CH400121A - Procédé de préparation de nouveaux dérivés de l'héparine - Google Patents

Description

  
 



  Procédé de préparation de nouveaux dérivés de l'héparine
 La présente invention a pour objet un procédé de préparation de   dérivés    de l'héparine appelés héparinamides, comportant notamment une proportion de 60 à 95 % des groupes   aarboxyles    amidifiés.



   Certains de ces nouveaux composés, et notamment les   N-méthyihéparinamides,    présentent des propriétés physiologiques utiles, en particulier une activité antilipémique élevée, tout en étant pratiquement exempts d'activité   anticoagulante    typique pour les composés de cette famille de corps.



   En particulier,   lle    sel de sodium du   N-méthyl-    héparinamide peut être utilise pour le traitement de l'hyperlipémie postprandiale ou chronique, de   l'hy-    percholestérolémie, de   l'athéromatose,    des stéatoses hépatiques et des néphroses lipoldiques.



   Le procédé suivant l'invention consiste à faire réagir un dérivé fonctionnel de l'héparine, soit avec l'ammoniac pour obtenir un   héparinamîde    simple, soit avec une amine primaire pour obtenir le dérivé
N-alcoylé correspondant.



   Dans un premier mode d'exécution on prépare, comme dérivé fonctionnel, un ester d'alcoyle inférieur de l'héparine en   soumettant      celle-ci,    sous forme de sel d'ammonium quaternaire à longue chaîne, à l'action d'un agent d'estérification correspondant.



     I1    est particulièrement avantageux d'utiliser, pour la réaction d'amidification, l'ester méthylique de l'héparine auquel on accède facilement en faisant réagir le   diazométhane    sur l'héparine sous forme de sel d'ammonium quaternaire à longue chaîne.



   La réaction d'amidification par l'ammoniac est de préférence effectuée dans un milieu aqueux.



   La réaction avec les amines primaires, notamment avec la méthylamine, est très avantageusement   effeotuée    dans un milieu aqueux   mais    on obtient aussi de bons résultats - comme il est montré plus loin - en opérant dans un milieu anhydre qui peut être constitué par un solvant tel que le formamide.



   On peut préparer ainsi au moyen des amines primaires telles que la méthuylamine, l'éthylamine, la propylamine, l'isopropylamine, la butylamine,
I'isobutylamine, la   ter-butylamine,    etc., les N-alcoyl   héparinamides    correspondants, à savoir: - le N-méthyl-héparinamide, -le N-éthyl-héparinamide, - le   N-propyl-héparinamide,    -le N-isopropyl-héparinamide, -le N-butyl-héparinamide, - le   N-isobutyl-hép ; arin, amide,    -le N-ter-butyl-héparinamide, etc.



   Il est avantageux de conduire les réactions d'ami  dification    sous refroidissement de préférence, à des températures comprises   entre -30    et +250 C.



   Dans le cas de la préparation du   N-méthyî-    héparinamide, une variante du procédé de l'invention consiste à préparer d'abord l'héparinamide simple et à méthyler ensuite   celui-ci,    sous forme de sel d'ammonium quaternaire à longue chaîne, à l'aide du diazométhane.



   Le degré   d'amidification    des carboxyles des produits ainsi obtenus dépend de la nature de l'amine et des conditions opératoires, en   particulier    de la concentration en amine du milieu, le taux   d'amidi-    fixation étant   généralement    plus élevé quand le milieu est plus riche en amine.



   Dans un deuxième mode d'exécution on prépare, comme dérivé fonctionnel, un   anhydride    mixte de l'héparine et de l'acide formique en faisant réagir l'héparine, sous forme de sel d'un ammonium quaternaire, à   longue    chaîne, avec un chloroformiate d'alcoyle inférieur.  



   Comme ammoniums quaternaires à longue chaîne, on emploie   avantageusemenlt    les produits suivants le chlorure de benzyldiméthyl-2-[2-(p-1,1,3,3,-tétraméthylbutylphénoxy)-éthoxy]-éthyl-ammonium, de de formule brute C27H42ClNO2,H2O et de formule développée:
EMI2.1     
 désigné ci-après par le terme commercial   hyamine   1622 ,    l'hyamine 2389 décrite à l'  Index des huiles sulfonées et détergents modernes  , de J. P-Sisley,   II,    p. 373, le    Cequartyl    BE  figurant page 287 de l'Index   susmentionné,      1'   Arquad      2C#    page 261, ou le   Zéphirol   page 286 du même Index.



