JPH0463674B2 - - Google Patents
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- JPH0463674B2 JPH0463674B2 JP24289486A JP24289486A JPH0463674B2 JP H0463674 B2 JPH0463674 B2 JP H0463674B2 JP 24289486 A JP24289486 A JP 24289486A JP 24289486 A JP24289486 A JP 24289486A JP H0463674 B2 JPH0463674 B2 JP H0463674B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- chitosan
- lactic acid
- hours
- acid bacteria
- bacillus
- Prior art date
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
〔産業上の利用分野〕
本発明は乳酸菌の増殖促進剤に関し、詳しくは
バチルス属に属する微生物により生産されたキト
サナーゼにより、キトサンを分解して得たキトサ
ンオリゴ糖からなる乳酸菌増殖促進剤に関する。 本発明の乳酸菌増殖促進剤は、その添加によ
り、乳酸菌の増殖を促進することができ、乳酸菌
の増殖に利用することができ、さらにチーズ、バ
ター、ヨーグルト、乳酸菌飲料などの乳製品、漬
物、サイレージまたは乳酸の製造などの乳酸菌の
利用における乳酸菌の増殖に利用することができ
る。 〔技術の背景および従来技術の説明〕 乳酸菌は糖類を発酵して多量の乳酸をつくる細
菌であつて、ラクトパチルス属、ストレプトコツ
カス属、ロイコノストツク属、ペデイオコツカス
属およびその他の属に属する微生物に多くのもの
が知られており（桜井芳人編「総合食品事典」
「乳酸菌」）、乳酸菌はチーズ、バター、ヨーグル
トまたは乳酸菌飲料などの乳製品、漬物、サイレ
ージまたは乳酸の製造などの多くの分野に利用さ
れている。 これまでに乳酸菌の増殖を促進する物質とし
て、酵母エキス、蛋白質の加水分解生成物、果物
や野菜の抽出物などが知られているが、その本体
は、主としてアミノ酸、ペプチド、核酸または核
酸関連物質として同定されている（宮本ら：日本
農芸化学会 昭和61年度大会講演要旨集 第576
頁）。 本発明におけるキトサンオリゴ糖は、キトサン
の分解生成物であるが、キトサンの構成単位の単
糖類のＤ−グルコサミンにまで分解されていない
ものであつて、キトサンにおけるＤ−グルコサミ
ンの重合度を小さくしたＤ−グルコサミンを構成
単位とする少糖類である。 一方、キトサンは、エビやカニなどの甲殻類の
殻に含まれるキチンを脱アセチル化して得られる
多糖類であつて、Ｄ−グルコサミンがβ−１，４
結合によつて直鎖状に結合した多糖類であり、キ
トサンを分解して得られる低重合度のキトサンも
知られている。キトサンを分解する方法には、塩
酸による加水分解法、亜硝酸による酸化分解法お
よび塩素による酸化分解法などの化学的な方法、
および酵素（キトサナーゼ）による方法がある。
キトサナーゼを生産する微生物として、バチルス
（Bacillus sp.）Ｒ−４〔トミナガ他：ビオヒミ
カ・エ・ビオフイジカ・アクタ（Y.Tominagaet
al：Biochimica et Biophysica Acta）第410巻
第145−155頁（1957年）〕、ペニシリウム・イス
ランデイクム（Penicillium islandicum）〔デイ
ー・エム・フエントン他：ジヤーナル・オブ・ジ
エネラル・ミクロバイオロジー（D.M.Fenton et
al Journal of General Microbiology）第126巻
第151−165頁（1981年）〕、バチルス（Bacillus
sp.）99−５（堀内：日本農芸化学会、昭和59年度
大会講演要旨集 第550頁）、ストレプトミセス
（Streptomyces）No.６〔ジエイ・エス・プライス
他：ジヤーナル・オブ・バクテリオロジー（J.S.
