JPH0372618B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、マクベシン類縁化合物およびその製
造法に関する。 本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的と
して、多数の微生物を土壌などより採取し、それ
らが生産する抗生物質を検索したところ、それら
微生物の培養物中にグラム陽性細菌、真菌、原虫
に対して活性を示す新規抗生物質が生産されてい
ることを見い出し、これを精製単離し、その性状
から、当該抗生物質がこれ迄にない新しい抗生物
質であることを認め、これらを抗生物質Ｃ−
33196−Ｅ−６，Ｅ−６−Ｒ，Ｅ−７およびＥ−
７−Ｒと称することにした。またこれら化合物
は、マクベシン類縁化合物であることを見い出し
た。これらの知見に基づいてさらに研究を重ねた
結果、本発明を完成した。 本発明は、(1)一般式 （式中、Ｘは

【式】または

【式】を示す。） で示され、下記の特性を有する抗生物質Ｃ−
33196E−６，Ｅ−６−Ｒ，Ｅ−７またはＥ−７
−Ｒ： (A) 抗生物質Ｃ−33196E−６： （） 旋光度〔α〕²⁴ _D＋258.8°±20°（ｃ＝0.5，
CHCl₃） （） 紫外部吸収スペクトル： λ^MeOH _Max273nm±2nm（Ｅ１％ １cm454±45） λ^MeOH _Max397nm±2nm（Ｅ１％ １cm50.3±５） （） 赤外部吸収スペクトル，主要ピーク（cm
^−１）： 1720，1705，1650，1610，1505， 1380，1325，1265，1210，1090， 1040； (B) 抗生物質Ｃ−33196E−６−Ｒ： （）旋光度：〔α〕²⁴ _D＋37.8°±4°（ｃ＝0.5，
MeOH） （） 紫外部吸収スペクトル： λ^MeOH _Max255nm±2nm（Ｅ１％ １cm337±30） λ^MeOH _Max307nm±2nm（Ｅ１％ １cm91±９） （） 赤外部吸収スペクトル，主要ピーク（cm
^−１）： 1720，1650，1600，1535，1460， 1380，1320，1090，1040，1010； (C) 抗生物質Ｃ−33196E−７： （） 旋光度〔α〕²⁴ _D＋37.4°±4°（ｃ＝0.5，
CHCl₃） （） 紫外部吸収スペクトル： λ^MeOH _Max274nm±2nm（Ｅ１％ １cm502±50） λ^MeOH _Max396nm±2nm（Ｅ１％ １cm59.8±６） （） 赤外部吸収スペクトル，主要ピーク（cm
^−１）： 1725，1670，1650，1605，1500， 1380，1325，1260，1205，1150， 1095，1035； (D) 抗生物質Ｃ−33196E−７−Ｒ： （） 旋光度：〔α〕²⁴ _D＋18.6°±20°（ｃ＝0.5，
MeOH） （） 紫外部吸収スペクトル： λ^MeOH _Max250nm±2nm（Ｅ１％ １cm305±30） λ^MeOH _Max315nm±2nm（Ｅ１％ １cm68±７） （） 赤外部吸収スペクトル，主要ピーク（cm
^−１）： 1710，1640，1600，1485，1455， 1380，1310，1250，1090，1040、 および(2) アクチノシンネマ属に属する抗生物
質Ｃ−33196E−６，Ｅ−６−Ｒ，Ｅ−７およ
び／またはＥ−７−Ｒを生産する能力を有する微
生物を培地に培養し、培養物から該化合物を採取
することを特徴とする抗生物質Ｃ−33196E−６，
Ｅ−６−Ｒ，Ｅ−７および／またはＥ−７−Ｒの
製造法である。 本明細書においては、抗生物質Ｃ−33196E−
６をＣ−33196E−６あるいは単にＥ−６と、抗
生物質Ｃ−33196E−６−ＲをＣ−33196E−６−
Ｒあるいは単にＥ−６−Ｒと抗生物質Ｃ−
33196E−７をＣ−33196E−７あるいは単にＥ−
７と、抗生物質Ｃ−33196E−７−ＲをＣ−
33196E−７−Ｒあるいは単にＥ−７−Ｒとそれ
ぞれ称するものとする。 また、抗生物質Ｃ−33196E−６，Ｅ−６−Ｒ，
Ｅ−７およびＥ−７−Ｒを「抗生物質Ｃ−33196〕
と総称することもある。 マクベシンについては、前記構造式（）にお
