JPS62215866A - 核酸の塩基配列決定のためのオ−トラジオグラフ解析方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の分野］ 本発明は、核酸の塩基配列決定のためのオートラジオク
ラブ解析方法に関するものである。

［発明の背景］ 近年、急速に発達して来た分子生物学の分野においては
、生物体の機ｆｌや複製のメカニズムを解明するために
、生物体のもつ遺伝情報を明らかにすることか必須のこ
ととなっている。とりわけ、特定の遺伝情報を担うＤＮ
Ａ　（もしくはＤＮＡ１ｔｌ’ｉ片物、以下同様）など
の核酸の塩基配列を決定することか必要不可欠なことと
なっている。

ＤＮＡ、ＲＮＡなとの核酸の塩基配列を決定するための
代表的な方法として、オートラジオグラフィーを利用す
るマキサム・ギルバート（Ｍａｘａｓ−ＧｉｌｂｃｒＬ
　）法およびサンガー・クールソン（Ｓａｎｇｅｒ−Ｃ
ｏｕｌｓｏｎ）法か知られている。前者のマキサム・ギ
ルバート法は、まず、Ｊ１２基配列を決定すべきＤＮＡ
あるいはＤＮＡ断片物の鎖状分子の一方の端部に３２　
ｐ等の放射性同位元素を含む基を結合させて放射性標識
を付与したのち、化学的な手段を利用して鎖状分子の構
成単位（塩基単位）間の結合を塩基特異的に切断する。

次に、得られた塩基特異的ＤＮＡ切断分解物の混合物を
ゲル電気泳動法により支持媒体上に分離展開し、多数の
切断分解物かそれぞれ分離展開されて形成された分離展
開パターン（ただし、視覚的には見ることかてきない）
を得る。この分離展開パターンをたとえばＸ線フィルム
上に可視化してそのオートラジオグラフを得、得られた
オートラジオグラフと各々の塩基特異的切断手段とから
、放射性同位元素が結合された鎖状分子の端部から一定
の位置関係にある塩基を順次決定し、これにより対象物
全ての塩基配列を決定するものである。

また、後者のサンガー・クールラン法は、ＤＮＡあるい
はＤＮＡ＠片物の鎖状分子と相補的であって、かつ放射
性標識が付与されたＤＮＡ合成物を化学的な手段を利用
して塩基特異的に合成し。

得られた塩基特異的ＤＮＡ合成物の混合物を用いて上記
と同様にしてそのオートラジオグラフから塩基配列を決
定する方法である。

従来より、オートラジオグラフの可視画像は、放射性標
識か付与された核酸の塩基特異的切断分解物もしくは塩
基特異的合成物（以下、単に核酸の塩基特異的断片物と
称する）が分離展開された支持媒体と、高感度Ｘ線フィ
ルムとを一定時間重ね合わせて該フィルムを感光させる
ことにより得られている。そして、核酸の塩基配列は、
フィルの塩基特異的断片物の分離展開位ｔを視覚的に判
断し、それらの分離展開位置を相互に比較することによ
り決定されている。

具体的に、オートラジオグラフの解析は、まずオートラ
ジオグラフが可視化されたＸ線フィルムなシャーカステ
ン上に固定したのち、シャーカステンに設置されている
プラスチック製のカーソル（読取用の目安板）を手動に
よりフィルム上を上下（または左右）に移動させながら
、このカーソルを目安にして放射性標識？Ｖ賀の相対的
な位置関係を［ｉ視によって判断することにより行なわ
れている。

プラスチック製の透明なカーソルの中央には通常、細い
直線が引かれており（いわゆるヘアラインカーソル）、
ヘアラインカーソルはシャーカステンに固定された状態
て一方向（フィルムにト行な方向）に移動することかで
きる。従って、放射性標識物質か理想的に分離展開され
た場合、すなわち分子！＃展開列がほぼ直線てあって各
列の放射性この直線状のヘアラインカーソルを用いて容
易に各列のハント（放射性標識物質の分離展開過程）の
相対位とを求め、各ハントに序列をつけることかできる
。