Price et al：Jounal of Bacteriology）第124巻
第1574−1584頁（1975年）〕、ストレプトミセ
ス・グリセウス（Streptomyces griseus）〔オオ
タカラ他：キチン・キトサン・アンド・リレイテ
ツド・エンザイムス（A.Ohtakara et al：
Chitin，Chitosan and Related Enzymes）第
147−160頁（1985年）アカデミツク・プレス〕お
よびバチルス（Bacillus sp.）No.７−Ｍ（特願昭
60−120673号）があり、キトサンが植物病原性の
カビの成育に影響を及ぼすこと〔ピー・エス・ス
トエツセル他：フイトパソロギツシエ・ツアイト
シユリフト（P.Stoessel et al：
Phytopathologische Zeitschrift）第111巻 第82
−89頁（1984年）、シー・アール・アラン他：エ
クスペリメンタル・マイコロジー（C.R.Allan et
al：Experimental Mycology）第３巻 第285−
287頁（1979年）：およびキトサンの分解物がえん
豆のカビの生育の抑制に影響を及ぼすこと〔デイ
ー・エフ・ケンドラ他：エクスペリメンタル・マ
イコロジー（D.F.Kendra et al Experimental
Mycology）第８巻 第276−281頁（1984年）〕
が知られ、さらにキトサンおよびキトサンの軽度
分解物が細菌の生育を抑制すること（特願昭60−
223749号）およびキトサンならびにキトサンの分
解産物によつて植物病害を防除すること（特願昭
61−40400号）が提案されている。 またパチルス属に属する微生物により生産さ
れ、PH５〜11の領域において安定なキトサナーゼ
によつてキトサンを分解して、Ｄ−グルコサミン
の単糖を含むことなく、主として２〜８の重合度
のキトサンオリゴ糖を製造する方法が提案されて
いる（特願昭60−167427号）。 本発明者らは、キトサンについて永年研究を続
けているが、その研究において、キトサンオリゴ
糖が乳酸菌の増殖促進に効果があることを見出
し、その知見に基づいて本発明に到達した。 〔発明の目的および発明の要約〕 本発明の目的は、乳酸菌増殖促進剤を提供する
ことにあり、詳しくは、人体に対して有害でな
く、安全に使用することができる乳酸菌増殖促進
剤を提供することにある。 本発明は、バチルス属に属する微生物により生
産されたキトサナーゼにより、キトサンを分解し
て得たキトサンオリゴ糖を有効成分とする乳酸菌
増殖促進剤である。 本発明の乳酸菌増殖促進剤のキトサンオリゴ糖
は、Ｄ−グルコサミンの重合度が２〜８のキトサ
ンオリゴ糖であり、本発明におけるキトサンオリ
ゴ糖は、キトサンを、バチルス属に属する微生物
によつて生産され、PH５〜11の領域において安定
なキトサナーゼにより分解することにより得られ
るが、このようなキトサナーゼは、バチルスNo.７
−Ｍ（微工研菌寄第8139号）により生産すること
ができる。 〔発明の具体的な説明〕 本発明の乳酸菌増殖促進剤の有効成分のキトサ
ンオリゴ糖は、その脱アセチル化度がいかなるも
のであつても、これを使用することができるが、
50〜100％の脱アセチル化度のものを使用するの
が好ましい。 キトサンオリゴ糖は、単体または塩などのいか
なる形態のものであつても、乳酸菌の増殖を促進
するものであれば、これを使用することができる
が、水に溶解しうる酸の塩、たとえば塩酸、硝
酸、ギ酸、酢酸、乳酸、グルタミン酸、アジピン
酸またはアスコルビン酸の塩を使用するのが好ま
しい。 またキトサンオリゴ糖におけるＤ−グルコサミ
ンの重合度は、２〜８の範囲のものを使用する。 キトサンオリゴ糖は、乳酸菌の増殖を促進する
範囲の量であれば、いかなる量においても、これ
を使用することができるが、0.1〜0.4％の培地に
