JPH10511685A - 子宮、卵巣及び乳房における抗増殖活性を有する薬剤の製造のためのフラバノリグナンの利用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、子宮、卵巣及び乳腫瘍の治療（及び予防）におけるシリマリン、シリビン、シリジアニン、シリクリスチン、それらの混合物、それらを含有する抽出物及び調剤などのフラバノリグナン類の利用に関する。これらのフラバノリグナン類はすでに種々の起源の肝障害の治療に用いられてきており、それらは驚くべきことにＩＩ型のエストロゲンレセプターに対する顕著な親和性、ならびに子宮、卵巣及び乳房の腫瘍細胞系への抗増殖活性を示す。

Description

【発明の詳細な説明】 子宮、卵巣及び乳房における抗増殖活性を有する薬剤の製造のためのフラバノリ グナンの利用 本発明は、子宮、卵巣及び乳腫瘍の治療及び予防のための薬剤の製造のための 、単独の又は既知の化学療法薬と組み合わされたフラバノリグナン(flavanolign anes)の利用に関する。 最近、いくつかのフラボノイドが抗腫瘍活性（Ｖｅｒｎａ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒ ｅｓｅａｒｃｈ ４８，５７５４，１９８８）、及びいくつかの腫瘍における化 学予防活性（Ｃａｓｓａｄｙ，Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．５３，２３，１９９０） を有することが見いだされた。特に、植物にほとんど偏在するフラボノイドであ るケルセチン(quercetin)は、通常の化学療法薬との相乗活性を有する他に、ヒ ト白血病細胞の増殖への（Ｄａｒｏｃｃａ，Ｂｒ．Ｊ．ｏｆ Ｈａｅｍａｔｏｌ ｏｇｙ ７５，４８９，１９９０）、及び他の細胞系への（Ｓｃａｍｂｉａ，Ｂ ｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ６２，９４２，１９９０−Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４６，１１１２，１９９０−Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａ ｃｏｌ．２８，２５５，１９９１−Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ４５，１３，１９９２）いくらかの阻害活性を有することが明らかにされた。 増殖へのそのような阻害活性の機構は未知であるが、それはこのフラボノイドと ＩＩ型のエストロゲンレセプターの相互作用に結び付いていると思われる（Ｍａ ｒｋａｖｅｒｉｃｈ，Ｊ．ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．３０，７１，１９ ８８）。ラットの子 宮において最初にＣｌａｒｋにより記載された（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５ ３，７６３０，１９７８）これらのレセプターは、真のエストロゲンレセプター （ＥＲ）と異なっており、それはこれらが比較的高濃度で存在し、エストラジオ ールに関する解離親和定数（Ｋ_D：１０〜２０ｎＭ）がエステロゲンレセプター （Ｋ_D：０．２〜１ｎＭ）のそれより低いからである。 今回、驚くべきことに、すでに種々の起源の肝障害の処置のための治療におい て広く用いられ、その主要な３つの成分がシリビン(silybin)、シリジアニン(si lidianin)、シリクリスチン(silicristin)及びデヒドロシリビン(dehydrosilybi n)の名称で既知であり、下記： に報告される構造を有するフラバノリグナン、その中でもシリマリン(silymarin )がＩＩ型のエストロゲンレセプターに対する高い親和性、ならびにシス−プラ チン及びアドリアマイシンに対して耐性の子宮、卵巣及び乳腫瘍細胞系に対する 非常に顕著な抗増殖活性を有することが見いだされた。フラバノリグナンの抗増 殖効果を証明するために、種々のヒト腫瘍に由来する種々の安定化細胞系の増殖 曲線を該化合物の存在下で調べ、卵巣癌試料中におけるＩＩ型ＥＢＳとのその相 互作用の能力を評価した。 エストロゲンレセプターへの結合の決定は、コウシ血清及び２００単位／ｍｌ のペニシリンが加えられたＤｕｌｂｅｃｃｏ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｍｅｄｉｕｍ を培地として用いて単層中で培養された卵巣腫瘍又は他の臓器の腫瘍の細胞上で 行われた。試験に用いられた細胞は毎週トリプシン処理され（ｔｒｙｐｓｉｎａ ｔｅｄ）、８ｘ１０^-4／ｍｌの濃度でプレート上で平板培養され、５％ＣＯ₂及 び水分を含有する空気雰囲気下で３７℃においてインキュベートされた。生成物 の抗増殖活性の標準として、細胞を４ｘ１０⁴／ｍｌの濃度でウェル（Ｆａｌｃ ｏｎ ３０４６，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＮＹ）中に入れた。２４ 時間後、培地を新しい培地で置換し、無水エタノールに溶解されたフラバノリグ ナンを加える。標準は同じ実験条件で、活性成分が不在のビヒクルのみで処理す る。上記の処理を２４時間の間隔で、７２時間の試験時間の間繰り返す。細胞増 殖の阻害は、細胞の直接計数により、処理された試料の増殖に対する対照の増殖 と比較して評価する。 レセプターの用量のために、２４時間後の細胞を、単独の又は１００倍量のジ エチルスチルベストロールの存在下におけるスカラー量(scala r amounts)の標識エストラジオール（³Ｈ−Ｅ２ ４０Ｃｉ／ミリモル，Ａｍｅ ｒｓｈａｎ ＵＫ）と共に４℃で２．５時間インキュベートする。 インキュベーション時間の最後に、細胞を新しい基質で迅速に洗浄し、１Ｍの ＮａＯＨと共に３０分間インキュベートする。シンチラーを用いて放射活性を測 定し、ジエチルスチルベストロールを含有するか又は含有しない試料の間の差か ら結合特異性を算出する。結果を通常の文献（Ｒａｎｅｌｅｔｔｉ，１９８８） の方法に従って細胞当たりの結合部位の数として表す。 細胞増殖への阻害を、処理された細胞の増殖に対する対照の増殖を比較する細 胞の直接の計数により評価する。 種々の細胞系に関する結果を図１ならびに表Ｉ及びＶにて報告する。特に図１ はＡ２７８０ ＷＴ、卵巣癌細胞系ＥＲ陰性、ＩＩ型陽性に対するシリビンの抗 増殖活性を示す。 結果は３重に行われた２回の実験の平均である。標準偏差は１０％未満である 。 抗増殖活性は用量依存性である。表Ｉは細胞増殖において０．０１μＭ〜２０ μＭの濃度で用いられたシリビンに関するデータを報告しており；シリビンは、 化学療法薬に耐性の細胞系（ＭＣＦ−７ ＡＤＲｒ、Ａ２７８０ ＣＩＳ）を含 む種々の細胞系に対し、４．８〜２４μＭのＩＣ₅₀で用量依存性抗増殖効果を与 えている。 シリビンの抗増殖活性をさらに研究するために、Ａ２７８０ ＷＴ細胞周期へ のこの物質の効果を研究した。表ＩＩに示される通り、サイトフルオリメトリー （ｃｙｔｏｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｉｃ）分析は、シリビンがＳ相細胞のパーセン テージを減少させ、相ＧＯ／Ｇ１のパーセンテージを穏やかに増加させることを 明らかにしている。 これらに結果に基づき、シリビンをいくつかの化学療法薬、特にシスプラチン （ＣＩＳ）及びアドリアマイシン（ＡＤＲ）の効果への増強に関して調べた。表 ＩＩＩに報告する通り、シリビンがＣＩＳと組み合わされて用いられると、単独 で用いられる対応する投薬量の薬剤と比較して、増殖に対する相乗的阻害効果が 観察される。 ＡＤＲと組み合わされたシリビンを用いて類似の結果が得られる（表ＩＶ）。 シリビンとアドリアマイン又はシスプラチンとの組み合わせのそのような効果 が相乗的作用によるか又は加算的作用によるかを確かめるために、Ｂｅｒｅｎｂ ａｕ（Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２５，２６９，１９８１）によるイソ ボリック法（ｉｓｏｂｏｌｉｃ ｍｅｔｈｏｄ）を用いてデータを分析した。得 られる組み合わせ指数は親細胞系（Ａ２７８０ ＷＴ、表ＩＩＩ）及び耐性細胞 系（ＭＣＦ７、ＡＤＲｒ、表ＩＶ）の両方において１未満であり、かくして２つ の薬剤の組み合わせが相乗的抗増殖活性を生むことを示した。 シリビン及びその類似体の抗増殖活性は安定化細胞系のみでなく、ヒト腫瘍初 代培養物に関しても観察される。調べられた複数のフラバノリグナンが類似の挙 動を有する。表Ｖにおいて、シリビン、シリジアニン、シリマリン及びデヒドロ シリビンに関連するデータを報告する。シリビン及びイソシリビンのジアステレ オマー形態は、これらの試験において同様に活性である。 さらに、通常の文献の条件に従ってヌード無胸腺マウスに体内埋植された腫瘍 の寸法を測定することにより、上記のフラバノリグナンが生体内細胞増殖を阻害 することが証明された。１〜１００ｍｇ／ｋｇの投薬量で動物を処置すると、調 べられている腫瘍が高パーセンテージの個体において顕著に後退し、消失に至る ことが証明された。人間において生成物は、タモキシフェンなどの既知の薬剤の 活性より高い卵巣、乳及び子宮腫瘍における活性を有することが証明された。 シリジアニン、デヒドロシリビン及びシリビンの２つのジアステレオマー形態 は特に顕著な活性を示した。試験管内試験の場合、フラバノリグナンはそのまま で用いられたが、生体内試験の場合は、ＥＰ−Ａ−０２０９３８に記載のリン脂 質とのその複合体が用いられた。 本発明に従うと、経口的に又は輸液によりフラバノリグナンを投与することが でき：経口的経路の場合、天然又は合成リン脂質が担体として特に有用であるこ とが証明され、それはそれらが該化合物と上記に挙げた脂質溶解性の安定な複合 体を形成するからであり、ならびに単一の化合物の、その天然の混合物の又はそ れらを含有する抽出物の生物利用性を強化することができる中鎖脂肪酸トリグリ セリドを含む液体半合成グリセリド類又はその類似体が有用である。 ヒトにおけるフラバノリグナンの投薬量は、５０〜１５００ｍｇ／日の範囲で あり、主に経口的経路により投与される。 本発明は、抗腫瘍治療における同時、連続又は分離使用のための、組み合わせ の形態のシリマリンフラバノリグナン及び抗腫瘍薬を含有する組成物にも関する 。 以下の実施例は本発明をさらに例示するものである。 実施例１ 大豆ホスファチジルコリンとのシリビンの複合体を含有する硬質ゼラチンカプセ ル。 組成： シリビン−大豆ホスファチジルコリン複合体 ３００ｍｇ ナトリウムカルボキシメチルセルロース １６ｍｇ タルク ６ｍｇ ステアリン酸マグネシウム ３ｍｇ 実施例２ デヒドロシリビンを含有する軟質ゼラチンカプセル 組成： デヒドロシリビン ２５０ｍｇ 液体半−合成グリセリド ３００ｍｇ 部分的水素化植物油 ４９ｍｇ 大豆レシチン １ｍｇ 実施例３ 大豆天然リン脂質とのシリマリンの複合体を含有する硬質ゼラチンカプセル 組成： シリマリン−大豆天然リン脂質複合体 ３６０ｍｇ ナトリウムカルボキシメチルセルロース ２１ｍｇ タルク ６ｍｇ ステアリン酸マグネシウム ３ｍｇ 実施例４ 大豆ホスファチジルコリンとのシリジアニンとの複合体を含有する硬質ゼラチン カプセル 組成： シリジアニン−大豆ホスファチジルコリン複合体 ２００ｍｇ ナトリウムカルボキシメチルセルロース １０ｍｇ タルク ３ｍｇ ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】１９９７年７月２２日 【補正内容】 請求の範囲 １．ＩＩ型のエストロゲンレセプターに対する拮抗活性及び抗増殖活性を有す る薬剤の製造のための、シリマリン、シリビン、シリジアニン、シリクリスチン 、デヒドロシリビン、それらの混合物又はそれらを含有する抽出物から選ばれる フラバノリグナンの利用。 ２．ＩＩ型のエストロゲンレセプターに対する拮抗活性及び抗増殖活性を有す る薬剤の製造のための、シリマリン、シリビン、シリジアニン、シリクリスチン 、デヒドロシリビン、それらの混合物又はそれらを含有する抽出物から選ばれる フラバノリグナンのリン脂質との複合体の利用。 ３．活性成分としてシリマリン、シリビン、シリジアニン、シリクリスチン、 デヒドロシリビン、それらの混合物又はそれらを含有する抽出物から選ばれるフ ラバノリグナンを、場合によりリン脂質との複合体の形態で、抗腫瘍薬と組み合 わせて含有するＩＩ型エストロゲンレセプターに対する拮抗活性及び抗増殖活性 を有する、同時、連続的又は分離使用のための製薬学的組成物。 ４．経口的投与に適した請求の範囲第３項に記載の組成物。 ５．担体として平均的鎖の脂肪酸の液体半合成グリセリドを含有する請求の範 囲第４項に記載の組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，Ｍ Ｋ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ， ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ＩＩ型のエストロゲンレセプターに対する拮抗活性及び抗増殖活性を有する 薬剤の製造のための、シリマリン、シリビン、シリジアニン、シリクリスチン、 デヒドロシリビン、それらの混合物又はそれらを含有する抽出物から選ばれるフ ラバノリグナンの利用。 ２．ＩＩ型のエストロゲンレセプターに対する拮抗活性及び抗増殖活性を有する 薬剤の製造のための、シリマリン、シリビン、シリジアニン、シリクリスチン、 デヒドロシリビン、それらの混合物又はそれらを含有する抽出物から選ばれるフ ラバノリグナンのリン脂質との複合体の利用。 ３．活性成分としてシリマリン、シリビン、シリジアニン、シリクリスチン、デ ヒドロシリビン、それらの混合物又はそれらを含有する抽出物から選ばれるフラ バノリグナンを、場合によりリン脂質との複合体の形態で、ならびに場合により 同時、連続的又は分離使用のための抗腫瘍薬と組み合わせて含有する、ＩＩ型エ ストロゲンレセプターに対する拮抗活性及び抗増殖活性を有する製薬学的組成物 。 ４．経口的投与に適した請求の範囲第３項に記載の組成物。 ５．担体として液体半合成中鎖脂肪酸グリセリドを含有する請求の範囲第４項に 記載の組成物。