ES2336808T3

ES2336808T3 - Granulos de enzima.

Info

Publication number: ES2336808T3
Application number: ES05785170T
Authority: ES
Inventors: Erik Schmidt Marcussen; Flemming Borup; Ole Simonsen; Erik Kjaer Markussen
Original assignee: Novozymes AS
Current assignee: Novozymes AS
Priority date: 2004-09-27
Filing date: 2005-09-27
Publication date: 2010-04-16
Anticipated expiration: 2025-09-27
Also published as: DE09171238T1; ES2390627T3; EP1804592A1; EP2160950A1; PL1804592T3; JP2013128491A; ES2335964T1; EP2143339B1; EP1804592B1; JP2008514192A; DE09171217T1; JP5918315B2; DE202005021811U1; EP2258209B1; ATE447853T1; EP2160950B1; DE602005017653D1; CN105211639A; DK2160950T3; EP2143339A1

Abstract

Método de fabricación de una composición alimentaria comprendiendo las etapas de: i. mezcla de componentes alimentarios con gránulos comprendiendo un núcleo y un recubrimiento, donde el núcleo comprende una enzima, ii. tratamiento con vapor de dicha composición (i), y iii. granulación de dicha composición (II), caracterizado por el hecho de que el recubrimiento comprende una que tiene una humedad constante a 20ºC que es superior a 60%.

Description

Gránulos de enzima.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a la producción de composiciones alimentarias granuladas tratadas al vapor comprendiendo gránulos de enzima recubiertos de sal. La invención se refiere también al uso de gránulos de enzima recubiertos de sal para la producción de composiciones alimentarias granuladas tratadas al vapor.

Antecedentes de la invención

En la técnica referente a alimentos para animales, es bien conocido que la granulación de alimentos es un desiderátum debido a que la granulación de alimentos incrementa la digestibilidad, especialmente de la fracción de almidón del alimento. Por otra parte, la granulación del alimento reduce los problemas relacionados con el polvo. Hace que el alimento sea más fácil de comer para los pájaros, y que se pueda incorporar cantidades pequeñas de ingredientes en el alimento y "encerrar" la mezcla alimentaria. En el proceso de producción de gránulos alimentarios, se considera necesario tratar con vapor los gránulos alimentarios con el fin de matar la bacteria de la salmonella si está presente, por lo que un tratamiento con vapor a aproximadamente 80ºC es apropiado. Las enzimas presentes en los gránulos alimentarios no son estables a esta temperatura elevada, y por consiguiente, se debe usar una cantidad excesiva de enzimas, o los componentes alimentarios sin enzimas son granulados y tratados con vapor, donde posteriormente, una enzima conteniendo una suspensión o solución es recubierta sobre los granulados tratados al vapor. No obstante, este recubrimiento es incómodo y a menudo no es compatible con las plantas existentes. Un intento para obtener gránulos de enzima mejorados para un alimento está presente en la patente WO 92/12645. WO 92/12645 describe T-gránulos, que son recubiertos con una grasa o una cera, y unos componentes alimentarios que son tratados con vapor y granulados posteriormente. Mediante esta invención fue posible tratar con calor los gránulos comprendiendo enzimas y evitar el recubrimiento incómodo con enzimas después del tratamiento térmico. El uso de T-gránulos recubiertos de cera fue una mejora significante en este campo ya que fue posible mantener una actividad de enzima aceptable durante la granulación con vapor. Pero la industria sigue solicitando una actividad de enzima mejorada después de la granulación con vapor. Además existe una demanda de pequeños gránulos de enzima que comprenden también una cantidad importante de enzima activa después de la granulación, para la producción de alimentos para pollos de engorde. Resulta mucho más fácil controlar la cantidad de enzimas en los gránulos alimentarios cuando se utilizan pequeños gránulos de enzima. Los pollos de engorde sólo comen una pequeña cantidad de granulados al día y se considera que éstos ingieren una toma de enzima más homogénea cuando se han usado pequeños gránulos de enzima en la fabricación de los gránulos alimentarios. Resulta más fácil resolver esta demanda con los gránulos usados en la presente invención, en comparación con los gránulos de enzima conocidos actualmente en el mercado.

La presente invención resuelve estas demandas a través del recubrimiento de un gránulo conteniendo una enzima con una sal antes de la granulación con vapor. Se ha demostrado que se puede tratar con vapor unos gránulos recubiertos de sal comprendiendo una enzima y mantener una cantidad importante de actividad.

El uso de recubrimientos de sal en la granulación de enzimas es conocido por WO 00/01793 donde se descubrió que los recubrimientos de sal mejoraban la estabilidad de almacenamiento de los gránulos de enzima para
detergentes.

WO 97/16076 A1 expone una partícula, preparación conteniendo enzimas adecuada para un uso, por ejemplo, en la producción de una composición de alimentos para animales.

EP-A2-0 940 088 expone una composición de aditivos alimentarios para rumiantes y un proceso para su producción.

WO 01/25411 A expone procesos de preparación de una partícula conteniendo enzimas.

US 2003/049811 A1 expone un proceso para la preparación de un granulado conteniendo enzimas.

WO 97/39116 A expone un gránulo conteniendo enzimas comprendiendo (a) una enzima y (b) un núcleo que es capaz intrínsecamente de absorber al menos 5% p/p (en base al peso del núcleo) de agua y un método para la producción de tales gránulos.

WO 00/01793 A, US-B1-6 268 329 y US 2002/160927 A exponen una composición granulosa conteniendo enzimas comprendiendo: a) un núcleo conteniendo enzimas y b) una capa continua esencialmente protectora o un recubrimiento de encapsulación del núcleo comprendiendo al menos 60% de un compuesto soluble en agua, que posee un peso molecular inferior a 500 gramos por mol, un pH inferior a 11 y una humedad constante de 20ºC de más del
81%.

WO 03/055967 A expone un proceso para la preparación de gránulos recubiertos comprendiendo las etapas que consisten en: (a) proveer una unidad de núcleo comprendiendo un componente activo (b) en contacto con la unidad de núcleo con una dispersión líquida comprendiendo un solvente, una sal disuelta y partículas sólidas dispersas donde las partículas sólidas constituyen al menos 10% p/p de la sustancia seca total de la dispersión y (c) la evaporación del solvente de la dispersión líquida para que la sal y las partículas sólidas se dispongan en recubrimiento sobre la unidad del núcleo.

Resumen de la invención

Un objeto de la presente invención consiste en producir composiciones alimentarias granuladas tratadas al vapor con una cantidad significante de actividad de enzimas. Un segundo objeto de la presente invención consiste en proveer el uso de gránulos comprendiendo una enzima que retiene una cantidad significante de actividad a pesar de la granulación con vapor. Se ha descubierto de forma sorprendente que los gránulos comprendiendo enzimas, cuando están recubiertos con una sal, son particularmente buenos para la producción de alimentos granulados tratados con vapor ya que retienen una cantidad significante de actividad a pesar del tratamiento con vapor.

También se ha demostrado que incluso con tamaños pequeños de gránulos se puede retener un volumen aceptable de actividad.

La presente invención provee así en un primer aspecto, un método para la fabricación de una composición alimentaria comprendiendo las etapas de:

i.: mezcla de componentes alimentarios con gránulos comprendiendo un núcleo y un recubrimiento, donde el núcleo comprende una enzima,

ii.: tratamiento con vapor de dicha composición (i), y

iii.: granulación de dicha composición (ii),

caracterizado por el hecho de que el recubrimiento comprende una sal que tiene una humedad constante de 20ºC superior al 60%.

En un segundo aspecto la presente invención provee el uso de gránulos comprendiendo un núcleo comprendiendo una enzima y un recubrimiento para la producción de una composición alimentaria granulada tratada con vapor, caracterizado por el hecho de que el recubrimiento comprende una sal que tiene una humedad constante a 20ºC superior al 60%.

Descripción detallada de la invención Definiciones

Solución:

Una solución está definida en forma de mezcla homogénea de dos o más sustancias.

Suspensión:

Una suspensión está definida en forma de partículas finas suspendidas en un fluido.

Tamaño de partícula:

Por tamaño de partícula del gránulo se entiende el diámetro de masa medio de los gránulos. % RH:

El término "% RH" debe ser entendido en el contexto de la invención como la humedad relativa del aire. 100% RH es el aire saturado con la humedad del agua a una temperatura fija y % RH refleja así la saturación de humedad del porcentaje de aire.

Humedad constante:

Los términos "humedad constante" (en el contexto de la invención, a veces abreviado como CH) de un compuesto o sustancia deben ser entendidos como el % RH de aire atmosférico en equilibrio con una solución acuosa saturada de dicho compuesto en contacto con la fase sólida de dicho compuesto, todos confinados al interior de un espacio cerrado a una temperatura determinada. Esta definición es conforme a "Handbook of chemistry and physics" CRC Press, Inc., Cleveland, EEUU, 58ª edición, P E46, 1977-1978. En consecuencia CH_{20^{o}C} = 50% para un compuesto significa que el aire con un 50% de humedad estará en equilibrio con una solución acuosa saturada del compuesto a 20ºC. Por lo que los términos humedad constante son una medida de las propiedades higroscópicas de un compuesto.

Introducción

Hemos descubierto de manera sorprendente que se puede aumentar la estabilidad de una enzima comprendida en los gránulos durante la granulación con vapor mediante la aplicación de un recubrimiento de sal sobre los gránulos antes del tratamiento con vapor. Esto significa que podemos mejorar la estabilidad de las enzimas comprendidas en las composiciones alimentarias que son expuestas a un tratamiento con vapor durante la granulación.

Hemos descubierto que también se puede preparar gránulos pequeños comprendiendo enzimas que retienen niveles de actividad aceptables a pesar de un tratamiento con vapor mediante el recubrimiento con una sal.

Además estas ventajas sorprendentes del recubrimiento de sal permiten proporcionar valores de polvo adecuados y aumentar la estabilidad de almacenamiento de los gránulos alimentarios en comparación con los gránulos conocidos recubiertos de cera. Por otra parte, un recubrimiento de sal puede actuar en forma de regulador de solubilidad.

El gránulo

Cuando se hace referencia al gránulo usado en la presente invención, puede tratarse de un gránulo único o bien de varios gránulos.

El gránulo que es particularmente adecuado para una granulación con vapor y como parte de una composición alimentaria granulada tratada con vapor, comprende un núcleo y al menos un recubrimiento. El núcleo comprende una enzima y el recubrimiento comprende una sal.

El tamaño de partícula de los gránulos que deben ser usados en granulados alimentarios es normalmente superior a 700 \mum, más particularmente de 700-1000 \mum. Tamaños de partícula adecuados del gránulo son de 50-2000 \mum, más particularmente de 100-1000 \mum. Hemos descubierto que se pueden preparar gránulos alimentarios particularmente pequeños para la granulación mediante el recubrimiento de los gránulos con un recubrimiento de sal. El gránulo puede en una forma de realización particular tener un tamaño de partícula inferior a 700 \mum. En otra forma de realización particular de la presente invención el tamaño de partícula del gránulo final es de 100-600 \mum. En una forma de realización más particular de la presente invención el tamaño de partícula del gránulo final es de 200-400 \mum. En una forma de realización aún más particular de la presente invención el tamaño de partícula es de 210-390 \mum. En un forma de realización más particular de la presente invención el tamaño de partícula del gránulo final es inferior a 400 \mum. En otra forma de realización más particular el tamaño de partícula de los gránulos es superior a 250 \mum e inferior a 350 \mum.

En una forma de realización particular de la presente invención el tamaño de partícula del gránulo es inferior a
400 \mum.

En una forma de realización particular de la presente invención los gránulos que deben ser usados para composiciones alimentarias granuladas tratadas con vapor tienen un tamaño de partícula inferior a 400 \mum.

En una forma de realización particular de la presente invención el tamaño de partícula del gránulo está entre 210 y 390 \mum.

En una forma de realización particular de la presente invención el tamaño de los gránulos que debe ser usado en composiciones alimentarias granuladas tratadas con vapor está entre 210 y 390 \mum.

El núcleo

El núcleo comprende una enzima en forma de sustancia seca concentrada.

El núcleo puede ser

1.: una mezcla homogénea de una enzima, o

2.: una partícula inerte con una enzima aplicada sobre ésta, o

3.: una mezcla homogénea de una enzima y opcionalmente materiales que actúan como ligantes que es recubierta con una enzima.

La partícula del núcleo es en una forma de realización particular de 20-800 \mum. En una forma de realización más particular de la presente invención el tamaño de partícula del núcleo es de 50-500 \mum. En una forma de realización aún más particular de la presente invención el tamaño de partícula del núcleo es de 100-300 \mum. En una forma de realización más particular de la presente invención el tamaño de partícula del núcleo es de 150-250 \mum.

Partícula inerte:

La partícula inerte puede ser soluble o insoluble en agua, por ejemplo almidón, por ejemplo en forma de yuca o de trigo; o un azúcar (tal como la sacarosa o lactosa), o una sal (tal como el cloruro de sodio o sulfato de sodio). Materiales de partícula inerte adecuados incluyen sales inorgánicas, azúcares, polialcoholes, pequeñas moléculas orgánicas tales como ácidos orgánicos o sales, minerales tales como arcillas o silicatos o una combinación de dos o más de éstos.

Las partículas inertes pueden ser producidas mediante una variedad de técnicas de granulación incluyendo: cristalización, precipitación, recubrimiento de recipiente, recubrimiento en lecho de fluido, aglomeración en lecho de fluido, atomización giratoria, extrusión, granulado, esferonización, métodos de reducción de tamaño, granulación de tambor, y/o granulación de corte alto.

Enzimas:

El compuesto activo en el núcleo del gránulo es una enzima.

La enzima en el contexto de la presente invención puede ser cualquier enzima o combinación de diferentes enzimas. Por consiguiente, cuando se hace referencia a "una enzima", en general se entenderá que incluye una enzima o una combinación de enzimas.