おける濃度の量において使用するのが好ましい。 またキトサンオリゴ糖は、単体の形、または固
体、粉体または液体の不活性担体との組成物の形
において使用することができる。 本発明の乳酸菌増殖促進剤に使用されるキトサ
ンオリゴ糖は、キトサンを単糖にまで分解するこ
とのない手段を採用するのが好ましく、そのため
にキトサンを単糖にまで分解することのないキト
サナーゼによつて、キトサンを分解するのが好ま
しい。このようなキトサナーゼとしては、バチル
ス属に属する微生物により生産され、５〜11のPH
の領域において安定なキトサナーゼを使用するの
が好ましく、またバチルスNo.７−Ｍ（微工研菌寄
第8139号）により生産されたキトサナーゼを使用
するのがさらに好ましい。 バチルスNo.７−Ｍは、長崎県南高来郡小浜町雲
仙の原生沼の土壌よりキチンまたはキトサンを唯
一の炭素源とする培地に生育しうる細菌として分
離されたバチルス（Bacillus sp.）No.７株を親株
として、この親株をＮ−メチル−N'−ニトロソ
−Ｎ−ニトロソグアニジン（NTG）で処理して
突然変異を誘発させ、得られたストレプトマイシ
ン耐性の変異株の中から、高活性のキトサナーゼ
を生産しうるものとして分離された変異株であつ
て、微工研菌寄第8139号（FERM Ｐ−8139）と
して通商産業省微生物工業技術研究所に寄託され
ている。 バチルスNo.７−Ｍの菌学的性質は以下に示され
る。 Ａ 細胞の形態 (1) 細胞の形および大きさ：短桿菌、 （肉汁および肉汁寒天斜面培養、37℃，24〜
72時間の培養） (2) 細胞の多形性の有無：無し、 (3) 運動性の有無：有り、 （肉汁寒天半流動高層穿刺培養） (4) 胞子の有無：有り、内生胞子および裸の胞
子、球状、 〔ドーナー（Dorner）の染色法およびウイ
ツツ（Witz）変法〕 (5) グラム染色性：陽性、 〔肉汁寒天斜面培養、37℃，18時間、ヒユツ
カー（Hucker）の変法により染色〕 Ｂ 各培地における生育状態 (1) 肉汁寒天平板培養（37℃，24〜168時間）： 糸状の周縁を有する円形で、隆起した乳白色の
コロニーを形成する。コロニーの表面は凹凸でや
や光沢があり、半透明である。時間の経過ととも
に盛上つてくる。色素は生産しない。 (2) 肉汁寒天斜面培養（37℃，24〜168時間）： 拡布状に盛上つた乳白色のコロニーを形成す
る。 コロニーは凸円形の隆起があり、光沢がある。
生育は良好で、時間とともに拡がつてくる。色素
は生産しない。 (3) 肉汁液体培養（37℃，24〜168時間）： 表面に膜を形成しない。時間とともに全体的に
濁つてくる。底部に絮状（顆粒状）の沈デンが形
成され、徐々に多くなつてくる。 (4) 肉汁ゼラチン穿刺培養（25℃，24〜168時
間）： 穿刺線に沿つて生育し、液化する。表面および
内部は漏斗状に生育し、液化する。液化部分は白
濁する。 (5) リトマスミルク（37℃，24〜168時間）： ２日後から上部が少しずつ液化し、４日目には
色は完全に変色し、酸性となつた。凝固はしな
い。時間の経過とともに、液化は進み、半透明に
なつた。 Ｃ 生理学的性質 (1) 硝酸塩の還元：− （硝酸塩肉汁培地、37℃，24〜120時間） (2) 脱窒反応：− （駒形らの方法、発酵管を使用、37℃，24〜
120時間） (3) MRテスト：＋ （37℃，24〜168時間） (4) VPテスト（アセチルメチルカルビノール 生成試験：＋ （37℃，24〜168時間） (5) インドールの生成：− （37℃，24〜168時間） (6) 硫化水素の生成：− （TSI寒天法、37℃，24〜168時間） (7) デン粉の加水分解：＋ （37℃，24〜168時間） (8) クエン酸の利用 （コーザーの培地、37℃，24〜168時間）：− （クリステンセンの培地、37℃，24〜168時
