JPS6345200B2 - - Google Patents
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- JPS6345200B2 JPS6345200B2 JP60165303A JP16530385A JPS6345200B2 JP S6345200 B2 JPS6345200 B2 JP S6345200B2 JP 60165303 A JP60165303 A JP 60165303A JP 16530385 A JP16530385 A JP 16530385A JP S6345200 B2 JPS6345200 B2 JP S6345200B2
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- Japan
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- bacterial cells
- linolenic acid
- lipids
- phosphatidylcholine
- culture
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Description
〔技術分野〕
本発明はγ−リノレン酸含量の高いホスフアチ
ジルコリンのモルテイエレラ属糸状菌による製造
方法に関するものである。 〔従来技術〕 モルテイエレラ属に属するイサベリナ、ビナセ
ア、ラマニアナ、ラマニアナ・アングリスポラ、
及びナナ等の糸状菌体を、高濃度の炭水化物を炭
素源とする培地に培養することにより、γ−リノ
レン酸含有脂質含量の高い菌体を高密度で生産す
る方法は既に提案されている。（特願昭59−22394
号）。 ところで、グリセロ型リン脂質の一種類である
ホスフアチジルコリンは次式の様な構造を持つこ
とが知られている。 その構造脂肪酸であるRCOOHあるいは
R′COOHにγ−リノレン酸含量が20％以上含む
ホスフアチジルコリンが微生物から製造単離濃縮
された従来技術は存在しない。 〔目的〕 本発明は、γリノレン酸含量の高いホスフアチ
ジルコリンの製造方法を提供することを目的とす
る。 〔構成〕 即ち、本発明によれば、γ−リノレン酸含量の
高いホスフアチジルコリンの生産にあたり、モル
テイエレラ属に属するイサベリナ、ビナセア、ナ
ナ、ラマニアナ、ラマニアナ・アングリスポラ又
はナナの糸状菌菌株を炭水化物を炭素源とした培
地に培養して、培地中に得られるγ−リノレン酸
を含む脂質の含量菌体より水の存在下でアルコー
ル抽出されたγ−リノレン酸含有脂質、特に多段
抽出（特願昭60−10283号）における第１段アル
コール抽出区分から効率よくγ−リノレン酸含量
の高いホスフアチジルコリンを、例えばクロマト
グラフイーなどで分離、濃縮することを特徴とす
るγ−リノレン酸含量の高いホスフアチジルコリ
ンの製造方法が提供される。 〔菌体培養方法〕 本発明においては、用いる使用菌はモルテイエ
レラ（Mortierella）属のイサベリナ
（isabellina）〔IFO7824、7884、7873、8183、
9309〕ビナセア（Vinacea）〔IFO6738〕、ナナ
（nana）〔IFO8794〕、ラマニアナ（ramaniana）
〔IFO8287〕、ラマニアナ・アングリスポラ
（ramaniana var.anglispora）〔IFO8187〕の各
種菌株である。なお、上記した菌はいずれも財団
法人発酵研究所に保存され、IFOカタログ（菌株
目録）に記載されている糸状菌である。 上記の糸状菌を培養する培地の炭素源である炭
水化物としては、たとえばグルコース、フラクト
ース、サツカロース、糖密、デン粉、木材糖化液
などが用いられる。炭水化物は培地１中に20〜
400ｇ用いられるのが好ましい。また窒素源とし
ては、例えば硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウムなど
の様な無機窒素源、または尿素、ペプトン、酵母
エキス、コーン、スチーブ・リカーなど有機窒素
源が用いられる。無機塩としては、例えば
KH2PO4、K2HPO4、NaCl、FeSO4・7H2O、
MgSO4・7H2O、ZnSO4・7H2Oなどが用いられ
る。その他必要に応じて微量要素、その他の栄養
源を添加する。 上記糸状菌の培養は通常液体培地で、振とう培
養、通気撹拌培養などにより行われる。培地のPH
は3.0〜6.0が良く、通常２日〜10日間位培養が行
われる。更に、培養の初期すなわち初期培地に、
また通気撹拌培養の場合では前培養培地に、ある
いは培養の中間段階で酢酸あるいは酢酸塩（ナト
リウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩）を
炭素源濃度など培養条件に応じて0.1〜20ｇ／
培地の割合で加えることにより菌体の培養が行わ
れる（特願昭59−115162）。かくして、培養物中
にγ−リノレン酸など不飽和脂肪酸含量が高い脂
質の高含量菌体が生産性高く生産されるので、培
養物より菌体を分離し、脂質が糸状菌菌体中に含
まれるので、この菌体よりγ−リノレン酸など不
飽和脂肪酸含量の高い脂質を採取するのが好適で
ある。培養物より菌体の分離に当つては菌糸があ
まりのびず極めて小単位（１〜10細胞）で培養さ
れており、従つて、例えば遠心脱水器などにより
極めて容易に分離され、乾燥度の高い菌体（含水
率約60％）になる利点を有することが明らかにな
つた。 〔抽出方法〕 γ−リノレン酸含量の高い脂質の採取は多段抽
出方法で行われる。すなわち、本発明において
は、モルテイエレラ属糸状菌体を、先ず、水の存
在下、アルコールを用いる第１抽出処理工程にお
いて抽出処理する。この場合、処理原料として用
いる菌体には、培地から遠心分離法や濾過法によ
つて分離された含水率50〜80％程度の含水菌体ケ
ーキや、その乾燥物を用いることができるが、経
済性の点からは、含水菌体ケーキを用いるのが有
利である。また、この第１抽出処理工程では、菌
体は、水の存在下、アルコール溶媒中で、機械力
を加えて破砕させることが必要であり、この菌体
破砕によつて効率的な抽出処理が達成される。こ
のような菌体破砕を伴う抽出装置としては、従来
公知の湿式粉砕機、例えば、ボールミル、マサツ
円板ミル、ヘンセルミキサー等を用いることがで
きる。このような粉砕機により菌体は、圧縮力や
マサツ力等の機械力を受け、その一部が破損ない
し破砕される。この場合、菌体を余りにも徴細に
破砕することは好ましくなく、濾過性の点から
は、その菌体の粒径は実質上変化しない程度に機
械力を加えるのが好ましい。アルコール溶媒とし
ては、通常、メタノール、エタノール、プロパノ
ール等の低級アルコールが用いられるが、人体に
対する安全性の点から、エタノールの使用が好ま
しい。アルコール溶媒の使用割合は、菌体１重量
部（乾燥物基準）に対し、２〜７重量部、好まし
くは３〜６重量部の割合である。この第１抽出処
理工程では、極性脂質を溶出させるために、水の
存在下で抽出処理を行うことが必要であり、水の
存在量は、アルコール溶媒１重量に対し、0.2〜
0.7重量部、好ましくは0.3〜0.6重量部である。こ
の第１抽出処理系に対する水の添加は、水を含む
菌体を用いて実施し得る他、アルコール溶媒に添
加することによつて行うことができる。このよう
な抽出処理により、菌体に含まれる全極性脂質の
90％以上を抽出分離させることができ、また中性
脂質の一部が抽出される。また、この第１抽出工
程では、脂質回収率は、全脂質回収率に対し、通
常、５〜30重量％、好ましくは８〜25重量％であ
る。 次に、前記で得た第１抽出生成物は第１固液分
離工程で破砕菌体成分と極性脂質を含むアルコー
ル溶媒成分とにそれぞれ分離される。この場合、
固液分離法としては、遠心分離法や、濾過分離法
等の慣用の方法が採用される。脂質分は得られた
極性脂質を含むアルコール溶媒成分から常法に従
つて減圧下で溶媒を蒸留留去することにより得ら
れる。 〔吸着分離法〕 前記多段抽出方法のアルコールを溶媒とした第
１段目の抽出操作により得られた脂質成分につい
て吸着カラムクロマトグラフイ法による分離操作
を行うことによりγ−リノレン酸含量の高いホス
フアチジルコリンは分離、精製される。即ち、50
〜300メツシユ、好ましくは100〜200メツシユの
ケイ酸（シリカゲル）、徴粒多孔質シリカ、シリ
カゲルＨ、シリカゲルＧ、ケイ酸マグネシウムな
どを充填剤としたカラムを用いて、ヘキサン、シ
クロヘキサン、四塩化炭素、ベンゼン、クロロホ
ルム、ジエチルエーテル、酢酸エチル、アセト
ン、アセトニトリル、メタノール、酢酸水を溶媒
として用いて溶媒の極性に応じて、一種類ないし
２〜３種類混合した溶媒、例えば、クロムホルム
とメタノール４：１、３：２、１：１、１：２混
合溶媒などを順次流下することにより、各極性脂
質の吸着力の差により分離溶出が可能になり、γ
−リノレン酸含量の高いホスフアチジルコリンが
分離されて含まれる溶出液を得る。この溶出液か
ら常法により溶媒を減圧下で蒸留留去することに
より、γ−リノレン酸含量の高いホスフアチジル
コリンが濃縮されることを見出した。 かくして、本発明によれば高濃度の炭水化物を
炭素源とする培地に高密度に培養された脂質含量
の高い菌体より採取された脂質からγ−リノレン
酸含量の高いホスフアチジルコリンの製造が可能
になる。 〔効果〕 γ−リノレン酸〔18：３（６、９、12）〕はリノ
ール酸と共に哺乳動物では食飼として要求される
必須脂肪酸である。これはγ−リノレン酸が体内
でビスホモ−γ−リノレン酸となり、さらにはア
ラキドン酸となる前駆体であること、ビスホモー
γ−リノレン酸、アラキドン酸はそれぞれプロス
タグランジン、E1、F1a及びE2、F2aとなり生体中
で極めて重要な生理的な役割をはたしているから
である。従つて、γ−リノレン酸含有脂質は医薬
品などとして利用できるものであることは明らか
である。 とくに、γ−リノレン酸は生体内ではリン脂質
として蓄縮されていることが知られており、プロ
スタグランジンになる際の前駆体としてはリン脂
質状態の方がより有効に作用するものと考えられ
ることからこのようにγ−リノレン酸含量が20％
以上と高いホスフアチジルコリンの医薬品として
の用途は十分期待できる。 なお、ホスフアチジルコリンはそれを主成分と
するリン脂質混合物（レシチン）として知られて
おり、乳化剤などの食品添加物としてマーガリ
ン、チヨコレートなどに用いられている。 〔実施例〕 次に本発明を実施例により詳細に説明する。 実施例 グルコース60ｇ、KH2PO42ｇ、
MgSO47H2O0.3ｇ、NaCl0.1ｇ、マルト・エキス
0.2ｇ、イースト・エキス0.2ｇ、ペプトン0.1ｇ、
FeSO4・7H2O10mg、MnSO4・4H2O1.0mgと窒素
源として（NH4）2SO43ｇ、〔Ｃ／Ｎ比（炭素源中
の炭素原子重量／窒素源中の窒素原子重量）は約
40〕を脱イオン水1000mlに混合した培地を基準と
して炭素源である炭水化物（グルコース、糖な
ど）の濃度を増加させた場合、その濃度に応じて
培地成分を増加して、又窒素源を尿素などに変え
た場合は同じＣ／Ｎ比になるように培地を調整し
た。 この培地を30の培養槽では20仕込み、それ
ぞれ菌株を接種し、30℃の培養温度で所定の時
間、通気量0.5〜2.0vvmで300〜700rpmで撹拌し
て培養を行つた。培養後遠心分離法で菌体を集め
た。又、菌体の増殖量、脂質生成量及び培地中の
炭水化物濃度の測定を行うため、培養の中間段階
において所定の時間毎に100mlずつ試料の採取を
行い、ロ過法により菌体と培地の分離を行つた。
分離された菌体はその一部を含水率の定量のた
め、精秤し恒温槽中120℃で一昼夜乾燥し、含水
率を求め、残りの菌体についての脂質の抽出を行
つた。菌体からの脂質の抽出は、残りの湿菌体に
クロロホルム−メタノール（２：1V／Ｖ）混液
を加え、ガラスビーズ存在下にホモジナイズする
ことにより菌体の破砕と脂質の抽出を同時に行つ
た。なお、抽出を完全に行うため、これを５回繰
返し、全抽出液を集めた。上記抽出液をFlochの
分配洗浄法により精製した後、溶媒を減圧留去
し、重量法で全脂質量を測定した。菌体を除いた
培地については高速液体クロマトグラフイー
（HPLC）により炭水化物（グルコース、フラク
トース、サツカロース）の濃度を測定し、濃度が
０になつた時点で培養を終了した。 菌株モルテイエレラ・ラマニアナ・アングリス
ポラIFO8187、モルテイエレラ・ビナセア
IFO6738、モルテイエレラ・イサベリナIFO7824
について、グルコースを炭素源、尿素を窒素源と
した30培養槽により培養して得られた菌体増殖
量（乾燥重量ｇ／）、脂質生成量（ｇ／）、脂
質含量（％）、脂質中のγ−リノレン酸含量を表
−１にまとめて示した。なお培養時間として示し
た時間は炭素源であるグルコースが完全に消費さ
れ、培地中になくなつた時間でありその時間で培
養を停止した。 表−１で３菌株ともγ−リノレン酸を含む脂質
が生産性高く生産されていることがわかる。
ジルコリンのモルテイエレラ属糸状菌による製造
方法に関するものである。 〔従来技術〕 モルテイエレラ属に属するイサベリナ、ビナセ
ア、ラマニアナ、ラマニアナ・アングリスポラ、
及びナナ等の糸状菌体を、高濃度の炭水化物を炭
素源とする培地に培養することにより、γ−リノ
レン酸含有脂質含量の高い菌体を高密度で生産す
る方法は既に提案されている。（特願昭59−22394
号）。 ところで、グリセロ型リン脂質の一種類である
ホスフアチジルコリンは次式の様な構造を持つこ
とが知られている。 その構造脂肪酸であるRCOOHあるいは
R′COOHにγ−リノレン酸含量が20％以上含む
ホスフアチジルコリンが微生物から製造単離濃縮
された従来技術は存在しない。 〔目的〕 本発明は、γリノレン酸含量の高いホスフアチ
ジルコリンの製造方法を提供することを目的とす
る。 〔構成〕 即ち、本発明によれば、γ−リノレン酸含量の
高いホスフアチジルコリンの生産にあたり、モル
テイエレラ属に属するイサベリナ、ビナセア、ナ
ナ、ラマニアナ、ラマニアナ・アングリスポラ又
はナナの糸状菌菌株を炭水化物を炭素源とした培
地に培養して、培地中に得られるγ−リノレン酸
を含む脂質の含量菌体より水の存在下でアルコー
ル抽出されたγ−リノレン酸含有脂質、特に多段
抽出（特願昭60−10283号）における第１段アル
コール抽出区分から効率よくγ−リノレン酸含量
の高いホスフアチジルコリンを、例えばクロマト
グラフイーなどで分離、濃縮することを特徴とす
るγ−リノレン酸含量の高いホスフアチジルコリ
ンの製造方法が提供される。 〔菌体培養方法〕 本発明においては、用いる使用菌はモルテイエ
レラ（Mortierella）属のイサベリナ
（isabellina）〔IFO7824、7884、7873、8183、
9309〕ビナセア（Vinacea）〔IFO6738〕、ナナ
（nana）〔IFO8794〕、ラマニアナ（ramaniana）
〔IFO8287〕、ラマニアナ・アングリスポラ
（ramaniana var.anglispora）〔IFO8187〕の各
種菌株である。なお、上記した菌はいずれも財団
法人発酵研究所に保存され、IFOカタログ（菌株
目録）に記載されている糸状菌である。 上記の糸状菌を培養する培地の炭素源である炭
水化物としては、たとえばグルコース、フラクト
ース、サツカロース、糖密、デン粉、木材糖化液
などが用いられる。炭水化物は培地１中に20〜
400ｇ用いられるのが好ましい。また窒素源とし
ては、例えば硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウムなど
の様な無機窒素源、または尿素、ペプトン、酵母
エキス、コーン、スチーブ・リカーなど有機窒素
源が用いられる。無機塩としては、例えば
KH2PO4、K2HPO4、NaCl、FeSO4・7H2O、
MgSO4・7H2O、ZnSO4・7H2Oなどが用いられ
る。その他必要に応じて微量要素、その他の栄養
源を添加する。 上記糸状菌の培養は通常液体培地で、振とう培
養、通気撹拌培養などにより行われる。培地のPH
は3.0〜6.0が良く、通常２日〜10日間位培養が行
われる。更に、培養の初期すなわち初期培地に、
また通気撹拌培養の場合では前培養培地に、ある
いは培養の中間段階で酢酸あるいは酢酸塩（ナト
リウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩）を
炭素源濃度など培養条件に応じて0.1〜20ｇ／
培地の割合で加えることにより菌体の培養が行わ
れる（特願昭59−115162）。かくして、培養物中
にγ−リノレン酸など不飽和脂肪酸含量が高い脂
質の高含量菌体が生産性高く生産されるので、培
養物より菌体を分離し、脂質が糸状菌菌体中に含
まれるので、この菌体よりγ−リノレン酸など不
飽和脂肪酸含量の高い脂質を採取するのが好適で
ある。培養物より菌体の分離に当つては菌糸があ
まりのびず極めて小単位（１〜10細胞）で培養さ
れており、従つて、例えば遠心脱水器などにより
極めて容易に分離され、乾燥度の高い菌体（含水
率約60％）になる利点を有することが明らかにな
つた。 〔抽出方法〕 γ−リノレン酸含量の高い脂質の採取は多段抽
出方法で行われる。すなわち、本発明において
は、モルテイエレラ属糸状菌体を、先ず、水の存
在下、アルコールを用いる第１抽出処理工程にお
いて抽出処理する。この場合、処理原料として用
いる菌体には、培地から遠心分離法や濾過法によ
つて分離された含水率50〜80％程度の含水菌体ケ
ーキや、その乾燥物を用いることができるが、経
済性の点からは、含水菌体ケーキを用いるのが有
利である。また、この第１抽出処理工程では、菌
体は、水の存在下、アルコール溶媒中で、機械力
を加えて破砕させることが必要であり、この菌体
破砕によつて効率的な抽出処理が達成される。こ
のような菌体破砕を伴う抽出装置としては、従来
公知の湿式粉砕機、例えば、ボールミル、マサツ
円板ミル、ヘンセルミキサー等を用いることがで
きる。このような粉砕機により菌体は、圧縮力や
マサツ力等の機械力を受け、その一部が破損ない
し破砕される。この場合、菌体を余りにも徴細に
破砕することは好ましくなく、濾過性の点から
は、その菌体の粒径は実質上変化しない程度に機
械力を加えるのが好ましい。アルコール溶媒とし
ては、通常、メタノール、エタノール、プロパノ
ール等の低級アルコールが用いられるが、人体に
対する安全性の点から、エタノールの使用が好ま
しい。アルコール溶媒の使用割合は、菌体１重量
部（乾燥物基準）に対し、２〜７重量部、好まし
くは３〜６重量部の割合である。この第１抽出処
理工程では、極性脂質を溶出させるために、水の
存在下で抽出処理を行うことが必要であり、水の
存在量は、アルコール溶媒１重量に対し、0.2〜
0.7重量部、好ましくは0.3〜0.6重量部である。こ
の第１抽出処理系に対する水の添加は、水を含む
菌体を用いて実施し得る他、アルコール溶媒に添
加することによつて行うことができる。このよう
な抽出処理により、菌体に含まれる全極性脂質の
90％以上を抽出分離させることができ、また中性
脂質の一部が抽出される。また、この第１抽出工
程では、脂質回収率は、全脂質回収率に対し、通
常、５〜30重量％、好ましくは８〜25重量％であ
る。 次に、前記で得た第１抽出生成物は第１固液分
離工程で破砕菌体成分と極性脂質を含むアルコー
ル溶媒成分とにそれぞれ分離される。この場合、
固液分離法としては、遠心分離法や、濾過分離法
等の慣用の方法が採用される。脂質分は得られた
極性脂質を含むアルコール溶媒成分から常法に従
つて減圧下で溶媒を蒸留留去することにより得ら
れる。 〔吸着分離法〕 前記多段抽出方法のアルコールを溶媒とした第
１段目の抽出操作により得られた脂質成分につい
て吸着カラムクロマトグラフイ法による分離操作
を行うことによりγ−リノレン酸含量の高いホス
フアチジルコリンは分離、精製される。即ち、50
〜300メツシユ、好ましくは100〜200メツシユの
ケイ酸（シリカゲル）、徴粒多孔質シリカ、シリ
カゲルＨ、シリカゲルＧ、ケイ酸マグネシウムな
どを充填剤としたカラムを用いて、ヘキサン、シ
クロヘキサン、四塩化炭素、ベンゼン、クロロホ
ルム、ジエチルエーテル、酢酸エチル、アセト
ン、アセトニトリル、メタノール、酢酸水を溶媒
として用いて溶媒の極性に応じて、一種類ないし
２〜３種類混合した溶媒、例えば、クロムホルム
とメタノール４：１、３：２、１：１、１：２混
合溶媒などを順次流下することにより、各極性脂
質の吸着力の差により分離溶出が可能になり、γ
−リノレン酸含量の高いホスフアチジルコリンが
分離されて含まれる溶出液を得る。この溶出液か
ら常法により溶媒を減圧下で蒸留留去することに
より、γ−リノレン酸含量の高いホスフアチジル
コリンが濃縮されることを見出した。 かくして、本発明によれば高濃度の炭水化物を
炭素源とする培地に高密度に培養された脂質含量
の高い菌体より採取された脂質からγ−リノレン
酸含量の高いホスフアチジルコリンの製造が可能
になる。 〔効果〕 γ−リノレン酸〔18：３（６、９、12）〕はリノ
ール酸と共に哺乳動物では食飼として要求される
必須脂肪酸である。これはγ−リノレン酸が体内
でビスホモ−γ−リノレン酸となり、さらにはア
ラキドン酸となる前駆体であること、ビスホモー
γ−リノレン酸、アラキドン酸はそれぞれプロス
タグランジン、E1、F1a及びE2、F2aとなり生体中
で極めて重要な生理的な役割をはたしているから
である。従つて、γ−リノレン酸含有脂質は医薬
品などとして利用できるものであることは明らか
である。 とくに、γ−リノレン酸は生体内ではリン脂質
として蓄縮されていることが知られており、プロ
スタグランジンになる際の前駆体としてはリン脂
質状態の方がより有効に作用するものと考えられ
ることからこのようにγ−リノレン酸含量が20％
以上と高いホスフアチジルコリンの医薬品として
の用途は十分期待できる。 なお、ホスフアチジルコリンはそれを主成分と
するリン脂質混合物（レシチン）として知られて
おり、乳化剤などの食品添加物としてマーガリ
ン、チヨコレートなどに用いられている。 〔実施例〕 次に本発明を実施例により詳細に説明する。 実施例 グルコース60ｇ、KH2PO42ｇ、
MgSO47H2O0.3ｇ、NaCl0.1ｇ、マルト・エキス
0.2ｇ、イースト・エキス0.2ｇ、ペプトン0.1ｇ、
FeSO4・7H2O10mg、MnSO4・4H2O1.0mgと窒素
源として（NH4）2SO43ｇ、〔Ｃ／Ｎ比（炭素源中
の炭素原子重量／窒素源中の窒素原子重量）は約
40〕を脱イオン水1000mlに混合した培地を基準と
して炭素源である炭水化物（グルコース、糖な
ど）の濃度を増加させた場合、その濃度に応じて
培地成分を増加して、又窒素源を尿素などに変え
た場合は同じＣ／Ｎ比になるように培地を調整し
た。 この培地を30の培養槽では20仕込み、それ
ぞれ菌株を接種し、30℃の培養温度で所定の時
間、通気量0.5〜2.0vvmで300〜700rpmで撹拌し
て培養を行つた。培養後遠心分離法で菌体を集め
た。又、菌体の増殖量、脂質生成量及び培地中の
炭水化物濃度の測定を行うため、培養の中間段階
において所定の時間毎に100mlずつ試料の採取を
行い、ロ過法により菌体と培地の分離を行つた。
分離された菌体はその一部を含水率の定量のた
め、精秤し恒温槽中120℃で一昼夜乾燥し、含水
率を求め、残りの菌体についての脂質の抽出を行
つた。菌体からの脂質の抽出は、残りの湿菌体に
クロロホルム−メタノール（２：1V／Ｖ）混液
を加え、ガラスビーズ存在下にホモジナイズする
ことにより菌体の破砕と脂質の抽出を同時に行つ
た。なお、抽出を完全に行うため、これを５回繰
返し、全抽出液を集めた。上記抽出液をFlochの
分配洗浄法により精製した後、溶媒を減圧留去
し、重量法で全脂質量を測定した。菌体を除いた
培地については高速液体クロマトグラフイー
（HPLC）により炭水化物（グルコース、フラク
トース、サツカロース）の濃度を測定し、濃度が
０になつた時点で培養を終了した。 菌株モルテイエレラ・ラマニアナ・アングリス
ポラIFO8187、モルテイエレラ・ビナセア
IFO6738、モルテイエレラ・イサベリナIFO7824
について、グルコースを炭素源、尿素を窒素源と
した30培養槽により培養して得られた菌体増殖
量（乾燥重量ｇ／）、脂質生成量（ｇ／）、脂
質含量（％）、脂質中のγ−リノレン酸含量を表
−１にまとめて示した。なお培養時間として示し
た時間は炭素源であるグルコースが完全に消費さ
れ、培地中になくなつた時間でありその時間で培
養を停止した。 表−１で３菌株ともγ−リノレン酸を含む脂質
が生産性高く生産されていることがわかる。
【表】
表−１のモルテイエレラ属糸状菌の30培養槽
による大量培養により得られたγ−リノレン酸含
有脂質の高含量で含む菌体を遠心脱水器により、
脱水分離し、含水率50〜70％の菌体ブロツク（ケ
ーキ）を得る。この菌体ブロツク（以下、湿菌体
と呼ぶ）をオートクレーブ中で120℃、２気圧で
10分間減菌した後、以下に示すようにして脂質の
抽出を行つた。 前記の湿菌体1.0〜1.7Kgを、内容積６のステ
ンレス製ボールミルに入れ、さらにエタノール２
を溶媒として加え、４時間ボールミルにより菌
体を破砕しながら抽出処理を行つた。抽出液を濾
過した後、得られた菌体（含水率3.4％）につい
て再度ヘキサン２を溶媒として用い、前記と同
様の抽出処理を７時間行つた。 前記２段抽出方法による３菌株についての第１
段のエタノールによる脂質の対菌体抽出率が表−
２に示されている。 このエタノール抽出脂質について、下記の方法
によるケイ酸（100〜200メツシユ）を充填剤とす
るカラムクロマトグラフイーを行いホスフアチジ
ルコリンの濃縮を行つた。即ち、前記抽出脂質１
ｇに対して30ｇのケイ酸を充填したカラムに脂質
を吸着させた後、中性脂質をクロロホルムで糖脂
質をアセトン、クロロホルム、メタノール４：１
及び同１：１溶出液でホスフアチジルコリン以外
のリン脂質を流出した後、クロロホルム、メタノ
ール２：３を溶出液として溶出する区分を得た。
得られた区分について薄層クロマトグラフイーに
よる分析の結果ホスフアチジルコリンが純度ほぼ
100％に濃縮されていることを認めた。 ３菌株についてエタノール抽出脂質量に対する
抽出率は表−２の如く6.9〜8.0％と比較的高い値
であり、乾燥菌体に対する抽出率は0.32〜0.46％
であつた。 このホスフアチジルコリンについて加水分解し
た後、メチルエステル化を行い、その脂肪酸組成
を比べた結果γ−リノレン酸含量が25.7％以上と
中性脂質区分の約７％と異なり極めて高い値が認
められた。脂肪酸組成を表−２の欄外に例示した
がγ−リノレン酸以外の不飽和脂肪酸としてはリ
ノール酸含量が高い特殊な脂肪酸組成を有するも
のであることが明らかになつた。
による大量培養により得られたγ−リノレン酸含
有脂質の高含量で含む菌体を遠心脱水器により、
脱水分離し、含水率50〜70％の菌体ブロツク（ケ
ーキ）を得る。この菌体ブロツク（以下、湿菌体
と呼ぶ）をオートクレーブ中で120℃、２気圧で
10分間減菌した後、以下に示すようにして脂質の
抽出を行つた。 前記の湿菌体1.0〜1.7Kgを、内容積６のステ
ンレス製ボールミルに入れ、さらにエタノール２
を溶媒として加え、４時間ボールミルにより菌
体を破砕しながら抽出処理を行つた。抽出液を濾
過した後、得られた菌体（含水率3.4％）につい
て再度ヘキサン２を溶媒として用い、前記と同
様の抽出処理を７時間行つた。 前記２段抽出方法による３菌株についての第１
段のエタノールによる脂質の対菌体抽出率が表−
２に示されている。 このエタノール抽出脂質について、下記の方法
によるケイ酸（100〜200メツシユ）を充填剤とす
るカラムクロマトグラフイーを行いホスフアチジ
ルコリンの濃縮を行つた。即ち、前記抽出脂質１
ｇに対して30ｇのケイ酸を充填したカラムに脂質
を吸着させた後、中性脂質をクロロホルムで糖脂
質をアセトン、クロロホルム、メタノール４：１
及び同１：１溶出液でホスフアチジルコリン以外
のリン脂質を流出した後、クロロホルム、メタノ
ール２：３を溶出液として溶出する区分を得た。
得られた区分について薄層クロマトグラフイーに
よる分析の結果ホスフアチジルコリンが純度ほぼ
100％に濃縮されていることを認めた。 ３菌株についてエタノール抽出脂質量に対する
抽出率は表−２の如く6.9〜8.0％と比較的高い値
であり、乾燥菌体に対する抽出率は0.32〜0.46％
であつた。 このホスフアチジルコリンについて加水分解し
た後、メチルエステル化を行い、その脂肪酸組成
を比べた結果γ−リノレン酸含量が25.7％以上と
中性脂質区分の約７％と異なり極めて高い値が認
められた。脂肪酸組成を表−２の欄外に例示した
がγ−リノレン酸以外の不飽和脂肪酸としてはリ
ノール酸含量が高い特殊な脂肪酸組成を有するも
のであることが明らかになつた。
Claims (1)
- １ モルテイエレラ属に属するイサベリナ、ビナ
セア、ラマニアナ、ラマニアナ・アングリスポラ
又はナナの菌株による炭水化物を炭素源とする培
地に培養された菌体から水の存在下でのアルコー
ル抽出により採取された脂質を、吸着分離処理し
てγ−リノレン酸を含有するホスフアチジルコリ
ンを分離することを特徴とするγ−リノレン酸含
有ホスフアチジルコリンの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60165303A JPS6225989A (ja) | 1985-07-26 | 1985-07-26 | γ−リノレン酸含量の高いホスフアチジルコリンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60165303A JPS6225989A (ja) | 1985-07-26 | 1985-07-26 | γ−リノレン酸含量の高いホスフアチジルコリンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6225989A JPS6225989A (ja) | 1987-02-03 |
| JPS6345200B2 true JPS6345200B2 (ja) | 1988-09-08 |
Family
ID=15809768
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60165303A Granted JPS6225989A (ja) | 1985-07-26 | 1985-07-26 | γ−リノレン酸含量の高いホスフアチジルコリンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6225989A (ja) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60168391A (ja) * | 1984-02-09 | 1985-08-31 | Agency Of Ind Science & Technol | γ‐リノレン酸濃縮物の製造方法 |
-
1985
- 1985-07-26 JP JP60165303A patent/JPS6225989A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6225989A (ja) | 1987-02-03 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |