JPH0586068A - 新規抗生物質ｒｋ−１４０９、その製造法並びに抗腫瘍剤及び抗炎症剤 - Google Patents
新規抗生物質ｒｋ−１４０９、その製造法並びに抗腫瘍剤及び抗炎症剤Info
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- JPH0586068A JPH0586068A JP3037593A JP3759391A JPH0586068A JP H0586068 A JPH0586068 A JP H0586068A JP 3037593 A JP3037593 A JP 3037593A JP 3759391 A JP3759391 A JP 3759391A JP H0586068 A JPH0586068 A JP H0586068A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibiotic
- agent
- culture
- production method
- streptomyces
- Prior art date
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 下記の式で示される抗生物質ＲＫ−１４０
９。 【化１】 【効果】 抗生物質ＲＫ−１４０９は抗腫瘍剤及び抗炎
症剤として有用である。
９。 【化１】 【効果】 抗生物質ＲＫ−１４０９は抗腫瘍剤及び抗炎
症剤として有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規抗生物質、その製
造法並びにそれを有効成分とする抗腫瘍剤及び抗炎症剤
に関する。
造法並びにそれを有効成分とする抗腫瘍剤及び抗炎症剤
に関する。
【０００２】
【従来の技術】リン脂質・カルシウム（Ｃａ2+）依存性
の蛋白質リン酸化酵素プロテインキナーゼＣは、動物細
胞中で、情報の受容・伝達等に重要な役割を担ってい
る。また、腫瘍プロモーターであるホルボールエステル
やテレオシジンの受容体であることも知られている。
の蛋白質リン酸化酵素プロテインキナーゼＣは、動物細
胞中で、情報の受容・伝達等に重要な役割を担ってい
る。また、腫瘍プロモーターであるホルボールエステル
やテレオシジンの受容体であることも知られている。
【０００３】プロテインキナーゼＣの阻害物質は、抗腫
瘍プロモーター、細胞増殖抑制（抗ガン剤）、抗血小板
凝集（抗炎症）などの効果が期待されるため、プロテイ
ンキナーゼＣに対する阻害作用を有する新規な抗腫瘍剤
及び抗炎症剤の開発が強く望まれている。
瘍プロモーター、細胞増殖抑制（抗ガン剤）、抗血小板
凝集（抗炎症）などの効果が期待されるため、プロテイ
ンキナーゼＣに対する阻害作用を有する新規な抗腫瘍剤
及び抗炎症剤の開発が強く望まれている。
【０００４】
【発明の解決しようとする課題】本発明の目的は、新規
抗生物質とその製造法を提供することにある。更に、本
発明の目的は、上記抗生物質を有効成分とする抗腫瘍剤
及び抗炎症剤を提供することにある。
抗生物質とその製造法を提供することにある。更に、本
発明の目的は、上記抗生物質を有効成分とする抗腫瘍剤
及び抗炎症剤を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明の抗生物質は、後
述の理化学的性質を有する文献未載の新規な抗生物質で
あり、ＲＫ−１４０９と命名された。抗生物質ＲＫ−１
４０９は公知の抗生物質ＲＫ−２８６Ｃ（特願平２−２
５８７２４号公報参照）と同様にプロテインキナーゼＣ
に対して阻害活性を示すため、抗腫瘍プロモーターある
いは抗血小板凝集を示す有用な抗腫瘍剤及び抗炎症剤と
して利用できる。
述の理化学的性質を有する文献未載の新規な抗生物質で
あり、ＲＫ−１４０９と命名された。抗生物質ＲＫ−１
４０９は公知の抗生物質ＲＫ−２８６Ｃ（特願平２−２
５８７２４号公報参照）と同様にプロテインキナーゼＣ
に対して阻害活性を示すため、抗腫瘍プロモーターある
いは抗血小板凝集を示す有用な抗腫瘍剤及び抗炎症剤と
して利用できる。
【０００６】以下に、本発明を詳細に説明する。 ＜抗生物質ＲＫ−１４０９の製造＞ （使用する微生物）本発明の抗生物質ＲＫ−１４０９を
生産する微生物は、ストレプトミセス（Streptomyces）
属に属する抗生物質ＲＫ−１４０９の生産能を有する菌
種である。
生産する微生物は、ストレプトミセス（Streptomyces）
属に属する抗生物質ＲＫ−１４０９の生産能を有する菌
種である。
【０００７】その一例として、ストレプトミセス・エス
ピー・ＲＫ８８−１４０９（Streptomyces sp.ＲＫ８８
−１４０９）（以下“ＲＫ８８−１４０９株”と称す
る。）を挙げることができる。ＲＫ８８−１４０９株の
自然的及び人工的変異株は勿論、ストレプトミセス属に
属する菌種で後述の抗生物質ＲＫ−１４０９の生産能を
有する微生物はすべて本発明方法において使用すること
ができる。
ピー・ＲＫ８８−１４０９（Streptomyces sp.ＲＫ８８
−１４０９）（以下“ＲＫ８８−１４０９株”と称す
る。）を挙げることができる。ＲＫ８８−１４０９株の
自然的及び人工的変異株は勿論、ストレプトミセス属に
属する菌種で後述の抗生物質ＲＫ−１４０９の生産能を
