JPS641116B2 - - Google Patents
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- JPS641116B2 JPS641116B2 JP55074925A JP7492580A JPS641116B2 JP S641116 B2 JPS641116 B2 JP S641116B2 JP 55074925 A JP55074925 A JP 55074925A JP 7492580 A JP7492580 A JP 7492580A JP S641116 B2 JPS641116 B2 JP S641116B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- proline
- medium
- glutamic acid
- culture
- acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/24—Proline; Hydroxyproline; Histidine
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- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は微生物を用いるＬ―プロリンの製造法
に関するもので、さらに詳しくは、Ｌ―プロリン
生産能を有する微生物を培養し培養物中にＬ―プ
ロリンを蓄積せしめ、該培養物よりＬ―プロリン
を採取することによりＬ―プロリンを製造するに
際し、生産培地中にＬ―グルタミン酸、Ｄ―、Ｌ
―、およびDL―ピロリドンカルボン酸の少なく
とも１種を存在せしめることを特徴とする発酵法
によるＬ―プロリンの製造法に関するものであ
る。その目的とするところは医薬品、食品等に
種々の用途を有するＬ―プロリンの新規な製造法
を提供することにある。 従来、微生物によるＬ―プロリンの製造法に関
してはブレビバクテリウム属、ミクロコツカス
属、パラコロバクトラム属、バチルス属、エシエ
リヒア属、クルチア属、ミクロバクテリウム属、
コリネバクテリウム属に属する細菌及びサツカロ
ミセス属に属する酵母の野性株、栄養要求性株ま
たは、特定の薬剤に対する耐性株を培養してＬ―
プロリンを生産する方法（特公昭43―11751、同
43―13679、同44―1193、同44―1198、同44―
6631、同44―26911、同48―38876、同49―28431、
同51―33190、同51―40158、同54―41386、同54
―105293）、培地中の無機塩濃度を或る特定濃度
にすることによる方法（特公昭46―38557、同46
―42597）が知られている。一方、Ｌ―プロリン
は生合成の過程でＬ―グルタミン酸を経ているこ
とはよく知られており、エシエリヒア・コリに属
する微生物においてＬ―グルタミン酸を培地中に
添加することによつてＬ―プロリンの分泌が促進
されることが知られているが、その分泌量が約
0.03ｇ／と余りにも少なく、実用的には問題に
ならない（バイオケミカ・バイオフイジカ・アク
タ、104巻、397頁、1965年）。 また、クルチア・カテナフオルマを培養する際
に界面活性剤と共にＬ―グルタミン酸を添加して
培養するとＬ―プロリン生産量が向上することが
報告されている（アブライド・マイクロバイオロ
ジー、23巻、758〜764頁、1972年）。しかし、コ
リネバクテリウム属、ブレビバクテリウム属、ア
ースロバクター属、ミクロバクテリウム属に属す
る、いわゆる、グルタミン酸生産菌と呼ばれる一
群の細菌においては、Ｌ―プロリン発酵における
Ｌ―グルタミン酸の添加によるＬ―プロリン蓄積
