JPH0359916B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はプレグナ−１，４，11(12)−トリエン−
３−オン−20−カルボン酸及びそのエステルに関
し、詳しくは一般式（） （式中、Ｒは水素原子又は低級アルキル基を表
わす。）で示される化合物に関する。 本発明により提供される一般式（）で示され
る化合物は公知文献に未記載の新規化合物であ
り、プロゲステロン又はブレドニゾロン、ハイド
ロコーチゾンなどのコルチコイドの合成中間体と
して有用である。 一般式（）で示される化合物は次に示す方法
により12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−ジエ
ン−３−オン−20−カルボン酸から誘導される。 （式中、R¹及びR²は各々低級アルキル基を表
わし、点線…はヒドロキシル基又はR²SO₂O基が
α−立体配置にあることを示す。） すなわち、12α−ヒドロキシプレグナ−１，４
−ジエン−３−オン−20−カルボン酸と一般式
（）で示されるアルコールとを塩酸、硫酸、Ｐ
−トルエンスルホン酸などの酸触媒の存在下に約
65〜120℃の温度で加熱反応させることにより一
般式（）で示されるエステルが得られる。一般
式（）で示されるアルコールを12α−ヒドロキ
シプレグナ−１，４−ジエン−３−オン−20−カ
ルボン酸に対して約３〜20倍量（重量）用いるこ
とにより、該アルコールに反応溶媒を兼ねさせる
のが好ましい。反応後、反応混合物を水にあけ、
塩化メチレンなどで抽出し、抽出液を水、希塩酸
水などで洗滌し、乾燥したのち、これより低沸点
物を留去することにより一般式（）で示される
エステルの粗生成物が得られる。この粗生成物を
例えば酢酸エチルなどから再結晶することにより
高純度の一般式（）で示されるエステルを得る
ことができる。 一般式（）で示されるエステルをスルホネー
ト化反応に付することにより一般式（）で示さ
れるスルホネートが得られる。例えば、このスル
ホネート化反応は、一般式（）で示されるエス
テルをピリジン、ピコリン又はこれらとベンゼ
ン、トルエンなどとの混合溶媒に溶解し、この溶
液に一般式（） R²SO₂Cl …（） （式中、R²は低級アルキル基を表わす。）で示
されるスルホン酸クロリドを該エステルに対し等
モル〜２倍モル量加え、室温ないしは必要に応じ
て約80℃までの加温下に行なわれる。反応後、反
応混合物を希塩酸水などにあけ、塩化メチレンな
どで抽出し、抽出液を希塩酸水、重曹水、水など
で洗滌し、乾燥したのち、これより低沸点物を留
去することにより一般式（）で示されるスルホ
ネートの粗生成物が得られる。この粗生成物を例
えば酢酸エチルなどから再結晶することにより高
純度の一般式（）で示されるスルホネートを得
ることができる。 一般式（）で示されるスルホネートを脱スル
ホン酸反応に付することにより、目的とする一般
式（−ａ）で示されるプレグナ−１，４，11(12)
−トリエン−３−オン−20−カルボン酸エステル
が得られる。この脱スルホン酸反応は通常、酢酸
カリウム、塩化リチウム、コリジン、カリウム
tert−ブトキシドなどの反応助剤（スルホン酸を
捕捉することができる化合物）の存在下に行なわ
れる。反応助剤の使用量は一般式（）で示され
るスルホネートに対して等モル〜20倍モル量であ
る。この反応はヘキサメチルホスホルトリアミ
ド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの溶媒中
で行なうのが好ましく、通常約80〜160℃の温度
下に加熱して行なわれる。反応後、反応混合物を
水、希塩酸水などにあけ、塩化メチレンなどで抽
出し、抽出液を希塩酸水、重曹水、水などで洗滌
し、乾燥したのち、これより低沸点物を留去する
ことにより一般式（−ａ）で示されるプレグナ
−１，４，11(12)−トリエン−３−オン−20−カル
ボン酸エステルの粗生成物が得られる。この粗生
成物を例えば酢酸エチル又はメタノール、エタノ
ールなどのアルコールから再結晶することにより
高純度の一般式（−ａ）で示されるプレグナ−
１，４，11(12)−トリエン−３−オン−20−カルボ
ン酸エステルを得ることができる。 一般式（−ａ）で示されるプレグナ−１，
４，11(12)−トリエン−３−オン−20−カルボン酸
エステルを加水分解することにより式（−ｂ）
で示されるプレグナ−１，４，11(12)−トリエン−
３−オン−20−カルボン酸とすることができる。
この加水分解反応はメタノール、エタノール、プ
ロパノールなどのアルコール溶媒中で水酸化ナト
リウム水溶液又は水酸化カリウム水溶液の存在下
に行なう。室温下では反応速度が遅いため、溶媒
の還流温度下に反応を行なうのが好ましい。反応
完了後、反応混合物からアルコール溶媒を留去さ
せ、その残渣に水を加えて均一溶液とし、この溶
液に系が酸性を呈するまで塩酸、硫酸などの酸を
加える。析出した沈澱をロ別し、アセトンなどか
らら再結晶することにより高純度のプレグナ−
１，４，11(12)−トリエン−３−オン−20−カルボ
ン酸を得ることができる。 原料化合物である12α−ヒドロキシプレグナ−
１，４−ジエン−３−オン−20−カルボン酸は公
知化合物であるが、本発明者らのうち数人が先に
見出した方法によれば、デオキシコール酸及び／
又はその塩を基質として12α−ヒドロキシプレグ
ナ−１，４−ジエン−３−オン−20−カルボン酸
及び／又はその塩を生産するアルカリゲネス属に
属する細菌を、デオキシコール酸及び／又はその
塩を含む培地に培養することにより得ることがで
きる。 上記のアルカリゲネス属に属する細菌として
は、土壌中から採取したアルカリゲネス・フエカ
リスD4020（Alcaligenes faecalisD4020）菌株
（微工研条寄第182号）がある。この菌株の菌学的
性質を列挙すると次表のとおりである。

【表】

【表】 上記の表に示した菌学的性質に基づき、アルカ
リゲネス・フエカリスD4020菌株の同定を行なつ
た。アルカリゲネス・フエカリスD4020菌株は、
桿菌であること、周鞭毛を有していること、グラ
ム染色が陰性であることなどの顕微鏡的所見並び
にオキシダーゼ反応及びカタラーゼ反応がともに
陽性であること、好気性であること、Ｏ−Ｆテス
トの結果が酸化的（Oxidative）であることなど
の生理学的性質からバージエイズ・マニユアル・
オブ・デイターミネイテイブ・バクテリオロジー
第７版及び第８版に基づき、アルカリゲネス属に
属する細菌であると同定した。さらにアルカリゲ
ネス・フエカリスD4020菌株は、ゼラチンを液化
しない点、ミルクがアルカリ性となる以外に変化
しない点及び脱窒反応がない点から、アルカリゲ
ネス属のフエカリス種に属する細菌であると同定
した。 上記の微生物を利用した12α−ヒドロキシプレ
グナ−１，４−ジエン−３−オン−20−カルボン
酸及び／又はその塩の製造方法では、デオキシコ
ール酸及び／又はその塩を基質として用いる。デ
オキシコール酸の塩としては具体的にはデオキシ
コール酸のナトリウム、カリウムなどのアルカリ
金属の塩又はカルシウム、マグネシウムなどのア
ルカリ土類金属の塩である。デオキシコール酸及
び／又はその塩の濃度は通常約１〜200ｇ／の
範囲でよいが、生産される12α−ヒドロキシプレ
グナ−１，４−ジエン−３−オン−20−カルボン
酸及び／又はその塩の収量、培養条件及び操作性
などの経済的観点から約10〜100ｇ／の範囲が
好ましい。培養方法は原則的には一般微生物の好
気培養で採用される方法と同じであるが、通常は
液体培地による振盪培養法又は通気撹拌培養法が
用いられる。培地は上記のデオキシコール酸及
び／又はその塩を基質として12α−ヒドロキシプ
レグナ−１，４−ジエン−３−オン−20−カルボ
ン酸及び／又はその塩を生産するアルカリゲネス
属に属する細菌が資化利用できる栄養源を含有す
るものであればよい。炭素源としてはデオキシコ
ール酸及び／又はその塩を単一素源としてもよ
く、或いはデオキシコール酸及び／又はその塩に
グルコース、グリセリン、ペプトン、肉エキス、
酵母エキスなどを併用してもよい。また窒素源と
しては、例えば硫酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、燐酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝
酸ナトリウム、硝酸カリウムなどの無機窒素源、
又はポリペプトン、ペプトン、肉エキスなどの有
機窒素源が用いられる。また、この他に燐酸水素
２カリウム、燐酸２水素カリウム、硫酸マグネシ
ウムなどの無機塩類が添加される。培養条件に特
徴はないが、通常25〜35℃で10時間〜７日間振盪
培養又は通気撹拌培養を行なう。 このようにして培養液中に蓄積された12α−ヒ
ドロキシプレグナ−１，４−ジエン−３−オン−
20−カルボン酸及び／又はその塩は、既知の方法
により分離採取することができる。例えば、培養
液中の菌体その他の不溶成分を濾過又は遠心分離
などにより分離除去して得られた培養濾液又は上
清に、塩酸、硫酸などの酸を加えて酸性としたの
ち、上記カルボン酸を溶解しかつ水と相分離する
有機溶媒、例えば酢酸エチル、クロロホルム、ク
ロロホルムとメタノールの混合液などを用いて抽
出する。得られた抽出液を集め、これより溶媒を
溜去することによつて目的とする12α−ヒドロキ
シプレグナ−１，４−ジエン−３−オン−20−カ
ルボン酸を回収することができる。この有機溶媒
による抽出操作は培養濾液又は上清についてのみ
でなく、培養液そのものについて行なうことがで
き、またこれらの培養液、培養濾液又は上清に予
め酸を加えることなしに行なうこともできる。上
記において培養濾液又は上清を酸性とした場合に
は12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−ジエン−
３−オン−20−カルボン酸が沈澱物として得られ
るため、これをそのまま濾過又は遠心分離などに
より回収することもできる。上記の方法で得られ
た抽出物又は沈澱物中には12α−ヒドロキシプレ
グナ−１，４−ジエン−３−オン−20−カルボン
酸の他に残存基質のデオキシコール酸及び／又は
その塩並びに副生物がほとんど含まれておらず、
例えば水／メタノールからの再結晶により容易に
高純度の12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−ジ
エン−３−オン−20−カルボン酸を取得すること
ができる。 本発明により提供されるプレグナ−１，４，11
(12)−トリエン−３−オン−20−カルボン酸又はそ
のエステルは、(i)これを常法により側鎖の20位の
ケトン化を行なうことにより、ブレドニゾロン、
ハイドロコーチゾンなどのコルチコイドの合成中
間体となる公知化合物のプレグナ−１，４，11(12)
−トリエン−３，20−ジオンに誘導することがで
き、また(ii)プレグナ−１，４，11(12)−トリエン−
３−オン−20−カルボン酸又はそのエステルを部
分水素添加反応に付したのち、必要に応じて３位
のケトン部分の保護を行ない、ついで常法法によ
り側鎖の20位のケトン化を行なうことによりプロ
ゲステロンに誘導することができる。 以下に、本発明を実施例及び参考例により具体
的に説明する。 参考例 １ アルカリゲネス・フエカリスD4020菌株（微工
研条寄第182号）を次に示す方法で培養した。デ
オキシコール酸2.0ｇ、硝酸アンモニウム0.2ｇ、
燐酸２水素カリウム0.12ｇ、燐酸水素２カリウム
0.61ｇ、硫酸マグネシウム・７水和物0.02ｇ、酵
母エキス0.02ｇ及び水酸化ナトリウム0.2ｇに水
道水を加えて容量を100ml（PH：8.4）に調整し、
これを培地とした。この培地を500ml容坂口フラ
スコに入れ、120℃で15分間、蒸気殺菌を行なつ
た。予め上記の培地と同じ培地で試験管振盪機に
て１日間増殖させた種菌10mlを上記の500ml容坂
口フラスコに添加し、30℃で３日間振盪培養し
た。培養後、この培養液を集め、遠心分離機で菌
体を除去後、得られた培養液上清に塩酸を加える
ことにより、この培養液上清のPHを３とした。生
じた沈澱を濾過し、充分水洗後、乾燥させること
により、12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−ジ
エン−３−オン−20−カルボン酸を950mg得た。 得られた12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−
ジエン−３−オン−20−カルボン酸の一部を取
り、これにメタノールを加えて１％溶液とし、こ
の溶液10μをミクロボンダパツクＣ−18カラム
を備えた高速液体クロマトグラフイー（米国ウオ
ーターズ社製、HLC−GPC−244型）に注入し
た。移動相としてPH4.0に調整した水／メタノー
ルの25／75容量比の混合液を流速１ml／分で流
し、検出を屈折率方式で行なつた。得られた液体
クロマトグラフにおける各ピークの面積比を積分
計（島津製作所製、島津クロマトパツクＣ−
R₁A）で求め、この面積比から上記の12α−ヒド
ロキシプレグナ−１，４−ジエン−３−オン−20
−カルボン酸の純度を求めたところ、93％であつ
た。 また、液体クロマトグラフのメインピークに相
当する物質を薄層クロマトグラフイーにより分取
し、下記の方法で12α−ヒドロキシプレグナ−
１，４−ジエン−３−オン−20−カルボン酸と同
定した。 マススペクトルｍ／ｚ：358〔Ｍ〕⁺

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 式中、Ｒは水素原子又は低級アルキル基を表わ
   す。） で示される化合物。