JPH0528785B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の分野］ 本発明は、核酸の塩基配列決定のためのオート
ラジオグラフ解析方法に関するものである。

［発明の背景］ 近年、急速に発達して来た分子生物学の分野に
おいては、生物体の機能や複製のメカニズムを解
明するために、生物体のもつ遺伝情報を明らかに
することが必須のこととなつている。とりわけ、
特定の遺伝情報を担うDNA（もしくはDNA断片
物、以下同様）などの核酸の塩基配列を決定する
ことが必要不可欠なこととなつている。

DNA、RNAなどの核酸の塩基配列を決定する
ための代表的な方法として、オートラジオグラフ
イーを利用するマキサム・ギルバート（Maxam
−Gilbert）法およびサンガー・クールソン
（Sanger−Coulson）法が知られている。前者の
マキサム・ギルバート法は、まず、塩基配列を決
定すべきDNAあるいはDNA断片物の鎖状分子の
一方の端部に³²P等の放射性同位元素を含む基を
結合させて放射性標識を付与したのち、化学的な
手段を利用して鎖状分子の構成単位（塩基単位）
間の結合を塩基特異的に切断する。次に、得られ
た塩基特異的DNA切断分解物の混合物をゲル電
気泳動法により支持媒体上に分離展開し、多数の
切断分解物がそれぞれ分離展開されて形成された
分離展開パターン（ただし、視覚的には見ること
ができない）を得る。この分離展開パターンをた
とえばＸ線フイルム上に可視化してそのオートラ
ジオグラフを得、得られたオートラジオグラフと
各々の塩基特異的切断手段とから、放射性同位元
素が結合された鎖状分子の端部から一定の位置関
係にある塩基を順次決定し、これにより対象物全
ての塩基配列を決定するものである。

また、後者のサンガー・クールソン法は、
DNAあるいはDNA断片物の鎖状分子と相補的で
あつて、かつ放射性標識が付与されたDNA合成
物を化学的な手段を利用して塩基特異的に合成
し、得られた塩基特異的DNA合成物の混合物を
用いて上記と同様にしてそのオートラジオグラフ
から塩基配列を決定する方法である。

従来より、オートラジオグラフの可視画像は、
放射性標識が付与された核酸の塩基特異的切断分
解物もしくは塩基特異的合成物（以下、単に核酸
の塩基特異的断片物と称する）が分離展開された
支持媒体と、高感度Ｘ線フイルムとを一定時間重
ね合わせて該フイルムを感光させることにより得
られている。そして、核酸の塩基配列は、フイル
ム上に可視化されたオートラジオグラフから核酸
の塩基特異的断片物の分離展開位置を視覚的に判
断し、それらの分離展開位置を相互に比較するこ
とにより決定されている。

具体的に、オートラジオグラフの解析は、まず
オートラジオグラフが可視化されたＸ線フイルム
をシヤーカステン上に固定したのち、シヤーカス
テンに設置されているプラスチツク製のカーソル
（読取用の目安板）を手動によりフイルム上を上
下（または左右）に移動させながら、このカーソ
ルを目安にして放射性標識物質の相対的な位置関
係を目視によつて判断することにより行なわれて
いる。

プラスチツク製の透明なカーソルの中央には通
常、細い直線が引かれており（いわゆるヘアライ
ンカーソル）、ヘアラインカーソルはシヤーカス
テンに固定された状態で一方向（フイルムに平行
な方向）に移動することができる。従つて、放射
性標識物質が理想的に分離展開された場合、すな
わち分離展開列がほぼ直線であつて各列の放射性
標識物質が同じ速度で分離展開された場合には、
この直線状のヘアラインカーソルを用いて容易に
各列のバンド（放射性標識物質の分離展開部位）
の相対位置を求め、各バンドに序列をつけること
ができる。

