JPH04197191A - 化合物ｍｓ―３４７ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、血管拡張作用を有する新規な生理活性物質Ｍ
Ｓ−３４７に関する。

従来の技術 本発明化合物ＭＳ−３４７と構造が類似している物質と
しては、アスペルギルス・シドウィ（Ａｓｐｅｒｇｉｌ
ｌｕｓ　ｓｙｄｏｗｉ）が生産するＳｙｄｏｗｉｎｉｎ
　Ｂ〔アグリカルチュラル・アンド・バイオロジカル°
ケミストリー（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ａｒｕｊ　
Ｂｉｏ！ｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ）　３９．２
３３７−２３４０（１９７５）：が報告されているが、
該文献にはその生理活性：二ついての記載はない。また
、本発明で用いろれるアスペルギルス・エスピー５ＰＣ
１６６４０は、ＭＳ−３４，７だけではなく、Ｓｙｄｏ
ｗｉｎｉｎ　Ｂも生成蓄積するがＳｙｄｏｗｉｎｉｎ　
Ｂには血管拡張作用はない。

Ｓｙｄｏｗｉｎｉｎ　Ｂ 発明が解決しようする課題 本発明の目的は、血管拡張作用を有する新規生理活性物
質を提供することにある。

課題を解決するための手段 本発明者は、新たに土壌より分離した微生物を培養する
ことにより得られる物質が、血管拡張作用を有する新規
物質であることを見いだし、本発明を完成した。

本発明によれば、下記の構造式 で表される化合物ＭＳ−３４７を提供することができる
。以下、該化合物をＭＳ−３４７と称す。

ＭＳ−３４７は、アスペルギルス属に属する微生物を培
養することにより得ることができる。

以下に本発明の詳細な説明する。

ＭＳ−３４７の理化学的性質は以下に示す通りである。

（１〕　　性　状　：　黄色粉末 （２）分子量　：　３１６ （３）分子式　：　Ｃ１６Ｈ３２０゜ （４）元素分析 分析値　　Ｃ：６０．５７％Ｈ：３．７８％Ｃ＋５Ｈ１
ｓＯｔとしての８十算値　　　Ｃ：６’０．７６％　　
）Ｉ：３．８３％（５）高分解能２１ＭＳスペクトル（
ｍ／ｚ）分析値　　：　３１６，０５９４（Ｍ　ａＣ，
６Ｈ，２０，としての８十算値　：　　３１６．０５８
２（６）融　点　：　２５３〜２５６℃（分解）（７〕
　　紫外邪吸収スペクトル（アセト二同ル中で測定）λ
ｍａｘ（ｎｍ）　３４４（５３，６００）、２８０（Ｅ
　　２７．０００）、２１６（ε　１９．０００） 酸性、アルカリ性で変化なし く８）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ法で測定）ν（ｃ
ｌ’）　３４７３．１？３２．１６５５．１５９５．１
４７３゜（９）　　２１ＭＳスペクトル（ｍ／ｚ）３１
６（Ｍ　”）、　３００．２８４．２６８．２５８αＧ
　　”Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ、　ＤＭＳ
Ｏ−＋ｊ６）δ（ｐｐｍ）　　１８０．０（ｓ）、　１
６６．５（ｓ）、　１５９．８（ｓ）。

１５９．４（ｓ）、　１５４．９（ｓ）、　１５３．２
（ｓ）。

１３８．４（ｄ）、　１２５．７（ｄ）、　１１２．３
（ｓ）。

１０８、９（ｄ）、　１０８．２（ｓ）、　１０４．５
（ｄ）。

６２．２（ｔ）、　５６．７（ｓ）、　５６．０（ｄ）
。

５２、６　（Ｑ） αｌ）　’Ｉｔ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ、　
Ｄ！、１ＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）　　１２．０３（Ｉ
Ｈ，ｂｒ、ｓ）、　７．２２（１１（、ｄｄ。

ｊ・９．９．３．８Ｈｚ）、　７．０３（ＬＨ，ｄ。

Ｊ＝１．３ｔｌｚ）、　　６．９４（１Ｎ、　　ｄｄ、
　　Ｊ＝９．９゜１．５Ｈｚ）、　６．８ＨＩＨ，ｄ、
　Ｊ＝ＩＪＨｚ）。

５．５５（１）１．　　ｔ、　　Ｊ＝５．８）１ｚ）、
　　４．５８（２Ｈ，ｄ、　　Ｊ＝５．８Ｈｚ）、　　
４．３４（ＬＨ，ｄｄ。

Ｊ＝３．８．　１．５Ｈｚ＞、　３．７４（３Ｈ，ｓ）
（支）呈色反応　：　ヨード、アニスアルデヒドによる
反応、ギブスの反応に陽性 側　溶解性 可　溶：　ベンゼン、クロロホルム、メタノール、ｎ−
ブタノール、酢酸 エチル、アセトン、ジメチルス ルホキシド 不　溶：　ヘキサン、水 以上のデータによりＭＳ−３４７は、新規化合物である
ことが判明した。

なお、以上のデータは下記の機器により測定した。′ 元素分析：　柳本製作所　ＣＩＩＮコーダーＭＴ−５８
ＩＭＳ　（金高分解能）：日立製作所Ｍ−８０８スペク
トロメーター 融　点：　柳本製作所　ミクロ融点測定装置紫外部吸収
スペクトル：日立製作所 ２００−２０型スペクトロメ一ター 赤外部吸収スペクトル：日本電子 ＪＩＲ−ＲＦＸ　３００１型スヘクトロメーター ＮＭＲスペクトル；プルカー社八Ｍ４００スペクトロメ
ーター 次に、各種展開剤によるＭＳ−３４７の薄層クロマトグ
ラフィーのＲｆ値を第１表に示す。検出は２５３、７ｎ
ｍの紫外線照射によって行った。

第　　　　１　　　　表 展開：　室温、上昇法、　展開時間：２０〜４０分次に
、ＭＳ−３４７の血管拡張作用を実験例で説明する。

実験例 ウサギ胸部大動脈標本における収縮抑制作用ウサギ（オ
ス、体重２〜３ｋｇ）の胸部大動脈を摘出後、幅約３ｍ
ｍのリンス標本を作成し、タレブスーヘンゼライト　（
Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ）液　（組成：ＮａＮ
ａＣｌ１１１Ｂ、にＣ１４，７５ｍＭ　、　ＣａＣｊ！
　２２．５４ｍＭ。

ＭｇＳＯ４１，１９ｍＭ、　ＮａＨＣＯ３１２，５ｍＭ
　、にＬＰｏ、　１．１９ｍＭおよびグルコース１０．
０ｍＭ）を満たしたマグヌス管に２ｇの負荷で懸垂した
。マグヌス管内は３７℃に保ち、混合ガス（９５％０２
＋５％Ｃ０２）を通気した。発生張力はアイソメトリッ
クトランスデユーサ−（ＦＤピックアップＴＢ−６１２
７，日本光電製）を用いて等尺性に測定し、インク式ペ
ンレコーダー上に記録した。

標本は６０分以上安定させた後、ＫＣ１４０ｍＭにより
収縮を惹起した。収縮が安定したところでＭＳ−３４７
をマグヌス中に添加し、ＫＣｌ１収縮に対する抑制作用
を検討した。その結果を第２表に示す。

第　　　２　　　表 第２表から明らかなように４０ｍＭ　ＫＣｊ！収率に対
して、ＭＳ−３４７は収縮抑制作用を示した。

ＭＳ−３４７は、上記実験例で示す通り血管拡張作用を
有するので、血圧降下剤、虚血性心疾患治療剤、末梢、
脳循環改善剤などとしての用途が期待される。

次に、ＭＳ−３４７の製造法について説明する。

ＭＳ−３４７は、ＭＳ−３４７生産能を有する微生物を
培地に培養し、培養物中にＭＳ−３４７を生成蓄積させ
、該培養物からＭＳ−３４７を採取することにより得る
ことができる。

ＭＳ−３４７生産微生物としては、野生株または、野生
株を人工的変異方法、たとえば紫外線照射、Ｘ線照射、
変異誘起剤処理などによって変異させた変異株あるいは
自然的に変異した変異株など、ＭＳ−３４７生産能を有
していればいずれの菌株でも用いることができる。具体
的な例として、アスペルギルス・エスピー（＾ｓｐｅｒ
ｇｉｌｌｕｓ　ｓｐ、）ＳＰＣ１６６４０株（以下５Ｐ
Ｃ１６６４０株と称する）−があげられる。５ＰＣ１６
６４０株は、本発明者により新たに分離された菌類であ
り、その菌学的性質は以下の通りである。

■肉眼的観察 麦芽エキス寒天培地を用いて、２５℃で培養したとき、
集落の直径は培養７日目で５２〜５７ｍｍに達する。集
落は白色綿毛状で、中央部は淡灰縁色を呈する。裏面は
、レモン色を呈する。培地中に淡いレモン色の色素を分
泌する。

バレイショ・ブドウ糖寒天培地を用いて、２５℃で培養
したとき、集落の直径は培養７日自で５９〜６３＋ｎｍ
に達する。集落は白色綿毛状で、中央部は灰青色を呈す
る。裏面はくすんだ赤褐色を呈する。培地中にくすんだ
ワイン褐色の色素を分泌する。

ツアペック酵母エキス寒天培地を用いて２５℃で培養し
たとき、集落の直径は培養７日目で７４〜７８關に達す
る。集落は白色綿毛状で中央部は淡灰縁色を呈する。裏
面はクリーム色を呈する。

２０％ショ糖添加ツアペック酵母エキス寒天培地を用い
て２５℃で培養したとき、集落の直径は培養７日目で７
８〜８０關に達する。集落は綿毛状で濃緑青色、周囲は
白色を呈する。裏面は、淡黄紫色を呈する。

本菌株の至適生育温度は１３〜４２℃であり、３５℃前
後で最も良好に生育する。生育しつるｐＨは２〜９で至
適生育ｐＨは５〜６である。

■ツアペック酵母エキス寒天培地上で培養したときの本
菌株の光学顕微鏡的観察 菌糸は隔壁を有し、無色、平滑でよく分岐する。

菌糸が束状になることはない。菌糸から分生子柄が立ち
上がり、分生子柄は、平滑、無色で、長さ約１００μｍ
、幅５〜９．５μｍである。分生子頭（ｃｏｎｉｄｉａ
ｌ　ｈｅａｄ）は、円柱形を呈する。分生子柄先端に、
直径１５〜２１μｍ球形あるいは亜球形の無色の頂嚢を
形成し、その上部４分の３以上にとっくり形のフィアラ
イドを多数形成する。フィアライドは単生し、長さ５〜
６．５μｍ、幅は最も広い部位に於て１．５〜２．５μ
ｍである。メトレは観察されない。分生子の個体発生様
式は内生出芽型であり、分生子はフィアライド先端より
形成し、連鎖状となる。フイアロ型分生子は、単細胞、
球形あるいは亜球形で、直径２〜２．５μｍ１表面はわ
ずかに刺状、無色で、集合すると青緑色を呈する。本菌
株は、上述したアナモルフ（ａｎａｍｏｒｐｈ）のみ観
察され、テレオモルフ（ｔｅｌｅｏｍｏｒｐｈ＞は観察
されない。

以上の菌学的性質から、本菌の分類学上の位置を「ザ・
ジェネラ・オブ・ファンジャイ・スポルレイティング・
イン・ピュア・カルチャー　第２版（Ｔｈｅ　Ｇｅｎｅ
ｒａ　ｏｆ　Ｆｕｎｇｉ　Ｓｐｏｒｕｌａｔｉｎｇ　ｉ
ｎ　ＰｕｒｅＣｕｌｔｕｒｅ、　２ｎｄ　ｅｄ、　Ｃｒ
ａｍｅｒ、　Ｖａｄｕｚ、　Ｊ、＾、　ｖａｎＡｒＸ、
　１９７４年）」に従って検索した結果、本菌株は、ア
スペルギルス・スピーシーズ（＾ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｓｐ、　）に属することが認められた。本発明者らは、
本菌株ヲ“アスペルギルス・エスピー（＾ｓｐｅｒｇｉ
ｌｌｕｓｓｐ、）　　５ＰＣ−１６６４０”と命名し、
ブダペスト条約に基づいて工業技術院微生物工業技術研
究所に平成２年１１月１６日付で微工研条寄３１６３号
（ＦＥＲＭ　ＢＰ−３１６３）として寄託した。

微生物の培養に際しては、菌類の培養に用いられる通常
の培養方法が適用される。用いられる培地は菌類が資化
しつる炭素源、窒素源、無機物などを程よく含有する培
地であれば天然培地、合成培地のいずれでも用いられる
。

炭素源としては、グルコース、フラクトース、シューク
ロース、ラクトース、スタビロース、澱粉、テキストリ
ン、マンノース、マルトース、糖蜜、マツシュポテトの
素などの炭水化物、クエン酸、リンゴ酸、酢酸、フマー
ル酸などの有機酸、メタノール、エタノールなどのアル
コール、メタン、エタン、ｎ−プロパンなどの炭化水素
、グルタミン酸などのアミノ酸あるいはグリセロール、
綿実油などが用いられる。

窒素源としては、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム
、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウムなどのアンモ
ニウム塩、アスパラギン酸、グルタミン、シスチン、ア
ラニンなどのアミノ酸、尿素、麦芽エキス、ペプトン、
肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチーブ・
リーカー、大豆粉、綿実粕、大豆カゼイン、カザミノ酸
、ファーマメディア、ソルブル・ベジタブル・プロティ
ン、野菜・果実のジュースなどが用いられる。

無機物としては、リン酸三水素カリウム、リン酸水素二
ナトリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、
硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸コバルト、硫酸亜鉛、
モリブデン酸アンモニウム、硫酸アルミニウムカリウム
、炭酸バリウム、炭酸カルシウム、塩化コバルト、塩化
マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムなどが用
いられる。

その他必要に応じて培地にビタミン（例えばパントテン
酸）、ｐＨ緩衝剤〔例えば３−（Ｎ−モルホリノ）プロ
パンスルホン酸〕など菌体の増殖あるいはＭＳ−３４７
の生産を促進あるいは安定化する物質を加えることがで
きる。

用いられる微生物が特定の物質を要求する場合は生前に
必要なものを加えることが必要である。

培養は振盪培養法、通気攪拌培養法などにより、１５〜
４０℃の温度で中性付近のｐＨで行われる。

３〜１０日培養することによってＭＳ−３４７の蓄積が
最大に達し、培養は完了する。

培養物中に生成蓄積したＭＳ−３４７を単離精製するに
際しては、通常の微生物生産生理活性物質を培養物から
単離精製する方法が適用される。

すなわち、アセトン、メタノールなどの溶剤による菌体
成分の抽出、ろ過、遠心分離などによる菌体除去、適当
な溶媒系による分配、吸着樹脂、シリカゲル、修飾シリ
カゲル、アルミナ、セルロース、珪藻土、珪酸マグネシ
ウム、ゲルろ過剤などを用いるカラムクロマトグラフィ
ーもしくは薄層クロマトグラフィーによる活性物質の吸
脱着処理などによってＭＳ−３４７を単離精製すること
ができる。

培養物からＭＳ−３４７を単離する１例は次の通りであ
る。

培養物をろ過または遠心分離することによって培養液と
菌体を分離する。得られる菌体にメタノ−ルやアセトン
などの適当な有機溶媒を添加して充分攪拌した後に再度
ろ過または遠心分離することにより抽出液を得る。得ら
れる抽出液に水を添加して適当に希釈した後に、吸着樹
脂、たとえばダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化成社製）
で処理して樹脂に活性物質を吸着させる。次いでメタノ
ールなどの適当な溶剤を用いて溶離し、溶離液を減圧下
で濃縮する。この濃縮液に必要に応じて水を加えた後、
さらに、水と混和しない適当な溶媒、たとえば酢酸エチ
ルやｎ−ブタノールなどを添加して活性物質を抽出する
。抽出液を減圧下で濃縮乾固した後、少量のメタノール
に懸濁し、ろ過によりメタノール不溶物を回収する。得
られるメタノール不溶物を適当な展開溶媒、たとえば、
０．５％メタノール／クロロホルムを用いて常法により
シリカゲルカラムクロマトグラフィーを行う。必要に応
じて同一あるいは別の組成の溶媒系を用いてシリカゲル
カラムクロマトグラフィーを繰り返して行う。ＭＳ−３
４７を含む両分を集めて減圧下で濃縮乾固した後、アセ
トンなどの適当な溶媒に溶解し、結晶化を行うことによ
りＭＳ−３４７の黄色粉末を得る。なお、上記精製工程
中のＭＳ−３４７の検出は、蛍光剤入りのシリカゲルプ
レートを用いて薄層クロマトグラフィーを行った後、２
５３、７　ｎｍの紫外線を照射することにより行う。

以下に実施例を示す。

実施例１ 種菌としてアスペルギルス・エスピー（＾ｓｐｅｒｇｉ
ｌｌｕｓｓｐ、＞　ＳＰＣ−１６６４０（ＦＩＥＲＭ　
ＢＰ−３１６３）を用いた。種培地としてＶ−８野菜ジ
ユース　（キャンペル社製）０．２ｄｌ／＃およびデキ
ス）ＩＪン３．Ｏｇ／４’の組成からなる培地（ｐＨ６
，５）を用いた。線菌を上記組成の種培地１０−を含む
大型試験管に植菌し、２５℃で菌が充分生育するまで振
盪培養した。このようにして得られた種培養液１０ｍの
うち５ｍｌを、上記組成からなる種培地５０−を含むエ
ルレンマイヤーフラスコ（３００ｍりに添加し、２５℃
で２日間振盪培養した。このようにして得られた種培養
液５ｍを、５０ｍ１の生産培地を含むエルレンマイヤー
フラスコ（３００ｒＩｉりに添加した。生産培地は、グ
ルコース２．０ｇ／ａ、マツシュポテトの素（雪印乳業
社製）４．０ｇ／ａ、ペプトン（極東製薬工業社製）０
．５ｇ／ａ、！Ｊン酸二水素カリウム０．５ｇ／Ｊおよ
びリン酸マグネシウム８水塩０．０５ｇ／＃の組成から
なる培地（ｐＨ６，０）を用いた。発酵培養は、２５℃
で６日間振盪下に行った。

培養終了後、培養物（５，５１’）をろ過することによ
り菌体を取得した。菌体に５．５１のメタノールを添加
し、充分攪拌した後、再度ろ過により菌体を除去した。

得られたメタノール抽出液に等量の水を添加した後、１
１のダイヤイオンＨＰ−２０を充填したカラムに通塔し
、活性物質を吸着させた。カラムを３１の５０％メタノ
ールで洗浄した後、３１のメタノールで活性物質をカラ
ムから溶出した。メタノール画分を減圧下で濃縮した後
、水を加えて２００ｍとし、酢酸エチル各々２００−を
用いて４回抽出した。酢酸エチル層を無水硫酸す）ＩＪ
ウムで脱水した後、減圧濃縮すると４．７ｇの褐色油状
物が得られた。この油状物を２００−のメタノール中に
懸濁し、これをろ過することによりメタノール不溶物（
１，０ｇ）を得た。このメタノール不溶物を、２００ｍ
のワコーゲルＣ−２００（和光純薬社製）を充填したカ
ラムの上端に供給し、１βのクロロホルム、ついで０．
５％になるようにメタノールを含んだクロロホルムで展
開した。０．５％になるようにメタノールを含んだクロ
ロホルムで溶出される両分をすべて集めて、濃縮乾固す
ることにより５９８ｍｇの黄色粉末を得た。この粉末を
３００−のアセトンに溶解した後、４℃に放置すること
により結晶化を行った。結晶をろ別して乾燥させること
によりＭＳ−３４７の黄色粉末４２２■を得た。

上記精製工程中、ＭＳ−３４７の検出は、蛍光剤を含む
シリカゲルプレート（シリカゲル６０Ｆ２．。

メルク社製）を用いて薄層クロマトグラフィーを行った
後、２５３．７　ｎｍの紫外線を照射することによって
行った。

発明の効−果 本発明によれば、血管拡張作用を有する新規化合物ＭＳ
−３４７を得ることができる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 下記の構造式で表される化合物ＭＳ−３４７。 ▲数式、化学式、表等があります▼