JPS5863397A - １２β−ヒドロキシアンドロスタ−１，４−ジエン−３，１７−ジオンの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はデオキシコール酸及び／又はその塩から微生物
により１２β−ヒドロキシアンドロスタ−１，４−ジエ
ン−３，１７−ジオンを製造する方法に関し、詳しくは
デオキシコール酸及び／又は１− その塩を基質として１２β−ヒドロキシアンドロスタ−
１，４−ジエン−３，１７−ジオンを生産するシュード
モナス・スツツエリに輌する一細！Ｉ’ｔ−１主炭素源
としてデオキシコール酸及び／又はその塩を含む培地に
培！して１２β−ヒドロキシアンドロスタ−１，４−ジ
エン−３，１７−ジオンを生成せしめ、これを採取する
ことを特徴とする１２β−ヒドロキシアンドロスタ−１
，４−ジエン’−３，１７−ジオンの製造方法に関する
。

従来、デオキシコール酸に微生物を作用させて１２β−
ヒドロキシアンドロスタ−１，４−ジエン−３，１７−
ジオン（以下、１２β−ヒドロキシＡＤＤと称す）を得
る方法として次に示す報告が見られる。まずバルネス（
Ｐ、Ｊ、　Ｂａｒｎｅｓ　）らによって、シュードモナ
ス・エスピーＮＣＩＢ　　１０５９０１０５９０（Ｐｓ
ｅｕｄｏ　ｓｐ、ＮＣＩＢ　　１０５９０）菌株を用い
る方法が報告されている［　Ｊ、　Ｃｈｅｒｎ、　Ｓｏ
ｃ、　Ｃｈｅｍ。

Ｃｏｍｍｕｎ、（１９７４年Ｌ１１５〜１１６頁及び　
、。

Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、　３２巻、８９〜９３頁（１
９７６年）参照］。この方法は、デオキシコール酸を０
．１ｓ含む無機塩培地１０１でシュードモナス・エスピ
ーＮＣＩＢ　　１０５９０菌株を１４時間好気的に培養
し、デオキシコール酸１０ｔから１２β−ヒドロキシＡ
ＤＤ９６０ｗＩＩ及び１２α−ヒドロキシプレグナ−１
，４−ジエン−３−オン−２０α−カルボン酸６５７”
ｆを主生産物として得、さらに１２α−ヒドロキシアン
ドロスタ−１，４−ジエン−３゜１７−ジオン、１２β
−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオン
及び１２ξ、１７ξ−ジヒドロキシ−４−アンドロステ
ン−３−オンを微量成分として得るものである。この方
法は１２β−ヒドロキシＡＤＤの収車が１０％未満と低
い点、１２β−ヒドロキシプレグナ−１，４−ジエン−
３−オン−２０α−カルボン酸が１２β−ヒドロキシＡ
ＤＤの収量の約２／３程副生し１２β−ヒドロキシＡＤ
Ｄへの選択率が低い点、及び基質であるデオキシコール
酸の濃度が０．１チと低い点で実用的ではない。なお、
仁の方法ス使用されているシュードモナス・ＳＰ−ＮＣ
ＩＢ　１０５９０　＃ｉ株については、この菌株が動物
糞便から採取され九シュードモナス属に属する細菌であ
ること以外には全く報告されていなし。また、テネンン
（Ｍ、Ｅ。

Ｔｅｎｎｅｓｏｎ　）らによる、嫌気性大腸菌を用いて
デオキシコール酸から１２β−ヒドロキ７ＡＤＤ及び１
２α−ヒト、ロキシプレグナー１，４−ジエン−３−オ
ン−２ｏα−カルボン酸を得る方法、（Ｂｉｏｃｈ＠ｍ
。

Ｓｏｔ、Ｔｒａｎｓ　、　５巻、１７５８〜１７６０頁
（１９７７年）参照〕；オーエン（Ｒ，Ｗ、　０ｖｅｎ
　）　ラＫ　１　ｂ、バクテロイデス・フラギリスＸ　
Ｆ　２３　（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓｆｒａｇｉｌｉｇ
　ＸＦ２３）菌株又はバクテロイデス・フラギリス参サ
ブスピーシーズ・セタイオタオミクロンＥ５９　（Ｂａ
ｃｔｅｒｏｉｄｅａ　ｆｒａｇｉｌｉｉ　ｇｕｂａｐ、
　ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎＥ５９））１１株
を用いてデオキシコール酸から１２β−ヒドロキ７ＡＮ
Ｄ、１２α−ヒトｐキシアンドロスタ−１，４−ジエン
−３，１７−ジオン、１２β−ヒドロキシ−４−アンド
ロステン−３，１７−ジオン及び１２α−ヒドロキシプ
レグナ−１，４−ジエン−３−オン−２０：：α−カル
ボン酸を得る方法（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　Ｔｒ
ａｎｓ、５巻、１７１１〜１７１３頁（１９７７年）参
照〕が知られているが、これらの方法はいずれも嫌気性
菌を用いており、用いる基質が低濃度となること、培養
に長期間を要すること、目的物の収率が低いことなど工
業的に発酵生産するに当り種々の問題点を有する。

本発明者らはデオキシコール酸及び／又はその塩を基質
として１２β−ヒドロキシＡＤＤを生産する微生物の探
索を長期間行なった結果、シュードそナス・スッツェリ
に属する特定の細菌がデオキシコール酸及び／又はその
塩を基質として１２β−ヒドロキシＡＤＤを高選択率、
高収率で生産することを見出し、本発明を完成するに至
った。

本発明者らが得九上記のシュードモナス・スソツエリに
属する細菌としては、シュードモナス・スツツエリＤ−
２９７（Ｐｍｅｕｄｏｍｏｎａｓ　５ｔｕｔｚｅｒＩＤ
−２９７）菌株（微工研菌寄第６１５０号）がある。

この菌株はデオキシコール酸及び／又はその塩を含む培
地で培養された場合、培養期間のいずれの時期において
も１２α−ヒドロキシプレグナ−１゜４−ジエン−３−
オン−２０α−カルボン酸ヲホとんど生産しない点で前
記のバールネスらの方法で用いられたシュードモナス・
エスピーＮＣｌＢ１０５９０藺株とは区別される。

本発明者らが得たシュードモナス・スッツェリＤ−２９
７菌株の自学的性質を列挙すると次表のとおりである。

顕微鏡的所見 形　態　　　　　　　　　　　　桿菌、単画大きさ　　
　　　　　　　　　　０．５Ｘ２．０μ鞭　毛　　　　
　　　　　　　極単鞭毛胞子　　　　　なし ダラム染色　　　　　　　　　　陰　性抗酸性　　　　
　　　　　　　な　し 培地における培養所見 ニュートリエンド寒天平板　　　円形、凸円状、金縁。

培養　　　　　　　　　　　　淡黄色、平滑ニュートリ
エンド寒天斜面　　　拡布状、淡黄色〜桃色、検査　　
　　　　　　　　　　鈍い光沢ニュートリエンド液体静
置　　　厚膜状函膜及び沈渣形成培養 ポテト・グルコース寒天斜面　　拡布状、淡黄色、平滑
培養（注１） ゼラチン穿刺培養　　　　　　　液化せずリドマスミル
ク　　　　　　　　リドマスを脱色せずミルクを凝固、
ペプトン化 せず ＢＣＰミルク　　　　　　　　　　敵　性硝酸塩の還元
　　　　　　　　　　　　　　　　十脱窒反ゐ　　　　
　　　　　　　　　　　　　　＋ＭＲテスト　　　　　
　　　　　　　　　　　　−ｖＰテスト　　　　　　　
　　　　　　　　　　−インドールの生成　　　　　　
　　　　　　　　−硫化水素の生成　　　　　　　　　
　　　　　　士澱粉の加水分解　　　　　　　　　　　
　　　　十クエン酸の利用　　　　　　　　　　　　　
　　十コハク酸の利用１　　　　　　　　　　　　　　
　＋グルタミン酸の利用　　　　　　　　　　　　　　
十ｐ−ヒドロキシベンゾエートの利用＋ 無機窒素源の利用　　　　　　　１　、　　　　　＋ウ
レアーゼ　　　　　　　　　　　　　　　　　　−オキ
シダーゼ　　　　　　　　　　　　　　　　＋カメラー
ゼ　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋ｔＩｔ票に
対する態度　　　　　　　　　　　　　好気的０−Ｆテ
スト　　　　　　　　　　　　　　　　　０（１）Ｌ−
アラビノース　　　　　　士　　　　　　　−（２）Ｄ
−キシロース　　　　　　　十　　　　　　　−（３）
Ｄ−グルコース　　　　　　　＋　　　　　　　−（４
）Ｄ−マンノース　　　　　　　士　　　　　　　−（
６）Ｄ−フラクトース　　　　　　−−（６）Ｄ−ガラ
クトース　　　　　　＋　　　　　　　−（７）マルト
ース　　　　　　　　　　−　　　　　　　　−（８）
シュークロース　　　　　　　−−（９）ラクトース　
　　　　　　　　　＋　　　　　　　　−（ト）トレハ
ロース　　　　　　　　　−　　　　　　　　−ｇｌＤ
−ソルビット　　　　　　　−−１２１０−マンニット
　　　　　　　−　　　　　　　−（１ｂ１イノジツト
　　　　　　　　　−　　　　　　　−に）グリセリン
　　　　　　　　　−−（ロ）デンプン　　　　　　　
　　　−−（注１）：培地組成： ポテトエキス４．Ｏｆ／ｊ、グルコース２０．０ｆ／１
及び寒天１５．Ｏｆ／Ｊ （注２）：生理学的性３！［において、＋、士及び−は
次のことを意味する。

