіу бій кго Біб АЗп о аап Ту уз тве о ТБе вго рКо
Зк: за 95 аю
Уві Кен ази ек аз обіу Зако вне вче зво Тук бек їух фвц ТвВг уд
БЕ: 410 315
Ажромув Бег овго тер овів зів бі деп Ущі Бе бег о Сук Бек ом ее
БО 425 аз ніз бів аі8 вен ні дяв Ніз Тут ТВк сій ух бе ре Берг вай Баг
Аї5 Бе в віх» З1у ту «21 317 хаВМіх МІ кій РТ «813 штучна послідовність «ВД хів» АнІЙСЩВ СЕА ТВЯ БВ, МН ствзницв За
ВАТА ЗО
«МЮх 317
Меї іув См зве откроуа) їЇї« ве оБвж їзи мес Аза Ущі Уві ТВгоТу
Уві Ав ет Чім УВІ біб вав обіп сій 5ве о стУу діа бФіц іви ві 5
КО КЕ 30
Кго щі дів Зего Уа? бух івц чего сСух ТВг АЇВ Зак пі яНе лкла т1Є 3 Я 35 їж ох Тс туг мех нів Тер очаї буз «1 Аг его га Біб бу ев з 55 5 «ій Ттроїіве Біу вагу Ті Азр ово Аїд Аза біу Ах аб о буз туго уві
ТО тк о рго рух Ве бій бБіу ув Аїд тв хів ТНК олія Аз отв бог обег аа
ЗО Зх
Тк діа тук фен бів цец тб дев бем ТВг бек Бін Ар отв о А1їа хв 190 ще Мо
Тут Тут Су Аїд вка вна біу туго Тук Уві Зак ар оТук АТ Мех Аїд 5 155 125 їУб о ткв оту бій сіу ТВгбоБає жі їйг о УЩі ЗвкК баг 153 135 їі саі0з ЗІВ «Ей БЕК «Кі .М туУЧчНВ пеЛІДОВНІСТЕ «ЙО «ВА» Анти ЄКА СТБЯА Б, М сю» 18 меж іш тйг оавр ТВг овен їн о гец тре УВІ Бевзоії каш о Тго Уві рго 1 ій Ки 5 біу бвг отвк о біу аз тів Уа бен о тТве оБів деко вгОо Аїд сег рев Аа за ЗЕ Кк
У ГІ ЗИ страница 8555 вата 5Ев
Уаї Заг бен обіу бів ага дій ТВгомМеї бак Су» АгО АТа ФУ сту ог 35 й 5
Узі Ави Хі КВе спі У біУу БНе це НІ5 ТгБотТУує Біб бів куз РКО)
Зо 55 щі щ1у Бій РКО Бго Муз рец фе Ті тує аку ді ЖК Абй Мем оцін бег то ТЕ Ва сіу їі8 Бго Уві ага вве баб обіу ТК ошШіу Хег АдКе тб АБ ря тТаг іжи їі її др йта уві бі: Аза ав врожаї Аїд Те ту тТУг Сух мою ТИ о піп бів Твгоазй бів азровБго тує ТК овБе щі Фіх бі ТАагобуб ев ів рія кув хів ЗАВ «ЯМ 332 «125 ДНК , «2132 штучна послідовність «КО «а3» Песлідовність» зкаайторної каркасної діявния важкого ланцюга «ню З казузчзскї сстадксоств возстоаоза воза ссто чіктауктай зараза
М хсжслсссск вчи ссЕсхс своя сазкоссавзО сссаосцюх зсзасстооЗ 120 зЗклмнки ца вовзеснь ніссксвєЗ за жесї свацаєсе рум 150 сткавсвоуєт акастате) скуцукоєдв сарнсопсс дасвеудеєх патч
ВЗ февзуатий тесскатссї тодтаєвасв азстаєвсас зоваатесса дозсзвоаВоке ха ащвісвссЗ сзпасазахс своє оессхасаєні востовосає ссхувавжи
ОО заааасасоа ссокагакта стола за стванива 455 щщк РАТ-ЯДИ-ВЕЙ
МЕ хі» ЗО кої 97 «кій ДНК Й «ФЩіУх Штучна пюослідевність «хо «й» йзспідовмісте вкцепторвої адкасвов діяння загкого ланцюга «Ку: о піцшвесбв вазсісвосх ссср касектосВо уоесессА ФС
ОО
«кхтксвнив сесзенісав сс їса епос озЗаааскоє ков квоа ї120 сссвовоечоа асоевминМмр ссссвоскоЗ ЗСЕжежетс шТИпсВоЄе КепОЦеесе 156 Й зиичнювивю аасахоавнує зЗзУктктсвсо ахбвецвав вежеттесов «єства 4 зсвасазата тваїтваває Жсавзайзтвив ссвасавкїж козсесівОК свавовеаої
МО знов стоваїтаєвк запбцивЕх сецЕкітаАке їссвасттєсх заїассиєко
ЗО спзазавстої зктоасвсва ссср В сопло остео чВаеККов. : с а2о скескссто сацооссвеак сачазічіха псапехвстХ вс хає павсвааве ря кіш ссопаошижс «сві віцсевіссне свувУссвее часа
З ссаошкосвВО кас темне встксастеох сасовкеВє соски є ща піозазайєкі жчсувжкак какао арс заспів стос жесс вовна ите
ЗК сеаваезвс авжамнзжсса асазвавссах сяптозїває казактвжїа касок мк; З со
ТА В
КЕсСситВсв сасВосІаяк зКкроассв сосні та саке аця стає 95 Е ТЗ КЕ і: В Я
ТО каски аЗ кон ВИК
У
- стИаниця 45
РАТААТЛЬ КО
«М ЗА «ав «ай» РАТ «ВАТ» щтучна пПОКЛІДВНВіКУ В «ЕбУ» АМмтІМйЗСКА СТВА, БЕЗБСНАЮ, СКАН «Ам Я
Ав отак тук Мет 3» 3 5 «3ім 19 «ій РА «гій» щЩиУучМма посліДдоВМісСтх «Ай» АМТИЗСЕАСТВА БА СНАХ,. ЄПАУНІ «Я 322
Ага бів Ав овго А1ва дяй піу аяпоБег цую тТуБ Уа! БРО був Не сти ї 5 іК НУ
ФУ
«Мт ЖАХ «1 35 «Кі0х АТ «213» виучна песлідовність «ад І «иФа» АНТИ СЕАТТКЯ БОЗСНАХ, СИНІ «00» ОЗЕ3 вна піх туго туг узі Бек оазв о тук А)іа маї 413 Туг і З 18 «БІЙ 14 ха «Кфйв РиТ «35» штучна послідовна сть «йАКх й «и2йе днтУиЗСБАСТНА БО СНУ КОКН «Ах З8Я ствамиця ІК
ВАТ-ЗІ1У0-5Е й ага ів біу бів ввакб жа! аАЗВ їв РВа бін Узі БіУу Ве ім о нЗХ і 5 1 15 «її «йійх РЕ «3» Штузма поасліДОВнНіСТЬ «Кох Й «ТИ» Анти СЕАСТВЯ ВБСНАЮ, СОКИ «300 325
Ага АїВ Жак АБИ АБФОдія ТВА
А 5 «ії» З «рій» ВЕК «ЙКЯ» штучна послідовність тюлю. тт о и ни Зону ях «ВИ Анти КВАЄТВЬ ВБР СНАВ СВ АІЯ «но 525 спів ошій ТР оАяВ Зім дер ово Туб ТВЕ 1. У «211 123 «212» Вт «Я» ощтТуУЧчЧНВ ПОСЛІДОВНІСТЬ «иа «йеЗ» Батьківський СКАеЗВ'взуючий вгемї. УМ
НН ОЗгу оін Уві сій іч бій бій баг обіу зіз Біц ва: уві бів бго с1у діа ї 5 15 1У аг оуВ! рух бвмодег о Сух ТВгоаів бег Оіу рве АХА 16 ру АБЮ ОТАК «83 25 30
Ту кеїг Міз тТгромві їух бів ага Рго біз сбіп 5іу бец бій тро 18 ї5 АВ ЕЕ
ПТУ АгО їі дер о рРго аз Аа біт ам бек огуб Турко ма кро іуз НЕ що ї5 щі
Стуканяцв Я
: ВАТА ВАР БЕВ іп ошіУу бух віз Тер ої1е тТВг оАЗа АБрОТнг чек Зак ода тн ОА1я тТух
НЯ 78 25 КН іїац сій фей ТВе доб фе твгоЗегобів АхротТве Аза УЗ) Ту тує Сук
За ЗУ
А1В вто вва бік Тує Тут ув) его АБ отТує Аза Мах АЇВ Туг ТЕ ОМУ що 105 Мо ій сіу тає Жак уві ТВг Уа! баг обер
І 126 «из 328 «кА «аКив ВКЕТ «ії» оштУзна послідовність «кИйх й й І «ІЗ» Батьківський СКА-ЗВ'язУуюЧчиЙ ВгеЯНтЖ,. У. «юю ЗВ дев хі мА? ем тв Пій деко рео дів его гей АЇа маії баг бем Ціу ії в та 15 бів ага Аа ТВг мех Заг осуз Ага А1В 1У ім Яеє уві Аза Хв Р
КУ з 35
СУ в; - ві маї бі Бе вен Мі Тгротут щіп Фі; бу кро бі Біб вгО вго) цуз іши зви 116 туго АКРФ АТа бег дай ге бів бегобіх хів бге уд ха 55 о
Ага кре Хвгожіу ТВ Осі бекоагоа тТВгоазв Ве тТвКобни Т1а Хе АБ "о 75 хо вка оУщі Бі АТЗ Ар АБИ УВІ АТа ТВК о тТук тує був ів ЦА ТВе о АВА
КУ ЗИ чу шій деровго Тут ТВговВе о біу Біт Біу ТвВгобув кн) сім їі рух : Бе ща що страница з
ВАТА КЕЛ-ВКО «Ох 395 «Вії» 42 «ака ВНТ «Й» штучна послідовні»
СОНЯ
«ИХм анти сЕДІТВЯ баЗЬСНАХ, УМ «НК» аз 5іпома! бій фов о Уді іп бак Мі дів шім ма) бух бух Рг бі бар 1 х 10 їх
Звгозаї бу» Уа? 5нт Сух фжх АЇа бек Оу вве Аз Ще фу дер тА
КА Й 25 Й В о БЬ; Ге
Тук меж ніх тт ді Ато бій Аїа го міх ів ШІУ фев ів тм) Мет 51У Аг Зі Ар овгОо діа два «1у Аби чат рух Туг УВІ ргОо Куз ВЕ 5 зів ші ага Уа тТВе їі твгбоАїй ар тв обакотвне хар оте АТа тує 55 То 75 8О меж бів фен Бог одаг оса Ага бег о йі) до Тв о Аїд ма Тук тує су
ВЕ 7 У ох І
АЇВ о вго вве бі туго тТук У баг АбротТуК АТА МВ ОАТа Тук ттвробів
НУ 105 це
ЗіповіУ ТК ованоха! Тв оУВІ бек дет сій ха)! бів ре; Ууді ій 5ек 115 іо 125 сік Ав сів Уа уз фу Бго сту Зоб ощек уві фу ді Зако буз фуз ї135 їух о
А1а Бак сію БНе дяп їі фу Ар о їВК о тТук Ме Ні теромні Ага й1й ї15 що 155 150 віз рго бі бів біх рен бін тго Кетї сі Аго тів АБЗ вго аа Ахв 155 їй 175 бЗіу ап о Зек фу Тур ма! кго руб ВНе сів діу ага уд) вро твг іо 155 ую страница ЗХ вдт-3175- БО аїз во їВгоБаг тТвгоЗає тТВгодіа тук МЕЖ Січ іви сег баг їз Аг 1 ЗОВ ЯН хак ів дев тве дів ді тТуг тут бе дів рко вве оці стр отку Уді ак о5)В АВ ОТНК дів ді тег ТУ Су мі вро вив ОБУ Тук о Тук У заг Аа тег дія мет діа тук тгв оз сій «Ту тїВгобеу маї твг уд! 2х5 3 15 240 хаб Чак «ЗА З «вії М «пійз РК «ФМІЇх Штучна песлідавність «еййх «ЖЕ» НИЗ СЕАСТВЯ ВОЗ СНАУ, М «НІ» 53 «іш Кіз шмаї рен тв дів зегоБго АТа тТвб фоц ет без Зак обро сім
ОБ АГО АЇА ТВг осв Зег о Сух аку віз біу Біб вк оУущЗі АБ ЩЇ18 вне 20 25 зе я БЖУ; «хе соту УВІ піу вве ге ні Ткротук бів бів буз Бе віх біл аіа рго 35 ай 45
Аброівав се їі туго Ага дій бек одюа АгО АТа о тТве шік ХР вк аїа
БО
Ага бле баг обі беакопіу бегойіу ті А5робвВе Тег орем о тТВг жів де
Зегомен бів Рто бій Ар оре Аїд ні Ту тут Сжа бів бій тТвг я5п 55 КІ 5 бів Аа ого тує ТВ оБн» Бі щівп дію тВгогех сабо ів ів Був
Ммю 105 Зо стовавица Я
ВАЖКУ ВАК
«КАМ» З «іх 1553 «21?» ДНК «і» Штучна ПпПеллЛІДОВНІСТЬ «аг» й «йай» дек, анти скАСТВА БИ-ЬСМАХ, Бо-панцює із хзападннєюве «ре З співа сВвак хан ес приеоссдпава ча ваве ссчонцєвоа соски тис ваза спасає сзасахсвав засапстаслі ктосастода зеасоводся ї2о сокодвововЗ застозвата дасззоасаза асспаєєсссо «ссаасоскав се«зсвавкає чкдссоваци Меса запас сви воссоссласа ссовосасстє сис тає
КЕ зидинмсоав спі нся сжнзмерас зас птН асбвототє «жесту хвосхасамах соасл свині км зовсвокеук ассих щцктанвка ссавоецисс скла кекк сестри с смена зецсвосвоє
БУ пас асва сезстстивр стос ваовиїаех кспсесовекс свЕщессикО тсстопаасв зсоовасссю аасіскас Фк лнноєх есери зві всвмах х : : Нео їсте как жадсствау сакутако восзїчеоїе сіесарост ооосасссао яю звів воза тиза совок аврсваєсаєсв возтоцасаз паза о сссевовоаєт дповсважвеє Сасасатає созвосфюе свосжексвов анстасаосо чиассатсац гекеесхсхк ссессссоаача сосна сети піс я секта ся саке зав о вессасозаю зссстоацах сазоттса
ВА сук Всо ми аспек аз обхцсакааК Зссвадцастав воспеоов повчав зи азаМсадснаиї восотцівеє сеесптесяє песякестЗс ассвойаскеа зпзаВое
З І І Й сСтванина п вАТ-ЯІЇ0-щЕО авазазсася зубосавсх сжесваєзаа чессинниз сосссаєсов зававссаїс зло ктсгазаосса ан арес ссоаозаєссвз сазана єсствскоис все 1089 пвоастзассв зуззаєссвов сарсстєстсоа осорсвссв вести тв їсссвосаВо 15 вжссссвівоа азтаовадац савсююса ссочувоавав асо са і ше качасе спиш сис с оспазсвацс тепвссакоча спимНи КИ 135 твоасарвсвсюв співає єтЕ стсацвос змиви вази «евокаскає 1320 всясвоваса пс ссст зони ваз «кій НК «хї3»м Втучна пестідевністе «ДВО «ії» ДНК, пегкнй ланцюг вити СЕК ТКЯ МААКНАЗЇ «а ЗЕ падаісвас тоасессеню ссепіссвос стоксаскаЄ скссвоЗеєЗа ас стадцстахв спедссенсоаз падспоавє Вісті поцосЯ гтечааїи сага їх семаЗасвє ссср спосо) ск схе пасом ав сосочка дзсакемо ссадЗавжеєс миісвюєс заспсвссоа асжієвоссї звсваковує ча заст зааас ссоувоудчєкї сросонокає састасснє зЗасесвасяв фессскве 300 закохана во саесва човна веоповаєов Бе тасвс ВККС
ІБ ассжксоссвє спїсїозпаков освоїте котецавеко сстсжактаЕ чес сЕкко
Бу азнтзасттст ассссвоаоа чЧоссвааака сша цаНоз пеаставсє сскссаатсЯ
Я жання вермезакх сасаозсво засвесзаца всазевеска св оВее
Б стидница че вАТ-З370-ЕО аЗсассстза сосна саз восазастас задазаєсваса зазісвасос схосопваціє що всссаксвм дссізавстс зосспісаса азоазасексоз зовооЗаааВ ої ціа ща че З хкїр: ЯМ хЕіжв КТ , «Кі» штучна гпеспідсвнієть «Во» «гей» АнтТи-КЕА СТ ШОЗРСНАХ, БселанцЕн їх «западяамовк -мюх 313 біп уві бій івц о уді бів Заг Бі Аїд зів жа груз Бу5 Рго бім ер 3 а 18 15
Зк Уа Му Уді 5ер сСув гу дій хег піу вве аз Їів губ ахротне тТуг век оніз Ткроуві Ага бів Аза орга бі бів бік фей Фій тТгЕ мех бі ага їі аз; оБго Ав ах Бі Аза Зак цу Турко) Бра фує ВВЕ
З 55 ЩО 5зів Бі Або уві тк чів тве дів Ар отве шаг ТВе бог о твгодів Тук
МЕЖ сін во баг бек о івц АгФф ша бін АЗО ТВг ові уві Туг Тук Суб мс З з аа ргоОо вне сіу Тег Тег УВІ йвб язротуг Аїд Меб Ав тує тер одіу сій біТу Тк обац Уві ТВгГоУВ)Ї цеб пог аа ве ощаК вуз Лу во Хв 135 їз 125
УВІ ВВЕ Бго ів АТ БеО Зерг Заг груз фаготТвг Зак обіу шіу ТВг Аїд 150 355 кет діз ізм біу сух ви мі БуБ Ах Тур обіе вгоозіц вго У81 ТК уві страница 455 ват-4173- 55
Хв откр дв еко сіу АТЗ ев тТвгобає сіє Уа Ні ТМК о бНе ко Аа їх 170 ІЗ
Ууді бач пік ек цеб о біу вав о тук баг оіїшу ве Хе ові уві ТВкК Уві тва 185 та
РгоОо баг Зак бак їжи о шіу ТТ осі ТВ тТуг Хі Суб ХВ Уа Ай НІВ 135 а 205 уч вк опег оди Твгокуз таф Ав огу» уз тд ші ккО рух Бак о сСує 216 15 228
Аврофух ТРОНІ ТВгосСув то Рго сСув рго дід вго січ АїВ АВ ФУ
КЗ 238 23 843
АНА ет В лози - "ях січ ср ко їх ї У ке - я м. сх
МУ т ЗУ ях ЖТА й ТОМА нирку и ен и и Яд т ЖИМ У се нь бі ве Щек оуЗі ВВЕ | «оче ВКОо БргО Бу КО Ух А тТвР оре М й 245 чи М пк ме щи си її» 5агє дво тс о Бго шій Уаф Тв оСух Уві Уві Уві ав оУаї Бак онів го м ат пім дер ого бій УР Ух Не АЗИ Ткротме УДІ Ар обі ЖЖ осів хв! нія Аз Ата фу ТВК офБу вто Аг оБіц бів ій туго Аза Чак ТВгоТее я 235 ЗО0 зго УЛ! Уві Бакоуа! вен тнк Уа ме мі іп Ар Тк оген о азп оту щих мо 315 БУ іуз Зів туго бу» буз ух Уві Жает АБ іх АЇд рев бі АТа го тів 325 З 135
ЗІ оку тк оїів 5еє Буз АТ їж» ПТУ бій БФ оАке бів го біп маї
З Зах З
Су ТК овев рго го «г АКО о АБрОФім фівц Твгб огБух Ахп бів а ак
ЗУ ІБ 355 і«ц Заг обуз АЇа Уві ж заіу Ве ту йко веб ав їі АЇвз Ома? и
З ЗУх Зк птранице ЯЬ
АТО КИ ттвошім баг ап Я іу піп Бгбо бів Аа АВ тує Бу ЇВРОТВР овкКо Бго
ЦЕ «а дер дк» ім ет ве Ва оівуц уві ще я; іржу Твробді
МаР ев АЗИ бер АквошіМ его вве вве о їом Уві Бебобув вжи Те ОУВі дах а 415
Азв із Каг дгу Ткрооіа бів бік ахв ді вне 5жгосСУх деб Уві мех адО 425 33 мів біз АЇв баз Міз дна Ні тує ТВг Осій фун баг овен бвгобеМ ве
Гея І Й Си «А ду
БгРОо осіуУ ух
Я5о «Азії» лів каїй» ВТ «іх штТУЗнНА пОспІДЕВНЯСТЬ «ВйОх | | І «Мой» Нагкий ланцюг автиескА СТВЯ де СНАХ
З й
КБУХУКАХУ ее: пін хів жа? ївец тв бій его вго їй ТВгофеб; еко івц бег Рг бу бін яки іа ТВк оре бек обух га лів щік шім чего Уві Аза оХів вл» зп МІ: і 38 що 4 ти зі УВІ іх вп сен оміз те» отук сій сіб вух Рго біу іп дій вка й ЗЕ ях й я
Зх ЗУ ЗК ага іжц о іву Ті тує АГО АТа его Аза Ага Аїд тк обіу Х16 вго Аїд
Зо 55 5
Аг вка бак обіу бет о Шіу чес сіу ТВгб Аз оВВе ТВг гц тТБе Ті Хе й 70 75 ко
Хегоржи біз Рго Зім АБ вве о АЇа УВІ Туг Тук бух БІЙ дій ТВг ден хх хе. ср сю сте Ява о мк ьо жви з нд вк п хі жує КІ
ПІіМ о АЧВОргО Тук тТВгОвВае оФтуУ біб бі тТвК Бу сво дім Хі іт Аг странвцв 557
БАТ-Ч1У0-ЗЕО
ТВг Уа! дів аїд вко бек Уді рве Ті Бе вго БгОо чек АЗо іч бій я Б 125 мервогу Зегобіу ТВ о АВ Заг ома? Уві Сех фвц фе Аа аж Рі тТук 153 135 з
БгОо АгУу Бій дій ух УВІ бів Ттв вуз Маф АЮ дп Аїа бец бій деє 145 155 155 ко біу азв бек обіп біз бак омаі тТВгошіч Фі АБ лег фу АЖ бак о ТВ 155 їі 375
Тит Чет фви Хе Же ТВгофенв ївйгорев Заг оїув АТ дер отуєЄ Оїч вух 150 ї55 їх нів уж уві Тугк віз Сув щі: угі ТК оніз сіл Ф1у ем его баг рве 155 ОД МЕ заф ТНК вух ек ВН Аби ага пік б Сує «Мія 335 «ії «212 ДНК т зу Мієеківмо п е за ен «1 ця чна слід ан кт «айїМ ДНК, вите-сСЕАСТВЯ ВА СНАЗ-Бсоланцюг 13 «зайадиноюедизерний ЗВТ «НИ» 335 сазакосаює биисвУєс мокесова зкозадчазає сесрнзчиаз соусоавацека 50 ксжіосаво) ссср савсвтсввь засвсствса бас коє аспек : 5 Ох ВСЕ,
ЯК
«стюовсвоу дассюазн заспацвов вісувскову сежвомеах свусаватає
АКО птіспсссзаат сссзцоЗса азсовссвіс вссцесовов осжрвсстс сассоєскає 240 акшовастпя честю завасое вок аск каЄ сссстесооє
КЕ твстасаках ссовстасос світа Биншссавою зоаовстєвк даси ставаница 458
ВАТ-ЯІОА КО
З хсжтостався созявееске ЄЕсоБ є ссср ссвосесав змнассаох дО паса косо стеасствнс азашвежвосї фссссвсс співи
ВО вис юазся зсрнкнжсх чвсолосаос зи асвсшх посох сто свовВиї її я вставок асжстнн своасоїовтс звскугисткх сійавсваасит дфоцеасскай мк вста с дсазсіоа ссвсваеск мркаасатов щозкораєаа земна
БО сссавзаж т Зсувсваваєс бсасасаєдс ссвесукчєє свосесестоа зрохЗсацоа
Те І шо шина стс ТсІККсЖеКЕ сссосссваве сосвезевов кесжсвивах скепоНмНио
ТВО справа тсвз сакеасеєтн фас ауссвсазау вссссзВеах свахісває
Бас трасою асо мк аєаак зссаасза аоссосчаза зва кве
Ка авсвасастак зосзкакчає сазсуксеко всезссетас ессадовсо земшрвекоче аашщкнукасв восочєжнх Єбесвзасата зпссіжев ссспентнов зазавссаке
Мо хссчасасса вада «нн соя серзсокока сосна ссс аксссоороуцах
За з тазкса возаєсвеух саосісісо сасоцсвассв вацестієта песо ії взтсєсица зачин кевтоикаоа соркемаса всіавсвавак секс їз зижеункм ссзвсовеско стсітоЄ віцаасвавс бтассаконца снадацсвоє зло теусаре шими ск сісВвіртек іменно застосо саассвст ах їх асасиоавоав осстетеєск отстссоюоє дово цасо оавосаачеа вузу ззадацнвсе киімчцн аа «окопах секосіаас ско вКсх зок 14 страница «че
ВАТА ЦВК И візі тоехс зрезвус сомів скосіваксв він еекех зе
КИ з ааїсств даскувсхов сен евота зеснвиющеєс брерсїасиа авадаВсвоє ззацвтнию сазіпвохсза часова бастасоакає співа сЕ Зоазастасоо 1520 зузоковісю сен втєжескся зізієтста сестосатєю деазсєкеко їБКО виааста ска клУю вена сно ВЕК щесКсК СВОИ с їй звацсссоан зізасзсатх мук ЕксзА фс секс пп 100 зедстеню їсатетеов спсошоцеє зодеасежне асчпечнса зстоавсвесву 1550 чсвскаива коЄєточасск Фгксвн висбсєовм ЕтосвоосюО сок зах
КТ ссашзаацко запасам своє посоцавевє сілрадвоаЗа асокозвасто
Мо тескстнко яіесвоєсву чеками семннехнею Зазтотіс совок
БИ
Вскспонявто спстоаєтаАЄ савсрЧвессх стзвостоаЗе вссссовесс зас тацса че че нниссс тоскно астоієстас вавчазаакз саавацавє КН овсЕ 2150 звавсцвюо каіастакак чЕКТХІхсВа стдоваскза востовує вупіова же пчежежмнни стрес засос сі назосає ва стсот мона
Ж пит сесІоастаК свапстоксВв совоасстста перазчсевоа асо а хни сс вадувосокх зскоусакста азсоссорає мкзсстодоа асо
ВЕ кетастзацюя ксвоааасссо оса мзю свеєстааске мноодсває ге гоова спек тоасеасстчв даїссстасс пазскассза зчессказакс воаа 4 І «ей ЗХ стінні ЗУ вату «Мі 3335 «2125 ДНК «ії» штучна впоглідовністх «Аа» Й і «ий» ОДНЕ, анти СКАСТВА (ЗОУКСНАЗ КсоЯВНВЮг З «ВУстуОом»-мовзомарний ЗІЗ ОСИ е5Я «МК 3 сачІчсВМас сУхссенкс аку ссоаз Фодазчвавео серронове сакоаачакуа кссішсавоюв ссозвоасоевЕ савосвусево свовосствив фовВсЕ зи свОцк 120 сциноенач засіпонасо чакачасавов вксовпспео ссвамеесваа спос ї1КО птрсссзаце ссоззчоЧдеаз зобов зисоапоцвов сек сопе
КО за вств воза одазсаоавсо асспслоц воском песен
КН таствсотак стоазвсхаєцє саворресках кррссаой Зевс пасеа 380 мист вка сови Кнв с зЕсоВІсТке спосо певосскссвВа пдасасиех пючосвсва соассстооа ссскоазс звозв кас бсссоавВо дим Зоо зако спра свозсасспт зассачс зпасасвоск обсте ссхвоваТох тсвдовВсЕКї встссестсва сао абсо осї ссваЗсвеєтх позевсссво
ЩЕ асствсакок зсоавсзкаав фсаоавоессє еавосвоса шкнодозсва свазасои
Б сссвчвките акуасавам жевснаяас ссассвоє садсвосскоаа вот своцо
Та дУвссоксву ТижеситеКх сессосазаз ссесавоавсв ссосЕсаман скоса
НЕ сетоацакяа Сакс азі зотозасви зассасваво аипктдаоВи свавтісвах ща пессасю аск а сохосатаве десвадаєав зоссосовоз паче чо вчоеазсасої вссаїагаОХ сафоксоєстЄс веосакестаєс ассводасєто зсеаан
З сСтвавуица АХ
РАТ- АТАКА «возасзквов здіссвзВаУЄ скосвасава песстсвосе ссесстахсва зваваєсако
ІНН ібсхевавска вики чних ссчвивасов сеМиааса соскою сти
МІК вазсізаста ззавссзс зЕсестан Ес оя зве сососаах мя пісасса ве юиводе сазсочксва сотдаавса всізсваоо сс
Не чЧЕшсіцееса фчБМмчнко соте кіскто їастєсааас КеКечцюа сазочассоу
БИ нич омВІ шсвасНіцкЕ сазстасавос зримо вофесстаси салссаскає зксквиаавази сесіцазсі засксзис пазосоЗсо зазоасозаЗа пудхааиос ї3ко вавоалодсх. «син ач ссссуні ах сс єс воша спосо
Іа
КЗ с вк мчюс сера скасіоакс асруиескоск есекоцкве
ЕН зесцвісств) паскувсков ис есвста пса баазрпїастьа додеонснсє
НК аажоавакице кцісшесна сини сасквсдЕек КежексВосюЕ паза 18520 ува мона ас ееех Фо ссср вес 165 щМмннКови фу стеасветОс аескемнив сіозсаоми вкстаксіссє каско 1545 пвозсковаз акацсчласх коцукісезЗа осв кас сера Кнсесогу ї5 пн цЗкиКер осві стосв сом зачасінане всоссічося зставсвАсви 155 сФсостасаву баси ої зетоаааце зссспосвава тіссацссо сотої о І скававацсВ ва 1332 «230» 337 хай мМ ВАХ
Кловмацв ай вАт-аТУО- КО «КЗ» штучна йпрслідовність «232 АНнтТВСЕАСТВЯ ВЕСНА) ЕсСеВванцг їз «ЗзваВдЕнОохедиВевнВй яБ-вВ Сл я, «ЩО» 35 сій уві іп фей уві біз баг обі 3із Бів заї був уз вро сішж ще ї х їй 15 заг чаї цу ді Бек осСуз ух АТа дек Фі Бва яз ів рфуз АЖр тТАг «а 25 30 тує меж ніх Тк ожві Аго обів 3іЗз то бі бів сбіу сей сім Тео Ме
З АЙ ах оіЖ аг хів АБ орРгОо 418 АхВ Зі Аа Зако вуз туго Ууді вро фу ВВЕ ке ва сій сі АгРу УЩі те їі ТВг о АТя Ам; ве Вег Твг о Зек тн дів тує
Ме бій іви ет Чет фен Ага Зако бів Азо тТВг дів уві Тут Тук Сух
АТБ РгО РВЕ ОТу туго зує МАТ ек Ав отуг АТВ Мет Аїд туго тїгр оспіх
Мо 125 що
Біп обі тТагосен о маї тТвгомаф хек Зак Аїа ЗвК о ТАг рух бі Брко зЗет чаї вне вто фей Афв око бвгочаг рух ет ТНК оЧек о 5іу піу тТвг 5із 12 135 й «й и Й
В 135 їі
Ата їжи Вік сСуз рео жа уз дяротжг РБа о рко біз Бо маї тк уді 155 їх їх 150 аг о Тго АХА бек обі Аїа фе ТВгобетг піу ув) нів тАйг о Бче веб 418 7 сих ей бу 155 170 375
Уаі вен ців бег Хек сіу фіем тує бег орем бек заг о маї мі тк ом 180 185 190
Стеваница 47 вАТ-ЯІ-БКа вто бар обаек бар оіви ші ТВг обі Твгботує Зі Суб Аза мні Аяпонів 135 і 205 їж5 Бге Звг ОАЕ ТТГ фу Уді 350 цу ку За зів вго фу дек су хі 25ї5 ви
Ажровув тВагонія Зб ух ВгО вгО Суб вро АТа вКо пів дів від Оу
ЗіУ Бго Хвг оз РБеорец РВе Вго Бро Буб Бго рух АВ Те реу мех їіе Баг дру твговго бів У оте бух ат уд Уа дБроуді Бек оніє жів вер оБго бін ві Ух Ве Аза Тріо Туб Уві Аз обі мафію ма! ніх Аза АТ фух ТВг о Кух рто зга Бі бів бій ТтТуб Авподеє ТВкотТке
ГЕН 235 ще
Ага омаї чаї его чаї ве) о тву чаї фей Мміз бів дяр тк о рец зма біх чл їз3й ач ІВ
У З Зх їз їхв 5ІВ Тук о кув о сух бу ма) бек деп ух АТ ів біу вів бро їв 525 30 КА
Зім кУ тео ї1в 5ек Бу» ав вух ШІУ сій кто ага бів ко бів маї
БОТИ ЗА 350
СУух ТВгогец кго бго Зеб Ага Азов сін ец о тАг о рує ав бій Уа 5ег івм ожет Се» АТ ха) уч біу РВЕ Тук орг его адхр уів Аїа мазі сів
Б 375 ЕЕ їгш ій его Ап ші біпобеоз бів аа Аза оїуУК вуз ТВг Тег Бго вго
ІБ а Бе щю
Уві и Ар охиг дробію Бек рве вав ген маї 5егофуз іви ТВ уд ча ЕН 435
Страница Я врдт-а1уО- КО дероіуз бер дго Тгр оцін сій біу аа Уді ве хек Ск бегоуві мех зго 425 330 ні 1 АЇТа (ву нія ап нів Тук Те щі» бух Жжт сем о бек рен ак а лах пу КУ м мк мух і ожини жі чн я жі дах ту узі ух
КгОа о щфіРу їхьу Ру зу шіжЖ ЗВТ озЗРУу зу фу бі Баг оОАТІО) БА щі Кг 355 450 об сез себ вго азроазо о вго дів Біу бер) обев ажрокем Ага сі щу
ЗЕ АТО 75 зо
Меф Ве аїв дій іні Уві АЇа сій Ай УВ! феном І18 дхр піу Вго 85 453 зх рев его тТгр отже бегоазо вгОо бі рев дів Біу щі баб грец тВк піу що ще ЗІ оіу веб обег тує був бів Ар оте фу 10 ни мав) ві Ат Бук АТ а 515 5 КУ іх мМаї Тук тує мі бе вва сій івц бій ілю аг го хаї Уві Аїд 530 535 540 сіу БІ сік яве о Фіу бег ув) бог грец АТа о цев нів вер ошів Еге бу чаї 150 55 т згин доб Аіа Аіх сі Аїд вів від із дід раз тТвКочді дя фам вк агц оче ліва ді сіу АН ОА ВІВ їеЧУ ліз и Так ожаР Ач ем го
ЕХ 570 575 вго дія Веб оцек бін АЇв дброахв Заг 4ів Во йіу пе сій біу Ага
ЗВО 585 50
Мен їео ніх івц авг Аа бі бів Абу без бім ча? ніх ібвц Ні ТВг 9 БОЮ ща зів аіз ага афіз АгО ній діа ттроб)ів мезо тн ців біу АТа зве ув! ів БІ Ей ан біу фей рве аку УВІ Так оБго бів їі бо дів щі їец Бге дає ща 530 Бі ща сСтвавина Я
РАТеЗУЛЬ КИ еп дк вав кі Кі і сію сі деб щі ці бі біу кг одго ЩІ
Вега оаго Вегб бів Бі щіу сі сО1у беб о б1у бі біу Біу бЕг о АгУу ім цах вхо пух іу Вко ів ем жет вкоа Аза Аза Бго дів віу во бе) дбр Цеч АК
БО Бах У ів ві меж ріж а)фа сій рем жи! АТа піз ам УВІ фо фен хів д»в
БУ Око БЕХ
Фіх вко іем ожеє тТгротує бек АБИ вВга бів рез дів сту мі Бег іву
МВ БУХ що тн обі біт ве; 5вк оТуб уз «ім аАБВ ОТВР фу пів бе чаї ма А1В 05 3 ті хо іму Аа Ффіу ві тує тук уді ве вве бів цен обів вх АКо Аг Уа! тах хо Т73х
Ууді аіФ бу бів пі зекоЗіу Звгтоуаі Звгорез ЇВ їм Ні за бів 740 735 хо ет; мен да Бег АіЇв Аз «1у АТ АТ Аа ви діа існ о жВгоУді АВ
Тт55 ТБ Те ви овго вВго дій ет де бів Аїд Аго азй бег дів вне Бі вне бів тв уче й Б У
ТМ ГЛ У пі діви Бей нів із бек оАЇа бі бів Аго вав обі ма) Ні ви зах н сАЗ Е ще т ЕЕ ах ко нів Твг обі АТа Аг АїВ АгРо ніз АТЗ тТРо о ЗІВ венотне сі» сіу ад
В УНН щІ5
ТК УВІ Сем сФіу рев рве Або УЗ Те оРго 01) Хіе вго ав ТУ сем
М ай дя
Во ку о
Вго Зк ву Акоа его бів ти м ву «аз» З38 «Вії» БАЯ «Айм РЕТ «813» ВчуУучнНВа песліДдОВнНісСТЬ сСтурамница 47 вдт- ЯР 0-5 Ка ка «ТЯ» АМти-СЕАТТЕЯ ВВО-ІСНАЮ КЕсланцня їх вВотупом» с ВОовоВерниЙ а-Ї1дн 6273-54 «НІХ 318 бів Уві біт бен оУуаі бів бак сту ді сію Уа! Бу бу Вго біу бек 1 5 18 15 чвгоУа! зу мні шег Сує Бу дів Бек овіу ЗНе Аа Щі вух АВ ТВ а 5 БІО тТугоМмеє ні тта о Унрф ага ців Аів вко бі сій біУу бенобів тго мех 3 30 Я спіУ аАКо їі ар око Аїд Аза БіУ Аха Зк обу5 тУк о тУді вро фу РВЕ щі 15 ща іп обі вата хі їВге зів твт діа дев отТВт Мат ТВ бек ТВг Вів тТук т 75 5
Мет 51) фен бек обек о іец Ага бегодії аз твВговіз Уві Тук отук сСуз 85 З У
Аа вто вва піу тут тТук УВІ 5ЕКк Аз Тук АВ Меї АТ ТУ Тгр Оу 120 М о еїв бБіу твБгобеч баї ТвВКоУВІ Зегозек Аа бек отаке Бу піу во пер 11 І ї2г5 чаї пе вва бен віз Бгто бек бат рух Хе ТВг охак о Оіу біу Твк 518 130 1 в ліз бен вік сук рев од ру» Авротук ВБе Кго сій Бго Маї Твгохаї 145 Тю ї5ї 150
