JPS6013777A - 新規化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は一般式■ １ を表わす）で示される化合物に関する。

前記式■は本明細書で以後リゾスタチンと称すで示され
る（２８，３８．５８．７Ｚ、１０Ｚ）−５−（（１９
）−２−ホルムアミド−４−メチル−バレリルオキシ）
−２−ヘキシル−６−ヒトロキシー７．１０−へキサデ
カジエン酸ラクトンおよび以後、テトラヒドロリプスタ
チンと称する式％式％（） カン酸ラクトンを包含する。

これらの化合物は新規であって、有用な薬理学的性質を
有する。特に、これらの化合物は膵リパーゼを阻害し、
肥満症および脂肪過剰血症の管理または予防に使用でき
る。

本発明の目的は化合物自体および薬理学的活性物質とし
ての式■の化合物、これらの化合物の製造、式■の化合
物を含有する医薬製剤および工業生産食品、それらの製
造方法並びにこれらの化合物の病気の管理または予防に
おける使用にある。

食物により摂取される脂肪（トリグリセリド）の消化は
膵リパーゼにより腸で行なわれる。膵リパーゼはトリグ
リセリドの１級エステル結合を分裂させ、かくして生成
物として遊離脂肪酸および２−モノグリセリドが生成さ
れる。これらの生成物は次いで吸収され、利用できる。

膵リパーゼを阻害することにより、食物脂肪の前記分裂
およびこれらの物質の吸収および利用が部分的に防止さ
れる；トリグリセリドは未変化の形で排泄される。

式Ｉの化合物による膵リパーゼの阻害作用は豚膵リパー
ゼによるトリオレインの分裂で遊離されるオレイン酸を
滴定法で記録することにより実験的に証明できる。１ｍ
Ｍタウロデオキシコレート、９　ｍＭタウロデオレエー
ト、Ｑ、１ｍＭコレステロール、１ｍＭ卵レシチン、１
５　ｍ９７ｍ１　ＥＳＡ　、２　ｍＭ　トリス−ＨＯＩ
　、１Ｑ　Ｑ　ｍＭ塩化ナトリウム、１ｍＭｑ化カルシ
カルシウム基質トリオレインを含有するエマルジョンを
エタノールマタはジメチル　スルホキシド中に溶解した
弐Ｉの化合物（エマルジョン容量の１０係）で処理し、
反応を脹脛リパーゼ１００μｍ（１７５Ｕ）の添加によ
り開始させる。

−は反応中、水酸化ナトリウムの添加により８に維持す
る。工Ｃ５ｏを１０分間の間、測定された水酸化ナトリ
ウムの消費量から計算する。工Ｃ５ｏはリパーゼの反応
性が最大値の半分まで阻害される濃度である。下記第１
表に、式■の化合物について決定された工Ｃ５ｏ値およ
び急性毒性に関するデータ（マウスに年次経口投与した
後のＬＤ５ｏ）を示す０　第１表 膵リパーゼの阻害により得られる食物からの脂肪の吸収
の抑止はマウスにおける二重標識実験により証明できる
。この目的には、実験動物に３Ｈ−トリオレインおよび
１４Ｃ−オレイン酸を含有する試験食および式Ｉの化合
物を与える。放射能を測定することにより、糞便から排
泄される３Ｈ−トリオレイン酸および１４Ｃ−オレイン
酸の量（与えられた量の係による）を測定する。下記第
２表に示されている結果は、非処理対照動物に比較して
、−未変化トリグリセリドの排泄が格別に増加し、およ
びオレイン酸の排泄がほとんど変化しないことを示して
いる。

第２表 ＊　実験は約１０チリシスタチン含有製剤を用いて行な
った。特記されている投与量は投与したりシスタチンの
量である。

式■の化合物は次の方法により製造できる：ａ）式■ａ
の化合物を製造する場合に、この化合物を生産するスト
レプトマイセス　トキシトリキニ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ　ｔｏｘｙｔｒｉｃｉｎｉ　）種の微生物を適当
な炭素源および窒素源並びに無機塩を含有する水性培養
培地中で通気培養し、次いで培養プロスから生成した式
１ａの化合物を分離するか、または ｂ）弐Ｉｂの化合物を製造する場合に、式１ａの化合物
を水素添加する。

