JPH04500676A - 骨髄損傷の処置およびそのための用量単位 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 骨髄損傷の処置およびそのための用量単位発明の背景 発明の分野 この発明は、生きているは乳類の骨髄の造血機能に対する損傷の処置方法に関す るものである。この発明の一態様は、抗癌処置などの望ましくない副作用の結果 として損なわれＩ；骨髄、特に抗癌剤の骨髄毒性により誘発された損傷の処置に 関するものである。この発明の別の態様は、ある種の臨床処置、特に骨髄の造血 機能が損なわれる抗癌処置の用量制限相の緩和に関するものである。この発明の さらに別の態様は、癌または他の病気の臨床的処置により損なわれた骨髄の造血 機能を少なくとも部分的に回復させるのに有効であることが見出された化合物の 非経口投与用単位用量に関するものである。

発明の背景 現在からさかのぼって少なくとも１９７０年代前半に、ジチオカルバメート類お よびそれらの２量体（例、ジスルフィラム）は、は乳類に対する毒性が比較的低 い臨床的に有用な化合物であることが見出された。ジエチルジチオカルバミン酸 ナトリウムの初期の用途の一つは、急性ニッケルカルボニル中毒の処置であった 。Ｓ、ウィリアム・サンダーマン、アナルス・オブ・クリニカル・リサーチ、３ ：］８２−１８５（１９７１）参照。ジエチルジチオカルバメート２量体、ジス ルフイラムは、これまでアルコール中毒の処置に使用されてきた。さらに最近で は、ジチオカルバメートまたはそれらの２量体は、抗新生物薬として使用される 白金化合物、例えば方形二次元白金（Ｉ＋）錯体の望ましくない副作用の阻害に 使用されている。アメリカ合衆国特許第４４２６３７２号（１９８４年１月１７ 日）、同第４５９４２３８号（１９８６年６月ｌＯ日）および同第４５８１２２ ４号（１９８６年４月８日）（全てＲ，Ｆ、ポーチによる）参照。これらのジチ オカルバミック化合物との組み合わせにおける使用についてポーチが考えた白金 含有薬剤のタイプの検討については、（ポーチの３特許に加えて）１９７７年１ ０月１１日付けのアメリカ合衆国特許番号第４０５３５８７号（デビンドソン等 ）、１９７９年１月３０日付けの同第４１３７２４８号（ゲール等）、１９８５ 年１２月３１日付けの同第４５６２２７５号（スピア等）、１９８７年７月１４ 日付けの同第４６８０３０８号（シュバルッ等）、並びに特許および科学文献の 両方に登場する類似参考文献、例えば、「キャンサー・トリートメント・レボー ツ」、６３巻（１９７９）において１４３３頁から始まる腫ようの白金処置およ び結果的に生じる副作用に関する一連の論文参照。白金（ＩＶ）化合物も白金（ ＩＩ）化合物と殆ど同様に投与され得ることが見出され、見たところ、これらの ６リガンド錯体はインビボで白金ＣＩ＋）タイプの方形二次元錯体に分解するた め、抗新生物剤として有用な白金化合物は白金（ＩＩ）化合物に限定されるわけ ではない。

例えば、アメリカ合衆国特許第４４２６３７２号のポーチによる方法は、臨床試 験で有効であることが示された。すなわち、この方法は、白金含有薬剤の副作用 を実質的に低下させる。これらの副作用には、腎臓毒性および骨髄毒性の両方が ある。ジチオカルバミック化合物が有する腎臓毒性に対する防御まｔ；は低減化 機構については、ポーチおよび彼の共同研究者が充分に研究しており、さらにイ ンビトロ試験で正確に模擬実験を行った。従って、この機構は比較的理解し易い 。腎臓毒性を除去するかまたは妨げるためには、白金含有薬剤が既に腫ように対 して攻撃を開始しく薬剤の有益な作用）、また、腎臓内の決定的に重要な構造を 攻撃し始めた（望ましくない副作用）後に、ジチオカルバミック化合物を投与す る。こうして投与されたジチオカルバミック化合物は、白金薬剤の腫よう阻害作 用を除去しないが、腎臓内においてこれらの危険な構造から白金を追放すること により、比較的無害なジチオカルバメート／　Ｐ　を錯体を形成させ、これらの うちある程度は尿に排出される。この腎臓損傷性の除去は、腎臓で結び付いた白 金の量に関して化学量またはほぼ化学量のジチオカルバミック化合物を必要とす る比較的直接的な化学反応により行なわれると思われる。結果として、ポーチの 方法におけるジチオカルバミック化合物の有効量は、上記状況の化学量論を反映 する傾向があり、５ｍｇ／ｋｇの量で白金化合物を静脈内投与した場合、マウス におけるジチオカルバミック「レスキュー剤」の量は、］　００ｍｇ／ｋｇ−４ ００ｍｇ／ｋｇ（静脈内）の範囲であると考えられ、またマウスにおける腹腔的 投与では７５０ｍｇ／ｋｇ程度の高い範囲になり得る。体重１ｋｇ当たり５０ｍ ｇ未満の用量のジチオカルバメートでは、腎臓損傷を軽減または阻止するのに充 分に有効であるとは考えられない。

医薬的に許容し得るジチオカルバミック化合物、例えばジエチルジチオカルバミ ン酸ナトリウム（ＮａＤＤＴＣ）およびジスルフィラムは、比較的高いＬＤ、。

値を有し、は乳類に対する毒性があまり高いとは考えられないが、ＮａＤＤＴＣ を注射されたラットまたはマウスが呈する奇妙な行動に関する報告が文献の随所 に見られる。文献の随所に見られるこれらの開示および示唆の真の重要性は、「 レスキュー剤」、すなわち白金化合物の投与による副作用を低減化させる薬剤と してのＮａＤ　Ｄ　Ｔ　Ｃの臨床試験中に充分に明白になった。

これらの臨床試験は、「レスキュー」目的に有効な量（例えば、体重１ｋｇ当た り５０−１５０ｍｇ程度の用量）のＮａＤＤＴＣを与えられたひと患者が、彼等 にパニックおよび不快感を与える非常に不愉快な作用を経験することを立証した 。ジチオカルバメートを与える前に患者を鎮静させるＮａＤ　Ｄ　Ｔ　Ｃの投与 技術の開発が必要であった。

入手可能な証拠は全て、例えば５０−１５０ｍｇ／ｋｇり用量によるジチオカル バメートに対するパニック反応が、患者の体に生じる何等かの生命を脅かすプロ セスの結果ではなく、まｆ：、ＮａＤＤＴｃ投与から生じる永続性または慢性作 用まＩ；は損傷の証拠も全く存在しないことを示している。ジチオカルバメート 投与クールが完了後、患者は正常に戻り、パニック反応の後遺症は全く観察され ない。さらに、現在では、ＮａＤＤＴＣのヒドロキシ置換類縁体の中には、Ｎａ Ｄ　Ｄ　Ｔ　Ｃ自体よりも毒性の低いものすらあり得ると思われる。

それにも拘わらず、毒性副作用の処置（例、白金化合物の副作用の処置）におけ るなお一層の改良が望まれている。

上述した通り、骨髄毒性の処置についてはあまり知られていない。

白金含有および白金不含有の両抗癌剤の中には、骨髄の造血機鹸に深刻な損傷（ 骨髄抑制（ｍｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ）と呼ばれることもある作用）を 与え得るものもある。顕著な骨髄抑制作用を誘発する薬剤としては、細胞毒性抗 生物質および抗生物質誘導体、他の細胞毒性剤、代謝きっ抗物質（ＤＮＡ形成に 関与するプロセスを阻害する）、アルカロイド型抗腫よう剤、アルキル化剤およ び重金属錯体（特にＰｔ錯体、例えば「カルポプラチン」）がある。これらの薬 剤の副作用の処置は、癌治療分野にとって非常にありがたい付加的処置である。

放射線療法は、骨髄の造血機能に深刻な損傷を与え得るさらに別の誘因である。

様々な化合物（例、ジチオカルバメート類）の投与が、放射線療法の副作用を阻 止する処置法として試験された。

ＮａＤ　Ｄ　Ｔ　Ｃを含む様々な硫黄含有化合物は、免疫刺激性医薬として示唆 されている。１９７９年４月ｌＯ日付けのアメリカ合衆国特許４１４８８８５（ ルノー等）参照。

発明の要旨 式　Ｓ 烏 Ｒ’Ｒ”ＮＣ３Ｍ ［式中、Ｒ１およびＲ２は、同一または相異なる、非置換またはヒドロキシルに より置換された低級脂肪族またはシクロ脂肪族またはへテロシクロ脂肪族基であ るか、またはＲ１およびＲ２のうち一方は（両方ではない）Ｈであり得るか、ま たはＲ１およびＲ２はＮＩＩＸ子と一緒になって脂肪族まｔ；は環酸素もしくは 第２環窒素により中断された脂肪族である５−または６−員Ｎ−複素環であり得 、Ｍは、Ｈまたは１当量の医薬的に許容し得るカチオンであるＣｆ−Ｍは、−５ −ＣＮＲ’Ｒ’（ただし、Ｒ３およびＲ４は、上記Ｒ１およびＲ２と同じ意味で ある）である］ で示されるジチオカルバミック化合物は、驚くべきことに、上述のバニンク反応 を誘発しない非常に低用量で投与された場合、生きているは乳類の骨髄の造血機 能に対する損傷の処置に有効であることが判明した。小型は乳類（例、マウス） の体重１ｋｇ当たり３０ｍｇを越える量のジチオカルバミック化合物は、この発 明では必要とはされず、大型は乳類、例えばひとにおける特に白金含有薬剤によ り誘発された損傷の場合には非常に過度である。マイクロダラム／ｋｇ範囲の用 量レベルでは、小型は乳類でもジチオカルバミック化合物に対する少なくともあ る程度の有益な応答が観察され得る。すなわち、この発明による適当な用量単位 は、は乳類の体重１ｋｇ当たり約０゜００１〜３０ｍｇ、さらに好ましくは体重 １ｋｇ当たり約０．００３より大で約１０ｍｇ以下の範囲であり得る。

上記ジチオカルバミック化合物の治療効果は、白金含有薬剤により誘発された損 傷の処置のみに限定されない。また、白金不含有骨髄抑制性抗新生物薬剤を投与 されたは乳類は、これらのジチオカルバミン酸塩類または２量体（または、それ ほど好ましくないが、酸、すなわちＭ−Ｈの場合）の一つの有効量により上首尾 で処置され得る。これらの白金不含有薬剤の副作用の処置に好ましい用量単位は 、白金含有薬剤の場合と同じであるが、適切な予備措置、例えば鎮静剤を使用す ると、マウスでは３００　ｍｇ／ｋｇ以下（ひとでは７５ｍｇ／ｋｇ以下）の用 量が耐容性を示すと思われる。

続いて説明する通り、これらの用量単位をｍｇ／＋＋＋”へ変換するガイドライ ンが、大型は乳類、例えばひと、および小型は乳類、例えばマウスの両方につい て発見され！；。主として、ｍｇ／ｍ”投与量は、大型および小型は乳類の両方 を含むあらゆる種類において均等である。

また、小型は乳類に関する適当なｍｇ／ｋｇ用量単位およびひとに関する適当な ｍｇ／ｋｇ用量単位間のギャップは、熟練した薬理学者が予測し得たものよりも 幾分少ないことが見出された。

これらの非常に低い用量は、化学量論的レベルよりがなり低く、触媒が使用され る場合の量にさらに似ていると考えられる。驚くべきことに、この発明のジチオ カルバミック化合物を健康なは乳類に投与しても、正常な骨髄の造血機能の改良 はむしろ極微である。しかしながら、は乳類の骨髄が例えば抗癌剤の投与により 損なわれた場合には、骨髄機能の非常に著しい改良が観察される。従って、この 発明の方法は、主として既にある程度の骨髄抑制作用を被ったは乳類に適用され る。しかしながら、この発明の有益な効果を観察する場合にある程度の時間の遅 延が伴い得るため、ジチオカルバミック化合物は、骨髄抑制誘発源（すなわち、 薬剤または放射線など）とほぼ同時に投与され得る。典型的には、骨髄抑制誘発 源を患者に与えた後に、ジチオカルバミック化合物は投与される。

この発明で使用される好ましいジチオカルバミック化合物は、前述の式Ｒ，Ｒ， ＮＣ５ＳＭ（式中、Ｍは、医薬的に許容し得るカチオンであり、Ｒ３およびＲ１ は低級脂肪族またはヒドロキシ置換低級脂肪族基（例、ポリヒドロキシ置換Ｃ１ −アルキル基）である）で示される化合物である。これらの化合物（特にＭが金 属性カチオンである場合）の好ましい投与経路は静脈内であり、適当な単位用量 を、医薬的に許容し得る担体、例えば水性媒質に溶解、懸濁するかまたは他の形 でこれと組み合わせることができる。水溶度がかなり低い２量体（例、ジスルフ イラム）の場合、好ましい投与経路は経口経路である。

詳細な記載 下記検討内容の大部分は、抗癌剤の骨髄毒性に対する防御におけるジチオカルバ メートの用途に関するものである。しかしながら、この発明の方法は、生きてい るは乳類の骨髄の造血機能が損なわれた場合は常ｌこ適用され得るものと理解さ れる。先に示した通り、この発明の方法および用量単位の臨床使用は、既知抗腫 よう剤と組み合わせて実施され得、一般には抗腫よう剤は最初に投与されるが、 抗腫よう剤の投与とほぼ同時（または投与前）であり得る。一般に、抗腫よう剤 を最初に投与した場合、ジチオカルバメートは６または８時間以内に処置された は乳類へ与えられるのが望ましい。

骨髄抑制（骨髄の造血細胞に対する毒性）は、今日の癌治療で使用される大部分 の抗癌剤の深刻かつ高頻度で用量制限的な副作用である。これらは急速に分裂し ている細胞であるため、それらは細胞増殖疾患の制御に使用される薬剤の毒性作 用を特に被りやすい。幹細胞は、骨髄細胞の最も初期のものである。それは骨髄 細胞の０．１％未満を占めるにすぎないが、分化することにより、血液セルライ ンの全部の始原細胞（赤血球、リンパ球、か粒球および血小板前駆体）を生じ得 る。また幹細胞は、分裂することによって追加の幹細胞を生じ得るという点で、 自己補充性細胞である。幹細胞は最近ようやく具体的に単離および特性検定され 、それもマウスにおいてのみであるが、ひ臓コロニー検定（ＣＦＵ−ｓ）を用い ることにより、それらの数の推定値が得られる。幹細胞の適当な集団の維持は、 は乳類そして恐らくは他の生物の生存にとっても明らかに重大である。

か粒球前駆体は、骨髄における最も重要で損傷されることも多い始原細胞の一つ である。その臨床的重要性は、が粒球が感染症と戦う場合に演じる役割に存する 。癌の化学療法の結果、か粒球の数が著しく減少した患者は、様々な生物による 感染症に非常にかかりゃすく、骨髄機能が充分迅速に回復しなければ、患者は、 彼等が本来処置を受けた悪性腫ようではなく感染症で死ぬこともあり得る。か粒 球前駆体は、幹細胞の分化に由来する。また、この前駆体は、分裂により自己複 製するか、または続いて分化することにより成熟か粒球を生じ得る。か粒球前駆 体は、幹細胞よりも骨髄に多く存在し、その数はＣＦＵ−ＧＭ検定を用いて推定 され得る。

先に示した通り、この発明の方法に関与する機構は特有のものであると思われ、 この発明が為された時点ではあまり知られていなかった。この発明と関連して為 された機構的研究は、ＤＮＡ合成に干渉することにより腫よう増大を阻止する（ そして、同じく骨髄におけるＤＮＡ合成に干渉するという望ましくない作用を有 する）抗癌剤は、抗癌剤の投与後、例えばその３時間後にジチオカルバメートを 投与した場合、骨髄でのＤＮＡ合成に対するそれらの作用が著しく変調されるこ とを示している。この発明はいかなる理論とも結びついていないが、これらの結 果は、ジチオカルバメートにより与えられた骨髄防御機構が、他の毒性（例、腎 臓毒性）の除去に関与する機構とは異なるものであり、また、生化学的構造から の白金の化学量論的除去により依存していないことを示すものとして解釈された 。

例えば、ジチオカルバメートが、毒性薬剤により損なわれた骨髄細胞の増殖を刺 激することは理論化されるが、この発見は、健康な骨髄では上記刺激が殆ど行な われないことを示している。

処置可能な骨髄損傷 先に示しｔ；通り、抗新生物剤および治療技術は骨髄抑制の特に重要な誘発源で ある。これらの抗新生物処置は、２つの大きな範ちゅう、すなわち、放射線療法 および薬剤療法に分類される。造血機能に対する副作用（例、骨髄毒性）を有す る薬剤は、様々な種類のストレプトマイシスの培養物から単離された細胞毒性抗 生物質および上記抗生物質の誘導体、必ずしも抗生物質誘導体ではない他の細胞 毒性薬剤、代謝きっ抗物質、例えば５−フルオロウラシル、天然供給源、例えば ツルニチニチソウ植物および類似草本から抽出されたアルカロイド類を含むアル カロイド型化合物、ＤＮＡ合成阻害剤、および例えばアルキル化剤または重金属 錯体（例、上述の白金錯体）であり得るＤＮＡ架橋剤、および２−クロロエチル 基（典型的には窒素原子に結合した２−クロロエチル基）を含む化合物を含む幾 つかの範ちゅうに分類される。これらの範ちゅうの２つ以上に分類される化合物 が、現在臨床的に使用されている。例えば、抗生物質誘導体または２−クロロエ チル含有化合物または細胞毒性薬剤は、ＤＮＡ合成阻害剤および／またはアルキ ル化剤であり得る。

「アドリアマインン」（ドキソルビンン塩酸塩）は、恐らく、主として白血球の 骨髄抑制作用を誘発することが知られているストレプトマイシス製造抗生物質誘 導体の代表例であると思われるため、この薬剤を投与して腫よう形成状態の緩解 を誘発している場合、注意深い血液モニターが要求される。

典型的には窒素原子に結合した、２−クロロエチル（すなわち、ベータークロロ エチル）基を有するかなり多様な抗新生物薬剤が存在する。これらの化合物の中 には、Ｌ−アミノ酸の誘導体、ステロイドの誘導体、単環式化合物、脂肪族アミ ン誘導体および尿素誘導体にトロソ尿素誘導体を含む）がある。ニトロソ原素型 化合物は、一般に式Ｃｌ−ＣＨ，ＣＨ，−Ｎ（Ｎｏ）−Ｇｏ−ＮＨ−Ｒ＊（式中 、Ｒ本は、有機基、例えば脂肪族またはクロロ脂肪族基または第２−クロロエチ ル基である）を有する。汎用されているこの型の一化合物は、ＢＣＮＵまｔ二は ＢｉＣＮＵまｔ二はカルムスチンとしても知られている１−３−ビス−（２−ク ロロエチル月−二トロン尿素である。

２−クロロエチル基を含む抗新生物薬剤において、ビス−（２−クロロエチル） −アミノ官能基が特に一般的である。このビス置換基は、式（ＣＩＣＨ２ＣＨｉ ）２Ｎ−を有し、脂肪族鎖まｔ：は芳香族もしくはクロロ脂肪族もしくはヘテロ シクロ脂肪族環が直接的に（またはＮがカルバメート・リンケージなどの一部分 である場合に間接的に）置換され得る。いわゆる「窒素イペリット」誘導体は、 一般的にビス−（２−クロロエチル）アミノ基を含み、高毒性であり、注意深く 投与しなければ危険でさえあり得る。

ＤＮＡ合成を阻害またはＤＮＡ分子を架橋する薬剤のうち、白金（Ｉ＋）および （ＩＶ）化合物は、臨床用途に最も有望な薬剤に含まれる。

化合物「シスプラチン」（シス−ジクロロジアミン白金［１１Ｄは、精巣および 卵巣騰ように対しては非常に有効であるが、この薬剤で処置した患者の２５−３ ０％に骨髄抑制作用の現れることが見出された。

白金（Ｉ＋）および白金（ＩＶ）抗癌剤に関するさらに最近の開発により、腫よ うに対して非常に有効であるだけでなく、骨髄抑制以外の副作用を実質的に伴わ ない化合物が製造された。（他方、シスプラチンは、顕著な腎臓毒性作用および 恐らくは骨髄毒性作用をも有する）。

文献によると、好ましい抗腫よう剤Ｐｔ（ＩＴ）またはＰＬ（ＯＶ）錯体は、（ ａ）中性であり、（ｂ）少なくとも１対のシス脱離基（一般に中間の不安定性を 有する、例、ハロゲン、オキサレート、マロネートオよび他の２座配位ジカルボ ン酸）を含み、（ｃ）好ましくは中性である程度不活性である２つの他のシスリ ガンドを含む。白金（ＩＶ）化合物と白金（Ｉ＋）化合物は、特に前者がインビ ボで白金（Ｉ＋）類縁体に変換される場合、機能的に類似したものであり得る。

白金（１ｖ）化合物は、６の配位数を有し、平面の上下にリガンドを有する矩形 二次元錯体であり、８面体構造を形成すると考えられ得る。

かなりのパーセンテージの場合において、ある程度の骨髄毒性を有することが知 られている白金（Ｉ＋）化合物は、式％式％ （式中、Ｘ’およびｘ２は、同一または異なって、アニオンにイオン化され得る 脱離基を表すか、または−緒になって、ＸＩおよびＸ！は環状２官能性脱離基、 例えば環状ジカルボン酸を構成し得、Ｌ、およびＬ３′は、同一または異なって 、アミンまｔ；はアミンリガンドの残基を表すか、または、組み合わせた形で、 Ｌ、およびり、ｌは−緒になって脂肪族またはシクロ脂肪族ジアミンリガンドの 残基を表す）を有する。

シス脱離基（構造式のｘｌおよびＸ！は前記の意味）力；、アンモニア、アミン および類似窒素含有リガンドよりも好まし一１脱離基である場合、ｘｌおよびＸ ！の正確な性質は厳密ではな’ｉ’＆！ｌわれる。（白金錯体から置換されると き、ＸｌおよびＸ”ｌま生理学的に許容し得るアニオンを形成するのが望ましい ）。従って、前記脱離基ｌこ加えて、スルフアート、スルフェートおよび中性水 分子力；、これらの化合物におけるリガンドとして使用されてしする。ヒドロキ シル基（ま、それがプロトン化されて水リガンドを形成すると、脱離基として機 能し得る。それ故、ＯＨ基もまたリガンドとして使用されてし〜る。

窒素含有単座および２座配位化合物のうち、１ノガンドカ；アンモニア、ジアミ ノシクロヘキサンおよびその誘導体、アルキレンジアミン（例、エチレンジアミ ン）、アルキル置換アミン、Ｃ３およびＣｓ−シーンアルキルアミンなどを含む 場合に、骨髄抑制カミ生じ得る。好適に選択された４価Ｐｔ錯体、例えばｒｃＨ ＩＦ」は、生きている生物に投与後、Ｐｔ（ＩＩ）錯体と同様に機能し得る。軸 リガンドのインビボ除去が、少なくともある程度まで、Ｐｔ（ＩＩ）種活性の原 因である。上記４価Ｐｔ錆体は、式 （式中、Ｌ３、Ｌ、′、およびｘｌおよびｘ２は、前記の意味であり、上記Ｐｔ （ＩＩ）錯体の構造式の場合と同様、矩形二次元錯体の赤道結合置換基である） で示される化合物であると考えられ得る。赤道結合ｘ１およびｘ２置換基は、好 ましくはハロゲン、例えばＣ１である。軸置換基ＸりおよびＸｌは、同一まｔ； は異なり、ＸｌおよびＸ！と似ている（例、）・ロゲン、ヒドロキシル、カルボ キシル、スルフアート、スルフェートおよび中性水分子）が、好ましくはヒドロ キシルまたは水分子である。

これらのＰＬ（ＩＶ）錯体において、Ｌ、Ｎおよびり、’−Ｎは、好ましくは脂 肪族アミン型リガンド、例えばＲＮＨ２（式中、Ｒは低級アルキルである）であ る。特に好ましい種類のＰ　Ｌ（ＩＶ）錯体は、クロロヒドロキシ−イソプロピ ルアミン白金（ｒＣＨＩ　ＰＪ）である。

ｒｃＨＩＰ」は、他の「第２世代」白金含有治療剤と同様、「第１世代」治療剤 と比べて腎臓毒性は低いが、不幸なことに骨髄毒性は高い。

まＩ；、立証された抗腫よう用途を有する様々なＰ　Ｌ（ＩＩ）化合物、例えば ｒＴＮｏ−６Ｊおよび「ＣＢＤＣＡ」（アメリカ合衆国特許第４１３７２４８号 参照）も、高い骨髄毒性を示す。他の点では望ましいこれらのＰｔ（ＩＩ）化合 物は、式 ％式％ （式中、ＸｌおよびＸ！は、同一または異なって、ハロゲン、ＯＨ１水、カルボ キシル、スルフアートまたはスルフェートであるか、または−緒になって、ポリ カルボン酸の残基を形成し、Ｘ’およびｘズ残基として例えば１．１−シクロブ タン−ジカルボン酸、トリメリット酸等であり、Ｒ′およびＲ“は、同一または 異なって、）翫ロゲンまたは脂肪族基、または−緒になって雨Ｎ−厘子を含む複 素環部分の脂肪族残基を示す） を特徴とし得る。

従って、シスプラチンまたは６種の下記抗腫よう剤のいずれかをは乳類に投与し たときの骨髄損傷の処置法が明らかに要望されている。

Ｃ１ （式中、Ｘ−ＯＨまたはＨ，Ｏ） ジチオカルバミック化合物 この明細書で使用されている「ジチオカルバミック化合物」という語は、官能基 Ｒ，Ｒ，Ｎ−Ｃ５−３−（式中、Ｒ１およびＲ１は、同一または異なって、非置 換またはヒドロキシルにより置換されｔ：、相異なる脂肪族またはンクロ脂肪族 またはへテロシクロ脂肪族基を表す）を含む化合物を包含する。２つの基Ｒ，お よびＲ３のうちの一方はＣｆ−だし、両方ではない）水素であり得る。別の場合 として、Ｒ１およびＲ２は、Ｎ−ｉ子と一緒になって、脂肪族または環酸素もし くは第２環窒素により中断された脂肪族である５−または６−員Ｎ−複素環であ り得る。

基Ｒ，Ｒ，Ｎ−Ｃ３−５−が２量体、例えばジスルフイラムの一部分である場合 、遊離の原子価結合手は、式−３−Ｃ３−Ｎ−Ｒ，Ｒ。

（式中、Ｒ３およびＲ１は、Ｒ１およびＲ８と同様に定義される）で示される基 に結合している。基ＲＩＲ，Ｎ−Ｃ５−５−がアニオンである場合、カチオンは 、アンモニウム−タイプに属し得るか、または１価もしくは２価金属、例えばア ルカリまたはアルカリ土類金属カチオンから誘導され得、水溶性が高く低毒性の カチオン、例えばＮａ（＋）、Ｋ（＋）、Ｚｎ（＋十）などが好ましい。ジチオ カルバミン酸の場合、基Ｒ，Ｒ２Ｎ−Ｃ５−５−は、特に約５より多いｐＨでイ オン化され得る水素厚子に結合している。ジチオカルバミン酸はインビトロでは あまり安定していないので、この発明の骨髄抑制治療剤のジチオカルバミン酸形 態を使用しても、僅かに効果がもたらされるだけで、有利ではないと思われる。

しかしながら、これらの酸は、一般に極性有機溶媒、例えばアルコールに可溶性 であり、それらは、体液中で安定したアルカリ金属塩類をある程度形成しやすい 。

ジチオカルバメートおよび関連化合物は、「ジチオカル／（メートおよび関連化 合物」（エルスピア、ニューヨーク、１９６２）と題するＧ、Ｄ、ソーツ等の著 書で充分に概説されている。ソーツ等の著書の第２章で説明されている通り、ジ チオカルノくメートの製法は非常に単純である。式Ｒ，Ｒ，ＮＣ５５ＨまたはＲ ，Ｒ，ＮＣ３ＳＮａで示される化合物は、一般的にはアルコール性または水性溶 液中、第２級アミンと二硫化炭素の反応により形成され得る。普通に実施する場 合、この反応はＮａＯＨの存在下で行なわれ、その結果、ジチオカルバミン酸ナ トリウム塩が形成される。すなわち、例えば、ジメチルジチオカルバミン酸ナト リウムは、ＣＳ　２、ＮａＯＨおよびジメチルアミンから形成される。ソーツ等 の著書の１４頁およびそこに引用されている参考文献を参照。ソーツ等の著書で 開示および特性検定されている他の典型的なジチオカルバミック化合物としては 、Ｎ−メチル、Ｎ−エチルジチオカルバメート、ヘキサメチレンジチオカルバミ ン酸、ジ（ベーターヒドロキシエチル）ジチオカルバミン酸ナトリウム、様々な ジプロピル、ジブチルおよびシアミルジチオカルバメート、Ｎ−メチル、Ｎ−シ クロブチルメチルジチオカルバミン酸ナトリウム、Ｎ−アリル−Ｎ−シクロプロ ピルメチルジチオカルバミン酸ナトリウム、シクロへキシルアミルジチオカルバ メート、ジベンジルジチオカルバメート、ジメチレン−ジチオカルバミン酸ナト リウム、様々なペンタメチレンジチオカルバメート塩類、ピロリジン−Ｎ−力ル ポジチオ酸ナトリウム、ピペリジン−Ｎ−力ルポジチオ酸ナトリウム、モルホリ ン−Ｎ−カルポージチオ酸ナトリウム、アルファーフルフリルジチオカルバメー トおよびイマダゾリン・ジチオカルバメートがある。

顕著な生物学的利用能および生物学的適合性を有すると思われる別の興味深いタ イプのジチオカルバメートとしては、Ｒ，Ｒ，Ｎ−Ｃ５−５−構造のＲ３が、６ 個以下の炭素原子を有するヒドロキシ置換または好ましくはポリヒドロキシ置換 低級アルキル基である化合物がある。例えば、Ｒ，は、ＨＯ−ＣＨ２−ＣＨＯＨ −ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−ＣＨ，−であり得る。それらの化合物におい て、Ｒ１はＨまたは低級アルキル（非置換まｔ；は１個もしくはそれ以上のヒド ロキシ置換により置換されている）であり得る。勿論、Ｒ８がＨ１メチルまたは エチルである場合、立体化学的問題は最小限になり得る。従って、このタイプの 特に好ましい化合物は、Ｎ−メチル−グルカミンジチオカルバメート塩であり、 これらの塩類のうち最も好ましいカチオンはナトリウムまＩ；はカリウムである 。

この明細書で使用されている（「低級アルキル」または「低級脂肪族」として、 ）「低級」という語は、１個〜６個の炭素原子を有する基を意味する。炭素原子 数が６を越えると、水溶性および／または生物学的適合性問題が大きく増加し得 る。非置換アルキル基の中で、エチル基は、比較的低い毒性と共に高レベルの水 溶性を与えると思われる。それにも拘わらず、例えばジエチルジチオカルバミン 酸ナトリウム（ＮａＤＤＴＣ）のような化合物は、体重１ｋｇ当たり５０＋ｏｇ を越えるレベルで投与された場合、ひとおよび他のは乳類（小型は乳類でさえ） による耐容性が必ずしも良好ではない。患者はＮａＤ　Ｄ　Ｔ　Ｃの注入中に紅 潮および胸部緊張を訴え、かれらは急性不安の徴候を発現する。これらの徴候は 注入停止後急速に後遺症も伴わずに鎮まるものであり、ま！二上記徴候は、誤静 剤を用いて予備処置することにより幾分軽減され得る（完全には無くならない） 。科学文献には、ラットにおける類似作用が時折引用されており、これらの作用 は「ラット・レージ」症候群と呼ばれることもある。この発明の主たる利点は、 この発明の用量単位が驚くほどの効果を示すため「ラット・レージ」症候群が完 全に回避され得ることである。

Ｎ−メチルグルカミンのジチオカルバメートｌｌ［体（Ｍ、Ｎ−メチルグルカミ ンジチオカルバミン酸ナトリウム）は１９８４年に合成され、化合物「シスプラ チン」（シス−ジクロロジアミン白金［１１］）の神経毒性を阻害することが示 された。さらに、ポリヒドロキシル化側鎖は、上記のジチオカルバメートによる 副作用を幾分低下させると思われる。

他の好ましいジチオカルバメートとしては、アニオンがジーｎ　−ブチルジチオ カルバメート、ジ−ｎ−プロピルジチオカルバメート、ペンタメチレンジチオカ ルバメートおよびテトラメチレン・ジチオカルバメートであるアルカリまｊ；は アルカリ土類金属塩類並びに式Ｒ，Ｒ２Ｎ−Ｃ５−５−のＲ８および／またはＲ ７がベーターヒドロキシエチルである化合物がある。総じて、この発明の方法で は非経口投与が特に好ましく、溶液（特に水溶液）の方が懸濁液よりも投与に好 都合であるため、極性溶媒（特に水性媒質）に対する溶解度が高いと、ジチオカ ルバミン酸骨髄抑制治療剤の投与は好都合になり得る。

このため、単量体ジチオカルバミン酸化合物は、２量体類縁体よりモ好ましい。

ジスルフィラムは市販されており、アルコール中毒の処置で患者を自ら課しｔ： 禁酒状態に維持するのを助けるために使用されている。しかしながら、このアル コール中毒の処置は、錠剤形態のジスルフィラムの経口投与により行なわれる。

ジスルフィラムは極性溶媒における溶解度が比較的低いが、ジエチルジチオカル バメートのモノマー性塩類およびヒドロキシ置換アルキルジチオカルバメートの モノマー性塩類は、水溶度が高く（例えば、モル量で）、アルコールにも可溶性 である。

他の非経口的投与方法、例えば筋肉内注射または腹腔内径路による導入も使用さ れ得る。しかしながら、この発明の用量単位は、静脈内経路による投与が最も効 果的である。

用量単位および形態 用量をｍｇ／ｋｇ（すなわち、体重１ｋｇ当たりのＢ数）で表現するのが薬理学 ではごく一般的であり、または多口数にわたる連続投与量を考える場合、１日当 たりのｍｇ／ｋｇで表現する。ｍｇ／ｋｇ用量単位は、所定の種類のは乳類につ いて当然一定である。しかしながら、平均有効量は、代謝速度が異なるため種間 で変化し得る。小型は乳類、例えばラットおよびマウスは、大型は乳類、例えば いぬおよびひとよりも効果的に薬剤を代謝する（薬剤を体内で他の化合物に変換 する）。全般的に、薬剤代謝速度の理論的研究は、薬剤代謝速度およびは乳類の 体表面積間における粗い逆相関関係の存在を確認する傾向を示す。次いで、主と して、ｍｇ／ｍ！で表現された用量は、体表面積とは無関係で全部の種類におい てほぼ等しい。すなわち、ひとにおける１００ｍｇ／ｒｎ’のＥＤ、、はマウス における１００ｍｇ／−でもある。ｍｇ／ｋｇをｍｇ／ｍ’に変換するため、そ の種類の一員の表面積の関数である、所望の種類Ｉ；関する定数を掛ける、すな わち、ｍｇ／ｍｇ’での用量一定数ｘ　ｍｇ／ｋｇでの用量。

ひと、いぬ、ラットおよびマウス種ｔこ関する定数は、各々３７．２０．５．２ および３０である。相対的に表現すると、ひと定数はいぬ定数のほぼ２倍であり （１，９）、ひき定数はラット定数の７倍を越え、ひと定数はマウス定数の１２ ，３倍である。シスプラチンの腎臓毒性を改善するためにマウスに投与されるＮ ａＤ　Ｄ　Ｔ　Ｃの用量単位は（７５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは＞　２００　ｍ ｇ／ｋｇ）、結局、例えば３．ＯＸ　２００ｍｇ／ｋｇ＝　６００ｍｇ／ｍ２、 さらに一般的には３．０×３００ｍｇ／ｋｇ”　９００ｍｇ／ｍ”となる。次い で、理論的には、典型的なひと用量単位は、９００ｍｇ／ｍ’：３７−約２５ｍ ｇ／ｋｇである。言い替えれば、理論的に、ｍｇ／ｋｇでのひと用量は、マウス 用量の約１２分の１であることが予測される。しかしながら、実際的には、Ｎａ Ｄ　Ｄ　Ｔ　Ｃのひと用量は、マウス用量の６分の１〜３分の１、例えば４分の １にもなり得ることが見出された。それ故、例えば、マウスにおける３０ｍｇ／ ｋｇの用量は、寅際はひとの場合の５〜１０ｍｇ／ｋｇ、最も典型的には７　、 ５　ｍｇ／　ｋｇ＋’：相当する。この発明では、０．００３＋ｎｇ／ｍ２の用 量で、ひとにおいである程度有用な効果が得られ、マウスではある程度の骨髄回 復効果を示すことが観察された。例えば、信頼できる有効用量範囲は、種類とは 関係無く、約０．０３〜約１４５ｍｇ／ｍ”、さらに好ましくはｌ　３０＋ｎｇ ／ｍ”である。全種類について、１３０ｍｇ／ｍ”の用量が必要を満たすに充分 であり、不ｎ要に大きい場合もあり得る。適当な用量単位は、９０ＩＩＩｇ／が 未満、または所望ならば７５ｍｇ／ｍ”未満であり得る。ひとの場合、ｍｇ／ｋ ｇでの用量単位は、マウスに関するｍｇ／ｋｇ用量を約４で（１２，３の代わり に）割ることにより最もよく計算される。従って、マウスにおける例えば３０ｍ ｇ／ｋｇの用量は、ひとにおける約７．５ｍｇ／ｋｇとなり、マウスに関するｌ ｏ＋ｎｇ／ｋｇの用量はひとにおける約２　、５　ｍｇ／ｋｇｌニー相当する。

骨１ｈｌ　抑制の処置において、この発明のジチオカルバミック治療剤は、かな り典型的なＳ字状対数用量応答曲線を呈する゛が、用量および応答軸に関するこ の曲線の配置は驚くべきものである。典型的な対数用量応答曲線を得るため、試 験動物において生存している幹細胞のパーセントを縦座標により示し、用量を横 座標に関してｌＯ倍間隔（ｌｏｇ　＋。用量単位）で示す。作成されたプロット は、最適な骨髄防御が、体重１ｋｇ当たり５０＋ｎｇよりかなり低い用量、さら に３０＋ａｇ／ｋｇよりかなり低い用量でも得られることを示す。非常に低い用 量（サブマイクログラム／ｋｇレベルより上であるが、それでも３μｇ／ｋｇ未 満、例えば約１μｇ／ｋｇ）で応答が観察され得、マウスでさえ、３μｇ／ｋｇ 程度の低い用量、すなわち０．００３ｍｇ／ｋｇで顕著な防御が達成されると思 われる。３０　ｍｇ／ｋｇ（マウスでさえ）に近い用量は、この発明の方法の趣 旨において不必要に高いと思われ、それ故、この発明の用量単位にとって好まし い範囲は、は乳類の体重１ｋｇ当たり約０．００３−１０ｍｇである。約０．０ １−約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば０．０３−３ｍｇ／ｋｇの場合に優れた結果が得 られる。Ｓ字状曲線の「平ｔ；い」部分には、０．３ｍｇ／ｋｇ程度の低用量で 到達すると思われるが、望ましくはこの用量レベルを越えることにより、確実に 高い効力を得ることができる。ひと用量にとって特に好ましい上限は、約１０ｍ ｇ／ｋｇ、さらに好ましくは３．０またはさらに２．５ｍｇ／ｋｇであると思わ れる。

この発明の用量単位の特に好ましい形態は、ジチオカルバミン酸塩を水性媒質（ 例、規定食塩水）に溶かし、処置される動物の体重１キログラム当たり０．００ １〜３０ｍｇの範囲における用量単位を測定し、慣用的静脈内投与技術での使用 に適合した瓶（例、ガラスまたはプラスチック瓶）に測定されｌ；用量単位を密 封することにより得られる。別法として、用量単位は慣用的プラスチック製静脈 内点滴袋中で溶解され得、その場合、用量単位は、一般的静脈内投与用流体の水 溶液により希釈され得る。（上記流体に関して、ジチオカルバミック化合物の潜 在的なキレートまたは錯体形成作用を考慮に入れるべきである）。

別法として、ジチオカルバミック化合物の用量単位は、標準的な固体の医薬的に 許容し得るエキステンダー（例、マンニトール）により増量され、後で静脈内投 与に適した流体に溶解される用量単位形態にパッケージ化され得る。アジュバン ト、賦形剤などが含まれ得る。

この発明の特に好ましい用量単位は、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇの割合でジ チオカルバミック骨０抑制治療剤を含み、前記治療剤は水性媒質を含む液体の医 薬的に許容し得る担体に溶解される。

他の退出な医薬的に許容し得る担体も当分野の熟練者には容易に想到するはずで ある。

用量単位がｍｇ／ｍ’で示されている場合、有用な範囲は、先に説明した通り、 例えば０．０３−９０ｍｇ／ｉ”、さらに好ましくは約１−７５ｍｇ／ｍ２であ る。

以下、非限定的実施例において、この発明の原理および実施態様を説明する。

実施例 これらの実施例にはＢＤＦ、マウスを使用しｔ；。薬剤は全て、尾の静脈におけ る静脈内（ｉｖ）注射により投与し、抗癌剤投与の３時間後、ジエチルジチオカ ルバミン酸ナトリウム（Ｎａ　ＤＤＴＣ）を様々な用量で投与した。抗癌剤処置 の２４時間後（Ｎａ　ＤＤＴＣ投与の２１時間後）に骨髄細胞を採取した。ひ臓 コロニー（ＣＦＵ−３）検定を用いて、幹細胞に対する毒性を評価した。インビ トロ・クロノジェニック（ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃＸｃ　Ｆ　Ｕ　−Ｇ　Ｍ）検定 を用いて、か粒球始原細胞に対する毒性を評価しＩ；。対照試験を実施するため 、マウスを無作為に各々４動物から成る４つの群に分けた。１群を非処置対照と して用い、１群にはＮａ　ＤＤＴＣのみを与えＣｒＤ　Ｄ　Ｔ　Ｃ群」）、１群 には抗癌剤のみを与え（「薬剤単独群」）、そして１群には抗癌剤、次いで３時 間後にＮａ　ＤＤＴＣを与えた（「薬剤およびＤＤＴＣ群」）。

薬剤処置の２４時間後、マウスを頚部脱臼により殺し、大腿骨を除去し、骨髄細 胞を骨から流し落とし、数えた。ＣＦＵ−３検定の場合、骨髄致死量の放射能を 照射されたばかりの受容体マウスに対し、尾の静脈から５−１５ＸＩＯ’細胞を 注射した。ドナー骨髄細胞注射の１２日後、マウスを頚部脱臼により殺し、ひ臓 を摘出し、ひ臓表面で生長している細胞のコロニーを数えた。データを正規化す ることにより、注射された細胞１０１当た゛りの形成されたコロニー数を表し、 対照群と比較した、形成されたコロニーのパーセントとして記録する。ＣＦＵ− ＧＭ検定の場合、処置群からの２−４Ｘ　１０４個の骨髄細胞をソフト寒天上に 置いた。７日間インキュベーション後、少なくとも５０個の細胞を含むコロニー を数えた。代表的実験では、コロニーを除去し、細胞タイプを決定した。対照群 と比較した、形成されたコロニーのパーセントとしてデータを記録する。

ＤＤＴＣ群および非処置群から得られたデータは、Ｎａ　ＤＤＴＣが健康な骨髄 に対しては殆どまたは全く刺激作用をもＩ；ないことを確認する傾向を示してい る。すなわち、正常マウス骨髄における幹細胞およびか粒球前駆体集団に対する Ｎａ　ＤＤＴＣの影響は、無視してよい程度である。ＤＤＴＣ群に関するコロニ ー数は、全ての場合でＣＦＵ−３およびＣＦＵ−ＧＭの両方に関して非処置群値 の１０％以内であった。薬剤単独群の場合、ＣＦＵ−５およびＣＦＵ−ＧＭの両 方に対する用量依存性毒性は、カルムスチン（ＢＣＮＵ）およびアドリアマイシ ンについて観察された。薬剤およびＤＤＴＣ群では、ＮａＤＤＴＣは、試験され たＢＣＮＵの全用量で幹細胞およびか粒球始原細胞の両方にＢＣＮＵ毒性に対す る顕著な防御作用を示した。アドリアマイシンの場合、全用量で毒性の低下が観 察されたが、試験された最高アドリアマイシン用量ではそれほど低下しなかった 。

マイトマイシン（抗生物質型の抗癌剤）の場合、この薬剤の骨髄抑制作用を阻止 または除去するのは特に困難であるため、状況はより複雑である。

薬剤＋ＤＤＴＣ群にカルポプラチン（白金含有抗癌剤）、次いで様々な用量のＤ ＤＴＣを与えると、非常に良い結果が得られた。薬剤単独群にカルポプラチンを 与えた結果、マウスは対照群レベルの８％にすぎないＣＦＵ−５値を示した。Ｃ ＦＵ−Ｓ検定が対照（非処置）群の値の４０％またはそれ以上を示す場合、これ は、骨髄抑制に対する非常に優れた活性の指標であると考えられる。薬剤＋ＤＤ ＴＣ群における４０％レベルは、３０ｍｇ／ｋｇの静脈内用量のＮａＤＤＴＣで 達成されたが、対照ＣＦＵ−Ｓレベルの４０％は、僅か０゜３ｍｇ／ｋｇの静脈 内用量のＮａ　ＤＤＴＣによって達成された。３０％レベルは、薬剤＋ＤＤＴＣ 群では０．０３ｍｇ／ｋｇ用量により達成され、２０％レベルは０．００３ｍｇ ／ｋｇのＮａ　ＤＤＴＣにより達成されｌ；。用量を減らした場合のみ、さらに 別の等級のマグニチュードにより、対照の％レベルは薬剤単独群において観察さ れたレベル程度に低下した（対照レベルの８％）。

この表に要約された寅験（上記方法により行なわれた）において、Ｎａ　ＤＤＴ Ｃの用量は体重１ｋｇ当ｔ；す３００ｍｇであり、これは多すぎると思われるが 、白金不含有薬剤による損傷と比べて、ジチオカルバメートの効力を説明してい る。Ａ部（薬剤−ＢＣＮＵ）および８部（薬剤−アドリアマイシン）の両方にお いて、データはｒＤＤＴＣ群」、「薬剤単独群」および「薬剤およびＤＤＴＣ群 」について与えられている。これらのデータを下表に示す。

表 薬剤誘発性骨髄抑制な対するＮａ　ＤＤＴＣの効果Ａ部 薬剤・ＢＣＮＬＩ −−ＤＤＴＣ１０２±　２１０２±１ ２０　薬剤単独　４７土６　８３±２ ２０　薬剤＋ＤＤＴＣ５７±１２９９±２−−　ＤＤＴＣ）０１　１０３土２ ４０　薬剤単独　３０±１　４３±２ ４０　薬剤＋ＤＤＴＣ５０±１　８３±２−−　ＤＤＴＣ１１４１０２±２ ６５　薬剤単独　１９土２　２５±１ ６５　薬剤十ＤＤ’ＴＣ４９±］Ｊ　６４土ＩＢ部 薬剤：アドリアマイシン −−ＤＤＴＣ１０６１０２ １８薬剤単独　（２１）　３７±６ １８　薬剤十〇ＤＴＣ（４２）　４５±２−−　ＤＤＴＣ−１０２±１ ２４　薬剤単独　４０３２±１ ２４　薬剤＋ＤＤＴＣ５２４２±２ −−　ＤＤＴＣ−１０２ ３２薬剤単独　２９±８　２０±５ ３２　薬剤＋ＤＤＴＣ５７±７　２８±２さらに別の実施例では、長期骨髄培養 物をＤＤＴＣにより１時間処理した。ＤＤＴＣ溶液を注いで捨て、新鮮な薬剤不 含有培地を細胞上に置いた。様々な間隔（８，２４，４８，７２および９６時間 ）で、培地を細胞から除去し、修飾か粒球／マクロファージ始原細胞（Ｇ／Ｍ細 胞）検定で使用することにより、こうして除去された培地がコロニー刺激活性（ ＣＳ　Ａ）をもつか否かをを測定した。この修飾検定では、成長因子を生じさせ るヨウシュヤマゴボウ・ミトゲン刺激性ひ臓細胞条件培地（ＰＭ−３部Ｍ）は全 く存在しなかっｔ；ため、成長因子の供給源は、あるとしても、ＤＤＴＣ処置（ ただし、ＤＤＴＣ不含有）細胞から得られた培地だけあった。骨髄細胞培養物の ＤＤＴＣ処置を使用しない場合でも、ＣＳＡはある程度観察され得る。すなわち 、培地を変えるだけで、細胞による低レベルのＣ３Ａの産生が誘発される。しか しながら、ＤＤＴＣ処理は、培地単独の変化と比べて３の係数によりＣ３Ａを高 めることが見出された。この結果は、ＤＤＴＣ処置の結果、Ｇ／Ｍ細胞において １種またはそれ以上の成長因子が生産されることを立証している。所望ならば、 この成長因子（複数も可）は、単離され、この発明の方法におけるＤＤＴＣの代 わりに利用され得る。

長期骨髄培養物は、Ｊ、Ｓ、グリーンバーガー、「ロング・ターム・ヘマトボイ エティック・カルチャーズＪ、Ｄ、Ｗ、ゴルデ（編集）、「ヘマトボイエンスｊ 中、チャーチル・リビングストーン、ニューヨーク、ニューヨーク、１９８４． ２０３−２１７頁の方法により確立され得る。

さらに別の実験において、ＤＤＴＣのＣ３Ａは、骨髄抑制剤（カルポプラチン） による予備処理により減少するが、除去されないことが見出された。

すなわち、１種またはそれ以上の成長因子（こ（れら）の因子は６７Ｍ細胞Ｃ５ Ａを有する）の生成は、インビトロで確立された骨髄培養物の培養培地に１式Ｒ ’Ｒ２Ｎ（Ｃ５）ＳＭで示される上記化合物の成長因子刺激量を加え（培養培地 １リツトル当たり好ましくは約０．１〜約１．０ミリモル、例えば約０．２〜０ ．５ミリモルの化合物）、こうして処置された培養物から化合物を分離し、こう して処置された培養物に新鮮な培養培地を加え、成長因子（複数も可）の濃度を 数時間（ただし、９６時間未満）新鮮な培地中で高めることによりインビトロで 立証され得る。成長因子（複数も可）は処置培養物による消費または利用に連続 的に付されるため、この濃度は８〜７２時間（例、２４−４８時間）でピークに 達し、次いで下降すると思われる。

次いで、成長因子（複数も可）は、処置された骨髄培養物から新鮮な培地を除去 することにより単離され得る。

従って、この発明は、非常に低用量の、式Ｒ’Ｒ”Ｎ（ＣＳ）ＳＭで示される上 記ジチオカルバミック化合物の１種またはそれ以上の投与による、１種またはそ れ以上の骨髄細胞成長因子（６７Ｍ細胞Ｃ５Ａを有する）のインビボまたはイン ビトロ刺激を意図している。

それ故、この発明は、インターロイキン因子および、生産手段として遺伝子工学 処理による生物の使用に頼らなければ大量には合成され難い他の高度複合細胞生 長刺激因子の投与に対して驚くほど単純な代替法を提供し得る。この目的におけ るＤＤＴＣまたは式ＲＩＲ２Ｎ（Ｃ５）ＳＭで示される他のジチオカルバミック 化合物の投与は、これらの化合物が低毒性あり、通常の医薬的に許容し得る媒質 、例えば水に溶は易く、非常に低用量でＧ／Ｍ細胞Ｃ３Ａの刺激に対して極めて 効力が強い点から特に魅力的である。この発明の用量単位は、時間拡散的用途と は反対の時間集中的、すなわち本質的に単一用量用途に理念的である。すなわち 、非分割または５または１０未満の増加量に分割された全用量は、非常に短時間 、例えば２４時間未満および好ましくは８時間未満（最も好ましくは１回の注射 により）で、好ましくは骨髄傷害（例えば、放射線療法または抗癌剤処置）に対 する反応においてのみ、かつその２４時間以内（好ましくは８時間以内）に投与 される。この時間集中的用途は、連続服用とは容易に区別され得、化合物が数日 間または数週間にわたって反復投与されるか、または典型的には小用量を伴う他 の時間拡散的方法で投与される長期投与体制とは特に異なる。

補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） １、特許出願の表示 ＰＣＴ／ＵＳ　８９１０３９４１ 、発明の名称 骨髄損傷の処置およびそのだめの用量単位３、特許出願人 名称　ユニバージティー・オブ・ロチニスター４、代理人 住所　〒５４０　大阪府大阪市中央区域見２丁目１番６１号（１）　補正書の翻 訳文　ｌ　通 請求の範囲 （１）生きているは乳類に投与された細胞毒性白金不含有抗新生物剤の毒性副作 用から生じるｔ髄抑制の処置方法であって、式［式中、Ｒ１およびＲ２は、同一 または異なる低級脂肪族またはシクロ脂肪族またはへテロシクロ脂肪族基であり 、前記基は非置換まｊ；はヒドロキシ基により置換されているか、まＩ；はＲ１ およびＲ２のうちの一方（ただし、両方ではない）はＨであるか、またはＲ１お よびＲ′はＮ１１ｒ子と一緒になって、脂肪族または環酸素もしくは第２環窒素 により中断された脂肪族である５−または６−員Ｎ−複素環であり得、 Ｍは、ＨまＩ；は１当量の医薬的１こ許容し得るカチオンであり、この場合、分 子の残りは負に荷電しているか、または同様に定義される）である］ で示される化合物を、は乳類の体重１キログラム当たり約０．００１〜３０ｍｇ の割合では乳類に投与することを含む方法。

（２）生きているは乳類に、は乳類の体重１ｋｇ当たり約０．００３〜１０ｍｇ の割合で式 （式中、Ｍは医薬的に許容し得るカチオンであり、Ｒ１およびＲ２は、低級脂肪 族まｔ；はヒドロキシ置換低級脂肪族基である） で示される化合物を投与することを含む、請求項１記載の方法。

（３）Ｒ’およびＲ２が両方ともＣ，−Ｃ，アルキルであるか、またはＲ１がｃ 　ｌ−ｃ　＆アルキルであり、Ｒ２がポリヒドロキシ置換Ｃ１−アルキル基であ る、請求項２記載の方法。

（４）Ｒ’およびＲ２がエチルであり、〜１がアルカリ金属カチオンである、請 求項２記載の方法。

（５）水性媒質に溶かした用量を、生きているは乳類に静脈内投与する、請求項 ２または４記載の方法。

（６）体！１ｋｇ当たり０．００３−１０ｍｇの用量の化合物を水性媒質ｌ１溶 かし、生きているは乳類に非経口投与する、請求項５記載の方法。

（７）用量が体重１ｋｇ当たり約０．０３−３ｍｇである、請求項６記載の方法 。

（８）抗新生物剤がストレプトマイシス−産生抗生物質誘導体である、請求項１ または２記載の方法。

（９）ストレプトマイシス−産生抗生物質誘導体がアドリアマイシンである、請 求項８記載の方法。

（１０）抗新生物剤が代謝きっ抗物質である、請求項１または２記載の方法。

（１１）代謝きっ抗物質が５−フルオロウラシルである、請求項９記載の方法。

（１２）抗新生物剤がアルカロイドである、請求項１または２記載の方法。

（１３）抗新生物剤がＤＮＡ合成阻害剤である、請求項１または２記載の方法。

（１４）抗新生物剤がアルキル化剤である、請求項１または２記載の方法。

（１５）抗新生物剤が２−クロロエチル基を含む、請求項１または２記載の方法 。

（１６）抗新生物剤がニトロソ尿素である、請求項１５記載の方法。

（１７）抗新生物剤がカルムスチンである、請求項１５記載の方法。

（１８）抗新生物剤がビス（２−クロロエチル）アミノ基を含む、請求項１また は２記載の方法。

（式中、Ｍ（＋）は医薬的に許容し得るカチオンであり、Ｒ１およびＲ２は同一 または異なって、低級アルキルまたはヒドロキシ基により置換された低級アルキ ルである）で示される化合物の細胞毒性白金不含有抗新生物剤と連係させたは乳 類への非経口投与用単位用量であって、ほ乳類の体重ＩＪ当を二り約０００３〜 約３０ｍｇの化合物、および医薬的に許容し得る担体を含む用量単位。

（２０）体重１ｋｇ当たり約０．Ｏ１〜１〜約１ｇの割合で化合物を含み、前記 化合物を、水性媒質を含む液体の医薬的に許容し得る担体に溶かした、請求項１ ９記載の単位用量。

（２１）担体に溶かしｌ；化合物を体重１ｋｇ当たり約０，０３〜約３ｍｇの割 合で含む、請求項２０記載の単位用量。

国際調査報告

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. （１）生きているほ乳類の骨髄の造血機能に対する損傷の処置方法であって、 ほ乳類に、ほ乳類の体重１ｋｇ当たり約０．００１〜３０ｍｇの割合で、式▲数 式、化学式、表等があります▼［式中、Ｒ１およびＲ２は、同一または異なる、 非置換またはヒドロキシルにより置換された、低級脂肪族またはシクロ脂肪族ま たはヘテロシクロ脂肪族基であるか、またはＲ１およびＲ２のうちの一方（ただ し、両方ではない）はＨであるか、またはＲ１およびＲ２はＮ原子と一緒になっ て、脂肪族または環酸素もしくは第２環窒素により中断された脂肪族である５− または６−員Ｎ−複数環であり得、Ｍは、Ｈまたは１当量の医薬的に許容し得る カチオンであり、この場合、分子の残りは負に荷電しているか、またはＭは▲数 式、化学式、表等があります▼（式中、Ｒ３およびＲ４は、Ｒ１およびＲ２と同 様に定義される）である］ で示される化合物を投与することを含む方法。
2. （２）生きているほ乳類に投与された薬剤の毒性副作用から生じる骨髄抑制の処 置方法であって、 生きているほ乳類に、ほ乳類の体重１ｋｇ当たり約０．００３〜１０ｍｇの割合 で式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｍは医薬的に許容し得るカチオンであり、Ｒ１およびＲ２は、低級脂肪 族またはヒドロキシ置換低級脂肪族基である） で示される化合物を投与することを含む方法。
3. （３）Ｒ１およびＲ２が両方ともＣ１−Ｃ６アルキルであるか、またはＲ１がＣ １−Ｃ６アルキルであり、Ｒ２がポリヒドロキシ置換Ｃ６−アルキル基である、 請求項２記載の方法。
4. （４）Ｒ１およびＲ２がエチルであり、Ｍがアルカリ金属カチオンである、請求 項２記載の方法。
5. （５）体重１ｋｇ当たり０．００３−１０ｍｇの用量の化合物を水性媒質に溶か し、生きているほ乳類に非経口投与する、請求項４記載の方法。
6. （６）水性媒質に溶かした用量を、生きているほ乳類に静脈内投与する、請求項 ５記載の方法。
7. （７）毒性副作用が、ほ乳類に投与された抗新生物剤に起因する、請求項２記載 の方法。
8. （８）体重１ｋｇ当たり０．００３−１０ｍｇの用量の化合物を水性媒質に溶か し、ほ乳類に非経口投与する、請求項２記載の方法。
9. （９）用量が体重１ｋｇ当たり約０．０３−３ｍｇである、請求項８記載の方法 。
10. （１０） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｍ（＋）は医薬的に許容し得るカチオンであり、Ｒ１およびＲ２は同一 または異なって、低級アルキルまたはヒドロキシ基により置換された低級アルキ ルである）で示される化合物のほ乳類への非経口投与用単位用量であって、ほ乳 類の体重１ｋｇ当たり約０．００３〜約３０ｍｇの化合物、および医薬的に許容 し得る担体を含む用量単位。
11. （１１）体重１ｋｇ当たり約０．０１〜約１０ｍｇの割合で化合物を含み、前記 化合物を、水性媒質を含む液体の医薬的に許容し得る担体に溶かした、請求項１ ０記載の単位用量。
12. （１２）担体に溶かした化合物を体重１ｋｇ当たり約０．０３〜約３ｍｇの割合 で含む、請求項１１記載の単位用量。
13. （１３）生きているほ乳類の骨髄の造血機能に対する損傷の処置、または生きて いるほ乳類に投与された薬剤の毒性副作用から生じる骨髄抑制の処置、またはか 粒球／マクロファージ始原細胞コロニー刺激活性を有する１種もしくはそれ以上 の生長因子のインビボ刺激を目的とする、請求項１０記載の単位用量。