JPH05222054A - 新規抗生物質ｒｋ−１４０９ｂ、その製造法並びに抗腫瘍剤及び抗炎症剤 - Google Patents
新規抗生物質ｒｋ−１４０９ｂ、その製造法並びに抗腫瘍剤及び抗炎症剤Info
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- JPH05222054A JPH05222054A JP2781492A JP2781492A JPH05222054A JP H05222054 A JPH05222054 A JP H05222054A JP 2781492 A JP2781492 A JP 2781492A JP 2781492 A JP2781492 A JP 2781492A JP H05222054 A JPH05222054 A JP H05222054A
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- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 下記の式で示される抗生物質ＲＫ−１４０９
Ｂ。 【化１】 該抗生物質は、例えばＲＫ８８−１４０９（ＦＥＲＭ
Ｐ−１１９５２）等のストレプトミセスに属するＲＫ−
１４０９Ｂ産生菌を培養した培養物から採取することが
できる。 【効果】 抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂはプロテインキナ
ーゼＣの阻害作用を有しており、抗腫瘍剤及び抗炎症剤
として有用である。
Ｂ。 【化１】 該抗生物質は、例えばＲＫ８８−１４０９（ＦＥＲＭ
Ｐ−１１９５２）等のストレプトミセスに属するＲＫ−
１４０９Ｂ産生菌を培養した培養物から採取することが
できる。 【効果】 抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂはプロテインキナ
ーゼＣの阻害作用を有しており、抗腫瘍剤及び抗炎症剤
として有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規抗生物質及びその
製造法に関する。本発明はまた、該抗生物質を有効成分
とする抗腫瘍剤及び抗炎症剤に関する。
製造法に関する。本発明はまた、該抗生物質を有効成分
とする抗腫瘍剤及び抗炎症剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】リン脂質・カルシウム（Ｃａ2+）依存性
の蛋白質リン酸化酵素プロテインキナーゼＣは、動物細
胞中で情報の受容・伝達等に重要な役割を担っている。
また、この物質は、腫瘍プロモーターであるホルボール
エステルやテレオシジンの受容体であることも知られて
いる。
の蛋白質リン酸化酵素プロテインキナーゼＣは、動物細
胞中で情報の受容・伝達等に重要な役割を担っている。
また、この物質は、腫瘍プロモーターであるホルボール
エステルやテレオシジンの受容体であることも知られて
いる。
【０００３】プロテインキナーゼＣの阻害物質は、抗腫
瘍プロモーター作用、細胞増殖抑制作用、抗血小板凝集
作用（抗炎症作用）などの効果が期待されるため、プロ
テインキナーゼＣに対する阻害作用を有する新規な抗腫
瘍剤及び抗炎症剤の開発が強く望まれていた。
瘍プロモーター作用、細胞増殖抑制作用、抗血小板凝集
作用（抗炎症作用）などの効果が期待されるため、プロ
テインキナーゼＣに対する阻害作用を有する新規な抗腫
瘍剤及び抗炎症剤の開発が強く望まれていた。
【０００４】
【発明の解決しようとする課題】本発明の目的は、プロ
テインキナーゼＣの阻害物質である新規抗生物質とその
製造法を提供することにある。更に、本発明の目的は、
上記抗生物質を有効成分とする抗腫瘍剤及び抗炎症剤を
提供することにある。
テインキナーゼＣの阻害物質である新規抗生物質とその
製造法を提供することにある。更に、本発明の目的は、
上記抗生物質を有効成分とする抗腫瘍剤及び抗炎症剤を
提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明の抗生物質は、後
述の理化学的性質を有する文献未載の新規な抗生物質で
あり、ＲＫ−１４０９Ｂと命名された。抗生物質ＲＫ−
１４０９Ｂは公知の抗生物質ＲＫ−２８６Ｃ（特願平２
−２５８７２４号参照）と同様、プロテインキナーゼＣ
に対して阻害活性を示すため、抗腫瘍プロモーター作用
あるいは抗血小板凝集作用を示す有用な物質として、抗
腫瘍剤及び抗炎症剤として利用できる。
述の理化学的性質を有する文献未載の新規な抗生物質で
あり、ＲＫ−１４０９Ｂと命名された。抗生物質ＲＫ−
１４０９Ｂは公知の抗生物質ＲＫ−２８６Ｃ（特願平２
−２５８７２４号参照）と同様、プロテインキナーゼＣ
に対して阻害活性を示すため、抗腫瘍プロモーター作用
あるいは抗血小板凝集作用を示す有用な物質として、抗
腫瘍剤及び抗炎症剤として利用できる。