有する微生物はすべて本発明方法において使用すること
ができる。
【０００８】上記ＲＫ８８−１４０９株は、山口県阿東
町で採取された土壌中より分離された土壌放線菌であ
り、工業技術院微生物工業技術研究所に平成３年１月２
８日付寄託され、その微生物受託番号は、微工研菌寄第
１１９５２号（ＦＥＲＭＰ−１１９５２）である。ＲＫ
８８−１４０９株は、次の菌学的性質を有する。 1. 形態的特徴 平板上に発育したＲＫ８８−１４０９株の顕微鏡観察で
は、気菌糸は螺旋状を呈する。ＲＫ−１４０９生産菌の
加水分解物からＬ，Ｌ−ジアミノピメリン酸が検出され
たが、メソジアミノピメリン酸は検出されなかった。従
って、細胞壁のタイプはＩと決定され、本生産菌はスト
レプトミセス（Streptomyces）属に分類される。 2. 各種培地上における生育状態（２７℃、２０日間培
養、色調はディスクリプティブ・カラー・ネームズ・デ
ィクショナリ（DescriptiveColor Names Dictionary）
による） １）スターチ・イースト寒天培地 発 育 ：良好 気菌糸 ：豊富 気菌糸色調：２ｆｅ（コバートグレー） 裏面色調 ：２ｌｅ（マスタード） 可溶性色素：無 ２）イーストエキス・モルトエキス寒天培地（ＩＳＰ−
２） 発 育 ：良好 気菌糸 ：豊富 気菌糸色調：２ｆｅ（コバートグレー） 裏面色調 ：２ｎｅ（マスタードゴールド） 可溶性色素：無 ３）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−３） 発 育 ：普通 気菌糸 ：普通 気菌糸色調：５ｆｅ（アッシィス） 裏面色調 ：２ｉｈ（ダークコバートグレー） 可溶性色素：無 ４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−４） 発 育 ：良好 気菌糸 ：多い 気菌糸色調：５ｆｅ（アッシィス） 裏面色調 ：２ｌｅ（マスタード） 可溶性色素：無 ５）チロシン寒天培地 発 育 ：良好 気菌糸 ：無 裏面色調 ：２ｎｅ（マスタードゴールド） 可溶性色素：無 ６）蔗糖硝酸塩寒天培地 発 育 ：普通 気菌糸 ：普通 気菌糸色調：５ｂａ（シェルピンク） 裏面色調 ：３ｃｂ（サンド） 可溶性色素：無 ７）グルコース・アスパラギン寒天培地 発 育 ：不良 気菌糸 ：無 裏面色調 ：３ｃａ（シェル） 可溶性色素：無 ８）グリセロール・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−
５） 発 育 ：不良 気菌糸 ：無 裏面色調 ：３ｃａ（シェル） 可溶性色素：無 ９）栄養寒天培地 発 育 ：不良 気菌糸 ：無 裏面色調 ：２ｅａ（ライトウィート） 可溶性色素：無 10）ペプトン・イーストエキス・鉄寒天培地 発 育 ：普通 気菌糸 ：無 裏面色調 ：２ｎｅ（マスタードゴールド） 可溶性色素：無 （培養法及び精製法）本発明の抗生物質ＲＫ−１４０９
を得るに当っては、ストレプトミセス属に属する上記抗
生物質生産菌を、抗生物質を生産する通常の方法に従っ
て培養する。培養の形態は、液体培養でも固体培養でも
よく、工業的に有利に培養するためには、前記生産菌の
胞子懸濁液又は培養液を培地に接種し、通気攪拌培養を
行えばよい。
町で採取された土壌中より分離された土壌放線菌であ
り、工業技術院微生物工業技術研究所に平成３年１月２
８日付寄託され、その微生物受託番号は、微工研菌寄第
１１９５２号（ＦＥＲＭＰ−１１９５２）である。ＲＫ
８８−１４０９株は、次の菌学的性質を有する。 1. 形態的特徴 平板上に発育したＲＫ８８−１４０９株の顕微鏡観察で
は、気菌糸は螺旋状を呈する。ＲＫ−１４０９生産菌の
加水分解物からＬ，Ｌ−ジアミノピメリン酸が検出され
たが、メソジアミノピメリン酸は検出されなかった。従
って、細胞壁のタイプはＩと決定され、本生産菌はスト
レプトミセス（Streptomyces）属に分類される。 2. 各種培地上における生育状態（２７℃、２０日間培
養、色調はディスクリプティブ・カラー・ネームズ・デ
ィクショナリ（DescriptiveColor Names Dictionary）
による） １）スターチ・イースト寒天培地 発 育 ：良好 気菌糸 ：豊富 気菌糸色調：２ｆｅ（コバートグレー） 裏面色調 ：２ｌｅ（マスタード） 可溶性色素：無 ２）イーストエキス・モルトエキス寒天培地（ＩＳＰ−
２） 発 育 ：良好 気菌糸 ：豊富 気菌糸色調：２ｆｅ（コバートグレー） 裏面色調 ：２ｎｅ（マスタードゴールド） 可溶性色素：無 ３）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−３） 発 育 ：普通 気菌糸 ：普通 気菌糸色調：５ｆｅ（アッシィス） 裏面色調 ：２ｉｈ（ダークコバートグレー） 可溶性色素：無 ４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−４） 発 育 ：良好 気菌糸 ：多い 気菌糸色調：５ｆｅ（アッシィス） 裏面色調 ：２ｌｅ（マスタード） 可溶性色素：無 ５）チロシン寒天培地 発 育 ：良好 気菌糸 ：無 裏面色調 ：２ｎｅ（マスタードゴールド） 可溶性色素：無 ６）蔗糖硝酸塩寒天培地 発 育 ：普通 気菌糸 ：普通 気菌糸色調：５ｂａ（シェルピンク） 裏面色調 ：３ｃｂ（サンド） 可溶性色素：無 ７）グルコース・アスパラギン寒天培地 発 育 ：不良 気菌糸 ：無 裏面色調 ：３ｃａ（シェル） 可溶性色素：無 ８）グリセロール・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−
