BE502332A - - Google Patents

Description

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  PROCEDE DE PRODUCTION DE PREPARATIONS CRISTALLISEES A BASE D9INSULINE. 



   La présente invention a pour objet un procédé de production de nouvelles préparations cristallisées précieuses qui s'obtiennent   à   partir de   l'hormone   hypoglycémiante du pancréas. 



   Dans le brevet allemand n  727 888 est décrit un procédé de pré-- paration de substances à action   ralentie,,   qui s'obtiennent à partir de 1' hormone hypoglycémiante du pancréas   (insuline)   procédé qui consiste à faire réagir l'hormone avec des composés de la série de la quinoléine et de celle 
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 de l'acridineg dont les bases sont, pour des pH compris entre 6a5 et 9, insolubles dans Peau ou n2y donnent que des solutions colloidaless et à porter les solutions  le cas échéante à un pH de 65 à à A Quand,, en opérant selon la méthode décrite dans ce breveta on 
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 établit dans la solution un pH compris entre 6s5 et 7 il se forme une sus- pension amorphe., finement répartie qui.!)

   pendant 39emmagasinsgea peut avoir tendance à se rassembler et qu'on ne peut répartir à nouveau d'une façon régulière qu'avec une grande difficultés par agitation. En portant la solu- tion à un   pH     d'environ   3,5 on réussit à obtenir des solutions limpides qui 
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 possèdent également une action ralentie et qui jusqu'ici, ont donné d9ec cellents résultats cliniques. 



   Suivant le procédé qui fait l'objet de la présente invention, 
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 on fait réagir l'insuline avec des composés des séries de l'acridine et de la quinoléine, dont les bases sont.!) pour des pH compris entre 65 et 9a in- solubles dans l'eau on n8 donnent que des solutions colloîdalesp et en faisant cristalliser les produits de réaction de la manière usuelle pour   l'insuline,,,   
On connaît déjà plusieurs méthodes de préparation de 1?insuline 
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 cristallisée pure (voir BomskovD Methodik der Hormonforschung  vol. 1/ 19J7, page 676.et suivb).

   A cet égards est très remarquable le procédé Scott et Gerlotagh Bates9 d'après lequel on peut obtenir %bhnaà3ri±é". ;'\-1:¯::' 

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 cristallisée à l'aide de l'acétone ou de 1-lalcool propylique par adjonc- tion d'un tampon de phosphate et en présence de petites quantités de zinc, de   cobalt.?   de nickel ou de cadmium. 



   Il est extrêmement surprenant que les produits obtenus par la réaction de l'insuline avec les composés en question des séries de l'acri- dine et de la quinoléine se laissent amener à l'état cristallin de la mê- me manière que l'insuline pure elle-mêmeOn peut, par exemple, commencer par ajouter à une solution acide d'hormone des tampons appropriés, tels que des phosphates ou des acétates, après quoi on ajoute de petites quantités de sels de zinc$ de   cadmium.)   de cobalt ou de   nickel,     ainsi   que des sissolvants organiques solubles dans   l'eau,   par exemple des alcools ou des cétones et, après ceux-ci, les solutions des composés d'acridine ou de quinoléine pour établir, 
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 enfin, dans la solution un pH compris entre 5 et 6,959 de préférence, de 6 en- viron.

   Le précipité qui d'abord est amorphe, se transforme, abondonné à lui- même, mais encore mieux et plus uniformément par agitation, en de beaux cris- taux bien formés qu'on peut débarrasser,par sédimentation fractionnée,, de petites portions amorphes.!) pour les isoler ensuite. Par variation de la quan- tité du sel métallique et des composés de quinoléine et d'acridine on est   à   même d'influer, entre les limites relativement écartées  sur la teneur des cristaux en ces substances. 



   Il s'est révélé que les cristaux ainsi obtenus se prêtent excel- lemment à la préparation de remèdes hormonaux à action ralentie, quand on les emploie sous la forme d'une suspension auqueuse. A l'encontre des solutions 
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 de 10hormone,, ces suspensions ne perdent., pendant l'emmagasinagea rien de leur activité  quand elles sont neutres.Grâce à leur structure cristalline, elles n'ont pas tendance à la   coagulations   leur dosage est exact et simple et elles sont tolérées sans produire la moindre irritation. 