しかしながら、電気泳動法などにより分離展開
して得られた分離展開パターンには、しばしばス
マイリング現象あるいはオフセツト歪みが発生す
る。スマイリング現象は、分離展開過程における
放熱効果（エツジ効果）などが原因となつて生じ
るものであり、支持媒体の中央部の分離展開距離
に比べて両端部の分離展開距離が短くなる現象で
ある。またオフセツト歪みは、試料注入口（スロ
ツト）の形状の相違等により試料の分離展開開始
位置、開始時間が各列（レーン）で異なることな
どが原因となつて生じるものであり、レーン間相
互の全体的な位置ずれをいう。これらのバンドの
位置ずれのほかにもバンド自体の欠陥、レーンの
蛇行などが生じることがある。

このような場合には、上記のヘアラインカーソ
ルではカーソルが直線であり、しかも始めから装
置に固定されていて平行移動しかできないため
に、カーソルだけではバンドの位置関係を判断す
ることができず、実際には解析者が目測によりこ
れらの位置ずれや欠陥を補正し、バンドの順序を
読み違えないように細心の注意を払つていた。従
つて、ヘアラインカーソルはあくまでも読取の目
安にほかならなかつた。

［発明の要旨］ 本発明は、核酸の塩基配列を高精度でかつ容易
に決定することができるオートラジオグラフ解析
方法を提供するものである。

すなわち、本発明は、放射性標識が付与された
塩基特異的DNA断片物もしくはRNA断片物が支
持媒体上に一次元的方向に分離展開されて形成さ
れた複数の分離展開列のオートラジオグラフを解
析することにより、核酸の塩基配列を決定する方
法において、 (1) オートラジオグラフに対応するデジタル信号
に基づいて該オートラジオグラフを電気的に画
像表示する工程、および (2) 表示画像上に、分離展開列を横切りかつ各列
のバンドに沿つた読取カーソルを作成する工
程、 を含むことを特徴とする核酸の塩基配列決定のた
めのオートラジオグラフ解析方法を提供するもの
である。

本発明の方法によれば、読取用のカーソルは従
来のようにシヤーカステン等の装置に固定されて
いなく、オートラジオグラフが可視画像化された
表示画面上で任意に作成することができる。すな
わち、スマイリング現象、オフセツト歪みなどに
よつて分離展開パターンのレーン間でバンドの位
置ずれが生じている場合であつても、バンドに沿
つて任意の形状（折れ線状、曲線状など）にカー
ソルを作成することができ、パターンごとに最適
なカーソルを個別に作成して画面に表示すること
ができる。しかも、各レーンのバンドに沿つて入
力された位置情報に基づいて自動的に短時間で作
成することができる。このことはまた、作成した
カーソルが不十分であつた場合あるいは読取りの
途中でカーソルがバンドに沿わなくなつた場合
に、カーソルを容易に作成し直すことができるこ
とを意味する。

また、画面上に表示されたカーソルの移動は上
下（または左右）の平行移動のみならず、任意の
方向に移動させることが可能である。これによ
り、分離展開パターンが蛇行している場合であつ
てもパターンに最適にカーソルを動かすことがで
きる。

従つて、解析者は作成した読取カーソルを分離
展開方向に沿つて移動させながら、カーソルに基
づいてバンドの相対位置を直接に読み取つてその
まま順序を付すことができる。従来のように、直
線状のカーソルを目安に、解析者が位置ずれを生
じたバンドの位置を目測で補正したり、欠陥バン
ドを補足したり、さらにはバンドの前後の位置関
係を記憶しながら読み取る必要がない。これによ
り、バンドの読取順序の逆転、バンドの読み落と
しおよび重複などを防ぐことができ、確実に間違
いなくバンドの位置を読み取つて核酸の塩基配列
を高い精度で決定することができる。

また、読取カーソルに基づいて直接にバンドに
順序を付すことができるから、従来のシヤーカス
テンおよびヘアラインカーソルを用いた場合より
も正確に読み取ることができるのみならず、従来
のような細心の注意あるいは熟練を要することな
く短時間のうちに簡易にバンドに順序を付して塩
基配列を決定することができる。

