CH324347A

CH324347A - Procédé de préparation de S-acétyl-glutathion

Info

Publication number: CH324347A
Authority: CH
Inventors: Charles Brick Eric
Original assignee: Distillers Co Yeast Ltd
Priority date: 1954-03-31
Filing date: 1955-03-07
Publication date: 1957-09-15
Also published as: US2760956A; GB761093A; DE1000390B; FR1171937A; DE1000390C2

Description


  
 



  Procédé de préparation de S-acétyl-glutathion
 La présente invention se rapporte à un procédé perfectionné de préparation de S-acétyl-glutathion.



   Le S-acétyl-glutathion est bien connu et il constitue, dans les études biochimiques, un moyen important de trans-acétylation et de transfert d'énergie dans le métabolisme cellulaire. Comme il est en rapport étroit avec le glutathion, qui est lui-même un composé basique de la cellule jouant un rôle dans beaucoup de fonctions du corps, il est précieux pour les études cliniques de détoxyfication, de diabète, d'exposition aux radiations et autres états maladifs dans lesquels le système sulfhydryle est intéressé.



   Jusqu'à présent, on a préparé ce composé en traitant du glutathion avec du thioacétate de phényle (Angew. Chem. 1952, 64, 59) et avec de l'acide thioacétique (J. Biol. Chem.



  1954, 206, 327). Ces réactifs sont cependant coûteux et difficiles à préparer.



   Dans le procédé selon la présente invention pour la préparation de S-acétyl-glutathion, on traite du glutathion avec de l'anhydride acétique en solution dans de l'acide acétique, en présence d'acide perchlorique.



   Il est indiqué de dissoudre le glutathion dans un mélange d'acide acétique glacial et d'acide perchlorique, en chauffant si cela est nécessaire pour effectuer la dissolution, avant d'ajouter l'anhydride acétique.



   De préférence, l'anhydride acétique est présent en excès moléculaire par rapport au glutathion présent dans le mélange final en vue d'assurer un haut rendement en S-acétyl-glutathion. On a trouvé qu'un excès d'environ 40   0/o    convient bien.



   Quand l'acétylation des groupes sulfhydryles est sensiblement terminée, l'excès de l'anhydride acétique peut être décomposé, si on le désire, par exemple par addition d'une quantité d'eau convenable, en vue de réduire l'effet de réactions accessoires nuisibles qui pourraient se produire après que la réaction désirée est sensiblement complète.



     I1    est bon d'employer l'acide perchlorique sous forme d'une forte solution aqueuse ne contenant pas moins d'environ   70  /0    poids/ poids d'acide perchlorique, par exemple un acide perchlorique aqueux à 72   O/o    poids/poids.



  La quantité employée d'acide perchlorique est avantageusement assez grande pour rendre le mélange de réaction fortement acide. Des concentrations moléculaires de, par exemple, 0,5 à 1,0 de cet acide par rapport au mélange ont été trouvées appropriées.



   De préférence, la réaction d'acétylation du groupe sulfhydryle est effectuée à la tempéra  ture ordinaire, ou au-dessous, c'est-à-dire audessous d'environ   250 C,    en refroidissant si cela est nécessaire.



   Lorsque la réaction d'acétylation a sensiblement cessé et éventuellement que l'excès d'anhydride acétique a été décomposé, le mélange de réaction peut être neutralisé par addition d'une base convenable, par exemple l'aniline, que   l'on    ajoute de préférence lentement et en refroidissant. On peut employer un excès de la base par rapport à l'acide perchlorique; ainsi, lors de l'emploi d'aniline, un excès d'environ 30   o/o    en plus de ce qui était théoriquement nécessaire pour neutraliser l'acide perchlorique présent, s'est trouvé bien convenir.



   Par le terme   neutraliser   employé ici, on ne veut pas dire que   l'on    amène le mélange à un pH de 7 par l'addition de la base, car la présence d'acide acétique rendrait cela difficile. Ce terme signifie que   l'on    ajoute une base convenable en une quantité au moins égale à la quantité théoriquement nécessaire pour réagir avec tout l'acide perchlorique présent.



   Le S-acétyl-glutathion peut alors être séparé par toute méthode connue comme, par exemple, en transférant la solution brute de
S-acétyl-glutathion dans un liquide dans lequel il cristallise par repos, par exemple le   mé-    thanol, et en recueillant les cristaux formés, que   l'on    peut encore purifier, si on le veut, par exemple en les lavant et en faisant une nouvelle recristallisation.



   Les exemples suivants servent à illustrer le procédé selon la présente invention.



