RS58638B1 - Humana antitela za pd-l1 - Google Patents

Humana antitela za pd-l1

Info

Publication number
RS58638B1
RS58638B1 RS20190468A RSP20190468A RS58638B1 RS 58638 B1 RS58638 B1 RS 58638B1 RS 20190468 A RS20190468 A RS 20190468A RS P20190468 A RSP20190468 A RS P20190468A RS 58638 B1 RS58638 B1 RS 58638B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
antibody
antigen
antibodies
binding
amino acid
Prior art date
Application number
RS20190468A
Other languages
English (en)
Inventor
Nicholas J Papadopoulos
Andrew J Murphy
Gavin Thurston
Ella Ioffe
Elena Burova
Original Assignee
Regeneron Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Regeneron Pharma filed Critical Regeneron Pharma
Publication of RS58638B1 publication Critical patent/RS58638B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

Opis
OBLAST TEHNIKE
[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na humana antitela i fragmente koji vezuju antigene humanih antitela koji se specifično vezuju za ligand imunomodulatornog receptora - ligand 1 programirane smrti (engl. programmed death-ligand 1, skr. PD-L1), i na terapeutske metode primene tih antitela.
STANJE TEHNIKE
[0002] Ligand 1 programirane smrti (PD-L1) (takođe se naziva B7-H1 ili CD274) je protein receptorski ligand od 290 aminokiselina koji se široko izražava i na limfoidnim, i na nelimfoidnim tkivima, kao što su CD4 i CD8 T-ćelije, ćelije loze makrofaga, periferna tkiva, kao i na tumorskim ćelijama i virusima inficiranim ćelijama (Dong et al 1999, Nature Med.). PD-L1 se vezuje za receptore PD-1 i B7-1 koji pripadaju CD28/CTLA-4 (citotoksični T limfocitni antigen)/ ICOS (induktibilni kostimulator) familiji ko-inhibitornih receptora T-ćelija (Chen et al 2013, Nature Rev. Immunol.13: 227-242) i slabe imunu reakciju inhibicijom aktivacije T-ćelija. PD-L1 vezivanje za PD-1 ili B7-1 rezultuje smanjenom proliferacijom T-ćelija i izlučivanjem citokina, što kompromituje humoralne i ćelijske imune reakcije kod bolesti kao što su kancer i virusna infekcija.
[0003] Ekspresiju PD-L1 na tumorskim ćelijama i virusima inficiranim ćelijama iskorišćavaju tumori i hronične virusne infekcije da bi izbegle imunu reakciju. PD-L1 se izražava na velikom mnoštvu tumora, a studije na životinjskim modelima su pokazale da PD-L1 na tumorima inhibira aktivaciju T-ćelija i lizu tumorskih ćelija i da može dovesti do povećanja smrtnosti T-ćelija specifičnih za tumor. Kod hroničnih virusnih infekcija, PD-L1 izražen na virusima inficiranim ćelijama se vezuje za PD-1 na T-ćelijama specifičnim za virus, pa ove T-ćelije postaju "iscrpljene" uz gubitak efektorskih funkcija i proliferativne sposobnosti (Freeman 2008, PNAS 105: 10275-10276). PD-1: PD-L1 sistem takođe igra važnu ulogu u indukovanom T-regulatornom (Treg) razvoju ćelija i u održavanju Treg funkcije (Francisco et al 2010, Immunol. Rev. 236: 219-242).
[0004] Pošto PD-L1 igra važnu ulogu u tumorskom imunitetu i infektivnom imunitetu, on je idealna meta za imunoterapiju. Blokiranje PD-L1 sa antagonistima, uključujući monoklonska antitela, bilo je proučavano u lečenju kancera i hroničnih virusnih infekcija (Ribas 2012, NEJM 366: 2517-2519; Freeman 2008, PNAS 105: 10275-10276; Sheridan 2012, Nature Biotechnology 30: 729-730).
[0005] Monoklonska antitela za PD-L1 su poznata iz stanja tehnike i opisana su, na primer, u US patentima/objavljenim prijavama br.7943742, 8383796, 8217149, 20090055944, 20120003056,20130034559, 20130045200, 20130045201, 20130045202, i u WO2007005874, WO2011066389, WO2010077634, EP1907424, i EP1899379. Naročito WO 2011/066389 opisuje humana monoklonska antitela protiv PD-L1 i primene ovih antitela u dijagnostici i za lečenje bolesti povezanih sa aktivnosti i/ili ekspresijom PD-L1. WO 2010/077634 opisuje anti-PD-L1 antitela, nukleinske kiseline koje kodiraju ista, terapeutske kompozicije i njihovu primenu u pojačanju funkcije T-ćelija da bi pojačale regulaciju ćelijski posredovanih imunih reakcija i za lečenje funkcionalnih poremećaja T-ćelija, uključujući infekciju i tumorski imunitet. WO 2013/166500 opisuje afinitetno sazrela humanizovana monoklonska antitela, bi-specifična antitela, konjugate antitela i fuzione proteine koji se vezuju za hemokinski receptor CCR4. WO 2007/005874 opisuje izolovana monoklonska antitela, a naročito humana monoklonska antitela koja se specifično vezuju za PD-L1 sa visokim afinitetom.
KRATKI SADRŽAJ SUŠTINE PRONALASKA
[0006] Predmetnim pronalaskom su realizovana antitela i njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji su definisani u patentnim zahtevima koji vezuju PD-L1. Antitela prema predmetnom pronalasku su korisna, inter alia, za ciljanje ćelija koje izražavaju PD-L1, kao što su kancerske ćelije ili virusima inficirane ćelije, i za modulaciju PD-L1 aktivnosti. U izvesnim primerima izvođenja, antitela prema pronalasku su korisna za inhibiciju ili neutralizaciju PD-L1 aktivnosti i za stimulaciju aktivacije T ćelija, npr. pod okolnostima gde je ubijanje posredovano T ćelijama korisno ili poželjno. Anti-PD-L1 antitela prema pronalasku, ili njihovi delovi koji vezuju antigen, mogu biti uključeni kao deo multi-specifičnog molekula koji vezuje antigen, na primer, da bi modulisali imunu reakciju i/ili ciljali na antitela za specifični tip ćelija, kao što je tumorska ćelija, ili virusom inficirana ćelija. Antitela su korisna u lečenju bolesti ili poremećaja kao što su kancer i virusna infekcija.
[0007] Antitela prema pronalasku mogu biti cele dužine (na primer, IgG1 ili IgG4 antitelo) ili mogu sadržati samo deo koji vezuje antigen (na primer, Fab, F(ab’)2 ili scFv fragment), i mogu biti modifikovana tako da utiču na funkcionalnost, npr. da eliminišu rezidualne efektorske funkcije (Reddy et al., 2000, J. Immunol.164:1925-1933). U izvesnim primerima izvođenja, antitela mogu biti bispecifična.
[0008] Prema prvom aspektu, predmetnim otkrivanjem su realizovana izolovana monoklonska antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, a koji se vezuju specifično za PD-L1. Ilustrativna anti-PD-L1 antitela su navedena ovde u Tabelama 1 i 2. Tabela 1 prikazuje identifikatore aminokiselinskih sekvenci varijabilnih regiona teškog lanca (HCVRs), varijabilnih regiona lakog lanca (LCVRs), regiona koji određuju komplementarnost teškog lanca (HCDR1, HCDR2 i HCDR3), i regiona koji određuju komplementarnost lakog lanca (LCDR1, LCDR2 i LCDR3) ilustrativnih anti-PD-L1 antitela. Tabela 2 prikazuje identifikatore sekvenci nukleinskih kiselina HCVRs, LCVRs, HCDR1, HCDR2 HCDR3, LCDR1, LCDR2 i LCDR3 ilustrativnih anti-PD-L1 antitela.
[0009] Predmetnim otkrivanjem su realizovana antitela, ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, koji sadrže HCVR koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu između bilo kojih HCVR aminokiselinskih sekvenci navedenih u Tabeli 1, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence sa njima.
[0010] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovana antitela, ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, koji sadrže LCVR koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu između bilo kojih LCVR aminokiselinskih sekvenci navedenih u Tabeli 1, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence sa njima.
[0011] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovana antitela, ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, koji sadrže HCVR i LCVR par aminokiselinskih sekvenci (HCVR/LCVR) koji sadrži bilo koju od HCVR aminokiselinskih sekvenci navedenih u Tabeli 1 uparenu sa bilo kojom od LCVR aminokiselinskih sekvenci navedenih u Tabeli 1. Prema izvesnim aspektima, predmetnim otkrivanjem su realizovana antitela, ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, koji sadrže HCVR/LCVR par aminokiselinskih sekvenci sadržan u okviru bilo kog od ilustrativnih anti-PD-L1 antitela navedenih u Tabeli 1. Prema izvesnim aspektima, HCVR/LCVR par aminokiselinskih sekvenci je izabran iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOs: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/170, 186/194, 202/210, 218/226, 234/242, 250/258, 266/274, 282/274, 290/274, 298/274, 306/274, 314/274, 322/274, 330/274, i 338/274. Prema izvesnim aspektima otkrivanja, HCVR/LCVR par aminokiselinskih sekvenci je izabran između jedne od SEQ ID NOs: 82/90 (npr. H2M8314N), 162/170 (npr. H2M8718N), 306/274 (npr. H1H9364P2), i 314/274 (npr. H1H9373P2). Prema izvesnim drugim aspektima otkrivanja, HCVR/LCVR par aminokiselinskih sekvenci je izabran između jedne od SEQ ID NOs: 98/106 (npr. H2M8316N), 146/154 (npr. H2M8323N), 290/274 (npr. H1H9351P2), i 330/274 (npr. H1H9387P2).
[0012] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovana antitela, ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, koji sadrže CDR1 teškog lanca (HCDR1) koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu između bilo koje HCDR1 aminokiselinske sekvence navedene u Tabeli 1 ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence.
[0013] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovana antitela, ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, koji sadrže CDR2 teškog lanca (HCDR2) koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu između bilo koje HCDR2 aminokiselinske sekvence navedene u Tabeli 1 ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence.
[0014] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovana antitela, ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, koji sadrže CDR3 teškog lanca (HCDR3) koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu između bilo koje HCDR3 aminokiselinske sekvence navedene u Tabeli 1 ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence.
[0015] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovana antitela, ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, koji sadrže CDR1 lakog lanca (LCDR1) koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu između bilo koje LCDR1 aminokiselinske sekvence navedene u Tabeli 1 ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence.
[0016] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovana antitela, ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, koji sadrže CDR2 lakog lanca (LCDR2) koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu između bilo koje LCDR2 aminokiselinske sekvence navedene u Tabeli 1 ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence.
[0017] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovana antitela, ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, koji sadrže CDR3 lakog lanca (LCDR3) koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu između bilo koje LCDR3 aminokiselinske sekvence navedene u Tabeli 1 ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence.
[0018] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovana antitela, ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, koji sadrže HCDR3 i LCDR3 par aminokiselinskih sekvenci (HCDR3/LCDR3) koji sadrži bilo koju od HCDR3 aminokiselinskih sekvenci navedenih u Tabeli 1 uparen sa bilo kojom od LCDR3 aminokiselinskih sekvenci navedenih u Tabeli 1. Prema izvesnim aspektima, predmetnim otkrivanjem su realizovana antitela, ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, koji sadrže HCDR3/LCDR3 par aminokiselinskih sekvenci sadržan u okviru bilo kog od ilustrativnih anti-PD-L1 antitela navedenih u Tabeli 1. Prema izvesnim aspektima, HCDR3/LCDR3 par aminokiselinskih sekvenci je izabran iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOs: 88/96 (npr. H2M8314N), 168/176 (npr. H2M8718N), 312/280 (npr. H1H9364P2), i 320/280 (npr. H1H9373P2). Prema izvesnim drugim aspektima, HCDR3/LCDR3 par aminokiselinskih sekvenci je izabran iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOs: 104/112 (npr. H2M8316N), 152/160 (npr. H2M8323N), 296/280 (npr. H1H9351P2), i 336/280 (npr. H1H9387P2).
[0019] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovana antitela, ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, koji sadrže grupu od šest CDR-ova (tj. HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3) sadržanih u okviru bilo kog od ilustrativnih anti-PD-L1 antitela navedenih u Tabeli 1. Prema izvesnim aspektima otkrivanja, grupa HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 aminokiselinskih sekvenci je izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOs: 84-86-88-92-94-96 (npr. H2M8314N); 164-166-168-172-174-176 (npr. H2M8718N); 308-310-312-276-278-280 (npr.
H1H9364P2); i 316-318-320-276-278-280 (npr. H1H9373P2). Prema izvesnim drugim aspektima, grupa HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 aminokiselinskih sekvenci je izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOs: 100-102-104-108-110-112 (npr. H2M8316N); 148-150-152-156-158-160 (npr.
H2M8323N); 292-294-296-276-278-280 (npr. H1H9351P2); i 332-334-336-276-278-280 (npr. H1H9387P2).
[0020] Prema odgovarajućem aspektu, predmetnim otkrivanjem su realizovana antitela, ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, koja sadrže grupu od šest CDR-ova (tj. HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3) sadržanih u okviru HCVR/LCVR para aminokiselinskih sekvenci koje su definisane bilo kojim od ilustrativnih anti-PD-L1 antitela navedenih u Tabeli 1. Na primer, predmetno otkrivanje obuhvata antitela, ili njihove fragmente koji vezuju antigen, koji obuhvataju grupu HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1- LCDR2-LCDR3 aminokiselinskih sekvenci sadržanih u okviru HCVR/LCVR para aminokiselinskih sekvenci izabranih iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOs: 82/90 (npr. H2M8314N), 98/106 (npr. H2M8316N), 146/154 (npr. H2M8323N), 162/170 (npr. H2M8718N), 290/274 (npr. H1H9351P2), 306/274 (npr. H1H9364P2), 314/274 (npr. H1H9373P2) i 330/274 (npr. H1H9387P2). Metodi i tehnike za identifikaciju CDR-ova u okviru HCVR i LCVR aminokiselinskih sekvenci su dobro poznati iz odgovarajuće oblasti i mogu se upotrebiti za identifikaciju CDR-ove u okviru specifikovanih HCVR i/ili LCVR aminokiselinskih sekvenci koje su ovde otkrivene. Ilustrativne konvencije koje se mogu upotrebiti za identifikaciju granica CDR-ova obuhvataju, npr. Kabat definiciju, Chothia definiciju, i AbM definiciju. Generalno posmatrano, Kabat definicija je bazirana na varijabilnosti sekvenci, Chothia definicija je bazirana na lokaciju strukturnih regiona petlje, i AbM definicija je kompromis između Kabat i Chothia pristupa. Vidi, npr. Kabat, "Sequences of Proteins of Immunological Interest," National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991); Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol.273:927-948 (1997); i Martin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:9268-9272 (1989). Za identifikaciju CDR sekvenci u okviru antitela su takođe raspoložive javne baze podataka.
[0021] Predmetno otkrivanje obuhvata anti-PD-L1 antitela koja imaju modifikovanu šemu glikozilacije. Prema nekim aspektima može biti korisna modifikacija da bi se uklonila nepoželjna mesta glikozilacije, ili antitelo kome nedostaje fukozna grupa prisutno na oligosaharidnom lancu, na primer, da bi se povećala funkcija ćelijske citotoksičnosti zavisna od antitela (ADCC) (vidi Shield et al. (2002) JBC 277:26733). U drugim primenama, modifikacija galaktozilacije može biti izvršena u cilju da se modifikuje citotoksičnost zavisna od komplementa (engl. complement dependent cytotoxicity, skr. CDC).
[0022] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovana antitela i njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji se nadmeću za specifično vezivanje za PD-L1 sa antitelom ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen, a koji sadrže CDR-ove HCVR i CDR-ove LCVR, pri čemu i HCVR, i LCVR imaju aminokiselinsku sekvencu izabranu između HCVR i LCVR sekvenci navedenih u Tabeli 1.
[0023] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovana izolovana antitela i njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji blokiraju vezivanje PDL1 za PD-1 ili za B7-1. Prema nekim aspektima, antitelo ili njegov fragment koji vezuju antigen koji blokira vezivanje PD-L1 za PD-1 ili za B7-1 se mogu vezivati za isti epitop na PD-L1 kao PD-1/B7-1 ili se mogu vezivati za različiti epitop na PD-L1 od PD-1/B7-1. Prema izvesnim aspektima, antitela koja blokiraju vezivanje PD-L1 za PD-1 ili za B7-1 sadrže CDR-ove HCVR koji imaju aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od HCVR sekvenci navedenih u Tabeli 1; i CDR-ove LCVR koji imaju aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od LCVR sekvenci navedenih u Tabeli 1.
[0024] Prema alternativnim aspektima, predmetnim otkrivanjem su realizovana antitela i njihovi fragmenti koji vezuju antigen, a koji ne blokiraju vezivanje PD-L1 za PD-1 ili za B7-1. Prema izvesnim aspektima, predmetnim otkrivanjem su realizovana izolovana antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, a koji se vezuju za PD-L1, pri čemu antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen pojačavaju vezivanje PD-L1 za PD-1 ili za B7-1. Prema nekim aspektima, izolovana antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji pojačava vezivanje PD-L1 za PD-1/B7-1 sadrže CDR-ove HCVR, pri čemu HCVR ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOs: 18, 66, 114, 130, 202, 218, 266, 282, 298, 322 i 338; i CDR-ove LCVR, pri čemu LCVR ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOs: 26, 74, 122, 138, 210, 226, i 274. Prema nekim aspektima, izolovana antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen sadrže HCVR/LCVR par aminokiselinskih sekvenci izabranih iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOs: 18/26 (npr. H2M8307N), 66/74 (npr. H2M8312N), 114/122 (npr. H2M8317N), 130/138 (npr. H2M8321N), 202/210 (npr. H1H9323P), 218/226 (npr. H1H9327P), 266/274 (npr. H1H9344P2), 282/274 (npr. H1H9345P2), 298/274 (npr. H1H9354P2), 322/274 (npr. H1H9382P2), i 338/274 (npr. H1H9396P2).
[0025] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovana antitela i njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji se vezuju specifično za PD-L1 ljudske ili drugih vrsta. Prema izvesnim aspektima, antitela se mogu vezivati za humani PD-L1 i/ili za makakijev PD-L1.
[0026] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovana antitela i njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji se unakrsno nadmeću za vezivanje za PD-L1 sa referentnim antitelom ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen koji sadrže CDR-ove HCVR i CDR-ove LCVR, pri čemu i HCVR, i LCVR imaju aminokiselinsku sekvencu izabranu između HCVR i LCVR sekvenci navedenih u Tabeli 1.
[0027] Prema jednom aspektu, otkrivanjem je realizovano izolovano antitelo ili fragment koji vezuje antigen koji imaju jednu ili više od sledećih karakteristika: (a) blokiraju vezivanje PD-L1 za PD-1 ili za B7-1; (b) vezuju se specifično za humani PD-L1 i/ili makakijev PD-L1; (c) inhibiraju proliferaciju T-ćelija u testu mešovite limfocitne reakcije (MLR); i (d) povećavaju izlučivanje IL-2 i/ili interferona-gama u MLR testu.
[0028] Prema nekim aspektima, antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen se mogu vezivati specifično za PD-L1 na agonističan način, tj. oni mogu pojačati ili stimulisati PD-L1 vezivanje i/ili aktivnost; prema drugim aspektima, antitelo se može vezivati specifično za PD-L1 na antagonističan način, tj. oni mogu blokirati vezivanje PD-L1 za njegov receptor.
[0029] Prema izvesnim aspektima, antitela ili fragmenti koji vezuju antigen su bispecifična i sadrže prvu specifičnost vezivanja za PD-L1 i drugu specifičnost vezivanja za drugi ciljni epitop. Drugi ciljni epitop može biti drugi epitop na PD-L1 ili na različitom proteinu, kao što je ko-inhibitor T-ćelija. Ciljni epitop može biti na različitoj ćeliji uključujući npr. različitu T-ćeliju, B-ćeliju, tumorsku ćeliju, autoimunu ćeliju tkiva ili virusom inficiranu ćeliju.
[0030] Prema drugom aspektu, predmetnim otkrivanjem su realizovani molekuli nukleinskih kiselina koji kodiraju anti-PD-L1 antitela ili njihove delove. Na primer, predmetnim otkrivanjem su realizovani molekuli nukleinskih kiselina koji kodiraju bilo koju od HCVR aminokiselinskih sekvenci navedenih u Tabeli 1; prema izvesnim aspektima molekul nukleinske kiseline sadrži polinukleotidne sekvence izabrane između bilo kojih HCVR sekvenci nukleinskih kiselina navedenih u Tabeli 2, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence sa njima.
[0031] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovani molekuli nukleinskih kiselina koji kodiraju bilo koju od LCVR aminokiselinskih sekvenci navedenih u Tabeli 1; prema izvesnim aspektima otkrivanja molekul nukleinske kiseline sadrži polinukleotidne sekvence izabrane između bilo kojih LCVR sekvenci nukleinskih kiselina navedenih u Tabeli 2, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence sa njima.
[0032] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovani molekuli nukleinskih kiselina koji kodiraju bilo koju od HCDR1 aminokiselinskih sekvenci navedenih u Tabeli 1; prema izvesnim aspektima otkrivanja molekul nukleinske kiseline sadrži polinukleotidne sekvence izabrane između bilo kojih HCDR1 sekvenci nukleinskih kiselina navedenih u Tabeli 2, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence sa njima.
[0033] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovani molekuli nukleinskih kiselina koji kodiraju bilo koju od HCDR2 aminokiselinskih sekvenci navedenih u Tabeli 1; prema izvesnim aspektima otkrivanja molekul nukleinske kiseline sadrži polinukleotidne sekvence izabrane između bilo kojih HCDR2 sekvenci nukleinskih kiselina navedenih u Tabeli 2, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence sa njima.
[0034] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovani molekuli nukleinskih kiselina koji kodiraju bilo koju od HCDR3 aminokiselinskih sekvenci navedenih u Tabeli 1; prema izvesnim aspektima otkrivanja molekul nukleinske kiseline sadrži polinukleotidne sekvence izabrane između bilo kojih HCDR3 sekvenci nukleinskih kiselina navedenih u Tabeli 2, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence sa njima.
[0035] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovani molekuli nukleinskih kiselina koji kodiraju bilo koju od LCDR1 aminokiselinskih sekvenci navedenih u Tabeli 1; prema izvesnim aspektima otkrivanja molekul nukleinske kiseline sadrži polinukleotidne sekvence izabrane između bilo kojih LCDR1 sekvenci nukleinskih kiselina navedenih u Tabeli 2, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence sa njima.
[0036] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovani molekuli nukleinskih kiselina koji kodiraju bilo koju od LCDR2 aminokiselinskih sekvenci navedenih u Tabeli 1; prema izvesnim aspektima otkrivanja molekul nukleinske kiseline sadrži polinukleotidne sekvence izabrane između bilo kojih LCDR2 sekvenci nukleinskih kiselina navedenih u Tabeli 2, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence sa njima.
[0037] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovani molekuli nukleinskih kiselina koji kodiraju bilo koje LCDR3 aminokiselinske sekvence navedene u Tabeli 1; prema izvesnim aspektima otkrivanja molekul nukleinske kiseline sadrži polinukleotidne sekvence izabrane između bilo kojih LCDR3 sekvenci nukleinskih kiselina navedenih u Tabeli 2, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence sa njima.
[0038] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovani molekuli nukleinskih kiselina koji kodiraju HCVR, pri čemu HCVR sadrži grupu od tri CDR-a (tj. HCDR1-HCDR2-HCDR3), pri čemu je grupa HCDR1-HCDR2-HCDR3 aminokiselinskih sekvenci definisana bilo kojim ilustrativnim anti-PD-L1 antitelima navedenim u Tabeli 1.
[0039] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovani molekuli nukleinskih kiselina koji kodiraju LCVR, pri čemu LCVR sadrži grupu od tri CDR-a (tj. LCDR1-LCDR2-LCDR3), pri čemu je grupa LCDR1-LCDR2-LCDR3 aminokiselinskih sekvenco definisana bilo kojim ilustrativnim anti-PD-L1 antitelima navedenim u Tabeli 1.
[0040] Predmetnim otkrivanjem su takođe realizovani molekuli nukleinskih kiselina koji kodiraju i HCVR, i LCVR, pri čemu HCVR obuhvata aminokiselinsku sekvencu bilo koje HCVR aminokiselinske sekvence navedene u Tabeli 1, i pri čemu LCVR obuhvata aminokiselinsku sekvencu bilo koje LCVR aminokiselinske sekvence navedene u Tabeli 1. Prema izvesnim aspektima, molekul nukleinske kiseline obuhvata polinukleotidne sekvence izabrane između bilo koje od HCVR sekvenci nukleinskih kiselina navedenih u Tabeli 2, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence sa njima, i polinukleotidne sekvence izabrane između bilo koje od LCVR sekvenci nukleinskih kiselina navedenih u Tabeli 2, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence sa njima. Prema izvesnim aspektima, molekul nukleinske kiseline koji kodira HCVR i LCVR, pri čemu i HCVR, i LCVR potiču od istog anti-PD-L1 antitela navedenog u Tabeli 1. U jednom primeru izvođenja, predmetnim pronalaskom je realizovan izolovani polinukleotidni molekul koji kodira antitelo ili fragment koji vezuje antigen koji sadrži HCVR/LCVR par aminokiselinskih sekvenci SEQ ID NOS: 82/90.
[0041] Prema odgovarajućem aspektu, predmetnim pronalaskom su realizovani rekombinantni ekspresioni vektori koji mogu da izraze polipeptid koji sadrži varijabilni region teškog ili lakog lanca anti-PD-L1 antitela prema pronalasku. Predmetno otkrivanje obuhvata rekombinantne ekspresione vektore koji sadrže molekule nukleinskih kiselina koji su navedeni gore, tj. molekule nukleinskih kiselina koji kodiraju bilo koju od HCVR, LCVR, i/ili CDR sekvenci navedenih u Tabeli 1. Takođe su u okviru predmetnog pronalaska ćelije domaćini u koje su uvedeni takvi vektori prema pronalasku, kao i metodi proizvodnje antitela ili njihovih delova kultivacijom ćelija domaćina pod uslovima koji omogućavaju proizvodnju antitela ili fragmenata antitela, i rekuperaciju tako proizvedenih antitela i fragmenata antitela.
[0042] Prema trećem aspektu, predmetnim otkrivanjem su realizovani multi-specifični molekuli koji vezuju antigen i njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji sadrže prvu specifičnost koja vezuje antigen, a koja se specifično vezuje za PD-L1 i drugu specifičnost koja vezuje antigen, a koja se specifično vezuje za antigen izabran iz grupe koja se sastoji od PD-L1, antigena specifičnog za tumorske ćelije, antigena specifičnog za inficirane ćelije, i ko-inhibitora T-ćelija. Prema izvesnim aspektima otkrivanja, prva specifičnost koja vezuje antigen može sadržati tri CDR-a koji potiču od HCVR sa aminokiselinskom sekvencom izabranom između HCVR sekvenci u Tabeli 1 i tri CDR-a koji potiču od LCVR sa aminokiselinskom sekvencom izabranom između LCVR sekvenci u Tabeli 1. Prema jednom aspektu, prva specifičnost koja vezuje antigen može sadržati ekstracelularni domen od PD-1 ili B7-1, ili njegov fragment. Druga specifičnost koja vezuje antigen može ciljati na antigen na istoj ćeliji kao PD-L1 ili na različitoj ćeliji istog tipa tkiva ili različitog tipa tkiva. Na primer, multispecifični molekul koji vezuje antigen može se vezivati za T-ćeliju, pri čemu se prva specifičnost koja vezuje antigen može vezivati specifično za PDL1, a druga specifičnost koja vezuje antigen se može vezivati za ko-inhibitor T-ćelija na T-ćeliji. Alternativno tome, prema sledećem aspektu, prva specifičnost koja vezuje antigen se vezuje specifično za PD-L1 na T-ćeliji, dok druga specifičnost koja vezuje antigen cilja na antigen/receptor na B-ćeliji ili makrofagu ili ćeliji koja prezentuje antigen. Prema izvesnim aspektima, druga specifičnost koja vezuje antigen je usmerena na antigen na tumorskoj ćeliji, ili na ćeliji inficiranoj virusom. Prema jednom aspektu, prva specifičnost koja vezuje antigen sadrži ekstracelularni domen PD-1, dok se druga specifičnost koja vezuje antigen vezuje za drugačiji epitop na PD-L1. U izvesnim slučajevima, prva specifičnost koja vezuje antigen se vezuje za PD-L1 sa manjim afinitetom, na primer, sa KD većim od 10<-8>M, većim od 10<-7>M, većim od 10<-6>M, ili većim od 10<-5>M.
[0043] Prema sledećem primeru izvođenja, pronalaskom je takođe realizovana farmaceutska kompozicija koja sadrži izolovano antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema pronalasku koji se specifično vezuju za PD-L1 i farmaceutski prihvatljivi nosač. Prema odgovarajućem aspektu, pronalazak karakteriše kompozicija koja je kombinacija anti-PD-L1 antitela i drugog terapeutskog agensa. Drugi terapeutski agens može biti bilo koji agens koji se prvenstveno kombinuje sa anti-PD-L1 antitelom. Ilustrativni agensi koji se prvenstveno mogu kombinovati sa anti-PD-L1 antitelom obuhvataju, ali bez ograničenja druge agense koji se vezuju i/ili modulišu PD-L1 signalizaciju (uključujući druga antitela ili njihove fragmente koji vezuju antigen, itd.) i/ili agense koji se ne vezuju direktno za PD-L1, ali ipak modulišu aktivaciju imunih ćelija. Dodatne kombinovane terapije i ko-formulacije koje sadrže anti-PD-L1 antitela i multi-specifične molekule koji vezuju antigen prema predmetnom pronalasku su opisana ovde na drugim mestima.
[0044] Prema sledećem aspektu, pronalaskom je realizovano antitelo ili fragment koji vezuje antigen ili farmaceutska kompozicija prema pronalasku za primenu u pojačanju imune reakcije kod subjekta, pri čemu taj metod sadrži davanje terapeutski efektivne količine anti-PD-L1 antitela ili njegovog fragmenta koji vezuje antigen prema pronalasku subjektu kome je to potrebno. U jednom primeru izvođenja, pronalaskom je takođe realizovano antitelo ili fragment koji vezuje antigen ili farmaceutska kompozicija prema pronalasku za primenu u metodu stimulacije ili pojačanja aktivacije T-ćelija kod subjekta, pri čemu taj metod sadrži davanje blokirajućeg antitela ili njegovog fragmenta koji vezuje antigen prema pronalasku subjektu kome je to potrebno. Prema jednom aspektu, otkrivanjem su realizovani metodi inhibicije T-regulatorne (Treg) ćelije kod subjekta, pri čemu metodi sadrže davanje blokirajućeg antitela ili njegovog fragmenta koji vezuje antigen prema pronalasku subjektu kome je to potrebno. U izvesnim primerima izvođenja, subjekt kome je to potrebno može bolovati od bolesti ili poremećaja kao što je kancer ili virusna infekcija. Prema alternativnim aspektima, predmetnim otkrivanjem su realizovani metodi inhibicije aktivacije T-ćelija, pri čemu metodi sadrže davanje aktivirajućeg antitela ili njegovog fragmenta koji vezuje antigen subjektu kome je to potrebno. Prema izvesnim drugim aspektima, subjekt kome je to potrebno može bolovati od autoimune bolesti.
[0045] Prema sledećem aspektu, pronalaskom je realizovano antitelo ili fragment koji vezuje antigen ili farmaceutska kompozicija prema pronalasku za primenu u lečenju kancera ili virusne infekcije kod subjekta, pri čemu terapeutski metodi obuhvataju davanje terapeutski efektivne količine farmaceutske kompozicije koja sadrži antitelo ili fragment antitela prema pronalasku subjektu kome je to potrebno. U izvesnim primerima izvođenja, antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema pronalasku se daje u kombinaciji sa drugim terapeutskim agensom subjektu kome je to potrebno. Drugi terapeutski agens može biti izabran iz grupe koja se sastoji od antitela za ko-inhibitor T-ćelija, antitela za antigen tumorskih ćelija, antitela za receptor T-ćelija, antitela za Fc receptor, antitela za epitop na virusom inficiranoj ćeliji, antitela za PD-1, citotoksičnog agensa, anti-kancerskog leka, anti-virusnog leka, antiinflamatornog leka (npr. kortikosteroida), VEGF antagonista, i bilo kog drugog leka ili terapije poznatih iz odgovarajuće oblasti. U izvesnim primerima izvođenja, drugi terapeutski agens može biti agens koji pomaže suprotstavljanje ili smanjuje bilo kakvo neželjeno dejstvo, odnosno dejstva povezana sa antitelom ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen prema pronalasku, ako bi se takvo neželjeno dejstvo, odnosno dejstva pojavili.
[0046] U izvesnim primerima izvođenja, predmetnim pronalaskom je realizovano antitelo prema pronalasku za primenu u sprečavanju rasta tumora. U izvesnim primerima izvođenja, antitela prema pronalasku povećavaju preživljavanje pacijenata sa kancerom. Primeri kancera obuhvataju, ali nisu ograničeni na primarni i/ili rekurentni kancer, uključujući kancer mozga (npr. glioblastoma multiforme), kancer pluća (npr. kancer ne-malih ćelija pluća), karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata, karcinom bubrežnih ćelija, melanom, multipli mijelom, kancer prostate, i kancer kolona. Metodi obuhvataju davanje farmaceutske kompozicije koja sadrži terapeutski efektivnu količinu anti-PD-L1 antitela prema predmetnom pronalasku u kombinaciji sa drugim terapeutskim agensom izabranim iz grupe koja se sastoji od antagonista vaskularnog endotelnog faktora rasta (VEGF) (npr. aflibercept, bevacizumab), inhibitora angiopoietina-2 (Ang2) (npr. anti-Ang2 antitelo, kao što je nesvakumab), inhibitora limfocitnog aktivacionog gena 3 (LAG-3), inhibitora citotoksičnog T-limfocitnog antigena 4 (CTLA-4) (npr. ipilimumab), CCR4 inhibitora (npr. mogamulizumab), hemoterapeutskog agensa, i terapije zračenjem. Dodatni primeri dodatnih terapija/terapeutskih agenasa koji se mogu upotrebiti u kombinaciji sa anti-PD-L1 antitelom prema pronalasku za primenu u lečenju kancera su opisani ovde na drugim mestima.
[0047] Antitelo ili njegov fragment se mogu davati subkutano, intravenski, intradermalno, intraperitonealno, oralno, intramuskularno, ili intrakranijalno. Antitelo ili njegov fragment se mogu davati u dozi od oko 0.1 mg/kg telesne težine do oko 100 mg/kg telesne težine subjekta.
[0048] Predmetno otkrivanje takođe obuhvata primenu anti-PD-L1 antitela ili njegovog fragmenta koji vezuje antigen prema pronalasku u proizvodnji leka za lečenje bolesti ili poremećaja (npr. kancera, i hronične virusne infekcije) za koju bi bilo korisno blokiranje ili pojačanje PD-L1 vezivanja i/ili signalizacije.
[0049] Drugi primeri izvođenja će postati jasni na osnovu uvida u naredni detaljni opis.
KRATKI OPIS SLIKA NACRTA
[0050]
Slika 1 je šematski prikaz PD-L1 biotesta baziranog na luciferazi opisanog ovde u Primeru 8. Panel A: Neaktivne Jurkat ćelije; Panel B: Jurkat ćelije su aktivirane klasterovanjem receptora T-ćelija (TCR) pomoću CD3xCD20 bispecifičnog antitela; Panel C: PD-1 aktivacija slabi reakciju u aktiviranim Jurkat ćelijama; Panel D: Blokiranje PD-L1 obezbeđuje reakciju u aktiviranim Jurkat ćelijama. Slika 2 ilustruje rast tumora i rezultate preživljavanja za miševe kojima su implantirane tumorske ćelije Colon-26 na Dan 0 i koji su tretirani sa navedenim kombinacijama molekula ubrizgavanjem u danima 3, 6, 10, 13 i 19 ("model ranog tretiranja tumora"). Grafikon prikazuje zapreminu tumora (u mm<3>) za različite eksperimentalne grupe u različitim vremenskim trenucima posle implantacije. Uspravne strelice duž X-ose pokazuju vremenske trenutke ubrizgavanja tretmana. "mlgG2a" je IgG2 izotipska kontrola; "Fc" je humana Fc kontrola; "VEGF zamka" je aflibercept; "anti-PD-1" je anti-mišiji PD-1 klon RPMI-14; "antiPD-L1" je anti-PD-L1 monoklonsko antitelo koje je opisano ovde na drugom mestu.
Slika 3 ilustruje rast tumora i rezultate preživljavanja za miševe kojima su implantirane tumorske ćelije Colon-26 na Dan 0 i koji su tretirani sa navedenim kombinacijama molekula ubrizgavanjem u danima 3, 6, 10, 13 i 19 ("model ranog tretiranja tumora"). Grafikon prikazuje zapreminu tumora (u mm<3>) pojedinačnih miševa u svakoj eksperimentalnoj grupi na Dan 28 posle implantacije. "mlgG2a" je IgG2 izotipska kontrola; "Fc" je humana Fc kontrola; "VEGF zamka" je
aflibercept; "anti-PD-1" je anti-mišiji PD-1 klon RPMI-14; "anti-PD-L1" je anti-PD-L1 monoklonsko antitelo koje je opisano ovde na drugom mestu.
DETALJNI OPIS PRONALASKA
[0051] Pre nego što budu opisani aktuelni postupci, podrazumeva se da ovaj pronalazak nije ograničen na opisane posebne postupke i eksperimentalne uslove, pošto takvi postupci i uslovi mogu varirati. Takođe se podrazumeva da je terminologija ovde korišćena isključivo za svrhe opisa posebnih aspekata i da ne treba da bude ograničavajuća, pošto je obim predmetnog pronalaska definisan samo priloženim patentnim zahtevima.
[0052] Ukoliko nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni izrazi koji se ovde koriste imaju značenja koja bi podrazumevao prosečan stručnjak iz odgovarajuće oblasti kojoj pripada ovaj pronalazak. Mada se bilo koji postupci i materijali slični ili ekvivalentni onima koji su ovde opisani mogu upotrebiti u praksi ili testiranju predmetnog pronalaska, sada će biti opisani poželjni postupci i materijali.
[0053] Izraz "PD-L1" se odnosi na ligand programirane smrti 1, koji je takođe poznat kao CD274 i B7H1. Aminokiselinska sekvenca cele dužine PD-L1 je obezbeđena kod GenBank pod pristupnim brojem NP_054862.1 i ovde se takođe navodi kao SEQ ID NO: 351. Izraz "PD-L1" takođe obuhvata varijante proteina PD-L1 koje imaju aminokiselinske sekvence SEQ ID NOs: 345, 346, 347 ili 348. Izraz "PD-L1" obuhvata rekombinantni PD-L1 ili njegov fragment. Izraz takođe obuhvata PD-L1 ili njegov fragment koji je spojen, na primer, sa histidinskim tagom, mišijom ili humanom Fc, ili signalnim sekvencama, kao što je ROR1. Na primer, izraz obuhvata sekvence ilustrovane sa SEQ ID NOs: 347 ili 348, koje sadrže mišiji Fc (mlgG2a) ili humani Fc (hIgG1) na C-kraju, spojene sa aminokiselinskim ostacima 19 - 239 cele dužine PDL1 (SEQ ID NO: 351; NP_054862.1). Varijante proteina koje su ilustrovane sa SEQ ID NO: 345 sadrže histidinski tag na C-kraju i spojene su sa aminokiselinskim ostacima 19 - 239 od NP_054862.1. Osim ako nije specifikovano da potiču od nehumanih vrsta, izraz "PD-L1" označava humani PD-L1.
[0054] PD-L1 je 290 aminokiselinski protein sa ekstracelularnim IgV-sličnim i IgC-sličnim domenima (aminokiseline 19 - 239 cele dužine PD-L1), transmembranskim domenom i intracelularnim domenom od približno 30 aminokiselina. PD-L1 je konstitutivno izražen na mnogim ćelijama, kao što su ćelije koje prezentuju antigen (npr. dendritske ćelije, makrofagi, i B-ćelije) i na hematopoietičnim i nehematopoietičnim ćelijama (npr. vaskularnim endotelnim ćelijama, pankreasnim ostrvcima, i mestima imune privilegije). PD-L1 je takođe izražen na velikom mnoštvu tumora, i virusima inficiranim ćelijama i on je komponenta imunosupresivnog miljea (Ribas 2012, NEJM 366: 2517-2519). PD-L1 se vezuje za jedan od dva ko-inhibitora T-ćelija PD-1 i B7-1.
[0055] Izraz "PD-1" se odnosi na protein 1 programirane smrti, ko-inhibitor T-ćelija, takođe poznat kao CD279. Aminokiselinska sekvenca cele dužine PD-1je obezbeđena kod GenBank pod pristupnim brojem NP_005009.2 i ovde se takođe navodi kao SEQ ID NO: 352. Izraz takođe obuhvata PD-1 ili njegov fragment spojen, na primer, sa histidinskim tagom, mišijim ili humanim Fc, ili signalnim sekvencama, kao što je ROR1. Na primer, izraz obuhvata sekvence ilustrovane sa SEQ ID NOs: 349 ili 350, koje sadrže mišiji Fc (mlgG2a) ili humani Fc (hIgG1) na C-kraju, spojene sa aminokiselinskim ostacima 25 - 170 od NP_005009.2 sa C93S promenom.
[0056] PD-1 je član CD28/ CTLA-4/ICOS familije ko-inhibitora T-ćelija. PD-1 je protein od 288-aminokiselina sa ekstracelularnim N-terminalnim domenom koji je nalik IgV, transmembranskim domenom i intracelularnim domenom koji sadrži imunoreceptorski, na tirozinu-bazirani inhibitorni (ITIM) motiv i imunoreceptorski, na tirozinu-bazirani prekidački (ITSM) motiv (Chattopadhyay et al 2009, Immunol. Rev.). PD-1 receptor ima dva liganda, PD-L1 i PD-L2.
[0057] Izraz "B7-1" se odnosi na T-limfocitni aktivacioni antigen, koji je takođe poznat kao kostimulatorni faktor CD80. B7-1 je membranski receptor od 288 aminokiselina sa ekstracelularnim N-terminalnim domenom koji sadrži regione nalik IgV (aa 37 -138) i nalik IgC (aa 154 - 232), transmembranski domen (aa 243 - 263) i C-terminalni intracelularni region (aa 263 - 288). Aminokiselinska sekvenca cele dužine B7-1 je obezbeđena kod GenBank pod pristupnim brojem NP_005182.1.
[0058] Kada se ovde koristi, izraz "ko-inhibitor T-ćelija" se odnosi na ligand i/ili receptor koji moduliše imunu reakciju putem aktivacije ili supresije T-ćelija. Izraz "koinhibitor T-ćelija", takođe poznat kao ko-signalni molekul T-ćelija, sadrži, ali nije ograničen na PD-1, protein limfocitnog aktivacionog gena 3 (LAG-3, takođe poznat kao CD223), citotoksični T limfocitni antigen-4 (CTLA-4), B i T limfocitni atenuator (BTLA), CD-28, 2B4, LY108, imunoglobulin i mucin-3 T-ćelija (TIM3), imunoreceptor sa imunoglobulinom i ITIM T-ćelija (TIGIT; takođe poznat kao VSIG9), leukocitima pridružen, imunoglobulinu sličan receptor 1 (LAIR1; takođe poznat kao CD305), induktibilni kostimulator T-ćelija (ICOS; takođe poznat kao CD278), B7-1 (CD80), i CD160.
[0059] Izraz "antitelo", kada se ovde koristi, treba da se odnosi na imunoglobulinske molekule koji sadrže četiri polipeptidna lanca, dva teška (H) lanca i dva laka (L) lanca međusobno spojena disulfidnim vezama (tj. "molekuli celog antitela"), kao i njihove multimere (npr. IgM) ili njihove fragmente koji vezuju antigen. Svaki teški lanac sadrži varijabilni region teškog lanca ("HCVR" ili "VH") i konstantni region teškog lanca (sastoji se od domena CH1, CH2 i CH3). Svaki laki lanac sadrži varijabilni region lakog lanca ("LCVR ili "VL") i konstantni region lakog lanca (CL). VH i VL regioni dalje mogu biti podeljeni na regione hipervarijabilnosti, koji se nazivaju regionima koji određuju komplementarnost (CDR), koji su prošarani regionima koji su očuvaniji, a nazivaju se regionima okvira (FR). Svaki VH i V L sadrži CDR-a i četiri FR-a, raspoređena od amino-terminusa prema karboksi-terminusu sledećim redosledom: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. U izvesnim primerima izvođenja pronalaska, FR-ovi antitela (ili njegovog fragmenta koji vezuje antigen) mogu biti identični sekvencama humanih germinativnih linija, ili mogu biti modifikovani prirodno ili veštački. Aminokiselinske konsenzusne sekvence mogu biti definisane na bazi analize dva ili više CDR-ova postavljena jedan pored drugog.
[0060] Supstitucija jednog ili više CDR ostataka ili izostavljanje jednog ili više CDR-ova je takođe moguća. U naučnoj literaturi su opisana antitela u kojima jedan ili dva CDR-a mogu biti izostavljena radi vezivanja. Padlan et al. (1995 FASEB J.9:133-139) su analizirali kontaktne regione između antitela i njihovih antigena, na osnovu publikovanih kristalnih struktura, i zaključili su da se samo oko jedne petine do oko jedne trećine CDR ostataka zaista nalazi u kontaktu sa antigenom. Padlan je takođe otkrio mnoga antitela u kojima jedan ili dva CDR-a nisu imala aminokiseline u kontaktu sa antigenom (vidi takođe, Vajdos et al.2002 J Mol Biol 320:415-428).
[0061] CDR ostaci koji nisu u kontaktu sa antigenom se mogu identifikovati na osnovu prethodnih studija (na primer, ostaci H60- H65 u CDRH2 često nisu potrebni), iz regiona Kabat CDR-ova koji leže izvan Chothia CDR-ova, molekulskim modeliranjem i/ili empirijski. Ako su CDR ili njegov ostatak, odnosno ostaci izostavljeni, oni su obično supstituisani sa aminokiselinom koja zauzima odgovarajuću poziciju u drugoj sekvenci humanog antitela ili konsenzusom takvih sekvenci. Pozicije za supstituciju u okviru CDRs i aminokiseline za supstituciju takođe mogu biti izabrane empirijski. Empirijske supstitucije mogu biti konzervativne ili nekonzervativne supstitucije.
[0062] Ovde opisana potpuno humana anti-PD-L1 monoklonska antitela mogu sadržati jednu ili više aminokiselinskih supstitucija, insercija i/ili delecija u okviru i/ili CDR regionima varijabilnih domena teških i lakih lanaca u poređenju sa odgovarajućim sekvencama germinativnih linija. Takve mutacije se mogu lako utvrditi upoređivanjem ovde opisanih aminokiselinskih sekvenci sa sekvencama germinativnih linija, na primer, iz javnih baza podataka sekvenci antitela. Predmetno otkrivanje obuhvata antitela, i njihove fragmente koji vezuju antigen, koji potiču od bilo koje od ovde opisanih aminokiselinskih sekvenci, pri čemu su jedna ili više aminokiselina u okviru jednog ili više okvirnih i/ili CDR regiona mutirani u odgovarajući ostatak, odnosno ostatke sekvence germinativne linije od koje antitelo potiče, ili u odgovarajući ostatak, odnosno ostatke sledeće sekvence humane germnativne linije, ili u konzervativnu aminokiselinsku supstituciju odgovarajućeg ostatka, odnosno ostataka germinativnih linija (takve promene sekvenci se ovde kolektivno nazivaju "mutacije germinativnih linija"). Osoba koja je prosečan stručnjak iz odgovarajuće oblasti, polazeći od ovde opisanih sekvenci varijabilnih regiona teških i lakih lanaca, može lako da proizvede brojna antitela i fragmente koji vezuju antigen, a koji sadrže jednu ili više pojedinačnih mutacija germinativne linije ili njihove kombinacije. Prema izvesnim aspektima, svi okvirni i/ili CDR ostaci u okviru VH i/ili VL domena su mutirani nazad u ostatke koji se nalaze u originalnoj sekvenci germinativne linije od koje antitelo potiče. Prema sledećim aspektima, samo izvesni ostaci su mutirani nazad u ostatke koji se nalaze u originalnoj sekvenci germinativne linije od koje antitelo potiče, npr. samo su mutirani ostaci koji se nalaze u okviru prvih 8 aminokiselina FR1 ili u okviru poslednjih 8 aminokiselina FR4, ili su mutirani samo ostaci koji se nalaze u okviru CDR1, CDR2 ili CDR3. Prema sledećim aspektima, jedan ili više okvirnih i/ili CDR ostatka, odnosno ostataka su mutirani u odgovarajući ostatak, odnosno ostatke različite sekvence germinativne linije (tj. sekvence germinativne linije koja je različita od sekvence germinativne linije od koje antitelo originalno potiče). Pored toga, antitela prema predmetnom otkrivanju mogu sadržati bilo koju kombinaciju dve ili više mutacija u germinativnoj liniji u okviru okvirnog i/ili CDR regiona, npr. pri čemu su izvesni pojedinačni ostaci mutirani do odgovarajućeg ostatka specifične sekvence germinativne linije, dok su izvesni drugi ostaci koji se razlikuju od originalne sekvence germinativne linije zadržani ili mutirani u odgovarajući ostatak različite sekvence germinativne linije. Kada se jednom dobiju, antitela i fragmenti koji vezuju antigen koji sadrže jednu ili više mutacija germinativnih linija se mogu lako testirati u pogledu jednog ili više željenih svojstava, kao što su poboljšana specifičnost vezivanja, povećani afinitet vezivanja, poboljšana ili povećana antagonistička ili agonistička biološka svojstva (što može biti slučaj), smanjena imunogenost, itd. Antitela i fragmenti koji vezuju antigen dobijeni na ovaj opšti način su obuhvaćeni u okviru predmetnog otkrivanja.
[0063] Predmetno otkrivanje takođe obuhvata potpuno humana anti-PD-L1 monoklonska antitela koja sadrže varijante bilo koje od ovde opisanih HCVR, LCVR, i/ili CDR aminokiselinskih sekvenci koje imaju jednu ili više konzervativnih supstitucija. Na primer, predmetno otkrivanje obuhvata anti-PD-L1 antitela koja imaju HCVR, LCVR, i/ili CDR aminokiselinske sekvence sa, npr.10 ili manje, 8 ili manje, 6 ili manje, 4 ili manje, itd. konzervativnih aminokiselinskih supstitucija u odnosu na bilo koji od ovde opisanih HCVR, LCVR, i/ili CDR aminokiselinskih sekvenci.
[0064] Izraz "humano antitelo", kada se ovde koristi, treba da obuhvati antitela koja imaju varijabilne i konstantne regione koji potiču od imunoglobulinskih sekvenci humanih germinativnih linija. Humana mAbs obuhvataju aminokiselinske ostatke koji nisu kodirani imunoglobulinskim sekvencama humanih germinativnih linija (npr. mutacije uvedene slučajnom ili mesno-specifičnom mutagenezom in vitro ili somatskom mutacijom in vivo), na primer, u CDR-ovima, a naročito u CDR3.
Međutim, izraz "humano antitelo", kada se ovde koristi, ne treba da obuhvati mAbs u kojima su CDR sekvence potiču od germinativne linije druge sisarske vrste (npr. miša) graftovane na humane FR sekvence. Izraz obuhvata antitela proizvedena rekombinantno u nehumanom sisaru ili u ćelijama nehumanog sisara. Izraz ne treba da obuhvati antitela izolovana iz humanog subjekta ili generisana u njemu.
[0065] Izraz "multi-specifični molekuli koji vezuju antigen", kada se ovde koristi se odnosi na bispecifične, tri-specifične ili multispecifične molekule koji vezuju antigen, i njihove fragmente koji vezuju antigen. Multi-specifični molekuli koji vezuju antigen mogu biti specifični za različite epitope na jednom ciljnom polipeptidu ili mogu sadržati domene koji specifično vezuju antigen za epitope više od jednog ciljnog polipeptida. Multi-specifični molekul koji vezuje antigen može biti samo jedan multifunkcionalni polipeptid, ili to može biti multimerni kompleks dva ili više polipeptida koji su kovalentno ili nekovalentno međusobno povezani. Izraz "multispecifični molekuli koji vezuju antigen" obuhvata antitela prema predmetnom pronalasku koja mogu biti povezana sa ili ko-izražena sa drugim funkcionalnim molekulom, npr. drugim peptidom ili proteinom. Na primer, antitelo ili njegov fragment mogu biti funkcionalno povezani (npr. hemijskim kuplovanjem, genetskom fuzijom, nekovalentnom asocijacijom ili drugačije) sa jednim ili više drugih molekulskih entiteta, kao što su protein ili njegov fragment da bi se proizveo bi-specifičan ili multispecifičan molekul koji vezuje antigen sa drugom specifičnosti vezivanja. Prema predmetnom pronalasku, izraz "multi-specifični molekuli koji vezuju antigen" takođe obuhvata bi-specifična, tri-specifična ili multi-specifična antitela ili njihove fragmente koji vezuju antigen. U izvesnim primerima izvođenja, antitelo prema predmetnom pronalasku je funkcionalno povezano sa drugim antitelom ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen da bi se proizvelo bispecifično antitelo sa drugom specifičnosti vezivanja. Bispecifična i multi-specifična antitela prema predmetnom pronalasku su opisana ovde na drugim mestima.
[0066] Izraz "specifično se vezuje" ili "vezuje se specifično za" znači da antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen formiraju kompleks sa antigenom koji je relativno stabilan pod fiziološkim uslovima. Specifično vezivanje se može karakterisati ravnotežnom konstantom disocijacije od najmanje oko 1x10<-8>M ili manjom (npr. a manji KD označava čvršće vezivanje). Metodi za određivanje da li se dva molekula specifično vezuju su dobro poznati iz stanja tehnike i obuhvataju, na primer, ravnotežnu dijalizu, površinsku plazmonsku rezonancu, i slično. Kao što je ovde opisano, antitela su identifikovana površinskom plazmonskom rezonancom, kao što je npr. BIACORE™, i vezuju se specifično za PD-L1. Pored toga, multi-specifična antitela koja se vezuju za jedan domen u PD-L1 i jedan ili više dodatni antigena ili bispecifična koja se vezuju za dva različita regiona PD-L1 se ipak smatraju antitelima koja se "specifično vezuju", kada se ovde koriste.
[0067] Izraz antitelo sa "visokim afinitetom" se odnosi na ona mAbs koja imaju afinitet vezivanja za PD-L1, izražen kao KD, od najmanje 10<-8>M; a prvenstveno 10<-9>M; još poželjnije 10<-10>M, čak još više poželjno 10<-11>M, čak još više poželjno 10<-12>M, što je izmereno površinskom plazmonskom rezonancom, kao što su npr. BIACORE™ ili afinitetna ELISA u rastvoru.
[0068] Pod izrazom "slow off rate", "Koff" ili "kd" se podrazumeva antitelo koje disosuje od PD-L1, uz konstantnu brzinu od 1 x 10<-3>s<-1>ili manju, a prvenstveno od 1 x 10<-4>s<-1>ili manju, što se određuje površinskom plazmonskom rezonancom, kao što je npr. BIACORE™.
[0069] Izrazi "deo antitela koji vezuje antigen", "fragment antitela koji vezuje antigen", kada se ovde koriste, obuhvataju bilo koji prirodni, enzimski dobijen, sintetički, ili genetskim inženjeringom dobijen polipeptid ili glikoprotein koji se specifično vezuje za antigen da bi formirao kompleks. Izrazi "fragment antitela koji vezuje antigen" ili " fragment antitela", kada se ovde koriste, se odnose na jedan ili više fragmenata antitela koji zadržavaju sposobnost da se vezuju za PD-L1.
[0070] Prema specifičnim aspektima, antitelo ili fragmenti antitela prema pronalasku mogu biti konjugovani sa grupom kao što je ligand ili terapeutska grupa ("imunokonjugat"), kao što je antibiotik, drugo anti-PD-L1 antitelo, ili antitelo za drugi antigen, kao što je antigen specifičan za tumor, antigen virusom inficirane ćelije, ili Ko-inhibitor T-ćelija ili imunotoksin, ili bilo koja druga terapeutska grupa koja je korisna za lečenje bolesti ili stanja, uključujući npr. kancer, hroničnu virusnu infekciju ili autoimunu bolest.
[0071] "Izolovano antitelo", kada se ovde koristi, treba da se odnosi na antitelo koje u suštini ne sadrži druga antitela (Abs) koja imaju različite antigene specifičnosti (npr. izolovano antitelo koje se specifično vezuje za PD-L1, ili njegov fragment, u suštini ne sadrži Abs koja se specifično vezuju za drugačije antigene od PD-L1.
[0072] "Blokirajuće antitelo" ili "neutralizujuće antitelo", kada se ovde koristi (ili "antitelo koje neutralizuje PD-L1 aktivnost" ili "antagonističko antitelo"), treba da se odnosi na antitelo čije vezivanje za PD-L1 rezultuje inhibicijom najmanje jedne biološke aktivnosti PD-L1. Na primer, antitelo može sprečiti ili blokirati vezivanje PD-L1 za PD-1 ili za B7-1.
[0073] "Aktivirajuće antitelo" ili "pojačavajuće antitelo", kada se ovde koristi (ili "agonističko antitelo"), treba da se odnosi na antitelo čije vezivanje za PD-L1 rezultuje povećanjem ili stimulacijom najmanje jedne biološke aktivnosti PD-L1. Na primer, antitelo može povećati ili pojačati vezivanje PD-L1 za PD-1 ili za B7-1.
[0074] Izraz "površinska plazmonska rezonanca", kada se ovde koristi, se odnosi na optički fenomen koji omogućava analizu u realnom vremenu biomolekulskih interakcija detekcijom promena u koncentracijama proteina u okviru biosenzorske matrice, na primer, korišćenjem BIACORE™ sistema (Pharmacia Biosensor AB, Upsala, Švedska i Piscataway, N.J.).
[0075] Izraz "KD", kada se ovde koristi, treba da se odnosi na ravnotežnu konstantu disocijacije specifične interakcije antitelo-antigen.
[0076] Izraz "epitop" se odnosi na antigenu determinantu koja sadejstvuje sa specifičnim mestom za vezivanje antigena u varijabilnom regionu molekula antitela poznatom kao paratop. Jedan jedini antigen može imati više od jednog epitopa. Shodno tome, različita antitela se mogu vezivati za različite oblasti na antigenu i mogu imati različite biološke efekte. Izraz "epitop" se takođe odnosi na mesto na antigenu na koje reaguju B i/ili T ćelije. On se takođe odnosi na region antigena za koji se vezuje antitelo. Epitopi mogu biti definisani kao strukturni ili funkcionalni. Funkcionalni epitopi su generalno podskup strukturnih epitopa i imaju one ostatke koji direktno doprinose afinitetu interakcije. Epitopi takođe mogu biti konformacioni, to jest, mogu se sastojati od nelinearnih aminokiselina. Epitopi mogu obuhvatati determinante koje su hemijski aktivne površinske grupacije molekula, kao što su aminokiseline, bočni lanci šećera, fosforil grupe, ili sulfonil grupe, i, u izvesnim situacijama, mogu imati specifične trodimenzionalne strukturne karakteristike, i/ili specifične karakteristike naelektrisanja.
[0077] Izraz "suštinska identičnost" ili "u suštini identični", kada se odnosi na nukleinsku kiselinu ili njen fragment, ukazuje da, kada se optimalno poravnaju podesnim nukleotidnim insercijama ili delecijama sa drugom nukleinskom kiselinom (ili svojim komplementarnim lancem), onda postoji identičnost nukleotidne sekvence od najmanje oko 90%, i još poželjnije za najmanje oko 95%, 96%, 97%, 98% ili 99% nukleotidnih baza, što je izmereno bilo kojim dobro poznatim algoritmom za identičnost sekvenci, kao što su FASTA, BLAST ili GAP, kao što je razmotreno u nastavku. Molekul nukleinske kiseline koji ima suštinsku identičnost sa referentnim molekulom nukleinske kiseline može, u izvesnim slučajevima, kodirati polipeptid koji ima istu ili u suštini sličnu aminokiselinsku sekvencu kao polipeptid koji je kodiran referentnim molekulom nukleinske kiseline.
[0078] Kada se primenjuje na polipeptide, izraz "suštinska sličnost" ili "u suštini sličan" se odnosi na dve peptidne sekvence, koje kada su optimalno poravnate, kao što je pomoću programa GAP ili BESTFIT, uz korišćenje unapred zadatih težinskih koeficijenata za gepove, dele najmanje 90% identičnosti sekvence, čak još poželjnije najmanje 95%, 98% ili 99% identičnosti sekvence. Prvenstveno se pozicije ostataka, koji nisu identični, razlikuju po konzervativnim aminokiselinskim supstitucijama.
"Konzervativna aminokiselinska supstitucija" je ona u kojoj je aminokiselinski ostatak supstituisan drugim aminokiselinskim ostatkom koji ima bočni lanac (R grupu) sa sličnim hemijskim svojstvima (npr. naelektrisanjem ili hidrofobnošću). Generalno, konzervativna aminokiselinska supstitucija neće u suštini promeniti funkcionalna svojstva proteina. U slučajevima kada se dve ili više aminokiselinskih sekvenci međusobno razlikuju po konzervativnim supstitucijama, procenat ili stepen sličnosti se mogu podesiti naviše da bi se korigovala konzervativna priroda supstitucije.
Sredstva za vršenje ovog podešavanja su dobro poznata stručnjacima iz odgovarajuće oblasti. Vidi, npr. Pearson (1994) Methods Mol. Biol.24: 307-331. Primeri grupa aminokiselina koje imaju bočne lance sa sličnim hemijskim svojstvima obuhvataju 1) alifatične bočne lance: glicin, alanin, valin, leucin i izoleucin; 2) alifatično-hidroksilne bočne lance: serin i treonin; 3) bočne lance koji sadrže amid: asparagin i glutamin; 4) aromatične bočne lance: fenilalanin, tirozin, i triptofan; 5) bazne bočne lance: lizin, arginin, i histidin; 6) kisele bočne lance: aspartat i glutamat, i 7) bočne lance koji sadrže sumpor: cistein i metionin. Poželjne konzervativne aminokiselinske supstitucione grupe su: valin-leucin-izoleucin, fenilalanin-tirozin, lizinarginin, alanin-valin, glutamat-aspartat, i asparagin-glutamin. Alternativno tome, konzervativna zamena je bilo koje naelektrisanje koje ima pozitivnu vrednost u PAM250 log-matrici sličnosti opisanoj u Gonnet et al. (1992) Science 256: 144345. "Umereno konzervativna" zamena je bilo koje naelektrisanje koje ima nenegativnu vrednost u PAM250 log-matrici sličnosti.
[0079] Sličnost sekvenci za polipeptide se obično meri korišćenjem softvera za analizu sekvenci. Softver za analizu proteina uparuje slične sekvence korišćenjem merenja sličnosti koja se dodeljuju različitim supstitucijama, delecijama i drugim modifikacijama, uključujući konzervativne aminokiselinske supstitucije. Na primer, GCG softver sadrži programe kao što su GAP i BESTFIT, koji se mogu koristiti kao unapred zadati parametri za određivanje homologije sekvenci ili identičnosti sekvenci između blisko srodnih polipeptida, kao što su homologi polipeptidi od različitih vrsta organizama ili između prirodnog proteina i njegovog muteina. Vidi, npr. GCG verziju 6.1. Polipeptidne sekvence se takođe mogu porediti korišćenjem FASTA sa unapred zadatim ili preporučenim parametrima; program u GCG verziji 6.1. FASTA (npr.
FASTA2 i FASTA3) obezbeđuje poravnanja i procenat identičnosti regiona sekvenci koji se najbolje preklapa između sekvence za upit i sekvenci koje se pretražuju (Pearson (2000) supra). Sledeći poželjni algoritam kada se upoređuje sekvenca prema pronalasku sa bazom podataka koja sadrži veliki broj sekvenci od različitih organizama je kompjuterski program BLAST, a naročito BLASTP ili TBLASTN, koji koriste unapred zadate parametre. Vidi, npr. Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol.215: 403-410 i (1997) Nucleic Acids Res.25:3389-3402.
[0080] Pod frazom "terapeutski efektivna količina" se podrazumeva količina koja proizvodi željeni efekat za koji se daje. Tačna količina će zavisiti od svrhe lečenja, i može je odrediti stručnjak iz odgovarajuće oblasti korišćenjem poznatih tehnika (vidi, na primer, Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding).
[0081] Kada se ovde koristi, izraz "subjekt" se odnosi na životinju, a prvenstveno sisara, kome je potrebno ublažavanje, prevencija i/ili lečenje bolesti ili poremećaja, kao što su hronična virusna infekcija, kancer ili autoimuna bolest.
[0082] Kada se ovde koristi, "anti-kancerski lek" se odnosi na bilo koji agens koji je koristan za lečenje kancera uključujući, ali bez ograničavanja na citotoksine i agense kao što su antimetaboliti, alkilujući agensi, antraciklini, antibiotici, antimitotički agensi, prokarbazin, hidroksiurea, asparaginaza, kortikosteroidi, mitotana (O,P’-(DDD)), interferoni i radioaktivni agensi. Kada se ovde koristi, "citotoksin ili citotoksični agens" označava bilo koji agens koji je štetan za ćelije. Primeri obuhvataju Taxol® (paklitaksel), citohalasin B, gramicidin D, etidijum bromid, emetin, mitomicin, etoposid, tenoposid, vinkristin, vinbiastin, kolhicin, doksorubicin, daunorubicin, dihidroksi antracin dion, mitoksantron, mitramicin, aktinomicin D, 1-dehidrotestosteron, glukokortikoidi, prokain, tetrakain, lidokain, propranolol, i puromicin i njihove analoge ili homologe.
[0083] Kada se ovde koristi, izraz "anti-virusni lek" se odnosi na bilo koji lek ili terapiju koja se koristi za lečenje, prevenciju ili ublažavanje virusne infekcije kod subjekta domaćina. Izraz "anti-virusni lek" obuhvata, ali nije ograničen na zidovudin, lamivudin, abakavir, ribavirin, lopinavir, efavirenc, kobicistat, tenofovir, rilpivirin, analgetike i kortikosteroide. U kontekstu predmetnog pronalaska, virusne infekcije obuhvataju dugotrajne ili hronične infekcije izazvane virusima uključujući, ali bez ograničavanja na virus humane imunodeficijencije (HIV), hepatitis B virus (HBV), hepatitis C virus (HCV), humani papiloma virus (HPV), virus limfocitnog horiomeningitisa (LCMV), i virus simijane imunodeficijencije (SIV).
[0084] Antitela i fragmenti koji vezuju antigen prema predmetnom pronalasku specifično se vezuju za PD-L1 i modulišu interakciju PD-L1 sa PD-1 ili sa B7-1. Anti-PD-L1 antitela, koja su ovde opisana, mogu se vezivati za PD-L1 sa visokim afinitetom ili sa niskim afinitetom. Antitela prema predmetnom pronalasku su blokirajuća antitela, pri čemu se antitela vezuju za PD-L1 i blokiraju interakciju PD-L1 sa PD-1 ili sa B7-1. Blokirajuća antitela prema pronalasku blokiraju vezivanje PD-L1 za PD-1 ili za B7-1 i stimulišu ili pojačavaju aktivaciju T-ćelija. U nekim primerima izvođenja, blokirajuća antitela prema pronalasku su korisna za stimulaciju ili pojačanje imune reakcije i/ili za lečenje subjekta koji boluje od kancera, ili hronične virusne infekcije. Kada se antitela daju subjektu kome je to potrebno, ona mogu smanjiti hroničnu infekciju virusom kao što je HIV, LCMV ili HBV kod subjekta. Ona se mogu koristiti za inhibiranje rasta tumorskih ćelija kod subjekta. Ona se mogu koristiti sama ili kao adjunktna terapija sa drugim terapeutskim grupama ili modalitetima poznatim iz odgovarajuće oblasti za lečenje kancera, ili virusne infekcije. Prema izvesnim aspektima, anti-PD-L1 antitela koja se vezuju za PD-L1 sa niskim afinitetom se koriste kao multi-specifični molekuli koji vezuju antigen, pri čemu se prva specifičnost vezuje za PDL1 sa niskim afinitetom, dok se druga specifičnost vezuje za antigen izabran iz grupe koja se sastoji od drugačijeg epitop PD-L1, koinhibitora T-ćelija, kao što je PD-1, antigena specifičnog za tumor i antigena specifičnog za inficiranu ćeliju.
[0085] Prema izvesnim aspektima, antitela prema predmetnom otkrivanju su agonistička antitela, pri čemu se antitela vezuju za PD-L1 i povećavaju interakciju PD-L1 i PD-1/B7-1. Prema nekim aspektima, aktivirajuća antitela povećavaju vezivanje PD-L1 za PD-1 ili za B7-1 i/ili inhibiraju ili sprečavaju aktivaciju T-ćelija. Aktivirajuća antitela mogu biti korisna za inhibiciju imune reakcije kod subjekta i/ili za lečenje autoimune bolesti.
[0086] U izvesnim primerima izvođenja, anti-PD-L1 antitela su multi-specifični molekuli koji vezuju antigen, pri čemu ona sadrže prvu specifičnost koja se vezuje za PD-L1 i drugu specifičnost koja se vezuje za antigen izabran iz grupe koja se sastoji od drugačijeg epitopa PD-L1, ko-inhibitora T-ćelija, kao što je PD-1, antigena specifičnog za tumor i antigena specifičnog za inficiranu ćeliju. Prema izvesnim aspektima, prva specifičnost koja se vezuje za PD-L1 se vezuje sa niskim afinitetom, npr. sa KD od 10<-8>M, 10<-7>M ili većim.
[0087] Izvesna anti-PD-L1 antitela prema predmetnom otkrivanju mogu da se vezuju i da neutralizuju aktivnost PD-L1, što se određuje in vitro ili in vivo testovima.
Sposobnost antitela da se vezuju i neutralizuju aktivnost PD-L1 može se izmeriti korišćenjem bilo kog standardnog metoda poznatog stručnjacima iz odgovarajuće oblasti, uključujući testove vezivanja, ili testove aktivnosti, kao što je ovde opisano.
[0088] Neograničavajući, ilustrativni in vitro testovi za merenje aktivnosti vezivanja su ovde ilustrovani u Primeru 3. U Primeru 3, afiniteti vezivanja i kinetičke konstante humanih anti-PD-L1 antitela za humani PD-L1 i makakijev PD-L1 su bili određeni površinskom plazmonskom rezonancom, a merenja su bila izvedena na T200 Biacore instrumentu. U Primerima 4 i 5, testovi blokiranja su bili upotrebljeni za određivanje sposobnosti anti-PD-L1 antitela da blokiraju sposobnost vezivanja PD-L1 za PD-1 ili za B7-1 in vitro. U Primeru 6, bili su upotrebljeni testovi blokiranja za određivanje unakrsnog nadmetanja između različitih anti-PD-L1 antitela. Primer 7 opisuje vezivanje antitela za ćelije koje prekomerno izražavaju PD-L1. U Primeru 8, test sa luciferazom je bio upotrebljen za određivanje sposobnosti anti-PD-L1 antitela da antagonizuju PD-1/PD-L1 signalizaciju u T-ćelijama.
[0089] Antitela prema predmetnom pronalasku mogu da pojačaju ili stimulišu aktivaciju T-ćelija in vitro i kod subjekta sa kancerom ili kod subjekta inficiranog sa virusom kao što je LCMV. U izvesnim primerima izvođenja, antitela prema predmetnom pronalasku se upotrebljavaju u kombinaciji sa drugim terapeutskim agensom, kao što je antitelo za antigen koji je specifičan za tumor ili ko-inhibitor T-ćelija, da bi se pojačala imuna reakcija i inhibirao rast tumora kod subjekta. Prema izvesnim aspektima otkrivanja, ovde opisana agonistična antitela mogu da pojačaju vezivanje PD-L1 za PD-1 ili za B7-1 i mogu inhibirati aktivaciju T-ćelija in vitro i/ili kod subjekta sa autoimunom bolesti.
[0090] Antitela specifična za PD-L1 ne moraju sadržati dodatne markere ili grupe ili mogu sadržati N-terminalni ili C-terminalni marker ili grupu. U jednom primeru izvođenja, marker ili grupa je biotin. U testu vezivanja, lokacija markera (ako ga ima) može odrediti orijentaciju peptida u odnosu na površinu preko koje je peptid vezan. Na primer, ako je površina obložena avidinom, peptid koji sadrži N-terminalni biotin će biti orijentisan tako da će C-terminalni deo peptida biti udaljen od površine. U jednom primeru izvođenja, marker može biti radionuklid, fluorescentna boja ili MRI-detektabilni marker. Prema izvesnim aspektima, takva obeležena antitela se mogu koristiti u dijagnostičkim testovima uključujući testove sa snimanjem.
Fragmenti antitela koji vezuju antigene
[0091] Osim ako specifično nije drugačije navedeno, kada se ovde koristi izraz "antitelo," onda se podrazumeva da obuhvata molekule antitela koji sadrže dva imunoglobulinska teška lanca i dva imunoglobulinska laka lanca (tj. "kompletni molekuli antitela"), kao i njihove fragmente koji vezuju antigen. Izrazi "deo koji vezuje antigen" antitela, "fragment koji vezuje antigen" antitela, kada se ovde koristi, obuhvata bilo koji prirodni, enzimski dobijeni, sintetički, ili genetskim inženjeringom dobijeni polipeptid ili glikoprotein koji specifično vezuje antigen da bi formirao kompleks. Izrazi "fragment koji vezuje antigen" antitela ili " fragment antitela", kada se ovde koriste, odnose se na jedan ili više fragmenata antitela koji sadržavaju sposobnost specifičnog vezivanja za PD-L1. Fragment antitela može obuhvatati Fab fragment, F(ab’)2 fragment, Fv fragment, dAb fragment, fragment koji sadrži CDR, ili izolovani CDR. U izvesnim primerima izvođenja, izraz "fragment koji vezuje antigen" se odnosi na polipeptid ili njegov fragment multi-specifičnog molekula koji vezuje antigen. U takvim primerima izvođenja, izraz "fragment koji vezuje antigen" obuhvata, npr. ekstracelularni domen PD-1 koji se vezuje specifično za PD-L1. Fragmenti antitela koji vezuju antigen se mogu dobiti, npr. od kompletnih molekula antitela korišćenjem bilo koje podesne standardne tehnike, kao što je proteolitička digestija ili tehnike rekombinantnog genetskog inženjeringa koje obuhvataju manipulaciju i ekspresiju DNK koja kodira varijabilne i (opciono) konstantne domene antitela. Takva DNK je poznata i/ili se može lako dobiti, npr. iz komercijalnih izvora, DNK biblioteka (uključujući, npr. biblioteke fag-antitelo), ili se može sintetisati. DNK se može sekvencirati i manipulisati hemijski ili korišćenjem tehnika molekularne biologije, na primer, da bi se rasporedio jedan ili više varijabilnih i/ili konstantnih domena u podesnu konfiguraciju, ili da bi se uveli kodoni, kreirali cisteinski ostaci, modifikovale, dodale ili izbrisale aminokiseline, itd.
[0092] Neograničavajući primeri fragmenata koji vezuju antigen obuhvataju: (i) Fab fragmente; (ii) F(ab’)2 fragmente; (iii) Fd fragmente; (iv) Fv fragmente; (v) jednolančane Fv (scFv) molekule; (vi) dAb fragmente; i (vii) minimalne prepoznatljive jedinice koje se sastoje od aminokiselinskih ostataka koji imitiraju hipervarijabilni region antitela (npr. izolovani region koji određuje komplementarnost (CDR) kao što je CDR3 peptid), ili ograničeni FR3-CDR3-FR4 peptid. Drugi genetskim inženjeringom dobijeni molekuli, kao što su antitela sa specifičnim domenom, antitela sa samo jednim domenom, antitela sa izbrisanim domenom, himerična antitela, CDR-graftovana antitela, dijatela, trijatela, tetratela, minitela, nanotela (npr. monovalentna nanotela, bivalentna nanotela, itd.), mali modularni imunofarmaceutici (SMIPs), i ajkulini varijabilni IgNAR domeni, takođe su obuhvaćeni u okviru izraza "fragment koji vezuje antigen," kada se on ovde koristi.
[0093] Fragment antitela koji vezuje antigen će obično sadržati najmanje jedan varijabilni domen. Varijabilni domen može imati bilo koju veličinu ili aminokiselinsku kompoziciju i generalno će sadržati najmanje jedan CDR, koji je susedan ili se nalazi u okviru sa jednom ili više sekvenci okvira. U fragmentima koji vezuju antigen koji imaju VH domen pridružen VL domenu, VH i VL domeni mogu biti smešteni jedan u odnosu na drugi u bilo kom podesnom rasporedu. Na primer, varijabilni region može biti dimerni i sadržati VH - VH, VH - VL ili VL - VL dimere. Alternativno tome, fragment antitela koji vezuje antigen može sadržati monomerni VH ili VL domen.
[0094] U izvesnim primerima izvođenja, fragment antitela koji vezuje antigen može sadržati najmanje jedan varijabilni domen kovalentno povezan sa najmanje jednim konstantnim domenom. Neograničavajuće, ilustrativne konfiguracije varijabilnih i konstantnih domena koje se mogu naći u okviru fragmenta antitela koji vezuje antigen prema predmetnom pronalasku obuhvataju: (i) VH -CH1; (ii) V H -CH2; (iii) VH -CH3; (iv) VH -CH1 -CH2; (v) VH -CH1-CH2-CH3; (vi) VH -CH2-CH3; (vii) VH -CL; (viii) VL -CH1; (ix) VL -CH2; (x) VL -CH3; (xi) VL -CH1-CH2; (xii) VL -CH1-CH2-CH3; (xiii) VL -CH2-CH3; i (xiv) VL -CL. U bilo kojoj konfiguraciji varijabilnih i konstantnih domena, uključujući bilo koji od gore navedenih ilustrativnih konfiguracija, varijabilni i konstantni domeni mogu biti direktno međusobno povezani ili mogu biti povezani pomoću celog ili delimičnog zgloba ili linkerskog regiona. Region zgloba se može sastojati od najmanje 2 (npr.5, 10, 15, 20, 40, 60 ili više) aminokiseline, što rezultuje fleksibilnom ili polu-fleksibilnom vezom između susednih varijabilnih i/ili konstantnih domena u samo jednom polipeptidnom molekulu. Pored toga, fragment antitela koji vezuje antigen prema predmetnom pronalasku može sadržati homo-dimer ili heterodimer (ili drugi multimer) bilo koje od koje od gore navedenih konfiguracija varijabilnog i konstantnog domena u nekovalentnoj međusobnoj asocijaciji i/ili sa jednim ili više monomernih VH ili VL domena (npr. pomoću disulfidne veze, odnosno veza).
[0095] Kao i za molekule celog antitela, fragmenti koji vezuju antigene mogu biti mono-specifični ili multi-specifični (npr. bispecifični). Multi-specifični fragment antitela koji vezuje antigen će obično sadržati najmanje dva različita varijabilna domena, pri čemu svaki varijabilni domen može da se specifično vezuje za poseban antigen ili za različiti epitop na istom antigenu. Bilo koji multi-specifični format antitela, uključujući ilustrativne ovde opisane bi-specifične formate antitela, može biti prilagođen za primenu u kontekstu fragmenta antitela koji vezuje antigen prema predmetnom pronalasku korišćenjem rutinskih tehnika koje se nalaze na raspolaganju u odgovarajućoj oblasti.
Priprema humanih antitela
[0096] Metodi za generisanje humanih antitela u transgenskim miševima su poznati iz odgovarajuće oblasti. Bilo koji takvi poznati metodi se mogu koristiti za pravljenje humanih antitela koja se specifično vezuju za PD-L1.
[0097] Imunogen koji sadrži bilo koji od sledećih može se upotrebiti za generisanje antitela za PD-L1. Antitela se mogu dobiti od miševa imunizovanih sa primarnim imunogenom, kao što je PD-L1 cele dužine [Vidi GenBank pristupni broj NP_054862.1 (SEQ ID NO: 351)] ili rekombinantnim oblikom PD-L1 ili modifikovanim fragmentima humanog PD-L1 (SEQ ID NOs: 345, 347 ili 348) ili modifikovanim fragmentima makakijevog PD-L1 (SEQ ID NO: 346), što je praćeno imunizacijom sa sekundarnim imunogenom, ili sa imunogeno aktivnim fragmentom PD-L1.
[0098] Imunogen može biti peptid sa N terminalnog ili C terminalnog kraja PD-L1. Imunogen može biti ekstracelularni PD-L1 domen nalik IgV i/ili nalik IgC. Imunogen može biti fragment PD-L1 koji se nalazi oko aminokiselinskih ostataka 19 - 239 od SEQ ID NO: 351 (NP_054862.1).
[0099] Imunogen može biti rekombinantni PD-L1 peptid izražen u E. coli ili u bilo kojim drugim eukariotskim ili sisarskim ćelijama kao što su jajne ćelije kineskog hrčka (engl. Chinese hamster ovary cells, skr. CHO ćelije).
[0100] Prema izvesnim aspektima otkrivanja, antitela koja se vezuju specifično za PD-L1 se mogu pripremiti korišćenjem fragmenata gore navedenih regiona, ili peptida koji se pružaju izvan navedenih regiona za oko 5 do oko 20 aminokiselinskih ostataka sa jednog, ili oba, N ili C terminalna kraja ovde opisanih regiona. Prema izvesnim aspektima otkrivanja, bilo koja kombinacija gore navedenih regiona ili njihovih fragmenata se može upotrebiti u pripremi PD-L1 specifičnih antitela.
[0101] Korišćenjem VELOCIMMUNE® tehnologije (vidi, na primer, US 6,596,541, Regeneron Pharmaceuticals, VELOCIMMUNE®) ili bilo kog drugog poznatog metoda za generisanje monoklonskih antitela, inicijalno se izoluju visoko afinitetna himerična antitela za PD-L1 koja imaju humani varijabilni region i mišiji konstantni region.
VELOCIMMUNE® tehnologija obuhvata generisanje transgenskog miša koji ima genom koji sadrži varijabilne regione humanog teškog i lakog lanca operativno povezane sa endogenim lokusima mišijeg konstantnog regiona tako da miš proizvodi antitelo koje sadrži humani varijabilni region i mišiji konstantni region kao reakciju na antigenu stimulaciju. DNK koja kodira varijabilne regione teškog i lakog lanca antitela se izoluje i operativno povezuje sa DNK koja kodira konstantne regione humanog teškog i lakog lanca. Onda se DNK izražava u ćeliji koja može da izražava potpuno humano antitelo.
Bioekvivalenti
[0102] Anti-PD-L1 antitela i fragmenti antitela prema predmetnom otkrivanju obuhvataju proteine koji imaju aminokiselinske sekvence koje se razlikuju od onih kod opisanih antitela, ali koje zadržavaju sposobnost da vezuju PD-L1. Takva varijantna antitela i fragmenti antitela sadrže jednu ili više adicija, delecija, ili supstitucija aminokiselina kada se uporede sa roditeljskim sekvencama, ali ispoljavaju biološku aktivnost koja je u suštini ekvivalentna sa onom kod opisanih antitela. Isto tako, DNK sekvence koje kodiraju antitelo prema predmetnom otkrivanju obuhvataju sekvence koje sadrže jednu ili više adicija, delecija, ili supstitucija nukleotida kada se uporede sa opisanim sekvencama, ali koje kodiraju antitelo ili fragment antitela koji je u suštini bioekvivalentan sa antitelom ili fragmentom antitela prema pronalasku.
[0103] Dva proteina koji vezuju antigen, ili antitela, se smatraju bioekvivalentnim ako su oni, na primer, farmaceutski ekvivalenti ili farmaceutske alternative čija brzina i stepen apsorpcije ne ispoljavaju značajnu razliku kada se daju u istoj molskoj dozi pod sličnim eksperimentalnim uslovima, bilo kao jedna doza ili kao više doza. Neka antitela će se smatrati ekvivalentima ili farmaceutskim alternativama ako su ona ekvivalentna po stepenu apsorpcije, ali ne i po svojoj brzini apsorpcije i još se mogu smatrati bioekvivalentnim, jer su takve razlike u brzini apsorpcije nenamerne i odražavaju se pri obeležavanju, nisu bitne za održavanje efektivnih koncentracija leka u telu, npr. pri hroničnoj upotrebi i smatraju se medicinski beznačajnim za specifični lekoviti proizvod koji se proučava.
[0104] Dva proteina koji vezuju antigen mogu biti bioekvivalentna ako ne postoje klinički značajne razlike u pogledu njihove bezbednosti, čistoće ili potencije.
[0105] Dva proteina koji vezuju antigen mogu biti bioekvivalentna ako se pacijent može prebaciti jednom ili više puta sa referentnog proizvoda i biološkog proizvoda bez očekivanog povećanja rizika od neželjenih dejstava, uključujući klinički značajnu promenu imunogenosti ili smanjenu efektivnost, u poređenju sa kontinualnom terapijom bez takvog prebacivanja.
[0106] Dva proteina koji vezuju antigen mogu biti bioekvivalentna ako oba deluju putem zajedničkog mehanizma ili mehanizama dejstva za stanje ili uslove upotrebe, do mere do koje su takvi mehanizmi poznati.
[0107] Bioekvivalencija se može demonstrirati in vivo i/ili in vitro metodima. Merenja bioekvivalencije obuhvataju, npr. (a) in vivo test kod ljudi ili drugih sisara, kod kojih se koncentracija antitela ili njegovih metabolita meri u krvi, plazmi, serumu, ili drugom biološkom fluidu kao funkcija vremena; (b) in vitro test koji je korelisan sa i razumno je predvidiv za humane in vivo bioraspoložive podatke; (c) in vivo test kod ljudi ili drugih sisara kod kojih se podesni akutni farmakološki efekat antitela (ili njegovog cilja) meri kao funkcija vremena; i (d) u dobro kontrolisanom kliničkom ispitivanju kojim se utvrđuje bezbednost, efikasnost, ili bioraspoloživost ili bioekvivalencija antitela.
[0108] Bioekvivalentne varijante antitela prema pronalasku mogu biti konstruisane, na primer, pravljenjem različitih supstitucija ostataka ili sekvenci ili delecijom terminalnih ili internih ostataka ili sekvenci koje nisu potrebne za biološku aktivnost. Na primer, cisteinski ostaci koji nisu značajni za biološku aktivnost mogu biti izbrisani ili zamenjeni drugim aminokiselinama da bi se sprečilo formiranje nepotrebnih ili nekorektnih intramolekulskih disulfidnih mostova posle renaturacije. U drugim kontekstima, bioekvivalentna antitela mogu obuhvatati varijante antitela koje sadrže aminokiselinske promene koje modifikuju karakteristike glikozilacije antitela, npr. mutacije koje eliminišu ili uklanjaju glikozilaciju.
Anti-PD-L1 antitela koja sadrže Fc varijante
[0109] Prema izvesnim aspektima otkrivanja, realizovana su anti-PD-L1 antitela koja sadrže Fc domen koji sadrži jednu ili više mutacija koje povećavaju ili smanjuju vezivanje antitela za FcRn receptor, npr. pri kiselom pH u poređenju sa neutralnim pH. Na primer, predmetno otkrivanje obuhvata anti-PD-L1 antitela koja sadrže mutaciju u CH2 ili CH3 regionu Fc domena, pri čemu mutacija, odnosno mutacije povećavaju afinitet Fc domena za FcRn u kiselom okruženju (npr. u endozomu gde se pH nalazi u opsegu od oko 5.5 do oko 6.0). Takve mutacije mogu rezultovati povećanjem serumskog poluživota antitela kada se daju životinji. Neograničavajući primeri takvih Fc modifikacija obuhvataju, npr. modifikaciju na poziciji 250 (npr. E ili Q); 250 i 428 (npr. L ili F); 252 (npr. L/Y/F/W ili T), 254 (npr. S ili T), i 256 (npr.
S/R/Q/E/D ili T); ili modifikaciju na poziciji 428 i/ili 433 (npr. H/L/R/S/P/Q ili K) i/ili 434 (npr. A, W, H, F ili Y [N434A, N434W, N434H, N434F ili N434Y]); ili modifikaciju na poziciji 250 i/ili 428; ili modifikaciju na poziciji 307 ili 308 (npr.308F, V308F), i 434. Prema jednom aspektu, modifikacija sadrži 428L (npr. M428L) i 434S (npr. N434S) modifikaciju; 428L, 259I (npr. V259I), i 308F (npr. V308F) modifikaciju; 433K (npr. H433K) i 434 (npr.434Y) modifikaciju; 252, 254, i 256 (npr.252Y, 254T, i 256E) modifikaciju; 250Q i 428L modifikaciju (npr. T250Q i M428L); i 307 i/ili 308 modifikaciju (npr.308F ili 308P). Prema jednom drugom aspektu, modifikacija sadrži 265A (npr. D265A) i/ili 297A (npr. N297A) modifikaciju.
[0110] Na primer, predmetno otkrivanje obuhvata anti-PD-L1 antitela koja sadrže Fc domen koji sadrži jedan ili više parova ili grupa mutacija izabranih iz grupe koja se sastoji od: 250Q i 248L (npr. T250Q i M248L); 252Y, 254T i 256E (npr. M252Y, S254T i T256E); 428L i 434S (npr. M428L i N434S); 257I i 311I (npr. P257I i Q311I); 257I i 434H (npr. P257I i N434H); 376V i 434H (npr. D376V i N434H); 307A, 380A i 434A (npr. T307A, E380A i N434A); i 433K i 434F (npr. H433K i N434F). Prema jednom aspektu, predmetno otkrivanje obuhvata anti-PD-L1 antitela koja sadrže Fc domen koji sadrži S108P mutaciju u regionu zgloba IgG4 da bi se stimulisala stabilizacija dimera. Razmotrene su sve moguće kombinacije gore navedenih mutacija Fc domena, i drugih mutacija u okviru ovde opisanih varijabilnih domena antitela.
[0111] Predmetno otkrivanje takođe obuhvata anti-PD-L1 antitela koja sadrže himerični konstantni region teškog lanca (CH), pri čemu himerični CH region sadrži segmente koji potiču od CH regiona od više od jednog imunoglobulinskog izotipa. Na primer, opisana antitela mogu sadržati himerični CH region koji sadrži deo ili ceo CH2 domen koji potiče od humanog IgG1, humanog IgG2 ili humanog IgG4 molekula, kombinovan sa delom ili celim CH3 domenom koji potiče od humanog IgG1, humanog IgG2 ili humanog IgG4 molekula. Prema izvesnim aspektima, opisana antitela sadrže himerični CH region koji ima himerični region zgloba. Na primer, himerični zglob može sadržati aminokiselinsku sekvencu "gornjeg zgloba" (aminokiselinske ostatke od pozicija 216 do 227 prema EU numeraciji) koja potiče od humanog IgG1, humanog IgG2 ili humanog IgG4 regiona zgloba, kombinovanu sa sekvencom "donjeg zgloba" (aminokiselinski ostaci od pozicija 228 do 236 prema EU numeraciji) koja potiče od humanog IgG1, humanog IgG2 ili humanog IgG4 regiona zgloba. Prema izvesnim aspektima, himerični region zgloba sadrži aminokiselinske ostatke koji potiču od humanog IgG1 ili humanog IgG4 gornjeg zgloba i aminokiselinske ostatke koji potiču od humanog IgG2 donjeg zgloba. Antitelo koje sadrži himerični CH region kao što je ovde opisano, pod izvesnim okolnostima, ispoljava modifikovane Fc efektorske funkcije bez nepoželjnog uticaja na terapeutska ili farmakokinetička svojstva antitela. (Vidi, npr. USSN.14/170,166, podneta 31. januara 2014).
Biološke karakteristike antitela
[0112] Generalno, antitela prema predmetnom pronalasku funkcionišu vezivanjem za PD-L1. Predmetnim pronalaskom su realizovana anti-PD-L1 antitela i fragmenti koji vezuju antigen kao što je definisano u njegovim patentnim zahtevima koji se vezuju za rastvorljive monomerne ili dimerne PD-L1 molekule sa visokim afinitetom. Na primer, predmetnim pronalaskom su realizovana antitela i fragmenti antitela koji vezuju antigen, a koji se vezuju za monomerni PD-L1 (npr. na 25°C ili na 37°C) sa KD manjim od oko 318 pM, što je izmereno površinskom plazmonskom rezonancom, npr. korišćenjem formata testa koji je definisan ovde u Primeru 3. Prema izvesnim aspektima, antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, se vezuju za monomerni PD-L1 sa KD manjim od oko 300 pM, manjim od oko 250 pM, manjim od oko 150 pM, manjim od oko 100 pM, ili manjim od oko 50 pM, što je izmereno površinskom plazmonskom rezonancom, npr. korišćenjem formata testa koji je definisan ovde u Primeru 3, ili u suštini sličnim testom.
[0113] Predmetnim pronalaskom su takođe realizovana antitela i njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji se vezuju za dimerni PD-L1 (npr. na 25°C ili na 37°C) sa KD manjim od oko 15 pM, što je izmereno površinskom plazmonskom rezonancom, npr. korišćenjem formata testa koji je definisan ovde u Primeru 3. U izvesnim primerima izvođenja, antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, se vezuju za dimerni PD-L1 sa KD manjim od oko 12 pM, manjim od oko 10 pM, manjim od oko 8 pM, ili manjim od oko 5 pM, što je izmereno površinskom plazmonskom rezonancom, npr.
korišćenjem formata testa koji je definisan ovde u Primeru 3, ili u suštini sličnim testom.
[0114] Predmetnim pronalaskom su takođe realizovana antitela ili fragmenti koji vezuju antigen koji su definisani u njegovim patentnim zahtevima, koji se vezuju za makakijev (Macaca fascicularis) PD-L1 (npr. na 25°C ili na 37°C) sa KD manjim od oko 28 nM, što je izmereno površinskom plazmonskom rezonancom, npr. korišćenjem formata testa koji je definisan ovde u Primeru 3. Antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, vezuju se za makakijev PD-L1 sa KD manjim od oko 25 nM, manjim od oko 20 nM, manjim od oko 15 nM, manjim od oko 10 nM, ili manjim od oko 5 nM, što je izmereno površinskom plazmonskom rezonancom, npr. korišćenjem formata testa koji je definisan ovde u Primeru 3, ili u suštini sličnim testom.
[0115] Predmetnim pronalaskom su takođe realizovana antitela i fragmenti koji vezuju antigene koji su definisani u njegovim patentnim zahtevima koji vezuju PD-L1 sa disocijativnim poluživotom (t1⁄2) većim od oko 1 minuta, mereno površinskom plazmonskom rezonancom na 25ºC ili 37ºC, npr. upotrebom formata testa koji je definisan ovde u Primeru 3, ili u suštini sličnim testom. U izvesnim primerima izvođenja, antitela ili fragmenti koji vezuju antigene prema predmetnom pronalasku vezuju PD-L1 sa t1⁄2 većim od oko 5 minuta, većim od oko 10 minuta, većim od oko 30 minuta, većim od oko 50 minuta, većim od oko 60 minuta, većim od oko 70 minuta, većim od oko 80 minuta, većim od oko 90 minuta, većim od oko 100 minuta, većim od oko 200 minuta, većim od oko 300 minuta, većim od oko 400 minuta, većim od oko 500 minuta, većim od oko 600 minuta, većim od oko 700 minuta, ili većim od oko 800 minuta, mereno površinskom plazmonskom rezonancom na 25ºC ili 37ºC, npr. upotrebom formata testa koji je definisan ovde u Primeru 3 (npr. format mAbhvatanja ili antigen-hvatanja), ili u suštini sličnim testom.
[0116] Predmetnim pronalaskom su takođe realizovana antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji blokiraju vezivanje PD-L1 za PD-1 sa IC50 manjim od oko 770 pM, što je određeno korišćenjem imunotesta baziranog na ELISI, npr. kao što je prikazano u Primeru 4, ili u suštini sličnog testa. Predmetnim pronalaskom su takođe realizovana antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji blokiraju vezivanje PD-L1 za B7-1 sa IC50 manjim od oko 10 nM, što je određeno korišćenjem imunotesta baziranog na ELISI, npr. kao što je prikazano u Primeru 4, ili u suštini sličnog testa. Predmetno otkrivanje takođe obuhvata antitela i njihove fragmente koji vezuju antigen, a koji se vezuju za PD-L1 i pojačavaju vezivanje PD-L1 za PD-1 ili za B7-1.
[0117] Antitela prema predmetnom otkrivanju se mogu vezivati za ekstracelularni domen PD-L1 ili za fragment domena. Antitela se mogu vezivati za više od jednog domena (unakrsno-reaktivna antitela). Antitela se mogu vezivati za epitop lociran u ekstracelularnom domenu koji sadrži aminokiselinske ostatke 19 - 239 od NP_054862.1 (SEQ ID NO: 351). Antitela se mogu vezivati za epitop koji sadrži jednu ili više aminokiselina izabranih iz grupe koja se sastoji od aminokiselinskih ostataka 1 - 221 od SEQ ID NOs: 345 - 348, ili 353.
[0118] Antitela mogu funkcionisati blokiranjem ili inhibicijom aktivnosti PD-1-vezivanja ili B7-1-vezivanja povezanom sa PD-L1 putem vezivanja za neki drugi region ili fragment proteina cele dužine, čija aminokiselinska sekvenca je prikazana u SEQ ID NO: 351. Antitela mogu oslabiti ili modulisati interakciju između PD-L1 i PD-1/B7-1.
[0119] U izvesnim primerima izvođenja, antitela prema predmetnom pronalasku mogu biti bi-specifična antitela. Bi-specifična antitela prema pronalasku se mogu vezivati za jedan epitop u jednom domenu i mogu se takođe vezivati za drugi epitop u različitom domenu PD-L1. U izvesnim primerima izvođenja, bi-specifična antitela prema pronalasku se mogu vezivati za dva različita epitopa u istom domenu. Prema jednom aspektu, multi-specifični molekul koji vezuje antigen sadrži prvu specifičnost koja vezuje antigen, pri čemu prva specifičnost koja vezuje antigen sadrži ekstracelularni domen ili njegov fragment od PD-1; i drugu specifičnost koja vezuje antigen za drugi epitop od PD-L1. Prema sledećem aspektu, multi-specifični molekul koji vezuje antigen sadrži prvu specifičnost koja vezuje antigen, pri čemu prva specifičnost koja vezuje antigen sadrži ekstracelularni domen ili njegov fragment od B7-1; i drugu specifičnost koja vezuje antigen za drugi epitop od PD-L1.
[0120] Prema jednom aspektu, otkrivanjem je realizovano potpuno humano monoklonsko antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen koji se vezuju za PD-L1, pri čemu antitelo ili njegov fragment ispoljavaju jednu ili više od sledećih karakteristika: (i) sadrže HCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 186, 202, 218, 234, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 306, 314, 322, 330 i 338, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; (ii) sadrže LCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 194, 210, 226, 242, 258, i 274, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; (iii) sadrže HCDR3 domen koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 280, 288, 296, 304, 312, 320, 328, 336 i 344, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; i LCDR3 domen koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 200, 216, 232, 248, 264, i 280, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; (iv) sadrže HCDR1 domen koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284, 292, 300, 308, 316, 324, 332, i 340, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; HCDR2 domen koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 294, 302, 310, 318, 326, 334, i 342, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; LCDR1 domen koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 196, 212, 228, 244, 260, i 276, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; i LCDR2 domen koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 198, 214, 230, 246, 262, i 278, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; (v) predstavljaju multispecifični molekul koji vezuje antigen koji sadrži prvu specifičnost koja vezuje PD-L1 i drugu specifičnost koja vezuje antigen izabran iz grupe koja se sastoji od PD-L1, antigena specifičnog za tumor, virusom inficiranog ćelijskog antigena, i ko-inhibitora T-ćelija; (vi) vezuju se za humani PD-L1 sa KD od oko 4 pM do oko 645 nM; (vii) vezuju se za makakijev PD-L1 sa KD od oko 70 pM do oko 400 nM; (viii) blokiraju ili povećavaju vezivanje PD-L1 za PD-1 sa IC50 ≤ 770 pM; (ix) blokiraju ili povećavaju vezivanje PD-L1 za B7-1 sa IC50 ≤ 10 nM; (x) blokira smanjenje regulacije T-ćelija indukovano sa PD-1 i/ili spasava signalizaciju T-ćelija u testu sa reporterom T-ćelija/APC luciferaze; (xi) stimulišu proliferaciju T-ćelija i aktivnost u testu mešovite limfocitne reakcije (MLR); (xii) indukuju produkciju IL-2 i/ili IFNγ u MLR testu; i (xiii) sprečavaju rast tumora i povećava preživljavanje kod subjekata sa kancerom.
[0121] Prema jednom aspektu, otkrivanjem je realizovano potpuno humano monoklonsko antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen koji blokiraju vezivanje PD-L1 za PD-1 ili za B7-1, pri čemu antitelo ili njegov fragment ispoljavaju jednu ili više od sledećih karakteristika: (i) sadrže HCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 82, 98, 146, 162, 290, 306, 314, i 330, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; (ii) sadrže LCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 90, 106, 154, 170, i 274, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; (iii) sadrže HCDR3 domen koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 88, 104, 152, 168, 296, 312, 320, i 336, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; i LCDR3 domen koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 96, 112, 160, 176, i 280, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; (iv) sadrže HCDR1 domen koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 84, 100, 148, 164, 292, 308, 316, i 332, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; HCDR2 domen koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 86, 102, 150, 166, 294, 310, 318, i 334, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; LCDR1 domen koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 92, 108, 156, 172, i 276, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; i LCDR2 domen koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 94, 110, 158, 174, i 278, ili u suštini njima sličnih sekvenci koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; (v) predstavljaju multispecifični molekul koji vezuje antigen koji sadrži prvu specifičnost koja vezuje PD-L1 i drugu specifičnost koja vezuje antigen izabran iz grupe koja se sastoji od drugačijeg epitopa PD-L1, antigena specifičnog za tumor, virusom inficiranog ćelijskog antigena, i ko-inhibitora T-ćelija; (vi) vezuju se za humani PD-L1 sa KD ≤ 10-
<10>M; (vii) vezuje se za makakijev PD-L1 sa KD ≤ 10<-7>M; (viii) blokiraju vezivanje PD-L1 za PD- 1 ili za B7-1; (ix) blokiraju smanjenje regulacije T-ćelija indukovano sa PD-1 i/ili spasava signalizaciju T-ćelija u testu sa reporterom T-ćelija/APC luciferaze; (xi) stimulišu proliferaciju T-ćelija i aktivnost u testu mešovite limfocitne reakcije (MLR); (xii) indukuju produkciju IL-2 i/ili IFNγ u MLR testu; i (xiii) sprečavaju rast tumora i povećavaju preživljavanje kod subjekata sa kancerom.
[0122] Antitela prema predmetnom otkrivanju mogu posedovati jednu ili više od gore navedenih bioloških karakteristika, ili bilo koje njihove kombinacije. Druge biološke karakteristike antitela prema predmetnom pronalasku će biti evidentne osobi koja je prosečan stručnjak iz odgovarajuće oblasti na osnovu uvida u predmetno otkrivanje, uključujući radne Primere u njemu.
Selektivnost vrsta i unakrsna reaktivnost vrsta
[0123] Prema izvesnim aspektima otkrivanja, anti-PD-L1 antitela se vezuju za humani PD-L1, ali ne i za PDL1 drugih vrsta. Anti-PD-L1 antitela prema pronalasku se vezuju za humani PD-L1 i za PD-L1 jedne ili više ne-humanih vrsta. Na primer, anti-PD-L1 antitela prema otkrivanju mogu se vezivati za humani PD-L1 i mogu se vezivati ili ne, što može biti slučaj, za jedan ili više od mišijeg, pacovskog, zamorčetovog, hrčkovog, gerbilovog, svinjskog, mačijeg, psećeg, zečijeg, kozijeg, ovčijeg, goveđeg, konjskog, kamiljeg, makakijevog, marmozetovog, rezusovog ili šimpanzinog PD-L1. Prema izvesnim aspektima, anti-PD-L1 antitela prema pronalasku se mogu vezivati za humani i makakijev PD-L1 sa istim afinitetima ili sa različitim afinitetima.
Mapiranje epitopa i srodne tehnologije
[0124] Predmetno otkrivanje obuhvata anti-PD-L1 antitela koja sadejstvuju sa jednom ili više aminokiselina pronađenih u okviru jednog ili više domena PD-L1 molekula uključujući, npr. ekstracelularni domen (nalik IgV), ekstracelularni domen nalik IgC, transmembranski domen, i intracelularni domen. Epitop za koji se vezuju antitela se može sastojati od samo jedne susedne sekvence 3 ili više (npr.3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ili više) aminokiselina lociranih u okviru bilo kog od gore navedenih domena PD-L1 molekula (npr. linearni epitop u domenu). Alternativno tome, epitop se može sastojati od mnoštva ne-susednih aminokiselina (ili aminokiselinskih sekvenci) lociranih u okviru bilo kog ili oba od gore navedenih domena PD-L1 molekula (npr. konformacioni epitop).
[0125] Različite tehnike poznate osobama koje su prosečni stručnjaci iz odgovarajuće oblasti se mogu upotrebiti za određivanje da li antitelo "sadejstvuje sa jednom ili više aminokiselina" u okviru polipeptida ili proteina. Ilustrativne tehnike obuhvataju, na primer, rutinske testove unakrsnog blokiranja, kao što je opisano u Antibodies, Harlow i Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY). Drugi metodi obuhvataju alaninsku skenirajuću mutacionu analizu, peptidnu blot analizu (Reineke (2004) Methods Mol. Biol.248: 443-63), analizu cepanjem peptida, kristalografske studije i NMR analizu. Pored toga, mogu se koristiti metodi kao što su ekscizija epitopa, ekstrakcija epitopa i hemijska modifikacija antigena (Tomer (2000) Prot. Sci.9: 487-496). Sledeći metod koji se može upotrebiti za identifikaciju aminokiselina u okviru polipeptida sa kojim antitelo sadejstvuje je vodonično/deuterijumska izmena detektovana masenom spektrometrijom. U opštem smislu, metod vodonično/deuterijumske izmene obuhvata obeležavanje deuterijum proteina od interesa, što je bilo praćeno vezivanjem antitela za protein obeležen deuterijumom. Sledeće, kompleks protein/antitelo se prenosi u vodu, a izmenljivi protoni u okviru aminokiseline koji su zaštićeni kompleksom antitela se podvrgavaju izmeni deuterijuma nazad u vodonik manjom brzinom od izmenljivih protona u okviru aminokiselina koji nisu deo interfejsa. Kao rezultat ovoga, aminokiseline koje formiraju deo interfejsa protein/antitelo mogu zadržati deuterijum i zato ispoljavaju relativno veću masu u poređenju sa aminokiselinama koje nisu uključene u interfejs. Posle disocijacije antitela, ciljni protein se podvrgava cepanju proteazom i analizi masenom spektrometrijom, čime se otkrivaju deuterijumom obeleženi ostaci koji odgovaraju specifičnim aminokiselinama sa kojima antitelo sadejstvuje. Vidi, npr. Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267: 252-259; Engen i Smith (2001) Anal. Chem.73: 256A-265A.
[0126] Izraz "epitop" se odnosi na mesto na antigenu na koje reaguju B i/ili T ćelije. Epitopi B-ćelija se mogu formirati od susednih aminokiselina ili od nesusednih aminokiselina koje su postavljene jedne uz druge tercijarnim savijanjem proteina. Epitopi formirani od susednih aminokiselina se obično održavaju izlaganjem denaturišućim rastvaračima, dok se epitopi formirani tercijarnim savijanjem obično gube pri tretiranju denaturišućim rastvaračima. Epitop obično sadrži najmanje 3, a češće, najmanje 5 ili 8-10 aminokiselina u jedinstvenoj prostornoj konformaciji.
[0127] Modifikacijom-asistirano profilisanje (MAP), takođe poznato kao Profilisanje antitela bazirano na strukturi antigena (ASAP) je metod koji kategorizuje veliki broj monoklonskih antitela (mAbs) usmerenih protiv istog antigena na osnovu sličnosti profila vezivanja svakog antitela za hemijski ili enzimski modifikovane površine antigena (vidi US 2004/0101920). Svaka kategorija može odražavati jedinstveni epitop, bilo karakteristično različit ili koji se delimično preklapa sa epitopom koji predstavlja druga kategorija. Ova tehnologija omogućava brzo filtriranje genetski identičnih antitela, tako da karakterizacija može biti fokusirana na genetski karakteristična antitela. Kada se primeni skrining hibridoma, MAP može olakšati identifikaciju retkih hibridoma klonova koji proizvode mAbs koja imaju željene karakteristike. MAP se mogu koristiti za sortiranje antitela prema pronalasku u grupe antitela koja se vezuju za različite epitope.
[0128] Prema izvesnim aspektima, anti-PD-L1 antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen se vezuju za epitop u okviru proizvoljnog jednog ili više regiona ilustrovanih sa PD-L1, bilo u prirodnom obliku, kao što je ilustrovano sa SEQ ID NO: 351, ili rekombinantno proizveden, kao što je ilustrovano sa SEQ ID NOS: 345 - 348, ili za njegov fragment. Prema nekim aspektima, antitela se vezuju za ekstracelularni region koji sadrži jednu ili više aminokiselina izabranih iz grupe koja se sastoji od aminokiselinskih ostataka 19 - 239 PD-L1. Prema nekim aspektima, antitela se vezuju za region koji sadrži jednu ili više aminokiselina izabranih iz grupe koja se sastoji od aminokiselinskih ostataka 1 - 221 makakijevog PD-L1, kao što je ilustrovano sa SEQ ID NO: 346.
[0129] Prema izvesnim aspektima, antitela koja su prikazana u Tabeli 1 sadejstvuju sa najmanje jednom aminokiselinskom sekvencom izabranom iz grupe koja se sastoji od aminokiselinskih ostataka koji se nalaze od oko pozicije 19 do oko pozicije 130 SEQ ID NO: 351; ili aminokiselinskih ostataka koji se nalaze od oko pozicije 130 do oko pozicije 153 SEQ ID NO: 351; ili aminokiselinskih ostataka koji se nalaze od oko pozicije 153 do oko pozicije 210 SEQ ID NO: 351; ili aminokiselinskih ostataka koji se nalaze od oko pozicije 210 do oko pozicije 239 SEQ ID NO: 351. Ovi regioni su delimično ilustrovani u SEQ ID NOs: 345 - 348.
[0130] Predmetno otkrivanje obuhvata anti-PD-L1 antitela koja se vezuju za isti epitop, ili deo epitopa, kao što su bilo koja specifična ilustrativna antitela koja su ovde opisana u Tabeli 1, ili antitelo koje ima CDR sekvence bilo kog od ilustrativnih antitela opisanih u Tabeli 1. Isto tako, predmetno otkrivanje takođe obuhvata anti-PD-L1 antitela koja se nadmeću za vezivanje za PD-L1 ili PD-L1 fragment sa bilo kojim od specifičnih ilustrativnih antitela opisanih ovde u Tabeli 1, ili antitelom koje ima CDR sekvence bilo kog od ilustrativnih antitela opisanih u Tabeli 1. Na primer, predmetno otkrivanje obuhvata anti-PD-L1 antitela koja se unakrsno nadmeću za vezivanje za PD-L1 sa jednim ili više antitela definisanim ovde u Primeru 6 (npr. H2aM8309N, H1H9329P, H1H9336P, H2aM8314N, H2aM8316N, H2AM8718N, H1H9387P2, H1H9351P2, H1H9364P2, H1H9373P2, i H2aM8306N). Predmetno otkrivanje takođe obuhvata anti-PD-L1 antitela koja se unakrsno nadmeću za vezivanje za PD-L1 sa jednim ili više antitela definisanih ovde u Primeru 6 (npr. H1H9396P2, H2aM8317N, H2aM8321N, H1H9323P, H1H9382P2, H1H9344P2, H1H9345P2 i H1H9354P2).
[0131] Moguće je lako odrediti da li se antitelo vezuje za isti epitop kao referentno anti-PD-L1 antitelo, ili se nadmeće za vezivanje sa njim korišćenjem rutinskih metoda poznatih iz stanja tehnike. Na primer, da bi se odredilo da li se testirano antitelo vezuje za isti epitop kao referentno anti-PD-L1 antitelo prema pronalasku, dopušta se da se ono referentno veže za PD-L1 protein ili peptid pod uslovima zasićenja. Kao sledeće, određuje se sposobnost testiranog antitela da se vezuje za PD-L1 molekul. Ako testirano antitelo može da se vezuje za PD-L1 posle vezivanja uz zasićenje referentnim anti-PD-L1 antitelom, može se zaključiti da se testirano antitelo vezuje za drugačiji epitop od referentnog anti-PD-L1 antitela. Sa druge strane, ako testirano antitelo ne može da se vezuje za PD-L1 protein posle vezivanja uz zasićenje referentnim anti-PD-L1 antitelom, onda se testirano antitelo može vezivati za isti epitop kao što je epitop za koji se vezuje referentno anti-PD-L1 antitelo prema pronalasku.
[0132] Da bi se odredilo da li se antitelo nadmeće za vezivanje sa referentnim anti-PD-L1 antitelom, gore opisana metodologija vezivanje je izvedena u dve orijentacije: u prvoj orijentaciji, dozvoljeno je da se referentno antitelo vezuje za PD-L1 protein pod uslovima zasićenja, što je bilo praćeno određivanjem vezivanja testiranog antitela za PD-L1 molekul. U drugoj orijentaciji, dozvoljeno je da se testirano antitelo vezuje za PD-L1 molekul pod uslovima zasićenja, što je bilo praćeno određivanjem vezivanja referentnog antitela za PD-L1 molekul. Ako je, u obe orijentacije, samo prvo (zasićujuće) antitelo moglo da se veže za PD-L1 molekul, onda je zaključeno da se testirano antitelo i referentno antitelo nadmeću za vezivanje za PD-L1. Kao što će shvatiti prosečan stručnjak iz odgovarajuće oblasti, antitelo koje se nadmeće za vezivanje sa referentnim antitelom ne mora nužno da se vezuje za identični epitop kao referentno antitelo, ali može prostorno blokirati vezivanje referentnog antitela vezivanjem za epitop koji se preklapa ili susedni epitop.
[0133] Dva antitela se vezuju za isti epitop ili epitope koji se preklapaju ako svako kompetitivno inhibira (blokira) vezivanje onog drugog za antigen. To znači da 1-, 5-, 10-, 20- ili 100-struki višak jednog antitela inhibira vezivanje onog drugog za najmanje 50%, ali prvenstveno za 75%, 90% ili čak za 99%, što se meri u testu kompetitivnog vezivanja (vidi, npr. Junghans et al., Cancer Res.199050:1495-1502). Alternativno tome, dva antitela imaju isti epitop ako u suštini sve aminokiselinske mutacije u antigenu koje redukuju ili eliminišu vezivanje jednog antitela redukuju ili eliminišu vezivanje drugog. Dva antitela imaju epitope koji se preklapaju ako neke aminokiselinske mutacije koje redukuju ili eliminišu vezivanje jednog antitela redukuju ili eliminišu vezivanje drugog.
[0134] Dodatno rutinsko eksperimentisanje (npr. peptidna mutacija i analize vezivanja) se onda može izvesti da bi se potvrdilo da li je uočeni izostanak vezivanja testiranog antitela nastao usled činjenice vezivanja za isti epitop kao referentno antitelo ili je prostorno blokiranje (ili drugi fenomen) odgovorno za uočeni izostanak vezivanja. Eksperimenti ove vrste se mogu izvesti korišćenjem ELISE, RIA, površinske plazmonske rezonance, protočne citometrije ili bilo kog drugog kvantitativnog ili kvalitativnog testa za vezivanje antitela koji se nalazi na raspolaganju u odgovarajućoj oblasti.
Imunokonjugati
[0135] Otkrivanje obuhvata humano anti-PD-L1 monoklonsko antitelo konjugovano sa terapeutskom grupom ("imunokonjugat"), kao što je citotoksin ili hemoterapeutski agens za lečenje kancera. Kada se ovde koristi, izraz "imunokonjugat" se odnosi na antitelo koje je hemijski ili biološki povezano sa citotoksinom, radioaktivnim agensom, citokinom, interferonom, ciljnom ili reporter grupom, enzimom, toksinom, peptidom ili proteinom ili terapeutskim agensom. Antitelo može biti povezano sa citotoksinom, radioaktivnim agensom, citokinom, interferonom, ciljnom ili reporter grupom, enzimom, toksinom, peptidom ili terapeutskim agensom na bilo kojoj lokaciji duž molekula sve dok može da se vezuje za svoj cilj. Primeri imunokonjugata obuhvataju konjugate antitelo-lek i fuzione proteine antitelo-toksin. Agens može biti drugo različito antitelo za PD-L1. Antitelo može biti konjugovano sa agensom specifičnim za tumorsku ćeliju ili virusom inficiranu ćeliju. Pored tipa terapeutskog radikala koji se može konjugovati sa anti-PD-L1 antitelom, uzeće se u obzir i stanje koje treba da se leči i željeni terapeutski efekat koji treba da bude ostvaren. Primeri podesnih agenasa za formiranje imunokonjugata su poznati iz odgovarajuće oblasti; vidi na primer, WO 05/103081.
Multi-specifična antitela
[0136] Antitela prema predmetnom pronalasku mogu biti mono-specifična, bispecifična, ili multi-specifična. Multi-specifična antitela mogu biti specifična za različite epitope jednog ciljnog polipeptida ili mogu sadržati domene koji vezuju antigen specifične za više od jednog ciljnog polipeptida. Vidi, npr. Tutt et al., 1991, J. Immunol.147:60-69; Kufer et al., 2004, Trends Biotechnol.22:238-244.
[0137] Prema jednom aspektu, predmetno otkrivanje obuhvata multi-specifične molekule koji vezuju antigen ili njihove fragmente koji vezuju antigen, pri čemu je jedna specifičnost imunoglobulina koja vezuje antigen specifična za epitop u okviru ekstracelularnog domena PD-L1 (npr. u regionu nalik IgV), ili njegovog fragmenta, i druga specifičnost imunoglobulina koja vezuje antigen je specifična za vezivanje drugačijeg epitopa u ekstracelularnom domenu PD-L1 (npr. u regionu nalik IgC), ili drugog terapeutskog cilja, ili je konjugovana sa terapeutskom grupom. Prema izvesnim aspektima, prva specifičnost koja vezuje antigen može sadržati PD-1 ili B7-1 ili njegov fragment. Prema jednom aspektu, prva specifičnost koja vezuje antigen koja se vezuje za PD-L1 sadrži ekstracelularni domen PD-1. Prema izvesnim aspektima prema pronalasku, jedna specifičnost imunoglobulina koja vezuje antigen je specifična za epitop u okviru aminokiselinskih ostataka 19 - 239 od PD-L1 (SEQ ID NO: 351) ili njegov fragment, dok je druga specifičnost imunoglobulina specifična za drugi ciljni antigen. Drugi ciljni antigen može biti na istoj ćeliji kao PD-L1 ili na različitoj ćeliji. Prema jednom aspektu, druga ciljna ćelija je na imunoj ćeliji različitoj od T-ćelije, kao što je B-ćelija, ćelija koja prezentuje antigen, monocit, makrofag, ili dendritska ćelija. U nekim primerima izvođenja, drugi ciljni antigen može biti prisutan na tumorskoj ćeliji ili na virusom inficiranoj ćeliji.
[0138] Prema sledećem aspektu, otkrivanjem su realizovani multi-specifični molekuli koji vezuju antigen ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji sadrže prvu specifičnost koja vezuje antigen, a koja se vezuje za PD-L1, i drugu specifičnost koja vezuje antigen, a koja se vezuje specifično za ciljni antigen na tumorskoj ćeliji. Prema različitim aspektima, antigen specifičan za tumor je jedan od CA9, CA125, antigena povezanog sa melanomom (MAGE), karcinoembrionskog antigena (CEA), vimentina, tumorskog-M2-PK, antigena specifičnog za prostatu (PSA), MART-1, ili CA19-9. Neograničavajući primeri drugih specifičnih antigena povezanih sa tumorom obuhvataju, npr. AFP, ALK, BAGE proteine, β-katenin, brc-abl, BRCA1, BORIS, ugljeničnu anhidrazu IX, kaspazu-8, CCR5, CD19, CD20, CD30, CD40, CDK4, CTLA4, ciklin-B1, CYP1B1, EGFR, EGFRvIII, ErbB2/Her2, ErbB3, ErbB4, ETV6-AML, EpCAM, EphA2, Fra-1, FOLR1, GAGE proteine (npr. GAGE-1, -2), GD2, GD3, GloboH, glipikan-3, GM3, gp100, Her2, HLA/B-raf, HLA/kras, HLA/MAGE-A3, hTERT, LMP2, MAGE proteine (npr. MAGE-1, -2, -3, -4, -6, i -12), HLA-A2, MART-1, mezotelin, ML-IAP, Muc1, Muc2, Muc3, Muc4, Muc5, Muc16 (CA-125), MUM1, NA17, NY-BR1, NY-BR62, NY-BR85, NY-ESO1, OX40, p15, p53, PAP, PAX3, PAX5, PCTA-1, PLAC1, PRLR, PRAME, PSMA (FOLH1), RAGE proteine, Ras, RGS5, Rho, SART-1, SART-3, Steap-1, Steap-2, survivin, TAG-72, TGF-β, TMPRSS2, Tn, TRP-1, TRP-2, tirozinazu, i uroplakin-3. Prema drugim aspektima, druga specifičnost koja vezuje antigen se vezuje za tumorski antigen koji je prisutan na tumorskim ćelijama specifičan za, ali bez ograničavanja na karcinom bubrežnih ćelija, kancer prostate, kolorektalni kancer, melanom, kancer dojke, kancer bubrega, kancer jajnika, i kancer pankreasa. Antitela prema otkrivanju, u ovom aspektu mogu inhibirati aktivnost PD-L1.
[0139] Prema sledećem aspektu, otkrivanjem su realizovani multi-specifični molekuli koji vezuju antigen ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, pri čemu se druga specifičnost koja vezuje antigen vezuje za antigen specifičan za virusom inficiranu ćeliju. Prema izvesnim aspektima, druga specifičnost koja vezuje antigen se vezuje za antigen specifičan za ćeliju inficiranu virusom izabranim iz grupe koja se sastoji od HIV, HBV, HCV, HPV, LCMV i SIV.
[0140] Prema sledećem aspektu, otkrivanjem su realizovani multi-specifični molekuli koji vezuju antigen ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji sadrže prvu specifičnost koja vezuje antigen koja se vezuje za PD-L1 i drugu specifičnost koja vezuje antigen koja se vezuje za ko-inhibitor T-ćelija, kao što su PD-1, LAG-3, TIM3, B7-1, CTLA-4, BTLA, CD-28, 2B4, LY108, TIGIT, LAIR1, ICOS i CD160.
[0141] Bilo koji od multi-specifičnih molekula koji vezuju antigen, ili njihovih varijanti, može biti konstruisan korišćenjem standardnih molekulskih bioloških tehnika (npr. tehnologije rekombinantne DNK i ekspresije proteina), kao što je dobro poznato osobi koja je prosečan stručnjak iz odgovarajuće oblasti.
[0142] U nekim primerima izvođenja, PD-L1-specifična antitela se generišu u bispecifičnom formatu ("bi-specifična") u kome se varijabilni regioni međusobno vezuju za karakteristične domene PD-L1 da bi prenela dualnu-domensku specifičnost unutar samo jednog vezujućeg molekula. Podesno dizajnirani bi-specifici mogu povećati celokupnu PD-L1 inhibitornu efikasnost putem povećanja i specifičnosti, i afiniteta vezivanja. Varijabilni regioni sa specifičnošću za pojedinačne domene, (npr. segmente N-terminalnog domena), ili koji se mogu vezivati za različite regione u okviru jednog domena, su upareni na strukturnom skeletu koji omogućava da se svaki region vezuje istovremeno za posebne epitope, ili za različite regione u okviru jednog domena. U jednom primeru za bi-specifik, varijabilni regioni (VH) teškog lanca vezivača sa specifičnošću za jedan domen se rekombinuju sa varijabilnim regionima (VL) lakog lanca od niza vezivača sa specifičnošću za drugi domen da bi se identifikovali ne-kognatni VL partneri koji se mogu upariti sa originalnim VH bez remećenja originalne specifičnosti za te VH. Na ovaj način samo jedan VL segment (npr. VL1) se može kombinovati sa dva različita VH domena (npr. VH1 i VH2) da bi se generisao bi-specifik koji sadrži dva "kraka" za vezivanje (VH1- VL1 i VH2- VL1).
Korišćenje samo jednog VL segmenta smanjuje kompleksnost sistema, a time pojednostavljuje i povećava efikasnost procesa kloniranja, ekspresije, i prečišćavanja koji se koriste za generisanje bi-specifika (Vidi, na primer, USSN13/022759 i US2010/0331527).
[0143] Alternativno tome, antitela koja se vezuju za više od jednog domena i drugi cilj, kao što je, ali bez ograničavanja, na primer, za drugo drugačije anti-PD-L1 antitelo, mogu se pripremiti u bi-specifičnom formatu korišćenjem ovde opisanih tehnika, ili drugih tehnika poznatim stručnjacima iz odgovarajuće oblasti. Varijabilni regioni antitela koji se vezuju za različite regione mogu se međusobno povezati sa varijabilnim regionima koji se vezuju za relevantna mesta, na primer, na ekstracelularnom domenu PD-L1, kako bi prenela dualnu-antigensku specifičnost unutar samo jednog vezujućeg molekula. Podesno dizajnirani bi-specifici ovakvog tipa imaju dualnu funkciju. Varijabilni regioni sa specifičnošću za ekstracelularni domen se kombinuju sa varijabilnim regionom sa specifičnošću izvan ekstracelularnog domena i upareni su na strukturnom skeletu koji omogućava da se svaki varijabilni region vezuje za posebne antigene.
[0144] Ilustrativni format bi-specifičnog antitela koji se može primeniti u kontekstu predmetnog pronalaska obuhvata upotrebu prvog imunoglobulinskog (Ig) CH3 domena i drugog Ig CH3 domena, pri čemu se prvi i drugi Ig CH3 domeni međusobno razlikuju po najmanje jednoj aminokiselini, i pri čemu najmanje jedna aminokiselinska razlika smanjuje vezivanje bi-specifičnog antitela za Protein A u poređenju sa bispecifičnim antitelom kome nedostaje aminokiselinska razlika. Prema jednom aspektu, prvi Ig CH3 domen vezuje Protein A, a drugi Ig CH3 domen sadrži mutaciju koja smanjuje ili sprečava vezivanje Proteina A, kao što je H95R modifikacija (prema IMGT numeraciji egzona; H435R prema EU numeraciji). Drugi CH3 može dalje sadržati Y96F modifikaciju (prema IMGT; Y436F prema EU). Sledeće modifikacije koje se mogu naći u okviru drugog CH3 obuhvataju: D16E, L18M, N44S, K52N, V57M, i V82I (prema IMGT; D356E, L358M, N384S, K392N, V397M, i V422I prema EU) u slučaju IgG1 antitela; N44S, K52N, i V82I (IMGT; N384S, K392N, i V422I prema EU) u slučaju IgG2 antitela; i Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q, i V82I (prema IMGT; Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q, i V422I prema EU) u slučaju IgG4 antitela. Razmotrene su varijacije na gore opisanom bi-specifičnom formatu antitela.
[0145] Drugi ilustrativni bispecifični formati koji se mogu upotrebiti u kontekstu predmetnog pronalaska obuhvataju, bez ograničenja, npr. formate bazirane na scFv ili bispecifičnim dijatelima, IgG-scFv fuzije, dualni varijabilni domen (DVD)-Ig, Quadroma, čvoriće-u-otvorima, zajednički laki lanac (npr. zajednički laki lanac sa čvorićima-u-otvorima, itd.), CrossMab, CrossFab, (SEED)telo, leucinski patent zatvarač, Duotelo, IgG1/IgG2, dualno delujući Fab (DAF)-IgG, i Mab<2>bispecifične formate (vidi, npr. Klein et al.2012, mAbs 4:6, 1-11, i tamo citirane reference, za pregled gore navedenih formata). Bispecifična antitela se takođe mogu konstruisati korišćenjem konjugacije peptida/nukleinske kiseline, npr. pri čemu se upotrebljavaju neprirodne aminokiseline ortogonalne hemijske reaktivnosti za generisanje mesnospecifičnih konjugata antitelo-oligonukleotid koji se onda samostalno sastavljaju u multimerne komplekse definisane kompozicije, valencije i geometrije. (Vidi, npr. Kazane et al., J. Am. Chem. Soc. [Epub: Dec.4, 2012]).
Terapeutska administracija i formulacije
[0146] U jednom primeru izvođenja, pronalaskom su realizovane terapeutske kompozicije koje sadrže anti-PD-L1 antitela ili njihove fragmente koji vezuju antigen prema predmetnom pronalasku. Terapeutske kompozicije u skladu sa pronalaskom će se davati sa podesnim nosačima, ekscipijensima i drugim agensima koji su inkorporirani u formulacije da bi se obezbedili poboljšani transfer, isporuka, tolerancija i slično. Mnoštvo podesnih formulacija se može naći u zbirci formulacija koja je poznata svim farmaceutskim hemičarima: Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. Ove formulacije sadrže, na primer, praškove, paste, meleme, gelove, voskove, ulja, lipide, vezikule koje sadrže lipide (katjonske ili anjonske) (kao što su LIPOFECTIN™), DNK konjugate, anhidrovane apsorpcione paste, emulzije ulje-u-vodi i voda-u-ulju, emulzije carbowax-a (polietilen glikoli različitih molekulskih težina), polučvrste gelove, i polučvrste smeše koje sadrže carbowax. Vidi takođe Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311.
[0147] Doza antitela može varirati u zavisnosti od starosti i veličine subjekta kome treba da bude dato, ciljne bolesti, stanja, načina administracije. Kada se antitelo prema predmetnom pronalasku koristi za lečenje bolesti ili poremećaja kod odraslog pacijenta, ili za sprečavanje takve bolesti, poželjno je da se antitelo prema predmetnom pronalasku normalno daje u samo jednoj dozi od oko 0.1 do oko 100 mg/kg telesne težine, još poželjnije od oko 5 do oko 80, od oko 10 do oko 60, ili od oko 20 do oko 50 mg/kg telesne težine. U zavisnosti od ozbiljnosti stanja, učestanost i trajanje lečenja se mogu podesiti. Antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema pronalasku se mogu davati kao inicijalna doza od najmanje oko 0.1 mg do oko 800 mg, od oko 1 do oko 500 mg, od oko 5 do oko 300 mg, ili od oko 10 do oko 200 mg, do oko 100 mg, ili do oko 50 mg. Inicijalna doza može biti praćena administracijom druge ili mnoštva sledstvenih doza antitela ili njegovog fragmenta koji vezuje antigen u količini koja može biti približno ista ili manja od one za inicijalnu dozu, pri čemu su sledstvene doze razdvojene za najmanje 1 dan do 3 dana; najmanje jednu nedelju, najmanje 2 nedelje; najmanje 3 nedelje; najmanje 4 nedelje; najmanje 5 nedelja; najmanje 6 nedelja; najmanje 7 nedelja; najmanje 8 nedelja; najmanje 9 nedelja; najmanje 10 nedelja; najmanje 12 nedelja; ili najmanje 14 nedelja.
[0148] Poznati su različiti sistemi za isporuku i mogu se primeniti za davanje farmaceutske kompozicije prema pronalasku, npr. kapsulacija u lipozomima, mikročestice, mikrokapsule, rekombinantne ćelije koje mogu da izražavaju mutantne viruse, receptorom posredovana endocitoza (vidi, npr. Wu et al. (1987) J. Biol. Chem.
262:4429-4432). Metodi uvođenja obuhvataju, ali nisu ograničeni na intradermalni, transdermalni, intramuskularni, intraperitonealni, intravenski, subkutani, intranazalni, epiduralni i oralni put. Kompozicije se mogu davati bilo kojim uobičajenim putem, na primer, infuzijom ili bolus injekcijom, apsorpcijom putem epitelne ili mukokutane površine (npr. oralne mukoze, rektalne i intestinalne mukoze, itd.) i mogu se davati zajedno sa drugim biološki aktivnim agensima. Administracija može biti sistemska ili lokalna. Farmaceutska kompozicija se takođe može davati u vezikuli, a naročito u lipozomu (vidi, na primer, Langer (1990) Science 249:1527-1533).
[0149] Ovde je takođe razmotrena upotreba nanočestica za isporuku antitela prema predmetnom pronalasku. Nanočestice sa konjugovanim antitelom se mogu koristiti i u terapeutskim, i u dijagnostičkim primenama. Nanočestice sa konjugovanim antitelom i metodi pripreme i primene su detaljno opisani kod Arruebo, M., et al.2009 ("Antibody-conjugated nanoparticles for biomedical applications" u J. Nanomat. tom 2009, članak ID 439389, 24 strane, doi: 10.1155/2009/439389). Nanočestice mogu biti razvijene i konjugovane sa antitelima sadržanim u farmaceutskim kompozicijama za ciljanje na tumorske ćelije ili autoimune ćelije tkiva ili virusno inficirane ćelije.
Nanočestice za isporuku lekova su takođe opisane, na primer, u US 8257740, ili US 8246995.
[0150] U izvesnim situacijama, farmaceutska kompozicija se može isporučiti sistemom za kontrolisano oslobađanje. U jednom primeru izvođenja, može se koristiti pumpa. Prema sledećem primeru izvođenja, mogu se koristiti polimerni materijali. U jednom drugom primeru izvođenja, sistem za kontrolisano oslobađanje se može postaviti u blizini cilja kompozicije, tako da je shodno tome potreban samo deo sistemske doze.
[0151] Injektabilni preparati mogu obuhvatiti farmaceutske oblike za intravenske, subkutane, intrakutane, intrakranijalne, intraperitonealne i intramuskularne injekcije, infuzije sa ukapavanjem, itd. Ovi injektabilni preparati se mogu pripremiti metodima koji su javno poznati. Na primer, injektabilni preparati se mogu pripremiti, npr. rastvaranjem, suspendovanjem ili emulgovanjem antitela ili njegove soli koja je opisana gore u sterilnom vodenom medijumu ili uljanom medijumu koji se uobičajeno koriste za injekcije. Vodeni medijum za injekcije su, na primer, fiziološki slani rastvor, izotonični rastvor koji sadrži glukozu i druge pomoćne agense, itd., koji se mogu primeniti u kombinaciji sa podesnim agensom za poboljšanje rastvaranja, kao što su alkohol (npr. etanol), polialkohol (npr. propilen glikol, polietilen glikol), nejonski surfaktant [npr. polisorbat 80, HKO-50 (polioksietilen (50 mol) adukt hidrogenovanog ricinusovog ulja)], itd. Kao uljani medijum se upotrebljavaju npr. susamovo ulje, sojino ulje, itd., koji se može upotrebiti u kombinaciji sa agensom za poboljšanje rastvaranja, kao što su benzil benzoat, benzil alkohol, itd. Shodno tome, pripremljena injekcija se prvenstveno puni u odgovarajuću ampulu.
[0152] Farmaceutska kompozicija prema predmetnom pronalasku se može isporučiti subkutano ili intravenski pomoću standardne igle i šprica. Pored toga, u odnosu na subkutanu isporuku, isporuka uređajem u vidu pena se lako primenjuje za isporuku farmaceutske kompozicije prema predmetnom pronalasku. Takav uređaj za isporuku u vidu pena može biti za višekratnu upotrebu ili za jednokratnu upotrebu. Uređaj za isporuku u vidu pena za višekratnu upotrebu generalno koristi zamenljivu patronu koja sadrži farmaceutsku kompoziciju. Kada se celokupna farmaceutska kompozicija unutar patrone da i patrona se isprazni, onda se prazna patrona može lako ukloniti i zameniti novom patronom koja sadrži farmaceutsku kompoziciju. Uređaj za isporuku u vidu pena se onda može ponovo koristiti. Kod uređaja za isporuku u vidu pena za jednokratnu upotrebu nema zamenljive patrone. Umesto toga, uređaj za isporuku u vidu pena za jednokratnu upotrebu je prethodno napunjen farmaceutskom kompozicijom koja se nalazi u rezervoaru unutar uređaja. Kada se iz rezervoara jednom isprazni farmaceutska kompozicija, onda se ceo uređaj odbacuje.
[0153] Brojni uređaji za isporuku u vidu pena i autoinjektora za višekratnu upotrebu imaju primenu u subkutanoj isporuci farmaceutske kompozicije prema predmetnom pronalasku. Primeri obuhvataju, ali izvesno nisu ograničeni na AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Vudstok, UK), DISETRONIC™ pen (Disetronic Medical Systems, Burgdorf, Švajcarska), HUMALOG MIX 75/25™ pen, HUMALOG™ pen, HUMALIN 70/30™ pen (Eli Lilly i Co., Indijanapolis, IN), NOVOPEN™ I, II i III (Novo Nordisk, Kopenhagen, Danska), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Kopenhagen, Danska), BD™ pen (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™, i OPTICLIK™ (Sanofi-Aventis, Frankfurt, Nemačka), da navedemo samo nekoliko. Primeri uređaja za isporuku u vidu pena za jednokratnu upotrebu koji imaju primenu u subkutanoj isporuci farmaceutske kompozicije prema predmetnom pronalasku obuhvataju, ali izvesno nisu ograničeni na SOLOSTAR™ pen (Sanofi-Aventis), FLEXPEN™ (Novo Nordisk), i KWIKPEN™ (Eli Lilly), SURECLICK™ autoinjektor (Amgen, Thousand Oaks, CA), PENLET™ (Haselmeier, Stuttgart, Nemačka), EPIPEN (Dey, L.P.) i HUMIRA™ Pen (Abbott Labs, Abbott Park, IL), da navedemo samo nekoliko.
[0154] Prvenstveno se farmaceutske kompozicije za oralnu ili parenteralnu primenu koje su gore opisane pripremaju u farmaceutske oblike sa jednom dozom koji su prilagođeni za doziranje aktivnih sastojaka. Takvi farmaceutski oblici sa jednom dozom obuhvataju, na primer, tablete, pilule, kapsule, injekcije (ampule), supozitorije, itd. Sadržana količina antitela je generalno od oko 5 do oko 500 mg po farmaceutskom obliku sa jednom dozom; posebno u obliku injekcije, poželjno je da antitelo bude sadržano od oko 5 do oko 100 mg i od oko 10 do oko 250 mg za druge farmaceutske oblike.
Terapeutske primene antitela
[0155] Antitela prema predmetnom otkrivanju su korisna za lečenje, prevenciju, i/ili ublažavanje bolesti ili poremećaja ili stanja kao što su kancer, autoimuna bolest ili virusna infekcija i/ili za ublažavanje najmanje jednog simptoma povezanog sa takvom bolesti, poremećajem ili stanjem. U nekim primerima izvođenja pronalaska, ovde opisana antitela su korisna za lečenje subjekata koji boluju od primarnog i/ili rekurentnog kancera, uključujući, na primer, karcinom bubrežnih ćelija, kancer prostate, kancer jajnika, kancer bubrega, kolorektalni kancer, kancer želuca, kancer dojke, kancer glave i vrata, kancer ne-malih ćelija pluća, kancer mozga, multipli mijelom, i melanom. Antitela se mogu primeniti za lečenje simptoma ranog stadijuma ili kasnog stadijuma kancera. U jednom primeru izvođenja, antitelo ili njegov fragment prema pronalasku se mogu primeniti za lečenje metastatičkog kancera. Antitela su korisna za redukciju ili inhibiciju ili smanjenje rasta tumora i kod čvrstih tumora, i kod krvnih kancera. U izvesnim primerima izvođenja, antitela se mogu primeniti za sprečavanje vraćanja tumora. U izvesnim primerima izvođenja, lečenje antitelom ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen prema pronalasku može dovesti do regresije tumora kod subjekta veće od 50%, veće od 60%, veće od 70%, veće od 80% ili veće od 90%. U izvesnim primerima izvođenja, antitela se mogu primeniti za povećanje preživljavanja subjekta koji boluje od kancera.
[0156] U izvesnim primerima izvođenja, antitela prema pronalasku su korisna za lečenje subjekata koji boluju od hronične virusne infekcije. U nekim primerima izvođenja, antitela prema pronalasku su korisna za smanjenje virusnih titara kod domaćina i/ili spasavanje iscrpljenih T-ćelija. U jednom primeru izvođenja, antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema pronalasku se mogu davati u terapeutskoj dozi pacijentu sa infekcijom virusom humane imunodeficijencije (HIV) ili humanim papiloma virusom (HPV) ili hepatitis B/C virusom (HBV/HCV). U srodnom primeru izvođenja, antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema pronalasku se mogu primeniti za lečenje infekcije virusom simijane imunodeficijencije (SIV) kod simijanog subjekta, kao što je makaki. Prema sledećem primeru izvođenja, antitelo ili njegov fragment prema pronalasku se mogu primeniti za lečenje hronične virusne infekcije sa limfocitnim horiomeningitis virusom (LCMV).
[0157] U izvesnim primerima izvođenja, blokirajuće antitelo prema predmetnom pronalasku se može davati u terapeutski efektivnoj količini subjektu koji boluje od kancera ili virusne infekcije.
[0158] Prema izvesnim aspektima otkrivanja, antitela su korisna za lečenje autoimune bolesti, uključujući, ali bez ograničavanja na alopecia areatu, autoimuni hepatitis, celijačnu bolest, Grejvsovu bolest, Gilen-Barov sindrom, Hašimotovu bolest, hemolitičku anemiju, zapaljensku bolest creva, zapaljenske miopatije, multiplu sklerozu, primarnu bilijarnu cirozu, psorijazu, reumatoidni artritis, sklerodermu, Sjegrenov sindrom, sistemski lupus eritematozus, vitiligo, autoimuni pankreatitis, autoimunu urtikariju, autoimunu trombocitopeničnu purpuru, Kronovu bolest, dijabetes tipa I, eozinofilni fasciitis, eozinofilni enterogastritis, Goodpasturov sindrom, mijasteniju gravis, psorijatični artritis, reumatsku groznicu, ulcerativni kolitis, vaskulitis i Vegenerovu granulomatozu. Prema izvesnim aspektima, aktivirajuće antitelo se može koristiti za lečenje subjekta koji boluje od autoimune bolesti.
[0159] Jedno ili više antitela prema predmetnom pronalasku se mogu davati za ublažavanje ili prevenciju ili smanjenje ozbiljnosti jednog ili više simptoma ili stanja bolesti ili poremećaja.
[0160] Ovde je takođe razmotrena primena jednog ili više antitela prema predmetnom pronalasku profilaktički za pacijente pod rizikom od razvoja bolesti ili poremećaja, kao što su kancer, i hronična virusna infekcija.
[0161] Prema sledećem aspektu otkrivanja predmetna antitela se upotrebljavaju za pripremanje farmaceutske kompozicije za lečenje pacijenata koji boluju od kancera, autoimune bolesti ili virusne infekcije. Predmetna antitela se mogu primeniti kao adjunktna terapija sa bilo kojim drugim agensom ili bilo kojom drugom terapijom koji su poznati stručnjacima iz odgovarajuće oblasti kao korisne za lečenje kancera, autoimune bolesti ili virusne infekcije.
Kombinovane terapije
[0162] Kombinovane terapije mogu obuhvatati anti-PD-L1 antitelo prema pronalasku i bilo koji dodatni terapeutski agens koji se na podesan način može kombinovati sa antitelom prema pronalasku, ili sa biološki aktivnim fragmentom antitela prema pronalasku.
[0163] Antitela prema predmetnom pronalasku se sinergistički mogu kombinovati sa jednim ili više anti-kancerskih lekova ili terapija koji se primenjuju za lečenje kancera, uključujući, na primer, karcinom bubrežnih ćelija, kancer jajnika, kancer prostate, kolorektalni kancer, kancer ne-malih-ćelija pluća, i melanom. Ovde se razmatra primena anti-PD-L1 antitela prema pronalasku u kombinaciji sa imunostimulatornim i/ili imunosuportivnim terapijama za inhibiciju rasta tumora, i/ili povećanje preživljavanja pacijenata sa kancerom. Imunostimulatorne terapije obuhvataju direktne imunostimulatorne terapije za povećanje aktivnosti imunih ćelija, bilo "puštanjem kočnice" za prigušene imune ćelije ili "dodavanjem gasa" da bi se aktivirala imuna reakcija. Primeri obuhvataju ciljanje drugih kontrolnih receptora, vakcinaciju i adjuvanse. Imunosuportivni modaliteti mogu povećati antigenost tumora podsticanjem imunogene ćelijske smrti, zapaljenja ili imati druge indirektne efekte koji podstiču anti-tumorsku imunu reakciju. Primeri obuhvataju zračenje, hemoterapiju, antiangiogene agense, i hirurgiju.
[0164] U različitim primerima izvođenja, jedno ili više antitela prema predmetnom pronalasku se mogu primeniti u kombinaciji sa drugim antitelom za PD-L1, antitelom za PD-1 (npr. nivolumabom), LAG-3 inhibitorom, CTLA-4 inhibitorom (npr. ipilimumabom), TIM3 inhibitorom, BTLA inhibitorom, TIGIT inhibitorom, CD47 inhibitorom, antagonistom drugog ko-inhibitora ili liganda T-ćelija (npr. antitelom za CD-28, 2B4, LY108, LAIR1, ICOS, CD160 ili VISTA), inhibitorom indoleamin-2,3-dioksigenaze (IDO), antagonistom vaskularnog endotelnog faktora rasta (VEGF) [npr. "VEGF-zamkom", kao što je aflibercept ili neki drugi fuzioni protein koji inhibira VEGF kao što je opisano u US 7,087,411, ili anti-VEGF antitelom ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen (npr. bevacizumabom, ili ranibizumabom) ili malim molekulom inhibitorom kinaze VEGF receptora (npr. sunitinibom, sorafenibom, ili pazopanibom)], Ang2 inhibitorom (npr. nesvakumabom), inhibitorom transformacije faktora rasta beta (TGFβ), inhibitorom receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR) (npr. erlotinibom, cetuksimabom), agonistom za ko-stimulatorni receptor (npr. agonistom za glukokortikoidom-indukovani TNFR-srodni protein), antitelom za antigen specifičan za tumor (npr. CA9, CA125, antigenom 3 povezanim sa melanomom (MAGE3), karcinoembrionskim antigenom (CEA), vimentinom, tumorom-M2-PK, antigenom specifičnim za prostatu (PSA), mucinom-1, MART-1, i CA19-9), vakcinama (npr. Bacillus Calmette-Guerin, kancerskim vakcinama), adjuvansom za povećanje prezentacije antigena (npr. faktorom za stimulaciju granulocita-kolonija makrofaga), bispecifičnim antitelom (npr. CD3xCD20 bispecifičnim antitelom, PSMAxCD3 bispecifičnim antitelom), citotoksinom, hemoterapeutskim agensom (npr. dakarbazinom, temozolomidom, ciklofosfamidom, docetakselom, doksorubicinom, daunorubicinom, cisplatinom, karboplatinom, gemcitabinom, metotreksatom, mitoksantronom, oksaliplatinom, paklitakselom, i vinkristinom), ciklofosfamidom, radioterapom, IL-6R inhibitorom (npr. sarilumabom), IL-4R inhibitorom (npr. dupilumabom), IL-10 inhibitorom, citokinom, kao što su IL-2, IL-7, IL-21, i IL-15, konjugatom antitelo-lek (ADC) (npr. anti-CD19-DM4 ADC, i anti-DS6-DM4 ADC), anti-zapaljenskim lekom (npr. kortikosteroidima, i nesteroidnim anti-zapaljenskim lekovima), dijetetskim suplementom, kao što su anti-oksidansi ili bilo koja palijativna nega za lečenje kancera. U izvesnim primerima izvođenja, anti-PD-L1 antitela prema predmetnom pronalasku se mogu primeniti u kombinaciji sa kancerskim vakcinama uključujući vakcine sa dendritskim ćelijama, onkolitičke viruse, vakcine sa tumorskim ćelijama, itd. da bi se povećala anti-tumorska reakcija. Primeri kancerskih vakcina koje se mogu primeniti u kombinaciji sa anti-PD-L1 antitelima prema predmetnom pronalasku obuhvataju MAGE3 vakcine za melanom i kancer mokraćne bešike, MUC1 vakcine za kancer dojke, EGFRv3 (npr. Rindopepimut) za kancer mozga (uključujući glioblastoma multiforme), ili ALVAC-CEA (za CEA+ kancere). U izvesnim primerima izvođenja, anti-PD-L1 antitela prema predmetnom pronalasku se mogu primeniti u kombinaciji sa dijetetskim suplementom, kao što su anti-oksidansi ili bilo kakvom palijativnom negom za lečenje kancera.
[0165] U izvesnim primerima izvođenja, anti-PD-L1 antitela prema pronalasku mogu se davati u kombinaciji sa terapijom zračenjem u metodima za generisanje dugoročnih trajnih anti-tumorskih reakcija i/ili za povećanje preživljavanja pacijenata sa kancerom. U nekim primerima izvođenja, anti-PD-L1 antitela prema pronalasku mogu se davati pre, istovremeno ili posle davanja terapije zračenjem pacijentu sa kancerom. Na primer, terapija zračenjem se može davati u jednoj ili više doza kod tumorskih lezija, što je praćeno administracijom jedne ili više doza anti-PD-L1 antitela prema pronalasku. U nekim primerima izvođenja, terapija zračenjem se može davati lokalno kod tumorske lezije da bi se povećala lokalna imunogenost pacijentovog tumora (adjuvinirajuće zračenje) i/ili da bi se ubile tumorske ćelije (ablativno zračenje), što je praćeno sistemskom administracijom anti-PD-L1 antitela prema pronalasku. Na primer, intrakranijalno zračenje se može davati pacijentu sa kancerom mozga (npr. sa glioblastoma multiforme) zajedno sa sistemskom administracijom anti-PD-L1 antitela prema pronalasku. U izvesnim primerima izvođenja, anti-PD-L1 antitela prema pronalasku se mogu davati u kombinaciji sa terapijom zračenjem i hemoterapeutskim agensom (npr. temozolomidom) ili VEGF antagonistom (npr. afliberceptom).
[0166] Antitela ili njihovi fragmenti prema pronalasku mogu se davati u kombinaciji sa jednim ili više antivirusnih lekova koji su poznati iz odgovarajuće oblasti, uključujući, ali bez ograničavanja na zidovudin, lamivudin, abakavir, ribavirin, lopinavir, efavirenc, kobicistat, tenofovir, rilpivirin i kortikosteroide. U nekim primerima izvođenja, anti-PD-L1 antitela prema pronalasku mogu se davati u kombinaciji sa LAG3 inhibitorom, CTLA-4 inhibitorom, PD-1 inhibitorom ili bilo kojim drugim antagonistom drugog koinhibitora T-ćelija za lečenje hronične virusne infekcije.
[0167] Antitela ili njihovi fragmenti prema otkrivanju se mogu primeniti u kombinaciji sa bilo kojim lekom ili terapijom poznatim iz odgovarajuće oblasti (npr. kortikosteroidima i drugim imunosupresantima) za lečenje autoimune bolesti ili poremećaja uključujući, ali bez ograničavanja na alopecia areatu, autoimuni hepatitis, celijačnu bolest, Grejvsovu bolest, Gilen-Barov sindrom, Hašimotovu bolest, hemolitičku anemiju, zapaljensku bolest creva, zapaljenske miopatije, multiplu sklerozu, primarnu bilijarnu cirozu, psorijazu, reumatoidni artritis, sklerodermu, Sjegrenov sindrom, sistemski lupus eritematozus, vitiligo, autoimuni pankreatitis, autoimunu urtikariju, autoimunu trombocitopeničnu purpuru, Kronovu bolest, dijabetes tipa I, eozinofilni fasciitis, eozinofilni enterogastritis, Goodpasturov sindrom, mijasteniju gravis, psorijatični artritis, reumatsku groznicu, ulcerativni kolitis, vaskulitis i Vegenerovu granulomatozu.
[0168] Dodatna terapeutski aktivna komponenta, odnosno komponente mogu se davati pre, istovremeno, ili posle administracije anti-PD-L1 antitela prema predmetnom pronalasku. Za svrhe predmetnog otkrivanja, takvi režimi administracije se smatraju administracijom anti-PD-L1 antitela "u kombinaciji sa" drugom terapeutski aktivnom komponentom.
[0169] Dodatna terapeutski aktivna komponenta, odnosno komponente mogu se davati subjektu pre administracije anti-PD-L1 antitela prema predmetnom pronalasku. Na primer, može se smatrati da se prva komponenta daje "pre" druge komponente ako se prva komponenta daje 1 nedelju pre, 72 sata pre, 60 sati pre, 48 sati pre, 36 sati pre, 24 sata pre, 12 sati pre, 6 sati pre, 5 sati pre, 4 sata pre, 3 sata pre, 2 sata pre, 1 sat pre, 30 minuta pre, 15 minuta pre, 10 minuta pre, 5 minuta pre, ili manje od 1 minut pre administracije druge komponente. U drugim primerima izvođenja, dodatna terapeutski aktivna komponenta, odnosno komponente mogu se davati subjektu posle administracije anti-PD-L1 antitela prema predmetnom pronalasku. Na primer, može se smatrati da se prva komponenta daje "posle" druge komponente ako se prva komponenta daje 1 minut posle, 5 minuta posle, 10 minuta posle, 15 minuta posle, 30 minuta posle, 1 sat posle, 2 sata posle, 3 sata posle, 4 sata posle, 5 sati posle, 6 sati posle, 12 sati posle, 24 sata posle, 36 sati posle, 48 sati posle, 60 sati posle, 72 sata posle administracije druge komponente. U još nekim drugim primerima izvođenja, dodatna terapeutski aktivna komponenta, odnosno komponente mogu se davati subjektu istovremeno sa administracijom anti-PD-L1 antitela prema predmetnom pronalasku. "Istovremena" administracija, za svrhe predmetnog pronalaska, obuhvata, npr. administraciju anti-PD-L1 antitela i dodatne terapeutski aktivne komponente subjektu u samo jednom farmaceutskom obliku (npr. koformulisanom), ili u posebnim farmaceutskim oblicima koji se daju subjektu u roku od oko 30 minuta ili manje jedan posle drugog. Ako se daju u posebnim farmaceutskim oblicima, onda se svaki farmaceutski oblik može davati istim putem (npr. i anti-PD-L1 antitelo, i dodatna terapeutski aktivna komponenta se mogu davati intravenski, subkutano, itd.); alternativno tome, svaki farmaceutski oblik se može davati različitim putem (npr. antiPD-L1 antitelo se može davati intravenski, a dodatna terapeutski aktivna komponenta se može davati subkutano). U svakom slučaju, davanje komponenata u pojedinačnim farmaceutskom obliku, u posebnim farmaceutskim oblicima istim putem, ili u posebnim farmaceutskim oblicima različitim putevima se svi smatraju "istovremenom administracijom," za svrhe predmetnog otkrivanja. Za svrhe predmetnog otkrivanja, administracija anti-PD-L1 antitela "pre", "istovremeno" ili "posle" (onako kako su ovi izrazi definisani ovde gore) administracije dodatne terapeutski aktivne komponente se smatra administracijom anti-PD-L1 antitela "u kombinaciji sa" dodatnom terapeutski aktivnom komponentom).
[0170] Predmetni pronalazak obuhvata farmaceutske kompozicije u kojima je anti-PD-L1 antitelo prema predmetnom pronalasku ko-formulisano sa jednom ili više dodatnih terapeutski aktivnih komponenata, odnosno komponenata koje su opisane ovde na drugom mestu, korišćenjem različitih kombinacija doza.
[0171] U ilustrativnim primerima izvođenja se anti-PD-L1 antitelo prema pronalasku daje u kombinaciji sa VEGF antagonistom (npr. VEGF zamkom, kao što je aflibercept), uključujući administraciju ko-formulacija koje sadrže anti-PD-L1 antitelo i VEGF antagonist, pri čemu se subjektu mogu davati pojedinačne komponente i/ili koformulisane korišćenjem različitih kombinacija doza. Na primer, anti-PD-L1 antitelo se može davati subjektu i/ili biti sadržano u ko-formulaciji u količini izabranoj iz grupe koja se sastoji od 0.01 mg, 0.02 mg, 0.03 mg, 0.04 mg, 0.05 mg, 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 0.5 mg, 0.6 mg, 0.7 mg, 0.8 mg, 0.9 mg, 1.0 mg, 1.5 mg, 2.0 mg, 2.5 mg, 3.0 mg, 3.5 mg, 4.0 mg, 4.5 mg, 5.0 mg, 6.0 mg, 7.0 mg, 8.0 mg, 9.0 mg, i 10.0 mg; i VEGF antagonist (npr. VEGF zamka, kao što je aflibercept) mogu se davati subjektu i/ili biti sadržan u ko-formulaciji u količini izabranoj iz grupe koja se sastoji od 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 0.5 mg, 0.6 mg, 0.7 mg, 0.8 mg, 0.9 mg, 1.0 mg, 1.1 mg, 1.2 mg, 1.3 mg, 1.4 mg, 1.5 mg, 1.6 mg, 1.7 mg, 1.8 mg, 1.9 mg, 2.0 mg, 2.1 mg, 2.2 mg, 2.3 mg, 2.4 mg, 2.5 mg, 2.6 mg, 2.7 mg, 2.8 mg, 2.9 mg i 3.0 mg. Kombinacije/koformulacije se mogu davati subjektu prema bilo kom od režima administracije koji su opisani ovde na drugom mestu, uključujući, npr. dva puta nedeljno, jednom nedeljno, jednom svake 2 nedelje, jednom svake 3 nedelje, jednom mesečno, jednom svaka 2 meseca, jednom svaka 3 meseca, jednom svaka 4 meseca, jednom svakih 5 meseci, jednom svakih 6 meseci, itd.
Režimi administracije
[0172] Prema izvesnim primerima izvođenja predmetnog pronalaska, može se davati više doza anti-PD-L1 antitela (ili farmaceutske kompozicije koja sadrži kombinaciju anti-PD-L1 antitela i bilo kojih dodatnih terapeutski aktivnih agenasa koji su ovde navedeni) subjektu tokom definisanog vremenskog perioda. Metodi mogu obuhvatati sukcesivno davanje subjektu više doza anti-PD-L1 antitela prema pronalasku. Kada se ovde koristi, "sukcesivno davanje" znači da se svaka doza anti-PD-L1 antitela daje subjektu u različitim vremenskim trenucima, npr. u različitim danima razdvojenim unapred određenim intervalom (npr. satima, danima, nedeljama ili mesecima).
Takođe su predviđeni metodi koji sadrže sukcesivno davanje pacijentu jedne inicijalne doze anti-PD-L1 antitela, praćeno jednom ili više sekundarnih doza anti-PD-L1 antitela, i opciono praćeno sa jednom ili više tercijarnih doza antiPD-L1 antitela. Anti-PD-L1 antitelo se može davati u dozi između 0.1 mg/kg i oko 100 mg/kg.
[0173] Izrazi "inicijalna doza," "sekundarne doze" i "tercijarna doze" se odnose na vremensku sekvencu administracije anti-PD-L1 antitela prema pronalasku. Shodno tome, "inicijalna doza" je doza koja se daje na početku režima lečenja (takođe se naziva "osnovna doza"); "sekundarne doze" su doze koje se daju posle inicijalne doze; i "tercijarne doze" su doze koje se daju posle sekundarnih doza. Sve doze, inicijalna, sekundarne, i tercijarne doze mogu sadržati istu količinu anti-PD-L1 antitela, ali se generalno mogu međusobno razlikovati u pogledu učestanosti administracije. U izvesnim primerima izvođenja, međutim, količina antiPD-L1 antitela sadržana u inicijalnoj, sekundarnim i/ili tercijarnim dozama međusobno varira (npr. podešavanjem naviše ili naniže, kako je podesno) u toku lečenja. U izvesnim primerima izvođenja, dve ili više (npr.2, 3, 4, ili 5) doza se daju na početku režima lečenja kao "početne doze" koje su praćene narednim dozama koje se daju na osnovu manje učestanosti (npr. "doze za održavanje").
[0174] U izvesnim ilustrativnim primerima izvođenja predmetnog pronalaska, svaka sekundarna i/ili tercijarna doza se daje od 1 do 26 (npr.1, 11⁄2, 2, 21⁄2, 3, 31⁄2, 4, 41⁄2, 5, 51⁄2, 6, 61⁄2, 7, 71⁄2, 8, 81⁄2, 9, 91⁄2, 10, 101⁄2, 11, 111⁄2, 12, 121⁄2, 13, 131⁄2, 14, 141⁄2, 15, 151⁄2, 16, 161⁄2, 17, 171⁄2, 18, 181⁄2, 19, 191⁄2, 20, 201⁄2, 21, 211⁄2, 22, 221⁄2, 23, 231⁄2, 24, 241⁄2, 25, 251⁄2, 26, 261⁄2, ili više) nedelja posle doze koja joj neposredno prethodi. Fraza "doza koja joj neposredno prethodi", kada se ovde koristi, u nizu višestrukih davanja označava dozu anti-PD-L1 antitela koja se daje pacijentu pre administracije upravo sledeće doze po redosledu bez neke druge doze između njih.
[0175] Metodi prema ovom aspektu pronalaska mogu sadržati davanje pacijentu bilo kog broja sekundarnih i/ili tercijarnih doza anti-PD-L1 antitela. Na primer, u izvesnim primerima izvođenja, samo jedna sekundarna doza se daje pacijentu. U drugim primerima izvođenja, dve ili više (npr.2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, ili više) sekundarnih doza se daju pacijentu. Slično tome, u izvesnim primerima izvođenja, samo jedna tercijarna doza se daje pacijentu. U drugim primerima izvođenja, dve ili više (npr.2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, ili više) tercijarnih doza se daju pacijentu.
[0176] U primerima izvođenja koji obuhvataju više sekundarnih doza, svaka sekundarna doza se može davati sa istom učestanosti kao i druge sekundarne doze. Na primer, svaka sekundarna doza se može davati pacijentu od 1 do 2 nedelje ili od 1 do 2 meseca posle neposredne prethodne doze. Slično tome, u primerima izvođenja koji obuhvataju više tercijarnih doza, svaka tercijarna doza se može davati sa istom učestanosti kao i druge tercijarne doze. Na primer, svaka tercijarna doza se može davati pacijentu od 2 do 12 nedelja posle neposredne prethodne doze. U izvesnim primerima izvođenja pronalaska, učestanost sa kojom se sekundarne i/ili tercijarne doze daju pacijentu može varirati u toku režima lečenja. Učestanost administracije takođe može podesiti lekar u toku lečenja u zavisnosti od potreba pojedinog pacijenta, posle kliničkog ispitivanja.
[0177] Predmetni pronalazak obuhvata režime administracije u kojima se od 2 do 6 početnih doza daju pacijentu sa prvom učestanosti (npr. jednom nedeljno, jednom svake dve nedelje, jednom svake tri nedelje, jednom mesečno, jednom u svaka dva meseca, itd.), što je praćeno administracijom dve ili više doza za održavanje pacijentu na bazi manje učestanosti. Na primer, prema ovom aspektu pronalaska, ako se početne doze daju sa učestanosti, npr. jednom mesečno (npr. dve, trim četiri ili više početnih doza se daje jednom mesečno), onda se doze za održavanje mogu davati pacijentu jednom svakih pet nedelja, jednom svakih šest nedelja, jednom svakih sedam nedelja, jednom svakih osam nedelja, jednom svakih deset nedelja, jednom svakih dvanaest nedelja, itd.).
Dijagnostičke primene antitela
[0178] Anti-PD-L1 antitela prema predmetnom pronalasku se mogu primeniti za detekciju i/ili merenje PD-L1 u uzorku, npr. za dijagnostičke svrhe. Razmotrena je primena jednog ili više antitela prema predmetnom pronalasku u testovima za detekciju bolesti ili poremećaja, kao što su kancer, autoimuna bolest ili hronična virusna infekcija. Ilustrativni dijagnostički testovi za PD-L1 mogu sadržati, npr. dovođenje u kontakt uzorka, dobijenog od pacijenta, sa anti-PD-L1 antitelom prema pronalasku, pri čemu je anti-PD-L1 antitelo obeleženo detektabilnim markerom ili reporter molekulom ili je upotrebljeno kao ligand za hvatnje za selektivnu izolaciju PD-L1 iz uzoraka pacijenta. Alternativno tome, može se upotrebiti neobeleženo anti-PD-L1 antitelo u dijagnostičkim primenama u kombinaciji sa sekundarnim antitelom koje je samo detektabilno obeleženo. Detektabilni marker ili reporter molekul može biti radioizotop, kao što su<3>H,<14>C,<32>P,<35>S, ili<125>I; fluorescentna ili hemiluminescentna grupa, kao što su fluorescein izotiocijanat, ili rodamin; ili enzim, kao što je alkalina fosfataza, β-galaktozidaza, ren peroksidaza, ili luciferaza.
Specifični ilustrativni testovi koji se mogu primeniti za detekciju ili merenje PD-L1 u uzorku obuhvataju enzimski-vezan imunosorbentni test (ELISA), radioimunotest (RIA), i fluorescencijom aktivirano sortiranje ćelija (FACS).
[0179] Uzorci koji se mogu upotrebiti u PD-L1 dijagnostičkim testovima obuhvataju bilo koji uzorak tkiva ili fluida koji se može dobiti od pacijenta, koji sadrži detektabilne količine PD-L1 proteina, ili njegovih fragmenata, pod normalnim ili patološkim uslovima. Generalno, nivoi PD-L1 u specifičnom uzorku dobijenom od zdravog pacijenta (npr. pacijenta koji nije pogođen kancerom ili autoimunom bolesti) će biti izmereni da bi se inicijalno odredila osnovna vrednost, ili standardni nivo PD-L1. Ovaj osnovni nivo PD-L1 se onda može uporediti sa nivoima PD-L1 izmerenim u uzorcima dobijenim od pojedinaca za koje se sumnja da imaju stanje povezano sa kancerom, ili simptomima povezanim sa takvim stanjem.
[0180] Antitela specifična za PD-L1 ne moraju sadržati dodatne markere ili grupe ili mogu sadržati N-terminalni ili C-terminalni marker ili grupu. Marker ili grupa mogu biti biotin. U testu vezivanja, lokacija markera (ako je prisutan) može odrediti orijentaciju peptida u odnosu na površinu preko koje je vezan peptid. Na primer, ako je površina obložena avidinom, onda će peptid koji sadrži N-terminalni biotin biti orijentisan tako da će C-terminalni deo peptida biti udaljeniji od površine.
[0181] Aspekti otkrivanja se odnose na primenu otkrivenih antitela kao markera za predviđanje prognoze kancera ili autoimunog poremećaja kod pacijenata. Antitela prema predmetnom pronalasku se mogu primeniti u dijagnostičkim testovima za evaluaciju prognoze kancera kod pacijenta i za predviđanje preživljavanja.
PRIMERI
[0182] Sledeći primeri su dati da bi se prosečnim stručnjacima iz odgovarajuće oblasti obezbedilo kompletno otkrivanje i opis kako da izvedu i primene metode i kompozicije prema pronalasku, a nisu namenjene za ograničavanje obima onoga što pronalazači smatraju za svoj pronalazak. Učinjeni su napori da se obezbedi tačnost u pogledu upotrebljenih brojeva (npr. količine, temperatura, itd.), ali treba računati sa izvesnim eksperimentalnim greškama i odstupanjima. Osim ako nije drugačije navedeno, delovi su težinski delovi, molekulska težina je prosečna molekulska težina, temperatura je u stepenima Celzijusa, sobna temperatura je oko 25°C, a pritisak je atmosferski ili blizak njemu.
Primer 1: Generisanje humanih antitela za PD-L1
[0183] Humana antitela za PD-L1 su bila generisana korišćenjem fragmenta PD-L1 koji se nalazi približno između aminokiselina 19 - 239 iz SEQ ID NO: 351 (Genbank pristupni br. NP_054862.1). Imunogen je bio davan direktno, sa adjuvansom da bi se stimulisala imuna reakcija, VELOCIMMUNE® mišu koji je sadržao DNK koja kodira varijabilne regione humanog imunoglobulinskog teškog i kapa lakog lanca. Imuna reakcija antitela je bila praćena pomoću PD-L1- specifičnog imunotesta. Kada je bila ostvarena željena imuna reakcija, splenociti su bili sakupljeni i fuzionisani sa mišijim mijeloma ćelijama da bi se očuvala njihova vijabilnost i da bi se formirale hibridoma ćelijske linije. Izvršena je trijaža hibridoma ćelijskih linija i selekcija da bi se identifikovale ćelijske linije koje proizvode PD-L1-specifično antitela. Korišćenjem ove tehnike i gore opisanog imunogena bilo je dobijeno nekoliko anti-PD-L1 himeričnih antitela (tj. antitela koja poseduju humane varijabilne domene i mišije konstantne domene); ilustrativna antitela generisana na ovaj način su bila označena sa H2M8306N, H2M8307N, H2M8309N, H2M8310N, H2M8312N, H2M8314N, H2M8316N, H2M8317N, H2M8321N, H2M8323N, H2M8718N, H2M8718N2, i H2M8719N.
[0184] Anti-PD-L1 antitela su takođe bila izolovana direktno iz antigen-pozitivnih B ćelija bez fuzije sa mijeloma ćelijama, kao što je opisano u US 2007/0280945A1. Korišćenjem ovog metoda je bilo dobijeno nekoliko potpuno humanih anti-PD-L1 antitela (tj. antitela koja poseduju humane varijabilne domene i humane konstantne domene); ilustrativna antitela generisana na ovaj način su bila označena kao što sledi: H1H9323P, H1H9327P, H1H9329P, H1H9336P, H1H9344P2, H1H9345P2, H1H9351P2, H1H9354P2, H1H9364P2, H1H9373P2, H1H9382P2, H1H9387P2, i H1H9396P2.
[0185] Biološka svojstva ilustrativnih antitela generisanih u skladu sa metodama iz ovog primera su detaljno opisana u dole navedenim primerima.
Primer 2: Aminokiselinske i nukleotidne sekvence varijabilnih regiona teškog i lakog lanca
[0186] Tabela 1 prikazuje identifikatore aminokiselinskih sekvenci varijabilnih regiona teškog i lakog lanca i CDR-ove izabranih anti-PD-L1 antitela prema pronalasku. Odgovarajući identifikatori nukleinskih kiselina su prikazani u Tabeli 2.
Tabela 1: Identifikatori aminokiselinskih sekvenci
SEQ ID NOs:
Oznaka antitela HCVR HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCVR LCDR1 LCDR2 LCDR3 H1H9351P2 290 292 294 296 274 276 278 280 H1H9354P2 298 300 302 304 274 276 278 280 H1H9364P2 306 308 310 312 274 276 278 280 H1H9373P2 314 316 318 320 274 276 278 280 H1H9382P2 322 324 326 328 274 276 278 280 H1H9387P2 330 332 334 336 274 276 278 280 H1H9396P2 338 340 342 344 274 276 278 280
Tabela 2: Identifikatori sekvenci nukleinskih kiselina
SEQ ID NOs:
Oznaka antitela HCVR HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCVR LCDR1 LCDR2 LCDR3 H2M8306N 1 3 5 7 9 11 13 15 H2M8307N 17 19 21 23 25 27 29 31 H2M8309N 33 35 37 39 41 43 45 47 H2M8310N 49 51 53 55 57 59 61 63 H2M8312N 65 67 69 71 73 75 77 79 H2M8314N 81 83 85 87 89 91 93 95 H2M8316N 97 99 101 103 105 107 109 111 H2M8317N 113 115 117 119 121 123 125 127 H2M8321N 129 131 133 135 137 139 141 143 H2M8323N 145 147 149 151 153 155 157 159 H2M8718N 161 163 165 167 169 171 173 175 H2M8718N2 177 179 181 183 169 171 173 175 H2M8719N 185 187 189 191 193 195 197 199 H1H9323P 201 203 205 207 209 211 213 215 H1H9327P 217 219 221 223 225 227 229 231 H1H9329P 233 235 237 239 241 243 245 247 H1H9336P 249 251 253 255 257 259 261 263 H1H9344P2 265 267 269 271 273 275 277 279 H1H9345P2 281 283 285 287 273 275 277 279 H1H9351P2 289 291 293 295 273 275 277 279 H1H9354P2 297 299 301 303 273 275 277 279 H1H9364P2 305 307 309 311 273 275 277 279 H1H9373P2 313 315 317 319 273 275 277 279 H1H9382P2 321 323 325 327 273 275 277 279 H1H9387P2 329 331 333 335 273 275 277 279 H1H9396P2 337 339 341 343 273 275 277 279
[0187] Antitela na koja se ovde vrši poziv su tipično označena u skladu sa sledećom nomenklaturom: Fc prefiks (npr. "H1H," "H2M," "H2aM," itd.), koji je praćen numeričkim identifikatorom (npr. "8306," "9323," itd., kao što je prikazano u Tabeli 1), što je praćeno "P," "N," "P2," ili "N2" sufiksom. Shodno tome, u skladu sa ovom nomenklaturom, antitelo ovde može biti označeno kao npr. "H2M8306N," "H1H9344P2," itd. H1H, H2M i H2aM prefiksi na ovde upotrebljenim oznakama antitela označavaju specifični izotip Fc regiona antitela. Na primer, "H1H" antitelo ima humani IgG1 Fc, "H1M" antitelo ima mišiji IgG1 Fc, i "H2M" ili "H2aM" antitelo ima mišiji IgG2 Fc, (svi varijabilni regioni su potpuno humani, što je označeno prvim ’H’ u oznaci antitela). Kao što će shvatiti prosečan stručnjak iz odgovarajuće oblasti, antitelo koje ima specifični izotip Fc se može prevesti u antitelo sa drugačijim izotipom Fc (npr. antitelo sa mišijim IgG1 Fc se može prevesti u antitelo sa humanim IgG4, itd.), ali u bilo kom slučaju, varijabilni domeni (uključujući CDR-ove) - koji su označeni numeričkim identifikatorima prikazanim u Tabeli 1 - ostaće isti i očekuje se da će svojstva vezivanja antigena biti identična ili u suštini slična, bez obzira na prirodu Fc domena.
Primer 3: Vezivanje antitela za PD-L1 određeno površinskom plazmonskom rezonancom
[0188] Konstante vezivanja, odnosno konstante asocijacije i disocijacije (ka i kd, respektivno), konstante ravnotežne disocijacije i poluživoti disocijacije (KD i t1⁄2, respektivno) vezivanja antigena za prečišćena anti-PD-L1 monoklonska antitela su bili određeni korišćenjem površinskog plazmonskog rezonantnog biosenzorskog testa u realnom vremenu na Biacore 4000 instrumentu. Biacore senzorska površina je bila derivatizovana poliklonskim zečijim anti-mišijim antitelom (GE, # BR-1008-38) ili monoklonskim mišijim anti-humanim Fc antitelom (GE, # BR-1008-39) da bi se uhvatilo približno 200-300 RUs anti-PD-L1 monoklonskih antitela, izraženih bilo sa mišijim Fc ili sa humanim Fc, respektivno. PD-L1 reagensi testirani u pogledu vezivanja za anti-PD-L1 antitela obuhvatali su humani PD-L1 (aminokiseline 19 - 239 pristupnog broja NP_054862.1) izražen sa C-terminalnim myc-myc-heksahistidinskim tagom (hPD-L1-MMH; SEQ ID: 345), rekombinantni PD-L1 makaki majmuna izražen sa C-terminalnim myc-myc-heksahistidinskim tagom (MfPD-L1-MMH; SEQ ID: 346), rekombinantni humani PDL1 (aminokiseline 19 - 239 pristupnog broja NP_054862.1) izražen sa C-terminalnim humanim IgG1 Fc tagom (hPD-L1-hFc; SEQ ID: 347) ili sa C-terminalnim mišijim IgG2a Fc tagom (hPD-L1-mFc; SEQ ID: 348), i rekombinantni PD-L1 makaki majmuna izražen sa C-terminalnim mišijim IgG2a Fc tagom (MfPD-L1-mFc; SEQ ID: 353). Različite koncentracije PD-L1 reagenasa su bile ubrizgane preko uhvaćene površine anti-PD-L1 monoklonskog antitela sa protokom od 30μL/min. Vezivanje PD-L1 reagenasa za uhvaćena monoklonska antitela je bilo praćeno od 3 do 4 minuta, dok je disocijacija antitela vezanog za PD-L1 reagense bila praćena 10 minuta u HBST tekućem puferu (0.01 M HEPES pH 7.4, 0.15 M NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% v/v surfaktant tween-20). Eksperimenti su bili izvedeni na 25°C ili 37°C.
Konstante kinetičke brzine asocijacije (ka) i disocijacije (kd) su bile određene obradom i fitovanjem podataka prema 1:1 modelu vezivanja uz korišćenje Scrubber 2.0c softvera za fitovanje krivih. Onda su bile izračunate konstante disocijacije ravnotežnog vezivanja (KD) i poluživota disocijacije (t1/2) kao: KD (M) = kd / ka i t1⁄2 (min) = [ln2/(60*kd)]. Parametri kinetike vezivanja za različita anti-PD-L1 monoklonska antitela koja se vezuju za različite PD-L1 reagense na 25°C i 37°C su navedeni u Tabelama 3 - 8.
Tabela 3: Parametri kinetike vezivanja anti-PD-L1 monoklonskih antitela za hPD-L1-MMH na 25°C
Vezivanje hPD-L1-MMH monomera na 25°C Antitelo ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1⁄2 (min) H2aM8306N 1.44E+05 1.00E-02 6.96E-08 1.2 H2aM8307N 3.27E+04 1.47E-04 4.50E-09 79 H2aM8309N 6.42E+05 1.04E-02 1.63E-08 1.1 H2aM8310N 8.86E+04 3.10E-04 3.50E-09 37 H2aM8312N 7.59E+04 7.22E-04 9.51E-09 16 H2aM8314N 9.25E+05 5.17E-05 5.58E-11 224 H2aM8316N 9.57E+05 1.12E-03 1.17E-09 10 H2aM8317N 9.40E+04 3.95E-02 4.21E-07 0.3 H2aM8321N 1.03E+05 3.59E-03 3.49E-08 3.2 H2aM8323N 9.37E+05 2.23E-04 2.38E-10 52 H2aM8718N 9.27E+05 8.01E-05 8.63E-11 144 Vezivanje hPD-L1-MMH monomera na 25°C Antitelo ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1⁄2 (min) H2aM8719N 8.64E+04 2.26E-03 2.62E-08 5.1 H1H9323P 5.51E+04 1.88E-02 3.41E-07 0.6 H1H9327P 4.19E+05 2.59E-04 6.19E-10 45 H1H9329P 1.77E+06 1.34E-01 7.58E-08 0.1 H1H9336P 7.92E+05 3.90E-04 4.92E-10 30 H1H9345P2 9.02E+04 1.49E-02 1.65E-07 0.8 H1H9351P2 4.56E+05 8.96E-04 1.96E-09 13 H1H9354P2 4.76E+04 3.83E-04 8.04E-09 30 H1H9364P2 9.32E+05 2.99E-04 3.21E-10 39 H1H9373P2 2.65E+06 2.91E-04 1.10E-10 40 H1H9382P2 7.90E+04 4.79E-03 6.06E-08 2.4 H1H9387P2 2.64E+06 5.82E-02 2.21E-08 0.2 H1H9396P2 1.72E+05 2.18E-03 1.27E-08 5.3
Tabela 4: Parametri kinetike vezivanja anti-PD-L1 monoklonskih antitela za hPD-L1-MMH na 37°C.
Vezivanje hPD-L1-MMH monomera na 37°C Antitelo ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1⁄2 (min) H2aM8306N 1.80E+05 3.10E-02 1.72E-07 0.4 H2aM8307N 5.35E+04 8.79E-04 1.64E-08 13 H2aM8309N 1.06E+06 3.14E-02 2.97E-08 0.4 H2aM8310N 1.32E+05 1.28E-03 9.70E-09 9.0 H2aM8312N 8.89E+04 4.03E-03 4.53E-08 2.9 H2aM8314N 1.07E+06 1.50E-04 1.40E-10 77 H2aM8316N 1.01E+06 5.30E-03 5.24E-09 2.2 H2aM8317N 9.03E+04 5.85E-02 6.47E-07 0.2 H2aM8321N 1.01E+05 9.29E-03 9.16E-08 1.2 H2aM8323N 1.38E+06 6.84E-04 4.97E-10 17 H2aM8718N 1.08E+06 1.55E-04 1.44E-10 74 H2aM8719N 1.50E+05 5.76E-03 3.84E-08 2.0 H1H9323P 1.21E+05 4.25E-02 3.52E-07 0.3 Vezivanje hPD-L1-MMH monomera na 37°C Antitelo ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1⁄2 (min) H1H9327P 5.21E+05 4.29E-04 8.24E-10 27 H1H9329P 2.82E+06 3.29E-01 1.17E-07 0.04 H1H9336P 1.07E+06 7.88E-04 7.33E-10 15 H1H9345P2 1.72E+05 3.40E-02 1.97E-07 0.3 H1H9351P2 6.82E+05 1.68E-03 2.47E-09 6.9 H1H9354P2 7.39E+04 1.14E-03 1.54E-08 10 H1H9364P2 1.35E+06 5.63E-04 4.17E-10 21 H1H9373P2 3.09E+06 5.58E-04 1.80E-10 21 H1H9382P2 9.97E+04 1.07E-02 1.07E-07 1.1 H1H9387P2 3.49E+06 1.37E-01 3.91E-08 0.08 H1H9396P2 3.44E+05 1.13E-02 3.30E-08 1.0
Tabela 5: Parametri kinetike vezivanja anti-PD-L1 monoklonskih antitela za humani PD-L1 dimer na 25°C.
Vezivanje za humani PD-L1 dimer na 25°C
Antitelo ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1⁄2 (min) H2aM8306N 7.39E+05 3.09E-04 4.18E-10 37 H2aM8307N 1.89E+04 2.89E-05 1.54E-09 399 H2aM8309N 3.36E+06 1.44E-04 4.29E-11 80 H2aM8310N 3.13E+05 5.71E-05 1.83E-10 202 H2aM8312N 2.47E+05 1.02E-04 4.13E-10 113 H2aM8314N 3.16E+06 1.35E-05 4.26E-12 859 H2aM8316N 3.08E+06 1.44E-04 4.68E-11 80 H2aM8317N 3.59E+05 4.50E-04 1.25E-09 26 H2aM8321N 8.13E+05 2.87E-04 3.53E-10 40 H2aM8323N 2.91E+06 2.05E-05 7.04E-12 565 H2aM8718N 3.20E+06 1.62E-05 5.06E-12 713 H2aM8719N 3.42E+05 2.62E-04 7.67E-10 44 H1H9323P 2.24E+05 1.69E-04 7.54E-10 68 H1H9327P 4.66E+05 7.87E-05 1.69E-10 147 H1H9329P 2.97E+06 7.68E-04 2.59E-10 15 Vezivanje za humani PD-L1 dimer na 25°C
Antitelo ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1⁄2 (min) H1H9336P 1.38E+06 1.09E-04 7.86E-11 106 H1H9345P2 5.00E+05 2.37E-04 4.74E-10 49 H1H9351P2 9.16E+05 1.53E-04 1.67E-10 76 H1H9354P2 1.68E+05 1.16E-04 6.89E-10 100 H1H9364P2 2.42E+06 1.06E-04 4.37E-11 109 H1H9373P2 4.08E+06 1.06E-04 2.60E-11 109 H1H9382P2 2.23E+05 1.48E-04 6.63E-10 78 H1H9387P2 5.07E+06 2.17E-04 4.27E-11 53 H1H9396P2 7.76E+05 1.90E-04 2.45E-10 61
Tabela 6: Parametri kinetike vezivanja anti-PD-L1 monoklonskih antitela za humani PD-L1 dimer na 37°C.
Vezivanje za humani PD-L1 dimer na 37°C
Antitelo ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1⁄2 (min) H2aM8306N 9.97E+05 4.16E-04 4.17E-10 28 H2aM8307N 4.41E+04 2.21E-04 5.00E-09 52 H2aM8309N 4.41E+06 1.66E-04 3.76E-11 70 H2aM8310N 4.81E+05 1.24E-04 2.58E-10 93 H2aM8312N 3.57E+05 2.61E-04 7.32E-10 44 H2aM8314N 3.89E+06 2.30E-05 5.91E-12 503 H2aM8316N 4.06E+06 2.37E-04 5.85E-11 49 H2aM8317N 4.81E+05 6.57E-04 1.36E-09 18 H2aM8321N 9.46E+05 2.69E-04 2.85E-10 43 H2aM8323N 4.32E+06 1.21E-04 2.80E-11 96 H2aM8718N 3.72E+06 1.98E-05 5.32E-12 584 H2aM8719N 4.37E+05 2.91E-04 6.66E-10 40 H1H9323P 5.19E+05 2.03E-04 3.91E-10 57 H1H9327P 6.83E+05 1.36E-04 2.00E-10 85 H1H9329P 3.87E+06 2.67E-03 6.89E-10 4.3 H1H9336P 2.75E+06 8.31E-05 3.02E-11 139 H1H9345P2 6.82E+05 2.03E-04 2.97E-10 57 Vezivanje za humani PD-L1 dimer na 37°C Antitelo ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1⁄2 (min) H1H9351P2 1.25E+06 1.46E-04 1.17E-10 79 H1H9354P2 4.56E+05 1.45E-04 3.17E-10 80 H1H9364P2 3.34E+06 6.96E-05 2.08E-11 166 H1H9373P2 5.12E+06 8.97E-05 1.75E-11 129 H1H9382P2 4.92E+05 1.37E-04 2.78E-10 84 H1H9387P2 6.12E+06 3.92E-04 6.39E-11 29 H1H9396P2 1.09E+06 2.58E-04 2.37E-10 45
Tabela 7: Parametri kinetike vezivanja anti-PD-L1 monoklonskih antitela za MfPD-L1-MMH na 25°C.
Vezivanje za MfPD-L1-MMH monomer na 25°C Antitelo ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1⁄2 (min) H2aM8306N 1.65E+05 7.88E-03 4.77E-08 1.5 H2aM8307N 2.61E+04 1.07E-03 4.09E-08 11 H2aM8309N 8.70E+05 1.30E-02 1.49E-08 0.9 H2aM8310N 1.03E+05 3.06E-04 2.97E-09 38 H2aM8312N 7.09E+04 5.97E-04 8.42E-09 19 H2aM8314N 9.66E+05 7.00E-05 7.24E-11 165 H2aM8316N 9.71E+05 1.64E-03 1.69E-09 7.0 H2aM8317N 1.06E+05 2.38E-02 2.26E-07 0.5 H2aM8321N 1.34E+05 4.02E-03 2.99E-08 2.9 H2aM8323N 5.47E+05 8.68E-03 1.59E-08 1.3 H2aM8718N 9.04E+05 6.64E-05 7.35E-11 174 H2aM8719N 8.17E+04 2.68E-03 3.28E-08 4.3 H1H9323P 8.22E+04 2.40E-02 2.92E-07 0.5 H1H9327P 3.59E+05 3.33E-04 9.28E-10 35 H1H9329P 1.76E+06 1.35E-01 7.69E-08 0.09 H1H9336P 6.79E+05 5.94E-04 8.76E-10 19 H1H9345P2 1.10E+05 8.50E-03 7.73E-08 1.4 H1H9351P2 3.49E+05 1.11E-03 3.19E-09 10 H1H9354P2 4.60E+04 3.05E-04 6.64E-09 38 Vezivanje za MfPD-L1-MMH monomer na 25°C
Antitelo ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1⁄2 (min) H1H9364P2 7.57E+05 3.12E-04 4.12E-10 37 H1H9373P2 2.21E+06 2.82E-04 1.27E-10 41 H1H9382P2 8.22E+04 1.29E-02 1.57E-07 0.9 H1H9387P2 2.37E+06 6.04E-02 2.55E-08 0.2 H1H9396P2 2.06E+05 2.52E-03 1.22E-08 4.6
Tabela 8: Parametri kinetike vezivanja anti-PD-L1 monoklonskih antitela za MfPD-L1-MMH na 37°C.
Vezivanje za MfPD-L1-MMH monomer na 37°C Antitelo ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1⁄2 (min) H2aM8306N 2.74E+05 3.68E-02 1.34E-07 0.3 H2aM8307N 1.87E+05 1.43E-03 7.63E-09 8.1 H2aM8309N 1.07E+06 2.81E-02 2.63E-08 0.4 H2aM8310N 4.71E+05 1.07E-03 2.27E-09 11 H2aM8312N 1.01E+05 3.32E-03 3.27E-08 3.5 H2aM8314N 1.07E+06 1.52E-04 1.42E-10 76 H2aM8316N 1.02E+06 5.38E-03 5.27E-09 2.1 H2aM8317N 2.66E+05 4.76E-02 1.79E-07 0.2 H2aM8321N 1.59E+05 8.16E-03 5.11E-08 1.4 H2aM8323N 9.56E+05 2.82E-02 2.95E-08 0.4 H2aM8718N 1.10E+06 1.46E-04 1.33E-10 79 H2aM8719N 1.35E+05 6.99E-03 5.19E-08 1.7 H1H9323P 1.25E+05 4.99E-02 3.98E-07 0.2 H1H9327P 4.77E+05 5.34E-04 1.12E-09 22 H1H9329P 2.66E+06 3.64E-01 1.37E-07 0.03 H1H9336P 9.09E+05 1.25E-03 1.38E-09 9.2 H1H9345P2 1.64E+05 1.97E-02 1.21E-07 0.6 H1H9351P2 5.60E+05 2.01E-03 3.59E-09 5.8 H1H9354P2 8.59E+04 8.44E-04 9.82E-09 14 H1H9364P2 1.12E+06 6.33E-04 5.66E-10 18 H1H9373P2 2.81E+06 5.69E-04 2.03E-10 20 Vezivanje za MfPD-L1-MMH monomer na 37°C
Antitelo ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1⁄2 (min) H1H9382P2 1.30E+05 2.45E-02 1.89E-07 0.5 H1H9387P2 3.20E+06 1.57E-01 4.89E-08 0.07 H1H9396P2 3.94E+05 1.20E-02 3.05E-08 1.0
Tabela 9: Parametri kinetike vezivanja anti-PD-L1 monoklonskih antitela za majmunski PD-L1-mFc na 25°C.
Vezivanje za MfPD-L1-mFc na 25°C
Antitelo ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1⁄2 (min) H1H8314N 2.58E+06 6.77E-05 2.63E-11 171 H1H8316N 2.71E+06 5.23E-05 1.93E-11 221 H1H8323N 2.67E+06 6.16E-05 2.31E-11 188 H1H9351P2 7.81E+05 7.19E-05 9.22E-11 161 H1H9364P2 1.32E+06 7.75E-05 5.87E-11 149 H1H9373P2 2.85E+06 4.96E-05 1.74E-11 233 H1H9387P2 3.55E+06 1.61E-04 4.52E-11 72 H1H9351P2 8.64E+05 7.80E-05 9.03E-11 148 H1H9364P2 1.25E+06 5.80E-05 4.62E-11 199 H1H9373P2 3.27E+06 6.55E-05 2.00E-11 176 H1H9387P2 2.90E+06 2.12E-04 7.30E-11 55 H1H9323P 2.80E+05 1.45E-04 5.19E-10 79 H1H9327P 3.48E+05 1.02E-04 2.94E-10 113 H1H9329P 1.74E+06 6.72E-04 3.86E-10 17 H1H9336P 9.90E+05 6.16E-05 6.22E-11 188 H1H9344P2 3.50E+05 1.38E-04 3.93E-10 84 H1H9345P2 2.96E+05 1.51E-04 5.12E-10 76 H1H9354P2 2.05E+05 9.14E-05 4.47E-10 126 H1H9382P2 2.13E+05 1.33E-04 6.26E-10 87 H1H9396P2 8.37E+05 1.88E-04 2.25E-10 61
Tabela 10: Parametri kinetike vezivanja anti-PD-L1 monoklonskih antitela za majmunski PD-L1-mFc na 37°C.
Vezivanje za MfPD-L1-mFc na 37°C
Antitelo ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1⁄2 (min) H1H8314N 2.89E+06 9.60E-05 3.33E-11 120 H1H8316N 2.96E+06 6.16E-05 2.08E-11 187 H1H8323N 2.99E+06 1.35E-04 4.51E-11 86 H1H9351P2 1.06E+06 9.46E-05 8.91E-11 122 H1H9364P2 2.36E+06 1.11E-04 4.71E-11 104 H1H9373P2 3.15E+06 8.59E-05 2.73E-11 134 H1H9387P2 3.41E+06 4.74E-04 1.39E-10 24 H1H9351P2 1.61E+06 1.04E-04 6.47E-11 111 H1H9364P2 2.41E+06 6.76E-05 2.80E-11 171 H1H9373P2 3.86E+06 1.23E-04 3.19E-11 94 H1H9387P2 2.90E+06 4.65E-04 1.61E-10 25 H1H9323P 3.84E+05 2.44E-04 6.36E-10 47 H1H9327P 7.64E+05 2.94E-04 3.85E-10 39 H1H9329P 2.18E+06 1.54E-03 7.08E-10 8 H1H9336P 1.86E+06 4.60E-05 2.47E-11 251 H1H9344P2 9.05E+05 2.17E-04 2.40E-10 53 H1H9345P2 8.61E+05 2.92E-04 3.39E-10 40 H1H9354P2 2.72E+05 2.03E-04 7.46E-10 57 H1H9382P2 2.84E+05 2.35E-04 8.25E-10 49 H1H9396P2 1.57E+06 5.02E-04 3.19E-10 23
[0189] Kao što je prikazano u Tabeli 3, na 25°C, svih 25 anti-PD-L1 antitela prema pronalasku se vezalo za hPD-L1-MMH sa KD vrednostima u opsegu od 55.8pM do 421nM. Kao što je prikazano u Tabeli 4, na 37°C, svih 25 anti-PD-L1 antitela prema pronalasku se vezalo za hPD-L1-MMH sa KD vrednostima u opsegu od 140pM do 647nM. Kao što je prikazano u Tabeli 5, na 25°C, svih 25 anti-PD-L1 antitela prema pronalasku se vezalo za hPD-L1 dimer sa KD vrednostima u opsegu od 4.26pM do 1.54nM. Kao što je prikazano u Tabeli 6, na 37°C, svih 25 anti-PD-L1 antitela prema pronalasku se vezalo za hPD-L1 dimer sa KD vrednostima u opsegu od 5.32pM do 5.0nM. Kao što je prikazano u Tabeli 7, na 25°C, svih 25 anti-PD-L1 antitela prema pronalasku se vezalo za MfPD-L1-MMH sa KD vrednostima u opsegu od 72.4pM do 292nM. Kao što je prikazano u Tabeli 8, na 37°C, svih 25 anti-PD-L1 antitela prema pronalasku se vezalo za MfPD-L1- MMH sa K D vrednostima u opsegu od 133pM do 398nM. Kao što je prikazano u Tabeli 9, na 25°C, svih 20 testiranih anti-PD-L1 antitela prema pronalasku se vezalo za MfPD-L1-mFc sa KD vrednostima u opsegu od 17.4pM do 626pM. Kao što je prikazano u Tabeli 10, na 37°C, svih 20 testiranih anti-PD-L1 antitela prema pronalasku se vezalo za MfPD-L1-mFc sa KD vrednostima u opsegu od 20.8pM do 825pM.
Primer 4: Blokiranje PD-L1 vezivanja za PD-1 određeno pomoću ELISE
[0190] Sposobnost monoklonskih anti-PD-L1 antitela da blokiraju vezivanje humanog PD-L1 za njegove partnere za vezivanje, humane PD-1 i humane B7-1 receptore, bilo je izmereno korišćenjem dva kompetitivna formata sendvič ELISE.
[0191] Dimerni humani PD-1 protein koji je sadržao deo ekstracelularnog domena (aminokiseline 25 - 170 pristupnog broja NP_005009.2 sa C93S promenom) koji je bio izražen sa C-terminalnim hFc tagom (hPD-1-hFc; SEQ ID: 350) i dimerni humani B7-1 protein koji je sadržao deo ekstracelularnog domena izraženog sa C-terminalnim hFc tagom i heksahistidinskim tagovima (hB7-1-hFc-6His; R&D Systems, #140-B1) bili su odvojeno obloženi sa 2 μg/mL na mikrotitarskoj ploči sa 96-bunarčića u PBS puferu preko noći na 4°C. Nespecifična mesta vezivanja su zatim bila blokirana korišćenjem 0.5% (w/v) rastvora BSA u PBS. Konstantna količina 0.5 nM ili 8.0 nM dimernog hPD-L1 proteina koja je sadržala deo humanog PD-L1 ekstracelularnog domena koji je bio izražen sa C-terminalnim mFc tagom (hPD-L1-mFc; SEQ ID: 348) bila je odvojeno titrovana sa koncentracijama anti-PD-1 antitela i izotipskih kontrolnih antitela u opsegu između 0-210 nM u serijskom razređivanju. Ovi kompleksi antitelo-protein su zatim bili inkubirani 1 sat na sobnoj temperaturi (ST). Kompleksi hPD-L1-mFc sa 0.5 nM konstantom su zatim bili preneti u mikrotitarske ploče obložene sa hPD-1- hFc, a kompleksi hPD-L1-mFc sa 8 nM konstantom su bili preneti u ploče obložene sa hB7-1-hFc-6His. Dozvoljeno je da se kompleksi vezuju za obložene ploče 1 sat na ST. Posle inkubacije od 1 sat, bunarčići su bili isprani i bio je detektovan hPD-L1-mFc vezan za ploče sa anti-mFc poliklonskim antitelom konjugovanim sa ren peroksidazom (Jackson ImmunoResearch, # 115-035-164). Uzorci su bili razvijeni pomoću TMB rastvora (BD Biosciences, #51-2606KC i #51-2607KC) da bi se proizvela kolorimetrijska reakcija, pa su neutralizovani sa 1M sumporne kiseline pre merenja apsorbanse na 450 nm na Victor X5 čitaču ploča. Za analizu podataka je bio upotrebljen sigmoidni model doza-reakcija u okviru Prism™ softvera. Izračunata IC50 vrednost, definisana kao koncentracija antitela potrebna za blokiranje 50% vezivanja hPD-L1-mFc za hPD- 1-hFc ili hB7-1-hFc-6His, bila je upotrebljena kao indikator potencije blokiranja. Maksimalne vrednosti blokiranja predstavljaju sposobnost antitela da blokiraju vezivanje hPD-L1-mFc u odnosu na početnu vrednost. Apsorbansa izmerena za konstantnu količinu hPD-L1 na krivoj doze je definisana kao 0% blokiranja, a apsorbansa bez dodatog hPD-L1 je definisana kao 100% blokiranja. Vrednosti apsorbanse za bunarčiće koji sadrže najveću koncentraciju svakog antitela su bile upotrebljene za određivanje procenta blokiranja za maksimalnu koncentraciju testiranog antitela. Antitela sa maksimalnim procentualnim blokiranjem ispod 25% su bila karakterisana kao neblokatori, a njihove IC50 vrednosti nisu navedene u Tabeli 11. Antitela sa maksimalnom procentualnom blokadom ispod -25% bila su karakterisana kao neblokatori/pojačavači.
Tabela 11: ELISA blokiranje vezivanja hPD-L1-mFc za hPD-1-hFc i hB7-1-hFc-6His pomoću anti-PD-L1 antitela
Najveća Blokiranje Najveća Blokiranje Blokiranje Blokiranje
konc. vezivanja 0.5 konc. vezivanja 8 nM vezivanja 0.5 vezivanja 8 nM
antitela (nM) nM hPD L1- antitela (nM) hPD-L1- mFc Antitelo nM hPD L1- hPD L1-mFc
testirana na mFc za hPD-1- testirana na za hB7-1-hFcmFc za hPD-1- za hB7-1-hFchPD-1-hFc hFc, % maks. hB7-1-hFc- 6His, % maks.
hFc, IC50(M) 6His, IC50(M)
prevlaci blokiranja 6His prevlaci blokiranja H1H9336P 50 <2.5E-10 (*) 100 210 4.4E-09 99 H1H9344P2 50 NBI 15 210 NBI/ pojačavač -51 H1H9345P2 50 <2.5E-10 (*) 26 210 NBI/ pojačavač -34 H1H9351P2 50 <2.5E-10 (*) 100 210 4.4E-09 100 H1H9354P2 50 5.3E-10 34 210 NBI -13 H1H9364P2 50 <2.5E-10 (*) 100 210 4.1E-09 101 H1H9373P2 50 <2.5E-10 (*) 100 210 4.6E-09 101 H1H9382P2 50 <2.5E-10 (*) 39 210 NBI/ pojačavač -30 H1H9387P2 50 <2.5E-10 (*) 100 210 <4.0E-09 (*) 100 H1H9396P2 50 <2.5E-10 (*) 59 210 NBI 8 Izotipska
kontrola - 50 NBI -11 210 NBI -3 humani IpG1
Izotipska
kontrola - mišiji 50 NBI 5 210 NBI -3 IgG2a
(*) - ispod teorijske donje granice testa; teorijska donja granica testa je 2.5E-10 M za hPD-1-hFc prevlaku i 4.0E-09 M za hB7-1-hFc-6His prevlaku; NBI - ne-blokator; IC - neubedljivo
[0192] Kao što je prikazano u Tabeli 11, 19 od 25 anti-PD-L1 antitela prema pronalasku je blokiralo vezivanje 0.5nM hPD-L1-mFc za hPD-1-hFc sa IC50 vrednostima u opsegu od manje od 250pM do 770pM sa maksimalnim procentom blokiranja u opsegu od 26% do 100%. Četiri od 25 testiranih anti-PD-L1 antitela su bila karakterisana kao neblokatori vezivanja hPD-L1-mFc za hPD-1-hFc, dok je jedno testirano antitelo (H1H9327P) bilo karakterisano kao neblokator/pojačavač hPD-L1-mFc vezivanja za hPD-1-hFc. Jedno antitelo (H2aM8307N) je ispoljilo slabo blokiranje vezivanje hPD-L1-mFc za hPD- 1-hFc sa maksimalnim procentom blokiranja od 29%; međutim, za ovaj uzorak nije mogla biti određena IC50 vrednost.
[0193] Dalje, 14 od 25 anti-PD-L1 antitela prema pronalasku blokiralo je vezivanje 8nM hPD-L1-mFc za hB7-1- hFc-6His sa IC 50 vrednostima u opsegu od <4nM do 10nM sa maksimalnim procentom blokiranja u opsegu od 57% do 101%. Dva od testiranih 25 anti-PD-L1 antitela su bila karakterisana kao neblokatori vezivanja hPD-L1-mFc za hB7-1-hFc-6His, dok su 8 testiranih antitela bila karakterisana kao neblokatori/pojačavači vezivanja hPD-L1-mFc za hB7-1-hFc-6His. Jedno antitelo (H1H9327P) je ispoljilo slabo blokiranje vezivanja hPD-L1-mFc za hB7-1-hFc-6His sa maksimalnim procentom blokiranja od 41%; međutim, za ovaj uzorak nije mogla biti određena IC50 vrednost.
Primer 5: Blokiranje vezivanja PD-L1 za PD-1 određeno biosenzorskim testom i površinskom plazmonskom rezonancom
[0194] Inhibicija vezivanja humanog PD-L1 za humani PD-1 različitim anti-PD-L1 monoklonskim antitelima je bila proučena korišćenjem bio-slojevitog interferometrijskog testa u realnom vremenu na Octet Red96 biosenzorskom instrumentu (Fortebio Inc.) ili korišćenjem biosenzorskog testa sa površinskom plazmonskom rezonancom u realnom vremenu na Biacore 3000 instrumentu.
[0195] Studije inhibicije za anti-PD-L1 monoklonska antitela izražena sa mišijim Fc su bile izvedene na Octet Red96 instrumentu. Prvo je 100nM rekombinantnog humanog PD-L1 izraženog sa C-terminalnim mišijim IgG2a Fc tagom (hPDL1-mFc; SEQ ID: 348) bilo inkubirano sa 500nM svakog anti-PD-L1 monoklonskog antitela tokom najmanje 1 sata pre izvođenja testa inhibicije. Približno 0.8nm do 1.2nm rekombinantnog humanog PD-1 izraženog sa C-terminalnim humanim IgG1 Fc tagom (hPD-1-hFc; SEQ ID: 350) je bilo uhvaćeno korišćenjem anti-humanih IgG Fc biosenzora za hvatanje. Octet biosenzori sa uhvaćenim hPD-1-hFc su posle toga bili potopljeni u bunarčiće koji su sadržali smešu hPD-L1-mFc i različita anti-PD-L1 monoklonska antitela. Ceo eksperiment je bio izveden na 25°C u Octet HBST puferu (0.01 M HEPES pH7.4, 0.15M NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% v/v surfaktant P20, 0.1mg/mL BSA) uz trešenje ploče brzinom od 1000 o/min. Biosenzori su bili ispirani sa Octet HBST puferom između svakog koraka eksperimenta. Reakcija vezivanja u realnom vremenu je bila praćena u toku eksperimenta, a bila je zabeležena reakcija vezivanja na kraju svakog koraka. Bilo je upoređeno vezivanje hPD-L1-mFc za uhvaćeni hPD-1-hFc u prisustvu i odsustvu različitih anti-PD-L1 monoklonskih antitela, koje je bilo upotrebljeno za određivanje blokirajućeg ponašanja testiranih antitela kao što je prikazano u Tabeli 12.
Tabela 12: Inhibicija vezivanja humanog PD-1 za humani PD-L1 pomoću različitih anti-PD-L1 monoklonskih antitela izraženih sa mišijim Fc izvedena na Octet Red96 instrumentu.
Anti-PD-L1 Količina Vezivanje smeše 100nM hPD L1-monoklonsko uhvaćenog hPD-1- mFc i 500nM anti-PD-L1 % blokiranja antitelo hFc (nm) monoklonskog antitela (nm)
Bez antitela 1.05 0.31 0 H2aM8306N 0.98 0.02 94 H2aM8307N 1.01 0.46 -48 H2aM8309N 0.89 0.02 94 H2aM8310N 0.95 0.13 58 H2aM8312N 1.06 0.52 -68 H2aM8314N 0.99 0.02 94 H2aM8316N 1.06 0.01 97 H2aM8317N 0.92 0.58 -87 H2aM8321N 1.04 0.60 -94 H2aM8323N 1.00 0.02 94 H2aM8718N 1.08 0.01 97 H2aM8719N 0.93 0.11 65 Izotipsko kontrolno
1.10 0.35 -13 antitelo
[0196] Kao što je prikazano u Tabeli 12, 8 od 12 anti-PD-L1 antitela testiranih na Octet Red96 instrumentu je ispoljilo blokiranje vezivanja hPD-L1-mFc za hPD-1-hFc u opsegu od 58% do 97%. Četiri testirana anti-PD-L1 antitela su ispoljila sposobnost da povećaju vezivanje hPD-L1-mFc za hPD-1-hFc.
[0197] Kao sledeće, bile su izvedene studije inhibicije za anti-PD-L1 monoklonska antitela izražena sa humanim Fc na Biacore 3000 instrumentu. Prvo je 100nM rekombinantnog humanog PD-L1 izraženog sa C-terminalnim humanim IgG1 Fc tagom (hPD-L1-hFc; SEQ ID: 350) bilo inkubirano sa 500nM svakog anti-PD-L1 monoklonskog antitela najmanje 1 sat pre izvođenja testa inhibicije. CM5 Biacore senzorska površina je bila prvo derivatizovana sa anti-mišijim IgG2a specifičnim poliklonskim antitelom (Southern Biotech, # 1080-01) uz korišćenje standardne EDC-NHS hemije. Oko 230 RUs rekombinantnog humanog PD-1 izraženog sa C-terminalnim mišijim IgG2a Fc tagom (hPD-1-mFc; SEQ ID: 348) je bilo onda uhvaćeno, što je bilo praćeno ubrizgavanjem 100nM hPD-L1-hFc u prisustvu i odsustvu različitih anti-PD-L1 monoklonskih antitela sa protokom od 25μL/min tokom 2 minuta. Ceo eksperiment je bio izveden na 25°C u HBST tekućem puferu (0.01 M HEPES pH7.4, 0.15M NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% v/v surfaktant P20). Reakcije vezivanja u realnom vremenu su bile praćene tokom celog toka eksperimenta, a reakcija vezivanja na kraju svakog koraka je bila zabeležena. Bilo je upoređeno vezivanje hPD-L1-hFc za uhvaćeni hPD-1-mFc u prisustvu i odsustvu različitih anti-PD-L1 monoklonskih antitela, koje je bilo upotrebljeno za određivanje blokirajućeg ponašanja testiranih antitela kao što je prikazano u Tabeli 13.
Tabela 13: Inhibicija vezivanja humanog PD-1 za humani PD-L1 pomoću različitih anti-PD-L1 monoklonskih antitela izraženih sa humanim Fc izvedena na Biacore 3000 instrumentu.
Anti-PD-L1 Količina Vezivanje smeše 100nM hPD L1-monoklonsko uhvaćenog hPD- hFc i 500nM anti-PD-L1 % blokiranja antitelo 1- mFc (RU) monoklonskog antitela (nm)
Bez mAb 222 56 0
H1H9323P 224 262 -368
H1H9327P 226 172 -207
H1H9329P 227 2 97
H1H9336P 227 9 84
H1H9345P2 229 292 -422
H1H9351P2 227 6 90
H1H9354P2 229 296 -428
H1H9364P2 228 8 86
H1H9373P2 227 6 89
H1H9382P2 228 307 -448
H1H9387P2 228 5 91
H1H9396P2 228 164 -193
Izotipsko kontrolno
228 56 0 antitelo
[0198] Kao što je prikazano u Tabeli 13, 6 od 12 anti-PD-L1 antitela prema pronalasku testiranih na Biacore 3000 instrumentu je ispoljilo blokiranje vezivanja hPD-L1-hFc za hPD-1-mFc u opsegu od 84% do 97%. Šest testiranih anti-PD-L1 antitela ispoljilo je sposobnost da pojačaju vezivanje hPD-L1-hFc za hPD-1-mFc.
Primer 6: Octet unakrsno nadmetanje između anti-PD-L1 antitela
[0199] Nadmetanje u vezivanju između anti-PD-L1 monoklonskih antitela je bilo određeno korišćenjem bio-slojevitog interferometrijskog testa u realnom vremenu, bez labele na Octet RED384 biosenzoru (Pall ForteBio Corp.). Ceo eksperiment je bio izveden na 25°C u Octet HBST puferu (0.01 M HEPES pH7.4, 0.15M NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% v/v surfaktant P20, 0.1mg/mL BSA) sa tresačem ploča pri brzini od 1000o/min. Da bi se utvrdilo da li su 2 antitela sposobna da se međusobno nadmeću za vezivanje za svoje odgovarajuće epitope na rekombinantnom humanom PD-L1 izraženom sa C-terminalnim myc-myc-heksahistidinskim tagom (hPD-L1-MMH; SEQ ID: 345), oko ∼0.3nm hPD-L1-MMH je bilo prvo uhvaćeno na anti-Penta-His antitelu obloženom sa Octet biosenzorskim šiljcima (Fortebio Inc, # 18-5079) potapanjem šiljaka tokom 5 minuta u bunarčić koji je sadržao 20μg/mL rastvora hPD-L1-MMH. Biosenzorski šiljci sa uhvaćenim antigenom su onda bili zasićeni prvim anti-PD-L1 monoklonskim antitelom (u nastavku se naziva mAb-1) umakanjem u bunarčiće koji su sadržali 50μg/mL rastvora mAb-1 tokom 5 minuta. Biosenzorski šiljci su potom bili umočeni u bunarčiće koji su sadržali 50μg/mL rastvora drugog antiPD-L1 monoklonskog antitela (u nastavku se naziva mAb-2). Biosenzorski šiljci su bili isprani u Octet HBST puferu između svakog koraka eksperimenta. Reakcija vezivanja u realnom vremenu je bila praćena u toku eksperimenta, a reakcija vezivanja na kraju svakog koraka je bila zabeležena kao što je prikazano na slici 1. Reakcija vezivanja mAb-2 za hPD-L1-MMH prethodno kompleksiranog sa mAb-1 je bila upoređena, pa je bilo određeno kompetitivno/nekompetitivno ponašanje različitih anti-PD-L1 monoklonskih antitela.
[0200] Pod eksperimentalnim uslovima korišćenim u ovom primeru, (a) H2aM8309N, H1H9329P, H1H9336P, H2aM8314N, H2aM8316N, H2aM8718N, H1H9387P2, H1H9351P2, H1H9364P2, H1H9373P2, i H2aM8306N su se međusobno unakrsno nadmetali; (b) H2aM8310N, H2aM8321N i H2aM8312N su se međusobno unakrsno nadmetali; (c) H1H9396P2, H2aM8317N, H2aM8321N, H1H9323P, H1H9382P2, H1H9344P2, H1H9345P2, i H1H9354P2 su se međusobno unakrsno nadmetali; i (d) H1H9327P i H2aM8307N su se međusobno unakrsno nadmetali. U jednom slučaju je bilo uočeno nadmetanje u jednoj orijentaciji, ali ne sa suprotnom orijentacijom: tj. H2aM8307N kada je primenjen prvi se nadmetao sa H2aM8309N, H1H9329P, H1H9336P, H2aM8314N, H2aM8316N, H2aM8718N, H1H9387P2, H1H9351P2, H1H9364P2, H1H9373P2, i H2aM8306N; međutim, sa suprotnom orijentacijom, H2aM8309N, H1H9329P, H1H9336P, H2aM8314N, H2aM8316N, H2aM8718N, H1H9387P2, H1H9351P2, H1H9364P2, H1H9373P2, i H2aM8306N kada su prvo primenjeni, nisu se nadmetali sa H2aM8307N.
Primer 7: Vezivanje antitela za ćelije koje prekomerno izražavaju PD-L1
[0201] Vezivanje anti-PD-L1 antitela za humanu embrionsku bubrežnu ćelijsku liniju (HEK293; ATCC, #CRL-1573) stabilno transfektovanu sa humanim PD-L1 cele dužine (aminokiseline 1 do 290 pristupnog broja NP_054862.1) (HEK293/hPDL1) bilo je određeno pomoću FACS-a.
[0202] Za test, prianjajuće ćelije su bile odvojene korišćenjem pufera za disocijaciju bez enzima, pa su blokirane sa kompletnim medijumom. Ćelije su bile centrifugirane i ponovo suspendovane u koncentraciji od 2.8x10^6 ćelije/mL u hladnom PBS koji je sadržao 2% FBS. HEK293 roditeljske i HEK293/hPD-L1 ćelije su onda bile inkubirane tokom 15 do 30 minuta na ledu sa 100nM svakog anti-PD-L1 antitela ili izotipskim kontrolnim antitelom. Nevezana antitela su bila odstranjena ispiranjem sa D-PBS koji je sadržao 2% FBS, a ćelije su zatim bile inkubirane sa fikoeritrinomkonjugovanim sekundarnim Fcγ fragmentom koji specifično prepoznaje humani Fc (Jackson ImmunoResearch, # 109-116-170) ili mišiji Fc (Jackson ImmunoResearch, #115-115-164) tokom 15 do 30 minuta na ledu. Ćelije su bile isprane sa D-PBS koji je sadržao 2% FBS da bi se uklonili nevezani sekundarni detekcioni reagensi i onda su bila izvršena merenja fluorescencije korišćenjem HyperCyte (IntelliCyt, Inc.) protočnog citometra. Podaci su bili analizirani korišćenjem HyperCyte softvera.
Tabela 14: FACS vezivanje anti-PD-L1 antitela za HEK293/hPD-L1 ćelije i roditeljske HEK293 ćelije
FACS na HEK293
FACS na HEK293/hPD-L1 Odnos HEK293/hPD-L1 prema HEK293 Antitelo roditeljskim
ćelijama [MFI] roditeljskim ćelijama ćelijama [MFI]
H1H9323P 1909 154992 81
H1H9327P 2120 317592 150 H1H9329P 1504 282088 188 H1H9336P 2263 379009 168 H1H9344P2 1691 200976 119
FACS na HEK293
FACS na HEK293/hPD-L1 Odnos HEK293/hPD-L1 prema HEK293 Antitelo roditeljskim
ćelijama [MFI] roditeljskim ćelijama ćelijama [MFI]
H1H9345P2 1885 228406 121 H1H9351P2 1685 289523 172 H1H9354P2 2204 275839 125 H1H9364P2 2066 323663 157 H1H9373P2 2151 333236 155 H1H9382P2 1473 205563 140 H1H9387P2 1232 323793 263 H1H9396P2 2340 227961 97 H2aM8306N 1286 316485 246 H2aM8307N 1382 73976 54 H2aM8309N 1160 192678 166 H2aM8310N 1357 14918 11 H2aM8312N 1380 158331 115 H2aM8314N 2053 194832 95 H2aM8316N 1601 172104 108 H2aM8317N 1270 67600 53 H2aM8321N 1322 112495 85 H2aM8323N 2250 163497 73 H2aM8718N 2225 194341 87 H2aM8719N 1272 133399 105
mišiji IgG
1273 1115 0.9
izotipska kontrola
humani IgG1
1179 1099 0.9
izotipska kontrola
humani IgG4
1991 1839 0.9
izotipska kontrola
[0203] Kao što je prikazano u Tabeli 14, svih 25 anti-PD-L1 antitela prema pronalasku je ispoljilo jako vezivanje za HEK293/ hPD-L1 ćelije u poređenju sa vezivanjem za roditeljsku HEK293 liniju.
Primer 8: Blokiranje smanjene regulacije T-ćelija indukovano sa PD-L1 u testu sa reporterom T-ćelija/APC luciferaze
[0204] Aktivacija T-ćelija je bila ostvarena stimulacijom receptora T-ćelija (TcR) koji prepoznaju specifične peptide koje predstavljaju proteini klasa I ili II glavnog histokompatibilnog kompleksa na ćelijama koje prezentuju antigen (APC). Aktivirani TcR-ovi dalje iniciraju kaskadu signalnih događaja koji se mogu pratiti pomoću reporter gena koje aktiviraju transkripcioni faktori, kao što je aktivatorprotein 1 (AP-1), Nuklearni Faktor Aktiviranih T-ćelija (NFAT) ili Nuklearni faktor pojačavača kapalakog-lanca aktiviranih B ćelija (NFκb). Reakcija T-ćelija se moduliše putem angažovanja ko-receptora izraženih bilo konstitutivno ili induktibilno na T-ćelijama. Jedan takav receptor je protein 1 programirane smrti ćelije (PD-1), negativni regulator T-ćelijske aktivnosti. PD-1 sadejstvuje sa svojim ligandom, PD-L1, koji se izražava na ciljnim ćelijama, uključujući APC-e ili kancerske ćelije, a ovo sadejstvo rezultuje predavanjem inhibitornih signala regrutovanjem fosfataza na TcR signalozome, što rezultuje sprečavanjem pozitivne signalizacije.
[0205] Biotest je bio razvijen za merenje signalizacije T ćelija indukovano interakcijom između APC i T ćelija korišćenjem mešovite kulture koja potiče od dveju sisarskih ćelijskih linija: Jurkat ćelije (obesmrćena T ćelijska linija) i Raji ćelije (B ćelijska linija) (slika 1). Za prvu komponentu biotesta, Jurkat klon E6-1 ćelije (ATCC, #TIB-152) su transdukovane sa Cignal Lenti AP-1 Luc Reporterom (Qiagen -Sabiosciences, #CLS-011L) prema instrukcijama proizvođača. Lentivirus kodira gen luciferaze obada pod kontrolom minimalnog CMV promotera, tandem ponavlja TPA-induktibilni transkriptivni reakcioni element (TRE) i gen otpornosti na puromicin.
Genetski modifikovana Jurkat ćelijska linija je zatim bila transdukovana sa PD-1 himerom koja sadrži ekstracelularni domen humanog PD-1 (aminokiseline od 1 do 170 humanog PD1; pristupni broj NP_005009.2) i trans-membranske i citoplazmične domene humanog CD300a (aminokiseline od 181 do 299 humanog CD300a; pristupni broj NP_009192.2). Rezultujuća stabilna ćelijska linija (Jurkat/AP1-Luc/ hPD1-hCD300a) je bila selekcionisana i održavana u RPMI/10% FBS/penicilinu/ streptomicinu/glutaminu kojima je bilo dodato 500ug/mL G418+1ug/mL puromicina.
[0206] Za drugu komponentu biotesta, Raji ćelije (ATCC, #CCL-86) su bile transdukovane sa humanim PD-L1 genom (aminokiseline 1-290 pristupnog broja NP_054862.1) koji je bio kloniran u lentivirusnom (pLEX) vektorskom sistemu (Thermo Scientific Biosystems, #OHS4735). Raji ćelije, pozitivne za PD-L1 (Raji/ hPD-L1) su bile izolovane pomoću FACS-a uz korišćenje PD-L1 antitela i održavane su u Iscove/10% FBS/penicilinu/streptomicinu/glutaminu kojima je dodato 1ug/mL puromicina.
[0207] Da bi se simulirala interakcija APC/T ćelija, bilo je upotrebljeno bispecifično antitelo sastavljeno od Fab kraka koji se vezuje za CD3 na T ćelijama i drugog Fab kraka koji se vezuje za CD20 na Raji ćelijama (CD3xCD20 bispecifično antitelo; npr. kao što je opisano u US20140088295). Prisustvo bispecifičnog molekula u testu rezultuje aktivacijom T ćelije i APC putem premošćavanja CD3 podjedinica na T-ćelijama CD20 endogeno izraženih na Raji ćelijama. Pokazano je da ligacija CD3 sa anti-CD3 antitelima dovodi do aktivacije T ćelija. U ovom biotestu, antitela koja blokiraju interakciju PD1/PD-L1 spasavaju aktivnost T-ćelija onemogućavajući inhibitornu signalizaciju i sledstveno dovodeći do povećane aktivacije AP1-Luc.
[0208] U biotestu baziranom na luciferazi, RPMI1640-u je bilo dodato 10% FBS, a penicilin/streptomicin/glutamin je bio korišćen kao medijum za test da bi se pripremile suspenzije ćelija i razređenja antitela kako bi se izvršila trijaža anti-PD-L1 monoklonskih antitela (mAbs). Na dan trijaže su bile određene EC50 vrednosti anti-PD-L1 mAbs, u prisustvu fiksne koncentracije CD3xCD20 bispecifičnog antitela (30 pM), kao i EC50 samog bispecifičnog antitela. Po sledećem redosledu, bile su dodate ćelije i reagensi u bele ploče sa 96 bunarčića i ravnim dnom. Za određivanja anti-PDL1 mAb EC50, prvo je bila pripremljena fiksna koncentracija CD3xCD20 bispecifičnog antitela (finalna 30 pM), pa je onda dodata u bunarčiće mikrotitarskih ploča. Onda je bilo dodat dvadeset serijskih razređivanja anti-PD-L1 mAbs i kontrola (finalne koncentracije u opsegu od 1.7 pM do 100 nM; plus bunarčići samo sa medijumom za testiranje). Za određivanje EC50 bispecifičnog antitela (samog), bispecifično antitelo, u finalnim koncentracijama u opsegu od 0.17 pM do 10 nM (plus bunarčići samo sa medijumom za testiranje), bilo je dodato u bunarčiće mikrotitarskih ploča. Posle toga je bilo pripremljeno 2.5x10^6/mL Raji/hPD-L1 ćelijske suspenzije, pa je bilo dodato 20 uL po bunarčiću (finalni broj ćelija/5x10^4 ćelija po bunarčiću). Ploče su bile ostavljene na sobnoj temperaturi (15-20 minuta), dok je bila pripremljena suspenzija od 2.5x10^6/mL Jurkat/AP1-Luc/hPD1 (ecto)-hCD300a(TM-Cyto). Bilo je dodato 20 uL Jurkat suspenzije (finalni broj ćelija/5x10^4 ćelija po bunarčiću) po bunarčiću. Ploče koje su sadržale ko-kulture su bile inkubirane 5 do 6 sati na 37°C u 5% CO2. Onda je bila detektovana aktivnost luciferaze posle dodavanja ONE-Glo™ (Promega, # E6051) reagensa, pa su bile izmerene relativne svetlosne jedinice (RLUs) na Victor luminometru. Svi uzorci su bili testirani u duplikatima.
[0209] RLU vrednosti za svako testirano antitelo su bile normalizovane podešavanjem uslova testa sa fiksnom (30 pM) koncentracijom CD3/CD20 bispecifičnog antitela, ali bez anti-PD-L1 antitela do 100%. Ovaj uslov odgovara maksimalnoj AP1-Luc reakciji pobuđenoj bispecifičnim molekulom u prisustvu PD-1/PD-L1 inhibitornog signala. Posle dodavanja anti-PD-L1 antitela, inhibitorni signal se sprečava, a povećana stimulacija je ovde prikazana kao Emax, procentualno povećanje signala u prisustvu najviše testirane doze antitela (100 nM). Da bi se uporedila potencija testiranih anti-PD-L1 antitela, koncentracija antitela za koju normalizovana RLU vrednost dostiže 125% aktivacije je bila određena iz četvoroparametarske logističke jednačine preko krive reakcije sa 12-tačaka uz korišćenje GraphPad Prism-a. Rezultati su sumirani u Tabeli 15.
Tabela 15: inhibicija AP1-Luc signalizacije zavisna od blokiranja PD-1/PD-L1 anti-PD-L1 antitelom
Antagonistički test koncentracije [M] Antagonistički test Emax Antitelo
antitela za 125% aktivacije srednja [%] @ 100nM H2aM8306N 3.78E-09 166.8 H2aM8307N N/A 87.7 H2aM8309N 3.09E-10 180.9 H2aM8310N N/A 112.8 H2aM8312N N/A 75.6 H2aM8314N 1.44E-11 234.9 H2aM8316N 1.47E-10 177.4 H2aM8317N N/A 109.2 H2aM8321N N/A 116.8 H2aM8323N 2.20E-10 173.3 H2aM8718N 1.51E-10 182.0 H1H9323P N/A 101.1 H1H9327P N/A 77.1 H1H9329P N/A 124.5 H1H9336P 9.81E-11 162.6 H1H9344P2 N/A 98.3 H1H9345P2 N/A 89.2 H1H9351P2 3.44E-10 154.4 H1H9354P2 N/A 89.9 H1H9364P2 7.93E-11 164.5 H1H9373P2 1.34E-10 150.2 H1H9382P2 N/A 86.5 H1H9387P2 1.86E-11 141.2 H1H9396P2 N/A 102.6 Antagonistički test koncentracije [M] Antagonistički test Emax Antitelo
antitela za 125% aktivacije srednja [%] @ 100nM H1H8314N 6.57E-11 147.9 H1H9364P2 1.62E-10 158.1 H1H9373P2 7.07E-11 152.5 mIgG2a izotipska
N/A 80.2 kontrola
hIgG1 izotipska
N/A 96.8 kontrola
hIgG4 izotipska
N/A 87.6 kontrola
N/A= nije primenljivo, jer se u testiranim koncentracijama ova antitela nisu aktivirala 125%
[0210] Kao što je prikazano u Tabeli 15, 14 od testiranih 27 anti-PD-L1 antitela prema pronalasku je blokiralo PD-1/PD-L1 inhibiciju sa Emax vrednostima u opsegu od 234.9 do 138.1. Trinaest od 27 anti-PD-L1 antitela prema pronalasku nije ispoljilo suštinski blokiranje interakcije PD1/PD-L1 kada su bila testirana u ovom testu.
Izotipske kontrole nisu remetile interakciju PD1/PD-L1.
Primer 9: In vivo efikasnost anti-PD-L1 antitela
[0211] Da bi se odredio efekat izabranog broja anti-PD-L1 antitela prema pronalasku u relevantnom in vivo modelu, bila je izvedena studija rasta tumora MC38.ova, koja je uključivala subkutano ubrizgavanje tumorskih ćelija i počela je tokom različitih dana, kod miševa koji su bili homozigotni za ekspresiju ekstracelularnog domena humanog PD-L1 umesto ekstracelularnog domena mišijeg PD-L1 (PD-L1 HumIn miševi) na bazi porekla 75% C57/BI6 / 25% 129 soja. MC38.Ova (mišiji adenokarcinom kolona) ćelije su bile genetski modifikovane tako da izražavaju pileći ovalbumin da bi se povećala imunogenost tumora, i da bi se omogućilo praćenje imunih reakcija T-ćelija sa dobro definisanim antigenim ovalbuminskim peptidima. U drugom koraku, MC38.Ova ćelije su bile transdukovane lentivirusnim vektorom koji izražava hPD-L1 pod SFFV promoterom. MC38.Ova ćelije pozitivne za hPD-L1 (MC38.Ova/hPD-L1) su bile izolovane pomoću FACS-a uz korišćenje hPD-L1-specifičnog antitela. Bilo je utvrđeno da ćelije izražavaju niske nivoe endogenog mišijeg PD-L1.
[0212] Za prvu studiju (studija #1), miševi su bili podeljeni na osnovu telesne težine u 5 tretiranih ili kontrolnih grupa (n=5 do 8 miševa po grupi). Na dan 0, miševi su bili anestezirani inhalacijom izoflurana, a onda im je ubrizgano subkutano u desni bok 1x10<6>MC38.ova/hPD-L1 ćelija u suspenziji od 100 uL DMEM. Tretiranim grupama je bilo intraperitonealno injektirano 500ug bilo kog od tri anti-PD-L1 antitela prema pronalasku, ili jedno od dva izotipska kontrolna antitela irelevantne specifičnosti u dane 3, 7, 10, 14, i 17 eksperimenta, dok je jedna grupa miševa ostala netretirana.
[0213] U drugoj studiji (studija #2), PD-L1 humanizovani miševi su bili podeljeni na slučajan način u 7 tretiranih grupa (n=5 do 6 miševa). Na dan 0, miševima je bilo subkutano implantirano 1x10^6 MC38.Ova/hPD-L1 ćelija. Miševima je bilo intraperitonealno dato REGN a-PD-L1 ab (H1H8314N ili H1H9364P2 ili H1H9373P2), ili izotipska kontrola abs hIgG4 mut ili hIgG1 u dozama od 10 mg/kg ili 5 mg/kg.
Grupama miševa je bilo dato antitelo u danima 3, 7, 10, 14, i 17. Zapremine tumora su bile praćene merenjem šestarom dva puta nedeljno tokom trajanja eksperimenta (21 dan). Eksperimentalni protokol doziranja i tretmana za grupe miševa je prikazan u Tabeli 16.
Tabela 16: Eksperimentalni protokol doziranja i tretmana za grupe miševa Dozirana količina u
Studija # Testirani uzorci svakom vremenskom Interval doziranja trenutku doziranja
Izotipska kontrola 1 500 μg Dani 3, 7, 10, 14, 17 H1H8314N 500 μg Dani 3, 7, 10, 14, 17 1 H1H9364P2 500 μg Dani 3, 7, 10, 14, 17
H1H9373P2 500 μg Dani 3, 7, 10, 14, 17 Izotipska kontrola 2 500 μg Dani 3, 7, 10, 14, 17 Izotipska kontrola 1 10 mg/kg Dani 3, 7, 10, 14, 17 H1H8314N 10 mg/kg Dani 3, 7, 10, 14, 17 H1H8314N 5 mg/kg Dani 3, 7, 10, 14, 17 2 H1H9364P2 10 mg/kg Dani 3, 7, 10, 14, 17
H1H9364P2 5 mg/kg Dani 3, 7, 10, 14, 17 H1H9373P2 10 mg/kg Dani 3, 7, 10, 14, 17 H1H9373P2 5 mg/kg Dani 3, 7, 10, 14, 17
[0214] Za studije, prosečne zapremine tumora su bile praćene merenjem šestarom dva puta nedeljno u toku trajanja eksperimenta (17 dana) i bilo je zabeleženo procentualno preživljavanje na kraju eksperimenta. Pored toga, broj miševa bez tumora je takođe bio određen na kraju studije. Rezultati, izraženi kao srednja zapremina tumora (mm<3>)(±SD), procentualno preživljavanje, i broj miševa bez tumora su prikazani u Tabelama 17 i 18.
Tabela 17: Srednja zapremina tumora, procentualno preživljavanje i brojevi miševa bez tumora u svakoj tretiranoj grupi iz studije # 1
[0215] Kao što je prikazano u Tabeli 17 za studiju #1, sva tri anti-PD-L1 antitela prema pronalasku su bila efikasna u podsticanju regresije tumora u dozi od 500ug/mišu, pri čemu su svi miševi iz tretiranih grupa koje su primile dva od antitela, H1H9364P2 i H1H9373P2, bili bez tumora na dan 17. U tretiranoj grupi koja je primila jedno od anti-PD-L1 antitela prema pronalasku, H1H8314N, 4 od 5 miševa je bilo bez tumora na dan 17, dok je 0 od 5 životinja bilo bez tumora u izotipskim kontrolnim grupama. Jednosmerna ANOVA sa Dunnett-ovim višestrukim poredbenim posttestom je otkrila značajnu razliku u zapreminama tumora između tretmana sa anti-PD-L1 antitelima prema pronalasku i izotipskog kontrolnog antitela sa p vrednosti <0.05.
Tabela 18: Srednja zapremina tumora, procentualno preživljavanje i brojevi miševa bez tumora u svakoj tretiranoj grupi iz studije # 2
14 19 108
H1H8314N 17 (4) 100% 100% 100% 100% 3/6 (50%) 2/5 (40%)
(15)922)(101)
18 23 34 231
H1H9364P2 100% 100% 100% 100% 5/6 (83%) 1/5 (20%)
(10) (10) (81)(238)
<25>37
H1H9373P2 10(8) 7 (16) 100% 100% 100% 100% 5/6 (83%) 3/5 (60%)
929) (59)
[0216] Kao što je prikazano u Tabeli 18, u studiji #2, administracija izabranih anti-PD-L1 antitela rezultovala je inhibicijom podsticanja regresije rasta tumora. Sva tri anti-PD-L1 antitela su bila efikasna u dozi od 10 mg/kg i dozi od 5 mg/kg, a podstaknuta regresija tumora kod tretiranih miševa je bila zavisna od doze u toku eksperimenta, dok je 0 od 5 životinja bilo bez tumora u kontrolnoj grupi. Jednosmerna ANOVA sa Tukey-ovim višestrukim poredbenim testom je otkrila značajnu razliku u zapreminama tumora između tretmana sa anti-PD-L1 antitelima i izotipskim kontrolnim antitelom sa p vrednosti <0.05 ili manjom.
Primer 10: Anti-tumorski efekti kombinacije anti-PD-L1 antitela i VEGF antagonista u mišijem modelu ranog lečenja tumora
[0217] Model ranog lečenja tumora je bio razvijen za testiranje efikasnosti kombinacije anti-PD-L1 antitela i VEGF antagonista. U ovom modelu, kombinovana terapija je davana odmah posle implantacije tumora. U eksperimentu se takođe koristilo samo anti-PD-1 antitelo i u kombinaciji sa VEGF antagonistom. Anti-PD-L1 antitelo upotrebljeno u ovom eksperimentu je bilo anti-PD-L1 monoklonsko antitelo sa VH/VL sekvencama antitela "YW243.55S70" prema US20100203056A1 (Genentech, Inc.), sa mišijim IgG2a i bilo je unakrsno reaktivno sa mišijim PD-L1. VEGF antagonist upotrebljen u ovom eksperimentu je bio aflibercept (himerični molekul baziran na VEGF receptoru, takođe poznat kao "VEGF-zamka" ili "VEGFR1R2-FcΔC1(a)," čiji kompletan opis je dat ovde na drugom mestu). AntiPD-1 antitelo upotrebljeno u ovom eksperimentu je bio anti-mišiji PD-1 klon "RPMI-14" sa pacovskim IgG2b (Bio X Cell, West Lebanon, NH).
[0218] Za ovaj eksperimentalni model, 1.0x10<6>tumorskih ćelija Colon-26 bilo je implantirano subkutano u BALB/c miševe na Dan 0. Počevši od Dana 3, pre stvaranja merljivih tumora, miševi su bili tretirani sa jednom od mono ili kombinovanih terapija, ili kontrolnom kombinacijom, kao što je navedeno u Tabeli 19.
Tabela 19: Eksperimentalne grupe za doziranje i tretman
Tretirana grupa Prvi agens Drugi agens Kontrolna kombinacija IgG2a izotipska kontrola (250 μg, IP) hFc kontrola (250 mg, SC) samo VEGF zamka IgG2a izotipska kontrola (250 μg, IP) Aflibercept (10 mg/kg, SC) samo anti-PD-1 anti-PD-1 mAb RPMI-14 (250 μg, IP) hFc kontrola (250 mg, SC) samo anti-PD-L1 anti-PD-L1 mAb (250 μg, IP) hFc kontrola (250 mg, SC) VEGF zamka anti-PD-1 anti-PD-1 mAb RPMI-14 (250 μg, IP) Aflibercept (10 mg/kg, SC) VEGF zamka anti-PD-L1 anti-PD-L1 mAb (250 μg, IP) Aflibercept (10 mg/kg, SC)
[0219] Različite terapije su bile davane u pet različitih vremenskih trenutaka u okviru dvonedeljnog perioda (tj. injekcije na Dan 3, Dan 6, Dan 10, Dan 13 i Dan 19).
[0220] Životinje u svakoj terapeutskoj grupi su bile ocenjene u pogledu pojave tumora, zapremina tumora, medijane vremena preživljavanja, i broja životinja bez tumora na Dan 50. Mera rasta tumora je sumirana na slici 2 (krive rasta tumora) i slici 3 (zapremina tumora na Dan 28). Rezultati su takođe sumirani u Tabeli 20.
Tabela 20: Miševi bez tumora posle tretmana
Br. životinja bez tumora
Tretirana grupa
zaključno sa Danom 50
Kontrolna kombinacija 0/10
samo VEGF zamka 3/10
samo anti-PD-1 4/10
samo anti-PD-L1 5/10
VEGF zamka anti-PD-1 7/10
VEGF zamka anti-PD-L1 9/10
[0221] Rast tumora je bio u suštini smanjen kod životinja tretiranih sa kombinacijom VEGF zamka anti-PD-L1 antitelo u poređenju sa režimima tretiranja koji su obuhvatali sam terapeutski agens (vidi slike 2 i 3). Pored toga, preživljavanje se u suštini povećalo u grupi sa VEGF zamkom anti-PD-L1 antitelom, sa 90% životinja koje su preživele bar dan 50 posle implantacije tumora. Nasuprot tome, za grupe sa anti-PD-L1 i VEGF zamka monoterapijom, preživljavanje do Dana 50 je bilo samo 50% i 30%, respektivno (vidi sliku 3 i Tabelu 20).
LISTA SEKVENCI

Claims (18)

Patentni zahtevi
1. Izolovano antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen koji se vezuju za humani protein ligand programirane smrti 1 (PD-L1), pri čemu se izolovano antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen sadrži tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR-a) varijabilnog regiona teškog lanca (HCVR) koji imaju aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 82, i tri CDR-a varijabilnog regiona lakog lanca (LCVR) koji imaju aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 90.
2. Izolovano antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema zahtevu 1, pri čemu antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen sadrže HCDR1 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 84, HCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO; 86, HCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 88, LCDR1 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 92, LCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 94 i LCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 96.
3. Izolovano antitelo ili fragment koji vezuje antigen prema zahtevu 1 ili 2, koji sadrže HCVR/LCVR par aminokiselinskih sekvenci SEQ ID NOs: 82/90.
4. Izolovano antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema bilo kom od zahteva 1-3, koje je IgG1 ili IgG4.
5. Izolovano antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema bilo kom od zahteva 1 - 4, pri čemu su antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen multispecifični molekul koji vezuje antigen.
6. Farmaceutska kompozicija koja sadrži izolovano antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen koji vezuju PD-L1 prema bilo kom od zahteva 1 - 5 i farmaceutski prihvatljivi nosač ili razređivač.
7. Izolovani polinukleotidni molekul koji kodira antitelo ili fragment koji vezuje antigen prema zahtevu 3.
8. Vektor koji sadrži polinukleotid prema zahtevu 7.
9. Ćelija koja izražava vektor prema zahtevu 8.
10. Postupak za proizvodnju anti-PD-L1 antitela ili njegovog fragmenta koji vezuje antigen, pri čemu pomenuti postupak sadrži kultivaciju ćelije prema zahtevu 9 pod uslovima koji dozvoljavaju proizvodnju antitela ili fragmenta, i sakupljanje tako proizvedenog antitela ili fragmenta.
11. Antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema bilo kom od zahteva 1-5 ili farmaceutska kompozicija prema zahtevu 6 za primenu u pojačanju imune reakcije kod subjekta ili za pojačanje aktivacije T ćelija kod subjekta.
12. Antitelo, njegov fragment koji vezuje antigen, ili farmaceutska kompozicija za primenu prema zahtevu 11, pri čemu subjekt ima tumor.
13. Antitelo, njegov fragment koji vezuje antigen, ili farmaceutska kompozicija za primenu prema zahtevu 11, pri čemu subjekt ima virusnu infekciju, opciono pri čemu je virusna infekcija HIV, HBV, HCV, HPV, LCMV ili SIV infekcija.
14. Antitelo prema bilo kom od zahteva 1 - 5 ili farmaceutska kompozicija prema zahtevu 6 za primenu u metodu inhibicije rasta tumora ili tumorske ćelije.
15. Antitelo, njegov fragment koji vezuje antigen, ili farmaceutska kompozicija za primenu prema zahtevu 12 ili 14, pri čemu tumor obuhvata karcinom bubrežnih ćelija, kancer mozga, karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata, kancer želuca, kancer bubrega, kancer dojke, kancer jajnika, kancer prostate, kancer ne-malih ćelija pluća, kolorektalni kancer, multipli mijelom ili melanom.
16. Antitelo, njegov fragment koji vezuje antigen, ili farmaceutska kompozicija za primenu prema zahtevu 14 ili 15, pri čemu su antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen, za administraciju subjektu u kombinaciji sa drugim terapeutskim agensom, pri čemu drugi terapeutski agens opciono sadrži NSAID, kortikosteroid, antitelo za ko-inhibitor T ćelija, antitelo za antigen specifičan za tumor, antitelo za PD-1, inhibitor indoleamin-2,3-dioksigelnaze, Ang2 inhibitor, kancersku vakcinu, EGFR inhibitor, TGFβ inhibitor, dijetetski suplement, kao što je antioksidans, VEGF antagonist, kao što je anti-VEGF antitelo, mali molekul inhibitor kinaze VEGF receptora ili VEGF-inhibirajući fuzioni protein, hirurgiju, zračenje, hemoterapeutski agens, citotoksični agens, ili njihovu kombinaciju.
17. Antitelo, njegov fragment koji vezuje antigen, ili farmaceutska kompozicija za primenu prema bilo kom od zahteva 11-16, pri čemu su antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen za subkutanu, intravensku, intradermalnu, intraperitonealnu, oralnu, intramuskularnu ili intrakranijalnu administraciju.
18. Antitelo, njegov fragment koji vezuje antigen, ili farmaceutska kompozicija za primenu prema bilo kom od zahteva 11-17, pri čemu su antitelo ili fragment koji vezuje antigen za administraciju u dozi od oko 0.1 mg/kg telesne težine do oko 60 mg/kg telesne težine subjekta.
RS20190468A 2014-01-23 2015-01-23 Humana antitela za pd-l1 RS58638B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461930582P 2014-01-23 2014-01-23
US201462089549P 2014-12-09 2014-12-09
EP15703380.4A EP3097120B1 (en) 2014-01-23 2015-01-23 Human antibodies to pd-l1
PCT/US2015/012595 WO2015112805A1 (en) 2014-01-23 2015-01-23 Human antibodies to pd-l1

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS58638B1 true RS58638B1 (sr) 2019-05-31

Family

ID=52463178

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190468A RS58638B1 (sr) 2014-01-23 2015-01-23 Humana antitela za pd-l1

Country Status (30)

Country Link
US (4) US9938345B2 (sr)
EP (2) EP3097120B1 (sr)
JP (2) JP2017507650A (sr)
KR (1) KR102182925B1 (sr)
CN (1) CN106103482B (sr)
AU (1) AU2015209238B2 (sr)
BR (1) BR112016016207B1 (sr)
CA (1) CA2937343C (sr)
CL (1) CL2016001879A1 (sr)
CY (2) CY1122005T1 (sr)
DK (2) DK3097120T3 (sr)
EA (1) EA034695B1 (sr)
ES (2) ES2711450T3 (sr)
HR (1) HRP20190749T1 (sr)
HU (2) HUE043672T2 (sr)
IL (1) IL246661B (sr)
LT (1) LT3097120T (sr)
ME (1) ME03642B (sr)
MX (1) MX373790B (sr)
MY (1) MY188355A (sr)
PH (1) PH12016501384B1 (sr)
PL (2) PL3097120T3 (sr)
PT (2) PT3473648T (sr)
RS (1) RS58638B1 (sr)
SG (1) SG11201605908WA (sr)
SI (1) SI3097120T1 (sr)
SM (1) SMT201900222T1 (sr)
TW (1) TWI680138B (sr)
UY (1) UY35965A (sr)
WO (1) WO2015112805A1 (sr)

Families Citing this family (343)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2009333580B2 (en) 2008-12-09 2016-07-07 Genentech, Inc. Anti-PD-L1 antibodies and their use to enhance T-cell function
EP2734205B1 (en) 2011-07-21 2018-03-21 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic protein kinase inhibitors
AU2013355054B2 (en) 2012-12-07 2017-08-24 Chemocentryx, Inc. Diazole lactams
AR095196A1 (es) 2013-03-15 2015-09-30 Regeneron Pharma Medio de cultivo celular libre de suero
AR097584A1 (es) 2013-09-12 2016-03-23 Hoffmann La Roche Terapia de combinación de anticuerpos contra el csf-1r humano y anticuerpos contra el pd-l1 humano
US10570204B2 (en) 2013-09-26 2020-02-25 The Medical College Of Wisconsin, Inc. Methods for treating hematologic cancers
MX375378B (es) 2013-09-27 2025-03-06 Genentech Inc Formulaciones de anticuerpos anti-pdl1.
TWI680138B (zh) * 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
SG10201900002QA (en) 2014-01-24 2019-02-27 Dana Farber Cancer Institue Inc Antibody molecules to pd-1 and uses thereof
EP3099717B1 (en) 2014-01-31 2019-03-27 Novartis AG Antibody molecules to tim-3 and uses thereof
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
US20150259420A1 (en) 2014-03-14 2015-09-17 Novartis Ag Antibody molecules to lag-3 and uses thereof
WO2016030455A1 (en) * 2014-08-28 2016-03-03 Medimmune Limited Anti-b7-h1 and anti-ctla-4 antibodies for treating non-small lung cancer
ES2771926T3 (es) 2014-09-13 2020-07-07 Novartis Ag Terapias de combinación
TWI716362B (zh) 2014-10-14 2021-01-21 瑞士商諾華公司 針對ｐｄ－ｌ１之抗體分子及其用途
HUE052606T2 (hu) * 2014-12-09 2021-05-28 Regeneron Pharma Humanizált differenciációs klaszter 274 génnel rendelkezõ nem humán állatok
CN108112254B (zh) 2015-03-13 2022-01-28 西托姆克斯治疗公司 抗-pdl1抗体、可活化的抗-pdl1抗体、及其使用方法
ES2739749T3 (es) 2015-05-18 2020-02-03 Tolero Pharmaceuticals Inc Profármacos de alvocidib que tienen biodisponibilidad aumentada
ES2904252T3 (es) 2015-05-21 2022-04-04 Chemocentryx Inc Moduladores de CCR2
MA44594B1 (fr) 2015-05-29 2020-09-30 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anticorps anti-ctla-4 et méthodes d'utilisation de ceux-ci
DK3317301T3 (da) 2015-07-29 2021-06-28 Immutep Sas Kombinationsterapier omfattende antistofmolekyler mod lag-3
TW202440904A (zh) 2015-08-04 2024-10-16 美商再生元醫藥公司 補充牛磺酸之細胞培養基及用法（二）
LT3353212T (lt) 2015-09-23 2021-12-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Optimizuoti anti-cd3 bispecifiniai antikūnai ir jų naudojimas
JP6954648B2 (ja) 2015-10-19 2021-10-27 シージー オンコロジー， インコーポレイテッド 併用療法による固形腫瘍又はリンパ系腫瘍の治療方法
EP3370768B9 (en) 2015-11-03 2022-03-16 Janssen Biotech, Inc. Antibodies specifically binding pd-1 and their uses
JP7126941B2 (ja) 2015-12-22 2022-08-29 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド がんを治療するための抗ｐｄ－１抗体と二重特異性抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３抗体の組合せ
CN106939047B (zh) 2016-01-04 2021-08-31 江苏怀瑜药业有限公司 一种pd-l1抗体及其制备方法
WO2017125815A2 (en) * 2016-01-22 2017-07-27 MabQuest SA Immunological reagents
KR20190003938A (ko) 2016-02-25 2019-01-10 셀 메디카 스위처란트 아게 면역치료를 위한 변형된 세포
WO2017152088A1 (en) 2016-03-04 2017-09-08 JN Biosciences, LLC Antibodies to tigit
JP6432121B2 (ja) 2016-03-04 2018-12-05 シチュアン ケルン−バイオテック バイオファーマシューティカル カンパニー リミテッド Ｐｄｌ−１抗体、その医薬組成物及びその使用
PL3426271T3 (pl) 2016-03-10 2025-11-24 Cg Oncology, Inc. Sposoby leczenia guzów litych terapią skojarzoną
CN116196412A (zh) * 2016-03-15 2023-06-02 中外制药株式会社 使用pd-1轴结合拮抗剂和抗gpc3抗体治疗癌症的方法
US11549099B2 (en) 2016-03-23 2023-01-10 Novartis Ag Cell secreted minibodies and uses thereof
CN109310677A (zh) 2016-04-07 2019-02-05 凯莫森特里克斯股份有限公司 通过联合施用ccr1拮抗剂与pd-1抑制剂或pd-l1拮抗剂降低肿瘤负荷
JP6979971B2 (ja) * 2016-05-09 2021-12-15 アイジーエム バイオサイエンシズ インコーポレイテッド 抗ｐｄ−ｌ１抗体
TWI755395B (zh) 2016-05-13 2022-02-21 美商再生元醫藥公司 抗-pd-1抗體與輻射治療癌症之組合
TWI781934B (zh) 2016-05-27 2022-11-01 美商艾吉納斯公司 抗-tim-3抗體及其使用方法
CN108350082B (zh) * 2016-06-13 2021-09-24 天境生物科技(上海)有限公司 Pd-l1抗体及其用途
JP7185530B2 (ja) 2016-06-13 2022-12-07 トルク セラピューティクス， インコーポレイテッド 免疫細胞機能を促進するための方法および組成物
KR102379464B1 (ko) 2016-06-20 2022-03-29 키맵 리미티드 항-pd-l1 항체
US9567399B1 (en) 2016-06-20 2017-02-14 Kymab Limited Antibodies and immunocytokines
WO2018029474A2 (en) 2016-08-09 2018-02-15 Kymab Limited Anti-icos antibodies
FI3478723T3 (fi) * 2016-06-29 2026-03-17 Checkpoint Therapeutics Inc Pd-l1-spesifisiä vasta-aineita ja niiden käyttömenetelmiä
CN109843921B (zh) * 2016-07-07 2023-05-26 艾欧凡斯生物治疗公司 程序性死亡1配体1(pd-l1)结合蛋白及其应用方法
EP3369745B1 (en) * 2016-08-04 2021-09-29 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Anti-pd-l1 nanobody and use thereof
KR20260030924A (ko) 2016-08-09 2026-03-06 키맵 리미티드 항-icos 항체
WO2018039499A1 (en) 2016-08-24 2018-03-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Host cell protein modification
CN109790220A (zh) 2016-08-25 2019-05-21 豪夫迈·罗氏有限公司 与巨噬细胞激活剂组合的抗csf-1r抗体的间歇给药
SG10201912663YA (en) 2016-10-11 2020-03-30 Agenus Inc Anti-lag-3 antibodies and methods of use thereof
HUE057559T2 (hu) 2016-11-02 2022-06-28 Jounce Therapeutics Inc PD-1 elleni antitestek és alkalmazásaik
EP3534947A1 (en) 2016-11-03 2019-09-11 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods
WO2018094275A1 (en) 2016-11-18 2018-05-24 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
EP3548515B1 (en) * 2016-12-01 2026-01-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled anti-pd-l1 antibodies for immuno-pet imaging
WO2018106862A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Agenus Inc. Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
JP7106538B2 (ja) 2016-12-07 2022-07-26 アジェナス インコーポレイテッド 抗体およびその使用方法
CA3040924A1 (en) 2016-12-09 2018-06-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for sequencing t cell receptors and uses thereof
US10611823B2 (en) 2016-12-14 2020-04-07 Hanssen Biotech, Inc CD137 binding fibronectin type III domains
WO2018111976A1 (en) 2016-12-14 2018-06-21 Janssen Biotech, Inc. Pd-l1 binding fibronectin type iii domains
NZ754187A (en) 2016-12-14 2026-02-27 Janssen Biotech Inc Cd8a-binding fibronectin type iii domains
CN108204958A (zh) * 2016-12-19 2018-06-26 伊缪泰普有限公司 结合测定
CN110072553B (zh) * 2016-12-22 2023-09-15 豪夫迈·罗氏有限公司 在抗pd-l1/pd1治疗失败之后抗csf-1r抗体与抗pd-l1抗体组合对肿瘤的治疗
CN108264561B (zh) * 2016-12-30 2021-09-10 惠和生物技术(上海)有限公司 一种结合cd19、cd3和t细胞负共刺激分子的三功能分子及其应用
CN110198954A (zh) 2017-01-13 2019-09-03 艾吉纳斯公司 与ny-eso-1结合的t细胞受体和其使用方法
AU2018211064A1 (en) * 2017-01-18 2019-09-05 Genentech, Inc. Idiotypic antibodies against anti-PD-L1 antibodies and uses thereof
CA3053348A1 (en) 2017-02-10 2018-08-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled anti-lag3 antibodies for immuno-pet imaging
WO2018150224A1 (en) * 2017-02-16 2018-08-23 Shenzhen Runshin Bioscience Anti-programmed death-ligand 1 (pd-l1) antibodies and therapeutic uses thereof
KR20240011262A (ko) 2017-02-21 2024-01-25 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 폐암의 치료를 위한 항-pd-1 항체
IL268836B2 (en) 2017-02-24 2024-04-01 Macrogenics Inc Bispecific binding molecules that are capable of binding cd137 and tumor antigens, and uses thereof
EP3366703B1 (en) * 2017-02-28 2019-04-03 Ralf Kleef Immune checkpoint therapy with hyperthermia
US11603407B2 (en) 2017-04-06 2023-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stable antibody formulation
JP7297672B2 (ja) 2017-04-13 2023-06-26 アジェナス インコーポレイテッド 抗ｃｄ１３７抗体およびその使用方法
RU2665790C1 (ru) * 2017-04-17 2018-09-04 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Моноклональное антитело к pd-l1
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
RS64576B1 (sr) 2017-05-01 2023-10-31 Agenus Inc Anti-tigit antitela i postupci njihove primene
JP2020522486A (ja) 2017-06-01 2020-07-30 サイトメックス セラピューティクス インコーポレイテッド 活性化可能抗ｐｄｌ１抗体、およびその使用方法
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
GB201709808D0 (en) 2017-06-20 2017-08-02 Kymab Ltd Antibodies
JP2020524694A (ja) 2017-06-22 2020-08-20 ノバルティス アーゲー がんの処置における使用のためのＩＬ−１β結合性抗体
WO2018235056A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag Il-1beta binding antibodies for use in treating cancer
WO2018237173A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
CN118307674A (zh) 2017-06-22 2024-07-09 诺华股份有限公司 针对cd73的抗体分子及其用途
EP3645738A4 (en) * 2017-06-25 2021-08-18 Systimmune, Inc. ANTI-PD-L1 ANTIBODIES AND METHOD FOR MANUFACTURING AND USING THEREOF
AU2018292618A1 (en) 2017-06-27 2019-12-19 Novartis Ag Dosage regimens for anti-TIM-3 antibodies and uses thereof
EA202090003A1 (ru) * 2017-07-06 2020-06-18 Мерус Н.В. Связывающие молекулы, модулирующие биологическую активность, которую проявляет клетка
KR102659791B1 (ko) 2017-07-06 2024-04-23 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 당단백질을 만들기 위한 세포 배양 과정
CN111163798A (zh) 2017-07-20 2020-05-15 诺华股份有限公司 用于抗lag-3抗体的给药方案及其用途
KR102880156B1 (ko) 2017-07-24 2025-11-05 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 항cd8 항체 및 이의 용도
TWI799432B (zh) * 2017-07-27 2023-04-21 美商再生元醫藥公司 抗ctla-4抗體及其用途
EP3661555B1 (en) 2017-08-01 2025-04-16 Ab Therapeutics, Inc. Bispecific antibodies and uses thereof
KR20200052327A (ko) 2017-09-04 2020-05-14 아게누스 인코포레이티드 혼합 계통 백혈병 (mll)-특이적 포스포펩타이드에 결합하는 t 세포 수용체 및 그것의 사용 방법
WO2019055579A1 (en) 2017-09-12 2019-03-21 Tolero Pharmaceuticals, Inc. TREATMENT REGIME FOR CANCERS THAT ARE INSENSITIVE TO BCL-2 INHIBITORS USING THE MCL-1 ALVOCIDIB INHIBITOR
WO2019059411A1 (en) * 2017-09-20 2019-03-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha DOSAGE FOR POLYTHERAPY USING PD-1 AXIS BINDING ANTAGONISTS AND GPC3 TARGETING AGENT
MX2020003204A (es) * 2017-09-20 2020-07-20 Regeneron Pharma Metodos de inmunoterapia para pacientes cuyos tumores portan una carga mutacional alta de un gen pasajero.
CN118267479A (zh) 2017-09-25 2024-07-02 凯莫森特里克斯股份有限公司 使用趋化因子受体2(ccr2)拮抗剂和pd-1/pd-l1抑制剂的联合治疗
AU2018348430B2 (en) * 2017-10-10 2025-09-04 Numab Therapeutics AG Antibodies targeting PDL1 and methods of use thereof
EP3700933A1 (en) 2017-10-25 2020-09-02 Novartis AG Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
ES2984919T3 (es) 2017-11-06 2024-10-31 Hoffmann La Roche Procedimientos diagnósticos y terapéuticos para el cáncer
BR112020010579A2 (pt) 2017-11-30 2020-11-10 Novartis Ag receptor de antígeno quimérico de alvejamento de bcma e usos do mesmo
EP3728314A1 (en) 2017-12-19 2020-10-28 Kymab Limited Bispecific antibody for icos and pd-l1
GB201721338D0 (en) 2017-12-19 2018-01-31 Kymab Ltd Anti-icos Antibodies
BR112020010615A2 (pt) 2017-12-22 2020-10-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. produto farmacêutico proteico, método e sistema para caracterizar impurezas de produto farmacêutico proteico e de fármaco de baixo peso molecular, método para produzir um anticorpo, anticorpo, e, usos do método e do sistema
CN115925943A (zh) 2017-12-27 2023-04-07 信达生物制药(苏州)有限公司 抗pd-l1抗体及其用途
CN109970856B (zh) 2017-12-27 2022-08-23 信达生物制药(苏州)有限公司 抗lag-3抗体及其用途
KR102845020B1 (ko) 2017-12-28 2025-08-12 난징 레전드 바이오테크 씨오., 엘티디. Pd-l1에 대한 항체 및 변이체
WO2019136210A1 (en) * 2018-01-04 2019-07-11 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials for treating cancer
TW201930591A (zh) 2018-01-08 2019-08-01 瑞士商諾華公司 用於與嵌合抗原受體療法併用之免疫增強rna
IL275898B2 (en) 2018-01-08 2025-05-01 Chemocentryx Inc Methods for treating solid tumors with CCR2 antagonists
US20190269664A1 (en) 2018-01-08 2019-09-05 Chemocentryx, Inc. Methods of treating solid tumors with ccr2 antagonists
US12398209B2 (en) 2018-01-22 2025-08-26 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating cancers with antagonistic anti-PD-1 antibodies
CN111655722A (zh) 2018-01-31 2020-09-11 瑞泽恩制药公司 用于表征药物产品杂质的系统和方法
EP3746116A1 (en) 2018-01-31 2020-12-09 Novartis AG Combination therapy using a chimeric antigen receptor
TW202311746A (zh) 2018-02-02 2023-03-16 美商再生元醫藥公司 用於表徵蛋白質二聚合之系統及方法
WO2019160956A1 (en) 2018-02-13 2019-08-22 Novartis Ag Chimeric antigen receptor therapy in combination with il-15r and il15
GB201802573D0 (en) * 2018-02-16 2018-04-04 Crescendo Biologics Ltd Therapeutic molecules that bind to LAG3
MX2020008988A (es) 2018-02-28 2020-09-28 Regeneron Pharma Sistemas y metodos para la identificacion de contaminantes virales.
CA3089655C (en) 2018-03-19 2026-01-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Microchip capillary electrophoresis assays and reagents
US12253490B2 (en) 2018-03-19 2025-03-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Microchip capillary electrophoresis assays and reagents
WO2019183093A1 (en) * 2018-03-19 2019-09-26 Abeome Corporation High affinity neutralizing monoclonal antibodies to programmed death ligand 1 (pd-l1) and uses thereof
US12259355B2 (en) 2018-03-19 2025-03-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Microchip capillary electrophoresis assays and reagents
JP7680208B2 (ja) 2018-04-04 2025-05-20 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗ｃｄ２７抗体およびその使用
US20210147547A1 (en) 2018-04-13 2021-05-20 Novartis Ag Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof
CN117568287A (zh) 2018-04-15 2024-02-20 深圳市亦诺微医药科技有限公司 结合pd-1的抗体及其用途
US11459393B2 (en) 2018-04-17 2022-10-04 Celldex Therapeutics, Inc. Anti-CD27 and anti-PD-L1 antibodies and bispecific constructs
MA52363A (fr) 2018-04-26 2021-03-03 Agenus Inc Compositions peptidiques de liaison à une protéine de choc thermique (hsp) et leurs méthodes d'utilisation
TW202016125A (zh) 2018-05-10 2020-05-01 美商再生元醫藥公司 用於定量及調節蛋白質黏度之系統與方法
MA52772A (fr) * 2018-05-24 2021-04-14 Janssen Biotech Inc Anticorps anti-tmeff2 monospécifiques et multispécifiques et leurs utilisations
AR126019A1 (es) 2018-05-30 2023-09-06 Novartis Ag Anticuerpos frente a entpd2, terapias de combinación y métodos de uso de los anticuerpos y las terapias de combinación
US20210214459A1 (en) 2018-05-31 2021-07-15 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
EP3810109B1 (en) 2018-05-31 2024-08-07 Peloton Therapeutics, Inc. Compounds and compositions for inhibiting cd73
UY38251A (es) 2018-06-01 2019-12-31 Novartis Ag Moléculas de unión contra bcma y usos de las mismas
CN112585166A (zh) 2018-06-23 2021-03-30 豪夫迈·罗氏有限公司 用pd-1轴结合拮抗剂、铂剂和拓扑异构酶ii抑制剂治疗肺癌的方法
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
DK3820573T3 (da) 2018-07-10 2023-10-23 Novartis Ag 3-(5-hydroxy-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidin-2,6-dion-derivativer og anvendelse deraf ved behandling af ikaros family zinc finger 2 (ikzf2)-afhængige sygdomme
TWI822815B (zh) * 2018-07-14 2023-11-21 財團法人生物技術開發中心 抗-人類ｐｄ-ｌ１之抗體及其用途
BR112021000673A2 (pt) 2018-07-18 2021-04-20 Genentech, Inc. métodos para tratar um indivíduo com câncer de pulmão, kits, anticorpo anti-pd-l1 e composições
WO2020020307A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 I-Mab Biopharma Co., Ltd. Anti-cd73 anti-pd-l1 bispecific antibodies
MY204234A (en) 2018-08-27 2024-08-16 Regeneron Pharma Use of raman spectroscopy in downstream purification
AU2019333047A1 (en) 2018-08-30 2020-12-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for characterizing protein complexes
WO2020051099A1 (en) 2018-09-03 2020-03-12 Genentech, Inc. Carboxamide and sulfonamide derivatives useful as tead modulators
US12331320B2 (en) 2018-10-10 2025-06-17 The Research Foundation For The State University Of New York Genome edited cancer cell vaccines
CN112638950B (zh) * 2018-10-22 2024-09-06 南通壹宸生物医药科技有限公司 一种双特异性抗体
WO2020092736A1 (en) 2018-10-31 2020-05-07 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials for treating cancer
EP3873532A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Novartis AG Dc-sign antibody drug conjugates
US12264189B2 (en) 2018-10-31 2025-04-01 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials for treating cancer
HUE067601T2 (hu) 2018-11-14 2024-10-28 Regeneron Pharma PD-1 inhibitorok intraléziós beadása a bõrrák kezelésére
US11034710B2 (en) 2018-12-04 2021-06-15 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. CDK9 inhibitors and polymorphs thereof for use as agents for treatment of cancer
SG11202104331YA (en) 2018-12-11 2021-05-28 Theravance Biopharma R&D Ip Llc Naphthyridine and quinoline derivatives useful as alk5 inhibitors
KR20210106437A (ko) 2018-12-20 2021-08-30 노파르티스 아게 3-(1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 유도체를 포함하는 투약 요법 및 약학적 조합물
WO2020128637A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1 binding antibodies in the treatment of a msi-h cancer
CN113227138A (zh) 2018-12-21 2021-08-06 诺华股份有限公司 IL-1β结合抗体的用途
BR112021011351A2 (pt) 2018-12-21 2021-11-16 Novartis Ag Uso de anticorpos il-1 beta no tratamento ou prevenção de síndrome mielodisplásica
WO2020127965A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Onxeo New conjugated nucleic acid molecules and their uses
EP3897613A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 Novartis AG Use of il-1beta binding antibodies
SG11202106768RA (en) * 2018-12-27 2021-07-29 Gigagen Inc Anti-pd-l1 binding proteins and methods of use thereof
CN111378044B (zh) * 2018-12-28 2022-07-15 长春金赛药业有限责任公司 抗体融合蛋白、制备方法及其应用
TW202515617A (zh) 2019-01-14 2025-04-16 美商建南德克公司 用於癌症療法之rna分子
ES2942024T3 (es) 2019-01-16 2023-05-29 Regeneron Pharma Métodos para caracterizar enlaces disulfuro
TWI756621B (zh) * 2019-01-25 2022-03-01 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司 新型雙特異性抗體分子以及同時結合pd-l1和lag-3的雙特異性抗體
WO2020159918A2 (en) 2019-01-28 2020-08-06 Ab Therapeutics, Inc. Bispecific antibodies and uses thereof
NZ778055A (en) 2019-02-12 2025-11-28 Sumitomo Pharma America Inc Formulations comprising heterocyclic protein kinase inhibitors
EP3924055B1 (en) 2019-02-15 2024-04-03 Novartis AG Substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
CN113490528B (zh) 2019-02-15 2024-12-03 诺华股份有限公司 3-(1-氧代-5-(哌啶-4-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其用途
MA55084A (fr) 2019-02-28 2022-01-05 Regeneron Pharma Administration d'inhibiteurs de pd-1 pour le traitement du cancer de la peau
MA55204A (fr) 2019-03-06 2022-01-12 Regeneron Pharma Inhibiteurs de la voie il-4/il-13 pour une efficacité améliorée dans le traitement du cancer
US11793802B2 (en) 2019-03-20 2023-10-24 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Treatment of acute myeloid leukemia (AML) with venetoclax failure
CA3133460A1 (en) 2019-03-22 2020-10-01 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Compositions comprising pkm2 modulators and methods of treatment using the same
CN109929037B (zh) 2019-04-01 2023-03-17 华博生物医药技术（上海）有限公司 针对程序性死亡配体的结合物及其应用
WO2020215020A1 (en) * 2019-04-18 2020-10-22 Qlsf Biotherapeutics Inc. Humanized anti-pd-l1 antibodies
BR112021020867A2 (pt) 2019-04-19 2022-01-04 Genentech Inc Anticorpos, ácido nucleico, vetor, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, usos do anticorpo, método de tratamento de um indivíduo com câncer e método para reduzir a depuração
EP3833691B1 (en) * 2019-04-26 2024-09-25 I-Mab Biopharma Co., Ltd. Human pd-l1 antibodies
EP3969908A1 (en) 2019-05-13 2022-03-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Improved competitive ligand binding assays
PE20220568A1 (es) 2019-05-21 2022-04-20 Novartis Ag Moleculas de union a cd19 y usos de las mismas
CN111606995B (zh) * 2019-06-04 2021-02-12 优睿赛思(武汉)生物科技有限公司 抗人pd-l1单克隆抗体及其应用
EP3983450A4 (en) * 2019-06-12 2023-07-05 Nanjing GenScript Biotech Co., Ltd. ANTI-PD-L1/ANTI-LAG-3 PROTEINS WITH MULTIPLE ANTIGEN BINDING AND METHODS FOR THEIR USE
IL288916B2 (en) 2019-06-21 2026-03-01 Regeneron Pharma Use of bispecific antigen-binding molecules that bind MUC16 and CD3 in combination with 4-1BB co-stimulation
CN118526580A (zh) 2019-06-21 2024-08-23 瑞泽恩制药公司 结合psma和cd3的双特异性抗原结合分子与4-1bb共刺激组合的用途
JP2022539208A (ja) 2019-07-03 2022-09-07 スミトモ ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド チロシンキナーゼ非受容体１（ｔｎｋ１）阻害剤およびその使用
US20220356255A1 (en) * 2019-07-15 2022-11-10 Capella Bioscience Ltd Anti-pd-l1 antibodies
CN110305906B (zh) * 2019-07-18 2021-11-12 山东大学第二医院 一种靶向pdl1的car嵌合受体的慢病毒载体及pdl1-car-t细胞
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
CN112409484B (zh) * 2019-08-22 2023-03-21 盛禾(中国)生物制药有限公司 多功能抗体、其制备及其用途
WO2021037007A1 (zh) * 2019-08-29 2021-03-04 荣昌生物制药(烟台)股份有限公司 抗pd-l1抗体及其应用
TW202122420A (zh) 2019-08-30 2021-06-16 美商艾吉納斯公司 抗ｃｄ９６抗體及其使用方法
US20220348651A1 (en) 2019-09-18 2022-11-03 Novartis Ag Entpd2 antibodies, combination therapies, and methods of using the antibodies and combination therapies
TW202124446A (zh) 2019-09-18 2021-07-01 瑞士商諾華公司 與ｅｎｔｐｄ２抗體之組合療法
EP4653865A3 (en) 2019-09-24 2026-02-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for chromatography use and regeneration
JP2022550420A (ja) * 2019-09-30 2022-12-01 ハーバー・バイオメド・（シャンハイ）・カンパニー・リミテッド 抗ｐｄ－ｌ１抗原結合タンパク質及びその応用
WO2021076543A1 (en) 2019-10-14 2021-04-22 Aro Biotherapeutics Company Epcam binding fibronectin type iii domains
CN114786682B (zh) 2019-10-14 2024-07-16 Aro生物疗法公司 结合cd71的纤维粘连蛋白iii型结构域
WO2021076574A2 (en) 2019-10-14 2021-04-22 Aro Biotherapeutics Company Fn3 domain-sirna conjugates and uses thereof
CN114786679A (zh) 2019-10-21 2022-07-22 诺华股份有限公司 具有维奈托克和tim-3抑制剂的组合疗法
TW202128191A (zh) 2019-10-21 2021-08-01 瑞士商諾華公司 Tim-3抑制劑及其用途
US12297451B1 (en) 2019-10-25 2025-05-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cell culture medium
WO2021087105A1 (en) 2019-10-30 2021-05-06 Duke University Immunotherapy with combination therapy comprising an immunotoxin
WO2021091964A1 (en) 2019-11-04 2021-05-14 Duke University Treatment for primary and metastatic cancer
CN115038718B (zh) * 2019-11-08 2024-07-02 山东先声生物制药有限公司 抗人程序性死亡配体-1（pd-l1）的抗体及其用途
CN112858678B (zh) * 2019-11-12 2023-10-27 上海奥普生物医药股份有限公司 一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒、制备方法及用途
CN114728905B (zh) 2019-11-13 2025-08-01 基因泰克公司 治疗性化合物及使用方法
WO2021102343A1 (en) 2019-11-22 2021-05-27 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Solid dose pharmaceutical composition
CN114728941A (zh) 2019-11-22 2022-07-08 施万生物制药研发Ip有限责任公司 作为alk5抑制剂的经取代的1,5-萘啶或喹啉
WO2021108548A1 (en) 2019-11-25 2021-06-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Sustained release formulations using non-aqueous emulsions
JP7802667B2 (ja) 2019-12-04 2026-01-20 江蘇康寧杰瑞生物制薬有限公司 腫瘍治療のための二重特異性融合タンパク質
MX2022007759A (es) 2019-12-20 2022-07-19 Novartis Ag Combinacion del anticuerpo anti tim-3 mbg453 y anticuerpo anti tgf-beta nis793, con o sin decitabina o el anticuerpo anti pd-1 spartalizumab, para el tratamiento de mielofibrosis y sindrome mielodisplasico.
JP2023510393A (ja) 2020-01-17 2023-03-13 ノバルティス アーゲー 骨髄異形成症候群または慢性骨髄単球性白血病の処置に使用するためのｔｉｍ－３阻害剤と低メチル化剤とを含む組合せ
MX2022008973A (es) 2020-01-21 2022-08-11 Regeneron Pharma Metodos de desglicosilacion para electroforesis de proteinas glicosiladas.
KR20210095781A (ko) 2020-01-24 2021-08-03 주식회사 에이프릴바이오 항원결합 단편 및 생리활성 이펙터 모이어티로 구성된 융합 컨스트럭트를 포함하는 다중결합항체 및 이를 포함하는 약학조성물
EP4097234A1 (en) 2020-01-28 2022-12-07 Université de Strasbourg Antisense oligonucleotide targeting linc00518 for treating melanoma
MX2022009391A (es) 2020-01-31 2022-09-26 Genentech Inc Metodos para inducir linfocitos t especificos para neoepitopo con un antagonista de union al eje de pd-1 y una vacuna de arn.
CN113318226A (zh) * 2020-02-28 2021-08-31 正大天晴药业集团股份有限公司 抗pd-l1抗体联合放射性射线治疗肺癌的方法
TW202204339A (zh) 2020-03-31 2022-02-01 美商施萬生物製藥研發 Ip有限責任公司 經取代的嘧啶及使用方法
EP4126965A4 (en) * 2020-05-14 2024-10-02 Elixiron Immunotherapeutics (Hong Kong) Limited ANTI-PD-L1 ANTIBODIES AND ANTI-PD-L1/IL10 FUSION PROTEINS
MX2022014734A (es) 2020-05-26 2023-03-15 Regeneron Pharma Metodos de tratamiento del cancer de cuello uterino mediante la administracion del anticuerpo inhibidor de pd-1 cemiplimab.
BR112022023989A2 (pt) 2020-05-26 2023-02-07 Boehringer Ingelheim Int Anticorpos anti-pd-1
BR112022024221A2 (pt) 2020-06-02 2022-12-20 Arcus Biosciences Inc Anticorpos para tigit
CN116323607A (zh) 2020-06-10 2023-06-23 施万生物制药研发Ip有限责任公司 用作alk5抑制剂的萘啶衍生物
AR122644A1 (es) 2020-06-19 2022-09-28 Onxeo Nuevas moléculas de ácido nucleico conjugado y sus usos
CN115916199A (zh) 2020-06-23 2023-04-04 诺华股份有限公司 包含3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物的给药方案
MX2023000197A (es) 2020-07-07 2023-02-22 BioNTech SE Arn terapeutico para el cancer positivo para vph.
TW202216778A (zh) 2020-07-15 2022-05-01 美商安進公司 Ｔｉｇｉｔ及ｃｄ１１２ｒ阻斷
US11787775B2 (en) 2020-07-24 2023-10-17 Genentech, Inc. Therapeutic compounds and methods of use
US20230271940A1 (en) 2020-08-03 2023-08-31 Novartis Ag Heteroaryl substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
CA3192204A1 (en) 2020-08-19 2022-02-24 Xencor, Inc. Anti-cd28 and/or anti-b7h3 compositions
JP2023540217A (ja) 2020-08-26 2023-09-22 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド Ｐｄ－１阻害剤を投与することによりがんを処置する方法
AU2021332355A1 (en) 2020-08-31 2023-03-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Asparagine feed strategies to improve cell culture performance and mitigate asparagine sequence variants
JP2023542490A (ja) 2020-09-03 2023-10-10 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド Ｐｄ－１阻害剤を投与することによりがん疼痛を処置する方法
AR123855A1 (es) 2020-10-20 2023-01-18 Genentech Inc Anticuerpos anti-mertk conjugados con peg y métodos de uso
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
AU2021374594B2 (en) 2020-11-04 2026-03-05 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and anti-cd79b antibody drug conjugates
CA3196539A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Chi-Chung Li Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
KR20230100732A (ko) 2020-11-04 2023-07-05 제넨테크, 인크. 항-cd20/항-cd3 이중특이성 항체의 피하 투여
US20240025993A1 (en) 2020-11-06 2024-01-25 Novartis Ag Cd19 binding molecules and uses thereof
JP2023551113A (ja) * 2020-11-06 2023-12-07 バイオ－テラ ソリュ－ションズ，エルティーディー． 二重特異性抗体及びその応用
WO2022104152A1 (en) * 2020-11-13 2022-05-19 SAB Biotherapeutics, Inc. Ungulate-derived polyclonal immunoglobulin specific for pd-l1 and uses thereof
WO2022115588A1 (en) 2020-11-25 2022-06-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Sustained release formulations using non-aqueous membrane emulsification
KR20230117162A9 (ko) 2020-12-02 2024-03-21 제넨테크, 인크. 신보조 및 보조 요로상피 암종 요법을 위한 방법 및 조성물
TW202237119A (zh) 2020-12-10 2022-10-01 美商住友製藥腫瘤公司 Ａｌｋ﹘５抑制劑和彼之用途
JP2024500409A (ja) 2020-12-17 2024-01-09 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド タンパク質封入マイクロゲルの作製
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
TW202342542A (zh) * 2020-12-23 2023-11-01 大陸商廣東菲鵬製藥股份有限公司 抗pd-l1抗體、編碼其的核酸、包含其的載體、細胞、藥物組合物及其用途
KR20230134117A (ko) 2021-01-20 2023-09-20 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 세포 배양물에서 단백질 역가를 개선시키는 방법
WO2022162569A1 (en) 2021-01-29 2022-08-04 Novartis Ag Dosage regimes for anti-cd73 and anti-entpd2 antibodies and uses thereof
KR20230141869A (ko) 2021-02-11 2023-10-10 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 신보조 요법으로서 pd-1 저해제의 투여에 의한 암 치료 방법
MX2023009774A (es) 2021-02-23 2023-10-30 Regeneron Pharma Metodos para tratar cancer de pulmon administrando un inhibidor de pd-1.
IL305156A (en) 2021-03-03 2023-10-01 Regeneron Pharma Systems and methods for quantifying and modifying protein viscosity
CN117321418A (zh) 2021-03-18 2023-12-29 诺华股份有限公司 癌症生物标志物及其使用方法
EP4313123A1 (en) 2021-03-23 2024-02-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cancer in immunosuppressed or immunocompromised patients by administering a pd-1 inhibitor
TW202304506A (zh) 2021-03-25 2023-02-01 日商安斯泰來製藥公司 涉及抗claudin 18.2抗體的組合治療以治療癌症
BR112023018665A2 (pt) 2021-03-26 2023-10-03 Regeneron Pharma Métodos e sistemas para desenvolvimento de protocolos de mistura
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
EP4323356A1 (en) 2021-04-13 2024-02-21 Nuvalent, Inc. Amino-substituted heterocycles for treating cancers with egfr mutations
CA3214552A1 (en) 2021-04-14 2022-10-20 Russell C. Addis Cd71 binding fibronectin type iii domains
BR112023021318A2 (pt) 2021-04-14 2023-12-19 Aro Biotherapeutics Company Conjugados de domínio fn3-sirna e usos dos mesmos
CA3213632A1 (en) 2021-04-30 2022-11-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for combination treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and anti-cd79b antibody drug conjugate
EP4330436A1 (en) 2021-04-30 2024-03-06 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods and compositions for cancer
US20220396623A1 (en) 2021-05-18 2022-12-15 Kymab Limited Uses of anti-icos antibodies
AR125874A1 (es) 2021-05-18 2023-08-23 Novartis Ag Terapias de combinación
WO2022251359A1 (en) 2021-05-26 2022-12-01 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Bicyclic inhibitors of alk5 and methods of use
EP4348234B1 (en) 2021-06-01 2026-04-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Microchip capillary electrophoresis assays and reagents
GB202107994D0 (en) 2021-06-04 2021-07-21 Kymab Ltd Treatment of cancer
EP4363449A2 (en) 2021-07-02 2024-05-08 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating cancer
JP2024525758A (ja) 2021-07-13 2024-07-12 ビオンテック・ソシエタス・エウロパエア がんのための併用療法におけるｃｄ４０およびｃｄ１３７に対する多重特異性結合剤
MX2024000406A (es) 2021-07-19 2024-04-18 Regeneron Pharma Combinacion de inhibidores de puntos de control y un virus oncolitico para el tratamiento del cancer.
CN118871463A (zh) 2021-07-28 2024-10-29 基因泰克公司 用于治疗癌症的方法和组合物
AU2022317820A1 (en) 2021-07-28 2023-12-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating cancer
US20230077710A1 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. HIGH-THROUGHPUT AND MASS-SPECTROMETRY-BASED METHOD FOR QUANTITATING ANTIBODIES AND OTHER Fc-CONTAINING PROTEINS
JP2024531800A (ja) 2021-09-20 2024-08-29 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 抗体の不均一性を制御する方法
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
WO2023051926A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 BioNTech SE Treatment involving non-immunogenic rna for antigen vaccination and pd-1 axis binding antagonists
CA3230985A1 (en) 2021-10-07 2023-04-13 Ross BROWNE Ph meter calibration and correction
WO2023059800A2 (en) 2021-10-07 2023-04-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods of ph modeling and control
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
CA3236367A1 (en) 2021-10-26 2023-05-04 Michelle Lafond Systems and methods for generating laboratory water and distributing laboratory water at different temperatures
WO2023080900A1 (en) 2021-11-05 2023-05-11 Genentech, Inc. Methods and compositions for classifying and treating kidney cancer
WO2023083439A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 BioNTech SE Tlr7 agonist and combinations for cancer treatment
TW202340212A (zh) 2021-11-24 2023-10-16 美商建南德克公司 治療性化合物及其使用方法
EP4436957A1 (en) 2021-11-24 2024-10-02 Genentech, Inc. Therapeutic indazole compounds and methods of use in the treatment of cancer
JP2025500922A (ja) 2021-12-16 2025-01-15 ヴァレリオ・セラピューティクス 新規のコンジュゲートされた核酸分子及びその使用
US20250152643A1 (en) 2022-02-17 2025-05-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Combinations of checkpoint inhibitors and oncolytic virus for treating cancer
CN119110809A (zh) 2022-02-23 2024-12-10 Xencor股份有限公司 抗CD28 x抗PSMA抗体
US20250177352A1 (en) 2022-03-14 2025-06-05 Laekna Limited Combination treatment for cancer
IL315548A (en) 2022-03-18 2024-11-01 Regeneron Pharma Methods and systems for analyzing polypeptide variants
IL315770A (en) 2022-04-01 2024-11-01 Genentech Inc Dosage for treatment with bispecific anti-FCRH5/anti-CD3 antibodies
WO2023187460A1 (en) * 2022-04-01 2023-10-05 Mabtree Biologics Ag Human antibody or antigen binding fragment thereof specific against pd-l1 to enhance t-cell function
EP4519326A1 (en) * 2022-05-04 2025-03-12 Janux Therapeutics, Inc. Tumor activated multispecific antibodies for targeting cd28 and pd-l1 and methods of use thereof
WO2023214325A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine derivatives and uses thereof as tet2 inhibitors
CN119317641A (zh) 2022-05-11 2025-01-14 基因泰克公司 针对用抗fcrh5/抗cd3双特异性抗体进行治疗的给药
US20250340641A1 (en) 2022-05-18 2025-11-06 Kymab Limited Uses of anti-icos antibodies
EP4537107A2 (en) 2022-06-07 2025-04-16 Genentech, Inc. Method for determining the efficacy of a lung cancer treatment comprising an anti-pd-l1 antagonist and an anti-tigit antagonist antibody
JP2025523020A (ja) 2022-07-13 2025-07-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ＦｃＲＨ５／抗ＣＤ３二重特異性抗体による処置のための投与
CA3261510A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 F. Hoffmann-La Roche Ag DOSAGE FOR TREATMENT WITH BISOPECIFIC ANTI-FCRH5/ANTI-CD3 ANTIBODIES
JP2025531738A (ja) 2022-09-01 2025-09-25 ジェネンテック， インコーポレイテッド 膀胱がんの治療方法及び診断方法
WO2024077095A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Genentech, Inc. Methods and compositions for classifying and treating bladder cancer
WO2024077166A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Genentech, Inc. Methods and compositions for classifying and treating lung cancer
WO2024091991A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for multiple myeloma
JP2025541738A (ja) 2022-12-01 2025-12-23 ビオンテック・ソシエタス・エウロパエア 抗ｐｄ１ａｂと化学療法での併用療法におけるｃｄ４０およびｃｄ１３７に対する多重特異性抗体
KR20250120305A (ko) 2022-12-14 2025-08-08 아스텔라스 파마 유럽 비.브이. Cldn18.2 및 cd3에 결합하는 2중 특이성 결합제와 면역 체크포인트 저해제를 수반한 조합 요법
EP4634659A1 (en) 2022-12-16 2025-10-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for assessing chromatographic column integrity
JP2026501282A (ja) 2022-12-20 2026-01-14 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｐｄ－１軸結合アンタゴニストおよびｒｎａワクチンを用いて膵臓がんを処置する方法
US20240245779A1 (en) 2023-01-25 2024-07-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modeling liquid protein composition stability
WO2024158961A1 (en) 2023-01-25 2024-08-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mass spectrometry-based characterization of antibodies co-expressed in vivo
WO2024160721A1 (en) 2023-01-30 2024-08-08 Kymab Limited Antibodies
US20240255519A1 (en) 2023-02-01 2024-08-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Asymmetrical flow field-flow fractionation with mass spectrometry for biomacromolecule analysis
EP4665410A1 (en) 2023-02-17 2025-12-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled anti-lag3 antibodies for immuno-pet imaging
US20240280551A1 (en) 2023-02-22 2024-08-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. System suitability parameters and column aging
WO2024216028A1 (en) 2023-04-12 2024-10-17 Agenus Inc. Methods of treating cancer using an anti-ctla4 antibody and an enpp1 inhibitor
WO2024218509A1 (en) * 2023-04-19 2024-10-24 Centessa Pharmaceuticals (Uk) Limited Activatable bispecific anti-cd28 and anti pd-l1 proteins and uses thereof
EP4701650A2 (en) 2023-04-26 2026-03-04 Isabella Pharma B.V. Methods of treating cancer by administering immunogenic compositions and a pd-1 inhibitor
EP4704808A1 (en) 2023-05-01 2026-03-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multidose antibody drug products using phenol or benzyl alcohol
WO2024233341A1 (en) 2023-05-05 2024-11-14 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
IL324490A (en) 2023-05-10 2026-01-01 Genentech Inc Methods and preparations for treating cancer
WO2024263195A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Genentech, Inc. Methods for treatment of liver cancer
WO2024263904A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Genentech, Inc. Methods for treatment of liver cancer
WO2025024257A1 (en) 2023-07-21 2025-01-30 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for cancer
WO2025049277A1 (en) 2023-08-25 2025-03-06 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating non-small cell lung cancer comprising an anti-tigit antagonist antibody and a pd-1 axis binding antagonist
TW202528736A (zh) 2023-09-08 2025-07-16 美商再生元醫藥公司 用於評估層析管柱完整性的方法及系統
WO2025056180A1 (en) 2023-09-15 2025-03-20 BioNTech SE Methods of treatment using agents binding to epcam and cd137 in combination with pd-1 axis binding antagonists
WO2025064403A2 (en) 2023-09-18 2025-03-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for developing chromatography protocols
CN121925272A (zh) 2023-09-29 2026-04-24 瑞泽恩制药公司 利用受控成核进行冻干
US20250114468A1 (en) 2023-10-09 2025-04-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cancer with a combination of a pd1 inhibitor and a targeted immunocytokine
WO2025085404A1 (en) 2023-10-16 2025-04-24 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for treating lung cancer
WO2025085594A1 (en) 2023-10-18 2025-04-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Rapid purification of monoclonal antibody from in-process upstream cell culture material
US20250145662A1 (en) 2023-11-02 2025-05-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing lipase activity using stress
WO2025117889A2 (en) 2023-11-30 2025-06-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cancer by administering a combination therapy including a neoadjuvant pd-1 inhibitor
WO2025120867A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and anti-vegfr2 antibodies
AR134560A1 (es) 2023-12-08 2026-01-28 Astellas Pharma Inc Terapia de combinación que implica agentes de unión biespecíficos que se unen a cldn18.2 y cd3 y agentes que estabilizan o aumentan la expresión de cldn18.2
WO2026033885A1 (en) 2024-08-08 2026-02-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and agents stabilizing or increasing expression of cldn18.2
WO2025120866A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and agents stabilizing or increasing expression of cldn18.2
TW202539700A (zh) 2024-01-16 2025-10-16 美商建南德克公司 用ｐｄ－１軸結合拮抗劑及ｒｎａ疫苗治療泌尿上皮癌之方法
WO2025166228A1 (en) * 2024-01-31 2025-08-07 D2M Biotherapeutics Limited Anti-il12p35 antibodies and uses thereof
WO2025166281A1 (en) 2024-02-01 2025-08-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Platform for charge-detection mass spectrometry analysis of aavs
WO2025174933A1 (en) 2024-02-14 2025-08-21 Genentech, Inc. Methods for treatment of pancreatic cancer with anti-pd-l1 ab, anti-tigit ab, gemcitabine and nab-placlitaxel
WO2025175164A1 (en) 2024-02-16 2025-08-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of producing concentrated formulated drug substances comprising proteins, and concentrated formulated drug substance made by the methods
TW202602489A (zh) 2024-03-15 2026-01-16 美商再生元醫藥公司 作為經穩定的蛋白質調配物之賦形劑的聚山梨醇酯及聚氧乙烯山梨糖醇酐
WO2025259840A1 (en) 2024-06-13 2025-12-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for scaled chromatography
WO2026008664A1 (en) * 2024-07-01 2026-01-08 Vib Vzw Allosteric modulators of inhibitory immune receptor complexes
WO2026025028A1 (en) 2024-07-26 2026-01-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of making ultra-high concentrated protein formulations using lyophilization
WO2026060350A1 (en) 2024-09-13 2026-03-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of improving photo stability and controlling formation of hmw species in biologic formulations, and biologic formulations produced by the methods
WO2026076201A2 (en) 2024-10-03 2026-04-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for producing therapeutic proteins using single pass tangential flow filtration for in-line concentration and volume reduction of production pools
WO2026080597A1 (en) 2024-10-08 2026-04-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Sustained delivery of biologics and non-aqueous manufacture of same

Family Cites Families (100)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2143491C (en) 1994-03-01 2011-02-22 Yasumasa Ishida A novel peptide related to human programmed cell death and dna encoding it
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US7087411B2 (en) 1999-06-08 2006-08-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fusion protein capable of binding VEGF
EP1210424B1 (en) 1999-08-23 2007-02-07 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Novel b7-4 molecules and uses therefor
EP1210428B1 (en) 1999-08-23 2015-03-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor
AU784634B2 (en) 1999-11-30 2006-05-18 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-H1, a novel immunoregulatory molecule
JP2004501631A (ja) 2000-06-28 2004-01-22 ジェネティックス・インスチチュート・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー Ｐｄ−ｌ２分子：新規ｐｄ−１リガンドおよびその使用
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
AR036993A1 (es) 2001-04-02 2004-10-20 Wyeth Corp Uso de agentes que modulan la interaccion entre pd-1 y sus ligandos en la submodulacion de respuestas inmunologicas
AU2002258941A1 (en) 2001-04-20 2002-11-05 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods of enhancing cell responsiveness
WO2003042402A2 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Agents that modulate immune cell activation and methods of use thereof
ES2350687T3 (es) 2002-07-03 2011-01-26 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Composiciones de inmunopotenciación.
JP2004104681A (ja) 2002-09-12 2004-04-02 Renesas Technology Corp 入力バッファ回路
US20040101920A1 (en) 2002-11-01 2004-05-27 Czeslaw Radziejewski Modification assisted profiling (MAP) methodology
CN1753912B (zh) 2002-12-23 2011-11-02 惠氏公司 抗pd-1抗体及其用途
US7563869B2 (en) 2003-01-23 2009-07-21 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Substance specific to human PD-1
EP1737890A2 (en) 2004-03-24 2007-01-03 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
KR100891620B1 (ko) 2004-04-13 2009-04-02 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-ｐ-셀렉틴 항체
WO2005103081A2 (en) 2004-04-20 2005-11-03 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
US8257740B1 (en) 2011-08-15 2012-09-04 Gp Medical, Inc. Pharmaceutical composition of nanoparticles
RU2494107C2 (ru) * 2005-05-09 2013-09-27 Оно Фармасьютикал Ко., Лтд. Моноклональные антитела человека к белку программируемой смерти 1 (pd-1) и способы лечения рака с использованием анти-pd-1-антител самостоятельно или в комбинации с другими иммунотерапевтическими средствами
US8246995B2 (en) 2005-05-10 2012-08-21 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Hydrophobic nanotubes and nanoparticles as transporters for the delivery of drugs into cells
WO2007002223A2 (en) 2005-06-20 2007-01-04 Medarex, Inc. Cd19 antibodies and their uses
CN104356236B (zh) 2005-07-01 2020-07-03 E.R.施贵宝&圣斯有限责任公司 抗程序性死亡配体1(pd-l1)的人单克隆抗体
CN102875681A (zh) 2005-07-08 2013-01-16 拜奥根Idec马萨诸塞公司 抗-αvβ6抗体及其用途
EP1820513A1 (en) 2006-02-15 2007-08-22 Trion Pharma Gmbh Destruction of tumor cells expressing low to medium levels of tumor associated target antigens by trifunctional bispecific antibodies
EP1997887B1 (en) 2006-03-03 2013-09-04 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Multimer of extracellular domain of cell surface functional molecule
ES2398076T3 (es) 2006-06-02 2013-03-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anticuerpos de alta afinidad contra el receptor de IL-6 humano
HRP20131167T1 (hr) 2007-06-18 2014-01-03 Merck Sharp & Dohme B.V. Antitijela za humani receptor programirane smrti pd-1
US20090028857A1 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
US9243052B2 (en) 2007-08-17 2016-01-26 Daniel Olive Method for treating and diagnosing hematologic malignancies
EP2195342A1 (en) 2007-09-07 2010-06-16 Ablynx N.V. Binding molecules with multiple binding sites, compositions comprising the same and uses thereof
PT2242773T (pt) 2008-02-11 2017-09-15 Cure Tech Ltd Anticorpos monoclonais para o tratamento de tumores
WO2009114335A2 (en) 2008-03-12 2009-09-17 Merck & Co., Inc. Pd-1 binding proteins
CN102203132A (zh) 2008-08-25 2011-09-28 安普利穆尼股份有限公司 Pd-1拮抗剂的组合物和使用方法
JP5794917B2 (ja) 2008-09-12 2015-10-14 アイシス・イノベーション・リミテッドＩｓｉｓ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｌｉｍｉｔｅｄ Ｐｄ−１特異抗体およびその使用
US8927697B2 (en) 2008-09-12 2015-01-06 Isis Innovation Limited PD-1 specific antibodies and uses thereof
KR101814408B1 (ko) 2008-09-26 2018-01-04 다나-파버 캔서 인스티튜트 인크. 인간 항-ｐｄ-１, ｐｄ-ｌ１, 및 ｐｄ-ｌ2 항체 및 그의 용도
KR101050829B1 (ko) 2008-10-02 2011-07-20 서울대학교산학협력단 항 ｐｄ-1 항체 또는 항 ｐｄ-ｌ1 항체를 포함하는 항암제
AU2009333580B2 (en) 2008-12-09 2016-07-07 Genentech, Inc. Anti-PD-L1 antibodies and their use to enhance T-cell function
WO2010089411A2 (en) 2009-02-09 2010-08-12 Universite De La Mediterranee Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof
JP5816170B2 (ja) 2009-06-26 2015-11-18 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 天然の免疫グロブリン形式を有する容易に単離される二重特異性抗体
EP3375791A1 (en) 2009-09-30 2018-09-19 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Combination immunotherapy for the treatment of cancer
WO2011066342A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Amplimmune, Inc. Simultaneous inhibition of pd-l1/pd-l2
NZ628923A (en) 2009-11-24 2016-02-26 Medimmune Ltd Targeted binding agents against b7-h1
SI2501817T2 (sl) 2010-02-08 2021-09-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Miš z navadno lahko verigo
TW201134488A (en) 2010-03-11 2011-10-16 Ucb Pharma Sa PD-1 antibodies
CN102892786B (zh) 2010-03-11 2016-03-16 Ucb医药有限公司 Pd-1抗体
JP2013532153A (ja) 2010-06-18 2013-08-15 ザ ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル インコーポレイテッド 慢性免疫病に対する免疫治療のためのｔｉｍ−３およびｐｄ−１に対する二重特異性抗体
DE102010025653B4 (de) 2010-06-30 2018-09-20 Kennametal Inc. Rotations-Schneidwerkzeug
CN103261217B (zh) 2010-11-11 2017-04-26 港大科桥有限公司 可溶性 pd‑1变体、融合构建体及其用途
KR101970025B1 (ko) * 2011-04-20 2019-04-17 메디뮨 엘엘씨 Ｂ7-ｈ1 및 ｐｄ-1과 결합하는 항체 및 다른 분자들
JP6240600B2 (ja) 2011-07-24 2017-11-29 キュアテク リミテッド ヒト化免疫モノクローナル抗体の変異体
JP6238459B2 (ja) 2011-08-01 2017-11-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｐｄ−１軸結合アンタゴニストとｍｅｋ阻害剤を使用する癌の治療方法
HRP20201595T1 (hr) 2011-11-28 2020-12-11 Merck Patent Gmbh Anti-pd-l1 protutijela i njihova uporaba
GB201120527D0 (en) 2011-11-29 2012-01-11 Ucl Business Plc Method
US20140370012A1 (en) 2012-01-27 2014-12-18 Gliknik Inc. Fusion proteins comprising igg2 hinge domains
KR102228296B1 (ko) * 2012-03-16 2021-03-17 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 히스티딘 공학처리된 경쇄 항체 및 그것을 생성하기 위한 유전자 변형된 비-사람 동물
AU2013256010B2 (en) * 2012-05-04 2018-01-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Affinity matured anti-CCR4 humanized monoclonal antibodies and methods of use
WO2013169693A1 (en) 2012-05-09 2013-11-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating cancer using an il-21 polypeptide and an anti-pd-1 antibody
US20130303250A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Ryan Moore Method of Playing a Card Game
CN113967253A (zh) 2012-05-15 2022-01-25 百时美施贵宝公司 通过破坏pd-1/pd-l1信号传输的免疫治疗
WO2013181452A1 (en) 2012-05-31 2013-12-05 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-l1 axis binding antagonists and vegf antagonists
AR091649A1 (es) * 2012-07-02 2015-02-18 Bristol Myers Squibb Co Optimizacion de anticuerpos que se fijan al gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
PL2904011T3 (pl) 2012-10-02 2018-01-31 Bristol Myers Squibb Co Połączenie przeciwciał anty-kir i przeciwciał anty-pd-1 w leczeniu raka
CA2889182A1 (en) 2012-10-26 2014-05-01 The University Of Chicago Synergistic combination of immunologic inhibitors for the treatment of cancer
TWI682941B (zh) 2013-02-01 2020-01-21 美商再生元醫藥公司 含嵌合恆定區之抗體
RU2718988C2 (ru) 2013-02-22 2020-04-15 Куревак Аг Комбинация противораковой рнк-вакцины и ингибитора пути pd-1 и ее применение
ES2812208T3 (es) 2013-03-14 2021-03-16 Bristol Myers Squibb Co Combinación de un agonista de DR5 y un antagonista de anti-PD-1 y métodos de uso
KR102389677B1 (ko) 2013-03-15 2022-04-21 제넨테크, 인크. Pd-1 및 pd-l1 관련 상태를 치료하기 위한 바이오마커 및 방법
JP6742903B2 (ja) 2013-05-02 2020-08-19 アナプティスバイオ インコーポレイティッド プログラム死−１（ｐｄ−１）に対する抗体
WO2014194293A1 (en) 2013-05-30 2014-12-04 Amplimmune, Inc. Improved methods for the selection of patients for pd-1 or b7-h4 targeted therapies, and combination therapies thereof
WO2014209804A1 (en) 2013-06-24 2014-12-31 Biomed Valley Discoveries, Inc. Bispecific antibodies
CA2916681A1 (en) 2013-07-16 2015-01-22 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and tigit inhibitors
CA2917858A1 (en) 2013-08-02 2015-02-05 Aduro Biotech Holdings, Europe B.V. Combining cd27 agonists and immune checkpoint inhibition for immune stimulation
CA2920113A1 (en) 2013-08-20 2015-02-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Treating cancer with a combination of a pd-1 antagonist and dinaciclib
AR097306A1 (es) 2013-08-20 2016-03-02 Merck Sharp & Dohme Modulación de la inmunidad tumoral
SG11201601763SA (en) 2013-09-20 2016-04-28 Bristol Myers Squibb Co Combination of anti-lag-3 antibodies and anti-pd-1 antibodies to treat tumors
US10570204B2 (en) 2013-09-26 2020-02-25 The Medical College Of Wisconsin, Inc. Methods for treating hematologic cancers
MX375378B (es) 2013-09-27 2025-03-06 Genentech Inc Formulaciones de anticuerpos anti-pdl1.
UA129760C2 (uk) 2013-12-17 2025-07-30 Дженентек, Інк. Анти-cd3 антитіло та спосіб його застосування
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
TWI680138B (zh) * 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
SG10201900002QA (en) 2014-01-24 2019-02-27 Dana Farber Cancer Institue Inc Antibody molecules to pd-1 and uses thereof
TWI754319B (zh) 2014-03-19 2022-02-01 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
JP2017515859A (ja) 2014-05-15 2017-06-15 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 抗ｐｄ−１抗体と他の抗癌剤の組み合わせを使用する肺癌の処置
US10092645B2 (en) 2014-06-17 2018-10-09 Medimmune Limited Methods of treatment with antagonists against PD-1 and PD-L1 in combination with radiation therapy
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
TWI716362B (zh) 2014-10-14 2021-01-21 瑞士商諾華公司 針對ｐｄ－ｌ１之抗體分子及其用途
CN108112254B (zh) * 2015-03-13 2022-01-28 西托姆克斯治疗公司 抗-pdl1抗体、可活化的抗-pdl1抗体、及其使用方法
WO2016191751A1 (en) 2015-05-28 2016-12-01 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of pd-l1 positive lung cancer using an anti-pd-1 antibody
CN114591433A (zh) 2015-07-13 2022-06-07 西托姆克斯治疗公司 抗pd-1抗体、可活化抗pd-1抗体及其使用方法
US9830706B2 (en) 2015-09-17 2017-11-28 Skycatch, Inc. Generating georeference information for aerial images
JP7126941B2 (ja) 2015-12-22 2022-08-29 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド がんを治療するための抗ｐｄ－１抗体と二重特異性抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３抗体の組合せ
KR20190003938A (ko) * 2016-02-25 2019-01-10 셀 메디카 스위처란트 아게 면역치료를 위한 변형된 세포
EP3548515B1 (en) * 2016-12-01 2026-01-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled anti-pd-l1 antibodies for immuno-pet imaging
HUE067601T2 (hu) * 2018-11-14 2024-10-28 Regeneron Pharma PD-1 inhibitorok intraléziós beadása a bõrrák kezelésére
MA55084A (fr) * 2019-02-28 2022-01-05 Regeneron Pharma Administration d'inhibiteurs de pd-1 pour le traitement du cancer de la peau
MA55204A (fr) * 2019-03-06 2022-01-12 Regeneron Pharma Inhibiteurs de la voie il-4/il-13 pour une efficacité améliorée dans le traitement du cancer

Also Published As

Publication number Publication date
DK3473648T3 (da) 2021-06-28
SMT201900222T1 (it) 2019-05-10
MX2016009444A (es) 2017-01-16
AU2015209238A1 (en) 2016-07-21
NZ721656A (en) 2020-10-30
HUE043672T2 (hu) 2019-09-30
TWI680138B (zh) 2019-12-21
US11117970B2 (en) 2021-09-14
US20210380702A1 (en) 2021-12-09
US20250092139A1 (en) 2025-03-20
JP2020115876A (ja) 2020-08-06
CA2937343A1 (en) 2015-07-30
JP2017507650A (ja) 2017-03-23
WO2015112805A1 (en) 2015-07-30
KR20160128309A (ko) 2016-11-07
EP3473648B1 (en) 2021-06-02
CY1122005T1 (el) 2020-10-14
CN106103482A (zh) 2016-11-09
CY1124437T1 (el) 2022-07-22
CL2016001879A1 (es) 2017-08-25
AU2015209238B2 (en) 2019-09-12
ME03642B (me) 2020-07-20
ES2711450T3 (es) 2019-05-03
TW201620936A (zh) 2016-06-16
MY188355A (en) 2021-12-02
EA034695B1 (ru) 2020-03-06
LT3097120T (lt) 2019-04-25
BR112016016207A2 (pt) 2017-10-03
PT3097120T (pt) 2019-05-08
PH12016501384A1 (en) 2016-08-15
US9938345B2 (en) 2018-04-10
ES2878091T3 (es) 2021-11-18
CN106103482B (zh) 2021-04-20
PL3097120T3 (pl) 2019-07-31
DK3097120T3 (en) 2019-03-18
HUE055465T2 (hu) 2021-11-29
EP3473648A1 (en) 2019-04-24
HRP20190749T1 (hr) 2019-08-23
IL246661B (en) 2019-05-30
KR102182925B1 (ko) 2020-11-25
EA201691487A1 (ru) 2016-12-30
EP3097120A1 (en) 2016-11-30
UY35965A (es) 2015-08-31
BR112016016207B1 (pt) 2023-10-24
US20180186883A1 (en) 2018-07-05
IL246661A0 (en) 2016-08-31
CA2937343C (en) 2022-08-16
JP7106594B2 (ja) 2022-07-26
US20150203580A1 (en) 2015-07-23
SG11201605908WA (en) 2016-08-30
PH12016501384B1 (en) 2016-08-15
PT3473648T (pt) 2021-07-12
EP3097120B1 (en) 2019-01-23
WO2015112805A8 (en) 2016-07-28
MX373790B (es) 2020-03-23
SI3097120T1 (sl) 2019-03-29
PL3473648T3 (pl) 2021-11-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20250092139A1 (en) Human antibodies to pd-l1
US20240316361A1 (en) Human Antibodies To PD-1
HK40070794A (en) Human antibodies to pd-1
HK1230213A1 (en) Human antibodies to pd-l1
HK1230213B (en) Human antibodies to pd-l1
NZ721656B2 (en) Human antibodies to pd-l1
HK1228406B (en) Human antibodies to pd-1