＋・・・・・・その性質又はその生成あシ±・・・・・
・その性質又はその生成の有無が判定し難い−・・・・
・・その性質又はその生成なしく注３）：ヒュー・アン
ド・ライフンン培地の炭素源をそれぞれ糖類１〜１５と
代え九培地での菌による糖類からの酸の生成及びガスの
発生を観察したものである。

十・・・・・・酸の生成又はガスの発生あり±・・・・
・・酸の生成又はガスの発生の有無が判定し難い−・・
・・・・豪の生成又はガスの発生なし上記の表に示した
菌学的性質に基づき、シュードモナス拳スツツエリＤ−
２９７菌株の同定を行なった。シュードモナス・スツツ
エリＤ−２９７菌株は、桿菌であること、極鞭毛を有し
ていること、ダラム染色が陰性であることなどの顕微鏡
的所見並びにオキシダーゼ反■５及びカタラーゼ反応が
ともＫｉｄＩｈ性であること、好気性であること、〇−
Ｆテストの結果が酸化的（０ｘｉｄａｔｉｖｅ　）であ
ることなどの生理学的性質からパージエイズ・マニュア
ル・オブ・デイターミネイティブ・バクテリオロジー第
７版及び第８版に基づき、シュードモナス属に属する細
菌であると同定した。さらにシュードモナス・ス、ツツ
エリＤ　−２９７ＴＭ株ハｓ　ニュートリエンド寒天斜
面上の菌体の色が淡黄色〜桃色である点、可溶性色素を
生成しない点、ゼラチンを液化しない点、脱窒反応を行
なう点、澱粉を加水分解する点などからシュードモナス
属のスツツエリ゛種に緘する細菌であると同定した。

本発明の方法による１２β−ヒドロキシＡＤＤの生産は
、デオキシコール酸及び／又は・その塩を基質として１
２β−ヒドロキシＡＤＤを生産するシュードモナス・ス
ツツエリに属する細菌を、デオキシコール酸及び／又は
その塩を含む培地に培養することにより行なわれる。デ
オキシコール酸の塩としては具体的にはデオキシコール
酸のナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属の塩又は
カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属の塩
である。デオキシコール酸及び／又はその塩の濃度は通
常的１〜２００９／ｌの範囲でよいが。

生産される１２β−ヒドロキシＡＤＤの収量、培養条件
及び操作性などの経済的観点から約１０〜１０（１／Ｊ
の範囲が好ましい。培養方法は原則的には一般微生物の
好気培養で採用される方法と同じであるが、通常は液体
培地による振盪培養法又は通気攪拌培養法が用いられる
。培地としては上記のデオキシコール酸及び／又はその
塩を基質として１２β−ヒドロキシＡＤＤを生産するシ
ュードモナス・スツツエリに属する細菌が資化利用でき
る栄養源を含有するものであればよい。炭素源としては
デオキシコール酸及び／又はその塩を単一炭素源として
もよく、或いはデオキシコール酸及び／又はその塩にア
ラビノースなどのベント−ｘａ　；　ｙルコース、マン
ノース、フラクトース、ガラクトースなどのヘキソース
類；シュークロース、マルトースなどの二゛糖類；澱粉
分解物；糖アルコール拳、グリセリンなどの多価アルコ
ール類；又はポリペプトン、ペプトン、肉エキス、麦芽
エキス、コーンステイープリカー、酵母エキス、各種−
アば）酸、有機酸などを併用してもよい。また窒素源と
しては、例えば硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、
燐酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム
、硝酸カリウムなどの無機窒素源、又はポリペプトン、
ペプトン、肉エキスなどの有機窒素源が用いられる。ま
た、この他に燐酸水素２カリウム、燐酸２水素カリウム
、硫酸マグネシウムなどの無機塩類が添加される６培養
条件に特徴はないが、通常２５〜３５℃で１０時間〜７
日間振盪培養又は通気攪拌培養を行なう。

