JPS58164561A - 新生理活性ペンタペプチド及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はアルカリフォスファターゼ（牛の肝臓由来）を
阻害する活性を有する新規な生理活性はンタベブチドに
関し、またその製造法に関する。

詳しく言えば、本発明は次式 （１） で表わされる新規なペンタペプチド、製薬学的に許容し
うるその塩およびそれらの水和物（以下。

単に本発明化合物と舊うことがおる）に関する。

ま九、そのらの製造方法、およびそれらを含有する製薬
学的調製物Ｋｙａするものである。本発明化合−は、牛
の肝臓中に存在するアルカリフォスファターゼを強く阻
害する生理活性および制癌作用を有する。アルカリフォ
スファターゼは主として細胞膜に存在し、を九小胞体、
リソシーム、ミトコンドリア外膜、ゴルジ体、Ｉｌ膜な
どに見出される。

生体内におけるアルカリ７オスフアターゼ本来の生理的
意義については、いまだ確立されていない、しかし１本
酵素に膜結合のものが多いこと中、その局在性から膜機
能に何らかの役割（九とえば、合成１分解、輸送など）
を釆九しているものと推測される（菰田ニー、坂田良克
、蛋白質・核酸・酵素２４．１５１〜１４４　（１９７
９））。

アルカリ７オス７アターゼ阻害物質ＦｉｍｌｌｌｌＫ存
在する酵素あるいは結合蛋白などに結合したのち、免疫
を含む細胞機能に影響を与える可能性のあることが示唆
される。

現在、アルカリ７オス７アターゼの阻害物質として、フ
オルヘニシン、レバ建ゾールなどが知られているが、こ
れらの化合物はいずれも免疫賦活作用を有する。本発明
化合物は、細胞毒性がないにもかかわらず、動物実験に
おいて制癌作用を示し、この物質がアルカリ７オスフア
ターゼの阻害活性を持つことを考慮すると、この制癌作
用には免疫の関与が考えられ、医薬の領域において制癌
剤、および免疫賦活剤として有用な化合物である。

本発明者らは、微生物の培養液中にアルカリ７オスフア
ターゼ阻害物質を探索し、微生物ＩＭＧ　５９−１２株
が、新規な構造を有するアルカリフォスファターゼ阻害
物質を生産することを見出し、この化合物が同時に制癌
作用を有することを発見しえ。

本発明はバチルス属に輌し且つ次式 （１） で示されるペンタペプチドを生産する−を培養し。

培養物中から該ペンタペプチド又はその塩又は水和物を
採取することを特徴とする該ペンタペプチド又はその塩
又は水和物の製造法に一関する。

前記はンタベプテド生産１の例には、昭和５ｓ年７月、
微生物化学研究所構内の土壌よ砂分離したバクテリアで
、１ＭＧ５９−１２０−株番号が付されたものがある。

１ＭＧ５９−１２株の１学的性状 １、　形態 １ＭＧ５９−１２株は、グラム陽性の有芽胞桿鉋で、１
体の大きさは１．２〜１，４　Ｘ　２．６〜Ｓ、６イク
ロン位で、鞭毛を認めない。芽胞は、卵円形。

０．９〜１．ＯＸ　１．６〜１．８ミタロン位の大きさ
を示し、その位置は中立（ｅ＠ｎｔｒａｌ　）　＋　陶
体の明瞭な膨隆は−められない、非抗酸性である。

２、　各種培地における生育状態 肉汁ゼラチン穿刺培養以外は、すべて３７℃で培養し九
。

（１）肉汁寒天平板培養 コロニーは、光沢のない不透明な円形で、辺縁は不規則
、色は蒼白（Ｂｒｏｗｎｉｓｈ　ｗｈｉｔｅ　）を示す
。

（２）肉汁寒天斜面培養 一線にそってよく生育し、光沢のない不透明な一面を呈
する。

（１）　　１ｌｉｌｉ汁液体培養 培養１日目で培地全体が濁り、試験管底部にわずかに陶
体が沈澱する。培養後７日目まで、培地全体の濁りはほ
とんど変化せず、試験管底部の菌体は増加してくる。培
地表面に１膜は形成されない。