量が増大するということは知られていない（日本
農芸化学会誌42巻、703〜710頁、1968年、アミノ
酸核酸No.16、126〜133頁、1967年）。 本発明者らは、Ｌ―プロリン発酵生産の培養条
件について種々検討した結果、コリネバクテリウ
ム属、ブレビバクテリウム属、アースロバクター
属、ミクロバクテリウム属の細菌およびサツカロ
ミセス属の酵母を用いるＬ―プロリン発酵におい
て、Ｌ―グルタミン酸、Ｌ―、Ｄ―およびDL−
ピロリドンカルボン酸の少なくとも１種を存在さ
せることにより、界面活性剤を添加せずともＬ―
プロリン生成量が増大することを見出し、本発明
を完成するに到つた。 次に本発明を詳しく説明する。 本発明を実施するに際し用いられる微生物とし
ては、コリネバクテリウム属、アースロバクター
属、ブレビバクテリウム属、ミクロバクテリウム
属またはサツカロミセス属に属するＬ―プロリン
生産菌が用いられる。例えば具体的菌株としては
コリネバクテリウム・グルミクムATCC21157、
同ATCC21158、同ATCC21159、同ATCC21355、
コリネバクテリウム・アセトフイラムFERM―
4045、コリネバクテリウム・アセトアシドフイラ
ムFERM―P4962、アースロバクター・シトレウ
スFERM―P4963、ブレビバクテリウム・ラクト
フアーメンタムFERM―P4964、ミクロバクテリ
ウム・アンモニアフイルムFERM―P4965、サツ
カロミセス・セレビシエATCC20169が挙げられ
る。 本発明に使用する培地としては、使用菌の利用
しうる炭素源、窒素源、無機物、その他使用菌株
の必要とする栄養素を程良く含有するものであれ
ば、合成培地、天然培地のいずれもが使用可能で
ある。培地に使用する炭素源としては、グルコー
ス、フラクトース、シヨ糖、ソルビトール、グリ
セロール、マルトース、マンニトール、殿粉加水
分解物、糖蜜などの各種炭水化物また、酢酸、ピ
ルビン酸、乳酸、フマール酸、クエン酸などの有
機酸、メタノール、エタノール等のアルコール類
等が使用できる。窒素源としては、アンモニア、
硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸ア
ンモニウム、酢酸アンモニウム等の各種無機およ
び有機アンモニウム塩、あるいは尿素等の含窒素
化合物、ならびにペプトン、肉エキス、酵母エキ
ス、コーン・スチーブ・リカー、カゼイン加水分
解物、大豆粕加水分解物、各種発酵菌体、あるい
はその加水分解物が利用できる。 無機物としては、リン酸二水素カリウム、リン
酸水素二カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナト
リウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガンおよび炭酸カ
ルシウム等を使用する。その他微量栄養素とし
て、ピオチン、チアミン、パントテン酸等のビタ
ミン類も必要に応じ添加する。更に使用微生物が
生育のために栄養物を必要とする場合には当然そ
の要求性を満足させるために適当量の栄養物を培
地に加えなくてはならないが、これらの物質は前
記のように窒素源として使用される天然物に含ま
れて供される場合はあえて添加する必要はない。 上記の如き培地に添加するＬ―グルタミン酸Ｌ
―、Ｄ―、DL―ピロリドンカルボン酸としては、
単離されたＬ―グルタミン酸、グルタミン酸ナト
リウム、Ｌ―、Ｄ―、DL―ピロリドンカルボン
酸の他、Ｌ―グルタミン酸発酵液すなわちグルタ
ミン酸発酵ブロス、発酵ブロスから菌体を除去し
た液およびグルタミン酸発酵液からグルタミン
酸を析出分離した母液、更にグルタミン酸ナトリ
ウムを析出分離した母液、更に、グルタミン酸ま
