ES2335579T3 - Microcapsulas y composiciones orales que las contienen. - Google Patents
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Abstract
Microcápsulas que presentan por lo menos una sustancia extraña encapsulada en las células de levadura, sobre cuyas superficies se adhiere por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por sacáridos y proteínas, en las que la sustancia extraña encapsulada en las células de levadura es por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por aromatizantes, colorantes, acidulantes, aderezos, amargantes, especias, edulcorantes, grasas/lípidos, ácidos grasos, aminoácidos, enzimas, vitaminas, extractos animales y vegetales, y sustancias bioactivas.
Description
Microcápsulas y composiciones orales que las
contienen.
La presente invención se refiere a microcápsulas
de sustancias extrañas encapsuladas en el interior de las células
de levadura. Más específicamente, la invención se refiere a
microcápsulas de sustancias extrañas encapsuladas en el interior de
las células de levadura, en las que la velocidad, intensidad y
persistencia de la liberación de las sustancias extrañas, puede
controlarse. La presente invención se refiere además a un
procedimiento de preparación de estas microcápsulas y a una
composición oral que contiene las mismas.
Los procedimientos denominados de
microencapsulación conocidos en la técnica implican la inclusión de
un componente deseado en el interior de contenedores de partículas
(microcápsulas) preparadas con macromoléculas naturales o
sintéticas y que tienen un diámetro desde pocos a varios cientos
\mum para controlar la velocidad de liberación y sus tiempos de
liberación, de forma que aumente su persistencia. Los procedimientos
bien conocidos de microencapsulación incluyen procedimientos de
coacervación que utilizan gelatina (por ejemplo, patentes US nº
2.800.457, nº 2.800.458), procedimientos in situ que
implican la construcción de una membrana externa (fase acuosa) (por
ejemplo, las solicitudes publicadas examinadas de patentes
japonesas nº S36-9168, S47-23165,
las solicitudes publicadas no examinadas de patentes japonesas nº
S48-57892, S51-9079,
S54-25277), y procedimientos de polimerización
interfacial utilizando una reacción que forma una película entre las
fases internas y externas; recientemente, procedimientos de
microencapsulación de microorganismos en los que las membranas
celulares de microorganismos tales como levaduras, se utilizan como
películas de cápsulas, son muy conocidos.
Los procedimientos de preparación de
microcápsulas que utilizan células de microorganismos incluyen
procedimientos en los que aromatizantes u otras sustancias extrañas
deseadas, se encapsulan en el interior de células de levadura sin
eliminar el contenido de las células (tal como se da a conocer, por
ejemplo, en las solicitudes publicadas no examinadas de las
patentes japonesas nº S61-88871,
S62-186937, S63-88033,
S58-107189, y WO94/22572, WO96/36433, EP 0 242 135
B1, etc.), así como procedimientos en los que las sustancias
extrañas deseadas se encapsulan en células de levadura después de
eliminar los componentes intracelulares endógenos (tal como se da a
conocer, por ejemplo, en las solicitudes publicadas no examinadas de
patentes japonesas nº H4-4033,
H4-63127, H4-117245,
H5-15770, H8-243378, etc.). El
ultimo procedimiento es ventajoso, porque la cantidad de componentes
intracelulares endógenos que pueden eliminarse de las células de
levadura es superior, y la cantidad de sustancias extrañas que
pueden encapsularse en dichas células, (también es) superior,
haciendo por tanto posible que aumente el efecto de estas
sustancias extrañas.
En la industria de la alimentación, por ejemplo,
el chicle es un tipo de producto que demanda una liberación rápida
pero sostenida de sabor y aroma (esencia) que es difícil de alcanzar
en la práctica, ya que aunque el sabor y el aroma se notan
intensamente al empezar a utilizar el chicle, tienden a debilitarse
rápidamente mientras se prosigue la utilización de éste. Por tanto,
se han estudiado activamente los procedimientos que permiten que el
aromatizante se mantenga tanto tiempo como sea posible. La solicitud
de patente japonesa publicada no examinada nº
H5-192085 propone un procedimiento para preparar
goma utilizando un agente aromatizante obtenido incluyendo un
aromatizante en el interior de una célula de un microorganismo,
haciendo por tanto posible obtener un chicle con un aromatizante
más intenso y sostenido, utilizando una pequeña cantidad de
aromatizante.
Sin embargo, la velocidad de liberación, la
intensidad y persistencia de los aromatizantes o especias
(edulcorantes, etc.), como sustancias extrañas (constituyentes) que
se incluyen en células de microorganismos, no constituyen todavía
medios suficientes, y requieren posteriores mejoras.
Además, el documento
EP-A-0 217 109 describe un chicle en
el que la masa gomosa está provista de diversas microcápsulas
dispersas en ella, en el que cada microcápsula contiene sustancias
activas, golosinas de sustancias médicas, estando realizadas las
microcápsulas en materiales apropiados para liberar las sustancias
contenidas después de los tiempos prefijados. Además, Jacson et
al., (Labensmittel-Wissenschaft und Technologie,
vol. 24, nº 4, páginas 289-297,1991) describe la
utilización de la microencapsulación en la industria alimenticia,
la patente WO-A-00/16643 describe
aromatizantes encapsulados y/o sustancias olorosas que están
cubiertas con celulosa modificada, en la que dicha celulosa
presenta una formación gélica reversible a temperaturas altas, la
patente EP-A-0 528 466 describe un
chicle que contiene un aromatizante encapsulado en células de
microorganismos, y la patente
EP-A-0 453 316 describe un
procedimiento para la preparación de microcápsulas que comprenden
la etapa de elución de los componentes intracelulares de una
levadura al exterior de sus células, y la etapa de preparación de
un líquido encerrado en las células de levadura a partir de las
cuales los componentes intracelulares se eluyeron.
El objetivo de la presente invención consiste en
proporcionar microcápsulas de sustancias extrañas encapsuladas en
el interior de células de levadura, y también mejorar las
propiedades de liberación de estas sustancias extrañas encapsuladas
(constituyentes), aumentando la velocidad, intensidad y persistencia
de la liberación de los constituyentes. Otro objetivo de la
presente invención consiste en proporcionar una composición oral,
en la que el efecto de dichas sustancias extrañas encapsuladas puede
obtenerse más eficientemente con cantidades más pequeñas de ellas,
o una composición oral que posee una persistencia excelente de
sustancias extrañas, con cantidades más pequeñas de ellas,
utilizando las microcápsulas mencionadas anteriormente.
\newpage
Como resultado de un cuidadoso estudio para
resolver los problemas mencionados, se descubrió que en las
denominadas microcápsulas de los microorganismos, de sustancias
extrañas encapsuladas en el interior de células de levadura,
cubriendo parcial o completamente estas células de levadura
(cápsulas) con, por lo menos, un elemento seleccionado a partir de
un grupo formado por sacáridos y proteínas, es posible mejorar la
velocidad, intensidad y persistencia de liberación de estas
sustancias extrañas, previniendo mientras su degradación. Se
constató asimismo que estos efectos mejoran notablemente utilizando
células de levadura cuyo componente endógeno intracelular se
eliminó previamente para encapsular sustancias extrañas. La presente
invención se cumple basándose en estos hallazgos.
Específicamente, la presente invención
proporciona microcápsulas que incluyen a continuación los puntos 1
a 9.
Punto
1
Las microcápsulas que tienen sustancias extrañas
encapsuladas en el interior de células de levadura, sobre cuyas
superficies se adhiere, por lo menos, un elemento seleccionado de
entre el grupo constituido por sacáridos y proteínas.
Punto
2
Las microcápsulas según el Punto 1, en el que
las células de levadura son las que previamente han sido tratadas
para eliminar (incluyendo "eliminación mediante elución") los
componentes intracelulares endógenos.
Punto
3
Las microcápsulas según cualquiera de los Puntos
1 a 2, en los que los sacáridos son por lo menos un elemento
seleccionado de entre el grupo constituido por monosacáridos,
disacáridos, trisacáridos, tetrasacáridos, oligosacáridos,
polisacáridos y alcoholes azucarados.
Punto
4
Las microcápsulas según alguno de los Puntos 1 a
2, en el que a las superficies de las células de levadura se
adhieren, por lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo
constituido por lactosa, maltitosa, trehalosa, palatinit y
dextrina.
Punto
5
Las microcápsulas según cualquiera de los Puntos
1 a 4, en las que la sustancia extraña encapsulada en las células
de levadura en una sustancia hidrófoba.
Punto
6
Las microcápsulas según cualquiera de los Puntos
1 a 5, en las que la sustancia extraña encapsulada en las células
de levadura, es por lo menos un elemento seleccionado de entre el
grupo constituido por aromatizantes, colorantes, amargantes,
acidulantes, aderezos, especias, edulcorantes, grasas/lípidos,
ácidos grasos, aminoácidos, enzimas, vitaminas, extractos animales
y vegetales, y sustancias bioactivas.
Punto
7
Las microcápsulas según cualquiera de los Puntos
1 a 6, que se utilizan como un constituyente en alimentos,
productos farmacéuticos, productos semifarmacéuticos, cosméticos o
piensos (animales).
Punto
8
Las microcápsulas según cualquiera de los Puntos
1 a 7, en las que las superficies de las células de levadura que
encapsulan la sustancia extraña, están cubiertas con, por lo menos,
un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por
sacáridos y proteínas.
Estas microcápsulas incluyen las formas de
realización siguientes:
- (a)
- Las microcápsulas según cualquiera de los Puntos 1 a 8 que se utilizan como un aromatizante, en las que la sustancia extraña encapsulada en las células de levadura, es por lo menos un aromatizante.
- (b)
- Las microcápsulas según cualquiera de los Puntos 1 a 8 que se utilizan como un edulcorante, en las que la sustancia extraña encapsulada en las células de levadura, es por lo menos un edulcorante.
- (c)
- Las microcápsulas según cualquiera de los Puntos 1 a 8 que se utilizan como un colorante, en las que la sustancia extraña encapsulada en las células de levadura, es por lo menos un colorante.
- (d)
- Las microcápsulas según cualquiera de los Puntos 1 a 8 que se utilizan como un aderezo, en las que la sustancia extraña encapsulada en las células de levadura, es por lo menos un aderezo.
- (e)
- Las microcápsulas según cualquiera de los Puntos 1 a 8 que se utilizan como un acidulante, en las que la sustancia extraña encapsulada en las células de levadura, es por lo menos un acidulante.
- (f)
- Las microcápsulas según cualquiera de los Puntos 1 a 8 que se utilizan como un amargante en las que la sustancia extraña encapsulada en las células de levadura, es por lo menos un amargante.
- (g)
- Las microcápsulas según cualquiera de los Puntos 1 a 8 que se utilizan como una especie, en las que la sustancia extraña encapsulada en las células de levadura, es por lo menos una especie.
La presente invención proporciona también un
procedimiento para preparar las microcápsulas mencionadas
anteriormente que incluye a continuación los Puntos 9 a 10.
Punto
9
Procedimiento de preparación de microcápsulas,
que comprende las etapas que consisten en:
- (1)
- encapsulación de una sustancia extraña en el interior de células de levadura, y
- (2)
- adhesión sobre la superficie de las células de levadura así obtenidas en el Punto (1) de, por lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por sacáridos y proteínas.
Punto
10
El procedimiento de preparación de microcápsulas
según el Punto 9, en el que la etapa (1) es una etapa de
encapsulamiento de una sustancia extraña en el interior de células
de levadura, cuyos componentes endógenos se han eliminado.
Estos procedimientos de preparación de
microcápsulas incluyen las formas de realización siguientes:
- (a)
- El procedimiento de preparación de microcápsulas según el Punto 9 ó 10, en el que el sacárido que se adhiere a las superficies de las células de levadura, es por lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por monosacáridos, disacáridos, trisacáridos, tetrasacáridos, oligosacáridos, polisacáridos y alcoholes azucarados.
- (b)
- El procedimiento de preparación de microcápsulas según el Punto 9 ó 10, en el que a las superficies de las células de levadura se adhiere, por lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por lactosa, maltitosa, trehalosa, palatinit, y dextrina.
- (c)
- El procedimiento de preparación de microcápsulas, según los Puntos 9 ó 10, en el que la sustancia extraña encapsulada en las células de levadura es una sustancia hidrófoba.