【０００６】以下に、本発明を詳細に説明する。 ＜抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂの製造＞ （使用する微生物）本発明の抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂ
は、ストレプトミセス（Streptomyces）属に属し、抗生
物質ＲＫ−１４０９Ｂの生産能を有する微生物により製
造することができる。
は、ストレプトミセス（Streptomyces）属に属し、抗生
物質ＲＫ−１４０９Ｂの生産能を有する微生物により製
造することができる。
【０００７】このような微生物の一例として、ストレプ
トミセス・エスピー・ＲＫ８８−１４０９（Streptomyc
es sp.ＲＫ８８−１４０９）（以下“ＲＫ８８−１４０
９”と称する。）を挙げることができる。本発明の抗生
物質の製造には、ＲＫ８８−１４０９株の自然的及び人
工的変異株は勿論、ストレプトミセス属に属する菌種で
抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂの生産能を有する微生物は、
すべて使用することができる。
トミセス・エスピー・ＲＫ８８−１４０９（Streptomyc
es sp.ＲＫ８８−１４０９）（以下“ＲＫ８８−１４０
９”と称する。）を挙げることができる。本発明の抗生
物質の製造には、ＲＫ８８−１４０９株の自然的及び人
工的変異株は勿論、ストレプトミセス属に属する菌種で
抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂの生産能を有する微生物は、
すべて使用することができる。
【０００８】上記ＲＫ８８−１４０９株は、山口県阿東
町で採取された土壌中より分離された土壌放線菌であ
り、工業技術院微生物工業技術研究所に平成３年１月２
８日付で寄託され、その微生物受託番号は微工研菌寄第
１１９５２号（ＦＥＲＭＰ−１１９５２）である。ＲＫ
８８−１４０９株は、次の菌学的性質を有する。 1. 形態的特徴 平板上に発育したＲＫ８８−１４０９株の顕微鏡観察で
は、気菌糸は螺旋状を呈する。ＲＫ−１４０９Ｂ生産菌
の加水分解物からＬ，Ｌ−ジアミノピメリン酸が検出さ
れたが、メソジアミノピメリン酸は検出されなかった。
従って、細胞壁のタイプはＩと決定され、本生産菌はス
トレプトミセス（Streptomyces）属に分類される。 2. 各種培地上における生育状態（２７℃、２０日間培
養、色調はカラー ハーモニー マニュアル（Color Ha
rmony Manualによる） １）スターチ・イースト寒天培地 発 育 ：良好 気菌糸 ：豊富 気菌糸色調：２ｆｅ（コバートグレー） 裏面色調 ：２ｌｅ（マスタード） 可溶性色素：無 ２）イーストエキス・モルトエキス寒天培地（ＩＳＰ−
２） 発 育 ：良好 気菌糸 ：豊富 気菌糸色調：２ｆｅ（コバートグレー） 裏面色調 ：２ｎｅ（マスタードゴールド） 可溶性色素：無 ３）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−３） 発 育 ：普通 気菌糸 ：普通 気菌糸色調：５ｆｅ（アッシィス） 裏面色調 ：２ｉｈ（ダークコバートグレー） 可溶性色素：無 ４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−４） 発 育 ：良好 気菌糸 ：多い 気菌糸色調：５ｆｅ（アッシィス） 裏面色調 ：２ｌｅ（マスタード） 可溶性色素：無 ５）チロシン寒天培地 発 育 ：良好 気菌糸 ：無 裏面色調 ：２ｎｅ（マスタードゴールド） 可溶性色素：無 ６）蔗糖硝酸塩寒天培地 発 育 ：普通 気菌糸 ：普通 気菌糸色調：５ｂａ（シェルピンク） 裏面色調 ：３ｃｂ（サンド） 可溶性色素：無 ７）グルコース・アスパラギン寒天培地 発 育 ：不良 気菌糸 ：無 裏面色調 ：３ｃａ（シェル） 可溶性色素：無 ８）グリセロール・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−
５） 発 育 ：不良 気菌糸 ：無 裏面色調 ：３ｃａ（シェル） 可溶性色素：無 ９）栄養寒天培地 発 育 ：不良 気菌糸 ：無 裏面色調 ：２ｅａ（ライトウィート） 可溶性色素：無 10）ペプトン・イーストエキス・鉄寒天培地 発 育 ：普通 気菌糸 ：無 裏面色調 ：２ｎｅ（マスタードゴールド） 可溶性色素：無 （培養法及び精製法）本発明の抗生物質ＲＫ−１４０９
Ｂを製造するには、ストレプトミセス属に属する上記の
抗生物質生産菌を、抗生物質を生産する通常の方法に従
って培養すればよい。培養の形態は、液体培養でも固体
培養でもよく、工業的に有利に培養するためには、前記
生産菌の胞子懸濁液又は培養液を培地に接種し、通気攪
拌培養すればよい。
町で採取された土壌中より分離された土壌放線菌であ
り、工業技術院微生物工業技術研究所に平成３年１月２
８日付で寄託され、その微生物受託番号は微工研菌寄第
１１９５２号（ＦＥＲＭＰ−１１９５２）である。ＲＫ
８８−１４０９株は、次の菌学的性質を有する。 1. 形態的特徴 平板上に発育したＲＫ８８−１４０９株の顕微鏡観察で