間）：＋ (9) 無機窒素源の利用（37℃，24〜168時間） 硝酸塩：未定、 アンモニウム塩：未定、 (10) 色素の生成 （マンニツト・酵母エキス寒天斜面培地）：− 〔キング（King）Ａ寒天斜面培地〕：− (11) 蛍光の有無：無し (12) ウレアーゼ：＋ （クリステンセン−ウレア寒天培地、37℃，24
〜168時間） (13) オキシダーゼ：＋ （肉汁寒天培地、37℃，24〜48時間） (14) カタラーゼ：＋ 肉汁寒天培地、37℃，24〜48時間） (15) 生育の範囲：（肉汁寒天培地） 温度：未定、 PH：５〜10、 添加食塩濃度：未定、 (16) 酸素に対する態度：好気性 （１％グルコース肉汁高層寒天培地、37℃，24
〜72時間） (17) ０−Ｆテスト〔ヒユー−ライフソン
（Hugh−Leifson）法、37℃，Ｄ−グルコー
ス〕：発酵的に酸を生成する。（fermentative） (18) 糖類からの酸およびガスの生成の有無 （37℃，24〜168時間）
バチルス属に属する微生物により生産されたキト
サナーゼにより、キトサンを分解して得たキトサ
ンオリゴ糖からなる乳酸菌増殖促進剤に関する。 本発明の乳酸菌増殖促進剤は、その添加によ
り、乳酸菌の増殖を促進することができ、乳酸菌
の増殖に利用することができ、さらにチーズ、バ
ター、ヨーグルト、乳酸菌飲料などの乳製品、漬
物、サイレージまたは乳酸の製造などの乳酸菌の
利用における乳酸菌の増殖に利用することができ
る。 〔技術の背景および従来技術の説明〕 乳酸菌は糖類を発酵して多量の乳酸をつくる細
菌であつて、ラクトパチルス属、ストレプトコツ
カス属、ロイコノストツク属、ペデイオコツカス
属およびその他の属に属する微生物に多くのもの
が知られており（桜井芳人編「総合食品事典」
「乳酸菌」）、乳酸菌はチーズ、バター、ヨーグル
トまたは乳酸菌飲料などの乳製品、漬物、サイレ
ージまたは乳酸の製造などの多くの分野に利用さ
れている。 これまでに乳酸菌の増殖を促進する物質とし
て、酵母エキス、蛋白質の加水分解生成物、果物
や野菜の抽出物などが知られているが、その本体
は、主としてアミノ酸、ペプチド、核酸または核
酸関連物質として同定されている（宮本ら：日本
農芸化学会 昭和61年度大会講演要旨集 第576
頁）。 本発明におけるキトサンオリゴ糖は、キトサン
の分解生成物であるが、キトサンの構成単位の単
糖類のＤ−グルコサミンにまで分解されていない
ものであつて、キトサンにおけるＤ−グルコサミ
ンの重合度を小さくしたＤ−グルコサミンを構成
単位とする少糖類である。 一方、キトサンは、エビやカニなどの甲殻類の
殻に含まれるキチンを脱アセチル化して得られる
多糖類であつて、Ｄ−グルコサミンがβ−１，４
結合によつて直鎖状に結合した多糖類であり、キ
トサンを分解して得られる低重合度のキトサンも
知られている。キトサンを分解する方法には、塩
酸による加水分解法、亜硝酸による酸化分解法お
よび塩素による酸化分解法などの化学的な方法、
および酵素（キトサナーゼ）による方法がある。
キトサナーゼを生産する微生物として、バチルス
（Bacillus sp.）Ｒ−４〔トミナガ他：ビオヒミ
カ・エ・ビオフイジカ・アクタ（Y.Tominagaet
al：Biochimica et Biophysica Acta）第410巻
第145−155頁（1957年）〕、ペニシリウム・イス
ランデイクム（Penicillium islandicum）〔デイ
ー・エム・フエントン他：ジヤーナル・オブ・ジ
エネラル・ミクロバイオロジー（D.M.Fenton et
al Journal of General Microbiology）第126巻
第151−165頁（1981年）〕、バチルス（Bacillus
sp.）99−５（堀内：日本農芸化学会、昭和59年度
大会講演要旨集 第550頁）、ストレプトミセス
（Streptomyces）No.６〔ジエイ・エス・プライス
他：ジヤーナル・オブ・バクテリオロジー（J.S.
