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" Procédé de préparation de composés de l'hormone du pancréas qui abaisse le sucre du sang ".
La préparation des composés de l'hormone du pancréas qui abaisse le sucre du sang à action à retardement est déjà connue.
C'est ainsi que suivant le procédé du brevet anglais 456 101, on obtient ces composés en faisant réagir l'hormone avec une protamine ou en la faisant réagir avec de la bis-2-méthyle-4- amino-chinolyl-6-carbamide ( Klin.Wo.1938 p.443 ). Cependant, ces composés ont l'inconvénient de la liaison de l'hormone avec une albumine de nature étrangère soit avec un produit in- troduit comme médicament qui n'est pas complètement indiffé- rent.
La Demanderesse a trouvé que l'on évite ces inconvénients
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en unissant l'insulhormone avec un corps préparé suivant un pro- cédé connu à partir des organes des animaux de boucherie sains, exempt d'albumine et complètement inerte vis-à-vis de l'orga- nisme humain, la psychosine, C23H45O7N ( Zeitschr.f. physiol.
Chemie.Tome 153, 1925 p. 76 ).
On a affaire, dans le cas de la psychosine, à un composé qui non seulement renferme un groupe basique à même de fixer le groupe acide de l'insulhormone dans le voisinage du point de neutralité, mais également un radical de sucre à groupes hydrox- yles accumulés, grâce auquel la psychclsine est soluble, après dissociation du composé avec l'insuline à proximité du point de neutralité, dans les humeurs du corps, mais également un groupe hydrophobe, notamment un radical hydrocarbure aliphatique à poids moléculaire élevé, facilement compatible, qui confère au composé la difficulté de solubilité nécessaire.
Opportunément, on réalise cette réunion en faisant réagir l'hormone avec la psychosine, éventuellement en présence de com- posés de métaux formant des complexes avec l'ammoniaque et fa- cilement solubles en présence d'ions de chlore, tels que par ex- emple le cuivre, le cobalt, le nickel et de préférence ceux qui n'accusent pas de changement de valences comme le zinc, en solu- tion aqueuse ou dans des solvants organiques aqueux, par exemple dans l'alcool dilué et en précipitant le composé formé opportu- nément en réglant le pH à 7, tandis que l'on peut augmenter le rendement à la précipitation de la solution eau-alcool en ajou- tant un solvant non miscible avec l'eau, tel que par exemple l'éther.
Que le produit précipité n'est pas un mélange mais un nouveau composé résulte du fait qu'au pH de 7 il est difficile- ment soluble, aussi bien dans lteau que dans l'alcool à 50 - 70 %, alors que les composants sont solubles même dans des con- ditions égales.
On emploie les nouveaux composés de préférence à l'état
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de suspensions à un pH de 7 environ et l'on peut se servir com- me agents de suspension en dehors de l'eau, de liquides organi- ques tels que la diéthyline et des huiles comme l'huile de ricin, l'huile de foie de morue, l'huile d'olive. Le nouveau composé d'insuline a une action " protrahibitive sans accuser toute- fois les inconvénients mentionnés ci-dessus des préparations d'insuline connues à action " protrahibitive ".
EXEMPLE 1..
On dissout 50 grammes d'insulhormone cristallisée ( 20 unités internationales par mgr. ) dans 19,88 ce d'acide chlorhy- drique ln/100. A la solution, on ajoute 60 ce de tricrésol et 160 cc d'une solution de 17 gr. de chlorhydrate de psychosine dans 1 litre. Après avoir mélangé convenablement, on fait arri- ver goutte à goutte la quantité de solution de potasse caustique n/10 suffisante pour obtenir, en agitant énergiquement, un pH de 6,4 à 7,2. Quand toutes ces opérations se sont accomplies dans des conditions stériles, on peut verser la suspension aqueu- se formée directement dans des ampoules stérilisées à capuchon en caoutchouc. Ces ampoules peuvent être utilisées immédiatement.
EXEMPLE 2 :
On procède comme dans l'exemple 1, mais en ajoutant au mélange 1 mg de zinc à l'état de solution de chlorure de zinc à 1/2 % avant de régler le pH à 7.
EXEMPLE 3 :
On dissout 50 mgr, d'insulhormone non cristallisée à 1.000 unités internationales dans 20 ce d'acide chlorhydrique n/100 qui renferme par litre 3 ce de tricrésol. En agitant énergique- ment, on ajoute 25 mgr de base de psychosine finement pulvéri- sée et l'on agite le mélange en réaction énergiquement jusqu'à dissolution complète. On peut faire subir au mélange de la réac- tion le traitement complémentaire de l'exemple 1 ou 2.
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. EXEMPLE 4 :
On dissout 50 mgr, d'insulhormone dans 20 ce d'acide chlor- hydrique n/100 qui renferme 0,3 % de tricrésol et, en agitant fortement, on verse goutte à goutte la quantité suffisante de solution de potasse caustique n/10 pour obtenir un pH de 7,1.
Il se produit alors à un pH de 4 à 6 un précipité qui se redis- sout au pH de 7. On traite cette solution par 0,16 cc d'une solution de base de psychosine libre qui renferme 15,5 mgr. par ce en agitant énergiquement et l'on fait subir à la suspension qui se forme le traitement complémentaire de l'exemple 1.
EXEMPLE 5 :
On dissout 200 mgr, d'insulhormone à 60 gammas par unité dans 20 cc d'alcool à 70 % qui renferme 10 co dtacide chlorhy- drique normal par litre.
On dissout ensuite 11 mgr. de base de psychosine, en agi- tant énergiquement, dans cette solution et ensuite on y fait arriver goutte à goutte en continuant à agiter suffisamment de solution n/10 de potasse caustique pour obtenir un pH de 6,9 à 7,1. On sépare par centrifugation le précipité du nouveau oom- posé qui se forme avec un mélange d'alcool et d'éther (1 : 1) et ensuite on lave avec de l'éther se(%.. Après séchage à l'ex- siccateur, le précipité pèse 148 mgr.
Du filtrat, on peut, en ajoutant la quantité d'alcool à 96 % requise pour que le densimètre accuse une teneur de 90 % en esprit de vin et en mélangeant ensuite 1,5 partie en volume dtéther, isoler encore 88 mgr, du nouveau composé.
On peut mettre cette poudre en ;suspension dans une solu- tion physiologique de sel de cuisine ou dans une solution de Ringer d'un pH de 7 ou dans la diéthyline ou l'huile de ricin.
Si les processus se sont déroulés dans des conditions de stéri- lité on peut verser ces suspensions dans des ampoules stériles.
Les suspensions dans l'huile, particulièrement, se caractérisent
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par leurs propriétés spéciales de conservation, même dans les régions tropicales.
EXEMPLE 6 : On dissout 600 mgr. d'insuline è. 18 unités/mgr dans 45 cc d'acide chlorhydrique n/100 et ensuite on règle au pH de 7,1 avec une solution diluée de soude caustique. Le précipité d'in- suline qui s'est formé entretemps au pH de 5 se redissout com- plètement. A cette solution, on mélange 100 mgr. de base de psychosine dissoute dans 30 cc de chloroforme, en agitant éner- giquement, dans un entonnoir à décantation ou dans une agita- trice. Il se forme un précipité floconneux d'insuline psychosine que l'on sépare après avoir réglé le pH du liquide à 6,7 - 7,2, par exemple par centrifugation ou d'une autre manière habituel- le et que l'on sèche, par exemple, en lavant avec de l'alcool et de l'éther.
La préparation de psychosine-insuline obtenue donne une forte réaction d'hydrate de carbone suivant Molisch.
EXEMPLE 7 :
On dissout 600 mgrs. d'insuline à 18 unités par mgr. dans 45 cc d'acide chlorhydrique n/100 et l'on établit le pH à 7 avec une solution de soude caustique à 7,1; l'insuline qui s'est précipitée entretemps à un pH de 5 environ se redissout. On a- joute à cette solution tout dtabord 160 cc d'alcool à 96 % et ensuite une solution de 72 mgr. de base de psychosine dans 300 ce d'éther. Il se produit un fort trouble qui en l'espace de quelques minutes se transforme en précipité floconneux que l'on peut séparer par les méthodes connues, par exemple par centri- fugation, et que l'on peut sécher.
EXEMPLE 8 :
Pour démontrer la possibilité de la précipitation de la psychosine-insuline également dtune solution acide, on dissout 1,8 grammes d'insuline à 20 unités par mgr. et 216 mgrs de base de psychosine dans 60 cc d'eau distillée en ajoutant suffisam-
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ment d'acide chlorhydrique pour qu'il se forme directement une solution claire. On établit alors le pH avec une solution al- caline, à 4,0 environ et l'on précipite en ajoutant 100 cc d'al- cool à 96 % et 180 ce d'éther. Le précipité séparé et séché de façon connue donne une forte réaction de Molisch; on peut le dissoudre dans de l'acide chlorhydrique n/loo et le précipiter à un pH de 6,6 à 7,2 environ.
REVENDICATIONS.
1.) Procédé de préparation de composés de l'hormone du pancréas qui abaisse le sucre du sang à action à retardement, caractérisé par le fait que l'on fait réagir l'hormone avec de la psychosine, éventuellement en présence de composés de métaux qui forment des complexes avec l'ammoniaque et qui sont facile- ment solubles en présence d'ions de chlore, tels que par exem- ple le cuivre, le cobalt, le nickel mais de préférence de métaux qui n'accusent pas de changements de valences comme le zinc.
2.) Forme de réalisation du procédé suivant la revendica- tion 1, caractérisée par le fait que :La réaction s'accomplit en solution aqueuse ou en solution eau-alcool.
3.) Forme de réalisation du procédé suivant les revendi- cations 1 - 2, caractérisée par le fa.it que l'on utilise le chlo- rure de zinc comme composé métallique.
4. ) Forme de réalisation du procédé suivant les revendi- cations 1 à 3, caractérisée par le fait que l'on emploie de la psychosine comme base libre.
5.) Forme de réalisation du procédé suivant les revendioa- tions 1 à 4, caractérisée par le fait que l'on précipite le pro- duit de la réaction en établissant le pH à 7.
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