５） 発 育 ：不良 気菌糸 ：無 裏面色調 ：３ｃａ（シェル） 可溶性色素：無 ９）栄養寒天培地 発 育 ：不良 気菌糸 ：無 裏面色調 ：２ｅａ（ライトウィート） 可溶性色素：無 10）ペプトン・イーストエキス・鉄寒天培地 発 育 ：普通 気菌糸 ：無 裏面色調 ：２ｎｅ（マスタードゴールド） 可溶性色素：無 （培養法及び精製法）本発明の抗生物質ＲＫ−１４０９
を得るに当っては、ストレプトミセス属に属する上記抗
生物質生産菌を、抗生物質を生産する通常の方法に従っ
て培養する。培養の形態は、液体培養でも固体培養でも
よく、工業的に有利に培養するためには、前記生産菌の
胞子懸濁液又は培養液を培地に接種し、通気攪拌培養を
行えばよい。
【０００９】培地の栄養源としては特に限定されること
はなく、微生物の培養に通常用いられる炭素源、窒素源
その他を培地中に含有させることができる。炭素源とし
ては、澱粉、デキストリン、グリセリン、グルコース、
シュークロース、ガラクトース、トノシトール、マンニ
トールなどが、また窒素源としては、ペプトン、大豆
粉、肉エキス、米ぬか、麸、尿素、コーンスティープリ
カー、アンモニウム塩、硝酸塩、その他の有機又は無機
の窒素化合物が用いられる。その他、無機塩類、たとえ
ば食塩、燐酸塩類、カリウム、カルシウム、亜鉛、マン
ガン、鉄等の金属塩類等を適宜に添加してもよく必要に
応じて消泡剤として、動、植、鉱物油等を添加してもよ
い。培養温度、培養時間等の培養条件は使用菌の発育に
適し、しかもＲＫ−１４０９の生産が最高となるような
条件が選ばれる。たとえば、培地のｐＨは４〜９、特に
中性付近がよく、培養の適温は２５〜３５℃程度がよ
い。しかし、これらの培養組成物、培地の水素イオン濃
度、培地温度、攪拌条件などの培養条件は使用する菌株
の種類や、外部の条件などに応じて好ましい結果が得ら
れるように適宜調節されるべきであることはいうまでも
ない。このようにして得られる培養物から、代謝産物を
採取するのに通常用いられる手段を適宜に利用してＲＫ
−１４０９を採取して得る。たとえばＲＫ−１４０９と
不純物との溶解度差を利用する手段、イオン結合力を差
を利用する手段、吸着親和力の差を利用する手段、分子
量の差を利用する手段のいずれも、それぞれ単独、又
は、適宜組合せて、あるいは反復して使用される。具体
的には、ＲＫ−１４０９は、培養菌体にその大部分が存
在する。その培養菌体抽出物を各種のイオン交換クロマ
トグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、吸着クロ
マトグラフィー、液体クロマトグラフィー、セルロース
分配クロマトグラフィー等を組合せて精製すると、ＲＫ
−１４０９及びその他の活性成分を含む画分が得られ
る。この画分を凍結乾燥して得られた粉末を更に高速液
体クロマトグラフィー（たとえばカプセルパックカラム
を用い、８０％メタノール−0.０１％アンモニアの系）
で展開により精製し、ＲＫ−１４０９の精製黄色粉末を
得る。
はなく、微生物の培養に通常用いられる炭素源、窒素源
その他を培地中に含有させることができる。炭素源とし
ては、澱粉、デキストリン、グリセリン、グルコース、
シュークロース、ガラクトース、トノシトール、マンニ
トールなどが、また窒素源としては、ペプトン、大豆
粉、肉エキス、米ぬか、麸、尿素、コーンスティープリ
カー、アンモニウム塩、硝酸塩、その他の有機又は無機
の窒素化合物が用いられる。その他、無機塩類、たとえ
ば食塩、燐酸塩類、カリウム、カルシウム、亜鉛、マン
ガン、鉄等の金属塩類等を適宜に添加してもよく必要に
応じて消泡剤として、動、植、鉱物油等を添加してもよ
い。培養温度、培養時間等の培養条件は使用菌の発育に
適し、しかもＲＫ−１４０９の生産が最高となるような
条件が選ばれる。たとえば、培地のｐＨは４〜９、特に
中性付近がよく、培養の適温は２５〜３５℃程度がよ
い。しかし、これらの培養組成物、培地の水素イオン濃
度、培地温度、攪拌条件などの培養条件は使用する菌株
の種類や、外部の条件などに応じて好ましい結果が得ら
れるように適宜調節されるべきであることはいうまでも
ない。このようにして得られる培養物から、代謝産物を
採取するのに通常用いられる手段を適宜に利用してＲＫ
−１４０９を採取して得る。たとえばＲＫ−１４０９と
不純物との溶解度差を利用する手段、イオン結合力を差
を利用する手段、吸着親和力の差を利用する手段、分子
量の差を利用する手段のいずれも、それぞれ単独、又
は、適宜組合せて、あるいは反復して使用される。具体
的には、ＲＫ−１４０９は、培養菌体にその大部分が存
在する。その培養菌体抽出物を各種のイオン交換クロマ
トグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、吸着クロ
マトグラフィー、液体クロマトグラフィー、セルロース
分配クロマトグラフィー等を組合せて精製すると、ＲＫ
−１４０９及びその他の活性成分を含む画分が得られ