Мебтктроахеа бек бів АЇв вм отТвВе яег дію уві Ні УВК вве Рез 518 ївУ ща 175 чаї рев ощіп Бек бек сіу ем Туб Хегофрец шет зак оуді мщі ТНК омії ї18о 185 їз го ЗвгоЗвВго Баг Без осі Тк обі ТВе Тук її Суб Аа Уаі дев Ні страница У вдт-а170-чкО їв Бгто Зак оав ТВг вуз Ві АНробух бух уві бім Бо Мув Заг ОсСух г 215 й
АБИ Му ТИРЕ ОМНіз тт Су го о Бго Суб Рг Зів го хін Аїа Аа сію ви оку геСІН Му Не г ОСу кто ян КСО хін дей ліз м У пі Рг 5ЗагоУуді вве бли КБе Кг Бгто іух Вро фу АЗВОТВг о Ка) Мах 245 250 255
Ті Яегт аку ТВК о Вке біб Маї тТвВгеобув Маї чаї Уа? Ар ові пет МНіх 25а 25 та бів а5ворто бів Уді зїуз БМе деп ТК Тут УВІ аз обі ді бів ма ее 28 КЗ
ІЗ дя А1іа куз ТНг о іу5 РГО Аг сім пім пТй тує ав Заротну туг зай 5 Зв
Аго уві уаф лег мві ее тк оМаї ев омів біп Акроткро бе Аза су
БІ ма 315 320
Вуз бів туго бу о Сує уз ма бак Ах іх ді іви піу дів Буре їв 325 щі 355 сій вуб твгозів Зег о куб Аза гез Шу щі» йго ага бів вго біп маї о зач З
Туг ТНК іви вбо Бго Сух Ага АЗВ ОБіч ів ї1ВгофУуб Аа бів жі Заг ї5 зва їв
МеВ тїгросуз фе Уві Бу біу ВВЕ о тТук Без Зак Ав їв дій хі 1
Би РУ ЗВО тв бів шег Аза бі вій вро Бі Аа Аа тук обу ТНе Те оБго вго 385 З 335 чо
Щі Кен аз его Ав бі Баг овбе не і) ту Зак оіух рев ТВ ха
І С 415 дхріув бег Аго тгр ові єзїай Зі Ам" УНі вве ет Сук зок УВІ ММ: сСтрамнца 478
РАТ-ЯЮТО-БКа аг чи 43 ніх сім Аїа беу нія Аза НіБ Тук ТК ОБів муз Хек о івц пок івецн бак чу; я пух вто Бі сіу бік Бі щіу баб сіу СУ сту О1у бегоАко зів Бі Бго 455 ац5о сім і 5 го АБр о Азв оРко АТ сі Бецобев АВ мен Ага пів Ту
З АТО 7 Зо меї ввя Аїз біп зецн УВі діа сій дей Уві бен обеб зів Азов озіу вгеа ча З 55 бемоБнг Тгротук 5ес АБр ОККО ОТу зве аа бі Уа хек фен ТВе Ту кН КЕ Ба
Оіу їсм Зв отТук Куб Бі АкротТвк муз хв вжи Уві маві іа фу Аа 53 58 Зав щіу ча! туго тТук зді Бе Кбе сів ем січ фе Ага Ага ма! Уві Аа 536 535 40 і із біу 5екошіу его уві Чет ем АТ фев Біб раз охжій вгБя їжи зах 5 55 ЗБ зате І т (я ЗК З Ко КТ є ді с "іу МУ ух їх м
Ага чЧаг АТа АЇВ сту віз АВ АїВ ке; дів ре) тне ер дев оБви вКо
Ко БУ ЗЕ вРо АїЗ о пеє че ін Азв Ага Ахз Зак дів бе зіу ВБе бів Оу Аг зво 585 ЗО заг фо; ців си йвг Дід зи ім де о їких ім о омд Яке позвіс ЖВе
Бац мву ні сец о 5Зег Ааів біж біп ага вв ошіу ді віх Бен ні ЯР;
У ВОЮ що сів із ага віз Аго Мі Аа тгросій во тб дій пі Аа тТвРК уд 510 ві що іжи Зі во Бе Ага мі ТВ о вВго сіб Уфа Бгто аіа біб Без оКго зак го Ага ек 518 стезнина 475
РАТ-Я1УЗ-БКВ «ЕМО 335 «Й1їз аг В кі одне І Й хе штучна послідовність «М «И3м дик. амти-сЕА СТБ, БЕ «СНАХ «Ек-ланцюг З «вапнадимове дивернви 3-74 «Оз 339 паспукоєвоє тонукоєаетє сепспесва зіовадавеє сефроваєа сзічвмонів ї-6М кссфосааця ссаокостх свасвісаво дасасстаєа соску асаскваке що стан застЧазака снгодЧосвов вісзевссскоа ссаасцосаа свв до
А шик есавтах сссмниказ запасах с восссщеєсв спас саловсстає
Х ач акоодаасток ссстсЯа чадеомюас всчвксвкак зотастоатас сосок ще каста ци ссбстасас сащшнствЕ ЗфоєсаЗа зсасасісєБ паса х
ЗО состав ссавщсс спЕсакає песен ссхасвосяв зн своє
БУ часачсасво ссоскске стопі вв жВсВ коп сеанс кИ 4ко їсстодавкв псдовоскоє Ззасстсоомос пїпсдсеасеї Їж пси: тт к т зощстаНу своп вссчичесїх ствусавсех сао ао й
Вссізсиі їі повчсожове созвсварссє арсвасалса век зчаасва пава тоцає
БО сссазлзакт Фсавсвавеє свсвоаКрв секс «наст ов виставу
З ке х - Бек
Мч заасооксве тес ссссссенвав попав аса состсаКаВх ства
ТВО сешрниекеа сану: Зетозасе я аЗссвасдаво всссцнинх саван
ВА чшсСкчЕча вста зозкосахавь зссвазалав вмассосовоав пом автве
БА страница З ват-а10-5КО заклав ассоіокачі сежфксстс весбресстаєс засос чекоаапе що зводазаса зукосазеюк єтссваєава фошаврвзр косжеовіжов давався с і0х0 скавазсеа авоаЗасНасо сбнераєсв серия сествоскскос посох
МО чвзсхазасса возвассвичЕ сезсскексЗ пасасвасся вадасекека ксссвосояс 15о атеЗшечкча зезинивм: сани ссоаоазсв вскапаваВс сао
ОЦ зкастозаск себувсоює сктЄтЕсєтс Збразсває бозссокоза свазазсво
КОВІ зрфказсвоЗ доуваєчієїтЕ стсаєоєтес зозвивовкО везсессвов савсоаство
І; вспсвовава Фссестокою дкскскот дувоосоосоя свадсоюаво аревоватоє 1350 вжив ствазсінм ссстеаковк ссїзночиає заст аксх зом азоза вати хс азс ики. сс сіосавісе ациусссскя зфківаїає 1500 завсзассстеа паст тацо сакатовскУ асафасевкс кавостасяа занаувовеск іо Й зазвуваєтв чрузнрвосаз поса каста сік саасї два рацію: сецасоа асо сї атакекекау сесіокатет ссацестеко жужстцвкта сточсцссс пістеюшеа сібасвотов вітєзаєстоє сассвосазе пездсссвов вківосесае соч кісва осаЗостає мроасстакс сссаЗссво
Ми іЧвазоа сровістеса свозаавсс ачоБетаоас аск внна чего
І18БО час КВеВе ши никжт чисто вссесесочая кесоваєВаВ ссопоовадоє тІсвИзссКО Зсчоомю яса аз очвсссанє кексссессва соте сос ше кастов асстоаонсе зарсатктс Фстсавстоо Єуастсвова сукуєтасту
Страница ЗК
ВАТА КО
БО зпттчвсЯоВо сствасто зеастесе соус нщо садове соканекоцо 230 чиаствіксх зсвазовоа габааазува стрес смертю пчічіасквх пише кІкЕс адстозавеся фс зви аа ксавоа сах пиннлсє акоетасвосє асщрветкск зсеквозО смномнової асом ко чиюоасскує ссесвоастіс тіссцацеєє аЗазаксазсв сеттозаЗчех ссзМмкнеоє 2 ствсічсакс рами асарссско зас зсасс тасакаєстов аресаовВосе що ска: еказстоаве соми а астатрвчо пеасжакевор сої хащі заяв сссКеТКх
ФаТЕ «АМе О «Д1їз АщЯ «кій» ДВК хЩії» штучна песлідовнійть «вх «КЖ3їх днк. анти-сЕА СТКЗ ВИЗ СНАЗеКсЗЯВМНЦНН ОЗ «Чистувовеемомомеойний ОЗ УТА «А БЮ са зваче сКвуасве счркеосова зковацаває см аоєяа сУсхававкиа
СС сс кеасаж соаасвескі савсвісмю забаєскаєа сосвомнии ссоссс семи звсбоззаєе чо свов втсозасеско ссвасдосаа сазана о персо сспавофво закон свІс весмжовсов ссвзсакєстє папок ає
М зкачазвстов шсевоасствося паезсваецевс ессрссоках Все сс з що фаствсвех сечо свіцасскВї Сиоссацу зсасастсове зво 150 зЗскташща сстеавнкес абсцес ткс сслсїнюас сетостєсваа Час щей птранаца ЯК
ВАТ Я ТО-Ка оц «созсссіЗшо смс с зазазстаєх тсессосозасс пато о «ВО зді вовнсх сан сє Зассвеає зр асассх сс ої петасацсе їсвоовєтсї асжесстево скоса всєзсесск соцосазеі поцеаеесво що всівсаїКі певасціцав соми с ззсвасасемй аосовасах опи
М сексававсіх Зіцвсвавас озон аБцик ксвссоіне саЗсвостав аосіосоу 725 пзвссахова стос ссссосвава сосвжемнєа сесісвтва своссцааео
ТВО кетазааков сахоасекнк Закасако воссвсвемю асесевинх мера
ЗО саотвсоцчек вес тв зе нічаХ сосааавова мес пово ч«авсвосайцї звсососзенуЄ пасок с апсптсе восчпасто встзааас заоовстаса аптасзачє стсосвасзав соски ссссесаксов зазавекНіє ї02о тссваввссз амврюсвоєс ссовчвносв саочіціасв ссствсссто сце 10КО шашок са ааавассвову зссссгае какеоточтсв воежжежв коссвоєевх що зксрекакаю вриюеннні свасовогад скоствиваса пствсдааВИ ваше їх ччкитуасв зсадсчасвИи сткскжесска састссазво совссзеЗав сазааассой 1258 мчнклнкаца Фавст миска зізавасв возссків кавскастзо ї32о асо сессії дацрпоссроє доувоЗсусоЯ занос аевочатсе 135о адаозасєцес стзваствн сестчатове ссхассчає пасинок феод аа їй зр еє вастеазєЗас ссадимеака сестваксов зточсссоєсє згсскавеВе
Ії аж ссто) аску коуз сестоссвсото асшкечнєє суадствасва ачаанкс птрвавмця 453
БАТ-ЯІ70-БКИ азацавстов соціо сва Ффросвосоєо паста їсти аої прмнохасв 1520 завомкиоО спричи оаєстерсої зі кекац єспівсвкех свое ка 15
Витстзи ск сВе осо в сіЗасвшоп Віста їв свосНЄ 1740 пвозссівоЗз вівосдеатх коЗзасктсва часвоосте мвасстоїє хдесодесвв асіеовУ касвкстаєв сасвоворє: зверне твавє асосєтуєа пстодсвеово 15 шасі асВ ето се Зі сзозчта асссссова косе пе 14 «210 34 тії» 8285 ха» ВН «АР» оШтуУчна поспідовнвієста» «шо «ей3» дНтв-сКА СТВЯ.ББ-зСНа)- Бе-ванцює із «звпадиною» димарний -188К САН «Ну 51 чіп чат бів ев ожафї пів хет З1у Аїа сій Узі Бух Буд РКО біж Заг 1 5 іо 15
Затомаі фу мі Зак Су уз Аа деє пі вва аа зе ру дк ТВг
Кк) 25 30 тує меж ніх тКроУЗ) Ага біб Аїд Ргш Фі Бій біх рев обіз тео меї
ІВ 40 45 "
Зі аг їі дер оРго дія аа бі Азп бек гу Тур о маії ко іху ваз за 15 БО пів пі акт оц Ер її а оїве ад дав зни цоек о тТвК Яд стае АТа ток
Ой сіу АРШ УВІ ТВг їі те АТ Аа ЗВг бек ТВ Бак тТВг Аїд туг 70 7х Во меж бім фен бак брг о ец АКЦ бек Бін азротВК А) Ді тут Туг сух вх БЕН зу страница ЗА вАт-Я МО ЗКО І
Аїа Бге вва біу Бук отТук мар жи Ачо о тТуб АТа Мен дія тує тгр обу
МЕ 105 ча зів Бі тТйК обви ма! ТВ Уві Че чає ід бек ТК оцуз щіу Вгб хек 315 і1:5 125 та| Ре Рго ів ай Бко Баг ог омбуз БЕК тТНг оЗаг бі біу твВгоаї1З 1 135 з
Аїа цен обі бух сей о заі фк5 Аз отТує Ве о рго біз вто уві ТК ма! 145 ї150 їх їв пет о тгюродявй чек дім ів Бен ожтнг зе овіу ма) Ніз тїВгоРВе Рго дів іа 7 175 чаї сен бів бек Бар об фу ем о Туг Щек бем о жХег о зег Уві УДі Тк Ма ї15а 155 138 го бек обат бак оїшу Ту ТВгобів ТвВготТук ЖТв буз Ачп УВІ АБлОНіх 395 що 235 їуш Рго шаг дяк ОТВг зує УВІ АБО вбуб Бу Ві со15 га ух бек Суб азвовуб ТвгонНії твгеосСух ко Кго Сух кго АТа вго Зів 8із Аза бід 230 55 зай зі Вго Зег мав вне бай вве вто РРО фу Бго Куб Ар оте це мех 25 ЕЕеее
Хі шег о аге тТВговге січ УВІ ТАК оСух Уді маї Уа Ахроуці ет НІХ
БО Фв5 а піз азв о Рго піц за) вує Не яхп отгротук хаї АБрошіюк уві сім ув!
ТВ зно 85
Ні Аза Аа фу ТВгобув ГО Ага Б1ів від свй тТУуК дай Зег ТВР Отут зо 255 30
Ага УВІ Уві Зак оУші ви Те Уа) рем віх сій Азротгр вав дк бі вів У КУ 32 страница 755 овжт-З178-5БО їх Бі ТуУК Бу Суб бу ма) Хе АБИ УЗ Аа фев бі Аїв вто 318 325 5 535 і; Й що чі жку У З фазу ки ув учи мож и срдта - з. біз був твко тів зве груз Ав гу фіу шій вто Аа вів вт шій Уві 340 ря Б сжЖ ТВг орви о вко вко пог Ага АВ ООів ев отв вуз Аа о Фіа Уві «вт 355 350 їх
Кам Зак був 418 Уа уз «Чіу ква тує вро ЧеБ аза жів АЇВ ма ів 370 за ак
Тер ошім Хет о АБ5а сі бів бго Бів Ап ам; тТуУЄ вуз ТЕ ТНК БгО ргО
Зк за 355 юю
Уаї цер азв Заг о азр оБіу Баг оБНе вне іа Уві беб вує цен твг уд м Я 15 ав оіУух Зак Ага тТгбоаій бій б3іу Ава уді вва бзегосСуз Щек о маї мех
Я Б: Б
Мі іч АТ іви іх Аз ОМіВ Тук тТвг бів груз 5ВБобжи Явгофву Чат 35 ща ч4х вто Бі бі бі біу біу баг оБіу Біу Бі бі хаб Аге «(бц біж вро ахо 455 а зів омев бек оБго Ар оАжхро РКО Аїд БТу ви ім аз оїев ака Бій оту 355 ато Як 480 меж вне дів вів із шаф АТ сій аа уві рем оіве жів 435 бу рго 485 яю 5 іжа Жек ТкКротук Мак оди БгОо біу Баш дів піу Узі Зегорев ТвР обі
УМО 05 10
Шу ем ЖК Тук кухХ Січ яв о їВг офух біц ізо Уді Ущі діа був вів
УК5 52 КЕ: біу уві тТуж Туб ха) вве рве бія Бен бів ев ага Ага охві Уві Аїд 535 За
Ктраница ЗК
КАКАО КО
Оіу січ бТУ дак бі бЗакочзаф Заг їв дів ви ніх івци бій БгоО фе зах 5 535 з
Аго вегоаід дів Біж Аїа Аза Аїа ївецч дів фец ТВготУа) АВ обец ркО 555 З щи го ад бЕк ве ЗМ АТ Аг Аа Бег АЇа вав біт Бе дій щі Аг
ВО 585 5ЕНХ і їв нів ма) Заг одід зі сій Ага вв Фіу Ууді ні рец нія ТВг 535 5 щі іч Аїа дра аа ага Ніяк АТ. тТеробій феб тТвгобів бі Аа ТВге ха 51 щі Бей мен піу сец вве дга Маф те кг бів їі вто Дів Фіу іва біу ОТУ вих 53 535 Б шу ші бак осі жі ФУ сту дег Ага бі бі вто бів геацобЕкК его ках 55 НТУ
Аз АБО БгоОо діа сі реч іви АЗвВ ізн ага бій Бі Меб вне АВ сій ще по ятО
Мен Уві АтТа бій Ази Уві без каз їік ах обі Вга іє) хве отгвоТУк
В БО вх
Зако АХ Рг піу ви дів оіу Маф бак без тТне осі ШІУ фвиа о Зеж Тут
БО 55 кю ув Зіз аз отвг куб 51) їжи маі ві дів гу АЇЗ3 щіу ува) ТуУк ТЖЕ що 735 То зві вне вве бів сен бін ем Ага аго уаі УВі Аза біу пів біх бег макж І Х 5 яка м а хх ок СН М жо нка 1 зх Сх з о : Н ці с 273 Кс
Бі Баг омщї Бег осец АЇв їни МІі5 Єви щіп Вкго івц Ага Заг о йіз від тай тах То
ФУ АТ АВ Аа Бец АЇа жи ТВ оУд! дароіви Бу Бго 8ідв Заро Зак
Ух ТБ ТАЗ страница «87
РАТНЕ Й бів дія вго да его Аїа Ре сіу вве бій біу Аг о вжм ви НІЗ Ге пу ТІ пи
Тс ІК жо хакоАдід БІіу ШІп АгФф фен бі Маї ні ев нів те о шіч Аїа Або АїВ ах 5 г ВОК аго нія дій Тк оБів во ТВ зіва шіу діа твгохві Без біу ве еле 505 Б 515
Ага оаф ТВг ові сім іє вгз аа Оу ев «Щі» 32 «І Ум БтжчнНа госвідсвність «ех «йЕ3» однте-СсЕА ТВА БЕ сМмазх- Ес ланцюг 3 «виступом» мономерний з-за 3453 «Ще ЗА; сів жі сів бен узі бій бег о біу іа біз Уа Муб уз вго сіу бек щегоУуві рух заі его Сук вує а|в Заг опіу вве дки Ї18 рух АБроТВе 2 25 о
Чуг мек ніх Ткр о Уаї Аго Зіп діа вго обі бів бі ве бів тро вет 35 зо 45
Біу Ага жів Аа Рг АВ Аква щі ай щит рух Тує УВІ Рг був Ве віп обі ага Ма! БК озіз так дів дер о тБе ес твВг о йег тик о8ів туг
Я та Її 50
Меж бів вен Хек Баг ге) Ак ше пін дяр о ТВг оАЇЗ УР тук тує гу па З іа Кг вйа обі туго Тубк ді бак одзротуг Аїа Мет Аїа Тук їТкробію
Та нене мо віпобіу тВг бен УВІ Тк оУді Звкобек дів его ТВгб фу Оіу рго Зег 315 хо 185 странина ЗВ
БАТ-ЯЗ МК
Узі вве вко се АТ Бе бак обак цу Зак отв Хек (Ту біу тТвг АТа їх і55 У
Аіа бзц біу Куб Бен оУщі КУБ АБЮ Тук РНа вгО ОЇ РК Уа ТвгоУВ! чат о тгводБа еко сту від ен о ївгоБеє біу УВІ Мія ТНЕ РБе Рг Аа 155 ї75 175
УЩі фен бій бег зве опіу фецоТув 5ет гсвц хек бегочаф узі твг Уві їко 155 150 вРО Заг оЗак Бак офіц бі ТВРОБіа їВгочїуг 16 Суз деп о Маї Ай Мі 135 зЗю 25 їжи ко его Ай ВР обу Маї Ар озув ву АР дів БКо фух пргоСук 210 215 йо дару тТВгОНі ТВгоСуз кго вго сух вгОо АтТЯя вга бів АЇв дів ОТу 225 ке 15 за су го Закохві вве вен Ре Бго вро гу Вго вБУя АБвотне фо Мет
Зі дет ак ТВгоБу бів Уві ТВгосув чаї Уві мат дер ож ек нів піч джю вго ін таї бує Бре Аза тгоотук о маї ар щіу уві бім Узі
Х7З | т8о зх
Ні азпа аз фу ТР Оогув Бгто ага ів бів бів тує адап явне Тс тує
Ме 295 щюЮ
Аг Ма! Ууді бегомаф шу Тег оУВі Бе) о ні бій АБ отТго рем яз щіуУ
З» ЗІ 335 ЗО вх обі Тук Бу« Суб буз Ді Щегодхп уз Ай івц бі Ач кро їв бів бух ТВ її бегору5 дів вуз Зі БІВ го Ага дій РКО бій уд
ВН 45 ї50 страмима ча вАТ-Я БЕ
Тут УВГ о івц вго Бро бух Ага дяо сій іш: ТБ бух ай Фів ді вер ім тгробуж бни уві бух Фіу ББкотТує Бео пек Аза жів Ав ма! им
Тевобів щоегодаа бі віп Бго Фі дяй дей Туб бух ТР ОТВг ра рго 390 335 за ме! жу Ачо ЕК одно ФРу чЧетг ББа вва іс тут бек оцуб рем ТВгоУді ще ще «іх аз гук чего Ага Тв обів бів бік Аки ма! вве бег сСух чего Уві Меж
Ніз Біб Аів кгц Ні Ах ОНія Туг ТНг бів ух Щег фен зак ре; зе 4335 Бе 445 вго пі Є1у Фту сту піу звгосіх біж 0іу Біу Зек о бса 41ю Ту РКО
Б 455 ща бів ісе дет Бго азв о Аза Рто віз бі мац зеь Ар бен Ага дій с1у
З ай алу З
Мет еле віз іп їв уві Аа 53)в Аа хаф ів ем Ті АЗОТУ Вго
Зх Км Я ізо озер отгр о тук 5Зау дер ВКОа щіу іш АїВа сі Уві его ізу ТВвгОосіу
М ох тів
Зіж вев о Зекотуб бух Яр о Аяр о ТВг іт ім оіви Уві Уві віз ух аї3
У ЕВ а сі мі тук Туг Зі РБе о РвВае цій ви Фін їси аго йго маї Уаї віз і ву м 7 вір мл -
Б іх М сі вів бі БегоБів ЗвготУуді дет іжи Аїд ін Ні бе бій Рг і ах ее ів двд окт дів дів ді; пу: й г; тТве м дат Фома ЗУ
Ага Заг ОАТВ АБ Оу лів дів дів вжи дів фей) ТВт Уві аЗВ ев Рг 565 То ЗИ стравина кг Аїа 5ек Заг сій Аів аку Ази Заг АТн вве БІУ Ве сій оту АКФ
ЗВ Зв 5 іен о їеч НІХ фец о бебобів біу б» Ага вам офіу УВР нія фев вія ТАЄ
ЩЕ а - не Мах В докчуж ск х. суч я смкх би сих ме ЗЕ ух хо ші АВ Ага Аїв аг ніх Аїа тер осій сем о тТвгобів бі АТВ о твг оугі
Біб ціх БІВ їве піж іви вве Ага Уаї Тк оБео бів їі го Ат ФіЖ іец
Я Б З
«ех 33 «211» 1353 «ий ДНК «вій» щтУучна послідовність «ВУ веж кейїх ДМК, внти-ПЕАЄТЕЯ. Я), Бсеванцює їз «зЗавадиною» «Ох 34 павчеденх тасВвЧсах сефсассоаа сооповас сеосасексо Кох
Ну введете син чнжЕ свасаессвжр зась а КИМ пе ВА ко І Й кох сво зсктшмив зазавнзн аіпаасссшо ссаесчсав садовавиве
Я шкдсксваде тпсвсвк ай озуссассвжс вопгепсопака сок афаа сс чи стає тве певесствМмі стссЗаоено апсоссахах встаєте сесехсоце вій ївк о ставите сащврКсхак скромні доасавчсує оассокаоє зу поставки сеча с сЕссЕчеКо ссссеуврсис сенс сва зви асоває
Б засвфслева персксксее стосстоакс ааооасєк стесссовЄсс сехавсска
ЗО 7 ки Умх ци туту уі у ет оч ун при 5 прати пи утат ух. дич ле КУ тотеюпаса Всачлекссх осасстсє ЗКусако сс пику о тстолсстоє вквосетм) сносвсаатс аспокоєсеж сіадсВессю Фасассказ
БК ши ше Й сСтрачвмця ЯЗ
АТАКА звсстасажех пспасукоза спсзсвоско восаасассвз зчокоапасва заводі
ЕІ сксазоусЗсї зб3асзаває їгсвсвеакУє ссовсосекаєс спщжассіаа арх аодо
ТхО жассозісаЗ коКтксоВИиЇВ сессссвада ссопадоазсов сесжесверат стсксоасх
У теса свічсцінчї озна; звуссасзаза ассокон сзазеесває шкрасоуєю асодсусва досокасавк фосвадаєав вуссоєовов дозуєжас
З авсвдсвсох аепокаму свасчесстоо вссаесстає васаєта воза ча замвосаса ацївсвавЯї стсосвасада ссссовдсо псссспвисза звавассвже 1029 тссзащсвя гуни ссововасса сю сВ ссстоссскс ЗЕсссЗдаах
МЕ праироозсса авазссави саосстсоко мережа авозсіска сссвосоае що зссрвкоаков вокоцеввса сванюсчоа ссзоаадазсов зстпозазає асо
ЗА чевстоадаст ссупсрчєто стістєсес Фзаоусавує тсассомуа севовосу 1250 чиеавоскао сзавсакеКе сСтсатасесс збоакеахеЯ ярих скоєа свассовокає 120 зсдсаоаца псих зістссоЗо вав «ей 344 хе4зйх ДМЕ хгі3м щтучна пестідовність «лЕО» «ей ДНК, пегЕнЯ яанцюг пнти-скАСТВЯ, ОВ «НІМ 344 иа тоапссвана сота Ксх снів сссцвавей Во сенос асКиссосз запфссзчасва зарозіоаас вкскіссо кові тсЕ сисних сапсязавую ссоссвкє ссесвазстЯ стпвтствоа диовжкав состава сптивнинв 432 вАТ-Я1МЗЕВ засво хесзатіказ созсвсмео азсвовассо вежесвосої дес ає 240 косоідаава ссзвозасої Фреска гаслессває вЗвосавсова одассостнс ви стік зацзсосва зскхозавакс авчсченнвІ мое все кекє
Зо вІстхсссас сабктцаїза зо кіовав сспіодавета ЄєсЕстаїКаЕ Зідссцко 1284 затавсхест аксссвовЯз зассвавів саціоааод бозаєвасес ксеїєссавЕсо зо пива ст возазазкЕ касова звовоснве) вслесвосств свое
За восвсосскаа сасіовосаз зчсвовстає зазавасвов вазфежаоє стосовакс. ще вссаісвов дсп їє есссзвесаса авзоавесєкісв вслооЗочвов тях
Ба «кіз ЗА5 «вії 451 «ке БК «лі» тучна послідовність «лох буть сучка шо узуі я ще Й . «ййЯх Анти -сКА СТЕЯ, БА). Ес-лануюг ія «западемоне г зах й «Щи: ах «ім Узі ій вен сій сій ек ШІУу АТа (ім офем УВІ бів вто біу А1в 1 5 НУ її
Заг оуа! ух вм ожеє сук ТвкоЗіз Зак обіу Кава тів гу дяротве тек ану ніх сука» са «о -з ба бів їв хін дах ств; три Уа
ТУгОЖек ні тїгрожа) Бук бів Ага Бгто бів біп обіє вен сій Тгроїіз
Бай 5 с дек ч Кк гум: Кїх хто мі: дм ха в хи смугу зах ща НД
ОІУ Ага жів Ар овгО АР Аа Бі Аза Бак обу Тр оМа!ї Вго іх ВйЗ
З Ах шу Ї бів бі Бук АТ ТАК Щ3ів тТНг АТ Ар отв Зак о хвр АЯй ТВгОАЇя тує мем Е - мо ЗЕ
КО Еж во ви Бій гемо ТВ обегофрев о тнг о беб бір Ар о тТВе діа УВІ) Туг о Туг Су странице 453 вАат-аУ0-ЕЙ 85 ще КІ
Аїа вгО вБе пі тТУук ту чі Зоб аз Тук АЇв о Ммеї лій тує ТгвоФіту 100 У це
Біпобіє твгобек о заї те ма Жег о бек лід ес ТВб руб бі Бо бек 115 125 145
Уві ке вко їем Афа Бго Векобаг ру его тТвР бар о щБ1Уу Чіу ТВг оАЇД
Мів ев обі Суб сез за: уз де) тує ВНа Вго січ Бго Уді тТвРгоУді 145 150 155 150
Емо Сте деп Мак іх Аїа зи о їВгобек ЗіУу ді Ні: тр обі вго дід еготТгаодяхп о Зег хі діа бе аКозагооіу чаі ніз тТнг На ага дід 155 170 175
УВІ ем ціп Баг хег бу Бу бує баг о бее бек охчК Ма) Уві ТВг уві 150 185 ую
Біо бЗек бек баг оцазвз ім ТвК оФій твВготег ХІТ Сує за Уді Аза Ні 15У «Оп ОЗ
Муз вго 5ег Аа ТВК о фух ма! Аяв обу бух уві піц вБео Куб аг був кій віх ло дер оБуз ТВгОнНіБ тВг Сук Бго Бгоа бух рга Аїв о вго 1» Аза АЇїВ ФУ
ІК 250 25 84 пі рго чего Уді рве цен РВЕ вго Вгору Бгто уз дяр ТВ рем мех
МУ КАК «Ух жів мг оАгО ТАЄ то біз ма! тТвбобуз уді ма) хі Авроуді его ніх ва 255 та вів азровРо бін Уді зу Ве чи Теротук У АБВ Обіу ді бів Уві ме Бо Кк
Мія Ап оАТя вує ТВгОовКуб Его Ага цію бів» шій тує Аха Зак о твйгК тує зп 35 00 дка УВІ ді Заг ма! фер тк Уві ів о мі5 шій ар о тррофео Аза бі птраница За ват-п1тР0-5КО ха З 5 2
Ко - ч о чн МНН Че НЯ куки А ЧИ уки Е тую в уз Бій Туг фуз Сез іух ві бог оаза рух вів ів БЗіУу Аїд вго ї1е 325 Зх ї35 піз бух тТВгоїів бегобуб5 АЇВ уз іу щій кга Акб бів ровів чаї 340 385 35
Су ТК овеац Бгто го аг Ага Аз обі Бен таК обу Ахи шій Уві же" ви заг осСух АТ Уа) зуз Бі Бе тТук Кг Хек Аз оті Аїва маї 516 370 ї75 ЗО їсв бів зек Аа бік сів бгОо дім Авй АБИ туго дув тб отак Кго го 385 З Бяеяи оп
Уа) іви Ар оЖег Аз бі ЗекоБре Ве рез щі хаб бух ев твгоУді
БІН чів 15
Ахроцув бак оага їгвобів Щіай «(іу апа уві вве бек був бак оз ме за чех ЯК чі5 бів Аіа без мі ачвп ніх туго ТВг ій Був Зегб фев Жак гец Жак «5 45 вко діжу я «УЗ» АБ «Кіх 315 «Віз еВ «ії щтучма поглідовність «вам йегкейЙ ланцює амти-ска СТЗЯ. ВВ «МНЮз 355
Аз хів жаії фец тВг бій бек обо АЇв бегоз«з АВ уні ет ем су ї х 18 15
Чі АГРО АТМ тТОгоМех Зеб Сух ага віз біу біз Бек омаі АБ їі ве 2 З птраняца Я вЖт-Я170-КО Й піу маї бОіу РВЕ ев нНіз Тр оте цій шій рух Бко Бі бів во Рго зо Зх су бен ої«ц У1і6 Туг Ага дів его оазп бен пін баг о Біу Ті бго мії ща 15 що
Агу кВе жигс ФІіУ ТВгобіу Бек одга тк дви Бае Тео іям хів їі Азо
Кг» очаї бів Аз Або Ар ха ді ТВг тег Тугб су дів зій ТК АБ во БЯ 35
Зібр вка Во тує твг Віа і біб «і твої ух «31: ЕН Жїїа БО пРМ АБНОовКОо Туг тМг вве Зі БіУ беж ТНК КУХ СВК обр ХР КУБ КО цю 105 МЕ
Твкомаї 5із із го бегоупі БВе ті Бе вро Бкоз Зако АЖВ одів сій 115 120 125 івц вух дет Фіу Тйгб АТ Бак ожді маї бу баз ім Аа АВ ВВЕ оту 130 155 135
Ро Агч пім дів губ ма! бів ттрогуз ві АБродеб АТя вец бій Заг 155 Ко 155 188 пі Азп бек бів Бі: бе" хаі тВгосбіч сій АЗБоЧек бух дЖхроБек Те 155 іт 175
Тук бер оман г бат ТВГОБбем твгоіец Зег обу дій Ав тую З БУВ 155 155 ізо ніх вух узі Тутг АтЖ Сух біб Уаі тТвеонів сбіп 5іу їжу Зак Хек го їз ю 25
Уві тт рух ящет ВН Аза АКО бі бів бух гій 215 «ЕН у «1 А «бій» ДНК «Кі» шШремна певідовнниогь «ве» «йКЛ» ДНК. пити-сСкЕАСТКЯ БОР-Есоавнцюг їз «Западеноювае динарний 4-їівв 711-854 птраница 55 ват-4170-5ЕО «Бе ЗА; чзаЗатисвця іцеадсвє сазосзоеома ствковавс скоса о сетумвуто
БО звастакасси сопацсяе свасаїсвна дасасстасвВ коса сазан сво пси азоа зсскоававна заїсоосача вісчасоссоя ссввсасва сасава
ФеЕдсспимиує єссбвесвсва одеса зсесессзасв ссвосврква сасвасскає
ФА крвсвоастах севассанс сісчнанме весЗссетех схастясяс себе 300 «апезсажах ссезстасоє сефпосскак еко чес зво
ЗО тстаскчесв ссовазнє сІсспааеЕс сесію сомів падсвнссяо 420 пасе ссептсо сосок ваззвостакт кесстниви: сепарати тссеоавсв децрувеєскк пескогвє зро гскесовскоє встуємє ве тка атАацссеоаа саезсеукоНЕє аспениж сте сие засос ма засствсаксЕ зсзасасочва ссоасадссс досаалаєсв вн азасая за ЗаВу й ссср фе заває тсвсасаАакеє сезон садова Ва
ТхО
Човссзісац кІЖЖсскитЕ сессссвава ссозацазсв сестєзіЗак сісссоувсс
У щ сехавєса сага сосоцасУку звоссесов восствазає сказати:
АЙ І І краса асЄфсвтчв зчаікакває зссбавевсва азс фазова
З азсвасасяє зссокасої свуєЗесско ассооксстоас вссєвозасто зов я шиннеМмасв вес Єєтессваєвава соски сек пазавосатио
КЕН кссаааасса верзсацсс сспаозасся сафчскосв ссскцсскоє вусссуАх 1050 ще часса драаспавчі садссксовсВ хусосацтса авт кста тосоавсоає страница 497 їв вАтТ-Я170-ВКка втсдхсуаю зхазазвавоа сварка сгозазазосв ветесаазає саше
ОО мае щи ссдчасодя сЕфЖЕсСЖс повені кедссакоаза сваннни ва
Ка тодсвосаю позасоаїтстЕ ставте ос зізвізовка везти касв сависаскве
Алех ведсадааова шексісїкск чіссвМи зов осо заява зоадаощакее ввадвадисх сковчсточа ссссзатоах сстцсммівс касіочвосю св чоце ки жеке асрЕЕеее щен сова стослаатосз авнросеесе зкесцнуає
АТО вав вона септсаєте звеводсє кеш твева пиннєвее
ЛУ завдпестце ни инисаз песспосУїО твої жетктсадеї опваєкосо ба ваваслетвя пееничзнемнмю абсо исї піс кожда пспесвиикх дееиетс
АК ваводерєте стрпкостас засо нна стпвсвотоз дкскасекшо сесКе
КМ вавоссєюа зкадшсвсакЕ рек тсав досаоцчитас тасавсстс гтассцасока
Ель ково сво тасахсснвка сасазазцєс вості аов: зсзсскпоса оскдасвсву
МВ васоствнї їпскцовкся кісвувута звепсоссцвом Тесс сс КсЕ «се веревосе аведІтчю сн вч посменнак стпазоавоава ассспваста
КК ксссстоВсв звис иназр псекочехоачах сор низмю озакактсзе ссаОстоцо «АКО вексваатя асхоестожЕ сЗасоадвскх свист аскисоцееє поко
ЯН ваФтаЕстю ззастзчоцо асівткстає зазоаваата сазаззаваєх замки хи заваркою катастатак зекЕКЕссва стпвасхаа осо аа зо Ччоча
Кая страница 955
КАТІ засто стр их оосістосає сровоаксво коасесжскеє косі сосв.