リプスタチン、すなわち式■の化合物を生産するストレ
プトマドセス種は種々の場所からの土壌試料から単離で
きる。例としては、スペイン国マロルカ（Ｍａｌｌｏｒ
ｃａ　）で採取した土壌試料から単離した微生物があり
、これはストレプトマドセス種８５−１３の研究所名称
が与えられており、そしてＣ！ＢＳ（バーレン、オラン
ダ国）により、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅａ　ｔｏｘｙｔ
ｒｉｃｉｎｉ　Ｐｒｅｏｂｒａｚｈｅｎｅｋａｙａ　＆
５ｖｅｓｈｎｉｋｏｖａとして同定されている（　Ｂｅ
ｒｇｅｙのＭａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔ
ｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、８版、８１１頁参
照〕。この際に、新しい番号ストレプトマイセストキシ
トリキニ８５−１３を受けた。

この種の真空凍結試料は寄託番号ＮＲＲＬ　１５４４３
として、Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ
　Ｃｕ１ｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　（Ｐｅｏｒｉ
ａ　、工１１ｉｎｏｉｓ　）に、　１９８６年６月１４
日付で寄託された。

ストレプトマイセス種８５−１３の同定の詳細を以下に
記載する： 培地： 使用培地の組成は工ｎｔ、　Ｊ、５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏ１１９６６．１６．３．３１３〜６２１に記載
されている。

ツノムラ　ダイヤグラム ツノムラはストレプトマイセス種の分類についてＩｎｔ
Ｑｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｐ
ｒｏｊｅｃｔ　（工ｓｐ）の結果を使用した（　、Ｔ、
Ｆｅｒｍｅｎｔ、　Ｔｅｃｈｎｏｌｌ、１９７４、５２
、２）。

色 好気性菌糸体の名称およびコード番号はＴｒｅｓｎｅｒ
およびＢａｃｋｕｓの「Ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｃｏｌｏ
ｒ　ｗｈｅｅｌｓ　ｆｏｒｅｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔｅ
　ｔａｘｏｎｏｍｙ　Ｊを採用する。コロニイの背面の
色はＢａｕｍａｎｎの「Ｆａｒｂｔｏｎｋａｒｔｅ　Ａ
ｔ１ａｓ工」からのＨｌＰｒａｕｓｅｒの選択を採用す
る。

方法 方法はＩＳＰ法により行なう（工ｎｔ、Ｊ、　５ｙｓｔ
。

Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ　、ｌ　９　６　６、　１　６、　
３：３１３〜ろ４０）。

生育：豊富；コロニイ：薄く展延；好気性菌糸体：ビロ
ード状の帯桃褐色（Ｌｉｇｈｔ　Ｂｒｏｗｎ　５７　）
　；コロニイの背面：広い紫−灰色（Ｐｒ、ＱＣ−６−
Ｘ）の縁を有する帯黄色（Ｐｒ、　Ｃｏｏ　−３−ｍ）
　；可溶性顔料：疑わしい。

ｂ）デンゾンー塩寒天 生育：良好；コロニイ：薄く展延；好気性菌糸体：ビロ
ード状で白色扇形を有する帯桃褐色（ＬｌｇｈｔＢｒｏ
ｗｎ　５７　）　；コロニイの背面：暗麦わら色に着色
した（　Ｐｒ、　Ｃ！ｏｏ（１：！ｒ）　５ａ　）　縁
およびその他のいくらかの部分は若干の暗帯赤褐色（Ｐ
ｒ、　０−５−８（ｒ））の斑点を有する帯桃色（Ｐｒ
、０ｃ−５−ｂ）　；可溶性顔料：疑わしい。糖化作用
が優れている。

Ｃ）グリセリン−アスパラギン寒天 生育：良好；コロニイ：薄く展延；好気性菌糸体：ビロ
ード状で淡帯桃褐色（Ｒ４ｅｃ　：　ＧｒａｙｉｅｈＹ
ｅｌｌｏｗｉｓｈ　Ｐｉｎｋ　）　；　コｏ　＝イの背
面ニオレンジ色（Ｐｒ、　Ｏｃ−６−ｍ／ｒ）；可溶性
顔料：淡帯桃褐色。

ｄ）イースト　モルト寒天 生育：良好；コロニイ：薄く展延；好気性菌糸体：帯赤
褐色（４ｇｅ　：　Ｌｉｇｈｔ　Ｇｒａｙｉｅｈ　Ｒｅ
４ａｉｅｈ　Ｂｒｏｗｎ４５）；コロニイの背面：黄色
（Ｐｒ、　Ｃｏｏ−４−５）および暗褐色（Ｐｒ、　Ｏ
ｃ　−５−ｒ　）　：可溶性顔料：非常に淡い帯黄褐色
。

生育：良好；コロニイ：薄く展延；好気性菌糸体：粉っ
ぽいビロード状で、広い、非常に淡い縁を有するシナモ
ン色（Ｒ，５ｇｃ　：　Ｌｉｇｈｔ　Ｒｅａｄｉａｈ　
Ｂｒｏｗｎ（４，２）　−Ｐｅａｃｈ　Ｔａｎ　〕；　
：１　ロニイの背面ニオ−クルー黄色（Ｐｒ、Ｃｏｏ−
３−ａ　）の縁を有する帯黄褐色、明るい（Ｐｒ、　０
ｃ−４−ｒ　）中心に向って僅かに灰色がかっている；
可醍性顔料：淡いオークルー褐色。

ｂ）、デンゾンー塩寒天 オートミール寒天の場合と同様であるが、変化する帯灰
褐色背面（Ｐｒ、　Ｏｃ　−７５−ｃ　）および暗褐色
（Ｐｒ、　Ｏｃ　−４−ｒ　）斑点およびあや目陰影の
末端に環を有する。

Ｃ）グリセリン−アスパラギン寒 デンゾンー塩寒天の場合と同様であるが、さらに淡い明
るいベージュ色（５ｅｃ　：　ＧｒａｙｉｓｈＹｅｌｌ
ｏｗｉｓｈ　Ｐｉｎｋ　３２−　Ｄｕｓｔｙ　Ｐｅａｃ
ｈ　）　；背面ニオ−クルー黄色（Ｐｒ、　Ｃ！ｏｏ　
（＝　Ｏｒ　）　−４−ｂ　〕、中心がさらに淡い；可
溶性顔料なし。

ｄ）イースト−モルト寒天 生育：明瞭；コロニイ：オートミール寒天の場合と同様
であるが、非常に薄い、淡い灰色の縁を有する；背面：
暗黄色（Ｐｒ、　Ｃ！ｏｏ　−４−ｂ　）、縁近くの領
域は暗褐色；可溶性顔料：疑わしい。

■６　メラノイド（Ｍｅｌａｎｏｉｄ　）顔料ペゾトン
ーイーストエキス寒天：２４時間後に陰性、４８時間後
に陽性；チロシン寒天：２４時間後に陽性、４８時間後
に陽性。

■、胞子形成性好気性菌糸体の形態学 切断面ニスピラー支帯口（ｇｐｉｒａ　−ｒｅｔｉｎａ
ｃｕ１ｕｍａｐθｒｔｕｍ　）。仮軸分枝形。ループは
多くの場合に直径が異なる５巻きまでで、長方形。

アラビノース、キシロース、イノシトール、マニトール
、フラクトース、ラムノース、サッカロース、ラフィノ
ース上で生育しないか、または僅かにだけ生育。

■、胞子 卵形ないし円柱−卵形、時により不規則な寸法、なめら
かな壁面。胞子鎖は１０個より多い胞子を有する。

■、ツノムラ　ダイヤグラム Ｒ（Ｇ７）　１００　ＳＲＡ　ｓｍ　（±）（±）（±
）・・・・・・リパーゼ阻害剤リプスタチンを生産する
全てのストレプトマイセス種、特にストレゾトマイセス
トキシトリキニ　８５−１３、ＮＲＲＬ１５４４３、お
よびそのサブカルチャー、変異菌および変異種が本発明
の目的に適している。

リゾスタチンを製造するためのこれらの微生物の培養は
種々の醗酵法により実施できる。たとえば動揺フラスコ
中で、あるいは１０ｔまたは２００ｔおよびｉ　ｏｏｏ
ｚ醗酵器で実施できる。リプスタチン生産仕種の胞子ま
たは菌糸体の一定量を、適当な炭素源および窒素源並び
に生育に要する塩を含有する液体培地に導入し、混合物
を２０’〜３７℃の温度で１〜６日間、通気インキュベ
ートする。適当な炭素源としては、たとえばデキストリ
ン、グルコース、デンプン、ｌＪ＆−スおヨヒクリセリ
ンがある。適当な窒素源には、たとえばイースト　エキ
ス、ペプトンまたは大豆ミールがある。好適な塩はアン
モニウム、マグネシウムおよびカルシウム塩である。醗
酵はｐＨ６〜８で行なう。

リゾスタチンの単離はそれ自体既知であって、当業者が
精通している方法に従い行なう。たとえば、単離は次の
方法で実施できる： 醗酵の完了後に、醗酵プロスな遠心分離すると、活性の
６０〜９０係が細胞塊中に見い出され、残りが遠心分離
液中に見い出される。細胞塊は次いでメタノールおよび
エタノールのような低級アルコールで処理し、同一溶剤
で抽出できる。遠心分離液は適当な有機溶剤で（たとえ
ば塩化メチレンまたは酢酸エチルで）抽出できる。抽出
液から生成した物質は所望のりデスタチンを含有してお
り、濃縮でき、クロマトグラフィ法により精製できる。

適当な方法には、たとえばへ、キサン／メタノール／水
（５０：４０：９）系による複合拍出、シリカケ９ル上
での溶出液としてクロロホルムヲ用いる濾過クロマトグ
ラフィ、シリカケ９ル上での溶出液としてヘキサン、酢
酸エチルおよびその混合物を用いるカラム　クロマトグ
ラフィ、非極性担体物質上での溶出液としてメタノール
のような極性溶剤を用いるクロマトグラフィ（逆転相ク
ロマトグラフィ）および高圧液クロマトグラフィがある
。

下□記の例はストレプトマイセス　トキシトリキニ８５
−１３の培養およびリプスタチンの単離に関する詳細な
情報を含んでいる。

弐Ｉｂの化合物であるテトラヒドロリゾスタチンはりデ
スタチンを適当な触媒の存在下に水素添加することによ
り製造できる。使用できる触媒の例にはパラジウム／炭
素、酸化白金、パラジウム等がある。適当な溶剤として
は、たとえばメタノールおよびエタノールのような低級
アルコールがある。水素添加は低水素圧および室温で行
なうと好ましい。

式■の化合物は、たとえば医薬製剤の形で医薬として使
用できる。医薬製剤は、たとえば錠剤、被覆錠剤、糖剤
、硬質および軟質ゼラチン　カプセル剤、溶液、エマル
ジョンまたは懸濁液の形で、経口投与できる。

医薬製剤を製造する場合に、式Ｉの化合物は医薬上で不
活性な無機または有機担体を用いて処理できる。錠剤、
被覆錠剤、糖剤および硬質ゼラチン　カプセルに使用で
きる担体の例には乳糖、トウモロコシ　デンプンまたは
その誘導体、タルク、ステアリン酸またはその塩等があ
る。軟質ゼラチン　カプセル用に適する担体には、たと
えば植物油、ワックス、脂肪、半固体および液体ポリオ
ール類等がある；しかしながら、活性成分の性質によっ
ては、軟質ゼラチン　カプセルの場合に担体は一般に不
必要である。溶液およびシロップの製造用の適当な担体
には、たとえば水、ポリオール類、ショ糖、転化糖、グ
ルコース等がある。

さらにまた、医薬製剤は保存剤、可溶化剤、安定化剤、
湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、風味剤、浸透圧を変
えるための塩、援衝剤、被覆剤または酸化防止剤を含有
できる。これらはまたその他の治療的に有用な物質を含
有できる。

前記したように、式Ｉの化合物を含有する医薬はまたこ
れらの医薬の製造方法とともに本発明の目的であり、こ
の方法は式Ｉの化合物および所望により１種または２種
以上のその他の治療的に有用な物質を調剤投与形にする
ことを包含する。前記したように、式Ｉの化合物は病気
の管理または予防に、特に゛肥満症たよび脂肪過剰血症
の管理または予防に使用できる。投与量は広い限度内で
変化させることができ、各特定の場合における個々の要
求に適合させることは勿論のことである。一般に、経口
投与の場合に、約０．１■〜１００ｍ９／に９体重の１
日薬用量が適当であるべきである。

式Ｉの化合物はまた工業生産食品、特に脂肪、油、バタ
ー、マーガリン、チョコレートおよびその他の菓子食品
に添加できる。このような工業生産食品およびそれらの
製造はまた本発明の目的である。

次側は本発明をさらに詳細に説明するものであるが、本
発明の範囲を制限しようとするものではない。全ての温
度は摂氏度で示す。

例　１ ａ）醗酵 予備培養培地３９１を含有する動揺フラスコにストレプ
トマイセストキシトリキニ８５−１３の胞子（またはそ
の生長能力のある菌糸体）を接種し、動揺培養物として
２８℃で７２時間、通気インキュベートする。この培養
物の約２〜５容量％を使用して予備培養培地６９１を含
有する１０１醗酵予備培地に接種する。インキュベーシ
ョンはｉ　ｖｖｍで通気しおよび４００　ｒｐｍで攪拌
しながら、２８°で６日間行なう。この１０１予備培養
物を使用して、生産培地ＮＺを含有する２００１生産醗
酵器に接種する。醗酵は１．Ｑｖｖｍの通気下に、１５
０　ｒｐｍで攪拌しながら２８°で１２４時間行なう。

規定の分析は１２４時間後に、５６エＣ５゜／罰の細胞
外リパーゼ阻害活性を示す。

予備培養培地３９１　（ｐＨ７，０）は次の組成を有す
る：トウモロコシデンプン３％、デキストリン４％、大
豆ミール３％、（ＮＨ，）２Ｓｏ、　０．２％、ＣａＣ
Ｏ３０，６％および大豆油０．８％。ＰＨは７に調整す
る。生産培地Ｎ７（ｐＨ７，０）は次の組成を有する：
ジャガイモデンプン１％、グルコース０．５％、リボー
ス１％、グリセリン０．５％、ペプトン０．２％、大豆
ミール２％および（ＮＨ４）２Ｓｏ、　０．２％。

ｂ）仕上げ： 醗酵ブロスを管遠心分離機により遠心分離し、培養濾液
１７５１および菌糸体１２ｋｙを得る。培養濾液を８０
°に１０分間加熱し、冷却させ、再度遠心分離し、次い
で６０°で減圧下ζこ５０１に濃縮する。この濃縮物を
連続作業性抽出機を用いてヘキサン５０ノで抽出し、得
られたエマルジョンをヘキサン／酢酸エチル（１：１）
５０Ａ’と混合し、有機相を分離する。これを硫酸ナト
リウム上で乾燥させ、蒸発させ、粗抽出液１　１９９ｇ
を得る。水性相は水で１００ノに稀釈し、酢酸エチル１
００ノで抽出する。この酢酸エチル溶液を蒸発させた後
に、粗抽出液１１４９．！９を得る。水性相はついでも
う１回、酢酸エチルＩ　ＯＯＡ’でさらに抽出する。こ
の場合ｌこ蒸発後に粗抽出液１７８Ｓを得る。

Ｃ）　’！ＦＩ製： 粗抽出液■および１を３つに分けて、各回シリカゲル６
０（粒径０．０４０〜［］、０６３ｍｍ）　Ｉｋｙ上で
濾過し、溶出はクロロホルムで行なう（カラム：１０Ｘ
１００ＣＴＬ）。濃厚になった物質１８．３　ｇがこの
方法で得られる。この物質１７８ｇをシリカゲル１　ｋ
ｙ上で溶出液としてクロロホルムを用いて再度濾過する
。かくして活性物質５．２９．９を得る。

この物質８０２ｍ９を市場で入手できるＬｏ　ｂａ　ｒ
カラム（Ｌｉｃｈｏｐｒｅｐ　ＲＰ　−８、サイズＣ）
上で、溶出液としてメタノールを用いて逆転相クロマト
グラフィにより精製する。室温で帯黄色油状物である（
２Ｓ、３Ｓ、５８％　７Ｚ、１ｏｚ）−５−［：（Ｓ）
−２−ホルムアミド−４−メチル−バレリルオキシ〕−
２−へキシル−３−ヒドロキシ−７，１〇−へキサデカ
ジエン酸ラクトン（リプスタチン）１５８’ｍｐを得る
。これは低温でワックス状−結晶である。

微量分析（５０°で高圧において２０時間乾燥後）：Ｃ
２９Ｈ４，Ｎｌ０５（４９１，７１３）について、計算
値：　Ｃ７０，８４；　Ｈ１０，０４；　Ｎ　２．８丁
実測値：　Ｃ７０，８５；　Ｈ９，９７；　Ｎ　２．５
９光学飾光度：〔α〕ＢＯ，＝　−１９，０°（クロロ
ホルム中Ｃ＝１）。質量スペクトル（試薬気体としてＮ
Ｈ３を用いる化学イオン化）：特に、ｍｌＺ５０９（Ｍ
　十ＮＨ４＋）および４９２（Ｍ＋Ｈ＋）にピークを有
する。

ＩＲスペクトル（フィルム）：特に、６３１８．３０１
２．２９２８．２５５８．２７４５．１８２３．１７４
０．１６７６．１５２１．１６８２．１３７０，１２５
０，１１９１ｃ７ｎ−１゜絶対配位はリプスタチンを化
学的に分解させ、既知物質で得られた各部分と比較する
ことにより確定できる。

例　２ ａ）醗酵： 生産培地Ｎ１６を含有する２００７醗酵器（と、例１に
より生成されたストレプトマイセストキシトリキニ８５
−１３の予備培養物（振盪フラスコおよび１０！醗酵）
を接種する。生産培地Ｎ　ｉ　６は例１で使用した年産
培地ＮＺに相当するが、但しさらに豚ラード０．１％を
含有する。′醗酵は例１にＳ己載のとおりにして１２０
ｊ群１０Ｊ行なう。１２０時間後に、絹胞円すパーゼー
阻害活注は７１１Ｃ５゜／醗酵ブロスｌ　ｍｌに相当し
、そして細胞外リパーゼ−阻害活性は４工Ｃ５０／醗酵
ブロス１縦に相当する。

ｂ）仕上け： 醗酵の完了後に、醗酵ブロスを８０°で１０分間加熱し
、次いで冷却させ、細胞塊を管遠心分離機を用いて分離
する。２重遠心分離により、両糸体１１．４＆ｙを得る
；培養物濾液は捨てる。菌糸体をメタノール７０１（！
：３０分間すりませ、得られた憑濁液を吸引濾過する。

濾過ケーキを再度、メタノール５Ｑｍｌとすり韮ぜ、次
いて吸引濾過する。

集めたメタノール性抽出液を１．８４にｔψ縮する。

この敲縮液を各回２Ｚの酢酸ブチルて３回抽出する。集
めた有機相から蒸発後に粗抽出液１６０ｇを得る。

Ｃ）精製： この粗抽出液をヘキサン／メタノール／水（５：４　：
　０．９　）系を用いる複合抽出により精製する。

活性物質を先ず、下方の相（ｌｐ　）から上方の相（ｕ
ｐ　）に移す。粗抽出液１６０ＩをｊＪｐ　４１１に溶
解し、攪拌容器中てｕｐ　４ノとともに攪拌する。

ｕｐを分離した後に、ノｐを新鮮なｕｐ　４　Ｊｌて２
回抽出する。安定なエマルジョンを生成し、これにｌｐ
　４１１およびｕｐ　４７を加えると、良好な相分離が
得られる。ｕｐを分離した後に、ｌｉｐを新鮮なｕｐ８
１でさらに２回抽出する。集めたｕｐから蒸発後に抽出
液９０．３．９が得られる。抽出液ｚｐは捨てる。活性
物質はここでｕｐからｌｐに移る。前記抽出液９０．３
　ｇをｕｐ　４　Ａｉに溶解し、ｌｐ　４　Ｉｔで抽出
する。相を分離させた後に、ｕｐを新鮮なｚｐでさらに
６回抽出する。ｕｐは次いで捨てる。集めたノｐを水性
相肌７ノに濃縮し、これを総量０．２ノの酢酸エチルで
８回抽出する。蒸発後に、生成物２５．８　ｇを得る。

抽出された水性相は捨てる。

この物質をシリカゾル６０（粒径０．０４０〜０．０６
３＋ｉｍ　）　１　ｋＦ！上で溶出液としてクロロホル
ムを用いるｄ々過ｆこよりさらに精製する（カラム：１
０Ｘ１００ＣＴ／Ｌ）。得られた生成物６４９　〃１ｇ
をＬｏｂａｒカラム（Ｌｉｃｈｏｐｒｅｐ　ＲＰ　−８
、サイズＣ）上で溶出液としてメタノールを用いてクロ
マトグラフィ処理する（逆転相クロマトグラフィ）。得
られたりプスタチン２０４　ｍｇは薄層クロマトグラフ
ィにより純粋である。

