CH298679A - Procédé pour la préparation de l'acide 5,6,7,8-tétrahydro-10-formyl-ptéroyl-glutamique. - Google Patents

Description

  Procédé     pour    la préparation de l'acide     5,6,7,8-tétrahydro-10-formyl-ptéroyl-glutamique.       La présente invention a pour objet un  procédé de préparation de l'acide     5,6,7,8-          tétrahydro-10-formyl-ptéroyl-glutamique,    qui       est    un composé nouveau destiné à être utilisé  en médecine.  



  En 1948,     Sauberlich    et     Baumann    (Journal  of     Biological        Chemistry,176,    p.165,1948) recon  nurent l'existence d'une substance stimulant  la croissance du     Leuconostoc        citrovorum.    On  trouva que cette substance inconnue était pré  sente dans les extraits de foie industriels et  également dans le foie et dans une grande  variété de matières naturelles. Des travaux  ultérieurs 'ont montré que le facteur de crois  sance n'est pas l'acide     ptéroylglutamique,    la.  vitamine Bit, ni aucune des vitamines déjà  reconnues que l'on rencontre dans le foie et  d'autres produits naturels.

   On a également  trouvé par la suite que la substance incon  nue peut satisfaire aux besoins d'acide foli  que des micro-organismes et des poussins. On  a de plus trouvé que ce facteur de puissance  inverse l'action des antagonistes de l'acide       ptéroylglutamique    et, chose surprenante, in  verse les effets     toxiques    de l'acide     amino-          ptérine-(N-[4-        {    [ (2,4 -     diamino    - 6 -     pyrimido-          [4,5-b]pyra.zyl)méthyl]-amino        }-benzoyl]glu-          tamique)    sur les souris et les bactéries,

   dans  des conditions dans     lesquelles    l'acide     ptéroyl-          glutamique    est inefficace.    Le facteur     citrovorum    existe dans les pro  duits naturels en quantité extrêmement fai  ble, de sorte que sa récupération de ces pro  duits     naturels    est excessivement difficile et  pratiquement impossible du point de vue in  dustriel. On a cependant découvert qu'il est  possible de préparer un composé ayant une  activité biologique identique ou voisine par  un procédé rendant possible     industriellement     la fabrication de quantités convenables de cet  agent actif, de sorte qu'on peut     utiliser     celui-ci en médecine.

   Comme on n'a     pas    en  core aujourd'hui élucidé la structure chimique  du facteur de croissance du     Leuconostoc        citro-          vorum    décrit par     Sauberlich    et d'autres, il  n'est pas possible de dire actuellement si le  produit obtenu par le procédé décrit ci-après  est le même ou pas, bien qu'il ait la même  activité biologique. Autant qu'on le sache, ce  pendant, le produit obtenu par le procédé se  lon la présente invention est nouveau.

      Suivant la présente invention, on prépare  l'acide     5,6,7,8-tétrahydro-10-formyl-ptéroyl-          gluta.mique    en traitant par un agent de.     for-          mylation    l'acide     5,6,7,8-tétrahydro    -     ptéroyl-          glutamique.       Le composé obtenu par le procédé selon la  présente invention répond à la formule sui  vante:    
EMI0002.0001     
         dans    laquelle     R    représente le radical de l'acide  glutamique.    On peut     utiliser    divers agents     formylants     pour préparer le nouveau composé.

   Les agents       formylants    préférés sont l'acide formique et  les esters et les amides de l'acide formique et  de l'acide     orthoformique.    Parmi ceux-ci, on  peut citer en particulier le formiate de mé  thyle, le formiate d'éthyle, le formiate de  butyle, le formiate de benzyle, le formiate de  glycol,     l'orthoformiate    de méthyle,     l'orthofor-          miate    d'éthyle, la     formamide,    la     formamidine     et la     formanilide.       On peut mettre en     oeuvre    la. réaction dans  le solvant formé par un excès d'acide formi  que ou d'un formiate d'alcoyle.