ВО шебосветаз сестоветажх віє сгадсстств поснменксао вавовепоєх 234й кісок тсст аздоасакст астсвесо воапассозоавс засєстево апа яю свквиїоаВваз севаваєнсВ зосзієстлямь пвоаславекс минає засо сао птоасасстаа зас дови ева всосевУаВіє ва «ве 4 «йії» 1557 «ВИ» ДнНЕ І І хелім ВНучна щеспідДОоВнНість сесОе й Щ «лей» ДиК. звти-СЕАЄТНА. БО КееяанцЮгє Я «виступом моновенвний
Я-18ВЮ сон «КР» ЗАВ чаЧчатосВас каса Ес мкс стави стві є пеїавоски
М ат оіВсс ссвусаехе сяасавкоави звсвсскВсВ басвоцнви кави 12 себовос честзслаВхО чагесвоз зпеевоссосв сопасовосва своапаватає 155 чиста сени ефісвскаюо авсеснихнив сомвацкав сасасосве 2 сктасвчєкоа ссостоо скопововає всехопсова аствстасас сссоутсОоЄ ча Е : ї КЕ ЯЗ ЗЕ квсів: 9 ксзаствсує сакзвсскае шмвючссвов осасавсЯх засос за хсхзстафіа ссавокноє дтсрукокеє ссоссокоадсве сстєстссяа засво ки
БЖ жФфиросасво сиусссткю сецесевх защрюсїатт песеповаєє запаска
АВ хсекодався саоуєєскх пассасовс укуєсасаєсх кшсесоцстак сотасваксе
В Й ссадоаєтсю встссско сеска ассокассєЕ седосвоске феркасесве
ТЯ мсюмоакекх пеазвсакчва ккасавосст восаасвска звшіодасва заваачЕ кода сСтранвца 453 вАТ-ЗВРО-КЕ
Як псесвавкскі фірбисазаав ска аКв спас сапсвесскоВ ОВ ха зчвассвісюва кскїессТкх сеєсссваааа сесазочаса состеакане сопе щі ссавці свісамви зуїозасата весвоваве весстдаочвк саяерксвао
Б казеасзю воскова поацасеатавк ссвамнкаа апсшсозча зааоВає зпв шмивоакасак сесосазет свисамисєс ассвекостох восени та зов аас
Зо векнимнаєа аотасвевє скссаасваа псссесювко ссссежесм звався ке 4050 тжсвавоєсв пмнинчнкє ссдадавсса своувізтвов секс «пвсвеВове з3а50 зазстчвсса заавснви есе сс рка зак секс аася всассв зусниювоаво савсвксвоа ссомвимнсва аствсвНне сах їм
Засн сповсзчсав сктиткспв ФасКосваве пеассктва свжнесооу і мери еовапосчіх своскопавс зона свов вазсестоєсв савани з1335а всесвовац сссбоавеєст ссосовує прик смс аофмнатсе іа звадласюює птадоскча сосках сстскцає сесленіассх сао за зе Ечстх аск ссауанчно сізсазеса вишасескс зи ню звжчкувтєсто засос) соцієвса всвемзюе с кош тасва жремеесвої 3550 зверну коцЗіЗЗссва ссср жка астасахак хека завассо ззвекоачічо ссоцеразов зе чес сс девосовсєо ї65о0 зоачасактЗ стос восхстчоаса пове яістасти касах ку ; ще З Е: я
У птвавмца МЕ
РАТеЗІМЗЕВ перс а аксиреакЕ зак сгаз зчсаочстас тес тоассцасео а
МК чнскеа) сзсасстцса сасмрирнс арюстазає всосстопсв пстовсвосва 185 пасосівсво метом зстсаоамрар всссссоаза ктссвасово сомокісх скавовенкчь ва 155 «21» ВВ «вза» КВТ «її» Штучна поспідовність ку «Ях АНТВСКАЄСТВЯ ОБО кс ааВця 33 «запалиноює димарний
Зевса «а» ЗАЗ сів хв! бі без бів бів Зак пі Аїво5ів рем ові бі вра Бі АТВ
Зег уЩаі Куб рев озек обу так дів дЗеб діу РВЕ Аза їв Був АД ОТИК да КО
Тук МЕї ні5 Теромаї Ух бій Ага Бго сіб сій бі реюв бів ткрорів
Оу АгФ ї18 Абр о Рго Аіщ ап бік ах йеговув Бук Ві вро рух РБЕ
Б зх їх бів біу ух АТа Твгожів твеодіз Ар тТнг о хаго бат Ахла Тйиг АТа тує т 75 Що
Кен бі бецотвк бек рев твко5егк бів Ап Тне дів Уа) тТук тТук Сух
Н У З - діа кро вве сіу Тук Тук Уді Зек аз тТук АЇВ Меї дід Тут ТкБосТУу їоп 15 це сія біу те обеє уві Тк оУущі Зак обег 3ів Зако ТНК бе ФфУ Вго дек у 128 зх
Страница МЕ вАТ-Я ВУД заф бе Бгто ев Ав о вго ет бег гук бот ВР озак бі щі тТвг АВ 10 їх ща аїв іо сі Суб сви уві рмБ АЗОВ Туг Ре о кго 5ів Бго ма ТР оУВІ 145 150 55 10 ек оукроаза его бів вій без Тк Зак сіу ві вів тВг вва Бго АїВ 165 її 175
Уаі вві бів Зако чає Біу рев туго Звгб орав бак о увко мав ві ТБе хв 180 1855 135 рго о Яек ек чек рев бі те оФій Те отТук їі Сх аа Уві Аа оНтя це І а іуз го бар оди ТВ об уУух Узі Аза бух Бук зді бів го буз вс Су
Ша; шк: | | 220
АБроіуз ТВе Ні Тв оСує Ре) Рг Суб бгб АТВ о бго Бій Ат АТ оту піу Бко зег уві вБбе ве) вне вго вгО руб РгО руб дво ТР оре) мех г4х ямі 255
Тв Зара ТВроБтоО «і ів) тТвг Сех Уві Уві ві хв ма? хвК. міх
Ті баг Ага тк кто щМіц узі тТвгосСех Узі пі Уді 55р Ма: Баг мів газ ато
Оті дво обго сін оді рух рвВа Аа зка Бук Ма Аа і Уві щін ді чі аз оКгОо сін о хаАК Су кпк ау ФК о руЄ щі АД БІУ Ма щіМ Ха
Ух па зах 275 КО «85 ніх Аз АТа сує ВК фу Рто Аг бів Бі Бій туго деа чего ТВгОТук
ЗО 25 КН акцоУВі уві ек УВІ Без тк оУді мезо Мі бій др о Тго іо Аза Фу
За зх ЗА 323
Куб сій тує руб бує губ чаї Зак о дяп із ДІВ іжшц ФіУ Аа орг ТЕ ів фу їТВг ої цегоїух дів іУу5 1У Є1й ро дк бій р; Бій Ууді оіц жи зїпгбозіє его Був ків оку шу ік ТО АгУ ФбРЧ го біб УДІ
За 335 з5а
Страница 505
ВАТ- ЯКО сУу5 Тр дез БгО ргО бег аг ар обБбіц Бец їйг бух Ап сій та ще тр за 355 івец же Суд діа мазі фу біу БВе тук г Заг оджр о Т18 АТа Уві сОїц
БК 375 БО тТкрохіц бе двй Бі вів Его Фі АБ Аа Ту Бу ТВКОТНе Бгто БКО 385 що Кк у;
Зі ієЗ АЕр о хак дав бін баг обве Бо без а? Зак огбух івц ТВг о Уд! 05 А 413
Ар му Заг одко тер ойіп бів сО1уУ АБй Узі Ве бек Суб 5вагома! Мет 42О 42 430 ні біц діа грец міх ай Ні тує ТВгоОБів бух жшт о їец бек фев дек 435 440 за вто опіу бпіж пі бік б5іу бек о біу ші сіу сОТу чаг дк бів Біу го 450 455 ЗО
Віз саи ЗегоБго Ажхроабр Бго Аїа сі фом фу Аза ев Ага жів у ч55 БУ 455 з
Мей Рне дів с1іпоієв уза) Ат бій ап Уді бе фев їі Аз осіу РгО 355 зо Бас ев йог о Тво оТук Зек о азв ого біу іже дів Щіу міф щеє бен о ївге бі що За а
Сі Бен одевг тук гру бів джв оїнг рух ам бен уз) уд! Аїв Куб АЇВ
У І ква ІВ 247 Зо ЗК щі УВІ Тег тур УВІ НО Но сія івц бі зі Ак враз УР Уві АД іж УДІ Туг тТук жві ке вне сій сви січ Сец о АКгУ АГРО УДО УДІ АІЗ 53 535 5
Бі січ бі его бік Зейк оці фак офец Аїд ів ніх їв бій во вв) 54 У З25 зба дги пег Афа АТа біж вів вів дів зе) дів бец тТВгоУЗі за фен вгО мен КК 575 страница 503
ВАТ-чТЛ КЗ рРго Аа его его бів а18 Ага Аза Зекодіз Ве сі вБе біб ОіУ АкКа
Ба 585 550 меноцвци нів ев баг о Аіа ФіУ бій Аг ів біу Уві Міб ів МІВ тТВе 55 Бо 55 шім дів дгу А1в Аге нів ід теробів ман о твеовБів б53у АТХ ТВг Уві
То 515 по зв обі іви Биж га мафї так вро сій Щї18 вго АїВ біу вв вБгО Баг
Бл АХ Б 55 ща бугу вки уки нм щі і Я іє «і вро щі щі їх пі са Ага Бі
КгОо АГфОЗВК міМ озту вБіу ОБіу ОтТу зшг о ЗІУ Бі БІЖ Бум ЕТ Аг стю 54 що 555
Біу Бго ОР вен бак Б АВР оАЯр РгОо АТа О1у ем ізй Ар овен АгО
БО вве БІ іп оФім Меї вне АТ шій ісвм уз) аїв біб да УдІ вен ово ЩЇ18 Ахр
ТУ ЗВО 5В5
ПіУу РРО іви хаб Тгротуєк баг Ар оРго БРУ Бр о АТа зіу Уві сег офе
Б 5 той
ТвВгобіх Бу фвноБеє тук оку сів дер отТве без шіб івц Уві Уві від тах 15 715 72 о 15 ТО
Бу Ав Бім маї Тугк Тук уві вБе РВЕ біб фей Бі ї8ц о АгОо Ага Ма!
Тих т т3х чар АТВ ШІ сій о шіу шжег о сіу его уві зегогев Аїв вев о ніз би ЩІ
ТО та ща
Рго ем Ага хак Аза віз іх аїз Ав АВ фено Афв мер оте Уві яр
Те ї55 івам о рго вго Аа чего его сі ліз Аго ап Бак аа ві Ту вне дій
Її ра ко
Оу Ага гам оіец нія фен бег дів біх бій дго рев обіу хі МІ5 фви
ТВ; яю 755 дю птраница З вАТеЯЗРОчКО
Н ще о додат АТ я. пи х ку я пн си МН ВШ ні тТвК Зі Аа АгО АВ АГРО МіІЗ АТа тТРрошівй це ТВгобів пі 13 тТвеомаї бен обі вав вне АкфоУВі! ТБР око біз їі вго АЇВ о бБіУ ев
Іа 25 5 вга о жет вгоОо Агу бе бін «й За «іі» 844 кефо ВЕК хі» Штучна послідовність «Ех «203» Анти СЕСІЯ п Ес пани З «вистуломе ковомерний 4-38,
СТА
«НЕ ІМ)
Чім охві іл оїем Фі біп Зек обі Аїв бів бев о аі дім вро Фіу Аа ї х та 15
Заготаї ух сен бер був ТБ оАіа бек ощіу БВ АБИ ХЕ руб АЗО ОТВРЕ я 25 Б туг мет ніс Тер омаф був аівп дра ово дім шій сіу февобів тго жів зх 4 45 сі Ага їів до вго Аа Ай біу ай шаг фу тує Уді Вго бу ВО 0 5 щі пі Фіу ве Аа твВг Зі ТВголіа Аза твеоЗаг баб Аба ТВК Аа тТук 5Х т дк ЩО цец іп бе) ТВгоЗег фей ТБгобек Біб АВ отТВК о АЇВ Уа) ТуУБ їТук Су що 35 зів вто ВВЕ о Ффіу Тук Тук Уа! ЖЕК Ар туг Аїд Мет Аа Тук тго Біу
Ма 105 ле зів бі зТвБгозЗоек о Ууді тк оУДі Хв оЖег дів ет ТВк бує біу Втр) Зак 130 15 Й стек БОКУ ОМ.
УЖі Ве вто веб дів вго же Хве о бух хве ТВгошеє бі біу ть вів
Страница 505
ВАТА ВИР КОУ
Мів рев бі СУБ МБО чаї УЗ АБО тує ВНе вго ОБР Бгто маї їйг оУді 155 їЗИ 155 150 чабоїг) дз дет біУу Аа рев ТвВгобег о біу Ууді ніз тб вве о вгоО Аїд
ЗБ 376 ТА
Уаї ев бів 5ег баг ойіу йти Ту бак оіви Явгодеє Ууді маї ТНгоУді іо ІВ 3
Бгто зак зег баг оівем сіу ТВгоБіб твкотуг зів Суб деп уві АБ НІЗ 135 бю 205 вже Рг чего Аа ТВг обу У Ав бух ку ВР січ РКО Бу Баг осує ер ову ЇВ ОН те сухо бго вго Суб Рго Ат Веб о 5ів АЗв о АїВ «1 425 230 235 зай
Фіу Бгто кегоуУуві вва фев вве Рг то У РКО Буз АБ ОТВЄ фоец мех іі бегодкЗ Тк оРго іш маї те осуз маф хаї ха? дзв о уді бегонії зо їБ55 ета
Зів Ах овго бів Маї фуз Не дхп Тер отТУук Уві Аз обіу Ууді Зв Уді
ВУХ Бі Во
НіЗ Аж А1В вуз ТНК фу рго Аг овім шіч Пій Тук Аа Зак оте тує ге Ка З дра Уві ві чего жа) фец о твг омаї рен ні 5ів о Азр тт ем Азп Оу зах зів 315 З
Вже пін туго Бух Су ум Уді ЗегоаАжа вуз АЇвВ ви 1іу діа вка тів
Зи5 4583 І зЗІх жк ЗУ Ох бів бух ТУВт Зк бек оїу5 ВІЗ Куз ЗіУу ів вРа Ага бів рко бій уд! 348 їх що
Тут тв ве: Бо вго Су Ага) АФ Бім фам ТВКофух Аа бів Уді баг
Страница 55 вАТ-а- КО 355 зе З
Мав оїгв бу вва чаї гу» пі ББе тує га от ази оїів Афівомаї бів м З Й реч
Кк ТУ КНУ
ТгроФій его Аа сіу Фі бго бів 3зпов3а ТуУугб ву ТЕ Тве Бга гу їх З 355 щі чаї мен ар Зек Ар осіу Хек Ве РН ви тує Чет Бу рен ївг чаї дОх Я 15
АБроіух Хек о Агу Тгросів біб бі Аза Маї вве Заг о Сузх мет уві мех 425 325 438 нів Бі ай фев Ні ахп нів Тук ТНговів Бех ХеЄ фев бег рев бег 4х5 Ве БУ вВго зіу щіж БіУ щіу Фіу зеє сіу ціу піу пі баг Ага щі) біу рго пім іям хевг о вго АБроаво Бго дів Біу ев оїез Ар гемо дго сія сту 455 ау 75 5 має рве Ан біб рев хат АТ Бій Ахп УВІ і«ц о іви Хі АЗВ бі ро
ЯМУ 3 495 мев о зек тгротук ак Аяо Рг» Сі би діа Бі УВІ Зек фев твг обі ко Ох БА щі іши дак отуг фа СТ дор о тТВе о пл їй ві маї дід ім дід
Щіу бен баг Туг ку січ АБр ОТГ бух пів іез Уві Уві він куб Аїд
ЗУ ца ЗАх «1Ж а тує Тує ві вве вп бів оз біб ев ато Аг маї мі діа 53 БЕН ши пі чає цію церг уві пот одягу іп іш щш ак Б емі піу пів шіу ВГ одіж хеК Уві Бегб фев дій ев Ні км ощівй Кго рем 545 50 Зх в
Ага олег АТа АТа сіу вів аз АВ мес дій вен отНг охаї ар орец о рго
БК ХУ Важ
Бгто Аїа доб дет бів Ав Аг Ази Заг оАТа кНе щі Бе сів біу Аг птраница 07 вВАІ-Я ЕЛЬ ВЕВ 580 КУ 5 ви гемо мі5 ген бек АЇЗ бі Біб оаго веновіу Уа ні без нія ТВг та: Как Щ й Бах
ЗУ Не АУ ів Аа яго АЇВ Ага мів Ата тТгрошів без ТВ опів Бі АЇа твг уд
БОНН віх ко івч йіу ви ве Ага УуВі ТВгоБго Вів їі вга Аїа Фіу гемо Бк ет
БІ аз п ї-Ні
Вга Ага его ха Мр м «їх дик «ТІї1їз штучна ПОІСЖЛіДЯВНСТх «еВ й «ей» ОДНЕ, Би МАХВІАт-вУт НІ «м 351 сенс зассв сезон зоссіїсває пікс сааааа Ста цела чЕссесавсє сасслсвоса стакан сані є асажннноа зсоЗакчас а
Япасвассдоє вожесмни стасвесатє посаєставє яаоссвсвоє сдоогкуєє
АВ заквостоса соводоженак сіассссвас дссвеєско сЗвкисвока сесавсесно
М васнмнсса зо еиає востссавоїє аізминюЯ асист справа
Ми щ У 2 ду ти Я З
МК змеуєсавк посвсокека скоса сссаассса дфовтсаосве саасвасаце
В завсссціча зазеїввеча сассомнс себавсстосв азсссоводє ссадавевсс
За вестмсекак дотопекова сецесасє стасссатає сесесвомех ссадоєовоє 5 чмоосазсв авесстчзає сскоекісавс дБ аізмнаосвяа ваполасоо число азазвсваезе зіссвскаво сосвоекчвмоє ссотевосох соках єстоа птриница ЗБ
АТЗ
Уч шко хтвсссссв вовосссєАк саксвесски сехдраєни а четвосмев свое скезасстоа асхзссавсве сссвосаас сссвоуєссте воаїгасна ск саве пекахєсєсопк всвсакас «банта ктхакссса зів свасавосває «Зсвсссвса сс сеЯх отссваксм пса зопавсваєсе свои 43 зесаїсвесо капесасскс псіїони сис зкоЗіцассв вессїсвоає сапмеаде що заиєсасся риса хазмнсаає півмаа сети свс свасзвиаси
Бо сФасвієсвосВ сссоЗіЕК сткеодлацваї савжсєсек ссвокачсва зсЗувіазо топ симинсвча засво «сек вм есвівза звана сок їо5о вісі осо ета гісва ссссвісваєс задааєсвов яоасссопає сабо що втрааесквсв всвисстяск ссвадевем: сідаксааку Ттозвистода авта сачцасссво псазсоцесі звасовесвк Фтсовазссс позазатсяа зедосасова ч450 певовасоо вссасжимв жоВшеще по тудру
М те» 355 «ії Зо «вій РЕ «15» ручна послідовність «ей «вай» ВИ МАЗНІАОсахіМі В «400 35
Чіп обжие ТНеОСтТнк б) Хек меж Бго Ба дей Уві Аза піц біу рух 518 1 5 12 15
Уві Кей овемоіви уві нів ай офем во сія біб рев вне Фіу Туг зер «0 25 30 страница МК
ВАТИ КО
ТРОо Туг о іУу; ЛУ ІМ дга уві два біу дк ага бів їТе уді біу тук
Тр отТуг уз Бі Зі оАгО УВІ Аз обі Аа АГ бій бів Уа ші туї
Кжя 30 4 діа бе шіу Те цій Зібй Аз зївговеро Зі Бга АЇв дки Шаг СТУ дк
Чо 55 МО бін о твк їі Тук о вго два АіВ шиг фев гу їі бій аа мі Тк бів
Уа 75 Що вазй дв Твг ошіу БВе о Тугб ТвВг ої Бій оМаї Біб су» Звгоазв ізн жд
ВХ За зх дай зів Біб Аїд отнК зі сій Ба нів УВІ Ту вра бів фецовВга ух 153 М м кго ще дів ес хог аз аз бек рух Бг) омаї бів ср АБИ АТа
Уч чех Й зх
МАУ кА їх чаї Аа ВВЕ ТВРосСув біз Бгто Зі» дій іп два тТВе тТвг отТук го тт їх 135 340 тгрохаї Аа бі біп аб ви бго та)! бег обро Ак рев бів рев ер 145 ї50 155 ї150 лап ошіу дяп Ага ТВ офем ТВКорен рве Аза УА ТВг о АгяЯ Ап АВ Аїд 155 179 т ака Аїа ту уп! Сух піу іє біп ази бек Уді Заг дій Ал дгу ет
УВО 155 Ма
Аа БІ; УДІ ТВгофев АхвоУаі ім туго Біу ВгО АБЕ ТВРг РКО хів її 1 здо | 205
Щеат ово го АВ бек Мак о Тук ву бан? шіу ява допоіеи Аз рев о о 215 РТ
Су НІ ек АТЗ его ода Вро пог вро бів Тукозак тТевоАга жів ду пес чн яУтрук В - ж дез 250 ж ай
Зіж зт вує сія бів Ні ТвВгобій УВІ збе Бе тів дів рух Ті тТВе
ДЯ 2 5 клз «ли «3 страница М вдт-ч1у0-Ед вро аяк дей Аяй Сіу ТВгОотуК АТа пух вне Ущі Хв Аза фе аіВ ТВ
КІ зх МУ біу аг ази ази бек Хі жі був бегт Хіе ТВ ув) Бек оА)Їв Зекомев виз ВО ФКх
Хатовго чаї Уа Аїд вух Бго бі бі бух аів Заробувх ТВгОтТВг Уві зв8о во Зо
Твг обі азрвогбує Аза баг за? дв оіно ТВ о Сух бе ТВБг Аа Аза ТВ
Му Зо 315 32 пі їт8 ЗК бів Аге тр вве врє Бу« вза бів Зк офвю Бко шег о ег 325 330 35
ЗНО АГФоВет фу фе заг сів М1Уу Аа ї1е ТНК ів бек хів аа орга ач 145 Зо
Уа уз Аго вів Ав Аів шіу ТВСотТУг тТкв Суб Пів маї Не АБИ ВгО ї55 ЗБ 155 12 шег оіуз Ап шій Чеб азЗв о БгО Хі МОЖ фев АЖхи Уа) АБ ТУ Ай дід фей орго сій Сім Аа бе Зі Аа маї Або о веи сім ха) цеу РВЕ
ЗК з У БУ ів біу вва обіу бЗакобім фен Аа Ар оті ВВе Фіч яів бів цу ї1в
У ЯМ аї5 и о АННИ - Мод - її «це ско Фі мли цій тевонів бі» Аді Ага АТ ні Ні НІЖ Ні ні нів
ІВ 48х «Мі Зч3 «г1їх ЗВО «й1х» ДНК «13» шуучна послідовність «ВА» ут НН ткххумізй феї рум й Й Ф меру дтих - - «ейїЇ» ДМК, димернив ни схо 51-13) 5 сре-Бссояаншає 8 «виступом» «Мю» 355 сапоїрссс зсвавівспс свовассав восаїбовмню сгокарктсєвс сезоїаєаня стеваниця МІ вАТ-ЗІОО- ЕКО зазоазоавазвоеа зсгБісакксї пасозвссяа ачзарансо заатезеоав шах ї2о авсвосцоакза єсамсчВсто соасеЗскес хасстазтяа посту Азнн сІастТІ сво. 150 «вювазкаЗ зсжісацсск девскассзоа азоадаєсани авссостатї ссвоствазі
МАЙ завнпкасзоаа зсеакочаасаз состава асп таа сеопасазадца свазецах
МюЮ підзапгатов ссвоссовова сассвоессо зве кіс випзбсовасцв садно ще вкксічаніс пови с садочки проце пазу вою 420 шизовлите вовтатсвсов соми пепвузкачі спаєтваваЄ зсацтЕкася пасивів звУвІмнчвь сЕКЕНіКкта всім зававовшеа зактаковае 5 чідсадувиів акістотоавЕ сассваєтук зас сїкі всскзаксаа сетоавЗоце
М
Мне за3оааеатоца свита сасквосаза подасовода асо. по спвоастоавовз вазтасвова сековасавс сіавплочев сбаасстоаає ствовадиаве тей вемиасатс твазвсавкщшасєс свосововас восазссоо пспастссса сао ас
ЩО часно в ссстеатссв ссвуваксит саке осзкаєкочо вас сраки ви ратстса баси оХ освосассхоа зекетакс спосо
В чассоозане казаістао сасазссвас фіг аокє Бсжоавква ЄтЕСІВоСеК счиснннся азот азам зва возасвапав сс ува
СВК шжмеКН чу З У РАК КУ У
Тахо засчиочвссу засазонсно свнннстсс зсетвовоєє хапосає сежоакссто тощо засво всїасчвива асвовавиу сирок вазкавсссв сс ссто 1350
Странинв 51Й вАтТ-Я170-ва тсжхвоассос сезссавова сттсовасс со аоіса всазазсссв ас ес ї500 сесвилвиску спот тЗсковсв соска весжаЕксс сосвадаеея ї35о0 завезастасси кавбвассвоа секс е звазіовссї став коЯх ово шо сасожнраєсс ссузавтвав зкїбавжко тасосоаорася зспеозаде девсазіосе ї135о завссващ сви ма зовн зазовоии зЕЧЕозвтса сосен еє 1448 пІсСсттВсВсс сщозстоЧех пи оЗсава звахасави асвазчаесїс саакавнх їкю стеки с стаксоацаз дессасксксс зазєсзаві озосякессоа зоавссвсао їв зчЕжіакасс косстссато сспузатово скуксазаа восени саЗ сс 15:50 семи сва чиста с сао оаовВх зоспоахоазай ово сва подосвасоа їс8о зЗвоавасавоЄ всвазассве зссзескосу седастссо веесжеєтЕ стЕсстство ії засввуєюся спзкоцастаз ааосазак сарсзаззаа асо кекс аніс ао 1500 акфеатвчун стсцвоасва севстасвсз савзазвУкс кохессЗіс мом каз 1550 ка» 54 хеії» ТІК
«айв ДНК й
«83УМ штучна послідовність
«ВО
«Ж» ДНК, момомерний ве ох. 151-385) - СНІ
«ВНУх 354 семи ісссс асаовевасся снзавкосво зрсвксавя тесвоаттеас сзаакасада чзазуащемю поста Есск часове) ема вовтсацьм зако весавсвкаа театсиасте срехннхс квксоховіса зсстовазцу скаЄєжкевОує 185 пирмнвУуцчнр вовжсжсск Ффоаскассво аазоасоадо аск сіНк сосні страница 513 вАТ- НЕО
МН
АТЗ азапмюкцва зсопїоазвовоа ссетаацвка зссовоассстав ссідсазаеза газах
БЕН стзаасниов ссвоспасав сассвосст пдсзвскесс асокоааєва сс
ЗО І І акссвааЕтвє зссаоазско сресоваВіс сі астю закеозаза сессодВЗао ча повоцеїста схвесасвов зоресссоує вівіжсссєс Коодспсєстад свпосавоває вже зсаєстосо савсвеєсвє секооюстоє стае витаскієсє совоуюстоєу
ЗИ ассзинссх дазакес сосок весзосятає асзкетЕє ската
БО свуадсдосв осстажасес котдаЗєвос са каасо гусссвуєва сорок уВЄ
ОО асссазвсят зсасстоєва сровиссає вазсссвуєа асвссваов: засво
ТЕО псдоавесея ВЧ сстаЄ 718 «Й» 355 «її» Бе «Ех ВК й «813 Штузна умстідавність ета
АКА. «Й» димерним Бу ПХЯОБ 515183) - Сря-всУулавцює я «вестувом» «Я 355 зіп УВІ Бегонія ага тТукоБто Аг їі бай Заг оті груз маї ій РВЕ твгобБРтнотуУК Бек бує бів бу бі Бе ї)фз їжу ТВт хв сів бух 1 га її о
АзроБів їі мех бух УЩІ бів Ахо аква оЗвгоУаї Її їф2 аз СУує АВ и З
Су РФ Тугоцец їі бегофен обу о1у Тук РБе бег сій пів У! Азр страница 5ІЯ вАТ-ЯРНЬ ЕВ тів 5ек фец ніч тук бів іж5 Аєр опію піч РКО їз вве бів рев гу во та Тт5 5 іуз жаР Ага баг Уа Аза пегофебв мет Уві афВ Зак обви ТВЕ тек ух во БЕЗ аз обу Уві Туг іев Ах жа ТНК о тТКг одхр оди ТВ лоб рев аз Аз цю 105 ща вне ніз ме! А«єп щі Фіж бін фев Ті ев тів із зів деп кго 1у 123 125 бів вве сСух УВІ рев бі бік Зі Бі багосіу «і О1у Бім бек цій ле 7 7 а сУх 7 й й ду й т їх 135 1 ма! Бак НіБ Аг) Тук вго Ага ї18 сій дег хіє уз Ууаї Бі вне те 145 150 5 160 пів ТУ ж ух пі був Бі Бе жів рев отак ЗБК ОСів ру дім дер 185 і70 15 ці комах г ді іп до дхп лвромМаї тів тів доп Сух адв опію фін оїіш МежЖ фу ді Бій Ах одхп Бак оУді Ті Ті А5й о Сух ав оту іо 385 15
БКе туго цеац їіє Зекобен оїуз біу Тук вне хат цій Фіз Уві архів 355 щі Ох
ХЕ оржм Мі Туг Щівй бух Аз осОіч біб РгО іо вве біп зген фуд фуд р Не К 1 СЯ 7 ох кОоко ко
Уві Аг їн чаї ачи его їец Ме: Уві АТ Чек офов Те Туг іуз дю 230 ІВ вен вух Зі тет демо Азй Уві ТВгоїВг о я5о аз ТвРОЗВК ве Або др З 250 о Е55 нта Уві Аа Фі сту бів ев їі фгз їіфв нів зів Аха вго іу 1
БЕ 255 ато
Бпе Суб чаї сей піж бі біу біу его бі Бі «1у Шіу Зег Ярое ТВ с та 7 7 чех Ш ка о «Ох станицв 515
ВАТА Я 7О- КО та! Аїв із бго чего Мді пе Рів вне вго вго шег Аз Ага Був Бен я 235 00
Кук доб Оу ТВг дій 5ек Удрф ма Сех вен бен Аа АхИи Бе туго Вго
З 310 і 2 дга 1 Аїв о фуз уві піп тбр обу УВІ! дж Ап дів ву бій бек обіу
Ази бек бій 5ів Бегозаі ТНК йім цій АБрожег Був аз бек тн отук
Зо 345 уні щакоіжи Мак оХМиг ТВ оо їВгоїев бек оку ів дЖр о тТУЄ Сід іук ВІК 355 ЗО ї655 муж Маї Туб зів був пі ма! ТВ Ні іп СТУ їву Заг об5ак о вгв ма зт Ух зо
ТВе їжа бак вів дБА Ага бі піц Сже ав му ТагОНіЗ ТР сСух Бга з85 355 5395 чию вро сСух вго Аїд вго Біб ів вів піу біфу тезу Хе в) БВжогец БвВ вго овкоО їує Бо уз дяротБК фей меї Хі Звб Ага Тйг око бів Уа га УБУ АдОа увкосУув Маї чаї ха дврожві ет Ні іч Азробго бів Уа вуж Не 315 440 4ч45
Аза о тТгВ тег МВі АБ обіу маї 5ів ді нів Ап АВ фуз ТНг бух Бго
У ЯКУ 50
Ага бін біч ій губ дзв Зак о тнкотуУук Агармаї жа? боб Уві рев ТВ «5 37 475 Б зафоев нія бів азр тТгроівц Аа піУ реа с1Ц ТУК зу бух гук уд! 485 9 а
ШегодЕВ Бжа Аїд се сіу їв вко Ті біз фу КР ОЖ)Їв бар був АВ. 500 що 530 стваннва 515
ВАТА ЯКИКБКО іжв «1у іа го Агар оБів вто біп Уа Туг о ТвВгокем Бго Рг сСух Агу 515 хо ех азв бін фен тТВг обу Ап сій Уві Хеб ни о їгр Суб Бен Уві Кув бі
Вмеа ту Его Знг Ар ожів АЛЕ У бів тт оБів Заг одяв Ру Пій Бго бів Аза вази тує фу ТВ ТВ ор) ба мні Св АБ ще вза біт баг вне ве рей Ту Кетг ож і»и Твг УВІ азпобув Зако дк тгро дів сій 550 ЗК кщО біу азип Уві вве бек суб же Мді ме ніз щіМ діа фен ні аза Ні