は、気菌糸は螺旋状を呈する。ＲＫ−１４０９Ｂ生産菌
の加水分解物からＬ，Ｌ−ジアミノピメリン酸が検出さ
れたが、メソジアミノピメリン酸は検出されなかった。
従って、細胞壁のタイプはＩと決定され、本生産菌はス
トレプトミセス（Streptomyces）属に分類される。 2. 各種培地上における生育状態（２７℃、２０日間培
養、色調はカラー ハーモニー マニュアル（Color Ha
rmony Manualによる） １）スターチ・イースト寒天培地 発 育 ：良好 気菌糸 ：豊富 気菌糸色調：２ｆｅ（コバートグレー） 裏面色調 ：２ｌｅ（マスタード） 可溶性色素：無 ２）イーストエキス・モルトエキス寒天培地（ＩＳＰ−
２） 発 育 ：良好 気菌糸 ：豊富 気菌糸色調：２ｆｅ（コバートグレー） 裏面色調 ：２ｎｅ（マスタードゴールド） 可溶性色素：無 ３）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−３） 発 育 ：普通 気菌糸 ：普通 気菌糸色調：５ｆｅ（アッシィス） 裏面色調 ：２ｉｈ（ダークコバートグレー） 可溶性色素：無 ４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−４） 発 育 ：良好 気菌糸 ：多い 気菌糸色調：５ｆｅ（アッシィス） 裏面色調 ：２ｌｅ（マスタード） 可溶性色素：無 ５）チロシン寒天培地 発 育 ：良好 気菌糸 ：無 裏面色調 ：２ｎｅ（マスタードゴールド） 可溶性色素：無 ６）蔗糖硝酸塩寒天培地 発 育 ：普通 気菌糸 ：普通 気菌糸色調：５ｂａ（シェルピンク） 裏面色調 ：３ｃｂ（サンド） 可溶性色素：無 ７）グルコース・アスパラギン寒天培地 発 育 ：不良 気菌糸 ：無 裏面色調 ：３ｃａ（シェル） 可溶性色素：無 ８）グリセロール・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−
５） 発 育 ：不良 気菌糸 ：無 裏面色調 ：３ｃａ（シェル） 可溶性色素：無 ９）栄養寒天培地 発 育 ：不良 気菌糸 ：無 裏面色調 ：２ｅａ（ライトウィート） 可溶性色素：無 10）ペプトン・イーストエキス・鉄寒天培地 発 育 ：普通 気菌糸 ：無 裏面色調 ：２ｎｅ（マスタードゴールド） 可溶性色素：無 （培養法及び精製法）本発明の抗生物質ＲＫ−１４０９
Ｂを製造するには、ストレプトミセス属に属する上記の
抗生物質生産菌を、抗生物質を生産する通常の方法に従
って培養すればよい。培養の形態は、液体培養でも固体
培養でもよく、工業的に有利に培養するためには、前記
生産菌の胞子懸濁液又は培養液を培地に接種し、通気攪
拌培養すればよい。
【０００９】培養に使用する培地の栄養源は特に限定さ
れることはなく、微生物の培養に通常用いられる炭素
源、窒素源その他を培地中に含有させればよい。炭素源
としては、例えば澱粉、デキストリン、グリセリン、グ
ルコース、シュークロース、ガラクトース、イノシトー
ル、マンニトールなどが、また窒素源としては、例えば
ペプトン、大豆粉、肉エキス、米ぬか、麸、尿素、コー
ンスティープリカー、アンモニウム塩、硝酸塩、その他
の有機又は無機の窒素化合物が用いられる。その他、無
機塩類、たとえば食塩、燐酸塩類、カリウム、カルシウ
ム、亜鉛、マンガン、鉄等の金属塩類等を適宜に添加し
てもよく、必要に応じて、消泡剤として動物油、植物
油、鉱物油等を添加してもよい。培養温度、培養時間等
の培養条件は当業者により適宜選択されるが、具体的に
は、使用菌の発育に適し、しかもＲＫ−１４０９Ｂの生
産が最高となるような条件を選べばよい。たとえば、培
地のｐＨは４〜９、特に中性付近がよく、培養の適温は
２５〜３５℃程度がよい。しかし、これらの培養組成
物、培地の水素イオン濃度、培地温度、攪拌条件などの
培養条件は、使用する菌株の種類や、外部の条件などに
応じて好ましい結果が得られるように適宜調節されるべ
きであることはいうまでもない。
れることはなく、微生物の培養に通常用いられる炭素
源、窒素源その他を培地中に含有させればよい。炭素源
としては、例えば澱粉、デキストリン、グリセリン、グ
ルコース、シュークロース、ガラクトース、イノシトー
ル、マンニトールなどが、また窒素源としては、例えば
ペプトン、大豆粉、肉エキス、米ぬか、麸、尿素、コー
ンスティープリカー、アンモニウム塩、硝酸塩、その他
の有機又は無機の窒素化合物が用いられる。その他、無
機塩類、たとえば食塩、燐酸塩類、カリウム、カルシウ
ム、亜鉛、マンガン、鉄等の金属塩類等を適宜に添加し
てもよく、必要に応じて、消泡剤として動物油、植物
油、鉱物油等を添加してもよい。培養温度、培養時間等
の培養条件は当業者により適宜選択されるが、具体的に
は、使用菌の発育に適し、しかもＲＫ−１４０９Ｂの生
産が最高となるような条件を選べばよい。たとえば、培
地のｐＨは４〜９、特に中性付近がよく、培養の適温は
２５〜３５℃程度がよい。しかし、これらの培養組成
物、培地の水素イオン濃度、培地温度、攪拌条件などの
培養条件は、使用する菌株の種類や、外部の条件などに