たはピロリドンカルボン酸を多量に含んだ甜菜糖
蜜またはその廃液等、グルタミン酸およびピロリ
ドンカルボン酸の少くとも１種を含む物質が挙げ
られる。 培地中に存在せしめるグルタミン酸またはピロ
リドンカルボン酸の量は菌株および添加時期によ
り異なり、さらに他の培地成分も考慮して最適量
を決定すべきであるが、通常培地１当りグルタ
ミン酸またはピロリドンカルボン酸として３ｇ以
上存在せしめるようにするのが良い。添加効果に
おける上限はないが、150ｇ／以上になるとPH
調整のための塩の影響、粘度上昇などの影響が認
められるので実質的な限度は150ｇ／である。 グルタミン酸等を存在せしめる時期について言
えば、植菌前から増殖が定常に達するまでの時期
に、グルタミン酸等を培地に一時にまたは分割し
て添加するのが良い。 プロリン発酵における生産菌の培養条件として
は、菌株によつて多少異なるが、培養温度は25℃
〜40℃が一般によい。培養中PHは６〜９に制限す
るのが良く、PH調整には、無機あるいは有機の酸
性あるいはアルカリ性物質、さらには尿素、炭酸
カルシウム等を使用することができる。また培養
は通気撹拌などの好気的条件で培養する。これら
の条件で培養液中のプロリン蓄積量が最大となる
まで、すなわち通常24〜120時間培養する。 発酵液からのＬ―プロリンの採取はイオン交換
樹脂法、メタノール晶出等の公知の方法を組合せ
ることにより行なわれる。 以下に本発明の実施例を示す。 実施例 １ 下記のごとき組成を有する種培養培地30mlを
250ml容三角フラスコに入れ、殺菌後、コリネバ
クテリウム・アセトフイラムFERM―Ｐ 4045
を接種して28℃、220r.p.mで24時間振盪培養し
た。 種培養培地組成 肉エキス 10ｇ／、ペプトン 10ｇ／、酵
母エキス ３ｇ／、食塩 ３ｇ／、（PH7.2） 本発酵培地としては下記の組成を有するものに
次の第１表に示したＬ―グルタミン酸ソーダ又は
DL―ピロリドンカルボン酸を添加した培地を用
い、その300mlずつを２容バツフル付三角フラ
スコに分注し、殺菌後、前記種培養液30mlを植菌
し28℃、220r.p.mで４日間培養した。発酵液中に
蓄積したＬ―プロリンの蓄積量は第１表に示す通
りであつた。 本発酵培地 廃糖蜜 170ｇ／（グルコースとして）、大豆
粕分解物 20ｇ／、KH2PO4 0.6ｇ／、
MgSO4・7H2O 0.6ｇ／、（NH4）2SO4 23.4
ｇ／、FeSO4・7H2O 0.012ｇ／、チアミン
塩酸塩 100μｇ／、およびCaCO3 30ｇ／、
（PH7.4）
に関するもので、さらに詳しくは、Ｌ―プロリン
生産能を有する微生物を培養し培養物中にＬ―プ
ロリンを蓄積せしめ、該培養物よりＬ―プロリン
を採取することによりＬ―プロリンを製造するに
際し、生産培地中にＬ―グルタミン酸、Ｄ―、Ｌ
―、およびDL―ピロリドンカルボン酸の少なく
とも１種を存在せしめることを特徴とする発酵法
によるＬ―プロリンの製造法に関するものであ
る。その目的とするところは医薬品、食品等に
種々の用途を有するＬ―プロリンの新規な製造法
を提供することにある。 従来、微生物によるＬ―プロリンの製造法に関
してはブレビバクテリウム属、ミクロコツカス
属、パラコロバクトラム属、バチルス属、エシエ
リヒア属、クルチア属、ミクロバクテリウム属、
コリネバクテリウム属に属する細菌及びサツカロ
ミセス属に属する酵母の野性株、栄養要求性株ま
たは、特定の薬剤に対する耐性株を培養してＬ―
プロリンを生産する方法（特公昭43―11751、同
43―13679、同44―1193、同44―1198、同44―
6631、同44―26911、同48―38876、同49―28431、
同51―33190、同51―40158、同54―41386、同54
