JPH0827182A - ペプチド系化合物 - Google Patents

ペプチド系化合物

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JPH0827182A
JPH0827182A JP6165062A JP16506294A JPH0827182A JP H0827182 A JPH0827182 A JP H0827182A JP 6165062 A JP6165062 A JP 6165062A JP 16506294 A JP16506294 A JP 16506294A JP H0827182 A JPH0827182 A JP H0827182A
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methanol solution
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JP6165062A
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Tomohiro Niwa
智宏 丹羽
Kazutoshi Mizogami
一敏 溝上
Noriyoshi Sakai
則義 酒井
Tadayasu Okazaki
忠靖 岡崎
Shigeo Morimoto
繁夫 森本
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Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Taisho Pharmaceutical Co Ltd
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 抗腫瘍作用を有する新規な化合物を提供する
こと。 【構成】 以下の理化学的性質を示す構造未知の化合
物。 (1)外観:白色粉末状 (2)融点:214〜216℃ (3)質量分析値: EIMSスペクトル m/z 737(M+) 陽イオンFABMSスペクトル m/z 738(M+
H)+ 陰イオンFABMSスペクトル m/z 736(M−
H)- (4)EI−高分解能マススペクトル: 実測値:737.5030 理論値:737.5009(C376778 として計
算) (5)分子式:C376778 (6)分子量:737 (7)比旋光度: [α]D 25=−71.2°(c=0.1,メタノール溶
液)

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は、抗腫瘍作用を有する新
規なペプチド系化合物に関する。
【0002】
【従来の技術】抗腫瘍作用を有するペプチド化合物につ
いては種々報告されているが、本発明の化合物と同一の
理化学的性質を有する化合物は報告がない。
【0003】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、抗腫
瘍作用を有する新規な化合物を提供することにある。
【0004】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、抗腫瘍作
用を有する新規物質を植物分離菌の中から得るべく探索
研究を重ねた結果、本発明者らの見出した特定の微生物
が癌培養細胞に対して増殖抑制作用を有する新規な生理
活性物質を生産することを見出し本発明を完成するに至
った。
【0005】本発明は、以下の理化学的性質を示す化合
物(FD−575)である。
【0006】(1)外観:白色粉末状 (2)融点:214〜216℃ (3)質量分析値: EIMSスペクトル m/z 737(M+) 陽イオンFABMSスペクトル m/z 738(M+
H)+ 陰イオンFABMSスペクトル m/z 736(M−
H)- (4)EI−高分解能マススペクトル: 実測値:737.5030 理論値:737.5009(C376778 として計
算) (5)分子式:C376778 (6)分子量:737 (7)比旋光度: [α]D 25=−71.2°(c=0.1,メタノール溶
液) (8)紫外線吸収スペクトル:メタノール溶液で測定し
た結果、末端吸収を示した (9)赤外線吸収スペクトル:図1に示すとおり (10)1H−NMRスペクトル:図2に示すとおり (11)13C−NMRスペクトル:図3に示すとおり (12)溶剤に対する溶解性:メタノール、クロロホル
ム、アセトン、ベンゼンに可溶 水、ヘキサンに不溶。
【0007】本発明の新規活性物質FD−575を生産
する菌株は、本発明者らが自然界から新たに分離した菌
株であり、微生物の名称「Cylindrocarpon sp. TF-041
7」および微生物受託番号「FERM P−1440
7」として、工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託
されている。
【0008】この菌株の菌学的性状を以下に示す。
【0009】1)形態 本菌株は、バレイショ・ブドウ糖寒天培地、オートミー
ル寒天培地、麦芽エキス寒天培地、YpSs寒天培地、
サブロー寒天培地、三浦寒天培地等で中程度の生育を示
し、やや抑制的なコロニーを形成する。胞子の形成はオ
ートミール寒天培地で良好、バレイショ・ブドウ糖寒天
培地で中程度、YpSs寒天培地、ツァペック寒天培
地、サブロー寒天培地、三浦寒天培地等でわずかに認め
られる。本菌株がオートミール寒天培地上、26℃、1