しかしなから、電気泳動法などにより分離展開して得ら
れた分離展開パターンには、しばしばスマイリング現象
あるいはオフセット歪みか発生する。スマイリング現象
は、分離展開過程における放熱効果（エツジ効果）など
が原因となって生じるものであり、支持媒体の中央部の
分Ｓ展開距離に比べて両端部の分離展開距離が短くなる
現象である。またオフセット歪みは、試料社入口（スロ
ット）の形状の相違等により試料の分子ａ展開開始位置
、開始時間か各列（レーン）で異なることなどが原因と
なって生じるものであり、レーン間相互の全体的な位置
ずれをいう。これらのバントの位置ずれのほかにもハン
ト自体の欠陥、レーンの蛇行などが生じることがある。

このような場合には、上記のヘアラインカーソルてはカ
ーソルが直線であり、しかも始めから装置に固定されて
いてｔ行移動しかできないために、カーソルたけてはハ
ントの位置関係を判断することかてきず、実際には解析
者かＩＩ　Ｊｌｌｌによりこれらの位置ずれや欠陥を補
正し、バンドの順序を読み違えないように細心の注、α
を払っていた。従って、ヘアラインカーソルはあくまで
も読取の１ｊ安にほかならなかった。

［発明の要旨１ 未発ＩＪは、核酸の塩基配Ａを高精度でかつ容易に決定
することかできるオートラジオグラフ解析方法を提供す
るものである。

すなわら、本発明は、放射性標識が付与された塩基特異
的ＤＮＡ断片物もしくはＲＮＡ断片物か支持媒体上に一
次元的方向に分ｇｌ展開されて形成された複数の分離展
開列のオートラジオグラフを解析することにより、核酸
の塩基配列を決定する方法において、 ■）オートラジオグラフに対応するデジタル信号に基づ
いて該オートラジオグラフを’＋ｔｔ′Ａ、的に画像表
示する工程、および ２）表示画像上に、分子！＃、展開列を横切りかつ各列
のバンドに沿った読取カーソルを作成する工程、 を含むことを特徴とする核酸の塩基配列決定のためのオ
ートラジオグラフ解析方法を提供するものである。

本発明の方法によれば、読取用のカーソルは従来のよう
にシャーカステン等の装置に固定されていなく、オート
ラジオグラフが可視画像化された表示画面上で任意に作
成することかできる。すなわち、スマイリング現象、オ
フセット歪みなどによって分離展開パターンのレーン間
でハントの位ｔずれが生じている場合であっても、バン
ドに沿って任意の形状（折れ線状、曲線状など）にカー
ソルを作成することがてき、パターンごとに最適なカー
ソルを個別に作成して画面に表示することができる。し
かも、各レーンのハントに沿って入力された位置情報に
基づいて自動的に短時間て作成することがてきる。この
ことはまた、作成した途中でカーソルがハントに沿わな
くなった場合に、カーソルを容易に作成し直すことかて
きることを、ａ味する。

また、画面上に表示されたカーソルの移動は上下（また
は左右）のモ行移動のみならず、任意の方向に移動させ
ることか可１敵である。これにより、分離展開パターン
か蛇行している場合てあってもパターンに最適にカーソ
ルを動かすことかてきる。

従って、解析者は作成した読取カーソルを分離ｇＣ開方
向に沿って移動させながら、カーソルに基づいてバンド
の相対位置を直接に読み取ってそのまま順序を付すこと
かできる。従来のように、直線状のカーソルを目安に、
解析者か位置ずれを生じたバントの位置を「１訓で補正
したり、欠陥ハントを補足したり、さらにはハントの前
後の位置関係を記憶しながら読み堆る必要かない。これ
により、ハントの・読取順序の逆転、バンドの読み落と
しおよび重複などを防ぐことかでき、確実に間違いなく
ノ１ンドの／ひ苦をシ番ス１〜うて１に譬のＭＩ　Ｉｔ
：＾１１―を高い精度て決定することができる。

また、読取カーソルに基づいて直接にハントに順序を付
すことができるから、従来のシャーカステンおよびヘア
ラインカーソルを用いた場合よりも正確に読み取ること
ができるのみならず、従来のような細心の注意あるいは
熟練を要することなく短時間のうちに簡易にバンドに順
序を付して塩基配列を決定することができる。

なお、本出願人は、分離展開パターンのオートラジオグ
ラフを得る方法として放射線フィルムを用いる従来の放
射線写真法の代りに、蓄積性蛍光体シートを用いる放射
線像変換方法を利用する方法について既に特許出願して
いる（特開昭５９−８３０５７号、特開昭６０−１０１
７４号、特願昭５８−１７３３９３号）。ここで、蓄積
性蛍光体シートは輝尽性蛍光体からなるものであり、放
射線エネルギーを該蛍光体シートの輝尽性蛍光体に吸収
させた後、可視乃至赤外領域の電磁波（励起光）で励起
することにより放射線エネルギーな輝尽光として放出さ
せることができるものである。この方法によれば、′Ａ
光時間を大幅に短縮化することができ、また従来より問
題となっていた化学カブリ等か発生することがない。さ
らに、放射性標識物質のオートラジオグラフは、−置数
射線エネルギーとして蛍光体シートに蓄積されたのち輝
尽光として光電的に読み取られるから、直接にデジタル
信号として得ることができる。

［発明の構成］ 本発明において用いられる試料の例としては、放射性標
識が付与されたＤＮＡ、ＲＮＡ等の核酸の塩基特異的断
片物の混合物を挙げることができる。ここで、核酸の断
片物とは長鎖状の分子の一部分を意味する。たとえば、
塩基特異的ＤＮＡ１ｔｌｉ片物混合物の一種である塩基
特異的ＤＮＡ切断分解５ｉＩｓ混合物は、前述のマキサ
ム・ギルバート法に従って、放射性標識が付与されたＤ
ＮＡを塩基特異的に切断分解することにより得られる。

また、塩基特異的ＤＮＡ合成物混合物は前述のサンガー
・クールラン法に従って、ＤＮＡをテンプレート（鋳型
）として、放射性標識が付与されたデオキシヌクレオシ
ドトリフオスフェートとＤＮＡ合成酵素とを用いて合成
することにより得られる。

さらに、塩基特異的ＲＮＡ断片物の混合物も上記と同様
の方法により、切断分解物混合物としてまたは合成物混
合物として得ることができる。なお、ＤＮＡはその構成
単位としてアデニン、グアニン、チミン、シトシンの四
種類の塩基からなるが、一方ＲＮＡはアデニン、グアニ
ン、ウラシル、シトシンの四種類の塩基からなる。

放射性標識は、これらの物質に適当な方法で３２Ｐ、１
４ｃ、”Ｓ、　　３Ｈ，”１などの放射性同位元素を保
持させることによって付与される。

試料である放射性標識が付与された核酸の塩基特異的断
片物の混合物はゲル状支持媒体など公知の各種の支持媒
体を用いて、電気泳動法、　１８１層クロマトグラフィ
ー、カラムクロマトグラフィー、ベーパークロマトグラ
フィーなど種々の分離展開方法により支持媒体上に分離
展開される。

次に、本発明の方法を用いたオートラジオグラ−ｙ　＆
ｌＦ　ｉＧ　ｆｆｉ　”−ｉ７　ｔｉｔ　ｆｆｆｉ　ｉ
ｔ　？ｚ　　ｎ　Ｎ　Ａ　Ｍ　１４ｆ甘ＩＱ　Ｋｍ　Ｊ
ｈ　”：Ｉ　６４Ｍにとって説明する。

第一に、以下の四種類の放射性標識か付与された塩７．
ｔｉ特異的ＤＮＡ断片物の混合物が電気泳動によりゲル
支持媒体上に分＃展開されてなる泳動パターンについて
、従来の写真感光材料を用いる放射線写真法により、あ
るいは蓄積性蛍光体シートを用いる放射線像変換方法に
よりそのオートラジオグラフを得、次いで適当な読取り
（読出し）系を介して該オートラジオグラフに対応する
デジタル信−）を得る。

ｌ）グアニン（Ｇ）特異的ＤＮＡ断片物２）アデニン（
Ａ）特異的ＤＮＡ！Ｎ片物３）チミン（Ｔ）特異的ＤＮ
Ａ断片物 ４）シトシン（Ｃ）特異的ＤＮＡ断片物ここて、各Ｉｉ
！基特異的ＤＮＡ断片物は、塩基特異的に切断分解もし
くは合成された、すなわち末端の１１！基を同しくする
種々の長さのＤＮＡ断片物からなる。

前者の放射線写真法を利用する場合には、まず支持媒体
とＸ線フィルム等の写真感光材料とを低温（−９０〜−
７０°Ｃ）で長時間（数十時間）重ね合わせて放射線フ
ィルムを感光させたのち、現像して放射性標識物質のオ
ートラジオグラフを放射線フィルム上に可視画像化する
。次いで、画像読取装置を用いて放射線フィルム上に可
視化されたオートラジオグラフを読み取る。たとえば、
放射線フィルムに光ビームを照射してその透過光または
反射光を光電的に検出することにより、オートラジオグ
ラフは電気信号として得られる。さらに、この電気信号
なＡ／Ｄ変換することにより、オートラジオグラフに対
応するデジタル信号を得ることができる。