いて17−及び21−位の水酸基がメトキシ基であり
Ｘが

【式】である化合物をマクベシン （Macbecin）と、前記構造式（）において、
R₁，R₂およびR₃がメチルでありＸが

【式】である化合物をマクベシンと称 されている〔特開昭53−121704号公報、特開昭53
−121705号公報、テトラヘドロン・レターズ
（Tetrahedron Letters）第21巻第309頁1980年、
テトラヘドロン（Tetrahedron）第37巻No.６、第
1123頁1981年参照〕。 本発明方法において使用される微生物は、アク
チノシンネマ（Actinosynnema）属に属し、抗
生物質Ｃ−33196E−６，Ｅ−６−Ｒ，Ｅ−７お
よび／またはＥ−７−Ｒを生産する能力を有する
微生物であれば何れでもよい。その具体例として
は、たとえば、アクチノシンネマsp.No.Ｃ−33196
株（以下、「Ｃ−33196株」と略称することもあ
る。）が挙げられる。 Ｃ−33196株の分類学的諸性質をシヤーリング
およびゴツトリープの方法〔インターナシヨナ
ル・ジヤーナル・オブ・システマテイツク・バク
テリオロジー（International Journal of
Systematic Bacteriology）第16巻、313頁〜340
頁、1966年）〕に準じて検討し、28℃21日間にわ
たつて観察した結果は下記の通りである。 １ 形態的特徴 基生菌糸は無色ないし淡黄または橙黄色を示
し、寒天培地上および液体培地中ともによく伸長
し、分岐する。基生菌糸の直径の多くは0.5〜
1.2μｍであり、培養後期に桿菌状、長桿菌状また
は分岐した菌糸状に分断する。本菌は、種々の分
類用培地上でよく生育し、気菌糸は基生菌糸上に
発育するが、多くの束状体（50〜180μｍ×400〜
1500μｍ）を形成し、それらの上に発育している
ように観察されることが多い。気菌糸の形状の多
くは屈曲状または直線状を示し、まれにゆるい螺
旋状を示すものも見られる。本菌の成熟した培養
を検鏡すると胞子が連鎖状になつていると考えら
れるものは少なく、いわゆる分生子または胞子の
形成は少ない。それらの培養表面から採取した菌
懸濁液について検鏡した所、長楕円形（0.5〜
1.2μｍ×4.8〜6.8μｍ）および楕円形（0.8〜1.2μｍ
×1.5〜4μｍ）の分裂細胞または分節胞子様のも
のが多く観察され、電子顕微鏡による観察ではそ
の表面は平滑であつた。また気菌糸の発育は一般
的に貧弱であり多くの培地上では３〜７日培養ま
では比較的発育しているが、10日以上培養すると
観察されなくなることがある。 成熟した気菌糸を液体培地に浸すと15〜30分後
に運動性の細胞が遊離する。これらの運動性を有
する細胞を電子顕微鏡によつて観察すると、それ
らの細胞周辺に長い周毛性のべん毛が観察され
る。本菌は液体培地で培養すると、その後期に時
として多形態の断裂菌糸を生じる。断裂した菌糸
の中には運動性を有するものも認められる。 ２ 菌体組成 本菌株をISPNo.１の改変培地中で28℃、66〜90
時間振盪培養して、十分生育し、静止期になつた
菌体を集め洗滌した。上記菌体をビー・ベツカー
らの方法〔アプライド・マイクロバイオロジー
（Applied Microbiology）、12巻、421頁、1964
年〕およびエム・ビー・ルシバリエーの方法〔ジ
ヤーナル・オブ・ラボラトリー・アンド・クリニ
カル・メデイシン（Journal of Laboratory and
Clinical Medicine）71巻、934頁、1968年〕に従
つて菌体細胞中のジアミノピメリン酸および糖組
成を検した結果、前者はメソ体であることが認め
られ、後者についてはガラクトースに相当するス
ポツトの存在が認められた。またビー・ベツカー
らの方法〔アプライド・マイクロバイオロジー
（Applied Microbiology）17巻、236頁、1965年〕
に従つて細胞壁を調整し、ジアミノピメリン酸、
糖およびアミノ酸を検すると以下の通りであつ
た。すなわちジアミノピメリン酸はメソ体が検出
され、糖は多量のガラクトースの存在が認められ
たが、アラビノースは検出されなかつた。またア
ミノ酸についてはグルタミン酸、アラニンは明瞭
に検出されたが、リジン、グリシンは極く微量し