4日間の培養で形成したコロニーを光学顕微鏡で観察す
ると、フェルト状に生育した気生菌糸から直接または数
本の気生菌糸からなる菌糸束から分生子形成細胞(フィ
アライド)が直接に単生し、形成された分生子はフィア
ライドの先端で球状の粘塊となる。気生菌糸は薄壁、径
は0.4〜2.2μm。フィアライドは基部に隔壁を有
し、基部から先端に向かって次第に細くなった先細りの
円筒形、先端は平でカラーは認められない。また、壁は
薄く無色、表面は平滑、長さは26〜57μm、幅は基
部で1.6〜2.6μm、先端部では0.4〜0.8μ
mである。分生子は両端がわずかに丸まった紡錘形、無
色、表面は平滑、柄足細胞(Foot cell)は認められ
ず、多くは0〜1隔壁、まれに2または3隔壁まで認め
られる。大きさは隔壁数0の場合で4.0〜14.0μ
m×1.0〜1.8μm、隔壁数1の場合で6.0〜2
1.0μm×1.2〜2.0μm、隔壁数2以上の場合
では14.2〜27.6μm×1.4〜2.2μmであ
る。
【0010】また、素寒天上の滅菌済みカーネーション
葉に本菌を接種したが葉上で形成された分生子の形状や
大きさはオートミール寒天培地の場合と差はなかった。
なお、培養を3週間に延長したがテレオモルフの形態は
認められなかった。 2)培地上での生育状態 各種培地上で、26℃、14日間培養した場合の肉眼的
観察結果を次の表1に示した。なお色の表示は日本規格
協会、JIS色名帳(1985年)の系統色名を引用し
た。
【0011】
【表1】
【0012】3)生理的性質 生育温度範囲および最適温度 本菌株はpH6.0のサブロー液体培地において、10
〜29℃の範囲で生育し、最適温度は23〜26℃であ
る。
【0013】生育pH範囲および最適pH 本菌株はYpSs液体培地中26℃においてpH3〜9
の範囲で生育し、最適pHは5〜7である。
【0014】4)好気性,嫌気性の区別 ; 好気性。
【0015】上記の形態的特徴および培養上の性状か
ら、本菌株が不完全菌亜門中の1属であることが明かと
なり、J. W. Carmichael, W. Bryce Kendrick, I. L. C
onners, Lynne Sigler共著『Genera of Hyphomycetes
The University of Alberta Press (1980年)およびK.
H. Domsch, W. Gams共著『Compendium of soil fungi V
ol.I』IHW-Verlag(1993年)などに報告されている多く
の既知菌種と比較検討した。その結果、本菌が多くの寒
天培地上で比較的抑制的生育を示す点、無色のフィアロ
型分生子がフィアライド先端部で粘球状になる点、菌糸
から単生するフィアライドが先端にかけて先細りの形状
を有し、基部に隔壁を有する点等から、本菌がAcremoni
um属あるいは、Fusarium属やCylindrocarpon属に類似し
た形態を示すことが判明した。そしてさらに本菌の場合
は稀ではあるが2〜3隔壁の分生子が観察され、サイズ
においてもAcremonium属とするにはあまりにも大きな分
生子が多数認められた点、分生子は湾曲せず両端がやや
丸まり、柄足細胞も観察できなかった点、さらにカーネ
ーション葉上でも分生子の形態に変化が認められなかっ
た点等から本菌をCylindrocarpon属の一菌種と同定し
た。以上のことから、本菌を「Cylindrocarpon sp. TF-
0417」と命名した。
【0016】この培養により生産されたFD−575を
単離するには、発酵生産物を採取する一般的な方法に準
じて行えば良い。すなわち各種の栄養物質を含む培地
で、Cylindrocarpon sp. TF-0417を好気的条件下で培養
し、培養終了後、培養液をアセトン抽出し、更に酢酸エ
チルエステルにて抽出する。抽出されたFD−575の
画分を濃縮してシロップ状とする。このシロップをOD
Sカラムを用いた高速液体クロマトグラフィーに付すこ
とにより、FD−575を精製単離することができる。
【0017】以上の精製法によって得られたFD−57
5の理化学的性質は以下のとおりである。
【0018】(1)外観:白色粉末状 (2)融点:214〜216℃ (3)質量分析値: EIMSスペクトル m/z 737(M+) 陽イオンFABMSスペクトル m/z 738(M+
H)+ 陰イオンFABMSスペクトル m/z 736(M−
H)- (4)EI−高分解能マススペクトル: 実測値:737.5030 理論値:737.5009(C376778 として計
算) (5)分子式:C376778 (6)分子量:737 (7)比旋光度: [α]D 25=−71.2°(c=0.1,メタノール溶
液) (8)紫外線吸収スペクトル:メタノール溶液で測定し
た結果、末端吸収を示した (9)赤外線吸収スペクトル:KBr錠中で測定したス
ペクトルを図1に示す (10)1H−NMRスペクトル:重アセトン中、40
0MHzで測定したスペクトルを図2に示す (11)13C−NMRスペクトル:重アセトン中、10
0MHzで測定したスペクトルを図3に示す (12)溶剤に対する溶解性:メタノール、クロロホル
ム、アセトン、ベンゼンに可溶 水、ヘキサンに不溶。
【0019】
【発明の効果】本発明の化合物は癌培養細胞に対して増
殖抑制作用を有するので医薬として有用である。
【0020】
【実施例】以下、実施例および試験例を挙げて本発明を
具体的に説明する。
【0021】実施例 (1)100ml当りグルコース2g、酵母エキス0.