Price et al：Jounal of Bacteriology）第124巻
第1574−1584頁（1975年）〕、ストレプトミセ
ス・グリセウス（Streptomyces griseus）〔オオ
タカラ他：キチン・キトサン・アンド・リレイテ
ツド・エンザイムス（A.Ohtakara et al：
Chitin，Chitosan and Related Enzymes）第
147−160頁（1985年）アカデミツク・プレス〕お
よびバチルス（Bacillus sp.）No.７−Ｍ（特願昭
60−120673号）があり、キトサンが植物病原性の
カビの成育に影響を及ぼすこと〔ピー・エス・ス
トエツセル他：フイトパソロギツシエ・ツアイト
シユリフト（P.Stoessel et al：
Phytopathologische Zeitschrift）第111巻 第82
−89頁（1984年）、シー・アール・アラン他：エ
クスペリメンタル・マイコロジー（C.R.Allan et
al：Experimental Mycology）第３巻 第285−
287頁（1979年）：およびキトサンの分解物がえん
豆のカビの生育の抑制に影響を及ぼすこと〔デイ
ー・エフ・ケンドラ他：エクスペリメンタル・マ
イコロジー（D.F.Kendra et al Experimental
Mycology）第８巻 第276−281頁（1984年）〕
が知られ、さらにキトサンおよびキトサンの軽度
分解物が細菌の生育を抑制すること（特願昭60−
223749号）およびキトサンならびにキトサンの分
解産物によつて植物病害を防除すること（特願昭
61−40400号）が提案されている。 またパチルス属に属する微生物により生産さ
れ、PH５〜11の領域において安定なキトサナーゼ
によつてキトサンを分解して、Ｄ−グルコサミン
の単糖を含むことなく、主として２〜８の重合度
のキトサンオリゴ糖を製造する方法が提案されて
いる（特願昭60−167427号）。 本発明者らは、キトサンについて永年研究を続
けているが、その研究において、キトサンオリゴ
糖が乳酸菌の増殖促進に効果があることを見出
し、その知見に基づいて本発明に到達した。 〔発明の目的および発明の要約〕 本発明の目的は、乳酸菌増殖促進剤を提供する
ことにあり、詳しくは、人体に対して有害でな
く、安全に使用することができる乳酸菌増殖促進
剤を提供することにある。 本発明は、バチルス属に属する微生物により生
産されたキトサナーゼにより、キトサンを分解し
て得たキトサンオリゴ糖を有効成分とする乳酸菌
増殖促進剤である。 本発明の乳酸菌増殖促進剤のキトサンオリゴ糖
は、Ｄ−グルコサミンの重合度が２〜８のキトサ
ンオリゴ糖であり、本発明におけるキトサンオリ
ゴ糖は、キトサンを、バチルス属に属する微生物
によつて生産され、PH５〜11の領域において安定
なキトサナーゼにより分解することにより得られ
るが、このようなキトサナーゼは、バチルスNo.７
−Ｍ（微工研菌寄第8139号）により生産すること
ができる。 〔発明の具体的な説明〕 本発明の乳酸菌増殖促進剤の有効成分のキトサ
ンオリゴ糖は、その脱アセチル化度がいかなるも
のであつても、これを使用することができるが、
50〜100％の脱アセチル化度のものを使用するの
が好ましい。 キトサンオリゴ糖は、単体または塩などのいか
なる形態のものであつても、乳酸菌の増殖を促進
するものであれば、これを使用することができる
が、水に溶解しうる酸の塩、たとえば塩酸、硝
酸、ギ酸、酢酸、乳酸、グルタミン酸、アジピン
酸またはアスコルビン酸の塩を使用するのが好ま
しい。 またキトサンオリゴ糖におけるＤ−グルコサミ
ンの重合度は、２〜８の範囲のものを使用する。 キトサンオリゴ糖は、乳酸菌の増殖を促進する
範囲の量であれば、いかなる量においても、これ
を使用することができるが、0.1〜0.4％の培地に
おける濃度の量において使用するのが好ましい。 またキトサンオリゴ糖は、単体の形、または固
体、粉体または液体の不活性担体との組成物の形
において使用することができる。 本発明の乳酸菌増殖促進剤に使用されるキトサ
ンオリゴ糖は、キトサンを単糖にまで分解するこ
とのない手段を採用するのが好ましく、そのため
にキトサンを単糖にまで分解することのないキト
サナーゼによつて、キトサンを分解するのが好ま
しい。このようなキトサナーゼとしては、バチル
ス属に属する微生物により生産され、５〜11のPH
の領域において安定なキトサナーゼを使用するの
が好ましく、またバチルスNo.７−Ｍ（微工研菌寄
