JPH01117794A - Ｌ−カルニチンの製造法 - Google Patents
Ｌ−カルニチンの製造法Info
- Publication number
- JPH01117794A JPH01117794A JP27208687A JP27208687A JPH01117794A JP H01117794 A JPH01117794 A JP H01117794A JP 27208687 A JP27208687 A JP 27208687A JP 27208687 A JP27208687 A JP 27208687A JP H01117794 A JPH01117794 A JP H01117794A
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- JP
- Japan
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- carnitine
- dehydrocarnitine
- medium
- rhizobium
- culture
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、特定の微生物を作用させて、３−デヒドロカ
ルニチンを効率的にＬ−カルニチンに変換せしめるＬ−
カルニチンの新規製造法に関する゛ものである。
ルニチンを効率的にＬ−カルニチンに変換せしめるＬ−
カルニチンの新規製造法に関する゛ものである。
Ｌ−カルニチンは、慢性の心筋虚血、狭心症などの治療
薬として、また脂質代謝改善薬として用いられておシ、
近年その重要性が高まってきている。
薬として、また脂質代謝改善薬として用いられておシ、
近年その重要性が高まってきている。
（従来の技術）
Ｌ−カルニチンの製造法としては、化学的な合成によっ
て得られたう七ミ体のカルニチンを光学分割する方法が
ある。その光学分割の方法は、前駆体であるＤＬ−カル
ニチンニトリルにＮ−７セチルーＤ−グルタミン酸又は
、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルタミン酸を分割剤として加え
、塩を生成させ、溶解度の差を利用して分割し、次いで
これを加水分解してＬ−およびＤ−カルニｔンクロライ
ドとなすもの（特公昭４３−８２４８）が代表的なもの
である。しかしながら、この方法では光学分割剤が高価
であシ、操作も複雑で収率も低い。又、酵素法によって
はシュードモナス属に属する微生物をか、反応系に補酵
素として消費されるＮＡＤＨを再生させるために別の酵
素を添加しておシ、未だ検討する余地が大きい。
て得られたう七ミ体のカルニチンを光学分割する方法が
ある。その光学分割の方法は、前駆体であるＤＬ−カル
ニチンニトリルにＮ−７セチルーＤ−グルタミン酸又は
、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルタミン酸を分割剤として加え
、塩を生成させ、溶解度の差を利用して分割し、次いで
これを加水分解してＬ−およびＤ−カルニｔンクロライ
ドとなすもの（特公昭４３−８２４８）が代表的なもの
である。しかしながら、この方法では光学分割剤が高価
であシ、操作も複雑で収率も低い。又、酵素法によって
はシュードモナス属に属する微生物をか、反応系に補酵
素として消費されるＮＡＤＨを再生させるために別の酵
素を添加しておシ、未だ検討する余地が大きい。
（発明が解決しようとする問題点）
上記欠点を解消する為に、３−デヒドロカルニチンをＬ
−カルニチンに変換する能力の高い新規な微生物を見い
出し、かつ高蓄積、高収率でＬ−カルニチンを製造する
方法を提供することにある。
−カルニチンに変換する能力の高い新規な微生物を見い
出し、かつ高蓄積、高収率でＬ−カルニチンを製造する
方法を提供することにある。
（問題点を解決すべき手段）
本発明者はこのような目的を達成すべく鋭意検討を重ね
た結果、リゾビウム属あるいはロドコッカス属に属する
微生物が効率よく３−デヒドロカルニチンよシム−カル
ニチンを生産することを見い出し、本発明を完成させる
に至った。
た結果、リゾビウム属あるいはロドコッカス属に属する
微生物が効率よく３−デヒドロカルニチンよシム−カル
ニチンを生産することを見い出し、本発明を完成させる
に至った。
即ち、本発明は３−デヒドロカルニチンよｊＤＬ−カル
ニチンを生成せしめる能力を有するリゾビウム属あるい
はロドコッカス属に属する微生物の作用によシ、水性媒