る。この画分を凍結乾燥して得られた粉末を更に高速液
体クロマトグラフィー（たとえばカプセルパックカラム
を用い、８０％メタノール−0.０１％アンモニアの系）
で展開により精製し、ＲＫ−１４０９の精製黄色粉末を
得る。
【００１０】こうして得られたＲＫ−１４０９の理化学
的性質及び生物学的性質は次のとおりである。 ＜抗生物質ＲＫ−１４０９の理化学的性質及び生物学的
性質＞ 融点 ：２３５〜２４０℃（褐色） 分子式 ：Ｃ28Ｈ24Ｎ4 Ｏ4 元素分析：Ｃ：６8.７％、Ｈ：4.９％、Ｎ：１1.５％ 比旋光度：〔α〕20 D ＝＋３8.３℃（ｃ 0.０６、クロ
ロホルム） 紫外線吸収スペクトル； λMeOH max ｎｍ（ε）２０８（１９６００）２３８（２
６４００）２６０（１３６００）２８７（１６８００）
３０５（ｓｈ，２０８００）３１７（３３６００）３４
０（ｓｈ，８８００）４１０（２４００） 赤外線吸収スペクトル；３４５０、２９２０、１７５
０、１７００、１５７０、１４６０、１４００、１３４
０、１３１０、１１００、７４０cm-1 溶解性 ：クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、メタ
ノール、ジメチルスルホキシドに易溶、水に不溶。
的性質及び生物学的性質は次のとおりである。 ＜抗生物質ＲＫ−１４０９の理化学的性質及び生物学的
性質＞ 融点 ：２３５〜２４０℃（褐色） 分子式 ：Ｃ28Ｈ24Ｎ4 Ｏ4 元素分析：Ｃ：６8.７％、Ｈ：4.９％、Ｎ：１1.５％ 比旋光度：〔α〕20 D ＝＋３8.３℃（ｃ 0.０６、クロ
ロホルム） 紫外線吸収スペクトル； λMeOH max ｎｍ（ε）２０８（１９６００）２３８（２
６４００）２６０（１３６００）２８７（１６８００）
３０５（ｓｈ，２０８００）３１７（３３６００）３４
０（ｓｈ，８８００）４１０（２４００） 赤外線吸収スペクトル；３４５０、２９２０、１７５
０、１７００、１５７０、１４６０、１４００、１３４
０、１３１０、１１００、７４０cm-1 溶解性 ：クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、メタ
ノール、ジメチルスルホキシドに易溶、水に不溶。
【００１１】分子量 ：４８０．１７７０（ＨＲ−ＥＩ
ＭＳ） 呈色反応：エーリッヒ、ライドン−スミス反応に陽性、 物質の色：黄色 薄層クロマトグラフィー： 米国メルク社製シリカゲル ＴＬＣプレート 溶媒 クロロホルム：メタノール＝９：１ Ｒｆ値 0.５４ 以上の諸性質から抗生物質ＲＫ−１４０９は以下の式で
示される新規物質であることが明らかとなった。
ＭＳ） 呈色反応：エーリッヒ、ライドン−スミス反応に陽性、 物質の色：黄色 薄層クロマトグラフィー： 米国メルク社製シリカゲル ＴＬＣプレート 溶媒 クロロホルム：メタノール＝９：１ Ｒｆ値 0.５４ 以上の諸性質から抗生物質ＲＫ−１４０９は以下の式で
示される新規物質であることが明らかとなった。
【００１２】
【化２】
【００１３】＜他物質との比較＞これらの理化学的及び
生物学的性質を有する抗生物質は、これまでに文献的に
報告されていないが、類似の抗生物質としてスタウロス
ポリン（The Journal ofAntibiotics 30 巻 275-282頁
1977年）、ＵＣＮ−０１（The Journal of Antibiotic
s 42巻 564-570頁 及び 571-576頁 (1989年)）及びＵ
ＣＮ−０２（The Journal of Antibiotics 42巻 564-5
70頁 及び 571-576頁 (1989年) ）が知られている。
生物学的性質を有する抗生物質は、これまでに文献的に
報告されていないが、類似の抗生物質としてスタウロス
ポリン（The Journal ofAntibiotics 30 巻 275-282頁
1977年）、ＵＣＮ−０１（The Journal of Antibiotic
s 42巻 564-570頁 及び 571-576頁 (1989年)）及びＵ
ＣＮ−０２（The Journal of Antibiotics 42巻 564-5
70頁 及び 571-576頁 (1989年) ）が知られている。
【００１４】ＲＫ−１４０９はこれらの物質とシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーあるいはシリカゲル薄層ク
ロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等の手
法により分取することが可能である。さらにその紫外部
吸収パターンから容易に識別できる。例えばクロロホル
ム：メタノール＝１０：１の溶媒系でストレプトミセス
sp.ＲＫ８８−１４０９株の培養液をシリカゲルクロマ
トグラフィーに供するとＲＫ−１４０９、スタウロスポ
リン、ＵＣＮ−０２の順に溶出されてきた。
ルカラムクロマトグラフィーあるいはシリカゲル薄層ク
ロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等の手
法により分取することが可能である。さらにその紫外部
吸収パターンから容易に識別できる。例えばクロロホル
ム：メタノール＝１０：１の溶媒系でストレプトミセス
sp.ＲＫ８８−１４０９株の培養液をシリカゲルクロマ