   Comme   chloroformiate    on choisit, de préférence, le chloroformiate d'éthyle.



   La réaction de l'amidifioation. peut être conduite en milieu anhydre, mais elle donne aussi de très bons résultats en opérant en présence d'une faible quantité d'eau.



   Ce deuxième mode d'exécution conduit à des produits dont l'activité antilipémique est aussi élevée que celle des produits obtenus par le premier, mais dont l'activité anticoagulante est réduite de moitié par   rapport    auxdits produits.



   Les exemples suivants illustrent l'invention.



   Les températures sont indiquées en degrés centigrades.



   Exemple 1
 Préparation d'un héparinamide (sel de potassium)
 Stade A : Ester méthylique d'héparine (sel de
 potassium) a) Préparation du sel d'hyamine acide de l'héparine
 On dissout   40 g    d'héparinate de sodium, solvaté à 7,2 % dans 160 cm3 d'eau, ajoute 10cm3 d'acide formique puis   810 cm3    d'une solution à   10 0/o    d'hyamine 1622.



   Le mélange réactionnel   eslt    agité pendant quelques minutes ; on essore le produit précipité, lave à l'eau et sèche pour recueillir 86,8 g (soit 91,4 %) de sel d'hyamine acide de l'héparine. b) Estérification par le diazométhane
 30 g de sel d'hyamine acide de l'héparine sont dissous dans   300cm3    de chlorure de méthylène, on refroidit à 00 C et introduit lentement 51 cm5 d'une solution   chlorométhylénique    renfermant   14, 7 g    de diazométhane par 100cm3 et abandonne le mélange réactionnel pendant 10 minutes à 00 C. On distille ensuite le solvant sous vide, dissout le résidu dans 450 cm3 de butanol saturé d'eau et extrait la solution butanolique avec une solution à 20 % d'acétate de potassium.

   Les extraits sont versés dans l'éthanol, on abandonne une heure au repos, essore, lave le produit obtenu à l'éthanol et à l'éther et recueille   12-, 86 g    de l'ester méthylique d'héparine, sel de potassium. Le produit est   solvate    à   4,4O/o.    Il se   présente    sous forme d'un   solide    blanc, insoluble dans les solvants organiques usuels tels que l'alcool, l'éther, l'acétone, le benzène, le chloroforme et soluble dans l'eau et les alcalis dilués aqueux. Il se décompose dans les acides dilués aqueux.   [α]D20    = +   450    (c = 1    /o,    elau).



   Analyse
 C52H78O73N4S11K11 = 2705
 Calculé
C 23,08% H 2.72% N   2,O-70/o      OCH5      4,60/o   
 Trouvé
C22,8-22,9% H 3,0-2,7% N1,9% OCH3 4,4%
 Ce produit n'est pas décrit dans la littérature.



   De manière similaire, on prépare l'ester méthylique de l'héparine, sel de sodium, en utilisant une solution d'acétate de sodium à la place de la solution d'acétate de potassium pour l'extraction de la solution butanolique contenant le sel d'hyamine.



   Stade B :   Amidification   
 On sature par du gaz ammoniac, à +3 C,   800 cm3    de solution ammoniacale à 220 Bé. On ajoute sous agitation, à   + 30    C, une solution de 8 g d'ester méthylique d'héparine, sel de potassium, dans 40 cm3 d'eau distillée, sature de nouveau avec l'ammoniac puis abandonne pendant quarante-huit heures à 00 C. On chasse ensuite l'ammoniac par distillation sous vide au-dessous de 200 C.



   A la solution aqueuse résiduelle, on ajoute une solution de 16 g   d'hyamine    1622 dans 160 cm3 d'eau distillée. Le sel d'hyamine précipite, on l'essore et le lave à l'eau, puis on le dissout dans du butanol saturé d'eau et on extrait avec une solution aqueuse à   20 /o    d'acétate de potassium. On verse les extraits dans l'éthanol et essore la   substance    précipitée qu'on sèche sur anhydride phosphorique. On obtient   7,08    g de produit à taux   d'amidification    d'environ 72 % présentant les caractéristiques suivantes :   solvation:    7,75   0/o - fonction    ester: 0.  



   Analyse
 C48H69O69S11N8K11 = 2.645
 Calculé
C21,79% H2.62% N4,23% S 13,33%
 Trouvé
C22,0-22.1% H2,6% N3,5-3,6% S12.3%
Activité   physiologique:   
 Antilipémique: 1 116 U/mg, soit corrigé 136 U/mg
   Anticoagulante:      25 U/mg,    soit corrigé   30U/mg   
 Ce produit n'est pas décrit dans la littérature.



   De manière similaire, on prépare un héparinamide, sel de sodium en utilisant une solution d'acétate de sodium à la place de la solution d'acétate de potassium pour   l'extraction    de la solution butanolique contenant le sel d'hyamine.



   Exemple 2
 Préparation d'un N-méthyl-héparinamide (sel de
 sodium) en milieu anhydre
 On condense à une température comprise entre -30 et   -400    30 cm3 de monométhylamine, ajoute une solution refroidie à 00 C de 0,5 g d'ester   móthy-    lique d'héparine sel de sodium et 15 cm3 de formamide. Le mélange réactionnel est maintenu à une température comprise   entre 100    et 150 C pendant deux heures. On   chasse      ensuite    sous vide l'excès de la méthylamine, puis ajoute une solution de 15 g d'hyamine 1622 dans 100 cm3 d'eau. Après un abandon d'une nuit, on essore le sel d'hyamine qu'on introduit dans 20 cm3 de butanol saturé d'eau.

   On extrait avec une solution aqueuse à 20 % d'acétate de sodium, verse les extraits dans l'alcool et essore le N-méthyl-héparinamide qu'on lave à l'alcool et sèche sur anhydride phosphorique.



   Rendement 458 mg (soit 88    /o)    de produit solvaté à 13,1    /o.   



   Activité antilipémique ; $151 U/mg.



   Activité anticoagulante: 11 U/mg (valeurs cor
 rigées).



   Taux d'azote: 3,8% (la théorie étant de   4,410/o).   



   D'après le pourcentage d'azote, le taux d'amidification est 71,5    /o.   



   Ce produit n'est pas décrit dans la littérature.



   De manière similaire, on prépare un N-méthylhéparinamide sel de potassium en utilisant une solution d'acétate de potassium à la place de la solution d'acétate de sodium pour l'extraction de la solution butanolique contenant le sel d'hyamine.



   Exemple 3
 Préparation d'un N-méthyl-héparinamide (sel de
 sodium) en milieu aqueux
 On fait barboter la monométhylamine dans   25cm3    d'eau maintenue entre   0    et   + 50 C    jusqu'à ce que le volume atteigne 50   cm3,    ajoute 0,5 g d'ester méthylique d'héparine, sel de sodium, et agite le mélange formé pendant deux heures à + 100 C.



   On chasse ensuite la   méthylamine    sous vide, ajoute une solution de 1,5 g d'hyamine 1622 dans 100 cm3   d'eau    et   abandonne    ensuite à la température ambiante pendant une nuit. On essore, dissout le produit essoré dans 20 cm3 de butanol   saturé    d'eau et extrait avec une   solution    d'acétate de sodium. On verse les extraits dans l'alcool, essore le   N-méthyl-    héparinamide qu'on sèche sur anhydride phosphorique.



   Rendement: 478 mg de produit (soit 95,5 %) solvaté à 9,95 %.   [ai20    = + 50,70 (c =   1 0/o,    eau).



   Activité   antilipémique:    148 U/mg.



   Activité anticoagulante: 10,5 U/mg (valeurs cor
 rigées)
 Analyse: C52H77O69S11N8Na11 =   2,524.   



   Taux de soufre:   13,03    % (théorie: 13,97    /o).   



   Taux d'azote:   4,1 0/o.   



   D'après le pourcentage d'azote, le taux d'amidification est de 85    /o.   



   Exemple 4
 Préparation d'un N-méthyl-héparinamide (sel de
 potassium) par méthylation de l'héparinamide
 On dissout 2 g d'héparinamide, sel de sodium, obtenu selon l'exemple 1, dans 10   omss    d'eau, ajoute 2 cm3 d'acide   formique    puis 34 cm3 d'une solution à 10    /o    d'hyamine 1622. Le sel acide d'hyamine qui précipite est essoré et bavé à l'eau. Après séchage sur anhydride phosphorique, on le dissout dans 50 cm3 de chlorure de méthylène, puis introduit 10   om3    d'une solution de   diazométhane    à 11 g/litre.



  Le mélange réactionnel   est    abandonné pendant   quel-    ques minutes puis concentré sous vide. Le résidu est repris dans 75 cm3 de butanol saturé d'eau et extrait avec une solution aqueuse à 20% d'acétate de potassium. On verse les extraits dans l'alcool, essore le précipité qu'on lave et sèche pour recueillir 1,7 g de produit solvaté à   7,1 0/o    et renfermant 5,05 % d'acétate de potassium.



   Pourcentage d'azote : 3,5-3,6 % (corrigé, théo
 rie: 4,23    /o).   



   Activité   antilipémique:    125 U/mg.



   Activité anticoagulante : 8,9 U/mg (valeurs   cor-   
 rigées).



   Le pourcentage d'azote confirme que le taux   d'amidification    du produit de départ de 72 % est resté constant dans le produit   obtenu.   



   De manière similaire, on prépare un N-méthylhéparinamide sel de sodium en utilisant une solution d'acétate de sodium à la place de la. solution d'acé- tate de   potassium,    pour l'extraction de la solution butanolique contenant le sel d'hyamine.



   Exemple 5
 Préparation d'un N-méthyl-héparinamide
 A une solution refroidie à une température comprise   entre    0 et   +20    C, contenant 0,3 % d'eau, de 6 g de sel neutre d'hyamine de l'héparine préparée selon le brevet suisse NO 380878 dans 120cm3 de  tétrahydrofuran, on ajoute 2   cm    de chloroformiate d'éthyle. On agite quinze minutes à une température comprise entre 00 et +20 C ; puis on fait barboter de la monométhylamine de façon à introduire 4 litres de gaz en quinze minutes en refroidissant pour ne jamais dépasser +70 C. On agite encore pendant quarante-cinq   minutes    à une température comprise entre 00 et +20 C. On distille à sec sous vide à température ambiante. Le résidu est dissous dans 80 cm3 de butaol n saturé d'eau.

   On effectue 4 extractions successives avec   6cm3    de solution aqueuse à 20    /o    d'acétate de sodium. Ces extraits réunis sont traités par 43   cmss    d'une solution d'hyamine 1622 à 10    lo.    Après repos d'une heure on essore, lave à l'eau, reprend par 60   Oms    de butanol saturé d'eau, effectue 3 extractions par 6 cm3 de solution aqueuse d'acétate de sodium à 20 % à chaque fois.



   Le produit obtenu est blanc, insoluble dans l'alcool et l'éther, soluble   dans l'eau    et les acides ou alcalis dilués aqueux.



     [a] D    =+ 55 à 580 (c = 1    /o,    eau).



   Taux   d'amidification:    90 0/o.



   Solvatation: 7,7    /o.   



   Soufre: 13,75 % (la théorie étant de   13,98).   



   Activité antilipémique : 179 unités/g.



   Activité anticoagulante: 4,1 unités/mg.
  

Claims (1)

1. REVENDICATION Procédé de préparation de dérivés de l'héparine appelés héparinamides, caractérisé en ce que l'on fait réagir un dérivé fonctionnel de l'héparine, soit avec l'ammoniac pour obtenir un héparinamîde simple, soit avec une amine primaire pour obtenir le dérivé N-alcoylé correspondant.

   SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce qu'on emploie, comme amine, la méthylamine.

   2. Procédé suivant la revendication caractérisé en ce que l'on fait réagir un anhydride mixte de l'héparine avec de la méthylamine, dans le tétrahydrofurane en présence d'une faible quantité d'eau.

   3. Procédé suivant la revendication, dans lequel on obtient des héparinamides simples, oaractérisé en ce que l'on fait réagir le diazométhane avec lesdits héparinamides simples sous forme de sels d'ammonium quaternaire à longue chaîne pour obtenir les dérivés N-méthylés.