ЗУ БО ОХ
Тук ТВг о Біп уз щЕег іш сег ілу бегоБго бі ув ща 5ІЗ НУ: ка ЯЗ «Вії» 245 «Вій» РА «2135 штучна поЄлідовність
Халк» «кої» моновермий Ме ох ЗІЗ І1К3) - сні? «НюЮз ЗБ
Бій Уді бе ні дк їуг Бго Ага фі бів бек о їі вух мі бій вве 1 5 за 15 чвроБіц ту мує уз піз іх Біу Бе їі били Те баг ціп фу БІВ за й пок Ко: 7
КО «З щі
АВ БІ; ів меї вуз ві сік Абродйпй его чтві їі Зі дзп обу АВ її ЕН 45 шіу вБе Ту ем ї1е чего фсн бух біу Туг вве бек бій Бій ці Ар
За 55 5 жів бог осев нт Туг бів був зр Біб Бів вБго вед РНБО шій рем рух т а що
Страница 517 вдтеЯ190- ЧЕ іа Маї дгар ех ма Ай обекорсв Мек ді АЇВ баг оби ТК тує фуз
Б Зі з ази гу таї тк оїзи АБИ ма! Тк Так АБЕ АБИ СТБ Беб ів АЗИ Ар цю 105 їв ре дома де, с3іУ сі щі ві хі ії ж вдо мч «і деп о вро і ввіз Узі Ах осі ФіУу ім Бе їі ів їв нія зів деп о Бго Фу 115 зо 155
ОЗіз вве о Сухє уаї вав щік щіУу Зі зіУ Знт с1у біу Бі біу заг дів : 150 135 1353
Затотйк бух біу Его хег отв) вва Рго із Аїа вгОо бек о5ву фу5 дає 145 150 ї55 їО
ТвВгошеє Фру ЖіУ ТВК АВ АЇв оїгв обі Су» вв ові ФіМ Аз о Тук вве
Не 170 175 вто обБів Без маї тТйгома? бет Трродва его оту АТа ве о твг его БТу їх що чар ні те вне его Ата Уа) фрез бій его Баг бі ів Ту Бар ори 195 КЕ 05 зак ошег УВІ маф ТВР ОА! Рг бег обег бегогец Біу ТНК оєій ТВК тує 3 ЩІ гйа їіє сСух азй ува) Аза Мі вух вто Зародуап ТНК оїу» В АБ обід зфух 230 235 й ді їв ії ми КК огУух щі БІВ ОГО був ЗК оку 245 «105 557 «із «30» ВИТ хаїЗ» штечна таспідсвністе «Кох й І «се» двтвесвіЗ ВЖИВ. МН «НН у сСтранвцв 518
РАТ-ЯКРАОА ЯКО оіп жі дів іео уві бів баг обі їв бі ма? ру» іже вко Бі АВ 1 5 18 А йекожві фу ув! щегобух цу Аїа ек Фіу тТжг ТВРг орав ТВКОоАЖротук 2 их о хі меї Мміз їв ота вто Бій АВ орто віх віп о біуУ фев ОБ о ТУф БУК щіж Жутг Жів зп овга ту АЕЙ АБ сіу Зег бух Туг ТВБодщів бух вне щі 55 БИ ців шіу ага жві ТВгомек твгоБек дер отнк еко їі ет тТВговів туг
Та 75 Зі мех бін ев бог Ага бан де) Жег о АБр Ар о ТБВг АТ ЖАі Туг о тук Суд и За й дід Ага щІіу тТвгротук Ту Тек Оу Бго Фі Бен рве Ах тує Тгрощіу 7 Зиг Й чих зід й
А М КМ ів Оіу ТвВге отТвВг о уУуді ТвгоУді Зак о5Ег ж заг вав А 2305 58 «ВМї» 1 хЕзй» ВЕК «г43м Штучна послідовніств вче зу хх ша : «Аа» дити СТО ТБЕБ-2В31 М, «ННІ» 358
АВ Ожів Уді макс твкг бів Те бео їй» Бек ої ще ві ТВг орга біх 1 Ух 18 Но
Чіп оРго АЇв Баг їі) бек о сСузх Куб ес шеб бів его їее бів так Зак
КУ Й Й з за «о р м
Ти ошІіУ ТВУ тТНе оту грм два їгБ тує вн бій груз го Біу ій Зак го сіп іец фе) ї18 Туг ар омаї зегогрує йго бве зер осіу мні го ща 55 5І
Стезница ЗІ
ВАТ-Я Вл ЗКа дер ага вне фак сіу бег бік Заг обі Твг одер ВНе тн рвм рух ХЕ т 7 БВ век Ага Уві РрЬ дів із дво омВі піу ха тує тує су ев вів бе
І Зо 5 ім йіМ АяЮ го Туг о тТвВг вве Бі Бій обі ТВгокуз демо пім дів ж і1093 105 мо «Кіа 55 «й 381 «Ар» ВЕЖ «ЕАЯх ручна Песлідовність «ех «ве3з АНТИ СІВ СЯБЕ-УНОГ У, МН «З» 0355 зій Уві сів обем о уаї пі Зоб обі Аїд бів Уаї бух бу го пі дій ї 5 т їх
Бек ма! фу« уві бек був суб АІв БЕК о БІіу Туг ТВЄ ВБЕБ ТВК аЗВ тТук
КО 45 БІВ їів мес нія тер оущі Ага дій Аа РО с1у шій піу гео бів тго мех 42 35 шіу Тук її Ахловко Тут Аз АЗОВ ОБІУ его фу ТУ Те ОБІВ буз Не 5 Ех 5
Ой ФУ Ага мці ТВгоМмек твгб о Зег ази Я бак їі) Заг о ївВг дід тує то 75 ВО
Мет Біб ізи Бог Ага Без Аг ЗК йкхродхо ТВголід УВІ Туг Туг о сСух 55 ЕЕ зх
АВ ОАЄЬроеРУ тТВготуК тук о тук сі Зак Сів ім Бе ази тує тКр обід зу уз я У з У
Зо їх 118 сік В. я сну ству ц ТВ 2: З че щу чіп ошіУ ЖК о ТНК от: ТВг ов) Заг оБоє 115 120 страница ЗйО
ВАТ-ЯЗЕО БЕЗ ха ЗБ ках З еВі2з РА «гіїз штучна послЛідДОВнНісти «г «иайе однчти- СВІ СВК НОГЬ жу «ам ЗО дер оїіз Узі Мет тво аій твгоБго ен Заг оев 5агоуві ТВ Бго ФУ 3 ія 10 їх піп вто АТ Бег ув Зекобуз уз фак охак бій Чек ген бір ТвВг оба 2 25 30
Твк обі Аза о тТвротТук жи Ава їкротєб Кео біпоКує Бго Фіу іп Жак
Бре осів ів іеу ТТ Туг Аг Маї бер ому Абу Ра шеве Фі ді ко
БО 5 ща дер ака вне Зак ожіх Мет о сіу чек сбтіу твкК Аза вве тн фу бух Хв що то 75 ко вт дга Ві см Аза цій АЗИ УВІ бі уві Тук о тук Суз ви дів аа
ТвВгонтх жів бро тує ТВК о Рва о біу Бій щіу тб бух Бец бів 51 ух що це ма «кіл» ЗБ «а1їз 121 «Ки КТ «13 ще уУчЧМаА пННІТДОБВНІСТЬ
СИЧ ве Оки кИвле Анти сві СВК ОКО, ХН «ВН Зв
Чі ар сів без уві бій бегобіу ів бін Уа: Бу ух Бго Ту Аа ії 5 1 15 шеє УВІ уз уні Чеб сСжч ру вів Заг обі Тук ТВг она Тйг АЗИ Тут о 25 Зо страница ЗХ кат-а 10-го їі твконіх тт омаї Аг Бій дій го щіу шій Фіу февобів тго мех 35 с 45 зі тук хів А5А ВгО тТуК Ази дгропіу шег бух Туг Ті ЗВ ку Не
У ТУ Ук Ах з Ж З зо 5 як пів дію дк уві ТВгомекх твг Зак одхр о ТвкоЗек із чет тТВг о аів тут
Мей зів бен звк Ага іям аг ошег Азов Азов о ТВгОВів маї тук отукК суз
Зо У
Зіз аг оіу ТВ отТуг Туг туго Біу Бко дер обей Ева Ахрвотук Тгробіу
Мо 155 Мо бЗів бі їйкК о тТВкомаї ТК ожа? Жве баг 1 Ії хи МЕ 355 «кім «212 РТ «813» штучна попяздонністх хе хийа» Анти сСпіЗ СВУ, м. хЕвЦе тівс Теакчке хай ЦО ..С1025 «геї» Хва може позначати бедьсяку амінокислоту, яма зустрічається 5 првродних умовах «НН» БЕ
А) Її Уа! Меї тт сій ТБгб оБго ів сяг рев бБег омаї Те о вВга діу ї 5 182 їз цій го дія его Ті Чет Се Бух бек одег бів бак овшеуи 510 Тв Хек а 25 за
ТВгбопіу дяй Те Туг фен Аа Тер отук рев бів вуз Рко шіу ій хе" ха зо ча
Рго бій фірм оівч бів Туг о аго Уді Зегогфує Ага ВБе Зв обі чаї ро що 55 що
Страница 522 вАТ-ЯІ?О- КВ азв ага РаЕ бек о біу 5акоєфім Бек Біу тт АБ ОБВЕ ТВ оре) вуз ТІВ 55 ТВ 75 о зак Ага маї Біб лід оів аз УР піу Ууаі ТуУуг туго сю ін сій сви
Ко зо 55
Твгоніх уві Бго тує Вк о вне бі бів зіу Хва ех ев біз ів Ку цю 3105 що «83ї0Ох 585 «Аз 151 «21й» ВАТ «8І1ї» штучна послідовністак каз Й хайїЇх Анти сі С5В5-5АЙУЮ, УН «ях ЗЕ ів ув! біз би у о Біп зав осіх АТаА сім Уві фу БУ РКО мі АВ 1 5 ів 15
Баг оМаї ву МЕР бек о Сех фік Аа авг о біу Туг тв вне Те одер оту
КІ с Й ам 2 5 ЗО їі Меї мі5 Тгр Уві ак бів Ав овго Біу БІпоБіУ іч біб Тк Мет
Зк КН й
За Б за біу тус хів аА5п Без тТук ден АчЧр Ру Зв бух Ту ТВКобів Бук ВНе 50 5 ЩО віп ошіу Або Уа тт меж тТвР о шег дев о ТВг лег їіфє ар отТВК Аїд тТук
РЕ) 75 ка
Мет сів іа Звг о ага ву Агоа лег Аз оазв отТвкК віз а? ТугоТує КуЗ я що зу
Аїа Аг ціу ТНготуг тує тТуг бік Зек вій рев вно АєЮ Тег отгв шіуУ т тт 7 й 7 оз дкЕ й зії й дО 955 АЮ т п Зм живе ти ЗАЧН Кн ри ді чзвгоїду
ОЗ бі МЕ пгоУві так ор ВаКоО ау зіх за
М Ка «ФМ ЗБ сСтрамица 535
ВАТ ЯКО
«ії 3 «212з РАХ «ВІЗ» штучма песятТдОовнНісти «пах Анти сві СВЕЕБААВТХ, м «Кк 354 дв її» маї мек тн щіп о тТВг ого іп чек фен бок оуді тк овго Ту 1 5 ів їх біз вро аАфа чеєб ік бак обу ув вк Зв ів чего бе ОР таб дет 2 ТУ Ве те обіу аа твготТує емо дені тр; о Ткбоїеу Фі рух Бгто б5іу бій Заг
БгОо о Фіай іч Бей Хі туго Ага ді багогцуз Аа Не бек о сіУ УВІ Вга
Ав ага вва пегобіу бек обі вк о біу твкоАєв вбе їтвВгокен Був її
БО ТО 75 БЗВ
ЗжкоАка чаї біз дів 1 АБ ОУЗі сСіуУ ві тує Тук був кв) о щів ге
Фіу ніз Тут Вго біу ТВгОРве біу із Біу ВР овБув ев бів ї18 ух
Мк 05 ЩЕ «21йх РЕ «213» Штучна песклідовністим «аа» «вам ДнтМ СВ СВ ММ, мВ бсіп уві бій йеи ув! бів Бек обік дів бів маф вух рух вго сту АТа ї 5 ї18 15
Бак чаї був маї 5ЗакоЄуз із АЇїа бек о сіу Ту ТВг о РЬВ ТВг др о Туг
Ка; 25 за
Її мес нів тер оУВі Ага Фі» АТа вго ШІУ ШІ бі фев бів тер мет сптрзничв 52 пАт-я170-БЕЙ ї5 30 45 «Ту тук Ті деп оврРОо тує Ап АВ біу бек обу Тук ТВ бій фу ВВЕ іп віх бага аї тТВг оМеї те ет АБИ ТВ дегб Тв ЗекотТВгр дів Тут меж дій ім его Ак ген ага Зегоахр Ав о тТваг о АТВ о УВі туї Тук Сух 25 за 35 зів акЗ Оіу їТВг тує Тук Тут Фі бат сій ву ВВЕ азвотТуК Тк ОБію 1 їх мо сіпосі тот за! тТвВг оба) Бек баг ї15 їхо «АМЕ: ЗБ «ве її «аї2з ВК «2135 штучна послідовність «во І кйВХ» Анти СВІ С888-МЯНІ, мі -щюх ЗВ
Ахо їі ді Мек твгозів тТВкоБго рац ха оіжц баг У) ТВговвОо бБіУ і 5 юю 15 сів Бго дів Зарої1б хаб Суз іх мот Чат бій Заг оба бів тТве ве їв шІУ дЕй оТНг тує реч аз їтгв о тУг їзц іп о фуя Бго Су сій ев вт ойій іецоївуи З тТук Аг Маї ек огув АЄЗ ВО» бет Сіу уві вго
КВ) ЗЕ БО азр агч Ре ес сіу пет оБіу его бі таке Ах» ві о тТвк івц гук їі
Зег ага УВІ бів 3ів бів АхроУці Бі Уді ТУ Ту Су і8ц Бій їв
БЕ з5 страница 325 вАТ-ЯЗ1-5БО
Твеоніх бів Без тук тб вне є1у іп ФТу тв вує ве біо КІВ Куб цю їх з16 «2105 ЗЕ? «й3ї2 21 «еЩії» щЩтТуУЧНІ ПОСЛІДОВНІ ЄТЬ «хх «пхати спіЯ свв ЗОМ ми «Нюх ЗА? піз уді бів ба а? щіп его ФіУ Аїда січ Узі ух вух РКО йЗіУ АВ 3 5 10 їх зак ма уз міф Хек сухо вуз Аіа Зак обіу Тук ТВгт о КБе ТР Аза Тут їів мах ніє Ткр ові дк вів Аді БгОо сту сії Оу беб бій тТкро мех о ад піу тТУук Зі» дхп ЕКО туг Ап оаБІ біу зеб бує Тук Тк оФім уз Ре 5У 5 БО сів осі» Аг Уві ТвВгбомек тТвгобЗеаєб Азо тТвгоБаг їі Щеє ТВК о АТа Туг т го Во мех сім ге бек ага фев Ага Зак оАкродчв о Тве дід уві Туб Тук о Сут
АіВ АКО Біу Тег тує Тук ту сі БгроОо бім ви Ва АзЗо туго тгроБіу цю 105 вм пів бік тТвкотак УДІ ТВгоУВ) Че дек 315 і22 «Ох 355 хіх 2 «812 ВТ «Ей» Штучна послідовність «йо доле «йЖ3» ватесюіЗ СВВВ-2ВОБУ, М. сСуранива Зб
ВАТА ВУЛ
АЖхротів чаї меї Тве ща тв Вго фец о зог фен Зак оУуяі ТБе РКО у 1 с та 15 бів Бго Аїа чЧег Зі Заг оЄуб фуз БЕгобек щіпй «вгофен бів твг баг
КН 25 за
Те ові Аза Тиг оту ви дви ТгроТУук фло ій фу Бго ціу Зір т
Ба 3
Бк бій івц о фіяч Хі туго АК ча! БеговузЗ Ага вва чек біб аї вто
М 55 що
АБр одга вне бат сіу Чек о біу бек обіу ТВгоАхв оре тт ори бух Хі бЗвг ага ха! Бін аїв Біб Азромаї біу ма Тук о Тук Сух венобвій рев ща З дж бак тук о Бго Ави те оРБе ціу шій пТу Тв бе мер біз дів вбив
М 105 ИН «3 З «із 351 «2123 Вт каїї» штучна послідовність «де йх «ді» авт іЗ сВвВ-ЗНОВ, У «а» 353 піп жві «кіп бем уві бів бегоб)і Аів бів чаї ду» ж Вго біх дід ї з 10 15 аг оУуді іух Уді дак обу ж дід вжут діу Тук ТВк ві ТВг ов Тур а; ді бух Уді Заг Ку Ку дід ЗК вію бук ТпК ве тВг ОА ТМ а з: З їїв мех ні тгв оаі Ак шіп дід вго Фу сій сту ев бів тео мет
ФіУ Туг Ї15 Ахп Кго ТУуг Ази аз о Оіу бек орує тук твгобіз муз На
Зіп Оіу Ага жа! тТВгомех тТвг зе АбротвакК зер ої его ТВг о АТа тує
Єзванмца ЗК?
й ват-Я|70- Ка що -ї з ши
Та КУ ТУ їм мех сіб іви Хек о Аге іє ага Зего Аз Ар ТР о АТд хаі Тує Туб Суб щц5 зо З віа вт пі ІВг тує Жук туго сі зву дів во вБЕ о АЗО Тук ТРОВОБіХ щю 105 це сій бі чт те Уві тТНе уві Бак оцек 115 їхо «Ам: Я? «Ді «й ВЕК хажМух Штучна послідовність «М «ай» однтиз СТКВ-ЧНОЗІ, УК «Ще ЗУ дерті Уа Мет ТВ ців тв окКко сви Зак обен бек ові ТВе го у
З ча їх зів Бго ів Шаг Їж бегосуб суб Баб двговій ве ісч О1ч бег бе
КІ Кз Б
КМ «А ле тТВкобіж аж Твготук фен ди ТКротуг івм цій бух Бк обі бів ак 35 БІ 5 го Біб фен феу Ті Ту АгФфоУВі Чаб рез Ага рве заг оціу ма! Втга 5 5
Ажроагу вно 5жройіу Же о піу Заг біфу ТВгоазо рве так оївм фу» ЩЇ18 пу то ях КО его Акп ові сім дів піб Аа Уві Оіу Уві тук тук су гвм дів ем
Ва в З
ІБ Аве Тук Бго уві ТВРК Овна пі Бій Біу тТвВгоїжз іви Фі Щі рух ї100 Р іт «Ох 575 «їі» ув «еїй» вит странице 528
ВАТУ УКИЙ
«314» цуузна постідовнсть «ВЕ Й кае3» дизерних Вих. 51-13), з'єднаний за допомогою са зй-ятінквоВ «Ой» ОЗ віп оУуаі загонів ато тук ВгО Ага їіз сію хаб їі рт Уві Зів вле 1 5 ів 15
ТВгОоБіш Тук іу5 ув Фін фу Бі вве ів рев о тТВеК Зак ЯЧій 5 ІМ
ЖИ 25 за дзроБів жів мех уз мі сій АбпоАва хиК о УДІі їі хіє азп бує а5рВ
ЗЕ й КУ АК Й й
Зх о піу вНа стук фен їі шег грец огуБ Бі Ту Ве Зекобїв дію Уйі дяй 53 У 50 тів век орец нії тук бів зу АхроБім іш го ем ВВае бів Бевз фу
БЕХ уЗ що іуз М Ага Заг о УаІ деп дет іви Мет УВР АТа баг орБац ТВг тує ув дар іу Маф Тук їни Ачй ув) ТВРб о ТВг АЗИ Аза ТВг бек ої; Ар АВ і ще це
РВЕ о НТ УВІ АВР Ту пін бін бен їіє вве зіе НіЗ бів Аяпорго ШУ її ї2о0 125
ОР МЕ о сСує Уа сен Бі Бі бі бі 5акосЇім шіу ші біУу деко осів
То 135 155
Уаї бек нія аку тТуг ВРО Ага жів бів вк г)8 уз Уві піа вве уВг 345 ї52 155 і50 дів Ту гу гу ів іУуз щі Во ті ів отвк дек пів руя Бін дха їв о їУК був бу баб Ку к«іу ка фра Кви о тпК о жхег іп о їУБ БР Аа 155 КЗ 175 сін жів меб був Уа щій Аяй Аза Хет уві ТТБ їіє бзпобув Ар ОБІУ їх 155 ще слюваняма 525 ват ЯКО
ВНе Тук їжи Кі Заг іс бух фіж Туг бе бег о Зів чі Уві Аза х1е 1 мю тах дес ви нів тує ФР бук Ахробів бів вго ви бе Фі о Бец бу Щух
АВ 1 а а Ат Бек Ма джи Зб оіем Ме узі дтТа Бог рен ок Тук лк АБО 225 М 235 ху іже мві ТУт Бец Аза УВІ ТНК Тв дО) Аа ТНК хг офеНБ др АБ РАВ ніз чаї дип бік біу шім цем Х18 февц зів ні біб два вкто сіж 1 г В та вве Сузх Уві їв «а» 7 «из кий «Вл» РЕТ «ФК» Штузна послідовність «во Й «їз димерних ВУЖ. (52-33, з'яднаний зд дотчомогємо пЯхй-лівкопя «КЕ ЗИ? маі вегоміє дго туго вга аго їі бів ог ї1є уз чаї о щіп Ве ТВ і 5 о 15 із тек фу вуз шій фук Ффу Рвж ОжЖіє ев їВг бек бів бух піц дар 23 25 за сів їіа меж рух Уві Бій Аза Ах Баг ма! Ті Її асп Су азообіє що Б вве тує фен Хі ЗаковбФое фу» Біу Тук бе Хвго Фів бін Уді Ав о їів
Бег о Кан нів тує щійв КУ даром Зі его бец РаВ ів ін їх іх о 7 75 що
Ві Ак 5же ма! Акй Че фе МОм Уві 8із 5агоїву ТВКотУуЄ ух АБ страница 50
РАТНЕ К
БУ 0 з5 їуз Уві туго гемо ай Ууді ТвготТВг о АВо дав тн 5е фе ав одер РВЕ цю ве ую ні УЩі аа щі бБіж бів ів їі єм їі ні бій Зп о Бго фу бів 115 150 125 вне Се Уа ви аіу пі біу бі БегоБіє бі бі сбТу Хвгожаі шег 135 335 34
Мі5 Аго ту БгО Ага ЖІз сТй шек її бух уаї Фі вме тк обЇв туг 145 ї50 їх 155 їжа ж Фів Бех піу вве ів фа; тв озег о бів кбуз зЗіц ар опію ї1Те ї1855 ї7а їх
Ме Бу УВІ біп або Ап хг Ма їі Х16 Аква Су АБР о біу вве туг ї5о 155 що інм ті 5еговфе)д бух пі Тук РВЕ Заг обі Біб ді деп тів хау у 155 й зав КІ який ее «ща ніх тже щій фж5 дар опція бів Бгто рес Бе бів ген огжв фу5 Уві Ага за Й 215 Зоо Й
КО 4 БЖ
Зек Уві ай Зег фс меї УДі Ав баг обжн оте тУук фу аАзЗвоїув Уді уже вч жк " 7 7 -
КО Зо 235 о туг Мен адзп УДІ ТК отв Айпродни Те ве обвм дор аз оБве ніх уді 245 5 жа
Ай дів ік бів ем Ї18 ім жіа ні біб Аза РКО БУ Зі) ве бух «50 ян Ка
Ві ви «Оз 33 кі ВМ «Її2х РЕ «2133 штучна посдідовність страница 3 кАтТ-аТ0о5КО «ке «23 Ве аз гК5-ТЯК «ую 373 ем дер кни АгУ шій сі крЖ Бе віз вів рев за? АТА жів Ай ма ї ї 10 15 ев обен їі Аза біФ вк бец бек о ТгротТук бек Ав обгз Бі їв і о «5 З
Щ1У ат жк оіна ТНгоФіУ бі Бе бек Тук о Буз Сів до тк офУуз зіц 35 Я 45 ев ов! Уві Аза бух вів о Біу уд! Туг Туг ві Ввео вве бі без 51
ЗО 55 що цен Ага га ма! хаї АТа о сіу бів піу бег о йіу зекомаї ек окев АЇа й То 75 Во ім ні ви дій го іо Абу его Аів 3ів біу дів дія дія фву дів що 35
Кен отвг Уві аз огав ро вбо дія Хек Хек Зіч АТа ага Аза бак вів
МюЮ 05 що вне Бі вав бів бі дк фву ем ні сем очог діа бі бів Аг обев 115 128 тах й
ААУ НМ ек шіу уві Міз ім НІХ ТВК бін Ага Ага ів го нів АТа тго осів Це ую 155 зо тТвгоБій аіу А! ТВг УВІ бево5іу рев Бр Ага ма о тТВг во пів її 155 150 їх5 ї5О
Вт Аа оіу фев «кі» Я7Я «й 155 «ЯВИ» ВК «ФАЗ» шрузна послідовність «ках странице 532 вАТ-ФТО- ЯКО «В» та ази Бгто АЇв Бі зби беч Ар оівц ага бів бі Меї вве Ата бій бец
Уаї АТ спів Аня уд) зн орви Тів дер ші БкО фр обек Тео о Тук Бек со Ка 3 дьвйовВго Зіу кеш Аза є3іу жаі шег о їем ТВе Бі Біб ік) хвкотук вух
Я 45 піз дав те бух Бі Беца Ууі уаі АЇа їж АТа сту Уді їТжк Тук уд
В 55 БО
Ме вве бів фев бів бвю дра дго ма Уві із іх віз сту Звкосію
Ж о 75 ВО дет оуві Хек бе діа Бен нів рев бів бгб се) Агу его АТа АТа сту це В З5 із аї8 аіз рев АТВ Кен о ТВгоУаВ Авроївч вро вго Афв Бер як дію цю їх То
Аїв Аго Аза ек Аів вве сіу РВФ бій Оіу аг ке ваз МНІ5 рей яв 115 іхо 125 ліз бі» біп агар івцч біу Ммаї нів рев ові Тнгохіц діа АКо АТа АгО 13 МЕ 150 ні діа тгропі емо твг бів 5іт Афв тн жав мем Ффіу ач вве Ага 145 р 155 їБО
Уді їТвговго біб жів его дід Фіу ау «2105 355 хкіії» ЗУ хафюю БК ха» ВЕгучна пЮспідовеЗить «ХО ейиЯ» Ве о ЯЗ 559-245) «ННІ» ї95
Страница 333 вАтТ-4170- 550
Рго ТгвоАїа маі его Біу АЇВ Ага А1В бегобго Фіж пог Аїд 8іЗз Заг
Бга Ага ізн Агро Зі с1у Рго біб фіяб бег Рго аЗр о Ахо вВга Аа с1у 28 5 Кн) іец ів Аз се аго віп озіу мет Не дія сій івцч Уві 8ів бів Ах ча 45
УЗ їм о ржи Хі Ар осіу Бго фев бек тт Тук Зако Ар вго сту їец аїз Бі ві его іеюв ТВ обі ЩіуУу бе о 5ет Туг фу ФРН АБО ТВКОру5 т 75 що зів ів Уві Ма АЇВ Бу Аа біу хаії туго туго жа! Вне зНе сій сви ка З 5 піч івец аг ак Уві ма! Аїд о ЗіУ бів 5іу За сіу бег о маї баг гг)
Не 135 їі
Аів ів Ні сен бій рго вм аго бег Аїд АЇв Зіу А1З АЇВ АВ ви їв ев тв ма Авр ої Вго Рго віз Заг обагкофів дід Агоойзи чог 13В 5 130 ій РВе ФіУ ВВе 0 О1у АТО Каб ве Мі зер нг АТа бі біб Агу ї 153 155 159 їанобі чаї нів кед; оміз ТВт сій АЇа Ага Аа АгО нів АТВ о тТгр цій ім Те осів б3)У Аа ТВготд)| їв піу фев вне Ага ма Те о РгОо ств ії іх5 180
Зін о кко дія пру бе їч5 сСтюанива З

Claims (45)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, що містить: (а) щонайменше одну молекулу Бар, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, що вибраний з групи, яка складається із наступних: фібробластактивуючий білок (БАР), асоційований з меланомою хондроїтинсульфат-протеоглікан (МСО5Р), рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕК), карциноембріональний антиген (СЕА), СО19, СО20 та СО33, (б) перший та другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить СНІ1- або СІ - домен та другий поліпептид містить Сі- або СНІ-домен, відповідно, де другий поліпептид з'єднаний з першим поліпептидом дисульфідним зв'язком між СНІ- та Сі -доменами, та де перший поліпептид містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ, що вибрані із
4-18В8ГЇ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із ЗЕО ІЮ МО-:1, 5ЕО ІЮ МО2, 5ЕО ІЮ МОЗ, 5ЕО ІЮ МО:4, 5ЕО І МО:96, 5ЕО ІЮ МО:373, 5ЕО Ір МО:374 та 5ЗЕО ІЮО МО:375, або ОХ401, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:53 або 5ЕО ІО МО:54, які з'єднані один з одним та з СНІ1- або Сі -доменами пептидним лінкером, та де другий поліпептид містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ, що вибраний із 4-18ВІ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із БЕО ІЮ МО:1, 5ЕО І МО: 2, 5ЕО ІЮ МО:З3, 5ЕО І МО:4, 5ЕО ІЮ МО:96, 5ЕО ІЮ МО: 373, ЗЕО ІЮ МО:374 та 5ЕО ІЮ МО:375, або ОХ40Ї, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО:53 або 5ЕО ІО МО:54, що з'єднаний через пептидний лінкер з СІ - або СНІ-доменом зазначеного поліпептиду, та (в) Ес-домен, який складається з першої і другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.
2. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за п. 1, де представник сімейства лігандів ТМЕ являє собою 4-18ВІ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із 5ЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮ МО: 2, 5ЕО ІЮО МОЗ, ЗЕО ІЮ МО:4, 5БЕО ІЮО МО:96, ЗЕО ІЮ МО: 373, ЗЕО ІЮ МО:374 та ЗЕО І МО:375.
3. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за п. 1 або 2, де ектодомен представника сімейства лігандів ТМЕ містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 1 або 5ЕО ІО МО:96.
4. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-3, де ектодомен представника сімейства лігандів ТМЕ містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:96.
5. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-2, що містить: (а) щонайменше одну молекулу Бар, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, що вибраний з групи, яка складається із наступних: фібробластактивуючий білок (БАР), асоційований з меланомою хондроїтинсульфат-протеоглікан (МО5Р), рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕК), карциноембріональний антиген (СЕА), СО19, СО20 та СО33, та (б) перший та другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із БЕО ІЮ МО:5, ЗЕО ІЮ МО:97, 5ЕО ІЮ МО:98 та ЗЕО ІЮО МО:99, та що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із БЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮО МО:96, 5ЕО ІЮ МО:З та 5ЕО ІЮ МО 4.
6. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-5, де молекула включає одну молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, що вибраний з групи, яка складається із наступних: фібробластактивуючий білок (БАР), асоційований з меланомою хондроїтинсульфат- протеоглікан (МС5Р), рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕК), карциноембріональний антиген (СЕА), СО19, СО20 та СОЗ33.
7. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-6, де антиген клітини-мішені являє собою фібробластактивуючий білок (БАР).
8. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-7, де молекула Раб, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить МН-домен, що містить: () СОВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:7 або 5ЕО ІЮ МО:100, (ї) СОВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:8 або ЗЕО ІЮ МО: 101, та (її) СОВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:9 або ЗЕО ІЮ МО:102, та МІ-домен, що містить: БО (м) СОВ-11, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:10 або ЗЕО ІЮ МО:103, (м) СОВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:11 або 5ЗЕО ІЮ МО:104, та (мі) СОВ-І 3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:12 або ЗЕО ІЮ МО:105.
9. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-8, де молекула Рар, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:16, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:17, або де фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:106, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:107.
10. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-9, де Ес-домен являє собою Ідс, зокрема Ес-домен Ідс1 або Есо-домен Ідсаі.
11. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-10, де Ес-домен являє собою Ес-домен ІдОС1, що містить амінокислотні заміни в положеннях 234 та 235 (ЕО-нумерація) та/або 329 (ЕО-нумерація).
12. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-11, де антигензв'язуюча молекула містить перший важкий ланцюг та перший легкий ланцюг, які обидва містять молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, перший пептид, що містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ, які з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, що злитий на його С- кінці за допомогою другого пептидного лінкера з другим важким або легким ланцюгом, та другий пептид, що містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ, що злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з другим легким або важким ланцюгом, відповідно.
13. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-12, де перший пептид, що містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ, які з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злитий на його С-кінці за допомогою другого пептидного лінкера з СН1І-доменом, який є частиною важкого ланцюга, та другий пептид, що містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ, злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з Сі-доменом, який є частиною легкого ланцюга.
14. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-12, де перший пептид, що містить два ектодомени представника сімейства лігандів ТМЕ, які з'єднані один з одним за допомогою першого пептидного лінкера, злитий на його С-кінці за допомогою другого пептидного лінкера з Сі -доменом, який є частиною важкого ланцюга, та другий пептид, що містить один ектодомен зазначеного представника сімейства лігандів ТМЕ, злитий на його С-кінці за допомогою третього пептидного лінкера з СНІ-доменом, який є частиною легкого ланцюга.
15. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за п. 13 або 14, де в СІ-домені, що прилягає до представника сімейства лігандів ТМЕ, амінокислота в положенні 123 (ЕО-нумерація) замінена на аргінін (К), та амінокислота в положенні 124 (ЕО-нумерація) замінена на лізин (К), та де в СНІ1-домені, що прилягає до представника сімейства лігандів ТМЕ, амінокислоти в положенні 147 (ЕО-нумерація) та в положенні 213 (ЕО-нумерація) замінені на глутамінову кислоту (Е).
16. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-15, де антигензв'язуюча молекула містить: (а) перший важкий ланцюг та перший легкий ланцюг, які обидва містять молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, (б) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із БЕО ІЮ МО:5, 5ЕО ІЮ МО:97, 5ЕО ІЮ МО:98 та 5ЕО ІЮ МО:99, та другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із ЗЕО ІЮ МО, БЕО ІО МО:96, 5ЕО ІЮ МО:З та 5ЕО ІЮ МО4.
17. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-14, де антигензв'язуюча молекула, що містить молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить: () перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:16, та перший легкий ланцюг, що містить Мі-домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:17, або перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:106, та перший легкий ланцюг, що містить Мі -домен, БО що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:107, (і) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із ЗЕО ІЮ МО:14, ЗЕО ІЮ МО:108, 5ЕО ІО МО:111 та ЗЕО ІЮ МО:113, та (ії) другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО І МО:15, 5ЕО ІО МО:109, 5ЕО ІЮО МО:110, 5ЕО ІЮ МО:112 та 5ЕО ІО МО:114.
18. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-14, де антигензв'язуюча молекула, що містить молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить: () перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:16, та перший легкий ланцюг, що містить Мі-домен, що містить амінокислотну 60 послідовність 5ЕО ІЮ МО:17, або перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:106, та перший легкий ланцюг, що містить Мі -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:107, (і) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із ЗЕО ІЮ МО:115, ЗЕО ІЮ МО:117, ЗЕО ІЮ МО:119 та 5ЕО ІО МО:173, та (ії) другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із БЕО ІЮ МО:116, 5ЕО ІЮ МО:118, 5ЕО ІЮО МО:120 та 5ЕО ІО МО:174.
19. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за п. 1, що містить молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, де антигензв'язуюча молекула вибрана з групи, що складається з наступних: а) молекула, що містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність «ЕС ІЮО МО:164, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО 125, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:115, та другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:116; б) молекула, що містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:164, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:125, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:117, та другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:118; в) молекула, що містить два легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:125, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:123, та другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:124; г) молекула, що містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ 10 МО:164, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:125, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО:119, та другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:120; д) молекула, що містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕ ІЮО МО:164, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:125, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮ МО:173, та другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:174; та е) молекула, що містить два легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:125, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:126, та другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІОЮ МО:127.
20. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за п. 1, що містить молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, де антигензв'язуюча молекула містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:164, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:125, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:119, та другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:120.
21. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-6 або 10-16, де антиген клітини-мішені являє собою СО19.
22. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-6 або 10-16, або 21, де молекула Рар, що має здатність специфічно зв'язуватись з СО19, містить МН-домен, що містить: () СОВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЖЕО ІЮ МО:195 або ЗЕО ІЮ МО:252, (ї) СОВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:196 або ЗЕО ІЮ МО:253, та (ії) СОКНЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:197 або 5ЕО ІО МО:254, та МІ-домен, що містить: (м) СОВ-11, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:198 або 5ЕО ІЮО МО:249, (м) СОВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:199 або 5ЕО ІО МО:250, та (мі) СОВ-І 3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:200 або 5ЕО ІО МО:251.
23. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-6 або 10-16, або 21, або 22, де молекула Рар, що має здатність специфічно зв'язуватись з СО19, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗБО 10 МО:201, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:202, або де фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватись з С019, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗБО 10 МО:357, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:358.
24. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-6 або 10-16, або 21-23, що містить молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватись з 60 СО19, де антигензв'язуюча молекула містить:
() перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:201, та перший легкий ланцюг, що містить Мі-домен, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:202, або перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:357, та перший легкий ланцюг, що містить Мі -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:358, (ї) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із ЗЕО ІЮ МО:14, ЗЕО ІЮ МО:108, 5ЕО ІО МО:111 та ЗЕО ІЮ МО:113, та (ії) другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО І МО:15, 5ЕО ІО МО:109, БЕО ІЮ МО:110, 5ЕО ІЮ МО:112 та 5ЕО ІЮ МО:114.
25. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-6 або 10-16, або 21-23, що містить молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватись з СО19, де антигензв'язуюча молекула містить: () перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:201, та перший легкий ланцюг, що містить Мі-домен, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:202, або перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:357, та перший легкий ланцюг, що містить Мі -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:358, (і) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із ЗЕО ІЮ МО:115, ЗЕО ІЮ МО:117, ЗЕО ІЮ МО:119 та 5ЕО ІО МО:173, та (ії) другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із БЕО ІЮ МО:116, 5ЕО ІЮ МО:118, 5ЕО ІЮО МО:120 та 5ЕО ІО МО:174.
26. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за п. 1, що містить молекулу Еаб, що має здатність специфічно зв'язуватись з СО19, де антигензв'язуюча молекула вибрана з групи, що складається з наступних: а) молекула, що містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО:205, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:206, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:115, та другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:116; б) молекула, що містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:205, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:206, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:117, та другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:118; в) молекула, що містить два легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:206, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:209, та З5 другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:210; г) молекула, що містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5БЕО ІЮ МО:205, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:206, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО:119, та другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:120; д) молекула, що містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО:205, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:206, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:173, та другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗХЕО ІЮ МО:174; та е) молекула, що містить два легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:206, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:213, та другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:214.
27. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за п. 1, що містить молекулу Еаб, що має здатність специфічно зв'язуватись з СО19, де антигензв'язуюча молекула містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:205, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:206, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:119, та другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:120.
28. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за п. 1, що містить молекулу Еаб, що має здатність специфічно зв'язуватись з СО19, де антигензв'язуюча молекула містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:306, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:279, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:119, та другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:120.
29. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 60 1-6 або 10-16, де антиген клітини-мішені являє собою СЕА.
30. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-6 або 10-16, або 29, де молекула Бар, що має здатність специфічно зв'язуватись з СЕА, містить МН-домен, що містить: () СОВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:321, (ії) СОК-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:322, та (її) СОВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮО МО:323, та МІ -домен, що містить: (м) СОВ-11, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:324, (м) СОВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:325, та (мі) СОВ-І 3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:326.
31. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-6 або 10-16, або 29, або 30, де молекула Бар, що має здатність специфічно зв'язуватись з СЕА, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗБО 10 МО:329, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:330.
32. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-6 або 10-16, або 29-31, що містить молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватись з СЕА, де антигензв'язуюча молекула містить: () перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:329, та перший легкий ланцюг, що містить Мі-домен, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:330, (і) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із ЗЕО ІЮ МО:14, ЗЕО ІЮ МО:108, 5ЕО ІО МО:111 та ЗЕО ІЮ МО:113, та (ії) другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:15, 5ЕО ІО МО:109, 5ЕО ІЮО МО:110, 5ЕО ІЮ МО:112 та 5ЕО ІО МО:114.
33. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-6 або 10-16, або 29-31, що містить молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватись з СЕА, де антигензв'язуюча молекула містить: () перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність хЕО Зо ІЮ МО:329, та перший легкий ланцюг, що містить Мі -домен, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:330, (і) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із ЗЕО ІЮ МО:115, ЗЕО ІЮ МО:117, ЗЕО ІЮ МО:119 та 5ЕО ІО МО:173, та (ії) другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із ЗЕО ІЮ МО:116, ЗЕО ІОЮ МО:118, ЗЕО ІЮ МО:120 та 5ЕО ІОЮ МО:174.
34. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за п. 1, що містить молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватись з СЕА, де антигензв'язуюча молекула містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:333, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:334, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:119, та другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:120.
35. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1 або 6-15, або 21-23, або 29-31, де представник сімейства лігандів ТМЕ являє собою ОХ40Ї, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:53 або 5ЕО ІЮ МО:54.
36. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1 або 6-15, або 21-23, або 29-31, або 35, де ектодомен представника сімейства лігандів ТМЕ містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:53.
37. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1 або 6-15, або 21-23, або 29-31, або 35, або 36, що містить: (а) щонайменше одну молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, та (б) перший та другий поліпептиди, зчеплені один з одним дисульфідним зв'язком, де антигензв'язуюча молекула відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО ІО МО:371 або ЗЕО ІО МО:372, та що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:53 або 5ЕО ІО МО:54.
38. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1 або 6-15, або 35-37, де антиген клітини-мішені являє собою фібробластактивуючий білок (ЕАР), та молекула Раб, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить МН-домен, що містить: 60 () СОВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:7 або 5ЕО І МО:100,
(ї) СОВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:8 або ЗЕО ІО МО:101, та (її) СОВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:9 або 5ЕО ІЮ МО:102, та МІ - домен, що містить: (м) СОВ-11, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:10 або 5ЕО ІО МО:103, (м) СОВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:11 або 5ЕО ІО МО:104, та (мі) СОВ-І 3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:12 або ЗЕО ІЮ МО:105.
39. Антигензв'язуюча молекула, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1 або 6-15, або 35-38, де антигензв'язуюча молекула, що містить молекулу Бар, що має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить: () перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:16, та перший легкий ланцюг, що містить Мі-домен, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:17 або перший важкий ланцюг, що містить МН-домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:106, та перший легкий ланцюг, що містить Мі -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:107, (її) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається із БЕО ІОЮ МО:355, та (ії) другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:356.
40. Виділений полінуклеотид, який кодує антигензв'язуючу молекулу, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-39.
41. Експресійний вектор, який містить виділений полінуклеотид за п. 40.
42. Клітина-хазяїн, яка містить виділений полінуклеотид за п. 40 або експресійний вектор за п.
41.
43. Спосіб одержання антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-39, що включає стадії, на яких: () культивують клітину-хазяїна за п. 42 в умовах, придатних для експресії антигензв'язуючої молекули, та (ії) виділяють антигензв'язуючу молекулу.
44. Фармацевтична композиція, призначена для лікування раку, що містить антигензв'язуючу молекулу, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-39, та щонайменше Зо один фармацевтично прийнятний ексципієнт.
45. Застосування антигензв'язуючої молекули, яка містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, за будь-яким з пп. 1-39, для виготовлення лікарського засобу для лікування раку.
ОО» По ВУ с ще ЩІ я шо я х 7 є ЕК й шк зсСозаообо5 босОоОобОов5 кит ек в) ши Ні Ккч совозоово5 о ; Кіш щ (В) моста ун с Н К- Н К вобозосоов соосозоооо5 ООДЕОКМНМ Я ПО х (г М оси с зозавоОоОо5 Фіг зав яв ве с НН з ТБ г ТРБхяІ В | ок п а тя Б. жк : У то Ж 8 ШОЖМ к і" щк сх - з й С а ки. ї іі я. в в реглан С о Я ж-нве «ІБВЬ п а ПО ще НЕК як ой Як з сн ЩІ -. й й п ше | п Ов с її оп Ж ОБ 00 зевкеем і бе 7
(Я) ун їмо ще -к ачВБ. дк й БК, сдк м Чо мя ЩО Ух мі ЗК щі Зв МН - я тв З Ж ема іх ВУХ ХУ ск С ЩІ сі ОХ Км кал ОН а ХК т щ ях я нн З и ШЕ її що ке І: Б її о в им г. «ВВ. ше «ВВ
С. іБо-аБа) пло (о-254а с хх ЖК УК й я? ча ще я щи. Ффрооне і З КК - НК о цу «в й Де і й ШИ й шин й ші пд шк ШИ ОК ОО у їж: І Фіг Фіг З (ЗА) М с в У й х У х 2 х ому: ї ; ово Оса5 цпесохвовЗої ЗБ) Мо неее)д нт нн с Тетянка 7 живи ї х ї х ї х Щ зодо5о5о55 чи тиа-1БВІ. (ЗВ) (104-308) ще с. й Сказ іх Я - УК хх їх ее Ко і. ж ше г ій Зх ЕК й Іх й сні ло пня се пава хи й й Оке
Фн 4 ге тре ТВ Б вида Аж 1) сова; (2.8 оф ши й Й й -- Я Я Й го 1 «и5 чи а ка В -- сх В ув Мк Ше є Ше ку тні й «а В МОЛ, и со о НИ в Я ШИ м оливу НО ее я Б ПВ штам с Ох БЕЖ АБО знав пщ я а васала ЕВ а : . її нва-тАВ хів 7 і. Р осова г х С, хх ке Я їж А пива: (2 вия ів Се. що Тжх НПК ТУЗЕМ. -к ки Пили ТРАВ) й ШК і з -е «ов сні Кз : Бех пе я МЕ й У БО чаш. З о -у в ОК В виз ви ь с ну що ан «ні КЗ ще КО ЕЕ ВУ ще с ШОМУ Зк 5 М Б ВО и Се еЯН ве че и ко еВ пе я БІДШКЇ ся ШИНИ п ПИЛИ МТЛюЦІЇ ці 1 ря У З Ах щей ді х дев, | кН ТЕ, коми ПЕКИ БО Х ХХ хх хе ї (БА) (БЕ ЗВ 288 пезБа) а пидт й овя? «Є й щ ОК й СУС аа ізероедкова (УМ ОО ізародкова ун Шу суху Я СНІ я 5 ж ЖК и що КК шо 5 ШЕ Й я ше 7 ПОДА й Що лин ї т вче во вв: ват ЗКУ вОїдА ЩЕ ке Кк
В ї. що Щ Фіг 5 ик БшвиаТує: Боізанаднваретьст
С.
; вд) Фіг. 6 Не х І; НЕ Не в НУ Ед во х.На ОДЕСУ клтини с ІБК ка пт меру ех ті ши нн В ОБЖ 5 ШИ й Еф в ЗКУ Еш У ІОВ Б вяю дення юОЖ; Я же і КОЖ: ИЧЕ-Я : риф фр т ІД ОК КН Не Х ї «ек ІОВ кОВКВЖОМ як НЕСТИ БОМ 1 й СЕ Ж ре Пн иа НЕ Ж НЯ КІ жк і сих в» о Я Вже веж Ом о: ее « ож С ИН СН ее й певен ї Її : хи 1 Н с В І с в, ІБ песнйнитияняярнттрннн С НЕ з Ж їм не ще щі тур 1 венцануввнів ім С: чн лев опонент о М ня їн НЕ ЧИ з го нан СОМ баня С ни ПОН Ж ня ВОЮ ЗМ КИТИ НУО : до диня
БЕ. і о яко) со ВКТввоВанІ СОТ КИНИН БО од ПАХ у ПЕВ ВОЮ ІБОЖ: ЧО ІВ в УС Ня НЯ ; ТОЖ: од 5 зно Бе п Од: ОО НЯ ІВ: ОО Тон й НЕ в се
ЕЕ. зно. уВ й певний ТЕ У овю М ІОВ: НК «а НЯ хо НЕ . сан ЦЕ ож реве ссвоттвесевссвК. поети й ЇЕ де а БО бор зненнтрятятдтеттнутевху стен ПЕ г кВ їх х хе я ПВ: а км М х щі сеотееечику 8 фетр ; МЕНЕ кн ни НИ о и Це їо0 концентрація М ши То язнианураня МЕ: т 1 : : : : х Фіг б ее БВ ВДЕ ПЕ
ІП. п ВЕ ПОЇ ЕЕ ни . . З. Н 5 5 ї і нВІМа Мк ан инУ й Ж: ще о ВктМВОцаНн МОКАЛиНЕ ТЕ ЯН ВЕ ї ОК Е НЕЗЕУ ЖЖ за ІК : шо ї ІБ щі в Ї ва 4 БО ї УЖ ї ун Ж вк Іо і фретфя НОЯ В де . : Е 5: жк о ШОЕ х Кеснладю я о й ЕОМ КМУ НК :Е БУ : Дан сив сфе нні В Й Ж НЯ В щи тер СТЕ НЯ Н о У МЕТУ укр ПЕ і: й
В. ЩЕ й де М М тях итютт ОБОХ Відня м со АЙ ТАЙ К-я 5 є ж. 5 І -е п їх х Шк й ск у клідіж ж жан жому ня пал жу юю ють їх ше ши х ЕЕ: Ф ще х - ш Ах ве : щу ня Н : ХУ КУ ху У с - обирав МК Шен ХУ ПН су ВИ МВВ коуч ФА дтицеенні піддони годе совні пат що де 1 НО ЛЕК за яктивкавіо Вюдкь вининня хх 1 ХИТ ееХ о ютини і СУКА кпимиМ сс «т е Н : КЗ 1 КУ «щокеуцютю В Х ї дю ТЕ ї ш ово ТНАЮЩЯ ни кове НК я пні В. ле НЕ і ще - Н роденя ехо їй ЕЕ Ти х р нн : ОВ ливі ОТ ий ке Ж І : КУ Н БКНКЯ їх НИ - х Е ж і поля сяк КВОТИ уВ Я БО ща мий кодах ЖЖ : Бо ШЩН ВК й ї ке Со Н о соц ї сн В до панни Я в | же нення Ї ще норка я кож; т в Кока а вн о а нн вх рана вва панна асо Звйоне ие Й и ие ИН: 5 ож ни нь НА СН : що « Ох -5 ке я «Е а Фе ШО КО «ву канетрукци ТА Ко неви мини ММ ве МІ ! п -шекОУмструкця 13 пи годенк нн вт соддлвни і и :
Кос. 001 ОНИ НЮЮВ здке. 000 онвованвюрсья «дм онструю Я Не Н ОККО аНинихОсСс: : ПЕТ: Ще о р: що ї іш Що ще ВО ВжщМ Голітніиттт КК та піти Б. пкт. КО: 1 Ще я ща і КВ : Ь : Но: і Ше сне і Я : Ну кт ІЗ К-е го щи й : Не ще г СЯ як УЖ и Кар с: ТЕ : І - В ї 2 : : :Е Я У ак : щи : : 0 що : Ек ! ! ос Бк щодо С КОНІ ПА Н їу ї З : : і поні р : Н ж ие ни і пслнюваяни ФЕЯ фенюоттеютетю отхчтютттх вт аа он ен а нан ОК ВУВЕВ МО: а Ек БУ М КУ хх КЯ а ОжШИчЯ ї Я Я щх вежа Н «Й Ж хо КЗ « з НІ кох ТО еко М свв ЗЕ Фіг Б п о вюктивовані юдеї Скло ревні пивом тт я колах о дюаклкдижня М, же вини «ВИК Б Ну ! : : : Е ущаданх : ЗК. Я : : . - : во ОЖНКму птн ЗК Ме - ше Хпнствукця З : ІВ Н ве : я ее г: ЖЕК : шу НОЯ і осн їх -к ан руюця : 1 Н т 2 Ма : Божко ук Я Ко. : : НК Н кн ХК в Н Я : ЗЕ І .. же. з с МКМ . Монитоудцяї її : їде зо р ж НК я с ав «дю МОБОТВУКЯ ТО :
СК». Ж ке пика ох піки пд на ВХ : : 1 ій кеди | | ДК одн Я : : : ка ан нн они мине не ме а комин во воно од оман он ся КОМ ТУКЦЕ Ь3 : п а х ж їх їх з». са дошк м Кк - ду ДУ с ЕТ Я дат У 7 ШКО Не ОКО МО : : « Б У о -3 Я їй зн пи : І шк г оддонннині плн" хеном тиви ост пидиднннннтня : : : : В вктвщовні З ОД : ЕМО ПюЕДНКО: - Момот : Я З ПО КМ ККНИ ОС: дао повну тяНхО ех БУКІУ ! ЖЕО пзодю В яка» : ! хонкувекне 17 : пт мітити ІК по 22 конствукц 7 ОМ 1 Яку ЗХ Н- ук : НО: і ї Е ТІЖ І 1 Н ї ж : 1 ї 7 ОО: шЕ Щ жюВ їй ду МОМОТ рУк В : 1 : ШК ї Не АК : ко: ВКМ «в В жк че : : «ї : І КА В ВК Мощихосмочи У : Я єв дор ; ЩЕ зе ня - що пи зах «сх : : о: н шт Іл ди Ме: с кол ше я : : Ж: з кн я і зага ко зткцтучицо І Н я і щі фухтиюююютюею осо сю ЗК фелглжуеклвс юю ккд юю су. УКкя т : Мам с СЕ АНА НЯ Жак шків М МУ : : КО о а ВЗ Ф ко М ще : : мож З БИ ет ху : : СОВОК НМУ В Зо Кипчнннийтннчння
ФІГ: ВА кол С овОКовнЕВЕМВНЕ внук ФІЗ: : он в На й : : - сонне пе Би : : хі щи о шовк.
Кк : ї 1х ї мо ї -Е ї а Я ОВ --Е х 1 Пк ХЕ Я ОХ х Я Же ЖЕ З Б СЕ БА СЕ ! НУ І шо ПЕ Й ня ЗК фк з ж ксоех Яка ій ляляй - г: 1 фар фер кофе енфев Най Ек вк ни мини ми ни шк ша ї Я ї й Ноя : Не ї її: : бжя Коня се нина вка вв няня.
Най еко оо асносс аван ювоююня зол ва овес й : Кк М ж ж Кк с» к п Ко 2 : Я СЯ : : СИ 7 хх СІЙ ко и В хх 10111 ех « ху ке Кк «Ж «ей -к ее Ку Мо МКМ ВЕя М а З З іш Бюл Ї окОхОВНДІЗЕНІ пед СМТ : ке. 1 оврковилен: пюдомЕ СМаМТя НЕО зн ВМ ння БО : Нк ї Ж ї НЕ ї НО ї НУ Е: НЯ ! ЕЕ х ПЕ: : КЕ ам НЕ ї Не ям НН Не х що нич НУ : Е Не ШЕ я їх: ПЧ Е ДИ НН НИК ПЕ за офі фай фія о дю вві В ефе ейьня Тянннї 32 у ЦЕ : -ї - она аа вв т ех» з дно тех : : де едекь звід еф паю око меня Б с и Ко пи 5 х - М в В ше й М їх У а що « (Е сх се пови НИ о оо СНИ Не З ННИНІЙ КО КФНТЕОТЬ МО ефе ВИНО нйк.ї ВАН рНь лані квенруЮц В: йо конт М же КОНОТВУуКН 2.3 «ву НТрОмь їЕ су З КаНЕТМУН КО: НН я : фсеклидищ во: чо НИ здо поря . ж КК. : КОМИ й Зоо ни пЕпш вип памуНІт ок : : це і ВЕТиВОВВ: : і с 1 КУ 1 т Босак» Н КУ ОКУ : ех км ще хе : Ь х Би : іолюдше ЕМ Батия СЯ чу сухарів, : : Іжуне Е тих ї. здо АТ тя: Е ву Є й :ДюДЕКВ МОН ННВ ко г ї іх Не Е КЕ Її с ання о ще й до «У ща хе АДУ Ж ак о Е | дея що о: нь що З ПІК С вч й НЕ Ка Бе : і В й ,: че чи а ча : ША, мож в а МИС я я й миши и и ен НИ ее ки де ки ж шим о жбаетрацнінН ше ііі : й ТТЛ ПИТИ ІЗ ТІ, пе : м а по НЯ ще : ЗКТНЕОВВ ї до пктмесвані ож її : І : Я Ж: : . Й 10 я : Теле РІД пледи що | ї пед патоку хх їх 1 ІДД АНІ КИ ЩЕ - : НЕДОК М ІКТ Тх гм кН ИЙ МИТТІ йсІйМЦИи п Х г не МИ в СКК вка НН: сх о а й ШИ с ц : Сак МВо НИ : : с го 7 В ККву ре З ІЕООІКЖКХ й ІВ : : МЕЖ фан НУ : роя ЕЕ дики Ж оон ай БЕ : ї мес Е ОО 1 Не ЕХ ОЇ я 7 ІЗ І: ШЕ Н ся.
КУ х зо у т-шо НЮХ Сх Ж : Н Я У ЩЕ ї - Я в-я вм еВ ЧДУ че КУ що м Ева ши Б Ж ху о, я Ж х ня х Я ля КУ Се с Ж х лк Я п А Як Я у - З у ОО ши Свв «Жоконтуюют 0 00 Куля: шин и В де жити М замов «м. ато лЬ МО жо вину я «ІМК ТУЮ ВВ «во Контроль оо жВЖнруюВ ях о
Фіг З Я ! Б хи х
ВА. (ЗБ) ЦЕ ФЕТИВІВНН ВК: : ОЗ с ПЕ М НО ї ЕЕ ко уекщтини. : їж «кове ВК НавОвюні давню ЖК. вк На ї : Упни : ВЕ ОПО» | сярй не іо ток Не «Ж ЕЕ: ; кт П5ООщКО Ж пово ж НЕО а ГУ їх х Ше 7 ЗА жов з ІОН гЗ ОБОВ НК х Я Кк ЕЕ ї ї БЕ: жов К ОБЖ жо х НЯ Е х НЕО їх 7 пою: ї КОЖ: х Кі : ЗОМ. - 5 з І х ворозове Е: БЕ Ша х ЖК ох «МОЖ ї щи ПБОЖ 54 з мВ НЕ УК: ПОКЕ 53 . зебукк МО пав кожи ПЕ вий шия Мн КЕ ах клону. ПОТ де й ній печу ет ттеоя ою, : : - Бад я й 1 из: НИ НЕ Е ин з п С ння ' кенценія НМ МО: іо ЖНеЖНЕя ОО: щ Фіг о пд пат ГОА) ОБ А, (ОБ) У за чкННх шо! Ж ек ВЕ МЕТКИ ЮНЯ ПО п Ж і : : до СО АД ИКЕ кА НнК: НЕО х : : НЯ ї Н : ОБовОжюв я пий ; ОК нано. : : ре : я БУ ! : піднятий ОВК КІ Бо МЯКЮХ я НЕО В ка МЕ ї я і Ж зм у; ЗВ: ВаюЯ Кк НК АНКН Я ІТК Ї КУ І і Я Ж еко с ОКО яю Кі ВЕ р; ПМЖ: з: Є Н КК с Я ПОВ й : 5 5: чої рі зв'я ТК в.4 НЕ: КУ пд УЖ че ни Й НЯ ІЗ У т ши кас жа В В вовк НИ с: ши чи НЕЗІ з ва вах що я се ПЕ орви ; сн У : : ЗХ Е ВНІ КМ ПК : пенні : не В НЕ ШИН Е :
Фк А пи КАПОМУ ати! пи дини пф, : Кол КАСЮГЕКИМНЮ ОО ї Н ї пишне т В Й ї ння шення? ї
Ух. ЗУ : ї Є х Мини не я ск уж. п жк й Зк жо «Шо. конуьЬ Є шк ІНН Же : С В щі Кая її Кз : ши Б ВЖК ж же я нд ЗКТрНК Я Б ШНШ ях : Як І : НЕЖ пд Ба І Же пед В сх ГЕ її з й ЗМ Рака яфо КОМСТРУКНВ МИ Нр ї Й : ши с мае ПХ Й їв УЖ .ожто. м. М, У жах о ТЯ - мою ШЕ . ї. я. «ЗІ Мк КВИТКА ання вже ос ДЗК АК нюю св» Конструкція 34 ПО: ж х «, -х воУ дх Б а м ся КУ о п й СИ КАК Й ЗНЗ во : машин : концентрацію : ОО хенцемуик ММ се КоВоррВе не УХЕЗКЕО В о «дю КОНЕТДЕКНН Я РОПЖоОозжу ОЕМ ТА ДИТ лм и А М : НК ЯК : й : КК ПЕОМ хі вне : : р : Я : : Я Н шу: щ Во: Я ян В Н : «а МКУ І: Еко - Же пи с Я : НОСІ я кА : : пе І с мон й з о. що, ох І ПЕК: ит я зай ВЖЕ ТВУМА Ж БЕ ве же К во: є де й : : Ж Се ч Гая ж неч ІБ оо КЕ й ке у та вата ТВ НЯ Е з. ке жк хе Н ШЕ | . Се, | КК ! ! ци В Н Ж де ї х знпуитюмимий ДИКІ ПЕЖО ко; ЯК. о З НИ У ех «Х. : ке шооошосж о. МЕ КО БОТИ УЮОВ ТК, ша зе вже ЗВО ООН Вежа АКА Аню Б : Ох Й хо Са ж ху сх У у ж Кк КЯ су ша ше вне м ше ИН нн : го КВУЦеМТН НВ: хоМЕНнтеаК Ів КМ Тіна Фіг ль щ Я В видах о НЕ : мае х ск МНК шк ; ї | Е Не тала МЕТО вика о : 1 ій мое Я ЛИЖ ТИ БЕЗ : Е В: й с овдвн Я се 0ВеКЕ ок ХМ Шк с і Ж СЯ СЕ ! де й дово ОВЖХМ ж І Я дн з НИ І Як жккю да НД : тях Ж пу Ж : т БА : Н ней га ох Бо Ж. «хикх ї У Ши Ме ЗкМю» КУ ГО : ит КІ о ше і - : Як Ех і пеня Кат ве ПОФОК сюммхеоювуихннречееккнтя я ж ь з ри їй З іх Б т «а « ЖЖ дк Кк і зх Я у г : хазментрац НМ ОО КОЗИН МО: зак: КОНСУБКУЮНЯ Ї схю КОМетруЮН З : ду ТВ :
Фіг 12А 33» Же Е таккк ваз Я ха й і - г я яз го : но ЗА В В 5 ш М; ї : Од: ї Ж г їз НЕННЯ КУ ЕЕ як Жди З жо ой НИЗУ ї Ж НЯ хо, З 3 той во сей ся ох як ВК ост КО дея й ЕЕ: ще і Ще-Я ах її її : ОО й є шо Ж Б : їх ПА ; у Х : пишних Дом нн НН с Не 5 Ух А а Я Кос КК ККУ Кук Й хх УК що ОО Хо с : КО « Я од : КЕ Х ОЙ НЕ УЗ Й ОБ МЧИЕВИ МВВ УЮ піп. 24... КН С о контроль В я Жвнерукця ДА «йо БОБУВОНЬТО се МЕКНРУЮНА ВІ а вапровь Є же ВНТУ В ни НЯ ее Ж «дн Кеметвуюя ЛЕ «во ХОМ НЕНЬ зв.
КОЧотруюця ВВ Фіг 1265 ДПІ ж : : Фо: В о: ще : я за ЗЕ р : їх ЯК.
ЗА В Ве Ж но зво со ИЙ ! є ; Умова х: Е КУ -ї ; ГЕ Кс я в Но ще Я і Ще т. сей й ІВ ! ав пе кое НІ ся й ЖЕ о в й в Не й ОТ ; ОР З Іо дао й ї: і й : І ВВЕ Я НЕ КК. 2 про й і ше ї : Тооздкнї -Е : : т ОО І ХЕ кю Що КО З А Не : З про 1 ра НЕ МО. й Шини й І : чи ПМЖ нні ДЕ ПОКИ Ка нов ові На ром : кН ; » х Гн В Сови орди. я « - ді « 5 шк В йк ох С чшКеЯ м. 55 ХУ Ж «В «а ОЗ ж з ій Ей «В як яе Ко пелажжнна налили кт тт тки, БУ ин дшннтя і НОНЦятТраЦ НМ о повцвнт ває М; як ша в а ЗО ЖОМІЮОНЬЯО ефе МОВОТУКНЯ ОК.
ЖОНЬЕ о Шшекжккця ЗА : : ак жом «в Крук В Я «Ж.
ЖенитеЯ 0сж ЖОжруююн Я Я : ин «во МРютТруюц я «дю БОБТрОЛЬ «ДМ КОНЄТВУЮЧНЯ КО
Фа п ше нику Поржтук зуид я Ткиак кад и геЗА 5. х звоах ІНВВАНІ МАЧО. чавкх : Ваївн внаач я ЗА и ІНН : Тктумни : : Гютяни ії св їх --к . що аа зп ня шо і ЖЖ ще полу щу ЗЕ е реа я Не НЕ: В Ва Щі СЕ - ж Й ЗА. пути ни иа няння БУ ш : х ї ж х : і Н
: х. 1 1 у ПЕОЖКООВо фрефюіроід ефе КЕШ са сих зак; и вивих МІ ше Б : Кемер тотем огу тю теле, Хек у е жу а жеух я его яю у т холи ху юу ДВО О: х М х - ху їх хх они жк д Кая їх шк ЗІБ мктмрових миша С В песни вані Ед вв срвдЙтнВоваН МАМУ ззав, ВКТМНОВаНІ МИНЕ СЕМУ У: ЗА НЕО Бош ВОНИ о В : клітини : Я - т о ЗАВ тя од с вн тав Н- ОКО ака : ОМВО: й сеї ГУК ач . і. . БЕЗ г3су нин ше я БЕ БУ і Ох ЗХ . дк КУ ния ДВА ВХ КОЖ: З я 1 по КО кі ї й ПОдКО ХУ . х ше ще НЕ х ВНУ Й їх сок ж хуй 5 - г з ВЕК сок 8. ДВ жов ПОМ, Хенкс ото есе но законно Все нн» зовн 5 сви НЕ НИ ННЯ Дани ЗНА й ЗО рекет тиовтн З Іхднуентрвае МЕ Її кОМаНТОВА НУ, : ті «мому М. «внконетруєция М. 00 СМ фомтрель оту ВН «ВевнНлЬ МИ: с ВМО КН МИ:
Фіг. 14 І ПЯА паб) ж Х 7 лях х З де ТВО»: пат п У ВИНИ дев БЕ я ВАХ ння ОК Я. у с : ї Е пе : р ЕЕ Ж По ВЕ тк ща ОХ дини ЖЕ ск ОХ : КИ її В З : р ща ПОхУ де Е М пре га Е в Пк ОВ ха Е ще ПЕС 4 Кая у Е ЗШ ние Й Я с. зя Ж Кк хх х С В Х х ях Зх їх. Фо ох сш шк сш ши ИН НО ОВНС 1 ЗВУ контрет М : за охонетвуця М 1 КОНІ : ! ТАНЯ М.
лек. ВИН ЮОВЬ В: «а КОНОТрНН МС:
РЕА ЛУКИВННй шетяН я є кава ет ь ун о. и зе Кт Ж п х я, З Бач З У ; ,. винен Є і ленні КО КН Пса ЖК Ди 7 сно Ми Каб іжунун ОО я о ФВ зо а що І 489 ІК х КУ ям і п /Я то лася ЕТ РОТА о в М б ну и а ОВ г пд о ШИ п СОКУ КО Я ВК т Бо Са Н че о ОНКО АТР, МОБ 0. А овен ния 7 ЖК НОМ он ЕТ З кН ну о Люцнферин : КК АННИ : : Ки МОУ сив пок в ОО ша чна зер доб у ИН ОНННННННХ 1 ї і рен : ї- ія ще є З у дей ее но ВМР ОО» чи їх Оксипючиферим ! МЕ «НК : : зак гаки ж Мике. 00 Клев За МННУТЬВИКАВ п о пЕЖКВІ УЗ І : : СЕ ден ОВ Би ро о: 5 дО: ке Боня що: ї лООшОВюХ й Шк 15 щ МОВ ї ЖК ОХ х я ОО І ї ве й ва ще м ки ви Я Фото МНЕ єї не К и й ЖОЖж КюВ р ОО жк вк г ж ЕКО: р Не сх о: вх дядя ОЇ 8. с ВИ ОБ вант ВУ я вля ща і їа хо ай ОО поши зігнати ліття . 7 фуда уюдиви нм : Ши ко НН пні иа пев) ОО ЛОВУ ул -ав-а В жк ЗБ яв ВКю Я Ж Би ШИ: й мА се їЕ Ка ОЖ У що м гз і поча и Фіг. 16 ВИН Е й шк; | й
: х. х. пд : я дику оку є с х: є ; Шенинненї В З й 3 КУ 1 ходові
НН : ВвакАдБ яти» аа кА клннм пи нлнннне : ВОЮ; : ев НЕО, : «Шо вюнтроль В : ї Н шлод Н : діди Я ? : ше 1 Тен ІТИ зн Щи : ВІД : : ЖЕ Зах 15 : НеУЯ ї мерців ж тежнювя «ник з конструкція ТА
МОЖ. ї : про ВХ ї ко ї с ЖЕ З. Жкко Коко «ФВ ЛрУКЦІ їх ПТУ 5 Мо ї ї Я ку : а ЖНяН з : : ТБКОЖЕ : ІЗ ї : Й Н ЖЖ Н їх ї спе кому уми м : аа ї ї ЖЖ МОМОТ УАЦІ Тл : ЩО ОБЖ гей кі . Я У : ОВ віж пиття : с ВВ ! ! п в ШЕ сю ни ВЕ ов ше в 3 ще з Вт 0 З о нн І КОБНЯМ УВС, І ЖОнЦентоВаиМ : : «АЖ рУКНЯ В ож | БеЗЕДЕеКИИНУ : ШеЗКАЕ КИМ ОГО: «в Крук Н ВА ш-ео В щока : ЗНА ї А : т НКУ і : ВД В Я тд : Бк сені я «Ж хост
МВ. Н : Я х є пощах ЗК :
ФО. ї се : МЕ се зво конетуюНаА А : КОДОМ ЗОМ вне А й : зу ю Ї : п ж і «З ох й : щі В век Бен «жк Ват мукНІя Я В : ТЕ ї х Й : Що меж «вив Б наовВив : : ї оц ВК моя х ве о ;пеккп ук а : ігінннй во МН ста сю СУ фе ВУ ТО : щи сваро щО0З за в що Фо Бі 1 що з : Несе Й Шо : і: 175 Фі пит 7 Мч : нн дп г кпееціевюнця ВЕ! Б рення : В ай: ПОВ ЦНЮММЦНЕ ОБО ще Й Н - Н Ов я ЗА откЗаюкю и, «вк: Монтром В : -5 Ей Бод : роемдетих ОБ і МК ї: й з не ії шо І Н В юю. Ж со о ЕНН в ни Н : ВО: фот - Н вес ї селу Кк Н «Ж диханні й. т В ї сон ня ЖОВ УКВУЯї В ку Ж, заяви у в а кит, ! що ї Я п Ь ї р : Н ку и щи ду ев М Н і шо ОМ ю БУ Се ОО Я тяж Комсірую ОЇ що Е ї- : Е ше Я : похо вої Ак -- Ко я в ! : ОО: 1 тя Ж і: Ко СНИ Н : ЕЕ Ми ї Н й --к НеШИ поч Ж жому С зх Ж Й Я МЮТРУКНН Я ЖІ Н й "т щі А Н т 3 сх шо ши. фі и Я ї - сойки де Н Її пили? КУЄ о ДК А А НУ оса й. ТІ у ння гНш дя НІ ех со здав ово пов ек утснчу ой й «Же МИМТрУЕцЯ Я І оо ме оо Я ЗИ АННИ ЗД щкх ящи ще Ба не їх роя ї НЕЗШЕ киННеКниниа с ОВ ИВМВ ІН: Н : НЕ МУЗ : ік : Ме : ! й : БЖ сахвіднашення 355; ЯКО співшдновнна МЕ ! шлю Ж, вда ан леї кон ; -ео КОнслруюИН ВІ БЕ в МНН КОН Ж званою ОВ д-р і ЖК У «Я ї Ка С Н І ПО сдахлюї З с ще У і й Н дохо ЗА і КІ ТК Я - «в. Мовсрую І І МЕЖ і ї й : ; : Тк : ОЖОВ: ВжккеЯ Явні. Нюх Я Н : ЕЕ ! ак ШО й: щ- Же Е щій і НЕ : Ж ї й ОВ, же МИвотурукця З ЗДО вану С ех сет Ку Же рук А КОТ ї сис х розв хе Н Н НЕО жилки же зх сини ЖЖ Н Н що бю В ще а Ка «фу УНЛрУКНА Я КО: НИ о УЗ Ку о п УНН ОМ яТК Ії ОчЕ сек нн НА Ам ВАШ р кун і В Ж : Том ся Ку З У ке пу с СУ х т. 3 ї ДАН ші Зої ОВ ї. . вон Я ее я я е ї. сх цена ех с. Жанструкнія злі ОБО РНІНМ РО КЕНЕ НТИВМ НМ: МоляянннюіченннннтіннтянняХ
; коло ФІ 17 НЕЗУ Ж ВШ: по аи «вхкіе ТА ОВБяЯ : Ве І її співаіднодюжня Мо КККЯ Мо ож. зедтпииц п 17 ї ї я Сех ВИ пі «Ай їО.ЙЖЕ. ЖОНКТДдадЬ НІ І Е лауюМ ! снід нациання ПА р ВУЕмт У НЕ ОО: МАКУЮ. з -. : т ПОВ пл : ІБК. Я : НИ УЖ зннлах : А : яд : і ша Ж ІЖККУЖХ: : : завюх пит нт Ім НЛО: ПК : : Н : 1: НК р Кз р ЗК З они : ВН З Ка а Н бе ій ей: ВОНОТруюНЯ ВО Пк й Я хе що а з : Що НЯ пух ї ЗК» КУ ик : : НЯ а Б Кз я і й п ча : : НИ ОХ окодх Кий а Ме : К со ни шою я зав я й ія ВеВеруКВН ВО т -. ще ОК я : НЯ я ЗИ Кия та КД ня до і ее с ще ши : й Не БО: Деу ню нн ето КАК чннняя ї Ас мен Що КО кв в : :
П.І що й Ко «я вк ж ух они: зок ня чно ин нею В ї Й у Н я 000 за Зх ЕХ 4 ЗВ ОО ос ОНОТВУЄНЯ ТЯ че З х ї : ки КІНАХ Оки А и : :
0. 00 БОБІВ АК То венувнтоаа НМ : Не : сптдуеддтях Й АНА ОКВ Я іще КОНЯ пухка : І защюдх Коса ЗВО мані «ок : : І :5 ї НИ ї аа шин днчнаННя ТИХ : : І:
Б. попівідновення Е оивведневення ГУ : сад В 5: ЗБОюмЯ В : теюв дев : «й МОВОТОУКН ВО С пом тех : | : З й | шин БИ НЕЯ НАМ г од, щкх й Я Я 1: НЕеЯ ї Є о я ї Я Ух : Я : ІД см СЯ х о діння у А, : но й К я : ЕК ВОбКМ ру ом ; ор ве. Кюомснакця ВЕС пек Її й мех : Ск : : НЕ ма х сх ж о : хх у І Ії кож ВНИХ з в ЗЕ Е : Я І: ПШОІ х ке із :
1. Н Її жк. дк ежа щ с сер к У І Б Ще вве не Др і ни КВ зі Ж. До ЕІ й нн ду КОНСТМУКН Я Ві й й х мох х і ої : :
ПО... о З С ВИДИ З ЗІ АННА ЗНННЬ СУ ад 00200000: : : їОВОННВНТЮВА ВАМ ОО КОМЦеНТ КВН С : у. КУКТЕЖЕН ОН: Фіг 18 х ї З Е: я о жо ФО Тиси трежрдчтееюндютюютнтну ВМ ин МЕ що с - ПОВЕ Її: Ме й ШЕ Уа Не ЗВАНИМ ї Н Н НИ Щек ї кедами ях КУ вима є Вт : хека ОД ВИшММ Н іа У « звкЕи ЕВ СВ ОО М Теги МОМ нні І ке І Я М : ЗЕ рова від ЕКО КОТМЦЕКМ кикк - К ї Ж аа У УТИЛІТ : ХЕ ІЧ ї ш ВО: КЗ 1 Х. В ЖЖ ші -і я Е Кон Ок Я Зк - -і зак -й й НИ З рх Н Я й 1 Ух Н У Ж ї С І го 3 я Е х Є ше 1
А.М. Мк ооо В їУ Ве кос іа ково ка вве мок хх ж ак жо С ШИ СУ Мох З Я й Ко й ВАС Ва йй ДЕ и МО НН шо они т ЦК, с ВЕ ОККО М БННННноо м іоЬ 1 Коніооль Я Се хи вови Є ня КОНСТИУНЯ В о КОНСТВУЮЦ ЯМ сяк ВОВОТВУННЯВО Хі: 5: СІ БОЖКО: МО ОО ОКУ ппнциний. МБАККУ мох т МЕХК; : УИКОВВ-Я : дові ІБ МНК: Н сем : і пквйвт оо Я ро НН : : : ЗНО с и ї ЕКАННЕНЕННИ ТО КУ ВКА Х. нини - довели : ЖЕ. ет ря Ной Кк. БЕЗ ВНи 7 Й тних ше | Я і ОО ЕА: Н : У й ж ї : Ва : хх І ІЗ 3 йотсх Н що и щі ї яке. пн . - ее ЕН Вин ННЯ 220 как . ПОМ: ї : У д ї ПОВ т Н их ї Ж Ж: роя шкі зво ня пит КТ Ж Мк п, ши «КК КУ ши зі - ому: хе еревв, зі зм. я н С вав МІ с ох х кс реа: ре ооо КК ЗАЖа рек ке ки ке о 2. я х - ХУ ох шк дк де жк м ще: Ж х Ь, - У ОН ЗА ИН У Ж ши У БУ Я о м шо Є ОВС и їй ОЗ З м ВЕН ВК УНН НК Й КЕНЕ ВЖЕ ск КОМТВО В. чо КОМТУЮЮТЬ М же КОБИТЦУКНВ ОЇ а НТ ЗА з ВОМУ ч Фіг 19 Ж КА ТУВУКНИНИ КТИНа ще ШИНИ у о НН ЯН З Б і о ЕЕ щ : чи : ся в . ОА Поу є У дн о я ЕН що же пи Кк Я То У о Що рев Лу НН ПСЖ КК ї 56. З М ТА не Й вв ЯАР гра ПЕД нет ве Ка о сх ЗД ББЖ 1 ЗИ С: сх «5 і: ЛЕК З Ко ШЕ х 5 МАК ККУ Ввід КК В РО БАГА о КОМ Кв Де КУ МК в Я КК ПОМ бок . ши КО КК М у ЦНУНсЯ ОО пек КА В Я ХО сем с - зи ке Ко МКМ ОКХ В ТЯ й вони ТУ рі плин ЗАМОК ЗУ НЕК У й : ря с ї ря З ОК КО В й ї ом : АТО, УМО ОО я НУ ек в с Н Й Ди ВХ ее ож ан мет СО її. шк: аа ШИ: х ор о соя р Кум ом в М В, Люднверан
С. о Хо : : у ОКХ ох ОЙ ен В МК. ря " ОО й МД с х х В вих ік жн лож міф шоб дн у рмалликяи З я х Н Зоя Е пк ї А дну ще - щей В дення АМе СО, КК : мое її Окрилюцуврин ? А Фіг 50 ши Бо х ше 03 0 ВЕК ее рин: ВЖК пн чення а : п пен ЖІ без кнуюн : пи мя : Ж и МИС З В Н што! і пспезщиошення: фехю М і ховянедня ЯК Ел БЖяМ Я Е МОНА ЯДЖКД ек т НЯ КИ їм : . ІОХОЖ Н : : Ме Не У 1 : Зп: Н мМ ї Н : щ ка 7 ї ново ну КОМІ ЯМ но пн НЯ Зп І З дні ве І жк КУ ни Ії Ж ддашфеотяя панелях ПО ї 1 3 У х «Я ПО СМ н - е мих Ж йо ВХ. пий : шо: ї зх їй їх З ОК: А і Ка є : й
З. ек х. КК 7 ВЕН си о хо ДН я ВИКОН В АК вед 5 ее пока їх мої Ко Й ОО У: ЧИ Кі «ее Фо хх К ще «й « ФУ а К Ба «КЕ ох о пови вини НИ По фо ЖБВОЛЬ В бронь кохонтвонь:о ее мот Я: й КОКСТрУМНЯ З ІА УоВстря КЗ І їх гз ВИ Ї ОеЕКкННщю ше : МУЗ нин М УХКЕВУХ пн НЕ И ї : паприки мон ЯК : здівцілнеимд Я пжвхнмї пн й о Й Е Флкаднсння ХДУ Ж 54 ДВІ ТИХ На і . ї. : ВИКО й ДИТ, ехо ЯН ц Мити ЗБЕ ! : ОБ 00000 х і ПН ОСУД б од Ж довов . - В хо І: Н Че яККУУ пф «уж пане бно ГЕО В і ож ї док ОК жи ї ї Ху ї жк, НО ІБК . . зипимю мання даже п, Й й й «Ля хек же гшу В ши г Е ду | Кк КО: 3 щ- й що К хо 3 ся зе 1 дк ня пишні Шк дек щу ке: їні Ка дм ЕК чені «Вр она а р я «ЕЕ хо в » та я я тож ь 2 су ся Ж КУ ке шк ЯКО . СОВА ЗМ НЯ З НИ а: й УОВиВУТОВЦ М : ОКО, я 2 ж діти нн я У : еко Аз ЕНН МОНТЕ ЯКІ Не НН и в ШИ
КК, ОБО Й Ж ХК «ех за ОНННН ль о КЕ ОВ о. ПЕ ша і Я 5 Жду: МНН ДУ ЕвНИЙ : м х : 5 : Овни КАР пимний ВО: ПИХОХО ї т а І й кох 1 " кни В га : с Ма с ВВІВ ОВК ся ЗК «в ши В. до Мономерний : що кое Се в сне кВ з Ку Ж У Он а Кк ОН ща 3 У що не З сш ХХ й ха и Я У що т. их М, у 5 ЩІ яке Не х ек с Ж ше г: 5 зро яе й нн В С В й Уч вугра КУк : ТАРЕМУЗ-КУЧТИВИ, : : мпульсно оброблені МЕ : вепидам, Фіг 2 гуд ІООвх од пад ох птрувеіти ява ПУЕ дат пе чі ета УНН з ПОЛИНУ. і СЛУ ММ ПНТ, коА кре яв. : НЯ 5. Ж і Ян ОО: ї «4 т Ж "Ж З ПЕ : Н Е Н сих Кеті що 4 В : Бон шт чі е З З Ще я По і ря і сна ВИ
В.Я : зі зі Кв; ї ява Ж Мор Це На Б є зії АХ Н ЕЗ М Ноя : і сн ІД НИНИ ї ше «одіж ВН а го Б ин нен ек дими Б НН Н лет пкт прак ую то тосодуктяесчосіч екю, а те КК я змен в як ЕХО а г з авво 53 кт т за копактрацнм но ИН веннентря МК ЯК ОВОВІВОМО А ж» ЖОВТНЯНЕЕ с се ов ее НО НЯ Х ОК К я) Не У й жа нен ину а: КО ВИ пани Я Бу ПМ Му жчелчии : Пе я : паї ї : на ї ї : : по щеХ : : Зах : : 5 : : кох : й їйж ! Ї Генія її і Н ж Ех полю ш: ві в вом «4 як в: ЕН ве й х ї Н - т ово МК ше 00 С р 1 тощо -ї є Й нс а мими КУ Ї до ях ї ев м ЗІ ща Сн ОО НО дже Ко и дм Ук ав ДЕК син ве ЕХ КО Дрилелтт у еее тт отиту тетеетом, о и ВК ХК лддлемумух т тнодтлдеі тала те ААТД тА яхту р вла щі ї яко м ШМК ВМ прийня ЩО ВЕЖ охо се ЯНН 1 ХонИшНВАН ММК ее во КОМЕНТ КЕ :
«ж. ХОМА че ХОНОТВУЮЦЯЯ ЇЇ се МИНА ЩХ Я схо ВОБСТБЕКНІ Я
Фін Є Фіг 52 усу Си х : гй т М доц 25. НМ у ета ТУ пп нищим ШЕ СЕЗ пептицу, Ще І й, їй ПОЗМЕМІЛесентки ІЕКОВУХ зх н вени пвх Хе 5 а х З п ї. ї зд о сюствнивн Пк і ї В ши Ж ов ЗЕ ПО за ха С я Е ко 1 х шик п, х о 58 ат, ПЕ ПОВ т м до кейси ха Коней нач ди ВИ пе 1 -ї БК Зв Шк ща фо - МО хе ов ще Ще й Ж Код що зв пе гою екф то ек пси тими Косово Вон ен ОМ весвоче сте це по аа в я Ин м су у ва за за з же вже пд ві 4 КУ З 583 З. ї «ЗМ ля зд З т З х В СО МИ й пнеушнтднтндіння пен о ОН ДЕК комцеМ паца Н Хонценцив НО п. о конима А МОНУ юан В зе ЖОНОТЕУЮЩЯ 1 00 сви кютруюнн і В : од ПИВНІ : : : ТЕ: ОВУ дезлентаду ще СУРМИ овалу : хо М МЕ менту: : РВК ОЯЖЯ Н : - : : їх : : І ах : : ях Мунтян зе Втвитттфитткі Зако мини Зх ї Шк Ще ж до | і а ШО и Ба : Ух 3 ол Вени ЕНН я ше : з Е я щи ша ЦП: : ї кеди ї Ки Пп : Н Я житя жая я З: ЗИ Щ ей и В С ХА я Досі йо В о зі и що ів ' і що поз я СН 1 п В "Мото Ен ІК Нв Я и Диня ЕМ Ед : хи дк нд нт Анти З фено етттттюттетоденттотетееттттетютюсст ЗК опнунчежлинкіутетнну чеадждте чне деяку нки тої ВХ яка ва ї тв аз ох ен НИК НИ НС з зд 5 че К ще НКУ п Інттен н и : ПО А не ан БОБЦеМТряЯ НМ КОНЦ комментвав НМ: ДМ и еВ шими ВК пврек «дЕ ертне і о ТЕУЮАВЯ Я до ЖТеКУТрУЮВе НУ пад кемотруюкця КЕ нях зазнсжруюня т : Фіг 25 НЕ тс гх ну НИ пиття о Ум Хустки : до пек ку - ПМ МЕМ Іжа рр тах а нн З З яку : ші де ек ду : М : ! : : ЗКУ зі з Не май ще п ЯВу - ев «А й СИ: Н й і ІК Я Поза в Є -і Ще ОТ ї ; т ше ім : й - Вих Ци а: -- фея х ї ка ротик дних ит. денді сх ок Я З що Ох Вк ї Кз ше ях Е Сай за. ПК - у ск - м шо т. з. І нм ї По е Шк з с км 2 донени Шести о КН ї цер ння пана иа пп Брі ОЯМЕМО00ОВаЗ 0 К ов жк в т може зм 8 КІ 5 зомиентваци ем : ХНН НЕЯВНІ ЖЕ КонТЮОНе ня ХОНСТЕУМХ КЕ Ой КонствуМВ Я я» КОМоТВуКВІЯ Я Же: Мово
Фіг ЗА пн Е се Ах ії ЖОВ да тан цу я НМ МЕ дчтих : яко ОМ Му нених : :Щщ ІЗ ще : ІЗ : ї й ква БО піп 024 4 х м ї сх х С це ЖІ вх 4 ве ток й У я я. Ат що Н У ! ДО ан он я вх ре В пе І х ї «Ж Се іні й я о ПК п да хе ие В НИ Ж ї В оз оай Моно ті Ідеї т Кв о нн ННЯ ЩЕ чи ва жу М Е її х ї п ек в в в йх кн ни дек я а и Длле ж уки тва ух ке кюмує те пу мю фену тн нон шн зовааововин за ща ЯЗ З що ОБя я а ї У аа що 5 4 КЗ ВЕН ване АН КОБЦИНТОВ КМ
«шк. ЖОМТЕКМИУТМ С ос КЗНІВОЯЬ ЕВ 1 сю МОНЕТВУЮХВОМ со КОВО ОУКЦНЯ ТЯ : Е тах я хе мо 11 миши Н ЯВИ МІ мелених : ЛІВ МЕ У-ваеттВя :
7 т. НИ ІНК Н ї й : я й : й ХА КЗ : Н 25 : ШЕ ї сш : пня ца ос з я -З сег с НН і 3 Х КЯ пт її ї ск ак З чу их Б » ша Бо їй КУН 1 ЩЕ Н шиейк Ж 1-1 1 що Пен пе 00154 КЗ БЕ с З СН ПЕ ті і З я «М ню ож да : її ї Ж ве її Мосінї, ЗІ Ки ооо и мя ов вс 2. були им и. я а ес мав ДМЕ де КИ и пожеж ке кун ик я за за 3 а ви Се: ИН ЗНА за та з за я сит ОА : хпиценІвав НМ : що ти млюВу І ШІ НИМИ ДУ УК хокинтовим НМ : МЕ ОЖОМТНе Й око Мструхуія тої миру я оо МОНОТННН ,
Фн. яЗ х. у. й 238 у я Я же щш - ще не : . к НОМ КВ Сливка Оу Шезтниом Б УМ АК лет: ще Пт о і : Що : І : й : ї : У І 1 : 1 : : х и ї У а : : КО І : що пе 10 Я ОКО Ми : вай: Пл 00 я во Н : 1 НЯ 1 ї ї ми ові хі зн н- ШИ ПА Н ї : Же Є х Ж: ої ай сої нн: КЗ З ти ЖВЯ т ра и Яке НУ і Н Ж они НЕ Н 1 КОЛЕ ЖАХ Ко У І и но й . «ТЕ псши ще в а ше й Мем дн ДИ 13 ї ї ї . ще й. ней : Н пок мини : : Ще и жи ЦЯ думи и ох щи й она іні кннн о зник ки нини ух ин он нани ния ана пааетьн спав ве ск авасва сао мин ва наль тт тв ж кю юткртвтьж тт тур жу тую В КК кю ме з з за ВМ о вдо А З о ва щи а ї Му донечці КОМІ МОМВ ІНК : пд пі Я МТК Я й ул : ОЙ БЕ КОМТОНЬОМ ОН КОМОТВУМЯНО Я 00 ВОМЄТОУКМ ТИХ 80 ВОВК шт», ке с и т 23п ПЕ пит - шу Ки вн тн НИ УМ де : Ноя да ВА КЕ Учнниид : ФУ ПпМШТУС УМ НИНІ ОС во петнцу вк : ща : носу і «Ж ру ; Її . К п Я 5. вв: ж КУ да ІОЯВ за ва Ж і У ее ша за -- ос св НЕ НО й а 15 ї я ко их ї І ї : о, сон он а ни ни Я а. Кн нн а нн мс З тп. фокусом ето кю в у ан Мн звана нас нн нива пани ЕН Нау зл 4 а кВ Ко НН 1 о оЗаНи З о НК: ЗЕ е пн шу шенм мне м ТВ : с пишні: НАННЯ КОНЦ ТИ ІМ Он иац М: ковцентраце іно Ст ни «шо жиди АХ ооо у вин НА НН НИ : ЯК КОНТВОМЬО З ХОМОТВУКНЯ Б с же Кометруюм тя ЗІКА З ЯК МОНТЕ В
-х жі Чнг УЗ гу Е; ЗД Кт ТЯ Не мія ЗИМА Монети г. в Монети т ї Чех: ее. кх І 5 а не неза : р ПК Таж КК КМУ жк. дО дез пептидх : Б : Ме я : : НЕЯ 1 : : і Я : ії : : є; о ния : чі і пи ва й -Ж я Н : : ше АБ ї г зи зи я й » й ві ЗЕ Е нт Я : Я ї пк я Б У п зва КО ще в - и 1Шх ї а и ПО х ок у п Це ї Я Х КА ї шодо ЦЕ: ї КІ - кан кл В Б Ів ї що НЯ ї й г ї НИ п ооо : ск сиодолян пер ЯН ОМ ее Же нн ен В Же ких ее ЯК одне ння мсузсівтучннн ун учення ченнку 1 ен в и п в п В ВЕ свв вино теваорсн - соня з, ї щ т. Н й є - х ї - лк пах о х 1010 мкВ з дл 5 ЗО юя и за х рон ще КИ КУ . тенти поплив шонцено ва АК : ХИНИЕНТаЦН МС: ХОМ ОН НМ Я і у : пиши Ко она М и и НН М По НН
«Б. ЖОНТУВХ А о МОТЕУЮНЯ Я у ХОНоТрУЮНЯ З.М хан МОНСТВУЮНЯ ТО ек воветрУк ЛЮ ї 2
Фіг. 24 (24) ечА) У пи. Я ПАК ати Х пах шу шин таза два хніюцишини ява ВОЗИ ВІЛ о гОбЯ УБан пептиду ях ЗОМ МІЛА: г : ші З ТД : : : ЦП : ї : хх. т : НК (щі 55 : ЖАХ : м по На : і піни жо ее ЩЕ Н ї х сов 3 ОВ: зе ди Тх ї ни ПЕ Н ї кКа ІБ : с -х га 1 с А во Ск Й о я усі старт Но Н і пз жк й Вк Закревесеь ин ТВ м пт 5-4 «б деее Жид Кох В що ж р У не : ї Мооея тд: Н Й ї Шо Й КО вфофресвв оф фнрчйювх 0 по ВЕ тод одне кафед тя ПУ тет н - ї м хо Кк кж- -ї щт ко хо хх ХУ мя ? ж КУ -х а і: Я е що х З -Е т КОНЕМ ТВ М: коКиентраи М ХОНЦЕНТОаМ НМ. «антрольй сзЖонрольМо а юхонтволь Є ге вн рукн я М МВВ (248) Пд ПОДА ЗЕ МК де! я мм р я : це КМТ ТА ТУТ М: х не Ма пе ее З Ян чн КИ ква : : Я і 7 Н : ї : ї п 1 : ї : х : : ХЕ Я і : « Пуііімннинннх пегшшнни М Н Н : Же «о Її х -ї се МЕ Я зм а я ще х т Н і З в ще Н с с Ка т. Би а во жИЙ ой ши Й щ-ч 1 І ярлик тую ки т : Н : я п пф те ти В Зх сеї зії ШК сен мн СЯ 37 ваш ЯКУ Ко КУ З ох с. ГУ 1 я ех ї ї як Я ї . - ї Соя я й й - хх А Я ОД Но о го кине ней в вва їх нт тю тент й ак м х КУ як «А х їху К я з х Бо х Б - х й « « ще х « с їх й хх ї й п їх : сх милій г кону ІН концент Ж. кониая тра А куме ють ЕХ Конус хонетуємі Я. се комет нука я:
. ФУ згу спявя Ме пеЕНТНАу я ЗНУ ЗА ВВС «пох ЗЕКРК БИЛИ в я що дай : : Зах : : то : пиши Ва Би пишший що : щОВЯ БЕ му ВХ ква що » В м зх Гн . сне зн зи ЩА Зх ї Я
А м. КД з у 2 Вот з жо й » т: -.х і, Ко: к дня тою, вся ке 33 ї ви ре май -4 Й ї их й т Я Що рн 3 з я й Я сумна и ШК за ьо й вій з офейса-вововою НС В ДА ЗК У вуоц. совка мо пи ник нн пока Кз нн нині новини ие хх де М хх ще с х - Я х я М Ж хх х 5 У БУ щї В Ж й хз х жу ях ХОНЦВНТОНЦ НК жониетрио кмином НУ Е «в КОНТраснеВ і НОВХКНВ Я в. МОНО не конотвукун ої не Кору Ки х р; де . пет яп Мілля Сі яах Ек ОО МОЯ Мі ленентий з ДИ МЬУНя ЖОВ і : і : ОБО тя і Іво ше це: В З -і я ен вм ожаХ зах Її Ж г ЯВоят Як : в го ій х ХК. я ши ПоОозя 35 - й кож ТА Нр У ї в Ї ї оо Що ПЕ: сша КЗ Я лин пф сани ОО К- Щі: З ден Ся ї и жо ко 8 т: 34 СИ ЧИ У 33 Бон: ж З Ме ве сни ик ний Ве В ВВ Я ЦО ї фея КН - й - те зх НО ВД Яке М кс ле Я долали я жа УХА АКТА АВТ, Ко мав мерсва и фараони заполвовн : І с й я ще Е Бо хх іх, - сх 7 я я си х Ки ж -Е я Кк « 5 г х х КОНЦЕНТВОНІНМИ МОВИ ОМ кОВІВИ ТВО СМ ОЖоМтуюмте В. хонтроюе КОГО комстлуц Я.О КОТА ВИОНетТичНУ ВТМ лю ми Коооооввосч з ДИМеВНиХ я й мужчин ВЕ, пава мн 4 -щ Кит я Ко сова вити Б з її ч Бо ХІН Я кожи пер. Дон Яких а сза сс ща. ОО ВеВТВНТ оса БОЛЕЕн роте п ОХ о В 0 Мечиеония ОКУ ОК А В З ше сах сс 8 З ОКО вк ех ОХ нний ХЕ КУ вВипиечка Я КД ше т МОУ КО я у З У
КУ . дк У : : Б й КЗ : : ех МЕ з : : Км ОО: ї и г. Н УКХ зим : «А г» ши 56 Я Я ФУ ОЦТУ ШЕ. меч с : КАК Спукаивн кичини
Фіг. 6 Фо
Фіг. 27
НГ. Сак я джен рова й
«вв. сь чрепнверуючих СОТ». й К НХ 5 Кв о шина й ! ШЕ ж ее зе ЦИ Ноя :. ее ше ше НИ се Ж : а ЗИ оди х х ОВ ОО же : и З БО Й Ж: ЗЕ Же я пе : ай шо. їх й з хе дк 7 КО з ще и ше ШИНИ НИ км 000 с ш Ши ек не ж : ще во : ШЕ Пор ю-о-8-а- в-ва Во 080. ' я ЧЕ : нь с з з 2» ДН ИН хонцентваців (НАВ : «М кантровь МА Ж конструкція МАЯ С
«-. КОМТООВЬ М.Я С зак ВОНСТВУКЦІВ МОХ ОС Фіг ВА зомемеж о Еш ЕЕ о Ї ІЗ: и ІІ Н НЕ ОО ОО М М Н НАШЕ ОО а В ОО я Н Е ОО М Е і З ЖЕ ХВ Зо 5 ЖК ща 75 За 5 б БО ЗЖР о Я ЯБа Лв че ЗИ ЗЕ ЧО а ЗХ ї : М ее ве: о НН !