か検出されなかつた。即ち、細胞壁タイプに属
する菌株である。 ３ 分類用培地上の諸性質 本菌株は各種培地上で、いずれも比較的よく発
育し、その基生菌糸は培養初期無色ないし淡黄色
で、その後、淡黄褐色または黄褐色を示す。また
ほとんどの分類用培地中に可溶性色素を生成しな
い。気菌糸は粉状で、一般には中程度に発育し、
白色ないし黄色または淡黄褐色を示す。これらの
気菌糸は多くの培地上では長期間（約２週間以
上）培養すると消失した状態となり、基生菌糸表
面が光沢を帯びて来る。本菌株の各種分類用培地
上における諸性状は第１表に示した通りである。 第１表 Ｃ−33196株の分類用培地上での諸性質 イ シユークローズ・ナイトレート寒天培地 生育（Ｇ）：中程度、薄く発育、淡黄色
（2ca）^* 気菌糸（AM）：貧弱、白色 可溶性色素（SP）：なし ロ グリセロール・ナイトレート寒天培地 Ｇ：中程度、淡黄色（2ca）^* AM：貧弱、白色 SP：なし ハ グルコース・アスパラギン寒天培地 Ｇ：中程度、黄色（3ga）^*、束状体形成 AM：貧弱、淡黄色（3ea）^* SP：なし ニ グリセロール・アスパラギン寒天培地 Ｇ：中程度、淡黄色（2ca）^*、束状体形成 AM：貧弱、白色ないし淡黄色（2ca）^* SP：なし ホ 栄養寒天培地 Ｇ：豊富、黄色（31a）^* AM：なし SP：なし ヘ カルシウム・マレート寒天培地 Ｇ：貧弱、淡黄色（2ca）^* AM：貧弱、白色 SP：なし ト 酵母エキス、麦芽エキス寒天培地 Ｇ：豊富、黄色（31a）^* AM：貧弱、白色 SP：なし チ オートミール寒天培地 Ｇ：中程度、淡い小麦色（2ea）^*、束状体形
成 AM：貧弱、白色 SP：なし リ 無機塩・スターチ寒天培地 Ｇ：中程度、淡黄色ないし黄色（2caまたは
3ea）^* AM：貧弱、淡い小麦色（2ea）^* SP：なし ヌ ペプトン・酵母エキス・鉄寒天培地 Ｇ：中程度、黄色（31a）^* AM：なし SP：なし ル チロジン寒天培地 Ｇ：中程度、黄色（31a）^*、束状体形成 AM：貧弱、白色 SP：なし ＊：カラー・ハーモニー・マニユアル・第４
版（コンテイナー・コーポレーシヨン・オ
ブ・アメリカ、1958年発行）による色名記号
４ 生理的性質 本菌株の生理的性質は第２表に示した通りであ
る。すなわち生育温度範囲は12℃ないし35℃また
寒天培地（ISPNo.２）上でよく生育する温度範囲
は16℃ないし32℃である。 第２表 Ｃ−33196株の生理的性状 生育温度範囲：12℃〜35℃ 気菌糸着生温度：16℃〜32℃ ゼラチン液化：陽性 でん粉加水分解：陽性 硝酸塩還元能：陽性 ミルク・ペプトン化：陽性 ミルク・凝固：陰性 カゼイン分解能：陽性 メラニン様色素形成：陰性 チロジン分解能：陽性 キサンチン分解能：陰性 ヒポキサンチン分解能：陰性 リゾチーム耐性：陽性 食塩耐性：２％ ５ 各種炭素源の利用性 アスパラギン0.05％、リン酸第２カリウム0.05
％、硫酸マグネシウム0.02％，硫酸第一鉄0.001
％、硫酸アンモニウム0.1％、寒天２％を含む基
礎培地を用いて各種炭素源の利用性を調べ、それ
らの結果を第３表に示した。

【表】 ６ その他の諸性質 前述「２）菌体組成」に示した方法で菌体を集
め、これらをジエー・マーマーらの方法〔ジヤー
ナル・オブ・モレキユラー・バイオロジー
（Journal of Molecular Biology）３巻、208頁、
1961年〕に準じてDNAを調製し、DNAのＧ−Ｃ
（グアニン−シトシン）含量を検すると約72モル
％であつた。 本菌株の栄養菌糸をグラム染色すると陽性であ
つた。 以上述べたＣ−33196株の諸性質をエス・エ
ー・ワツクスマン著、ジ・アクチノミセテス
（The Actinomycetes）第２巻、ザ・ウイリアム
ス・アンド・ウイルキンス・カンパニー発行、
1961年、アール・イー・ブツフアナン・アンド・
エヌ・イー・ギボンス編、バージーズ・マニユア
ル・オブ・デターミネーテイブ・バクテリオロジ
ー（Bergey's Manual of Determinative
Bacteriology）第８版、1974年およびその他の
文献に従つて検索した。 本菌株は上記したように１）栄養増殖の後期に
多形態の断裂菌糸を生成し、それらの一部に運動
性が認められる。２）成熟した気菌糸より周毛性
の運動性細胞が生成する。３）気菌糸は幾つかの
寒天培地上で束状体を形成する。４）細胞壁タイ
プに属する。その他の諸性質から本菌はアクチ
ノシンネマ属に属する菌株であることは明らかで
ある。従つて、本菌をアクチノシンネマ（Acti
−nosynnema）sp.No.Ｃ−33196と称した。 なお、アクチノシンネマ属は放線菌目の１属で
あり、菌学的性質は長谷川らにより、インターナ
シヨナル・ジヤーナル・オブ・システマテイツ
ク・バクテリオロジイ（International Journal
of Systematic Bacteriology）第28巻、304〜
310頁（1978年）で報告され、さらに同書第30巻、
245頁（1980年）にも掲載されている。 本菌株Ｃ−33196株は、財団法人発酵研究所に
昭和56年８月11日に受託されIFO 14127として寄
託されており、また本微生物は通商産業省工業技
術院微生物工業技術研究所に昭和56年８月26日に
受託されFERM BP−166として寄託されてい
る。 一般に、アクチノシンネマ属菌は、その性状が
変化しやすく、自然的にまた変異剤によつて変異
を起し得る。たとえばＸ線、ガンマー線、紫外線
等の放射線の照射単胞子分離、種々の薬剤を含有
する培地上での培養、その他の手段で変異させて
得られる多くの変異株、あるいは自然に得られる
突然変異株等であつても、上記した菌学的性状ま
たは下記に示した様な菌学的性状との比較におい
て実質的に別種とするに足らず、しかも当該抗生
物質を生産する性質を有するものはすべて本発明
方法に利用し得る。たとえば、当該抗生物質生産
株を種々の変異処理することにより、淡黄色ない
し淡黄褐色または褐色の可溶性色素を生成するも
の、基生菌糸が無色のもの、赤褐色ないし橙赤色
を示すもの、黄緑色の基生菌糸または可溶性色素
を生成するもの、豊富な白色の気菌糸を生成する
ものおよび菌糸が分断し易い変異株が得られる。 当該抗生物質生産菌の培養に用いられる培地は
該菌が利用し得る栄養源を含むものなら、液状で
も固状でもよいが、大量を処理するときには液体
培地を用いるのがより適当である。培地には、当
該抗生物質生産菌が同化し得る炭素源、消化し得
る窒素源、無機物質、微量栄養素が適宜配合され
る。炭素源としては、たとえばブドウ糖、乳糖、
シヨ糖、麦芽糖、デキストリン、でん粉、グリセ
リン、マンニトール、ソルビトール、油脂類
（例、大豆油、ラード油、チキン油など）、ｎ−パ
ラフインその他が、窒素源としては、たとえば肉
エキス、酵母エキス、乾燥酵母、大豆粉、コー
ン・スチープ・リカー、ペプトン、棉実粉、癈糖
蜜、尿素、アンモニウム塩類（例、硫酸アンモニ
ウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、酢
酸アンモニウムなど）その他が用いられる。さら
にナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシ
ウムなどを含む塩類、鉄、マンガン、亜鉛、コバ
ルト、ニツケルなどの金属塩類、リン酸、ホウ酸
などの塩類や酢酸、プロピオン酸などの有機酸の
塩類が適宜用いられる。その他、アミノ酸（例、
グルタミン酸、アスパラギン酸、アラニン、リジ
ン、メチオニン、プロリンなど）、ペプチド（例、
ジペプチド、トリペプチドなど）、ビタミン類
（例、B₁，B₂、ニコチン酸、B₁₂、Ｃなど）、核酸
類（例、プリン、ピリミジン、その誘導体など）
等を含有させてもよい。もちろん培地のPHを調節
する目的で無機または有機の酸、アルカリ類、緩
衝剤等を加え、あるいは消泡の目的で油脂類、表
面活性剤等の適量を添加してもさしつかえない。 培養の手段は静置培養でも振盪培養あるいは通
気攪拌培養法等の手段を用いてもよい。大量の処
理には、いわゆる深部通気攪拌培養によるのが望
ましいことはいうまでもない。培養の条件は培地
の状態、組成、菌株の種類、培養の手段等によつ
て一定しないのは当然であるが、それらは通常約
20℃〜32℃の温度で、初発PHを中性付近に選択す
るのがよい。とりわけ培養中期の温度は、約25℃
〜28℃、また初発PHは約6.5〜7.5の条件が望まし
い。培養期間も前記の諸条件により一定しない
が、所望の抗生物質濃度が最大となるまで培養す
るのがよい。これに要する時間は液体培地を用い
る振盪培養または通気攪拌培養の場合は通常約48
〜96時間程度である。 培養物中に産生された抗生物質Ｃ−33196E−
６，Ｅ−６−Ｒ，Ｅ−７および／またはＥ−７−
Ｒを採取するには、抗生物質Ｃ−33196が中性脂
溶性であるので、このような微生物代謝物を採取
するために通常用いられる分離、精製の方法が適
宜利用される。たとえば、不純物との溶解度の差
を利用する手段、活性炭、非イオン性マクロポー
ラス樹脂、シリカゲル、アルミナ等の各種の担体
を用いる吸着クロマトグラフイーなどがそれぞれ
単独又は組合わせて利用される。 抗生物質Ｃ−33196は、一般に培養液により
多く含まれているが、菌体に含まれていることも
あるので、菌体からも抽出することができる。菌
体からの抽出には、水と混和する有機溶媒、例え
ばメタノール、エタノールなどの低級アルコール
類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン
類、又はこれらと水との混合液が用いられる。
又、水と混和しない有機溶媒、たとえば、酢酸エ
チルなどのエステル類を使用して抽出することも
できる。更に培養物にメタノール、アセトンなど
水と混和する有機溶媒を加えて抽出することも出
来る。 培養液から抗生物質Ｃ−33196を採取するに
は、水と混和しない有機溶媒、たとえば酢酸エチ
ル、酢酸ブチルなどの脂肪酸エステル類、ブタノ
ールなどのアルコール類、クロロホルムなどのハ
ロゲン化炭化水素類、メチルイソブチルケトンな
どのケトン類による抽出が利用される。この有機
溶媒による抽出液を水洗、濃縮後、ｎ−ヘキサン
などの非極性有機溶媒を加えることにより、粗物
質を得ることができる。 その際、抗生物質Ｃ−33196中、一成分が主成
分として多量に含まれる場合には、この有機溶媒
による抽出及び濃縮の操作のみで結晶として単離
されることもある。 又、培養液からの抗生物質Ｃ−33196の採取
には、ダイヤイオンHP−10（三菱化成株式会社
製）などの非イオン性マクロポーラス樹脂による
吸着、含水アルコールまたは含水ケトン類などに
よる溶出も利用できる。 培養液から上記の如く、抽出、濃縮などの操作
を経て得られる粗物質が、抗生物質Ｃ−33196の
混合物からなる場合には、各成分の分離に種々の
吸着クロマトグラフイーなどが利用される。吸着
剤としては通常用いられる担体、たとえば、シリ
カゲル、アルミナ、非イオン性マクロポーラス樹
脂等が使用できる。 吸着剤として、シリカゲルを用いる場合は、一
般に極性有機溶媒と非極性有機溶媒との組合わ
せ、例えば酢酸エチルとｎ−ヘキサン、メタノー
ルとクロロホルムなどの混合溶媒による展開が利
用される。即ち、初めに、非極性溶媒で展開した
後、次第に極性溶媒の比率を増して溶出すること
により、各成分が分離される。粗物質が多成分か
らなり、又、不純物が多い場合には、これら有機
溶媒の組合わせを変え、クロマトグラフイーを繰
返すことにより、単一成分に分離される。 又、場合によつては、シリカゲルのような吸着
剤又はマイクロボンダパツクC₁₈（ウオータース・
アソシエーツ製、米国）のような逆相系の担体を
用いる高速液体クロマトグラフイーも利用でき
る。 抗生物質Ｃ−33196は、ベンゾキノン型（Ｃ−
33196E−６及びＥ−７）とハイドロキノン型
（Ｃ−33196E−６−Ｒ及びＥ−７−Ｒ）とからな
り、相互変換可能であるので、精製を行うに当つ
ては、酸化又は還元により、ベンゾキノン型又は
ハイドロキノン型とすれば成分の種類が半減する
ので好都合である。 酸化の方法としては、通常ハイドロキノンを酸
化するのに用いられる方法が利用される。たとえ
ば、酸化剤としては、塩化第二鉄、硫酸第二鉄、
フエリシアン化カリウム、酸化銀などが挙げら
れ、又、反応溶媒としては、反応を妨げない溶媒
であれば如何なるものでも使用可能である。例え
ば、酢酸エチルなどのエステル類、アセトンなど
のケトン類、又は水などが挙げられるが、或いは
これらの混合溶媒であつても良い。更に、水及び
水と混和しない有機溶媒との二相系も好都合に用
いられる。酸化剤の使用量は、原料化合物１モル
に対し、約１〜200モルである。反応温度は、特
に規定されないが、通常約０〜40℃、一般には室
温で行われ、反応時間も温度にもよるが、通常、
約30秒ないし24時間の間で容易に反応が完了す
る。 還元の方法としては、通常ベンゾキノンを還元
するのに用いられる方法が利用される。たとえ
ば、反応に用いられる還元剤としては、ハイドロ
サルフアイトナトリウム、酸性亜硫酸ナトリウ
ム、水素化ホウ素ナトリウムなどが挙げられ、又
反応溶媒としては、上記の反応を阻害しないもの
であれば如何なる溶媒でも使用可能である。例え
ば、酢酸エチルなどのエステル類、メタノール、
エタノール等のアルコール類又は水などが挙げら
れるが、或いはこれらの混合溶媒であつても良
い。更に、水及び水と混和しない有機溶媒との二
相系も好都合に利用できる。還元剤の使用量は、
原料化合物１モルに対し、約１〜200モルである。
反応温度は、通常約０〜40℃、一般に室温で行わ
れ、反応時間も温度にもよるが、約30秒ないし24
時間で容易に反応が完了する。 シリカゲルクロマトグラフイーに当つては、一
般に、ベンゾキノン型で精製が行われるが、場合
によつては、ハイドロキノン型で精製すると好都
合の場合もあり、混合物中の不純物の量、種類に
応じて適宜、酸化、還元を利用して各成分の分離
が行われる。 得られた各成分は、いずれも酢酸エチル、メタ
ノール、塩化メチレン、メタノール−水等の溶媒
から結晶化される。 後述の実施例２で得られた抗生物質Ｃ−
33196E−６およびＥ−６−Ｒの物理化学的性状
を表１に、実施例１で得られた抗生物質Ｃ−
33196E−７およびＥ−７−Ｒの物理化学的性状
を表２にそれぞれ示す。

【表】

【表】

【表】 抗生物質Ｃ−33196の各成分の少なくとも二種
以上を含む混合物の各成分の比率は特に限定され
ないが、たとえば２成分系ではそのうちの１成分
が約５％以上、３成分系ではそのうちの２成分が
それぞれ約５％以上、４成分系ではそのうちの３
成分がそれぞれ約５％以上の混合物であつてもよ
い。 核磁気共鳴（NMR）スペクトルを表３に記載
する。

【表】 上記の物理化学的性状およびNMRスペクトル
から、本発明の抗生物質Ｃ−33196E−６，Ｅ−
６−Ｒ，Ｅ−７およびＥ−７−Ｒの構造式は、一
般式 （式中、Ｘは前記と同意義を有する。）で表わさ
れると考えられる。また、Ｅ−６およびＥ−７
は、Ｘが

【式】であり、Ｅ−６−Ｒおよ びＥ−７−Ｒは、Ｘが

【式】であり、Ｅ −６とＥ−７およびＥ−６−ＲとＥ−７−Ｒと
は、前記の旋光度、NMRスペクトルなどより、
それぞれ立体異性体であると考えられる。 このように、本発明の抗生物質Ｃ−33196E−
６，Ｅ−６−Ｒ，Ｅ−７およびＥ−７−Ｒは、そ
れらの物理化学的性状、NMRスペクトルおよび
構造式から、新規化合物であると考えられる。 抗生物質Ｃ−33196は、抗細菌作用、抗真菌作
用、抗原虫作用を有する。又、腫瘍細胞に対し殺
細胞効果を示すことから、抗腫瘍作用も期待され
る。更に、有用誘導体の合成の際の原料ともなり
得る。 抗生物質Ｃ−33196E−６およびＥ−７は、寒
天希釈法による抗微生物検定で、バチルス・セレ
ウス（Bacillus cereus）IFO 3154およびスタフ
イロコツカス・アウレウス（Staphylococcus
aureus）FDA 209Pの増殖を50〜100μｇ／ml濃
度で阻害した。また液体希釈法による検定でテト
ラヒメナ・ピリフオルミス（Tetrahymena
pyriformis）Ｗの増殖をＥ−６は10μｇ／mlで、
Ｅ−７は40μｇ／mlでそれぞれ阻害した。したが
つて、抗生物質Ｃ−33196は、抗菌剤、抗原虫剤
として使用することができる。 また、抗生物質Ｃ−33196E−７−Ｒは、その
急性毒性がLD₅₀400mg／Kg以上（マウス、腹腔内
投与）と低毒性である。したがつて、抗生物質Ｃ
−33196の毒性は低いと考えられる。 抗生物質Ｃ−33196は、たとえば、10〜100μ
ｇ／mlのエタノール含有水溶液剤として、鳥かご
の消毒、実験器具の消毒、或いは家畜舎又は動物
舎の消毒などに消毒剤として塗布、噴霧すること