後者の放射線像変換方法を利用する場合には。

まず、支持媒体と蓄積性蛍光体シートとを常温で短時間
（数秒〜数十分間）改ね合わせて蛍光体シートに放射性
標識物質から放出される放射線エネルギーをＭｕさせる
ことにより、そのオートラジオグラフを蛍光体シートに
一種の潜像として記録する。ここで、７ｉ積性蛍光体シ
ートは、たとえばプラスチックフィルムからなる支持体
、二価ユーロピウム賦活弗化臭化バリウム（ＢａＦＢｒ
・Ｅ　ｕ　”　）等の輝尽性蛍光体からなる蛍光体層、
および透明な保護膜かこの順に桔層されたものである。

蓄積性蛍光体シートに含有されている輝尽性蛍光体は、
Ｘ線等の放射線か照射されるとその放射線エネルギーを
吸収して蓄積し、そののち可視乃至赤外領域の光で励起
すると蓄積していた放射線エネルギーな輝尽光として放
出するという特性を有する。

次いで、読出装置を用いて蓄積性蛍光体シートに蓄積記
録されたオートラジオグラフを読み出す。具体的には、
たとえば蛍光体シートをレーザー光で走査して放射線エ
ネルギーを輝尽光として放出させ、この輝尽光を光電的
に検出することにより、放射性標ａ物質のオートラジオ
グラフは可視画像化することなく直接に電気信号として
得られる。さらに、この電気信号なＡ／Ｄ変換すること
により、オートラジオグラフに対応するデジタル信号を
得ることができる。

上述のオートラジオグラフ測定操作およびオートラジオ
グラフに対応するデジタル信号を得る方法の詳細につい
ては、前記特開昭５９−８３０５７号、特開昭５９−１
２６５２７号、特開昭５９−１２６２７８号等の各公報
に記載されている。

なお、上記においては、支持媒体上に分離展開された放
射性標識物質のオートラジオグラフに対応するデジタル
信号を得る方法として、従来の放射線写真法および放射
線像変換方法を利用する方法について述べたが、これら
の方法に限定されるものではなく、それ以外の如何なる
方法により得られたデジタル信号であっても放射性標識
物質のオートラジオグラフと対応関係がある限り、本発
明の信号処理方法を適用することが可能である。

また、上記いずれの方法においてもオートラジオグラフ
の読取り（または読出し）は、放射線フィルム（または
蓄積性蛍光体シート）の全面に−ぼって行なう必要はな
く１画像領域のみについて行なうことも勿論可使である
。

さらに、本発明においては、ｒ・め各分＃展開列の位置
およびバンドの幅等についての＋＋’を報を人力して読
取り（読出し）条件を設定しておき、読取り（読出し）
操作においては各バンド上を二本以上の走査線が通過す
るような走査線密度で光ビームによる走査を行なうこと
により、読取り（読出し）時間を短縮化して必要な情報
を効率良く得ることができる。なお、本発明においてオ
ートラジオグラフに対応するデジタル信号とは、このよ
うにして得られたデジタル信号をも包含する。

得られたデジタル信号ＤＸＦは、放射線フィルム（また
は蛍光体シート）に固定された座標系で表わされた座標
（ｘ、ｙ）とその座標における信号のレベル（２）とか
らなる、信号のレベルはその座標における画像濃度、す
なわち放射性標ａ物質の量を表わしている。従って、一
連のデジタル信号（すなわち、デジタル画像データ）は
放射性標識物質の二次元的な位ｌ情報を有している。

このオートラジオグラフに対応するデジタル信号を一旦
メモリ（バッファーメモリ、または磁気ディスク等の不
揮発性メモリ）に記憶したのち、信号処理回路と、オー
トラジオグラフおよびカーツルを同時に表示することか
できるＣＲＴなどの表示手段と、カーソル作成のための
人力を行なうことかできる入力手段とを有する装置に送
り、解析対象のオートラジオグラフ（放射性標識ＩＩ質
の分離展開パターン）を表示画面上に可視画像化する。

なお、デジタル信号には予め、濃度およびコントラスト
が適正て観察読影性源の優れた可視画像が得られるよう
に信号処理（画像処理）を行なっておいてもよい。画像
処理としては、たとえば、空間周波数処理、階調処理、
加算乎均処理、縮小処理、拡大処理などが挙げられる。

画面上に画像表示されるオートラジオグラフは、画面に
設定された座標系における信号のレベル（画像濃度、す
なわろ放射性標識物質の量）を色彩の明度で表わした、
従来の写真画像と同様のｃｉ淡両画像あってもよいし、
あるいは信号レベルを予め二値化することにより簡略化
して表わした二値画像であってもよい。

あるいはまた、オートラジオグラフは、−次元の位置（
泳動方向に沿った位置）と信号レベルとからなる多数の
二次元波形を泳動方向に垂直な方向に一定間隔で多重表
示することにより表わした画像（いわゆる鳥轍図）であ
ってもよい。この几轍図によれば放射性標識物質の量か
鳥轍図の高さとして三次元的に表わされるから、ハント
のピーク位置を正確に読み取ることかでき、泳動列（レ
ーン）間のバンドの位置関係の把握並びに泳動開始位置
近くのバンドの密な領域におけるバンドの分離を容易に
行なうことかてきる。なお、鳥轍図によってオートラジ
オグラフを表示する方法の詳細については、本出願人に
よる特願昭６０−１８１４３１号明細書に記載されてい
る。

第１図は１画面上に濃淡画像として表示された泳動パタ
ーンのオートラジオグラフを示す図である。第１図にお
いて泳動方向は右方向である。なお、泳動パターンには
スマイリング現象か生じている。

第二に、表示画面上て読取カーソルを作成する。

泳動列（レーン）を横切りかつ各レーンのバンドに沿う
ような読取カーソルは、たとえば以下のようにして画面
上に作成することができる。

まず１画面の上端から表示画面に基づいて入力された位
置まて垂直な線を引く。入力される最初の位置は、端部
のレーン上のバンドの位置であるのが好ましい（第１図
１）。端部のレーンとするのは読取カーソルかこの位置
を起点として作成されるからである。

位置情報の入力は、マウスカーソル、ライトベ゛ン、ジ
ョイステイラクなどの手段を用いて行なうコトカてきる
。位置精度の点から、特にマウスカーソルが好ましい。

マウスカーソルによる入力は、画面上に矢印（←）とし
て表示されて画面上を自由に移動しうるマウスカーソル
（第１図２）と、このマウスカーソルを自由自在に動か
し、かつ該カーソルの位置を情報として入力しうる人力
部材（図示なし）とによって行なわれる。

たとえば、画面上のオートラジオグラフか表示される四
角形の領域を座標（Ｘａ＋　ｙａ）、（Ｘｂ＋　ｙｂ）
で表わし、マウスカーソルの位置座標を（Ｘｍ、３／ｍ
）て表わすとすると、マウスカーソルによってＸ　ｍ　
”　Ｘ　、＋　３／　ｍ　＝　’ｌ　＋なる位置情報か
入力されることにより、線分（Ｘ、。

３／ａ）　　（Ｘ　ｒ　＋　Ｙ　＋　）か画面上に表示
される（第１図３）。

次に、起点の位置から、それよりも泳動パターンの内側
の入力された位置（第二の位置）まで直線を引く０位置
の入力は上記と同様にしてマウスカーソル等を介して行
なわれる。

第２図に示すように、始めに、起点４（ｘ、。

ｙ　＋　）とマウスカーソル２の位置（ｘｆｉ、ｙｍ）
との間に線分（ｘ、、ｙ＋）（Ｘｍ、ｙｍ）か表示され
る。マウスカーソル２が移動すると、この線分は画面上
から消えて、新たに起点４と移動した位置との間に線分
か表示される。なお、マウスカーソルは上記座標（Ｘａ
、３／ａ）、（Ｘｂ。

ｙｂ）て仕切られた四角形の領域内を自由に移動するこ
とかできる。こうして、マウスカーソルの移動とともに
起点４とマウスカーソル２の各移動位置とを結んだ線分
か次々と表示される。該線分が好適にレーンを横切ると
ころで位置の入力Ｘｍ＝ｘ２．ｙｆｆｌ＝ｙ２を行なう
ことにより、第３図に示すように、線分３に連結した線
分５（ｘ、。

