JPH0834766A

JPH0834766A - 抗腫瘍性物質ｂｅ−３９９０７類

Info

Publication number: JPH0834766A
Application number: JP19198294A
Authority: JP
Inventors: Takayoshi Okabe; 隆義岡部; Kaori Uemi; かおり上見; Hajime Suzuki; 肇鈴木; Hiroyuki Suda; 寛之須田
Original assignee: Banyu Phamaceutical Co Ltd
Current assignee: MSD KK
Priority date: 1994-07-22
Filing date: 1994-07-22
Publication date: 1996-02-06

Abstract

(57)【要約】【構成】一般式［Ｉ］【化１】（式中、Ｒは水素原子、低級アルキル基、低級アルカノ
イル基、又はベンゾイル基を示す）で表される化合物。【効果】本発明に記載するＢＥ−３９９０７類は癌細胞
の増殖を強く抑制するため、医薬の分野で癌の治療薬と
しての使用が期待される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は医薬の分野で有用であ
り、より具体的には腫瘍細胞の増殖を阻害して抗腫瘍作
用を有する新規化合物群、その製造法及びその用途並び
に該化合物を産生する微生物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】癌化学療法の分野においては、ブレオマ
イシン（Ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）及びアドリアマイシン
（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）等の多くの微生物代謝産物を
臨床的に応用することが試みられ、またこれらは実際に
臨床において使用されている。しかしながら、様々な種
類の腫瘍に対してその効果は必ずしも充分ではなく、よ
り優れた新規な抗腫瘍性物質に関して不断の希求がある
のが現状である。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】このような現状に鑑
み、本発明者らは広く微生物代謝産物をスクリーニング
することにより、優れた新規抗腫瘍性物質を見出すこと
を課題とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく、抗腫瘍活性を有する物質について微生
物二次代謝産物を広くスクリーニングした結果、下記一
般式［Ｉ］で表される化合物が優れた抗腫瘍作用を示す
ことを見出して本発明を完成した。

【０００５】即ち、本発明は、新規な一般式［Ｉ］

【０００６】

【化７】（式中、Ｒは水素原子、低級アルキル基、低級アルキル
カルボニル基又はベンゾイル基を示す）で表される化合
物、その製法及び用途、並びに式［Ｉ］の化合物を産生
する能力を有するサッカロポリスポーラ（Ｓａｃｃｈａ
ｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ）属に属する微生物に関するも
のである。

【０００７】次に本明細書において用いる用語について
説明する。本明細書において使用する「低級」なる語
は、この語の付された基又は化合物の炭素数が６個以
下、好ましくは４個以下であることを意味する。

【０００８】「低級アルキル基」とは炭素数が１〜６個
の直鎖状又は分岐状のアルキル基であり、例えば、メチ
ル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル
基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチ
ル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、
ヘキシル基等が挙げられる。

【０００９】「低級アルカノイル基」とは炭素数が１〜
６個の直鎖状又は分枝状のアルカノイル基を示し例えば
ホルミル基、アセチル基、プロパノイル基、ブチリル
基、イソブチリル基、ペンタノイル基、イソペンタノイ
ル基、ヘキサノイル基、イソヘキサノイル基等が挙げら
れる。

【００１０】以下に本発明にかかわる新規な抗腫瘍性物
質ＢＥ−３９００７類の物理化学的な性状を示す。

【００１１】ここで、式［ＩＩＩ］の化合物をＢＥ−３
９９０７Ａ１と称し、式［ＩＩ］の化合物をＢＥ−３９
９０７Ａ２と称する。

【００１２】下記にＮＭＲ測定における略号の意味を以
下に示す。ｂｒ：ブロードｓ：シングレットｄ：ダブレットｄｄ：ダブルダブレットｑ：カルテットｍ：マルチプレットＪ：カップリング定数Ｈｚ：ヘルツ以下に、本発明化合物の理化学的性状を示す。ＢＥ−３９９０７Ａ１の理化学的性状性状：赤橙色固体分子式：Ｃ₈Ｈ₁₀Ｎ₂Ｏ₂ 構造式：

【００１３】

【化８】質量スペクトル：高分解能ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ１６
６．０７５５［Ｍ⁺］紫外及び可視吸収スペクトル：λ_max（ＭｅＯＨ，ｎｍ
（ε））２５９（９，０６０），３８７（１４，００
０），４８５（４，５８０）赤外吸収スペクトル ν_max（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３３
６３，１６１８，１５９９，１５６４，１５０８，１３
６９，１２５７，１１０３，８３７¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，δ
ｐｐｍ）：２．８８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），
４．０８（３Ｈ，ｓ），５．４３（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．
９Ｈｚ），６．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），
６．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ），７．３７（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．９，９．８Ｈｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，
δｐｐｍ）：２９．１，４８．６，９２．０，１２４．
２，１２６．６，１４３．３，１４４．２，１８０．４薄層クロマトグラフィー：（メルク社製キーゼルゲル６
０Ｆ₂₅₄）Ｒｆ値：０．８０（展開溶媒クロロホルム：メタノー
ル＝１０：１）溶解性：メタノール、アセトン、酢酸エチル、クロロホ
ルムに易溶、ｎ−ヘキサンに不溶。

【００１４】酸性、中性、塩基性物質の区別：塩基性物
質呈色反応：ヨード反応陽性りんモリブデン酸反応陽性ＢＥ−３９９０７Ａ２の理化学的性状性状：黄色固体分子式：Ｃ₇Ｈ₈Ｎ₂Ｏ₂ 構造式：

【００１５】

【化９】質量スペクトル：高分解能ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ１５
２．０５７８［Ｍ⁺］紫外及び可視吸収スペクトル：λ_max（ＭｅＯＨ，ｎｍ
（ε））２３４（１１，４００），３２８（８，８５
０），４３１（３，０７０）赤外吸収スペクトル ν_max（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３３
２３，１６１６，１５７９，１５１８，１４１７，１３
１５，９９３，９３９，８３９¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−
ｄ₆，ｐｐｍ）：２．６７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈ
ｚ），６．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），６．４
１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），６．４１（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），７．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．８，２．４Ｈｚ），１２．６（１Ｈ，ｂｒｓ）¹³Ｃ
−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆，
ｐｐｍ）：２８．６，８６．２，１２６．６，１３９．
７，１４３．５，１５０．１，１８１．９薄層クロマトグラフィー：（メルク社製キーゼルゲル６
０Ｆ₂₅₄）Ｒｆ値：０．７４（展開溶媒クロロホルム：メタノー
ル＝１０：１）溶解性：メタノール、アセトンに易溶、酢酸エチル、ク
ロロホルムに可溶、ｎ−ヘキサンに不溶。

【００１６】酸性、中性、塩基性物質の区別：両性物質呈色反応：ヨード反応陽性りんモリブデン酸反応陽性次にＢＥ−３９９０７類の製造法について説明する。本
発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−３９９０７類の製造に使用す
る微生物又はその変異株は、抗腫瘍性物質ＢＥ−３９９
０７Ａ１又はＢＥ−３９９０７Ａ２を生産するものなら
いずれでも良いが、例えば以下の菌学的性状を有する微
生物が挙げられる。

【００１７】Ａ３９９０７株の菌学的性状１．形態Ａ３９９０７株は気菌糸上に中空の胞子鞘で胞子（１．
３〜１．０×０．７〜０．６μｍ）が連結された直状お
よび曲状の長い胞子鎖を形成し、胞子鞘の表面は毛髪状
である。基生菌糸の断裂は認められるが、胞子のう、鞭
毛胞子、および菌核等の特殊な器官は観察されない。２．各種寒天平板培地における培養性状（２８℃ １４
日間培養）

【００１８】

【表１】３．生育温度（スターチ・無機塩寒天培地１４日間培
養）最適生育条件１２℃：生育せず１６℃：生育は痕跡程度１９℃：生育良好、気菌糸形成せず２３℃：生育非常に良好、気菌糸良好２８℃：生育非常に良好、気菌糸形成良好３２℃：生育非常に良好、気菌糸形成良好３７℃：生育良好、気菌糸形成せず４３℃：生育せず４．生理学的諸性質（１）ゼラチンの液化陽性（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地）（２）スターチの加水分解陽性（スターチ・無機塩寒天培地）（３）脱脂粉乳の凝固陰性（スキムミルク培地）（４）脱脂粉乳のペプトン化陽性（スキムミルク培地）（５）メラニン様色素の生成陰性（６）食塩耐性食塩含有量１３％以下で生育（イースト・麦芽寒天培地）５．炭素源の利用能プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各種
糖を添加して２８℃１４日間培養した。Ｄ−グルコース＋ラフィノース＋Ｄ−キシロース − Ｄ−マンニトール＋Ｌ−アラビノース − イノシトール＋Ｌ−ラムノース＋サリシン ± Ｄ−フルクトース＋シュクロース＋Ｄ−ガラクトース＋６．細胞壁組成細胞壁からはｍｅｓｏ−ジアミノピメリン酸、アラビノ
ースおよびガラクトースが検出され、細胞壁タイプはＩ
Ｖ型であると考えられる。分類上特徴ある全菌体糖成分
はアラビノース、ガラクトースであり、糖パターンはＡ
型であった。また、ミコール酸は検出されず、主要メナ
キノンはＭＫ−９（Ｈ₄）及びＭＫ−１０（Ｈ₄）であっ
た。

【００１９】以上の菌学的諸性質よりＡ３９９０７株は
放線菌サッカロポリスポーラ属に属すると考えられる。
従って、Ａ３９９０７株をサッカロポリスポーラエス
ピーＡ３９９０７（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒ
ａｓｐ．Ａ３９９０７）と称することとした。

【００２０】なお、本菌株は通商産業省工業技術院生命
工学工業技術研究所に寄託されており、その微工研受託
番号は、微工研菌寄第１４０７１号（ＦＥＲＭＰ−１
４０７１）である。

【００２１】本発明で使用される微生物は、サッカロポ
リスポーラ属に属し、抗腫瘍性物質ＢＥ−３９９０７類
を産生する能力を有する放線菌であればいずれのもので
もよいが、好ましくはサッカロポリスポーラエスピー
Ａ３９９０７又はその変異株が挙げられる。該変異株
としては、例えばＸ線若しくは紫外線等の照射処理、例
えばナイトロジェン・マスタード、アザセリン、亜硝
酸、２−アミノプリン若しくはＮ−メチル−Ｎ’−ニト
ロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）等の変異誘起剤
による処理又はファージ接触、形質転換、形質導入若し
くは接合等の通常用いられる菌種変換処理方法等により
ＢＥ−３９９０７類産生菌を変異させた微生物が挙げら
れる。

【００２２】本発明のＢＥ−３９９０７類は、ＢＥ−３
９９０７類の生産菌株Ａ３９９０７株又はその変異株を
栄養源含有培地に接種して好気的に培養させることによ
り、その培養液及びその菌体からＢＥ−３９９０７類を
採取し、要すれば薬学的に許容しうる塩とすることによ
り製造することができる。

【００２３】栄養源としては、放線菌の栄養源として公
知のものが使用でき、炭素源としては、例えば市販され
ているブドウ糖、グリセリン、麦芽糖、デンプン、庶
糖、糖蜜又はデキストリン等が単独又は混合物として用
いられる。窒素源としては、例えば市販されている大豆
粉、コーングルテンミール、コーンスティープリカー、
肉エキス、脱脂肉骨粉、ミートミール、酵母エキス、乾
燥酵母、綿実粉、ペプトン、小麦胚芽、脱脂米糠、魚
粉、無機アンモニウム塩又は硝酸ナトリウム等が単独又
は混合物として用いられる。無機塩としては、例えば市
販されている炭酸カルシウム、塩化カルシウム、塩化ナ
トリウム、臭化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネ
シウム又は各種リン酸塩等が単独又は混合物として使用
することができる。その他要すれば、鉄、マンガン、コ
バルト、モリブデン、銅、亜鉛等の重金属塩を微量添加
してもよい。また、発泡の著しい時には、消泡剤とし
て、例えば大豆油、亜麻仁油等の植物油類、例えばオク
タデカノール等の高級アルコール類、各種シリコン化合
物等を適宜添加してもよい。これらのもの以外でも、該
生産菌が利用し、ＢＥ−３９９０７類の生産に役立つも
のを適宜使用することができ、例えば３−（Ｎ−モルホ
リノ）プロパンスルホン酸、ホウ酸ナトリウム等が挙げ
られる。

【００２４】培養方法は、一般の微生物代謝産物の生産
方法と同様に行うことができ、固体培養でも液体培養で
もよい。液体培養の場合は、静置培養、撹拌培養、振盪
培養、通気培養等のいずれの培養方法を実施してもよい
が、特に振盪培養又は深部通気撹拌培養等が好ましい。
培養温度は１９℃〜３７℃が適当であるが、２３℃〜３
２℃が好ましい。培養時間は７２時間〜２８８時間が適
当であるが、１４４時間〜２４０時間が好ましい。

【００２５】培養液及び菌体から目的とするＢＥ−３９
９０７類を採取するには、微生物の生産する代謝物の培
養物から採取するのに通常使用される分離手段が適宜利
用される。ＢＥ−３９９０７類は培養濾液中及び菌体
中、主に濾液中に存在するので、培養濾液又は菌体より
通常の分離手段、例えば溶媒抽出法、イオン交換樹脂
法、吸着又は分配クロマトグラフィー法、ゲル濾過法等
を単独又は組合せて行うことにより精製することができ
る。また高速液体クロマトグラフィーや薄層クロマトグ
ラフィーなども抽出精製に適宜利用可能である。

【００２６】好ましい分離−精製の例としては次の方法
等が挙げられる。まず培養液を濾過し、濾液を得る。濾
液を酢酸エチル抽出し、抽出液を減圧下濃縮後、シリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノ
ール）に供し、ＢＥ−３９９０７Ａ１及びＡ２の粗物質
を得る。このものを再度シリカゲルカラムクロマトグラ
フィーにより精製することにより、各々を純粋な物質と
して得ることができる。

【００２７】式［ＩＩ］の化合物（ＢＥ−３９９０７Ａ
２）は有機化学の分野でよく知られたアルキル化、アル
カノイル化又はベンゾイル化の方法により、各々一般式
［Ｉ］でＲが低級アルキル基、低級アルカノイル基また
はベンゾイル基である化合物に容易に変換することがで
きる。

【００２８】例えば塩基の存在下でＢＥ−３９９０７Ａ
２を低級アルキル化剤で処理し、一般式［Ｉ］の化合物
のうちＲが低級アルキル基である化合物に導くことがで
きる。

【００２９】又、塩基存在下にＢＥ−３９９０７Ａ２を
酸無水物又は酸ハロゲン化物で処理し、対応する低級ア
ルカノイル誘導体又はベンゾイル誘導体に容易に導くこ
とができる。

【００３０】次に、本発明の化合物の有用性を示すため
に、本発明化合物の腫瘍細胞に対する増殖抑制効果をを
測定した。ＢＥ−３９９０７類の抗腫瘍活性抗腫瘍性物質類ＢＥ−３９９０７類のマウス実験腫瘍細
胞に対する増殖阻止作用を決定するため、ｉｎｖｉｔ
ｒｏで試験を行なった。マウス白血病細胞Ｐ３８８に対
する抗腫瘍作用試験は、ＢＥ−３９９０７類をジメチル
スルホキシドに溶解した後、牛胎児血清１０％含有ＲＰ
ＭＩ１６４０培地（２０μＭの２−メルカプトエタノー
ルを含む）で逐次希釈し、２×１０³ 個の腫瘍細胞を
含む細胞培養培地（牛胎児血清１０％含有ＰＲＭＩ１６
４０培地、２０μＭの２−メルカプトエタノールを含
む）５０μｌに対し５０μｌを加えた。３７℃で７２時
間、５％ＣＯ₂下で培養後、ＭＴＴ測定法により対照群
と比較した。

【００３１】マウス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ２６に対する
抗腫瘍試験は、ＢＥ−３９９０７類をジメチルスルホキ
シドに溶解した後、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６
４０培地で逐次希釈し、１×１０³個の腫瘍細胞を含む
細胞培養培地（牛胎児血清１０％含有ＰＲＭＩ１６４０
培地）１００μｌに対し１００μｌを加えた。３７℃で
７２時間、５％ＣＯ₂下で培養後、５０％トリクロロ
酢酸で固定し、０．４％スルホローダミンＢで染色後、
１０ｍＭトリス緩衝液を用いて細胞から色素を抽出し
た。４５０ｎｍを対照波長として５５０ｎｍに於ける吸
光度を測定して対照群と比較した。その結果、ＢＥ−３
９９０７類は両癌細胞に対し、強い増殖阻止活性を示
し、５０％増殖阻害濃度（ＩＣ₅₀）は第２表の通りで
あった。

【００３２】更に、ＢＥ−３９９０７類のヒト癌細胞に
対する抗腫瘍活性をｉｎｖｉｔｒｏで試験した。細胞
は、ヒト大腸癌細胞ＤＬＤ−１、ヒト肺癌細胞ＰＣ−１
３及びヒト胃癌細胞ＭＫＮ−４５を使用し、細胞培養用
培地は、全ての癌細胞共に牛胎児血清１０％含有ＲＰＭ
Ｉ１６４０培地を用いた。ＢＥ−３９９０７類をまずジ
メチルスルホキシドに溶解し、次に牛胎児血清１０％含
有ＲＰＭＩ１６４０培地で逐次希釈して検液とした。癌
細胞増殖阻害の検定は、１×１０³ 個の癌細胞を含む
細胞培養用の培地１００μｌを９６穴マイクロプレート
に分注し、３７℃で２４時間、５％ＣＯ₂下で培養した
後、上記検液１００μｌを加えた。更に、７２時間培養
後細胞を５０％トリクロロ酢酸で固定し、以下ｃｏｌｏ
ｎ２６細胞と同様の方法を用い対照群と比較検討し
た。その結果、ＢＥ−３９９０７類はヒト腫瘍細胞にお
いても強い増殖阻害活性を示し、その５０％増殖阻止濃
度（ＩＣ₅₀）は第２表の通りであった。

【００３３】

【表２】上述したようにＢＥ−３９９０７類はマウス及びヒトの
癌細胞に対し顕著な増殖阻止作用を示す。従って、本発
明はヒトをはじめとする哺乳動物の抗腫瘍剤として有用
である。

【００３４】本発明化合物を抗腫瘍剤として使用する際
の投与形態としては各種の形態を選択でき、例えば錠
剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、液剤等の経口剤、例え
ば溶液、懸濁液等の殺菌した液状の非経口剤等が挙げら
れる。

【００３５】固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。該
添加物としては、例えば乳糖、ブドウ糖等の糖類、例え
ばトウモロコシ、小麦、米等の澱粉類、例えばステアリ
ン酸等の脂肪酸類、例えばメタケイ酸ナトリウム、アル
ミン酸マグネシウム、無水リン酸カルシウム等の無機塩
類、例えばポリビニルピロリドン、ポリアルキレングリ
コール等の合成高分子類、例えばステアリン酸カルシウ
ム、ステアリン酸マグネシウム等の脂肪酸塩類、例えば
ステアリルアルコール、ベンジルアルコール等のアルコ
ール類類、例えばメチルセルロース、カルボキシメチル
セルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメ
チルセルロース等の合成セルロース誘導体類、その他、
水、ゼラチン、タルク、植物油、アラビアゴム等通常用
いられる添加物等が挙げられる。

【００３６】これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤、粉末
等の固形製剤は、一般的には０．１〜１００重量％、好
ましくは５〜１００重量％の有効成分を含むことができ
る。

【００３７】液状製剤は、水、アルコール類又は例えば
大豆油、ピーナツ油、ゴマ油等の植物由来の油等液状製
剤において通常用いられる適当な添加物を使用し、懸濁
液、シロップ剤、注射剤等の形態として製造することが
できる。

【００３８】特に、非経口的に筋肉内注射、静脈内注
射、皮下注射で投与する場合の適当な溶剤としては、例
えば注射用蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉内注射
用）、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈
内注射用液体（例えばクエン酸、クエン酸ナトリウム等
の水溶液）、電解質溶液（例えば点滴静注、静脈内注射
用）等又はこれらの混合溶液が挙げられる。

【００３９】又、これらの注射剤は予め溶解したものの
他、粉末のまま又は適当な添加物を加えたものを用時溶
解する形態もとることができる。これらの注射液は、通
常０．１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％の有効
成分を含むことができる。