第8139号）により生産されたキトサナーゼを使用
するのがさらに好ましい。 バチルスNo.７−Ｍは、長崎県南高来郡小浜町雲
仙の原生沼の土壌よりキチンまたはキトサンを唯
一の炭素源とする培地に生育しうる細菌として分
離されたバチルス（Bacillus sp.）No.７株を親株
として、この親株をＮ−メチル−N'−ニトロソ
−Ｎ−ニトロソグアニジン（NTG）で処理して
突然変異を誘発させ、得られたストレプトマイシ
ン耐性の変異株の中から、高活性のキトサナーゼ
を生産しうるものとして分離された変異株であつ
て、微工研菌寄第8139号（FERM Ｐ−8139）と
して通商産業省微生物工業技術研究所に寄託され
ている。 バチルスNo.７−Ｍの菌学的性質は以下に示され
る。 Ａ 細胞の形態 (1) 細胞の形および大きさ：短桿菌、 （肉汁および肉汁寒天斜面培養、37℃，24〜
72時間の培養） (2) 細胞の多形性の有無：無し、 (3) 運動性の有無：有り、 （肉汁寒天半流動高層穿刺培養） (4) 胞子の有無：有り、内生胞子および裸の胞
子、球状、 〔ドーナー（Dorner）の染色法およびウイ
ツツ（Witz）変法〕 (5) グラム染色性：陽性、 〔肉汁寒天斜面培養、37℃，18時間、ヒユツ
カー（Hucker）の変法により染色〕 Ｂ 各培地における生育状態 (1) 肉汁寒天平板培養（37℃，24〜168時間）： 糸状の周縁を有する円形で、隆起した乳白色の
コロニーを形成する。コロニーの表面は凹凸でや
や光沢があり、半透明である。時間の経過ととも
に盛上つてくる。色素は生産しない。 (2) 肉汁寒天斜面培養（37℃，24〜168時間）： 拡布状に盛上つた乳白色のコロニーを形成す
る。 コロニーは凸円形の隆起があり、光沢がある。
生育は良好で、時間とともに拡がつてくる。色素
は生産しない。 (3) 肉汁液体培養（37℃，24〜168時間）： 表面に膜を形成しない。時間とともに全体的に
濁つてくる。底部に絮状（顆粒状）の沈デンが形
成され、徐々に多くなつてくる。 (4) 肉汁ゼラチン穿刺培養（25℃，24〜168時
間）： 穿刺線に沿つて生育し、液化する。表面および
内部は漏斗状に生育し、液化する。液化部分は白
濁する。 (5) リトマスミルク（37℃，24〜168時間）： ２日後から上部が少しずつ液化し、４日目には
色は完全に変色し、酸性となつた。凝固はしな
い。時間の経過とともに、液化は進み、半透明に
なつた。 Ｃ 生理学的性質 (1) 硝酸塩の還元：− （硝酸塩肉汁培地、37℃，24〜120時間） (2) 脱窒反応：− （駒形らの方法、発酵管を使用、37℃，24〜
120時間） (3) MRテスト：＋ （37℃，24〜168時間） (4) VPテスト（アセチルメチルカルビノール 生成試験：＋ （37℃，24〜168時間） (5) インドールの生成：− （37℃，24〜168時間） (6) 硫化水素の生成：− （TSI寒天法、37℃，24〜168時間） (7) デン粉の加水分解：＋ （37℃，24〜168時間） (8) クエン酸の利用 （コーザーの培地、37℃，24〜168時間）：− （クリステンセンの培地、37℃，24〜168時
間）：＋ (9) 無機窒素源の利用（37℃，24〜168時間） 硝酸塩：未定、 アンモニウム塩：未定、 (10) 色素の生成 （マンニツト・酵母エキス寒天斜面培地）：− 〔キング（King）Ａ寒天斜面培地〕：− (11) 蛍光の有無：無し (12) ウレアーゼ：＋ （クリステンセン−ウレア寒天培地、37℃，24
〜168時間） (13) オキシダーゼ：＋ （肉汁寒天培地、37℃，24〜48時間） (14) カタラーゼ：＋ 肉汁寒天培地、37℃，24〜48時間） (15) 生育の範囲：（肉汁寒天培地） 温度：未定、 PH：５〜10、 添加食塩濃度：未定、 (16) 酸素に対する態度：好気性 （１％グルコース肉汁高層寒天培地、37℃，24
〜72時間） (17) ０−Ｆテスト〔ヒユー−ライフソン
（Hugh−Leifson）法、37℃，Ｄ−グルコー
ス〕：発酵的に酸を生成する。（fermentative） (18) 糖類からの酸およびガスの生成の有無 （37℃，24〜168時間）
【表】
【表】
以上の菌学的性質について、バージエイス・マ
ニユアル・オブ・デターミネイテイブ・バクテリ
オロジー（Bergey's Manual of Determinative
Bacteriology）の第８版（1974年）を検索した
ところ、No.７−Ｍ株はバチルス（Bacillus）属に