応じて好ましい結果が得られるように適宜調節されるべ
きであることはいうまでもない。
【００１０】このようにして得られる培養物から、代謝
産物を採取するのに通常用いられる手段を適宜利用する
ことにより、培養液からＲＫ−１４０９Ｂを分離でき
る。たとえばＲＫ−１４０９Ｂと不純物との溶解度差を
利用する手段、イオン結合力を差を利用する手段、吸着
親和力の差を利用する手段、分子量の差を利用する手段
を利用すればよく、これらは、それぞれ単独又は適宜組
合せて、あるいは反復して使用される。具体的には、Ｒ
Ｋ−１４０９Ｂは、培養菌体にその大部分が存在するの
で、その培養菌体抽出物を各種のイオン交換クロマトグ
ラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、吸着クロマト
グラフィー、液体クロマトグラフィー、セルロース分配
クロマトグラフィー等を組合せて精製すると、ＲＫ−１
４０９Ｂ及びその他の活性成分を含む画分が得られる。
この画分を凍結乾燥して得られた粉末を、例えば高速液
体クロマトグラフィー（たとえばカプセルパックカラ
ム）を用いて８０％メタノール−0.０１％アンモニアの
系で展開により精製すれば、ＲＫ−１４０９Ｂの精製黄
色粉末が得られる。
産物を採取するのに通常用いられる手段を適宜利用する
ことにより、培養液からＲＫ−１４０９Ｂを分離でき
る。たとえばＲＫ−１４０９Ｂと不純物との溶解度差を
利用する手段、イオン結合力を差を利用する手段、吸着
親和力の差を利用する手段、分子量の差を利用する手段
を利用すればよく、これらは、それぞれ単独又は適宜組
合せて、あるいは反復して使用される。具体的には、Ｒ
Ｋ−１４０９Ｂは、培養菌体にその大部分が存在するの
で、その培養菌体抽出物を各種のイオン交換クロマトグ
ラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、吸着クロマト
グラフィー、液体クロマトグラフィー、セルロース分配
クロマトグラフィー等を組合せて精製すると、ＲＫ−１
４０９Ｂ及びその他の活性成分を含む画分が得られる。
この画分を凍結乾燥して得られた粉末を、例えば高速液
体クロマトグラフィー（たとえばカプセルパックカラ
ム）を用いて８０％メタノール−0.０１％アンモニアの
系で展開により精製すれば、ＲＫ−１４０９Ｂの精製黄
色粉末が得られる。
【００１１】この様にして得られたＲＫ−１４０９Ｂの
理化学的性質及び生物学的性質は、以下の通りである。 ＜抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂの理化学的性質及び生物学
的性質＞ 融点 ：２６０℃以上（褐変） 分子式 ：Ｃ27Ｈ23Ｎ3 Ｏ4 分子量 ：４５３．１６７２（ＥＩ−ＨＲ−ＭＳ） ４５３．１６８７（計算値） 比旋光度：〔α〕D 22＝ ＋１４７°（ｃ 0.２、ジメ
チルスルホキシド） 紫外線吸収スペクトル：λmax MeOH ｎｍ（ε）２０３
（３７８７０）、２３７（sh. ２４４６０）、２４５
（２５３７０）、２６７（sh. ２６２７０）、２９３
（５８７１０）、３２０（１０４２０）、３３６（１３
１４０）、３５７（９９７０）、３７４（１０８７０） 赤外線吸収スペクトル：νmax KBr cm-1 ３３５０、２
９５０、１６７０、１５８０、１４５０、１３８０、１
３４０、１３０５、１０９５、７３５ 溶解性 ：ジメチルスルホキシドに易溶；メタノール、
クロロホルム、酢酸エチル、アセトンにやや難溶；水、
n-ヘキサンに不溶。 物質の色：淡黄色
理化学的性質及び生物学的性質は、以下の通りである。 ＜抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂの理化学的性質及び生物学
的性質＞ 融点 ：２６０℃以上（褐変） 分子式 ：Ｃ27Ｈ23Ｎ3 Ｏ4 分子量 ：４５３．１６７２（ＥＩ−ＨＲ−ＭＳ） ４５３．１６８７（計算値） 比旋光度：〔α〕D 22＝ ＋１４７°（ｃ 0.２、ジメ
チルスルホキシド） 紫外線吸収スペクトル：λmax MeOH ｎｍ（ε）２０３
（３７８７０）、２３７（sh. ２４４６０）、２４５
（２５３７０）、２６７（sh. ２６２７０）、２９３
（５８７１０）、３２０（１０４２０）、３３６（１３
１４０）、３５７（９９７０）、３７４（１０８７０） 赤外線吸収スペクトル：νmax KBr cm-1 ３３５０、２
９５０、１６７０、１５８０、１４５０、１３８０、１
３４０、１３０５、１０９５、７３５ 溶解性 ：ジメチルスルホキシドに易溶；メタノール、
クロロホルム、酢酸エチル、アセトンにやや難溶；水、
n-ヘキサンに不溶。 物質の色：淡黄色
【００１２】以上の諸性質から抗生物質ＲＫ−１４０９
Ｂは以下の式で示される新規物質であることが明らかと
なった。
Ｂは以下の式で示される新規物質であることが明らかと
なった。
【化２】
【００１３】＜他物質との比較＞これらの理化学的及び
生物学的性質を有する抗生物質は、これまでに文献的に
報告されていないが、類似の抗生物質としては、スタウ