―105293）、培地中の無機塩濃度を或る特定濃度
にすることによる方法（特公昭46―38557、同46
―42597）が知られている。一方、Ｌ―プロリン
は生合成の過程でＬ―グルタミン酸を経ているこ
とはよく知られており、エシエリヒア・コリに属
する微生物においてＬ―グルタミン酸を培地中に
添加することによつてＬ―プロリンの分泌が促進
されることが知られているが、その分泌量が約
0.03ｇ／と余りにも少なく、実用的には問題に
ならない（バイオケミカ・バイオフイジカ・アク
タ、104巻、397頁、1965年）。 また、クルチア・カテナフオルマを培養する際
に界面活性剤と共にＬ―グルタミン酸を添加して
培養するとＬ―プロリン生産量が向上することが
報告されている（アブライド・マイクロバイオロ
ジー、23巻、758〜764頁、1972年）。しかし、コ
リネバクテリウム属、ブレビバクテリウム属、ア
ースロバクター属、ミクロバクテリウム属に属す
る、いわゆる、グルタミン酸生産菌と呼ばれる一
群の細菌においては、Ｌ―プロリン発酵における
Ｌ―グルタミン酸の添加によるＬ―プロリン蓄積
量が増大するということは知られていない（日本
農芸化学会誌42巻、703〜710頁、1968年、アミノ
酸核酸No.16、126〜133頁、1967年）。 本発明者らは、Ｌ―プロリン発酵生産の培養条
件について種々検討した結果、コリネバクテリウ
ム属、ブレビバクテリウム属、アースロバクター
属、ミクロバクテリウム属の細菌およびサツカロ
ミセス属の酵母を用いるＬ―プロリン発酵におい
て、Ｌ―グルタミン酸、Ｌ―、Ｄ―およびDL−
ピロリドンカルボン酸の少なくとも１種を存在さ
せることにより、界面活性剤を添加せずともＬ―
プロリン生成量が増大することを見出し、本発明
を完成するに到つた。 次に本発明を詳しく説明する。 本発明を実施するに際し用いられる微生物とし
ては、コリネバクテリウム属、アースロバクター
属、ブレビバクテリウム属、ミクロバクテリウム
属またはサツカロミセス属に属するＬ―プロリン
生産菌が用いられる。例えば具体的菌株としては
コリネバクテリウム・グルミクムATCC21157、
同ATCC21158、同ATCC21159、同ATCC21355、
コリネバクテリウム・アセトフイラムFERM―
4045、コリネバクテリウム・アセトアシドフイラ
ムFERM―P4962、アースロバクター・シトレウ
スFERM―P4963、ブレビバクテリウム・ラクト
フアーメンタムFERM―P4964、ミクロバクテリ
ウム・アンモニアフイルムFERM―P4965、サツ
カロミセス・セレビシエATCC20169が挙げられ
る。 本発明に使用する培地としては、使用菌の利用
しうる炭素源、窒素源、無機物、その他使用菌株
の必要とする栄養素を程良く含有するものであれ
ば、合成培地、天然培地のいずれもが使用可能で
ある。培地に使用する炭素源としては、グルコー
ス、フラクトース、シヨ糖、ソルビトール、グリ
セロール、マルトース、マンニトール、殿粉加水
分解物、糖蜜などの各種炭水化物また、酢酸、ピ
ルビン酸、乳酸、フマール酸、クエン酸などの有
機酸、メタノール、エタノール等のアルコール類
等が使用できる。窒素源としては、アンモニア、
硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸ア
ンモニウム、酢酸アンモニウム等の各種無機およ
び有機アンモニウム塩、あるいは尿素等の含窒素
化合物、ならびにペプトン、肉エキス、酵母エキ
ス、コーン・スチーブ・リカー、カゼイン加水分
解物、大豆粕加水分解物、各種発酵菌体、あるい
はその加水分解物が利用できる。 無機物としては、リン酸二水素カリウム、リン
酸水素二カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナト
リウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガンおよび炭酸カ
ルシウム等を使用する。その他微量栄養素とし
て、ピオチン、チアミン、パントテン酸等のビタ
ミン類も必要に応じ添加する。更に使用微生物が
生育のために栄養物を必要とする場合には当然そ
の要求性を満足させるために適当量の栄養物を培
地に加えなくてはならないが、これらの物質は前
記のように窒素源として使用される天然物に含ま
れて供される場合はあえて添加する必要はない。 上記の如き培地に添加するＬ―グルタミン酸Ｌ
―、Ｄ―、DL―ピロリドンカルボン酸としては、
単離されたＬ―グルタミン酸、グルタミン酸ナト
リウム、Ｌ―、Ｄ―、DL―ピロリドンカルボン
酸の他、Ｌ―グルタミン酸発酵液すなわちグルタ
ミン酸発酵ブロス、発酵ブロスから菌体を除去し
た液およびグルタミン酸発酵液からグルタミン
酸を析出分離した母液、更にグルタミン酸ナトリ
ウムを析出分離した母液、更に、グルタミン酸ま
たはピロリドンカルボン酸を多量に含んだ甜菜糖
蜜またはその廃液等、グルタミン酸およびピロリ
ドンカルボン酸の少くとも１種を含む物質が挙げ
られる。 培地中に存在せしめるグルタミン酸またはピロ
リドンカルボン酸の量は菌株および添加時期によ
り異なり、さらに他の培地成分も考慮して最適量
を決定すべきであるが、通常培地１当りグルタ
ミン酸またはピロリドンカルボン酸として３ｇ以
上存在せしめるようにするのが良い。添加効果に
おける上限はないが、150ｇ／以上になるとPH
調整のための塩の影響、粘度上昇などの影響が認
められるので実質的な限度は150ｇ／である。 グルタミン酸等を存在せしめる時期について言
えば、植菌前から増殖が定常に達するまでの時期
に、グルタミン酸等を培地に一時にまたは分割し
て添加するのが良い。 プロリン発酵における生産菌の培養条件として
は、菌株によつて多少異なるが、培養温度は25℃
〜40℃が一般によい。培養中PHは６〜９に制限す
るのが良く、PH調整には、無機あるいは有機の酸
性あるいはアルカリ性物質、さらには尿素、炭酸
カルシウム等を使用することができる。また培養
は通気撹拌などの好気的条件で培養する。これら
の条件で培養液中のプロリン蓄積量が最大となる
まで、すなわち通常24〜120時間培養する。 発酵液からのＬ―プロリンの採取はイオン交換
樹脂法、メタノール晶出等の公知の方法を組合せ
ることにより行なわれる。 以下に本発明の実施例を示す。 実施例 １ 下記のごとき組成を有する種培養培地30mlを
250ml容三角フラスコに入れ、殺菌後、コリネバ
クテリウム・アセトフイラムFERM―Ｐ 4045
を接種して28℃、220r.p.mで24時間振盪培養し
た。 種培養培地組成 肉エキス 10ｇ／、ペプトン 10ｇ／、酵
母エキス ３ｇ／、食塩 ３ｇ／、（PH7.2） 本発酵培地としては下記の組成を有するものに
次の第１表に示したＬ―グルタミン酸ソーダ又は
DL―ピロリドンカルボン酸を添加した培地を用
い、その300mlずつを２容バツフル付三角フラ
スコに分注し、殺菌後、前記種培養液30mlを植菌
し28℃、220r.p.mで４日間培養した。発酵液中に
蓄積したＬ―プロリンの蓄積量は第１表に示す通
りであつた。 本発酵培地 廃糖蜜 170ｇ／（グルコースとして）、大豆
粕分解物 20ｇ／、KH2PO4 0.6ｇ／、
MgSO4・7H2O 0.6ｇ／、（NH4）2SO4 23.4
ｇ／、FeSO4・7H2O 0.012ｇ／、チアミン
塩酸塩 100μｇ／、およびCaCO3 30ｇ／、
（PH7.4）
【表】
実施例 ２
アースロバクター・シトレウスFERM―Ｐ
