CH278131A - Procédé pour la séparation d'acide ptéroylglutamique d'avec des ptérines apparentées. - Google Patents

Description

  Procédé pour la séparation d'acide     ptéroy1glutamique    d'avec des     ptérines    apparentées.    Cette invention se rapporte<B>à</B> un procédé  pour la séparation d'acide     ptéroylglutamique     d'avec des     ptérines    apparentées.  



  La synthèse, réalisée avec succès, du  L.     easei    factor. également connu sous le nom       (Vaeide    folique, a été mentionnée dans        ,Seienee ,    vol.<B>103,</B> page<B>667, 31</B> mai 1M.  Ce produit synthétique, qui porte le nom    scientifique d'acide N-[4-1-[(2-amino-4       liydroxy-6-pyrimido-[4,5-bl-pyrazyl)-métliyll-          iiminol-benzoyll-,-Iutamique,    et qui est d'or  dinaire appelé de façon     pl-Lis    concise acide       ptéroylalutamique,    est identique ou analogue  au L.     casei    factor isolé de sources naturelles.  



  La formule de structure de l'acide     ptéroyl-          glutamique    est la suivante:  
EMI0001.0015     
    <B>Il</B> a été constaté     que    ce produit synthétique  est     un    agent thérapeutique important<B>dans</B>  le traitement d'anémies     macroeytiques    et  autres maladies analogues du sang.  



  En raison de l'importance de ce nouveau  produit     m-nthétique    dans l'art médical, il est  devenu nécessaire (le le préparer en grandes  quantités et<B>à</B> un     de-ré    relativement élevé de  pureté. Bien qu'il ait été proposé divers pro  cédés<B>(le</B> préparation de l'acide     ptérovigluta-          inique,    tous ces procédés conduisent<B>à</B> la for  mation de proportions considérables de pro  duits secondaires     biologiquement    inactifs,     qui     doivent être éliminés de la substance théra  peutique.

   Beaucoup de ces produits secon  daires sort étroitement apparentés<B>à</B> l'acide       ptéroviglutamique    et, comme on pouvait s'y  attendre, possèdent des propriétés physiques       el        ehimiques    analogues, telles     que    la solubilité,  <B>1</B>    par exemple.<B>Il</B> est par conséquent difficile       tic    séparer l'acide     ptéroy1glutamique    des     pté-          rines    apparentées dans les mélanges résul  tant d'une synthèse chimique,

   et les procédés  proposés jusqu'ici<B>à</B> cet effet impliquent un  grand nombre de manipulation- et convien  nent mal<B>à</B> une production industrielle.<B>Il</B> a  été maintenant découvert un procédé très  simple de purification d'acide     ptéroy1gluta-          inique    produit par     svnthèse,    procédé qui peut  être utilisé dans la production industrielle sur  une grande échelle pour obtenir un produit  possédant un degré beaucoup élevé de pureté.  Ce procédé peut être utilisé seul ou en com  binaison avec d'autres     prQcédés.     



  Le procédé selon l'invention, pour la sépa  ration d'acide     ptéroylglutamique    d'avec, des       ptérines    apparentées, est caractérisé en ce  qu'on dissout l'acide     ptérovIgliitamique    impur      dans une solution aqueuse     d'un    acide fort,  d'une concentration     d'a-Li    moins<B>2N</B> en cet  acide,

   pour former un sel<B>de</B> l'acide     ptéroyl-          glutainique    et en ce     qu#on    dilue la solution  avec de Peau de façon<B>à</B> provoquer la     disso-          eiation    dudit sel et la séparation d'acide       ptéroy1glutamique        d'un    degré de pureté plus  élevé que l'acide initial.  



  Le présent procédé est basé sur     la    décou  verte que, lors de la dilution de solution du  produit impur, dilution entraînant la disso  ciation des sels formés, l'acide     ptéroyl-lutami-          que    tend<B>à</B> se séparer en premier lieu et qu'il  est donc possible de régler cette dilution de  façon<B>à</B> obtenir une séparation sélective     dadit     acide, la plupart des     ptérines        biologiquement     inactives restant en solution dans l'acide di  lué, mais encore modérément concentré.  



  L'acide chlorhydrique est     Facide    utilisé de  préférence pour exécuter le procédé selon  l'invention, bien qu'on puisse utiliser d'autres  acides forts, tels que les acides     broinhydri-          cinés,    nitriques, sulfuriques, phosphoriques,       chloracétiques,    formique,     toluène-sulfonique     et analogues. On dissout de préférence l'acide       ptéroy1glutamique    brut dans une solution  d'un acide fort dune concentration supé  rieure<B>à 5N</B> et en quantité aussi grande que  possible.<B>Il</B>     West    ordinairement pas nécessaire  de chauffer la solution.

   Des essais de stabilité,  ont montré que l'acide     ptéroylci-LLtamiqiie        pe    Lit  être récupéré avec un rendement de<B>90</B>     Oio   <B>à</B>  partir d'acide chlorhydrique     12N    après<B>6</B>     heLires     <B>à</B> la température ambiante.

       Aprèq    48 heures,  il était encore possible d'en     réeupérer    la plus  grande partie.<B>A 500 C,</B> l'acide     ptéro#,lglutami-          que    peut rester en contact avec l'acide chlor  hydrique     12-NT    pendant<B>3</B> heures environ sans  décomposition sérieuse.<B>A</B> des températures  de l'ordre de<B>750</B>     C,    il se produit une forte  décomposition, même en utilisant des acides  d'une concentration plus faible.<B>Il</B> est par  conséquent préférable de réaliser le procédé  clans un intervalle de températures allant     clé          0'-   <B>C</B> ou moins,

   jusqu'à une température qui  n'est pas supérieure<B>à 750 C.</B>  



  La précipitation de l'acide     ptéroylglutami-          que    s'effectue avantageusement en diluant la    solution acide     j,,isqii#ù    ce que sa concentration  en acide fort soit comprise entre<B>0,5N</B> et<B>5N.</B>  La dilution<B>à</B> une concentration inférieure<B>à</B>  <B>0,5N</B> aurait pour résultat la précipitation  d'une partie des: impuretés avec l'acide     pté-          ro#,1,c,,I-Litamiq    Lie, tandis que. pour une concen  tration supérieure<B>à, 5N,</B> il ne se produira pas       une    précipitation complète du produit actif.

    La concentration optimum de la solution di  luée pour une précipitation complète et ra  pide de l'acide     pt6royl'-i-Litamique    est de<B>1 à</B>  <B>2N,</B> quand elle contient<B>1</B> partie d'acide       ptéroy-1glatainique    pour<B>100 à</B> 200 parties  de solution.  



  On peut, améliorer considérablement l'effi  cacité     du    procédé par l'utilisation de charbon  de bois activé, notamment lorsque la     matièe     première est     clé    faible     ptireté.    On traite alors  avec du charbon<B>de</B> bois activé la solution  acide avant, dilution et on élimine     eelui-ci    par  filtration avant de diluer la solution. Le char  bon de bois ne doit pas être utilisé clams des  solutions de concentration relativement faible  en acide fort, car il tend alors<B>à</B> adsorber  l'acide     ptéro:rlglutamiqiie.     



  L'invention peut être réalisée comme indi  qué dans les exemples suivants:  <I>Exemple<B>1:</B></I>  On a dissous une certaine     (Ictantité    d'acide       ptéroyl-littamiqiie    brut.     eoiiteiiant   <B>1 g</B> de 'la  matière active., le reste étant des     ptérines     constituant (les sous-produits de la synthèse,  dans<B>20</B>     em3    d'acide     ehlorhydrique    concentré       (12N)   <B>à</B> la température ambiante.

   On a en  suite traité la solution par quelques grammes  de charbon clé bois activé et on a filtré. lia  solution claire a ensuite été diluée avec de  Veau     jusqueà        une    concentration clé<B>1N</B> en  acide chlorhydrique.     Par    repos, des cristaux  d'acide     ptéroyl-lutamique    se sont séparés de  <B>la</B> solution.  



  <I>Exemple 2:</I>       Un    mélange clé réaction brut de<B>17,5 g,</B>  contenant d'acide     i)téroviglutaniique    réel,  a été     mélairgé    avec<B>100 g</B> d'acide     ehlorhydri-          que   <B>12N à 320C.</B> La plus grande partie de  la matière s'est dissoute     eii    donnant     une    solu-           tion        brun-clair,    qui est toutefois devenue     légè-          renient    trouble après un repos     cle   <B>15</B> minutes.

