JPS6345274A - Ａｉ−７７類のアミド誘導体およびその塩の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、抗Ｔ：Ｒ傷活性を有する下記式（１）で示き
れるＡＩ−７７類のアミド誘導体およびその塩の製造法
に関する。

（従来の技術） 本物質を製造する技術として発の法が知られている（特
公昭５７−６９１３号）。すなわち、バチルス属に属す
る菌株全好気的条件で培養し、そＣ）培養ｒ液から各種
のりａマドグラフィおよび有＠溶媒抽出法などを組合せ
る繁雑な精製工程金経て製造されている。

（発明が解決しようとする問題点） 上記の従来法においてｒよ１発酵生産量が２００〜２５
０　ｍｃｇ／−と憔めて低く、ｆｌｌ製工程も複雑であ
る。したがって１本物質を高純度で工業的に大量に供給
でさる製造法の田現が望まれている。

（問題点ｙｋ解決するための手段） 本発明者らは、前記の便乗法に比し、医薬品として高純
度の尚該化合Ｗを工業的に大量に供給できる製造法定つ
いて鋭慧検討し友結果、当該化合物に比し、培養液中Ｋ
ｄるかに多量に発酊生産され、結晶性のため容易に培養
液から単離檀製が可能なＡＩ−７７−Ｂ　ｉ原料として
、簡単な化学合成法により、当該化付物を高純度に得る
方法を完成し次。

すなわち、本発明は、ＡＩ−７７−Ｂｉｆｉ性条件下で
脱水災厄させて、下記式（ＩＩ） で示６れる５　Ａ　ＪＪｋ　：）クトン体とし、これに
アンモニアを反１δさせて、下記式（１） で示芒れるＡ（−７７類のアミド訪導体およびその塩を
製造する方法である。

ＡＩ−７７−Ｂは不発明者らによって虜次に土壌から分
離され、バチルス・プミルスに属する菌株と同定でれ之
ＡＩ−７７休「工桑技術院第４０６６号」を培地に好気
的に培養することによシ、＋の培養液中に蓄積されるか
ら、その培養液より採取することができる。

次に、上記したＡＩ−７７−Ｂの埋ｆヒ字的性状につい
て述べる。

ＡＩ−７７−Ｈの質量分析値、紫外吸収値、赤外吸収１
直、Ｎ　Ｍ　Ｒ＠を第１表に示し、溶解性は、水。

メタノール、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキ
シドに易溶で、その他の低級アルコール、ジオキサン、
テトラヒドロフランにや＼難溶で、酢酸エチル、クロロ
ホルム、エーテル、ヘキサンおよびベンゼンに殆んど解
けない。安定性は、水浴液はアルカリに不安定で、室温
でも徐々にラクトンの氷解が進行する。

培養にはバチルス属の一株の培養に関する一船釣知誠が
適用でれる。すなわち、窒素源、炭素源。

無機塩、ビタミン、アミノ酸、核酸関連物質等。

該微生物の成育に必要な物質を含んだ培地に２５〜４０
Ｃで好気的に行なわれる。大規模に培ｔ８ヲ行うには、
通気撹拌培養を行うのが有利である。

なお、ＡＩ−７７株（工業技術院第４０６６号）の菌字
的件貞は下記のとおりである。

菌学的性質 ａ）各徨培地上における生育状態 ■肉汁：培地にほとんど均一に混濁して皮膜はっくらな
い。

■肉汁寒天培地：コロニーの周辺はおおむねＳｍｏｏｔ
ｈ型を呈するが１時にはｒｏｕｇｈ型を呈し。

扁平に拡がる。色は不透明ないし半透明で、アイポリ−
色から白色を経てクリーム色となる。

色素はつくらない。

■グルコース肉汁寒天培地；肉汁寒天培地より生育は良
好、外観は肉汁寒天培地に同じ。

■（ラチン培地；緩慢に液化する。

■ペプトン水；生育はや＼抑制され、全体がや＼混濁す
る。

■リドマスミルク；ミルクｔａ固しない。ペプトンｆヒ
もしない。リドマスの変色も認められない。

■バレイショ培地；炎黄褐色に拡がって生育し。

細かな皺を生ずる。

グルコース肉汁寒天培地における形態学的性状は０．５
〜Ｑ、９　Ｘ　２．０〜５．０μの大きさの短稈状を呈
し、グラムｉｆヒ性で楕円状ないし円筒状の胞子をつく
る。胞子はお＼むね中央に位置し、ふくらみは明瞭でな
い。

ｂ）生理的性質 ■最適生育条件：ｐＨ５〜ｐＨ８，２７〜３５’Ｃ好気
性。

（！）生Ｈしうる条件；　ｐ　Ｈ５，０〜１０．０．１
０〜５Ｃ １、〕）グラム染色性；ｄｆヒ性がある。

（り抗酸性；なし くλ）メチルレッド試験；陽性 ■フォーゲス・プコスカウエル反応；陽性■インドール
の生成ハ認められない。

■億１ヒ水素の生成はほとんど認められない。

■アンモニアの生成は認められない。

◎硝改塩の還元は認められない。

■カタラーゼの生成は旺盛である。

■ゼラテンをゆるやかに液比する。

［相］澱粉を加水分解しない。

［株］クエン酸ヲ利用する。

■７幅食塩培養液に生育する。

に）メチレンブルーを還元しない。

■尿素の利用性は微弱である。

Ｃ）炭素源の利用性 フラクトース、サッカロース、グルコース、マンニット
を利用してａｔ生成する。マンノース。

トレハロースもわずかに利用して酸を生成する。

アラビノース、キシロース、ガラクトース、ラクトース
、マルトース、ラフィノース、ソルビット。

イノジット、グリセロール、α−メチルグルコシノド、
イヌリン、テキストリン、デンプン、繊維素は利用しな
い。いずれの炭素源からもガスの発生は認められない。

上記の諸性質１ｋＢｅｒｇｅｙ’ｓ　ｍａｎｕａｌ　ｏ
ｆ　ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏ
ｇｙ　７版および８版に照合すると１重囲はアラビノー
ス、キシロースがらｍｔ生成しないし、牛乳のペプトン
ｒヒも載置も起こさない等の点で多少の相違点はあるが
、２＼むねバチルス・プミルスの性質に一致して−る。

しｔがって１重囲をバチルス・プミルスに属する一菌株
と判定し九が、同一の既知の１株が存在しないので、バ
チルス・プミルスＡＩ−７７と命名し九。本菌株は工業
技術院倣生物工業技ｖｔＩ研究所に寄託委号第４０６６
号として寄託嘔れている。本発明において、このバチル
ス・プミルスＡＩ−７７株のすべての天然および人工変
異株のうち、ＡＩ−７７ＦＡの生産能を有する株ニすべ
て用いることができる。

本発明の方法におけるＡＩ−７７−Ｂの培養による生産
と場養物からの採取工程は１％定の手段を利用すること
により実施される。すなわち、ＡＩ−７７−Ｂ　ｉｊ、
その生産ｍ’に該醜が必要とする栄養源全含む培養液に
所定時間、好気的に培養することにより培養液中に蓄積
されるから、ＡＩ−７７−Ｂの理化学的性［ｋ利用して
、その培養液から櫨々の精製手段を組合せて採取される
。

発酵に用いられる栄養源としては、炭素源、窒素源、無
機塩類、その他必要に応じてビタミン類、アミノ酸類お
よび使用菌の生育に必要な諸栄養因子が使用される。炭
素源としては１例えば、グルコース、シュウクロース、
フラクトース、マンニトール、有機酸、糖蜜、ｆｉ粉類
、グリセリンなど。

窒素源としては１例えば、コーン・スチープ・リカー、
大豆粉、ファマメディア、酵母エキス、肉エキス、ペプ
トンやカザミノ酸等の蛋白氷解物。

アミノ酸、アンモニウム塩など、無機塩としては。

例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシ
ウム、鉄等の金属イオン、アンモニウム。

リン酸、硫酸、塩素、カルボン酸等のイオンを含む塩が
使用される。生産菌の生育に必要な必須栄養賛素も培地
に含まれる必要があシ、ビタミン類。

アミノ酸類、核酸関連ｇ！：素が必要に応じて添加され
る。

ＡＩ−７７−Ｂ生産園は樵々の条件で生育する。

例えば、この微生物は広範囲の初期ｐＨ′ｔ−有する種
々の培地に生育できる。しかし１発酵を開始する培地の
ｐＨは６〜８．好ましくはｐＨ６〜７で。

一般に培地のｐＨは、微生物の生育にし九がって多少変
動する。培養温度は２５〜４０Ｃで好気的に６０時間〜
９６時間行われる。

本発明のＡＩ−７７類生産菌は、寒天斜面上、振盪フラ
スコ中、中釜ないしは大型発酵タンク内で培養すること
ができる。大量生産ＩＣは通気攪拌の発酵条件が好まし
い。通気攪拌の好気的な培養条件では、シリコン、ポリ
プロピレングリコール誘導体などの消泡剤を培地に加え
ることがＡＩ−７７−Ｂ成分の蓄積１ｋを増大させるの
に有効な場合もある。発酵の経過に関してＡＩ−７７−
Ｈの生産量は、培ｉ！涙液の３１４ｍμにおける紫外部
吸収の増加によって追跡することができる。

好気的発酵条件下で生産し７ｔＡＩ−７７−Ｂは。

主として発酵培地から各々の理化学的性質を利用して、
イオン交換樹脂、マクロ網状樹脂、ゲル濾過剤、吸着剤
等を使用したクロマトや溶媒抽出等を組合せて単離する
ことかできる。すなわち、好気的に４８〜９６時間培養
し友培養Ｐ液ｆｚクロ網状樹脂１例えば、ローム・アン
ド・ハース社製アンバーライトＸＡＤ−２ま之はＸＡＤ
−４あるいは三菱化成製ダイアイオンＨＰ−系に吸着さ
せ、水および有機溶媒あるいは両者の混合溶媒を用いて
浴出する。有機溶媒としては、特に水と親和性のあるＣ
１〜Ｃ４のアルコール類、アセトン、ジオキサン、テト
ラヒドロフラン等を使用することができる。例えば、メ
タノールを３０係以上含有し友水により、ＡＩ−７７−
３３はマクロ網状樹脂ＸＡＤ−２から脱離されるから、
この溶離液を減圧下に濃縮すると、ＡＩ−７７−Ｈの粗
標品が得られる。マクロ網状樹脂ＶＣよる精製を繰返す
ことにより、あるいは熱水またはメタノールから再結晶
δぜることにより、純度の高いＡＩ−７７−Ｈの結晶？
得ることができる。

次に、ＡＩ−７７−Ｂから下記式側 で示されるＡＩ−７７−Ｂ−ｒ−ラクトンの製造は。

よく乾燥し友ＡＩ−７７−Ｂを乾燥した有機溶媒１例え
ば、アルコール類、テトラヒドロフラン等に溶解し、酸
を加えて酸性にすると、容易に脱水閉環してｒ−ラクト
ン体となる。溶媒を留去すると。

ＡＩ−７７−Ｂ−ｒ−ラクトンが一級アミンの塩として
得られる。遊離のアミンは、この塩？有機溶媒に溶解し
て希重曹水で洗浄し、有機溶媒を乾個することにより得
られる。

上記式■の化合物から式（１）の化合物の製造は。

弐ＩのＡＩ−７７−Ｂ−γ−ラクトンを乾燥し次有機溶
媒に溶解し、乾燥アンモニアガスを吹き込むと。

アンモノリシス反応によりｒ−ラクトンが開環して、弐
（１）の化合物が得られる。式（Ｉ）の化合物は。

これを有機溶媒にとかし、６量の酸を加えて溶媒を留去
し、アミンの塩にすると、より安定な化合物となる。医
薬として利用するには、安定なアミン塩として使用する
のが好ましい。

（発明の効果） 本発明により得られる式ＣＩ）の化合物は、第２表に示
す抗漬賜試験の結果から明らかなよう罠、優れた抗潰瘍
活性を有しており、また、抗菌活性も有している。

抗潰瘍性試Ｍは次のように実施した。

ラット（ウィスター、雄９体ム１５０２前後）を試験開
始の２４時間前から絶食させた。生理食塩水を溶媒とし
て用い、試験ｆヒ合物の所定＃度の溶液または＠濁液を
調製して動物に経口的に投与し友。薬剤投与の１時間後
に金網篭にラット？固定し、２１Ｃの水上中に胸部剣状
骨まで６時間浸漬し次。動物は類推脱臼して層殺し九後
、青？摘出して大湾に沿って切開し胃内壁ヲ剖見し之。

潰瘍の発生がほとんど認められないものを０とし。

潰尋の発生程度によ＃）０．５．１．２．３の採点全行
つ友。下記の式よシ潰嚇抑制率を算出し几。

第２表に式（１１の化合物の投与量とその潰瘍抑制率？
示す。

第　　２　　表 （実施例） 以下に本発明の実施例を示す。

光分にｔ！ｉ、燥し７ｔＡ！−７７−８１０ミリモルを
水浴上で　１００１１Ｉ／のＩＮＨＣ６−エタノールに
溶解した。７’５’ｙちに減圧で溶媒を除去（パス＠２
０〜５０Ｃ）し、その後、真空ポンプを用いて残渣を光
分に乾燥し友。次に、この残渣に５０−の０．５モルの
１炭酸ナトリウム溶液を加え、６０〇−の酢酸エチルを
用い抽出を行なつ九。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗つ
友後、芒硝を加え一晩放置し７几。

芒硝ｋＰ別して酢はエチルを減圧で除去すると、３，９
８９　（収准９８％）のＡＩ−７７−Ｂ−ｒ−ラクトン
が得られた。

上記ＡＩ−７７−Ｂ−ｒ−ラクトン５ミリモルを１００
艷の無水メタノールにｆｇ解し、水浴上で（１０〜１５
Ｃ）乾燥アンモニヤガスを５０ミリモルまで吹きこみ、
２時間密栓して攪拌した後。

溶媒を減圧で除去し、浅漬を５０−のメタノールを加え
て溶解させ次。スーパーセル５？を加えて撹拌後、溶媒
を減圧で除去し、残渣ｔｉ線し友。

この残渣を乳鉢を用い微細化し７を後、クロロホルムで
充填し几シリカゲルカラム（２００ｊ’）にのせた。最
初に５００−のクロロホルムでカラムを洗った伎、　　
５００　ｍｌのクロロホルム：メタノール；３：１で生
Ｆｙ、ｗ’を分離し次。分画５１〜１５０ケ果め４縮に
固し、残渣に少量のメタノールを加え放置すると、１晶
沈澱が生じた。この沈澱を酢酸エチルで洗って集め、減
圧で溶媒を除去すると、０．５１９の目的１８合物を得
た。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ＡＩ−７７−Ｂを酸性条件下で脱水反応により５員環ラ
   クトン体とし、これにアンモニアを反応させることを特
   徴とする下記式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） で示されるＡＩ−７７類のアミド誘導体およびその塩の
   製造法。