PT944648E - Derivados do glp-1. - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO DERIVADOS DO GLP-1

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a derivados novos do peptídeo 1 tipo glucagon humano (GLP-1), aos seus fragmentos e análogos destes fragmentos que têm um perfil de acção prolongada, e aos métodos para os produzir e os utilizar.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Os peptideos são muito utilizados na prática médica, e dado que podem ser produzidos por tecnologia do ADN recombinante pode ser esperado que a sua importância aumentará também nos próximos anos. Quando os peptideos nativos ou os seus análogos são utilizados nos tratamentos, descobriu-se que estes habitualmente têm uma elevada depuração. Uma elevada depuração de um agente terapêutico é um inconveniente nos casos em que é desejado manter um nível elevado no sangue deste agente durante um período de tempo prolongado em virtude de que seguidamente serão necessárias administrações repetidas. Exemplos de peptideos que têm uma alta depuração são: ACTH, factor libertador da corticotropina, da angiotensina, da calcitonina, da insulina, do glucagon, peptídeo 1 semelhante ao glucagon, peptídeo 2 semelhante ao glucagon, factor de crescimento 1 semelhante à insulina, factor de crescimento 2 semelhante à insulina, peptídeo iníbidor gástrico, factor libertador da hormona do crescimento, peptídeo de activação do adenilato cíclase pituitária, secretina, enterogastrina, somatostatina, somatotropina, somatomedina, hormona paratiróíde, trombopoietina, eritropoietina, factores de libertação hipotalámica, prolactina, hormonas estimuladoras da tiróide, endorfinas, encefalinas, vasopressina, oxitocina, opiódes e seus 1 análogos, superóxido dísmutase, interferão, asparaginase, arginase, arginina desaminase, adenosina desaminase e ribonucleas Nalguns casos é possível influenciar o perfil de libertação dos peptideos aplicando composições farmacêuticas adequadas, porém este processo tem várias lacunas e geralmente não é aplicado.

As hormonas que regulam a secreção da insulina pertencem ao denominado eixo enteroinsular, designando um grupo de hormonas, libertadas da mucosa gastrointestinal em resposta à presença e absorção de nutrientes no intestino, que provêm uma libertação inicial e potenciada da insulina. 0 efeito do aumento na secreção de insulina, o denominado efeito incretina, é provavelmente essencial para uma tolerância à glicose normal. Muitas das hormonas gastrointestinais, incluída a gastrina e a secretina (a colecistocinina não é insulinotrópica no homem), são ínsulinotrópicas mas as únicas que são fisiologicamente importantes, as que são responsáveis do efeito incretina, são o polipeptídeo insulinotrópico dependente da glicose, GIP, e o peptídeo 1 semelhante ao glucagon (GLP-1) . Devido ao seu efeito insulinotrópico, o GIP, isolado em 1973 (1) atraiu imediatamente um interesse considerável entre os diabetologistas. No entanto, numerosas investigações realizadas durante os anos seguintes indicaram claramente que uma secreção defeituosa de GIP não estava envolvida na patogénese da diabetes mellitus insulino-dependente (IDDM) ou da diabetes mellitus não insulino-dependente (NIDDM) (2) . Além disso, foi descoberto que o GIP como uma hormona insulinotrópica era quase ineficaz em NIDDM (2) . A outra hormona incretina, o GLP-1 é a substância insulinotrópica conhecida mais potente (3). Ao contrário do GIP, esta é surpreendentemente eficaz na estimulação da secreção de insulina nos pacientes com NIDDM. Adicionalmente, e em contraste com as outras hormonas ínsulinotrópicas (talvez com excepção da secretina) esta também inibe potentemente a secreção do glucagon. Devido a estas acções, esta tem efeitos acentuados na 2 redução da glicose no sangue particularmente nos pacientes com NIDDM. 0 GLP-1, um produto do proglucagon (4), é um dos elementos mais jovens da família dos peptídeos secretina-VIP, mas já está estabelecido como uma importante hormona do intestino com função reguladora no metabolismo da glicose e na secreção e metabolismo gastrointestinal (5) . 0 gene do glucagon é processado diferentemente no pâncreas e no intestino. No pâncreas (9), o processamento conduz à formação e secreção paralela do 1) próprio glucagon, ocupando as posições 33-61 do proglucagon (PG) ; 2) um peptídeo do N-terminal de 30 aminoácidos (PG (1-30)) frequentemente denominado peptídeo pancreático relacionado com a glicentina, GRPP (10, 11); 3) um hexapeptídeo correspondente a PG (64 a 69); 4) e, finalmente, o denominado fragmento proglucagon principal (PG (72 -158)), no qual as duas sequências semelhantes a glucagon estão enterradas (9) . O glucagon parece ser o único produto biologicamente activo. Pelo contrário, na mucosa intestinal, é o glucagon o que está enterrado por uma molécula maior, enquanto que os dois peptídeos semelhantes ao glucagon são formados separadamente (8). Os seguintes produtos são formados e segregam de forma paralela: 1) glicentina, correspondente a PG (1-69), com a sequência do glucagon que ocupa os resíduos Nos. 33-61 (12); 2) GLP-1 (7-36) amida (PG (78-107)) amida (13), não como originalmente se pensava PG (72-107) amida ou 108, que é inactiva). Quantidades pequenas de GLP-1 (7- 37), (PG (78-108)) 3 de glicina C-terminalmente estendida mas igualmente bioactiva, são também formadas (14); 3) intervindo o peptídeo-2 (PG (111-122) amida) (15); e 4) GLP-2 (PG (126-158)) (15, 16).

Uma fracção de glicentina é adicionalmente clivada em GRPP (PG (1-30)) e oxintomodulina (PG (33-69)) (17, 18). Destes peptideos, o GLP-1, tem as actividades biológicas mais conspícuas.

Quando segregados em paralelo com glicentina/enteroglucagon, foi concluído que muitos dos estudos sobre a secreção do enteroglucagon (6,7) até certo ponto podem ser aplicados à secreção do GLP-1, mas o GLP-1 é metabolizado mais rapidamente com um plasma de meia-vida nos seres humanos de 2 minutos (19). As refeições ricas em hidratos de carbono ou em gorduras estimulam a secreção (20), supostamente como resultado da interacção directa dos nutrientes ainda não absorvidos com as micro-vilosidades das L-células do tipo aberto da mucosa do intestino. Podem existir mecanismos endócrinos ou neurais que promovem a secreção do GLP-1 mas ainda não foram demonstrados nos seres humanos. A função da incretina de GLP-1 (29-31) tem sido claramente ilustrada nas experiências com o antagonista receptor de GLP-1, a exendina 9-3S, que reduz drasticamente o efeito da incretina inferida pela glicose oral nas ratazanas (21, 22) . A hormona interage directamente com as β-células via receptor de GLP-1 (23) que pertence à família glucagon/VIP/calcitonina dos receptores dispersos das 7 transmembranas acopladaas à G-proteína. A importância do receptor GLP-1 para regular a secreção de insulina foi ilustrada nas experiências recentes nas quais foi efectuada uma ruptura específica do gene receptor de GLP-1 em ratos. Os animais homozigotos para a ruptura tinham 4 muito deteriorada a tolerância à glicose e à hiperglicemia por jejum, e mesmo os animais heterozígotos foram intolerantes à gl icose (24). 0 mecanismo de transdução de sinais (25) envolve principalmente a activação do adenilato ciclase, mas as subidas de Caz~ intracelular são também essenciais (25, 26) . A acção da hormona é melhor descrita como a potenciação de libertação da insulina estimulada por glicose (25), mas não é conhecido o mecanismo que acopla a estimulação da glicose e o GLP-1. Pode envolver uma libertação de cálcio induzida por cálcio (26, 27) . Como o anteriormente mencionado, a acção insulinotrópica do GLP-1 é preservada nas β-células diabéticas. Também não é conhecida a relação destas últimas com a sua capacidade para transportar "competência de glicose" até às células isoladas secretoras de insulina (26, 28), que individualmente respondem de forma insuficiente à glicose ou GLP-1 mas a combinação das duas respondem totalmente. Igualmente de maneira importante, no entanto, a hormona também inibe potentemente a secreção do glucagon (29). 0 mecanismo não é conhecido, mas parece ser parácrino, via a insulina vizinha ou células da somatostatina (25) . Também a acção glucagonostática é glicose-dependente, de forma a que o efeito inibidor diminui à medida que diminui a glicose no sangue. Devido a este efeito duplo, se as concentrações de GLP-1 no plasma aumentam, por uma secreção aumentada ou por uma infusão exógena, o rácio molar de insulina para glucagon no sangue que atinge o fígado via a circulação portal é muito aumentada, pelo que a produção de glicose hepática diminui (30). Como resultado, as concentrações de glicose no sangue diminuem. Devido à dependência da glicose das acções insulinotrópica e glucagonostática, o efeito da redução da glicose é auto-limitadora, e portanto, a hormona, não provoca hipoglicemia independentemente da dose (31). Os efeitos são preservados em pacientes com diabetes mellitus (32), nos quais as infusões de doses ligeiramente suprafisiológicas de GLP-1 podem normalizar totalmente os valores de glicose no sangue apesar do controlo metabólico insuficiente e falha secundária na 5 sulfonilureia (33) . A importância dos efeitos glucagonostáticos é ilustrada pela descoberta de que GLP-1 reduz também a glicose no sangue nos pacientes diabéticos tipo 1 sem capacidade de secreção das β-células residuais (34). Além dos seus efeitos sobre as ilhotas pancreáticas, o GLP-1 tem acções potentes sobre o tracto gastrointestinal. Infundido em quantidades fisiológicas, o GLP-1 inibe potentemente a secreção do ácido gástrico induzido por pentagastrina assim como induzido pela refeição (35, 36) . Inibe também a taxa de esvaziamento gástrico e a secreção da enzima pancreática (36). Efeitos inibidores idênticos aos da secreção gástrica e pancreática e motilidade podem ser infundidos nos seres humanos com a perfusão do íleo com soluções que contenham hidratos de carbono ou lipídeos (37, 38). Concomitantemente, a secreção de GLP-1 é muito estimulada, e foi especulado que o GLP-1 pode ser pelo menos parcialmente responsável do denominado efeito "ileal-brake" (38). De facto, estudos recentes sugerem que, fisiologicamente, os efeitos do ileal breake do GLP-1 podem ser mais importantes do que os seus efeitos nas ilhotas pancreáticas. Assim, nos estudos da resposta à dose o GLP-1 influencia a taxa do esvaziamento gástrico quando as taxas de infusão são pelo menos tão baixas como as requeridas para influenciar a secreção da ilhota (39). 0 GLP-1 parece ter efeito sobre a ingestão de alimentos. A administração intraventricular do GLP-1 inibe profundamente a ingestão de alimentos em ratazanas (40, 42). Este efeito parece ser altamente específico. Assim, o GLP-1 estendido de forma N-terminal (PG 72-107) amída está ínactivo e doses apropriadas do antagonista de GLP-1, a exendina 9-39, anulam os efeitos do GLP- 1 (41) . A administração periférica aguda do GLP-1 não inibe de forma aguda a ingestão de alimentos em ratazanas (41, 42) . No entanto, continua a ser possível que o GLP-1 segregado desde as L-células intestinais possa também agir como um sinal de saciedade. 6 Não só são conservados os efeitos insulinotrópicos mas também os efeitos do GLP-1 sobre o tracto gastrointestinal nos pacientes diabéticos (43), e podem ajudar na restrição de excursões da glicose induzida pelas refeições, mas, de maneira mais importante, pode ainda influenciar na ingestão dos alimentos. Tem sido demonstrado que o GLP-1 a 4 ng/kg/min ao ser administrado por via intravenosa, continuamente durante uma semana, melhora acentuadamente o controlo glicémico nos pacientes com OMNI sem efeitos secundários significativos (44) . 0 peptídeo é completamente activo após a administração subcutânea (45), mas é rapidamente degradado principalmente devido à degradação por enzimas semelhantes dipeptidil peptidase IV (46, 47) . A sequência de aminoácidos do GLP-1 é dada i.a. por Schmidt et al. (Diabetologia 28 704-707 (1985). Ainda que as propriedades farmacológicas interessantes do GLP-1 (7-37) e seus análogos tenham nos últimos anos atraído muito a atenção, sabe-se muito pouco sobre a estrutura destas moléculas. A estrutura secundária do GLP-1 em micelas foi descrita por Thorton et al. (Biochemistry 33 3532-3539 (1994)), mas em solução normal, o GLP-1 é considerada uma molécula muito flexível. Surpreendentemente, descobrimos que a derivação desta molécula relativamente pequena e muito flexível resultou em compostos cujo perfil de plasma era muito prolongado e continuava a ter a actividade retida. O GLP-1 e os análogos do GLP-1 e os seus fragmentos são potencialmente úteis i.a. no tratamento da diabetes tipo 1 e tipo 2. No entanto, a alta depuração limita a utilidade destes compostos, e portanto continua a existir a necessidade de aperfeiçoamentos neste campo. Consequentemente, é um objecto da presente invenção o de prover derivados do GLP-1 e seus análogos com um perfil de acção prolongado em relação ao GLP-1 (7-37). É ainda outro objecto da invenção, o de prover derivados do GLP-1 e seus análogos com uma depuração inferior ao GLP-1 (7-37). É 7 outro objecto da invenção, o de prover uma composição farmacêutica que compreenda um composto de acordo com a invenção e utilizar um composto da invenção para prover essa composição. É ainda um objecto da presente invenção, o de prover um método para tratar a diabetes mellitus insulino-dependente e a diabetes mellitusnão insulino-dependente.

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RESUMO DA INVENÇÃO 0 GLP-1 humano é um peptídeo de resíduo de 37 aminoácidos originado do preproglucagon que é sintetizado i.a. nas L-células no íleo distai, no pâncreas e no cérebro. 0 processamento do preproglucagon para dar GLP-1(7-36) amida, GLP-1(7-37) e GLP-2 dá-se principalmente nas L-células. Um sistema simples é utilizado para descrever fragmentos e análogos deste peptídeo. Assim, por exemplo, Gly8-GLP-1(7-37) designa um fragmento de GLP-1 derivado formalmente do GLP-1 pela eliminação dos resíduos de aminoácidos Nos. 1 a 6 e substituindo o resíduo de aminoácido de origem natural na posição 8 (Ala) por Gly. De forma idêntica, Lys34 (NE-tetradecanoil)-GLP-1(7-37) designa GLP-1 (7-37) em que o grupo ε-amino do resíduo Lys na posição 34 foi tetradecanoilado. Quando neste texto é feita referência aos análogos de GLP-1 estendidos C-terminalmente, o resíduo de aminoácido na posição 38 é Arg a não ser que seja indicado o contrário, o resíduo de aminoácido opcional na posição 39 é também Arg a não ser que seja indicado o contrário e o resíduo de aminoácido opcional na posição 40 é Asp a não ser que seja indicado o contrário. Também, se um análogo estendido C-terminalmente se estende até à posição 41, 42, 43, 44 ou 45, a sequência de aminoácidos desta extensão é como a sequência correspondente do preproglucagon humano a não ser que seja indicado o contrário.

No seu aspecto mais amplo, a presente invenção refere-se a derivados de GLP-1 e seus análogos. Os derivados de acordo com a invenção têm propriedades farmacológicas interessantes, em 14 particular têm um perfil de acção mais prolongada que os peptídeos de origem.

No presente texto, a designação "um análogo" é utilizada para designar um peptídeo em que um ou mais resíduos de aminoácidos do peptídeo de origem foram substituídos por outro resíduo de aminoácido e/ou em que um ou mais resíduos de aminoácidos do peptídeo de origem foram eliminados e/ou em que um ou mais resíduos de aminoácidos foram adicionados ao peptídeo de origem. Esta adição pode ter lugar na extremidade N-terminal ou na extremidade C-terminal do peptídeo de origem ou nas duas. A designação "derivado" é utilizada no presente texto para designar um peptídeo em que um ou mais dos resíduos de aminoácidos do peptídeo de origem foram quimicamente modificados, por exemplo por alquilação, acilaçâo, formação de éster ou formação de amida. A designação "um derivado de GLP-1" é utilizada no presente texto para designar um derivado de GLP-1 ou um seu análogo. No presente texto, ao peptídeo de origem a partir do qual esse derivado é formalmente derivado nalguns lugares é referido como a "fracção de GLP-1" do derivado.

Como o aqui descrito, mas não explicitamente reivindicado, um derivado de GLP-1 no qual pelo menos um resíduo de aminoácido do péptido de origem tem um substituinte lipofílico ligado com a condição de que se somente estiver presente um substituinte lipofílico e este substituinte estiver ligado ao resíduo do aminoácido N-terminal ou C-termínal do peptídeo de origem então este substituinte é um grupo alquilo ou um grupo que tem um grupo de ácido ω-carboxílico.

Descrito na presente, mas não explicitamente reivindicado, um derivado de GLP-1 somente com um substituinte lipofílico. 15

Descrito na presente, mas não explícitamente reivindicado, um derivado de GLP-1 somente com um substituinte lipofílico este substituinte é um grupo alquilo ou um grupo que tem um grupo de ácido ω-carboxílico e está ligado ao resíduo do aminoácído N-terminal do peptídeo de origem.

Descrito na presente, mas não explicitamente reivindicado, um derivado de GLP-1 somente com um substituinte lipofílico este substituinte é um grupo alquilo ou um grupo com um grupo de ácido ω-carboxílico e está ligado ao resíduo de aminoácído C-terminal do peptídeo de origem.

Numa forma de realização preferida, como a descrito na reivindicação 1, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1(7-37) ou um análogo de GLP-1(7-37) o derivado é um agonista receptor de GLP-1 humano, caracterizado por o derivado ter apenas um substituinte lipofílico que está ligado a um resíduo de aminoácido que não é o resíduo de aminoácído N-terminal ou C-terminal.

Descrito na presente, mas não explicitamente reivindicado, um derivado de GLP-1 em que os dois substituintes lipofílicos estão presentes.

Descrito na presente, mas não explicitamente reivindicado, um derivado de GLP-1 em que dois substituintes lipofílicos estão presentes, estando um ligado ao resíduo de aminoácido N-terminal e estando o outro ligado ao resíduo de aminoácido C-terminal.

Noutra forma de realização preferida, como a descrita na reivindicação 3, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP 1(7-37) ou um análogo de GLP-1(7-37), em que o dito derivado é um agonista receptor de GLP-1 humano, caracterizado por o derivado ter somente dois substituintes lipofílicos que estão 16 ligados aos resíduos de aminoácidos que não são o resíduo de aminoácido N-terminal ou C-terminal.

Noutra forma de realização preferida, como a descrita na reivindicação 2, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP 1 (7-37) ou um análogo de GLP-1 (7-37) este derivado é um agonista receptor de GLP-1 humano, caracterizada por o derivado ter somente dois substituintes lipofílicos, um dos quais está ligado ao resíduo de aminoácido C-terminal enquanto que o outro está ligado a um resíduo de aminoácido que não é o resíduo de aminoácido N-terminal nem o C-terminal.