   Selon la teneur en métaux et en composés d'acridine ou de quinolé- ine, on obtient des préparations d'une activité plus ou moins -prolongée, de sorte qu'il est possible de satisfaire aux diverses exigences cliniques no- tamment dans des cas de diabète très graves, de sorte qu'on réussit à main- tenir,, par une seule injection,, 1?équilibre métabolique complet pour 24 heu- res. 



   De plus  il s'est révélé qu'en utilisant ces préparations cris-   talliséesa   on n'avait besoin que d'une fraction de la teneur en composés d' acridine ou de quinoléine pour parvenir à la même action ralentie qu'avec les préparations connues. 



    EXEMPLE 1   
On dissout 800 mg   d'insulfine   pure dans de l'eau, par addition de peu d'acide chlorhydrique, et   l'on   complète à 200 cm3. On y ajoute une so- 
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 lution de 36 mg de chlorhydrate de bis méthyl,.maminomquinoléyl=6=carbam:i.de dans 20 cm3 d'eau, ainsi que 2 em3 d'une solution de chlorure de zinc à 05 %, pour précipiter ensuite le complexe d'insuline, en ajoutant une solution de 2a7 g de phosphate monopotas5ique9 portée à l'aide de lessive de soude causti- que à un pH de 6,5 et complétée avec de l'eau à 220 cm3o On y ajoute tout de suite 50 cm3 d'alcool isopropylique et l'on porte ensuite la solution à un pH de 6 à 6,1 par adjonction d'acide chlorhydrique deux fois   normalo   On agite 
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 lentement à la tempéra:Í:

  il1re ambiante jusqu'à, ce que le précipité se compose presque exclusivement de cristauxo On sépare les cristaux par centrifugationg on les débarrasse dans la centrifugeuse par sédimentation fractionnée de pe- tites portions amorphes et on les sèche avec de l'acétone et de 1-'éther. 



   On obtient environ 700 mg de cristaux uniformes contenant 2,5% 
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 de bisnéthyhL,.mam.noquinoléylm6arbamide Si,, au lieu de 36 mg de elorby- drate de bis méthyl,mam.i.noquixaoléyl6Cax bam3.de on ajoute 72 mg 'de ce composé on obtient des cristaux contenant,4,,5% de bis=2¯méthyl-4-aminoqui- noléyl=6-carbamide 

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   EXEMPLE    2   : 
On dissout 5 g d'insuline dans de l'eau à   1?aide   d'acide chlor- 
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 4tae et l'on complète à 950 eu3. On y ajoute une solution de 150 mg de chlorhydrate de bisc02=méthyl=4=aminoquinoléyl=6=cbamide dans 50 cm3 d9eau.

   On ajoute 1 litre de tampon de phosphate contenant 169 g de phos- phate bisodique et 2,8 g de phosphate monopotassique et préalablement acidulé avec 80 cm3 d'acide chlorhydrique   normal.   On ajoute ensuite 20 cm3 de solu- tion de chlorure de zinc   à   0,5 % et 200 cm3 d'acétone et l'on porte avec de 
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 lemmoniaque à un pH de 5e8 environ. Abandonné à lui-mêmes le précipité qui, au début est amorphese tranforme en cristaux, que l'on soumet au traitement ultérieur décrit dans l'exemple la 
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 On obtient un produit contenant 1>5 $ de bis=méthyla.4=aminoqui= noléyl-6 arbemideo Quand on utilise 300 mg de chlorhydrate de bis-2-méthyl- lmaminoquinoléyl6carbamide on parvient à un produit final cristallisé contenant environ z de bis-2-méthyl-4-aminoquinoléyl-6-carbamide.

   On obtient un produit d'insuline cristallisé ayant la même teneur en bis4-méthfl-4oo anàno-qpinoléyloo6-carbauide> quand, à la place de la solution de chlorée de zinc à 095%, on prend une solution de chlorure de cobalt à 1%,1) en appli- quant des conditions identiques pour le reste. 



    EXEMPLE 3    
On dissout 10 g   d'insuline   dans de l'eau à 1-laide d'acide chlorhy- drique et l'on complète à 1,1   litre...il.   cette solution on ajoute 1,2 litre de tampon de phosphate préalablement acidifié avec 96 cm3 d'acide chlorhydri- que normal ainsi que 24 cm3 de solution de chlorure de zincà 0,5% et 240 
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 cm3 d9acétone on ajoute.\! enfin> une solution de 860 mg de chlorhydrate de bis méthylam.noqu.noléylm6arbamide dans 100 cm3 d'eau. On porte alors avec de l'ammoniaque à un pH de 6,3 et l'on procède au traitement ultérieur décrit dans   l'exemple   1. 