4963、ミクロバクテリウム・アンモニアフイラム
FERM―Ｐ 4965、ブレビバクテリウム・ラク
トフアーメンタムFERM―Ｐ 4964およびサツ
カロマイセス・セレビシエATCC20169を用い、
下記の如き組成の本発酵培地を用いる以外は実施
例１と同様に培養した。 本発酵培地 グルコース 100ｇ／、KH2PO4 0.5ｇ／、
K2HPO4 0.5ｇ／、（NH4）2SO4 30ｇ／、大
豆粕分解物 20ｇ／、ビオチン 100μｇ／、
MgSO4・7H2O 0.25ｇ／、FeSO4・7H2O 12
mg／、MnSO4・4H2O 12mg／、ZnSO4・
7H2O 10mg／、チアミン塩酸塩 100μｇ／、
CaCo3 30ｇ／、（PH7.2）。本培地にＬ―グルタ
ミン酸ソーダまたはＬ―ピロリドンカルボン酸を
20ｇ／添加した時のプロリン蓄積量を第２表に
示す。
4963、ミクロバクテリウム・アンモニアフイラム
FERM―Ｐ 4965、ブレビバクテリウム・ラク
トフアーメンタムFERM―Ｐ 4964およびサツ
カロマイセス・セレビシエATCC20169を用い、
下記の如き組成の本発酵培地を用いる以外は実施
例１と同様に培養した。 本発酵培地 グルコース 100ｇ／、KH2PO4 0.5ｇ／、
K2HPO4 0.5ｇ／、（NH4）2SO4 30ｇ／、大
豆粕分解物 20ｇ／、ビオチン 100μｇ／、
MgSO4・7H2O 0.25ｇ／、FeSO4・7H2O 12
mg／、MnSO4・4H2O 12mg／、ZnSO4・
7H2O 10mg／、チアミン塩酸塩 100μｇ／、
CaCo3 30ｇ／、（PH7.2）。本培地にＬ―グルタ
ミン酸ソーダまたはＬ―ピロリドンカルボン酸を
20ｇ／添加した時のプロリン蓄積量を第２表に
示す。
【表】
【表】
実施例 ３
コリネバクテリウム・グルタミクム
ATCC21355を下記のごとき本発酵培地を用いる
以外は実施例１と同様に培養した。 本発酵培地 グルコース 120ｇ／、尿素 ３ｇ／、硫
安 30ｇ／、塩安 30ｇ／、KH2PO4 1.5
ｇ／、K2HPO4 0.5ｇ／、MgSO4・7H2O
0.5ｇ／、FeSO4・7H2O 0.02ｇ／、
MnSO4・4H2O 0.02ｇ／、ビオチン 50μｇ／
、チアミン塩酸塩 １mg／、ペプトン 10
ｇ／、（PH7.2）。ただし培養24時間目に40ｇ／
のパラアルデヒドを添加した。 ４日間28℃、220r.p.mで振盪培養後のＬ―プロ
リン蓄積量は27.0ｇ／であつたが、グルタミン
酸ソーダ20ｇ／添加して培養した場合はプロリ
ン蓄積量が38.9ｇ／であつた。 実施例 ４ 下記のごとき組成を有する種培養培地200mlを
２容バツフル付三角フラスコに入れ、殺菌後、
コリネバクテリウム・アセトフイラムFERM―
Ｐ 4045またはコリネバクテリウム・アセトアシ
ドフイラムFERM―Ｐ 4962を接種して28℃、
220r.p.mで24時間振盪培養した。 種培養培地 シユクロース 60ｇ／、KH2PO4 ２ｇ／、
MgSO4・7H2O 0.5ｇ／、FeSO4・7H2O 0.01
ｇ／、MgSO4・4H2O 0.01ｇ／、コーンス
チーブ・リカー ５ｇ／、チアミン塩酸塩
100μｇ／、ビオチン 100μｇ／、大豆粕分
解物 20ｇ／、尿素 ３ｇ／（PH7.4）。 本発酵培地としては、下記の組成を有するもの
にグルタミン酸ソーダを析出分離した母液をグル
タミン酸換算で20ｇ／添加したものを用い、２
容ジヤーフアーメンターに700mlずつ分注し、
殺菌後、前述の種培地を200ml植菌し、30℃にて
通気撹拌した。培養中のPHコントロールは、酢酸
溶液を自動的に添加してPH7.0に維持するように
して培養した。 本発酵培地 シユクロース 20ｇ／、酢酸アンモニウム