   La présence,  dans le mélange réactionnel, d'un solvant  inerte comme un alcool, est admissible. Le sol  vant est essentiellement anhydre quand on  utilise un formiate d'alcoyle. On introduit gé  néralement dans le mélange réactionnel des  substances     basiques    telles que des     alcoolates    de  métal alcalin, de la     pyridine,    de la     triéthanol-          amine    et autres amines tertiaires quand on       utilise    des formiates d'alcoyle.

   Il est préfé  rable d'utiliser 2 à 3 molécules     d'alcoolate    de  métal alcalin par molécule d'acide     tétrahydro-          ptéroyl-glutamique.    On a utilisé de plus  grands excès de     pyridine    et d'autres amines  tertiaires.  



  Quand on utilise un     formiate    d'alcoyle, la  température de la réaction peut varier entre  50 et 200  C, l'intervalle préféré étant de 100  â 150  C et le temps - nécessaire pour que  la réaction soit sensiblement complète varie  de 30 minutes à 6 heures. Quand on utilise  l'acide formique, la température peut varier  "entre 0 et 100  C. .  



  Après la     formylatioli,    on peut directe  ment séparer le produit par     filtration    ou tam-         ponner    la solution avec du bicarbonate de  sodium aqueux, selon le solvant utilisé. Quand  il est désirable d'éliminer du mélange réac  tionnel l'excès d'acide formique, on peut ver  ser la solution dans l'éther et isoler par fil  tration le produit désiré insoluble. On peut  également éliminer l'acide formique par des       procédés    de distillation ou     d'absorbtion.       On comprendra mieux l'invention grâce  aux exemples suivants.

      <I>Exemple 1:</I>    On dissout 3 échantillons de 0,80 g cha  cun d'acide     tétra-hydroptéroylglutamique,        cha-          cun        dans        20        cm3        d'acide        formique    à     100        %.     On     laisse    un échantillon (a.) reposer à 0  C  pendant 1 heure, après quoi on le verse dans  un mélange de 50 g de bicarbonate de sodium  et 300     cm3    d'eau,

   ce qui donne un volume  de 315     cm3.    'Cette solution contient<B>570000</B>  unités d'activité par     cm3    de solution. On  laisse le second échantillon (b) reposer à la  température ambiante (25  C) pendant 1 heure  et on le traite comme (a), ce qui donne un  volume de 320     cm3.    Celui-ci contient 1,15 mil  lion d'unités d'activité par     cm3    de solution.  On chauffe le troisième échantillon (c) à  60  C pendant 1 heure et on le traite comme  précédemment, ce qui donne 325     cm3    de solu  tion. Celle-ci contient 1,56 million d'unités  d'activité par     cm3    de solution.

      On détermine     les        unités    d'activité par  essai     microbiologiqué    en utilisant. le milieu  synthétique décrit par H. B.     Sauberlich    et       Baumann    (J.     Biological        Chemistry        [1948]     176, p. 165) et l'organisme     Leuconostoc        citro-          vorum    8.081, chaque unité d'activité étant  arbitrairement prise comme équivalente à  16,6     millimierogrammes    d'une préparation      standard initiale.

   Cette unité d'activité ainsi  déterminée est approximativement égale à  deux     fois    l'unité d'activité définie par     Sauber-          lich    et     Baumann    qui     est    la quantité de ma  tière par     cm3    de milieu de culture nécessaire  pour provoquer la demi-croissance maximum  de l'organisme d'essai.    <I>Exemple 2:</I>  On mélange un échantillon de 0;50 g  d'acide     tétra    -     hydroptéroylglutamique    avec  5     cm3    de formiate de glycol, plus 0,15 g de       méthylate    de sodium et on chauffe à 155  C,  en atmosphère d'azote pendant 4 heures.