なお、本出願人は、分離展開パターンのオート
ラジオグラフを得る方法として放射線フイルムを
用いる従来の放射線写真法の代りに、蓄積性蛍光
体シートを用いる放射線像変換方法を利用する方
法について既に特許出願している（特開昭59−
83057号、特開昭60−10174号、特願昭58−173393
号）。ここで、蓄積性蛍光体シートは輝尽性蛍光
体からなるものであり、放射線エネルギーを該蛍
光体シートの輝尽性蛍光体に吸収させた後、可視
乃至赤外領域の電磁波（励起光）で励起すること
により放射線エネルギーを輝尽光として放出させ
ることができるものである。この方法によれば、
露光時間を大幅に短縮化することができ、また従
来より問題となつていた化学カブリ等が発生する
ことがない。さらに、放射性標識物質のオートラ
ジオグラフは、一旦放射線エネルギーとして蛍光
体シートに蓄積されたのち輝尽光として光電的に
読み取られるから、直接にデジタル信号として得
ることができる。

［発明の構成］ 本発明において用いられる試料の例としては、
放射性標識が付与されたDNA、RNA等の核酸の
塩基特異的断片物の混合物を挙げることができ
る。ここで、核酸の断片物とは長鎖状の分子の一
部分を意味する。たとえば、塩基特異的DNA断
片物混合物の一種である塩基特異的DNA切断分
解物混合物は、前述のマキサム・ギルバート法に
従つて、放射性標識が付与されたDNAを塩基特
異的に切断分解することにより得られる。また、
塩基特異的DNA合成物混合物は前述のサンガ
ー・クールソン法に従つて、DNAをテンプレー
ト（鋳型）として、放射性標識が付与されたデオ
キシヌクレオシドトリフオスフエートとDNA合
成酵素とを用いて合成することにより得られる。

さらに、塩基特異的RNA断片物の混合物も上
記と同様の方法により、切断分解物混合物として
または合成物混合物として得ることができる。な
お、DNAはその構成単位としてアデニン、グア
ニン、チミン、シトシンの四種類の塩基からなる
が、一方RNAはアデニン、グアニン、ウラシル、
シトシンの四種類の塩基からなる。

放射性標識は、これらの物質に適当な方法で
³²P、¹⁴C、³⁵S、³H、¹²⁵Iなどの放射性同位元素を保
持させることによつて付与される。

試料である放射性標識が付与された核酸の塩基
特異的断片物の混合物はゲル状支持媒体など公知
の各種の支持媒体を用いて、電気泳動法、薄層ク
ロマトグラフイー、カラムクロマトグラフイー、
ペーパークロマトグラフイーなど種々の分離展開
方法により支持媒体上に分離展開される。

次に、本発明の方法を用いたオートラジオグラ
フ解析の実施態様を、DNAの塩基配列決定を例
にとつて説明する。

第一に、以下の四種類の放射性標識が付与され
た塩基特異的DNA断片物の混合物が電気泳動に
よりゲル支持媒体上に分離展開されてなる泳動パ
ターンについて、従来の写真感光材料を用いる放
射線写真法により、あるいは蓄積性蛍光体シート
を用いる放射線像変換方法によりそのオートラジ
オグラフを得、次いで適当な読取り（読出し）系
を介して該オートラジオグラフに対応するデジタ
ル信号を得る。

(1) グアニン(G)特異的DNA断片物 (2) アデニン(A)特異的DNA断片物 (3) チミン(T)特異的DNA断片物 (4) シトシン(C)特異的DNA断片物 ここで、各塩基特異的DNA断片物は、塩基特
異的に切断分解もしくは合成された、すなわち末
端の塩基を同じくする種々の長さのDNA断片物
からなる。

