ES2330932T3

ES2330932T3 - Peptidos microciclicos activos contra el virus de la hepatitis c.

Info

Publication number: ES2330932T3
Application number: ES03809217T
Authority: ES
Inventors: Montse Llinas-Brunet; Murray D. Bailey
Original assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Current assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Priority date: 2002-10-25
Filing date: 2003-10-20
Publication date: 2009-12-17
Anticipated expiration: 2023-10-20
Also published as: ATE443713T1; DE60329408D1; US20060089300A1; EP1558632B1; CA2498572C; EP1558632A1; US7504378B2; JP2006517915A; CA2498572A1; AU2003275826A1; US20050075279A1; WO2004037855A1; JP4398424B2

Abstract

Un compuesto de la fórmula (I): **(Ver fórmula)** donde R1 es * alquilo(C1-8), cicloalquilo(C3-7), {cicloalquil(C3-7)-alquilo(C1-8)}, **(Ver fórmula)** * un heterarilo escogido entre: **(Ver fórmula)** todos ellos sustituidos opcionalmente 1 hasta 3 veces con halo, ciano, nitro, O-alquilo(C1-6), amido, amino o fenilo, o bien R1 es arilo C6 o C10 sustituido opcionalmente 1 hasta 3 veces con halo, ciano, nitro, alquilo(C1-6), O-alquilo (C1-6), amido, amino o fenilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

Péptidos macrocíclicos activos contra el virus de la hepatitis C.

Ámbito de la presente invención

La presente invención se refiere a compuestos, procesos para sintetizarlos, composiciones y métodos destinados al tratamiento de la infección por el virus de la hepatitis C (VHC). La presente invención proporciona concretamente nuevos análogos peptídicos, composiciones farmacéuticas que los contienen y métodos para usar estos análogos en el tratamiento de la infección por VHC.

Antecedentes de la presente invención

El virus de la hepatitis C (VHC) es el principal agente etiológico mundial de la hepatitis no A no B postransfusional y adquirida en la comunidad. Se calcula que en el mundo hay más de 200 millones de personas infectadas por el virus. Un gran porcentaje de portadores queda infectado crónicamente y muchos desarrollan una enfermedad crónica del hígado, llamada hepatitis C crónica. A su vez este grupo tiene un alto riesgo de padecer enfermedades graves del hígado
tales como cirrosis hepática, carcinoma hepatocelular y enfermedad terminal del hígado, que producen la muerte.

El mecanismo por el cual el VHC se hace persistente y causa una elevada tasa de enfermedades crónicas del hígado no ha sido enteramente elucidado. Se sabe cómo el VHC interactúa con el sistema inmunitario del huésped y lo elude. Además aún hay que establecer las funciones protectoras de la respuesta inmune celular y humoral frente a la infección y las enfermedades por VHC. Hay informes sobre la profilaxis con inmunoglobulinas de la hepatitis viral asociada a transfusiones; sin embargo el Center for Disease Control [Centro de control de enfermedades] no recomienda actualmente el tratamiento con inmunoglobulinas para este fin. La falta de una respuesta inmune protectora y efectiva está dificultando el desarrollo de una vacuna o de adecuadas medidas profilácticas posteriores a la exposición y por tanto a corto plazo las esperanzas están cifradas en intervenciones antivirales.

Se han realizado varios estudios clínicos con el fin de identificar agentes farmacéuticos capaces de tratar la infección por VHC en pacientes afectados de hepatitis C crónica. Estos estudios han incluido el uso de interferón-alfa, solo o combinado con otros agentes antivirales. Dichos estudios han demostrado que un número sustancial de los participantes no respondía a estas terapias y una gran proporción de los que habían respondido favorablemente recayó al cesar el tratamiento.

Hasta hace poco el interferón (IFN) era la única terapia disponible de comprobada eficacia clínicamente aprobada para pacientes con hepatitis C crónica. No obstante, el ritmo de respuesta sostenida es lento y el tratamiento con interferón también induce graves efectos secundarios (p.ej. retinopatía, tiroiditis, pancreatitis aguda, depresión) que disminuyen la calidad de vida de los pacientes tratados. Recientemente se ha aprobado la combinación de interferón con ribavirina para pacientes que no responden al IFN solo. Sin embargo los efectos secundarios causados por el IFN no son aliviados por esta terapia combinada. Aparentemente las formas pegiladas de los interferones tales como PEG-Intron® y Pegasys® pueden tratar en parte estos efectos secundarios nocivos, pero los fármacos antivirales aún son la opción preferida para el tratamiento oral del VHC.

Por lo tanto hace falta desarrollar agentes antivirales que sean efectivos para tratar la infección por VHC y superen las limitaciones de las terapias farmacéuticas existentes.

El VHC es un virus ARN de cadena positiva con envoltura, perteneciente a la familia Flaviviridae. El genoma del ARN de cadena única del VHC tiene una longitud aproximada de 9500 nucleótidos e incluye un solo marco de lectura abierto (MLA) que codifica una sola poliproteína grande de unos 3000 amino-ácidos. En células infectadas esta poliproteína es seccionada en múltiples sitios por proteasas celulares y virales, dando lugar a las proteínas estructurales y no estructurales (NS). En el caso del VHC la generación de proteínas no estructurales maduras (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A y NS5B) es realizada por dos proteasas virales. La primera, aún insuficientemente caracterizada, corta por la unión NS2-NS3; la segunda es una serinaproteasa contenida en la región N-terminal de NS3 (de aquí en adelante designada como NS3-proteasa) e interviene en todas las segmentaciones subsiguientes más allá de NS3, tanto en cis, en el sitio de corte NS3-NS4, como en trans, en los sitios restantes NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B. Al parecer la proteína NS4A realiza múltiples funciones, actuando como cofactor de la NS3-proteasa y, probablemente, ayudando en la localización de la NS3 y de otros componentes de la replicasa viral en la membrana. La formación del complejo de la NS3 con NS4A parece necesaria para el desarrollo de los procesos, al incrementar la eficiencia proteolítica en todos los sitios. La proteína NS3 también muestra actividades de nucleósido trifosfatasa y ARN helicasa. La NS5B es una ARN polimerasa dependiente de ARN que interviene en la replicación del VHC.

Una estrategia general para desarrollar agentes antivirales consiste en inactivar los enzimas codificados por el virus que son esenciales para la replicación del mismo.

En la siguiente lista figura una serie de solicitudes de patente publicadas en los últimos años recientes, que revelan análogos peptídicos inhibidores de la NS3-proteasa del VHC, estructuralmente distintos de los compuestos de la presente invención.

WO 98/17679 (publicada el 30 de abril de 1998); WO 99/50230 (publicada el 7 de octubre de 1999); WO 01/74768 (publicada el 11 de octubre de 2001); WO 98/22496 (publicada el 28 de mayo de 1998); US 6,187,905; WO 97/43310 (publicada el 20 de noviembre de 1997); WO 01/58929 (publicada el 16 de agosto de 2001); WO 01/77113 (publicada el 18 de octubre de 2001); WO 01/81325 (publicada el 1 de noviembre de 2001); WO 98/46597 (publicada el 22 de octubre de 1998); WO 98/46630 (publicada el 22 de octubre de 1998); JP 10298151 (publicada el 10 de noviembre de 1998); JP 11127861 (publicada el 18 de mayo de 1999); JP 2001103993 (publicada el 17 de abril de 2001); JP 11292840 (publicada el 26 de octubre de 1999); WO 99/38888 (publicada el 5 de agosto de 1999); WO 99/64442 (publicada el 16 de diciembre de 1999); WO 00/31129 (publicada el 2 de junio de 2000); WO 01/32691 (publicada el 10 de mayo de 2001); US 6,159,938 (publicada el 12 de diciembre de 2000); WO 01/02424 (publicada el 11 de enero de 2001); WO 01/07407 (publicada el 1 de febrero de 2001); WO 01/40262 (publicada el 7 de junio de 2001); y WO 01/64678 (publicada el 7 de septiembre de 2001).

En las solicitudes de patente WO 00/09543 (publicada el 24 de febrero de 2000), WO 00/09558 (publicada el 24 de febrero de 2002), WO 00/59929 (publicada el 12 de octubre de 2000) y WO 02/060926 (publicada el 8 de agosto de 2002) se han revelado análogos peptídicos que inhiben la NS3-proteasa del VHC. Los compuestos de la presente invención se distinguen por una estructura química diferente y por el hallazgo sorprendente de que inhiben específicamente la NS3-proteasa del VHC, sin mostrar una actividad inhibidora significativa contra otras serinaproteasas. La patente WO 00/59929 revela el correspondiente ácido terminal de los presentes compuestos, que también manifiesta especificidad. La WO 03/053349, publicada el 3 de julio de 2003, también revela inhibidores tripeptídicos macrocíclicos del virus de la hepatitis C. Sin embargo la actividad específica de los presentes compuestos era inesperable.

Una ventaja de la presente invención es que proporciona compuestos tripeptídicos inhibidores de la NS3-proteasa, un enzima fundamental para la replicación del virus de la hepatitis C.

Otra ventaja de un aspecto de la presente invención reside en el hecho de que los compuestos inhiben específicamente la NS3-proteasa y no muestran actividad inhibidora importante contra otras serinaproteasas tales como la elastasa leucocitaria humana (ELH), la elastasa pancreática porcina (EPP) o la quimotripsina pancreática bovina, o contra cisteínproteasas tales como la catepsina B hepática humana (Cat B).

Además los compuestos son activos en cultivos celulares.

Resumen de la presente invención

En el ámbito de la presente invención están incluidos los compuestos de la fórmula (I):

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1

donde R^{1} es

\bullet alquilo(C_{1-8}), cicloalquilo(C_{3-7}), {cicloalquil(C_{3-7})-alquilo(C_{1-8})} o Het escogido entre

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2

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o

\bullet un heterarilo escogido entre:

3

todos ellos sustituidos opcionalmente 1 hasta 3 veces con halo, ciano, nitro, O-alquilo(C_{1-6}), amido, amino o fenilo, o bien R^{1} es arilo C_{6} o C_{10} sustituido opcionalmente 1 hasta 3 veces con halo, ciano, nitro, alquilo(C_{1-6}), O-alquilo(C_{1-6}), amido, amino o fenilo; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

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En el ámbito de la presente invención está incluida una composición farmacéutica que contiene una cantidad efectiva contra el virus de la hepatitis C de un compuesto según la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, mezclado con un excipiente o un agente auxiliar farmacéuticamente aceptable.

También está incluido en el ámbito de la presente invención el uso de un compuesto de la fórmula (I), como el aquí descrito, para la elaboración de un medicamento destinado a tratar o prevenir infecciones por el virus de la hepatitis C.

Según una forma de ejecución la composición farmacéutica de la presente invención lleva adicionalmente interferón o interferón pegilado. Como alternativa la composición lleva un compuesto de fórmula (I) combinado con ribavirina. Según otra alternativa la composición lleva un compuesto de fórmula (I) combinado con interferón (pegilado o no) y ribavirina.

Los compuestos de la presente invención se pueden utilizar en un método para inhibir la replicación del virus de la hepatitis C, que consiste en exponer el virus a una cantidad de un compuesto de la fórmula (I), o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o de una composición como la arriba descrita, capaz de inhibir la NS3-proteasa de la hepatitis C.

Los compuestos de la presente invención se pueden usar en un método para tratar o prevenir infecciones por el virus de la hepatitis C en mamíferos, que consiste en administrarles una cantidad efectiva contra el virus de la hepatitis C de un compuesto de la fórmula (I), o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o de una composición como la arriba descrita, sola o en combinación con interferón o ribavirina o ambos.

Descripción detallada de formas de ejecución preferidas Definiciones

Se aplican las siguientes definiciones - tal como están aquí empleadas - a no ser que se indique otra cosa:

Haciendo referencia a los ejemplos donde se usa (R) o (S) para designar la configuración absoluta de un sustituyente, p.ej. R^{4} en el compuesto de la fórmula (I), la designación se hace en el contexto de todo el compuesto y no solo del sustituyente.

La designación P1, P2 y P3, tal como se emplea aquí, se refiere a la posición de los radicales aminoácidos, partiendo del extremo C-terminal de los análogos peptídicos y prosiguiendo hacia el extremo N-terminal (es decir, P1 se refiere a la posición 1 desde el extremo C-terminal; P2 es la segunda posición desde el extremo C-terminal, etc.) (véase Berger A. & Schechter I., Transactions of the Royal Society, London, series B257, 249-264 (1970)).

Tal como se usa aquí, el término "(1R, 2S)-vinil-ACCA" se refiere al compuesto de la fórmula:

4

o sea, ácido (1R,2S) 1-amino-2-etenilciclopropilcarboxílico.

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Tal como se usa aquí, el término "halo" significa un sustituyente halógeno escogido entre bromo, cloro, fluoro o yodo.

Tal como se emplea aquí, el término "alquilo(C_{1-8})", solo o combinado con otro sustituyente, significa sustituyentes alquilo acíclicos de cadena recta o ramificada que contienen 1 hasta 8 átomos de carbono e incluye, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, butilo, hexilo, 1-metiletilo, 1-metilpropilo, 2-metilpropilo, 1,1-dimetiletilo.

Tal como se usa aquí, el término "cicloalquilo(C_{3-7})", solo o combinado con otro sustituyente, significa un sustituyente cicloalquilo que contiene tres hasta siete átomos de carbono e incluye ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo.

Tal como se emplea aquí, el término "cicloalquil(C_{3-7})-alquilo(C_{1-6})" significa un radical cicloalquilo que contiene 3 hasta 7 átomos de carbono, unido directamente a un radical alquileno que contiene 1 hasta 6 átomos de carbono, como por ejemplo ciclopropilmetilo, ciclopentiletilo, ciclohexilmetilo y ciclohexiletilo. Cuando R^{1} es cicloalquil(C_{3-7})-alquilo(C_{1-6}) este grupo va unido al grupo SO_{2} mediante el alquilo(C_{1-6}) (es decir, la porción alquileno).

Tal como se emplea aquí, el término "O-alquilo(C_{1-6})" o "alcoxi C_{1-6}", indistintamente, ya sea solo o en combinación con otro sustituyente, significa el sustituyente O-alquilo-(C_{1-6}), donde alquilo corresponde a la definición arriba indicada y lleva hasta seis átomos de carbono. El O-alquilo(C_{1-6}) incluye metoxi, etoxi, propoxi, 1-metiletoxi, butoxi y 1,1-dimetiletoxi. Este último sustituyente se conoce usualmente como terc-butoxi.

El término "sal farmacéuticamente aceptable" significa una sal de un compuesto de fórmula (I) que en el sano juicio médico es apropiada para usar en contacto con los tejidos de humanos y animales menores, sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica, etc., con una razonable proporción beneficio/riesgo, y es generalmente soluble o dispersable en agua o en aceite y efectiva para el uso propuesto. El término incluye sales de adición de ácido y sales de adición de base farmacéuticamente aceptables. Se encuentran listas de sales adecuadas, p.ej., en S.M. Birge y otros, J. Pharm. Sci., 1977, 66, p. 1-19, que se incorpora aquí como referencia en su totalidad.

El término "sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable" representa aquellas sales que conservan la efectividad y las propiedades biológicas de las bases libres y no son desaconsejables desde el punto de vista biológico o desde cualquier otro, y que están formadas con ácidos inorgánicos como el clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, sulfúrico, sulfámico, nítrico, fosfórico y análogos, y con ácidos orgánicos como el acético, tricloroacético, trifluoroacético, adípico, algínico, ascórbico, aspártico, bencenosulfónico, benzoico, 2-acetoxibenzoico, butírico, canfórico, canforsulfónico, cinnámico, cítrico, diglucónico, etanosulfónico, glutámico, glicólico, glicerofosfórico, hemisúlfico, heptanoico, hexanoico, fórmico, fumárico, 2-hidroxietanosulfónico (ácido isetiónico), láctico, maleico, hidroximaleico, málico, malónico, mandélico, mesitilensulfónico, metanosulfónico, naftalensulfónico, nicotínico, 2-naftalensulfónico, oxálico, pamoico, pectínico, fenilacético, 3-fenilpropiónico, pícrico, piválico, propiónico, pirúvico, salicílico, esteárico, succínico, sulfanílico, tartárico, p-toluensulfónico, undecanoico y análogos.

El término "sal de adición de base farmacéuticamente aceptable" representa aquellas sales que conservan la efectividad y las propiedades biológicas de los ácidos libres y no son desaconsejables desde el punto de vista biológico o desde cualquier otro, y que están formadas con bases inorgánicas tales como amoniaco o hidróxidos, carbonatos o bicarbonatos de amonio o de un catión metálico como sodio, potasio, litio, calcio, magnesio, hierro, cinc, cobre, manganeso, aluminio y similares. Se prefieren particularmente las sales amónicas, de potasio, sodio, calcio y magnesio. Las sales derivadas de bases orgánicas no tóxicas farmacéuticamente aceptables comprenden sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, compuestos amínicos cuaternarios, aminas sustituidas, incluyendo aminas sustituidas de origen natural, aminas cíclicas y resinas básicas de intercambio iónico, por ejemplo metil-amina, dimetilamina, trimetilamina, etilamina, dietilamina, trietilamina, isopropilamina, tripropilamina, tributilamina, etanolamina, dietanolamina, 2-dimetilaminoetanol, 2-dietil-aminoetanol, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, hidrabamina, colina, betaína, etilendiamina, glucosamina, metilglucamina, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, N-etilpiperidina, compuestos de tetrametilamonio, compuestos de tetraetilamonio, piridina, N,N-dimetilanilina, N-metilpiperidina, N-metilmorfolina, diciclohexilamina, dibencilamina, N,N-dibencilfenetilamina, 1-efenamina, N,N'-dibenciletilendiamina, resinas poliamínicas y similares. Como bases orgánicas no tóxicas se prefieren especialmente isopropilamina, dietilamina, etanolamina, trimetilamina, diciclohexilamina, colina y cafeína.

Tal como se utiliza aquí, el término "agente antiviral" representa un agente (compuesto o biológico) que es eficaz para inhibir la formación y/o la replicación de un virus en un mamífero, incluyendo aquellos agentes que interfieren en mecanismos del huésped o del virus necesarios para la formación y/o la replicación de un virus en un mamífero. Entre los agentes antivirales cabe mencionar, por ejemplo, ribavirina, amantadina, VX-497 (merimepodib, Vertex Pharmaceuticals), VX-498 (Vertex Pharmaceuticals), levovirina, viramidina, Ceplene (maxamina), XTL-001 y XTL-002 (XTL Biopharmaceuticals).

Tal como se emplea aquí, el término "agente inmunomodulador" representa aquellos agentes (compuestos o biológicos) que son eficaces para aumentar o potenciar la respuesta del sistema inmune en un mamífero. Los agentes inmunomoduladores incluyen, por ejemplo, los interferones de tipo I (como los interferones \alpha, \beta, \delta y omega, interferones tau; interferones de consenso y asialo-interferones), los interferones de tipo II (como los interferones \gamma) y los interferones pegilados.

Tal como se usa aquí, el término "inhibidor de la NS3-proteasa del VHC" significa un agente (compuesto o biológico) que es eficaz para inhibir la función de la NS3-proteasa del VHC en un mamífero. Los inhibidores de la NS3-proteasa de VHC incluyen, por ejemplo, los compuestos descritos en las patentes WO 99/07733, WO 99/07734, WO 00/09558, WO 00/09543, WO 00/59929 o WO 02/060926, y el compuesto de Vertex en fase previa de desarrollo, identificado como VX-950. Especialmente los compuestos # 2, 3, 5, 6, 8, 10, 11, 18, 19, 29, 30, 31, 32, 33, 37, 38, 55, 59, 71, 91, 103, 104, 105, 112, 113, 114, 115, 116, 120, 122, 123, 124, 125, 126 y 127 revelados en la tabla de las páginas 224-226 de la patente WO 02/060926 se pueden usar en combinación con los compuestos de la presente invención.

Tal como se usa aquí, el término "inhibidor de la polimerasa del VHC" significa un agente (compuesto o biológico) que es capaz de inhibir la función de una polimerasa del VHC en un mamífero, incluyendo, por ejemplo, inhibidores de la polimerasa NS5B del VHC. Los inhibidores de la polimerasa del VHC incluyen no-nucleósidos como por ejemplo los compuestos descritos en:

\bullet WO 03/010140 (Boehringer Ingelheim),

\bullet WO 03/010141 (Boehringer Ingelheim),

\bullet WO 03/007945 (Boehringer Ingelheim),

\bullet WO 03/026587 (Bristol Myers Squibb);

\bullet WO 02/100846 A1 y WO 02/100851 A2 (ambas de Shire),

\bullet WO 01/85172 A1 y WO 02/098424 A1 (ambas de GSK),

\bullet WO 00/06529 y WO 02/06246 A1 (ambas de Merck),

\bullet WO 01/47883 y WO 03/000254 (ambas de Japan Tobacco) y

\bullet EP 1 256 628 A2 (Agouron).

Asimismo hay otros inhibidores de la polimerasa del VHC que incluyen también análogos de nucleósidos, por ejemplo los compuestos descritos en:

\bullet WO 01/90121 A2 (Idenix),

\bullet WO 02/069903 A2 (Biocryst Pharmaceuticals Inc.), y

\bullet WO 02/057287 A2 y WO 02/057425 A2 (ambas de Merck/Isis).

Como ejemplos específicos de inhibidores de polimerasa del VHC cabe mencionar JTK-002/003 y JTK-109 (Japan Tobacco), y NM283 de Idenix.

Tal como se emplea aquí, el término "inhibidor de otra diana en el ciclo de vida del VHC" significa un agente (compuesto o biológico) que es capaz de inhibir la formación y/o replicación del VHC en un mamífero de otra manera que no sea inhibiendo la función de la NS3-proteasa del VHC. Incluye agentes que interfieren en aquellos mecanismos del huésped o del virus que son necesarios para formar y/o replicar el VHC en un mamífero. Como inhibidores de otra diana en el ciclo de vida del VHC cabe citar, por ejemplo, los agentes que inhiben una diana escogida entre una helicasa, una proteasa NS2/3 de VHC y un sitio de entrada al ribosoma interno (IRES). Como ejemplos específicos de inhibidores de otra diana en el ciclo de vida del VHC cabe mencionar el ISIS-14803 (de ISIS Pharmaceuticals).

Tal como se emplea aquí, el término "inhibidor de VIH" significa un agente (compuesto o biológico) que es capaz de inhibir la formación y/o replicación del VIH en un mamífero, incluyendo los agentes que interfieren en aquellos mecanismos del huésped o del virus que son necesarios para formar y/o replicar el VIH en un mamífero. Los inhibidores de VIH incluyen, por ejemplo, los de tipo nucleosídico, no nucleosídico, inhibidores de proteasa, inhibidores de fusión e inhibidores de integrasa.

Tal como se emplea aquí, el término "inhibidor de VHA" significa un agente (compuesto o biológico) que es capaz de inhibir la formación y/o replicación del VHA en un mamífero, incluyendo los agentes que interfieren en aquellos mecanismos del huésped o del virus que son necesarios para formar y/o replicar el VHA en un mamífero. Los inhibidores de VHA incluyen las vacunas de la hepatitis A, por ejemplo Havrix® (de GlaxoSmithKline), VAQTA® (Merck) y Avaxim® (Aventis Pasteur).

Tal como se emplea aquí, el término "inhibidor de VHB" significa un agente (compuesto o biológico) que es capaz de inhibir la formación y/o replicación del VHB en un mamífero, incluyendo los agentes que interfieren en aquellos mecanismos del huésped o del virus que son necesarios para formar y/o replicar el VHB en un mamífero. Los inhibidores de VHB incluyen, por ejemplo, agentes que inhiben la ADN-polimerasa viral del VHB o las vacunas del VHB. Como ejemplos específicos de inhibidores del VHB cabe mencionar Lamivudina (Epivir-HBV®), Adefovir Dipivoxil, Entecavir, FTC (Coviracil®), DAPD (DXG), L-FMAU (Clevudina®), AM365 (Amrad), Lot (Telbivudina), monoval-LdC (Valtorcitabina). ACH-126,443 (L-Fd4C) (Achillion), MCC478 (Eli Lilly), Racivir (RCV), fluoro-L y D nucleósidos, Robustaflavona, ICN 2001-3 (ICN), Bam 205 (Novelos), XTL-001 (XTL), iminoazúcares (Nonyl-DNJ) (Synergy), HepBzyme; y productos inmunomoduladores como: interferón alfa 2b, HE2000 (Hollis-Eden), Theradigm (Epimmune), EHT899 (Enzo Biochem), Thymosin alfa-1 (Zadaxin®), vacuna ADN contra VHB (PowderJect), vacuna ADN contra VHB (Jefferon Center), antígeno VHB (OraGen), BayHep B® (Bayer), Nabi-HB® (Nabi) y Anti-hepatitis B (Cangene); y productos de vacuna contra el VHB como los siguientes: Engerix B, Recombivax HB, GenHevac B, Hepacare, Bio-Hep B, TwinRix, Comvax, Hexavac.

Tal como se usa aquí, el término "interferón de tipo I" significa un interferón escogido de un grupo de interferones que se fijan al receptor de tipo I. Naturalmente esto incluye tanto los interferones de tipo I de origen natural como los producidos sintéticamente. Como ejemplos de interferones del tipo I cabe citar los interferones \alpha, \beta, \delta, omega, los interferones tau, interferones de consenso y asialo-interferones.

Tal como se usa aquí, el término "interferón de tipo II" significa un interferón escogido de un grupo de interferones que se fijan al receptor de tipo II. Como ejemplos de interferones del tipo II cabe mencionar los interferones \gamma.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden llevar uno o más agentes activos adicionales elegidos, por ejemplo, entre agentes antivirales, agentes inmunomoduladores, inhibidores de la polimerasa de VHC, otros inhibidores de la NS3-proteasa del VHC, inhibidores de otra diana en el ciclo de vida del VHC, inhibidores del VIH, inhibidores del VHA e inhibidores del VHB. En la sección anterior de definiciones hay ejemplos de dichos agentes.

A continuación se ofrece una lista de ejemplos específicamente preferidos de algunos de estos agentes:

\bullet agentes antivirales: ribavirina y amantadina

\bullet agentes inmunomoduladores: interferones de tipo I, interferones de tipo II e interferones pegilados

\bullet inhibidores de la polimerasa de VHC: análogos no nucleósidos y nucleósidos

\bullet inhibidores de otra diana en el ciclo de vida del VHC que inhiben una diana escogida entre: NS3-helicasa, NS2/3-proteasa de VHC o sitio de entrada al ribosoma interno (IRES)

\bullet inhibidores del VIH: inhibidores nucleosídicos, inhibidores no nucleosídicos, inhibidores de proteasa, inhibidores de fusión e inhibidores de integrasa

\bullet inhibidores del VHB: agentes que inhiben la ADN-polimerasa viral del VHB o que son vacunas del VHB

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Como se ha expuesto antes la terapia combinada se realiza administrando conjuntamente un compuesto de la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, con al menos otro agente escogido entre: un agente antiviral, un agente inmunomodulador, un inhibidor de la polimerasa de VHC, otro inhibidor de la NS2/3-proteasa de VHC, un inhibidor de otra diana en el ciclo de vida del VHC, un inhibidor del VIH, un inhibidor del VHA y un inhibidor del VHB. En la sección anterior de definiciones se dan ejemplos de dichos agentes. Estos agentes adicionales pueden combinarse con los compuestos de la presente invención, creando una sola forma de dosificación farmacéutica. Opcionalmente estos agentes adicionales pueden administrarse al paciente por separado, como parte de una forma de dosificación múltiple, por ejemplo, mediante el uso de un kit. Entonces los agentes adicionales se pueden administrar al paciente antes, durante o después de la administración de un compuesto de la fórmula (I) o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Formas de ejecución preferidas

Preferiblemente un compuesto de la fórmula I es como el arriba definido, en que R^{1} es alquilo(C_{1-6}), cicloalquilo(C_{3-6}) o {cicloalquil(C_{3-6})-alquilo(C_{1-6})}, todos ellos sustituidos opcionalmente 1 hasta 3 veces con halo, nitro o con O-alquilo (C_{1-6}), o fenilo sustituido opcionalmente 1 hasta 3 veces con halo, nitro, alquilo(C_{1-6}) o con O-alquilo(C_{1-6}).

Con mayor preferencia R^{1} se selecciona entre metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopropilmetilo, ciclohexiletilo, CCl_{3}, CF_{3}, fenilo, 2-fluorofenilo o 4-metilfenilo.

Especialmente R^{1} es metilo, ciclopropilo, CF_{3} o fenilo. Aún más preferentemente R^{1} es metilo, ciclopropilo o fenilo, sobre todo metilo. Como alternativa R^{1} es más preferentemente ciclopropilo y sobre todo fenilo.

Según una forma de ejecución alternativa la composición farmacéutica de la presente invención puede llevar adicionalmente otro agente anti-VHC. Como ejemplos de agentes anti-VHC cabe citar los interferones \alpha (alfa), \beta (beta), \delta (delta), \gamma (gamma) u \omega (omega), la ribavirina y la amantadina.

Según otra forma de ejecución alternativa la composición farmacéutica de la presente invención puede llevar adicionalmente un inhibidor de la polimerasa de VHC.

Según otra forma de ejecución alternativa la composición farmacéutica de la presente invención puede llevar adicionalmente otro inhibidor de la NS3-proteasa de VHC.

Según otra forma de ejecución alternativa la composición farmacéutica de la presente invención puede llevar adicionalmente un inhibidor de otras dianas en el ciclo de vida del VHC, incluyendo, sin limitarse a ellas, una helicasa, NS2/3-proteasa o un sitio de entrada al ribosoma interno (IRES).

La composición farmacéutica de la presente invención se puede administrar por vía oral, parenteral o a través de un reservorio implantado. Se prefiere la administración oral o por inyección. La composición farmacéutica de la presente invención puede contener cualquier tipo de excipientes, adyuvantes o vehículos convencionales, no tóxicos y farmacéuticamente aceptables. En algunos casos el pH de la formulación se puede ajustar con ácidos, bases o tampones farmacéuticamente aceptables, a fin de aumentar la estabilidad del compuesto formulado o su forma de suministro. Tal como aquí se usa, el término parenteral incluye técnicas de inyección o infusión subcutánea, intracutánea, intravenosa, intramuscular, intra-articular, intrasinovial, intrasternal, intratecal e intralesional.

La composición farmacéutica puede estar en forma de un preparado esterilizado inyectable, por ejemplo como suspensión acuosa u oleaginosa esterilizada inyectable. Esta suspensión se puede formular según técnicas conocidas del estado técnico, empleando agentes dispersantes o humectantes apropiados (como por ejemplo Tween 80) y agentes suspensores.

La composición farmacéutica de la presente invención se puede administrar oralmente en cualquier forma de dosificación apta para vía oral, incluyendo, sin limitarse a ellas, cápsulas, tabletas y soluciones y suspensiones acuosas. En el caso de tabletas para uso oral los excipientes normalmente empleados son lactosa y almidón de maíz. También se añaden tópicamente agentes lubricantes como el estearato magnésico. Para la administración oral en forma de cápsula, como diluyentes útiles se emplean lactosa y almidón de maíz secado. Cuando se administran suspensiones acuosas por vía oral, el ingrediente activo va combinado con agentes emulsionantes y suspensores. Si se desea, pueden agregarse ciertos agentes edulcorantes y/o saborizantes y/o colorantes.

Otros vehículos o excipientes adecuados para las formulaciones y composiciones arriba indicadas pueden encontrarse en textos farmacéuticos clásicos, p.ej. en "Remington's Pharmaceutical Sciences", The Science and Practice of Pharmacy, 19ª ed. Mack Publishing Company, Easton, Penn., (1995).

Los niveles de dosificación comprendidos aproximadamente entre 0,01 y 100 mg/kg de peso corporal por día, sobre todo entre aproximadamente 0,1 y 50 mg/kg de peso corporal por día, del compuesto inhibidor de proteasa aquí descrito son útiles en una monoterapia para la prevención y el tratamiento de la enfermedad mediada por VHC. Normalmente la composición farmacéutica de la presente invención se administrará 1 hasta 5 veces al día o, alternativamente, como infusión continua. Esta administración puede utilizarse como terapia crónica o aguda. La cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con los materiales soporte para producir una forma de dosificación unitaria variará en función del huésped tratado y del modo particular de administración. Un preparado típico contendrá aproximadamente 5% a 95% de compuesto activo (p/p). Preferiblemente tales preparados contienen aproximadamente 20% hasta 80% de compuesto activo.

Como apreciará el especialista experimentado se pueden necesitar dosis menores o mayores que las arriba citadas. Los regímenes específicos de dosificación y tratamiento para cada paciente concreto dependerán de varios factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la edad, el peso corporal, el estado de salud general, el sexo, la dieta, el tiempo de administración, la tasa de excreción, la combinación de fármacos, la gravedad y el curso de la infección, la disposición del paciente a la infección y el juicio del médico a cargo del tratamiento. Generalmente el tratamiento se inicia con pequeñas dosis sustancialmente inferiores a la dosis óptima del péptido. Luego la dosificación se incrementa poco a poco hasta alcanzar el efecto óptimo en las circunstancias existentes. En general es deseable, sobre todo, administrar el compuesto a un nivel de concentración que logre resultados antivirales efectivos, sin causar ningún daño ni efectos secundarios perniciosos.

Si la composición de la presente invención comprende una combinación de un compuesto de fórmula I y uno o más agentes adicionales terapéuticos o profilácticos, tanto el compuesto como el agente adicional deberían encontrarse a unos niveles de dosificación comprendidos aproximadamente entre 10 y 100%, con preferencia entre 10 y 80% aproximadamente, de la dosificación normal administrada en un régimen de monoterapia.

Cuando estos compuestos o sus sales farmacéuticamente aceptables se formulan conjuntamente con un excipiente farmacéuticamente aceptable, la composición resultante se puede administrar in vivo a mamíferos como el hombre, para inhibir la NS3-proteasa del VHC o para tratar o prevenir la infección por el virus VHC. Este tratamiento también se puede realizar empleando un compuesto de la presente invención combinado con agentes como, sin limitarse a ellos, interferón \alpha, \beta, \delta, \omega o \gamma, ribavirina, amantadina; inhibidores de la polimerasa del VHC; otros inhibidores de la NS3-proteasa del VHC; inhibidores de otras dianas en el ciclo de vida del VHC, incluyendo, sin limitarse a ellos, helicasa, NS2/3-proteasa o un sitio de entrada al ribosoma interno (IRES); o combinaciones de los mismos. Los agentes adicionales pueden combinarse con compuestos de la presente invención, a fin de crear una forma de dosificación unitaria. Como alternativa estos agentes adicionales pueden administrarse separadamente a un mamífero, como parte de una forma de dosificación múltiple.

Si la composición farmacéutica solo lleva un compuesto de la presente invención como componente activo, esté método puede incluir otra etapa, para administrar a dicho mamífero un agente escogido entre un agente inmunomodulador, un agente antiviral, un inhibidor de la polimerasa del VHC, un inhibidor de la NS3-proteasa del VHC o un inhibidor de otras dianas en el ciclo de vida del VHC, tales como helicasa, NS2/3-proteasa o IRES. Este agente adicional puede administrarse al mamífero antes, durante o después de administrarle la composición de la presente invención.

Un compuesto de fórmula I como el aquí descrito también se puede usar como reactivo de laboratorio. Un compuesto de la presente invención también se puede emplear para tratar o prevenir la contaminación viral de materiales y reducir, por lo tanto, el riesgo de infección viral del personal médico o de laboratorio o de los pacientes que entran en contacto con tales materiales (como p.ej. sangre, tejidos, instrumental y prendas de cirugía, instrumental y prendas de laboratorio, y aparatos y materiales de recogida de sangre).

Un compuesto de fórmula I como el aquí descrito también se puede usar como reactivo para investigación. Un compuesto de fórmula I también se puede usar como control positivo para validar ensayos basados en células sustitutas o ensayos de replicación viral in vitro o in vivo.

Otros detalles de la presente invención están explicados en los siguientes ejemplos, que no pretenden ser limitativos respecto a las reivindicaciones adjuntas.

Metodología

En general el compuesto de la fórmula I y los intermedios previos se preparan por métodos conocidos, utilizando unas condiciones de reacción que ya se sabe que son adecuadas para los reactantes. Varios de estos métodos están revelados en las patentes WO 00/09543 y WO 00/09558.

El esquema siguiente ilustra un proceso conveniente, en el cual se emplean métodos conocidos para preparar un intermedio fundamental, de fórmula 6a, partiendo de intermedios acíclicos:

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Esquema 1

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Esquema 1

Las secuencias de acoplamiento A y C pueden realizarse de varias maneras, que pueden ser fácilmente reconocidas por personas experimentadas en la materia. Partiendo de 4-(S)-hidroxiprolina, el sustituyente en 4-hidroxilo puede incorporarse mediante una reacción de Mitsunobu (como se describe en Mitsunobu Synthesis 1981, January, 1-28; Rano y otros, Tet. Lett. 1994, 36, 3779-3792; Krchnak y otros, Tet. Lett. 1995, 36, 6193-6196) antes o después de la macrociclación. Alternativamente el empalme puede efectuarse con la deseada prolina 4-(R)-hidroxi-sustituida, tal como se expone en los procesos generales de las patentes WO 00/09543 y WO 00/09558.

Etapas A, B, C, D: en resumen, los fragmentos P1, P2 y P3 pueden unirse mediante técnicas de acoplamiento peptídico bien conocidas, expuestas de manera general en las patentes WO 00/09543 y WO 00/09558.

Etapa E: la formación del macrociclo puede llevarse a cabo mediante una metátesis olefínica, usando un catalizador basado en Ru como el descrito por Miller, S.J.; Blackwell, H.E.; Grubbs, R.H. J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 9606-9614 (a); Kingsbury, J.S.; Harrity, J.P.A.; Bonitatebus, P.J.; Hoveyda, A.H. J. Am. Chem. Soc. 1999, 121, 791-799 (b) y Huang, J.; Stevens, E.D.; Nolan, S.P.; Petersen, J.L.; J. Am. Chem. Soc. 1999, 121, 2674-2678 (c). Como podrá apreciarse, para esta reacción también pueden emplearse catalizadores que contengan otros metales de transición, como por ejemplo Mo.

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La subsiguiente conversión del intermedio fundamental de fórmula 6a en los compuestos de la fórmula 1 de la presente invención se revela detalladamente más abajo en los ejemplos.

Ejemplos

La presente invención se ilustra con más detalle mediante los siguientes ejemplos no limitativos. Otras vías concretas de síntesis o resolución pueden encontrarse en las patentes WO 00/09543 y WO 00/09558.

Las temperaturas se indican en grados centígrados. Los porcentajes de solución expresan una relación peso a volumen y las proporciones de solución expresan una relación volumen a volumen, a no ser que se indique de otro modo. Los espectros de resonancia magnética nuclear (RMN) se registraron en un espectrómetro Bruker de 400 MHz; los desplazamientos químicos (\delta) se indican en partes por millón y están referidos al disolvente interno deuterado, a no ser que se indique de otro modo. Los espectros RMN de todos los compuestos finales (inhibidores) se registraron en DMSO-d_{6} de su sal con TFA, a no ser que se indique otra cosa. La cromatografía de columna flash se efectuó en gel de sílice (SiO_{2}) según la técnica de cromatografía flash de Still (W.C. Still y otros, J. Org. Chem., 1978, 43, 2923).

Las abreviaturas usadas en los ejemplos son vinil-ACCA: ácido 1-amino-2-vinil-ciclopropil-carboxílico; Boc: terc-butoxicarbonilo [Me_{3}COC(O)]; BSA: albúmina de suero bovino; Cbz: benciloxicarbonilo; CHAPS: 3-[(3-colamido-propil)-di-metilamonio]-1-propansulfonato; DBU: 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-undec-7-eno; DCM: CH_{2}Cl_{2}: cloruro de metileno; DEAD: dietil-azodicarboxilato; DIAD: diisopropilazodicarboxilato; DIPEA: diisopropiletilamina; DMAP: dimetilaminopiridina; DMF: N,N-dimetilformamida; DMSO: dimetilsulfóxido; DPPA: difenilfosforil-azida; EDTA: ácido etilendiaminotetraacético; (S,S)-Et-DUPHOS Rh (COD)OTf: (+)-1,2-bis (2S,5S)-2,5-dietilfosfolano)-benceno (ciclooctadieno) rodinio (1) trifluorometansulfonato; EtOH: etanol; EtOAc: acetato de etilo; ESMS: espectrometría de masas tipo electrospray; eq.: equivalente(s); h.: hora(s); HATU: O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil-uronio hexafluorofosfato; HPLC: cromatografía líquida de alto rendimiento; MS: espectrometría de masas; MALDI-TOF: desorción/ionización láser asistida por matriz-tiempo de vuelo; min.: minuto(s); FAB: bombardeo por átomos rápidos; Me: metilo; MeOH: metanol; Ph: fenilo; Pr: propilo; RP-HPLC: HPLC de fase inversa; Rt: tiempo de retención; TA: temperatura ambiente (18º-22º); sat.: saturado; TBTU: 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio tetrafluoroborato; TFA: ácido trifluoroacético; THF: tetrahidrofurano; TLC: cromatografía de capa fina; Tris/HCl: tris(hidroximetil)-aminometano hidrocloruro.

Ejemplo 1 Síntesis del dipéptido 1c

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Una mezcla de Boc-hidroxiprolina 1a (50,0 g, 216 mmoles), (1R,2S)-vinil-ACCA hidrocloruro 1b (42,25 g, 238 mmoles), TBTU (76,36 g, 238 mmoles) y DIPEA (113 ml, 649 mmoles) en DMF (800 ml) se agitó a TA bajo atmósfera de nitrógeno. A las 3,5 h se evaporó el disolvente, y el residuo se extrajo con EtOAc y se lavó con ácido clorhídrico (al 10%), bicarbonato sódico saturado y salmuera. Después la fase orgánica se secó sobre sulfato magnésico, se filtró y se evaporó, obteniéndose un aceite. Después de secar el aceite durante la noche (18 h) a vacío elevado se obtuvo el dipéptido 1c en forma de espuma amarilla (72,0 g, 94%, pureza > 95% por HPLC).

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Ejemplo 2 Síntesis del dipéptido 1a

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El dipéptido 1c (72,0 g, 203 mmoles) con trifenilfosfina (63,94 g, 243,8 mmoles, 1,2 equiv.) y ácido nitrobenzoico (41,08 g, 245,8 mmoles, 1,2 equiv.) se disolvió en THF seco (1,4 l) y la solución agitada se enfrió a 0º bajo atmósfera de nitrógeno. Después se añadió DEAD (38,4 ml, 244 mmoles, 1,2 equiv.) gota a gota durante 45 min. y la mezcla reactiva se dejo calentar a TA. Pasadas 4 h se evaporó el disolvente y el residuo se repartió en cuatro porciones, cada una de las cuales se cromatografió sobre gel de sílice fino (10-40 mm de malla, diámetro de columna 12 cm, longitud de columna 16 cm), utilizando un gradiente de 2 : 1 hexano/EtOAc a 1:1 hexano/ EtOAc hasta EtOAc puro. El éster 2a se obtuvo en forma de un sólido blanco amorfo, tras evaporar el disolvente y secar con vacío elevado a 70º durante 1 h (108,1 g, rendimiento cuantitativo).

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Ejemplo 3 Síntesis del dipéptido-alcohol 3a

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El éster de nitrobenzoílo 2a (108,1 g, 203,1 mmoles) se disolvió en THF (1,0 l) y la disolución resultante se enfrió a 0º. Luego se añadió rápidamente una disolución de hidróxido de litio monohidrato (10,66 g, 253,9 mmoles) en agua (225 ml) y la mezcla reaccionante se agitó a 0º durante 30 min., tras lo cual la base excedente se neutralizó con ácido clorhídrico (1 N, 50,8 ml). Se agregó lentamente más ácido hasta eliminar el color amarillo (7 ml). Después se evaporó la mezcla resultante, el residuo se extrajo con EtOAc (3 x 150 ml) y se lavó con bicarbonato sódico saturado (150 ml) y salmuera (150 ml). La fase orgánica se secó con sulfato magnésico-carbón activo, se filtró a través de tierra de diatomeas y se evaporó. Tras secar el residuo durante la noche con vacío elevado se obtuvo el alcohol 3a en forma de una espuma incolora (70,1 g, 98%, pureza > 99% por HPLC).

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Ejemplo 4 Síntesis del ácido (2S)-N-Boc-amino-non-8-enoico (4g)

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Etapa A

A una solución de 2-acetamidomalonato de dietilo 4a comercialmente disponible (100 g, 0,46 moles) en dioxano (500 ml) se le añadió gota a gota en 30 a 45 min. hidróxido sódico acuoso (1 M, 1 eq., 460 ml). La mezcla resultante se dejó 16,5 h en agitación y después el dioxano se evaporó al vacío. La solución acuosa resultante se extrajo con tres porciones de 300 ml de EtOAc y se acidificó a pH 1 con HCl concentrado. Esta disolución se dejó cristalizar en un baño de agua helada. Al aparecer unos cuantos cristales, la mezcla se sometió a ultrasonidos y se formó un precipitado abundante. Después de filtrar y secar al vacío se obtuvo el compuesto 4b (62,52 g, 72% de rendimiento) en forma de un sólido blanco.

Etapa B

A una emulsión del 7-octeno-1,2-diol comercialmente disponible 4c (25 g, 0,173 moles) y agua (100 ml), agitada magnéticamente en un frasco de 1 l de fondo redondo, se le añadió una disolución acuosa de peryodato sódico (40,7 g, 0,190 moles, 1,1 eq., en 475 ml de H_{2}O) durante un periodo de 20 min. (ligera exotermia). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h más (final de reacción confirmado por TLC). Después se pasó la mezcla a un embudo de decantación, separando la capa acuosa de la capa orgánica. La solución acuosa se saturó con NaCl, se decantó y se separó de nuevo de la fracción orgánica. Las dos fracciones orgánicas se combinaron, se secaron con sulfato sódico y se filtraron a través de un tapón de algodón (en una pipeta Pasteur), dando el compuesto 4d (15,135 g, aceite incoloro, 78% de rendimiento). La disolución acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2}, se secó con MgSO_{4} anhidro y se concentró al vacío (sin calentar, p.ej. 6-heptenal, p.eb. 153ºC) para obtener una cantidad adicional de compuesto 4d (1,957 g, aceite incoloro, 10% de rendimiento). Rendimiento total 88%.

Etapa C

Al 2-acetamidomalonato de etilo 4b (7,57 g, 40 mmoles) sólido se le añadió 6-heptenal 4d (4,48 g, 40 mmoles) disuelto en piridina (32 ml, 10 eq.) a lo largo de 1 min. La disolución resultante se enfrió en un baño a 10º y se agregó anhídrido acético (12 ml, 3,2 eq.) durante 4 min. La solución naranja resultante se agitó 3 h a TA y se añadió otra porción de 2-acetamidomalonato de etilo 4b (2,27 g). La mezcla resultante se agitó a la temperatura ambiente 11 h más. Después se agregó hielo (60 ml) y la disolución se agitó durante 1,5 h; luego la mezcla se diluyó con 250 ml de agua y se extrajo con dos porciones de dietiléter. La disolución etérea se lavó con HCl 1N, NaHCO_{3} sat., se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se concentró y se purificó por cromatografía flash (EtOAc 40%/hexano), dando el compuesto 4e (4,8 g, 50% de rendimiento), en forma de un aceite amarillo pálido.

Etapa D

A una solución desgasificada (burbujeo de argón durante 30 min.) del Z-etil 2-acetamido-2,8-nonadienoato 4e (8,38 g, 35 mmoles) en etanol seco (70 ml) se añadió (S,S)-Et-DUPHOS Rh(COD)OTf (51 mg, (substrato/catalizador = 496)). La mezcla se presurizó con 30 psi de hidrógeno (tras 4 ciclos de vacío-H_{2}) y se agitó en un aparato de Parr durante 2 h. La mezcla resultante se evaporó hasta sequedad, para obtener el compuesto crudo 4f, que se usó sin purificar en la siguiente etapa.

Etapa E

A una disolución del (S)-etil 2-acetamido-8-nonenoato crudo 4f (7,3 g, 30,3 mmoles) en THF (100 ml) se le añadió Boc_{2}O (13,2 g, 2 eq.) y DMAP (740 mg, 0,2 eq). La mezcla reaccionante se calentó 2,5 h a reflujo. Luego se evaporó la mayor parte del disolvente THF, la mezcla cruda se diluyó con CH_{2}Cl_{2} y se lavó con HCl 1 N para eliminar la DMAP. La capa orgánica se extrajo con NaHCO_{3} acuoso saturado, se secó con Na_{2}SO_{4} anhidro y se concentró al vacío. El producto crudo se diluyó luego con THF (50 ml) y agua (30 ml), se le añadió LiOH\cdotH_{2}O (2,54 g, 2 eq.) y la mezcla resultante se agitó a TA durante 25 h (fin de reacción confirmado por TLC). La mezcla reactiva se concentró al vacío para eliminar la mayor parte del disolvente THF y se diluyó con CH_{2}Cl_{2}. La solución resultante se lavó con HCl 1 N, se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro y se concentró al vacío. Para eliminar las pequeñas impurezas y el exceso de Boc_{2}O, el producto crudo se purificó por cromatografía flash (usando un gradiente de disolvente desde 100% de hexano hasta 100% de EtOAc, como eluyente). El compuesto del epígrafe 4g se obtuvo con gran pureza, en forma de un aceite de color amarillo pálido (5,82 g, 71% de rendimiento). RMN-H^{1} (DMSO, 400 MHz): \delta 7,01 (d, J = 8 Hz, 1H), 5,79 (tdd, Jt = 6,7 Hz, Jd = 17,0, 10,2 Hz, 1H), 5,00 (md, Jd = 17,0 Hz, 1H), 4,93 (md, Jd = 10,2 Hz, 1H), 3,83 (m, 1H), 2,00 (q, J = 6,9 Hz, 2H), 1,65-1,5 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,35-1,21 (m, 6H).

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Ejemplo 5 Síntesis del tripéptido 5b

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Etapa 1

Se añadió una solución de cloruro de hidrógeno en dioxano (4 N, Aldrich) al fragmento Boc P2-P1 3a (5,32 g, 15,0 mmoles), resultando una disolución incolora. Después de 1 h de agitación a temperatura ambiente se evaporó el disolvente y el residuo se expuso a un vacío elevado durante 3 h, obteniéndose la sal de hidrocloruro del compuesto 5a en forma de un sólido amorfo que se usó tal cual.

Etapa 2

Se añadió DIPEA (2,6 ml, 15 mmoles) a una mezcla en DCM seco (100 ml) del hidrocloruro de P2-P1 (15 mmoles) arriba preparado, obteniéndose una solución homogénea. Por separado se añadió TBTU (5,30 g, 16,5 mmoles, 1,1 equiv.) a una solución agitada del conector C9 4g (4,07 g, 15,0 mmoles) en DCM seco (130 ml), lográndose la disolución parcial del reactivo. Se agregó DIPEA (2,6 ml, 15 mmoles) y a los 10 min. quedó una disolución sustancialmente homogénea, a la cual se añadió luego la solución de P2-P1 y DIPEA hasta que la reacción resultó básica (pH > 8 sobre pasta de tornasol húmeda). Después de agitar durante 5 h bajo atmósfera de nitrógeno se evaporó el disolvente al vacío, y el residuo se extrajo con EtOAc (2 x 250 ml) y se lavó con ácido clorhídrico diluido (0,05 N, 400 ml), agua (400 ml) y bicarbonato sódico saturado (400 ml). Las fases orgánicas reunidas se secaron luego sobre sulfato magnésico, se filtraron y se evaporaron, quedando un jarabe amarillo. El producto crudo se cromatografió sobre gel de sílice, mediante EtOAc/hexano 6:1 hasta EtOAc puro como eluyente, obteniéndose el tripéptido deseado - dieno 5b - en forma de una espuma blanca (5,88 g, 82%, pureza > 95% por HPLC).

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Ejemplo 6 Síntesis del intermedio macrocíclico 6a

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Una solución del dieno 5b (4,0 g, 7,88 mmoles) en DCM seco (800 ml) se desoxigenó burbujeando Ar durante 2 h. Luego se añadió catalizador de Hoveyda (262 mg, 0,434 mmoles, 5,5% molar) sólido y la reacción se llevó a cabo a reflujo bajo un balón de Ar. Después de 28 h la solución rojo anaranjada se evaporó hasta dejar un sólido amorfo y luego se purificó por cromatografía flash en columna de gel de sílice. El sistema disolvente inicial fue EtOAc al 10% en CH_{2}Cl_{2}. Una vez eluido el catalizador de la columna, el disolvente se cambió a EtOAc puro. La elución del catalizador fuera de la columna resultó evidente por el color. El producto macrocíclico 6a se aisló en forma de una espuma incolora que se redisolvió en CH_{2}Cl_{2}/hexano (1:2). La evaporación del disolvente dejó un polvo de color blanco (3,362 g, 89% de rendimiento).

RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 400 MHz): \delta 1,20-1,50 (m, 6H), 1,43 (s, 9H), 1,53 (dd, J = 9,5 & 5,4, 1H), 1,61-1,70 (m, 1H), 1,76-1,90 (m, 2H), 2,05-2,26 (m, 4H), 2,45 (d, J = 14,3, 1H), 3,67 (s, 3H), 3,71 (d, J = 11,1, 1H), 3,90 (dd, J = 11,1 & 4,3, 1H), 4,43-4,53 (m, 2H), 4,76 (d, J = 8,6, 1H), 4,86 (bd, J = 9,8, 1H), 5,20-5,23 (m, 2H), 5,57 (dt, J = 7,0 & 9,8, 1H), 7,32 (bs, 1H).

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(Esquema pasa a página siguiente)

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Ejemplo 7 Síntesis del intermedio tripéptido macrocíclico 7h

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Etapa A

A una solución del intermedio macrocíclico 6a (13,05 g, 27,2 mmoles, 1,0 eq.), Ph_{3}P (14,28 g, 54,4 mmoles, 2,0 eq.) y 2-carboximetoxi-4-hidroxi-7-metoxiquinolina (WO 00/09543 & WO 00/09558) (6,67 g, 28,6 mmoles, 1,05 eq.) en THF (450 ml) a 0º se le añadió gota a gota DIAD (10,75 ml, 54,6 mmoles, 2,0 eq.) durante un periodo de 15 min. Luego se retiró el baño de hielo y la mezcla reaccionante se agitó a TA durante 3 h. Una vez completada la conversión del material de partida en productos se evaporó el disolvente al vacío, la mezcla restante se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHCO_{3} (2x) saturado y salmuera (1x); la capa orgánica se secó con MgSO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó hasta sequedad. El compuesto 7a puro se obtuvo tras la cromatografía flash en columna; la columna se eluyó primero con hexano/EtOAc (50:50), seguido de CHCl_{3}/EtOAc (95:5), para eliminar el Ph_{3}PO y los subproductos de DIAD, y la elución de las impurezas se controló por TLC. Finalmente el producto deseado 7a se eluyó de la columna con CHCl_{3}/EtOAC (70:30). Normalmente la etapa de cromatografía se tuvo que repetir 2-3 veces antes de poder aislar el compuesto 7a en forma de un sólido blanco con elevado grado de pureza y un rendimiento global del 68% (12,8 g, 99,5% de pureza por HPLC).

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Etapa B

A una solución en CH_{2}Cl_{2} (15 ml) del intermedio 7a protegido con Boc (1,567 g) se añadió HCl 4 N en dioxano (12 ml) y la mezcla reactiva se agitó 1 h a TA [si a mitad del periodo de reacción se formaba un gel espeso se añadían 10 ml más de CH_{2}Cl_{2}]. Una vez completada la desprotección los disolventes se evaporaron a sequedad para obtener un sólido amarillo y un material pastoso. La mezcla se redisolvió en MeOH aproximadamente al 5% en CH_{2}Cl_{2} y se reevaporó al vacío hasta sequedad, para obtener el compuesto 7b en forma de un sólido amarillo que se utilizó sin purificar en la siguiente etapa.

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Etapa C

A una solución de ciclopentanol (614 ml, 6,76 mmoles) en THF (15 ml) se le añadió gota a gota una solución de fosgeno en tolueno (1,93 M, 5,96 ml, 11,502 mmoles) y la mezcla se agitó a TA durante 2 h para formar el reactivo de cloroformiato de ciclopentilo (z). Tras este periodo se eliminó aproximadamente la mitad del disolvente por evaporación al vacío; la disolución restante de color amarillo claro se diluyó añadiendo CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se concentró a la mitad de su volumen original, a fin de asegurar la eliminación de todo el fosgeno sobrante. La solución anterior del reactivo cloroformiato de ciclopentilo se diluyó aún más con THF (15 ml) y se agregó a la sal amina-2HCl 7b. La mezcla se enfrió a 0º en un baño de hielo, el pH se ajustó a 8,5-9 con Et_{3}N (añadido gota a gota) y la mezcla reactiva se agitó a 0º durante 1 h. Tras este periodo, la mezcla se diluyó con EtOAc, se lavó con agua (1x), NaHCO_{3} saturado (2x), H_{2}O (2x) y salmuera (1x). La capa orgánica se secó con MgSO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó al vacío, para obtener una espuma de color ambarino. El dimetil-éster 7c se obtuvo en forma de una espuma blanca tras la purificación por cromatografía flash en columna (usando un gradiente de disolvente de 30% a 20% de hexano en EtOAc, como eluyente) con un 80% de rendimiento (1,27 g) y pureza > 93%.

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Etapa D

El dimetil-éster 7c (1,17 g) se disolvió en una mezcla de THF/MeOH/H_{2}O (20 ml, en proporción 2:1:1) y se le añadió una disolución acuosa de NaOH (1,8 ml, 1 N, 1eq.). La mezcla reactiva se agitó a TA durante 1 h antes de evaporar a sequedad, para obtener la sal sódica 7d en forma de un sólido blanco (\sim1,66 mmoles). El compuesto 7d se usó sin purificar en la siguiente etapa.

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Etapa E

La sal sódica cruda 7d (1,66 mmoles) se disolvió en THF (17 ml), se añadió Et_{3}N y la mezcla se enfrió a 0º en baño de hielo. Se agregó por goteo cloroformiato de isobutilo (322 ml, 2,5 mmoles) y la mezcla se agitó a 0º durante 75 min. Tras este periodo se añadió diazometano (15 ml) y se continuó agitando a 0º durante 30 min. y luego 1 h más a TA. La mayor parte del disolvente se evaporó mediante vacío hasta sequedad, la mezcla restante se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHCO_{3} saturado (2x), H_{2}O (2x) y salmuera (1x), se secó sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó hasta sequedad, para obtener el compuesto 7e en forma de espuma de color amarillo claro (1,2 g, 1,66 mmoles). La diazocetona intermedia 7e se usó sin purificar en la siguiente etapa.

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Etapa F

La diazocetona 7e (1,2 g, 1,66 mmoles) se disolvió en THF (17 ml) y se enfrió a 0º en un baño de hielo. Se agregó por goteo una solución acuosa de HBr (48%, 1,24 ml) y la mezcla reaccionante se agitó a 0º durante 1 h. Luego la mezcla se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHCO_{3} saturado (2x), H_{2}O (2x) y salmuera (1x), y la capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó hasta sequedad, para obtener la \alpha-bromocetona 7f en forma de una espuma de color amarillo claro (\sim1,657 mmoles).

Etapa G

A una solución de bromocetona 7f (1,66 mmoles) en isopropanol (50 ml) se le añadió isopropiltiourea (392 mg, 3,32 mmoles) y la mezcla reaccionante se colocó en un baño de aceite precalentado a 75º, donde se dejó en agitación durante 1 h. Luego se eliminó el isopropanol a vacío y el producto se disolvió en EtOAc (250 ml). La disolución se lavó con NaHCO_{3} saturado y salmuera, la capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó, para dar el producto crudo 7g (1,35 g) en forma de sólido cremoso coloreado. El producto crudo se purificó por cromatografía flash en gel de sílice (1:1 hexano/EtOAc), obteniéndose 860 mg de un sólido blanquecino (66% de rendimiento a lo largo de 4 etapas).

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Etapa H

El éster metílico 7g (860 mg, 1,1 mmoles) se disolvió en una disolución de THF/MeOH/H_{2}O (2:11, 24 ml) y se saponificó con LiOH\cdotH_{2}O(369 mg, 8,8 mmoles). La reacción de hidrólisis se efectuó durante 12 h a TA. Luego la disolución se evaporó hasta sequedad, para dar una pasta blanquecina. La mezcla se ajustó a pH 6 con HCl 1 N. Se separó la capa de EtOAc y la capa acuosa se extrajo dos veces con EtOAc. Los extractos de EtOAc combinados se lavaron con agua desionizada (2x) y salmuera (1x), se secaron (MgSO_{4}) y se evaporaron para obtener el tripéptido cíclico intermedio 7h, en forma de un sólido amarillo (818 mg; 97% de rendimiento).

RMN-H^{1} (400 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 8,59 (s, 1H), 8,03 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,43 (s, 2H), 7,28 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,02 (dd, J = 1,9, 8,9 Hz, 1H), 5,54-5,41 (m, 2H), 5,28 (bdd, J = 9,2, 9,2 Hz, 1H), 4,73-4,64 (m, 1H), 4,54-4,42 (m, 2H), 4,17-4,08 (m, 1H), 3,96-3,91 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,86-3,76 (m, 1H), 2,60-2,44 (m, 1H), 2,43-2,31 (m, 1H), 2,23-2,13 (m, 1H), 1,82-1,28 (m, 20H), 1,26 (d, J = 1,3 Hz, 3M), 1,24 (d, J = 1,3 Hz, 3H).

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Ejemplo 8 Preparación del compuesto 100 (compuesto de la fórmula I en que R^{1} es metilo)

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El tripéptido cíclico intermedio 7h (20 mg, 0,026 mmoles) se combinó con HATU (12 mg, 0,031 mmoles) en DMF anhidra (4 ml). La solución se agitó a TA antes de añadir gota a gota DIPEA (23 ml, 0,13 mmoles) durante aprox. 1 min. La mezcla se agitó durante 40 min. a TA y se analizó por HPLC para ver la formación del éster activado. Se agregó una solución en DMF (1 ml) de metanosulfonamida (12,4 mg, 0,13 mmoles), DMAP (14,3 mg, 0,12 mmoles) y DBU (15,5 ml, 0,10 mmoles). La mezcla reaccionante se agitó 36 h a TA antes de concentrarla. El residuo se reconstituyó en DMSO y se purificó por HPLC preparativa. La liofilización de las fracciones puras dio el derivado de sulfonamida 100 (7,95 mg, 36%) en forma de un sólido amorfo de color amarillo brillante.

MS (electrospray): 852,5 (M + H)^{+} y 850,5 (M - H)^{-}.

RP-HPLC: Rt = 6,6 minutos (homogeneidad = 100%).

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Ejemplo 9 Preparación del compuesto 101 (compuesto de la fórmula I en que R^{1} es fenilo)

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Empleando el mismo protocolo descrito en el ejemplo 8, pero usando bencenosulfonamida en vez de metanosulfonamida se preparó el análogo fenílico 101, en forma de un sólido amorfo de color amarillo brillante, con un rendimiento del 27%.

MS (electrospray): 914,5 (M + H)^{+} y 912,5 (M - H)^{-}.

RP-HPLC: Rt = 7,2 minutos (homogeneidad = 100%).

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Ejemplo 10 Preparación del compuesto 102 (compuesto de la fórmula I en que R^{1} es ciclopropilo)

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El tripéptido cíclico intermedio 7h (20 mg, 0,026 mmoles) se combinó con HATU (29,5 mg, 0,077 mmoles) en DMF anhidra (4 ml). La solución se agitó a TA, antes de añadir gota a gota DIPEA (23 ml, 0,13 mmoles) durante aprox. 1 min. La mezcla se agitó durante 45 minutos a TA y se analizó por HPLC para ver la formación del éster activado a 6,6 minutos.

A continuación se añadió inmediatamente una disolución de ciclopropanosulfonamida (12,6 mg, 0,104 mmoles) y DMAP (14,3 mg, 0,117 mmoles) en DMF (1 ml). Pasadas 2 h se agregó DBU (15,5 ml, 0,104 mmoles) y la mezcla reaccionante se agitó 20 h a TA, antes de concentrarla. La reacción se reconstituyó en DMSO y se purificó por HPLC preparativa. La liofilización de las fracciones puras dio el derivado de sulfonamida 102 en forma de un sólido amarillo (6,5 mg, 28,5%).

MS (electrospray): 878,4 (M + H)^{+} y 876,4 (M - H)^{-}.

RP-HPLC: Rt = 6,9 minutos (homogeneidad = 100%).

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Ensayos biológicos Ensayo de NS3-NS4A proteasa

El ensayo enzimático utilizado para evaluar los compuestos según la presente invención está descrito en las patentes WO 00/09543 y WO 00/59929.

Ensayo de replicación celular del ARN del VHC

El ensayo de replicación celular del ARN del VHC usado para evaluar los compuestos según la presente invención está descrito detalladamente en la patente WO 03/010141.

Algunos de los compuestos de la presente invención se evaluaron según los antedichos ensayos de base enzimática y celular y se encontró que eran muy activos. Más en concreto, los compuestos dieron valores IC_{50} inferiores a 0,1 \muM en el ensayo de NS3-NS4A proteasa y valores EC_{50} menores de 0,5 \muM en el ensayo de replicación celular del ARN del VHC.

Ensayos de especificidad

Los ensayos de especificidad empleados para evaluar la selectividad de los compuestos están descritos en la patente WO 00/09543.

Al evaluar los compuestos en los ensayos de especificidad se vio que los compuestos de la fórmula I eran selectivos, porque no producían una inhibición relevante en los ensayos de elastasa leucocitaria humana y de catepsina B.

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TABLA DE COMPUESTOS

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Claims

1. Un compuesto de la fórmula (I):

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donde R^{1} es

\bullet alquilo(C_{1-8}), cicloalquilo(C_{3-7}), {cicloalquil(C_{3-7})-alquilo(C_{1-8})},

21

\bullet un heterarilo escogido entre:

22

todos ellos sustituidos opcionalmente 1 hasta 3 veces con halo, ciano, nitro, O-alquilo(C_{1-6}), amido, amino o fenilo, o bien R^{1} es arilo C_{6} o C_{10} sustituido opcionalmente 1 hasta 3 veces con halo, ciano, nitro, alquilo(C_{1-6}), O-alquilo(C_{1-6}), amido, amino o fenilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el cual R^{1} es alquilo(C_{1-8}), cicloalquilo(C_{3-7}) o {cicloalquil(C_{3-7})-alquilo-(C_{1-6})}, todos ellos sustituidos opcionalmente 1 a 3 veces con halo, ciano, nitro, O-alquilo (C_{1-6}), amido, amino o fenilo; o bien R^{1} es arilo C_{6} o C_{10} sustituido opcionalmente 1 a 3 veces con halo, ciano, nitro, alquilo(C_{1-6}), O-alquilo(C_{1-6}), amido, amino o fenilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

3. Un compuesto según la reivindicación 2, en el cual R^{1} es alquilo(C_{1-6}), cicloalquilo(C_{3-6}) o {cicloalquil(C_{3-6})-alquilo-(C_{1-6})}, todos ellos sustituidos opcionalmente 1 a 3 veces con halo, nitro o con O-alquilo (C_{1-6}), o bien fenilo, sustituido opcionalmente 1 a 3 veces con halo, nitro, alquilo(C_{1-6}) o con O-alquilo(C_{1-6}).

4. Un compuesto según la reivindicación 3, donde R^{1} es metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopropilmetilo, ciclohexiletilo, CCl_{3}, CF_{3}, fenilo, 2-fluoro-fenilo o 4-metilfenilo.

5. Un compuesto según la reivindicación 4, en el cual R^{1} es metilo, ciclopropilo, CF_{3} o fenilo.

6. Un compuesto según la reivindicación 5, en el cual R^{1} es metilo.

7. Un compuesto según la reivindicación 5, en el cual R^{1} es ciclopropilo.

8. Un compuesto según la reivindicación 5, en el cual R^{1} es fenilo.

9. Una composición farmacéutica que contiene una cantidad efectiva contra el virus de la hepatitis C de un compuesto de la fórmula I según la reivindicación 1 o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en mezcla con un excipiente o un agente auxiliar farmacéuticamente aceptable.

10. Una composición farmacéutica según la reivindicación 9, que además contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de interferón \alpha.

11. Una composición farmacéutica según la reivindicación 9, que además contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de interferón \alpha pegilado.

12. Una composición farmacéutica según la reivindicación 9, que además contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de ribavirina.

13. Uso de una cantidad efectiva contra el virus de la hepatitis C de un compuesto de la fórmula I según la reivindicación 1 o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para preparar un medicamento destinado a tratar o prevenir una infección por el virus de la hepatitis C en un mamífero.

14. Uso de un compuesto de la fórmula I según la reivindicación 1 o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo que inhiba la NS3-proteasa del virus de la hepatitis C, para preparar una composición inhibidora de la replicación del virus de la hepatitis C.

15. Uso de un compuesto de la fórmula I según cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 8, para elaborar un medicamento destinado al tratamiento de las infecciones por el virus de la hepatitis C.