Фіг 285 ЯН о фанати і ї ї ще : : ї Я : Н х Я с : х І ї Я Я ї і : : Н 1 ї Я ППП : ї Е Е - по і 1 ІЗ т ПИШИ ПИШИ Я : ї ї : ТИПИ, ТИИИТИИШИТИКИ ї ї ї ТИПИ. ПИПИИИНИЦИПИИИИМИИ у ї ІЗ як ПИТ ПІНИ її : і З о-т ї ПИПИПИИИИ и ПППЛИИНИИИНИНИТИН ПИТИ ї ЕЕ ува ч ПИПИИИИИНИЙИЙИ с ПИППИИИИИ МИЛИ. І ї В: ДУ ессооео дк АКА Анени ПППИЛИН Ал ШИ : Її : ха лах зо піоосу що АВ В ВВ яювя сх піки х І: З а о он : Н Ого сан я ПИТ ПТ ікони» К МОУ я ї : Род: ха Зв НН ПИ ев ППП НН Ж Н РІ : Пед Ки З З ПІ ПИТ ї й : : КІЖ ІЗ йони ННЯ оо ВНН - Я ї КІВ ї вжи ПИЛИ ккд ТИППИИИЛИЙ ПМ, 5 ї і ЗУ Ї де ОН пода Ка ПИЛИ скл : у Коіж і й оон вас я : ї ОО: Моппаххннхххх і роя соя ППП вл, т н СІВ т : Не СУК Я нн Я : РО в : НЕ ее НЯ ПОМ : ! БО: Гая еко ЇХ ке М : К ППП кА яВА т у КОГО Ка ІІ АСК КИТЬ В о: ПИШИ пд : : и 5 її : : іх ПЕИХИШВК Вова ї ї ОЇ КЗ : 1 ПИЛИ В Я Н КО: КУЗНЯ : : І: ТИТТИИНИ ї : РКО ню : Дн о оо ооо і р їщ екеї укинтуик В НИ ПИ ї Н 1 Кп : : ї ПИ ИШИНИШИНИ Я їх Н Рі і : : ї ПИНИИНИ ПП у Я І ТЯ 1 : їх ППП НИМИ їх Н КІ 7 : її ПІШИХ ї : КІ КЗ ; ше ПИЛИ ї Н ро щі І УВК ДЕ Її і у ЕЯНа : 1: Я ї Н з пт : : : п ї Н з їплЕ : : : я я я їх Е 1 їх : : : Я їх : ї ОЇ ї : : їх Н ї НВ еВ ОМТруВНН ВІ Я ї : Н Я Зх зх х З г я Б Ск - с с у у лу г Н Н х Око що еще 76 Же 8 зоБ 533 525 МЗ 83 мЗ а пО КО : : НЯ МАЕ НЕ М ТЕВВИУ Ми : Фе нн а в п в п в в и І М З ї ї : ї ше я ОО М НН : ПО і ї ОК НН НН В Я 1 ХВО ОО ОК Овен оо о оо ооо в ОО ОКО ве оо оо во ен : є ПОН ПОПИ КК КЕ ! 1 ХУ ОО В ОО ф ОО НО ОО 1 1 ФА И КИ ОИПИИ ИИШНИИИПИННИКИИ Н рол ШВИ ППП Н ЕН М а М Н і ПЕНЯ УСИК НН 1 ві ПЕКЛА НН Н ві Ко о НО В ни ї її Б ї ві В п ї 11: ШИПШИНИ КИ НИ Н ТОБ дно ПЕК М М І ї ТКй ЕК НВ, ОО І х Я ОВ КО : 1 ІК ОО і : вад МИНЕ оИИН В ОО о Н Ток ОО о и : 1 ОК р КО ОК ОМ Н Н І ВИНИ ОМ и Н ОБХО ШИШКИ ПАНИ КИНЕ, ї ТОЖ ІПН а Н ЕН Б не в ВК ї ОБ ППП нн ОО КО Н ра ОО ЗВ Н ЕЕ По В в В Н 1 ПИ ЖК КК В нн Н раж ПО ОО Н ІН ПИПИИПИИИШ ПИТНЕ НЕ ї 11: її о В НО я і 11 БУ ОО ІІ, ОО ОО В З і Н т ПОМ в В
ГЕ. и ОО В І фо хй М ЕНН Ин ни ї і г Ні ОО М ІІІ 3 і І о КН В і і І І НН В о В Н ї реУ п спмтуєцмщо КВН ї ІЗ ШХ кю ИМТЕУМНИК ОКОБНННИИН НИ НННННн ї : ВОЛА шо : У І вини ПППШННННИНН ППП, : 1 ЩЕ ФИПИНШМННН вв ІЗ ї ооо КК 5 І «ий оо о в о о КК о КК Ко КК КК а кання Ї і Й лі г с Й я я хх. с с. че мех - зби х3В жо у 1 КУ ХЕ 5 за я же я ВВЕ ЗЯБ бай жк З ма 5) ЕЙ ЗБ ЗМ ве З І ї х їх ї і МЖК ИЯ БІВ. Я ЗП ни у и и о а
Фіг. 29 ; ях ЕЦУ со о. осокою іі що Я й й Н х ї х Бобоосо5 0 посозосов ; я: КОВО тк СВ. ев) мн. (ЩМО-- с З т Н Х ї у Н х і У ї х посозводох пасом со ; со ж ше МЕС В) М Ян С й ї Б ЗЛВУКХКНКИНИХ І х оаозхавосх Фіг ЗО З г-Вщ) (32) поети 5.3) сне вав І І Ще ща І й Се Й вно У пи зай.
Й і.
ЕЕ зт ме т дич» Й ЛЬ ок сто СОМ Еве й й о смов вн ке в ше з ге о ши Че БМ ше ОК Я гц 5 ЩЕ пе Фе Тх Ен НН ДН ПІВ грою ут вну ПІ: що ше и мої їв Я -к їх ВААС в і | поа-іТВЕ ща ЩО М сік З в як дух р - СЯ) зка-ТЕВІ, СБ) вищ, (5.8) анти ТР ПОВ, ше Кз вити» я щи "дв зитя» й СКК на зок. ж 5 кмх СНІ сО15 гав Нд Е ще м Бабн Як і о вот й й | с ни ть св і Шу. я о а о о НК с ПЕН Ще ОМ Я С внрх а Я ОА КОДІВ т яд дм, У ПВА ЕН ЕН Бе Па Пе 4 | пра й ЕУ !
Фіг ЗА СВ відлевізно до пистоми нумерація КЕНЕ НН ЕН Ї КУ Ї ПЗ ЕЕ: і я : з у и зм дк мою вам їх ж.
Ух ха кхесКаКания их пехижнга хауса ек аву КХ о кю вен евне В КЕНЕ ХІІІ УКАІКККВВК І КІ ких: лАтУКК Щх ТУХУгОУКУІКІ тки СА НЕБА ИН КК яю феєю юю юю юю я я я кА КК КАК КК КК КК КАК КК Кия я як КК КК АКА АК Ки АК КК Ж ЖК КК КАК КК КАК А КА Ки и чи М Кон МКК ЖЖ кт кт ня ж жк кож ки жжити тини в ще ИН: х х хх х ххх сезитиебзмициь З КВ пЕКУДЮНМтТ М ЗБЕ ТЕЖ ї ПК Її Ї УК Я Я хакі. ях ХхмумамиЖ ик цих юних Км и у«Ухиі:хухимхк кі киоІкиУХУКИММІ МКК ИХаАКИ МИЦИК МКК ве М вв п в С и и пд п п а в а в в п вих х ххх хе р УНН КУ х жжхххж Кк подтдевети М ВВА Х ВН Неи пнОм тм: попожеи Фі: ЗБ МЕ й в Ме СД Др вв ди в ув п тн понос нний нен ВНС ння іх фронн ння Й Й рик нн нн мя Вже тан жодон АЗИ Шо окон в ен ЗНННИШИНИЕ Я БОМ пркня рандоміхяціх ЗК 8 КОІВНІі Ух адм Нв пе БОТОМЕ кехме радо міянях Шк мо БЕЖ зюоратна ракАсОяК ОР ме хр! шк - щи: - Не зе аа М ее ЗМ --ЗВИХ пого ви то а пон о и ня о БАН нн ВВ се фея, НЕК З й Бен п Ме КОП КОДеВ АВМ: З їх Н ТУЯ звороти панди: У СП прумупондамя.
В МІННЯ ПОМ гін с це З гущха У КН защуотиа ПЗМДиММИя 5 ай ще «М учуч Що й УЖ СО прям пзндомажи мус "ще ЩУКА ї фрушиа зеороке енд х Ка Фіг 32 ЕН мож ма сордХ к сих лис БІК КУТИ дх УК КАШЕТИАХ: у" у; тах ТІСНИМИ ТЕ КВК ВМ КК кий но НК Мена шежюя : 7 УтКУМ КУ ХК МКК КК ТМ КВ ТИТА фінитятинниту вки юю кю хи ІЗ у КиМУ Ии Ви АНКЕТИ зви жюрі еко юю кВ В лях поч: ши ем ни С Фотон Знав ом нн На МНН прое Міжн п ит Кт «Мох Бежжжююююююююю вних СВІ нер: пекрю Мих УКОЛУ АК К ЕК родоеррен УК Жх МЕЧ: ЕЛЕ ЛУ ФРОЛОВА В КАК ЖК КК КА ТЕМ КАР ДАЕ КК мевововевосовораевово всі МОЗ хКИВ с, Е СЕМ КВА КК Е ККОЕА М К КВК КТК кудуєЯ донна хо па а У т УДО в КК ВН ОК зкЕ ПІ Фелеремитвхияни няття ких Н ЖАВ ВЕНА ЕК А КМ вет Ед АМКУ Юхим я. ІЗ ху тчжхитих я юку жи, В іх ТЖКУ й я юю июля і на и фею яки не шашок фе хі клік до ї паху вки ких В шкхухи их ки кох ки дяки їх он в В В їх їх ї Га: ЕК им кю хх уки ю хни их Й ж т ЖД еф яки нн: щи х фіг. 33.- Нео НА МЕ: ї бої нн пен дол ж у Бі Вони й 25 ПМД йМУ 7 из - о батьківевка і В нан р : сах НН Фо ння зда ПІ Н : НЯ по ОМ й ЖУКАХ ві ї- пня мене КК нн ЖК ї и пд си НЯ ї І: Ат муюкх І-ї Ї То Соні пе КО джхююнєнккя ду луком Мом и МИ ПИ: сна печжкюкюхя НИ ЗТ ллтлелтнн ТВ: МЕ пмлуму и МУ Й ЛКК и щея ща скєюююх : : и ово ох 2.00... 0 ХМ : в опа и ко х г Н Не Ку З хо хе їх КУ : НЯ вн хе п чав : НЯ тд й іш: пт Б Мав: Па Вовк ІМТ ої р. Ті дежнннняям КК ї і х ака ИН я пня в НУ ї КЕЩІ ме Е Й НО З ї Се Їх тат Йони ві До? дджентнтнтєтютессвюетння НЕЯШНН и ЖК ЗК АКТИ ти Не г ІЕЖО КЕ орки, г: Й джекнтеююктююкхх Мф и ку учи НЕО ЗШЕя життя На КУ Е Я реч ІІ ві пух н НЯ ши РО МУ ур Як : НЯ Я 2 хе М но вас (В: пня
НИ . пікінннння ня х : ІДЕ їх ее ча і) : пд ХХХ я же тюкюеюкк пої же я Не ї го Тож АХ рн ої й С я зва що ВСЯ: я МАМ ЕКО М нн кА Же Не І : ї т х . лох ї В НЕ ЗАЙ І НЕ пи Не ї Її Не ї НЕ нини ОК ї щої Ко пек ї. ТК щу махом мими У С замов ГІ ТЛ АКА НКУ Конан : : сх У повин КОТ, в Но ЩЕ хх ЕК КН В КА часів : Нр м Жоден сн пт ММА ни магії : гл НН часів: І ЯМОК. ПЕ жк пееужютеююи шт ня ї я Б Мк ід: КН чі ву ї они Ви ї І хх - ВВ ОО Н ее Е Та ї ї дини З: М ї ї оіож В «ЕЬКУ дк ї . ві Ше Вдроку Їх шк 1 В Ту і СИНКУ Я одичнтткндкилтюююцяхнли ри їх КО Години печення 1 Її 1 те УК КАК що і омана НИ пн ан ІТ щі дуоюют ВЕТО пк ш хх ке й ІК О щур змо ук. є 400020... ІТ ума нуннмнянюнняняя Ме іс : т - й ня вав
Фіг. ЗА НН ХО ВХ СО БАКНЕО: ; сан у: КО МНЕ пилиєиі тет. ВШ НН нам Ба я пз пи Тлті т и : сме я і верямовамай ЕД : й а ВС і ременя й Я о:
г. я ЗВВівналн 1. ! Осо х Б МЕ о МЕЖ Фіг 35 МОХ ННЯ БЕ че КЕ - «І як що КО Пі Я пр бі 00 ІІ ГЕО : В І 1 лах ПВ я ІВ Б Нори ДТ ве шк . ТЖІМЯ я. ї 17 п пОбІЯ Ї х ях : о ща Її х і
Ві. Ше Не: НИ з й ної зі НЕЗЗННЕ м Х НУ ДЕ Ще 8 як й Же БОШ ЕЕ а | Кол НЕ БОС а. Б ЩЕ ЕІ ЕКО ВО НЕННЯ : НЕ ЗИ ІВ МИ Й ВО вн а а а Не на кн па о ни ІДД Духу ук ПЕ ха З БО Обл іх ШУ уко Му дО Не ЖИ цю Камю М Хо а ми ТЕ: 5 в ої НО Ми й М КО ІК ізасідсвихідний момент Ж.О 0007000 маоібе вихідний момент КО нас ібкнюхідни яовенті ох «ох СОЯ « ЩО 5 2. В дае, ШИ іде, Я схо їсхжи. БОЖЕ ПМ ПК Дня ЕН Я ит Н ПВ Код ця щ НА : ї 7 НЕ Н я ті 7 Я мах ІТИ : х, : п мк КА НЕ й ся «т ОшІ щі Ї т і ВЕН 7 У ТУ я м нан І зу й ТК ї ЖІ ша : ше ТМ 2я Ї х Н а : ЕН НІ жі 1 М ОД Н Не ГЛЖЯ : ваш Та ш Же Я НН Жан Га: Ба ШЕ я Ж Я пон ПКОоБАня Воші нн и : Шлунок имя, КИ нення ння І От є Бо удо дю Зх ХК яко Кок хо ох шо ХЕ КВ, ГМЙООбО Я дкОЛО ЖК ОК В М ВК мето Маки» яахіднам моментю 85 ЗРО пастсвихідний мозаент). о хи Макдевихдмня ет В.
.
Фіг. ЗА й ще пи БИ 5 са Б Зоо КЕ яв ме се ке: засо Не як сох ко Бе МБ свое Яку жене ІБ вх «о Жов - ОБО ший: й «КН МК. ей В те я ши шН « о зах се я що А ке. їз 5 НЕ ЗШ Шк; ЩІ вк Є їх се счннЯ жі з ; х Б «ові ; з. М Іоан ЕК І . дат ЖИ їв ке змій ши ттх фр и ву В хо дк дек в ко І ОМ св вв вв ПОРО ЯМбдну фонпедотнанрчвнне ніс етлнуквнічннм Во феотлієтччнюінннор тн рчнннн Зуромї," дока что тео іооучегеї ПО БА в СК КН жк ак кою мих й ке У х БК КУ какая СЗЗ Ко Я ж: КО ховчантрая ІН, ВЕН КЕВК ХОВНеВТ рація НКУ «ккчніроль г : Ка Жекнруєія хів Хонтрюм д : «к-хонстрекців ЗЕ : а. розтрати Є : же Конптрукею Бе Звиртнн В РО кеетруююжйя 1 онютьг як упкаруцвя ви: о женраь В: ЯК бововуман ЯКО. Явна мі Н й : шк рі : : Й : Менувель К : З уж: Ж хенованеж 007 коноруіа я ПА Бе пОБКаЖОВА се зак чи Ома яв сое що яко: Ше вкРсо о С вх БУ З Зк 3 ЯК. ЖІ їх 1 в ї Х і! їх з в шк пиши ши; г; ї ща я я ! й рек де ОБ З Бе Ї В я Е пи я зевеї гав ЗК афяеакои У Н Куй і З ЯК і сеї Я сезаї Без кв. вх Ок Кк зав: ШЕ» тв - Пх мно іш ся дк Ще зе повела ни нн ИН о ЕКС СВЕ ВИ ЕЕ КОТ ВВ ВВ ет» пр ик и НН у кача І КД СКУ Б Кк: ОМ К нОДЕ ОО «У Шок ОКО ОБ у З НИ Ко ДКЖНТЕЮКНО еВ с збурень зе енсриця За ЖОНІНЬ Й 00 МНЯОЗОЮМНЯ ТЯ і НД : ! дкмтечь ЩЕ : : гущі зе ЖОМІТЮОВЬУ ск КОНСТВУЄНЯ Й Сон 1 ее ково За - ВОНИ 1 з хору В «етан «ажантвови В 0 жовНерволь 1 о дк Меютнкія 04,
х - ЗЕ ФІ ТА НН зах ші : що по я ва: він й оку ній еко ЩА отак ще Я ї Й с. ї Ж ве я с же че ЖЖ ев ! НН її х 1 Ж Ко ке дет Ж о акмох са за и Ж х ІВ іде Є зані яЖ Ох твеваї з Ей ще Яе «а ПІ, Ї Же : в Я проте» ; зав Б; жваві в Ей НЕ ще ї У, па Іо прі Ве В св ВХ защаі Же ох и Й і. с ; ік в Би у дива ун звані в ях тео шо Я одн в ой ПЕ: ї що ве т Б в рано Є Кн з знан зна нин нанні 8 ен фогоюсулесстютеюртекттєсесюттєтсо ТЕ : и Ж ку М С хх -лк ж 6; «о х є хх СЯ . с х х хх м М кл Шк и м НН фіни ТИХ : Поу ут нн Отто Ве о НИЙ 00 МННив вив МУ о ЖОВУВНИВНІН 00, с ХоНУВЬЇ Р комотруюа Я сов ВОНЕМНЯ ХО звуовотвукц я В ВНТ Я В ВОНЕТ НЯ се вомююь СХ ЧК УУНСЦННЯ Я ко БАНТОМ фуонотцня ЗА 00 сере жоюнстеуюн Я зк шаПраде зв: Манти В зе хОнщютЬ Ж. жено зу ЗУ ФІ Ть НУ ІЩЕ Я ПІ щук Й з ; вес НЕ: у кааив ямах мата м: марив : ше : і : : СІВ вав «аа зве Фо СЕ ї : і шок ї я КЕ і Не: і з х п а Ов х х Її зва Ж за зт Я : РІО ії 1 х І ОК одю дн, Ко ; і ЩЕ ЕВ що Баче53 г; дних ХЯМ сб : ТОЖ і СЯ х Ж Як і: БІЖІ і Ка : : в З РО зві КЕ; вм тра я Е НЕ і що ї Ка і: лах : РІВ і Н ши Й ї Й Ша 3 й МД : НЕ Ба пев росою пад Во ца кових Зще р КЕ КК ВОНИ РІ: они но ШІ НО о НН НН НС НИ З За ух ж а Не дво Ще: 5 ь Ко : САС МНя НК Не « ко БУ шь я є а жу х ще - « днини ка ХУ : пі по диня днини пристінні сцени : с ТОНИ НМ МИНЕ КН : "Зеушнтроне Ж БЄТВУЮЯ Я 00 се хантровь Я зехжинруюв я 00 хонеролья с зеохотруюа ЯЗ : с ЖенЇминХ: ВОКОМОТВУЄНЯ ЗЯ ж жееомь зв хецвуючи мя 00 се веронья: вконотрующя ЗА з котровь я з хинротьЕ я ВЕОЄНКОК: демютрувН Я
Фіг 378 І, х а ху ТО КУМ.
ММ ох ОВО Ж, ЦЕ м ТОВ Ух Твій: а Тоїва НВ ї м І жкввя «ох чі НК : пк ожю зе заащя НЕ Н Іон ша я пф «ази Же Кв зе ддеря тк нут ї Кі | У «ев ІБ: З Ж зав Є ев а. ви НЯ Н що ї 5 Кк ОдЕ їх Є . ї й Й й В Й ЙО пі ве ода оловх ВЕНВ В сво вея зізв Но вав де шк мож М х к сх КУ х ча дк Я ж У Я 5 Ж х Сем х х х хх по ою я жо КЕ, ой в ВИНИ Я на ХОННВНТрАН ІМ: МОМЕНТИ аН МК: век ко ИН даму се кот уКя В: ш КОНУВОСЬ Я ско МОНОТНУКЦІВ ВВ НКУ ву В КЛННММІЯ се ЖОМУ КУКЦЯ Я 000 зни Вольі с з ЗОНЕТЮЖКННЮЯЯ сожентрююь ВО онук З: «кончини В «нат се КОНТРОЛЬ Ж ово руюци ЗА Фіг ЗУГг п Ць: : Б ме ме жк. сеї Ко рів гвКО Ву сем ші Імя Мона см НО ії й і Ж: звана. ех зі НЯ і тд; ев: я БО не ї Не Таз роя дао - шк ЗВ Зароз : че де с . З ї дя і ще м Кк оо х с с Я 3 В М с 0 ра фено онов а В ВВ ТЕО «іди Ва додав МЕ ЗА « С А Я Он ни НН НН НЄ У Же ак ож хх В хв Но й я о Моя чо х ОО зай «ї Ше ож Кей І ВОННВНрая пи ХОМИН В ВМ пт КОКОН ВА ЕН 020 : УНН дя : : М пон Я ді ЖІ сля хащі МУ. : зе жов г зевонствУкц о ож ВНМОМ А сво конст 00000 о КОМ Код КОМОТЕЮВ Я : екон Б ЖНИВА Я 2 сх вщИфОлЬ се омотуюВи Я що ВОМНКЮЬ В зв КоМеВВуНН З ші що чу : хакикщь жк: «ваствумя ЗК: ЗЕНИК: «кино я : о он в о НВ
Фк. ЗВ . и : Ж Б ЕВ з уже СУК вк зававя І й ЕЕ і СА Б НЯ: т ВВ Що щЮМОН ж
У.О тата: ї о ДИ ан ї пла ак Х повне МеВ, змові : ппбКННешеНМя Завеві 0 опннкдноення у я до РОЮ КООЛЯ НЯ ОВ Одне таке засо нн НЕ і ик 3 Я ННЯ х й ся Н ї пе ся іжех до КЗ У твеяке Ди нер Н рай і ай Н5я НЕ мудрості е фея ква ЕК зі и зар у Поч нн вен нн Десерти Дт тету оту что кн ккктт, у Я хх Я Я - ке Сея ск СЯ ж Ук ж к х м СЯ їх. ня х. Я ХУ Я : де я З ХХ ж ьо З хх МЕ її ца сх її (ха хх а я ох ин и М є Ви М В В ВМ М есе Же ЗИ ХОННВЕТВЯНИ НВК ен З НН «Б ЖННЮОЛЬК 0 се лонтроле в ож хонетрюкція і нак комктруюя ВВ г 39 Фіг З У щ Ше За пд птн нвнннне . В є й «ін Катвхіовка киМмерне 1845 : зу оекоя : 7 : : де 30895 в я ж зуманиований яарізни ї : поко «АК 7 сам НЕ Ще ще : Й : : 5 рай КО й «о туманиованнй варнт а : СХ Ух КЕ; ми : 1 ях Х ї ро їх. «83 ти КУ : НЕесУ Е зав а «ек: гуманимианий Варити : ІОН ї : дже НЕ ; Я ї : БАН: ШИ з Ка Ве: тукотюнианий варта Я : б Кі Кі од ОКО НЯ :
БО. | ге ДЯ ЕЕ ууюетмованих зарізми х : НЕ З і ї дак: : х од Я : їй К мнню Я Ах, Я й нессокав : туманєвании яанаме й : : : і ШК ний З НЕ : : БЖ 5 ! КОКО суют Ж чільки кпінни : : х я Ко со оо. хі щи : : о Др З М М осео» ков сжим сад Ж НИ : НЯ ща і Її св Не : в ЕВ З я МЕ КЯСЕ Є ЕЕ З оцю нини няцинийийнийиичнинниинииинй : концентрація зититва (мими)
Фіг. 40 мий ЗІ анвьокА я Ми кох хват ДУ кет ух Ед» С) 235 (5 рови М ук ут) М чн й Б о00вичовА Й «Без п. Й вне СБА ув ШЕ ши Є ша Ши НН їх; 5; У З Оу я еВ оч що ая ер аЕт о ЖЕ в у З ще «СМТ, ях жі: ОО ДИ М СНІ пав а ОСОБІ пе РБімА Є, с . | те» ВВі. є: ще ФУ рова с Е; г х уях вчу й щ іо. 4 з ЯВВ 5 нов вАі, (5. ЕКЗ) ант Е73 пи уч туди ЕК оЯ СУЯ сх ї; РО щ. чи І : В; анти СЕА бе х шо І «а «А Сов щй с Тусевсопі з Кай ще се Б о вк б я ЕВ» КЕ м В ее і в ше. м З ШК, Шон БО и ОС и МОДІ я Б ож я ЖЕО ше ШЕ жу ще сві ко я т ж дих НЯ КО пМчеТОюМ Я ПК о | гр ВАЯ А) (41) со щи 5 вемдаволя о т аУвнЕ д ОН вна) ВАЗА се щ й НИМАЗВІАЛ вні: ш- жк де по ВЕК о Села струмовий Порюденю СЕАСАМІЇ е ВОРІ Є зримерний ЗАВ х сь оооавнавняв Важ г Беж в е Фіг 4» В ПУХ нКиКиХиХ Я по КИШИНИНИЕК ІМ: ІЕКЕНИНИИИН по ВОК ви КК ех ЕК «хх І ПТ Б чт ! їз МО слон ж ОКУ Уа : гої ПОВІЯ : с 84 ше оз: Фо: Н 7 ї пн кос НЕК пит НУ УВА ї Н У киш ПА оосвші ях НО щі : х : ши БА шо З НЕ а ШЕ 0 дю Е - і й ї мая Не ОО і і: хе Я ї Й ол ї о ї х АОС ї Н Не кої : МОУ ск Я ЖОВ ! іме В Под : АТ ди Я яко Тжя : СЕ Ох : хх : ї : сх Н 1 : ОКЕ п ї КО тож : я : пк Н Ко : я : оо: щі : 5 щі : ї ТОДІ :Ж : Кут ми ї : Ї 1 : ї Ї Та : : ї ПИ ке ема зник мис тен вн іа нн Зно : І п хо йо кох ЗКй ло лев дя лу, зе : : оо дк жк лету му кох ЗМК "мл Уж «М ж МАЕ ОМА ДК ж ЖК ХО : : ЖЕ ОО НЕО ЖЕ ДО ЖК ОКА ОНИ Пд тікав км ши Ок НО В и и п ОО пан хідний МЕЛЕНІ 5: опади х зма 5: ВІХИ ВИННИКИ їм В ПЕ МЕ в ПЕЖО що КОМИ ККЖК же КВ, ДИКИМ, за У их МІ о ж Мт тт ї мч нні цу : СН: сей : ще се вшо103 код : НИ 4 пк ПЕ ВА. В У пФ: 554 й Я Н Хід І 13 В х нку НУ НИ 7 ін : Тих їж гої 7 У : тех НК ї. ї : їх ї ТА за : М Е ве ВЖК ї Бе : хх УОх. ї я :ї ав ко ТО : ге : НЕ ЗІННШН ! Я ІК: 1 : ше
7. соя ії М тА І І ї 7 З І с і Я НА : НК З ХУ і КЗ: ке я : веж ІНШЕ п НБН Я Н НЕО ОА ї ЕОМ Ї я : Н Во АЇ : ПЕ п : 1 цк І но ЛИ : ПУ же : 1 : : : М в и ї : М ду : . ї ї ЕКО ОДеря : я : Боня Не її БО: х Я он Не : «І Те ун вх ну нн Ктя й їх ТЕ во оо МУ ОВ ММ; ДК ЛОВ ЗО о ГОЛО БО ВИ, НК Ж ВО МНЕ ВХ ще же Не ОК о оо МНН пий чи ізвикачий мпмони Пт : Великі ним МОомеНХ : МС ІБВМХВНИМ ВЕНИ до
Фіг. 43 й В зе зве : пе со м зу жк НИ БЕК Н ВА СО ШКО ЗХ НУ т - ЩО Зах охо ІЕОО х -ї жа я 8 Фу: ї З. с дич Джо ОБОВ Ше З же ж ге ША шо ХЕ У сини сої На: ХЕ ПОЗ ех я М за НН: жа хащі х я се я 834 туту неон во е ШИЯ МНЕ А ПЕК задо МОЄ и Зв ех я й но : 25 ї Б СОУ др Я рн МЕТ п тя ух ях ко ж дя ЯМ я ЯК Ин а ни НН НИ Бе а нс СЯ питания СОВИ ко Кк СН Я ОК Од З Я хо СОМ й кеЗ і: г ее й ее и НИ Ж яю кр ще ; СЕН месоВ ша дере о ї Н ОБ дві . педа 2 ко МВА ще Ку ЩО ЗЕ ; я ши ї Ж НЕЯ ї с Тис Я ї п Хв не Ви мин ї І я х ИНА ра й Же вав Ше Со Ж : : хх ї ООН В От ї де Ж ї ОТ оз Мо: і Гой їх З же Кк жу ї в ЕО Ж ї й п ху ДО ї жи еко Ге у о КАСИ У а Е з Спа осв, З кивок аСНИ БОС Се ЗИ С НОЯ Б С А ШУ е- КУ МН НЕ АН ме НО : х У и я Му во Ко ех Я Б с «У Ж я як МИНУВОМЬ Ж 0 ке КОМОЩЕКЦВТ 0 сх Бон В як, Коник Бе : «ве КОМІ осо ВОБЮТВУНННЯЯ 02 юдмирв В -а- КОВО рУКВН Я Е юн ронНЬ з Зенструкц ва :
т .
