ES2266221T3 - Procedimiento y dispositivo para concentrar y estabilizar estrogenos conjugados de orina de yeguas. - Google Patents
Procedimiento y dispositivo para concentrar y estabilizar estrogenos conjugados de orina de yeguas. Download PDFInfo
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Abstract
Procedimiento para la concentración y estabilización descentralizada acorde con la práctica de mezclas de estrógenos conjugados (CE) de la orina de yeguas preñadas (PMU), el cual se caracteriza porque - la mezcla natural de estrógenos conjugados (CE) contenida en la orina de yeguas preñadas (PMU) se concentra y estabiliza en un soporte sólido (= adsorbente), de manera que - una cantidad total máxima preestablecida de un líquido de orina recolectado, eventualmente depurado mecánicamente con anterioridad de manera burda, se bombea de forma continua o en cantidades parciales discretas desde un recipiente de depósito, a una velocidad de flujo preestablecida, a través de un cartucho colocado en posición vertical, y el líquido de orina que fluye al exterior se desecha, de manera que - el cartucho está repleto de un agente de adsorción adecuado, rodeado de líquido, para la adsorción de una cantidad predefinida de la mezcla de estrógenos conjugados contenida en el líquido de la orina, y de maneraque - la cantidad total máxima del líquido de orina bombeado a través del cartucho, preestablecida como punto de control final para la carga del agente de adsorción, se ajusta a la capacidad máxima de carga del agente de adsorción para los estrógenos conjugados (CE) contenidos en el líquido de la orina.
Description
Procedimiento y dispositivo para concentrar y
estabilizar estrógenos conjugados de orina de yeguas.
La presente invención se refiere a un
procedimiento y a un dispositivo para concentrar y estabilizar los
estrógenos conjugados de la orina de yeguas preñadas en soportes
sólidos para obtener material de partida adecuado para la
preparación de productos farmacéuticos que contienen como componente
activo la mezcla natural de estos estrógenos conjugados.
Los estrógenos se emplean en medicina para la
terapia de sustitución de hormonas. En particular se emplean mezclas
de estrógenos para el tratamiento y la profilaxis de las molestias
que se presentan en las mujeres en el climaterio después de una
menopausia natural o artificial. Para ello, han resultado
particularmente efectivas y bien tolerables las mezclas naturales de
estrógenos conjugados como se encuentran en la orina de yeguas
preñadas.
El contenido de sólidos disuelto en la orina de
yeguas preñadas (a continuación abreviadamente como "PMU"
(Pregnant Mares Urine) puede variar naturalmente dentro de
intervalos muy amplios y se encuentra en general en el intervalo de
40-90 g de sustancia seca por litro. Aparte de la
orina y las demás sustancias habitualmente contenidas en la orina,
en el contenido de sólidos de la PMU están contenidos componentes
fenólicos en cantidades de aproximadamente 2-5% en
peso con relación a la sustancia seca. Entre estos componentes
fenólicos hay cresoles y la
dihidro-3,4-bis[(3-hidroxifenil)metil]-2(3H)-furanona
que se conoce como HPMF. Estos pueden estar presentes en forma libre
o conjugada. En la PMU está contenida una mezcla natural de
estrógenos que está en gran medida presente en forma conjugada, por
ejemplo como sal de sodio del semiéster del ácido sulfúrico (a
continuación abreviadamente como "sal de sulfato"). El
contenido de estrógenos conjugados (a continuación abreviado como
"CE" (Conjugated Estrogen) puede ser de 0,3 a 1% en peso
calculado como sal de sulfato de estrógeno y con relación a la
sustancia seca.
Para la preparación y obtención directa de los
estrógenos conjugados que contiene la PMU se describen diversos
procedimientos en el estado de la técnica. Generalmente, los
extractos que contienen estrógenos conjugados de la PMU se obtienen
mediante la extracción con un disolvente orgánico polar no miscible
con agua o sólo poco miscible con agua como, por ejemplo, acetato de
etilo, n-butanol o ciclohexanol. Sin embargo, en
estas extracciones de tipo líquido-líquido se
presentan una multitud de problemas como son fuerte formación de
espuma, formación de sedimento, formación de emulsión y mala
separación de fases. En general se requieren varias etapas de
extracción, lo cual conduce a pérdidas y a una obtención sólo
parcial del contenido de estrógenos. Para evitar estas desventajas
se propusieron, por lo tanto, en el estado de la técnica una serie
de procedimientos de extracción en fase sólida.
Para la preparación de pequeñas cantidades de
líquidos de orina y plasma para una determinación analítica de
estrógenos mediante cromatografía en fase gaseosa, Heikkinnen et
al. (Clin. Chem. 27/7, (1981), 1186-1189) y
Shackleton et al. (Clinica Chimica Acta 107(1980)
231-243) describen una extracción de estrógenos en
fase sólida mediante un cartucho con gel de sílice silanizado que
contiene residuos de octadecilsilano (Sep-Pak^{R}
C^{18}-cartridge, fabricante Waters Ass. Inc.
Milford, MA, USA). En este caso, los estrógenos se eluyen del
cartucho con metanol.
H.L. Bradlow propuso en 1968 (véase Steroids 11
(1968) 265-272) utilizar Amberlite
XAD-2^{R}, una resina de poliestireno neutra,
apolar, hidrófuga de la razón social Rohm & Haas, para la
extracción de estrógenos conjugados de orina. La capacidad de
adsorción indicada es baja. Según Bradlow se hace pasar una orina
eventualmente diluida a una baja velocidad de paso a través de una
columna que contiene la resina. Los estrógenos se eluyen con metanol
o etanol.
Las solicitudes de patente más recientes
describen procedimientos para obtener un extracto que contiene las
mezclas naturales de estrógenos conjugados de orina de yeguas
mediante la extracción en fase sólida de la mezcla de estrógenos
conjugados de la orina de yeguas preñadas en, por ejemplo, gel de
sílice de fase inversa (documento WO 98/08525) o en resinas de
adsorción polímeras, no iónicas, semipolares (documento WO
98/08526).
Además de la optimización precedentemente
descrita del acondicionamiento directo, completo, de la orina de
yeguas preñadas (PMU) para la obtención de mezclas naturales de
estrógenos conjugados (CE), para el rendimiento y la calidad de la
materia prima que contiene estrógeno, y de la mezcla natural de
estrógenos conjugados que a partir de ella se deberá aislar también
son de particular importancia las etapas previas al
acondicionamiento como son, por ejemplo, el asegurar un
almacenamiento y una manipulación cuidadosos para el estrógeno en el
lugar de recolección de la orina. En este contexto también se deberá
procurar una optimización del transporte de la materia prima que
contiene estrógeno recolectada desde el lugar de la recolección
hasta el lugar del propio acondicionamiento y aislamiento de los
estrógenos conjugados.
Un acondicionamiento completo de la PMU
mediante, por ejemplo, extracción en fase sólida requiere personal
químico-farmacéutico especializado, cualificado,
para poder mantener bajo condiciones bien controlables los altos
requisitos de pureza y calidad de una sustancia o mezcla de
sustancias que se deberá utilizar como principio activo
farmacéutico. Sin embargo, la recolección de la orina (PMU) por lo
general se lleva a cabo en el entorno normal de las yeguas preñadas,
es decir, en acaballaderos, en un ámbito campesino y frecuentemente
también en lugares más remotos. Por regla general, en esos lugar
sólo existe una infraestructura simple y la recolección de la orina
(PMU) y su manipulación se efectúa habitualmente por personal
humilde, adiestrado para ello, al cual no se le pueden imponer
exigencias demasiado estrictas en lo referente a la manipulación de
la orina recolectada.
Los estrógenos conjugados (CE), cuya composición
es como la excretada en la orina de yeguas preñadas, son una mezcla
compleja que contiene en particular estronasulfato de sodio,
equilinasulfato de sodio así como otros CE. Para el aislamiento de
los CE es muy importante que la PMU se acondicione lo más rápido
posible en estado reciente. Con un almacenamiento algo prolongado la
orina se comienza a descomponer rápidamente. La orina adquiere un
tono oscuro, huele a amoniaco y el contenido en CE disminuye mucho.
La velocidad de descomposición depende de las condiciones de
almacenamiento y de criterios de limpieza. Por consiguiente, puesto
que se trata de grandes cantidades de líquido, la orina (PMU)
recolectada hasta el momento debe ser transportada diariamente desde
el lugar de la recolección hasta un lugar centralizado de
acondicionamiento para poder asegurar un acondicionamiento lo más
rápido posible.
Por consiguiente, existe una urgente necesidad
de procedimientos y dispositivos adecuados para llevar a cabo
directamente en el lugar de recolección de la orina (PMU) una
concentración y estabilización de los estrógenos conjugados (CE)
contenidos en la orina de yeguas preñadas, de la manera más
cuidadosa posible para el producto y máxima sencillez de
manipulación, así como de un transporte lo más eficiente posible
desde el lugar de recolección al lugar del acondicionamiento y el
aislamiento.
Por consiguiente, es objeto de la presente
invención desarrollar un procedimiento técnico adecuado para la
obtención de la mezcla natural de estrógenos conjugados y un
dispositivo adecuado para la concentración y estabilización de los
estrógenos conjugados (CE) de la orina recolectada de yeguas
preñadas, que evite las desventajas precedentemente descritas. En
particular, el procedimiento y el dispositivo deben permitir una
concentración y estabilización de los estrógenos conjugados de la
PMU con trato cuidadoso para el producto y manipulación sencilla en
el lugar de recolección de la orina y un transporte lo más eficiente
posible de la materia prima que contiene estrógeno, proporcionada de
esta manera desde el lugar de recolección hasta el lugar del
acondicionamiento y aislamiento propiamente dichos de la mezcla
natural de estrógenos conjugados.
Se descubrió ahora, sorprendentemente, que los
estrógenos conjugados (CE) son muy estables ligados a soportes
sólidos (= agentes de adsorción) y se conservan por períodos más
prolongados sin indicación alguna de una descomposición.
Por consiguiente, la presente invención se
refiere a un procedimiento acorde a la práctica, descentralizado, es
decir, próximo a los acaballaderos y/o pastizales, para la
concentración y estabilización de las mezclas de estrógenos
conjugados (CE) de la orina de yeguas preñadas (PMU), que se
caracteriza porque
- la mezcla natural de estrógenos conjugados
(CE) contenida en la orina de yeguas preñadas (PMU) se concentra y
estabiliza en un soporte sólido (= agente de adsorción), de manera
que
- desde un recipiente de depósito se bombea en
forma continua o en cantidades parciales discretas, a una velocidad
de flujo preestablecida, a través de un cartucho colocado en
posición vertical, una cantidad total máxima preestablecida de un
líquido de orina recolectado, eventualmente previamente tamizado, y
el líquido de orina que fluye al exterior se desecha, de modo
que
- el cartucho está repleto de un agente de
adsorción adecuado, rodeado (constantemente) de líquido para la
adsorción de una cantidad predefinida de la mezcla de estrógenos
conjugados (CE) contenida en el líquido de la orina, y de modo
que
- la cantidad total máxima del líquido de orina
bombeado a través del cartucho, la cual se preestablece como punto
de control final para la carga del agente de adsorción, se ajusta a
la capacidad máxima de carga del agente de adsorción para los
estrógenos conjugados (CE) contenidos en el líquido de la orina.
El concepto "acorde con la práctica"
significa en este caso que el procedimiento es adecuado para las
condiciones de la práctica de recolección en el campo, o sea, que se
puede manejar de manera sencilla y segura por parte del personal
adiestrado; es decir, no es complicado y se puede llevar a cabo con
la exclusión en gran medida de operaciones erróneas.
El concepto "descentralizado" significa, en
este caso, que el procedimiento se puede llevar a cabo en el lugar
respectivo de la operación de recolección de orina sin instalaciones
químico-farmacéuticas especiales, es decir, en
particular se puede llevar a cabo próximo a los acaballaderos y/o
pastizales. Como "cartucho" se entiende en este caso cualquier
tipo de columna cerrada con admisión y desagüe que se pueden cerrar,
así como elementos de conexión, por ejemplo, acoplamientos rápidos.
El concepto "cartucho" comprende también, por consiguiente,
dentro del marco de la presente invención, las columnas como las que
se usan habitualmente, por ejemplo, en laboratorios, en
instalaciones técnicas y en fábricas químicas, y que están equipadas
como se acaba de mencionar para el empleo conforme con la
invención.
Según el procedimiento conforme con la invención
se proporciona convenientemente una materia prima o material de
partida que sirve para la preparación de productos farmacéuticos
que, como principio activo, contienen la mezcla natural de
estrógenos conjugados de la PMU, en la cual el contenido de la
mezcla natural de estrógenos se concentra prácticamente de forma
completa en el agente de adsorción (soporte) y se puede estabilizar
durante un período más prolongado en las condiciones normales del
entorno del respectivo lugar de recolección. Después de la carga
completa (máxima) se puede recambiar fácilmente el cartucho y
sustituirlo por un cartucho con agente de adsorción sin cargar. Los
cartuchos con el agente de adsorción cargado se pueden almacenar
todavía bastante tiempo in situ a la temperatura ambiente o,
en caso deseado, también con refrigeración hasta aproximadamente 4ºC
y, bajo ciertas condiciones, también congelado hasta aproximadamente
-20ºC, por ejemplo, hasta que se encuentre disponible una
determinada cantidad de cartuchos cargados para un transporte
colectivo conveniente a un punto centralizado de acondicionamiento.
El transporte se puede llevar a cabo a las temperaturas del entorno
o, como se describió precedentemente para el almacenamiento, con
refrigeración o congelación. El acondicionamiento y aislamiento
propiamente dichos de la mezcla natural de estrógenos conjugados
(CE) puede entonces tener lugar de manera convencional en el lugar
centralizado de acondicionamiento de una manera habitual para el
respectivo agente de adsorción, por ejemplo, mediante lavado y
elución de los CE del agente de adsorción y elaboración ulterior de
manera convencional del material eluido. Por ejemplo, se puede
seguir concentrando el material eluido de manera en sí conocida con
el fin de obtener un concentrado en gran medida libre o
completamente libre de disolventes orgánicos, adecuado para la
elaboración galénica ulterior. En caso deseado, también se puede
preparar una mezcla de sólidos libre de agente de elución mediante
otros procesos de secado adecuados como, por ejemplo, mediante
secado por atomización, secado en lecho fluidizado, liofilización o
secado al vacío. Tanto el material eluido que contiene la mezcla de
estrógenos como también un concentrado o un producto sólido secado
por atomización producido a partir de éste se pueden incorporar de
manera en sí conocida en preparados galénicos sólidos o líquidos
como, por ejemplo, comprimidos, grageas, cápsulas o emulsiones.
Además del procedimiento conforme con la
invención, la invención también se refiere a un dispositivo que se
puede utilizar en este procedimiento, el cual tiene convenientemente
en cuenta las sencillas condiciones en el lugar de empleo y
garantiza que el proceso se desarrolle de forma segura y respetuosa
con el producto. Este dispositivo conforme con la invención es
adecuado para la concentración y estabilización acorde a la
práctica, descentralizada, es decir, en particular próxima a los
acaballaderos y los pastizales. A continuación se explicarán de
manera general algunos parámetros de proceso adicionales,
importantes, para llevar a cabo el procedimiento. Con respecto a los
diseños especiales en la construcción y los aparatos de dispositivos
adecuados para llevar a cabo el procedimiento conforme a la
invención se remite a la siguiente descripción detallada del
dispositivo conforme con la invención, a la que eventualmente deberá
recurrirse en forma complementaria a la siguiente descripción
general de la realización del procedimiento.
Para el procedimiento conforme con la invención
se puede utilizar la PMU recolectada como tal, y mantener la
cantidad de PMU diariamente recolectada para este propósito primero
en un recipiente de depósito. Eventualmente, se recomienda la
separación previa de impurezas mecánicas burdas como son paja, heno
o análogos, por ejemplo mediante un simple cedazo de malla ancha al
llenar el recipiente de depósito con la PMU acabada de recolectar.
En caso deseado, se puede añadir a la orina recolectada en el
recipiente de depósito conservantes, germicidas, bactericidas y/o
antihelmínticos para reducir el número de gérmenes y virus.
A partir del recipiente de depósito, la PMU se
bombea regularmente mediante una bomba, por ejemplo, mediante una
bomba de manguera al cartucho que contiene el agente de adsorción en
función de la cantidad de orina que se recibe, por ejemplo una o dos
veces al día. Este cartucho presenta por lo general dimensiones y
pesos que permiten una manipulación por personas de fuerza normal.
En lo referente al procedimiento, se recomienda establecer las
dimensiones internas del cartucho para el lecho de agente de
adsorción a ser alojado de manera que pueda alojar aproximadamente
30 a 50 l de agente de adsorción y que la PMU tenga que recorrer
preferentemente un trecho de aproximadamente 80 a 120 cm desde la
admisión hasta el desagüe. Conforme con la invención, la adsorción
de los estrógenos conjugados en el agente de adsorción tiene lugar a
través del contacto de la PMU con el agente de adsorción al
introducir el líquido de la orina arbitrariamente desde la cabeza o
desde el fondo, en un cartucho dispuesto en forma vertical, el cual
contiene el agente de adsorción, y manteniéndolo en contacto con el
agente de adsorción dentro de éste durante el paso del flujo por un
tiempo suficiente para la adsorción del contenido de estrógeno,
hasta que la orina residual finalmente abandona el cartucho por el
lado opuesto. En este caso, la PMU se introduce en el cartucho, por
ejemplo, por el lado de la cabeza o del fondo, de manera que se
asegure que el agente de adsorción se encuentra constantemente
rodeado de líquido con el fin de excluir dentro de lo posible un
indeseable flujo en seco en el cartucho.
El tiempo de contacto o, respectivamente, la
velocidad de flujo se ajustan al agente de adsorción respectivo, y
en el caso de adsorbentes adecuados para el procedimiento (=
velocidad de carga) debería encontrarse en el intervalo de 3 a 10
volúmenes de lecho adsorbente/h, preferentemente 4 a 6 volúmenes de
lecho adsorbente/h. Velocidades de carga adecuadas son, por ejemplo,
4,5 a 5,5 volúmenes de lecho adsorbente/h.
Los tiempos de contacto y velocidades de flujo
especiales para los agentes de adsorción particularmente preferidos
se especifican más adelante en la descripción de estos agentes de
adsorción.
La cantidad total máxima de líquido de orina que
se puede conducir a través del cartucho depende de la capacidad de
adsorción del agente de adsorción respectivo y, en el caso de
adsorbentes adecuados para el procedimiento, se debiera encontrar en
el intervalo de 20 a 60 volúmenes de lecho adsorbente,
preferentemente de 30 a 40 volúmenes de lecho adsorbente. Por lo
general la cantidad total máxima de líquido de orina que se puede
conducir por el cartucho para su carga se debe encontrar, por
consiguiente, en el intervalo de 900 a 2.000 l según el agente de
adsorción y el tamaño del cartucho. El respectivo valor final del
volumen de paso se fija de manera preestablecida al personal de
trabajo para el respectivo tipo de cartucho, en el lugar de la
recolección. Para la medición de la cantidad de líquido de orina
bombeada a través del cartucho se puede utilizar, por consiguiente,
un contador volumétrico sencillo, preferentemente, por ejemplo, un
contador de agua. Al ser alcanzada la carga máxima se puede cambiar
eventualmente a un segundo cartucho paralelo y continuar con el
proceso de adsorción.
Cuando se alcanza el valor final preestablecido
para el cartucho, en caso deseado, antes de interrumpir el
suministro de líquido, se puede lavar aún el cartucho con los CE
adsorbidos, por ejemplo, con agua y/u otra solución de lavado acuosa
adecuada. Después de esto, se cierran el desagüe y la admisión de
líquido y seguidamente se suelta la conexión, por ejemplo, un
sencillo acoplamiento rápido de la admisión del líquido al cartucho.
Después de esto, el cartucho cargado se puede retirar y almacenar en
un lugar adecuado hasta que tiene lugar el transporte al punto
centralizado de acondicionamiento, y conectar a la admisión de
líquido un nuevo cartucho sin cargar.
Después de la carga con la PMU, por ejemplo
antes del recambio de un cartucho completamente cargado con PMU, o
también antes de ser alcanzada la capacidad total de carga, después
de etapas de carga parcial individuales, arbitrarias, se puede
enjuagar además el cartucho en caso deseado con agua y/u otra
solución de lavado acuosa adecuada, por ejemplo, una solución de
lavado de carácter básico como particularmente, por ejemplo,
hidróxido sódico acuoso diluido (por ejemplo, NaOH acuoso
0,5-2 N) para eliminar del cartucho líquido de orina
residual. La cantidad de la solución de lavado no es crítica y se
elige preferentemente de manera que sea suficiente para expulsar la
orina residual del cartucho sin que durante ello se eliminen por
lavado cantidades dignas de mención de los estrógenos conjugados.
Resulta conveniente, por ejemplo, la utilización de
1-3, de preferencia aproximadamente 2 volúmenes de
lecho de líquido de lavado por volumen de lecho de agente de
adsorción. En este caso, el agua de lavado o la solución de lavado
se conduce convenientemente a través del cartucho que contiene el
agente de adsorción con una velocidad de paso de 3 a 10,
preferentemente 5 a 7 partes en volumen de agua de lavado por 1
parte en volumen de agente de adsorción/hora. El agente de adsorción
cargado de CE en el cartucho puede servir como materia prima o,
respectivamente, material de partida para el aislamiento de CE puro
para la preparación de medicamentos que contienen la mezcla natural
de estrógenos conjugados.
En una variante de la invención, para una mayor
estabilización del CE adsorbido se puede aclarar finalmente el
cartucho, después de haber sido lavado con agua y/o solución de
lavado, con una solución conservante, por ejemplo, una solución que
contiene un agente de conservación, una solución acuosa de pH
ajustado y/o una solución salina acuosa, antes de soltar el cartucho
del dispositivo y sustituirlo por uno nuevo. Para evitar la
formación de gérmenes en la columna, en particular durante el
almacenamiento o el transporte sin refrigeración se pueden emplear
los agentes de conservación habituales y, por ejemplo, también
germicidas, bactericidas y/o antihelmínticos. Un ajuste del pH del
agua de lavado se corresponderá con el respectivo agente de
adsorción utilizado. Como soluciones salinas se pueden utilizar
soluciones acuosas de sales orgánicas de concentraciones diversas,
para las cuales se dan ejemplos en la Tabla III.I. Se recomienda
particularmente el empleo de soluciones salinas también en el caso
en que los cartuchos cargados con CE se deban almacenar
refrigerados, en particular congelados. Las soluciones salinas
preferidas son las soluciones de cloruro de sodio con
concentraciones de sal de aproximadamente 10 a 35% en peso,
preferentemente 25 a 33% en peso.
En un perfeccionamiento preferido del
procedimiento conforme con la invención, la orina recolectada antes
de ser bombeada desde el recipiente de depósito al cartucho se
libera preferentemente de mucosidades y sustancias sólidas más
finas. Por consiguiente, es conveniente conducir primero el líquido
de la orina desde el recipiente de depósito a través de uno o varios
filtros previos antes de bombear el líquido de la orina a través del
cartucho. Así, por ejemplo, se puede conducir la PMU a través de al
menos un dispositivo de separación en sí conocido, por ejemplo a
través de una instalación de filtración con al menos un filtro de
profundidad o filtro de masa filtrante sobre tamices. Como
dispositivo de separación puede servir, por ejemplo, un filtro de
profundidad con lecho de arena o un cartucho filtrante comercial, o
se pueden utilizar filtros de masa filtrante sobre tamices o filtros
de placa o filtros de bujía o filtros de saco o también tubos de
filtración. Los filtros se pueden utilizar individualmente o también
varios de ellos en combinación arbitraria entre sí, por ejemplo
conectados en serie uno tras otro y/o en paralelo. En caso deseado,
se pueden añadir además coadyuvantes de filtración al líquido de la
orina (PMU) antes de la filtración. Coadyuvantes de filtración
adecuados son, por ejemplo, aquellos que ligan carbonato de calcio
y/o mucinas y con ello mejoran la filtración de la orina. Además, a
continuación del filtro se puede acoplar eventualmente un separador
de partículas, por ejemplo en el caso de emplear un lecho de arena
como filtro, un separador de arena.
En sí, el experto está familiarizado con los
principios y, respectivamente, la forma de realización de la
filtración. Por consiguiente, con miras al problema que ha de ser
resuelto por la invención entran en consideración los principios
habituales de la filtración de clarificación para su empleo conforme
con la invención. La filtración de clarificación tiene por objeto la
depuración de la fase líquida, de manera que la pureza del filtrado
es la principal magnitud de evaluación para alcanzar la meta del
proceso. El proceso de separación se realiza fundamentalmente por la
interacción del agente de filtración y la suspensión. Esto se debe
tener en cuenta al elegir los agentes de filtración, el diseño del
proceso, así como también al proyectar los aparatos filtrantes para
la técnica del proceso. En la mayoría de los casos, la sustancia
sólida separada influye decisivamente en el desarrollo del proceso.
Así, en el caso de una suficiente proporción de sustancia sólida, y
en su capacidad de formar puentes (las partículas se apoyan sobre el
agente de filtración sin obstruirlo), entonces la torta filtrante
que se forma y que crece continuamente asume la función de agente de
filtración. En este caso de filtración de la masa filtrante sobre
tamices, de filtración por la torta, es la estructura de la torta de
filtración la que determina el desarrollo del proceso, mientras que
el agente filtrante propiamente dicho sólo tiene una función de
apoyo después de una fase de inicio. El lugar de la separación de la
sustancia sólida es otra característica esencial para diferenciar
los procesos de filtración. En el caso de la filtración de
superficie la separación de la sustancia sólida tiene lugar en la
superficie del agente filtrante por un efecto de cedazo, es decir,
en razón de las relaciones de tamaño entre las partículas de
sustancia sólida y los poros del agente filtrante. Contrariamente a
esto, en el caso de la filtración en profundidad las partículas de
sustancia sólida penetran en el agente filtrante y se depositan en
el interior del mismo.
En sí, los agentes de adsorción que se pueden
utilizar en el cartucho pueden ser todos los agentes de adsorción
inorgánicos u orgánicos que presenten una suficiente capacidad de
adsorción para la mezcla natural de estrógenos conjugados que
contiene la PMU. Como agentes de adsorción para el procedimiento
conforme con la invención son adecuados, por lo tanto, para su
empleo en el cartucho, las resinas de adsorción polímeras, gel de
sílice, gel de sílice de fase inversa o preferentemente resinas de
adsorción polímeras semipolares.
Los geles de sílice hidrofugados que se pueden
insertar en el cartucho como agente de adsorción son, por ejemplo,
los geles de sílice de fases inversas, en sí conocidos (= geles de
sílice Reverse-Phase, abreviadamente "geles de
sílice RP"), los cuales son geles de sílice químicamente
modificados que tienen grupos o respectivamente ligandos funcionales
hidrófugos. Así, por ejemplo, son adecuados los geles de sílice RP
silanizados que como grupos funcionales hidrófugos contienen
radicales n-octadecildimetilsililoxi,
n-octildimetilsililoxi o dimetilhidroxisililoxi. Son
adecuados, por ejemplo, los geles de sílice silanizados con un
tamaño medio de grano de 15 a 500 \mum. Resultó ser
particularmente conveniente el gel de sílice que contiene radicales
dimetilhidroxisililoxi con un tamaño medio de grano en el intervalo
de 0,05-0,3 mm, por ejemplo el "Kieselgel
60/Dimethylsilanderivat" de la razón social Merck.
Convenientemente, el líquido de la orina se puede conducir a través
del cartucho que contiene el gel de sílice a una velocidad de paso
tal que el tiempo de contacto sea suficiente para la adsorción del
contenido de estrógeno. Por ejemplo, son adecuadas velocidades de
paso que corresponden a un caudal de 5 a 20 partes en volumen de PMU
por 1 parte en volumen de gel de sílice/hora. La adsorción se lleva
a cabo preferentemente a la temperatura ambiente. Convenientemente,
la velocidad de paso del líquido de la orina a través del reactor se
puede controlar trabajando con una leve sobrepresión (regulada por
la potencia de la bomba). La cantidad de gel de sílice hidrofugado a
ser utilizada puede variar según el tipo de gel de sílice empleado y
la cantidad del contenido de sustancias sólidas en el líquido de
orina recolectado. En el caso de una PMU prefiltrada, es decir,
liberada de mucosidades y sustancias sólidas, se puede cargar, por
ejemplo, una parte en volumen del gel de sílice hidrofugado con
hasta 80 partes en volumen de PMU previamente tratado sin que se
puedan detectar cantidades notables de estrógenos en el líquido de
orina que fluye hacia el exterior.
Las resinas adsorbentes polímeras semipolares
que se pueden utilizar como agente de adsorción en el cartucho son
preferentemente polímeros orgánicos no iónicos, porosos, los cuales
en contraposición con las resinas adsorbentes polímeras hidrófugas
no polares tienen una polaridad intermedia (=, por ejemplo, con un
momento dipolar de la superficie activa de la resina en el intervalo
de 1,0 a 3,0, en particular 1,5 a 2,0 debye) y una estructura algo
más hidrófila, por ejemplo resinas de ésteres de ácidos
policarboxílicos. Convenientemente se usan resinas semipolares
macroporosas con estructura preferentemente macroreticular y
diámetros medios de poro en el intervalo de 50 a 150,
preferentemente 70 a 100 Angström, y una superficie específica en el
intervalo de 300 a 900, preferentemente 400 a 500 m^{2}/g.
Resultan ser particularmente adecuadas las resinas macroporosas de
ésteres de ácidos policarboxílicos, transversalmente reticuladas,
alifáticas, en particular las resinas del ésteres poliacrílicos
transversalmente reticuladas como, por ejemplo, Amberlite
XAD-7^{R} de la razón social Rohm und Haas. El
líquido de la orina se puede conducir convenientemente a través del
cartucho que contiene la resina absorbente con una velocidad de paso
tal que el tiempo de contacto sea suficiente para la adsorción del
contenido de estrógenos. Son adecuadas, por ejemplo, velocidades de
paso que corresponden a 3 a 10, preferentemente 5 a 7 partes en
volumen de PMU por 1 parte en volumen de resina adsorbente/hora. La
adsorción se lleva a cabo preferentemente a la temperatura ambiente.
Convenientemente, la velocidad de paso del líquido de la orina a
través del reactor se puede controlar trabajando con una leve
sobrepresión (regulada mediante la potencia de la bomba). La
cantidad de resina adsorbente semipolar a ser aplicada puede variar
según el tipo de la resina adsorbente utilizada y la cantidad de
contenido de sólidos en el líquido de la orina recolectado. En el
caso de utilizar PMU se puede cargar, por ejemplo, una parte en
volumen de resina adsorbente, por ejemplo resina adsorbente de
ésteres de ácidos policarboxílicos alifáticos, transversalmente
reticulada, con hasta 80 partes en volumen de PMU previamente
tratada sin que se puedan detectar cantidades notables de estrógenos
en el líquido de orina que fluye hacia el exterior.
Además de los agentes de adsorción preferidos
mencionados, también se pueden utilizar otras resinas adsorbentes u
otros tipos de gel de sílice. Como resinas adsorbentes son adecuadas
en este caso las resinas adsorbentes apolares, semipolares, así como
también las polares. La cantidad de la orina que se puede bombear a
través del agente de adsorción se deberá determinar previamente en
base a la respectiva capacidad de adsorción. Ejemplos de resinas
adsorbentes que se pueden utilizar son los tipos comerciales
habituales tales como los adsorbentes polímeros Amberlite con
estructuras de base de estireno-divinilbenceno (por
ejemplo, los tipos XAD-1180, XAD-2,
XAD-4, XAD-16), con estructuras de
base de ésteres acrílicos (por ejemplo, XAD-7) o
aquellas con estructuras de base altamente polares que contienen
nitrógeno y oxígeno (por ejemplo, XAD-12). Otras
resinas adsorbentes son las resinas Dowex (copolímeros de estireno y
divinilbenceno) como, por ejemplo, Dowex 112, Dowex Optipore, Dowex
Optipore V 493; Lewatite (poliestirenos reticulados), por ejemplo,
Lewatit OC 1064, Lewatit OC 1066 ó Lewatit OC 1163, resinas
intercambiadoras de aniones de poliamina, por ejemplo, resinas
Dowex. Resinas adsorbentes ventajosas son en particular
XAD-7, XAD-16 (tipo HP), XAD 118 y
Dowex Optipore, preferentemente como Dowex Optipore V 493, así como
Lewatite OC 1064, OC 1066 y OC 1163.
Además del procedimiento conforme con la
invención precedentemente descrito, la invención se refiere también
a un dispositivo que puede ser empleado en este procedimiento, el
cual tiene en cuenta de manera conveniente las condiciones sencillas
en el lugar de empleo y garantiza que el procedimiento se lleve a
cabo de manera segura y respetuosa con el producto.
El dispositivo conforme con la invención se
caracteriza por ser adecuado para la concentración y estabilización
descentralizada, acorde con la práctica, es decir, en particular
próxima a los acaballaderos o los pastizales, de las mezclas de
estrógenos conjugados (CE) contenidos en la orina de yeguas preñadas
(PMU) sobre un soporte sólido (= agente de adsorción), comprendiendo
este dispositivo:
- un cartucho dispuesto verticalmente repleto
con un agente de adsorción adecuado (continuamente) rodeado de
líquido para la adsorción de una cantidad predefinida de la mezcla
de estrógenos conjugados (CE) contenido en el líquido de la orina de
yeguas preñadas, y presentando el cartucho o bien a) una admisión de
líquido dispuesta en el lado del fondo y una salida del líquido
dispuesta en el lado de la cabeza, o b) una admisión de líquido
dispuesta en el lado de la cabeza y una salida de líquido dispuesta
en el lado del fondo,
- así como localizados corriente arriba del
cartucho en la secuencia indicada y conectados a través de
mangueras
- una bomba, un contador volumétrico y un
medidor de cantidades de paso.
El dispositivo conforme con la invención se
destina a la ejecución del procedimiento precedentemente descrito
para la concentración y estabilización descentralizada, acorde con
la práctica, de los estrógenos conjugados (CE) contenidos en la PMU.
En caso deseado, el dispositivo también puede contener dos cartuchos
conectados en paralelo, los cuales se hacen funcionar sucesiva o
bien alternantemente.
El cartucho que se utiliza en el dispositivo
conforme con la invención puede tener dimensiones que con relación a
la altura y el diámetro se encuentran dentro de un amplio marco. Sin
embargo, para no dificultar la manipulación en la práctica, las
dimensiones del cartucho en lo referente a tamaño y peso deberían
ser tales para que se pueda manipular y cargar bien a mano por una
persona de fuerza normal, por ejemplo para recambiar cartuchos
cargados por cartuchos nuevos sin cargar. Por ejemplo, el cartucho
debería estar dimensionado aproximadamente de tal modo que el
cartucho presentase dimensiones internas para el lecho de agente de
adsorción que permitan alojar 30 a 50 l de agente de adsorción, para
lo cual la altura interna se situará en particular en el intervalo
de 80 a 120 cm. Generalmente, el diámetro interno del cartucho se
situará en 10 a 25 cm. El experto estará en condiciones de dar al
cartucho un dimensionado exacto para asegurar condiciones de flujo
óptimas durante el funcionamiento.
Además, el cartucho que se utiliza en el
dispositivo conforme con la invención se compone convenientemente de
materiales robustos, resistentes al uso y resistentes a los
productos químicos como los que se utilizan habitualmente en la
preparación de aparatos para la industria química, por ejemplo,
vidrio de laboratorio resistente a los golpes, material sintético
y/o metal como, por ejemplo, chapa de acero.
En el dispositivo conforme con la invención se
puede utilizar en sí cualquier tipo de bomba, de construcción
sencilla y robusta como, por ejemplo, monobombas, bombas de manguera
o bombas de membrana. Por ejemplo, para el dispositivo conforme con
la invención resultó conveniente como bomba una bomba de
manguera.
En el dispositivo conforme con la invención se
puede utilizar en si cualquier tipo de medidores de cantidades de
paso, de construcción sencilla y robusta como, por ejemplo,
rotámetros, contadores volumétricos de aspas giratorias o contadores
volumétricos inductivos. Por ejemplo, como contador volumétrico para
el dispositivo conforme con la invención resultó conveniente un
rotámetro con flotador.
En el dispositivo conforme con la invención,
para la medición de las cantidades de líquido de orina bombeadas a
través del cartucho se pueden utilizar medidores de cantidad de paso
de cualquier tipo, de construcción sencilla y robusta como, por
ejemplo, contadores de agua o caudalómetros inductivos. Como medidor
de la cantidad de paso para el dispositivo conforme con la invención
resultó conveniente, por ejemplo, un contador de agua.
En una variante conveniente del dispositivo
conforme con la invención, entre la bomba y el contador volumétrico
se intercalan adicionalmente al menos uno o varios filtros previos,
por ejemplo filtros de profundidad o filtros de masa filtrante. En
el caso de los filtros se puede tratar, por ejemplo, de un filtro de
profundidad con lecho de arena o de un cartucho filtrante comercial,
o de filtros de masa filtrante o filtros de placa o filtros de bujía
o filtros de saco o, también, tubos de filtración comerciales.
Además, corriente abajo del filtro previo se puede disponer
eventualmente un separador de partículas, por ejemplo, en el caso de
un lecho de arena como filtro previo, un subsiguiente separador de
arena. En variantes del dispositivo los filtros se puede conectar
individualmente o también varios de ellos en combinación arbitraria
entre sí, por ejemplo en serie uno tras otro y/o conectados en
paralelo. Un perfeccionamiento ventajoso de esta variante se
caracteriza por el hecho de que el filtro previo es un módulo de dos
filtros previos conectados en paralelo, que funcionan
alternativamente de forma individual y que incluso en el caso de un
funcionamiento continuo del dispositivo se pueden intercambiar por
un nuevo filtro previo. Otro perfeccionamiento conveniente de estas
variantes se caracteriza porque la instalación filtrante se compone
de un módulo de una unidad de filtración previa conectada en serie,
que consta de filtro previo (por ejemplo, filtro de saco) y uno o
dos filtros de lecho profundo y, a continuación de estos, dos
filtros absolutos conectados en paralelo (por ejemplo, filtros de
membrana), de modo que los filtros absolutos funcionan
alternativamente de forma individual e incluso en funcionamiento
continuo del dispositivo se pueden intercambiar por un nuevo filtro.
Además, es eventualmente conveniente que en el dispositivo conforme
con la invención se intercale en cada caso un manómetro entre la
bomba y el filtro previo, así como también un manómetro en la zona
situada después del filtro previo, preferentemente después del
contador volumétrico, para controlar el funcionamiento correcto del
filtro previo.
\newpage
Para explicar adicionalmente el dispositivo
conforme con la invención en una forma de ejecución preferida sirve
la Figura 1 que muestra en forma esquemática un dispositivo para la
estabilización y concentración de CE a partir de PMU. En la Figura 2
se reproduce una representación esquemática del modo operativo de
una variante de la filtración de orina bruta.
El procedimiento conforme con la invención y el
dispositivo conforme con la invención presentan una serie de
ventajas de las cuales a continuación se mencionan brevemente las
más importantes. La concentración de los CE, es decir, la carga de
las columnas con agente de adsorción se puede llevar a cabo
directamente en el lugar de la recolección. Con ello se suprime el
transporte diario de grandes cantidades de líquido de orina a un
lugar de acondicionamiento centralizado. La carga se puede llevar a
cabo durante un período de tiempo más prolongado, de hasta varias
semanas, en forma continua hasta que se sature la columna de
adsorción; en el caso de la resina de adsorción
XAD-7, por ejemplo, la cantidad de orina adsorbida
es de aproximadamente 35 volúmenes de lecho. La orina residual
liberada de los CE permanece en el lugar de la recolección, en el
cual de todos modos existen dispositivos adecuados para la
evacuación. Se transporta la columna cargada, es decir, sólo
aproximadamente 1/35 del peso original del líquido de orina. El
transporte se puede efectuar a intervalos de tiempo mayores. El
transporte también puede requerir un tiempo más largo, por ejemplo
bien puede prolongarse hasta por algunas semanas. Debido a la buena
estabilidad de los CE en la columna adsorbente no se espera
descomposición alguna. Se suprime el tratamiento de grandes
cantidades de orina mediante separador e instalación de
ultrafiltración, puesto que la separación de las sustancias
mucilaginosas y los sedimentos eventualmente presentes en la orina
de partida se lleva a cabo mediante filtros de masa filtrante o de
profundidad (por ejemplo, filtros de arena, cartuchos filtrantes,
filtros de masa filtrante sobre tamices, filtros de placa, filtros
de bujía, filtros de saco o tubos de filtración) robustos y exentos
de mantenimiento que, en caso necesario, se pueden recambiar con
facilidad.
Las figuras y los ejemplos siguientes deberán
explicar la invención con más detalle, pero sin limitar su
alcance.
Fig.
1
Dispositivo esquemático conveniente para la
estabilización y concentración de CE a partir de PMU; los elementos
del dispositivo tienen el significado siguiente: (1) = admisión del
líquido de orina del recipiente de depósito;
(2) = bomba, por ejemplo, bomba de manguera; (3) = tuberías de conexión; (4) = manómetro; (5) = válvula de tres vías; (6) = acoplamientos rápidos; (7) = válvulas de cierre; (8) = filtros; (9) = contador volumétrico con flotador (rotámetro); (10) = medidor de cantidades de paso, por ejemplo, contador de agua; (11) = cartucho, columna; (12) = lecho de agente de adsorción; (13) = desagüe.
(2) = bomba, por ejemplo, bomba de manguera; (3) = tuberías de conexión; (4) = manómetro; (5) = válvula de tres vías; (6) = acoplamientos rápidos; (7) = válvulas de cierre; (8) = filtros; (9) = contador volumétrico con flotador (rotámetro); (10) = medidor de cantidades de paso, por ejemplo, contador de agua; (11) = cartucho, columna; (12) = lecho de agente de adsorción; (13) = desagüe.
Fig.
2
Representación esquemática de una forma del
procedimiento para la filtración de orina bruta, en el cual la
instalación filtrante consta de un módulo de una unidad de
prefiltración conectada en serie, que comprende un filtro previo
(por ejemplo, filtro de saco) y uno o dos filtros de lecho profundo
y, a continuación, de ellos dos filtros absolutos conectados en
paralelo (por ejemplo, filtros de membrana).
Instrucción general de trabajo para la
concentración y estabilización de los estrógenos conjugados (CE)
contenidos en la orina de yeguas preñadas (PMU) directamente en el
lugar de la recolección del PMU mediante la adsorción por un agente
de adsorción contenido en un cartucho.
Para ello, la PMU recolectada se vierte en un
recipiente de depósito, en cada caso a través de un embudo equipado
con un cedazo. El cedazo tiene una amplitud de malla gruesa y
solamente sirve para separar impurezas mecánicas gruesas como paja,
heno, etc.
El procedimiento se explica a continuación como
ejemplo utilizando una columna adsorbente (como cartucho) con una
resina adsorbente semipolar. Si se utilizan cartuchos con otros
adsorbentes, entonces eventualmente la manipulación y en particular
el acondicionamiento del cartucho cargado se rigen conforme al tipo
del agente de adsorción respectivo. El proceso de carga y el lavado
final del cartucho en el lugar de la recolección de la orina se
conserva sustancialmente igual a lo que se describe bajo A) y B), o
eventualmente se adapta solamente en aspectos menores a posibles
condiciones especiales en el campo o del respectivo agente de
adsorción.
La adsorción del contenido en CE de la PMU se
lleva a cabo en una instalación de adsorción como se esboza como
ejemplo en la Fig. 1. Una cantidad total de PMU preestablecida con
relación a la capacidad del cartucho o, respectivamente, de la
columna adsorbente se bombea a la temperatura ambiente,
eventualmente después de un tamizado y eventualmente filtración
previos, en su totalidad o en partes, a una velocidad de paso
preestablecida a través de una columna o, respectivamente, cartucho
repleto de un agente de adsorción. Como agente de adsorción se puede
utilizar, por ejemplo, una resina adsorbente de éster poliacrílico
semipolar expandida en agua (= Amberlite XAD-7 de
la razón social Rohm und Haas, tamaño de grano 0,3 a 1,2 mm, momento
dipolar 1,8 debye, diámetro medio de poros 80 Angström, superficie
específica aproximadamente 450 m^{2}/g, seca) u otros adsorbentes
adecuados. Después de alcanzar la cantidad de carga máxima
preestablecida de PMU se detiene la alimentación de PMU a la columna
o, respectivamente, al cartucho y, en caso deseado, se bombea desde
la columna o, respectivamente, cartucho cargado a una columna o,
respectivamente, cartucho libre conectado en paralelo. El contenido
en estrógeno de la PMU se adsorbe completamente en la columna
adsorbente, cargada de esta manera.
La columna o, respectivamente, cartucho
adsorbente cargado se lava después de finalizado el proceso de
adsorción facultativamente con agua u otra solución de lavado
acuosa, por ejemplo una solución de lavado alcalina como, en
particular, lejía diluida de hidróxido sódico (por ejemplo, NaOH
0,5-2 N). Para ello, el agua de lavado o la solución
de lavado se bombea asimismo a través de la columna o
respectivamente del cartucho a la temperatura ambiente con una
velocidad de paso preestablecida de, por ejemplo, aproximadamente
5,5 volúmenes de lecho por hora. El líquido de lavado que se sale se
desecha.
Para el transporte de retirada o,
respectivamente, para el almacenamiento intermedio de la columna
adsorbente cargada, ésta se cierra por ambos lados después de
terminado el proceso de adsorción o, respectivamente, después del
lavado facultativo con, por ejemplo, agua (o con otra solución de
lavado acuosa, eventualmente alcalina, como en particular hidróxido
sódico diluido, por ejemplo, NaOH 0,5-2 N), se
desconecta del dispositivo de carga y se almacena en un lugar
adecuado. El almacenamiento puede tener lugar a la temperatura
ambiente, por ejemplo 15 a 30ºC en una nave de almacenamiento
normal, o bien en una cámara frigorífica a hasta aproximadamente
4ºC. Si el líquido que se encuentra en la columna adsorbente se
protege contra congelamiento se puede también almacenar a
temperaturas más bajas, por ejemplo hasta -20ºC. Las columnas o,
respectivamente, cartuchos cargados se transportan a intervalos
regulares de unos días hasta algunas pocas semanas desde el lugar de
recolección y almacenamiento a un lugar centralizado de
acondicionamiento en donde se garantiza el acondicionamiento y
aislamiento químico de los estrógenos conjugados de una manera
experta.
El acondicionamiento de las columnas o,
respectivamente, cartuchos cargados para separar las impurezas y
aislar los CE se lleva a cabo de manera habitual para el agente de
adsorción respectivo. En el caso de utilizar una resina de adsorción
semipolar del tipo Amberlite, por ejemplo, XAD-7, el
acondicionamiento se puede llevar a cabo como en la solicitud de
patente internacional WO 98/08526. Para ello, se hace pasar el
fluido de elución con una velocidad de flujo adecuada a través de la
columna o, respectivamente, cartucho precalentado a 45ºC. La
sustancia eluida que sale se recoge en fracciones. La primera
fracción corresponde a aproximadamente 1 volumen de lecho, las
fracciones restantes son en cada caso de aproximadamente 0,75
volumen de lecho. Las fracciones individuales se analizan mediante
HPLC con respecto a su contenido en sal de sulfato de estrógeno,
cresol y HPMF. La primera fracción se recoge durante el tiempo que
la sustancia eluida aparece desde incolora hasta de coloración
débilmente amarilla. Esta fracción por lo general solamente contiene
trazas de sal de sulfato de estrógeno.
Después de haber salido el primer volumen de
lecho de sustancia eluida se produce un cambio de color en la
sustancia eluida a un tono de color pardo oscuro intenso. En las
siguientes 2 a 4 fracciones se encuentran entonces contenidos
regularmente, aproximadamente 80 a 98% de la totalidad de los
estrógenos conjugados adsorbidos en la columna. Las fracciones
restantes solamente contienen todavía cantidades pequeñas de sal de
sulfato de estrógeno. Esto también es claramente visible en la
reducción de la intensidad del color. Eventualmente se pueden seguir
acondicionando las fracciones residuales después de eliminar por
destilación el contenido de disolvente y aislar más CE.
Las fracciones principales que contienen los
estrógenos conjugados tienen en cada caso elevados contenidos en SS
(SS = sustancia seca, determinada por HPLC) de sal de sulfato de
estrógeno y están libres de cresol y HPMF, en tal grado que estas
fracciones ya constituyen extractos adecuados para un procesamiento
galénico ulterior.
La regeneración de las columnas o,
respectivamente, cartuchos cargados se lleva a cabo de la manera en
cada caso habitual para el respectivo agente de adsorción. En el
caso de utilizar una resina adsorbente semipolar del tipo Amberlite,
por ejemplo XAD-7, la regeneración se puede llevar a
cabo como en la solicitud de patente internacional WO 98/08526. Para
la regeneración, la columna o, respectivamente, el cartucho se lava
primero con una mezcla de etanol/agua que contiene 50% en peso de
etanol, ajustada a pH 12, luego con una solución acuosa de citrato
de sodio al 10% en peso y nuevamente con la mezcla de etanol/agua y,
finalmente, con agua destilada. Toda la regeneración se lleva a
cabo para la resina adsorbente especificada como ejemplo a una
temperatura de 45ºC, pudiéndose introducir también en este caso las
soluciones de regeneración y lavado a través de la columna o,
respectivamente, el cartucho por el lado del fondo o de la cabeza.
La columna o, respectivamente, el cartucho se puede cargar y
regenerar de nuevo varias veces, por ejemplo, hasta 40 veces.
Para analizar la estabilidad de la columna, es
decir, la estabilidad de los CE adsorbidos (estrógenos conjugados)
se llevaron a cabo pruebas de estabilidad con columnas de adsorción
cargadas con orina de partida. Para este propósito se cargaron de
la manera habitual columnas de adsorción, a continuación se retiró
la resina adsorbente de la columna y se almacenó a dos temperaturas
a lo largo de diversos períodos de tiempo. Después de transcurrido
el tiempo de almacenamiento se eluyó la sustancia adsorbida y se
analizó con respecto a su contenido en CE e impurezas. El resultado
obtenido se comparó con el resultado de la elución de las pruebas de
control, es decir, pruebas sin tiempo de almacenamiento.
La absorción se llevó a cabo respectivamente en
una columna de 3 l repleta de manera conocida con resina adsorbente
semipolar del tipo XAD 7 (resina adsorbente semipolar de éster
poliacrílico, es decir, Amberlite XAD-7 de la razón
social Rohm und Haas, tamaño de grano 0,3 a 1,2 mm, momento dipolar
1,8 debye, diámetro medio de poros 80 Angström, superficie
específica aproximadamente 450 m^{2}/g, seca). Para ello, la
columna se alimentó con una cantidad previamente ultrafiltrada de 90
l (= 30 volúmenes de lecho) de orina de yeguas (procedente de
Polonia) a la temperatura ambiente, con una velocidad de paso de 5
volúmenes de lecho por hora. El contenido en estrógenos de la PMU se
adsorbió completamente en la columna de resina adsorbente semipolar
cargada de esta manera. Después de terminada la carga de la columna
con la orina de yegua se lavó con 3 l de agua y la resina cargada se
extrajo de la columna y se distribuyó en 10 muestras de 300 ml, y
éstas se transfirieron a columnas más pequeñas. Una muestra
se
desechó.
desechó.
A continuación se siguió procediendo como
sigue:
- 1.
- Elución inmediata de la muestra de control, es decir, sin almacenamiento.
- 2.
- Almacenamiento de las respectivas muestras restantes a 4ºC ó a 25ºC.
- 3.
- Elución de las muestras 1 (4ºC) y 2 (25ºC) después de un almacenamiento de una semana.
- 4.
- Elución de las muestras 3 (4ºC) y 4 (25ºC) después de un almacenamiento de dos semanas.
- 5.
- Elución de las muestra 5 (4ºC) y 6 (25ºC) después de un almacenamiento de cinco semanas.
- 6.
- Elución de las muestras 7 (4ºC) y 8 (25ºC) después de un almacenamiento de ocho semanas.
La elución se llevó a cabo de manera en sí
conocida lavando primero la resina adsorbente cargada con una
solución acuosa de hidróxido de sodio. Después de cada etapa de
lavado se analizó el respectivo líquido de lavado mediante HPLC con
respecto a su contenido en estrona (como sal de sulfato), equilina,
cresol y HPMF.
Como líquido de elución se utilizó una mezcla de
agua/etanol (al 30% en peso, valor pH 12) alcalinizada por adición
de hidróxido de sodio, y la elución de la resina se llevó a cabo a
una temperatura de elución de 45ºC. La sustancia eluida se recogió
en fracciones y las fracciones individuales se analizaron, a su vez,
mediante HPLC con respecto a su contenido en estrona, cresol y HPMF.
La primera fracción se recogió durante el tiempo en que la sustancia
eluida aparecía desde incolora hasta con color levemente amarillo.
Esta fracción sólo contiene trazas de estrona (sal de sulfato de
estrógeno). Después de haber desaguado el primer volumen de lecho
de sustancia eluida se produce un cambio de color de la sustancia
eluida a un tono de color pardo oscuro intenso. En las siguientes 2
a 4 fracciones se encuentra contenida entonces aproximadamente 80 a
98% de la cantidad total de estrógenos conjugados adsorbidos en la
columna. Las fracciones restantes para la regeneración de la resina
(a respectivamente 45ºC con etanol al 50% en peso con pH 12, citrato
de sodio al 10% en peso y agua, en la secuencia indicada) ya
solamente contienen pequeñas cantidades de sal de sulfato de
estrógeno. Esto también es claramente visible debido a la reducción
de la intensidad del color.
Los resultados obtenidos en las pruebas de
estabilidad de la columna para las pruebas individuales se
reproducen en las Tablas I.0 a I.9 y se compilan en la Tabla I.10, y
a continuación se explicarán adicionalmente.
La carga de la columna o, respectivamente, el
cartucho, con orina, véase Tabla I.0, así como la elución de la
columna de control, Tabla I.1 muestran un desarrollo normal de la
adsorción y desorción. Es cierto que se encontraron valores
incrementados de cresol y HPMF en la sustancia eluida, lo cual sin
embargo probablemente se debe en gran medida a un flujo no
completamente laminar en la columna y a los valores muy elevados de
cresol, de aproximadamente 1000 mg/l, en la orina de partida.
\newpage
Las Tablas I.2 a I.9 reproducen los resultados
para la elución después del almacenamiento durante una, dos, cinco y
ocho semanas. Fundamentalmente se comprueba que las hormonas
adsorbidas (CE) por regla general se desorben cuantitativamente.
Eventualmente, por ejemplo en particular después de sólo una semana
de almacenamiento a 25ºC, se comprueba una desorción cuantitativa
sólo en la regeneración etanólica al 50%, sin embargo en este caso
sólo se trata de la desorción de cantidades residuales del CE, y que
la mayor parte ya se pudo aislar antes en la desorción propiamente
dicha. No parece que exista una dependencia de la desorción del
tiempo de almacenamiento y de la temperatura o, en todo caso, sólo
existe de manera limitada, por ejemplo siempre cuando las
condiciones de flujo eventualmente no óptimas en las columnas
pequeñas pueden desempeñar un mayor papel. Pero, en cualquier caso,
la sustancia eluida está en gran medida libre de cresol y HPMF. Por
consiguiente, para obtener resultados óptimos se debe cuidar de un
flujo óptimo a través de la columna, independientemente del tiempo
de almacenamiento. Por lo tanto, las columnas o, respectivamente,
cartuchos deben estar continuamente inmersos en líquido, es decir,
se debe evitar un flujo en seco.
Los resultados después de un almacenamiento
durante cinco semanas, Tablas I.6 a I.7 muestran para una
temperatura de 4ºC un buen desarrollo de la elución; para T = 25ºC
todavía aparecen, por cierto, porciones de hormonas en la sustancia
regenerada. Los contenidos en HPMF y cresol en la sustancia eluida
son muy bajos en ambos casos.
Sorprendentemente se obtienen muy buenos
resultados incluso después de un almacenamiento muy largo, como se
muestra para el almacenamiento de ocho semanas con excelentes
resultados en las Tablas I.8 a I.9. Los picos de elución para
estrona y equilina son muy empinados o pronunciados, es decir, el
volumen de la sustancia de CE eluida es muy pequeña. Los valores de
cresol y HPMF tienden a cero.
La Tabla I.10 reproduce todas las pruebas en una
relación sinóptica. La suma, por ejemplo, del contenido en estrona
de la sustancia eluida y de la sustancia regenerada en todos los
casos se encuentra dentro de aproximadamente 1055 mg \pm 4% y
corresponde con ello al balance esperado.
Por consiguiente, recopilando se puede sostener
que el almacenamiento de una a ocho semanas de la resina
XAD-7 cargada a temperaturas de 4ºC y 25ºC
ciertamente muestra diferencias en el comportamiento de la elución,
altura y anchura de los picos hormonales, pero no, sin embargo, en
la suma del total de hormonas eluidas, las cuales en conjunto se
encuentran en el intervalo de 1055 mg \pm 4% en lo referente al
contenido de estrona. De esto se puede deducir que las diferencias
cualitativas observadas en gran medida sólo se deben a las
condiciones de flujo no homogéneas en las columnas relativamente
pequeñas que se utilizaron y las cuales se pueden evitar fácilmente
con columnas o, respectivamente, cartuchos de dimensiones acordes a
la práctica.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
Carga de la columna con orina nativa de Polonia,
ultrafiltrada
Agente de adsorción XAD 7, volumen = 3 l
Después del aporte a la columna se evacúa la
resina y se lava con 3 l de agua. La resina se divide en partes
iguales de 300 ml y se somete a una prueba de estabilidad de la
columna. Un paquete de resina se eluye inmediatamente, los demás se
almacenan a la temperatura ambiente y en el frigorífico.
\vskip1.000000\baselineskip
| a) Muestras | Volumen I | Estrona mg/l | HPMF mg/l | Cresol mg/l | Equilina mg/l |
| Solución de partida (= después de la ultrafiltración) | |||||
| Solución de control 1 | 30 | 85,4 | 67,2 | 908,0 | 50,1 |
| Solución de control 2 | 30 | 117,7 | 96,9 | 990,4 | 70,0 |
| Solución de control 3 | 30 | 137,6 | 105 | 997,5 | 80,2 |
| 90 | 113,567 | 89,7 | 965,3 | 66,8 | |
| = 30 VL | = promedio |
\vskip1.000000\baselineskip
| b) Pruebas | Vol. | Tiempo | Flujo | Flujo | Estrona | Equilina | HPMF | HPMF | Cresol | Cresol |
| I | h | l/h | VL/h | mg/l | mg/l | mg/l | mg | mg/l | mg | |
| Desagüe 1 | 10 | 0,7 | 15 | 5,0 | 0,0 | 0,0 | 142,6 | 1426,0 | 2,7 | 27,0 |
| Desagüe 2 | 10 | 0,7 | 15 | 5,0 | 0,0 | 0,0 | 0,0 | 0,0 | 2,2 | 22,0 |
| Desagüe 3 | 10 | 0,7 | 15 | 5,0 | 0,0 | 0,0 | 0,0 | 0,0 | 0,8 | 8,0 |
| Desagüe 4 | 10 | 0,7 | 15 | 5,0 | 0,0 | 0,0 | 148,5 | 1485,0 | 1,4 | 14,0 |
| Desagüe 5 | 10 | 0,7 | 15 | 5,0 | 0,0 | 0,0 | 150,6 | 1506,0 | 5,2 | 52,0 |
| Desagüe 6 | 10 | 0,7 | 15 | 5,0 | 0,0 | 0,0 | 153,7 | 1537,0 | 27,3 | 273,0 |
| Desagüe 7 | 10 | 0,7 | 15 | 5,0 | 0,0 | 0,0 | 153,8 | 1538,0 | 81,9 | 819,0 |
| Desagüe 8 | 10 | 0,7 | 15 | 5,0 | 0,0 | 0,0 | 155,7 | 1557,0 | 322,4 | 3224,0 |
| Desagüe 9 | 10 | 0,7 | 15 | 5,0 | 0,0 | 0,0 | 154,2 | 1542,0 | 770,5 | 7705,0 |
\newpage
La calidad e inocuidad microbiológica de los
materiales de partida naturales para la producción de preparaciones
farmacéuticas se vuelve cada vez más importante en los últimos
tiempos. Por este motivo se llevaron a cabo análisis para determinar
el número de gérmenes en las muestras después de un almacenamiento
de las columnas de cinco y ocho semanas, de acuerdo con
procedimientos habituales (Farmacopea ........).
Los resultados de las determinaciones del número
de gérmenes se reproducen en la Tabla II. El número total de
gérmenes para una temperatura de almacenamiento de 4ºC se debe
calificar de pequeño. Para la temperatura de almacenamiento de 25ºC
el agua de lavado de la columna tiene de 1,2 a 4,6 x 10^{6}
gérmenes, en la sustancia eluida se encontraron 80 a 170 gérmenes.
Sin embargo hay que hacer notar que las adsorciones de las columnas
almacenadas no se lavaron ni se conservaron previamente, o sea, que
desde el principio estaban expuestas a un mayor riesgo de formación
de gérmenes. Por consiguiente, en el caso del almacenamiento sin
refrigeración es recomendable que las columnas cargadas se laven a
conciencia al menos con agua, pero convenientemente, además, con
soluciones de lavado adicionalmente estabilizantes y conservantes,
por ejemplo solución de cloruro de sodio.
\vskip1.000000\baselineskip
| Tiempo de almacenamiento 5 semanas | Tiempo de almacenamiento 8 semanas | |||
| Tiempo de almacenamiento a ºC | 4ºC | 25ºC | 4ºC | 25ºC |
| Agua de lavado de la columna | 200 | 4.6* 10^{6} | 150 | 1.2* 10^{6} |
| Agua de lavado básica | < 1 | 18 | 3 | 14 |
| Eluato etanólico | 20 | 80 | 3.5 | 170 |
| * Especificaciones en KBE/ml | ||||
| (KBE = unidades formadoras de colonias) |
\vskip1.000000\baselineskip
En función de la estación del año y/o de la
región pueden presentarse temperaturas por debajo del punto de
congelación durante el almacenamiento o durante el transporte de
columnas o, respectivamente, cartuchos cargados, con la consecuencia
indeseada de que el contenido acuoso de las columnas o,
respectivamente, cartuchos, se solidifica. Las pruebas
correspondientes permiten suponer que el proceso de congelación
parece tener un efecto negativo sobre la elución de las columnas o,
respectivamente, cartuchos vueltos a descongelar. Siempre que no sea
posible llevar a cabo un atemperado de la columna, o siempre que
tenga lugar un almacenamiento a bajas temperaturas se recomienda
que, para impedir el congelamiento, el último lavado se lleve a cabo
con mezclas frigoríficas adecuadas en lugar de agua.
De la multitud de posibles mezclas frigoríficas
de las cuales para aclaración se especifican algunas como ejemplo en
la Tabla III.1, se recurrió como ejemplo para otros experimentos a
una solución de cloruro de sodio. En el caso de una adición de 23 g
de NaCl por 100 g de agua, el punto de congelamiento se encuentra a
-21ºC.
La carga de la columna se llevó a cabo de la
manera habitual. Después de terminar la carga con orina se llevó a
cabo un lavado con 3 volúmenes de lecho de agua, después con 2
volúmenes de lecho de una solución de NaCl al 33% en peso. A
continuación, la columna se almacenó durante 9 días a -19ºC en un
arcón congelador.
| Temp. alcanzable en ºC | Sustancia A | [g de A/100 g de agente | Sustancia B |
| frigorífico] | |||
| -3,4 | NH_{4}Cl | 23 | Agua |
| -5,3 | NaNO_{3} | 43 | Agua |
| -7,8 | BaCl_{2} | 22 | Hielo |
| -10 | NaCl | 26 | Agua |
| -12 | CaCl_{2} x 6 H_{2}O | 71 | Agua |
| -16 | NH_{4}SCN | 57 | Agua |
| -19 | (NH_{4})_{2}SO_{4} | 38 | Hielo |
| -21 | NaCl | 23 | Hielo |
| -22 | CaCl_{2} x 6 H_{2}O | 45 | Hielo |
| -28 | NaBr | 39 | Hielo |
| -33 | MgCl_{2} | 22 | Hielo |
| -37 | H_{2}SO_{4} al 66% | 48 | Nieve |
| -40 | CaCl_{2} x 6 H_{2}O | 55 | Hielo |
| -55 | CaCl_{2} x 6 H_{2}O | 59 | Hielo |
Incluso después de 9 días de almacenamiento a
-19ºC el contenido de la columna permaneció fluido, y esto sin
indicaciones de una posible solidificación parcial. El
acondicionamiento de la columna, es decir, el lavado básico, elución
y regeneración transcurrió de manera normal. El contenido total de
hormona por SS fue de aproximadamente 22% en peso. Los resultados se
representan en la Tabla III.2.
No se pudieron detectar efectos negativos del
elevado contenido en NaCl sobre el contenido en CE y la separación
de cresol y HPMF. En resumen, se puede determinar por lo tanto, que
la estabilización de las columnas o, respectivamente, los cartuchos
cargados con orina, con una mezcla frigorífica líquida, por ejemplo,
una solución acuosa de cloruro de sodio y un almacenamiento a
temperaturas inferiores a la de congelación, por ejemplo de hasta
-20ºC, incluso durante períodos de tiempo de 1,5 a 2 semanas tiene
un efecto positivo. El contenido de la columna o, respectivamente,
del cartucho permanece fluido, el acondicionamiento de las columnas
o, respectivamente, los cartuchos para aislar el CE mediante lavado,
elución y regeneración transcurre normal. No se pudieron encontrar
resultados negativos incluso con elevados contenidos en NaCl.
En una prueba práctica se debía demostrar que
con un contenido suficiente de hormonas en la orina no sólo se
pueden obtener buenos resultados en el laboratorio sino también bajo
condiciones de producción. Se llevó a cabo una prueba como puede
desarrollarse en campañas de recolección en cualquier lugar.
Se recolectó orina fresca de calidad suficiente
en un acaballadero. Con tres caballos y 15 a 20 l de orina/día se
obtuvieron en 10 días un total de 150 a 200 l. Para la adsorción se
eligió por consiguiente una columna de adsorción de 5 l.
La carga diaria con orina, excepto el fin de
semana, se llevó a cabo en la prueba de acuerdo al esquema
siguiente:
Inicio de la recolección de orina durante el fin
de semana
\hskip0,4cm Lunes: Aporte de la
orina del sábado, domingo y lunes
\hskip0,4cm Martes a viernes:
Aporte de la orina del respectivo día
\hskip0,4cm Lunes: Aporte de la
orina del sábado, domingo y lunes
\hskip0,4cm Martes: Elución
El aporte de la orina con una velocidad de carga
de aproximadamente 4,5 volúmenes de lecho/h se llevó a cabo
directamente a la columna, únicamente una bujía de algodón con
límite de separación de 20 \mum sirvió como filtro previo. Entre
los aportes individuales no se llevó a cabo un lavado con agua para
dificultar las condiciones. En pruebas previas se pudieron pasar
hasta 450 l de orina a través de una bujía de algodón sin pérdidas
de presión. Sin embargo, en esta prueba práctica la filtración
resultó ser difícil en virtud de un contenido inesperadamente alto
de sedimento de carbonato de calcio y/o mucinas. Después de
respectivamente 40 a 50 l se produjo un bloqueo con un aumento de la
presión hasta aproximadamente 4 bar, el cual hacía necesario un
cambio de filtro. En función del contenido de carbonato de calcio
y/o mucinas se recomienda, por consiguiente, eventualmente la
adición de coadyuvantes de filtración.
A pesar de que la bujía dejó pasar porciones de
sedimento > 20 \mum, no se produjo un taponamiento de la
columna de adsorción.
Los resultados de esta prueba práctica se
reproducen en la Tabla IV.
Los contenidos en estrona y equilina de la orina
bruta fueron satisfactoriamente elevados con 123 mg/l y,
respectivamente, 74 mg/l, y corresponden a una orina de calidad
mediana a buena. Sin embargo, fueron inesperadamente altos los
valores de cresol con 531 mg/l en la orina reciente, los cuales no
se habían observado hasta ahora. En este caso desempeña un papel la
cuestión de la alimentación y requiere ser tenida en cuenta. Aunque
fundamentalmente se pueden controlar, por ejemplo, mayores
contenidos en cresol, en el caso individual si pueden provocar
dificultades. Por consiguiente, puede ser necesario prolongar el
proceso de lavado alcalino durante el acondicionamiento para
minimizar los valores de cresol en la sustancia etanólica eluida.
Por lo demás, la adsorción y la desorción transcurrieron como de
costumbre. En la sustancia eluida se obtuvo un transcurso bien
marcado para la estrona y la equilina. En las sustancias eluidas 2 y
3 se hallaron más de 95% de estrona/equilina. Con relación al
contenido en SS, el contenido total de hormona es de aproximadamente
30% en peso. Con ello se satisfizo la expectativa que se esperaba de
la prueba y, bajo condiciones de prueba difíciles, se obtuvo una
excelente concentración hasta un contenido en hormona/SS > 15% en
peso.
\newpage
Adicionalmente a la adsorción de orina se
analizó una posible contaminación con gérmenes bacterianos de la
columna. Con las presentes condiciones:
- 1.
- Aporte de orina bruta contaminada (no se separan gérmenes mediante la filtración con la bujía de algodón)
- 2.
- No se efectúa lavado después del aporte diario
- 3.
- La prueba se lleva a cabo a la temperatura ambiente
- 4.
- Duración de la prueba de 10 días
no era posible excluir la
posibilidad de una colonización de gérmenes en la columna y un
subsiguiente crecimiento de los gérmenes. Una determinación del
número total de gérmenes en diversas etapas de la adsorción arrojó
el resultado
siguiente:
| Muestra | Cantidad total de gérmenes/ml |
| Orina bruta | 1,1 \cdot 10^{8} |
| Agua de lavado de la columna después de 10 días | 1,1 \cdot 10^{8} |
| Agua de lavado básica | < 1 |
| Sustancia eluida principal | 1,5 |
A lo largo de un período de prueba de 10 días se
aportó orina fresca diariamente a una columna de adsorción de 5 l.
El volumen total de orina fue de 140 l con un contenido medio de
estrona y equilina de 123 mg/l y, respectivamente, 74 mg/l.
Se prescindió intencionadamente de un lavado de
columna con agua después de la adsorción diaria de orina. En ambas
sustancias eluidas principales, que se obtuvieron de forma muy
marcada, se hallaron aproximadamente 93% de estrona y,
respectivamente, equilina. El contenido total de hormonas de la
sustancia eluida con relación a la SS fue de aproximadamente 30% en
peso. Otro resultado sorprendente se refiere a una imaginable
contaminación de la columna con gérmenes. Aquí, a pesar del aporte
de orina bruta altamente contaminada con gérmenes no se pudo
detectar un crecimiento de gérmenes en la columna incluso después de
10 días. La sustancia eluida resultante estaba casi libre de
gérmenes con 1,5 gérmenes/ml. Bajo condiciones difíciles se demostró
con ello, a mayor escala, que con un contenido de hormonas
suficiente en la orina bruta, con una columna adsorbente se puede
realizar con buena calidad una estabilización y concentración a un
contenido de hormona/SS superior a 15%.
En una prueba práctica adicional se llevaron a
cabo pruebas de filtración con filtros de bujía, cuyos resultados se
pueden resumir como sigue:
Material utilizado: orina reciente
(procedente de un acaballadero alemán)
La orina de yeguas preñadas parcialmente
removida, reunida en barriles, se trasegó a un contenedor desde los
barriles mediante una bomba de manguera a través de una saco de
5\mu (filtro previo). En el contenedor quedó un sedimento de
aproximadamente 0,5% en peso. Una representación esquemática de la
forma de proceder para la filtración de la orina bruta se reproduce
en la Fig. 2.
| Saco | 5 \mu |
| Filtros de bujía | 5 \mu, 3 \mu, 1 \mu conectados en serie |
| Bujías absolutas | 2 x 1,2 \mu conectadas en paralelo |
| Carga de la columna | 95 l de filtrado |
| Sedimento de filtrado | 0,000% |
| Saco | 5 \mu |
| Filtros de bujía | 5 \mu, 3 \mu, 1 \mu conectados en serie |
| Bujías absolutas | 2 x 3 \mu conectadas en paralelo |
| Carga de la columna | 142 l de filtrado |
| Sedimento de filtrado | 0,001% |
| Saco | 5 \mu |
| Filtros de bujía | 3 \mu, 1 \mu conectados en serie |
| Bujías absolutas | 2 x 1 \mu conectadas en paralelo |
| Carga de la columna | 160 l de filtrado |
| Sedimento de filtrado | 0,000% |
Por cada prueba se tomó una muestra corriente
abajo de la bujía absoluta (filtro de membrana). Cada 100 l se tomó
una muestra del desagüe, después de la columna.
Carga total de la columna: 397 l de
filtrado
El contenido de sólidos (SS) después del
acondicionamiento era de 5,9% en peso.
Claims (23)
1. Procedimiento para la concentración y
estabilización descentralizada acorde con la práctica de mezclas de
estrógenos conjugados (CE) de la orina de yeguas preñadas (PMU), el
cual se caracteriza porque
- la mezcla natural de estrógenos conjugados
(CE) contenida en la orina de yeguas preñadas (PMU) se concentra y
estabiliza en un soporte sólido (= adsorbente), de manera que
- una cantidad total máxima preestablecida de
un líquido de orina recolectado, eventualmente depurado
mecánicamente con anterioridad de manera burda, se bombea de forma
continua o en cantidades parciales discretas desde un recipiente de
depósito, a una velocidad de flujo preestablecida, a través de un
cartucho colocado en posición vertical, y el líquido de orina que
fluye al exterior se desecha, de manera que
- el cartucho está repleto de un agente de
adsorción adecuado, rodeado de líquido, para la adsorción de una
cantidad predefinida de la mezcla de estrógenos conjugados contenida
en el líquido de la orina, y de manera que
- la cantidad total máxima del líquido de orina
bombeado a través del cartucho, preestablecida como punto de control
final para la carga del agente de adsorción, se ajusta a la
capacidad máxima de carga del agente de adsorción para los
estrógenos conjugados (CE) contenidos en el líquido de la orina.
2. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque las dimensiones internas del cartucho
para el lecho de agente de adsorción se calculan de tal modo que el
cartucho pueda alojar 30 a 50 l de agente de adsorción, y que la
orina de las yeguas preñadas deba recorrer un trecho de 80 a 120 cm
desde la entrada hasta la salida.
3. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque el cartucho utilizado en el
procedimiento se compone de vidrio de laboratorio resistente a los
golpes, material sintético y/o metal.
4. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque como bomba se emplea una monobomba, una
bomba de manguera o una bomba de membrana.
5. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque como contador volumétrico se emplea un
rotámetro con flotador, un contador volumétrico con aspas rotatorias
o un contador volumétrico inductivo.
6. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque para la medición de la cantidad de
líquido de orina bombeado a través del cartucho se emplea un medidor
de cantidades de paso, de preferencia un contador de agua o un
medidor de cantidades de paso.
7. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque la velocidad de flujo (velocidad de
carga) se encuentra en el intervalo de 3 a 10 volúmenes de lecho de
agente de adsorción/h, preferentemente 4 a 6 volúmenes de lecho de
agente de adsorción/h.
8. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque como agente de adsorción se emplean
resinas adsorbentes polímeras, gel de sílice o gel de
sílice-RP (de fase inversa), en particular resinas
adsorbentes polímeras, preferentemente resinas adsorbentes polímeras
semipolares.
9. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque la cantidad máxima total de líquido de
orina es de 20 a 60 volúmenes de lecho de agente de adsorción,
preferentemente 30 a 40 volúmenes de lecho de agente de
adsorción.
10. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque el cartucho después de la carga del
agente de adsorción con una cantidad de PMU que corresponde
aproximadamente a la capacidad total del agente de adsorción, o
incluso también antes de alcanzar la capacidad total de carga,
después de etapas individuales de carga parcial arbitrarias, se lava
con agua y/u otra solución de lavado acuosa adecuada.
11. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque el cartucho después de la carga del
agente de adsorción, en caso deseado se lava primero con agua y/o
alguna otra solución de lavado acuosa adecuada y, finalmente, para
una estabilización adicional, con una solución conservante, por
ejemplo con una solución que contiene un agente de conservación, una
solución acuosa con pH ajustado y/o una solución acuosa salina.
12. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque el líquido de la orina del recipiente de
depósito se bombea primero a través de uno o varios filtros previos,
preferentemente al menos a través de un filtro de profundidad o un
filtro de masa filtrante sobre tamices, antes de que el líquido de
la orina se bombee a través del cartucho.
13. Procedimiento según la reivindicación 12,
caracterizado porque el filtro previo es un filtro de
profundidad con lecho de arena o un cartucho filtrante, un filtro de
placas, un filtro de bujía, un filtro de saco o un tubo de
filtración.
14. Procedimiento según la reivindicación 12 ó
13, caracterizado porque al líquido de la orina se le añaden
antes de la filtración agentes coadyuvantes de filtración.
15. Dispositivo para la concentración y
estabilización descentralizada, acorde con la práctica, de mezclas
de estrógenos conjugados (CE) de la orina de yeguas preñadas (PMU)
sobre un soporte sólido (adsorbente), el cual comprende
- un cartucho dispuesto en forma vertical,
repleto con un agente de adsorción rodeado (continuamente) de
líquido, adecuado para la adsorción de una cantidad predefinida de
la mezcla de estrógenos conjugados (CE) contenida en el líquido de
la orina de yeguas preñadas, comprendiendo el cartucho o bien a) una
admisión de líquido dispuesta en el lado del fondo y una salida del
líquido dispuesta en el lado de la cabeza, o b) una admisión de
líquido dispuesta en el lado de la cabeza y una salida de líquido
dispuesta en el lado del fondo,
- así como dispuestos corriente arriba del
cartucho, en la secuencia indicada y conectados entre sí a través de
mangueras,
- una bomba, un contador volumétrico y un
medidor de cantidades de paso.
16. Dispositivo según la reivindicación 15,
caracterizado porque entre la bomba y el contador volumétrico
se intercala adicionalmente al menos un filtro previo,
preferentemente un filtro de profundidad o un filtro de masa
filtrante sobre tamices.
17. Dispositivo según la reivindicación 16,
caracterizado porque el filtro previo es un módulo de dos
filtros previos conectados en paralelo que pueden funcionar
individualmente en forma alternativa y que también, en el caso de
funcionamiento continuo del dispositivo, se pueden recambiar.
18. Dispositivo según la reivindicación 16 ó 17,
caracterizado porque para controlar la función correcta del
filtro previo se intercala un manómetro entre la bomba y el filtro
previo, así como un manómetro en la zona corriente abajo del filtro
previo, preferentemente corriente abajo del contador
volumétrico.
19. Dispositivo según la reivindicación 15,
caracterizado porque el cartucho tiene dimensiones internas
para el lecho de agente de adsorción con una altura interior en el
intervalo de aproximadamente 80 a 120 cm y un diámetro interior en
el intervalo de aproximadamente 10 a 25 cm.
20. Dispositivo según la reivindicación 15,
caracterizado porque el cartucho comprendido en el
dispositivo es de vidrio de laboratorio resistente a los golpes,
material sintético y/o metal.
21. Dispositivo según la reivindicación 15,
caracterizado porque la bomba comprendida en el dispositivo
es una monobomba, una bomba de manguera o una bomba de membrana.
22. Dispositivo según la reivindicación 15,
caracterizado porque el contador volumétrico comprendido en
el dispositivo es un rotámetro con flotador, un contador volumétrico
de aspas rotatorias o un contador volumétrico inductivo.
23. Dispositivo según la reivindicación 15,
caracterizado porque el medidor de cantidades de paso
comprendido en el dispositivo para medir la cantidad de líquido de
orina bombeada a través del cartucho es un contador de agua o un
contador volumétrico.
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| US20070212751A1 (en) * | 2006-01-18 | 2007-09-13 | Solvay Pharmaceuticals Gmbh | Microbial method for the 11beta hydroxylation of 9beta, 10alpha-steriods |
| CA2761844C (en) | 2009-05-14 | 2017-11-28 | University Health Network | Quantitative endoscopy |
| US10391419B1 (en) | 2015-02-12 | 2019-08-27 | Nostrum Pharmaceuticals. Llc. | Isolation and purification of conjugated estrogens |
| AU2017260320B2 (en) * | 2016-05-05 | 2021-11-11 | Indiana University Research & Technology Corporation | Quantitative profiling of progesterone metabolites for the prediction of spontaneous preterm delivery |
| RU180071U1 (ru) * | 2016-05-23 | 2018-05-31 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Федеральный исследовательский центр "Казанский научный центр Российской академии наук" | Линия получения лекарственного средства Na-, Fe-, Ca-полигалактуронат |
| US11014025B1 (en) * | 2020-03-06 | 2021-05-25 | Kevin-Steven Creagh Buford | Pressurized filtration system and device for rapid extraction and recycling of medication from body fluid |
| CN116920459B (zh) * | 2023-09-15 | 2023-11-24 | 东营平明医药科技有限公司 | 一种2-巯基苯并噻唑粗品的提纯装置 |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2519743A (en) * | 1947-12-29 | 1950-08-22 | Ivy H Dameron | Adjustable protector cap |
| US2578729A (en) * | 1948-09-21 | 1951-12-18 | Upjohn Co | Extraction of hydrolyzed estrogens from urine |
| US2565115A (en) * | 1948-10-28 | 1951-08-21 | Squibb & Sons Inc | Method of obtaining a conjugated estrogen preparation |
| US2834712A (en) * | 1953-05-27 | 1958-05-13 | American Home Prod | Urinary estrogen compositions and methods for preparing them |
| GB821989A (en) | 1957-11-06 | 1959-10-14 | Ayerst Mckenna & Harrison | Urinary estrogen compositions and methods for preparing them |
| DE1245373B (de) * | 1964-02-06 | 1967-07-27 | Vni Chimiko Pharmazewtitschesk | Verfahren zur Isolierung von Steroiden aus Kulturfluessigkeiten |
| NL7111863A (es) | 1970-10-13 | 1972-04-17 | ||
| US3769401A (en) * | 1970-11-19 | 1973-10-30 | Frosst & Co | Chemical process |
| US4379845A (en) * | 1981-07-23 | 1983-04-12 | Nabisco Brands, Inc. | Yeast process and product |
| GB2230856A (en) * | 1989-04-13 | 1990-10-31 | St Thomas Hosp Med School | Storing urine samples |
| HU9500322D0 (en) * | 1994-02-08 | 1995-03-28 | Solvay Deutschland | Process for separating estrogenes from the urine of mares with foal |
| HU9500323D0 (en) * | 1994-02-08 | 1995-03-28 | Solvay Deutschland | Process for separating estrogenes from urine of mares with foal |
| PL185920B1 (pl) * | 1996-08-30 | 2003-08-29 | Solvay Pharm Gmbh | Sposób otrzymywania estrogenów z moczu klaczySposób otrzymywania estrogenów z moczu klaczy |
| DE59610985D1 (de) | 1996-08-30 | 2004-05-19 | Solvay Pharm Gmbh | Verfahren zur gewinnung von oestrogenen aus stutenharn |
| CN1278432A (zh) * | 1999-06-22 | 2001-01-03 | 中国科学院新疆化学研究所 | 从孕尿液中提取雌性激素的新方法 |
| DE10048524A1 (de) * | 2000-09-29 | 2002-06-06 | Solvay Pharm Gmbh | Kresolabtrennung aus Stutenharn |
| US6855704B2 (en) * | 2002-10-09 | 2005-02-15 | Apr Llc | Process for isolating conjugated estrogens |
-
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