JPH055477B2 - - Google Patents
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- JPH055477B2 JPH055477B2 JP23173985A JP23173985A JPH055477B2 JP H055477 B2 JPH055477 B2 JP H055477B2 JP 23173985 A JP23173985 A JP 23173985A JP 23173985 A JP23173985 A JP 23173985A JP H055477 B2 JPH055477 B2 JP H055477B2
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
（産業上の利用分野）
Ｌ−グルタミン酸は調味料として大きな用途が
あるほか、医薬原料、界面活性剤原料等に巾広い
用途がある。本発明はＬ−グルタミン酸を発酵法
によつて製造する方法を改良するものである。 （従来の技術） Ｌ−グルタミン酸は大量生産されているアミノ
酸であり、製造方法に種々の改良が行なわれてい
る。 （本発明が解決しようとする問題点） 本発明が解決しようとする問題点は工業的に安
価なＬ−グルタミン酸を製造する方法を開発する
ことにある。 （問題点を解決するための手段） 本発明者らは発酵法によるＬ−グルタミン酸の
製造法を改良すべく鋭意研究した結果、ブレビバ
クテリウム属又はコリネバクテリウム属のＬ−グ
ルタミン酸生産菌より誘導アスパラギン酸アナロ
グ又はアスパラギンアナログに耐性を有する変異
株の中からＬ−グルタミン酸の生産能が優れた菌
株を分離することに成功し、本発明を完成するに
到つた。 本発明でいうアスパラギン酸アナログとはブレ
ビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属に属
する微生物の増殖を抑制するがこの抑制がアスパ
ラギン酸が共存することにより部分的又は全面的
に解除されるようなものをいう。例えばフルオロ
アスパラギン酸、β−アスパラギン酸ヒドラジ
ド、アスパラギン酸ヒドロキサメート、α−メチ
ルアスパラギン酸、β−メチルアスパラギン酸、
システインスルフイン酸、ジフルオロコハク酸、
ハダシジン等がある。 上記アスパラギン酸アナログによるブレビバク
テリウム属又はコリネバクテリウム属に属する微
生物の生育阻害はアスパラギンを共存させること
によつても部分的又は全面的に解除される。 本発明の要旨はブレビバクテリウム属またはコ
リネバクテリウム属に属し、アスパラギン酸アナ
ログ又はアスパラギンアナログに耐性を有し、か
つＬ−グルタミン酸生成能を有する変異株を培養
して、培養液中にＬ−グルタミン酸を生成蓄積さ
せて、これを採取することを特徴とする発酵法に
よるＬ−グルタミン酸の製造方法である。以下本
発明をさらに詳細に説明する。 本発明に使用するアスパラギン酸アナログに耐
性を有する菌株は、例えば以下の菌株がある。 ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム AJ12247（FERM−P8364，FERM BP−1167） フルオロアスパラギン酸耐性 ブレビバクテリウム・フラバム AJ12246（FERM−P8363） フルオロアスパラギン酸耐性 コリネバクテリウム・グルタミクム AJ12248（FERM−P8365） フルオロアスパラギン酸耐性 これ等の菌株は、それぞれブレビバクテリウ
ム・ラクトフエルメンタムATCC13869、ブレビ
バクテリウム・フラバムATCC14067、コリネバ
クテリウム・グルタミクムATCC13032を親株と
して変異誘導したものである。 その他例えばブレビバクテリウム・デイバリカ
タム（Brevibacterium divaricatum）
ATCC14020、ブレビバクテリウム・サツカロリ
テイカム（Brevibacterium saccharoliticum）
ATCC14066、及びコリネバクテリウム・アセト
アシドフイラム（Corynebacterrium
acetoacidophilum）ATCC13870等を親株として
用いても同様に変異株をつくることができる。 上記変異株の変異誘導方法としては、紫外線照
射、Ｘ線照射、放射線照射、変異誘起剤処理等の
通常の方法が用いられ、例えば250μｇ／mlのＮ
−ニトロ−N′−メチル−Ｎ−ニトロソグアニジ
ンにより30℃で20分間処理する方法等がある。 上記例示の菌株のフルオロアスパラギン酸耐性
に関する実験は以下に述べる方法によつて行つ
た。 グルコース５ｇ／Ｌ、尿素1.5ｇ／Ｌ、硫安1.5
ｇ／Ｌ，KH2PO4３ｇ／Ｌ，K2HPO4１ｇ／Ｌ，
MgSO4・7H2O0.1ｇ／Ｌ，CaCl2・2H2O1.0mg／
Ｌ、サイアミン塩酸塩100μｇ／Ｌ、ビオチン30μ
ｇ／Ｌ，Na2B4O7・10H2O4.4mg／Ｌ，FeCl3・
6H2O48.5mg／Ｌ，CuSO4・5H2O19.5mg／Ｌ，
（NH4）6Mo7O24・4H2O1.85mg／Ｌ，ZnSO4・7H2
O440mg／Ｌ及びMnCl2・4H2O3.6mg／Ｌの培地に
第１表に示した量のフルオロアスパラギン酸を添
加し、第１表に示した菌株を接種し、温度31.5℃
で96時間振盪培養を行つた。 フルオロアスパラギン酸無添加培地での生育を
100とした時の相対生育度を第１表に示した。
あるほか、医薬原料、界面活性剤原料等に巾広い
用途がある。本発明はＬ−グルタミン酸を発酵法
によつて製造する方法を改良するものである。 （従来の技術） Ｌ−グルタミン酸は大量生産されているアミノ
酸であり、製造方法に種々の改良が行なわれてい
る。 （本発明が解決しようとする問題点） 本発明が解決しようとする問題点は工業的に安
価なＬ−グルタミン酸を製造する方法を開発する
ことにある。 （問題点を解決するための手段） 本発明者らは発酵法によるＬ−グルタミン酸の
製造法を改良すべく鋭意研究した結果、ブレビバ
クテリウム属又はコリネバクテリウム属のＬ−グ
ルタミン酸生産菌より誘導アスパラギン酸アナロ
グ又はアスパラギンアナログに耐性を有する変異
株の中からＬ−グルタミン酸の生産能が優れた菌
株を分離することに成功し、本発明を完成するに
到つた。 本発明でいうアスパラギン酸アナログとはブレ
ビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属に属
する微生物の増殖を抑制するがこの抑制がアスパ
ラギン酸が共存することにより部分的又は全面的
に解除されるようなものをいう。例えばフルオロ
アスパラギン酸、β−アスパラギン酸ヒドラジ
ド、アスパラギン酸ヒドロキサメート、α−メチ
ルアスパラギン酸、β−メチルアスパラギン酸、
システインスルフイン酸、ジフルオロコハク酸、
ハダシジン等がある。 上記アスパラギン酸アナログによるブレビバク
テリウム属又はコリネバクテリウム属に属する微
生物の生育阻害はアスパラギンを共存させること
によつても部分的又は全面的に解除される。 本発明の要旨はブレビバクテリウム属またはコ
リネバクテリウム属に属し、アスパラギン酸アナ
ログ又はアスパラギンアナログに耐性を有し、か
つＬ−グルタミン酸生成能を有する変異株を培養
して、培養液中にＬ−グルタミン酸を生成蓄積さ
せて、これを採取することを特徴とする発酵法に
よるＬ−グルタミン酸の製造方法である。以下本
発明をさらに詳細に説明する。 本発明に使用するアスパラギン酸アナログに耐
性を有する菌株は、例えば以下の菌株がある。 ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム AJ12247（FERM−P8364，FERM BP−1167） フルオロアスパラギン酸耐性 ブレビバクテリウム・フラバム AJ12246（FERM−P8363） フルオロアスパラギン酸耐性 コリネバクテリウム・グルタミクム AJ12248（FERM−P8365） フルオロアスパラギン酸耐性 これ等の菌株は、それぞれブレビバクテリウ
ム・ラクトフエルメンタムATCC13869、ブレビ
バクテリウム・フラバムATCC14067、コリネバ
クテリウム・グルタミクムATCC13032を親株と
して変異誘導したものである。 その他例えばブレビバクテリウム・デイバリカ
タム（Brevibacterium divaricatum）
ATCC14020、ブレビバクテリウム・サツカロリ
テイカム（Brevibacterium saccharoliticum）
ATCC14066、及びコリネバクテリウム・アセト
アシドフイラム（Corynebacterrium
acetoacidophilum）ATCC13870等を親株として
用いても同様に変異株をつくることができる。 上記変異株の変異誘導方法としては、紫外線照
射、Ｘ線照射、放射線照射、変異誘起剤処理等の
通常の方法が用いられ、例えば250μｇ／mlのＮ
−ニトロ−N′−メチル−Ｎ−ニトロソグアニジ
ンにより30℃で20分間処理する方法等がある。 上記例示の菌株のフルオロアスパラギン酸耐性
に関する実験は以下に述べる方法によつて行つ
た。 グルコース５ｇ／Ｌ、尿素1.5ｇ／Ｌ、硫安1.5
ｇ／Ｌ，KH2PO4３ｇ／Ｌ，K2HPO4１ｇ／Ｌ，
MgSO4・7H2O0.1ｇ／Ｌ，CaCl2・2H2O1.0mg／
Ｌ、サイアミン塩酸塩100μｇ／Ｌ、ビオチン30μ
ｇ／Ｌ，Na2B4O7・10H2O4.4mg／Ｌ，FeCl3・
6H2O48.5mg／Ｌ，CuSO4・5H2O19.5mg／Ｌ，
（NH4）6Mo7O24・4H2O1.85mg／Ｌ，ZnSO4・7H2
O440mg／Ｌ及びMnCl2・4H2O3.6mg／Ｌの培地に
第１表に示した量のフルオロアスパラギン酸を添
加し、第１表に示した菌株を接種し、温度31.5℃
で96時間振盪培養を行つた。 フルオロアスパラギン酸無添加培地での生育を
100とした時の相対生育度を第１表に示した。
【表】
上記の本発明のアスパラギン酸アナログ又はア
スパラギンアナログに耐性を有する菌株を用いて
Ｌ−グルタミン酸を生成蓄積させるにはＬ−グル
タミン酸発酵に用いられる常法を用いて行なえば
よい。 すなわち、使用する培地としては、通常の炭素
源、窒素源、無機イオンその他の栄養素の含有す
る通常の培地が用いられる。炭素源としては例え
ばサトウキビ、甜菜からの糖汁あるいは廃糖蜜、
澱粉、加水分解物等の糖質原料等または酢酸等の
有機酸等を用いる。 窒素源としては通常のＬ−グルタミン酸発酵に
用いられる例えばアンモニウム塩、アンモニア
水、尿素等が用いられ、その他リン酸イオン、マ
グネシウムイオン等の無機イオンが必要に応じて
適宜使用される。ビオチンに関してはビオチン又
はビオチン活性物質が生育の適量以下の制限量含
有する培地が用いられ、廃糖蜜等のビオチン過剰
原料を炭素源として使用するときはペニシリン
Ｇ，Ｆ，Ｋ，Ｏ，Ｖ，Ｘ等のペニシリン類あるい
はシユークロースモノパルミテート、ポリオキシ
エチレンソルビタン−モノパルミテート、パルミ
チン酸等の高級脂肪酸又はその誘導体よりなる界
面活性剤をビオチン抑制物質として添加する等の
常法で行なう。培養条件についても、温度30〜40
℃，PH６〜８の範囲内で好気的条件で実施する
等、常法によつて実施する。 以下本発明のフルオロアスパラギン酸に耐性を
有する変異株を用いた実施例を次に示す。 実施例 １ グルコース36mg／ml、尿素２mg／ml，KH2PO4
１mg／ml，MgSO4・7aq0.4mg／ml，FeSO4・7H2
O10μｇ／ml，MnSO4・4H2O8μｇ／ml、大豆蛋
白酸加水分解物（「味液」）5μｇ／ml、サイアミ
ン塩酸塩100μｇ／、ビオチン2.5μｇ／を含有
する培地を調製しその20mlずつを500ml容の振盪
フラスコに入れ115℃で10分間加熱殺菌した。こ
の培地に次に示す菌株を接種し往復振盪により
31.5℃で培養を行つた。培養中、培養液をPH6.5
ないし8.0に保つように450mg／mlの濃度の尿素溶
液を少量ずつ添加した。30時間で発酵を終了し発
酵液中に蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖収率を
測定した。その結果を第２表に示す。
スパラギンアナログに耐性を有する菌株を用いて
Ｌ−グルタミン酸を生成蓄積させるにはＬ−グル
タミン酸発酵に用いられる常法を用いて行なえば
よい。 すなわち、使用する培地としては、通常の炭素
源、窒素源、無機イオンその他の栄養素の含有す
る通常の培地が用いられる。炭素源としては例え
ばサトウキビ、甜菜からの糖汁あるいは廃糖蜜、
澱粉、加水分解物等の糖質原料等または酢酸等の
有機酸等を用いる。 窒素源としては通常のＬ−グルタミン酸発酵に
用いられる例えばアンモニウム塩、アンモニア
水、尿素等が用いられ、その他リン酸イオン、マ
グネシウムイオン等の無機イオンが必要に応じて
適宜使用される。ビオチンに関してはビオチン又
はビオチン活性物質が生育の適量以下の制限量含
有する培地が用いられ、廃糖蜜等のビオチン過剰
原料を炭素源として使用するときはペニシリン
Ｇ，Ｆ，Ｋ，Ｏ，Ｖ，Ｘ等のペニシリン類あるい
はシユークロースモノパルミテート、ポリオキシ
エチレンソルビタン−モノパルミテート、パルミ
チン酸等の高級脂肪酸又はその誘導体よりなる界
面活性剤をビオチン抑制物質として添加する等の
常法で行なう。培養条件についても、温度30〜40
℃，PH６〜８の範囲内で好気的条件で実施する
等、常法によつて実施する。 以下本発明のフルオロアスパラギン酸に耐性を
有する変異株を用いた実施例を次に示す。 実施例 １ グルコース36mg／ml、尿素２mg／ml，KH2PO4
１mg／ml，MgSO4・7aq0.4mg／ml，FeSO4・7H2
O10μｇ／ml，MnSO4・4H2O8μｇ／ml、大豆蛋
白酸加水分解物（「味液」）5μｇ／ml、サイアミ
ン塩酸塩100μｇ／、ビオチン2.5μｇ／を含有
する培地を調製しその20mlずつを500ml容の振盪
フラスコに入れ115℃で10分間加熱殺菌した。こ
の培地に次に示す菌株を接種し往復振盪により