   On obtient ainsi ¯,5 g de cristaux contenant 3 % environ de bis-   2-méthyl-4-aminoquinoléyl-6-carbamide. o     EXEMPLE 4   : 
On dissout 1,25 g d'insuline pure dans de   l'eau   avec adjonction de 
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 2p5 cm3 d'acide chlorhydrique normal et l'on complète à 125 cm3* On y ajoute un mélange composé de 150 cm3 de tampon de phosphate 12 cm3 diacide   chlorhy   
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 drique normale 3 cm3 de solution de chlorure de zinc à 0 5 et 30 cm3 d9acé- tone. On ajoute ensuite 54 mg de lactate de éthoxym6a9mdiam.noaer.d.ne dissous dans 15 cm3 deeauo On porte la solution limpide à 1-'aide d'ammoniaque à un pH d'environ 6D8 pour l9abandoniaer ensuite à elle-même pendant trente minutes. 



   On amène le pH à 6,1 avec de l'acide chlorhydrique normal et   l'on   agite lentement à la température ambiante., jusqu'à ce que le précipité se soit transformé presque complètement en de petits cristaux arrondis. On centrifuge et on procède au traitement ultérieur décrit dans l'exemple le On obtient 1 g de cristaux de couleur jaune-citron intense qui, injectés en suspension aqueu-   se.!)   possèdent, en comparaison avec l'insuline cristallisée normale., une action considérablement ralentie. 



  EXEMPLE 5 
On dissout 1,25 g d'insuline cristallisée selon la méthode décrite dans   1?exemple   4 et l'on ajoute ensuite les substances mentionnées dans 
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 cet exemple. Cependant au lieu de lactate de éthoxy 6a9md.3.amâ.nomacridine on ajoute une solution de 95 mg de chlorure de 3<6-diamino-iooométhyiaeridi- num dans 15 cm3 d'eauo On porte le pH de la solution à environ 6s98 on 19a- bandonne à elle-même pendant 15 minutes environ et l'on porte le pH à 6,2 environ avec de l'acide chlorhydrique.Le traitement ultérieur se fait selon les indications de l'exemple 4. On obtient 1,23 g de petits cristaux bien   formés,  de couleur jaune d'or brillant. 

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    EXEMPLE   6 
On dissout 1,25 g d'insuline cristallisée selon la méthode décrite dans l'exemple 4 et on effectue les additions usuelles pour la cristallisa-   tiono   On ajoute, de plus 120 mg d'acétone de 2 - ss - diéthylamino-éthoxy- 6-acétamido-9-amino-acridine, dissoute dans un peu d'eau, et l'on porte avec de l'ammoniaque à un pH d'environ 6,3. Les cristaux obtenus sont soumis au traitement ultérieur usuel. On obtient 0,8 g de cristaux aciculaires de cou- leur citron qui excellent par une action particulièrement ralentie   EXEMPLE 7   : 
On dissout,, selon la méthode décrite dans l'exemple 4,1,25 g d'insuline cristallisée après addition de 108 mg de chlorhydrate de la diami- de N.N'-di-(2-méthyl-4-amino-quinoléyl-6)-adipique dans un peu d'eau et on fait cristalliser le produit de réaction obtenu.

   On recueille 1,21 g de cu- bes arrondis qui contiennent 2% de la base. 



    EXEMPLE 8   
On   recristalliseg   selon la méthode décrite dans l'exemple 7,   1,,25   g d'insuline cristallisée mais après addition de 100 mg de dichlorhydrate de la diamide N.N.'- di-(2-méthyl-4-aminoquinoléyl-6)-cyanurique. On obtient   1915   g de cubes arrondis contenant 2,6% de la base et possédant une action ralentie nettement augmentée.

Claims (1)

1. RESUME.

   ----- Un procédé de production de préparations d'hormone hypoglycémian- te du pancréas par réaction de cette hormone avec des composés des séries de l'acridine et de la quinoléine dont les bases sont insolubles ou ne donnent que des solutions colloïdales à des pH compris entre 6,5 et 9, pro- cédé caractérisé par le fait que l'on soumet les produits de réaction à une cristallisation de la manière usuelle pour l'insuline pure.