Se entenderá que unas variantes de enzimas (producidas, por ejemplo mediante técnicas recombinantes) se incluyen en el significado del término "enzima". Ejemplos de este tipo variantes de enzima están descritos, por ejemplo en EP 251,446 (Genencor), WO 91/00345 (Novo Nordisk), EP 525,610 (Solvay) y WO 94/02618 (Gist-Brocades NV).

Las enzimas pueden ser clasificadas en base al manual Enzyme Nomenclature a partir del NC-IUBBM, 1992), ver también el sitio Internet ENZYME: http://www.expasy.ch/enzymel. ENZYME es un almacén de información relativa a la nomenclatura de enzimas. Está basada principalmente en las recomendaciones del Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (IUB-MB), Academic Press, Inc., 1992, 1992, y describe cada tipo de enzima caracterizada para la cual un número EC (Enzyme Commission) ha sido provisto (Bairoch A. The ENZYME database, 2000, Nucleic Acids Res 28:304-305). Esta nomenclatura IUBBM de enzimas se basa en su especificidad de sustrato y ocasionalmente en su mecanismo molecular; ya que una clasificación no refleja las características estructurales de estas enzimas.

Otra clasificación de ciertas enzimas de hidrolasa de glucósido, tales como la endoglucanasa, xilanasa, galactanasa, mananasa, dextranasa y alfa-galactosidasa, en familias basadas en similitudes de secuencias de aminoácidos ha sido propuesta hace años. Se encuentran habitualmente en 90 familias diferentes: ver el sitio Internet CAZy(ModO) (Coutinho, P.M. & Henrissat, B. (1999) servidor de Enzimas activas de carbohidratos en el URL: http://afmb.cnrs-mrs.fr/-cazy/CAZY/index.html (documentos correspondientes: Coutinho, P.M. & Henrissat, B. (1999) Carbohydrate-active enzymes: an integrated database approach. En "Recent Advances in Carbohydrate Bioengineering", H.J. Gilbert, G. Davies, B. Henrissat and B. Svensson eds., The Royal Society of Chemistry, Cambridge, pp. 3-12; Coutinho, P.M. & Henrissat, B. (1999) The modular structure of cellulases and other Carbohydrate-active enzymes: an integrated database approach. En "Genetics, Biochemistry and Ecology of Cellulose Degradation"., K. Ohmiya, K. Hayashi, K. Sakka, Y. Kobayashi, S. Karita and T. Kimura eds., Uni Publishers Co., Tokyo, pp. 15-23).

Los tipos de enzimas que pueden ser incorporados en gránulos incluyen oxidorreductasas (EC 1.-.-.-), transferasas (EC 2.-.-.-), hidrolasas (EC 3.-.-.-), liasas (EC 4.-.-.-), isomerasas (EC 5.-.-.-) y ligasas (EC 6.-.-.-).

Las oxidorreductasas preferidas en el contexto de la invención son las peroxidasas (EC 1.11.1), lacasas (EC 1.10.3.2) y glucosa oxidasas (EC 1.1.3.4)]. Un ejemplo de oxidorreductasa disponible comercialmente (EC 1.-.-.-) es Gluzyme^{TM} (enzima disponible en Novozymes A/S). Otras oxidorreductasas están disponibles con otros proveedores. Las transferasas preferidas son transferasas de cualquiera de las siguientes subclases:

a: Transferasas de transferencia de grupos de mono-carbono (EC 2.1);

b: transferasas de transferencia de residuos de aldehída o de cetona (EC 2.2); aciltransferasas (EC 2.3);

c: glicosiltransferasas (EC 2.4);

d: transferasas de transferencia de grupos alquilo o arilo, otras que los grupos de metilo (EC 2.5); y

e: transferasas de transferencia de grupos nitrogenados (EC 2.6).

Un tipo preferido de transferasa en el contexto de la invención es una transglutaminasa (proteína-glutamina \gamma-glutamiltransferasa; EC 2.3.2.13).

Otros ejemplos de transglutaminasas adecuados están descritos en WO 96/06931 (Novo Nordisk A/S).

Unas hidrolasas preferidas en el contexto de la invención son: hidrolasas de éster carboxílico (EC 3.1.1.-) tales como las lipasas (EC 3.1.1.3); fitasas (EC 3.1.3.-), por ejemplo 3-fitasas (EC 3.1.3.8) y 6-fitasas (EC 3.1.3.26); glicosidasas (EC 3.2, que se incluyen en un grupo denominado en la presente "carbohidrasas"), tales como \alpha-amilasas (EC 3.2.1.1); peptidasas (EC 3.4, también conocidas como proteasas); y otras hidrolasas carbonilo. Ejemplos de fitasas disponibles comercialmente incluyen Bio Feed^{TM} Phytase (Novozymes), Ronozyme^{TM} P (DSM Nutritional Products), Natuphos^{TM} (BASF), Finase^{TM} (AB Enzymes), y las series de productos Phyzyme^{TM} (Danisco). Otras fitasas preferidas incluyen aquellas descritas en WO 98/28408, WO 00/43503, y WO 03/066847.

En el presente contexto, el término "carbohidrasa" es usado para indicar no sólo enzimas capaces de separar cadenas de carbohidratos (por ejemplo almidones o celulosa) de estructuras especialmente en forma de anillo de cinco y seis elementos (es decir, glicosidasas, EC 3.2), sino también enzimas capaces de isomerizar carbohidratos, por ejemplo estructuras en forma de anillo de seis elementos tales como la D-glucosa para estructuras en forma de anillo de cinco elementos tales como la D-fructosa.

Unas carbohidrasas relevantes incluyen las siguientes (números EC entre paréntesis):

\alpha-amilasas (EC 3,2,1,1), \beta-amilasas (EC 3,2,1,2), glucano 1,4-\alpha-glucosidasas (EC 3,2,1,3), endo-1,4-beta-glucanasa (celulasas, EC 3,2,1,4), endo-1,3(4)-\beta-glucanasas (EC 3,2,1,6), endo-1,4-\beta-xilanasas (EC 3,2,1,8), dextranasas (EC 3,2,1,11), quitinasas (EC 3,2,1,14), poligalacturonasas (EC 3,2,1,15), lisozimas (EC 3,2,1,17), glucosidasas (EC 3,2,1,21), \alpha-galactosidasas (EC 3,2,1,22), galactosidasas (EC 3,2,1,23), amylo-1,6-glucosidasas (EC 3,2,1,33), xilano 1,4-\beta-xilosidasas (EC 3,2,1,37), glucano endo-1,3-\beta-D-glucosidasas (EC 3,2,1,39), \alpha-dextrina endo-1,6-\alpha-glucosidasas (EC3,2,1,41), sacarosa \alpha-glucosidasas (EC 3,2,1,48), glucano endo 1,3-\alpha-glucosidasas (EC 3,2,1,59), glucano 1,4-\beta-glucosidasas (EC 3,2,1,74), glucano endo-1,6-\beta-glucosidasas (EC 3,2,1,75), galactanasas (EC 3,2,1,89), arabinano endo-1,5-\alpha-L-arabinosidasas (EC 3,2,1,99), lactasas (EC 3,2,1,108), quitosanasas (EC 3,2,1,132) e isomerasas de xilosa (EC 5,3,1,5).

En el presente contexto una fitasa es una enzima que cataliza la hidrólisis de fitato (mio-inositol hexaquisfosfato) en (1) mio-inositol y/o (2) mono-, di-, tri-, tetra y/o pentafosfatos de la misma y (3) fosfato inorgánico.

Según el sitio ENZYME indicado más arriba, diferentes tipos de fitasas son conocidas: una denominada 3-fitasa (mio-inositol hexafosfato 3-fosfohidrolasa, EC 3.1.3.8) y una denominada 6-fitasa (mio-inositol hexafosfato 6-fosfohidrolasa, EC 3.1.3.26). Para los objetivos de la presente invención, ambos tipos se incluyen en la definición de la fitasa.

Para los objetivos de la presente invención la actividad de la fitasa puede ser, es preferiblemente, determinada en la unidad de FYT, una FYT siendo la cantidad de enzima que libera un ortofosfato inorgánico de 1 micromol por minuto en las condiciones siguientes: pH 5.5; temperatura 37ºC; sustrato: fitato de sodio (C_{6}H_{6}O_{24}P_{6}Na_{12}) en una concentración de 0.0050 mol/l. Ensayos de fitasa adecuados son descritos en el Ejemplo 1 de WO 00/20569. FTU sirve para determinar la actividad de fitasa en los alimentos y en la premezcla. Como alternativa, los mismos principios de extracción como descritos en el Ejemplo 1, por ejemplo para las mediciones de endoglucanasa y xilanasa, pueden ser usados para determinar la actividad de fitasa en los alimentos y en la premezcla.

Ejemplos de fitasas son descritos en WO 99/49022 (variantes de fitasa), WO 99/48380, WO 00/43503 (fitasas de consenso), EP 0897010 (fitasas modificadas), EP 0897985 (fitasas de consenso).

También se pueden obtener fitasas, por ejemplo a partir de los siguientes:

i.: Ascomycetes, tales como los que están descritos en EP 684313 o US 6139902; Aspergillus awamori PHYA (SWISSPROT P34753, gen 133:55-62 (1993)); Aspergillus Niger (ficuum) PHYA (SWISSPROT P34752, Gen 127:87-94 (1993), EP 420358); Aspergillus awamori PHYB (SWISSPROT P34755, Gen 133:55-62 (1993)); Aspergillus niger PHYB (SWISSPROT P34754, Biochem.

\quad: Biophys. Res. Commun. 195:53-57(1993)); Emericella nidulans PHYB (SWISSPROT 000093, Biochim.; Biophys. Acta 1353:217-223 (1997));

ii.: Thermomyces o Humicola, tal como la fitasa Thermomyces lanuginosus descritas en WO 97/35017;

iii.: Basidiomycetes, tal como Peniophora (WO 98/28408 y WO 98/28409);

iv.: Otras fitasas fúngicas como descritas en JP 11000164 (fitasa Penicillium), o W098/13480 (fitasa Monascus ankca);

v.: Bacillus, tal como Bacillus subtilis PHYC (SWISSPROT 031097, Appl. Environ. Microbiol. 64:2079-2085 (1998)); Bacillus sp. PHYT (SWISSPROT 066037, FEMS Microbiol. Lett. 162:185-191 (1998); Bacillus subtilis PHYTJSWISSPROT P42094, J. Bacteriol. 177:6263-6275 (1995)); la fitasa descrita en AU 724094, o WO 97/33976;

vi.: Escherichia coli (US 6110719);

vii.: Schwanniomyces occidentalis (US 5830732);

viii.: una fitasa que posee una secuencia de aminoácidos de al menos 75% de identidad en una secuencia de aminoácidos (madura) de una fitasa de (i)-(vii); o

ix.: una fitasa codificada por una secuencia de ácido nucleico que se hibridaza en condiciones de astringencia baja con una parte de codificación de la fitasa madura de un gen correspondiente a una fitasa de (i)-(vii);

x.: una variante de la fitasa de (i)-(vii) comprendiendo una sustitución, deleción, y/o inserción de uno o más aminoácidos;

xi.: una variante alélica de (i)-(vii);

xii.: un fragmento de (i), (ii), (iii), (iv), (vi) o (vii) que tiene una actividad de fitasa; o

xiii.: un polipéptido sintético diseñado en base a (i)-(vii) y que posee una actividad de fitasa.

Otras fitasas pertinentes para el uso según la invención son variantes diferentes de la fitasa Peniophora lycii (péptido maduro correspondiente a aminoácidos 31-225 de SEQ ID NO: 15). Estas variantes están descritas en WO 2003 66847.

Ejemplos de proteasas disponibles comercialmente (peptidasas) incluyen Kannase^{TM}, Everlase^{TM}, Esperase^{TM}, Alcalase^{TM}, Neutrase^{TM}, Durazym^{TM}, Savinase^{TM}, Ovozyme^{TM}, Pyrase^{TM}, Pancreatic Trypsin NOVO (PTN), Bio-Feed^{TM} Pro y Clear-Lens^{TM} pro (todas disponibles en Novozymes A/S, Bagsvaerd, Dinamarca). Otras proteasas preferidas incluyen las que están descritas en WO 01/58275 y WO 01/58276.

Otras proteasas disponibles comercialmente incluyen Ronozyme^{TM} Pro, Maxatase^{TM}, Maxacal^{TM}, Maxapem^{TM}, Opticlean^{TM}, Propease^{TM}, Purafect^{TM} y Purafect Ox^{TM} (disponibles en Genencor International Inc., Gist-Brocades, BASF, o DSM Nutritional Products).

Ejemplos de lipasas disponibles comercialmente incluyen Lipex^{TM}, Lipoprime^{TM}, Lipopan^{TM}, Lipolase^{TM},
Lipolase^{TM} Ultra, Lipozyme^{TM}, Palatase^{TM}, Resinase^{TM}, Novozym^{TM} 435 y Lecitase^{TM} (todas disponibles en Novozymes A/S).

Otras lipasas disponibles comercialmente incluyen Lumafast^{TM} (Lipasa Pseudomonas mendocina de Genencor Internacional Inc.); Lipomax^{TM} (lipasa Ps. pseudoalcaligenes de Gist-Brocades/Genencor Int. Inc.; y lipasa de especie Bacillus de enzimas Solvay. Otras lipasas son disponibles con otros proveedores.