   Exemple I
 On a dissous trois grammes de glutathion dans un mélange de 1 ml d'acide perchlorique aqueux à 72   o/o    poids/poids et 19 ml d'acide acétique glacial, en chauffant dans la mesure nécessaire. On a ensuite maintenu la solution au-dessous de   1 5o    C, tout en y ajoutant, en agitant, 5 ml d'anhydride acétique, quantité suffisante pour qu'il y ait un excès moléculaire d'environ 40   o/o    de l'agent d'acétylation. Après repos pendant 1 heure à la température ordinaire pour compléter l'acétylation, on a ajouté 0,4 ml d'eau, pour éliminer l'anhydride acétique, et on a laissé passer encore une heure. On a alors traité le mélange avec 1,5 ml d'aniline fraîchement distillée, en l'ajoutant doucement tout en refroidissant, pour neutraliser l'acide perchlorique.

   Le mélange a alors été versé dans du méthanol en quantité voulue pour avoir un volume de 100 ml; on a agité puis laissé reposer jusqu'au lendemain dans un réfrigérateur, pour effectuer la cristallisation.



   Les cristaux bruts ont été séparés et lavés avec du méthanol et de l'éther, puis séchés à l'air à 50 - 600 C pendant 1 heure. On a obtenu 2,4 g de substance, représentant un rendement de 70   o/o    calculé sur le glutathion. Une nouvelle addition de méthanol et/ou d'éther à la liqueur-mère n'a donné qu'une très faible quantité du produit.



   Exemple 2
 On a dissous 50 g de glutathion de pureté   97,70/0    p/p, dans un mélange de 16,7 ml d'acide perchlorique aqueux à   720/0    p/p et 315 ml d'acide acétique glacial, en chauffant dans la mesure nécessaire. On a ensuite maintenu la solution au-dessous de 150 C tout en y ajoutant doucement et avec agitation 83,3 ml d'anhydride acétique; on a alors laissé l'acétylation se faire pendant 1 heure à la température ordinaire. On a alors éliminé l'excès d'anhydride acétique en ajoutant 6,7   ml    d'eau et laissant de nouveau reposer pendant 1 heure.



  Puis la solution a été traitée avec 25   ml    d'aniline que   l'on    a ajoutés lentement et en refroidissant, et ensuite versée dans 1200 mi de méthanol. On a agité puis laissé reposer jusqu'au lendemain dans un réfrigérateur. Les cristaux bruts ont été séparés et lavés avec du méthanol et de l'éther; on les a ensuite séchés à l'air à 50 - 600 C pendant 1 heure, et on a obtenu 42 g de substance, ce qui représente un rendement de 70   O/o    calculé sur le glutathion.

Claims

REVENDICATION : Procédé de préparation de S-acétyl-glutathion, caractérisé en ce que l'on traite du glutathion avec de l'anhydride acétique en solu tion dans de l'acide acétique en présence d'acide perchlorique.

SOUS-REVENDICATIONS : 1. Procédé selon la revendication, dans lequel on dissout le glutathion dans un mélange d'acide acétique glacial et d'acide perchlorique avant d'ajouter l'anhydride acétique.

2. Procédé selon la revendication, dans lequel l'anhydride acétique est présent en excès moléculaire par rapport au glutathion présent.

3. Procédé selon la sous-revendication 2, dans lequel l'excès moléculaire de l'anhydride acétique présent est d'environ 40 0/o.

4. Procédé selon la revendication, dans lequel la concentration moléculaire de l'acide perchlorique dans le mélange de réaction est de l'ordre d'environ 0,5 à 1,0 par rapport au mélange.

5. Procédé selon la revendication, dans lequel l'acide perchlorique est ajouté sous forme d'une forte solution aqueuse à pas moins de 70 O/o p/p d'acide perchlorique.

6. Procédé selon la revendication, dans lequel la réaction d'acétylation est effectuée audessous de 250 C, en refroidissant dans la mesure nécessaire.

7. Procédé selon la revendication, dans lequel un excès d'anhydride acétique, après que l'acétylation des groupes sulthydryle a sensiblement cessé, est décomposé par addition d'eau.

8. Procédé selon la revendication, dans lequel le mélange de réaction, après que l'acétylation des groupes sulfhydryle du glutathion a sensiblement cessé, est neutralisé avant la séparation du S-acétyl-glutathion.

9. Procédé selon la sous-revendication 8, dans lequel l'agent de neutralisation est i'ani- line.

10. Procédé selon la sous-revendication 9, dans lequel l'aniline est ajoutée en une quantité telle qu'il y ait un excès d'environ 30 o/o par rapport à celle nécessaire pour neutraliser tout l'acide perchlorique présent.