DD285114A5 - Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper gegen die humane cu/zn-superoxiddismutase (cu/zn-sod) - Google Patents
Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper gegen die humane cu/zn-superoxiddismutase (cu/zn-sod) Download PDFInfo
- Publication number
- DD285114A5 DD285114A5 DD32978589A DD32978589A DD285114A5 DD 285114 A5 DD285114 A5 DD 285114A5 DD 32978589 A DD32978589 A DD 32978589A DD 32978589 A DD32978589 A DD 32978589A DD 285114 A5 DD285114 A5 DD 285114A5
- Authority
- DD
- German Democratic Republic
- Prior art keywords
- sod
- human
- monoclonal antibodies
- mice
- cells
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 title claims abstract 5
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 title claims abstract 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 26
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims abstract description 11
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 9
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims abstract description 8
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims abstract description 7
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 claims description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 2
- 201000010374 Down Syndrome Diseases 0.000 claims 3
- 206010044688 Trisomy 21 Diseases 0.000 claims 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims 2
- 241000233756 Fabriciana elisa Species 0.000 claims 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims 1
- 208000007452 Plasmacytoma Diseases 0.000 claims 1
- 101710123661 Venom allergen 5 Proteins 0.000 claims 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 claims 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 claims 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 claims 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims 1
- 238000011246 intracellular protein detection Methods 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 claims 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims 1
- 238000003793 prenatal diagnosis Methods 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 claims 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 claims 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 4
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000020560 abdominal swelling Diseases 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 238000012606 in vitro cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung monoklonaler Antikoerper gegen Epitope der humanen Cu/Zn-Superoxiddismutase (Cu/Zn-SOD). Durch Immunisierung von Maeusen mit Rekombinanten-Cu/Zn-SOD und Immortalisierung ihrer Milzlymphozyten mit einer murinen Myelomzellinie werden die Hybridomzellinien H-CB-SOD1 bis H-CB-SOD11 (ZIM 0384 bis 0394) und daraus die entsprechenden murinen monoklonalen Antikoerper CB-SOD1 bis CB-SOD11 erhalten. Das Anwendungsgebiet der Erfindung ist die medizinische Diagnostik.{Antikoerper; monoklonale Antikoerper; Epitope; Antigen; Human-Cu/Zn-Superoxiddismutase; Cu/Zn-SOD; Immunisierung; Maeuse; Hybridzellen; Hybridomzellinien; Medizin; Diagnostik}
Description
50μ9 des gereinigten Rekombinanten-Cu/Zn-SOD-Materials in komplettem Freundschen Adjuvons intraperitoneal über einen Zeitraum von 8 bis 12 Monaten appliziert bekamen. Die letzte Immunisierung erfolgte erfindungsgemäß mit 100-150μρ des Antigens, in Phosphatpuffer intravenös. Aus den Milzen derart hyperimmunisierter Mäuse wurde 5 Tage nach der letzten Immunisierung durch Gewebe-Homogenisierung eine Einzel-Zell-Suspension hergestellt.
Als Fusionspartner für diese Zellen wurden Maus-Myelomzellen der Linie P3X63 Ag8/653 (J. KEARNEY et al., J. Immunol. 123, 1979,548) verwendet, die in RPM11640 Zellzuchtmedium, ergänzt mit 10% fetalem Kälberst rum (FKS), kultiviert wurden. Nach Mischen der Zellsuspensionen (Milzlymphozyten:Myelomzellen im Verhältnis 5:1) und ihrer Sedimentation erfolgte die Zellfusion durch PEG (50%) in Gegenwart von DMSO (6%). Anschließend wurden die Zellen in Subkulturen (mehrere Hundert pro Fusion zu je 200μΙ Volumen) aufgeteilt und in einem HAT-Selektionsmedium (Hypoxanthin, Aminopterin, Thymidin; LITTLEFIELD, Science, 145,1964,709) kultiviert. Damit konnten nicht fusionierte Zellen der permanenten Myelomlinie eliminiert und, erfindungsgemäß, Hybridzellen selektioniert werden, die Antikörper gegen humane Cu/Zn-SOD produzieren. Die Detektion spezifischer Zellkulturen erfolgte im ELISA. Primärzellinien mit spezifischer Antikörper-Produktion wurden nach dem Grenzverdünnungsprinzip (CTASWELL; J. Immunol. 126,1981,1614) kloniert und subkloniert, bis mit statistischer Sicherheit Hybridoma erhalten wurden, die äußerst stabil und mit bisher nicht beschriebener, hoher Effizienz monoklonale Antikörper gegen humane Cu/Zn-SOD sezernieren. Diese Hybridoma wurden als H-CB-SOD bezeichnet. Etabliert wurden die Hybridoma-Klone H-CB-SOD-1 bis H-CB-SOD-11. Diese 11 Hybridoma sind in der Hinterlegungsstelle des Zentralinstitutes für Molekularbiologie der AdW der DDR, Berlin-Buch, unter den Nummern ZIM-0384 bis ZIM-0394 registriert, Bei den beschriebenen Hybridoma handelt es sich um Zellinien mit hoher Produktivität (nur wenige vergleichbare Daten aus dem internationalen Schrifttum sind bekannt). Die Hybridomzellkulturen eignen sich für die Massenproduktion von mAk in vitro und in vivo.
Erstmalig ist es gelungen, in den beschriebenen Hybridomalinien mAk zu produzieren, die verschiedene Epitope der humanen Cu/Zn-SOD erkennen. Die überraschend hohe Antigen-Bindungsaffinität erlaubt den Einsatz der mAk zu diagnostischen und biotechnologischen Zwecken.
Es liegen experimentelle Erfahrungen bei der Bearbeitung der Hybridoma im Airlift-Bioreaktor (Kulturvolumen 501) in vitro sowie der Ascitesproduktion in Pristan behandelten Balb/c-Mäusen in vivo vor. Auf diese Weise wurden aus den beschriebenen Hybridomkulturen die monoklonalen Antikörper CB-SOD1 bis CB-SOD11 in großen Mengen gewonnen. Durch verschiedene Verfahren lassen sich die mAk bis zu einem hohen Reinheitsgrad anreichern. Für die Entwicklung bestimmter Testverfahren können die Ak mit Enzymen (z. B. Peroxidase) markiert werden. Sie können außerdem zur Anwendung bei Trennverfahren (positive Affinitätschromatographie) an bestimmte Trägermaterialien gekoppelt werden.
Ausführungsbeispiele
Über einen Zeitraum von 6 Monaten werden 5 Mäuse mit jeweils 50 pm gereinigter Rekombinaten-Cu/Zn-SOD (GRÜNTHAL-AG) in komplettem Freundschen Adjuvans immunisiert. Die Boosterungen erfolgen alle 6 Wochen. Nach der letzten Immunisierung mit 150 ..g Antigen intravenös werden pro Tier etwa 2 x 108 Milzzellen isoliert. Diese werden durch Polyethylengtykol 1 500 (unter Zusatz von 6% DMSO) mit 2 χ 107Myelomzellen P3X63Ag8.653 fusioniert. Nach entsprechenden Waschschritten werden die Zellen in 96-well-Flachboden-Zellkulturplatten mit 105 Milzzellen in 150μΙ pro well ausplattiert. Als Zellzuchtmedium wird RPM11640, ergänzt durch 10% hitzeinaktiviertes FKS verwendet. Am nächsten Tag werden pro well 50μΙ 4fach konzentriertes HAT-Selektionsmedium zugesetzt. Nach etwa 14 Tagen werden die Primärkulturen mit einem spezifischen ELISA hinsichtlich der Produktion spezifischer Antikörper gegen humane Cu/Zn-SOD geprüft. Nach dem angegebenen Verfahren können bis zu 20% der Primärkulturen spezifische Antikörper produzieren. Die positiven Primärkulturen werden auf Maus-Peritonealmakrophagen (104 pro well) nach dem Grenzverdünnungsverfahren kloniert und rekloniert. Auf diese Weise werden monoklonale Zellinien mit spezifischer Antikörperproduktion gegen humane Cu/Zn-SOD erhalten.
Die klonierten Zellinien mit spezifischer Antikörperproduktion gegen humane Cu/Zn-SOD werden in RPM11640 Kulturmedium, ergänzt durch 10% fetales Kälberserum, gezüchtet in einer feuchten Atmosphäre mit 5% COi-Anteil. Durch schrittweise Adaptation lassen sich diese Zellen auch in Medien mit 2-5% FKS-Anteil züchten. Die Zellen werden in Zellkulturflaschen vermehrt. Mit Verdünnungsraten von bis zu 1:10 kann das Kulturvolumen expandiert werden. Die Massenproduktion der Antikörper erfolgt in Rollerflaschen und anschließend im Airlift-Bioreaktor mit 50 Litern Volumen. Eine Beschreibung der In-vitro-Zellkultureigenschaften der Hybridoma erfolgt in Tabelle 1.