ロスポリン（The Journal of Antibiotics 30 巻 275-2
82頁 1977年）及びＲＫ−２８（The Journal ofAntibi
otics 43巻 163-167頁 及び 168-173頁 (1990年) ）
が知られている。
生物学的性質を有する抗生物質は、これまでに文献的に
報告されていないが、類似の抗生物質としては、スタウ
ロスポリン（The Journal of Antibiotics 30 巻 275-2
82頁 1977年）及びＲＫ−２８（The Journal ofAntibi
otics 43巻 163-167頁 及び 168-173頁 (1990年) ）
が知られている。
【００１４】本発明の抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂは、こ
れらの物質とシリカゲルカラムクロマトグラフィーある
いはシリカゲル薄層クロマトグラフィー、高速液体クロ
マトグラフィー等の手法により識別することが可能であ
る。さらにその紫外部吸収パターンから容易に識別でき
る。例えば、クロロホルム：メタノール＝１０：１の溶
媒系を用いて、ストレプトミセス sp.ＲＫ８８−１４０
９株の培養液をシリカゲルクロマトグラフィーに供する
と、ＲＫ−１４０９、スタウロスポリンＲＫ−１４０９
Ｂ、ＵＣＮ−０２の順に溶出される。
れらの物質とシリカゲルカラムクロマトグラフィーある
いはシリカゲル薄層クロマトグラフィー、高速液体クロ
マトグラフィー等の手法により識別することが可能であ
る。さらにその紫外部吸収パターンから容易に識別でき
る。例えば、クロロホルム：メタノール＝１０：１の溶
媒系を用いて、ストレプトミセス sp.ＲＫ８８−１４０
９株の培養液をシリカゲルクロマトグラフィーに供する
と、ＲＫ−１４０９、スタウロスポリンＲＫ−１４０９
Ｂ、ＵＣＮ−０２の順に溶出される。
【００１５】（ＲＫ−１４０９Ｂを有効成分とする抗腫
瘍剤及び抗炎症剤）本発明の抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂ
は、該抗生物質を有効成分とする抗腫瘍剤及び抗炎症剤
として、経口及び非経口投与のいずれの経路でも投与可
能である。経口投与する場合は、例えば軟・硬カプセル
剤又は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤として投与すればよ
く、非経口投与する場合は、水溶性懸濁液、油性製剤な
どの皮下あるいは静脈注射剤、点滴剤及び固体状又は懸
濁粘稠状として持続的な経皮吸収が維持できるように坐
薬、塗布薬、軟膏のような剤型で投与すればよい。
瘍剤及び抗炎症剤）本発明の抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂ
は、該抗生物質を有効成分とする抗腫瘍剤及び抗炎症剤
として、経口及び非経口投与のいずれの経路でも投与可
能である。経口投与する場合は、例えば軟・硬カプセル
剤又は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤として投与すればよ
く、非経口投与する場合は、水溶性懸濁液、油性製剤な
どの皮下あるいは静脈注射剤、点滴剤及び固体状又は懸
濁粘稠状として持続的な経皮吸収が維持できるように坐
薬、塗布薬、軟膏のような剤型で投与すればよい。
【００１６】本発明の有効成分の製剤化は、界面活性
剤、賦形剤、滑沢剤、佐剤、皮膜形成物質、コーティン
グ助剤等を用いて適宜行うことができる。その具体例を
挙げれば、本発明の組成物の崩壊、活性成分の溶出を良
好ならしめるために、界面活性剤、例えばアルコール、
エステル類、ポリエチレングリコール誘導体、ソルビタ
ンの脂肪酸エステル類、硫酸化脂肪アルコール類等の１
種又は２種以上を添加することができ、また、賦形剤と
して、例えば蔗糖、乳糖、デンプン、結晶セルロース、
マンニット、軽質無水珪酸、アミン酸マグネシウム、メ
タ珪酸アルミン酸マグネシウム、合成珪酸アルミニウ
ム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素
カルシウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム等
の１種又は２種以上を組合せて添加することができる。
剤、賦形剤、滑沢剤、佐剤、皮膜形成物質、コーティン
グ助剤等を用いて適宜行うことができる。その具体例を
挙げれば、本発明の組成物の崩壊、活性成分の溶出を良
好ならしめるために、界面活性剤、例えばアルコール、
エステル類、ポリエチレングリコール誘導体、ソルビタ
ンの脂肪酸エステル類、硫酸化脂肪アルコール類等の１
種又は２種以上を添加することができ、また、賦形剤と
して、例えば蔗糖、乳糖、デンプン、結晶セルロース、
マンニット、軽質無水珪酸、アミン酸マグネシウム、メ
タ珪酸アルミン酸マグネシウム、合成珪酸アルミニウ
ム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素
カルシウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム等
の１種又は２種以上を組合せて添加することができる。
【００１７】滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグ
ネシウム、タルク、硬化油等を１種又は２種以上添加す
ることができ、また嬌味剤及び嬌臭剤として、食塩、サ
ッカリン、糖、マンニット、オレンジ油カンゾウエキ
ス、クエン酸、ブドウ糖、メントール、ユーカリ油、リ
ンゴ酸等の甘味剤、香料、着色料、保存料等を含有させ
てもよい。
ネシウム、タルク、硬化油等を１種又は２種以上添加す
ることができ、また嬌味剤及び嬌臭剤として、食塩、サ
ッカリン、糖、マンニット、オレンジ油カンゾウエキ
ス、クエン酸、ブドウ糖、メントール、ユーカリ油、リ
ンゴ酸等の甘味剤、香料、着色料、保存料等を含有させ
てもよい。
【００１８】懸濁剤、湿潤剤の如き佐剤としては、例え
ばココナッツ油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、乳酸
カルシウム、ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有させる
ことができる。また、皮膜形成物質としては、セルロー
ス、糖類等の炭水化物誘導体として酢酸フタル酸セルロ
ース（ＣＡＰ）、またアクリル酸系共重合体、二塩基酸
モノエステル類等のポリビニル誘導体としてアクリル酸
メチル・メタクリル酸共重合体、メタアクリル酸メチル
・メタアクリル酸共重合体が挙げられる。
ばココナッツ油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、乳酸
カルシウム、ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有させる
ことができる。また、皮膜形成物質としては、セルロー
ス、糖類等の炭水化物誘導体として酢酸フタル酸セルロ
ース（ＣＡＰ）、またアクリル酸系共重合体、二塩基酸
モノエステル類等のポリビニル誘導体としてアクリル酸
メチル・メタクリル酸共重合体、メタアクリル酸メチル
・メタアクリル酸共重合体が挙げられる。
【００１９】さらに、上記皮膜形成物質をコーティング
するに際し、通常使用されるコーティング助剤、例えば
可塑剤の他、コーティング操作時の薬剤相互の付着防止
のための各種添加剤を添加することによって皮膜形成剤
の性質を改良したり、コーティング操作をより容易なら
しめることができる。なお、有効成分を皮膜形成物質を
用いてマイクロカプセル化してから賦形剤等と混合した
剤型としても良い。
するに際し、通常使用されるコーティング助剤、例えば
可塑剤の他、コーティング操作時の薬剤相互の付着防止
のための各種添加剤を添加することによって皮膜形成剤
の性質を改良したり、コーティング操作をより容易なら
しめることができる。なお、有効成分を皮膜形成物質を
用いてマイクロカプセル化してから賦形剤等と混合した
剤型としても良い。
【００２０】特に代表的な剤型における配合比は下記の
とおりである。 特に好ましい範囲 有効成分 0.１〜９０ 重量％ 0.１〜１５ 重量％ 賦形剤 １０〜９9.８ 〃 ８５〜９9.４ 〃 滑沢剤 ０〜５０ 〃 ０〜２０ 〃 界面活性剤 ０〜５０ 〃 ０〜２０ 〃 皮膜形成物質 0.１〜５０ 重量％ 0.３〜２０ 重量％ 特に好ましい賦形剤は、乳糖、結晶セルロース、カルボ
キシメチルセルロースカルシウムである。また、投与量
は、対象腫瘍を有効に治療するに十分な量、または炎症
部位の消炎に十分な量とすればよい。一般に、経口投与
の場合、大人では１日当り約0.０１〜１００mg／Kg体重
とすればよく、非経口投与の場合、好ましくは約１０mg
／Kg体重、更に好ましくは約５mg／Kg体重が適当であ
る。
とおりである。 特に好ましい範囲 有効成分 0.１〜９０ 重量％ 0.１〜１５ 重量％ 賦形剤 １０〜９9.８ 〃 ８５〜９9.４ 〃 滑沢剤 ０〜５０ 〃 ０〜２０ 〃 界面活性剤 ０〜５０ 〃 ０〜２０ 〃 皮膜形成物質 0.１〜５０ 重量％ 0.３〜２０ 重量％ 特に好ましい賦形剤は、乳糖、結晶セルロース、カルボ
キシメチルセルロースカルシウムである。また、投与量
は、対象腫瘍を有効に治療するに十分な量、または炎症
部位の消炎に十分な量とすればよい。一般に、経口投与
の場合、大人では１日当り約0.０１〜１００mg／Kg体重
とすればよく、非経口投与の場合、好ましくは約１０mg
／Kg体重、更に好ましくは約５mg／Kg体重が適当であ
る。
【００２１】以下に、本発明を製造例及び試験例によっ
て具体的に説明するが、本発明はこれに何ら限定される
ものではない。なお、実施例中「％」は重量％を表わ
す。 製造例 グルコース２％、可溶性デンプン３％、大豆粉2.５％、
ビール酵母0.４％、食塩0.２％、リン酸２カリ0.００５
％、炭酸カルシウム0.４％の組成からなる４００リット
