JPS5918991B2 - 抗生物質ａｍ−２９４７およびその製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規抗生物質ＡＭ−２９４７およびその製造方
法を供することを目的としている。

本発明者は放線菌の生産する抗生物質を研究し、ある種
の放線菌が新規抗生物質を生産することを見出し、この
菌株の菌学的性質を調べ、またこの抗生物質を単離した
後、その理化学的および生物学的性質を調べることによ
つて、本発明を完成した。本発明によつて提供される抗
生物質を単離精製したものは橙色粉末で、次の理化学的
性質を有している。１、元素分析 Ｃ６９．８８％；Ｈ５．０９％：Ｎｏ％ ） ２、分子量 ５８０ ＦＤ・マス・スペクトルで（Ｍ＋１）十＝５８１が観測
された。

元素分析値、プロトン核磁気共鳴スペクトル（第３図）
およびＣ−１３核磁気共鳴スペクトル（第４図）から分
子式ク Ｃ３４Ｈ２８０９が求められた。３、融点 １
７６−１７８℃ ４、比旋光度 〔α〕２４＝＋５０２０（Ｃ＝１、クロ
ロホルム）５、紫外線吸収スペクトル ’５ メタノール中で２２８、２６８および４２２ｎｍ
に吸収極大を示し、分子吸光係数はそれぞれ４９４００
：４２５００および１３６００である（第１図）６．赤
外線吸収スペクトル 第２図の通りである（ＫＢｒ法） ７．溶剤に対する溶解性 メタノール、エタノール等の低級アルコール、アセトン
、酢酸エチル、クロロホルム、ベンゼン等の有機溶媒に
溶解し、ｎ−ヘキサン、石油エーテルおよび水には溶解
しない。

８．呈色反応 塩化第二鉄反応に陽性であり、ニンヒドリン反応、ライ
ドン・スミス反応およびエールリツヒ反応には陰性であ
る。

９．微酸性物質である。

１０．プロトン核磁気共鳴スペクトルおよびＣｌ３核磁
気共鳴スペクトルは、それぞれ第３図および第４図の通
りである。

上記の理化学的性質から、本抗生物質はアントラサイク
リン型抗生物質であると考えられるが、上記の理化学的
性質を有する既知の抗生物質は存在しないので、本発明
による新規抗生物質をＡＭ一２９４７と命名した。

さらにＡＭ−２９４７の構造解析を行なつた結果、下記
構造を有することを見出した。抗生物質ＡＭ−２９４７
の栄養寒天培地（ＰＨ７ｎθ）における最小発育阻止濃
度を常法の寒天稀釈法で測定した結果は第１表の通りで
ある。

上表から分るように、本抗生物質はグラム陽性菌に対し
て比較的強い抗菌活性を有し、ペニシリン耐性菌および
エリスロマイシン・テトラサイクリン耐性菌に対しても
活性を有している。従つて本抗生物質は抗菌剤、医薬、
動物薬等の用途に供することができると期待される。マ
ウスに対して本抗生物質を腹腔内に投与して調べたＬＤ
，Ｏは２００−４００η／Ｋｇであつた。

本発明の方法により、抗生物質ＡＭ−２９４７は、スト
レプトミセス属に属し、抗生物質ＡＭ−２９４７を生産
する能力を有する微生物を培地に好気的に培養し、培地
中または菌体中に本抗生物▼積させ、これを採取するこ
とによつて製造）０］可能な微生物の実用的な例は、本
発明者がｌ小豆島の土壌から分離選別して得たストレセ
ス・エスピ一・ＡＭ−２９４７株であつヒの菌学的性状
は次の通りである。

？態的性質 ？養菌糸は合成寒天培地および天然寒天培地５いてよく
発達し、不規則に分岐するが、通Ｌ隔壁を有しない。

気菌糸はスターチ、無機Ｋ天培地、イースト・麦芽寒天
培地等では中〔に着生し、ビロード状または綿状である
。／コース・硝酸塩寒天培地、ペプトン・イ一・鉄寒天
培地、栄養寒天培地、グルコース・７゜トン寒天培地等
で艮気菌糸を着生しないトたは着生しても少ない。その
色調は、培地［つて褐灰色ないし褐白色を呈する。頁微
鏡で観察すると、気菌糸の主軸は不規則｝岐している。

胞子柄は直線状で、通常は）個以上の胞子の連鎖が認め
られる。

胞子のｎは、しわを有せず、ほとんど平滑である。ｒは
ほぼ楕円形で、その大きさを０．４−０．８く０．８−
１．３μが普通である。菌核、胞子嚢Ｉび遊走子は観察
されない。｝種培地での性状（第２表） イ一・ビ一・シャーリングの方法〔Ｉｎｔ．Ｊ．５ｔ．
ＢａｃｔｅｒｌＯｌ．、ＶＯｌ．ｌ６、３１３１９６６
）〕に従い、さらに常用の培地およ起験方法も併用した
。

標準色表として、ガラ●ハーモニ＝・マニユアル、第４
版（コンテ一・コーポレーシヨン・オブ・アメリカ、シ
ゴ、１９５８年）を用いて色調を決定し、第交に示した
。表示した結果は、特記しない限２７℃で２週間培養し
た後の各培地についつ観察である。

．生理的諸性質 （１）メラニン色素の形成 ０）チロシン寒天 陽性 （至）ペプトン・イースト鉄寒天 陽性 ←→ グルコース・ペプトン・ゼラチン培地、穿刺（２
１〜２３℃） 陽性目 トリフトン・イースト液 陽性 （２）チロシナーゼ反応 陽性 （３）硝酸塩の還元 陰性 （４）ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼラチ
ン培地） 陰性（５）スターチの加水分解 陽性 （６）脱脂乳の凝固（３７℃） 陰性 （７）脱脂乳のペプトン化（３７℃） 陽性（８）セル
ロースの分解 陰性（９）生育温度範囲 ２０〜３８℃ ＱＯ）炭素源の利用性（ブリドハム・ゴトリープ寒天培
地）Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、シユクロース
、Ｄ−フラグドーズ、Ｄ−キシロース、Ｌ−ラムノース
、ｉ−イノシトール、ラフイノース、Ｄ−マンニツトを
よく利用する。

．細胞壁組成 ＬＬ型のジアミノピメリン酸とグリシンとを含有するが
、アラビノース、ガラクトースは認められない。

本菌株の菌学的性状を要約すると次の通りである。

細胞壁組成はＬＬ−ジアミノピメリン酸とグリシンとを
含有する。

また、形態的には直線状の胞子柄を形成し、胞子の表面
は平滑である。培養上の諸性質としては栄養菌糸は淡黄
色ないし淡黄褐色でＰＨの変化によつて変化せず、気菌
糸の色調は褐灰色ないし褐白色を呈する。メラニン色素
の産生は陽性で、これ以外の可溶性色素は黄褐白色の色
素を産生する。これらの結果から、本菌株はストレプト
ミセス属に属する菌種であり、しかもプリドハムとトレ
スナ一の分類（バージーズ・マニユアル・オブ・デタミ
ネーテイブ・バクテリオロジ一、第８版、１９７４年、
７４８〜８２９頁）によるグレイ・シリーズかあるいは
レツド・シリーズに属する菌種と認められ、ストレプト
ミセス・シュードベネズエラエ（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃ
ｅｓｐｓｅｕｄＯｖｅｎｅｚｕｅｌａｅ）に属するもの
と決定した。

本菌株はストレプトミセス・エスピ一・ＡＭ２９４７（
ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓｓｐ．ＡＭ−２９４７）とし
て工業技術院微工研に寄託されている（微工研菌寄第４
３６０号）。また本菌株はＮＲＲＬｌｌ２６９として米
国にも寄託されている。本発明の方法には上記したスト
レプトミセス・エスピ一・ＡＭ−２９４７およびその変
位株だけでなく、ストレプトミセスに属しかつ本抗生物
質を生産する能力を有する微生物であればすべて用いる
ことができる。本発明の方法において、培地としては、
炭素源、窒素源、無機物、必要に応じてその他の栄養物
を適当に含有する合成培地または天然物使用培地のうち
ストレプトミセス属に属する微生物培養に利用すること
のできるすべての培地を用いることができる。

この種の各種の培地組成および培養法はそれ自体公知で
ある。炭素源の濃度は培地に対して０．１−５．０７／
ｄｌ（グルコース換算）が好ましい。発酵は公知の好気
的条件で行なわれる。培養温度も公知であつて、通常２
０−３８℃の範囲とする。通常には培養期間は２−８日
で、これによつて培地および菌体中に著量の抗生物質Ａ
Ｍ−２９４７が生成蓄積される。培養終了后、培養液ま
たは菌体もしくはその混合物から本抗生物質を採取する
。

本抗生物質のよよな脂溶性物質を培養物から採取するた
めの各種の手法が知られているので、適当な方法を選ん
で応用することができる。たとえば培養物を菌体と沢液
とに分けた後、菌体からはアセトンや酢酸エチル等の有
機溶媒で、また沢液からは酢酸エチル、酢酸ブチル、ベ
ンゼン等の有機溶媒で、本抗生物質を抽出し、次に脂溶
性物質の精製に常用される各種の手法によつて本抗生物
質を回収することができる。たとえば、抽出液を濃縮し
た後、シリカゲルカラム・クロマトグラフイ一等によつ
て本抗生物質を単離することができる。次に本発明の実
施例を示すが、本発明はこれによつて限定されるもので
はない。

実施例 １ ストレプトミセス・エスピ一・ＡＭ−２９４７（微工研
菌寄第４３６０号）菌株の斜面培養から１白金耳をとり
、坂ロフラスコ（５００ｍ１容）に入れた１００ａの種
培地（グリセリン２．０ｔ／Ｄｌｌ大豆粉２．０７／ｄ
ｌおよび食塩０．３ｆ７／ｄｌを含有し、ＰＨ，７．Ｏ
に調整後殺菌したもの）に接種し、２７℃で２日間しん
とう培養した。

この培養物をジヤーフアーメンタ一（３０１容）に入れ
た発酵培地２０１（種培地と同様にして調製したもの）
に１．０％（Ｖ／Ｖ）ずつ接種し、種培養と同様にして
通気かくはん培養した。培養液２０１に酢酸エチル１０
ｆ！を加えてよくかくはんした後、遠心分離により酢酸
エチル層を分離し、これを減圧下に約２０ｍ１に濃縮し
た後、２％硫酸で前処理されたシリカゲル（タルク社製
、シリカゲルＧ）４００７を充填したカラムとクロロホ
ルム−メタノール（２００：１）の溶媒系とを用いたク
ロマトグラフイ一によつて溶出した。溶出された画分（
各約１５ｍ０の抗菌活性を、バチルス・スブチリスＰＣ
Ｉ２ｌ９を含む寒天平板を用いて、ペーパーデイスク法
による阻止円を測定して決定した。活性区分（第５４番
から第１１８番まで）を合せ（９５０ｍ１）、減圧下に
濃縮乾固して黄橙色粉末２．３７を得た（純度９６％、
融点１７４−１７７℃）。この粉末２００ワを薄層クロ
マトグラフイ一でさらに精製した。すなわちタルク社製
シリカゲルプレート（厚さ２ｍｍ）とベンゼン一酢酸エ
チル（１：３）の混合溶媒とを用いて展開した後活性区
分をかき取つて、酢酸エチルで抽出後抽出液を減圧下に
濃縮乾固して、橙色粉末１１３ηを得た（純度９９％以
上）。この物の理化学的性質は次の通りであつた。フ ５８１が観測された。

元素分析値、プロトン核磁気共鳴スペクトル（第３図）
およびＣ−１３核磁気共鳴スペクトル（第４図）から決
定された分子式はＣ３４Ｈ２８Ｏ９であつた。実施例
２ 実施例１と同様にして得られた培養液（１９．５ｆ！）
から遠心分離により菌体を除去した後の培養液上清（１
６ｆ！）に酢酸エチル（１０１）を加えてよく攪拌、抽
出した。

抽出液を減圧で濃縮乾固し、実施例１と同様の方法で処
理して、黄橙色の粉末２．９７を得た（純度９７％、融
点１７５一１７７℃）。この粉末をさらに実施例１と同
様にして精製して得た橙色の粉末（収量１，８Ｖ）の理
化学的性質は実施例１のものと同様であつた。実施例
３実施例１と同様にして得られた培養液（１９．５ｆ！
）から遠心分離により菌体１．３１＜ｇ（湿重量）を得
た後、菌体を５１の酢酸エチルに懸濁してよく攪拌、抽
出した。

抽出液を濃縮乾固し、実施例１と同様の方法で処理して
、黄橙色の粉末２．２ｒを得た（純度９５％、融点１７
４−１７６℃）。この粉末をさらに実施例１と同様にし
て精製して得た橙色の粉末（収量１．４ｔ）の理化学的
性質は実施例１のものと同様であつた。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質ＡＭ−２９４７の紫外線吸収スペクト
ル（メタノール）を、第２図は赤外線吸収スペクトル（
ＫＢｒ法）を、第３図はプロトン核磁気共鳴スペクトル
（重クロロホルム）を、第４図はＣ−１３核磁気共鳴ス
ペクトル（重クロロホルム）を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次の理化学的性質を有する抗生物質 １、元素分析 Ｃ６９．８８％；Ｈ５．０９％；Ｎ０％ ２、分子量５８０ ３、融点１７６−１７８℃ ４、比旋光度〔α〕＾２＾４＿Ｄ＝＋５０２°（Ｃ＝１
   、クロロホルム）５、紫外線吸収スペクトル、第１図の
   とおり６、赤外線吸収スペクトル、第２図のとおり７、
   溶剤に対する溶解性メタノール、エタノール等の低級ア
   ルコール、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、ベン
   ゼン等の有機溶媒に溶解し、ｎ−ヘキサン、石油エーテ
   ルおよび水には溶解しない８、呈色反応 塩化第二鉄反応に陽性、ニンヒドリン反応、ライドン・
   スミス反応およびエールリツヒ反応には陰性である。 ９、微酸性である。 １０、色は橙色である。 ２ ストレプトミセス属に属し抗生物質ＡＭ−２９４７
   を生産する能力を有する微生物を培地に好気的に培養し
   、培地中または菌体中に抗生物質ＡＭ−２９４７を蓄積
   させ、これを採取することを特徴とする抗生物質ＡＭ−
   ２９４７の製造方法。 ３ 微生物がストレプトミセス・エスピー・ＡＭ−２９
   ４７である特許請求の範囲第２項記載の製造方法。