例　３ リプスタチン１３８ｍ９をエタノール１０ｍ１に溶解し
、溶液を５％パラジウム／炭素６０ｍ９を用いて処理し
、室温で３時間、水素雰囲気（バルーン）中で攪拌する
。触媒を次いで遠心分離する。水素添加生成物をシリカ
ケゞル短カラム（ＩＸ５１）上でクロロホルムを用いて
クロマトグラフィ処理する。ワックス状で僅かに黄色の
固形物として、（２８Ｎ　３ｓ、５Ｓ）−５−（（Ｓ）
−２−ホルムアミド−４−メチル−バレリルオキシ〕−
２−ヘキシル−３−ヒドロキシ−ヘキサデカン酸ラクト
ン（テトラヒドロリプスタチン）１１２ｍｇを得る。

光学旋光度；〔α〕も０＝−３２，０°（クロロわレム
中ｃ−１）。

質量スペクトル（試薬気体としてＮＨ３を用いる化学イ
オン化）：特に、ｍ／　Ｚ　５１３　（Ｍ＋　ＮＨ，”
）；４９６（Ｍ＋Ｈ”）および４５２　（Ｍ＋Ｈ”−Ｃ
ｏ２）にピークを有する。

ＩＲスペクトル（フィルム）：特に、６３６２．２９５
６．２９２１．２８５３．１８３８．１７６１．１７０
９．１６８０．１６６５．１５２４．１３８３．１２４
９および１２００ｃＴＬ−１に吸収帯を示す。

ｌＨ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣ，％）
　：　０．８９（６Ｈ）；０．９７（６Ｈ）；１．１５
〜１．５　（２７Ｈ）　；　１．５〜１．８５（６Ｈ）
；１．９〜２．２５　（２Ｈ）　；　３．２４　（１Ｈ
）　；　４．３２　（Ｉ　Ｈ）　；　４．６８（１）（
）　；　５．０３（Ｉ　Ｈ）　；　６．４３　（１Ｈ）
　；８．０７および８．２１（１Ｈ）ｐｐｍ。

例　４ ａ）醗酵： 予備培地６９１を含有する２１動揺培養フラスコニ、ス
トレプトマイセストキシトリキニ８５−１６の趨天斜面
培養物からの胞子を接種し、２８℃で７２時間通気イン
キュベートする。その後、この２１予備培養物を、生産
培地Ｎ１６を含有するｓｏ１ｍ酵器に移し、２８℃で７
２時間、Ｑ、５ｖｖｍで通気しなからインキュベートす
る。この５０Ａ？予備培養物を使用して、培地Ｎ１６を
含有する１ｏｏｏｌ醗靜器に接種する。この生産嵌酵は
２８°ＣおよびＱ、５ｖｖｍ通気下に９１時間行ない、
かくして細胞内で７３　ＩＣ５ｏ　／　”および雌側外
て１６　ＩＣ５ｏ　／　ｍｌＪプスタチンカ価を得る。

全醗醇ブロスを２℃に冷却させ、遠心分離し、得られた
冷水生物塊４１に９を一２０℃で凍結乾燥させる。

ｂ）仕上げ： 菌糸体３７ｋｇを４°Ｃて解凍し、ミキサーで本釣４０
１と均質化する。得られた薄い液体懸濁液をメタノール
１４０１で処理し、２０分間攪拌する。

混合物を次いで布フィルター上で吸引濾過し、濾過ケー
キをメタノール１４０ノでさらに抽出する。

メタノール抽出液を６０℃で約２２１に濃縮する。

得られた濃縮物を水で５０７に稀釈し、攪拌容器中で各
回５０７のヘキサン／酢酸エチル（’１　：　１　）に
より６回抽出する。第２回および第６回の抽出で得られ
たエマルジョンは塩化すｌ−ＩＪウムをそれぞれ約Ｌ４
ｋｇおよび０．５ｋｙ加えることにより分解できる。集
めた有機抽出液を濃縮し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ
、次いで油状残留物に痙縮する。

