JPS63226292A - 脱アセチル化非清澄複合多糖ｓ−６０及びその製法 - Google Patents

脱アセチル化非清澄複合多糖ｓ−６０及びその製法

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JPS63226292A JP63040902A JP4090288A JPS63226292A JP S63226292 A JPS63226292 A JP S63226292A JP 63040902 A JP63040902 A JP 63040902A JP 4090288 A JP4090288 A JP 4090288A JP S63226292 A JPS63226292 A JP S63226292A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 複合多糖類はある微生物によって生成されることが知ら
れている。親木性コロイドとしてまたその粘性と流動学
的性質によりこの複合多糖類の作用のいくつかが水性の
系における濃化剤として使われてきた。
科学技術の他の分野に関し、濃化、懸濁およびまたは安
定剤として有用な性質を有する新しい複合多糖類を発見
する１］的の研究か継絖さｒした。これらの目的の性質
を有する新しい複−８４糖會与えることが本発明の目的
でめる。この新規化合物の製造法を与えることも目的で
ちる。さらに濃化または＠濁または安定剤としてこのｆ
ｒ規複什多糖を含む処方の提供も目的である。またさら
に本発明の目的は本発明の続く記述から明確になるであ
ろう。
本発明は選ばれた炭素源上で細ｄの作用に工り生産され
る′＃規複合多楯に関する。また本発明ｔま梱御さ几た
条件下で選ばれた炭素源と培養培地成分で細菌を培養す
ることにエリ　。
複ぜ多糖を製造する新規な方法に関する。本発明の仮付
多糖は主に炭水化物残基と夕波の蛋白質を含む高分子量
の多糖である。時々これｒｉ「ガム（μ情）」と呼ばれ
るが複合多糖という術語がエリ正確で的確であると考え
られる。本発明の以下の記述において、該化合物は時に
工り複仕多糖６０または５−６０とで 呼ぶことにする。
この新規化合物は広範囲にわたる分類学的研究に基き、
今捷でに禾記載の微生物で無能名のシュードモナス属の
菌Ｃ３ｎｎａｍａｄ　Ｐｚａｕｄｏ−１゜ｎａｚ　ｓｐ
ｔｃｉｇｔ　）にエリ適当な栄誉培地で醗酵することに
エリ製造することができる。該複合多糖を天道する時に
使用するこの微生物の拘束金堂けない（ｕｎｒｅｓｔｒ
ｉＣｔｅｄ）　　永久寄託が１９７８年１１月２１日に
アメリカン喀タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍ
ｇｒｉａａ％Ｔｙｐｅ　Ｃｗｌｔｓｒｇ　Ｃｏ１１ａｃ
ｔｔｏｎ　）にエリ受は入れ食号ＡＴＣＣ３１４６１で
行なわ几た。
シュードモナス（Ｐｚａｕｄｏｍｏ％１１１）属の補々
の分類の手がかり及びシュードモナス（ｐｚａｕｄｏ−
ｍｏｎａｚ　）　ｄの培養の記述はＢａｒｇｇｙ”ｚ　
Ｍａｍｍａｌ〔ブリー１−″（Ｂｒｅａｄ　）ら、（１
９５７）　］の７７版び１ｈｒ（Ｈｙ”ｚ　Ｍａｎｓｃ
ａｌ　（ドウドロフら（Ｄｏｓｄｏｒｏｆｆ）ら、（１
９７４）　）の８版、また他の学派による種々の出版４
１８！Ｉ：ヒユー（７／ｓｇｈ）とギラルゲイ（ＧｉＬ
ａｒｄｉ）　、１９７４、シュードモナス（Ｐｚｇｗｄ
ｏ−ｒｒＬＯｎａＩ）、臨床微生物便覧（Ｍａｎｕａｌ
　ａｆＣｌｉｎｉｔｓａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｇ　
）、２版、レンネットＣＬｍｎｎａｔｔｇ）ら編、２５
０−２６９ページ、アメリカ微生物学会、ワシントンＤ
、Ｃ１；ウェーバ−（Ｗｇａ−ｖｎｒ　）ら、１９７２
、診らしいｖ４ＷＬ性グラム陰性細菌の同定（Ｉｄｇｎ
ｔｉｆｉｃａｔｔｏｔｓ　ｏｆ　ＵｎｕｚｘａｊＰａｔ
ｈｏｇ＠ｎｉｃ　　Ｇｖａｍ４ａｇａｔｉｖａ　　Ｂａ
ｃｔｇｒｉａ　　）　　、イー　・オー・キング（Ｅ、
　０．、Ｋｉｎσ）、疾病市１１＠のためのセンター（
Ｃ−％ｔａｒ　ｆｏｒ　Ｄｉｓｍａｙｓ　Ｃｏｎｔｒｏ
ｌ　）、アトランタ；イイズカ（ハｚｘｋａ）ら、１９
６３、シュードモナス属の分類の試み（Ａｔｔｅｍｐｔ
　ｏｆＧｒｏｕｐｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｇａｔｎｂｚ　Ｐｚ
ｇｕｄｏｍｏｎａｚ　）、Ｊ、Ｇａｓ。
Ａｐｐｌ、Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌｏｇｇ　　９　：　７３
−８２　：ヘントリック＜ｌＩｇ％ｄｒｉ６）ら、１９
６６　、微生物学者のための同定方法（Ｉｄｇｓｔｉｆ
ｉｃａｔｉｏｎ　Ｍｇｔｈｏｄｓ　ｆ６ｒＭｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｉｚｔｚ）、Ａの部（ｐａｒｔ　Ａ）、ギブ
ス（ＧｉＡＡＩ）ら紬、ｌ−７ページ、アカデミツク・
プレス（ＡＣａｄｇｍｉａ　Ｐｒａｔｅ）、ニューヨー
クに見られる。
これらの手がかりと記述からＡｒＣＣ３１４６１のそれ
と同様の形態学的及び培養上の特徴を有するシュードモ
ナス（Ｐｅａ譬ｄｏ惧０％α、）柵を捜した。以下の考
察は新しいシュードモナス（Ｐルｄｏｍｏｎａｚ）ｔｉ
の帰属に必要かつ正当化するものである。
１　細胞形態の特徴 単細胞、直線またはしばしば曲がった棒状、一般的に０
．６−０．８　Ｘ　　２．０−３．０＃ｍ、　Ｌばしは
先細になった端、培養期間を長くすると工す大さくエリ
長＜　（０，８−１，ｏにン３μ悔）なり、奇形ａ＠及
び多形性が、特に炭水化物の制限量の培地上で現われる
。反対に、炭水化物を富んだ培地上で生育する時には細
胞はむしろ一定の桿菌状を保つが、培養が長くなると再
び大部分の細＠は大きくなり多形性が現われる。ダラム
陰性、莢膜を有せず、ポリ−β−ヒドロキシ酪酸とポリ
ホスフェートの顆粒が特に窒素欠損培地上での培養で見
られる。極多毛性の鞭毛着性状態による運動性が、つま
り１〜４本の鞭毛がある一万の端ＫＮ毛及び時には端に
近い（Ｓｓｂｐｏｌａ’ｗ）所から着生していることＶ
Ｃ工り、見られる。
２　コロニー形自の特徴 肉汁寒天（％ｕｔτｉｓ％ｔ　ａｇａｒ）平板上では１
小（ＩＮ！径０．８−１．１　ｍ　）及び犬（直径３．
２−３．５鶏）のコロニーが現わｎる。コロニーは黄色
カロチノイド色素をイし、平滑、円形、凸円状からクッ
ション状である。大きなコロニーはしばしば同心円状の
しわを有する。コロニーの表面は硬く非粘着性の組繊で
白省耳で押すとコロニー全体が除かれる。ＹＭ寒天平板
上では、比較的大きい（＠径Ｎ、６−７１）、黄色、円
形、平滑、粘゛貞性、凸円状のただ一種類のコロニーが
現われる、粘質性で弾力のある膜がコロニーの表面上に
形成され、コロニーの表面の膜全体を除くことができる
。二次生育が最初のコロニーの周縁にできる。これらの
コロニーの色は周縁よりも中心の万がＬり暗黄色であり
、同心円状の色素形成が見られる。細側内黄色カロチノ
イド色素Ｉｌｃ〃口えて、拡散性渇色色素が培養期１１
！１を長くすると自動酸化の結果として現われる。この
現Ｗ！は肉汁練入（Ａ’ｕ　ｔ　ｒ　ｉ　ｇ％ｔ　ａｇ
ａｒ）上でエリ容易をて認められる。螢光性色素は生産
されなかった。
３　生理学的及び生化学的特徴 ５−６０匁株の生育範囲は約２０℃から４１℃までであ
る。４℃では生育は起きない。
：３．０％ＮａＣｔ　は生育を阻止するのに充分であり
、菌株は、Ｈが５と１１の間で生育かり能である。
はとんどすべての炭水化物から酸が生成しガスは発生し
ないが、ポリアルコールからは生成しない。ワレアーゼ
は生産される。ＭＲ１〆Ｐ、及びインドールテストはす
べて陰性である。アルギニン、ジヒドロラーゼ、リジン
とオルニチンデカルボキシラーゼは生産されない。リド
マス・ミルクでは酸の生成及び還元が起こる。脂肪分解
性卵黄反応（ｌｉｐｏｌｙｔｉｃすｇ　ｙｏｌｋ　ｒａ
ａａｔｉｏ％）は陰性である。ゼラチンを弱く加水分解
するが、カゼイン、殿粉、アルギン酸、ペクチン、セル
ロース、キチン、ＤＮＡを加水分解しない。
４　抗生物質に対する感受性 菌株はカナマイシン、ネオマイシン、クロールテトラサ
イクリン、エリスロマイシンに非常に感受性があり、ス
トレプトマイシンとペニシリンにはない。
５　栄養上の特徴 Ｍ磯物性の生長因子は套装ではないし、アンモニウム塩
は単一の窒素源として要求を満たす。少なくとも３５の
Ｍ磯化会物、すなわちローリポース、殿粉、２−ケトグ
ルコネート、ムケー）　（ｍｕｅａｔｇ）以外の大部分
の炭水化物が利用された。さらにアゼテート、カプロエ
ート、カブリレート、ベンゾエ−ト、スクシネート、ア
ゼレート、Ｌ−マレエート、ＤＬ−β−ヒドロ壬シブチ
レート、ピルグエート、エタノール、ｎ−プロパツール
、ｐ−ヒドロキシベンゾエート、フェニルアセテート、
Ｌ−α−アラニン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−ロイシン、Ｄ
Ｌ−インロイジノ、Ｌ−アスパルテート、Ｌ−グルタメ
ート、Ｌ−チロシンが利用された。
６　　ＤＮＡのＧＣ＠甘 ＤＮＡの評価はモル憾で〜６８　（Ｔｙａｙｏｌｋいう
結果［なった。
オキシダーゼ＝ＫＯυａｅ”ｚ　　　　４　　　加水分
解能：ｐａｔ五ｏｔｇｏｈ　　＋４ａ　　　　ゼラチン
　　　　　＋（２）カタラーゼ　　　　　　　　　　＋
　　　　カゼイン　　　　　−〇Ｆデスト：酸化　　　
　　　　＋　　　　殿粉　　　　　　　−グルコースか
らのガスの生成　　　　　　　　　ペクチン　　　　　
一硫化水素の生成：　ＴＳＩ　　　　　　　　　　アル
ギ、酸−シスチンから　＋　　　　　でルロース　　　
　　−ペプトンからアンモニアの生成　　　十　　　　
　干チン　　　　　　　−β−ガラクトシダービＣ０Ｒ
ＰＧ）　　　＋ＣＡＰＩ）　　ＤＮＡ　　　　　　　　
−リジンデカルボキシラービ　　　　　　　　諸培地上
での生育オルニチン　デ力ルポ午シラービ　　−ｌｊＭ
Ｂ外天　　　　　−トリプトファン　デアミナーゼ　　
　−　　　　　ＭａａＣｏｎＫｍｙｌｌ！天　−フニル
アラニンデ７ミナーゼ　　−５Ｓ球入ウレアーゼ　　　
　　　　　　＋１±　　　マンニトール−１１ｆｆＥ天
　−インドール　　　　　　　　　−ＴＣＢＳ殊大　　
　−ＭＲテスト　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｔ
ｉｎｚｄａ１ｇ唾テルル酸〆Ｐテスト　　　　　　　　
　　　　　　血液寒天　　　　　十硝酸塩の還元　　　
　　　　　　　　　　　Ｐｚｍｓｄｏｚａ１紙−也硝酸
塩の還元　　　　　　　　　　　　色素生成：脱窒反応
　　　　　　　　　　　　　　　　Ｋ＠％、Ａ培地　　
　−Ｎｔ−固定　　　　　　　　　　　　　　　Ｋｉ％
σＢ培地　　　−Ｂｓｒｋ培耽Ｆη清　　　　　＋　　
　染色性ニトロゲナーゼ活性　　　　　　　　　　　　
　コンゴ−レッド　　　−マロンａｉＩ！（酸化）　　
　　　　　　　　　　　　ナイト・ブルー　　　−（Ｎ
ｉｔａ　ＡＪｕｇ） ホスファターゼ　　　　　　　士 溶血反応（単面）　　　　　　− リトマス番ミルク：酸産虫還元 ３−ケトラクトース産生　　　　　　　−６０℃、３０
分の生存　　　　　　　−ＴＳＩ：＄＋面培培養　　　
　色電化なし高Ｊ−培養（１３１Ｌｔｔ）　　色Ｎヒな
しガス　　　　　　　− 卵黄反応　　　　　　　　　　− 培養条件： 複合条５Ｓ−６（ｌｊ：無命名のシュードモナスＣＰｚ
ｔｕｄｏｍｏｎａｚ）　ｉｉの微生物のｍ？ｉ［ｆる制
御された粂件下で適当な水性栄誉培地の好気培養中に生
産さ几る。培地は炭素、窒素、無機温源を含む通常の培
地である。
一般的に、炭水化物（例えば、グルコース、フルクトー
ス、マルトース、砂糖、千シロース、マンニトールなど
）は栄養培地における同化性炭素源として単独あるいは
組み仕せて使うことができる。培地中ｖｃ便ゎする炭素
源または炭素源類の正確な童は一部分培地の他の成分に
よるが、一般的に炭水化物のｔは晋通培地重童あたり約
２ｔＩｂと４俤の間で変化する。これらの炭素源は個々
に、またはいくつかの炭素源類を組み合せて培地＆Ｃ便
用できめ。
一般に、凝白は性の多くの物質が培養工程中における・
窒素源として使うことができる。適当な窒素源は、例え
ば、酵母〃口水分ｍ物、生酵母、大豆粉、ｆｓ冥粉、カ
ゼイン万口水分解物、コーンスチープリカー、蒸ｖＢ＋
￥！］残渣のｏＴ浴性粉、トマトペーストなど金含む。
窒素源は、単独でまたは組み合せて、水性培地の重量あ
たり約０．０５係から０．２憾までの範囲の量で使われ
る。
培養培地に加えることができる栄養無機塩類はナトリウ
ム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、リン酸、懺
酸、塩素、炭酸などのイオンになり得る通常の塩類であ
る。コバルト、マンガン、鉄、マグネシウムのような痕
跡金属もまた含まれる。
実施例に述べる培地は使用可能な広範囲の着地の一例に
すぎず、これに限定さｎるものではないことに留意され
たい。
培ＩＩは約２５℃から３５℃までの間の温度頭囲で行う
が、最適の結果を得るには、約２８℃から３２℃１での
温度で培養を行うことが好適でろる。シュードモナス（
ｐｓｅｕｄｏ脩ｏ、ｎａｐ）閑の生育及び多糖５−６０
の生産のための栄養培地のｐＨＩ’ｌ約６から８まで変
えることができる。
新多糖５−６０は表面及び液中培養で生産さ几るが、液
中培養を行う方が好適である。
小規模の培養は圃を適当な栄養培地に接種、生産培地に
移した後、約３０℃の一定温度、シェーカー上で数日間
培養を行うことに工り便利に行なわれる。
培養は徨萌の生育が培地の入った滅菌フラスコで始めら
れ、１ないしそれ以上の段階を経る。種菌生育用の栄養
培地は炭素及び窒素源の適当な組み合せたものである。
種菌のフラスコは約３０℃の一定温匪で、１〜２日間ま
たは満足な生育が得られるまで振盪し、得られた増殖の
一部を第二段の種または生産用培地に接種することに使
われる。必要とするなら中間段１留の橿用フラスコを要
するに同様な方法により増殖させる。すなわち、直間の
段階の撞用フラスコの内容物の一部が生産培地に接種す
ることに使わｔする。接種したフラスコは一定温度で数
日ｒＩＪ１振盪し、培養期の最後にフラスコの内容物を
イソプロピルアルコールのような適当なアルコールで沈
殿させる仁とにエリ回収する。
大きな規模の時には、撹拌器及び培養培地を通気する手
段を備えた適当なタンクで培養を行うことが好適である
。この方法によると、栄養培地はタンク内で作り約１２
ＩＣまでの温度に加熱滅菌する。冷却後、Ｏｋ、菌した
培地に生産培地に前に生育させた種を接種し、培養を栄
養培地を攪拌及びまたは通気しながら及び約３０℃の＠
式に保ちながら、例えば２日から４日間の培養＃Ａ間で
行う。この５−６０を生産する方法は特に大音の製造に
適している。
生産物はインプロパツールのような適当なアルコールで
沈殿させることにエリ培養培地から回収する。
無命名のシュードモナス（Ｐｚｔｓｔｄｏｍｏｎａｚ）
　ｍに工す生産される複合多糖はお工そ王に炭水化物、
０−グリコシド結合したエステルのアセチル基が３−４
．５％、蛋白質１０−１５憾からなる。
多８！５−６０の炭水化物部分はウロン酸（〜１２４ガ
ム重量に対し）と中性糖のグルコースとラムノースを含
む。ラムノースとグルコースのおよそのモル比ｒｉ′１
．５対ｌである。
４．５係の７ｔチル含量は５−６０樹脂の０．２％水性
溶ｇ１．ヲアルカリ性ヒドロキシルアミン試薬と処理し
、続いて酸性塩化第２鉄試薬で処理することに工り決定
した〔ニス・ヘストリン（Ｓ−ＨｇＩｔｒｉｓ）（１９
４９）　／、　Ｂ１０ｒ、　ｅｈｇ、１８０．２４９−
２６１１゜ 多糖５−６０の中性糖は以丁の工うに決定り、り。生成
物１０　ｑ　ｋ　２Ｎｄ、５ｏ４１Ｏｄｖｃｆｇ解し、
混付物を１００℃４時間加熱する。得られる溶液全冷却
し水酸化バリウムで中ｎ＜＋固体二酸化炭素でｐＨを５
−６とする。得られる硫酸バリウムの沈殿を遠心分離に
エリ除き上ｆ＃を減圧下でシロップ状になるまで濃縮す
る。
加水分解物の糖は３重ｔ％ＯＶ　−２２５を保持したガ
スクロームＱ　８０／１００　　メツシュを２１０℃で
使いヒュレットーパツカード５７５０型クロマトグラフ
（Ｈｓｗｌｇｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ　Ｍｏｄｅ１５７５
０　ｃｈｒａｔｌ＆ａｔｒｇｒｇｐｋ）でそれらのフル
トノニトリル酢−エステル＃Ｓ尋体をガスクロマトグラ
フを行うことにＬり試験的に固定する。楯は真の標準品
と比較することにエリ同定・定電する〔ジエー・ケーー
ベアード（Ｊ、　ＬＢａｉｒｄ）、エム・ジエー・ホル
ロイド（Ｉｌｌ、Ｊ、Ｈｏ１ｒｏｙｄａ）、ディー・シ
ー・エルウッド（Ｄ、Ｃ，Ｅｌ　１ｗｏｏｄ）（１９７
３）　Ｃａｒｈｏｋｙｄｒ、　７？ｇ１．２７．４６４
−４６７１゜多糖の種々の中性ｌ＠轄またピリジン：酊
−エチル：水（２：５：５）の上４を溶媒とするホワッ
トマン１　＠　（ｌｆ’ｈａｔｔ＠ａ％ム１）クロマト
グラフ用２１４紙による下降法ペーパークロマトグラフ
を用いることにエリ特徴づけられた。クロマトグラフは
硝ｒ＊銀に浸漬及びフタル醸−ｊニリン噴霧試４にエリ
染色した。構成糖は糖の標準品と同時クロマトグラフィ
ーを行うことにエリ及びフタル酸−アニリン試薬との特
異的呈色反応ＶＣＬす固定した。
多糖のウロン酸含ｔは２つの異なった方法にエリ決足し
た。ある方法では試料ｔ−１９％塩酸で脱炭醸し遊離し
た二酸化炭素を標準水酸化ナトリウムで捕捉し逆滴定に
エリ〔ピー・エル・ブラウニング（Ｂ、ムＢｒ＊ｖｓｉ
ｓｌ）（１９６７）Ｍｇｔｈｏｄｚ　ｏｆ　ｆｏｏｄ　
Ｃｋｇｎｃｉｚｔｒｙ　［Ｉ　、６３２−６３３　］及
びカルバゾール比色法に工り〔ティー・ビター　（ｆ、
　Ｂｉｔｔｇｒ）、エッチ−エム・ムアー（Ｈ。
Ｍ、Ａｆｓｉｒ）　（１９６２）　ＡｔＬ＠ｊ、　Ｂｉ
ｏａｈａｘ　４．３３０−３３４　］決定した。
１紙・藏気泳動は上述の中和した壷加水分解物にあるウ
ロン酸の分離及び試験的同定に用いた。この分解物の一
定量及び既矧のウロン酸標早品金カマグ（Ｃａｍ６ｇ）
市気隊動用ｅ紙６０６０−０ｌ１／ｒのせ、は気体励を
カマグ（ＣａｍαＱ）モデルＨＶＥ電気泳動装置金用い
てｐＨ２，７緩衝液中２．０時間行なった。クロマトグ
ラムを風乾し硝酸銀掟潰試薬で染色し分離したウロン酸
の位置を求めた。２つの大きな及び１つの小さなスポッ
トが見られた。大きなスポットの１つはグルクロンｔｄ
　（ＲＧ、６．＝ｘ、　０）と同様の移動度で動きもう
一方の大きなスポット（／？Ｇ、ｃＡ＝０．８５）及び
小さなスポット（ＲＧ、６Ａ＝　０．７３　）はエリ小
さな移動度でめった。。
こ几らと同一条件下での既知ウロン酸の相対移動度は以
下の通りである： む グルクロン＃　　　　　　１．０ マンニュロン酸　　　　０．９６ ガラクツロン酸　　　　０．６５ グル口：／ｃ１１．０．６３ 自然の５−６０の赤外吸収スペクトルはＫＢｒ錠剤法で
乾燥物質について行なった。複合多糖は水酸基、メチレ
ン基、カルボニル基、カルボン酸塩を示す３４００ｔｍ
−”、２９５０ｚ−’、１７４０ｃｍ−’、１６２０ｃ
ｒｎ−’　　にピークを示した。塩化メチレン染料を受
けつけず、実質的にＮ、Ｎ−ジメチルホルム７ミドに不
溶、ＤＭＳＯまたはホルムアミドに可溶である。
５−６０の試料は以下の元素分析値を示す二Ｎ−２，０
０％、Ｃ−４２，６２％、＃　−５，８０係。
多糖５−６０は水に低濃度で俗解した時に水性溶液に粘
度を与える。この事、ＪＩＪｆｆＴに対する感受性及び
全体の流動学的性質のため、これは水性の系における濃
化、懸濁及び安定剤として、例えば織物工業の捺染用糊
、または低流動水性除草剤組成物、サラダドレッシング
、濃厚プディング、粘着剤組成物処方用の添加剤として
有用である。９口熱及び冷却後、これは弱い弾力のある
ゲルを形成する。
脱アセチル、非清澄５−６０ 乾燥高分子または培養液を高ｐＨ（例えば、炭酸ナトリ
ウムまたは水酸化ナトリウムを用いてｐｄｌｏにする）
で９０−１００℃の高温に１０分から４５分間加熱する
と脱アセチル化が容易に起こる。得られる脱アセチル多
糖５−６ｏｆ″ｉ堅い弾力のないまたはもろいゲルを形
成し、工朶的及び食品関係における多くの応用に有用で
ある。脱アセチル５−６０の組成は主に炭水化物、蛋白
質〜１７チ、７セチル〜０４でろる。炭水化物部分は〜
１３％のウロン酸、およそのモル比が１．５：１の中性
糖ラムノースとグルコースから成る。
脱アセチル化樹脂のある使用法は堅くもろいゲルなので
型をつくる及び堅い構造物として使うことができること
から、香料のような過当な浴液と処理した後、室内防臭
剤、または空気清浄剤などに応用を見いだす。脱１セチ
ル鋪１旨ｒｉまたゲル藏気泳励において、電子囮倣睨使
用時のミクロトーム用のゲル化剤にも萌われる。自然の
及び脱アセチル樹脂ｄ−１た放射線学におけるバリウム
、菓子類の懸濁剤として、及び工具作り、歯科学、犯罪
学における型どり＠質としても使わ几る。
ＫＢτ碗剤法で乾ｊ栗物質で測定した脱アＺチル５−６
０の赤外吸収スペクトルは３４００ｃｙ＋＋−１２９５
ＯｒＩｎ−，１７４０ｍ　　％１６５０ｍ−，１６１０
ｃｍ−’にピーフケ示した。
脱アごチル５−６０の試料は以下の元素分析値を示す：
　Ｎ　−２，６７係、Ｃ−４１，８９係、Ｈ−６，０７
％。
脱アπチル、清漏５−６０ 清澄、脱アセチル５−６０の組成は以下に示すとおりで
ある：〜２憾蛋白質、０憾アセチル、及び炭水化物、後
者は〜２２悌のウロン酸とおよそのモル比が１．５：１
の中性糖ラムノースとグルコースから成る。
ＫＢ　ｒ錠剤法で乾燥物質で測定した清蛭、脱アセチル
５−６０の赤外吸収スペクトルは３４００（７＋１−’
、２９５０ｔ−Ｉｎ−”　、１６００ｃｍ’にピークを
示した。脱アセチル、清澄５−６０の試料は以下の元素
分析ｌｌｔを示す：＃−０．４２４、Ｃ−３６，８５％
、Ｈ−５，６２係。試料は次の比旋光度金示す。
〔α〕２５＝−４５゜ 脱アセチル清混・朗脂は広範囲の培養承全便用する種々
の臨床または非臨床倣生吻のだめの、微生物学での培養
基における球入代用品として特に有用でるる。寒天に置
き換えるために必要な脱アセチル清皺引脂の濃度は使用
する培地によるが、約０．５から約１．２５％覗（各ｔ
あたりの重量比）の範囲内である。
微生物の生育の特徴は標準の球大金基にした培地のそれ
と全く同様でるる。
以Ｆの詳細な実施例は本発明の代表的ｆＬＩｆｉを説明
したものでろる。
実施例１ 複合多糖５−６０生産用の培養工程 Ａ　継代培養 無命名のシュードモナスＣＰｚｔ＊ｄｏｍｏｎａｚ）　
ｍ、ＡＴＣＣ３１４６１ｒｉＮＡまたはＹＭ寒天上テ非
常に工く生育するから、日常、これらを継代培養用に使
用する。培養温厩は３０℃である。倣２．３１ 生物ｒ′ｉ、貨ｉ色のカロチノイド色素と褐色のＯｆ弓
性色累を２−５日間のＭ！ｒ養で生オする。
Ｂ　棟呵の製造 フラスコの樺ｄ４は３０℃で培養したＹＭ培地で作られ
る。新しい平板培養の菌を接種した時、ＹＭ１＠地の培
養は２４時間までに良い生育と樹脂の形成を与える。
種培養容器として１ガロン発酵［を用いる発酵槽用培地
は最終の発酵槽の培地と同じものである。
Ｃ最終の発酵槽用培地 ４Ｎ＆のナトリウム−とカリウム−塩型は異なった培地
で作られる：それらは共に以下に述べる。微生物は一定
のＫを要求しこれをナトリウム型培養培地に加えねばな
らない。
（３％デキストロースも便うことができる。
ナトリウム塩　　　　カリウム塩 ３．０％グルコース　　　　　３．０係グルコース０．
０１４Ｍｇ５Ｏ，−７Ｍ、０　　　０．０１％ＭａＳＯ
４，７Ｍ、　００．０９チＮｆ１４ＮＯ３０，０９憾　
ＨＩＴ、　ＮＯ。
（大豆蛋白濃縮物） １　ｓｕｅ／Ｌ　　ＨｏＬｇ　塩類　　　　　　　　１
　ｗＬｅ／　Ｌ　　ノｆ　ｏ　Ｌ　ｔ　↓ＡｋＭｌ　ｐ
ｐｎｓ　　Ｆｇ＋＋　　　　　　　　１　ｐｐｍ　　Ｆ
ｇ”　十０、０５％　Ｎａ、ＭＰＯ４ｏ、　０５％　　
Ｋ２ｔｌＰｏ４＋ １０、−　Ｋ ｐＨＪＩＪ御−ＮａＯｆｌ　　　　　　　、Ｈｙ、＋）
御＝　ＫｏｊｉＨ６Ｌ＊順類は酒石酸、モリブデン醸マ
グネシウム、ＣｏｃＬｓ　、ＺｎＣＬ、、ｃｓＬｃｔ２
％ホウ酸、塩化マンガン、憾酸第１鉄を営む痕跡元素の
溶液である。
低カルシウム生成物を目的とする時、上記の培地のいず
れかも脱イオン水で使用する。
培養は５０時間で光了し；培養液の粘度は通常５０００
−８０００ｃｐＪＩである。
Ｄ　回収 生成物のゲル化する性質のために良好な繊維形成は普通
電熱放置の沈殿では起きない。
しかし、９０−９５０で１０−１５分間の低温枚重によ
り（この間に績培養液は加熱−著しく薄くなる）、優秀
な繊維が培養液の容量の２倍量の９９係イソプロパツー
ルを用いて冷却することなく培養液からの沈殿にエリ得
ら几ることがわかった。＋ＩＭｉｔ５ｓの平均収率が２
０１と７０１の発酵槽でグルコース３チに工り得られる
。
Ｅ　乾燥 生成物を回収し５０−５５℃で１時ＩＩＩまでに強制通
気式トレイドライヤーで乾燥する。
Ｆ　生成物の品質 ＋ に塩の１憾粘度は通常３０００６ｐＩの範囲内にあり、
低カルシウムナトリウム塩のものでは約７０００６ＰＪ
Ｆである。
実施例２ 複合条ａ１５−６０の脱アセチル化と清Ｕ化すべての便
用法において必ずしも必要ではないが樹脂の装置化は樹
脂を寒天の代用品として使用するときには価値がある。
清Ｍ化は脱アセチルの前（自然のｉまの状態）または後
でも行うことができる。脱アセチル化は熱アルカリを用
い清澄化は熱い状態で行われるから、２つの方法は容易
ｖＣｆ利に結合される。
脱アセチル化と渭市化は共に培養液または乾燥高分子の
いずれでも行うことができる。脱アセチル化では、培養
液を餠用するならば、ＰＨをＫＯＩＩでＩＯＫ合わせ溶
液を９０℃で１５分間加熱、希Ｈ，５０，でシを７とし
、ＣａＣＬ、を０．２４濃度になる工うに加え冷却する
。堅くもろいゲルが得られる。
脱アセチル化と清澄化の両方法における一般的方法は以
丁に示す： ／ｌ　培養液または１ｍ脂の２係浴液を９０℃に加熱す
る。
Ｂ、　　ｐｇをＫＯＨで１０にする。
Ｃ０培養液または溶液の温度を１５分間９０−９５℃に
保つ。
Ｄ、、１１１に希ＨＣｔ−１ｆｔＦｉＨｔＳＯ，ｃ６−
８トする。
Ｈ：、１０ｆ／ｌのスーパーエイト（Ｓ％Ｐ蓼ｒＡｉｄ
）をＰ遇する物質に加える。
Ｆ、　この物′ばを１３６ｃｄの面積をもつフィルタ一
部分を用いて約６鴫のスーパーエイド（Ｓｕｐｅｒ　Ａ
ｉｄ）の層と約２０−３０　ｐｓｉの圧力て圧力フィル
タ一部分（予備加熱）を通して１過する。
Ｇ、　　ｆ液はゲル化を防ぐためにただちにインプロパ
ツールで沈殿させ繊維を１時間またはそれエリ少ない時
間で５０℃で乾燥する。
脱アセチル化が不必要の時は、上述の方法はｐＨを上げ
ること以外はそのまま従う＝９０℃に保ち、溶液をただ
ちにＣ過し、回収する。
清澄化はいつもカリウム塩型で行われる；ＫＣｔは必要
なら前に作った生成物の溶液に加えることができる。
実施例３ 複合多糖５−６０のゲルの特徴 自然のままの位（脂及び脱アセチル樹脂のに型とＣａ　
　Ｖの両方の型で、カラゲニン及び寒天と比較したデー
タを編果したものを下に示す：埒 型　　　　　　ゲルｌ生質　　融点　　　固化点　　ヒ
ステリシス自然の５−６０　　　非常に弾性　６５−７
０℃　　６５−７０℃　　なし脱アセチルＳ−６０ Ｋ　ゲル　　　　　堅い　　　　９０℃　　　３１−４
６℃　　４５−６０℃Ｃα　ゲル　　　　堅い　　　　
９０℃　　　４５−５０℃　　４５−５０℃カッパ・カ
ラゲニン　　堅い　　４０−９５℃　　２５−７５℃　
　１５−２０Ｃ寒天★　　　　　　堅い　　６０−９７
℃　　３２−３９℃　　　６０℃★　バクテリオロジカ
ルグレードのものニゲル化＠度３３°−３９℃の範囲、
融点最低７０℃（ｌｉ’ｈｉｚｔｌａｒ’ｚ＠ｌ悌ムｚ
ｔｒ＝ａｌ　Ｇｓｖｙ’）最低ゲル濃度 カッパーカラゲニン　　　　　　　　　　０．３％寒天
　　　　　　　０．０４１６ 脱アセチルＳ−６０（カルシウムゲル）　　　　　０．
０５４すべてのいろいろの型のゲルの固化及び融けるた
めの広い範囲の！匿があることｔ上述のように留意され
たい。寒天では、変化は主に海草の型にエリカッパ・カ
ラゲニンではカリウムイオン濃度がゲルの特徴を決定す
る。
脱アセチル５−６０のゲルは主に脱アセチル化の程Ｉｆ
ｖＣ工り特徴づけられる。はんの少し脱アセチル化する
とゲルはエリ高い温帳で固まり、エリ弾性がある：央際
、弾力のあるものから堅いものまで広い範囲のゲルの型
が脱アセチル化の程１現にエリｃｉＴ詣である。ゲルは
、主に固化点と融点の間の大きなヒステリシスがあるこ
とから、カッパ・カラゲニンエリも球入にエリ類似して
しる。それらｒｉ浴かすことがむずかしく、ゲル−ゾル
の変化を観察することがむずかしいこと全強調しておく
。一方、ゲル化の始まりから固いゲルに鋭く数置でゲル
が固化することからゲル化点は容易に定義できる。
実施例４ 脱アセチル非情ＭＳ−６０ Ｓ−６０培養液金９０℃ＶＣ７ＩＯ熱し、Ｚｆを２５噛
ＫＯＨの添加で１０とする。温度を１５分間維持し、さ
らに濃ＨＣ１で中和する。この培養液を発酵槽から流出
させ、熱いうちに２倍量の９９１　ＩＰＡで回収する。
脱アセチル５−６０の繊維をあつめ、５５℃で１時間強
制通六弐トレイドライヤーで乾燥し、紛にひく。
実施例５ 脱アセチル５−６０の清筺化 実施例４で製造した脱アセチル複合多糖５−６０をライ
トニン（Ｌｉｇｈｔｎｉ外）混合器で１時間脱イオン水
中１噛濃度に再構成し５０℃まで加熱しＡｒｔｉＢａｒ
ｉ％＆０　で混合する。浴液は温度（ｉ−４０℃以上に
保ちながら５ｏｒｖａｌｌ　ＲＣ２−Ｂ冷凍遠心機で２
０分間１０．０００ＬＰ、　Ｍ。
（ＧＳＡヘッドＣｈａａｄ））で遠心する。上清をデカ
ントしてとり次に穴が５μ、３μ、１．２μ、０．８１
Ｉのゲルマン（ＧａＬｍａｎ）型ＡＮＨｙｄｒｏｐｈｉ
ｌｉａＡｃｒｏｐｏｒ膜（２９３ｍ＋）を通してｅ過す
る。ｃ液を約３−４倍量の９９嗟イソプロパツールに加
え、繊維をあつめ、簡単に強制通気式トレイドライヤー
で５５℃で乾燥し、紛にひく。
生成物は本発明の脱アセチルイ育澄５−６０樹脂でめる
。
実施例６ 脱７甘チル清澄５−６０を用いて寒天との置換いくつか
の異なった培地が以下に示す通りに作られる： 肉汁寒天 （Ａ　　０．８％　肉汁ブロース（Ｎｕｔｒｉａｓｔ　
　Ｂｒｏｔｈ）（Ｄｉｆｃｏ）１．５係　外大（Ｄｉｆ
ｃｏ） （ａ　　　０．８％　肉汁ブロース（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ
　　１Ｊｒｏｔ五）（Ｄｉｆａｏ）０．２係　ＫＣｔ ０．９％　Ｓ−６０ （Ａ　　２．７５％　トリブチコース　ソイ　ブロース
（ＴｒｙｐｔｉｅｏｚｍＳｏｙ　　Ｂｒｏｔｈ）（ＢＢ
Ｌ） １．５％　寒天（Ｄｉｆｃｏ） （＄　　　２．７５％　トリブチコース　ソイ　ブロー
ス（ＴｒｙｐｔｉａａｚｇＳａｙ　　Ｂｒｏｔｈ）（Ｂ
ＢＬ） ０．２％　　ＫＣｔ ｏ、９−ｂ　　　、５−６０ ポテト　デキストロース寒天 （Ａ　　２．４憾　　ポテトデキストロースブロース（
Ｄｉｆｅｏ）１．５係　寒天 （７３）２．４係　　ポテト　デキストロース　ブロー
ス（Ｄｉｆａｏ）３ン ０．２係　　ＫＣｌ ０．９憾　　Ｓ５−６ ０Ｙ寒天 （Ａ　　２．１％　　１Ｍブロース（Ｄｉｆａｏ）１．
５チ　　寒天（Ｄｉｆａｏ） （ａ　　２．１１　　１Ｍブロース（Ｄｉｆａｏ）０．
２憾　　ＫＣｔ Ｏ６９憾　　５−６０ 寒天 （／ｆＪ　３．７僑　　ＢＨＩブロース（Ｄｉｆａｏ）
１．５％　寒天 （ａ　　　３．７％　　　ＢＨＩブロース（Ｄげａｏｊ
Ｏ０２悌　ＫＣｔ ０、９％　Ｓ−６０ （４（ω １．５％　　　　　寒天（ＤｉｆＣｏ）　　　　　　０
，２嗟ＫＣＬＯ０９悌５−６０ 脱イオンをすべての培地に使った。成分を一緒にして（
パーク（Ｂｓｒｋ″Ｉ）を除（）１２１℃、１５ｐｚｉ
　　で１５−２０分オートクレーブを行い５５℃に冷却
、滅菌したペトリ皿に注いだ。
パーク（Ｂｓｒｋ”ｚ　　）の成分はグルコースを除φ
て一緒にし、別々にオートクレーブを行い、オートクレ
ーブ後培地に加える。これらの培養養プレートが固化し
たら滅−を検査するために室温で２４時間培養した後、
それらに以下の１４菌株ですしを引いて接種した： アグロマイセス　ラモサス（Ａｇｒｏｖｎｙｏａｚ　　
ｒａｍｏｚｕｚ）ＥＣＣ２！５１１３アースロバクター
　グロビホルミス（Ａｒｔｋｒｏｈａｏｔｅｒｇｌｏｂ
ｉｆｏｍｉｚ）、４ＴＣＣ８０］０オーレオバシデイウ
ム　プルランス（Ａｖｒｇｏｂａｚｉｄｉｕｍｐｗｌｌ
ｗＬａｘｚ＞ＮＲＲＬ　　ＹＢ−３８６１アゾトバクタ
−インディカス（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｇｒ　　ｉｎｄｉ
ｃｕｔ）ｗａｒ　　ミクソゲネスＣｍｙｘｏｇｇｎｇｚ
）Ｓ−７菌株ＡＴＣＣ２１４２３アゾトバクタ−ビネラ
ンデイ（Ａｚ　ｏ　ｔ　ｏ　ｈａ　Ｃｔ　＃　ｒ　Ｐｉ
　５ｇ１ａｎｄｉｉ）ＡＴＣＣ９０４７ ベイジエリンキア　ラクテイコゲネス（Ｂａｉｊａｒｉ
ルＹｋｉαｌａａｔｉａｏｇａｎａａ）ＡＴＣＣＬ９３
６１ニルグイニア　カルトボラ（Ｅｒｗｉｓｉａ　　ｃ
ａｒｔｏｖｏｒａ）ＡＴＣＣＢＯ６１エシェリヒア　コ
リ（Ｅｚｏｈｇｒｉｃｈｉａ　　Ｎｏム）ＥＧ−４７ｍ
株クレりジーラ　ニューモニエ（Ｋｌｇｂｚｉｇｌｌａ
　　ｐｍａ＊ｍｏ＊１ａａ）Ｓ−５３菌株 ノカルディア　サルモニカラ−（Ｎｏｏａｒｄｉａ　　
ｚａＬｍｏｎｉａｏＥｏｒ）ＡＴＣＣ２１２４３５−６
０ ストレプトコツカス　ファエ力リス（Ｓｔｒａｐｔｏｃ
ｏａａ藝ｚｆａａａａｌｉｚ） トリコデルン　ロングブラキアタム（Ｔｒｉｃｈｏｄａ
ｒｍα１ｏｎｇｂｒａａｈｉａｔ＊ｍ）ＡＴＣＣ１３６
３１ズーグロエア　ラミゲラ（ＺｏｏｇＬｏｇａ　ｒａ
ｍｉｇａｒａ）　ＡＴ　ＣＣ２５９３５３ぐ プレートを３０℃で３−５日間培養し生育を調べた。５
−６０で作った培地上にすべて司株について良い生育が
得られ寒天の代わり５−６０で作った培地と寒天のもの
はコロニーの形態ではほとんど差はなかった。これらの
結果は５−６０が微生物学の培地における寒天の優秀な
代用になることを示している。
ＢＨＩ培地とＴＳＡを除く、５−６０を含むすべての培
地のゲル化点は４２℃であった。
Ｂｆｌｌ　９１天とＴＳＡのゲル化点は５２℃であった
。球入は典型的に４２−４４℃でゲル化する。
実施例７ 脱７セチル５−６０を用いた成型香料ゲルの製造 （３）　ｉ、　Ｎｏ悌　　多糖Ｓ−６００，７５％　　
炭酸ナトリウム ０、　Ｌ１２５％　　ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル３
．００係　　バラのかおり ４．００憾　　イソプロパツール ｂ ２．００悌　　エチレングリコール ８８．５０％水 自然のままの多糖５−６０を炭酸ナトリウムと防腐剤と
混合し７０℃で水に溶解する。
溶液はさらに９０℃に加熱しその温度で１０分間保ち多
糖を脱７でチルする。６０℃に冷却後、溶媒に分散させ
た香料を加え混合物を通常の空気清浄剤のプラスチック
の成型に入れる。混合物が３８℃に冷えたらゲル化が起
こり芳香を発散する性質を持つ堅い独立したゲルを得る
。
（ω　乾燥脱アセチル多ａ！ｓ　−６０を培養液から希
水酸化ナトリウムでｐＭｆ　１０．０とし９０℃に１５
分間加熱することエリ作る。＃４液を希塩酸でｐＨ７，
０に中和し２倍重のインプロパツールで沈殿させ、乾燥
、粉にひく。固体の空気清浄剤ゲルは以ドの方法で脱ア
セチル生成物から作ら几る：脱アセチル多＄Ｓ−６０３
，０ｇを塩化カリウム１．５１及びｐ−ヒドロキシ安息
香酸メチル防腐剤０．１５Ｆと混会し水１７７ｄを加え
る。溶液を９０℃に加熱して溶解し６０℃に冷却後、は
っか油の香料６、Ｏｇ、イソプロパツール８．０２、エ
チレングリコール４．Ｏｆの混合物を加える。溶液をプ
ラスチックの型に入れ室温まで冷却する。
香りの強いはつかの香りをもった強力な堅いゲルが形成
される。ゲルは簡単に変形できたわむことなくその形を
保持する。
詩 本発明の態様を要約すると以下の様である。
１．　１０−１５％蛋白質、３−４．５％アセチル及び
主として炭水化物を含み、炭水化物部分が〜１２％のウ
ロン酸、モル比がおよそ１．５：ｌであるラムノースと
クルコースからなる複合多糖５−６０てあって、該多糖
が塩化メチレン染料と不相溶性てあり、実質的にＮ、Ｎ
−ジメチルホルムアミドに不溶てかつＤＭＳＯまたはホ
ルムアミドに可溶であり、３４００　ｃｍ−’、２９５
０ａｍ−”、　　１７４０　ｃ＋＊−’、１６２０ｃ＋
ａ−’のピークによって特徴づけられる赤外吸収スペク
トルを有することを特徴とする前記複合多糖５−６０゜ ２、無命名のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
）属微生物、　ＡＴＣＣ３１４６１を炭素源、カリウム
イオン源、窒素源、痕跡無機元素、水を含む醗酵培地で
２８−３２℃、ｐＨ６−８において４０−６０時間培養
し、適当な低級アルコールによる沈殿法によりガムを回
収することから成る第１項記載の複合多糖５−６０の製
法。
３、　窒素源をコーン・スチープ・リカー、アルコール
をイソプロパツールとする第２項記載の製法。
４、　無命名のシュードモナス（ＰｓｃｕｄｏＩＩｌｏ
ｎａｓ）菌、八ＴＣＣ３１４６１の凍結乾燥培養物。
５、１７％蛋白質、アセチル含量Ｏ％で、炭水化物部分
が１３％のウロン酸とおよそのモル比か１．５：１であ
る中性糖ラムノースとグルコースから成る炭水化物を含
む脱アセチル化非清澄複合多糖５−６０゜ ６．２％蛋白質、アセチル含量が０％で、炭水化物部分
がウロン酸２２％、およそのモル比が１．５：１である
中性糖ラムノースとグルコースから成る炭水化物を含む
脱アセチル化清澄複合多糖５−６０゜ ７、複合条ＪｌｉＳ−６０の１−５％水性溶液をｐＨ１
ｔｏ、９Ｏ−１００℃の温度で１０分から４５分加熱し
、それにより生成する生酸物を回収することからなる第
５項記載の化合物の製法。
８、約０．５−５％の脱アセチル化複合多糖５−６０と
栄養物から成る微生物学的培養基。
９、脱アセチル化５−６０か清澄したものである第８項
記載の培養基。
ＩＯ９約０．１−５％の脱アセチル化複合多糖５−６０
、水及び低級アルカノールから成る香料ゲル組成物。
出願人　メルク　エンド　カムバニー インコーボレーテット

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、１７％蛋白質、アセチル含量が０％で、炭水化物部
    分が１３％のウロン酸とおよそ のモル比が１．５：１である中性糖ラムノ ースとグルコースから成る炭水化物を含む 脱アセチル化非清澄複合多糖Ｓ−６０。 ２、複合多糖Ｓ−６０の１−５％水性溶液をｐＨ約１０
    、９０−１００℃の温度で１０分から４５分加熱し、そ
    れにより生成する生 成物を回収することからなる特許請求の範 囲第１項記載の化合物の製法。
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