2g、硫酸マグネシウム0.05g、ポリペプトン0.
5g、リン酸一カリウム0.1gを含む無菌液体培地に
Cylindrocarpon sp. TF-0417株を接種し、26℃、96
時間振とう培養した。次に、内容量5Lのミニジャー1
基を用いて種培地と同じ組成の無菌培地3Lに前記培養
液100mlを接種し、26℃、96時間通気撹拌培養
した。
【0022】(2)培養終了後、1基分の培養液3Lを
アセトン3Lで抽出した。アセトンを除去した後、酢酸
エチルエステル3Lで抽出を行い、無水硫酸ナトリウム
で脱水後、濃縮し褐色のシロップ状物質676mgを得
た。
【0023】(3)シロップ状物質をメタノールに溶解
し、カラムとしてPrep Nova-Pak HR C18(商品
名、ウオーターズ社製)40×100mm、溶離液とし
て67%アセトニトリル水溶液を用いた高速液体クロマ
トグラフィーを行った。活性画分を集め、濃縮乾固し、
白色粉末(FD−575)16.4mgを得た。
【0024】試験例(各種培養細胞に対する増殖阻害作
用) (検体)実施例で得られたFD−575 10mgをメ
タノールに溶解し、目的濃度となるように滅菌生理食塩
水にて希釈したものを用いた。
【0025】(試験細胞) P388 マウス白血病 L−1210 マウス白血病 HL−60 ヒト白血病 (使用した培養液) RPMI−1640培地。
【0026】(試験方法)前記培養液を用いて各種癌細
胞を、2×104〜1×105/mlとし、直径35mm
の6穴シャーレに2mlずつ分注した。次いで目的濃度
にあらかじめ希釈した検体50μlを、培養開始と同時
に添加した。
【0027】試験細胞は、37℃、5%炭酸ガス培養器
内で3〜4日間培養を続けた後、生細胞を測定し、試料
濃度と阻害率から、IC50値(50%阻害のための濃
度)を求めた。
【0028】(結果)結果を表2に示した。
【0029】
【表2】
【図面の簡単な説明】
【図1】KBr錠にて測定したFD−575の赤外線吸
収スペクトルを示す。
【図2】重クロロホルム中、400MHzで測定したF
D−575の1H−NMRスペクトルを示す。
【図3】重クロロホルム中、100MHzで測定したF
D−575の13C−NMRスペクトルを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 FI 技術表示箇所 C12R 1:645) (72)発明者 岡崎 忠靖 東京都豊島区高田3丁目24番1号 大正製 薬株式会社内 (72)発明者 森本 繁夫 東京都豊島区高田3丁目24番1号 大正製 薬株式会社内

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 以下の理化学的性質を示すペプチド系化
    合物 (1)外観:白色粉末状 (2)融点:214〜216℃ (3)質量分析値: EIMSスペクトル m/z 737(M+) 陽イオンFABMSスペクトル m/z 738(M+
    H)+ 陰イオンFABMSスペクトル m/z 736(M−
    H)- (4)EI−高分解能マススペクトル: 実測値:737.5030 理論値:737.5009(C376778 として計
    算) (5)分子式:C376778 (6)分子量:737 (7)比旋光度: [α]D 25=−71.2°(c=0.1,メタノール溶
    液) (8)紫外線吸収スペクトル:メタノール溶液で測定し
    た結果、末端吸収を示した (9)赤外線吸収スペクトル:図1に示すとおり (10)1H−NMRスペクトル:図2に示すとおり (11)13C−NMRスペクトル:図3に示すとおり (12)溶剤に対する溶解性:メタノール、クロロホル
    ム、アセトン、ベンゼンに可溶 水、ヘキサンに不溶
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