JPS6366193A - 新規アントラサイクリン抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は制がん作用を有する新規アントラサイクリン抗
生物質に関する。

（従来の技術） 制がん性アントラサイクリン系抗生物質としては、従来
から放線菌の培養液から得られるダウノマイシン（米国
特許第３，６１６，２４２号明細書参照）及びアドリア
マイシン（米国特許第３，５９０，０２８号明細書参照
）が知られておシ、これらの化合物は実験腫瘍に対して
広域抗がんスペクトルを有し、がん化学療法剤として臨
床的にも広く利用されている。しかし、ダウノマイシン
及びアドリアマイシンはかｉｂ強い抗がん作用を示すが
、ま九重篤な心電作用などの副作用も強く、制がん剤と
して決して満足できるものではない。そのため、発酵法
、半合成法、微生物変換法など各種の手段によシ、更に
多数のアントラサイクリン抗生物質が提案されている〔
例えば、特公昭５１−３４９１５号公報（アクラシノマ
イシンＡ及びＢ）、特開昭５７−５６４９４号公報（４
−デメトキシ−１１−デオキシダウノマイシン等）、特
開昭５６−１５２９９月（ロドマイシン群抗生物質）等
参照〕。

（発明が解決しようとする問題） 抗腫瘍剤としてのアントラサイクリン抗生物質は、上述
の如く、各種の類縁化合物が提案され、既に一部は臨床
的に広く利用されているものもあり、また臨床試験に供
されているものもある。しかし、毒性、抗がん作用双方
について共に満足できるものは危い。しかも、抗腫瘍剤
は、試験管内試験、動物試験の結果が必ずしも直接にヒ
トの抗がん作用と相関し々いため、多角的々研究が要示
される。そのため抗腫瘍剤として一応の評価がされるア
ントラサイクリン抗生物質類について、更に臨床薬とし
て有効な、新たな部類に属する化合物の提案が望まれて
いる。

（問題点を解決するための手段） 本発明者等は、よりｉ用なアントラサイクリン抗生物質
又はその合成中間体となり得る新規化合物を提案すべく
研究を重ねた結果、ダウノマイシン及びその類縁化合物
を生産する能力を有する土壌分離菌株又は公知の菌株を
変異原として、例えば紫外線あるいはＮ−メチル−Ｎ′
−二）０−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ　）を用い
る通常の変異処理手段により得られた菌が、一定の制が
ん作用を示し、かつ、各種の誘導体に導ひき得る官能基
を有し、合成中間体としても有用かアントラサイクリン
抗生物質を生産することを見い出し本発明を完成した。

しかして、本発明は次式 で示される新規アントラサイクリン抗生物■ｔＳ供する
ものである。

本発明の化合物は、４−０−メチルアクラビノンとダウ
ノサミンから成ることを特徴とする従来の文献に未載の
新規アントラサイクリン抗生物質である。以下、式（Ｉ
）で示される化合物をＤ７８８−１６と称する。

（作用・効果） Ｄ７８８−１６は、培養マウス白血病細胞Ｌ１２１０に
対して強い増殖阻止作用を有し、それ自体側がん剤とし
て有用である。

なお、該作用は次の試験によシ容易に確認できる。

例えば、２０係仔牛血清を含むＲＰＭ１１６４培地（ロ
ーズウェルバー　り研究ＰＪｒ　）へＬ１２１０細胞’
ｔ−５×１０　ケ／ｍｌ接種し、これに本発明の物質を
０．００１〜０．２５μｉ／ｍｌの濃度で添加し、３７
℃にて炭酸ガス培養器中で４８時間培養し、対照区に対
する５０係増殖阻害濃度を求めた。なお、本発明の物質
の添加はＭ１５０酢酸（ｐＨ３，０）中に１１℃ｇ／ｄ
濃度で溶解したのち、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ　ＰＢＳ（−）
　（日永製薬製）で希釈し、添加した。

更に上記のＬ１２１０培養細胞を１０チ仔牛血清を含む
ＲＰＭ１１６４０培地へ８×１０５ケ／ゴと彦る様に懸
濁し、３７℃にて炭酸ガス培警器中で１．５時間培養を
行ったのち、上記で調製した本物質溶液を種々濃度で添
加し、１５分間後さらに１４Ｃ−ウリジン（０，０５μ
Ｃ１／ｄ　）　４たけ１４Ｃ−チミジン（０，０５μＣ
１／ゴ）を添加し、３７℃にて６０分間培養した。反応
液へ冷１０％ｌＪクロル酢酸（ＴＣＡ　）を添加し、反
応を中止させると同時に、酸不溶物を沈殿させ、遠心操
作にて集積せしめ。

冷５　＊　ＴＣＡ　２　ｍにて２回洗浄したのち、ギ酸
に溶解し、放射活性を測定し、無添加対照区に対する放
射能の取込み率から５０チ取込み阻害濃度を求めた。第
１表に結果を示した。

５０チ阻害濃度　（μｇ汐１） ０７８８−１６　　１．２　　　２．６０　　　１．７
０本発明の抗生物質Ｄ７８８−１６の製造はアクティノ
ミセス属に属するダウノマイシンあるいはカルミノマイ
シン及びその類縁化合物を生産する能力を肩する土壌分
離菌株又は公知の菌株を変異原として例えば紫外線或は
Ｎ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−二トロソグアニジン（
ＮＴＧ　）を用いる通常の変異処理により容易に単離さ
れる本発明の化合物Ｄ７８８−１６を生産する能力を有
する変異株を、適当が栄養源から成る培地に培養するこ
とにより行うことが出来る。これらの変異株のうち具体
的なものとしては、新規アントラサイクリン抗生物質Ｄ
７８８−５（特願昭５９−３８６２６）の生産菌、スト
レプトミセス・スピーシズＤ７８８．４Ｌ−６６０菌株
（微工研菌寄第７４５９号）をＮＴＧ処理し、得られる
変異株でＹＤＫ　−１８株を挙げることが出来る。

本菌株は、昭和６１年９月　３　日付で工業技術院微生
物工業研究所に微工研菌寄第８９５２号（ＦＥＢＭ　Ｐ
　−１９，！；ｌ　）として寄託されている。以下に、
ＹＤＫ　−１８株の菌学的性状を示す。

中　形態 分枝した基中菌糸より、直線状の気中菌糸を伸長し、輪
生枝は認められない。成熟した胞子鎖は１０ケ以上の胞
子の連鎖が認められ胞子の大きさは０．６〜０．８　Ｘ
　０．９〜２，５ミクロン位で胞子の表面は平滑である
。子のり胞子、鞭毛胞子などは認められない。

（１１）各種培地における生育状態 色の記載について０内に示す標準はＨ，Ｄ。

Ｔｒａｓｎｅｒ　　＆　　Ｅ、Ｊａ　　Ｂａｃｋｕｍ　
　著、　　ｓｙｓｔｅｍ　　ｏｆ　　ｃｏｌｏｒｗｈｅ
ｓｌａ　ｆｏｒ　ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｅｅｓ　ｔａｘｏ
ｎｏｍｙ　（Ｊ、　Ａｐｐｌ。

Ｍｉｅｒｏｂｌｏｌ、　１１巻、３３５〜３３８頁、１
９６３年）を用い、補足的に日本色彩研究所出版の「色
の標準」を用いた。

（ｉｉｉ）　　生理的性質 （１）生育温度範囲（イースト、麦芽寒天培地を使用、
ｐＨ６，０で２０℃、２８℃、３３℃、３７℃。

４２℃の各温度で実験）：２０℃〜３７℃までは生育が
認められた。

（２）　　ゼラチンの液化（グルコース、ベゾトン、ゼ
ラチン培地を使用し、２０℃で培養）：陽性（３）　　
スターチの加水分解（スターチ、無機塩寒天培地）：陽
性 （４）脱脂牛乳の凝固及び（プトン化：僅かに凝固及び
ペノトン化は陽性 （５）　　メラニン様色素の生成（トリノトン、イース
トエキス、鉄寒天培地）：陽性 ４ψ　各種炭素源の利用性（フリドハム、マドリーブ寒
天培地上）； Ｌ−アラビノース　　＋　　９＋は良く生育Ｄ−キシロ
ース　　　＋　　　士僅かに生育Ｄ−グルコース　　　
＋ Ｄ−７ラクトース　　士 シュクローズ　　　　士 イノシトール　　　　＋ Ｌ−ラムノース　　　＋ ラフィノース　　　　± Ｄ−マンニット　　　士 本発明によるＤ７８８−１６製造に使用する菌株の培養
は、放線菌の栄養源として通常使用されるそれ自体公知
の培地組成中で行うことができる。例えば、炭素源とし
ては、グルコース、グリセリン、蔗糖、澱粉、マルトー
ズ、動植物油などが使用でき、窒素源としては、大豆粉
、肉エキス、酵母エキス、ペグトーン、コーン・ステー
ノリカー、　ｊｆｆ実粕１魚粉などの有機体窒素源並び
に硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸ナトリウ
ム、リン酸アンモニウムなどの無機体窒素が使用できる
。

又必要に応じて食塩、塩化カリウム、リン酸塩その他Ｍ
ｇ＋　、Ｃａ”　、Ｚｎ廿、　　Ｆｅ廿、Ｃａ廿、　　
Ｍｕ廿あるいはＮｌ＋などの２価金属塩及びアミノ酸や
ビタミン類を添加する他、発酵中の発泡を抑制するため
、例えばシリコーン他各種市販消泡剤を適宜添加するこ
ともできる。

温度、…、通気攪拌および発酵時間等の発酵条件は、用
いられる菌株が最大量の該化合物を蓄積する様に選択す
る。例えば温度は２０〜４０℃、好ましくは２８℃、−
は５〜９、好ましくは６〜７において１発酵時間は３〜
１０日間、好ましくは６日間で発酵を行うのが有利であ
る。

培養液からＤ７８８−１６物質を単離、採取するには、
発酵終了後の培養物を遠心分離によるか。

ケイ藻土の如き適当な濾過助剤の存在下で濾過すること
により、菌体と上澄オた１ｌｔＦ液に分離する。

上澄からはＰ）１７〜９でクロロホルム、トルエン、酢
酸エチル、ｎ−ブタノール々どのＭ機溶媒で抽出する。

菌体からは必要によ勺、アセトン、メタノール、エタノ
ールもしくはｎ−ブタノール等０Ｍ機溶媒を用いて抽出
する。これを吸着相体、例えば、合成吸着樹脂、シリカ
ゲルを用いたクロマトグラフィーによシ処理するか、陰
イオン交換樹脂、陽イオン交換樹脂を用いる処理等を単
独にあるいは適宜組合せて使用することにより、Ｄ７８
８−１６物質を精製、採取できる。

以下に本発明を実施例により更に詳細に説明する。

実施例１ ストレプトシセススビーシスＤ７８８　、　ＴＤＫ−１
８菌株（微工研■菌寄第５９６２号）のＹＳ（０，３チ
酵母エキス、１チ可溶性デンプン、１．５１寒天、ｐＨ
７，２）斜面培養よシー白金耳を採シ、下記する種母培
地１００ｄを分注殺菌した５００ｄ容三角フラスコに接
種し、２８℃、ロータリーシェカー（２２０ｒｐｍ　）
にて２日間振盪培養して種母を作成した。

種母培地 可溶性デンプン　　　　　　　　　　０．５係グルコー
ス　　　　　　　　　　　　　０．５係大豆粉（ニスサ
ンミート、味の素社ｆｆ）　　　　　　１．０１食　　
　塩　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１係
第ニリン酸カリ　　　　　　　　　　　０．１係硫酸マ
グネシウム（含、　７Ｈ２０）　　　　　　０．１係水
道水 ｐＨ７，４（殺菌前） 次いで、下記組成の生産培地１５ノを入れ、殺菌した３
０／容ジャーファーメンタ−１基に上記の種母培養液７
５０１ｄ（５％に相当）を添加接種した。

生産培地 可溶性デンプン　　　　　　　　　　５　チマルトーズ
　　　　　　　　　　　　３　優ドライ・イースト　　
　　　　　　　　３ｑ６大豆粉（ニスサンミート、前出
）　　　　　　　２　　優酵母エキス　　　　　　　　
　　　　０．２係食　　　塩　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　０．１１硫酸マグネシウム（含７Ｈ２０
）　　　　　　　０．１係炭酸カルシーウム　　　　　
　　　　　　　０．２嗟ミネラル溶液”　　　　　　　
　　　　　　０．０５憾水道水 ＰＨ７，４（殺菌前） 通気量１５１／分、攪拌３５０回転／分で、２８℃、６
日間培養する。ジャーファーメンタ−よシ培養液を回収
し、遠心操作にて菌体と上清に分離する。菌体にはアセ
トン８１を加え、よく攪拌したのち濾過し、アセトン抽
出Ｐ液を得る。これをおよそ２ノまで減圧濃縮したのち
、４Ｎ苛性ソーダーにてｐＨを８．０に調整し、クロロ
ホルム４１（総量）で抽出する。一方、培養上清に関し
ては４Ｎ苛性ソーダーにて声を８．０としたのち、おｊ
そ２７（１）クロロホルムで２回抽出する。菌体からの
クロロホルム抽出、及び上清からのクロロホルム抽出物
を混合し、少量まで濃縮する。これに過剰のｎ−ヘキサ
ンを添加して抽出物を沈殿させ、乾燥してＤ７８８−１
６物質を含む粗粉末（３，４，Ｖ）を採取した。

実施例２ 実施例１で得た粗粉末３．４１１をクロロホルム５００
　ｍｔに溶解し、これを０．１Ｍ醋酸緩衝液３００ｍ１
で３回抽出した。抽出水溶液区分を混合し、これをトル
エン３００ばで２回洗浄した。次いで水層を４Ｎ−苛性
ソーダーを添加してＰＨｓ、　ｏとしたノチ、クロロホ
ルム３００ｍ１！で２回抽出した。濃縮乾個し、部分精
製の黄色粉末９８３Ｉｎｇを得た。