このようにして培養液中に蓄積された１２β−ヒドロキ
シＡＤＤを分離、採取するには、１２β−ヒドロキシＡ
ＤＤを溶解しかつ水と相分離する有機溶媒、例えば酢酸
エチル、クロロホルム、クロロホルムとメタノールの混
合液などを用いて抽：：：。

出する方法が採られる。この有機溶媒による抽出は、画
体を含んだ状態の培養液について行なってもよいし、予
め培養液中の菌体その他の不溶成分を濾過又は遠心分離
などＫよシ分離除去し、得られた培養濾液又は上清につ
ｉて行なってもよい。

後者の抽出方法を採る場合には、必要に応じて瀘過又・
は遠心分離などによって分離除去される不溶成分につい
て上記の有機溶媒による抽出操作を行なうことにより、
培養液中に析出又は沈澱している１２β、−ヒドロキシ
ＡＤＤを回収することができる。仁のようにして得られ
た抽出液を集め、これよりｅ媒を溜去することによって
目的とする１２β−ヒドロキシＡＤＤをほぼ全量回収す
ることができる。得られた抽出物中には１２β−ヒドロ
キシＡＤＤの他に残存基質のデオキシコール及び／又は
その塩並びに副生物が含まれており、その抽出物を例え
ばシリカゲルカラムに吸着させ、クロロホルムとエタノ
ールの混合液で溶出させることによシ１２β−ヒドロキ
シＡＤＤｔ−取得することができる。

本発明の方法により得ら−れる１２β−ヒドロキシＡＤ
Ｄは、その人環を部分水添し１２位のヒドロキシ基を化
学的に除去することによって利尿剤として有用なスピロ
ノラクトンなどのステロイドの合成原料となる４−アン
ドロステン−３，１７−ジオンに誘導することができる
。例えば、１２β−ヒドロキシＡＤＤをトリス（トリフ
ェニルホスフィン）クロロホルムを用いて部分水添する
ことにより１２β−ヒドロキシ−４−アンドロステン−
３，１７−ジオンを得［Ｃ，Ｄｊｅｒａａｓ＋ｉ　　ａ
ｎｄ　Ｊ。

Ｇｕｔｚｗｉｌｌｅｒ、Ｊ、　Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ
、、　８８巻、４５３８〜４５３９画（１９６６年）参
照〕、この１２β−ヒドロキク−４−アンドロステン−
３，１７−ジオンを２−メチル−２−エチル−１，３−
ジオキンランと反応させることにより３位と１７位のケ
ト基が保護された１２β−ヒドロキシ−１５−アンドロ
ステン−３゜１７−シオンー３．１７−ビス（エチレン
アセタール）を得る［Ｇ、　Ｒｏｓｅｎｋｒａｎｚ　ａ
ｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ。

５ａｃ０．７６巻、５０２４〜５０２６頁（１９５４年
）参照〕。

コノアセタールｔｐ−１ルエンスルホニルクロリドでト
シル化し、５８水素化トリエチルホウ素リチウムで還元
【７て１２位のヒドロキシル基を脱離後、鉱＃Ｉ／アセ
トンで処理して３位と１７位の保護基を脱離させること
によシ４−アンドロステン−３゜１７−ジオンとするこ
とができる。

以下実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。

実施例１ シュードモナス・スツツエリＤ−２９７１ｍ（微工研菌
寄第６１５０号）を次に示す方法で培養した。デオキシ
コール酸ｓｔｓ硝酸アンモニウム０．２９％燐酸２水素
カリウム０．１ｆ、燐酸水素２カリウム０．５Ｆ、硫酸
マグネシウム・７水和物これを培地とした。この培地を
５００ｄ容坂ロフラスコに入れ、１２０℃で１５分間、
蒸気殺菌を行なった。予め上記の培地と同じ培地で試験
管伽盪機にて２日間増殖させた種菌の１０−を上記の５
００ＭＬｌ容坂ロフラスコに添加し、３０℃で６日間振
盪培養した０培養後、との墳養液を集ヤ、−心分離機で
一体を除去後、得られた培養液上清をクロロホルム／メ
タノールの２／１容量比の混合液でクロロホルム／メタ
ノール混合液を溜去することにより、３．４ｆのデオキ
シコール酸の酸化生成物及び未変換のデオキシコール酸
の混合物を得た。

上記の混合物ρ極く一部を取シ、これにメタノールを加
えて１チ溶液とし、この溶液１０μｍをミクロボンダパ
ックＣ−１８カラ′ムを備えた高速液体−クロマトグラ
フィー（米国ウォーターズ社′製、田４．０に調整した
水／メタノールの２５／７５容量比の混合液を流速１１
／分で流し、検出を屈折率方式で行なったとζろ第１図
のクロマトグラムが得られた。とのクロマトグラムにお
けるピークＡ１ビークＢ１　ピークＣ１ピークＤ及びピ
ークＥは標準品のピークと縄合するこ゛とによ□り各々
１２β−ヒドロキシＡＤＤ、１２ｚ−ヒドロキシプレグ
ナ−今、１ １２α−ヒドロキシ−３−ケト−５β−コラン酸及びデ
オキシコール酸のものと一致した。

上記の混合物３ｔを少量のクロロホルムに静解させ、５
０Ｆのシリカゲルカラムに吸着δせた。

このカラムにクロロホルム／エタノールのｙ証比が９９
／１．９８／２．９７／３．９５１５及び９０／１０の
各々の混合液５００　ｄをこの順序で流し％溶出液を１
０ｇｊ宛フラクションチューブに分取し、薄層クロマト
グラフィーによシ単一スポットを与える画分をそれぞれ
合わせ、ロータリー・エバポレーターで溶媒を溜去した
。その結果、クロロホルム／エタノールの９９／１容量
比の混合液による溶出画分から１２β−ヒドロキシＡＤ
Ｄを７１０１１９侍、クロロホルム／エタノールの９８
／２容量比の混合液による溶出画分から１２ａ−ヒドロ
キシ−３−ケト−４−コレン酸を６０ｖ得た。クロロホ
ルム／エタノールの９７／３容量比の混合液による前半
の溶出画分から１２α−ヒドロキシ−３−ケト−５８−
コラン酸を４０岬得、その後半の溶出画分及びクロロホ
ルム／エタノールの９５１５　容量比の混合液による前
半の溶出画分から１２α−ヒドロキシプレグナ−１，４
−ジエン−３−オン−２０α−カルボン酸を３０”ｆ得
た。また、クロロホルム／エタノールの９０／１０容量
比の混合液による溶出画分からデオキシコール酸を６８
０”ｆ回収した。得られた各々の化合物を王妃の方法で
向定した０ １２βニヒドロキシＡＤＤ　　　”　　　　　　　　　
’融点：２１３℃ −ｑｘｘぺｐ）ルｍ／ｚ　：　３０Ｇ（ＭＥ”　　２８
５［Ｍ−ＣＨｓ］”。

２８ゼ・（Ｍ−Ｈ＊Ｏ）”°　　・ またｍ／ｚ＝１２２より３−ケト−１，４−ジエンの存
在が確認された。

ＣＤα８゜ 、ＮＭＲｘベクトル（９０ＭＨｚ　）、δＨＭＳ　・　
　　　　　、０．９６（３Ｈ，５）１８−ＣＨ８ １，２１（３Ｈ，畠）　［１−’ＣＨｓ２．３０〜２．
５０（２Ｈ，ｍ）　１６−ＣＨｓ　　　　　’３．７２
（１，Ｈ，ｄｄ、Ｊ＝５Ｈｚ及びｌ０ＨＦ）、ＩＷａ−
Ｈ６，０６（ＩＨ，５）４−Ｈ ６，２０（ＩＨ，ｄ、　Ｊ＝１０Ｈｚ）　２−Ｈ６，９
８（ＩＨ，ｄ、　Ｊ＝１０Ｈｚ）　１−Ｈｌ２α−ヒド
ロキシプレグナ−１，４−ジエン−３−オン−２゜α−
カルボン酸 −ｗｘｘぺｌ　トルｒｎ／ｗ　：　３５８（ＭＥ＋（３
４０（Ｍ−ＨｚＯ）” ３２２（Ｍ−４Ｈ怠０〕１゜ ｉ九ｍ／Ｖす２２より３−ケト−１，４−ジエンの存在
が確認され１ｍ／ｚ＝７４より一〇Ｈ−Ｃｏｏｌの存在
が確認された。、、　　　　　　　　　　　　さ出ＤＭ
ＳＯ−ｄ６　。

ＮＭＲｘベク）＃（９０ＭＨ１）ＪＨ，ｓ　　。

０．６５　（３Ｈ、ｓ　）　１８−ＣＨｓｌ、０５　（
３Ｈ，ｄ　）　２１−ＣＨｓ１．１３（３Ｈ，１）１９
−ＣＨｓ ３．７４（ｌ）ｌ、　ｔ　、　Ｊ−３Ｈｚ）　１２β−
Ｈ１２α−ヒドロ中シー３−ケトー４−コレン酸マスス
ペクトＪｌ／　ｍ／ｉ　：　３８８　（Ｍ）”３７Ｇ（
Ｍ−ＨｔＯ）“ ３５５　（Ｍ−ＨｓＯ−ＣＨｓ　）” またｍ／１＝１２４よし３−ケト−４−エンの存在が確
認され、ｍ／　ｚ　ｚ　６６より−Ｃ石−ＣＯＯＨの存
在が確認された０ ０．６０（３Ｈ，ａ）１８−ＣＨｓ　　−０，８６（３
Ｈ，ｄ　）　２　’１−ＣＨｓ１．０７　（３１（、畠
）１９−ＣＨｓ３．７５（ＩＨ，ｔ　、　Ｊ＝３Ｈｚ）
　１２β−■５．５６（ＩＨ，ｍ）４−Ｈ １２α−ヒドロキシ−３−ケト−５β−コラン酸マスス
ペクトルＩｎ／Ｚ　：３９０（Ｍ）＋’３７２　（Ｍ−
Ｈ２Ｏ，１＋“。

３５４〔Ｍ−２Ｈ２０）“。

３３　ｇ　（’Ｍ−２ＨｚＯ−Ｃ）Ｉｎ　）　”またｍ
　／　Ｚ　＝　５　Ｑより−ＣＨトＣθＯＨの存在が確
認された。

ＮＭＲユｇ　ｌ　、ｙｖ　（９゜ＭＨｚ）δＤＭＢＯ−
ｄ６　。

０．５７（３Ｈ，ａ）　１８−ＣＨＩ ｏ、８３（３Ｈ，ｄ）２１−ＣＨｓ ｏ、８９　（３Ｈ，ｓ　）　１９−ＣＨｓ３．７６（Ｉ
Ｈ，ｔ、Ｊｌ＝３Ｈｚ）１２β−Ｈ第１図のクロマトグ
ラムにおける各ピークの面積比を積分針（島津製作所製
、島津クロマトパックＣ−ＲＩＡ’）で求め、この面積
比から得られたデオキシコール酸の酸化生成物の収量及
び未変換ル酸の残存量を門出すると次表の とおりである。

【図面の簡単な説明】

第１図社実施例１で得られ九デオキシコール酸の酸化生
成−及び未変換のデオキシコール酸の液体クロマトグラ
ムを表わすａ 補出麩　株式会社り　ラレ 代理人弁場士本多　竪 手続補正書（自発） 昭和５７年　１月　１１日 特許庁長官島田春樹殿 事件の表示 昭和５６年特許願第１６３９６８号 ３．１７−ジオンの製造法 （１０８）株式会社り　ラ　し 代表取組に岡林次男 ６、補正の内容 （１）明細書＃Ｉｌ貞ｇ６〜１５行の記載（特許請求の
範１ａｉ）を別紙のとおり訂正する。 （２）明細書第２貞第３〜４行における「主炭巣源とし
て」ｔ−削除する。 以上 ；別紙）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. デオキシコール酸及び／又はその塩を基質として１２β
   −ヒドロキシアンドロスタ−１，４−ジエン−３，１７
   −ジオンｅ生１ｉｔ、＆シュードモナス・スツツエリに
   属する細菌管、主炭素源としてデオキシコール酸及び／
   又はその酸を含む培地に培養シて１２β−ヒドロキシア
   ンドロスタ−１，４−ジエン−３，１７−ジオンを生成
   せしめ、これを採取することを特徴とする１２β−ヒド
   ロキシアンドロスタ−１，４−ジエン−３，１７−ジオ
   ンの製造方法。