属するのが相当であることがわかつた。 バチルスNo.７−Ｍにより生産されたキトサナー
ゼの酵素化学的性質は以下に示すとおりである。 (1) 作用： キトサンに作用し、分子の内部鎖から任意にβ
−１，４結合を分解して、主としてキトサンオリ
ゴ糖（GlcN）o（ｎ＝２〜８）（２量体〜８量体）
を生成する。キトサンオリゴ糖は高速液体クロマ
トグラフイーを用いてキトサン分解液から分離す
ることができる。この分解液におけるキトサンの
分解度は約45％である。カルボキシメチルセルロ
ース（CMC）にも作用し、ある程度はこれを分
解するが、キチンには全く作用しない。 (2) 作用温度範囲および最適作用温度： 可溶性キトサンを基質とした場合、80℃まで作
用し、最適作用温度は50℃である。 PH6.0において10分間反応させた場合の温度と
比活性の関係を第１図に示す。 (3) 作用PH範囲および最適PH： PH３〜９の範囲において作用し、最適PHはPH６
である。 １％可溶性キトサン１mlに各PHの緩衝液２mlお
よび酵素液１mlを加えた反応液を37℃において10
分間反応させた場合のPHと酵素の比活性の関係を
第２図に示す。 (4) 熱安定性： 50℃における15分間の保温まで、ほぼ安定で、
60℃における15分間の加熱により、酵素の約40％
が失活し、70℃における15分間の加熱により、完
全に失活した。 温度と比活性の関係を第３図に示す。 (5) PH安定性： 0.1M緩衝液中で30℃において２時間放置した
後、残存する酵素活性を測定したが、PH５〜11の
範囲において安定であつた。PH10〜11において安
定であることは、バチルスNo.７−Ｍにより生産さ
れたキトサナーゼの大きな特徴の一つである。PH
と比活性の関係を第４図に示す。 (6) 阻害剤： バチルスNo.７−Ｍにより生産されたキトサナー
ゼは、１×10-3Ｍの終濃度のHgCl2，PbCl2，
AgNO3、およびPCMBの存在によりほぼ100％
が阻害された。 (7) 基質特異性： 種々の基質を使用し、基質の終濃度を0.25％と
した時に、酵素反応液４ml当り酵素蛋白質１mgに
よつて１時間後に遊離する全還元糖とヘキソサミ
ンの量（mg／mg蛋白質／時）を測定した。その結
果が第１表に示される。
ニユアル・オブ・デターミネイテイブ・バクテリ
オロジー（Bergey's Manual of Determinative
Bacteriology）の第８版（1974年）を検索した
ところ、No.７−Ｍ株はバチルス（Bacillus）属に
属するのが相当であることがわかつた。 バチルスNo.７−Ｍにより生産されたキトサナー
ゼの酵素化学的性質は以下に示すとおりである。 (1) 作用： キトサンに作用し、分子の内部鎖から任意にβ
−１，４結合を分解して、主としてキトサンオリ
ゴ糖（GlcN）o（ｎ＝２〜８）（２量体〜８量体）
を生成する。キトサンオリゴ糖は高速液体クロマ
トグラフイーを用いてキトサン分解液から分離す
ることができる。この分解液におけるキトサンの
分解度は約45％である。カルボキシメチルセルロ
ース（CMC）にも作用し、ある程度はこれを分
解するが、キチンには全く作用しない。 (2) 作用温度範囲および最適作用温度： 可溶性キトサンを基質とした場合、80℃まで作
用し、最適作用温度は50℃である。 PH6.0において10分間反応させた場合の温度と
比活性の関係を第１図に示す。 (3) 作用PH範囲および最適PH： PH３〜９の範囲において作用し、最適PHはPH６
である。 １％可溶性キトサン１mlに各PHの緩衝液２mlお
よび酵素液１mlを加えた反応液を37℃において10
分間反応させた場合のPHと酵素の比活性の関係を
第２図に示す。 (4) 熱安定性： 50℃における15分間の保温まで、ほぼ安定で、
60℃における15分間の加熱により、酵素の約40％
が失活し、70℃における15分間の加熱により、完
全に失活した。 温度と比活性の関係を第３図に示す。 (5) PH安定性： 0.1M緩衝液中で30℃において２時間放置した
後、残存する酵素活性を測定したが、PH５〜11の
範囲において安定であつた。PH10〜11において安
定であることは、バチルスNo.７−Ｍにより生産さ
れたキトサナーゼの大きな特徴の一つである。PH
と比活性の関係を第４図に示す。 (6) 阻害剤： バチルスNo.７−Ｍにより生産されたキトサナー
ゼは、１×10-3Ｍの終濃度のHgCl2，PbCl2，
AgNO3、およびPCMBの存在によりほぼ100％