    On a ensuite ajouté<B>25</B> de charbon de bois  activé et, après 20 minutes, on a filtré le mé  lange. On a lavé le gâteau de filtration,  d'abord avec 20     em3    d'acide chlorhydrique       l-2N    et ensuite avec<B>10</B>     em3    de cet acide fort,  et on a dilué le filtrat et les produits de la  vage combiné-, avec<B>100</B>     cm.3    d'eau, puis     oit    a  refroidi<B>à 51 C</B> pendant une heure     enviroD.     Le précipité a été recueilli sur le filtre, lavé  avec de     J'eau    et de l'acétone, et séché.

   Un  essai chimique du produit a montré qu'il est       constitué        d'acide        ptéroylo-lutamique   <B>à</B>     82,1%.     



  Après repos pendant la nuit, la solution a  déposé     une    seconde récolte de cristaux qui,<B>à</B>  l'essai, ont montré une pureté légèrement plus  grande.  



  <I>Exemple<B>3:</B></I>  On a mélangé 4<B>g</B>     d'un    produit de réaction  brut, contenant 24,8 % d'acide     ptéroylglutaini-          que    réel, le reste étant constitué par des     pté-          rines    apparentées et quelques produits aidant  la filtration, avec 20     em3    d'acide chlorhydri  que<B>12N.</B> On a ajouté<B>1 g</B> de charbon de bois  activé, et on<B>a</B> filtré la     suspension.    Le filtrat  jaune clair<B>a</B> été dilué.<B>à 1.00</B> cm? avec de  l'eau et a été refroidi.

   Après<B>16</B> heures, le  précipité jaune qui s'était formé a été re  cueilli, lavé avec de     15eau    et de l'acétone, et  séché.<B>A</B> J'analyse, on a constaté que le pro  duit consistait en acide     ptéroy1glutamique   <B>à</B>       85,5%.     



  <I>Exemple<B>-1:</B></I>  Un mélange brut, pesant 1.0,4<B>1-</B> et conte  nant<B>1. g</B>     diacide        ptéro-%,Igl-Lttamiqi.-te    réel sous  la forme de son sel clé zinc, a été mis en sus  pension dans<B>9-0</B> cm' d'acide chlorhydrique  <B>12N</B> et<B>a</B> été traité par<B>1</B>     clé    charbon de  bois activé.

   La suspension     .3    ensuite été filtrée  et le gâteau de filtration a été lavé avec une  quantité d'eau suffisante pour donner un vo  lume total. de<B>100</B>     em3.    De l'acide     ptéroyl-          glutamique,    dans     -tin    état beaucoup plus élevé  (le pureté, a précipité     clé    la solution par repos.    <I>Exemple<B>5:</B></I>  <B>A</B> 40     eni3    d'acide chlorhydrique concentré,  à la température ambiante, on a ajouté<B>9 1<U>g</U></B>    d'acide     ptéroy1glutamique    a<B>39,3 %,<I>10</I> g</B> de  charbon de bois activé, et on a agité la sus  pension pendant     l/.    heure.

   Après filtration<B>à</B>  travers     un    filtre en verre     fritté,    le filtrat a  été dilué<B>à</B> 430     em3.    Après     '/,,    heure<B>à</B> la tem  pérature ambiante, l'acide     ptéroylgl-uitamique     a commencé<B>à.</B> cristalliser<B>à</B> partir de la solu  tion. On a agité la solution pendant % heure  <B>à 250 C</B> et on a ensuite refroidi<B>à 100</B>     C;    la  matière solide a été séparée par filtration,  lavée avec de l'eau et de l'acétone.

   Par sé  chage<B>à</B>     601,        C    et analyse, on a constaté qu'elle  contient de l'acide     ptéroviglulamique   <B>à</B>     92,21/o     et<B>2,9</B> % d'eau.  



  <I>Exemple<B>6:</B></I>  Le mode opératoire décrit dans l'exemple  précédent a été répété en utilisant moins de  charbon de bois,<B>3</B> parties en poids pour cha  que partie d'acide     ptéroy1glutamique    réel. Le  produit obtenu était d'un degré de pureté  légèrement plus élevé et a été recueilli avec  un rendement sensiblement plus élevé.  