（４）肉汁ゼラチン穿刺培養 ２０℃で培養すると、培養１日目に培地表面に増殖が−
められ、２日目から液化が始まる。

その型ｉ状で、６日目で深さ５龍位まで液化され、８日
目には約１１２１の深さまで液化され九のみで、完了を
誌めなかった。５０℃培養では、培養２日目に培地表面
の増殖を紹め、５日目から液化が始ｔｂ、１１日目に完
了した。

（５）ＢＣＰミルク ｎｃｐｔ＋夕培地に３７℃で培養すると、培養３日目か
らＢＣＰが實変し、凝固が−められる。培養液４日目に
は凝固が完了し、直ちにペプトン化が始まヤ、約２遍間
で完了し友。

（６）サブロ−・デキストａ−ス晦天培地およびサブロ
ー・デキストロース・プロス サブロー・デキストロース寒天斜面およびサブｐ−・デ
キストロース・プロス（ペプトン１０ｆ、デキストロー
ス４０ｆ、寒天１５ｆ、＄１製氷１０００ｍｇ　−ｐＨ
５−６；サブロー・デキストロース・ブースは斜面培地
から寒天を除いたもの）に培養すると、液体培地ではほ
とんど生育を緒めないが、斜面培地では発育が認められ
友。

６、　生理的性質 ％に紀さない限〉、培養温縦はすべて５７℃である。

（１）　　硝酸塩の還元 硝酸塩肉汁培地（牛肉エキス１０ｆ、ペプトン１０　ｔ
　、　ＮａＣＬ　５　ｆ　、　ＫＮＯａ　１　ｔ　、精
製水１０００ｍｇ、ｐＨ７，２）およびコハタ鐵−硝酸
塩培地（コハタ酸ナトリクム１０　ｔ　、　Ｋ２ＨＰＯ
４１ｆ　−ＮａＮ０ｍ１　　ｆ　、Ｍｇ１ｌＯ，・７Ｍ
、０　０．５　ｆ　、　　ＫＣＡ　　Ｏ，２ｆ　。

Ｆ　＠　８０４　’　７８１０黴量、精製水１０００ｍ
１．　ｐＨ２２）で、培養１＋　５．６日目のいずれの
場合も亜硝酸塩の検出をみなかつえ。

（２）脱窒反応 脱窒反応試験を駒形らの方法（長谷用武治編着；黴生物
の分類と同定２２５真、東京大学出販金、１９７５年）
で行なつ九結果、陰性であつ九。

（５）Ｍ鼠テスト プロテオース・ペプトン７ｆ、プドク＠５２゜ＮａＣＬ
　５　ｆ　、精製水１ｏ　ｏ　Ｏｓｇ、　ｐＨ７，ｏ　
（無修正）の培地（Ｂ＠ｒｇ＠ｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　
ｏｆ　Ｄａｔ＠ｒｖａ１ｍａｔ１ｖ＊１１ａｏｔ＠ｒｌ
ｅｌ＠ｇｙ　　８ｔｈ　　＠ｄｌｔｉｏｎｙ　　Ｒ，Ｅ
＋　ｌｌｓｃｈｍｎａｍ　　＆Ｎ、　Ｅ、　Ｇｉｂｂｏ
ｎｓ、　ＴｈＩＷｌｌｌｉａｍｓ　＆　ＷＩｅｋｌｍｓ
Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｂａｌｔｉｍｏｒ・”、　ｐ、　５
５２　＋　１９７４　）を　　　１用いて、６０℃およ
び５７℃で培養し、１，２゜５日目にメチルレッド試験
を行なつ九結果、３０℃では３日目の、５７℃では２．
５日目の培養液が陽性を示した。

（４）ＶＰテスト ＭＫｆストに用い友培養箪で同時ＫＶＰ反応を試験し九
が、いずれ−陰性であった。

（５）インドールの生成 ペプトン１０ｆ、ＮａＣ４５Ｆ、精製水１０００ｍｇ、
ｄＨ７，２の培地で培養し、コバツク試薬、シュウ酸紙
、パラージメテルアイノベンズアルデヒド試験紙のそれ
ぞれの方法で試験し九が、培養１８日＠まですべて陰性
であった。

（６）硫化水素の生成 ？８Ｉ寒天培地（ＴｒｉｐｌＩｓｕｇａｒ　１ｒｏｎ　
＆ｇａＦ。

栄研）で、７日間培養したが硫化水素の生成は認められ
なかった。

（７）デンプンの加水分解 可溶性デンプンをＱ、２−含んだ肉汁寒天平板に画線培
養して、５日目に曹−ド・ヨードカリ液で試験し九結釆
、デンプンの分解が鎮められた。

（８）クエン酸の利用 コーサーの培地及びクリステン七ン・クエン酸塩培地で
、クエン酸の利用を認めた。

（９）無機饅素振（硝酸塩およびアン毛ニウム塩）の利
用 基礎培地（ブドウ糖１０　ｆ　、　ＫＨ，ＰＯ４１ｆ　
。

Ｍｇ８０．・７Ｈ鵞００．５ｆ、　ＫＣｊ　Ｏ，２Ｆ、
精製水１０００ｍ、ｐＨ７，２）Ｋ各窒素源ＮａＮ０１
１　ｆ　。

（ＮＨ４）！８０４　　［Ｌ　７８　ｔ　、グルタずン
酸ナトリウム１．７ｆを加えて試験し九結果、いずれの
場合も増殖し、利用することを認めた。

（１０）色素の生成 キングム寒天培地（栄研）で１夜培養価、室温に１２日
間放置、一方、キングＢ寒天培地（栄研）で１５日間培
養すると、キングＡでは５日目に、キングＢでは１１日
目に、うす茶色の溶解性色素をわずかに認めた。

（１１）ウレアーゼ 尿素培地（栄研）で、２４時間培養したが、ウレアーゼ
陰性であった。

（１２）オキシダーゼ テトク四−ム・オキシダーゼ試験紙（日永）で試験した
結果、オキシダーゼ反応陰性であり九。

（１５）力！ラーゼ 肉汁寒天斜面培地で１夜培養し九新鮮−について、３チ
過酸化水素水でカタラーゼ試験を行うと、気泡を認め陽
性であった。

（１４）生育の範囲 滅■稜の−がそれぞれ５．０　、４．０　、　５．０　
、６．０゜７、０　、７．８　、８．６　、９．６０内
汁ブイ盲ン培地で、２４時間培養すると、−５，０〜８
．６の範囲で生育を１め九、生育の最適ｐＨ１ｊ、　６
．０〜７．８である。又、肉汁ブイヨン培地に接１ｍ後
、７，１２゜１４．２０，２４，２７，５０．５７．５
０℃の各温度で、それぞれ２４時間培養すると、１２〜
５７℃ＯＩｉ囲で生育な瞳め、５日間培養では５０℃に
お込てもわずかに生育が認められ丸。

生育の最適温度は、３７℃前後である。

（１５）　Ｈ素に対する態度 １９６プドク糖肉汁寒天培地ＫＩＩｉ［を懸濁９ＩｋＩ
ＮＩｉ層に固めて培養すると、培地表面及び費−に近い
部分によく生育した。

（１６）　Ｑ−Ｆテスト（ＨＢｈ−Ｌ＠１ｆｔｏｎ試験
）好気的、嫌気的条件のいずれの場合も生育弱く、わず
かではあるがブドウ糖を分解し、酸を生成した。

（１７）糖類からの酸およびガスの生成基礎培地（（Ｎ
Ｈ４）、ＨＰｏ、　　１ｔ　、　Ｋｃｔ　Ｏ，２ｔ　。

Ｍｇ８０．・７ＨｔＯＯ，２ｔ　、隣母エキス０．２ｆ
、鎌天１５ｔ、ブロムクレゾール−パープル０．２−水
溶液４−１精製水１０００ｍ、ｐＨ７，０）に別に滅菌
した糖をそれぞれ鍛終１１１度が１−になるように加え
、斜面に固めた後、１ＭＧ５９−１２株を培養し、５０
日間にわたって、酸の生成を観察した。その結果、Ｄ−
マンノース、Ｄ−７ラクトース、Ｄ−ガ２クトース、麦
芽糖、シヨ糖、乳糖、トレハロース、Ｄ−ソルビット、
Ｄ−グルコース、Ｌ−７２ビノース、Ｄ−キシロース、
Ｄ−マンニットからは、それすれ酸を生成したが、イノ
ジット、グリセリン、デンプンからは、いずれも酸を生
成しなかった。

一方、ガスの生成は、基Ｉ！培地（ペプトン５ｆ、酵母
エキス５　ｆ　、　）ＪａＣＬ　５　ｆ、寒天５Ｆ、ブ
ロムクレゾール−パープル０．２−水溶液４−１精製水
１ｏ　ｏ　Ｏｊ、　ｍ７．ｏ　）に前記と同様に６糖を
加え、高層に固め先後、１ＭＧ５？−１２株をそれぞれ
穿刺培養し、ｓＯ日日間わ九って観察した。上記の糖の
いずれからも、ガスの生成は認められなかった。

（１８）カゼインの加水分解 カゼイン寒天平板（崗汁瞭天に滅−し友脱脂牛乳（Ｄｉ
ｒｅｏ　ＩＩ　）を５−の＊直に加え、固化した。ｐ１
１７．４）Ｋ１１１１培養すルト、培１１＆１Ｅ１１４
からカゼインの消化が謔められ、１１日目で加水分解が
完了した。

（１９）塩化ナトリウムの耐性 基礎培地（ペプトン１０ｆ、精製水１０００ｍｇ。

−７，０に、７９！のａｆになるように塩、化ナトリウ
ムを加え、１液を接種後静置培養し、７日間にわたって
鉋の増殖をＩＩＩＩＬ、九。その結果、基礎培地と塩化
ナトリウム７ｓを含む双方の培地で、培養後１日目から
同根贋の鉋の増殖が観察されえ。

（２０）　フェニルピルビン酸試験 り＠Ｌ−フェニルアラニン２１．＠母エキス３ｆ　、　
Ｎａ１Ｈデ０４１Ｆ、ＮａＣｊ５Ｆ、寒天２０ｆ。

精製水１０００ｍ、１１７．２組成の斜面培地に培養し
、培養後１日目及び７日目に１Ｄ−塩化第二鉄水溶液で
試験し九結釆、共に陽性であつ九。

（２１）チロシンの溶解性試験 チロシン寒天培地（ペプトン５１．肉エキスＳｔ、寒天
２０ｆ、糟製水１０口０−、チロシン５１Ｆ、ｐＨ７，
２）で培養し、５日目ごろよりチロシンの溶解が繍めら
れた。

（２２）リゾチーム感受性 基礎培地（イブトン１０ｆ、牛肉エキス１０ｆ、　Ｎａ
ＣＬ　５ｆ、　ｐｔ１７．４　）に別に滅菌したリゾチ
ームを０．００１９６になるように加え、−を接１１［
、ロータリ・シェーカー（ｒ、ｐ、ｍ、１８０）で６０
℃、７日間振とり培養したが、菌の増殖は全く４められ
なかつ九。

以上の性状を要約すると、１ＭＧ５９−１２株は好気性
のグラム陽性の有茅胞桿謔で、鞭毛を鑓めず、運動性も
確認できない。芽胞は卵円形で中立（Ｃ＠ｎｔｒａｌ　
）、菌体の明瞭な膨隆は−められず、又耐熱性である。

寒天培地で、光沢のない辺縁が不規則な不透明な円形の
コｏニーを形成し、筐体培地で１膜を形成することはな
い、ゼラチンを液化し、ＢＣＰミルクを實変して凝固し
、ペプトン化する。サブロー・デキストロース・プロス
では発育が認められないが、ナプロー〇デキストロース
寒天培地で発育がみもれる。硝酸塩を還元せず、脱窒反
応陰性、ＭＲテスト陣性、ｖｐテスト陰性である。イン
ドールは培養１８日目まで検出されず、硫化水素の生成
も−められない。デンプンを分解し、クエン酸を利用す
る。ウレアーゼ反応陰性、オキシメーゼ反応陰性、カメ
ラーゼ反応陽性である＊　ｐＨｓ　ｏ〜＆６の範囲で生
育し、最適−は、６・０〜７．８である。また、１２〜
５０℃の範囲で生育し、最適温度ｔｉ３７℃前後である
。プドク輔を酸化的および発酵的に分解し、酸を生成す
る。

Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、
Ｄ−マンニットからそれぞれ酸を生成するが、ガスは生
成しない。カゼインを加水分解し、チロシンを溶解する
。リゾチームには感受性である。

以上の性状をもとに、１ＭＧ５９−１２株をＢ＊ｒｇ＠
ｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　Ｄ＠ｔ＠ｒｍｉｎａｔｉｖｅ　
Ｂａｅｔ＠ｒｉａｌｅｇｙ８ｔｈ　ｅｄｉｔｉｏｎ　（
Ｒ，Ｅ、　Ｂｗｅｈａｎａｎ　＆　Ｎ、　Ｅ、　Ｇｉｂ
ｂｏｎｓ。

ＴｈＩ　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　　＆　Ｗｌｌｋｊｔｓ　　
Ｃｏｍｐａｎｙ、ｌａｌｔｉｍｅｒ＊。

１９７４）で検索すると、５５６真バチルス・メガテリ
ウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ　）が
最龜近嫌の橿として挙げられる。

ＢＭＧ５？−１２株の性状をバチルス・メガテリウムの
性状と比較し、又当研究所保管の１株バチルスｅメガテ
リウムＡＰＦａ：について、同時に比較試験した底積も
合せて示すと、次の衆１のようＫなる。

表１　：１１ＭＧ５９−１２株とバチルスｅメガテリク
ムとの性状の比較 性質　　　／サルスリゴテ１五　１旺籠１１体の膨隆　
　　　　　−、（−）　　　　　　　　−芽胞の位置　
　　　中立、（中立）　　　　　　中　立グラム染色　
　　　　　　　＋　　　　　　　　　＋デンプンの加水
分解　　　　＋　　　　　　　　　＋クエン陵塩の利用
　　　　　　＋　　　　　　　　　＋硝酸塩の還元　　
　　　　　　ｄ　　　　　　　　−カゼインの加水分解
　　　　＋（＋）十チロシンの溶解　　　　　　ｄ　（
＋）　　　　　　　＋（）内は当研究所保管のバチルス
・メガテリウムムＰＦ株の試験結果 バチルス・メガテリウムの場合 注：＋＝９０〜１００チの株で陽性 −＝９０〜１００チの株で陰性 ｄ寡１１〜８９−の株で陽性 表から明らかなように、１ＭＧ５９−１２株は、バチル
ス・メガテリウムに極めて近縁である。又、この種の特
徴といわれるポリ・ベータ・ハイドロキシブチレート（
ｐｏｌｙ−β−ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｓ　）様
の細胞内小球を、１ＭＧ５９−１２株とバチルス書メガ
テリウムムＰＦ株（尚研究所保管）の双方を弱く単染色
した際に、それぞれ数個ずつ確認できよって、１ＭＧ５
９−１２株をバチルス・メＩテリ　　ウ　Ａ　　　（ｌ
１ａｅｉｌｌｎｓ　　　ｍｅｇａｔ＠ｒｉｍｍ）　　Ｂ
　　ＭＯＳ　　　９　　　＝　　１１　２と一定する。

なお、８ＭＧ５９−１２株を工業技術院微生物工業技術
研究所に、昭和５６年１０月９日寄託申請し、受託番号
は黴工研−寄第６１７７号である。

本発明化合物はこれを生産するバチルス属に属する８Ｍ
Ｇ５９−１２株の胞子または一系を栄養源含有培地に接
種して好気的に発育させるととによって得られる。栄養
源としては、細１．放ｌｌＩ■などの栄養源として公知
のものが使用できる。例えば、市販されているグリセリ
ン、グルコース。

ラクトース、曹糖、澱粉、マルトース、願書などの炭水
化物あるいは脂肪（動物脂肪、大豆油、綿実油、落花生
油などの植物神）などの炭素源および市販されているは
プトン、肉エキス、コーンステイブリカー、コーングル
ーテン建−ル、Ｍ実油。

落花生粉、大豆粉、酵母エキス、Ｎ−Ｚ−ア（ン。

カゼイン、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウム。硫鹸アンモ
ニウムなどの窒素源と食塩、燐険塩、嶽酸カルシウム、
硫＃マグネシウ五などの無機塩を使用できる。その他、
必要に応じて微量の金属塩を添加する。これらのものは
本発明化合物生産−が利用し、まえ本発明化合物の生産
に役立つものであれば良い。公知の細鉋、放Ｍｉｌｌな
どの培養材料はすべて利用できる。培養源ＦＩＬは本発
明化合物を生産する範囲で適用し得るが、殊に好ましい
のは２５〜５５℃である。培養は普通本発明化合物が充
分蓄積するまで維続される。例えば、グリセリン３−、
カゼイ７　！ｉ−−ＮａＣｔＯｌｌ　＄　−ＫｔＨＰＯ
４０，１％　、　Ｍｇ８０ａ”　７Ｈ，ＯＯ，３％　（
Ｄ培１ｍをｐＨ７，６に―贅し、＃ｄｌＬ走後、８ＭＧ
５９−１２株のＩＩｉ＋向培養したものから胞子および
菌糸を接種し、２８℃で好気的に揚盪培養を行うと培養
２５〜２７時間目に培地ｉＫ本発明化合物の蓄積が−め
られ九。

本発明化合物の抗アルカリフォスファターゼ活性は次の
方法で測定される。すなわちパラニトロフェニルリン酸
二ナトリウム塩（第一化学社製）を基質とし、牛の肝臓
よシ得九アルカリフォスファターゼ（シグマ社製、米国
）によシ加水分解されて遊離するパラニトロフェノール
を比色法により足置する方法である。パラニトロフェニ
ルリン酸二ナトリウム塩を水に＃ｌ解し、０．１Ｍ溶液
とする。この基質溶液０．０４−に０．５　Ｍ　２−ア
イノー２−メチル−１，５−プロパンジオール緩衝液（
’ｐＨ９，０）υ、３２　ｓｄ、　０．２　Ｍ塩化マグ
ネシウム０．０２ｍ、および蒸−水、あるいは検体を含
む水溶液０．１−を加え、３分間３７℃で加温したのち
、アルカリフォスファターゼ５０μｔを１−の蒸留水に
溶かした溶液０．０２−を加えて５７℃、２０分反応し
、０．１５Ｎ苛性ソーダ１．５−を加えて反応を止め、
毎分５０００回転、５分間遠心することによ）得た上溝
液の４２０１１１１１における吸光度（ａ）を＃１足し
丸。同時に上記検体を含まない、蒸留水のみを加えた対
照の吸光［（ｂ）を醐足し、阻害率を（ｂ−ａ）／ｂｘ
１ｏＯＫより計算した。この方法で不発明化合物は３．
４Ｘ１０ＭＭ　で５０ｄｌｉｌｉ害嬢良（ＩＣ，、）を
示し丸。

不発明化合物は、生産−の培＊＊中に主として存在する
。培養液中の本物質の分離精製は、微生物の生産する代
−産物をその微生物の培養物からの採取するのに通常使
用される分離手段が適宜使用される。本発明化合物は、
水溶性酸性物質であるので例えば次のような精製方法が
利用できる。

培養ろ液を陽イオン交換向脂、例えばダイヤイオンＰＫ
−２１６（Ｈ”）（三菱化成社）力、２ムに流し、この
カラムに吸着しない通過液を活性炭に吸着させ、含水メ
タノール、含水アセトンなどで浴出し、有効成分を集め
て濃縮し、ＤＥＡＲ−七ファデツクス（ファルマシア社
）に吸着させ、ギ酸ナトリウムにて溶出することによシ
精製し、ダイヤイオンＰＫ−２１１６（）ｌ”）にて脱
塩を行うととＫよ）本発明化合物を得ることができる。

次に本発明化合物の理化学的性状について述べる。

本発明化合物は、水、希塩酸およびトリフルオロ酸＃に
可溶であるが、アセトン、酢酸エチル。

ベンゼンＫｆｌ解である。

本発明化合物は、ニンヒドリン、ライドン−スイス試薬
、モリブデン酸アンモニウム−涌塩素敵（Ｈ口■試薬）
、および過マンガン酸カリウムの諸反応に陽性で、２，
４−ジニトｐフェニルヒドラジン、ボーリイ試薬、坂ロ
試薬、エーリツヒ試薬、レゾルシン−塩酸の諸反応は陰
性である。

本発明化合物の薄層クロマトグラフィーはシリカゲル（
Ｅ、メルク社）を用い、展開溶媒として、ｎ−ブタノー
ル：酢ＩＩ：水（！Ｓ二１：１）の系でＲｆｏ、２１を
与えた。

ギ酸：酢緻：水（２５ニア５：９００）を用いた６００
Ｖ、１時間のＦ紙電気泳動では、本発明化合物は、アラ
ニンを１とじ九場合、Ｒｍｉ［０，０５８を示した。

本発明化合物は、６朧足塩酸中、窒素置換し九封管中に
て、１０５℃、２４時間加熱加水分解すると、グルタ〈
ン酸、セリン、イソロイシン、およびインロイシル・イ
ソロイシンが得られる。ｔえ、加水分解液からモリブデ
ン酸アンモニウム−Ｆ＠８０４試薬によ）リン酸が検出
される。

以上のことより本発明化合物はリン酸を含むペプチドで
あると推定されるが、発明者による構造決定の結果、不
発明化合物は、次式（１）の如く新規な構造を有するリ
ン酸はンタベプテドであることが判明した。　　　゛ ■ Ｈ （１） 上記の諸性状および構造決定の結果から、本発明化合物
に類似の既知代謝物質および化合物は見当らず、本発明
者らは、本発明化合物を新規な微生物代謝物質であると
昭めた。

式（１）のはンタベプテドはそのカルボキシル基及び／
又はリン酸基における塩、特に薬学的に無害な金属カチ
オンとの塩であることができ、またそのアずノ基におけ
る薬学的に無害な酸との酸付加塩であることができる。

また薬学的に無害なエステル形成基、例えばアルキル又
はベンジル基などとのエステルの形であることもでき、
さらに水和物の形であることもできる。

以下、本発明化合物の關イケミアＬ−１２１０細胞に対
する効果について検討した結果について述べる。

本発明化合物の共存下にて、Ｌ−１２１０１ＸＩＧ”個
を５７℃で１時間培養し、ｌ　Ｄ　Ｆｓマウスの尾静脈
内に静脈注射することで癌細胞を移植し、次式により嬌
命効果を算出した。

Ｔ／ＣＸ　１００　＝↑／Ｃ９６ ｉ：投与群平均生存日数 Ｃ：対照群平均生存日数 結果は、表２に示す。

武（１）の化合物　　　　　　１０　　　　　　　　　
＞２５１２．５　　　　　　　　　＞２５１ １　　　　　　　　　＞２５１ ０．５　　　　　　　　　　　　　１０４０．２５　　
　　　　　　　＞２５１ ０．１　　　　　　　　　＞２５１ ０．０５　　　　　　　　１０４ 以−ヒのような、本発明化合物のＬ−１２１０１１胞に
対する効果は、本発明化合物が制癌剤として利用され得
ることが期待できる。

以下に本発明化合物の製造例を実施例として掲げるがこ
れに限定されるものではない。

実施例 アルカリフォスファターゼ阻害作用を有する物質を産生
する１１ＭＧ５９−１２株（ｒｇｉｔＭ−ｐ６１７７−
ｍｌの斜面培養から、１白金耳量をグルコース１ｓ。

ポリペプトン１−９肉エキス０．５　％　、　）ＪａＣ
Ｌ　Ｏ，５−を含む培地に接種し、２８℃にて４８時間
振盪培養して種培養を得た。次に、グリセリント１カゼ
イン５　％　、　Ｎ＠Ｃｊ　０．１−、　ＫＩＨＰｏ、
　０．１１Ｇ。

Ｍｇ８０４すＨＩＯＯ，５”ＩＧ”、　　Ｃｕ８０．・
５Ｈ１００，口００７１゜Ｆｅ２Ｏ２”７　ＨＩＯ０，
０００１−、ｌ＋Ｉｎｃ４＠４　Ｈ，００，０００８−
、２ｍ８０４・７Ｈ２００，０００２１Ｇを含む液体培
地ＳＯＬに上記の種培養を２−容接種し、２８℃で２７
時間振盪培養した。この培養液を遠心分離機にかけて一
体を除去すると、上澄液２５ｔが得られえ。これをダイ
ヤイオンＰＫ−２１６（Ｈ”）カラムＫＲし、通過液を
カーボンカラムに吸着させた。このカーボンカラムを水
洗１１８０Ｇメタノールにて溶出させ、溶出液を減圧濃
縮乾固すると飴状残渣が得られえ、この残渣を水に溶解
してＤＩＡＩ−セファデックス（ギａ１ｍｌ）に吸着さ
せ、ギ盾ナトリウム溶液Ｏ〜０．５Ｍの直１ｍ！濃度勾
配で浴出させ、アル★す７オス７アタ一ゼ阻害活性部分
をダイヤイオンＰＫ　−２１６（Ｈ”）Ｋて脱塩して、
溶出液を濃縮乾固すると、前出の式（１）の本発明化合
物ペンタ堅プテドが白色粉末として１００キ得られ丸。

第１頁の続き ０発　明　者　森島甫 東京都目黒区中目黒１−１−３２ ３０１ ０発　明　者　松本部用 東京都杉並区高井戸西１丁目２３ 番１４号 手続補正書（自発） 昭和５マ年１０月２１日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和　５７　年特許願第４５７１４号 ２、発明の名称 新生理活性ペンタペプチド及びその製造法３、補正をす
る者 事件との関係　　　　　特許出願人 柱　所　　東京部品用区上大崎３丁目１４番２３号＆補
正の対象 明細書の発明の詳細な説明 ６、補正の内容 《１》明細書第２真下から２行Ｏ「そのら」を「七“れ
ら」と補正する。

（２）同第２０頁８行の「維」を「継」と補正するＯ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　次式 （１） で表わされる新生理活性ペンタペプチド、＃！薬学的に
   許容しうるその塩およびそれらの水和物。 ２　バチルス属に属し且つ次式 （１） で示されるはンタベブチドを生産する菌を培養し。 培養物中から鍍ペンタはプチド又はそＯ塩又社水和物を
   採板することを特徴とする該インタはプデド又はその塩
   又は水和物の製造法。