トグラフィーに供するとＲＫ−１４０９、スタウロスポ
リン、ＵＣＮ−０２の順に溶出されてきた。
【００１５】（ＲＫ−１４０９を有効成分とする抗腫瘍
剤及び抗炎症剤）本発明のＲＫ−１４０９を有効成分と
する抗腫瘍剤及び抗炎症剤は、経口及び非経口投与のい
ずれも使用可能であり、経口投与する場合は軟・硬カプ
セル剤又は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤として投与さ
れ、非経口投与する場合は、水溶性懸濁液、油性製剤な
どの皮下或は静脈注射剤、点滴剤及び固体状又は懸濁粘
稠状として持続的な経皮吸収が維持できるように坐薬、
塗布薬、軟膏のような剤型で投与され得る。
剤及び抗炎症剤）本発明のＲＫ−１４０９を有効成分と
する抗腫瘍剤及び抗炎症剤は、経口及び非経口投与のい
ずれも使用可能であり、経口投与する場合は軟・硬カプ
セル剤又は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤として投与さ
れ、非経口投与する場合は、水溶性懸濁液、油性製剤な
どの皮下或は静脈注射剤、点滴剤及び固体状又は懸濁粘
稠状として持続的な経皮吸収が維持できるように坐薬、
塗布薬、軟膏のような剤型で投与され得る。
【００１６】本発明の有効成分の製剤化は、界面活性
剤、賦形剤、滑沢剤、佐剤、及び有効成分の性質を考慮
して腸溶性製剤とするために医薬的に許容し得る皮膜形
成物質、コーティング助剤等を用い適宜行うことがで
き、その具体例を挙げれば、次のとおりである。本発明
の組成物の崩壊、溶出を良好ならしめるために、界面活
性剤、例えばアルコール、エステル類、ポリエチレング
リコール誘導体、ソルビタンの脂肪酸エステル類、硫酸
化脂肪アルコール類等の１種又は２種以上を添加するこ
とができる。また、賦形剤として、例えば蔗糖、乳糖、
デンプン、結晶セルロース、マンニット、軽質無水珪
酸、アミン酸マグネシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネ
シウム、合成珪酸アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸
水素ナトリウム、リン酸水素カルシウム、カルボキシメ
チルセルロースカルシウム等の１種又は２種以上を組合
せて添加することができる。
剤、賦形剤、滑沢剤、佐剤、及び有効成分の性質を考慮
して腸溶性製剤とするために医薬的に許容し得る皮膜形
成物質、コーティング助剤等を用い適宜行うことがで
き、その具体例を挙げれば、次のとおりである。本発明
の組成物の崩壊、溶出を良好ならしめるために、界面活
性剤、例えばアルコール、エステル類、ポリエチレング
リコール誘導体、ソルビタンの脂肪酸エステル類、硫酸
化脂肪アルコール類等の１種又は２種以上を添加するこ
とができる。また、賦形剤として、例えば蔗糖、乳糖、
デンプン、結晶セルロース、マンニット、軽質無水珪
酸、アミン酸マグネシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネ
シウム、合成珪酸アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸
水素ナトリウム、リン酸水素カルシウム、カルボキシメ
チルセルロースカルシウム等の１種又は２種以上を組合
せて添加することができる。
【００１７】滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグ
ネシウム、タルク、硬化油等を１種又は２種以上添加す
ることができ、また嬌味剤及び嬌臭剤として、食塩、サ
ッカリン、糖、マンニット、オレンジ油カンゾウエキ
ス、クエン酸、ブドウ糖、メントール、ユーカリ油、リ
ンゴ酸等の甘味剤、香料、着色料、保存料等を含有させ
てもよい。
ネシウム、タルク、硬化油等を１種又は２種以上添加す
ることができ、また嬌味剤及び嬌臭剤として、食塩、サ
ッカリン、糖、マンニット、オレンジ油カンゾウエキ
ス、クエン酸、ブドウ糖、メントール、ユーカリ油、リ
ンゴ酸等の甘味剤、香料、着色料、保存料等を含有させ
てもよい。
【００１８】懸濁剤、湿潤剤の如き佐剤としては、例え
ばココナッツ油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、乳酸
カルシウム、ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有させる
ことができる。また、皮膜形成物質としては、セルロー
ス、糖類等の炭水化物誘導体として酢酸フタル酸セルロ
ース（ＣＡＰ）、またアクリル酸系共重合体、二塩基酸
モノエステル類等のポリビニル誘導体としてアクリル酸
メチル・メタクリル酸共重合体、メタアクリル酸メチル
・メタアクリル酸共重合体が挙げられる。
ばココナッツ油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、乳酸
カルシウム、ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有させる
ことができる。また、皮膜形成物質としては、セルロー
ス、糖類等の炭水化物誘導体として酢酸フタル酸セルロ
ース（ＣＡＰ）、またアクリル酸系共重合体、二塩基酸
