BE551421A

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Info

Publication number: BE551421A
Authority: BE

Description


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  La présente invention a pour objet un procédé 
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 de"propagation de composas saturés ou non saturés, oxygénés en lle de l4 hydroKy¯9a¯halogéno¯prëgnan<2S et do leurs dérivés fonctionnels. Ces nouveaux 14-hydrcxy-prëgnanes et leurs dérivés, par exemple la llta-hydE'osy-9a¯fiuoro-hydîiocor1îi- sone et la i4a-hydroxy-ga-fluorocortisone présentent une ' 
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 efficacité accrue par rapport aux composée non hydroxylés en 

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 position 14. 
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  Selon le présent procéda ces nouveaux l4-.hydroxy-' pr6gnanes,nont obtenus en soumettant des HW8¯9a-hal.Qgô'no- prégnanes saturés ou non saturés, oxygénés en 110 à 3.''action aérobie d*enzymes de champignons, des genres Igucor, Hel1costylum, Pleospora ou Curvalaria. 



  Les 14-H-9a-halogéno-prégnane oxygénés en il, notamment le 14-H-9a-fluo:t'o-prégnane ,'J le ll..H-9a-Q.-hloro... prégnane utilisés comme substances de départ présentait des hydroxyles ou des groupes oxo libres ou fonct:to1±tneJ.10ment modifiés, de préférence en position 3 et 20.  Ils   peuvent être saturés ou renfermer des doubles liaisonspar exemple en 
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 position 1 et/ou 4, ainsi guten position 5, 6p 7 ou 16> ou porter encore des   substituants,   tels que des hydroxyles ou des groupes oxo libres ou   modifias,   ou d'autre part des groupes époxy ou des atomes   d'halogène..,   par exemple en position 2, 4, 
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 5,6,7,8,15,16,17 ou 21, ou des groupes méthyllqves,

   par exemple en position   17[alpha].   Les substances de départ indiquées ci-dessus sont de n'importe quelle configuration stérique et peuvent 
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 aussi être à l'état de racématea. Elles comprennent également les composés des séries dites nor et/ou homo, notamment   les   19-nor- et D-homo-composés.

   Des substances de départ parti-   culièrement   importantes sont, par   exemple, les     9a-fluoro-   et 
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 les 9a-chloro-dérlvês de l'hydrocortisone, de la cortisone, de la oorticoatérone, de la 11-d6hydro-cortleostéranee les 

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 1-déhydro- et 21-oxo-composés correspondants 9 tôls que les 9c6-fluoro- et les 9a-chloro-dér1véa de la l-déhydro-hydro- cortisone, de la 1-débydro-cortlooneo de la l-déhydro-oort1p costéronep de la ijll-bis-âéhydro-corticostérone, d la 11- hydroxy- et de la 11-o;to-progestéronep de la Ilp-1-iyclroxy- et de la ll-oxo -17a-hydroxy -progestérone, <Se la l-dhyro-'llp" hydroxy- et -Il-o2ò¯progssttéron âs de la 1-(Mb.yÓho...11..17a- dihydroxy- et de la l-.déhydro-.ll'-oxo-17c;'-hy0-ï'oxy-ppogestéyone. 



  Dans les substances de départ l'hy.d?oxy3.e foctiotT<sllemem 
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 modifié est par exemple un hydroxyle estérifié, par exemple 
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 par un acide carboxylique 'al1phatiqua aromatique ou hétéro- cyclique, par exemple par les acides acétique, propion1que, benzoïque ou furanne-carboxylique, ou un hydroxyle éthérifié, par exemple le groupe tétrahydropyranyloxy bsnayloscy ou tri- phénylméthoxy. Le groupe'oxo .fonl,)t1onnellment modifié est sVantaget1Erement un groupe oxo céta11aé dérivant notamment d'un a10601 dîvalpnt, par exemple le groupe éthyln.'la1oXY. 
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  Selon le présent procédé les substances de départ définies ci-dessus sont amenées à réagir sur des enzymes de 
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 champignons des genres Mucor, ilalloostylum, Pleospora ou Curvular:1.ag notamment des espèces triucor griseocyanus;, Mucor parasit1cus, Helicostylum piriforme, Pleospora gaeuman1 et 
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 Curvularia pallescens. Pour leur obtention sont appropriés les milieux utilises habituellement à cet effets par exemple ceux renfermant des sucres, comme le glucose ou le lactose., 

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 des   peptones,   de   l'eau   de gonflement du mais, des   produita   du sojaet des produits analogues, ainsi que des sels minéraux ou d'autre part des solutions nutritives synthétiques.

   On travaille notamment dans des conditions aérobies* par exemple en   culture   d'agitation; ou, dans le cas d'une croissance   Immergée,   avec agitation et amenée d'air. Les champignons   indiqués   se différencient d'autres   microorganismes,   par exemple des bactéries, par leur bonne croissance dans des conditions de culture relativement   simples.   La réaction con- forme au procédé a lieu dans la culture de champignon décrite ou à l'aide des enzymes qu'elle renferme, le cas   échéant   après enrichissement ou   séparation     ainsi:

    dans le cas le plus   simple.,   dans une suspension du mycélium   séparer   du mycélium homogénéisé ou dans des filtrats ou des extraits aqueux du   mycélium.   



   La séparation des produits du procédé peut avoir lieu par exemple en extrayant le mélange réactionnel avec un solvant organique, par exemple avec du chlorure de méthylène ou de l'acétate   d'éthyle.   Pour purifier davantage l'extrait ainsi obtenu, sont notamment appropriées la chromatographie, par exemple sur de l'oxyde d'aluminium ou sur du gel de silice, l'utilisation de méthodes de répartition, par exemple le procédé à contre-courant, ou la séparation à   l'aidé   de réactifs de Girard, tels que le chlorure de triméthyl-acét- hydrazide-ammonium ou le chlorure d'acéthydrazide-pyridinium. 

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  Après la purification ou à &a placer on effectué finalement une reorictallisation, de préférence dans des solvants or- 
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 ganiques ou dans des solvants organiques aqueux. 
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  Par introduction de l'hydroxyle en 14 on parvient à de précieux 14-hydroxY-9a-halogéno-prégnanea oxygénés en 11, et à leurs dérivés qui, comparée aux composés thérapeu- tiquement actifs qui ne sont pas hydrozvl6a en position 14e 
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 se caractérisent par une efficacité accrue. Par composés oxygénés et leurs dérivés fonctionnels, on entend ceux qui renferment des hydroxyles ou des groupes oxo libres ou fane- 
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 tlonnellerùênt modifiés, tels que par exemple les esters, êtheray thîoesters$ thioéthara, thiol- et thlon-eotera, acétals, mercaptals, cétals, les dérivés énoliques tels que les ecté?ra dnolîquooo les éthers dnolîqucs ou les énamines, les By<3ra zones, aemi-oarbazones et analogues.

   Parmi les produits du procédés il y a lieu de citer notamment les 9a-fluoro- et 9a-chloro- dérivés de la 14a-hydroxy-hydrocortisone, de la 14a-hydroxy. 



  . cortisone,\' de la I4a-hy<3roxy-corticoatéron@# de la l4a-hydro'- xy¯ll-déh3?clro¯corticostéronej de la l4a<-hydroxy-l-déhydro- hydrocortisone, de la 14a-hydroxy-1-déhydro-cortîzone, de la l4a-hydroxy--l-<3éhydro-oorticostéron< de la l4a-hydro-lll- b1a-dhydro-cortioostérone, de la 14a,11-dihYdroxy- et de la 14a-hydroxy-l1-oxo-progeatérone, de la 14a.119,17a"tri- hydroxy- et de la l4a,17a-dihydroxy¯ll-o.xo-progestérone, de la l4a;,llp-dihydroxy- et de la 14a-hydroxy-ll-oxo-l-déhydro- 

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 progestérone de la 14a,11t3,17a-trioxo- êt de la 11Ct" 17a- <3ihydro.3y-ll'-oxo-l-dhy<3ro-'progestéronep ainsi que 108 dérivés fonctionnels correspondants, tels que leurs esters et leurs éthers.

   Pour autant que les produits du   procédé   ne présentent 
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 pas la configuration et les substituants des stéroïdes théra- peutiquement utilisables, ils peuvent être utilises comme produits intermédiaires pour leur préparation; par exemple pour la préparation des composés indiques   ci-dessus.   



   Les produits réactionnels obtenus   conformément '   au procédé peuvent être   transformés  d'une manière connue en elle-même, en leurs dérivés fonctionnels tels que les dérivés oxygénés, soufiés ou   azotés,   par exemple en esters, 
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 éthers, esters énoliques, éthers énol1quesy cétals, thîo6thorz, et thlocétals, ainsi qu'en hydrazor-es, oximes et diiamînez.4 les hydroxyles peuvent être 6ebh'drogénés en groupes oxo. 



  Dans ces composés, les   hydroxyles!   et/ou les groupes oxo peuvent être totalement ou partiellement modifiés du point de vue fonctionnel. 



   Dans les esters et les esters énoliques, les restes d'acides sont ceux d'acides organiques ou inorganiques quelconques, par exemple les restes d'acides carboxyliques, 
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 thloncarboxyliques, thiolcarboxyliques ou sulfoniques aliphatiques, alicycliques, araliphatiques, aromatiques .ou hé térocy cliques, de préférence les restes des acides 1 formique, acétique, des acides chloracétic!Ué6; trifluoraoétique, 

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 p'op1oniQua, des acides butyriques;

   des acides valérianiques, des acides trimëthylacetique., dléthlilacétique, des acides caproïques, des acides oenanthiques" des acides capl'liq1.tea.? des acides palmitiques, des acides crotoniquee undéoanlque9 undécylénique, oxalique., succiniquep plastiques aaléïque, lactique des acides carbamiques des acides a.coy;a:bos.y:L3.ques, des acides t3-oyclopentylprop1on1.(IUe3 he^aFaycrobeîsoi'gu, bensoïque, phay,acb3.que, oyclolie,,-.ylac6tîque,  Ses acides phëny3.propioniqu<SËj. des acides tvtméthylgall1que, phtalique. fuyanne-2-oarboliquej, .uOii.cOJ:à3.Ques mhaz3e-;u.f'r.lcue,   toluène-sulfonique,   des acides sulfuriques, des hydracides halogènes ou des acides phosphoriques. 



   Si on le désira on peut, dans les composés obtenus, transformer en groupes libres les hydroxyles ou les 
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 groupes oxo tonct1onnelleme!1t modifiés. De cette manière on peut aussi mettre partiellement un liberté les groupes 03.C:'OYà.3?>â2 modifiés notamment dans les dér1é poly- substitués. Cela a lieu, par exemple, par hydrolyse chimique ou enzymatique, par exemple en utilisant des agents acides 
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 ou baalqu-as# par alcoolyse ou par acétalisatlon couplée. 



  A partir des dérivés obtenus de cette manière ou aussi directe- ment, dérivés qui ne' sont que   partiellement   modifiés, par exemple estérifiés ou éthérifiés, on peut, par modification fonctionnelle subséquente, par exemple par estérification 
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 ou éthérification, préparer des dérivés polysubatituës, notamment 

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 aussi des esters ou des éthers mixtes ou des   ester-éthers      Si,   lors de l'hydrolyse, effectuée notamment avec des agents 
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 alcalins, les ,1.-ha?ogne-hyc9rines ont été transformées en les 9,,1-époxg-eorpotés' eof respo.dan'cs, ces derniers peuvent à nouveau être transformes en les 9,11-balogenc-hydrine2 désirées, en faisant agir des hydracides halogénés, notamment de l'acide fluorhydrique ou de l'acide chlorhydrique. 



   Les produits du procédé   peuvent être   employés comme médicaments ou être utilisés comme produits intermédiaires pour préparer d'autres produits précieux. 



   L'invention concerne également à titre de produits industriels nouveaux les composés obtenus par la mise en oeuvre du procédé défini ci-dessus... 



   L'invention est décrite plus en détail dans les exemples non limitatifs qui suivent,* dans lesquels les tempé- ratures sont indiquées en degrés centigrades. 



   Exemple 1 
A une culture de Pleospora   gaeumanni,   bien développée par agitation à 28 , âgée de quatre jours, dans 500 cm3 d'une solution aqueuse à   70%   de moût de bièreavec 0,5 cm3 d'huilé de baleine, on ajoute, dans des conditions 

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 stériles, une solution de 125 mg de A -?,20-dloKo¯9ct¯fluoro- 11P.17a.21-trihydroxy-prégnène dans 10 com d'acétone. On continue d'agiter la suspension pendant quatre jours à la même température. On sépare.alors le mycélium et le lave bien à l'eau et à l'acétate d'éthyle. Après avoir réuni les so- lutions claires, on les extrait à l'acétate d'éthyle. On lave à l'eau les   solutions  d'acétate d'éthyle, les sèche et les évapore sous vide.

   On dissout le résidu dans du méthanol à 80% et extrait encore à plusieurs reprises avec de l'éther de pétrole.On évapore ensuite complètement sous vide les solutions   méthanoliques.   Un chromatogramme sur papier du 
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 résidu.(propylèneglycol-toluèrie montre, à côté de peu de A 4 -3,20-dioxo-9a-fluoro-ll117a,2l-trihYdroxy-prégnène, le a-3,20-dioxo-9a fluoro 31,1ap.7a,2x-ttrahydroxy-prgnène qui migre quelque peu plus lentement. On traite la totalité du résidu à l'aide d'un chromatogramme préparatoire sur 
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 papier (propylèneglycol-toluène) . Les zones correspondant . au l4a-hydroxy -dérivé sont découpées et extraites à plusieurs reprises avec du méthanol à 50%.

   On élimine ensuite le méthanol sous vide, extrait la solution aqueuse qui reste, à plusieurs reprises, avec de l'acétate d'éthyle, lave à l'eau les so- lutions d'acétate d'éthyle après les avoir réunies, les sèche et les évapore sous vide le résidu est formé de A 4-3,20- 
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 dloxo-9a-f luoro-lip, l4a 17aJ,21-tétrahydroxy-prégnène pur. 



  On peut aussi effectuer l'incubation du A4-3,20- 

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 dloxo-9a-fluoro-11P.17a.21-trlhydroxy-prdgn%ene dans 500 em3 d'une culture aqueuse, bien développée, de Curvularia palles-   cens qui   renferme les adjuvants   suivants ;   5 g de sucre de canne, 5 g de Tripton   Difco, 1   g de nitrate de sodium, 0,5 g 
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 d'orthophosphste secondaire de potassium, 0,25 g de sulfaté de sodium, 0,25 g de chlorure de potassium, 5 mg de sulfate de fer heptahydrate, 1,25 g de carbonate de potassium et 0,5 cm3 d'huile de baleine. Le traitement a lieu comme indiqué ci-dessus. 
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  Le! à4 -3,20-diozo-110,14a.17a.21-tétrahydro.%g- prégnène peut être acétylé comme   suit ;  A 100 mg de ce produit, on ajoute   0,3   cm3 d'anhydride acétique et 3 gouttes de pyridine. 



  On laisse   la   solution reposer pendant 15 heures à 20 , l'éva- pore ensuite sous un vide habituellement   utilisé,   après y avoir ajouté de l'eau, puis complètement sous un vide poussé, 
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 et obtient comme résidu le 21-acétate du A -3,20-dioxo-9a- 'luoxa.-1, â,'a, 23.-écraYydraxy-prgnne . 



   Exemple 2 
A une culture de Pleospora   gaeumanni,   bien développée par agitation à 28 , âgée de quatre Jours, dans 500 cm3 d'une solution aqueuse à 70% de moût de bière, avec 0,5 cm3   d'huile   de baleine, on ajoute, dans des conditions      
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 stériles, une solution de 125 mg de üi' 3s20-ci.oxo-9a-F.uoro¯ li,17a,21-trihydroxy-prégnadlène dans 10 em3 d'acétone. On 

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 continue d'agiter la suspension pendant quatre jours à la même température. Le traitement du mélange réactionnel ainsi 
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 que la séparation et la purification du t1''-3,24-c.o:o-9a- fluoro-1.,â.#a,l?c,21-éCrahydroxy-prégnad3.ène formé sont effectués comme indiqué à 1' exemple 1.

   Le 1., 3.a,17a, 2.- tétz,ahydroxy-ddrîv6 obtenu migre, dans un chromatogramane sur papier (propylèneglycol-toluène), un peu plus lentement que le dl' -j, 24-â.oxo-9a-f l,uoro-l°, 27a, 21-r.hydroxypr. gnadiéna . 



  Comme indiqué à l'exemple 1, le t1f'-,20wdinxo- 9a-f lunro-11, .a,17a, 23.-êrahydroxy-prâgrradiène peut être aodtyl6 en 21-acétate du 4''-3,2Q-dioxo-9cx-fluor0 13.9.a, .7a, 23.cébrahydroxy-prdgnasiène .      



  Exemple 3 
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 Par incubation de Qj'-3,11a20-tr.oro-9a-i .uoro-   prégnène   dans les conditions indiquées ci-dessus, et après traitement et purification analogues,on obtient le   #4-3,11,   
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 20-trloxo-9oloro-l4a-hydroxy-prégnene qui, dans un chroma- togramme sur papier (formamide-cyclohexane-benzene [1 c .7 ), migre un peu plus lentement que le -.3,13.,,20-br3oxo-9a-fiuoro   prégnène,

Claims

Revendications Un procède de préparation de nouveaux 14-hydroxy- EMI12.1 9a-halogéno-prégnanes et de leurs dérivés fonctionnels, ca- ractérisé par le fait qu'on soumet à l'action aérobie d'en- zymes de champignons des genres Mucor, Helicostylum, Pleospora ou Curvularia, des composés saturés ou non saturés, oxygénés EMI12.2 en il, du l4-H-9a¯halogéno-prégnane; et qu'on transforme le cas échéant les produits réactionnels en leurs dérivés fonc- tionnels .

Le présent procédé peut¯encore être caractérisé par les points suivants : 1) On utilise des cultures de Pleospora gaeumanni ou de Curvularia pallescens ou les enzymes qu'elles renfermant, 2) On utilise comme substances de départ des #4-3,20- EMI12.3 dioxo-14-H-9a-halogéno-prélènee oxygénés en Il.

3) On utilise comme substance de départ la 9a- fluoro- ou la 9a-chloro-hydrooortisone.

4) On utilise comme substance de départ la 9[alpha]-fluoro- EMI12.4 ou la 9a-chloro-cortîsone.

5) On utilise comme substance de départ la 9a- fluoro- ou la 9a-chloro-corticostérone.

6) On utilise comme substance de départ la a- EMI12.5 fluoro- ou la 9a-ehloro-ll-.dèhydro-oortioostérone.

7) On utilise comme substance de départ la 9a- <Desc/Clms Page number 13> EMI13.1 fluoo" ou la 9Cî-cl:Ùoro-ll3-hydl"O;;r.y "l'H;'oge 'Gê!'on 8) On utilise cosme substance d départ la 9s- fluoro- ou la 9a¯ûlilor0¯ll¯oxo¯prog@stëroïï8.

9) On utilise comme substance de départ la 9c!- fluoro- ou la' S's'-chloro-lllTe-dihydroxy-prog'aBtépone 10) On utilise con#ie substance de départ la 9a-* fluoro- ou la 9c;-chloro-ll"oxo<*17Q.-hydroxy-progestérone..

Il) On utilise cont'1 substances de départ l'as 6ehy6ro-dylvés des composes indlcjuë& sous 2) à 10).

IL titra de produits îriâutbi'ieïs nouveaux; EMI13.2 12) . ' Les composas obtenus par la mise eu oeuvre du EMI13.3 procède clef înl ci-dessus.

13) Les composas saturés ou non saturés oxygénés en z.? du l4¯hy(2ro3±y-9ct-halogéno -pîtëgnane? et leurs dérivés fonc'Mom'ilH.

'l4) Las A *-5i,20-dlo3i:o >liîa--hydrroxy¯9 -îialogéno- prëgnaes oxygnëa sn Il.? et leurs dérivés toactionels.

"15) la 9-fl'uorc- et la 9G."ohloro"l4G"hydrosy- hydroco'.?'eison'Ei, et leurs dérives fonctionnels. l6) La 9oi'-fluoro- et la 9(x-chloro-l4a-hydroxy-cortl- EMI13.4 sone, et leurs dérivés fonctionnels. EMI13.5

17) La 9o.-fluoro.- et la 9cx¯chloro-l4a-hydroxj{-eoî?ti¯ oostérone, et leurs dérives fonctionnels.

18) La 9a-fluoro- et la 9o:'..chloro-14a-hydro:x:y-l1- <Desc/Clms Page number 14> EMI14.1 ro-oorticostéronel et leurs dérivés fonctionnels, 19) La 9a-fluoro- et la 9a-ahloro.-.a,ll-d.hydroxy. EMI14.2 progestérone, et leurs dérivés fonctionnels. EMI14.3 20) La 9a-fluoro- et la 9a-ahlora-la-hydroxy-1Z. EMI14.4 oxo-progestérone, et leurs dérivés fonctionnels. EMI14.5 21) La 9a-fluoro- et la 9a-ohl.oro-la,11,37a-tri.- EMI14.6 hydroxy-progestérone, et leurs dérivés fonctionnels. EMI14.7

22) La 9a-fluoro- et la ga-Qh.oro-3.#a,17a-dihydroxf- 1.-oxo-progestërare, et leurs dérivés fonctionnels. EMI14.8 EMI14.9

23) Les l-déhydro-oomposés des 64 -3,20-dioxo-l4a- hydroxy-9a-halogéno-prégnenes oxygénés en 11 indiqués sous 14) à 22)# et leurs dérivés fonctionnels