JPH08277222A

JPH08277222A - 神経疾患の予防治療剤

Info

Publication number: JPH08277222A
Application number: JP8058395A
Authority: JP
Inventors: Toshiaki Shiyou; 利明晶; Toru Kawamura; 透河村; Takeshi Uchida; 武内田
Original assignee: Green Cross Corp Japan; Green Cross Corp Korea
Current assignee: Tanabe Pharma Corp; GC Biopharma Corp
Priority date: 1995-04-05
Filing date: 1995-04-05
Publication date: 1996-10-22

Abstract

(57)【要約】【構成】プロスタグランジンＥ₁またはその誘導体を
有効成分とする非虚血性またはアポトーシス介在性の神
経疾患の予防治療剤、特に脂肪乳剤の形態を有する予防
治療剤の提供。【効果】非虚血性またはアポトーシス介在性、す
なわち、アポトーシスに伴う、アポトーシスを伴う、も
しくはアポトーシスが関与する、神経疾患の予防および
／または治療に有用である。従って、これらに該当する
と思われる疾患、例えば、中枢神経系ではアルツハイマ
ー病、パーキンソン病など、末梢神経系では筋萎縮性側
索硬化症などの予防または治療に有用である。また、突
発性難聴などの疾患のうち、非虚血性またはアポト
ーシス介在性のものの予防および／または治療に有用で
ある。特に脂肪乳剤の形態を有する場合は、上記作用に
加えて徐放性、持続性、局所集積性に優れ、保存安定性
も良好である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、プロスタグランジンＥ
₁（以下「ＰＧＥ₁」という。）およびその誘導体の新
規医薬用途に関し、詳細には、これらを有効成分とす
る、特殊な態様にある神経疾患を予防および／または治
療するための予防治療剤に関する。

【０００２】

【従来の技術・発明が解決しようとする課題】ＰＧＥ₁
は生体内に微量存在し、多岐にわたる生理作用、例え
ば、血管拡張作用、血圧降下作用、血管形成作用、血小
板凝集抑制作用、上皮再生促進作用等を有しており、末
梢血流障害の治療剤として既に市販されている。

【０００３】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、ＰＧＥ₁
またはその誘導体（以下、これらを総称する場合には
「ＰＧＥ₁類」という。）が特殊な態様にある神経疾
患、すなわち非虚血性またはアポトーシス介在性の
神経疾患の予防治療剤として有用であることを見出し、
本発明を完成するに至った。ＰＧＥ₁と神経疾患との関
係では、脳神経細胞の酸素欠乏性疾患への適用（特開昭
５９−７３５２２号公報）、糖尿病性末梢神経障害への
適用（特開平１−３１６３２３号公報）等が報告されて
いる。しかし、上記の特殊な態様にある神経疾患、すな
わち非虚血性またはアポトーシス介在性の神経疾患
との関係に関しては何ら言及されておらず、本知見は全
く予想外なものである。

【０００４】本発明の予防治療剤の有効成分であるＰＧ
Ｅ₁類は、ＰＧＥ₁、ＰＧＥ₁活性を有する誘導体、生
体内においてＰＧＥ₁に変換されＰＧＥ₁活性を発現す
るもの（ＰＧＥ₁前駆体）等を含む概念である。ＰＧＥ
₁活性を有する誘導体としては７−チオ体（特開昭５８
−１１０５６２号公報）等が挙げられる。具体的には７
−チオ−ＰＧＥ₁等が例示される。

【０００５】本発明で使用し得るＰＧＥ₁前駆体は、生
体内において、ＰＧＥ₁に変換されＰＧＥ₁活性を発現
しうる化合物であれば、特に限定されない。

【０００６】ＰＧＥ₁類としては、例えば、ＰＧＥ₁の
アルキルエステル体（特開昭５９−２１６８２０号公
報）、アルコキシカルボニルアルキルエステル体または
アシルオキシアルキルエステル体（特開昭５９−２０６
３４４号公報、特開昭６０−１３７７９号公報）、９−
アシルオキシ体（特開昭５８−３９６６０号公報、特開
平３−２０４８５３号公報、特開平５−２１３８６２号
公報）、７−チオ体（特開昭５８−１１０５６２号公
報）等が挙げられ、好ましくは９−アシルオキシ体であ
る。