ルの培地に、ＲＫ８８−１４０９Ｂ株を接種して、タン
クを用いて２８℃で１１４時間通気攪拌培養した。この
全培養液を菌体と培養液に分離し、菌体を９０％アセト
ン抽出して、抽出液を濃縮後酢酸エチルで抽出した。酢
酸エチル抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
（１Ｋｇ）に供し（カラムサイズ８φ×４０cm）、１％
メタノール／ジクロルメタンで溶出した。活性画分をメ
タノール、次にアセトニトリル中から結晶化させ濾液を
得た。濾液を減圧濃縮後、セファデックスＬＨ−２０
（6.２φ×５６cm、メタノール）にて精製し、最終的に
高速液体クロマトグラフィー（カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ
ＰＡＫ Ｃ18 ２０φ×２５０mm）に付し、８０％メ
タノール−0.０１％アンモニアの溶媒系で単一物質まで
精製した。収量は３３mgであった。
て具体的に説明するが、本発明はこれに何ら限定される
ものではない。なお、実施例中「％」は重量％を表わ
す。 製造例 グルコース２％、可溶性デンプン３％、大豆粉2.５％、
ビール酵母0.４％、食塩0.２％、リン酸２カリ0.００５
％、炭酸カルシウム0.４％の組成からなる４００リット
ルの培地に、ＲＫ８８−１４０９Ｂ株を接種して、タン
クを用いて２８℃で１１４時間通気攪拌培養した。この
全培養液を菌体と培養液に分離し、菌体を９０％アセト
ン抽出して、抽出液を濃縮後酢酸エチルで抽出した。酢
酸エチル抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
（１Ｋｇ）に供し（カラムサイズ８φ×４０cm）、１％
メタノール／ジクロルメタンで溶出した。活性画分をメ
タノール、次にアセトニトリル中から結晶化させ濾液を
得た。濾液を減圧濃縮後、セファデックスＬＨ−２０
（6.２φ×５６cm、メタノール）にて精製し、最終的に
高速液体クロマトグラフィー（カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ
ＰＡＫ Ｃ18 ２０φ×２５０mm）に付し、８０％メ
タノール−0.０１％アンモニアの溶媒系で単一物質まで
精製した。収量は３３mgであった。
【００２２】試験例１ アムシャム社（Amersham) から販売されているプロテイ
ンキナーゼＣアッセイキットを用いて、ＲＫ−１４０９
Ｂの阻害効果を測定した。アッセイの条件は、アムシャ
ム社の実験法に従った。その結果、ＲＫ−１４０９Ｂが
プロテインキナーゼＣの活性の５０％を阻害する濃度は
約0.４μＭであった。同じ条件下で対照として用いたＲ
Ｋ−２８６Ｃの阻害濃度（ＩＣ50）は、0.０４μＭであ
った。
ンキナーゼＣアッセイキットを用いて、ＲＫ−１４０９
Ｂの阻害効果を測定した。アッセイの条件は、アムシャ
ム社の実験法に従った。その結果、ＲＫ−１４０９Ｂが
プロテインキナーゼＣの活性の５０％を阻害する濃度は
約0.４μＭであった。同じ条件下で対照として用いたＲ
Ｋ−２８６Ｃの阻害濃度（ＩＣ50）は、0.０４μＭであ
った。
【００２３】試験例２ ヒト骨髄性白血病細胞Ｋ５６２を１０％牛胎児血清を含
むＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。培養は３７℃、５
％の炭酸ガス培養器で行った。細胞密度を１×１０又は
１０万細胞／mlに合わせた後、終濃度0.１μｇ／mlとな
るようにホルボールエステル（phorbol １２，１３−di
butyrate）を加えた。３０分後（この間、細胞は炭酸ガ
ス培養器中に静置）、顕微鏡で観察するとＫ５６２細胞
表面に著しい形態変化（水泡化）が生じた。これは、プ
ロテインキナーゼＣの活性化によるものである。ＲＫ−
１４０９Ｂ物質をホルボールエステルとともに細胞に加
えると、その形態変化を抑制した。これは、プロテイン
キナーゼＣ活性の阻害によるものであり、阻害活性（Ｉ
Ｃ50）は、約0.４μＭであった。同一条件でＲＫ−２８
６Ｃの阻害濃度（ＩＣ50）は、約0.３μＭであり、ＲＫ
−１４０９Ｂとほぼ同等であった。
むＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。培養は３７℃、５
％の炭酸ガス培養器で行った。細胞密度を１×１０又は
１０万細胞／mlに合わせた後、終濃度0.１μｇ／mlとな
るようにホルボールエステル（phorbol １２，１３−di
butyrate）を加えた。３０分後（この間、細胞は炭酸ガ
ス培養器中に静置）、顕微鏡で観察するとＫ５６２細胞
表面に著しい形態変化（水泡化）が生じた。これは、プ
ロテインキナーゼＣの活性化によるものである。ＲＫ−
１４０９Ｂ物質をホルボールエステルとともに細胞に加
えると、その形態変化を抑制した。これは、プロテイン
キナーゼＣ活性の阻害によるものであり、阻害活性（Ｉ
Ｃ50）は、約0.４μＭであった。同一条件でＲＫ−２８
６Ｃの阻害濃度（ＩＣ50）は、約0.３μＭであり、ＲＫ
−１４０９Ｂとほぼ同等であった。
【００２４】