７ｇ／、MgSO4・7H2O 0.6ｇ／、KH2PO4
４ｇ／、（NH4）2SO4 40ｇ／、大豆粕分解物
20ｇ／、FeSO4・7H2O 0.012ｇ／、
MnSO4・4H2O 0.012ｇ／、ZnSO4・7H2O
0.01ｇ／、ビオチン 100μｇ／、チアミン塩
酸塩 100μｇ／、（PH7.4）。 72時間培養した結果、初発液量に対し15％の酢
酸を消費して、FERM―Ｐ 4045、4962のプロ
リン蓄積量はそれぞれ38.8ｇ／、30.1ｇ／で
あつた。グルタミン酸無添加の場合はそれぞれ
25.4ｇ／、21.3ｇ／であつた。
ATCC21355を下記のごとき本発酵培地を用いる
以外は実施例１と同様に培養した。 本発酵培地 グルコース 120ｇ／、尿素 ３ｇ／、硫
安 30ｇ／、塩安 30ｇ／、KH2PO4 1.5
ｇ／、K2HPO4 0.5ｇ／、MgSO4・7H2O
0.5ｇ／、FeSO4・7H2O 0.02ｇ／、
MnSO4・4H2O 0.02ｇ／、ビオチン 50μｇ／
、チアミン塩酸塩 １mg／、ペプトン 10
ｇ／、（PH7.2）。ただし培養24時間目に40ｇ／
のパラアルデヒドを添加した。 ４日間28℃、220r.p.mで振盪培養後のＬ―プロ
リン蓄積量は27.0ｇ／であつたが、グルタミン
酸ソーダ20ｇ／添加して培養した場合はプロリ
ン蓄積量が38.9ｇ／であつた。 実施例 ４ 下記のごとき組成を有する種培養培地200mlを
２容バツフル付三角フラスコに入れ、殺菌後、
コリネバクテリウム・アセトフイラムFERM―
Ｐ 4045またはコリネバクテリウム・アセトアシ
ドフイラムFERM―Ｐ 4962を接種して28℃、
220r.p.mで24時間振盪培養した。 種培養培地 シユクロース 60ｇ／、KH2PO4 ２ｇ／、
MgSO4・7H2O 0.5ｇ／、FeSO4・7H2O 0.01
ｇ／、MgSO4・4H2O 0.01ｇ／、コーンス
チーブ・リカー ５ｇ／、チアミン塩酸塩
100μｇ／、ビオチン 100μｇ／、大豆粕分
解物 20ｇ／、尿素 ３ｇ／（PH7.4）。 本発酵培地としては、下記の組成を有するもの
にグルタミン酸ソーダを析出分離した母液をグル
タミン酸換算で20ｇ／添加したものを用い、２
容ジヤーフアーメンターに700mlずつ分注し、
殺菌後、前述の種培地を200ml植菌し、30℃にて
通気撹拌した。培養中のPHコントロールは、酢酸
溶液を自動的に添加してPH7.0に維持するように
して培養した。 本発酵培地 シユクロース 20ｇ／、酢酸アンモニウム
７ｇ／、MgSO4・7H2O 0.6ｇ／、KH2PO4
４ｇ／、（NH4）2SO4 40ｇ／、大豆粕分解物
20ｇ／、FeSO4・7H2O 0.012ｇ／、
MnSO4・4H2O 0.012ｇ／、ZnSO4・7H2O
0.01ｇ／、ビオチン 100μｇ／、チアミン塩
酸塩 100μｇ／、（PH7.4）。 72時間培養した結果、初発液量に対し15％の酢
酸を消費して、FERM―Ｐ 4045、4962のプロ
リン蓄積量はそれぞれ38.8ｇ／、30.1ｇ／で
あつた。グルタミン酸無添加の場合はそれぞれ
25.4ｇ／、21.3ｇ／であつた。
Claims (1)
- １ コリネバクテリウム属、アースロバクター
属、ミクロバクテリウム属またはサツカロミセス
属に属し、Ｌ―プロリン生産能を有する微生物を
培地に培養し培養物中にＬ―プロリンを蓄積さ
せ、該培養物よりＬ―プロリンを採取することに
よるＬ―プロリンの製造に際し、培地中にＬ―グ
ルタミン酸、Ｄ―、Ｌ―およびDL―ピロリドン
カルボン酸の少なくとも１種を存在させることを
特徴とする発酵法によるＬ―プロリンの製造法。
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