Ejemplos de carbohidrasas disponibles comercialmente incluyen Alpha-Gal^{TM}, Bio-Feed^{TM} Alpha, Bio-Feed^{TM} Beta, Bio-Feed^{TM} Plus, Bio-Feed^{TM} Wheat, Bio-Feed^{TM} Z, Novozyme^{TM} 188, Carezyme^{TM}, Celluclast^{TM}, Cellusoft^{TM}, Celluzyme^{TM}, Ceremyl^{TM}, Citrozym^{TM}, Denimax^{TM}, Dezyme^{TM}, Dextrozyme^{TM}, Duramyl^{TM}, Energex^{TM}, Finizym^{TM}, Fungamyl^{TM}, Gamanase^{TM}, Glucanex^{TM}, Lactozym^{TM}, Liquezyme^{TM}, Maltogenase^{TM}, Natalase^{TM}, Pentopan^{TM},
Pectinex^{TM}, Promozyme^{TM}, Pulpzyme^{TM}, Novamyl^{TM}, Termamyl^{TM}, AMG^{TM} (Amyloglucosidase Novo),
Maltogenase^{TM}, Sweetzyme^{TM} y Aquazym^{TM} (todas disponibles en Novozymes A/S). Otras carbohidrasas son disponibles con otros proveedores, tales como las series de productos Roxazyme^{TM} y Ronozyme^{TM} (DSM Nutritional Products), las series de productos Avizyme^{TM}, Porzyme^{TM} y Grindazyme^{TM} (Danisco, Finnfeeds), y Natugrain^{TM} (BASF), Purastar^{TM} y Purastar^{TM} OxAm (Genencor).

Otras enzimas disponibles comercialmente incluyen Mannaway^{TM}, Pectaway^{TM}, Stainzyme^{TM} y Renozyme^{TM}.

En una forma de realización particular de la presente invención la enzima es seleccionada en el grupo que consiste en endoglucanasas, endo-1,3(4)-beta-glucanasas, proteasas, fitasas, galactanasas, mananasas, dextranasas y alfa-galactosidasa, y se hace referencia a la patente WO 2003/062409 que está incorporada en la presente como referencia.

Enzimas alimentarias adecuadas particulares incluyen: amilasas, fosfotasas, tales como fitasas, y/o fosfatasas ácidas; carbohidrasas, tales como enzimas amilíticas y/o pared celular vegetal de degradación de enzimas incluyendo celulasas tales como \beta-glucanasas y/o hemicelulasas tales como xilanasas o galactanasas; proteasas o peptidasas tales como lisozima; galatosidasas, pectinasas, esterasas, lipasas, en particular fosfolipasas tales como fosfolipasas pancreáticas mamíferas A2 y glucosa oxidasa. En particular las enzimas alimentarias tienen un pH neutro y/o ácido óptimo.

En una forma de realización particular de la presente invención la enzima es seleccionada en el grupo comprendiendo amilasas, proteasas, beta-glucanasas, fitasas, xilanasas, fosfolipasas y glucosa oxidasas.

La presente invención es particularmente adecuada para enzimas termolábiles. El término termolábil tal como se ha aplicado en el contexto de enzimas determinadas se refiere a la temperatura de fusión, T_{m}, determinada mediante el uso de una calorimetría diferencial de barrido (DSC) con un pH de 5.5. Para una enzima termolábil, la T{m} es inferior a 100ºC. En formas de realización particulares, la T_{m} es inferior a 90ºC, tal como inferior a 80ºC, inferior a 70ºC, incluso inferior a 60ºC. La determinación de T_{m} por DSC se realiza con diferentes valores de pH mediante el uso de una VP-DSC de MicroCal. Los barridos se realizan en un índice de barrido constante a 1.5ºC/min a partir de 20-90ºC. Antes de realizar la DSC, las fitasas son desaladas usando columnas NAP-5 (Pharmacia) equilibradas en los tampones apropiados (por ejemplo 0.2 m de glicina-HCl, pH 2.5 o 3.0, 0.1 M de acetato de sodio, pH 5.5, 0.1 M de tris-HCl, pH 7.0). Se puede realizar una manipulación de datos mediante el uso del software MicroCal Origin. Las mediciones de DSC son realizadas tal como descritas en la patente WO 2003/66847 que se ha incorporado en la presente como referencia.

En una forma de realización particular de la presente invención la enzima de los gránulos que debe ser usada en composiciones alimentarias granuladas tratadas con vapor es termolábil.

Se ha descubierto que mediante el recubrimiento de los gránulos de la presente invención con un recubrimiento de sal se puede obtener más del 50% de actividad de la enzima presente en el núcleo, más del 60%, tal como más del 70%, e incluso más del 75% de actividad después de la granulación con vapor a 100ºC en 60 segundos.

En una forma de realización particular de la presente invención, la actividad retenida de la enzima presente en el núcleo de los gránulos en la composición alimentaria granulada tratada con vapor es de al menos 75% de la actividad de la enzima en el núcleo de los gránulos antes de la granulación con vapor.

En una forma de realización particular de la presente invención la actividad retenida de la enzima presente en el núcleo de los gránulos que deben ser usados en las composiciones alimentarias granuladas tratadas con vapor es de al menos 75% de la actividad de la enzima en el núcleo de los gránulos antes de la granulación con vapor.

En una forma de realización particular de la presente invención la actividad de la enzima es de al menos 75% de la actividad original de la enzima presente en el núcleo de los gránulos antes del tratamiento con vapor y de la granulación de la composición.

En una forma de realización particular de la presente invención el gránulo comprende un núcleo y un recubrimiento donde el núcleo comprende una enzima y el recubrimiento comprende una sal, y donde el gránulo es capaz de retener al menos 75% de la actividad de enzima inicial cuando se incorpora en el proceso de granulación con vapor y donde el gránulo comprende también uno o más de las características siguientes:

i.: el tamaño de partícula del gránulo es inferior a 400 \mum,

ii.: el espesor del recubrimiento de sal es de al menos 8 \mum,

iii.: la enzima es termolábil,

iv.: el gránulo comprende también un recubrimiento de cera, y

v.: el gránulo comprende también una fuente de ácido láctico.

Análisis de actividad de fitasa:

: Método: la fitasa separa el ácido fítico en fosfato, el fosfato liberado reacciona con óxidos de vanadio y molidenio en un complejo coloreado (amarillo). La absorbencia es medida a 415 nm.

: Unidad: 1 FTU = cantidad de enzima que en condiciones estándar (como indicadas más abajo) libera una cantidad de fosfato equivalente a 1 \mum de fosfato por minuto.

Tampones:

: Tampón de extracción: 0.01% Tween 20 (monolaurato de polioxietileno sorbitán)

: Sustrato: 5 mM de ácido fítico, 0.22M de acetato (acetato de sodio/ácido acético), pH 5.5.

: Reactivo: 5 mM de vanadato de amonio, 20 mM de amonio heptamolibdato tetrahidrato, 40 mM de amonio, 2.4M de ácido nítrico

Procedimiento:

Extracción de alimento: 50 g de alimento es extraído en un tampón de extracción de 500 ml durante 1 hora. Otra dilución eventual en un tampón de extracción si la actividad es superior a 2.5 FTU/g por alimento, (nivel de detección de 0.1 FTU/g por alimento). La muestra es centrifugada (15 minutos a 4000 r.p.m.). 300 \mul de sobrenadante son mezclados con 3 ml de sustrato y dispuestos para su reacción durante 60 minutos a 37 grados C. 2 ml de reactivo son añadidos. Las muestras son centrifugadas (10 minutos a 4000 r.p.m..). La absorbencia a 415 nm es medida. La actividad es determinada con respecto a una curva estándar preparada con KH_{2}PO_{4}.

Se hace referencia a WO 2003/66847.

Análisis de actividad de la \beta-glucanasa:

: Método: unas muestras conteniendo \beta-glucanasa son incubadas con un sustrato de \beta-glucano (cebada) teñido con remazol y centrifugado. El sustrato convertido es soluble y colorea el azul sobrenadante. La absorbencia es medida a 590 nm. Unidad: la actividad es medida en relación con un estándar de enzima de \beta-glucanasa (por ejemplo una enzima antes de su granulación).

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Tampones:

Tampón de extracción: 33.3 mM de tampón Sørensen pH 5.0.

Tampón Sørensen:

: Dehidrato de hidrogenofosfato disódico Na_{2}HPO_{4} x2H_{2} O 0.096 g

: Fosfato dehidrogenado de potasio H_{2}PO_{4} 8.9864 g

: Agua desmineralizada hasta 2000 ml

: Tampón: 0.1 M de tampón Sørensen, 45 g/l de EDTA (Triplex III), 0.5 g/ml de Albúmina bovina (BSA), pH 5.0

: Sustrato: comprimidos de \beta-glucano teñidos de remazol (cebada) de Megazyme

: Reactivo de parada: 1% TRIS (Sigma 7-9)

Procedimiento:

Extracción de alimento: 50 g de alimento son extraídos en un tampón de extracción de 500 ml durante 1 hora. En caso de necesidad otra dilución en un tampón de extracción cuando se obtiene una señal de absorbencia demasiado alta. La muestra es centrifugada (5 minutos a 4000 r.p.m.). 1 ml de sobrenadante es mezclado con 1 ml de tampón y 1 sustrato de comprimido y dispuesta en reacción durante 90 minutos a 60ºC. 5 ml de reactivo de parada son añadidos. Las muestras son filtradas. La absorbencia a 590 nm es medida. Una actividad es determinada con respecto a una curva estándar preparada con un estándar de enzima. Análisis de actividad de xilanasa:

Método: las muestras que contienen xilanasa son incubadas con un sustrato de arabinoxilano de trigo con remazol y centrifugadas. El sustrato convertido es soluble y colorea el azul sobrenadante. La absorbencia es medida a
600 nm.

Unidad: la actividad es medida en relación con un estándar de enzima de xilanasa (por ejemplo enzima antes de la granulación).

Tampones:

: Tampón de extracción: 0.1 m de fosfato (Na_{2}HPO_{4}/NaH_{2}PO_{4}) pH 6.0

: Sustrato: 5 g/l de arabinoxilano AZCL (trigo) de Megazyme disueltos en un tampón de extracción

: Reactivo de parada: 2% de Trizma (Sigma T) (2-amino-2-(hidroximetil)-1,3-propanediol y tris(hidroximetil) tampón de aminometano hidroclorido)

Procedimiento:

Extracción de alimento: 50 g de alimento son extraídos en 500 ml de tampón de extracción durante 1 hora. En caso de necesidad, dilución adicional en un tampón de extracción si se obtiene una señal demasiado alta de absorbencia. La muestra es centrifugada (5 minutos a 4000 r.p.m.). 25 \mul de sobrenadante son mezclados con 150 \mul de sustrato y dispuestos para su reacción durante 60 minutos a 50ºC. 100 \mul de reactivo de parada son añadidos. Las muestras son filtradas. La absorbencia a 600 nm es medida. Una actividad es determinada en relación con una curva estándar preparada con un estándar de enzima.

La actividad de otras enzimas es analizada por métodos estándar conocidos por el experto en la técnica.

En una forma de realización particular de la presente invención la composición alimentaria del ejemplo 1 es usado cuando se determina la actividad de la enzima. En una forma de realización más particular de la presente invención la composición alimentaria del ejemplo 2 es usada cuando se determina la actividad de la enzima.

Materiales adecuados en forma de ligantes:

Ligantes de la presente invención pueden ser polímeros sintéticos, grasas incluyendo ceras, caldo de fermentación, carbohidratos, sales o polipéptidos.

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Polímeros sintéticos

Por polímeros sintéticos se entiende polímeros cuyo esqueleto ha sido polimerizado sintéticamente.

Polímeros sintéticos adecuados incluyen en particular polivinilpirrolidona (PVP), alcohol polivinílico (PVA), acetato de polivinilo, poliacrilato, polimetacrilato, poli-acrilamida, polisulfonato, policarboxilato, y copolímeros de éstos, en particular polímeros o copolímeros solubles en agua.

En una forma de realización particular de la presente invención el polímero sintético es un polímero de vinilo.

Ceras

Una "cera" en el contexto de la presente invención se define como un material polimérico que posee un punto de fusión entre 25-150ºC, particularmente de 30 a 100ºC más particularmente de 35 a 85ºC más particularmente de 40 a 75ºC. La cera preferiblemente está en un estado sólido a temperatura ambiente, 25ºC. Se prefiere el hecho de que el límite inferior se ajuste a una distancia razonable entre la temperatura en la que la cera comienza a fundirse hasta la temperatura en la que los gránulos o composiciones comprendiendo los gránulos son almacenados normalmente, de 20 a 30ºC.

Para algunos gránulos una característica preferible de la cera es que la cera debe ser soluble en agua o dispersible en agua, la cera debería desintegrarse y/o disolverse para proporcionar una liberación y disolución rápidas de la enzima incorporada en las partículas a la solución acuosa. Ejemplos de ceras solubles en agua son glicoles de polietileno (PEG). Entre las ceras insolubles en agua, que son dispersibles en una solución acuosa se encuentran triglicéridos y aceites. Para algunos gránulos es preferible que la cera sea insoluble.

En una forma de realización particular de la presente invención la composición de la cera es una composición hidrofílica. En una forma de realización particular al menos 25% p/p de los ingredientes comprendidos en la composición de la cera es soluble en agua, preferiblemente al menos 50% p/p, preferiblemente al menos 75% p/p, preferiblemente al menos 85% p/p, preferiblemente al menos 95% p/p, preferiblemente al menos 99% p/p.

En otra forma de realización la composición de la cera es hidrofílica y dispersible en una solución acuosa.

En una forma de realización particular la composición de la cera comprende menos de 75% p/p constituyentes hidrofóbicos, preferiblemente menos de 50% p/p, preferiblemente menos de 25% p/p, preferiblemente menos de 15% p/p, preferiblemente menos de 5% p/p, preferiblemente menos del 1% p/p.

En una forma de realización particular la composición de la cera comprenden menos de 75% p/p ingredientes insolubles de agua, preferiblemente menos de 50% p/p, preferiblemente menos de 25% p/p, preferiblemente menos de 15% p/p, preferiblemente menos de 5% p/p, preferiblemente menos del 1% p/p.

Las ceras adecuadas son compuestos orgánicos o sales de compuestos orgánicos que tienen una o más de las propiedades mencionadas anteriormente.

La composición de la cera puede comprender cualquier cera, que es sintetizada químicamente. Puede comprender también a partes iguales ceras aisladas a partir de una fuente natural o un derivado de éstas. Por lo que la composición de cera puede comprender ceras seleccionadas a partir de la siguiente lista no limitativa de ceras.

-: glicoles de polietileno, PEG. Diferentes ceras de PEG son disponibles comercialmente con distintos tamaños moleculares, donde los PEG con tamaños moleculares reducidos también tienen puntos de fusión reducidos. Ejemplos de PEG adecuados son PEG 1500, PEG 2000, PEG 3000, PEG 4000, PEG 6000, PEG 8000, PEG 9000 etc. por ejemplo de BASF (serie Pluriol E) o de Clariant o de Ineos. Derivados de glicoles de polietileno pueden ser usados también.

-: polipropilenos (por ejemplo glicol de polipropileno serie Pluriol P de BASF) o polietilenos o mezclas de éstos. Derivados de polipropilenos y polietilenos pueden ser usados también.

-: polímeros de etileneoxido, propileneoxido o copolímeros de éstos son útiles, tales como polímeros en bloque, por ejemplo Pluronic PE 6800 de BASF. Derivados de alcoholes grasos etoxilados.

-: las ceras aisladas a partir de una fuente natural, tal como la cera Carnauba (punto de fusión entre 80-88ºC), la cera Candelilla (punto de fusión entre 68-70ºC) y la cera de abejas. Otras ceras naturales o derivadas de éstas son ceras derivadas de animales o plantas, por ejemplo de origen marino. Aceite de planta hidrogenada o sebo animal. Ejemplos de tales ceras son el sebo de buey hidrogenado, aceite de palma hidrogenado, semillas de algodón hidrogenadas y/o aceite de soja hidrogenado, donde el término "hidrogenado" como se utiliza en la presente debe ser interpretado en forma de saturación de cadenas de carbohidratos insaturados, por ejemplo en triglicéridos, donde enlaces dobles de carbonocarbono se convierten en enlaces únicos de carbono-carbono. El aceite de palma hidrogenado es disponible comercialmente por ejemplo en Hobum Oele und Fette GmbH - Alemania o Deutche Cargill Gmbh - Alemania.

-: Alcoholes de ácido graso, tales como el alcohol de ácido graso de la cadena larga lineal NAFOL 1822 (C18, 20, 22) de Condea Chemie Gmbh - Alemania, con un punto de fusión entre 55-60ºC. Derivados de alcoholes de ácido graso.

-: Monoglicéridos y/o diglicéridos, tales como el glicerilo estearato, donde el estearato es una mezcla de ácido esteárico y palmítico, son ceras útiles. Un ejemplo de éste es Dimodan PM - de Danisco Ingredients, Dinamarca.

-: Ácidos grasos, tales como ácidos grasos de cadena larga lineal hidrogenados y derivados de ácidos grasos.

-: Parafinas, es decir hidrocarburos sólidos.

-: cera microcristalina.

En otras formas de realización se puede encontrar ceras útiles en la invención en C.M. McTaggart et. al., Int. J. Pharm. 19, 139 (1984) o Flanders et. al., Drug Dev. Ind. Pharm. 13, 1001 (1987) ambos incorporados aquí en forma de referencia.

En una forma de realización particular de la presente invención la cera de la presente invención es una mezcla de dos o más ceras diferentes.

En una forma de realización particular de la presente invención la cera o ceras es seleccionada en el grupo comprendiendo PEG, ácidos grasos, alcoholes de ácido graso y glicéridos.

En otra forma de realización particular de la presente invención las ceras son elegidas a partir de ceras sintéticas. En una forma de realización más particular las ceras de la presente invención son PEG. En una forma de realización particular de la presente invención la cera es seleccionada a partir del grupo de sebo bovino, PEG y aceite de palma.

Caldo de fermentación

Un caldo de fermentación comprende células microbianas y/o restos de célula de éstas (biomasa).

En una forma de realización preferida el caldo de fermentación comprende al menos 10% de la biomasa, más preferiblemente al menos 50%, incluso más preferiblemente al menos 75% y de forma más preferible al menos 90% o al menos 95% de la biomasa originada a partir de la fermentación. En otra forma de realización preferida el caldo contiene 0-31 % p/p de sustancia seca, preferiblemente 0-20% p/p, más preferiblemente 0-15% p/p tal como 10- 15% p/p de sustancia seca, 0% de sustancia seca excluida de dichas gamas. La biomasa puede constituir hasta 90% p/p de sustancia seca, preferiblemente hasta 75% p/p, más preferiblemente hasta 50% p/p de sustancia seca, mientras que la enzima puede constituir hasta 50% p/p de sustancia seca, preferiblemente hasta 25% p/p, más preferiblemente hasta 10% p/p de sustancia seca.

Polisacáridos

Los polisacáridos pueden ser polisacáridos no modificados producidos naturalmente o polisacáridos modificados producidos naturalmente.

Polisacáridos adecuados incluyen celulosa, pectina, dextrina y almidón. Los almidones pueden ser solubles o insolubles en agua.

En una forma de realización particular de la presente invención el polisacárido es un almidón. En una forma de realización particular de la presente invención el polisacárido es un almidón insoluble.

Almidones producidos naturalmente a partir de una amplia variedad de fuentes vegetales son adecuados en el contexto de la invención (sea como almidones per se, o como el punto de inicio de los almidones modificados), y almidones relevantes incluyen almidón a partir de: arroz, maíz, trigo, patata, avena, mandioca, palma de sagú, yuca, cebada, batata, sorgo, boniatos, centeno, milla, alforfón, arrurruz, malanga, tannia, y pueden estar en forma de harina por ejemplo.

El almidón de mandioca se encuentra entre los almidones preferidos en el contexto de la invención; con respecto a esto se puede mencionar que la casava y almidón de casava son conocidos con varios sinónimos, incluyendo tapioca, mandioca y manihot.

Como empleado en el contexto de la presente invención, el término "almidón modificado" revela un almidón producido naturalmente, que ha sufrido al menos algún tipo de modificación química parcial, modificación enzimática, y/o modificación física o fisicoquímica, y que -en general- expone propiedades alteradas con respecto al almidón "parental".

En una forma de realización particular de la presente invención el gránulo comprende un polisacárido.

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Sales

El núcleo puede comprender una sal. La sal puede ser una sal inorgánica, por ejemplo sales de sulfato, sulfito, fosfato, fosfonato, nitrato, cloruro o carbonato o sales de ácidos simples orgánicas (menos de 10 átomos de carbono por ejemplo 6 o menos átomos de carbono) tal como el citrato, malonato o acetato. Ejemplos de cationes en esta sal son iones metálicos álcali o ácali térreos, aunque el ión de amonio o iones metálicos de la primera serie de transición, tales como sodio, potasio, magnesio, calcio, zinc o aluminio. Ejemplos de aniones incluyen cloruro, yoduro, sulfato, sulfito, bisulfito tiosulfato, fosfato, fosfato monobásico, fosfato dibásico, hipofosfito, pirofosfato de dihidrogeno, carbonato, bicarbonato, metasilicato, citrato, malato, maleato, malonato, succinato, lactato, formato, acetato, butirato, propionato, benzoato, tartrato, ascorbato o gluconato. En particular sales metálicas álcali o álcali térreas de sulfato, sulfito, fosfato, fosfonato, nitrato, cloruro o carbonato o sales de ácidos orgánicos simples tales como el citrato, malonato o acetato pueden ser usadas. Ejemplos específicos incluyen NaH_{2}PO_{4}Na_{2}HPO_{4}, Na_{3}PO_{4}, (NH_{4})H_{2}PO_{4}, K_{2}HPO_{4}, KH_{2}PO_{4}, Na_{2}SOK_{2}SO_{4}, KHSO_{4}, ZnSO_{4}, MgSO_{4}, CuSO_{4}, Mg(NO_{3})_{2}, (NH_{4})_{2}SO_{4}, borato de sodio, acetato de magnesio y citrato de sodio.

La sal puede ser también una sal hidratada, es decir un hidrato de sal cristalina con agua(s) ligada(s) de cristalización, tal como se describe en WO 99/32595. Ejemplos de sales hidratadas incluyen heptahidrato de sulfato de magnesio (MgSO_{4}(7H_{2}O), heptahidrato de sulfato de zinc (ZnSO_{4}(7H_{2}O), heptahidrato dibásico de fosfato de sodio (Na_{2}HPO_{4}(7H_{2}O), hexahidrato de nitrato de magnesio (Mg(NO_{3})_{2}(6H_{2}O), decahidrato de borato de sodio, dihidrato de citrato de sodio y tetrahidrato de acetato de magnesio.

En una forma de realización particular de la presente invención el ligante es un polipéptido. El polipéptido puede ser seleccionado a partir de gelatina, colágeno, caseína, quitosano, ácido poliaspártico y ácido poliglutamático. En otra forma de realización particular el ligante es un derivado de la celulosa tal como celulosa de hidroxipropilo, celulosa de metilo o CMC. Un ligante adecuado es un ligante de carbohidratos tal como la dextrina por ejemplo Glucidex 21 D o Avedex W80.

Materiales de absorción de humedad:

Hemos descubierto que algunos gránulos que son recubiertos de sal tienen una reducción significante de estabilidad per se. El trabajo de la sal como barrera contra la humedad, y cuando el núcleo no está suficientemente seco antes del recubrimiento de sal, la humedad es retenida al interior del núcleo y puede afectar negativamente la actividad de la enzima. Hemos descubierto que se puede resolver dicho problema mediante la adición de un compuesto de absorción de la humedad sea para el núcleo y/o para el recubrimiento. En algunos casos esto puede ser resuelto mediante el secado del núcleo íntegramente antes de la aplicación del recubrimiento de sal.

El material de absorción de la humedad está presente en el gránulo en forma de tampón capaz de reducir la actividad del agua al interior del núcleo mediante la eliminación del agua libre en contacto con la enzima después de la aplicación del recubrimiento de sal. Si el material de absorción de la humedad es añadido al núcleo, es importante que exista una capacidad de tampón presente después de la aplicación del recubrimiento de sal para eliminar el agua presente. El compuesto de absorción de la humedad tiene una comprensión de agua superior a 3%, superior a 5%, tal como superior a 10%. La retención de agua es definida como la retención de agua de equilibrio a 25ºC y 70% de humedad relativa después de una semana. La cantidad de compuesto de absorción de la humedad añadida al gránulo es superior al 1%, superior a 2%, superior a 5%, incluso superior a 10% p/p.

Los materiales de absorción de la humedad pueden ser compuestos orgánicos e inorgánicos y pueden ser pero sin limitarse al grupo comprendiendo harina, almidón, productos de mazorcas de maíz, celulosa y gel de sílice.

Otros materiales de granulación:

El gránulo puede comprender materiales adicionales tales como productos de relleno, materiales de fibra, agentes estabilizantes, agentes de solubilización, agentes de suspensión, agentes de regulación de viscosidad, esferas ligeras, plastificantes, sales, lubricantes y fragancias.

Productos de relleno

Productos de relleno adecuados son sales inorgánicas solubles y/o insolubles en agua tales como sulfato de álcali finamente térreo, carbonato de álcali y/o cloruro de álcali, arcillas tales como el caolín (por ejemplo SPESW-HITE^{TM}, English China Clay), bentonitas, talcos, zeolitas, yeso, carbonato de calcio y/o silicatos. Los productos de relleno típicos son sulfato de di-sodio y calcio-lignosulfonato.

Otros productos de relleno son sílice, yeso, caolín, talco, silicato de aluminio de magnesio y fibras de celulosa.

Materiales fibrosos

Celulosa pura o impura en forma fibrosa tal como el serrín, celulosa fibrosa pura, algodón, u otras formas de celulosa fibrosa pura o impura. Además, la asistencia de filtros en base a una celulosa fibrosa puede ser usada. Varias marcas de celulosa en forma fibrosa existen en el mercado, por ejemplo CEPO^{TM} y ARBOCELL^{TM}. Ejemplos pertinentes de apoyos de filtro de celulosa fibrosa son ARBOCELL BFC 200^{TM} y ARBOCELL BC 200^{TM}. También se pueden usar fibras sintéticas tales como descritas en EP 304331 B1.

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Agentes estabilizantes

Agentes estabilizantes o protectores como se usan de manera convencional en el campo de la granulación. Agentes estabilizantes o protectores pueden formar parte de varias categorías: materiales álcali o neutrales, agentes de reducción, antioxidantes y/o sales de iones metálicos de series de primera transición. Cada uno de éstos puede ser usado en conjunto con otros agentes protectores de las mismas categorías o diferentes. Ejemplos de agentes protectores álcali son silicatos metálicos de álcali, carbonatos o bicarbonatos. Ejemplos de agentes protectores de reducción son sales de sulfito, tiosulfito, tiosulfato o MnSO_{4} mientras que ejemplos de antioxidantes son metionina, hidroxitolueno butilado (BHT) o butilado hidroxianisol (BHA). En particular agentes estabilizantes pueden ser sales de tiosulfatos, por ejemplo tiosulfato de sodio o metionina. Otros ejemplos de estabilizadores útiles también son gelatina, úrea, sorbitol, glicerol, caseína, pirrolidona polivinilo (PVP), hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), carboximetilcelulosa (CMC), hidroxietilcelulosa (HEC), polvo de leche desnatada y/o aceites comestibles, tales como el aceite de soja o aceite de canola. Agentes estabilizantes particulares en gránulos alimentarios son una fuente de ácido láctico o de almidón. En una forma de realización particular de la presente invención el gránulo comprende una fuente de ácido láctico según la solicitud de patente nº EP 1,117,771 que está incorporada en la presente como referencia. Una fuente de ácido láctico preferida es un licor de remojo de maíz. También se conoce el hecho de que en la técnica, unos sustratos de enzimas tales como el almidón, lípidos, proteínas etc. pueden actuar en forma de estabilizadores para las enzimas.

Agentes de solubilización

Como es conocido por el experto en la técnica, muchos agentes, a través de una variedad de métodos, sirven para aumentar la solubilidad de formulaciones, y unos agentes típicos conocidos en la técnica puede estar presentes en National Pharmacopeia's.

Esferas ligeras:

Unas esferas ligeras son partículas pequeñas con una densidad real baja. Típicamente, son partículas esféricas vacías con aire o gas al interior. Tales materiales son preparados habitualmente mediante la expansión de un material sólido. Estas esferas ligeras pueden ser de naturaleza inorgánica o de naturaleza orgánica. Se prefieren los polisacáridos, tal como el almidón o derivados de éstos. Biodac® es un ejemplo de material no ligero vacío hecho de celulosa (desechos de fabricación de papel), disponible en GranTek Inc. Estos materiales pueden estar incluidos en los gránulos sea solos o en forma de mezcla de distintos materiales ligeros.

Agentes de suspensión:

Agentes de suspensión, mediadores y/o solventes pueden ser incorporados.

Agentes de regulación de viscosidad:

Unos agentes de regulación de viscosidad pueden estar presentes.

Plastificantes:

Los plastificantes incluyen, por ejemplo: polioles tales como azúcares, alcohol de azúcar, glicerina, glicerol trimetilol propano, glicol de neopentilo, trietanolamina, glicol mono-, di- y trietileno o de glicoles de politileno (PEG) con un peso molecular inferior a 1000; urea y agua.

Lubricantes:

Como usado en el presente contexto, el término "lubricante" se refiere a cualquier agente, que reduce la fricción de superficie, lubrifica la superficie del gránulo, reduce la tendencia al aumento de la electricidad estática, y/o reduce la friabilidad de los gránulos. Los lubricantes pueden servir de agentes de anti-aglomeración y agentes de humidificación. Ejemplos de lubricantes adecuados son glicoles de politileno inferiores (PEG) y aceites minerales. El lubricante particularmente es un aceite mineral o un tensioactivo no iónico, y más particularmente el lubricante no puede ser mezclado con otros materiales.

Recubrimiento de sal

El gránulo comprende además un núcleo, al menos un recubrimiento que debe ser entendido aquí como la capa que envuelve el núcleo.

El recubrimiento que comprende una sal, puede en una forma de realización particular de la presente invención comprender al menos 60% p/p, por ejemplo 65% p/p o 70% p/p de sal, en particular puede ser de al menos 75% p/p, por ejemplo al menos 80% p/p, al menos 85% p/p, por ejemplo al menos 90% p/p o al menos 95% p/p, incluso al menos 99% p/p.

En una forma de realización particular de la presente invención la cantidad de sal en el recubrimiento del gránulo constituye al menos 60% p/p del recubrimiento.

En una forma de realización particular de la presente invención la cantidad de sal del recubrimiento de los gránulos en la composición alimentaria granulada tratada con vapor constituye al menos 60% p/p del recubrimiento.

En una forma de realización particular de la presente invención la cantidad de sal en el recubrimiento de los gránulos que debe ser usada para composiciones alimentarias granuladas tratadas con vapor constituye al menos 60% p/p del recubrimiento.

Dependiendo del tamaño del material de núcleo, el recubrimiento puede aplicarse en 1-200% p/p del peso del gránulo recubierto para obtener un tamaño deseado del gránulo recubierto. Normalmente los recubrimientos constituyen 5-150% p/p, particularmente 10 100% p/p, incluso más particularmente 20-80% p/p, y más particularmente 40-60% p/p del gránulo recubierto. No obstante en algunos casos particularmente cuando se utilizan pequeños tamaños de núcleo, el recubrimiento puede constituir hasta el 15-50% o incluso el 50-75% p/p del gránulo recubierto.

El efecto del recubrimiento de sal depende del espesor del recubrimiento. Un espesor de recubrimiento superior provee una mejor protección de la enzima, pero al mismo tiempo produce costes de fabricación mayores.

Para poder proveer una protección aceptable, el recubrimiento de sal tiene preferiblemente un grosor determinado. En una forma de realización particular de la presente invención el recubrimiento de sal es de al menos 1 \mum de grosor. En una forma de realización más particular el espesor del recubrimiento de sal es de al menos 2 \mum. En una forma de realización incluso más particular el espesor total del recubrimiento de sal es de al menos 4 \mum. En un forma de realización más particular el espesor total del recubrimiento de sal es de al menos 8 \mum. Cuanto más grueso es el recubrimiento, más larga y cara es la producción del gránulo. En una forma de realización particular de la presente invención el grosor del recubrimiento de sal es inferior a 100 \mum. En una forma de realización más particular el grosor del recubrimiento de sal es inferior a 60 \mum. En una forma de realización incluso más particular el grosor total del recubrimiento de sal es inferior a 40 \mum.

En una forma de realización particular de la presente invención el grosor del recubrimiento de sal del gránulo es de al menos 8 \mum.

En una forma de realización particular de la presente invención el grosor del recubrimiento de sal de la composición alimentaria granulada tratada con vapor es de al menos 8 \mum.

En una forma de realización particular de la presente invención el grosor del recubrimiento de sal de los gránulos que deben ser usados para composiciones alimentarias granuladas tratadas con vapor es de al menos 8 \mum.

En una forma de realización el gránulo recubierto es un gránulo según WO 01/25412, donde la unidad del núcleo es más pequeño que los núcleos conocidos en la técnica y el recubrimiento es más grueso que los recubrimientos conocidos en la técnica. Para tales gránulos la proporción entre el diámetro del gránulo recubierto y el diámetro de la unidad del núcleo (abreviado DG/DC) para este tipo de gránulos será habitualmente DG/DC de al menos 1.1, particularmente al menos 1.5, más particularmente al menos 2, más particularmente al menos 2.5, más particularmente al menos 3, y particularmente al menos 4. DG/DC es no obstante particularmente inferior a aproximadamente 100, particularmente inferior a aproximadamente 50, más particularmente inferior a 25, y más particularmente inferior a 10. Una gama particular para DG/DC es de aproximadamente 4 a aproximadamente 6. Así para este tipo de gránulos el grosor del recubrimiento debería ser de al menos 25 \mum. Un grosor particular es de al menos 50 \mum tal como al menos 75 \mum, al menos 100 \mum, al menos 150 \mum, al menos 200 \mum, al menos 250 \mum o particularmente al menos 300 \mum. El grosor de este tipo de recubrimiento es normalmente inferior a 800 \mum. Un grosor particular es inferior a 500 \mum tal como inferior a 350 \mum, inferior a 300 \mum, inferior a 250 \mum, inferior a 200 \mum, inferior a 150 \mum o particularmente inferior a 80 \mum.

El recubrimiento debería encapsular la unidad de núcleo mediante la formación de una capa esencialmente continua. Una capa esencialmente continua debe ser entendida en la presente invención como un recubrimiento que posee pocos o ningún agujero, de modo que la unidad del núcleo que está encapsulando tiene pocas o ningún área no revestida. La capa o recubrimiento debería tener un espesor particularmente homogéneo.

La sal que debe ser añadida está preferiblemente en forma de solución salina o de suspensión de sal donde las partículas finas son inferiores a 5 \mum, tal como inferior a 1 \mum.

En una forma de realización particular de la presente invención se prefiere el uso de una solución de sal como recubrimiento de sal, pero si las sales usadas presentan una baja solubilidad, puede ser preferible usar una suspensión de sal en vez de una solución, con el fin de poder añadir más sal por litro de líquido añadido a los gránulos. En una forma de realización particular de la presente invención el recubrimiento de sal es preparado conformemente al recubrimiento en WO 03/55967.

Sales:

En referencia a la sal en el recubrimiento de sal este puede ser una sal particular o bien una mezcla de sales.

\newpage

La sal usada puede ser una sal inorgánica, por ejemplo sales de sulfato, sulfito, fosfato, fosfonato, nitrato, cloruro o carbonato o sales de ácidos orgánicos simples (menos de 10 átomos de carbono por ejemplo 6 o menos átomos de carbono) tal como el citrato, malonato o acetato. Ejemplos de cationes en esta sal son iones metálicos álcali o álcali tórreos, aunque el ión del amonio o iones metálicos de las primeras series de transición, tal como el sodio, potasio, magnesio, calcio, zinc o aluminio. Ejemplos de aniones incluyen, cloruro, bromuro, yoduro, sulfato, sulfito, bisulfito, tiosulfato, fosfato, fosfato monobásico, fosfato dibásico, hipofosfito, pirofosfato de dihidrogeno, tetraborato borato, carbonato, bicarbonato, metasilicato, citrato, malato, maleato, malonato, succinato, lactato, formato, acetato, butirato, propionato, benzoato, tartrato, ascorbato o gluconato. En particular sales metálicas álcali o álcali térreas de sulfato, sulfito, fosfato, fosfonato, nitrato, cloruro o carbonato o sales de ácidos simples orgánicos tales como citrato, malonato o acetato pueden ser usadas. Ejemplos específicos incluyen NaH_{2}PO_{4}, Na_{2}HPO_{4}, Na_{3}PO_{4}, (NH_{4})H_{2}PO_{4}, K_{2}HPO_{4}, KH_{2}PO_{4}, Na_{2}SO_{4}, K_{2}SO_{4}, KHSO_{4}, ZnSO_{4}, MgSO_{4}, CuSO_{4}, Mg(NO_{3})_{2}, (NH_{4})_{2}SO_{4}, borato de sodio, acetato de magnesio y citrato de sodio.

La sal también puede ser una sal hidratada, es decir un hidrato de sal cristalino con agua(s) ligada de cristalización, tal como descrita en WO 99/32595. Ejemplos de sales hidratadas incluyen heptahidrato de sulfato de magnesio (MgSO_{4}(7H_{2}O),heptahidrato de sulfato de zinc (ZnSO_{4}(7H_{2}O), heptahidrato dibásico de fosfato de sodio (Na_{2}HPO_{4}(7H_{2}O), hexahidrato de nitrato de magnesio (Mg(NO_{3})_{2}(6H_{2}O), decahidrato de borato de sodio, dihidrato de citrato de sodio y tetrahidrato de acetato de magnesio.

No obstante se ha descubierto de manera sorprendente que algunas sales hidratadas tienen una influencia negativa sobre la estabilidad de los gránulos per se y sobre la estabilidad de la granulación. Sales hidratadas discutibles son sales comprendiendo moléculas de agua que pueden separarse de la sal después de la aplicación del recubrimiento de sal y migrar después al interior del núcleo en el que está presente una enzima hidrosensible. En una forma de realización particular de la presente invención el recubrimiento no comprende sal hidratada. En una forma de realización más particular de la presente invención el recubrimiento no comprende una sal comprendiendo más de cuatro moléculas de agua a 50ºC.

La sal usada en el recubrimiento tiene una humedad constante a 20ºC superior a 60%. En una forma de realización más particular de la presente invención la sal usada en el recubrimiento tiene una humedad constante a 20ºC superior al 70%. En una forma de realización aún más particular de la presente invención la sal usada en el recubrimiento tiene una humedad constante a 20ºC superior al 80%. En una forma de realización más particular de la presente invención la sal usada en el recubrimiento tiene una humedad constante a 20ºC superior al 85%. En una forma de realización particular de la presente invención el recubrimiento de sal es preparado según la patente WO 00/01793, incorporada en la presente como referencia.

La sal comprendida en el recubrimiento del gránulo tiene una humedad constante a 20ºC superior al 60%.

La sal comprendida en el recubrimiento del gránulo de la composición alimentaria granulada tratada con vapor tiene una humedad constante a 20ºC superior a 60%.

La sal comprendida en el recubrimiento de los gránulos que deben ser usados para la composición alimentaria granulada tratada con vapor tiene una humedad constante a 20ºC superior a 60%.

La sal tiene una humedad constante a 20ºC que es superior a 60%.

Ejemplos específicos de sales adecuadas son NaCl(CH_{20^{o}C} = 76%), Na_{2}CO_{3}(CH_{20^{o}C} = 92%), NaNO_{3}(CH_{20^{o}C} = 73%), Na_{2}HPO_{4} (CH_{20^{o}C} = 95%), Na_{3}PO_{4}(CH_{25^{o}C} = 92%), NH_{4}Cl(CH_{20^{o}C} = 79.5%), (NH_{4})_{2}HPO_{4}(CH_{20^{o}C} = 93,0%), NH_{4}H_{2}PO_{4}(CH_{20^{o}C} = 93.1%), (NH_{4})_{2}SO_{4}(CH_{20^{o}C} = 81.1%), KCl(CH_{20^{o}C} = 85%), K_{2}HPO_{4}(CH_{20^{o}C} = 92%), KH_{2}PO_{4}(CH_{20^{o}C} = 96.5%), KNO_{3}(CH_{20^{o}C} = 93.5%), Na_{2}SO_{4}(CH_{20^{o}C} = 93%), K_{2}SO_{4}(CH_{20^{o}C} = 98%), KHSO_{4}(CH_{20^{o}C} = 86%), MgSO_{4}(CH_{20^{o}C} = 90%), ZnSO_{4}(CH_{20^{o}C} = 90%) y citrato de sodio (CH_{25^{o}C} = 86%).

En una forma de realización particular de la presente invención la sal es seleccionada a partir del grupo que consiste en NaCl, Na_{2}CO_{3}, NaNO_{3}, Na_{2}HPO_{4}, Na_{3}PO_{4}, NH_{4}Cl, (NH_{4})_{2}HPO_{4}, NH_{4}H_{2}PO_{4}, (NH_{4})_{2}SO_{4}, KCl, K_{2}HPO_{4}, KH_{2}PO_{4}, KNO_{3}, Na_{2}SO_{4}, K_{2}SO_{4}, KHSO_{4}, MgSO_{4}, ZnSO_{4}, NaCl y citrato de sodio o mezclas de éstos. En una forma de realización más particular de la presente invención la sal es seleccionada en el grupo que consiste en Na_{2}CO_{3}, NaNO_{3}, Na_{2}HPO_{4}, Na_{3}PO_{4}, NH_{4}Cl, (NH_{4})_{2}HPO_{4}, NH_{4}H_{2}PO_{4}, (NH_{4})_{2}SO_{4}, KCl, K_{2}HPO_{4}, KH_{2}PO_{4}, KNO_{3}, Na_{2}SO_{4}, K_{2}SO_{4}, KHSO_{4}, NaCl y citrato de sodio o mezclas de éstos.

En una forma de realización particular de la presente invención la sal comprendida en el recubrimiento del gránulo es seleccionada en el grupo que consiste en NaCl, Na_{2}CO_{3}, NaNO_{3}, Na_{2}HPO_{4}, Na_{3}PO_{4}, NH_{4}Cl, (NH_{4})_{2}HPO_{4}, NH_{4}H_{2}PO_{4}, (NH_{4})_{2}SO_{4}, KCl, K_{2}HPO_{4}, KH_{2}PO_{4}, KNO_{3}, Na_{2}SO_{4}, K_{2}SO_{4}, KHSO_{4}, MgSO_{4}, ZnSO_{4}, NaCl y citrato de sodio o mezclas de éstos.

En una forma de realización particular de la presente invención la sal comprendida en el recubrimiento del gránulo de la composición alimentaria granulada tratada al vapor es seleccionada en el grupo que consiste en NaCl, Na_{2}CO_{3}, NaNO_{3}, Na_{2}HPO_{4}, Na_{3}PO_{4}, NH_{4}Cl, (NH_{4})_{2}HPO_{4}, NH_{4}H_{2}PO_{4}, (NH_{4})_{2}SO_{4}, KCl, K_{2}HPO_{4}, KH_{2}PO_{4}, KNO_{3}, Na_{2}SO_{4}, K_{2}SO_{4}, KHSO_{4}, MgSO_{4}, ZnSO_{4}, NaCl y citrato de sodio o mezclas de éstos.

En una forma de realización particular de la presente invención la sal comprendida en el recubrimiento de los gránulos que debe ser usada para composiciones alimentarias granuladas tratadas con vapor es seleccionada en el grupo que consiste en NaCl, Na_{2}CO_{3}, NaNO_{3}, Na_{2}HPO_{4}, Na_{3}PO_{4}, NH_{4}Cl, (NH_{4})_{2}HPO_{4}, NH_{4}H_{2}PO_{4}, (NH_{4})_{2}SO_{4}, KCl, K_{2}HPO_{4}, KH_{2}PO_{4}, KNO_{3}, Na_{2}SO_{4}, K_{2}SO_{4}, KHSO_{4}, MgSO_{4}, ZnSO_{4} NaCl y citrato de sodio o mezclas de éstos.

Recubrimientos adicionales

Los gránulos pueden comprender una, dos o más capas de recubrimiento adicionales sobre la superficie interna o externa del recubrimiento protector según la invención.

Recubrimientos adicionales pueden ser aplicados al gránulo para proveer características o propiedades adicionales. Así, por ejemplo, un recubrimiento adicional puede conseguir uno o más de los siguientes efectos:

(i): reducción de la tendencia de un gránulo a la formación de polvo;

(ii): protección de la enzima en el gránulo contra compuestos hostiles en el medio ambiente.

(iii): disolución a un nivel deseado después de la introducción del gránulo en un medio líquido (tal como un medio ácido);

(iv): proveer una mejor resistencia física del gránulo.

Cualquier recubrimiento(s) adicional(es) convencional(es) de propiedades deseadas puede ser aplicado y ejemplos de materiales de recubrimiento y métodos de recubrimiento convencionales, entre otras cosas, son descritos en US 4,106,991, EP 170360, EP 304332, EP 304331, EP 458849, EP 458845, WO 97/39116, WO 92/12645, WO 89/08695, WO 89/08694, WO 87/07292, WO 91/06638, WO 92/13030, WO 93/07260, WO 93/07263, WO 96/38527, WO 96/16151, WO 97/23606, 5,324,649, 4,689,297, EP 206417, EP 193829, DE 4344215, DE 4322229 A, DD 263790, JP 61162185 A, JP 58179492 o PCT/DK/01/00628.

En una forma de realización particular de la presente invención el recubrimiento adicional es un recubrimiento de cera, según US 4,106,991 o EP 0,569,468 que han sido incorporadas en la presente como referencia. Para ceras adecuadas ver la sección "Ceras" más arriba. En una forma de realización particular de la presente invención, un recubrimiento adicional puede comprender PEG y/o aceite de palma.

Otros materiales de recubrimiento:

El recubrimiento puede comprender otros materiales de recubrimiento tales como ligantes, productos de relleno, materiales fibrosos, agentes estabilizantes de enzima, agentes de solubilización, agentes de suspensión, agentes de regulación de viscosidad, esferas ligeras, plastificantes, sales, lubricantes y fragancias tal y como se han mencionado en la sección "materiales de granulación adicionales" más arriba. Otros ingredientes de recubrimiento pueden ser pigmentos.

Pigmentos

Pigmentos adecuados incluyen, pero no se limitan a éstos, blanqueadores divididos finamente, tal como el dióxido de titanio o caolín, pigmentos coloreados, colorantes solubles en agua, así como combinaciones de uno o más pigmentos y colorantes solubles en agua.

Opcionalmente, los gránulos pueden ser recubiertos con una mezcla de recubrimiento. Estas mezclas pueden comprender pero no se limitan a éstos, agentes de recubrimiento, agentes de recubrimiento preferiblemente hidrofóbicos, tales como el aceite de palma hidrogenado y el sebo bovino, y si se desea otros aditivos, tales como el carbonato de calcio o caolín.

En una forma de realización particular de la presente invención el gránulo comprende también un recubrimiento de cera.

En una forma de realización particular de la presente invención el gránulo de la composición alimentaria granulada tratada al vapor comprende un recubrimiento de cera.

En una forma de realización particular de la presente invención los gránulos que deben ser usados en composiciones alimentarias granuladas tratadas con vapor comprenden un recubrimiento de cera.

En una forma de realización particular de la presente invención el gránulo comprende también una fuente de ácido láctico.

En una forma de realización particular de la presente invención el gránulo de la composición alimentaria granulada tratada con vapor comprende una fuente de ácido láctico.

En una forma de realización particular de la presente invención el gránulo que debe ser usado para composiciones alimentarias granuladas tratadas con vapor comprende una fuente de ácido láctico.

En una forma de realización particular de la presente invención el gránulo comprende también una sustancia seca de licor de maíz.

En una forma de realización particular de la presente invención el gránulo de la composición alimentaria granulada tratada con vapor comprende una materia seca de licor de maíz.

En una forma de realización particular de la presente invención el gránulo que debe ser usado en composiciones alimentarias granuladas tratadas al vapor comprende una materia seca de licor de maíz.

Preparación del núcleo

El núcleo comprende una enzima en forma de sustancia seca concentrada. La sustancia seca concentrada puede ser pero no se limita a ésta, la preparación por secado por pulverización.

Unos métodos de preparación del núcleo pueden estar presentes en Handbook of Powder Technology; Particle size enlargement by C. E. Capes; Volume 1; 1980; Elsevier. Los métodos de preparación incluyen tecnologías conocidas de formulación de alimentos y de gránulos, es decir:

a): Productos secos de pulverización, donde una solución líquida conteniendo una enzima es pulverizada en una torre de secado por pulverización para formar pequeñas gotas, las cuales, durante su bajada es secada por la torre de secado para formar un material granuloso conteniendo una enzima. Partículas muy pequeñas pueden ser producidas de esta manera (Miguel S. Showell (editor); Surfactant Science Series; 1998; vol. 71; page 140-142; Marcel Dekker).

b): Productos en capas, donde la enzima dispuesta en recubrimiento en forma de capa alrededor de una partícula de núcleo inerte preformado, donde una solución conteniendo enzimas es atomizada, típicamente en un aparato de lecho de fluido donde las partículas del núcleo preformado son fluidificadas, y la solución conteniendo enzimas se adhiere a las partículas del núcleo y se seca hasta dejar una capa de enzima seca sobre la superficie de la partícula del núcleo. Unas partículas de tamaño deseado pueden ser obtenidas de esta manera cuando una partícula de núcleo útil del tamaño deseado puede estar presente. Este tipo de producto está descrito por ejemplo en WO 97/23606.

c): Partículas de núcleo absorbido, donde en vez de un recubrimiento de enzima en forma de capa alrededor del núcleo, la enzima es absorbida encima de y/o al interior de la superficie del núcleo. Tal proceso está descrito en WO 97/39116.

d): Extrusión o productos granulados, donde una pasta conteniendo enzimas es prensada en pastillas o es extrudida bajo presión a través de una pequeña abertura y cortada en partículas que son secadas posteriormente. Este tipo de partículas tienen normalmente un tamaño considerable debido al material en el que se ha hecho la abertura de extrusión (habitualmente una placa con perforaciones) según un límite sobre la caída de presión aceptable sobre la abertura de extrusión. Además, unas presiones de extrusión muy elevadas cuando se utiliza una pequeña abertura aumenta la generación de calor en la pasta de enzima, que es nociva para la enzima. (Miguel S. Showell (editor); Powdered detergents; Surfactant Science Series; 1998; vol. 71; page 140-142; Marcel Dekker)

e): Productos comprimidos, donde un polvo de enzimas es suspendido en cera fundida y la suspensión es pulverizada, por ejemplo a través de un atomizador de disco giratorio, al interior de una cámara de enfriamiento donde las gotitas se solidifican rápidamente (Miguel S. Showell (editor); Powdered detergents; Surfactant Science Series; 1998; vol. 71; page 140-142; Marcel Dekker). El producto obtenido es un producto donde la enzima es distribuida uniformemente sobre la totalidad de un material inerte en vez de estar concentrada en su superficie. También US 4,016,040 y US 4,713,245 son documentos referentes a esta técnica

f): Productos de granulación de mezclador, donde un líquido conteniendo enzimas es añadido a una composición de polvo seca de componentes de granulación convencionales. El líquido y el polvo en una proporción adecuada son mezclados y a medida que la humedad del líquido es absorbida en el polvo seco, los componentes del polvo seco empezarán a adherirse y a aglomerarse y las partículas se formarán, formando granulados comprendiendo la enzima. Tal proceso está descrito en US 4,106,991 (Novo Nordisk) y en los documentos relacionados EP 170360 B1 (Novo Nordisk), EP 304332 B1 (Novo Nordisk), EP 304331 (Novo Nordisk), WO 90/09440 (Novo Nordisk) y WO 90/09428 (Novo Nordisk). En un producto particular de este proceso donde varios mezcladores de corte alto pueden ser usados en forma de granuladores, los granulados que poseen una enzima en forma de enzima, productos de relleno y ligantes etc. son mezclados con fibras de celulosa para fortalecer las partículas y producir el denominado T-granulado. Unas partículas reforzadas, que son más robustas, liberan polvo menos enzimático.

g): Reducción de tamaño, donde los núcleos son producidos por molienda o triturado de partículas más grande, granulados, comprimidos, aglomerados etc. conteniendo la enzima. La fracción de la partícula de núcleo deseada es obtenida mediante tamizado del producto molido o triturado. Unas partículas sobredimensionadas y subdimensionadas pueden ser recicladas. Una reducción de tamaño está descrita en (Martin Rhodes (editor); Principies of Powder Technology; 1990; Chapter 10; John Wiley & Sons).

h): Granulación del lecho de fluido. La granulación del lecho de fluido implica la suspensión de partículas en una corriente de aire y la pulverización de un líquido sobre las partículas fluidificadas a través de unas boquillas. Las partículas tocadas por las gotitas de pulverización se vuelven húmedas y adhesivas. Las partículas adhesivas se chocan contra otras partículas, se adhieren a éstas y forman un gránulo.

i): Los núcleos pueden estar sometidos a un secado, por ejemplo en un secador de lecho de fluido. Otros métodos conocidos para el secado de gránulos en la industria alimentaria o de enzimas pueden ser usados por el experto en la materia. El secado se realiza preferiblemente a una temperatura del producto de 25 a 90ºC. Para algunas enzimas es importante que los núcleos que incluyen la enzima contengan una pequeña cantidad de agua antes del recubrimiento con la sal. Si las enzimas hidrosensibles son revestidas con una sal antes de retirar el agua en exceso, serán atrapadas dentro del núcleo y esto puede afectar negativamente la actividad de la enzima. Después del secado, los núcleos contienen preferiblemente 0.1-10% p/p de agua.

Preparación del recubrimiento de sal

El recubrimiento de sal puede ser aplicado sobre el gránulo del núcleo comprendiendo la enzima por atomización sobre los gránulos del núcleo en un lecho de fluido, el recubrimiento de sal puede ser aplicado también en mezcladores de vacío, envolvedores tipo gragea (envolvedores de tambor), equipamiento para recubrimiento de semillas, equipamiento comprendiendo fondos giratorios (eks. Roto Glatt, granuladores CF (Freund), procesadores Torbed (Gauda) o en procesadores de lecho de fluido giratorios tales como Omnitex (Nara).

Después de la aplicación de la capa de sal el gránulo puede ser secado opcionalmente. El secado del gránulo recubierto de sal puede ser realizado por medio de cualquier método de secado disponible para el experto en la materia, tal como un secado por pulverización, liofilización, secado al vacío, secado en lecho de fluido, recubrimiento en tambor y secado por microondas. El secado del gránulo recubierto de sal también puede ser combinado con métodos de granulación que comprenden por ejemplo el uso de un lecho de fluido, un secador por pulverización del lecho de fluido (FSD) o un secador de varias etapas (MSD).