【発明の効果】上記の試験結果より、抗生物質ＲＫ−１
４０９Ｂは、プロテインキナーゼＣに対する阻害活性を
示すことが明らかである。従って、本発明の抗生物質Ｒ
Ｋ−１４０９Ｂは抗腫瘍プロモーター、細胞増殖抑制剤
（制癌剤）、抗血小板凝集剤、抗炎症剤として有用であ
る。
４０９Ｂは、プロテインキナーゼＣに対する阻害活性を
示すことが明らかである。従って、本発明の抗生物質Ｒ
Ｋ−１４０９Ｂは抗腫瘍プロモーター、細胞増殖抑制剤
（制癌剤）、抗血小板凝集剤、抗炎症剤として有用であ
る。
【図１】図１は、本発明の抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂの
メタノール溶液中での紫外線吸収スペクトルを示す図で
ある。
メタノール溶液中での紫外線吸収スペクトルを示す図で
ある。
【図２】図２は、抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂの赤外線吸
収スペクトル（ＫＢｒ中）を示す図である。
収スペクトル（ＫＢｒ中）を示す図である。
【図３】図３は、DMSO-d6 中でのＲＫ−１４０９Ｂの 1
Ｈ−ＮＭＲを示す図である。
Ｈ−ＮＭＲを示す図である。
フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） 7804−4Ｂ
Claims (5)
- 【請求項１】 下記の式で示される抗生物質ＲＫ−１４
０９Ｂ。 【化１】 - 【請求項２】 ストレプトミセス（Streptomyces）属に
属する抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂ生産菌を培養し、その
培養物から抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂを分離採取するこ
とを特徴とする抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂの製造法。 - 【請求項３】 抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂ生産菌がスト
レプトミセス・エスピーＲＫ８８−１４０９株（Strept
omyces sp.ＲＫ−１４０９）である請求項２に記載の製
造法。 - 【請求項４】 抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂを有効成分と
して含有することを特徴とする抗腫瘍剤。 - 【請求項５】 抗生物質ＲＫ−１４０９Ｂを有効成分と
して含有することを特徴とする抗炎症剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2781492A JPH05222054A (ja) | 1992-02-14 | 1992-02-14 | 新規抗生物質ｒｋ−１４０９ｂ、その製造法並びに抗腫瘍剤及び抗炎症剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2781492A JPH05222054A (ja) | 1992-02-14 | 1992-02-14 | 新規抗生物質ｒｋ−１４０９ｂ、その製造法並びに抗腫瘍剤及び抗炎症剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05222054A true JPH05222054A (ja) | 1993-08-31 |
Family
ID=12231441
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2781492A Pending JPH05222054A (ja) | 1992-02-14 | 1992-02-14 | 新規抗生物質ｒｋ−１４０９ｂ、その製造法並びに抗腫瘍剤及び抗炎症剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05222054A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009091302A (ja) * | 2007-10-10 | 2009-04-30 | Maruzen Pharmaceut Co Ltd | 抗炎症剤、免疫賦活剤、美白剤、抗老化剤及び抗肥満剤、並びに皮膚外用剤及び美容用飲食品 |
-
1992
- 1992-02-14 JP JP2781492A patent/JPH05222054A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009091302A (ja) * | 2007-10-10 | 2009-04-30 | Maruzen Pharmaceut Co Ltd | 抗炎症剤、免疫賦活剤、美白剤、抗老化剤及び抗肥満剤、並びに皮膚外用剤及び美容用飲食品 |
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