体中にて３−７′ヒドロカルニチンをＬ−カルニチンに
変換せしめることを特徴とするＬ−カルニチンの製造方
法である。
ニチンを生成せしめる能力を有するリゾビウム属あるい
はロドコッカス属に属する微生物の作用によシ、水性媒
体中にて３−７′ヒドロカルニチンをＬ−カルニチンに
変換せしめることを特徴とするＬ−カルニチンの製造方
法である。
本発明において使用される微生物は、具体的にはりゾビ
ウム メリロテ４ （Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉｌ
ｏｔｉＡＪ２８２７ （ＦＥＲＭＰ−９６５７） ）
、ロドコッカス エクイ（Ｒｈｏｄｏｅｏｅｃｕｓ ＠
ｑｕｉ ＡＴＣＣ６９３９）等がある。
ウム メリロテ４ （Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉｌ
ｏｔｉＡＪ２８２７ （ＦＥＲＭＰ−９６５７） ）
、ロドコッカス エクイ（Ｒｈｏｄｏｅｏｅｃｕｓ ＠
ｑｕｉ ＡＴＣＣ６９３９）等がある。
これらの微生物を培養するには、通常の炭素源・窒素源
・無機イオンを含有する培地で培養すればよい。更にビ
タミン、アミノ酸等の有機微量栄養累を添加すると望ま
しい結果が得られる場合が多い。
・無機イオンを含有する培地で培養すればよい。更にビ
タミン、アミノ酸等の有機微量栄養累を添加すると望ま
しい結果が得られる場合が多い。
炭素源としては、グルコース、シュクロース等の炭水化
物、酢酸等の有機酸、アルコール類、その他が適宜使用
される。窒素源としては、アンモニアガス、アンモニア
水、アンモニウム塩、その他が用いられる。無機イオン
としては、マグネシウムイオン、燐酸イオン、カリイオ
ン、鉄イオン、その他が必要に応じ適宜使用される。
物、酢酸等の有機酸、アルコール類、その他が適宜使用
される。窒素源としては、アンモニアガス、アンモニア
水、アンモニウム塩、その他が用いられる。無機イオン
としては、マグネシウムイオン、燐酸イオン、カリイオ
ン、鉄イオン、その他が必要に応じ適宜使用される。
培養は好気的条件下に、ｐＨ４ないし８、温度２５ない
し４０℃の適当な範囲に制御しつつｌないし１０日培養
を行えば望ましい結果が得られる。
し４０℃の適当な範囲に制御しつつｌないし１０日培養
を行えば望ましい結果が得られる。
Ｌ−カルニチンを生成させる方法としては、上記培地を
用いて培養した培養初期あるいは培養途中に３−デヒド
ロカルニチンを培地に添加しながち行う培養法を用いて
もよいし、静止菌体を用いる酵素法を用いてもよい。静
止菌体を用いる方法としては、上記で培養した培養液を
そのまま用いる方法や遠心分離等によシ菌体を分離しこ
れをリン酸緩衝液あるいは水等の水性媒体に再懸濁した
ものに３−ｆヒＰＯカルニチンを添加させる方法等があ
る。
用いて培養した培養初期あるいは培養途中に３−デヒド
ロカルニチンを培地に添加しながち行う培養法を用いて
もよいし、静止菌体を用いる酵素法を用いてもよい。静
止菌体を用いる方法としては、上記で培養した培養液を
そのまま用いる方法や遠心分離等によシ菌体を分離しこ
れをリン酸緩衝液あるいは水等の水性媒体に再懸濁した
ものに３−ｆヒＰＯカルニチンを添加させる方法等があ
る。
この反応の際、ＮＡＤＨ，グルコース、シュクロース等
をエネルギー源として添加してもよい。又、生菌体のま
までもよいしアセトン逃理又は、凍結乾燥等の１８１瑞
を施したもめでもよい。又、これらの菌体を担体に固定
化してｍ−ることもできる。
をエネルギー源として添加してもよい。又、生菌体のま
までもよいしアセトン逃理又は、凍結乾燥等の１８１瑞
を施したもめでもよい。又、これらの菌体を担体に固定
化してｍ−ることもできる。
３−デヒドロカルニチンは反応の始めから一括Ｋ。
あるいは分割添加してもよい。反応は、−４〜１０の範
囲で、１０〜７０℃の適当な温度に調節しつつ、暫時静
置又は攪拌すればよい。かくして１〜１００時間も経過
すれば水性媒体中に多量のＬ−カルニチンが生成される
。
囲で、１０〜７０℃の適当な温度に調節しつつ、暫時静
置又は攪拌すればよい。かくして１〜１００時間も経過
すれば水性媒体中に多量のＬ−カルニチンが生成される
。
このようにして得られたＬ−カルニチンを培養液又は水
溶液よシ採取する方法は、本発明の方法゛によれば、Ｄ
−カルニチンが副生じないので、イオン交換樹脂を用い
る方法、等電点にて沈澱せしめる方法等、通常の方法が
採用される。
溶液よシ採取する方法は、本発明の方法゛によれば、Ｄ
−カルニチンが副生じないので、イオン交換樹脂を用い
る方法、等電点にて沈澱せしめる方法等、通常の方法が
採用される。
生成したＬ−カルニチンの定量は、デビット・ジ、イ・
ビアスン（Ｄａｖｉｄ Ｊ、Ｐｏａｒｓｏｎ）らの方法
で分析した（Ｍｏｔｈｏｄ ｏｆ Ｅｎｚｙｍａｔｌｅ
Ａｎａｌｙｓｉｍ ） 、第４巻（第２版）、１９７
４年、１７５８頁、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒ＠ｓｓ Ｉａ
ｅ、 参照）。
ビアスン（Ｄａｖｉｄ Ｊ、Ｐｏａｒｓｏｎ）らの方法
で分析した（Ｍｏｔｈｏｄ ｏｆ Ｅｎｚｙｍａｔｌｅ
Ａｎａｌｙｓｉｍ ） 、第４巻（第２版）、１９７
４年、１７５８頁、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒ＠ｓｓ Ｉａ
ｅ、 参照）。
（実施例）
以下、本発明を実施例にて説明する。
実施例１
グル＝ｔ−ス２．０１１／ｄｌ、（ＮＨ４）２Ｓｏ４０
．５１１／ｄｌ。
．５１１／ｄｌ。
Ｋ２？０４０．３１／ｄｔ、ＫＨ２ＰＯ４０，１１１／
ｄｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０５１７ｄ１． Ｆ
ｅＳＯ４・７Ｈ２０１ダ／ｄｔ１ＭｎＳＯ４”４Ｈ２０
１１ｎｇ／＃ 、酵母エキスｌＩ／ｃｔｔ、ペプトン
１ Ｎ／ｄｔ、 ｃａｃｏ、 ４． ＯＩ／ｌａ （
別殺菌）（声７．０）を５００−容肩付フラスコに５０
ｄ入れ、１２０℃で１５分間殺菌した。
ｄｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０５１７ｄ１． Ｆ
ｅＳＯ４・７Ｈ２０１ダ／ｄｔ１ＭｎＳＯ４”４Ｈ２０
１１ｎｇ／＃ 、酵母エキスｌＩ／ｃｔｔ、ペプトン
１ Ｎ／ｄｔ、 ｃａｃｏ、 ４． ＯＩ／ｌａ （
別殺菌）（声７．０）を５００−容肩付フラスコに５０
ｄ入れ、１２０℃で１５分間殺菌した。
これにブイヨン寒天培地で３０℃にて３０時間前培養し
たりゾピウム メリロテイ（ＦＥＢＭＰ−９６５７）′
−この培養液よシ菌体を遠心分離によシ採取し、培養液
と同量の生理食塩水で１回洗浄し菌体を集めた。これら
の菌体を、３−デヒドロカルニチン塩酸塩１０ ｍＭ
（１９５Ｗ／ｄｌ ）とＮＡＤＨＩ Ｏ−を含む１００
ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）に添加して、５１１
７ｄｉになるよう調製し、３０℃にて３時間保持反応さ
せた。反応液中に存在するＬ−カルニチンは前記の酵素
的分析法で測定した。
たりゾピウム メリロテイ（ＦＥＢＭＰ−９６５７）′
−この培養液よシ菌体を遠心分離によシ採取し、培養液
と同量の生理食塩水で１回洗浄し菌体を集めた。これら
の菌体を、３−デヒドロカルニチン塩酸塩１０ ｍＭ
（１９５Ｗ／ｄｌ ）とＮＡＤＨＩ Ｏ−を含む１００
ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）に添加して、５１１
７ｄｉになるよう調製し、３０℃にて３時間保持反応さ
せた。反応液中に存在するＬ−カルニチンは前記の酵素
的分析法で測定した。
この結果、リゾビウム メリロテイ（ＦＥＢＭＰ−９６
５７）を用いた場合にはＬ−カルニチンが６．５ｍＭ（
１１ＯＴｎ９７ｄｔ）、ロドコッカス エクイ（ＡＴＣ
Ｃ６９３９）を用いた場合には３．８ ｍＭ （６０η
／ｄｉ ）のＬ−カルニチンが生成していた。
５７）を用いた場合にはＬ−カルニチンが６．５ｍＭ（
１１ＯＴｎ９７ｄｔ）、ロドコッカス エクイ（ＡＴＣ
Ｃ６９３９）を用いた場合には３．８ ｍＭ （６０η
／ｄｉ ）のＬ−カルニチンが生成していた。
実施例２
実施例１と同様に培養したリゾビウム メリロテイ（Ｆ
ＥＲＭＰ−９６５７）を実施例１と同様の方法で洗浄し
集めた菌体の全量をグルコース２１１７ｄｌと３−゛デ
ヒドロカルニチン塩酸塩２１１７ｄｉを含む１０ｍＭの
リン酸緩衝液（ｐＨ７，０）５０−に添加し、これを５
００−容肩付フラスコへ入れた。更にこれを３０℃４時
間振盪反応したところ、培養液中にＬ−カルニチンが、
０．６１１７ｄｌ生成していた。
ＥＲＭＰ−９６５７）を実施例１と同様の方法で洗浄し
集めた菌体の全量をグルコース２１１７ｄｌと３−゛デ
ヒドロカルニチン塩酸塩２１１７ｄｉを含む１０ｍＭの
リン酸緩衝液（ｐＨ７，０）５０−に添加し、これを５
００−容肩付フラスコへ入れた。更にこれを３０℃４時
間振盪反応したところ、培養液中にＬ−カルニチンが、
０．６１１７ｄｌ生成していた。
実施例３
実施例１に示した培地を５００−容７ラスコに２〇−人
れ、１２０℃１５分間殺菌した。これに実施例１と同様
に前培養したリゾビウム メリロテイ（ＦＥＢＭＰ−９
６５７）あるいはロドコッカス エフ４ （ＡＴＣＣ６
９３９）を−白金耳接種し、３０’ＣＩ６時間振盪培養
後、グルコース１． ＯＩ／ｄｌと３−デヒドロカルニ
チン塩酸塩２．０１１／ｄｉを含む１００−リ、ン酸緩
衝液（ｐＨ７，０）２０−を添加し、更に５時間培養を
継続させた。この培養液中のＬ−カルニチンを実施例１
と同様にして測定したところりゾビウム メリロテイ（
ＦＥＢＭＰ−９６５７）を用いた場合には０．６１１７
ｄｌ、ロドコ７ カスエクイ（ＡＴＣＣ６９３９）を用
いた場合には０．７１１７ｄｔｃ） Ｌ−カルニチンが
生成していた。
れ、１２０℃１５分間殺菌した。これに実施例１と同様
に前培養したリゾビウム メリロテイ（ＦＥＢＭＰ−９
６５７）あるいはロドコッカス エフ４ （ＡＴＣＣ６
９３９）を−白金耳接種し、３０’ＣＩ６時間振盪培養
後、グルコース１． ＯＩ／ｄｌと３−デヒドロカルニ
チン塩酸塩２．０１１／ｄｉを含む１００−リ、ン酸緩
衝液（ｐＨ７，０）２０−を添加し、更に５時間培養を
継続させた。この培養液中のＬ−カルニチンを実施例１
と同様にして測定したところりゾビウム メリロテイ（
ＦＥＢＭＰ−９６５７）を用いた場合には０．６１１７
ｄｌ、ロドコ７ カスエクイ（ＡＴＣＣ６９３９）を用
いた場合には０．７１１７ｄｔｃ） Ｌ−カルニチンが
生成していた。
（発明の効果）
以上から明らかな如く、本発明によシム−カルニチンの
多様な製造法が可能となシ、故に本発明は、医薬産業上
重要なものである。
多様な製造法が可能となシ、故に本発明は、医薬産業上
重要なものである。
Claims (1)
- ３−デヒドロカルニチンをＬ−カルニチンに変換せしめ
る能力を有するリゾビウム属あるいはロドコッカス属に
属する微生物を水性媒体中にて３−デヒドロカルニチン
に作用せしめ、３−デヒドロカルニチンをＬ−カルニチ
ンに変換せしめることを特徴とするＬ−カルニチンの製
造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27208687A JPH01117794A (ja) | 1987-10-28 | 1987-10-28 | Ｌ−カルニチンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27208687A JPH01117794A (ja) | 1987-10-28 | 1987-10-28 | Ｌ−カルニチンの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01117794A true JPH01117794A (ja) | 1989-05-10 |
Family
ID=17508889
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27208687A Pending JPH01117794A (ja) | 1987-10-28 | 1987-10-28 | Ｌ−カルニチンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01117794A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2665058A1 (fr) * | 1990-07-30 | 1992-01-31 | Cohas Pascal | Procede de preparation de lysat de levures en suspension. |
-
1987
- 1987-10-28 JP JP27208687A patent/JPH01117794A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2665058A1 (fr) * | 1990-07-30 | 1992-01-31 | Cohas Pascal | Procede de preparation de lysat de levures en suspension. |
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