モノエステル類等のポリビニル誘導体としてアクリル酸
メチル・メタクリル酸共重合体、メタアクリル酸メチル
・メタアクリル酸共重合体が挙げられる。
【００１９】また、上記皮膜形成物質をコーティングす
るに際し、通常使用されるコーティング助剤、例えば可
塑剤の他、コーティング操作時の薬剤相互の付着防止の
ための各種添加剤を添加することによって皮膜形成剤の
性質を改良したり、コーティング操作をより容易ならし
めることができる。なお、有効成分を皮膜形成物質を用
いてマイクロカプセル化してから賦形剤等と混合した剤
型としても良い。
るに際し、通常使用されるコーティング助剤、例えば可
塑剤の他、コーティング操作時の薬剤相互の付着防止の
ための各種添加剤を添加することによって皮膜形成剤の
性質を改良したり、コーティング操作をより容易ならし
めることができる。なお、有効成分を皮膜形成物質を用
いてマイクロカプセル化してから賦形剤等と混合した剤
型としても良い。
【００２０】特に代表的な剤型における配合比は下記の
とおりである。 特に好ましい範囲 有効成分 0.１〜９０ 重量％ 0.１〜１５ 重量％ 賦形剤 １０〜９9.８ 〃 ８５〜９9.４ 〃 滑沢剤 ０〜５０ 〃 ０〜２０ 〃 界面活性剤 ０〜５０ 〃 ０〜２０ 〃 皮膜形成物質 0.１〜５０ 重量％ 0.３〜２０ 重量％ 特に好ましい賦形剤は、乳糖、結晶セルロース、カルボ
キシメチルセルロースカルシウムである。また、投与量
は、対象腫瘍を有効に治療するに十分な量であり、腫瘍
の症状、投与経路、剤型などによって左右されるが、一
般に、経口投与の場合、大人では１日当り約0.０１〜１
００mg／Kg体重（小人では、約0.０１〜７０mg／Kg体
重）の範囲で、その上限は好ましくは約２０mg／Kg体
重、更に好ましくは約１０mg／Kg体重程度であり、非経
口投与の場合、その上限は約５０mg／Kg体重程度であ
り、好ましくは約１０mg／Kg体重、更に好ましくは約５
mg／Kg体重が適当である。
とおりである。 特に好ましい範囲 有効成分 0.１〜９０ 重量％ 0.１〜１５ 重量％ 賦形剤 １０〜９9.８ 〃 ８５〜９9.４ 〃 滑沢剤 ０〜５０ 〃 ０〜２０ 〃 界面活性剤 ０〜５０ 〃 ０〜２０ 〃 皮膜形成物質 0.１〜５０ 重量％ 0.３〜２０ 重量％ 特に好ましい賦形剤は、乳糖、結晶セルロース、カルボ
キシメチルセルロースカルシウムである。また、投与量
は、対象腫瘍を有効に治療するに十分な量であり、腫瘍
の症状、投与経路、剤型などによって左右されるが、一
般に、経口投与の場合、大人では１日当り約0.０１〜１
００mg／Kg体重（小人では、約0.０１〜７０mg／Kg体
重）の範囲で、その上限は好ましくは約２０mg／Kg体
重、更に好ましくは約１０mg／Kg体重程度であり、非経
口投与の場合、その上限は約５０mg／Kg体重程度であ
り、好ましくは約１０mg／Kg体重、更に好ましくは約５
mg／Kg体重が適当である。
【００２１】以下に、本発明を製造例、製剤例及び試験
例によって具体的に説明するが、本発明はこれに何ら限
定されるものではない。なお、「％」は重量％を表わ
す。 製造例１ （放線菌からの製造例）グルコース２％、可溶性デンプ
ン１％、肉エキス0.１％、乾燥酵母0.４％、大豆粉2.５
％、食塩0.２％の組成からなる１８リットルの培地に前
記ＲＫ−１４０９株を接種して、２７℃で７２時間通気
攪拌培養した。この全培養液を菌体と培養液に分離し
て、菌体をアセトン抽出し、さらに減圧濃縮後酢酸エチ
ルで抽出した。抽出された活性物質は減圧濃縮乾固し、
シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。（カラ
ムサイズ4.２×３０cm）。活性画分は、酢酸エチル：メ
タノール＝９５：５で溶出される。得られた活性画分を
再度シリカゲルカラムクロマトグラフィー（２×３０c
m、クロロホルム：アセトニトリル＝４：１）に供し
た。次にセファデックスＬＨ−２０（３×４２cm、メタ
ノール）にて精製し、最終的に高速液体クロマトグラフ
ィー（カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ18 ２０φ
×２５０mm）で８０％ＭｅＯＨ−0.０１％ＮＨ4 ＯＨの
溶媒系で単一物質まで精製された。収量は1.２mgであっ
た。 製造例２ （化学修飾による製造例）スタウロスポリン（ＳＳＰ）
（３５mg）を７０％ｔ−ＢｕＯＯＨ（ｔ−ブチルハイド
ロペルオキシド）１mlに溶かし反応液に、Ｍｎ（ＩＩ
Ｉ）アセチルアセトネート2.６４mgをＥｔＯＡｃ１mlに
溶かした溶液を加え、４℃で４８時間攪拌した。さらに
同量のＭｎ（ＩＩＩ）アセチルアセトネート−酢酸エチ
ル溶液を添加して４３時間攪拌した。反応液をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー（３ｇ）に供し、酢酸エチ
ル（１５ml）で溶出後、ＣＨＣｌ3 −ＣＨ3 ＯＨ（９：
１）、１０mlで反応生成物は溶出された。最終的に高速
液体クロマトグラフィー（カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ Ｐ
ＡＫ Ｃ18 ２０φ×２５０mmで８５％ＣＨ3 ＯＨ−0.