Preparación de recubrimiento adicional

Recubrimientos convencionales y métodos conocidos en la técnica pueden ser usados de manera adecuada, tal como los recubrimientos descritos en la patente danesa PA 2002 00473, WO 89/08694, WO 89/08695, 270 608 B1 y/o WO 00/01793. Otros ejemplos de materiales de recubrimiento convencionales pueden estar presentes en US 4,106,991, EP 170360, EP 304332, EP 304331, EP 458849, EP 458845, WO 97/39116, WO 92/12645A, WO 89/08695, WO 89/08694, WO 87/07292, WO 91/06638, WO 92/13030, WO 93/07260, WO 93/07263, WO 96/38527, WO 96/16151, WO 97/23606, WO 01/25412, WO 02/20746, WO 02/28369, 5879920, 5,324,649, 4,689,297, 6,348,442, EP 206417, EP 193829, DE 4344215, DE 4322229 A, DE 263790, JP 61162185 A y/o JP 58179492.

El recubrimiento puede ser preparado por medio de los mismos métodos mencionados anteriormente en la sección "Preparación del núcleo" y "Preparación del recubrimiento de sal".

Los gránulos obtenidos pueden estar sujetos a un redondeo (por ejemplo esferonización), tal como en un
Marumeriser^{TM}, o a una compactación.

Los gránulos pueden ser secados, por ejemplo en un secador de lecho de fluido. Otros métodos conocidos para el secado de gránulos en la industria alimentaria o de enzimas pueden ser usados por el experto en la materia. El secado se realiza preferiblemente a una temperatura del producto de 25 a 90ºC.

Fabricación de granulados alimentarios

En la fabricación de granulados alimentarios preferiblemente se efectúa el tratamiento con vapor antes de la granulación, un proceso llamado acondicionamiento. En la fase de la granulación posterior el alimento es forzado a través de una boquilla y los hilos obtenidos son cortados en gránulos adecuados de longitud variable. Durante esta fase de acondicionamiento la temperatura del proceso puede alcanzar 60-100ºC.

La mezcla alimentaria es preparada mediante la mezcla de los gránulos comprendiendo la enzima con componentes alimentarios deseados. La mezcla es dirigida hacia un acondicionador por ejemplo un mezclador en cascada con inyección de vapor. El alimento es calentado en el acondicionador hasta una temperatura especifica, de 60 a 100ºC, por ejemplo de 60ºC, 70ºC, 80ºC, 90ºC o 100ºC mediante la inyección de vapor, medido a la salida del acondicionador. El tiempo de residencia puede ser variable, desde segundos hasta minutos e incluso horas. Tal como 5 segundos, 10 segundos, 15 segundos, 30 segundos, 1 minuto, 2 minutos, 5 minutos, 10 minutos, 15 minutos, 30 minutos y 1 hora. En una forma de realización particular de la presente invención la temperatura es de 100ºC y el tiempo de residencia es de 60 segundos.

En una forma de realización particular de la presente invención la temperatura del proceso durante el tratamiento con vapor es de al menos 60ºC. En una forma de realización más particular de la presente invención la temperatura del proceso durante el tratamiento con vapor es de al menos 70ºC. En una forma de realización aún más particular de la presente invención la temperatura del proceso durante el tratamiento al vapor es de al menos 80ºC. En un forma de realización más particular de la presente invención la temperatura del proceso durante el tratamiento con vapor es de al menos 90ºC.

A partir del acondicionador el alimento es dirigido hacia una prensa por ejemplo una prensa Simón Heesen, y es prensado en granulados de longitud variable por ejemplo de 15 mm. Después del prensado los granulados son dispuestos en un equipo de refrigeración de aire y son enfriados durante un tiempo especifico por ejemplo de 15 minutos.

Una forma de realización particular de la presente invención es un método de fabricación de una composición alimentaria comprendiendo las etapas de:

i.: mezcla de componentes alimentarios con gránulos comprendiendo un núcleo y un recubrimiento donde el núcleo comprende una enzima y el recubrimiento comprende una sal,

ii.: tratamiento al vapor de dicha composición (i), y

iii.: granulación de dicha composición (ii).

Donde los gránulos pueden comprender también una o más de las características siguientes:

i.: la cantidad de sal en el recubrimiento constituye al menos 60% p/p del recubrimiento,

ii.: la sal comprendida en el recubrimiento tiene una humedad constante a 20ºC superior a 60%,

iii.: la sal comprendida en el recubrimiento del gránulo es seleccionada en el grupo que incluye NaCl, Na_{2}CO_{3}, NaNO_{3}, Na_{2}HPO_{4}, Na_{3}PO_{4}, NH_{4}Cl, (NH_{4})_{2}HPO_{4}, NH_{4}H_{2}PO_{4}, (NH_{4})_{2}SO_{4}, KCl, K_{2}HPO_{4}, KH_{2}PO_{4}, KNO_{3}, Na_{2}SO_{4}, K_{2}SO_{4}, KHSO_{4}, MgSO_{4}, ZnSO_{4}, NaCl y citrato de sodio o mezclas de éstos

iv.: el tamaño de partícula del gránulo es inferior a 400 \mum,

v.: el espesor del recubrimiento de sal es de al menos 8 \mum,

vi.: la enzima es termolábil,

vii.: el gránulo comprende también un recubrimiento de cera, y

viii.: El gránulo comprende también una fuente de ácido láctico.

Alimentos para animales

El gránulo es adecuado para su uso en composiciones de alimentos para animales. El gránulo es mezclado con sustancias alimentarias. Las características del gránulo permite su uso como componente de una composición que es adecuada en forma de alimentos para animales, la cual es tratada con vapor y granulada posteriormente.

El término animal incluye todos los animales. Unos ejemplos de animales son los no rumiantes, y los rumiantes, como las vacas, ovejas y caballos. En una forma de realización particular, el animal es un animal no rumiante. Los animales no rumiantes incluyen animales monogástricos, por ejemplo cerdos o puercos (incluyendo, pero sin limitarse a éstos, lechones, cerdos de crecimiento, y cerdas); aves como los pavos y pollos (incluyendo pero sin limitarse a éstos, pollos de engorde, gallinas ponedoras); terneros; y peces (incluyendo el salmón pero sin limitarse a éste).

El término alimento o composición alimentaria define cualquier compuesto, preparación, mezcla, o composición.

El alimento puede comprender proteínas vegetales. Los términos proteínas vegetales como se utilizan en la presente se refieren a cualquier compuesto, composición, preparación o mezcla que incluye al menos una proteína derivada o procedente de un vegetal, incluyendo proteínas modificadas y derivados de proteína. En formas de realización particulares, el contenido de proteína de las proteínas vegetales es de al menos 10, 20, 30, 40, 50, o 60% (p/p).

Las proteínas vegetales pueden ser derivadas de fuentes de proteína vegetales, como las leguminosas y cereales, por ejemplo materiales procedentes de plantas de las familias Fabaceae (Leguminosae), Cruciferaceae, Chenopodiaceae, y Poaceae, como la harina de soja, harina de lupino y harina de colza.

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En una forma de realización particular, la fuente de proteína vegetal es un material de una o más plantas de la familia Fabaceae, por ejemplo semilla de soja, altramuz, guisante, o judía.

En otra forma de realización particular, la fuente de proteína vegetal es un material procedente de una o más plantas de la familia Chenopodiaceae, por ejemplo la remolacha, remolacha azucarera, espinaca o quinoa.

Otros ejemplos de fuentes de proteína vegetal son el colza, y la col.

La soja es una fuente de proteína vegetal preferida.

Otros ejemplos de fuentes de proteína vegetal son los cereales tales como la cebada, trigo, centeno, avena, (maíz) de maíz, arroz, y sorgo.

Unos aditivos de alimentos para animales adecuados son inhibidores de enzimas, vitaminas liposolubles, vitaminas solubles en agua, oligoelementos y macrominerales.

Por otra parte, ingredientes de aditivos alimenticios opcionales son agentes colorantes, compuestos aromáticos, estabilizadores, péptidos antimicrobianos, y/o al menos otra enzima seleccionada entre las fitasas EC 3.1.3.8 o 3.1.3.26; xilanasas EC 3.2.1.8; galactanasas EC 3.2.1.89; y/o beta-glucanasas EC 3.2.1.4.

Ejemplos de péptidos antimicrobianos (AMP) son CAP18, Leucocin A, Tritrpticin, Protegrin-1, Thanatin, Defensin, Ovispirin tal como Novispirin (Robert Lehrer, 2000), y variantes, o fragmentos de éstos que retienen una actividad antimicrobiana.

Ejemplos de polipéptidos antifúngicos (AFP) son el Aspergillus giganteus, y péptidos de Aspergillus Niger, así como variantes y fragmentos de éstos que retienen una actividad antifúngica, tal como descrito en WO 94/01459 y PCT/DK02/00289.

Vitaminas solubles en grasas y en agua, así como oligoelementos forman parte de una premezcla conocida prevista para una adición al alimento, mientras que los macrominerales son añadidos habitualmente en forma separada al alimento.

Las listas siguientes son listas no exclusivas de ejemplos de estos componentes:

: Unos ejemplos de vitaminas liposolubles son la vitamina A, vitamina D3, vitamina E, y vitamina K, por ejemplo vitamina K3.

: Ejemplos de vitaminas hidrosolubles son vitamina B12, biotina y colina, vitamina B1, vitamina B2, vitamina B6, niacina, ácido fólico y pantotenato, por ejemplo Ca-D-pantotenato.

: Ejemplos de oligoelementos son manganeso, zinc, hierro, cobre, yodina, selenio, y cobalto.

: Ejemplos de macrominerales son el calcio, fósforo y sodio.

: En otras formas de realización particulares también, la composición de alimentos para animales contiene 0-80% de maíz; y/o 0-80% de sorgo; y/o 0-70% de trigo; y/o 0-70% de cebada; y/o 0-30% de avena; y/o 0-40% de harina de soja; y/o 0 10% harina de pescado; y/o 0-20% de suero de leche.

La presente invención es descrita posteriormente por los ejemplos siguientes que no deben ser interpretados como un limite para el ámbito de la invención.

Ejemplos Ejemplo 1 Gránulo 1

5 kg de núcleos Na_{2}SO_{4} tamizados hasta 180-250 micras fueron cargados en un lecho de fluido de pulverización superior Niro MP-1. La mezcla siguiente fue aplicada sobre los núcleos:

: 450 g de concentrado de fitasa

: 50 g de dextrina, Avedex W80

: 265 g de polvo de licor de maíz

: 265 g de almidón de trigo

: 3300 g de agua

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Gránulo 2

3.0 kg de gránulo 1 fueron cargados en un lecho de fluido de pulverización superior Niro MP-1.

La mezcla siguiente fue aplicada sobre los núcleos:

: 1200 g de Na_{2}SO_{4}

: 50 g de dextrina, Avedex W80

: 3200 g de agua

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Gránulo 3

3.0 kg de gránulo 1 fueron cargados en un lecho de fluido de pulverización superior MP-1.

La mezcla siguiente fue aplicada sobre los núcleos:

: 1200 g MgSO_{4}\cdot7H_{2}O

: 50 g de dextrina, Avedex W80

: 2000 g agua

El sulfato de magnesio es aplicado después aún hidratado con al menos 6 moléculas de agua

Las características siguientes del lecho fueron usadas durante el recubrimiento de gránulo 1, 2 y 3:

: Corriente de aire: 175 kg/h

: Temperatura del aire de entrada: 80ºC

: Temperatura de producto: 42-46º

: 1.2 mm de boquilla

: Presión de boquilla de 3.6 bares

Después del recubrimiento los gránulos fueron secados a una temperatura del producto de 60ºC

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Gránulo 4

Unos pequeños núcleos de fitasa fueron preparados mediante secado por pulverización y recubiertos posteriormente.

Spray-feed 1 (suspensión de sulfato mantenida a 45-50ºC):

: 14560 g de Na_{2}SO_{4}

: 3200 g de Talco (silicato de magnesio)

: 2080 g de dextrina, Avedex W80

: 12160 g de agua

Alimento de pulverización 2 (solución de enzima mantenida a 20-25ºC):

: 19840 g de concentrado de fitasa

: 4800 g polvo de licor de maíz

: 4800 g almidón de trigo

: 2560 g de agua

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Los dos alimentos de pulverización fueron dosificados a través de bombas peristálticas en una gama de 500 g/minutos y mezclados en un mezclador estático justo antes de la introducción del secador de pulverización (Bontech 1038DAN). La temperatura del aire de entrada en el secador de pulverización era de 140ºC y la temperatura del polvo de salida de 44 a 46ºC.

El polvo fue tamizado entre 125 y 180 micras.

3 kg de núcleos tamizados fueron aplicados sobre el MP-1 con la mezcla siguiente:

: 3045 g de Na_{2}SO_{4}

: 105 g de dextrina, Avedex W80

: 7350 g de agua

Durante este recubrimiento se usó la configuración de lecho de fluido siguiente:

: Corriente de aire: 80-110 kg/h

: Temperatura del aire de entrada = 70-90ºC

: Temperatura de producto 40-43º

: Boquilla de 1.2 mm

: Presión de boquilla de 3.0 bares

Después del recubrimiento, los productos fueron secados a una temperatura de producto de 60ºC

Las partículas fueron ampliadas por pulverización de la dispersión siguiente sobre los núcleos recubiertos de sal en el MP-1:

: 10451 g de Na_{2}SO_{4}

: 968 g de CaCO_{3} precipitado (PCC)

: 581 g de dextrina, Avedex W80

: 7353 g de agua

Durante este aumento se usó la configuración de lecho de fluido siguiente:

: Corriente de aire: 110-130 kg/h

: Temperatura del aire de entrada = 80-92ºC

: Temperatura de producto 39-41ºC

: Boquilla de 1.2 mm

: Presión de boquilla de 3.6 bares

Después del recubrimiento, los productos fueron secados a una temperatura del producto de 60ºC

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Gránulo 5

Un granulado alimentario fue producido tal y como está descrito en WO 92/12645 ejemplo 2 (T-granulado, aunque con un concentrado de fitasa y usando aceite de palma hidrogenado como material de recubrimiento en vez de sebo bovino hidrogenado).

Mediciones de estabilidad de granulación

Los gránulos 1 a 5 fueron granulados en condiciones muy duras.

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Preparación experimental:

Aproximadamente 50 g de granulados de enzima fueron premezclados con 10 kg de alimentos durante 10 minutos en un pequeño mezclador horizontal. Esta premezcla fue mezclada con 90 kg de alimentos durante 10 minutos en un mezclador mayor horizontal. A partir del mezclador el alimento fue dirigido hacia el acondicionador (un mezclador en cascada con inyección de vapor) en una proporción de aproximadamente 300 kg/hora. El acondicionador calentó el alimento hasta 100ºC (medido a la salida) por inyección de vapor. El tiempo de residencia en el acondicionador fue de 60 a 70 segundos. Desde el acondicionador el alimento fue dirigido hacia una prensa Simón Heesen equipada con una boquilla horizontal de 3.0x35 mm y prensado en granulados con una longitud de aproximadamente 15 mm. Después del prensado, los granulados fueron dispuestos en un refrigerante de aire y enfriados durante 15 minutos.

Formulación de alimentos:

: 74.0% de trigo molido

: 20.7% granos de soja tostados

: 5.0% de aceite de soja

: 0.3% de Solivit Mikro 106 (mezcla comercial de minerales y vitaminas de Løvens Kemiske Fabrik, Dinamarca)

: Contenido de agua: 12.0%

La actividad de los granulados de enzima de entrada y las actividades de los granulados finales fueron analizadas, y se calculó la actividad residual a partir de estas figuras. Las figuras fueron corregidas para los niveles ciegos de fitasa en una muestra de alimento sin enzima antes y después de la granulación.

Resultados de la prueba de granulación:

1

El gran tamaño de partícula se debe a la aglomeración que se produce durante el recubrimiento de sal. Las partículas "primarias" son de aproximadamente 300 micrones.

Según los resultados es evidente que un recubrimiento de sal mejora significativamente la estabilidad de la granulación. El recubrimiento del sulfato de sodio es bastante más eficiente que el recubrimiento heptahidrato de sulfato de magnesio. La estabilidad de los granulados recubiertos con sulfato de sodio es mejor que la de los gránulos recubiertos con cera.

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Ejemplo 2 Gránulo 6

4 kg de núcleos Na_{2}SO_{4} tamizados hasta 180-250 micrones fueron cargados en un lecho de fluido de pulverización superior MP-1 y recubiertos con:

: 500 g de concentrado de fitasa

: 40 g de dextrina, Avedex W80

: 210 g de polvo de licor de remojo de maíz

: 210 g de almidón de trigo

: 2300 g de agua

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Gránulo 7

3 kg de gránulo 6 fueron recubiertos sobre el MP-1 con:

: 1200 g de Na_{2}SO_{4}

: 50 g de dextrina, Avedex W80

: 3200 g de agua

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Gránulo 8

: 640 g de concentrado de fitasa

: 40 g de dextrina, Avedex W80

: 210 g de polvo de licor de maíz

: 210 g de almidón de trigo

: 2200 g de agua

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Gránulo 9

3 kg de gránulo 8 fueron cargados en un lecho de fluido de pulverización superior MP-1 y recubiertos con:

: 2400 g de Na_{2}SO_{4}

: 100 g de dextrina, Avedex W80

: 6400 g de agua

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Gránulo 10

: 550 g de concentrado de fitasa

: 40 g de dextrina, Avedex W80

: 210 g de polvo de licor de maíz

: 210 g de almidón de trigo

: 500 g de Farigel triturado (harina gelatinizada de Westove)

: 2200 g de agua

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Gránulo 11

3 kg de gránulo 10 fueron cargados en el MP-1 y recubiertos con:

: 1200 g de Na_{2}SO_{4}

: 50 g de dextrina, Avedex W80

: 3200 g de agua

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Gránulo 12

3 kg de gránulo 6 fueron cargados en el MP-1 y recubiertos con:

: 1200 g de (NH_{4})_{2}SO_{4}

: 2000 g de agua

La siguiente configuración de lecho de fluido fue usada más arriba durante el recubrimiento de enzima sobre los núcleos:

: Corriente de aire: 220 kg/h

: Temperatura del aire de entrada = 70ºC

: Temperatura de producto 42-46ºC

: Boquilla de 1.2 mm

: Presión de boquilla 3.0 bares

Después del recubrimiento, los productos fueron secados a una temperatura de producto de 60ºC.

La siguiente configuración de lecho de fluido fue usada más arriba durante el recubrimiento de sal sobre la enzima:

: Corriente de aire: 270 kg/h

: Temperatura del aire de entrada = 90ºC

: Temperatura de producto 45-55ºC

: boquilla de 1.2 mm

: presión de boquilla 3.0 bares

Estabilidad de granulación

Los productos 6, 7, 8, 9 y 10 comprendiendo un gránulo 7, 9, 11, 12 y 5 respectivamente fueron granulados mediante el uso de las condiciones determinadas en el ejemplo 1, excepto para el contenido de agua en el alimento que fue reducido a 10.1% por secado del trigo de entrada (proporcionando en cierta medida condiciones de granulación menos difíciles)

2

3

Según los experimentos resulta evidente que un recubrimiento de sal mejora significativamente la estabilidad de granulación, y la estabilidad es mejor que la de los gránulos conocidos recubiertos de cera.

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Referencias citadas en la descripción

Esta lista de referencias citada por el solicitante ha sido recopilada exclusivamente para la información del lector. No forma parte del documento de patente europea. La misma ha sido confeccionada con la mayor diligencia; la OEP sin embargo no asume responsabilidad alguna por eventuales errores u omisiones.

Documentos de patente citados en la descripción

- WO 9212645 A [0002] [0002] [0152] [0170] [0211]

- WO 0001793 A [0004] [0010] [0140] [0170]

- WO 9716076 A1 [0005]

- EP 0940088 A2 [0006]

- WO 0125411 A [0007]

- US 2003049811 A1 [0008]

- WO 9739116 A [0009] [0152] [0167] [0170]

- US 6268329 B1 [0010]

- US 2002160927 A [0010

- WO 03055967 A [0011]

- EP 251446 A [0037]

- WO 9100345 A [0037]

- EP 525610A [0037]

- WO 9402618 A [0037]

- WO 9606931 A [0043]

- WO 9828408 A [0044] [0051]

- WO 0043503 A [0044] [0050]

- WO 03066847 A [0044]

- WO 0020569 A [0049]

- WO 9949022 A [0050]

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- EP 0897010 A [0050]

- EP 0897985 A [0050]

- EP 684313 A [0051]

- US 6139902 A [0051]

- EP 420358 A [0051]

- WO 9735017 A [0051]

- WO 9828409 A [0051]

- JP 11000164 B [0051]

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- AU 724094 [0051]

- WO 9733976 A [0051]

- US 6110719 A [0051]

- US 5830732 A [0051]

- WO 200366847 A [0052] [0062] [0071]

- WO 0158275 A [0053]

- WO 0158276 A [0053]

- WO 2003062409 A [0059]

- WO 9932595 A [0106] [0138]

- EP 304331 B1 [0113]

- EP 1117771 A [0114]

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- WO 0355967 A [0135]

- US 4106991 A [0152] [0153] [0167] [0170]

- EP 170360A [0152] [0170]

- EP 304332 A [0152] [0170]

- EP 304331 A [0152] [0167] [0170]

- EP 458849 A [0152] [0170]

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- WO 8908695 A [0152] [0170] [0170]

- WO 8908694 A [0152] [0170] [0170]

- WO 8707292 A [0152] [0170]

- WO 9106638 A [0152] [0170]

- WO 9213030 A [0152] [0170]

- WO 9307260 A [0152] [0170]

- WO 9307263 A [0152] [0170]

- WO 9638527 A [0152] [0170]

- WO 9616151 A [0152] [0170]

- WO 9723606 A [0152] [0167] [0170]

- US 5324649 A [0152] [0170]

- US 4689297 A [0152] [0170]

- EP 206417 A [0152] [0170]

- EP 193829A [0152] [0170]

- DE 4344215 [0152] [0170]

- DE 4322229 A [0152] [0170]

- DD 263790 [0152]

- JP 61162185 A [0152] [0170]

- JP 58179492 B [0152] [0170]

- DK 0100628 W [0152]

- EP 0569468 A [0153]

- US 4016040 A [0167]

- US 4713245 A [0167]

- EP 170360 B1 [0167]

- EP 304332 B1 [0167]

- WO 9009440 A [0167]

- WO 9009428 A [0167]

- DK PA200200473 [0170]

- WO 270608 B1 [0170]

- WO 0220746 A [0170]

- WO 0228369 A [0170]

- US 5879920 A [0170]

- US 6348442 B [0170]

- DE 263790 [0170]

- WO 9401459 A [0193]

- DK 0200289 W [0193]

Literatura no patentada citada en la descripción

- Handbook of chemistry and physics CRC Press, Inc. 1977. E46- [0019]

- Bairoch A. The ENZYME database, 2000, Nucleic Acids Res, 2000, vol. 28, 304-305 [0038]

- Coutinho, P.M. Henrissat, B. Carbohydrate-Active Enzymes, 1999, [0039]

- Recent Advances in Carbohydrate Bioengineering The Royal Society of Chemistry3-12 [0039]

- The modular structure of cellulases and other carbohydrate-active enzymes: an integrated database approach Coutinho, P.M. Henrissat, B. Genetics, Biochemistry and Ecology of Cellulose Degradation Uni Publishers Co. 1999. 15-23 [0039]

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- Appl. Environ. Microbiol., 1998, vol. 64, 2079-2085 [0051]

- FEMS Microbiol. Lett., 1998, vol. 162, 185-191 [0051]

- J. Bacteriol., 1995, vol. 177, 6263-6275 [0051]

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- C. E. Capes Handbook of Powder Technology Elsevier 1980. vol. 1, [0167]

- Powdered detergents; Surfactant Science Series Marcel Dekker 1998. vol. 71, 140-142 [0167] [0167] [0167]

- Principies of Powder Technology John Wiley & Sons 1990. [0167]

Claims

1. Método de fabricación de una composición alimentaria comprendiendo las etapas de:

ii.: tratamiento con vapor de dicha composición (i), y

iii.: granulación de dicha composición (II),

caracterizado por el hecho de que el recubrimiento comprende una que tiene una humedad constante a 20ºC que es superior a 60%.

2. Método según la reivindicación 1, donde la enzima presentada en el núcleo retiene al menos 75% de la actividad antes de la granulación con vapor.

3. Método según la reivindicación 1 o 2, donde el recubrimiento comprende al menos 60% p/p de sal.

4. Método según la reivindicación 1 o 2, donde el recubrimiento comprende al menos 80% p/p de sal.

5. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde la sal en el recubrimiento es seleccionada en el grupo que consiste en NaCl, Na_{2}CO_{3}, NaNO_{3}, Na_{2}HPO_{4}, Na_{3}PO_{4}, NH_{4}Cl, (NH_{4})_{2}HPO_{4}, NH_{4}H_{2}PO_{4}, (NH_{4})_{2}SO_{4}, KCl, K_{2}HPO_{4}, KH_{2}PO_{4}, KNO_{3}, Na_{2}SO_{4}, K_{2}SO_{4}, KHSO_{4}, MgSO_{4}, ZnSO_{4}, CuSO_{4} y citrato de sodio.

6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde la sal en el recubrimiento es (NH_{4})_{2}SO_{4}, Na_{2}SO_{4} o MgSO_{4}.

7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde la sal en el recubrimiento es Na_{2}SO_{4}.

8. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, donde los gránulos tienen un tamaño de partícula de 100-1000 \mum.

9. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, donde los gránulos tienen un tamaño de partícula de 100-600 \mum.

10. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, donde los gránulos tienen un tamaño de partícula entre 210 y 390 \mum.

11. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, donde los gránulos tienen un tamaño de partícula inferior a 700 \mum.

12. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, donde los gránulos tienen un tamaño de partícula inferior a 400 \mum.

13. Método según cualquiera de reivindicaciones 1-12, donde el espesor del recubrimiento de sal es de al menos 8 \mum.

14. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-13, donde la enzima es seleccionada en el grupo que consiste en amilasas, proteasas, beta-glucanasas, fitasas, xilanasas, fosfolipasas y glucosa oxidasas.

15. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-13, donde la enzima es una fitasa.

16. Método según la reivindicación 15, donde la fitasa es una 6-fitasa.

17. Método según la reivindicación 15, donde la fitasa es una fitasa Escherichia coli.

18. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-17, donde el núcleo es una partícula inerte con la enzima aplicada sobre éste.

19. Método según la reivindicación 18, donde la partícula inerte es un almidón, una azúcar o una sal.

20. Método según la reivindicación 18, donde la partícula inerte es Na_{2}SO_{4}.

21. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-20, que comprende también una, dos o más capas de recubrimiento adicionales sobre la superficie interior o exterior del recubrimiento de sal.

22. Método según la reivindicación 21, donde el recubrimiento adicional comprende talco.

23. Método según la reivindicación 21, donde el recubrimiento adicional comprende alcohol polivinílico (PVA).

24. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-23, donde el tratamiento con vapor consiste en calentar la mezcla alimentaria a 60-100ºC mediante una inyección de vapor.

25. Uso de gránulos comprendiendo un núcleo comprendiendo una enzima y un recubrimiento para la producción de una composición alimentaria granulada tratada con vapor, caracterizado por el hecho de que el recubrimiento comprende una sal que tiene una humedad constante a 20ºC que es superior a 60%.

26. Uso según la reivindicación 25, donde la sal es seleccionada en el grupo que consiste en NaCl, Na_{2}CO_{3}, NaNO_{3}, Na_{2}HPO_{4}, Na_{3}PO_{4}, NH_{4}Cl, (NH_{4})_{2}HPO_{4}, NH_{4}H_{2}PO_{4}, (NH_{4})_{2}SO_{4}, KCl, K_{2}HPO_{4}, KH_{2}PO_{4}, KNO_{3}, Na_{2}SO_{4}, K_{2}SO_{4}, KHSO_{4}, MgSO_{4}, ZnSO_{4} CuSO_{4} y citrato de sodio.