粗抽出液４２８ｇが得られる。

Ｃ）精製： この粗抽出液を４部に分けて、各場合にシリカゾル６０
（粒径［］、０４０〜０．０６３朋）上で濾過する。こ
の場合に、溶出はクロロホルムを用いて行なう（カラム
：１０Ｘ１０Ｘ１００゜得られた濃厚な生成物７０ｇを
２部に分けて、各場合にシリカｒル６０１＃上で、溶出
液としてヘキサン／酢酸エチル（９：１〜４：１の勾配
）を用いて濾過する。得られた活性物質４．２１を４部
に分けて、Ｌｏｂａｒカラム（Ｌｉｃｈｏｐｒｅｐ　Ｒ
Ｐ　−８、サイズＣ）上でｉ出液としてメタノールを使
用する逆転相クロマトグラフィにより精製する。リプス
フチン１．７７　ｇが得られる。

例　Ａ 次の組成の軟質ゼラチンカプセルを製造する：リプスタ
チン　５０ｍ９ ＮＥｏＢＥＥ１．ｒ−５４５０μ１ ＮＥＯＢＥＥ　Ｍ　−５中の活性物質の溶液を適尚な大
きさの軟質ゼラチンカプセルに充填する。

代理人　浅　村　晧 第１頁の続き ＠発明者　ハンス・レングスフェルト スイス国うインナツハ・ランチ レル・レベルグベグ９６ ０発　明　者　エルンスト・カール・ヴアイベル スイス国プラツテルン・フォグ タケルベグ３

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）一般式 一（ＣＨ２）５−　を表わす）で示される化合物。 ｆ２）　（２８，３ＥＩ、５８，７Ｚ、１０Ｚ）−５−
   ［：（Ｓ）−２−ホルムアミド−４−メチル−バレリル
   オキシ）−２−へキシル−６−ヒトロキシー７．１０−
   へキサデカジエン酸ラクトンである特許請求の範囲第１
   項の化合物。 （３１（２Ｓ、ろＳ、５Ｓ）−５−（（Ｓ）−２−ホル
   ムアミド−４−メチル−バレリルオキシ〕−２−へキシ
   ル−６−ヒトロキシーヘキザデカン酸ラクトンである特
   許請求の範囲第１項の化合物。 （４）治療活性物質として使用するための特許請求の範
   囲第１項、第２項または第６項の化合物。 （５）膵リパーゼを阻害する活性物質として使用するた
   めの特許請求の範囲第１項、第２項または第６項の化合
   物。 （６）　一般式 ％式％（：） を表わす）で示される化合物の製造方法であって、ａ）
   式 ％式％） −バレリルオキシ）−２−へキシル−６−ヒトロキシー
   ７．１０−へキサデカジエン酸ラクトンを製造する場合
   に、式Ｊａの化合物を生産するストレプトマイセス　ト
   キシトリキニ種の微生物を、適当な炭素源および窒素源
   並びに無機塩を含有する水性培養培地中で通気培養し、
   培養ゾロスから生産された式１ａの化合物を分離するか
   、またはｂ）式 ％式％（（） −２−ホルムアミド−４−メチル−／ぐし１ノルオキシ
   ）−２−ヘキシル−３−ヒＰロキシーへキサデカン酸ラ
   クトンを製造する場合に、式■ａの化合物を水素添加す
   ることを特徴とする前岩己式Ｉの化合物の製造方法。 （７）微生物として、式１ａの化合物を生産するストレ
   プトマイセス　トキシトリキニＮＲＲＬ　１５４４３あ
   るいはそのサブカルチャー、変異菌またをま変異種を使
   用する特許請求の範囲第６項の方法。 （８）式■ １ を表わす）で示される化合物および治療上で不活性の担
   体物質を含有する医薬製剤。 （９）膵リパーゼを阻害する特許請求の範囲第８項の医
   薬製剤。 （１０式Ｉ 〔Ｓ〕〔Ｓ〕 １ を表わす）で示される化合物を含有する工業生産食品。 （１１）　病気の管理または予防における式１を表わす
   ）で示される化合物の使用。 ０２）肥満症および脂肪過剰血症の管理または予防にお
   げろ式■ １１ を表わす）で示される化合物の使用。 （１（６）特許請求の範囲第６項に記載の方法により、
   またはその自明の化学的に均等な方法により製造された
   式Ｉ ■■ １ を表わす）で示される化合物。