Фіг. 44 зх щі ГЕ саке змид ЩОКУ зхжкх ОО» ів мо: 1 ща і: Же ЕХ 5 ик, ї АПУ Ж я ОК щОЮ о: Е оо ожнко, вки с жею ще , У 1 х СЕ ра А ще С жах пану до ж 0 БЕЮЩОЯ ; ЗО А НН ж ї я Ще кож КУ «ем - ВЖЮЮ р. КОХ Я ПО й ї я Й т їх Ж ж | як хх й : їй : й дин ї зо вай н ще я ОМУУМЕУТУ УЮ у Ук УК в: У озарея поиск се су сухому ТиСеУМях У» М х 5 СУ Ка х х ве 5 х я 5 х ек ех ; І М Ск, ВОМЩЮЛЬВ 000 дам МВНОТВУЮЦА КУ Ще
Фіг. 45 В Зез хийне заЖкь, оофажлєвно ВО: І І: : ОК: ї Шк ояжесх ї : 2 В ї я Н : тод : ДНЯ : : хх ш МНЮВА яка КОЖ Н ж Н к ШО Н я і тая
Ж с. й і: зн х Ж: і Ки ї У ФО: Н ооо Н й он З ШЕ НН від сова Зкясвн пе Ж кн и НН ННІ осн НН Но, НН НН НИ ОНИ СЯ щік З - КОМ ой й Кк ще ко де КОНЧЕНТРНЯН ково Пес НН п ЛИН зе іо опювєекинення З : ооо | сини щинна КУ : НЕ і рт ї сон КЕШ я У щ ЖЖ ІШОЖО ЗОВ й ; що й я пк о Я й х ї Ге Ек і Я х | реж іч су КА 7 ЗихН е ще пд ОВ і Ка х й у Ж Не ДА дет ой не с в В щі дм де бета В Нас рей : 7 мя уииессюрчу сою усю ис щі ген фесту тт у топа чел Ук БОБ: І М НИ ООН ун в А НН НК ССЗ В й й КЗ я ке в «і « ОНЕСЯ кох я пит Бе ОБ АННИ о о з Комтравь се зомотруюя В хо фентвонь йо се конетвуКНА БЯ С: «в: ВОМТІЄЮЬ Я же воМотруюіВ В «а хонтроль як КОНСТЮрУуКЦЯ 5 : що КОНІ рОДЬЇ сяк МОНЕ ИДЮЦІ ВА :
Фіг. 46 - ОМ ОК Снеки и З (4бА) м (ФЕТА С с 7 х ї х й х Її х ї х й х ОС Зв еО у З Б ЖК і алалалалаамк ОДІИН. І 2 фа М о | Киповюю) с В х Е х й 3 де ОО (45 (40 й й пи. і ) 153-183) анти Ед Еш Я ВРАУ Збта ВН З іа топа 5 бснодкова б я С. «зле Він)
в Б. «В. За «ВБь я Б, в ен Ше МН шо додА ви ее . : у РаТАСА Я вмів п в вва ГАЗ ке шо УМ аа 1 а ПО ВЕК» пр Е ЕЕ о000-
ва. і Бе я в'я 8юв. у я : Й ОО я Ех А Б я ев У Б ше Ж: В Ся КО Кочесуюрчлис отого ооо тоурнн ік оду юю я б ВЖЕ й ї чо 18о ОС о ЖХонцентрація ЯМІ «ак МанОоВаЛентна націлена ма БАР СІВ; конетруюя вка мітить розвіленин пимерняй о МЕанД яю я зате Ге КН : Б АБ Мис ші Кей Повх м ШИНУ ше - в 0 НОВО Же би ВО 3 ШЕ вв о В я ЖЖ щН В в ОМ в ж Яке ва го ва в З за 0 зво : си МвентравівіВМЕ 0. «ве ПДНОВВЛеНТМа Мацинне ка АК ВНІ конструкція, яке містить розмнений тримерний КК о :
і В з й пд КК ння в . пинннння (ВА В ГО ит Овни я ; ДктиВОЗВНЕ ВЕДЕ САТ:
х. ОХ о НИ СТВ сло ОКО «ий Н не НН: ОВО ОО: у ЗЕ : ї СЯ У КЕ : ОВ Б ї от і у я ЗЗЖм жк Код : ще 1 дян ГО дії пон : на: В ОК ово ПЖОИОВ Н с : КО Ко СІІКЕ М ОК ПОВоД ВН й ПОМ З РКО ї ї шо ВЖЕ Не НИНИ Ж НЕННЯ Її ЖЕ ОО дао 4 КЕ " і ПЕК: ПМ Ку ГЕО: Н ЗЕД: : с НЕ СННННЯ о НО: ї й ом: Му ДЕОЦВ я пи х са Е ЗБЕ К-я БУТТЯ свои щи ЖЕ асо вн я ПЕК: БУ ря чл х аа ке ПОМ: т руч плоду дерму пла я : Пдлиииикиииюикнннии : її : 5 35 ха й сом Ку : зма ;. ш пу : пзвжнн ни НИВИ Зх пу : УХикицануйпаНу Я ПЕ : ха зепти тні и : й ПЕК МОІЦеНТЕКВВАя НВ п: ХОнЦЕНІрац НО: 01111. р оо ЗВ АНА Й 02201 о с : Мюдое СПА ЗІ яни в 1 голкою моли ЕН ЖЕНЯ ке акція НН ШЕ детнвоВан ес Не СС: як р 22 ЖИВЕ шНОКОЮ БЖ: й 7 : ТЕ і КБ ж М ддпнниннннчнннй РЕА ФО: ї НЯ я: І БОЖКО стежу Я: НИ: о і Ко ЯМ ож : ов і що В Я ІОВ Ж зді Ж М ї ПО ОМ ВМО ГЖООДЕ ї ПЖООКЕ х ЖОВ ха СО ІЗ ОО же. а БУВ Н ї ОО: : ОБ ОО ОО: Н ЕКО ї ОЩК ОО овак ВК: ; з Таж М : ХЕ дкі дАфу АЛАНА тодаю М Н х. х НН дадас знне, ай НЕ БО: жен ПН Мет осно оовс КО прє пф в ко РОЖЬО: 2 тк д Я й ПО: о З ря : и КОХЯ 3 ї ще з : се : сд Яку й - рони шо ння ОО: пок ща: ТЗ НИ НН НОЯ ан ХОВНеВІУрацВ НЕ: ІПДО: Кит у НОМ СУМІ ЖННЖК МЕЖ І ПК. ЖОМЦЕНІВаН НМ: Пани пилеитиВ ен р КЕ коле і со ун кон поп пе їх ДЕНТНІ ННЯ НЕ БАК КОНЕтУЮТИ. МИХ ВТИТЬ ПОЗДІЕНЯ Й пиво: тивна зв помощи УЗ тить Іди Мои: шк видокчва зи В щи й мн кантри Є : к кв Фіг о яку : Н ЦЕ ЩЕ Ен КтТня Опов од вени пеня ОО с Е НЕ Мети питні ДО ВЕНА Бод : ТА : агУех : А р ни 7 о бу : Од іа ми ДОД, ЗУ іди З ОВЧИНИ : ОКО : : ї етиці им ПИТ зт тити
1 і. ЗВ нів ОК НВиНЯ: То ск п; ї кя : ху и ІК ККе К ЗУ: Ж : ж і ЖК Ка ОО: ї : дич ІЩЖІ с ЩО шо : я ПЕ: «Е ФК Я йод роди пМОМОдОдВ КА, іже МЕ х ОН Ас НН. ОВО ЄЄ ж шим К ННЯ Ь (Ж кі й ще Ж і я ЕХО КОЛО я КЕ Мт: й - ПИ У: У г. ПО дк КЗ ки ї Є Еш й рих х Нв ше МНН: й вро ко ве, ХНН й НО: 7 т т енер ЦО: 8Я-- я. БУЄ К : й г ІС : Е: ско с и и АН ОЇ й пух: ННЯ 8 з Тако 1 Шк Я ЕК соте ов о кави Е : концент НМ НИ СЗШ х ДВК. ї ко лання ї К ї н мне 1 Не І пог гепиуху ух КЛАСІ пт й ! : І БОНН ВОМ подана носі она ма ЕАВННХ пити «й ОПНОВІПЯНТНА нещіЛена Ма Го ОВК) конструкт, яке мітить роза тримерник пиуесіМ Се ЧИЯ і Й МУКУ МЕ КУМ МКС МКУ ух ікс тим: Вішна СаО в злиті з ЕКО вот» розділених тричерння : т ттрань Є І :
UAA201705791A 2014-11-14 2015-11-13 Антигензв'язуюча молекула, які містить тримерний ліганд сімейства tnf UA125577C2 (uk)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14193260 2014-11-14
EP15183736 2015-09-03
EP15188142 2015-10-02
PCT/EP2015/076528 WO2016075278A1 (en) 2014-11-14 2015-11-13 Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA125577C2 true UA125577C2 (uk) 2022-04-27

Family

ID=54695680

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201705791A UA125577C2 (uk) 2014-11-14 2015-11-13 Антигензв'язуюча молекула, які містить тримерний ліганд сімейства tnf

Country Status (29)

Country Link
US (6) US10392445B2 (uk)
EP (3) EP3489256B1 (uk)
JP (2) JP6873901B2 (uk)
KR (3) KR102877243B1 (uk)
CN (4) CN114634570B (uk)
AU (3) AU2015345024B2 (uk)
CL (2) CL2017001000A1 (uk)
CO (1) CO2017003212A2 (uk)
CR (1) CR20170194A (uk)
DK (2) DK3224275T3 (uk)
EA (1) EA037557B1 (uk)
ES (2) ES2788979T3 (uk)
HR (2) HRP20200679T1 (uk)
HU (2) HUE049982T2 (uk)
IL (2) IL282922B (uk)
LT (2) LT3489256T (uk)
MA (2) MA53242A (uk)
MX (2) MX380253B (uk)
MY (1) MY191428A (uk)
PE (2) PE20170896A1 (uk)
PH (1) PH12017500892B1 (uk)
PL (2) PL3224275T3 (uk)
PT (1) PT3224275T (uk)
RS (2) RS61870B1 (uk)
SG (1) SG11201703597TA (uk)
SI (2) SI3489256T1 (uk)
TW (2) TWI757803B (uk)
UA (1) UA125577C2 (uk)
WO (1) WO2016075278A1 (uk)

Families Citing this family (93)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110229471A1 (en) 2008-11-26 2011-09-22 Cedars-Sinai Medical Center Methods of determining responsiveness to anti-tnf alpha therapy in inflammatory bowel disease
CN110437337B (zh) 2013-02-26 2024-07-30 罗切格利卡特公司 双特异性t细胞活化性抗原结合分子
KR20240122922A (ko) 2013-03-27 2024-08-13 세다르스-신나이 메디칼 센터 Tl1a 기능 및 관련된 신호전달 경로의 저해에 의한 섬유증 및 염증의 완화 및 반전
EP3022295A4 (en) 2013-07-19 2017-03-01 Cedars-Sinai Medical Center Signature of tl1a (tnfsf15) signaling pathway
ES2788979T3 (es) 2014-11-14 2020-10-23 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno que comprenden un trímero de ligando de la familia de TNF
MA41460A (fr) 2015-02-03 2017-12-12 Oncomed Pharm Inc Agents de liaison à la tnfrsf et leurs utilisations
JP6996979B2 (ja) 2015-03-31 2022-02-04 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 三量体ｔｎｆファミリーリガンドを含む抗原結合分子
AR106188A1 (es) * 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
EP3356405B1 (en) * 2015-10-02 2026-07-08 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-human cd19 antibodies with high affinity
MY206406A (en) 2015-10-02 2024-12-16 Hoffmann La Roche Bispecific antibodies specific for a costimulatory tnf receptor
EP3356407B1 (en) * 2015-10-02 2021-11-03 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific anti-cd19xcd3 t cell activating antigen binding molecules
JP7044700B2 (ja) * 2015-10-02 2022-03-30 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 二重特異性抗ｃｅａｘｃｄ３ ｔ細胞活性化抗原結合分子
MA43028B1 (fr) 2015-10-02 2021-09-30 Hoffmann La Roche Anticorps bispécifiques pour pd1 et tim3
CA3004830A1 (en) 2015-11-11 2017-05-18 Opi Vi- Ip Holdco Llc Composition and methods for anti-tnfr2 antibodies
BR112018011029A2 (pt) 2016-01-08 2018-11-21 Hoffmann La Roche métodos para tratar ou atrasar a progressão do câncer e para melhorar a função imune em um indivíduo com câncer, usos de um antagonista de ligação e de um anticorpo biespecífico, composições e kits
CN109462996A (zh) 2016-03-17 2019-03-12 西达-赛奈医疗中心 通过rnaset2诊断炎性肠病的方法
EP3243836A1 (en) * 2016-05-11 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG C-terminally fused tnf family ligand trimer-containing antigen binding molecules
EP3455254B1 (en) 2016-05-11 2021-07-07 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and a tenascin binding moiety
EP3243832A1 (en) * 2016-05-13 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and pd1 binding moiety
JP7213180B2 (ja) 2016-10-19 2023-01-26 エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 免疫コンジュゲートを製造するための方法
MY191324A (en) 2016-10-26 2022-06-15 Cedars Sinai Medical Center Neutralizing anti-tl1a monoclonal antibodies
JP7125400B2 (ja) * 2016-12-19 2022-08-24 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 標的化４－１ｂｂ（ｃｄ１３７）アゴニストとの併用療法
KR102692708B1 (ko) * 2016-12-20 2024-08-07 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-cd20/항-cd3 이중특이성 항체 및 4-1bb(cd137) 작용물질의 병용 요법
CA3047070A1 (en) 2017-01-03 2018-07-12 F.Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecules comprising anti-4-1bb clone 20h4.9
ES2916217T3 (es) 2017-01-05 2022-06-29 Kahr Medical Ltd Una proteína de fusión SIRP1 ALPHA-41BBL y métodos de uso de la misma
DK3565579T3 (da) 2017-01-05 2023-09-04 Kahr Medical Ltd Pd1-41bbl-fusionsprotein og fremgangsmåder til anvendelse deraf
US11566060B2 (en) 2017-01-05 2023-01-31 Kahr Medical Ltd. PD1-CD70 fusion protein and methods of use thereof
WO2018151820A1 (en) * 2017-02-16 2018-08-23 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules comprising a trimeric ligand and uses thereof
WO2018178076A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
WO2018178055A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
KR102461885B1 (ko) 2017-04-03 2022-11-03 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-pd-1 항체와 돌연변이 il-2 또는 il-15의 면역접합체
CN110402255B (zh) 2017-04-04 2022-12-02 豪夫迈·罗氏有限公司 新颖的能够特异性结合cd40和fap的双特异性抗原结合分子
CA3052532A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies specifically binding to pd1 and lag3
EP3615564A1 (en) * 2017-04-24 2020-03-04 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Antibody immune cell inhibitor fusion proteins
WO2018226887A1 (en) 2017-06-07 2018-12-13 Spark Therapeutics, Inc. ENHANCING AGENTS FOR IMPROVED CELL TRANSFECTION AND/OR rAAV VECTOR PRODUCTION
CN111246884A (zh) * 2017-11-01 2020-06-05 豪夫迈·罗氏有限公司 新颖的含有tnf家族配体三聚体的抗原结合分子
EP3502140A1 (en) * 2017-12-21 2019-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of tumor targeted icos agonists with t-cell bispecific molecules
CA3084398A1 (en) * 2018-01-15 2019-07-18 I-Mab Biopharma Us Limited Modified c.kappa. and ch1 domains
TWI841551B (zh) 2018-03-13 2024-05-11 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 使用靶向4-1bb (cd137)之促效劑的組合療法
PL3765489T3 (pl) * 2018-03-13 2025-02-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Terapeutyczne połączenie agonistów 4-1BB z przeciwciałami anty-CD20
CR20200459A (es) * 2018-04-13 2020-11-11 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno dirigidas a her2 que comprendan 4-1bbl
CN119735681A (zh) 2018-04-25 2025-04-01 普罗米修斯生物科学公司 优化的抗tl1a抗体
TW202035447A (zh) 2018-07-04 2020-10-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 新穎雙特異性促效性4-1bb抗原結合分子
IL280102B1 (en) * 2018-07-11 2026-07-01 Kahr Medical Ltd Fusion protein containing PD1-4-1BBL and methods of using the same
CA3104780A1 (en) * 2018-07-11 2020-01-16 Kahr Medical Ltd. Sirpalpha-4-1bbl variant fusion protein and methods of use thereof
US11242396B2 (en) 2018-10-01 2022-02-08 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific antigen binding molecules comprising anti-FAP clone 212
TWI839395B (zh) * 2018-10-09 2024-04-21 瑞士商Ｎｕｍａｂ治療公司 靶向cd137的抗體及其使用方法
CR20210326A (es) 2018-12-21 2021-09-10 Hoffmann La Roche Moléculas agonistas de unión al antígeno cd28 que actúan sobre el tumor
JP2022535564A (ja) 2019-06-04 2022-08-09 モレキュラー パートナーズ アクチェンゲゼルシャフト 多選択性タンパク質
CA3140668A1 (en) * 2019-06-12 2020-12-17 Obsidian Therapeutics, Inc. Ca2 compositions and methods for tunable regulation
BR112021026293A2 (pt) 2019-06-26 2022-03-03 Hoffmann La Roche Moléculas de ligação, anticorpos humanizados, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, métodos para produzir a molécula de ligação ao antígeno, para tratar um indivíduo e suprarregular ou prolongar a atividade de células t citotóxicas, composição farmacêutica e uso da molécula
MX2021015823A (es) 2019-06-26 2022-02-03 Hoffmann La Roche Lineas celulares de mamifero con inactivacion del gen sirtuina-1 (sirt-1).
AR119382A1 (es) 2019-07-12 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos de pre-direccionamiento y métodos de uso
TW202600603A (zh) 2019-10-24 2026-01-01 美商普羅米修斯生物科學股份有限公司 針對類-tnf配體1a (tl1a)之人類化抗體及其用途
JP7675083B2 (ja) * 2020-01-09 2025-05-12 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 新規４－１ｂｂｌ三量体含有抗原結合分子
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
WO2021209050A1 (en) * 2020-04-17 2021-10-21 Biocytogen Jiangsu Co., Ltd. Genetically modified non-human animal with human or chimeric tnfsf9 and/or 4-1bb
WO2021229103A2 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Apogenix Ag Multi-specific immune modulators
CR20220637A (es) 2020-06-19 2023-01-31 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3 y cd19
WO2022008688A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies which bind to cancer cells and target radionuclides to said cells
TW202219067A (zh) * 2020-07-24 2022-05-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用於表現抗體多聚體融合之方法
PE20240690A1 (es) 2021-01-12 2024-04-10 Hoffmann La Roche Anticuerpos split que se unen a celulas cancerosas y dirigen radionuclidos a dichas celulas
AU2022207624A1 (en) 2021-01-13 2023-07-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy
AU2022231874A1 (en) 2021-03-09 2023-07-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of pd-1-targeted il-2 variant immunoconjugates and fap/4-1bb binding molecules
WO2022243261A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic cd40 antigen binding molecules targeting cea
CN117396182A (zh) * 2021-05-21 2024-01-12 百济神州有限公司 抗cea和抗cd137多特异性抗体及其使用方法
BR112023025020A2 (pt) * 2021-06-01 2024-02-20 Janssen Biotech Inc Anticorpos anti-idiotípicos contra anticorpos anti-cd79b
EP4148067A1 (en) * 2021-09-08 2023-03-15 F. Hoffmann-La Roche AG Method for the expression of an antibody-multimer-fusion
JP2024540174A (ja) 2021-11-01 2024-10-31 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｈｌａ－ａ２／ｗｔ１×ｃｄ３二重特異性抗体および４－１ｂｂ（ｃｄ１３７）アゴニストを用いたがんの治療
WO2023088876A1 (en) 2021-11-16 2023-05-25 Apogenix Ag Multi-specific immune modulators
WO2023088889A1 (en) 2021-11-16 2023-05-25 Apogenix Ag CD137 ligands
EP4448560A1 (en) 2021-12-14 2024-10-23 F. Hoffmann-La Roche AG Treatment of cancer using a hla-a2/mage-a4 x cd3 bispecific antibody and a 4-1bb (cd137) agonist
CN114349869B (zh) * 2021-12-20 2023-09-26 上海恩凯细胞技术有限公司 一种双特异性的nk细胞激动剂及制备方法和应用
CN114426585B (zh) * 2022-02-15 2023-10-03 广东香雪干细胞再生医学科技有限公司 融合蛋白及其表达细胞株与应用
CN116462769A (zh) * 2022-04-02 2023-07-21 广东东阳光药业有限公司 一种嵌合受体及其应用
CN114805564B (zh) * 2022-06-10 2023-06-06 郑州大学 特异性识别SARS-CoV-2 S蛋白NTD区域的单克隆抗体及应用
EP4587122A1 (en) 2022-09-15 2025-07-23 Avidicure IP B.V. Multispecific antigen binding proteins for stimulating nk cells and use thereof
WO2024094741A1 (en) 2022-11-03 2024-05-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with anti-cd19/anti-cd28 bispecific antibody
CN116574189A (zh) 2023-01-30 2023-08-11 北京智仁美博生物科技有限公司 针对人il-36r和/或人il-1r3的多种抗体及其用途
CN120826234A (zh) 2023-03-06 2025-10-21 豪夫迈·罗氏有限公司 抗EGFRvIII/抗CD3抗体与肿瘤靶向性4-1BB激动剂的组合疗法
WO2024188966A1 (en) 2023-03-13 2024-09-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Treatment of cancer using an anti-hla-g/anti-cd3 bispecific antibody and a 4‑1bb (cd137) agonist
CN118894934A (zh) 2023-05-05 2024-11-05 北京智仁美博生物科技有限公司 抗人il-15的抗体及其用途
CN119552258B (zh) 2023-09-01 2025-11-07 北京智仁美博生物科技有限公司 结合hla-a02/mage-a4复合体的多种抗体及其用途
CN119912577A (zh) 2023-10-31 2025-05-02 北京智仁美博生物科技有限公司 结合hla-a24/prame复合体的多种抗体及其用途
CN119930832A (zh) 2023-11-02 2025-05-06 北京智仁美博生物科技有限公司 结合HLA-A02/HBsAg复合体的多种抗体及其用途
CN121851173A (zh) 2023-11-30 2026-04-14 北京智仁美博生物科技有限公司 抗肿瘤坏死因子样配体1a的抗体及其用途
TW202540200A (zh) 2023-12-01 2025-10-16 美商基利科學股份有限公司 抗ｆａｐ－ｌｉｇｈｔ融合蛋白及其用途
WO2025140212A1 (en) * 2023-12-26 2025-07-03 Laekna Therapeutics Shanghai Co., Ltd. Multispecific binding agents comprising anti-fibroblast activation protein (fap) antibodies and one or more monovalent ligand traps and uses thereof
WO2025191136A1 (en) 2024-03-15 2025-09-18 Avidicure Ip B.V. Muteins of 4-1bb ligand extracellular domain, fusion proteins comprising the same and uses thereof
WO2025191139A1 (en) * 2024-03-15 2025-09-18 Avidicure Ip B.V. Conjugates of her2-specific antigen binding proteins and cytokines
WO2025191133A1 (en) 2024-03-15 2025-09-18 Avidicure Ip B.V. Il-21 muteins, fusion proteins comprising the same and uses thereof
WO2026087747A1 (en) 2024-10-24 2026-04-30 Avidicure Ip B.V. Multispecific antigen binding proteins for tumor-targeting of γδ1 t cells and use thereof
WO2026087748A1 (en) 2024-10-24 2026-04-30 Avidicure Ip B.V. Multispecific antigen binding proteins for the expansion of γδ t cells and use thereof

Family Cites Families (112)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2808353C2 (de) 1977-04-18 1984-01-19 Hitachi Metals, Ltd., Tokyo Ohrring
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
FI903489A7 (fi) 1988-11-11 1990-07-10 Medical Res Council Yhden osan sisältävät ligandit, näitä ligandeja sisältävät reseptorit, menetelmiä niiden valmistamiseksi sekä ligandien ja reseptorien käytt ö
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
EP0590058B1 (en) 1991-06-14 2003-11-26 Genentech, Inc. HUMANIZED Heregulin ANTIBODy
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
FI941572L (fi) 1991-10-07 1994-05-27 Oncologix Inc Anti-erbB-2-monoklonaalisten vasta-aineiden yhdistelmä ja käyttömenetelmä
CA2372813A1 (en) 1992-02-06 1993-08-19 L.L. Houston Biosynthetic binding protein for cancer marker
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
JP2002506353A (ja) 1997-06-24 2002-02-26 ジェネンテック・インコーポレーテッド ガラクトシル化糖タンパク質の方法及び組成物
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
DE19742706B4 (de) 1997-09-26 2013-07-25 Pieris Proteolab Ag Lipocalinmuteine
CA2307166A1 (en) 1997-10-31 1999-05-14 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
WO1999029888A1 (en) 1997-12-05 1999-06-17 The Scripps Research Institute Humanization of murine antibody
AUPP221098A0 (en) 1998-03-06 1998-04-02 Diatech Pty Ltd V-like domain binding molecules
JP4334141B2 (ja) 1998-04-20 2009-09-30 グリカート バイオテクノロジー アクチェンゲゼルシャフト 抗体依存性細胞傷害性を改善するための抗体のグリコシル化操作
US7115396B2 (en) 1998-12-10 2006-10-03 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
US6818418B1 (en) 1998-12-10 2004-11-16 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
KR100797667B1 (ko) 1999-10-04 2008-01-23 메디카고 인코포레이티드 외래 유전자의 전사를 조절하는 방법
PT2857516T (pt) 2000-04-11 2017-08-28 Genentech Inc Anticorpos multivalentes e utilizações dos mesmos
EP1332209B1 (en) 2000-09-08 2009-11-11 Universität Zürich Collections of repeat proteins comprising repeat modules
EP1423510A4 (en) 2001-08-03 2005-06-01 Glycart Biotechnology Ag ANTIBODY GLYCOSYLATION VARIANTS WITH INCREASED ANTIBODY-DEPENDENT CELLULAR CYTOTOXICITY
PL213948B1 (pl) 2001-10-25 2013-05-31 Genentech Inc Kompozycje zawierajace glikoproteine, czasteczka kwasu nukleinowego kodujaca te glikoproteine, komórka gospodarza, sposób wytwarzania glikoproteiny, kompozycja do zastosowania do leczenia, zastosowanie kompozycji i zestaw zawierajacy kompozycje
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US7432063B2 (en) 2002-02-14 2008-10-07 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Methods for affinity maturation
EP2311867A1 (en) 2002-10-29 2011-04-20 Anaphore, Inc. Trimeric binding proteins for trimeric cytokines
CA2515100A1 (en) * 2003-02-06 2004-08-19 Micromet Ag Trimeric polypeptide construct to induce an enduring t cell response
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
CA2531238C (en) 2003-07-04 2015-02-24 Affibody Ab Polypeptides having binding affinity for her2
WO2005019255A1 (en) 2003-08-25 2005-03-03 Pieris Proteolab Ag Muteins of tear lipocalin
HUE038955T2 (hu) 2003-11-05 2018-12-28 Roche Glycart Ag Antigén-kötõ molekulák fokozott Fc receptor-kötõ affinitással és effektor funkcióval
BRPI0417302A (pt) 2003-12-05 2007-03-06 Compound Therapeutics Inc inibidores de receptores de fator de crescimento endotelial vascular do tipo 2
CN1961003B (zh) 2004-03-31 2013-03-27 健泰科生物技术公司 人源化抗TGF-β抗体
WO2005100402A1 (en) 2004-04-13 2005-10-27 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-p-selectin antibodies
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
TR201808537T4 (tr) 2004-09-23 2018-07-23 Genentech Inc Sistein değiştirilmiş antikorlar ve konjugatlar.
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
AU2011265482B2 (en) * 2005-05-06 2013-08-29 Providence Health & Services - Oregon Trimeric OX40L-immunoglobulin fusion protein and methods of use
AU2013263717B2 (en) 2005-05-06 2016-05-19 Providence Health & Services - Oregon Trimeric OX40L-immunoglobulin fusion protein and methods of use
EP1736482A1 (en) 2005-06-20 2006-12-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Medicale) Recombinant trimeric 4-1BBL
DE102005036542A1 (de) 2005-08-03 2007-02-08 Universität Stuttgart CTL-Prodrug
RS53263B (sr) 2006-08-14 2014-08-29 Xencor Inc. Optimizovana antitela usmerena na cd19
EP1958957A1 (en) 2007-02-16 2008-08-20 NascaCell Technologies AG Polypeptide comprising a knottin protein moiety
EP2009022A1 (en) 2007-06-26 2008-12-31 Apogenix GmbH Trimeric death ligands with enhanced activity (tenascin)
GB0718843D0 (en) 2007-09-26 2007-11-07 Cancer Rec Tech Ltd Materials and methods relating to modifying the binding of antibodies
US8242247B2 (en) 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
EP3663318A1 (en) 2008-01-07 2020-06-10 Amgen Inc. Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects
PL2604693T3 (pl) * 2008-07-21 2016-09-30 Jednołańcuchowe cząsteczki TNFSF
WO2010037395A2 (en) * 2008-10-01 2010-04-08 Dako Denmark A/S Mhc multimers in cancer vaccines and immune monitoring
RU2583876C2 (ru) 2009-08-17 2016-05-10 Роше Гликарт Аг Иммуноконъюгаты направленного действия
PL2483310T3 (pl) 2009-09-29 2015-01-30 Roche Glycart Ag Bispecyficzne przeciwciała agonistyczne dla receptora śmierci
US8993524B2 (en) 2010-03-05 2015-03-31 The Johns Hopkins University Compositions and methods for targeted immunomodulatory antibodies and fusion proteins
WO2011147834A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Roche Glycart Ag Antibodies against cd19 and uses thereof
PE20171512A1 (es) 2010-08-13 2017-10-20 Roche Glycart Ag Anticuerpos anti-fap
US8552024B2 (en) 2010-08-13 2013-10-08 Hoffman-La Roche Inc. Azacyclic compounds
CN105440123B (zh) 2011-02-10 2020-10-09 罗切格利卡特公司 突变体白介素-2多肽
LT2691417T (lt) 2011-03-29 2018-10-25 Roche Glycart Ag Antikūno fc variantai
JP6047142B2 (ja) 2011-04-01 2016-12-21 ウニヴェルズィテート シュトゥットガルト 抗体結合ドメインを有する組換えｔｎｆリガンドファミリーメンバーポリペプチドおよびそれらの使用
JP2013055204A (ja) 2011-09-02 2013-03-21 Toshiba Corp 半導体記憶装置
PL3489254T3 (pl) 2012-04-30 2023-01-30 Biocon Limited Ukierunkowujące/immunomodulujące białko fuzyjne i sposoby jego otrzymywania
US9346872B2 (en) 2012-08-08 2016-05-24 Roche Glycart Ag Interleukin-10 fusion proteins
EP2948475A2 (en) * 2013-01-23 2015-12-02 AbbVie Inc. Methods and compositions for modulating an immune response
CN110437337B (zh) * 2013-02-26 2024-07-30 罗切格利卡特公司 双特异性t细胞活化性抗原结合分子
UA118028C2 (uk) 2013-04-03 2018-11-12 Рош Глікарт Аг Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування
JP6618463B2 (ja) 2013-05-07 2019-12-11 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 三量体型抗原結合分子
BR112016016658A2 (pt) 2014-02-06 2018-01-23 F. Hoffmann-La Roche Ag proteína de fusão de um anticorpo, polinucleotídeo, vetor, célula hospedeira, composição farmacêutica, métodos para produzir uma proteína de fusão e de tratamento de uma doença em um indivíduo e uso da proteína de fusão
UA117289C2 (uk) 2014-04-02 2018-07-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Мультиспецифічне антитіло
US10647768B2 (en) 2014-05-29 2020-05-12 Macrogenics, Inc. Multi-chain polypeptide-containing tri-specific binding molecules
CN106456734A (zh) 2014-05-29 2017-02-22 免疫医疗有限责任公司 Ox40l融合蛋白及其用途
ES2788979T3 (es) 2014-11-14 2020-10-23 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno que comprenden un trímero de ligando de la familia de TNF
JP6996979B2 (ja) 2015-03-31 2022-02-04 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 三量体ｔｎｆファミリーリガンドを含む抗原結合分子
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
EP3356407B1 (en) 2015-10-02 2021-11-03 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific anti-cd19xcd3 t cell activating antigen binding molecules
EP3356405B1 (en) 2015-10-02 2026-07-08 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-human cd19 antibodies with high affinity
MY206406A (en) 2015-10-02 2024-12-16 Hoffmann La Roche Bispecific antibodies specific for a costimulatory tnf receptor
CN108290958B (zh) 2015-10-02 2021-12-28 豪夫迈·罗氏有限公司 多特异性抗体
PE20181349A1 (es) 2015-10-07 2018-08-22 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecificos con tetravalencia para un receptor de fnt coestimulador
EP3231813A1 (en) 2016-03-29 2017-10-18 F. Hoffmann-La Roche AG Trimeric costimulatory tnf family ligand-containing antigen binding molecules
EP3455254B1 (en) 2016-05-11 2021-07-07 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and a tenascin binding moiety
EP3243836A1 (en) 2016-05-11 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG C-terminally fused tnf family ligand trimer-containing antigen binding molecules
EP3243832A1 (en) 2016-05-13 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and pd1 binding moiety
EP3482170B1 (en) 2016-07-08 2020-02-12 Roche Diagnostics GmbH Apparatus for processing a laboratory sample, laboratory automation system and method for pipetting a laboratory sample
JP7125400B2 (ja) 2016-12-19 2022-08-24 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 標的化４－１ｂｂ（ｃｄ１３７）アゴニストとの併用療法
KR102692708B1 (ko) 2016-12-20 2024-08-07 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-cd20/항-cd3 이중특이성 항체 및 4-1bb(cd137) 작용물질의 병용 요법
CA3047070A1 (en) 2017-01-03 2018-07-12 F.Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecules comprising anti-4-1bb clone 20h4.9
WO2018178076A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
WO2018178055A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
CN110402255B (zh) 2017-04-04 2022-12-02 豪夫迈·罗氏有限公司 新颖的能够特异性结合cd40和fap的双特异性抗原结合分子
CN111246884A (zh) 2017-11-01 2020-06-05 豪夫迈·罗氏有限公司 新颖的含有tnf家族配体三聚体的抗原结合分子
PE20210844A1 (es) 2017-11-01 2021-05-10 Hoffmann La Roche Contorsbodies 2 + biespecificos
PL3765489T3 (pl) 2018-03-13 2025-02-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Terapeutyczne połączenie agonistów 4-1BB z przeciwciałami anty-CD20
TWI841551B (zh) 2018-03-13 2024-05-11 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 使用靶向4-1bb (cd137)之促效劑的組合療法
CR20200459A (es) 2018-04-13 2020-11-11 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno dirigidas a her2 que comprendan 4-1bbl
TW202035447A (zh) 2018-07-04 2020-10-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 新穎雙特異性促效性4-1bb抗原結合分子
US11242396B2 (en) 2018-10-01 2022-02-08 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific antigen binding molecules comprising anti-FAP clone 212
CN112654641A (zh) 2018-10-01 2021-04-13 豪夫迈·罗氏有限公司 具有与cd40的三价结合的双特异性抗原结合分子
CN113677403B (zh) 2019-04-12 2024-12-27 豪夫迈·罗氏有限公司 包含脂质运载蛋白突变蛋白的双特异性抗原结合分子
BR112021026293A2 (pt) 2019-06-26 2022-03-03 Hoffmann La Roche Moléculas de ligação, anticorpos humanizados, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, métodos para produzir a molécula de ligação ao antígeno, para tratar um indivíduo e suprarregular ou prolongar a atividade de células t citotóxicas, composição farmacêutica e uso da molécula
JP7675083B2 (ja) 2020-01-09 2025-05-12 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 新規４－１ｂｂｌ三量体含有抗原結合分子
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap

Also Published As

Publication number Publication date
PL3489256T3 (pl) 2021-08-23
EP3738609C0 (en) 2025-06-18
CL2019003728A1 (es) 2020-07-17
CO2017003212A2 (es) 2017-09-20
IL251317B (en) 2021-05-31
HUE049982T2 (hu) 2020-11-30
RS61870B1 (sr) 2021-06-30
JP2018503356A (ja) 2018-02-08
TWI713474B (zh) 2020-12-21
BR112017009006A2 (pt) 2018-04-10
MX2020012798A (es) 2022-04-07
EP3738609B1 (en) 2025-06-18
US20200247904A1 (en) 2020-08-06
MX391388B (es) 2025-03-21
US10392445B2 (en) 2019-08-27
NZ730933A (en) 2024-02-23
US20220259327A1 (en) 2022-08-18
EA201791057A1 (ru) 2017-10-31
DK3224275T3 (da) 2020-05-04
EA037557B1 (ru) 2021-04-14
MA40882A (fr) 2017-10-04
JP7184938B2 (ja) 2022-12-06
EP3489256A1 (en) 2019-05-29
HK1255482A1 (zh) 2019-08-16
JP6873901B2 (ja) 2021-05-19
KR20250158074A (ko) 2025-11-05
US20190382507A1 (en) 2019-12-19
AU2020264337A1 (en) 2021-01-28
AU2015345024B2 (en) 2020-10-15
MA40882B1 (fr) 2020-05-29
EP3224275B1 (en) 2020-03-04
CN114634570A (zh) 2022-06-17
MX2017006250A (es) 2017-11-17
CN113372434B (zh) 2024-06-04
PH12017500892B1 (en) 2023-08-18
AU2020264337B2 (en) 2021-12-02
CN108064237B (zh) 2022-02-11
SI3489256T1 (sl) 2021-08-31
AU2022201144A1 (en) 2022-03-17
KR20170085552A (ko) 2017-07-24
HUE054122T2 (hu) 2021-08-30
EP3489256B1 (en) 2021-03-17
MY191428A (en) 2022-06-27
IL282922B (en) 2022-08-01
CL2017001000A1 (es) 2018-01-12
IL282922A (en) 2021-06-30
PE20221909A1 (es) 2022-12-23
EP3738609A1 (en) 2020-11-18
MA53242A (fr) 2021-06-23
JP2021097674A (ja) 2021-07-01
SG11201703597TA (en) 2017-06-29
DK3489256T3 (da) 2021-05-25
US20250101135A1 (en) 2025-03-27
KR102588377B1 (ko) 2023-10-12
PT3224275T (pt) 2020-05-04
AU2022201144B2 (en) 2025-03-06
ES2788979T3 (es) 2020-10-23
CN120574325A (zh) 2025-09-02
KR20230146133A (ko) 2023-10-18
HRP20200679T1 (hr) 2020-07-24
PH12017500892A1 (en) 2017-11-06
NZ767672A (en) 2024-02-23
PL3224275T3 (pl) 2020-09-07
ES2871045T3 (es) 2021-10-28
WO2016075278A1 (en) 2016-05-19
US20220259326A1 (en) 2022-08-18
SI3224275T1 (sl) 2020-07-31
CN113372434A (zh) 2021-09-10
US20160200833A1 (en) 2016-07-14
CN114634570B (zh) 2025-05-06
RS60201B1 (sr) 2020-06-30
US11306154B2 (en) 2022-04-19
PE20170896A1 (es) 2017-07-12
NZ767674A (en) 2024-07-05
US12441812B2 (en) 2025-10-14
AU2015345024A1 (en) 2017-04-20
TW202041527A (zh) 2020-11-16
LT3489256T (lt) 2021-06-10
US11267903B2 (en) 2022-03-08
HRP20210739T1 (hr) 2021-06-25
CN108064237A (zh) 2018-05-22
TWI757803B (zh) 2022-03-11
EP3224275A1 (en) 2017-10-04
CA2963718A1 (en) 2016-05-19
CR20170194A (es) 2017-07-10
TW201629094A (zh) 2016-08-16
LT3224275T (lt) 2020-05-25
KR102877243B1 (ko) 2025-10-29
MX380253B (es) 2025-03-12
IL251317A0 (en) 2017-05-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7352473B2 (ja) がん細胞を標的化するキメラ抗原受容体のための方法および組成物
US20180147257A1 (en) Btn3a ectodomain proteins and methods of use
UA125611C2 (uk) Біспецифічні молекули, що мають імунореактивність відносно pd-1 і ctla-4, і способи їх застосування
JP2022514693A (ja) Ｍｕｃ１８に特異的な抗体
UA118950C2 (uk) Поліпептид, який зв'язує специфічний мембранний антиген простати та комплекс т-клітинного рецептора
UA129471C2 (uk) Білки, які містять антигензв'язувальні домени пов'язаної з калікреїном пептидази 2, і їх застосування
UA127450C2 (uk) Рекомбінантний поліпептид, що зв'язується з cd123
UA124734C2 (uk) Антитіло проти с5 і його застосування
UA126441C2 (uk) Химерні антигенні рецептори, націлені на bcma, та способи їх застосування
UA125717C2 (uk) Конструкція антитіла до flt3 і cd3
UA122676C2 (uk) Біспецифічна антигензв'язувальна молекула проти folr1 і cd3, що активує t-клітини
UA125962C2 (uk) Біспецифічна антигензв'язуюча молекула до ox40 та фібробласт-активуючого білка (fap)
UA125718C2 (uk) Композиції антитіл до ror1 і пов'язані з ними способи
UA125382C2 (uk) Антитіла проти людського vista та їх застосування
UA127308C2 (uk) Активована протеазою біспецифічна молекула, яка зв'язує т-клітини
UA118749C2 (uk) Конструкція антитіла до cdh19 і cd3
UA119673C2 (uk) Біспецифічне fc-діатіло, здатне імуноспецифічно зв'язуватися з епітопом pd-1 і з епітопом lag-3, та його застосування
UA114883C2 (uk) Антитіло до рецептора епідермального фактора росту-3 (her3)
JP2009527500A (ja) 免疫機能を改善するための方法および哺乳動物対象における疾患の防止または処置のための方法
JP2022523710A (ja) Ｃｄ４４に特異的な抗体
CN113784986A (zh) 间皮素特异性嵌合抗原受体及表达它的t细胞
JPWO2012176765A1 (ja) 抗ヒトｐ−カドへリン（ｃｄｈ３）遺伝子組み換え抗体
US20260116986A1 (en) Epo receptor agonists and antagonists
TW202546009A (zh) 抗hk2嵌合抗原受體(car)
JP2022514786A (ja) Ｍｕｃ１８に特異的な抗体