【０００７】アルキルエステル体、アルコキシカルボニ
ルアルキルエステル体、アシルオキシアルキルエステル
体におけるアルキルは、好ましくは炭素数１〜３０、よ
り好ましくは炭素数１〜１０のアルキルである。アルコ
キシカルボニルアルキルエステル体におけるアルコキシ
は、好ましくは炭素数１〜１５、より好ましくは炭素数
３〜１０のアルコキシである。アシルオキシアルキルエ
ステル体におけるアシルは、好ましくは炭素数１〜１
５、より好ましくは炭素３〜１０のアシルである。９−
アシルオキシ体におけるアシルは、好ましくは炭素数２
〜６、より好ましくは炭素数２〜４のアシルである。

【０００８】ＰＧＥ₁のアルキルエステル体としては、
具体的には、ＰＧＥ₁メチルエステル、ＰＧＥ₁エチル
エステル、ＰＧＥ₁プロピルエステル、ＰＧＥ₁ブチル
エステル、ＰＧＥ₁ペンチルエステル、ＰＧＥ₁オクチ
ルエステル等が挙げられる。ＰＧＥ₁のアルコキシカル
ボニルアルキルエステル体としては、具体的には、ＰＧ
Ｅ₁ブトキシカルボニルメチルエステル、ＰＧＥ₁ヘキ
シルオキシカルボニルメチルエステル、ＰＧＥ₁オクチ
ルオキシカルボニルメチルエステル、ＰＧＥ ₁デシルオ
キシカルボニルメチルエステル等が挙げられる。ＰＧＥ
₁のアシルオキシアルキルエステル体としては、具体的
には、ＰＧＥ₁アセトキシメチルエステル、ＰＧＥ₁ピ
バロイルオキシメチルエステル、ＰＧＥ ₁１−アセトキ
シエチルエステル、ＰＧＥ₁１−ヘキサノイルオキシエ
チルエステル、ＰＧＥ₁１−デカノイルオキシエチルエ
ステル等が挙げられる。

【０００９】ＰＧＥ₁の９−アシルオキシ体としては、
例えば、次の一般式〔Ｉ〕で示される化合物が挙げられ
る。

【００１０】

【化１】

【００１１】〔式中、Ｒ¹はアシル、Ｒ²はアルキル、
Ｒ³は水素原子または水酸基の保護基、Ｒ⁴は水素原子
または水酸基の保護基、Ｒ⁵はアルキルを示す。〕Ｒ¹
で示されるアシルは、炭素数２〜６、好ましくは炭素数
２〜４のアシルであり、例えばアセチル、プロピオニ
ル、ブチリル、ピバロイル、ヘキサノイル等が挙げられ
る。Ｒ²で示されるアルキルは、炭素数１〜３０、好ま
しくは炭素数１〜４のアルキルであり、例えばメチル、
エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ヘキシル、
オクチル、デシル、イコシル等が挙げられる。Ｒ³また
はＲ⁴で示される水酸基の保護基としては、アシル（例
えばアセチル、プロピオニル、ベンゾイル）、アラルキ
ル（例えばベンジル、フェニルエチル）等が挙げられ
る。Ｒ⁵で示されるアルキルは、炭素数１〜１０、好ま
しくは炭素数５〜７のアルキルであり、例えばメチル、
エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ペンチル、
ヘキシル、ヘプチル、２−メチルヘキシル、オクチル、
デシル等が挙げられる。

【００１２】ＰＧＥ₁の９−アシルオキシ体としては、
具体的には、メチル９−アセトキシ−１１α，１５Ｓ
−ジヒドロキシプロスタ−８，１３Ｅ−ジエン−１−オ
エート、メチル９，１１α，１５Ｓ−トリアセトキシ
−プロスタ−８，１３Ｅ−ジエン−１−オエート、メチ
ル９，１５Ｒ−ジアセトキシ−１１α−ヒドロキシプ
ロスタ−８，１３Ｅ−ジエン−１−オエート、メチル
９，１５Ｓ−ジアセトキシ−１１α−ヒドロキシプロス
タ−８，１３Ｅ−ジエン−１−オエート、ブチル９−
アセトキシ−１１α，１５Ｓ−ジヒドロキシ−１７Ｓ，
２０−ジメチルプロスタ−８，１３Ｅ−ジエン−１−オ
エート、ブチル９−アセトキシ−１１α，１５Ｓ−ジ
ヒドロキシプロスタ−８，１３Ｅ−ジエン−１−オエー
ト、ブチル９−ブチリルオキシ−１１α，１５Ｓ−ジ
ヒドロキシプロスタ−８，１３Ｅ−ジエン−１−オエー
ト、ブチル９，１１α−ジアセトキシ−１５Ｓ−ヒド
ロキシ−１７Ｓ，２０−ジメチルプロスタ−８，１３Ｅ
−ジエン−１−オエート等が挙げられる。

【００１３】ＰＧＥ₁の７−チオ体は、上記の各種ＰＧ
Ｅ₁前駆体の７位のＣＨ₂がＳで置換されたものを意味
する。具体的には７−チオ−ＰＧＥ₁メチルエステル、
７−チオ−ＰＧＥ₁エチルエステル、７−チオ−ＰＧＥ
₁ブトキシカルボニルメチルエステル、７−チオ−ＰＧ
Ｅ₁ピバロイルオキシメチルエステル、ブチル７−チ
オ−９−ブチリルオキシ−１１α，１５Ｓ−ジヒドロキ
シプロスタ−８，１３Ｅ−ジエン−１−オエート等が挙
げられる。

【００１４】当該ＰＧＥ₁類は、例えば、シクロデキス
トリン（ＣＤ）包接化、リポソーム化、エタノール溶液
化、脂肪乳剤化等、適当な形態に製剤化することにより
使用することができる。好ましくは脂肪乳剤の形態であ
り、これは徐放性、持続性、局所集積性に優れ、保存安
定性も良好である。

【００１５】次に、好ましい形態としての脂肪乳剤につ
いて説明する。本発明において、ＰＧＥ₁類を含有する
脂肪乳剤（以下「ＰＧＥ₁類含有脂肪乳剤」という。）
とは、ＰＧＥ₁類を含有し、油成分が分散媒に液滴とし
て分散された製剤をいう。

【００１６】油成分としては、植物油、中鎖脂肪酸トリ
グリセリド（いわゆるＭＣＴ）、魚油等が挙げられる。
これらは１種または２種以上を用いることができるが、
植物油と、ＭＣＴまたは魚油等との併用が好ましい。植
物油としては、例えば大豆油、ゴマ油、ヒマシ油、綿実
油、オリーブ油等が挙げられる。好ましくは、高純度の
精製大豆油であり、より好ましくは精製大豆油を例えば
水蒸気蒸留法により更に精製して得た高純度の精製大豆
油（純度：トリグリセリド、ジグリセリドおよびモノグ
リセリドとして９９．９％以上含有）である。

【００１７】油成分を分散媒に分散させるために、リン
脂質等を乳化剤として用いる。リン脂質としては、卵黄
リン脂質、大豆リン脂質等が挙げられ、特にこれらの精
製リン脂質が好ましく用いられる。この精製リン脂質
は、常法に従い、有機溶媒による分画法によって調製す
ることができる。精製リン脂質は、主としてホスファチ
ジルコリン、ホスファチジルエタノールアミンからな
り、これ以外のリン脂質として、ホスファチジルイノシ
トール、ホスファチジルセリン、スフィンゴミエリン等
も含有する。また、精製リン脂質からホスファチジルエ
タノールアミンを除去したものを用いてもよく、これ
は、卵黄、大豆等のリン脂質を使用し、常法によって有
機溶媒分画を行った後、シリカゲル、アルミナ等の無機
吸着剤によって精製することにより得られる。かくして
得られたリン脂質は、主としてホスファチジルコリンか
らなる（特開昭６０−１４９５２４号公報）。更に、ホ
スファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミ
ン、ホスファチジルセリンあるいはホスファチジルイノ
シトールそのものを用いることもできる。分散媒として
は、水が挙げられ、好ましくは精製水である。

【００１８】当該ＰＧＥ₁類含有脂肪乳剤は、主とし
て、植物油５〜５０％（ｗ／ｖ）、植物油１００重量部
に対してリン脂質１〜５０重量部、好ましくは５〜３０
重量部、および適量の水からなるものである。

【００１９】また、本発明におけるＰＧＥ₁類含有脂肪
乳剤は、上記成分の他、必要に応じて、更に乳化補助
剤、保存剤、安定化剤、高分子物質、等張化剤等を加え
ることもできる。

【００２０】乳化補助剤としては、炭素数６〜２２、好
ましくは１２〜２０の脂肪酸またはその薬理学的に許容
される塩、および炭素数２〜２２の脂肪族アミン等が挙
げられる。脂肪酸は、医薬品に添加可能なものであれば
特に制限はなく、直鎖状、分枝状のいずれでもよいが、
具体的には直鎖状のステアリン酸、オレイン酸、リノー
ル酸、パルミチン酸、リノレン酸、ミリスチン酸等を用
いるのが好ましい。また、これら脂肪酸の薬理学的に許
容される塩としては、例えばアルカリ金属塩（ナトリウ
ム塩、カリウム塩等）、アルカリ土類金属塩（カルシウ
ム塩、マグネシウム塩等）等を挙げることができる。更
に脂肪族アミンとしては、医薬品に添加可能なものであ
れば特に制限はなく、例えば直鎖状または分岐状の炭素
数２〜２２の第一級アミン、第二級アミンが例示され、
具体的にはエタノールアミン、プロピルアミン、オクチ
ルアミン、ステアリルアミン、オレイルアミン等が挙げ
られる。当該乳化補助剤の配合量は、脂肪酸またはその
塩は０．３％（ｗ／ｖ）以下、また脂肪族アミンは０．
１％（ｗ／ｖ）以下の量であることが好ましい。

【００２１】安定化剤としては、医薬用として使用可能
なものであれば特に制限はなく、コレステロール類、ホ
スファチジン酸等が挙げられる。その配合量は、コレス
テロール類は好ましくは０．５％（ｗ／ｖ）以下、より
好ましくは０．１％（ｗ／ｖ）以下であり、またホスフ
ァチジン酸は好ましくは５％（ｗ／ｖ）以下、より好ま
しくは１％（ｗ／ｖ）以下である。

【００２２】高分子物質としては、医薬用として使用可
能なものであれば特に制限はなく、アルブミン、デキス
トラン、ビニル重合体、非イオン性界面活性剤、ゼラチ
ン、ヒドロキシエチル澱粉等が挙げられる。アルブミン
としては、抗原性の問題からヒト由来のものが用いられ
る。ビニル重合体としては、ポリビニルピロリドン等が
挙げられる。非イオン性界面活性剤としては、ポリアル
キレングリコール（例えば、平均分子量1,000 〜10,00
0、好ましくは4,000 〜6,000 のポリエチレングリコー
ル）、ポリオキシアルキレン共重合体（例えば、平均分
子量1,000 〜20,000、好ましくは6,000 〜10,000のポリ
オキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体）、硬
化ヒマシ油ポリオキシアルキレン誘導体〔例えば、硬化
ヒマシ油ポリオキシエチレン−（２０）−エーテル、硬
化ヒマシ油ポリオキシエチレン−（４０）−エーテル、
硬化ヒマシ油ポリオキシエチレン−（１００）−エーテ
ル等〕、ヒマシ油ポリオキシアルキレン誘導体〔例え
ば、ヒマシ油ポリオキシエチレン−（２０）−エーテ
ル、ヒマシ油ポリオキシエチレン−（４０）−エーテ
ル、ヒマシ油ポリオキシエチレン−（１００）−エーテ
ル等〕等を用いることができる。その配合量は、ＰＧＥ
₁類１００重量部に対して、高分子物質は好ましくは１
０〜５００重量部、より好ましくは、５０〜１００重量
部である。

【００２３】等張化剤としては、グリセリン、ブドウ糖
等が挙げられる。

【００２４】上記脂肪乳剤中に含有させるＰＧＥ₁類の
量は、乳剤の形態および用途によって適宜増減できる
が、一般には当該乳剤中に極微量、例えば０．１〜１０
０μg/ml含有させることで十分である。

【００２５】本発明に用いるＰＧＥ₁類含有脂肪乳剤の
特に好ましい組成としては、例えば次のものが例示され
る。ＰＧＥ₁類１〜１００μｇ精製大豆油５０〜５００ｍｇ高度精製レシチン５〜５０ｍｇオレイン酸０．１〜５ｍｇ濃グリセリン５〜５０ｍｇ蒸留水適量合計１ｍｌ

【００２６】ＰＧＥ₁類含有脂肪乳剤の製造方法は特に
限定されず、種々の方法により調製でき、基本的には、
ＰＧＥ₁類とその他の油成分からなる油液状物に、分散
媒としての水、特に精製水を加え、適当な方法で乳化
し、全質を均等にすることによって調製される。具体的
には、次の方法等が挙げられる。即ち、所定量のＰＧＥ
₁類、油成分（好ましくは、大豆油）、リン脂質、およ
び必要に応じてその他前記の添加剤等を混合、加熱して
溶液となし、常用のホモジナイザー（例えば、高圧噴射
型ホモジナイザー、超音波ホモジナイザー等）を用いて
均質化処理することにより油中水型分散液を作り、次い
でこれに必要量の水を加え、再び前記ホモジナイザーで
均質化を行って水中油型乳剤に変換することにより製造
することができる。製造上の都合によっては、脂肪乳剤
の調製後に安定化剤、等張化剤等の添加剤を加えてもよ
い（特開昭５８−２２２０１４号公報）。

【００２７】上記処理に引き続いて、滅菌処理を施して
もよい。滅菌処理としては、通常の方法が用いられ、例
えば滅菌フィルター法、γ線照射法、高圧加熱処理法等
が挙げられる。

【００２８】かくして調製されたＰＧＥ₁類含有脂肪乳
剤はそのままで、もしくは所望により更に他の添加剤を
加えることにより、本発明の予防治療剤とすることがで
きる。なお、その他の添加剤としては、エイコサペンタ
エン酸（いわゆるＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（いわ
ゆるＤＨＡ）等が挙げられる。

【００２９】また、当該脂肪乳剤の平均粒子径は、好ま
しくは１μｍ以下、より好ましくは０．２〜０．４μｍ
である。

【００３０】当該ＰＧＥ₁類を用い、脂肪乳剤以外の形
態に製剤化する場合について、以下に説明する。

【００３１】シクロデキストリン（ＣＤ）包接化は、例
えば、ＰＧＥ₁類を溶媒（エタノール等）に溶解した溶
液に、シクロデキストリンを水等に加温溶解した溶液を
加えた後、冷却し、析出した沈澱を濾過し、減圧乾燥す
ることにより行うことができる。シクロデキストリンと
しては、α−シクロデキストリン、β−シクロデキスト
リンおよびγ−シクロデキストリンが挙げられる。ＣＤ
包接化の例としては、特公昭５２−３１４０４号公報に
記載の方法が挙げられる。

【００３２】リポソーム化は、例えば、リン脂質を溶媒
（クロロホルム等）に溶解させた溶液に、ＰＧＥ₁類を
溶媒（エタノール等）に溶解した溶液を加えた後、溶媒
を留去し、これにリン酸緩衝液を加え、振盪、超音波処
理および遠心分離した後、上清をメンブランフィルター
等で濾過することにより行うことができる。リポソーム
化の例としては、ケミカル・アブストラクト９３巻１１
３６ｆ（８０年）、同９５巻９１２３１ｗ（８１年）に
記載の方法が挙げられる。

【００３３】エタノール溶液化は、ＰＧＥ₁類をエタノ
ールに溶解することにより行うことができる。エタノー
ル溶液中のＰＧＥ₁類含有量は通常１〜１０００μｇ／
ml程度である。なお、当該エタノール溶液剤は用時、生
理食塩水またはブドウ糖液等で希釈して用いる。

【００３４】本発明の予防治療剤は、注射剤等の形態と
して非経口的に投与することができ、特に静脈投与が好
ましい。その投与は、例えばＰＧＥ₁類として１〜１０
００μｇを、０．０１〜１０００ｎｇ／ｋｇ体重／分の
割合で１日１回静脈内に持続注入することにより行う。

【００３５】

【実施例・試験例】本発明をより詳細に説明するため
に、実施例および実験例を挙げるが、本発明はこれらに
何ら限定されるものではない。実施例１（ＣＤ包接化）ＰＧＥ₁１７ｍｇをエタノール０．２ｍｌに溶解した溶
液に、β−シクロデキストリン２５７ｍｇを水６ｍｌに
加温溶解して調製した溶液を加え、４５℃で加温溶解し
た後に室温に冷却し、沈澱を析出させた。これを０℃で
一夜放置後に濾過し、５０％エタノール水溶液で洗浄し
て減圧乾燥することにより、ＣＤ包接化製剤を調製し
た。

【００３６】実施例２（リポソーム化）卵黄ホスファチジルコリン６０ｍｇおよびオレイルアミ
ン１１ｍｇをクロロホルム５ｍｌに溶解後、ＰＧＥ₁３
０μｇをエタノール１００μｌに溶解した溶液をこれに
加え、ナス型フラスコに入れ、ロータリーエバポレータ
ーで溶媒を留去した。０．１Ｍ等張化リン酸緩衝液（ｐ
Ｈ５）１ｍｌを加え、振盪、超音波処理（ソニケート）
および遠心分離後に、上清を０．２μｍのメンブランフ
ィルターで濾過し、リポソーム製剤を回収し、調製し
た。

【００３７】実施例３（エタノール溶液化）ＰＧＥ₁５００μｇをエタノール１ｍｌに溶解すること
により、エタノール溶液剤を調製した。用時、生理食塩
水またはブドウ糖液等で希釈して用いる。

【００３８】実施例４（脂肪乳剤化）精製大豆油３０ｇに精製卵黄リン脂質５．４ｇ、ＰＧＥ
₁１．５ｍｇおよびオレイン酸０．７２ｇを加え、４０
〜７５℃で加熱溶解した。これに蒸留水２００ｍｌを加
え、次いで日本薬局方グリセリン７．５ｇを加え、２０
〜４０℃の注射用蒸留水で全量を３００ｍｌとし、ホモ
ジナイザーで粗乳化した。これをマントン−ガウリン型
ホモジナイザーを用い、１回目１２０kg/cm ²、合計５
００kg/cm ²の加圧下で１０回通過させ、乳化した。こ
れにより均質化された極めて微細のＰＧＥ₁を含有する
脂肪乳剤を得た。この乳剤の平均粒子径は０．２〜０．
４μｍであり、１μｍ以上の粒子を含有しなかった。

【００３９】実施例５〜８実施例４のＰＧＥ₁の代わりに、ＰＧＥ₁エチルエステ
ル（実施例５）、ＰＧＥ₁ピバロイルオキシメチルエス
テル（実施例６）、ＰＧＥ₁オクチルオキシカルボニル
メチルエステル（実施例７）、ブチル９−ブチリルオ
キシ−１１α，１５Ｓ−ジヒドロキシプロスタ−８，１
３Ｅ−ジエン−１−オエート（実施例８）を用いる以外
は実施例４の方法に準じて、均質化された極めて微細な
脂肪乳剤を得た。当該乳剤の平均粒子径は０．２〜０．
４μｍであった。

【００４０】実験例１非虚血性細胞死であるアポトーシスのモデルとして、坐
骨神経の漸増性圧迫法をＰＧＥ₁の神経機能変性に対す
る評価に用いた。神経漸増性圧迫モデルの作製 Wistar系雄性ラット（体重３５０ｇ前後）をペントバル
ビタール腹腔内投与により麻酔し腹位に固定下、右側大
腿部に切開を加え坐骨神経を露出させた後、顕微鏡観察
下で結合組織を注意深く剥離し、坐骨神経を分岐部より
上位に１ｍｍ間隔で４箇所、腸線縫合糸にて不完全結紮
した。すなわち、結紮時２６ゲージ注射針を添わせて結
紮し、事後これを抜去した。

【００４１】被検薬の投与モデル作製の翌日より２週間、脂肪乳剤（ベヒクル）お
よびＰＧＥ₁脂肪乳剤（１，３，１０μｇ／ｋｇ体重）
を連日静脈内投与した。また、対照薬として静脈内投与
可能なプロスタグランジンＩ₂（以下、ＰＧＩ₂とい
う）の安定誘導体であるカルバサイクリン（１，３，１
０μｇ／ｋｇ体重）を用いた。

【００４２】脊髄血流測定２週間の被検薬投与期間を経た後、供試動物をペントバ
ルビタール麻酔し、腹位に固定し顕微鏡観察下、第４お
よび第５腰髄を愛護的に露出し、硬膜外よりレーザード
ップラー血流計により脊髄後角の組織血流を測定した。

【００４３】神経細胞変性に対する生化学的／組織
学的検討血流測定が完了した後、顕微鏡観察下で第４および第５
腰髄を摘出し、それぞれ凍結保存およびリリー緩衝液に
より組織固定以下の生化学的および組織学的手法により
ＤＮＡ分析を実施した。なお、対照として坐骨神経から
の神経線維入力がない第１３胸髄を採取し、上記と同様
の操作を施した。凍結保存した第４腰髄から、ＧＮＯＭ
ＥＤＮＡＩＳＯＬＡＴＩＯＮＫＩＴを用いて、抽
出したゲノムＤＮＡをアガロース電気泳動にかけ断片化
の有無を調べた。また、組織固定した第５腰髄からパラ
フィン切片を作製し、トルイジンブルーを用いて暗調細
胞（dark cells）を染色し、画像解析処理して一定視野
における暗調神経（dark neuron ）の出現頻度を定量し
た。一方、ＤＮＡ損傷を特異的に検出すべくｄＵＴＰ
（deoxyuridine 5'-triphosphate）を用いて、関心領野
の神経細胞を染色した。得られた標本を画像解析処理
し、一定領野のＤＮＡ損傷の程度を定量した。

