JPH08266295A - Ｌ−ロイシンの製造方法 - Google Patents
Ｌ−ロイシンの製造方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 コリネバクテリウム属又はエシェリヒア属に
属し、Ｌ−ロイシン生産能を有する微生物を糖類を主炭
素源として含有する培地に培養して得た菌体を糖類及び
酢酸もしくはその塩に作用させて反応液中にＬ−ロイシ
ンを生成・蓄積せしめ、これを採取することを特徴とす
るＬ−ロイシンの製造方法。 【効果】 本発明の方法によれば、微生物を用いるＬ−
ロイシンの生産においてＬ−ロイシン蓄積量を向上させ
るとともに副生アミノ酸を低減することができ、工業的
により安価にＬ−ロイシンを製造することができる。
属し、Ｌ−ロイシン生産能を有する微生物を糖類を主炭
素源として含有する培地に培養して得た菌体を糖類及び
酢酸もしくはその塩に作用させて反応液中にＬ−ロイシ
ンを生成・蓄積せしめ、これを採取することを特徴とす
るＬ−ロイシンの製造方法。 【効果】 本発明の方法によれば、微生物を用いるＬ−
ロイシンの生産においてＬ−ロイシン蓄積量を向上させ
るとともに副生アミノ酸を低減することができ、工業的
により安価にＬ−ロイシンを製造することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、Ｌ−ロイシンの製造方
法に関する。Ｌ−ロイシンは医薬品、食品、飼料添加物
等の広い分野で種々の用途を有する。
法に関する。Ｌ−ロイシンは医薬品、食品、飼料添加物
等の広い分野で種々の用途を有する。
【０００２】
【従来の技術】従来、発酵法によるＬ−ロイシンの製造
方法として、ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリ
ウム属に属し、イソロイシン、スレオニン、メチオニン
の１種又は２種以上を生育のために要求しかつＬ−ロイ
シンによるフィードバックインヒビション又は（及び）
リプレッションに抵抗性である菌株を培養する方法（特
開昭５０−１２３８７７号公報）、エシェリヒア属に属
し、β−チエニルアラニンに耐性を有する微生物を培養
する方法（特開昭５６−７２６９５公報）等が知られて
いる。しかしながら、これらの方法ではＬ−ロイシンの
蓄積量が十分でなく、また、Ｌ−バリン等のアミノ酸が
副生する等の問題があった。
方法として、ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリ
ウム属に属し、イソロイシン、スレオニン、メチオニン
の１種又は２種以上を生育のために要求しかつＬ−ロイ
シンによるフィードバックインヒビション又は（及び）
リプレッションに抵抗性である菌株を培養する方法（特
開昭５０−１２３８７７号公報）、エシェリヒア属に属
し、β−チエニルアラニンに耐性を有する微生物を培養
する方法（特開昭５６−７２６９５公報）等が知られて
いる。しかしながら、これらの方法ではＬ−ロイシンの
蓄積量が十分でなく、また、Ｌ−バリン等のアミノ酸が
副生する等の問題があった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、微生
物を用いるＬ−ロイシンの製造法において、Ｌ−ロイシ
ン蓄積量を向上させるとともに副生アミノ酸を低減する
ことにより、工業的に安価なＬ−ロイシンの製造方法を
提供することである。
物を用いるＬ−ロイシンの製造法において、Ｌ−ロイシ
ン蓄積量を向上させるとともに副生アミノ酸を低減する
ことにより、工業的に安価なＬ−ロイシンの製造方法を
提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、微生物に
よるＬ−ロイシンの生産においてＬ−ロイシンの蓄積量
向上及び副生アミノ酸の低減化を目的として鋭意検討し
た結果、従来公知のＬ−ロイシン生産菌を糖類を主炭素
源として含有する培地に培養して得た菌体を糖類及び酢
酸もしくはその塩に作用させると、糖類のみに作用させ
た場合と比べてＬ−バリンの副生が減少しＬ−ロイシン
の蓄積が著量増加することを見いだし、本発明を完成す
るに至った。すなわち、本発明は、コリネバクテリウム
属又はエシェリヒア属に属し、Ｌ−ロイシン生産能を有
する微生物を糖類を主炭素源として含有する培地に培養
して得た菌体を糖類及び酢酸もしくはその塩に作用させ
て反応液中にＬ−ロイシンを生成・蓄積せしめ、これを
採取することを特徴とするＬ−ロイシンの製造方法を提
供するものである。
よるＬ−ロイシンの生産においてＬ−ロイシンの蓄積量
向上及び副生アミノ酸の低減化を目的として鋭意検討し
た結果、従来公知のＬ−ロイシン生産菌を糖類を主炭素
源として含有する培地に培養して得た菌体を糖類及び酢
酸もしくはその塩に作用させると、糖類のみに作用させ
た場合と比べてＬ−バリンの副生が減少しＬ−ロイシン
の蓄積が著量増加することを見いだし、本発明を完成す
るに至った。すなわち、本発明は、コリネバクテリウム
属又はエシェリヒア属に属し、Ｌ−ロイシン生産能を有
する微生物を糖類を主炭素源として含有する培地に培養
して得た菌体を糖類及び酢酸もしくはその塩に作用させ
て反応液中にＬ−ロイシンを生成・蓄積せしめ、これを
採取することを特徴とするＬ−ロイシンの製造方法を提
供するものである。
【０００５】本発明に用いられる微生物としては、コリ
ネバクテリウム属又はエシェリヒア属に属し、Ｌ−ロイ
シン生産能を有する微生物であればよく、野生株、変異
株、細胞融合法あるいは遺伝子操作法その他の遺伝学的
手法で誘導される組換え株のいずれもでもよい。
ネバクテリウム属又はエシェリヒア属に属し、Ｌ−ロイ
シン生産能を有する微生物であればよく、野生株、変異
株、細胞融合法あるいは遺伝子操作法その他の遺伝学的
手法で誘導される組換え株のいずれもでもよい。
【０００６】本発明にいうコリネバクテリウム属に属す
る微生物とは、バージーズ・マニュアル・オブ・デター
ミネイティブ・バクテリオロジー（Bargey's Manual of
Determinative Bacteriology）第８版599頁（1974年）
に定義されている一群の微生物であり、好気性、グラム
陽性、非抗酸性、胞子形成能を有しない桿菌であって、
従来ブレビバクテリウム属に分類されていたが現在コリ
ネバクテリウム属細菌として統合されたブレビバクテリ
ウム属細菌（Int. J. Syst. Bacteriol., 41,255 (198
1)）を含み、またコリネバクテリウム属細菌と非常に近
縁なブレビバクテリウム属細菌及びミクロバテリウム属
細菌を含む。このようなコリネバクテリウム属細菌のう
ち、以下に述べるようなＬ−グルタミン酸生産性細菌と
して知られているものから誘導されるＬ−ロイシン生産
菌が、本発明においては最も好ましいものである。
る微生物とは、バージーズ・マニュアル・オブ・デター
ミネイティブ・バクテリオロジー（Bargey's Manual of
Determinative Bacteriology）第８版599頁（1974年）
に定義されている一群の微生物であり、好気性、グラム
陽性、非抗酸性、胞子形成能を有しない桿菌であって、
従来ブレビバクテリウム属に分類されていたが現在コリ
ネバクテリウム属細菌として統合されたブレビバクテリ
ウム属細菌（Int. J. Syst. Bacteriol., 41,255 (198
1)）を含み、またコリネバクテリウム属細菌と非常に近
縁なブレビバクテリウム属細菌及びミクロバテリウム属
細菌を含む。このようなコリネバクテリウム属細菌のう
ち、以下に述べるようなＬ−グルタミン酸生産性細菌と
して知られているものから誘導されるＬ−ロイシン生産
菌が、本発明においては最も好ましいものである。
【０００７】コリネバクテリウム・アセトアシドフィラ
ム コリネバクテリウム・アセトグルタミカム コリネバクテリウム・グルタミカム コリネバクテリウム・リリウム（コリネバクテリウム・
グルタミカム） コリネバクテリウム・メラセコーラ ブレビバクテリウム・ディバリカタム（コリネバクテリ
ウム・グルタミカム） ブレビバクテリウム・ラクトファーメンタム（コリネバ
クテリウム・グルタミカム） ブレビバクテリウム・サッカロリティカム ブレビバクテリウム・フラバム（コリネバクテリウム・
グルタミカム） ミクロバクテリウム・アンモニアフィラム
ム コリネバクテリウム・アセトグルタミカム コリネバクテリウム・グルタミカム コリネバクテリウム・リリウム（コリネバクテリウム・
グルタミカム） コリネバクテリウム・メラセコーラ ブレビバクテリウム・ディバリカタム（コリネバクテリ
ウム・グルタミカム） ブレビバクテリウム・ラクトファーメンタム（コリネバ
クテリウム・グルタミカム） ブレビバクテリウム・サッカロリティカム ブレビバクテリウム・フラバム（コリネバクテリウム・
グルタミカム） ミクロバクテリウム・アンモニアフィラム
【０００８】具体的には、ブレビバクテリウム・ラクト
ファーメンタム（Brevibacterium lactofermentum）
ＡＪ３７１８（ＦＥＲＭ Ｐ−２５１６；２−チアゾー
ルアラニン及びβ−ハイドロキシロイシン耐性かつイソ
ロイシン及びメチオニン要求性）、コリネバクテリウム
・グルタミカム（Corynebacterium glutamicum） ＡＪ
３４５３（ＦＥＲＭ Ｐ−１９６６；２−チアゾールア
ラニン及びβ−ハイドロキシロイシン耐性かつイソロイ
シン要求性）、エシェリヒア・コリ（Eschelichia col
i） ＡＪ１１４７８（ＦＥＲＭ Ｐ−５２７４；β−
２−チエニルアラニン及びβ−ハイドロキシロイシン耐
性）等のＬ−ロイシン生産菌があげられる。
ファーメンタム（Brevibacterium lactofermentum）
ＡＪ３７１８（ＦＥＲＭ Ｐ−２５１６；２−チアゾー
ルアラニン及びβ−ハイドロキシロイシン耐性かつイソ
ロイシン及びメチオニン要求性）、コリネバクテリウム
・グルタミカム（Corynebacterium glutamicum） ＡＪ
３４５３（ＦＥＲＭ Ｐ−１９６６；２−チアゾールア
ラニン及びβ−ハイドロキシロイシン耐性かつイソロイ
シン要求性）、エシェリヒア・コリ（Eschelichia col
i） ＡＪ１１４７８（ＦＥＲＭ Ｐ−５２７４；β−
２−チエニルアラニン及びβ−ハイドロキシロイシン耐
性）等のＬ−ロイシン生産菌があげられる。
【０００９】上記微生物を培養する培地としては、一般
にアミノ酸の発酵生産に用いられる培地が用いられる。
すなわち菌が資化できる炭素源、窒素源、無機塩類その
他の栄養物を含む培地が用いられる。炭素源としては、
グルコース、フラクトース、シュクロース、糖蜜、澱粉
加水分解物などの糖類を用いる。窒素源としては、アン
モニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸ア
ンモニウム、リン酸アンモニウム、尿素、有機酸アンモ
ニウム塩、アミン類その他の窒素化合物、あるいは酵母
エキス、ペプトン、大豆加水分解物、各種発酵菌体及び
その消化物などを単独もしくは混合して用いる。無機塩
類としてはリン酸二水素カリウム、硫酸マンガン、硫酸
鉄及び硫酸マグネシウム等を用いる。この他に菌の生育
及びＬ−ロイシンの生成に必要であれば、各種アミノ
酸、各種ビタミン、ペプトン、酵母エキス、カザミノ酸
等の栄養源を適宜培地に添加する。
にアミノ酸の発酵生産に用いられる培地が用いられる。
すなわち菌が資化できる炭素源、窒素源、無機塩類その
他の栄養物を含む培地が用いられる。炭素源としては、
グルコース、フラクトース、シュクロース、糖蜜、澱粉
加水分解物などの糖類を用いる。窒素源としては、アン
モニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸ア
ンモニウム、リン酸アンモニウム、尿素、有機酸アンモ
ニウム塩、アミン類その他の窒素化合物、あるいは酵母
エキス、ペプトン、大豆加水分解物、各種発酵菌体及び
その消化物などを単独もしくは混合して用いる。無機塩
類としてはリン酸二水素カリウム、硫酸マンガン、硫酸
鉄及び硫酸マグネシウム等を用いる。この他に菌の生育
及びＬ−ロイシンの生成に必要であれば、各種アミノ
酸、各種ビタミン、ペプトン、酵母エキス、カザミノ酸
等の栄養源を適宜培地に添加する。
【００１０】培養は、（通気）攪拌、振とう等の好気的
条件下で、培養温度２０〜４５℃、好ましくは２５〜４
０℃にて行う。培養途中のｐＨは、必要により酸又はア
ルカリを添加することにより、５〜１０、好ましくは６
〜８に調整する。培養時間は１０〜１７０時間、好まし
くは１６〜７２時間である。
条件下で、培養温度２０〜４５℃、好ましくは２５〜４
０℃にて行う。培養途中のｐＨは、必要により酸又はア
ルカリを添加することにより、５〜１０、好ましくは６
〜８に調整する。培養時間は１０〜１７０時間、好まし
くは１６〜７２時間である。
【００１１】かくして得られた培養液中には、Ｌ−ロイ
シンが生成・蓄積しているが、本発明の方法において
は、この培養物に含まれる菌体を更に糖類及び酢酸もし
くはその塩に作用させ、反応を行うことにより更にＬ−
ロイシンを生成・蓄積させる。菌体を作用させる糖類と
しては、グルコース、フラクトース、シュクロース、糖
蜜、澱粉加水分解物などを用いる。
シンが生成・蓄積しているが、本発明の方法において
は、この培養物に含まれる菌体を更に糖類及び酢酸もし
くはその塩に作用させ、反応を行うことにより更にＬ−
ロイシンを生成・蓄積させる。菌体を作用させる糖類と
しては、グルコース、フラクトース、シュクロース、糖
蜜、澱粉加水分解物などを用いる。
【００１２】菌体を糖類及び酢酸もしくはその塩に作用
させる方法としては、菌体を含む培養物をそのまま用い
これに糖類及び酢酸もしくはその塩を添加して反応する
方法と、培養液より菌体を分離回収しこれを糖類及び酢
酸もしくはその塩を含む水溶液（反応液）に添加して反
応する方法とがある。
させる方法としては、菌体を含む培養物をそのまま用い
これに糖類及び酢酸もしくはその塩を添加して反応する
方法と、培養液より菌体を分離回収しこれを糖類及び酢
酸もしくはその塩を含む水溶液（反応液）に添加して反
応する方法とがある。
【００１３】菌体を含む培養物をそのまま用いこれに糖
類及び酢酸もしくはその塩に添加して反応する方法にお
いては、添加する糖類の濃度は０．１〜３００ｇ／Ｌ、
好ましくは１〜１５０ｇ／Ｌであり、酢酸もしくはその
塩の濃度は酢酸として０.１〜３００ｇ／Ｌ、好ましく
は１〜５０ｇ／Ｌであって、酢酸／糖類の比率は重量比
で０．０１〜１０、好ましくは０．１〜３である。
類及び酢酸もしくはその塩に添加して反応する方法にお
いては、添加する糖類の濃度は０．１〜３００ｇ／Ｌ、
好ましくは１〜１５０ｇ／Ｌであり、酢酸もしくはその
塩の濃度は酢酸として０.１〜３００ｇ／Ｌ、好ましく
は１〜５０ｇ／Ｌであって、酢酸／糖類の比率は重量比
で０．０１〜１０、好ましくは０．１〜３である。
【００１４】培養液より菌体を分離しこれを糖類及び酢
酸もしくはその塩を含む水溶液（反応液）に添加して反
応する方法においては、分離した菌体を作用させる反応
液として上記糖類及び酢酸もしくはその塩の他、使用す
る微生物が利用できる窒素源、無機塩その他の栄養物を
含む反応液が用いられるが、菌の生育に必要なアミノ酸
を除くなど反応液中で菌体の増殖が起こらないようにし
てもよい。糖類の濃度は、０．１〜３００ｇ／Ｌ、好ま
しくは５〜１５０ｇ／Ｌであり、酢酸もしくはその塩の
濃度は酢酸として０.１〜３００ｇ／Ｌ、好ましくは０.
５〜５０ｇ／Ｌであって、酢酸／糖類の比率は重量比で
０．０１〜１０、好ましくは０．０５〜３である。窒素
源としては、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アン
モニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、尿
素、有機酸アンモニウム塩、アミン類及びその他の窒素
化合物、あるいは酵母エキス、ペプトン、大豆加水分解
物、各種発酵菌体及びその消化物などを単独もしくは混
合して用いる。無機塩としては、リン酸二水素カリウ
ム、硫酸マンガン、硫酸鉄及び硫酸マグネシウム等を用
いる。この他にＬ−ロイシンの生成に必要であれば、各
種アミノ酸、各種ビタミン、ペプトン、酵母エキス、カ
ザミノ酸等の栄養源を適宜反応液に添加する。
酸もしくはその塩を含む水溶液（反応液）に添加して反
応する方法においては、分離した菌体を作用させる反応
液として上記糖類及び酢酸もしくはその塩の他、使用す
る微生物が利用できる窒素源、無機塩その他の栄養物を
含む反応液が用いられるが、菌の生育に必要なアミノ酸
を除くなど反応液中で菌体の増殖が起こらないようにし
てもよい。糖類の濃度は、０．１〜３００ｇ／Ｌ、好ま
しくは５〜１５０ｇ／Ｌであり、酢酸もしくはその塩の
濃度は酢酸として０.１〜３００ｇ／Ｌ、好ましくは０.
５〜５０ｇ／Ｌであって、酢酸／糖類の比率は重量比で
０．０１〜１０、好ましくは０．０５〜３である。窒素
源としては、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アン
モニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、尿
素、有機酸アンモニウム塩、アミン類及びその他の窒素
化合物、あるいは酵母エキス、ペプトン、大豆加水分解
物、各種発酵菌体及びその消化物などを単独もしくは混
合して用いる。無機塩としては、リン酸二水素カリウ
ム、硫酸マンガン、硫酸鉄及び硫酸マグネシウム等を用
いる。この他にＬ−ロイシンの生成に必要であれば、各
種アミノ酸、各種ビタミン、ペプトン、酵母エキス、カ
ザミノ酸等の栄養源を適宜反応液に添加する。
【００１５】培養して得た菌体を糖類及び酢酸もしくは
その塩に作用させＬ−ロイシン生成反応を行なう際、反
応は、（通気）攪拌又は振とう等の好気的条件下で、反
応温度２０〜４５℃、好ましくは２５〜４０℃にて行
う。反応中のｐＨは、必要により酸又はアルカリを添加
することにより、５〜１０、好ましくは６〜８に調整す
る。反応時間は１〜７２時間、好ましくは６〜４０時間
である。
その塩に作用させＬ−ロイシン生成反応を行なう際、反
応は、（通気）攪拌又は振とう等の好気的条件下で、反
応温度２０〜４５℃、好ましくは２５〜４０℃にて行
う。反応中のｐＨは、必要により酸又はアルカリを添加
することにより、５〜１０、好ましくは６〜８に調整す
る。反応時間は１〜７２時間、好ましくは６〜４０時間
である。
【００１６】反応終了後、反応液からＬ−ロイシンを採
取する方法としては、必要により反応液より菌体などの
沈澱物を除去した後、濃縮、塩析、等電点沈澱などの方
法を併用する通常の方法が用いられる。
取する方法としては、必要により反応液より菌体などの
沈澱物を除去した後、濃縮、塩析、等電点沈澱などの方
法を併用する通常の方法が用いられる。
【００１７】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
する。なお、Ｌ−ロイシン及びＬ−バリンの定量は、遠
心分離により菌体を除去した反応液上清をアミノ酸アナ
ライザーにより分析することにより行った。
する。なお、Ｌ−ロイシン及びＬ−バリンの定量は、遠
心分離により菌体を除去した反応液上清をアミノ酸アナ
ライザーにより分析することにより行った。
【００１８】実施例１ コリネバクテリウム・グルタミカム ＡＪ３４５３（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１９６６）を表１の組成の保存寒天培地上
で生育させた後、その一白金耳量を５００ｍｌ容フラス
コに分注した表２の組成のＬ−ロイシン生産培地２０ｍ
ｌに植菌し、３１.５℃にて４０時間振とうしながら培
養を行ない、菌体を含む培養物を得た。この培養物にグ
ルコース２ｇ／Ｌと酢酸ナトリウム４ｇ／Ｌを添加し、
３１.５℃にて振とうしつつ３２時間反応させ、反応開
始時（培養終了時）と反応終了時のＬ−ロイシン及びＬ
−バリンを定量した。なお、培養物にグルコース２ｇ／
Ｌのみを添加して同様に反応を行ったものを対照とし
た。
ＥＲＭ Ｐ−１９６６）を表１の組成の保存寒天培地上
で生育させた後、その一白金耳量を５００ｍｌ容フラス
コに分注した表２の組成のＬ−ロイシン生産培地２０ｍ
ｌに植菌し、３１.５℃にて４０時間振とうしながら培
養を行ない、菌体を含む培養物を得た。この培養物にグ
ルコース２ｇ／Ｌと酢酸ナトリウム４ｇ／Ｌを添加し、
３１.５℃にて振とうしつつ３２時間反応させ、反応開
始時（培養終了時）と反応終了時のＬ−ロイシン及びＬ
−バリンを定量した。なお、培養物にグルコース２ｇ／
Ｌのみを添加して同様に反応を行ったものを対照とし
た。
【００１９】
【表１】
【００２０】
【表２】
【００２１】その結果、表３に示すように、グルコース
のみを添加し反応した場合はＬ−ロイシンの生成蓄積と
ともに副生アミノ酸であるＬ−バリンの蓄積量の増加が
認められたのに対し、グルコースと酢酸ナトリウムを添
加し反応させた場合、Ｌ−ロイシンのみが反応により生
成蓄積し、最終生成物に占めるＬ−バリンの割合が低減
されることが確認された。
のみを添加し反応した場合はＬ−ロイシンの生成蓄積と
ともに副生アミノ酸であるＬ−バリンの蓄積量の増加が
認められたのに対し、グルコースと酢酸ナトリウムを添
加し反応させた場合、Ｌ−ロイシンのみが反応により生
成蓄積し、最終生成物に占めるＬ−バリンの割合が低減
されることが確認された。
【００２２】
【表３】
【００２３】実施例２ エシエリヒア・コリ ＡＪ１１４７８（ＦＥＲＭ Ｐ−
５２７４）を表４の組成の保存寒天培地上で生育させた
後、その一白金耳量を５００ｍｌ容フラスコに分注した
表５の組成の生産培地２０ｍｌに植菌し、３７℃にて振
とうしながら２４時間培養を行い、菌体を含む培養物を
得た。この培養物にグルコース２ｇ／Ｌと酢酸ナトリウ
ム４ｇ／Ｌを添加し、３７℃にて振とうしながら１６時
間反応させ、反応開始時と反応終了時のＬ−ロイシン及
びＬ−バリンを定量した。なお、培養物にグルコース２
ｇ／Ｌのみを添加して同様に反応を行ったものを対照と
した。
５２７４）を表４の組成の保存寒天培地上で生育させた
後、その一白金耳量を５００ｍｌ容フラスコに分注した
表５の組成の生産培地２０ｍｌに植菌し、３７℃にて振
とうしながら２４時間培養を行い、菌体を含む培養物を
得た。この培養物にグルコース２ｇ／Ｌと酢酸ナトリウ
ム４ｇ／Ｌを添加し、３７℃にて振とうしながら１６時
間反応させ、反応開始時と反応終了時のＬ−ロイシン及
びＬ−バリンを定量した。なお、培養物にグルコース２
ｇ／Ｌのみを添加して同様に反応を行ったものを対照と
した。
【００２４】
【表４】
【００２５】
【表５】 その結果、表６に示すように、グルコースのみを添加し
反応させた場合はＬ−ロイシンの生成蓄積とともに副生
アミノ酸であるＬ−バリンの蓄積量の増加が認められた
のに対し、グルコースと酢酸ナトリウムを添加し反応さ
せた場合、Ｌ−ロイシンのみが反応により生成蓄積し、
最終生成物に占めるＬ−バリンの割合が低減されること
が確認された。
反応させた場合はＬ−ロイシンの生成蓄積とともに副生
アミノ酸であるＬ−バリンの蓄積量の増加が認められた
のに対し、グルコースと酢酸ナトリウムを添加し反応さ
せた場合、Ｌ−ロイシンのみが反応により生成蓄積し、
最終生成物に占めるＬ−バリンの割合が低減されること
が確認された。
【００２６】
【表６】
【００２７】実施例３ コリネバクテリウム・グルタミカム ＡＪ３４５３（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１９６６）を実施例１と同様の条件で４８
時間培養し、フラスコ１本分の培養物から遠心分離によ
り菌体を回収した。これを０．２％ＫＣｌで洗浄した
後、表７に示す組成に各濃度の酢酸ナトリウムを添加し
た反応液７５ｍｌに懸濁し、３１．５℃で振とうしなが
ら１６時間反応を行った。反応終了後、反応液中に生成
蓄積したＬ−ロイシン及びＬ−バリンを定量した。な
お、酢酸ナトリウムを添加しない反応液を用いて同様に
反応を行ったものを対照とした。
ＥＲＭ Ｐ−１９６６）を実施例１と同様の条件で４８
時間培養し、フラスコ１本分の培養物から遠心分離によ
り菌体を回収した。これを０．２％ＫＣｌで洗浄した
後、表７に示す組成に各濃度の酢酸ナトリウムを添加し
た反応液７５ｍｌに懸濁し、３１．５℃で振とうしなが
ら１６時間反応を行った。反応終了後、反応液中に生成
蓄積したＬ−ロイシン及びＬ−バリンを定量した。な
お、酢酸ナトリウムを添加しない反応液を用いて同様に
反応を行ったものを対照とした。
【００２８】
【表７】
【００２９】その結果、表８に示すように、酢酸ナトリ
ウムを２〜３２ｇ／Ｌ添加することにより、酢酸ナトリ
ウム無添加の場合と比べてＬ−バリン蓄積のＬ−ロイシ
ン蓄積に対する比率は減少しＬ−ロイシン蓄積が増加す
ることが確認された。
ウムを２〜３２ｇ／Ｌ添加することにより、酢酸ナトリ
ウム無添加の場合と比べてＬ−バリン蓄積のＬ−ロイシ
ン蓄積に対する比率は減少しＬ−ロイシン蓄積が増加す
ることが確認された。
【００３０】
【表８】
【００３１】
【発明の効果】本発明の方法によれば、微生物を用いる
Ｌ−ロイシンの生産においてＬ−ロイシン蓄積量を向上
させるとともに副生アミノ酸を低減することができ、工