が阻害された。 (7) 基質特異性： 種々の基質を使用し、基質の終濃度を0.25％と
した時に、酵素反応液４ml当り酵素蛋白質１mgに
よつて１時間後に遊離する全還元糖とヘキソサミ
ンの量（mg／mg蛋白質／時）を測定した。その結
果が第１表に示される。
キトサンオリゴ糖は乳酸菌の増殖を促進する。
第１図は、バチルスNo.７−Ｍにより生産された
キトサナーゼの作用温度範囲および最適作用温度
範囲を示す図表、第２図は、バチルスNo.７−Ｍに
より生産されたキトサナーゼの作用PH範囲および
最適PHを示す図表、第３図は、バチルスNo.７−Ｍ
により生産されたキトサナーゼの温度と比活性の
関係（熱安定性）を示す図表、第４図は、バチル
スNo.７−Ｍにより生産されたキトサナーゼのPHと
比活性の関係（PH安定性）を示す図表、第５図
は、バチルスNo.７−Ｍにより生産されたキトサナ
ーゼのSDS−ポリアクリルアミド電気泳動法によ
る分子量を示す図表、第６図は、バチルスNo.７−
Ｍにより生産されたキトサナーゼのゲル濾過法に
よる分子量を示す図表、そして第７図は、参考例
２で得たキトサンオリゴ糖の重合度分布を示す図
表、さらに第８図は実施例におけるラクトバチル
ス・ブルガリクスの菌の増殖を示す図表である。
キトサナーゼの作用温度範囲および最適作用温度
範囲を示す図表、第２図は、バチルスNo.７−Ｍに
より生産されたキトサナーゼの作用PH範囲および
最適PHを示す図表、第３図は、バチルスNo.７−Ｍ
により生産されたキトサナーゼの温度と比活性の
関係（熱安定性）を示す図表、第４図は、バチル
スNo.７−Ｍにより生産されたキトサナーゼのPHと
比活性の関係（PH安定性）を示す図表、第５図
は、バチルスNo.７−Ｍにより生産されたキトサナ
ーゼのSDS−ポリアクリルアミド電気泳動法によ
る分子量を示す図表、第６図は、バチルスNo.７−
Ｍにより生産されたキトサナーゼのゲル濾過法に
よる分子量を示す図表、そして第７図は、参考例
２で得たキトサンオリゴ糖の重合度分布を示す図
表、さらに第８図は実施例におけるラクトバチル
ス・ブルガリクスの菌の増殖を示す図表である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ キトサンオリゴ糖が、バチルス属に属する微
生物により生産され、PH５〜11の領域において安
定なキトサナーゼによりキトサンを分解して得ら
れたものであつて、Ｄ−グルコサミンの重合度が
２〜８であるキトサンオリゴ糖を有効成分とする
ことを特徴とする乳酸菌増殖促進剤。 ２ バチルス属に属する微生物が、バチルスNo.７
−Ｍ（微工研菌寄第8139号）であることを特徴と
する特許請求の範囲第１項に記載の乳酸菌増殖促
進剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24289486A JPS6398379A (ja) | 1986-10-15 | 1986-10-15 | 乳酸菌増殖促進剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24289486A JPS6398379A (ja) | 1986-10-15 | 1986-10-15 | 乳酸菌増殖促進剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6398379A JPS6398379A (ja) | 1988-04-28 |
| JPH0463674B2 true JPH0463674B2 (ja) | 1992-10-12 |
Family
ID=17095800
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24289486A Granted JPS6398379A (ja) | 1986-10-15 | 1986-10-15 | 乳酸菌増殖促進剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6398379A (ja) |
-
1986
- 1986-10-15 JP JP24289486A patent/JPS6398379A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6398379A (ja) | 1988-04-28 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |