JPH0341089A - 生理活性物質３１２７ - Google Patents
生理活性物質３１２７Info
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- JPH0341089A JPH0341089A JP1176933A JP17693389A JPH0341089A JP H0341089 A JPH0341089 A JP H0341089A JP 1176933 A JP1176933 A JP 1176933A JP 17693389 A JP17693389 A JP 17693389A JP H0341089 A JPH0341089 A JP H0341089A
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- physiologically active
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、
蛋白質分解酵素阻害作用を有する、
更に詳しくは、
カルシウム依存性中性プロテア−
ゼ
カテプシンＢ阻害作用を有する新規なペプチド化合物に
関する。
関する。
［従来の技術］
カルシウム依存性中性プロテアーゼ、カテプシンＢに対
して阻害作用を有するペプチドとしては、ロイペプチン
や特公昭５９−３４７１１号公報、特公昭６０−３７１
０５号公報に示されているＥ−６４が知られている。
して阻害作用を有するペプチドとしては、ロイペプチン
や特公昭５９−３４７１１号公報、特公昭６０−３７１
０５号公報に示されているＥ−６４が知られている。
［発明が解決しようとする課題］
カルシウム依存性中性プロテアーゼ（ＣＡＭＰと略称す
る）は筋ジストロフィーにおける筋蛋白質分解酵素とし
て、また力テプシンＢは、骨ノ異常代謝、ライソゾーム
病、ｆ５萎縮症、癌の転移に関する蛋白分解酵素として
知られており、その阻害剤は、現代の難病の治療薬とし
て有望視されている。そのため、ＣＡＭＰ、カテブシン
Ｂに対して阻害活性を有する薬剤の開発が強く望まれて
いる。
る）は筋ジストロフィーにおける筋蛋白質分解酵素とし
て、また力テプシンＢは、骨ノ異常代謝、ライソゾーム
病、ｆ５萎縮症、癌の転移に関する蛋白分解酵素として
知られており、その阻害剤は、現代の難病の治療薬とし
て有望視されている。そのため、ＣＡＭＰ、カテブシン
Ｂに対して阻害活性を有する薬剤の開発が強く望まれて
いる。
［課題を解決するための手段］
本発明者らは、生理活性を有する新規物質を土壊分離菌
の中から得るべく探索研究を重ねた結果、本発明者らの
見出した特定の微生物が、蛋白質分解酵素阻害作用を有
する新規な生理活性物質を生産することを見出し本発明
を完成するに至った。
の中から得るべく探索研究を重ねた結果、本発明者らの
見出した特定の微生物が、蛋白質分解酵素阻害作用を有
する新規な生理活性物質を生産することを見出し本発明
を完成するに至った。
本発明の式（Ｉ）
ＮＨ。
で表わされる生理活性物質３１２７を生産する菌株は、
本発明者らが、埼玉県大宮市で採取した土壌より新たに
分離した菌株であり、微生物の名称’ Ｅｍａｒｉｃｅ
ｌｌａ ｎ１ｄｕｌａｎｓ Ｆ−３１２７Ｊおよび微生
物寄託番号「微工研菌寄第１０７９７号（ＦＥＲＭ
Ｐ−１０７９７」として、工業技術院微生物工業技術研
究所に寄託されているものである。
本発明者らが、埼玉県大宮市で採取した土壌より新たに
分離した菌株であり、微生物の名称’ Ｅｍａｒｉｃｅ
ｌｌａ ｎ１ｄｕｌａｎｓ Ｆ−３１２７Ｊおよび微生
物寄託番号「微工研菌寄第１０７９７号（ＦＥＲＭ
Ｐ−１０７９７」として、工業技術院微生物工業技術研
究所に寄託されているものである。
この菌株の菌学的性状を以下に示す。
■ 形態
本菌株は麦芽汁寒天培地、バレイショ・ブドウ糖寒天培