  <I>Exemple<B>7:</B></I>  Un échantillon de<B>5 g</B> d'acide     ptéroyl-          glutamique   <B>à</B>     88 /o    a été dissous dans<B>50</B> cm,  d'acide chlorhydrique<B>à 37</B> %, a été traité par  <B>5 g</B> de charbon de bois     aetivé    et a été filtré.  Le charbon de bois a été lavé avec<B>100</B>     eni-          de    l'acide chlorhydrique, et les produits du  lavage ont été combinés avec le filtrat qui a  ensuite été dilué<B>à. 500</B>     em3    avec<B>de</B> l'eau  chaude. Par repos<B>à</B> 4-60<B>C,</B> il s'est déposé 4,6<B>g</B>  d'acide     ptéroylgl-Litamiq-uie    cristallin.

   Après  répétition de l'opération de cristallisation, le  produit a été recueilli. a été lavé avec de  l'eau, de l'alcool et de l'éther et, a été séché<B>à</B>       1-401,   <B>0</B> pendant 4 heures. L'analyse chimique       cl-Li    produit au point de vue de sa teneur en  carbone, hydrogène et azote, coïncidait<B>à</B> peu  près parfaitement avec les valeurs théoriques  pour     C191TI906N7.        JJ20.            Exeni.ple   <B><I>8:

  </I></B>  Un échantillon de<B>2,78 g</B> de matière brute,  contenant 129% d'acide     ptéroy1glutamique,    a  été dissous dans<B>15</B>     cins    d'acide phosphorique       15N.    La solution a ensuite été traitée par      <B>2,78 g</B> de charbon de bois activé et a été fil  trée. Le charbon de bois a été lavé     aVeC   <B>10</B>     CM3     clé la solution d'acide phosphorique; les pro  duits de lavage et le filtrat ont     été        combinâ     et dilués<B>à 100</B>     ellis    avec de l'eau.

   Après  repos pendant la nuit     ùâ    4-60<B>C,</B> il a été re  cueilli de l'acide     ptéroy1glutamique    d'une pu  reté de<B>50</B> %.  



  En répétant deux fois le traitement décrit  ci-dessus, la pureté de     Facide        ptéroyl,-I-Litami-          que    a été accrue jusqu'à<B>92 "/'0</B> environ.  



  <I>Exemple</I>     9:     Un échantillon de<B>2,78 g</B> d'acide     ptéroyl-          glutamique   <B>à</B>     1211/o    a été dissous dans un mé  lange de 20<B>g</B> d'acide     trichloracétique    dans  20<B>g</B> d'eau. Cette solution a été traitée par<B>1 g</B>  de charbon de bois activé, a été filtrée et,     di-          hiée   <B>à</B> 120     ciii3    avec de l'eau, Le mélange a été  chauffé jusqu'à, ce     quon    obtienne une     so'lu-          tion    claire, qui a ensuite été traitée par<B>1 g</B>  de charbon activé et a été filtrée.

   Par     refroi-          dissenient    rapide     du    filtrat, il s'est séparé       une        Par        matière        repos   <B>à</B>     goudronneuse        4-60        C,

          il        s'est        qui        déposé    a     été        des        enlevée'        cris-          taux    d'acide     ptéroy1glutamique   <B>à</B>     801/o.    Une  seconde récolte de cristaux,     qui    se sont<B>dé-</B>  posés après un repos supplémentaire, ont       montré   <B>à</B>     Fessai        une        pureté        de        90%.     



  <I>Exemple<B>10.</B></I>  



       Uri    échantillon de<B>2,78<U>-</U></B> de matière brute,  contenant<B>de</B> 12     11/o    d'acide     ptéro.#        Ighitamique,     <B>a</B> été dissous dans<B>8</B>     em-    d'acide sulfurique  <B>18N,</B> traité par<B>1 g</B> de charbon de bois et  filtré. Le charbon de bois a     été    lavé     a7,Tec     2     em3    de l'acide sulfurique     12'#N;'Ies    produit.-,  de lavage obtenus ont été combinés avec le  filtrat. qui a été dilué<B>à 90</B>     ems    et a été main  tenu<B>à</B> 4-W<B>C</B> pendant     ïa    nuit.

   La solution  refroidie a été filtrée et le filtrat a été dilué  <B>à 180</B>     em3    avec de l'eau. Après repos<B>à</B>       -1-60C,    il s'est déposé de     lacide        ptéro.0-          -ÇYluta,niiqtie    d'une pureté de     501/o.     



  <I>Exemple<B>11:</B></I>  Un échantillon de<B>5 g</B> d'acide     ptéroyl-          gl        utamique   <B>à</B>     12        %    a     été        dissous        dans        20        eT-ii3     d'acide     bromhydrique   <B>à</B> 48     'Io,    a été traité par  <B>9</B>  <B>1</B>     g,   <B>(le</B> charbon clé bois, filtré, traité     -une,    se-         eonde    fois par<B>3 g</B> de charbon de bois et filtré  <B>à</B> nouveau.

   Le filtrat a été dilué<B>à</B> 200     ems     avec de l'eau et a été abandonné au repos  pendant la nuit<B>à</B> la température ambiante.  Le produit cristallin qui s'est déposé a     étk     recueilli, lavé, séché et examiné. On a constaté  qu'il     s#agït    d'acide     ptéroy1glutamique    d'une  pureté de<B>88</B>     1/0.     



  <I>Exemple .12:</I>  On peut se dispenser d'utiliser du charbon  de bois activé lorsqu'on part     diacide        ptéroyl-          glutamique        qui    a<B>déjà</B> été purifié Jusqu'à un  degré de pureté de     75-90%.     



  <B>1</B> -d'acide     ptéroyl.-lutamique,    d'une pu  reté de<B>88 0/û,</B> a été dissous dans 20     enil     d'acide phosphorique 20<B>N.</B> La solution a en  suite été diluée<B>à 100</B>     em3    avec de l'eau  chaude. La cristallisation a commencé immé  diatement. Après repos<B>à</B> 4-60<B>C</B> pendant la  nuit, il a été recueilli<B>0,88<U>- y</U></B> d'acide     ptéroyl-          gl   <B>-</B>     utamique        dune        pureté        améliorée.     



  On a répété le même mode opératoire en  utilisant de l'acide sulfurique<B>18N,</B> de l'acide  nitrique<B>à</B> 70%, de l'acide     dichloracétique,    de       Facide    formique<B>à</B>     9011/o    et de l'acide     toluène-          sulfonique   <B>à</B> 75%. Dans chaque cas, les ré  sultats ont<B>été</B> sensiblement les mêmes: il  s'est déposé de     Facide        ptéroy1glutamique    d'une  pureté améliorée.

Claims (1)

1. <B>REVENDICATION:</B> Procédé pour la séparation d'acide ptéroyl- gliatamique d'avec des ptérines apparentées, caractérisé en ce qu'on dissout de l'acide ptéro.0 glutamique impur dans une solution aqueuse d'un acide fort d'une concentration d'au moins<B>2N</B> en cet acide, pour former un sel de l'acide ptéroy1glutamique, et en ce qu'on dilué la solution avec de l'eau, de façon <B>à,</B> provoquer la dissociation dudit sel et la séparation d'acide ptéroy1glutamique d'un de gré de pureté plus élevé que l'acide initial.

   SOUS-REVENDICATIONS: <B>1.</B> Procédé suivant la revendication, carac térisé en ce qu'on dissout l'acide ptéroyl- glutamique impur dans une -,olution aqueuse d'un acide<B>f</B> ort possédant une éoncentration d'au moins<B>5N</B> et qu'on dilue cette solution avec de l'eau jusquI une concentration com prise entre<B>0,5N</B> et 5,ON. 2.

   Procédé suivant la sous-revendieation <B>1,</B> caractérisé en ce qu'on dilue la solution jus qu'à une concentration comprise entre<B>1N</B> et 2<B>N.</B> <B>3.</B> Procédé suivant la sous-revendication <B>1,</B> caractérisé en ce qu'avant cette dilution on traite la solution avec du charbon de bois activé et filtré.

   4, Procédé suivant la revendication, carac- térisé en ce que ladite solution est une sol-u- tion d'acide chlorhydrique dont la concentra tion est au moins<B>5N.</B> <B>5.</B> Procédé suivant la revendication, earac- térisé en ce que ladite solution est une solu tion d'acide bromhydrique dont la concentra tion est au moins<B>5 N.</B> <B>6.</B> Procédé suivant la revendication, carac térisé en ce que ladite solution est une solu tion d'acide trichloracétique dont la concen tration est au moins<B>5N.</B>