    Après     refroidissement,    on sépare par filtra  tion le solide produit qui, brut, est gris     crème     clair et on le lave à l'alcool et à l'éther. Ce  produit contient environ 320 000 unités de la  matière active par mg, déterminée par essai       microbiologique.            Exemple   <I>3:</I>  On mélange 1 g d'acide     tétra-hydro-          ptéroy1glutamique    avec 12     cms    de formiate  d'éthyle et 0,3 g de     méthylate    de sodium et  on chauffe en tube scellé en atmosphère  d'azote à 150  C pendant 4 heures. On sépare  par filtration le solide produit qui, brut, est       gris    crème clair.

   Il contient environ 200 000  unités de la matière active par milligramme  comme le détermine l'essai     microbiologique.            Exemple     On mélange 1 g d'acide     tétra-hydroptéroyl-          glutamique    avec 6     cm3    de formiate d'éthyle,  6     6m3    de glycol et 0,3 g de     méthylate    de  sodium, et on chauffe en atmosphère d'azote  en tube scellé à 150  C pendant 4 heures. On  divise en deux la     solution    brun clair limpide  résultante. On verse une fraction dans     un     mélange alcool-éther, ce qui provoque la pré  cipitation d'un solide qui, à l'état brut, est  gris clair.

   Activité: 68 500 unités par milli  gramme. On chauffe le reste pendant une  demi-heure dans 50     em3    d'alcali 0,1N, puis on  neutralise par l'acide acétique. L'activité est  de 420 000 unités par 1     cm3.       Le composé obtenu par le procédé suivant  la présente invention qui, brut, est un solide       gris    clair ou     gris    crème clair, se présente,  une fois     purifié,    sous la forme d'un solide  cristallin jaune clair. Il est stable dans la  soude caustique 0,1.N, même chauffée pendant  30 minutes à 100  C.

   En solution     aqueuse    à  pH 2, à la température. ambiante, il est ins  table et rapidement transformé en une matière  ayant la même activité biologique que l'acide       ptéroylglutamique    avec la perte d'activité  correspondante vis-à-vis de l'organisme     Leuco-          nostoc        citrovorum.    La matière active est ab  sorbée sur divers agents absorbants tels que  le charbon de bois à pH acide et le silicate de  magnésium à     pa    faiblement alcalin et on peut  utiliser ceux-ci pour purifier le produit de  réaction brut par des procédés d'adsorption       chromatographique.    En solution dans la soude  caustique 0,1N,

   la substance présente une  absorption maximum à 275 à 285'     my.    Elle  est très soluble dans l'eau à pH 3,5 à 4,0, elle  forme un sel de baryum insoluble dans l'alcool  aqueux dilué. Elle-précipite partiellement sous  forme de sel de zinc à<B>pH</B> 6,8 à -7,0.

Claims (1)

1. REVENDICATION: Procédé de préparation de l'acide 5,6,7,8 tétrahydro-10-formyl-ptéroyl-glutamique, ca ractérisé en ce qu'on traite par un agent de formylation l'acide 5,6,7,8-tétrahydro-ptéroyl- glutamique. Le produit obtenu est un solide cristallin jaune clair qui est facilement soluble dans l'eau à un pH de 3,5 à 4,0 et présente un maximum d'absorption, en solution de soude caustique 0,111Z, à 275-285 mu. Ce produit est utilisable en médecine. SOUS-REVENDICATIONS 1.

   Procédé suivant la revendication, carac térisé en ce qu'on utilise comme agent de formylation l'acide formique à une tempéra ture comprise entre 0 et 100 C. 2. Procédé suivant la revendication, carac térisé en ce qu'on utilise comme agent de formylation un formiate d'alcoyle à une tem pérature comprise entre 50 et 200 C. 3. Procédé suivant la revendication et la sous-revendication 2, caractérisé en ce que la réaction est effectuée en présence d'une subs tance basique. 4. Procédé suivant la revendication, carac térisé en ce que la réaction est effectuée en présence d'un solvant inerte.