BE636975A - - Google Patents

Description

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  " Procédé d'isolement et de purification de l'Ampicilline " 
Des procédés d'isolement et de purifica- tion de l'Ampicilline, dans lesquels on n'utilise pas d'eau nais on ne travaille qu'au sein de sol- vants organiques, n'ont pas été jusqu'à présent dé- crits dans la littérature. 



   Si l'on utilise pour l'isolement et la purification de   11,Ampicilline   des milieux plus ou 

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 moins aqueux, on se heurte aux inconvénients sui- vants   l'Ampioilline   est assez bien soluble dans l'eau, surtout en   présence   d'impuretés. Il est vrai que l'on peut évaporer avec précautions des filtrats aqueux par petites   charges   et parvenir ainsi à de nouveaux   précipités,   liais l'expérience contre que ces précipités sont très impurs et ne se prêtent ensuite que fort mal à une purification. 



  En ortre des solutions aqueuses de l'Ampicilline sont détruites par la Pénicillinase (provenant de germes de l'atmosphère) et par suite d'autres in-   fluences   non encore élucidées. 



   La Demanderesse vient de trouver que l'on peut isoler sous forme pure l'Ampicilline à partir d'une solution plus ou   Moins   aqueuse, comme on l'obtient par exemple par dissolution et hydrogé- 
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 nolyse de la :-carbe'benzyloxy-arpici.line, par e4- - paration ou groupe N-caroobenzyloxy (Doyle, Pocker# Nayler, Smith : Soc.   162,   page 1444) en solution aqueuse et qui la plupart du   tempu   no contient pas 
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 l'acide 6arinopnicillanioue comme impureté.

   Pour cet isolement, on règle le pH de la solution à 4,0- 4,8, on la soumet à un séchage par congélation (lyophilisation), on met le résidu de cette lyophi- lisation en suspension dans un solvant organique, on ajoute 1 à 2 moles d'une trialkylamine, on agite quelques heures, on sépare les impuretés par filtra- tion ; et ensuite l'on évapore le filtrat, ce qui permet d'obtenir le sel de trialkylamine de l'Ampi- cilline, ou bien on incorpore   h   ce filtrat une   quan-   tité calculée d'un acide, ce qui détermine la préei- 

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 pitation de l'Ampicilline libre sous forme pure. 



   Hais au cour  de la production de l'Ampicilline, il Peut aussi, selon la nature du   procède   choisi, pour cette production, se poser le problème d'élimi- ner de l'Ampicilline formée, - l'acide 6-aminopéni- cillanique qui n'a pas réagi. Du fait que ces deux substances présentent l'une et l'autre dos carac- téristiques très voisines de solubilité, il est très difficile de parvenir à une telle séparation. La Demanderesse vient de trouver que, dans le cas où parmi les impuretés   accompagnant   l'Ampicilline se trouve l'acide   6-aminopénicillanique,   on peut pro- céder   de   la façon décrite ci-dessus, mais avec cotte restriction que l'on no doit pas utiliser d'excès do trialkylamine. On doit tout au contraire dans ce cas utiliser exactement 1 molede trialkylamine par mole d'Ampicilline.

   L'Ampicilline passe alors pure- ment et simplement en solution sous forme do sel de trialkylamine, alors que l'acide 6-aminopénicilla- nique peut,   Eventuellement   avec d'autres impuretés, âtre   séparé   par filtration. 



   Comme solvants organiques (pour recevoir le sel de trialkylamine de l'Ampicilline),   oonvien'-   nent le chlorure de méthylène, le chloroforme, l'a- cétone, le méthanol, la diméthylformiamide, l'acétoni-   trile,   l'éthanol, le diméthylsulfoxyde et   l'éther   monométhylique du glycol. Le chlorure de méthylène   @   et le chloroforme se sont avérés être particulière- ment intéressants. 



   Conviennent comme trialkylamines celles qui comportent dans leur molécule   3 à 12   atomes de 

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 carbone, cocne par exemple : la trim6thylamino, la n éthyldi 4th:rlu!:line, la tri I:thylm:1ine, la tripro- pylamine, etc. La Decnderccsc préfère particuliè- rement la tridthylamiiie. 



  Jour précipiter l'Ampicilline libre, on utilise den ac,le,3 dont le sol de trialkylamines correspondant cit soluble dans le solvant utilisé. 



  Par exemple, le sel de triîthylaraine de l'acide para- toluène-aulfonique est bien soluble dans le chlorure de méthylène. La combinaison : chlorure de méthylène, triéthylaaine, acide para-toluène. sulPoniquo uppar-   'tiunt   donc à une forme   préférée   do réalisation du   procédé   de la présente invention. 



   L'agitation du résidu de la lyophilisa- tion dans un solvant organique, en prononce d'une trialkylamine, s'effectue selon   l'état   de surface du produit, durant une ou plusieurs heures   à   la température ambiante ou h une température légèrement 
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 plus faible, et de préférence à 0 C. 



   On précipite l'Ampicillino libre, au moyen d'un acide, à des   températures     écales   ou inférieu- 
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 res à 0 C, et du préférence ontre .15 C et -35 0. 