Numa forma de realização adicional preferida, como a descrita na reivindicação 4, a presente invenção refere-se a um derivado de um análogo de GLP-1 (7-37) o derivado é um agonista receptor de GLP-1 humano e em que o análogo é GLP 1(7-C), onde C é desde 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 e 45 caracterizado por o derivado ter somente um substituinte lipofílico que está ligado ao resíduo de aminoácido C-terminal.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que o substituinte lipofílico compreende de 4 a 40 átomos de carbono, mais preferencialmente de 8 a 25 átomos de carbono.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que um substituinte lipofílico é ligado a um resíduo de aminoácido de modo a que um grupo carboxiio do substituinte lipofílico forme uma ligação amida com um grupo amino do resíduo de aminoácido.

Numa forma de realização preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que um substituinte lipofílico está ligado a um resíduo de aminoácido de modo a que um grupo amino do substituinte lipofílico forme uma ligação de amida com um grupo carboxiio do resíduo de aminoácido. 17

Numa forma de realização preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que um substituinte lipofílico é ligado ao peptídeo de origem por meio de um separador.

Descrito na presente, mas não explicitamente reivindicado, um derivado de GLP-1 em que um substituinte lipofílico opcionalmente via separador - é ligado ao grupo ε-amino de um resíduo Lys contido no peptídeo de origem.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que um substituinte lipofílico é ligado ao peptídeo de origem por meio de um separador que é um grupo de ácido a,ω-dicarboxílico de alcano não ramificado com 1 a 7 grupos de metileno, preferencialmente dois grupos de metileno, este separador forma uma ponte entre um grupo amino do peptídeo de origem e um grupo amino do substituinte lipofílico.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que um substituinte lipofílico é ligado ao peptídeo de origem por meio de um separador que é um resíduo de aminoácido excepto Cys, ou um dipeptídeo como Gly-Lys. No presente texto, a expressão "um dipeptídeo como Gly-Lys" é utilizado para designar um dipeptídeo em que o resíduo de aminoácido C-terminal é Lys, His ou Trp, preferencialmente Lys, e onde o resíduo de aminoácido N-terminal é seleccionado do grupo composto por Ala, Arg, Asp, Asn, Gly, Glu, Gin, Ile, Leu, Vai, Phe e Pro.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que um substituinte lipofílico é ligado ao peptídeo de origem por meio de um separador que é um resíduo de aminoácido excepto Cys, ou é um dipeptídeo como Gly-Lys e em que um grupo carboxílo do peptídeo 18 de origem forma uma ligação de amida com um grupo amino de um resíduo Lys ou um dipeptídeo que contém um resíduo Lys, e o outro grupo amino do resíduo Lys ou um dipeptídeo contendo um resíduo Lys forma uma ligação de amida com um grupo carboxilo do substituinte lipofílico.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que um substituinte lipofílico é ligado ao peptídeo de origem por meio de um separador que é um resíduo de aminoácido excepto Cys, ou é um dipeptídeo como Gly-Lys e onde um grupo de amino do peptídeo de origem forma uma ligação de amida com um grupo carboxílico do resíduo de aminoácido ou do dipeptídeo separador, e um grupo amino do resíduo de aminoácido ou separador do dipeptídeo forma uma ligação amida com um grupo carboxilo do substituinte lipofílico.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 onde um substituinte lipofílico é ligado ao peptídeo de origem por meio de um separador que é um resíduo de aminoácido excepto Cys, ou é um dipeptídeo como Gly-Lys e onde um grupo carboxilo do peptídeo de origem forma uma ligação de amida com um grupo amino do resíduo de aminoácido separador ou do dipeptídeo separador, e o grupo carboxilo do resíduo do aminoácido separador ou do dipeptídeo separador forma uma ligação de amida com um grupo amino do substituinte lipofílico.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 onde um substituinte lipofílico é fixado ao peptídeo de origem por meio de um separador que é um resíduo de aminoácido excepto Cys, ou é um dipeptídeo como Gly-Lys, e onde um grupo carboxilo do peptídeo de origem forma uma ligação de amida com um grupo de amino de um separador que é Asp ou Glu, ou um dipeptídeo separador contendo um resíduo Asp ou Glu, e um grupo carboxilo do separador forma 19 uma ligação de amida com um grupo amino do substituinte lipofílico.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 com um substituinte lipofílico que compreende um esqueleto de ciclopentanofenatreno parcial ou totalmente hidrogenado.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 com um substituinte lipofílico que é um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 com um substituinte lipofílico que é o grupo acilo de um ácido gordo de cadeia linear ou ramificada.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 com um substituinte lipofílico que é um grupo acilo seleccionado do grupo composto por CH3 (CH2) nC0-, onde n é um número inteiro de 4 a 38, preferencialmente um número inteiro de 4 a 24, mais preferencialmente seleccionado do grupo composto por -CH3(CH2)6CO-, CH3 (CH2) 8C0-, CH3 (CH2) 10CO-, CH3 (CH2) 12CO-, CH3ÍCH2) 14CO-, CH3(CH2) i6CO-, CH3(CH2)i8CO-, CH3 (CH2) 20CO- e CH3 (CH2) 22CO- .

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 com um substituinte lipofílico que é um grupo acilo de ácido a,ω-dicarboxílico alcano de cadeia linear ou ramificada. 20

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 com um substituinte lipofilico que é um grupo acilo seleccionado do grupo composto por HOOC (CH2)mCO~, onde m é um número inteiro de 4 a 38, preferencialmente um número inteiro de 4 a 24, mais preferencialmente seleccionado do grupo composto por HOOC(CH2)i4CO-, BQOC(CH2)i6CO-, HOOC(CH2)18CO-, HOOC(CH2)2oCO- e HOOC(CH2)22CG-.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 com um substituinte lipofilico que é um grupo da fórmula CH3 (CH2)P ( (CH2) q COOH)CHNH-CO (CH2) 2C0-, onde p e q são números inteiros e p+q é um número inteiro de 8 a 33, preferencialmente de 12 a 28.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 com um substituinte lipofilico que é um grupo da fórmula CH3(CH2)rCO- NHCH(COOH) (CíbhCO-, onde r é um número inteiro de 10 a 24.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 com um substituinte lipofilico que é um grupo da fórmula CH3(CH2)sCO- NHCH( (CH2)2COOH)C0-, onde s é um número inteiro de 8 a 24.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 com um substituinte lipofilico que é um grupo da fórmula COOH (CH2) tCO- onde t é um número inteiro de 8 a 24.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 com um substituinte lipofilico que é um grupo da fórmula -NHCH (COOH) (CH2) 4NH-CO(CH2) uCHb onde u é um número inteiro de 8 a 18. 21

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 que tem um substituinte lipofílico que é um grupo da fórmula --NHCH(COOH) (CH2)4NH-COCH( (CH2) 2COOH) NH-CO (CH2) „CH3, onde w é um número inteiro de 10 a 16.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 com um substituinte lipofílico que é um grupo da fórmula -NHCH (COOH) (CH2) 4NH- CO (CH2) 2CH(COOH)NH-CO(CH2) xCH3, onde x é um número inteiro de 10 a 16.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 com um substituinte lipofílico que é um grupo da fórmula NHCH(COOH) (CH2)4NH-CO(CH2)2 CH (COOH) NHCO (CH2) yCH3, onde y é zero ou um número inteiro de 1 a 22.

Na presente é descrito, mas não é explicitamente reivindicado, um derivado de GLP-1 com um substituinte lipofílico que pode ser negativamente carregado. Este substituinte lipofílico pode por exemplo ser um substituinte que tenha um grupo carboxílo.

Na presente é descrito, mas não é explicitamente reivindicado, um derivado de GLP-1 cujo peptídeo de origem é seleccionado do grupo que compreende GLP-1(1-45) ou um derivado análogo.

Na presente é descrito, mas não é explicitamente reivindicado, um derivado de GLP-1 derivado de um fragmento de GLP-1 seleccionado do grupo que compreende GLP-1(7-35), GLP-1(7-36), GLP-1(7-36) amida, GLP-1(7-37), GLP-1(7-38), GLP-1(7-39), GLP 1(7-40) e GLP-1(7-41) ou um seu análogo.

Na presente é descrito, mas não é explicitamente reivindicado, um análogo de GLP-1 derivado de um análogo de GLP-1 seleccionado do grupo composto por GLP-1(1-35), GLP-1(1-36), GLP-1(1-36) 22 amida, GLP-l(l-37), GLP-1 (1-38), GLP-l(l-39), GLP 1(1-40) e GLP-1(1-41) ou um seu análogo.

Na presente é descrito, mas não é explicitamente reivindicado, um derivado de GLP-1 onde a designação análogo compreende derivados em que um total de até quinze, preferencialmente até dez resíduos de aminoácidos foram trocados por qualquer resíduo α-aminoácido.

Na presente é descrito, mas não é explicitamente reivindicado, um derivado de GLP-1 onde a designação análogo compreende derivados em que um total de até quinze, preferencialmente até dez resíduos de aminoácidos foram trocados por qualquer resíduo α-aminoácído que pode ser codificado pelo código genético.

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 onde a designação análogo compreende derivados em que um total de até seis resíduos de aminoácidos foram trocados por outro resíduo a-aminoácido que pode ser codificado pelo código genético.

Na presente é descrito, mas não é explicitamente reivindicado, um peptídeo de origem para um derivado de acordo com a invenção ser seleccionado do grupo composto por Arg26-GLP-1 (7-37) ; Arg34-GLP-1 (7-37 ) ; Lys36-GLP-1 (7-37); Arg26-34Lys3e-GLP-l (7-37 ) ;

Arg26'34Lys38GLP-l (7-38) ; Arg26‘34Lys39-GLP-l (7-39); Arg26-34Lys40-GLP-1(7-40); Arg26Lys36-GLP-l (7-37); Arg34Lys36-GLP-l (7-37); Arg26Lys39-GLP-1 (7-39) ; Arg34Lys40-GLP-l (7-40); Arg26,34Lys3ê-39-GLP-l (7-39) ;

Arg26'34Lys36'40-GLP-l (7-40) ; Gly8Arg26-GlP-l (7-37) ; Gly8Arg34-GLP-1 (7-37); Gly8Lys36-GLP-l (7-37); Gly8Arg26’34Lys36-GLP-l (7-37) ; ,36

Gly8Arg26'34Lys39-GLP-l (7-39) ;

Gly8Arg26Lys36-GLP-l (7-37) ;

Giy8Arg26'34Lys40-GLP-l (7-40) ; Gly3Arg34Lys36-GLP-l (7-37) ; .39

Gly8Arg26Lys39-GLP-l (7-39) ;

Gly3Arg34Lys40-GLP-l (7-40) ;

Gly8Arg26‘34I ys 36.39 -GLP-1 (7-39) e Gly8Arg2ê,34Lys: .40 GLP-1 (7-40) . 23

Numa forma de realização preferida adicional, um peptídeo de origem para um derivado de acordo com a invenção ser seleccionado do grupo composto por:

Arg26-34Lys38GLP-l (7-38) ; Arg26'34Lys39GLP-l (7-39) ; Arg26‘34Lys40GLP-l (7-40); Arg26-34Lys41GLP-l (7-41) ; Arg26'34Lys42GLP-l (7-42) ; Arg26'34

Lys43GLP-l (7-43) ; Arg26'34Lys44GLP-l (7-44); Arg26'34Lys45GLP-l (7-45) ; Arg26‘34Lys38GLP-l (1-38) ; Arg2634Lys39GLP-l (1-39) ; Arg26'4Lys40GLP-1 (1-40) ; Arg26-34Lys41GLP-l (1-41) ; Arg26>34Lys42GLP-l (1-42) ;

Arg26'34Lys43GLP-l (1-43) ; Arg26'34Lys44GLP-l (1-44); Arg28'34Lys45GLP-1(1-45) ; Arg26‘34Lys38GLP-l (2-38) ; Arg26'34Lys39GLP-l (2-39) ;

Arg26'34Lys40GLP-l (2-40) ; Arg26'34Lys41GLP-l (2-41) ; Arg26'34Lys42GLP-1(2-42); Arg26'34Lys43GLP-l (2-43) ; Arg26'34Lys44GLP-l (2-44) ;

Arg26'34Lys45GLP-l (2-45) ; Arg26'34Lys38GLP-l (3-38 ) ; Arg26'34Lys39GLP-1 (3-39) ; Arg26,34Lys40GLP-l (3-40) ; Arg26'34Lys41GLP-l (3-41) ;

Arg26'34Lys42GLP-l (3-42) ; Arg26'34Lys43GLP-l (3-43) ; Arg26'34Lys44GLP-1 (3-44) ; Arg26,34Lys45GLP-l (3-45) ; Arg26'34Lys38GLP-l (4-38) ;

Arg26'34Lys39GLP-l (4-39) ; Arg26‘34Lys40GLP-l (4-40) ; Arg26,34Lys4lGLP-1(4-41); Arg26‘34Lys42GLP-l (4-42) ; Arg26‘34Lys43GLP-l (4-43) ;

Arg26'34Lys44GLP-l (4-44) ; Arg25‘34Lys45GLP-l (4-45) ; Arg26‘34Lys38GLP-1 (5-38) ; Arg26'34Lys39GLP-l (5-39) ; Arg26,34Lys40GLP-l (5-40) ;

Arg26'34Lys41GLP-l (5-41) ; Arg26'34Lys42GLP-l (5-42) ; Arg26'34Lys43GLP-1(5-43); Arg26'34Lys44GLP-l (5-44) ; Arg26’34Lys45GLP-l (5-45) ;

Arg26-34Lys38GLP-l (6-38) ; Arg26‘34Lys39GLP-l (6-39) ; Arg26‘34Lys40GLP-1(6-40); Arg26’34Lys41GLP-l (6-41) ; Arg26,34Lys42GLP-l (6-42) ;

Arg26‘34Lys43GLP-l (6-43) ; Arg26’34Lys44GLP-l (6-44) ; Arg26,34Lys45GLP-1(6-45); Arg26Lys38GLP-l (1-38) ; Arg34Lys38GLP-l (1- 38);

Arg26,34Lys36, 38GLP-l (1-38) ; Arg26Lys38GLP-l (7-38) ; Arg34Lys38GLP-l (7-38); Arg26‘34Lys36,38GLP-l (7-38) ; Arg26'34Lys58GLP-l (7-38) ;

Arg26Lys35GLP-l (1-39) ; Arg34 Lys39GLP-l (1-39) ; Arg25,34Lys36'39GLP- 1(1-39); Arg26Lys39GLP-l (7-39); Arg34Lys39GLP-l (7-39) e

Arg26'34Lys36'39GLP-l (7-39) .

Numa forma de realização preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 onde o peptídeo de origem foi seleccionado do grupo composto por Arg26-GLP-1(7-37),

Arg34-GLP-1 (7-37) , Lys36-GLP-1 (7-37), Arg28,34Lys36-GLP-l (7-37) , Arg26Lys36-GLP-l (7-37), Arg34Lys36-GLP-l (7-37) , Gly8Arg26-GLP-l (7- 37), Gly8Arg34-GLP-l (7-37) , Gly8Lys36-GLP-l (7-37) , Gly8Arg26'34Lys36-GLP-1 (7-37), Gly3Arg26Lys36-GLP-l (7-37) e Gly8Arg34Lys36-GLP-l (7- 37) .

Numa forma de realização adicional preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 onde o peptideo de origem foi seleccionado do grupo composto por Arg^6Lys38-GLP-l (7- 38) , Arg26'34Lys38-GLP-l (7-38), Arg2ê'34Lys36'38-GLP-l (7-38) ,

Gly8Arg26Lys38-GLP-l (7-38) e Gly8Arg26'34 Lys36'38-GLP-1 (7-38 ) .

Numa forma de realização preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 onde o peptideo de origem foi seleccionado do grupo composto por Arg26Lys39-GLP-l (7- 39) , Arg26, 34Lys36,39-GLP-l (7-39) , Gly8Arg26Lys39-GLP-l (7-39) e Gly8Arg26'34Lys36,39-GLP-l (7-39) .

Numa forma de realização preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 onde o peptideo de origem foi seleccionado do grupo composto por Arg34Lys40-GLP-l (7- 40) , Arg26-34Lys36'40-GLP-l (7-40) , Gly8Arg34Lys40-GLP-l (7-40) e Gly8Arg26'34Lys36-40-GLP-l (7-40) .

Numa forma de realização preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 que foi seleccionado do grupo composto por:

Lys26 (Ne-tetradecanoil) -GLP-1 (7-37) ;

Lys44 (NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-37) ;

Lys26,j4-bis (NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-37) ;

Gly8Lys26 (N£-tetradecanoil) -GLP-1 (7-37) ;

Gly8Lys54 (Nfc-tetradecarioil) -GLP-1 (7-37) ;

Gly8Lys‘6,34-bis (Nc-tetradecanoil) -GLP-1 (7-37);

Arg26Lys34 (Ne-tetradecanoil) -GLP-1 (7-37) ; 25

Lys20 (NÊ-tetradecanoil) -GLP-1 (7-38) ;

Lys34 (NÊ-tetradecanoil) -GLP-1 (7-38) ;

LySzo'34-bis (Νε-tetradecanoil) -GLP-1 (7-38) ;

Gly8Lys26 (NÊ-tetradecanoil) -GLP-1 (7-38) ;

Gly8Lys34 (Ns-tetradecanoil) -GLP-1 (7-38) ;

Gly8Lys26'34-bis (Νε-tetradecanoil) -GLP-1 (7-38)

Arg26Lysj4 (Ne-tetradecanoil) -GLP-1 (7-38) ;

Lysz6 (N®-tetradecanoil) -GLP-1 (7-39);

Lys34 (NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-39) ;

Lys26‘3<i-bis (Νε-tetradecanoil) -GLP-1 (7-39) ;

Gly8Lys26 (NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-39) ;

Gly8Lys34 (Ns-tetradecanoil) -GLP-1 (7-39) ;

Gly8Lys26,34-bis (NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-39)

Arg26Lys34 (Nfc-tetradecanoil) -GLP-1 (7-39) ;

Lys26 (NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-40) ;

Lys34 (NÊ-tetradecanoil) -GLP-1 (7-40) ;

Lys26_34-bis (Ne-tetradecanoil) -GLP-1 (7-40) ;

Gly8Lys26 (Ns-tetradecanoil) -GLP-1 (7-40) ;

Gly8Lys34 (Nf'-tetradecanoil) -GLP-1 (7-40) ;

Gly8Lys26,34-bis (Ne-tetradecanoil) -GLP-1 (7-40) ;

Arg26Lys34 (Ne-tetradecanoil) -GLP-1 (7-40) ;

Lys28 (Ns-tetradecanoil) -GLP-1 (7-36) ;

Lys34 (NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-36) ;

Lysz6,34-bis (NÊ-tetradecanoil) -GLP-1 (7-36) ;

Gly8Lys26 (NÊ-tetradecanoil) -GLP-1 (7-36) ;

Gly8Lys34 (NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-36) ;

Gly8Lys2fc,34-bis (NF'~tetradecanoil) -GLP-1 (7-36) ;

Arg2eLys34 (N -tetradecanoil) -GLP-1 (7-36) ;

Lys2a (Ne-tetradecanoil) -GLP-1 (7-35) ;

Lys34 (NÊ-tetradecanoil) -GLP-1 (7-35) ;

Lys2o,34-bis (Νε-tetradecanoil) -GLP-1 ( 7-35) ;

Gly8Lys26 (Ns-tetradecanoil) -GLP-1 (7-35) ; 26

Gly8Lys34 (N£-tetradecanoil) -GLP-1 (7-35) ; Gly8Lys2fc,34-bis (NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-35) ; Arg26Lysj4 (Ne-tetradecanoil) -GLP-1 (7-35) ;

Lys26 (NF-tetradecanoil) -GLP-1 (7-36) amida;

Lys34 (NF'-tetradecanoil) -GLP-1 (7 — 36) amida; Lys"6,34-bis (Ne-tetradecanoil) -GLP-1 (7-36) amida; Giy8Lys2° (N6-tetradecanoil) -GLP-1 (7-36) amida; Gly8Lys34 (N6-tetradecanoil) -GLP-1 (7-36) amida; GlysLys26-34-bis (NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-36) amida; Arg2c,Lys34 (N^-tetradecanoil) -GLP-1 (7-36) amida; Gly8Arg26Lysj4 (Ne-tetradecanoil) -GLP-1 (7-37) ;

Lys20 (NE-tetradecanoil) Arg34-GLP-1 (7-37) ;

Gly8Lys26 (Ns-tetradecanoil) Arg34-GLP-1 (7-37) ; Arg2D‘34LyS36 (Ne-tetradecanoil) -GLP-1 (7-37) ; Gly8Arg2b'j4Lys36(NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-37) ; Gly8Arg26Lys34 (Ne-tetradecanoil) -GLP-1 (7-38) ;

Lysz6 (if-tetradecanoil) Arg34-GLP-1 (7-38) ;

Gly8Lys26 (Ne-tetradecanoil) Arg34-GLP-1 (7-38) ; Arg26,34Lys36 (NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-38); Arg26,34Lys38 (N8-tetradecanoil) -GLP-1 (7-38) ;

Gly8Arg26, 34Lysj6(NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-38) ; Gly8Arg26Lys'í4 (NK-tetradecanoil) -GLP-1 (7-39) ;

Lys26 (NE-tetradecanoil) Arg34-GLP-1 (7-39) ;

Gly8Lysz6 (NE-tetradecanoil) Arg34-GLP-1 (7-39);

Argz6, j4Lys3b (tf-tetradecanoil) -GLP-1 (7-39) ;

Gly8Arg26, j4Lys3D (NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-39) ; Gly8Argz6Lys34 (NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-4 0) ;

Lysz6 (Ne-tetradecanoíl) Argj4-GLP-1 (7-40) ;

Gly8Lys26 (NE-tetradecanoii) Argj4-GLP-1 (7-40) ;

Arg‘6,34 Lys36 (Ne-tetradecanoil) -GLP-1 (7-40); Gly8Arg26'i4Lys56 (Ne-tetradecanoil) -GLP-1 (7-40) ; 27

Lys26 (Nb- (ω-carboxynonadecanoil) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys34 (Νε- (ω-carboxynonadecanoil) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys2c,34-bis (Νε- (ω-carboxinonadecanoil)) -GLP-1 (7-37) ; Gly8Lys26 (Νε-(ω-carboxinonadecanoil))-GLP-1 (7-37); Gly6Lys34 (NÊ- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-37) ; Gly8Lys2t5,34-bis (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-37) ; Lys26 (N8-(ω-carboxinonadecanoil))-GLP-1 (7-38);

Lys34 (N8- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-38) ;

Lys^6'34—biS (N8- (ω-carboxinonadecanoil)) -GLP-1 (7-38) ; Gly8Lys26 (Νε-(ω-carboxinonadecanoil))-GLP-1 (7-38); Gly8Lys34 (Nfc-(ω-carboxinonadecanoil))-GLP-1 (7-38); Gly8Lys26,34~bis (Nc- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-38); Lys26 (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Lys34 (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Lys26, 34-bis (N8- (ω-carboxinonadecanoil)) -GLP-1 (7-39) ; Gly8Lys26 (Νε-(ω-carboxinonadecanoil))-GLP-1 (7-39);

Gly8 Lys34 (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7—39) ; Gly8Lys26,34-bis (Ne- (ω-carboxinonadecanoil)) -GLP-1 (7-39) ; Lys26 (Nb- (ω-carboxinonadecanoil) )-GLP-1 (7-40) ;

Lys34 (N6- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-40) ; Lys26'34-bis (Νε- (ω-carboxinonadecanoil)) -GLP-1 (7-40); Gly8Lys26 (Νε- (o)-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-40) ; Gly8Lys34 (Νε-(ω-carboxinonadecanoil))-GLP-1 (7-40); Gly8Lys/6,34-bis (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-40) ; Lys28 (N8- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-36) ;

Lys34 (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-36);

Lysz6'34 -bis (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-36) ; Gly8Lys,iD (N8- (ω-carboxinonadecanoil)) -GLP-1 (7-36) ; GlysLys34 (N6- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-36) ; GlysLys2D'34-bis (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) -GLP-1 (7-36) ; Lys26 (N6- (o}-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-36) amida; 28

Lys34 (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-36) amida;

Lys26'34-bis (N6- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-36) amida;

Gly8Lys26 (N8-(ω-carboxinonadecanoil))-GLP-1(7-36)amida;

Gly8Lysj4 (Νε-(ω-carboxinonadecanoil))-GLP-1(7-36)amida;

Gly8Lys2o,34-bis (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-36) amida;

Lys28 (N6- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-35) ;

Lys34 (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-35);

Lys26'34-bis (N8- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-35) ;

GlyeLys26 (N8-(ω-carboxinonadecanoil))-GLP-1 (7-35);

Gly8Lys34 (N6-(ω-carboxinonadecanoil))-GLP-1 (7-35);

Gly8Lys26,34 -bis (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-35) ;

Arg26Lys34 (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-37);

Gly8Arg26 Lys34 (Νε-(ω -carboxinonadecanoil)) -GLP-1 (7-37) ;

Lys28 (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) Arg34-GLP-1 (7-37) ;

Gly8Lys26(N8-carboxinonadecanoil) ) Arg34-GLP-1 (7-37) ;

Arg26,34Lys36 (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-37 ) ;

Gly8Arg2o,34Lys36 (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-31)

Arg26Lys34 (Νε- (ω-carboxinonadacanoil) ) -GLP-1 (7-38);

Gly8Arg2oLys34 (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-38 ) ;

Lys26(Ne- (ω-carboxinonadecanoil)) Arg34 -GLP-1 (7-38) ;

Gly3Lys26(Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) Arg34 -GLP-1 (7—38) ;

Arg26,34Lys26 (N6- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-38) ;

Gly6Arg26,34Lys36 (NE- (ω-carboxinonadecanoil) )-GLP-1 (7-38) ;

Arg26Lys34 (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Gly6Arg26Lys44 (N -( -carboxinonadecanoil)) -GLP-1 (7-39) ;

Lys26 (N6- (ω-carboxinonadecanoil)) Arg34-GLP-1 (7-39);

Gly6Lys2° (NE- (ω-carboxinonadecanoil) ) Argj4-GLP-1 (7-39) ;

Arg26'34Lys35 (N6- (ω-carboxínonadecanoil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Gly6Arg26,34Lys36 (Νε (-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Arg26Lys':í4 (N8- (ω-carboxinonadecanoil) )-GLP-1 (7-40) ;

Gly8Arg26Lys"4 (lf'~ (ω-carboxinonadecanoi 1) ) -GLP-1 (7-40) ;

Lys25 (Ne- (ω-carboxinonadecanoil) ) Argj4-GLP-1 (7-40) ; 29

Gly8Lys26(Nb- (ω-carboxínonadecanoil) ) Arg34-GLP-1 (7-40); Arg26,34Lys3e (Νε- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-40) ; Gly8Arg26,'í4Lys38 (Nb~ (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-40) Lys28 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lysj4 (Nb- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys26,34-bis (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-37) ; Gly6Lys20(NE- (7-desoxicoloil) )-GLP-1 (7-37) ;

Gly6Lys34 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-37); Gly8Lys26,34-bis (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-37) ; Arg28Lys34 (Νε-(7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys26 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-38) ;

Lys34 (Νε-(7-desoxicoloil) )-GLP-1 (7-38) ;

Lys26,34-bis (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-38) ;

Gly6Lys26 (Νε-(7-desoxicoloil))-GLP-1 (7-38) ;

Gly8Lys34 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-38) ;

Gly8Lys26, 34-bis (Νε~ (7-desoxicoloil) )-GLP-1 (7-38) ; Arg26Lys34 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-38) ;

Lys26 (Νε- (7-desoxicoloil)) -GLP-1 (7-39) ;

Lys34 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Lys26,34-bis (N6- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Gly8Lys26 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-39) ;

GlyeLys34 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Gly8 Lys26,34-bis (N6- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-39) ; Arg26Lys34 (Νε-(7-desoxicoloil)) -GLP-1 (7-39) ;

Lys26 (Νε- (7-desoxicoloil) }-GLP-1 (7-40) ;

Lys34 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-40) ;

Lyg26,34_bis (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-40);

Gly6Lys26(Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-40) ;

Gly8Lys34 (Nc- (7-desoxícoloíl) ) -GLP-1 (7-40) ;

Gly8Lys26, 34-bis (Νε~ (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-40) ; Argb6Lys34 (Ne- (7-desoxicoloil) } -GLP-1 (7-40); 30

Lys26 (N8- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-36) ;

Lys34 (N8- (7-desoxicoloil) } -GLP-1 (7-36) ;

LyS26'34-bís (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-36) ;

Gly8Lys26 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-36) ;

Gly8Lys34 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-36) ;

Gly8Lys26, 34-bis (N8- (7-desoxicoloil)} -GLP-1 (7-36) ; Arg26Lysj4 (N8- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-36) ;

Lys26 (Νε- (7-desoxicoloil)) -GLP-1 (7-35) ;

Lys34 (NK- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-35) ;

Lys26, 34-bis (Nc- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7—35) ;

Gly8Lys26 (Νε- (7-desoxicoloil)) -GLP-1 (7-35) ;

Gly8Lys34 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-35) ; Gly8Lys26,34-bis (N8- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-35) ; Arg26Lys34 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-35) ;

Lys26 (N8-(7-desoxicoloil))-GLP-1(7-36)amida;

Lys34 (N8- (7-desoxicoloil)) -GLP-1 (7-36) amida;

Lys26, 34-bis (N6- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-36) amida; Gly8Lys26(Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-36) amida; Gly8Lys34 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-36) amida; Gly9Lys26,34-bis (N8- (7-desoxicoloil)) -GLP-1 (7-36) amida; Arg26Lys34 (N8- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-36) amida; Gly8Arg26Lys34 (N8- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys^6 (N8- (7-desoxicoloil) ) Arg34-GLP-1 (7-37) ;

Gly8Lys26 (Νε- (7-desoxicoloil) ) Arg34-GLP-1 (7-37) ;

Arg26, j4Lys36 (NE- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-37 ) ; Gly8Arg26,34Lys36 (Ne- (7-desoxicoloil) )-GLP-1 (7-37) ; Lvs26 (N8- (coloil) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys34 (N8- (coloil) ) -GLP-1 (7-37);

Lys26'34 -bis (Νε-(coloil))-GLP-1 (7-37) ;

Gly8Lys26(Ne- (coloil) ) -GLP-1 (7-37) ;

Gly8Lys34 (Ne- (coloil) ) -GLP-1 (7-37) ; 31

Gly8Lys26, 34-bis (Νε- (coloíl) ) -GLP-1 (7-37) ;

Arg26Lys34 (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-37) ;

Gly8Arg<:6Lysj4 (Ne- (7-desoxicoloíl) ) -GLP-1

Lys26 (Νε- (7-desoxicoloil) ) Argj4 -GLP-1 (7-

GlysLys26 (Νε- (7-desoxicoloil) ) Arg34 -GLP-1

Arg26'j4Lys35(Ne- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7

Arg26,j4Lys38 (NE- (7-desoxicoloil) )-GLP-1 (7

Gly8Arg2e,34Lys3êNE- (7-desoxicoloil)) -GLP-1

Lys26 (Ns- (coloil) ) -GLP-1 (7-38) ;

Lys34 (Νε-(coloil) )-GLP-1 (7-38) ;

Lys26, 34-bis (Ns- (coloil) ) -GLP-1 (7-38) ;

Gly8Lys26(Ne- (coloil) ) -GLP-1 (7-38) ;

Gly8Lys34(Ne-(coloil) )-GLP-1 (7-38) ;

Gly8Lys26'34-bis (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-38) ;

Arg2êLys34 (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-38) ;

Gly8Argz6Lys34 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1

Lys26 (Νε- (7-desoxícoloil) ) Arg34 -GLP-1 (7-3

Gly8Lys2°(Ne- (7-desoxicoloil)) Arg34 -GLP-1

Arg26, 34LyS36 (N - (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (7-

Gly8Arg26'34Lys36 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-'

Lys26(Nc- (coloil)) -GLP-1 (7-39) ;

Lys34 (N6-(coloil) )-GLP-1 (7-39) ;

Lys26'j4-bis (Ne- (coloil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Gly8Lys26 (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Gly8Lys34 (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Gly8Lys26, 34-bis (Nc- (coloil) )-GLP-1 (7-39) ;

Arg26Lys34 (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Gly8Arg26Lysií (Nf- (7-desoxicoloíl) ) -GLP-1 (7

Lys26 (lf~ (7-desoxicoloíl)) Arg34 -GLP-1 ¢7-4(

Gly8Lys2° (Nc- (7-desoxicoloil)) Arg34 -GLP-1

Arg26, 34Lys36 (Νε- (7-desoxicoloil) ) -GLP-1 (Ί

Gly8Arg26'34 Lys36 (Νε- (7-desoxícoloil) ) -GLP 32 (7-38); 38) ; (7-38); -38;; -38) ; (7-38); (7-39); 9) ? (7-39); •39) ; L(7-39); ' - 4 0) ; 3) ; (7-40); -40) ; -1 (7-40)

Lys26 (N8- (coloil) ) -GLP-1 (7-40) ;

Lys34 (tf- (coloil) )-GLP-1 (7-40) ;

Lys26'34-bis (N8- (coloil) ) -GLP-1 (7-40) ;

GlysLys2€ (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-40) ;

Gly8Lys34 (Νε- (coloil) )-GLP-1 (7-40) ; Gly8Lys26,34-bís (N8- (coloil) ) -GLP-1 (7-40) ; Arg26Lys34(N8- (coloil) ) -GLP-1 (7-40) ;

Lys26 (N8-(coloil) )-GLP-1 (7-36) ;

Lys34 (Νε-(coloil) ) -GLP-1 (7-36) ;

Lys2Ê'34-bis (Nc- (coloil) ) -GLP-1 (7-36) ; Gly8Lys26(N6-(coloil) )-GLP-1 (7-36) ;

GlyeLys34 (Ne- (coloil) ) -GLP-1 (7-36) ;

Gly8 Lys26'34 -bis (tf-(coloil) )-GLP-1 (7-36) ; Arg26Lys34 (N8- (coloil) ) -GLP-1 (7-36) ;

Lys25 (Νε-(coloil) ) -GLP-1 (7-35) ;

Lys34 (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-35) ;

Lys26'34-bis (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-35) ;

Gly8Lys28 (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-35) ; Gly8Lys34(Ne-(coloil) )-GLP-1 (7-35) ; Gly8Lys26,34-bis (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-35) ; Arg26Lys34 (Νε-(coloil))-GLP-1 (7-35) ;

Lys26 (NK- (coloil) ) -GLP-1 (7-36) amida;

Lys34 (tf - (coloil) ) -GLP-1 (7-36) amida; Lys"e'34-bis (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-36) amida; GlysLys26 (tf - (coloil) ) -GLP-1 (7-36) amida; GlyBLysi4 (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-36) amida; Gly8Lys26'34-bis (tf- (coloil)) -GLP-1 (7-36) amida; Arg2oLys‘54 (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-36) amida; GlyfArg^Lys34 (N8- (coloil) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys2° (N8- (coloil) )Argj4-GLP-l (7-37)

GlysLys26 (tf - (coloil) )Arg34 -GLP-1 (7-37) ; 33

Arg26'34Lys36 (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-37) ; Gly8ArgZ6'34Lys36 (Νε- (coloil} ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys26 (Νε- (litocoloil) )-GLP-1 (7-37 ) ;

Lys34 (N8- (litocoloil) )-GLP-1 (7-37) ;

Lys26, 34-bis (N6- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-37) ; Gly8Lys26 (Νε- (litocoloil)) -GLP-1 (7-37) ; GlysLys34 (Νε-(litocoloil) )-GLP-1 (7-37) ; Gly8Lys26'34-bís (Νε- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-37) ; Arg26Lys34 (Νε- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-37) ; Gly8Arg26Lys34 (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-38) ;

Lys26 (N6- (coloil) )Arg34-GLP-l (7-38) ; Gly6Lys2ê(Ne- (coloil) )Arg3' -GLP-1 (7-38) ; Arg26'34Lys36(Ne- (coloil)) -GLP-1 (7-38) ;

Arg26, 34Lys38 (Ns- (coloil) ) -GLP-1 (7-38) ; Gly8Arg2É,34Lys36 (NB- (coloil)) -GLP-1 (7-38) ; Lys26 (Νε- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-38) ;

Lys34 (Νε-(litocoloil) )-GLP-1 (7-38) ;

Lys26'34—bis (Νε- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-38) ; Gly8Lys26 (Νε- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-38) ; Gly8Lys34(Nc-(litocoloil) ) -GLP-1 (7-38) ; Gly8Lys26'34-bis (N6- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-38) ; Arg2êLys34 (Νε- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-38) ; Gly8Arg26Lys34 (Ns- (coloil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Lys26 (Νε-(coloil) ) Arg34-GLP-1 (7-39) ; Gly8Lys26(NF- (coloil) )Arg34-GLP-l (7-39) ;

Arg26, 34Lys36 (N6- (coloil) ) -GLP-1 (7-39) ; Gly8Arg26,34Lys36 (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Lys26 (Νε-(litocoloil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Lys34 (N6- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-39) ; l,ys26'34-bis (Ne-(litocoloil)) -GLP-1 (7-39) ; Gly8Lys26 (Ne-(litocoloil) )-GLP-1 (7-39) ; 34

Gly8Lys34 (NK- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Gly8 Lys26'34 bis(N6- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-39) ; Arg26Lys34 (Ne- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-39) ; Gly8Arg26Lys34 (Νε- (coloil) ) -GLP-1 (7-40) ;

Lys26 (Νε- (coloil) ) Arg34-GLP-1 (7-40) ;

Gly8Lys26 (N8- (coloil)) Arg34-GLP-1 (7-40) ; Arg26'34Lys36(N8- (coloil) )-GLP-1 (7-40) ; Gly8Arg26,34Lys3ê (Νε- (coloil) )-GLP-1 (7-40) ;

Lys26 (Nb- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-40) ;

Lys34 (Νε- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-40) ;

Lys26, 34-bis (Νε- (litocoloil) )-GLP-1 (7-40) ; Gly8Lys26 (Νε- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-40) ; Gly8Lys34 (N8- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-40) ; Gly8Lys26,34-bis (Νε- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-40) ; Arg26Lys34 (N8- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys26 (N8- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-36) ;

Lys34 (Nfc- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-36) ;

Lys26, 34-bis (N8- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-36) ; Gly8Lys2ê (N8- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-36) ;

Gly8Lys3<1 (N8- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-36);

Gly8 Lys26,34-bis (N8-(litocoloil) )-GLP-1 (7-36); Arg26Lys34 (N8- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-36) ;

Lys26 (N8- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-35) ;

Lys34 (N8- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-35) ;

Lys2o,34-bis (Nfc- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-35) ; Gly8Lys26(Ne- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-35) ; Gly8Lys34 (N - (litocoloil) ) -GLP-1 (7-35); Gly8Lys26,34-bís (N - (litocoloil) ) -GLP-1 (7-35); Arg2oLysj4 (N -(litocoloil)}-GLP-1 (7-35);

Lys26 (N8- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-36) amida;

Lys34 (N8- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-36) amida;

Lys26'j4-bis (Nc- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-36) amida; 35

Gly8Lys26 (Νε- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-36) amida;

Gly8 Lysj4 (Νε- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-36) amida;

Gly8 Lys26,j4 -bis (Νε- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-36) amída;

Arg2bLys34 (Nfc- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-36) amida;

Gly8Arg26Lys34 (Nc- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys26 (N6- (litocoloil) ) Argj4-GLP-1 (7-37) ;

Gly8Lys26 (N8- (litocoloil) ) Arg34-GLP-1 (7-37) ;

Arg26,34Lys3° (Νε- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-37 ) ;

Arg26'34Lys38 (Νε-(litocoloil) )-GLP-1 (7-37) ;

Gly8Arg26, 34Lys36 (NE- (litocoloil)) -GLP-1 (7-37) ;

GlyeArg26Lys34(NE- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-38) ;

Lys26 (Νε- (litocoloil) ) Arg34 -GLP-1 (7-38) ;

Gly8 Lys26 (Νε- (litocoloil))Arg34-GLP-1 (7-38) ;

Arg26'34Lys36(Ne- (litocoloil) )-GLP-1 (7-38 ) ;

Arg26'34Lys38(NE-(litocoloil) )-GLP-1 (7-38 ) ;

Gly8Arg26,34Lys36 (Νε- (litocoloil)) -GLP-1 (7-38) ;

Gly8Arg26Lys34(NE-(litocoloil) )-GLP-1 (7-39) ;

Lys26(Νε-(litocoloil) )Arg34-GLP-l (7-39) ;

Gly8Lys26 (Νε- (litocoloil) )Arg34-GLP-l (7-39) ;

Arg26'34Lys36(NE-(litocoloil) )-GLP-1 (7-39) ;

Gly8Arg26,34Lys36 (Ν’ - (litocoloil) ) -GLP-1 (7-39) ;

Gly8Arg26Lys34 (N - (litocoloil) ) -GLP-1 (7-40) ;

Lys26 (Ne- (litocoloil) ) Arg34-GLP-1 (7-40) ;

Gly8Lys26 (Νε- (litocoloil) ) Arg34-GLP-1 (7-40) ;

Arg26'34Lys35(NE- (litocoloil) ) -GLP-1 (7-40) y Gly8Arg26·34 Lys36 (Νε- (litocoloil)) -GLP-1 (7-40) .

Numa forma de realização preferida adicionai, a presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica que compreende um derivado de GLP-1 e um veiculo ou portador aceite na Indústria Farmacêutica. 36

Numa forma de realização preferida adicional, a presente invenção refere-se ao uso de um derivado de GLP-1 de acordo com a invenção para a preparação de um medicamento com um perfil de acção prolongada em relação à GLP-1 (7-37).

Numa forma de realização preferida adicional, a presente invenção refere-se ao uso de um derivado de GLP-1 de acordo com a invenção para a preparação de um medicamento com efeito prolongado para o tratamento da diabetes mellítus não insulino-dependente.

Numa forma de realização preferida adicional, a presente invenção refere-se ao uso de um derivado de GLP-1 de acordo com a invenção para a preparação de um medicamento com efeito prolongado para o tratamento da diabetes mellítus insulino-dependente.

Numa forma de realização preferida adicional, a presente invenção refere-se ao uso de um derivado de GLP-1 de acordo com a invenção para a preparação de um medicamento com efeito prolongado para o tratamento da obesidade.

Numa forma de realização preferida adicional, a presente invenção refere-se a um método de tratamento da diabetes mellítus insulino-dependente ou da diabetes não ínsulino-dependente num doente com necessidade deste tratamento, compreendendo a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um derivado de GLP-1 de acordo com a reivindicação 1 em conjunto com um portador aceite na Indústria Farmacêutica.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Para obter um perfil prolongado de acção satisfatória do derivado de GLP-1, o substituínte lipofílico ligado à fracção de GLP-1 preferencialmente compreende 4-40 átomos de carbono, em 37 particular 8-25 átomos de carbono. 0 substituinte lipofílico pode ser ligado a um grupo amino da fracção de GLP-1 por meio de um grupo carboxilo do substituinte lipofílico que forma uma ligação amida com um grupo amino do resíduo do aminoácido ao qual é ligado. Alternativamente, o substituinte lipofílico pode ser ligado ao dito resíduo de aminoácido de forma a que um grupo amino do substituinte lipofílico forme uma ligação amida com um grupo carboxilo do resíduo de aminoácido. Como outra opção, o substituinte lipofílico pode ser ligado à fracção de GLP-1 via uma ligação de éster. Formalmente, o éster pode formado por reacção entre um grupo carboxilo da fracção de GLP-1 e um grupo hidroxilo do substituinte a ser obtido ou por reacção entre um grupo hidroxilo da fracção de GLP-1 e um grupo carboxilo do substituinte a ser obtido. Como outra alternativa, o substituinte lipofílico pode ser um grupo alquilo que é introduzido num grupo amino primário da fracção de GLP-1.

Numa forma de realização preferida da invenção, o substituinte lipofílico é ligado à fracção de GLP-1 por meio de um separador de maneira a que um grupo carboxilo do separador forme uma ligação amida com um grupo amino da fracção de GLP-1. Os exemplos de separadores adequados são o ácido succínico, Lys, Glu ou Asp, ou um dipeptídeo como Gly-Lys. Quando o separador é o ácido succínico, um seu grupo carboxilo pode formar uma ligação amida com um grupo amino do resíduo de aminoácido, e o outro seu grupo carboxilo pode formar uma ligação amida com um grupo amino do substituinte lipofílico. Quando o separador é Lys, Glu ou Asp, o seu grupo carboxilo pode formar uma ligação amida com um grupo amino do resíduo de aminoácido, e o seu grupo amino pode formar uma ligação amida com um grupo carboxilo do substituinte lipofílico. Quando Lys é utilizado como separador, nalguns casos outro separador pode ser inserido entre o grupo ε-amino de Lys e o substituinte lipofílico. Numa forma de realização preferida, este separador adicional é ácido succínico que forma uma ligação amidao com o grupo ε-amino de Lys e com um 38 grupo amino presente no substituinte lipofílíco. Noutra forma de realização preferida este separador adicional é Glu ou Asp que forma uma ligação amida com o grupo ε-amino de Lys e outra ligação amida com um grupo carboxilo presente no substituinte lipofílíco, ou seja, o substituinte lipofílíco é um resíduo de lisina N®-acilado.

Noutra forma de realização preferida da presente invenção, o substituinte lipofílíco tem um grupo que pode ser negativamente carregado. Um grupo preferido que pode ser negativamente carregado é um grupo de ácido carboxílíco. 0 peptídeo de origem pode ser produzido por um método que compreende a cultura de uma célula hospedeira que contém uma sequência de ADN que codifica o polipeptídeo e que é capaz de expressar o polipeptídeo num meio nutriente adequado sob condições que permitam a expressão do peptídeo, após o que o peptídeo resultante é recuperado da cultura. 0 meio utilizado para cultivar as células pode ser qualquer meio convencional adequado para o crescimento das células hospedeiras, como meios mínimos ou complexos que contenham os suplementos apropriados. Os meios adequados estão disponíveis por fornecedores comerciais ou podem ser preparados de acordo com as receitas publicadas (por exemplo nos catálogos da American Type Culture Collection). 0 peptídeo produzido pelas células pode seguidamente ser recuperado do meio de cultura por procedimentos convencionais que incluem a separação das células hospedeiras do meio por centrifugação ou filtração, precipitação dos componentes proteicos do sobrenadante ou filtração por meio de um sal, por exemplo sulfato de amónio, purificação por uma variedade de procedimentos cromatográficos, por exemplo cromatografia de troca iónica, cromatografia de filtração em gel, cromatografia de afinidade, ou similar, dependendo do tipo de peptídeo em questão. 39 A sequência de ADN que codifica o peptideo de origem pode de maneira adequada ser de origem genómica ou de ADNc, por exemplo obtida preparando uma biblioteca genómica ou de ADNc e seleccionando para sequências de codificação de ADN para todo ou parte do peptideo por hibridação utilizando sondas de oligonucleotídeos sintéticas de acordo com as técnicas Standard (ver, por exemplo, Sambrook, J, Fritsch, EF and Maniatis, T, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor

Laboratory Press, New York, 1989). A sequência de ADN que codifica o peptideo pode também ser preparada sinteticamente por métodos Standard, por exemplo o método da fosfoamidito descrito por Beaucage & Caruthers, Tetrahedron Letters 22 (1981), 1859 -1869, ou o método descrito por Matthes et al., EMBO Journal 3 (1984), 801 - 805. A sequência de ADN também pode ser preparada por reacção em cadeia da polimerase utilizando iniciadores específicos, como o por exemplo descrito no Pedido de Patente norte-americana US 4,683,202 ou Saiki et al., Science 239 (1988), 487 - 491 A sequência de ADN pode ser inserida em qualquer vector o qual pode ser convenientemente submetido a procedimentos de ADN recombinante, e a escolha do vector muitas vezes dependerá da célula hospedeira na qual este tenha de ser introduzido introduza. Assim, o vector pode ser um vector de replicaçâo autónoma, ou seja um vector que existe como uma entidade extracromossómica, cuja replicaçâo é independente de replicaçâo cromossómica por exemplo, um plasmídeo. Alternativamente, o vector pode ser um que, ao ser introduzido numa célula hospedeira, é integrado no genoma da célula hospedeira e replicado em conjunto com o(s) cromossoma(s) no(s) qual tenha sido integrado. O vector é preferencialmente um vector de expressão, no qual, a sequência de ADN que codifica o peptideo está funcionalmente 1igado a segmentos adicionais necessários para a transcrição do ADN, como por exemplo um promotor. 0 promotor pode ser qualquer 40 sequência de ADN que mostre actividade de transcrição na célula hospedeira escolhida e pode ser derivado dos genes que codificam as proteínas homólogas assim como as heterólogas à célula hospedeira. Exemplos de promotores adequados para dirigir a transcrição do ADN que codifica o peptídeo da invenção numa variedade de células hospedeiras, são bem conhecidas na técnica, cf. por exemplo Sambrook et al., supra. A sequência de ADN que codifica o peptídeo no caso de que seja necessário pode também, ser funcionalmente ligada a um terminador adequado, sinais de poliadenilação, sequências potenciadoras da transcrição, e sequências potenciadoras de traslação. 0 vector recombínante da invenção pode ainda compreender uma sequência de ADN que permita que o vector replique na célula hospedeira em questão. 0 vector pode também compreender um marcador seleccionável, por exemplo um gene cujo produto complemente um defeito na célula hospedeira ou um que confira resistência a um medicamento, como por exemplo ampicilina, canamicina, tetraciclína, cloranfenicol, neomicina, higromicina ou metotrexato.

Para dirigir um peptídeo de origem da presente invenção na via secretora das células hospedeiras, uma sequência sinal secretora (também conhecido como uma sequência líder, sequência prepro ou sequência pre) pode ser fornecida no vector recombínante. A sequência de sinal secretor é unida à sequência de ADN que codifica o peptídeo no marco da leitura correcta. As sequências de sinal secretor são habítualmente colocadas 5' em relação à sequência de ADN que codifica o peptídeo. A sequência de sinal secretor pode ser aquela normalmente associada ao peptídeo ou pode proceder de um gene que codifica outra proteína segregada.

Os procedimentos utilizados para ligar as sequências de ADN de codificação deste peptídeo, o promotor e opcionaimente o terminador e/ou a sequência de sinal secretor, respectivamente, 41 e para os inserir nos vectores adequados contendo a informação necessária para a replicação, são bem conhecidos por dos técnicos especializados (cf., por exemplo, Sambrook et al., supra) , A célula hospedeira na que se introduz a sequência de ADN ou o vector recombinante pode ser qualquer célula que seja capaz de produzir o presente peptídeo e inclui bactérias, levedura, fungos e células eucarióticas superiores. Exemplos de células hospedeiras adequadas bem conhecidas e utilizadas na técnica são, sem limitação E. coli, Saccharomyces cerevisiae, ou linhas celulares mamíferas de BHK ou de CHO.

Exemplos de compostos que podem ser úteis como fracções de GLP-1 de acordo com a presente invenção estão descritos no Pedido de Patente Internacional No. WO 87/06941 (The General Hospital Corporation) que se refere a um fragmento de peptídeo que compreende GLP-1(7-37) e seus derivados funcionais e a sua utilização como um agente insulinotrópico.

Outros análogos do GLP-1 estão descritos no Pedido de Patente Internacional No. 90/11296 (The General Hospital Corporation) que se refere a fragmentos de peptídeos que compreendem GLP-1 (7-36) e seus derivados funcionais e que têm uma actívidade insulinotrópica que excede a actividade ínsulinotrópica do GLP-1(1-36) ou GLP-1(1-37) e a sua utilização como agentes insulinotrópicos. O Pedido de Patente Internacional No. 91/11457 (Buckley et al.) descreve análogos dos peptídeos 7-34,7-35,7-36, e 7-37 de GLP-1 activo que de acordo com a presente invenção podem também ser utilizados como fracções de GLP-1. 42

Composições farmacêuticas

As composições farmacêuticas que contém um derivado de GLP-1 de acordo com a presente invenção podem ser administradas parenteralmente a pacientes necessitados deste tipo de tratamento. A administração parenteral pode ser realizada por injecção subcutânea, intramuscular ou intravenosa por meio de uma seringa, opcionalmente uma seringa semelhante a uma caneta. Alternativamente, a administração parenteral pode ser realizada por meio de uma bomba de infusão. Uma opção adicional é uma composição que pode ser um pó ou um líquido para a administração do derivado de GLP-1 em forma de um spray nasal ou pulmonar. Ainda outra opção adicional, os derivados de GLP-1 de acordo com a invenção, podem também ser administrados por via transdérmica, por exemplo com um emplastro, opcionalmente um emplastro iontoforético, ou por meio de transmucosa, por exemplo bucal.

As composições farmacêuticas que contém um derivado de GLP-1 de acordo com a presente invenção podem ser preparadas por técnicas convencionais, por exemplo como o descrito em Remington's Pharmaceutical Sciences, 1985, ou em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th,1995.

Assim, as composições injectáveis do derivado de GLP-1 de acordo com a invenção podem ser preparadas utilizando as técnicas convencionais da Indústria Farmacêutica que envolvem dissolver e misturar os ingredientes como o apropriado para dar o produto final desejado.

De acordo com um procedimento, o derivado de GLP-1 é dissolvido numa quantidade de água que é algo inferior ao volume final da composição a ser preparada. Um agente isotónico, um conservante e um tampão são adicionados conforme o necessário e o valor do PH da solução é ajustado - caso seja necessário - utilizando um ácido, por exemplo o ácido clorídrico, ou uma base, como por exemplo o hidróxido de sódio aquoso conforme o necessário 43

Finalmente, o volume da solução é ajustado com água para dar a concentração desejada dos ingredientes.

Exemplos de agentes isotónicos são o cloreto de sódio, manitol e glicerina.

Exemplos de conservantes são fenol, m-cresol, metil p- hidroxibenzoato e álcool benzílico.

Exemplos de tampões adequados são o acetato de sódio e o fosfato de sódio.

Além dos componentes acima mencionados, as soluções que contêm um derivado de GLP-1 de acordo com a presente invenção podem também conter um agente tensioactivo para melhorar a solubilidade e/ou a estabilidade do derivado de GLP-1.

Uma composição para a administração nasal de certos peptídeos pode, por exemplo, ser preparada como o descrito na Patente Europeia No. 272097 (para Novo Nordisk A/S) ou no Pedido de Patente Internacional WO 93/18785.

De acordo com uma forma preferida de realizar a presente invenção, o derivado de GLP-1 é provido na forma de uma composição adequada para a administração por injecção. Esta composição pode ser uma solução injectável pronta a usar ou pode ser uma quantidade de uma composição sólida, por exemplo, um produto liofilizado, que tem de ser dissolvido num solvente antes de que possa ser injectado. A solução injectável preferencialmente não contém menos de aproximadamente 2 mg/ml, preferencialmente não menos de aproximadamente 5 mg/ml, mais preferencialmente não menos de aproximadamente 10 mg/ml do derivado de GLP-1 e, preferencialmente, não mais de aproximadamente 100 mg/ml do derivado de GLP-1. 44

Os derivados de GLP-1 de acordo com esta invenção podem ser utilizados para o tratamento de várias doenças. 0 derivado de GLP-1 específico a ser utilizado e o nível de dose ideal para qualquer paciente dependerá da doença a ser tratada e de uma variedade de factores incluindo a eficácia do derivado do peptídeo específico empregue, a idade, a massa corporal, a actividade física, e a dieta do paciente, de uma possível combinação com outros medicamentos, e da gravidade do caso.

Recomendados que a dosagem do derivado de GLP-1 de acordo com esta invenção seja determinada pelos técnicos especializados individualmente para cada paciente.

Em particular, é previsível que o derivado de GLP-1 será útil para a preparação de um medicamento com um perfil de acção prolongada para o tratamento da diabetes mellitus não insulino-dependente e/ou para o tratamento da obesidade. A presente invenção é adicionalmente ilustrada pelos seguintes exemplos os quais, no entanto, não devem ser considerados como limitativos do âmbito de protecção. As características expostas na descrição anterior e nos exemplos que se descrevem à continuação podem, tanto separadamente como em qualquer combinação entre eles, ser material para realizar a invenção nas suas diversas formas.

EXEMPLOS

Sao utilizados os seguintes acrónimos para os produtos químicos disponíveis comercialmente: DMF: NMP: EDPA: N,N-dimetílformamida. N-Metil-2-pirrolidona. N-etil-N,N-diisopropilamina. 45 EGTA: Ácido etilenglicol-bis(β-aminoetil éter)-Ν,Ν,Ν', N'- tetraacético. GTP Guanosina 5'-trifosfato. TFA: Ácido trifluoroacético. THF: Tetrahidrofurano

Myr-ONSu: Ácido tetradecanóico 2,5-dioxopirrolidin -1-il éster. Pal-ONSu: Ácido hexadecanóico 2,5-dioxopirrolidin -1-il éster. Ste-ONSu Ácido octadecanóico 2,5-dioxopirrolidin -1-il éster. HOOC-(CH2) 6~C00NSu: Ácido ω-carboxiheptanóico 2,5-dioxopirrolidín-l-il éster. HOOC- (CH2) iq-COONSu : Ácido dioxopirrolidin-l-il éster. ω-carboxiundecanóico 2,5- HOOC- (CH2) 12-COONSu: Ácido dioxopirrolidin-l-il éster. ω-carboxitridecanóico 2,5- HOOC- (CH2) 14-COONSu: Ácido dioxopirrolídín-l-il éster. ω-carboxipentadecanóico 2,5- HOOC- (CH2) 16-COONSu : Ácido dioxopirrolidin-l-il éster. ω-carboxiheptadecanóico 2,5- HOOC- (CH2) i8-C00NSu: Ácido dioxopirrolidin-l-il éster. ω-carboxinonadecanóico 2,5-

Abreviaturas: PDMS: Espectrometria de massas por dessorção de plasma MALDI-MS: Espectrometria de massas por ionização/dessorção laser assistida por matriz HPLC: Cromatografia líquida de alta eficiência amu: Unidades de massa atómica

Analítica

Espectrometria de massas por dessorção de plasma

Preparação da amostra: 46 A amostra é dissolvida em 0.1 % de TFA/EtOH (1:1) a uma concentração de 1 μς/μ1. A solução da amostra (5-10 μΐ) é colocada num marcador de nitrocelulose (Bio-ion AB, Uppsala, Suécia) e deixada adsorver durante 2 minutos na superfície do marcador. O marcador é subsequentemente enxaguado com 2x25 μΐ de TFA a 0.1 % e centrifugado. Finalmente, o marcador de nitrocelulose é colocado num carrossel de marcadores e introduzido no espectrómetro de massas.

Análise de MS: A análise por PDMS foi efectuada utilizando um instrumento de tempo de voo Bio-ion 20 (Bio-ion Nordic AB, Uppsala, Suécia). Foi aplicada uma voltagem de aceleração de 15 kV e os iões moleculares formadas por bombardeio da superfície de nitro celulose com fragmentos de fissão 252-Cf foram acelerados na direcção de um detector de paragem. O espectro do tempo de voo resultante foi calibrado num espectro de massas real utilizando os iões H+ e N0+ a m/z 1 e 30, respectivamente. Os espectros das massas foram geralmente acumulados durante l.OxlO6 eventos de fissão correspondendo a 15-20 minutos. As massas atribuídas resultantes correspondem todas a massas moleculares com média isotrópica. A exactidão de atribuição da massa é geralmente melhor que 0.1 %.

MALDI-HS A análise de MS MALDI-TOF foi efectuada utilizando um instrumento Voyager RP (PerSeptive Biosystems Inc., Framíngham, MA) equipado com extracção retardada e accionado em modo linear. Como matriz foi utilizado o ácido cinâmico alfa-ciano-4-hidroxi, e as atribuições de massa foram baseadas na calibração externa. 47

Exemplo 1 Síntese de Lys2°(Ns-tetradecanoil)-GLP-1(7-37). 0 composto do título foi sintetizado de GLP-1 (7-37). Uma mistura de GLP-1 (7-37) (25 mg, 7.45 μιη), EDPA (26.7 mg, 208 μπι), NMP (520 μΐ) e água (260 μΐ) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de Myr-ONSu (2.5 mg, 7.67 μιη) em NMP (62.5 μΐ) , a mistura da reacçâo foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente e foi deixada em repouso durante 20 minutos. Uma quantidade adicional de Myr-ONSu (2.5 mg, 7.67 μτη) em NMP (62.5 μΐ) foi adicionada e a mistura resultante foi agitada suavemente durante 5 minutos. Após um tempo de reacção total de 40 minutos a reacção foi arrefecida pela a adição de uma solução de glicina (12.5 mg, 166 μτηοΐ) em etanol aquoso a 50% (12.5 ml). O composto do título foi isolado da mistura da reacção por HPLC utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA, rendimento: 1.3 mg (correspondente a 4.9% do rendimento teórico). A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O produto isolado foi analisado por PDMS e foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era 3567.913. Assim o peso molecular resultante é 3566.913 amu (valor teórico: 3565.9 amu). A posição de acilação (Lys26) foi verificada por clivagem enzimática do composto do título com protease V8 de Staphylococcus aureus e a subsequente determinação da massa dos fragmentos de peptídeos por PDMS.

Adicionalmente ao composto do título outros dois derivados de GLP-1 foram isolados da mistura de reacção utilizando a mesma coluna cromatográfica e um gradiente mais baixo (35-38% de acetonitrilo em 60 minutos), ver exemplos 2 e 3. 48

Exemplo 2 Síntese de LysjÍt (Nb-tetradecanoí 1)-GLP-1 (7-37). 0 composto do título foi isolado por HPLC a partir da mistura da reacção descrita no exemplo 1. A análise por PDMS produziu um ião molecular protonado a m/z 3567.7+3. Foi assim descoberto que o peso molecular é 3566.7+3 amu (valor teórico: 3565.9 amu): 0 local de acilação foi determinado com base no modelo de fragmentação.

Exemplo 3 Síntese de Lys26,34-bis (NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-37) . 0 composto do título foi isolado por HPLC a partir da mistura da reacção descrita no exemplo 1. A análise por PDMS produziu um ião molecular protonado a m/z 3778.4+3. Foi assim descoberto que o peso molecular é 3777.4+3 amu (valor teórico: 3776.1 amu).

Exemplo 4 Síntese de Lys/6(tf-tetradecanoil)Arg34-GLP-1 (7-37). 0 composto do título foi sintetizado de Arg34-GLP-1 (7-37) . Uma mistura de Arg34 -GLP-1 (7-37) (5 mg, 1.47 μτη) , EDPA (5.3 mg, 41.1 μπι), NMP (105 μΐ) e água (50 μΐ) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi

adicionada uma solução de Myr-ONSu (0.71 mg, 2.2 μπι) em NMP (17.8 μΐ), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos, à temperatura ambiente e seguidamente esta foi deixada em repouso durante 20 minutos. Após um tempo de reacção total de 30 minutos a reacção foi arrefecida pela a adição de uma solução

de glicina (25 mg, 33.3 μη) em etanol aquoso a 50% (2.5 ml). A mistura da reacção foi purificada por HPLC como o descrito no 49 exemplo 1. A análise PDMS deu um ião molecular protonado a m/z 3594.913. Foi assim descoberto que o peso molecular é 3593.913 amu (valor teórico: 3593.9 amu).

Exemplo 5 Síntese de GlysArgZ0'34Lys36(N6-tetradecanoil)-GLP-1 (7-37), 0 composto do título foi sintetizado de Gly8Arg26, 34Lys36-GLP-l (7-37 que foi adquirido a QCB. Uma mistura de Gly8Arg26'34Lys3o-GLP-1(7-37) (1.3 mg, 0.39 pm), EDPA (1.3 mg, 10 pm), NMP (125 pl) e água (30 pl) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de Myr-ONSu (0.14 mg, 0.44 pm) em NMP (3.6 ml), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 15 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (0.1 mg, 1.33 pm) em etanol aquoso a 50% (10 pl) . A mistura da reacção foi purificada por HPLC, e o composto do título (60 pg, 4%) foi isolado.

Exemplo 6 Síntese de Arg26, 34Lys36 (NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-37) -OH.

Uma mistura de Arg26,34Lys36-GLP-l (7-37)-OH (5.0 mg, 1.477 pmol), EDPA (5.4 mg, 41.78 pmol) , NMP (105 pl) e água (50 pl) foi suavemente durante 5 minutos agitada à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de Myr-ONSu (0.721 mg, 2.215 pmol) em NMP (18 pl) . A mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente e seguidamente esta foi deixada em repouso mais 45 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (2.5 mg, 33.3 pmol) em etanol aquoso a 50% (250 pl) . A mistura da reacção foi purificada por 50 cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. 0 composto do título (1.49 mg, 28 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS.

Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era 3595 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é 3594 ± 3 amu (valor teórico 3594 amu).

Exemplo 7 Síntese de Lys26,34bis (NE-(ω -carboxinonadecanoil)) -GLP-1 (7-37) -OH.

Uma mistura de GLP-1 (7 —37) ~OH (70 mg, 20.85 μιηοΐ), EDPA (75.71 mg, 585.8 pmol), NMP (1.47 ml) e água (700 μΐ) foi suavemente agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC H00C-(CH2) i8~C00NSu (27.44 mg, 62.42 pmol) em NMP (686 μΐ), a mistura da reacçâo foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente esta foi deixada em repouso mais 50 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (34.43 mg, 458.7 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (3.44 ml). A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (8.6 mg, 10 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 4 006 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é 4005 ± 3 amu (valor teórico 4005 amu). 51

Exemplo 8 Síntese de Arg^^Lys"6 (N£- {ω-carboKinonadecanoil) j -GLP-1 {7-36) -OH.

Uma mistura de Arg2o,34Lysj6-GLP-l (7-36) -OH (5.06 mg, 1.52 μπιοί) , EDPA (5.5 mg, 42.58 μπιοί), NMP (106 μΐ) e água (100 μΐ) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC- (0¾) is~ COONSu (1.33 mg, 3.04 μπιοί) em NMP (33.2 μΐ) , a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente esta foi deixada em repouso mais 2.5 horas à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (2.50 mg, 33.34 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (250 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. 0 composto do título (0.46 mg, 8 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3652 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é 3651 ± 3 amu (valor teórico 3651 amu).

Exemplo 9 Síntese de Arq^^Lys^ (N£- (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-38)-OH.

Uma mistura de Arg26, 34Lysj8-GLP-l (7-38) -OH (5.556 mg, 1.57μτηο1), EDPA (5.68 mg, 43.96 μπιοί), NMP (116.6 μΐ) e água (50 μΐ) foi suavemente agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(CH2) is-COONSu (1.38 mg, 3.14 μπιοί) em NMP (34.5 μΐ), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente esta foi deixada em repouso mais 2.5 52 horas à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (2.5 mg, 33.3 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (250 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (0.7 mg, 12 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era 3866 ± 3. Desta maneira, o peso molecular resultante é 3865 ± 3 amu (valor teórico 3865 amu).

Exemplo 10 Síntese de Arg34Lys26 (Ne-(ω-carboxinonadecanoil) )-GLP-1 (7-37)-OH.

Uma mistura de Arg34-GLP-1 (7-37)-OH (5.04 mg, 1.489 μπιοί), EDPA (5.39 mg, 41.70 μπιοί), NMP (105 μΐ) e água (50 μΐ) foi suavemente agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de H00C-(CH2) i8~ COONSu (1.31 mg, 2.97 μπιοί) em NMP (32.8 μΐ), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 30 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (2.46 mg, 32.75 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (246 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 30QSB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (1.2 mg, 22 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3709 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é 3708 1 3 amu (valor teórico 3708 amu). 53

Exemplo 11 Síntese de Arg^Lys26 (NE- (ω-carboxiheptadecanoilj) -GLP-1 (7-37)-OH.

Uma mistura de Arg34-GLP-1 (7-37)-OH (5.8 mg, 1.714 μιτιοί) , EDPA (6.20 mg, 47.99 μιηοΐ), NMP (121.8 μΐ) e água (58 μΐ) foi suavemente agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de H00C-{CH2) i6_ COONSu (2.11 mg, 5.142 μιηοΐ) em NMP (52.8 μΐ), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 2 horas à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (2.83 mg, 37.70 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (283 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrilo/TFA Standard. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (0.81 mg, 13 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3681 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3680 + 3 amu (valor teórico 3680 amu).

Exemplo 12 Síntese de Arg26'3"Lysje (Νε- (ω-carboxiheptadecanoil)) -GLP-1 (7-37)-OH.

Uma mistura de Arg2ê,34Lys36-GLP-l (7-37) -OH (3.51 mg, 1.036 μτηοΐ), EDPA (3.75 mg, 29.03 μιτιοί) , NMP (73.8 μΐ) e água (35 μΐ) foi suavemente agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de H00C- ((¾) ie~ COONSu (1.27 mg, 3.10 μιηοΐ) em NMP (31.8 μΐ), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 2 horas e 54 10 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (1.71 mg, 22.79 μιηοΐ) em etanol aquoso a 50% (171 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrilo/TFA Standard. A coluna foi aquecida a 65°fC e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (0.8 mg, 21 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3682 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3681 ± 3 amu (valor teórico 3681 amu).

Exemplo 13 Síntese de Arg26,34Lys38 (Ne- (ω-carboxiheptadecanoil) ) -GLP-1 (7-38)-OH.

Uma mistura de Arg26,34Lys38-GLP-l (7-38)-OH (5.168 mg, 1.459 μιηοΐ), EDPA (5.28 mg, 40.85 μπιοί), NMP (108.6 μΐ) e água (51.8 μΐ) foi suavemente agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de H00C-(0¾) íe-COONSu (1.80 mg, 4.37 μπιοί) em NMP (45 μΐ), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 2 horas e 15 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (2.41 mg, 32.09 μιηοΐ) em etanol aquoso a 50% (241 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrilo/TFA Standard. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. 0 composto do título (0.8 mg, 14 I) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3838 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3837 ± 3 amu (valor teórico 3837 amu). 55

Exemplo 14 Síntese de Arg^^Lys36 (Ns- (ω-carboxiheptadecanoil) ) -GLP-1 (7-36) -OH.

Uma mistura de Arg26'34Lys38-GLP-l (7-36) -OH (24.44 mg, 7.34 μπιοί), EDPA (26.56 mg, 205.52 μπιοί), NMP (513 μΐ) e água (244.4 μΐ) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de H00C-(0¾) ie~ COONSu (9.06 mg, 22.02 μπιοί) em NMP (1.21 ml), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 30 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (12.12 mg, 161.48 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (1.21 ml). A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrilo/TFA Standard. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foide 0-100% em 60 minutos. 0 composto do título (7.5 mg, 28 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3625 + 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3624 ± 3 amu (valor teórico 3624 amu).

Exemplo 15 Síntese de Arg26, j4Lys36 (Ne- (ω-carboxiundecanoil) ) -GLP-1 (7-37) -OH.

Uma mistura de Arg26,34Lys36-GLP-l (7-37) -OH (4.2 mg, 1.24 μπιοί) , EDPA (4.49 mg, 34.72 μιηοΐ) , NMP (88.2 μΐ) e água (42 μΐ) foi suavemente agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de H00C-(CH2) io~ COONSu (1.21 mg, 3.72 μπιοί) em NMP (30.25 μΐ), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 40 minutos 56 à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (2.04 mg, 27.28 pmol) em etanol aquoso a 50% (204 μ!) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. 0 composto do titulo (0.8 mg, 18 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3598 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3597 ± 3 amu (valor teórico 3597 amu).

Exemplo 16 Síntese de Arq26'~4Lys38 (Ns- (ω-carboxiundecanoil) ) -GLP-1 (7-38) -OH.

Uma mistura de Arg26,34Lys38-GLP-l (7-38)-OH (5.168 mg, 1.46 μιηοΐ), EDPA (5,28 mg, 40.88 μιηοΐ), NMP (108.6 μΐ) e água (51.7 μΐ) foi suavemente agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(0¾) io~ COONSu (1.43 mg, 4.38 μιηοΐ) em NMP (35.8 μΐ), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 50 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (2.41 mg, 32.12 pmol) em etanol aquoso a 50% (241 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. 0 composto do título (0.85 mg, 16 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3753 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3752 ± 3 amu (valor teórico 3752 amu). 57

Exemplo 17 Síntese de Lys26, 34bis (NE- (ω-carboxiundecanoíl) ) -GLP-1 (7-37) -OH.

Uma mistura de GLP-1 (7-37) -OH (10.0 mg, 2.98 μιηοΐ), EDPA (10.8 mg, 83.43 μιηοΐ) , NMP (210 μΐ) e água (100 μΐ) foi suavemente agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC- ¢0¾) io-COONSu (2.92 mg, 8.94 μπιοί) em NMP ( 73 μΐ) , a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 50 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (4.92 mg, 65.56 μιηοΐ) em etanol aquoso a 50% (492 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. 0 composto do título (1.0 mg, 9 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3781 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3780 ± 3 amu (valor teórico 3780amu).

Exemplo 18 Síntese de Argz6,34Lys36 (Ne- (ω-carboxiundecanoil) ) -GLP-1 (7-36) -OH.

Uma mistura de Arg26'j4Lysá6-GLP-l (7-3 6)-OH (15.04 mg, 4.52 μπιοί), EDPA (16.35 mg, 126.56 μπιοί) , NMP (315.8 μΐ) e água (150.4 μΐ) foi suavemente agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC- (CH2) lo-COONSu (4.44 mg, 13.56 μπιοί) em NMP (111 μΐ), a mistura da reacção foi agitada suavemente durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 58 40 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (7.5 mg, 99.44 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (750 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (3.45 mg, 22 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3540 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3539 ± 3 amu (valor teórico 3539 amu).

Exemplo 19 Síntese de Arg34Lys26 (Ne-(ω-carboxiundecanoil) )-GLP-1 (7-37)-OH.

Uma mistura de Arg34-GLP-1 (7-37)-OH (5.87 mg, 1.73 μπιοί), EDPA (6.27 mg, 48.57 μπιοί), NMP (123.3 μΐ) e água (58.7 μΐ) foi suavemente agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC- (0¾) io~ COONSu (1.70 mg, 5.20 μπιοί) em NMP (42.5 μΐ), a mistura da reacção foi agitada suavemente durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 40 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (2.86 mg, 286 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (286 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (1.27 mg, 20 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3597 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3596 ± 3 amu (valor teórico 3596 amu). 59

Exemplo 20 Síntese de Arg34Lys26 (Ne- (ω-carboxiheptanoil) ) -GLP-1 (7-37) -OH.

Uma mistura de Arg34-GLP-1 (7-37) -OH (4.472 mg, 1.32 μπιοί) , EDPA (4.78 mg, 36.96 μπιοί) , NMP (94 μΐ) e água (44.8 μΐ) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de H00C-(CH2) e-COONSu (1.07 mg, 3.96 μπιοί) em NMP (26.8 μΐ) , a mistura da reacção foi agitada suavemente durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 1 hora e 50 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (2.18 mg, 29.04 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (218 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. 0 composto do título (0.5 mg, 11 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3540 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3539 ± 3 amu (valor teórico 3539 amu).

Exemplo 21 Síntese de Arg2fc,34LyS38 (Νε- (ω-carboxiheptanoil)) -GLP-1 (7-38) -OH.

Uma mistura de Arg^6'34Lys3B-GLP-l (7-38)-OH (5.168 mg, 1.459 μπιοί), EDPA (5.28 mg, 40.85 μπιοί), NMP (108.6 μΐ) e água (51.6 μΐ) foi suavemente agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(CH2)6~ COONSu (1.18 mg, 4.37 μπιοί) em NMP (29.5 μΐ), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 1 hora e 50 60 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (2.40 mg, 32.09 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (240 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65QC e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. 0 composto do título (0.5 mg, 9 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3697 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3695 ± 3 amu (valor teórico 3695 amu).

Exemplo 22 Síntese de Arg26,34Lys36 (Ne-((o-carboxiheptanoil) )-GLP-1 (7-37)-OH.

Uma mistura de Arg2Ê,34Lys36-GLP-l (7-37)-OH (5.00 mg, 1.47 μπιοί), EDPA (5.32 mg, 41.16 μπιοί), NMP (105 μΐ) e água (50 μΐ) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(CH2)6_ COONSu (1.19 mg, 4.41 μπιοί) em NMP (29.8 μΐ), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 2 horas à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (2.42 mg, 32.34 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (242 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (0.78 mg, 15 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3542 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3541 ± 3 amu (valor teórico 3541 amu). 61

Exemplo 23 Síntese Arg28,34Lysj6 (NE- (ω-carboxiheptanoil) ) -GLP-1 (7-36) -OH.

Uma mistura de Arg26'j4Lys3ê-GLP-l (7-36) -OH (5.00 mg, 1.50 μπιοί) , EDPA (5.44 mg, 42.08 μιηοΐ), NMP (210 μΐ) e água (50 μΐ) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC- (0¾) e-COONSu (1.22 mg, 4.5 μιηοΐ) em NMP (30.5 μΐ), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 2 horas à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (2.47 mg, 33.0 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (247 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (0.71 mg, 14 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3484 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3483 ± 3 amu (valor teórico 3483 amu).

Exemplo 24 Síntese de Lys26f34bis (Νε- (ω-carboxiheptanoil)) -GLP-1 (7-37) -OH.

Uma mistura de GLP-1 (7-37} -OH (10 mg, 2.5 μπιοί) , EDPA (10.8 mg, 83.56 μπιοί), NMP (210 μΐ) e água (100 μΐ) foi suavemente agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC- (CH2) 6-COQNSu (2.42 mg, 8.92 μπιοί) em NMP (60.5 μΐ), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguídamente foi deixada em repouso mais 2 horas e 35 minutos à temperatura 62 ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (4.92 mg, 65.54 μπιοί) em etanol aquoso ao 50% (492 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (2.16 mg, 241) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3669 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3668 ± 3 amu (valor teórico 3668 amu).

Exemplo 25 Síntese de Arg34Lysz6 (NE- (co-carboxipentadecanoil)) -GLP-1 (7-37) -OH.

Uma mistura de Arg34-GLP-1 (7-37) -OH (4.472 mg, 1.321 μπιοί), EDPA (4.78 mg, 36.99 μπιοί), NMP (93.9 μΐ) e água (44.7 μΐ) foi suavemente agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(CH2) 14-COONSu (1.519 mg, 3.963 μπιοί) em NMP (38 μΐ), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 1 hora à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (2.18 mg, 2 9.06 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (218 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (0.58 mg, 12 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3654 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3653 ± 3 amu (valor teórico 3653 amu). 63

Exemplo 26 Síntese de Argz6,34Lys3i:> (Ne- (ω-carboxiheptanoil)) -GLP-1 (7-36) -OH.

Uma mistura de Arg26‘34Lys36-GLP-l (7-36)-OH (5.00 mg, 1.50 μπιοί), EDPA (5.44 mg, 42.08 μπιοί), NMP (210 μΐ) e água (50 μΐ) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de K00C-(CH2) 14-COONSu (1.72 mg, 4.5 μιηοΐ) em NMP (43 μΐ) , a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 1 hora à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (2.48 mg, 33 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (248 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e 0 gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. 0 composto do título (0.58 mg, 11 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3596 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3595 ± 3 amu (valor teórico 3595 amu).

Exemplo 27 Síntese do ácido litocólico 2,5-dioxo-pirrolidin-l-il éster. À mistura do ácido litocólico (5.44 g, 14.34 mmol), M- hidroxisuccinimida (1.78 g, 15.0 mmol), THF anidro (120 ml) e acetonitrilo anidro (30 ml), mantida a 10°C, foi adicionada uma solução de N,N'-diciclohexilcarbodiimida (3.44 g, 16.67 mmol) em THF anidro. A mistura da reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em diclorometano (450 ml) , lavado com uma solução aquosa de Na2C03 a 10% (2x150 ml) e água (2x150 ml), e seca (MgS04) . Este foi filtrado e o produto filtrado foi 64 concentrado a vácuo para dar um resíduo cristalino. 0 resíduo foi recristalizado a partir de uma mistura de diclorometano (30 ml) e n-heptano (30 ml para dar o composto do título (3.46 g. 51 %) como um sólido cristalino.

Exemplo 28 Síntese de Argj4Lys26 (Ne-litocolil) -GLP-1 (7-37) -OH.

Uma mistura de Arg34-GLP-1 (7-37)-OH (4.472 mg, 1.32 pmol), EDPA (4.78 mg, 36.96 μπιοί), NMP (94 μΐ) e água (44.8 μΐ) foi agitada suavemente durante 10 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de ácido litocólico 2,5-dioxo-pirrolidin-l-il éster (1.87 mg, 3.96 μπιοί) em NMP (46.8 μΐ), a mistura da reacção foi agitada suavemente durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 1 hora à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicína (2.18 mg, 29.04 μιηοΐ) em etanol aquoso a 501 (218 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. 0 composto do título (1.25 mg, 25%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3744 +- 3. Assim, o peso molecular resultante é 3743 +- 3 amu (valor teórico 3743 amu).

Exemplo 28 Síntese de Ntt-Tetradecanoil-Glu (ONSu) -OBu*1. A uma suspensão de H-Glu (OH) -OBut (2.5 g, 12.3 mmol) , DMF (283 ml) e EDPA (1.58 g, 12.3 mmol) foi adicionada gota a gota uma solução de Myr-ONSu (4.0 g, 12.3 mmol) em DMF (59 ml). A mistura 65 da reacção foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente e seguidamente concentrada a vácuo até um volume total de 20 ml. O resíduo foi divido entre ácido cítrico aquoso a 5% (250 ml) e acetato de etilo (150 ml), e as fases foram separadas. A fase orgânica foi concentrada e o resíduo dissolvido em DMF (40 ml). A solução resultante foi adicionada gota a gota a uma solução aquosa de ácido cítrico a 10% (300 ml) mantida a 0°C. O composto precipitado foi recolhido e lavado com água gelada e seco num forno de secagem a vácuo. O composto seco foi dissolvido em DMF (23 ml) e foi adicionado HONSu (1.5 g, 13 mmol) . À mistura resultante foi adicionada uma solução de N,N'~ diciclohexilcarbodiimida (2.44 g, 11.9 mmol) em diclorometano (47 ml). A mistura da reacção foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente, e o composto precipitado foi filtrado. O precipitado foi recristalizado de n-heptano/2-propanol para dar o composto do titulo (3.03 g, 50%).

Exemplo 30 Síntese de Glu22,23,30Arg26,34Lysj8 (Ne- (γ-glutamil (Na-tetradecanoil)) ) -GLP-1(7-38)-OH.

Uma mistura de Glu22'2j'30Arg26,34Lys38-GLP-l (7-38) -OH (1.0 mg, 0.272 μπιοί) , EDPA (0.98 mg, 7.62 μπιοί) , NMP (70 μΐ) e água (70 μΐ) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante fo adicionada uma solução de Na-

Tetradecanoil-Glu(ONSu)-OBu2, preparada como o descrito no exemplo 29, (0.41 mg, 0.816 μπιοί} em NMP (10.4 μΐ) , a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 45 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glícina (0.448 mg, 5.98 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (45 μΐ) . Foi adicionada uma solução aquosa de acetato de amónio a 0.5 I (0.9 ml), e a mistura resultante foi imobilizada num cartucho Varian 500 mg 08 Mega Bond Elut®, o composto 66 imobilizado foi lavado com acetonitrilo aquoso a 5% (10 ml), e finalmente libertado do cartucho por eluição com TFA (10 ml). O eluido foi concentrado a vácuo, e a mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (0.35 mg, 32 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 4012 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 4011 ± 3 amu (valor teórico 4011 amu).

Exemplo 31 Síntese de Glu23,26Arg34Lys38 (NE- (γ-glutamil (Na~tetradecanoil)) ) -GLP-1 (7-38)-OH.

Uma mistura de de Glu23,26Arg34Lys38-GLP-l (7-38)-OH (6.07 mg, 1.727 μπιοί) , EDPA (6.25 mg, 48.36 μιηοΐ) , NMP (425 μΐ) e água (425 μΐ) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de Na-Tetradecanoil-Glu(ONSu)-OBufc, preparada como o descrito no exemplo 29, (2.65 mg, 5.18 μηαοί) em NMP (66.3 μΐ) , a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso mais 45 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (2.85 mg, 38.0 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (285 μΐ) . Foi adicionada uma solução aquosa de acetato de amónio a 0.5 % (5.4 ml), e a mistura resultante foi imobilizada num cartucho Varian 500 mg C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado foi lavado com acetonitrilo aquoso a 5% (10 ml), e finalmente foi libertado do cartucho por eluição com TFA (10 ml) . O eluido foi concentrado a vácuo, e a mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de 67 acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (0.78 mg, 12 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3854 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3853 ± 3 amu (valor teórico 3853 amu).

Exemplo 32 Síntese de Lys26'j4-bis (Νε-(ω-carboxitridecanoil))-GLP-1 (7-37)-OH.

Uma mistura de GLP-1 (7-37) -OH (30 mg, 8.9 μηαοί) , EDPA (32.3 mg, 250 μχηοΐ) , NMP (2.1 ml) e água (2.1 ml) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de H00C- ((¾) 12-COONSu (12.7 mg, 35.8 μιηοΐ) em NMP (318 μΐ) , a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 1 hora e 40 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (3.4 mg, 44.7 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (335 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (10 mg, 29 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3840 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3839 ± 3 amu (valor teórico 3839 amu).

Exemplo 33 Síntese Lys28,j4-bis (Ne- (γ-glutamil (Na-tetradecanoil) ) ) -GLP-1 (7-37)-OH. (NNC 90-1167). 68

Uma mistura de GLP-1 (7-37)-OH (300 mg, 79.8 μιιιοί), EDPA (288.9 mg, 2.24 mmol), NMP (21 ml) e água (21 ml) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de Na-Tetradecanoil-Glu(ONSu)-OBut, preparada como o descrito no exemplo 29, (163 mg, 319.3 μπιοί) em NMP (4.08 ml), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso rtiais 1 hora à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (131.8 mg, 1.76 mmol) em etanol. aquoso a 50% (13.2 ml). Foi adicionada uma solução aquosa de acetato de amónio a 0.5 % (250 ml), e a mistura resultante foi dividida em quatro partes iguais. Cada parte foi eluída num cartucho Varian 500 mg C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado foi lavado com TFA aquoso a 0.1% (3.5 ml), e finalmente foi libertado do cartucho por eluição com acetonitrilo aquoso a 70% (4 ml). Os eluídos combinados foram diluídos com TFA aquoso a 0.1% (300 ml). 0 composto precipitado foi recolhido por centrifugação, lavado com TFA aquoso a 0.1 % (50 ml), e finalmente isolado por centrifugação. Foi adicionado ao precipitado TFA (60 ml), e a mistura da reacção resultante foi agitada durante 1 hora e 30 minutos à temperatura ambiente. O excesso de TFA foi removido a vácuo, e o resíduo foi vertido em água (50 ml) . O composto precipitado foi purificado por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 30QSB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (27.3 mg, 8 %} foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 4036 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 4035 ± 3 amu (valor teórico 4035 amu).

Exemplo 34 Síntese de Arg26'3‘‘Lysib (Ns~ (co-carfaoxipentadecanoil)) -GLP-1 (7-38)-OH. 69

Uma mistura de Arg26,34Lys38-GLP-l (7-38) -OH (30 mg, 8.9 μπιοί), EDPA (32.3 mg, 250 μπιοί), NMP (2.1 ml) e água (2.1 ml) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. Â mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(CH2) i4COONSu (13.7 mg, 35.8 μπιοί) em NMP (343 μΐ), a mistura da reacçâo foi suavemente agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. A reacçâo foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (3.4 mg, 44.7 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (335 μΐ) . A mistura da reacçâo foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrilo/TFA Standard. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (4.8 mg, 14 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 38 94 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3893 ± 3 amu (valor teórico 3893 amu).

Exemplo 35 Síntese de Na-hexadecanoil-Glu(ONSu)-OBut. A uma suspensão de H-Glu (OH)-0Bufc (4.2 g, 20.6 mmol) , DMF (500 ml) e EDPA (2.65 g, 20.6 mmol) foi adicionada gota a gota uma solução de Pal-ONSu (7.3 g, 20.6 mmol) em DMF (100 ml). A mistura da reacçâo foi agitada durante 64 horas à temperatura ambiente e seguidamente foi concentrada a vácuo até um volume total de 20 ml. 0 resíduo foi divido entre ácido cítrico aquoso a 10% (300 ml) e em acetato de etilo (250 ml), e as fases foram separadas. A fase orgânica foi concentrada a vácuo e o resíduo dissolvido em DMF (50 ml) . A solução resultante foi adicionada gota a gota a uma solução aquosa de ácido cítrico a 10% (500 ml) mantido a 0 °C. O composto precipitado foi recolhido e lavado com água gelada e seca num forno de secagem a vácuo. O composto seco foi dissolvido em DMF (45 ml) e foi adicionado HONSu (2.15 70 g, 18.7 mmol). À mistura resultante foi adicionada uma solução de N,N'-diciclohexilcarbodiimida (3.5 g, 17 mmol) em diclorometano (67 ml) . A mistura da reacção foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente, e o composto precipitado foi filtrado. 0 precipitado foi recristalizado de n-heptano/2-propanol para dar o composto do título (6.6 g, 72%).

Exemplo 36 Síntese de Lys26,3,1-bis (Ne- (γ-glutamil (t^-hexadecanoil))) -GLP-1 (7-37) -OH.

Uma mistura de GLP-1 (7-37}-OH (10 mg, 2.9 μιηοΐ) , EDPA (10.8 mg, 83.4 μιτιοί) , NMP (0.7 ml) e água (0.7 ml) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de Na-hexadecanoil-Glu(ONSu)-OBu1, preparada como o descrito no exemplo 33, (163 mg, 319.3 μπιοί) em NMP (4.08 ml}, a mistura da reacção foi suavemente agitada 1 hora e 20 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (4.9 mg, 65.6 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (492 μΐ) . Foi adicionada uma solução aquosa de acetato de amónio a 0.5 % (9 ml), e a mistura resultante foi eluída num cartucho Varian 1 g C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado foi lavado com acetonitrilo aquoso a 5% (10 ml), e finalmente libertado do cartucho por eluição com TFA (10 ml) . 0 eluído foi concentrado a vácuo, e o resíduo purificado por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (2.4 mg, 20 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 4092 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 4091 ± 3 amu (valor teórico 4091 amu). 71

Exemplo 37 Síntese de Arg^Lys26 (NE- (y-glutamil (tf-hexadecanoil)) j -GLP-1 (7-37) -OH.

Uma mistura de Arg34-GLP-1 (7-37) -OH (3.7 mg, 1.1 μτηοΐ), EDPA (4.0 mg, 30.8 μιηοΐ), acetonitrilo (260 μΐ) e água (260 μΐ) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de Na-hexadecanoil-Glu(ONSu)-OBu,t preparada como o descrito no exemplo 35, (1.8 mg, 3.3 μιηοΐ) em acetonitrilo (44.2 μΐ), e a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 1 hora e 20 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (1.8 mg, 24.2 pmol) em etanol aquoso a 50% (181 μΐ). Uma solução aquosa de acetato de amónio a 0.5 % (12 ml) e NMP (300 μΐ) foram adicionados, e a mistura resultante foi eluida num cartucho Varian lg C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado foi lavado com acetonitrilo aquoso a 5% (10 ml), e finalmente libertado do cartucho por eluição com TFA (6 ml). O eluido foi deixado a repousar durante 2 horas à temperatura ambiente e seguidamente foi concentrado a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna Standard utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (0.23 mg, 6 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3752 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3751 ± 3 amu (valor teórico 3751 amu).

Exemplo 38 Síntese de Arg26, 34Lys38 (NE- (γ-glutamil (Na-tetradecanoil))) -GLP-1 (7-38)-OH. 72

Uma mistura de Arg26' j4Lys38-GLP-l (7-38) -OH (14 mg, 4.0 μπιοί), EDPA (14.3 mg, 110.6 μπιοί), NMP (980 μΐ) e água (980 μΐ) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de Na-Tetradecanoil-Glu(ONSu)-OBufc, preparada como o descrito no exemplo 29, (12.1 mg, 23.7 μιηοΐ) em NMP (303 μΐ), e a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glícina (6.5 mg, 86.9 mmol) em etanol aquoso a 50% (652 μΐ). Foi adicionada uma solução aquosa de acetato de amónio a 0.5 % (50 ml), e a mistura resultante foi eluida num cartucho Varian Ig C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado foi lavado com acetonitrilo aquoso a 5% (15 ml), e finalmente libertado do cartucho por eluição com TFA (6 ml) . O eluído foi deixado em repouso durante 1 hora e 45 minutos à temperatura ambiente e seguidamente foi concentrado a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (3.9 mg, 26 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3881 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3880 ± 3 amu (valor teórico 3880 amu).

Exemplo 39 Síntese de Arg26,34Lys38 (Ns-(ω-carboxipentadecanoil) ) -GLP-1 (7-38) -OH. IJma mistura Arg26'34Lys38-GLP-l (7-38)-OH (14 mg, 4.0 μπιοί), EDPA (14.3 mg, 111 μιηοΐ), NMP (980 μΐ) e água (980 μΐ) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(CH2) 14-COONSu (4.5 mg, 11.9 μπιοί) em NMP (114 μΐ) , a mistura da reacção foi 73 suavemente agitada durante 1 hora e 45 minutos à temperatura ambiente. Uma solução adicional de HOOC- (CH2) 14-COONSu (4.Q mg, 10.4 μκιοί) em NMP (100 μΐ) foi adicionada, e a mistura resultante foi suavemente agitada durante mais 1 hora e 30 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida mediante a adição de uma solução de glicina (1.5 mg, 19.8 μτηοΐ) em etanol aquoso a 50% (148 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. 0 composto do título (3.9 mg, 26 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3809 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3808 ± 3 amu (valor teórico 3808 amu).

Exemplo 40 Síntese de Arg26'34Lys38 (Νε- (γ-glutamil (Na-hexadecanoil))) -GLP-1 (7-

38)-OH

Uma mistura de Arg26,34Lys36-GLP-l (7-38)-OH (14 mg, 4.0 pmol) , EDPA (14.3 mg, 110.6 μιηοΐ), NMP (980 μΐ) e água (980 μΐ) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de N“-hexadecanoil-Glu(ONSu)-OBut, preparada como o descrito no exemplo 35, (6.4 mg, 11.9 μπιοί) em NMP (160 μΐ) , e a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 1 hora e 20 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (6.5 mg, 87 irtmol) em etanol aquoso a 50% (653 μΐ) . Foi adicionada uma solução aquosa a 0.5 % de acetato de amónio (50 ml), e a mistura resultante foi eluída num cartucho Varian lg C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado foi lavado com acetonitrilo aquoso a 5% (10 ml), e finalmente 74 libertado do cartucho por eluição com TFA (6 ml) . 0 eluído foi deixado em repouso durante 1 hora e 30 minutos à temperatura ambiente e seguidamente foi concentrado a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (7.2 mg, 47 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3881 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3880 ± 3 amu (valor teórico 3880 amu).

Exemplo 41 Síntese de firqls'23'26-30'3jLys38 (N -hexadecanoil) -GLP-1 (7-38)-OH.

Uma mistura de Arg18‘23“!í6'30"34Lys38-GLP-l (7-38)-OH (1.0 mg, 0.27 μπιοί) , EDPA (0.34 mg, 2.7 μπιοί) e DMSO (600 μΐ) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de Pal-ONSu (0.28 mg, 0.8 μπιοί) em NMP (7 μΐ) . A mistura da reacção foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, e seguidamente foi deixada em repouso durante mais 6 horas à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (1.6 mg, 21.7 μιηοΐ) em etanol aquoso a 50% (163 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 3Q0SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (0.17 mg, 16 %) foi isolado, e o produto foi analisado por MALDI-MS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3961 + 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3960 ± 3 amu (valor teórico 3960 amu). 75

Exemplo 42 Síntese de Arq26'34Lys3S (Ne- (ω-carboxitrídecanoil) )-GLP-1 (7-38)-OH.

Uma mistura de Arg':6'34Lysj8“GLP-l (7-38)-OH (14 mg, 4,0 μπιοί), EDPA (14.3 mg, 111 μπιοί), NMP (980 μΐ) e água (980 μΐ) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(CH2) n~ COONSu (4.2 mg, 11.9 μπιοί) em NMP (105 μΐ), a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 1 hora e 50 minutos à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (6.5 mg, 87 μπιοί) em etanol aquoso a 50% (652 μΐ) . A mistura da reacção foi purificada por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0- 100% em 60 minutos. O composto do título (5.8 mg, 39 %) foi isolado, e o produto foi analisado por MALDI-MS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3780 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3779 ± 3 amu (valor teórico 3781 amu) . Síntese de Arg34Lys26 (Ns- (γ-glutamil (N^-tetradecanoil))) -GLP-1 (7-37)-OH.

Uma mistura de Arg34-GLP-1 (7-37)-OH (15 mg, 4.4 μπιοί), EDPA (16 mg, 124 μπιοί) , NMP (2 ml) e água (4.8 ml) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de Na-Tetradecanoil-Glu(ONSu)-OBufc, preparada como o descrito no exemplo 29, (12.1 mg, 23.7 μπιοί) em NMP (303 μΐ), e a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida pela adição de uma solução de glicina (6.5 mg, 86.9 μπιοί) em 76 etanol aquoso a 50% (652 μΐ) . Foi adicionada uma solução aquosa de acetato de amónio a 0.5 % (50 ml), e a mistura resultante foi eluida num cartucho Varian lg C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado foi lavado com acetonitrilo aquoso a 5% (15 ml), e finalmente libertado do cartucho por eluição com TFA (6 ml). O eluido foi deixado em repouso durante 1 hora e 45 minutos à temperatura ambiente e seguidamente foi concentrado a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitríto/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente do acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (3.9 mg, 26 %) foi isolado, e o produto foi analisado por MALDI-MS. Foi descoberto que o valor de m/z para o ião molecular protonado era de 3723 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3722 ± 3 amu (valor teórico 3723 amu).

Exemplo 44 Síntese de Na-octadecanoil-Glu (ONSu) -OBu11. A uma suspensão de H-Glu(OH)-0Bufc (2.82 g, 13.9 mm.ol), DMF (370 ml) e EDPA (1.79 g, 13.9 mmol) foi adicionada gota a gota uma solução de Ste-ONSu (5.3 g, 13.9 mmol) em DMF (60 ml). Foi adicionado díclorometano (35 ml) , e a mistura da reacção foi agitada durante 24 horas à temperatura ambiente e seguidamente concentrada a vácuo. 0 resíduo foi divido entre ácido cítrico aquoso a 10% (330 ml) e acetato de etilo (200 ml), e as fases foram separadas. A fase orgânica foi concentrada a vácuo e o resíduo foi dissolvido em DMF (60 ml) . A solução resultante foi adicionada gota a gota a uma solução aquosa de ácido cítrico a 101 (400 ml) mantida a 0 °C. O composto precipitado foi recolhido e lavado com água gelada e seco num forno de secagem a vácuo. 0 composto seco foi dissolvido em DMF (40 ml) e foi adicionado HONSu (1.63 g, 14.2 mmol). À mistura resultante foi adicionada uma solução de DCC (2.66 g, 12.9 mmol) em 77 diclorometano (51 ml} . A mistura da reacção foi agitada durante 64 horas à temperatura ambiente, e o composto precipitado foi filtrado, 0 precipitado foi recristalizado de n-heptano/2-propanol para dar o composto do título (4.96 g, 68 %).

Exemplo 45 Síntese de Ãrg2t!,34Lys38 (Ns- (γ-glutamil (Na-octadecanoil) ) ) -GLP-1 (7-38) -OH.

Uma mistura de Arg26,34-GLP-1 (7-38) -OH (28 mg, 7.9 jimol), EDPA (28.6 mg, 221.5 μπιοί) , NMP (1.96 ml) e água (1.96 ml) foi suavemente agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de Na-octadecanoil-Glu (ONSu)-OBut (17.93 g, 31.6 μπιοί), preparada como o descrito no exemplo 44, em NMP (448 μΐ), e a mistura da reacção foi suavemente agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida mediante a adição de uma solução de glicina (13.1 mg, 174 μιηοΐ) em etanol aquoso a 50% (1.3 ml). Foi adicionada uma solução aquosa de acetato de amónio a 0.5 % (120 ml), e a mistura resultante foi dividida em duas partes iguais. Cada parte foi eluida num cartucho Varian 5 g C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado foi lavado com acetonitrilo aquoso a 5% (25 ml) , e finalmente libertado do cartucho por eluição de TFA (25 ml). Os eluidos combinados foram deixados em repouso durante 1 hora e 25 minutos à temperatura ambiente e seguidamente concentrados a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando uma coluna de cianopropilo (Zorbax 300SB-CN) e um sistema Standard de acetonitrilo/TFA. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrilo foi de 0-100% em 60 minutos. O composto do título (3.6 mg, 11 %) foi isolado, e o produto foi analisado por MALDI-MS. Foi descoberto que o valor de irt/z para o ião molecular protonado era de 3940 ± 3. Assim, o peso molecular resultante é de 3939 ± 3 amu (valor teórico 3937 artiu) . 78

DESCOBERTAS BIOLÓGICAS

Protracção de derivados de GLP-1 após a administração s.c. A protracção de diversos derivados de GLP-1 de acordo com a invenção foi determinada controlando a sua concentração no plasma após a administração sc a porcos saudáveis, com a utilização do método descrito abaixo. Para a comparação, foi também controlada a concentração no plasma de GLP-1(7-37) após a administração sc. Os resultados são dados no quadro 1. A protracção de outros derivados de GLP-1 de acordo com a invenção pode ser determinada da mesma maneira.

Porcos (50% Duroc, 25% Yorkshire, 25% Danish Landrace, com aproximadamente 40 kg) foram mantidos em jejum desde o princípio da experiência. A cada porco foi administrado 0.5 nmol do composto do teste por kg de massa corporal numa solução isotónica de 50 μπι (5 mM fosfato, pH 7.4,0.02% Tween©-20 (Merck), 45 mg/ml manitol (sem pirogénio, Novo Nordisk). As amostras de sangue foram colhidas a partir de um cateter na vena jugularis nas horas indicadas no quadro 1. 5 ml das amostras de sangue foram vertidos nos vidros arrefecidos que continham 175 μΐ da seguinte solução: 0.18 M de EDTA, 1500 KIE/ml de aprotinina (Novo Nordisk) e 3% de bacitracina (Sigma), pH 7.4. Passados 30 minutos as amostras foram centrifugadas durante 10 minutos a 5-6000*g. A temperatura foi mantida a 4 °C. O sobrenadante foi pipetado em vidros diferentes e guardados a menos 20°C até à sua utilização.

As concentrações no plasma dos peptídeos foram determinadas por RIA utilizando um anticorpo monoclonal específico para a região N-terminal do GLP-1 (7-37). As reactividades cruzadas foram inferiores a 1% com GLP-1 (1-37) e GLP-1 (8-36) amida e < 0.1% com GLP-1 (9-37), GLP-1(10-36)amida e GLP-1 (11-36)amida. Todo o procedimento foi efectuado a 4°C. 79 0 ensaio foi efectuado da seguinte maneira: 100 μΐ de plasma foi misturado com 271 μΐ de etanol a 96%, para a mistura foi utilizado um agitador vortex e centrifugação a 260Q*g durante 30 minutos. O sobrenadante foi decantado em tubos Miniscrp e evaporado completamente (Savant Speedvac AS290). O resíduo da evaporação foi reconstruído no tampão de ensaio que continha 80 mM de NaH2P04/Na2HP04, 0.1% de HSA (Orpha 20/21, Behring), 10 mM de EDTA, 0.6 mM de tiomersal (Sigma), pH 7.5. As amostras foram reconstituídas em volumes adequados para as suas concentrações esperadas, e foram deixadas a reconstituírem~se durante 30 minutos A uma amostra de 300 μΐ, foi adicionada 100 μΐ de solução de anticorpos num tampão de diluição que continha 40 mM de NaH2P04/Na2HP04, 0.1 % de HSA, 0.6 mM de tiomersal, pH 7.5. Uma amostra não específica foi preparada misturando 300 μΐ de tampão com 100 μΐ de tampão de diluição. As amostras Standard individuais foram preparadas a partir de amostras guardadas liofilizadas, dissolvidas em 300 μΐ de tampão de ensaio. Todas as amostras foram pré-incubadas em tubos Minisorp com anticorpos como o acima descrito durante 72 h. Foi adicionado 200 μΐ de traçador em tampão de diluição contendo 6-7000 CPM, as amostras foram misturadas e incubadas durante 48 horas. Foi adicionado a cada tubo 1.5 ml de uma suspensão de 200 ml por litro de plasma bovino estabilizada com heparina e 18 g por litro de carvão activado (Merck) em 40 mM de NaH2P04/Na2HP04, 0.6 mM de tiomersal, pH 7.5. Antes de ser utilizada, a suspensão foi misturada e foi deixada em repouso durante 2 horas a 4°C. Todas as amostras foram incubadas durante 1 hora a 4°C e seguidamente foram centrifugadas a 3400*g durante 25 minutos. Imediatamente a seguir à centrifugação, o sobrenadante foi decantado e contado num y-contador. A concentração nas amostras foi calculada a partir das curvas Standard individuais. As seguintes concentrações no plasma foram encontradas calculadas como % da concentração máxima para os compostos individuais (n=2): 80

Quadro 1

Composto do Horas depois da administração SC. teste* ) 0.75 1 2 4 6 g 10 12 24 GLP-1(7- 37) 100 9 1 Exemple 25 73 92 100 98 82 24 16 16 16 Exemple 17 76 71 91 100 84 68 30 9 Exemplo 43 39 71 93 100 91 59 50 17 Exemplo 37 26 38 97 100 71 81 80 45 Exemplo 11 24 47 59 71 100 94 100 94 Exemplo 12 36 54 65 94 80 100 85 93 Exemple 32 55 53 90 83 88 70 98 100 100 Exemplo 14 18 25 32 47 98 83 97 100 Exemplo 13 15 22 38 59 97 85 100 76 Exemplo 38 60 53 100 66 48 39 25 29 0 Exemplo 39 38 100 70 47 33 33 18 27 14 Exemplo 40 47 19 50 100 51 56 34 14 0 Exemplo 34 19 32 44 84 59 66 83 84 100 *) Os compostos do teste são os compostos do título dos exemplos com os números dados

Como pode ser constado do resultado do quadro 1, os derivados de GLP-1 de acordo com a invenção em relação ao GLP-1 (7-37) têm um perfil de acção prolongada e são muito mais persistentes no plasma que o GLP-1 (7-37). Pode também ser constatado do quadro 1 que o tempo em que é obtido o valor máximo de concentração no plasma varia em limites amplos, dependendo do derivado de GLP-1 específico seleccionado. 81

Estimulação de formação de cAMP numa linha celular que expressa o receptor de 6LP-1 humano clonado

Para demonstrar a eficácia dos derivados de GLP-1, foi testada a sua capacidade para estimular a formação de cAMP numa linha celular que expressa o receptor de GLP-1 humano clonado. Um EC50 foi calculado a partir da curva dose-resposta.

Foram utilizadas as células do rim de hamster bébé (BHK) que expressavam o receptor de GLP-1 pancreático humano (Knudsem & Pridal, 1996, Eur. J. Pharm. 318, 429-435) . As membranas plasmáticas foram preparadas (Adelhorst et al., 1994, J. Biol. Chem. 269, 6275) por homogeneização em tampão (10 mmol/1 de tris-HCl e 30 mmol/1 de NaCl pH 7.4, contendo, adicionalmente, 1 mmol/1 de ditiotreitol, 5 mg/1 de leupeptina (Sigma, St. Louis, MO, USA), 5 mg/1 de pepstatina (Sigma, St. Louis, MO, USA), 100 mg/1 de bacitracina (Sigma, St. Louis, MO, USA), e 16 mg/1 de aprotinina (Novo Nordisk A/S, Bagsvaerd, Dinamarca)) . O produto homogeneizado foi centrifugado no topo de uma camada de 41 p/v% de sacarose. A faixa branca, entre as duas camadas, foi diluía num tampão e centrifugado. As membranas de plasma foram guardadas a -80°C até serem utilizadas. O ensaio foi efectuado em placas de microtitulaçâo de 96 poços num volume total de 140 μΐ. O tampão utilizado foi 50 mmol/1 de tris-HCl, pH 7.4 com a adição de 1 mmol/1 de EGTA, 1.5 mmol/1 de MgS04,1.7 mmol/1 de ATP, 20 mM de GTP, 2 mmol/1 de 3- isobutil-1-metilxantina, 0.01 % de Tween-20 e 0.1 % de albumina de soro humano (Reinst, Behringwerke AG, Marburg Alemania). Os compostos que devem ser testados para a actividade agcnista foram dissolvidos e diluídos num tampão, adicionados à preparação da membrana e a mistura foi incubada durante 2 heras a 37°C. A reacção foi parada pela adição de 25 μΐ de 0.05 mol/1 de HC11 As amostras foram diluídas 10 vezes antes da análise de cAMP por um ensaio de proximidade de cintilação (RPA 538, Amersham, UK). 82

Foram encontrados os seguintes resultados:

Composto do teste*) EC50, PM Composto do teste*) EC50, pM GLP-1 (7-37) 61 Exemplo 31 96 Exemplo 45 120 Exemplo 30 41 Exemplo 43 24 Exemplo 26 OD OO Exemplo 40 55 Exemplo 25 99 Exemplo 39 5.1 Exemplo 19 79 Exemplo 38 54 Exemplo 16 3.5 Exemplo 37 60 *) Os compostos do teste são os compostos do título dos exemplos com os números dados.

Lisboa, 14 de Junho de 2007.

Pela Requerente O Agente Oficial

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Claims (60)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Derivado de GLP-1 (7-37) ou um análogo de GLP-1 (7-37) em que o derivado é um agonista receptor de GLP-1 humano, caracterizado por o derivado ter apenas um substituinte lipofilico que está ligado a um residuo de aminoácido que não é o resíduo de aminoácido N-terminal ou C-termínal.
2. 2. Derivado de GLP-1 (7-37) ou um análogo de GLP-1 (7-37) em que o derivado é um agonista receptor de GLP-1 humano, caracterizado por o derivado ter apenas dois substituintes lipofílicos, um dos quais está ligado ao resíduo de aminoácido C-terminal enquanto que o outro está ligado a um resíduo de aminoácido que não é o resíduo de aminoácido N-terminal ou C- terminal.
3. 3. Derivado de GLP-1 (7-37) ou um análogo de GLP-1 (7-37) em que o derivado é um agonista receptor de GLP-1 humano, caracterizado por o derivado ter apenas dois substituintes lipofílicos, que estão ligados a resíduos de aminoácidos que não é o resíduo de aminoácido N-terminal ou C-terminal.
4. 4. Derivado de um análogo de GLP-1 (7-37) em que o derivado é um agonista receptor de GLP-1 humano, e em que o análogo é GLP-1 {7—C) onde C é de 38 a 45; caracterizada por este ter apenas um substituinte lipofilico que está ligado ao resíduo de aminoácido C-terminal.
5. 5. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações de 1-4, caracterizado por o análogo de GLP-1 (7-37) ser seleccíonado do grupo composto por: Arg26-GLP-1 (7-37) ; Arg26'34Lys36-GLP-l (7-37) Arg34-GLP-1 (7-37) ; Lys36-GLP-1 (7-37) ; ; Arg26,34Lys38GLP-l (7-38 ) ; Arg"6'~'4Lys39- GLP-1 (7-39) ; Arg26, 34Lys40-GLP-l (7-40); Argz6Lys36-GLP-l (7-37) ; 1 ArgJ<íLys36-GLP-l (7-37) ; Arg^Lys :39-GLP-l (7-39); Arg34Lys40-GLP-l (7- 40) ; Arg26'34Lys3e,39-GLP-l (7- 39}; Arg2É,34Lys36, 40-GLP-l (7-40) ; Gly8Arg26-GLP-l (7-37) ; Gly8Arg 34-GLP-l (7-37); Gly8Lys3s-GLP-l (7- 37) ; GlyeArg26,34Lys36-GLP-l (7- 37) ; Gly8Arg26, 34Lys39-GLP-l (7-39) ; Giy8Arg26'34Lys40-GLP-l (7-40) ; Gly8Arg26Lys35-GLP-l (7-37) ; Gly8Arg34Lvs36-GLP-l (7-37) ; Gly8Arg26Lys39-GLP-l (7-39) ; GIy8Arg34Lys40-GLP-l (7-40) ; Gly8Arg2€'34Lys36'39-GLP-l (7-39) e Gly8Arg26'34Lys56, 40-GLP-l (7-40) .
6. 6. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações de 1- 4, caracterizado por o análogo de GLP-1 (7-37) ser seleccionado do grupo composto por: Arg26'34Lys38GLP-l (7-38) ; Arg26,36Lys3SGLP-l (7-39) ; Arg2S'34Lys40GLP-l (7-40) ; Arg26,34Lys41GLP-l (7-41) ; Arg26'34Lys42GLP-l (7-42) ; Arg26,34Lys43GLP-l (7-43) ; Arg26'34Lys44GLP-l(7-44) ; Arg26'34Lys45GLP-l(7-45) ; Arg26'34Lys38GLP-l(l-38) ; Arg26'34Lys39GLP-l(l-39) ; Arg26'34Lys40GLP-l(l-40) ; Arg26,34Lys41GLP-l (1-41) ; Arg26,34Lys42GLP-l (1-42) ; Arg26'34Lys43GLP-l (1-43) ; Arg2e'34Lys44GLP-l (1-44) ; Arg26,34Lys45GLP-l (1-45) ; Arg26,34Lys38GLP-l (2-38) ; Arg26'34Lys39GLP-l (2-39) ; Arg26,34Lys40GLP-l (2-40) ; Arg26'34Lys41GLP-l (2-41) ; Arg26'34Lys42GLP-l (2-42) ; Arg26,34Lys43GLP-l (2-43) ; Arg26,34Lys44GLP-l (2-44) ; Arg26,34Lys45GLP-l (2-45) ; Arg26'34Lys38GLP-l (3-38) ; Arg26,34Lys39GLP-l (3-39) ; Arg25,34Lys40GLP-l (3-40) ; Arg26,34Lys41GLP-l (3-41); Arg26'34Lys42GLP-l (3-42) ; Arg26,34Lys43GLP-l (3-43) ; Arg26'34Lys44GLP-l (3-44) ; Arg26?34Lys45GLP-l (3-45) ; Arg26'34Lys38GLP-l (4-38) ; Arg2e'44Lys35GLP-l (4-39) ; Arg26, 34Lys40GLP-l (4-40) ; Arg26, 34Lys41GLP-l (4-41) ; Arg26'34Lys42GLP-l (4-42) ; Arg26,34Lys43GLP-l (4-43) ; Arg26'34Lys44GLP-l (4-44) ; Arg26'34Lvs45GLP-l (4-45) ; Arg26, 34Lys38GLP-l (5-38) ; Arg26'34Lys39GLP-l (5-33); Arg26'34Lys40GLP-l (5-40) ; Arg26,J,iLys41GLP-l (5-41) ; Arg26,34Lys42GLP-l (5-42) ; Arg26'34Lys43GLP-l (5-43) ; 2 ,26,34Lys44GLP-l (5-44) ; Arg26, 34Lys45GLP-l (5-45) ; 26'34Lys38GLP-l (6-38) ; Arg26'34Lys39GLP-l (6-39) ; 26'34Lys40GLP-l (6-40) ; Arg26'34Lys4iGLP-l (6-41) ; 25'34Lys42GLP-l (6-42) ; Arg26'34Lys43GLP-l (6-43) ; ,26'34Lys44GLP~l (6—44); Arg2* 5,34Lys45GLP-l (6-45) ; Arg26Lys36GLP- Arg34LysJOGLP-l (1-38) ; ,36, Arg^6, j4Lys 36,38 GLP-1(1-38); 38r ,26,34, ,36,38 Arg Arg Arg' Arg Arg Arg"cLysJ3GLP~l(7-38J ; Arg34LysJDGLP-l (7-38) ; Arg^Lys GLP- 1(1-38) ; _26 1(7-38) ; ,34 Arg26'34LysJBGLP-l(7-38) ; ,38 Arg26LysJ'GLP-l (1-39) Arg34Lys39GLP-l (1-39) ; Arg26'34Lys3ê'39GLP-l (1-39) ; Arg26Lys39GLP-1(7.39); Arg34Lys39GLP-l (7-39) e Arg26'34Lys36'39GLP-l (7-39) .
7. 7. Derivado de um análogo de GLP-1 (7-37) onde o derivado é um agonista receptor de GLP-1 humano, caracterizado por pelo menos um resíduo de aminoácído ter um substituinte lipofílico ligado e por o análogo ser seleccionado do grupo composto por: 1(7-39); Arg26'34Lys40GLP-Arg26'34Lys42GLP-l (7-42) ; 1(7-44); Arg26,34Lys45GLP-Arg26'34Lys39GLP-l (1-39) ; 1 (1-41); Arg26,34Lys42GLP- Arg26,34Lys44GLP-l (1-44) ; Arg26,34Lys35GLP-l (7-38) ; Arg26'34Lys39GLP-1 (7-40) ; Arg26'34Lys41GLP-l (7-41) ; Arg26'34Lys43GLP-l (7-43); Arg2ê'34Lys44GLP-1 (7-45); Arg26'34Lys38GLP-l (1-38) ; Arg26'34Lys40GLP-l (1-40); Arg26'34Lys41GLP- 1 (1-42); ArgZ6'34Lys43GLP-l (1-43); Arg26,34Lys45GLP-1 (1-45) ; Arg26'34Lys38GLP- ,44 1 (2-38); Arg26'34LysjyGLP- 1 (2- -39) ; Arg26' 34Lys40GLP-l (2-40) t Arg26 34Lys41GLP-l (2- 41); Arg" 6'34Lys 42GLP-1 (2- 42); Arg26'34Lys43GLP- -1(2-43) ; Arg26,34Lys4' GLP- 1(2- -44); Arg26, 34- t* Lys 5GLP-1(2-45) t Arg26 34Lys3€GLP-l (3- 38); Arg2 6,34Lys 39GLP-1 (3- 39) ; Arg26,34Lys40GLP- -1(3-40) ; Arg26, 34Lys43 GLP- 1(3- -41) ; Arg^6' 34- i -ys‘ 2GLP-1 (3-42) / Arg20' 34Lys43GLP-l (3- 43) ; Arg2 6'34Lys44GLP-l (3 -44); Arg26, 34Lys45GLP- -1(3-45) ; Arg26'34Lys38 GLP— 1(4- -38) ; Arg26' 34Lys39GLP-l (4-39) f Arg'1®' 34Lys40GLP-l (4- 40) ; Arg~ 6,34Lys 41GLP-1 (4- 41); Arg2S,34Lys4: GLP- 1(4-42) ; Arg2e,34Lys4j GLP- 1(4- -43); Arg2-" 34Lys44GLP-l (4-44) r Arg26' 34Lys45GLP-l (4- 45); Arg26,j4Lys 38GLP-1 (5- 38); Arg25,34Iys3s GLP- 1(5-39) ; Arg26'34Lys40 GLP- 1(5- 40); Arg26,34Lys41 GLP-1 (5-41); Arg26,3 4Lys42GLP-l- (5- 42) ; Arg^ 6,34Lys 43GLP-1 (5- 43); Arg26,34Lvs44 ρτ n bijr “ 1(5-44) ; Arg26'34Lys45 GLP- 1(5- 45) ; Arg 26,34Lys38GLP-l (6-38) ; Arg26' 34Lys39GLP- 1(6- 39) ;Arg26'34Lys40GLP-l (6-40} ; Arg26'34Lys42GLP-l (6-42) ; Arg26’34 Arg26,34Lys41GLP-l (6-41) ; ,ys43GLP-l (6-43) ; Arg26'34Lys44GLP- 1(6-44); Arg26,34Lys45GLP-l (6-45) ; ' Arg2êLys38GLP-l (1-38) ; Arg34Lys38GLP-l (1-38) ; Arg26'34Lys36'38GLP~l (1-38); Arg26Lys38GLp-l (7- 38) ; Arg34Lys38GLP-l (7-38) ; Arg26'34Lys36'38GLP-l (7-38) ; Arg26'34Lys38GLP-l(7-38) ; Arg26Lys39GPL-l (1-39) ; Arg34Lys39GLP-l (1- 39) ; Arg26, 34Lys36, 39GLP-l (1-39) ; Arg26Lys35GLP-l (7-39) ; Argj4Lys39GL?-l (7-39) e Arg26, 34Lys3b'39GLP-l (7-39), com a condição de que se um substituinte lipofilicc· estiver presente e esse substituinte estiver ligado ao resíduo de aminoácido N-terminal ou C-terminal, então este substituinte é um grupo alquilo ou um grupo que tem um grupo ω-carboxílico.
8. 8. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por o substituinte lipofílico compreender de 4 a 40 átomos de carbono, mais preferencialmente de 8 a 25 átomos de carbono.
9. 9. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por um substituinte lipofílico ser ligado a um resíduo de aminoácido de maneira a que um grupo carboxilo do substituinte lipofílico forme uma ligação amida com um grupo amíno do resíduo de aminoácido.
10. 10. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações de 1-8, caracterizado por um substituinte lipofílico ser ligado a um resíduo de aminoácido de maneira a que um grupo amino do substituinte lipofílico forme uma ligação amida com um grupo carboxilo do resíduo de aminoácido.
11. 11. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por o substituinte lipofílico ser ligado ao resíduo de aminoácido mediante um separador. 4
12. 12. Derivado de acordo coro a reivindicação 11, caracterizado por o separador ser um grupo de ácido a,ω-dicarboxílico de alcano não ramificado que tem de 1 a 7 grupos de me ti leno, preferencialmente dois grupos de metileno, que formam uma ponte entre um grupo amino do peptídeo e um grupo amino do substituinte lipofilico
13. 13. Derivado de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por o separador ser um resíduo de aminoácido excepto Cys, cu um dipeptídeo como Gly-Lys.
14. 14. Derivado de acordo ccm a reivindicação 13, caracterizado por um grupo carboxilo do peptídeo de origem formar uma ligação amida com um grupo amino de Lys ou um dipeptídeo que contém um resíduo Lys, e por o outro grupo amino do separador Lys ou um dipeptídeo separador que contém um resíduo Lys formar uma ligação amida com um grupo carboxilo do substituinte lipofilico.
15. 15. Derivado de acordo com a reivindicação 13, caracterizado por um grupo amino do peptídeo formar uma ligação amida com um grupo carboxilico do resíduo de aminoácido ou dipeptídeo separador, e por um grupo amino do resíduo de aminoácido ou dipeptídeo separador formar uma ligação amida com um grupo carboxilo do substituinte lipofilico.
16. 16. Derivado de acordo com a reivindicação 13, caracterizado por um grupo carboxilo do peptídeo formar uma ligação amida com um grupo amino do resíduo de aminoácido separador ou do dipeptídeo separador, e por um grupo carboxilo do resíduo de aminoácido separador ou do dipeptídeo separador formar uma ligação amida com um grupo amino do substituinte lipofilico. 5
17. 17. Derivado de acordo ccm a reivindicação 13, caracterizado por um grupo carboxilo do peptideo formar uma ligação amida com um grupo amino de um separador que é Asp ou Glu, ou um dipeptideo separador que contém um resíduo Asp ou Glu, e por um grupo carboxilo do separador formar uma ligação amida com um grupo aminc do substituinte lipofílico.
18. 18. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por o substituinte lipofílico compreender um esqueleto de ciclopentanofenatreno parcial ou totalmente hidrogenado.
19. 19. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações de 1-17, caracterizado por o substituinte lipofílico ser um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada.
20. 20. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações del-17, caracterizado por o substituinte lipofílico ser um grupo acilo de um ácido gordo de cadeia linear ou ramificada.
21. 21. 21. Derivado de acordo com a reivindicação 20, caracterizado por o grupo acilo ser seleccionado do grupo composto por CH3 (CH2) nC0-, onde n é 4 a 38, preferencialmente CH3 (CH2) eCO-, CH3(CH2)eC0-, CH3(CH2) ioCO-, CH3 (CH2) i2CO-, CH3 (CH2) uCO-, CH3(CH2)i6CO-, CH3(CH2)18CO-, CH3(CH2)2cco- e CH3 (CH2) 22C0-.
22. 22. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações de 1-17, caracterizado por o substituinte lipofílico ser um grupo acilo de um ácido α,ω-dicarboxílico de alcano de cadeia linear ou ramificada.
23. 23. Derivado de acordo com a reivindicação 22, caracterizado por o grupo acilo ser seleccionado do grupo composto por HOOC (CH2)mCO-, onde m é de 4 a 38, preferencialmente de 4 a 24, mais preferencialmente ser seleccionado do grupo composto por 6 HOOC(CH2)20 CO- e HOOC(CH2)i4CO-, HOOC(CH2) icCO-, HOOC(CH2)i8CO-, HOOC(CH2)22CO-.
24. 24. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações 1-17, caracterizado por o substituinte lípofílico com o separador ser um grupo da fórmula CH3 (CH2) p ( (CH2) qCOOH) CHNH-CO (CH2} 2C0-, onde p e q são números inteiros e p+q é um número inteiro de 8 a 33, preferencialmente de 12 a 28.
25. 25. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações 1-17, caracterizado por o substituinte lípofílico com o separador ser um grupo da fórmula CH3 (CH2) rCO-NHCH (COOH) (CH) 2C0-, onde r é um número inteiro de 10 a 24.
26. 26. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações 1-17, caracterizado por o substituinte lípofílico com o separador ser um grupo da fórmula CH3 (CH2) 5C0-NHCH ((CH2) 2COOH) CO-, onde s é um número inteiro de 8 a 24.
27. 27. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações 1-17, caracterizado por o substituinte lipofílico com o separador ser um grupo da fórmula -NHCH(COOH)(CH2)aNH-CO(CH2)UCH3, onde u é um número inteiro de 8 a 18.
28. 28. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações 1-17 caracterizado por o substituinte lipofílico com 0 separador ser um grupo da fórmula -NHCH (COOH) (CH2) 4NH-COCH ( (CH2) 2COOH) NH-CO(CH2)wCH3, onde w é um número inteiro de 10 a 16.
29. 29. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações 1-17 caracterizado por o substituinte lipofílico com o separador ser um grupo da fórmula -NHCH (COOH; (CH2} 4NH-CO (CH2) 2CH (COOH) NH-CO(CH2)xCH3, onde x é um número inteiro de 10 a 16.
30. 30. Derivado de acordo com quaisquer das reivindicações 1-17 caracterizado por o substituinte lipofílico com o separador ser um grupo da fórmula -NHCH ÍCQOH) (CH2) 4NH-CO(CH2) 2CH(COOH)NH-CO(CH2} yCH3, onde y é zero ou um número inteiro de 1 a 22.
31. 31. Derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por um total de até seis resíduos de amínoácidos de GLP-1 (7-37) terem sido trocados por qualquer resíduo α-aminoácidc que possa ser codificado pelo código genético.
32. 32. Derivado de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por este ser Lys26 (NE-tetradecanoil)-GLP-1(7-37) .
33. 33. Derivado de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por este ser Lys34 (tf-tetradecanoil) -GLP-1 (7-37) .
34. 34. Derivado de acordo com a reivindicação 2 caracterizado por este ser Lys26,34-bis (N6-tetradecanoil)-GLP-1 (7-37).
35. 35. Derivado de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por este ser Lys26 (NE-tetradecanoil) Arg34 -GLP-1 (7-37).
36. 36. Derivado de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por este ser GlysArg26,j4Lys35 (Ne-tetradecanoil)-GLP-1 (7-37) .
37. 37. Derivado de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por este ser Arg26'34Lys36(NE-tetradecanoil) -GLP-1 (7-37) .
38. 38. Derivado de acordo com a reivindicação 3 caracterizado por este ser Lysz6,34bís (Νε~ (ω-carboxinonadecanoil) ) -GLP-1 (7-37) .
39. 39. Derivado de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por este ser Arg^Lys26 (Νε- (ω-carboxinonadecanoil)) -GLP-1 (7-37). 8
40. 40. Derivado de acordo com a reivindicação i caracterizado por este ser Arg"4Lys26 (Νε- (ω-carboxiheptadecanoil)) -GLP-1 (7-37) .
41. 41. Derivado de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por este ser Arg/b,34Lys36 (Νε- (ω-carboxiheptadecanoil)) -GLP-1 (7-37 ) .
42. 42. Derivado de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por este ser Arg26, 34Lys36(NE- (ω-carboxiundecanoii)) -GLP-1 (7-37) .
43. 43. Derivado de acordo com a reivindicação 3 caracterizado por este ser Lys26, 34bis (Νε- (ω-carborytmderanoil) ) -GLP-1 (7-37).
44. 44. Derivado de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por este ser Argj4Lys26 (NE- (ω-carboxiundecanoil) ) -GLP-1 (7-37) .
45. 45. Derivado de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por este ser Arg34Lys26 (NE-(ω-carboxiheptanoil) )-GLP-1 (7-37) .
46. 46. Derivado de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por este ser Arg2S'34Lys36(NE-(ω-carboxiheptanoil))-GLP-1 (7-37).
47. 47. Derivado de acordo com a reivindicação 3 caracterizado por este ser Lys26,34bis (N6- (ω-carboxiheptanoil) ) -GLP-1 (7-37) .
48. 48. Derivado de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por esre ser Arg34Lys26 (Νε- (ω-carboxipentadecanoil) ) -GLP-1 (7-37).
49. 49. Derivado de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por este ser Argj4Lys26 (N6-litocolil) -GLP-1 (7-37).
50. 50. Derivado de acordo com a reivindicação 3 caracterizado por este ser Lys"0,34-bis (Νε- (co-carboxitridecanoil) ) -GLP-I (7-37). 9
51. 51. Derivado de acordo com a reivindicação 3 caracterizado por este sei ,34 -bis (Νε (γ-giutamil (Να- tetradecanoil)})-GLP-1(7- 37) .
52. 52. Derivado de acordo com a reivindicação 3 caracterizado por este ser Lysz6,34-bis (Νε- (γ-glutamil (Na~hexadecanoil) ) ) -GLP-1 (7-37) .
53. 53. Derivado de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por este ser Arg34Lys26 (Νε- (γ-glutamil (Na-hexadecanoil) )) -GLP-1 (7-37) .
54. 54. Derivado de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por este Arg34Lys26 (Νε- (γ-glutamil (Na-tetradecanoil)) ) -GLP-1 (7-37) .
55. 55. Composição farmacêutica caracterizada por esta compreender um derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações de 1-54 e um veículo ou portador aceite na Indústria Farmacêutica.
56. 56. Utilização de um derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações de 1-54 caracterizado por este ser utilizado na preparação de um medicamento que em relação ao GLP-1 (7-37) tem um perfil de acção prolongada.
57. 57. Utilização de um derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações de 1-54 caracterizado por este derivado ser utilizado na preparação de um medicamento para o tratamento da diabetes mellitus não insulino-dependente.
58. 58. Utilização de um derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações de 1-54 caracterizado por este derivado ser utilizado na preparação de um medicamento para o tratamento da diabetes mellitus insulino-dependente. 10
59. 59. Utilização de um derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações de 1-54 caracterizado por este derivado ser utilizado na preparação de um medicamento para o tratamento da obesidade.
60. 60. Utilização de um derivado de acordo com quaisquer uma das reivindicações de 1-54 caracterizado por este derivado ser utilizado na preparação de um medicamento para o tratamento de uma ou mais doenças seleccionadas entre a diabetes mellitus não msulino-dependente, diabetes mellitus insulíno-dependente e obesidade. Lisboa, 14 de Junho de 2007. Pela Requerente O Agente Oficial

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