地、ＹｐＳＳ寒天培地などで良好に生育し、分生子の形
成は上記寒天培地の他にもツアッペク寒天培地やオート
ミル寒天培地などでも良好である。バレイショ・ブドウ
糖寒天培地に生育したコロニーを顕微鏡下で観察すると
、菌糸は隔壁を有し、高度に分枝しており、分生子柄は
滑面でやや茶褐色を呈し、長さは３５〜１２０μと変化
に富み、その径は基部でａ、ｏ−４，ｏμ、先端付近（
頂嚢下部）では４．０〜５．０Ｐ、である、頂嚢は、半
球形フラスコ状で直径９．０〜１５ＪＪ１１．通常、頂
嚢１／２ぐらいに、ブイアライドが放射状に複列に形成
されている。大きさは基底ブイアライド（メトリ）が５
〜７Ｘ２〜３．５μ、先端ブイアライドが５〜６×２〜
３Ｐである。 分生子はブイアライドの先端から連鎖状
に形成されるフィアロ型分生子であり、長さ１００μ以
下の短円柱形の分生子頭を形成する。電子顕微鏡下で観
察すると分生子は球形で隔壁は無く、暗灰緑色から黄緑
色を呈し、大きさは直径２．８〜３．８μであり、その
表面はしわ状で粗面を呈している。
地、ＹｐＳＳ寒天培地などで良好に生育し、分生子の形
成は上記寒天培地の他にもツアッペク寒天培地やオート
ミル寒天培地などでも良好である。バレイショ・ブドウ
糖寒天培地に生育したコロニーを顕微鏡下で観察すると
、菌糸は隔壁を有し、高度に分枝しており、分生子柄は
滑面でやや茶褐色を呈し、長さは３５〜１２０μと変化
に富み、その径は基部でａ、ｏ−４，ｏμ、先端付近（
頂嚢下部）では４．０〜５．０Ｐ、である、頂嚢は、半
球形フラスコ状で直径９．０〜１５ＪＪ１１．通常、頂
嚢１／２ぐらいに、ブイアライドが放射状に複列に形成
されている。大きさは基底ブイアライド（メトリ）が５
〜７Ｘ２〜３．５μ、先端ブイアライドが５〜６×２〜
３Ｐである。 分生子はブイアライドの先端から連鎖状
に形成されるフィアロ型分生子であり、長さ１００μ以
下の短円柱形の分生子頭を形成する。電子顕微鏡下で観
察すると分生子は球形で隔壁は無く、暗灰緑色から黄緑
色を呈し、大きさは直径２．８〜３．８μであり、その
表面はしわ状で粗面を呈している。
子嚢果の形成は培養１０日前後から観察され、開口部の
ない、いわゆる閉子麦殻を形成する。
ない、いわゆる閉子麦殻を形成する。
閉鎖子嚢果は赤紫色、球形から亜球形で大きさは直径１
７０〜２５０Ｐであり、その表面を渋茶褐色ドーナツ状
直径１２〜１２０μｍのホールセル（Ｈａｌｌ Ｃａ１
ｌ ）が覆っている。子嚢は球形から亜球形で大きさは
直径８．０〜９．２７Ｊ１１．内部に赤紫色、レンズ形
の子嚢胞子を８個含んでいる。子嚢胞子を電子顕微鏡下
で観察すると、直径は３゜５〜４．ＢＰ、レンズ面は滑
面を呈している。赤道面に２枚の波状に屈曲した隆起を
形成しており、周縁は丸く、やや反り返り、規則的なひ
だが放射状に並んでいる。
７０〜２５０Ｐであり、その表面を渋茶褐色ドーナツ状
直径１２〜１２０μｍのホールセル（Ｈａｌｌ Ｃａ１
ｌ ）が覆っている。子嚢は球形から亜球形で大きさは
直径８．０〜９．２７Ｊ１１．内部に赤紫色、レンズ形
の子嚢胞子を８個含んでいる。子嚢胞子を電子顕微鏡下
で観察すると、直径は３゜５〜４．ＢＰ、レンズ面は滑
面を呈している。赤道面に２枚の波状に屈曲した隆起を
形成しており、周縁は丸く、やや反り返り、規則的なひ
だが放射状に並んでいる。
■ 培地上での諸性状
各種培地上で３０’Ｃ，１４日間培養した場合の肉眼的
観察結果を次の表１に示した。
観察結果を次の表１に示した。
表１
■ 生理的、生態的性質
１）最適生育条件
本菌株の最適生育条件は、ＹｐＳｓ培地においてｐＨ７
〜８、温度３４〜４０”Ｃである。
〜８、温度３４〜４０”Ｃである。
２）生育範囲
本菌株の生育範囲はＹｐＳｓ培地においてｐＨ３〜９、
温度１０〜４９℃である。
温度１０〜４９℃である。
３）好気性、嫌気性の区別；好気性
以上の形態的特徴および培養上の性状から、本菌株が、
子嚢菌亜門、不整子嚢菌網に属することが明らかであり
、子嚢果や子ｆＡ胞子の特徴および不完全世代の特徴を
基に、宇田用俊−１椿啓介偏「菌類図鑑、（１９７８）
およびレイパー（Ｒａｐｅｒ）、フェンネル（Ｆｅｎｎ
ｅｌｌ）プ（著の「ザ・ジーナス・アスペルギルス（Ｔ
ｈｅ Ｇｅｎｕｓ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ）（１９
６５）Ｊに報告されている多くの既知菌株と比較検討し
た。その結果、本菌株はＥｍｅｒｉｃｅｌｌａ ｎ１ｄ
ｕｌａｎｓ （Ｅｉｄａｍ）Ｖｕｉｌｌに最も近い性状
を示すことが明らかとなり、本菌株を’ Ｅｍｅｒｉｃ
ｅｌｌａ ｎ１ｄｕ１ａｎｓ−Ｆ−３１２７Ｊと命名し
た。
子嚢菌亜門、不整子嚢菌網に属することが明らかであり
、子嚢果や子ｆＡ胞子の特徴および不完全世代の特徴を
基に、宇田用俊−１椿啓介偏「菌類図鑑、（１９７８）
およびレイパー（Ｒａｐｅｒ）、フェンネル（Ｆｅｎｎ
ｅｌｌ）プ（著の「ザ・ジーナス・アスペルギルス（Ｔ
ｈｅ Ｇｅｎｕｓ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ）（１９
６５）Ｊに報告されている多くの既知菌株と比較検討し
た。その結果、本菌株はＥｍｅｒｉｃｅｌｌａ ｎ１ｄ
ｕｌａｎｓ （Ｅｉｄａｍ）Ｖｕｉｌｌに最も近い性状
を示すことが明らかとなり、本菌株を’ Ｅｍｅｒｉｃ
ｅｌｌａ ｎ１ｄｕ１ａｎｓ−Ｆ−３１２７Ｊと命名し
た。
次に、生理活性物質３１２７の生産であるが、これは大
略一般発酵生産物を生産する場合に準じて行なわれる。
略一般発酵生産物を生産する場合に準じて行なわれる。
すなわち、各種の栄養物質を含む培地でＥｍｅｒｉｃｅ
ｌｌａ ｎ１ｄｕｌａｎｓ−Ｆ −３１２７株を好気的
条件下で培養する。
ｌｌａ ｎ１ｄｕｌａｎｓ−Ｆ −３１２７株を好気的
条件下で培養する。
培地は主として液体培地を用い、炭素源としてはグルコ
ース、廃糖蜜、スターチなどを単独または混合して用い
ることができる。窒素源としてはポリペプトン、大豆粉
、酵母エキスなどを単独かまたは混合して用いることが
できる。その他、菌株の生育を助は生理活性物質３１２
７の生産を促進する有機物および無機塩を必要により添
加することができる。消泡剤としては、アデカノール、
シリコンなどを用いるこ゛とができる。
ース、廃糖蜜、スターチなどを単独または混合して用い
ることができる。窒素源としてはポリペプトン、大豆粉
、酵母エキスなどを単独かまたは混合して用いることが
できる。その他、菌株の生育を助は生理活性物質３１２
７の生産を促進する有機物および無機塩を必要により添
加することができる。消泡剤としては、アデカノール、
シリコンなどを用いるこ゛とができる。
培養方法は振とう培養、通気攪拌培養などの好気培養が
適しており、ｐＨ３〜７．２５〜３７℃で、２〜５日間
、望ましくは、ｐＨ６〜７．２８〜３０℃で３〜４日間
培養する。
適しており、ｐＨ３〜７．２５〜３７℃で、２〜５日間
、望ましくは、ｐＨ６〜７．２８〜３０℃で３〜４日間
培養する。
この培養液中に生産された生理活性物質３１２７を単離
するには、発酵生産物を採取する一般的な方法に準じて
行なえば良い、すなわち培養終了後、遠心分離または濾
過により分離した培養濾液をダイヤイオンＨＰ−２０（
商品名；三菱化成製）などに吸着させ、低級アルコール
等にて溶出する。溶出された生理活性物質３１２７の両
分を濃縮後、酢酸エチルエステル、クロロホルムなどの
非水溶媒に転溶し、濃縮してシロップ状とする。このシ
ロップを再度、酢酸エチルエステル、クロロホルムなど
の有機溶媒に溶解し、シリカゲルを用いたカラムクロマ
トグラフ、セファデックスＬＨ−２０（商品名；ファル
マシア社製）を用いたゲル濾過およびクロマトレックス
（商品名；富士−デビソン化学社製）を用いたカラムク
ロマトグラフに付し、活性成分を集めることにより、−
形式（Ｉ）で表わされるトリペプチド誘導体を精製単離
することができる。
するには、発酵生産物を採取する一般的な方法に準じて
行なえば良い、すなわち培養終了後、遠心分離または濾
過により分離した培養濾液をダイヤイオンＨＰ−２０（
商品名；三菱化成製）などに吸着させ、低級アルコール
等にて溶出する。溶出された生理活性物質３１２７の両
分を濃縮後、酢酸エチルエステル、クロロホルムなどの
非水溶媒に転溶し、濃縮してシロップ状とする。このシ
ロップを再度、酢酸エチルエステル、クロロホルムなど
の有機溶媒に溶解し、シリカゲルを用いたカラムクロマ
トグラフ、セファデックスＬＨ−２０（商品名；ファル
マシア社製）を用いたゲル濾過およびクロマトレックス
（商品名；富士−デビソン化学社製）を用いたカラムク
ロマトグラフに付し、活性成分を集めることにより、−
形式（Ｉ）で表わされるトリペプチド誘導体を精製単離
することができる。
以上の精製法によって得られた生理活性物質３１２７は
、その元素分析値１分子量、紫外線スベクトル、赤外線
スペクトル、’Ｈ−ＮＭＲスペクトル、”Ｃ−ＮＭＲス
ペクトルの解析によりその構造式が次の如く決定された
。
、その元素分析値１分子量、紫外線スベクトル、赤外線
スペクトル、’Ｈ−ＮＭＲスペクトル、”Ｃ−ＮＭＲス
ペクトルの解析によりその構造式が次の如く決定された
。
（構造式）
％式％）
：
：
）
）
）
（４）元素分析値；Ｃ□Ｈ４ｔ Ｎ ｓ Ｏｔとして計
算値（％）；Ｃ５７゜６５．Ｈ８，７５，Ｎ １２．９
３゜０２０．６４゜ 実測値（％） ； Ｃ５７，９４，Ｈ８，６３，Ｎ １
２．８８゜０２０．５５ （５〉分子量＝５４１ （６）［α］ ニー３１．０゜ （ｃ−０，１，メタノール溶液） （７）ＵＶ吸収スペクトル： エタノール溶液で測定した結果、 末端吸収を 示す。
算値（％）；Ｃ５７゜６５．Ｈ８，７５，Ｎ １２．９
３゜０２０．６４゜ 実測値（％） ； Ｃ５７，９４，Ｈ８，６３，Ｎ １
２．８８゜０２０．５５ （５〉分子量＝５４１ （６）［α］ ニー３１．０゜ （ｃ−０，１，メタノール溶液） （７）ＵＶ吸収スペクトル： エタノール溶液で測定した結果、 末端吸収を 示す。
（８）ＩＲ吸収スペクトル：
ＫＢｒ錠中で測定したスペクトルを第１図に示す。
（９）’Ｈ−ＮＭＲスペクトル：
重ジメチルスルフオキシド（ｄ 、−ＤＭＳＯ）中、４
００ＭＨｚで測定したスペクトルを第２図に示す。
００ＭＨｚで測定したスペクトルを第２図に示す。
〈１０）ロＣ−ＮＭＲスペクトル：
重ジメチルスルフオキシド中、１００ＭＨｚで測定した
スペクトルを第３図に示す。
スペクトルを第３図に示す。
〈１１〉溶解性：
メタノール、酢酸、ＤＭＳＯに易溶。
酢酸エチルエステル、クロロホルム、アセトンに難溶。
ｎ−ヘキサン、石油エーテル、エチルエーテル、水に不
溶。
溶。
（１２）呈色反応：
陽性：沃素、ライドン−スミス、２，４−ジニトロフェ
ニルヒドラジン（２，４−ＤＮＰ）、トリフェニルテト
ラゾリウムクロライド（ＴＴＣ） 陰性：硫酸、アニスアルデヒド−硫酸、バニリン−硫酸
、ニンヒドリン （１３〉塩基性、酸性、中性の区別：中性［発明の効果
］ 本発明の生理活性物質３１２７は、ＣＡＭＰ。
ニルヒドラジン（２，４−ＤＮＰ）、トリフェニルテト
ラゾリウムクロライド（ＴＴＣ） 陰性：硫酸、アニスアルデヒド−硫酸、バニリン−硫酸
、ニンヒドリン （１３〉塩基性、酸性、中性の区別：中性［発明の効果
］ 本発明の生理活性物質３１２７は、ＣＡＭＰ。
カテブシンＢに対して阻害活性を有するので筋ジストロ
フィーなどの治療薬として有用である。
フィーなどの治療薬として有用である。
［実施例］
以下、実施例および試験例を挙げて本発明を具体的に説
明する。
明する。
実施例１
（１） １００ｍＱ当り、グルコ〜ス４ｇ、ポリペプ
トン１ｇを含む無菌液体培地にＥｍｅｒｉｃｅｌｌａ
ｎ１ｃｌｕｌａｎｓ−Ｆ−３１２７株を接種し、３０°
Ｃ１９６時間振とう培養した。次、に、内容量５０ｐ、
のジャーファーメンタ−を用いて、種培養と同じ組成の
無菌培地３０ｐ、、タンク（内容量２ｏ０ｉ）には１２
０１入れ、前記種培養液を各々０．３１．１゜２２を接
種し、３０″Ｃ１８８時間通気攪拌、培養した。
トン１ｇを含む無菌液体培地にＥｍｅｒｉｃｅｌｌａ
ｎ１ｃｌｕｌａｎｓ−Ｆ−３１２７株を接種し、３０°
Ｃ１９６時間振とう培養した。次、に、内容量５０ｐ、
のジャーファーメンタ−を用いて、種培養と同じ組成の
無菌培地３０ｐ、、タンク（内容量２ｏ０ｉ）には１２
０１入れ、前記種培養液を各々０．３１．１゜２２を接
種し、３０″Ｃ１８８時間通気攪拌、培養した。
（２）培養終了後、ジャーファーメンタ−３基、タンク
１基分の培養液２１０ｐ、を濾過し、得られた濾液２０
０２をダイヤイオンＨＰ−２０（商品名；三菱化成工業
株式会社製）５２に吸着させ、７５％メタノール溶液お
よびメタノール１５１にて溶出し、さらに溶出液を２ｅ
に濃縮した。この濃縮液を等量の酢酸エチルエステルで
２回抽出した。濾液から得られた酢酸エチルエステル層
と菌体から得られた酢酸エチルエステル層を合わせて、
無水硫酸ナトリウムで脱水後、濃縮し褐色のシロップ状
物質３８ｇを得た。
１基分の培養液２１０ｐ、を濾過し、得られた濾液２０
０２をダイヤイオンＨＰ−２０（商品名；三菱化成工業
株式会社製）５２に吸着させ、７５％メタノール溶液お
よびメタノール１５１にて溶出し、さらに溶出液を２ｅ
に濃縮した。この濃縮液を等量の酢酸エチルエステルで
２回抽出した。濾液から得られた酢酸エチルエステル層
と菌体から得られた酢酸エチルエステル層を合わせて、
無水硫酸ナトリウムで脱水後、濃縮し褐色のシロップ状
物質３８ｇを得た。
＜３〉 シロップ状物質３８ｇをクロロホルム１００
ｍ１に溶解し、クロロホルムで調製したシリカゲルを充
填した２５０ｍＭのカラムに吸着させ、クロロホルム５
００ｍ１で洗浄後、クロロホルム−メタノール（８０：
２０）の混合溶媒１２で溶出した画分を集め、粗粉末４
００＋ｒｇを得た。
ｍ１に溶解し、クロロホルムで調製したシリカゲルを充
填した２５０ｍＭのカラムに吸着させ、クロロホルム５
００ｍ１で洗浄後、クロロホルム−メタノール（８０：
２０）の混合溶媒１２で溶出した画分を集め、粗粉末４
００＋ｒｇを得た。
（４）前項の粗粉末４０（Ｉｇを、７５％メタノール溶
液１０ｍ１！に溶解し、同じ溶媒で調製したクロマトレ
ックス（商品名、富士−デビソン化学社製）に付し、同
じ組成の溶媒で溶出し、得られた活性画分を集め濃縮乾
固し、黄色粉末１３０■を得た。
液１０ｍ１！に溶解し、同じ溶媒で調製したクロマトレ
ックス（商品名、富士−デビソン化学社製）に付し、同
じ組成の溶媒で溶出し、得られた活性画分を集め濃縮乾
固し、黄色粉末１３０■を得た。
（５〉前項で得られた黄色粉末１３０ｔ＋ｇをメタノー
ル１０ｍＱに溶解し、同じ溶媒で調製したり、Ｈ−２０
（商品名；ファルマシア社製）に付し、同じ組成の溶媒
で溶出し、得られた活性画分を集めた。
ル１０ｍＱに溶解し、同じ溶媒で調製したり、Ｈ−２０
（商品名；ファルマシア社製）に付し、同じ組成の溶媒
で溶出し、得られた活性画分を集めた。
この溶液を７５％メタノール溶液になるように調製し逆
相高速液体クロマトグラフィー（センシューパック、
０ＤＳ−４２５１−Ｕ 、直径１０ｍ×長さ２５０ｍ、
センシュー科学社製）に付し、カラム温度５０℃、流速
４Ｔｎｌｌ／分、７５％メタノールで繰り返し溶出し、
保持時間が７分前後の両分を集めて濃縮乾固し、白色粉
末６，５■を得た。この白色粉末の融点を測定したとこ
ろ１７７〜１７９℃であった。
相高速液体クロマトグラフィー（センシューパック、
０ＤＳ−４２５１−Ｕ 、直径１０ｍ×長さ２５０ｍ、
センシュー科学社製）に付し、カラム温度５０℃、流速
４Ｔｎｌｌ／分、７５％メタノールで繰り返し溶出し、
保持時間が７分前後の両分を集めて濃縮乾固し、白色粉
末６，５■を得た。この白色粉末の融点を測定したとこ
ろ１７７〜１７９℃であった。
試験例１（ＣＡＭＰに対する阻害活性）（試験方法）
１００７ＪＩの１．２％カゼイン溶液、２００μの１０
０ｍＭグリセロリン酸ナトリウム−塩酸溶液（ｐＨ７，
５）、５４の５０ｍＭ塩化カルシウム溶液および５０μ
の２５０ｍＭの２−メツしカプトエタノールを混和し反
応溶媒とした。この反応溶液に目的濃度になるように調
製した生理活性物質３１２７を５０μ加え、３０℃で５
分間インキュベートした後、更に５０ｄＣＡＭＰ溶液（
豚赤血球μｍ ＣＡＭ Ｐ 、 ２００ ｕ／ｒＮｌ／
ｒｄ）を加え、３０°Ｃで２０分間反応させた。１０％
トリクロロ酢酸５００、Ｑを加えて反応を止め、６０分
放置後遠心し、上清のＡ１．を測定した。
０ｍＭグリセロリン酸ナトリウム−塩酸溶液（ｐＨ７，
５）、５４の５０ｍＭ塩化カルシウム溶液および５０μ
の２５０ｍＭの２−メツしカプトエタノールを混和し反
応溶媒とした。この反応溶液に目的濃度になるように調
製した生理活性物質３１２７を５０μ加え、３０℃で５
分間インキュベートした後、更に５０ｄＣＡＭＰ溶液（
豚赤血球μｍ ＣＡＭ Ｐ 、 ２００ ｕ／ｒＮｌ／
ｒｄ）を加え、３０°Ｃで２０分間反応させた。１０％
トリクロロ酢酸５００、Ｑを加えて反応を止め、６０分
放置後遠心し、上清のＡ１．を測定した。
（結果）
ＩＣ，。値は、０．５μＭであった。また、Ｅ−６４の
ＩＣ，。値は、３．０μＭであった。
ＩＣ，。値は、３．０μＭであった。
試験例２（カテプシンＢに対する阻害活性）（試験方法
） ０．２５ｍＭの０．４Ｍリン酸バッフｙ−（ｐＨ６，０
）に８ｍＭ−ジチオスレイトールおよび４ｍＭ−ＥＤＴ
Ａを含む溶液に１０〜１１００ｎのカテブシンＢをｏ、
ｉ％ブリジ（Ｂｒ１ｊｉ） ３５を含む０．５ｍＭの溶
液に溶かし、１■／ｍｌの生理活性物１３１２７のジメ
チルスルホキシド溶液を目的濃度となるように加えて３
７℃で５分間インキュベートした。
） ０．２５ｍＭの０．４Ｍリン酸バッフｙ−（ｐＨ６，０
）に８ｍＭ−ジチオスレイトールおよび４ｍＭ−ＥＤＴ
Ａを含む溶液に１０〜１１００ｎのカテブシンＢをｏ、
ｉ％ブリジ（Ｂｒ１ｊｉ） ３５を含む０．５ｍＭの溶
液に溶かし、１■／ｍｌの生理活性物１３１２７のジメ
チルスルホキシド溶液を目的濃度となるように加えて３
７℃で５分間インキュベートした。
次に、Ｚ −Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＮＭｅｃ（基質）を加え
、１０分間反応させた後、ＩＴｎＩｌの１００ｍＭ−モ
ノクロル酢酸ナトリウムを含む０．１Ｍ−酢酸バッファ
ー（ｐＨ＝４．３）を加えて反応を停止させた。
、１０分間反応させた後、ＩＴｎＩｌの１００ｍＭ−モ
ノクロル酢酸ナトリウムを含む０．１Ｍ−酢酸バッファ
ー（ｐＨ＝４．３）を加えて反応を停止させた。
その後、遊離のアミノメチルクマリンを螢光光度計にて
測定し阻害濃度を求めた。
測定し阻害濃度を求めた。
（結果）
結果は８．５μＭであった。
第１図は、ＫＢｒ錠にて測定した生理活性物質３１２７
のＩＲスペクトルを示す。 第２図は重ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ、）中
、４００ＭＨｚで測定した生理活性物質３１２７の’Ｈ
−ＮＭＲスペクトルを示す。 第３図は重ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ＠）中
、１００ＭＨｚで測定した生理活性物質３１２７の”Ｃ
−ＮＭＲスペクトルを示す。
のＩＲスペクトルを示す。 第２図は重ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ、）中
、４００ＭＨｚで測定した生理活性物質３１２７の’Ｈ
−ＮＭＲスペクトルを示す。 第３図は重ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ＠）中
、１００ＭＨｚで測定した生理活性物質３１２７の”Ｃ
−ＮＭＲスペクトルを示す。
Claims (1)
- （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる生理活性物質３１２７
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1176933A JPH0341089A (ja) | 1989-07-07 | 1989-07-07 | 生理活性物質３１２７ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1176933A JPH0341089A (ja) | 1989-07-07 | 1989-07-07 | 生理活性物質３１２７ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0341089A true JPH0341089A (ja) | 1991-02-21 |
Family
ID=16022281
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1176933A Pending JPH0341089A (ja) | 1989-07-07 | 1989-07-07 | 生理活性物質３１２７ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0341089A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7637057B2 (en) | 2002-04-25 | 2009-12-29 | Aisin Seiki Kabushiki Kaisha | Operating mechanism for an open/close object |
| CN102174075A (zh) * | 2011-01-31 | 2011-09-07 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 脂肽类化合物、其组合物、其制备方法和用途 |
-
1989
- 1989-07-07 JP JP1176933A patent/JPH0341089A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7637057B2 (en) | 2002-04-25 | 2009-12-29 | Aisin Seiki Kabushiki Kaisha | Operating mechanism for an open/close object |
| CN102174075A (zh) * | 2011-01-31 | 2011-09-07 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 脂肽类化合物、其组合物、其制备方法和用途 |
| CN102174075B (zh) | 2011-01-31 | 2013-04-17 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 脂肽类化合物、其组合物、其制备方法和用途 |
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