RS58449B1 - Upotreba soli inhibitora janus kinaze (r)-3-(4-(7h-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1h- pirazol-1-il)-3-ciklopentilpropionitrila - Google Patents

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Ovaj pronalazak obezbeđuje oblike soli (R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-ciklopentilpropionitrila koji su korisni u lečenju policitemije vere.

POZADINA PRONALASKA

[0002] Proteinske kinaze (PKs) su grupa enzima koji regulišu različite, važne biološke procese, uključujući rast ćelije, preživljavanje i diferencijaciju, formiranje organa i morfogenezu, neovaskularizaciju, obnovu tkiva i regeneraciju, među drugima. Proteinske kinaze ispoljavaju svoje fiziološke funkcije kroz kataliziranje fosforilacije proteina (ili supstrata), a time i moduliranje ćelijskih aktivnosti supstrata u raznovrsnim biološkim kontekstima. Osim funkcija u normalnim tkivima/organima, mnoge proteinske kinaze igraju više specijalizovanih uloga u mnoštvu humanih bolesti, uključujući kancer. Podskup proteinskih kinaza (takođe poznat kao onkogene proteinske kinaze), kada je neregulisan, može uzrokovati nastanak tumora i rast, i dodatno doprineti održavanju i progresiji tumora (Blume-Jensen P et al, Nature 2001, 411(6835):355-365). Tako sada, onkogene proteinske kinaze predstavljaju jednu od najvećih i najatraktivnijih meta grupe proteina za intervenciju kancera i razvoj leka.

[0003] Familija Janus Kinaze (JAK) igra ulogu u citokin-zavisnoj regulaciji proliferacije i funkciji ćelija uključenih u imuni odgovor. Trenutno, postoje četiri poznata člana JAK familije sisara: JAK1 (takođe poznat kao Janus kinaza -1), JAK2 (takođe poznat kao Janus kinaza-2), JAK3 (takođe poznat kao Janus kinaza, leukocita; JAKL; L-JAK i Janus kinaza-3) i TYK2 (takođe poznat kao proteinska-tirozinska kinaza 2). JAK proteini su raspona veličine od 120 do 140 kDa, i obuhvataju domene sedam konzervisanih homolognih JAK (JH); jedna od ovih je domena funkcionalne katalitičke kinaze, a druga je domena pseudokinaze potencijalno služeći regulatornoj funkciji i/ili služeći kao priključno mesto za STATs (Scott, Godshall et al.2002, supra).

[0004] Blokiranje signala transdukcije na nivou JAK kinaza obećava razvoju lečenja za humane kancere. Takođe je predviđeno da inhibicija JAK kinaza ima terapijske prednosti kod pacijenata koji pate od kožnih imunih poremećaja kao što su psorijaza i senzitizacija kože. Prema tome, inhibitori Janus kinaza ili srodnih kinaza su široko traženi i nekoliko publikacija objavljuje efikasne klase jedinjenja. Na primer, određeni inhibitori JAK, uključujući (R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-ciklopentilpropionitril prikazani ispod su objavljeni u U.S. Ser. No.11/637,545, filed December 12, 2006.

[0005] Tako, novi ili poboljšani oblici inhibitora postojeće Janus kinaze su stalno potrebni za razvoj novih, poboljšanih i efikasnijih farmaceutskih formulacija za lečenje kancera i drugih bolesti. Oblici soli i metode koji su opisane ovde su usmereni prema ovim potrebama i drugim ciljevima.

REZIME PRONALASKA

[0006] Ovaj pronalazak obezbeđuje, između ostalog, upotrebu soli koja je izabrana od:

(R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-ciklopentilpropionitrilne soli maleinske kiseline;

(R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-ciklopentilpropionitrilne soli sumporne kiseline; i

(R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-ciklopentilpropionitrilne soli fosforne kiseline, za pripremu leka za lečenje policitemije vere.

[0007] "So prema pronalasku" kao što se ovde koristi se odnosi na so koja je izabrana od:

(R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-yl)-3-ciklopentilpropionitrilne soli maleinske kiseline;

(R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-ciklopentilpropionitrilne soli sumporne kiseline; i

(R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3- ciklopentilpropionitrilne soli fosforne kiseline.

DETALJAN OPIS

[0008] Ovaj pronalazak obezbeđuje, između ostalog, uporebu soli inhibitora JAK (R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-ciklopentilpropionitrila odabranog iz soli maleinske kiseline, soli sumporne kiseline i soli fosforne kiseline, za pripremu leka za lečenje policitemije vere. Ove soli moduliraju aktivnost jedne ili više JAKs i korisne su, na primer, u lečenju bolesti povezanih sa ekspresijom JAK ili aktivnosti.

[0009] Soli iz pronalaska imaju brojne prednosti svojstava preko oblika slobodne baze i drugih oblika soli. Konkretno, ove soli su visoko kristalne što bi olakšalo pripremu farmaceutskih formulacija i poboljšalo opšte rukovanje, manipulaciju, i skladištenje aktivnog sastojka. Soli iz pronalaska takođe imaju bolju rastvorljivost u vodi, stopu rastvaranja, hemijsku stabilnost (sa dužim rokom trajanja), kompatibilnost sa ekscipijentima, i reproduktivnost u poređenju sa oblikom slobodne baze.

[0010] U nekim izvođenjima, soli iz pronalaska su suštinski izolovane. Pod "suštinski izolovan" znači da je so najmanje parcijalno ili suštinski odvojena od okoline u kojoj je formirana ili otkrivena. Parcijalno odvajanje može uključiti, na primer, kompoziciju obogaćenu solju iz pronalaska. Suštinska separacija može uključiti kompoziciju koja sadrži najmanje 50%, najmanje oko 60%, najmanje oko 70%, najmanje oko 80%, najmanje oko 90%, najmanje oko 95%, najmanje oko 97%, ili najmanje oko 99% po težini soli.

[0011] Soli iz pronalaska takođe uključuju sve izotope atoma koji se pojavljuju u soli. Izotopi uključuju one atome koji imaju isti atomski broj, ali različite masene brojeve. Na primer, izotopi vodonika uključuju tricijum i deuterijum.

[0012] Soli iz pronalaska mogu biti pripremljene korišćenjem poznatih tehnika. Konvencionalno, oblik soli je pripremljen kombinovanjem u rastvoru slobodne baze jedinjenja i kiseline koja sadrži anjon željenog oblika soli, i zatim izolovanjem produkta čvrste soli iz reakcije rastvora (npr., kristalizacijom, precipitacijom, evaporacijom itd.). Mogu biti upotrebljene druge tehnike formiranja soli.

Metode Korišćenja

[0013] Soli iz pronalaska mogu modulirati aktivnost jedne ili više Janus kinaza (JAKs). Pojam "modulirati" podrazumeva da se odnosi na sposobnost da se poveća ili smanji aktivnost jednog ili više članova familije JAK kinaza. Prema tome, soli iz pronalaska mogu biti korišćene u metodama moduliranja JAK kontaktiranjem JAK sa bilo kojom ili više soli ili kompozicija opisanih ovde. Soli iz pronalaska mogu delovati kao inhibitori jedne ili više JAKs. Soli mogu delovati da stimulišu aktivnost jedne ili više JAKs. Soli iz pronalaska mogu biti korišćene za moduliranje aktivnosti JAK kod pojedinca kome je potrebna modulacija receptora primenom modulirajuće količine soli iz pronalaska.

[0014] JAKs na kojima se prisutne soli vežu i/ili moduliraju uključuju bilo koji član familije JAK. U nekim izvođenjima, JAK je JAK1, JAK2, JAK3 ili TYK2. U nekim izvođenjima JAK je JAK1 ili JAK2. U nekim izvođenjima JAK je JAK2. U nekim izvođenjima, JAK je JAK3.

[0015] Soli iz pronalaska mogu biti selektivne. Pod "selektivno" znači da se jedinjenje veže na ili inhibira JAK sa većim afinitetom i potencijom, respektivno u poređenju sa najmanje jednom drugom JAK. U nekim izvođenjima, soli iz pronalaska su selektivni inhibitori JAK1 ili JAK2 preko JAK3 i/ili TYK2. U nekim izvođenjima, soli iz pronalaska su selektivni inhibitori JAK2 (npr., preko JAK1, JAK3 i TYK2). Bez želje da se vežemo za teoriju, jer inhibitori JAK3 mogu dovesti do imunosupresivnih efekata, jedinjenje koje je selektivno za JAK2 preko JAK3 i koje je korisno u lečenju kancera (kao što je multipli mijelom, na primer) može ponuditi dodatnu prednost da ima manje imunosupresivne sporedne efekte. Selektivnost može biti najmanja 5 puta, 10 puta, najmanja oko 20-puta, najmanja oko 50-puta, najmanja oko 100-puta, najmanja oko 200-puta, najmanja oko 500-puta ili najmanje oko 1000 puta. Selektivnost može biti izmerena metodama koje su rutinske u tehnici. U nekim oblicima, selektivnost se može ispitati na Km za svaki enzim. U nekim izvođenjima, selektivnost soli prema pronalasku za JAK2 preko JAK3 može biti određena ćelijskom koncentracijom ATP.

[0016] Soli iz pronalaska mogu biti korišćene u metodama lečenja JAK–povezane bolesti ili poremećaja kod pojedinca (npr., pacijenta) davanjem pojedincu kojem je potrebno takvo lečenje terapijski efikasne količine ili doze soli iz ovog pronalaska, ili njene farmaceutske kompozicije. JAK-povezana bolest može obuhvatitii bilo koju bolest, poremećaj ili stanje koje je direktno ili indirektno povezano sa ekspresijom ili aktivnošću JAK, uključujući prekomernu ekspresiju i/ili abnormalne nivoe aktivnosti. JAK-povezana bolest može takođe obuhvatiti bilo koju bolest, poremećaj ili stanje koje može biti sprečeno, ublaženo ili izlečeno moduliranjem aktivnosti JAK.

[0017] Primeri JAK-povezanih bolesti uključuju bolesti koje uključuju imuni sistem, uključujući, na primer, odbacivanje transplantiranog organa (npr., odbacivanje alografta i graft versus host bolest).

[0018] Dalji primeri JAK-povezanih bolesti uključuju autoimune bolesti kao što su multipla skleroza, reumatoidni artritis, juvenilni artritis, dijabetes tipa I, lupus, psorijaza, inflamatorna bolest creva, ulcerozni kolitis, Kronova bolest, miastenija gravis, imunoglobulinske nefropatije, autoimuni poremećaji štitnjače, i slično. U nekim izvođenjima, autoimuna bolest je autoimuni bulozni poremećaj kože kao što je pemfigus vulgaris (PV) ili bulozni pemfigoid (BP).

[0019] Dalji primeri JAK-povezanih bolesti uključuju alergijska stanja kao što su astma, alergija na hranu, atopijski dermatitis i rinitis. Dalji primeri JAK-povezanih bolesti uključuju virusne bolesti kao što je Epštajn-Barov virus (EBV), Hepatitis B, Hepatitis C, HIV, HTLV 1, Varičela-Zoster virus (VZV) i Humani papiloma virus (HPV).

[0020] Dalji primeri JAK-povezanih bolesti ili stanja uključuju poremećaje kože kao što su psorijaza (na primer, psorijaza vulgaris), atopijskii dermatitis, kožni osip, iritacija kože, senzitizacija kože (npr., kontaktni dermatitis ili alergijski kontaktni dermatitis). Na primer, određene supstance uključujući i neke farmaceutike kada su lokalno primenjene mogu izazvati senzitizaciju kože. Istovremena ili sekvencijalna primena najmanje jednog inhibitora JAK iz pronalaska zajedno sa agensom uzrokujući neželjenu senzitizaciju može biti korisna u lečenju takve neželjene senzitizacije ili dermatitisa. Poremećaj kože može biti lečen topikalnom primenom najmanje jednog JAK inhibitora iz pronalaska.

[0021] JAK-povezane bolesti uključuju kancer, uključujući one karakterisane čvrstim tumorima (npr., kancer prostate, kancer bubrega, kancer jetre, kancer gušterače, kancer želuca, kancer dojke, kancer pluća, kancere glave i vrata, kancer štitnjače, glioblastom, Kapošijev sarkom, Kastlemanovu bolest, melanom itd.,), hematološke kancere (npr., limfom, leukemiju kao što je akutna limfoblastična leukemija, akutna mijelogena leukemija (AML), ili multipli mijelom), kancer kože, kao što je kožni limfom T-ćelija (CTCL) i kožni limfom B-ćelija. Primer kožnih T-ćelijskih limfoma uključuje Sezari sindrom i mikozu fungoides.

[0022] JAK-povezane bolesti mogu dalje uključiti one karakterisane ekspresijom mutirane JAK2, takve kao one koje imaju najmanje jednu mutaciju u domenu pseudo-kinaze (npr., JAK2V617F).

[0023] JAK-povezane bolesti mogu dalje uključiti mijeloproliferativne poremećaje (MPDs), kao što policitemija vera (PV), esencijalna trombocitemija (ET), mijeloidna metaplazija sa mijelofibrozom (MMM), hronična mijelogena leukemija (CML), hronična mijelomonocitna leukemija (CMML), hipereozinofilni sindrom (HES), sistemska bolest mastocita (SMCD), i slično.

[0024] Dalje JAK-povezane bolesti uključuju inflamaciju i inflamatorne bolesti. Primer inflamatorne bolesti uključuje inflamatorne bolesti oka (npr., iritis, uveitis, skleritis, konjuktivitis, ili povezanu bolest), inflamatorne bolesti respiratornog trakta (npr., gornjeg respiratornog trakta, uključujući nos i sinuse, kao što su rinitis ili sinuzitis ili donjeg respiratornog trakta uključujući bronhitis, hroničnu opstruktivnu bolest pluća, i slično), inflamatornu miopatiju kao što je miokarditis, i druge inflamatorne bolesti. Druge inflamatorne bolesti koje se mogu lečiti solima iz pronalaska uključuju sindrom sistemskog inflamatornog odgovora (SIRS), i septički šok.

[0025] JAK inhibitori opisani ovde mogu dalje biti korišćeni za lečenje ishemijskih reperfuzionih povreda ili bolesti ili stanja povezanih sa inflamatornim ishemijskim događajem kao što su moždani ili srčani zastoj. Inhibitori JAK opisani ovde mogu dalje biti korišćeni za lečenje anoreksije, kaheksije, ili umora kao što je onaj koji rezultira ili je povezan sa kancerom. Inhibitori JAK opisani ovde mogu dalje biti korišćeni za za lečenje restenoze, sklerodermitisa ili fibroze. JAK inhibitori opisani ovde mogu dalje biti korišćeni za lečenje stanja povezanih sa hipoksijom ili astrogliozom kao što je, na primer, dijabetička retinopatija, kancer, ili neurodegeneracija. Videti, npr., Dudley, A.C. et al. Biochem. J.2005, 390(Pt 2):427-36 and Sriram, K. et al. J. Biol. Chem.2004, 279(19):19936-47. Epub 2004 Mar 2.

[0026] JAK inhibitori opisani ovde mogu dalje biti korišćeni za lečenje gihta i povećanja veličine prostate zbog, npr., benigne hipertrofije prostate ili benigne hiperplazije prostate.

[0027] Kao što se ovde koristi, termin "dovođenje u kontakt" se odnosi na prikupljanje navedenih ostataka u in vitro sistemu ili in vivo sistemu. Na primer, "dovođenje u kontakt" JAK sa soli iz ovog pronalaska uključuje primenu soli iz ovog pronalaska na pojedincu ili pacijentu, kao što je čovek, koji ima JAK, kao i, na primer, uvođenje soli iz pronalaska u uzorak koji sadrži ćelijski ili prečišćeni pripravak koji sadrži JAK.

[0028] Kao što se ovde koristi, termin "pojedinac" ili "pacijent" korišćeni naizmenično, se odnose na bilo koju životinju, uključujući sisare, poželjno miševe, pacove, ostale glodare, zečeve, pse, mačke, svinje, goveda, ovce, konje, ili primate, i najpoželjnije ljude.

[0029] Kao što se ovde koristi, izraz "terapijski efikasna količina" se odnosi se na količinu aktivne soli ili farmaceutskog agensa koji izaziva biološki ili medicinski odgovor koji se traži u tkivu, sistemu, životinji, pojedincu ili čoveku, od strane istraživača, veterinara, lekara ili drugog kliničara.

[0030] Kao što se ovde koristi, izraz "lečenje" ili "tretman" se odnosi na jednu ili više od (1) prevencije bolesti; na primer, prevenciju bolesti, stanja ili poremećaja kod pojedinca koji može biti predisponiran za bolest, stanje ili poremećaj ali još uvijek ne doživljava ili ne pokazuje patologiju ili simptome bolesti; (2) inhibicije bolesti; na primer, inhibiciju bolesti, stanja ili poremećaja kod pojedinca koji doživljava ili pokazuje patologiju ili simptomatologiju bolesti, stanja ili poremećaja; i (3) ublažavanje bolesti; na primer, ublažavanje bolesti, stanja ili poremećaja kod pojedinca koji doživljava ili pokazuje patologiju ili simptomatologiju bolesti, stanja ili poremećaja (t.j., poništavanjem patologije i/ili simptomatologije), kao što je smanjenje ozbiljnosti bolesti.

Kombinovane Terapije

[0031] Jedno ili više dodatnih farmaceutskih agenasa kao što su, na primer, hemoterapijski agensi, antiinflamatorni agensi, steroidi, imunosupresanti kao i Bcr-Abl, Flt-3, inhibitori kinaze RAF i FAK, kao što su, na primer, oni opisani u WO 2006/056399, ili drugi agensi mogu biti korišćeni u kombinaciji sa solima iz ovog pronalaska za lečenje JAK-povezanih bolesti, poremećaja ili stanja. Jedan ili više dodatnih farmaceutskih agenasa mogu biti davani pacijentu istovremeno ili sekvencijalno.

[0032] Primer hemoterapijskih agenasa uključuje inhibitore proteozoma (npr., bortezomib), talidomid, revlimid, i agense koji oštećuju DNK kao što su melfalan, doksorubicin, ciklofosfamid, vinkristin, etopozid, karmustin, i slično.

[0033] Primer steroida uključuje kortikosteroide kao što su deksametazon ili prednizon.

[0034] Primer inhibitora Bcr-Abl uključuje jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, od rodova i vrsta otkrivenih u U.S. Pat. No. 5,521,184, WO 04/005281, EP2005/009967, EP2005/010408, i U.S. Ser. No.

60/578,491.

[0035] Primer pogodnih Flt-3 inhibitora uključuje jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je otkriveno u WO 03/037347, WO 03/099771, i WO 04/046120.

[0036] Primer pogodnih RAF inhibitora uključuje jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je otkriveno u WO 00/09495 and WO 05/028444.

[0037] Primer pogodnih FAK inhibitora uključuje jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je otkriveno u WO 04/080980, WO 04/056786, WO 03/024967, WO 01/064655, WO 00/053595, i WO 01/014402.

[0038] U nekim izvođenjima, oblici soli iz pronalaska mogu biti korišćeni u kombinaciji sa drugim inhibitorima kinaze kao što imatinib, naročito za lečenje pacijenata rezistentnih na imatinib ili druge kinaze.

[0039] U nekim izvođenjima, jedan ili više oblika soli iz pronalaska mogu biti korišćeni u kombinaciji sa hemoterapijskim agensima u lečenju kancera, kao što je multipli mijelom, i mogu poboljšati odgovor na lečenje u odnosu na odgovor na sam hemoterapijski agens, bez egzacerbacije toksičnih efekata. Primeri dodatnih farmaceutskih agenasa korišćenih u lečenju multiplog mijeloma, na primer, mogu uključiti, bez ograničenja, melfalan, melfalan plus prednizon [MP], doksorubicin, deksametazon, i Velcade (bortezomib). Dalji dodatni agensi korišćeni u lečenju multiplog mijeloma uključuju Bcr-Abl, Flt-3, RAF i inhibitore FAK kinaze. Aditivi ili sinergijski efekti su poželjni ishodi kombinovanja inhibitora JAK iz poronalaska sa dodatnim agensom. Pored toga, rezistencija ćelija multiplog mijeloma na agense kao što je deksametazon može biti reverzibilna nakon tretmana sa inhibitorom JAK iz ovog pronalaska. Agensi mogu biti kombinovani sa ovim jedinjenjima u pojedinačnom ili kontinuiranom doznom obliku, ili agensi mogu biti davani istovremeno ili sekvencijalno kao odvojeni dozni oblici.

[0040] U nekim izvođenjima, kortikosteroid kao što je deksametazon se primenjuje na pacijentu u kombinaciji sa najmanje jednim inhibitorom JAK gde se deksametazonom primenjuje isprekidano nasuprot kontinuiranoj primeni.

[0041] U nekim daljim izvođenjima, kombinacije jednog ili više inhibitora JAK iz pronalaska sa drugim terapijskim agensima se mogu davati pacijentu pre, za vreme i/ili nakon transplantacije koštane srži ili transplantacije matičnih ćelija.

Farmaceutske Formulacije i Dozni Oblici

[0042] Kada se koriste kao farmaceutski agensi, soli iz pronalaska mogu biti primenjene u obliku farmaceutskih kompozicija. Ove kompozicije mogu biti pripremljene na način koji je dobro poznat u farmaceutskoj struci i mogu se davati različitim putevima, zavisno od toga da li se želi lokalno ili sistemsko lečenje i od oblasti koja se tretira. Primena može biti topikalna (uključujući transdermalnu, epidermalnu, oftalmičku i na mukoznim membranama, uključujući intranazalnu, vaginalnu i rektalnu isporuku), plućna (na primer, inhalacijom ili insuflacijom praha ili aerosola, uključujući nebulizator; intratrahealna ili intranazalna), oralna ili parenteralna. Parenteralna primena uključuje intravenoznu, intraarterijsku, supkutanu, intraperitonealnu, intramuskularnu ili injekcijom ili infuzijom; ili intrakranijalnu, npr., intratekalnu ili intraventrikularnu, primenu. Parenteralna primena može biti u obliku jedne bolus doze ili može biti, na primer, putem kontinuirane perfuzione pumpe. Farmaceutske kompozicije i formulacije za topikalnu primenu mogu uključiti transdermalne flastere, masti, losione, kreme, gelove, kapi, čepiće, sprejeve, tečnosti i prah. Konvencionalni farmaceutski nosači, vodeni, u prahu ili uljane baze, agensi za zgušnjavanje i slično mogu biti neophodni ili poželjni. Obloženi kondomi, rukavice i slično, mogu takođe biti korisni.

[0043] Farmaceutske kompozicije mogu da sadrže, kao aktivni sastojak, jednu ili više soli iz ovog pronalaska iznad u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača (ekscipijenata). U pravljenju kompozicija, aktivni sastojak se obično meša sa ekscipijentom, razblažen sa ekscipijentom ili zatvoren unutar takvog nosača u obliku, na primer, kapsule, kesice, papira, ili drugog spremnika. Kada ekscipijent služi kao razblaživač, to može biti čvrsta supstanca, polu-čvrsta supstanca, ili tečni materijal, koji deluje kao prenosnik, nosač ili medijum za aktivni sastojak. Tako, kompozicije mogu biti u obliku tableta, pilula, praha, pastila, kesica, kapsula, eliksira, suspenzija, emulzija, rastvora, sirupa, aerosola (kao čvrsta supstanca ili u tečnom medijumu), masti koje sadrže, na primer, do 10% po težini aktivnog jedinjenja, mekih i tvrdih želatinskih kapsula, čepića, sterilnih injekcijskih rastvora, i sterilno upakovnog praha.

[0044] U pripremanju formulacije, aktivno jedinjenje se može samleti da se obezbedi odgovarajuća veličina čestica pre kombinovanja sa drugim sastojcima. Ako je aktivno jedinjenje u suštini nerastvoreno, može se samleti do veličine čestice manje od 200 meša. Ako je aktivno jedinjenje u suštini rastvoreno u vodi, veličina čestica može biti prilagođena mlevenjem da se dobije u suštini ravnomerna raspodela u formulaciji, npr., oko 40 meša.

[0045] Soli iz pronalaska mogu biti samlevene korišćenjem poznatih procedura mlevenja kao što je vlažno mlevenje da bi se dobila odgovarajuća veličina čestica za formiranje tableta i drugih tipova formulacije. Fino usitnjeni (nanočestice) pripravci soli iz ovog pronalaska mogu biti pripremljeni procedurom poznatom u tehnici, na primer videti International Patent Application No. WO 2002/000196.

[0046] Neki primeri pogodnih ekscipijenata uključuju laktozu, dekstrozu, saharozu, sorbitol, manitol, skrobove, gumu akaciju, kalcijum fosfat, alginate, tragakant, želatin, kalcijum silikat, mikrokristalnu celulozu, polivinilpirolidon, celulozu, vodu, sirup, i metil celulozu. Formulacije mogu dodatno uključivati: agense za podmazivanje kao što su talk, magnezijum stearat, i mineralno ulje; agense za vlaženje; agense za emulgovanje i agense za suspendovanje; konzervanse kao što su metil- i propilhidroksi-benzoati; zaslađivače; i sredstva za aromu. Kompozicije mogu biti formulisane tako da obezbede brzo, produženo ili odloženo otpuštanje aktivnog sastojka posle primene na pacijentu primenom procedura poznatih u tehnici.

[0047] Kompozicije mogu se formulisane u jediničnom doznom obliku, svaka doza sadrži od oko 5 do oko 1000 mg (1 g), obično od 100 do oko 500 mg, aktivnog sastojka. Termin "jedinični dozni oblici" se odnosi na fizički odvojene jedinice pogodne kao jedinične doze za humane subjekte i druge sisare, svaka jedinica sadrži prethodno određenu količinu aktivnog materijala izračunatog da proizvede željeni terapijski efekat, zajedno sa pogodnim farmaceutskim ekscipijentom.

[0048] Aktivno jedinjenje može biti efikasno u širokom rasponu doze i generalno se primenjuje u farmaceutski efikasnoj količini. Podrazumeva se, međutim, da će količinu jedinjenja koja se primenjuje obično odrediti lekar, prema relevantnim okolnostima, uključujući stanje koje se tretira, odabrani put primene, jedinjenje koje se primenjuje, starost, težinu, i odgovor pojedinog pacijenta, ozbiljnost pacijentovih simptoma, i slično.

[0049] Za pripremanje čvrstih kompozicija kao što su tablete, glavni aktivni sastojak je pomešan sa farmaceutskim ekscipijentom da se formira čvrsta predformulacijska kompozicija koja sadrži homogenu smešu soli iz ovog pronalaska. Kada se odnosi na ove kompozicije predformulacije kao homogene, aktivni sastojak je obično dispergovan ravnomerno u kompoziciji tako da kompozicija može biti jednostavno podeljena u jednako efikasne jedinične dozne oblike kao što su tablete, pilule i kapsule. Ova čvrsta predformulacija je zatim podeljena u jedinične dozne oblike tipa opisane iznad koji sadrže od, na primer, oko 0.1 do oko 1000 mg aktivnog sastojka iz ovog pronalaska.

[0050] Tablete ili pilule mogu biti obložene ili drugačije stvorene da obezbede oblik doze dajući prednost produženom delovanju. Na primer, tableta ili pilula može sadržavati komponentu unutrašnje doze i komponentu spoljašnje doze, druge u obliku omotača preko prethodne. Dve komponente mogu biti razdvojene enteričkim slojem koji služi da spreči dezintegraciju u želucu i omogući unutarašnjoj komponenti da prođe netaknuta u duodenum ili da se odloži njeno oslobađanje. Mogu se koristiti različiti materijali za takve enterične slojeve ili omotače, takvi materijali uključuju veliki broj polimernih kiselina i smeša polimernih kiselina sa takvim materijalima kao što je šelak, cetil alkohol, i acetat celuloza.

[0051] Tečni oblici u kojima jedinjenja i kompozicije mogu biti inkorporisani za oralnu primenu ili injekcijom, uključuju vodene rastvore, pogodne aromatizovane sirupe, vodene ili uljane suspenzije, i aromatizovane emulzije sa jestivim uljima kao što je pamučno ulje, susamovo ulje, kokosovo ulje ili ulje kikirikija, kao i eliksire i slične farmaceutske nosače.

[0052] Kompozicije za inhalaciju ili insuflaciju uključuju rastvore i suspenzije u farmaceutski prihvatljivim, vodenim ili organskim rastvaračima, ili smeše od njih, i prah. Tečne ili čvrste kompozicije mogu da sadrže pogodne farmaceutski prihvatljive ekscipijente kako je opisano gore. U nekim izvođenjima, kompozicije se primenjuju oralnim ili nazalnim respiratornim putem za lokalno ili sistemsko delovanje. Kompozicije mogu biti raspršene upotrebom inertnih gasova. Raspršeni rastvori se mogu udisati direktno iz uređaja za raspršivanje ili uređaj za raspršivanje može biti priključen na maski za lice šatora, ili isprekidanim pozitivnim pritiskom na aparat za disanje. Rastvor, suspenzija ili kompozicije praha se mogu davati oralno ili nazalno iz uređaja koji isporučuju formulaciju na odgovarajući način.

[0053] Količina soli ili kompozicije primenjene na pacijentu će varirati u zavisnosti od toga šta se primenjuje, svrhe primene, kao što su profilaksa ili lečenje, stanja pacijenta, načina primene, i slično. U terapijskim aplikacijama, kompozicije mogu biti davane pacijentu koji već pati od bolesti, u količini dovoljnoj da izleči ili barem delimično zaustavi simptome bolesti i njene komplikacije. Efikasne doze će zavisiti od stanja bolesti koja se leči, kao i od procene kliničkog lekara u zavisnosti od faktora kao što su ozbiljnost bolesti, starost, težna i opšte stanje pacijenta, i slično.

[0054] Kompozicije primenjene na pacijentu mogu biti u obliku farmaceutskih kompozicija koje su opisane iznad. Ove kompozicije mogu biti sterilisane konvencionalnim tehnikama sterilizacije, ili mogu biti sterilno filtrirane. Vodeni rastvori mogu biti upakovani za upotrebu kao takvi, ili liofilizovani, gde se liofilizovani pripravak kombinuje sa sterilnim vodenim nosačem pre primene. pH pripravaka jedinjenja uglavnom će biti između 3 i 11, poželjnije od 5 do 9, i najpoželjnije od 7 do 8. Podrazumeva se da će upotreba određenih gore navedenih ekscipijenata, nosača ili stabilizatora rezultirati u formiranju farmaceutskih soli.

[0055] Terapijske doze soli iz ovog pronalaska mogu varirati u skladu sa, na primer, određenom upotrebom za čiju svrhu se sprovodi lečenje, načina primene jedinjenja, zdravlja i stanja pacijenta i procene nadležnog lekara. Proporcija ili koncentracija soli prema ovom pronalasku u farmaceutskoj kompoziciji može varirati u zavisnosti od brojnih faktora, uključujući doziranje, hemijske karakteristike (npr., hidrofobnost), i put primene. Na primer, soli iz pronalaska mogu biti obezbeđene u vodenom rastvoru fiziološkog pufera koji sadrži oko 0.1 do oko 10% mas/v jedinjenja za parenteralnu primenu. Neki rasponi tipične doze su od oko 1 µg/kg do oko 1 g/kg telesne težine na dan. U nekim izvođenjima, raspon doze je od oko 0.01 mg/kg do oko 100 mg/kg telesne težine na dan. Doza će verovatno zavisiti od takvih varijabli kao što su vrsta i obim progresije bolesti ili poremećaja, ukupni zdravstveni status konkretnog pacijenta, relativna biološka efikasnost izabranog jedinjenja, formulacija ekscipijenta, i njegov put primene. Efikasne doze mogu biti ekstrapolirane iz kriva doza-odgovor dobijenih iz in vitro ili na sistemima ispitivanja na životinjskom modelu.

[0056] Kompozicije mogu dalje uključiti jedan ili više dodatnih farmaceutskih agenasa kao što su hemoterapijsko, steroidno, anti-inflamatorno jedinjenje ili imunosupresant, čiji primeri su navedeni iznad. Označena Jedinjenja i Metode Ispitivanja

[0057] Soli iz pronalaska mogu biti označene (radioaktivno označene, fluorescentno označene, itd.,) i mogu biti korisne ne samo u slikovnim tehnikama, već i u ispitivanjima in vitro i in vivo, za lokalizaciju i kvantifikaciju JAK u uzorcima tkiva, uključujući humana, i za identifikaciju JAK liganada inhibicijom vezivanja označenog jedinjenja. Prema tome, predviđeni su JAK testovi koji sadrže takva označena jedinjenja.

[0058] Soli iz pronalaska mogu biti izotopski označene. "Izotopski" ili "radio-označeno" jedinjenje je so iz pronalaska, gde su jedan ili više atoma zamenjeni ili supstituisani sa atomom koji ima atomsku masu ili maseni broj različit od atomske mase ili masenog broja koji se obično nalaze u prirodi (tj., pojavljuju se prirodno). Pogodni radionukleotidi koji mogu biti inkorporisani u jedinjenja iz ovog pronalaska uključuju, ali nisu ograničeni na<2>H (takođe se piše kao D za deuterijum),<3>H (takođe se piše kao T za tricijum),<11>C,<13>C,<14>C,<13>N,<15>N,<15>O,<17>O,<18>O,<18>F,<35>S,<36>Cl,<82>Br,<75>Br,<76>Br,<77>Br,<123>I,<124>I,<125>I i<131>I. Radionuklid koji je inkorporisan u trenutno radio-označena jedinjenja će zavisiti od specifične primene tog radioaktivno označenog jedinjenja. Na primer, za in vitro označavanje metaloproteaze i ispitivanja konkurencije, jedinjenja koja inkorporiraju<3>H,<14>C,<82>Br,<125>I,<131>I,<35>S će generalno biti najkorisnija. Za aplikacije radio snimanja<11>C,<18>F,<125>I,<123>I,<124>I,<131>I,<75>Br,<76>Br ili<77>Br će generalno biti najkorisniji.

[0059] Podrazumeva se da "radioaktivno označeno" ili "označeno jedinjenje "je so koja ima inkorporisan najmanje jedan radionuklid. U nekim izvođenjima radionukleotid je izabran iz grupe koju čine<3>H,<14>C,<125>I,<35>S i<82>Br.

[0060] Takođe dolaze u obzir sintetičke metode za inkorporaciju radio-izotopa u jedinjenja iz pronalaska. Metode sinteze za inkorporaciju radio-izotopa u organska jedinjenja su dobro poznate u struci, a prosečan stručnjak sa ovog područja tehnike će lako prepoznati metode koje se primenjuju za jedinjenja iz pronalaska.

[0061] Označena so iz pronalaska može biti korišćena u skrining testu da se identifikuju/procene jedinjenja. Na primer, novo sintetizovano ili identifikovano jedinjenje (tj. test jedinjenje), koje je označeno može biti procenjeno u pogledu njegove sposobnosti da se veže za JAK putem praćenja varijacije njegove koncentracije prilikom kontaktiranja sa JAK, kroz praćenje označavanja. Na primer, test jedinjenje (označeno) može biti procenjeno u pogledu njegove sposobnosti da redukuje vezivanje drugog jedinjenja koje je poznato da se veže za JAK (tj., standardnog jedinjenja). Prema tome, sposobnost test jedinjenja da se takmiči sa standardnim jedinjenjem za vezivanje na JAK je u direktnoj korelaciji sa njegovim afinitetom vezivanja. Obrnuto, u nekim drugim skrining testovima, standardno jedinjenje je označeno i test jedinjenja su neoznačena. Prema tome, koncentracija označenog standardnog jedinjenja je praćena u cilju procene konkurencije između standardnog jedinjenja i ispitivanog jedinjenja i relativni afinitet vezivanja test jedinjenja je tako utvrđen.

Kompleti

[0062] Soli iz pronalaska mogu biti uključene u farmaceutske komplete korisno, na primer, u lečenju ili prevenciji JAK-povezanih bolesti ili poremećaja, kao što su kancer, inflamacija ili poremećaji kože, koji uključuju jedan ili više spremnika koji sadrže farmaceutsku kompoziciju koja sadrži terapijski efikasnu količinu soli iz pronalaska. Takvi kompleti mogu dalje uključivati, ako se želi, jednu ili više različitih konvencionalnih farmaceutskih komponenti kompleta, kao što su, na primer, spremnici sa jednim ili više farmaceutskih prihvatljivih nosača, dodatni spremnici, itd., kao što će biti očigledno stručnjacima u ovom području tehnike. Instrukcije, bilo kao umeci ili kao nalepnice, koje pokazuju količine komponenti koje se primenjuju, smernice za primenu, i/ili smernice za mešanje komponenti, takođe mogu biti uključene u komplet.

[0063] Pronalazak će biti opisan u više detalja putem specifičnih primera. Sledeći primeri se nude za ilustrativne svrhe i nisu namenjeni da ograniče pronalazak na bilo koji način. Stručnjaci u ovom području tehnike će lako prepoznati mnoštvo nekritičnih parametara koji se mogu menjati ili modifikovati da bi se dobili u suštini isti rezultati.

PRIMERI

Primer 1: Priprema soli (R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-ciklopentilpropionitril maleinske kiseline

[0064] U epruvetu je dodat (R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-ciklopentilpropionitril (153.7 mg, 0.5 mmol) i maleinska kiselina (61.7 mg), a zatim izopropil alkohol (IPA) (4 mL). Dobijena smeša je zagrevana do bistrine, ohlađena do sobne temperature, i zatim mešana još 2.5 sata. Precipitat je sakupljen filtracijom i filter kolač je bio ispran sa 0.8 mL hladnog IPA. Kolač je osušen pod vakumom do konstantne težine da se obezbedi finalna so produkta (173 mg).

[0065] Pokazano je da će so maleinske kiseline biti 1:1 so od H<1>NMR i kristalitet je potvrđen difrakcijom praha pomoću rendgenskih zraka (XRPD). Diferencijalna skenirajuća kalorimetrija (DSC) je dala oštri maksimum tačke topljenja na oko 175.96°C (Početak na 175.67°C). Produkt je pokazao samo neznatni gubitak težine do 150°C, termogravimetrijskom analizom (TGA).

Primer 2: Priprema soli (R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-ciklopentilpropionitril fosforne kiseline

[0066] U epruvetu je dodat (R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-ciklopentilpropionitril (153.5 mg) i fosforna kiselina (56.6 mg), zatim izopropil alkohol (IPA) (5.75 mL). Dobijena smeša je zagrevana do bistrine, ohlađena do sobne temperature, i zatim mešana još 2 sata. Precipitat je sakupljen filtracijom i filter kolač je bio ispran sa 0.6 mL hladnog IPA. Kolač je osušen pod vakumom do konstantne težine da se obezbedi finalna so produkta (171.7 mg).

[0067] Pokazano je da će so fosforne kiseline biti 1:1 so od H<1>NMR i kristalitet je potvrđen difrakcijom praha pomoću rendgenskih zraka (XRPD). Diferencijalna skenirajuća kalorimetrija (DSC) je dala oštri maksimum tačke topljenja na oko 198.66°C. Produkt je pokazao samo neznatni gubitak težine do 200°C putem TGA.

Primer 3: Priprema soli (R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3- ciklopentilpropionitril sumporne kiseline

[0068] U epruvetu je dodat (R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3- ciklopentilpropionitril (153.0 mg) i sumporna kiselina (56.1 mg), zatim acetonitril (7.0 mL). Dobijena smeša je zagrevana do bistrine, ohlđena do sobne temperature, i zatim mešana još 2 sata. Precipitat je sakupljen filtracijom i filter kolač je bio ispran sa 0.8 mL hladnog acetonitrila. Kolač je osušen pod vakumom do konstantne težine da se obezbedi finalna so produkta (180 mg).

[0069] Pokazano je da će so sumporne kiseline biti 1:1 od H<1>NMR i kristalitet je potvrđen difrakcijom praha pomoću rendgenskih zraka (XRPD). Diferencijalna skenirajuća kalorimetrija (DSC) je dala oštri maksimum tačke topljenja na oko 186.78 °C. Produkt je pokazao samo neznatni gubitak težine do 175°C putem TGA. Primer A

In vitro Ispitivanje JAK Kinaze

[0070] Inhibitorna aktivnost test jedinjenja na JAK mete može biti testirana prema sledećem in vitro testu opisanom u Park et al., Analytical Biochemistry 1999, 269, 94-104. Katalitičke domene humanog JAK1 (a.a.

837-1142), Jak2 (a.a. 828-1132) i Jak3 (a.a. 781-1124) sa N-terminalnom His oznakom su izražene korišćenjem baculovirusa u ćelijama insekata i prečišćene. Katalitička aktivnost JAK1, JAK2 ili JAK3 je ispitivana merenjem fosforilacije biotinilisanog peptida. Fosforilisani peptid je detektovan homogenim vremenom oslobođene fluorescencije (HTRF). IC50s jedinjenja su merena za svaku kinazu u reakcijama koje sadrže enzim, ATP i 500 nM peptida u 50 mM Tris (pH 7.8) pufera sa 100 mM NaCl, 5 mM DTT, i 0.1 mg/mL (0.01%) BSA. Koncentracija ATP u reakcijama je 90µM za Jak1, 30 µM za Jak2 i 3 µM za Jak3. Reakcije su izvedene na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, i onda zaustavljene sa 20 µL 45 mM EDTA, 300 nM SA-APC, 6 nM Eu-Py20 u testnom puferu (Perkin Elmer, Boston, MA). Vezanje na Europijum obeleženo antitelo se odvija tokom 40 minuta, i HTRF signal je izmeren je na čitaču ploča Fusion (Perkin Elmer, Boston, MA). I so fosforne kiseline iz pronalaska, i odgovarajuća slobodna baza jedinjenja, su nađene da imaju IC50vrednosti manje od 50 nM za svaki od JAK1, JAK2, i JAK3.

Claims (4)

Patentni zahtevi

1. Upotreba soli koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od:

(R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il)-3-ciklopentilpropionitrilne soli fosforne kiseline;

(R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il)-3-ciklopentilpropionitrilne soli sumporne kiseline; i

(R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il)-3- ciklopentilpropionitrilne soli maleinske kiseline, za pripremu leka za lečenje policitemije vere.

2. Upotreba prema zahtevu 1 pri čemu je so (R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-ciklopentilpropionitrilna so fosforne kiseline.

3. Upotreba prema zahtevu 1 ili zahtevu 2 pri čemu je so kristalna.

4. Upotreba prema zahtevu 3 pri čemu je kristalna so 1:1 (R)-3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-ciklopentilpropionitril: so fosforne kiseline.

Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5