- (d)
- El procedimiento de preparación de microcápsulas según el Punto 9 ó 10, en el que la sustancia extraña encapsulada en las células de levadura, es, por lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por aromatizantes, colorantes, amargantes, acidulantes, aderezos, especias, edulcorantes, grasas/lípidos, ácidos grasos, aminoácidos, enzimas, vitaminas, extractos animales y vegetales, y sustancias bioactivas.
- (e)
- El procedimiento de preparación de microcápsulas según el Punto 9 ó 10, en el que la etapa (2) es una etapa de recubrimiento de la superficie de la célula de levadura con, por lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por sacáridos y proteínas.
La presente invención proporciona además una
composición oral que contiene microcápsulas según cualquiera de los
Procedimientos 1 a 8. Esta composición oral puede constituir una
composición comestible tal como un alimento, producto farmacéutico
oral, producto semifarmacéutico, etc., o una composición para la
cavidad oral, tal como un dentífrico, etc. La composición oral es
preferentemente un alimento. Las composiciones orales apropiadas en
la presente memoria incluyen, pero no se limitan a, gomas tales como
chicles, golosinas blandas como gomas y turrón, y otros elementos
que se mantienen durante un tiempo prolongado en la boca tal como
masticatorios, etc.
Punto
11
Una composición oral que contiene microcápsulas
de cualquiera de los Puntos 1 a 8.
Punto
12
La composición oral según el Punto 11, que
contiene microcápsulas de cualquiera de los Puntos 1 a 8, como, por
lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por
aromatizantes, colorantes, aderezos, acidulantes, amargantes,
especias y edulcorantes.
\global\parskip0.930000\baselineskip
Punto
13
La composición oral según el Punto 11 ó 12, que
se mantiene o se mastica en la boca durante un tiempo
prolongado.
Punto
14
La composición oral según cualquiera de los
Puntos 11 a 13, en la que la composición oral es un chicle.
La presente invención proporciona también un
procedimiento para controlar la liberación de sustancias extrañas
encapsuladas en las microcápsulas, incluyendo los Puntos 15 a
19.
Punto
15
Un procedimiento para controlar la velocidad,
intensidad, o persistencia de sustancias extrañas liberadas a
partir de microcápsulas de las sustancias extrañas encapsuladas en
células de levadura, que comprende la etapa de adhesión en la
superficie de estas microcápsulas de, por lo menos, un elemento
seleccionado partir del grupo formado por sacáridos y
proteínas.
Punto
16
El procedimiento según el Punto 15, que es un
procedimiento para controlar la velocidad, intensidad o persistencia
de la expresión de aroma/sabor a partir de las microcápsulas de un
componente aroma/sabor encapsulado en las células del
microorganismo.
Punto
17
El procedimiento según el Punto 16, en el que
las microcápsulas del componente aroma/sabor encapsulado en las
células de levadura, se preparan encapsulando un componente
aroma/sabor en células de levadura, cuyos componentes
intracelulares endógenos se han eliminado.
Punto
18
El procedimiento según los Puntos 16 ó 17, que
es un procedimiento para aumentar la velocidad, intensidad o
persistencia de la expresión del aroma o sabor a partir de
microcápsulas.
Punto
19
El procedimiento según cualquiera de los Puntos
16 a 18, que comprende la etapa de recubrimiento de las superficies
de las células de levadura, con, por lo menos, un elemento
seleccionado de entre el grupo constituido por sacáridos y
proteínas.
Estos procedimientos de control incluyen las
siguientes formas de realización:
- (a)
- El procedimiento según cualquiera de los Puntos 15 a 19, en el que los sacáridos adheridos a las superficies de las células de levadura, son, por lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por monosacáridos, disacáridos, trisacáridos, tetrasacáridos, oligosacáridos, polisacáridos y alcoholes azucarados.
- (b)
- El procedimiento según cualquiera de los Puntos 15 a 19, en el que a las superficies de las células de levadura, se adhieren, por lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por lactosa, maltitosa, trehalosa, palatinit y dextrina.
- (c)
- El procedimiento según cualquiera de los Puntos 15 a 19, en el que la sustancia extraña encapsulada en las células de levadura, es una sustancia hidrófoba.
- (d)
- El procedimiento según cualquiera de los Puntos 15 a 19, en el que la sustancia extraña encapsulada en las células de levadura, es, por lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por aromatizantes, colorantes, amargantes, acidulantes, aderezos, especias, edulcorantes, grasas/lípidos, ácidos grasos, aminoácidos, enzimas, vitaminas, extractos animales y vegetales, y sustancias bioactivas.
La presente invención proporciona asimismo un
procedimiento para controlar la velocidad, intensidad y persistencia
de la expresión de un componente en una composición oral que
incluye a continuación los Puntos 20 a 24:
Punto
20
Un procedimiento para controlar la velocidad,
intensidad y persistencia de la expresión de una sustancia extraña
en una composición oral, incluyendo composiciones orales que
contienen microcápsulas de sustancias extrañas encapsuladas en el
interior de células de levadura, sobre cuyas superficies se
adhieren, por lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo
constituido por sacáridos y proteínas.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Punto
21
Un procedimiento para controlar la velocidad,
intensidad y persistencia de la expresión de aroma o sabor en una
composición oral, incluyendo composiciones orales que contienen
microcápsulas de componentes aroma/sabor encapsulados en el
interior de células de levadura, sobre cuyas superficies se
adhieren, por lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo
constituido por sacáridos y proteínas.
Punto
22
El procedimiento según el Punto 20 ó 21, en el
que las células de levadura son las que han sido tratadas
previamente para eliminar los componentes intracelulares
endógenos.
Punto
23
El procedimiento según cualquiera de los Puntos
20 a 22, que aumenta la velocidad, intensidad o persistencia de la
expresión de una sustancia extraña, en particular del aroma o sabor,
en una composición oral.
Punto
24
El procedimiento según cualquiera de los Puntos
20 a 23, que utiliza células de levadura cuyas superficies están
cubiertas con, por lo menos, un elemento, seleccionado de entre el
grupo constituido por sacáridos y proteínas como microcápsulas.
Estos procedimientos incluyen las siguientes
formas de realización:
- (a)
- El procedimiento según cualquiera de los Puntos 20 a 24, en el que los sacáridos adheridos a la superficie de la célula de levadura, son, por lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por monosacáridos, disacáridos, trisacáridos, tetrasacáridos, oligosacáridos, polisacáridos y alcoholes azucarados.
- (b)
- El procedimiento según cualquiera de los Puntos 20 a 24, en el que a la superficie de la célula de levadura, se adhiere, por lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por lactosa, maltitosa, trehalosa, palatinit y dextrina.
- (c)
- El procedimiento según cualquiera de los Puntos 20 a 24, en el que la sustancia extraña encapsulada en la célula de levadura, en particular un componente de aroma/sabor, es una sustancia hidrófoba.
- (d)
- El procedimiento según el Punto 20, en el que la sustancia extraña encapsulada en las células de levadura, es, por lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por aromatizantes, colorantes, amargantes, acidulantes, aderezos, especias, edulcorantes, grasas/lípidos, ácidos grasos, aminoácidos, enzimas, vitaminas, extractos animales y vegetales, y sustancias bioactivas.
- (e)
- El procedimiento según cualquiera de los Puntos 21 a 24, en el que los componentes aroma/sabor encapsulados en las células de levadura, son, por lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por aromatizantes, colorantes, amargantes, acidulantes, aderezos, especias, edulcorantes, grasas/lípidos, ácidos grasos, aminoácidos, enzimas, vitaminas, o extractos animales o vegetales.
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención incluye además los
siguientes Puntos:
Punto
25
Utilización de microcápsulas que poseen
sustancias extrañas encapsuladas en el interior de células de
levadura sobre cuyas superficies se adhieren, por lo menos, un
elemento seleccionado de entre el grupo constituido por sacáridos y
proteínas tales como aromatizantes, edulcorantes, colorantes,
aderezos, amargantes, especias o acidulantes.
Punto
26
Utilización de microcápsulas que poseen
sustancias extrañas encapsuladas en el interior de células de
levadura, sobre cuyas superficies se adhieren, por lo menos, un
elemento seleccionado de entre el grupo constituido por sacáridos,
para la preparación de una composición oral.
Punto
27
Utilización de microcápsulas que poseen
componentes aroma/sabor encapsulados en el interior de células de
levadura, sobre cuyas superficies se adhieren, por lo menos, un
elemento seleccionado de entre el grupo constituido por sacáridos y
proteínas, para la preparación de una composición oral con una
mejora en la velocidad, intensidad y persistencia de la expresión
del aroma o del sabor.
Punto
28
Utilización de microcápsulas que poseen
componentes aroma/sabor encapsulados en el interior de células de
levadura, sobre cuyas superficies se adhieren, por lo menos, un
elemento seleccionado de entre el grupo constituido por sacáridos y
proteínas, para aumentar la velocidad, intensidad y persistencia de
la expresión del aroma o del aromatizante en una composición
oral.
\vskip1.000000\baselineskip
Las microcápsulas según la presente invención
son microcápsulas de sustancias extrañas encapsuladas dentro de
células de microorganismos, sobre cuyas superficies se adhiere, por
lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo constituido
por sacáridos y proteínas.
Los microorganismos que se utilizan en la
presente invención para encapsular sustancias extrañas son
levaduras. Las levaduras que pueden utilizarse incluyen levaduras
que pueden ingerirse apropiadamente por el organismo humano, tales
como levaduras de cerveza, levaduras del pan, levaduras de tórula,
etc. Los ejemplos específicos de levaduras incluyen, por ejemplo,
levaduras que pertenecen a Saccharomyces, tales como
Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces rouxii, Saccharomyces
carlsbergensis, etc y levaduras de Candida, tales como
Candida utilis, Candida tropicalis, Candida lipolytica, Candida
flaveri, etc. Dichas células de levadura pueden utilizarse de
forma única, o en combinación de 2 o más. Estas células de levadura
no se restringen de ninguna forma en particular, pero su tamaño de
partícula es del orden, preferentemente, de entre 1 \mum y 20
\mum.
Estas células de levadura pueden utilizarse en
cualquier estado para encapsular las sustancias extrañas, como
células de levadura viables o muertas, en un estado seco o húmedo, y
con o sin su componente intracelular endógeno eliminado mediante
elución. Las células de levadura con su componente intracelular
endógeno eliminado (incluyendo la eliminación mediante elución) se
utilizan previamente de manera preferida. Los componentes
intracelulares endógenos en la presente memoria incluyen
aminoácidos, péptidos, proteínas (incluyendo enzimas), azúcares,
ácidos nucleicos, grasas/lípidos, etc. La elución de los componentes
intracelulares endógenos permite en la presente memoria incluir más
sustancias extrañas en el interior de las células de levadura,
mientras elimina significativamente olores y aromatizantes
indeseables emitidos por los componentes intracelulares endógenos,
previniendo también cualquier posible descomposición (debida a) la
desnaturalización de las sustancias extrañas, propiciada por el
componente intracelular endógeno.
El procedimiento para eluir los componentes
intracelulares (contenido endógeno) no está particularmente
restringido, y puede incluir procedimientos que se conocen en la
técnica, o procedimientos según desarrollos futuros. Los
procedimientos convencionales incluyen, por ejemplo, métodos de
tratamiento físico que implican tratamiento térmico, tratamientos
de PH y rotura de la pared celular; procedimientos químicos que
implican la adición de agentes que promueven la elución;
procedimientos enzimáticos que utilizan enzimas para disolver e
componente intracelular, o enzimas para la lisis de la pared
celular, y combinaciones de estos procedimientos (solicitud
publicada no examinada de patente japonesa nº
H4-4033).
El tratamiento térmico en la presente memoria
puede llevarse a cabo calentando una suspensión de las células de
levadura diana, habitualmente a una temperatura de entre 30ºC y
100ºC, preferentemente entre 30 y 60ºC, mientras se agita entre
varios minutos y varias horas. Los agentes promotores de la elución
pueden utilizarse simultáneamente para aumentar la eficiencia de la
elución del componente intracelular. Agentes promotores apropiados
de la elución, incluyen, por ejemplo, disolventes orgánicos polares,
tales como etanol, propanol y otros alcoholes inferiores, acetato
de etilo, acetona, y otros disolventes orgánicos polares; bases
inorgánicas, azúcares, sales de amonio cuaternario, varios tipos de
fungicidas, bactericidas, germicidas y bases tales como hidróxido
sódico, hidróxido potásico, etc. Un ejemplo específico de dicho
procedimiento implica la adición de un disolvente tal como la
acetona o similar, a una dispersión acuosa de la levadura, y su
agitación durante alrededor de 24 horas, a una temperatura de
alrededor de 40ºC.
