JPH01243992A - ビスホモ−γ−リノレン酸及びこれを含有する脂質の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はアラキドン酸生産能を有する微生物を利用した
醗酵法によるビスホモ−γ−リノレン酸又はそれを含有
する脂質の製造方法に関する。

〔従来技術〕

ビスホモ−γ−リノレン酸（８，１１，１４−エイコサ
トリエン酸）は魚油、海藻等の構成脂肪酸のひとつとし
て存在することが知られている。しかしながら、その含
量はわずかであるため単離精製品はたいへん高価なもの
となっており、生産効率の高い製法の開発が強く望まれ
ている。このためビスホモ−γ−リノレン酸を微生物に
より製造する方法が種々提案されている。しかしながら
その生産効率は必ずしも満足できるものではない。

〔発明が解決しようとする課題〕

従って本発明は、安価な常用の培地を用いて効率よくビ
スホモ−γ−リノレン酸を製造することができる方法を
提供しようとするものである。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者等は、上記の目的を達成するため種々研究した
結果、アラキドン酸を生産する能力を有する微生物を、
培地または培養中の培養液に胡麻油または落花生油を添
加して培養した場合にアラキドン酸の生産が押えられ、
その前駆体であるビスホモ−γ−リノレン酸の生産量が
増加するという全く新しい知見を得た。

本発明者等はさらに、胡麻油中の有効成分を追求した結
果、胡麻油に対して実質的に非混和性である有機溶剤、
例えばアセトン、により胡麻油から抽出される抽出物中
に有効成分が存在することを見出し、さらにこの抽出物
中の有効成分を追求した結果、少なくともセサミン、セ
サミノール、エピセサミン、エピセサミノール、及びセ
サモリンが有効成分であることを見出した。本発明者ら
はさらに、胡麻種子の有機溶剤抽出物から得られる２−
（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メ
トキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサ
ビシクロ〔３．３．０〕オクタン、２．６−ビス−（３
−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオ
キサビシクロ〔３．３．０〕オクタン、２−（３，４−
メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−４
−ヒドロキシフェノキシ）−３，７−シオキサピシクロ
（３．０〕オクタン等も有効であることを見出し、これ
らの知見に基いて本発明を完成した。

従ってこの発明は、アラキドン酸生産能を有する微生物
を胡麻油及び／又は、落花生油を添加した培地で培養す
るか、あるいは該微生物が培養されている培養液に胡麻
油及び／又は落花生油を添加してさらに培養することに
よりビスホモ−ｒ　−リノレン酸又はビスホモ−γ−リ
ノレン酸を含有する脂質を生成せしめ、そしてビスホモ
−γ−リノレン酸を採取することを特徴とするビスホモ
−γ−リノレン酸の製造方法；及びアラキドン酸生産能
を有する微生物を胡麻油及び／又は落花生油を添加した
培地で培養するか、あるいは該微生物が培養されている
培養液に胡麻油及び／又は落花生油を添加してさらに培
養し、そしてビスホモ−γ−リノレン酸を含有する脂質
を採取することを特徴とするビスホモ−γ−リノレン酸
を含有する脂質の製造方法を提供しようとするものであ
るふこの発明はさらに、胡麻油に対して実質的に非混和
、性である有機溶剤により胡麻油から抽出した抽出物又
は胡麻種子の溶剤抽出物を添加した培地でアラキドン酸
生産能を有する微生物を培養するか、あるいは該微生物
が培養されている培養液に前記抽出物を添加してさらに
培養することによりビスホモ−γ−リノレン酸又はビス
ホモ−γ−リノレン酸を含有する脂質を生成せしめ、そ
してビスホモ−γ−リノレン酸を採取することを特徴と
するビスホモ−γ−リノレン酸の製造方法；並びに前記
抽出物を添加した培地でアラキドン酸生産能を有する微
生物を培養するか、あるいは該微生物が培養されている
培養液に前記抽出物を添加してさらに培養し、そしてビ
スホモ−γ−リノレン酸を含有する脂質を採取すること
を特徴とするビスホモ−γ−リノレン酸を含有する脂質
の製造方法を提供する。

この発明はさらに、アラキドン酸生産能を有する微生物
をセサミン、セサミノール、エピセサミン、エピセサミ
ノール、セサモリン、２−　（３。

４−メチレンジオキシフェニル）−６−、（３−メトキ
シ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビシ
クロ（３．０〕オクタン、２．６−ビス−（３−メトキ
シ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビシ
クロ（３．０〕オクタン、又は２−（３，４−メチレン
ジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロ
キシフェノキシ）−３，７−ジオキサビシクロ〔３゜３
．０〕オクタンを単独で又は組み合わせて添加した培地
で培養するか、あるいは該微生物が培養されている培養
液にセサミン、セサミノール、エピセサミン、エピセサ
ミノール、セサモリン、２−（３，４−メチレンジオキ
シフェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフ
ェニル）−・３゜７−ジオキサビシクロ（３．０〕オク
タン、 ２．６−ビス−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニ
ル）−３，７−シオキサビシクロＣ３．０〕オクタン、
又は２−（３，４−メチレンジオキシフェニル”）−６
−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェノキシ）−３，
７−ジオキサビシクロ（３．０〕オクタンを単独で又は
組み合わせて添加してさらに培養することによりビスホ
モ−γ−リノレン酸又はビスホモ−γ−リノレン酸を含
有する脂質を生成せしめ、そしてビスホモ−γ−リノレ
ン酸を採取することを特徴とするビスホモ−γ−リノレ
ン酸の製造方法；並びにアラキドン酸生産能を有する微
生物をセサミン、セサミノール、エピセサミン、エピセ
サミノール、セサモリン、２−（３，４−メチレンジオ
キシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシ
フェニル）−３，７−ジオキサビシクロ（３．０〕オク
タン、２．６−ビス−（３−メトキシ−４−ヒドロキシ
フェニル）−３，７−ジオキサビシクロ（３．０〕オク
タン、又は２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）
−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェノキシ）−
３，７−ジオキサビシクロ（３．０〕オクタンを単独で
又は組み合わせて添加した培地で培養するか、あるいは
該微生物が培養されている培養液にセサミン、 セサミノール、エピセサミン、エピセサミノール、セサ
モリン、２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−
６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，
７−ジオキサビシクロ（３．０〕オクタン、２．６−ビ
ス−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，
７−ジオキサビシクロ（３．０〕オクタン、又は２−（
３゜４−メチレンジオキシフェニル”）　−６−（３−
メトキシ−４−ヒドロキシフェノキシ）−３，７−ジオ
キサビシクロ（３．０〕オクタンを単独で又は組み合わ
せて添加してさらに培養し、そしてビスホモ−γ−リノ
レン酸を含有する脂質を採取することを特徴とするビス
ホモ−γ−リノレン酸を含有する脂質の製造方法を提供
する。

この発明はさらに、アラキドン酸生産能を有する微生物
をタラゴン（Ｔａｒｒａｇｏｎ）、イノンド種子組み合
わせて添加した培地で培養するか、あるいは該微生物が
培養されている培養液にタラゴン（Ｔａｒｒａｇｏｎ）
、イノンド種子（Ｄｉｌｌ　５ｅｅｄ）　、パセリに培
養することによりビスホモ−γ−リノレン酸又はビスホ
モ−γ−リノレン酸を含有する脂質を生成せしめ、そし
てビスホモ−γ−リノレン酸を採取することを特徴とす
るビスホモ−γ−リノレン酸の製造方法、並びにアラキ
ドン酸生産能を有する微生物をタラゴン（Ｔａｒｒａｇ
ｏｎ）、イノンド種子組み合わせて添加した培地で培養
するか、あるいは該微生物が培養されている培養液にタ
ラゴン（Ｔａｒｒａｇｏｎ）、イノンド種子（Ｄｉｌｌ
　５ｅｅｄ）　、パセリに培養し、そしてビスホモ−γ
−リノレン酸を含有する脂質を採取することを特徴とす
るビスホモ−ｒ−リノレン酸を含有する脂質の製造方法
を提供する。

〔具体的な説明〕

本発明においては、アラキドン酸生産能を有する微生物
であれば、すべて使用することができる。

このような微生物として、例えばモルティエレラ２（Ｍ
ｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属、コニディオボラス（Ｃｏｎ
ｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）属、フィチウム（Ｐｙｔｈｉｕｍ
）属、フィトフトラ′（Ｐｈｙ　Ｌｏｐｈ　ｔｈｏｒａ
）属、ベニシリューム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、
クラトスボリューム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ）属、
ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属、フザリューム（Ｆｕｓａｒ
ｉｕｍ）属、アスペルギルス （Ｒｈｏｄｏ　ｔｏｒｕ　ｌａ）属、エントモフトラ（
Ｅｎ　ｔｏｍｏｐｈ　ｔｈｏｒａ　）属に属する微生物
を挙げることができる。モルティエレラ属では例えば、
モルティエレラ・エロンガタ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ
　　ｅｌ力四区島）　ＩＦＯ　８５７０，モルティエレ
ラ・エキシグア（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　肛ｎ胆）Ｉ
ＦＯ　８５７１、モルティエレラ・ヒグロフィラ（Ｍｏ
ｒｔｉｅｒｅｌｌａ　　立肛並牡圏）　ＩＦＯ　５９４
１、モルティエレラ・アルビナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌ
ａ　　旦旦匣）　ＩＰ０８５６８等を挙げることができ
る。これらの菌株はいずれも、財団法人醗酵研究所がら
なんら制限なく入手することができる。

また、本発明者らが土壌から分離した菌株モルティエレ
ラ・エロンガタＳＡＭ　Ｏ２１９　　（ｍ１研菌寄第８
７０３号）（微工研条寄第１２３９号）を使用すること
もできる。

本発明に使用される菌株を培養する為には、その菌株の
胞子、菌子、又は予め培養して得られた前培養液を、液
体培地又は固体培地に接種し培養する。液体培地の場合
に、炭素源としてはグルクース、フラクトース、キシロ
ース、サッカロースマルトース、可溶性デンプン、糖蜜
、グリセロール、マンニトール等の一般的に使用されて
いるものが、いずれも使用できるが、これらに限られる
ものではない。窒素源としてはペプトン、酵母エキス、
麦芽エキス、肉エキス、カザミノ酸、コーンステイブリ
カー等の天然窒素源の他に、尿素等の有機窒素源、なら
びに硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニ
ウム等の無機窒素源を用いることができる。この他必要
に応じリン酸塩、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、硫酸銅等
の無機塩及びビタミン等も微量栄養源として使用できる
。これらの培地成分は微生物の成育を害しない濃度であ
れば特に制限はない。実用上一般に、炭素源は０、１〜
３０重量％、好ましくは１〜１０重量％、窒素源は０．
０１〜５重量％、好ましくは０．１〜２重量％の濃度と
するのが良い。

固体培地で培養する場合は、固形物重量に対して５０〜
１００重量％の水を加えたふすま、もみがら、米ぬか等
を用い、５〜４０℃、好ましくは２０〜３０℃の温度に
おいて、３〜１４日間培養を行う。この場合に必要に応
じて培地中に窒素源、無機塩類、微量栄養源を加えるこ
とができる。

本発明は、本来アラキドン酸生産能を有する微生物を、
胡麻油又は落花生油、あるいは胡麻油又は落花生油中に
含まれる有効性分の存在下で培養することによりビスホ
モ−γーリルン酸を蓄積せしめることを特徴としている
。この場合の胡麻油及び落花生油は粗製品でも精製品で
もよい。本発明においては、ビスホモ−γ−リノレン酸
の蓄積を促進する物質として胡麻油の抽出物を使用する
ことができ、この場合、胡麻油とは実質的に非混和性で
あり且つ有効成分を抽出・溶解することができる種々の
有機溶剤を用いて抽出を行うこ亡ができる。このような
有機溶剤として、例えばアセトン、メチルエチルケトン
、ジエチルケトン、メタノール、エタノール等を挙げる
ことができる。

有効成分を含有する抽出物を得るには、例えば胡麻油と
上記の溶剤のいずれかとを均一に混合した後、低温にお
いて静置し、遠心分離等の常法に従って相分離を行い、
溶剤画分から溶剤を蒸発除去することにより得られる。

本発明において使用する添加物はまた、胡麻種子からの
抽出物であってもよい。この場合、胡麻種子を必要によ
り破砕した後、任意の溶剤、例えば胡麻油からの抽出に
ついて前記した溶剤を用いて常法により抽出することが
できる。抽出残渣を分離した後、抽出液から蒸発等によ
り溶剤を除去することにより抽出物が得られる。

本発明によれば、この様にして調製される抽出物中に含
まれるセサミン、セサミノール、エピセサミン、エピセ
サミノール、セサモリン、２−（３，４−メチレンジオ
キシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシ
フェニル）−３゜７−ジオキサビシクロ〔３．３．０〕
オクタン、２．６−ビス−（３−メトキシ−４−ヒドロ
キシフェニル）−３，７−ジオキサビシクロ〔３．３．
０〕オクタン、又は２−（３，４−メチレンジオキシフ
ェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェノ
キシ）−３，７−ジオキサビシクロ〔３．３．０〕オク
タン等のリグナン類化合物を単独で、又はいずれか２種
類以上を組み合わせて使用することもできる。これらは
いずれも既知化合物であり商業的に入手することができ
る。また、これらの化合物を胡麻油抽出物から得るため
には、前記のようにして得られる抽出物をカラムクロマ
トグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、再結晶、
蒸留等の常法に従って処理することにより目的とする化
合物を単離すればよい。

この発明の添加物としてはさらに、各種の植物、例えば
香辛性植物、例えばタラゴン（Ｔａｒｒａｇｏｎ）、イ
ノンド種子（Ｄｉｌｌ　５ｅｅｄ）　、パセリ（Ｐａｒ
ｓ　１ｅｙ）、ウコン（Ｔｕｒｍｅｒｉｃ）、ナツメグ
（Ｎｕ　ｔｍｅｇ）等からの抽出物、又はこれらから製
造された香辛料からの抽出物を使用することができる。

これらの抽出物は常用の溶剤、例えばジクロロメタン、
エタノール、メタノール、エチルエーテル等を用いて調
製することができる。

添加物の量はおよそ次の通りである。胡麻油又は落花生
油、あるいはこの両者の総添加量は培地に対して０．０
０１〜１０重量％、好ましくは０．５〜１０重量％であ
る。胡麻油の抽出物を添加する場合、その添加量は培地
に対して３Ｘ１０−’〜３Ｘ１０−’である。また、セ
サミン、サセミノール、エピセサミン、エピセサミノー
ル等のリグナン類化合物を添加する場合その量（これら
の２種類以上を組み合わせて使用する場合はその合計量
）は、培地に対してｌＸｌ０−’〜ｌＸｌ０−’重量％
である。これらの添加物類は生産微生物を接種する前又
はその直後の培地に加えてもよく、又は培養を開始した
後に加えてもよく、あるいは両持点で加えてもよい、培
養開始後の添加は１回でもよく、又は複数回に分けて間
欠的に添加してもよい。あるいは、連続的に添加するこ
ともできる。なお、上記の各種の添加物のほかに、さら
にアラキドン酸の生産を上げる油脂、例えば、オリブ油
、大豆油、綿実油、ヤシ油等を使用することもできる。

培養温度は５〜４０℃、好ましくは２０〜３０℃とし、
培地のｐＨは４〜１０、好ましくは６〜９として通気攪
拌培養、振盪培養、又は静置培養を行う。

培養は通常２〜１０日間行う。

このようにして培養して、菌体内にビスホモ−γ−リノ
レン酸を大量に含有する脂質が生成蓄積される。液体培
地を使用した場合には、培養菌体から、例えば、次のよ
うにしてビスホモ−γ−リノレン酸の採取を行う。

培養終了後、培養液より遠心分離及び濾過等の常用の固
液分離手段により培養菌体を得る。菌体は十分水洗し、
好ましくは乾燥する。乾燥は凍結乾燥、風乾等によって
行うことができる。乾燥菌体は、好ましくは窒素気流下
で有機溶媒によって抽出処理する。有機溶媒としてはエ
ーテル、ヘキサン、メタノール、エタノール、クロロホ
ルム、ジクロロメタン、石油エーテル等を用いることが
でき、又メタノールと石油エーテルの交互抽出やクロロ
ホルム−メタノール−水の一層系の溶媒を用いた抽出に
よっても良好な結果を得ることができる。抽出物から減
圧下で有機溶媒を留去することにより、高濃度のビスホ
モ−γ−リノレン酸を含有した脂質が得られる。

また、上記の方法に代えて湿菌体を用いて抽出を行うこ
とができる。メタノール、エタノール等の水に対して相
溶性の溶媒、又はこれらと水及び／又は他の溶媒とから
成る水に対して相溶性の混合溶媒を使用する。その他の
手順は上記と同様である。

上記のようにして得られた脂質中には、ビスホモ−γ−
リノレン酸が脂質化合物、例えば脂肪の構成成分として
含まれている。これらを直接分離することもできるが、
低級アルコールとのエステル、例えばビスホモ−γ−リ
ノレン酸メチルとして分離するのが好ましい。このよう
なエステルにすることにより、他の脂質成分から容易に
分離することができ、また、培養中に生成する他の脂肪
酸、例えばパルミチン酸、オレイン酸、リノール等（こ
れらも、ビスホモ−γ−リノレン酸のエステル化に際し
てエステル化される）から容易に分離することができる
。例えば、ビスホモ−γ−リノレン酸のメチルエステル
を得るには、前記の抽出脂質を無水メタノール−塩酸５
〜１０％、ＢＦ、１−メタノール１０〜５０％等により
、室温にて１〜２４時間処理するのが好ましい。

前記の処理液からビスホモ−γ−リノレン酸メチルエス
テルを回収するにはヘキサン、エーテル、酢酸エチル等
の有機溶媒で抽出するのが好ましい。

次に、この抽出液を無水硫酸ナトリウム等により乾燥し
、有機溶媒を好ましくは減圧下で留去することにより主
として脂肪酸エステルからなる混合物が得られる。この
混合物中には、目的とするビスホモ−γ−リノレン酸メ
チルエステルの他に、パルミチン酸メチルエステル、ス
テアリン酸メチルエステル、オレイン酸メチルエステル
等が含まれている。これらの脂肪酸メチルエステル混合
物からビスホモ−γ−リノレン酸メチルエステルを単離
するには、カラムクロマトグラフィー、低温結晶化法、
尿素包接法、液々交流分配クロマトグラフィー等を単独
で、又は組み合わせて使用することができる。

こうして単離されたビスホモ−γ−リノレン酸メチルか
らビスホモ−γ−リノレン酸を得るには、アルカリで加
水分解した後、エーテル、酢酸エチル等の有機溶媒で抽
出すればよい。

また、ビスホモ−γ−リノレン酸をそのメチルエステル
を経ないで採取するには、前記の抽出脂質をアルカリ分
解（例えば５％水酸化ナトリウムにより室温にて２〜３
時間）した後、この分解液から、脂肪酸の抽出・精製に
常用されている方法により抽出・精製することができる
。

次に、実施例により、この発明をさらに具体的に説明す
る。

災施勇土 グルコース２．５％及び酵母エキス１％を含む培地（ｐ
Ｈ６，０）並びにグルコース０．５％、胡麻油２％及び
酵母エキス１％を含む培地（ｐＨ６，０）　　２ａ（を
それぞれねじ口試験管に入れ、１２０℃で２０分間殺菌
した。モルティエレラ・イサベリナ（Ｍｏｒｔｉ−ｅｒ
ｅｌｌａ　　１ｓａｂｅｌｌｉｎａ）　ＩＦＯ７８８４
、モルティエレラ・ビナセア（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ
　ｖｉｎａｃｅａ）　ＩＦｏ　７８７５、モルティエレ
ラ・ヒューミコラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａｈｕｍｉｃ
ｏｌａ）　ＩＰＯ８２８９、モルティエレラ・ナナ　ｔ
（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ｎａｎａ）　ＩＦＯ８７９
４、モルティエレラ・アルビナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌ
ａ旦且匝）　ＩＰｏ　８５６Ｂ、モルティエレラ・エロ
ンガタ　（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ｍｌ旦Ｉｌ罰）Ｉ
ＦＯ８５７０、又はモルティエレラ・パルビスボラ（Ｍ
ｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　且■ｎ匹ｎ）　ＩＦＯ８５７４
を２種類の培地にそれぞれ１白金耳を接種し、レシプロ
シェーカー（１１０ｒｐｍ）により２８℃で６日間振盪
培養した。培養後、遠心エバポレーター（６０℃、２時
間）で乾燥後、各ねじ口試験管に塩化メチレン２ｍｊ、
無水メタノール−塩酸（１０％）２−加え、キャップし
た後、５０℃で３時間処理することによってメチルエス
テル化し、ｎ−ヘキサン４−１水ｌ−を加え、２回抽出
し溶媒を遠心エバポレーター（４０℃、１時間）で留去
した後、得られた脂肪酸メチルエステルをガスクロマト
グラフィーで分析した。この結果を第１表に示す。

以下余白 監」−唐 この表から明らかなように、アラキドン酸生産能を有す
る微生物を胡麻油が含まれる培地で培養することにより
アラキドン酸の生産が押えられ、その前駆体であるビス
ホモ−γ−リノレン酸が大量に生産されることが認めら
れた。なお、得られたビスホモ−γ−リノレン酸につい
ては質量分析、ＮＭＲ分析等により同定された。

大施桝主 グルコース４％、酵母エキス１％及び胡麻油２％を含む
培地（ｐＨ６，０）、グルコース４％、酵母エキス１％
及び落花生油２％を含む培地（ｐＨ６，０）、グルコー
ス４％、酵母エキス１％及びオリブ油２％を含む培地（
ｐＨ６，０）、並びにグルコース４％及び酵母エキス１
％を含む培地（＋）Ｈ６，０）　４ｍ７を２０ｆｄのエ
ルレンマイヤーフラスコに入れ、１２０℃で２０分間殺
菌した。モルティエレラ・アルビナＩＦ０８５６８の胞
子液２００Ｉをそれぞれの培地に加え、レシプロシェー
カー（１１０ｒｐｍ）により２８℃で８日間振盪培養し
た。培養後、濾過により菌体を回収し、十分水洗した後
、遠心エバポレーター（６０℃、２時間）で乾燥させ、
そして実施例１と同様に加水分解、メチルエステル化及
び抽出を行い、得られた脂肪酸メチルエステルをガスク
ロマトグラフィーで分析した。この結果を第２表に示す
。

第２表から明らかなように、胡麻油及び落花生油を培地
に、あるいは培養中の培養液に添加することにより、ア
ラキドン酸の生産が押えられ、ビスホモ−γ−リノレン
酸が大量に生産された。又、胡麻油、落花生油以外の油
の一例としてオリプ油を添加したが、ビスホモ−γ−リ
ノレン酸の大量生産は認められなかった。

大詣炎主 グルコース０，０．５．１．２．３又は４％、酵母エキ
ス１％、及び胡麻油２％を含む培地（ｐＨ６，０）、並
びにグルコース４％、酵母エキス１％及び胡麻油０．１
．２又は３％を含む培地（ｐ）Ｈ６，０）１０−を５０
ｍｊのエルレンマイヤーフラスコに入れ、１２０℃で２
０分間殺菌した。モルティエレラ・アルビナＩＦ０８５
６８の胞子液２５０　ｔ１！をそれぞれの培地に加え、
レシプロシェーカー（１１０ｒｐｍ）により２８℃で７
日間振盪培養した。培養後、実施例１と同様に濾過、水
洗、乾燥、加水分解、メチルエステル化、及び抽出を行
い、得られた脂肪酸メチルエステルをガスクロマトグラ
フィーで分析した。第１図にその結果を示す。グルコー
スが増すとアラキドン酸が大量に生産され、それが胡麻
油の添加により押えられ、前駆体のビスホモ−γ−リノ
レン酸が大量に生産されることが認められた。

次１１」１ グルコース５％、酵母エキス１％及び胡麻油２％を含む
培地（ｐｔｌ　６．０　）　　１００ｒｎ１を５００　
＋ｎＺエルレンマイヤーフラスコに入れ、１２０℃で２
０分間殺菌した。モルティエレラ・アルビナＩＦ０８５
６８の胞子液２．５ｄを加え、レシプロシェーカー（１
１０ｒｐｍ）により２８℃で７日間振盪培養した。実施
例１と同様に濾過、水洗、乾燥、加水分解、メチルエス
テル化、及び抽出を行い、混合脂肪酸メチルエステル１
２．０　ｇを得た。このもののビスホモ−γ−リノレン
酸メチル含量は９．３％、生成量は培地当り２．２３ｇ
／ｌ乾燥菌体当り５５．８■／ｇであった。

また、この時のアラキドン酸メチル含量は６．６％、生
成量は培地当り１．５８ｇ／ｌ、乾燥菌体当り３９．４
■／ｇであった。

１施■） グルコース４％、酵母エキス１％及び胡麻油１％を含む
培地（ｐＨ６，０）、並びにグルコース４％及び酵母エ
キス１％を含む培地（ｐＨ６，０）　２−を１０−のエ
ルレンマイヤーフラスコに入れ、１２０°Ｃで２０分間
殺菌した。コニディオボラス・ヘテロスポラス（Ｃｏｎ
ｉｄｉｏｂｏｌｕｓ　　ｈｅｔｅｒｏｓ　ｏｒｕｓ）　
ＣＢ５１３８．５７、フィチウム・イレグラレ（、Ｑハ
紅叩１ｒｒｅ■ｔａｒｓ）　ＣＢＳ　４９４．８６、フ
ィトフトラ・インフェスタンス（Ｐｈ　ｔｏ　ｈｔｈｏ
ｒａ　　１ｎｆｅｓｔａｎｓ）　ＩＦＯ４８７２、コニ
ディオボラス・スロモボイデス（Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌ
ｕｓ　ｔｈｒｏｍｏｂｏｉｄｅｓ）　ＣＢＳ　１８３．
６０、ペニシリューム・シアネウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌ
ｉｕｍ公μ狙四）　ＩＦＯ５３３７、クラトスボリュー
ム・ヘルプラム（Ｃ１ａｄｏｓ　ｏｒｉｕｍ　　ｈｅｒ
ｂａｒｕｌｌ）　ＩＦＯ３０３１４、ムコール・アンビ
ガス（シルＶ　並城■用）　ＩＦＯ６７４２、アルペル
ギルス・カンディダス（Ａｓ　ｅｒ　１ｌｌｕｓ　　ｃ
ａｎｄｉｄｕｓ）　ＩＦＯ８８１６、ロードトルラ・グ
ラチニス（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　　ＬＬ旦１ｎｉｓ
）　ＩＦＯＯ６９５、フザリューム・オキツボラム（Ｆ
ｕｓａｒｉｕｍ■■ｏｒｕｍ）ＩＦＯ５９４２、タラト
スポリウム・スファロフベルムム（Ｃ１ａｄｏｓ　ｏｒ
ｉｕｍ　　且勤肛匹匣皿憇）ＩＦＯ６３７７又はエント
モフトラ・イブノビリス（Ｅｎｔｏｓｏ　ｈｔｈｏｒａ
　　ロμ庚Ｕ±αＣｌ５Ｓ　１８１．６０を２種類の培
地にそれぞれ１白金耳に接種し、レシプロシェーカー（
１１０ｒｐｍ）により２８℃で７日間振盪培養した。実
施例１と同様に濾過、水洗、乾燥、加水分解、メチルエ
ステル化及び抽出を行い、得られた脂肪酸メチルエステ
ルがガスクロマトグラフィーで分析した結果を第３表に
示す。アラキドン酸生産菌に胡麻油を添加することによ
りビスホモ−γ−リノレン酸の生産増加が認められた。

監Ｕ アラキドン酸生産菌の培地当たりのビスホモ−γ−リノ
レン酸生産量スｍ グルコニス４％及び酵母エキス１％を含む培地（ｐＨ６
，０）　４ａｆを２０−のエルレンマイヤーフラスコに
入れ、１２０℃で２０分間殺菌した。モルティエレラ・
アルビナＩＰ０８５６８の胞子液２００ｄをそれぞれの
培地に加え、レシプロシェーカー（１１０ｒｐｍ）によ
り２８℃で２日間振盪培養した後、胡麻油８０＋ａｇ（
２％）を加え、さらに６日間培養した。

培養後、濾過により束体を回収し、十分水洗した後、遠
心エバポレーター（６０℃、２時間）で乾燥させ、実施
例１と同様に加水分解、メチルエステル化、抽出を行い
、得られた脂肪酸メチルエステルをガスクロマトグラフ
ィーで分析したところ、ビスホモ−γ−リノレン酸メチ
ルの生成量は、培地あたり、１．６ｇ／ｌであった。

実施■工 胡麻油２０ｇをアセトン１５０ｒｄに溶かし一８０℃で
一晩放置した。その結果油成分が沈殿となり、濾過によ
り得た濾液からロータリーエバポレーターで有機溶媒を
留去しアセトン可溶成分Ａを得た。

又、沈殿からロータリーエバポレーターで含まれる有機
溶媒を留去して油を得た。成分Ａの容量は油の容量の５
０分の１であった。

グルコース４％、酵母エキス１％及び胡麻油０゜０．５
，１．２又は３％を含む培地（ｐＨ６，０）、並びにグ
ルコース４％、酵母エキス１％及びアセトン処理により
得た油０，０．５，１．２又は３％を含む培地（ｐＨ６
，０）、並びにグルコース４％、酵母エキス１％及び成
分Ａ　　Ｏ，０，１，０，２又は０．５■を含む培地（
ｐＨ６，０）　２−を１ＯｎｔＺのエルレンマイヤーフ
ラスコに入れ、１２０℃で２０分間殺菌した。モルティ
エレラ・アルビナＩＦ０８５６８の胞子液１００４をそ
れぞれの培地に加え、レシプロシェーカー（１１０ｒｐ
ｍ）により２８℃で８日間振盪培養した。培養後、濾過
により菌体を回収し、十分水洗した後遠心エバポレータ
ー（６０℃、２時間）で乾燥させ、そして、塩化メチレ
ン２ｔａ１、無水メタノール−塩酸（１０％）２−加え
、５０℃で３時間処理することによってメチルエステル
化し、ｎ−ヘキサン４−水１ｍｌを加え、２回抽出し溶
媒を遠心エバポレーター（４０℃、１時間）で留去した
後、得られた脂肪酸メチルエステルをガスクロマトグラ
フィーで分析した。この結果を第２図に示す。

実施■工 逆相カラム（５Ｃ１ｌｌ）、溶離液にメタノール水（６
０：　４０）を使って、実施例７で得られた成分Ａ２０
■を高速液体クロマトグラフィーで分取した所、ビスホ
モ−γ−リノレン酸の生産に作用するいくつかのフラク
ションが得られた。そのひとつの溶媒を留去し、得られ
た結晶をさらにエタノールで再結晶化したものを質量分
析、ＮＭＲ等によりセサミン、２．６−ビス＝（３，４
−メチレンジオキシフェニル）−シス−３，７−シオキ
サビシクロ［３、３、Ｏ］オクタンであると同定した。

先の分取したセサミンフラクションを遠心エバポレータ
ーで溶媒を留去した後、クロロホルム２００Ｉに再溶解
しセサミン溶液とした。

グルコース４％、酵母エキス１％及びセサミンの０．４
％クロロホルム溶液０　、５．１０．２０．３５゜５０
ｍを含む培地（ｐＨ６，０）２−を１０−のエルレンマ
イヤーフラスコに入れ、１２０℃で２０分間殺菌した０
モルティエレラ・アルビナＩＦ０８５６８の胞子液１０
０　ｐｌをそれぞれの培地に加え、レシプロシェーカー
（１１０ｒｐｍ）により２８℃で８日間振盪培養した。

培養後、実施例１と同様に濾過、水洗、乾燥、加水分解
、メチルエステル化及び抽出を行い、得られた脂肪酸メ
チルエステルをガスクロマトグラフィーで分析した。第
３図にその結果を示す。セサミン溶液が増すとアラキド
ン酸の生産が押えられ、前駆体のビスホモ−γ−リノレ
ン酸が大量に生産することが認められた。

実隻開ニ ゲルコース４％及び酵母エキス１％を含む培地（ｐＨ６
，０）２−を１０艷のエルレンマイヤーフラスコに入れ
、１２０℃で２０分間殺菌した０モルティエレラ・アル
ビナＩＰ０８５６８の胞子液１００１１１をそれぞれの
培地に加え、レシプロシェーカー（１１０ｒｐｍ）によ
り２８℃で２日間振盪培養した後、実施例２で用いたセ
サミン溶液５０ｄを加え、さらに６日間培養した。培養
後、実施例１と同様に濾過、水洗、乾燥、加水分解、メ
チルエステル化及び抽出を行い、得られた脂肪酸メチル
エステルをガスクロマトグラフィーで分析したところ、
ビスホモ−γ−リノレン酸の生成量は、 培地あたり、１．５ｇ／ｊ’であった。

裏施五刊 グルコース４％、酵母エキス１％及び実施例２で用いた
セサミン溶液５０ｍを含む培地（ｐｌ！　６．０　）並
びにグルコース４％及び酵母エキス１％を含む培地（ｐ
Ｈ６，０）　２−を１０ｍＺのエルレンマイヤーフラス
コに入れ、１２０℃で２０分間殺菌した。コニディオボ
ラス・ヘテロスポラス（Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓｈｅ
ｔｅｒｏｓ　ｏｒｕｓ）　ＣＢＳ　１３Ｂ、５７、フィ
チウム・イレグラＬ／　（ｈｍ」ｎ旦■旦匹）ＣＢＳ　
４９４．８６．７　イトフトラ・インフェスタンス（Ｐ
ｈ　ｔｏ　ｈｔｈｏｒａｉｎｆｅｓｔａｎｓ）　ＩＦＯ
４８７２ペニシリユーム・シアネウム（Ｐｅｎｉｃｉｌ
ｌｉｕｍ　　ｑ主咀四）ＩＦＯ５３３７、クラトスボリ
ューム・ヘルプラム（Ｃ１ａｄｏｓ　ｏｒｉｕｍｈｅｒ
ｂａｒｕｍ）　ＩＦＯ３０３１４、ムコール・アンビガ
ス（珈μ仄憇Ｕ■旦）　ＩＦＯ６７４２、アスペルギル
ス・カンディダス（Ａｓ　ｅｒ　１ｌｌｕｓ　　ｃａｎ
ｄｉｄｕｓ）　ＩＦＯ８８１６、ロードトルラ・グラチ
ニス（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ社１植林）　ＩＦＯ０６
９５、フザリューム・オキツボラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ
　　ｄｌＦｏ　５９４２、及びエントモフトラ・イブノ
ビリス■ｎｔｏｍｏ　ｈｔｈｏｒａｎ並城旦５）ＣＢＣ
Ｉ８１．６０を２種類の培地にそれぞれ１白金耳を接種
し、レシプロシェーカー（１１０ｒｐｍ）により２８℃
で７日間振盪培養した。実施例１と同様に濾過、水洗、
乾燥、加水分解、メチルエステル化及び抽出を行い、得
られた脂肪酸メチルエステルをガスクロマトグラフィー
で分析した結果を第４表に示す。アラキドン酸生産菌に
セサミンを添加することによりビスホモートーリルン酸
の生産増加が認められた。

以下余白。

第一↓−表 実施例２で得たビスホモ−γ−リノレン酸の生産に使用
するセサミン以外のいくつかのフラクションの溶媒を留
去し、得られた結晶をさらにエタノールで再結晶化した
ものを質量分析・ＮＭＲ等により同定した結果、セサミ
ノール１−（３゜４−メチレンジオキシ−６−ヒドロキ
シフェニル）−６−（３，４−メチレンジオキシフェニ
ル）−シス−３，７−シオキシビシクロ［３，３，０］
オクタン、エピセサミン溶液及びエピセサミンであるこ
とが確められた。分取したセサミノール、エピセサミノ
ール、エピセサミンのフラクションを遠心エバポレータ
ーで溶媒を留去した後、クロロホルム２００Ｉに再溶解
しセサミノール、エピセサミノール、エピセサミン溶液
とした。

グルコース４％、酵母エキス１％及びセサミノール、エ
ピセサミノール又はエピセサミンの０．４％クロロホル
ム溶液５０Ｉ１１を含む培地（ｐＨ６，０）２ｒｄを１
０−のエルレンマイヤーフラスコに入れ、１２０℃で２
０分間殺菌した。モルティエレラ・アルビナＩＦ０８５
６８の胞子液１００Ｉｌｌをそれぞれの培地に加え、レ
シプロシェーカー（１１０ｒｐｍ）により２８℃で８日
間振盪培養した。培養後、実施例１と同様に濾過、水洗
、乾燥、加水分解、メチルエステル化及び抽出を行い、
得られた脂肪酸メチルエステルをガスクロマトグラフィ
ーで分析した。

セサミノール、エピセサミノール、エピセサミン溶液の
添加によりビスホモ−γ−リノレン酸が大量に生産する
ことが認められ、培地当りの生産量はそれぞれ０．８６
　、０．７１　、０．８１　ｇ　／　Ｉｌであった。

ス上炎旦 香辛料であるタラゴン（Ｔａｒｒａｇｏｎ）、イノンド
種子（Ｄｉｌｌ　５ｅｅｄ）　、パセリ（Ｐａｒｓｌｅ
ｙ）　、ウコン（Ｔｕｒｍｅｒｉｃ）、ナツメグ（Ｎｕ
ｔｎ＋ｅｇ）各々０．５ｇに５＋ｎＺのジクロロメタン
を添加し、乳鉢材中で磨砕、抽出を行なった後、遠心分
離にかけて、上滑を集め、溶媒をエバポレーターで留去
し、抽出物を得た。

上記の抽出物を４ｍ７のエタノールに溶解した溶液、あ
るいは、ウラシル、シトシン、アデニン、。

グアニン、ヒボキサンチンの各４■／−水溶液を、実施
例１の基本培地（グルコース４％、酵母エキス１％、ｐ
Ｈ６，０）　　１０ｍ７　（試験管中）にそれぞれ滅菌
濾過後５０ｐｌずつ添加し、これにモルティエレラ・ア
ルビナＩＦ０８５６８の胞子液１００４を植菌し、２８
℃で６日間振盪培養（３００ｒｐｍ）　シて得られた菌
体について実施例１に従ってそれぞれの培地当りのビス
ホモ−γ−リノレン酸生産量を求めたところ、タラゴン
（Ｔａｒｒａｇｏｎ）抽出物添加では０．５５　ｇ　／
ｌ、イノンド種子（Ｄｉｌｌ　５ｅｅｄ）抽出物添加で
は０．４３ｇ／ｌ、パセリ（Ｐａｒｓ　１ｅｙ）抽出物
添加では０．３７ｇ／ｌ、ウコン（Ｔｕｒｍｅｒｉｃ）
抽出物添加では０．７５ｇ／ｌ、ナツメグ（Ｎｕ　ｔｍ
ｅｇ）抽出物添加では０．４５ｇ／ｌ、ウラシル添加で
は０．２５ｇ／ｌ、シトシン添加では０．２２ｇ／ｊ！
、アデニン添加では０．３５ｇ／ｌ、グアニン添加では
０．２７　ｇ　／　Ｉｔ、ヒポキサンチン添加物では０
．２５ｇ／ｌであった。又、同時に比較のために、これ
ら添加物を加えなかった対照区の培地当りのビスホモ−
γ−リノレン酸生産量は０．１８ｇ／ｌであった。

裏施皿Ｕ ウコン（Ｔｕｒｒａｅｒｉｃ）について、実施例６で用
いた培地に、実施例４に従って種々の菌を植菌し、ビス
ホモ−γ−リノレン酸生産における添加効果を調べた。

結果を第２表に示す。

第一１−表 ビスホモーγ−リノレン酸の生産に関与する化合物を胡
麻油より見出したが、他のリゲナン類化合物として、胡
麻油の粗製品からセサモリン（化合物Ａ）、又胡麻種子
のアセトン抽出物から２−（３，４−メチレンジオキシ
フェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェ
ニル）−３゜７−ジオキサビシクロ〔３．３．０〕オク
タン（化合物Ｂ）、２．６−ビス−（３−メトキシ−４
−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビシクロ〔
３．３．０〕オクタン（化合物Ｃ）、２−（３，４−メ
チレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−
ヒドロキシフェノキシ）−３，７−ジオキサビシクロ〔
３．３，３，Ｏ）オクタン（化合物Ｄ）が知られており
、実施例８及び１１に記載したのと同様にしてこれらを
高速液体クロマトグラフィーで分取し、各化合物を得た
。

グルコース４％、酵母エキス１％、及び化合物Ａ、化合
物Ｂ、化合物Ｃ又は化合物りのいずれか０．０１％を含
む培地＜ｐＨ６，０）　２ｍｆを１０−のエルレンマイ
ヤーフラスコに入れ、１２０℃で２０分間殺菌した。モ
ルテイエレラ・アルビナＩＰ０８５６Ｂの胞子液１００
／Ｊ１をそれぞれの培地に加え、レシプロシェーカー（
１１０ｒｐｎ＋）により２８℃で８時間振盪培養した。

培養後、実施例１と同様に濾過、水洗、乾燥、加水分解
、メチルエステル化及び抽出を行い、得られた脂肪酸メ
チルエステルをガスクロマトグラフィーで分析した。化
合物Ａ、Ｂ、Ｃ，又はＤの添加によりビスホモ−γ−リ
ノレン酸が大量に生産することが認められ、培地当りの
生産料はそれぞれ０．７４　、０．６３　、０．５９　
、０．６６　ｇ　／１であった。又、同様の骨格をもつ
ハエドキサン関連化合物も同様の活性を示すのも明らか
である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、培地中のグルコース量又は胡麻油量を変えた
場合のアラキドン酸及びビスホモ−γ−リノレン酸の生
産量の変化を示すグラフである。 第２図は、各種胡麻油処理画分の添加量と各種脂肪酸の
生産量との関係を示すグラフである。 第３図は、セサミンの添加量とアラキドン酸及びビスホ
モ−γ−リノレン酸の生産量との関係を示すグラフであ
る。 グルコース添加量（’／、）　　　　　　　　　胡麻油
添加量（’／、）Ａ）胡麻油 胡麻油の添加す１）　（’／＠） ８）アヤト、処理後。油　　　　　　Ｃ）ア七トン・・
丁溶成分Ａ第２図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、アラキドン酸生産能を有する微生物を胡麻油及び／
   又は落花生油を添加した培地で培養するか、あるいは該
   微生物が培養されている培養液に胡麻油及び／又は落花
   生油を添加してさらに培養することによりビスホモ−γ
   −リノレン酸又はビスホモ−γ−リノレン酸を含有する
   脂質を生成せしめ、そしてビスホモ−γ−リノレン酸を
   採取することを特徴とするビスホモ−γ−リノレン酸の
   製造方法。 ２、アラキドン酸生産能を有する微生物を胡麻油及び／
   又は落花生油を添加した培地で培養するか、あるいは該
   微生物が培養されている培養液に胡麻油及び／又は落花
   生油を添加してさらに培養し、そしてビスホモ−γ−リ
   ノレン酸を含有する脂質を採取することを特徴とするビ
   スホモ−γ−リノレン酸を含有する脂質の製造方法。 ３、胡麻油に対して実質的に非混和性である有機溶剤に
   より胡麻油から抽出した抽出物又は胡麻種子の溶剤抽出
   物を添加した培地でアラキドン酸生産能を有する微生物
   を培養するか、あるいは該微生物が培養されている培養
   液に前記抽出物を添加してさらに培養することによりビ
   スホモ−γ−リノレン酸又はビスホモ−γ−リノレン酸
   を含有する脂質を生成せしめ、そしてビスホモ−γ−リ
   ノレン酸を採取することを特徴とするビスホモ−γ−リ
   ノレン酸の製造方法。 ４、胡麻油に対して実質的に非混和性である有機溶剤に
   より胡麻油から抽出した抽出物又は胡麻種子の溶剤抽出
   物を添加した培地でアラキドン酸生産能を有する微生物
   を培養するか、あるいは該微生物が培養されている培養
   液に前記抽出物を添加してさらに培養し、そしてビスホ
   モ−γ−リノレン酸を含有する脂質を採取することを特
   徴とするビスホモ−γ−リノレン酸を含有する脂質の製
   造方法。 ５、アラキドン酸生産能を有する微生物をセサミン、セ
   サミノール、エピセサミン、エピセサミノール、セサモ
   リン、２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６
   −（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７
   −ジオキサビシクロ〔３．３．０〕オクタン、２，６−
   ビス−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３
   ，７−ジオキサビシクロ〔３．３．０〕オクタン、又は
   ２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−（３
   −メトキシ−４−ヒドロキシフェノキシ）−３，７−ジ
   オキサビシクロ〔３．３．０〕オクタンを単独で又は組
   み合わせて添加した培地で培養するか、あるいは該微生
   物が培養されている培養液にセサミン、セサミノール、
   エピセサミン、エピセサミノール、セサモリン、２−（
   ３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メト
   キシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビ
   シクロ〔３．３．０〕オクタン、２，６−ビス−（３−
   メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキ
   サビシクロ〔３．３．０〕オクタン、又は２−（３，４
   −メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−
   ４−ヒドロキシフェノキシ）−３，７−ジオキサビシク
   ロ〔３．３．０〕オクタンを単独で又は組み合わせて添
   加してさらに培養することによりビスホモ−γ−リノレ
   ン酸又はビスホモ−γ−リノレン酸を含有する脂質を生
   成せしめ、そしてビスホモ−γ−リノレン酸を採取する
   ことを特徴とするビスホモ−γ−リノレン酸の製造方法
   。 ６、アラキドン酸生産能を有する微生物をセサミン、セ
   サミノール、エピセサミン、エピセサミノール、セサモ
   リン、２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６
   −（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７
   −ジオキサビシクロ〔３．３．０〕オクタン、２，６−
   ビス−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３
   ，７−ジオキサビシクロ〔３．３．０〕オクタン、又は
   ２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−（３
   −メトキシ−４−ヒドロキシフェノキシ）−３，７−ジ
   オキサビシクロ〔３．３．０〕オクタンを単独で又は組
   み合わせて添加した培地で培養するか、あるいは該微生
   物が培養されている培養液にセサミン、セサミノール、
   エピセサミン、エピセサミノール、セサモリン、２−（
   ３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メト
   キシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビ
   シクロ〔３．３．０〕オクタン、２，６−ビス−（３−
   メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキ
   サビシクロ〔３．３．０〕オクタン、又は２−（３，４
   −メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−
   ４−ヒドロキシフェノキシ）−３，７−ジオキサビシク
   ロ〔３．３．０〕オクタンを単独で又は組み合わせて添
   加してさらに培養し、そしてビスホモ−γ−リノレン酸
   を含有する脂質を採取することを特徴とするビスホモ−
   γ−リノレン酸を含有する脂質の製造方法。 ７、アラキドン酸生産能を有する微生物をタラゴン（Ｔ
   ａｒｒａｇｏｎ）、イノンド種子（ＤｉｌｌＳｅｅｄ）
   、パセリ（Ｐａｒｓｌｅｙ）、ウコン（Ｔｕｒｍｅｒｉ
   ｃ）、又はナツメグ（Ｎｕｔｍｅｇ）の抽出流を単独で
   又は組み合わせて添加した培地で培養するか、あるいは
   該微生物が培養されている培養液にタラゴン（Ｔａｒｒ
   ａｇｏｎ）、イノンド種子（ＤｉｌｌＳｅｅｄ）、パセ
   リ（Ｐａｒｓｌｅｙ）、ウコン（Ｔｕｒｍｅｒｉｃ）、
   又はナツメグ（Ｎｕｔｍｅｇ）の抽出流を単独で又は組
   み合わせて添加してさらに培養することによりビスホモ
   −γ−リノレン酸又はビスホモ−γ−リノレン酸を含有
   する脂質を生成せしめ、そしてビスホモ−γ−リノレン
   酸を採取することを特徴とするビスホモ−γ−リノレン
   酸の製造方法。 ８、アラキドン酸生産能を有する微生物をタラゴン（Ｔ
   ａｒｒａｇｏｎ）、イノンド種子（ＤｉｌｌＳｅｅｄ）
   、パセリ（Ｐａｒｓｌｅｙ）、ウコン（Ｔｕｒｍｅｒｉ
   ｃ）、又はナツメグ（Ｎｕｔｍｅｇ）の抽出流を単独で
   又は組み合わせて添加した培地で培養するか、あるいは
   該微生物が培養されている培養液にタラゴン（Ｔａｒｒ
   ａｇｏｎ）、イノンド種子（ＤｉｌｌＳｅｅｄ）、パセ
   リ（Ｐａｒｓｌｅｙ）、ウラン（Ｔｕｒｍｅｒｉｃ）、
   又はナツメグ（Ｎｕｔｍｅｇ）の抽出流を単独で又は組
   み合わせて添加してさらに培養し、そしてビスホモ−γ
   −リノレン酸を含有する脂質を採取することを特徴とす
   るビスホモ−γ−リノレン酸を含有する脂質の製造方法
   。