BE555986A - - Google Patents

Description

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   La présente invention est relative à un procédé de production de composés 1-déhydro-corticostéroïdes par déshydrogé- nation des composés   corticostéroides   correspondants ayant une seu- le liaison entre les atomes de carbone 1 et 2. Il est bien connu que l'introduction de cette double liaison dans des composés corti   costéroides   augmente grandement leurs effets thérapeutiques. 

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   On connaît des méthodes qui permettent   l'introducti   d'une double liaison entre les atomes de carbone 1 et 2 dans le corticostéroïdes grâce à une série de réactions purement chimiq Cependant, ces méthodes supposent un certain nombre de phases, en conséquence le rendement de composés 1-déhydro est assez bas 
On a maintenant trouvé que par croissance d'un champ gnon appartenant au genre Colletotrichum ou au genre Vermicularj dans un milieu de culture approprié en présence d'un composé cort costéroide ayant une seule liaison entre les atomes de carbone 1 et 2, ledit composé est transformé en le composé cortieostéroide correspondant, ayant une double liaison entre ces deux atomes.de carbone. 



   Les deux genres mentionnés sont étroitement apparentés et diverses espèces sont parfois classifiées comme appartenant.à l'un, et parfois comme appartenant à l'autre de ces deux genres. 



  A titre d'exemple d'une espèce donnant un rendement élevé.de 1-dé- hydrocortisone, on peut mentionner le Colletotrichum atramentarium espèce qui est désignée par certains auteurs comme étant le Vermi- cularia atramentaria et par d'autres comme étant le Vermicularia varians. 



   Un milieu de culture approprié pour ce but devait con- tenir : une source de carbone, telle que des hydrates de carbone ou du glycérol ; une source d'azote, telle que des   Matières   conte- nant de la protéine, par exemple de la farine de viande ou de la farine de soya, ou des hydrolysats de protéine, par exemple de la peptone, ou des sels d'ammonium; et des facteurs de croissance cou- ramment requis par des micro-organismes, tels que ceux présents dans des préparations de levure et une liqueur de trempage de mais. 



   On a trouvé que nême en des concentrations relativement élevées, des   corticostéroides   ne sont pas nocifs pour la croissance de l'espèce Colletotrichum. En conséquence, le composé   stéroide   à déshydrogéner peut être ajouté au milieu de culture en même temps 

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 que le champignon, si on le désire, afin d'accélérer le procédé. 



  Ledit composé   est,de     préférence,   ajouté dissous   dans   un solvant organique Miscible dans l' eau. 



   Dans le procédé décrit ici, des réactions dans la mo- lécule de stéroïde autres que la   1-déshydrogénation   ne se produi-      sent qu'à un petit degré tel   qu'il     est possible   d'isoler le compo- sé de 1-déhydrostéroïde par extràction du milieu'de culture avec un solvant erganique immiscible ou légèrement miscible   avec l'eau,   tel que du chloroforme, de la méthylisobutyletone, du chlorure de méthylène, ou un ester convenable, par exemple de l'acétate de bu- tyle, et évaporation du solvant à partir de l'extrait. Par reçris- tallisation du résidu, le composé   1-déhydro  s téroïde peut être obtenu avec un degré de pureté suffisant pour des besoins thérapeu-      tiques.

   Par cette méthode, il est possible d'éviter les méthodes   chromatographiques   coûteuses et incommodes. 



   On a, en outre,trouvé que des champignons des genres Colletortrichum et Vermicularia sont capables de saponifier un grou- pe acétate situé dans la position 21 de la molécule de stéroïde. 



  C'est ainsi qu'il est possible grâce à ces champignons de produire par exemple de la 1-déhydrocortisone sous la forme de son alcool libre en partant d'acétate de cortisone, en rendements élevés. 



   L'invention sera illustrée par les exemples suivants : EXEMPLE 1. 



   Un milieu de culture était,préparé par dissolution, dans de l'eau distillée, des substances nutritives suivantes par litre du milieu : 
 EMI3.1 
 
<tb> Glucose <SEP> '10 <SEP> gr
<tb> 
<tb> Glycérol <SEP> 7,5 <SEP> gr
<tb> 
<tb> Farine <SEP> de <SEP> viande <SEP> et <SEP> d'os <SEP> 10 <SEP> gr
<tb> 
<tb> Liqueur <SEP> de <SEP> trempage <SEP> de <SEP> niais <SEP> 2,5 <SEP> gr
<tb> Na <SEP> Cl <SEP> 4,0 <SEP> gr
<tb> 
<tb> 
<tb> Mg <SEP> SO4 <SEP> 0,05 <SEP> gr
<tb> 
<tb> KH2 <SEP> PO4 <SEP> 0,06 <SEP> gr
<tb> 
<tb> Fe <SEP> SO4 <SEP> 5 <SEP> mgr <SEP> 
<tb> 
<tb> Cu <SEP> SO4 <SEP> 4 <SEP> mgr <SEP> 
<tb> 
 

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5 litres de ce milieu de culture étaient ensemencés avec une culture de Colletotrichum atramentarium, (B. et Br.) Taub.C.B.S, Dickson, et ensuite agités et aérés pendant 48 heures à 28  C.

   Ensuite, une solution de 2,5 gr de cortisone dans 150 ml de méthanol était ajoutée. Après une nouvelle agitation pendant 100 heures et une aération à la .même température, un test de chroma tographie au papier grâce au système propylène glycol/toluène mon- trait que 98 % de la cortisone avaient été transformés en 1-déhydre cortisone. Le mycélium était enlevé par filtration et lavé avec 1 litre d'eau, et le filtrat et la solution de lavage combinés étaient extraits deux fois, chaque fois avec 1,5 litre de chlorure de méthylène. Par concentration des extraits combinés par évapora- tion sous le vide, on obtenait un résidu partiellement cristallin qui, par recristallisation à partir d'acétone, donnait 1,60 gr de 1-déhydrocortisone ayant un point de fusion de   231 -233    C et un 
 EMI4.1 
 [ 0(, J D == + 170 (dioxane). 



  EXEMPLE 2. 



   Lorsqu'on utilisait le même champignon, le même mi- lieu-de culture, et le même processus qu'à l'exemple 1,' on obtenait, à partir de 3 gr d'acétate de cortisone, 1,8 gr de   1-déhydrocorti-   sone ayant un point de fusion de   230 -232    C et un [Ó]D25= + 1700 (dioxane). 



    EXEMPLE 3.    



   Lorsqu'on utilisait le même champignon, le même milieu de culture, et le même processus qu'à l'exemple 1, on obtenait, à partir de 2,5 gr d'hydrocortisone (17-hydroxy-corticostérone), 1,7 
 EMI4.2 
 gr de z l''-pré;nadiëne-11 , 17 0(, 21-trio7¯-3,20-dione ayant u point de fusion de 232 -jl  C et un 1 -/) = + 10'  (dioxane). 



  .EYEtDTCll'TO1S 

**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.

Claims (1)

1. Un procédé de production de composés stéroïdes ayant, une double liaison entre les atomes de carbone 1 et 2, en partant . <Desc/Clms Page number 5> des composés stéroïdes correspondants n'ayant pas une telle double liaison, caractérisé en ce qu'un champignon d'un des genres Colle- totrichum et Vermicularia est mis à croître'dans un milieu de cul- ture contenant une source de carbone, une source d'azote et les facteurs organiques et inorganiques ordinairement requis pour la croissance des champignons, en présence du composé stéroïde dans lequel on désire introduire la double liaison, le composé 1-déhy- dro-s téroide ainsi formé étant ensuite isolé du milieu de culture.

2. Un procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le composé 1-déhydrostéroide est isolé du milieu de cul- ture en l'extrayant avec un solvant organique non miscible ou lé- gèrement miscible dans l'eau et en évaporant le solvant à partir de l'extrait.

3. Composés obtenus grâce au procédé suivant l'une ou l'autre des revendications précédentes.