In Zellkulturflaschen (Volumen 275ml; NUNCLON, Kamstrup, Dänemark) werden die monoklonalen Hybridoma auf eine Zellmenge von 107-2,5 χ 107 gezüchtet. Die Zellen werden abzentrifugiert und in Phosphat gepufferter isotonischer Kochsalzlösung resuspendiert. Je 1 ml Suspension mit einer bestimmten (optimierten) Zellzahl wird Balb/c-Mäusen intraperitoneal appliziert, die 8 Tage zuvor mit 1 ml Pristan behandelt worden waren. Nach 5-14 Tagen zeigt die Bauchschwellung den Beginn der Ascitesproduktion. Die Hybridomklone unterscheiden sich hinsichtlich optimaler Bedingungen und Effektivität in der In-vivo-Gewinnung von mAk gegen humane Cu/Zn-SOD (Tabelle 2). Die Reinigung der monoklonalen Antikörper erfolgt nach bekannten Verfahren.
Nach dem beschriebenen Schema werden Hybridomzellinien mit Antikörperproduktion gegen mindestens 3 verschiedene Epitope der Cu/Zn-SOD gewonnen, die mit CB-SOD-I bis CB-SOD-11 bezeichnet werden. Die Antikörper reagieren mit hoher Affinität mit den entsprechenden bpitopen auf dem Molekül der humanen Cu/Zn-SOD.
Tabelle 1 Maus-Hybridorna mit Antikörperproduktion gegenhumane Cu/Zn-SOD.
Hybridom Verdopplungszeit nAk-Produktion in vitro
(Std.) Mgper24Std.per10*
Zellen
154 133
80
34
62 168 141
Tabelle 2 Produktion muriner monoklonaler Antikörper gegen humane Cu/Zn-SOD in vivo (Ascitesflüssigkeit)
| H-CB-SOD1 | 15 |
| H-CB-SOD2 | 18 |
| H-CB-SOD3 | 22 |
| H-CB-SOD4 | 28 |
| H-CB-SOD5 | 28 |
| H-CB-SOD10 | 36 |
| H-CB-SOD11 | 34 |
Hybridom Ig-Konzentration in Ascites-
Flüssigkeit (mg/ml)
H-CB-SOD1 50
H-CB-SOD2 20
H-CB-SOD3 40
H-CB-SOD4 12
H-CB-SOD5 30
H-CB-SOD10 10
H-CB-SOD11 20
Tabelle 3 Murine monoklonale Antikörper gegen humane Cu/Zn-SOD.
Antikörper Ig-Subklasse Bindungsaffinität (l/Mol)
CB-3OD1 IgGI 1,5 χ 1010
CB-SOD2 IgGI 4,7x10'°
CB-SOD5 IgGI 1,2 x1010
CB-SOD11 IgGI 1,0x10t0
Claims (2)
1. Verfahren zur Herstellung monoklonaler Antikörper, die verschiedene Epitope der humanen Cu/Zn-Superoxiddismutase (Cu/Zn-SOD) mit unterschiedlicher Bindungsaffinität erkennen, durch Immunisierung von Balb/c-Mäusen mit Rekombinanten-Cu/Zn-SOD und Immortalisierung von Milzlymphozyten mit einer murinen Myelomzellinie,"dadurch gekennzeichnet, daß daraus die Hybridomzellinien H-CB-SOD1 (ZIM0384) bis H-CB-SOD11 (ZIM 0394) selektiert, zur Züchtung eingesetzt und aus dem zellfreien Überstand die moncklonalen Antikörper CB-SOD1 bis CB-SOD11 isoliert werden.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Isolierung der Milzlymphozyten erfolgt, nachdem als Antigen gereinigte Rekombinanten-Cu/Zn-SOD derart verwendet wird, daß alle 6 Wochen über einen Zeitraum von 8 bis 12 Monaten Boosterungen durch Gabe von 50pg Antigen erfolgen und die letzte Immunisierung, die zu einer Hyperimmunisierung führt, mit 100 bis 150|ig Antigen 5 Tage vor Entnahme der Milzlymphozyton vorgenommen wird.
Anwendungsgebiet der Erfindung
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung monoklonaler Antikörper (mAk) gegen humane Cu/Zn-Superoxiddismutase (Cu/Zn-SOD). Anwendungsbeispiele bestehen beim Einsatz der mAk zum Nachweis von Cu/Zn-SOD in menschlichen Körperflüssigkeiten (z. B. pränatale Diagnostik des M. Langdon-Down, der Trisomie 21) sowie der Möglichkeit der Reinigung von humaner Cu/Zn-SOD durch positive Affinitätschromatographie. Das Anwendungsgebiet der Erfindung ist die medizinische Diagnostik.
Charakteristik des bekannten Standes der Technik
Die Herstellung muriner monoklonaler Antikörper (mAk) ist als technisches Problem gelöst. Das Prinzip wurde erstmalig durch G. KÖHLER und C. MILSTEIN publiziert (NATURE 1975,256,495), die Ak-bildtnde Zellen aus der Milz immunisierter Mäuse mit Zellen einer permanent wachsenden Plasmozytomzellinie hybridisierten, Ak-produzierende Hybridoma erhielten und nach entsprechenden Klonierungsschritten monoklonal (von einem Zell-Klon gebildete) Ak erhielten. Dieses bictechnologische Prinzip wird (modifiziert) bis heute breit angewendet. Auch die Anwendung des Verfahrens auf die Herstellun j von murinen mAk gegen humane Cu/Zn-SOD ist bekannt (T. Porstmann, R. Wietschke, H. Schmechta, R. Grunow, B. Porstmann, R. Bleiber, M.Pergande, S.Stachat, R. von Baehr, Clin. Chim. Acta 171 (19881,1-10; A.A.Khan, R.E.Warrington b'P 279705). Die Cu/Zn-SOD schützt Zellen vor der Akkumulation toxischer Superoxidradikale (0 2~), in dem sie die Reaktion 02" + 02" + 2H* ->H202 + 02 katalysiert. Damit stellt die Cu/Zn-SOD ein Markerenzym für entzündliche Prozesse dar, an denen sie regulativ als Zellschutz mitwirkt (J. FRIDOVICH: in Advances in Enzymology, ed. H. Rister, Vol.41,39-97,1974). Der Nachweis von Cu/Zn-SOD bei entzündlichen Reaktionen (z. B. Rheumatoider Arthritis) ist von diagnostischer Wertigkeit (H. RISTER and K.BAUERMEISTER; Klin. Wochenschr.60,1982,561-565). Von besonderer klinisch-diagnostischer Bedeutung jedoch ist die Lokalisation des Gens für Cu/Zn-SOD auf Chromosom 21, das beim M. Langdon-Down (Trisomie 21) in den Körperzellen dreimal vorliegt. Die somit verstärkte Genexpression führt zur Erhöhung der intrazellulären Cu/Zn-SOD-Konzentration und wird zum diagnostischen Nachweis der Erkrankung genutzt (P.SINET; in: Altzheimer's Disease, Down's Syndrome and Aging. Ann. NY. Acad. Sei. 396,83-94, New York, USA).
Zum Nachweis humaner Cu/Zn-SOD wurden bisher u.a. ELISA-Techniken genutzt, die ausschließlich auf polyklonalen anti-Cu/Zn-SOD-Antiseren basieren (S.IIZUKA,N.TANIGUCHI,A.MAKITA; JNCI. 72,5,1984,1043-1048). Diese Testsysteme sind schwer zu standardisieren und gewährleisten nicht die geforderte Sensitivität, wie sie zum Beispiel für den intrazellulären Nachweis von humaner Cu/Zn-SOD in intrauterinem Material gefordert wird.
Ziel der Erfindung
Es ist das Ziel der Erfindung, monoklonale Antikörper gegen humane Cu/Zn-SOD zum Einsatz für diagnostische Zwecke zu entwickeln.
Darlegung des Wesens der Erfindung
Die Erfindung besteht in der Entwicklung eines Verfahrens zur effektiven Erzeugung von murinen Hybridomzellinien, von denen in anschließenden methodischen Schritten monoklonale Antikörper gegen Cu/Zn-SOD isoliert werden können. Die Hybridomzellen sollen im optimalen ökonomischen Aufwand/Nutzen-Verhältnis in vitro (bis zum Large-Scaling im Bioreaktor) und in vivo (Ascites-Flüssigkeit der Maus) kultivierbar sein und durch hohe Antikörper-Sekretionsleistung die Reinigung begünstigen.
Die Aufgabe wurde derart gelöst, daß zunächst Mäuse vom Stamm Balb/c mit einem gereinigten Rekombinanten-Präparat der humanen Cu/Zn-SOD nach einem bestimmten, der Erfindung gemäßen, Schema immunisiert werden. Als vorteilhaft erwies sich die Verwendung von 8 bis 10 Wochen alten weiblichen Balb/c-Mäusen. Die Immunisierung erfolgte durch mehrmalige Applikation des Antigens. Die besten Ergebnisse wurden erzielt, wenn die Mäuse zunächst etwa alle 6 Wochen eine Dosis von
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD32978589A DD285114A5 (de) | 1989-06-20 | 1989-06-20 | Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper gegen die humane cu/zn-superoxiddismutase (cu/zn-sod) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD32978589A DD285114A5 (de) | 1989-06-20 | 1989-06-20 | Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper gegen die humane cu/zn-superoxiddismutase (cu/zn-sod) |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD285114A5 true DD285114A5 (de) | 1990-12-05 |
Family
ID=5610063
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DD32978589A DD285114A5 (de) | 1989-06-20 | 1989-06-20 | Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper gegen die humane cu/zn-superoxiddismutase (cu/zn-sod) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD285114A5 (de) |
-
1989
- 1989-06-20 DD DD32978589A patent/DD285114A5/de unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4472500A (en) | Rat myeloma cell lines | |
| JP2648419B2 (ja) | モノクローナル抗体混合物 | |
| DE3177290T2 (de) | Monoklonale antikoerper gegen hepatitis-b-virus. | |
| DD285114A5 (de) | Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper gegen die humane cu/zn-superoxiddismutase (cu/zn-sod) | |
| DD285114B5 (de) | Verfahren zur Herstellung monoklonaler Antikoerper gegen die humane Cu/Zn-Superoxiddismutase (Cu/Zn-SOD) | |
| DE3851855T2 (de) | Gegen die Gamma-Kette des T-Zell-Rezeptors gerichteter monoklonaler Antikörper. | |
| DE3888924T2 (de) | Monoklonale Antikörper gegen Anthracycline. | |
| JP3043023B2 (ja) | ハイブリドーマ | |
| DD280786A1 (de) | Verfahren zur Herstellung monoklonaler Antikoerper gegen das Gruppenpolysaccharid des Streptococcus agalactiae | |
| DD280785B5 (de) | Verfahren zur Herstellung monoklonaler Antikoerper gegen das Gruppenpolysaccharid der B-Streptokokken | |
| Askonas | Immunoglobulin formation in B lymphoid cells. | |
| CA1213841A (en) | Hybrid cell line for producing complement-fixing monoclonal antibody to mouse i-a antigen and to i-a analogous antigens on human and other animal lymphocytes, antibody and methods | |
| DD287953A5 (de) | Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper gegen das kapselpolysaccharid des haemophilus influencae typ b | |
| DD296101A5 (de) | Verfahren zur herstellung eines monoklonalen antikoerpers gegen 5-brom-substituiertes uridin | |
| GB2079313A (en) | Improvements in or relating to rat myeloma cell lines | |
| WO1991009873A1 (de) | T-zellen-oberflächenproteine | |
| WO1992004463A1 (de) | Cd58 spezifischer monoklonaler antikörper und dessen verwendung | |
| DD280785A1 (de) | Verfahren zur Herstellung monoklonaler Antikörper gegen dasGruppenpolysaccharid der B-Streptokokken | |
| US6013518A (en) | Fused cell line and method of obtaining the same | |
| DD287954A5 (de) | Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper gegen tetanustoxin | |
| DD271916A1 (de) | Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper gegen hbsag | |
| DD292021A5 (de) | Verfahren zur Herstellung humaner monoklonaler Antikörper gegenAlpha-Hämolysin von Staphylococcus aureus | |
| Farnsworth | Immunoglobulin formation in B lymphoid cells | |
| DD265910A1 (de) | Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper gegen das huellprotein des rinderleukaemievirus | |
| DD255001A1 (de) | Verfahren zur gewinnung eines monoklonalen antikoerpers gegen das protein p24 des rinderleukaemievirus (blv) |