ｙ＋）（Ｘ２１　ｙ２）が画面に固定されて表示される
。

このようにして、北端のレーンから下端のレーンまでレ
ーンを横切りかつ各レーンのバンドに沿うように順次、
線分−←Ｘｉよ−Ｌ」−上−Ｌ３工Ｌ９工ｙ、や□）（
ただし、ｉは正整数である）を引くことかできる。なお
、試料は四種の塩基特異的ＤＮＡ断片物の排他的な組合
せであるので、各レーンのバンドは互いに同じ位置（泳
動距離）には存在しえない。従って、ｒバントに沿うよ
うに１とは、各レーンの泳動距離か等しくなるように巨
視的な意味でハントに沿って線分を引くことを意味し、
厳密に各線分が各レーンのハント上を通過することを意
味するものてはない。

次いで、第４図に示すように、線分が泳動パターンを完
全に横切った時点で最後に入力された位置か終点である
との人力情報に従って、該終点の位置６から画面下端ま
ての東直な線分’ｙ　（ｘ　＋　＊χ−りつ−」二ニー
１４−ｙ二□９−を引く。このようにして画面上には、
泳動パターンを完全、に横切った複数の連結した折れ線
からなる読取カーソル８か表示される。

読取カーソルは、泳動パターン上の任意の領域で作成す
ることができ、泳動開始位置に近いパターンＬ部の領域
であってもよいし、あるいは泳動距離の大きなパターン
下部の領域であってもよい。

また、一般に位置情報の入力はレーンごとに行なう、す
なわちレーンの数に相当する個数の位置が入力されるか
、泳動パターンに応じて入力される位置の個数はそれよ
り多くてもよいし、あるいは少なくてもよい。少なくと
も−っの位置か入力され、かつ起点と終点か認識できれ
ばよい。

読取カーソルは人力位置を直線で結んだ折れ線状であっ
てもよいし、あるいは得られた折れ線に適当な演算処理
（曲線近似）を施すことにより曲線状てあってもよい。

作成された読取カーソルは泳動パターンに合致している
から、このカーソルを用いて解析者は正確かつ容易にＤ
ＮＡの塩基配列を決定することがてきる。

具体的には、画面上で読取カーソルを左もしくは右方向
に適宜平行移動させながらカーソルに近い順にハントを
順次読み取っていく、一般に、泳動下方（画面右方）で
あるほどバンドとバンドの間隔か開いているので、バン
ドの序列付けは泳動パターンの下方から行なうのが好ま
しい。なお。

この際に上記四種類の塩基特異的ＤＮＡ断片物の組合せ
が排他的な組合せであることから、同じ位置に二つ以上
のハント（異なるレーンのバンド）は存在しえないこと
を利用して、序列を決定することかてきる。各バンドか
属する（１）〜（４）のレーンはそれぞれ（Ｇ）、（Ａ
）、（Ｔ）、（Ｃ）からなる末端塩ノ＾についての情報
を有するから、各ハントの属するレーンに対応するＩｉ
！基で置き換えることにより、ＤＮＡの塩基配列（例え
ばＡ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｔ−・・・）を得ることが
できる。

なお、予め読取カーソルの移動距離および移動開始位置
を設定しておくことにより、簡単な操作でカーソルを一
定の間隔で自動的に動かすことが可催である。また、カ
ーソルの移動は画面の左右方向への平行移動のみならず
、任意の角度をもって斜め方向に移動させることもでき
る。従って、レーンが蛇行している場合あるいはパター
ン全体が傾斜している場合であってもそれに沿ってカー
ソルを移動させることかできる。カーソルの移動方向を
予め設定しておくことも勿論可能である。

バンドに序列を付ける過程で読取カーソルか泳動パター
ンに合致しなくなった場合には、上記と同様の操作を繰
り返すことにより筒単に所望の形状のカーソルを作成す
ることができる。

上記においては、試料である塩ノ＾特異的ＤＮＡ断片物
の混合物として（Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｃ）の排他的組合せを利
用した場合について説明したか１本発明の解析方法はこ
の組合せに限定されるものてはなく、例えば（Ｇ、Ｇ＋
Ａ、Ｔ＋Ｃ，Ｃ）などの種々の組合せに適用することか
できる。また同様に、塩基特異的ＲＮＡ断片物の混合Ｔ
ｈ（例えば、Ｇ、Ａ、Ｕ、Ｃの組合せ）についても本発
明の方法を適用することができる。さらに、本発明の方
法は、−組の核酸の塩基特異的断片物の分離展開列に限
定されるものではなく、支持媒体上に同時に分離展開さ
れた全ての分離展開列につい−て同時に適用することか
可使である。