En los tratamientos de rotura de la pared
celular, esta rotura de las paredes celulares puede llevarse a cabo
utilizando ultrasonidos, un molino, etc. Un ejemplo específico de
dicho procedimiento implica el tratamiento de una dispersión acuosa
de la levadura, durante 10 minutos, en un molino de perlas.
Los procedimientos enzimáticos que utilizan
enzimas para disolver los componentes intracelulares, pueden
implicar la utilización de enzimas autolíticas a partir de las
mismas levaduras (Babayan T.L. y Bezrukov, M.G., 1 Acta Biotechnol.
0,5, 129-136 (1985)), y los procedimientos de
tratamiento enzimático con proteasas solas, o proteasas combinadas
con, por lo menos, una que se seleccione a partir de la nucleasa,
\beta-glucanasa, esterasa y lipasa. Un modo
concreto para implementar dicho procedimiento, puede implicar, por
ejemplo, la incubación durante 1 a 48 horas, a una temperatura de
entre 30 a 60ºC, una dispersión acuosa de la levadura que posee las
enzimas autolíticas, o una dispersión acuosa de un microorganismo al
cual se han añadido las enzimas mencionadas anteriormente.
Los tratamientos enzimáticos para la lisis de la
pared celular implican el tratamiento de las células de levadura,
utilizando, por ejemplo, por lo menos, un tipo de enzima tal como la
glucanasa (\beta-1,3-glucanasa),
mananasa, quitinasa, etc., que descompone los constituyentes de la
pared celular de las levaduras (polisacáridos tales como glucano y
manano, complejos de estos polisacáridos y proteínas, quitina,
etc.). Una forma concreta de implementar dicho tratamiento
enzimático para la lisis de la pared celular, puede implicar, por
ejemplo, la incubación de una dispersión acuosa de la levadura, a
la cual se añadieron las enzimas anteriormente mencionadas durante
entre varios minutos y aproximadamente 10 horas, a una temperatura
de entre 30 y 60ºC, y ordinariamente a un pH de entre 4 a 9.
El material así obtenido, puede centrifugarse
posteriormente, descartando el sobrenadante, mientras que el
residuo (celular) se lava a continuación, se calienta y/o ajustando
el pH si es necesario, para obtener células de levadura (variantes)
con sus componentes intracelulares eliminados.
En las células de levadura con sus componentes
intracelulares endógenos eluidos, que se utilizan en la presente
invención, el procedimiento de elución y el grado de ésta no se
limitan a los ejemplos anteriormente mencionados, sino que
significa la inclusión de un amplio conjunto de otros
procedimientos, en los que los constituyentes intracelulares
también son eliminados mediante elución. Las células de levadura con
sus componentes celulares endógenos eluidos, incluyen
preferentemente en la presente memoria células de levadura en las
que la proporción de peso seco absoluto del componente eluido (tasa
de elución) con respecto al 100% en peso del peso seco absoluto de
las células de levadura no tratadas, oscila desde el 10 al 80%, y
más preferentemente desde el 30% al 70%.
Los productos comercializados pueden utilizarse
convenientemente como las células de levadura con sus componentes
intracelulares endógenos (componentes endógenos) eliminados. Dichos
productos incluyen, a título de ejemplo no limitativo, paredes
celulares de levaduras comercializadas a partir de Oriental Yeast,
Co., Ltd.; Tanabe Seiyaku Co. Ltd.; Asahi Food & Healthcare
Ltd.; Kirin Brewery Co. Ltd., etc. (todas empresas japonesas).
Para encapsular tanta cantidad como sea posible
de sustancias extrañas en el interior de estas células de levadura
(residuos celulares) que tengan sus componentes intracelulares
endógenos eliminados, pueden realizarse otros tratamientos
ulteriores que sean necesarios, además de los que se han mencionado
anteriormente, por ejemplo, tratamientos ácidos (solicitud
publicada no examinada de patente japonesa nº
H8-243378), tratamientos alcalinos (solicitud
publicada examinada de patente japonesa nº
H7-32871), tratamientos alcohólicos (solicitud
publicada examinada de patente japonesa nº
H8-29246), etc. Dichos procedimientos mencionados
que se conocen en la técnica, no están limitados, estando sólo
limitados por la física y química permisibles de las paredes
celulares de levaduras que actúan como películas
microcapsulares.
En un tratamiento ácido, específicamente, los
residuos celulares obtenidos mediante tratamiento enzimático o
mediante otros procedimientos anteriores, se suspenden, por ejemplo,
en una solución ácida acuosa (pH preferido 2 o menor) de un ácido
inorgánico tal como el ácido clorhídrico, ácido fosfórico o ácido
sulfúrico, o de un ácido orgánico tal como ácido láctico, ácido
cítrico, ácido acético o ácido ascórbico, calentando entonces
(preferentemente a una temperatura de entre 50 a 100ºC), mientras se
agita durante cierto tiempo.
Un tratamiento alcalino, puede llevarse a cabo,
por ejemplo, agitando los residuos celulares obtenidos mediante
tratamiento enzimático o mediante otros procedimientos tal como los
mencionados anteriormente, durante varios minutos a varias horas,
en una solución acuosa alcalina que tenga preferentemente un pH de 9
a 13, y más preferentemente entre 10 y 12. La temperatura de esta
solución acuosa no está limitada de ninguna forma particular, pero
oscila ordinariamente entre 20 y 100ºC, preferentemente de 30 a
100ºC, y todavía más preferentemente entre 50 y 80ºC. Los
compuestos que se utilizan para preparar la solución acuosa alcalina
incluyen, por ejemplo, soluciones acuosas de sales inorgánicas
tales como hidróxido sódico, hidróxido cálcico, hidróxido potásico,
silicato sódico, etc.; y componentes orgánicos de nitrógeno, tales
como amoníaco, monoetanoldiamina, etilendiamina, dietilentriamina,
etc.
En un tratamiento alcohólico, por ejemplo, los
alcoholes tales como alcoholes monohídricos, etc., o hidroalcoholes,
pueden añadirse a los residuos celulares obtenidos mediante
tratamiento enzimático o mediante otros procedimientos tales como
los anteriormente mencionados, agitando durante varios minutos a
varias horas. La temperatura de la solución de tratamiento no está
particularmente limitada, siempre que el alcohol no se evapore, y
está, ordinariamente, comprendida entre 20 y 80ºC. La temperatura,
en la presente memoria, está, preferentemente, comprendida entre 30
y 60ºC. Procedimientos más preferidos implican, por ejemplo,
agitación, mientras se calienta de 40 a 50ºC. Los alcoholes
monohídricos incluyen, por ejemplo, alcoholes inferiores que tienen
de 1 a 6 átomos de carbono tales como metanol, etanol, propanol,
alcohol isopropílico, butanol, hexanol, etc., preferentemente,
etanol.
La sustancia extraña encapsulada en la célula de
levadura es líquida. Ejemplos suyos incluyen, pero no se limitan a
un líquido hidrófilo, hidrófobo o anfifílico. La sustancia extraña
es preferentemente una sustancia hidrófoba. Una sustancia extraña
en la presente memoria se refiere a una sustancia que se añade
artificialmente a la célula de levadura para encapsularse en ella.
Esto incluye, por ejemplo, sustancias que no se derivan de
componentes de la célula de levadura (componentes endógenos), así
como sustancias derivadas de las sustancias de levaduras extraídas
a partir de éstas, y entonces, concentradas, mezcladas con otros
componentes o sometidas a otros tipos de tratamiento artificial.
Volviendo a situar estas sustancias en la célula, esto tiene valor
en la presente memoria como un tratamiento artificial; estas
sustancias se consideran, entonces, como sustancias extrañas según
la presente invención.
Los ejemplos de las primeras incluyen, por
ejemplo, aditivos alimentarios, composiciones alimenticias,
composiciones farmacéuticas, aditivos farmacéuticos, composiciones
semifarmacéuticas, composiciones cosméticas, etc. Los ejemplos de
las últimas incluyen, por ejemplo, extractos microbianos tales como
extractos de levaduras, o sustancias bioactivas derivadas de (o
producidas por) células de microorganismos, tales como antibióticos
o fármacos inmunosupresores, etc. En la presente memoria se
encuentran composiciones comestibles tales como aditivos
alimentarios, composiciones alimenticias (que incluyen materiales
alimentarios en bruto), composiciones farmacéuticas orales, y
aditivos farmacéuticos orales.
Los ejemplos específicos de sustancias extrañas
incluyen, por ejemplo, aromatizantes, (incluyendo componentes de
éstos), colorantes, (incluyendo colorantes, pigmentos y pastas
colorantes), edulcorantes (incluyendo sacáridos), acidulantes,
aderezos, amargantes, especias, grasas/lípidos, ácidos grasos,
aminoácidos, enzimas, vitaminas, extractos animales o vegetales,
sustancias bioactivas, etc. Los preferidos en la presente memoria
son los componentes que pueden dar lugar a aromas/sabores,
(componentes aroma/sabor) tales como aromatizantes, edulcorantes,
acidulantes, aderezos, amargantes, especias, grasas/lípidos,
aminoácidos, vitaminas, o extractos animales o vegetales, etc.;
colorantes, vitaminas, sustancias bioactivas, etc. Todavía, en la
presente memoria son más preferidos los componentes
aromatizante/sabor, en particular, aromatizantes, acidulantes,
aderezos, amargantes y especias.
Estas sustancias extrañas pueden ser sustancias
extrañas (ingredientes activos) por sí mismas, con su carácter
intrínseco hidrófobo, hidrófilo o anfotérico, preferentemente
hidrófobo, o preparaciones en las que las sustancias extrañas se
calientan o mezclan con otras sustancias tales como disolventes,
preferentemente preparaciones hidrófobas.
Los aromatizantes incluyen en la presente
memoria aromatizantes ordinarios ampliamente utilizados en los
alimentos, industrias farmacéuticas y cosméticas, preferentemente
aromatizantes apropiados para ser utilizados en productos
comestibles, tales como alimentos, etc. Los ejemplos específicos
incluyen, por ejemplo, aromatizantes afrutados tales como los de
naranja, limón, lima, toronja, mandarina, tangerina, etc.; otros
aromatizantes afrutados, como manzana, plátano, cereza, uva, melón,
melocotón, piña, ciruela, frambuesa, fresa, etc.; aromatizantes de
granos (semillas), tales como vainilla, café, coco, chocolate, etc.;
aromatizantes de menta tales como menta piperita, menta romana,
etc.; aromatizantes de especias tales como pimienta inglesa, canela,
nuez moscada, etc., aromatizantes de almendras, cacahuetes, nueces,
etc.; aromatizantes de productos acuáticos como centollos, gambas,
pescado, marisco, etc.; y varios tipos de otros aromatizantes de
vegetales, cereales, algas, etc. Los componentes de aromatizantes
incluyen, por ejemplo, mentol, dimentol, mentona, vainilina, etil
vainilina, ácido cinnámico, piperonal, d-borneol,
maltol, etil maltol, alcanfor, antralinato de metilo, cinnamato de
metilo, alcohol cinnámico,
metil-N-metil antranilato, metil
\beta-naftil cetona, limoneno, linalool,
isotiocianato de alilo, etc. Estos pueden utilizarse aislada o
combinadamente de 2 o más.