前者の放射線写真法を利用する場合には、まず
支持媒体とＸ線フイルム等の写真感光材料とを低
温もしくは常温で長時間（数時間〜数十時間）重
ね合わせて放射線フイルムを感光させたのち、現
像して放射性標識物質のオートラジオグラフを放
射線フイルム上に可視画像化する。次いで、画像
読取装置を用いて放射線フイルム上に可視化され
たオートラジオグラフを読み取る。たとえば、放
射線フイルムに光ビームを照射してその透過光ま
たは反射光を光電的に検出することにより、オー
トラジオグラフは電気信号として得られる。さら
に、この電気信号をＡ／Ｄ変換することにより、
オートラジオグラフに対応するデジタル信号を得
ることができる。

後者の放射線像変換方法を利用する場合には、
まず、支持媒体と蓄積性蛍光体シートとを常温で
短時間（数秒〜数十分間）重ね合わせて蛍光体シ
ートに放射性標識物質から放出される放射線エネ
ルギーを蓄積させることにより、そのオートラジ
オグラフを蛍光体シートに一種の潜像として記録
する。ここで、蓄積性蛍光体シートは、たとえば
プラスチツクフイルムからなる支持体、二価ユー
ロピウム賦活弗化臭化バリウム（BaFBr：Eu²⁺）
等の輝尽性蛍光体からなる蛍光体層、および透明
な保護膜がこの順に積層されたものである。蓄積
性蛍光体シートに含有されている輝尽性蛍光体
は、Ｘ線等の放射線が照射されるとその放射線エ
ネルギーを吸収して蓄積し、そののち可視乃至赤
外領域の光で励起すると蓄積していた放射線エネ
ルギーを輝尽光として放出するという特性を有す
る。

次いで、読出装置を用いて蓄積性蛍光体シート
に蓄積記録されたオートラジオグラフを読み出
す。具体的には、たとえば蛍光体シートをレーザ
ー光で走査して放射線エネルギーを輝尽光として
放出させ、この輝尽光を光電的に検出することに
より、放射性標識物質のオートラジオグラフは可
視画像化することなく直接に電気信号として得ら
れる。さらに、この電気信号をＡ／Ｄ変換するこ
とにより、オートラジオグラフに対応するデジタ
ル信号を得ることができる。

上述のオートラジオグラフ測定操作およびオー
トラジオグラフに対応するデジタル信号を得る方
法の詳細については、前記特開昭59−83057号、
特開昭59−126527号、特開昭59−126278号等の各
公報に記載されている。

なお、上記においては、支持媒体上に分離展開
された放射性標識物質のオートラジオグラフに対
応するデジタル信号を得る方法として、従来の放
射線写真法および放射線像変換方法を利用する方
法について述べたが、これらの方法に限定される
ものではなく、それ以外の如何なる方法により得
られたデジタル信号であつても放射性標識物質の
オートラジオグラフと対応関係がある限り、本発
明の信号処理方法を適用することが可能である。

また、上記いずれの方法においてもオートラジ
オグラフの読取り（または読出し）は、放射線フ
イルム（または蓄積性蛍光体シート）の全面に亘
つて行なう必要はなく、画像領域のみについて行
なうことも勿論可能である。

さらに、本発明においては、予め各分離展開列
の位置およびバンドの幅等についての情報を入力
して読取り（読出し）条件を設定しておき、読取
り（読出し）操作においては各バンド上を一本以
上の走査線が通過するような走査線密度で光ビー
ムによる走査を行なうことにより、読取り（読出
し）時間を短縮化して必要な情報を効率良く得る
ことができる。なお、本発明においてオートラジ
オグラフに対応するデジタル信号とは、このよう
にして得られたデジタル信号をも包含する。

得られたデジタル信号D_xyは、放射線フイルム
（または蛍光体シート）に固定された座標系で表
わされた座標（ｘ、ｙ）とその座標における信号
のレベル(z)とからなる。信号のレベルはその座標
における画像濃度、すなわち放射性標識物質の量
を表わしている。従つて、一連のデジタル信号
（すなわち、デジタル画像データ）は放射性標識
物質の二次元的な位置情報を有している。

このオートラジオグラフに対応するデジタル信
号を一旦メモリ（バツフアーメモリ、または磁気
デイスク等の不揮発性メモリ）に記憶したのち、
信号処理回路と、オートラジオグラフおよびカー
ソルを同時に表示することができるCRTなどの
表示手段と、カーソル作成のための入力を行なう
ことができる入力手段とを有する装置に送り、解
析対象のオートラジオグラフ（放射性標識物質の
分離展開パターン）を表示画面上に可視画像化す
る。

なお、デジタル信号には予め、濃度およびコン
トラストが適正で観察読影性能の優れた可視画像
が得られるように信号処理（画像処理）を行なつ
ておいてもよい。画像処理としては、たとえば、
空間周波数処理、階調処理、加算平均処理、縮小
処理、拡大処理などが挙げられる。

画面上に画像表示されるオートラジオグラフ
は、画面に設定された座標系における信号のレベ
ル（画像濃度、すなわち放射性標識物質の量）を
色彩の明度で表わした、従来の写真画像と同様の
濃淡画像であつてもよいし、あるいは信号レベル
を予め二値化することにより簡略化して表わした
二値画像であつてもよい。

あるいはまた、オートラジオグラフは、一次元
の位置（泳動方向に沿つた位置）と信号レベルと
からなる多数の二次元波形を泳動方向に垂直な方
向に一定間隔で多重表示することにより表わした
画像（いわゆる鳥瞰図）であつてもよい。この鳥
瞰図によれば放射性標識物質の量が鳥瞰図の高さ
として三次元的に表わされるから、バンドのピー
ク位置を正確に読み取ることができ、泳動列（レ
ーン）間のバンドの位置関係の把握並びに泳動開
始位置近くのバンドの密な領域におけるバンドの
分離を容易に行なうことができる。なお、鳥瞰図
によつてオートラジオグラフを表示する方法の詳
細については、本出願人による特願昭60−181431
号明細書に記載されている。

第１図は、画面上に濃淡画像として表示された
泳動パターンのオートラジオグラフを示す図であ
る。第１図において泳動方向は右方向である。な
お、泳動パターンにはスマイリング現象が生じて
いる。

第二に、表示画面上で読取カーソルを作成す
る。

泳動列（レーン）を横切りかつ各レーンのバン
ドに沿うような読取カーソルは、たとえば以下の
ようにして画面上に作成することができる。

まず、画面の上端から表示画面に基づいて入力
された位置まで垂直な線を引く。入力される最初
の位置は、端部のレーン上のバンドの位置である
のが好ましい（第１図１）。端部のレーンとする
のは読取カーソルがこの位置を起点として作成さ
れるからである。

位置情報の入力は、マウスカーソル、ライトペ
ン、ジヨイスステイツクなどの手段を用いて行な
うことができる。位置精度の点から、特にマウス
カーソルが好ましい。マウスカーソルによる入力
は、画面上に矢印（←）として表示されて画面上
を自由に移動しうるマウスカーソル（第１図２）
と、このマウスカーソルを自由自在に動かし、か
つ該カーソルの位置を情報として入力しうる入力
部材（図示なし）とによつて行なわれる。

たとえば、画面上にオートラジオグラフが表示
される四角形の領域を座標（x_a，y_a）、（x_b，y_b）
で表わし、マウスカーソルの位置座標を（x_n，
y_n）で表わすとすると、マウスカーソルによつ
てx_n＝x₁、y_n＝y₁なる位置情報が入力されるこ
とにより、線分（x₁，y_a）（x₁，y₁）が画面上に
表示される（第１図３）。

次に、起点の位置から、それよりも泳動パター
ンの内側に入力された位置（第二の位置）まで直
線を引く。位置の入力は上記と同様にしてマウス
カーソル等を介して行なわれる。

第２図に示すように、始めに、起点４（x₁，
y₁）とマウスカーソル２の位置（x_n，y_n）との
間に線分（x₁，y₁）（x_n，y_n）が表示される。マ
ウスカーソル２が移動すると、この線分は画面上
から消えて、新たに起点４と移動した位置との間
に線分が表示される。なお、マウスカーソルは上
記座標（x_a，y_a）、（x_b，y_b）で仕切られた四角形
の領域内を自由に移動することができる。こうし
て、マウスカーソルの移動とともに起点４とマウ
スカーソル２の各移動位置とを結んだ線分が次々
と表示される。該線分が好適にレーンを横切ると
ころで位置の入力x_n＝x₂、y_n＝y₂を行なうこと
により、第３図に示すように、線分３に連結した
線分５（x₁，y₁）（x₂，y₂）が画面に固定されて
表示される。

このようにして、上端のレーンから下端のレー
ンまでレーンを横切りかつ各レーンのバンドに沿
うように順次、線分（x_i，y_i）、（x_i+1，y_i+1）（た
だし、ｉは正整数である）を引くことができる。
なお、試料は四種の塩基特異的DNA断片物の排
他的な組合せであるので、各レーンのバンドは互
いに同じ位置（泳動距離）には存在しえない。従
つて、『バンドに沿うように』とは、各レーンの
泳動距離が等しくなるように巨視的な意味でバン
ドに沿つて線分を引くことを意味し、厳密に各線
分が各レーンのバンド上を通過することを意味す
るものではない。

次いで、第４図に示すように、線分が泳動パタ
ーンを完全に横切つた時点で最後に入力された位
置が終点であるとの入力情報に従つて、該終点の
位置６から画面下端までの垂直な線分７（x_i，
y_i）（x_i，y_b）を引く。このようにして画面上に
は、泳動パターンを完全に横切つた複数の連結し
た折れ線からなる読取カーソル８が表示される。

読取カーソルは、泳動パターン上の任意の領域
で作成することができ、泳動開始位置に近いパタ
ーン上部の領域であつてもよいし、あるいは泳動
距離の大きなパターン下部の領域であつてもよ
い。

また、一般に位置情報の入力はレーンごとに行
なう、すなわちレーンの数に相当する個数の位置
が入力されるが、泳動パターンに応じて入力され
る位置の個数はそれより多くてもよいし、あるい
は少なくてもよい。少なくとも一つの位置が入力
され、かつ起点と終点が認識できればよい。

読取カーソルは入力位置を直線で結んだ折れ線
状であつてもよいし、あるいは得られた折れ線に
適当な演算処理（曲線近似）を施すことにより曲
線状であつてもよい。

作成された読取カーソルは泳動パターンに合致
しているから、このカーソルを用いて解析者は正
確かつ容易にDNAの塩基配列を決定することが
できる。

具体的には、画面上で読取カーソルを左もしく
は右方向に適宜平行移動させながらカーソルに近
い順にバンドを順次読み取つていく。一般に、泳
動下方（画面右方）であるほどバンドとバンドの
間隔が開いているので、バンドの序列付けは泳動
パターンの下方から行なうのが好ましい。なお、
この際に上記四種類の塩基特異的DNA断片物の
組合せが排他的な組合せであることから、同じ位
置に二つ以上のバンド（異なるレーンのバンド）
は存在しえないことを利用して、序列を決定する
ことができる。各バンドが属する(1)〜(4)のレーン
はそれぞれ(G)、(A)、(T)、(C)からなる末端塩基につ
いての情報を有するから、各バンドの属するレー
ンに対応する塩基で置き換えることにより、
DNAの塩基配列（例えばＡ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−Ａ−
Ｇ−Ｔ−…）を得ることができる。

なお、予め読取カーソルの移動距離および移動
開始位置を設定しておくことにより、簡単な操作
でカーソルを一定の間隔で自動的に動かすことが
可能である。また、カーソルの移動は画面の左右
方向への平行移動のみならず、任意の角度をもつ
て斜め方向に移動させることもできる。従つて、
レーンが蛇行している場合あるいはパターン全体
が傾斜している場合であつてもそれに沿つてカー
ソルを移動させることができる。カーソルの移動
方向を予め設定しておくことも勿論可能である。

バンドに序列を付ける過程で読取カーソルが泳
動パターンに合致しなくなつた場合には、上記と
同様の操作を繰り返すことにより簡単に所望の形
状のカーソルを作成することができる。

上記においては、試料である塩基特異的DNA
断片物の混合物として（Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｃ）の排他
的組合せを利用した場合について説明したが、本
発明の解析方法はこの組合せに限定されるもので
はなく、例えば（Ｇ、Ｇ＋Ａ、Ｔ＋Ｃ、Ｃ）など
の種々の組合せに適用することができる。また同
様に、塩基特異的RNA断片物の混合物（例えば、
Ｇ、Ａ、Ｕ、Ｃの組合せ）についても本発明の方
法を適用することができる。さらに、本発明の方
法は、一組の核酸の塩基特異的断片物の分離展開
列に限定されるものではなく、支持媒体上に同時
に分離展開された全ての分離展開列について同時
に適用することが可能である。

得られた核酸の塩基配列についての情報は、信
号処理回路を介して磁気デイスクや磁気テープな
どの記憶保存手段に保存したり、あるいはCRT
等の表示画面、感光材料、感熱記録材料に表示記
録することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図〜第４図はそれぞれ、画面上に表示され
たオートラジオグラフを示す図であり、本発明に
従う読取カーソルの作成工程を説明する図であ
る。 １：泳動バンド、２：マウスカーソル、３，
５，７：線分、４：起点、６：終点、８：読取カ
ーソル。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 放射性標識が付与された塩基特異的DNA断
   片物もしくはRNA断片物が支持媒体上に一次元
   的方向に分離展開されて形成された複数の分離展
   開列のオートラジオグラフを解析することによ
   り、核酸の塩基配列を決定する方法において、 (1) オートラジオグラフに対応するデジタル信号
   に基づいて該オートラジオグラフを電気的に画
   像表示する工程、および (2) 表示画像上に、分離展開列を横切りかつ各列
   のバンドに沿つた読取カーソルを作成する工
   程、 を含むことを特徴とする核酸の塩基配列決定のた
   めのオートラジオグラフ解析方法。 ２ 上記第二工程において、少なくとも一つの位
   置に関する入力情報に基づいて該位置を通る直線
   もしくは弧を描くことにより、折れ線状もしくは
   曲線状のカーソルを作成することを特徴とする特
   許請求の範囲第１項記載の核酸の塩基配列決定の
   ためのオートラジオグラフ解析方法。 ３ 上記第二工程において、位置情報がポインテ
   イングデバイスを用いて入力されることを特徴と
   する特許請求の範囲第２項記載の核酸の塩基配列
   決定のためのオートラジオグラフ解析方法。 ４ 上記ポインテイングデバイスがマウスカーソ
   ルであることを特徴とする特許請求の範囲第３項
   記載の核酸の塩基配列決定のためのオートラジオ
   グラフ解析方法。 ５ 上記第一工程において、オートラジオグラフ
   に対応するデジタル信号が、支持媒体と輝尽性蛍
   光体を含有する蓄積性蛍光体シートとを重ね合わ
   せて、支持媒体上の放射性標識物質のオートラジ
   オグラフを該蛍光体シートに蓄積記録した後、該
   蛍光体シートに励起光を照射して該オートラジオ
   グラフを輝尽光として光電的に読み出すことによ
   り得られたものであることを特徴とする特許請求
   の範囲第１項記載の核酸の塩基配列決定のための
   オートラジオグラフ解析方法。 ６ 上記第一工程において、オートラジオグラフ
   に対応するデジタル信号が、支持媒体と写真感光
   材料とを重ね合わせて、支持媒体上の放射性標識
   物質のオートラジオグラフを該感光材料に感光記
   録した後、該感光材料上に可視化されたオートラ
   ジオグラフを光電的に読み取ることにより得られ
   たものであることを特徴とする特許請求の範囲第
   １項記載の核酸の塩基配列決定のためのオートラ
   ジオグラフ解析方法。