業的により安価にＬ−ロイシンを製造することができ
る。
Ｌ−ロイシンの生産においてＬ−ロイシン蓄積量を向上
させるとともに副生アミノ酸を低減することができ、工
業的により安価にＬ−ロイシンを製造することができ
る。
Claims (1)
- 【請求項１】 コリネバクテリウム属又はエシェリヒア
属に属し、Ｌ−ロイシン生産能を有する微生物を糖類を
主炭素源として含有する培地に培養して得た菌体を糖類
及び酢酸もしくはその塩に作用させて反応液中にＬ−ロ
イシンを生成・蓄積せしめ、これを採取することを特徴
とするＬ−ロイシンの製造方法。
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|---|---|---|---|
| JP07293795A JP3704737B2 (ja) | 1995-03-30 | 1995-03-30 | Ｌ−ロイシンの製造方法 |
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|---|---|---|---|
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|---|---|
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|---|---|---|---|
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| WO2015050234A1 (ja) | 2013-10-02 | 2015-04-09 | 味の素株式会社 | アンモニア制御装置およびアンモニア制御方法 |
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| US3865690A (en) * | 1969-11-06 | 1975-02-11 | Ajinomoto Kk | Fermentative production of L-leucine |
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| JPH06324839A (ja) * | 1993-05-14 | 1994-11-25 | Toshiba Corp | 表示装置のカーソル制御手段 |
| JPH1031093A (ja) * | 1996-07-16 | 1998-02-03 | Ishikawajima Harima Heavy Ind Co Ltd | 溶融炉 |
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1995
- 1995-03-30 JP JP07293795A patent/JP3704737B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-03-05 US US08/610,874 patent/US5763231A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-03-29 CN CN96104294A patent/CN1072721C/zh not_active Expired - Fee Related
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|---|---|---|---|---|
| WO2008044409A1 (fr) | 2006-10-10 | 2008-04-17 | Ajinomoto Co., Inc. | Procédé de fabrication d'un l-amino acide |
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| WO2008102572A1 (ja) | 2007-02-20 | 2008-08-28 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ－アミノ酸または核酸の製造方法 |
| WO2009088049A1 (ja) | 2008-01-10 | 2009-07-16 | Ajinomoto Co., Inc. | 発酵法による目的物質の製造法 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
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| CN1072721C (zh) | 2001-10-10 |
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| CN1140761A (zh) | 1997-01-22 |
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