Los colores naturales y los sintéticos pueden
utilizarse como colorantes. En la presente memoria, los preferidos
son los colorantes apropiados para utilizarse en productos
comestibles tales como alimentos, etc. Los ejemplos de colores
naturales incluyen colores basados en carotenoides, tales como
colores de carotenoides, color de pimentón, color de achiote, color
anaranjado, color de tomate, color de caléndula, etc.; colores
antociánicos tales como color púrpura de boniato; color rojo de
col, color de baya, color de zumo de uva, color de piel de uva,
color de maiz rojo, color de rábano rojo, color de perilla, color
rojo de granos de arroz, color de arándano rojo, color de grosella,
color de mirtilo, color salmón de baya, color bellota, color de
fresa, color cerezo oscuro, color cereza, color de hibisco, color
de ráspano, color de grosella negra, color de mora, color arándano,
color ciruela, color mirtilo, color frambuesa, color morera, color
de ñame morado, color frambuesa, color de grosella roja, color de
frambuesa de Logan, colores basados en quinoides, tales como color
cochinilla, color Shikon, color alizarina, color Lac, etc.; colores
basados en flavonoides tales como color cacao, color kooroo, color
kaoliang, color rojo de madera de sándalo, color cebolla, color
tamarindo, color caqui, color de semilla de algarrobo, color
regaliz, color de madera de Sappan, color cacahuete, color de nuez
de pacana, color rojo de Carthamus, color amarillo de Carthamus,
etc.; colores basados en la azafilona, tales como color Monascus,
color rojo Monascus, etc.; y otros colores como el color amarillo
Monascus, caramelo, color turménico, color Kusagi, color azul de
Gardenia, color amarillo Gardenia, color rojo Gardenia, color de
clorofilina, clorofila, color azul de espirulina, etc. Colores
sintéticos de alquitrán de hulla incluyen, por ejemplo, Rojo
alimentario nº 2 (Amaranto), Rojo alimentario nº 3 (Eritrosina),
Rojo alimentario nº 40 (Rojo Allura AC), Rojo Alimentario nº 102
(Nuevo Coccine), Rojo alimentario nº 104 (Floxina B), Rojo
Alimentario nº 105 (Rosa de Bengala), Rojo Alimentario nº 106 (Rojo
Ácido), Amarillo Alimentario nº 4 (Tartrazina), Amarillo
Alimentario nº 5 (Sunset Amarillo FCF), Azul Alimentario nº 1, (Azul
Brillante FCF), Azul Alimentario nº 2 (Indigo carmín), Verde
Alimentario nº 3 (Verde rápido FCF), etc. Los derivados del color
natural incluyen, por ejemplo, norbixinato sódico, norbixinato
potásico, clorofil cúprico, clorofilin sódico cúprico y clorofilin
sódico férrico, etc.; los colores naturales sintéticos incluyen, por
ejemplo, \beta-caroteno, luteína, astaxantina,
cantaxantina, riboflavina, acetato de riboflavina, éster sódico de
fosfato de 5'-riboflavina, etc. Los preferidos en
la presente memoria son el \beta-caroteno, colores
de carotenoides, color pimentón, color achiote, color alizarina,
color anaranjado, colores de Gardenia (color azul de Gardenia, color
amarillo de Gardenia, color rojo de Gardenia), clorofila, color
Shikon, Rojo Alimentario nº 3, (Eritrosina), Amarillo Alimentario nº
4 (Tartrazina), color cebolla, color tomate, color caléndula, color
luteína, etc.
Los edulcorantes (incluyendo los sacáridos)
incluyen en la presente memoria, por ejemplo, monosacáridos,
disacáridos, oligosacáridos, alcoholes azucarados, y edulcorantes
de alta intensidad. Los ejemplos específicos suyos incluyen, por
ejemplo, monosacáridos tales como arabinosa, galactosa, xilosa,
glucosa, sorbosa, fructosa, ramnosa, ribosa, azúcares líquidos
isomerizados (jarabe de alta intensidad de fructosa de maíz,
N-acetil glucosamina, etc.; disacáridos tales como
isotrehalosa, sacarosa, trehalulosa, trehalosa, neotrehalosa,
palatinosa, maltosa, melibiosa, lactulosa, lactosa, etc.;
oligosacáridos tales como \alpha-ciclodextrina,
\beta-ciclodextrina, isomalto oligosacáridos
(isomaltosa, isomaltotriosa, panosa, etc.)
oligo-N-acetilglucosamina,
galactosil sacarosa, galactosil lactosa, galactopiranosil
(\beta1-3) galactopiranosil
(\beta1-4) glucopiranosa, galactopiranosil
(\beta1-3) glucopiranosa, galactopiranosil
(\beta1-6) galactopiranosil
(\beta1-4) glucopiranosa, galactopiranosil
(\beta1-6) glucopiranosa, xilooligosacáridos
(xilotriosa, xilobiosa, etc.);gentiotetraosa, etc.) Staquiosa,
oligosacáridos theander, nigero-oligosacáridos
(nigerosa, etc.), palatinosa oligosacáridos, jarabes de palatinosa,
fucosa, fructooligosacáridos (questosa, nistosa, etc.)
fructofuranosil nistosa, polidextrosa, maltosil
\beta-ciclodextrina, maltooligosacáridos
(maltotriosa, tetraosa, pentaosa, hexaosa, heptaosa, etc.),
rafinosa, jarabes de glicosilgalactosa, (azúcares de acoplamiento),
oligosacáridos de soja, azúcares de inversión, jarabes de glucosa,
etc.; alcoholes azucarados tales como isomaltitol, eritritol,
xilitol, glicerol, sorbitol, palatinil, maltitol, maltoteraitol,
maltotriitol, manitol, lactitol,
isomalto-oligosacáridos reducidos,
xilooligosacáridos reducidos, gentioligosacáridos reducidos, jarabe
de maltosa reducida, jarabes de glucosa reducida, etc.; y
edulcorantes de alta intensidad tales como estevia tratada con
\alpha-glucosiltransferasa, aspartano, acesulfamo
potásico, alitamo, extracto de licor (glicirricina), glicirrizato
triamónico, glicirrizato tripotásico, glicirrizato trisódico,
glicirrizato diamónico, glicirrizato dipotásico, glicirrizato
disódico, curculina, sacarina, sacarina sódica, ciclamato,
sucralosa, extracto de estevia, polvo de estevia, dulcina, taumatina
(somatina), extracto de tenrioca (té de mora chino), extracto de
serendipia, neotamo, neohesperidina dihidrochalcona, estevia tratada
con fructosiltransferasa, extracto de licor Brasileño, extracto del
fruto milagro, extracto del fruto luohan, licor tratado
enzimáticamente, licor descompuesto enzimáticamente, etc., y otros
edulcorantes tales como miel, jugos de frutas, concentrados de
jugos de frutas, etc.
Las grasas/lípidos incluyen en la presente
memoria, por ejemplo, aceite de soja, aceite de maíz, aceite de
arroz, aceite de girasol, aceite de semillas de algodón, aceite de
oliva, aceite de castor, aceite de pescado, manteca, sebo de vaca,
sebo de oveja, grasa de caballo, lecitina, etc.
Los ácidos grasos incluyen, por ejemplo, el
ácido docosahexaenoico, ácido eicosapentaenoico, ácido linoleico,
ácido linolénico, ácido palmítico, ácido oleico, etc.
Las vitaminas incluyen, por ejemplo, vitamina A,
vitaminas del grupo B (vitamina B_{1}, B_{2}, B_{6},
B_{12}, B_{13}, B_{c}, B_{t}, etc.), vitamina C, vitamina D,
vitamina E, vitamina H, vitamina K, vitamina M, vitamina P,
vitamina U, etc., y sus derivados.
Los extractos animales o vegetales incluyen en
la presente memoria extractos ordinariamente animales o vegetales
muy utilizados en las industrias alimenticias, farmacéuticas y
cosméticas, preferentemente, los apropiados para la utilización en
productos comestibles tales alimentos, etc. Los ejemplos incluyen,
por ejemplo, extractos vegetales tales como extracto de trigo,
extracto de vainilla, extracto de quillaja, extracto de aloe vera,
extracto de amacha, extracto de germen de trigo, extracto de udo,
extracto de goma benzoína, extracto de Aloe arborescens, extracto
de konjac, extracto de hojas de eucalipto, extracto de quina,
extracto neutralizador de naranja, extracto del árbol Amur del
corcho, extracto de Genciana, extracto de semilla de uva, extracto
de té, etc.; y extractos animales tales como extracto de ternera,
extracto de pollo, extracto de cerdo, extracto de centollo,
extracto de bonito, extracto de ostra, gelatina, colágeno, extracto
de levadura, etc. Los extractos animales o vegetales incluyen en la
presente memoria extractos de animales o vegetales procesados tales
como extractos de escamas de bonito rasuradas y secas, etc., y
extractos animales o vegetales que se someten a ulterior
procesamiento, tales como hidrolizados de gelatina.
Las sustancias bioactivas incluyen en la
presente memoria sustancias ordinariamente bioactivas son muy
utilizadas en las industrias alimenticias, farmacéuticas y
cosméticas, preferentemente las que son apropiadas para la
utilización en productos comestibles tales como alimentos,
medicamentos por vía oral, etc. Sus ejemplos incluyen, por ejemplo,
etenzamida, salicilato sódico, acetoaminofeno, ibuprofeno,
fenacetina, eugenol, antipirina, catequinas, saponinas, condroitín
sulfato, fosfolípidos tales como ceramidas, etc.
Las especias incluyen en la presente memoria
especias que ordinariamente se utilizan ampliamente en las
industrias alimenticias, farmacéuticas y cosméticas. Las que se
prefieren en la presente memoria son las que son apropiadas para la
utilización en productos comestibles, tales como alimentos,
medicamentos por vía oral, etc. Ejemplos suyos incluyen, pero no se
limitan a ajo, cebolla, hierba Luisa, perifollo, estragón, laurel,
romero, albahaca, pimienta chili, tomillo, canela, anacardo,
orégano, cúrcuma, diente de ajo, pimienta, coriandro, etc.
Los componentes en los grupos mencionados
anteriormente que pertenecen a la misma categoría (es decir, grupos
de colorantes, edulcorantes, etc.), pueden utilizarse de forma única
o en combinación de 2 o más.
Cada uno de los grupos de sustancias extrañas
mencionados anteriormente pueden utilizarse asimismo de forma única
o en combinación de 2 o más. A las sustancias extrañas anteriormente
mencionadas se le pueden añadir también dispersantes,
antioxidantes, conservantes, que mejoran el aromatizante,
emulsificantes, agentes de refuerzo, etc. Por ejemplo, con las
sustancias extrañas encapsuladas en las células de levadura, puede
utilizarse simultáneamente, por lo menos, un antioxidante
seleccionado de entre el grupo constituido por tocoferol extraído,
dl-\alpha-tocoferol,
d-\alpha-tocoferol,
dl-\gamma-tocoferol, tocoferol
mezclado, extracto de romero, extracto de arrayán japonés, extracto
de rutina, extracto de té y tocotrienol, en particular componentes
aromáticos/aromatizantes, preferentemente aromatizantes.
Las sustancias extrañas mencionadas
anteriormente pueden encapsularse en el interior de las células de
levadura mencionadas anteriormente, mezclando las células de
levadura (cuerpos celulares) con las sustancias extrañas.
Específicamente, las sustancias extrañas pueden encapsularse en el
interior de las células de levadura añadiendo la sustancia extraña
a una dispersión líquida de las células de levadura (cuerpos
celulares), ajustando el pH y la temperatura a los valores
deseados, y agitando tanto como sea necesario durante un período de
tiempo predeterminado. El pH no está en la presente memoria
particularmente limitado y puede seleccionarse apropiadamente de
forma ordinaria dentro del intervalo de 5 a 9, y preferentemente
entre 6 y 8. Los valores térmicos no están particularmente
limitados, y pueden seleccionarse apropiadamente, de forma que
ordinariamente estén comprendidos entre 40 y 80ºC, y
preferentemente, entre 50 y 70ºC.
No existe una restricción particular con
respecto a la necesidad de agitación. Si algún equipo de agitación
se utiliza para obtener ésta, por ejemplo, mezcladores con cuchillas
para agitación, dispositivos para emulsificación, dispositivos para
dispersión, homogeneizadores, etc., la encapsulación de la sustancia
extraña en el interior de las células de levadura, puede llevarse a
cabo de forma más efectiva. La velocidad de agitación o el número
de rotaciones de la agitación por minuto no se restringe
particularmente en la presente memoria, y puede seleccionarse
apropiadamente, de forma que esté habitualmente comprendida entre
1.000 y 10.000 rpm.
Cuando las sustancias extrañas se mezclan con
las células de levadura anteriormente mencionadas (cuerpos
celulares), pueden incluirse otros constituyentes en el sistema de
mezcla de la sustancia extraña y las células de levadura, por
ejemplo, endurecedores, antioxidantes, estabilizadores,
dispersantes, emulsificantes, agentes de ajuste del pH,
conservantes, agentes antidesnaturalizantes, etc.
La presente invención se caracteriza, además,
porque, por lo menos un elemento entre los sacáridos y proteínas se
adhiere a la superficie de las microcápsulas (células de levadura
que encapsulan la sustancia extraña), así obtenidas encapsulando
las sustancias extrañas en el interior de las células del
microorganismo.
