ES2248319T3 - Proceso sintetico para producir un compuesto de tipo ecteinascidina. - Google Patents
Proceso sintetico para producir un compuesto de tipo ecteinascidina.Info
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Abstract
Una etapa del proceso de la fabricación de un compuesto ecteinascidina, donde la etapa comprende la desprotección de un compuesto de fórmula (A) mediante la eliminación de ambos grupos protectores en un solo paso, para dar una -aminolactona de fórmula (35), de acuerdo con el siguiente esquema: donde ProtNH es un grupo protector de amino, y ProtOH es un grupo protector de hidroxilo.
Description
Proceso sintético para producir un compuesto de
tipo ecteinascidina.
La presente invención trata sobre procesos
sintéticos, y en particular trata sobre procesos sintéticos para
producir compuestos de tipo ecteinascidina.
La Patente Europea 309,477 trata sobre las
ecteinascidinas 729, 743, 745, 759A, 759B y 770. Se ha revelado que
los compuestos de tipo ecteinascidina tienen propiedades
antibacterianas y otras propiedades útiles. Se están llevando a cabo
ensayos clínicos sobre la ecteinascidina 743 como agente
antitumoral.
La ecteinascidina 743 tiene una estructura
compleja tris(tetrahidroisoquinolinfenol) con la fórmula
siguiente (I):
Actualmente se prepara mediante el aislamiento a
partir de extractos del tunicate marion Ecteinascidina
turbinata. El rendimiento es bajo, y se han buscado procesos de
preparación alternativos.
Se describe un proceso sintético para la
producción de compuestos de tipo ecteinascidina en la U.S. Pat. No.
5,721,362, ver también WO 9812198 que se incorpora aquí como
referencia en su totalidad. El método que se reivindica es largo y
complejo, habiendo 38 Ejemplos, cada uno de los cuales describe una
o más etapas en la secuencia sintética para llegar a la
ecteinascidina 743.
En el proceso sintético conocido, se forma un
puente 1,4 utilizando un compuesto 1-lábil,
10-hidroxi, 18-hidroxi protegido,
di-6,8-en-5-ona
anillo fusionado. Tal como se muestra en el Ejemplo 33, se
convierte un compuesto (13) en un compuesto (14):
\vskip1.000000\baselineskip
De acuerdo con el proceso sintético conocido, a
continuación se forma una espiroquinolina en el puente 1,4 mediante
los pasos de los Ejemplos 34 a 36, y el grupo protector
18-MOM se elimina para dar la ecteinascidina 770 que
se puede convertir en la ecteinascidina 743.
La reivindicación 25 de la U.S. Pat. No.
5,721,362 se halla dirigida a un compuesto fenol intermedio de una
fórmula dada (11), al cual nos referimos también como Intermedio 11
o Int-11. Tiene la siguiente estructura
bis(tetrahidroisoquinolinfenol) (II):
donde MOM es un sustituyente
metoximetil y TBDPS es un sustituyente
tert-butildifenilsililo.
A partir del Intermedio 11 es posible sintetizar
otro agente antitumoral interesante, ftalascidina, ver Proc. Natl.
Acad. Sci. USA, 96, 3496-3501, 1999. La
ftalascidina es un derivado bis(tetrahidroisoquinolinfenol)
de fórmula (III):
\vskip1.000000\baselineskip
En las ecteinascidinas 743 y 770, el puente 1,4
tiene la estructura de fórmula (IV):
\vskip1.000000\baselineskip
Otras ecteinascidinas conocidas incluyen
compuestos con un sistema cíclico con puente, como ocurre en las
ecteinascidinas 722 y 736, donde el puente tiene la estructura de
fórmula (V):
\vskip1.000000\baselineskip
las ecteinascidinas 583 y 597,
donde el puente tiene la estructura de fórmula
(VI):
y las ecteinascidina 594 y 596,
donde el puente tiene la estructura de fórmula
(VII):
La estructura completa para estos compuestos y
otros compuestos relacionados se da en J. Am. Chem. Soc. (1996) 118,
9017-9023. Este artículo se incorpora aquí como
referencia.
Otra literatura sobre ecteinasdinas incluye:
Corey, E. J., J. Am. Chem. Soc, 1996, 118 pp.
9202-9203; Rinehart, et al., Journal de
Natural Products, 1990, "Bioactive Compounds from Aquatic and
Terrestrial Sources", vol. 53, pp. 771-792;
Rinehart et al., Pure and Appl. Chem., 1990, "Biologically
active natural products", vol 62, pp. 1277-1280;
Rinehart, et al., J. Org. Chem., 1990, "Ecteinascidins 729,
743, 745, 759A, 759B, and 770: potent Antitumour Agents from the
Caribbean Tunicate Ecteinascidia tuminatac, vol. 55, pp.
4512-4515; Wright et al., J. Org. Chem.,
1990, "Antitumour Tetrahidroisoquinolina Alkaloids from the
Colonial ascidian Ecteinascidia turbinata", vol. 55, pp.
4508-4512; Sakai et al., Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 1992, Additional anitumor ecteinascidins from a Caribbean
tunicate: Crystal structures and activities en vivo",
vol. 89, 11456-11460; Science 1994, "Chemical
Prospectors Scour the Seas for Promising Drugs", vol. 266,
pp.1324; Koenig, K. E., "Asymmetric Synthesis", ed. Morrison,
Academic Press, Inc., Orlando, Fla., vol. 5, 1985, p. 71; Barton,
et al., J. Chem Soc. Perkin Trans., 1, 1982, "Synthesis
and Properties of a Series de Sterically Hindered Guanidine
bases", pp. 2085; Fukuyama et al., J. Am. Chem. Soc.,
1982, "Stereocontrolled Total Synthesis de
(+)-Saframicin B", vol. 104, pp. 4957; Fukuyama
et al., J. Am. Chem. Soc., 1990, "Total Synthesis de
(+)-Saframicin A", vol. 112, p. 3712; Saito,
et al., J. Org. Chem., 1989, "Synthesis de Saframicins.
Preparation de a Key tricyclic Lactam Intermediate a Saframicin
A", vol. 54, 5391; Still, et al., J. Org. Chem., 1978,
"Rapid Chromatographic Technique for Preparative Separations with
Moderate Resolution", vol. 43, p. 2923; Kofron, W. G.; Baclawski,
L. M., J. Org. Chem., 1976, vol. 41, 1879; Guan et al., J.
Biomolec. Struc. & Dynam., vol. 10, pp. 793-817
(1993); Shamma et al., "Carbon-13 RMN Shift
Assignments de Amines and Alkaloids", p. 206 (1979); Lown et
al., Biochemistry, 21, 419-428 (1982); Zmijewski
et al., Chem. Biol. Interactions, 52,
361-375 (1985); Ito, CRC Crit. Rev. Anal. Chemn, 17,
65-143 (1986); Rinehart et al., "Topics en
Pharmaceutical Sciences 1989", pp. 613-626, D.
D. Breimer, D. J. A. Cromwelin, K. K. Midha, Eds., Amsterdam Medical
Press B. V., Noordwijk, The Netherlands (1989); Rinehart et
al., "Biological Mass Spectrometry",
233-258 eds. Burlingame et al., Elsevier
Amsterdam (1990); Guan et al., Jour. Biomolec. Struct. &
Dynam., vol. 10 pp. 793-817 (1993); Nakagawa et
al., J. Am. Chem. Soc., 111: 2721-2722 (1989);
Lichter et al., "Food and Drugs from the Sea
Proceedings" (1972), Marine Technology Society, Washington, D.C.
1973, 117-127; Sakai et al., J. Am. Chem.
Soc., 1996, 118, 9017; Garcia-Rocha et al.,
Brit. J. Cancer, 1996, 73: 875-883; y Pommier et
al., Biochemistry, 1996, 35: 13303-13309.
Se conocen otros compuestos adicionales que no
tienen un sistema cíclico con puente. Entre ellos se incluyen los
antibióticos anti-tumorales
anti-microbiales
bis(tetrahidroisoquinolinaquinona) safracinas y saframicinas,
y los productos naturales marinos renieramicinas y xestomicina
aislados a partir de microbios o esponjas cultivados. Todos tienen
en común un esqueleto carbonado de tipo tetrahidroisoquinolina
dimérico. Estos compuestos pueden clasificarse en cuatro tipos, los
tipos I a IV, según el patrón de oxidación de los anillos
aromáticos.
Las isoquinolinaquinonas diméricas de Tipo I son
un sistema de fórmula (VIII) que ocurren con más frecuencia en esta
clase de compuestos, ver la tabla I.
| Sustituyentes | ||||||
| Compuesto | R^{14a} | R^{l4b} | R^{21} | R^{25a} | R^{25b} | R^{25c} |
| saframicina A | H | H | CN | O | O | CH_{3} |
| saframicina B | H | H | H | O | O | CH_{3} |
| saframicina C | H | OCH_{3} | H | O | O | CH_{3} |
| saframicina G | H | OH | CN | O | O | CH_{3} |
| saframicina H | H | H | CN | OH | CH_{2}COCH_{3} | CH_{3} |
| saframicina S | H | H | OH | O | O | CH_{3} |
| saframicina Y_{3} | H | H | CN | NH_{2} | H | CH_{3} |
| saframicina Yd_{1} | H | H | CN | NH_{2} | H | C_{2}H_{5} |
| saframicina Ad_{1} | H | H | CN | O | O | C_{2}H_{5} |
| saframicina Yd_{2} | H | H | CN | NH_{2} | H | H |
| saframicina Y_{2b} | H | Q^{b} | CN | NH_{2} | H | CH_{3} |
| saframicina Y_{2b-d} | H | Q^{b} | CN | NH_{2} | H | C_{2}H_{5} |
| saframicina AH_{2} | H | H | CN | H^{a} | OH^{a} | CH_{3} |
| saframicina AH_{2}Ac | H | H | CN | H | OAc | CH_{3} |
| saframicina AH_{1} | H | H | CN | OH^{a} | H^{a} | CH_{3} |
| saframicina AH_{1}Ac | H | H | CN | OAc | H | CH_{3} |
| saframicina AR_{3} | H | H | H | H | OH | CH_{3} |
| ^{a} las asignaciones son intercambiables. | ||||||
| ^{b} donde el grupo Q tiene la fórmula (IX): |
Los anillos aromáticos de Tipo I se observan en
las saframicinas A, B y C; G y H; y S aisladas de Streptomyces
lavendulae como componentes minoritarios. Se conoce un derivado
ciano de la saframicina A, que recibe el nombre de
cianoquinonamina, de la Japanese Kokai JP-A2
59/225189 y 60/084,288. Las saframicinas Y3, Yd1, Ad1, y Yd2 fueron
fabricadas por S. lavendulae mediante biosíntesis directa,
con un complementado apropiado del medio de cultivo. Los dímeros de
las saframicinas Y2b y Y2b-d formados mediante el
enlace del nitrógeno en el C-25 de una de las
unidades al C-14 de la otra, también se han
fabricado en un medio comlementado de S. lavendulae. Las
saframicinas AR_{1} (=AH_{2}), un producto de la reducción
microbiana de la saframicina A en C-25 producida
por Rhodococcus amidophilus, también se prepara mediante
reducción química no estereoseleciva de la saframicina A mediante
borohidruro de sodio en la forma de una mezcla 1:1 de los epímeros
seguido de una separación cromatográfica (el otro isómero AH_{1}
es menos polar). El producto de la reducción adicional de la
saframicina AR3,
21-deciano-25-dihidro-saframicina
A, (=25-dihidrosaframicina B) se fabricó con la
misma conversión microbiana. Otro tipo de conversión microbiana de
la saframicina A que utiliza la especie Nocardia produjo saframicina
B y la reducción adicional mediante la especie Mycobacterium
produjo saframicina AH_{1}Ac. Los acetatos 25-O-
de la saframicina AH_{2} y AH_{1} también se han preparado de
forma química para estudios biológicos.
Los compuestos de Tipo I de fórmula (X) también
se han aislado de esponjas marinas, ver la Tabla II.
\vskip1.000000\baselineskip
| Sustituyentes | |||||
| R^{14a} | R^{l4b} | R^{21} | R | ||
| renieramicina A | OH | H | H | -C(CH_{3})=CH-CH_{3} | |
| renieramicina B | OC_{2}H_{5} | H | H | -C(CH_{3})=CH-CH_{3} | |
| renieramicina C | OH | O | O | -C(CH_{3})=CH-CH_{3} | |
| renieramicina D | OC_{2}H_{5} | O | O | -C(CH_{3})=CH-CH_{3} | |
| renieramicina E | H | H | OH | -C(CH_{3})=CH-CH_{3} | |
| renieramicina F | OCH_{3} | H | OH | -C(CH_{3})=CH-CH_{3} | |
| xestomycin | OCH_{3} | H | H | -CH_{3} |
\vskip1.000000\baselineskip
Las renieramicinas A-D se
aislaron del extracto antimicrobiano de una esponja, de la especie
Reniera recogida en Méjico, junto con loas isoquinolinas
monoméricas relacionadas biogenéticamente renierona y compuestos
relacionados. La estructura de la renieramicina A fue asignada
inicialmente con la estereoquímica invertida en
C-3, C-11, y C-13.
Sin embargo, un examen cuidadoso de los datos de ^{1}H RMN para
los compuestos nuevos relacionados renieramicinas E y F, aislados
de la misma esponja recogida en Palau, reveló que la unión en el
anillo de las renieramicinas era idéntico al de las saframicinas.
Ello llevó a la conclusión de que la estereoquímica asignada
previamente a las renieramicinas A a D debe ser la misma que la de
las saframicinas.
La xestomicina se encontró en una esponja, de la
especie Xestospongia recogida en las aguas de Sri Lanca.
Los compuestos Tipo II de fórmula (XI) con un
anillo de hidroquinona incluyen saframicinas D y F, aisladas de
S. lavendulae, y saframicinas Mx-1 y
Mx-2, aisladas de Myxococcus xanthus. Ver
tabla III.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
| Sustituyentes | |||||||
| Compuesto | R^{14a} | R^{l4b} | R^{21} | R^{25a} | R^{25b} | R^{25c} | |
| saframicina D | O | O | H | O | O | CH_{3} | |
| saframicina F | O | O | CN | O | O | CH_{3} | |
| saframicina Mx-1 | H | OCH_{3} | OH | H | CH_{3} | NH_{2} | |
| saframicina Mx-2 | H | OCH_{3} | H | H | CH_{3} | NH_{2} |
\vskip1.000000\baselineskip
El esqueleto tipo III se encuentra en los
compuestos antibióticos safracinas A y B, aisladas de Pseudomonas
fluorescens cultivadas. Estos antibióticos de fórmula (XII)
consisten en una subunidad de
tetrahidroisoquinolina-quinona y una subunidad
tetrahidroisoquinolinfenol.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
donde R^{21} es -H en la
safracina A y es -OH en la safracina
B.
La saframicina R, el único compuesto clasificado
como esqueleto de Tipo IV, también se aisló de S. lavendulae.
Este compuesto de fórmula (XIII), que consiste en un anillo de
hidroquinona con una cadena lateral de éster glicólico en uno de los
oxígenos fenólicos, es de forma concebible un
pro-fármaco de la saframicina A debido a su moderada
toxicidad.
Todos estos compuestos conocidos tienen un
sistema fusionado de cinco anillos (A) a (E) tal como se muestra en
la siguiente estructura de fórmula (XIV):
Los anillos A y E son fenólicos en las
ecteinascidinas y algunos otros compuestos, mientras que en otros
compuestos, de forma notable en las saframicinas, los anillos A y E
son quinólicos. En los compuestos conocidos, los anillos B y D son
tetrahidro, mientras que el anillo C es perhidro.
Todavía existe la necesidad de rutas sintéticas
alternativas para los compuestos de tipo ecteinascidina y
compuestos relacionados. Tales rutas sintéticas pueden proporcionar
caminos más económicos para los agentes antitumorales conocidos,
así como permitir la preparación de nuevos compuestos activos.
Esta invención trata sobre los procesos
sintéticos para la formación de intermedios, derivados y estructuras
relacionadas de ecteinascidinas u otros compuestos tipo
tetrahidroisoquinolinfenol.
En un aspecto, la presente invención proporciona
un proceso para la preparación de un producto de tipo
ecteinascidina, donde el paso comprende la desprotección de un
compuesto de fórmula (A) mediante la eliminación de ambos grupos
protectores en un sólo paso, para dar una
\alpha-aminolactona de fórmula (35), de acuerdo
con el siguiente esquema:
donde Prot^{NH} es un grupo
protector de amino, y Prot^{OH} es un grupo protector de
hidroxilo.
Los materiales iniciales apropiados para la
fabricación empleando la nueva etapa del proceso sintético incluyen
loa compuestos relacionados a los alcaloides de tipo
bis(tetrahidroisoquinolina) naturales. Tales materiales
iniciales se pueden preparar a partir de distintas clases de
antibióticos de tipo saframicina y safracina que se pueden adquirir
de distintos caldos de cultivo tal como se detalla en WO 0069862 o
bien mediante otros procesos sintéticos o bioquímicos.
En un aspecto particular, la fabricación se halla
dirigida a la utilización del compuesto Intermedio 21 en cierto
número de nuevos procesos sintéticos para la preparación de la
ecteinascidina 743 y de compuestos relacionados.
En general, la conversión del Intermedio 21, o de
un compuesto relacionado, a un producto de tipo ecteinascidina
conlleva las siguientes transformaciones clave:
(a) Conversión del NH_{2} a OH mediante la
reacción con, por ejemplo nitrito de sodio en ácido acético.
(b) Protección del fenol del anillo E.
(c) Esterificación mediante la protección de la
función 1-hidroxi primaria con una cadena lateral
de cisteína protegida.
(d) Desprotección del grupo alilo y
oxidación.
(e) Creación del anillo con el puente mediante
una reacción de ciclación.
(f) Desprotecciones del fenol del anillo E y del
grupo cisteína
(g) Introducción de la quinolina mediante
reacciones de trans-aminación y Petter Spengler.
La alta funcionalidad de los compuestos
intermedios hace necesario el uso de grupos protectores para el
fenol del anillo E y para la cadena lateral de cisteina para
prevenir de esta manera reacciones secundarias no deseadas.
De esta forma, se pueden generar cierto número de
intermedios alternativos dependiendo de la selección particular que
se haga de los grupos protectores.
Distintas posibles secuencias son posibles para
combinar estas transformaciones, dependiendo principalmente de los
grupos protectores seleccionados para el anillo fenol y la amina de
la cadena lateral de cisteína.
El número total de transformaciones sintéticas
también es función de los grupos protectores seleccionados.
Con el propósito de ilustración, se describe a
continuación la utilización de distintas combinaciones de grupos
protectores para seis rutas típicas para la preparación de
ET-743 a partir del Intermedio 21, al cual también
se hace referencia aquí como SF21. Las rutas 1 y 2 emplean la etapa
de proceso de la presente invención.
| Ruta | Protección de Fenol | Protección de la Cisteína | Número de etapas |
| 1 | MOM | Boc | 12 |
| 2 | MEM | Boc | 10 |
| 3 | MEM | Cbz | 11 |
| 4 | MOM | Alloc | 13 |
| 5 | MEM | Alloc | 13 |
| 6 | MOM | Cbz | 15 |
Como apreciará inmediatamente una persona con
experiencia en el campo de la técnica, los esquemas de reacción
descritos aquí pueden ser modificados y/o combinados de distintas
formas.
La utilización de otras estrategias respecto a
los grupos protectores que no se han detallado también es parte de
esta invención.
El esquema de reacción completo para cada ruta se
muestra en los siguientes Esquemas 1 a 6.
Esquema
1
ET-743: Ruta
Alternativa Hemisintética
1
Esquema
2
ET-743: Ruta
Alternativa Hemisintética
2
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Esquema
3
ET-743: Ruta
Alternativa Hemisintética
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Esquema
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ET-743: Ruta
Alternativa Hemisintética
4
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Esquema
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ET-743: Ruta
Alternativa Hemisintética
5
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Esquema
6
ET-743: Ruta
Alternativa Hemisintética
6
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Para las rutas 1 y 2, la protección de la cadena
lateral de cisteína con Boc permite a los grupos fenol y cisteína
ser desprotegidos en un único paso en lugar de en dos pasos
separados. Para el resto de las rutas, se requiere un paso de
desprotección adicional, y así pues las rutas 3 a 6 no emplean la
etapa del proceso de la presente invención.
Para las ruta 2, se evita el Intermedio 25
mediante la utilización de la metodología de la esterificación
directa y mediante la subsiguiente protección del fenol con el
grupo MEM.
En las rutas 2 y 3 la protección del anillo de
fenol E se retrasa hasta después de los pasos de diazotización y
esterificación, permitiendo así la protección del fenol en una sola
etapa en lugar de mediante la secuencia de tres etapas de la ruta
1.
Para las rutas 1, 2 y 3, la esterificación
directa del alcohol primario con un derivado de cisteína elimina las
etapas improductivas de protección/desprotección del alcohol
primario con un grupo sililo (rutas 4 y 5) acortando de esta manera
la secuencia en dos etapas.
La ruta 6 sólo contempla aquí los últimos pasos
para el Intermedio 161, que puede ser obtenido fácilmente a partir
del Intermedio 21.
En las rutas 4 y 5 el alcohol primario producido
mediante la etapa de diazotización inicial se protege con silicio
para permitir una protección selectiva del Fenol del anillo E y
eliminar así el Intermedio 25. Después de la modificación del
Anillo A (deprotección/oxidación), se elimina el grupo silicio y el
alcohol primario se esterifica con el derivado de cisteína.
Estos cambios son una consecuencia directa de los
problemas que se encontraron en el escalado de la ruta proporcionada
en WO 0069862. Como resultado de estos cambios la ruta 2 es tres
etapas más corta y así pues es potencialmente más apropiada para
una fabricación rutinaria más apropiada y/o barata.
La etapa de proceso de esta invención puede
formar parte de un proceso de fabricación para la preparación de un
producto tipo ecteinascidina con un puente
espiroamina-1,4, donde el proceso comprende la
formación de un puente 1,4 utilizando un compuesto
1-lábil, 10-hidroxi,
18-hidroxi protegido,
di-6,8-en-5-ona
anillo fusionado, donde la protección en C-18 se
elimina antes de la introducción de la espiroamina.
En una de las versiones del proceso, el producto
ecteinascidina tiene un grupo 21-hidroxi, y el
proceso incluye la conversión de un grupo 21-ciano
en un grupo 21-hidroxi.
Típicamente la espiroamina es una
espiroquinolina, especialmente la espiroquinolina de la
ecteinascidina 743.
En uno de los procesos preferidos, el grupo
18-protegido del compuesto 1-lábil,
10-hidroxi, 18-hidroxi protegid,
di-6,8-en-5-ona
anillo fusionado compuesto está protegido con: MOM, metoximetil; o
MEM, grupo metoxietoximetil.
De forma apropiada el grupo
1-lábil es un grupo cisteiniloximetilen
N-protegido de fórmula
-CH_{2}-O-CO-CNHProt^{1}-CH_{2}-S-H.
En esta fórmula Prot^{1} es típicamente: Boc,
t-butiloxicarbonil; Troc,
2,2,2-tricloroetiloxicarbonil; Cbz,
benciloxicarbonil; o Alloc, aliloxicarbonil.
En la etapa de esta invención, Prot^{1} se
elimina en el mismo paso que la protección
C-18.
El grupo 1-lábil puede generarse
a partir de un 1-sustituyente de fórmula:
-CH_{2}-O-CO-CNHProt^{1}-CH_{2}-S-Prot^{2}.
En esta fórmula, Prot^{2} es típicamente Fm,
9-fluorenilmetil.
Un 1-sustituyente de fórmula:
-CH_{2}-O-CO-CNHProt^{1}-CH_{2}-S-Prot^{2}
puede formarse mediante la
esterificación de un sustituyente
-CH_{2}-O-H.
La esterificación se puede llevar a cabo antes o
después de la formación de la estructura 10-hidroxi,
di-6,8-en-5-ona.
En una de las versiones, el proceso empieza a
partir de un compuesto con anillo fusionado
1-aminometilen, 5-hidroxi protegido,
7,8-dioximetilen, 18-hidroxi,
21-ciano.
El grupo 1-aminometilen puede
protegerse de forma temporal para permitir la protección del grupo
18-hidroxi, y eliminarse la protección temporal.
De forma alternativa, el grupo
C-18 hidroxi puede protegerse después de la
formación de la función 1-éster.
En otra de las variaciones, el grupo
1-aminometilen se convierte en un grupo
1-hidroximetilen y el grupo
1-hidroximetilne se protege de forma temporal, para
permitir la protección del grupo 18-hidroxi, y se
elimina la protección temporal.
La estructura de anillo fusionado tiene, de forma
apropiada, la fórmula:
especialmente donde R^{15} es H.
Uno o más de todos los sustituyentes restantes puedes ser como en
la ecteinascidina
743.
La invención permite la utilización de un
compuesto conocido, la safracina B, que también recibe el nombre de
quinonamina, en un proceso de síntesis hemisintética.
De forma más general, la invención trata sobre un
proceso hemisintético para la formación de intermedios, derivados y
estructuras relacionadas de ecteinascidina u otros compuestos de
tipo tetrahidroisoquinolinfenol empezando a partir de alcaloides de
tipo bis(tetrahidroisoquinolina) naturales. Los materiales
iniciales apropiados para el proceso hemisintético incluyen los
antibióticos de tipo saframicina y safracina que se pueden obtener
a partir de distintos caldos de cultivo, y también los compuestos de
tipo reineramicina y xestomicina que se pueden obtener de esponjas
marinas.
La fórmula general (XV) para los compuestos
iniciales es como sigue:
donde:
R^{1} es un grupo amidometileno como
-CH_{2}-NH-CO-CR^{25a}R^{25b}R^{25c}
donde R^{25a} y R^{25b} forman un grupo ceto o uno de ellos es
-OH, -NH_{2} o -OCOCH_{3} y el otro es -CH_{2}COCH_{3}, -H,
-OH o -OCOCH_{3}, mientras que cuando R^{25a} sea -OH o
-NH_{2} then R^{25b} no sea -OH, y R^{25c} es -H, -CH_{3} o
-CH_{2}CH_{3}, o R^{1} es un grupo aciloximetilen como
-CH_{2}-O-CO-R,
donde R es -C(CH_{3})=CH-CH_{3} o
-CH_{3};
R^{5} y R^{8} se escogen de forma
independiente de entre -H, -OH o -OCOCH_{2}OH, o bien R^{5} y
R^{8} son ambos un grupo ceto y el anillo A es un anillo de tipo
p-benzoquinona;
R^{14a} y R^{14b} son ambos -H o uno de ellos
es -H y el otro es -OH, -OCH_{3} o -OCH_{2}CH_{3}, o
R^{14a} y R^{14b} forman conjuntamente un grupo ceto;
R^{15} y R^{18} se escogen de forma
independiente entre -H o -OH, o bien R^{5} y R^{8} son ambos un
grupo ceto y el anillo A es un anillo de
p-benzoquinona; y
R^{21} es -OH o -CN.
Una fórmula más general para esta clase de
compuestos se proporcione a continuación:
donde los grupos sustituyentes
definidos por R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{6},
R_{7}, R_{8}, R_{9}, R_{10} se seleccionan de forma
independiente del grupo consistente en H, OH, OCH_{3}, CN, =O,
CH_{3};
donde X son las distintas funcionalidades amida o
éster contenidas en los productos naturales mencionados;
donde cada círculo de puntos representa uno, dos
o más enlaces dobles opcionales.
Así pues, ahora proporcionamos rutas
hemisintéticas para la producción de intermedios incluyendo los
Intermedios 11 o 21 y, de esta forma, producción de los compuestos
de tipo ecteinascidina, así como ftalascidina y compuestos
adicionales. Cada una de las rutas hemisintéticas de la invención
comprende cierto número de etapas de transformación para alcanzar
el producto deseado. Se pueden proporcionar rutas alternativas, por
ejemplo, cambiando el orden de las etapas de transformación como se
considere apropiado o mediante el cambio de los grupos protectores
utilizados.
En particular, esta invención trata sobre el
suministro de un material inicial 21-ciano de
fórmula general (XVI):
donde R^{1}, R^{5}, R^{8},
R^{14a}, R^{14b}, R^{15} y R^{18} son tal como se ha
definido.
Otros compuestos de fórmula (XVI) con distintos
sustituyentes en la posición 21 pueden representar también posibles
materiales iniciales. En general, cualquier derivado capaz de
producir compuestos de fórmula (XV) mediante desplazamiento
nucleofílico del grupo 21-hidroxi, donde R^{21} es
un grupo hidroxi cis un candidato. Algunos ejemplos de
sustituyentes 21 apropiados incluyen pero no están limitados a:
un grupo mercapto;
un grupo alquiltio (el grupo alquilo tiene de 1 a
6 átomos de carbono);
un grupo ariltio (el grupo arilo tiene de 6 a 10
átomos de carbono y es no sustituido o bien se halla sustituido por
de 1 a 5 sustituyentes seleccionados de entre, por ejemplo, un
grupo alquilo con desde 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi con
desde 1 a 6 átomos de carbono, átomos halógenos, grupos mercapto y
grupos nitro);
un grupo amino;
a mono-or dialquilamino (cada
grupo alquilo tiene de 1 a 6 átomos de carbono);
un grupo mono-or diarilamino
(cada grupo arilo es tal como se ha definido anteriormente en
relación a los grupos ariltio);
un grupo
[\alpha]-carbonilalquilo de fórmula
-C(R^{a})(R^{b})-C(-O)R^{c},
donde
R^{a} y R^{b} se seleccionan de entre átomos
de hidrógeno, grupos alquilo con de 1 a 20 átomos de carbono,
grupos arilo (tal como se han definido anteriormente en relación a
grupos ariltio), un grupo aralquilo (en el cual un grupo alquilo que
tiene de 1 a 4 átomos de carbono se halla sustituido por un grupo
arilo tal como se ha definido anteriormente relación a los grupos
ariltio), mientras que uno de los R^{a} y R^{b} sean un átomo
de hidrógeno;
R^{c} se selecciona de entre un átomo de
hidrógeno, un grupo alquilo que tenga de 1 a 20 átomos de carbono,
grupos arilo (tal como se han definido anteriormente en relación a
los grupos ariltio), un grupo aralquilo (en el cual un grupo alilo
con de 1 a 4 átomos de carbono se halla sustituido con un grupo
arilo tal como se ha definido anteriormente en relación a los
grupos ariltio), un grupo alcoxi con de 1 a 6 átomos de carbono, un
grupo amino o un grupo mono- o dialquilamino tal como se han
definido anteriormente.
Así pues, en un aspecto más general, la primera
etapa es para formar un derivado 21 utilizando un reactivo
nucleofílico. Hacemos referencia a tales compuestos como compuestos
21-Nuc.
La presencia del grupo 21-ciano
se requiere en algunos productos finales, notablemente en la
ecteinascidina 770 y la ftalascidina, mientras que en otros
productos finales actúa como grupo protector que puede ser
convertido fácilmente en otro sustituyente, como en el grupo
21-hidroxi de la ecteinascidina 743. La adopción
del compuesto 21-ciano como material inicial
estabiliza de forma efectiva la molécula durante las etapas
sintéticas subsiguientes, hasta que, opcionalmente, se elimina.
Otros compuestos 21-Nuc pueden conferir estas y
otras ventajas.
En otro aspecto importante, la fabricación
consiste en la utilización de un compuesto 21-ciano
de fórmula general (XVI) en la preparación de compuestos bis- o
tris-(tetrahidroisoquinolinfenol). Los productos que puede
prepararse incluyen el Intermedios como el Intermedio 11 o 21, y
ecteinascidinas, así como compuestos nuevos y conocidos con
estructuras relacionadas.
Los materiales iniciales preferidos incluyen
aquellos compuestos de fórmula (XV) o (XVI) donde R^{14a} y
R^{14b} son ambos hidrógeno. Los materiales iniciales preferidos
también incluyen los compuestos de fórmula (XV) o (XVI) donde
R^{15} es hidrógeno. Además, los materiales iniciales preferidos
incluyen compuestos de fórmula (XV) o (XVI) donde el anillo E es un
anillo fenólico. Los materiales iniciales preferidos incluyen
además compuestos de fórmula (XV) o (XVI) donde al menos uno, mejor
al menos dos o tres de R^{5}, R^{8}, R^{15} y R^{18} no son
hidrógeno.
Algunos ejemplos de materiales iniciales
apropiados para esta invención incluyen saframicina A, saframicina
B, saframicina C, saframicina G, saframicina H, saframicina S,
saframicina Y_{3}, saframicina Yd_{1}, saframicina Ad_{1},
saframicina Yd_{2}, saframicina AH_{2}, saframicina AH_{2}Ac,
saframicina AH_{1}, saframicina AH_{1}Ac, saframicina AR_{3},
renieramicina A, renieramicina B, renieramicina C, renieramicina D,
renieramicina E, renieramicina F, xestomicina, saframicina D,
saframicina F, saframicina Mx-1, saframicina
Mx-2, safracina A, safracina B y saframicina R. Los
materiales iniciales preferidos tienen un grupo ciano en la
posición 21, para el grupo R^{21}.
En un aspecto particularmente preferido, la
invención trata sobre un proceso hemisintético en el cual las etapas
de transformación se aplican a la safracina B:
La safracin B presenta un sistema de anillos muy
relacionado con otras ecteinascidinas. Este compuesto tiene la misma
estructura pentacíclica y el mismo patrón de sustitución en el
anillo de la derecha, el anillo E. Además, la safracina B tiene una
alta similitud con algunos de los intermedios sintéticos en la
síntesis total del ET-743, en particular con los
intermedios 11 o 21. Tal intermedio puede transformarse en el
Et-743 utilizando un método bien establecido. La
conversión sintética de la safracina B en los intermedios 11 o 21
proporcionará de esta manera un método
hemi-sintético para la obtención del
ET-743.
Así los Intermedios 11 o 21 se pueden fabricar a
partir del compuesto safracina B, y se pueden derivar compuestos a
partir del Intermedio 11 o 21, en particular compuestos de tipo
ecteinascidina.
Los materiales iniciales más preferidos de esta
invención tienen un grupo 21-ciano. El compuesto
más preferido actualmente es el compuesto de Fórmula 2. Este
compuesto se obtiene directamente a partir de la safracina B y se
considera un intermedio clave en el proceso hemisintético.
(compuesto
2)
En un aspecto relacionado, la cianosafracina B se
obtiene mediante la fermentación de una cepa de Pseudomonas
fluorescens productora de safracina B, y estimulando el caldo
de cultivo utilizando ion cianuro. La cepa preferida de
Pseudomonas fluorescens es la cepa A2-2, FERM
BP-14, que se utiliza en el procedimiento de EP
055,299. Una fuente apropiada de ion cianuro es el cianuro de
potasio. En un procedimiento de trabajo típico, el caldo de cultivo
se filtra y se añade un exceso de ion cianuro. Después de un
intervalo apropiado de agitación, como 1 hora, el pH resultante es
alcalino, por ejemplo pH 9.5, y una extracción orgánica da un
extracto crudo que puede ser purificado de forma adicional para dar
la cianosafracina B.
Para evitar las dudas, la estereoquímica indicada
en esta especificación de patente está basada en nuestro
conocimiento de la estereoquímica correcta de los productos
naturales. Si se descubre un error en la estereoquímica asignada, se
necesitan hacer las correcciones apropiadas en las fórmulas
proporcionadas durante toda esta especificación de patente. Además,
como las síntesis pueden ser modificadas, esta invención se
extiende a los estereoisómeros.
Los productos de esta invención tienen
típicamente la fórmula (XVIIb):
(donde
R^{1} y R^{4} forman conjuntamente un grupo
de fórmula (IV), (V) (VII) o (VII):
R^{5} es -H o -OH;
R^{7} y R^{8} forman conjuntamente un grupo
-O-CH_{2}-O-;
R^{14a} y R^{14b} son ambos -H o uno de ellos
es -H y el otro es -OH, -OCH_{3} o -OCH_{2}CH_{3}, o
R^{14a} y R^{14b} forman conjuntamente un grupo ceto; y
R^{15} es -H o -OH;
R^{21} es -H, -OH o -CN;
y sus derivados incluyendo sus
derivados acilo especialmente cuando R^{5} es acetiloxi u otro
grupo aciloxi de hasta 4 átomos de
carbono.
En la fórmula (XVIIb), R^{1} típicamente forma
un grupo (IV) o (V) con R^{4}. El grupo R^{18} se halla
normalmente protegido. Normalmente R^{21} es ciano.
Preferiblemente R^{14a} y R^{14b} son
hidrógeno. Preferiblemente R^{15} es hidrógeno. Los derivados
O-acilo son, de forma preferible, derivados
O-acilo alifáticos, especialmente derivados acilo
de 1 a 4 átomos de carbono, y típicamente un grupo
O-acetilo, de forma notable en la posición 5.
Los grupos protectores apropiados para los grupos
fenol e hidroxilo incluyen éteres y ésteres, como alquil,
alcoxialquil, ariloxialquil, alcoxialcoxialquil,
alquilsililalcoxialquil, alquiltioalquil, ariltioalquil,
azidoalquil, cianoalquil, cloroalquil, heterociclos, arilacil,
haloarilacil, cicloalquilalquil, alquenil, cicloalquil,
alquilarilalquil, alcoxiarilalquil, nitroarilalquil, haloarilalquil,
alquilaminocarbonilarilalquil, alquilsulfinilarilalquil,
alquilsilil y otros ésteres, y arilacil, aril alquil carbonato,
carbonato alifático, alquilsulfinilarilalquil carbonato, alquil
carbonato, aril haloalquil carbonato, aril alquenil carbonato, aril
carbamato, alquil fosfinilo, alquilfosfinotioil, aril fosfinotioil,
aril alquil sulfonato y otros ésteres. Tales grupos pueden estar
sustituídos de forma opcional con los grupos mencionados
anteriormente en R^{1}.
Entre los grupos protectores apropiados para
aminas se incluyen carbamatos, amidas, y otros grupos protectores,
como alquil, arilalquil, sulfo- o halo-arilalquil,
haloalquil, alquilsililalquil, arilalquil, cicloalquilalquil,
alquilarilalquil, heterociclilalquil, nitroarilalquil,
acilaminoalquil, nitroarilditioarilalquil,
dicicloalquilcarboxamidoalquil, cicloalquil, alquenil, arilalquenil,
nitroarilalquenil, heterociclilalquenil, heterociclil,
hidroxiheterociclil, alquilditio, alcoxi- o halo- o alquilsulfinil
arilalquil, heterciclilacil, y otros carbamatos, y alcanoil,
haloalcanoil, arilalcanoil, alquenoil, heterociclilacil, aroil,
arilaroil, haloaroil, nitroaroil, y otras amidas, así como alquil,
alquenil, alquilsililalcoxialquil, alcoxialquil, cianoalquil,
heterociclil, alcoxiarilalquil, cicloalquil, nitroaril, arilalquil,
alcoxi- o hidroxiarilalquil, y muchos otros grupos. Tales grupos
pueden estar sustituídos de forma opcional con los grupos
mencionados previamente en R^{1}.
Ejemplos de tales grupos protectores se dan en
las siguientes tablas.
| protección para el grupo -OH | ||
| éteres | abreviatura | |
| metoximetil | MOM | |
| benciloximetil | BOM | |
| metoxietoximetil | MEM | |
| 2-(trimetilsilil)etoximetil | SEM | |
| metiltiometil | MTM | |
| feniltiometil | PTM | |
| azidometil | ||
| cianometil | ||
| 2,2-dicloro-1,1-difluoroetilo | ||
| 2-cloroetilo | ||
| 2-bromoetilo | ||
| tetrahidropiranilo | THP | |
| 1-etoxietilo | EE | |
| fenacilo | ||
| 4-bromofenacilo | ||
| ciclopropilmetil | ||
| alil | ||
| propargil | ||
| isopropil | ||
| ciclohexil | ||
| t-butil | ||
| bencil |
(Continuación)
| éteres | abreviatura | |
| 2,6-dimetilbencil | ||
| 4-metoxibencil | MPM o PMB | |
| o-nitrobencil | ||
| 2,6-diclorobencil | ||
| 3,4-diclorobencil | ||
| 4-(dimetilamino)carbonilbencil | ||
| 4-metilsulfinilbencil | Msib | |
| 9-antrilmetil | ||
| 4-picolil | ||
| heptafluoro-p-tolil | ||
| tetrafluoro-4-piridil | ||
| trimetilsilil | TMS | |
| t-butildimetilsilil | TBDMS | |
| t-butildifenilsilil | TBDPS | |
| triisopropilsilil | TIPS | |
| ésteres | ||
| formiato de arilo | ||
| acetato de arilo | ||
| levulinato de arilo | ||
| pivaloato de arilo | ArOPv | |
| benzoato de arilo | ||
| 9-fluorocarboxilato de arilo | ||
| carbonato de aril metilo | ||
| carbonato de 1-adamantilo | ||
| carbonato de t-butilo | BOC-OAr | |
| carbonato de 4-metilsulfinilbencilo | Msz-Oar | |
| carbonato de 2,4-dimetilpent-3-ilo | Doc-Oar | |
| carbonato de aril 2,2,2-tricloroetilo | ||
| carbonato de aril vinilo | ||
| carbonato de aril bencilo | ||
| carbamato de arilo | ||
| dimetilfosfinilo | Dmp-OAr | |
| dimetilfosfinotioilo | Mpt-OAr | |
| difenilfosfinotioil o | Dpt-Oar | |
| metanosulfonato de arilo | ||
| toluenosulfonato de arilo | ||
| 2-formilbencenosulfonato de arilo | ||
| Protección para el grupo -NH_{2} | ||
| carbamatos | abreviatura | |
| etilo | ||
| 9-fluorenilmetil | Fmoc | |
| 9-(2-sulfo)fluroenilmetil | ||
| 9-(2,7-dibromo)fluorenilmetil | ||
| 17-tetrabenzo[a,c,g,i]fluorenilmetil | Tbfmoc | |
| 2-cloro-3-indenilmetil | Climoc | |
| benz[f]inden-3-ilmetil | Bimoc | |
| 2,7-di-t-butil[9-(10,10-dioxo-10,10,10,10-tetrahidrotioxantil)]metil | DBD-Tmoc | |
| 2,2,2-tricloroetilo | Troc | |
| 2-trimetilsililetilo | Teoc |
(Continuación)
| carbamatos | abreviatura | |
| 2-feniletilo | hZ | |
| 1-(1-adamantilo)-1-metiletilo | Adpoc | |
| 2-cloroetilo | ||
| 1,1-dimetil-2-cloroetilo | ||
| 1,1-dimetil-2-bromoetilo | ||
| 1,1-dimetil-2,2-dibromoetilo | DB-t-BOC | |
| 1,1-dimetil-2,2,2-tricloroetilo | TCBOC | |
| 1-metil-1-(4-bifenil)etilo | Bpoc | |
| 1-(3,5-di-t-butilfenil)-1-1-metiletilo | t-Burmeoc | |
| 2-(2'- y 4'-piridil)etilo | Pyoc | |
| 2,2-bis(4'-nitrofenil)etilo | Bnpeoc | |
| n-(2-pivaloillamino)-1,1-dimetiletilo | ||
| 2-[(2-nitrofenil)ditio]-1-feniletilo | NpSSPeoc | |
| 2-(n,n-diciclohexilcarboxamido)etilo | ||
| t-butil | BOC | |
| 1-adamantilo | 1-Adoc | |
| 2-adamantilo | 2-Adoc | |
| vinil | Voc | |
| alil | Aloc o Alloc | |
| 1-isopropilalil | Ipaoc | |
| cinamil | Coc | |
| 4-nitrocinamil | Noc | |
| 3-(3'-piridil)prop-2-enil | Paloc | |
| 8-quinolil | ||
| n-hidroxipiperidinil | ||
| alquilditio | ||
| bencil | Cbz o Z | |
| p-metoxibencil | Moz | |
| p-nitrobencil | PNZ | |
| p-bromobencil | ||
| p-clorobencil | ||
| 2,4-diclorobencil | ||
| 4-metilsulfinilbencil | Msz | |
| 9-antrilmetil | ||
| difenilmetil | ||
| fenotiazinil-(10)-carbonil | ||
| n'-p-toluenosulfonilaminocarbonil | ||
| n'-fenilaminotiocarbonil | ||
| amidas | ||
| formamida | ||
| acetamida | ||
| cloroacetamida | ||
| trifluoroacetamida | TFA | |
| fenilacetamida | ||
| 3-fenilpropanamida | ||
| pent-4-enamida | ||
| picolinamida | ||
| 3-piridilcarboxamida | ||
| benzamida | ||
| p-fenilbenzamida | ||
| n-ftalimida | ||
| n-tetracloroftalimida | TCP |
(Continuación)
| carbamatos | abreviatura | |
| 4-nitro-n-ftalimida | ||
| n-ditiasuccinimida | Dts | |
| n-2,3-difenilmaleimida | ||
| n-2,5-dimetilpirrol | ||
| n-2,5-bis(triisopropilsioxil)pirrol | BIPSOP | |
| aducto n-1,1,4,4-tetrametildisiliazaciclopentano | STABASE | |
| 1,1,3,3-tetrametil-1,3-disilaisoindolina | BSB | |
| grupos protectores de -NH especiales | ||
| n-metilamina | ||
| n-t-butilamina | ||
| n-alilamina | ||
| n-[2-trimetilsilil)etoxi]metilamina | SEM | |
| n-3-acetoxipropilamina | ||
| n-cianometilamina | ||
| n-(1-isopropil-4-nitro-2-oxo-3-pyrrolin-3-il)amina | ||
| n-2,4-dimetoxibencilamina | Dmb | |
| 2-azanorbornenes | ||
| n-2,4-dinitrofenilamina | ||
| n-bencilamina | Bn | |
| n-4-metoxibencilamina | MPM | |
| n-2,4-dimetoxibencilamina | DMPM | |
| n-2-hidroxibencilamina | Hbn | |
| n-(difenilmetil)amino | DPM | |
| n-bis(4-metoxifenil)metilamina | ||
| n-5-dibenzosuberilamina | DBS | |
| n-trifenilmetilamina | Tr | |
| n-[(4-metoxifenil)difenilmetil]amino | MMTr | |
| n-9-fenilflurenilamina | Pf | |
| n-ferrocenilmetilamina | Fcm | |
| n-2-picolilamina n'-óxido | ||
| n-1,1-dimetiltiometileneamina | ||
| n-bencilideneamina | ||
| n-p-metoxibencilideneamina | ||
| n-difenilmetileneamina | ||
| n-(5,5-dimetil-3-oxo-1-ciclohexenil)amina | ||
| n-nitroamina | ||
| n-nitrosoamina | ||
| difenilfosfinamida | Dpp | |
| dimetiltiofosfinamida | Mpt | |
| difeniltiofosfinamida | Ppt | |
| dibencil fosforamidato | ||
| 2-nitrobencenosulfenamida | Nps | |
| n-1-(2,2,2-trifluoro-1,1-difenil)etilosufenamida | TDE | |
| 3-nitro-2-piridinasulfenamida | Npys | |
| p-toluenosulfonamida | Ts | |
| bencenosulfonamida |
Los grupos protectores para Prot^{NH} y
Prot^{OH} se deben escoger para que puedan ser eliminados en una
sola etapa.
Los productos de tipo ecteinascidina particular
de esta invención incluyen compuestos de fórmula (XVIII):
donde R^{1} y R^{4} forman un
grupo de fórmula (IV), (V), (VI) o
(VII):
más particularmente un grupo (IV) o
(V);
R^{21} es -H, -OH o -CN, más particularmente
-OH o -CN;
y sus derivados acilo, más particularmente los
derivados 5-acilo incluyendo el derivado
5-acetilo.
En general, la conversión del compuesto inicial
21-ciano a un producto de tipo ecteinascidina, por
ejemplo, de fórmula (XVIII) comprende:
a) conversión si se considera necesario de un
sistema quinona por el anillo E en el sistema fenol
b) conversión si se considera necesario de un
sistema quinona por el anillo A en el sistema fenol;
c) conversión de el sistema fenol por el anillo
A en el anillo metilenedioxifenol;
d) formación del sistema de anillo con el puente
espiro de fórmula (IV), (VI) o (VII) a través de la posición 1 y la
posición 4 en el anillo B; y
e) derivatización apropiada, como acilación.
La etapa (a), la conversión si se considera
necesario de un sistema quinona por el anillo E en el sistema
fenol, se puede llevar a cabo mediante técnicas convencionales de
reducción. Un sistema reactivo apropiado es hidrógeno con un
catalizador de paladio-carbono, aunque se pueden
utilizar otros sistemas reductores.
La etapa (b), la conversión si se considera
necesario de un sistema quinona por el anillo A en el sistema fenol
es análoga a la etapa (a), y no se necesitan más detalles.
La etapa (c), la conversión de el sistema fenol
por el anillo A en el anillo metilenedioxifenol, se puede llevar a
cabo de diversas formas, posiblemente al mismo tiempo que el paso
(b). Por ejemplo, se puede desmetilar un anillo A de quinona en el
sustituyente metoxi en la posición 7, y reducirse a una
dihidroquinona y atraparse con un reactivo electrofílico adecuado
como CH_{2}Br_{2}, BrCH_{2}Cl, o un reactivo divalente
similar que da directamente el anillo metilenedioxi, o con un
reactivo divalente como tiocarbonildiimidazol que da un anillo
metilenedioxi sustituido que puede ser convertido en el anillo
deseado.
La etapa (d) se lleva a cabo típicamente mediante
una sustitución apropiada en la posición 1 con un reactivo que
pueda ayudar en la formación del puente deseado, formando un
metiluro de quinona exento en la posición 4 y permitiendo que el
metiluro reaccione con el sustituyente en 1 para dar la estructura
con el puente. Los reactivos formadores de puente preferidos tienen
la fórmula (XIX)
donde Fu indica un grupo funcional
protegido, como un grupo -NHProt^{4a}, Prot^{3} es un grupo
protector, y la línea de puntos es un doble enlace
opcional.
Es conveniente que el metiluro se forme mediante
la introducción previa de un grupo hidroxilo en la posición 10 en la
unión de los anillos A y B para dar una estructura parcial de
fórmula (XX):
o más preferiblemente una
estructura parcial de fórmula
(XXI):
donde el grupo R'' se escoge para
el grupo deseado de fórmula (IV), (V), (VI) o (VII). Para el
primero de estos dos grupos, el grupo R'' típicamente toma la forma
de -CHFu-CH_{2}-SProt^{3}. A
continuación, los grupos protectores se pueden eliminar y modificar
como se considere apropiado para dar el compuesto
deseado.
Un procedimiento típico para la etapa (d) se
proporciona en la U.S. Pat. No. 5,721,362 que se incorpora aquí como
referencia. Se hace referencia en particular al pasaje en la
columna 8, etapa (I) y al Ejemplo 33 de la US Patent, y a los
pasajes relacionados.
La derivatización el la etapa (e) puede incluir
acilación, por ejemplo con un grupo R^{a}-CO-,
donde R^{a} puede ser diversos grupos como alquil, alcoxi,
alquilen, arilalquil, arilalquilen, acilo de aminoácido, o
heterociclil, cada uno de ellos opcionalmente sustituido con halo,
ciano, nitro, carboxialquil, alcoxi, aril, ariloxi, heterociclil,
heterocicliloxi, alquil, amino o amino sustituido. Otros agentes
acilantes incluyen isotiocianatos, como aril isotiocianatos,
notablemente fenil isocianato. Los grupos alquil, alcoxi o alquilen
de R^{a} tienen de forma apropiada de 1 a 6 o 12 átomos de
carbono, y pueden ser lineales, ramificadas o cíclicos. Los grupos
arilo son típicamente fenil, bifenil o naftil. Los grupos
heterocíclicos pueden ser aromáticos o parcial o completamente
insaturados y tienen de forma apropiada de 4 a 8 átomos en el
anillo, más preferiblemente 5 o 6 átomos en el anillo, con uno o
más heteroátomos seleccionados de entre nitrógeno, azufre y
oxígeno.
Sin ser exhaustivos, los grupos R^{a} típicos
incluyen alquil, haloalquil, alcoxialquil, haloalcoxialquil,
arilalquilen, haloalquilarilalquilen, acil, haloacil, arilalquil,
alquenil y aminoácido. Por ejemplo, R^{a}-CO-
puede ser acetil, trifluoroacetil,
2,2,2-tricloroetoxicarbonil, isovalerilcarbonil,
trans-3- (trifluorometil)cinamoilcarbonil,
heptafluorobutirilcarbonil, decanoilcarbonil,
trans-cinamoilcarbonil, butirilcarbonil,
3-cloropropionilcarbonil, cinamoilcarbonil,
4-metilcinamoilcarbonil, hidrocinamoilcarbonil, o
trans-hexenoilcarbonil, o alanil, arginil, aspartil,
asparagil, cystil, glutamil, glutaminil, glycil, histidil,
hidroxiprolil., isoleucil, leucil, lisil, metionil, fenilalanil,
prolil, seril, treonil, tironil, triptofil, tirosil, valil, así como
otros acilos de aminoácidos menos comunes, así como ftalimido y
otras amidas cíclicas. Se pueden encontrar otros ejemplos entre los
grupos protectores listados. Los compuestos en los cuales
-CO-R^{a} deriva de un aminoácido e incluyen un
grupo amino pueden formar derivados acilo por sí mismos. Entre los
comandos N-acilo apropiados se incluyen dipéptidos
que a su vez pueden formar derivados N-acilo.
Como modo de ilustración, ahora es posible
transformar el compuesto cianosafracina B de fórmula 2 en
ET-743, resultando así en una forma más corta y
directa de fabricar ET-743 que los métodos que se
han descrito previamente. Algunos de los Esquemas descritos no
utilizan la etapa del procedimiento de la invención pero se
mantienen como referencia.
El análisis retrosintético para la fabricación de
ET-743 utilizando el compuesto 29 se muestra en el
esquema I.
Esquema
I
Siguiendo el esquema I anterior es posible
obtener ET-743 en 21 etapas lineales. Este método
transforma la cianosafracina B en el Intermedio 25 a través de una
secuencia d reacciones que involucran esencialmente (1) la
eliminación del grupo metoxi del anillo A, (2) la reducción del
anillo A y la formación de un grupo metilen-dioxi
en un recipiente, (3) hidrólisis de la función amida situada sobre
el carbono 1, (4) transformación del grupo amina resultante en un
grupo hidroxilo. Además el método evita la protección y
desprotección del alcohol primario en la posición 1 del anillo B
del compuesto 25 utilizando directamente un residuo de cisteína 29
para formar el intermedio 27. El derivado de cisteína 29 se protege
en el grupo amino con un grupo protector
[\beta]-[\beta]-[\beta]-tricloroetoxicarbonil
para que existe compatibilidad con el alilo presente y los grupos
MOM. El intermedio 27 se oxida y cicla directamente. Estas
circunstancias, junto con una estrategia de desprotección distinta
en las últimas etapas de la síntesis hace que la ruta sea novedosa
y mas apropiada para su desarrollo industrial que el proceso de
U.S. 5,721,362.
La conversión del compuesto
2-ciano en el intermedio 25 normalmente consiste en
las siguientes etapas (ver esquema II):
formación del compuesto protegido de fórmula 14
haciendo reaccionar a 2 con anhídrido de
tert-butoxicarbonilo;
conversión de 14 en el compuesto
di-protegido de fórmula 15 haciéndolo reaccionar
con bromometilmetil éter y diisopropiletiloamina en
acetonitrilo;
eliminación selectiva del grupo metoxi del
sistema quinona en 15 para obtener el compuesto de fórmula 16
mediante la reacción con una solución metanólica de hidróxido
sódico;
transformación de 16 en el compuesto
metilen-dioxi de fórmula 18 empleando la siguiente
secuencia preferida: (1) el grupo quinona del compuesto 16 se reduce
con 10% Pd/C bajo atmósfera de nitrógeno; (2) el intermedio
hidroquinona se convierte en el compuesto metilenedioxi de fórmula
17 mediante la reacción con bromoclorometano y carbonato de cesio
bajo atmósfera de nitrógeno; (3) 17 se transforma en el compuesto
de fórmula 18 mediante la protección del grupo hidroxilo libre como
un grupo OCH_{2}R. Esta reacción se lleva a cabo con BrCH_{2}R
y carbonato de cesio, donde R puede ser arilo, CH=CH_{2}, OR',
etc.
eliminación de los grupos protectores
tert-butoxicarbonil y metiloximetil de 18 para dar
el compuesto de fórmula 19 mediante la reacción con una solución de
HCl en dioxano. Esta reacción también se consigue mezclando 18 con
una solución de ácido trifluoroacético en diclorometano;
formación del compuesto tiourea de fórmula 20
haciendo reaccionar 19 con fenilisotiocianato;
conversión del compuesto de fórmula 20 en un
compuesto amina de fórmula 21 mediante la reacción con una solución
de cloruro de hidrógeno en dioxano;
transformación del compuesto de fórmula 21 en el
derivado N-Troc 22 mediante la reacción con
cloroformiato de tricloroetilo y piridina;
formación del compuesto hidroxi protegido de
fórmula 23 haciendo reaccionar 22 con bromometilmetil éter y
diisopropiletiloamina;
transformación del compuesto de fórmula 23 en el
derivado N-H 24 mediante la reacción con ácido
acético y zinc;
conversión del compuesto de fórmula 24 en el
compuesto hidroxi de fórmula 25 mediante la reacción con nitrito de
sodio en ácido acético.
De forma alternativa, se puede utilizar
tetraóxido de nitrógeno tetroxide en una mezcla de ácido acético y
acetonitrilo seguido de tratamiento con hidróxido sódico. También
se puede usar nitrito de sodio en una mezcla de anhídrido
acético-ácido acético, seguido de tratamiento con hidróxido
sódico.
Esquema
II
\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
\cr \cr
\cr}
\newpage
La conversión del compuesto intermedio 25 en
ET-743 utilizando el derivado cisteína 29
normalmente conlleva los siguientes pasos (ver esquema III):
Esquema
III
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
transformación del compuesto de fórmula 24 en el
derivado 30 mediante la protección de la función primaria hidroxilo
con
(S)-N-2,2,2-tricloroetoxicarbonil-S-(9H-fluoren-9-ilmetil)cisteína
29;
conversión del compuesto protegido de fórmula 30
en el derivado fenol 31 mediante escisión del grupo alilo con
hidruro de tributilestaño y dicloropaladio-bis
(trifenilfosfina);
transformación el compuesto fenol de fórmula 31
en el compuesto de fórmula 32 mediante oxidación con anhídrido
bencenoselenínico a baja temperatura;
transformación del compuesto hidroxi de fórmula
32 en la lactona 33 mediante la siguiente secuencia: (1) Reacción
del compuesto de fórmula 32 con 2 eq. de anhídrido tríflico y 5 eq.
de DMSO. (2) sequido de la reacción con 8 eq. de
diisopropiletiloamina. (3) seguido de la reacción con 4 eq de
t-butil alcohol (4) seguido de la reacción con 7
eq de
2-tert-Butil-1,1,3,3,tetrametilguanidina
(5) seguido de la reacción con 10 eq de anhídrido acético;
transformación del compuesto lactona 33 en
compuesto hidroxilo 34 mediante la eliminación del MOM grupo
protector con TMSI;
escisión del grupo
N-tricloroetoxicarbonil del compuesto de fórmula 34
en el compuesto 35 mediante reacción con Zn/AcOH;
transformación del compuesto amino 35 en el
correspondiente compuesto [\alpha]-ceto lactona
36 mediante reacción con cloruro de
N-metilpiridinio carboxaldehído seguido de DBU;
formación de ET-770 haciendo
reaccionar el compuesto de fórmula 36 con
3-hidroxi-4-metoxifeniletiloamina;
transformación del ET-770 en
ET-743 mediante la reacción con nitrato de plata
en una mezcla de AcN/H_{2}O.
El análisis retrosintético se describe en la
siguiente secuencia.
En la presente fabricación, un tipo clave de
intermedios incluye al Intermedio 11 y tiene la fórmula general
(XXI):
donde Prot^{1} y Prot^{2} son
grupos protectores hidroxi, preferiblemente distintos. Para el
Intermedio 11, el grupo Prot^{1} es un grupo metoximetil, y
Prot^{2} es un grupo
t-butildifenilsilil.
La conversión del compuesto
21-ciano en el Intermedio 11 o un intermedio
relacionado de fórmula (XXI) normalmente conlleva las siguientes
etapas:
a) conversión si se considera necesario de un
sistema quinona por el anillo E en el sistema fenol
b) formación del grupo -OProt^{1} en la
posición 18, en el anillo E;
c) formación del grupo
-CH_{2}-OProt^{2} en la posición 1, en el anillo
B; y
d) conversión si se considera necesario de un
sistema quinona por el anillo A en el sistema fenol;
e) conversión del sistema fenol por el anillo A
en el anillo metilenedioxifenol.
La etapa (b), la formación del grupo -OProt^{1}
en la posición 18 en el anillo E, es una reacción de protección
típica para un grupo fenol, y no es necesario hacer comentarios
especiales. Se escogen las condiciones apropiadas dependiendo de la
naturaleza del grupo protector. Las otras etapas son similares a las
otras reacciones.
La etapa (b), la formación del grupo
-CH_{2}-OProt^{2} en la posición 1 en el anillo
B, se lleva a cabo normalmente formando un grupo -CH_{2}NH_{2}
en la posición 1 y seguidamente convirtiendo la función amina en
una función hidroxi y protegiendo. Así pues, cuando el material
inicial tiene un grupo R^{1} que es
-CH_{2}-NH-CO-CR^{25a}R^{25b}R^{25c}
entonces es cuestión de eliminar el grupo N-acilo.
Cuando el material inicial tiene un grupo R^{1} que es
-CH_{2}-O-CO-R
entonces no es necesario ningún cambio para un producto
ecteinascidina en el cual el sustituyente R^{1} es el mismo. Para
otros productos, es cuestión de eliminar el grupo
O-acilo. Existen diversos procedimientos para tales
deacrilaciones. En una variación, la deacilación y conversión en una
función hidroxi se lleva a cabo en un paso. Seguidamente, el grupo
hidroxi puede ser acilado o convertido de otra forma ara dar el
grupo R^{1} apropiado.
La U.S. Pat. No. 5,721,362 describe métodos
sintéticos para la fabricación de ET-743 a través de
un proceso de síntesis largo de varias etapas. Uno de los
intermedios en esta síntesis es el Intermedio 11. Utilizando
cianosafracina B como material inicial es posible llegar al
Intermedio 11, proporcionando una forma mucho más corta de fabricar
tal Intermedio y mejorando de esta forma el método de fabricación
del ET-743.
La cianosafracins B puede convertirse en el
Intermedio 25 mediante los métodos que se han descrito
anteriormente. A partir del Intermedio 25 es posible alcanczar el
Intermedio 11 utilizando las siguientes etapas, ver el esquema
VII.
formación del compuesto hidroxi protegido de
fórmula 26 haciendo reaccionar 25 con cloruro de
tert-butildifenilsilil en presencia de una base;
final escisión del grupo alilo con hidruro de
tributilestaño y dicloropaladio-bis
(trifenilfosfina) en 26 que lleva a la formación del Intermedio
11.
Esquema
VII
Uno de los ejemplos de realización del proceso de
síntesis para transformar la safracina B en el Intermedio 11 es una
modificación y extensión del Esquema VIII y comprende los pasos
secuenciales de:
conversión estereoespecífica del compuesto
Safracina B en el compuesto de Fórmula 2 mediante reemplazamiento
selectivo del OH por CN mediante reacción con KCN en medio
ácido;
formación del compuesto tiourea de fórmula 3
haciendo reaccionar el compuesto de fórmula 2 con fenil
isotiocianato;
conversión del compuesto tiourea de fórmula 3 en
la acetamida de Fórmula 5 mediante hidrólisis en medio ácido
seguido de adición de anhídrido acético; El compuesto amina
Intermedio de fórmula 4 se puede aislar haciendo terminar la
reacción de hidrólisis en medio ácido con bicarbonato de sodio,
pero este Intermedio es altamente inestable, y se convierte
rápidamente quickly en una imina cíclica de cinco miembros, que
recibe el nombre de compuesto 6;
formación del compuesto protegido de fórmula 7
mediante la reacción con bromometilmetil éter y
diusopropiletiloamina en diclorometano;
desmetilación selectiva del grupo metoxi del
sistema quinona del compuesto de Fórmula 7 en el compuesto de
fórmula 8 mediante la reacción con una solución metanólica de
hidróxido sódico;
transformación del compuesto de fórmula 8 en un
compuesto metilenedioxi de
Fórmula 9 mediante la siguiente secuencia
preferida: (1) el grupo quinona del compuesto 8 se reduce con 10%
Pd/C bajo atmósfera de nitrógeno; (2) el intermedio hidroquinona se
convierte en el compuesto metilen-dioxi de Fórmula 9
mediante la reacción con bromoclorometano y carbonato de cesio bajo
atmósfera de nitrógeno; (3) el compuesto de Fórmula 9 se transforma
en el compuesto de Fórmula 10 mediante la protección de grupo
hidroxilo libre como un grupo OCH_{2}R, mediante reacción con
BrCH_{2}R y carbonato de cesio, donde R puede ser aril,
CH=CH_{2}, OR' etc.;
conversión del grupo acetamida del compuesto de
fórmula 10 en el correspondiente grupo hidroxilo de fórmula 25
mediante reacción con tetraóxido de nitrógeno en una mezcla de
ácido acético y acetato acético seguido de tratamiento con hidróxido
sódico; de forma alternativa puede utilizarse nitrito de sodio en
una mezcla de anhídrido acético y ácido acético, seguido de
tratamiento con hidróxido sódico; de forma alternativa el grupo
acetamida del compuesto de Fórmula 10 puede convertirse en el grupo
amida primaria mediante la reacción con hidracina o con Boc2O, DMAP
seguido de hidracina; esta amina primaria puede convertirse en el
correspondiente grupo hidroxilo (compuesto de Fórmula 25) mediante
una conversión por oxidación de la amina primaria en el
correspondiente aldehído con bencenosulfonato de
4-formil-1-metilpiridinio
u otro ión piridinio, seguido de DBU u otro tratamiento básico y
hidrolización adicional, y seguido de la reducción del aldehído al
correspondiente grupo hidroxilo con hidruro de litio y alumino u
otro agente reductor;
formación del compuesto protegido de fórmula 26
mediante la reacción con cloruro
t-butildifenilsililo y dimetilaminopiridina en
diclorometano (Esquema VII);
transformación del compuesto sililado de fórmula
26 en el Intermedio 11 mediante la desprotección del grupo
protector OCH_{2}R, llevando a cabo la reacción bajo condiciones
reactivas o condiciones ácidas. Los procedimientos típicos son con
negro de paladio bajo atmósfera de nitrógeno, o TFA acuoso, o
hidruro de tributilestaño y diclorobis (trifenilfosfina
paladio).
Esquema
VIII
En otra modificación preferida, el compuesto
ciano de fórmula 2 puede transformarse en el Intermedio 11
utilizando una extensión del esquema II, consistiendo en los pasos
de.
formación del compuesto hidroxi protegido de
fórmula 26 haciendo reaccionar 25 con cloruro de
tert-butildifenilsililo en la presencia de una
base;
final escisión del grupo alilo con hidruro de
tributilestaño y dicloropaladio-bis
(trifenilfosfina) en 26, que lleva a la formación del Intermedio
11.
Así pues, mediante estas y otras rutas, es
posible transformar la cianosafracina B en cierto número de
intermedios y derivados con una potencial actividad terapéutica
antitumoral. Estos intermedios pueden fabricarse empezando a partir
de los compuestos ya descritos, o utilizando rutas
alternativas.
A la luz de las explicaciones previas, se puede
observar como la fabricación utiliza nuevos compuestos intermedios.
Dependiendo del anillo A, los intermedios son de fórmula
(XXIIa):
o de fórmula
(XXIIb):
donde:
R^{1} es -CH_{2}NH_{2} o -CH_{2}OH, o una
versión protegida o derivatizada de tal grupo y R^{4} es -H;
o
R^{1a} y R^{4} forman conjuntamente un grupo
de fórmula (IV), (V), (VI) o (VII):
R^{5} es -OH o una versión protegida o
derivatizada de tal grupo;
R^{14a} y R^{14b} son ambos -H o uno de ellos
es -H y el otro es -OH o una versión protegida o derivatizada de
tal grupo, -OCH_{3} o -OCH_{2}CH_{3}, o R^{14a} y R^{14b}
forman conjuntamente un grupo ceto;
R^{12} es -H-, -CH_{3}- o
-CH_{2}CH_{3}-;
R^{15} es -H, -OH o una versión protegida o
derivatizada de tal grupo; y
R^{18} es -OH o una versión protegida o
derivatizada de tal grupo.
En un ejemplo de realización, preferiblemente al
menos R^{1}, R^{5}, R^{14a}, R^{14b}, R^{15} o R^{18}
es un grupo protegido o derivatizado.
En una variación de esta invención, el grupo
R^{1} no es un sustituyente
tert-butildifenilsilil y/o el grupo R^{18} no es
un grupo metoximeti.
Preferiblemente R^{1} es -CH_{2}NH_{2} o
-CH_{2}OH, o una versión protegida o derivatizada de tal grupo y
R^{4} es -H; o
R^{1a} y R^{4} forman conjuntamente un
grupo:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Preferiblemente R^{14a} y R^{14b} son ambos
-H.
Una clase preferida de intermedios incluye el
compuesto que identificamos como el compuesto 25, de fórmula:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La clase preferida es pues de la fórmula general
donde el grupo MOM se ha reemplazado por otro grupo protector.
Otros intermedios preferidos incluyen los
compuestos que identificamos como los compuestos 45 y 43 (Esquema
IX).
Otros derivados N-acilo pueden
fabricarse inmediatamente a partir del compuesto 45 y son una parte
importante de esta invención. Los grupos acilo apropiados incluyen
aquellos mencionados previamente. Los correspondientes compuestos
21-hidroxi son también útiles y se encuentran entre
los compuestos activos que hemos encontrado.
Hemos encontrado además que ciertos compuestos
que preparamos inicialmente como intermedios poseen una actividad
excepcional en el tratamiento de cáncer, como leucemia, cáncer de
pulmón, cáncer de colon, cáncer de hígado y melanoma.
Tales compuestos pueden utilizarse en un método
para el tratamiento de cualquier mamífero, notablemente un humano,
afectado de cáncer que comprende la administración al individuo
afectado de una cantidad con eficacia terapéutica de un compuesto
de la invención, o de una de sus composiciones farmacéuticas.
Algunos ejemplos de composiciones farmacéuticas
incluyen cualquier sólido (tabletas, pastillas, cápsulas, gránulos,
etc.) o líquido (soluciones, suspensiones o emulsiones) con una
composición adecuada para su administración oral, tópica o
parenteral, y pueden contener el compuesto puro o en combinación con
cualquier vehículo u otros compuestos con actividad farmacológica.
Se puede necesitar que estas composiciones sean estériles cuando se
administran vía parenteral.
La administración de los compuestos o
composiciones puede ser mediante cualquier método apropiado, como
infusión intravenosa, preparaciones orales, o administración
intraperitoneal e intravenosa. Preferimos que se utilicen tiempos
de infusión de hasta 24 horas, más preferiblemente de
2-12 horas, siendo más preferido
2-6 horas. Los tiempos de infusión cortos que
permiten que el tratamiento se lleve a cabo sin que sea necesario
permanecer durante la noche en el hospital son especialmente
deseables. Sin embargo, la infusión puede ser de 12 a 24 horas o
incluso más larga si se considera necesario. La infusión se puede
llevar a cabo a intervalos apropiados de por ejemplo 2 a 4 semanas.
Las composiciones farmacológicas que contienen los compuestos de la
invención pueden administrarse mediante encapsulación en liposomas o
nanoesferas, en formulaciones de liberación sostenida o mediante
otros medios de administración estándar.
La dosificación correcta de los compuestos
variará de acuerdo a la formulación particular, el modelo de
aplicación y el situs particular, huésped y tumor tratados.
Otros factores como la edad, el peso corporal, el sexo, la dieta, el
tiempo de administración, velocidad de eliminación, condición del
huésped, combinación de fármacos, reacciones de sensibilidad y
severidad de la enfermedad se deberán tomar en cuenta. La
administración puede realizarse de forma continua o periódica dentro
de la dosis máxima tolerada.
Los compuestos y composiciones de esta invención
pueden utilizarse con otros fármacos para proporcionar una terapia
combinada. Los otros fármacos pueden formar parte de la misma
composición o bien pueden proporcionarse como una composición
separada para su administración al mismo tiempo o a tiempos
distintos.
La identidad del otro fármaco utilizado no se
halla limitada de forma especial, y entre los candidatos apropiados
se incluyen:
a) fármacos con efectos antimitóticos, en
especial aquellos dirigidos a elementos del citoesqueleto,
incluyendo moduladores de los microtúbulos como los fármacos tipo
taxano (como taxol, paclitaxel, taxotere, docetaxel),
podofilotoxinas o alcaloides de vinca (vincristine,
vinblastine);
b) fármacos antimetabolito como
5-fluorouracil, cytarabine, gemcitabine, análogos
de purina como pentostatin, metotrexato);
c) agentes de alquilación como mostazas de
nitrógeno (como ciclofosfamida o ifosfamida);
d) fármacos dirigidos al ADN como las
antraciclinas adriamicina, doxorubicina, farmorubicina o
epirubicina;
e) fármacos dirigidos a las topoisomerases como
etoposide;
f) hormonas y agonistas o antagonistas de
hormonas como estrógenos, antiestrógenos (tamoxifen y compuestos
relacionados) y andrógenos, flutamida, leuprorelina, goserelina,
cyprotrone o octreotide;
g) fármacos dirigidos a la transducción de señal
en células tumorales incluyendo derivados de anticuerpos como
herceptin;
h) fármacos alquilantes como fármacos de platino
(cis-platino, carboplatino, oxaliplatino,
paraplatino) o nitrosoureas;
i) fármacos que afectan potencialmente la
metástasis de tumores como los inhibidores de matriz de
metaloproteinasa;
j) terapia génica y agentes antisentido;
k) anticuerpos terapéuticos;
l) otros compuestos bioactivos de origen marino,
notablemente las didemninas como la aplidina;
m) análogos de esteroides, en particular
dexametasona;
n) fármacos antiinflamatorios, en particular
dexamehasona; y
o) fármacos antieméticos, en particular
dexametasona.
Cultivos Celulares. Las células se mantuvieron en
una fase de crecimiento logarítmico en Medio Esencial Mínimo Eagle,
con Sales Equilibradas Earle, con 2.0 mM
L-glutamina, con aminoácidos no esenciales, sin
bicarbonato de sodio (EMEM/neaa); complementado con 10% de Serum
Fetal Bovino (FCS), 10^{-2} M bicarbonato de sodio y 0.1 g/l de
sulfato de pencilina-G+estreptomicina.
Se ha llevado a cabo un proceso de análisis
sencillo para determinar y comparar la actividad antitumoral de
estos compuestos, utilizando una forma adaptada del método descrito
por Bergeron et al (1984). La línea de células tumorales
empleada ha sido P-388 (cultivo en suspensión de un
neoplasma limfoide de ratón DBA/2), A-549 (cultivo
monocapa de carcinoma de pulmón humano), HT-29
(cultivo monocapa de carcinoma de colon humano) y
MEL-28 (cultivo monocapa de un melanoma humano).
Las células P-388 se sembraron en
placas de 16 mm a 1*10^{4} células por placa en alícuotas de 1 ml
de MEM 5FCS que contenía la concentración indicada del fármaco. Se
sembró un grupo separado de cultivos sin los fármacos como control
de crecimiento para asegurar que las células permanecían el la fase
exponencial de crecimiento. Todas las determinaciones se llevaron a
cabo por duplicado. Después de tres días de incubación a 37ºC, 10%
CO_{2} en una atmósfera del 98% de humedad, se determinó un
IC_{50} aproximado mediante la comparación del crecimiento en las
placas con los fármacos con el crecimiento en las placas
control.
Las células A-249,
HT-29 y MEL-28 se sembraron en
placas de 16 mm a 2*10^{4} células por placa en alícuotas de 1 ml
de MEM 10FCS que contenía la concentración indicada del fármaco. Se
sembró un grupo separado de cultivos sin los fármacos como control
de crecimiento para asegurar que las células permanecían el la fase
exponencial de crecimiento. Todas las determinaciones se llevaron a
cabo por duplicado. Después de tres días de incubación a 37ºC, 10%
CO_{2} en una atmósfera del 98% de humedad, se tiñeron las placas
con un 0,1% de violeta cristal. Se determinó un IC_{50}
aproximado mediante la comparación del crecimiento en las placas con
los fármacos con el crecimiento en las placas control.
1. Raymond J. Bergeron, Paul F. Cavanaugh, Jr.,
Steven J. Kline. Robert G. Hughes, Jr., Gary T. Elliot and Carl W.
Porter. Antineoplastic and antiherpetic activity de spermidine
catecholamide hierro chelators. Biochem. Bioph Res. Comm. 1984,
121(3), 848-854.
2. Alan C. Schroeder, Robert G. Hughes, Jr. and
Alexander Bloch. Effects de Acyclic Pirimidine Nucleoside Analoges.
J. Med. Chem. 1981, 24 1078-1083.
Actividad
citotóxica
De esta forma, los compuestos activos incluyen
compuestos con el grupo 10-hidroxi y el grupo
1-lábil.
Un método importante de esta invención incluye la
reacción:
Otro método importante de esta invención incluye
la reacción:
Otro método importante de esta invención incluye
la reacción incluye la reacción en la cual un grupo R^{1} que es
aminometilen se convierte en un grupo hidroximetilen.
Otro método importante de esta invención incluye
la reacción en la cual un compuesto con un grupo R^{1} que es
hidroximetilen se hace reaccionar con un reactivo de fórmula
(XIX)
donde Fu indica un grupo funcional
protegido, Prot^{3} es un grupo protector, y la línea de puntos
muestra un doble enlace
opcional.
Otro método importante incluye la reacción para
la preparación de un compuesto 21-ciano de fórmula
(XVI) que comprende la reacción de un compuesto de fórmula (XV):
donde R^{1}, R^{5}, R^{8},
R^{14a}, R^{14b}R^{15} y R^{18} son tal como se ha definido
y R^{21} es un grupo hidroxi, con una fuente de ión cianuro, para
dar el compuesto 21-ciano
deseado.
Además, los procesos que utilizan otros
compuestos que contienen nucleófilos, para producir compuestos
similares de fórmula (XVI), donde la posición 21 está protegida por
otro grupo nucleofílico, un grupo 21-Nuc, también se
toman en consideración. Por ejemplo, se puede fabricar un compuesto
21-Nuc de fórmula (XVI) con un sustituyente
alquilamino en la posición 21 haciendo reaccionar el compuesto de
fórmula (XV) donde R^{21} es un grupo hidroxi con una alquilamina
apropiada. También puede obtenerse un compuesto
21-Nuc de fórmula (XVI) con un sustituyente
alquiltio en la posición 21 haciendo reaccionar el compuesto de
fórmula (XV) donde R^{21} es un grupo hidroxi con un alcanotiol
apropiado. De forma alternativa, se puede obtener un compuesto
21-Nuc de fórmula (XVI) con un sustituyente
carbonilalquil en la posición 21 haciendo reaccionar el compuesto
de fórmula (XV) donde R^{21} es un grupo hidroxi con un compuesto
carbonilo apropiado, típicamente en presencia de una base. Existen
otras rutas sintéticas para otros compuestos
21-Nuc.
Otra reacción importante conlleva el tratamiento
de un producto 21-ciano de esta invención para
formar un compuesto 21-hidroxi. Tales compuestos
tienen propiedades in vivo interesantes.
Las etapas del proceso de la presente invención
se ilustran mediante los siguientes ejemplos.
A una solución de 2 (21.53 g, 39.17 mmol) en
etanol (200 ml), se añadió anhídrido de
tert-butoxicarbonilo (7.7 g, 35.25 mmol) y la mezcla
se agitó durante 7 h a 23ºC. A continuación, la reacción se
concentró al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía
de columna flash (SiO_{2}, hexano:acetato de etilo 6:4) para dar
14 (20.6 g, 81%) en la forma de un sólido de color amarillo.
Rf: 0.52 (acetato de etilo:CHCl_{3} 5:2).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.49 (s,
1H), 6.32 (bs, 1H), 5.26 (bs, 1H), 4.60 (bs, 1H), 4.14 (d, J=2.4
Hz, 1H), 4.05 (d, J=2.4 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.81 (d, J=4.8 Hz,
1H), 3.7 (s, 3H), 3.34 (br d, J=7.2 Hz, 1H),
3.18-3.00 (m, 5H), 2.44 (d, J=18.3 Hz, 1H), 2.29
(s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.82 (s, 3H), 1.80-1.65 (m,
1H), 1.48 (s, 9H), 0.86 (d, J=5.7 Hz, 3H)
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 185.5,
180.8, 172.7, 155.9, 154.5, 147.3, 143.3, 141.5, 135.3, 130.4,
129.2, 127.5, 120.2, 117.4, 116.9, 80.2, 60.7, 60.3, 58.5, 55.9,
55.8, 54.9, 54.4, 50.0, 41.6, 40.3, 28.0, 25.3, 24.0, 18.1, 15.6,
8.5.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{34}H_{43}N_{5}O_{8}: 649.7. Encontrado
(M+H)^{+}: 650.3.
A una solución agitada de 14 (20.6 g, 31.75 mmol)
en CH_{3}CN (159 ml), se añadieron diisopropiletiloamina (82.96
ml, 476.2 mmol), bromuro de metoximetileno (25.9 ml, 317.5 mmol) y
dimetilaminopiridina (155 mg, 1.27 mmol) a 0ºC. La mezcla se agitó
a 23ºC durante 24 h. La reacción se enfrió a 0ºC con 0.1N HCl acuoso
(750 ml) (pH=5), y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 400 ml). La
fase orgánica se secó (sulfato de sodio) y se concentró al vacío.
El residuo se purificó mediante cromatografía de columna flash
(SiO_{2}, gradiente hexano:acetato de etilo 4:1 a hexano:acetato
de etilo 3:2) para dar 15 (17.6 g, 83%) en la forma de un sólido de
color amarillo.
Rf: 0.38 (hexano:acetato de etilo 3:7).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.73 (s,
1H), 5.35 (bs, 1H), 5.13 (s, 2H), 4.50 (bs, 1H), 4.25 (d, J=2.7 Hz,
1H), 4.03 (d, J=2.7 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.84 (bs, 1H),
3.82-3.65 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.56 (s, 3H),
3.39-3.37 (m, 1H), 3.20-3.00 (m,
5H), 2.46 (d, J=18 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.85 (s,
3H), 1.73-1.63 (m, 1H), 1.29 (s, 9H), 0.93 (d,
J=5.1 Hz, 3H)
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 185.4,
180.9, 172.4, 155.9, 154.5, 149.0, 148.4, 141.6, 135.1, 131.0,
129.9, 127.6, 124.4, 123.7, 117.3, 99.1, 79.3, 60.7, 59.7, 58.4,
57.5, 56.2, 55.9, 55.0, 54.2, 50.0, 41.5, 39.9, 28.0, 25.2, 24.0,
18.1, 15.6, 8.5.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{47}N_{5}O_{9}: 693.8. Encontrado
(M+H)^{+}: 694.3.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A un recipiente que contenía 15 (8 g, 1.5 ml) en
metanol (1.6 l) se añadió una solución acuosa de 1M hidróxido sódico
(3.2 l) a 0ºC. La reacción se agitó durante 2 h a esta temperatura
y a continuación, se detuvo con 6M HCl a pH=5. La mezcla se extrajo
con acetato de etilo (3 x 1 l) y las capas orgánicas combinadas se
secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron al vacío. El
residuo se purificó mediante cromatografía de columna flash
(SiO_{2}, gradiente CHCl_{3} a CHCl_{3}:acetato de etilo 2:1)
para dar 16 (5.3 mg, 68%).
Rf: 0.48 (CH_{3}CN:H2O 7:3,
RP-C18)
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.73 (s,
1H), 5.43 (bs, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.54 (bs, 1H), 4.26 (d, J=1.8 Hz,
1H), 4.04 (d, J=2.7 Hz 1H), 3.84 (bs, 1H), 3.80-3.64
(m, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.41-3.39 (m, 1H),
3.22-3.06 (m, 5H), 2.49 (d, J=18.6 Hz 1H), 2.35 (s,
3H), 2.30-2.25 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 1.87 (s, 3H),
1.45-1.33 (m, 1H), 1.19 (s, 9H), 1.00 (br d, J=6.6
Hz 3H)
^{13}C RMN (75 MHz, -CDCl3):\delta 184.9,
180.9, 172.6, 154.7, 151.3, 149.1, 148.6, 144.7, 132.9, 131.3,
129.8, 124.5, 123.7, 117.3, 116.8, 99.1, 79.4, 59.8, 58.6, 57.7,
56.2, 55.6, 54.9, 54.5, 50.1, 41.6, 40.1, 28.0, 25.3, 24.4, 18.1,
15.7, 8.0.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{35}H_{45}N_{5}O_{9}: 679.7. Encontrado
(M+H)^{+}: 680.3.
A una solución desgasificada del compuesto 16
(1.8 g, 2.64 mmol) en DMF (221 ml) se añadió 10% Pd/C (360 mg) y se
agitó bajo H_{2} (presión atmosférica) durante 45 min. La
reacción se filtró a través de celite bajo argón, a un recipiente
que contenía anhidro Cs_{2}CO_{3} (2.58 g, 7.92 mmol). A
continuación, se añadió bromoclorometano (3.40 ml 52.8 mmol), y se
selló el tubo y se agitó a 100ºC. durante 2 h. La reacción se
enfrió, se filtró a través de celite y se lavó con CH_{2}Cl_{2}.
La capa orgánica se concentró y se secó (sulfato de sodio) para dar
17 en la forma de un aceite de color marrón que se utilizó en la
etapa siguiente sin purificación adicional.
Rf: 0.36 (hexano:acetato de etilo 1:5,
SiO_{2}).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.68 (s,
1H), 6.05 (bs, 1H), 5.90 (s, 1H), 5.79 (s, 1H), 5.40 (bs, 1H),
5.31-5.24 (m, 2H), 4.67 (d, J=8.1 Hz, 1H), 4.19 (d,
J=2.7 Hz, 1H), 4.07 (bs, 1H), 4.01 (bs, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.67 (s,
3H), 3.64-2.96 (m, 5H), 2.65 (d, J=18.3 Hz, 1H),
2.33 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.01-1.95
(m, 1H), 1.28 (s, 9H), 0.87 (d, J=6.3 Hz, 3H)
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 172.1,
162.6, 154.9, 149.1, 145.7, 135.9, 130.8, 130.7, 125.1, 123.1,
117.8, 100.8, 99.8, 76.6, 59.8, 59.2, 57.7, 57.0, 56.7, 55.8, 55.2,
49.5, 41.6, 40.1, 36.5, 31.9, 31.6, 29.7, 28.2, 26.3, 25.0, 22.6,
18.2, 15.8, 14.1, 8.8.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{47}N_{5}O_{9}: 693.34. Encontrado
(M+H)^{+}: 694.3.
A un recipiente que contenía una solución de 17
(1.83 g, 2.65 mmol) en DMF (13 ml), se añadieron Cs_{2}CO_{3}
(2.6 g, 7.97 mmol), y bromuro de alilo (1.15 ml, 13.28 mmol) a 0ºC.
La mezcla resultante se agitó a 23ºC. durante 1 h. La reacción se
filtró a través de celite y se lavó con CH_{2}Cl_{2}. La capa
orgánica se secó y se concentró (sulfato de sodio). El residuo se
purificó mediante cromatografía de columna flash (SiO_{2},
CHCl_{3}:acetato de etilo 1:4) para dar 18 (1.08 mg, 56%) en la
forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.36 (CHCl_{3}:acetato de etilo 1:3).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.70 (s,
1H), 6.27-6.02 (m, 1H), 5.94 (s, 1H), 5.83 (s, 1H),
5.37 (dd, J1=1.01 Hz, J2=16.8 Hz, 1H), 5.40 (bs, 1H), 5.25 (dd,
J1=1.0 Hz, J2=10.5 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.91 (bs, 1H),
4.25-4.22 (m, 1H), 4.21 (d, J=2.4 Hz, 1H),
4.14-4.10 (m, 1H), 4.08 (d, J=2.4 Hz, 1H), 4.00 (bs,
1H), 3.70 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.56-3.35 (m, 2H),
3.26-3.20 (m, 2H), 3.05-2.96 (dd,
J1=8.1 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2.63 (d, J=18 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.21
(s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.91-1.80 (m, 1H), 1.24 (s,
9H), 0.94 (d, J=6.6 Hz, 3H)
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 172.0,
154.8, 148.8, 148.6, 148.4, 144.4, 138.8, 133.7, 130.9, 130.3,
125.1, 124.0, 120.9, 117.8, 117.4, 112.8, 112.6, 101.1, 99.2, 73.9,
59.7, 59.3, 57.7, 56.9, 56.8, 56.2, 55.2, 40.1, 34.6, 31.5, 28.1,
26.4, 25.1, 22.6, 18.5, 15.7, 14.0, 9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{39}H_{51}N_{5}O_{9}: 733.4. Encontrado
(M+H)^{+}: 734.4.
A una solución de 18 (0.1 g, 0.137 mmol) en
dioxano (2 ml), se añadió 4.2M HCl/dioxano (1.46 ml) y la mezcla se
agitó durante 1.2 h a 23ºC. La reacción se enfrió a 0ºC. con
bicarbonato de sodio acuoso saturado (60 ml) y se extrajo con
acetato de etilo (2*70 ml). La capa orgánicas se secaron (sulfato de
sodio) y se concentraron al vacío para dar 19 (267 mg, 95%) en la
forma de un sólido de color blanco que se utilizó en reacciones
posteriores sin purificación adicional.
Rf: 0.17 (acetato de etilo:meihanol 10:1,
SiO_{2})
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): S 6.49 (s, 1H),
6.12-6.00.(m, 1H), 5.94 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 5.34
(dd, J=1.0 Hz, J=17.4 Hz, 1H), 5.25 (dd, J=1.0 Hz, J=10.2 Hz, 1H),
4.18-3.76 (m, 5H), 3.74 (s, 3H),
3.71-3.59 (m, 1H), 3.36-3.20 (m,
4H), 3.01-2.90 (m, 1H), 2.60 (d, J=18.0 Hz, 1H),
2.29 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.97-1.86
(m, 1H), 0.93 (d, J=8.7 Hz, 3H)
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 175.5,
148.4, 146.7, 144.4, 142.4, 138.9, 133.7, 131.3, 128.3, 120.8,
117.9, 117.4, 113.8, 112.4, 101.1, 74.2, 60.5, 59.1, 56.5, 56.1,
56.3, 56.0, 55.0, 50.5, 41.6, 39.5, 29.5, 26.4, 24.9, 21.1, 15.5,
9.33.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{32}H_{39}N_{5}O_{6}: 589. Encontrado (M+H)^{+}:
590.
A una solución de 19 (250 mg, 0.42 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (1.5 mmol), se añadió fenil isotiocianato (0.3 ml,
2.51 mmol) y la mezcla se agitó a 23ºC. durante 1 h. La reacción se
concentró al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía
de columna flash (SiO_{2}, gradiente hexano a 5:1 hexano:acetato
de etilo) para dar 20 (270 mg, 87%) en la forma de un sólido de
color blanco.
Rf: 0.56 (CHCl_{3}:acetato de etilo 1:4).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 8.00 (bs,
1H), 7.45-6.97 (m, 4H), 6.10 (s, 1H),
6.08-6.00 (m, 1H), 5.92 (s, 1H), 5.89 (s, 1H), 5.82
(s, 1H), 5.40 (dd, J=1.5 Hz, J=17.1 Hz, 1H), 3.38 (bs, 1H), 5.23
(dd, J=1.5 Hz, J=10.5 Hz, 1H), 4.42-4.36 (m, 1H),
4.19-4.03 (m, 5H), 3.71 (s, 3H),
3.68-3.17 (m, 4H), 2.90 (dd, J=7.8 Hz, J=18.3 Hz,
1H), 2.57 (d, J=18.3 Hz, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.10 (s,
3H), 1.90 (dd, J=12.3 Hz, J=16.5 Hz, 1H), 0.81 (d, J=6.9 Hz,
3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 178.4,
171.6, 148.6, 146.8, 144.3, 142.7, 138.7, 136.2, 133.6, 130.7,
129.8, 126.6, 124.2, 124.1, 120.9, 120.5, 117.7, 117.4, 116.7,
112.6, 112.5, 101.0, 74.0, 60.6, 59.0, 57.0, 56.2, 56.1, 55.0, 53.3,
41.4, 39.7, 26.3, 24.8, 18.3, 15.5, 9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C39H44N6O6S: 724.8 Encontrado (M+H)^{+}: 725.3.
A una solución de 20 (270 mg, 0.37 mmol) en
dioxano (1 ml), 4.2N HCl/dioxano (3.5 ml) se añadió y la reacción se
agitó a 23ºC. durante 30 min. A continuación, acetato de etilo (20
ml) y H2O (20 ml) se añadieron y la capa orgánica se decantó. La
fase acuosa was basified con saturated aqueous bicarbonato de sodio
(60 ml) (pH=8) a 0ºC. y a continuación, se extrajo con
CH_{2}Cl_{2} (2*50 ml). Los extractos orgánicos combinados se
secaron (sulfato de sodio), y se concentró al vacío. El residuo se
purificó mediante cromatografía de columna flash (SiO_{2}, acetato
de etilo:metanol 5:1) para dar compuesto 21 (158 mg, 82%) en la
forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.3 (acetato de etilo:metanol 1:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): S 6.45 (s, 1H),
6.12-6.03 (m, 1H), 5.91 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 5.38
(dd, J1=1.2 Hz, J2=17.1 Hz, 1H), 5.24 (dd, J1=1.2 Hz, J2=10.5 Hz,
1H), 4.23-4.09 (m, 4H), 3.98 (d, J=2.1 Hz, 1H), 3.90
(bs, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.36-3.02 (m, 5H),
2.72-2.71 (m, 2H), 2.48 (d, J=18.0 Hz, 1H), 2.33 (s,
3H), 2.22 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.85 (dd, J1=11.7 Hz, J2=15.6 Hz,
1H)).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 148.4,
146.7, 144.4, 142.8, 138.8, 133.8, 130.5, 128.8, 121.5, 120.8,
118.0, 117.5, 116.9, 113.6, 112.2, 101.1, 74.3, 60.7, 59.9, 58.8,
56.6, 56.5, 55.3, 44.2, 41.8, 29.7, 26.5, 25.7, 15.7, 9.4.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{29}H_{34}N_{4}O_{5}: 518.3. Encontrado
(M+H)^{+}: 519.2.
A una solución de 21 (0.64 g, 1.22 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (6.13 ml), se añadieron piridina (0.104 ml, 1.28
mmol) y cloroformatiato de 2,2,2-tricloroetilo
(0.177 ml, 1.28 mmol) a -10ºC. La mezcla se agitó a esta
temperatura durante 1 h y a continuación, la reacción se enfrió
mediante la adición de 0.1N HCl (10 ml) y se extrajo con
CH_{2}Cl_{2} (2 x 10 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato
de sodio y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante
cromatografía de columna flash (SiO_{2}, (hexano:acetato de etilo
1:2) para dar 22 (0.84 g, 98%) en la forma de una espuma sólida de
color blanco.
Rf: 0.57 (acetato de etilo:metanol 5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.50 (s,
1H), 6.10-6.00 (m, 1H), 6.94 (d, J=1.5 Hz, 1H),
5.87 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.73 (bs, 1H), 5.37 (dq, J1=1.5 Hz, J2=17.1
Hz, 1H), 5.26 (dq, J1=1.8 Hz, J2=10.2 Hz, 1H), 4.60 (d, J=12 Hz,
1H), 4.22-4.10 (m, 4H), 4.19 (d, J=12 Hz, 1H), 4.02
(m, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.37-3.18 (m, 5H), 3.04 (dd,
J1=8.1 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2.63 (d, J=18 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.26
(s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.85 (dd, J1=12.3 Hz, J2=15.9 Hz, 1H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 154.3,
148.5, 146.7, 144.5, 142.8, 139.0, 133.8, 130.7, 128.7, 121.3,
120.8, 117.8, 117.7, 116.8, 112.7, 101.2, 77.2, 74.3, 60.7, 59.9,
57.0, 56.4, 55.3, 43.3, 41.7, 31.6, 26.4, 25.3, 22.6, 15.9, 14.1,
9.4.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{32}H_{35}Cl_{3}N_{4}O_{7}: 694.17. Encontrado
(M+H)^{+}: 695.2.
A una solución de 22 (0.32 g, 0.46 mmol) en
CH_{3}CN (2.33 ml), se añadieron diisopropiletiloamina (1.62 ml,
9.34 mmol), bromometil metil éter (0.57 ml, 7.0 mmol) y
dimetilaminopiridina (6 mg, 0.046 mmol) a 0ºC. La mezcla se calentó
a 30ºC. durante 10 h. A continuación, la reacción se diluyó con
diclorometano (30 ml) y se vertió en una solución acuosa de HCl a
pH=5 (10 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y el
disolvente se eliminó bajo presión reducida para dar un residuo que
se purificó mediante cromatografía de columna flash (SiO_{2},
hexano:acetato de etilo 2:1) para dar 23 (0.304 g, 88%) en la forma
de una espuma sólida de color blanco.
Rf: 0.62 (hexano:acetato de etilo 1:3).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.73 (s,
1H), 6.10 (m, 1H), 5.94 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.88 (d, J=1.5 Hz, 1H),
5.39 (dq, J1=1.5 Hz, J2=17.1 Hz, 1H), 5.26 (dq, J1=1.8 Hz, J2=10.2
Hz, 1H), 5.12 (s, 2H), 4.61 (d, J=12 Hz, 1H), 4.55 (t, J=6.6 Hz,
1H), 4.25 (d, J=12 Hz, 1H), 4.22-4.11 (m, 4H), 4.03
(m, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.58 (s, 3H), 3.38-3.21 (m,
5H), 3.05 (dd, J1=8.1 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2.65 (d, J=18 Hz, 1H), 2.32
(s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 1.79 (dd, J.=12.3 Hz, J2=15.9
Hz, 1H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 154.3,
148.6, 148.4, 144.5, 139.0, 133.6, 130.6, 130.1, 125.07, 124.7,
124.0, 121.1, 117.7, 112.6, 101.2, 99.2, 77.2, 74.4, 74.1, 59.8,
59.8, 57.7, 57.0, 56.8, 56.68, 55.3, 43.2, 41.5, 26.4, 25.2, 15.9,
9.3.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{34}H_{39}Cl_{3}N_{4}O_{8}: 738.20. Encontrado
(M+H)^{+}: 739.0.
A una suspensión de 23 (0.304 g, 0.41 mmol) en
ácido acético acuoso al 90% (4 ml), powder zinc (0.2 g, 6.17 mmol)
se añadió y la reacción se agitó durante 7 horas a 23ºC. La mezcla
se filtró a través de celite que se lavó con CH_{2}Cl_{2}. La
capa orgánica se lavó con una solución acuosa saturada de
bicarbonato de sodio (pH=9) (15 ml) y se secó sobre sulfato de
sodio. El disolvente se eliminó bajo presión reducida para dar 24
(0.191 g, 83%) en la forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.3 (acetato de etilo:metanol 5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.68 (s,
1H), 6.09 (m, 1H), 5.90 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.83 (d, J=1.5 Hz, 1H),
5.39 (dq, J1=1.5 Hz, J2=17.1 Hz, 1H), 5.25 (dq, J1=1.5 Hz, J2=10.2
Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.22-4.09 (m, 3H), 3.98 (d,
J=2.4 Hz, 1H), 3.89 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.57 (s, 3H),
3.37-3.17 (m, 3H), 3.07 (dd, J1=8.1 Hz, J2=18 Hz,
1H), 2.71 (m, 2H), 2.48 (d, J=18 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.19 (s,
3H), 2.17 (s, 3H), 1.80 (dd, J.=12.3 Hz, J2=15.9 Hz, 1H)
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 148.5,
148.2, 144.3, 138.7, 133.7, 130.7, 129.9, 125.0, 123.9, 121.3,
117.9, 117.5, 113.6, 112.0, 101.0, 99.2, 74.0, 59.8, 59.7, 58.8,
57.6, 57.0, 56.2, 55.2, 44.2, 41.5, 31.5, 26.4, 25.6, 22.5, 16.7,
14.0, 9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C31H38N4O6: 562.66. Encontrado (M+H)^{+}: 563.1.
A una solución de 24 (20 mg, 0.035 mmol), en H2O
(0.7 mmol) y THF (0.7 mmol), se añadieron NaNO_{2} (12 mg, 0.17
mmol) y AcOH acuoso al 90% (0.06 ml) a 0ºC. y la mezcla se agitó a
0ºC. durante 3 h. Después de dilución con CH_{2}Cl_{2} (5 ml),
la capa orgánica se lavó con agua (1 ml), se secó sobre sulfato de
sodio y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante
cromatografía de columna flash (SiO_{2}, hexano:acetato de etilo
2:1) para dar 25 (9.8 mg, 50%) en la forma de un sólido de color
blanco.
Rf: 0.34 (hexano:acetato de etilo 1:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.71 (s,
1H), 6.11 (m, 1H), 5.92](d, J=1.5 Hz, 1H), 5.87 (d, J=1.5 Hz, 1H),
5.42 (dq, J1=1.5 Hz, J2=17.1 Hz, 1H), 5.28 (dq, J.=1.5 Hz, J2=10.2
Hz, 1H), 5.12 (s, 2H), 4.26-4.09 (m, 3H), 4.05 (d,
J=2.4 Hz, 1H), 3.97 (t, J=3.0 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H),
3.67-3.32 (m, 4H), 3.58 (s, 3H), 3.24 (dd, J1=2.7
Hz, J2=15.9 Hz, 1H), 3.12 (dd, J1=8.1 Hz, J2=18.0 Hz, 1H), 2.51 (d,
J=18 Hz, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 1.83 (dd,
J1=12.3 Hz, J2=15.9 Hz, 1H)
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 148.7,
148.4, 138.9, 133.7, 131.1, 129.4, 125.1, 123.9, 120.7, 117.6,
117.5, 113.2, 112.3, 101.1, 99.2, 74.0, 63.2, 59.8, 59.7, 57.9,
57.7, 57.0, 56.5, 55.2, 41.6, 29.6, 26.1, 25.6, 22.6, 15.7, 9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{31}H_{37}N_{3}O_{7}: 563.64. Encontrado
(M+H)^{+}: 564.1.
El material inicial (2.0 g, 5.90 mmol) se añadió
a una suspensión de hidruro de sodio (354 mg, 8.86 mmol) en THF (40
ml) a 23ºC., a continuación la suspensión se trató con
cloroformiato de alilo (1.135 ml, 8.25 mmol) a 23ºC. y a
continuación se sometió a reflujo durante 3 horas. La suspensión
se enfrió, se filtró a fondo, el sólido se lavó con acetato de
etilo (100 ml), y el filtrado se concentró. El crudo en forma de
aceite se molió con hexano (100 ml) y se mantuvo a 4ºC. durante toda
la noche. A continuación, el disolvente se decantó y la pasta de
color amarillo pálido se trató con CH_{2}Cl_{2} (20 ml), y se
precipitó con hexano (100 ml). Después de 10 minutos, el disolvente
se decantó de nuevo. La operación se repitió hasta que apareció un
sólido de color blanco. El sólido de color blanco se filtró a fondo
y se secó para dar compuesto 29 (1.80 g, 65%) en la forma de un
sólido de color blanco.
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl3):
\delta 7.74 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.62 (d, J=6.9 Hz, 2H), 7.33 (t,
J=7.5 Hz, 2H), 7.30 (t, J=6.3 Hz, 2H), 5.71 (d, J=7.8 Hz, 1H), 4.73
(d, J=7.8 Hz, 2H), 4.59 (m, 1H), 4.11 (t, J=6.0 Hz, 1H), 3.17 (dd,
J=6.0 Hz, J=2.7 Hz, 2H), 3.20 (dd, J=5.4 Hz, J=2.1 Hz, 2H).
^{13}C-RMN (75 MHz, CDCl3):
\delta 173.6, 152.7, 144.0, 139.7, 137.8, 126.0, 125.6, 123.4,
118.3, 73.4, 52.4, 45.5, 35.8, 33.7.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{20}H_{18}Cl_{3}NO_{4}S: 474.8. Encontrado
(M+Na)^{+}: 497.8.
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de compuesto 25 (585 mg, 1.03 mmol) y
compuesto 29 (1.47 mg, 3.11 mmol) se hizo azeotrópica con tolueno
anhidro (3*10 ml). A una solución de 25 y 29 en CH_{2}Cl_{2}
anhidro (40 ml) se añadió DMAP (633 mg, 5.18 mmol) y EDCHCl (994
mg, 5.18 mmol) a 23ºC. La mezcla de reacción se agitó a 23ºC.
durante 3 horas. La mezcla se repartió con una solución acuosa
saturada de bicarbonato de sodio (50 ml) y las capas se separaron.
La capa acuosa se lavó con CH_{2}Cl_{2} (50 ml). Las capas
orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron
y se concentraron. El crudo se purificó mediante cromatografía de
columna flash (acetato de etilo/hexano 1:3) para obtener 30 (1.00
g, 95%) en la forma de un sólido de color amarillo crema
pálido.
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl3):
\delta 7.72 (m, 2H), 7.52 (m, 2H), 7.38 (m, 2H), 7.28 (m, 2H),
6.65 (s, 1H), 6.03 (m, 1H), 5.92 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.79 (d, J=1.5
Hz, 1H), 5.39 (m, 1H), 5.29 (dq, J=10.3 Hz, J=1.5 Hz, 1H), 5.10 (s,
2H), 4.73 (d, J=11.9 Hz, 1H), 4.66 (d, J=11.9 Hz, 1H), 4.53 (m,
1H), 4.36-3.96 (m, 9H), 3.89 (t, J=6.4 Hz, 1H),
3.71 (s, 3H), 3.55 (s, 3H), 3.33 (m, 1H), 3.20 (m, 2H), 2.94 (m,
3H), 2.59 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.83
(dd, J=16.0 Hz, J=11.9 Hz, 1H).
^{13}C-RMN (75 MHz, CDCl3):
\delta 169.7, 154.0, 148.8, 148.4, 145.7, 144.5, 140.9, 139.0,
133.7, 130.9, 130.6, 127.6, 127.0, 124.8, 124.6, 124.1, 120.8,
119.9, 118.2, 117.7, 117.3, 112.7, 112.1, 101.3, 99.2, 74.7, 73.9,
64.4, 59.8, 57.7, 57.0, 56.8, 55.4, 53.3, 46.7, 41.4, 36.5, 34.7,
31.5, 26.4, 24.9, 22.6, 15.7, 14.0, 9.1.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{51}H_{53}Cl_{3}N_{4}O_{1}0S: 1020.4. Encontrado
(M+H)^{+}: 1021.2.
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de 30 (845 mg, 0.82 mmol), se
añadió ácido acético (500 mg, 8.28 mmol) y
(PPh_{3})_{2}PdCl_{2} (29 mg, 0.04 mmol) en 20 ml de
CH_{2}Cl_{2} anhidro a 23ºC., gota a gota, Bu_{3}SnH (650 mg,
2.23 mmol). La mezcla de reacción se agitó a esta temperatura
durante 15 min., burbujeando. El crudo se enfrió con agua (50 ml) y
se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se
secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El
crudo se purificó mediante cromatografía de columna flash (acetato
de etilo/hexano en gradiente desde 1:5 a 1:3) para obtener el
compuesto 31 (730 mg, 90%) en la forma de un sólido de color
amarillo crema pálido.
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl3):
\delta 7.72 (m, 2H), 7.56 (m, 2H), 7.37 (m, 2H), 7.30 (m, 2H),
6.65 (s, 1H), 5.89 (s, 1H), 5.77 (s, 1H), 5.74 (s, 1H), 5.36 (d,
J=5.9 Hz, 1H), 5.32 (d, J=5.9 Hz, 1H), 5.20 (d, J=9.0, 1H), 4.75
(d, J=12.0 Hz, 1H), 4.73 (m, 1H), 4.48 (d, J=11.9 Hz, 1H), 4.08 (m,
4H), 3.89 (m, 1H), 3.86, (t, J=6.2 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.69 (s,
3H), 3.38 (m, 1H), 3.25 (m, 1H), 3.02-2.89 (m, 4H),
2.67 (s, 1H), 2.61 (s, 1H), 2.51 (dd, J=14.3 Hz, J=4.5 Hz, 1H),
2.29 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.95 (s, 3H), 1.83 (m, 1H).
^{13}C-RMN (75 MHz, CDCl3):
\delta 168.2, 152.5, 148.1, 146.2, 144.4, 144.3, 143.3, 139.6,
134.6, 129.7, 129.6, 126.2, 125.6, 123.4, 123.3, 121.6, 118.5,
116.3, 110.7, 110.2, 105.1, 99.4, 98.5, 75.2, 73.3, 61.7, 58.4,
57.9, 56.3, 56.1, 55.1, 54.7, 53.9, 51.9, 45.2, 40.1, 35.6, 33.3,
24.8, 23.3., 14.5, 7.3.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{48}H_{49}Cl_{3}N_{4}O_{10}S: 980.3. Encontrado
(M+H)^{+}: 981.2.
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de 31 (310 mg, 0.32 mmol), en
CH_{2}Cl_{2} anhidro (15 ml) a -10ºC. se añadió una solución de
anhídrido bencenoselenínico 70% (165 mg, 0.32 mmol), en
CH_{2}Cl_{2} anhidro (7 ml), a través de un a cánula,
manteniendo la temperatura a -10ºC. La mezcla de reacción se agitó
a -10ºC. durante 5 min. Se añadió una solución saturada de
bicarbonato de sodio (30 ml) a esta temperatura. La capa acuosa se
lavó con más CH_{2}Cl_{2} (40 ml). La capa orgánicas se secaron
sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El crudo se
purificó mediante cromatografía de columna flash (acetato de
etilo/hexano en gradiente desde 1:5 a 1: 1) para obtener 32 (287
mg, 91%, HPLC: 91.3%) en la forma de un sólido de color amarillo
crema pálido y como una mezcla de dos isómeros (65:35) que se
utilizaron en la siguiente etapa.
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl3):
\delta (Mezcla de isómeros) 7.76 (m, 4H), 7.65 (m, 4H), 7.39 (m,
4H), 7.29 (m, 4H), 6.62 (s, 1H), 6.55 (s, 1H),
5.79-5.63 (m, 6H), 5.09 (s, 1H), 5.02 (d, J=6.0 Hz,
1H), 4.99 (d, J=6.0 Hz, 1H), 4.80-4.63 (m, 6H), 4.60
(m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.38 (d, J=12.8 Hz, J=7.5 Hz, 1H), 4.27 (dd,
J=12.8 Hz, J=7.5 Hz, 1H), 4.16-3.90 (m, 10H), 3.84
(s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.50 (s, 3H), 3.49 (s, 3H),
3.33-2.83 (m, 14H), 2.45-2.18 (m,
2H), 2.21 (s, 6H), 2.17 (s, 6H), 1.77 (s, 6H), 1.67 (m, 2H).
^{13}C-RMN (75 MHz, CDCl3):
\delta (Mezcla de isómeros) 168.6, 168.4, 158.6, 154.8, 152.8,
152.5, 147.3, 147.2, 146.8, 144.1, 144.0, 140.8, 139.7, 137.1,
129.8, 129.3, 128.4, 128.7, 126.5, 125.5, 123.7, 123.6, 123.5,
123.4, 122.2, 121.3, 118.3, 115.8, 115.5, 110.2, 106.9, 103.5,
103.2, 100.1, 99.6, 97.9, 97.7, 93.8, 73.4, 70.9, 69.2, 64.9, 62.5,
59.3, 58.9, 58.4, 56.7, 56.3, 56.2, 55.4, 55.2, 55.1, 54.9, 54.7,
54.3, 54.1, 53.8, 52.8, 45.5, 40.5, 40.0, 39.8, 35.8, 35.5, 33.9,
33.7, 30.1, 28.8, 24.2, 24.1, 21.2, 14.5, 14.4, 12.7, 6.0, 5.7.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{48}H_{49}Cl_{3}N4O_{11}S: 996.3. Encontrado
(M+H)^{+}: 997.2.
El recipiente de reacción se pasó sobre una llama
dos veces, se purgó con vacío/argón varias veces y se mantuvo bajo
atmósfera de argón durante la reacción. A una solución de DMSO
(39.1 ml, 0.55 mmol, 5 equivalentes.) en CH_{2}Cl_{2} anhidro
(4.5 ml) se añadió gota a gota anhídrido tríflico (37.3 ml, 0.22
mmol, 2 equivalentes.) a -78ºC. La mezcla de reacción se agitó a
-78ºC. durante 20 minutos, a continuación se añadió una solución de
32 (110 mg, 0.11 mmol, HPLC: 91.3%) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (1
ml, para la adición principal y 0.5 ml para el lavado) a -78ºC., a
través de una cánula. Durante la adición la temperatura se mantuvo
a -78ºC. en ambos recipientes y el color cambió de amarillo a
marrón. La mezcla de reacción se agitó a -40ºC. durante 35 minutos.
Durante este periodo de tiempo la solución pasó de amarilla a verde
oscuro. Después de este tiempo, se añadió ^{i}Pr_{2}NEt (153 ml,
0.88 mmol, 8 equivalentes.) gota a gota y la mezcla de reacción se
mantuvo a 0ºC. durante 45 minutos, y durante este tiempo el color
de la solución se volvió marrón. A continuación se añadieron gota a
gota t-butanol (41.6 ml, 0.44 mmol, 4 equivalentes.)
y
2-^{t}Butil-1,1,3,3-tetrametilguanidina
(132.8 ml, 0.77 mmol, 7 equivalentes.) y la mezcla de reacción se
agitó a 23ºC. durante 40 minutos. Después de este tiempo, se añadió
gota a gota anhídrido acético (104.3 ml, 1.10 mmol, 10
equivalentes.) y la mezcla de reacción se mantuvo a 23ºC. durante 1
hora más. A continuación la mezcla de reacción se diluyó con
CH_{2}Cl_{2} (20 ml) y se lavó con solución acuosa saturada de
NH_{4}Cl (50 ml), bicarbonato de sodio (50 ml), y cloruro de
sodio(50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre
sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se
purificó mediante cromatografía de columna flash (eluyente: acetato
de etilo/hexano gradiente desde 1:3 a 1:2) para dar el compuesto
33 (54 mg, 58%) en la forma de un sólido de color amarillo
pálido.
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl3):
\delta 6.85 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.20 (d, J=5.8
Hz, 1H), 5.14 (d, J=5.3 Hz, 1H), 5.03 (m, 1H), 4.82 (d, J=12.2, 1H),
4.63 (d, J=12.0 Hz, 1H), 4.52 (m, 1H), 4.35-4.17
(m, 4H), 3.76 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 3.45 (m, 2H), 2.91 (m, 2H),
2.32 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.12 (m, 2H), 2.03 (s,
3H).
^{13}C-RMN (75 MHz, CDCl3):
\delta 168.5, 167.2, 152.7, 148.1, 147.1, 144.5, 139.6, 139.1,
130.5, 129.0, 123.7, 123.5, 123.3, 118.8, 116.5, 112.1, 100.6, 97.8,
73.3, 60.5, 59.4, 59.2, 58.3, 57.6, 57.4, 56.1, 53.3, 53.1, 40.6,
40.0, 31.0, 22.2, 18.9, 14.4, 8.1.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{39}Cl_{3}N_{4}O_{11}S: 842.1. Encontrado
(M+H)^{+}: 843.1.
A una solución de 33 (12 mg, 0.014 mmol) en
diclorometano seco (1.2 ml) y acetonitrilo de calidad HPLC (1.2 ml)
se añadió a 23ºC. yoduro sódico (21 mg, 0.14 mmol) y cloruro de
trimetilsililo recién destilado (sobre hidruro de calcio a presión
atmosférica) (15.4 mg, 0.14 mmol). La mezcla de reacción se volvió
de color naranja. Después de 15 min la solución se diluyó con
diclorometano (10 ml) y se lavó con una solución acuosa saturada
recién preparada de Na_{2}S_{2}O_{4} (3 x 10 ml). La capa
orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró.
Se obtuvo el compuesto 34 (13 mg, quantitative) en la forma de un
sólido de color amarillo pálido que se utilizó sin ninguna
purificación adicional.
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl3):
\delta 6.85 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.99 (s, -1H), 5.27 (d, J=5.8
Hz, 1H), 5.14 (d, J=5.3 Hz, 1H), 5.03 (d, J=11.9 Hz, 1H), 4.82 (d,
J=12.2, 1H), 4.63 (d, J=13.0 Hz, 1H), 4.52 (m, 1H), 4.34 (m, 1H),
4.27 (bs, 1H), 4.18 (m, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 3.44 (m,
1H), 3.42 (m, 1H), 2.91 (m, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.21
(s, 3H), 2.03 (s, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{34}H_{35}N_{4}O_{10}S: 798.1. Encontrado
(M+H)^{+}: 799.1.
A una solución de 34 (13 mg, 0.016 mmol) en una
mezcla de ácido acético/H2O (90:10, 1 ml) se añadió zinc en polvo
(5.3 mg, 0.081 mmol) a 23ºC. La mezcla de reacción se calentó a
70ºC. durante 6 h. Después de este tiempo, se enfrió a 23ºC., se
diluyó con CH_{2}Cl_{2} (20 ml) y se lavó con una solución
acuosa saturada de bicarbonato de sodio (15 ml) y una solución
acuosa de Et_{3}N (15 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato
de sodio, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante
cromatografía de columna flash con silica-NH_{2}
(eluyente: acetato de etilo/hexano gradiente desde 0:100 a 50:50)
para dar el compuesto 35 (6.8 mg, 77% para los dos pasos) en la
forma de un sólido de color amarillo pálido.
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl3):
\delta 6.51 (s, 1H), 6.03 (dd, J=1.3 Hz, J=26.5 Hz, 2H), 5.75
(bs, 1H), 5.02 (d, J=11.6 Hz, 1H), 4.52 (m, 1H), 4.25 (m, 2H), 4.18
(d, J=2.5 Hz, 1H), 4.12 (dd, J=1.9 Hz, J=11.5 Hz, 1H), 3.77 (s,
3H), 3.40 (m, 2H), 3.26 (t, Jo 6.4 Hz, 1H), 2.88 (m, 2H),
2.30-2.10 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.18
(s, 3H), 2.02 (s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz, CDCl3):
\delta 174.1, 168.4, 147.8, 145.4, 142.9, 140.8, 140.1, 131.7,
130.2, 129.1, 128.3, 120.4, 118.3, 117.9, 113.8, 111.7, 101.7, 61.2,
59.8, 59.2, 58.9, 54.4, 53.8, 54.4, 41.3, 41.5, 34.1, 23.6, 20.3,
15.5, 9.4.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{31}H_{34}N_{4}O_{8}S: 622.7. Encontrado
(M+H)^{+}: 623.2.
Una solución de yoduro de
N-metilpiridina-4-carboxaldehído
(378 mg, 1.5 mmol) en anhidro DMF (5.8 mL) se trató con tolueno
anhidro (2*10 mL) para eliminar el agua mediante eliminación
azeotrópica del tolueno. Se añadió una solución de 35 (134 mg, 0.21
mmol), tratada previamente con tolueno anhidro (2*10 mL), en anhidro
CH_{2}Cl_{2} (destilada sobe CaH_{2}, 7.2 mL), a través de
una cánula, a 23ºC. a esta solución de color naranja. La mezcla de
reacción se agitó a 23ºC. durante 4 horas. Después de este tiempo
se añadió DBU (32.2 -L, 0.21 mmol) gota a gota a 23ºC. y se agitó
durante 15 minutos a 23ºC. Se añadió una solución acuosa saturada
de ácido oxálico recién preparada (5.8 mL) a la mezcla de reacción
y se agitó durante 30 minutos a 23ºC. A continuación la mezcla de
reacción se enfrió a 0ºC. y se añadió NaHCO_{3} en porciones
seguido de la adición de una solución acuosa saturada de
NaHCO_{3}. La mezcla se extrajo con Et_{2}O. Se añadió
K_{2}CO_{3} a la capa acuosa y se extrajo con Et_{2}O. Las
capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4} y el
disolvente se eliminó bajo presión reducida. El crudo se purificó
mediante cromatografía de columna flash (AcOEt/hexano from 1/3 a
1/1) para dar compuesto 36 (77 mg, 57%) como un sólido de color
amarillo pálido.
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl3):
\delta 6.48 (s, 1H), 6.11 (d, J=1.3 Hz, 1H), 6.02 (d, J=1.3 Hz,
1H), 5.70 (bs, 1H), 5.09 (d, J=11.3 Hz, 1H), 4.66 (bs, 1H), 4.39 (m,
1H), 4.27 (d, J=5.6 Hz, 1H), 4.21 (d, V 10.5 Hz, 1H), 4.16 (d,
J=2.6 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.54 (d, J=5.1 Hz, 1H), 3.42 (d, J=8.5
Hz, 1H), 2.88-2.54 (m, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.24 (s,
3H), 2.14 (s, 3H), 2.04 (s, 3H). ^{13}C-RMN (75
MHz, CDCl3): \delta 186.7, 168.5, 160.5, 147.1, 146.4, 142.9,
141.6, 140.7, 130.4, 129.8, 121.7 (2C), 120.0, 117.8, 117.1, 113.5,
102.2, 61.7, 61.4, 60.3, 59.8, 58.9, 54.6, 41.6, 36.9, 29.7, 24.1,
20.3, 15.8, 14.1, 9.6.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{31}H_{31}N_{3}O_{9}S: 621.7. Encontrado
(M+H)^{+}: 622.2.
A una solución de 36 (49 mg, 0.08 mmol) y
2-[3-hidroxi-4-metoxifenil]etiloamina
(46.2 mg, 0.27 mmol) en etanol (2.5 ml) se añadió silica gel (105
mg) a 23ºC. La mezcla de reacción se agitó a 23ºC. durante 14 h. Se
diluyó con hexano y se vertió en una columna de cromatografía
(acetato de etilo/hexano desde 1/3 a 1/1) para dar
Et-770 (55 mg, 90%) en la forma de un sólido de
color amarillo pálido.
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl3):
\delta 6.60 (s, 1H), 6.47 (s, 1H), 6.45 (s, 1H), 6.05 (s, 1H),
5.98 (s, 1H), 5.02 (d, J=11.4 Hz, 1H), 4.57 (bs, 1H), 4.32 (bs, 1H),
4.28 (d, J=5.3 Hz, 1H), 4.18 (d, J=2.5 Hz, 1H), 4.12 (dd, J=2.1 Hz,
J=11.5 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.50 (d, J=5.0 Hz, 1H),
3.42 (m, 1H), 3.10 (ddd, J1=4.0 Hz, J2=10.0 Hz, J3=11.0 Hz, 1H),
2.94 (m, 2H), 2.79 (m, 1H), 2.61 (m, 1H), 2.47 (m, 1H), 2.35 (m,
1H), 2.32 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.09 (m, 1H), 2.04
(s, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{40}H_{42}N_{40}O_{10}S: 770.7. Encontrado
(M+H)^{+}: 771.2.
A una solución de 21 (22 mg, 0.042 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.8 ml) se añadió anhídrido ftálico (6.44 mg,
0.042 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 2 h a 23ºC. A
continuación, se añadió carbonildiimidazol (1 mg, 0.006 mmol) y la
mezcla se agitó a 23ºC. durante 7 h. A continuación, se añadió
carbonildiimidazol (5.86 mg, 0.035 ml) y la reacción se agitó a
23ºC. durante otras 17 h. La solución se diluyó con
CH_{2}Cl_{2} (15 ml) y se lavó con 0.1 N HCl (15 ml). La capa
orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y el disolvente
se eliminó bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante
cromatografía de columna flash (SiO_{2}, hexano:acetato de etilo
2:1) para dar 27 (26.4 mg, 96%) en la forma de un sólido de color
blanco.
Rf: 0.58 (acetato de etilo).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta
7.73-7.64 (m, 4H), 6.40 (s, 1H),
6.12-6.01 (m, 1H), 5.63 (s, 1H), 5.58 (d, J=1.5 Hz,
1H), 5.37 (dd, J1=1.8 Hz, J2=17.4 Hz), 5.23 (dd, J1=1.8 Hz, J2=10.5
Hz, 1H), 5.12 (d, J=1.5 Hz, 1H), 4.22-4.15 (m, 3H),
4.08 (d, J=1.8 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.59-3.55 (m
2H), 3.35 (d, J=8.1 Hz, 1H), 3.27-3.16 (m, 2H),
3.05 (dd, J1=8.1 Hz, J2=18.3 Hz, 1H), 2.64 (d, J=18.0 Hz, 1H), 2.30
(s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.80 (dd, J1=11.4 Hz, J2=15
Hz, 1H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 167.7,
148.9, 146.4, 144.2, 142.6, 139.5, 134.0, 133.5, 132.0, 131.0,
128.3, 123.0, 121.3, 120.9, 118.1, 117.5, 116.8, 113.6, 112.4,
100.8, 74.5, 60.6, 60.5, 57.7, 56.6, 55.6, 55.5, 42.3, 41.7, 26.6,
25.5, 15.9, 9.46.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{37}H_{35}N_{4}O_{7}: 648.79. Encontrado
(M+H)^{+}: 649.3.
A una solución de 27 (26 mg, 0.041 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (11 ml), se añadieron ácido acético (11 ml),
(PPh_{3})_{2}PdCl_{2} (2.36 mg) y Bu_{3}SnH (28 ml,
0.10 mmol) a 23ºC. Después de agitar a esta temperatura durante 2 h
la reacción se vertió en una columna de flash (SiO_{2}, gradiente
Hex a hexano:acetato de etilo 2:1) para dar 28 (24.7 mg, 99%) en la
forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.33 (hexano:acetato de etilo 2:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta
7.75-7.70 (m, 2H), 7.69-7.65 (m,
2H), 6.39 (s, 1H), 5.82 (bs, 1H), 5.50 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.0 (d,
J=1.5 Hz, 1H), 4.45 (bs, 1H), 4.23-4.19 (m, 2H),
4.10-4.09 (m, 1H), 3.73 (s, 3H),
3.60-3.48 (m, 2H), 3.36-3.33 (m,
1H), 3.26-3.20 (m, 1H), 3.14-3.08
(m, 1H), 3.98 (d, J=14.4 Hz, 1H), 2.61 (d, J=18.3 Hz, 1H), 2.30 (s,
3H), 2.23 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.85 (dd, J1=12 Hz, J2=15.3
Hz);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 167.8,
146.4, 145.1, 143.9, 142.7, 137.1, 133.5, 131.9, 130.8, 128.4,
122.9, 120.8, 118.0, 116.8, 114.0, 113.4, 106.4, 100.4, 60.6, 60.5,
57.8, 56.6, 55.5, 55.2, 42.6, 41.5, 25.6, 25.5, 15.8, 8.9.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{34}H_{32}N_{4}O_{7}: 608.6. Encontrado
(M+H)^{+}: 609.2.
A una solución de 28 (357 mg, 0.058 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (3 ml), se añadieron cloruro de acetilo (41.58 ml,
0.58 mmol) y piridina (47.3 ml, 0.58 ml) a 0ºC. La mezcla de
reacción se agitó durante 1 h y a continuación, la solución se
diluyó con CH_{2}Cl_{2} (15 ml) y se lavó con 0.1 N HCl (15
ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y
el disolvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo se
purificó mediante cromatografía de columna flash
(RP-18, CH_{3}CN:H2O 60:40) para dar ftalascidina
(354 mg, 94%) en la forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.37 (CH_{3}CN:H2O 7:3,
RP-18).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta
7.72-7.68 (m, 2H), 7.67-7.63 (m,
2H), 6.38 (s, 1H), 5.69 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.64 (d, J=1.2 Hz, 1H),
5.30 (bs, 1H), 4.25-4.21 (m, 2H), 4.02 (d, J=2.1
Hz, 1H), 3.64-3.62 (m, 5H), 3.33 (d, J=8.4 Hz, 1H),
3.21-3.16 (m, 1H), 3.02 (dd, J1=8.1 Hz, J2=18 Hz,
1H), 2.76 (dd, J1=1.8 Hz, J2=15.6 Hz, 1H), 2.63 (d, J=17.7 Hz, 1H),
2.29 (s, 3H), 2.28 (s,3H), 2.21.(s, 3H), 2.0 (s, 3H), 1.73 (dd,
J1=12.0 Hz, J2=15.3 Hz, 1H))
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3)): \delta 168.5,
167.6, 146.2, 144.2, 142.5, 141.0, 140.5, 133.4, 131.8, 130.7,
128.2, 120.9, 120.8, 117.9, 116.4, 113.6, 101.1, 60.4, 60.0, 57.0,
56.3, 55.6, 55.4, 41.6, 41.5, 26.5, 25.2, 20.2, 15.7, 9.4.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{34}N_{4}O_{8}: 650. Encontrado (M+H)^{+}:
651.2.
A una solución de 17 (300 mg, 0.432 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (2 ml), se añadieron cloruro de acetilo (30.7 ml,
0.432 mmol) y piridina (34.9 ml, 0.432 mmol) a 0ºC. La mezcla de
reacción se agitó durante 2 h a that temperature y a continuación,
la solución se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (15 ml) y se lavó con
0.1 N HCl (15 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio,
filtered, y el disolvente se eliminó bajo presión reducida para dar
42 (318 mg, 100%) en la forma de un sólido de color blanco que se
utilizó en reacciones posteriores sin purificación adicional.
Rf: 0.5 (acetato de etilo:metanol 5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3). \delta 6.66 (s,
1H), 5.93 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.83 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.42 (t, J=6.6
Hz, 1H), 5.07 (d, J=5.7 Hz, 1H), 4.98 (d, J=5.7 Hz, 1H), 4.16 (d,
J=1.8 Hz, 1H), 4.11 (d, J=2.7 Hz, 1H), 3.98 (bs, 1H),
3.73-3.61 (m, 2H), 3.64 (s, 3H),
3.52-3.48 (m, 1H), 3.50 (s, 3H), 3.33 (d, J=9.6 Hz,
1H), 3.17-3.14 (m, 1H), 2.97-2.87
(m, 1H), 2.75-2.70 (d, J=16.8 Hz, 1H), 2.26 (s, 6H),
2.16 (s, 3H), 1.96 (s, 3H), 1.70 (dd, J1=11.7 Hz, J2=15.6 Hz, 1H),
1.33 (s, 9H), 0.59 (d, J=6.0 Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3)): \delta 172.0,
168.3, 162.3, 148.2, 144.4, 140.4, 140.2, 130.9, 130.5, 125.3,
123.4, 120.8, 117.6, 112.7, 111.7, 101.4, 99.1, 79.2, 59.5, 58.8,
57.5, 57.4, 56.4, 55.5, 55.0, 41.3, 39.0, 28.2, 26.4, 24.6, 19.9,
18.4, 15.4, 9.1.
ESI-MS m/z: Calculado para
C38H49N5010: 735.82. Encontrado (M+H)^{+}: 736.3.
A una solución de 42 (318 mg, 0.432 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (2.16 mmol), ácido trifluoroacético (1.33 ml,
17.30 mmol) se añadió y la mezcla de reacción se agitó durante 3.5
h a 23ºC. La reacción se enfrió a 0ºC. con bicarbonato de sodio
acuoso saturado (60 ml) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 70
ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato de sodio) y
se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante
cromatografía de columna flash (SiO_{2}, acetato de etilo:metanol
20:1) para dar 43 (154 mg, 60%) en la forma de un sólido de color
blanco.
Rf: 0.22 (acetato de etilo:metanol 5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3). \delta 6.47 (s,
1H), 6.22 (bs, 1H), 5.95 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.88 (d, J=1.2 Hz, 1H),
4.08-4.06 (m, 2H), 4.01 (bs, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.49
(d, J=3.6 Hz, 1H), 3.33 (d, J=8.1 Hz, 1H),
3.26-3.22 (m, 1H), 2.95 (dd, J1=8.1 Hz, J2=18 Hz,
1H), 2.80-2.76 (m, 2H), 2.58 (d, J=18 Hz, 1H), 2.29
(s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.96 (s, 3H), 1.77 (dd,
J1=12.3 Hz, J2=15.6 Hz, 1H), 0.90 (d, J=6.9 Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCb)): \delta 174.8,
169.0, 146.8, 144.4, 142.8, 140.5, 140.2, 131.1, 128.8, 120.8,
120.5, 117.1, 112.9, 111.6, 101.5, 60.3, 59.0, 56.5, 56.3, 55.6,
55.1, 50.2, 41.6, 39.5, 26.8, 26.3, 24.9, 20.2, 15.4, 9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{31}H_{37}N_{5}O_{7}: 591.65. Encontrado
(M+H)^{+}: 592.3.
A una solución de 43 (154 mg, 0.26 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (1.3 ml), se añadió fenil isotiocianato (186 ml,
1.56 mmol) y la mezcla se agitó a 23ºC. durante 2 h. La reacción se
concentró al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía
de columna flash (SiO_{2}, gradiente Hexano a hexano:acetato de
etilo 1:1) para dar 44 (120 mg, 63%) en la forma de un sólido de
color blanco.
Rf: 0.41 (acetato de etilo:metanol 5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3). \delta 8.17 (s,
1H), 7.49-7.44 (m, 3H), 7.31-7.24
(m, 3H), 7.05 (d, J=6.9 Hz, 1H), 5.98 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.87 (d,
J=1.2 Hz, 1H), 5.52 (bs, 1H), 4.54 (t, J=6.6 Hz, 1H), 4.15 (d,
J=2.1 Hz, 1H), 4.03 (d, J=2.7 Hz, 2H), 3.80 (bs, 1H), 3.66 (s, 3H),
3.40 (bs, 1H), 3.32 (d, J=7.8 Hz, 1H), 3.16 (d, J=11.7 Hz, 1H),
2.82-2.61 (m, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.01
(s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.80 (dd, J1=12.0 Hz, J2=15.9 Hz, 1H), 0.62
(d, J=6.0 Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 178.5,
171.9, 168.7, 146.7, 144.5, 142.6, 140.6, 140.3, 136.3, 131.0,
129.9, 128.9, 126.7, 124.4, 120.9, 120.6, 117.7, 116.6, 112.7,
111.9, 101.4, 60.4, 58.7, 57.5, 56.1, 55.7, 55.1, 53.3, 41.4, 38.8,
26.3, 24.4, 20.2, 18.1, 15.3, 9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{38}H_{42}N_{6}O_{7}S: 726.3. Encontrado
(M+H)^{+}: 727.3.
A una solución de 44 (120 mg, 0.165 mmol) en
dioxano (0.9 ml), se añadió 5.3N HCl/dioxano (1.8 ml) y la reacción
se agitó a 23ºC. durante 2.5 h. A continuación, se añadieron
CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y H_{2}O (5 ml) a esta reacción y la capa
orgánica se decantó. La fase acuosa se basificó con bicarbonato de
sodio acuoso saturado (20 ml) (pH=8) a 0ºC. y a continuación, se
extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2*15 ml). Los extractos orgánicos
combinados se secaron (sulfato de sodio), y se concentraron al vacío
para dar 45 (75 mg, 87%) en la forma de un sólido de color blanco
que se utilizó en reacciones posteriores sin purificación
adicional.
Rf: 0.23 (acetato de etilo:metanol 5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.43 (s,
1H), 5.94 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.87 (d, J=1.2 Hz, 1H), 4.10 (d, J=2.1
Hz, 1H), 3.98 (d, J=2.4 Hz, 1H), 3.91 (bs, 1H), 3.69 (s, 3H),
3.34-3.25 (m, 2H), 3.05 (dd, J1=1.8 Hz, J2=8.1 Hz,
1H), 2.80-2.73 (m, 3H), 2.46 (d, J=18 Hz, 1H), 2.30
(s, 3H), 2.28 (s,3H), 2.20 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.79 (dd, J1=12.6
Hz, J2=16.2 Hz, 1H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3)): \delta 168.7,
146.7, 144.4, 142.9, 140.4, 130.4, 128.9, 121.1, 120.8, 117.8,
116.8, 113.6, 111.5, 101.4, 67.6, 60.5, 59.8, 58.4, 56.6, 55.8,
55.3, 43.6, 41.8, 31.3, 25.6, 20.2, 15.6, 9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{28}H_{32}N_{4}O_{6}: 520.58. Encontrado
(M+H)^{+}: 521.3.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de 45 (10 mg, 0.02 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.4 ml) se añadió anhídrido ftálico (2.84 mg, 0.02
mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 2 h a 23ºC. A
continuación, se añadió carbonildiimidazol (0.5 mg, 0.003 mmol) y la
mezcla se agitó a 23ºC. durante 7 h. A continuación, se añadió
carbonildiimidazol (2.61 mg, 0.016 mmol) y la reacción se agitó a
23ºC. durante otras 17 h. La solución se diluyó con
CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se lavó con 0.1 N HCl (5 ml). La capa
orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y el disolvente
se eliminó bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante
cromatografía de columna flash (RP-18,
CH_{3}CN:H2O 60:40) para dar ftalascidina (11.7 mg, 93%) en la
forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.37 (CH_{3}CN:H2O 7:3,
RP-18).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta
7.72-7.68 (m, 2H), 7.67-7.63 (m,
2H), 6.38 (s, 1H), 5.69 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.64 (d, J=1.2 Hz, 1H),
5.30 (bs, 1H), 4.25-4.21 (m, 2 h), 4.02 (d, J=2.1
Hz, 1H), 3.64-3.62 (m, 5H), 3.33 (d, J=68.4 Hz, 1H),
3.21-3.16 (m, 1H), 3.02 (dd, J1=8.1 Hz, J2=18 Hz,
1H), 2.76 (dd, J1=1.8 Hz, J2=15.6 Hz, 1H), 2.63 (d, J=17.7 Hz, 1H),
2.29 (s, 3H), 2.28 (s,3H), 2.21 (s, 3H), 2.0 (s, 3H), 1.73 (dd,
J.=12.0 Hz, J=15.3 Hz, 1H)).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3)): \delta 168.5,
167.6, 146.2, 144.2, 142.5, 141.0, 140.5, 133.4, 131.8, 130.7,
128.2, 120.9, 120.8, 117.9, 116.4, 113.6, 101.1, 60.4, 60.0, 57.0,
56.3, 55.6, 55.4, 41.6, 41.5, 26.5, 25.2, 20.2, 15.7, 9.4.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{34}N_{4}O_{8}: 650. Encontrado (M+H)^{+}:
651.2.
A una solución de 25 (18 mg, 0.032 mmol) en DMF
(0.05 ml), se añadieron cat. DMAP (0.5 mg, 0.004 mmol), imidazol (5
mg, 0.08 mmol) y cloruro de tert-butildifenilsililo
(12.5 ml, 0.048 mmol) a 0ºC. y la mezcla de reacción se agitó
durante 6 h a 23ºC. Se añadió agua (10 ml) a 0ºC. y la fase acuosa
se extrajo con hexano:acetato de etilo 1:10 (2*10 mmol). La capa
orgánica se secó (sulfato de sodio), se filtró, y el disolvente se
eliminó bajo presión reducida. El crudo se purificó mediante
cromatografía de columna flash (SiO_{2}, hexano:acetato de etilo
3:1) para dar 26 (27 mg, 88%) en la forma de un sólido de color
blanco.
Rf: 0.29 (hexano:acetato de etilo 3:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta
7.61-7.58 (m, 2 h), 7.42-7.28 (m,
8H), 6.71 (s, 1H), 6.19-6.02 (m, 1H), 5.78 (d,
J=1.2 Hz, 1H), 5.64 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.40 (dd, J1=1.2 Hz, J2=17.1
Hz, 1H), 5.27 (dd, J1=1.2 Hz, J2=10.2 Hz, 1H), 5.13 (s, 2 h), 4.45
(d, J=2.4 Hz, 1H), 4.24 (d, J=2.1 Hz, 1H),
4.17-4.06 (m, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.64 (dd, J1=2.4
Hz, J2=9.9 Hz, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.42-3.21 (m, 4H),
3.10 (dd, J1=8.1 Hz, J2=17.7 Hz, 1H), 2.70 (d, J=17.7 Hz, 1H), 2.33
(s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.08-1.89 (m,
1H), 0.87 (s, 9H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 148.5,
148.3, 148.1, 144.0, 139.0, 135.6, 135.4, 133.8, 133.1, 132.6,
130.5, 130.3, 129.6, 129.4, 127.5, 127.4, 125.1, 124.3, 121.6,
118.5, 117.5, 112.9, 111.7, 100.8, 99.2, 74.0, 67.7, 61.5, 59.6,
59.0, 57.7, 57.1, 55.4, 41.6, 29.6, 26.6, 25.5, 18.8, 15.8,
9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{47}H_{55}N_{3}O_{7}Si: 801.3. Encontrado
(M+H)^{+}: 802.3.
A una solución de 26 (7 mg, 0.0087 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.15 ml), se añadieron ácido acético (2.5 ml,
0.044 mmol), (PPh_{3})_{2}PdCl_{2} (0.5 mg, 6.96 x
10^{-4} mmol) y Bu_{3}SnH (3.5 ml, 0.013 mmol) a 23ºC. La mezcla
de reacción se agitó a esa temperatura durante 1 h. La solución se
diluyó con una mezcla de hexano:acetato de etilo 5:1 (0.5 ml) y se
vertió en una columna flash (SiO_{2}, gradiente 5:1 a 1:1
hexano:acetato de etilo) dando ET-11 (5 mg, 75%) en
la forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.36 (hexano:acetato de etilo 1:5,
silica).
^{1}H RMN (300 MHz, CDC): \delta 7.56 (m, 2
h), 7.41-7.25 (m, 8H), 6.67 (s, 1H), 5.72 (d, J=1.0
Hz, 1H), 5.58 (d, J=1.0 Hz, 1H), 5.51 (s, 1H), 5.38 (d, J=5.75 Hz,
1H), 5.16 (d, J=5.7 Hz, 1H), 4.57 (d, J=2.9 Hz, 1H), 4.21 (m, 1H),
4.09 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.68 (dd, J1=2.1 Hz,
J2=10.4 Hz, 1H), 3.38-3.26 (m, 3H), 3.11 (dd,
J1=2.5 Hz, J2=15.7 Hz, 1H), 3.01 (dd, J1=8.9 Hz, J2=17.9 Hz, 1H),
2.70 (d, J=17.9 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.06 (s, 3H),
1.89 (dd, J1=12.1 Hz, J2=15.7 Hz, 1H), 0.9 (s, 9H).);
^{13}C RMN (75 MHz, CDC): \delta 149.0,
147.4, 145.3, 144.3, 136.3, 135.7, 135.4, 133.2, 130.9, 130.5,
129.6, 129.5, 127.5, 125.0, 118.6, 112.5, 112.1, 105.7, 100.5,
99.8, 68.5, 61.5, 59.7, 58.8, 57.7, 56.9, 56.5, 55.4, 41.7, 26.6,
26.2, 25.5, 18.9, 15.8, 14.2, 8.7.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{44}H_{51}N_{3}O_{7}Si: 761. Encontrado
(M+H)^{+}: 762.
Una solución de 2 (3.0 g, 5.46 mmol) y fenil
isotiocianato (3.92 mL, 32.76 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (27 ml) se
agitó a 23ºC. durante 1.5 h. La mezcla de reacción se repartió
entre CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y H2O (5 ml). La capa orgánica se
secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. El residuo
se purificó mediante cromatografía de columna flash (SiO_{2},
gradiente Hex a 2:3 hexano:acetato de etilo) para dar 3 (3.29 g,
88%) en la forma de un sólido de color amarillo.
Rf: 0.27 (ACN:H2O 3:2,
RP-C18);
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 7.77 (bs,
1H), 7.42-7.11 (m, 5H), 6.65 (d, 1H), 6.29 (s, 1H),
5.6-5.5 (m, 1H), 4.19-4.14 (m, 2 h),
4.08 (d, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.87-3.65 (m, 6H), 3.77
(s, 3H), 3.37-2.98 (m, 8H), 2.50 (d, 1H), 2.31 (s,
3H), 2.20 (s, 3H), 1.96 (d, 1H), 1.87 (s, 3H),
1.81-1.75 (m, 1H), 0.96 (d, 3H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): 6185.7, 180.9,
178.9, 172.0, 155.7, 147.1, 143.2, 142.4, 136.0, 135.1, 130.5,
129.9, 129.3, 128.5, 126.9, 124.4, 120.2, 117.4, 116.3, 77.1, 60.9,
58.6, 56.2, 55.8, 55.0, 54.6, 53.5, 41.7, 40.3, 25.1, 24.5, 18.4,
15.8, 8.7
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{40}N_{6}O_{6}S: 684.8. Encontrado
(M+H)^{+}: 685.2.
Una solución de 3 (0.143 g, 0.208 mmol) en 6.5 M
HCl/dioxano (150 ml) se agitó a 23ºC. durante 6 h. A continuación,
se añadió tolueno (3 ml) a esta reacción y la capa orgánica se
decantó. El residuo se repartió entre bicarbonato de sodio acuoso
saturado (3 ml) y CHCl_{3} (3*3 ml) Las capas orgánicas se secaron
y se concentraron para dar el compuesto del título como una mezcla
de 4 y 6 (4:6 90:10) que lentamente cicla a 6 al reposar.
Rf: 0.4 (acetato de etilo:metanol5:1,
silica);
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): 6.45 (s, 1H), 4.16
(m, 1H), 4.02 (d, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.79 (m, 2 h), 3.75 (s, 3H),
3.35 (m, 1H), 3.20-3.00 (m, 3H), 2.87 (d, 1H), 2.75
(d, 1H), 2.43 (d, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 1.93 (s, 3H),
1.72-1.5 (m, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{26}H_{30}N_{4}O_{5}: 478.5. Encontrado
(M+H)^{+}: 479.2.
Una solución de 3 (0.143 g, 0.208 mmol) en 6.5M
HCl/dioxano (150 ml) se agitó a 23ºC. durante 1 h. La evaporación
del disolvente dio un residuo que se purificó mediante cromatografía
de columna flash (acetato de etilo/metanol/trietiloamina
100:25:0.1) para dar 6 (80 mg, 83%) en la forma de un sólido de
color amarillo.
Rf: 0.26 (ACN:H2O 3:2,
RP-C18);
^{1}H RMN (500 MHz, CDCl3): \delta 6.46 (s,
1H), 5.9 (bs, 1H) 4.67 (dd, J=18.3 Hz, J=7.8 Hz, 1H), 4.24 (d, 1H),
4.16 (s, 3H), 3.93 (d, J=2.7 Hz, 1H), 3.8 (m, 2 h), 3.77 (s, 3H),
3.45 (m, 2 h), 3.08 (dd, J=17.9 Hz, J=3.6 Hz, 1H), 2.78 (m, 1H),
2.55 (d, 1H), 2.3 (m, 1H), 2.3 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 1.90 (s,
3H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 186.2,
162.1, 154.9, 146.9, 145.3, 143.0, 130.1, 129.4, 128,1, 125.0,
121.4, 116.4, 116.2, 66.6, 60.7, 60.7, 60.1, 59.6, 58.8, 55.6,
54.9, 41.9, 25.3, 24.7, 15.7, 8.9.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{26}H_{28}N_{4}O_{4}: 460.5. Encontrado
(M+H)^{+}: 461.1.
A una solución de 3 (2.38 g, 3.47 mmol) en
dioxano (5 ml) se añadió 5.3M HCl en dioxano (34 mrl) y la reacción
se agitó a 23ºC. durante 45 minutos. A continuación se añadió
Ac_{2}O (51 ml, 539.5 mmol) y la mezcla se agitó durante 4 h. La
reacción se enfrió a 0ºC. y se repartió entre Na_{2}CO_{3}
acuoso saturado (300 ml) y acetato de etilo (300 ml) a esta
temperatura. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se
filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía
de columna flash (SiO_{2}, gradiente CH_{2}Cl_{2} a
CH_{2}Cl_{2}:acetato de etilo 1:2) para dar 5 (1.75 g, 97%) en
la forma de un sólido de color amarillo.
Rf: 0.53 (ACN:H2O 3:2,
RP-C18);
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.51 (s,
1H), 5.98 (bs, 1H), 4.84 (dd, 1H), 4.17 (d, 1H), 4.00 (d, 1H), 3.99
(s, 3H), 3.85 (bs, 1H), 3.81 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.70 (d, 1H),
3.23 (m, 1H), 3.11 (dd, 1H), 3.09 (m, 1H), 2.93 (m, 2 h), 2.44 (d,
1H), 3.67 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.70 (s, 3H),
1.60-1.50 (m, 2 h), 1.29 (s, 3H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 185.9,
180.8, 169.9, 160.2, 156.2, 147.0, 143.1, 140.4, 136.1, 130.6,
129.6, 127.9, 120.4, 117.2, 61.0, 60.7, 58.6, 56.1, 55.7, 55.1,
54.3, 41.8, 41.1, 25.7, 23.9, 22.2, 15.7, 8.7.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{28}H_{32}N_{4}O_{6}: 520.6. Encontrado
(M+H)^{+}: 521.1.
A una solución de 5 (1.75 g, 3.36 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (17 ml) se añadieron diisopropiletiloamina (11.71
ml, 67.23 mmol), DMAP (20 mg, 0.17 mmol) y bromometil metil éter
(4.11 ml, 50.42 mmol) a 0ºC. Después de 6 h a 23ºC. la reacción se
repartió entre CH_{2}Cl_{2} (50 ml) y bicarbonato de sodio
acuoso saturado (25 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de
sodio y el disolvente se eliminó bajo presión reducida. El crudo se
purificó mediante cromatografía de columna flash
(RP-18, CH_{3}CN/H2O 1/1) para dar 7 (1.32 g,
70%) en la forma de un sólido de color amarillo.
Rf: 0.34 (ACN:H2O 2:3,
RP-C18);
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.74 (s,
1H), 5.14 (s, 2 h), 4.82 (m, 1H), 4.22 (d, 1H), 4.00 (s, 3H), 4.0
(m, 1H), 3.83 (m, 2 h), 3.7 (s, 3H), 3.58 (s, 3H), 3.4 (m, 1H),
3.2-2.95 (m, 6H), 2.43 (d, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.22
(s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.5-1.4 (m, 2 h), 1.31 (s,
3H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 185.9,
180.7, 169.6, 156.2, 148.9, 148.5, 140.3, 136.2, 131.3, 130.1,
127.7, 124.6, 123.7, 117.3, 99.5, 99.2, 60.9, 59.7, 58.8, 57.7,
56.4, 55.7, 55.0, 54.2, 51.0, 41.6, 41.0, 40.5, 25.5, 23.9, 22.3,
19.3, 15.6, 14.6, 8.6.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{30}H_{36}N_{4}O_{7}: 564.6. Encontrado
(M+H)^{+}: 565.3.
A una solución de 7 (0.37 g, 0.65 mmol) en
metanol (74 ml) a 0ºC. se añadió 1M hidróxido sódico (130 ml). La
reacción se agitó durante 15 minutos y a continuación, se enfrió a
0ºC. con 6M HCl a pH=5. La mezcla se extrajo con acetato de etilo
(3*50 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato
de sodio y se concentraron al vacío. El residuo se purificó
mediante cromatografía de columna flash (RP-C18
CH_{3}CN:H2O 1/1) para dar 8 (232 mg, 65%) en la forma de un
aceite de color amarillo.
Rf: 0.5 (ACN:H2O 3:2,
RP-C18);
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.75 (s,
1H), 5.15 (s, 2 h), 4.86 (m, 1H), 4.26 (d, 1H), 4.01 (d, 1H),
3.88-3.81 (m, 2 h), 3.70 (s, 3H), 3.58 (s, 3H), 3.39
(m, 1H), 3.27-3.21 (m, 1H),
3.18-3.08 (m, 2 h), 3.03-2.97 (m,
1H) 2.47 (d, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.90 (s, 3H),
1.57-1.46 (m, 2 h), 1.33 (s, 3H);
^{13}C RMN (75 MHz, -CDCl3):\delta 185.3,
180.6, 175.9, 170.1, 151.5, 148.9, 148.6, 143.3, 133.7, 131.5,
129.9, 124.7, 123.5, 117.1, 117.0, 99.2, 59.8, 58.7, 57.8, 56.3,
55.3, 54.9, 54.3, 41.5, 40.7, 29.6, 25.5, 24.4, 22.2, 20.7, 15.7,
8.0.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{29}H_{34}N_{4}O_{7}: 550.6. Encontrado
(M+H)^{+}: 551.2.
A una solución desgasificada del compuesto 8 (240
mg, 0.435 mmol) en DMF (30 ml) se añadió 10% Pd/C (48 mg) y la
reacción se agitó bajo H_{2} (presión atmosférica.) durante 1 h.
La reacción se filtró a través de celite bajo argón a un tubo
Schlenk, como una solución incolora, que contenía Cs_{2}CO_{3}
anhidro (240 mg, 0.739 mmol). A continuación, se añadió
bromoclorometano (0.566 ml, 8.71 mmol). El tubo se selló y se agitó
a 90ºC. durante 3 h. La reacción se enfrió y se filtró a través de
celite y se lavó con CH_{2}Cl_{2}. La capa orgánica se concentró
y se secó (sulfato de sodio) para dar 9 en la forma de un aceite de
color marrón que se utilizó en la etapa siguiente sin purificación
adicional.
Rf: 0.36 (SiO_{2}, hexano:acetato de etilo
1:5)
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.71 (s,
3H), 5.89 (d, 11H), 5.81 (d, 1H), 5.63 (bs, 1H), 5.33 (d, 1H), 5.17
(d, 1H), 4.97 (m, 1H), 4.20 (d, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.99 (m, 1H),
3.68 (m, 1H), 3.65 (s, 6H), 3.59-3.47 (m, 4H),
3.37-3.27 (m, 2 h), 3.14-2.97 (m, 2
h), 2.62 (d, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.72 (m,
1H), 1.36 (s, 3H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 169.8,
149.1, 147.4, 145.5, 136.2, 130.9, 130.8, 125.0, 122.9, 117.7,
112.6, 111.8, 106.4, 100.8, 99.8, 59.8, 58.9, 57.7, 56.6, 56.4,
55.5, 55.2, 41.6, 40.1, 29.6, 25.9, 25.0, 22.6, 15.6, 8.8.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{30}H_{36}SiN_{4}O_{7}: 564.6. Encontrado
(M+H)^{+}: 565.3.
A un recipiente que contenía 9 (245 mg, 0.435
mmol) en DMF, (4 ml), se añadieron carbonato de cesio (425 mg, 1.30
mmol) y bromuro de alilo (376 ml, 4.35 mmol) a 0ºC. y la mezcla se
agitó a 23ºC. durante 1 h. La reacción se filtró a través de celite
y se repartió entre CH_{2}Cl_{2} (25 ml) y H_{2}O (10 ml). La
fase orgánica se secó (sulfato de sodio) y se concentró a presión
reducida para dar un residuo que se purificó mediante cromatografía
de columna flash (SiO_{2}, CHCl_{3}:acetato de etilo 1:2) para
dar 10 en la forma de un aceite de color amarillo. (113 mg,
43%).
Rf: 0.36 (hexano:acetato de etilo 1:5)
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.74 (s,
1H), 6.3-6.0 (m, 1H), 5.94 (d, 1H), 5.87 (d, 1H),
5.43-5.36 (m, 2 h), 5.22 (s, 2 h), 5.00 (m, 1H),
4.22 (m, 1H), 4.17-4.01 (m, 1H), 3.98 (m, 2 h),
3.71-3.67 (m, 1H), 3.69 (s, 3H),
3.62-3.51 (m, 3H), 3.58 (s, 3H),
3.39-3.37 (m, 1H), 3.31-3.26 (m,
3H), 3.09 (dd, 1H), 2.56 (d, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11
(s, 3H), 2.24-2.10 (m, 1H),
1.82-1.73 (m, 1H), 1.24 (bs, 3H)
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 169.4,
148.8, 148.3, 139.1, 133.7, 130.9, 130.3, 125.2, 120.2, 117.7,
113.1, 112.6, 101.3, 99.3, 74.1, 59.7, 59.3, 57.8, 57.0, 56.1,
56.1, 55.2, 41.6, 41.0, 40.9, 29.7, 26.3, 22.5, 15.6, 9.3
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{33}H_{40}N_{4}O_{7}: 604.7. Encontrado
(M+H)^{+}: 605.3.
A una solución de 9 (22 mg, 0.039 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.2 ml), se añadieron cloruro de acetilo (2.79
ml, 0.039 mmol) y piridina (3.2 ml, 0.039 mmol) a 0ºC. La mezcla de
reacción se agitó durante 1 h y a continuación, la solución se
diluyó con CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se lavó con 0.1 N HCl (5 ml).
La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y el
disolvente se eliminó bajo presión reducida para dar 46 (22 mg,
93%) en la forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.4 (hexano:acetato de etilo 1:5).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3). \delta 6.74 (s,
1H), 5.97 (d, J=0.9 Hz, 1H), 5.91 (d, J=0.9 Hz, 1H), 5.12 (d, J=5.7
Hz, 2 h), 5.04 (d, J=5.7 Hz, 1H) 4.90 (t, J=6 Hz, 1H), 4.17 (d,
J=2.7 Hz, 1H), 4.05 (d, J=2.7 Hz, 1H), 4.01 (bs, 1H), 3.71 (s, 3H),
3.57 (s, 3H), 3.50-3.44 (m, 2 h),
3.38-3.36 (m, 1H), 3.30-3.26 (m,
1H), 3.00 (dd, J1=7.8 Hz, J2=18.0 Hz, 1H), 2.79 (d, J=12.9 Hz, 1H),
2.60 (d, J=18.0 Hz, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.21 (s, 3H),
2.00 (s, 3H), 1.68 (dd, J1=11.7 Hz, J2=15.6 Hz, 1H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{32}H_{38}N_{4}O_{8}: 606.67. Encontrado
(M+H)^{+}: 607.3.
A una solución de 46 (8 mg, 0.013 mmol) en
dioxano (0.1 ml), se añadió 5.3N HCl/dioxano (0.5 ml) y la reacción
se agitó a 23ºC. durante 1 h. A continuación, la solución se diluyó
con CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se lavó con 0.1 N HCl (3 ml). La capa
orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y el disolvente
se eliminó bajo presión reducida para dar 47 (5 mg, 70%) en la
forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.4 (hexano:acetato de etilo 1:5).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3). \delta 6.51 (s,
1H), 5.97 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.91 (d, J=1.2 Hz, 1H), 4.97 (bs, 1H),
4.11 (bs, 1H), 4.04-4.02 (m, 2 h), 3.75 (s, 3H),),
3.65 (d, J=2.1 Hz, 2 h), 3.56-3.30 (m, 2 h), 3.04
(dd, J1=7.5 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2.80 (d, J=14.4 Hz, 1H), 2.59 (d,
J=18.3 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.76 (dd,
J1=12.0 Hz, J2=15.9 Hz, 1H), 1.33 (s, 3H), 1.25 (s, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{30}H_{34}N_{4}O_{7}: 562.61. Encontrado
(M+H)^{+}: 563.3.
A una solución de 45 (10 mg, 0.0192 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de isovalerilo
(2.34 ml, 0.0192 mmol) y piridina (1.55 ml, 0.0192 mmol) a 0ºC. La
mezcla de reacción se agitó durante 1 h y a continuación, la
solución se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se lavó con 0.1 N
HCl (3 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se
filtró, y el disolvente se eliminó bajo presión reducida. El
residuo se purificó mediante cromatografía de columna flash
(SiO_{2}, Hex: acetato de etilo 1:2) para dar 48 (11 mg, 95%) en
la forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.12 (Hex: acetato de etilo 1:2).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.50 (s,
1H), 5.98 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.91(d, J=1.5 Hz, 1H), 5.75 (s,
1H), 5.02 (t, J=5.4 Hz, 1H), 4.10 (d, J=1.5 Hz, 1H), 4.06 (d, J=2.7
Hz, 1H), 4.02 (d, J=2.7 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H),
3.76-3.71 (m, 1H), 3.86-3.28 (m,
3H), 3.04 (dd, J1=8.1 Hz, J2=18.3 Hz, 1H), 2.78 (d, J=15.9 Hz, 1H),
2.55 (d, J=18 Hz, 1H), 2.32 (s, 6H), 2.26 (s, 3H), 1.98 (s, 3H),
1.84-1.68 (m, 2 h), 1.36 (d, J=7.2 Hz, 2 h), 0.69
(d, J=6.6 Hz, 3H), 0.62 (d, J=6.6 Hz, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{33}H_{40}N_{4}O_{7}: 604.69. Encontrado
(M+H)^{+}: 605.3.
A una solución de 45 (10 mg, 0.0192 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de isovalerilo
(3.98 ml, 0.0192 mmol) y piridina (1.55 ml, 0.0192 mmol) a 0ºC. La
mezcla de reacción se agitó durante 1 h y a continuación, la
solución se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se lavó con 0.1 N
HCl (3 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se
filtró, y el disolvente se eliminó bajo presión reducida. El
residuo se purificó mediante cromatografía de columna flash
(SiO_{2}, Hex: acetato de etilo 1:2) para dar 49 (12.4 mg, 96%)
en la forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.7 (acetato de etilo:metanol10:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.50 (s,
1H), 5.98 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.91 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.73 (s, 1H),
5.08 (t, J=5.4 Hz, 1H), 4.10 (d, J=1.5 Hz, 1H), 4.05 (m., 1H), 4.01
(m, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.65-3.61 (m, 1H),
3.40-3.27 (m, 3H), 3.03 (dd, J1=8.1 Hz, J2=18.6 Hz,
1H), 2.78 (d, J=13.2 Hz, 1H), 2.57 (d, J=18.3 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H),
2.31 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.79 (dd, J1=12.0 Hz,
J2=16.5 Hz, 1H), 1.73-1.42 (m, 4H),
1.33-1.18 (m, 10H), 1.03 (m, 2 h), 0.87 (t, J=6.6
Hz, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{38}H_{50}N_{4}O_{7}: 674.83. Encontrado
(M+H)^{+}: 675.5.
A una solución de 45 (14.5 mg, 0.0278 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de
trans-3-trifluorometil cinamoilo
(4.76 ml, 0.0278 mmol) y piridina (2.25 ml, 0.0278 mmol) a 0ºC. La
mezcla de reacción se agitó durante 1 h y a continuación, la
solución se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se lavó con 0.1 N
HCl (3 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se
filtró, y el disolvente se eliminó bajo presión reducida. El
residuo se purificó mediante cromatografía de columna flash
(SiO_{2}, Hex: acetato de etilo 1:1) para dar 50 (18.7 mg, 94%)
en la forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.64 (acetato de etilo:metanol5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CH_{3}OD). \delta
7.74-7.55 (m, 4H), 7.23 (d, J=16.0 Hz, 1H), 6.34
(s, 1H), 6.12 (d, J=16.0 Hz, 1H), 6.07 (d, J=0.9 Hz, 1H), 5.96 (d,
J=0.9 Hz, 1H), 4.39 (d, J=2.4 Hz, 1H), 4.07-4.05
(m, 1H), 3.81 (bs, 1H), 3.46-3.51 (m, 3H), 3.42 (s,
3H), 3.09 (br d, J=12.0 Hz, 1H), 2.94-2.85 (m, 2 h),
2.74 (d, J=18.3 Hz, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.02 (s, 3H),
1.80 (s, 3H), 1.84-1.75 (m, 1H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3)): \delta 168.7,
165.3, 146.5, 144.7, 142.6, 140.6, 138.0, 135.9, 131.0, 130.9,
129.1, 128.6, 125.8, 125.7, 124.5, 124.4, 122.7, 121.2, 117.8,
116.5, 113.0, 112.0, 101.7, 60.4, 59.1, 56.5, 56.4, 55.6, 55.3,
41.8, 40.3, 26.6, 25.1, 20.3, 15.4, 9.3.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{38}H_{37}F_{3}N_{4}O_{7}: 718.72. Encontrado
(M+H)^{+}: 719.3.
A una solución de 43 (33 mg, 0.0557 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.4 ml), se añadieron cloruro de isovalerilo
(6.79 ml, 0.0557 mmol) y piridina (4.5 ml, 0.0557 mmol) a 0ºC. La
mezcla de reacción se agitó durante 1 h y a continuación, la
solución se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se lavó con 0.1 N
HCl (3 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se
filtró, y el disolvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo
se purificó mediante cromatografía de columna flash (SiO_{2},
Hex: acetato de etilo 1:2) para dar 51 (34 mg, 91%) en la forma de
un sólido de color blanco.
Rf: 0.09 (Hex: acetato de etilo 1:2).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 6.46
(s,1H), 6.10 (bs, 1H), 5.99 (d, J=0.9 Hz, 1H), 5.90 (d, J=0.9 Hz,
1H), 5.30 (t, J=6.0 Hz, 1H), 4.10-4.05 (m, 3H),3.81
(bs, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.54 (bs,1H), 3.38-3.36 (m,
1H), 3.29-3.21 (m, 1H), 3.00 (dd, J1=8.0 Hz,
J2=18.0 Hz, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.00 (s, 3H),
1.95-1.90 (m, 3H), 0.87 (d, J=6.6 Hz, 6H), 0.76 (d,
J=6.0 Hz, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{45}N_{5}O_{8}: 675.77. Encontrado
(M+H)^{+}: 676.3.
A una solución de 43 (33 mg, 0.0557 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.4 ml), se añadieron cloruro de
trans-3-trifluorometil cinamoilo
(9.52 ml, 0.0557 mmol) y piridina (4.5 ml, 0.0557 mmol) a 0ºC. La
mezcla de reacción se agitó durante 1 h y a continuación, la
solución se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se lavó con 0.1 N
HCl (3 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se
filtró, y el disolvente se eliminó bajo presión reducida. El
residuo se purificó mediante cromatografía de columna flash
(SiO_{2}, Hex: acetato de etilo 1:2) para dar 52 (40 mg, 92%) en
la forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.21 (hexano:acetato de etilo 1:2).
^{1}H RMN (300 MHz, CD3OD). \delta
7.74-7.47 (m, 4H), 6.49 (s, 1H), 6.40 (d, J=15.6
Hz, 1H), 6.00 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.90 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.47 (t,
J=6 Hz, 1H), 4.12-4.09 (m, 3H), 3.93 (bs, 1H), 3.71
(s, 3H), 3.59-3.58 (m, 1H), 3.38 (d, J=7.8 Hz, 1H),
3.29 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.00 (dd, J1=8.1 Hz, J2=18.3 Hz, 1H),
2.79-2.78 (m, 1H), 2.65 (d, J=18.3 Hz, 1H) 2.29 (s,
6H), 2.28 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.84-1.80 (m, 1H),
0.85-0.84 (m, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 171.9,
168.8, 164.4, 146.9, 144.6, 143.0, 140.5, 140.5, 139.3, 135.7,
131.1, 131.0, 129.4, 129.1, 126.0, 124.1, 124.0, 122.4, 121.1,
120.7, 120.6, 117.7, 116.9, 112.8, 112.0, 101.6, 60.6, 59.3, 57.1,
56.3, 55.9, 55.2, 49.0, 41.7, 49.9, 26.5, 25.1, 20.2, 18.4, 15.7,
9.3.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{41}H_{42}F_{3}N_{5}O_{8}: 789.8. Encontrado
(M+H)^{+}: 790.3.
A una solución de 43 (10 mg, 0.0169 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.2 ml) se añadió anhídrido trifluoroacético
(2.38 \mul, 0.0169 mmol) a 23ºC. La mezcla de reacción se agitó
durante 5 h y a continuación, la solución se diluyó con
CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se lavó con 0.1 N HCl (3 ml). La capa
orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y el disolvente
se eliminó bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante
cromatografía de columna flash (SiO_{2}, Hex: acetato de etilo
3:2) para dar 53 (10.7 mg, 93%) en la forma de un sólido de color
blanco.
Rf: 0.57 (acetato de etilo:metanol5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 6.45 (s,
1H), 6.00 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.90 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.87 (bs, 1H),
5.32 (bs, 1H), 4.12(d, J=2.1 Hz, 1H), 4.08 (d, J=1.8 Hz,
1H), 3.78-3.56 (m, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.40 (d, J=8.1
Hz, 1H), 3.25 (d, t 9.3 Hz, 1H), 3.00 (dd, J1=8.4 Hz, J2=18.0 Hz,
1H), 2.77 (dd, J1=2.1 Hz, J2=15.9 Hz, 1H), 2.68 (d, J=18.6 Hz, 1H),
2.30 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.75 (dd,
J1=11.4 Hz, J2=15.9 Hz, 1H), 0.69 (d, J=6.3 Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 170.1,
168.6, 156.0, 147.0, 144.6, 143.0, 140.6, 140.4, 131.0, 129.4,
120.9, 120.7, 117.6, 116.8, 112.4, 112.1, 101.6, 60.5, 59.0, 57.1,
56.3, 55.6, 55.2, 48.7, 41.6, 39.4, 26.5, 24.9, 20.2, 17.8, 15.4,
9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{33}H_{36}F_{3}N_{5}O_{8}: 687.63. Encontrado
(M+H)^{+}: 688.66.
A una solución de 19 (11 mg, 0.0169 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.2 ml) se añadió anhídrido trifluoroacético
(2.38 ml, 0.0169 mmol) a 23ºC. La mezcla de reacción se agitó
durante 5 h y a continuación, la solución se diluyó con
CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se lavó con 0.1 N HCl (3 ml). La capa
orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y el disolvente
se eliminó bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante
cromatografía de columna flash (SiO_{2}, Hex: acetato de etilo
3:2) para dar 54 (10.7 mg, 93%) en la forma de un sólido de color
blanco.
Rf: 0.6 (acetato de etilo:metanol5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 7.33 (d,
J=6.3 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 6.04 (m, 1H), 5.95 (d, J=1.5 Hz, 1H),
5.84 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.32 (m, 2 h), 5.21 (m, 1H), 4.11 (m, 4H),
3.73 (s, 3H), 3.64 (m, 2 h), 3.51 (m, 1H), 3.37 (d, J=7.8 Hz, 1H),
3.22 (m, 2 h), 3.03 (dd, 1H, J1=8.1 Hz, J2=18.3 Hz, 1H), 2.60 (d,
J=18.3 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.86 (dd,
J1=12 Hz, J2=16.2 Hz, 1H), 0.82 (d, J=7.2 Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 170.0,
156.0, 148.4, 147.1, 144.3, 143.0, 138.7, 133.8, 130.5, 129.4,
120.6, 120.4, 117.6, 117.5, 117.0, 113.5, 112.5, 112.4, 101.1,
74.1, 66.8, 60.4, 59.3, 56.9, 56.6, 56.3, 55.4, 48.7, 41.6, 40.1,
26.2, 25.0, 17.6, 15.4, 9.1.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{35}H_{39}F_{3}N_{5}O_{7}: 685.69. Encontrado
(M+H)^{+}: 686.3.
A una solución de 54 (100 mg, 0.415 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (4 ml), se añadieron ácido acético (40 ml),
(PPh_{3})_{2}PdCl_{2} (8.4 mg, 0.012 mmol) y
Bu_{3}SnH (157 ml, 0.56 mmol) a 23ºC. Después de agitar a esa
temperatura durante 2 h la reacción se vertió en una columna flash
(SiO_{2}, gradiente hex a hexano:acetato de etilo 2:1) para dar
55 (90 mg, 96%) en la forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.6 (hexano:acetato de etilo 1:2).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCB) \delta 7.55 (d,
J=7.2 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.90 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.82 (d, J=1.2
Hz, 1H), 5.37 (t, J=6.0 Hz, 1H), 4.15 (d, J=2.1 Hz, 1H), 4.04 (d,
J=1.8 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.66-3.53 (m, 2 h),
3.37-3.31 (m, 2 h), 3.19-3.15 (d,
J=11.7 Hz, 1H), 3.08-3.00 (m, 2 h), 2.56 (d, J=18.3
Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.91 (dd,
J1=12.0 Hz, J2=15.6 Hz, 1H), 0.84 (d, J=6.9 Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 170.1,
156.3, 147.3, 144.9, 144.4, 143.3, 136.7, 130.7, 129.3, 120.6,
117.6, 117.4, 114.4, 112.1, 107.7, 101.0, 85.8, 60.5, 59.3, 56.5,
56.4, 56.2, 55.2, 48.9, 41.6, 40.9, 25.7, 25.3, 18.0, 15.6, 8.7.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{32}H_{35}F_{3}N_{5}O_{7}: 645.63. Encontrado
(M+H)^{+}: 646.2.
A una solución de 17 (200 mg, 0.288 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (1.44 ml), se añadió ácido trifluoroacético (888
ml, 11.53 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 4 h a
23ºC. La reacción se enfrió a 0ºC. con bicarbonato de sodio acuoso
saturado (60 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 70 ml). Las
capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato de sodio) y se
concentraron al vacío para dar 56 (147 mg, 93%) en la forma de un
sólido de color blanco que se utilizó en reacciones posteriores sin
purificación adicional.
Rf: 0.19 (acetato de etilo:metanol5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CD3OD). \delta 6.48 (s,
1H), 5.88, d, J=0.9 Hz, 1H), 5.81 (d, J=0.9 Hz, 1H), 4.35 (d, J=2.4
Hz, 1H),4.15 (d, J=1.8 Hz, 1H), 3.99-3.98 (m, 1H),
3.70 (s, 3H), 3.52-2.96 (m, 7H), 2.68 (d, J=18.3
Hz, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.85 (dd,
J1=11.7 Hz, J2=15.6 Hz, 1H), 0.91 (d, J=6.6 Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CD3OD): \delta 173.2,
149.1, 145.6, 144.9, 138.0, 132.2, 130.6, 121.4, 119.6, 117.4,
114.3, 109.2, 102.5, 82.3, 60.4, 58.4, 58.3, 57.8, 56.6, 50.1,
42.3, 41.6, 27.8, 26.2, 19.5, 15.5, 9.8.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{29}H_{35}N_{5}O_{6}: 549.62. Encontrado
(M+H)^{+}: 550.3.
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de 56 (10 mg, 0.018 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.4 ml), se añadió fenil isotiocianato (13 ml,
0.109 mmol) y la reacción se agitó a 23ºC. durante 1.5 h. La mezcla
se concentró al vacío y el residuo se purificó mediante
cromatografía de columna flash (SiO_{2}, gradiente hexano a 1:1
hexano:acetato de etilo) para dar 57 (8 mg, 65%) en la forma de un
sólido de color blanco.
Rf: 0.57 (acetato de etilo:metanol10:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3): \delta 7.88 (bs,
1H), 7.41-7.36 (m, 2 h), 7.27-7.22
(m, 1H), 7.02-7.00 (d, J=7.8 Hz, 2 h), 6.71 (d,
J=7.2 Hz, 1H), 6.31 (s, 1H), 6.17 (bs, 1H), 5.93 (d, J=1.2 Hz, 1H),
5.83 (d, 1.2 Hz, 1H), 5.55 (bs, 1H), 5.20-5.17 (m,
1H), 4.16 (d, J=1.8 Hz, 1H), 4.05 (bs, 1H), 4.02 (d, J=2.4 Hz, 1H),
3.79 (s, 3H), 3.75-3.71 (m, 1H), 3.35 (d, J=7.8 Hz,
1H), 3.28-3.19 (m, 2 h), 3.12-2.97
(m, 2 h), 2.50 (d, J=18.3 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.21 (s, 3H),
2.15-2.09 (dd, J1=11.4 Hz, J2=15.9 Hz, 1H), 1.95 (s,
3H), 0.88 (d, J=6.9 Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3): \delta 178.5,
171.7, 147.2, 145.0, 144.3, 143.3, 137.0, 135.7, 130.6, 130.4,
129.6, 127.5, 124.3, 120.6, 117.7, 117.2, 115.3, 112.1, 108.3,
100.9, 60.9, 59.5, 56.7, 56.5, 56.2, 55.2, 54.1, 41.7, 41.1, 26.3,
25.4, 18.5, 15.8, 9.0.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{40}N_{6}O_{6}S: 684.81. Encontrado
(M+H)^{+}: 685.3.
A una solución de 57 (45 mg, 0.065 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.5 ml), se añadieron cloruro de acetilo (4.67
ml, 0.065 mmol) y piridina (5.3 ml, 0.065 mmol) a 0ºC. La mezcla de
reacción se agitó durante 3 h y a continuación, la solución se
diluyó con CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se lavó con 0.1 N HCl (5 ml).
La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y el
disolvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo se purificó
mediante cromatografía de columna flash (RP-18,
CH_{3}CN: H2O 40:60) para dar 58 (14 mg, 28%) en la forma de un
sólido de color blanco.
Rf: 0.34 (CH_{3}CN: H2O 7:15).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3). \delta 11.90 (d,
J=6.6 Hz, 1H), 7.45-7.40 (m, 3H),
7.18-7.15 (m, 2 h), 6.58 (s, 1H), 6.00 (d, J=1.2 Hz,
1H), 5.89 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.70 (s, 1H), 5.37 (t, J=4.8 Hz, 1H),
4.48 (m, 1H), 4.23 (bs, 1H), 4.07 (bs, 2 h),
3.85-3.75 (m, 1H), 3.70 (s, 3H),
3.46-3.41 (m, 2 h), 3.24-3.20 (m,
1H), 3.00-2.95 (m, 1H), 2.87-2.75
(m, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.00 (s, 3H),
1.85 (dd, J1=11.4 Hz, J2=15.6 Hz, 1H), 1.66 (s, 3H), 0.82 (d, J=6.0
Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3)): \delta 182.6,
174.3, 171.0, 146.6, 144.6, 142.7, 142.3, 140.7, 140.2, 131.3,
129.8, 129.3, 128.9, 128.8, 121.5, 120.4, 117.3, 116.6, 112.8,
112.0, 111.3, 101.5, 60.5, 59.0, 57.6, 56.2, 55.9, 55.3, 55.1, 41.6,
39.4, 27.8, 26.5, 24.8, 20.2, 17.1, 15.5, 9.3.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{40}H_{44}N_{6}O_{8}S: 768.88. Encontrado
(M+H)^{+}: 769.2.
A una solución de 57 (130 mg, 0.189 mmol) en
dioxano (1 ml), se añadió 5.3N HCl/dioxano (1.87 ml) y la reacción
se agitó a 23ºC. durante 4 h. A continuación, se añadieron
CH_{2}Cl_{2} (15 ml) y H2O (10 ml) a esta reacción y la capa
orgánica se decantó. La fase acuosa se basificó con bicarbonato de
sodio acuoso saturado (60 ml) (pH=8) a 0ºC. y a continuación, se
extrajo con acetato de etilo (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos
combinados se secaron (sulfato de sodio), y se concentraron al vacío
para dar 59 (63 mg, 70%) en la forma de un sólido de color
blanco.
Rf: 0.15 (acetato de etilo:metanol5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3). \delta 6.67 (s,
1H), 5.99 (d, J=0.9 Hz, 1H), 5.91 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.10 (bs, 1H),
4.32 (d, J=7.2 Hz, 1H), 4.25 (dd, J1=3.6 Hz, J2=9.3 Hz, 1H), 3.7
(s, 3H), 3.71-3.64 (m, 2 h), 3.50 (dd, J1=2.4 Hz,
J2=15.9 Hz, 1H), 3.42-3.37 (m, 2 h), 3.16 (dd,
J1=3.6 Hz, J2=12.9 Hz, 1H), 2.57 (dd, J1=9.3 Hz, J2=12.9 Hz, 1H),
2.27 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.91 (dd, J1=12.0 Hz, J2=15.9 Hz,
1H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{26}H_{30}N_{4}O_{5}: 478.5. Encontrado
(M+H)^{+}: 479.3.
A una solución de 43 (20 mg, 0.0338 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de cinamoilo (5.63
mg, 0.0338 mmol) y piridina (2.73 ml, 0.0338 mmol) a 0ºC. La mezcla
de reacción se agitó durante 1 h y a continuación, la solución se
diluyó con CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se lavó con 0.1 N HCl (5 ml).
La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y el
disolvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo se purificó
mediante cromatografía de columna flash (SiO_{2}, EtOAc:MeOH
20:1) para dar 60 (22 mg, 90%) en la forma de un sólido de color
blanco.
Rf: 0.56 (EtOAc:MeOH 5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3). \delta 7.51 (s,
1H), 7.50-7.47 (m, 2H), 7.36-7.35
(m, 2H), 6.43 (s, 1H), 6.36 (brd, J=15.9 Hz, 2H), 6.01 (d, J=1.5 Hz,
1H), 5.90 (brd, J=1.5 Hz, 2H), 5.42 (t, J=6.0 Hz 1H),
4.12-4.07 (m, 3H), 3.96-3.95 (m,
1H), 3.73 (bs, 3H), 3.58 (bs, 2H), 3.39 (d, J=8.7 Hz, 1H), 3.25 (d,
J=11.7 Hz, 1H), 3.0 (dd, J1=7.5 Hz, J2=17.7 Hz, 1H), 2.78 (d,
J=15.9 Hz, 1H), 2.67 (d, J=16.5 Hz, 1H), 2.29 (s, 6H), 2.23 (s,
3H), 1.99 (s, 3H), 1.82 (dd, J1=11.4 Hz, J2=15.6 Hz, 1H), 0.83 (d,
J=6.0 Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3)): \delta 172.0,
165.0, 146.9, 144.6, 143.1, 141.0, 140.5, 134.8, 131.0, 129.7,
129.1, 128.8, 127.8, 125.5, 123.8, 123.0, 121.1, 120.5, 117.7,
116.9, 112.8, 112.0, 101.9, 60.6, 59.2, 57.1, 56.4, 55.9, 55.3,
48.8, 41.7, 40.0, 26.5, 25.1, 20.3, 18.5, 15.7, 9.3.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{40}H_{43}N_{5}O_{8}: 721.8. Encontrado
(M+H)^{+}: 722.3.
A una solución de 45 (19 mg, 0.0364 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de
heptafluorobutirilo (5.44 ml, 0.0364 mmol) y piridina (2.95 ml,
0.0364 mmol) a 0ºC. La mezcla de reacción se agitó durante 1 h y a
continuación, la solución se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y
se lavó con 0.1 N HCl (5 ml). La capa orgánica se secó sobre
sulfato de sodio, se filtró, y el disolvente se eliminó bajo presión
reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna
flash (SiO_{2}, EtOAc:MeOH 20:1) para dar 61 (11.7 mg, 45%) en la
forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.76 (EtOAc:MeOH 5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCb3) \delta 6.46 (s,
1H), 6.12 (bs, 1H), 5.98 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.93 (d, J=1.2 Hz, 1H),
5.72 (bs, 1H), 4.13-4.11 (m, 2H), 4.0 (d, J=2.4 Hz,
1H), 3.98-3.96 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.39 (d,
J=7.5 Hz, 1H), 3.39-3.28 (m, 2H), 3.09 (dd, J1=8.1
Hz, J2=18.0 Hz, 1H), 2.80 (d, J=16.2 Hz, 1H), 2.46 (d, J=18.3 Hz,
1H), 2.32 (s, 6H), 2.21 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.80 (dd, J1=12.0
Hz, J2=16.2 Hz, 1H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{32}H_{31}F_{7}N_{4}O_{7}: 716.6. Encontrado
(M+H)^{+}: 717.2.
A una solución de 43 (24 mg, 0.04 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de butirilo (4.15
ml, 0.04 mmol) y piridina (3.28 ml, 0.04 mmol) a 0ºC. La mezcla de
reacción se agitó durante 1 h y a continuación, la solución se
diluyó con CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se lavó con 0.1 N HCl (5 ml).
La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y el
disolvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo se purificó
mediante cromatografía de columna flash (SiO_{2}, EtOAc:MeOH 20:1)
para dar 62 (24 mg, 90%) en la forma de un sólido de color
blanco.
Rf: 0.35 (EtOAc:MeOH 5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCb) 86.47 (s, 1H), 6.10
(d, J=6.5 Hz, 1H), 6.0 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.91 (d, J=1.5 Hz, 1H),
5.86 (bs, 1H), 5.31 (d, J=6.9 Hz, 1H), 4.11-4.06
(m, 3H), 3.85-3.81 (m, 1H), 3.75 (s, 3H),
3.59-3.53 (m, 2H), 3.38 (d, J=7.5 Hz, 1H),
3.27-3.22 (m, 1H), 3.0 (dd, J1=7.8 Hz, J2=17.4 Hz,
1H), 2.79 (d, J=15.3 Hz, 1H), 2.63 (d, J=17.7 Hz, 1H), 2.31 (s,
3H), 2.0 (s, 3H), 1.80 (dd, J1=12.0 Hz, J2=15.9 Hz, 1H), 1.58 (q,
J=7.2 Hz, 2H), 0.89 (t, J=7.2 Hz, 3H), 0.76 (d, J=6.6 Hz, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{35}H_{43}N_{5}O_{8}: 661.64. Encontrado
(M+H)^{+}: 662.3.
A una solución de 43 (19 mg, 0.0364 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de cinamoilo (6.06
mg, 0.0364 mmol) y piridina (2.95 ml, 0.0364 mmol) a 0ºC. La mezcla
de reacción se agitó durante 1 h y a continuación, la solución se
diluyó con CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se lavó con 0.1 N HCl (5 ml).
La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y el
disolvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo se purificó
mediante cromatografía de columna flash (SiO_{2}, EtOAc:MeOH
20:1) para dar 63 (20.1 mg, 85%) en la forma de un sólido de color
blanco.
Rf: 0.65 (EtOAc:MeOH 5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta
7.39-7.29 (m, 5H), 6.42, (s, 1H), 6.01 (d, J=1.5
Hz, 1H), 5.92 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.73 (bs, 1H), 5.24 (t, J=6.8 Hz,
1H), 4.12-4.08 (m, 3H), 3.66-3.64
(m, 2H), 3.58 (bs, 3H), 3.36 (d, J=8.7 Hz, 1H), 3.29 (d, J=12.0 Hz,
1H), 2.98 (dd, J1=8.1 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2.33 (s, 6H), 2.29 (s, 3H),
2.01 (s, 3H), 1.84 (dd, J1=12.0 Hz, J2=15.9 Hz, 1H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{37}H_{38}N_{4}O_{7}: 650.72. Encontrado
(M+H)^{+}: 651.2.
A una solución de 43 (20 mg, 0.0338 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de
3-cloropropionilo (3.22 ml, 0.0338 mmol) y piridina
(2.73 ml, 0.0338 mmol) a 0ºC. La mezcla de reacción se agitó
durante 1 h y a continuación, la solución se diluyó con
CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se lavó con 0.1 N HCl (5 ml). La capa
orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y el disolvente
se eliminó bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante
cromatografía de columna flash (SiO_{2}, EtOAc:MeOH 20:1) para
dar 64 (20.5 mg, 89%) en la forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.32 (EtOAc:Hexano 5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 6.48 (s,
3H), 6.28 (m, 1H), 5.99 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.91 (d, J=1.2 Hz, 1H),
5.86 (bs, 1H), 5.31 (m, 1H), 4.08-4.07 (m, 3H), 3.75
(s, 3H), 3.72-3.53 (m, 5H), 3.39 (d, J=8.1 Hz, 1H),
3.24 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.00 (dd, J1=8.1 Hz, J2=18.0 Hz, 1H), 2.79
(d, J=13.5 Hz, 1H), 2.50 (t, J=6.3 Hz, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.28 (s,
3H), 2.25 (s, 3H), 2.0 (s, 3H), 1.79 (dd, J1=12.3 Hz, J2=14.8 Hz,
1H), 0.81 (d, J=6.3 Hz, 3H).
A una solución de 43 (19 mg, 0.0364 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de butilo (3.78 ml,
0.0364 mmol) y piridina (2.95 ml, 0.0364 mmol) a 0ºC. La mezcla de
reacción se agitó durante 1 h y a continuación, la solución se
diluyó con CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se lavó con 0.1 N HCl (5 ml).
La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y el
disolvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo se purificó
mediante cromatografía de columna flash (SiO_{2}, EtOAc:MeOH 20:1)
para dar 64 (19 mg, 87%) en la forma de un sólido de color
blanco.
Rf: 0.60 (EtOAc:MeOH 5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 6.50 (s,
1H), 5.98 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.91 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H),
5.01 (t, J=6.4 Hz, 1H), 4.10-4.09 (m, 1H), 4.06 (d,
J=2.1 Hz, 1H), 4.03-4.02 (m, 1H), 3.76 (s, 3H),
3.67-3.60 (m, 1H), 3.42-3.35 (m,
2H), 3.29 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.02 (dd, J1=7.8 Hz, J2=17.7 Hz, 1H),
2.79 (d, J=14.1 Hz, 1H), 2.56 (d, J=18.3 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.31
(s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.78 (dd, J1=12.0 Hz, J2=15.9 Hz, 1H), 1.63
(s, 3H), 1.53-1.46 (m, 2H),
1.28-1.16 (m, 2H), 0.68 (t, J=7.2 Hz, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{32}H_{38}N_{4}O_{7}: 590.67. Encontrado
(M+H)^{+}: 591.2.
A una solución de 50 (31.7 mg, 0.044 mmol) en
CH_{3}CN/H2O (1.5 ml/0.5 ml), se añadió AgNO_{3} (225 mg, 1.32
mmol) y la reacción se agitó a 23ºC. durante 17 h. A continuación
se añadieron salmuera (10 ml) y NaHCO_{3} saturado acuoso (10 ml)
a 0ºC. y la mezcla se agitó durante 15 min, se filtró a través de
celite y se lavó con CH_{2}Cl_{2} (20 ml). La solución se
decantó y la capa orgánica se secó y se concentró al vacío. El
residuo se purificó mediante cromatografía de columna flash
(SiO_{2}, EtOAc:MeOH 5:1) para dar 66 (16 mg, 51%) en la forma de
un sólido de color blanco.
Rf: 0.26 (EtOAc:MeOH 5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta
7.66-7.42 (m, 4H), 7.20 (bs, 1H), 6.44 (s, 1H),
5.97 (b, J=1.2 Hz, 1H), 5.90 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.76 (bs, 1H), 5.28
(bs, 1H), 4.54 (bs, 1H), 4.43 (bs, 1H), 4.00 (bs, 1H),
3.68-3.57 (m, 4H), 3.47 (d, J=3.3 Hz, 1H), 3.40 (d,
J=11.7 Hz, 1H), 3.17 (d, H=6.9 Hz, 1H), 2.92 (dd, J1=8.1 Hz, J2=17.7
Hz, 1H), 2.74 (d, J=17.1 Hz, 1H), 2.48 (d, J=18.6 Hz, 1H), 2.32 (s,
6H), 2.28 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.76 (dd, J1=12.0 Hz, J2=16.2 Hz,
1H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{37}H_{38}F_{3}N_{3}O_{8}: 709. Encontrado
(M^{+}-17): 692.3.
A una solución de 53 (57 mg, 0.0828 mmol) en
CH_{3}CN/H2O (1.5 mL/0.5 ml), se añadió AgNO_{3} (650 mg, 3.81
mmol) y la reacción se agitó a 23ºC. durante 24 h. A continuación,
se añadieron salmuera (10 ml) y NaHCO_{3} acuoso
saturado(10 ml) a 0ºC. y la mezcla se agitó durante 15 min,
se filtró a través de celite y se lavó con CH_{2}Cl_{2} (20
ml). La solución se decantó y la capa orgánica se secó y se
concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía de
columna flash (SiO_{2}, EtOAc:MeOH 5:1) para dar 67 (28 mg, 50%)
en la forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.28 (EtOAc:MeOH 10:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 6.47 (s,
1H), 5.97 (s, 1H), 5.88 (s, 1H), 5.35 (bs, 1H), 4.51 (bs, 1H), 4.41
(bs, 1H), 4.12-4.05 (m, 1H), 4.00 (d, J=2.7 Hz, 1H),
3.77 (s, 3H), 3.64 (bs, 1H), 3.46 (d, J=3.3 Hz, 1H), 3.34 (d,
J=11.4 Hz, 1H), 3.18 (d, J=7.5 Hz, 1H), 2.95 (dd, J1=8.4 Hz,
J2=18.3 Hz, 1H), 2.70 (d, J=15.6 Hz, 1H), 2.48 (d, J=17.7 Hz, 1H),
2.28 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.68 (dd,
J1=12 Hz, J2=15.6 Hz, 1H), 0.86 (d, J=6.3 Hz, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{32}H_{37}F_{3}N_{4}O_{9}: 678.66. Encontrado
(M^{+}-17): 661.2.
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de 48 (32 mg, 0.0529 mmol) en
CH_{3}CN/H2O (1.5 ml/0.5 ml), se añadió AgNO_{3} (270 mg, 1.58
mmol) y la reacción se agitó a 23ºC. durante 24 h. A continuación,
se añadieron salmuera (10 ml) y NaHCO_{3} acuoso saturado (10
ml) a 0ºC. y la mezcla se agitó durante 15 min, se filtró a través
de celite y se lavó con CH_{2}Cl_{2} (20 ml). La solución se
decantó y la capa orgánica se secó y se concentró al vacío. El
residuo se purificó mediante cromatografía de columna flash
(SiO_{2}, EtOAc:MeOH 5:1) para dar 68 (18 mg, 56%) en la forma de
un sólido de color blanco.
Rf: 0.40 (EtOAc:MeOH 5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 6.50 (s,
1H), 5.95 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.88 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.23 (d, J=6.9
Hz, 1H), 4.45 (d, J=3.3 Hz, 1H), 4.38 (s, 1H), 4.01 (d, J=2.4 Hz,
1H), 3.78 (m, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.41-3.37 (m, 1H),
3.17-3.15 (m, 1H), 2.96 (dd, J1=7.8 Hz, J2=18.0 Hz,
1H), 2.70 (d, J=15.3 Hz, 1H), 2.40 (d, J=18.0 Hz, 1H), 2.30 (s,
6H), 2.27 (s, 3H), 1.76-1.65 (m, 1H),
1.35-1.25 (m, 2H), 0.89-0.82 (m,
1H), 0.69 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.58 (d, J=6.6 Hz, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de 51 (27 mg, 0.04 mmol) en
CH_{3}CN/H2O (1.5 ml/0.5 ml), se añadió AgNO_{3} (204 mg, 1.19
mmol) y la reacción se agitó a 23ºC. durante 24 h. A continuación,
se añadieron salmuera (10 ml) y NaHCO_{3} acuoso saturado (10
ml) a 0ºC. y la mezcla se agitó durante 15 min, se filtró a través
de celite y se lavó con CH_{2}Cl_{2} (20 ml). La solución se
decantó y la capa orgánica se secó y se concentró al vacío. El
residuo se purificó mediante cromatografía de columna flash
(SiO_{2}, EtOAc:MeOH 5:1) para dar 69 (10 mg, 38%) en la forma de
un sólido de color blanco.
Rf: 0.38 (EtOAc:MeOH 5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 6.48 s,
1H), 6.16 (bs, 1H), 5.98 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.89 (d, J=1.5 Hz, 1H),
5.33 (t, J=6.0 Hz, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.40 (m, 1H),
4.11-4.09 (m, 1H), 4.00 (d, J=2.6 Hz, 1H), 3.78 (s,
3H), 3.41-3.32 (m, 3H), 3.18 (d, J=8.4 Hz, 1H),
2.94 (dd, J1=8.4 Hz, J2=18.3 Hz, 1H), 2.70 (d, J=14.4 Hz, 1H), 4.45
(d, J=18.3 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.04
(s, 3H), 2.00-1.86 (m, 3H), 1.73 (m, 1H), 0.87 (d,
J=6.3 Hz, 6H).
A una solución de 63 (15 mg, 0.023 mmol) en
CH_{3}CN/H2O (1.5 ml/0.5 ml), se añadió AgNO_{3} (118 mg, 0.691
mmol) y la reacción se agitó a 23ºC. durante 24 h. A continuación,
se añadieron salmuera (10 ml) y NaHCO_{3} acuoso saturado (10
ml) a 0ºC. y la mezcla se agitó durante 15 min, se filtró a través
de celite y se lavó con CH_{2}Cl_{2} (20 ml). La solución se
decantó y la capa orgánica se secó y se concentró al vacío. El
residuo se purificó mediante cromatografía de columna flash
(SiO_{2}, EtOAc:MeOH 5:1) para dar 70 (20.1 mg, 85%) en la forma
de un sólido de color blanco.
Rf: 0.43 (EtOAc:MeOH 5:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta
7.38-7.28 (m, 5H), 6.48 (s, 1H), 5.98 (d, J=1.5 Hz,
1H), 5.91 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.75 (bs, 1H), 5.38 (brd, 1H), 5.30
(bs, 1H), 4.53 (m, 1H), 4.42 (m, 1H), 4.02 (d, J=2.7 Hz, 1H),
3.78-3.65 (m, 5H), 3.46-3.40 (m,
2H), 3.17 (d, J=7.8 Hz, 1H), 2.94 (dd, J1=7.8 Hz, J2=17.7 Hz, 1H),
2.73 (d, J=16.8 Hz, 1H), 2.45 (d, J=18.0 Hz, 1H), 2.31 (s, 6H), 2.28
(s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.77 (dd, J1=12.0 Hz, J2=15.3 Hz, 1H).
A una solución de 65 (25 mg, 0.042 mmol) en
CH_{3}CN/H2O (1.5 ml/0.5 ml), se añadió AgNO_{3} (215.56 mg,
1.269 mmol) y la reacción se agitó a 23ºC. durante 24 h. A
continuación, se añadieron salmuera (10 ml) y NaHCO_{3} acuoso
saturado (10 ml) a 0ºC. y la mezcla se agitó durante 15 min, se
filtró a través de celite y se lavó con CH_{2}Cl_{2} (20 ml).
La solución se decantó y la capa orgánica se secó y se concentró al
vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna
flash (SiO_{2}, EtOAc:MeOH 5:2) para dar 71 (16 mg, 65%) en la
forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.0.5 (EtOAc:MeOH 5:2).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 6.50 (s,
1H), 5.95 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.78 (s, 1H), 5.19 (bs, 1H), 4.45 (d,
J=3.3 Hz, 1H), 4.37 (bs, 1H), 4.11 (brd, J=4.8 Hz, 1H), 4.01 (d,
J=2.1 Hz, 1H), 3.76 (s, 1H), 3.71-3.69 (m, 1H),
3.49-3.35 (m, 1H), 3.24 (d, J=13.5 Hz, 1H), 3.15
(d, J=9.3 Hz, 1H), 2.95 (dd, J1=8.1 Hz, J2=17.7 Hz, 1H), 2.70 (d,
J=15.6 Hz, 1H), 2.40 (d, J=18.0 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.29 (s,
3H), 2.26 (s, 3H), 1.96 (s, 3H), 1.75-1.66 (m, 1H),
1.52-1.17 (m, 2H), 0.66 (t, J=7.2 Hz, 3H).
Medio de siembra YMP3 que contenía 1% glucosa;
0.25% extracto de carne; 0.5% bacto-peptone; 0.25%
NaCl; 0.8% CaCO3 se inoculó con 0.1% de una reserva en estado
vegetativo congelada del microorganismo, la cepa
A2-2 de Pseudomonas fluorescens, y se incubó
en un agitador de rotación (250 rpm) a 27ºC. Después de 30 h de
incubación, el cultivo de siembra se añadió a un fermentador
provisto de agitación con un medio de producción compuesto de 2%
dextrosa; 4% manitol, 2% levadura seca (Vitalevo Biolux, Belgium);
1% (NH_{4})_{2}SO_{4}; 0.04% K_{2}HPO_{4}; 0.8
KCl; 0.001% FeCl_{3}; 0.1% L-Tyr; 0.8% CO_{3}Ca;
0.05% PPG-2000; 0.2% silicona
anti-espumante (ASSAF-100, RHODIA
UK). La esterilización se llevó a cabo a 122ºC. 30 minutos. El
volumen inoculado fue un 2% (v/v). La temperatura fue de 27ºC. (0 a
16 h) y 24ºC. desde las 16 h hasta el final del proceso (41 horas).
La presión del oxígeno disuelto fue superior al 25%. El pH se
mantuvo a 6.0 con ácido sulfúrico diluido a partir de las 28 horas
hasta el final del proceso. El exceso de presión fue de 0.5 bar. Se
añadió un 1% de manitol o sorbitol a partir de las 16 h hasta el
final del proceso (para un proceso de dos días) y un 2% para un
proceso de fermentación de tres días.
Después de 41 o 64 horas, el caldo de
fermentación debía extraerse para recuperar la safracina B o debía
tratarse con KCN en el caldo clarificado para recuperar de forma
satisfactoria la safracina B-ciano.
Una clarificación o filtración del caldo de
fermentación a pH 6 elimina los sólidos. El caldo clarificado se
ajustó a pH 9.5 con hidróxido sódico diluido y se extrajo dos veces
con 2:1 (v/v) acetato de etilo, cloruro de metileno o acetato de
butio. La extracción se llevó a cabo en un recipiente provisto de
agitación durante 20', la temperatura de la mezcla se mantuvo a 8 a
10ºC. Las dos fases se separaron mediante centrifugación
líquido-líquido. La fase orgánica se secó con
sulfato de sodio anhidro o congelado y a continuación se filtró
para eliminar el hielo. Esta fase orgánica (capa de acetato de
etilo) se evaporó hasta la obtención de un extracto crudo en forma
de aceite.
Una clarificación o filtración del caldo de
fermentación a pH 6 elimina los sólidos. El caldo clarificado se
ajustó a un pH de 3.9 con ácido acético concentrado. Se añaden 0.5
gramos por litro de KCN al caldo clarificado y se incuba a 20ºC.
durante 1 hora con agitación. A continuación, la temperatura se
disminuyó a 15ºC. y el pH se ajustó a 9.5 con hidróxido sódico
diluido y se extrajo con 2:1.5 (v/v) de acetato de etilo. La
extracción se llevó a cabo en un recipiente provisto de agitación
durante 20 minutos, la temperatura de la mezcla se mantuvo a 8 a
10ºC. Las dos fases se separaron mediante centrifugación
líquido-líquido. La fase orgánica se secó con
sulfato de sodio anhidro. Esta fase orgánica (capa de acetato de
etilo) se evaporó hasta la obtención de un extracto crudo en forma
de aceite. Este extracto se purificó mediante cromatografía de
columna flash (SiO_{2}, gradiente 20:1 a 10: a 5:1 acetato de
etilo:metanol) para dar el compuesto 2 en forma cuantitativa en la
forma de un sólido de color amarillo claro.
Rf: 0.55 (acetato de etilo:metanol5:1);.
t_{R}=19.9 min [HPLC, Delta Pack C4, 5 \mu\lambda\mum, 300
A, 150*3 mm, \lambda=215 nm, flujo=0.7 ml/min, temp=50ºC., grad.:
CH_{3}CN-aq. NaOAc (10 mM) 85%-70% (20')];
^{1}H RMN (300 Mhz, CDCl3): \delta 6.54 (dd,
J1=4.4 Hz, J2=8.4 Hz, 1H),6.44 (s, 1H), 4.12 (d, J=2.4 Hz, 1H),
4.04 (d, J=2.4 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.87 (bs, 1H), 3.65 (ddd,
J1=1.5 Hz, J2=8.7 Hz, J3=9.9 Hz, 1H), 3.35 (br. D, J=8.4 Hz, 1H),
3.15-2.96 (m, 4H), 2.92 (q, J=7.2 Hz, 1H), 2.47 (d,
J=18.3 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.18 (s, 3H) 1.83 (s, 3H), 1.64 (ddd,
J1=2.7 Hz, J2=11.1 Hz, J3=14.1 Hz, 1H), 0.79 (d, J=7.2 Hz, 3H);
^{13}C RMN (75 Mhz, CDCl3): \delta 186.0 (q),
175.9 (q), 156.2 (q), 146.8 (q), 142.8 (q), 140.7 (q), 136.6 (q),
130.5 (q), 128.8 (q), 127.0 (q), 120.5 (s), 117.4 (q), 116.5 (q),
60.8 (t), 60.4 (s), 58.7 (t), 56.2 (s), 55.7 (s), 54.8 (s), 54.8
(s), 54.4 (s), 50.0 (s), 41.6 (t), 39.8 (d), 25.2 (d), 24.4 (d),
21.2 (t), 15.5 (t), 8.4 (t).
ESI-MS m/z: Calcd for
C_{29}H_{35}N_{5}O_{6}: 549.6. Encontrado
(M+Na)^{+}: 572.3.
Un medio (50 l) compuesto de dextrosa (2%),
manitol (4%), levadura seca (2%), sulfato de amonio (1%), fosfato
secundario de potasio (0.04%), cloruro de potasio (0.8%), hierro
(III) cloruro 6-hidrato (0.001%),
L-tirosina (0.1%), carbonato de calcio (0.8%),
poli-(propilenglicol) 2000 (0.05%) y antiespumante ASSAF 1000 (0.2%)
se vertió en un fermentador de una capacidad total de 75 l y,
después de la esterilización, se inoculó con el cultivo de siembra
(2%) de la cepa A2-2 (FERM BP-14) y
se llevó a cabo un cultivo aireado bajo agitación de 27ºC. a 24ºC.
durante 64 horas (aireación de 75 l por minuto y agitación desde
350 a 500 rpm). El pH se controló mediante alimentación automática
de ácido sulfúrico diluido desde las 27 horas hasta el final del
proceso. Se añadió un 2% manitol desde las 16 horas hasta el final
del proceso. El medio de cultivo (45 l) así obtenido, después de
eliminar las células mediante centrifugación, se ajustó a un pH de
9.5 con hidróxido sódico diluido, se extrajo con 25 litros de
acetato de etilo dos veces. La mezcla se llevó a cabo en un
recipiente provisto de agitación a 8ºC. durante 20 minutos. Las dos
fases se separaron mediante centrifugación
líquido-líquido. La fase orgánicas se congelaron a
-20ºC. y se filtró para eliminar el hielo y el hielo se evaporó
hasta la obtención de 40 g de extracto crudo en forma de aceite de
color oscuro. Después de la introducción del grupo cianuro y la
purificación, se obtuvieron 3.0 gramos de safracina B ciano.
Un medio (50 l) compuesto de dextrosa (2%),
manitol (4%), levadura seca (2%), sulfato de amonio (1%), fosfato
secundario de potasio (0.02%, cloruro de potasio (0.2%), hierro
(III) cloruro 6-hidrato (0.001%,
L-tirosina (0.1%), carbonato de calcio (0.8%,
poli-(propilenglicol) 2000 (0.05%) y antiespumante ASSAF 1000 (0.2%)
se vertió en un fermentador de una capacidad total de 75 l y,
después de la esterilización, se inoculó con el cultivo de siembra
(2%) de la cepa A2-2 (FERM BP-14) y
se llevó a cabo un cultivo aireado bajo agitación de 27ºC. a 24ºC.
durante 41 horas (aireación de 75 l por minuto y agitación de 350 a
500 rpm). El pH se controló mediante alimentación automática de
ácido sulfúrico diluido desde las 28 horas hasta el final del
proceso. Se añadió un 1% de manitol desde ñas 16 horas hasta el
final del proceso. El medio de cultivo (45 l) así obtenido, después
de eliminar las células mediante centrifugación, se ajustó a un pH
de 3.9 con 200 ml de ácido acético concentrado. Se añadieron 25
gramos de cianuro de potasio 97% y después de 1 hora de agitación a
20ºC., el pH se ajustó a 9.5 con 1500 ml de una solución al 10% de
hidróxido sódico. A continuación, se extrajo con 35 litros de
acetato de etilo. La mezcla se llevó a cabo en un recipiente
provisto de agitación a 8ºC. durante 20 minutos. Las dos fases se
separaron mediante centrifugación líquido-líquido.
La fase orgánica se secó con sulfato de sodio anhidro y se evaporó
hasta la obtención de 60 g de un extracto crudo de color
oscuro.
Después de la cromatografía, se obtuvieron 4.9
gramos de safracina B ciano.
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\vskip1.000000\baselineskip
A una solución bajo agitación de 25 (7.83 g,
0.0139 mol) y el derivado asequible comercialmente
Boc-Cys (Fm) (Bachem) (8.33 g, 35.04 mmol) en
diclorometano (535 mL) bajo argón, se añadieron dimetilaminopiridina
(4.28 g, 35.04 mmol) e hidrocloruro de
1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilocarbodiimida
(6.66 g, 35.04 mmol) a 23ºC. Seguidamente la mezcla se agitó a 23ºC.
durante 2.5 horas. La reacción se detuvo mediante la adición de una
solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado (500 mL), la fase
orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo de nuevo con
diclorometano (250 mL). Los extractos orgánicos combinados se
secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron a
sequedad bajo presión reducida. El producto crudo se purificó
mediante cromatografía de columna flash eluyendo con mezclas de
acetato de etilo y hexano en forma de gradiente, desde 1:4 a 2:1
para dar 142 (12.21 g, 93%) en la forma de un sólido de color
amarillo claro. Rf=0.35 Hex:EtOAc 1:1.
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl3):
\delta 7.72 (d, J=7.3, 2.7 Hz 2H), 7.55 (dd, J1=14.6, J2=7.6 2H),
7.40-7.34 (m, 2H), 7.30-7.24 (m,
2H), 6.63 (s, 1H), 6.08-5.99 (m, 1H), 5.91 (d,
J=1.5 Hz, 1H), 5.80 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.39 (dd, J1=17.3, J2=1.7 Hz
1H), 5.24 (dd, J1=10.5, J2=1.7 Hz, 1H), 5.09 (AB, J=4.48 Hz, 2H),
5.07 (t, J=7.8 Hz, 1H), 4.34-4.29 (m, 2H), 4.17 (d,
J=1.9 Hz, 1H), 4.16-4.04 (m, 4H),
4.02-3.96 (m, 2H), 3.93 (t, J=5.3 Hz, 1H), 3.70 (s,
3H), 3.56 (s, 3H), 3.32 (d, J=8.0, 1H), 3.23-3.17
(m, 2H), 3.0-2.89 (m, 3H),
2.65-2.57 (m, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.03
(s, 3H), 1.76 (dd, J1=16.3, J2=12.7 Hz, 1H), 1.45, 1.44 (s,
9H).
^{13}C-RMN (75 MHz, CDCl3):
\delta 170.9, 155.3, 148.9, 148.6, 146.1, 146.0, 144.7, 141.2,
141.1, 139.4, 134.0, 131.0, 130.1, 127.8, 127.2, 125.2, 125.0,
124.3, 121.3, 121.2, 120.1, 118.1, 117.6, 112.9, 101.4, 99.5, 80.3,
74.2, 65.6, 60.4, 60.1, 57.9, 57.4, 57.2, 57.1, 56.9, 55.6, 53.2,
47.0, 41.8, 41.7, 36.7, 35.3, 28.5, 26.6, 25.3, 15.9, 9.4.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{53}H_{60}N_{4}O_{10}S: 945.13. Encontrado
(M+1)^{+}: 946.3.
A una solución agitada de 142 (12.01 g, 0.0127
mol) en diclorometano (318 mL), se añadieron
diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II) (0.71 g, 1.015 mmol)
y ácido acético (3.6 mL, 0.176 mol) bajo argón a 23ºC. A
continuación, se añadió hidruro de tributil estaño (10.27 mL, 0.037
mol) gota a gota. La mezcla se agitó a 23ºC. durante 10 minutos.
Seguidamente la reacción se filtró a través de una columna de silica
gel compactada con hexano. Se obtuvo 143 (10.89 g, 95%) en la forma
de un sólido de color amarillo mediante una posterior elución con
mezclas de acetato de etilo y hexano en forma de gradiente, desde
1:4, 1:1 a 7:3. Rf=0.25 Hex:EtOAc 2:1.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 7.72 (d,
J=7.6 Hz, 2H), 7.61 (d, J=6.6 Hz, 1H), 7.52 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.37
(t, J=7.8 Hz, 2H), 7.28 (m, 2H), 6.63 (s, 1H), 5.87 (d, J=1.5 Hz,
1H), 5.76 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.58 (bs, 1H), 5.31 (d, J=5.8 Hz, 1H),
5.17 (d, J=5.6 Hz, 1H), 4.91 (d, J=8.3 Hz, 1H),
4.17-4.06 (m, 4-6H), 3.85 (t, J=5.7
Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 3.34 (brd, J=6.6 Hz, 1H), 3.23
(brd, J=11.2 Hz, 1H), 3.06 (brd, J=12.9 Hz, 1H),
3.04-2.86 (m, 3H), 2.65-2.54 (m,
2H), 2.28 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.94 (s, 3H), 1.80 (dd, J1=11.5
Hz, J2=15.8 Hz, 1H), 1.45 (s, 9H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) 6175.3, 170.5,
154.9, 149.1, 147.6, 145.9, 145.8, 145.7, 144.5, 140.9, 140.8,
136.1, 130.9, 127.4, 126.9, 124.3, 124.7, 122.9, 119.7, 117.6,
112.3, 111.4, 106.6, 100.7, 99.7, 80.0, 64.2, 60.3, 59.8, 57.6,
57.0, 56.5, 56.4, 55.2, 52.7, 46.7, 46.5, 41.4, 41.3, 36.9, 36.6,
34.9, 28.2, 26.0, 24.9, 20.9, 20.7, 15.7, 14.1, 8.5.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{50}H_{56}N_{4}O_{10}S: 905.5. Encontrado
(M+1)^{+}: 906.3.
A una solución de 143 (10 g, 0.01 \mumol) en
anhidro diclorometano (185 mL) a -10ºC. (temperatura del baño
-15ºC.), se añadió una solución de anhídrido bencenoselenínico (5.7
g, 0.011 mol) en anhidro diclorometano (185 mL), descartando
cualquier sólido blanco presente en la solución. La mezcla se agitó
durante 10 minutos a la misma temperatura. La reacción se diluyó
con diclorometano (200 mL) y se añadió una solución de bicarbonato
de sodio acuoso saturado (500 mL) a -10ºC. La fase orgánica se
separó, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a
sequedad a presión reducida. El residuo se purificó mediante
cromatografía de columna flash, eluyendo con mezclas de acetato de
etilo y hexano en forma de gradiente, desde 1:1, 3:2, 7:3 a 4:1
para obtener 144 (9.34 g, 92%) en la forma de un sólido de color
amarillo. El sólido purificado en la cromatografía se disolvió en
diclorometano (250 mL), se añadió carbón (3.3 g) y la suspensión se
agitó a 23ºC. durante 1 hora. La mezcla se filtró a través de
celite y el celite se lavó con diclorometano (80 mL). El disolvente
se evaporó a presión reducida manteniendo la temperatura a
25-30ºC. para dar 144 (8.96 g, 88%) en la forma de
un sólido de color amarillo. Rf=0.30 y 0.25 (mezcla de isómeros)
Hex:EtOAc 1:1.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) (mezcla de isómeros)
\delta 7.73-7.61 (m, 4H),
7.37-7.30 (m, 4H), 6.62 (s, 1H), 6.59 (s, 1H), 6.53
(s, 1H), 5.72 (s, 1H), 5.70 (s, 1H), 5.61 (s, 1H), 5.55 (bs, 1H),
5.34 (m, 2H), 5.08 (AB sist., JAB=6.7 Hz, 1H), 5.00 (AB sist.,
JAB=5.9 Hz, 1H), 4.67 (m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.38 (dd, J1=4.9 Hz,
J2=12.9 Hz, 1H), 4.21 (dd, J1=6.3 Hz, J2=12.9 Hz, 1H), 4.11 (t,
J=5.9 Hz, 1H), 4.02 (m, 3H), 3.87 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.72 (m,
1H), 3.61 (s, 3H), 3.49 (s, 3H), 3.27 (m, 1H), 3.15 (dd, J1=1.8 Hz,
J2=6.2 Hz, 2H), 3.07 (d, J=6.3 Hz, 1H), 2.94 (m, 4H), 2.86 (m, 2H),
2.42 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.08 (dd,
J1=2.4 Hz, J2=13.9 Hz, 1H), 1.77 (s, 3H), 1.76 (s, 3H), 1.43 (s,
9H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) (mezcla de isómeros)
\delta 200.6, 171.2, 160.4, 155.6, 148.9, 148.8, 148.3, 145.9,
145.8, 141.3, 141.2, 138.7, 130.9, 127.9, 127.4, 127.3, 127.3,
125.3, 125.1, 124.2, 120.1, 117.1, 111.9, 108.5, 105.0, 104.7,
101.7, 101.3, 99.5, 99.4, 80.5, 72.5, 70.8, 60.5, 60.1, 58.4, 58.0,
57.9, 56.9, 56.8, 56.3, 55.9, 55.5, 55.4, 53.8, 53.7, 47.1, 42.0,
41.8, 41.5, 37.4, 37.3, 35.6, 35.5, 28.5, 25.8, 25.7, 16.1, 16.0,
7.7, 7.3.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{50}H_{56}N_{4}O_{11}S: 921.3. Encontrado
(M+1)^{+}: 922.3.
A una solución de DMSO (3.44 mL) en anhidro
diclorometano (396 mL), se añadió anhídrido tríflico (3.27 mL, 19.45
mmol) bajo argón a -78ºC. y la mezcla se agitó a esa temperatura
durante 20 minutos. A continuación, se añadió una solución de 144
(8.92 g, 9.6 mmol) en anhidro diclorometano (124 mL) a -78ºC. y la
mezcla se agitó bajo argón a -40ºC. durante 35 minutos. Se añadió
diisopropiletilamina (13.5 mL, 73.43 mmol) y la mezcla se agitó
bajo argón durante 45 minutos a 0ºC. Se añadieron
tert-butanol (3.65 mL, 38.6 mmol) y
tert-butil tetrametil guanidina (11.6 mL, 67.46
mmol) y la mezcla se agitó bajo argón durante 40 minutos a 23ºC.
Seguidamente se añadió anhídrido acético (9.15 mL, 96.78 mmol) y la
reacción se agitó durante otra hora a 23ºC. La reacción se diluyó
con diclorometano (250 mL) y se añadió una solución acuosa saturada
de cloruro de amonio (500 mL). La capa orgánica se separó y se lavó
secuencialmente con una solución acuosa saturada de bicarbonato de
sodio (500 mL) y una solución acuosa saturada de cloruro de sodio
(500 mL). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato de
sodio, se filtró y se concentró a sequedad a presión reducida,
manteniendo la temperatura a 25-30ºC. El crudo en
forma de sólido se purificó en una columna flash, mediante
cromatografía, eluyendo con mezclas de acetato de etilo y hexano en
forma de gradiente, desde 1:4 a 2:3 para dar 145 (4.99 g, 68%) en
la forma de un sólido de color amarillo. Rf=0.44 Hex:EtOAc 3:2.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) (mezcla de isómeros)
\delta 6.79 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 6.00 (s, 1H), 5.20 (d, J=5.4
Hz, 1H), 5.14 (d, J=5.6 Hz, 1H), 5.02 (d, J=11.7 Hz, 1H), 4.63 (d,
J=9.0 Hz, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.33 (d, J=5.4 Hz, 1H), 4.30 (m, 1H),
4.25 (bs, 1H), 4.18 (d, J=2.4 Hz, 1H), 4.17 (dd, J1=1.3 Hz, J2=11.7
Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.42 (m, 2H), 2.93 (m, 2H),
2.35 (m, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.09 (m,
1H), 2.05 (s, 3H), 1.45 (s, 9H).).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 207.3,
170.9, 168.8, 155.4, 149.8, 148.6, 146.0, 141.1, 140.7, 131.7,
130.6, 125.1, 120.6, 118.3, 113.7, 102.2, 99.4, 80.0, 61.6, 60.4,
59.8, 59.4, 59.2, 57.7, 55.0, 54.7, 54.0, 41.9, 41.6, 33.1, 31.8,
28.7, 23.9, 20.6, 16.1, 14.3, 9.8.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{38}H_{46}N_{4}O_{11}S: 766.86. Encontrado
(M+1)^{+}: 767.3.
A una solución de 145 (1.0 g, 1.3 mmol) en
acetonitrilo (50 mL) y diclorometano (25 mL), se añadió yoduro de
sodio (1.52 g, 10.01 mmol) a 23ºC. La mezcla se enfrió entonces a
0ºC. y se añadió tricloruro de aluminio (1.33 g, 10.01 mmol) en
porciones manteniendo la temperatura a 0ºC. La mezcla se agitó
entonces durante 2.5 horas a 0ºC. La reacción se diluyó con
diclorometano (25 mL) y se añadió una solución acuosa saturada de
tartrato de potasio y sodio (100 mL). La fase acuosa se separó y se
extrajo con diclorometano (2*75 mL). Seguidamente se añadió una
solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (50 mL) a la fase
acuosa que se extrajo de nuevo con diclorometano (2 x 50 mL). Los
extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio,
se filtraron y se evaporaron a sequedad bajo presión reducida,
manteniendo la temperatura por debajo de 25ºC. El sólido en forma de
crudo se purificó entonces mediante cromatografía de columna sobre
amino-silica gel y eluyendo con mezclas de acetato
de etilo y hexano en forma de gradiente.
35 (487 mg, 60%) en la forma de un sólido de
color amarillo. Los datos experimentales de 35 se describieron
previamente en PCT/GB00/01852.
36, ET-770 y
ET-743 se prepararon siguiendo los mismos
procedimientos que los descritos previamente en PCT/GB00/01852.
Ruta
2
Una solución de 21 (9.84 g, 18.97 mmol) en THF
(569 mL) y H2O (285 mL)se enfrió a 0ºC. con un baño de
hielo. A continuación, se añadieron NaNO_{2} (1.96 g, 28.45 mmol)
y 90% aq. AcOH (18.97 mL, 0.33 mol) a 0ºC. y la mezcla se agitó a
23ºC. durante 18 h. Después de enfriar la reacción a 0ºC., se
añadieron una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (300
mL, basic pH) y diclorometano (500 mL). Después de la extracción, la
fase acuosa se extrajo de nuevo con diclorometano (2 x 300 mL). Los
extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio y
evaporaron a sequedad bajo presión reducida. El sólido en forma de
crudo se disolvió entonces en MeOH (379 mL), y se añadió 1M NaOH
(38 mL) a 0ºC. La mezcla se agitó a 23ºC. durante 4 h. Después de
diluir con EtOAc (600 mL) a 0ºC., la capa orgánica se lavó con una
mezcla de agua (400 mL) y una solución acuosa saturada de
bicarbonato de sodio (100 mL, basic pH). Después de la extracción,
la fase acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc (3 x 300 mL). Los
extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron
y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante
cromatografía de columna flash (SiO_{2}, Hex:EtOAc gradiente desde
3:1 a 2:1) para dar 146 (4.55 g, 46%) en la forma de un sólido de
color blanco. Rf: 0.33 (Hex:EtOAc 1:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 6.48 (s,
1H), 6.15-6.02 (m, 1H), 5.92 (d, J=1.5 Hz, 1H),
5.86 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.77 (s, 1H), 5.39 (dd, J1=1.5 Hz, J2=17.1
Hz, 1H), 5.26 (dd, J1=1.5 Hz, J2=10.5 Hz, 1H),
4.24-4.15 (m, 3H), 4.04 (d, J=2.4 Hz, 1H), 3.97 (t,
J=3.3 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.64 (dt, J1=3.3 Hz, J2=11.1 Hz, 1H),
3.43 (dd, J1=3.3 Hz, J2=10.5 Hz, 1H), 3.38-3.34 (m,
2H), 3.31 (t, J=2.7 Hz, 1H), 3.22 (dd, J1=2.4 Hz, J2=15.6 Hz, 1H),
3.10 (dd, J1=8.1 Hz, J2=18.3 Hz, 1H), 2.49 (d, J=18.3 Hz, 1H), 2.34
(s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.88 (dd, J1=12 Hz, J2=15.9 Hz,
1H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 148.6,
146.7, 144.4, 143.0, 138.9, 133.9, 130.2, 129.1, 121.1, 120.9,
117.7, 117.4, 116.8, 113.3, 112.3, 101.1, 74.3, 63.7, 60.6, 60.1,
58.1, 56.9, 56.7, 55.4, 41.7, 26.2, 25.7, 15.7, 9.3.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{29}H_{33}N_{3}O_{6}: 519.59. Encontrado
(M+1)^{+}: 520.5.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución agitada de 146 (47.35 g, 0.091
mol) y el derivado asequible comercialmente Boc-Cys
(Fm) (54.6 g, 0.137 mol) en diclorometano (2.8 L) bajo argón, se
añadieron gota a gota dimetilaminopiridina (5.6 g, 0.046 mol) e
hidrocloruro de
1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilocarbodiimida
(43.6 g, 0.227 mol) durante 1.5 h a 23ºC. La mezcla se agitó
entonces a 23ºC. durante otra hora. La reacción se enfrió mediante
la adición de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio
(1 L) y la fase orgánica se separó. La capa acuosa se extrajo de
nuevo con diclorometano (2*500 mL). Los extractos orgánicos
combinados se secaron sobre sulfato de sodio y evaporaron a sequedad
bajo presión reducida. El producto crudo se purificó mediante
cromatografía de columna flash eluyendo con mezclas de acetato de
etilo y hexano en forma de gradiente, desde 1:4 a 3:1 para dar 147
(74.3 g, 93%) en la forma de un sólido de color blanco. Rf=0.5 Hex:
EtOAc 1:1.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 7.73 (d,
J=7.8 Hz, 2H), 7.63-7.55 (m, 2H),
7.39-7.35 (m, 2H), 7.29-7.25 (m,
2H), 6.41 (s, 1H), 6.07-5.97 (m, 1H), 5.92 (d, J=1.2
Hz, 1H), 5.80 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.67 (s, 1H), 5.34 (dd, J1=1.8 Hz,
J2=17.4 Hz, 1H), 5.23 (dd, J=1.8 Hz, J2=10.5 Hz, 1H), 5.04 (d,
J=9.3 Hz, 1H), 4.32-4.29 (m, 1H),
4.13-3.91 (m, 9H), 3.72 (s, 3H), 3.31 (d, J=7.2 Hz,
1H), 3.26-3.17 (m, 2H), 2.96-2.87
(m, 3H), 2.68-2.54 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 2.24 (s,
3H), 2.05 (s, 3H), 1.83 (dd, J1=12.6 Hz, J2=15.9 Hz, 1H), 1.45 (s,
9H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 170.9,
155.4, 149.0, 147.1, 146.2, 146.0, 144.7, 143.0, 141.1, 139.4,
134.1, 131.5, 129.1, 127.8, 127.2, 125.0, 121.3, 120.9, 120.1,
118.2, 117.6, 117.2, 112.9, 112.4, 101.4, 80.3, 76.6, 74.4, 65.3,
61.0, 60.4, 57.4, 56.9, 56.7, 55.6, 53.0, 46.9, 41.8, 36.7, 35.3,
31.8, 28.5, 26.6, 25.2, 22.9, 16.0, 14.4, 9.5.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{51}H_{56}N_{4}O_{9}S: 900.3. Encontrado
(M+1)^{+}: 901.3.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de 147 (0.562 g, 0.624 mol) en
CH_{3}CN (3.12 mL), se añadieron MEMCl (1.07 mL, 9.36 mmol),
DIPEA (2.17 mL, 12.48 mmol) y DMAP (0.0076 g, 0.06 mmol) a 0ºC. La
mezcla se agitó durante 5.5 h a 23ºC. La reacción se diluyó con
CH_{2}Cl_{2} (50 mL) y se extrajo con 0.1N HCl (50 mL). La fase
acuosa se extrajo de nuevo con CH_{2}Cl_{2} (50 mL). Las fases
orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se
filtraron y se concentraron al vacío para dar un residuo que se
purificó mediante cromatografía de columna flash
(CH_{2}Cl_{2}:EtOAc 10:1, 5:1) para dar 148 (539 mg, 87%) en la
forma de un sólido de color blanco. Rf=0.50 CH_{2}Cl_{2}:AcOEt
6:1.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta
7.73-7.71 (m, 2H), 7.57 (dd, J1=7.2 Hz, J2=15.3 Hz,
2H), 7.40-7.34 (m, 2H), 7.29-7.26
(m, 2H), 6.62 (s, 1H), 6.08-5.99 (m, 1H), 5.91 (d,
J=1.2 Hz, 1H), 5.79 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.35 (dd, J1=1.2 Hz, J2=17.1
Hz, 1H), 5.23 (d, J=6.3 Hz, 1H), 5.21 (bs, 1H), 5.13 (d, J=6.3 Hz,
1H), 5.04 (brd, J=9 Hz, 1H), 4.33-4.29 (m, 2H),
4.16-3.90 (m, 8H), 3.85-3.78 (m,
1H), 3.69 (s, 3H), 3.60-3.55 (m, 2H), 3.38 (s, 3H),
3.31 (brd, J=8.1 Hz, 1H), 3.21-3.17 (m, 2H),
2.98-2.88 (m, 3H), 264-2.56 (m,
2H), 2.29 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.75 (dd, J1=11.7
Hz, J2=15.6 Hz, 1H), 1.47 (s, 9H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 170.5,
155.0, 148.6, 148.5, 148.2, 145.77, 145.6, 144.4, 140.8, 140.7,
139.0, 133.6, 130.7, 130.5, 127.4, 126.9, 124.8, 124.6, 123.8,
120.8, 119.7, 117.8, 117.2, 122.5, 111.9, 101.0, 98.1, 80.0, 77.4,
77.0, 76.6, 73.8, 71.6, 69.2, 65.0, 60.2, 60.0, 59.8, 59.0, 56.8,
56.7, 56.6, 55.2, 52.7, 46.6, 41.3, 36.2, 34.9, 29.6, 28.2, 26.3,
24.9, 15.6, 14.1, 9.0.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{55}H_{64}N_{4}O_{1}S: 988.4. Encontrado
(M+1)^{+}: 989.3.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución bajo agitación de 148 (38.32 g.
0.039 mol) en diclorometano (1 L), se añadieron
diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II) (2.17 g, 0.0031 mol)
y ácido acético (11.1 mL, 0.195 mol) bajo argón a 23ºC. A
continuación, se añadió hidruro de tributil litio (36.5 mL, 0.136
mol) gota a gota. La mezcla se agitó a 23ºC. durante 15 minutos. La
reacción se filtró entonces a través de una columna de silica gel
compactada con hexano. Se obtuvo 149 (35.07 g, 95%) en la forma de
un sólido de color blanco mediante una posterior elución con
mezclas de acetato de etilo y hexano en forma de gradiente, desde
0:100, 1:4, 1:3, 2:5, 2:3, 1:1, 2:1, 3:1 a 100:0. Rf=0.25 Hex:EtOAc
2:1.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 7.74 (d,
J=7.2 Hz, 2H), 7.63-7.53 (m, 2H),
7.39-7.34 (m, 2H), 7.30-7.27 (m,
2H), 6.62 (s, 1H), 5.87 (m, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.69 (bs, 1H), 5.37
(d, J=6 Hz, 1H), 5.23 (d, J=5.7 Hz, 1H), 4.96 (d, J=8.1 Hz, 1H),
4.44 (brd, J=8.7 Hz, 1H), 4.18-3.70 (m, 11H), 3.69
(s, 3H), 3.38 (s, 3H), 3.34-3.18 (m, 3H),
2.99-2.88 (m, 3H), 2.63-2.58 (m,
2H), 2.28 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.78 (dd, J1=12.9
Hz, J2=15.6.3 Hz, 1H), 1.41 (s, 9H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 170.8,
155.2, 149.0, 148.0, 146.2, 146.0, 144.8, 141.1, 136.4, 131.3,
131.2, 127.8, 127.2, 125.1, 125.0, 123.2, 120.0, 118.1, 112.6,
111.6, 107.2, 101.0, 98.9, 98.8, 80.3, 71.8, 69.8, 64.9, 60.6, 60.2,
59.2, 57.1, 56.9, 55.5, 53.0, 47.0, 46.9, 41.8, 37.0, 35.3, 28.5,
26.2, 25.2, 21.9, 21.3, 16.1, 14.4, 9.0.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{52}H_{60}N_{4}O_{11}S: 948.4. Encontrado
(M+1)^{+}: 949.3.
A una solución de 149 (15 g, 0.0158 mol) en
diclorometano anhidro (265 mL) a -10ºC. (temperatura del baño
-15ºC.), se añadió gota a gota una solución de anhídrido
bencenoselenínico (7.4 g, 0.0143 mol) en diclorometano anhidro (265
mL) durante 30 minutos, descartando cualquier sólido blanco presente
en la solución. La mezcla se agitó durante otros 10 minutos a la
misma temperatura. La reacción se diluyó con diclorometano (200 mL)
se añadió y una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio
(500 nL) a -10ºC. La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato
de sodio, se filtró y se concentró a sequedad a presión reducida.
El residuo se purificó mediante cromatografía de columna flash
eluyendo con mezclas de acetato de etilo y hexano en forma de
gradiente, desde 1:2 a 100:0 para obtener 150 (14.20 g, 89%) en la
forma de un sólido de color amarillo. El sólido purificado por
cromatografía se disolvió en diclorometano (250 mL) y se añadió
carbón (4.95 g). La suspensión se agitó entonces a 23ºC. durante 1
hora. La mezcla se filtró a través de celite y el celite se lavó
con diclorometano (80 mL). El disolvente se evaporó a presión
reducida para dar 150 (13.72 g, 86%) en la forma de un sólido de
color blanco. Rf=0.37 Hex:EtOAc 1:2.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) (mezcla de isómeros)
\delta 7.73 (t, J=6.7 Hz, 4H), 7.63 (m, 2H), 7.54 (d, J=7.6 Hz,
2H), 7.40-7.34 (m, 4H), 7.31-7.27
(m, 4H), 6.62 (s, 2H), 5.86 (s, 1H), 5.81 (s, 1H), 5.75 (s, 1H),
5.72 (s, 1H), 5.70 (s, 1H), 5.35 (d, J=5.9 Hz, 1H), 5.30 (d, J=8.4
Hz, 1H), 5.23 (d, J=5.9 Hz, 1H), 5.22 (d, J=5.9 Hz, 1H), 5.13 (d,
J=5.9 Hz, 1H), 4.97 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.43 (m, 2H),
4.20-4.01 (m, 8H), 3.97-3.86 (m,
4H), 3.82 (s, 3H), 3.80-3.74 (m, 1H), 3.69 (s, 3H),
3.66-3.64 (m, 4H), 3.54 (m, 2H), 3.38 (s, 3H), 3.35
(s, 3H), 3.34-2.90 (m, 8H),
2.60-2.31 (m, 4H), 2.27 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.21
(s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.94-1.81 (m, 2H), 1.77 (s,
3H), 1.43 (s, 9H), 1.41 (s, 9H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) (mezcla de isómeros)
\delta 200.2, 198.3, 170.7, 170.5, 160.0, 155.2, 154.9, 148.5,
148.4, 145.5, 142.1, 140.9, 138.3, 130.9, 130.5, 130.0, 129.8,
127.5, 126.9, 125.0, 124.9, 124.7, 123.8, 122.5, 119.8, 117.2,
116.7, 111.5, 108.1, 104.6, 104.3, 101.3, 100.9, 98.0, 80.1, 72.1,
71.5, 70.5, 69.2, 69.0, 66.4, 63.5, 60.7, 60.1, 59.6, 58.9, 58.8,
58.0, 56.7, 56.4, 56.2, 55.9, 55.5, 55.0, 53.5, 46.7, 41.7, 41.3,
41.1, 36.9, 35.2, 35.1, 31.4, 28.1, 25.4, 25.3, 22.5, 15.7, 15.6,
14.0, 7.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{52}H_{60}N_{4}O_{12}S: 964.4. Encontrado: 965.3
(M+1)^{+}, 987.3 (M+23)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El recipiente de reacción se pasó sobre una llama
dos veces, se purgó con vacío/argón varias veces y se mantuvo bajo
atmósfera de argón durante la reacción. A una solución de DMSO
(385.0 \muL) en anhidro CH_{2}Cl_{2} (42 mL) se añadió gota a
gota anhídrido tríflico (366.5 \muL, 2.16 mmol) a -78ºC. La
mezcla de reacción se agitó a -78ºC. durante 20 minutos. A
continuación, se añadió una solución de 150 (1 g, 1.03 mmol) en
anhidro CH_{2}Cl_{2} (10 mL, para la adición principal y 5 mL
para el lavado) a través de una cánula (tiempo de adición: 5 min) a
-78ºC. Durante la adición la temperatura se mantuvo a -78ºC. en
ambos recipientes y el color cambió de amarillo a marrón. La mezcla
de reacción se agitó a -40ºC. durante 35 minutos. Durante este
periodo de tiempo la solución pasó de amarillo a verde oscuro.
Después de este tiempo, se añadió ^{i}Pr_{2}NEt (1.51 mL, 9.55
mmol) gota a gota y la mezcla de reacción se mantuvo a 0ºC. durante
45 minutos, y el color de la solución se volvió marrón durante este
tiempo. A continuación, se añadieron ^{t}BuOH (409.5 \muL, 4.33
mmol) y tert-butil tetrametil guanidina (1.31 mL,
7.61 mmol) gota a gota y la mezcla de reacción se agitó a 23ºC.
durante 40 minutos. Después de este tiempo, se añadió anhídrido
acético (1.03 mL, 10.89 mmol) gota a gota y la mezcla de reacción
se mantuvo a 23ºC. durante 1 hora más. A continuación, la mezcla de
reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (25 mL) y se lavó con
solución acuosa saturada de NH_{4}Cl (50 mL), NaHCO3 (50 mL), y
NaCl (50 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre
Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron. El residuo se
purificó mediante cromatografía de columna flash (diámetro interno:
2.0 cm, altura de silica: 9 cm; eluyente: acetato de etilo/hexano en
forma de gradiente, desde 20:80, 30:70 a 40:60) para dar 151 (832.6
mg, 99%) en la forma de un sólido de color blanco. Rf=0.48
Hex:EtOAc 3:2.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 6.78 (s,
1H), 6.09 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.99 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.32 (d, J=5.8
Hz, 1H), 5.19 (d, J=5.6 Hz, 1H), 5.01 (d, J=11.7 Hz, 1H), 4.62 (d,
J=9.8 Hz, 1H), 4.50 (bs, 1H), 4.34 (d, J=5.1 Hz, 1H), 4.28 (dd,
J1=2.4 Hz, J2=6.8 Hz, 1H), 4.24 (s, 1H), 4.17 (m, 2H), 3.90 (m,
2H), 3.76 (s, 3H), 3.58 (t, J=4.8 Hz, 2H),
3.42-3.37 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 2.91 (m, 2H),
2.36-2.08 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.21
(s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.44 (s, 9H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 170.9,
168.9, 168.0, 155.4, 149.8, 148.6, 146.0, 141.1, 140.6, 131.6,
131.1, 130.6, 129.0, 125.1, 120.6, 118.3, 102.2, 98.4, 79.9, 71.9,
69.4, 61.6, 60.4, 59.8, 59.4, 59.2, 54.9, 54.7, 54.0, 41.6, 30.6,
29.1, 28.7, 23.9, 23.2, 20.6, 16.1, 14.2, 11.2, 9.8.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{40}H_{50}N_{4}O_{12}S: 810.91. Encontrado
(M+1)^{+}: 811.3.
A una solución de 151 (2.9 g, 3.57 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (120 mL), se añadió MeSO_{3}H (1.4 mL, 21.46
mmol) a 23ºC. Después de agitar la reacción durante 30 minutos a
23ºC., se añadió una solución acuosa saturada de bicarbonato de
sodio (200 mL) a 0ºC. La fase orgánica se separó, se secó sobre
sulfato de sodio, se filtró y se concentró a sequedad a presión
reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna
flash, eluyendo con mezclas de acetato de etilo y hexano en forma de
gradiente, desde 0:1 a 1:0 para obtener 35 (1.43 g, 64%) en la forma
de un sólido de color amarillo pálido. Los datos experimentales de
35 se describieron previamente en PCT/GB00/01852.
36, ET-770 y
ET-743 se prepararon siguiendo los mismos
procedimientos que aquellos descritos previamente en
PCT/GB00/01852.
Ruta
3
La primera etapa de esta Ruta (transformación de
21 es 146) se ha descrito anteriormente en el Ejemplo 71.
A una solución de el
HO.Cys(Fm)-H.HCl asequible comercialmente
(Bachem) (40 g, 0.119 mol) en acetona (500 mL) y agua (500 mL), se
añadieron una solución 1M Na_{2}CO_{3} (238 mL) y BnCO_{2}Cl
(18.7 mL, 0.131 mol) a 0ºC. Después de agitar la reacción a 60ºC.
durante 30 minutos, la mezcla se enfrió con 1N HCl (pH 0 1) y se
extrajo con eter (3*400 mL). La fase orgánica se separó, se secó
sobre sulfato de magnesio se filtró y se concentró a sequedad a
presión reducida. El sólido en forma de crudo se disolvió en una
mezcla de EtOAc/CH_{2}Cl_{2} 1:1, se precipitó con hexano y se
mantuvo a 4ºC. durante toda la noche. A continuación, la suspensión
se filtró a fondo, el sólido se lavó con hexano (200 mL) y el
filtrado se secó al vacío para dar 152 (50.16 g, 97%) en la forma
de un sólido de color blanco.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 10.66 (bs,
1H), 7.74 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.69-7.64 (m, 2H),
7.62-7.29 (m, 9H), 5.67 (d, J=7.5 Hz, 1H), 5.14 (bs,
2H), 4.70-4.64 (m, 1H), 4.09-4.05
(m, 1H), 3.12-3.09 (m, 2H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 175.2,
155.9, 145.5, 141.0, 135.8, 128.5, 128.2, 128.1, 127.5, 127.0,
124.7, 119.8, 84.8, 67.3, 46.8, 37.0.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{25}H_{23}NO_{4}S: 433.52. Encontrado (M+1)^{+}:
434.4.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución agitada de 146 (10 g, 19.2 mmol) y
152 (12.5 g, 28.8 mmol) en diclorometano (800 mL) bajo argón, se
añadieron dimetilaminopiridina (705 mg, 5.77 mmol), hidrocloruro de
1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilocarbodiimida
(9.2 g, 48.1 mmol) y diisopropiletilamina (7.4 mL, 42.3 mmol) gota
a gota durante 1 h a 0ºC. La mezcla se agitó entonces a 23ºC.
durante otras 1.5 horas. La reacción se detuvo mediante la adición
de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (600 mL).
La fase orgánica se separó y se lavó de nuevo con una solución
acuosa saturada de cloruro de amonio (500 mL) y una solución
saturada de cloruro de sodio (500 mL). El extracto orgánico se secó
sobre sulfato de sodio, se filtró y evaporó a sequedad bajo presión
reducida. El producto crudo se purificó mediante cromatografía de
columna flash (RP18, CH_{3}CN:H2O 4:1) para dar 153 (13.89 g, 77%)
en la forma de un sólido de color amarillo pálido.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta
7.74-7.72 (m, 2H), 7.61-7.53 (m,
2H), 7.37-7.24 (m, 9H), 6.39 (s, 1H),
6.09-5.96 (m, 1H), 5.90 (s, 1H), 5.84 (s, 1H), 5.78
(s, 1H), 5.34 (dd, J1=1.5 Hz, J2 17.4 Hz, 1H), 5.32 (bs, 1H), 5.24
(dd, J1=1.5 Hz, J2=10.2 Hz, 1H), 5.17-5.07 (m, 2H),
4.40 (dd, J1=3.6 Hz, J2=10.8 Hz, 1H), 4.30 (m, 1H),
4.18-4.01 (m, 6H), 3.92 (brt, J=6.3 Hz, 1H), 3.71
(s, 3H), 3.30-3.19 (m, 3H),
2.99-2.85 (m, 3H), 2.65 (dd, J1=4.5 Hz, J2=14.4 Hz,
1H), 2.55 (d, J=18.3 Hz, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.06 (s,
3H), 1.86 (dd, J1=11.7 Hz, J2=15.9 Hz, 1H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 170.2,
155.6, 148.6, 146.8, 145.7, 145.6, 144.3, 142.6, 140.7, 139.0,
133.7, 131.1, 128.8, 128.4, 128.1, 128.0, 127.4, 126.9, 124.7,
124.6, 121.0, 120.5, 119.7, 117.8, 117.3, 116.8, 112.5, 112.0,
101.0, 74.1, 67.0, 64.7, 60.7, 59.9, 57.0, 56.6, 56.3, 55.2, 53.1,
46.5, 41.4, 36.4, 34.8, 26.2, 24.8, 15.6, 9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{54}H_{54}N_{4}O_{9}S: 934.36. Encontrado
(M+1)^{+}: 935.4.
A una solución de 153 (13.89 g, 14.85 mmol) en
CH_{3}CN (74.3 mL), se añadieron MEMCl (25.4 mL, 223 mmol), DIPEA
(52 mL, 297 mmol) y DMAP (0.181 g, 0.15 mmol) a 0ºC. La mezcla se
agitó durante 5 h a 23ºC. La reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2}
(400 mL) y se extrajo con 0.1N HCl (300 mL) y 3N HCl (pH=3). La
fase acuosa se extrajo de nuevo con CH_{2}Cl_{2} (2*50 mL). Las
fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se
filtraron y se concentraron al vacío para dar un residuo que se
purificó mediante cromatografía de columna flash (SiO_{2},
CH_{2}Cl_{2}:EtOAc 10:1, 5:1) para dar 154 (13.47 g, 88%) en la
forma de un sólido de color blanco.
Rf=0.27 CH_{2}Cl_{2}:AcOEt 6:1.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta
7.73-7.70 (m, 2H), 7.58-7.50 (m,
2H), 7.38-7.22 (m, 9H), 6.59 (s, 1H),
6.08-5.98 (m, 1H), 5.89 (s, 1H), 5.77 (s, 1H), 5.35
(d, J=17.1 Hz, 1H), 5.31-5.28 (m, 1H), 5.23 (d,
J=6.9 Hz, 1H), 5.13 (d, J=6.9 Hz, 1H), 5.12-5.05
(m, 2H), 4.37-4.29 (m, 2H),
4.15-3.77 (m, 9H), 3.68 (s, 3H),
3.58-3.55 (m, 2H), 3.37 (s, 3H),
3.30-3.27 (m, 1H), 3.21-3.16 (m,
2H), 2.96-2.84 (m, 4H), 2.64-2.58
(m, 1H), 2.55 (d, J=18 Hz, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.02
(s, 3H), 1.75 (dd, J1=12.3 Hz, J2=16.2 Hz, 1H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 171.9,
170.2, 155.5, 148.7, 148.6, 148.3, 145.8, 145.7, 144.5, 142.1,
140.9, 139.1, 136.1, 133.8, 130.8, 130.5, 128.5, 128.3, 128.1,
127.6, 127.0, 124.9, 124.7, 123.9, 122.2, 120.9, 119.8, 117.8,
117.3, 112.6, 112.0, 101.1, 98.2, 74.0, 71.7, 69.3, 67.1, 65.1,
60.1, 59.8, 59.0, 56.9, 56.8, 56.7, 55.3, 53.3, 46.7, 41.4, 36.5,
35.0, 31.6, 29.7, 26.4, 25.0, 22.6, 15.7, 14.1, 9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{58}H_{62}N_{4}O_{11}S: 1023.2. Encontrado
(M+23)^{+}: 1046.3.
A una solución agitada de 154 (20.84 g. 0.02 mol)
en diclorometano (530 mL), se añadieron
diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II) (1.14 g, 1.63 mmol)
y ácido acético (11.64 mL, 0.2 mol) bajo argón a 23ºC. A
continuación, se añadió hidruro de tributilestaño (27.44 mL, 0.1
mol) gota a gota. La mezcla se agitó a 23ºC. durante 15 minutos. La
reacción se filtró entonces a través de una columna de silica gel
compactada con hexano. 155 (18.78 g, 94%) se obtuvo en la forma de
un sólido de color amarillo pálido mediante una posterior elución
con mezclas de acetato de etilo y hexano en forma de gradiente,
desde 1:4, 1:1, 3:2 a 7:3.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 7.71 (d,
J=7.2 Hz, 2H), 7.59 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.53 (d, J=7.5 Hz, 1H),
7.41-7.23 (m, 9H), 6.60 (s, 1H), 5.87 (bs, 2H), 5.74
(s, 1H), 5.40 (d, J=6.3 Hz, 1H), 5.33 (d, J=5.8 Hz, 1H), 5.18 (d,
J=9 Hz, 1H), 5.09 (d, J=12 Hz, 1H), 4.97 (d, J=12 Hz, 1H), 4.56
(dd, J1=3 Hz, J2=11.1 Hz, 1H) 4.19 (d, J=2.1 Hz, 1H),
4.16-3.87 (m, 9H), 3.66 (s, 3H), 3.38 (s, 3H),
3.32-3.20 (m, 3H), 2.96-2.87 (m,
3H), 2.62-2.54 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.19 (s, 3H),
1.97 (s, 3H), 1.82 (dd, J1=13.2 Hz, J2=15.6 Hz, 1H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 170.0,
155.4, 149.0, 147.5, 145.7, 145.6, 144.4, 140.8, 135.9, 130.9,
128.4, 128.1, 128.0, 127.4, 126.9, 124.7, 124.6, 122.7, 119.7,
117.7, 112.4, 111.4, 100.6, 98.7, 71.5, 69.4, 67.0, 64.9, 63.9,
59.7, 59.6, 58.8, 57.0, 56.5, 56.4, 55.1, 54.9, 53.1, 52.5, 46.5,
41.4, 36.8, 34.9, 25.8, 24.7, 15.7, 8.7.
A una solución de 155 (18.5 g, 18.82 mmol) en
anhidro diclorometano (530 mL) a -10ºC. (temperatura del baño
-15ºC.), se añadió una solución de anhídrido bencenoselenínico (9.68
g, 18.82 mmol) en anhidro diclorometano (290 mL) gota a gota,
descartando cualquier sólido blanco presente en la solución. La
mezcla se agitó durante 10 minutos a la misma temperatura. La
reacción se enfrió entonces con una solución acuosa saturada de
bicarbonato de sodio (600 mL). La fase orgánica se separó, y la
fase acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 300 mL). Los
extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio,
se filtraron, y se concentraron a sequedad bajo presión reducida.
El residuo se purificó mediante cromatografía de columna, eluyendo
con mezclas de acetato de etilo y hexano en forma de gradiente,
desde 1:1, 3:2, 7:3 a 4:1 para obtener 156 (17.62 g, 88%) en la
forma de un sólido de color amarillo pálido.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) (mezcla de isómeros)
\delta 7.73 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.63 (d, J=7.5 Hz, 2H),
7.40-7.29 (m, 9H), 6.59 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 5.68
(s, 1H), 5.66 (s, 1H), 5.58 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.23 (d, J=6 Hz,
1H), 5.15-5.05 (m, 4H), 4.76-4.68
(m, 1H), 4.64-4.55 (m, 1H),
4.40-4.37 (m, 1H), 4.15-3.68 (m,
8H), 3.60 (s, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.39 (s, 3H), 3.36 (s, 3H),
3.25-2.78 (m, 7H), 2.38-2.24 (m,
2H), 2.20 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.09 (m, 1H), 2.04
(s, 3H), 1.77 (s, 3H), 1.58 (s, 3H).,
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{55}H_{58}N_{4}O_{12}S: 999.13. Encontrado
(M+1)^{+}: 1000.0.
El recipiente de reacción se pasó sobre una llama
dos veces, se purgó con vacío/argón varias veces y se mantuvo bajo
atmósfera de argón durante la reacción. A una solución de DMSO (178
\muL) en anhidro CH_{2}Cl_{2} (20 mL) se añadió gota a gota
anhídrido tríflico (169 \muL, 1 mmol) a -78ºC. La mezcla de
reacción se agitó a -78ºC. durante 20 minutos. A continuación, una
solución de 156 (0.5 g, 0.5 mmol) en anhidro CH_{2}Cl_{2} (4
mL, para la adición principal y 1.5 mL para el lavado) se añadió a
través de una cánula (tiempo de adición: 5 min) a -78ºC. Durante la
adición la temperatura se mantuvo a -78ºC. en ambos recipientes y
el color cambió de amarillo a marrón. La mezcla de reacción se
agitó a -40ºC. durante 35 minutos. Durante este periodo de tiempo la
solución pasó de amarillo a verde oscuro. Después de este tiempo, se
añadió ^{i}Pr2NEt (0.7 mL, 4.42 mmol) gota a gota y la mezcla de
reacción se mantuvo a 0ºC. durante 45 minutos, y el color de la
solución se volvió marrón durante este tiempo. Entonces se
añadieron ^{t}BuOH (189 \muL, 2 mmol) y
tert-butil tetrametil guanidina (0.6 mL, 3.49 mmol)
gota a gota y la mezcla de reacción se agitó a 23ºC. durante 40
minutos. Después de este tiempo, se añadió anhídrido acético (0.47
mL, 4.97 mmol) gota a gota y la mezcla de reacción se mantuvo a
23ºC. durante otra hora. A continuación, la mezcla de reacción se
diluyó con CH_{2}Cl_{2} (15 mL) y se lavó con solución acuosa
saturada de NH_{4}Cl (25 mL), NaHCO_{3} (25 mL), y NaCl (25 mL).
Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se
filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante
cromatografía de columna flash (diámetro interno: 2.0 cm, altura de
silica: 9 cm; eluyente: acetato de etilo/hexano en forma de
gradiente, desde 1:4, 1:3, 1:2 a 1:1) para dar 157 (128 mg, 30%) en
la forma de un sólido de color amarillo claro. Rf=0.37 Hex:EtOAc
3:2.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 7.37 (bs,
5H), 6.66 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.30 (d, J=5.4 Hz,
1H), 5.17 (d, J=6 Hz, 1H), 5.06 (d, J=7.8 Hz, 1H), 5.00 (s, 1H),
4.83 (d, J=9.3 Hz, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.34-4.17 (m,
7H), 3.90-3.87 (m, 2H), 3.66 (s, 3H),
3.65-3.56 (m, 2H), 3.37 (s, 3H),
2.89-2.90 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.18 (s, 3H),
2.15-2.04 (m, 2H), 2.03 (s, 3H), 1.99 (s, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{43}H_{48}N_{4}O_{12}S: 844.93. Encontrado
(M+1)^{+}: 845.8.
A una solución de 157 (100 mg, 0.118 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (2 mL) y CH_{3}CN (2 mL), se añadieron NaI (71
mg, 0.472 mmol) y TMSCl (60 \muL, 0.472 mmol) a 0ºC. Después de
agitar la reacción a 23ºC. durante 50 minutos, la mezcla se enfrió
con agua (30 mL) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 20 mL). Las
fases orgánicas combinadas se lavaron sucesivamente con una
solución saturada de NaCl (20 mL) y una solución saturada de
ditionito de sodio (20 mL), se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se
filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó
mediante cromatografía de columna flash (eluyente: acetato de
etilo/hexano gradiente desde 1:4, 1:2 a 1:1) para dar 158 (62 mg,
70%) en la forma de un sólido blanco. Rf=0.21 Hex:EtOAc 1:1.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 7.36 (bs,
5H), 6.44 (s, 1H), 6.07 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.97 (d, J=1.2 Hz, 1H),
5.81 (bs, 1H), 5.10-5.00 (m, 3H), 4.82 (d, J=9.3 Hz,
1H), 4.49 (bs, 1H), 4.35-4.30 (m, 1H),
4.21-4.17 (m, 2H), 4.16-4.14 (m,
2H), 3.65 (s, 3H), 3.41-3.36 (m, 2H),
2.88-2.85 (m, 2H), 2.28 (s, 3H),
2.24-2.03 (m, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 2.00
(s, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 170.5,
168.8, 155.9, 148.3, 146.0, 143.1, 141.2, 140.6, 136.6, 130.6,
130.0, 128.8, 128.7, 128.5, 121.0, 120.3, 118.3, 118.2, 113.7,
113.6, 102.2, 67.2, 61.5, 60.8, 60.3, 59.6, 59.5, 54.8, 54.7, 54.1,
41.9, 41.6, 32.9, 23.9, 20.8, 15.5, 9.8.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{39}H_{40}N_{4}O_{10}S: 756.82. Encontrado
(M+1)^{+}: 757.3.
A una solución de 158 (100 mg, 0.132 mmol) en
MeOH (6.8 mL), HCO2H (360 \muL) y 10% Pd/C (140 mg, 0.132 mmol)
se añadieron a 23ºC. y la mezcla se agitó durante 15 minutos. A
continuación, se añadió tolueno (7 mL) a la reacción y el
disolvente se evaporó bajo presión reducida. La destilación
azeotrópica con tolueno se repitió 3 veces. El residuo se diluyó
entonces con diclorometano (15 mL) y se añadió una solución acuosa
saturada de bicarbonato de sodio (15 mL). La fase acuosa se separó y
se extrajo con diclorometano (2 x 10 mL). Los extractos orgánicos
combinados se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se
evaporaron a sequedad bajo presión reducida. El residuo se purificó
entonces mediante cromatografía de columna flash sobre
amino-silica gel y eluyendo con mezclas de acetato
de etilo y hexano en forma de gradiente, desde 1:2, 1:1 a 2:1 para
dar 35 (57 mg, 70%) en la forma de un sólido de color amarillo. Los
datos experimentales de 35 se describieron previamente en
PCT/GB00/01852.
36, ET-770 y
ET-743 se prepararon siguiendo los mismos
procedimientos que los descritos previamente en PCT/GB00/01852.
Ruta
4
La primera etapa de esta Ruta (transformación de
21 en 146) se ha descrito anteriormente en el Ejemplo 71.
A una solución de 146 (18 mg, 0.032 mmol), cat.
DMAP e imidazol (5 mg, 0.08 mmol) en DMF (0.05 mL) a 0ºC., se
añadió cloruro de tert-butildifenilsililo (12.5
\muL, 0.048 mmol) y la reacción se agitó durante 4 horas a 23ºC. A
continuación, se añadió agua (30 mL) a 0ºC. y la mezcla se extrajo
con Hex:EtCAc 1:10 (2 x 40 mL). Las fases orgánicas combinadas se
secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, y el disolvente se
eliminó bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante
cromatografía de columna flash (SiO_{2}, Hex:EtOAc 3:1) para dar
159 (27 mg, 88%) en la forma de un sólido de color blanco. Rf=0.29
Hex:EtOAc 3:1.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta
7.72-7.41 (m, 2H), 7.40-7.20 (m,
8H), 6.46 (s, 1H), 6.16-6.00 (m, 1H), 5.77 (d,
J=1.5 Hz, 1H), 5.71 (s, 1H), 5.63 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.24 (dd,
J1=1.2 Hz, J2=17.1 Hz, 1H), 5.23 (dd, J1=1.2 Hz, J2=10.2 Hz, 1H),
4.18 (d, J=2.4 Hz, 1H), 4.13-4.00 (m, 4H), 3.77 (s,
3H), 3.63 (dd, J1=2.4 Hz, J2=7.5 Hz, 1H), 3.39-3.19
(m, 4H), 2.99 (dd, J1=8.1 Hz, J2=18.0 Hz, 1H), 2.68 (d, J=17.7 Hz,
1H), 2.30 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.99 (dd, J1=12.6 Hz,
J2=16.3 Hz, 1H), 0.89 (s, 9H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 148.3,
146.6, 144.0, 142.5, 139.0, 135.7, 135.4, 133.9, 133.6, 132.2,
131.2, 129.5, 129.4, 128.3, 127.5, 127.4, 121.8, 120.9, 118.7,
117.3, 117.2, 112.9, 111.7, 100.8, 74.2, 68.0, 61.6, 60.6, 60.3,
59.0, 57.4, 56.7, 55.4, 41.7, 29.6, 26.6, 26.5, 25.5, 18.9, 15.8,
9.3.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{45}H_{51}N_{3}O_{6}Si: 757.9. Encontrado
(M+1)^{+}: 758.4.
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de 159 (2.4 g, 3.17 mmol) en
CH_{3}CN (16 mL), se añadieron MOMBr (2.6 mL, 31.75 mmol), DIPEA
(8.3 ML, 47.6 mmol) y DMAP (16 mg, 0.127 mmol) a 0ºC. La mezcla se
agitó durante 6 h a 23ºC. La reacción se diluyó con
CH_{2}Cl_{2} (50 mL) y se extrajo con 0.1 N HCl (50 mL). La fase
acuosa se extrajo de nuevo con CH_{2}Cl_{2} (50 mL). Las fases
orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se
filtraron y se concentraron al vacío para dar un residuo que se
purificó mediante cromatografía de columna flash (SiO_{2},
CH_{2}Cl_{2}:EtOAc 15:1, 5:1) para dar 26 (1.78 g, 70%) en la
forma de un sólido de color blanco. Los datos experimentales de 26
se han descrito previamente en PCT/GB00/01852.
Los procedimientos experimentales para Int. 11,
160, 161, 162, y 163 se han descrito previamente en la U.S. Pat.
No. 5,721,362.
A una solución de 163 (15.8 g, 0.02 mol) en
anhidro CH_{2}Cl_{2} (250 mL) y acetonitrilo (300 mL), se
añadieron NaI (31.5 g, 0.21 mol) y ClTMS (recién destilado
CaH_{2}, 26.7 mL, 0.21 mol) bajo atmósfera de argón a 23ºC. La
mezcla de reacción se agitó durante 40 minutos. Seguidamente la
reacción se repartió entre CH_{2}Cl_{2} (200 mL) y agua (300
mL). La capa orgánica se lavó con a una solución acuosa saturada de
NaCl (2 x 300 mL). La fase orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4},
se filtró y el disolvente se eliminó bajo presión reducida. El
crudo se purificó mediante cromatografía de columna flash utilizando
acetato de etilo/hexano 2:3 como eluyente para dar 164 (10.74 g,
76%) en la forma de un sólido de color amarillo pálido. Rf=0.25
Hex:EtOAc 3:2.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 6.57 (s,
1H), 6.08 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.98 (d, J=1.5 Hz, 1H),
5.96-5.85 (m, 1H), 5.76 (bs, 1H), 5.30 (dd, J1=1.5,
J2=17.3 Hz, 1H), 5.23 (dd, J1=1.5, J2=10.2 Hz, 1H), 5.00 (d, J=12.1
Hz, 1H), 4.81 (d, J=9.8 Hz, 1H), 4.58- 4.45 (m, 3H),
4.34-4.28 (m, 1H), 4.23 (m, 2H),
4.17-4.00 (m, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.40- 3.38 (m, 2H),
2.91-2.85 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.29 (s, 3H),
2.24-2.23 (m, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.02 (s, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) 170.1, 168.4, 155.2,
148.0, 145.5, 142.8, 140.7, 140.1, 132.7, 130.2, 129.6, 120.7,
119.9, 117.8, 113.3, 101.9, 65.6, 61.0, 60.4, 59.9, 59.2, 59.0,
54.3, 53.6, 41.5, 41.2, 32.6, 29.5, 23.5, 20.4, 15.6, 9.4.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{35}H_{38}N_{4}O_{10}S: 706.76. Encontrado
(M+1)^{+}: 707.2.
A una solución agitada de 164 (2 g. 2.85 mmol) en
diclorometano (142 mL), se añadieron
diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II) (0.2 g, 0.28 mmol) y
ácido acético (0.65 mL, 11.4 mmol) bajo argón a 23ºC. A
continuación, se añadió hidruro de tributilestaño (4.51 mL, 17.02
mmol) gota a gota durante 25 minutos. Después de la adición de
HsnBu_{3}, la mezcla se agitó a 23ºC. durante 20 minutos más. La
reacción se filtró a través de una columna de silica gel compactada
con hexano. Se obtuvo 35 (1.38 g, 78%) mediante una posterior
elución con mezclas de acetato de etilo y hexano en forma de
gradiente, desde 1:2 a 15:1. Los datos experimentales de 35 se han
descrito previamente en PCT/GB00/01852.
36, ET-770 y
ET-743 se prepararon siguiendo los mismos
procedimientos que aquellos descritos previamente en
PCT/GB00/01852.
Ruta
5
La primera etapa de esta Ruta (transformación de
21 into 146) se ha descrito anteriormente en Ejemplo 71.
A una solución de 146 (8.72 g, 16.78 mmol) en DMF
(20.1 mL), se añadieron imidazol (3.43 g, 50.34 mmol),
tert-butil dimetil clorosilano (7.58 mL, 50.34 mmol)
y DMAP (0.2 g, 1.7 mmol) a 0ºC. Después de agitar a 23ºC. durante
3.5 h, la mezcla de reacción se enfrió con agua (100 mL) y se
extrajo con EtOAc/Hex 1:3 (2*75 mL). Las fases orgánicas combinadas
se lavaron con 0.1 M HCl (50 mL) y la fase acuosa se extrajo de
nuevo con EtOAc/Hex 1:3 (40 mL). Las fases orgánicas combinadas se
secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron al
vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna
flash (Hex:EtOAc 10:1, 3:1) para obtener 165 (9.85 g, 93%) en la
forma de un sólido de color blanco. Rf=0.39 en Hex:AcOEt 2:1.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) - 6.43 (s, 1H),
6.15-6.03 (m, 1H), 5.92 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.84 (d,
J=1.2 Hz, 1H), 5.67 (s, 1H), 5.41 (dd, J1=1.5, J2=17.1 Hz, 1H), 5.26
(dd, J1=1.5, J2=10.5 Hz, 1H), 4.44 (d, J=2.7 Hz, 1H),
4.20-4.08 (m, 3H), 3.97 (dd, J1=2.7, J2=8.1 Hz,
1H), 3.75 (s, 3H), 3.61 (dd, J1=2.71, J2=9.9 Hz, 1H), 3.18 (brd,
J=8.7 Hz, 1H), 3.22-3.16 (m, 2H), 2.99 (dd, J1=8.1,
J2=17.4 Hz, 1H), 2.65 (d, J=17.4 Hz, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.25 (s,
3H), 2.11 (s, 3H), 1.89 (dd, J1=12, J2=15.6 Hz, 1H), 0.8 (s, 9H),
-0.05 (s, 3H), -0.09 (s. 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) - 148.2, 146.5,
143.8, 142.4, 138.9, 133.8, 131.0, 128.0, 121.5, 120.4, 118.4,
117.1, 112.8, 111.6, 100.7, 74.0, 68.2, 61.5, 60.2, 58.6, 57.1,
56.5, 55.2, 41.3, 26.2, 25.4, 25.2, 20.6, 17.8, 15.3, 13.8, 9.0,
-3.9, -6.0.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{35}H_{47}N_{3}O_{6}Si: 633.85. Encontrado
(M+1)^{+}: 634.2.
A una solución de 165 (7.62 g, 12.02 mmol) en THF
(87.64 mL) y agua (0.24 mL), se añadió MEMCl (2.33 mL, 20.43 mmol)
a -6ºC. Después de la adición de 60% NaH (0.72 g, 18.03 mmol) en
porciones durante 45 min, la mezcla se agitó durante 1.5 h a esta
temperatura. La reacción se enfrió con agua (150 mL) y se extrajo
con CH_{2}Cl_{2} (2 x 100 mL). Las fases orgánicas combinadas
se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron
al vacío para dar 166 (8.69 g, 100%) en la forma de un sólido de
color blanco que se utilizó en los siguientes pasos sin purificación
adicional. Rf=0.24 Hex:AcOEt 2:1.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl3) \delta 6.64 (s,
1H), 6.16-6.05 (m, 1H), 5.92 (d, J=1.2 Hz, 1H),
5.85 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.41 (dd, J1=1.51, J2=17.1 Hz, 1H),
5.29-5.24 (m, 2H), 5.14 (d, J=6 Hz, 1H), 4.42 (d,
J=2.7 Hz, 1H), 4.21-4.06 (m, 3H),
4.01-3.95 (m, 2H), 3.88-3.82 (m,
1H), 3.72 (s, 3H), 3.64-3.57 (m, 3H), 3.39 (s, 3H),
3.29 (brd J=7.5 Hz, 1H), 3.25-3.15 (m, 2H), 3.00
(dd, J1=8.1, J2=17.4 Hz, 1H), 2.65 (d, J=18 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H),
2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.82 (dd J1=12, J2=15.6 Hz, 1H),-0.79
(s, 9H), -0.06 (s, 3H), -0.11 (s, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl3) \delta 148.4,
148.1, 144.1, 139.2, 133.9, 130.9, 130.8, 130.2, 128.8, 125.1,
124.2, 121.5, 118.8, 117.45, 113.0, 111.9, 101.0, 98.2, 74.1, 71.7,
69.3, 68.3, 61.7, 59.6, 59.0, 58.9, 57.3, 57.1, 55.5, 41.6, 29.7,
26.4, 25.8, 25.5, 25.4, 15.7, 9.2, -5.6, -5.6.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{39}H_{55}N_{3}O_{8}Si: 721.3. Encontrado
(M+1)^{+}: 722.3.
A una solución de 166 (10.76 g, 14.90 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} anhidro (275 mL), se añadieron
Pd(PPh_{3}P)_{2}Cl_{2} (837 mg, 1.19 mmol),
ácido acético (4.26 mL, 74.5 mmol) y hidruro de tributilestaño
(11.85 mL, 44.7 mmol) bajo atmósfera de argón a 23ºC. La mezcla de
reacción se agitó a 23ºC. durante 15 minutos. (TLC AcOEt/Hexano 1:1
no mostró el material inicial). Se añadió hexano (100 mL) y la
mezcla se vertió en una columna de cromatografía flash, (SiO_{2},
EtOAc:Hexano en forma de gradiente, desde 0:100, 1:4, 2:3 a 1:1)
para dar 167 (9.95 g, 98%) en la forma de un sólido de color
amarillo. Rf=0.42 Hex:EtOAc 3:7.
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl3):
\delta 6.63 (s, 1H), 5.89 (d, J=1.4 Hz, 1H), 5.79 (d, J=1.4 Hz,
1H), 5.76 (m, 1H), 5.38 (d, J=5.6 Hz, 1H), 5.23 (d, J=5.9 Hz, 1H),
4.53 (d, J=2.7 Hz, 1H), 4.17 (dd, J1=1.95 Hz, J2=6.05 Hz, 1H), 4.11
(dd, J1=7.0 Hz, J2=12.5 Hz, 1H), 4.01-3.92 (m, 2H),
3.70 (s, 3H), 3.67 (m, 3H), 3.40 (s, 3H), 3.29 (m, 1H),
3.24-3.13 (m, 3H), 2.99 (dd, J1=8.0 Hz J2=17.5 Hz,
1H), 2.67 (d, J=17.5 Hz, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.05 (s,
3H), 1.80 (dd, J1=11.2 Hz, J2=14.9 Hz, 1H), 0.82 (s, 9H), -0.03 (s,
3H), -0.07 (s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz, CDCl3):
\delta 148.4, 147.3, 145.5, 144.1, 136.2, 134.9, 134.8, 130.9,
130.2, 124.8, 123.1, 118.6, 112.8, 112.1, 106.2, 100.4, 98.4, 71.5,
69.2, 68.9, 61.7, 59.6, 58.7, 58.6, 56.9, 56.6, 55.3, 41.5, 29.5,
25.7, 25.3, 17.9, 15.5, 8.7, -5.7, -5.8.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{51}N_{3}O_{8}Si: 681.89. Encontrado
(M+1)^{+}: 682.3. HPLC: Condiciones: Columna: Simetría C18;
fase móvil: AcN-tampón fosfato 25 mM, pH=5,
isocrático de AcN (65%) en 5 minutos y gradiente en AcN desde
65-92% en 31 minutos, O: 0.6 mL/min, t^{a}: 40ºC.
Tiempo de retención: 27.89 minutos. pureza HPLC en área:
89.62%.
A una solución de 167 (9.95 g, 14.6 mmol) en
anhidro CH_{2}Cl_{2} (300 mL), se añadió una solución de
anhídrido bencenoselenínico (7.51 g, 14.6 mmol, pureza del reactivo
70%) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (120 mL) gota a gota, bajo
atmósfera de argón a - 15ºC. (el sólido blanco restante se
descartó). La solución se agitó entonces a -15ºC. durante 15 minutos
(TLC EtOAc/Hexano 2:3, no mostró material inicial). Se añadió una
solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (500 mL) a la
mezcla de reacción a esta temperatura. La fase orgánica se separó y
la fase acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (500 mL). Los
extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio, se
filtraron y el disolvente se eliminó bajo presión reducida. El
crudo de la reacción se purificó mediante cromatografía de columna
flash, (SiO_{2}, EtOAc:Hexano en forma de gradiente, desde 2:3 a
3:1) para dar 168 (9.86 g, 97%) en la forma de un sólido de color
amarillo. Rf=0.33 Hex:EtOAc 3:7).
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl3)
(Isomers ratio: 3:2): \delta 6.59 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.77 (s,
1H), 5.76 (s, 1H), 5.68 (s, 1H), 5.63 (s, 1H), 5.19 (d, J=6.0 Hz,
1H), 5.09 (d, J=6.0 Hz, 1H), 5.07 (d, J=6.1 Hz, 1H), 5.00 (d, J=6.1
Hz, 1H), 4.40 (d, J=2.7 Hz, 1H), 4.27 (d, J=2.44 Hz, 1H), 4.22 (d,
J=10.5 Hz, 1H), 3.95 (d, J=1.7 Hz, 1H), 3.86-3.75
(m, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.72-3.68 (m, 2H), 3.65 (m,
2H), 3.54 (s, 3H), 3.50 (m, 3H), 3.31 (s, 3H), 3.29 (s, 3H); 3.24
(m, 1H), 3.09 (dt, J=3.2 Hz, J=7.6 Hz, 1H), 3.02 (d, J=11.2 Hz,
1H), 2.92 (m, 2H), 2.48 (d, J=9.5 Hz, 1H), 2.43 (d, J=9.3 Hz, 1H),
2.21 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.03 (m, 2H), 1.73 (s,
3H), 1.71 (s, 3H), 0.86 (s, 9H), 0.77 (s, 9H), 0.04 (s, 3H), 0.02
(s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz, CDCl3):
200.5, 197.2, 159.8, 157.7, 148.4, 148.2, 147.7, 140.0, 137.6,
130.5, 130.2, 129.9, 129.4, 124.9, 124.7, 124.0, 122.7, 117.1,
116.9, 113.4, 110.8, 103.9, 103.8, 101.0, 100.4, 97.8, 72.8, 71.3,
69.7, 68.9, 68.8, 65.4, 64.1, 60.2, 59.9, 59.3, 59.1, 59.0, 58.6,
58.5, 56.8, 56.5, 56.2, 55.5, 54.9, 54.8, 42.5, 41.1, 40.9, 35.8,
25.6, 25.5, 25.4, 25.3, 20.6, 17.9, 17.8, 15.5, 15.3, 13.8, 7.0,
6.7, -5.7, -6.0, -6.1.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{51}N_{3}O_{9}Si: 697.89. Encontrado
(M+1)^{+}: 698.8 HPLC: Condiciones: Columna: Simetría C18;
fase móvil: AcN, tampón fosfato 25 mM, pH=5, gradiente en AcN desde
30-100% en 50 minutos. O: 1.2 mL/min, t^{a}: 40ºC.
Tiempo de retención: 30.70 minutos y 30.95 minutos (los dos
isómeros). Pureze HPLC en área: 60.77% y 31.99%.
A una solución de 168 (16.38 g, 23.47 mmol) en
THF anhidro (727 mL, 0.03 M), se añadió una solución de TBAF en 1M
THF (59 mL, 59 mmol) gota a gota a 23ºC. La mezcla de reacción se
agitó a 23ºC. durante 45 minutos. A continuación, la mezcla se
repartió entre una solución acuosa saturada de NaCl (850 mL) y
CH_{2}Cl_{2} (950 mL). Ambas capas se separaron y la capa
orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtraron y se
concentraron bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante
cromatografía de columna flash (SiO_{2}, EtOAc:Hexano en forma de
gradiente, desde 40:60, 50:50, 70:30, 90:10 a 100:0) para dar 169
(12.17 g, 89%) en la forma de un sólido de color amarillo pálido.
Rf=0.1 Hex:EtOAc 3:7.
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl3)
(Isomers ratio: 3:2): \delta 6.63 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.79 (s,
1H), 5.77 (s, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.62 (s, 1H), 5.23 (s, 1H), 5.18
(d, J=6.1 Hz, 1H), 5.08 (d, J=6.1 Hz, 1H), 5.01 (d, J=6.1 Hz, 1H),
4.22 (d, J=2.7 Hz, 1H), 4.09 (d, J=2.4 Hz, 1H), 4.00 (m, 4H), 3.82
(s, 3H), 3.87-3.64 (m, 6H), 3.55 (s, 3H),
3.51-3.44 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.29 (s, 3H), 3.26
(m, 1H), 3.18 (dt, J1=2.9 Hz, J2=7.3 Hz, 1H), 2.94 (m, 4H) 2.50 (m,
4H), 2.22 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 0.3H), 2.02
(d, J=7.3 Hz, 2H), 1.72 (s, 3H), 1.69 (s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz, CDCl3):
200.2, 200.1, 159.6, 158.5, 148.5, 148.4, 148.1, 147.9, 140.5,
137.4, 130.9, 130.4, 130.1, 130.0, 125.1, 124.9, 123.8, 122.7,
116.9, 116.6, 113.3, 110.7, 104.5, 103.9, 101.4, 100.7, 98.1, 97.9,
71.9, 71.5, 71.4, 70.1, 69.0, 69.0, 62.0, 60.1, 59.5, 58.7, 58.5,
58.1, 57.4, 56.9, 56.8, 56.4, 55.9, 55.1, 55.0, 41.3, 41.0, 36.1,
31.3, 25.3, 25.2, 22.4, 15.6, 15.5, 13.8, 7.0, 6.8.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{30}H_{37}N_{3}O_{9}: 583.63. Encontrado
(M+1)^{+}: 584.2.
A una solución de 169 (11.49 g, 19.69 mmol) y
Alloc-Cys-(Fm) (11.32 g, 29.53 mmol) (para su
preparación, ver Kruse, C. H.; Holden, K. G., J. Org. Chem., 1985,
50, pp. 2792-2794) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (688
mL), se añadieron DMAP (2.4 g, 19.69 mmol) y
EDC-HCl (9.44 g, 49.22 mmol) a 23ºC. A continuación,
se añadió DIPEA (5.14 mL, 29.53 mmol) a 0ºC. y la reacción se agitó
a 23ºC. durante 3 hora. La mezcla se lavó sucesivamente con a una
solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (500 mL), NaCl (400 mL) y
NH_{4}Cl (2 x 300 mL). La capa orgánica se secó sobre
Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró bajo presión reducida.
El residuo se purificó mediante cromatografía de columna flash
(SiO_{2}, AcOEt:Hex en forma de gradiente, desde 1:1, 6:4 a 7:3)
para dar 170 (14.76 g, 79%) en la forma de un sólido de color
amarillo pálido. Rf=0.31 y 0.40 Hex:EtOAc 3:7 (mezcla de
isómeros).
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl3):
7.74 (d, J=7.6 Hz, 4H), 7.63 (dd, J=7.0 Hz, J=15.3 Hz, 4H), 7.38
(t, J=7.3 Hz, 4H), 7.29 (m, 4H), 6.61 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.89
(m, 2H); 5.73 (s, 1H), 5.70 (s, 1H), 5.69 (s, 1H), 5.62 (s, 1H),
5.55 (m, 1H), 5.32 (d, J=15.1 Hz, 1H), 5.23 (d, J=6.1 Hz, 1H), 5.22
(d, J=10.6 Hz, 1H), 5.14 (d, J=5.9 Hz, 1H), 5.13 (d, J=6.0 Hz, 1H),
5.07 (d, J=6.3 Hz, 1H), 4.68 (m, 1H), 4.56 (m, 4H), 4.51 (m, 2H),
4.38 (dd, J1=4.5 Hz, J2=12.6 Hz, 1H), 4.22 (dd, J1=6.2 Hz, J2=11.1
Hz, 1H), 4.14-3.88 (m, 12H), 3.83 (s, 3H),
3.79-3.69 (m, 4H), 3.61 (s, 3H), 3.56 (m, 4H), 3.39
(s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.23 (m, 2H), 3.16 (d, J=6.0 Hz, 2H), 3.07
(d, J=6.1 Hz, 2H), 3.00-2.81 (m, 6H),
2.46-2.34 (m, 4H), 2.25 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.16
(s, 3H), 2.07 (m, 1H), 1.83 (dd, J1=9.5 Hz, J2=15.1 Hz, 1H), 1.78
(s, 3H), 1.77 (s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz, CDCl3):
\delta 200.3, 198.4, 170.3, 160.0, 158.1, 148.7, 148.7, 148,5,
148.2, 145.6, 145.6, 145.5, 142.2, 141.1, 141.0, 141.0, 138.5,
132.4, 132.3, 131.1, 130.6, 130.1, 129.8, 128.8, 127.6, 127.1,
127.1, 125.1, 125.0, 124.8, 124.7, 124.7, 124.0, 122.7, 119.9,
118.1, 118.0, 117.2, 116.8, 111.6, 108.3, 104.8, 104.5, 101.5,
101.0, 98.2, 98.2, 72.3, 71.7, 71.7, 70.6, 69.3, 69.2, 66.4, 66.0,
66.0, 65.5, 63.8, 60.8, 60.2, 59.8, 59.0, 58.9, 58.1, 56.8, 56.6,
56.5, 56.3, 56.1, 55.7, 55.3, 55.2, 53.9, 46.9, 41.9, 41.4, 41.2,
37.2, 36.9, 35.4, 31.5, 29.6, 25.6, 25.4, 22.6, 15.8, 15.7, 14.1,
7.3, 7.0.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{51}H_{96}N_{4}O_{12}S: 948.36. Encontrado
(M+1)^{+}: 949.3.
\vskip1.000000\baselineskip
El recipiente de reacción se pasó sobre una llama
dos veces, se purgó con vacío/argón varias veces y se mantuvo bajo
atmósfera de argón durante la reacción. A una solución de DMSO (5.4
mL) en anhidro CH_{2}Cl_{2} (554 mL) se añadió gota a gota
anhídrido tríflico (5.11 mL, 30.4 mmol) a -78ºC. La mezcla de
reacción se agitó a -78ºC. durante 20 minutos. A continuación, se
añadió una solución de 170 (14.43 g, 15.2 mmol) en anhidro
CH_{2}Cl_{2} (188 mL) a -78ºC. a través de una canula. Durante
la adición la temperatura se mantuvo a -78ºC. en ambos recipientes,
y el color de la reacción era amarillo. La mezcla de reacción se
agitó a -40ºC. durante 35 minutos. Durante este periodo de tiempo
la solución pasó de amarillo a verde oscuro. Después de este
tiempo, se añadió ^{i}Pr2NEt (21.2 mL, 121.6 mmol) gota a gota y
la mezcla de reacción se mantuvo a 0ºC. durante 45 minutos. El
color de la solución se volvió marrón claro durante este tiempo. A
continuación, se añadieron ^{t}BuOH (5.8 mL, 60.8 mmol) y
tert-butil tetrametil guanidina (18.3 mL, 106.4
mmol) gota a gota y la mezcla de reacción se agitó a 23ºC. durante
40 minutos. Después de este tiempo, se añadió anhídrido acético
(14.34 mL, 152 mmol) gota a gota y la mezcla de reacción se mantuvo
a 23ºC. durante 1 hora más. A continuación, la mezcla de reacción se
diluyó con CH_{2}Cl_{2} (38 mL) y se lavó con a una solución
acuosa saturada de NH_{4}Cl (500 mL), NaHCO_{3} (500 mL), y
NaCl (500 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre
Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron. El residuo se
purificó mediante cromatografía de columna flash (SiO_{2},
EtOAc:Hex en forma de gradiente, desde 3:7 a 4:6) para dar 171
(6.24 g, 52%) en la forma de un sólido de color amarillo pálido.
Rf=0.38 Hex:EtOAc 1:1.
^{1}H-RMN (CDCl3): 6.78 (s,
1H), 6.07 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.98 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.92 (m, 1H),
5.32 (d, J=5.9 Hz, 1H), 5.31 (dd, J1=1.5 Hz, J2=17.1 Hz, 1H), 5.23
(dd, J1=1.5 Hz, J2=10.4 Hz, 1H), 5.19 (d, J=5.6 Hz, 1H), 5.01 (d,
J=11.5 Hz, 1H), 4.81 (d, J=9.8 Hz, 1H), 4.53-4.51
(m, 3H), 4.35-4.27 (m, 2H), 4.24 (s, 1H),
4.18-4.13 (m, 2H), 3.94-3.84 (m,
2H), 3.73 (s, 3H), 3.58 (t, J=4.7 Hz, 2H), 3.43-3.37
(m, 2H), 3.36 (s, 3H), 2.91 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 2.26 (s, 3H),
2.20 (s, 3H), 2.36-2.06 (m, 2H), 2.02 (s, 3H).
^{13}C-RMN (CDCl3): 170.23,
168.49, 155.26, 149.62, 148.26, 145.63, 140.85, 140.24, 132.74,
131.60, 130.11, 124.89, 124.70, 120.14, 117.89, 117.84, 113.21,
101.89, 98.03, 92.67, 71.60, 69.04, 65.70, 61.20, 60.35, 59.36,
59.01, 58.89, 54.71, 54.42, 53.79, 41.53, 41.19, 32.68, 29.53,
23.57, 20.26, 15.62, 9.45.
ESI-MS m/z: Calculado para
C39H46N4O12S: 794.87. Encontrado: 796 (M+1)^{+}, 817
(M+23)^{+}. HPLC: Condiciones: Columna: Simetría C18, Fase
móvil: AcN/tampón fosfato (pH: 5) en gradiente desde 45 a 65% en
15 minutos y 65-90% en 36 minutos. \diameter=0.8
ml/min, t^{a}=40ºC. Tiempo de retención: 19.734 minutos. Pureza
HPLC en área: 83.17%
A una solución de 171 (2.26 g, 2.85 mmol) en
anhidro CH_{2}Cl_{2} (74 mL) y acetonitrilo (74 mL), se
añadieron NaI (3.42 g, 22.8 mmol) y TMSCl (recién destilado sobre
CaH_{2}) (2.6 mL, 22.8 mmol) a 0ºC. y la reacción se agitó durante
35 minutos. Se añadió una solución acuosa saturada de bicarbonato de
sodio (150 mL) a la mezcla de reacción a esta temperatura. La fase
orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2}
(2 x 100 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre
sulfato de sodio, se filtraron y el disolvente se eliminó bajo
presión reducida para dar 164 (2.4 g, 100%) en la forma de un
sólido de color amarillo pálido que se utilizó en las reacciones
posteriores sin purificación adicional. Los datos experimentales de
164 se han descrito anteriormente en Ejemplo 88.
La transformación de 164 en 35 se ha descrito
anteriormente en el Ejemplo 89.
Los intermedios 35, 36, ET-770 y
ET-743 se prepararon siguiendo los mismos
procedimientos que los descritos previamente en PCT/GB00/01852.
Ruta
6
A una solución de 144 (7 g, 7.6 mmol) en MeOH
(140 mL), se añadió 1M NaOH (15.1 mL) y la reacción se agitó durante
10 minutos a 23ºC. Se añadió una solución acuosa saturada de
NH_{4}Cl (100 mL) a la mezcla de reacción. La fase orgánica se
separó y se lavó con 5% HCl hasta que el color se volvió amarillo.
El extracto orgánico se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y el
disolvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo se purificó
mediante cromatografía de columna flash (SiO_{2}, EtOAc:Hexano en
forma de gradiente, desde 0:1, 1:3, 1:2, 1:1, 1:1 a 3:1) para dar
161 (3.76 g, 85%). Los datos experimentales de 161 se han descrito
previamente en la U.S. Pat. No. 5,721,362.
A una solución de 161 (200 mg, 0.37 mmol) y la
cisteína 152 (240 mg, 0.55 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (20
mL), se añadieron DMAP (110 mg, 0.925 mmol) y EDC.HCl (170 mg,
0.925 mmol) a 23ºC. y la reacción se agitó a esta temperatura
durante 1.5 horas. La mezcla se lavó entonces sucesivamente con una
solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (15 mL), NaCl (15 mL) y
NH_{4}Cl (2*10 mL). La capa orgánica se secó sobre
Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El
residuo se purificó mediante cromatografía de columna flash con
silica gel (SiO_{2}, AcOEt/Hexano en forma de gradiente, desde
1:4 a 1:2) para dar 172 (285 mg, 80%) en la forma de un sólido de
color blanco. Rf=0.3 Hex:EtOAc 2:1.
^{1}H RMN (CDCl3) \delta 7.73 (d, J=7.5 Hz,
2H), 7.59-7.57 (m, 2H), 7.40-7.28
(m, 9H), 6.60 (s, 1H), 5.69 (s, 1H), 5.65 (s, 1H), 5.54 (d, J=7.8
Hz, 1H), 5.11-5.08 (m, 4H),
4.52-4.49 (m, 1H), 4.21-3.90 (m,
6H), 3.83 (s, 3H), 3.49 (s, 3H), 3.21 (d, J=6.6 Hz, 1H),
3.09-2.90 (m, 6H), 2.41 (d, J=18 Hz, 1H),
2.34-2.31 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.19 (s, 3H),
1.88-1.83 (m, 1H), 1.77 (s, 3H).
^{13}C-RMN (CDCl3) \delta
198.7, 170.5, 158.4, 155.9, 148.9, 148.8, 145.8, 142.5, 141.3,
136.2, 131.4, 130.0, 128.8, 128.6, 128.4, 127.9, 127.3, 125.3,
125.0, 124.9, 123.0, 120.1, 117.5, 108.5, 104.8, 101.7, 99.5, 70.8,
67.4, 60.5, 57.8, 57.0, 56.5, 56.0, 55.5, 47.1, 41.6, 37.4, 37.1,
31.8, 25.8, 22.8, 15.9, 14.3, 7.6.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{53}H_{4}N_{4}O_{11}S: 954.35. Encontrado
(M+23)^{+}: 977.8.
El recipiente de reacción se pasó sobre una llama
dos veces, se purgó con vacío/argón varias veces y se mantuvo bajo
atmósfera de argón durante la reacción. A una solución de DMSO (977
\muL) en anhidro CH_{2}Cl_{2} (118 mL) se añadió gota a gota
anhídrido tríflico (930 -L, 5.5 mmol) a -78ºC. La mezcla de reacción
se agitó a -78ºC. durante 20 minutos. A continuación, se añadió una
solución de 172 (2.63 g, 2.75 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (26
mL, para la adición principal y 13 mL para el lavado) a través de
una cánula (tiempo de adición: 5 min) a -78ºC. Durante la adición la
temperatura se mantuvo a -78ºC. en ambos recipientes y el color
cambió de amarillo a marrón. La mezcla de reacción se agitó a
-40ºC. durante 35 minutos. Durante este periodo de tiempo la
solución pasó de amarillo a verde oscuro. Después de este tiempo, se
añadió ^{i}Pr2NEt (3.48 mL, 22 mmol) gota a gota y la mezcla de
reacción se mantuvo a 0ºC. durante 45 minutos, y el color de la
solución se volvió marrón durante este tiempo. A continuación, se
añadieron ^{t}BuOH (1.04 mL, 11 mmol) y tert-butil
tetrametil guanidina (3.31 mL, 19.25 mmol) gota a gota y la mezcla
de reacción se agitó a 23ºC. durante 40 minutos. Después de este
tiempo, se añadió anhídrido acético (2.6 mL, 27.5 mmol) gota a gota
y la mezcla de reacción se mantuvo a 23ºC. durante 1 hora más. A
continuación, la mezcla de reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2}
(70 mL) y se lavó sucesivamente con a una solución acuosa saturada
de NH_{4}Cl (180 mL), NaHCO_{3} (180 mL), y NaCl (180 mL). Las
capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se
filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se
purificó mediante cromatografía de columna flash (SiO_{2},
Hex:EtOAc en forma de gradiente, desde 4:1, 3:1, a 2:1) para dar
173 (1.145 g, 52%) en la forma de un sólido de color blanco.
Rf = 0.31 Hex:EtOAc 3:2.
Rf = 0.31 Hex:EtOAc 3:2.
^{1}H RMN (CDCl3) \delta 7.37 (bs, 5H), 6.67
(s, 1H), 6.08 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.99 (d, J=1.2 Hz, 1H),
5.19-5.00 (m, 4H), 4.82 (d, J=9.3 Hz, 1H), 4.49 (bs,
1H), 4.32-4.15 (m, 5H), 3.67 (s, 3H), 3.55 (s, 3H),
3.44 (d, J=4.8 Hz, 1H), 3.39 (d, J=6 Hz, 1H),
2.90-2.87 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.19 (s, 3H),
2.15-2.07 (m, 2H), 2.03 (s, 3H), 2.00 (s, 3H).
^{13}C-RMN (CDCl3) \delta
170.6, 168.8, 155.8, 149.9, 148.5, 146.0, 141.2, 140.6, 136.6,
132.0, 130.4, 128.8, 128.7, 128.5, 125.2, 124.9, 120.5, 118.2,
113.7, 113.6, 102.2, 99.4, 67.2, 61.6, 60.7, 59.7, 59.3, 57.6, 55.1,
54.8, 54.2, 41.9, 41.6, 33.0, 29.9, 23.9, 20.6, 15.6, 9.8.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{41}H_{44}N_{4}O_{11}S: 800.87. Encontrado
(M+23)^{+}: 823.7.
A una solución de 173 (100 mg, 0.125 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (2 mL) y CH_{3}CN (2 mL), se añadieron NaI (75
mg, 0.5 mmol) y TMSCl (63 -L, 0.5 mmol) a 0ºC. Después de agitar la
reacción a 23ºC. durante 50 minutos, la mezcla se enfrió con agua
(30 mL) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 20 mL). Las fases
orgánicas combinadas se lavaron sucesivamente con una solución
acuosa saturada de NaCl (20 mL) y ditionito de sodio (20 mL), se
secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró al vacío. El
residuo se purificó mediante cromatografía de columna flash
(SiO_{2}, EtOAc:Hexano en forma de gradiente, desde 1:4, 1:2 a
1:1) para dar 158 (66 mg, 70%) como un sólido blanco. Rf=0.21
Hex:EtOAc 1:1. Los datos experimentales de 158 se ha descrito
anteriormente en Ejemplo 19.
La transformación de 158 en 35 se ha descrito
anteriormente en Ejemplo 85.
Los intermedios 36, ET-770 y
ET-743 se prepararon siguiendo los mismos
procedimientos que aquellos descritos previamente en
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Claims (13)
1. Una etapa del proceso de la fabricación de un
compuesto ecteinascidina, donde la etapa comprende la desprotección
de un compuesto de fórmula (A) mediante la eliminación de ambos
grupos protectores en un solo paso, para dar una
\alpha-aminolactona de fórmula (35), de acuerdo
con el siguiente esquema:
donde Prot^{NH} es un grupo
protector de amino, y Prot^{OH} es un grupo protector de
hidroxilo.
2. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 1,
donde Prot^{NH} es t-butiloxicarbonil y
Prot^{OH} es metoximetil.
3. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 1,
donde Prot^{NH} es t-butiloxicarbonil y
Prot^{OH} es metoxietoximetil.
4. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 1
que incluye una etapa adicional de oxidación de la
\alpha-aminolactona de fórmula (35) a la
correspondiente \alpha-cetolactona de fórmula
(36) mediante transaminación:
5. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 4,
que incluye una etapa adicional de formación estéreoespecífica del
compuesto espirotetrahidroisoquinolina Et770 a partir de la
\alpha-cetolactona de fórmula (36) mediante una
reacción de Pictet-Spengler:
6. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 5,
que incluye la etapa adicional de reemplazamiento del nitrilo en
C-21 de Et770 por un hidroxilo para dar Et743.
7. Un proceso en la fabricación de un compuesto
ecteinascidina mediante la oxidación de una
\alpha-aminolactona de fórmula (35) a la
correspondiente \alpha-cetolactona (36) mediante
transaminación.
8. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 7,
que incluye una etapa adicional de formación estéreoespecífica del
compuesto espirotetrahidroisoquinolina Et770 a partir de la
\alpha-cetolactona de fórmula (36) mediante una
reacción de Pictet-Spengler:
9. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 8,
que incluye un paso adicional de cambio del nitrilo en
C-21 de Et770 por un hidroxilo para dar Et743:
10. Una etapa en el proceso de fabricación de un
compuesto ecteinascidina mediante la formación estéreoespecífica
del compuesto espirotetrahidroisoquinolina Et770 a partir de la
\alpha-cetolactona de fórmula (36) mediante una
reacción de Pictet-Spengler:
11. Un proceso de acuerdo con la reivindicación
10, que incluye el paso adicional del cambio del nitrilo en
C-21 de Et770 por un hidroxilo para dar Et743:
12. Un intermedio para la síntesis de un
compuesto ecteinascidina con la fórmula (35):
13. Un intermedio para la síntesis de un
compuesto ecteinascidina con la fórmula (36):
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