得られた核酸の塩基配列についての情報は、信す処理回
路を介して磁気ディスクや磁気テープなどの記憶保存手
段に保存したり、あるいはＣＲＴ等の表示画面、感光材
料、感熱記録材料に表示記録することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図〜第４図はそれぞれ、画面上に表示されたオート
ラジオグラフを示す図であり、本発明に従う読取カーソ
ルの作成工程を説明する図である。 ｌ：泳動ハント、２：マウスカーソル、３．５．７：線
分、４：起点、６：終点、８：読取カーソル 特許出願人　　富士写真フィルム株式会社代　理　人　
　弁理士　　柳　川　泰　実弟１図 第３図 第２図 第４図 手続省１１正７［２ 昭和６２年　４月１０日 特許庁長官　黒［■引離　殿　　　　　　　　　　　　
欠（１、＝バ件の表示 昭和６１年　特許願　第４７９２４号 ２、発明の名称 核酩の塩基配列決定のための オートラジオグラフ解析方法 ３、補正をする者 ・１９件との関係　　　　　特許出願人名　称　　（５
２０）富士写真フィルム株式会社４、代理人 住　所　　東京都新宿区四谷２−１４ミツヤ四谷ビル８
階６、補ｊＩＥにより増加する発明の数　　な　し７、
補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄。 明細、りの「発明の詳細な説明」の欄を下記の如く補正
致します。 −記一 （１）明細書の第１４頁最終行〜第１５頁第１行目のｒ
低温（−９０〜−７０°Ｃ）で長時間（数十時間）、！
ｌを「低温もしくは常温て長時間（数時間〜数十時間）
Ｊと補正する。 （２）明細書の第１８頁第２行〜３行目の「二本以上」
をｒ一本以、Ｌ、、！Ｉと補正する。 −以上一

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、放射性標識が付与された塩基特異的ＤＮＡ断片物も
   しくはＲＮＡ断片物が支持媒体上に一次元的方向に分離
   展開されて形成された複数の分離展開列のオートラジオ
   グラフを解析することにより、核酸の塩基配列を決定す
   る方法において、１）オートラジオグラフに対応するデ
   ジタル信号に基づいて該オートラジオグラフを電気的に
   画像表示する工程、および ２）表示画像上に、分離展開列を横切りかつ各列のバン
   ドに沿った読取カーソルを作成する工程、 を含むことを特徴とする核酸の塩基配列決定のためのオ
   ートラジオグラフ解析方法。 ２、上記第二工程において、少なくとも一つの位置に関
   する入力情報に基づいて該位置を通る直線もしくは弧を
   描くことにより、折れ線状もしくは曲線状のカーソルを
   作成することを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
   核酸の塩基配列決定のためのオートラジオグラフ解析方
   法。 ３、上記第二工程において、位置情報がポインティング
   デバイスを用いて入力されることを特徴とする特許請求
   の範囲第２項記載の核酸の塩基配列決定のためのオート
   ラジオグラフ解析方法。 ４、上記ポインティングデバイスがマウスカーソルであ
   ることを特徴とする特許請求の範囲第３項記載の核酸の
   塩基配列決定のためのオートラジオグラフ解析方法。 ５、上記第一工程において、オートラジオグラフに対応
   するデジタル信号が、支持媒体と輝尽性蛍光体を含有す
   る蓄積性蛍光体シートとを重ね合わせて、支持媒体上の
   放射性標識物質のオートラジオグラフを該蛍光体シート
   に蓄積記録した後、該蛍光体シートに励起光を照射して
   該オートラジオグラフを輝尽光として光電的に読み出す
   ことにより得られたものであることを特徴とする特許請
   求の範囲第１項記載の核酸の塩基配列決定のためのオー
   トラジオグラフ解析方法。 ６、上記第一工程において、オートラジオグラフに対応
   するデジタル信号が、支持媒体と写真感光材料とを重ね
   合わせて、支持媒体上の放射性標識物質のオートラジオ
   グラフを該感光材料に感光記録した後、該感光材料上に
   可視化されたオートラジオグラフを光電的に読み取るこ
   とにより得られたものであることを特徴とする特許請求
   の範囲第１項記載の核酸の塩基配列決定のためのオート
   ラジオグラフ解析方法。