Los ejemplos de sacáridos incluyen, por ejemplo,
monosacáridos tales como arabinosa, galactosa, xilosa, glucosa,
sorbosa, fructosa, ramnosa, ribosa, azúcar líquida isomerizada
(jarabe de fructosa de maíz de alta intensidad),
N-acetil glucosamina, etc.; disacáridos tales como
isotrehalosa, sacarosa, trehalulosa, trehalosa, neotrehalosa,
palatinosa, maltosa, melibiosa, lactulosa, lactosa, etc.;
trisacáridos como maltotriosa, etc.; tetrasacáridos tales como
maltotetraosa, etc.; oligosacáridos tales como
\alpha-ciclodextrina,
\beta-ciclodextrina, isomalto oligosacáridos
(isomaltosa, isomaltotriosa, panosa, etc.)
oligo-N-acetilglucosamina,
galactosil sacarosa, galactosil lactosa, galactopiranosil
(\beta1-3), galactopiranosil
(\beta1-4) glucopiranosa, galactopiranosil
(\beta1-3) glucopiranosa, galactopiranosil
(\beta1-6), galactopiranosil
(\beta1-4) glucopiranosa, galactopiranosil
(\beta1-6) glucopiranosa, xilooligosacáridos
(xilotriosa, xilobiosa, etc.); gentiooligosacáridos (gentiobiosa,
gentiotriosa, genitotetraosa, etc.), estaquiosa, oligosacáridos
theander, nigero-oligosacáridos (nigerosa, etc.),
palatinosa oligosacáridos, jarabes de palatinosa, fucosa,
fructooligosacáridos (questosa, nistosa, etc), fructofuranosil
nistosa, polidextrosa, maltosil
\beta-ciclodextrina, maltooligosacáridos
(maltotriosa, tetraosa, pentaosa, hexaosa, heptaosa, etc.),
raffinosa, jarabes de glicosilsacarosa (azúcares de acoplamiento),
oligosacáridos de soja, azúcares de inversión, jarabes de glucosa,
dextrina, goma arábiga, goma xantan, goma guar, carragenina,
curdlano, goma de semilla de tamarindo, goma gellan, almidones,
almidones modificados, etc.; alcoholes azucarados tales como
isomaltitol, eritritol, xilitol, glicerol, sorbitol, palatinil,
maltitol, maltoteraitol, maltotriitol, manitol, lactitol,
isomalto-oligosacáridos reducidos,
xilooligosacáridos reducidos, gentioligosacáridos reducidos, jarabe
de maltosa reducida, jarabes de glucosa reducida, etc. En la
presente memoria se encuentran preferentemente monosacáridos tales
como glucosa, ribosa, arabinosa, xilosa, manosa, galactosa,
fructosa, etc.; disacáridos tales como maltosa, lactosa, sacarosa,
trehalosa, etc.; tetrasacáridos tales como maltotetraosa, etc.;
oligosacáridos tales como maltooligosacáridos, etc.; polisacáridos
tales como dextrina, goma arábiga, goma xantan, goma guar, goma
gellan, almidones, almidones modificados, ciclodextrina, etc.;
alcoholes azucarados tales como eritritol, xilit, sorbit, palatinit,
maltitol, lactitol. Todavía más preferidos son disacá-
ridos tales como lactosa, trehalosa, etc. Dichos sacáridos pueden utilizarse de forma única o combinada de 2 o más.
ridos tales como lactosa, trehalosa, etc. Dichos sacáridos pueden utilizarse de forma única o combinada de 2 o más.
Las proteínas incluyen, por ejemplo, gelatina,
hidrolizados, proteínas del maíz, caseina, caseinato sódico,
colágeno, etc. Incluyen preferentemente gelatina, proteínas del maíz
y caseinato sódico. Estas proteínas pueden utilizarse de forma
única o en combinación de 2 o más.
Además, estos sacáridos y proteínas pueden
utilizarse, asimismo, de forma única o en combinación de 2 o
más.
Los procedimientos para la adhesión de los
sacáridos y proteínas (a los que se hace referencia en adelante
como "sacáridos", etc.), sobre las microcápsulas mencionadas
anteriormente, no están limitados de ninguna manera en particular.
Pueden incluir, por ejemplo, procedimientos en los que las
microcápsulas (células de levadura que encapsulan sustancias
extrañas) que se preparan según un procedimiento que se describe
anteriormente, se secan en un dispositivo de secado mediante
pulverización, y se pulverizan entonces utilizando un granulador de
lecho fluidificado, etc., y con soluciones o dispersiones de
"sacáridos", etc., se dispersan o disuelven en agua u otros
disolventes; procedimientos en los que un lecho extendido sobre con
los sacáridos, etc., (lecho fluido) se pulveriza con una dispersión
de microcápsulas (células de levadura que encapsulan sustancias
extrañas), y entonces las gotitas de microcápsulas con sus
superficies cubiertas con "sacáridos", etc., se extraen y se
secan; procedimientos en los que "los sacáridos, etc.", se
añaden a una dispersión líquida de las microcápsulas (células de
levadura que encapsulan sustancias extrañas), se disuelven
homogéneamente allí y se liofilizan entonces; procedimientos en los
que las microcápsulas (células de levadura que encapsulan sustancias
extrañas) se secan mediante pulverización, etc., y los
"sacáridos, etc.", se mezclan con ellas como una mezcla
pulverulenta utilizando un mezclador agitador de alta velocidad,
etc.; y procedimientos en los que los "sacáridos, etc.", se
añaden a una dispersión líquida de las microcápsulas (células de
levadura que encapsulan sustancias extrañas) y se disuelven ahí
homogéneamente, pulverizándose entonces esta dispersión líquida. Los
procedimientos preferidos son aquéllos en los que los "sacáridos
etc.", se añaden a una dispersión líquida de las microcápsulas
(células de levadura que encapsulan sustancias extrañas), se
disuelven en ella y esta dispersión líquida se seca entonces
mediante pulverización.
La proporción de los "sacáridos, etc." o de
las proteínas respecto al 100% en peso de las microcápsulas (células
de levadura que encapsulan sustancias extrañas) está habitualmente
comprendida entre el 1 y el 90% en peso, preferentemente entre el
10 y el 50%, y todavía más preferentemente entre el 20% y el 40%
(proporciones en peso seco de los sólidos).
En el procedimiento anterior, si las
microcápsulas (células de levadura que encapsulan sustancias
extrañas) se utilizan como una dispersión/suspensión en una
solución líquida, la proporción de microcápsulas en estas
dispersiones/suspensiones líquidas es del orden, habitualmente, de
entre el 5 y el 80%, preferentemente de entre el 10 y el 50%, y más
preferentemente todavía de entre el 20 y el 40%; si los
"sacáridos, etc." se utilizan también como una solución
líquida o dispersión/suspensión, su proporción en estas soluciones
oscila habitualmente entre el 1 y el 60%, preferentemente entre el
10 y el 50%, y todavía más preferentemente entre el 30 y el
40%.
Las microcápsulas así obtenidas poseen
"sacáridos, etc." o proteínas añadidos, por lo menos
parcialmente, sobre sus superficies. En la presente memoria, la
superficie de las microcápsulas está preferentemente cubierta
(revestida) parcial o completamente con "sacáridos, etc.". Los
"sacáridos, etc.", pueden también infiltrarse/penetrar en la
película de la microcápsula (pared celular) o en el interior de la
microcápsula, siempre que algunos "sacáridos, etc."
permanezcan adheridos, por lo menos parcialmente, a la superficie de
ella.
Dichas microcápsulas según la presente
invención, es decir, las microcápsulas con "sacáridos, etc.",
que se adhieren a sus superficies, o preferentemente, que tienen
sus superficies cubiertas con "sacáridos, etc.", pueden
utilizarse como componentes en alimentos, medicamentos, productos
semifarmacéuticos, cosméticos y piensos (en animales). Las
microcápsulas según la presente invención pueden utilizarse
preferentemente como componentes en composiciones orales que se
utilicen oralmente (composiciones alimenticias, composiciones
farmacéuticas orales o semifarmacéuticas y composiciones de piensos
para animales). Las composiciones orales incluyen en la presente
memoria composiciones comestibles que puedan ingerirse
fisiológicamente, así como composiciones bucales, comestibles o no,
para utilizar bucalmente.
Las microcápsulas según la presente invención
(microcápsulas con "sacáridos, etc." adheridos (que las
revisten), pueden tener distintas aplicaciones, dependiendo del
tipo de componentes encapsulados. Por ejemplo, las microcápsulas
que alojan aromatizantes pueden prepararse y utilizarse como
aromatizantes (aromatizantes microencapsulados); las microcápsulas
que alojan edulcorantes, (pueden prepararse y utilizarse) como
edulcorantes (edulcorantes microencapsulados); las microcápsulas
que alojan aderezos, (pueden prepararse y utilizarse) como aderezos
(aderezos microencapsulados); las microcápsulas que alojan
acidulantes, (pueden prepararse y utilizarse) como acidulantes
(acidulantes microencapsulados); las microcápsulas que alojan
amargantes (pueden prepararse y utilizarse) como amargantes
(amargantes microencapsulados); las microcápsulas que alojan
especias (pueden prepararse y utilizarse) como especias; y las
microcápsulas que alojan colorantes, (pueden prepararse y
utilizarse) como colorantes (colorantes microencapsulados).
Las microcápsulas según la presente invención
pueden utilizarse apropiadamente como un componente en formas de
realización de composiciones orales que se ingieren mientras se
mantienen o se mastican en la boca. Los ejemplos específicos de
dichas composiciones orales incluyen, por ejemplo, chicles,
golosinas blandas tales como goma, turrón, etc., o composiciones
alimenticias que se mantienen en la boca durante un tiempo
prolongado, tales como dulces, alimentos comestibles no esenciales,
etc.; composiciones farmacéuticas o semifarmacéuticas que se
ingieren mientras se mantienen o se mastican en la boca, tales como
comprimidos que pueden ser masticados, masticatorios, gránulos,
comprimidos (tipo pastilla), comprimidos bucales, dentífricos, etc.
En la presente memoria resultan preferidas las composiciones que se
ingieran mientras se mastican durante un tiempo prolongado en la
boca, tales como el chicle. En la presente invención, el término
chicle se aplica en un sentido amplio a cualquier tipo de goma que
se utilice masticando en la boca, incluyendo los chicles con globo,
etc.
La presente invención proporciona composiciones
orales que contienen las microcápsulas mencionadas anteriormente
con "sacáridos, etc." adheridos (que las revisten)
(microcápsulas con "sacáridos etc." adheridos (que las
revisten): microcápsulas según la presente invención). Como se
aprecia a partir de los expuesto anteriormente, las composiciones
orales según la presente invención comprenden así composiciones que
se utilizan en la boca(composiciones bucales) y las
composiciones que se ingieren oralmente (se comen) (composiciones
comestibles), tales como composiciones alimenticias, composiciones
farmacéuticas orales o semifarmacéuticas y composiciones de
pienso.
pienso.
Los ejemplos específicos de dichas composiciones
orales son similares a los que se han mencionado anteriormente, por
ejemplo, dichos chicle, golosinas suaves tales como gomas, turrones,
etc.; composiciones alimenticias que se mantienen en la boca
durante un tiempo prolongado tales como dulces, alimentos
comestibles no esenciales, etc.; composiciones farmacéuticas o
semifarmacéuticas que se toman mientras se mantienen o mastican en
la boca durante un tiempo prolongado, tales como comprimidos que
pueden masticarse, masticatorios, gránulos, comprimidos de
tableta,comprimidos bucales, dentífricos, etc. En la presente
memoria se prefieren composiciones alimenticias, y más
preferentemente, chicles.
Aparte de contener como constituyentes
microcápsulas con "sacáridos etc." adheridos (que las revisten)
(microcápsulas según la presente invención), las composiciones
orales según la presente invención, especialmente las composiciones
alimenticias y en particular los chicles, pueden contener también
constituyentes de las composiciones orales convencionales,
especialmente de las composiciones alimenticias y en particular de
los chicles, y pueden prepararse utilizando estos procedimientos
convencionales.
En el caso de un chicle, no existe limitación
con respecto a la cantidad de microcápsulas según la presente
invención (microcápsulas con "sacáridos etc." adheridos (que
las revisten)) en el 100% del peso del chicle final, pero
habitualmente es del orden de entre el 0,05 y el 10%,
preferentemente entre el 0,1 y el 5% en peso, y todavía más
preferentemente entre el 0,5 y el 3%.