31.5℃で培養を行つた。培養中、培養液をPH6.5
ないし8.0に保つように450mg／mlの濃度の尿素溶
液を少量ずつ添加した。30時間で発酵を終了し発
酵液中に蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖収率を
測定した。その結果を第２表に示す。
【表】
【表】
実施例 ２
甘蔗糖蜜を、糖として100mg／ml，KH2PO4１
mg／ml，MgSO4・7H2O1mg／ml、サイアミン塩
酸塩100μｇ／の組成を有する培地を調製し
（PH7.0）、その30mlずつを500ml振盪フラスコに分
注し、加熱殺菌した。この培地に下記の菌株を接
種し、往復振盪機により31.5℃で培養を行つた。 培養中、培養液をPH6.5〜8.0に保つように400
mg／mlの濃度の尿素溶液を少量ずつ添加した。培
地の26倍希釈液の562mμの吸光度が0.30に到達し
た時にポリオキシエチレンソルビタンモノパルミ
テートを添加した。36時間で発酵を終了し、発酵
液中に蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖収率を測
定した。その結果を第３表に示す。
mg／ml，MgSO4・7H2O1mg／ml、サイアミン塩
酸塩100μｇ／の組成を有する培地を調製し
（PH7.0）、その30mlずつを500ml振盪フラスコに分
注し、加熱殺菌した。この培地に下記の菌株を接
種し、往復振盪機により31.5℃で培養を行つた。 培養中、培養液をPH6.5〜8.0に保つように400
mg／mlの濃度の尿素溶液を少量ずつ添加した。培
地の26倍希釈液の562mμの吸光度が0.30に到達し
た時にポリオキシエチレンソルビタンモノパルミ
テートを添加した。36時間で発酵を終了し、発酵
液中に蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖収率を測
定した。その結果を第３表に示す。
Claims (1)
- １ ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウ
ム属に属し、アスパラギン酸アナログ又はアスパ
ラギンアナログに耐性を有し、かつＬ−グルタミ
ン酸生産能を有する変異株を培養して、培養液中
にＬ−グルタミン酸を生成蓄積させて、これを採
取することを特徴とするＬ−グルタミン酸の製造
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23173985A JPS6291194A (ja) | 1985-10-17 | 1985-10-17 | Ｌ−グルタミン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23173985A JPS6291194A (ja) | 1985-10-17 | 1985-10-17 | Ｌ−グルタミン酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6291194A JPS6291194A (ja) | 1987-04-25 |
| JPH055477B2 true JPH055477B2 (ja) | 1993-01-22 |
Family
ID=16928278
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23173985A Granted JPS6291194A (ja) | 1985-10-17 | 1985-10-17 | Ｌ−グルタミン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6291194A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH09285294A (ja) * | 1996-04-23 | 1997-11-04 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
| JPH09294581A (ja) * | 1996-05-02 | 1997-11-18 | Ajinomoto Co Inc | 酵母及びそれを含んでなる飲食品 |
-
1985
- 1985-10-17 JP JP23173985A patent/JPS6291194A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6291194A (ja) | 1987-04-25 |
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