【００４０】又、経口投与の懸濁剤又はシロップ剤等の
液剤は、０．５〜１０重量％の有効成分を含むことがで
きる。

【００４１】本発明の化合物の実際に好ましい投与量
は、使用される化合物の種類、配合された組成物の種
類、適用頻度及び治療すべき特定部位及び患者の病状に
よって適宜増減することができる。例えば、一日当りの
成人一人当りの投与量は、経口投与の場合、１０ないし
５００ｍｇであり、非経口投与、好ましくは静脈内注射
の場合、１日当り１０ないし１００ｍｇである。なお、
投与回数は、投与方法及び症状により異なるが、単回又
は２ないし５回に分けて投与することができる。

【００４２】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に
説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるも
のではなく、実施例の修飾手段はもちろん、本発明によ
って明らかにされたＢＥ−３９９０７類の性状に基づい
て、公知の手段を用いてＢＥ−３９９０７類を生産、濃
縮、抽出、精製する方法すべてを包含する。実施例１斜面軟寒天培地に接種した放線菌Ａ３９９０７株をグル
コース０．２％、デキストリン２％、ミートミール０．
５％、脱脂米ヌカ０．５％、脱脂肉骨粉０．２％、乾燥
酵母０．１％、硫酸マグネシウム０．０５％、臭化ナト
リウム０．０５％、塩化ナトリウム０．５％、リン酸水
素二カリウム０．１％、硫酸第一鉄０．０００２％、塩
化第二銅０．００００４％、塩化マンガン０．００００
４％、塩化コバルト０．００００４％、硫酸亜鉛０．０
０００８％、ホウ酸ナトリウム０．００００８％及びモ
リブデン酸アンモニウム０．０００２４％からなる培地
（ｐＨ７．２）１００ｍｌを含む５００ｍｌ容の三角フ
ラスコ４本に接種し、２８℃で１２０時間、回転振盪機
（毎分１８０回転）上で培養した。

【００４３】この培養液を２ｍｌずつ上記の培地を１０
０ｍｌ含む５００ｍｌ容の三角フラスコ１００本に接種
し２８℃で２４０時間、回転振盪機（毎分１８０回転）
上で培養した。

【００４４】このようにして得られた培養液（約１０
Ｌ）に酢酸エチル１０Ｌを加え、室温にて３０分間撹拌
した。これにセライトを加え、濾過法により、菌体を分
離し、酢酸エチル層を得た。酢酸エチル層を無水硫酸ナ
トリウムにて脱水後、減圧下濃縮乾固した。残渣をクロ
ロホルム１５０ｍｌに溶解し、シリカゲルカラム（１０
０ｇ，メルク社製キーゼルゲル６０）カラムに吸着し、
クロロホルムで洗浄後、クロロホルム／メタノール（１
００：１）の混液で溶出し、ＢＥ−３９９０７Ａ１を主
に含む分画１と、ＢＥ−３９９０７Ａ２を主に含む分画
２を得た。

【００４５】分画１を濃縮後、クロロホルム７ｍｌに溶
解し、４０ｇのシリカゲルカラムに付しクロロホルムで
洗浄後、クロロホルム／エタノール（２００：１）の混
液で溶出することにより、ＢＥ−３９９０７Ａ１の赤橙
色固体１９５ｍｇを得た。

【００４６】分画２を濃縮後トルエン２５ｍｌに溶解
し、４０ｇのシリカゲルカラムにかけ、トルエン／酢酸
エチル（１０：１）の混液で溶出することにより、ＢＥ
−３９９０７Ａ２の黄色固体２１ｍｇを得た。

【００４７】以下に本発明の化合物の製剤化例を示す
が、本発明の化合物の製剤化は、本製剤化例に限定され
るものではない。製剤例１本物質（ＢＥ−３９９０７Ａ１）１０部重質酸化マグネシウム１５部乳糖７５部を均一に混合して３５０μｍ以下の粉末状又は細粒状の
散剤とする。この散剤をカプセル容器に入れてカプセル
剤とした。製剤例２本物質（ＢＥ−３９９０７Ａ１）４５部澱粉１５部乳糖１６部結晶性セルロース２１部ポリビニルアルコール３部蒸留水３０部を均一に混合した後、破砕造粒して乾燥し、次いで篩別
して１４１０〜１７７μｍの大きさの顆粒剤とした。製剤例３製剤化例２と同様の方法で顆粒剤を作った後、この顆粒
剤９６部に対してステアリン酸カルシウム４部を加えて
圧縮成形し、直径１０ｍｍの錠剤を作製した。製剤例４製剤化例２の方法で得られた顆粒剤の９０部に対して結
晶性セルロース１０部及びステアリン酸カルシウム３部
を加えて圧縮成形し、直径８ｍｍの錠剤とした後、これ
にシロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁液
を加えて糖衣錠を作製した。製剤例５本物質（ＢＥ−３９９０７Ａ１）０．６部非イオン系界面活性剤２．４部生理的食塩水９７部を加温混合してからアンプルに入れ、滅菌を行って注射
剤を作製した。

【００４８】

【発明の効果】本発明のＢＥ−３９９０７類は、ヒト及
びマウスの腫瘍細胞に対して、増殖抑制効果を示すこと
から医薬の分野で抗腫瘍剤として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ０７Ｃ 251/68 8829−4ＨＣ１２Ｎ 1/20 Ａ 8828−4ＢＣ１２Ｐ 13/00 2121−4Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 13/00 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者須田寛之茨城県つくば市大久保３番地萬有製薬株式会社つくば研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式［Ｉ］【化１】（式中、Ｒは水素原子、低級アルキル基、低級アルカノ
イル基、又はベンゾイル基を示す）で表される化合物。
【請求項２】サッカロポリスポーラ（Ｓａｃｃｈａｒｏ
ｐｏｌｙｓｐｏｒａ）属に属し、式［ＩＩ］で表される
化合物を産生する能力を有する微生物又はその変異株を
培養し、その培養液及び菌体から式［ＩＩ］で表される
化合物を採取することを特徴とする、式［ＩＩ］【化２】で表される化合物の製造法。
【請求項３】サッカロポリスポーラ（Ｓａｃｃｈａｒｏ
ｐｏｌｙｓｐｏｒａ）属に属し、式［ＩＩ］で表される
化合物を産生する能力を有する微生物又はその変異株を
培養し、その培養液及び菌体から式［ＩＩ］【化３】で表される化合物を採取し式［ＩＩ］の化合物をアルキ
ル化、アルカノイル化又はベンゾイル化することを特徴
とする一般式［Ｉ］【化４】（式中、Ｒは水素原子、低級アルキル基、低級アルカノ
イル基、又はベンゾイル基を示す）で表される化合物の
製造法。
【請求項４】サッカロポリスポーラ（Ｓａｃｃｈａｒｏ
ｐｏｌｙｓｐｏｒａ）属に属し、式［ＩＩＩ］で表され
る化合物を産生する能力を有する微生物又はその変異株
を培養し、その培養液及び菌体から式［ＩＩＩ］で表さ
れる化合物を採取することを特徴とする、式［ＩＩＩ］【化５】で表される化合物の製造法。
【請求項５】微生物又はその変異株が、サッカロポリス
ポーラエスピーＡ３９９０７（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏ
ｌｙｓｐｏｒａｓｐ．Ａ３９９０７）である請求項２
記載の製法。
【請求項６】微生物又はその変異株が、サッカロポリス
ポーラエスピーＡ３９９０７（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏ
ｌｙｓｐｏｒａｓｐ．Ａ３９９０７）である請求項４
記載の製法。
【請求項７】一般式［Ｉ］【化６】（式中、Ｒは水素原子、低級アルキル基、低級アルカノ
イル基又はベンゾイル基を示す）で表される化合物を有
効成分とする抗腫瘍剤。
【請求項８】一般式［ＩＩ］の化合物を産生する能力を
有するサッカロポリスポーラ（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌ
ｙｓｐｏｒａ）属に属する微生物又はその変異株。
【請求項９】微生物が、サッカロポリスポーラエスピ
ーＡ３９９０７（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒ
ａｓｐ．Ａ３９９０７）である請求項８記載の微生物
又はその変異株。
【請求項１０】一般式［ＩＩＩ］の化合物を産生する能
力を有するサッカロポリスポーラ（Ｓａｃｃｈａｒｏｐ
ｏｌｙｓｐｏｒａ）属に属する微生物又はその変異株。
【請求項１１】微生物が、サッカロポリスポーラエス
ピーＡ３９９０７（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏ
ｒａｓｐ．Ａ３９９０７）である請求項１０記載の微
生物又はその変異株。