により用いることができる。 以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説
明する。なお、以下の実施例において、パーセン
ト（％）はとくにことわりのないかぎり、重量／
容量パーセント（Ｗ／Ｖ％）を表わす。 実施例 １ 酵母エキス・麦芽エキス寒天培地に培養したア
クチノシンネマsp.No.Ｃ−33196（LFO 14127，
FERM BP−166）を200ml容三角フラスコ内の
グルコース２％、可溶性デンプン３％、生大豆粉
１％、コーンステイープリーカー１％、ポリペプ
トン0.5％、NaCl0.3％、CaCO₃0.5％（PH7.0）を
含む40mlの種培地に接種し、28℃、48時間回転振
盪機上で培養した。得られた培養液10mlを種培地
500mlを含む２容坂口フラスコに移植し、28℃
48時間往復振盪機上で培養した。この培養液の１
を種培地100を含む200容ステンレススチー
ルタンクに接種し、28℃、通気100／分、攪拌
180回転／分で48時間培養し、種培養液を得た。
得られた種培養液の60をグリセロール５％、コ
ーンスチイープリカー２％、乾燥酵母２％、
MgCl₂0.5％、KH₂PO₄２％，CaCO₃0.1％の組成
からなる主培地1200を含む2000容ステンレス
スチールタンクに移植し28℃、通気1200／分、
攪拌180回転／分、内圧１Kg／cm²の条件で114時間
培養した。得られた培養液1150にハイフロスー
パーセル（ジヨンス・マンビル社製、米国）を加
え過し、液1300をPH6.5とし、酢酸エチル
650で抽出した。 抽出液を薄層クロマトグラフイー（展開溶媒：
クロロホルム−メタノール（９：１）で調べる
と、Ｅ−７（Rf値：0.65）およびＥ−７−Ｒ（Rf
値：0.18）の存在が認められた。 次に、目的物の単離をより容易にするため、抽
出液に含まれるＥ−７−Ｒをいつたん酸化してＥ
−７として精製した後、更にＥ−７を還元してＥ
−７−Ｒとして分離精製を行なつた。すなわち、
抽出液を水300で洗滌後、減圧濃縮し（28）、
これに２％塩化第二鉄水溶液14を加えて攪拌し
た。一時間後、酢酸エチル層を水14で２回洗
い、濃縮した。油状の濃縮液にｎ−ヘキサン500
ml宛加えて４回洗滌し、残るアメ状残査を酢酸エ
チル500mlに溶かし、シリカゲルKieselgel 60（メ
ルク社製、西ドイツ）250ｇと混合し、濃縮乾固
後、シリカゲル（500ｇ）のカラム上端に充てん
した。カラムをｎ−ヘキサンで洗つた後、ｎ−ヘ
キサン−酢酸エチル（４：１→２：１→１：１→
１：２→１：４→１：８）の混合溶液で順次展開
すると、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（２：１→
１：１）の区分からＣ−33196E−７を含む液が
溶出された。この区分を約50mlまで濃縮し、さら
に酢酸エチル200mlを加えて希釈した後、２％ハ
イドロサルフアイトナトリウム120mlを加えて攪
拌した。水層をのぞきもう一度同じ方法で還元を
繰返した後、水洗、乾燥し次いで減圧濃縮し、20
mlとなつたところで、シリカゲル10ｇを加えて再
び濃縮乾固した。残査をシリカゲル（50ｇ）カラ
ムの上端に充てんし、ｎ−ヘキサンで展開後、ク
ロロホルム次いでクロロホルム−メタノール
（100：１→50：１→４：１）で順次展開した。ク
ロロホルム−メタノール（４：１）で溶出された
Ｃ−33196E−７−Ｒ区分を減圧濃縮し、更に酢
酸エチル溶液として冷却するとＣ−33196E−７
−Ｒの無色の結晶423mgが得られた。 Ｃ−33196E−７−R200mgを酢酸エチル100mlに
溶かし、２％塩化第二鉄水溶液100mlを用いて酸
化し、水洗後濃縮しｎ−ヘキサンを加えると、Ｃ
−33196E−７の黄色粉末180mgが得られた。 実施例 ２ 実施例１の三角フラスコを用いる培養によつて
得られた種培養液を２mlづつ200ml容三角フラス
コ内のグリセロール５％、乾燥酵母２％、コーン
ステイープリカー２％、リン酸第一アンモニウム
３％（PH7.0）を含む40mlの主培地に移植し、28
℃、90時間回転振盪機上で培養した。得られた培
養液５をハイフロスーパーセルを用いて過
し、得られた液のPHを７として、酢酸エチル
2.5で２回抽出した。 抽出液を薄層クロマトグラフイー〔展開溶媒：
クロロホルム−メタノール（９：１）〕で調べる
と、Ｅ−６（Rf値：0.41）およびＥ−６−Ｒ（Rf
値：0.22）の存在が認められた。 次に、目的物の単離をより容易にするため、抽
出液に含まれるＥ−６−Ｒを酸化してＥ−６と
し、微生物が産生したＥ−６と合わせて分離精製
を行なつた。すなわち、酢酸エチル層を水洗後１
迄濃縮し、２％塩化第二鉄水溶液500mlを加え
て攪拌し、一時間後酢酸エチル層を水洗乾燥後濃
縮した。濃縮液約30mlにシリカゲル10ｇを加えて
再び濃縮乾固し、残査をシリカゲル（50ｇ）カラ
ムの上端に充てんした。 カラムは、ｎ−ヘキサン、クロロホルム、クロ
ロホルム−メタノール（100：１→30：１）で順
次展開し、薄層クロマトグラフイーで確認したＥ
−６区分を集めて濃縮すると、Ｃ−33196E−６
の黄色結晶160mgが得られた。 この結晶母液にシリカゲル５ｇを加えて濃縮乾
固し、シリカゲル（25ｇ）カラムの上端に充てん
して、前記と同様に展開し、溶出されたＥ−６区
分を濃縮後、酢酸エチル100mlに溶解し、２％ハ
イドロサルフアイトナトリウム50ml宛で２回還元
を行なつた。酢酸エチル層を水洗、乾燥後濃縮す
ると、Ｃ−33196E−６−Ｒの無色の結晶45mgが
得られた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 （式中、Ｘは【式】または 【式】を示す。） で示され、下記の特性を有する抗生物質Ｃ−
   33196E−６，Ｅ−６−Ｒ，Ｅ−７またはＥ−７
   −Ｒ： (A) 抗生物質Ｃ−33196E−６： （） 旋光度：〔α〕²⁴ _D＋258.8°±20°（ｃ＝0.5
   ，
   CHCl₃） （） 紫外部吸収スペクトル： λ^MeOH _Max273nm±2nm（Ｅ１％ １cm454±45） λ^MeOH _Max397nm±2nm（Ｅ１％ １cm50.3±５） （） 赤外部吸収スペクトル，主要ピーク（cm
   ^−１） 1720，1705，1650，1610，1505，1380， 1325，1265，1210，1090，1040； (B) 抗生物質Ｃ−33196E−６−Ｒ： （）旋光度：〔α〕²⁴ _D＋37.8°±4°（ｃ＝0.5，
   MeOH） （）紫外部吸収スペクトル： λ^MeOH _Max255nm±2nm（Ｅ１％ １cm337±30） λ^MeOH _Max307nm±2nm（Ｅ１％ １cm91±９） （） 赤外部吸収スペクトル，主要ピーク（cm
   ^−１） 1720，1650，1600，1535，1460，1380， 1320，1090，1040，1010； (C) 抗生物質Ｃ−33196E−７： （） 旋光度：〔α〕²⁴ _D＋37.4°±4°（ｃ＝0.5，
   CHCl₃） （） 紫外部吸収スペクトル： λ^MeOH _Max274nm±2nm（Ｅ１％ １cm502±50） λ^MeOH _Max396nm±2nm（Ｅ１％ １cm59.8±６） （） 赤外部吸収スペクトル，主要ピーク（cm
   ^−１） 1725，1670，1650，1605，1500，1380， 1325，1260，1205，1150，1095，1035； (D) 抗生物質Ｃ−33196E−７−Ｒ： （） 旋光度：〔α〕²⁴ _D＋18.6°±20°（ｃ＝0.5，
   MeOH） （） 紫外部吸収スペクトル： λ^MeOH _Max250nm±2nm（Ｅ１％ １cm305±30） λ^MeOH _Max315nm±2nm（Ｅ１％ １cm68±７） （） 赤外部吸収スペクトル，主要ピーク（cm
   ^−１） 1710，1640，1600，1485，1455，1380， 1310，1250，1090，1040。 ２ アクチノシンネマ属に属する抗生物質Ｃ−
   33196E−６，Ｅ−６−Ｒ，Ｅ−７および／また
   はＥ−７−Ｒを生産する能力を有する微生物を培
   地に培養し、培養物から該化合物を採取すること
   を特徴とする抗生物質Ｃ−33196E−６，Ｅ−６
   −Ｒ，Ｅ−７および／またはＥ−７−Ｒの製造
   法。