ES2243598T3

ES2243598T3 - Nuevos derivados de pirazolopiridina sustituidos con piridina.

Info

Publication number: ES2243598T3
Application number: ES01997489T
Authority: ES
Inventors: Johannes-Peter Stasch; Achim Feurer; Stefan Weigand; Elke Stahl; Dietmar Flubacher; Cristina Alonso-Alija; Frank Wunder; Dieter Lang; Klaus Dembowsky; Alexander Straub; Elisabeth Perzborn
Original assignee: Bayer Healthcare AG
Current assignee: Bayer AG
Priority date: 2000-11-22
Filing date: 2001-11-09
Publication date: 2005-12-01
Anticipated expiration: 2021-11-09
Also published as: JP4246991B2; EP1343786A1; CZ294648B6; SI1343786T1; MXPA03004500A; US6693102B2; UY27029A1; AR031176A1; DK1343786T3; MA26060A1; IL155974A0; BG107804A; HUP0303283A2; SK5912003A3; PT1343786E; PL366090A1; BR0115477A; NO20032299L; US20020173514A1; AU2002220692A1

Abstract

Compuestos de fórmula (I) en la que R1 representa 4-piridinilo o 3-piridinilo; R2 representa H, NH2 o halógeno; así como sus sales e hidratos.

Description

Nuevos derivados de pirazolopiridina sustituidos con piridina.

La presente invención se refiere a nuevos compuestos químicos que estimulan la guanilatociclasa soluble, a su preparación y a su uso como medicamento, en especial como medicamento para el tratamiento de enfermedades cardiocirculatorias.

Uno de los sistemas de transducción celulares más importantes en células de mamíferos es el monofosfato de guanosina cíclico (GMPc). Junto con el monóxido de nitrógeno (NO), que es liberado por el endotelio y transmite señales hormonales y mecánicas, forma el sistema NO/GPMc. Las guanilatociclasas catalizan la biosíntesis del GMPc a partir del trifosfato de guanosina (GTP). Los representantes conocidos hasta ahora de esta familia se pueden dividir en dos grupos, tanto en función de las características estructurales como en función del tipo de ligandos: Las guanilatociclasas particulares estimulables por péptidos natriuréticos y las guanilatociclasas solubles estimulables por NO. Las guanilatociclasas solubles constan de dos subunidades y contienen muy probablemente un hemo por heterodímero, que es una parte del centro regulador. Éste tiene una importancia crucial para el mecanismo de activación. El NO puede unirse al átomo de hierro del hemo y aumentar así notablemente la actividad de la enzima. Las preparaciones carentes de hemo, por el contrario, no se pueden estimular con NO. También el CO es capaz de atacar el átomo de hierro central del hemo, siendo la estimulación con CO claramente menor que la obtenida con NO.

Debido a la formación de GMPc y a la regulación, resultante de ello, de fosfodiesterasas, canales iónicos y proteinquinasas, la guanilatociclasa desempeña un papel decisivo en diversos procesos fisiológicos, en particular en la relajación y proliferación de las células de músculo liso, en la agregación y adhesión de plaquetas y en la transducción de señales neuronales, así como en enfermedades basadas en un trastorno de los procesos antes mencionados. En estados fisiopatológicos puede estar suprimido el sistema NO/GMPc, lo que puede conducir, por ejemplo, a hipertensión arterial, activación de plaquetas, mayor proliferación celular, disfunción endotelial, aterosclerosis, angina de pecho, insuficiencia cardiaca, trombosis, ataque de apoplejía e infarto de miocardio.

La posibilidad de un tratamiento para este tipo de enfermedades independiente de NO y con la finalidad de influir sobre la vía de señalización de GMPc en organismos, constituye una estrategia muy prometedora debido a la alta eficacia y los pocos efectos adversos que son de esperar.

Para la estimulación terapéutica de la guanilatociclasa soluble se han usado hasta ahora exclusivamente compuestos tales como nitratos orgánicos, cuyo efecto se basa en el NO. Éste se forma por bioconversión y activa la guanilatociclasa soluble mediante ataques al átomo de hierro central del hemo. Además de los efectos adversos, el desarrollo de tolerancia constituye uno de los inconvenientes decisivos de esta forma de tratamiento.

En los últimos años se han descrito algunas sustancias que estimulan la guanilatociclasa directamente, es decir, sin la liberación previa del NO, como, por ejemplo, el 3-(5'-hidroximetil-2'-furil)-1-bencilindazol (YC-1, Wu y col., Blood 84 (1994), 4226; Mülsch y col., Br. J. Pharmacol. 120 (1997), 681), ácidos grasos (Goldberg y col., J. Biol. Chem. 252 (1977), 1279), el hexafluorofosfato de difenilyodonio (Pettibone y col., Eur. J. Pharmacol. 116 (1985), 307), la isoliquiritigenina (Yu y col., Brit. J. Pharmacol. 114 (1995), 1587), así como diversos derivados de pirazol sustituidos (documento WO 98/16223).

En los documentos WO 98/16507, WO 98/23619, WO 00/06567, WO 00/06568, WO 00/06569 y WO 00/21954 se describen asimismo derivados de pirazolopiridina como estimuladores de la guanilatociclasa soluble. En estas solicitudes de patente también se describen pirazolopiridinas que presentan un resto pirimidino en la posición 3. Este tipo de compuestos presentan una muy alta actividad in vitro respecto a la estimulación de la guanilatociclasa soluble. Sin embargo, se observó que estos compuestos presentan algunos inconvenientes en cuanto a sus propiedades in vivo, como, por ejemplo, su comportamiento en el hígado, su comportamiento farmacocinético, su relación dosis/efecto o su ruta de metabolización.

Por lo tanto, el objetivo de la presente invención era proporcionar derivados de pirazolopiridina adicionales que actuaran como estimuladores de la guanilatociclasa soluble pero no presentaran los inconvenientes antes expuestos de los compuestos del estado de la técnica.

Este objetivo se alcanza de acuerdo con la presente invención mediante los compuestos según la reivindicación 1. Estos nuevos derivados de pirazolopiridina se caracterizan por un resto pirimidino en la posición 3 que presenta un determinado patrón de sustitución, a saber, un resto piridino en la posición 5 del anillo de pirimidina, así como un grupo amino en la posición 4 del anillo de pirimidina.

En concreto, la presente invención se refiere a compuestos de fórmula (I)

1

en la que

R^{1}: representa 4-piridinilo o 3-piridinilo;

R^{2}: representa H, NH_{2} o halógeno;

así como sus sales, isómeros e hidratos.

Según una forma de realización alternativa, la presente invención se refiere a compuestos de fórmula (I) en la que

R^{1}: representa 4-piridinilo o 3-piridinilo;

R^{2}: representa H, NH_{2} o Cl;

así como sus sales e hidratos.

Según otra forma de realización alternativa, la presente invención se refiere a compuestos de fórmula (I) en la que

R^{1}: representa 4-piridinilo o 3-piridinilo;

R^{2}: representa H;

así como sus sales e hidratos.

Los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con la invención también pueden estar presentes en forma de sus sales. En general, son de mencionar las sales con bases o ácidos orgánicos o inorgánicos.

En el marco de la presente invención se prefieren las sales fisiológicamente inocuas. Las sales fisiológicamente inocuas del compuesto de acuerdo con la invención pueden ser sales de las sustancias de acuerdo con la invención con ácidos minerales, ácidos carboxílicos o ácidos sulfónicos. Se prefieren especialmente, por ejemplo, las sales con ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido naftalenodisulfónico, ácido acético, ácido propiónico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido fumárico, ácido maleico o ácido benzoico.

Las sales fisiológicamente inocuas también pueden ser sales de metal o de amonio del compuesto de acuerdo con la invención que posean un grupo carboxilo libre. Se prefieren especialmente, por ejemplo, las sales de sodio, de potasio, de magnesio o de calcio, así como las sales de amonio que derivan de amoniaco o aminas orgánicas, como, por ejemplo, etilamina, di- o trietilamina, di- o trietanolamina, diciclohexilamina, dimetilaminoetanol, arginina, lisina o etilendiamina.

Los compuestos de acuerdo con la invención pueden estar presentes en sus formas tautoméricas. Esto es conocido para el experto, y las formas de este tipo están incluidas igualmente dentro del alcance de la invención.

Asimismo, los compuestos de acuerdo con la invención pueden existir en forma de sus hidratos posibles.

Halógeno representa en el marco de la invención flúor, cloro, bromo y yodo.

Los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con la invención se pueden preparar mediante la transformación del compuesto de fórmula (II)

2

A): con un compuesto de fórmula (III)

3

en la que

R^{1}: es como se definió anteriormente;

en el compuesto de fórmula (I), dado el caso en un disolvente orgánico y bajo calentamiento;

o

B): con un compuesto de fórmula (IV)

4

en la que

R^{1}: es como se definió anteriormente;

en un disolvente orgánico y bajo calentamiento para dar los compuestos de fórmula (V)

5

en la que

R^{1}: es como se definió anteriormente;

a continuación con un agente de halogenación para dar los compuestos de fórmula (VI)

6

en la que

R^{1}: es como se definió anteriormente;

R^{2}: representa halógeno;

así como, finalmente, con una solución acuosa de amoniaco bajo calentamiento y presión elevada.

El compuesto de fórmula (II) se puede preparar según el siguiente esquema de reacciones:

7

El compuesto de fórmula (II) se puede obtener en una síntesis de varios pasos a partir de la sal sódica del éster etílico del ácido cianopirúvico, conocida en la bibliografía (Borsche y Manteuffel, Liebigs Ann. Chem. 1934, 512, 97). Mediante su transformación con 2-fluorobencilhidracina bajo calentamiento y atmósfera de gas protector en un disolvente inerte, tal como dioxano, se obtiene el éster etílico del ácido 5-amino-1-(2-fluorobencil)-pirazol-3-carboxílico, que se cicla por transformación con dimetilaminoacroleína en medio ácido bajo atmósfera de gas protector y calentamiento para dar el derivado de piridina correspondiente. Este derivado de piridina, el éster etílico del ácido 1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboxílico, se transforma en el compuesto de fórmula (II) mediante una secuencia de varios pasos, formada por la transformación del éster con amoniaco en la amida correspondiente, la deshidratación con un agente deshidratante, tal como anhídrido del ácido trifluoroacético, para dar el derivado nitrilo correspondiente, la transformación del derivado nitrilo con etilato sódico y la reacción final con cloruro de amonio.

Los compuestos de fórmula (III) se pueden preparar a partir de los compuestos t-butoxibis(dimetilamino)metano y 4-piridilacetonitrilo o 3-piridilacetonitrilo, que se pueden adquirir en el mercado (por ejemplo, de Aldrich), por transformación de estos reactantes preferentemente en cantidades equimolares, preferentemente a presión normal y bajo agitación de la solución de reacción durante varias horas, por ejemplo durante 2 horas, a temperatura aumentada, por ejemplo de 60 a 130ºC, preferentemente de 80 a 120ºC, en especial a 100ºC.

La transformación de los compuestos de las fórmulas (II) y (III) en los compuestos de fórmula (I) se puede realizar en un disolvente orgánico, por ejemplo en un hidrocarburo, preferentemente en un hidrocarburo aromático y, en especial, en xileno, usando los reactantes en cantidades equimolares o usando el compuesto de fórmula (III) en un ligero exceso, preferentemente en presencia de 0,1 a 1 equivalentes, preferentemente de 0,3 equivalentes de un ácido de Lewis como, por ejemplo, BF_{3}Et_{2}O o trifluorosulfonato de trimetilsililo (MSOTf), y preferentemente a presión normal y bajo agitación de la solución de reacción durante varias horas, por ejemplo durante 12 horas, a temperatura aumentada, por ejemplo de 80 a 160ºC, preferentemente de 100 a 150ºC, en especial a 140ºC.

Los compuestos de fórmula (IV) se pueden adquirir en el mercado (por ejemplo, de Mercachem) o se pueden sintetizar de manera conocida para el experto.

La transformación de los compuestos de las fórmulas (II) y (IV) en los compuestos de fórmula (V) se puede realizar en un disolvente orgánico, por ejemplo en un hidrocarburo, preferentemente en un hidrocarburo aromático y, en especial, en tolueno, usando los reactantes en cantidades equimolares o usando el compuesto de fórmula (IV) en un ligero exceso, preferentemente a presión normal y bajo agitación de la solución de reacción durante varias horas, por ejemplo durante 12 horas, a temperatura aumentada, por ejemplo de 80 a 160ºC, preferentemente de 100 a 150ºC, en especial a 140ºC.

La transformación de los compuestos de fórmula (V) en los compuestos de fórmula (VI) se puede realizar por reacción de los compuestos de fórmula (V) con un agente de halogenación, dado el caso en un disolvente orgánico usado convencionalmente para este tipo de reacciones, como, por ejemplo, dimetilformamida (DMF), y preferentemente a presión normal y bajo agitación de la solución de reacción durante varias horas, por ejemplo durante 3 horas, a temperatura aumentada, por ejemplo de 80 a 160ºC, preferentemente de 100 a 120ºC. Como agente de halogenación se puede usar preferentemente de acuerdo con la invención POCl_{3}.

La transformación de los compuestos de fórmula (VI) en los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con la invención se puede realizar por reacción de los compuestos de fórmula (VI) con una solución acuosa de amoniaco, preferentemente a presión elevada, por ejemplo dejando que la reacción transcurra en un autoclave de manera que la reacción transcurra bajo la presión propia de la mezcla de reacción, y bajo agitación de la solución de reacción durante varias horas, por ejemplo durante 12 horas, a temperatura aumentada, por ejemplo de 80 a 160ºC, preferentemente de 100 a 150ºC, en especial a 140ºC.

Los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con la invención muestran un valioso espectro de actividad farmacológica no previsible.

Los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con la invención producen una relajación vascular, una inhibición de la agregación de trombocitos y una disminución de la presión arterial, así como un aumento del flujo sanguíneo coronario. Estos efectos son mediados por una estimulación directa de la guanilatociclasa soluble y por un aumento del GMPc intracelular. Además, el compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención potencia el efecto de sustancias que aumentan el nivel de GMPc, como, por ejemplo, el EDRF (factor de relajación derivado del endotelio), donadores de NO, protoporfirina IX, ácido araquidónico o derivados de fenilhidracina.

Por lo tanto, se pueden usar en medicamentos para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares, como, por ejemplo, para el tratamiento de la hipertensión arterial y la insuficiencia cardiaca, la angina de pecho estable e inestable, angiopatías perféricas y cardiacas, de arritmias, para el tratamiento de enfermedades tromboembólicas e isquemias, tales como el infarto de miocardio, el ataque de apoplejía, ataques transitorios e isquémicos, trastornos de la circulación periférica, para evitar reestenosis tales como las que se producen después de terapias trombolíticas, angioplastias transluminales percutáneas (PTA), angioplastias coronarias transluminales percutáneas (PTCA), derivaciones, así como para el tratamiento de la arteriosclerosis, enfermedades asmáticas y afecciones del sistema urogenital, como, por ejemplo, la hipertrofia de la próstata, la disfunción eréctil, la disfunción sexual femenina, la osteoporosis, la gastroparesia y la incontinencia.

Los compuestos de fórmula (I) descritos en la presente invención constituyen también principios activos para combatir enfermedades del sistema nervioso central que se caractericen por trastornos del sistema NO/GMPc. Son especialmente adecuados para mejorar la percepción, la capacidad de concentración, la capacidad de aprendizaje o la capacidad de memorización después de trastornos cognitivos, como los que se producen especialmente en situaciones/enfermedades/síndromes tales como discapacidad cognitiva leve, trastornos de aprendizaje y de memoria asociados a la edad, pérdidas de memoria asociadas a la edad, demencia vascular, traumatismo craneoencefálico, ataque de apoplejía, demencia que aparece después de ataques de apoplejía ("post stroke dementia"), traumatismo craneoencefálico post-traumático, trastornos de concentración generales, trastornos de concentración en niños con problemas de aprendizaje y de memoria, la enfermedad de Alzheimer, demencia vascular, demencia con corpúsculos de Lewy, demencia con degeneración de los lóbulos frontales, incluido el síndrome de Pick, la enfermedad de Parkinson, parálisis nuclear progresiva, demencia con degeneración corticobasal, esclerosis amiolateral (ALS), la enfermedad de Huntington, esclerosis múltiple, degeneración del tálamo, demencia de Creutzfeld-Jacob, demencia por VIH, esquizofrenia con demencia o psicosis de Korsakoff. También son adecuados para el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central tales como estados de ansiedad, tensión y depresión, disfunciones sexuales condicionadas por el sistema nervioso central y trastornos del sueño, así como para la regulación de trastornos patológicos en la ingestión de alimentos, estimulantes y drogas.

Los principios activos son adecuados asimismo para la regulación de la circulación cerebral, constituyendo así agentes eficaces para combatir la migraña.

También son adecuados para la profilaxis y el combate de las consecuencias de episodios de infarto cerebral (apoplejía cerebral), tales como ataque de apoplejía, isquemias cerebrales y traumatismo craneoencefálico. Los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con la invención se pueden usar igualmente para combatir estados dolorosos.

Además, los compuestos de acuerdo con la invención poseen un efecto antiinflamatorio y, por lo tanto, se pueden usar como agentes antiinflamatorios.

La invención comprende también la combinación de los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con la invención con nitratos orgánicos y donadores de NO.

En el marco de la invención, los nitratos orgánicos y los donadores de NO son generalmente sustancias que despliegan su efecto terapéutico a través de la liberación de NO o especies de NO. Se prefieren el nitroprusiato sódico, la nitroglicerina, el dinitrato de isosorbida, el mononitrato de isosorbida, la molsidomina y el SIN-1.

La invención comprende además la combinación con compuestos que inhiben la degradación del monofosfato de guanosina cíclico (GMPc). Éstos son en particular los inhibidores de las fosfodiesterasas 1, 2 y 5; nomenclatura según Beavo y Reifsnyder (1990) TiPS 11, pág. 150 a 155. Estos inhibidores potencian la actividad de los compuestos de acuerdo con la invención e incrementan el efecto farmacológico deseado.

Estudios biológicos Efecto vasorrelajante in vitro

Se aturden conejos mediante un golpe en la nuca y se desangran. La aorta se extrae, se libera de tejido adherido, se divide en anillos de 1,5 mm de ancho y se introducen por separado, bajo una tensión de polarización, en baños de órganos de 5 ml con una solución de Krebs-Henseleit, calentada a 37ºC y gaseada con carbógeno, de la siguiente composición (mM): NaCl: 119; KCl: 4,8; CaCl_{2} x 2 H_{2}O: 1; MgSO_{4} x 7 H_{2}O: 1,4; KH_{2}PO_{4}: 1,2; NaHCO_{3}: 25; glucosa: 10. La fuerza de contracción se registra con células Statham UC2, se amplifica, se digitaliza mediante un convertidor A/D (DAS-1802 HC, Keithley Intruments Munich) y se registra en paralelo en un registrador de trazos continuos. Para generar una contracción se añade al baño fenilefrina de forma acumulativa y en concentración creciente. Después de varios ciclos de control se estudia la sustancia que se ha de analizar en cada ciclo adicional con una dosificación creciente y se compara la magnitud de la contracción con la magnitud de la contracción alcanzada en el último ciclo previo. A partir de ello se calcula la concentración necesaria para reducir la magnitud del valor control en un 50% (CI_{50}). El volumen de aplicación normal es de 5 \mul, la proporción de DMSO en la solución del baño corresponde al 0,1%. El resultado se expone a continuación en la Tabla 1.

TABLA 1 Efecto vasorrelajante in vitro

Ejemplo nº	CI_{50} [\muM]
1	0,66
4	1,21

Determinación del aclaramiento hepático in vitro

Las ratas se anestesian, se heparinizan y el hígado se perfunde in situ a través de la vena porta. A partir del hígado se obtienen después ex vivo los hepatocitos primarios de rata mediante una solución de colagenasa. Se incubaron a 37ºC 2x10^{6} hepatocitos por ml con la misma concentración de cada compuesto que se ha de analizar. La disminución de la sustancia que se ha de analizar a lo largo del tiempo se determinó bioanalíticamente (HPLC/UV, HPLC/fluorescencia o CL/EMEM) en 5 momentos a lo largo de un periodo de tiempo de 0 a 15 min después del inicio de la incubación. A partir de ello se calculó el aclaramiento mediante el número de células y el peso del hígado.

Determinación del aclaramiento plasmático in vivo

La sustancia que se ha de analizar se administra a las ratas por vía intravenosa en forma de solución a través de la vena de la cola. En momentos predeterminados se extrae sangre de las ratas, ésta se hepariniza y a partir de ella se obtiene el plasma usando medidas convencionales. La sustancia se cuantifica en el plasma bioanalíticamente. A partir de las curvas de concentración en plasma/tiempo así halladas se calculan los parámetros farmacocinéticos mediante procedimientos convencionales, no compartimentados, usados para este propósito.

La presente invención incluye preparaciones farmacéuticas que, además de vehículos no tóxicos, inertes, farmacéuticamente adecuados, contienen el compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención, así como procedimientos para la elaboración de estas preparaciones.

El principio activo también puede estar presente dado el caso en forma microencapsulada en uno o varios de los vehículos antes mencionados.

El compuesto de fórmula (I) terapéuticamente eficaz debe estar presente en las preparaciones farmacéuticas antes expuestas en una concentración de aproximadamente 0,1 a 99,5, preferentemente de aproximadamente 0,5 a 95% en peso, respecto a la mezcla total.

Las preparaciones farmacéuticas antes expuestas también pueden contener principios activos farmacéuticos adicionales, además del compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención.

Para obtener los resultados deseados, ha resultado ventajoso en general, tanto en la medicina humana como en la veterinaria, administrar el principio activo de acuerdo con la invención en cantidades totales de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 700, preferentemente de 0,01 a 100 mg/kg de peso corporal, cada 24 horas, dado el caso en forma de varias dosis eficaces. Una dosis eficaz contiene el principio activo de acuerdo con la invención preferentemente en cantidades de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 80, en especial de 0,1 a 30 mg/kg de peso corporal.

La presente invención se explica con más detalle a continuación mediante ejemplos preferidos no limitantes. Salvo que se indique otra cosa, todos los datos cuantitativos se refieren a porcentajes en peso.

Ejemplos Abreviaturas

TA:: Temperatura ambiente

AE:: Acetato de etilo

MCPBA:: Ácido m-cloroperoxibenzoico

BABA:: Acetato de n-butilo/n-butanol/ácido acético glacial/tampón fosfato pH 6 (50:9:25:15; fase orgánica)

DMF:: N,N-Dimetilformamida

\vskip1.000000\baselineskip

Eluyentes para la cromatografía en capa fina

T1 E1:: Tolueno - acetato de etilo (1:1)

T1 EtOH1:: Tolueno - metanol (1:1)

C1 E1:: Ciclohexano - acetato de etilo (1:1)

C1 E2:: Ciclohexano - acetato de etilo (1:2)

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Procedimientos para hallar los tiempos de retención en la HPLC o procedimientos de separación preparativos

Procedimiento A = (CL-EM)

Eluyente:: A = Acetonitrilo + 0,1% de ácido fórmico,

\quad: B = Agua + 0,1% de ácido fórmico

Flujo:: 25 ml/min

Temperatura:: 40ºC

Material de relleno:: Symmetry C 18, 50x2,1 mm, 3,5 \mum.

Tiempo (min)	A	B
0	10	90
4,0	90	10
6,0	90	10
6,1	10	90
7,5	10	90

Procedimiento B (HPLC preparativa)

Eluyente:: A = Agua Milli-Q + 0,6 g de ácido clorhídrico concentrado en 1 l de H_{2}O,

\quad: B = Acetonitrilo

Flujo:: 50 ml/min

Temperatura:: Temperatura ambiente

Material de relleno:: Gel YMC ODS-AQS 11 \mum 250 x 30 mm.

Tiempo (min)	A	B
0	90	10
3	90	10
27	2	98
34	2	98
34,01	90	10
38	90	10

Compuestos de partida I. Síntesis de 4-[(dimetilamino)metilen]-piridinacetonitrilo (mezcla E/Z)

8

Se agitaron durante 2 h a 100ºC 7,52 g (63,7 mmol) de 4-piridilacetonitrilo y 11,09 g (63,7 mmol) de terc.-butoxibis(dimetilamino)metano. Durante este proceso se evacuaron a la atmósfera dimetilamina y t-butanol liberados mediante una bomba de vacío con una ligera corriente de vacío. La cromatografía ultrarrápida (CH_{2}Cl_{2}/ acetato de etilo 50:1 -> 20:1) proporcionó el compuesto del título.

Rendimiento: 10,2 g (93%)

Valor R_{f}: 0,29 (CH_{2}Cl_{2}/ AE 20/1)

RMN-^{1}H: (300 MHz, D_{6}-DMSO), \delta = 3,25 (s, 6H, 2 x CH_{3}), 7,25 (d, 2H, Ar-H), 7,80 (s, 1H, Ar-H), 8,33 (d, 2H, Ar-H).

EM: (ESI pos.), m/z = 174 ([M+H]^{+})

II. Síntesis de 3-[(dimetilamino)metilen]-piridinacetonitrilo (mezcla E/Z)

9

Se agitaron durante 2 h a 100ºC 3,00 g (25,4 mmol) de 3-piridilacetonitrilo y 4,23 g (25,4 mmol) de terc.-butoxibis(dimetilamino)metano. Durante este proceso se evacuaron a la atmósfera dimetilamina y t-butanol liberados mediante una bomba de vacío con una ligera corriente de vacío. Tras el enfriamiento se filtró el sólido precipitado, éste se lavó con un poco de H_{2}O y se obtuvo así el compuesto del título.

Rendimiento: 4,23 g (96%)

Valor R_{f}: 0,27 (CH_{2}Cl_{2}/ MeOH 40/1)

RMN-^{1}H: (300 MHz, D_{6}-DMSO), \delta = 3,08 (s, 3H, CH_{3}), 3,25 (s, 3H, CH_{3}), 7,29 (dd, 1H, Ar-H), 7,57 (s, 1H, =C-H), 7,66 (dt, 1H, Ar-H), 8,26 (d, 1H, Ar-H), 8,54 (d, 1H, Ar-H).

CL-EM: Tiempo de retención: 0,33 min (columna: Symmetry, C-18, 3,5 \mum, 50x2,1 mm, flujo 0,5 ml/min, 40ºC, gradiente: Agua (+ 0,1% de ácido fórmico): acetonitrilo (+ 0,1% de ácido fórmico) a 0 min: 90:10, a 7,5 min 10:90); EM: (ESI pos.), m/z = 174 ([M+H]^{+})

III. Síntesis de 1-(2-fluorobencil)1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboxamidina IIIA) Éster etílico del ácido 5-amino-1-(2-fluorobencil)-pirazol-3-carboxílico

10

A 100 g (0,613 moles) de la sal sódica del éster etílico del ácido cianopirúvico (síntesis según Borsche y Manteuffel, Liebigs Ann. 1934, 512, 97) se añaden a temperatura ambiente, bajo argón y agitación intensa, en 2,5 l de dioxano 111,75 g (75 ml, 0,98 moles) de ácido trifluoroacético y se agitan durante 10 min, durante lo cual se solubiliza gran parte del reactante. Después se añaden 85,93 g (0,613 moles) de 2-fluorobencilhidracina y se hierve durante la noche. Tras el enfriamiento, los cristales precipitados del trifluoroacetato sódico se filtran con succión, se lavan con dioxano y la solución se sigue transformando en forma bruta.

IIIB) Éster etílico del ácido 1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboxílico

11

A la solución obtenida en el apartado 3A) se añaden 61,25 ml (60,77 g, 0,613 moles) de dimetilaminoacroleína y 56,28 ml (83,88 g, 0,736 moles) de ácido trifluoroacético y se hierve bajo argón durante 3 días. A continuación se evapora el disolvente al vacío, y el residuo se vierte en 2 l de agua y se extrae tres veces con 1 l de acetato de etilo. Las fases orgánicas reunidas se secan con sulfato de magnesio y se concentran por rotación. Se cromatografía en 2,5 kg de gel de sílice y se eluye con un gradiente de tolueno/ tolueno-acetato de etilo = 4:1. Rendimiento: 91,6 g (49,9% de la teoría a través de dos etapas).

Punto de fusión: 85ºC

R_{f} (SiO_{2}, T1E1): 0,83

IIIC) 1-(2-Fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboxamida

12

Se disponen 10,18 g (34 mmol) del éster obtenido en el ejemplo 3B) en 150 ml de metanol saturado con amoniaco a 0-10ºC. Se agita durante 2 días a temperatura ambiente y a continuación se concentra al vacío.

R_{f} (SiO_{2}, T1E1): 0,33

IIID) 3-Ciano-1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridina

13

Se disuelven 36,1 g (133 mmol) de la 1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboxamida del ejemplo 3C) en 330 ml de THF y se añaden 27 g (341 mmol) de piridina. A continuación se añaden, en un plazo de 10 min, 47,76 ml (71,66 g, 341 mmol) de anhídrido del ácido trifluoroacético, con lo cual la temperatura aumenta hasta 40ºC. Se agita durante la noche a temperatura ambiente. A continuación, la preparación se vierte en 1 l de agua y se extrae tres veces con 0,5 l de acetato de etilo. La fase orgánica se lava con una solución saturada de hidrogenocarbonato sódico y con HCl 1 N, se seca con MgSO_{4} y se concentra por rotación.

Rendimiento: 33,7 g (100% de la teoría)

Punto de fusión: 81ºC

R_{f} (SiO_{2}, T1E1): 0,74

IIIE) Éster metílico del ácido (2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboximídico

14

Se disuelven 30,37 g (562 mmol) de metilato sódico en 1,5 l de metanol y se añaden 36,45 g (144,5 mmol) de 3-ciano-1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridina (del ejemplo 3D). Se agita durante 2 horas a temperatura ambiente, y la solución obtenida se usa directamente en la etapa siguiente.

IIIF) 1-(2-Fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboxamidina

15

A la solución obtenida en el ejemplo 3E) de éster metílico del ácido (2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboximídico en metanol se añaden 33,76 g (32,19 ml, 562 mmol) de ácido acético glacial y 9,28 g (173 mmol) de cloruro de amonio y se agita durante la noche a reflujo. El disolvente se evapora al vacío, el residuo se frota a conciencia con acetona y el sólido precipitado se filtra con succión.

RMN-^{1}H (d_{6}-DMSO, 200 MHz): \delta = 5,93 (s, 2H); 7,1-7,5 (m, 4H); 7,55 (dd, 1H); 8,12 (dd, 1H); 8,30 (dd, 1H); 9,5 (sa, 4H intercambiable) ppm.

EM (ESI): m/z = 270,2 (M-HCl)

IV. Síntesis de 2-[1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5-(4-piridinil)-4,6-pirimidinadiol

16

Se suspenden 3,27 g (12,1 mmol) de 1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboximidamida del ejemplo III en 40 ml de tolueno, se añaden 2,88 g (12,1 mmol) de 2-(4-piridinil)malonato de dietilo (se puede adquirir en el mercado de Mercachem) y se agitan durante la noche a 140ºC. Para el procesamiento, el sólido precipitado se filtra con succión y se seca al alto vacío.

Rendimiento: 2,43 g (34%)

CL-EM: R_{f} = 2,69 min (procedimiento A).

\hskip1cm

EM (ESI pos.), m/z = 415 ([M+H]^{+}). V. Síntesis de 3-[4,6-dicloro-5-(4-piridinil)-2-pirimidinil]-1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo-[3,4-b]piridina

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17

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Se disuelven 2,39 g (5,77 mmol) de 2-[1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5-(4-piridinil)-4,6-pirimidinadiol del ejemplo IV en 10 ml de cloruro de fosforilo. A ello se añaden 3 gotas de DMF y se deja agitando durante 3 h a reflujo. Para el procesamiento, la solución de reacción se concentra y se seca al alto vacío. Rendimiento: 0,67 g (24%)

CL-EM: R_{f} = 4,34 min (procedimiento A)

\hskip1cm

EM (ESI pos.), m/z = 451 ([M+H]^{+}, Cl_{1}). Ejemplos 1. 2-[1-[(2-Fluorofenil)metil]-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5-(4-piridinil)-4-pirimidinamina

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18

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Se suspendieron en xileno 0,50 g (1,9 mmol) de 1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboximidamida del ejemplo III y [(dimetilamino)metilen]-piridinacetonitrilo (0,32 g, 1,9 mmol) del ejemplo I y se añadió BF_{3}*PEt_{2} (71 \mul, 79 mg, 0,56 mmol, 0,3 equiv.). Después de permanecer durante 19 h a 140ºC se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El compuesto del título se pudo purificar mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (CH_{2}Cl_{2}:MeOH 20:1) y agitación siguiente en acetonitrilo.

Rendimiento: 0,24 g (33%)

Valor R_{f}: 0,17 (AE/MeOH 20:1)

P.f.: 254ºC

Tiempo de retención: 2,7 min (columna: Symmetry, C-18, 3,5 \mum, 50x2,1 mm, flujo 0,5 ml/min, 40ºC, gradiente: Agua (+ 0,1% de ácido fórmico): acetonitrilo (+ 0,1% de ácido fórmico) a 0 min: 90:10, a 7,5 min 10:90)

RMN-^{1}H: (300 MHz, D_{6}-DMSO), \delta = 5,81 (s, 2H, CH_{2}), 7,0-7,6 (m, 9H, Ar-H, NH_{2}), 8,64 (m_{c}, 3H, Ar-H), 9,05 (d, 1H, Ar-H)

EM: (ESI pos.), m/z = 398 ([M+H]^{+}), (ESI neg.), m/z = 396 ([M-H]^{+})

2. 2-[1-[(2-Fluorofenil)metil]-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5-(4-piridinil)-4-pirimidinamina

19

Se suspendieron en xileno 4,00 g (14,9 mmol) de 1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboximidamida del ejemplo III y 3-[(dimetilamino)metilen]-piridinacetonitrilo (2,57 g, 14,9 mmol) del ejemplo II. Después de permanecer durante 12 h a 120ºC se dejó enfriar a temperatura ambiente y se filtró el sedimento precipitado. Las aguas madre se purificaron por HPLC preparativa (columna: Cromsil 120 ODS, C-18, 10 \mum, 250x30 mm, flujo 50 ml/min, temperatura ambiente, gradiente: Agua/ acetonitrilo a 0 min: 90:10, a 28 min 5:95). Hubo que repetir el proceso de purificación.

Rendimiento: 0,024 g (0,4%)

Valor R_{f}: 0,17 (AE/MeOH 20:1)

RMN-^{1}H: (200 MHz, D_{6}-DMSO), \delta = 5,81 (s, 2H, OCH_{2}), 6,95-7,6 (m, 8H, Ar-H, NH_{2}), 7,92 (dt, 1H, Ar-H), 8,21 (s, 1H, Ar-H), 8,6-8,75 (m, 2H, Ar-H), 9,03 (dd, 1H, Ar-H)

CL-EM: Tiempo de retención: 2,66 min (columna: Symmetry, C-18, 3,5 \mum, 50x2,1 mm, flujo 0,5 ml/min, 40ºC, gradiente: Agua (+ 0,1% de ácido fórmico): acetonitrilo (+ 0,1% de ácido fórmico) a 0 min: 90:10, a 7,5 min 10:90); EM: (ESI pos.), m/z = 398 ([M+H]^{+}), (ESI neg.), m/z = 396 ([M-H]^{+})

3. 6-Cloro-2-[1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5-(4-piridinil)-4-pirimidinilamina

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20

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Se suspendieron 200 mg (0,443 mmol) de 3-[4,6-dicloro-5-(4-piridinil)-2-pirimidinil]-1-(2-fluorobencil)-1H-pira-
zolo-[3,4-b]piridina del ejemplo V en 5 ml de una solución acuosa de amoniaco al 25% y se agitó en el autoclave durante la noche a 140ºC y presión propia. La mezcla se extrajo tres veces con diclorometano, y los extractos reunidos se secaron mediante sulfato de magnesio y se concentraron hasta la sequedad. El residuo se cromatografió a través de gel de sílice con diclorometano/ metanol 30:1. Para la purificación adicional, el producto bruto se purificó mediante una HPLC preparativa (procedimiento B).

Rendimiento: 34 mg (15%)

R_{f}: 0,45 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH 20:1)

RMN-^{1}H: (300 MHz, D_{6}-DMSO), \delta = 5,85 (s, 2H, CH_{2}), 7,10-7,48 (m, 9H, 7Ar-H y NH_{2}), 8,61-8,75 (m, 3H, Ar-H), 8,99 (dd, 1H, Ar-H)

CL-EM: R_{f} = 3,55 min (procedimiento A).

\hskip1cm

EM: (ESI pos.), m/z = 432,3 ([M+H]^{+}), 885,2 ([2M+Na]^{+}) 4. 2-[1-(2-Fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5-(4-piridinil)-4,6-pirimidindiamina

21

Se suspendieron 200 mg (0,443 mmol) de 3-[4,6-dicloro-5-(4-piridinil)-2-pirimidinil]-1-(2-fluorobencil)-1H-pira-
zolo-[3,4-b]piridina del ejemplo V en 5 ml de una solución acuosa de amoniaco al 25% y se agitó en el autoclave durante la noche a 140ºC y presión propia. La mezcla se extrajo tres veces con diclorometano, y los extractos reunidos se secaron mediante sulfato de magnesio y se concentraron hasta la sequedad. El residuo se cromatografió a través de gel de sílice con diclorometano/metanol 30:1. Para la purificación adicional, el producto bruto se purificó mediante una HPLC preparativa (procedimiento B).

Rendimiento: 45 mg (20%)

R_{f}: 0,30 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH 20:1)

RMN-^{1}H: (300 MHz, D_{6}-DMSO), \delta = 5,82 (s, 2H, CH_{2}), 6,02 (sa, 4H, NH_{2}), 7,08-7,48 (m, 7H, Ar-H), 8,57-8,68 (m, 3H, Ar-H), 9,13 (dd, 1H, Ar-H)

CL-EM: R_{f} = 2,55 min (procedimiento A).

\hskip1cm

EM: (ESI pos.), m/z = 413,3 ([M+H]^{+}), 847,8 ([2M+Na]^{+}).

Claims

1. Compuestos de fórmula (I)

22

en la que

R^{1}: representa 4-piridinilo o 3-piridinilo;

R^{2}: representa H, NH_{2} o halógeno;

así como sus sales e hidratos.

2. Compuestos según la reivindicación 1,

en los que

R^{1}: representa 4-piridinilo o 3-piridinilo;

R^{2}: representa H, NH_{2} o Cl;

así como sus sales e hidratos.

3. Compuestos según la reivindicación 1,

en los que

R^{1}: representa 4-piridinilo o 3-piridinilo;

R^{2}: representa H;

así como sus sales e hidratos.

4. Procedimiento para la preparación del compuesto de fórmula (I), que comprende la transformación del compuesto de fórmula (II)

23

A): con un compuesto de fórmula (III)

27

en la que

R^{1}: es como se definió anteriormente;

o

B): con un compuesto de fórmula (IV)

24

en la que

R^{1}: es como se definió anteriormente;

25

en la que

R^{1}: es como se definió anteriormente;

26

en la que

R^{1}: es como se definió anteriormente;

R^{2}: representa halógeno;

5. Compuesto de fórmula (I) para el tratamiento de enfermedades.

6. Medicamento que contiene al menos el compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1.

7. Procedimiento para la preparación de medicamentos, caracterizado porque el compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 se incorpora en una forma de administración adecuada, usando dado el caso coadyuvantes y aditivos habituales.

8. Medicamento que contiene el compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 en combinación con nitratos orgánicos o donadores de NO.

9. Medicamento que contiene el compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 en combinación con compuestos que inhiben la degradación del monofosfato de guanosina cíclico (GMPc).

10. Uso del compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 en la preparación de medicamentos para el tratamiento de enfermedades cardiocirculatorias.

11. Uso del compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 en la preparación de medicamentos para el tratamiento de la hipertensión arterial.

12. Uso del compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 en la preparación de medicamentos para el tratamiento de enfermedades tromboembólicas e isquemias.

13. Uso del compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 en la preparación de medicamentos para el tratamiento de la disfunción sexual.

14. Uso del compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 en la preparación de medicamentos con propiedades antiinflamatorias.

15. Uso de los compuestos de fórmula general (I) de acuerdo con la reivindicación 1 en la preparación de medicamentos para el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central.

16. Uso de acuerdo con una de las reivindicaciones 8 a 13, en el que el compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 se usa en combinación con nitratos orgánicos o donadores de NO, o en combinación con compuestos que inhiben la degradación del monofosfato de guanosina cíclico (GMPc).