実施例３ 実施例２で得た部分Ｎ製粉末２００ダを下記する分取用
高速液体クロマトグラフィーにかけた。

即ち、下記液クロ展開溶媒９　ｒｒｔに全量を溶解、１
．５ｄずつ６回に分けてクロマトを行った。

高速液体クロマトグラフィー条件 ポｙ　７’　：　Ｗａｔｅｒｓ　Ｍ−６００ＯＡ検出器
：　Ｗａｔｅｒｓ　Ｍｏｄｅｌ　４４０　（λ２８５　
ｎｍ使用）流　速：５ｄ／分 分　画ニアｄ 分画３〜１４を集め、６回分を混合した。４Ｎ苛性ソー
ダ溶液を添加しＰＨｓ、　ｏとしたのち、クロロホルム
総量５ＱＱｄで抽出した。水洗し濃縮乾個しおよそ９０
係純度のＤ７８Ｂ−１３粉末１３４＋１１９を得た。

実施例４ 実施例３で得た粉末１３４■を次いで分取用シリカゲル
薄層クロマトグラフィーでさらにＭＭした。分取用シリ
カデル薄層グレートＰＦ２５４（メルク社製：２０ｃｒ
ｎＸ２０α）２０枚の下端２閉位に。

全量にクロロホルム−メタノール（１５：１）に溶解し
た試料溶液を塗布し、風乾後、クロロホルム−水−醋酸
−アンモニャ水（１２０：　５０　：　５：１：１）系
で展開した。Ｄ７８６−１６区分をかきとり、クロロホ
ルム−メタノール（４：１）混液で溶出させた。濃縮乾
個し、これに３Ｑａ／の０．１Ｍ酢酸緩衝液（μｍ３．
０）を加えて溶解させ、遠心操作にて不溶物を除去した
のち、トルエン１０１ｍで２回洗浄した。４Ｎ苛性ソー
ダーで声を８．０としたるのち、クロロホルムで抽出し
た。クロロホル五抽出層を水洗、芒硝添加で脱水を行い
小量まで濃縮した。およそ１０倍容のｎ−へキサンを添
加して沈殿させ、遠心操作にて集積し、真空乾燥して９
８．８チ純度のＤ７８８−１６を８６〜取得した。

上記実施例によって得られたＤ７８８−１６化合物の物
理化学的性状は以下の通シである。

Ａ）性状：黄色粉末 Ｂ）融点：１３８〜１４１℃（分解） Ｃ）　　（α）　　、＋１０６’（Ｃ０，０２，クロロ
ホルム中）Ｄ）紫外可視吸収スペクトル： λ９０１ＣＨ３０Ｈｎｍ　（Ｅｌ　ｍ　、　。

ｗａｘ　　　　　　　　　　　　１ｃｒｓ２０４　（３
９９）、２２９（７００）、２５８（４０５）。

λ０．０１ＮＨＣｚ−９０４ＣＨ，ＯＨｎｍ　（、１％
　）。

ｍａｘ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１ｃ
ｒＩＩ２０５（６０５）、２２９（７９７）、２５８（
４２１）。

λＯ−０１Ｎ　ＮａＯＨ−９０％ＣＨｓ　ＯＨｎｍ　Ｃ
Ｅ　１　％　）　：ｍａｘ　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　１　ｃｍ２０７（７５０）、２３０（４９
５）、２５１（ｆｉ２０）。

３２３（８４）、５１１（９４） Ｅ）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）（ｖｃ＋ｎ　　）
：３４３０．２９５０．１７４０．１６Ｂ０，１６４０
゜１５９５．１４５０，１３９０，１３００，１２５５
゜１１３０．１０２０．９９０，８５０，７６０Ｆ）　
　ＦＤ−ＭＳスペクトラム： ｍ７　ｚ　　５ｓ　ｓ　（Ｍ＋１ｔ　＞　　（Ｃ２９Ｈ
！、３０１ＯＮとしてｍ、ｗ５５５） ＃　　　３９０（Ｍ−ダウノサミン） Ｇ）プロトン核磁気共鳴スペクトル（４００ＭＨｚ）　
：プロトン　　δ　ｐｐｍ Ｈ−１７，９７，ｄ　　　（Ｊ＝８．０Ｈｚ）Ｈ−２７
，７６、ｔ　　　ＣＪ＝８．０Ｈｚ）Ｈ−３７，３８，
ｄ　　　（Ｊ＝８．０Ｈｚ）ＯＣＨ３−４４，０８，５ Ｈ−７５，２９，ｂｓ Ｈａ−８２，３３，ｄ　　　（Ｊ＝１５．０Ｈｚ）Ｈｂ
−８２，５３，ｄｄ　　（Ｊ＝１５．０　＆　４．０Ｈ
ｚ）Ｈ−１０４，１０、ｍ ＣＨｓ−１６３，６９、ａ Ｈ−１１７，６３，５

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される新規アントラサイクリン抗生物質。