Las microcápsulas según la presente invención,
en las composiciones orales tales como chicles, etc, no están
particularmente limitadas con respecto a su utilización, pero ellas
contienen en su interior, preferentemente, por lo menos, uno de los
siguientes: aromatizantes, edulcorantes (incluyendo sacáridos),
colorantes, acidulantes, vitaminas, especias, extractos
animales/vegetales, sustancias bioactivas, condimentos, amargantes,
grasas/lípidos, ácidos grasos, aminoácidos o enzimas. En el caso de
un chicle, resultan preferidos componentes que proporcionen aroma o
sabor (componentes de aroma/sabor), en particular aromatizantes,
edulcorantes, acidulantes, condimentos o amargantes. Las
microcápsulas ((composiciones orales) según la presente invención
que contienen estos aromatizantes, edulcorantes, acidulantes,
condimentos o amargantes, pueden formularse respectivamente en un
chicle (composición oral) o en aromatizantes microencapsulados,
edulcorantes microencapsulados, acidulantes microencapsulados,
condimentos microencapsulados y amargantes microencapsulados.
Los ejemplos específicos de dichos componentes
de sustancias extrañas (aromatizantes, edulcorantes, colorantes,
etc.) incluyen los mismos ejemplos que se han listado anteriormente,
pero no se limitan a ellos. Por ejemplo, aromatizantes distintos a
los mencionados anteriormente, pueden utilizarse asimismo como
componentes aromatizantes.
Aparte de las microcápsulas según la presente
invención, la formulación del chicle puede incluir otros
componentes, tales como base de goma, edulcorantes (incluyendo
sacáridos), colorantes, engrosantes, acidulantes, suavizantes, etc.
La cantidad de goma base en el chicle oscila ordinariamente entre el
10 y el 35%, y preferentemente, entre el 20 y el 30% en peso. En la
presente memoria, los edulcorantes incluyen, por ejemplo, sacáridos
tales como sacarosa, fructosa, azúcar líquido, glucosa,
oligosacáridos, etc.; edulcorantes de alta intensidad tales como
aspartano, sucralosa, acesulfamo potásico, somatina, estevia,
alitamo, neotamo, xilitol, sales de sacarina, glicirizina, etc.
Los chicles pueden prepararse, por ejemplo,
según los procedimientos y métodos que se describen en "Gum Base
and Gum Products Technology" y "The Great American Chewing Gum
Book", por Robert Hendrickson, publicado por CAFOSA Gum S/A
(1974). Los componentes constituyentes de las microcápsulas según la
presente invención, pueden incorporarse a ellas en cualquier etapa
arbitraria del procedimiento, pero preferentemente de forma próxima
a la finalización del procedimiento de preparación, especialmente en
los casos en los que las sustancias extrañas que van a encapsularse
en las microcápsulas son sensibles al calor, por ejemplo,
componentes de aroma/sabor (aromatizantes en particular),
colorantes, etc., para prevenir la alteración térmica de estas
sustancias extrañas (es decir, pérdida o desnaturalización del
aromatizante o del color, etc.).
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La presente invención se refiere además a un
procedimiento de preparación para las microcápsulas mencionadas
anteriormente según la presente invención (microcápsulas con
"sacáridos, etc." adheridos (recubiertas con ellos), o un
recubrimiento de los mismos).
Este procedimiento comprende esencialmente las
siguientes etapas:
- 1)
- encapsulación de una sustancia extraña en el interior de las células de levadura;
- 2)
- adhesión sobre la superficie de las células de levadura obtenidas en la etapa (1), de, por lo menos, un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por sacáridos) y proteínas.
Entre las etapas 1) y 2) las células de levadura
que encapsulan la sustancia extraña pueden someterse si es
necesario a tratamientos posteriores, tales como separación, lavado,
deshidratación, secado, etc.
Alternativamente, las células de levadura con su
componente intracelular endógeno eluido pueden utilizarse como las
células de levadura de la etapa 1) anterior.
Las células de levadura, las sustancias
extrañas, los sacáridos y proteínas, utilizados en el procedimiento
mencionado anteriormente de preparación, pueden ser los que se han
descrito en la sección (1) anterior, mientras que los
procedimientos para eluir el componente intracelular endógeno hacia
afuera de las células de levadura, los procedimientos para
encapsular las sustancias extrañas en las células de los
microorganismos, y los procedimientos para adherir los sacáridos y
proteínas sobre la superficie de las levaduras, pueden llevarse a
cabo también según el procedimiento que se describe en la sección
(1) anterior.
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La presente invención se refiere asimismo a un
procedimiento para controlar la velocidad, intensidad y persistencia
de la liberación de sustancias extrañas en las microcápsulas, de
las encapsuladas en las células de levadura (células de levadura
que encapsulan la sustancia extraña), preferentemente, para aumentar
la velocidad, intensidad y persistencia o la liberación de las
sustancias extrañas.
Este procedimiento puede implementarse
esencialmente adhiriendo sobre las superficies de las células de
levadura que encapsulan las sustancias extrañas (células de
levadura que encapsulan la sustancia extraña) un elemento, por lo
menos, seleccionado de entre el grupo constituido por sacáridos y
proteínas. Las células de levadura que se utilizan en la presente
memoria son preferentemente levaduras con sus componentes
intracelulares endógenos eluidos.
En la presente memoria, las levaduras,
sustancias extrañas, sacáridos, y proteínas que se utilizan en el
procedimiento anteriormente mencionado, pueden ser las que se
describen anteriormente en la sección (1) anterior, mientras que
los procedimientos para eluir el componente intracelular endógeno
hacia afuera de las células de levadura, los procedimientos para
encapsular las sustancias extrañas en las células de levadura m y
los procedimientos para adherir los sacáridos y proteínas sobre la
superficie de las levaduras, pueden llevarse a cabo también según
el procedimiento que se describe en la sección (1) anterior.
Asimismo, el grado en el que los sacáridos y proteínas
("sacáridos etc.") se adhieren sobre la superficie de las
células de la levadura que encapsulan las sustancias extrañas, no
está particularmente limitado, de forma que las levaduras pueden ser
cubiertas completa o parcialmente. Los "sacáridos, etc."
pueden también infiltrarse/penetrar en las paredes de las células
de levadura, o en el interior celular, sin ninguna limitación
particular. La proporción de "sacáridos, etc." que se adhiere
a (cubre) la superficie de las células de levadura que encapsulan
las sustancias extrañas, con respecto al 100% en peso de las
levaduras que encapsulan la sustancia extraña, es del orden,
habitualmente, del 1 al 90% en peso, preferentemente del 10 al 50%
en peso, y todavía más preferentemente del 20 al 40% en peso
(proporciones en peso seco de sólidos).
Las microcápsulas (microcápsulas con
"sacáridos, etc.", adheridos (revestidas con ellos) así
obtenidas, permiten el control de la velocidad, intensidad y
persistencia de la liberación de las sustancias extrañas
encapsuladas en ellas. Este efecto resulta más pronunciado
especialmente cuando se sitúan las "microcápsulas con ``sacáridos,
etc.'' adheridos (que las recubren)" en presencia de agua, en
particular cuando se sitúan dentro de la boca. Por tanto, el
procedimiento según la presente invención puede utilizarse
apropiadamente para controlar la velocidad, intensidad y
persistencia de la liberación de los componentes de aroma/sabor en
el interior de la boca.
De este modo, la presente invención proporciona
un procedimiento apropiado para controlar la velocidad, intensidad
y persistencia de la expresión de aroma/sabor, preferentemente para
aumentar la velocidad, intensidad y persistencia de la expresión de
aroma/sabor, en las microcápsulas de un componente de aroma/sabor,
encapsulado en las células de levadura (células de levadura que
encapsulan una sustancia extraña).
Los componentes de aroma/sabor de la presente
memoria incluyen compuestos para proporcionar aromas (olorosos) o
aromatizantes. Estos incluyen, pero no se limitan, a aromatizantes,
edulcorantes (incluyendo sacáridos), acidulantes, aderezos,
amargantes, especias, grasas/lípidos, vitaminas, aminoácidos, y
extractos animales y vegetales. Más preferentemente, incluyen
aromatizantes, edulcorantes, acidulantes, aderezos, amargantes y
especies, todavía más preferentemente aromatizantes y edulcorantes,
y más preferentemente, aún, aromatizantes. Estos componentes
constituyen todos componentes preferentemente comestibles apropiados
para el uso en los alimentos. Todavía más preferentemente, son
componentes hidrófobos tales como aromatizantes hidrófobos, etc.
Las microcápsulas con "sacáridos, etc."
adheridos (que las recubren), obtenidas adhiriendo (revistiendo con)
"sacáridos, etc.", las superficies de las células de levadura
que encapsulan componentes de aroma/sabor (microcápsulas), son más
efectivas para conseguir una expresión más rápida de los
aromas/sabores en la boca, y prolongar una intensidad moderada de
ellos, que en el caso de células de levadura no modificadas que
encapsulen componentes de aroma/sabor (microcápsulas).
El procedimiento según la presente invención
constituye, por tanto, un procedimiento para controlar la liberación
de componentes de aroma/sabor encapsulados en microcápsulas
(células de levadura), a partir de las microcápsulas.
Específicamente, el procedimiento según la presente invención puede
utilizarse como una técnica para aumentar la velocidad, intensidad
y persistencia de la liberación o de la expresión de componentes
aroma/sabor (aromas, edulcorantes, acidulantes, aderezos,
amargantes, especias, grasas/lípidos, vitaminas, aminoácidos, o
extractos de animales o de plantas, etc.).
Además, incluyendo como componentes aroma/sabor
(aromas, edulcorantes, acidulantes, aderezos, amargantes, especias,
grasas/lípidos, vitaminas, aminoácidos, o extractos de animales o de
plantas, etc.), en microcápsulas según la presente invención que se
utilizan en la presente memoria (microcápsulas con "sacáridos,
etc.", adheridos, (que las revisten)) en composiciones orales
tales como alimentos, es posible controlar la velocidad, intensidad
y persistencia de la expresión del aroma/sabor en dichas
composiciones orales.
Así, la presente invención proporciona un
procedimiento apropiado para controlar la velocidad, intensidad y
persistencia de la expresión de aroma/sabor, preferentemente para
aumentar la velocidad, intensidad y persistencia de la expresión de
aroma/sabor, en composiciones orales tales como alimentos, etc.
Composiciones orales apropiadas en la presente memoria incluyen
composiciones que se mantienen o mastican durante un tiempo
prolongado en la boca, por ejemplo, composiciones alimenticias
tales como chicle, golosinas blandas, etc.; composiciones
farmacéuticas o semifarmacéuticas tales como comprimidos para
masticar, masticatorios, comprimidos bucales, dentífricos, etc. Una
composición oral que se prefiere en la presente memoria es el
chicle. Este procedimiento puede implementarse utilizando como
componente de la composición oral diana las "microcápsulas con
``sacáridos, etc.'' adheridos (que las revisten)", mencionadas
anteriormente, es decir, preparando la composición oral diana
utilizando las "microcápsulas con ``sacáridos, etc.'' adheridos
(que las revisten)" como un componente suyo. La proporción de
"microcápsulas con ``sacáridos, etc.'' adheridos (que las
revisten)" que se utiliza en la preparación de la composición
oral, en particular del chicle, etc., puede ser la que se ha
descrito en la sección (1) anterior, mientras que su procedimiento
de preparación puede llevarse a cabo también según el procedimiento
que se describe en la sección (1) anterior.
La presente invención se describirá a
continuación con mayor detalle, haciendo referencia a los Ejemplos
siguientes, Ejemplos Comparativos y Experimentos, pero no está
limitada por ellos. En dicho Ejemplo, si no se especifica de otro
modo, "parte" significa "parte ponderal" y "%"
significa "% en peso".
Ejemplos 1 a
6
2 g de proteasa se añadieron a 2.000 g de
lechada en la que 100 g de una levadura de cerveza (Saccharomyces
cerevisiae) se dispersaron en agua, y la mezcla resultante se
agitó entonces a 50ºC durante 20 horas para eluir los componentes
intracelulares desde el interior celular al exterior. La lechada
obtenida se separó mediante centrifugación a 8.000 rpm durante 30
minutos y el sobrenadante se eliminó, dando lugar a 350 g (contenido
en sólidos del 20%) de residuo de levadura. Se añadieron entonces
930 g de agua y 120 g de ácido clorhídrico concentrado,
calentándose la mezcla resultante durante 10 minutos a 80ºC mientras
se agitaba (tratamiento ácido), seguido por enfriamiento. Después
de centrifugar a 8.000 rpm durante 30 minutos, el sobrenadante se
eliminó, dando lugar a 500 g (contenido en sólidos del 10%) de
residuo de levadura tratado con ácido. A continuación, se añadieron
500 g de agua, seguido por centrifugación a 8.000 rpm durante 30
minutos, y el sobrenadante se eliminó. Se añadió hidróxido sódico
acuoso al 10% a 500 g del residuo obtenido (contenido en sólidos del
10%) y la solución resultante se ajustó a pH 7,0.
Se calentaron 450 g (contenido en sólidos del
10%) de la dispersión acuosa preparada anteriormente, que contenía
la levadura a partir de la cual se habían eliminado los componentes
endógenos de los cuerpos celulares de levadura, a 70ºC, añadiéndose
25 g de mentol, seguido por agitación a 5.000 rpm durante 2 horas,
por lo que un aromatizante (mentol) se incluyó en los cuerpos
celulares de la levadura (levadura conteniendo aromatizante).
Se prepararon 475 g de cada una de las
soluciones acuosas preparadas de esta forma, en las que se
encontraba la levadura que contenía el aromatizante (6 tipos). Con
cada solución acuosa se mezclaron 60 g de una solución acuosa con
un contenido en lactosa del 50% calentada a 60ºC (Ejemplo 1), 60 g
de una solución acuosa con un contenido en dextrina (DE=10) del 50%
(Ejemplo 2), 60 g de una solución acuosa con un contenido en maltosa
del 50% (Ejemplo 3), 60 g de una solución acuosa con un contenido
en paratinosa reducida del 50% (Ejemplo 4), 120 g de una solución
acuosa con un contenido en gelatina del 25% (ejemplo 5), o 100 g de
una solución acuosa que contenía gelatina al 15% y lactosa al 15%
(Ejemplo 6). A continuación, estas soluciones mezcladas se secaron
mediante pulverización con un secador-pulverizador
con una temperatura de entrada de 150ºC y una de salida de 90ºC,
para dar lugar a cada 90 g de "microcápsulas con sacáridos en
polvo adheridos, cápsulas conteniendo aromatizantes"
(componentes intracelulares eliminados) (Ejemplos 1 a 6).
Se llevó a cabo un procedimiento (utilizando una
solución acuosa con un contenido en lactosa del 50%) de la misma
forma que en el Ejemplo 1, con la excepción de que, en lugar de la
levadura de la cual se habían eliminado los componentes
intracelulares endógenos a partir del cuerpo celular, se utilizó una
levadura de cerveza (Saccharomyces cerevisiae) que contenía
componentes intracelulares endógenos, para dar lugar a una
microcápsula con sacáridos en polvo adheridos, conteniendo las
cápsulas aromatizantes (conteniendo componentes intracelulares)
(Ejemplo 7).
Se calentaron 450 g de una solución acuosa que
contiene 45 g de levadura (Saccharomyces cerevisiae), a 70ºC
según el procedimiento que se describe en el Ejemplo 1 (2),
añadiéndose entonces 25 g de mentol, seguido por la agitación a
5.000 rpm durante 2 horas, por lo que un aromatizante (mentol) se
incluyó en los cuerpos celulares de la levadura (levaduras que
contienen aromatizantes). Con 475 g de una solución que contenía las
levaduras que incluían aromatizantes preparados de esta forma, se
mezclaron 30 g de una solución acuosa con un contenido en lactosa
del 50% y que se calentó a 60ºC según el procedimiento descrito en
el Ejemplo 1 (3) anteriormente mencionado. A continuación, la
solución mezclada se secó mediante pulverización con un secador de
pulverización con una temperatura de entrada de 150ºC y una de
salida de 90ºC, para preparar 90 g de "microcápsulas con
sacáridos en polvo adheridos, microcápsulas que contenían
aromatizantes (conteniendo componentes intracelulares)" (Ejemplo
7).
Ejemplos 8 a
14
Las microcápsulas que contienen aromatizantes,
preparadas en los Ejemplos 1 a 7, se utilizaron como un ingrediente
aromático (aromatizantes microencapsulados) para preparar chicles
según la formulación siguiente. Los chicles se prepararon de la
forma habitual.
\vskip1.000000\baselineskip
Se prepararon 450 g de una solución de levaduras
(contenido en sólidos del 10%) dispersando en agua levaduras de las
cuales se habían eliminado componentes intracelulares endógenos a
partir de los cuerpos celulares preparados de la misma forma que en
el Ejemplo 1 (1). La solución se calentó a 70ºC, y a ella se le
añadieron 25 g de aceite de naranja, seguido por agitación a 5.000
rpm durante 2 horas. Se añadieron y mezclaron 60 g de una solución
acuosa con un contenido en lactosa del 50% A continuación, la
solución mezclada se secó mediante pulverización con un secador
pulverizador a una temperatura de entrada de 150ºC y a una
temperatura de salida de 90ºC, para obtener 90 g de
"microcápsulas con sacáridos en polvo adheridos (revestidas con
ellos) que contienen aromatizantes (componentes intracelulares
eliminados)" (Ejemplo 15).
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Ejemplo comparativo
1
Se prepararon 643 g de una solución de levaduras
(contenido en sólidos del 10%) dispersando en agua levaduras de las
cuales se habían eliminado componentes intracelulares endógenos a
partir de los cuerpos celulares preparados de la misma forma que en
el Ejemplo 1 (1). La solución se calentó a 70ºC, y se le añadieron
36 g de mentol, seguido por agitación a 5.000 rpm durante 2 horas.
A continuación, la solución se secó mediante pulverización con un
secador pulverizador a una temperatura de entrada de 150ºC y a una
temperatura de salida de 90ºC, para obtener 90 g de micro-
cápsulas en polvo que contienen aromatizantes (componentes intracelulares eliminados) (Ejemplo comparativo 1).
cápsulas en polvo que contienen aromatizantes (componentes intracelulares eliminados) (Ejemplo comparativo 1).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
2
Se añadieron y mezclaron 30 g de lactosa en
polvo con 70 g de microcápsulas en polvo [microcápsulas que
contenían aromatizantes (con componentes intracelulares
eliminados)] preparadas en el Ejemplo Comparativo 1, dando lugar a
98 g de un compuesto formado por un contenido de microcápsulas en
polvo (componentes intracelulares eliminados) y lactosa (Ejemplo
comparativo 2).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
3
Se prepararon 750 g de una solución de levaduras
(contenido en sólidos del 10%) dispersando en agua 75 g de
levaduras de cerveza (Saccharomyces cerevisiae). La solución
resultante se calentó a 70ºC, y a ella se añadieron 25 g de mentol,
seguido por agitación a 5.000 rpm durante 2 horas. A continuación,
la solución se secó mediante pulverización con un secador
pulverizador a una temperatura de entrada de 150ºC y a una
temperatura de salida de 90ºC, para obtener 90 g de microcápsulas
en polvo (que contienen aromatizantes) (que contienen componentes
intracelulares) (Ejemplo comparativo 3).
Ejemplos comparativos 4 a
6
Cada uno de los ejemplos de microcápsulas
preparados en los Ejemplos Comparativos 1 a 3, se utilizó como un
ingrediente aromático (aromatizantes microencapsulados) para
preparar chicles (Ejemplos Comparativos 4 a 6), de la misma forma
que en los Ejemplos anteriores 8 a 14.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
7
Se prepararon 750 g de una solución de levaduras
(contenido en sólidos del 10%) dispersando en agua levaduras de las
cuales se habían eliminado componentes intracelulares endógenos a
partir de los cuerpos celulares preparados de la misma forma que en
el Ejemplo 1 (1). La solución se calentó a 70ºC, y se le añadieron
25 g de aceite de naranja, seguido por agitación a 5.000 rpm
durante 2 horas. A continuación, la solución se secó mediante
pulverización con un secador pulverizador a una temperatura de
entrada de 150ºC y a una temperatura de salida de 90ºC, para
obtener 90 g de micro-
cápsulas en polvo que contienen aromatizantes (componentes intracelulares eliminados) (Ejemplo comparativo 7).
cápsulas en polvo que contienen aromatizantes (componentes intracelulares eliminados) (Ejemplo comparativo 7).
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Ejemplo comparativo
8
Se calentaron 250 g de una solución (contenido
en sólidos del 30%) preparados disolviendo 30 g de goma arábiga y
30 g de lactosa en agua, a 50ºC, y se le añadieron 25 g de aceite de
naranja, seguido por agitación a 5.000 rpm durante 2 horas. A
continuación, la solución se secó mediante pulverización con un
secador pulverizador a una temperatura de entrada de 150ºC y a una
temperatura de salida de 90ºC, para obtener 90 g de microcápsulas
en polvo que contienen aromatizantes.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo experimental
1
La velocidad de expresión y la persistencia del
aroma/sabor en las microcápsulas que contienen aromatizantes
(aromatizantes microencapsulados) preparadas en el Ejemplo 1, y en
el Ejemplo Comparativo 2, fueron evaluadas. (Ejemplo 1:
microcápsulas adheridas a lactosa que contienen aromatizantes
(componentes intracelulares eliminados), Ejemplo Comparativo 1:
microcápsulas que contienen aromatizantes (componentes
intracelulares eliminados)+ lactosa). Específicamente, seis
miembros del equipo expertos masticaron 75 veces por minuto el
chicle (Ejemplo 8 y Ejemplo Comparativo 5), que comprendía los
aromatizantes microencapsulados (Ejemplo 1 y Ejemplo Comparativo 2)
como ingrediente aromático. La velocidad de la expresión, la
intensidad y persistencia del aroma/sabor en los ratones, se
evaluaron comparándolos con los del chicle (Ejemplo Comparativo 4)
preparados utilizando las microcápsulas (aromatizantes
microencapsulados: microcápsulas que contienen aromatizantes (con
los componentes intracelulares eliminados) del Ejemplo Comparativo
1 como un ingrediente aromático, que se definió como el control. La
evaluación se llevó a cabo basándose en los criterios que se
muestran en la Tabla 1 con la velocidad de expresión, intensidad y
persistencia del aroma/sabor de la goma del chicle de control
(Ejemplo Comparativo 4) que es definido como 3.
\vskip1.000000\baselineskip
La Tabla 2 muestra los resultados. Las
evaluaciones (de los datos) se expresan como promedio de los de los
seis miembros del equipos expertos.
\vskip1.000000\baselineskip
En la tabla, "Ejemplos 1/8" y "Ejemplos
Comparativos 2/5" indican respectivamente Ejemplos 1 a 8, y
Ejemplos Comparativos 2 y 5. Las tablas a continuación siguen la
misma regla.
Tal como se aprecia a partir de los resultados
del ensayo llevado a cabo utilizando el chicle del Ejemplo 8, es
posible preparar chicles que posean una expresión más rápida,
intensa y persistente de aroma/sabor dentro de la boca, utilizando
un aromatizante microencapsulado (Ejemplo 1), que comprende una
levadura que contiene aromatizantes (con los componentes
intracelulares eliminados) cubierta con lactosa como ingrediente
aromático. El chicle (Ejemplo Comparativo 5) preparado utilizando
un aromatizante microencapsulado (Ejemplo Comparativo 2) obtenido
mezclando únicamente una levadura que contiene un aromatizante
(componente intracelular eliminado) y lactosa como componente
aromático, se evaluó casi lo mismo que la goma de control (velocidad
de expresión, intensidad y persistencia del aroma/sabor en la boca:
3,0), en el que la velocidad de expresión, intensidad y
persistencia del aroma/sabor son significativamente inferiores a la
goma del Ejemplo 8 de la presente invención. Estos resultados
evidencian que adhiriendo a, o cubriendo la superficie de la
levadura que contiene el aromatizante con lactosa, pueden obtenerse
los efectos distintivos de la presente invención, y que éstos no
pueden alcanzarse mezclando únicamente la levadura con la
lactosa.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo experimental
2
La velocidad de expresión, intensidad y
persistencia del aroma/sabor, se evaluaron de la misma forma que en
el Ejemplo experimental 1, utilizando chicle (Ejemplo 12 y Ejemplo
Comparativo 6) preparado utilizando los aromatizantes
microencapsulados del Ejemplo 7 y el Ejemplo Comparativo 3 (Ejemplo
7: microcápsulas con lactosa adherida que contienen aromatizantes
(que contienen componentes intracelulares), Ejemplo Comparativo 3:
microcápsulas con aromatizantes microencapsulados (conteniendo
componentes intracelulares)) como ingredientes aromáticos sin
eliminar los componentes intracelulares endógenos a partir del
cuerpo celular de la levadura. La Tabla 3 muestra los
resultados.
\vskip1.000000\baselineskip
Tal como se aprecia a partir de estos
resultados, el chicle (Ejemplo 14), que comprende los aromatizantes
microencapsulados (Ejemplo 7: microcápsulas adheridas a maltosa que
contienen aromatizantes (incluyendo componentes intracelulares))
que se prepararon incluyendo los aromatizantes en las levaduras (sin
eliminar los componentes intracelulares endógenos), a partir de los
cuerpos celulares de las levaduras, y adhiriendo lactosa sobre su
superficie, fue significativamente superior al chicle (Ejemplo
Comparativo 6) que comprende los aromatizantes microencapsulados
(Ejemplo Comparativo 3: microcápsulas con aromatizantes encapsulados
(conteniendo componentes intracelulares)), obtenidas sin la
adhesión de sacáridos en la superficie de los cuerpos celulares], en
la velocidad de expresión, intensidad y persistencia de los
aromatizantes.
\newpage
Ejemplo experimental
3
La expresión de la (velocidad e intensidad) y la
persistencia de los aromatizantes se evaluaron de la misma forma
que en el Ejemplo experimental 1, utilizando chicle (Ejemplos 9 a
11) preparado de la misma forma que en el Ejemplo 8, con la
excepción de que se utilizaron los aromatizantes microencapsulados
obtenidos en los Ejemplos 2 a 4 (Ejemplo 2: microcápsulas adheridas
a dextrina conteniendo aromatizantes (con componentes intracelulares
eliminados)); Ejemplo 3: microcápsulas adheridas a maltosa
conteniendo aromatizantes (componentes intracelulares eliminados),
Ejemplo 4: microcápsulas adheridas a palatinit reducido conteniendo
aromatizantes (con componentes intracelulares eliminados), en vez
de los obtenidos en el Ejemplo 1 (microcápsulas adheridas a lactosa
que contienen aromatizantes (con componentes intracelulares
eliminados)).
Los resultados se muestran en la tabla 4 junto
con los resultados del ensayo obtenidos utilizando el chicle
(utilizando lactosa como sacárido adherido) del Ejemplo 8.
\vskip1.000000\baselineskip
Tal como se aprecia a partir de los resultados
de los Ejemplos 9 y 10, los aromatizantes microencapsulados que
poseen las superficies cubiertas con dextrina (DE10) o maltosa,
mostraron casi la misma intensidad de aroma/sabor que la del
control (Ejemplo Comparativo 4); sin embargo, la persistencia del
aroma/sabor mejoró significativamente. Tal como se aprecia a partir
de los resultados del Ejemplo 11, los aromatizantes
microencapsulados con su superficie recubierta por el palatinit
reducido, mejoraron notablemente la intensidad del aroma/sabor.
Además, los resultados de los Ejemplos 12 y 13,
muestran que los aromatizantes microencapsulados que tienen sus
superficies cubiertas con gelatina o gelatina + lactosa mostraron
una intensidad del aromatizante más débil que la del control
(Ejemplo Comparativo 4): sin embargo, la persistencia de sus
aromas/sabores mejoró significativamente.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo experimental
4
Las Microcápsulas del Ejemplo 15 y de los
Ejemplos Comparativos 7 y 8 (Ejemplo 15: microcápsulas adheridas a
sacáridos que contienen aromatizantes (con los componentes
intracelulares eliminados), Ejemplo comparativo 7: microcápsulas
con aromatizantes microencapsulados (con componentes intracelulares
eliminados), Ejemplo Comparativo 8: aromatizantes microencapsulados
(no microbianos)), se evaluaron con respecto a la intensidad y
persistencia del aroma/sabor.
Específicamente, 50 g de cada microcápsula se
introdujeron en una bolsa de plástico, se sellaron y se conservaron
a 50ºC durante un mes. Para evaluar la persistencia del aroma/sabor
incluido en las microcápsulas, se midió el contenido de limoneno
(aromatizante de naranja) en las microcápsulas que se conservaron
durante un mes, calculándose la proporción restante, habiendo
definido el contenido de limoneno antes del almacenamiento como del
100%. Las microcápsulas (antes del almacenamiento) del Ejemplo 15 y
de los Ejemplos Comparativos 7 y 8 contenían 23% de limoneno,
basado en el peso de la microcápsula (100%).
Para examinar el cambio en la cualidad de los
aromatizantes después del almacenamiento, se prepararon soluciones
del 0,1% utilizando las microcápsulas antes y después del
almacenamiento a 50ºC durante un mes, y seis miembros del grupo
expertos evaluaron el aromatizante. La tabla 5 muestra los
resultados.
A partir de estos resultados, se dedujo que la
persistencia del aromatizante puede mejorarse cubriendo la
superficie de la levadura con los aromatizantes encapsulados
(microcápsula) con sacáridos (Ejemplo 15), pudiendo prevenirse
significativamente cambios en la calidad del aromatizante.
La presente invención puede mejorar la velocidad
de liberación, la intensidad y la persistencia de materiales
extraños contenidos en células de levadura (microcápsulas). Las
microcápsulas que tienen una velocidad, intensidad y/o persistencia
de la liberación del material extraño controladas y/o mejoradas,
pueden utilizarse como varios productos, tales como alimentos,
productos farmacéuticos, productos semifarmacéuticos, cosméticos y
alimentos misceláneos, dependiendo del material extraño contenido
en ellas. Por ejemplo, una microcápsula comestible de aromatizantes
encapsulados de la presente invención, puede utilizarse como un
ingrediente aromático en los chicles. Un chicle que contiene las
microcápsulas como ingredientes aromáticos, muestra los efectos de,
dependiendo del tipo de sacárido y de los alcoholes polihídricos
adheridos, la pronta liberación del aromatizante en la boca,
liberando intensivamente el aromatizante en la boca, y conservando
el aroma/sabor durante un largo período de tiempo.
Claims (23)
1. Microcápsulas que presentan por lo menos una
sustancia extraña encapsulada en las células de levadura, sobre
cuyas superficies se adhiere por lo menos un elemento seleccionado
de entre el grupo constituido por sacáridos y proteínas, en las que
la sustancia extraña encapsulada en las células de levadura es por
lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por
aromatizantes, colorantes, acidulantes, aderezos, amargantes,
especias, edulcorantes, grasas/lípidos, ácidos grasos, aminoácidos,
enzimas, vitaminas, extractos animales y vegetales, y sustancias
bioactivas.
2. Microcápsulas según la reivindicación 1, en
las que las células de levadura son las que se han tratado
previamente para eliminar los componentes intracelulares
endógenos.
3. Microcápsulas según la reivindicación 1, en
la que los sacáridos son por lo menos un elemento seleccionado de
entre el grupo constituido por monosacáridos, disacáridos,
trisacáridos, tetrasacáridos, oligosacáridos, polisacáridos y
alcoholes azucarados.
4. Microcápsulas según la reivindicación 1, en
la que a las superficies de las células de levadura se adhieren por
lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por
lactosa, maltitosa, trehalosa, palatinit y dextrina.
5. Microcápsulas según la reivindicación 1, en
las que la sustancia extraña encapsulada en las células de levadura
es una sustancia hidrófoba.
6. Microcápsulas según la reivindicación 1, en
las que la sustancia extraña encapsulada en las células de levadura
es por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo
constituido por aromatizantes, acidulantes, amargantes, especias,
edulcorantes, ácidos grasos y vitaminas.
7. Microcápsulas según la reivindicación 1, que
se utilizan como un constituyente en alimentos, productos
farmacéuticos, productos semifarmacéuticos, cosméticos o
piensos.
8. Procedimiento de preparación de microcápsulas
que comprende las etapas que consisten en:
- (1)
- encapsular una sustancia extraña en el interior de las células de levadura, en el que la sustancia extraña es por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo tal como se define en la reivindicación 1, y
- (2)
- adherir sobre la superficie de las células de levadura obtenidas en la etapa (1), por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo constituido por sacáridos y proteínas.
9. Procedimiento de preparación de microcápsulas
según la reivindicación 8, en el que la etapa (1) es una etapa de
encapsulación de una sustancia extraña en el interior de las células
de levadura cuyos componentes intracelulares endógenos se han
eliminado.
10. Composición oral que contiene las
microcápsulas según la reivindicación 1.
11. Composición oral según la reivindicación 10,
que contiene las microcápsulas según la reivindicación 1, como
aromatizantes, colorantes, aderezos, acidulantes, amargantes,
especias o edulcorantes.
12. Composición oral según la reivindicación 10,
que se mantiene o se mastica en la boca durante un tiempo
prolongado.
13. Composición oral según la reivindicación 10,
que es un chicle.
14. Procedimiento para controlar la velocidad,
intensidad y persistencia de la sustancia extraña liberada a partir
de las microcápsulas de las sustancias extrañas encapsuladas en las
células de levadura, que comprende la etapa de adhesión sobre la
superficie de estas microcápsulas de por lo menos un elemento
seleccionado de entre el grupo constituido por sacáridos y
proteínas, en el que la sustancia extraña es por lo menos un
elemento seleccionado de entre el grupo tal como se ha definido en
la reivindicación 1.
15. Procedimiento según la reivindicación 14,
que es un procedimiento para controlar la velocidad, intensidad o
persistencia de la expresión del aroma/sabor a partir de las
microcápsulas de un componente de aroma/sabor encapsulado en las
células de levadura.
16. Procedimiento según la reivindicación 15, en
el que las microcápsulas del componente de aroma/sabor encapsulado
en las células de levadura, se obtienen encapsulando un componente
de aroma/sabor en células de microorganismos cuyos componentes
intracelulares endógenos se han eliminado.
17. Procedimiento según la reivindicación 14,
que es un procedimiento para aumentar la velocidad, intensidad o
persistencia de la expresión del aroma/sabor de las
microcápsulas.
18. Procedimiento para controlar la velocidad,
intensidad y persistencia de la expresión del aroma/sabor en una
composición oral que incluye microcápsulas que presentan sustancias
extrañas encapsuladas en el interior de las células de levadura
sobre cuyas superficies se adhiere por lo menos un elemento
seleccionado de entre el grupo constituido por sacáridos y
proteínas, en el que la sustancia extraña es por lo menos un
elemento seleccionado de entre el grupo tal como se define en la
reivindicación 1.
19. Procedimiento según la reivindicación 18, en
el que las células de levadura son las que se han eliminado los
componentes intracelulares endógenos.
20. Procedimiento según la reivindicación 18,
que es un procedimiento para aumentar la velocidad, intensidad y
persistencia de la expresión de aroma/sabor en una composición
oral.
21. Utilización de microcápsulas que presentan
sustancias extrañas encapsuladas en el interior de las células de
levadura sobre cuyas superficies se adhiere por lo menos un elemento
seleccionado de entre el grupo constituido por sacáridos y
proteínas, en las que la sustancia extraña es por lo menos un
elemento seleccionado de entre el grupo tal como se define en la
reivindicación 1, como aromatizantes, edulcorantes, colorantes,
aderezos, amargantes, especias o acidulantes.
22. Utilización de microcápsulas que presentan
sustancias extrañas encapsuladas en el interior de las células de
levadura sobre cuyas superficies se adhieren por lo menos un
elemento seleccionado de entre el grupo constituido por sacáridos y
proteínas, para la preparación de una composición oral, en la que la
sustancia extraña es por lo menos un elemento seleccionado de entre
el grupo tal como se define en la reivindicación 1.
23. Utilización de microcápsulas que presentan
sustancias extrañas encapsuladas en el interior de las células de
levadura sobre cuyas superficies se adhiere por lo menos un elemento
seleccionado de entre el grupo constituido por sacáridos y
proteínas, para aumentar la velocidad, intensidad y persistencia de
la expresión de aroma/sabor en una composición oral, en las que la
sustancia extraña es por lo menos un elemento seleccionado de entre
el grupo tal como se define en la reivindicación 1.
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