【００４４】実験結果ｉ）坐骨神経の漸増性圧迫によっても腰部の脊髄後角の
組織血流は減少しなかった。このことより、関心領域で
は特に正常動物に比して虚血に陥っているという事実は
なかったと結論される。

【００４５】ii）坐骨神経の漸増性圧迫によって、同側
の腰髄において暗調細胞の出現頻度は有意に増加し、Ｐ
ＧＥ₁脂肪乳剤では正常レベル近くまで有意に改善し
た。一方、カルバサイクリン投与群では若干の軽減は観
察されたものの有意ではなかった。同側腰髄における暗
調細胞の出現頻度を表１に示す。対側では、特段の変化
は観察されなかった。

【００４６】

【表１】

【００４７】iii ）ｄＵＴＰを用いた脊髄神経細胞染色
で、アポトーシス様の細胞死が観察され、ＰＧＥ₁脂肪
乳剤は最高投与量群（１０μｇ／ｋｇ体重）で明らかに
細胞死の出現頻度を抑制した。

【００４８】iv）脊髄組織よりＤＮＡを取りだして分析
した結果、坐骨神経を漸増性圧迫した動物の腰髄組織で
はヌクレオソーム単位のＤＮＡ断片化が観察され、対照
として用いた第１３胸髄ではこのような現象は認められ
なかった。これに対し、ＰＧＥ₁脂肪乳剤ではいずれの
用量においてもＤＮＡ断片化は観察されなかった。一
方、カルバサイクリン投与群では最低用量（１μｇ／ｋ
ｇ体重）で明らかなＤＮＡ断片化の現象が認められた。

【００４９】結論暗調細胞の出現頻度において、ＰＧＥ系薬剤であるＰＧ
Ｅ₁脂肪乳剤が有意にそれを抑制し、一方ＰＧＩ₂系薬
剤であるカルバサイクリンの効果が有意ではなかったこ
と、さらにＤＮＡの断片化についても、最低用量から断
片化を抑制したＰＧＥ₁脂肪乳剤に対して、同用量では
無効であったカルバサイクリンの効果を勘案すれば、脊
髄後角神経細胞に見られたアポトーシスの抑制にはＥＰ
受容体（Ｅ型プロスタグランジンに対する受容体）が優
勢的に関与している可能性が示唆された。

【００５０】実験例２毒性試験実施例４で調製した本発明の予防治療剤をマウス、ラッ
トおよびイヌにＰＧＥ ₁として２５０μｇ／ｋｇ体重ま
で静脈内投与しても死亡例はなく、重篤な毒性は発現し
なかった。

【００５１】

【発明の効果】本発明の予防治療剤は、哺乳動物（例え
ば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ヒト等）に
おける神経疾患の予防治療剤として、特に非虚血性ま
たはアポトーシス介在性、すなわち、アポトーシスに
伴う、アポトーシスを伴う、もしくはアポトーシスが関
与する、神経疾患の予防および／または治療に有用であ
る。従って、これらに該当すると思われる疾患、例え
ば、中枢神経系ではアルツハイマー病、パーキンソン病
など、末梢神経系では筋萎縮性側索硬化症などの予防ま
たは治療に有用である。また、突発性難聴などの疾患の
うち、非虚血性またはアポトーシス介在性のものの
予防および／または治療に有用である。

【００５２】また、本発明の予防治療剤が特に脂肪乳剤
の形態を有する場合、上記の神経疾患の予防治療剤の有
効成分としてのＰＧＥ₁類の安定性の改善および作用の
持続化が図られ、その結果、上記の有用性が向上し、大
量製剤化に適した製剤が得られる。さらに徐放性、持続
性、局所集積性に優れ、保存安定性も良好となる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】プロスタグランジンＥ₁またはその誘導
体を有効成分とする、非虚血性またはアポトーシス介在
性の神経疾患の予防治療剤。
【請求項２】脂肪乳剤の形態である請求項１記載の予
防治療剤。