     EXHALE  1 
On mot 20 g de produit de lyophilisation, qui d'après un essai   microbiologique   sur Baot. subtilis contient   7,3   d'Ampicilline, en suspension dans 150 cm3 de chlorure de méthylène ; on   rofroi-   dit la suspension à 0 C environ, puis on ajoute 4,2 g de   trithylamine,   on agite une heure et demie à 0 C environ, on filtre et   essore   ensuite sous vide ; 

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 on ajoute lentement au filtrat à   -20 0,   tout en   agi tant,   13,1 ml d'une solution anhydre 1,4 N d'a- 
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 cide toluèno-eulfoniquo dana le chlorure de tadthy- lène.

   L'Ampicilline précipite aussitôt et au bout d'une courte période de repos on pout la filtrer,. l'essorer   (loua   vide, la laver avec du chlorure de   méthylène   et de l'acétone froide et la sécher. 



   Quantité obtenue : 7,2 g d'Ampicilline   (pureté   égale à 97,8 %, d'après une détermination   microbiologique   faite sur Bact.   sub.).   



   EXEMPLE 2 
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 On dissout 5 e de sol pur de triethylanine et d'Ampicilline dans 50 ml de chlorure de méthylène à 0 C environ ; puis on refroidit la solution   à   -20 C environ, on ajoute goutte à goutte et tout en   agitant   une solution de 0,8 mole d'acide para-toluène-   sulfonique   (contenant de l'eau de cristallisation) dans 10   ml   d'acétone, on laisse ensuite reposer \ 5   minutes   à la même température, on filtre et essore sous vide, on lave avec de l'acétone froide et l'on sèche. 
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  Quantité obtenue : 3, 2 g d'AmPioÏllînu (pureté égale à 8, 5 , d'après une détermination nicrobiologique sur Tact. sub.). 



  EX::1,rPLE 
On dissout 20 g de produit de   lyophili-   sation, qui d'après un essai micro biologique sur Bact. subtilis contient 7,3 g d'Ampicilline, comme décritdans   1' Exemple   1, dans un mélange de chlo- 
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 rure de mthyl:n^ et de triéthylr3raine ; on sépare 

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 les impuretés par filtration, on évapore le filtrat sous vide et on   sèche   le   résidu.   



   Quantité obtenue :   9,2   g du col do trié- 
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 thylanine et d'Aapiclllinu (pureté d'environ 10(7 ô ; cela correspond à 7,1 g d'Ampicillil1o). 



  3XfllHi3 On met un r:1ülu.n,.'ù de 1,75 g d' Ar.'lpicilline (présentant contre Bact. nubtilis une activité do 1500 Unités) et l,Cfz C d'acide aminopanicillanique en suspension dans 400 ni de chlorure do méthylène absolu ; on refroidit la suspension à 00 environ et ajoute 0,505 c de tri<thylaniine. On agite en- suite durant 5 heures a 0 C, on filtra et osoore sous vide le   précipité   obtenu, on le lave avec du chlorure de   méthylène   et on le sèche. 
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 Quantité d'acide aulnopénicillanique obtenue : 1,20 g. 



   Activité contre Bact.   pubtilin   130 uni- tés. 



   On évapore totalement le filtrat,   résul-   
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 tant de la o4puratïon du précipita ci-dessus, dans un évaporateur rotatif ut l'on sèche le résidu (sel de triéthylanine et d'Aspicilline). '*'#> Quantité obtenue :2,1 g (soit 93,4 % du 
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 rendement théorique ; activité contre -%et. subt.l,o,   rapportée  par le calcul à   l'Anpicilline   libre :   1550   unités).

Claims (1)

1. RESUME procède d'isolement et de purification de EMI6.5 l'Ampiclllins, caractérise par les pointa suivants, <Desc/Clms Page number 7> isolément ou en combinaisons : 1 ) On agite l'Ampicilline brute dans un solvant organique on présence d'une à deux noies d'une trialkylamine par mole d'Ampicilline pendant une ou plusieurs heures à la température ambiante ou à une température légèrement inférieure, de préférence à 0 C; on sépare les impuretés par filtration et l'en traite le filtrat, dans lequel ou trouve l'Ampicilline sous forme de sel de la trialkylamine, soit en évaporant le dit filtrat dans des conditions ménagées pour obtenir le dit sel de trialkylamine et d'Ampicilline, soit en ajou- tant à ce filtrat une quantité calculée d'un acide pour déterminer une précipitation de l'Ampicilline libre.

   2 ) Au cas où. l'acide 6-aminopé- nicillanique, seul ou avec d'autres substances d'accompagnement constituant des impuretés, se trouve dans l'Ampicilline brute, on utilise exacte- ment une mole d'une trialkylamine par mole d'Ampi- cilline.

   3 ) On utilise comme solvant orga- nique le chlorure de méthylène, le chloroforme, l'acétone, le méthanol, la diméthylformiamide, l'acétonitrile, l'éthanol, le diméthylsulfoxyde, ou l'éther monométhylique du glycol, et l'on fait de préférence appel au chlorure de méthylène ou au chloroforme.

   4 ) On utilise comme trialkylamines celles dont la molécule comporte 3 à 12 atomes de carbone, et de préférence on fait appel à la trié-. <Desc/Clms Page number 8> thylanine. EMI8.1 5 ) Pour précipiter l'Anpioillino libre, on utilise des acides dont le sel corres- pondant de trialkylanine est soluble dans le sol- vant utilisé, et l'on fait de préférence appel à EMI8.2 l'acide para- toluène-suif oniquo .

   6 ) On effectue la précipitation de l'Ampicilline libre des températures égalas ou inférieures à 0 C, et de préférence entre -15 C et -35 C.