０１％ＮＨ4 ＯＨの溶媒系で精製し、酸化生成物（ＲＫ
−１４０９物質）を1.５mgの収量で得た。原料のスタウ
ロスポリンは5.０mg回収された。
例によって具体的に説明するが、本発明はこれに何ら限
定されるものではない。なお、「％」は重量％を表わ
す。 製造例１ （放線菌からの製造例）グルコース２％、可溶性デンプ
ン１％、肉エキス0.１％、乾燥酵母0.４％、大豆粉2.５
％、食塩0.２％の組成からなる１８リットルの培地に前
記ＲＫ−１４０９株を接種して、２７℃で７２時間通気
攪拌培養した。この全培養液を菌体と培養液に分離し
て、菌体をアセトン抽出し、さらに減圧濃縮後酢酸エチ
ルで抽出した。抽出された活性物質は減圧濃縮乾固し、
シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。（カラ
ムサイズ4.２×３０cm）。活性画分は、酢酸エチル：メ
タノール＝９５：５で溶出される。得られた活性画分を
再度シリカゲルカラムクロマトグラフィー（２×３０c
m、クロロホルム：アセトニトリル＝４：１）に供し
た。次にセファデックスＬＨ−２０（３×４２cm、メタ
ノール）にて精製し、最終的に高速液体クロマトグラフ
ィー（カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ18 ２０φ
×２５０mm）で８０％ＭｅＯＨ−0.０１％ＮＨ4 ＯＨの
溶媒系で単一物質まで精製された。収量は1.２mgであっ
た。 製造例２ （化学修飾による製造例）スタウロスポリン（ＳＳＰ）
（３５mg）を７０％ｔ−ＢｕＯＯＨ（ｔ−ブチルハイド
ロペルオキシド）１mlに溶かし反応液に、Ｍｎ（ＩＩ
Ｉ）アセチルアセトネート2.６４mgをＥｔＯＡｃ１mlに
溶かした溶液を加え、４℃で４８時間攪拌した。さらに
同量のＭｎ（ＩＩＩ）アセチルアセトネート−酢酸エチ
ル溶液を添加して４３時間攪拌した。反応液をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー（３ｇ）に供し、酢酸エチ
ル（１５ml）で溶出後、ＣＨＣｌ3 −ＣＨ3 ＯＨ（９：
１）、１０mlで反応生成物は溶出された。最終的に高速
液体クロマトグラフィー（カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ Ｐ
ＡＫ Ｃ18 ２０φ×２５０mmで８５％ＣＨ3 ＯＨ−0.
０１％ＮＨ4 ＯＨの溶媒系で精製し、酸化生成物（ＲＫ
−１４０９物質）を1.５mgの収量で得た。原料のスタウ
ロスポリンは5.０mg回収された。
【００２２】 ＨＰＬＣ、条件、 カラム カプセルパック Ｃ18 ２０φ×２５０ 溶媒 ８５％ＣＨ3 ＯＨ−0.０１％ＮＨ4 ＯＨ Ｆ．Ｒ． 5.０ml／分 ＵＶ ３１５nm 保持時間 ＲＫ−１４０９ ２5.５分 スタウロスポリン １９分 試験例 ヒト骨髄性白血病細胞Ｋ５６２を１０％牛胎児血清を含
むＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。培養は３７℃、５
％の炭酸ガス培養器にて行った。
むＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。培養は３７℃、５
％の炭酸ガス培養器にて行った。
【００２３】細胞密度を１０5 細胞／mlに合わせた後、
終濃度0.１μｇ／mlとなるようにホルボールエステル
（phorbol １２，１３−dibutyrate）を加えた。３０分
後（この間、細胞は炭酸ガス培養器中に静置）、顕微鏡
で観察するとＫ５６２細胞表面に著しい形態変化（水泡
化）が生じた。これは、プロテインキナーゼＣの活性化
によるものである。第３図に、形態変化した細胞の割合
と薬剤のモル濃度との関係を示したが、ＲＫ−１４０９
物質をホルボールエステルとともに細胞に加えると、そ
の形態変化を抑制していることがわかる。これは、プロ
テインキナーゼＣ活性の阻害によるものであり、阻害活
性（ＩＣ50）は、約0.２μＭを示した。
終濃度0.１μｇ／mlとなるようにホルボールエステル
（phorbol １２，１３−dibutyrate）を加えた。３０分
後（この間、細胞は炭酸ガス培養器中に静置）、顕微鏡
で観察するとＫ５６２細胞表面に著しい形態変化（水泡
化）が生じた。これは、プロテインキナーゼＣの活性化
によるものである。第３図に、形態変化した細胞の割合
と薬剤のモル濃度との関係を示したが、ＲＫ−１４０９
物質をホルボールエステルとともに細胞に加えると、そ
の形態変化を抑制していることがわかる。これは、プロ
テインキナーゼＣ活性の阻害によるものであり、阻害活
性（ＩＣ50）は、約0.２μＭを示した。
【００２４】
【発明の効果】上記の試験結果より、抗生物質ＲＫ−１
４０９は、プロテインキナーゼＣに対する阻害活性を示
すため、抗腫瘍プロモーター、細胞増殖抑制（抗ガン
剤）、抗血小板凝集（抗炎症）などの効果を生ずる。
４０９は、プロテインキナーゼＣに対する阻害活性を示
すため、抗腫瘍プロモーター、細胞増殖抑制（抗ガン
剤）、抗血小板凝集（抗炎症）などの効果を生ずる。
【図１】図１は、本発明の抗生物質ＲＫ−１４０９のメ
タノール溶液中での紫外線吸収スペクトルを示す図であ
る。
タノール溶液中での紫外線吸収スペクトルを示す図であ
る。
【図２】図２は、抗生物質ＲＫ−１４０９の赤外線吸収
スペクトル（ＫＢｒ中）を示す図である。
スペクトル（ＫＢｒ中）を示す図である。
【図３】図３は、重クロロホルム中でのＲＫ−１４０９
の 1Ｈ−ＮＭＲを示す図である。
の 1Ｈ−ＮＭＲを示す図である。
【図４】図４は、抗生物質ＲＫ−１４０９のプロテイン
キナーゼＣに対する阻害活性を示す図である。ｏはスタ
ウロスポリンを、・はＲＫ−１４０９を示す。
キナーゼＣに対する阻害活性を示す図である。ｏはスタ
ウロスポリンを、・はＲＫ−１４０９を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465）
Claims (5)
- 【請求項１】 下記の式で示される抗生物質ＲＫ−１４
０９。 【化１】 - 【請求項２】 ストレプトミセス（Streptomyces）属に
属する抗生物質ＲＫ−１４０９生産菌を培養し、その培
養物から抗生物質ＲＫ−１４０９を分離採取することを
特徴とする抗生物質ＲＫ−１４０９の製造法。 - 【請求項３】 抗生物質ＲＫ−１４０９生産菌がストレ
プトミセス・エスピー．ＲＫ−１４０９（Streptomyces
sp.ＲＫ−１４０９）である請求項２に記載の製造法。 - 【請求項４】 抗生物質ＲＫ−１４０９を有効成分とし
て含有することを特徴とする抗腫瘍剤。 - 【請求項５】 抗生物質ＲＫ−１４０９を有効成分とし
て含有することを特徴とする抗炎症剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3037593A JPH0586068A (ja) | 1991-03-04 | 1991-03-04 | 新規抗生物質ｒｋ−１４０９、その製造法並びに抗腫瘍剤及び抗炎症剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3037593A JPH0586068A (ja) | 1991-03-04 | 1991-03-04 | 新規抗生物質ｒｋ−１４０９、その製造法並びに抗腫瘍剤及び抗炎症剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0586068A true JPH0586068A (ja) | 1993-04-06 |
Family
ID=12501849
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3037593A Pending JPH0586068A (ja) | 1991-03-04 | 1991-03-04 | 新規抗生物質ｒｋ−１４０９、その製造法並びに抗腫瘍剤及び抗炎症剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0586068A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996013506A1 (en) * | 1994-10-26 | 1996-05-09 | Cephalon, Inc. | Protein kinase inhibitors for treatment of neurological disorders |
| US6184217B1 (en) | 1996-06-25 | 2001-02-06 | Cephalon, Inc. | Use of K-252a derivative |
| US6306849B1 (en) | 1996-06-03 | 2001-10-23 | Cephalon, Inc. | Selected derivatives of K-252a |
| US6875865B1 (en) | 1996-06-03 | 2005-04-05 | Cephalon, Inc. | Selected derivatives of K-252a |
-
1991
- 1991-03-04 JP JP3037593A patent/JPH0586068A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5741808A (en) * | 1992-07-24 | 1998-04-21 | Cephalon, Inc. | Protein kinase inhibitors for treatmen of neurological disorders |
| US5756494A (en) * | 1992-07-24 | 1998-05-26 | Cephalon, Inc. | Protein kinase inhibitors for treatment of neurological disorders |
| WO1996013506A1 (en) * | 1994-10-26 | 1996-05-09 | Cephalon, Inc. | Protein kinase inhibitors for treatment of neurological disorders |
| EP1125938A1 (en) * | 1994-10-26 | 2001-08-22 | Cephalon, Inc. | Protein kinase inhibitors for treatment of neurological disorders |
| US6306849B1 (en) | 1996-06-03 | 2001-10-23 | Cephalon, Inc. | Selected derivatives of K-252a |
| US6875865B1 (en) | 1996-06-03 | 2005-04-05 | Cephalon, Inc. | Selected derivatives of K-252a |
| US6184217B1 (en) | 1996-06-25 | 2001-02-06 | Cephalon, Inc. | Use of K-252a derivative |
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